JPS59164724A - サ−フアクタント及びそれを含有する呼吸窮迫症候群治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は肺表面活性を有するサーファクタントに関し、
更に詳しくは、コリンホスホグリセリド。

酸性リン脂クリ、脂肪酸類及びリポ蛋白質をそれぞれ特
定比率で含有するサーファクタント及び該サーファクタ
ントを有効成分とする呼吸窮迫症候群治療剤に関する。

肺胞腔内の表面張力を低下させる物質、いわゆる肺表面
活性物質の欠如は肺拡張不全をもたらし。

生命の維持に不可欠な肺呼吸が損われる。かかる症状を
呈するもｅは呼吸窮迫症候群（以下ＲＤ８と略す）と総
称され、早産児のみならず細菌感染。

ガス中拷又は外傷後の成人患者にも多発することが知ら
れている。

近年、ＲＤ８の治療においては欠如した肺表面活性物質
を代用物で補充する方法が重要視され。

その代用物となりうるための一定の理化学的基準が過去
の肺表面活性物質に関する多くの研究により解明されて
来た。その主要な基準のおおよそをまとめれば、■生理
食塩液の表面張力を１０ｄｙｎｅｓ々以下番こ低下させ
る作用をもち（これが最も重要）。

■迅速に気液面こと吸着拡散する性質を有し、（２）良
好な表面張カー表面積ヒステリシス曲腺（以下−ｒｐに
ヒステリシス曲線と略す）を示すという三点である（　
Ａｍｅｒｉｃａｎ　、Ｔｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈｙｓ
ｉｏｌｏｇｙ　２２３巻３号７１５頁１９７２年、引ｏ
ｃｈｉｍｌｃａ　ｅｔ　１ｌｉｏ　−ｐｈｙｍｉｃｍ　
Ａｃｔａ　３４４巻２４１頁１９７４年、　ＴｈｅＮｅ
ｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉ
ｃｉｎｅ　’ｌ　８Ｑ巻１２９８頁１９６９年）。

肺表面活性物質の代用物となりうる公知物質としては、
ホス７アチジルコリン及びホス７アチジルグリセロール
の二成分からなる混合物（以下ＰＣ−ＰＧ混合物と略す
；　Ｐｅｄｌａｔｒｌｃ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ１１巻５７
３頁１９７９年）、主にジパルミトイルホス７アチジル
コリン及び脂肪アルコールからなる組成物（１ν下Ｔ）
ＰＰＣ組成物と略す；特開昭５７−９９５２４号公報）
及び哺乳動物の肺臓組織に存在するリン脂質、中性脂質
、総コ１／ステロール、炭水化物及び蛋白質を特定比率
で含有する物質（以下ＴＡ−５４６と略す；特開昭５５
−１６０７２１号公報）などが報告されている。しかし
ながら。

本発明者らの追試実１験によれば、ＰＣ−ＰＧ混合物は
生理食塩液の表面張力をＩ　Ｑ　ｄｙｎｅｓ／ｃｒｎ以
下にまで低下させる作用はないこと、またＤＰＰＣ組成
物は気液面への吸着拡散速度が遅く、シかもヒステリシ
ス曲線が良好ではないことが判明した。

従って、これらは、その化学組成が肺表面活性物質の主
要成分からなるもの又は含むものであるにもかかわらず
、上記基準を満足するものではない。

一方、上記基準に適合するＴＡ−５４６においても、そ
の化学組成は複雑で、肺表面活性に影響を及ぼす不必要
な成分も含まれていることが予想される。

本発明者らは肺表面活性物質及びＴＡ−５４６を構成す
る個々の成分について詳細に研究した結果、肺表面活性
を示すのに不可欠な成分はジパルミトイルホス７アチジ
ルコリンなどのコリンホスホグリセリド、ホスファチジ
ルグリセロール又はホス７アチジルセリンなどの酸性リ
ン脂質、バルミチン酸などの脂肪酸類及び哺乳動物の肺
臓由来のリボ蛋白質の四成分であり、これらの成分が特
定比率で混在する場合に一体となって肺胞腔の気液面に
一種の膜を形成し９表面張力を低下させることを知り本
発明を完成した。

本発明によれば、コリンホスホグリセリド、酸性リン脂
質、脂肪酸類及び哺乳動物の肺臓由来のリボ蛋白質を主
番こ含有し、総重量に対するこれらの含量が、コリンホ
スホグリセリドは５０．６〜８５．。

チ（Ｗ／Ｗ）　、酸性リン脂質は４５〜３７６係（Ｗ／
Ｗ）。

脂肪酸類は４６〜２４６　ｆ、　（ｗ、Ａ）　、　リボ
蛋白質はα１〜１α０４　（ｗＡｐｉ）であることを特
徴とするサーファクタントが提供される。更に本発明に
よれば該サーファクタントを有効成分として含むときを
特徴とする呼吸窮迫症候群治療剤が提供される。

本発明サーファクタントにおいて、コリンホスホグリセ
リドは肺胞腔内の気液面に形成される膜の主構成成分で
あり、酸性リン脂質は形成された膜を安定化する成分で
あり、脂肪酸類及びリボ蛋白質は共に気液面における上
述二成分の吸着拡散に関与し、かつ肺胞収縮時ζこおけ
る表面張力低下効果を助長する成分であると考察される
。

本発明サーファクタントにおいて使用できるプリンホス
ホグリセリドトシては、１．２−レバル２トイルグリセ
日−（３）−ホスホコリン（別名ジパルミトイルホスフ
ァチジルコリンＬｌ、２−ジステアロイルクリセロ−（
３）−ホスホコリン、１−バルミトイル−２−ステア四
イルグリセロ−（３）−ホスホコリンもしくは１−ステ
ア四イル−２−パルミトイルグリセロー（３）−ホスホ
プリンなどのような１，２−ジアシルグリセＥ２−　（
３）−ホスホコリン、１−ヘキサデシル−２−バルミト
イルグリセロ−（３）−ホスホコリンもしくは１−オク
タデシル−２−バルミトイルグリセロ−（３）−ホスホ
コリンなどのような１−アルキル−２−アシルグリセロ
−（３）　−ホスホコリン又は１．２−ジヘキサデシル
グリセロ−（３）−ホスホコリンなどのような１．２−
ジアルキルグリセ０−（３）−ホスホコリンが適当であ
る。これらの化合物についてはグリセロール残基の２位
の炭素ζこ基づく光学異性体が知られているが２本発明
サーファクタントにおいては９体、Ｌ体又は９体及びＩ
・体が混在しているいわゆるり、Ｌ体のいずれを問わず
使用することができる。このほかにコリンホスホグリセ
リドとしては、上述の単品からなるコリンホスホグリセ
リド以外番こ、炭素数が１４〜２４個のアシル基、好適
には飽和アシル基を２個有する１、２−ジアシルグリセ
ロ−（３）−ホ該混合物と上述の単品との混合物も使用
するこさができる。

酸性リン脂質としては、１．２−ジアシル−３・ｎ−グ
リセロ−（３）−リン酸（別名り一α−ホスファチジン
酸）、１．２−ジアシル−５ｎ−グリセロ−（３）−ホ
スホ−Ｌ−セリン（別名ホスファチジルセリン）、１．
２−ジアシル−＄ｎ−グリ七四−（３）−ホスホ−＄ｎ
−グリ七四−ル（別名ホスツアチジルグリセロール）又
は１．２−ジアシル−ａｎ−グリセロ−（３）−ホスホ
−（１）　−Ｌ　−ｍ　ｙ　ｏ−イノシトール（別名ホ
スファチジルイノシトール）が適当である。これらの化
合物において、１位及び２位は同一種類又は異なる種類
のアシル基でそれぞれ置換されていてもよい。ここでの
アシル基としては炭素数が１４〜２４個のものが適当で
ある。

