JPS60237023A - 界面活性剤欠乏起因の呼吸困難症候群を治療するための薬剤およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、界面活性剤膜がまだ形成されていないもしく
は病理学的に変什した患者に肺胞面活性剤欠乏によって
引き起された呼吸［１Ｉｔ　＆候群の治療に用いる剤、
ならびに哺乳動物の肺からその剤を製造する方法に関す
る。このタイプ■の肺胞細胞からつくられた作用物質は
、界面活性剤欠乏によって引き起された呼吸困難症候群
の原因治療に用いることができる。

（従来の技術） 硝子様腸疾患（ＨＭＤ）は、肺内の肺胞界面活性剤の欠
乏に依り、そしてそれによって肺拡張不全を引き起す。

薬剤的および根本的な可能な処置には、気管への肺界面
活性剤の投与がある。動物実験および新生児についての
最初の臨床実験が、天然の界面活性剤と同様にその主成
分のジパルばチルレクチンで、主にホスファチジルグリ
セロールとの縮み合せで実施された。天然の界面活性剤
は、Ｃ１Ｎ、　ＭＯＲＩＪＹ共著のＴｈｅ　Ｌａｎｃｅ
ｔ　１　（１９８１）、Ｐ６４〜６８によれば、不十分
でありかつ多い種々の活性があるから治療用剤として不
十分であるとみなされている。Ｔ、　Ｆ［ＪＪＩＷＡＲ
Ａは、呻乳動物肺からの天然存在の界面活性剤と合成リ
ン脂質との混合物である半合成界面活性斉１を示した。

Ｉ（ＭＤを持った１０人の未熟児について良好な治療効
果なイＭた（　Ｔ。

Ｆ［］ＪＩＷＡＲＡ共著Ｔｈｅ　Ｌａｎｃｅｔ　Ｉ　（
１９８０）　、ｐｓ５〜５９　）。

（１９２９）　Ｐ　２４９、ＪｌｌＡ、　ＯＬＩＩＭＨ
；ＮＴＳ著Ｐｒｏｃ、、　Ｓｅａ。

ｅｘｐ、　Ｂｉｏｌ、（Ｎ、　Ｙ）　９５　（１９５７
）　Ｐ　１７０　）　、脈管洗　（浄に、ｌニッチ（Ｓ
、ＢＯＮＤＯＲＡＮＴおよびり、　Ａ、　Ｍ工ＩＪＪＲ
著Ｊ、　ａｐｐｌ、Ｐｈｙｓｉｏｌ、１７　（１９６２
）、ＰＪ６７）、またＬ’／Ｊ は気管支洗浄によって（Ｊ、　Ａ、　ＯＬＥＭＥＮＴＳ
著Ｐｒｏｃ。

ＢｏＣ，ｅｘｐ、　Ｂｉａｓ、（Ｍ、　Ｖ、　）　９５
　（１９５７）　ｐｒｏ　）　、行ｔ【うことかできろ
。作用物質を治療に利用するためには、細かく砕かれた
肺胡紗からの分離を考慮しｔ「い。これによって得られ
た抽出物には、もちろん表面活性系の成分のみならず、
適用された抽出条件に応じて可溶性および乳化性の肺構
成成分および肺に含まれた白液を含有する。

ＨＭＤ治療用の表面活性物質を獲得するための可能性が
西独特許公開公報第３０２１００６号明細書に記載され
ている。哺乳動物の肺からの粗製物質が電解質溶液から
得られ、７５〜９５．５　％のリン脂質含有邪−に到達
するように必要郊の合成リン脂質が添加される。そのタ
ンパク質含有邦は０．５〜５．０％に達する。細胞砕片
の５０（１〜１５００　［］ＰＭの分離稜、０℃〜１０
℃の１２．０ＬＩＯ〜１６，０００　ｍＴＰＭの遠心分
離によって粗製作用物質混合物を沈殿物として得る。

塩化ナトリウム溶液中での脂質の数回の再嘔収および高
回転遠心分離によってさらに回収する。透析、アセトン
による抽出、およびクロロホルム／（８） メタノール混合液中でのリン脂質の吸収、ならびに溶剤
の除去によって作用物質混合物が得られ、リン酸塩金賞
に基づいてＩ　：　＋１．６５　：　０．１２のモル比
でシバルミチルレシチンおよびホスファチジルグリセロ
ールが添加される。

また、天然界面活性剤の採取のための文献に記載された
他の方法（Ｉｉ’、　８．　ＢＲＯＷＮ　１９　カ著Ｊ
、　Ａｐｐｌ、Ｐｈｙｅｉｏｌ、１４　（１９５９）Ｐ
７］７　、Ａ、ＪＯＢＥ著Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ　４８９　（１９７７）　
Ｐ４４Ｕ　〜４５３、Ｒ，Ｊ。

ＫＩＮＧおよびＪ、　Ａ％（ＬＥＭＥＮＴＳ著Ａｍ、　
Ｊ、　ＰｈｙｓｉＯユ、２２３　（１９７２）　Ｐ２Ｏ
３〜７］４、Ｐ、　ＢＲＲＧＲＫＮ　ホか著ＩＲＯ８Ｍ
ｅｄ、　Ｓｃｉ、９　（１９８１）　Ｐ２Ｓ５〜２８４
　）は、電解質溶液による哺乳動物の肺の洗浄もしくは
抽出、ならびに引き続く異なったｇ値および湯度での数
回の遠心分離を基礎とし、その際にリン脂質の分離には
高いｇ値の適用ならびに濃縮な必要とする。

その基準増大に際して芦い骨用な必然的に伴う。

ＭｌＩＥ％ＳＣ！ＡＲＰＨ；ＬＬ工ら（Ｊ、　Ａｐｐｌ
、Ｐｈｙｅｉｏｌ、η（１９６７）　Ｐ８８０〜８８６
）は、等張の塩化ナトリウム溶液を用いて犬の肺および
うさぎの肺の抽出にょって、それに引き続いて多段の遠
心分前によって粗製界面活性斉１を得た。分析の目的で
、界面活性剤の構成成分がセファデクス（５ｅｐｈａａ
ｅｘ　（商標））　Ｇ　２００によるゲル濾過によって
分離された。押押の粒子寸法および表面活性のためにゲ
ル濾過によって多くの物質損失をもたらし、しかも製造
の目的には適していない。

０、Ｊ、　ＭＯＲＩＪＹ等（Ｔｈｅ　Ｌａｎｃｅｔ　ｌ
　（１９８１１Ｆ６４〜６８）は、比率７：３のシバル
ミチルレシチンとホスファチジルグリセロールとの混合
物から成る合成の肺界面活性剤を、ＨＭＤを持つ新生児
に投与した。しかしながら、その作用は不十分である。

シバルミチルレシチンとヘキサデカノールとから成る合
成の無タンパク質の界面活性剤の製造は、米国特許第４
３１２６００号に記載されている。

本発明は次の課題を解決する。肺界面活性剤欠乏により
発生した呼吸困ｉ＃症候群の置換療法用の薬剤を用意す
ることおよび天然の原料にもとづいて容易に入手可能な
補助物質より製造するための方法でた。り広範な技術水
準にもとすいて代用可能な簡単な方法を提示することで
ある。本発明によって製造された特有な組成の天然肺界
面活性剤は、可能なすべての疾患の、特に新生児および
成人の呼吸困雛症候群の根本治療剤であり、変化して肺
の界面活性剤になると思われる。そのような治療は、上
述の医学的意義ならびに人道的意義、特に界面活性剤層
がまだ形成されていない新生児に関する乳児死亡率の低
減の観点から、ならびに病理学上の経過上で肺の界面活
性剤が損傷を受けた患者の緊急治療のために人道的意義
を持つ。

