FI93123B - Menetelmä glykolipidien erottamiseksi lipidiseoksesta ja näin saatujen jakeiden käyttö - Google Patents
Menetelmä glykolipidien erottamiseksi lipidiseoksesta ja näin saatujen jakeiden käyttö Download PDFInfo
- Publication number
- FI93123B FI93123B FI895081A FI895081A FI93123B FI 93123 B FI93123 B FI 93123B FI 895081 A FI895081 A FI 895081A FI 895081 A FI895081 A FI 895081A FI 93123 B FI93123 B FI 93123B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- glycolipids
- solvent
- lipid mixture
- volume
- methanol
- Prior art date
Links
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 title claims description 68
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 title claims description 63
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 58
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 34
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 44
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 42
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 33
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 30
- 235000015155 buttermilk Nutrition 0.000 claims description 29
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 25
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 25
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 23
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 23
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 claims description 20
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 17
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 13
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 12
- GBBUBIKYAQLESK-UHFFFAOYSA-N [3-(2-methylprop-2-enoylamino)phenyl]boronic acid Chemical compound CC(=C)C(=O)NC1=CC=CC(B(O)O)=C1 GBBUBIKYAQLESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 11
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 10
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 claims description 10
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 4
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 claims description 4
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 claims description 3
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 claims description 3
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 claims description 3
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 claims description 3
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 2
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 claims description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 claims 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 165
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 82
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 72
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 36
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 35
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 28
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 24
- 201000005488 Capillary Leak Syndrome Diseases 0.000 description 23
- 208000001353 Coffin-Lowry syndrome Diseases 0.000 description 23
- 238000000050 ionisation spectroscopy Methods 0.000 description 23
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 18
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 16
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 16
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 15
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 15
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 12
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 12
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 11
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 10
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 10
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 10
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 9
- 238000001220 thermal lens spectroscopy Methods 0.000 description 9
- 230000011637 translesion synthesis Effects 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 8
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 8
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 8
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 8
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 description 8
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 8
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 7
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 7
- 230000009965 odorless effect Effects 0.000 description 7
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 6
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 6
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 150000001783 ceramides Chemical class 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- -1 hematosides Chemical class 0.000 description 5
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 5
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 5
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 5
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 4
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 4
- 239000012156 elution solvent Substances 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- HXITXNWTGFUOAU-UHFFFAOYSA-N phenylboronic acid Chemical compound OB(O)C1=CC=CC=C1 HXITXNWTGFUOAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000005373 porous glass Substances 0.000 description 4
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 4
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 4
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 3
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 3
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 3
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 3
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 3
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 3
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 235000003869 genetically modified organism Nutrition 0.000 description 3
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 3
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 3
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 3
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 3
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical group CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 235000021298 Dihomo-γ-linolenic acid Nutrition 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006004 Quartz sand Substances 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N all-cis-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCC(O)=O MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 2
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 235000020669 docosahexaenoic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 235000020673 eicosapentaenoic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 2
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 2
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 2
- 150000008131 glucosides Chemical class 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N hexan-1-ol Chemical compound CCCCCCO ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 239000003495 polar organic solvent Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N tetraphosphorus decaoxide Chemical compound O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WWUZIQQURGPMPG-UHFFFAOYSA-N (-)-D-erythro-Sphingosine Natural products CCCCCCCCCCCCCC=CC(O)C(N)CO WWUZIQQURGPMPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HOBAELRKJCKHQD-UHFFFAOYSA-N (8Z,11Z,14Z)-8,11,14-eicosatrienoic acid Natural products CCCCCC=CCC=CCC=CCCCCCCC(O)=O HOBAELRKJCKHQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 1-hexadecanoyl-2-(9Z,12Z-octadecadienoyl)-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 0.000 description 1
- GQUYHVWGORQHMI-UHFFFAOYSA-N 3-anilino-3-borono-2-methylprop-2-enoic acid Chemical compound OC(=O)C(C)=C(B(O)O)NC1=CC=CC=C1 GQUYHVWGORQHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XOJWAAUYNWGQAU-UHFFFAOYSA-N 4-(2-methylprop-2-enoyloxy)butyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCCCOC(=O)C(C)=C XOJWAAUYNWGQAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 208000003343 Antiphospholipid Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 101100013926 Caenorhabditis elegans gale-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-LUWBGTNYSA-N N-acetylneuraminic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)CC(O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-LUWBGTNYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical group [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000000061 acid fraction Substances 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N all-cis-5,8,11,14,17-icosapentaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000010533 azeotropic distillation Methods 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- ZADPBFCGQRWHPN-UHFFFAOYSA-N boronic acid Chemical compound OBO ZADPBFCGQRWHPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001626 borono group Chemical group [H]OB([*])O[H] 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000005859 cell recognition Effects 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 229930183167 cerebroside Natural products 0.000 description 1
- 150000001784 cerebrosides Chemical class 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 229920006037 cross link polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- HOBAELRKJCKHQD-QNEBEIHSSA-N dihomo-γ-linolenic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCC(O)=O HOBAELRKJCKHQD-QNEBEIHSSA-N 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L disodium [3-[2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propoxy-oxidophosphoryl]oxy-2-hydroxypropyl] 2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propyl phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCC=CCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COP([O-])(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- DVSZKTAMJJTWFG-UHFFFAOYSA-N docosa-2,4,6,8,10,12-hexaenoic acid Chemical class CCCCCCCCCC=CC=CC=CC=CC=CC=CC(O)=O DVSZKTAMJJTWFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940090949 docosahexaenoic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 description 1
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 description 1
- 239000008344 egg yolk phospholipid Substances 0.000 description 1
- 229960005135 eicosapentaenoic acid Drugs 0.000 description 1
- JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N eicosapentaenoic acid Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 1
- 150000002313 glycerolipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 235000021125 infant nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 229940060155 neuac Drugs 0.000 description 1
- CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N neuraminic acid Natural products NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003075 phytoestrogen Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 238000004094 preconcentration Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000197 pyrolysis Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 239000013557 residual solvent Substances 0.000 description 1
- 239000002195 soluble material Substances 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 229940083466 soybean lecithin Drugs 0.000 description 1
- WWUZIQQURGPMPG-KRWOKUGFSA-N sphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCC\C=C\[C@@H](O)[C@@H](N)CO WWUZIQQURGPMPG-KRWOKUGFSA-N 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000005062 synaptic transmission Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- FKHIFSZMMVMEQY-UHFFFAOYSA-N talc Chemical compound [Mg+2].[O-][Si]([O-])=O FKHIFSZMMVMEQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 1
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 1
- 235000019149 tocopherols Nutrition 0.000 description 1
- 230000032895 transmembrane transport Effects 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- QUEDXNHFTDJVIY-UHFFFAOYSA-N γ-tocopherol Chemical class OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1 QUEDXNHFTDJVIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/68—Sphingolipids, e.g. ceramides, cerebrosides, gangliosides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J7/00—Phosphatide compositions for foodstuffs, e.g. lecithin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
- A61K8/14—Liposomes; Vesicles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/55—Phosphorus compounds
- A61K8/553—Phospholipids, e.g. lecithin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/98—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
- A61K8/981—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin of mammals or bird
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/98—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin
- A61K8/981—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution of animal origin of mammals or bird
- A61K8/982—Reproductive organs; Embryos, Eggs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1276—Globules of milk or constituents thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Birds (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
93123
Menetelmä glykolipidien erottamiseksi lipidiseoksesta ja näin saatujen jakeiden käyttö - Förfarande för separering av glykolipider frän en lipidblandning och sä erhällna frak-tionernas användning
Keksintö koskee menetelmää glykolipidien erottamiseksi komp-leksilipidejä (CLS) sisältävästä lipidiseoksesta.
Kompleksilipidit ovat kemiallisia rakenteita, joita on laajalti biologisissa kudoksissa, joissa niillä on perustuvaa laatua oleva asema välituotemetaboliassa ja määrättyjen elinten soluissa, kuten aivoissa ja maksassa. Niitä on 2 pääryhmää, nimittäin: fosfolipidit (PLS), joista saadaan hydrolysoitaessa mineraalifosfaatteja, esimerkiksi fosfatidyylikoliini (PC), fosfatidyylietanoliamiini (PE), fosfatidyyli-inositoli (PI); ja glykolipidit (GLS), joista rakenteelliset perustat sfin-gosiini, esimerkiksi serebrosidit, hematosidit, gangliosidit, glyseroli, esimerkiksi mono- ja digalaktosyylidiglyseridit, tai sterolit, esimerkiksi steryyliglukosidit ja niiden esterit, sisältävät ainakin yhden sokeritähteen. GLS:ien määrä CLS:issä on yleensä 3-10 kertaa pienempi kuin PLS:ien määrä.
Eläin-GLS:t, joita on suuria konsentraatioita aivoissa, muodostavat membraanien tärkeitä toiminnallisia komponentteja, ja ne ovat osallisina kalvojen läpi tapahtuvassa kuljetuksessa, soluntunnistuksessa, synaptisessa välityksessä, solujen kasvussa, hormonien kiinnittymisessä, entsyymeissä, bakteereissa, bakteeritoksiineissa, pahanlaatuisten kasvainten muunnoksissa ja monissa muissa biologisissa toiminnoissa. Siten CLS:iä käytetään esimerkiksi lääketieteessä, farmakologiassa, geriatriassa ja kosmetiikassa.
Tiedetään, että GLS:t voidaan uuttaa biologisista kudoksista osittain tai täysin erilaisilla poolisten orgaanisten liuottimien seoksilla, esimerkiksi kloroformi/metanolilla, heksaani/-isopropanolilla tai tetrahydrofuraani/vedellä. Näissä menetel- 2 93123 missä ne saadaan vain seoksina neutraalilipidien (NLS) ja PLS.-ien kanssa niin, että näitä uutteita kutsutaan kokonais lipideiksi (TLS). Vaihtoehtoisesti biologiset kudokset uutetaan ensin asetonilla suuren neutraalilipidiosan, esimerkiksi tri-glyseridien, sterolien ja vapaiden rasvahappojen poistamiseksi, minkä jälkeen jäännÖsmembraanilipidit uutetaan edellä mainituilla poolisilla orgaanisilla liuottimilla. TLS:ien erotusta voidaan jatkaa eri tavoilla. Eniten käytetty menetelmä on Folch-prosessi, jossa kloroformin, metanolin ja veden 2-kerros-liuotinjärjestelmässä kerätään yläfaasi, joka sisältää pääosan gangliosideista, yli k - 5 sokeritähdettä sisältävät GLS:t ja hieman hapanta PLS:ää (APLS) ja alempi kerros, joka sisältää PLS:ien pääosan, keramidit, steryyliglukosidit, keramidien mono-, di- ja triheksosidit ja kaikki poolittomat lipidit, esimerkiksi triglyseridit. Lipidien erotus ei kuitenkaan ole puhdas niin, että esimerkiksi hematosideja esiintyy kummassakin kerroksessa.
