BG100554A - Нов синтетичен пептид, съдържащо пептида белодробно повърхностно активно вещество и лекарствено средство за лечение на дихателна недостатъчност - Google Patents

Abstract

Изобретението се отнася до синтетичен пептид, включващ последователността хаа рrо vаl хвв хсс lys аrg w, където хаа липсва или представлява сys или sеr; хвв представлява нis или аsu, хсс представляваlеu или jlе и w представлява хидрофобна пептидна част, до един междинен продукт за получаване на пептида, до метод за получаване на пептида, до белодробно повърхностно активно вещество, което го съдържа, до липидна смес и до лекарствено средство за лечение на синдрома на дихателната недостатъчност,съдържащо повърхностно активното вещество като активен ингредиент. Пептидът се изолира лесно и е подходящ за масово производство. Тъй като е лесно разтворим в метанол и други подобни разтворители, той може лесно да бъде смесван с липидна смес и е подходящ за получаване на белодробно повърхностно активно вещество. Последното показва добре изразена способност да образува суспензии, както и потенциална повърхностна активност, поради което е приложимо за получаванена лекарствено средство за лечениена синдрома на дихателната недостатъчност.

Description

НОВ СИНТЕТИЧЕН ПЕПТИД. СЪДЪРЖАЩО ПЕПТИДА БЕЛОДРОБНО ПОВЪРХНОСТНО АКТИВНО ВЕЩЕСТВО И ЛЕКАРСТВЕНО СРЕДСТВО ЗА ЛЕЧЕНИЕ НА ДИХАТЕЛНА НЕДОСТАТЪЧНОСТ Област на техниката Представяното изобретение се отнася за нов синтетичен пептид. По-подробно. касае се за синтетичният пептид, които бидейки, смесен с липиона микстара, показва силнодеиствуваша повърхностна активност. Изобретението също се явява междинен продукт за производството на такъв синтетичен пептид, с качества на белодробно повърхностно активно вещество, съдържащо пептида и липидна смес и. лекарствено средство за лечение на синдрома дихателна недостатъчност, съдържащо активна съставна част. Предшествувана» състояние на техниката Синдромът на дихателна недостатъчност е заболяване,

гази което повърхностната активност на алвеоларната повърхност е понижена дължаща се на липса на белодробно повърхностно активно вещество. Това неизбежно води оо колабиране на алвеолите. което от своя стоана причинява тежки. респираторни разстройства. Този синдром се среща често при. недоносени, новородени и завършва с висок прои.ент на смъртност. Известно е, че такива белодробни повърхностно активни вещества са силно ефективни при синдрома на неонатална дихателна недостатъчност„ Хората в зряла възраст също страдат от хипоксия пои различни, заболявания и. съществуват много примери, когато дифузни сенки,, наподобяващи матова стъкло се виждат при рентгенови снимки на гръдния кош и. се наблюдава респираторна инсуфициенция, въпреки командното дишане с респиратоо. Сева и сътрудници ( НхгогаоЪо Уаеива , "Вхозиг^асСап^з„ Сбар+;.ег 3, ПесНса! Ргас11се5 и»хпд ЗигТ&amp;с!.ап« ЗесНоп 1» С1 1η1са 1 Αρρΐхсаίхоп«> οϊ ЙигТас:1ап1<··· „ V,, А«>рхгесЬхоп Рпеитопх&amp; апв йигТасЬап,," р., 134 „ 1??0„ Зсхепсе Гогит., Со„ [..1.4,,) съобщават за два случая на пневмония при възрастни хора ί, 1) пневмония от вдишване на газове на азотна киселина и 2) реии.дивираща а спира и,йонна пневмония, породена от мозъчен тумор, довели до хипоксемия и предизвикали влошаване на общото състояние и дихателна недостатъчност) при. които беше постигнато значителна подобрение и живота на пациентите беше спасен благодарение на инжектиране в респираторния тракт на белодробно повърхностно активно вещество. Следоперативна дихателна инсуфициенция може да се получи след сърдечни операции, след спиране на дишането през време на операцията. Ефектът от прилагането на белодробни. повърхностно активни вещества при. такива случаи, на дихателна недостатъчност е Зоигпа! съобщаван и от драги автори 13к»и1сЬх Иовака еЪ ах.. ο'ϊ Зарапеве х с&amp;1 Зос:хе! у "Рог ВхоХоахсаЗ. 1п1ег^ас:е» Уо1 „ 22, р66,. :).991 ) „ Заместителната терапия посредством прилагането на артефиииални белодробни повърхностно активни вещества през респираторния тракт в това отношение показва значителни терапевтични ефекти при третирането на синдрома на дихателна нед ос т а т ъч нос т . Напоследък, бяха открити четири типа апопротеини, които са единствени по рода си за белодробни повърхностно активни вещества от бозайници. Съществуват апопротеин за повърхностно активно вещество А и апопротеин за повърхностно активно вещество ϋ„ които са с хидрофилни свойства, и апопротеин за повърхностно активно вещество В (оттук нататък ще бъде отбелязван като 5Р-В) и апопротеин за повърхностно активно вещество С (оттук нататък ще бъде отбелязван като ЗР-С), които са с хидрофобни свойства (Тоуокх Акхпо апв УозНхо Кигокх , Ре^рхга!.хоп апс! Сх геи 1аПоп νο ,ί.38,, Мо»:1.8,, р„ 222,, 1990 п Нх гопчоЬо Уа^ива е! а!„ ВхойигУас:1.ап 1.<х:: СЬаргег 2„ ТНе ВхоеИетхаЬгу оУ Вхо^игУасЬап-· 8игУас1.ап а η <:) А р ο ρ го ΐ. е ж η <»,, р13, 1990 „ 3 с: ж е η с е Г о г и т,, С ο „ I... 1 <:! „ ) „ ЗР-С (секбенция Να 1), получен от човешки бял дроб, се състои от 35 аминокиселини и е? апопротеин със силно изразени хидрофобни свойства, богат на вали.н и има Фенилаланин, като Ν-терминална аминокиселина. СР-С са изолирани от волски бял дроб (последователност Να 2). свински бял дроб (секвениия Να 3), бял дроб от плъхове и т.м., също се състоят от 34 до 35 аминокиселини и макар че зминокиселинните секвениии на Ν-терминала са различни за различните видове, те демонстрират екстремално висока степен на хомоложност с човешкия 5Р-С. Патентна публикация в Япония с Мо Нел......3-502095 съшо посочва, че синтетичният пептиа (послеаобателност Να 4). със споменатата по-долу 32 аминокиселинна последователност. която е част от структурата на 5Р-С, е минималната единица, която показва висока повърхностна активност, така че смеси от гореспоменатия пептид и липиди са ефективни при лечението на синдрома на белодробна инсуфициенция и че сравнения межди повърхностните активности на тази минимална единица пептид и на друг синтетичен пептид с по-къси аминокиселинни последователности показват, че загубата на повърхностна активност се дължи не на загубата на специфична аминокиселина, а на намаляването на дължината на пептидната верига - Предварително, част от авторите на представяното изобретение са установили, че микстури от синтетичен пептид (ще бъде споменаван оттук нататък като ТР-С), и липид са ефективни при лечението на синдрома на дихателна недостатъчност и са заявени за патентоване в този предмет на патент (варапезе раСепЪ арр!хсаТ-ίοη Να. Ηβί-5-518188). Относно производството на синтетични пептиди, най-общо е упоменато, че? аминокиселинната последователност на пептида става дълга, образуването на погрешни пептиди в процеса на добиване зачестява, изолирането и пречистването стават трудни, удължава се времето за производство, обема на продукцията намалява и т.н. Съш,о така, поради съображения за запазване на качествените показатели, композициите на белодробните повърхностно активни вещества често се предлагат под Формата на прах за приложение като суспензия на п р и л о ж е н и е к а т о с у с п е н з и я Ф и з и о л о г и ч е н оазтвоо, Такива методи. като прибавяне на суспендиращи. средства например манитол (Зарапезе раЪегтЬ риЬ1 Хса ЬТоп Νο. Ηθί-1-60541) и лиоФилизация при първично замразяващи температури от -1 до -.10 С<!, са вили предлагани за подобряване на суспензибилитета на белодробните повърхностно активни вещества. Обаче, тези методи са комплицирани за производството и по-нататъшното им усъвършенствиване за получаването на лекарствени средства е желано. Съставът на белодробното повърхностно активно вещество (упоменавано по-нататък като 5-35), получен посредством свързването на ЗР-С с липидна смес, включваща кисел фосфолипид и масленокиселинен аналог, има крайно ниска диспеосибилност във Физиологичен разтвор, правейки, го труден за приготвяне на суспензия,, която е достатъчно постоянна, за да бъде използвана като композиция. Причините включват Формирането на дисулФидни връзки посредством цистеинови остатъци в пептидз, които придават на пептиаа силна способност за свързване и голяма хидрофобност на белодробното повърхностно активно вещество. Тъй като ТР-с е с: ниска разтворимост 6 най-често прилаганите разтворители, необходимо да се използва триФлуороцетна киселина (ТРА) за получаването на състава на белодробното повърхностно активно вещество. ТР-С поражда също проблеми, като например е необходимо по-продължително време за концентриране и изсушаване за отделянето на колкото е възможно повече ТРА и суспезията на белодробното повърхностно активно вещество става подкиселена през време на добиването на белодробното повърхностно активно вещество, пора ди ос татъч на т а ТР А. Съшност на изобретението Авторите на представяното иаойоетение изследват задьлоочено синтетични пептиди достигат до изооретението. откривайки, че неизвестни до сега синтетични пептиди (по-нататък ще? се наричат "синтетичните пептиди. от изобретението"), които съдържат спомената по-дола аминокиселинна последователност с хидроФилна пептидна част на специфична секвенция на Ν-κрая и хидрофобна пептидна част, съставена главно от левцин и/или Клевиин на С-края, лесни за изолиране и пречистване, годни за получаване в големи количества, добре разтворими в мравчена киселина, трифлуороиетна киселина, трифлиоретилов алкохол, диметилсулФоокис (01*180) , хлороформ, хлороформ-метанолови микстари, метанол, етиленов хлорхидрин и тетрахидрофуран и, особено, имат значително висока разтворимост в метанол в сравнение с синтетични 8Р-С и ТР-С. Авторите на представяното изобретение също са открили, че белодробните повърхностно активни вещества, получени от синтетичните пептиди от изобретението и липидни смеси показват, дори когато са получени посредством обикновени лиоФилизаиионни методи, проведени при -20 С° или повече и без прибавяне на суспендиращо средство, добра. постоянна суспензибилност 6 сравнение с 8—35 или с синтетично белодробно повърхностно активно вещество (споменавано оттук нататък като "ЗР-З": варапеве равепб ри Ь11саί ίοη Nο„ Ηе ί-2-87685) съдържа щи с амο л ипид н а микстура, състояща се от холинов ФосФоглицерид, кисел Фосфолипид и мастно киселинен аналог или субстанция (споменавана оттук нататък като "8-ТА"? варапезе рабепб риЬ1Хса1юп Να. ЗКо-61-9924) съдържаща заедно с мастна киселина и вещество, съдържащо фосфолипид, неутрален липид, ο δ ш, κ ο λ е с τ е ρ ο λ. въглехидрати и протеини, намиращи се 6 белите дробове на бозайници и показали висока повърхностна активност, която е еквивалентна на тази на 8-35. 5-ТА или белоаробно повърхностно активно вещество, съдържащо ТР-С и липидна смес, Хаа ~ Пролин - Валин - ХЬЬ - Хсс - Лизин - Аргинин - М (Хаа може да не е представена или може да представлява цистеин или серии,- ХЬЬ представлява хистиоин или аспарагин, Хсс представлява леви.ин или изолевцин и № представлява хидрофобната част,, ) Синтетичния пептид от изобретението съдържа хидрофилна пептидна част описана посредством спомената по-дола специфична последователност на Ν-край и пептидна част от левцин и/или Млевиин на С-край и синтетичен пептид, които разкрива голяма повърхностна активност когато е съединен с липидна микстура. Хаа - пролин -·· валин -· ХЬЬ ~ Хсс - лизин -- аргинин (Хаа може да не е представена или може да предста влява цистеин или серин, ХЬЬ представлява хиетидин или аспарагин, Хсс представлява левцин или изолевцин). Въпреки че хидрофобната пептидна част е съставена от такива хидрофобни аминокиселина като левцин, Млевиин, изолевцин, валин, фенилаланин, Мвалин и триптофан, тя основно включва 12 или повече и предимно 12 - 20 молекули на левцин и/или Млевцин, Въпреки че е предпочитана за целите на синтеза, тази хидрофобна пептидна част е съставена от същите хидрофобни аминокиселини, последната може да включва подходяща секбенция от молекули на левцин и Млевиин или може да съдържа от 1 до 5 молекули изолевцин, валин, триптофан и други хидрофобни аминокиселини в техните секвенции. Синтетичните пептиди от изобретението също съдържат синтетични пептиди. б които аминокиселина или пептид са прибавени към Ν-края и/или С~-края на гореспоменатия синтетичен пептид, Аминокиселина, която се прибавя към Ν-терминала може да бъде иистеин или серин. Освен това, пептид с последователност Фенилалзнин - глицин - изолевиин - пролин може да бъде прибавена към Ν-края, Тиоловата грипа или хидроксилната група присъстващи в гореспоменатият синтетичен пептид могат да бъдат ацилирани посредством мастна киселина с .14 до 18 въглеродни атома и за предпочитане посредством палмитинова киселина или може да бъде ацетамидмети.лат в. Пептидът, които ое прибавя към С-терминала може да има последователност - глицин - аланин левцин - левцин или глицин - аланин - левцин - левцин - метионин - глицин - левцин. Освен това, синтетичния пептид от изобретението също в к лю ч в а с и н т е т и ч н и п е п т и д и ( с и з к л юч е н и е з а п е п ти д и те, и м а щи частичната структура на природен 6Р-С), които съдържат пептидна група за да покажат силни повърхностни активности, когато са свързани с липидни смеси, дори при прибавяне, отстраняване или заместване на една или множество включени а минок ис елини, Синтетичния пептид от изобретението може да бъде π о л учен ч р е з х им и ч е с к и и л и ген н о и н ж е н е р н и м е т о д и , в ъ п р е к и че химичните методи са за предпочитане, имайки предвид процесите на изолиране и пречистване. Химическите способи за получаване на синтетичният пептид от изобретението включват етапни методи за елонгиране и Фрзгментни кондензационни способи, включващи методи за синтез с течна фаза или твърда Фаза, такива като азидни