リン脂質に富みかつタンパク質を含有する界面活性剤複
合体が、粉砕化された哨乳動物肺の水性抽出物もしくは
肺自体の水相から水と混和しない単一の脂質溶媒、例え
ばクロロホルム、ジクロロメタン、テトラクロロメタン
もしくは石油エーテルに、その生物学的作用を失うこと
なく、移されることが意外にもわかった。邪魔になる細
胞構成成分の大部分、特にタンパク質がこの際に沈殿し
て容易に分離される。主に分析用として界面活性剤の溶
解に従来から使用されていたＦＯＬＯＨ（体積（ＩＩ） 比２：ｔのクロロホルム／メタノール）による抽出媒に
代えて、単一な脂質溶媒を、特にクロロホルム、他人に
好ましいノ・ロゲン化炭化水素を、アルコール関与を回
避しつつ、用いる。それによって、従来の通常の実験法
に際して用いられている多段階遠心分離な、非常に高い
ｇ値および濃縮を部分的に避けることができる。溶媒へ
のアルコール添加の除外は、その異質性のために投薬す
ると人にアレルギー反応を起させるタンパク質関与をか
なり減少させろという利点を持つ（Ｋ、−（３Ｈ１ＢＴ
ＬＲＧＭＡＮＮおよびＢ１ＬＡＯＨＭＡＮＮ著Ｚ、　ｎ
ｒｋｒ％Ａｔｍ。

１３７　（１９７２１Ｆ２Ｏ〜６０．０．　Ｎ％１ｉｌ
ＯＲＩＪＹほか著ＴｈｅＬａｎｃｅｔ、　Ｊａｎ、１０
　（１９８１１Ｆ６４〜６Ｒ）　、その反面、少ないが
作用の発現に不可欠でば））るリポタンパクａ分が本発
明に従う指針の抽出によって溶媒相に移行する。そのう
え岸−な脂質溶媒の使用が種々の溶媒混合物の使用に比
べて再蒸留による溶媒の回収を軽減して、そのために本
方法の経済性の改善にかなり寄与する。

本発明による方法の実施に際して哺乳動物の肺、（１２
） 主に牛の肺もしくは豚の肺から脂肪組織およびり管残部
を取り除き、肉挽器の助けをかりて粉砕する。そのよう
にして得られた肺粉砕唆ケ直ちにクロロホルムまたは他
のハロゲン化炭化水素などの脂質溶媒で攪拌し、もしく
は肺粉砕物から等張の電解質溶液もしくは糖溶液より水
性抽出勅として調製してこれをクロロホルムまたは仙の
ハロゲン化炭化水素などの脂質溶媒で攪拌する。ハロゲ
ンは１．５１の溶媒で行なう。

水性抽出物の調製を＠液１１あたり０．１〜０．５ｋｇ
の肺で行ない、この溶液１１から界面活性剤の抽出を脂
質溶媒、特にハロゲン化炭化水素（）、１〜２．０１．
好ましくは０．２５１ですることができる。

肺の残渣をそのつどガーゼによる口過によって抽出物か
ら分離し、水性抽出物のクロロホルム処理移、好ましく
は遠心分離によってタンパク質を沈殿させて分離する。

得られたクロロホルム相を清澄したのちフィルター上で
真空下４０℃で濃縮し、引き続き４０℃で窒素を漕大し
て完全に溶媒を追い出し、その紡速、パスタ様の淡黄−
褐色物質が残る。このリン脂質含量は直接クロロホルム
抽出で２０〜５０％、主に３０〜４０％に述し、水性抽
出の中間処理で３０〜７５係、主に５０〜６０係に達す
る。このようにして得られかつ生物学的にすでに９好な
作用を持つ粗製界面活性剤のタンパク質含量は、直接ク
ロロホルム抽′出で０．８〜１．５’％の間にあり、ま
た水性抽出の中間処理で１係以下、主に０．５％である
。

それから、得られた界面活性剤を引き続きアルコール抽
出に付す。そのために粗製界面活性剤物質を一１０℃〜
＋６０℃の温度範囲におくことができ、窩速回転の攪拌
操作で攪拌し、その際この物９１ｇあたりアルコールは
１〜２０ｍ１、特に３　ｍｌである。溶媒としてメタノ
ールまたはエタノールを用いることができる。アルコー
ル相を口過もしくは遠心分離によって分離して、溶媒を
追い出す。

このようにして得られた乾燥物質は、次の組成を持ち、
気管内投与に際して例外なくｐ好な親和性を示す。

リン脂質　４５−６５％ 中性脂ＳＲ１０−２５係 コレステロール　１０−２５％ タンパク質　０．５−１．５係 遊離脂肪酸　２−５％ このリン脂質は次の比率にある。

ホスファチジルコリン　５０−６０４ ホスフアチジルグリセロール　２−３係ホスフアチジル
エタノールアミン　１ｇ−２０％ホスファチジルセリン
　１−２係 スフインゴミエリン　１０−２５％ ホスファチジルイノジット　０．５−　１％界面活性剤
物質のアルコール抽出を数回性なうことができ、そのた
めにアルコールに不溶残渣を同じ抽出条件下でエタノー
ルもしくはメタノールと再度撹拌しうろことがさらにわ
かった。そのと（ き残った不溶性特質を用いて第１および第２の攪拌と同
様に第３の攪拌を実施することができる。

この得られた物質は第１の抽出物のほぼ同じ組成（１５
） を持つが、第３の抽出後のリン脂質含量は明らかに減少
し、他方その抽出工程後のコレステルール含量は常に増
大する。しかし、第２および第３の抽出によって、なお
良好な作用を持ちかつ気管内滴注において例外なく親和
性のある物質を調製することができる。

肺からの抽出界面活性剤と不溶性吸着剤、特にシリカゲ
ルもしくは活性シリケートとを混ぜ、引き続きリン脂質
に適した溶媒を用いた溶離を簡単な方法で行なって、界
面活性剤製品を得ることができ、この製品は呼吸置敷症
候群の治療において高い薬剤的効能を示す。

本発明によるこの方法の実施に際して、粉砕された哺乳
動物の肺、特に牛もしくは豚の肺からの界面活性剤の抽
出を、単糖類もしくは二糖頬の溶液によって、特に等張
のグルコースもしくはサッカロースの溶液によって、ま
たは文献によって公知であるように、例えば等張の環化
ナトリウム溶液などの電解質溶液で行なう。公知の佃い
ｇ−値での遠心分離によって細胞砕片の分離後、作用物
（１６） 質混合物をシリカゲルもしくは活性マグネシウムシリケ
ートに吸着させる。有効な界面活性剤とシリカゲルとの
結合が可逆的であると期待できない。

なぜならば、この多成分混合物の物理的および化学的な
性質が固形のクロマトグラフィー物質と不可逆的に結合
して、そのために生物学上活性な界面活性剤の単離なこ
の方法で実施しえないことが文献にはっきりと指摘され
ているからである（Ｒ，Ｊ、　Ｋ工ＮＧ著Ｆｅｄｅｒａ
ｔｉｏｎ　Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　３３　（１９７４
３Ｆ　２２３８〜２２４７　）。蒸留水またはアセトン
を用いた未吸着物質の洗浄後、活性な作用物質を溶媒混
合物で、特にＦ’ＯＬ（！Ｈ（クロロホルム／メタノー
ル）で吸着剤から分離し、真空下の蒸発もしくは窒素導
入による乾燥によって得る。

