RU2632710C2 - Способ получения натрий моносиалового ганглиозида и нейропротекторное средство на его основе - Google Patents
Способ получения натрий моносиалового ганглиозида и нейропротекторное средство на его основе Download PDFInfo
- Publication number
- RU2632710C2 RU2632710C2 RU2016112141A RU2016112141A RU2632710C2 RU 2632710 C2 RU2632710 C2 RU 2632710C2 RU 2016112141 A RU2016112141 A RU 2016112141A RU 2016112141 A RU2016112141 A RU 2016112141A RU 2632710 C2 RU2632710 C2 RU 2632710C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sodium
- solution
- precipitate
- water
- added
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2121/00—Preparations for use in therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
- A61K31/7032—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a polyol, i.e. compounds having two or more free or esterified hydroxy groups, including the hydroxy group involved in the glycosidic linkage, e.g. monoglucosyldiacylglycerides, lactobionic acid, gangliosides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
- C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
- C07H15/06—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical being a hydroxyalkyl group esterified by a fatty acid
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу выделения моносиалотетрагексозилганглиозида натрия (GM1). Способ выделения GM1 заключается в том, что готовят экстракт свиного мозга с использованием смеси трихлорметана, метилового спирта, проводят абсорбцию на макроретикулярной ионообменной смоле и десорбцию жидкого экстракта, разделение ганглиозидной смеси, отделение моносиалотетрагексозиловых ганглиозидов сырьевого продукта с его последующей очисткой, сушкой и упаковкой при определенных условиях. Нейропротекторное средство в форме раствора для инъекций. Вышеописанный способ позволяет получить субстанцию высокой чистоты, пригодную для получения инъекционных препаратов. 2 н.п. ф-лы, 3 пр.
Description
Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности и касается препаратов ганглиозида GM1 в инъекционной форме.
Ганглиозиды, представляющие собой гликосфинголипиды, содержащие сиаловую кислоту, присутствуют в клеточной мембране млекопитающих, особенно в мембранах нервных клеток.
Ганглиозиды играют существенную роль в развитии нервной клетки, росте, дифференцировании, репарации нерва.
Натрий моносиаловый ганглиозид (моносиалотетрагексозилганглиозид натрия, GM1, monosialotetrahexosylganglioside) является одним из самых важных ганглиозидов. Он играет значительную роль в лечении заболеваний центральной нервной системы. GM1 при введении в организм может включаться в структуру нейрональных мембран и вызывать динамические перестройки в эндогенных ганглиозидах. Известно, что GM1 при введении животным с ишемическими, травматическими и токсическими повреждениями мозга предохраняют его нервные клетки от гибели, повышает жизнеспособность нейронов и клеток нейрональных линий при действии на них глутамата и других токсинов.
GM1 способствуют лечению различных нарушений функционирования ЦНС и является нейропротекторным средством (Neuroprotective effects of monosialotetrahexosylganglioside, Ai-ping Xi. et al., Neural Regen Res. 2015 Aug; 10(8): 1343-1344). Включается механизм «ремоделирования нейропластичности нерва» (состоит из выживания нервных клеток, роста аксонов, синаптического роста). Моносиалотетрагексозилганглиозид оказывает защитное воздействие на вторичный дегенеративный нерв после травм. А также положительно воздействует на параметры церебральной гемодинамики и травмы, ведущие к отеку мозга. Ганглиозид снимает отек нервных клеток с помощью повышения активности ферментов клеточной мембраны. Эксперименты на животных показали, что ганглиозид помогает при расстройствах поведения, вызванных болезнью Паркинсона.
Моносиалотетрагексозилганглиозид натрия (GM1)
Как правило, для использования в медицинской практике к препаратам природного происхождения предъявляются высокие требования к степени их очистки. Поэтому исследователями были предприняты многочисленные попытки разработки подходящих способов получения ганглиозидов.
Например, известен патент RU 2483736 (С2), опубл. 2013-06-10, который относится к способу получения и очистки моносиалоганглиозида в форме его натриевой соли и включает а) отделение GM1 от Фукозил GM1 в липидной смеси, содержащей моносиалоганглиозид GM1 в качестве основного ганглиозидного компонента, с помощью колоночной ионообменной хроматографии с использованием элюента, содержащего ионы калия или цезия, (б) извлечение растворенного вещества из элюированного раствора, (в) диафильтрацию водного раствора извлеченного растворенного вещества стадии (б), (г) добавление натриевой соли и диафильтрацию полученного водного раствора, (д) извлечение GM1 в форме его натриевой соли.
