CN101108868A - 制备高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂的方法 - Google Patents
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Abstract
一种制备高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂的方法，工艺步骤包括：(1)用新鲜家畜脑组织制备丙酮粉；(2)将步骤(1)制备的丙酮粉用提取液溶解后搅拌4h～5h，离心分离并收集上清，将上清用低压色谱柱进行纯化获总神经节苷脂；(3)将步骤(2)制备的总神经节苷脂用MonoQ柱层析分离，得纯度90～95％的神经节苷脂GM1；(4)将步骤(3)制备的GM1用疏水柱层析分离，获纯度大于98％神经节苷脂GM1；(5)将步骤(4)制备的GM1水溶液通过5万～10万截留分子量的超滤膜超滤，所得滤液经冷冻干燥制得GM1干粉。此种方法不仅工艺流程简单、操作安全，而且可提高GM1的得率和避免其被磷脂污染。
Description
技术领域
本发明属于单唾液酸四己糖神经节苷脂制备领域，特别涉及一种制备单唾液酸四己糖神经节苷脂的方法。
背景技术
单唾液酸四己糖神经节苷脂(monosialoganglioside，简称GM1，说明书下文和权利要求中的“GM1”即为“单唾液酸四己糖神经节苷脂”)是目前已知的唯一能穿透血脑屏障的神经节苷脂。GM1分子量为1547，主要位于髓鞘、神经元细胞膜和轴突，所以在脑内含量丰富(每克脑组织约含730nmol GM1)，外周神经如坐骨神经、股神经中也含有GM1。在中枢、外周神经受损后，内源性GM1不足，外源性GM1聚集到受损区域，整合到细胞浆膜上，通过胞吞作用成为细胞的组成成分或与膜蛋白相互作用而发挥药效。外源性GM1在临床上已用于治疗休克、缺血、缺氧、创伤引起的中枢神经系统损伤和帕金森病、老年痴呆等，并且取得了良好的治疗效果。
外源性GM1一般从哺乳动物脑组织中提取，国内外已有相关文献及专利报道。申请号为02111387.4的中国专利公开了一种制备单唾液酸四己糖神经节苷脂制剂的方法，该方法的工艺步骤为：取新鲜猪脑组织制备丙酮粉；丙酮粉加氯仿∶甲醇∶水(50∶50∶3-10，V/V/V)溶解、去沉渣，氯化钠水溶液分提上清液，下层水溶液减压去除有机溶剂，加蒸馏水后超滤膜超滤，脱盐、浓缩后冷冻干燥得混合性神经节苷脂初提物；Iatrobeads层析柱层析上述初提物，得神经节苷脂GM1初纯品，纯度75％；DEAESephadex A-25柱亲和层析或高效液相色谱方法纯化初纯品得纯化神经节苷脂GM1，纯度达95％以上，得率为猪脑湿重的0.3～0.5/1000；将纯化神经节苷脂GM1制成冻干粉针剂。此种方法的不足之处在于：1、混合性神经节苷脂初提物制备步骤的流程较复杂，该步骤中将超滤膜超滤所得滤液脱盐、浓缩后进行冷冻干燥易产生爆炸，存在安全隐患，此外，该步骤中提取液的配方有碍于增加神经节苷脂GM1的得率。2、Iatrobeads层析加DEAE Sephadex A-25柱亲和层析或高效液相色谱方法纯化，神经节苷脂GM1的纯度仅达95％以上。
