WO2017168200A2 - Способ получения натрий моносиалового ганглиозида и нейропротекторное средство на его основе - Google Patents

Способ получения натрий моносиалового ганглиозида и нейропротекторное средство на его основе Download PDF

Info

Publication number
WO2017168200A2
WO2017168200A2 PCT/IB2016/001612 IB2016001612W WO2017168200A2 WO 2017168200 A2 WO2017168200 A2 WO 2017168200A2 IB 2016001612 W IB2016001612 W IB 2016001612W WO 2017168200 A2 WO2017168200 A2 WO 2017168200A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
sodium
solution
ganglioside
precipitate
added
Prior art date
Application number
PCT/IB2016/001612
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
WO2017168200A3 (ru
Inventor
Валерий Алексеевич МАНДРОВСКИЙ
Original Assignee
Лонг Шенг Фарма Лимитед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Лонг Шенг Фарма Лимитед filed Critical Лонг Шенг Фарма Лимитед
Publication of WO2017168200A2 publication Critical patent/WO2017168200A2/ru
Publication of WO2017168200A3 publication Critical patent/WO2017168200A3/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2121/00—Preparations for use in therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7032—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a polyol, i.e. compounds having two or more free or esterified hydroxy groups, including the hydroxy group involved in the glycosidic linkage, e.g. monoglucosyldiacylglycerides, lactobionic acid, gangliosides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
    • C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
    • C07H15/06—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical being a hydroxyalkyl group esterified by a fatty acid