３０と７０％との間、特に４０〜５０係のリン脂質を有
する天然の界面活性剤が得られる。この製品はタンパク
質含量（≦０．５％）が少ない点で秀れている。タンパ
ク質含量が少ないことは、界面活性剤製品のありうる副
作用を考慮すれば重要である。

なぜならば、抽出の過程で血清タンパク質と同様に器官
固有のタンパク質が抽出物中に入り込み、ヒトへの投与
に際してその抗原特性をあられすことがあるからである
（Ｋ、　ＣＨ，Ｂ訊ＧＭＡＮＮ、およびＢ、　ＬＡＯＨ
ＪＩＩＡＮＮ著Ｚ、　ｎｒｋｒ、　Ａｔｍ、　１３７　
（１９７２）　Ｐ５５〜６０゜０１ＩＮ、　ＭＯＲＬＥ
Ｙほか著Ｔｈｅ　Ｌａｎｃｅｔ、Ｉ　（１９８１）Ｐ６
４〜６８）。

分析結果を確認するために、次の分析法を採用した。

’）　ｙ　脂ｉｔ　含ｆ４Ｈハ、ＢＡＲＴＬＢＴＴ　（
Ｋ　Ｚ３ＬＬＮｌ　オヨびり、ＥＢＥＲＨＡＧＥＮ著「
血液中の脂質の分析および測定Ｊ　Ｓｐｒｉｎｇｅｒ　
−Ｖｅｒｌａｇ　、ベルリン、ハイデルベルグ、ニュー
ヨーク１９６５　）　から公表された方法（８−±２尖
）によって測定された。比較物質としてリン酸二水素カ
リウムが用いられた。コレステロール含量は比色定量法
で測定され、その際コレステロールにコレステロールニ
ステルモ組ミ込まれている（８−±４％）。中性脂佃は
鋲２東独薬局方Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｉ　Ａ入λのトリグリ
セリド測定法で捕えられた。タンパク質含邦は、ＨＲ８
ＥＩＲとＬＩＮＤＲＦｊ　（一般雑誌Ｍｉｋｒｏｂｉｏ
ｌｏｇｉｅ　１０１９７１）　Ｐ５８５〜５９４、同上
旦（１９７５）Ｐ　５５９〜５６Ｊ）に記制された方法
によって測定され、この方法は水性乳什液中のタンパク
質＃度の確認に％　Ｋ、　ＩＩ好に適している（Ｓ−±
３係）。個々のリン脂質の測定け、Ｐ、ＧＩＴＩＩおよ
びその協力者（Ｊ、ｏｆ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ
ｙ迦６　（１９８１）　Ｐ　２００〜２０４）による薄
層クロマトグラフ分Ｗ後に比色穴５（参考、Ｎ、ｚｂＬ
ＬＮｕ、ｕ　およびり、　ＥＢＲＲＨＡＧＥＮ著ｍ液中
の脂質の分析と測定」Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ
、ベルリン、ハイデルベルグ、ニューヨーク、１９６５
）によって実施された（主成分に対し８＝±３係）。比
較物質としてリン酸水素カリウムが用いられた。リン脂
質Ｉの溶＊相失は飛散のなかで起る。遊離脂肪酸に関す
る含量の確認は薄層クロマトグラフ分離およびガスクロ
マトグラフでの溶離によって行なわれた（Ｓ−±１ｏ係
）。

本発明による製品によって水相の表面張力が変化する。

表面張力の測定およびヒステリス曲線の作製は、ＷＩＬ
ＨＦ；Ｔ、ＭＹ計タイプＡＴＦ　０１　（Ｊｌｌ看者Ｆ
ａ、瓢Ｂ１θｇｌｅｒ、３旧マウナーバッハ、オースト
リア）を用いて公知の方法で行なった。

（１９） 物・質投入＝５μｍ　６０ｍｇリポ脂質／　ｍｌ結果　
第１図　例２の物質 第２図　例３の物質 第３図　例９の物質 第４図　例１０の物質 第５図　例１８の物質 縦　軸：　表面張力 横　軸：　相対表面 本発明によｌ）方法で得られた製品は、動物モデルに刻
する生体内試験において高い作用を示し、気管内滴注で
例外のない捏好な親和性を有していた。

次の動物モデルについて報告する。

（イ）成熟Ｉ−だものの呼吸困難症候群における界面活
性剤の影響（参照、表２、第９図） 成熟したものの呼吸困難症候群におけろ界面活性剤滴注
の影響がモルモットについて調べられた。

急性呼吸不全症を起す前に、通常の麻酔後の動物に気管
切開を施し、採珀１のためにカテーテルを頚動脈に挿入
して一定圧で純粋な酸素を１吸気させた。

（２０） 急性の呼吸困難症候群を、その動物について淵生理食塩
水による８回の界面活性剤の気管支洗浄によって発生さ
せた。この洗浄零相ばその動物の肺活齋に一致する。洗
浄過程の終りにこの動物の動脈酸素圧は、＋３０　Ｑｍ
　Ｈ２Ｏの優冒匝を持つ・吸気にもかかわらず、５Ｑ　
ｍｍ　Ｈｇの下で、８０ｍＨ２Ｏと純酸素の正最終呼気
圧（Ｐｏｓｉｔｉｖｅ−Ｋｍｌｅｘｐｉｒａｔｏｒｙ−
ｐｒｅｓｅｕｒｅ、ＰＩＦ）であった。最後の肺洗浄か
ら１０分および４０分後に、動物の半分に界面活性剤１
　ｍｌずつ気管へ滴注された。抑液のガス分析が各々の
界面活性剤投薬から５．１５、および３０分後に行なわ
れた。最適の界面活性剤では、全く同じ吸気条件の下で
平均２００ｍｍＨｇだけの上昇をただちにもたらす。

（ロ）未成熟な肺についての界面活性剤の影響（参照、
表２、第６図、第７図および第８図）未成熟な肺につい
ての界面活性剤の影響を試験するために、帝王切開で妊
娠２７日の未熟なうさぎの新生児を取り出した（総妊娠
期間３１±１日）。

その動物を出生後ただちに気管切開し、その一部に気管
カニーレで平均６０μｍの界面活性剤を気管滴注した。

同じひと腹の姉妹動物を対照として用いた。引き続いて
その動物が一定圧の全身充盈計測法（３８℃）にかげら
れ、吸気圧および呼吸体積の連続的な記録の下で純粋な
酸素を吸わせた。第１日から胸郭−肺の容量が計測され
た。同じ試みで出生拶のすべての動物２１０〜１５分間
吸気させ、そして次いでその動物の一部に気管滴注で界
面活性剤を与えた。

（ハ）若いラットについての気管滴注における親、相性
の検査（参照、表２） 若いラットについての親和性の検査を、治療用量（２０
０ｍｇ！Ｊン脂質／ｋｇ体重）ないし治療用量の３倍量
の濃度範囲で行なう。ラット（約５０ｇ体重）あたりＪ
Ｏ〜３Ｏｍｇのリン脂質を投与する。親和性試験のため
にメスならびにオスの動物を用い、−回の実験ｎ＝１０
には同じ性のラットだけを用いる。

手順： １０匹の約５０ｇの重いラット（オスまたはメス）をエ
ーテルで麻酔し、次いで頚切開ならびに気管の調節を行
なう。その調節後、エーテル麻酔を深め、つまりその結
果動物はさらに規則的に呼吸する。曲った細管で各々に
０．３ｍｌの生理食塩水あたり１０〜３０ｍｇのリン脂
質を注入する。注入を行なった後切開箇所を縫い合せる
。観察期間は２週間に及び、その７２時間後に最終判定
を確定する。一連の試Ｄ（５０〜６０匹の動物）あたり
５匹の対照動物も一緒に行ない、それぞれ０．３ｍｌの
生理食塩水を注入する。