申请号为00133077.2的中国专利公开了一种单唾液酸四己糖神经节苷脂的高纯度制备工艺，该工艺的步骤为：用有机溶剂混合物从哺乳动物脑组织中提取总神经节苷脂，酸水解总神经节苷脂，浓缩水解产物经脱盐后溶解于有机溶剂混合物中进行阴离子交换柱层析，收集含GM1的洗脱峰浓缩后再进行反向柱层析。此种方法虽然可得到纯度大于98％的GM1干粉，但却存在以下问题：1、提取总神经节苷脂步骤的流程较复杂。2、将浓缩水解产物经脱盐后溶解于有机溶剂混合物中进行阴离子交换柱层析，其中离子交换树脂对GM1并无选择性，而优先吸附极性小的物质，故虽然可以分离去除水溶性杂质，但同样具有亲水基团和疏水基团的磷脂则难以去除，故磷脂污染大，含磷量高。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种制备高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂的方法，此种方法不仅工艺流程简单、操作安全，而且可提高单唾液酸四己糖神经节苷脂的得率和避免其被磷脂污染。
本发明所述制备高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂的方法，工艺步骤包括：
(1)用新鲜家畜脑组织制备丙酮粉
将新鲜家畜脑组织清洗干净，加入-20℃预冷丙酮，新鲜家畜脑组织以克或公斤计量，预冷丙酮以毫升或升计量，新鲜家畜脑组织质量∶预冷丙酮体积＝1∶5～1∶10，采用4000rpm～6000rpm速度匀浆，梯度离心收集沉淀，沉淀真空干燥至恒重，得脑组织丙酮粉；
(2)制备总神经节苷脂
将步骤(1)制备的丙酮粉在常压、室温下用提取液溶解，丙酮粉以克或公斤计量，提取液以毫升或升计量，丙酮粉的质量∶提取液的体积＝1∶3～1∶5，
所述提取液为氯仿、甲醇和水的混合液，氯仿体积∶甲醇体积∶水体积＝3～5∶2～5∶1，
将丙酮粉溶液搅拌4h～5h，然后离心分离并收集上清，再将上清用低压色谱柱进行纯化，收集到的总神经节苷脂通过减压浓缩至恒重，去除其中有机溶剂；
低压色谱柱层析条件如下：将硅胶用四氯化碳-二氧六环按(四氯化碳体积∶二氧六环体积＝2∶5～1∶1)匀浆混匀后装入柱内(1×30～50cm)，然后依次用洗脱液E、洗脱液F淋洗，直至基线恒定；洗脱液E为氯仿体积∶甲醇体积＝4∶1～1∶1的氯仿-甲醇溶液，洗脱液F为氯仿体积∶甲醇体积＝5∶1～2∶1的氯仿-甲醇溶液。
(3)神经节苷脂GM1的MonoQ柱层析分离
将步骤(2)制备的总神经节苷脂用MonoQ柱层析分离，洗脱峰分别进行薄层层析(TLC)检测，收集含有GM1的洗脱液，减压浓缩至恒重，得神经节苷脂GM1，纯度为90～95％；
(4)神经节苷脂GM1的纯化
将步骤(3)所获神经节苷脂GM1用疏水柱层析分离，洗脱峰分别进行高效液相色谱(HPLC)检测，收集含有GM1的洗脱液，减压浓缩至恒重，获纯度大于98％的神经节苷脂GM1，得率可达新鲜家畜脑组织湿重的0.95/1000。
(5)神经节苷脂GM1干粉制备
将步骤(4)制备的GM1用水溶解，GM1溶液通过5万～10万截留分子量的超虑膜超虑，所得滤液经冷冻干燥制得GM1干粉，呈乳白色，得率可达新鲜家畜脑组织湿重的0.65/1000。
