JPS5845299A - 新規な表面活性物質、その製造法及びそれを含有する呼吸窮迫疾候群治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 その製造法及びそれを有効成分とする呼吸窮迫症候群治
療剤に関する。

呼吸窮迫症候群（以下ＲＤｓと略す）は、在胎期間が約
２８〜３６週の早産児及び敗血症、尿毒症、手術後の７
コツク肺又は毒劇物等の吸入による中毒症などに罹患し
た成人患者に多発する死亡率の高い疾患である。このＲ
ＤＳＯ主なる病因は、肺胞内の表面張力を迅速に且つ持
続的に低下させ、その結果呼吸運動を円滑ならしめる、
いわゆる肺表面活性物質が欠如することによる肺拡張不
全にあシ、その欠如は肺機能の未熟又は基本疾患に由来
することが解明されている。

従来、欠如した肺表面活性物質の代用物としては、哺乳
動物の肺臓組織に存在するリン脂質、中性脂質、総コレ
ステロール、炭水化物及び蛋白質を特定比率で含有する
表面活性物質（以下ＴＡ−５４６と略す）が特開昭５５
−１６０７２１号公報に記載されている。

しかしながら、本発明者らは追試実験により、このＴ　
Ａ　−　５４６には上記の成分のほかに更に１０チ未満
の遊離脂肪酸が併存することを確認し、他成分に対する
この遊離脂肪酸の含量の相対比率を１、０〜２７７％に
上昇させることによシ、ＴＡ−５４６の持つ表面張力低
下作用、表面拡散作用及び気液面吸着作用が増強される
ことを究明した。

本発明はこれらの知見に基づ（　Ｔ　Ａ　−　５４６の
改善に係るものであり、更には成人及び早産児のＲＤＳ
に有効な治療剤の提供に係るものである。

本発明により提供される表面活性物質の化学組成、理化
学的性質及び薬理学的性質を詳述する。

詳述するにあたり、公報に記載された又は追試実験で判
明したＴ　Ａ　−　５４６のこれらの事項を比較の・た
めに併記した。

〔Ｉ〕　　化学組成 本発明の表面活性物質は牛、馬、羊又は豚等の哺乳動物
の肺臓組織に存在する特定成分、即ちリン脂質、中性脂
肪、総コレステロー・ル、遊離脂肪酸、炭水化物及び蛋
白質を含有する。表１に乾燥総重量に対する上述の各成
分、中性脂肪を構成するアシルグリセロール及び総コレ
ステロールを構成スる遊離又はエステル体のコレステロ
ールの重量百分率、リン脂質総重量に対するリン脂質組
成分の重量百分率並びにホスファチノルコ’）ン総Ｍ量
に対する飽和脂肪酸残基ｆ：２個有するホスファチノル
コリン．の重量百分率を示す。リン脂質、炭水化物、蛋
白質及び水分、リン脂質組成分並びに飽和脂肪酸残基金
２個有するホスファチノルコリンの含量測定は前記公報
に記載された同様の方法で行った。中性脂肪、総コレス
テロール及び遊離脂肪酸の含量測定は、本発明物質をシ
リカグル６０の薄層板（層厚０．　２　５　ｍｍ、サイ
ズ５　ｘ　２　０　ｃｍ　：メルク社製）′ｆ：用いた
薄層クロマトグラフィー法で分別し、各成分に相当する
分画を分取したのち該分画中の含量を定量することによ
り行った。展開溶媒は石油エーテル−エーテル（容量比
３二１）からなる混合液を、発色剤はヨウ素を用いた。

定量は、中性脂肪についてはアセチルアセトン比色法（
クリ０力°シミ力・アクタ：　Ｃｔｉｎｉｃａ　Ｃｈｉ
ｍｉｃａＡｃｔａ；２２巻３９３頁１９６８年）に準じ
た方法を用いて、分別されたモノ、ジ及びトリアシルグ
リセロールをモノ、ジ及びトリオレオイルグリセロール
にそれぞれ換算したのち合算することにより行った。ま
た総コレステロールについては０−フタルアルデヒド法
（アナリテイヵル・バイオケミスト　リ　ー　：　　Ａ
ｎａｔｙｔｉｃａｔ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　　；
　２９　　巻　　１４３頁　ｌ９６９年）に準じた方法
を用いて、分別された遊離コレステロール及びコレステ
ロールエステルを前者はそのまま、後者はコレステロー
ルミルミ。

チン酸エステルに換算したのち合算し、遊離脂肪酸につ
いては板谷らの方法（ノヤーナル・オブ・リビド・リサ
ーチ：　Ｊｏｕｒｎａｔｏｆ　Ｌｉｐｉｄ　Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ：６巻　１６頁　１９６５年　）に準じて・ぐル
ミチン酸に換算することにより行った。

（以下余白） ＆　　ｌ ｌ〕　理化学的性質 （１）表面張力低下作用 本発明の表面活性物質を５４．０ｃｍの表面積を有する
生理食塩液に、１ｃｒＩＬあたり温度１５〜２５℃で＃
ｉ０．３〜０．８μｇ１３７℃では１．０〜２．０μｇ
それぞれ滴下し、該表面積を５４．０〜２１．６ｃｎＬ
２の範囲内で２〜５分かけて増減した際の表面張力を、
ウィルヘルミー法に準じて連続的に測定した（図１及び
３）、結果を表２に示す、生理食塩液の当初の表面張力
は１５〜２５℃では７２．　Ｏｄｙｎｅａ／ｃｍｓ３７
℃では７０．５　ｄｙｎ＠５Ａ−ＩｒＬであった。