CN101108868 (A) - 2008-01-23 раскрывает метод получения GM1 с высокой чистотой, который включает стадии: (1) свежую мозговую ткань licestock используют для приготовления ацетонового порошка; (2) порошок, подготовленный на стадии(1), растворяют раствором для извлечения и перемешивают 4-5 часов, отделяют центрифугированием и собирают супернатант, супернатант очищают LV хроматографической колонкой для получения ганглиозида; (3) весь ганглиозид, подготовленный на стадии (2), отделяют колоночной хроматографией MonoQ для получения ганглиозида GM1 с чистотой 90-95%; (4) GM1, подготовленный на стадии (3), отделяют гидрофобной хроматографией для получения ганглиозида GM1 с чистотой больше чем 98%; (5) водный раствор GM1, подготовленный на стадии (4), фильтруют через мембрану гиперфильтрации с 50 000-100 000 MWCO, и полученный фильтрат переводят в GM1 сухой порошок посредством замораживания и высыхания. Метод может улучшить выработку GM1 и избежать загрязнения другими фосфолипидами.
Патент US 5532141, опубл. 1996-07-02, раскрывает способ получения молекулы липида ганглиозида, включающей контакт образца мозговой невральной ткани, полученной из животного, с агентом извлечения, таким как хлороформ, метанол, вода при условиях, обеспечивающих извлечение молекул липида ганглиозида из указанной невральной ткани и удаление извлеченных молекул липида ганглиозида из указанного агента извлечения.
CN 104151372 А -2014-11-19 описывает способ приготовления моносиалотетрагексил ганглиозида натрия. Способ включает следующие шаги: а) берут замороженный свиной мозг, размораживают, моют, гомогенизируют, добавляют жидкий раствор в концентрированную соляную кислоту, перемешивают и затем центрифугируют для получения отделенного мозгового протеина; b)осажденный протеин добавляют в метанол, гомогенизируют, перемешивают и центрифугируют для получения спиртового экстракта; с) концентрируют; d) гидролизуют концентрат, полученный ранее, затем отделяют центрифугированием и собирают жидкость супернатанта для получения продукта гидролиза; е) проводят ультрафильтрацию продуктагидролиза многократно, отделяя вещества с молекулярными массами выше 1 600 дальтон для получения предварительного чистого продукта GM1, далее проводят ультрафильтрацию предварительно очищенного продукта GM1 и удаляют вещества с молекулярными массами ниже 1500 дальтон для получения чистого раствора GM1; f) высушивают раствор GM1 и получают моносиалотетрагексил ганглиозид натрия.
Известен способ выделения и очистки GM1 из мозга свиньи. Метод состоит из экстракции смесью вода- метанол- хлороформ и двухступенчатого хроматографического отделения с помощью DEAE-сефарозной ионно-обменной средой и Sephacryl S-100 средой. Очищенный GM1 был гомогенным и имел чистоту >98,0%. Молекулярная масса, измеренная методом высокоэффективной вытеснительной хроматографии, была 30.0 kDa и 1546.9 Da при масс-спектроскопическом измерении ионизацией распылением в электрическом поле (Liujiao Bian, Isolation and purification of monosialotetrahexosylgangliosides from pig brain by extraction and liquid chromatography, Biomedical Chromatography, Volume 29, Issue 10, pages 1604-1611, October 2015). Данное решение может быть указано в качестве ближайшего аналога.
Задачей настоящего изобретения является получение непирогенной субстанции с высокой степенью чистоты, пригодной для производства эффективных инъекционных форм ганглиозида.
Задача решается новым способом получения моносиалотетрагексозилганглиозида натрия (GM1) и инъекционного раствора на его основе.
Способ заключается в том, что свиные мозги экстрагируют смесью трихлорметан-метиловый спирт, добавляют гидроксид натрия, отделяют раствор от осадка центрифугированием, медленно нагревают до расщепления, адсорбируют на макроретикулярной ионообменной смоле с последующей десорбцией и промыванием водой, десорбированную жидкость помешивают, повышая температуру нагрева, кристаллизовавшуюся смесь пропускают через центрифугу, осадок промывают ацетоном и этанолом, просушивают, полученную ганглизиодную смесь переводят в водный раствор, тщательно размешивают, добавляют соляную кислоту, для регуляции уровня рН=3.0-3.2, нагревают до 75-85°С в течение 1.5-2 ч, добавляют ацетон для выпадения осадка, отделяют осадок центрифугированием и промывают его ацетоном, высушивают, проводят хроматографическое разделение смеси на ионообменной колонне, собирают фракцию моносиалотетрагексозиловых ганглиозидов (GM-1), определенную тонкослойной хроматографией, концентрируют до выпадения GM-1 осадка, растворяют его в смеси трихлорметана, метилового спирта и очищенной воды, затем раствор пропускают через ионообменную смоляную колонну, получившуюся жидкость концентрируют, добавляют ацетон для получения осадка, фильтруют, высушивают, разбавляют в воде, добавляют активированный уголь, размешивают, фильтруют и пропускают через катионообменную смоляную колонну, получившуюся жидкость повторно фильтруют и концертируют, добавляют ацетон, охлаждают, получившийся осадок вновь фильтруют, высушивают с получением конечного продукта.