このｉＪＩ　Ｉ＋の安定性および乳化性をさらに改良す
ることかリン脂質画分の追加によって可能であり、次の
ように得られる。上述した組成の本発明による乾燥物質
を脂質溶媒、特にクロロポルムに溶がして脂質溶媒１ｍ
ｌあたり０．１　ｇないし１．０　ｇの物質を溶解させ
、リン脂質画分のアセトン沈殿を行なう。この沈殿を−
２０℃ないし＋２０　”Ｃ１牛「に＋５℃で行なう。り
・・ホルーの作用物質溶液とアセ　（トンとの体秤比は
、ｆｉｌと１：８との間にあり、特に１：４である。口
過または遠心分離によって（２３） 母液を分離し、アセトンで固相を洗浄した後、特に−１
０℃ないし一２０℃の温度に調節すべきであり、リン脂
質画分を乾燥する。そのように得られたほぼ白色の物質
は、７０〜９０係がリン脂質から成りかつ０、ａ、モデ
ルで生物学的活性を示さず、アルコール抽出より得られ
た界面活性剤に加えることができる。

そのようにして得られた乾燥混合物は、次の組成を有す
る（手順は既に述べた方法に対応する）。

リン脂質　６０〜７５係 中性脂質　５〜１５係 コレステロール　１０〜２０係 タンパク質　０．５〜１．５％ 遊離脂肪酸　２〜５％ このリン脂質は次の比率にある。

ホスファチジルコリン　６０〜７０係 ホスフアチジルグリセロール　２〜４％ホスファチジル
エタノールアミン　５〜１０％ホスファチジルセリン　
１〜３係 スフインゴミエリン　１０〜２０係 （２４） ホスファチジルイノジット　２〜３％ この方法で得られた製品は、既に述べた動物モデルにつ
いての生体内試眸において高い有効性（参照、表２）を
示し、気管内滴注において例外なく良好な親和性を有し
ている（参照、表２）。

また、繰り返しのアルコール抽出およびアセトン沈殿に
よって得られたリン脂質画分を同様にｌ−で使用するこ
とができる。

薬剤の製造 ４０と７０係との間のリン脂質を有する得られた天然界
面活性剤から下記の方法によって薬剤に製造する。

この物質をエタノールまたはハロゲン化炭化水素で溶か
した後、ガラスフィルターまたはフィルター紙上で削口
遇し、引き続いて溶媒に対して安定な薄膜上で無菌口過
する。溶媒の真空蒸発後、得られた残渣を注射液用に水
または無菌水溶液で乳化し、ガラスビンに詰め、低温凍
結させ、凍結真空乾燥する。水溶液として等張の塩化す
）　ＩＪウムまたは塩化カルシウム溶液、または坪糖類
または三糖類の等張溶液を用いることができる。均質化
にはウルトラ−ツルラックス（Ｏユｔｒａ　−Ｔｕｌ”
ｒａＸ）が特に適している。その他、乳化性の改良、安
定性の向上、および一定のｐＨ値保持の緩衝のために適
切な剤を添加することができる。

薬剤を得ることが他に可能であり、それは得られた天然
界面活性剤（有機溶媒中での蕪菌口過を避けたもの）を
同様に水または水溶液中で乳化することにある。その際
上記した溶液および添加物が同様にあてられ、また乳化
液がオートクレーブにかけられる。冷却後もし心壁なら
ばもう一度乳化することができる。引き続き乳化液をガ
ラスビンに詰め、低温凍結させて、凍結真空乾燥させる
。

リン脂質含シー４０〜７０係、タンパク賃金ｉ１．５％
未満、コレステロール含量１０〜４０壬、中性脂質含量
５〜３０％である本発明による作用物質混合物は、生理
的キャリア流体１　ｍｌあたり１〜５００　ｍｇ、好ま
しくは７０〜１５０ｍｇの含有量で薬剤に利用される。

（実施例） 例Ｊ ４．１ｋｇ　新鮮な牛の肺臓から脂肪組織、大きな気管
部分および付着した血液を取り除いて肺を分割した。次
いで、肺片を４　ｍｍ孔円板の肉挽器で細かく砕き、得
られた３、５ｋｇ肺砕物を１４．０１の等張塩化ナトリ
ウム液で２０℃一時間、強く攪拌しなから抽出した。デ
デロンガーゼ（Ｄｅｄｅｒｏｎｇａｚｅ　）で吸い取っ
た後、１２．４１　の濁った抽出液を得ることができ、
それを１時間２０℃、７．６１のクロロホルムとかき混
ぜた。３日間の放置期間後、細かいタンパク質低沈殿を
１５分間２０００　ｇで遠心分離した。５．８１１　の
澄んだクロロホルム相を　得て、それを濃くした後、回
転循環蒸発器内で乾燥まで窒素下で濃縮した。　６．１
４　ｇの物質を得た。

例２ ２００ｋｇの肺臓から脂肪組織と大きな気管部分を取り
除き、８ｒｎｍ孔円板の内挽器で細かく砕いた。

この肺粉砕物を工業用抽出器内で６００１の等張地（２
７） 化ナトリクム溶液と３０分間１７℃で攪拌した。１５分
間の放置後、肺の主な部分が水相の上に溜った。

この水相を抽出器の底から引き出して、なお含まれてい
る肺断片および血細胞を分離器で取り除いた。４１０１
の水性抽出物を２００１傾注釜でさらに処理した。２回
、１３（１１の抽出物をそれぞれ１．１ｋｇの無水塩化
カルシウムと混合してそれぞれ３２．０１のクロロホル
ム（第２東独薬局方）と２５分間１５℃で攪拌した。ま
た−回、１５０１の抽出物を１．２ｋｇの無水塩化ナト
ｌ）ワムと混合して３６．０１のクロロホルム（第２東
独薬局方）と２５分間攪拌した。

−夜の放置後、それぞれ水性の上層と沈殿したタンパク
質部分とがデカンテーションで分子ｆラレ、残りは遠心
分離された。６０１のクロロホルム相を得て、それを真
空循環蒸発器の内で、引き続き回転循環蒸発器の内で濃
縮した。窒素で溶媒を取り除いた。５１３ｇの物質を得
ることができた。

例３ 例１で述べたと同様に２．２　ｋｇの牛の肺臓から得る
ことのできる２、Ｏｌｃｇの肺粉砕物を、５．０１のり
（２９） （２８） ロロホルムと６０分間２０℃で攪拌した。肺の口利後、
濃縮後のクロロホルム抽出物を窒素下の回転循環蒸発器
の内で乾燥した。２．８４　ｇの物質を得た。

例４ ２７６沌の新鮮な牛の肺臓から脂肪組織および大きな気
管部分を取り除き、８Ｉ１１ｎ′Ｉ孔円板の工業用肉挽
器で細かく砕いた。得られた２５０ｋｇの肺粉砕物を工
業用抽出器内で３００１のクロロホルムと６０分間２０
℃で攪拌した。クロロホルム相を５０分間放置後引き出
し、真空循環蒸発器および真空回転蒸発器で濃縮して窒
素導入によって乾燥した。９５０ｇの物質を得た。

