JP3012259B2

JP3012259B2 - 脂質混合物から糖脂質を分離する方法

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Publication number: JP3012259B2
Application number: JP1277006A
Authority: JP
Inventors: コラーロウラディスラス
Original assignee: ソシエテデプロデユイネツスルソシエテアノニム
Priority date: 1988-10-28
Filing date: 1989-10-24
Publication date: 2000-02-21
Anticipated expiration: 2015-02-21
Also published as: NO894294L; NO170635C; PT92133A; JPH02180995A; DK536489A; FI93123B; NO894294D0; IE893155L; IE893155A1; ES2052855T3; AR246981A1; MY104676A; ATE81469T1; AU621407B2; GR3005986T3; IE62791B1; US5284941A; DE68903209D1; DE68903209T2; CA2000657A1

Description

【発明の詳細な説明】産業上の利用分野本発明は複合脂質（CLS）を含有する脂質混合物から
糖脂質を分離する方法に関する。

従来の技術および発明が解決しようとする課題複合脂質は生物学的組織に広く分布する化学構造体で
あり、これらは中間代謝および脳や肝臓のような、ある
器官の細胞に基本的位置を占める。これらは２つの主な
種類に分けられる、すなわち：無機リン酸塩を加水分解
により生ずる燐脂質（PLS）、例えばホスファチジルコ
リン（PC）、ホスファチジルエタノールアミン（PE）、
ホスファチジルイノシトール（P1）であり、そして基本
構造がスフィンゴシンである糖脂質（GLS）、例えばセ
レブロシド、ヘマトシド、ガングリオシド、モノ−およ
びジガラクトシルジグリセリドのようなグリセロール、
又はステリルグルコシドおよびそのエステルなどのステ
ロールで、少なくとも１個の糖残基を含有する。CLS中
の（GLS）量はPLSよりも一般に３〜10倍小さい。

脳に高濃度で存在する動物GLSは膜の重要な機能性成
分を構成し、膜内輸送、細胞認識、シナプス伝達、細胞
成長、ホルモン固定、酵素、細菌、細菌毒素、悪性腫瘍
変換および他の多くの生物学的機能に含まれる。こうし
てGLSは、例えば薬剤、薬理学、老人医学および化粧品
に使用される。

GLSは生物学的組織から極性溶媒の各種混合液、例え
ばクロロホルム−メタノール、ヘキサン−イソプロパノ
ール、テトラヒドロフラン−水により完全に又は部分抽
出できることが知られている。これらの方法では、これ
らが総脂質（TLS）と呼ばれるように中性脂質（NLS）お
よびPLSの混合物で得られるに過ぎない。別法では、生
物学的組織は最初アセトンにより抽出して大部分のNL
S、例えばトリグリセリド、ステロールおよび遊離脂肪
酸を除去し、その後残留膜脂質は上記極性有機溶媒によ
り抽出する。TLSは各種方法で継続分離できる。もっと
も広く使用される方法はFolchの方法であり、この方法
はクロロホルム、メタノールおよび水の二相溶媒系で、
上部相は大部分のガングリオシドを含有し、GLSは４〜
５個以上の糖残基および微量の酸性PLS（APLS）を含有
し、そして下部層は大部分のPLS、セラミド、ステリル
グルコシド、セラミドモノ−、ジ−、およびトリヘキソ
シドおよびすべての非極性脂質、例えばトリグリセリド
を含有する、これら２相に集めることを含む。しかし、
脂質の分離は、例えばヘマトシドが両相に見出されるよ
うにすっきりしない。

NLSとCLSの１つの既知大規模分離方法はヘキサンとエ
タノール混液の使用に基づく、他の方法は液体クロマト
グラフィを使用するが不適当な能力、例えば30mg脂質/g
シリカゲルの不利を伴なう。特許出願DE2915614号明細
書に記載のきわめて魅力的方法はシリカゲル上でTLSをN
LSおよびPLSに分離することを含む。しかし、他のCLS、
例えばガングリオシド又はGLSについて全く記載がな
い。この方法ではNLSは炭化水素に可溶性であるTLSの部
分として、これらの溶媒中でミセル形成するPLSに対し
規定される。ミセルを形成する脂質のみがシリカゲルか
ら自由に溶離し、一方NLSは吸着して残留する。

しかし、この方法は不利を伴なう。実際に、多くのGL
Sは炭化水素の存在で自然にミセルを形成しない。その
結果、炭化水素中で不溶性固体粒子を形成し、NLSを吸
着するシリカゲルカラムを妨害する。従って、PLSのみ
がカラムから定量的に溶離する。

CLS混合物からGLSの完全回収は可能であるが、異常に
長時間を要する。標準方法では、脂質は最初五酸化リン
上で24〜48時間完全に乾燥し次にピリジン中で無水酢酸
によりアセチル化する。アセチル化GLSはFlorisilカラ
ムで液体クロマトグラフィにより他の脂質から分離し、
GLSは脱アセチル化し、中和し、塩を除去し、最後に生
成物を凍結乾燥する。この方法はすべてのPLSおよび塩
基に敏感な結合を含有するあるGLS、例えばＮ−Ｏ−ジ
アセチルノイラミン酸を有するガングリオシドに対し破
壊的である。さらに、操作は数日又はまるまる１週を要
する。

上記論議の難点を液体クロマトグラフィの簡単な方法
により解決することが提案された。この方法は架橋結合
ポリスチレンのマトリックスに共有結合することにより
固定したフェニル硼酸（PBA）基を含有する再使用可能
樹脂の製造を含む。樹脂はPBA基とGLS糖部分のシス−ジ
オール基間に複合体を形成することによりすべてのGLS
を選択的に保留し、こうしてPLSおよびNLSの完全な溶離
を供する。次にGLSは水性有機溶媒により分解する。し
かし、樹脂のチャージ能力は比較的低く、代表的には0.
7〜7mgTL/g又は0.18〜1.8mg/ml樹脂（見かけ容量）であ
る。1mgTLに必要な溶離溶媒容量は2.5〜25mlのオーダの
ものである。100mg樹脂を含有する商業的に入手しうる
樹脂カートリッジはPLSとGLSの分離には無効である。

GLSはGLSを含有する脂質混合物からPLSに対して破壊
的でない簡単なクロマトグラフ法により実質的に定量的
に分離できる。

課題を解決するための手段本発明方法は混合物を適当な溶媒に溶解し、硼酸ゲル
上に通して糖脂質を選択的に吸着させ、その後糖脂質を
溶離溶媒によりゲルから脱着することを特徴とする。