Definitions

  • the invention relates to the field of the pharmaceutical industry and relates to preparations of ganglioside GM1 in an injectable form.
  • State of the art relates to the field of the pharmaceutical industry and relates to preparations of ganglioside GM1 in an injectable form.
  • Gialliosides which are glycosphingolipids containing sialic acid, are present in the cell membrane of mammals, especially in the membranes of nerve cells.
  • Gangliosides play a significant role in the development of a nerve cell, growth, differentiation, and nerve repair.
  • Sodium monosial ganglioside (monosialotetrahexosyl sodium ganglioside, GM1, monosialotetrahexosylganglioside) is one of the most important gangliosides. It plays a significant role in the treatment of diseases of the central nervous system. When introduced into the body, GM1 can be incorporated into the structure of neuronal membranes and cause dynamic rearrangements in endogenous gangliosides. GMlnpn is known to be administered to animals with ischemic, traumatic and toxic damage to the brain protects its nerve cells from death, increases the viability of neurons and cells of neuronal lines when they are affected by glutamate and other toxins.
  • GM1 contributes to the treatment of various disorders of the central nervous system and is a neuroprotective agent (Neuroprotective effects of monosialotetrahexosylganglioside, Ai-ping Xi. Et al., Neural Regen Res. 2015 Aug; 10 (8): 1343-1344).
  • the mechanism of "remodeling of neuroplasticity of the nerve” is activated (consists of the survival of nerve cells, axon growth, synaptic growth).
  • Monosialotetrahexosyl ganglioside has a protective effect on the secondary degenerative nerve after injuries. It also positively affects the parameters of cerebral hemodynamics and trauma leading to cerebral edema. Ganglioside relieves swelling of nerve cells by increasing the activity of cell membrane enzymes. Animal experiments have shown that ganglioside helps with behavior disorders caused by Parkinson's disease.
  • the patent RU 2483736 (C2), publ. 2013-06-10 which relates to a method for the preparation and purification of monosialoganglioside in the form of its sodium salt and includes a) separating GM1 from Fucosyl GM1 in a lipid mixture containing GM1 monosialoganglioside as the main ganglioside component using ion-exchange column chromatography using an eluent, containing potassium or cesium ions, (b) extracting the dissolved substance from the eluted solution, (c) diafiltration of the aqueous solution of the extracted dissolved substances of stage (b), (d) adding sodium salt and diafiltration of the resulting aqueous solution, (e) extracting GM1 in the form of its sodium salt.
  • Patent CN 101108868, publ. 2008-01-23 discloses a method for producing high purity GM1, which comprises the steps of: (1) fresh licestock brain tissue used to prepare acetone powder; (2) the powder prepared in stage (1) is dissolved in a solution for extraction and stirred for 4-5 hours, separated by centrifugation and the supernatant is collected, the supernatant is purified by an LV chromatographic column to obtain a ganglioside; (3) the entire ganglioside prepared in step (2) is separated by MonoQ column chromatography to obtain GM1 ganglioside with a purity of 90 -95%; (4) GM1 prepared in step (3) is separated by hydrophobic chromatography to obtain GM1 ganglioside with a purity of more than 98%; (5) the GM1 aqueous solution prepared in step (4) is filtered through a hyperfiltration membrane with 50,000-100,000 MWCO, and the obtained filtrate is transferred to GM1 dry powder by freezing and drying.
  • the method can improve GM1
  • US Pat. No. 5,532,141, publ. 1996-07-02 discloses a method for producing a ganglioside lipid molecule comprising a contact a sample of brain neural tissue obtained from an animal with an extraction agent such as chloroform, methanol, water under conditions providing extraction of ganglioside lipid molecules from said neural tissue and removal of the extracted ganglioside lipid molecules from said extraction agent.
  • an extraction agent such as chloroform, methanol, water
  • Patent CN 104151372, publ. to19 describes a method for preparing monosialotetrahexyl sodium ganglioside.
  • the method includes the following steps: a) take a frozen pork brain, thaw, wash, homogenize, add a liquid solution to concentrated hydrochloric acid, mix and then centrifuge to obtain a separated brain protein; B) precipitated protein is added to methanol, homogenized, mixed and centrifuged to obtain an alcoholic extract; c) concentrated; d) the concentrate obtained previously is hydrolyzed, then centrifuged, and the supernatant liquid is collected to obtain a hydrolysis product; e) carry out ultrafiltration of the hydrolysis product repeatedly, separating substances with molecular weights above 1,600 daltons to obtain a GM1 pre-pure product, then ultrafiltrate the pre-purified GM1 product and remove substances with molecular weights below 1,500 daltons to obtain a pure GM1 solution; f) dried the solution of
  • a known method for the isolation and purification of GM1 from the brain of a pig consists of extraction with a mixture of water-methanol-chloroform and a two-stage chromatographic separation using a DEAE-Sepharose ion-exchange medium and Sephacryl S-100 medium.
  • Purified GM1 was homogeneous and had a purity> 98.0%.
  • the molecular mass measured by high-performance displacement chromatography was 3 O.
  • the present invention is to obtain a non-pyrogenic substance with a high degree of purity, suitable for the manufacture of effective injectable forms of ganglioside.
  • the problem is solved by a new method for producing Monosialotetrahexosyl sodium ganglioside (GM1) and an injection solution based on it.
  • GM1 Monosialotetrahexosyl sodium ganglioside
  • Pig brain monosialotetrahexosyl ganglioside The content of sodium monosialotetrahexosyl ganglioside (C 7 3Hi3oN 3 Na0 3 i or C 7 5H 134 N 3 Na0 31 ) is not less than 98%.
  • macroreticular ion exchange resins such as divinyl benzene or polystyrene based resins can be used, which are sold in particular under the trade names Dowex (Dow Chemical Co) and Amberlyte (Rohm and Haas) .
  • a cation exchange resin for example, Sepharose SP, Sepharose CM, Trisacryl M SP, DOWEX MAC-3, Fractogel EMD Amberlite, etc. can be used.
  • GUDU resins are used as ion exchange resins, in particular a strong acid gel with a cation exchange resin 001 * 7, for example a polystyrenesulfonate cation exchange resin crosslinked with approximately divinylbenzene
  • the resulting Ganglioside Substance is used to prepare a neuroprotective agent in the form of a solution for injection, which is then subjected to sterilizing filtration and the filling of glass ampoules is performed.
  • the solution for injection contains mg / ml:
  • Trichloromethane, methyl alcohol and pork brain are placed in the extract container in accordance with the ratio (2.5-2.6): 5: 1, after stirring, the mixture is allowed to stand for 2 hours, until the upper layer of liquid in the container becomes transparent.
  • the top layer of liquid is mixed with 1.5% a solution of Sodium hydroxide in a volume ratio of 5: 1.
  • the temperature is controlled so that it does not exceed 80 ° C until the complete splitting and sampling of the upper layer of the split liquid. (Intermediate I).
  • the flow rate is controlled within 5.00 l / min. After adsorption and saturation, the resin is washed with drinking water until a clear liquid flows out and the flow rate is controlled within 8.00 l / min. Dissolve and desorb with a solution of Sodium Hydroxide in methyl alcohol with a pH of 11.50-1 1.80; controlling the flow rate within 3.5 l / min .; temperature 28-30 ° C; and the desorbed solution is collected in a proportion of more than 95%.
  • the stripped liquid is transferred to a concentrating container; mix and heat, controlling the temperature so as not to exceed 30 ° C; and concentrate to 1-3% of the initial volume. Settled concentrated solution for more than 8 hours for crystallization and separation under the action of centrifugal forces.
  • the filter cake was washed with acetone and ethyl alcohol; after drying, a preformed ganglioside mixture is obtained.
  • aqueous solution is prepared from a preformed ganglioside mixture; after mixing until complete dissolution, hydrochloric acid is added to a pH of 3.00-3.20. Heated to 75-85 ° C and subjected to transformation for 1.5-2 hours. After transformation, add acetone in 10-15 times the volume; mix evenly, assert and leave. Centrifuged; washing the filter cake with acetone and obtaining a ganglioside mixture (Intermediate III).
  • GM-1 feed product Dissolve the GM-1 feed product by flowing phase (Trichloromethane, Methyl alcohol and purified water in volume ratio 70: 35: 4.1). The solution is passed through ion-exchange resins at a flow rate of 10 ppm. After adjusting the pH of the effluent to 4.50-5.50 with a saturated solution of sodium hydroxide, decompression, concentration and addition of acetone to obtain a precipitate; filtering and drying with air, get purified raw product GM-1.