例５ ７．２ｋｆＪの新鮮な牛の肺臓から脂肪組織および大き
な気管部分を取り除き、付着した血を洗浄した後、肉挽
器で細かく砕いた。６．０　ｋｇの肺粉砕物を分けて等
張塩化す）　ＩＪウム溶液と攪拌し、２．５ｋｇの肺粉
砕物から８．０１の水溶液を得た。肺残渣の分離後、得
られた１７．６１の抽出物の８．８１を５９．０ｇの無
水塩化カルシウムと混ぜ、２．２１の四塩化（３θ） 炭素と３０分間攪拌した。１．９７１の有機相を得るこ
とができ、溶媒の除去後２．３４ｇの物質を得た。

例６ 新鮮な牛の肺臓から脂肪組織、大きな気管部分および付
着した血液を取り除き、その肺を分割した。引き続き、
４ｍｎ孔円板の肉挽器で肺片を細かく砕き、そして得ら
れた６５．０ｋｇの肺粉砕物を１３０ｋｇずつ５回に分
けてそれぞれ１５．６１のクロロホルムと３０分間室温
で攪拌した。肺の口利後１０．５〜１１．５１のクロロ
ホルム抽出物を得た。５つの抽出物を一緒にし、回転循
環蒸発器内で濃縮して窒素下で乾燥した。２５４ｇの粗
製界面活性剤を得た。

その５５ｇを９６チエタノール１０５１ｎｌと室温で５
分間ワルトラーツルラックスで攪拌した。その際温度は
６２℃に上昇した。不溶性の残渣を口利し、澄んだエタ
ノール抽出物を回転循環蒸発器で濃縮し、そして窒素下
で溶媒を完全に除去した。純粋な界面活性剤１１．９ｇ
を得ることができた。

例７ 例１と同様に調製された１２．０ｋ１ｇの肺粉砕物から
３１’ｌｌ’ｌＪｌ室温でのクロロホルム１５．０１と
のａ拌後に１０．２１の抽出物を得た。溶媒除去後５０
．２４ｇの粗製界面活性剤があとに残った。

この粗製界面活性剤の２０ｇを８０ｍ１のエタノールと
５分間−１０°Ｃで攪拌した。例６と同様の処理後３．
８９　ｇ、の純粋な界面活性剤を得た。

例８ 例６と同様に調製された１６．０　ｋｇの肺粉砕物から
、３０分間室温でのクロロホルム１８．２１との攪拌後
に１４１の抽出物を得た。溶媒の除去後あとに６３．１
　ｇの粗製界面活性剤が残った。この粗製界面活性剤０
２６ｇを８０ｍ１のエタノールと５分間１５〜２０℃で
攪拌した。例６と同様の処理後に８．４５　ｇの純粋な
界面活性剤を得た。

例９ 例６と同様に婢製された１２５．（１ｋ（＜の肺粉砕物
から、各々３０分間室温での全体として１５０１のりｐ
ロホルムとの分割攪拌後に１０２．ｆｉ　ｌの抽出物を
得　（た。溶媒除去後あとに５２０ｇの和製界面活性剤
が残った。

この粗製界面活性剤の５００ｇを１５０１１ｍｌのエタ
ノールと１５分間１０〜２０℃で攪拌した。得られた抽
出物を例６と同様に処理した。１９８ｇの純粋な界面活
性剤を得た。

例１０ 例９からの純粋な界面活性剤１５０ｇより、クロロホル
ム３２０ｍ１への溶解および０℃への冷却後、冷却アセ
トン（−２０℃）９６０１ｎｌ−の添加によってリン脂
質画分を沈殿させた。９７．０　ｇのリン脂質画分を得
た。

このリン脂質の１２ｇと例９の純粋な界面活性剤の１２
ｇを一緒に乳化して、例２９に従って薬剤材料に処理さ
れた。

例■ 例８の粗製界面活性剤３９．４　ｇを１１７．６　ｍｌ
のメタノールと１５分間２８〜３−１　℃で攪拌した。

例６に従った処理後、１３．８３　ｇの純粋な界面活性
剤を得るととができた。

例１２ １９６．１１　ｋｔｚの肺粉砕物から、例６で述べられ
た方（３３）　−へ− 法で７２３ｇの粗製界面活性剤を得た。６０３ｇの粗製
界面活性剤を１８０９ｍ１のエタノールと１６分間１５
〜２０℃で攪拌した。エタノール性抽出物から溶媒除去
後２４０ｇの純粋な界面活性剤を得た。エタノールに不
溶性の残渣３６５ｇがあとに残った。

例１３ 例１２の残渣３６５ｇを同じ条件下で再度１２００　ｍ
ｌのエタノールと攪拌した。抽出物から５９ｇの純粋な
界面活性剤を再び得た。エタノールに不溶の残渣３１４
ｇがあとに残った。

例１４ 例１３の純粋な界面活性剤４０ｇを１００ｍ１のクロロ
ホルムに溶かし、溶液を８℃に冷却した。この溶液から
リン脂質画分を冷却アセトン３１）Ｏｍｌの添加によっ
て沈殿させた。こ、の沈殿を吸い取り乾燥した。１６．
９　ｇのリン脂質画分を得た。

例１５ ４．５職の新鮮な牛の肺臓から大きな血管、気管部分お
よび付着した脂肪組織を除去して、その肺を分割した。

付着した血液全部を除去する肺片の（３４） 洗浄後、４ｍｍ孔円叛の肉挽器で肺組織を細かく砕いた
。得られた肺粉砕物を５００ｇずつ分けてそれぞれ２．
０１のサッカロース溶液（１１４ｇ／ｌ　）と１０分間
強く振った。プラスチック口板での口過および引き続く
２０℃５００ｇの口液の遠心分離によって、１５．４１
の水性抽出物を得た。

この抽出物の７．Ｏｌをカラムクロマトグラフィー用の
シリカゲル４２０ｇと６０分間２０℃で攪拌した。４℃
の１６時間の放置後、澄んだ上澄液を取り出して除いた
。界面活性剤を吸着したシリカゲルを０２−フリッチ（
Ｆｒ１ｔｔθ）からの蒸留水１１によって残留上澄液を
除去して洗浄［７た。界面活性剤の溶離を１．５１のク
ロロホルム／メタノール混合液（２：］）によって行な
った。クロロホルム相を分離し窒素下で乾燥し、た。そ
の結果５１５■の物質を得た。

例１６ 例１５で記載した水性抽出物の８．４１を５００ｇのフ
ロリシル（１１ｏｒｉｓｉｌ、商標）と３０分間２０℃
で攪拌した。４℃での１６時間放置緩、澄んだ上澄液を
取り出し除いた。例１５で記載されたようにさらに処理
した。６（１０１１１ｇの物質を得ることができた。

例１７ 例１５で述べられたように調製した２、５ｋｇの肺粉砕
物を凍結真空乾燥し、そして３週間の冷却貯蔵後、例１
５で記載されたとＩＯ］様に、水性抽出物０こ処理を施
した。その際、元々の新鮮なときの重量に応じて肺凍結
真空乾燥物を添加した。例１５と相違して抽出媒として
グルコース溶液Ｃ５５ｇ／ｌ）を用いた。水性抽出物の
７．１１をカラムクロマトグラフィー用シリカゲル４２
０　ｇと６０分間２０℃で攪拌した。例１５で調製され
た変形例に相当する吸着物の処理後、３１（Ｉｍｇの物
質を得ることができた。

例１Ｂ 例１で記載されたと同様に、３６ｋｇのｆｒｆｎな牛の
肺臓を肺粉砕物に処理した。この柵かぐ砕かれた肺の５
００ｇずつを、各々２．０１の等張塩化ナトリワム溶液
と６０分間２０℃で強く攪拌した３、デデロンガーゼで
の口過および次の２０°Ｃ５（１０ｇの口液の遠心分離
後、１２０１の水性抽出物を得た。