表　２ 表２から本発明物質が生理食塩液の表面張力を、１５〜
２５℃では最大で４８０分の１、最小で１５分の１に、
３７℃では同じ＜３９．２分の１．１．９分の１に低下
させたことが認められる。

（１１）表面拡散作用 ３７℃に調整した生理食塩液の液面に、表面積１函２あ
たり０８〜１．５１℃ｇの本発明表面活性物質を滴下し
、滴下直後からの表面張力を垂直板法によシ経詩的に測
定した。当初７０．５　ｄｙｎｅｓＡｍであった生理食
塩液の表面張力は１０秒経過後には一定値となり、その
値は１８．０〜３５．１　ｄｙｎｅｓ／ＣＩｎの範囲内
にあった。これは、滴下された本発明物質がわずか１０
秒で気液界面に表面張力低下能の高い単分子膜を形成し
たこと、換言すれば、極めて迅速に表面に拡散したこと
を示している。ＴＡ−５４６を用いて同様にして測定し
た際の表面張力は、一定値になるまでに１２０秒かかシ
、その値は２６、３〜４　’８．　’１　ｄｙｎｅｓＡ
ｌｎと高かった。

（ｉｉｉ）　　気液面吸着作用 生理食塩液１　ｍｌあたり２０〜１００μｇの本発明表
面活性物質を含み、且つ浮遊物を有さない３７℃の懸濁
液を調製し、懸濁された本発明物質の気液面への吸着速
度をキングらの方法（アメリカン・ツヤ−ナル・オブ・
フィジオロノイ：　ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｔｏ
ｆ　Ｐｈｙｓｉｏｔｏｇｙ：　２２３巻７１５頁１９７
２年）を用いて調製直後からの表面張力の変動値より測
定した。当初７０．５　ｄｙｎｅｓ／ｃｒＩＬであった
生理食塩液の表面張力は３０秒経過後に、１６８〜３９
９ｄｙｎｅＳＡｒＩＬの範囲内で一定値となった。これ
は、懸濁状態にある本発明物質が３０秒で気液界面に浮
上吸着し、強い表面活性を持つ単分子膜を形成したこと
を示している。同様にして行ったＴＡ−５４６の実験で
は、表面張力は３３２〜５５．Ｏｄ　ｙｎ　ｅ　８／ｃ
ｍの範囲内で一定値を示し、その所要時間は１５０秒で
あった。

（ｉψ　比旋光度 比旋光度ｉ　ＤＩＰ−１８０型自動旋光型（日本分光株
社製）を用いて測定したところ、〔α］、、＋２．０〜
＋７．２　（Ｃ０，２ベンゼン）であった。

（Ｖ）　　溶解性等 本発明物質の水溶液は弱酸性を呈した。表３に各溶媒に
対する本発明物質１０１ｎ９の溶解性を示す。

判定は約１０秒間攪拌し、視覚的に溶解した時は＋、溶
解しなかった時は−で表示した。

（ｖｔ　　吸収ス被りトル 本発明物質の赤外線及び紫外線吸収スペクトルは図５及
び図６に示すとおりであった。

［１１１Ｄ　　薬理学的性質− （１）急性毒性 ５週令の雄性ＩＣＲ系マウス及びウィスター系ラットヲ
用いて本発明の表面活性物質の急性毒性を試験したとこ
ろ、経口ＬＤ５ｏ及び腹腔内ＬＤ５ｏはマウスでは３．
、ＯｇＡｙ以上及び２ｏＶｋｇ以上であり、ラットでは
４．０　Ｖｋｇ以上及び２５Ｖｋｇ以上であった。

（１１）　　亜急性毒性 本発明の表面活性物質を成、熟したウィスター系ラット
に毎日０．５　Ｖｋｇずつ１ケ月間１腹腔内投与したが
、体重の変化並びに主要臓器の肉眼的〜及び組線学的観
察における異常は認められなかった。

（１１０肺胞腔内牟面張力低下作用 ■　肺胞肺容量維持作用 在胎期間２７日の兎胎仔７匹を用いて、気道内圧の漸減
下における肺胞肺容量（以下ｐｖ凹曲線略す）を測定し
た。この測定は胎仔の頚部全切開し露出させた気管に接
続させた水マノメーターを用いて、本発明の表面活性物
質を投与したのち５分後から連続的に行った。気道内圧
は気管に接続させた２チヤンネル独立駆動シリンノポン
プ煮９４０（米国バーバード社製、）を用いて増減した
。

本発明物質の投与は該物質の濃度が１０〜１．５％（ｗ
／ｖ）になるように調製した生理食塩液懸濁液０４〜Ｑ
、　５　ｍｌを気道内に直接注入する方法で行ったっ上
述の測定条件は前記公報に記載されたものとほぼ同一で
ある。対照群の肺胞肺容量は本発明物質の懸濁液にかえ
て生理食塩水を用いた以外は同様にして測定した。肺胞
肺容量は体Ｎ１ｋｇあたりのミＩＪ　ＩＪットルで表示
した。表４に結果を示す。