本発明によれば、使用脂質混合物は動物又は植物起源
のものでよい。適当な動物脂質は例えば、腸、肺、胸
腺、骨髄、および好ましくは牛の脳のような屠殺場から
入手しうる動物組織の溶媒抽出により得られるものであ
る。別の興味ある出発材料は人又は動物の胎盤である。
これらの組織は天然、凍結又は脱水状態のものでよい。
大量に入手できる別の興味ある出発材料はカゼインおよ
びラクトースを含まないスイートバターミルクである。
植物脂質は、例えば天然大豆レシチンである。

出発材料から脂質を抽出するために、出発材料は例え
ば高速ミルで崩壊させ、親油性ではあるが、水混和性溶
媒又は溶媒混合液中で均質化する。例えば、テトラヒド
ロフラン、4:1〜10:1容量比のテトラヒドロフランと水
の混液、3:2容量比のジイソプロピルエーテルとイソプ
ロパノールの混液、塩素化溶媒、例えばクロロホルム、
ジクロロメタン、2:1容量比のクロロホルムとメタノー
ルの混液を使用することができる。勿論同様の親油性溶
媒およびその混液を使用することができる。操作は100
℃以下の温度、例えば50〜60℃の温度に加熱して行なう
ことが好ましい。次に分散体は濾過し、例えば乾燥する
まで真空蒸留することにより溶媒を除去した後、粗TLS
を集める。粗TLSは任意には溶媒中に再溶解し、次にデ
カントし、沈降固体粒子を分離することにより精製する
ことができる。

別法では、脂質は非極性炭化水素溶媒、例えばヘキサ
ンにより抽出できる。これは凍結乾燥又は噴霧乾燥した
動物組織から成る出発材料の場合好ましい。この場合、
砕解ミルで、例えばヘキサンの存在で環境温度で、組織
を完全に均質化し、その後、TLSの抽出は例えば60〜62
℃で、攪拌しながら、攪拌機を装置した密閉反応器で継
続する。次にサスペンジョンは環境温度で１〜２時間放
置する。沈澱が生成し、上澄相から分離後、非極性炭化
水素、例えばヘキサンにより上記のように再処理する。
合わせた上澄相は遠心分離機で遠心分離し、又は別法で
は、24〜48時間環境温度に放置する。形成沈澱を分離
し、透明溶液は、例えば真空蒸発により、初めの重量の
約12〜15％に濃縮する。TLS濃縮液は等容量の蒸留水で
稀釈処理し、その後、残留ヘキサンを、例えば窒素下で
68〜70℃で蒸発して除去し、水性エマルジョンは、例え
ば凍結乾燥により乾燥する。別法では、ヘキサンに溶解
したTL濃縮液は下記クロマトグラフィによるCLSの製造
に中間生成物として直接使用できる。この場合、CLS含
有溶離物は溶媒除去後初めの容積の５〜10％に濃縮す
る。その後等容量の蒸留水により稀釈し、エマルジョン
は、例えば凍結乾燥により乾燥する。

脂質混合物はすべての脂質、すなわちNLSおよびCLSを
含むことができ、又は好ましくはCLS単独で形成するこ
とができる。この場合、CLSはシリカゲルカラムで非極
性、水不混性炭化水素溶媒、例えばCLSの溶離溶媒とし
て供する石油エーテル中で予め分離する。NLSはカラム
に残留する。脂質の溶解中、超音波処理はこれらを完全
に溶解するために使用することは好ましい。集めたCLS
は、特にPLS、プラスマロゲン、セラミドヘキソシド、
グリセログリコリピドおよびガングリオシドを含む。NL
Sは極性、親油性溶媒混液、例えばクロロホルムおよび
メタノール混液を使用してカラムから脱着する。集めた
NLSは特にモノ−、ジ−およびトリグリセリド、脂肪
酸、トコフェロール、油溶性ビタミン、エストロゲンお
よびフィトエストロゲンを含む。NLSは脂肪酸、およびG
LSから分離したこれらの脂肪酸、特にアラキドン酸、ジ
ホモガンマリノレン酸、エイコサペンタエン酸、および
人の胎盤に存在するドコサヘキサエン酸を含むトリグリ
グリセリドを集めることを望む場合、有利であるGLSを
全く含有しないことがわかる。分離後、溶媒は、例えば
真空蒸発により乾燥除去する。

特にバターミルクの脂質処理に適用できるCLSのみを
含有する脂質混合物を製造する一変法では、カゼインお
よびラクトースを含まないスイート（非酸性）バターミ
ルクは極性溶媒、例えばアセトンにより処理して、溶解
するNLSを、例えば透析濾過（洗滌を含む限外濾過）に
より分離し、その後アセトンを除去した残渣は微極性溶
媒、例えばメタノールにより処理する。次に溶液は例え
ばメタノールを蒸発して濃縮する。得た濃縮物は上記の
ようにシリカゲルカラムで処理する。

バターミルク脂質を処理する好ましい一変法は、ラク
トースおよびカゼインを含まないバターミルクから例え
ばヘキサンおよびメタノール混液によりTLSを抽出し、
例えばミクロ濾過又は遠心分離により残渣の分離後溶媒
混液を例えば蒸発により除去する。次にTL濃縮液はバタ
ーミルクを直接処理する上記変法におけるより著しく少
量の極性溶媒、例えばアセトンにより処理する。不溶性
画分を集め、アセトンをそこから除去する。この予備分
離変法は上記変法以上のいくつかの利点を有する：アセ
トン所要量は約10〜12倍少ない；アセトンに不溶の物質
は約75〜80重量％のCSLおよび高融点トリグリセリドか
ら成る約20〜25重量％のNLSを含有する。これはCLSの次
の分離を達成するために上記場合におけるより15倍まで
の少ないシリカゲルが必要であるにすぎない。最後に使
用バターミルクの約40〜45重量％を表わすアセトン可溶
性物質は、トリグリセリドの他に遊離脂肪酸、ステロー
ルおよび一層容易に除去できる大多数の発臭化合物を含
む。この予備分離後、得た脂質混合物は上記のようにシ
リカゲル上でクロマトグラフィにより処理する。

硼酸ゲルを満たしたカラムはGLSからPLSを分離するた
めに使用する。吸着剤は水および有機溶媒に不溶の架橋
結合ポリマーである。これはジヒドロキシボリルアニリ
ノメタクリル酸とし、４−ブタンジオールジメタクリレ
ートの共重合化および架橋結合により得る。任意の１理
論に限定することを好まないが、PLSおよびGLSの実質的
定量分離はゲルのジヒドロキシボリル基とGLSのシス−
ジオールが複合化し、水の存在で脱複合化する、糖脂質
と複合体を形成する吸着剤の能力によることは明らかで
ある。硼酸ゲルは極性媒体の無水親油性溶媒に懸濁させ
る。例えば、5:1〜2:1容量比のクロロホルムおよびメタ
ノール混液、又は4:1〜2:1容量比のジイソプロピルエー
テルおよびイソプロパノール混液を使用することができ
る。

