JPH05500903A - 酪農製品からコレステロールを除去する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 酪農製品からコレステロールを除去する方法この出願は１９８９年１０月１３日 に出願した米国特許出願第４２１１５３号明細書の１部係属出願であり、ここに この明細書を引用例として加えることにする。

光凱夏公ト 本発明は酪農製品（ｄａｉｒｙ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ）からコレステロールを除去 する方法に関する。特に、本発明は牛乳、クリームまたはバター油脂（ｂｕｔｔ ｅｒｏｉｌ）のような酪農製品をサポニンと高められた温度で接触させ、次いで 少なくとも１種の珪藻土または他の吸着剤で処理し、生成した不溶性コレステロ ール−サポニンを濾過により除去する方法に関する。

聚ｌ肢歪■起盟 ミートおよび酪農製品を含む種々の食物に存在するコレステロールはヒトの高レ ベル　コレステロール源として古くから関係づけられている。例えば、乳脂肪は 通常、１００ｇ当り約３１０ｍｇの全コレステロールを含有している（Ｃｈｒｉ ｓｔｉｅ（１９８３））。さらに、乳脂肪における実質的にすべてのコレステロ ールは遊離コレステロールとして、エステルとして存在する痕跡量のコレステロ ールと存在している。

それ故、食物として最終的に用いる酪農製品からコレステロールを除去する、経 費のかがらない大規模プロセスが要望されている。

コレステロールを酪農製品がら除去する方法は知られている。

これらの方法としては、例えば、蒸気ストリンピング、二酸化炭素を用いる超臨 界流体抽出（ＳＦＥ）　、特異的酵素コレステロール還元酵素、またはシクロデ キストリンを用いる吸着を挙げることができる。しかしながら、これらの他の方 法は時間がかがり、装備を増強させおよび／または経費がかさむことになる。

次に、一般に、および特に興味のある引用例を列挙する：「パターンｌ１ｌｌｌ Ｉｌ旨におけるβ−シトステロール」、へ〇へＣｏｆｆｉｃｉａｌＭｅｔｈｏｄ 　ｏｆ　Ａｎａｌ　ｓｉｓ、第１４版、ページ５２２　Ａｓ５ｏｃ、　Ｏｆｆ、 　Ａｎａｌ。

Ｃｈｅｍ、バージニア州、アーリントン。

Ｗ、　Ｗ、クリステイー氏、「乳脂質の成分および構造」、油１ｏ　ｍｅｎｔ　 ｉｎ　Ｄａｉｒ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒ　、　Ｖｏｌ、　ｎ、ベージ５　（１９８３ ）、Ａｐｐｌｉｅｄ　５ｃｉｅｎｃｅ　、ニューヨーク州、ニューヨーク。

グラウレート氏はか、「生物細胞膜におけるサポニンの作用」、Ｎａｔｕｒｅ、 　Ｖｏｌ、　１９４　：　９５３〜９５５（１９６２）、門、カテス氏はか、「 総および遊離コレステロールＪ　、Ｔｅｃｈｎｉｕｅｓ　ｏｆ　Ｌｉ　１ｄｏｌ ｏ　、　ベージ３６０（１９７２）　、Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、 ニューヨーク州、ニューヨーク。

■、カッツ氏はか、「非エステル化ステロールの迅速分離方法および乳脂肪粗悪 品を植物性油脂で検出する適用方法Ｊ、Ｊｈ江ＬしＬ、　Ｖｏｌ、５０　：　１ ７６４〜１７６８（１９６７）。

Ｋ、　Ｒ，プライス氏はか、「食物および飼料におけるサポニンの化学的および 生物学的重要性」、ＣＲＣＣｒ１ｔｉｃａｌ　Ｒｅｖｉｅｗｓ　１ｎＦｏｏｄ　 ５ｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｎｕｔｒｉｔ土ｏｎ　Ｖｏｌ、２６　：　２７〜１３ ５゜Ｄ、　Ｐ、シュワルツ氏はか、「コレステロールを乳脂肪から除去する迅速 定量手順Ｊ、Ｊユ江旦」且、Ｖｏｌ、８　：　５４〜５９（１９６７）。