（以下余白） 表　　４ ■　肺胞腔内圧低下作用 在胎期間２７日の兎胎仔５匹を用いて、人工呼吸下にお
ける一回換気量が体重１ｋｇあた。９１０ｉｕに維持さ
れる際の気道内圧を呼吸流量計ＭＦＰ−１１００（日本
光電株社製）で測定した。この測定は本発明の表面活性
物質の１．０　％　（ｗ７’マ）生理食塩液懸濁液０．
４１１７を気道内に注入したのち５分後に行った。

本発明物質を投与した際の気道内圧は８　（ｍ　Ｈ２Ｏ
でＴｏシ、一方Ｔ　Ａ　−５４６のそれは１２　ａｎ　
Ｈ，Ｏであ゛り（切　呼吸機能改善作用 ■　敗血症由来のＲＤＳへの効果 大腸菌の腹腔内投与により敗血症に罹患し、ついでＲＤ
Ｓを併発した成熟家兎を用いて、本発明の表面活性物質
の呼吸機能改善作用を試験した。

試験は上述の家兎３２匹を対照群（無投与群）、硫酸カ
ナマイとン単独投与群、本発明物質単独投与群、硫酸カ
ナマイシン及び本発明物質の併用投与群の４群に分け、
各群の呼吸改善度を比較することにより行った。病態家
兎の調製及び呼吸障害度の判定はキュエバスらの方法（
アーカイブス・オブ・サージェリー：　Ａｒｃｈｉｖｅ
ｓ　ｏｆ　Ｓｕｒｇｅｒｙ　：１０４巻　３１９頁　１
９７２年）に、血液中のエンドトキシンのサーキュレー
テイングタイター（Ｃｉｒｃｕｔａｔｉｎｇ　Ｔｉｔｅ
ｒ）の測定はレインホールドら。

の方法（プロシーディング・オブ・ザ・ソサイエティ・
フォー・エクスペリメンタル・ビオロノー・アンド・メ
ゾイスｙ　：　Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ
Ｓｏ’ｃｉｅｔｙ　ｆｏｒ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｔ
Ｂｉｏｔｏｇｙ　ａｎｄ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ；１３７巻
　３３４頁　１９７１年）にそれぞれ準じて行った。

処置はＲＤＳの発現前後２４時間以内に、本発明物質に
ついては５０〜１００　ｍｇＡｙを１回投与量とし、こ
れを１〜６回気道内に注入し、硫酸カナマイシンについ
ては８０〜１５０　ｍｆｇ−＋　２〜８回に分けて筋注
することにより行った。試験結果は表５に示すとおりで
あった。結果は処置後２日間経過した時の被検動物の生
死及び呼吸障害度で表示した。死亡例における呼吸障害
度は死亡直前時のもので示した。呼吸障害度はその数値
が大きいほど重篤であることを表わす。

（以下余白） 表　　５ 表５よシ明らかなように、本発明物質は硫酸カナマイシ
ンの併用ではほぼ完全に、単独でも予想以上に呼吸機能
を改善した。

■　成人のモデルＲＤＳへの効果 肺洗浄によシモデル的なＲＤＳに罹患したモルモット１
６匹を用いて、呼吸機能改善作用を試験した。試験は上
述の病態モルモットを２群に分け、呼吸管理下に一方は
そのまま６時間放置し、他方は該管理開始から３時間後
に本発明の表面活性物質を投与しそののち更に３時間放
置し、ついで脱血層殺し、その際に得られる各ｐｖ曲線
と別途に得られた正常モルモットの２７曲線とを比較す
ることによシ行った。病、態モルモットの調製及び呼吸
管理はラックマンらの方法（アクタ・アネスセシオロジ
ー・スカンノナビカ：　Ａｃｔａ　Ａｎａｅｓｔｈｅｓ
ｉｏｔｏｇｙＳｃａｎｄｉｎａｖｉｃａ＋　２４巻　２
３１頁　１９８０年）に準じて、２７曲線の測定は前記
とほぼ同様にして行った。投与は生理食塩液の１０％（
ｗ／ｖ）懸濁液に調整した本発明物質６０≠９を、気道
内に注入する方法をとった。表６にその結果を示す。

表６から明らかなように、本発明物質は呼吸機能をはは
正常にまで回復させた。

以上に詳述した化学組成、理化学的性質及び薬理学的性
質からみて、本発明の表面活性＠’ＪＡを包含する薬剤
は、効果が著明に且つ迅速に発現するＲ’ＤＳ治療剤と
いうことかで門る。

本発明によシ提供されるＲＤＳ治療剤は、早産児に対し
ては５０〜４００９、成人に対しては５００〜３０００
■の本発明表面活性物ＪＪ［ｔ−１１回投与蓋として含
有する。用法は上述の用量を水又は生理食塩液のような
電解質溶液に懸濁し、１０〜５０％（ｗ／ｖ）の濃度に
調整し、これを早産児には出生後７２時間以内に、成人
には呼吸障害の発現前後１２０時間以内に気道内に注入
又は噴霧させる。