Eräs tunnettu suuren mittakaavan menetelmä NLS:ien ja CLS:ien erottamiseen perustuu heksaani/etanoli-seoksen käyttöön. Muissa menetelmissä käytetään nestekromatografiaa, mutta niillä on haittana riittämätön kapsasiteetti, esimerkiksi 30 mg lipide-jä/g silikageeliä. Hyvin kiinnostava menetelmä, joka esitetään patenttihakemuksessa DE-2915614, käsittää TLS:ien erottamisen TLS: iin ja PLS:iin silikageelillä, vaikka muista CLS:ist.ä, kuten gangliosideista tai GLS:stä ei mainitakaan. Tässä menetelmässä NLS:t määritellään osaksi TLS:ää, joka on liukoinen hiilivetyihin, vastakohtana PLS:lle, joka muodostavat, noissa liuottimissa misellejä. Vain misellejä muodostavat lipidit eluoituvat vapaasti silikageelistä, kun taas NLS pysyy adsorboituneena.
Tällä menetelmällä on kuitenkin haittoja. Monet GLS:t. eivät tosiasiassa muodosta spontaanisti misellejä hiilivetyjen läsnäol -lessa. Tuloksena muodostuu hiilivetyihin liukenemattomia kiinteitä hiukkasia ja tukkivat silikageelipylvään, joka tällöin absorboi NLS:t. Seurauksena vain PLS:t eluoituvat pylväästä 3 93123 kvantitatiivisesti.
Vaikka GLS:ien täydellinen kerääminen CL-seoksista on mahdollista, vaatii se kuitenkin epätavallisen pitkän ajan. Vakiome-netelmässä lipidit kuivataan ensin täysin 24 - 48 h fosfori-pentoksidilla ja asetyloidaan sitten etikka-anhydridillä pyri-diinissä. Asetyloidut GLS:t erotetaan sitten muista lipideistä nestekromatografiällä Florisil-kolonnissa, GLS:t deasetyloidaan ja neutralisoidaan, suolat poistetaan, ja lopuksi tuote pakas-tekuivataan. Menetelmä tuhoaa kaiken PLS:n ja määrätyt GLS:t, jotka sisältävät emäksille herkkiä sidoksia, esimerkiksi gang-liosidit, joissa on N-O-diasetyylineuramiinihappoa. Lisäksi tapahtuma vaatii useita päiviä tai kokonaisen viikon.
On esitetty edellä esitettyyn menetelmään liittyvien vaikeuksien ratkaisemista yksinkertaisella nestekromatografiamenetel-mällä, joka käsittää uudelleenkäytettävän hartsin valmistamisen, joka hartsi sisältää fenyyliboorihappo (PBA)ryhmiä kiinnittyneinä kovalenttisilla sidoksilla ristiiiitettyyn polysty-reenimatriisiin. Hartsi pidättää selektiivisesti kaiken GLS:n muodostamalla PBA-ryhmien ja GLS:ien sokeriosan cis-dioliryh-mien välisen kompleksin, saaden siten aikaan PL3:ien ja NLSiien täydellisen eluoitumisen. Sitten GLS:t vapautetaan komplekseista vesipitoisella orgaanisella liuottimella. Hartsin panoskapa-siteetti on kuitenkin suhteellisen alhainen, tyypillisesti 0,7 - 7 mg TL/g eli 0,18 - 1,8 mg/ml haitsia (näennäsitilavuus). 1 • · : : mg TL:lie vaadittu eluointiliuottimen tilavuus on luokkaa 2,5 - 25 mi. On havaittu, että kaupallisesti saatavat hartsipatruu-nat, jotka sisältävät 100 mg hartsia, ovat tehottomia PLS:ien ja GLS:ien erotuksessa.
. Nyt on havaittu, että GLS:t voidaan erottaa olennaisen kvanti- • tatiivisesti CLS:iä sisältävästä lipidisecksesta yksinkertai sella kromatografisella menetelmällä, joka ei tuhoa PL5:iä.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle on tunnusomaista, että seos liuotetaan sopivaan liuottimeen ja lisätään boorihappogeeliin 4 93123 niin, että glykolipidit adsorboituvat selektiivisesti, minkä jälkeen glykolipidit desorboidaan geelistää eluointiliuottimel-la.
Keksinnön mukaisesti käytetty lipidiseos voi olla alkuperältään eläimistä tai kasveista. Sopivia eläinlipidejä ovat teurastamoista saatista eläinkudoksista, kuten esimerkiksi suolista, keuhkoista, kateenkorvasta, luuytimestä ja, edullisesti, naudan aivoista, saatavista liuosuutteista peräisin olevat lipidit. Toinen kiinnostava lähtömateriaali on ihmisen tai eläimen istukka. Nämä kudokset voivat olla luonnollisessa, jäädytetyssä tai dehydratoidussa tilassa. Toinen kiinnostava, suurissa määrissä saatavissa oleva lähtöaine on kaseiiniton, laktoositon ja makea kirnupiimä. Kasvislipidejä ovat esimerkiksi luonnolliset soijalesitiinit.
Lipidien uuttamiseksi lähtömateriaalista lähtöaine hienonnetaan ja homogenisoidaan esimerkiksi suurinopeuksisessa sekoittimessa lipofiilisessa mutta veteensekoittuvassa liuottimessa tai liuo-tinseoksessa. On mahdollista käyttää esimerkiksi tetrahydrofu-raania, tetrahydrofuraani/vesi-seosta, tilavuussuhde 4:1 -10:1, di-isopropyylieetteri/isopropanoli-seosta, tilavuussuhde 3:2, kloorattuja liuottimia, esimerkiksi kloroformia, dikloori-metaania, kloroformi/metanoli-seosta, tilavuussuhde 2:1. On tietysti mahdollista käyttää samanlaisia lipofiilisia liuottimia ja näiden seoksia. Tapahtuma suoritetaan edullisesti kuumentaen lämpötilaan alle 100 °C, esimerkiksi alueelle 50 - 60 °C. Sitten dispersio suodatetaan, ja liuottimien poistamisen jälkeen, esimerkiksi tislaamalla kuiviin tyhjiössä, raaka-TLS:t otetaan talteen. Raaka-TLS:t voidaan valinnaisesti puhdistaa liuottamalla ne uudelleen liuottimeen ja sitten dekantoimalla ja erottamalla saostuneet kiinteät hiukkaset.
Vaihtoehtoisessa menetelmässä lipidit voidaan uuttaa poolitto-malla hiilivetyliuottimella, esimerkiksi heksaanilla, mikä on edullista mikäli lähtöaine koostuu pakastekuivauksella tai spaykuivauksella kuivatuista eläinkudoksista. Tässä tapauksessa 5 931 23 kudokset homogenisoidaan täydellisesti hienonnusmyllyssä esimerkiksi heksaanin läsnäollessa ympäristön lämpötilassa, minkä jälkeen TLS:ien uuttoa jatketaan sekoittaen, esimerkiksi 60 -62 °C:ssa suljetussa sekoittimella varustetussa reaktorissa. Sitten suspensio saa seistä ympäristön lämpötilassa 1 - 2 h. Muodostuu kerrostuma, joka supernatanttikerroksesta erotuksen jälkeen käsitellään uudelleen edellä mainitulla tavalla poolit-tomalla hiilivedyllä, esimerkiksi heksaanilla. Yhdistetyt su-pernatanttikerrokset voidaan sitten sentrifugoida sentrifuugis-sa, tai vaihtoehtoisesti ne saavat seistä 24 - 48 h ympäristön lämpötilassa. Muodostunut kerrostuma erotetaan, ja kirkas liuos konsentroidaan noin 12 - 15 %:iin alkupainostaan, esimerkiksi haihduttamalla tyhjiössä. TLSiien konsentraatti voidaan käsitellä laimentamalla samalla tilavuudella tislattua vettä, minkä jälkeen heksaanijäännös poistetaan esimerkiksi haihduttamalla typen alla 68 - 70 °C:ssa, ja vesiemulsio kuivataan esimerkiksi pakastekuivaamalla. Vaihtoehtoisesti heksaaniin liuotettu TL-konsentraatti voidaan käyttää suoraan välituotteena CLS:ien valmistuksessa kromatografoimalla alla kuvatulla tavalla. Tässä tapauksessa CLS:t sisältävä eluaatti konsentroidaan 5-10 %:iin alkutilavuudestaan liuottimen poistamisen jälkeen, minkä jälkeen se laimennetaan samalla tilavuudella tislattua vettä, ja emulsio kuivataan esimerkiksi pakastekuivaamalla.
Lipidiseos voi sisältää kaikki lipidit, ts. NLS:t ja CLS:t, tai se voi olla muodostunut pelkästään CLS:istä. Tässä tapauksessa CLS:t erotetaan etukäteen silikageelipylväässä poolittomassa, veteen s eko ittumattomas s a hiilivetyliuottimessa, esimerkiksi petrolieetterissä, joka toimii CLS:ien eluointiliuottimena, NLS:ien jäädessä pylvääseen. Lipidien liuotuksen aikana käytetään edullisesti sonikointia niiden täydellisesti liuottamisek-·' si. Kerätyt CLS:t käsittävät erityisesti PLS:ien plasmalogee- nit, keramidiheksosidit, glyseroglykolipidit ja gangliosidit. NLS:t desorboidaan kolonnista poolista, lipotiilista liuotin-seosta käyttäen, esimerkiksi kloroformi/metanoii-seosta. Kerätyt NLS:t käsittävät erityisesti mono-, di- ja triglyseridit, rasvahapot, tokoferolit, rasvaliukoiset vitamiinit, estrogeenit 6 93123 ja fytoestrogeenit. Voidaan nähdä, etteivät NLS:t sisällä lainkaan GLS:iä, mikä on etu haluttaessa kerätä rasvahappoja ja näitä sisältäviä triglyseridejä ilman GLSriä, ex-ityisesti ara-kidonihappoa, dihomogammalinoleenihappoa, eikosapentaeenihappoa ja dokosaheksaeenihappoa, joita esiintyy ihmisen istukassa. Erotuksen jälkeen tuotteesta poistetaan liuottimet kuiviin, esimerkiksi haihduttamalla tyhjiössä.
Eräässä valmistusmuunnelmassa, jossa valmistetaan vain CLSriä sisältävää lipidiseosta, joka muunnelma on sovellettavissa erityisesti kirnupiimän lipidien käsittelyyn, makea (ei-hapan) kaseiinista ja laktoosista vapautettu kirnupiimä käsitellään esimerkiksi diasuodatuksella (ultrasuodatuksella pesten) poolisel-la liuottimella, esimerkiksi asetonilla, erottamaan NL3:t, jotka kulkevat liuokseen, jonka jälkeen jäännös, josta asetoni on poistettu, käsitellään hieman poolisella liuottimella, esimerkiksi metanolilla, ja liuos konsentroidaan esimerkiksi haihduttamalla metanoli. Saatu konsentraatti voidaan käsitellä edellä kuvatulla tavalla silikageelipylväässä.