３０１ずつの抽出物を２．５鞄のＦｌｏｒｉｓｉｌ　（
商標）と６０分間２０℃で攪拌し７た。吸着剤の沈降抜
上澄液（それぞれ２６〜２８１）をデカンテーションに
かけ、さらに２．０　ｋｇＦｌｏｒｉｓｉｌ　（商標）
と６０分間２０℃で攪拌した。個々のＦｌｏｒｉθ１１
吸着物をそれぞれ５〕、の蒸留水で洗浄してそれぞれ６
．４１のクロロホルム／メタノール混合液（２：］）で
溶離させた。

クロロホルム相を一つにまとめて、窒素下の濃縮後１２
．２ｇの物質を得ろことができた。

例１９ ９．３５ｋｇの新鮮な肺臓から例１５に従って５００ｇ
ずつに分けられ、それぞれ２．０１の等張塩化ナトリウ
ム溶液と２０℃で強く攪拌し、３１．’７Ｌの水性抽出
液を得た。この抽出液の２：３．０１を１．１５ｋｇの
Ｆｌｏｒｉｓｉｌ　（商標）と６０分間２０°Ｃで攪拌
した。上澄液の除去後界面活性剤吸着Ｆ’１Ｏｒｉｓｉ
ｌ　（商標）を二つの等しい部分に分けた。半分と４１
の水道水で、他方を３１のアセトンで洗浄した。それぞ
れの部分を引き続き２１のクロロホルム／メタノール混
合液（２：１キ）で溶離させ、クロロホルム相を分離１
２、窒素下で乾燥した。水で洗浄された吸着剤から１．
０ｇの物質が、またアセトンで洗浄された吸着剤から０
．６２　ｇの物質が産生じた。

例２０ 例１９の下で得られた抽出液８．１１を１．２権のシリ
カゲルと６０分間２０℃で攪拌した。上澄液の分離後界
面活性剤吸着シリカゲルを４１の水道水および２１のジ
クロロエタン／エタノール混合液（２：１）で溶離させ
た。乾燥させられたジクロロメタン相から４２２ｇの物
質が産生じた。

例２１ 例１９記載のように調製された９、０１の水性抽出液か
ら、２ｋｇのシリカゲルとの攪拌、１０１の水道水によ
る吸着物の洗浄、および６０分間攪拌による２、８１の
クロロホルム／メタノール混合液（２：１）での界面活
性剤物質の溶離後、６００ｍ’ｌのクロロホルム相を得
ることができた。これを窒素下で乾燥して１．３ｇの物
質を産生させた。

例２２ 例］１１記蒔のように調ｕＦ、Ｉ″Ｉた３、Ｏｌの水性
抽出液から、０．６８　ｋｇのシリカゲル（例］９で既
に使用されて２ＮのＮａＯＨとの処理によって再生され
たもの）との攪拌、２１のアセトンとの吸着物の洗浄、
および６０分間攪拌による１０００　ｍｌのクロロホル
ム／メタノール混合液での界面活性剤物質の溶離後、９
６０ｍ１のクロロホルム相を得ることができた。真空下
で乾燥して０．６ｇの物質を産生させた。

例２３ 例１記載されたように調製した９、０棺の肺粉砕物を、
０゜５ｋｇずつ１８に分け、それぞれ２．０１の等侵食
塩水で１０分間強く視盪して抽出し、肺残渣をプラスチ
ック口板およびデデロンガーゼで分離した。得られた３
４１の抽出液をカラム（直径１５ｃｍ、充填高２５　ｃ
ｍ　）に充填された２、０棺のＦｌｏｒｉｓｉｌ　（商
標）にかけた。

次いで、１０．０１−の蒸留水で洗浄し、７．５１のク
ロロボルム／メタノール混合液（２：１）で作用物質を
溶離させた。−夜の放置後、溶離液のメタノール相を取
り除くことができた。クロロホルム相と真空下で乾燥さ
せた。２．６５　ｇの界面活性剤を得ることができた。

例２４ ２０ｇの本発明による作用物質（リン脂質含量６０．１
％）をエタノール中で、変性させず溶解し、Ｇ４−フリ
ッチ（ガラス繊維フィルタ紙皿■で載せられたもの）で
前口過し、引き続き縫工筋フィルターＳＭ　１１６−０
７で無菌口過した。真空回転蒸発器での無菌溶液の濃縮
後、無菌窒素の導入および容器の同時排気によって溶媒
を除去した。得られた無菌物質を、無菌水１８０ｍ１と
ワルトラーツルラックで乳化し、そしてその乳化液を２
５ｍ１のロールランドビンに注ぎ入れ、１７個のビンに
はそれぞれ４［ＩＱ、、　ｍｇのリポ脂質を含んでいた
。３日間−５０℃に凍結させて試料を凍結真空乾燥させ
、その際加熱を最高２０℃壕でに調整した。凍結真空乾
燥後そのビンを針貫入栓Ｂ１８０およびアルミロ金栓で
密封した。　６ 例２５ ５ｇの本発明による作用物質（リン脂質含量５６．８％
）を５０．０　ｍｌのクロロホルム〔第２東独薬局方〕
で溶かし、ガラス繊維口紙（層厚１，８０　ｍｍ　）お
よび口紙で口過し、またガラス繊維前口過（層厚４５０
ＩＩｍ）に引専続いてセルロース無菌四級（孔径０．２
岬、９（）虜の膜厚）で無菌口過した。真空回転蒸発器
での無菌溶液の濃縮後、無菌９素の導入と容器内の同時
排気によって溶媒を除去した。

得られた無菌物質を４０．０　ｍｌの無菌水とワルトラ
＝ツルラックスで乳化し、乳化液を２５　ｍｌのロルラ
ンドビンに詰め、７個のビンには４００　ｍｇのリン脂
質が含まれていた。試料を一５０°０３日間の凍結真空
乾燥をし、その際加熱を最高２０℃１でに調整した。凍
結乾燥後、そのビンを針貫入栓８１８０およびアルミロ
金栓で密封した。

対照動物 ８リン脂質両分 親和性の評価： 親和性は生存動物数を全体の動物数（ｎ＝１ｏ）で割っ
た値であり、すなわち、１．０は１０匹のすべての動物
が生存したことを意味する。少なくとも９匹の動物が生
存したときその物質は親和性があるものと特徴付けられ
る。