上記のようにPLSはカラムから溶離し、一方GLSは吸着
する。PLSは同じ溶離溶媒、例えば2:1容量比のクロロホ
ルムおよびメタノール混液を使用して集め、その後溶媒
は乾燥するまで真空蒸発して除去する。GLSは極性、水
混和性有機溶媒および１〜25重量％の脱イオン水を含む
溶媒混液を使用してカラムから脱着する。例えば、10:1
〜4:1容量比のテトラヒドロフランと水の混液、テトラ
ヒドロフラン、メタノールおよび水の混液、クロロホル
ム、メタノールおよび水の混液、又はジクロロメタン、
メタノール又はエタノールおよび水の混液を使用するこ
とができる。テトラヒドロフランおよび水の混液は使用
することが好ましい。混液の割合は溶離処理中変化でき
る。例えば、有機溶媒の豊富な、代表的には10:1容量の
混液により出発し、4:1（容量で）混液で終了すること
ができる。テトラヒドロフランは、例えば次の凍結乾燥
中水と同時に容易に除去できる利点を有する。アルコー
ル含有混液を使用する場合、アルコール／水混液に溶解
するGLSのみを脱着し、さらにカラムはテトラヒドロフ
ランおよび水の混液により再生中洗滌しなければならな
い。

ある場合、GLSの純粋分離が必要である。このため
に、GLSはクロロホルムおよびメタノールの溶媒混液
に、例えば50℃に加熱し、二重壁攪拌機付きデカンテー
ションフラスコに溶解し、そこにKCl水溶液を導入す
る。最初攪拌は急速で、次に遅くする。２相すなわちガ
ングリオシドを含有する水性相および他のGLSを含有す
る有機層を形成する。例えば重力により排液して下部相
を分離後、溶媒は、例えば真空蒸発によりそこから除去
する。

本発明方法の特別の一態様では、PLSは一方では非酸
性PLS（NPLS）および酸性PLS（APLS）に分離し、またGL
Sはイオン交換クロマトグラフィにより非酸性GLS（NGL
S）および酸性GLS（AGLS）に分離できる。これらの分離
の利点は高速液体クロマトグラフィ（HPLC）、高速薄層
クロマトグラフィ（HPTLC）および核磁気共鳴分光分析
（NMR）のような標準分析方法ではCLSの各種画分の検出
および定量ができないことである。何故なら、生物学的
抽出物に含まれる脂質の種類はこれらの方法が有効であ
るためには余りに多すぎるからである。存在するすべて
の種類の脂質のHPLCによる溶離は各種移動相を使用せず
に、又はある脂質の誘導体を合成せずに達成することは
できない。架橋結合アガロースイオン交換樹脂、特にア
セテート形の急速−処理ジエチルアミノエチルセファロ
ースゲル上での予備分離は１時間につき10層容積の処理
量で各種酸性および非酸性画分にGLSおよびPLSを定量的
に分離できる。この分離により、各種区分は蛍光検索と
組み合せたHPTLCにより同定および定量できる。

本発明方法の別の特別の態様では、大豆の天然レシチ
ンは、例えばNLSを予備分離せずに、硼酸ゲル上を通す
ことによりGLSおよび遊離糖を実質的に完全に除去する
ことができる。GLS含有画分をその後脱イオン水に対し
透析して遊離糖を除去できる。こうしてフィトグリコリ
ピドを得る。この態様の変法では、NLSおよびCLSはシリ
カゲル上で予備分離し、その後GLSおよびPLSは硼酸ゲル
上でCLSから分離する。得たPLSは糖脂質および遊離糖を
含まない。従って、これらは、例えば非経口エマルジョ
ン中に、PLSの代表的リスクはもはや全く存在しない。
この点に関してこれらの組成は卵レシチンのものと比較
できる。

本発明は分離により得る画分の使用にも関する。

第１の態様では、動物組織のPLS、GLSおよびガングリ
オシドおよびバターミルクのPLSは化粧組成物の製造に
使用できる。

第２の態様では、PLS,GLSおよびガングリオシドを抽
出する各組織の組成が特異的であるこれらの画分は、特
に幼児栄養のための栄養組成物の処方に使用する。

第３の態様では、ガングリオシドを含有する画分は化
粧品用に、又は神経系の治療に対する薬剤の製造に適す
るリポゾームの製造に使用できる。

第４の態様では、フィトグリコリピドを含まない大豆
レシチンは非経口エマルジョンの製造に使用できる。

最後の態様では、人の胎盤のNLSはGLSを含まず、特に
アラキドン酸、ジホモガンマリノレン酸、エイコサペン
タエン酸およびドコサヘキサエン酸を含有する脂肪酸ト
リグリセリドを得るために使用できる。これらのトリグ
リセリドは本発明により得た他の画分、特にPLS,GLSお
よびガングリオシドと一緒に特に幼児栄養のための栄養
組成物の製造に使用できる。

本発明は次例により例示する。例中部および％は特記
しない限り重量による。

これらの例で、試料からHPTLCによるNLSおよびCLSの
分離効率をシリカゲルで被覆した10×10cmのガラスプレ
ート上で試験した。画分の各種成分は蛍光により十分に
規定された標準化合物と比較して検索した。

CLSからGLSの定量的分離はいくつかの方法:HPTLC、比
色法および気相クロマトグラフィ（GLC）により測定し
た。特に、HPTLCによる糖脂質の分離は標準純粋GLSと比
較することにより糖脂質の糖基を特異的に着色するオル
シノールにより検知して測定した。

PL画分を分析するために、PLSはイオン交換クロマト
グラフィによりNPLSおよびAPLSに予備分離し、次いでHP
TLCにより各種成分を検索し各画分を標準純粋PLSと比較
した。

同時に、GL画分の内容物は分取イオン交換クロマトグ
ラフィにより、次いで各種非酸性成分（NGLS）および酸
性成分（AGLS）をHPTLCにより分析し標準試料と比較し
て証明した。

例１ 1.1 牛の脳のTLSの抽出噴霧乾燥により乾燥した粉末形の5kgの牛の脳を50
のテトラヒドロフランおよび水の溶媒混液（4:1容量
比）中で20℃で10,000r.p.m.で回転するロータリミキサ
ーで均質化する。

３〜５分後、脳脂質の抽出は160〜250r.p.m.で攪拌し
ながら100の密閉反応器で50〜60℃で20分継続する。
得たサスペンジョンは40〜50℃で１工程紙フィルターを
備えた二重ジャケット付き濾過タンクに通す。濾過タン
クに保留した固体粒子は4:1容量比の40〜50℃の温度に
保持したテトラヒドロフランおよび水混液35により除
去する。

脳粗脂質抽出物を含有する合せた濾液は真空蒸発機で
65〜75℃で恒重量に濃縮し、その後残留水は５のイソ
プロパノールを連続添加し、次いで共沸蒸発することに
より脂質濃縮物から除去する。