投与回数は１〜１０回が適当である。患者の症状及び併
用療法に応じて、上述の用量、用法及び回数を変更して
もよい。成人に対しては基本疾患に有効な治療剤と併用
するのが望ましい。

本発明治療剤は必要に応じて安定剤、保存剤、等張化剤
、緩衝剤もしくは懸濁化剤等の医薬品添加物又は殺菌剤
を含有してもよい。剤形は液剤又は用量に懸濁して用い
る。粉末剤が適当である。

本発明治療剤はバイヤル瓶又はアンプル瓶等の気密容器
内に充填され、無菌製剤として保存される。

本発明９衣面活性物質の具体的な製造法を以下に詳述す
る。

（ａ）＠乳動物から摘出した肺臓を拳大の塊に分断し、
不要な血管、気管、脂肪体及び血液等を除去したのち肉
ひき機を用いて細断する。つきに得られた肺臓細片を生
理食塩液等の電解質溶液に０〜２０℃で１５〜１２０分
間攪拌下で接触させたのち、生成混合液から圧搾沖過に
より抽出液を採取する。哺乳動物としては牛、馬、羊又
は豚が適当であり、それらの乳幼仔を使用すれば更に有
利である。肺臓細片は抽出処理を行うまで凍結乾燥して
保存してもよい。

（ｂ）　　上述の抽出液を０〜１０℃で８０００〜２４
）　０００　ｒ、ｐ、ｍの回転速度で遠心分離し粗沈殿
物を得る。この粗沈殿物中に残存する不要な肺臓細片は
該沈殿物を生理食塩液等の電解質溶液に再懸濁し、これ
を５００〜２０００　ｒ、ｐ、ｍで遠心分離して除去す
る。

（Ｃ）ついでこの粗沈殿物を水に懸濁し、これに塩化す
）　ＩＪウム等を加えて液の比重ｆ：１．１０〜１２０
に調整する。この調整液を０〜１０℃で２０〜１８０分
間、５０００〜１３０００　ｒ、ｐ、ｍの回転速度で遠
心分離して３層に分け、上層の乳濁上薄部を分取する。

この乳濁上薄部は、これを１２．５〜２６０％（ｗ／ｖ
）の塩化す）　ＩＪウム水溶液に再懸濁し、中速回転で
の遠心分離を必要に応じて数回くり返すことにより精製
できる。

（ｄ）　　この乳濁上薄部を水に懸濁し、得られた懸濁
液を水に対して４〜１０℃で６〜２４時間、セロハン膜
を用いて透析し、透析内液を得る。−この透析内液をつ
いで凍結乾燥して粗乾燥物を得る。透析は乳濁上薄部に
含まれている不要の無機塩類及び低分子の水溶性有機物
の除去を目的とする。粗乾燥物の純度は、該乾燥物を生
理食塩液等の電解質溶液に再懸濁し、これを０．２５〜
０．８０　Ｍのショ糖溶液に積層したのち０〜６℃で１
〜２４時間、２２０００〜５００００　ｒ、ｐ、ｍで遠
心分離することによシ高めることができる。但し、この
純化処理は本発明の製造法において必須ｑものではない
。

（ｅ）上述の粗乾燥物を２０〜２００倍重量の酢酸エス
テルに一１０〜１０℃で懸濁し、３０〜６０分間放置し
たのち不溶物を採取する。この酢酸エステル不溶物を乾
燥し、ついで２０〜２００倍重量の混合有機溶媒に接触
させ、１０〜２０分開放置したのち精製涙液を得る。酢
酸エステルによる処理は過剰に残存する総コレステロー
ルの除去を、混合有機溶媒による処理は不要な蛋白質の
除去を目的とする。酢酸エステルとしては酢酸メチルエ
ステル、酢酸エチルエステル、酢酸プロピルエステル又
は酢酸ブチルエステルが、混合有機溶媒としてはクロロ
ホルム−メタノール（容量比２：ｌ；以下同様）、クロ
ロホルム−エタノール（２：１）、クロロホルム−イン
プロパツール（２：１）又１ｄエーテルーエタノール（
１：３）がそれぞれ適当である。ここで得られた精製涙
液を無菌試験法（第９改正日本薬局方Ｂ　−２３２頁）
に従って試験したところ無菌であったので、以下の処理
は無菌条件下で行った。

（ｆ）　　上述の精製ろ液を滅菌水で１〜２４時間洗浄
したのち減圧濃縮し、固形残渣を採取する。この残゛渣
が前記した本発明物質の化学組成を有する場合はそのま
ま凍結乾燥して本発明の製造法による最終製品とする。