  • phase Terichloromethane, Methyl alcohol and purified water in volume ratio 70: 35: 4.1
  • the solution is passed through ion-exchange resins at a flow rate of 10 ppm. After adjusting the pH of the effluent to 4.50-5.50 with a saturated solution of sodium hydroxide, decompression, concentration and addition of acetone to obtain a precipitate; filtering and drying with air, get purified raw product GM-1.
  • the purified GM-1 raw product is prepared as a 15% aqueous solution; add activated carbon weighing 20% by weight of the purified raw material product GM-1; and then the solution is filtered; the filtrate passes through cation-exchange resins with a flow rate of 5 l / h; the effluent is collected and the pH is adjusted to 4.70-4.80 with saturated sodium hydroxide solution and then filtered.
  • 2 ml of water is added to 0.2 ml of the test solution containing the specified amount of the element, then 2 ml of the resorcinol hydrochloric acid solution (0.2 g of resorcinol is mixed with 10 ml of water, 90 ml of hydrochloric acid is added, then 0.25 ml of OD mol / L of copper sulfate), heated in a warm bath for 15 minutes, the color of the solution is blue-violet; 5 ml of n-amyl alcohol are recovered; the layer of n-amyl alcohol is blue.
  • This product is a differential reaction of the sodium salt (Appendix IV C of the Chinese Pharmacopoeia (2010 version) volume II).
  • the maximum time of the content of the test solution is equal to the maximum time of the content of the standard solution.
  • the infrared absorption spectrum of this product is the same as that of the reference product. Clarity and color of the solution.
  • the product is diluted with water so that 1 ml of 20 mg of solution is obtained, a colorless solution is obtained.
  • Sialic acid The product is diluted with water so that 1 ml of 0.25 mg of solution, as a solution for testing. Separately, take the standard of sialic acid, dilute with water so that 50 ml of solution fall per 1 ml, it will be a standard solution. 2 ml of the standard solution and the test solution are accurately measured, 2 ml of resorcinol hydrochloric acid are added to each, mixed, the resulting solutions are lowered into the bath for 15 minutes, then cooled. 5 ml of n-amyl alcohol are added to each solution, shake for 1 minute. Place the solutions in an ice bath for 15 minutes with a 2000 rpm centrifuge for 5 minutes.
  • Protein is determined by the folin reagent method (Appendix VII M of the Chinese Pharmacopoeia (2010 version) II). Based on the dry product, the protein content is not more than 1.0%.
  • High molecular weight impurities Determined by molecular exclusion chromatography (Appendix V H of the Chinese Pharmacopoeia (201 Overversion) Volume II). Chromatographic conditions and suitability of the testing system.
  • hydrophilic modified silica gel as a filler of a chromatographic column (for example, TSK GEL 2000SWxl, ZOOshpkh 7.8mm, 5 ⁇ ; or with similar efficiency); trifluoroacetic acid - acetonitrile - water (0.05: 40: 60) as the mobile phase, flow rate 0.7 ml / min; wavelength 214nm.
  • the number of theoretical plates in accordance with peak A ribonuclease is not less than 5000, the degree of separation between adjacent peaks is not less than 3.0, based on the ratio of peak height and valley height.
  • Preparation of a standard curve Take ribonuclease A (molecular weight 13700), human insulin (molecular weight 5808), thymosin ⁇ (molecular weight 3108) and somatostatin (molecular weight 1638), separately add the mobile phase to dissolve and obtain a solution of 1 mg / ml as a standard molecular solution . Measure 20 ⁇ 1 of the above solution, individually pour into a liquid chromatograph, record the chromatogram, repeat 5 times, the relative standard deviation of the retention time should be no more than 2.0%. Take the retention time of each peak as an abscissa, the logarithm of molecular weight per ordinate, conduct linear regression, the correlation coefficient is less than 0.99.
  • the peak area of impurities with a molecular weight of more than 5000 daltons is less than 1.00%.
  • Humidity Measured using the method of determining humidity (Appendix VIII M article A of the Chinese Pharmacopoeia (2010 version) volume II), the water content does not exceed 4.5%.
  • Heavy metals Measured in accordance with Appendix VIII H of the Chinese Pharmacopoeia (2010 version) volume II, the content of heavy metals does not exceed 12%.
  • the number of theoretical plates is calculated as the peak of sodium monosialotetrahexosylganglioside and not less than 1000, the degree of separation between sodium monosialotetrahexosylganglioside and neighboring impurity peaks meets the requirements.
  • Ampoules are placed on the conveyor of an ultrasonic washing machine, after which they automatically fall into the washing cabinet, which rinses the ampoules with ultrasound.
  • a further scheme for washing the ampoules is: circulating water - circulating water - compressed air - distilled water - water for injection - compressed air, after which the ampoules are automatically transferred to a drying tunnel through a closed conveyor.
  • the washing machine washing frequency should not exceed 50 Hz, the temperature in the drying tunnel should not be lower than 280 °. 2.
  • Injection water is poured into the reactor with a volume of 105-1 10% of the total water volume.
  • the mixer is switched on, the speed of which must be at least 360 rpm.
  • Ultrafine filtered salt water is added to the powder of the active component, stirred for 20 minutes until completely dissolved.
  • the connecting pipeline passes through the reactor - the sanitary system pump -> filter - » ⁇ collection. After turning on the pump of the sanitary system, filtration begins, the duration of filtration should be no more than 1 hour.
  • Pre-filter pressure ⁇ 0.15 Mra, it is necessary to record the pressure level at the beginning, middle and at the end of the filtration process.
  • the drug solution Before filling, the drug solution is passed through a filter, the cell diameter of which should be 0.22 mm, it is also necessary to check the filter tip, standard> 50psi, or in accordance with the instructions before and after filtering.
  • the filtered drug solution is poured into washed and sterilized ampoules, sealed with and sent further along the conveyor line to the sterilization compartment.
  • the operator checks the packaging volume and oxygen ingress every half hour, the standard is: 2 ml: 20 mg: 2.1240g: 2.2337g
  • Time from powder dissolving to packaging and sealing no more than 12 hours.
  • the sterilization department operators collect hermetically sealed ampoules in a stainless steel box, after filling the box, it is installed in the sterilizer and sterilization is carried out.
  • Sterilization parameters sterilize for 20 minutes at a temperature of 121 °, and with a rarefied vacuum: 0.08 MPa for three minutes. It is also necessary that the hermetically packed prefabricated product undergo bti-hour sterilization.
  • the ampoules When conducting a visual inspection, the ampoules should be installed in the test trough, a test should be carried out, sifted ampoules with defects (leaky air, blistering, carbonized), put in a stainless steel box. After completion of the mechanical check, the ampoules are conveyed through the conveyor to the compartment for fully automatic inspection for defects. Ampoules without defects and rejected are stacked on different conveyor lines. Defective ampoules are stacked in a separate stainless steel box. 6. Packing
  • the PVC blister is installed on the conveyor, after filling the ampoules into the PVC blister, their quantity is checked, in case of an excess or missing ampoule, it is necessary to report or remove the ampoule. Also during packaging, it is necessary to monitor the quality and clarity of the marking and its compliance with the requirements. After that, the instruction is placed on top of the blister, and the blister is placed in a box and sealed.
  • the invention is applicable in the field of the pharmaceutical industry, in particular, in the field of production of GM1 ganglioside preparations in injection form.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности и касается препаратов ганглиозида GM1 в инъекционной форме. Способ заключается в том, что готовят экстракт свиного мозга с использованием смеси Трихлорметана, метилового спирта, проводят абсорбцию на макроретикулярной ионообменной смоле и десорбцию жидкого экстракта, разделение ганглиозидной смеси, отделение. Моносиалотетрагексозиловых ганглиозидов сырьевого продукта с его последующей очисткой, сушкой и упаковкой. Способ обеспечивает субстанцию высокой чистоты, пригодную для получения инъекционных препаратов.