【図面の簡単な説明】 第１図ないし第５図は、各々、例２の物質、例３の物質
、例９の物質、例１０の物質、例１８の物質の表面張力
のヒステリス曲線を示す線図であり、第６図ないし第８
図は、未成熟な肺についての界面活性剤の影響を示す線
図であり、第９図は成熟したものの呼吸困難症候群にお
ける界面活性剤の影響を示す線図である。 出願人代理人　猪　股　清 （４４） 手続補正書（方刻 昭和６０年６月Ｚ　日 特許庁長官　志　賀　学　殿 １　事件の表示 昭和５９年　特許願　第　２５９８５９号２　発明の名
称 界面活性剤欠乏起因の呼吸困難症候群を治療するための
薬剤およびその製造法 ３　補正をする者 事件との関係　特許出願人 フオルクスアイゲネルベトリープ、 アルツナイミツテルベルク、ドレスデン４代理人 昭　和　６０年　４　月　１０日 （発送日　昭和６０年４月３０日） ６　補正の対象 明細書の「発明の詳細な説明」の欄、図面、法人証明書
。 ７　補正の内容 １）　図面の浄＠（内容に変更なし）。 ２）　法人証明書を別紙の通り補正する。 〈但し、法人証明用の原木は特願昭第５９−る。 （１）　明ｌ書第８頁第６〜７行の［Ｃ，Ｎ、・・・Ｔ
ｈｅｔａｎｃｅＢを「シ、エヌ、モルレイ（Ｃ，Ｎ、　
ＨＯＲＩ−ＥＹ　）共著のザ、ランセット（Ｔｈｅ　Ｌ
ａｎｃｅｔ）　Ｊに訂正する。 （２）　明細書第８頁第１０行のｒＴ４１１月ｋｌ　Ａ
　Ｉｔ八」を［ティ、フジワラ（Ｔ、　ＦＩＩＪＩＷＡ
Ｒ＾）１に訂正する。 （３）　明細書第８頁第１３〜１４行のｒ　Ｔ、　ＦＩ
ＩＪ１１４ＡＲ＾共−＋−ａｎｃｃｔ　、１を「ティ、
フジワラ（Ｔ、　ＦＵＪＩＷＡＲＡ）共著ザ、ランセッ
ト（ＴｈｅＬａｎｃｅｔ）　Ｊに訂正する。■明細書第
８頁第１６行の「Ｋ、　Ｖ、　・Ｈｅｄ　Ｊを［ケー、
ブイ、ネ■ルガード著）■ルハンドルンゲンデル、ドウ
チェン、ゲゼルシャフト、フェル、インネレ、メゾシン
（Ｖｅｒｈ、Ｄｔｓｃｈ、Ｇｅｓ、ｉｎｎ、Ｈｅｄ）　
Ｊに訂正する。 （５）　明］１＠第８頁第１７〜１８行および第９頁第
１〜２行の［Ｊ、Ａ、・・・Ｂ　ｉ　ｏ　ｌ　ｊを「ジ
エー、エイ、クレメンツ（Ｊ、＾、　ＣＬＥＨＩＥＮＴ
Ｓ　）著プロシーアング、セック、■クスペリメンタル
、ビオロジ−（Ｐｒｏｃ、Ｓｅｃ、ｅｘｐ、Ｂｉｏｌ　
）　Ｊに訂正する。 （６）　明細書第８頁第１９〜２０行のｒ　Ｓ、　ＢＯ
ＮＤＩＩＲＡＮＴ・・・Ｐｈｙｓｉｏｌ　ｊを［ニス、
ボントウラント（Ｓ、　ＢＯＮＤＩＩＲＡＮＴ　）おに
びディー、エイ、ミラー（０，＾、旧ＬＬＥＲ）著ジャ
ーナル、オブ、アプライド、フイジオロジ＝（Ｊ、ａｐ
ｐｌ、Ｐｈｙｓｉｏｌ）　Ｊに訂正する。 （７）　明細書第１０頁第７〜１２行の［Ｅ、Ｓ、・・
・・・・Ｓｃｉ　Ｊを［イー、ニス、ブラウン（Ｅ、Ｓ
、ＢＲＯＩＩＩＮ　）ほか著ジャーナル、オブ、アプラ
イド、フイジオロジ−（Ｊ、Ａｐｐｌ、Ｐｈｙｓｉｏｌ
）１４（１９５９）ｐ７１７、エイ、ジオベ（＾、　Ｊ
ＯＢＥ　）著ビオケミ、ビオフジ−、アクタ（Ｂｉｏｃ
ｈｅｎ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、＾ｃｔａ）４８９（１９７
７）　ｐ４４０〜４５３、アール、ジエー、キング（、
Ｒ，Ｊ、にＩＮＧ）およびジェー、エイ、クレメンツ（
Ｊ、＾、ＣＬＥＨＥＮＴＳ）著アメリカン、ジャープル
、オブ、フィジオロジー（Ａｍ、Ｊ、Ｐｈｙｓｉｏｌ）
　２２３（１９７２）ｐ７０７〜７１４、ピー、ベルグ
レン（Ｐ、　ＢＥＲＧＲＥＮ）ほか著アイ、アール、シ
ー、ニス、メジカル、＋ｊ　イエンス（ＩＲＣ３Ｒｅｄ
、５ｃｉ）　Ｉに訂正する。 （８）　明細書第１０頁第１８行の［Ｈ，Ｅ、・・・Ｐ
ｈｙｓｉｏｌ　Ｊを［エム、イー、スカルペーリ（Ｈ，
Ｅ。 ５ＣＡＲＰＥＬＬＩ　）ら（ジャーナル、オブ、アプラ
イド、フィシキロジー（Ｊ、八ｐｐｌ、Ｐｈｖｓｉｏｌ
）　Ｉに訂正する。 （９）　明細書第１１頁第８行の「Ｃ，Ｊ、−Ｌａｎｃ
ｅｔ　Ｊを「シー、ジエー、モルレイ（Ｃ，Ｊ、　ＨＯ
ＲＬＥＹ）等（ザ、ランセット（Ｔｈｅ　Ｌａｎｃｅｔ
）　Ｊに訂正する。 （１０）明細書第１３頁第１０〜１３行のおよび明細書
第１９頁第３〜５行の「に、　−Ｃｌｌ、−Ｌａｎｃｅ
ｔ　Ｊを［ケー、シーエッチ、ベルブマン（Ｋ、−ＣＨ
。 ＢＥＲＧＨＡＮＮ　）およびビー、ラックマン（Ｂ、　
ＬＡＣＨＨＡＮＮ　）著ツアイトシュリフト、フェル、
エアクランクング、アートｌｘング（Ｚ、　Ｅｒｋｒ、
＾ｔｍ）　１３７（１９７２）Ｐ　５０〜６０．シー、
エヌ、モルレイ（Ｃ，Ｎ、　ＨＯＲＬＥＹ　）ほか著ザ
、ランセット（Ｔｈｅしａｎｃｅｎｔ　）　Ｊに訂正す
る。 （１１）明細書第１８頁第９行の［Ｒ，Ｊ、・・・（１
９７４）　ｊを［アール、ジエー、キング（Ｒ。 ＪｌにＩＮＧ）著フＪデレージョン、フロシーアングス
（Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ　Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　３
３　（１９７４）　Ｊに訂正する。 （１２）明細書第１９頁第９〜１１行の［ＢＡＲＴＬＥ
ＴＴ−Ｖｅｒｌｏｇ　Ｊを［パルトレッド（ＢＡＩＩＬ
ＥＴｒ　）　（，１ヌ、ツエリネル（Ｎ、７０１．１Ｎ
ＥＲ）およびディー、エベルハゲン（Ｄ、　ＥＢＥＲＨ
八ＧＩＥへ　）著［′白液中の脂質の分析および測定］
シコプリンゲル出版（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｏ
）、１に訂正する。 （１３）明細書第１９頁第１９〜２０行の［ＩＩＥＳＳ
ＥＨｉｋｒｏｂｉｌｏｇｉｅｌを［ヘス（ＩＩＥｓｓＥ
　）とリンゲル（１、ＩＮＤＥＲ）　（一般雑誌ミクロ
ピオロジイ（Ｈｉｋｒｏｂｉｏｌｏｏｉｅ））　Ｊに訂
正する。 （１４）明１１＠第２０頁第４〜５行のｒ　Ｉ’、ＧＥ
ＮＴＥＲ・・・Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　Ｊを「
ピー、ゲンターおよびその協力者〈ジャーナル、オブ、
クロマ［へグラフィー（Ｊ、ｏｆ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇ
ｒａｐｈｙ　）　」ニ訂正スル。 （１５）明＠書第２０頁第７〜８行のＩ　Ｎ、　２ＯＬ
ＬＮＩＩｌ・・・ＥＢＥＲＨＡＧＥＮ　Ｊを［■ヌ、ツ
エリネル（Ｎ、ｌｂ［ＬＮＥＲ）およびディー、■ベル
ハゲン（Ｄ。 ＥＢＥＩＩＩＩＧＥＩＩ）　Ｊに訂正する。 （