しかしながら一般には、この残渣の化学組成において、
リン脂質含量が６８６チ未満、中性脂肪含量が０．３％
未満もしくは遊離脂肪酸含量が１０％未満である場合又
はリン脂質含量が６８６％以上であってもそのリン脂質
の主成分であるホスファチノルコリンの含量がリン脂質
総重量の５８４％に満たない場合、又はこれらの２種以
上に該当する場合が多い。これらの場合には不足してい
る当該成分を別途のホスファチノルコリン、中性脂肪又
は遊離脂肪酸で補充し、リン脂質、中性脂肪及び遊離脂
肪酸の含量を６８６〜９０７％、０３〜１３．０チ及び
１０〜２７．７％に、並びにホスファチジルコリンの含
量をリン脂質総重量の５８４〜８５．０％にそれぞれな
るように調整したのち凍結乾燥して最終製品とする。補
充するホスファチノルコリンとしてはノパルミトイルホ
スファチジルコリンが、中性脂肪としてはトリノンルミ
トイルグリセロール、トリステアロイルグリセロールモ
ジくハトリオレオイルグリセロール又はこれらの２種以
上からなる混合物が適当である。同じく遊離脂肪酸とし
ては・ぐルミチン酸、ステアリン酸もしくはオレイン酸
又はこれらの２種以上からなる混合物が適当である。

本発明を製剤例及び実施例をもって更に詳述する。

製剤例１ 正確に秤量した本発明の表面活性物質１０００ｍ９を無
菌下で３０ｍ１容量のバイヤル瓶内に粉末充填法を用い
て充填し、ついで圧検巻締法で密封した。これに無菌の
生理食塩液２５ｍ１を添付し用量に懸濁して用いる製剤
とした。

製剤例２ 本発明の表面活性物質６０ｍ９及び生理食塩液６ｍｌ　
’ｆｒ：　’１０　ｍｌ容量のアンプル瓶内に正確に秤
量し、該アンプル瓶を無菌下で溶封した。

実施例　１ （ａ）牛の摘出肺臓３２．０　ｋｇを水で洗浄し、付着
している血液等を除去し、ついでこれを拳大の肉塊に分
断しハサミを用いて不要な血管、気管等を切除した。こ
の肉塊を肉ひき機を用いて細断し、肺臓細片を得た。こ
の肺臓細片３０ｋｇに１２０ｊの生理食塩液を混和し、
水冷下撹拌し、ついで得られた混合液を沖過袋に入れて
圧搾濾過し抽出液を得だ。この操作は４回縁シ返し行っ
た。上述のようにして得られた抽出液は合算で１３０！
であった。

（ｂ）　　この抽出液を８０００　ｒ、ｐ、ｍで１時間
、４層℃で遠心分離し粗沈殿物を採取した。得られた粗
沈殿物を２０！の生理食塩液に懸濁した後、２０００　
ｒ、ｐ、ｍで１０分間、遠心分離し残存する組織片等を
沈殿物として除去した。上層懸濁液は再度８０００　ｒ
、ｐ、ｍで遠心分離し、粗沈殿物を揖採取した。この精
製操作は３回繰り返し行った。

（ｃ）上述のようにして得られた粗沈殿物を２０！の水
に懸濁し、これに５．７　ｋｌ？の塩化ナトリウムを加
えて液の比重を約１２０に調整した。この調整液を８０
０　Ｏｒ、ｐ、ｍで４５分間遠心分離して３層に分け、
乳濁上薄部を分取した。との乳濁上薄部を２６．０％（
ｗ／ｖ）の塩化ナトリウム水溶液１０！に再懸濁し、８
０００　ｒ、ｐ、ｍで４５分間遠心分離して精製した。

（ｄ）　　精製された乳濁上薄部を蒸留水に懸濁し、蒸
留水に対してセロハン膜を用いて透析し、透析内液を得
た。この透析内液を凍結乾燥したところ２２０ｇの粗乾
燥物を得た。

（ｅ）　　この粗乾燥物に５℃に冷却した酢酸エチルエ
ステル１１！を添加し、３０分間攪拌したのち減圧沢過
し不溶物を戸数した。この不溶物を乾燥したのち、これ
に７１のクロロホルム−メタノール（容量比２：１）の
混合溶媒を添加し、３０分間攪拌後に沖紙濾過し精製涙
液を得た。ｐ過残渣には再度、同混合溶媒７ｋを添加し
、３０分間（覚拌した後沖紙涙過し２次精製ろ液を得た
。この操作はもう１回線シ返し行い３次精製涙液まで得
た。

このようにして得られた精製涙液は合算して２１！であ
った。この精製涙液の微量を用いて無菌試験を行ったと
ころ無菌であることが確認されたので以下は無菌条件下
で操作した。− （ｆ）　　上述の精製涙液を減圧濃縮したところ３７０
ｇの固形残渣を得た。この固形残渣の微量を凍結乾燥し
リン脂質、中性脂肪及び遊離脂肪酸の含量を測定したと
ころ、乾燥総重量に対する百分率で７８．５％、１０３
％及び０５％であり、リン脂質総重量に対するホスファ
チノルコリン含量は５０．８俤であった。従って残りの
固形残渣にジパルミトイルホスファチジルコリン１２．
３．９及び、９ルミチン酸５．１ｇを添加し、これを蒸
留水に懸濁したのち凍結乾燥し、表面活性物質５４４ｇ
を得た。該物質の化学組成の測定結果は表７に示すとお
シであった。