Description

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НАТРИЙ МОНОСИАЛОВОГО ГАНГЛИОЗИДА И НЕЙРОПРОТЕКТОРНОЕ СРЕДСТВО
НА ЕГО ОСНОВЕ Область техники
Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности и касается препаратов ганглиозида GM1 в инъекционной форме. Предшествующий уровень техники
Ганглиозиды, представляющие собой гликосфинголипиды, содержащие сиаловую кислоту, присутствуют в клеточной мембране млекопитающих, особенно в мембранах нервных клеток.
Ганглиозиды играют существенную роль в развитии нервной клетки, росте, дифференцировании, репарации нерва.
Натрий моносиаловый ганглиозид (моносиалотетрагексозил ганглиозид натрия, GM1, monosialotetrahexosylganglioside) является одним из самых важных ганглиозидов. Он играет значительную роль в лечении заболеваний центральной нервной системы. GM1 при введении в организм может включаться в структуру нейрональных мембран и вызывать динамические перестройки в эндогенных ганглиозидах. Известно, что GMlnpn введении животным с ишемическими, травматическими и токсическими повреждениями мозга предохраняют его нервные клетки от гибели, повышает жизнеспособность нейронов и клеток нейрональных линий при действии на них глутамата и других токсинов.
GM1 способствуют лечению различных нарушений функционирования ЦНС и является нейропротекторным средством (Neuroprotective effects of monosialotetrahexosylganglioside, Ai-ping Xi. et al., Neural Regen Res. 2015 Aug; 10(8): 1343-1344). Включается механизм «ремоделирования нейропластичности нерва» (состоит из выживания нервных клеток, роста аксонов, синаптического роста). Моносиалотетрагексозила ганглиозид оказывает защитное воздействие на вторичный дегенеративный нерв после травм. А также положительно воздействует на параметры церебральной гемодинамики и травмы ведущие к отеку мозга. Ганглиозид снимает отек нервных клеток с помощью повышения активности ферментов клеточной мембраны. Эксперименты на животных показали, что Ганглиозид помогает при расстройствах поведения, вызванных болезнью Паркинсона.
Figure imgf000004_0001
Моносиалотетрагексозил ганглиозид натрия (GM1)
Как правило, для использования в медицинской практике к препаратам природного происхождения предъявляются высокие требования к степени их очистки. Поэтому исследователями были предприняты многочисленные попытки разработки подходящих способов получения ганглиозидов.
Например, известен патент RU 2483736 (С2), опубл. 2013-06- 10, который относится к способу получения и очистки моносиалоганглиозида в форме его натриевой соли и включает а) отделение GM1 от Фукозил GM1 в липидной смеси, содержащей моносиалоганглиозид GM1 в качестве основного ганглиозидного компонента, с помощью колоночной ионообменной хроматографии с использованием элюента, содержащего ионы калия или цезия, (б) извлечение растворенного вещества из элюированного раствора, (в) диафильтрацию водного раствора извлеченного растворенного вещества стадии (б), (г) добавление натриевой соли и диафильтрацию полученного водного раствора, (д) извлечение GM1 в форме его натриевой соли.
Патент CN 101108868, опубл. 2008-01-23, раскрывает метод получения GM1 с высокой чистотой, который включает стадии: (1) свежую мозговую ткань licestock используют для приготовления ацетонового порошка; (2) порошок, подготовленный на стадии(1), растворяют раствором для извлечения и перемешивают 4- 5 часов, отделяют центрифугированием и собирают супернатант, супернатант очищают LV хроматографической колонкой для получения ганглиозида; (3) весь ганглиозид, подготовленный на стадии (2), отделяют колоночной хроматографией MonoQ для получения ганглиозида GM1 с чистотой 90 -95%; (4) GM1, подготовленный на стадии (3), отделяют гидрофобной хроматографией для получения ганглиозида GM1 с чистотой больше чем 98 %; (5) водный раствор GM1, подготовленный на стадии (4), фильтруют через мембрану гиперфильтрации с 50 000 - 100 000 MWCO, и полученный фильтрат переводят в GM1 сухой порошок посредством замораживания и высыхания. Метод может улучшить выработку GM1 и избежать загрязнения другими фосфолипидами.
Патент US 5532141, опубл. 1996-07-02, раскрывает способ получения молекулы липида ганглиозида, включающей контакт образца мозговой невральной ткани, полученной из животного, с агентом извлечения, таким как хлороформ, метанол, вода при условиях, обеспечивающих извлечение молекул липида ганглиозида из указанной невральной ткани и удаление извлеченных молекул липида ганглиозида из указанного агента извлечения.
Патент CN 104151372, опубл. 2014-11-19, описывает способ приготовления моносиалотетрагексил ганглиозида натрия. Способ включает следующие шаги: а) берут замораженный свиной мозг, размораживают, моют, гомогенизируют, добавляют жидкий раствор в концентрированную соляную кислоту, перемешивают и затем центрифугируют для получения отделенного мозгового протеина; Ь)осажденный протеин добавляют в метанол, гомогенизируют, перемешивают и центрифугируют для получения спиртового экстракта; с) концентрируют; d) гидролизуют концентрат, полученный ранее, затем отделяют центрифугированием и собирают жидкость супернатанта для получения продукта гидролиза; е) проводят ультрафильтрацию продуктагидролиза многократно, отделяя вещества с молекулярными массами выше 1 600 дальтон для получения предварительного чистого продукта GM1, далее проводят ультрафильтрацию предварительно очищенного продукта GM1 и удаляют вещества с молекулярными массами ниже 1 500 дальтон для получения чистого раствора GM1 ; f) высушиват раствора GM1 и получают Моносиалотетрагексил ганглиозид натрия.
Известен способ выделения и очистки GM1 из мозга свиньи. Метод состоит из экстракции смесью вода- метанол- хлороформ и двухступенчатого хроматографического отделения с помощью DEAE-сефарозной ионно обменной средой и Sephacryl S-100 средой. Очищенный GM1 был гомогенным и имел чистоту> 98,0%. Молекулярная масса, измеренная методом высокоэффективной вытеснительной хроматографии была ЗО.ОШа и 1546.9Da при масс-спектроскопическом измерении ионизацией распылением в электрическом поле (Liujiao Bian, Isolation and purification of monosialotetrahexosylgangliosides from pig brain by extraction and liquid chromatography, Biomedical Chromatography, Volume 29, Issue 10, pages 1604-1611, October 2015). Данное решение может быть указано в качестве ближайшего аналога.
Раскрытие изобретения
Задачей настоящего изобретения является получение непирогенной субстанции с высокой степенью чистоты, пригодной для производства эффективных инъекционных форм ганглиозида. Задача решается новым способом получения Моносиалотетрагексозил ганглиозида натрия (GM1) и инъекционного раствора на его основе.