次に、脂肪酸類としては、遊離脂肪酸、脂肪酸のアルカ
リ金桝塩、脂肪酸アルキルエステル、脂肪酸グリセリン
エステルもしくは脂肪酸アミド又はこれらの二種以上か
らなる混合物、更には脂肪アルコール又は脂肪族アミン
が適当である。本明細書において「脂肪酸類」とは、こ
こでいう脂肪アルコール及び脂肪族アミンも包含する意
味である。遊離脂肪酸としてはパルミチン酸、ステアリ
ン酸又はオレイン酸が適当であるが、パルミチン酸が好
適である。脂肪酸のアルカリ金属塩としてはパルミチン
酸ナトリウム又はステアリン酸ナトリウムが、脂肪酸ア
ルキルエステルトシてはパルミチン酸エチルエステルが
、脂肪酸グリセリンエステルとしてはモノパルミチン又
はモノステアリンが、脂肪酸アミドとしてはパルミチン
酸アミドがそれぞれ適当である。脂肪アルコールとして
はヘキサデシルアルコール又はオクタデシルアルコール
が、脂肪族アミンとしてはヘキサデシルアオンが適当で
ある。

上述のコリンホスホグリセリド、酸性リン脂質及び脂肪
酸類は動植物から分離された製品、半合成品又は化学合
成品のいずれでもよく、それらの市販品を使用すること
ができる。

本発明サーファクタントにおいて使用できるリボ蛋白質
としては、哺乳動物の肺臓から以下に説明する方法によ
り製造されるものが適当である。

〔リボ蛋白質の製泄法〕

（ａｌ　　牛、馬、羊又は豚等の哺乳動物から摘出した
肺臓を重大の塊ｌこ分断し、不要な血管、気管、脂肪体
及び血液等を除去したのち肉ひき機を用いて細断する。

つぎに得られた肺臓細片を生理食塩液に０〜２０Ｃで１
５〜１２０分間攪拌下で接触させたのちこれを圧搾濾過
し、粗抽出液・を採取する。

（ｂ）　　この粗抽出液をθ〜１０Ｃで８０００〜２０
０００ｒ、ｐ、ｍの回転速度で遠心分離し粗沈殿物を得
る。

粗沈殿物中に残存する不要な肺臓組織片は該沈殿物を生
理食塩液等の電解質溶液に再懸濁し、これを５００〜２
０　Ｑ　Ｏｒ、ｐ、ｍで遠心分離して除去する。

（０１ついでこの粗沈殿物を水に懸濁し、これに塩化ナ
トリウムを加えて液の比重を１．１０〜１．２０に調整
する。この調整液をＯ〜１０ｔＺ”で２０〜１８０分間
、１５０００〜１３０００ｒ、ｐ、ｍの回転速度で遠心
分離して二層に分け、上層の乳濁上薄部を分取する。・ （ｄｉ　　この乳濁−ヒ薄部を水ｌこ懸濁し、得られた
懸濁液を水に対して４〜１０Ｃで６〜２４時間、セロフ
ァン膜を用いて透析し、透析内液を川る。この透析内液
をついで凍結乾燥して粗乾燥物を得る。

（６１得られた和乾燥物を２０〜２００倍重年の酢酸エ
チル又はアセトンに一１０〜１０Ｃで接触させ、３０〜
６０分間攪拌したのち不溶物を採取する。この不溶物を
乾燥し、ついで８０〜２００倍重量のクロロホルム−メ
タノール混合液（容量比２：１）に接触させ、１０〜４
０分間攪拌したのち抽出Ｐ液を採取する。

げ）　この抽出耐液を減圧乾固し、得られた固形残渣を
２〜１５化市♂−２好適には５〜８倍重量のクロロホル
ム−メタノール混合液（容ｉ比２：１乃至４：１）に溶
解する。この溶液をセファデックスＬ　Ｈ−２０、同Ｌ
　Ｈ−６０又は同Ｇ−２５（７アルマシア、ファインケ
ミカルイ十η提）などのようなデキストランゲルを担体
としたカラムに付してゲルＦＪし、ボ・ｆドボリューム
画分を採取する。

使用するデキストランゲルカラムは予め固形残渣を溶解
する上述の混合液と同一の溶媒で平衡化しておくのが望
ましい。デキストランゲルのカラムベッド体積はゲル濾
過しよう吉する固形残渣１２に対して６００罰以上ζこ
なるようにし、該カラムのデキストランゲル層の長さは
カラム直径の大小を問わず５０ＧＦ１Ｊｇｔ上、好適に
は８０ｆｆｉ以上になるようにするのが適当である。

（ｇｌ　　上述のボイドボリューム画分を減圧乾固し。

ついでこれを水ｌこ懸濁したのち凍結乾燥するとリボ蛋
白質が淡黄褐色乃至黄褐色の粉末として得られる。この
リボ蛋白質の理化学的性質を次に列挙する。

〔リボ蛋白質の理化学的性質〕

（１）　　分子量 ５ＤＳ−ゲル雷４気泳動法（別冊蛋白質核酸酵素；生体
膜実験法（上）　２３０頁１９７４年）に準じた方法に
より測定した分子量は３０，０００〜３８．０００であ
る。

（ｉｉ）化学組成 このリボ蛋白質の化学組成比は第１表に示すとおりであ
る。同表において２組成比はリボ蛋白Ｔ１の総重量・ｌ
こ対する各組成分の重量百分率である。

リン脂質外の重量はリボ蛋白質中のリン含量をキングら
の方法（Ｂｉｏｃｈｅｍｌｃａｌ　Ｊ＋）ｕｒｎａｌ　
２５巻２９２頁１９３２年）に準じた方法で測定し、そ
のリン含量値屹２５を乗じて求めた。蛋白室外の重量は
デユーソー１グリープ方法（Ｄｕｌｌｅｙ−Ｇｒｉｅｖ
ｅ方法；Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｌｏｃｈｅｍｌｓｔ
ｒｙ　６４巻１３６頁１９７５年）により宇祭し、牛血
清アルブミンに換算して求メた。水分重用はカールフィ
ッシャー法で測定した。なお不明組成分については、リ
ボ蛋白質の総重量と上述のようにして求めたリン脂質分
、蛋白室外及び水分の合計重量との差をその重量とした
。

第　　１　　表 （ｉの比旋光度 〔α）７１．　４Ｑ°〜−８５゜ 測定溶媒は１％ドデシル硫酸ナトリウム水溶液器はＤＩ
Ｐ−１８０型自動旋光計（１１本分光■社製）を用いた
。

（ｉｖ）吸収スペクトル 赤外線吸収スペクトル及び紫外線吸収スペクトルは図４
及び図５に示すとおりである。

（Ｖ）溶解性等 クロ日ホルム、ベンゼン、メタノール、エタノール、ジ
メチルスルホキシド及び水に不溶。クロ四ホルムーメタ
ノール混合液（容量比２：１乃至４：１）にはｏ、　ｉ
％（Ｗ／ｖ）濃度では溶解する。α１規定水酸化す）　
ＩＪウム水溶液にも不溶。このリボ蛋白質は水及び含水
有機溶媒には不溶のため、それの酸性、塩基性、中性の
区別はできない。

（ｖｌ）呈色反応 キサンドブ四ティン反応は陽性。しかし、ビュウレット
反応については陽性、陰性の明確な判定はできない。

上述したような理化学的性質を有するリボ蛋白造するこ
とができる。この場合には人羊水を適当量採集し、これ
を上述した製造法の（ｂｌ工程における粗抽出液の代り
に用い、以下同様に処理することにより製造する。

本発明サーファクタントは以上において説明したコリン
ホスホグリセリド、酸性リン脂質、脂肪酸類及びリボ蛋
白質を混合することにより製造することができる。混合
比は最終生成物の乾燥総重量に対するこれらの成分の重
量比率がコリンホスホグリセリドは５１Ｌ　６〜８５．
０　％　（Ｗ／ｗ）　＊酸性リン脂質は４５〜３７６％
（ｗ／ｗ）、脂肪酸類は４６〜２４６％（Ｗ／Ｗ）　、
　　リボ蛋白質はα１〜１α０％（ｗ／Ｗ）となるよう
に設定するのが適当である。この混合比以外で製造した
サーファクタントでは表面活性が劣化する傾向が認めら
れた。

混合方法としては、上述の四成分をそのまま練り合せた
のち乾燥してサーファクタントとする方法又は四成分を
有機溶媒に溶解して混合し、この溶液を減圧乾固し、得
られた残留物を適当な懸濁溶媒を用いて懸濁し、ついで
凍結乾燥する方法（以下溶液法と略す）のいずれでもよ
いが、得られたサーファクタント中の四成分が生理食塩
液に均質に懸濁されやすいという理由から溶液法が好適
である。溶液法において四成分を混合するのに用いる有
機溶媒としてはクロ四ホルムーメタノール混合液（容量
比２：１乃至４：１）が適当である。