Продукт: моносиалотетрагексозилганглиозид натрия из свиного мозга. Содержание моносиалотетрагексозилганглиозида натрия (C73H130N3NaO31 или C75H134N3NaO31) не менее 98%.
В качестве макроретикулярной ионообменной смолы могут быть использованы такие, как смолы на основе дивинилбензола или на основе полистирола, которые выпускаются, в частности, под торговыми названиями «Dowex» (фирма «Dow Chemical Со») и «Amberlyte» (фирма «Rohm and Haas»).
В качестве катионообменной смолы могут быть использованы, например, сефароза SP, сефароза CM, Trisacryl М SP, DOWEX МАС-3, Fractogel EMD Amberlite и др.
Предпочтительно в качестве ионообменных смол используют смолы марки GUDU, в частности гель сильной кислоты с катионообменной смолой 001*7, например катионообменной смолой на основе полистиролсульфоната, сшитой приблизительно с дивинилбензолом (http://www.sxresin.com/en/display.asp?id=51), смолу сильноосновного анионита 1-го (гель) типа 201*4 (http://www.sxresin/com/en/display.asp?id=90).
Полученная субстанция ганглиозида используется для приготовления нейропротекторного средства в форме раствора для инъекций, который затем подвергается стерилизующей фильтрации и производится наполнение ампул стеклянных.
Раствор для инъекций содержит, мг/мл:
моносиалотетрагексозилганглиозида натрия | 10-40 |
гидрофосфат натрия | 0,5-5 |
натрия дигидрофосфат | 2-5 |
хлористый натрий | 8-9 |
вода для инъекций | остальное |
Возможность осуществления изобретения может быть продемонстрирована ниже представленными примерами.
Пример 1
(1) Приготовление экстракта:
Помещают трихлорметан, метиловый спирт и свиной мозг в экстрактную емкость в соответствии с соотношением (2.5-2.6):5:1, после перемешивания дают смеси отстояться в течение 2 часов, пока верхний слой жидкости в емкости не станет прозрачным. Верхний слой жидкости смешивают с 1.5% раствором гидроксида натрия в объемном соотношении 5:1. Проводят расщепление (гидролиз) путем медленного нагревания; когда жидкость выливается наружу, регулируют паровой клапан, чтобы стабилизировать выливание жидкости. Температура контролируется, чтобы не превысила 80°С до момента полного расщепления и забора образца верхнего слоя расщепленной жидкости. (Промежуточный продукт I).
(2) Абсорбция на макроретикулярной ионообменной смоле и десорбция образца верхнего слоя жидкого экстракта;
При абсорбции жидкого экстракта контролируют скорость течения в пределах 5.00 л/мин. После адсорбции и сатурации промывают смолу питьевой водой, пока не будет вытекать прозрачная жидкость и контролируют скорость течения в пределах 8.00 л/мин. Растворяют и десорбируют раствором Гидроксида Натрия в метиловом спирте с рН 11.50-11.80; контролируя скорость потока в пределах 3.5 л/мин.; температуру 28-30°С; и собирают десорбированный раствор в пропорции более чем 95%.
Перемещают десорбированную жидкость в концентрирующую емкость; перемешивают и нагревают, контролируя температуру, чтобы не превышала 30°С; и концентрируют до 1-3% от начального объема. Отстаивают концентрированный раствор более 8 часов для кристаллизации и разделения под действием центробежных сил. Осадок на фильтре промывают ацетоном и этиловым спиртом; после высыхания получают предварительно преобразованную ганглиозидную смесь.
Из предварительно преобразованной ганглиозидной смеси готовят водный раствор; после смешивания до полного растворения добавляют соляную кислоту до рН 3.00-3.20. Нагревают до 75-85°С и подвергают трансформации в течение 1.5-2 ч. После трансформации добавляют ацетон в 10-15-кратном объеме; равномерно перемешивают, отстаивают и оставляют. Центрифугируют, промывают осадок на фильтре ацетоном и получают ганглиозидную смесь (Промежуточный продукт III).