Способ заключается в том, что свиные мозги экстрагируют смесью трихлорметан-метиловый спирт, добавляют гидроксид натрия, отделяют раствор от осадка центрифугированием, медленно нагревают до расщепления, адсорбируют на макроретикулярной ионообменной смоле с последующей десорбцией и промыванием водой, десорбированную жидкость помешивают, повышая температуру нагрева, кристаллизовавшуюся смесь пропускают через центрифугу, осадок промывают ацетоном и этанолом, просушивают, полученную ганглизиодную смесь переводят в водный раствор, тщательно размешивают, добавляют соляную кислоту, для регуляции уровня рН =3.0-3.2, нагревают до 75-85°С в течение 1.5-2 ч, добавляют ацетон для выпадения осадка, отделяют осадок центрифугированием и промывают его ацетоном, высушивают, проводят хроматографическое разделение смеси на ионообменной колонне, собирают фракцию Моносиалотетрагексозиловых ганглиозидов (GM-1), определенную тонкослойной хроматографией, концентрируют до выпадения GM-1 осадка, растворяют его в смеси трихлорметана, метилового спирта и очищенной воды, затем раствор пропускают через ионообменную смоляную колонну, получившуюся жидкость концентрируют, добавляют ацетон для получения осадка, фильтруют, высушивают, разбавляют в воде, добавляют активированный уголь, размешивают, фильтруют и пропускают через катионобменную смоляную колонну, получившуюся жидкость повторно фильтруют и концертируют, добавляют ацетон, охлаждают, получившийся осадок вновь фильтруют, высушивают с получением конечного продукта.
Продукт: моносиалотетрагексозилганглиозид натрия из свиного мозга. Содержание моносиалотетрагексозилганглиозида натрия (C73Hi3oN3Na03i или C75H134N3Na031) не менее 98%.
В качестве макроретикулярной ионообменной смолы могут быть использованы такие как смолы на основе дивинил бензола или на основе полистирола, которые выпускаются в частности под торговыми названиями «Dowex» (фирма «Dow Chemical Со») и «Amberlyte» (фирма «Rohm and Haas»).
В качестве катионообменной смолы могут быть использованы, например, сефароза SP, сефароза CM, Trisacryl М SP, DOWEX МАС-3, Fractogel EMD Amberlite и др.
Предпочтительно в качестве ионообменных смол используют смолы марки GUDU, в частности гель сильной кислоты с катионообменной смолой 001*7, например катионообменной смолой на основе полистиролсульфоната, сшитой приблизительно с дивинилбензолом
(http ://www. sxresin.com/en/display . asp?id=51 ), смолу сильноосновного анионита 1-го (гель) типа 201 *4 (http://www.sxresin.com/en/display.asp?id=90).
Полученная Субстанция Ганглиозида используется для приготовления нейропротекторного средства в форме раствора для инъекций, который затем подвергается стерилизующей фильтрации и производиться наполнение ампул стеклянных.
Раствор для инъекций содержит мг/мл:
моносиалотетрагексозилганглиозида натрия 10-40
гидрофосфат натрия 0,5-5
натрия дигидрофосфат 2-5
хлористый натрий 8-9
воду для инъекций остальное.
Лучший пример осуществления изобретения
Возможность осуществления изобретения может быть продемонстрирована ниже представленными примерами.
Пример 1.
(1) Приготовление экстракта:
Помещают Трихлорметан, метиловый спирт и свиной мозг в экстрактную емкость в соответствии с соотношением (2.5-2.6) :5: 1, после перемешивания дают смеси отстояться в течение 2 часов, пока верхний слой жидкости в емкости не станет прозрачным. Верхний слой жидкости смешивают с 1.5% раствором Гидроксида Натрия в объемном соотношении 5: 1. Проводят расщепление (гидролиз) путем медленного нагревания; когда жидкость выливается наружу, регулируют паровой клапан, чтобы стабилизировать выливание жидкости. Температура контролируется, чтобы не превысила 80°С до момента полного расщепления и забора образца верхнего слоя расщепленной жидкости. (Промежуточный продукт I).
(2) Абсорбция на макроретикулярной ионообменной смоле и десорбция образца верхнего слоя жидкого экстракта;
При абсорбции жидкого экстракта контролируют скорость течения в пределах 5.00 л/мин. После адсорбции и сатурации промывают смолу питьевой водой, пока не будет вытекать прозрачная жидкость и контролируют скорость течения в пределах 8.00 л/мин. Растворяют и десорбируют раствором Гидроксида Натрия в метиловом спирте с рН 11.50-1 1.80; контролируя скорость потока в пределах 3.5 л/мин.; температуру 28-30°С; и собирают десорбированный раствор в пропорции более чем 95%.
Перемещают десорбированную жидкость в концентрирующую емкость; перемешивают и нагревают, контролируя температуру, чтобы не превышала 30°С; и концентрируют до 1-3% от начального объема. Отстаивают концентрированный раствор более 8 часов для кристаллизации и разделения под действием центробежных сил. Осадок на фильтре промывают ацетоном и этиловым спиртом; после высыхания получают предварительно преобразованную ганглиозидную смесь.
Из предварительно преобразованной ганглиозидной смеси готовят водный раствор; после смешивания до полного растворения добавляют соляную кислоту до рН 3.00-3.20. Нагревают до 75-85°С и подвергают трансформации в течение 1.5-2 ч. После трансформации добавляют ацетон в 10-15 кратном объеме; равномерно перемешивают, отстаивают и оставляют. Центрифугируют; промывают осадок на фильтре ацетоном и получают ганглиозидную смесь (Промежуточный продукт III).
(3) Разделение ганглиозидной смеси:
Смешивают Промежуточный Продукт III и проточную фазу (Трихлорметан, Метиловый спирт и очищенная вода в соотношении 55:40:4), в соответствии с соотношением объемов 1 :3, после сорбции ионообменную хроматографическую колонну промывают проточной фазой (Трихлорметан, Метиловый спирт и очищенная вода в соотношении 55:40:4); элюируют и детектируют собираемый раствор в соответствии с методом тонкослойной хроматографии; и затем собирают раствор в соответствии с результатом определения соответственно. После того как вытекающая жидкость, соответствующая требованиям, декомпрессируется и концентрируется при условиях 0.06-0. IMPa вакуумной степени и температуре не превышающей 35°С, регулируют значение РН до 7-8 насыщенным раствором Гидроксида Натрия; отстаивают, центрифугируют и добавляют ацетон и после сушки получают сырьевой продукт (Промежуточный продукт IV).
(4) Отделение Моносиалотетрагексозиловых ганглиозидов сырьевого продукта:
Смешивают Промежуточный Продукт IV и промывочную фазу (Трихлорметан, Метиловый спирт и очищенная вода в соотношении объемов 60:40:4) в соответствии с соотношением объемов 1 :3, пропускают через ионную хроматографическую колонну, промывают. Собирают элюат в соответствии с результатом тонкослойной хроматографии (TLC). Из раствора с результатом измерения TLC которого получен Промежуточный Продукт V, требуется забор образцов собранной жидкости из каждой емкости. После подготовки образец подвергается HPLC детекции с максимальной единичной примесью <0.5%; концентрируют и отстаивают образцы с примесями <3.0%; удаляют супернатант, чтобы получить моносиалотетрагексогиловый ганглиозный сырьевой продукт (GM-1 сырьевой продукт).
(5) Очистка, сушка и упаковка GM-1 :