I методиметоди с кисел хлорид, методи с кисел анхидрид, методи със: смесен кисел, анхидрид, ОСС методи, методи ' с активиран естер (р-нитроФенол), естерен метод, метод с р-хидроксисакцимамиден естер, карбоимидазолов метод и т.н.), окислително-редакционни методи и ОСС-активаиионни методи. Изобретението също предлага Фрагментен кондензационен метод за производство на синтетичните пептиди от изобретението 6 които хидрофилната пептидна група със защитен Ν-краи и защитени Функционална страна на веригите слажи преходен за производство» В сравнение с поетапният елонгационен метод, Фрагментния кондензационен метод осигуряващ по-лесно пречистване на необходимата субстанция, е по-подходящ за синтез с голям обем и има особеност, че могат да бъдат предотвратени загубите от неочаквани грешки. Синтетичните пептиди от изобретението могат да бъдат получени посредством кондензиране на хидрофобната част с предимно произведена хидрофилна пептидна част със защитен Ν-край и защитена функционалната страна на веригите, посредством метод за синтеза с течна или твърда фаза» Защитните групи за М-терминала и функционалната страна на веригите не са частично ограничени като дължина, тъй като те са защитни групи и се прилагат в обикновена синтеза на пептиди. Групите на 9-Флуоренилметилоксикарбонил (Гтос), 2-хлорбензилокси карбонил (2-С1_2) или С~бутилаксикарвонил (Бос) могат да бъдат прилагани като протективни групи за терминалната аминокиселинна група, Ртос, Вос или карбобензокси ί. Ζ) или толуолсулфонилна група (Тоз) могат дабъдат използвани като протективни групи за лизин» триптофан,Ргоос, Вос, ϋηρ, Вот, Βζΐ или Таз могат да бъдат използвани

като поотективна пзнпа за хистидин и 1*1 Ίγ, Ртс. 1*1 Рг или. Ίо~ могат да бъдат използвани като протектибна грипа за аргинин. Така, пептидите, които могат да бъдат използвани като междинни за полнчабането на синтетичният пептид от изобретението включват Ршос - пролин - валин хистидин (ТгΌ ) - лебцин - лизин(Вос) - аргинин (1*1 ίτ) Ртос - пролин - валин -- аспарагин - лебцин - лизин(Вос) - аргинин(1*1Рг) и Ртос - пролин - валин -· аспарагин - изолебцин ~ лизин(Вос) - аргинин(МРг) „ Белодробното повърхностно активно вещество (по-нататък в текста ще бъде означавана като "повърхностното активно вещество от изобретението“) може да бъде получавано посредством съединяването на синтетичния пептид от изобретението с липидна смес, състояща се от хлорфосфоглицерид, киселинен фосфолипид и аналог на мастна киселина » Подходящо е да се установят композиционни съотношения, така че тегловните съотношения на всеки от тези компоненти към общото сухо тегло на крайния продукт да са 0.1 - 0.57. (М/М.) за синтетичния пептид. 50.6 - 80.57, (М/Ш за хлорфосфоглицерида, 4.5 - 37.6% (Ю/Ю за киселинния ФосФолипид и 4.6 -24.67. <№/№) за аналога на мастна киселина. Примери за холиноби фосфоглицериди, които могат да бъдат използвани съвместимо в състава на повърхностното активно вещество от изобретението включват 1.2 д и а ии л г л и и,е р о - ( 3) - Ф о с Ф ο хо ли н и , т а к и в а к а то 1,2 дипалмитоилглииеро - (3) - фосфохолин (дипалмитоилФосФатидилхолин), 1,2 - дистеароилглицеро - (3) - Фосфохолин. и 1 - стеароил - 2 - палмитиолглицеро - (3) Фосфохолин и т.н.; 1 - алкил - 2 ·- ацилглицеро - (3) - I '1 ФосФохолини., такива като хексааеиил - 2 - палмитоилглииеоо - (3) - Фосфохолин и 1 - октарецил - 2 - палмитоилглицеро - (3) - Фосфохолин и т.н.5 и 1.2 - диалкилглицеро ~ (3; Фосфохолини, такива като 1,2 - дихексадеиилгдииеро - (3; ..... Фосфохолин и т.н. Въпреки че, оптични изомери. базирани на вторият въглероден атом на глицероловия остатък, са налице за гореспоменатите съединения. всяка от Д-~ (дясновъртяща), Я— (лябовъртяща) и ДЛ ""Форми могат да бъдат използвани като повърхностното активна вещество от изобретението. Освен

споменатите по-горе единични съединения на холинобите фосфоглицериди и микстаои съставени от два или повече различни 1,2 - диацилглицеро - (3) - Фосфохолини с аиилови групи, за предпочитане с две наситени аиилови групи, с 12 до 24 въглеродни атома или смеси от такива микстари, и г оре с πомен а т и те единични с ъ е д и н е н и я м о г а т да бъдат олиноб фосфоглицерис). Примери з а π о д х о д я щи к и с е л и ф о с ф о л и п и д и включват - диацил - зп - глицеро - (3) - Фосфорна киселина (Я - а фосфатидна киселина). 1,2 -- диацил - зп - глицеро - (3)

ФосФо - Л - серин (Фосфатидилсерин), 1,2 - диацил - зп глицеро - (3) - ФосФо - зп - глицерол (ФосФатирилглицерол) и 1,2 - диацил - зп -· глицеро - (3) - (1) - Я - мио - инозитол (ФосФатидилинозитол). Първата и втората позиции на тези съединения могат да бъдат заместени от същата ацилова група или от различни аиилови групи. Тук за предпочитане е аиилобата група да има от 12 до 24 въглеродни атома. Примерите за подходящи аналози на мастни кисели киселини включват свободни мастни киселини, соли на алкални метали на мастни киселини. алкилови естери на мастни к иселини глицеринови естери на мастни киселини и мастни

а миди или смеси, състоящи се от аба или повече от гореизброените и мастни алкохоли и мастни амини. В представяното описание на изобретението, терминът "аналози на мастни киселини" включва гореспоменатите мастни алкохоли и алифатни амини. Мирис типовата киселина, палмитинобата киселина или. стеариновата киселина могат да бъдат използвани като свободни мастни киселини, въпреки че палмитинобата киселина е за предпочитане. Натриевите соли. калиевите? соли, магнезиевите соли и калциевите соли на гореспоменатите мастни киселини могат да бъдат използвани като соли на алкалните метали на мастни киселини, въпреки че натриевият палмитат е предпочитан. Леките алкилови естери с: от 1 до 4 въглеродни атома могат да бъдат използвани като алкилови естери на мастните киселини, въпреки че е предпочитан етиловият палмитат. Моноглицериновите естери могат да бъдат използвани като глицеринови, естери на мастни киселини, въпреки че предпочитаният е монопалмитинът. Алкохоли с от 1,4 до 18 въглеродни атома могат да бъдат използвани като мастни алкохоли, въпреки че е предпочитан хексадециловия алкохол, Амини е 14 до 18 въглеродни атома могат да бъдат използвани като алифатни амини, въпреки че хексадециловият амин е предпочитан, Гореспоменатите калинов Фосфаглицерид, кисел фосфолипид и аналог на мастна киселина могат да бъдат продукти, извлечени от растения или животни, полусинтетичми продукти или синтетични химически продукти, а също и от продукти, предложени на пазара. Повърхностното активно вещество от изобретението може да се продуцира посредством изсушаваме и. втвърдяване под редуцирано налягане, микстура от равтооси. на пептидът от изобретението и гореспомената липидна смес: и суспендиране на така получения остатък в подходяща суспендираща течност и след това последваща лиофилизация.

Примери за разтворители, които могат да бъдат прилагани за получаване на разтвора на пептида от повърхностното активно вещество от изобретението включват м р а в ч е н а к и с е л и н а , Т Р А , 0 М 3 0 , х л ο р ο ф о р м м етан о л , х л ο р ο ф о р м , м е т а н о л, е т и л е н о в х л о р х и д р и н и т е т р а х и д р о ф у р а н, Примерите за разтворители, които могат да бъдат прилагани за получаване на разтвора на липидната смес, включват хлороформ и хлороформ--метанол [ 1:2 - 5:1 ίν/ν)}. Примери за суспендираща течност включват вода и водно- метанолови смеси [4 : 1 - 20 : 1 (ν/Μ)3, въпреки че водно- метаноловите смеси са за предпочитане. Суспендиращата реакция се извършва в продължение на 5 - 6- минути, за предпочитане за 15 - 30 минати при 30 - 60“ С и

наа-добре при. 40 - 50“ С. Повърхностното активно вещество от изобретението, получено по този метод, неизбежно съдържа малко количество от остатъчна бода. Обаче, за предпочитане е да се извърши изсушаване, така че тегловния процент на остатъчната вода се намали до 5,0% (М/М) или по-малко от общото тегло на π ο о д у к т а , А к ο π а в ъ р х н о с т н а т о а к т и. в н о в е ще с т в о е и з с у ш е н о д о това равнище, етаполовият остатък ще стане неоткриваем в с л у ч а и т е , к о г а т о с е и з π о л з в а т в о д н о - е т а н о л о в и м и к с т у р и . Сухи композиции на повърхностното активно вещество от изобретението под формата на прах могат да бъдат еднакво с: у с п е н д и р а н и. или д и с п е р г и р а н и в разтвор подходяща

··· Л 4 '· Физиологична концентргция на еднобалентна или абавзлентна сол на метали, например 0.97. разтвор на натриев хлорид или 1.5 тМ калциев хлорид, или буферен Физиологичен разтвор. съдържаш, такива соли, посредством използването на ръчна бъркалка или миксер с няколко скорости или прибор, генериращ ултразвук, Π о в ъ р х н о с т н а т а а к т и в н о с т,, с у с пенз и δ и л и т е та и Фармакологичните свойства на повърхностното активно вещество от изобретението, получено по този начин, ще бъдат подробно ο п и с а н и π о - д о л у . 1) Повърхностна активност а) Ефект на снижаване на повърхностното напрежението Ефектите на снижаване на повърхностното напрежението