Kirnupiimän lipidien käsittelyn edullisessa muunnelmassa TLS:t uutetaan kirnupiimästä, josta on poistettu laktoosi ja kaseiini, esimerkiksi heksaanin ja metanolin seoksella, ja jäännöksen erotuksen jälkeen, esimerkiksi mikrosuodatuksella tai sentrifu-goimalla, liuotinseos poistetaan esimerkiksi haihduttamalla. Sitten TL-konsentraatti käsitellään poolisella liuottimella, esimerkiksi asetonilla merkittävästi pienempään määrään kuin edeltävässä muunnelmassa, jossa kirnupiimä käsitellään suoraan. Siitä kerätään liukematon jae ja poistetaan asetoni. Tällä esierotusmuunnelmalla on edeltävään muunnelmaan verrattuna useita etuja: tarvittavan asetonin määrä on noin 10 - 12 kertaa : pienempi; asetoniin liukenematon materiaali sisältää noin 75 - 80 paino-% CLS:iä ja vain noin 20 - 25 paino-% NLS:iä käsittäen korkean sulamispisteen omaavia triglyseridejä, mikä vaatii seu-raavan CLS:ien erotuksen saavuttamiseksi jopa 15 kertaa vähemmän silikageeliä verrattuna edeltävään tapaukseen. Lopuksi, asetoniin liukoinen materiaali, jolta edustaa noin **0 - <*5 pai- « 7 93123 no-%:ia käytetystä kirnupiimästä, käsittää - triglyseridien lisäksi - vapaat rasvahapot, sterolit ja pääosan hajua aiheuttavista yhdisteistä, jotka voidaan täten poistaa helpommin. Tämän esierotuksen jälkeen saatu lipidiseos käsitellään edellä kuvatulla tavalla kromatografoimalla silikageelillä.
PLS:in erottamiseksi GLSristä käytetään boorihappogeelillä täytettyä pylvästä. Adsorbentti on ristiliit.etty polymeeri, joka on veteen ja orgaanisiin liuottimiin liukenematon. Se saadaan dihydroksiboryylianilinometakryylihapon ja 1,4-butaanidiolidi-metakrylaatin sekapolymeroinnilla ja ristiliittämisellä. Rajoittumatta yhteen teoriaan on ilmeistä, että PLSrien ja GLSrien olennaisen kvantitatiivinen erottaminen johtuu adsor-bentin kyvystä muodostaa komplekseja glykolipidien kanssa komp-leksoimalla GLSrien cis-dioleja geelin dihydroksiboryyliryhmien kanssa ja kyvystä dekompleksoitua veden läsnäollessa. Boorihap-pogeeli suspendoidaan vedettömään lipofiiliseen liuottimeen, jolla on keskinkertainen poolisuus. On esimerkiksi mahdollista käyttää kloroformi/metanoli-seosta, tilavuussuhde 5:1 - 2:1 tai di-isopropyylieetteri/isopropanoli-seosta, tilavuussuhde 4:2 -2:1.
Kuten edellä mainittiin, eluoituvat. PLS:t. pylväästä kun taas GLS:t ovat adsorboituneina. PLS:t kerätään samaa eluointiliuo-tinta käyttäen, esimerkiksi kloroformi/metanoli-seosta, tilavuussuhde 2:1, minkä jälkeen liuottimet poistetaan haihdutta- • t maila kuiviin tyhjiössä. GLS:t desorboidaan pylväästä käyttämällä liuotinseosta, joka käsittää poolista, veteen sekoittuvaa orgaanista liuotinta ja 1 - 25 paino-% deionisoitua vettä. On esimerkiksi mahdollista käyttää tetrahydrofuraani/vesi-seosta, tilavuussuhde 10:1 - 4:1, tetrahydrofuraani/metanoli/vesi-seos- *·' ta, kloroformi/metanoli/vesi-seosta, tai dikloorimetaani/meta- noli/vesi- tai dikloorimetaani/etanoli/vesi-seosta. Edullisesti käytetään tetrahydrofuraani/vesi-seosta. Seoksen suhteita voidaan vaihdella eluointiprosessin aikana. Voidaan esimerkiksi aloittaa seoksella, jossa on runsaasti orgaanista liuotinta, tyypillisesti 10:1 (tilavuus), ja lopettaa 4:1 (tilavuus)- • · * 8 931 23 seoksella. Tetrahydrofuraanilla on etuna, että se voidaan helposti poistaa samanaikaisesti veden kanssa, esimerkiksi seuraa-van pakastekuivauksen aikana. Jos käytetään alkoholia sisältävää seosta, sedorfcoituu vain alkoholi/vesi-seokseen liukoiset GLS:t ja, lisäksi, pylväs on regeneroinnin aikana pestävä tetrahydrof uraani/vesi-seoksella.
Määrätyissä tapauksissa vaaditaan GLS:ien hienoa erottumista. Tätä varten GLS:t liuotetaan kloroformi/metanoli-liuotinseok-seen, esimerkiksi kaksoisseinäisessä, sekoittimella varastetussa dekantointiastiassa, joka kuumennetaan esimerkiksi 50 °C:een, johon astiaan lisätään KCi:n vesiliuosta. Alussa sekoitetaan nopeasti, mutta sitten hitaammin. Muodostuu 2 kerrosta, nimittäin gangliosidit sisältävä vesifaasi ja muut GLS:t sisältävä orgaaninen kerros. Alemman kerroksen erotuksen jälkeen, esimerkiksi poisvalutuksella, liuottimet poistetaan siitä esimerkiksi haihduttamalla tyhjiössä.
Eräässä erityisessä keksinnon mukaisessa suoritusmuodossa PLS:t voidaan erottaa ei-happamiin PL3:iin (NPLS) ja toisaalta happa-miin PLS:iin (APLS) samalla kun GLS:t voidaan erottaa ei-happamiin GLS:iin (NGLS) ja toisaalta happamiin GLS:iin (AGLS) io-ninvaihtokromatografiällä. Näiden peräkkäisten erotusten etuna on, että analyyttisillä vakiomenetelmillä, kuten suuren suorituskyvyn nestekromatografiällä (HPLC), suuren suorituskyvyn ohutlevykromatografiällä (HPTLC) ja ydinmagneettiseila reso-nanssispektroskopialla (NMR) ei ole mahdollista havaita ja määrittää kvantitatiivisesti erilaisia CLS:ien eri jakeita, koska näiden fciogisissa uutteissa olevien lipidiluokkien määrä on aivan liian suuri, jotta nämä menetelmät .olisivat tehokkaita. Näiden kaikkien läsnäolevien lipidiluokkien eluointia ei voida toteuttaa käyttämättä erilaisia liikkuvia faaseja tai syntetisoimatta määärätyistä lipideistä johdannaisia. Esierotus risti-liitetyllä agaroosi-ioninvaihtohartsilla, erityisesti nopeasti läpi päästävällä dietyyliaminoetyylisefaroosigeelillä asetaat-timuodossa mahdollistaa GLS:ien ja FLS:ien kvantitatiivisen erotuksen erilaisiin happamiin ja ei-happamiin jakeisiinsa niin 9 931 23 suurilla läpiajonopeuksilla kuin 10 kerroksen paksuutta tunnissa. Tämän erotuksen avulla eri jakeet voidaan sitten tunnistaa ja kvantisoida HPTLC:llä fluoresenssihavainnoinnilla.
• s
Keksinnön mukaisen menetelmän toisessa erityisessä suoritusmuo-dosssa soijan luonnolliset lesitiinit käsitellään esimerkiksi ennen alustavaa NLS:ien erotusta ja poistamalla GLS:t ja vapaat sokerit olennaisen täydellisesti ajamalla boorihappogeelin läpi. Seuraavalla GLS:t sisältävän jakeen dialyysillä deionisoi-tua vettä vastaan voidaan eliminoida vapaat sokerit. Näin saadaan fytoglykolipidejä. Tämän suoritusmuodon muunnelmassa NLS:t ja CLS:t erotetaan silikageelillä, minkä jälkeen GLS:t ja PLS:t erotetaan CLSiistä boorihappogeelillä. Saadut PLS:t ovat vapaita glykolipideistä ja vapaista sokereista. Niinpä niillä ei enää ole mitään PLS:ien tyypillisistä haitoista, erityisesti parenteraalisissa emulsioissa, ja tässä suhteessa niiden koos-
J
tumus on verrattavissa munan lesitiinin koostumukseen.
Keksintö koskee myös näistä erotuksista peräisin olevien jakei-den käyttöä.
Ensimmäisessä suoritusmuodossa eläinkudosten PLS:iä, GLS:iä ja gangliosideja ja kirnupiimän PLS:iä voidaan käyttää kosmeettisten formulaatioiden valmistukseen.
Toisessa suoritusmuodossa PLS:iä, GLS:iä ja gangliosideja, joi- • · 1 1 den koostumukset ovat spesifisiä kullekin kudokselle, josta nä mä jakeet on uutettu, käytetään ravintokoostumusten formulointiin erityisesti lasten ravintoon.
Kolmannessa suoritusmuodossa gangliosideja sisältäviä jakeita ; voidaan käyttää kosmetiikassa käytettäväksi sopivien tai hermo- ’ · järjestelmän hoitoon sopivien lääkkeiden valmistuksessa sopi vien liposomien formulointiin.
Neljännessä suoritusmuodossa fytoglykolipideistä vapaita soija-lesitiinejä voidaan käyttää parenteraalisten emulsioiden formu- 10 931 23 lointiin.
Viimeisessä suoritusmuodossa ihmisen istukan NLS:iä voidaan käyttää GLS:istä vapaiden, erityisesti arakidoni-, dihomogamma-linoleeni-, eikosapentaeeni- ja dokosaheksaeenihappoja sisältävien rasvahappotriglyseridien saamiseksi. Näitä triglyseridejä voidaan käyttää muiden keksinnön mukaisesti saatujen jakeiden, erityisesti PLSrien, GLS:ien ja gangliosidien kanssa ravinto-koostumusten valmistukseen erityisesti lasten ravintoon.
Keksintöä kuvataan seuraavissa esimerkeissä, joissa osat ja prosenttiosuudet ovat, ellei toisin ilmoiteta, painon mukaan.
Näissä esimerkeissä NLS:ien ja CLS:ien erotuksen tehokkuus testattiin HPTLC:llä 10 cm x 10 cm:n lasilevyillä, jotka oli päällystetty silikageelillä. Jakeiden eri ainesosaset havainnoitiin fluoresenssilla verraten standardi, hyvin tunnettuihin yhdisteisiin .
GLS:ien kvantitatiivista erotusta CLS:istä määritettiin seuraa-villa menetelmillä: HPTLC, kolorimetria ja kaasufaasikromato-grafia (GLC). Erityisesti glykolipidien erotus HPTLC:llä määritettiin detektoimalla orsinolilla, joka värjäää spesifisesti glykolipidien sokeriryhmät verraten standardi, puhtaisiin GLS:iin.
• PL-jakeen analysoimiseksi PLS:t esierotettiin NPLS:iin ja APLS:iin ioninvaihtokromatografiällä, ja detektoitiin sitten eri komponentit kustakin jakeesta HPTLC:llä vertaamalla standardi, puhtaisiin PLS:iin.
. Samalla GL-jakeiden sisällöt valmistettiin alustavalla ionin- vaihtokromatografiällä ja sitten eri ei-happamien komponenttien (NGLS) ja happamien komponenttien (AGLS) HPTLC-analyysillä standardinäytteisiin vertaamalla.
n 93123 ESIMERKKI 1 1.1. Naudan aivojen TLS:ien uutto 5 kg naudan aivoja jauhemaisessa muodossa kuivattuna spraykui-vauksella homogenisoidaan 50 l:aan tetrahydrofui'aani/vesi-liuo-tinseosta (tilavuussuhde 4:1) 20 °C:ssa pyörityssekoittimessa pyörittäen nopeudella 10000 r/min.
