JP3103582B2 - 低粘度、高濃度サーファクタント懸濁液 - Google Patents
低粘度、高濃度サーファクタント懸濁液Info
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明は気道疾患の置換療法に用いる低粘度、高濃度
サーファクタント懸濁液及びこれの製造方法に関する。
このサーファクタントは単離された天然の肺サーファク
タントから得られたリン脂質、中性脂質及びサーファク
タント−会合疎水性蛋白質の界面活性凝集体である。し
かし、また、このサーファクタントは合成源から得ても
よく、この場合合成脂質及び任意の組み換え型蛋白質か
ら構成される。
サーファクタント懸濁液及びこれの製造方法に関する。
このサーファクタントは単離された天然の肺サーファク
タントから得られたリン脂質、中性脂質及びサーファク
タント−会合疎水性蛋白質の界面活性凝集体である。し
かし、また、このサーファクタントは合成源から得ても
よく、この場合合成脂質及び任意の組み換え型蛋白質か
ら構成される。
肺サーファクタントの欠乏は未熟児の呼吸窮迫症候群
の主要原因であると認識されている（Avery ME,Mead J.
Surface properties in relation to atelectasis and
hyaline membrane disease.Amer J Dis Child 97:517−
523（1959））。
の主要原因であると認識されている（Avery ME,Mead J.
Surface properties in relation to atelectasis and
hyaline membrane disease.Amer J Dis Child 97:517−
523（1959））。
天然サーファクタントを用いる置換療法の価値は実験
研究及び臨床研究によって知られている（Van Golde,LM
G,Batenburg JJ,Robertson B.The pulmonary surfactan
t system:biochemical aspects and functional signif
icance.Physiol Rev 68:374−455（1988）、Robertson
B,Lachmann B.Experimental evaluation of surfactant
s for replacement therapy.Experimental Lung Resear
ch 14:279−310（1988））。使用するサーファクタント
の活性を考慮し、あるいは著者らの判断によって、50〜
200mg/kgの個体投与量を気管内ルートで滴下した。大人
の呼吸窮迫症候群疾患は未熟児の呼吸窮迫症候群疾患と
一定の類似性を有する。多数の科学者は、サーファクタ
ント置換が致死率が高いこの疾患に治療のチャンスを与
えるという意見を有している（Lachmann B,Surfactant
replacement in acute respiratory failure:Animal st
udies and first clinical trials,in B.Lachmann ed.:
Surfactant replacement therapy in neonatal and adu
lt respiratory distress syndrome.Springer−Verlag,
Berlin 1988 pp212−223）。
研究及び臨床研究によって知られている（Van Golde,LM
G,Batenburg JJ,Robertson B.The pulmonary surfactan
t system:biochemical aspects and functional signif
icance.Physiol Rev 68:374−455（1988）、Robertson
B,Lachmann B.Experimental evaluation of surfactant
s for replacement therapy.Experimental Lung Resear
ch 14:279−310（1988））。使用するサーファクタント
の活性を考慮し、あるいは著者らの判断によって、50〜
200mg/kgの個体投与量を気管内ルートで滴下した。大人
の呼吸窮迫症候群疾患は未熟児の呼吸窮迫症候群疾患と
一定の類似性を有する。多数の科学者は、サーファクタ
ント置換が致死率が高いこの疾患に治療のチャンスを与
えるという意見を有している（Lachmann B,Surfactant
replacement in acute respiratory failure:Animal st
udies and first clinical trials,in B.Lachmann ed.:
Surfactant replacement therapy in neonatal and adu
lt respiratory distress syndrome.Springer−Verlag,
Berlin 1988 pp212−223）。
この治療方法においては、400mg/kgまでの高投与量が
提唱されている（Lachmann B,Surfactant replacement
in acute respiratory failure:Animal studies and fi
rst clinical trials,in B.Lachmann ed.:Surfactant r
eplacement therapy in neonatal and adult respirato
ry distress syndrome.Springer−Verlag,Berlin 1988
pp212−223;Spragg RG,Richmann P,Gillard N,Merritt
TA.The future for surfactant therapy of the adult
respiratory distress syndrome,in B.Lachmann ed.:Su
rfactant replacement therapy in neonatal and adult
respiratory distress syndrome.Springer−Verlag,Be
rlin 1988 pp203−211）。
提唱されている（Lachmann B,Surfactant replacement
in acute respiratory failure:Animal studies and fi
rst clinical trials,in B.Lachmann ed.:Surfactant r
eplacement therapy in neonatal and adult respirato
ry distress syndrome.Springer−Verlag,Berlin 1988
pp212−223;Spragg RG,Richmann P,Gillard N,Merritt
TA.The future for surfactant therapy of the adult
respiratory distress syndrome,in B.Lachmann ed.:Su
rfactant replacement therapy in neonatal and adult
respiratory distress syndrome.Springer−Verlag,Be
rlin 1988 pp203−211）。
これら全ての適用において、患者の肺に多量の液体を
入れることが問題となっている。エンホーニング（Enho
rning）は未熟児患者を25mg/mlの懸濁液状態の100mg/kg