са измерени посредством методът на Тапака и съто. ( ΰ'ουгпаI ο·ί в а рап е ее МесНсаХ ЗосхеХу Тог В ίο,ΐο с:,хс «ч1 1п1ег“Ре?гас:е? ,, νοί 13,, Мо 2, р. 37,, 1332),, Суспензия на повърхностното активно вещество от изобретението (ЛАВИ! беше накапана във физиологичен разтвор(с повърхностна зона от 54.0 стг), %ака че да се получат 1.0 2,0 цд от ПАВИ за 1 см2. Споменатата повърхностна зона беше стеснена и разширена в границите на 54,0 - 21.6 см2 за 2 до 5 минути и беше извършено продължително измерване на повърхностното напрежение при 37’С с везна на 14 х 1 Ке1ту (произведена от Куома ХпЪегТасе Зсхепсе 0ο.1_£ά.). Максималното повърхностно напрежение бе 24.7 - 34.1 вупе/ст а минималното - от 0,2 до 8.7 вупе/ст, показвайки, че снижавайки повърхностното напрежение, ефектите на повърхностното активно вещество от изобретението понижават на повърхностното напрежение на Физиологичен разтвор. Измервания извършени, със същия метод за снижаване на повърхностното напрежение показват понижаване на ефекта на ЗГ-—-3 до максимални стойности от 26.,8 - 50 - 3 вупе/ст и минимални стойности 1.0 - 13.5 вупе/ст. Повърхностното напрежение на Физиологичния разтвор при 37° С бе 70.5 вупе/ст. δ) Способност за разпространение над разделителната повърхност между газ-течност Суспензия н а π о в ъ р х н о с т н ο т о а к т и в н о в е ще с: т в ο о т и з о в р е т е н и е т о в е ш е накапана върху повърхността на физиологииен разтвор, така че да се получат 0.8 - 1.5 цд за .1 см2от повърхността на физиологичния разтвор и изменението във времето на повърхностното напрежение беше измерено чрез метода на вертикална пластина от момента, непосредствено след като суспензията беше накапана. Температурата при и з м е р в а н е то бе 3 7 °С. Равновесното състояние се отнася за времето, когато повърхностното напрежение достига фиксирана стойност от момента. непосредствено след накапването на пробата и стойността след това време се нарича равновесно повърхностно напрежение. Π о в ъ р х н о с т н и т е а к т и в н и в е ще с т в а о т и з о б р е т е н и е т о Формират филм върху повърхността между газ-течност за кратко време от 30 - 60 секунди и понижават повърхностното напрежение до 26.7 - 34.3 вупе/ст. Измервания, извършени със същия метод за разпространение на повърхност газ-течност, на ефекта на ЗР-З показват, че? след 120 секунди повърхностното напрежение беше 38,1 -· 52,.? в у η е/спи Това показва, че повърхностните активни вещества от изобретението се разпростират бързо над повърхността газ-течност и бързо снижават побьохностното нзпоежение. в) Абсорбционна способност към разделителната π ов ърхнос т межд а газ-т еч нос т Бяха приготвени суспензии на Физиологичен разтвор, съдържащи 0.2 - 1.0 тд от повърхностното активно вещество от изобретението на 1 го1 при 37вС и бяха измерени степените на абсорбиия на суспендираните повърхностни активни вещества от изобретението от разделителната повърхност между газ-течност н а Ф и з и о л о г и ч е н р а з т бор . Абсорбционните способности бяха измери според метода на Κίηα и сътр. (Аяепсап боите.! οί РКузхоХоду, Να. 223, р.715, 1972),, Суспензията беше инжектирана на дъното на теФлонов резервоар с диаметър 5 ст, съдържащ физиологичен разтвор и след това беше извършено разбъркване5 с магнитна бъркалка. След пр ек р а т я в а н е то на р а зб ър к в а нето, а 5 с οр б и,ионната способност беше определена чрез разликата на повърхностното напрежение. Π о в ъ р х н о с т н ο т о актив н о вещество от изобретението понижи повърхностното напрежение до 28.3 - 36.8 вупе/ст за 30 до 1.00 секунди след спиране на разбъркването и след това повърхностното напрежение остана постоянна. Т о в а π о к а з в а . ч е π о 6 ъ р х н о с т н ο т о а к т и 9 н о в е ще с т в ο о т и з о б р е т е н и е т ов с а с п е н д и р а н о с ъ с т о я н и е , с е а б с ο ο б и р а о т разделителната повърхност между газ-течност за 30 до 1.00 секунди и образува Филм със силна повърхностна активност. Когато се измерва по същия начин 81---3, се установява, че постоянни повърхностни напрежения от 42,2 до 58.3 Оупе/ст бяха осъществени за 150 секунди и повече. псж а зва , че абе ор б и,йонна та с пас об нос т к ъм Това че а б с ор б и,йонна та СПОСОРНОСТ разделителната повърхност межда газ-течност на 5Р-3 е по-ниска от тази на повърхностното активно вещество от изобретението. и че последното притежава голяма способност д а πов и шава π о в ър х но с т на т а абе ор 5 и,и я .

2 ) С π о с ο б нос т з а с у с п е н з и. я Бяха проведени тестове за изпитване на способността за суспендиране б съответствие с метода посочен от варапеее иШПу тове! риЬНсаНоп Να. Не1-4-76965. Способността за суспендиране беше оценена по отношение? на дисперсионната ефективност за специфично време след началото на процеса на дисперсия, както и на размера на максималните? оиспергирани частици 2 минати след началото на

процеса. Бяха проведени тестове за изпитване на способността за суспензия, кзкто следва. По 60 тд от всяко от повърхностните активни вещества от изобретението бяха диспертирани във 20 милилитрови стъкленици. След това бяха прибавени по 2 т1 Физиологичен разтвор към всеки съд и виалите бяха поставени в шеикърът на 1макх КМ 3бакег--0---3 (произведен от 1мак1 Запдуо Со „ 1_Л'.с:1. ) и разклащани при 270 удар за минута. Дисперсионните свойства на всяка проба бяха визуално наблюдавани е у8елинителни стъкла на всеки 30 секунди, през първите 2 минути след началото на бъркането. всяка минута между 2-та минута и 4-та минута след началото на разбъркването и всеки 10 минути, след четвъртата минута от нач а лοто на 5ър к а нето. Способността за суспензия беше оценена по отношение на дисперсионната ефективност за всяко специфично време от две лица. като всяко лице оценява по 10 проби. За суспензията на пробите се съдеше по това да няма малки -4

количества в к онтейнеоа и дали съставът е аиспергират р а б н о м е р н о б ъ б Ф и з и о л о г и ч н и я р а з т 6 ο р , ф о р м и р а и к и δ я л а к о н с и с т е н т н а с м с п е н з и. я . Способността за суспензия беше оценена по отношение на дисперсионната ефективност за всяко специфично време от всяко лице, като процент на пробите, за които суспензията е завършена по отношение на общия брой (.10 стъкленици.) на пробите и беше посочена като средна стойност, определена от двете лица. Беше измерен размера на максималните диспергирани частици как то следва. По 60 т1 от всяко от повърхностните; активни вещества от изобретението бяха диспергирани във 20 т! стъкленици. След това бяха прибавени по 2 т! от Физиологичен разтвор към всяка стъкленица и последните бяха разклащани непрекъснато за 2 минути при същите условия, като споменатите по-горе. След това беше търсена с микроскоп най-голямата частица в суспензията и нейният диаметърът бе определен с дебеломер. Беше установено, че повърхностните активни вещества от изобретението вяха по-добре диспергирани за двете минути. и че; максималните размери на техните частици беше с 0.8 тт или по-малък, показвайки, че тяхната способност за суспензия е добра. 3 ') Ф а р м а к о л о г и ч н и с в о й с т в а а) Остра токсичност Острата токсичност на повърхностните активни вещества от изобретението бяха изпитани, като се използваха 5 седмични мъжки мишки 1СК и плъхове ΜΐβίβΓ» Оралната летална доза - 50 ίΙ_Ε'~50ί и перитонеалната (1.-Е-50! за мишките беше 2.4 - 10.0 д/кд и 1.0 - 5.0 д/кд респективно, докато за същите за плъховете бяха 1.5 - 5.0 д/ксз и 1.5 - 2.5 д/кд .... I у.... реепек тибно. 3 ) Π о д о е. т р а т о к с и ч н о с т Повърхностните активни вещества от изобретението бяха инжектирани итраперитонеално на зрели плъхове тип МхзРег с дневни дози от по 300 - 600 тд/кд в продължение на 1 месец. Нямаше различия в теглото на плъховете и не бяха видени аномалии при хистологичните изследвания с невъоръжено око. в) Ефекти, поддържащи алвеоларния обем Недоразвити зародиш от заек, едва ли произвеждат белодробно повърхностно активно вещество в 27 дек от периода на бременността и са в състояние на дефицит на белодробно повърхностно активно вещество. Така те се използват като модел на опитни животни за изучаване на синдрома на дихателна недостатъчност при новородените. 5 заешки зародиша в 27-ия ден на бременността бяха използвани и обемите на алвеоларното пространство (от сега ще бъде означаван като белодробен обем) бяха измерени при различни стойности на въздушно налягане при 37“С. Шията на фетаса беше срязана и бяха извършени продължителни измервания с воден манометър, прикрепен към трахеята, 5 минати след прилагането на повърхностното активно вещество от изобретението в респираторния тракт. Въздушното налягане нарасна до 30 сгп Н2 0 с двуканална с отделно задвижване на буталата помпа Να. 940 (производство на Нагуагв Со. , 1)ЗА) за разширяване на алвеолите. Въздушното налягане след това беше намалено до, 0 ст Н20 доколапс на алвеолите, докато се измерваха белодробните обеми при различни налягания. Белодробните обеми бяха отбелязани в милиметри за килограм тегло (т1/кд), Повърхностните активни вещества от изобретението бяха и. н ж е к т и. р а н и ч р е з а и р е к т н и и н ж е к ии и а т 0.0 т; к онцентр а ции на 6,07, (Н/0) б суспензии на Физиологичен разтвор и повърхностни активни вещества от 1.0 респираторния тракт. Белодробният обем в момента, когато налягането беше намалено ао 5 ст Н20, показа Функционалния остатъчен к а па иитет „ к а то на ра с тв а нето на този об ем в од и д ο πо- в ис ок а активност на повърхностното активно вещество от изобретението. Като контрола беше поставен физиологичен разтвор вместо повърхностното активно вещество от изобретението. Белодробните обеми (при 5 ст Н20) на недоразвитите зародиши от засили от контролната група бяха от .1 - '5 т!/кд. Отбелязваме, че алвеолите традно бяха разширени. В пълния срок Фетасите в 30-ия ден от бременността имат нормални нива на белодробно повърхностното активно вещество» Техните белодробни обеми (при 5 ст Н20) са 35 53 т1/кд, показвайки че алвеолите са адекватно разширени, и че може да бъде осъществена нормална аспирация. В случаите, където 5Р-3 беше прилаган, белодробните обеми (при 5 ст Н2 0) на недоразвити зародиши бяха 15 - 25 т]./кд, показвайки неадекватно разширяване на алвеолите. В случаите, където повърхностното активно вещество от изобретението беше инжектирано, белодробните обеми (при 5 ст Н:-0) бяха 39 - 55 т1/кд» показвайки че повърхностното активно вещество от изобретението подобрява белодробния обем на недоразвитите зародиши до нормални нива. Както бе описано по-горе, синтетичните пептиди от изобретението притежават качеството силно да повишават повърхностната активност на липианите снеси. Това дава възможност да се произвеждат лечение на синдрома на дихателна т е р а п е в т и ч н и с р е а с т б а недос та тъчнос т , които за са активни по отношение на побърхностна ак тибност. суспенсибилитета и Фармакологични свойства на повърхностни активни вещества от изобретението, съдържащи синтетичните пептиди от изобретението и липидна смес. Л е к а р с т в е н и т е с ъ с т а в и . и м а щи π о в ъ р х нос т н и а к т и. в н и вещества от изобретението, като активният инградиент може също да бъде използван за лечението на други заболябания, за които белодробното повърхностно активно бешество показва терапевтичен ефект, включително при постопеоативна дихателна недостатъчност, астма, бронхити., некротични ентерити, при н ο в ο р а д е н и , с т ома шн и и. д а о д е н а л н и я з в и , р е с п и р а т о р н и болести, причинени от вируси и тръбна непроходимост, и за предпазване на сраствания на фалопиевата тръба и за с л е д ο п е р а т и в н и о р г а н ни сра с т в а н и я, и к а т о е к с пек т о р а н т и. Терапевтични средства за синдрома на дихателна инсуфициенция, предлагани чрез изобретението, съдържат 50 .1000 тд от повърхностното активно вещество от изобретението за доза при употреба от деца и 500 5000 тд от повър хностното а ктив но 6 еществ о възрастни. Такива дози са суспендирането във вода, Физио. за доза за приготвени огичен разтвор употреба от посредством или буфери. т.е. те са Физиологично толерантни при концентрации от до 72 часа посредством .10 пъти. Формата на употреба и 10.0У. (Μ/ν) . Тогава те се прилагат за лечение с л е д и з я в и т е н а б е л о д р о б н и н а р у ш е н и я , инжектиране в белодробния тракт от 1 до Композициите могат също да бъдат вдишвани под ηрах без саспендиране. Дозирането, начина на честотата на приема могат да бъдат променяни, в зависимост от симптоматиката на пациента и съвпадащо лечение. Терапевтични средства от изобретението могат да съдържат, а к о е н е ο δходимо, т а к ива * ар м а к ологични средс тва к а т о е: т а б и л и з и р а що с р е д с т в ο, п р е д п а з н о с р е д с т 6 о, и з ο т о н и ч н о средство, буферни средство, суспендиращо средство, з н тиок ислително с р ед ство и ποвър хнос тно а к тивно вещес тв о или такива лекарства к ато бронходилататори. антиалергични средства,карциномостатични средства, антивирусни средства, противовъзпалителни средства и антигъбични средства. Дозата може съвместимо да се приема под формата на течност или·прах. Терапевтичните средства от изобретението могат с)<&amp; бъдат напълнени в запечатани опаковки като ампули и флакони и съхранявани като стерилни лекарствени средства. Примери за изпълнение на изобретението 1Де бъде описана с повече подробности референция за и з ο б р е т е н и. е т о с ъ с с л е д н и т е η р и м ери. (1) Получаване на пептида В п р и м е р и т е,, и з δ р о е н и. π о - д о л у , м о л е к у л н ο т о т е г л о н а синтезирания пептид беше измерено с помощта на мас спектрометър чрез бомбардиране с бърз атом (РАВМ5). Беше използван Мас анализаторът ЛМ5-8102А (3Ε0ί_ .ДЛ в. ) и беше използвана цезиева пушка .1.0 КеО) като източник на и.они.