(3) Разделение ганглиозидной смеси:
Смешивают Промежуточный Продукт III и проточную фазу (Трихлорметан, Метиловый спирт и очищенная вода в соотношении 55:40:4) в соответствии с соотношением объемов 1:3, после сорбции ионообменную хроматографическую колонну промывают проточной фазой (Трихлорметан, Метиловый спирт и очищенная вода в соотношении 55:40:4); элюируют и детектируют собираемый раствор в соответствии с методом тонкослойной хроматографии и затем собирают раствор в соответствии с результатом определения соответственно. После того как вытекающая жидкость, соответствующая требованиям, декомпрессируется и концентрируется при условиях 0.06-0.1МРа вакуумной степени и температуре, не превышающей 35°С, регулируют значение РН до 7-8 насыщенным раствором Гидроксида Натрия; отстаивают, центрифугируют и добавляют ацетон и после сушки получают сырьевой продукт (Промежуточный продукт IV).
(4) Отделение Моносиалотетрагексозиловых ганглиозидов сырьевого продукта:
Смешивают Промежуточный Продукт IV и промывочную фазу (Трихлорметан, Метиловый спирт и очищенная вода в соотношении объемов 60:40:4) в соответствии с соотношением объемов 1:3, пропускают через ионную хроматографическую колонну, промывают. Собирают элюат в соответствии с результатом тонкослойной хроматографии (TLC). Из раствора, с результатом измерения TLC которого получен Промежуточный Продукт V, требуется забор образцов собранной жидкости из каждой емкости. После подготовки образец подвергается HPLC детекции с максимальной единичной примесью ≤0.5%; концентрируют и отстаивают образцы с примесями ≤3.0%; удаляют супернатант, чтобы получить моносиалотетрагексогиловый ганглиозный сырьевой продукт (GM-1 сырьевой продукт).
(5) Очистка, сушка и упаковка GM-1:
Растворяют сырьевой продукт GM-1 проточной фазой (Трихлорметан, Метиловый спирт и очищенная вода в соотношении объемов 70:35:4.1). Раствор пропускают через ионно-обменные смолы при скорости течения 10 л/ч. После регулирования значения рН вытекающей жидкости до 4.50-5.50 насыщенным раствором гидроксида натрия, декомпрессии, концентрирования и добавления ацетона для получения осадка; фильтрации и сушки воздухом, получают очищенный сырьевой продукт GM-1.
Очищенный сырьевой продукт GM-1 готовят в виде 15% водного раствора; добавляют активированный уголь массой 20% от массы очищенного сырьевого продукта GM-1 и затем раствор фильтруют; фильтрат проходит через катионно-обменные смолы со скоростью течения 5 л/ч; вытекающую жидкость собирают и значение рН доводят до 4.70-4.80 насыщенным раствором гидроксида натрия и затем фильтруют. После дистилляции при 70-75°С к охлажденному отфильтрованному раствору добавляется в два раза больший по объему концентрированный ацетон; температуру снижают не ниже 0°С; раствор отстаивают и фильтруют; осадок подвергают аэрации и затем вакуумной сушке 24 ч при 0.08 МПа вакуума и при 49°С-51°С для получения GM-1. Высушенный конечный продукт дробят до получения порошка в течение 30-40 минут, пакуют, маркируют и помещают в место хранения.
Пример 2
Исследование чистоты полученной субстанции
К 0,2 мл раствора для испытания с содержанием установленного количества элемента добавляют 2 мл воды, затем 2 мл раствора резорцин-соляной кислоты (0,2 г резорцина смешивают с 10 мл воды, добавляют 90 мл соляной кислоты, затем 0,25 мл 0,1 моль/л сульфата меди), подогревают в теплой ванне 15 минут, цвет раствора сине-фиолетовый; извлекают 5 мл н-амилового спирта, слой н-амилового спирта синий.
Берут около 20 мг продукта, добавляют 1 мл ледяной уксусной кислоты, нагревают в кипящей воде до полного растворения, после чего добавляют 1 каплю раствора трихлорида железа и в кипящей ванне медленно вливают 1 мл серной кислоты, что повлечет разделение раствора на 2 слоя, цвет 2-х слоев должен быть коричневый.
Данный продукт представляет собой дифференциальную реакцию натриевой соли (Приложение IV С Китайской Фармакопеи (2010 версия) том II).
В зафиксированной хроматограмме с содержанием установленного элемента, максимальное время содержания раствора для испытания равняется максимальному времени содержания эталонного раствора.
Инфракрасный спектр поглощения данного продукта такой же, как и у эталонного продукта.