3-5 min kuluttua aivolipidien uuttamista jatketaan 20 min 50 - 60 °C:ssa 100-1 umpinaisessa reaktorissa sekoittaen 160 - 250 r/min. Muodostunut suspensio suodatetaan 1-vaihesuodatuspape-rilla varustetussa kaksoisvaippasuodatustankissa 40 - 50 °C:ssa. Suodatustankissa pysyneet kiinteä hiukkaset poistetaan 35 1:11a tetrahydrofuraani/vesi-seoksella, tilavuussuhde 4:1, pitäen liuottimen lämpötilan 40 - 50 °C:ssa. Yhdistetyt suodok-set, jotka sisältävät raa1 an aivolipidiuutteen, konsentroidaan sitten vakiopainoon tyhjiöhaihduttimessa 65 - 75 °C:ssa, minkä jälkeen lipidikonsentraatista poistetaan jäännösvesi peräkkäisillä 5-1 isopropanolilisäyksillä, ja haihduttamalla kukin lisäys atseotrooppisesti.
1.2 Raakalipidien puhdistus
Edeltävä 2,68-kg raakauute liuotetaan uudelleen 10 l:aan tetrahydrof uraania ja sentrifugoidaan sitten 10 min 1500 - 1700 g:llä korkeilla suljetuissa pulloissa. Vaihtoehtoisesti liuo-tettu raakauute 3aa seistä 24 h ympäristön lämpötilassa, minkä jälkeen kerrostuneet kiinteät aineet erotetaan. Kirkastunut liuos konsentroidaan kuiviin 65 - 70 °C:ssa pyörötyhjiöhaihduttimessa. Näin saadaan 2,32 g aivo-TLS:iä ja 0,36 kg ei-lipidi-siä epäpuhtauksia.
« 1.3 Naudan aivojen CLS:ien eristys 100 cm pitkä lasipylväs, jonka sisähalkaisija on 21.3 cm, ja joka sisältää 15 1 petrolieetteriä 60 - 30 °C:ssa, täytetään 4 kg:llä 0,21 - 0,062 mm (70 - 230 mesh) silikageelillä disper- 12 93123 goituna 20 Iraan petrolieetteriä. Silikageeli aktivoitiin etukäteen käsittelemällä ainakin 16 h 160 - 165 °C:ssa. Lasipyl-väässä on silikageelihiukkasten pysyttämiseksi huokoslasisuoda-tin, jonka huokoisuus on 100 - 160 μιη. Edellä oleva aivo-TLS, ts. 2,32 kg, liuotetaan sekoittaen 10 Iraan petrolieetteriä ja sonikoidaan sitten 2-5 min (250 - 500 W/kg lipidejä), kunnes samea liuos kirkastuu. Sonikoidun näytteen lämpötila pidetään 45 - 50 °Crssa. Näyte ajetaan silikageelipylvään läpi ja CLSrät eluidaan täysin 15 - 30 lrlla petrolieetteriä (eluaatti 1).
NLSrt (eluaatti 2) desorboidaan silikageelistä 15 lrlla kloro-formi/metanoli-seosta, tilavuussuhde lrl.
1.4 Silikaeeeliadsorbentin reeenerointi
Adsorbentin läpi ajetaan 15 1 metanolia ja sitten 15 - 20 1 de-ionisoitua vettä. Sitten adsorbentti kuivataan uunilla 6 h 105 °C:ssa ja sitten 18 h 160 - 165 °C:ssa. Lopuksi uudelleen aktivoitu adsorbentti dispergoidaan 15 Iraan petrolieetteriä ilman kanssa kontaktin estämiseksi.
1.5. Naudan aivojen CLSrien pakastekuivaus
Edeltävä eluaatti 1 konsentroidaan täysin kuivaksi 50 - 75 “Crssa 50 - 100-1 pyörötyhjiöhaihduttimessa. Sitten CLSrien läpi puhalletaan typpivirta 12 - 24 h ajan ympäristön lämpötilassa kaikkien jäännösliuottimien poistamiseksi. Liuottimistaan vapaat lipidit homogenisoidaan sitten tislatussa vedessä (5 kg vettä 1 kgraan CLSriä) 40 - 45 “Crssa, minkä jälkeen muoodos-tunut emulsio levitetään 1 - 1,5 cm paksuiksi kerroksiksi ruostumattomille teräslevyille. Sitten emulsio jäädytetään -40 “Creen ja pakastekuivataan. Näin saadaan 1,45 kg CLSriä.
1.6 NLSrien talteenotto
Eluaatti 2 konsentroidaan kuiviin kuten kappaleessa 1.5. Liuottimen poistamisen jälkeen kuten l.Srssä saadaan 0,43 kg NLSriä.
13 931 23 1.7 Naudan aivojen PLS:ien ja GLS:ien erotus
Kappaleessa 1.5 kuvatulla tavalla valmistetut naudan aivojen CLS:t liuotetaan kloroformi/metanoli-seokseen, tilavuussuhde 4:1, suhteessa 1 g lipidejä/5 g liuotinseosta. Lipidien liukenemista nopeutetaan sonikoimalla 40 - 50 °C:ssa, minkä jälkeen kaikki hiukkaset poistetaan suodattamalla liuos Buchner-suodattimena.
Käytetty lasiadsorptiopylväs, joka on 30 cm pitkä, ja jolla on sisähalkaisija 5 cm, käsittää kaksi huokoslasisuodatinta, joiden huokoisuus on 100 - 160 nm ja läpityönnettävä sovitin, jolla pylvään korkeutta voidaan säätää välillä 15 - 30 cm. Pylväs yhdistetään matalapainepumppuun (1-2 bar), jolla voidaan lisätä 3 eri eluointiliuosta 3-tieventtiilin kautta nopeuksilla 0-60 ml/min. 150 g boorihappogeeliä suspendoidaan 1000 mlraan tetrahydrofuraania, ja suspensio kaadetaan pylvääseen toisiaan seuraavina erinä, ja ylimääräinen liuotin saa virrata pois painovoimalla. Läpityönnettävä sovitin säädetään kerroskorkeuteen 20 - 22 cm. Pylväs pestään ennen käyttöä 3 kerrostilavuudella (1200 - 1300 ml) deionisoitua vettä nopeudella 30 - 50 ml/min, ja sitten yhdellä kerrostilavuudella 0,5 N suolahappoa, ja sitten 3 kerrostilavuudella tai yli deionisoitua vettä neutraaliin pH-arvoon, 3 kerrostilavuudella metanolia, ja lopuksi 3 kerros-tilavuudella kloroformi/metanoli-seosta, tilavuussuhde 2:1.
Pylväs esipestään 20 ml:lla kloroformi/metanoli-seosta, tilavuussuhde 4:1, nopeudella 20 ml/min. Sitten pylvääseen lisätään naudan aivojen CLS:ien näyte, ts. 30 g lipidejä/150 g kloroformi/metanoli-seosta, tilavuusssuhde 4:1, samalla nopeudella, ja sitten 20 ml kloroformi/metanoli-seosta, tilavuussuhde 4:1.
PLS: t ja plasmalogeenit eluoidaan pylväästä 3 kerrost-ilavuudel - * la (1200 - 1300 ml) kloroformi/metanoli-seosta, tilavuussuhde 2:1, nopeudella 50 ml/min. Kaiken, esimerkiksi keramidiheksosi-dit, gangliosidit ja sulfatidit käsittävän GLS:n eluoimiseksi käytetään tetrahydrofuraani/vesi-seosta, tilavuussuhde 4:1, samalla nopeudella kuin PLS:ille.
• · „ 93123 1.8. Boorihappogeelipvlvään linjassa tapahtuva regenerointi
Boorihappogeelipylväs regeneroidaan jokaisen eluutiosyklin jälkeen käyttämällä 3 kerrostilavuutta kloroformi/metanoli-seosta, tilavuussuhde 2:1, nopeudella 60 ml/min geelin dehydrateimisek-si.
1.9. Naudan aivojen PLS:ien ja GLS:ien eristäminen PLS:t sisältävä jae konsentroidaan kuiviin tyhjiössä 65 - 70 °C:ssa ja pakastekuivataan edellä kuvatulla tavalla (kappaleessa 1.5). Näin saadaan 950 - 970 g valkoista, hygroskooppista jauhetta, joka on täysin hajutonta.
GLS:t sisältävä jae konsentroidaan tyhjiössä 70 - 75 °C:ssa kunnes tetrahydrofuraani on täysin poistettu, ja jäännös otetaan .deionisoituun veteen tilavuuteen 2500 ml. Homogenisoinnin jälkeen glykolipidit sisältävä emulsio pakastekuivataan edellä kuvatulla tavalla. Saadaan 430 - 490 g hajutonta valkoista jauhetta.
ESIMERKKI 2 2.1. Laktoosittoman kirnupiimän lipidien uutto
Tuoreesta kirnupiimästä poistetaan laktoosi diasuodatuksella ja kuivataan sitten spaykuivauksell a. Saa dulla kirnupiimä-: jauheella on seuraava koostumus: % kosteus 2,5 (mitattuna 2 h jälkeen uunissa 102 °C:ssa) rasvat 52,9 (Mojonnierin menetelmä) ♦ proteiinit 29,7 (N x 6,38) laktoosi 3,1 (entsymaattisesti määritetty) tuhka 6,8 is 93123
Sitten 80 kg kimupiimäjauhetta dispergoidaan homogenisaattoria käyttäen 450 1:aan asetonia 20 - 22 °C:ssa. Rasvat uutetaan la-pasekoittimella varustetussa umpinaisessa reaktorissa sekoittaen nopeudella.120 - 250 r/min. Uuuttolämpötila pidetään 20 -22 °C:ssa noin 20 min, minkä jälkeen dispersio suodatetaan tankissa, joka on varustettu 1-vaihepaperisuodattimella. Suodatti-meen jääneet kiinteät hiukkaset pestään toisella 300-1 asetoni-erällä 20 - 22 °C:ssa. Yhdistetyt suodokset kuivataan sitten haihduttamalla tyhjiössä ja kerätään 26 kg neutraaleja kirnu-piimälipidejä. Sitten suodatustankkiin jääneen rasvattoman kir-nypiimäjäännöksen läpi puhalletaan typpeä 35 - 40 °C:ssa 2 h liuottimen poistamiseksi.
Sitten tämä 53 - 55-kg rasvaton ja liuottimeton kixmipiimäkiin-toaine dispergoidaan 560 l:aan metanolia nopeudella 10000 r/min pyörivässä homogenisaattorissa, minkä jälkeen lipidien uuttoa jatketaan 20 - 30 min 60 - 62 °C:ssa kaksoisseinäisessä reaktorissa. Sitten dispersio suodatetaan umpinaiseen kal:soisseinäi-seen tankkiin järjestetyllä paperisuodattimella paineessa 1,5 - 2,5 bar, minkä jälkeen suodattimeen jääneet kiinteät hiukkaset poistetaan 80 1:11a kuumaa metanolia. Metanolinen suodos konsentroidaan tilavuuteen 40 - 45 1, ja metanolijäännös haihdutetaan atseotrooppisella tislauksella 100 - 150 1:11a petrolieet-teriä, joka muodostaa metanolin kanssa atseotrooppisen seoksen välillä 60 ja 90 °C.