[Пример 1] Пептидът (пептид А) показан чрез [последователност По 5], беше синтезиран на Фемилацетамидметил (РАП) на повърхност от смола с помощта на метода за синтеза на твърда Фаз а в съатв етств ие метода, οписа н в "Пептид и те" (6 гозз Е - апв ИехпепКоТе 0„ ес)з»,, Вагапу □« апс! Негг:Нп.ес1 Р„ аи^Ьогз, νοί2,, рр„ 1--284,, Асавеп:!. с Ргезз,, Пеш гогк,. 1880)„

Остатък от лебцин с С~терминал беше трансформиран с Е-бУтилоксикаебонил - лебцин (Вас - лебиин) и свързан към РАМ смола през оксиметилфенилаиетамидметилоба връзка. След свързване С-терминала. смолата Вос - лебцин - Рая» (0.70 гпо 3. / д , 0.3 5 д ) &amp; еше тр а нс фер ир а на к ъ м р е а к цион ни я к о нте инер на пептиден синтезатор (Μοάβΐ 990Е, Весктап ЗпзСгитепСз, 1пс.). Аминокиселини, към които се прилага предпазно третиране, след това бяха прибавени в посока на Ν-края на повърхност от смола чрез симетричен анхидриден метод за синтезиране на напълно защитен пептид ~ 0 ~ смола . Но при кондензацията на аргинина, беше извършено двойно съединяване, при използване на N,N - д и и,и к л ох е к с и лк а р б о д и и м и д / х и д р о к с и б е н з о тр и а з о л Г С ο η х е е ΐ а! СГюш „ Ве?г „ 3.03,, 788--798 (1970)“!,, N - те р ми н а л н а а м и. н о гρ уп а от 9 с и ч к и а м и н о к и с е л и ни δ е ш е защитена с Вос грипа и функционалните странични вериги бяха

защитени със следните групи преди използването на а м и. н о к и с е л и ни в р е а к и,и ята : а р г и н и н - Т о з ; (т о с и л) лизин - 2СЕ2 ; (2-хлорбензилоксикаобонил) цистеин -- 4МеВс1 : (4-метилбензил) х и с т и д и н -- Т о © : (т о с и л ) Техните кондензационни реакции бяха потвърдени чрез нинхидоинобия метод на кахзег Се;»!:. Напълно защитената пептид - 0 - смола (155 тд) беше оставена да набъбне за 5 минути в дихлорметан. Беше отстранена N - и Вос защитна група с ТЕА, съдържаща 17. (ν/ν) индол и 0.17. (ν/ν) етандитиол. След това пептидът беше посредством третиране на незащитения 9езводен водороден Флуорид (НЕ) (.11 разцепен от смолата пептид-0-смола с <η 1 ) , към които бяха прибавени р-крезол (1 ίηΐ ) , р-тиокрезол (0.2 о) и 0ΙΤ30 (1 я>1 ) зз 60 минати при 0°С» Водороден флаорид и ОМБО вяха дестилирани под бакаам при 0вС. Отстраненият пептид и след това смолата вяха промити трикратно със стаден диетилов етер (15 т1 ) иотделения пептид беше екстрахиран чрез промиване за четири пъти в студен ТРА (5 мл). Екстрахираната течност беше Филтрирана незабавно и беше прибавена леденостадена вода зада преципитира сарабия пептид. Саробия пептид след това оеше центрифагира н на 1000 х д и 0'~ С за 30 минати възстановен като преиипитат. Този преципитат Реше промит с диетилов етер (15 т1). След повтарянето на тези промиваши процеси с използване на диетилов етер, етилов аиетат и дестилирана вода, бяха добити 84 тд от пептид А. Този суров пептид беше раз творен в 50 У. воден разтвор на 0М80 и беше пречистен чрез обратима фаза на прецизна т е ч н а х р о м а т о г р а Ф и я π о д в и с ο к о н а л я г а н е ( Η Р к. С ) и з η о л з в а й к и μ ВопвазрНегез и С8-300 колана за събиране на чист пептид А. Беше извършено елюиране за 5 минути е използване на 50*/. воден разтвор на ацетнитрил, съдържащ 0.1*/. ТРА, катоелюент. След това беше извършена елюиране за 30 минати под л и н е й н ο к он це н т р а ци оне н г р а д и е н т , фо р м и р а н ч р е з гореспоменатия елюент и 80"/. воден разтвор на ацетнитрид, съдържаш, 0.1Х ТРА. Наличието на пептида в елюента беше демонстрирано над ъ л ж и н а 2 4 5 η т ( с п е к т р ο Ф ο т о м е т ъ р ; 3 а р а п Зрее 1. г о 5 с ο р ί с С ο. к. Т с!. Μ о в е 1 870- и V ) и с д и Ф е р е н ци а л е и р е ф р а к т о м е т ъ р (81"1хтас1 ги МапиТасТигхпд согрога1хоп Г1обе1 КПТ-бй) РАВМ8 (М+ Н+ ); 3837.1 (изчислено молекулно тегло; 3835,9) [Пример 2.3 Пептирът (пептид В) със Ссекбенция Νο. 6] беше синтезиран посредством метод с твърда Фаза с използването на системата за синтез на полипептиди със твърда Фаза, "Кокки-Зап" (търговска маркаг Кокизап СЬетхса1 могкз Со. , и позовавайки се на методите показани в "δοϊίβ РКазе РерЪФве Зуп^Кезхз - А Ргасвхса! АрргозасК" от Е. ί·Γί НегФоп апс! лф Вберрагв ( рр „ 25--189) Охтогв ϋη ί иегз:). Фу Ргезз, ΟκίοΓό) и от Κβηίοήί Акадх еб а1. (Свет, РРагт. В и .11р р „ 2661 2 6 6 4 :1.9 8 9 ) „ N ... Й - φ ··- фдуооенилметилоксикарвонил - леви.ин - 0 - смола (Ртос - левиин - □ - смола) (0.20 тто1/0.5 д), в който 9 - Ф л у о р е н и л м е т и л о к с и к а ρ δ о н и л · л е в и, и н (Р т о с леви.ин) е свързан към 4 - (хидроксиметил) Феноксил-съполимер (стирен 1"/, дивинилов бензин) смола, беше използван като започна смолата. Този смола беше оставена да набъбне за 20 минзти с Ν, N - диметилформамид (ϋΜΡ) и след това промита четири пъти с ОМР. 202 пиперидин в 0М5 беше след това прибавен и сместа беше разклащана за отстраняване на защитните групи. -Тази операция беше повторена три пъти да отдели напълно защитните групи. Последва трикратно промиване с ОМР, трикратно с N - метил ~ 2 - пиролидон и трикратно с ОМР отново за отделяне на излишъка от пиперидин в смолата. Наличието на пиперидин беше проверено по това време с хартия за рН. ОМР (6 т1 ) Ртос хидроксибензотриазол (0.5 тто! ) и

левиин (0.5 тто!), N Ν, диизопропилкарбодиимид (0.5 тто1) бяха прибавени и сместа беше разклащана в продължение на 90 минати за да се проведе реакцията кондензация. Смолата след това беше промита четири пъти с ОМР за да бъдат елиминирани излишните реагенти. Тази кондензационна реакция беше тествана с кахвег тест чрез нинхидриноб метод. Набелязаният з м и н о к и с е л и н и т е б я х N····тео нина ла на πов ър формира пептида план за синтеза беше изпълняван и а прибавяни стъпка по стъпка 8 посока на хността на смолата, посредством това да 0 - смола с Ν-краО и напълно защитени функционални гр апи. Кондензационните реакиии за въвеждането на аргинин, лизин, хистидин, пролин и цистеин бяха изпълнени двукратно за 1.20 минати всяка. Посредством това, 20% пиридин в ОМГ бяха прибавени към защитения пептид - 0 ..... смола за дз. отдели Ртос защитната група от N.....терминала. След това пептида -· 0 -- смола беше промит шест пъти с ОМР и шест пъти с метанол и изсушен при понижено налягане. т-крезол (0,2 т1 ) , 1,2 - етандитиол (0,5 <п 1 ) , тиоаниаол (1,2 т1), ТРА (7.5 т1)' и триметилсилибромид (1,4 (п1 ) бяха прибавени, към изсушения пептид - 0 - смола (100 <пд) , докато се извършваше разбъркване и охлаждане с: лед. След това сместа беше разбъркана за 120 минути, докато охлаждането <::: лед отдели защитните групи от Функционалните странични вериги и отдели пептида от смолата и след това последва филтриране през стъклен филтър (63), Филтратът беше концентриран под редуцирано налягане до приблизително 5 т1 с евапоратор. След това беше прибавен аиетилоб етер за да преципитира пептида. Така преципитираният пептид беше с ъбр а н ч рез с тъклен Филтър (63), прамит петкратно с д иетилов етер и след изсушаване под намалено налягане, бяха получени 60 тд от пептида В. Аминогрупите с Ν-терминал на всички аминокиселини бяха защитени с Ртос група и функционалните странични вериги 5яха защитени със следните групи преди използването на а ми м ок ис е лин ит© в р е а к и,ия та : а р г и. н и н - Μ1: г : (4 -- м е т о к с и -- 2.3,6 - т р и м е т и л δ е н з е н с у л ф о н и л) л и. з и н -- В о с : ( 1 -- бут и л о к с и к а р б о н и л ) иистеин - Тг1: ; (тритил) хистидин - ϊτΐ ; (тритил) Приблизително 100 гад от суровия пептид 5яха разтворени 6 ТРА (1 т1 ) и четири, пъти това количество от подвижна Фаза на разтворител, т.е.Ю тМ (3 - меркаптоетанол в ТРА - аихлорметан (5 ! 95. У/У), беше прибавено за да се получи 20 тд/т! разтвор на проба за пречистване посредством КРОС с използването на АзаКхрак 68 - 510 (® 7.5 :·; 500 тш) колона (търговска марка 8 АзаЬх СЬетх са1 1пвиз-Ьгу Со.иТв.) посредством това да се събере чист пептид В. Бяха използвани 10 тМ 8 - меркаптоетанол в ТРА ..... д и х л о р м е т а н (5:9 5 . У / У ) к ата е л ю е н т и е л ю и. р а н е т о б е ш е проведено при скорост на потока от 0.8 т1/гпхп за 80 минути. Наличието на пептида в елюианта беше регистрирано на дължина 245 пт (спектрофотометър; Зарап ЗресТгозсср!с Со „ 1...Тс1. Мове! 870-иУ) и с диференциален рефрактометър (ЗНхтавги Г'1апиТл!:“иг 1 ηд со грога!',ίоп Нос!е.1. НЮ—6А) РАВ148 (1*1+ Н+ ); 30.17.9 (изчислено молекулно теглог 3016.9) ГПример 3] Пептидът (пептид С) с [последователност Νο» 71 беше синтезиран по същия начин както при пример 2. РАВМЗ (14+ Н+ ); 3116.0 (изчислено молекулно тегло? 3115.1) [Пример 4] Пептидът (пептид ϋ) със [секвенция Νο. 8] беше синтезиран по същия начин както при пример 2. РАВМВ (1*1+ Н+ ); 2663.7 (изчислено молекулно тегло: 2662.5) [Пример 5'1 Пептидът (пептид Е) със Гсеквениия Мо» 9'] беше с и н те з и р а н π о сьши я н а ч и н к а в: т ο п р и пр и ме р 2 . ЕАВМЗ (М+ Н+ ); 2211.2 (изчислено молекулно тегло; 2209.9) [Пример 6] Пептидът (пептид Е) със [секвениия Να. 101 беше с и н т е з и р а н π о с ъ щи я н а ч и н к а к т ο п р и η р и м е р 2 . ЕАВМ8 (М+ Н+ ); 2647,5 (изчислено молекулно тегло; 2646.4) [Пример 73 Пептидът (пептид 6) със [секвениия Να. 111 беше синтезиран по същия начин как то при. пример 2. ЕАВМ8 (М+ Н+ ) $ 3018.1 (изчислено молекулно тегло; 3016.9) [Пример 8Ί П е п т и. д ъ т ί η е п т и д Н ) с ъ с [ с е к б е н и, и я N ο , 12'] б е ш е използвайки системата за синтез на полипептиди със твърда Фаза, по същия начин как то при. пример 2. За начална смола беше използвана Флуоренил метилоксикарбонил -НОрлвВЦИН норлевцин-0“ смола) (0.20 якпо1/0.5 д). оставена да набъбне за 20 минути с ΏΜΡ и след това промита четири пъти с ОМЕ. 207. пиперидин в .ОМЗ беше след това прибавен и сместа беше разклащана за отстраняване на защитните групи. Тази операиия беше повторена три пъти да отдели напълно защитните групи. Последва- деветкратно промиване с ОМР за отделяне на излишъка от пиперидин в смолата» Наличието на пиперидин беше проверено по това смола н - а 0 - смола (Етос - Тази смола беше време с хартия за рН« ()№: (6 пч! ) :; и д р о к с и б е нз о т р и а з о л Нпосг-МХб? (0,. 5 ίηίίΐο.!.) ( 0.5 тто1) и N , Ν' диизопропилкарбодиимид (0.5 тто!) бяха прибавени и места