のサーファクタントで治療した。このことは、彼が体重
1kgにつき4mlの液体を投与したことを意味する（Enhorn
ing G.Shennan A,Possmayer F,Dunn M,Chen CP,Milliga
n J.Prevention of neonatal respiratory distress sy
ndrome by tracheal instillation of surfactant:A ra
ndomized clinical trial.Pediatrics 76:145−153（19
85））。ロバートソン（Robertson）は80mg/mlの比較的
に高い濃度の懸濁液を200mg/kgの単一投与量で投与した
（Noack G,Bergren P,Curstedt T.Grossmann G,Herin
P,Mortensson W,Nilsson R,Robertson B,Severe neonat
al respiratory distress syndrome treated with the
isolated phospholipid fraction of natural surfacta
nt.Acta Paediatr Scand 76:697−705（1987））。この
ことは2.5ml/kgの投与量で投与されたことを意味する。
最も高い濃度のものは、モーレイ（Morley）によって使
用され、この場合合成サーファクタントが用いられてい
る（The centre study group.Ten centre trial of art
ificial sufactant（artificial lung expanding compo
und）in very premature babies.British Med J 294:99
1−996（1987））。100mg/kgが100mg/ml結晶懸濁液の状
態で与えられた。24時間以内に400mg/kgまでが要求され
た。牛の肺から単離された天然サーファクタントから得
られた、リン脂質、中性脂質及びサーファクタント−会
合疎水性蛋白質の界面活性組み合わせからなるサーファ
クタント（以下「SF−RI １」という。）を用いること
により、比較的有利な状態が得られた。40mg/ml懸濁液
として50mg/kgが与えられた。これは、患者が1.2ml/kg
の容量を与えられたことを意味する。
入れることが問題となっている。エンホーニング（Enho
rning）は未熟児患者を25mg/mlの懸濁液状態の100mg/kg
のサーファクタントで治療した。このことは、彼が体重
1kgにつき4mlの液体を投与したことを意味する（Enhorn
ing G.Shennan A,Possmayer F,Dunn M,Chen CP,Milliga
n J.Prevention of neonatal respiratory distress sy
ndrome by tracheal instillation of surfactant:A ra
ndomized clinical trial.Pediatrics 76:145−153（19
85））。ロバートソン（Robertson）は80mg/mlの比較的
に高い濃度の懸濁液を200mg/kgの単一投与量で投与した
（Noack G,Bergren P,Curstedt T.Grossmann G,Herin
P,Mortensson W,Nilsson R,Robertson B,Severe neonat
al respiratory distress syndrome treated with the
isolated phospholipid fraction of natural surfacta
nt.Acta Paediatr Scand 76:697−705（1987））。この
ことは2.5ml/kgの投与量で投与されたことを意味する。
最も高い濃度のものは、モーレイ（Morley）によって使
用され、この場合合成サーファクタントが用いられてい
る（The centre study group.Ten centre trial of art
ificial sufactant（artificial lung expanding compo
und）in very premature babies.British Med J 294:99
1−996（1987））。100mg/kgが100mg/ml結晶懸濁液の状
態で与えられた。24時間以内に400mg/kgまでが要求され
た。牛の肺から単離された天然サーファクタントから得
られた、リン脂質、中性脂質及びサーファクタント−会
合疎水性蛋白質の界面活性組み合わせからなるサーファ
クタント（以下「SF−RI １」という。）を用いること
により、比較的有利な状態が得られた。40mg/ml懸濁液
として50mg/kgが与えられた。これは、患者が1.2ml/kg
の容量を与えられたことを意味する。
もし、これらの条件を大人の治療に移行させると、40
mg/mlの懸濁液として与えられる200mg/kgの投与量であ
れば、体重70kgの患者に気管内ルートによって350mlを
滴下して与えなければならないことを意味する。この計
算は、サーファクタントをできるだけ濃縮することが望
ましいことを示している。しかし、この要望には、60mg
/mlより高い濃度のサーファクタント懸濁液は高粘度を
有するという限界がある。高粘度であれば、サーファク
タントの投与及び運搬において問題を引き起こし、呼吸
気管の抵抗を高めてしまう。ロバートソン（Robertso
n）は豚の肺から得られたサーファクタントから中性脂
質を分離することによって、80mg/mlの濃度を達成し
た。（Noack G,Bergren P,Curstedt T,Grossmann G,Her
in P,Mortensson W,Nilsson R,Robertson B,Severe neo
natal respiratory distress Syndrome treated with t
he isolated phospholipid fraction of natural surfa
ctant.Acta Paediatr Scand 76:697−705（1987））。
モーレイ（Morley）は100mg/mlの合成脂質の結晶子懸濁
液を使用した（British Med J 294:991−996（198
7））。彼は氷冷した懸濁化剤を用いなければならない
という犠牲を払って、この高濃度を得た。
mg/mlの懸濁液として与えられる200mg/kgの投与量であ
れば、体重70kgの患者に気管内ルートによって350mlを
滴下して与えなければならないことを意味する。この計
算は、サーファクタントをできるだけ濃縮することが望
ましいことを示している。しかし、この要望には、60mg
/mlより高い濃度のサーファクタント懸濁液は高粘度を
有するという限界がある。高粘度であれば、サーファク
タントの投与及び運搬において問題を引き起こし、呼吸
気管の抵抗を高めてしまう。ロバートソン（Robertso
n）は豚の肺から得られたサーファクタントから中性脂
質を分離することによって、80mg/mlの濃度を達成し
た。（Noack G,Bergren P,Curstedt T,Grossmann G,Her
in P,Mortensson W,Nilsson R,Robertson B,Severe neo
natal respiratory distress Syndrome treated with t
he isolated phospholipid fraction of natural surfa