実施例　２ 実施例１において（ｂ）工程の遠心分離の回転速度８０
００　ｒ、ｐ、ｍを１５００　Ｏｒ、ｐ、ｍに、（ｃ）
工程の遠心分離の回転速度８０００　ｒ、ｐ、ｍを５０
０Ｏｒ、ｐ、ｍに変更した以外はほぼ同様にして行い、
（ｆ）工程において乾燥総重量に対してリン脂質含量が
８６．３％、中性脂肪含量が０．１％及び遊離脂肪酸含
量が０．８％並びにリン脂質総重量に対するホスファチ
ジルコリン含量が５５．８％である固形残渣４４２ｇを
得た。従ってこの残直にジパルミトイルホスファチジル
コリン２Ｂ、１ｇ、）すＡルミトイルグリセロール１．
２．！ｉ’、）リオレオイルグリセロール１．３ｇ、／
９ルミチン酸６．４ｇ及びステアリン酸４０Ｉを添加し
たのち混合し、凍結乾燥して８５、２　、！７の表面活
性物質を得た。該物質の化学組成の測定結果は表７に示
すとおりであった。

実施例　３ 実施例１において、（ｂ）工程の遠心速度８０００ｒ、
ｐ、ｍを１８００　Ｏｒ、ｐ、ｍに（ｃ）工程の遠心速
度８０００　ｒ、ｐ、ｍを１２００ｏｒ、ｐ、ｍに、同
じ＜（ｃ）工程の比重の１２０を１１０に、同じ＜（ｃ
）工程の塩化ナトリウム水溶液の濃度２６．０チ（ｗ／
ｖ）を１３０チ（ｗ／ｖ）に変更した以外はほぼ同様に
して行い、（ｆ）工程において乾燥総重量に対してリン
脂質、中性脂肪及び遊離脂肪、酸の各含量が９２８％、
　０．２　％及び１５％であり、且つリン脂質総重量に
対するホスファチジルコリンの含量が５７．９％である
固形残渣２４０Ｉを得た。従って、との残渣にジパルミ
トイルホスファチジルコリン１１．０．９、トリノやル
ミトイルグリセロール１．０ｇ及びトリステアロイルグ
リセロール０７ｇを添加し、これを蒸留水に懸濁したの
ち凍結乾燥し、表面活性物質３６７ｇを得た。この物質
の化学組成は表７に示すとおりであった。

実施例　４ 実施例１において、（ｅ）工程の酢酸エチルエステル１
１！及びクロロホルム−メタノール（容量比２　：　ｌ
　）７７を、酢酸プロピルエステル１５！及びクロロホ
ルム−エタノール（容量比２：１’）１０ｋに変更した
以外はほぼ同様にして行い、（ｆ）工程で乾燥総重量に
対してリン脂質、中性脂肪及び遊離脂肪酸の各含量が７
２８％、１０．５％及び０２チであシ、リン脂質総重量
に対するホスファチノルコリン含量が４８１係である固
形残渣３２８Ｉを得た。従って、この残渣に゛ホスファ
チジルコリン５．９ｇ、ノＱルミチン酸２．１．９及び
オレイン酸０．５ｇを添加し、これを蒸留水に懸濁した
のち凍結乾燥し、表面活性物質４１３ｇを得た。この物
質の化学組成は表７に掲示した。

実施例　５ 実施例１において、（ｂ）工程の遠心速度８０００ｒ、
ｐ、ｍ　ｆ　２００００　ｒ、ｐａｍに（ｅ）工程のり
ｏｏホルムーメタノール（容量比２：１）７Ａｉエーテ
ル７エタノール（容量比１：３）１０＃に変更した以外
はほぼ同様にして行い、（ｆ）工程で乾燥総重量に対す
るリン脂質含量が８５．５％、中性脂肪含量が０１％及
び遊離脂肪酸含量が０．６％並びにリン脂質総重量に対
するホスファチジルコリン含蓄カ５４２チである固形残
渣２８．３　、Ｆを得た。従って、との残渣にホスファ
チノルコリン８．９，９．）！Ｊステアロイルグリセロ
ール５．９ｇ及びツクルミチン酸２．５Ｉを添加し、こ
れを蒸留水に懸濁したのち凍結乾燥して４５．６ｇの表
面活性物質を得た。この物質の化学組成は表７に掲示し
た。

実施例　６ 実施例１において、牛の摘出肺臓３２．０　ｋｇのかわ
力に馬の摘出肺臓３５．５　ｋｇを用いた以外はほぼ同
様にして行い、（ｆＪ工程において乾燥総重量に対する
リン脂質、中性脂肪及び遊離脂肪酸の含蓄が８０．１％
、０２％及ヒ０．９％並びにリン脂質総重量に対するホ
スファチノルコリン含量が５３．８％である固形残渣３
４．５．９を得た。従って、）・母ルミトイルホスファ
チジルコリン２１．０！９、）！Ｊ／ｅルミトイルグリ
セロール６．Ｏ，？、）リオレオイルクリセロール２．
０９、ノぐルミチン酸１．０．９．ステアリン酸　？及
びオレイン酸０．５．９を添加し、これを蒸留水に懸濁
したのち凍結乾燥し、表面活性物質６５．０　＆を得た
。この物質の化学組成は表７に掲示した。

実施例　７ 実施例１において、牛の摘出肺臓３２．０　ｋｇめかわ
シに緬羊の摘出肺臓２８．５　ｋｇを用いた以外はぼ同
様にして行い、（ｆ）工程において乾燥総重量に対する
リン脂質、中性脂肪及び遊離脂肪酸の含量並びにリン脂
質総重量に対するホスファチノルコリンの含量がそれぞ
れ５５．６　％　、　’１３．９チ及び１７４チ並びに
７０１％である固形残渣２８．３　ｇを得た。