беше разклащана; <3 продължение на 90 минати за да се пробеае реакцията кондензация. Смолата след това беше промита четири пъти с ОМР за да бъдат елиминирани излишните реагенти. Тази. кондензационна реакция беше тествана с кахзег тест чрез нинхидриноб метод. Набелязаният план за синтеза беше изпълняван и аминокиселините бяха поибабяни стъпка по стъпка в посока на Ν-терминала на повърхността на смолата, посредством тоба да формира пептида - 0 ·-- смола с Ν-краи и напълно защитени Функционални групи. Кондензационните реакции за въвеждането на аргинин. лизин» хистидин, пролин и цистеин бяха изпълнени двукратно за 120 мин ути в сяка . Посредством това, 202 пиридин в ПМР бяха прибавени към защитения пептид - 0 - смола за да отдели Ртос защитната група от N-терминал а . След това пептида ..... 0 - смола беше промит шест пъти с ОМР и шест пъти с метанол и изсушен при понижено налягане. т-крезол (0.2 т1), 1,2 - етандитиол (0.5 т1), тиоанизол (1.2 т1 ; ΤΡΆ (7.5 т1) и триметилсилибромиа (1.4 т!) бяха прибавени към изсушения пептид - 0 - смола (100 тд ) , докато се извършваше разбъркване и охлаждане с лед. След това сместа беше разбъркана за 120 минати, докато охлаждането с лед отдели защитните гоупи от функционалните странични вериги и отдели пептида от смолата и след това последва Филтриране през стъклен Филтър (63). Филтратът беше концентриран под редуцирано налягане до приблизително 5 т! с ебапоратор. След това беше прибавен диетилов етер за да преципитира пептида, Така преципитирзният пептид беше събран чрез стъклен Филтър (63), промит петкратно с диетилов и слео изсушаване пор намалено налягане, бяха получени етер 65 ίηα от пептиоз Н„ Аминограпите с: N......терминал на всички аминокиселини бяха защитени с Ртос: гвзпа и функционалните странични вериги бяха защитени със следните грапи преди използването на зминокисел .ините в реакцията: аргинин Μ1. γ- 5 (4-метокси· -2,3,6-триметилбензенсулФонил лизин Βο с 5 ( ν-бутилокс: :икарбонил) цистеин Тг1. 5 ( три тил.) хистидин - Тгб (тритил) е Приблизително 10 тд от пептида бяха разтбооени т! ат смесен разтворител на хлороформ - метанол (С/М (0/0). Пробата след това беше пречистена със ЗерЬавех колона (« 2.5 ст х 90 ст). която бе така балансирана с смесен разтворител 2:1 (0/0) да събере чистия пептид Н. 2:1 ΠΗ-όΟ с/ м Наличието на пептида в елюианта беше регистрирано на д ъ л ж и н а 2 4 5 η т ( с п е к т р ο Ф ο т о м е т ъ р ; 3 а р а η Зрее 1. г о з с ο р ί с ' С о 1_1в. Мобе! 870 ~ ПО) и с диференциален рефрактометър С81"|1табζυ. Магш^ассЬигхпд согрогаНоп Мос1е1 -бй) Г-АВМЗ (М+ Н+ ); 2663.6 (изчислено молекално тегло: 2662.5) Пример 9"| Пептидът (пептид I) със [секбенция Мо. 131 беше синтезиран по същия начин както при пример 8. РАВМЗ (М+ Н+ ); 2560.4 (изчислено молекулно тегло; 2559.3) [Пример 101 Пептидът (пептид □) със [секбенция Να. 141 беше синтезиран по същия начин както при пример 8. РАВМЗ (М+ Н+ ); 2663.3 (изчислено молек улно тегло 2 2662.5) [Пример 1.1] П еп ти рът (пептид К) със г сек венция Νο .·, 15] оеше синтезиран по същия начин както при пример

ΡΑΒΙΊ5 ί Μ+· Η+ !; 2663.5 (изчислено молекулно тегло; 2662.5) [Пример .12'] Пептидът (пептид 1_ 5 със: [секвениия Να» 16] беше синтезиран по същия начин както при пример 2« РАВМ5 ί1*1+ Н+ ); 2503.6 (изчислено молекулно тегло; 2502.4) [Пример 13] Пептидът (пептид М) със [секвениия Мо, 17] беше синтезир а н по същия на ч ин к а к тο пр и пр имер 2. РАВМ8 (1*1+ Н+ ); 2736.7 (изчислено молекулно тегло; 2735.5) [Пример 14Ί Пептидът (пептид Ν) със [секвениия Мо. 1(3] веше синтезиран по същия начин както при пример 2. РАВМЗ (М+ Н+ ); 2640.4 (изчислено молекулно тегло; 2639.4) [Пример 15] Пептидът (пептид 0) със [секвени,ия Να. 19] беше синтезиран по същия начин както при пример 8» Р А В М 8 (1*1 + Н+ ) ; 2 6 4 0.3 ( и з ч и с л е н о м о л е к у л н о т е г л о; 2639 „ 4 ) [Пример .16] Ршос - пролин ..... валии - хистидин (Тг1.) - лебии.н - лизин(Вос) - аргинин(1*11 г ) Пептидът (пептид Р) от заглавието беше синтезиран спомощта на метода за синтеза на твърда Фаза, използвайки Системата за синтез на пептид и 9050 (МИНроге Согр, ) . N _ α ... 9 флуоренилметилоксикарвонил ~ N - Ω - 4 метокси - 2, 3» 6, триметилвензенсалфонил ~ аргинин ~ 0 -

смола (Ряюс ~ аргинин (1*1 Ъг) ~0~ смола) (0.20 тто1) , в която N а „ а _ флморенилметилаксик ар вонил ~ ~ Ω - 4 метокси - 2, 3, 6, триметилбензенсулФонил - аргинин(Ртос аргинин (1*11г) е свързан с 2 - метокси - 4 алкоксивензилалкохол ~ смола (5азг1п гезхп, търговска марка Η ВасКет Со«,Ь'Ьс1»') беше използвана за начална смола и бяха послеабашо прибавени аминокиселини в посока на Ν-терминала на повърхността на смолата 8 съответствие? с протокол за синтеза от Системата за синтез на пептиди 9050 (МПИроге Согр. ) за да се синтезира пептид - 0 - смола с N -- терминал и напълно защитени Функционални групи» Напълно защитения пептид - □ - смола беше промит пет пъти с метакол и изсушен при понижено налягане. Разтвор на ТРА - дихлорметан (1:99), V/V) беше след това прибавен към изсушения пептид --0..... смола (330 тд ) , докато се извършваше разбъркване и охлаждане с лед» След това сместа беше разбъркана за 30 минути и след това разбъркана за 90 минути при стайна температура за да отдели пептида от смолата със: з а щи т н и т е г р у п и , о ще п р и к р е п е н и к ъ м η е п т и д а . След т о в а последва филтриране през стъклен филтър (63) и Филтратът беше концентриран под редуцирано налягане до приблизително 5 т 3. с ев а пор а тор. След това беше прибавен диети лов етер за да преципитира пептида. Така преципитираният пептид беше събран чрез стъклен Филтър (63), промит петкратно с диетилов етер и след изсушаване под намалено налягане. Бяха получени 180 тд от пептида Р. . Аминогрупите е N-терминал на всички! аминокиселини бяха защитени с Ртос група и функционалните странични вериги бяха защитени със: следните групи преди използването на а м и н о к и с е л и н и те в р е а к. и,и я т а : (4-метокси-2,3,6-триметилбензенсулФонил) Μίτ аргинин л и з и н -· В о с : (1. ·- 5 у т и л о к с и к а р б о н и л) хистидин -· Тг1 ; (тритил) След това беше прибавен разтвор на ТРА - дихлорметан (1:99, ν/ν) към суров пептид за да се получи проба от 10 т α / т 1 р а з т θ ο р . к ο ύ т о беше п □ е ч и с т е н π о с р е а с т в о м Η Р 1_ С - с помощта на АзаКхрак 63 ~ 510 (® 21.5 х 500 тя») колона (търговска маска: АзаКх СЬетхса! 1пвиз£гу Со. Ш.) посредством това да се? събере· чист пептид Р. Бе ш е и з π о л зв а н Т Р А ·· д и х лор мет а н (1:99 . V / V) к а т о елюент и елюиоамето беше проведено при скорост на потока от 8.1 т!/тхп за .120 минати. Наличието на пептида 9 елюианта беше регистрирано на дължина 245 пя» (спектрофотометър 5 1арап ЗресЬгозсорхс СоI..ίά · Мове! 870--υν ) и с диференциален р е ф р а к т о м е т ъ р (5 Н х я» а с:1 ги М а η и ί а с Ф и г х η д с о г р о г а 1. хоп Μ о в е 1 ОП. ·6Α ; „ РАВМЗ (М+ Н+ )5 1405.0 (изчислено молекулно тегло; 1403.8) [Пример 17] Н ···· 1Члевиин - ((Члевцин) 14 - (Члевцин - 0 -· смола бяха синтезиран с помощта на метода за синтеза на твърда фаза» по същия начин както при пример 8. След това, π е и б а в я а к и ОМ Р' к ъм с интез и р а ни я Н (Члевиим - ((Члевцин) 14 - (Члевцин -0..... смола,, пептида Р беше прибавен вместо Ртос ··· аргинин (М'Ьг) . 14 х и д р о к е и б е н з о т р и а з о л и N , 14 " д и и з ο π р ο п и л к а р δ о д и и м и д δ я х а сместа бе разклащана 8 часа. Тази беше изпълнена двукратно. Кондензационната реакция беше потвърдена с кахзег тест чоез нинх ид р инов ия ме?то д „ След това, в съответствие с метода от [пример 8] защитните групи на функционалните групи бяха елиминирани и пептида беше отделен от смолата и пречистен чрез НР1...С за да се получи пептида (пептид I) с [последователност 1Чо. 133 . РАВМЗ (М+ Н+ ); 2560.2 (изчислено молекулно тегло; 2559.3) прибавени и. след това к онд енза и,йонна р еа к ция [Пример 1.8'1 •••34···· Пептиаът (пептид □) с тиолобите групи от пептид 0, Формиран от зи.етамидметил ( АСМ ) , беше по и, готвен по съшия начин как то при пример 4, с изключение на това» че Ршос -· цистеин ( АСМ ) беше използван вместо Ртас -- цистеин ( "Г гЪ) . РАВМЗ (М+ Н+ ); 2734.7 (изчислено молекулно тегло: 2733.6) ['Пример 193 Пептидът Р бе получен чрез естерификаиия на тиоловите групи от пептид Е с палмитинова киселина, в съответствие с метода на Загхп, Мхгепвег апв Китаг (ЕР 0 458 167А1). РАВМЗ (М+ Н+ ); 2448.5 (изчислено молекулно тегло: 2448.3) [ С р а в н и. т е л е н П р и м е р 1 3 Пептидът (пептид 5) със [секвениия 1Мо. 20 3 беше синтезиран по същия начин както при пример 2. РАВМЗ (М+ Н+ ); 2793.8 (изчислено молекулно тегло; 2792.6) [Ср а в нителен Пример 2 3 Пептид ът (пептид Т) със [секвенция Να. 2131 беше синтезиран по същия начин както при пример 2. РАВМЗ (М+ Н+ ); 3018.3 (изчислено молекулно тегло; 3016.9) [Анализ на аминокиселинния състав на синтетичните η е п т и д и о т из о бретението'] Синтетичните пептиди от изобретението бяха подложени на кисела хидролиза с 12 N разтвор на солна киселина и ТРА['2:1 (9/9) ] , съдържащ 57 (м/ν) Фенол под вакуум, при 150* С за 1. 2, 4, 6, 12. 24, 48 и 71 часа и след това продуктите на хидролизата бяха анализирани със ЗПхтавги АиСотаСхс Ат!по Асхс) АпаИзув ЗузЪет след отделяне на киселината. ТриптоФанът от пептида М беше подложен на алкална хидролиза с 4.2 N воден натриев хидроокис за 16, 24 и 32 часа, след това неутрализиран със солна киселина и след това бе анализиран с Атхпо Асхй АпаИзуз Зуз1ет. Аминокиселинните състави, изчислени на базата на аминокисединните стойности, които показаха по-високо възстановяване у хиоролизите от 1 до 72 часа. показаха стойности., които съществено потвъоаиха стойностите» пресметнати от химическите формули. Резултатите са показани в Таблица 1. (2) Получаване на повърхностните активни вещества от и з о б р е т е н и е т о Повърхностните активни вещества от изобретението бяха получени от смесването на пептидите от изобретението с трите липидни компонента на холинов ФосФоглицерин, кисел Фосфолипид аналог н а м а с т н а к и е е л и н а . {'Пример 20'] Стерилизирани количества от 1,2 - дипалмитоилглицеро ~ (3) - Фосфохолин (1399 тд) , 1,. 2 ·-· диацил - зп - глицеро -· (3) - фосфо · зп - глицерол (с аииловата група, имаща 14 24 въглеродни атома; произведена от 51дта СКетхса! Со.. Ι_.ΐβ„) (450 тд ) < 1 миристинова киселина (200 тд) бяха р а зтв ор ени при с т а й н а т е м п е р а т ура в смес от хлороформ и метанол Г2;: 1 (У/У /) '1 (1000 т!) и 2 5 те] от пептида А вяха разтворени в Т!-А (1,0 тХ ) . Тези разтвори вяха смесени, след това изсушени и втвърдени под намалено налягане. Получения остатък беше суспендиран в смес на вода и етанол [9:1 (У/У)'] (100 тХ ) за 19 минути при 40" С. Тази суспензия беше замразена при -50° С и след това изсушена за 36 часа при вакуум от 85 - 1.00 μ Нд, като беше добито повърхностното активно вещество (2070 тд) под Формата на бяла прах. Не бяха открити количества от етанол в този прах и съдържанието на всеки от компонентите по отношение на общото тегло на повърхностното активно вещество беше; 65.27. (М/М) за .1,,2 - дипалмитоилглицеро - (3) - фосфохолин, 21.77. (И/М) за х. 2 ~ чиаиил ~ вп - глиивоо — ί·ϋ ~ Фослю зп ~ глицерол, 9.7% (Ν/Μ) за миристиноба киселина, 1.2% ίΐΑΐ/ΙΜ) за пептида А и. 2.2% (М/М) вада.