Ясность и цвет раствора. Продукт разбавляют водой так, чтобы на 1 мл приходилось 20 мг раствора, получается бесцветный раствор. Сиаловая кислота. Продукт разбавляют водой так, чтобы на 1 мл приходилось 0,25 мг раствора, в качестве раствора для испытаний. Отдельно берут эталон сиаловой кислоты, разбавляют водой так, чтобы на 1 мл приходилось 50 μg раствора, это будет эталонный раствор. Точно отмеряют по 2 мл эталонного раствора и раствора для испытаний, в каждый добавляют по 2 мл резорцин-соляной кислоты, перемешивают, опускают получившиеся растворы в ванну на 15 минут, затем охлаждают. В каждый раствор добавляют по 5 мл н-амилового спирта, трясут 1 минуту. Помещают растворы в ледяную ванну на 15 минут с центрифугой 2000 об/мин на 5 минут. Извлекают из верхнего слоя н-амиловый спирт в соответствии с УФ методом спектрофотометрии (Приложение IV А Китайской Фармакопеи (2010 версия) том II) и определяют степень поглощения при длине волны 585 нм; раствор для испытаний заменивают на воду и проводят исследование по такому же методу. Исходя из того, что это сухой продукт, он содержит 19.0%-21.0% сиаловой кислоты. Протеин определяют по реагентному методу Фолина (Приложение VII М Китайской Фармакопеи (2010 версия) том II). Из расчета на сухой продукт, содержание протеина не более 1.0%.
Примеси с высоким молекулярным весом определяются по методу молекулярной эксклюзионной хроматографии (Приложение V Н Китайской Фармакопеи (2010 версия) том II).
Хроматографические условия и пригодность системы тестирования
Используют гидрофильный модифицированный силикагель в качестве наполнителя хроматографической колонки (например, TSK GEL 2000 SW×1, 300 nm ×7.8 mm, 5 μm; или с подобной эффективностью); трифторуксусную кислоту - ацетонитрил - воду (0.05:40:60) в качестве подвижной фазы, скорость потока 0,7 мл/мин; длина волны 214 нм. Число теоретических тарелок в соответствии с рибонуклеазой пика А не менее 5000, степень разделения между смежными пиками не менее 3.0, исходя из соотношения высоты пика и высоты долины.
Подготовка стандартной кривой. Берут рибонуклеазу А (молекулярный вес 13700), инсулин человека (молекулярный вес 5808), тимозин α1 (молекулярный вес 3108) и соматостатин (молекулярная масса 1638), по отдельности добавляют подвижную фазу для растворения и получения раствора 1 мг/мл в качестве стандартного молекулярного раствора. Отмеряют 20 μ1 вышеуказанного раствора, по отдельности вливают в жидкий хроматограф, записывают хроматограмму, повторите 5 раз, относительное стандартное отклонение времени удерживания должно быть не больше 2.0%. Принимают время удерживания каждого пика за абсциссу, логарифм молекулярного веса за ординату, проводят линейную регрессию, коэффициент корреляции менее 0.99.
Метод определения. Согласно методу нормализации, в хроматографии раствора для испытаний площадь пика примесей с молекулярным весом более 5000 дальтон менее 1.00%.
Влажность. Измеряют с помощью метода определения влажности (Приложение VIII М статья А Китайской Фармакопеи (2010 версия) том II), содержание воды не превышает 4,5%.
Тяжелые металлы. Измеряют в соответствии с Приложением VIII Н Китайской Фармакопеи (2010 версия) том II, содержание тяжелых металлов не превышает 12%.
Аномальная токсичность. Проверяют в соответствии с Приложением XI С Китайской Фармакопеи (2010 версия) том II, лекарство, согласно методу внутривенных инъекций, соответствует требованиям.
Пироген. Определяют на основе Приложения XI D Китайской Фармакопеи (2010 версия) том II; на 1 кг веса домашней кошки вводят 2 мл, соответствует требованиям - не содержит пирогенов.
Определение содержания с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Количество теоретических тарелок исчисляется пиком моносиалотетрагексозилганглиозида натрия и не менее 1000, степень разделения между моносиалотетрагексозилганглиозидом натрия и соседними пиками примесей соответствовует требованиям.
Нейропротекторный агент.
Пример 3. Схема и описание производственного процесса получения раствора инъекций натрий моносиалового ганглиозида
Описание производственного процесса
1. Стерилизация и промывка ампул:
Ампулы закладываются на конвейер ультразвуковой моющей машины, после чего автоматически попадают в моющий шкаф, который при помощи ультразвука промывает ампулы. Дальнейшая схема промывки ампул: циркуляционная вода - циркуляционная вода - сжатый воздух -дистиллированная вода - вода для инъекций - сжатый воздух, после этого ампулы по закрытому конвейеру автоматически переправляются в сушильный тоннель. Частота промывки моющей машины не должна превышать 50 Hz, температура в сушильном тоннеле не должны быть ниже 280°.