ctant.Acta Paediatr Scand 76:697−705（1987））。
モーレイ（Morley）は100mg/mlの合成脂質の結晶子懸濁
液を使用した（British Med J 294:991−996（198
7））。彼は氷冷した懸濁化剤を用いなければならない
という犠牲を払って、この高濃度を得た。
60mg/mlより多いサーファクタントを含ませ、かつ、
数時間周囲温度で貯蔵する場合においてさえ、下記要件
を満たすことを条件として、懸濁液の粘度が30mPasより
下にとどまることが驚くべきことに見い出された。
数時間周囲温度で貯蔵する場合においてさえ、下記要件
を満たすことを条件として、懸濁液の粘度が30mPasより
下にとどまることが驚くべきことに見い出された。
ａ） 使用するサーファクタント脂質／蛋白質が、有機
的に抽出可能なリン脂質につき25mmol/molより多い、好
ましくは40mmol/molより多い結合Ca2+及び／又はMg2+イ
オンを含むこと、 ｂ） 懸濁化剤が少なくとも1mmol/、好ましくは2.5
〜3.5mmol/のCa2+及び／又はMg2+イオンを含むこと、
及び ｃ） 同時に、懸濁化剤が少なくとも33mmol/、好ま
しくは60〜150mmol/の塩化ナトリウムを含むこと。
的に抽出可能なリン脂質につき25mmol/molより多い、好
ましくは40mmol/molより多い結合Ca2+及び／又はMg2+イ
オンを含むこと、 ｂ） 懸濁化剤が少なくとも1mmol/、好ましくは2.5
〜3.5mmol/のCa2+及び／又はMg2+イオンを含むこと、
及び ｃ） 同時に、懸濁化剤が少なくとも33mmol/、好ま
しくは60〜150mmol/の塩化ナトリウムを含むこと。
一般的に、水が懸濁化剤として用いられる。もし、上
記要件のうち一つでも欠けるならば、あるいは上記要件
のうち一つでも低過ぎる濃度で存在するならば、そのよ
うにして得られた懸濁液の粘度は周囲温度で急激に増大
する。もし、全ての３つの要件が具備されれば、周囲温
度においてさえも12時間以上安定である高濃度の低粘度
サーファクタントを、小胞凍結乾燥体からでさえ調製す
ることができる。このようなサーファクタント懸濁液
は、非常に高いサーファクタント含量においてさえ気道
の抵抗を危険なほど増加しないし、かつ、気道疾患の置
換療法に最も適合する。この種のサーファクタント懸濁
液は、肺に水を入れ過ぎたり、あるいは例えば粘度の増
加によって他のいずれの悪影響を及ぼすことなく、サー
ファクタントを高投与量で気管内ルートによって導入で
きる。これまでに知られているサーファクタント懸濁液
が1mlあたり60mgのサーファクタント濃度においてさえ
高い粘性を有するのに対して、本発明の方法を用いれば
200mg/mlの濃度の懸濁液を調製することが可能である。
例えば、治療のためには、150mg/mlのサーファクタント
濃度の懸濁液が特に適当である。所望であれば、本発明
の懸濁液を本発明による懸濁化剤で希釈することによ
り、より低い粘度のサーファクタント懸濁液を容易に得
ることができる。畜牛や豚の肺の洗浄液から有機的に抽
出可能なリン脂質を単離した後、これらリン脂質にCa2+
及び／又はMg2+イオンを帯電させることは、例えば、水
性相をクロロホルムで抽出する際に該水性相に過剰量の
Ca2+又はMg2+イオンを与えることによって行われる。調
製方法に依存して、リン脂質1molにつき約70mmolのCa2+
又はMg2+というCa2+又はMg2+イオンの上限がある。リン
脂質混合物又はリン脂質／蛋白質混合物が、バッチＢ
（表１）のリン脂質／蛋白質混合物1molにつき13mmolの
Ca2+のようにあまりにも低過ぎるCa2+又はMg2+イオンの
帯電を有するならば、引き続いてこのバッチを有機溶液
中の不十分なCa2+又はMg2+イオンで帯電させることがで
きる。これは、例えば、メタノールに溶解させたCaCl2
を添加することによりなされる。一般に、全ての公知の
サーファクタントにCa2+及び／又はMg2+イオンを帯電さ
せて、低粘度の懸濁液を調製することができるというこ
とができる。
記要件のうち一つでも欠けるならば、あるいは上記要件
のうち一つでも低過ぎる濃度で存在するならば、そのよ
うにして得られた懸濁液の粘度は周囲温度で急激に増大
する。もし、全ての３つの要件が具備されれば、周囲温
度においてさえも12時間以上安定である高濃度の低粘度
サーファクタントを、小胞凍結乾燥体からでさえ調製す
ることができる。このようなサーファクタント懸濁液
は、非常に高いサーファクタント含量においてさえ気道
の抵抗を危険なほど増加しないし、かつ、気道疾患の置
換療法に最も適合する。この種のサーファクタント懸濁
液は、肺に水を入れ過ぎたり、あるいは例えば粘度の増
加によって他のいずれの悪影響を及ぼすことなく、サー
ファクタントを高投与量で気管内ルートによって導入で
きる。これまでに知られているサーファクタント懸濁液
が1mlあたり60mgのサーファクタント濃度においてさえ
高い粘性を有するのに対して、本発明の方法を用いれば
200mg/mlの濃度の懸濁液を調製することが可能である。
例えば、治療のためには、150mg/mlのサーファクタント
濃度の懸濁液が特に適当である。所望であれば、本発明
の懸濁液を本発明による懸濁化剤で希釈することによ
り、より低い粘度のサーファクタント懸濁液を容易に得
ることができる。畜牛や豚の肺の洗浄液から有機的に抽
出可能なリン脂質を単離した後、これらリン脂質にCa2+
及び／又はMg2+イオンを帯電させることは、例えば、水
性相をクロロホルムで抽出する際に該水性相に過剰量の
Ca2+又はMg2+イオンを与えることによって行われる。調
製方法に依存して、リン脂質1molにつき約70mmolのCa2+
又はMg2+というCa2+又はMg2+イオンの上限がある。リン
脂質混合物又はリン脂質／蛋白質混合物が、バッチＢ
（表１）のリン脂質／蛋白質混合物1molにつき13mmolの
Ca2+のようにあまりにも低過ぎるCa2+又はMg2+イオンの
帯電を有するならば、引き続いてこのバッチを有機溶液
中の不十分なCa2+又はMg2+イオンで帯電させることがで
きる。これは、例えば、メタノールに溶解させたCaCl2
を添加することによりなされる。一般に、全ての公知の
サーファクタントにCa2+及び／又はMg2+イオンを帯電さ
せて、低粘度の懸濁液を調製することができるというこ
とができる。
このカルシウム及びマグネシウムは可溶性のカルシウ
ム及びマグネシウム塩の状態で供給される。この目的の
ためには塩化カルシウム又は塩化マグネシウムを用いる
のが好ましい。しかし、硫酸カルシウム又はマグネシウ
ム、硝酸カルシウム、乳酸カルシウム、ソルビン酸カル
シウム、アスコルビン酸カルシウム、グルコン酸カルシ
ウム、ラクトグルコン酸カルシウム、クエン酸水素マグ
ネシウム、グルタミン酸二水素マグネシウム又はクエン
酸マグネシウム等の他の生理学的に許容な水溶性カルシ
ウム及び／又はマグネシウム塩をも用いることができ
る。
ム及びマグネシウム塩の状態で供給される。この目的の
ためには塩化カルシウム又は塩化マグネシウムを用いる
のが好ましい。しかし、硫酸カルシウム又はマグネシウ
ム、硝酸カルシウム、乳酸カルシウム、ソルビン酸カル
シウム、アスコルビン酸カルシウム、グルコン酸カルシ
ウム、ラクトグルコン酸カルシウム、クエン酸水素マグ
ネシウム、グルタミン酸二水素マグネシウム又はクエン
酸マグネシウム等の他の生理学的に許容な水溶性カルシ
ウム及び／又はマグネシウム塩をも用いることができ
る。
低粘度、高濃度サーファクタント懸濁液のための出発
生成物を構成するサーファクタント物質は、Yu et al.