[Пример 21] 1 ч 2 д и п а л м и т о и л г л и ц е р о - (3) '· Фосфохолин ί 300 . 0 тд ) , 1,2 - диацил ..... 5п ..... глицеос (3) ™ Фосфо зп - глицерол (с а и.и лоб а та група, имаща 14 - 24 въглеродни а том а : произведена от 51 ата СКет! са.1 С о. , РФв. ) (100.0 тд ί и палмитинова к иселина (40.0 тд) и бяха разтворени в с мес ОТ хлороформ и метанол [ 2:1 (0/0)] (300 т!) и 10.0 тд ОТ пептида В бяха разтворени в смес от хлороформ и метанол [2ί1 (0/0!] (2,,0 т1 ) . Тези разтвори бяха смесени, след това изсушени и втвърдени под намалено налягане. Получения остатък беше суспендиран в смес на вода и етанол Г9:1 (0/0)] (100 т1) за 20 минути при 45* С. Тази суспензия беше замразена при -60 ’ С и след това изсушена за 40 часа при вакуум от 60 - 110 ц Нд и беше добито повърхностното активно вещества (459.1 тд) под формата на бяла прах. Не бяха открити количества от етанол в този поах и съдържанието на всеки от компонентите по отношение на общото тегло на повърхностното активно вещество беше 65.3% (Н/Ь!) за 1,2 - дипалмитоилглицеро - (3) ·- Фосфохолин, 21.8% (№/и() за 1, 2 - диацил - еп - глииеро - (3) - фосф»о - зп -- глииерол, 8.7% (М/И) за палмитинова киселина. 2.2% (И/М) за пептида В и 2.0% СИ/М) бода.

[Пример 22] 1,2 - дипалмитоилглицеро - (3) - ФосФохолин (280,,0 тд), 1, 2 - дилауроил ~ зп - глицеоо - (3) - фосфо - еп - глииерол (120.0 тд) и палмитинова киселина (27.0 тд) и бяха разтворени в смес: от хлороформ и. метанол [2:1 (0/0)] (1.50 (η I ) и. от пептиаа С ояха 2.8 та от пептиаа С бяха разтворени 6 смес от хлороформ и метанол С2;1 (9/9)1 (0.5 т1) Тези разтвори бяха смесени. след това изсушени и втвърдени под намалено налягане. Получения остатък беше суспендиран в смес на бода и етанол [8:2 (9/9) ] (1.00 <п1) за 40 минати при 40° С. Тази снспензия беше замразена при ---65° С и след това изсушена за 36 часа при вакаам от 50 -- 80 μ Нд и беше добито повърхностното активно вещество (437.1 тд) под формата на О 'Я А 3- ΓΊ р 3 X в Не бяха открити количества от етанол в този прах и съдържанието на всеки от компонентите по отношение на общото тегло на повърхностното активно вещество беше 64.0"Ζ (М/М) за 1,2 -- дипалмитоилглицеро - (3) - фосФохолин, 27.4У. (М/М) за 1. 2 -- дилауроил - зп - глицеро - (3) - Фосфо - зп глииерол» 6.2% (М/М) за палмитинова киселина. 0.67. (14/и1) за пептиаа С и 1.8% (И/Ю вода.

[Пример 231 □свен използването на пептида 0 вместо пептида В и използването на 1. - палмитоил - 2 - олеоил - зп - глицеро - (3) - фосфо ·“ зп тлицерол вместо 1, 2 диацил - зп - глицеро - (3) - Фосфо - зп - глицерол (с а цоловата група. имаща 14 -· 24 въглеродни атома; произведена от Бхдта СКет1са1 Со. , !„ί.β.),, същите процедури като тези в [Пример 213 бяха изпълнени за да се получат 451.9 гпд повърхностно активна вещество под Формата на бяла прах. Не бяха открити количества от етанол в този прах и съдържанието на всеки от компонентите по отношение на общототе г л о на пов ър х но с т н ο т о а к т и в н о в е ще с т в о б е ше 6 6» 4 % (И / М ) з а 1,2 ·- дипалмитоилглицеро - (3) - ФосФохолин, 22.1% (М/М) за палмитоил - олеоил. зп глицеро Фос Фо - глицеоол, 8.9% ((4/1)) за палмитинова киселина, 2.2% (М/М) за пептира 0 и 0,4% (М/М) бода, [Пример 24] 1,2 - дипалмитоилглииеро - (3) - ФосФохоли.н (320,0 тд) , 1, 2 - димиристоил - вп - глицеро - (3 ) - Фосфо -· βη глииерол (80,0 та) и палмитиноба киселина (60.0 тд ) и бяха разтворени в смес от хлороформ и метанол [1:1 (V/1/)] (200 т1) и 14,0 тд от пептида Е бяха разтворени в ТГА (0.3 т1) Тези разтвори бяха смесени, след това изсушени и втвърдени под намалено налягане. Получения остатък беше суспендиран в смес на вода и етанол [10:1 (0/0)] (50 т!) за 60 минути при 45" С, Тази суспензия беше замразена при --45" С и слее; това изсушена за 24 часа при вакуум от 50 - 110 ц Нд и беше д ο б и т ο π о в ъ р х но с т н ο т о а к т и в н о в е ще е т в о ( 4 '7 9,2 т д ) по д формата на бяла прах. Не бяха открити количества от етанол б този. прах и. съдържанието на всеки от компонентите по отношение на общото тегло на повърхностното активно вещество беше 66,8% (Ν/Ν) за 1,2 - дипалмитоилглииеро - (3) - ФосФохолин. 16,7% (М/Ш за 1, 2 - димиристоил - вп - глицеро - (3) - Фосфо - ап глицерол, 12.5"% (14/14) за палмитиноба киселина, 2.9% (14/14) за пептида Е и 1,1% (Й/14) вода.

[Пример 251 □сбен използването на пептида Е (22,0 тд) вместопептида Е (10,0 тд) и използването на 1,2 ~ дистеароил - вп-·- глицеро - (3) - Фосфо - вп -глицерол вместо 1, 2 - диацил вп ~ глицеро - (3) - фосфо - вп - глицерол (с аииловата група, имаща 14 -- 24 въглеродни атома? произведена от 31дта СКетхса 1 Со. . 1....1.6, ) , същите процедури като тези в [Пример 21] вяха изпълнени за да се получат 463,9 щд повърхностно активно вещество под Фооматз на вяла поах. Не вяха откоити количества от етанол в този прах и съдържанието на всеки от компонентите по отношение на общото тегло на повърхностното активно вещество беше 64.7% (к1/М) за 1.2 - дипалмитоилглицеро - (3) - ФосФохолин, 21.67. (1*)/М) за 1.2 - дистеароил - зп ..... глицеро - (3) -· Фосфо - зп - г л и це р о л . 8.6 7. ( № / М ) з а п а л м и т и н о в а к и с е л и на, 4.7 % ( М / N ) з а пептида I- и 0.4% (М/М) вода.

[Пример 26] 0 с в ен и зπол з в а нето на пептида 6 вместо пептида В, същите процедури като тези в [Пример 21] 5 я х а и. з п ъ л н е н и за да се π о л у ч а Ί· 4 5 4 »1 т д η о в ъ р х н о с т н о а кти в но в еществ о под ф о р м а т а н а в я л а п р а х. Не бяха открити количества от етанол в този прах и съдържанието на всеки от компонентите по отношение на общото тегло на повърхностното активно вещество беше 66.1% (М/М) за 1.2 "··· дипалмитоилглииеоо - (3) - ФосФохолин, 22.0% (М/Ю за 1, 2 - ацил - зп - глицеро - (3) - фосфо - зп - глицерол (с аииловата група» имаща 14 -- 24 въглеродни атома: произведена от 51дта Свени, са 1 Со. , !_Фс1. ) 8.8% ((4/Ν) за палмитинова киселина. 2.2% (М/М) за пептида (3 и 0.9% (Μ/Ν) в о д а .

[Пример 27] 1,2 -- дипалмитоилглицеро - (3) - ФосФохолин (210.0 гад), 1, 2 - диацил -- зп - глицеро - (3) фосфо - зп - глицерол (с ациловата група, имаща 14 - 24 въглеродни атома; произведена от Зхдта СКетХса! Со., кСв.), (90 тд ) и с τ е а р и н о в а киселина (33.0 т д ) и вя х а разтворени в смес о т хлороформ и метанол [3:1 (У/У)] (100 т1) и 1,9 тд от пептида Н бяха разтворени в метанол (0,5 т!) Тези разтвори вяха смесени. ....4().,.. след това изсашени и втвърдени поо намален·:: налягане. Получения остатък беше суспендиран в смес на бода и етанол Г9 г 1 (9/9)] (50 т1 ) за 1.5 минати при. 50° С. Тази. смспензия беше замразена при --55° С и след тоба изсушена за 28 часа при вакуум от 100 120 р. Нд и веше добито повърхностното активно вещество (340.2 то) под Формата на бяла прах. Ие бяха открити количества от етанол в този прах и съдържанието на всеки от компонентите по отношение на общото тегло на повърхностното активно вещество беше 61.77. (1*1/14) за 1,2 - дипалмитоилглицеро ~ (3) - ФосФохолин» 26.57. (М/М) за 1, 2 - диацил - еп ~ глицеро -- (3) - Фосфо - зп - глицерол. 9.77. (М/М) за стеаринова киселина. 0.57. (14/14) за пептида Н и 1.6 /« ι V) / V)) в о д а . (Пример 28] 1,2 - дипалмитоилглицеро - (3) ~ ФосФохолин (210.0 тд) . 1 - палмитоил - 2 — олеоил ~ зп — глицеро - (3) -· фосфо |_ - серин (90.0) и палмитиноба киселина (33.0 тд) и бяха разтворени в смес от хлороформ и метанол [ 4; 1 (9/9)] (.1.00 т! ) и 11.0 тд от пептида I бяха разтворени в ТгА (0.5 т!) Тези разтвори бяха смесени, след това изсушени и втвърдени под намалено налягане. Получения остатък беше суспендиран в смес на вода и. етанол ('9;1 (9/9)] (100 т! ) за 45’ С. Тази суспензия беше замразена при -55’ С и след това изсушена за 28 часа пои вакуум от 100 - 120 μ Нд СА '.3 № Сх добито повърхностното активно вещество (348.7 ма) под Формата на. бяла прах. Не бяха открити количества от етанол в този прах и съдържанието на всеки от компонентите по отношение на общото т е г л о н а π о в ъ р х н о с т н ο т о а к т и в н о вещество беше 60.27. минути при (14/14) за

1,2 дипзлмитоилглицеро - ( 3 ) - ФосФохолин. 25.,87. (14/14) за .1 - палмитоил ~ 2 -- олвоил - вп - глицеро -· (3) - ФосФо - Ь серин 9 . 37. (И /14 ) за палмитинο в а к иселина . 1.37. ( М/14) за пептидз Н и 1.67. (14/14) бода.

[Пример 29] Освен използването ма пептида 3 вместо пептида В„ съште процедури като тези в [Пример 213 вяха изпълнени за д а с е по л у ч а т 4 59 - 3 т д π о в ъ р х н о с т н о а к т и 6 н о в е ще с т в ο π о д Формата г I. същите да се формата [Пример 313 Освен използването на пептида 1. вместо пептида В, същите процедури като тези в [Пример 213 вяха изпълнени за да се получат 456.6 тд повърхностно активно вещество под формата на вяла πрах.