为了提高GM1在总神经节苷脂中的相对量，可设置总神经节苷脂的酸水解步骤，该步骤设置在神经节苷脂GM1的MonoQ柱层析分离步骤之前，操作如下：将制备的总神经节苷脂加水溶解，总神经节苷脂的浓度控制在16g/L～20g/L，在总神经节苷脂溶液中加入盐酸，盐酸的加入量以溶液的pH＝3.0～4.0为限，在常压、室温进行酸水解，时间为2小时～3小时。
上述方法的神经节苷脂GM1的MonoQ柱层析分离步骤中，首先对MonoQ柱进行处理，然后将4倍～5倍柱床体积的总神经节苷脂溶液或酸水解溶液以400ml/h～450ml/h流速上样，用5倍～10倍柱床体积的洗脱液A以800ml/h～1000ml/h流速进行淋洗，以5倍～10倍柱床体积的洗脱液A和洗脱液B进行梯度洗脱；MonoQ柱处理为：将空柱装填MonoQ，以10倍～20倍柱床体积的0.4M乙酸钠-乙酸溶液淋洗并浸泡过夜，然后用10倍～20倍柱床体积的洗脱液B淋洗，再用5倍～10倍柱床体积的洗脱液A淋洗，直至基线恒定；所述洗脱液A的配方为氯仿体积∶甲醇体积∶水体积＝4～5∶6～8∶1，洗脱液B的配方为氯仿体积∶甲醇体积∶0.4M乙酸钠-乙酸溶液体积＝4～5∶6～8∶1。
上述方法中，神经节苷脂GM1的纯化步骤是将神经节苷脂GM1溶液上样疏水柱，GM1溶液体积∶柱体积＝1∶1～3，然后用5～10倍柱体积的洗脱液C和洗脱液D进行梯度洗脱；所述神经节苷脂GM1溶液的溶剂为1M乙酸钠-乙酸缓冲液，GM1的浓度为10g/L～20g/L，所述洗脱液C为1M乙酸钠-甲醇溶液，所述洗脱液D为0.005M乙酸钠-甲醇溶液。
本发明具有以下有益效果：
1、制备总神经节苷脂步骤不仅工艺流程简单，操作安全，而且所选择的提取液配方有利于提高神经节苷脂GM1的得率。
2、采用MonoQ柱层析分离总神经节苷脂，不仅可直接得到纯度为90～95％的神经节苷脂GM1，而且可避免磷脂对GM1的污染。
3、经疏水柱层析分离，获得了纯度大于98％的神经节苷脂GM1，其得率可达新鲜家畜脑组织湿重的0.95/1000；制备的神经节苷脂GM1干粉，得率可达新鲜家畜脑组织湿重的0.65/1000。
4、设置总神经节苷脂的酸水解步骤，可减少GM1类似物，提高GM1相对量，有利于后续的分离和纯化。
附图说明
图1是本发明所述方法纯化后所获GM1的高效液相色谱(HPLC)检测图谱。
具体实施方式
实施例1
本实施例以新鲜猪脑组织为原料制备高纯度神经节苷脂GM1干粉，工艺步骤依次如下：
(1)制备脑组织丙酮粉
将新鲜猪脑组织清洗干净，加入-20℃预冷丙酮，新鲜猪脑脑组织以克计量，预冷丙酮以毫升计量，新鲜家畜脑组织质量∶预冷丙酮体积＝1∶10，采用5500rpm速度匀浆30min，梯度离心收集沉淀，沉淀真空干燥至恒重，得脑组织丙酮粉；离心上清中的丙酮通过减压蒸馏回收。
(2)制备总神经节苷脂
将步骤(1)制备的丙酮粉在常压、室温下用提取液溶解，丙酮粉以克计量，提取液以毫升计量，丙酮粉的质量∶提取液的体积＝1∶3，所述提取液为氯仿、甲醇和水的混合液，氯仿体积∶甲醇体积∶水体积＝3∶2∶1；将丙酮粉溶液搅拌4h，5000rpm离心30min，收集上清。上清用低压色谱柱进行纯化，低压色谱柱层析条件：将23ml硅胶用20ml四氯化碳-二氧六环(四氯化碳体积∶二氧六环体积＝2∶5)匀浆混匀，用高压泵装入柱内(1×30cm)，然后经输液泵依次用100ml的洗脱剂E、洗脱剂F交替淋洗，直至基线恒定；洗脱剂E为氯仿体积∶甲醇体积＝4∶1的氯仿-甲醇溶液，洗脱剂F为氯仿体积∶甲醇体积＝5∶1的氯仿-甲醇溶液。纯化操作：将收集的上清加入到柱头上，用洗脱剂E和洗脱剂F淋洗，收集到的总神经节苷脂通过浓缩设备减压浓缩至恒重，去除其中有机溶剂。