2. Приготовление
2.1 В реактор заливается вода для инъекций объемом 105-110% от общего водного объема. Включается мешалка, скорость которой должна быть не менее 360 оборотов в минуту.
2.2 В соответствии с общим количеством воды и общими пропорциями, гидрофосфат натрия, натрия дигидрофосфат и хлористый натрий добавляется в воду для инъекций, перемешивается в течение 5 минут до полного растворения. После этого, соленую воду в баке охлаждают до 40-45°С, производят ультратонкую фильтрацию, взвешивают соленую воду и проверяют рецептуру (включая указанное в рецептуре общее количество воды и соли). После этого соленую воду заливают в отдельный реактор.
2.3 В порошок активного компонента добавляют прошедшую ультратонкую фильтрацию соленую воду, размешивают в течение 20 минут до полного растворения.
2.4 Проверка получившейся жидкости
Используя 10 mol/L NaOH регулируют уровень рН (необходимый уровень 7.3-7.7), размешивая раствор в течение 5 минут.
2.5 Заливают 50± мл жидкости в колбу, проводим визуальную проверку цвета и прозрачности, проверяем уровень рН.
Описание: получившаяся жидкость бесцветная и прозрачная.
Цвет: ≤колориметрического раствора желтого цвета №1
Прозрачность:≤стандартного нефелометрического раствора №2
Уровень рН: 7.3-7.7
2.6 Связующий трубопровод проходит через реактор → насос санитарной системы → фильтр → сборник. После включения насоса санитарной системы начинается фильтрация, продолжительность фильтрации должны быть не более 1-го часа. Давление предварительного фильтра: ≤0.15 Мра, необходимо протоколировать уровень давления в начале, середине и в конце процесса фильтрации.
3. Порядок наполнения ампул и герметизация:
Перед началом расфасовки лекарственный раствор пропускают через фильтр, диаметр ячеек которого должен быть - 0,22 мм, также необходимо до и после проведения фильтрации проверить фильтрующий наконечник, стандарт ≥50 psi или в соответствии с требованиями инструкции.
Отфильтрованный лекарственный раствор разливают по помытым и стерилизованным ампулам, запаивают при помощи и направляют дальше по конвейерной линии в отсек стерилизации. В процессе расфасовки, оператор каждые полчаса проверяет объем расфасовки и попадание кислорода, стандартом является: 2 мл :20 мг : 2.1240g : 2.2337g 2 мл : 40 мг : 2.1340 г - 2.2363 г
Остаток кислорода ≤2.5%
Время от растворения порошка до расфасовки и герметизации: не более 12 часов.
4. Стерилизация и проверка герметичности
Операторы отдела стерилизации при выходе ампул из конвейерного туннеля собирают герметично запаянные ампулы в бокс из нержавеющей стали, после заполнения бокса, его устанавливают в стерилизатор, и проводят стерилизацию.
Параметры стерилизации: стерилизовать в течение 20 минут при температуре 121° и при разреженном вакууме: 0,08 МРа три минуты. Также необходимо, чтобы герметично упакованный полуфабрикат прошел 6-часовую стерилизацию.
5. Визуальная проверка
При проведении визуальной проверки ампулы следует установить в проверочный желоб, провести проверку, отсеянные ампулы с дефектами (пропускающие воздух, вспузырившиеся, карбонизированные) уложить в бокс из нержавеющей стали. После завершения механической проверки ампулы по конвейеру переходят в отсек полностью автоматической проверки на наличие дефектов. Ампулы без дефектов и отбракованные укладываются на разные конвейерные линии. Ампулы с дефектами укладываются в отдельный бокс из нержавеющей стали.
6. Упаковка
ПВХ блистер устанавливают на конвейере, после расфасовки ампул в ПВХ блистер проверяется их количество, в случае лишней или недостающей ампулы необходимо доложить или убрать ампулу. Также во время упаковки необходимо следить за качеством и четкостью маркировки и ее соответствию требованиям. После этого сверху блистера укладывается инструкция, а сам блистер укладывается в коробку и запечатывается.