[Пример 323 Освен използването на пептида М вместо пептида В,същите процедури като тези в [Пример 21] вяха изпълнени зада се получат 453.9 тд повърхностно активно вещество под Формата на бяла прах.

[Пример 33] Освен използването на пептида N вместо пептида В, същите процедури като тези в [Пример 21.3 вяха изпълнен и з й да се получат 452.5 тд повърхностно активно вещество под Формата на вяла прах. на сяла прах,, Пример 303 Освен използването на пептида К вместо пептида В, процедури като тези в [Пример 2.13 вяха изпълнени за получат 452.5 тд повърхностно активно вещество под на зяла прах.

[Пример 34] *

Освен използването на пептиоа 0 вместо пептиоа В, същите процедури. като тези 9 ('Пример 21] бяха изпълнени за да се получат 458.1 то повърхностно активна вещество под Формата на вяла прах.

[Пример 35] 1,2 - дипалмитоилглицеро - (3) - фосфохолин (30.0 тд ) , 1, 2 - диацил - зп глицеро - (3) - ФосФо - еп глииерол (с аи,иловата група,, имаща 14 ..... 24 въглеродни атома; произведена от ЗФдта СКетхса! Со. , !...Л9. ) (10.0 тд) и палмитинова киселина (4.0 тд) и вяха разтворени в смес от хлороформ и метанол (2:1. (V/··/)] (30 т!) и 1.0 тд от пептида 0 бяха разтворени в смес от хлороформ и метанол [2:1 (0/0)1 (2.0 т1 ) Тези разтвори бяха смесени, след това изсушени и втвърдени под намалено налягане. Получения остатък беше суспендиран в смес на вода и етанол (9:1 (0/0)1 (10 т1) за 20 минити при 45° С. Тази суспензия беше замразена при. -60° С и след това изсушена за 36 часа при вакуум от 60 - 120 μ Нд и беше добито повърхностното активно вещество (49.4 то) под формата на бяла прах. Не бяха открити количества от етанол в този прах и съдържанието на всеки от компонентите по отношение на общото тегло на повърхностното активно вещество беше 66.1% (М/М) за 1,2 -- дипалмитоилглицеро ~ (3) - фосфохолин, 22.0% (М/«) за .1, 2 - диацил - зп - глицеро - (3) - фосфо - зп - глицерол, 8.8% (И/ЧМ) за палмитинова киселина, 2.2% (1ч/Ш за пептида 8 и 0.9% (М/М) вода, [Пример 36] Освен използването на пептида К вместо пептида 0, същите процедури като тези б [Пример 35] бяха изпълнени за д а се πолуч ат 45.7 тд πов ър хностно а ктив но 6 еществ ο πод Формата на бяла поах, С С о а вн и т е л е н Пример 31 Осбен използването на разтвор на пептида 3 (10,0 тд 5 в ТРА (0.3 т! ) вместо разтвор на пептиоа В (10.0 тд) смес на хлороформ и метанол ('2:1 (0/0)] (2.0 гп1)„ егидите процедури като тези в [Пример 213 вяха изпълнени за да се получат 455.2 тд повърхностно активно вещество под Формата на бяла прах. Не бяха открити количества от етанол в този прах и съдържанието на всеки от компонентите по отношение на общото т е г л о н а π о в ъ р х н о с т н ο т о актив н р бе ще с т в ο δ еше 6 5.9 % (14 / М) за 1.2 дипалмитоилглицеоо - (3) - Фосфохолин, 22.ОХ (Ν/Μ) за 1, 2 -· ацил ацоловата >п - глицеро -·· (3) - Фосфо ..... εη - глицерол (с 24 въглеродни атома: Βίβ. ) 8.37. (М/иП за група. имаща 14 произведена от 31дта Свет!са 1 Со. палмитинова киселина, 2.2% <Н/Н) за пептида 3 и 1.1% (И/М) вода. Г С р а в и и т е л е н П р и м е р 4 ] Освен използването на разтвор на пептида Т (10.0 тд) в ΤΙ-Α (0.3 т 1 ) вместо разтвор на пептида В (10.0 тд ) смес на хлороформ и метанол [2:1 (М/М)1 (2.0 ял!.), същите процедури като тези в [Пример 21] вяха изпълнени за да се получат 456.0 то повърхностно активно вещество под формата на бяла ί Ϊ £3 3 .·< в Не вяха открити количества от етанол в този прах и съдържанието на всеки от компонентите по отношение на общото тегло на повърхностното активно вещество беше 65.87. (М/кИ за 1,2 - дипалмитоилглицеро ~ (35 ~ фосфохолин, 21.97. ((ч/Ш за 1, 2 ··- ацил - зп - глицеро - (3) - фосфо - зп - глицерол (с а ци лоб а та група, имаща 14 - 24 въглеродни атома: произведена от Зхата СЬетхса1 Со.. Ι..ί.ά„) 8.87. 61М/И1 за палмитиноба киселина, 2.2% (Μ/Ν) за пептида Т и 1.3% (' Н/Чч) бода, Таблица 2 показва резултатите от изпитването на пов ъохнос тната а к тив нос т и а лб еоларното прос тра нс τθ о поддържащото действие на повърхностните активни вещества от изобретението.

[Потенциални възможности за приложения в промишлеността “Ϊ Като бе описано по-горе, неизвестните досега синтетични полипептиои от изобретението лесно се изолират и. пречистват, могат да бъдат получавани посредством методи. даваши добив в промишлени количества, притежават висока разтворимост в общите разтворители и показват по-добра еднородна саспенсибилност и равномерно разпространена повърхностна активност. в сравнение с конвенционалните лекарс т6 ени сред с тв а. Изобретението може също да бъде прилагано и като терапевтично средство за лечение на синдрома на дихателна недостатъчност, кой то е за боляване, коетο пр ед изв икв а р а з л и ч н и р е с п и р а т о р н и н а р у ш е н и я . ТАБЛИЦА ЗА ПОСЛЕДОВАТЕЛНОСТИТЕ Секбени.ия Νο; 1 Дължина на секбенцията; 35 Виа на секбениията; аминокиселина Т ο π о л о г и я ; п р а б а в е р и г а Тип на секбениията: пептид Π о с л е α о 6 а т е л н о с т: 4енилаланин глииин изолебиин пролин иистеин цистеин пролин Залин хистисин лебцин лизин аргинин лебиин лебиин изолебцин балин 1 5 10 15 балин балин балин балин Залин лебиин изолебцин балин балин балин изолебиин балин глииин аланин лебцин лебцин метионин 20 25 30 глииин лебиин 35 Д ъ л жи н а н а с е к в е н и. и я т а : 3 4 Вид на секбениията: аминокиселина Т α п а л о г и я : п р а 6 а в е р и г а Тип на секбениията; пептио Π о с л ед о в а т е л н о с т; лебцин изолебиин пролин цистеин цистеин пролин балин аспарагин изолебиин лизин аргинин лебцин лебцин изолебиин Залин балин15 10 ' 15 балин балин Залин балин лебиин лебцин Залин балин балин изолебиин балин глииин аланин лебиин лебцин метионин 20 25 30 глииин лебиин Секбенция Νο; 3 Дължима ма секбенииятаз 35 Вид на секбениията; аминокиселина Топология; права верига Тип на секбениията: пептид

I Последователност; левцин авгинин изолевиин пролин иистеин иистеин првлин валия аспзоагин левиин лазим аргинин лебцин лебцин валия валия 15 10 15 валия валия валия валия валия левцин валия валия валия валия извлевцин валия глицин алания левцин левцин 20 25 30 метивнин глииин левцин 35 Секбениия Νο: 4 Дължина на секвениията: 32 Вила на секвениията; аминокиселина Топология: поаба беоига Тип на секвениията: пептид Последователно с т: иистеин иистеин пролин валия хистивин левцин лизин авгинин левцин левцин изслевиик валия валия валия валия валия

! * 1А < X X « XV Αν валия левцин извлевцин валия валия валия извлевцин валия глицин левцин хистидин 20 30 Секбениия Να: 5 Дължина на секвениията; 33 Вид на секвениията: аминокиселина Т ο π о л о г и я ; п р а б а б е р и г а "Г и п н а с е к б е н и и я т а : п е п т и д П оследобателнос т: фенилаланин глииин Извлевцин повлия иистеин иистеин прелия валия хистидин левиин лизин авгинин левцин левцин левцин левцин 15 10 15 левцин левиин левцин левиин левиин лебцин левцин левцин левиин левиин левцин левиин глицин аланин левцин левиин 20 25 30 нетионин глицин левиин 35 Секбениия Νο: 6 Дължика на с е к б ениията: 27 Виц на секбвнцията: аминокиселина Т ο π ол о ги я: пра в а бер и га Тип на секбениията: пептио цистеин пволин бзлин хистиоин лебиин лебцин лизин зргинин лебцин лебиин лебцин лебцин лебцин лебцин лебцин лебцин лебцин 1 5 10 15 лебцин лебиин лебцин лебиин лебцин лебцин лебиин глииин алзнин лебиин лебиин 20 25 Секбениия Νο; 7 € Дължина на секбениията;; 27 Виа на секбениията! аминокиселина Топология: права верига Тип на секбениията: пептио Π о с: л е α о б а т е л н ο с т г цистеин пволин бзлин хистиоин лебиин лизин зргинин лебиин лебцин лебцин лебцин лебцин лебиин лебиин лебцин лебиин 1 5 10 15 лебиин лебцин лебцин лебиин лебцин лебиин лебцин лебцин лебиин лебиин лебцин 20 25 Сек б ении я Nо: 8 Дължина на секбениията: 23 Вид на секбениията: аминокиселина Т ο π о л о г и я : п р а в а в е р и г а Тип на секбениията:; пептид Последовател н ос тг цистеин пволин бзлин хистиоин лебиин лизин зргинин лебиин лебцин лебиин лебиин лебиин лебцин лебцин лебцин 15 10 15 лебцин лебцин лебцин лебцин лебцин лебцин лебиин 20 Секбениия Νο; 9 Дължина на секбениията: 19 ...-48-- Виа кз секбениията; аминокиселина Тοηология: права в еоига Т и п н з с е к в е н и.и я т а : п е п т и а Π о слеаобател ност: иистеин пролин балин хистиоин лебиин лизин аргинин лебцин лебцин лебиин лебиин лебиин лебцин лебиин лебиин левцин 15 10 15 лебцин лебцин лебцин Секвениия Νο: 10 Дължина на секбенцията Вир на секбениията: аминокиселина Топология: права верига Тип на секбенцията: пептиа Π о с л е а о б а т е л н а с т : серин пролин балин хистиоин лебиин лизин аргинин лебиин лебцин лебиин лебцин лебиин лебиин лебцин лебиин левцин 10 лебиин лебиин лвбиин лебцин лебцин лебиин лебиин 20

Секвениия Νο: 11 Дължина на секвениията: 27 Вир на сек бениията: а минок ис елина Т ο π о л о г и я : η раба в е о и. г а Т и η н а с ек в е н и,и я т а ; п е п т и д Послеаовател н о с т иистеин пролин балин хистиоин лебцин лизин аргинин Нлебиин Нлебиин Нлевцин Илевцин Нлебиин Нлебиин Нлебиин Нлебиин 1 5 10 15 Нлебиин Нлебиин Нлебиин Нлебиин Нлебиин Нлебиин Нлебиин Илебцин глицин аланин лебиин лебцин 20 25 Секвениия Νο: 12 Дължина на секвенцията: 23 Виа на секбенцията: аминокиселина Τ οπολοгияί πраба θ е □ига ,( ип на сек венцията « пептид Πоследователносτ: цистеин пролин балин хистиаин лвбцин лизан авгинин Нлебиин Нлебцин Нлебиин Нлебцин Нлебцин Нлебцин Нлебцин Нлебиин Нлебцин 1 5 10 15 Нлебиин Нлебцин Нлебиин Нлебиин Нлебцин Нлебиин Нлебиин 20

С е к б е н ии я N ο; 13 Д ъ л ж и н а н а с е к 6 е н и.и я т а ; 2 2 Вид на секвениията: аминокиселина Т οπоло пия; пра в а вери па Тип на секвениията: пептид П а с л е д о в а т е л и о с т: пролин взлин хистиаин лебиин лизин аргинин Нлебцин Нлебиин Нлебцин Нлебиин Нлебиин Нлебиин Нлебиин Нлебиин Нлебцин 1 5 10 15 Нлебцин Нлебцин Нлебцин Нлебиин Нлебиин Нлебцин Нлебцин 20 иистеин С е к в е н и,и я N о г 14 Дължина на секбенцията: 23 В и д н а се кв еиии ята; а м и н окисе ли н а Τ ο ηол оги я: права в ер и га Т и п н а с е к в е н и,и я т а ; п е п т и а Последователностз пролин бзлин хистирин левцин лизин аргинин лебцин левцин лебиин лебцин левцин лебцин лебцин левцин 15 10 15 Нлебцин Нлебиин Нлебцин Нлебцин Нлебцин Нлебцин Нлебцин Нлебцин 20 С е к в е н ии я N ο ί 15 Дължина на секвенииятаз 23 В и а н а с е к в е н ии я т а з а м и н о к и с е л и н а "!О/ ο γ- πο а беоига Тип на секбвнццята: пептид Π а с л е ο о б а т е л н о с т : цистеин пролин балин хистирин лебиин лизин аргинин лебцин лебцин изолебцин лебцин лебиин лебиин лебцин лебцин лебцин 1 5 10 изолебиин лебцин лебцин лебцин лебиин изолебиин лебцин 20 Секбениия Но: 16