1.2 粗脂質の精製 2.68kgを表わす上記粗抽出物は10のテトラヒドロフ
ランに再溶解し、カプセルにより密閉した瓶中で1500〜
1700gで10分遠心分離した。別法では、溶解した粗抽出
物は24時間環境温度に放置し、その後沈澱固体を分離す
る。澄明溶液は回転真空蒸発機で65〜70℃で乾燥するま
で濃縮する。2.32kgの脳TLSおよび0.36kgの非脂質不純
物を得る。

1.3 牛の脳のCLSの単離 60〜80℃の15の石油エーテルを入れた内径21.3cm、
長さ100cmのガラスカラムに20の石油エーテルに分散
させた4kgの0.21〜0.062mm（70〜230メッシュ）のシリ
カゲルを満たす。シリカゲルは予め少なくとも16時間16
0〜165℃で処理して活性化する。ガラスカラムはシリカ
ゲル粒子を保留するために100〜160ミクロンの多孔性を
有するガラス濾過器を含む。上記脳TLS、すなわち2.32k
gを10の石油エーテルに攪拌溶解し、次にクラウデイ
溶液が透明になるまで２〜５分超音波処理する（250〜5
00w/kg脂質）。超音波処理試料の温度は45〜50℃に保持
する。次にシリカゲルカラムに通し、CLSは15〜30の
石油エーテルにより完全に溶離する（溶離液１）。NLS
（溶離液２）は1:1容量比のクロロホルムとメタノール
混液15を使用してシリカゲルから脱着する。

1.4 シリカゲル吸着剤の再生 15のメタノール、次に15〜20の脱イオン水を吸着
剤に通す。吸着剤は６時間105℃で、次に18時間160〜16
5℃でオーブン乾燥する。最後に、再活性化吸着剤は15
の石油エーテルに分散し、大気水分との接触を回避す
る。

1.5 牛の脳のCLSの凍結乾燥上記溶離液１は50〜100回転真空乾燥機で50〜75℃
で完全乾燥するまで濃縮する。次にCLSは環境温度で12
〜24時間窒素流にさらし残留微量溶媒を除去する。これ
らの溶媒を含まないリピドは40〜45℃で蒸留水（5kg水
対1kgCLS）中で均質化し、その後得たエマルジョンはス
テンレス鋼プレート上に１〜1.5cmの厚さの層に伸ば
す。エマルジョンは−40℃で凍結し、凍結乾燥する。こ
うして1.45kgのCLSを得る。

1.6 NLSの回収溶離液２は1.5節におけるように乾燥するまで濃縮す
る。1.5節におけるように溶媒の除去後、0.48kgのNLSを
得る。

1.7 牛の脳のPLSおよびGLSの分離上記1.5節に記載のように製造した牛の脳のCLSは4:1
容量比のクロロホルムおよびメタノール混液に1gリピド
対5g溶媒混液の割合で溶解する。リピドの溶解は40〜50
℃で超音波処理により加速する。その後溶液をブフナー
濾過器に通してすべての粒子を除去する。

長さ30cm、内径5cmの使用ガラス吸着カラムは100〜16
0ミクロンの多孔性を有するガラス濾過器および層の高
さを15〜30cmに調節できる処理用アダプターの二層支持
体を含む。カラムは低圧（１〜２バール）ポンプに連結
し、これは０〜60ml/分の割合で３方バルブを通して３
つの異る溶離溶液を送達できる。150gの硼酸ゲルは1,00
0mlのテトラヒドロフランにサスペンドし、サスペンジ
ョンは連続バッチのカラムに注入し、過剰の溶媒は重力
により流れるままにする。処理用アダプターは20〜22cm
の層の高さに調整する。使用前、カラムは３層容積（1,
200〜1,300ml）の脱インオ水により30〜50ml/分の割合
で、次に１層容積の0.5N塩酸により、次に３層容積又は
それ以上の脱イオン水により中性pH値まで、３層容積の
メタノール、最後に容量比2:1のクロロホルムおよびメ
タノール混液の３層容積により洗滌する。

カラムは20ml/分の割合で4:1容量比のクロロホルムお
よびメタノール混液20mlにより予備洗滌する。次にカラ
ムに牛の脳のCLS試料、すなわち、4:1容量比のクロロホ
ルムとメタノール混液150gに対し30gの脂質を同じ割合
で、次に4:1容量比のクロロホルムおよびメタノール混
液20mlをチャージする。PLSおよびプラスマロゲンは50m
l/分の割合で2:1容量比のクロロホルムおよびメタノー
ル混液３層容積（1,200〜1,300ml）を使用して50ml/分
の割合でカラムから溶離する。例えばセラミドヘキソシ
ド、ガングリオシドおよびスルファチドを含むすべての
GLSを溶離するために、4:1容量比のテトラヒドロフラン
および水混液の３層容積をPLSに対し同じ割合で使用す
る。

1.8 硼酸ゲルカラムのライン内再生硼酸ゲルカラムは2:1容量比のクロロホルムおよびメ
タノール混液３層容積を使用し60ml/分の割合で各溶離
サイクル後ゲルを再生脱水する。

1.9 牛の脳のPLSおよびGLSの単離 PLSを含有する画分は65〜70℃で乾燥するまで真空濃
縮し、次に上記のように凍結乾燥する（1.5節）。無臭
の白色、吸湿性粉末950〜970gをこうして得る。

GLSを含有する画分はテトラヒドロフランを完全に除
去するまで70〜75℃で真空濃縮し、残渣を脱イオン水に
採り全体を2500mlにする。均質化後、グリコリピドを含
有するエマルジョンは上記のように凍結乾燥する。480
〜490gの無臭白色粉末を得る。

例２ 2.1 ラクトースを含まないバターミルクの脂質の抽出新鮮バターミルクは透析濾過によりラクトースを除
き、次に噴霧乾燥により乾燥する。得たバターミルク粉
末は次の組成を有する：％水分 2.5 （オーブンで102℃、２時間後測定）脂肪 52.9 （Mojonnier法）たん白 29.7 （Ｎ×6.38）ラクトース 8.1 （酵素的に測定）灰分 6.8 80kgのバターミルクの粉末はホモジナイザーを使用し
て20〜22℃で450のアセトン中に分散させる。脂肪は1
20〜250r.p.m.で攪拌又は回転する刃を装備した密閉反
応器で抽出する。抽出温度は約20分20〜22℃に保持し、
その後分散体は１工程紙フィルターを備えたタンクで濾
過する。保留固体粒子は20〜22℃で別の300アセトン
により洗滌する。次に合わせた濾液は真空蒸発乾燥し、
26kgの中性バターミルク脂質を集める。次に35〜40℃に
２時間保持した濾過タンク内の脂肪を含まない保留バタ
ーミルク残渣に窒素を通して溶媒を除去する。