従って、ジノｅルミトイルホスファチジルコリン１５．
５．９を添加し、これを蒸留水に懸濁したのち凍結乾燥
し４０．８．９’の表面活性物質を得た。この物質の化
学組成を測定したところ表７に示すとおりであった。

実施例　８ 実施例１において、牛の摘出肺臓３２．０　ｋｇのかわ
シに豚の摘出肺臓３０．０　ｋｇを用いた以外はほぼ同
様にして行い、（ｆ）工程で乾燥総重量に対するリン脂
質、中性脂肪及び遊離脂肪酸の含量並びにリン脂質総重
量に対するホスファチノルコリンの含量がそれぞれ８９
．３　％　、　０．２％及び０７％並びに７６８チであ
る固形残渣ｇを得た。従って、これにトリバルミトイル
グリセロール１０９、トリステアロイルグリセロール０
．５１Ｓパルミチン酸４２ｇ及びオレイン酸１．３！ｊ
を添加した。ここで得られた混合物を蒸留水に懸濁し、
凍結乾燥したところ表面活性物質３６８ｇを得た。該物
質の化学組成は表７に示すとおシであった。

実施例　９ （、）　　月令Ｏケ月の禎牛の摘出肺臓２．８　ｋｇ’
を水で洗浄し付着している血液等を除去し、ついでこれ
を拳大の肉塊に分断し、ハサミヲ用いて不要な血管、気
管及び脂肪体等を切除し、再度水で洗浄した。

この肉塊を肉ひき機で細断し、肺臓細片２．５　ｋｇを
得た。この肺臓細片を１５．ＯＡの生理食塩液に加え、
４℃で２時間攪拌し、得られた液を沖過袋に入れて１２
０ｋｇ／ｃＩｒＬの圧で圧搾濾過し抽出液を得た。

ｐ過残渣に５，０！の生理食塩液を注ぎ、再度圧搾濾過
して抽出液を得た。ここで得られた抽出液は全量で１９
５！であった。

（ｂ）　　上述の抽出液を１３００　Ｏｒ、ｐ、ｍテ４
０分間、５℃で遠心分離して粗沈殿物を得た。この粗沈
殿物に２．０にの生理食塩液を加えて懸濁したのち、５
℃で１０分間、７００　ｒ、ｐ、ｍで遠心分離し、残存
する組織片等を沈殿させて除去した。

（ｃ）残った上層懸濁液に塩化ナトリウムを少量ずつ添
加し、液の比重を１．１５に調整した。この調整液を１
０００　Ｏｒ、ｐ、ｍで３０分間、５℃で遠心分離して
３層にわけ乳濁上薄部を分取した。この乳濁上薄部を％
（ｗ／ｖ　）の塩化す）　ＩＪウム水溶液１、　ＯＡに
再懸濁し、１００００　ｒ、ｐ、ｍテ３０分間遠心分離
して精製した。

（ｄ）　　得られた乳濁上薄部を蒸留水に懸濁し、蒸留
水に対してセロハン膜を用いて透析し、透析内液を得た
。この透析内液を凍結乾燥したところ１９．５ｇの粗乾
燥物を得た、。

（ｅ）　　この粗乾燥物を５℃に冷却した酢酸エチルエ
ステル１２００　ｍｌに添加し、２０分間攪拌したのち
減圧沖過して不溶物を戸数した。この不溶物を乾燥した
のち、これに６５０　ｍｌのクロロホルム−メタノール
（容量比２：１）の混合溶媒を添加し、２０分間攪拌後
にｐ紙濾過し精製ｐ液６３０ｍｅを得た。このｐ液の微
量を用いて無菌試験を行い、無菌であることが確認され
たので以下は無菌条件下で操作した。

（ｆ）　　上述の精製ｐ液を減圧濃縮し、更に凍結乾燥
したところ１．６１の固形残渣を得た。この残渣のリン
脂質、中性脂肪及び遊離脂肪酸の総重量に対する重量百
分率並びにホスファチジルコリンのリン脂質総重量に対
する重量百分率は８３６％。

６４％及び５．７％並びに７５．８％であった。従って
、との残渣はそのまま最終製品とした。この製品の化学
組成は表７に掲示したとおりであった。

実施例　１０ 実施例９において、方今Ｏケ月の種牛の摘出月市臓２８
ｋｇのかわシに方今４ケ月の種牛のそれ３５に９を用い
た以外はほぼ同様にして行い、（ｆ）工程において乾燥
総重量に対するリン脂質、中性脂肪及び遊離脂肪酸の含
量並びにリン脂質総重量に対するホスファチジルコリン
の含量が９４８％、０４チ及び０５％並びに８０２係で
ある固形残渣３４ｇを得た。従って、この残直に・、９
ルミチン酸１３Ｉを添加し、蒸留水に懸濁したのち凍結
乾燥し４．７１１の表面活性物質を得た。この物質のイ
ヒ学組成は表７に掲示したとおシであった。