Растворяют сырьевой продукт GM-1 проточной фазой (Трихлорметан, Метиловый спирт и очищенная вода в соотношении объемов 70:35:4.1). Раствор пропускают через ионно-обменные смолы при скорости течения Юл/ч. После регулирования значения рН вытекающей жидкости до 4.50-5.50 насыщенным раствором гидроксида натрия, декомпрессии, концентрирования и добавления ацетона для получения осадка; фильтрации и сушки воздухом, получают очищенный сырьевой продукт GM-1.
Очищенный сырьевой продукт GM-1 готовят в виде 15% водного раствора; добавляют активированный уголь массой 20% от массы очищенного сырьевого продукта GM-1 ; и затем раствор фильтруют; фильтрат проходит через катионно- обменные смолы со скоростью течения 5л/ч; вытекающую жидкость собирают и значение рН доводят до 4.70-4.80 насыщенным раствором гидроксида натрия и затем фильтруют. После дистилляции при 70-75°С, к охлажденному отфильтрованному раствору добавляется в два раза больший по объему концентрированный ацетон; температуру снижают не ниже 0°С; раствор отстаивают и фильтруют; осадок подвергают аэрации и затем вакуумной сушке 24ч при 0.08 МПа вакуума и при 49°С-51°С для получения GM-1. Высушенный конечный продукт дробят до получения порошка в течение 30-40 минут, пакуют, маркируют и помещают в место хранения. Пример 2.
Исследование чистоты полученной субстанции
К 0,2мл раствора для испытания с содержанием установленного количества элемента добавляют 2мл воды, затем 2мл раствора резорцин-соляной кислоты (0,2г резорцина смешивают с 10мл воды, добавляют 90мл соляной кислоты, затем 0,25мл ОД моль/л сульфата меди), подогревают в теплой ванне 15 минут, цвет раствора сине-фиолетовый; извлекают 5мл н-амилового спирта, слой н-амилового спирта синий.
Берут около 20мг продукта, добавляют 1мл ледяной уксусной кислоты, нагревают в кипящей воде до полного растворения, после чего добавляют 1 каплю раствора трихлорида железа, и в кипящей ванне медленно вливают 1мл серной кислоты, что повлечет разделение раствора на 2 слоя, цвет 2х слоев должен быть коричневый.
Данный продукт представляет собой дифференциальную реакцию натриевой соли (Приложение IV С Китайской Фармакопеи (2010версия) том II).
В зафиксированной хроматограмме с содержанием установленного элемента, максимальное время содержания раствора для испытания равняется максимальному времени содержания эталонного раствора.
Инфракрасный спектр поглощения данного продукта такой же, как и у эталонного продукта. Ясность и цвет раствора. Продукт разбавляют водой так, чтобы на 1мл приходилось 20мг раствора, получается бесцветный раствор.
Сиаловая кислота. Продукт разбавляют водой так, чтобы на 1мл приходилось 0,25мг раствора, в качестве раствора для испытаний. Отдельно берут эталон сиаловой кислоты, разбавляют водой так, чтобы на 1мл приходилось 50μ раствора, это будет эталонный раствор. Точно отмеряют по 2мл эталонного раствора и раствора для испытаний, в каждый добавляют по 2мл резорцин-соляной кислоты, перемешивают, опускают получившиеся растворы в ванну на 15 минут, затем охлаждают. В каждый раствор добавляют по 5 мл н-амилового спирта, трясут 1 минуту. Помещают растворы в ледяную ванну на 15 минут с центрифугой 2000 об/мин на 5 минут. Извлекают из верхнего слоя н-амиловый спирт в соответствии с УФ методом спектрофотометрии (Приложение IV А Китайской Фармакопеи (2010версия) том II) и определяют степень поглощения при длине волны 585 нм; раствор для испытаний заменивают на воду и проводят исследование по такому же методу. Исходя из того, что это сухой продукт, он содержит 19.0%-21.0% сиаловой кислоты.
Протеин определяют по реагентному методу Фолина (Приложение VII М Китайской Фармакопеи (2010версия) том II). Из расчета на сухой продукт, содержание протеина не более 1.0%.
Примеси с высоким молекулярным весом Определяются по методу молекулярной эксклюзионной хроматографии (Приложение V Н Китайской Фармакопеи (201 Оверсия) том II). Хроматографические условия и пригодность системы тестирования. Используют гидрофильный модифицированный силикагель в качестве наполнителя хроматографической колонки (например, TSK GEL 2000SWxl, ЗООшпх 7.8mm, 5μπι; или с подобной эффективностью); трифторуксусную кислоту - ацетонитрил - воду (0.05:40:60) в качестве подвижной фазы, скорость потока 0,7мл/мин; длина волны 214нм. Число теоретических тарелок в соответствии с рибонуклеазой пика А не менее 5000, степень разделения между смежными пиками не менее 3.0, исходя из соотношения высоты пика и высоты долины.
Подготовка стандартной кривой. Берут рибонуклеазу А (молекулярный вес 13700), инсулин человека (молекулярный вес 5808), тимозин αΐ (молекулярный вес 3108) и соматостатин (молекулярная масса 1638), по отдельности добавляют подвижную фазу для растворения и получения раствора 1мг/мл в качестве стандартного молекулярного раствора. Отмеряют 20μ1 вышеуказанного раствора, по отдельности вливают в жидкий хроматограф, записывают хроматограмму, повторите 5 раз, относительное стандартное отклонение времени удерживания должно быть не больше 2.0%. Принимают время удерживания каждого пика за абсциссу, логарифм молекулярного веса за ординату, проводят линейную регрессию, коэффициент корреляции менее 0.99.
Метод определения. Согласно методу нормализации, в хроматографии раствора для испытаний площадь пика примесей с молекулярным весом более 5000дальтон менее 1.00%.
Влажность. Измеряют с помощью метода определения влажности (Приложение VIII М статья А Китайской Фармакопеи (2010версия) том II), содержание воды не превышает 4,5%.
Тяжелые металлы. Измеряют в соответствии с Приложением VIII Н Китайской Фармакопеи (2010версия) том II, содержание тяжелых металлов не превышает 12%.
Аномальная токсичность. Проверяют в соответствии с Приложением XI С Китайской Фармакопеи (2010 версия) том II, лекарство, согласно методу внутривенных инъекций, соответствует требованиям.
Пироген. Определяют на основе Приложения XI D Китайской Фармакопеи (2010 версия) том II; на 1кг веса домашней кошки вводят 2мл, соответствует требованиям- не содержит пирогенов.. Определение содержания с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Количество теоретических тарелок исчисляется пиком моносиалотетрагексозилганглиозида натрия и не менее 1000, степень разделения между моносиалотетрагексозилганглиозидом натрия и соседними пиками примесей соответствовует требованиям.
Нейропротекторный агент.
Пример 3.
Схема и описание производственного процесса получения раствора инъекций натрий моносиалового ганглиозида Описание производственного процесса
1. Стерилизация и промывка ампул:
Ампулы закладываются на конвейер ультразвуковой моющей машины, после чего автоматически попадают в моющий шкаф, который при помощи ультразвука промывает ампулы. Дальнейшая схема промывки ампул: циркуляционная вода - циркуляционная вода - сжатый воздух - дистиллированная вода - вода для инъекций - сжатый воздух, после этого ампулы по закрытому конвейеру автоматически переправляются в сушильный тоннель. Частота промывки моющей машины не должна превышать 50 Hz, температура в сушильном тоннеле не должны быть ниже 280°. 2. Приготовление