53〜55kgの脂肪および溶媒を含まないバターミルク固
形は10,000r.p.m.で回転するホモジナイザーで560の
メタノール中に分散させる。その後二重壁反応器で60〜
62℃で20〜30分脂質の抽出を継続する。次に分散体は密
閉二重壁タンクに配列した紙フィルターに60〜62℃で1.
5〜2.5バール圧下に通し、その後フィルター上に保留し
た固体粒子を80熱メタノールにより除去する。メタノ
ール濾液は40〜45容量に濃縮し、残留メタノールは60
〜90℃でメタノールと共沸混合物を形成する石油エーテ
ル100〜150と共沸蒸留して蒸発する。

2.2 バターミルクのCLSの単離 2.1節で得た上記濃縮液容量を石油エーテルにより100
に調整し、その後溶液は環境温度で48時間放置する。
形成固体沈澱は濾過により除去し、その後清澄化石油エ
ーテル相は上記例1.3節に記載のように26kg（約65の
１層容積に相当）のシリカゲルを含有する内径35cm、長
さ100cmのカラムに通す。すべてのCLSは65〜70石油エ
ーテル（溶離液１）により溶離するが、一方吸着リピド
は1:1容量比のクロロホルムおよびメタノール混液80
により脱着する（溶離液２）。溶離液１は乾燥するまで
真空濃縮し、脱イオン水に分散し、次に例1.5節に記載
のように凍結乾燥する。こうして10.2kgのCLSを得る。
乾燥するまで濃縮した溶離液２から5.1kgの残留NLSを得
る。

2.3 バターミルクのPLSおよびGLSの分離上記2.2節に記載のように得たバターミルクのCLS試料
600gを硼酸ゲルカラムに通し、PLSは例１の７節記載と
同じ方法でGLSから分離する。例1,1.9節記載のように乾
燥するまで濃縮し、凍結乾燥後、バターミルクのPLS365
gを白色状無臭粉末形で得る。

2.4 バターミルクのGLSの精製 GLSを含有する画分は例1,1.9節に記載のように真空濃
縮してテトラヒドロフランを完全に除去する。その後、
残渣を脱イオン水に採り、全体を800mlにする。次にGLS
水性溶液は3500ダルトンの分子量カットオフ限界を有す
る透析膜を使用して脱イオン水に対し透析する。GLS溶
液は凍結乾燥して１％より少ない遊離ラクトースを含有
する精製GLSの白色粉末160gを得る。乾燥後、透析物は7
5gを表わす。

例３ 3.1 牛骨髄のCLSの単離 10kgの新たに均質化した牛骨髄を凍結乾燥し、得た乾
物1.6〜1.7kgは2:1容量比のジクロロメタンおよびメタ
ノールの溶媒混液50に20〜22℃で分解する。牛骨髄の
TLSは例1.1節におけるように閉鎖反応器で抽出する。例
1.2節におけるように濾過および溶媒混液の除去後、0.6
5kgのTLSを得、2.5のヘキサンに再溶解し、形成溶液
は例１記載のように750gのシリカゲルを満たした内径10
cm、長さ40cmのガラスカラムに通す。

CLSは２のヘキサンにより溶離し、一方NLSは2:1容
量比のクロロホルムおよびメタノールの混液２をカラ
ムに通すことによってカラムから脱着する。CLSは例1.5
節に記載のように凍結乾燥して430gの白色、吸湿性、無
臭粉末を得る。

3.2 牛骨髄のGLSおよびPLSの分離および単離牛骨髄の上記430gのCLSは例1.7節におけるように4:1
容量比のクロロホルムおよびメタノールの溶媒混液2.15
0gに溶解する。CLSは1.7節記載のように150gの溶媒に対
し30gの脂質からPLSおよびGLS画分に分離し、硼酸ゲル
カラムは1.8節におけるように2:1容量比のクロロホルム
およびメタノール混液３層容積を使用して各サイクル後
再生する。次に溶離および吸着画分は1.9節におけるよ
うに濃縮、凍結乾燥し、無臭、白色粉末形の274gPLSお
よび150gGLSを得る。

例４ 4.1 牛の脳のGLSの溶媒による分離例1.9節におけるように製造した牛の脳の60gのGLS
を、上部にシャフト攪拌機を装置した10容の二重壁デ
カンテーションフラスコで3,200mlのクロロホルムおよ
び1,600mlのメタノールから成る溶媒混液中に分散させ
る。攪拌機のシャフトは相互に離れた２枚の刃を備え、
下部の刃のみ溶媒に浸漬するようにする。GLS溶液の温
度は徐々に50℃に上げ、その後1,200mlの88％KCl水溶液
を添加し、従って攪拌機の上部刃も浸漬する。300〜600
r.p.m.の初めの速度から、攪拌機は５〜10r.p.m.に速度
を落とし、デカンテーションフラスコの加熱は15分後に
スイッチを切る。２相が形成し、それぞれが１つの刃に
より攪拌を継続する。８〜12時間後、ガングリオシドを
含有する上部水性相および他のGLSを含有する下部相が
透明になると他のGLSからガングリオシドの完全な分離
が認められる。下部相は重力によりデカンテーションフ
ラスコから流し、上部相は別に集める。下部相の他のGL
Sはモノガラクトシルセラミドおよびスルファチドによ
り形成する。

4.2 GLS相の単離すべてのスルファチドおよび中性GLS（モノガラクト
シルセラミド）を含有する下部相は65〜75℃で乾燥する
まで真空濃縮し、次いで例1.9節記載のように凍結乾燥
する。最終生成物は49gの純粋GLS（モノガラクトシルセ
ラミドおよびスルファチド）から成る完全な白色粉末で
ある。上部相は有機溶媒を完全に除去するまで65〜70℃
で真空濃縮し、初めの容積の約2,400mlから300〜600ml
の透明溶液に減少させる。次に水性相は例2.4節におけ
るように透析し、その後濃縮上部相は例1.9節に記載の
ように凍結乾燥する。最終生成部は牛の脳の代表的ガン
グリオシドを含有する無臭、完全な白色粉末5.1gであ
り、SvennerholmおよびHolmgrenの略語を使用して次に
リストする： NeuAcα２→3Galβ１→3GalNAcβ１→４［NeuAcα２→
３］Galβ１→Glc→Cer（GD1a）,NeuAcα２→8NeuAcα
２→3Galβ１→4Glc→Cer（GD3）,NeuAcα２→3Galβ１
→3GalNAcβ１→４［NeuAcα２→8NeuAcα２→３］Gal
β１→4Glc→Cer（GTlb）andGelβ１→3GalNAcβ１→４
［NeuAcα２→３］Galβ１→4Glc→Cer（GMl）．例５バターミルクのGLSの分離例2.4節におけるように単離したバターミルクのGLSは
例４の抽出方法を使用して分離する。ガングリオシドを
含有する上部相は有機溶媒クロロホルムおよびメタノー
ルが完全蒸発するまで65〜70℃で真空濃縮し、約2,400m
lの初めの容積は300〜600mlに減少する。水性濃縮物は
例2.4節に記載のように４℃で24時間脱イオン水に対し
透析する。最終生成物はGD₃（約80％を表わす）、GM
₁（例4.2節で説明）およびNeuAcα２→3Galβ１→4Glc
→Cer（SvennerholmおよびHolmgrenによればGM₃）のよ
うなバターミルクの代表的ガングリオシドから本質的に
成る4.8gのしみのない粉末である。遊離ラクトース含量
は１％未満である。