Claims (3)
1. Способ выделения моносиалотетрагексозилганглиозида натрия (GM1), отличающийся тем, что свиные мозги экстрагируют смесью трихлорметан-метиловый спирт при соотношении трихлорметан:метиловый спирт:свиные мозги (2.5-2.6):5:1, добавляют гидроксид натрия, отделяют раствор от осадка центрифугированием, медленно нагревают до расщепления, адсорбируют на макроретикулярной ионообменной смоле, контролируя скорость течения жидкого экстракта в пределах 5.00 л/мин, с последующей десорбцией и промыванием водой, десорбированную жидкость помешивают, повышая температуру нагрева, кристаллизовавшуюся смесь пропускают через центрифугу, осадок промывают ацетоном и этанолом, просушивают, полученную ганглизиодную смесь переводят в водный раствор, тщательно размешивают, добавляют соляную кислоту, для регуляции уровня рН=3.0-3.2, нагревают до 75-85°C в течение 1.5-2 ч, добавляют ацетон для выпадения осадка, отделяют осадок центрифугированием и промывают его ацетоном, высушивают, проводят хроматографическое разделение смеси на ионообменной колонне, собирают фракцию моносиалотетрагексозиловых ганглиозидов (GM-1), определенную тонкослойной хроматографией, концентрируют до выпадения GM-1 осадка, растворяют его в смеси трихлорметана, метилового спирта и очищенной воды, затем раствор пропускают через ионообменную смоляную колонну, получившуюся жидкость концентрируют, добавляют ацетон для получения осадка, фильтруют, высушивают, разбавляют в воде, добавляют активированный уголь, размешивают, фильтруют и пропускают через катионообменную смоляную колонну, получившуюся жидкость повторно фильтруют и концертируют, добавляют ацетон, охлаждают, получившийся осадок вновь фильтруют, высушивают с получением конечного продукта.
2. Нейропротекторное средство в форме раствора для инъекций, содержащее моносиалотетрагексозилганглиозид натрия и вспомогательные вещества, отличающееся тем, что содержит моносиалотетрагексозилганглиозид натрия, полученный по п. 1, а в качестве вспомогательных веществ - гидрофосфат натрия, натрия дигидрофосфат, хлорид натрия и воду для инъекций при следующем содержании компонентов в мг/мл:
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016112141A RU2632710C2 (ru) | 2016-03-31 | 2016-03-31 | Способ получения натрий моносиалового ганглиозида и нейропротекторное средство на его основе |
PCT/IB2016/001612 WO2017168200A2 (ru) | 2016-03-31 | 2016-10-11 | Способ получения натрий моносиалового ганглиозида и нейропротекторное средство на его основе |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2016112141A RU2632710C2 (ru) | 2016-03-31 | 2016-03-31 | Способ получения натрий моносиалового ганглиозида и нейропротекторное средство на его основе |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2016112141A RU2016112141A (ru) | 2017-10-05 |
RU2632710C2 true RU2632710C2 (ru) | 2017-10-09 |
Family
ID=59962672
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016112141A RU2632710C2 (ru) | 2016-03-31 | 2016-03-31 | Способ получения натрий моносиалового ганглиозида и нейропротекторное средство на его основе |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2632710C2 (ru) |
WO (1) | WO2017168200A2 (ru) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109721632B (zh) * | 2017-10-27 | 2023-10-31 | 齐鲁制药有限公司 | 一种高纯度神经节苷脂gm1及其制备方法 |
CN109320566B (zh) * | 2018-08-14 | 2022-03-15 | 四川兴杰象药业有限公司 | 一种从猪脑髓中提取神经节苷脂的分离纯化制备方法 |
CN112076218A (zh) * | 2020-09-30 | 2020-12-15 | 江苏恒新药业有限公司 | 一种猪脑丙酮粉的制备方法 |
CN114642634A (zh) * | 2020-12-17 | 2022-06-21 | 中国科学院深圳先进技术研究院 | 一种透血脑屏障载药胶束及其制备方法和应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1993017691A2 (en) * | 1992-03-13 | 1993-09-16 | Fidia S.P.A. | Pharmaceutical compositions containing monosialoganglioside gm1 or a derivative thereof suitable for the treatment of parkinson's disease |
RU2483736C2 (ru) * | 2007-06-18 | 2013-06-10 | Лаборатуар Медидом С.А. | Способ получения чистого моносиалоганглиозида gm1 для применения в медицине |
CN104151372A (zh) * | 2014-07-30 | 2014-11-19 | 湖南利诺生物药业有限公司 | 单唾液酸四已糖神经节苷脂钠gm1原料的制备方法 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5532141A (en) * | 1995-06-13 | 1996-07-02 | Holler; Larry D. | Process for obtaining ganglioside lipids |