2.1. В реактор заливается вода для инъекций, объёмом 105- 1 10% от общего водного объёма. Включается мешалка, скорость которой должна быть не менее 360 оборотов в минуту.
2.2. В соответствии с общим количеством воды и общими пропорциями, гидрофосфат натрия, натрия дигидрофосфат и хлористый натрий добавляется в воду для инъекций, перемешивается в течение 5 минут до полного растворения. После этого, соленую воду в баке охлаждают до 40-45°С, производят ультратонкую фильтрацию, взвешивают соленую воду и проверяют рецептуру (включая указанное в рецептуре общее количество воды и соли). После этого соленую воду заливают в отдельный реактор.
2.3. В порошок активного компонента, добавляют прошедшую ультратонкую фильтрацию соленую воду, размешивают в течение 20 минут до полного растворения.
2.4. Проверка получившейся жидкости
Используя 10mol/L NaOH регулируют уровень рН (необходимый уровень 7.3-7.7), размешивая раствор в течении 5 минут.
2.5. Заливают 50±мл жидкости в колбу, проводим визуальный проверку цвета и прозрачности, проверяем уровень рН.
Описание: получившаяся жидкость бесцветная и прозрачная. Цвет: < колориметрического раствора желтого цвета N°l Прозрачность: < стандартного нефелометрического раствора
ЛЬ2
Уровень рН: 7.3-7.7
2.6. Связующий трубопровод проходит через реактор — насос санитарной системы — > фильтр — »· сборник. После включения насоса санитарной системы начинается фильтрация, продолжительность фильтрации должны быть не более 1го часа. Давление предварительного фильтра: < 0.15 Мра, необходимо протоколировать уровень давление в начале, середине и в конце процесса фильтрации.
3. Порядок наполнения ампул и герметизация:
Перед началом расфасовки, лекарственный раствор пропускают через фильтр, диаметр ячеек которого должен быть - 0,22мм, также необходимо до и после проведения фильтрации проверить фильтрующий наконечник, стандарт >50psi или в соответствии с требованиями инструкции. Отфильтрованный лекарственный раствор разливают по помытым и стерилизованным ампулам, запаивают при помощи и направляют дальше по конвейерной линии в отсек стерилизации. В процессе расфасовки, оператор каждые полчаса проверяет объём расфасовки и попадание кислорода, стандартом является: 2 мл:20 мг: 2.1240g: 2.2337g
2 мл: 40мг: 2.1340 г-2.2363г Остаток кислорода<2.5%
Время от растворения порошка до расфасовки и герметизации: не более 12 часов.
4. Стерилизация и проверка герметичности
Операторы отдела стерилизации при выходе ампул из конвейерного туннеля собирают герметично запаянные ампулы в бокс из нержавеющей стали, после заполнения бокса, его устанавливают в стерилизатор, и проводят стерилизацию.
Параметры стерилизации: стерилизовать в течение 20 минут при температуре 121°, и при разреженном вакууме: 0,08МРа три минуты. Также необходимо, что бы герметично упакованный полуфабрикат прошел бти часовую стерилизацию.
5. Визуальная проверка
При проведении визуальной проверки, ампулы следует установить в проверочный желоб, провести проверку, отсеянные ампулы с дефектами (пропускающие воздух, вспузырившиеся, карбонизированные), уложить в бокс из нержавеющей стали. После завершения механической проверки, ампулы по конвейеру переходят в отсек полностью автоматической проверки на наличие дефектов. Ампулы без дефектов и отбракованные укладываются на разные конвейерные линии. Ампулы с дефектами укладываются в отдельный бокс из нержавеющей стали. 6. Упаковка
ПВХ блистер устанавливают на конвейере, после расфасовки ампул в ПВХ блистер, проверяется их количество, в случае лишней или недостающей ампулы необходимо доложить или убрать ампулу. Также во время упаковки необходимо следить за качеством и четкостью маркировки и ее соответствию требованиям. После этого сверху блистера укладывается инструкция, а сам блистер укладывается в коробку и запечатывается.
Промышленная применимость
Изобретение применимо в области химико- фармацевтической промышленности, в частности, в области производства препаратов ганглиозида GM1 в инъекционной форме.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Способ выделения моносиалотетрагексозилганглиозида натрия (GM1), отличающийся тем, что свиные мозги экстрагируют смесью трихлорметан-метиловый спирт, добавляют гидроксид натрия, отделяют раствор от осадка центрифугированием, медленно нагревают до расщепления, адсорбируют на макроретикулярной ионообменной смоле с последующей десорбцией и промыванием водой, десорбированную жидкость помешивают, повышая температуру нагрева, кристаллизовавшуюся смесь пропускают через центрифугу, осадок промывают ацетоном и этанолом, просушивают, полученную ганглизиодную смесь переводят в водный раствор, тщательно размешивают, добавляют соляную кислоту, для регуляции уровня рН =3.0-3.2, нагревают до 75- 85°С в течение 1.5-2 ч, добавляют ацетон для выпадения осадка, отделяют осадок центрифугированием и промывают его ацетоном, высушивают, проводят хроматографическое разделение смеси на ионообменной колонне, собирают фракцию Моносиалотетрагексозиловых ганглиозидов (GM-1), определенную тонкослойной хроматографией, концентрируют до выпадения GM-1 осадка, растворяют его в смеси трихлорметана, метилового спирта и очищенной воды, затем раствор пропускают через ионообменную смоляную колонну, получившуюся жидкость концентрируют, добавляют ацетон для получения осадка, фильтруют, высушивают, разбавляют в воде, добавляют активированный уголь, размешивают, фильтруют и пропускают через катионобменную смоляную колонну, получившуюся жидкость повторно фильтруют и концертируют, добавляют ацетон, охлаждают, получившийся осадок вновь фильтруют, высушивают с получением конечного продукта.
2. Способ по п. 1 , отличающийся тем, что экстракцию проводят при соотношении трихлорметан, метиловый спирт и свиной мозг (2.5-2.6) :5: 1.
3. Способ по п. 1 или п. 2, отличающийся тем, что при абсорбции жидкого экстракта контролируют скорость течения в пределах 5.00 л/мин.
4. Нейропротекторное средство в форме раствора для инъекций, содержащее моносиалотетрагексозилганглиозида натрия и вспомогательные вещества, отличающееся тем, что содержит моносиалотетрагексозилганглиозида натрия, полученный по любому из п. п. 1-3, а в качестве вспомогательных веществ- гидрофосфат натрия, натрия дигидрофосфат, хлорид натрия и воду для инъекций при следующем содержании компонентов в мг/мл: моносиалотетрагексозилганглиозида натрия 10- гидрофосфат натрия 0,5-5
натрия дигидрофосфат 2-5
хлористый натрий 8-9
воду для инъекций остальное.
PCT/IB2016/001612 2016-03-31 2016-10-11 Способ получения натрий моносиалового ганглиозида и нейропротекторное средство на его основе WO2017168200A2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2016112141 2016-03-31
RU2016112141A RU2632710C2 (ru) 2016-03-31 2016-03-31 Способ получения натрий моносиалового ганглиозида и нейропротекторное средство на его основе