(3)神经节苷脂GM1的MonoQ柱层析分离
对MonoQ柱进行处理：选用XK50，将空柱装填MonoQ 200m1，以10倍柱床体积的0.4M乙酸钠-乙酸溶液淋洗并浸泡过夜，然后用20倍柱床体积的洗脱液B淋洗，再用10倍柱床体积的洗脱液A淋洗，直至基线恒定；
将步骤(2)制备的总神经节苷脂加去离子水溶解，总神经节苷脂的终浓度为18g/L；
将4倍柱床体积的总神经节苷脂溶液以400ml/h流速上样，用10倍柱床体积的洗脱液A以1000ml/h流速进行淋洗，以10倍柱床体积的洗脱液A和洗脱液B进行梯度洗脱，所述洗脱液A的配方为氯仿体积∶甲醇体积∶水体积＝4∶6∶1，洗脱液B的配方为氯仿体积∶甲醇体积∶0.4M乙酸钠-乙酸溶液体积＝4∶6∶1；
将洗脱峰分别进行TLC检测，收集含有GM1的洗脱液，减压浓缩至恒重，得神经节苷脂GM1，得率约为猪脑组织湿重的2.0/1000，通过TLC检测，GM1的纯度为94％。
(4)神经节苷脂GM1的纯化
将步骤(4)所获神经节苷脂GM1用1M乙酸钠-乙酸缓冲液溶解，GM1的浓度为10g/L；
将神经节苷脂GM1溶液上样疏水柱，GM1溶液体积∶柱体积＝1∶1，用10倍柱体积的洗脱液C和洗脱液D进行梯度洗脱，所述洗脱液C为1M乙酸钠-甲醇溶液，所述洗脱液D为0.005M乙酸钠-甲醇溶液；
将洗脱峰分别进行HPLC检测，收集含有GM1的洗脱液，减压浓缩至恒重，神经节苷脂GM1的得率约为猪脑组织湿重的0.82/1000，通过HPLC检测，GM1的纯度大于98％，其HPLC检测图谱见图1。
(5)神经节苷脂GM1干粉制备
将步骤(4)制备的GM1用无热原水溶解(GM1的浓度无严格要求)，GM1溶液通过5万截留分子量的超虑膜超虑，去除菌和热原，所得滤液经冷冻干燥制得GM1干粉，呈乳白色，得率约为猪脑组织湿重的0.6/1000。
实施例2
本实施例以新鲜牦牛脑组织为原料制备高纯度神经节苷脂GM1干粉，工艺步骤依次如下：
(1)制备脑组织丙酮粉
将新鲜牦牛脑组织清洗干净，加入-20℃预冷丙酮，新鲜猪脑脑组织以克计量，预冷丙酮以毫升计量，新鲜家畜脑组织质量∶预冷丙酮体积＝1∶8，采用4000rpm速度匀浆30min，梯度离心收集沉淀，沉淀真空干燥至恒重，得脑组织丙酮粉；离心上清中的丙酮通过减压蒸馏回收。
(2)制备总神经节苷脂
将步骤(1)制备的丙酮粉在常压、室温下用提取液溶解，丙酮粉以克计量，提取液以毫升计量，丙酮粉的质量∶提取液的体积＝1∶3，所述提取液为氯仿、甲醇和水的混合液，氯仿体积∶甲醇体积∶水体积＝5∶2∶1；将丙酮粉溶液搅拌4h，4000rpm离心30min，收集上清。上清用低压色谱柱进行纯化，低压色谱柱层析条件：将硅胶用20ml四氯化碳-二氧六环(四氯化碳体积∶二氧六环体积＝2∶5)匀浆混匀，用高压泵装入柱内(1×30cm)，然后经输液泵依次用100ml的洗脱剂E、洗脱剂F交替淋洗，直至基线恒定；洗脱剂E为氯仿体积∶甲醇体积＝4∶1的氯仿-甲醇溶液，洗脱剂F为氯仿体积∶甲醇体积＝4.5∶1的氯仿-甲醇溶液。纯化操作：将收集的上清加入到柱头上，用洗脱剂E和洗脱剂F淋洗，收集到的总神经节苷脂通过浓缩设备减压浓缩至恒重，去除其中有机溶剂。