2.2. Kirnupiimän CLS:ien erotus
Edellä kohdassa 2.1 saadun konsentraatin tilavuus säädetään petrolieetterillä 100 l:ksi, minkä jälkeen liuos saa seistä 48 h ympäristön lämpötilassa. Kaikki muodostunut saostuma poiste-;; taan suodattamalla, minkä jälkeen kirkastunut petrolieetteri- kerros ajetaan 100 cm pitkän pylvään läpi, jonka sisähalkaisija on 35 cm, ja joka sisältää 26 kg (vastaten yhtä kerrostilavuutta, noin 65 1) silikageeliä, kuten kuvattiin edellä esimerkin 1 kappaleessa 3. Kaikki CLS:t eluoidaan 65 - 70 1:11a petrolieet-teriä (eluaatti 1), kun taas adsorboituneet lipidit, desorboi- I* 93123 daan 80 1:11a kloroformi/metanoli-seosta, tilavuussuhde 1:1 (eluaatti 2). Eluaatti 1 konsentroidaan kuiviin tyhjiössä, dis-pergoidaan deionisoituun veteen ja pakastekuivataan sitten esimerkin 1 kappaleessa 5 kuvatulla tavalla. Näin saadaan 10,2 kg CLS:iä. Eluaatti 2 konsentroidaan kuiviin, jolloin saadaan 5,1 kg jäännös-NLS:iä.
2.3 Kirnupiimän PLS:ien ja GLS:ien erotus 600-g näyte kirnupiimän CLS:iä, joka on saatu edellä kappaleessa 2.2 kuvatulla tavalla, ajetaan boorihappogeelipylvään läpi, ja sitten PLS:t erotetaan GL3:istä samalla tavalla kuin kuvattiin esimerkin 1 kappaleessa 7. Kuiviin haihduttamisen ja pa-kastekuivauksen jälkeen, kuten kuvattiin edellä esimerkin 1 kappaleessa 1.9, saadaan 365 g kirnupiimän PLS:iä vaikeahkona, hajuttomana jauheena.
2.4 Kirnupiimän GLS:ien puhdistus GLS:t sisältävä jae konsentroidaan tyhjiössä tetrahydrofuraanin täydellisesti poistamiseksi, kuten kuvattiin esimerkin 1 kappaleessa 1.9, minkä jälkeen jäännös otetaan deionisoituun veteen tilavuuteen 800 ml. Sitten GLS:ien vesiliuos dialysoidaan deio-nisoitua vettä vastaan 4 °C:ssa 24 h käyttäen dialyysimembraa-nia, jonka molekyylipainoleikkausraja on 3500 daltonia. Sitten GLS:ien liuos pakastekuivataan, jolloin saadaan 160 g valkoista « puhdistettujen GLS:ien jauhetta, joka sisältää alle 1 % vapaata laktoosia. Kuivauksen jälkeen dialysaatin paino on 75 g.
ESIMERKKI 3 3.1. Härän luuytimen CL5:ien eristys - 10 kg äskettäin homogenisoitua härän luuydintä pakastekuivataan ja saatu kuiva aine, 1,6 - 1,7 kg, dispergoidaan 50 l:aan dik-loorimetaani/metanoli-liuotinseosta, tilavuussuhde 2:1, 20 - 22 °C:ssa. Härän luuytimen TLS:t uutetaan umpinaisessa reaktorissa kuten esimerkin 1 kappaleessa 1. Suodatuksen ja liuotinseoksen 17 93123 poistamisen jälkeen kuten esimerkin 1 kappaleessa 2 saadaan 0,65 kg TLS:iä, ja liuotetaan sitten uudelleen 2,5 l:aan hek-saania ja saatava liuos ajetaan 40 cm pitkän lasipylvään läpi, jolla pylväällä on sisähalkaisija 10 cm, ja joka on täytetty 750 g:lla silikageeliä, esimerkissä 1 kuvatulla tavalla.
CLS:t eluoidaan 2 1:11a heksaania, kun taas NLS:t desorboidaan ajamalla pylvään läpi 2 1 kloroformi/metanoli-seosta, tilavuus-suhde 2:1. CLS:t pakastekuivataan esimerkin 1 kappaleessa 5 kuvatulla tavalla, jolloin saadaan 430 g valkoista, hygroskooppista, hajutonta jauhetta.
3.2 Härän luuytimen GLS.-ien ja PLS:ien erotus ja eristys
Edellä olevat 430 g härän luuytimen CLS:t liuotetaan 2150 g:aan kloroformi/metanoli-liuotinseosta, tilavuussuhde 4:1, kuten esimerkin 1 kappaleessa 7. CLS:t erotetaan PLS- ja GLS-jakeikseen kuten 1.7:ssä kuvataan, 30 g lipidejä/150 g liuotinta, ja boorihappogeelipylväs regeneroidaan kunkin eluoinnin jälkeen käyttäen 3 kerrostilavuutta kloroformi/metanoli-seosta, tilavuussuhde 2:1, kuten 1.8:ssa. Sitten eluoidut ja desorboi-dut jakeet konsentroidaan ja pakastekuivataan kuten 1.9:ssä, jolloin saadaan 274 g PLS:iä ja 150 g GLS:iä hajuttomina, valkoisina jauheina.
ESIMERKKI 4 4.1 Naudan aivojen GLS:ien erotus liuot-timella 60 g esimerkin 1 kappaleen 9 tavalla valmistettuja naudan aivojen GLS:iä dispergoidaan liuotinseokseen, joka koostuu 3200 ml:sta kloroformia ja 1600 ml:sta metanolia kapasiteetiltaan ; 10-litraisessa, 2-seinäisessä dekantointiastiassa, jonka ylä- ‘ ' osaan on järjestetty akselisekoitin. Sekoittimen akselille on järjestetty kaksi lapaa toisistaan erilleen niin, että vain alempi lapa on upotettu liuottimeen. GLS:ien liuoksen lämpötila nostetaan tasaisesti 50 °C:een, minkä jälkeen lisätään 1200 ml 88-% KCl:n vesiliuosta, jolloin sekoittimen ylempi lapa uppoaa • « 18 931 23 nesteeseen. Sekoittimen nopeutta lasketaan alkunpeudesta 300 -600 r/min nopeuteen 5 - 10 r/min, ja dekantointiastian kuumennus lopetetaan 15 min kuluttua. Muodostuu 2 kerrosta, joita molempia sekoitetaan edelleen yhdellä lavoista. 8 - 12 h kuluttua havaitaan täydellinen gangliosidien erottuminen muista GLS:istä, kun ylempi gangliosidit sisältävä vesikerros ja alempi muut GLS:t sisältävä kerros tulevat kirkkaiksi. Alemman kerroksen annetaan virrata dekantointiastiasta painovoimalla, ja yläkerros kerätään erikseen talteen. Alakerroksen muut GLS:t koostuvat monogalaktosyylikeramideista ja -sulfatideista.
4.2 GLS:ien kerrosten eristys
Alempi kerros, joka sisältää kaikki sulfatidit ja neutraalit GLS:t (monogalaktosyylikeramidit) konsentroidaan kuiviin tyhjiössä 65 - 75 °C:ssa ja pakastekuivataan sitten esimerkin 1 kappaleessa 9 kuvatulla tavalla. Lopputuote on tahrattoman valkoinen jauhe, joka koostuu 49 g:sta puhtaita GLS:iä (monogalak-tosyylikeramideja ja -sulfatideja). Ylempi kerros konsentroidaan tyhjiössä 65 - 70 °C:ssa orgaanisten liuottimien täydellisesti haihduttamiseksi, joiden liuottimien alkytilavuutta pienennetään 2400 ml:11a 300 - 600 ml:aan kirkasta liuosta. Sitten vesiliuos dialysoidaan kuten esimerkin 2 kappaleessa 4, jonka jälkeen konsentroitu yläkerros pakastekuivataan esimerkin 1 kappaleessa 9 kuvatulla tavalla. Lopputuote en 5,1 g hajuton-.ta, tahrattoman puhdasta jauhetta, joka sisältää naudan aivojen tyypilliset gangliosidit, kuten seuraavaksi luetellaan Svenner-holmin ja Holmgrenin lyhenteitä käyttäen:
NeuAca2-> 3 GalCl-> 3 GalNAcfil-> 4 [NeuAca2 -> 3JGalfil-> Glc-> Cer (GDla), NeuAca2-> 8 NeuAca2-> 3 6alfil-> 4Glc-> Cer (GD3), NeuAca2-> 3 GalBl-> 3 Gal NAcBl-> 4[NeuAca2-> 8 NeuAca2-> 3] : GalBl-> 4 Glc-> Cer (GTlb) ja Galfil -> 3 Gal NAcBl-> 4 [NeuAca2-> 3] GalBl-> 4 Glc-> Cer (GM15.
ESIMERKKI 5
Kirnupiimän GLS:ien erotus » 19 93123
Esimerkin 2 kappaleen 4 tavalla eristetyt kirnupiimän GLS:t erotetaan esimerkin 4 uuttoprosessia käyttäen. Gangliosidit sisältävä yläkerros konsentroidaan tyhjiössä 65 - 70 °C:ssa kunnes orgaaniset liuottimet kloroformi ja metanoli on haihdutettu täysin, alkutilavuuden 2400 ml pienentyessä 300 - 600 ml:aan. Vesipitoista konsentraattia dialysoidaan 24 h 4 °C:ssa deionisoitua vettä vastaan esimerkin 2 kappaleessa 4 kuvatulla tavalla. Lopputuote on tahraton jauhe, 4,8 g, joka koostuu olennaisesti kirnupiimälle tyypillisistä gengliosideista kuten GDa:sta (edustaa noin 60 %:ia), GMi :stä (selitetty esimerkissä 4.2) ja NeuAc a 2 -> 3 Gale 1 -> 4 Glc -> Cerrstä (Svennerhol-min ja Holmgrenin mukaan GM3). Sen vapaan laktoosin pitoisuus on alle 1 %.
Alakerros konsentroidaan täysin kuivaksi ja pakastekuivataan sitten kuten esimerkin 4 kappaleessa 2. Saadaan 46 g tahratto-man valkoista jauhetta, joka sisältää ainoastaan neutraaleja glykolipidejä, kuten diheksosyyli- ja triheksosyylikeramideja, eikä vapaata laktoosia.
ESIMERKKI 6 6.1 Ihmisen istukan CLS:ien erotus
Ihmisen istukkaa uutetaan isopropyylieetteri/isopropanoli-liuo-tinseoksella, tilavuussuhde 3:2, ja sonikoidaan sitten heksaa-nissa 55 - 60 °C:ssa (400 W/100 g istukkaa 350 ml:ssa heksaa-nia) kunnes alunperin samea liuos kirkastuu. 30-cm lasipylväs, jonka sisähalkaisija on 5,5 cm, ja johon on järjestetty suodatin huokoisesta lasista, täytetään 100 g:11a 0,21 - 0,062 mm (70 - 230 mesh) silikageelihiukkasilla, jotka on aktivoitu etukäteen 15 h 160 - 165 °C:ssa, ja dispergoitu sitten heksaaniin.
Sitten näyte ajetaan pylvään läpi 50 °C:ssa, minkä jälkeen CLS:ien eluointi suoritetaan 400 - 500 ml :11a heksaania (eluaatti 1).
NLS:t (eluaatti) desorboidaan pylväästä käyttäen 500 ml kloro- • · 20 931 23 formi/metanoli-liuotinseosta, tilavuussuhde 1:1. Eluaattien 1 ja 2 konsentroinnilla kuiviin tyhjiössä saadaan 55,3 g CLS:iä ja 44,7 g NLS:iä.