（Lipids 18:522−529（1983））記載の方法に従って調
製される。この方法からの実質的な逸脱は、全工程にわ
たってカルシウム又はマグネシウムを含む溶媒又は懸濁
化剤を使用することである。畜牛の肺を3mmol/のCa2+
及び／又はMg2+イオンを含む食塩溶液で洗浄する。この
サーファクタントを６〜12mmol/のCa2+及び／又はMg
2+イオン、好ましくはCa2+イオンを含む溶液から遠心分
離する。1.05〜1.15g/mlの密度でグルコースを用いる密
度勾配遠心法による精製を、再び３〜8mol/のCa2+及
び／又はMg2+イオンの存在下に行う。この精製に引き続
いて、さらに、３〜10mmol/、好ましくは6mmol/のC
a2+及び／又はMg2+イオンを含む水性相を用いて、Bligh
and Dyer（cf.Can.J.Biochem.Physiol.37:911−917（1
959））の方法に従ってクロロホルム、メタノール及び
水系への分配により、精製を行う。次いで、この有機相
を周囲温度で減圧蒸発により濃縮し、残留物を乾燥し、
最終的に粉砕する。あるいは、また、この有機相を凍結
乾燥してもよい。この場合、得られる生成物はより長期
間（冷蔵温度において少なくとも３年間）の貯蔵におい
て安定である。このようにして得られた微粉砕されたサ
ーファクタントを、所望の脂質濃度が得られるまで、本
発明の量の食塩及びCa2+及び／又はMg2+塩を含む水性溶
液中に激しい振盪によって懸濁する。この方法により調
製した懸濁液もまた冷蔵温度において数日間貯蔵するこ
とができ、必要に応じて気管内ルートによって投与する
ことができる。
生成物を構成するサーファクタント物質は、Yu et al.
（Lipids 18:522−529（1983））記載の方法に従って調
製される。この方法からの実質的な逸脱は、全工程にわ
たってカルシウム又はマグネシウムを含む溶媒又は懸濁
化剤を使用することである。畜牛の肺を3mmol/のCa2+
及び／又はMg2+イオンを含む食塩溶液で洗浄する。この
サーファクタントを６〜12mmol/のCa2+及び／又はMg
2+イオン、好ましくはCa2+イオンを含む溶液から遠心分
離する。1.05〜1.15g/mlの密度でグルコースを用いる密
度勾配遠心法による精製を、再び３〜8mol/のCa2+及
び／又はMg2+イオンの存在下に行う。この精製に引き続
いて、さらに、３〜10mmol/、好ましくは6mmol/のC
a2+及び／又はMg2+イオンを含む水性相を用いて、Bligh
and Dyer（cf.Can.J.Biochem.Physiol.37:911−917（1
959））の方法に従ってクロロホルム、メタノール及び
水系への分配により、精製を行う。次いで、この有機相
を周囲温度で減圧蒸発により濃縮し、残留物を乾燥し、
最終的に粉砕する。あるいは、また、この有機相を凍結
乾燥してもよい。この場合、得られる生成物はより長期
間（冷蔵温度において少なくとも３年間）の貯蔵におい
て安定である。このようにして得られた微粉砕されたサ
ーファクタントを、所望の脂質濃度が得られるまで、本
発明の量の食塩及びCa2+及び／又はMg2+塩を含む水性溶
液中に激しい振盪によって懸濁する。この方法により調
製した懸濁液もまた冷蔵温度において数日間貯蔵するこ
とができ、必要に応じて気管内ルートによって投与する
ことができる。
この懸濁化剤は1mmol/より多くの、好ましくは2.5
〜3.5mmol/のCa2+及び／又はMg2+イオン、並びに33mm
ol/、好ましくは75mmol/より多く、かつ、150mmol/
未満の食塩を含むべきである。
〜3.5mmol/のCa2+及び／又はMg2+イオン、並びに33mm
ol/、好ましくは75mmol/より多く、かつ、150mmol/
未満の食塩を含むべきである。
異なるサーファクタント配合物の粘度の検討装置及び方
法 これから行うテストのために、豚の肺の洗浄液から得
られた抽出サーファクタントを出発物質（以下「SF−RI
１」という）として用いた。使用する方法は、Yu et
al.（Yu S,Harding PGR,Schmith N,Possmayer F.Bovine
pulmonary surfactant:chemical composition and phy
sical properties.Lipids 18:522−529（1983））の方
法を本質的に改変または改良したものである。この方法
からの主たる逸脱は、全工程にわたってカルシウム−含
有溶媒を使用することである。畜牛の肺の洗浄を食塩溶
液を用いて行い、洗浄液体を6mmol/のカルシウム含量
（CaCl2使用）に調整した。このサーファクタントを9mm
ol/のカルシウムを含む溶液から遠心分離した。グル
コース密度勾配法を用いた精製を6mmol/のカルシウム
の存在下行った。最も重要な工程は、6mmol/の塩化カ
ルシウムを含んだ水性相を用いて、精製をBligh and Dy
er（Can.J.Biochem.Physiol.37:911−913（1959））に
従い、クロロホルム／メタノール／水系への分配により
行ったことである。
法 これから行うテストのために、豚の肺の洗浄液から得
られた抽出サーファクタントを出発物質（以下「SF−RI
１」という）として用いた。使用する方法は、Yu et
al.（Yu S,Harding PGR,Schmith N,Possmayer F.Bovine
pulmonary surfactant:chemical composition and phy
sical properties.Lipids 18:522−529（1983））の方
法を本質的に改変または改良したものである。この方法
からの主たる逸脱は、全工程にわたってカルシウム−含
有溶媒を使用することである。畜牛の肺の洗浄を食塩溶
液を用いて行い、洗浄液体を6mmol/のカルシウム含量
（CaCl2使用）に調整した。このサーファクタントを9mm
ol/のカルシウムを含む溶液から遠心分離した。グル
コース密度勾配法を用いた精製を6mmol/のカルシウム
の存在下行った。最も重要な工程は、6mmol/の塩化カ
ルシウムを含んだ水性相を用いて、精製をBligh and Dy
er（Can.J.Biochem.Physiol.37:911−913（1959））に
従い、クロロホルム／メタノール／水系への分配により
行ったことである。
相分離を行った後、有機相を周囲温度でロータルーエ