実施例　１１ 実施例９において、種牛の摘出肺臓ｉ−ｂ・わりに方今
３ケ月の仔豚の摘出肺臓２．０　ｋｇを用いた以外はほ
ぼ同様にして行い、（ｆ）工程で乾燥総重量に対するリ
ン脂質、中性脂肪及び遊離脂肪酸の含量１＝７８．３％
、１．８％及び１５５％であシ、１ノ／Ｊｌ旨質総重量
に対するホスファチジルコリンの含量〃；５４８チであ
る固形残渣２８Ｉを得た。従って、この残直にホスファ
チジルコリン０．６９を添加し、これを蒸留水に懸濁し
たのち凍結乾燥し３４ｇの表面活性物質を得た。該物質
の化学組成は表７に掲示した。

（以下余白）

【図面の簡単な説明】

図１〜４は生理食塩液の表面張力をアコマウィルヘルミ
ーバランス（アコマ医学工業株製）で測定Ｌ、Ｘ−Ｙレ
コーダー・モデルＦ−３Ｄ　（理研電子ｆ→製）を用い
て記録したヒステリシス曲線の出現領域（斜線部分）を
・示す。図１は本発明の表面活性物質を、図２はＴ　Ａ
　−５４６’ｉ　１５〜２５℃で表面積１ｃｒｎ＠ｌυ
０３〜０８μｇｉＴ下した際のものを示す。また、図３
は本発明物質を、図４はＴＡ−５４６を３７℃で表面積
１ｃＩｒＬあたシ１０〜２０μｇ滴下したーのものを示
す。縦軸は表面張力を横軸は測定時の最大表面積（５４
，０ｃ７ｎ）の百分率で表わした表面積を示す。各図に
おいて、出現領域内の太実線は、得られたヒステリシス
曲線の１実例を示す。図５は本発明物質のＫＢｒ錠法Ｋ
１る赤外緑吸収スペクトルを、図６は本発明物質をシク
ロヘキサン−エチルアルコール（ｌ比１　：　１　）（
７）混合溶媒に溶鍛し、０．１％（Ｗ／ｖ）の濃度に調
整したものを用いて測定した紫外線吸収ス被りトルーを
それぞれ示す。 図面の浄Ｗ＜内容に変更なし） メ ｅ　　ｏ　　　　ＯＯｏ　　　　ｏ　　　　ＯＯく　ω
　　　−寸　　の　　へ　　− ψ 図　６ 暖光度 手　　続　　補　　正　　書（方式） ％式％ １、事件の表示 特　願　昭５６−１４１，６７２　　号２発明の名称 新規な表面活性物質、その製造法及びそれを含有する呼
吸窮迫症候群治療剤 ３補正をする者 ７、補正の内容　別紙のように願書、明細書及び回向の
浄簀（内容に変史なし）を提

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）哺乳動物の肺臓組織に存在するリン脂質、中性脂
   肪、総コレステロール、遊離脂肪眩い炭水化物及び蛋白
   質を含有する表面活性物質であって、該物質の乾燥総重
   量に対する各成分の重量自分率が、リン脂質は６８６〜
   ９０．７％、中性脂肪は０３〜１３０％、総コレステロ
   ールはｏ、　ｏ〜８０チ、遊離脂肪酸は１０〜２７．７
   ％、炭水化物は０１〜２０チ及び蛋白質は０．０〜３５
   チであることを特徴とする表面活性物質。 （２）　　（ａ）哺乳動物の肺臓細片を電解質溶液に接
   解させて抽出液を得る工程、（ｂ）該抽出液を遠心分離
   し粗沈殿物を得る工程、（ｃ）該粗沈殿物の水性懸濁液
   の比重を塩化す）　ＩＪウムを添加して調整し、得られ
   た調整液を遠心分離して乳濁上薄部を分取する工程、（
   ｄ）該乳濁上薄部の水性懸濁液を透析して透析内液を得
   、ついでこの内液を凍結乾燥して粗乾燥物を得る工程、
   （ｅ）該粗乾燥物を酢酸エステルに接触させ酢酸エステ
   ル不溶物を採取し、ついでこの不溶物を混合有機溶媒に
   接触させたのち精製ｐ液を得る工程、及び（ｆ）該精製
   ろ液の固形残置をその１ま又は該残渣に必要に応じて所
   要量の別途のリン脂質、中性脂肪及び遊離脂肪酸を補充
   し、最終製品に含有されるリン脂質、中性脂肪及び遊離
   脂肪酸の重量をそれぞれ６８．６〜９０７％。 ０３〜１３．０％及び１．０〜２７７％に、並びにリン
   脂質に含有されるホスファチジルコリンの重量を５８４
   〜８５０％に調整したのち凍結乾燥することを特徴とす
   る表面活性物質の製造法。 （３）哺乳動物の肺臓組織に存在するリン脂質、中性脂
   肪、総コレステロール、遊離脂肪酸、炭水化物及び蛋白
   質を含有し、全体の乾燥総重量に対するこれら各成分の
   重量百分率が上述の順に６８６〜９０．７チ、００〜１
   ３．０％、０３〜８．０％。 １．０〜２７，７％、０．１〜２．０チ及びＯＯ〜３５
   チである表面活性物質を、有効成分として含むことを特
   徴とする呼吸窮迫症候群治療剤。