また懸濁溶媒としては水又は水−エタノール混合液（容
量比４：１乃至２０：１）が適当であるが。

水−エタノール混合液が好適である。懸濁は３０〜６０
Ｃ９好適匿は４０〜５０Ｃで、５〜６０分間、好適には
１５〜３０分間かけて行うのが望ましい。この溶液法に
より得られるサーファクタントには製法上、微量の水分
の残存は避けられないが、その残存重量比率が総重量に
対して５．０　％　（Ｗ／Ｗ）以下になるまで乾燥する
のが望ましい。かかる程度まで乾燥すれば、水−エタノ
ール混合液を用いる場合でもエタノールの残存は検出不
能となる。

次に、このようにして製造された本発明サーファクタン
トの表面活性及び薬理学的性質を詳述する。

ＣＩ）　　表面活性 （１）　　表面張力低下作用 本発明サーファクタントを５４０ｍの表面積を有する生
理食塩液に、１ｄあたり１．０〜２．０μ２滴下し、３
７Ｃで５該表面積を５４０〜２　Ｌ６１１’ｆｆｌの範
囲内で２〜５分かけて増減した際の表面張力をウイルヘ
ルミー法に準じて連続的に測定した（図１）。また同様
にしてＰＣ−ＰＧ混合物及びＤＰｐｃ組成物の各代表例
並びにＴＡ−５４６のヒステリシス曲線も比較のために
測定した（図２及び３）。ＰＣ−ＰＧ混合物の代表例と
してはホスファチジルコリンとホスファチジルグリセ四
−ルとの混合比がそれぞれ９０％（Ｗ／ｗ）及び１０％
（Ｗ／ｅＷ）からなる組成のものを、ＤＰＰＣＩｆＪ１
成物のイ（表側としてはジパルミトイルホスファチジル
コリンとヘキサデシルアルコールとの混合比がそれ、ぞ
れ８２％　（Ｗ／Ｗ）及び１８　％　（Ｗ／Ｗ）からな
る組成のものを用いた。結果を第２表に示す。なお３７
ｔｌ’における生理食塩液の当初の表面張力は７０．５
　ｄｙｎｅｓ／Ｃｒｎであった。

第　　２　　表 第２表から本発明サーファクタントが生理食塩液の表面
張力を最高で１７ａ３分の１に、最低で２．０分の１に
低下させたことが認められる。

（ｉｉ）　　気液固拡散作用 生理食塩液の液面に９表面積１ｄあたり０．８〜１．５
μ２の本発明サーファクタントを滴下し２滴下直後から
の表面張力を垂直板法により経時的に測定した。測定湯
度は３７ｒとした。結果を第３表に示す。同表には、同
様にして測定したＰＣ−ＰＧ混合物及びＤＰＰＣ組成物
の各代表例並びにＴＡ−５４６の結果を併記した。ＰＣ
−ＰＧ混合物及びＤＰＰＣ組成物の代表例としては前記
と同一組成のものを用いた。表中到達時間とは、試料の
滴下直後から表面張力が一定値にまでに要する時間をい
い、平衡表面張力とはその時の値を意味する。

（以下余白） 第　　３　　表 第３表から明白なように本発明サーファクタントは３０
〜１００秒という短時間で気液面に一種の膜を形成し１
表面張力を低下させたことが認められる。

（ｉｉｉ）　　気液面吸着作用 、１．ｍｌあたり２０〜１００μｔの本発明サーファク
タントを含有する３７ｒの生理食塩液懸濁液を調製し、
ａ：濁された本発明サーファクタントの気液面への吸着
速度を測定した。吸着速度はキングらの方法（Ａｍｅｒ
ｉｃａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇ
ｙ　２２３巻７１５頁１９７２年）を用いて懸濁液調製
直後からの表面張力の変動値より求めた。当初７α５ｄ
　ｙｎ　ｅ　ｓ／ｃｍであった生理食塩液の表面張力は
３０〜１２０秒経過後に、　　２２．５〜４０．１　ｄ
ｙｎｅｓ、Ａｒ＋の範囲内で一定値きなった。これは懸
濁状態にある本発明サーファクタントが３０〜１２０秒
で気液面に浮上吸着し９強い菱面活性を持つ一種の膜を
形成したことを示している。同様にして試験したＴＡ−
５４６においては１表面張力は３８．２〜５５．Ｏｄ　
ｙ　ｎ　ｅ　ｓ７ｆｍの範囲内で一定値を示し、その所
要時間は約１５０秒であった。

〔■〕　　薬理学的性質 （ｉ）　　急性毒性 ５週令の雄性ＩＣＲ系マウス及びウィスター系ラットを
用いて本発明サーファクタントの急性毒性を試験した。

マウスでの経口ＬＤ、。及び腹腔内ＬＤ、。

は２．５〜１０．　Ｏｆ／／に９及び１．４〜５．０９
７に９であり。

ラットでのそれらはＬ３〜５．０　ｙＡｙ及びＬ２〜２
．６９７ｋｇであった。

（ｉｉ）　　亜急性毒性 毎日２８０〜６ｏ　Ｏ吟勺ずつ１ケ月間９本発明サーフ
ァクタントをウィスター系成熟ラットに腹腔内投与した
が１体重の変化並びに主要臓器の肉眼的及び組織学的観
察における異常は認められなかった。

（ｉｉｉ）　　肺胞腔容量維持作用 在胎期間２７日の兎胎仔５匹を用いて、気道内圧の漸減
下における肺胞腔容量（以下肺容量と略す）を測定した
。この測定は胎仔の頚部を切開し露出させた気管化接続
させた水マノメーターを用いて２本発明サーファクタン
トを投与したのち５分径′から連続的に行った。気道内
圧は気管化接続させた２チヤンネル独立駆動シリンジボ
ンＡ９４０（米国バーバード社製）を用いて増減した。

本発明サーファクタントの投与はその濃度がＬＯ〜ａ０
１　（Ｗ／Ｖ）　Ｊどなるよう化調製した生理食塩液懸
濁液つた。対照群の肺容量は本発明サーファクタントの
懸濁液にかえて生理食塩液を用いた以外は同様にして測
定した。肺容量は体重１ｋｇあたりのミリリットルで表
示した。第４表に結果を示す。同表には同様にして測定
したＤＰＰＣ組成物の代表例（組成は前記と同じ）及び
ＴＡ−５４６の結果を併記した。

（１ソ下余白） 特開昭５９−１６４７２４（８） 田Ｃ） ・　ｔｌ □、ｅＱ　　　　へ　　　四　　　−−（ｉｖ）　　モ
デルＲＤＳにおける呼吸機能改善作用１０〜１２週令の
モルモットを肺洗浄してモデル的なＲＤＳに罹患させ、
これを用いて呼吸機能改善作用を試験した。試験は上述
のＲＤ　８モルモット８匹を呼吸管理下に３時間放置し
たのち本発明サーファクタント４０〜１００　ｍ１Ａ９
を投与し。

ついで更に３時間放置して脱血層殺し、その際に得られ
る肺容量を測定することにより行った。正常群としては
、同週令の正常モルモット１０匹をそのまま、対照群と
してはＲＤ８モルモット８匹を呼吸管理下に６時間放置
したのち脱血層殺してその際の肺容量を測定した。ＲＤ
８モルモットの調製及び呼吸管理はラックマンらの方法
（ＡｃｔａＡｎｓ＠ｔｈｅｓｌｏｌｏｇｌｃａ　５ｃａ
ｎｄｌｎａｖｌｃａ　２４巻２３１頁１９８０年）に準
じて行った。投与は本発明サーファクタントの濃度が１
．０〜ａ　Ｏ％　（Ｗ／Ｖ）になるようｌｌ１１１！ｔ
、た生理食塩液懸濁液を気道内に直接注入する方法をと
った。肺容量の測定は前記とほぼ　２６− （以下余白） ・　−２７一 第５表から本発明サーファクタントは呼吸機能をほぼ正
常にまで回復させたことが認められる。

（Ｖ）　　敗血症由来の几ＤＳにおける呼吸機能改善作
用 本発明サーファクタントの呼吸機能改善作用を大腸菌の
腹腔内投与により敗血症ζこ４’＋ｌ’患し、ついで■
（・ＤＳを併発した成熟家兎を用いて試験した。