バポレーターを用いて蒸発乾固し、次いで減圧乾燥し
た。可能であれば、カールフィッシャー法による水分含
量は３％より低くすべきである。この物質をふるいにか
けて約160μｍの粒子サイズにまで小さくした。
バポレーターを用いて蒸発乾固し、次いで減圧乾燥し
た。可能であれば、カールフィッシャー法による水分含
量は３％より低くすべきである。この物質をふるいにか
けて約160μｍの粒子サイズにまで小さくした。
テストのために、この微粉砕されたサーファクタント
を、多量の水中に種々の量の塩化カルシウム及び塩化ナ
トリウムを含む水性溶液に、激しく振盪させて懸濁し
た。
を、多量の水中に種々の量の塩化カルシウム及び塩化ナ
トリウムを含む水性溶液に、激しく振盪させて懸濁し
た。
特定期間周囲温度に貯蔵した後のこれらの懸濁液の粘
度は細管粘度計を用いて決定した。使用された方法は、
（Weller et al.in Wiener Medizinische Wochenschrif
t suppl.33:7−12（1975）and Weller in “Viskosimet
rie inhomogener Flssigkeiten",Dustri Verlag Mn
chen,pp 21−41）に記載の細管粘度計による測定の改変
方法であった。次に簡単な説明を行う。シリンジ内に含
ませたサンプルを定められた一定速度で計量細管を通し
て押し込む。不均一性もまた検出することができる。剪
断速度は既知であり一定である。検量用オイルを用いて
検量線を作成する。細管の前面の圧力によって粘度を測
定し、ペンレコーダーを用いて連続的に記録する。
度は細管粘度計を用いて決定した。使用された方法は、
（Weller et al.in Wiener Medizinische Wochenschrif
t suppl.33:7−12（1975）and Weller in “Viskosimet
rie inhomogener Flssigkeiten",Dustri Verlag Mn
chen,pp 21−41）に記載の細管粘度計による測定の改変
方法であった。次に簡単な説明を行う。シリンジ内に含
ませたサンプルを定められた一定速度で計量細管を通し
て押し込む。不均一性もまた検出することができる。剪
断速度は既知であり一定である。検量用オイルを用いて
検量線を作成する。細管の前面の圧力によって粘度を測
定し、ペンレコーダーを用いて連続的に記録する。
テスト期間の終了近くに、いくつかの懸濁液は超音波
エネルギーを用いて小胞懸濁液に変換された（ブランソ
ン（Branson）超音波装置、マイクロチップ、20ワッ
ト、２分/ml、氷水冷却）。
エネルギーを用いて小胞懸濁液に変換された（ブランソ
ン（Branson）超音波装置、マイクロチップ、20ワッ
ト、２分/ml、氷水冷却）。
また、凍結乾燥溶液を振盪することによって調製した
懸濁液又は小胞分散液についても調べた。必要であれば
超音波エネルギーを使用してサーファクタントを約40mg
/mlの濃度となるように多量の水に分散し、又は約40〜2
50mg/mlの濃度となるようにｔ−ブタノール等の他の適
当な溶媒中に分散した。次いで、懸濁液又は溶液を凍結
乾燥した。生成したケーキを粉砕し、得られた粉末を再
び処理した。
懸濁液又は小胞分散液についても調べた。必要であれば
超音波エネルギーを使用してサーファクタントを約40mg
/mlの濃度となるように多量の水に分散し、又は約40〜2
50mg/mlの濃度となるようにｔ−ブタノール等の他の適
当な溶媒中に分散した。次いで、懸濁液又は溶液を凍結
乾燥した。生成したケーキを粉砕し、得られた粉末を再
び処理した。
また、別のSF−RI １の調製方法もテストに含まれて
いる。サーファクタントバッチＢ（第１表を参照）を、
塩化カルシウムを洗浄媒体に添加せずに調製した。
いる。サーファクタントバッチＢ（第１表を参照）を、
塩化カルシウムを洗浄媒体に添加せずに調製した。
適当な希釈サーファクタント懸濁液を約3000℃でアセ
チレン炎で燃焼させた後（Zeiss FL6）、カルシウムを
原子吸光分光分析法により測定した。これらの温度で
は、蛋白質マトリックスに結合したカルシムウムでさえ
解離し、正確に測定される。
チレン炎で燃焼させた後（Zeiss FL6）、カルシウムを
原子吸光分光分析法により測定した。これらの温度で
は、蛋白質マトリックスに結合したカルシムウムでさえ
解離し、正確に測定される。
未熟なウサギ胎児に対するサーファクタント懸濁液の
相対的な有効性は対照標準との比較により決定された。
投与量−活性曲線を試験バッチ及び対照標準について３
投与量づつプロットした（第２図を参照）。一般的に知
られている統計的な標準（共変動の分析）を用いること
により、本発明のCa2+イオンを含む高濃度懸濁液の効果
は、同様の投与量における低濃度の小胞分散液とはそれ
ほど顕著には違わないことが示された。
相対的な有効性は対照標準との比較により決定された。
投与量−活性曲線を試験バッチ及び対照標準について３
投与量づつプロットした（第２図を参照）。一般的に知
られている統計的な標準（共変動の分析）を用いること
により、本発明のCa2+イオンを含む高濃度懸濁液の効果
は、同様の投与量における低濃度の小胞分散液とはそれ
ほど顕著には違わないことが示された。
結果及び議論 SF−RI １の代表的なバッチのカルシウム含量を表１
に示す。
に示す。
この結果は、記述された製造方法に対応するすべての
バッチが、脂質抽出ホスフェートにつき40mmol/molより
多い量の結合カルシウムを含むことを示している。一
方、カルシウムを添加しないで調製したバッチ（Ｂ）は
13mmol/molだけの結合カルシウムを含む。これは、結果
として、抽出された肺のサーファクタント中の16mmol/m
olを超えないカルシウム含量値の範囲内である。（Webe
r MJ,possmayer F.Calcium interactions in Pulmonary
surfactant.Biochim Biophys Acta 796:83−91（198
4））。後に示されるように、これらの結合カルシウム
の高含量はSF−RI １の性質にとって非常に重要であ
る。
バッチが、脂質抽出ホスフェートにつき40mmol/molより
多い量の結合カルシウムを含むことを示している。一
方、カルシウムを添加しないで調製したバッチ（Ｂ）は
13mmol/molだけの結合カルシウムを含む。これは、結果
として、抽出された肺のサーファクタント中の16mmol/m