(3)总神经节苷脂的酸水解
将步骤(2)制备的总神经节苷脂加去离子水溶解，总神经节苷脂的终浓度为18g/L，向总神经节苷脂溶液中加入盐酸，盐酸的加入量以溶液的pH＝3.4为限，在常压、室温进行酸水解，时间为2.5h。
(4)神经节苷脂GM1的MonoQ柱层析分离
对MonoQ柱进行处理：选用XK50，将空柱装填MonoQ 200ml，以20倍柱床体积的0.4M乙酸钠-乙酸溶液淋洗并浸泡过夜，然后用20倍柱床体积的洗脱液B淋洗，再用10倍柱床体积的洗脱液A淋洗，直至基线恒定；
将5倍柱床体积的步骤(3)制备的总神经节苷脂酸水解溶液以450ml/h流速上样，用10倍柱床体积的洗脱液A以1000ml/h流速进行淋洗，以10倍柱床体积的洗脱液A和洗脱液B进行梯度洗脱，所述洗脱液A的配方为氯仿体积∶甲醇体积∶水体积＝3.5∶6∶1，洗脱液B的配方为氯仿体积∶甲醇体积∶0.4M乙酸钠-乙酸溶液体积＝4∶6∶1；
将洗脱峰分别进行TLC检测，收集含有GM1的洗脱液，减压浓缩至恒重，得神经节苷脂GM1，得率约为牦牛脑组织湿重的2.6/1000，通过TLC检测，GM1的纯度为92％。
(5)神经节苷脂GM1的纯化
将步骤(4)所获神经节苷脂GM1用1M乙酸钠-乙酸缓冲液溶解，GM1的浓度为10g/L；
将神经节苷脂GM1溶液上样疏水柱，GM1溶液体积∶柱体积＝1∶3，用10倍柱体积的洗脱液C和洗脱液D进行梯度洗脱，所述洗脱液C为1M乙酸钠-甲醇溶液，所述洗脱液D为0.005M乙酸钠-甲醇溶液；
将洗脱峰分别进行HPLC检测，收集含有GM1的洗脱液，减压浓缩至恒重，神经节苷脂GM1的得率约为牦牛脑组织湿重的0.95/1000，通过HPLC检测，GM1的纯度大于98％。
(6)神经节苷脂GM1干粉制备
将步骤(4)制备的GM1用无热原水溶解(GM1的浓度无严格要求)，GM1溶液通过10万截留分子量的超虑膜超虑，去除菌和热原，所得滤液经冷冻干燥制得GM1干粉，呈乳白色，得率约为牦牛脑组织湿重的0.65/1000。
实施例3
本实施例以新鲜猪脑组织为原料制备高纯度神经节苷脂GM1干粉，工艺步骤依次如下：
(1)制备脑组织丙酮粉
将新鲜猪脑组织清洗干净，加入-20℃预冷丙酮，新鲜猪脑脑组织以克计量，预冷丙酮以毫升计量，新鲜家畜脑组织质量∶预冷丙酮体积＝1∶5，采用6000rpm速度匀浆30min，梯度离心收集沉淀，沉淀真空干燥至恒重，得脑组织丙酮粉；离心上清中的丙酮通过减压蒸馏回收。
(2)制备总神经节苷脂
将步骤(1)制备的丙酮粉在常压、室温下用提取液溶解，丙酮粉以克计量，提取液以毫升计量，丙酮粉的质量∶提取液的体积＝1∶5，所述提取液为氯仿、甲醇和水的混合液，氯仿体积∶甲醇体积∶水体积＝5∶5∶1；将丙酮粉溶液搅拌5h，5000rpm离心30min，收集上清。上清用低压色谱柱进行纯化，低压色谱柱层析条件：将硅胶用20ml四氯化碳-二氧六环(四氯化碳体积∶二氧六环体积＝1∶1)匀浆混匀，用高压泵装入柱内(1×30cm)，然后经输液泵依次用100ml的洗脱剂E、洗脱剂F交替淋洗，直至基线恒定；洗脱剂E为氯仿体积∶甲醇体积＝1∶1的氯仿-甲醇溶液，洗脱剂F为氯仿体积∶甲醇体积＝2∶1的氯仿-甲醇溶液。纯化操作：将收集的上清加入到柱头上，用洗脱剂E和洗脱剂F交替淋洗，收集到的总神经节苷脂通过浓缩设备减压浓缩至恒重，去除其中有机溶剂。