試験は上述の家兎６匹を一群として無没力群、硫酸カナ
マイシン単独投与群１本発明ザー７アクタント単独投与
群及び硫酸カナマイシンと本発明サーファクタントとの
併用投与群の四群に分けて行った。敗血症由来のＲＤＳ
家兎の調製及び呼吸障害度の判定はキュエバスらの方法
（Ａｒｃｈｌｖｅｓ　ｏｆＳｕｒｇｅｒｙ　１０４巻３
１９頁１９７２年）に、血液中のエンドトキシンのサー
キニレーテイングタイタ−（Ｃｌｒｃｕｌａｔｌｎｇ　
Ｔｌｔｅｒ　）の測定はレインホールドらの方法（Ｐｒ
ｏｃｅｅｄＩｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　８ｏｃｌｅｔｙ　
ｆｏｒＦｌｘｐｅｒｌｍｅｎｔｌｌ　　　Ｂｉｏｉｏｇ
ｙ　　　ａｎｄ　　Ｍｅｄｌｃｌｎａ　　　ｌ　　　３
　　７　　巻　３３４頁１９７１年）にそれぞれ準じて
行った。本発明サーファクタントについては５０〜１０
０　ｍ１７ｋｇを１回投与量とし、これを几ｎｓの発現
前後２４時間以内に１〜６回気道内に注入し、硫酸カナ
マイシンについては同じく２４時間以内ｌこ８０〜１５
０ｍ１／７ｃ５７を２〜８回に分けて筋注した。結果を
第６表に示す。結果は薬物注入後２日間経過した時の家
兎の生死及び呼吸障害度で表示した。死亡例における呼
吸障害度は死亡直前時のもので示した。呼吸障害度はそ
の数値が高いほど重篤であることを意味する。

（以下余白） 第６表 ３１− 第６表から本発明サーファクタントは有意に呼吸機能を
改善したことが認められる。

以上に詳述した表面活性水び薬理学的性質から、本発明
サーフアクタン）ｌ有効成分とする薬剤は有用なＲＤＳ
治療剤ということができる。

本発明によシ提供されるＲＤＳ治療剤は１回投与量とし
て早産児用には４０〜５００■、成人用には４００〜４
０００■の本発明サーファクタントを含有する。この用
＠を水又は生理食塩液に懸濁し、濃度が１．０〜６．０
％（ｗ／ｖ）になるように調整し、これを早産児では出
生後７２時間以内に、成人では呼吸障害の発現前後１２
０時間以内に気道内に注入又は噴霧させることによシ使
用する。投与回数は早産児では１〜４回が、成人では１
〜１０回が適当である。用量、使用法及び回数は患者の
症状及び併用療法に応じて適宜に変更してもよい。

成人に対しては基本疾患に有効な治療剤、例えば抗生物
質又は解毒剤などと併用するのが望ましい。

本発明治療剤は必要に応じて安定剤、保存剤、等張化剤
、緩衝剤もしくは懸濁化剤等の医薬品添３２− 加物又は殺菌剤を含有してもよい。剤形は液剤又は用時
に懸濁して用いる粉末剤が適当である。本発明治療剤は
バイアル瓶又はアンプル瓶等の密封容器内に充填され、
無菌製剤として保存される。

本発明を参考例及び実施例をもって更に説明する。

参考例１　（生計からのす、＋？蛋白質の製造）（、）
　　牛の摘出肝１１Ｑ１２８．３ｋｙを水で洗浄し、付
着している白液等を除去し、ついでこれを重大の肉塊に
分断しハサミヲ用いて不要な血管、気管等を切除した。

この肉塊を肉ひき機を用いて細断し肺臓細片１２０．１
　ｋｇを得た。この肺臓細片と生理食塩液４９０１とを
混和し、４℃で１００分間攪拌し、ついで得られた混合
液を濾過袋に注入して圧搾ν過し粗抽出液４７０ノを得
た。

（ｂ）　　この粗抽出液’ｅｌ　００００　ｒ−ｐ−ｍ
で遠心分離し粗沈殿物を採取した。得られた粗沈殿物を
１００１の生理食塩液に再懸濁し、２０００ｒ−ｐ−ｍ
で１０分間遠心分離し残存する組織片等を沈殿物として
除去した。上層懸濁液は再度１０００１００００ｒ−ｐ
−かくして得られた粗沈殿物を水８５１に懸濁し、これ
に塩化ナトリウム２５．７ｋｇを加え、液の比重を約１
．２０に調整した。この調整液を１０００　Ｏｒ−ｐ−
ｍで５０分間Ｏ℃で遠心分離して三層に分け、乳濁上薄
部を分取した。

（ｄ）　　この乳濁上薄部を蒸留水に懸濁し蒸留水に対
してセロハンｔｉｌｌ用いて透析し、透析内液を得た。

この透析内液を凍結乾燥したところ９６０ｇの粗乾燥物
を得た。

（・）　この粗乾燥物に５℃に冷却した酢酸エチルエス
テル４８１を添加し、４５分間攪拌したのち減圧濾過し
不溶物？Ｆ取した。この不溶物を乾燥したのち、これに
クロロホルム−メタノール混合液（容量比２　：　１　
）２８／ｌ−添加し３０分間攪拌後にＰ＃ｔ濾過し抽出
ｐ液を得た。ｐ過残渣には再度、同混合液２８７′ｆｒ
添加し３０分間攪拌後にｐ紙濾過し２次抽出Ｆ液を得た
。この操作はもう一回繰り返し行い３次抽出Ｆ液まで得
た。得られた抽出Ｐ液は合算して８２ノであった。

（ｆ）　　この抽出ｐ液を減圧乾固したところ１６０．
４ｇの固形残渣を得た。この固形残渣Ｔｈ２５．ＯＩＩ
ずつ６回に分けて以下の操作を行った。まず、各固形残
渣２５．０ｇＴｈそれぞれクロロホルム−メタノール混
合液（容量比２：１）１７０ｍＪに溶解した。

次に得られた名醇液をそれぞれ別個に同混合液で平衡化
したセファデックスＬＨ−２０カラム（直径１５．５　
ｔｙｎ　Ｘ　９０　ｃｍ　：カラムベッド体積１７．Ｏ
Ｊ）に付し、同混合液を用いて流速５　ｍｌ　７分で溶
出してグル濾過し、ディトがリューム画分をそれぞれ採
取した。６回の操作で得られただイドデリューム画分は
全量で６４８０　ｍｌであった。この画分の微祭を用い
無菌試験を行ったところ無菌であることが確認されたの
で以下は無菌条件下で操作した。

優）？イドｄｅリーーム画分を減圧乾固し、ついでこれ
を無菌水に懸濁したのち凍結乾燥したところリポ蛋白質
８．３ｇが淡黄褐色粉末として得られた。分子量は３４
，０００、比旋光度〔α〕わけ−６９゜であった。また
化学組成はリン脂室外６２．ＩＪ（ｗ／ｗ）、蛋白室外
３１．３％（Ｗ／Ｗ）、水分４．６％３５− （ｗ／ｗ）及び不明組成分２．　Ｏ％　（ｗ／ｖ）であ
った。

参考例２　（豚肺からのリポ蛋白質の製造）豚の摘出肺
臓３６ｋｇに参考例１の（ａ）工程で述べたのと同様な
操作をして肺臓細片３３．５ｋＰを得た。

これを生理食塩液１６８Ａ！に添加し、１０℃で３０分
間攪拌し、ついで得られた液’ｔ濾過袋に注入したのち
圧搾濾過し粗抽出液１４５１を得た。

（ｂ）　　この粗抽出液？１４０００ｒ−ｐ−ｍで遠心
分離し粗沈殿物を得た。得られた粗沈殿物に生理食塩液
２０１’に加えて懸濁したのち、４℃で１００゜ｒ’ｐ
”ｍの回転速度で遠心分離し残存する不要な組織片を沈
殿物として除去した。上層懸濁液は１３０００　ｒ−ｐ
−ｍで遠心分離し、粗沈殿物を再採取した。

（ｃ）　　この粗沈殿物を水２６１に懸濁１／　、これ
に塩化す）　ＩＪウム５．８　ｋ！？　’に加えて液の
比重を約１．１５に調整し、ついでこの調整液ｔ　８０
００　ｒ、ｐ、ｍで３０分間４℃で遠心分離し乳濁上薄
部を分取した。