CN101899074B (zh) * | 2009-05-26 | 2012-05-30 | 北京赛升药业股份有限公司 | 单唾液酸四己糖神经节苷脂的制备方法以及单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液或冻干粉针 |
CN102020684A (zh) * | 2009-09-16 | 2011-04-20 | 胡增荣 | 一种单唾液酸四己糖神经节苷脂的提取方法 |
CN103524572B (zh) * | 2012-09-24 | 2015-07-15 | 湖南赛隆药业有限公司 | 高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂钠的制法 |
-
2016
- 2016-03-31 RU RU2016112141A patent/RU2632710C2/ru active IP Right Revival
- 2016-10-11 WO PCT/IB2016/001612 patent/WO2017168200A2/ru active Application Filing
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1993017691A2 (en) * | 1992-03-13 | 1993-09-16 | Fidia S.P.A. | Pharmaceutical compositions containing monosialoganglioside gm1 or a derivative thereof suitable for the treatment of parkinson's disease |
RU2483736C2 (ru) * | 2007-06-18 | 2013-06-10 | Лаборатуар Медидом С.А. | Способ получения чистого моносиалоганглиозида gm1 для применения в медицине |
CN104151372A (zh) * | 2014-07-30 | 2014-11-19 | 湖南利诺生物药业有限公司 | 单唾液酸四已糖神经节苷脂钠gm1原料的制备方法 |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
Liujiao Bian et al. Isolation and purification of monosialotetrahexosylgangliosides from pig brain by extraction and liquid chromatography// Biomedical Chromatography. Volume 29, Issue 10 October 2015 Pages 1604-1610. * |
Перечень данных [он-лайн] 2006 [найдено 2010.04.27 ] - найдено в Интернете: URL: http://www.ggau.by/./160-veterinarno-sanitarnyj-kontrol-na-prodovolstvenn. * |
Свиридова А.П., Копоть О.В. "Определить качества пчелиного меда". Гродно, 2007. С. 9. * |
Свиридова А.П., Копоть О.В. "Определить качества пчелиного меда". Гродно, 2007. С. 9. Перечень данных [он-лайн] 2006 [найдено 2010.04.27 ] - найдено в Интернете: URL: http://www.ggau.by/./160-veterinarno-sanitarnyj-kontrol-na-prodovolstvenn. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2017168200A2 (ru) | 2017-10-05 |
RU2016112141A (ru) | 2017-10-05 |
WO2017168200A3 (ru) | 2018-04-26 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2632710C2 (ru) | Способ получения натрий моносиалового ганглиозида и нейропротекторное средство на его основе | |
CN101108868B (zh) | 制备高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂的方法 | |
JP4709203B2 (ja) | アルギンオリゴ糖及びその誘導体、並びにそれらの調製と用途 | |
FR2461500A1 (fr) | Procede de production d'une substance capable de stimuler la proliferation et la differenciation des cellules souches granulopoietiques humaines | |
Luo et al. | In vivo and in vitro neuroprotective effects of Panax ginseng glycoproteins | |
CN114848667A (zh) | 一种透明质酸片段的新应用及制造方法 | |
CN101899074B (zh) | 单唾液酸四己糖神经节苷脂的制备方法以及单唾液酸四己糖神经节苷脂钠注射液或冻干粉针 | |
JP6469002B2 (ja) | 抽出物及び該抽出物を含有する製剤 | |
CN1799552A (zh) | 单唾液酸四己糖神经节苷脂钠制剂的制备方法 | |
DE69731891T2 (de) | Verfahren zur reinigung von gbs-toxin/cm101 | |
JPH02180995A (ja) | 脂質混合物から糖脂質を分離する方法 | |
WO2014057995A1 (ja) | 抽出物及び該抽出物を含有する製剤 | |
KR101628853B1 (ko) | 자가면역 질환을 치료하기 위한 조성물 및 방법 | |
RU2632709C1 (ru) | Нейропротекторный агент из свиного мозга на основе натрий моносиалового ганглиозида | |
CN1939533A (zh) | 注射用肌氨肽苷粉针剂及其制备方法 | |
Zhang et al. | A 4.7-kDa polysaccharide from Panax ginseng suppresses Aβ pathology via mitophagy activation in cross-species Alzheimer’s disease models | |
Raheem et al. | Effect of hypercholestermic diet on the β-amyloid deposition and microglial cells with some biomarkers alterations in male rats | |
JP5622346B2 (ja) | 神経細胞の細胞死抑制剤等 | |
RU2420212C1 (ru) | Средство для поддерживающей терапии и способ его получения из замороженной икры морских ежей | |
RU2414914C1 (ru) | Средство для поддерживающей терапии и способ его получения из лиофилизированной икры морских ежей | |
US20090269415A1 (en) | Novel therapeutic agent derived from marine organism | |
CN111454303A (zh) | 一种肉苁蓉苯乙醇苷及制备治疗阿尔茨海默病药物的应用 | |
CN106551963B (zh) | 太白楤木或其提取物的新用途 | |
CN101732697B (zh) | 一种复方骨肽冻干制剂 | |
US20180078595A1 (en) | Inhibition of formation of amyloid b-protein fibrils using cactus mucilage extracts |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180401 |
|
NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20190819 |
|
PD4A | Correction of name of patent owner |