»/ CLS:t sisältävällä jakeella on etuna, ettei se sisällä estrogeenejä, jotka tavallisesti seuraavat CLS:iä käytettäessä tavanomaisia liuotinseoksiin perustuvia uutto- ja erotusmenetelmiä.
Pylvän regeneroimiseksi adsorbentin läpi ajetaaan 250 ml meta-nolia ja sitten 1000 ml deionisoitua vettä, minkä jälkeen seuraa edellä kuvattu aktivointi lämmössä.
6.2. Ihmisen istukan PLS:ien ja GLS:ien eristys 30 cm pitkä lasipylväs, jonka sisähalkai3ija on 5,5 cm, ja johon on järjestetty suodatin huokoisesta lasista, täytetään 100 g:11a boorihappogeeliä. Kloroformi/metanoli-liuotinseokseen, tilavuussuhde 2:1, suspendoitu geeli täytetään noin 1-cm kvart- ' sihiekkakerroksella. Sitten adsorbentti pestään vaiheittain 3 kerrostilavuudella metanolia, 3 kerrostilavuudella deionisoitua vettä, 1 kerrostilavuudella 0,5 N HC1-liuosta ja sitten 10 kerrostilavuudella deionisoitua vettä neutraaliin pH-arvoon, ja geeli muutetaan lipofiiliseen muotoon käyttäen 3 kerrostila-vuutta metanolia ja sitten 3 kerrostilavuutta kloroformi/meta-noli-liuotinseosta, tilavuussuhde 2:1.
15 g kohdassa 6.1 kuvatulla tavalla saatuja ihmisen istukan CLS:iä liuotettuna 60 ml:ssa kloroformi/metanoli-liuotinseok-sessa, tilavuussuhde 2:1, ajetaan pylvään läpi. Eluaatin (eluaatti 1) konsentroinnin jälkeen kuiviin tyhjiössä saadaan 14 g PLS:iä. GLS:t (eluaatti 2) desorboidaan pylväästä käyttäen 600 ml tetrahydrofuraani/vesi-liuotinseosta, tilavuussuhde 4:1.
Pylvään regeneroinnin jälkeen 600 ml:11a kloroformi/metanoli-seosta, tilavuussuhde 2:1, minkä jälkeen ajetaan toinen 15-g ihmisen istukan CLS:ien näyte, pylväs regeneroidaan, ja lopulta, ajetaan kolmas 15-g ihmisen istukan CLS:ien näyte, PLS:ien 21 93123 jakeet (eluaatti 1) yhdistetään, liuottimet poistetaan täysin kuiviin ja kerätään 40 - 42 g ihmisen istukan PLS:iä. Kun yhdistetyt eluaatit 2 on konsentroitu kuiviin, jäännös suspendoi-daan uudelleen veteen sonikoimalla 50 °C:ssa ja, pakastekui-vauksen jälkeen, saadaan 3 g ihmisen istukan GLS:iä.
ESIMERKKI 7
Soijan fytoglvkolipidien eristys 25 g kaupallisesti saatavaa luonnollista soijan lesitiiniä liuotetaan 75 ml:aan kloroformi/metanoli-liuotinseosta, tilavuussuhde 4:1, ja muodostuva liuos ajetaan esimerkin 6 kappaleessa 2 kuvatun boorihappogeelipylvään läpi. Näin saadaan 22,7 g NLS:ien ja PLS:ien seosta ja 2,3 g jaetta, joka sisältää fy-toglykolipidit ja vapaat sokerit. Dialysoimalla ja konsentroimalla kuten esimerkin 2 kappaleessa 4 saadaan 1,4 g (4 %) soijan fytolipidejä vapaana vapaasta sokerista.
ESIMERKKI 8
Soijan PLS:ien ja fvtoglvkolipidien erotus 40-g jae, joka sisältää NLS:t ja 60-g jae, joka sisältää CLS:t, erotetaan 100 g:sta kaupallisesti saatavaa luonnollista soijan lesitiiniä kuten esimerkin 1 kappaleessa 3.
CLS:s sisältävä jae liuotetaan uudelleen sonikoimalla 40 °C:ssa 200 ml:aan di-isopropyylieetteri/isopropanoli-liuotinseosta, tilavuussuhde 3:2, ja saatava liuos ajetaan peräkkäisinä 15-g panoksina pylvään läpi - 30 cm pitkä, ja 5,5 cm sisähalkaisija - boorihappogeeliä dispergoituna di-isopropyylieettex-i/isopro-panoli-liuotinseokseen. PLS:t sisältävät jakeet eluoidaan käyttämällä 2 kerrostilavuutta di-isopropyylieetteri/isopropanoli-liuotinseosta, tilavuussuhde 3:2, ja sitten 1 kerrostilavuus isopropanolia.
Fytoglykolipidit sisältävät jakeet desorboidaan pylväästä 3 kerrostilavuudella tetrahydrofuraani/vesi-liuotinseosta, tila- > · 22 931 23 vuussuhde 4:1, esimerkin 6 kappaleessa 2 kuvatulla tavalla. Ad-sorbentti regeneroidaan kunkin syklin jälkeen käyttämällä 1 kerrostilavuus isopropanolia ja sitten 2 kerrostilavuutta di-isopropyylieetteri/isopropanoli-liuotinseosta, tilavuussuhde 3:2.
Yhdistetyt PLS:ien jakeet toisaalta ja fytoglykolipidit toisaalta kerätään erikseen ja konsentroidaan tyhjiössä, jolloin saadaan 40 g PLS:iä ja 20 g fytoglykolipidejä.
Näin valmistetuissa PLS:issä on merkittävää, että niissä ei ole yhdisteitä, joita luonnollisesti on soijalesitiineissä, ja jotka saattavat aiheuttaa ei-toivottuja sivuvaikutuksia.
Ne ovat verrattavissa munanvalkuaisen lesitiineihin, joissa on vähän glykolipidejä ja vapaita sokereja, mikä tekee ne kiinnos-
J
taviksi patenteraalisten, ihmisen kehon hyvin sietämien emulsioiden valmistamiseen.
i ESIMERKKI 9 9.1 Marsun suolen PLS :ien ja QLS:ien erotus 7,86 g marsun suolia pestään vaiheittain 2 x 80 ml :11a kloro-formi/metanoli-liuotinseoksella, tilavuussuhde 1:2, homogeni-saatti sentrifugoidaan 2500 g:llä, ja kirkas supei'natantti konsentroidaan kuiviin tyhjiössä.
Saadut 290 mg raakalipidejä liuotetaan sonikoimalla 10 ml:aan tetrahydrofuraania, liuos sentrifugoigaan 2500 g:llä ja konsentroidaan sitten kuiviin, jolloin saadaan 250 mg TLS:iä.
NLS:t poistetaan kuten sterolit, vapaat rasvahapot ja triglyse-ridit liuottamalla TLS:t sonikoimalla 2x2,5 ml:aan heksaania ja ajamalla liuos 10 cm pitkän lasipylvään läpi, jolla on sisä-halkaisija 1 cm, ja joka on täytetty 0,21 - 0,062 mm (70 - 230 mesh) aktivoiduilla silikageelihiukkasilla. Näin eluoidaan 190 mg CLS:iä kvantitatiivisesti 25 ml:11a heksaania. 57 mg NLS:iä desorboidaan pylväästä 3 kerrostilavuudella kloroformi/metano- 23 93123 li-liuosseosta, tilavuussuhde 2:1. Sitten CLS:t erotetaan 143 mgrksi PLS:iä ja 47 mg:ksi GLS:iä edellä esimerkin 1 kappaleessa 7 kuvatulla tavalla. Dialysoimalla deionisoitua vettä vas- r taan ja lyofilisoimalla saadaan 16,6 mg pyhdasta GLSrien jaet-ta, jossa ei ole vapaita sokereita.
9.2 Marsun suolen PLS:ien erotus NPLS:ksi ja APLS.-ksi ioninvaihdolla 8,5 ml nopeasti läpipäästävää dietyyliaminoetyylisefaroosigee-liä suspendoidaan etanoliin ja 10 cm pitkä lasipylväs, jonka sisähalkaisija on 1,15 cm, täytetään saadulla suspensiolla. Sitten geeli pestään 30 ml:11a deionisoitua vettä, muutetaan asetaattimuotoon 20 ml :11a 2 M natriumasetaatin vesiliuosta ja pestään vaiheittain 30 ml:11a deionisoitua vettä, 10 ml:11a me-tanolia ja lopuksi 10 ml:11a kloroformi/metanoli-liuotinseosta, tilavuussuhde 2:1. Geeli peitetään 7 - 10 mm paksulla kvartsi-hiekkakerroksella. 143-mg marsun suolen PLS:ien näyte ajetaan pylvään läpi, minkä jälkeen ei-happamat PLS:t eluoidaan vaiheittain 2x2 ml:11a ja sitten 10 ml :11a kloroformi/metanoli-liuotinseosta, tilavuussuhde 2:1, ja lopuksi 5 ml :11a metano-lia. Pidetään yllä pientä painetta eluoinnin nopeuttamiseksi. Liuottimien poistamisella kuiviin tyhjiössä saadaan 107 mg NPLS:iä.
Pylvääseen jääneiden happamien PLS:ien desox-boimiseksi pylvään läpi ajetaan 15 ml kloroformin, metanolin ja 0,8 M natriumasetaatin vesiliuoksen liuotinseosta (30:60:8). Happaman jakeen kuiviin konsentroimisen ja uudelleen liuotuksen jälkeen soni-koimalla 2x1 ml:aan kloroformi/metanoli-liuotinseokseen, tilavuussuhde 2:1, suolat poistetaan 10 cm pitkässä lasipylvääs-sä, jonka sisähalkaisija on 1,15 cm, ja joka on täytetty 4 ml:11a Sephadex G-25-geeliä kloroformi/metanoli/vesi-liuotin-seoksessa, tilavuussuhde 60:30:4,5, pitäen pylvään pienessä paineessa. Liuottimien poistamisella kuiviin alipaineessa saadaan 35 mg APLS:iä. Ioninvaihtopylväs regeneroidaan jokaisen syklin jälkeen käyttäen 1 kerrostilavuus metanolia ja sitten 2 • « 24 931 23 kexxostilavuutta kloroformi/metanoli-liuosseosta, tilavuussuhde 2:1.
NPL-jae käsittää tyypillisesti fosfatidyylikoliinia, fosfati-dyylietanoliamiinia ja sfingomyeliiniä.
APL-jae käsittää tyypillisesti fosfatidyyli-inositolia, fosfa-tidyyliseriiniä, fosfatidihappoa ja kardiolipiiniä.
9.3 Marsun suolen GLS:ien erotus NGLS:ksi ja AGLS:ksi NGL- ja AGL-jakeet erotetaan edellä kappaleessa 9.2 kuvatulla tavalla. Edellä olevasta 16,6 mg:sta (kappale 9.1) saadaan 11,9 mg NGLS:iä ja 4,5 mg AGLS:iä.
Saadut NGLSrt ovat tyypillisesti keramidiheksosideja ja glyko7 glyserolipidejä.
Saadut AGLSrt ovat tyypillisesti sulfatisoituja, hematosideja ' ja gangliosideja.