（ｄ）　　この乳濁上薄部を蒸留水に懸濁し、蒸留水に
対してセロハン膜を用いて透析し、ついで得ら　３６− れた透析内液を凍結乾燥して相乾燥物１６３ｇを得た。

（、）　　この粗乾燥物にアセトン１５１ｋ６℃で加え
、３０分間攪拌した後ｐ紙濾過を行い不溶物を戸数した
。乾燥後この不溶物をクロロポルム−メタノール混合液
（容量比２：１）２３７に接触させ２０分間攪拌し、つ
いで戸紙沖過を行い抽出ろ液２２１！を得た。

（ｆ）　　この抽１１１戸ｖｊ、を減圧乾固し、固形残
渣４６．２ｇを得た。得られた固形残渣２０．０．９を
クロロホルム−メタノール混合液（容量比３：１）１２
０ｍｌ溶解し、これを同混合液で平衡化したセファデッ
クスＴ、　Ｈ−２ｎカラム（直径１５．５ｍＸ８８ｍ：
カラムベッド体ｆｆ１６．５７）に付した。このカラム
を同混合液を月１いて流速３　ｍｌ　７分で溶出してダ
ル濾過し、？イドデリューム画分９１０　ｍｌｘ採取し
た。この両分の微量を用いて無菌試験を行ったところ無
菌であることが確認されたので以下の操作は無菌条件下
で行った。

（ｇ）　　上述のゴイドＣリーーム両分を減圧乾固し、
これを無菌水に懸濁しついで凍結乾燥し、黄褐色のリポ
蛋白質粉末１．１ｇＴｈ得た。分子量は３２，０００、
比旋光度〔α〕、）は−５１°であり、化学組成はリン
脂室外６９，２％（Ｗ／Ｗ）、蛋白室外２６．４係（ｗ
／ｗ）、水分３．０％（ψ）及び不明組成分１．、４　
％　（ｗ／ｗ）であった。

実施例　１ 無菌処理した１、２−ソバルミトイルグリセロ＝（３）
−ホスホコリン６．５８！７．１．２−ジアシル−ｓｎ
−グリセロ−（３）−ホスホ−８１−グリセロール（ア
シル基の炭素数１４〜２４個：シグマ社製）２．１９ｇ
及びｐｅルミチン酸１１０ｇ並びに参考例１で調製１−
たリポ蛋白質０．１３．！ｒ室温でクロロホルム−メタ
ノール混合液（容ｔＪｔ２　：　１　）１０．０ＡＫｎ
￥解して４１□合した。この溶液を減圧乾固し、得られ
た残渣を４５℃で２０分間かけて水−エタノール混合液
（容量比９：］）１．ＯＩ！に懸濁した。この懸濁液を
一４０℃で凍結させて真空度７５〜９０μＨｇで２４時
間乾燥し、サーファクタント１０．３３．！ｌｉ”ｅ白
色粉末として得た。この粉末中にはエタノールの残存は
認められなかった。

従ってこのサーファクタントの総重量に対する各成分の
含量は、１．２−ジノＪ？ルミトイルグリセロー（３）
−ホスホコリンは６３．７　％　（ｗ／ｗ）、１，２−
ジアシル−８０−グリセロ−（３）−ホスホ−５ｎ−グ
リセロールは２１．２％（ｗ／Ｗ）、バルミチン酸ハ１
０．６％（Ｗ／／ｗ）、す７ｆ？蛋白質は１．３　％　
（ｗ／ｗ）及び水は３．２　％　（ｗ／ｗ）であった。

得られたサーファクタントの各作用は次のとおりであっ
た。

（１）表面張力低下作用 最大表面張力　　　２１．２　ｄｙｎｅｓ／／？ｆｆ最
小表面張力　　　　１．２　ｄｙｎｅｓ／ｃｒｎ（１１
）気液面拡散作用 到達時間３０秒　平衡表面張力２８．９ｄｙｎｅｓ／ｃ
ｍ Ｇｉｉ）　　肺胞肺容量維持作用 肺容’、Ｗｋ　（５６ｎＨ２０）　　５３　ｍｌ／ｋｇ
実施例　２ クロロホルム−メタノール混合液（容量比４：１）５２
ｏｍｚに、無菌処理した１、２−ジパルミト　３９− イルグリセロ−（３）−ホスホコリン３３６．５■、１
．２−ジアシル−５ｎ−グリセロ−（３）−ホスホ−ａ
ｎ−グリセロール（アシル基の炭素数１４〜２４個：シ
グマ社製）１１２．０Ｉｎ９、・チルミチン酸４５．０
Ｉη及び参考例１で調製したリポ蛋白質６．５ｍりを加
えて混合溶解した。この溶液の溶媒全減圧留去し、得ら
れた残渣を水−エタノール混合液（容量比１５：１）２
００ｍ／に４０℃で３０分間かけて懸濁し、ついでこれ
を−５０℃で凍結させ真空度７０〜１００μＨｇで３６
時間乾燥したところ白色粉末のサーファクタント５１４
．５ｍ９を得た。この粉末中にはエタノールが検出され
なかったことから、総重量に対する各成分の含量は１，
２−ジ・千ルミトイルグリセロー（３）−ホスホコリン
は６５．４％（ｗ／ｗ）、１．２−ジアシル−５ｎ−グ
リセロ−（３）−ホスホ−５ｎ−グリセロールは２１．
８％（Ｗ／Ｗ　）、ｚｆルミチ／酸は８．７　％　（ｗ
／ｗ）、リホ蛋白質は１．３％（−／−）及び水は２．
８　％　（ｗ／ｗ）であった。得られたサーファクタン
トの各作用は次のとおシであった。

４０− （１）　　表面張力低下作用 最大表面張力　２６．５　ｄｙｎｅｓ／ｃｍ最小表面張
力　　１．９　ｄｙｎｅｓ／ｃ１ｎ（ｉＤ　　気液重拡
散作用 到達時間３５秒 平衡表面張力２７．１　ｄｙｎｅｓ／ｃｒｎＧｉＤ　　
肺胞肺容量維持作用 肺容量（５ｃｒｎ　Ｔｌ２Ｏ）　　５５　ＴＩＬｌ　／
　ｋｇｌ、２−ジアシル−５ｎ−グリセロ−（３）−ホ
スホ−５ｎ−グリセロール１１２．ｏｍ９のかわりに１
．２−シアシル−５ｎ−グリセロ−（３）−ホスホ−Ｌ
−セリン（アシル基の炭素数１４〜２４個；シグマ社製
）、１．２−ジアシル−＠ｎ−グリセロー（３）−ホス
ホ−（１）−Ｌ−ｍｙｏ−イノシトール（アシル基の炭
素数１４〜２４個；サーダリー社製）又は１．２−ジア
シル−８ｎ−グリセロ−（３）−リン酸（アシル基の炭
素数１４〜２４個：サーダリー社製）の各１１２．０ａ
ｌ−用いた以外は、他の三成分の使用（ｉ、及び操作等
を上述と全く同様にして、以下の実施例３〜５のサーフ
７クタン）１−製造し実施例　３ 〔化学組成〕 １．２−ジノぐルミトイルグリセロー（３）−ホスホコ
リン　６５．４％（ｗ／ｖｒ　）１．２−ジアシル１ｎ
−グリセロ−（３）−ホスホ−Ｌ−セリン２１．８係（
ｗ／ｗ　） パルミチン酸　　　　　　　　　　８．７チ（Ｗ／Ｗ）
リポ蛋白質　　　　　　　　　　　　１．３チ（Ｗ／Ｗ
）水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
２．８チ（ｖ／ｗ）〔収量及び外観〕 ５１４．６ｍ９　　白色粉末 （，１）　　表面張力低下作用 最大表面張力　２８．２　ｄｙｎｅｓ／ｚ最小表面張力
　　１．６　ｄｙｎｓｓ／ｃＩｎ（１１）気液重拡散作
用 到達時間３５秒 平衡表面張力　２７．４　ｄｙｎｅｓ／ｃＰｎＯＩＤ　
　肺胞肺容量維持作用 肺容ｔ　（５ｃｍ　Ｈ２Ｏ）　５４　ｍｌ　／　ｋｇ実
施例　４ 〔化学組成〕 １．２−ジノやルミトイルグリセロー（３）−ホスホコ
リン　　　６６．２％（Ｗ／Ｗ）１．２−ジアシル−５
ｎ−グリセロ−（３）−ホスホ−１−Ｌ−ｍｙ）−イノ
シトール２２．０％（ｖｒ／ｗ）゛ ノやルミチン酸　　　　　　　　　　　８．８％（ｗ／
ｗ）す？蛋白質　　　　　　　　　　　　　１．３チ（
Ｗ／Ｗ）水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　１．７％（ｗ、／Ｗ）〔収量及び外観〕 ５０８、５　ｍｌ　　白色粉末 中　表面張力低下作用 最大表面張力　３５．　Ｏｄｙｎｅｓ／ｃＩｎ最小表面
張力　　６．３　ｄｙｎｅｓ／。