(3)总神经节苷脂的酸水解
将步骤(2)制备的总神经节苷脂加去离子水溶解，总神经节苷脂的终浓度为20g/L，向总神经节苷脂溶液中加入盐酸，盐酸的加入量以溶液的pH＝4.0为限，在常压、室温进行酸水解，时间为3h。
(4)神经节苷脂GM1的MonoQ柱层析分离
对MonoQ柱进行处理：选用XK50，将空柱装填MonoQ 200ml，以15倍柱床体积的0.4M乙酸钠-乙酸溶液淋洗并浸泡过夜，然后用10倍柱床体积的洗脱液B淋洗，再用20倍柱床体积的洗脱液A淋洗，直至基线恒定；
将4倍柱床体积的总神经节苷脂溶液以400ml/h流速上样，用5倍柱床体积的洗脱液A以800ml/h流速进行淋洗，以5倍柱床体积的洗脱液A和洗脱液B进行梯度洗脱，所述洗脱液A的配方为氯仿体积∶甲醇体积∶水体积＝5∶8∶1，洗脱液B的配方为氯仿体积∶甲醇体积∶0.4M乙酸钠-乙酸溶液体积＝5∶8∶1；
将洗脱峰分别进行TLC检测，收集含有GM1的洗脱液，减压浓缩至恒重，得神经节苷脂GM1，得率约为猪脑组织湿重的2.3/1000，通过TLC检测，GM1的纯度为92％。
(5)神经节苷脂GM1的纯化
将步骤(3)所获神经节苷脂GM1用1M乙酸钠-乙酸缓冲液溶解，GM1的浓度为20g/L；
将神经节苷脂GM1溶液上样疏水柱，GM1溶液体积∶柱体积＝1∶3，用5倍柱体积的洗脱液C和洗脱液D进行梯度洗脱，所述洗脱液C为1M乙酸钠-甲醇溶液，所述洗脱液D为0.005M乙酸钠-甲醇溶液；
将洗脱峰分别进行HPLC检测，收集含有GM1的洗脱液，减压浓缩至恒重，神经节苷脂GM1的得率约为猪脑组织湿重的0.90/1000，通过HPLC检测，GM1的纯度大于98％。
(6)神经节苷脂GM1干粉制备
将步骤(4)制备的GM1用无热原水溶解(GM1的浓度无严格要求)，GM1溶液通过5万截留分子量的超虑膜超虑，去除菌和热原，所得滤液经冷冻干燥制得GM1干粉，呈乳白色，得率约为猪脑组织湿重的0.65/1000。
上述实施例所用的各种设备(装置)与化学试剂均有市售商品，可直接购买。
Claims (5)
1.一种制备高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂的方法，其特征在于工艺步骤包括：
(1)用新鲜家畜脑组织制备丙酮粉；
(2)制备总神经节苷脂
将步骤(1)制备的丙酮粉在常压、室温下用提取液溶解，丙酮粉以克或公斤计量，提取液以毫升或升计量，丙酮粉的质量∶提取液的体积＝1∶3～1∶5，
所述提取液为氯仿、甲醇和水的混合液，氯仿体积∶甲醇体积∶水体积＝3～5∶2～5∶1，
将丙酮粉溶液搅拌4h～5h，然后离心分离并收集上清，再将上清用低压色谱柱进行纯化，收集到的总神经节苷脂通过减压浓缩至恒重，去除其中有机溶剂；
(3)神经节苷脂GM1的MonoQ柱层析分离