olを超えないカルシウム含量値の範囲内である。（Webe
r MJ,possmayer F.Calcium interactions in Pulmonary
surfactant.Biochim Biophys Acta 796:83−91（198
4））。後に示されるように、これらの結合カルシウム
の高含量はSF−RI １の性質にとって非常に重要であ
る。
また、表Ｉ及び第１図は新たに調製されたサーファク
タント懸濁液の粘度に関する経時テストの結果をも含
む。カルシウムに乏しい、即ち、従来のサーファクタン
ト（Ｂ）を75mmol/の食塩及び3mmol/の塩化カルシ
ウムの溶液に懸濁したとき、粘度は周囲温度で迅速に増
加し、わずか30分後には150mPasを超えていた。このこ
とは、このサーファクタント懸濁液がクリーム状の稠度
を有していたことを意味する。この懸濁液は気管内で臨
床的に用いることができない。
タント懸濁液の粘度に関する経時テストの結果をも含
む。カルシウムに乏しい、即ち、従来のサーファクタン
ト（Ｂ）を75mmol/の食塩及び3mmol/の塩化カルシ
ウムの溶液に懸濁したとき、粘度は周囲温度で迅速に増
加し、わずか30分後には150mPasを超えていた。このこ
とは、このサーファクタント懸濁液がクリーム状の稠度
を有していたことを意味する。この懸濁液は気管内で臨
床的に用いることができない。
また、高含量の結合カルシウムを含むサーファクタン
ト（Ａ、Ａ′及びＣ）を3mmol/の塩化カルシウムを含
む溶液に懸濁させたときも、粘度は非常に迅速に増加し
た（表１のA1を参照）。75mmol/の食塩溶液に懸濁し
た場合においてさえ、周囲温度に90分間貯蔵後粘度は約
150mPasに達した（表１のA2及びC1を参照）。75mmol/
の食塩及び1mmol/の塩化カルシウムの溶液の懸濁液の
粘度は、ゆるやかで少なく増加した（表１のA3を参
照）。
ト（Ａ、Ａ′及びＣ）を3mmol/の塩化カルシウムを含
む溶液に懸濁させたときも、粘度は非常に迅速に増加し
た（表１のA1を参照）。75mmol/の食塩溶液に懸濁し
た場合においてさえ、周囲温度に90分間貯蔵後粘度は約
150mPasに達した（表１のA2及びC1を参照）。75mmol/
の食塩及び1mmol/の塩化カルシウムの溶液の懸濁液の
粘度は、ゆるやかで少なく増加した（表１のA3を参
照）。
カルシウムに富むサーファクタントを75mmol/の食
塩及び3mmol/の塩化カルシウムの溶液に懸濁させるこ
とにより、非常に満足すべき結果が得られた。この場
合、長期の貯蔵後においてさえ、粘度は25mPasを超えな
かった（表１のA4、Ａ′及びC2を参照）。カルシウムに
富むサーファクタント凍結乾燥体を75mmol/の食塩及
び3mmol/の塩化カルシムウの溶液に懸濁させることに
よって、類似の結果が得られている（バッチＣ）。ここ
で再び、周囲温度で16時間という長期の貯蔵後において
さえ、粘度は25mPasを超えなかった。ただ、超音波エネ
ルギーを適用した場合にのみ、粘度は220mPasにまで増
加した。
塩及び3mmol/の塩化カルシウムの溶液に懸濁させるこ
とにより、非常に満足すべき結果が得られた。この場
合、長期の貯蔵後においてさえ、粘度は25mPasを超えな
かった（表１のA4、Ａ′及びC2を参照）。カルシウムに
富むサーファクタント凍結乾燥体を75mmol/の食塩及
び3mmol/の塩化カルシムウの溶液に懸濁させることに
よって、類似の結果が得られている（バッチＣ）。ここ
で再び、周囲温度で16時間という長期の貯蔵後において
さえ、粘度は25mPasを超えなかった。ただ、超音波エネ
ルギーを適用した場合にのみ、粘度は220mPasにまで増
加した。
12mmol/という非生理的に高いCa含量及び75mmol/
のNaClを有する溶液のCaに乏しい脂質（ｂ）の懸濁液の
粘度はよりゆるやかで少なく増加した。しかし、120分
後には60mPasの値が得られた。Ａ、Ａ′又はＣを3mmol/
のCa含有溶液に懸濁させたと仮定した場合、得られる
最終濃度（懸濁化剤及び脂質中のCa2+含量の総計）が同
じ値となるように、12mmol/の濃度を計算した。懸濁
化剤中のCa含量を高くするという変化はその結果により
不利に作用し、企図される生体内での用途に使用するこ
とはできない。というのは、非生理的に高いCa濃度を懸
濁化剤に用いると、気管支収縮を誘発するおそれがある
からである。
のNaClを有する溶液のCaに乏しい脂質（ｂ）の懸濁液の
粘度はよりゆるやかで少なく増加した。しかし、120分
後には60mPasの値が得られた。Ａ、Ａ′又はＣを3mmol/
のCa含有溶液に懸濁させたと仮定した場合、得られる
最終濃度（懸濁化剤及び脂質中のCa2+含量の総計）が同
じ値となるように、12mmol/の濃度を計算した。懸濁
化剤中のCa含量を高くするという変化はその結果により
不利に作用し、企図される生体内での用途に使用するこ
とはできない。というのは、非生理的に高いCa濃度を懸
濁化剤に用いると、気管支収縮を誘発するおそれがある
からである。
この結果は、驚くべきことに、高濃度であるにもかか
わらず低粘度のサーファクタント懸濁液を得るために
は、３つの要因が必須であることを示している。使用す
るサーファクタント脂質／蛋白質配合物が有機的に抽出
したリン脂質につき高含量の、好ましくは25mmol/よ
り多い結合カルシウムを有さなければならない。懸濁化
剤はその中に溶解したNaCl及びCaCl2の両方を、好まし
くはそれぞれ75mmol/及び3mmol/の濃度で含まなけ
ればならない。表１のテストは、３つの要因のうち一つ
でも欠ければ、周囲温度における懸濁化剤の粘度は、短
時間のうちに急激に増加することを示す。しかし、すべ
ての３つの要因が維持された場合、周囲温度においてさ
え12時間以上の間安定である高濃度でかつ低粘度のサー
ファクタントを、小胞凍結乾燥体からでさえ調製するこ
とができる。この種類のサーファクタント懸濁液は治療
のために適当である。また、第１図は添加塩を含む場合
及び含まない場合、並びにサーファクタントに結合した
及び懸濁化剤に溶解したCa2+濃度を変えた場合の、150m
g/mlのサーファクタントを有する懸濁液の粘度曲線を示
す。
わらず低粘度のサーファクタント懸濁液を得るために
は、３つの要因が必須であることを示している。使用す
るサーファクタント脂質／蛋白質配合物が有機的に抽出
したリン脂質につき高含量の、好ましくは25mmol/よ