（１１）気液重拡散作用 到達時間１００秒 平衡表面張力　３５．　Ｏｄｙｎｅｓ／Ｆ＋ＯｉＤ　　
肺胞肺容量維持作用 肺容量（５ｃｍ　Ｈ２Ｏ）　３５　ｍｌ／＃ｌ／側　５ 〔化学組成〕 １．２−ジ／ちヤミトイルグリセロ−（３）−ホスホコ
リン　　　６４．７％（ｗ／ｖ　）　４３− １．２−ジアシル−５ｎ−グリセロ−（３）−リン酸　
　　　２１．５　％　（Ｗ／Ｗ）ノやルミチン酸　　　
　　　　　　　　８．７％（Ｗ／Ｗ）リポ蛋白質　　　
　　　　　　　　　１，３％（ｗ／ｗ）水　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　３．８％（ｗ／ｗ
）〔収量及び外観〕 ５２０、０ダ　淡黄色粉末 （１）表面張力低下作用 最大表面張力　２８．１　ｄｙｎｓｇ／ｍ最小表面張力
　　５．９　ｄｙｎｅｓ／ｍ（ｉｉ）　　気液重拡散作
用 到達時間８５秒 平衡表面張力　３０．３　ｄｙｎｅｓ／ｍ０ｉＤ　　肺
胞肺容量維持作用 肺容量（５ｃｍ　Ｈ２Ｏ）　４２　ｍｌ／ｋｇ実施例　
６〜１７ １．２−ジパルミトイルグリセロ−（３）−ホスホコリ
ン４０８．０　ｍｌ、　　１．２−ジアシル−８ｎ−グ
リセロ−（３）−ホスホ−５ｎ−グリセロール（アシル
基の炭素数１４〜２４個；シグマ社製）１２６．０■、
ツクルミチン酸５４．０叩及び参考例１で調製し４４− たリポ蛋白質１２．０７９を無菌処理したのちクロロホ
ルム−メタノール混合液（容量比３　：　１　）　６１
０ｍ１に添加し、混合溶解した。この溶液を減圧乾固し
、得られた残渣を水−エタノール混合液（容量比１０：
１）３００ｍ／に５０℃で１５分間かけて懸濁した。こ
の懸濁液を一６０℃で凍結させ真空度５０〜１２０μＨ
ｇで４０時間乾燥して、サーファクタントを得た。また
、ノ臂ルミチン酸５４．０　ｍ９のかわりに神々の脂肪
酸類５４．０ｍ９ｊｒ：用いた以外は上述と全く同様に
して各サーフアクタン）Ｔｈ製造した。これらの化学６
１成、収量、外観、表面張力低下作用、気液面拡散作用
及び肺胞肺容量維持作用は第７表に示すとおシであった
。

（以下余白） 　４５− ２１０− 実施例　】８〜２１ １．２−ジステアロイルグリセロ−（３）−ホスホコリ
ン３３０．０　ｍ９．１．２−ジアジ／ｌ／−自ｙｌ−
グリセロ−（３）−ホスホ−８ｎ−グリセロール（アシ
ル基の炭素数１４〜２４；シグマ社製）１１０．０り、
／譬ルミチン酸４５．５１Ｒｇ及び参考例２で調製した
りＩ蛋白＊１５．５＋！を無菌処理し、クロロホルム−
メタノール（容量比２．５：１）５００＋＋７に溶解し
て混合した。この溶液の溶媒を留去し、得られた残渣を
水−エタノール混合液（容ｉＪｔ比１０：１）１８０ｍ
／に４０℃で２５分間かけて懸濁し、この懸濁液を一４
５℃で凍結させて真空度７０〜９０μＴ（ｇで３６時間
乾燥してサーファクタントを製造した。また、１．２−
ジステアロイルグリセロ−（３）−ホスホコリン３３０
．０■のかわシに１−ステアロイル−２−／４ルミトイ
ルグリセロー（３）−ホスホコリン、１−ヘキサデシル
−２−ノ母ルミトイルグリセロー（３）−ホスホコリン
又ハ１．２−ジヘキサデシルグリセロ−（３）−ホスホ
コリンの各３３０．０！７’ｅ用いた以外は上述と全く
同様にして各サーファクタントを製造した。得られた各
サーファクタントの化学組成、収量、外観及び表面張力
低下作用等は第８表に示すとおシであった。

（以下余白） 実施例　２２〜２５ 無菌処理した１、２−ジステアロイルグリセロ−（３）
−ホスホコリア３３０．０１ｎ９．１．２−ジアシル−
ａｎ−グリセロ−（３）−ホスホ−Ｌ−セリン（アシル
基の炭素数１４〜２４個；シグマ社製）１１０、０　ｍ
ｇ、ノやルミチン酸４４．５１ｎ９及び参考例１で調製
したり？蛋白質１５．５■をクロロホルム−メタノール
（容量比２．５：１）５００ｍＪに溶解して混合し、つ
いでこれを減圧乾固した。得られた残渣を水−エタノー
ル混合液（容量比ｔｏ：ｉ）１８０ｍ／に４０℃で２５
分間かけて懸濁した。この懸濁液を一４５℃で凍結させ
て真空度７０〜９０μＨｇで３６時間かけて乾燥し、サ
ーファクタントを得た。また、１．２−ジステアロイル
グリセロ−（３）−ホスホコリン３３０．０１ｎｇのか
わシに１−ノ母ルミトイルー２−ステアロイルグリセロ
−（３）−ホスホコリン、１−ヘキサデシル−２−ノ９
ルミトイルグリセロ−（３）−ホスホコリン又は１．２
−ジヘキサデシルグリセロ−（３）−ホスホコリンの各
３３０．０■を用いた以外は上述と全ファクタントの化
学組成、収量、外観及び表面張力低下作用等は第９表に
示すとおシであった。

（以下余白） 実施例　２６〜２９ １．２−ジパルミトイルグリセロ−＜　３　＞−ホスホ
コリン４００．（ｌり、１．２−ジアシル−ａｎ−グリ
セロ−（３）−ホスホ−１Ｉｎ−グリセロール（アシル
基の炭票数１４〜２４個；シグマ社製）４４．５１１Ｉ
９、／ｆルミチン酸４４．５１Ｒ９及び参考例２で調製
したリゾ蛋白ｆｒ１１．ｏＩＩ＋！７’に無菌処理した
のち、クロロホルム−メタノール混合液（容量比２：１
）５３０１１／に添加し、混合溶解した。この溶液を減
圧乾固し、得られた残渣を水−エタノール混合液（容量
比９：１）１９０ｍ／に４０℃で３０分間かけて懸濁し
、ついでこれ’１−５０℃で凍結させた後、真空度６０
〜９０μＨｇで３６時間乾燥してサーファクタントを製
造した。また１、２−ジパルミトイルグリセロー（３）
−ホスホコリン及び１．２−ジアシル−５ｎ−グリセロ
−（３）−ホスホ−８ｎ−グリセロールの使用量をそれ
ぞれ３５５．５＃＋！７及び８９．０■、３１１．０ダ
及び１３３．５■又は２５５、０　Ｍ９及び１８９．５
１１１９に変更した以外は、他の二成分の使用量及び製
造操作は上述と全く同様ァクタントの化学組成、収量、
外観及び各作用は第１０表に示すとシりであった。