下部相は例4.2節におけるように完全乾燥まで濃縮
し、次いで凍結乾燥する。ジヘキソシルおよびトリヘキ
ソシルセラミドのような中性糖脂質のみを含有し、遊離
ラクトースを含まない完全な白色粉末46gを得る。

例６ 6.1 人の胎盤のCLSの分離人の胎盤を3:2容量比のイソプロピルエーテルおよび
イソプロパノールの溶媒混液により抽出し、次にヘキサ
ン中で初めのクラウディ溶液が透明になるまで55〜60℃
で超音波処理する（400w/100g胎盤、350mlヘキサン
中）。ガラス濾過器を装置した内径5.5cmを有する30cm
のガラスカラムに予め15時間160〜165℃で活性化し、次
にヘキサンに分散した100gの0.21〜0.062mm（70〜230メ
ッシュ）シリカゲル粒子を満たす。

次に試料は50℃でカラムに通し、その後CLSの溶離は4
00〜500mlのヘキサンにより完了する（溶離液１）。

NLS（溶離液２）は1:1容量比のクロロホルムおよびメ
タノールの溶媒混液500mlを使用してカラムから脱着す
る。乾燥するまで溶離液１および２を真空濃縮して55.3
gのCLSおよび44.7gのNLSを得る。

CLSを含有する画分は、溶媒混液に基づく通例の抽出
および分離方法を使用する場合、一般にCLSに随伴する
エストロゲンを含まない利点を有する。

カラムを再生するために、250mlのメタノール、次い
で1,000mlの脱イオン水を吸着剤に通し、次に上記のよ
うに熱活性化を行なう。

6.2 人の胎盤のPLSおよびGLSの単離ガラス濾過器を装置した内径5.5cmを有する30cmの長
さのガラスカラムに100gの硼酸ゲルを満たす。2:1容量
比のクロロホルムおよびメタノール溶媒混液にサスペン
ドしたゲルは約1cm厚の石英砂層で被覆する。次に吸着
剤は３層容積のメタノール、３層容積の脱イオン水、１
層容積の0.5N HCl、次に10層容積の脱イオン水により
中性pH値まで連続洗滌し、ゲルは３層容積のメタノール
および次に2:1容量比のクロロホルムおよびメタノール
の溶媒混液３層容積を使用して親油形に転換する。

6.1記載のように得た人の胎盤の15gのCLSは2:1容量比
のクロロホルムおよびメタノールの溶媒混液60mlに溶解
し、カラムに通す。溶離液を乾燥するまで真空濃縮後、
14g（溶離液１）を得る。GLS（溶離液２）は4:1容量比
のテトラヒドロフランおよび水の溶媒混液600mlを使用
してカラムから脱着する。2:1の容量比のクロロホルム
およびメタノール混液600mlによりカラムの再生後、次
いで人の胎盤の第２の15gCLS試料を通し、カラムを再生
し、最後に、人の胎盤の第３の15gCLS試料を通し、PLS
画分（溶離液１）を合せ、溶媒を完全乾燥して除去し、
人の胎盤の40〜42gのPLSを集める。GLSを含有する合せ
た溶離液２を乾燥するまで濃縮後、残渣は水に再サスペ
ンドして50℃で超音波処理し、凍結乾燥後人の胎盤の3g
GLSを集める。

例７大豆のフィトグリコリピドの単離 25gの商業的に入手できる天然大豆レシチンを4:1容量
比のクロロホルムおよびメタノールの溶媒混液75mlに溶
解し、形成溶液は例6.2節に記載のように硼酸ゲルカラ
ムに通す。これにより22.7gのNLSおよびPLS混合物、お
よび2.3gのフィトグリコリピドおよび遊離糖を含有する
画分を得る。例2.4節におけるように透析および濃縮に
より遊離糖を含まない大豆フィトグリコリピド1g（４
％）を得る。

例８大豆のPLSおよびフィトグリコリピドの分離 NLSを含有する40gの画分およびCLSを含有する60gの画
分を例1.3節におけるように商業的に入手できる天然大
豆レシチン100gから分離する。

CLSを含有する画分は3:2容量比のジイソプロピルエー
テルおよびイソプロパノールの溶媒混液200mlに40℃で
超音波処理して再溶解する。形成溶液はジイソプロピル
エーテルおよびイソプロパノールの溶媒混液に分散した
硼酸ゲルカラム−内径5.5cm、長さ30cm−を通して15gの
連続バッチに通す。PLSを含有する画分は２層容積の3:2
容量比のジイソプロピルエーテルおよびイソプロパノー
ルの溶媒混液、次いで１層容積のイソプロパノールを使
用して溶離する。

フィトグリコリピドを含有する画分は例6.2節に記載
のように4:1容量比のテトラヒドロフランおよび水の溶
媒混液の３層容積によりカラムから脱着する。各サイク
ル後、吸着剤は１層容積のイソプロパノール、次に3:2
容量比のジイソプロピルエーテルおよびイソプロパノー
ルの溶媒混液の２層容積を使用して再生する。

一方ではPLSの合せた画分および他方ではフィドグリ
コリピドを別々に集め、乾燥するまで真空濃縮して40g
のPLSおよび20gのフィトグリコリピドを得る。

こうして製造したPLSは大豆レシチンに天然に存在し
望ましくない二次作用を起こしうる化合物を含まないこ
とで特徴がある。

これらはグリコリピドおよび遊離糖の少ない卵黄のも
のに比較でき、人が十分に許容できる非経口エマルジョ
ン製造用に魅力あるものにする。

例９ 9.1 モルモット腸のPLSおよびGLSの分離 7.86gのモルモットの腸を1:2容量比のクロロホルムお
よびメタノール溶媒混液２×80mlで連続洗滌する。均質
化物は2500gで遠心分離し、透明上澄液を乾燥するまで
真空濃縮する。