ESIMERKKI IQ
10.1 Naudan aivojen TLS:ien uuton muunnelma 8 kg naudan sparaykuivattua, jauhemaista aivoa homogenisoidaan ympäristön lämpötilassa 45 kg:ssa heksaania kolloidimyllyssä, minkä jälkeen uuttamista jatketaan 60 °C:ssa umpinaisessa reaktorissa, johon on järjestetty lapasekoittimia, jotka pyörivät nopeudella 250 r/min.
30-min uuttamisen jälkeen suspensio saa seistä 1 - 2 h erillisessä astiassa. Supernatanttikerros kerätään dekantoimalla, ja kerrostunut kiinteä aine uutetaan uudelleen toisella 30 kg:11a heksaania.
Toinen uutto saa seistä 1 - 2 h, supernatanttikerros otetaan talteen dekantoimalla ja yhdistetään sitten edeltävän superna- 25 93123 tanttikerroksen kanssa. 24 - 48 h seisomisen jälkeen ympäristön lämpötilassa yhdistetyt supematantit antavat läpikuultavan nestekerroksen, josta kiinteä jäännös erotetaan varovaisesti • / dekantoimalla.
Sitten nestekerros esikonsentroidaan 66 - 70 °C:ssa 12 - 15 %:iin alkutilavuudestaan haihduttamalla tyhjiössä, minkä jälkeen esikonsentraatti laimennetaan samalla tilavuudella tislattua vettä. Liuotin poistetaan tislaamalla 68 - 70 °C:ssa ja saatu emulsio homogenisoidaan, jäädytetään -40 °C:een ja sitten pakastekuivataan. Näin saadaan 3,32 kg naudan aivojen TLS:iä hajuttomana, hygroskooppisena, beigen värisenä jauheena, jolla on seuraava koostumus: % kolesteroli 25 - 27 CLS:t käsittäen 73-75 , PLS:iä 50 - 53 GLSriä käsittäen 20 - 23 neutraali-GLS;iä ja sulfatideja 15 - 18 gangliosideja 1,5 - 1,8 10.2 Naudan aivojen CLS:ien ja NLS:ien erotuksen muunnelma 8 kg naudan aivoja käsitellään nestekerroksen esikonsentroin-tiin asti kappaleessa 10.2 kuvatulla tavalla. Konsentraatti ... heksaanissa sisältää 3,3 kg TLS:iä. Valmistetaan hienojakoinen dispersio sonikoimalla, ja tämä ajetaan esimerkin 1 kappaleessa 3 kuvatun tyyppisen pylvään läpi, joka on täytetty 3,3 - 3,5 kg:11a silikageeliä. Sitten CLS:t eluoidaan 20 - 25 1:11a hek-saania ja eluaatti esikonsentroidaan 12 - 15 %:iin alkuperäisestä painostaan haihduttamalla heksaani tyhjiössä. Laimennuk-:* sen jälkeen samalla painolla vettä emulsio käsitellään edellä * kohdassa 10.1 kuvatulla tavalla, jolloin saadaan 2,45 kg CLS:iä, jotka sisältävät: % PLS:iä 70 - 73 GLS:iä sisältäen 25 - 28 26 93123 neutraaleja GLS:iä ia sulfatideja 20-25 gangliosideja 2-3 NLS:t desorboidäan pylväästä 2 kerrostilavuudella kloroformi/-metanoli-seosta, tilavuussuhde 2:1, minkä jälkeen eluaatti konsentroidaan 5 %:iin alkuperäisestä painostaan haihduttamalla tyhjiössä. Laimennuksen jälkeen 5 1:11a heksaania NLS:ien liuos konsentroidaan kuiviin, jolloin saadaan 0,88 kg keltaista jauhetta, jossa on yli 95 % kolesterolia.
ESIMERKKI 11 11.1 Kirnupiimän CLS:ien erotuksen muunnelma
Ei-happamast kirnupiimästä poistetaan kaseiini ja laktoosi dia-suodattamalla ja kuivataan sitten spraykuivauksella.
. f
Saadulla kirnupiimäjauheella on seuraava koostumus: % kosteus (2 h jälkeen uunissa 102 °C:ssa) 3,22 kiintoaine yhteensä, käsittäen 96,78 lipidit yhteensä (Mojonnierin menetelmä) 61,24 proteiinit (N x 6,38) 32,43 laktoosi (entsymaattisesti määritetty) 1,24 tuhka 1,87 ; 100 g tätä jauhetta homogenisoidaan kahdesti 500 ml:11a heksa- noli/metanoli-seosta, tilavuussuhde 94:6, 1 min ajan 50 °C:ssa kolloidimyllyssä. Homogenisaattia sentrifugoidaan kummankin ho-mogenisoinnin jälkeen 2 min 1500 g:llä.
Sitten supematanttikerros konsentroidaan kuiviin tyhjiössä 65 °C:ssa, jolloin saadaan 65,2 g TLS:iä, jotka jäävät nestemäiseksi johtuen niiden suuresta voiöljyn %-osuudesta (70 - 75 %).
TLS:t jäähdytetään 40 °C:een, homogenisoidaan 1,5 - 2 x tilavuudellaan asetonia (90 - 130 ml) kolloidimyllyssä, jätettiin ympäristön lämpötilaan (22 - 24 °C) ja sentrifugoidaan sitten 1 27 9 3 1 23 min 2000 g:llä. Kirkas supernatanttikerros, joka sisältää pääosan NLS:istä ja hajua aiheuttavista yhdisteistä, poistetaan. Kerätty kiinteä jäännös sisältää CLS:t. Se liuotetaan uudelleen heksaaniin ja konsentroidaan sitten tyhjiössä, jolloin saadaan 21,7 g asetoniin liukenematonta materiaalia (AIM).
Tämä materiaali suspendoidaan 3 x tilavuuteensa heksaania, minkä jälkeen CLS:t (80,6 %) erotetaan NLS:istä (19,4 %) nestead-sorptiokromatografiällä käyttäen samaa tilavuutta 3ilikageeliä (10 - 11 g).
Sitten edeltävät kirnupiimän CLS:t (17,5 g) homogenisoidaan 10 x tilavuuteensa tislattua vettä, ja emulsio pakastekuivataan.
11.2 Kirnupiimän CLSsien erotuksen toinen muunnelma 7,84 kirnupiimäjauhetta, jolla on kohdassa 11.1 esitetty koostumus, käsitellään sekoittaen refluksoimalla 90 1:11a heksaa-ni/metanoli-liuotinseosta, tilavuussuhde 94:6. 15 min kuluttua saatu suspensio jäähdytetään 40 °C:een ja ajetaan sitten mik-rosuodattimen läpi, minkä jälkeen suodatin pestään 10 1:11a heksaani/metanoli-seosta, tilavuussuhde 94:6.
Sitten suodos konsentroidaan kuiviin 65 °C:ssa haihduttamalla tyhjiössä, jolloin saadaan 4,57 kg TLS:iä, jotka jäähdytetään 40 °C:een, homogenisoidaan 2 x tilavuudellaan asetonia (10 1) * · « : ja annetaan jäähtyä ympäristön lämpötilaan (22 - 24 °C).
1-3 min sentrifugoinnin jälkeen 1500 g:llä kirkas supernatanttikerros , joka sisältää pääosan NLS:istä ja hajua aiheuttavista yhdisteistä, heitetään pois ja asetoniin liukenematon ,, materiaali (AIM) otetaan 10 l:aan heksaania ja konsentroidaan sitten kuiviin haihduttamalla tyhjiössä. Näin saadaan 1,52 kg AIM:iä AIM:t otetaan 3 - 4 x tilavuuteensa heksaania (6 - 7 1) ja erotetaan sitten CLS:iinsa (1,16 kg) ja NLS:iinsa (0,36 kg) ad- 93123 28 sorptiokxomatografiällä silikageelillä käyttäen noin 1 kg ad-sorbenttia. Eluaatti, joka sisältää CLS:t, otetaan talteen ja kuivataan haihduttamalla typpivirrassa. 5-min homogenisoinnin jälkeen 40 °C:ssa 9 x tilavuutensa kanssa tislattua vettä emulsio kuivataan pakastekuivauksella.
<
Claims (12)
- 93123
- 1. Menetelmä glykolipidien erottamiseksi fosfolipideistä kompleksilipidejä sisältävästä lipidiseoksesta, tunnet -t u siitä, että lipidiseos liuotetaan liuottimeen liuoksen muodostamiseksi, joka johdetaan boorihappogeelin yli niin, että glykolilipidit adsorboituvat geelille ja fosfolipidit kulkevat geelin läpi.
- 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetty lipidiseos on kompleksilipidien seos, joka on saatu neutraalilipidien erotuksen jälkeen silikagee-lillä ja joka sisältää glykolipidit ja fosfolipidit vapaina estrogeeneistä.
- 3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että glykolipidit ajetaan ioninvaihtohartsin läpi happamien glykolipidien erottamiseksi ei-happamista glykolipi-deistä.
- 4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että fosfolipidit ajetaan ioninvaihtohartsin läpi happamien fosfolipidien erottamiseksi ei-happamista fosfolipideistä . * ;*· 5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että lipidiseos on peräisin eläinkudoksen liuotinuutos-ta, erityisesti naudan aivoista, kateenkorvasta tai luuytimes-tä.
- 6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetty lipidiseos on peräisin laktoosittoman kokokirnupiimän liuotinuutosta.
- 7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kirnupiimä käsitellään poolisella liuottimena liuokseen kulkevien neutraalilipidien erottamiseksi, ja kun 3„ 93123 jäännös on otettu talteen ja poolinen liuotin poistettu, jäännös käsitellään hieman poolisella liuottimella ja, kun tämä hieman poolinen liuotin on poistettu, kompleksilipidit sisältävä lipidiseos erotetaan adsorptiokromatografiällä silikageeIillä.
- 8. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kirnupiimä käsitellään ensin hieman poolisella liuottimella ja, kun jäännös on erotettu, liuos otetaan talteen ja liuotin poistetaan konsentraatin saamiseksi, minkä jälkeen konsentraatti käsitellään poolisella liuottimella ja liukenematon jae otetaan talteen, poolinen liuotin poistetaan siitä ja kompleksilipidit sisältävä lipidiseos ex'otetaan adsorptiokromatograf iällä silikageelillä.
- 9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetty lipidiseos on peräisin ihmisen tai eläimen istukasta, tai eläimen suolista.
- 10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetty lipidiseos on luonnollinen soijalesitiini.
- 11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että gangliosidit erotetaan muista glykolipideistä gly-kolipidien liuotinuutolla veden läsnäollessa, gangliosidien esiintyessä vesikerroksessa.