（以下余白） 実施例　３０〜３７ 無菌処理した１、２−ジノ４ルミトイルグリセロ−（３
）−ホスホコリン３７０．０〜．１．２−ジアシル−■
−グリセロー（３）−ホスホ−５ｎ−グリセロール（ア
シル基の炭素数１４〜２４個；シグマ社製）１３０．０
１ｎ９、パルミチン酸２５．０１ｎ９及び参考例１で調
製したリポ蛋白質１０．０１９Ｔｈクロロホルム−メタ
ノール混合液（容量比２：１）６３０ｍｌに溶解して混
合し、ついでこれ全減圧乾固した。

得られた残渣を水−エタノール混合液（容量比８：１）
２００＃Ｉ／に４５℃で２５分間かけて懸濁し、この懸
濁液−５０℃で凍結させ真空［８０〜１００μＨｇで３
０時間乾燥してサーファクタントを製造した。また、ツ
ヤルミチン酸の使用量を９０．０９．１２９．０１１９
又は１６８．ＩＴｎ９に増加した以外は上述と全く同様
にして実施例３１〜３３のサーファクタント’に製造し
た。更に上述の・やルミチン酸及び１．２−ジアシル−
５ｎ−グリセロ−（３）−ホスホ−５ｎ−グリセロール
のかわりにステアリン酸及び１．２−ジアシル−５ｎ−
グリセロ−（３）−ホスホ−Ｌ−セリン（アシル基の炭
素数１４〜２４個：シグマ社製）をそれぞれ２５．０　
ｍ！及び１３０．０■、３５．０１ノ及び１３０．０ダ
、５０゜０ツ及び１３０、（１１９又は６５．０　ｍ９
及び１３０．０７Ｖ’ｆｌ？用いた以外は他の二成分、
即ち１．２−ジ・母ルミトイルグリセロ−（３）−ホス
ホコリン及びリポ蛋白質の使用量、更には製造操作は上
述と全く同様にして実施例３４〜３７のサーファクタン
トも製造した。

各サーファクタントの化学組成等及び各作用は第１１表
に示すとおシであった。

（以下余白） 実施例　３８〜４１ １．２−ジパルミトイルグリセロ−（３）−ホスホコリ
ン７６０．０■、１．２−シアシル−８ｎ−グリセロ−
（３）−ホスホ−８ｎ−グリセロール（アシル基の炭素
数１６〜１８）２４０．０〜、ノＰルミチン酸１００．
ＯＴｖ及び参考例１で調製したＩＪ　、１？蛋白質１．
０７！　’２無菌処理し、クロロホルム−メタノール混
合液（容量比２　：　１　）　１０００　Ｔｄに混合溶
解した。このｍ液の溶媒全減圧留去して得られた残渣を
水−エタノール混合液（容量比９　：　１　）　３８０
ｍ／に４０℃で３０分間かけて懸濁した。この懸濁液を
一４０℃で凍結させ真空度８０〜９０μＨｇで３６時間
乾燥してサーファクタントを製造した。

また、１Ｊｙｆ蛋白質の使用量を５．０〜．５９．０ｍ
９又は１２３．７ｍ９に増加した以外は上述と全く同様
にして実施例４０〜４２のサーファクタントも製造した
。各サーファクタントの化学組成、収量、外観、表面張
力低下作用、気液面拡散作用及び肺胞腔容酔維持作用は
第１２表に示すとおシであった。

６３− 実施例　４２ １．２−ノへキサデシルグリセロ−（３）−ホスホコリ
ン３００．０■、１゜２−ジアシル−５ｎ−グリセロ−
（３）−リン酸（アシル基の炭素数１４〜２４個：サー
ダリー社製）１００．０■、パルミチン酸４０．ＯＴｖ
及び参考例１で調製したリポ蛋白質９、０７＃　’ｅ無
菌処理したのち、クロロホルム−メタノール混合液（容
量比２：１）４８０ｍｌに溶解混合した。この溶液を減
圧乾固し、得られた残渣を水−エタノール混合液（容量
比２０：１）に４０℃で３０分間かけて懸濁した。つい
でこれヲ−５０℃で凍結させ５０〜１００μＨｇの真空
度で乾燥して淡黄色粉末のサーファクタント４６０．２
■を得た。この粉末中にはエタノールの残存は検出され
なかった。

〔化学組成〕

１．２−ジヘキサデシルグリセロ−（３）−ホスホコリ
ン　６５．２％（ｗ／ｗ）１．２−ジアシル−５ｎ−グ
リ七〇−（３）−り４　　　２１．７％（ｗ／ｗ）パル
ミチン酸　　　　　　　　　　８．７％（ｗ／ｗ）すＩ
蛋白質　　　　　　　　　　　　２．０％（ｗ／ｗ）水
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２．４
％（ｗ／ｗ）（１）表面張力低下作用 最大表面張力　２９．２　ｄｙｎｅｓ／ｃｍ最小表面張
力　　５．３　ｄｙｎｅｑ論（１１）気液面拡散作用 到達時間８０秒 平衡表面張力　３０．４　ｄｙｎｅｓ／ｃｒｎ（ｉｌＤ
　　肺胞肺容量維持作用 肺容量（５ｔｔｎ　Ｈ２Ｏ）　　４１　ｍｌ／’に９実
施例　４３ 実施例４２において、パルミチン酸４０．０ｍｇのかわ
シにヘキサデシルアルコール４０．０〜ヲ用いた以外は
同実施例と全く同様に操作して淡黄色粉末のサーファク
タント４５１．．７．３１ｎｇを製造した。エタノール
の検出結果は陰性であった。

〔化学組成〕

１．２−ジヘキサデシルグリセロ−（３）−ホスホコリ
ン　６５．６　％　（Ｗ／Ｗ）１．２−シフ′シルー５
ｎ−グリセロ−（３）−リン酸　　２１．９％（ｗ／ｗ
）ヘキサデシルアルコール　　　　　８．７％（Ｗ／Ｗ
）リポ蛋白質　　　　　　　　　　　　２．０％（ｗ／
ｗ）水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　１．８％（ｗ／ｗ）（１）表面張力低下作用 最大表面張力　３４．９　ｄｙｎｅｓ／ｍ最小表面張力
　　８．７　ｄｙｎｅｑら（１１）気液面拡散作用 到達時間９５秒 平衡表面張力　３４．７　ｄｙｎｅｓ／ｃＴｎ（ｉｌＤ
　　肺胞肺容量維持作用 肺容量（５ｍＨ２Ｏ）　　３７ｍｌ／Ｉ’４実施例　４
４ １．２−　ジノ母ルミトイルグリセロ−（３）−ポスホ
コリｙ（Ｌ体）３００．０１ｎ９．１．２−ジアシル−
５ｎ−グリセロ−（３）−ホスホ−１Ｉｎ−グリセロー
ル（アシル基の炭素数１４〜２４；シグマ社製）１００
、■、ノ９ルミチン酸４０．０１ｎ９及び参考例１で調
製したリポ蛋白質８．０７１１９’ｉｉ無菌処理し、ク
ロロホルム−メタノール混合液（容量比２　：　１　）
　４５０ｄに混合溶解した。この溶液を減圧乾固し、得
られた残渣全ボーエタノール混合液（容量比４：１）１
５０ｍｌに４０℃で３０分間かけて懸濁した。こ　６７
− の懸濁液ｆｔ−８０℃で凍結させ真空度５０〜７０μＨ
ｇで２４時間乾燥し、サーファクタント４５９．７■を
白色粉末として得た。エタノールの残存は検出されなか
った。

〔化学組成〕

１．２−ジノｆルミトイルグリセロ−（３）−ホスホコ
リン（Ｌ体）６５．３チ（ｗ／ｗ） １．２−シアシル−８ｎ−グリセロ−（３）−ホスホ−
８ｎ−グリセロール２１．８チ（ｗ／ｗ’） パルミチン酸　　　　　　　　　　８．７％（Ｗ／Ｗ）
リポ蛋白質　　　　　　　　　　　　１．７％（Ｗ／Ｗ
）水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　２，５チ（ｗ／ｗ’）（１）表面張力低下作用 最大表面張力　２６．５　ｄｙｎｅｓ／ｃＩｎ最小表面
張力　　２．３　ｄｙｎｅｓ／ｍ（１１）気液面拡散作
用 到達時間４０秒 平衡表面張力　２８．７　ｄｙｎｅｓ　／ｃｍＧｉｉ）
　　肺胞肺容量維持作用 肺容量（５ｃｍ　Ｈ２Ｏ）　　５２　’Ｉｌｌ／”！１
６８− 実施例　４５ 実施例４４において、１．２−ジノ４ルミトイルグリセ
ロ−（３）−ホスホコリン（Ｌ体）３００．０■のかわ
シに１．２−ジノ母ルミトイルグリセロー（３）−ホス
ホコリン（０体）３００．０ダを用いた以外は回倒と全
く同様にして白色粉末のサーフアクタン）４６２．６＋
Ｖｔ製造した。エタノールの残存は検出されなかった。