得た290mgの粗リピドは10mlテトラヒドロフランに溶
解し、溶液は2500gで遠心分離し、次に乾燥するまで濃
縮して250mgのTLSを得る。NLSはTLSを２×2.5mlヘキサ
ン中で超音波処理することにより溶解し、0.21〜0.062m
m（70〜230メッシュ）の活性化シリカゲル粒子を満たし
た内径1cm、長さ10cmのガラスカラムに溶液を通してス
テロール、遊離脂肪酸およびトリグリセリドとして除去
する。190mgのCLSをこうして25mlヘキサンにより定量的
に溶離する。57mgNLSを2:1容量比のクロロホルムおよび
メタノール溶媒混液の３層容積によりカラムから脱着す
る。次にCLSを例1.7節に記載のように143mgのPLSおよび
47mgGLSに分離する。脱インオ水に対する透析および凍
結乾燥により遊離糖を含まない16.6mgの純粋GLS画分を
得る。

9.2 モルモット腸のPLSをイオン交換によりNPLSおよび
APLSに分離 8.5mlの急速−処理用ジエチルアミノエチルセファロ
ースゲルをエタノールにサスペンドし、内径1.15cm、長
さ10cmのガラスカラムに形成サスペンジョンを満たす。
次にゲルは30mlの脱イオン水により洗滌し、20mlの2M酢
酸ナトリウム水溶液によりアセテート形に転換し、30ml
の脱イオン水、10mlのメタノール、および最後に2:1容
量比のクロロホルムおよびメタノール溶媒混液10mlによ
り連続洗滌する。ゲルは７〜10mm厚の石英砂の層で被覆
する。モルモット腸の143mgPLS試料をカラムに通し、そ
の後非酸性PLSを2:1容量比のクロロホルムおよびメタノ
ール溶媒混液２×2ml、次に10ml、そして最後に5mlメタ
ノールの連続部分により溶離する。微圧を保持して溶離
を促進する。乾燥するまで溶媒の真空除去により107mg
のNPLSが残留する。

カラムに保留される酸性PLSを脱着するために、クロ
ロホルム、メタノールおよび0.8M酢酸ナトリウム水溶液
（30:60:8）の溶媒混合物15mlをカラムに通す。酸性画
分を乾燥するまで濃縮し、2:1容量比のクロロホルムお
よびメタノールの溶媒混液２×1ml中に超音波処理して
再溶解し、その後塩は60:30:4.5容量比のクロロホル
ム、メタノールおよび水の溶媒混液中のセファデックス
Ｇ−25ゲル4mlを満たした内径1.15cm、長さ10cmのガラ
スカラムで除去し、カラムは微圧下に維持する。溶媒を
乾燥するまで真空除去すると35mgAPLSが残る。各サイク
ル後、イオン交換カラムは１層容積のメタノールおよび
次に2:1の容積比のクロロホルムおよびメタノール溶媒
混液の２層容積を使用して再生する。

NPL画分は代表的にはホスファチジルコリン、ホスフ
ァチジルエタノールアミンおよびスフィンゴミエリンを
含む。

APL画分は代表的にはホスファチジルイノシトール、
ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸およびカルジ
オライピンを含む。

9.3 モルモットの腸のGLSのNGLSおよびAGLSへの分離 NGLおよびAGL画分は上記9.2節に記載の方法により分
離する。11.9mgNGLSおよび4.5mgAGLSを上記16.6mg（9.1
節）から得る。

得たNGLSは代表的にはセラミドヘキソシドおよびグリ
コグリセロリピドである。

得たAGLSは代表的には硫酸塩化ヘマトシドおよびガン
グリオシドである。

例 10 10.1 牛の脳のTLSの抽出変法噴霧乾燥により乾燥した粉末形の8kgの牛の脳を環境
温度でコロイドミルで45kgヘキサン中で均質化し、その
後、250r.p.m.で回転する刃攪拌機を装置した密閉反応
器で60℃で抽出を継続する。

30分抽出後、サスペンジョンは別の容器で１〜２時間
放置する。上澄相はデカンテーションにより集め、沈澱
固体は別の30kgのヘキサンにより再抽出する。

第２抽出物は１〜２時間放置し、上澄相はデカンテー
ションにより集め、次に上記上澄相と合せる。環境温度
で24〜48時間放置後、合せた上澄相は半透明液体を与
え、これから慎重なデカンテーションにより固体残渣を
分離する。

次に液体相は66〜70℃で予備濃縮して初めの容積の12
〜15％に真空蒸発する。その後、予備濃縮物は等容量の
蒸留水により稀釈する。溶媒は68〜70℃で蒸留して除去
し、得たエマルジョンは均質化し、−40℃に凍結し、次
に凍結乾燥する。牛の脳の3.32kgのTLSをこうして次の
組成を有する無臭、吸湿性ベージュ色粉末形で得る：％コレステロール 25〜27 CLS 73〜75 PLS 50〜53 GLS 20〜23 中性GLSおよびスルファチド 15〜18 ガングリオシド 1.5〜1.8 10.2 牛の脳のCLSおよびNLSの分離変法 8kgの粉末形牛の脳を上記10.1節記載のように液相を
予備濃縮するまで処理する。ヘキサン中の濃縮物は3.3k
gTLSを含有する。すぐれた分散体を超音波処理により製
造し、次に3.3〜3.5kgのシリカゲルを満たした例1.3節
記載のものと同じカラムに通す。次にCLSをカラムから2
0〜25のヘキサンにより溶離し、溶離液はヘキサンを
真空蒸発して初めの重量の12〜15％に予備濃縮する。同
重量の水で稀釈後、エマルジョンは上記10.1節記載のよ
うに処理して次のものを含むCLS2.45kgを得る：％ PLS 70〜73 GLS 25〜28 中性GLSおよびスルファチド 20〜25 ガングリオシド２〜３ NLSは2:1容量比のクロロホルムおよびメタノール混液
の２層容積によりカラムから脱着し、その後溶離液は真
空蒸発して始めの重量の５％に濃縮する。５ヘキサン
により稀釈後、NLS溶液は乾燥するまで濃縮して、95％
より多いコレステロールを含有する0.88kgの黄色粉末を
得る。

例 11 11.1 バターミルクのCLSの分離変法スイートバターミルクは透析濾過してカゼインおよび
ラクトースを除き、次に噴霧乾燥により乾燥する。

得たバターミルクの粉末は次の組成を有する：％水分（オーブンで２時間、102℃後） 3.22 全固形 96.78 全リピド（Mojonnier法） 61.24 たん白（Ｎ×6.38） 32.43 ラクトース（酵素的に定量） 1.24 圧分 1.87 100gのこの粉末を94:6容量比のヘキサンおよびメタノ
ール混液500mlにより50℃でコロイドミルで２回均質化
する。各均質化後、均質化物は1,500gで２分遠心分離す
る。