将步骤(2)制备的总神经节苷脂用MonoQ柱层析分离，洗脱峰分别进行薄层层析检测，收集含有GM1的洗脱液，减压浓缩至恒重，得神经节苷脂GM1；
(4)神经节苷脂GM1的纯化
将步骤(3)所获神经节苷脂GM1用疏水柱层析分离，洗脱峰分别进行高效液相色谱检测，收集含有GM1的洗脱液，减压浓缩至恒重，获高纯度神经节苷脂GM1；
(5)神经节苷脂GM1干粉制备
将步骤(4)制备的GM1用水溶解，GM1溶液通过5万～10万截留分子量的超虑膜超虑，所得滤液经冷冻干燥制得GM1干粉，呈乳白色。
2.根据权利要求1所述的制备高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂的方法，其特征在于还包括总神经节苷脂的酸水解步骤，该步骤设置在神经节苷脂GM1的MonoQ柱层析分离步骤之前，操作如下：
将制备的总神经节苷脂加水溶解，总神经节苷脂的浓度控制在16g/L～20g/L，在总神经节苷脂溶液中加入盐酸，盐酸的加入量以溶液的pH＝3.0～4.0为限，在常压、室温进行酸水解，时间为2小时～3小时。
3.根据权利要求1或2所述的制备高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂的方法，其特征在于神经节苷脂GM1的MonoQ柱层析分离步骤中，首先对MonoQ柱进行处理，然后将4倍～5倍柱床体积的总神经节苷脂溶液或酸水解溶液以400ml/h～450ml/h流速上样，用5倍～10倍柱床体积的洗脱液A以800ml/h～1000ml/h流速进行淋洗，以5倍～10倍柱床体积的洗脱液A和洗脱液B进行梯度洗脱，
MonoQ柱处理为：将空柱装填MonoQ，以10倍～20倍柱床体积的0.4M乙酸钠-乙酸溶液淋洗并浸泡过夜，然后用10倍～20倍柱床体积的洗脱液B淋洗，再用5倍～10倍柱床体积的洗脱液A淋洗，直至基线恒定，
所述洗脱液A的配方为氯仿体积∶甲醇体积∶水体积＝4～5∶6～8∶1，洗脱液B的配方为氯仿体积∶甲醇体积∶0.4M乙酸钠-乙酸溶液体积＝4～5∶6～8∶1。
4.根据权利要求1或2所述的制备高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂的方法，其特征在于神经节苷脂GM1的纯化步骤是将神经节苷脂GM1溶液上样疏水柱，GM1溶液体积∶柱体积＝1∶1～3，然后用5倍～10倍柱体积的洗脱液C和洗脱液D进行梯度洗脱，
所述神经节苷脂GM1溶液的溶剂为1M乙酸钠-乙酸缓冲液，GM1的浓度为10g/L～20g/L，所述洗脱液C为1M乙酸钠-甲醇溶液，所述洗脱液D为0.005M乙酸钠-甲醇溶液。
5.根据权利要求3所述的制备高纯度单唾液酸四己糖神经节苷脂的方法，其特征在于神经节苷脂GM1的纯化步骤是将神经节苷脂GM1溶液上样疏水柱，GM1溶液体积∶柱体积＝1∶1～3，然后用5倍～10倍柱体积的洗脱液C和洗脱液D进行梯度洗脱，
所述神经节苷脂GM1溶液的溶剂为1M乙酸钠-乙酸缓冲液，GM1的浓度为10g/L～20g/L，所述洗脱液C为1M乙酸钠-甲醇溶液，所述洗脱液D为0.005M乙酸钠-甲醇溶液。
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