り多い結合カルシウムを有さなければならない。懸濁化
剤はその中に溶解したNaCl及びCaCl2の両方を、好まし
くはそれぞれ75mmol/及び3mmol/の濃度で含まなけ
ればならない。表１のテストは、３つの要因のうち一つ
でも欠ければ、周囲温度における懸濁化剤の粘度は、短
時間のうちに急激に増加することを示す。しかし、すべ
ての３つの要因が維持された場合、周囲温度においてさ
え12時間以上の間安定である高濃度でかつ低粘度のサー
ファクタントを、小胞凍結乾燥体からでさえ調製するこ
とができる。この種類のサーファクタント懸濁液は治療
のために適当である。また、第１図は添加塩を含む場合
及び含まない場合、並びにサーファクタントに結合した
及び懸濁化剤に溶解したCa2+濃度を変えた場合の、150m
g/mlのサーファクタントを有する懸濁液の粘度曲線を示
す。
呼吸生理機能に関するサーファクタントの有効性を未
熟なウサギ胎児を用いて調べることができる。（Robert
son B,Lachmann B.,Experimental evaluation of surfa
ctants for replacement therapy.Experimental Lung R
esearch 14、279−310（1988））。これらの未熟な肺を
有する動物には、サーファクタントを用いる置換療法
後、呼吸させて酸素を送り込んだ。同腹子からの動物の
２つのバッチを直接比較することによって、相対的効
力、即ち、同じ効果を得るための量を定めた。この動物
実験モデルにおいて、懸濁化剤に約3mmol/の濃度のカ
ルシウムを添加することは有効性の程度に全く影響を及
ぼさないことが見い出された（第２図）。相対的効力は
変化しなかった。
熟なウサギ胎児を用いて調べることができる。（Robert
son B,Lachmann B.,Experimental evaluation of surfa
ctants for replacement therapy.Experimental Lung R
esearch 14、279−310（1988））。これらの未熟な肺を
有する動物には、サーファクタントを用いる置換療法
後、呼吸させて酸素を送り込んだ。同腹子からの動物の
２つのバッチを直接比較することによって、相対的効
力、即ち、同じ効果を得るための量を定めた。この動物
実験モデルにおいて、懸濁化剤に約3mmol/の濃度のカ
ルシウムを添加することは有効性の程度に全く影響を及
ぼさないことが見い出された（第２図）。相対的効力は
変化しなかった。
第１図において、各々の曲線は粘度（mPas）の経時
（分）変化を示す。各々の曲線は以下に示す一連のテス
トに関係づけられる。
（分）変化を示す。各々の曲線は以下に示す一連のテス
トに関係づけられる。
第２図においては、懸濁媒体に3mmol/の濃度範囲の
カルシウムを添加することは、未熟なウサギ胎児につい
ての有効性の程度に影響を及ぼさないことを示してい
る。連続線は塩化カルシウムがない場合を示すのに対
し、点線は3mmol/のCa2+イオン（CaCl2の状態）が存
在する場合を示す。測定された効力は、投与量対数値を
変化させた場合の3KPa呼吸圧力で得られた一回の呼吸量
として示されている。
カルシウムを添加することは、未熟なウサギ胎児につい
ての有効性の程度に影響を及ぼさないことを示してい
る。連続線は塩化カルシウムがない場合を示すのに対
し、点線は3mmol/のCa2+イオン（CaCl2の状態）が存
在する場合を示す。測定された効力は、投与量対数値を
変化させた場合の3KPa呼吸圧力で得られた一回の呼吸量
として示されている。
以下の実施例は、本発明のいくつかの懸濁液の調製を
述べている。
述べている。
実施例１ 畜牛の肺から有機溶媒で抽出して得られたサーファク
タントを用いた。このサーファクタントは約88％のリン
脂質、４％のコレステロール、１％のサーファクタント
−会合疎水性蛋白質、0.6％の遊離脂肪酸、トリグリセ
リド及び結合カルシウムから構成されていた。このリン
脂質の平均相対分子質量は約760Dであった。この物質は
水に不溶であるがクロロホルム等の非極性溶媒に容易に
溶解する黄色の非晶粉末であった。これは振盪によりあ
るいは超音波エネルギーを用いて、水中に懸濁させるこ
とができる。５重量％以上の濃度の懸濁液は視覚的に粘
稠である。調製、単離及び仕上げは追加的にCa2+イオン
を導入させて、Lipids 18:522−529（1983）に記載の方
法に従って行った。次いで、必要に応じて、例えばメタ
ノールに溶解した計算量の塩化カルシウムをクロロホル
ム等の有機溶媒に溶解したサーファクタントに添加する
ことにより、所望のカルシウム含量に修正することがで
きる。
タントを用いた。このサーファクタントは約88％のリン
脂質、４％のコレステロール、１％のサーファクタント
−会合疎水性蛋白質、0.6％の遊離脂肪酸、トリグリセ
リド及び結合カルシウムから構成されていた。このリン
脂質の平均相対分子質量は約760Dであった。この物質は
水に不溶であるがクロロホルム等の非極性溶媒に容易に
溶解する黄色の非晶粉末であった。これは振盪によりあ
るいは超音波エネルギーを用いて、水中に懸濁させるこ
とができる。５重量％以上の濃度の懸濁液は視覚的に粘
稠である。調製、単離及び仕上げは追加的にCa2+イオン
を導入させて、Lipids 18:522−529（1983）に記載の方
法に従って行った。次いで、必要に応じて、例えばメタ
ノールに溶解した計算量の塩化カルシウムをクロロホル
ム等の有機溶媒に溶解したサーファクタントに添加する
ことにより、所望のカルシウム含量に修正することがで
きる。
1.5gの前述の微粉砕されふるい分けされたサーファク
タント、又はｔ−ブタノールもしくはシクロヘキサンに
溶解したサーファクタントを凍結乾燥することにより得
られる物質を、8.5mlの懸濁化剤、好ましくは75mmol/
の食塩及び3mmol/の塩化カルシウムを含む食塩溶液
に、好ましくは注射用バイアル中で混合した。この懸濁
液をサイズ１の注射用カニューレ（20 Ｇ）を備えた注
射用シリンジに引き揚げ、次いでサイズ18のカニューレ
（26 Ｇ）を通じてバイアルに再び注射した。薄いカニ
ューレを通しての懸濁液のバイアルへの出し入れは、懸
濁液が塊を有しないことを確保するための単なる安全対
策に過ぎない。
タント、又はｔ−ブタノールもしくはシクロヘキサンに
溶解したサーファクタントを凍結乾燥することにより得
られる物質を、8.5mlの懸濁化剤、好ましくは75mmol/