上澄相を65℃で乾燥するまで真空濃縮し、バター油の
高％（70〜75％）のため流体として残るTLS65.2gを得
る。

TLSを40℃に冷却し、コロイドミルで1.5〜２倍量のア
セトン（90〜130ml）により均質化し、環境温度（22〜2
4℃）に戻し、次に2,000gで１分遠心分離した。大部分
のNLSおよび発臭物質を含有する透明上澄相を除去す
る。集めた固体残渣はCLSを含有する。ヘキサンに再溶
解し、次いで真空蒸発により濃縮し、アセトンに不溶性
物質（AIM）21.7gを得る。

この物質を３倍量のヘキサンにサスペンドし、その後
CLS（80.6％）を等量のシリカゲル（10〜11g）を使用し
て液体吸着クロマトグラフィによりNLS（19.4％）から
分離する。

次に上記バターミルクのCLS（17.5g）を10倍量の蒸留
水中で均質化し、エマルジョンは凍結乾燥する。

11.2 バターミルクのCLSの第２分離変法 11.1節記載と同じ組成を有する7.84kgのバターミルク
は還流下に攪拌しながら94:6容量比のヘキサンおよびメ
タノール溶媒混液90により処理する。15分後、得たサ
スペンジョンを40℃に冷却し、次にミクロフィルターを
通し、その後フィルターは94:6容量比のヘキサンおよび
メタノール混液10により洗滌する。

次に濾液は乾燥するまで65℃で真空蒸発により濃縮し
て4.57kgのTLSを得、これは40℃に冷却し、２倍量（10
）のアセトンにより均質化し、環境温度（22〜24℃）
に冷却する。

1,500gで１〜３分遠心分離後、大部分のNLSおよび発
臭化合物を含有する透明上澄相は廃棄し、アセトン不溶
性物質（AIM）を10ヘキサン中に採取し、乾燥するま
で真空蒸発により濃縮する。こうして1.52kgのAIMを得
る。

AIMを３〜４倍量のヘキサン（６〜７）中に採取
し、次に約1kgの吸着剤を使用してシリカゲル上で吸着
クロマトグラフィによりそのCLS（1.16kg）およびそのN
LS（0.36kg）に分離する。CLSを含有する溶離液を集
め、窒素流中で蒸発乾燥する。40℃で５分９倍量の蒸留
水により均質化後、エマルジョンは凍結乾燥する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩ // Ａ２３Ｊ 7/00 Ａ２３Ｊ 7/00 Ａ６１Ｋ 7/00 Ａ６１Ｋ 7/00 ＦＫ 31/715 37/20 (56)参考文献特開昭62−45601（ＪＰ，Ａ) 特表昭63−502345（ＪＰ，Ａ) ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，Ｎｏ．153（1978) ｐ．550−552 ＡＬＤＲＩＣＨＴｅｃｈｎｉｃａｌＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎＢｕｌｌｅｔｉｎＮｏ．ＡＬ−102（1978) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C11B 7/00,11/00 C07H 1/08

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】リン脂質から糖脂質を分離するに当り、複
合脂質を溶媒に溶解して溶液を得、ついでその溶液を架
橋・共重合したジヒドロキシボリルアニリノメタクリル
酸と1,4−ブタンジオールジメタクリレートのゲルに通
して、糖脂質をゲルに吸着させかつリン脂質はゲルを透
過させることからなる、リン脂質から糖脂質を分離する
方法。
【請求項２】ゲルを中間極性の無水親油性溶媒に懸濁さ
せる、請求項１記載の方法。
【請求項３】無水親油性溶媒はクロロホルムとメタノー
ルの混液を含む、請求項２記載の方法。
【請求項４】無水親油性溶媒はジイソプロピルエーテル
とイソプロパノールの混液を含む、請求項２記載の方
法。
【請求項５】ゲルを透過するリン脂質を集取する、請求
項１記載の方法。
【請求項６】集取したリン脂質をイオン交換樹脂に通し
て、非酸性リン脂質から酸性リン脂質を分離する、請求
項５記載の方法。
【請求項７】糖脂質をゲルから脱着し、そして脱着した
糖脂質を集取する、請求項１記載の方法。
【請求項８】糖脂質は極性、水不混和性有機溶媒と１％
〜25重量％の脱イオン水からなる溶離溶媒混液を使って
脱着する、請求項７記載の方法。
【請求項９】溶離溶媒混液はテトラヒドロフランと脱イ
オン水からなる、請求項８記載の方法。
【請求項１０】集取した糖脂質をイオン交換樹脂に通し
て、非酸性糖脂質から酸性糖脂質を分離する、請求項７
記載の方法。
【請求項１１】集取した糖脂質を水性／有機溶媒混液に
て抽出し、水性相と有機相を分離し、そして水性溶媒を
水性相から除いて、ガングリオシドを得る、請求項７記
載の方法。
【請求項１２】複合脂質は、複合脂質と中性脂質を含有
する混合物を非一極性水不混和性溶媒中シリカゲルのカ
ラムに通して得られ、中性脂質はカラムに残り、そして
複合脂質はカラムを通して溶離し集取する、請求項１記
載の方法。
【請求項１３】複合脂質は、ラクトースを含まないバタ
ーミルクを溶媒で抽出して得られる、請求項１記載の方
法。
【請求項１４】複合脂質は天然大豆レシチンである、請
求項１記載の方法。
【請求項１５】ラクトースを含まないバターミルクを極
性溶媒で処理して、複合脂質含有残渣と天然脂質を含む
溶液を得、極性溶媒を残渣から除き、この残渣を僅かに
極性の溶媒で処理し、複合脂質含有溶液を得、わずかに
極性の溶媒を除いて、濃縮液を得、この濃縮液をシリカ
ゲル含有カラムで溶離して、残存天然脂質から複合脂質
を分離し、複合脂質を共重合・架橋したジヒドロキシボ
リルアニリノメタクリル酸と1,4−ブタンジオールジタ
クリル酸のゲルに通して、糖脂質をゲルに吸着させかつ
リン脂質はゲルを透過させ、ついでリン脂質と糖脂質を
集主することからなる、糖脂質とリン脂質を得る方法。
【請求項１６】ラクトースを含まないバターミルクをわ
ずかに極性の溶媒で処理して、溶液と残渣を得、残渣を
溶液から分離し、溶媒を溶液から除いて、濃縮液を得、
この濃縮液を極性溶媒で処理し、不溶性画分を極性溶媒
から集取し、微量の極性溶媒を除いて、濃縮液を得、こ
の濃縮液からシリカゲルの吸着クロマトグラフィにより
複合脂質を分別し、この複合脂質を共重合・架橋したジ
ヒドロキシボリルアニリノメタクリル酸と1,4−ブタン
ジールジメタクリレートのゲルに通し、糖脂質をそのゲ
ルに吸着させかつリン脂質はゲルを通過し、ついでリン
脂質と糖脂質を集取する、糖脂質とリン脂質を得る方
法。