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、すｙ脂質含量４０〜７０係、タンパク質含聞１．５
   係未満、コレステロール含量１０〜４０％、中性脂質含
   ！５〜３０チである作用物質混合物を生卵的キャリア流
   体１　ｍｌあたり１〜５００　ｍｇ含有することを特徴
   とする界面活性剤欠乏起因の呼吸困難症候群を治療する
   ための薬剤。 ２、タンパク質含量が０．５〜１．０係であり、作用物
   質混合物を生理的キャリア流体１ｍｌあたり７０−１５
   ０　ｍｇ含有する、特許請求の範囲第１項記載の薬剤。 ３、細かく砕かれた肺を、または等張の電解質溶液もし
   くは単糖類溶液もしくは三糖類溶液よりｐＨｇされた水
   性肺抽出物を、水と混ざらない脂質溶媒で抽出し、その
   抽出物から不溶成分を取り除き、脂質溶媒を除去し、水
   溶性アルコールで抽出し、アルコール不溶性成分を抽出
   物から取り除き、アルコールを除去し、そしてこの精製
   作用物質を必要に応じたリン脂質画分の添加伊に呼吸器
   に適用するに適した形態にすることを特徴とする界面活
   性剤欠乏起因の呼吸困難症候群を治療するための薬剤の
   製造法。 ４、細かく砕かれた肺を２〜ｌＯ倍重量の等張食塩溶液
   または単糖類溶液もしくは三糖類溶液と攪拌して調製し
   た水性肺抽出物を用いる、特許請求の範囲第３項記載の
   製造法。 ５、細かく砕かれた肺１　ｋｇあたり０．５〜１０１の
   脂質溶媒を用いるか、もしくは水性肺抽出物を０．１〜
   ２倍体積の脂質溶媒で抽出する、特許請求の範囲第３項
   または第４項記載の製造法。 ６、細かく砕かれた肺１ｋｇあたり１．５１の脂質溶媒
   を用いる、特許請求の範囲第５項記載の製造法。 ７、脂質溶媒としてハロゲン化炭化水素または石油エー
   テルを用いる、特許請求の範囲第３項ないし第６頂のい
   ずれか１項記載の製造法。 ８、脂質溶媒としてジクロロメタン、トリクロロメタン
   またはテトラクロロメタンを用いる、特許請求の範囲第
   ７項記載の製造法。 ９、水溶性アルコールでの抽出を繰り返す、特許請求の
   範囲第３項書已敵の製造法。 Ｈｌ、　ｉ、Ｐ件アルコールとしてエタノールおよび（
   または）メタノールを用い、抽出釈度が一２０℃と＋６
   ０℃との間にある、特許請求の範囲第３項または第９項
   記載の製造法。 ｌ］、抽出温度が１０°Ｃと３０℃との間にある、特許
   請求の範囲第１Ｏ項記載の製造法。 １２、和製作用物質の抽出を粗製作用物質１ｇあたりア
   ルコール１〜３０ｍ１の割合で行なう、特許請求の範囲
   第３項、第９項、第１０項または第１１項記載の製造法
   。 １３、粗製作用物質の抽出を粗製作用物質１ｇあたりア
   ルコール２〜２０ｍ１の割合で行なう、特許請求の範囲
   第１２項記載の製造法。 １４、精製作用物質にリン脂質画分を］０：Ｊ〜１：２
   の割合で心安に応じて混合する、特許請求の範囲第３項
   記宙（（の製造法。 １５、精製作用物質にリン脂質画分を１　：１の割合で
   必要に応じて混合する、特許請求の範囲第１４項記載の
   製造法。 １６、特許請求の範囲第３項により州た作用物質０．０
   ５〜２ｇを１　ｍｄの脂質溶媒に溶かし、引き続いてＩ
   　：　０．５〜１：１０の割合でアセトンによって沈殿
   させて、リン脂質画分を得る、特許請求の範囲第１４項
   または第１５浄記制、の製造法。 １７、１　＋　３と１：５との間の割合でアセトンによ
   って沈殿させて、リン脂質画分を得ろ、特許請求の範囲
   第１６項記載の製造法。 １８、リン脂質画分の沈殿を一２０℃〜＋４０℃で行な
   う、特許請求の範囲第１６項または第１７項記載の製造
   法。 １９、　ＩＪン脂質画分の沈殿を２℃と１０℃との間で
   行なう、特許請求の範囲詰１８項記載の製造状。 ２０、等張の市、解質溶液もしくは却糖類溶液もしくは
   三糖類溶液より調ｊ１．１４された水性肺抽出物から、
   低いｇ値の遠心分離によって細胞砕片を分離し、 引永続き不溶性吸着剤と抽出物を接触させ、水またはア
   セトンで洗浄し、作用物質を有機溶媒またはその混合物
   で剥離させ、作用物質含有溶液を特に真空中で乾燥し、
   作用物質を呼吸器に適用するに適した形態にすることを
   特徴とする界面活性剤欠乏起因の呼吸困Ｗｔ症候群を治
   療するための薬剤の製造法。 ２１．１かく砕かれた肺を２〜１０倍ｖ９の等張角塩溶
   液または単糖類溶液もしくは三糖類溶液と攪拌して調製
   した水性肺抽出物を用いる、特許請求の範囲第２０項記
   載の製造法。 ２２、細かく砕かれた肺１ｋｇあたり０．５〜１０１の
   脂質溶媒を用いるか、もしくは水性肺抽出物を０．１２
   倍体積の脂質溶液で抽出する、特許請求の範囲第２０項
   または第２１項記載の製造法。 ２３、細かく砕かれた肺１ｋｇあたり１．５１の脂質溶
   媒を用いる、特許請求の範囲第２２］Ｊｊ記載の製造法
   。 ２４、脂質溶媒としてハロゲン化炭化水素または石油エ
   ーテルを用いろ、特許請求の範囲第２０項ないし第２３
   項のいずわが１項記載の製造法。 ２５、脂質溶媒としてジクロロメタン、トリクロロメタ
   ンまたはテトラクロロメタンを用いる、特許請求の範囲
   第２４項記載の製造状。 ２６、ケイ酸に基づく吸着剤として特に活性シリカゲル
   またはマグネシウムシリケートを用いる、特許請求の範
   囲第２０項記載の製造法。 ２７、吸着剤からの作用物質の剥離のために、割合２１
   １で塩化メチレンまたはクロロホルムとメタノールとか
   らなる溶媒混合物を用いる、特許請求の範囲第２０項ま
   たは第２６項記載の製造法。 ２８、作用物質混合物を適切な溶媒で溶かし、必要に応
   じて不溶性成分を除去し、無菌口過し、真空下で乾燥し
   、蒸留水で乳化して凍結真空乾燥することを特徴とする
   、リン脂質合邦４０〜７０係、タンパク質含量１．５％
   未満、コレステロール含量ｌＯ〜４０係、中性脂質含量
   ５〜３ｏ係である作用物質混合物を生理的キャリア流体
   １ｍｌあたり１〜５００ｍｇ含有すべき薬剤の製剤法。 ２り、適切な溶媒としてエタノールまたはクロロホルム
   を用いる、特許請求の範囲第２８項記載の製剤法。