〔化学組成〕

１．２−ジノ臂ルミトイルグリセロー（３）−ホスホコ
リン（０体）６４．９チ（ｗ／ｗ　） １．２−ジアシル−ａｎ−グリセロ−（３）−ホスホ−
ａｎ−グリセロール２１．６％（ｗ／ｗ） ノｆルミチン酸　　　　　　　　　　　８．６％（ｗ／
ｗ）リポ蛋白質　　　　　　　　　　　　１．７％（ｗ
／ｗ’）水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　３．２チ（ｗ／ｗ）中　表面張力低下作用 最大表面張力　２７．　Ｏｄｙｎｅｓ／ｚ最小表面張力
　　１．９　ｄｙｎｅａ／ｃｒＲ（１１）気液面拡散作
用 °到達時間３５秒 平衡表面張力　２７．３　ｄｙｎｅｓ／ｍ（ｉｉＤ　　
肺胞肺容量維持作用 肺容量（５ｃｍ　Ｈ２Ｏ）　　５３　”／”ｌｉ’実施
例　４６ 無菌処理した１、２−ジノ４ルミトイルグリセロ−（３
）−ホスホコリン４００．０＃、　１．２−ノアシル−
Ｂｎ−グリセロ−（３）−ホスホコリン（アシル基の炭
票数１４〜２４個；シグマ社製）１６７．０−ダ、１．
２−ジアシル−１町−グリセロ−（３）−ホスホ−Ｉｎ
−グリセロール（アシル基の炭素数１４〜２４個；シグ
マ社製）３０．０ｒｎ９、ノ＋ルミチン酸５４．０■及
び参考例１で調製したリポ蛋白質１０．０１ｖをクロロ
ホルム−メタノ−・ル混合液（容量比２：１）４５０１
ｄに混合溶解した。この溶液を以下実施例４４と全く同
様に操作して微黄白色のサーファクタント６６７．０■
を得た。

〔化学組成〕

（以下余白） １．２−／ノヤルミトイルグリセロ １．２−シフ′シルー５ｎ−グリセロ−（３）−ホスホ
−Ｉｎ−グリセルール４．５％（ｗ／ｗ） ／ｆルミチン酸　　　　　　　　　　８．１％（多倍）
リポ蛋白質　　　　　　　　　　、１．５係（ｗ／ｗ）
水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０
．９％（ｗ／ｗ）中　表面張力低下作用 最大表面張力　３３．７　ｄｙｎ＠ｓ／ｍ最小表面張力
　　８．９　ｄｙｎ’ｅｓ　７ｃｍ（１１）気液面拡散
作用 到達時間８５秒 平衡表面張力　３４．８　ｄｙｎｅｓ／ｃｍ（＋＋Ｄ　
　肺胞肺容量維持作用 肺容量（５ｃｍ　Ｈ２Ｏ）　　３６　ｙｎ１７’ｋｇ実
＄ｆＲ４７ 無菌処理した１、２−ジノ４ルミトイルグリセロ−（３
）−ホスホコリン５３３．６〜．１．２−ジアシル−ａ
ｎ−グリセロ−（３）−ホスポー３ｎ−グリセ　７１− 四−ル（アシル基の炭素数１４〜２４個；シグマ社製）
１７７．６１Ｒ９、／４ルミチン酸７１．２１９及び参
考Ｎ１で調製したリポ蛋白、質１７．６ダｔ−堝瑞乳鉢
ニトシ、これに５　ｍｌのり占゛ロホルムーメタノール
混合液（容量比２：１）を数回に分けて滴下しながら３
０分間練シ合わせた。ついで、これを５１−で２４時間
真空乾燥し、７７０．３＃のサーファクタントを淡黄色
粉末として得た。

〔化学組成〕

１．２−ジノ勢ミドイルグリセロ−（３）−ホスホコリ
ン　６６．７’チ（Ｗ；／Ｗ）１．２−ジアシル−＠ｎ
−グリセロー（３）−ホスホ−５ｎ−グリセロール・　
、・　　　′　　　・　２．２．２．チ（ψ）ノ臂ルミ
ーｔン酸　　　　　　　　　　　　８．９チ（Ｗぐ）リ
ポ蛋白質　　　　　　　　　　　　２．２ｍ’（ｗ／ｗ
）水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
ｏ、ｏチ（７／Ｗ）（１）表面張力低下作用、　　　　
　　　　　［、、，１大表面張力　２７．５”ｄｙｎｅ
ｓ／ｙｊＩ最小表面張力　　２．５　ｄｙｎｅｓ＾（ｉ
ｉ）　　気液面拡散作用 到達時間４５秒 ７２− 平衡表面張力　２７．２　ｄｙｎｅｓ／ｚ（ｉｉＤ　　
肺胞腔容童維持作用 肺容量（５ｃｍ　Ｈ２Ｏ）　　５０　ｍｌ／ｋｇ

【図面の簡単な説明】

図１〜３は生理食塩液の表面張力全アコマウィルヘルミ
ーバランス（アコマ医学工業（株）　製”）で測定し、
Ｘ−Ｙレコーダー・モデルＲＷ−１１（理化電機工業（
株）製）を用いたヒステリシス曲ｇＪを示す。図１は本
発明サーファクタントを、図３はＴＡ−５４６’ｅ３７
℃で表面積１６ｎ２あたり１、０〜２．０ム９滴下した
時のもので、斜線部分は当該ヒステリシス曲線の出現領
域を、出現領域内の太実線はその１実例を意味する。図
２はＰＣ−ＰＧ混合物及びＤＰＰＣ組成物の各代表例に
おけるもので同様にして測定したものである。同図にお
いて実線はＤＰＰＣ組成物のヒステリシス曲線であシ、
点線はＰＣ−ＰＧ混合物のヒステリシス曲線である。 各図において縦軸は表面張力を横軸は測定時の最大表面
積（５４，０ｃｒｎ２）の百分率で表わした表面積金示
す。図４は本発明サーファクタントの主要な成分の一つ
であるリポ蛋白質のＫＢｒ錠法Ｋ１る赤外線吸収スペク
トルを、図５は該リポ蛋白質ｊ、３７ｍ９を１係ドデシ
ル硫酸す）　ＩＪウム水溶液１０ｍ、ｌに溶解して得ら
れた溶液を用いて測定した紫外線吸収スペクトルをそれ
ぞれ示す。 特許出願人　東京田辺製薬株式会社 代理人久高将信（外１名） 図１ （ｄｙｎｅｓ／ｃｍ） （’／、） （０ム） 図５ 吸先度 （ｎｍ） 手　続　補　正　書（方式） ％式％ １、事件の表示 １Ｆ＃　　願　　昭５’８−　３８，１８９号２発明の
名称 サーファクタント及びそれを含有する呼吸窮迫症候群治
療剤 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 東京田辺製薬株式会社 ４代理人 ５、補正命令の日付　昭和５８年６月２８日（発送）ａ
補正の対象　願書及び明細書全文

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 工、　コリンホスホグリセリド、酸性リン脂質、脂肪酸
   類及び哺乳動物の肺臓由来のリポ蛋白質を主薯こ含有し
   、総重量に対するこれらの含量が、コリンホスホグリセ
   リドは５０６〜８５．０４　（ｗ／ｗ）　ｅ酸性リン脂
   質は４５〜３″１６壬（Ｗ／Ｗ）、脂肪酸類は４．６〜
   ２４６チ（Ｗ／Ｗ）　、　　リボ蛋白質は０．１〜１０
   ．０ｇ６（Ｗ／Ｗ）であることを特徴とするサーファク
   タント。 ２、　コリンホスホグリセリド、酸性リン脂質、脂肪酸
   類及び１＠乳動物の肺臓由来のリボ蛋白質を主審ζ含有
   し、総重量に対するこれらの各成分の含量であるサーフ
   ァクタントを、有効成分として含むことを特徴とする呼
   吸窮迫症候群治療剤。