の食塩及び3mmol/の塩化カルシウムを含む食塩溶液
に、好ましくは注射用バイアル中で混合した。この懸濁
液をサイズ１の注射用カニューレ（20 Ｇ）を備えた注
射用シリンジに引き揚げ、次いでサイズ18のカニューレ
（26 Ｇ）を通じてバイアルに再び注射した。薄いカニ
ューレを通しての懸濁液のバイアルへの出し入れは、懸
濁液が塊を有しないことを確保するための単なる安全対
策に過ぎない。
実施例２ 2.5gの微粉砕され、ふるい分けされたサーファクタン
トを150mmol/の食塩及び3.5mmol/のの塩化カルシウ
ムを含む7.5mlの懸濁化剤（食塩溶液）と混ぜた。その
後の工程は実施例１と同様に行った。
トを150mmol/の食塩及び3.5mmol/のの塩化カルシウ
ムを含む7.5mlの懸濁化剤（食塩溶液）と混ぜた。その
後の工程は実施例１と同様に行った。
第１図はサーファクタント懸濁液の粘度の経時変化を表
わす。 第２図は懸濁媒体にカルシウムを添加した場合としない
場合のウサギ胎児についての効力の比較を表わす。
わす。 第２図は懸濁媒体にカルシウムを添加した場合としない
場合のウサギ胎児についての効力の比較を表わす。
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 33/06 Ａ６１Ｋ 33/06 35/42 35/42 Ａ６１Ｐ 11/00 Ａ６１Ｐ 11/00 Ｂ０１Ｊ 13/00 Ｂ０１Ｊ 13/00 Ｂ Ａ６１Ｋ 37/22 (72)発明者 ロベルト ベッカー ドイツ連邦共和国 デー7950 ビベラッ ハ １ ヒューネルフェルトシュトラー セ 26 (56)参考文献 特開 昭59−181219（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−76016（ＪＰ，Ａ) Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈｙｓｉｏｌｏ ｇｙ，Ｖｏｌ．３（1983），ｐ．97− 110 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 38/00 - 38/58 A61K 31/19 A61K 31/20 A61K 31/215 A61K 31/23 A61K 33/06 A61K 35/42 B01J 13/00 ＣＡ（ＳＴＮ)
Claims (13)
- 【請求項１】気道疾患の置換療法のためのサーファクタ
ント懸濁液の製造方法において、畜牛の肺を食塩水で洗
浄し、 ａ）サーファクタントを６〜12mmol/のCa2+及び／又
はMg2+イオンを含む溶液から分離し、 ｂ）第１の精製を３〜8mmol/のCa2+及び／又はMg2+イ
オンの存在下グルコース密度勾配法によって行い、 ｃ）第２の精製を３〜10mmol/のCa2+及び／又はMg2+
イオンを含む水性相を用いて有機溶媒／アルコール／水
を含む系に分配することによって行い、 ｄ）次いで有機相を取り除いて残留物を乾燥して微粉砕
し、 ｅ）このようにして得られた微粉砕したサーファクタン
トを、１〜3.5mmol/のCa2+及び／又はMg2+イオン及び
33〜150mmol/の食塩を含む水性溶液に懸濁し、 懸濁液の粘度が30mPasより下にとどまり、サーファクタ
ントの含有量が60mg/mlより多いことを特徴とする製造
方法。 - 【請求項２】Ca2+及び／又はMg2+イオンを含む食塩水で
畜牛の肺を洗浄する、請求項（１）に記載の方法。 - 【請求項３】畜牛の肺の洗浄によって得られた洗浄液を
６〜12mmol/のCa2+含有量となるように調製する、請
求項（１）記載の方法。 - 【請求項４】工程ｃ）において、クロロホルム／メタノ
ール／水の系の分配を行う、請求項（１）記載の方法。 - 【請求項５】工程ｅ）において、微粉砕したサーファク
タントを2.5〜3.5mmol/のCa2+及び／又はMg2+イオン
及び60〜150mmol/の塩化ナトリウムを含む水溶液に懸
濁する、請求項（１）記載の方法。 - 【請求項６】工程ｄ）において、凍結乾燥後に有機溶剤
を除去する、請求項（１）記載の方法。 - 【請求項７】工程ｅ）で、１〜3.5mmol/のCa2+及び／
又はMg2+イオンと、33〜150mmol/の塩化ナトリウムを
含む水性懸濁化剤によって得られる懸濁液を希釈するこ
とによって低密度サーファクタント懸濁液を得る、請求
項（１）記載の方法。 - 【請求項８】Ca2+及び／又はMg2+塩のアルコール溶液を
後に添加することによって、サーファクタントのCa2+及
び／又はMg2+含有量を調節する、請求項（１）記載の方
法。 - 【請求項９】請求項（１）記載の工程ａ）〜ｄ）によっ
て調製されたサーファクタント。 - 【請求項１０】請求項（１）記載の方法に従って得られ
る、気道疾患の置換療法のためのサーファクタント懸濁
液であって、 ａ）使用するサーファクタント脂質／蛋白質が、有機的
に抽出可能なリン脂質1molに対して25mmolより多い、該
サーファクタント脂質／蛋白質に結合したCa2+及び／又
はMg2+イオンを含み、 ｂ）懸濁化剤が１〜3.5mmol/のCa2+及び／又はMg2+イ
オンを含み、 ｃ）同時に該懸濁化剤が33〜150mmol/の食塩を含み、 該懸濁液の粘度が30mPasより下にとどまり、サーファク
タントの含有量が60mg/mlより多いことを特徴とするサ
ーファクタント懸濁液。 - 【請求項１１】使用するサーファクタント脂質／蛋白質
が有機的に抽出可能なリン脂質1molに対して40〜70mmol
の結合Ca2+及び／又はMg2+イオン、かつ、懸濁化剤が2.
5〜3.5mmol/のCa2+及び／又はMg2+イオン及び60〜150
mmol/の塩化ナトリウムを含むことを特徴とする、請
求項（10）記載のサーファクタント懸濁液。 - 【請求項１２】懸濁化剤である水が75mmol/の塩化ナ
トリウムを含むことを特徴とする、請求項（10）又は
（11）記載のサーファクタント懸濁液。 - 【請求項１３】該サーファクタント脂質／タンパク質
が、それに結合したCa2+イオンを含み、懸濁化剤である
水が塩化ナトリウム及びCa2+イオンを含むことを特徴と
する、請求項（10）〜（12）の何れか一項に記載のサー
ファクタント懸濁液。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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