- 12. Jonkin patenttivaatimuksista 1-11 mukaisesti saadun ja-keen käyttö kosmeettisten, ravinto- tai farmaseuttisten formu-laatioiden valmistukseen. « 93123
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH4033/88A CH677494A5 (fi) | 1988-10-28 | 1988-10-28 | |
| CH403388 | 1988-10-28 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI895081A0 FI895081A0 (fi) | 1989-10-26 |
| FI93123B true FI93123B (fi) | 1994-11-15 |
| FI93123C FI93123C (fi) | 1995-02-27 |
Family
ID=4268556
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI895081A FI93123C (fi) | 1988-10-28 | 1989-10-26 | Menetelmä glykolipidien erottamiseksi lipidiseoksesta ja näin saatujen jakeiden käyttö |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5284941A (fi) |
| EP (1) | EP0365868B1 (fi) |
| JP (1) | JP3012259B2 (fi) |
| AR (1) | AR246981A1 (fi) |
| AT (1) | ATE81469T1 (fi) |
| AU (1) | AU621407B2 (fi) |
| CA (1) | CA2000657A1 (fi) |
| CH (1) | CH677494A5 (fi) |
| DE (1) | DE68903209T2 (fi) |
| DK (1) | DK536489A (fi) |
| ES (1) | ES2052855T3 (fi) |
| FI (1) | FI93123C (fi) |
| GR (1) | GR3005986T3 (fi) |
| IE (1) | IE62791B1 (fi) |
| MY (1) | MY104676A (fi) |
| NO (1) | NO170635C (fi) |
| NZ (1) | NZ231170A (fi) |
| PT (1) | PT92133B (fi) |
| ZA (1) | ZA897552B (fi) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2661331A1 (fr) * | 1990-04-30 | 1991-10-31 | Oreal | Composition cosmetique ou dermopharmaceutique contenant des vesicules formees par un melange phospholipides/glycolipides. |
| IT1243340B (it) * | 1990-07-13 | 1994-06-10 | Crinos Industria Farmaco | Metodo per isolare e purificare il monosialoganglioside ad elevato grado di purezza da una miscela lipidica che lo contiene e relativo composto intermedio |
| US6017558A (en) * | 1994-06-17 | 2000-01-25 | Nestec S.A. | Incorporation of a water-soluble active principle in a lipid |
| ES2170079T3 (es) * | 1994-06-17 | 2002-08-01 | Nestle Sa | Incorporacion, en un lipido, de un principio activo hidrosoluble. |
| JPH0851934A (ja) * | 1994-08-10 | 1996-02-27 | Kyodo Nyugyo Kk | 乳化力の強い乳画分の製造法及びその画分を用いた製品 |
| US5532141A (en) * | 1995-06-13 | 1996-07-02 | Holler; Larry D. | Process for obtaining ganglioside lipids |
| JP2002030093A (ja) * | 2000-03-13 | 2002-01-29 | Nof Corp | グリコシルセラミドの精製方法 |
| FR2943893B1 (fr) * | 2009-04-02 | 2011-05-13 | Sojasun Technologies | Procede de fabrication d'un produit laitier a teneur reduite en glucides et enrichi en phospolipides, notamment en choline, proteines et calcium |
| WO2012081508A1 (ja) * | 2010-12-13 | 2012-06-21 | 日本ケミカルリサーチ株式会社 | スフィンゴ糖脂質の定量法 |
| WO2018112165A1 (en) * | 2016-12-14 | 2018-06-21 | University Of Maryland, Baltimore | Methods for lipid extraction and identification of microbes using same via mass spectrometry |
| CN109096327A (zh) * | 2018-08-27 | 2018-12-28 | 大连工业大学 | 一种高纯度蛋黄磷脂酰乙醇胺的制备方法 |
| CN108864179A (zh) * | 2018-08-27 | 2018-11-23 | 大连工业大学 | 一种基于低压柱层析的蛋黄磷脂酰胆碱制备方法 |
| CN110917216A (zh) * | 2019-12-08 | 2020-03-27 | 新疆医科大学 | 一种牛骨髓卵磷脂的制备方法及其应用 |
Family Cites Families (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3687927A (en) * | 1971-06-07 | 1972-08-29 | Diagnostic Data Inc | Orgotein isolation process employing single ion exchange resin having both acidic and basic groups |
| US3930047A (en) * | 1974-03-11 | 1975-12-30 | Dynapol Corp | Fat or oil composition stabilized with polystyrlphenol antioxidant |
| DE2915614A1 (de) * | 1979-04-18 | 1980-10-30 | Guenter Dr Heidemann | Verfahren zur gewinnung von reinen phosphatiden |
| JPS5861463A (ja) * | 1981-10-07 | 1983-04-12 | Kureha Chem Ind Co Ltd | 液体クロマトグラフイ−用担体及び該担体を用いる脂溶性物質の分離精製方法 |
| CH658458A5 (fr) * | 1981-12-17 | 1986-11-14 | Lucchini Lab Sa | Procede pour l'obtention du lacto-n-norhexaosyl ceramide. |
| JPS58137752A (ja) * | 1982-02-09 | 1983-08-16 | Japan Exlan Co Ltd | 液体クロマトグラフイ−用ゲルの再生方法 |
| US4563354A (en) * | 1983-10-26 | 1986-01-07 | Kabivitrum Ab | Oil-in-water emulsion for parenteral administration |
| US4576927A (en) * | 1983-11-25 | 1986-03-18 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Porous adsorbent for adsorbing low density lipoproteins |
| US4552755A (en) * | 1984-05-18 | 1985-11-12 | Minnesota Mining And Manufacturing Company | Substantive moisturizing compositions |
| SU1289440A1 (ru) * | 1985-01-23 | 1987-02-15 | Институт биохимии им.А.В.Палладина | Способ получени фосфолипидов |
| JPH0768135B2 (ja) * | 1985-03-29 | 1995-07-26 | 株式会社ヤクルト本社 | ボツリヌス毒素の中和剤 |
| US4888324A (en) * | 1985-10-01 | 1989-12-19 | Angio-Medical Corporation | Method for enhancing angiogenesis with lipid containing molecules |
| US4879114A (en) * | 1985-12-20 | 1989-11-07 | Angio-Medical Corporation | Lipids from omentum and methods for cosmetic use |
| FR2596988B1 (fr) * | 1986-04-14 | 1990-06-08 | Merieux Inst | Procede de preparation de lipides riches en acides gras polyinsatures a longue chaine |
| FR2609393A1 (fr) * | 1988-02-23 | 1988-07-15 | Serobiologiques Lab Sa | Composition notamment utile comme matiere de base pour la preparation de compositions pharmaceutiques, notamment dermatologiques et/ou cosmetiques comprenant une substance azotee, notamment aminoacides, oligo- ou polypeptides, proteines, et leurs derives, et composition pharmaceutique ou cosmetique ainsi preparee. |
-
1988
- 1988-10-28 CH CH4033/88A patent/CH677494A5/fr not_active IP Right Cessation
-
1989
- 1989-09-30 AT AT89118183T patent/ATE81469T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-09-30 DE DE8989118183T patent/DE68903209T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-09-30 EP EP89118183A patent/EP0365868B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1989-09-30 ES ES89118183T patent/ES2052855T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-10-02 US US07/415,629 patent/US5284941A/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-10-03 IE IE315589A patent/IE62791B1/en not_active IP Right Cessation
- 1989-10-04 ZA ZA897552A patent/ZA897552B/xx unknown
- 1989-10-06 AU AU42633/89A patent/AU621407B2/en not_active Ceased
- 1989-10-13 CA CA002000657A patent/CA2000657A1/en not_active Abandoned
- 1989-10-17 MY MYPI89001429A patent/MY104676A/en unknown
- 1989-10-24 JP JP1277006A patent/JP3012259B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1989-10-26 NZ NZ231170A patent/NZ231170A/xx unknown
- 1989-10-26 FI FI895081A patent/FI93123C/fi not_active IP Right Cessation
- 1989-10-27 PT PT92133A patent/PT92133B/pt not_active IP Right Cessation
- 1989-10-27 NO NO894294A patent/NO170635C/no not_active IP Right Cessation
- 1989-10-27 DK DK536489A patent/DK536489A/da not_active Application Discontinuation
- 1989-10-27 AR AR89315299A patent/AR246981A1/es active
-
1992
- 1992-10-15 GR GR920402231T patent/GR3005986T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0365868A2 (fr) | 1990-05-02 |
| EP0365868A3 (en) | 1990-06-27 |
| DE68903209T2 (de) | 1993-05-06 |
| NO894294D0 (no) | 1989-10-27 |
| CH677494A5 (fi) | 1991-05-31 |
| US5284941A (en) | 1994-02-08 |
| IE62791B1 (en) | 1995-03-08 |
| DK536489D0 (da) | 1989-10-27 |
| NO894294L (no) | 1990-04-30 |
| NO170635B (no) | 1992-08-03 |
| JP3012259B2 (ja) | 2000-02-21 |
| CA2000657A1 (en) | 1990-04-28 |
| NZ231170A (en) | 1990-08-28 |
| JPH02180995A (ja) | 1990-07-13 |
| ZA897552B (en) | 1990-07-25 |
| PT92133B (pt) | 1995-06-30 |
| DE68903209D1 (de) | 1992-11-19 |
| FI93123C (fi) | 1995-02-27 |
| AU621407B2 (en) | 1992-03-12 |
| GR3005986T3 (fi) | 1993-06-07 |
| FI895081A0 (fi) | 1989-10-26 |
| AU4263389A (en) | 1990-05-03 |
| EP0365868B1 (fr) | 1992-10-14 |
| NO170635C (no) | 1992-11-11 |
| DK536489A (da) | 1990-04-29 |
| IE893155A1 (en) | 1991-05-08 |
| ES2052855T3 (es) | 1994-07-16 |
| AR246981A1 (es) | 1994-10-31 |
| ATE81469T1 (de) | 1992-10-15 |
| PT92133A (pt) | 1990-04-30 |
| MY104676A (en) | 1994-05-31 |
| IE893155L (en) | 1990-04-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI93123C (fi) | Menetelmä glykolipidien erottamiseksi lipidiseoksesta ja näin saatujen jakeiden käyttö | |
| AU2007241642B2 (en) | Process for separating lipid materials | |
| Sung et al. | Effect of soybean saponins and gypsophila saponin on morphology of colon carcinoma cells in culture | |
| Palmer | The extraction of acidic phospholipids in organic solvent mixtures containing water | |
| AU675116B2 (en) | Method for extracting sphingomyelin from phospholipid con taining fat concentrate | |
| Rhodes et al. | 695. On the composition of the phospholipids of cows' milk | |
| FI81261C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ett farmaceutiskt medel foer behandling av andnoedssyndrom paokallande av surfaktantbrist. | |
| JPH0347192A (ja) | 乳または乳製品由来のリン脂質画分を分画精製する方法 | |
| Huang et al. | Vesicle properties and health benefits of milk phospholipids: a review | |
| Smith et al. | Isolation of milk phospholipids and determination of their polyunsaturated fatty acids | |
| US3869482A (en) | Method of producing highly purified phosphatides | |
| JP4559836B2 (ja) | 複合脂質高含有素材の製造方法及び複合脂質高含有素材 | |
| JP5261732B2 (ja) | シアル酸含有オリゴ糖の製造方法 | |
| RU2305548C1 (ru) | Способ комплексной переработки плоских морских ежей | |
| WO2007123425A1 (en) | Process for separating lipid materials | |
| JP6951736B2 (ja) | セレブロシドの製造方法及びセレブロシド精製キット | |
| Cerbulis | Lipid and chloroform-methanol-extractable protein content of casein micelles and other milk fractions | |
| Malin et al. | Influence of preparative method on the lipid profiles of bovine fat globule membrane | |
| RU2071337C1 (ru) | Способ получения комплекса фосфолипидов | |
| RU2066198C1 (ru) | Способ получения легочного сурфактанта | |
| JPH05500903A (ja) | 酪農製品からコレステロールを除去する方法 | |
| WO2010026229A1 (en) | Composition richly containing polar lipid and method of manufacturing the same |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: SOCIETE DES PRODUITS NESTLE S.A. |