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2017168200A2 true WO2017168200A2 (ru) 2017-10-05
WO2017168200A3 WO2017168200A3 (ru) 2018-04-26

Family

ID=59962672

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/IB2016/001612 WO2017168200A2 (ru) 2016-03-31 2016-10-11 Способ получения натрий моносиалового ганглиозида и нейропротекторное средство на его основе

Country Status (2)

Country Link
RU (1) RU2632710C2 (ru)
WO (1) WO2017168200A2 (ru)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109320566A (zh) * 2018-08-14 2019-02-12 四川兴杰象药业有限公司 一种从猪脑髓中提取神经节苷脂的分离纯化制备方法
CN109721632A (zh) * 2017-10-27 2019-05-07 齐鲁制药有限公司 一种高纯度神经节苷脂gm1及其制备方法
CN112076218A (zh) * 2020-09-30 2020-12-15 江苏恒新药业有限公司 一种猪脑丙酮粉的制备方法
CN114642634A (zh) * 2020-12-17 2022-06-21 中国科学院深圳先进技术研究院 一种透血脑屏障载药胶束及其制备方法和应用

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1254280B (it) * 1992-03-13 1995-09-14 Fidia Spa Composizioni farmaceutiche comprendenti monosialoganglioside gm1 o un suo derivato atte al trattamento della malattia di parkinson
US5532141A (en) * 1995-06-13 1996-07-02 Holler; Larry D. Process for obtaining ganglioside lipids
US7943750B2 (en) * 2007-06-18 2011-05-17 Laboratoire Medidom S.A. Process for obtaining pure monosialoganglioside GM1 for medical use
CN101899074B (zh) * 2009-05-26 2012-05-30 北京赛升药业股份有限公司 单唾液酸四己糖神经节苷脂的制备方法以及单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液或冻干粉针
CN102020684A (zh) * 2009-09-16 2011-04-20 胡增荣 一种单唾液酸四己糖神经节苷脂的提取方法
CN103524572B (zh) * 2012-09-24 2015-07-15 湖南赛隆药业有限公司 高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制法
CN104151372B (zh) * 2014-07-30 2017-05-17 湖南利诺生物药业有限公司 单唾液酸四已糖神经节苷脂gm1原料的制备方法

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109721632A (zh) * 2017-10-27 2019-05-07 齐鲁制药有限公司 一种高纯度神经节苷脂gm1及其制备方法
CN109721632B (zh) * 2017-10-27 2023-10-31 齐鲁制药有限公司 一种高纯度神经节苷脂gm1及其制备方法
CN109320566A (zh) * 2018-08-14 2019-02-12 四川兴杰象药业有限公司 一种从猪脑髓中提取神经节苷脂的分离纯化制备方法
CN109320566B (zh) * 2018-08-14 2022-03-15 四川兴杰象药业有限公司 一种从猪脑髓中提取神经节苷脂的分离纯化制备方法
CN112076218A (zh) * 2020-09-30 2020-12-15 江苏恒新药业有限公司 一种猪脑丙酮粉的制备方法
CN114642634A (zh) * 2020-12-17 2022-06-21 中国科学院深圳先进技术研究院 一种透血脑屏障载药胶束及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
RU2632710C2 (ru) 2017-10-09
RU2016112141A (ru) 2017-10-05
WO2017168200A3 (ru) 2018-04-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2632710C2 (ru) Способ получения натрий моносиалового ганглиозида и нейропротекторное средство на его основе
CN101108868A (zh) 制备高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂的方法
JP2018162252A (ja) 抽出物及び該抽出物を含有する製剤
JP2024109818A (ja) オリゴ糖組成物およびアンモニアレベルを低下させるためのその使用方法
CN1799552A (zh) 单唾液酸四己糖神经节苷脂钠制剂的制备方法
WO2014057995A1 (ja) 抽出物及び該抽出物を含有する製剤
JPH02180995A (ja) 脂質混合物から糖脂質を分離する方法
CN110448686B (zh) 铜蓝蛋白联合运铁蛋白的应用
JP5760145B2 (ja) 自己免疫障害を治療するための組成物およびその方法
CN111808208A (zh) 一种具有抗疲劳作用的西藏凹乳芹多糖的制备方法及应用
Zhang et al. A 4.7-kDa polysaccharide from Panax ginseng suppresses Aβ pathology via mitophagy activation in cross-species Alzheimer’s disease models
CN1939533A (zh) 注射用肌氨肽苷粉针剂及其制备方法
Raheem et al. Effect of hypercholestermic diet on the β-amyloid deposition and microglial cells with some biomarkers alterations in male rats
RU2632709C1 (ru) Нейропротекторный агент из свиного мозга на основе натрий моносиалового ганглиозида
EP4196138A1 (en) Bee product extracts, methods of production and uses thereof
RU2420212C1 (ru) Средство для поддерживающей терапии и способ его получения из замороженной икры морских ежей
JP5622346B2 (ja) 神経細胞の細胞死抑制剤等
JP2997419B2 (ja) 脳ガングリオシド含量減少抑制剤
US20090269415A1 (en) Novel therapeutic agent derived from marine organism
CN101732697B (zh) 一种复方骨肽冻干制剂
RU2414914C1 (ru) Средство для поддерживающей терапии и способ его получения из лиофилизированной икры морских ежей
JP6043922B2 (ja) 抽出物及び該抽出物を含有する製剤
CN106551963B (zh) 太白楤木或其提取物的新用途
JPH0269492A (ja) シアル酸の製造方法
US10946056B2 (en) Inhibition of formation of amyloid b-protein fibrils using cactus mucilage extracts

Legal Events

Date Code Title Description
NENP Non-entry into the national phase in:

Ref country code: DE

121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 16896663

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A2

32PN Ep: public notification in the ep bulletin as address of the adressee cannot be established

Free format text: NOTING OF LOSS OF RIGHTS PURSUANT TO RULE 112(1) EPC (EPO FORM 1205A DATED 11.01.2019)

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 16896663

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A2