Дъ лжин а н а с ек б ени,и я т а: 23 Вид на секбенцията : аминокиселина Т ο π о л о г и я 5 п р а б а бе р и г а Т и п н а с е к б е н и,и я т а : п е η т и. д цистеин пролин валин хистирин лебцин лизин аргинин лебиин лебцин лебцин 10 лебцин балин лебиин Нбалин лебиин балин 15 лебцин Нбалин лебиин лебцин лебцин лебцин балин 20 С е к б е ι···ι ии я Να: 17 Дължина на секбениията: 23 В 1.1 д н а с е к б е н и,и ята: а м и н о к и с: е л и н а Топология: права беоига Тип на секбенцията: пептид Последователност: цистеин пролин балин хистирин лебцин лизин аогинин лебиин лебцин лебцин лебцин лебиин лебиин лебцин лебцин лебиин 15 10 15 лебиин лебцин лебиин лебцин лебцин лебцин триптофан 20 ’ С е к б е н и.и я Μ ο: 1Θ Дължина на секбениията: 23 Вио на секбениията: аминокиселина 1 ο π ο λο рия: πο а 8а ο еο и г а τ и η на с вк 8 ени,и я та : п епти д Последобателност: иистеин пволин Залив аспавагин лебцин лизин авгинин лебцин левиин лебцин 1 5 10 лебиин лебиин лебцин лебиин леЙцин лебцин лебцин 20 С е к 8 е н ци я N ο" 19 Дължина на секбенцията: 23 В и р н а се к 6 е н и,и я т а ; а м и н о к и с: е л и н а Τ ο π о л о г" и я : пра 8 а 8 е? р иг а Т и η н а с е к 8 е н ии я та :: η епти д Π о с л е д о 8 а т е л н о с т: иистеин пволин балин аспавагин извлебцин лизин аргинин «лебиин «лебцин «лебцин 1 5 10 «лебцин «лебцин «лебцин «лебцин «лебцин «лебцин «лебцин «лебцин 20 С е к 8 е н и,и я Nо : 2 0 Д ъл ж и н а н а с ек 8 е и и,и ята; 27 Вид на секбениията: аминокиселина Топология: поаба беоига Т и п н а с е к 8 е н и, и ята: п е π т и а Пое леооба телност: иистеин пволин балин хистирин лебцин лизин аргинин балин балин балин лебцин левиин левиин лебиин лебиин лебиин 15 «лебцин «лебиин «лебцин «лебцин «лебиин 15 балин .балин балин балин балин балин 15 10 балин балин балин балин балин балин балин глицин аланин лебиин лебцин 20 Секбениия Но: ζ.3. Дължина на секбенцията В и а на сек8ениията: 25 а м инок ис елина Τοπ ολοгия: πο а 6 а β еο и г а Тип на секвениията: пептио Π о с л е α а в а т е; л н ос т ϊ иистеин пролин валин х.истидин лебиин лизин аргикин изолевиин изолебцин изолебцин изолебцин изолебцин изолебцин изолебцин 10 Изолевиин изолебцин изолебцин изолебцин изолебцин изолевиин изолевиин изолебцин изолевиин глииин аланин лебиин лебиин 20

Claims (6)

1. Π А Τ Е Κ Τ Η И Π Ρ Е Τ Е Η Ц И Иг Η а ш и. τ ε π а τ е н τ н υ. π ρ е τ е и и.и. и са за:

   1. Синтетични пептиои, имащи следната специфична π о с л е α о 9 а т е л н о с т г X а а - π р о л и н - 9 а л и н X Ь Ь ~ X с с — л и з и. н - аргинин ~ Н (Хаа може да не присъстбаба или може да представлява цистеин или серин, ХЬЬ представлява хистиринили аспарагин, Хсс предета6ля6а левиин или изолебиин и Мп р е д с т а в л я в а х и д р ο Ф ο 5 н а т а ч а с т ) ..
2. 2. Синтетични пептиди, кан: то в претенция 1, характеризиращи се е това» че хидрофобната пептидна част се състои от 12 до 20 молекули на левццн и/или Млевцин,
3. 3. Синтетични пептиди, както в претенции 1 и 2» характеризиращи се е това, че хидрофобната пептидна част съдържа хидрофобни аминокиселини, освен левцин и/или Млевцин. 4» Синтетични пептиди, както в претенции 1 - 3 вкл»чително, характеризиращи се с това, че хидрοФοбната пептидна част съдържа 1 до 5 молекули на изолебиин, валин, N в а л и н или т риπτ οФ а н, 5„ Синтетичен пептид, както 9 претенция .1, от секвенциите от 5 до 19 като специфична пептидна или който е 3 -· ацетоамидометилирана Форма на последователност Νο 8, или който е 3 - палмитоилна πе π тида с последователност Nо 9„ тр иπτοфа н. Пептиди за синтег в които N имащ една сек венци<я пептида с Форма на Ф а н к и.и. о н а л н и т е го а η и н а и д р о ф и л на та п е п т и а н а ч а с ти з р а з е н и. чрез сентенцията по-дола са защитени Хаа - поолин - балон ..... ХЬЬ - Хсс - лизин - аогинин ('Хаа може да и л и м о ж е да η р е д с т а в л я б а ии с т е и н и л и с е р и н , х и с т и д и н и л и а с п а р а г и н „ X с с п р е д с т а в л я б изолебиин). не пр ис ъс тб аб а X ЬЬ предета б лчб а а леби.ин или
4. 7. Пептиди за синтез, как.то б претенция 6, характеризираш, се с това, б които N - края и че е или Ртос - π р о л и н - б а л и н - х и с т и д и н (Т г ΐ ) - л е б ии и -- л и з и н ( В о с ) аргинин(М1:г) « или Ртос - пролин - балин - аспарагин - лебиин лизин (В ос ) - аргинин ( М1'.'.г ) , или Ртос - пролин - балин - аспарагин - изолебцин - лизин(Вос) - аргинин(Μίг).
5. 8. Метор за произвеждане на синтетичните пептиои

   п р е т е н ци я 1, х а р а к т е р и з и р а щ с е хидрофобната пептидна част. показана включително. със пептиаите за синтез 6 или 7. с к о н д е н з и р а н е н а в претенции 1-4 показани 6 претенции съдържащи Белодробни синтетичен повърхностно активни бешеетба„ п е п т и д , и м а ш, с π е ци Ф и ч н а последователност, холиноб Фосфоглииерид, кисел ФосФолипид и аналог на мастна киселина
6. 10. Терапевтично средство за лечение на синдрома на д и а т е л н а н е д о с т а т ъ ч н о с т , с: ъ д ъ р ж а що к а т о а к т и в н а с ъ с т а б н а част белодробно повърхностно активно вещество, съдържащо синтетичен пептид, имащ специфична последователност, холиноб Фосфоглииерид, кисел ФосФолипид и аналог на мастна киселина. Таблица 1. Аминокиселин£н_лцксхав_на_грнтетичнил». петади....глглаг.нп ичпйретйниетп ’ · е- σ> о СМ <·—< ο 4 г-ч σ τ-4 1 «5 Ο 07 СЗ σ> Г- ¢4 “3 I ο 4 1 1 1 1 1 о ο ο Τ*4 03 ^4 ΙΛ οο 1 I Ο • 1 I I 1 1 00 • ^4 4 Г4 т<ч 4 Τ-4 1 <ο «3 τ-4 «Λ τ^ О сп о <Ν 4 Τ-4 1 1 1 α> 4 Ο 1 05 ό 1 ο> 6 1 ο • τ-4 1 0Ο а — I 1 ο • τ-4 сч —4 Τ- 1 ο ΟΟ 1 1 СЧ 1 , 1 ο • 5С ГЧ —•4 1 σ 4—Ч (Ρ »—4 Τ-4 ΤΙ σ> *-4 ο <0 ςη Г- 1 1 α 4 1 , I σι οί 1 ю 4 σ 4 гЧ т*Ч ό Ο Ю —4 -3 сч т-ч σ • 4—4 ο • т-Ч I 1 00 σ 1 οϊ С0 οο τ-4—4 1 1 οσ а 1 1 τ4 «4 1 1 сл Ο ο σ> I σ οο σ» 1 Τ-4 • 1 1 I ί 1 ьй » о 1"4 т—4 ό Τ-4 ео —4 · ΟΪ —4 т-Ч 07 ο 4-* τ·4 <η <η 1 σ> « 1 1 1 »-» т-4 ο Τ-4 ο Τ-4 οό ο Г- ьч т-4 4 т-ч ο τ-4 ο *-4 1 1 1 1 05 4 Ο φ ο 1 1 00 а 1 τ-4 ώ τ-4 1 1 1 и X г- φ σ οθ Τ-4 I ο> 1 σ> 4 1 1 1 н Е . • © ό • Τ—4 ο Ο Τ-4 σ Ю τ*4 е <υ е~ οθ σ *-( Τ-" “ 00 οθ οο τ-4 σ- и» Г- 4 1 I 1 Е и о ο 4 ^4 • Τ-4 4 Ο σ ό οό а £ ”7— Ο0 « ο £р © т »-Ч С— ό ο Τ—4 1 00 ο 1 I <Ν σ> 4 ω τ-4 · 1 1 1 1 1 1 1 из σ> 05 ο , 0Ο τ-4 1 οο 1 1 1 1 1 ό ό τ-4 Τ—4 ο С0 τ-4 σ <Х> ΟΟ ο σι σ> οθ 1 С— 1 1 , 1 1 о ο ο -4 1 1 сЗ с5 τ-4 ο о ο 05 -1' ο σ ο0 Ю 1 σ> 1 1 1 1 1 • τ-4 1 ο « Ή 1 1 4—4 1 Ο а Ο 97 τ-4 Ο (Μ <ο ο ο Ο- I СЧ 4 , 1 1 1 1 ш • ο τ»4 4 τ-4 4 τ-4 1 Г—( τ-4 Τ-4 00 Τ-4 Г τ-4 ο ο СЧ σ> σ» σ> Μ7 . Ο •"4 Ο 04 σ> I 1 1 1 τ-4 4 τ-4 1 —4 ο ο σ$ Τ-4 τ-4 а χ~ X- —X— Амино -киселина κ -X X X π3 X X X σι X Ε X X X X и Ри -^С X X Η X Η υ' X' X X X . X 4 X X Ри <υ ϋ Дистеин X X X Λ Β .-ДГ. X X 4 ο3 £Ο X X X Μ ο -С.· X Й ω . XοσιУ X X ο X Η <υ -5? 1ролин 1 XX XX XX 03<υ в норлевц норвали ·3< ο Η X X Ри 4 >—ί Ρ Λ Ρ. α3 Β υ ^-4— Таблица 2. Повърхностна активност и ефекти, разширяващиалвеоларния обем на повърхностно-активните вещества съгласно изобретението Повърхностна активност Ефект, по- Разпространи-нижаващ па- мост върху га-върхностна- зово-течна по-то напреже}- върхност ние Ефекти,увеличава-щи алвео- Способност за аб-сорбция на газово|ларниятечна повърхност обем мах <3упе /си Креме за У.равновеΜίη йастъпва-1 сяващо(1упе не на повърхно /Сга Равнове_ стно на ---- (ппежение ауле/сш сие сек. Време занастъпва не наравнове сие сек. Уравнове}· Обем насяващо белия дроб| повърхно}- (при5СП| стно на-прежение! ауле/сш К.О т1/кв Пример 20 29. 0 ример 21 24.7 Пример 22 32.6 Пример 23 26.8 Пример 24 33.1 Пример 25 33.7 Пример 26 27.2 Пример - 27 27. 2 Пример - 28 I 34. 1 . Шример 29 . 28.0 Пример 30 31.5 Пример 31 34.2 Пример 32 33.7 Пример 33 28.7 Пример 34 30.8 Пример 35 зо, ι Пример 36 33. 4 За сравнени*Пример 3 40. 1 {За сравнение Пример 4 | 39. 0 0.2 0.5 4.3 2.5 7.3 7.4 1. 1 8.7 3.9 0.8 1.6 1.2 3.0 3.2 2.1 2.5 3.9 10.3 2.5 30 30 60 40 60 60 60 60 60 30 50 60 30 30 50 40 60 90 95 27.5 65 30.3 26 33 28.5 33.5 32.8 28.3 27.5 34.3 27.6 28.0 31.6 26 29 30 31 37. 2 36.4 30 90 50 100 100 40 50 95 30 80 100 60 50 70 50 90 180 150' 1 29.2 34.8 32.3 34.6 34.2 29.9 28 36 29.9 32.1 34.5 33.9 30. 2 91.9 31.7 32.9 41.5 39.7 41 51 39 39 49 46 40 53 47 40 44 51 49 49 45 28 29