Ｐ、ジーマン氏、「免疫溶解、浸透溶解および薬物誘導溶解における膜障害の微 細構造」、ハ鼓胆［ｋ匹並虹旦ｓ　、　Ｖｏｌ、３３　：２１１６〜２１２０９ 　（１９７４）。

Ｓ、タカジ氏はか、「ジキトニンー　トレスチロール複合体の形成：側鎖の長さ の変化の効果Ｊ　、Ｃｈｅｗ、Ｐｈａｒ、Ｂｕｌｌ、　３０　：　３４８５〜３ ４９１　（１９８２）。

Ｄ、　Ｐ、シュワルツ氏ほか、米国特許第３４５０５４１号明細書。

Ｊ、ボサ氏、米国特許第４５４６０９７号明細書。

Ｔ、　Ｅ、フリア氏（編集者）　、ＣＲＣＨａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　 Ａｄｄｉｔｉｖｅｓ距、ＣＲＣＰｒｅｓｓ　、フロリダ州　ポッカ　ラタン。

Ｗ、　Ｊ、バースト氏はか、「非固体の指示体として卵ヌードルのコレステロー ル含有量のＨＰＬＣ決定Ｊ　、ユ壕ｙ四立り旦り入旺譚胆上包ｒａｌ　Ｆｏｏｄ 　Ｃｈｅｍｉｓｔｒ　、　Ｖｏｌ、３３　：　８２０〜８２２（１９８５）。

Ｍ、　Ｒ，マリノフ氏はか、米国特許第４２４２５０２号明細書、１９８０年１ ２月３０日発行（クラス５３６１５）。

Ｊ、コーレゲロンギュ氏はか、米国特許第４８８０５７３号明細書、１９８９年 １１月１４日発行（クラス２６０／４２０）。

Ｓ、アリッチ氏はか、米国特許第４５２４０６７号明細書、１９８５年６月１８ 日発行（クラス５１４／３３）。

Ｆ、ウエノベ氏はか、米国特許第４４８９０６７号明細書、１９８４年１２月１ ０日発行（クラス４２４／１９５）。

欧州特許出願第３１８３２６号明細書、１９８９年５月発行。

この出願の明細書に引用したすべての引例、特許明細書、参考書などは引用例と してここに加える。

サポニンは、植物において、主として、しかし排他的でなく存在するグリコシド であり、一般に３−βＯＨステロールの結合、水中における著しい発泡、界面活 性、および水溶液を血流に注入する場合の赤血球の溶血を含む多くの特性を与え る。サポニンは食物および飼料に用いる植物に広く存在し、かつその種々の化学 的および生物学的特性に反映する広範にわたる種々の構造を有している。一般に 、分子のアグリコンまたは非糖蛋白質は疎水性ステロイドまたはトリテルペノイ ド（ｔｒ　ｉ　ｔｅｒｐｅｎｏ　１ｄｏａ　１　）誘導体であるのに対して、極 性炭水化物部分は種々の鎖長さの異なるオリゴ糖を含んでおり、あるものは単糖 類または三糖類のみである。アグリコンと結合する糖はラムノース、グルコース 、ガラクトース、キシロース、アラビノース、グルクロン酸またはその混合物で ある。オリゴ媚のアグリコンへのカップリングは糖残留物の還元末端間のへミア セタール結合、またはアグリコンのヒドロキシル基と結合したグルグロン酸塩（ ｇｌｕｃｕｒｏｎａ　ｔｅ）のカルボキシル基間のエステル結合を伴う。

コレステロール−グリコシド複合体の性質は確かに知られていないと思われてい る。電子顕微鏡に基づき、ジーマン氏（１９７４年）およびグラウレート氏はか （１９６２年）は、３個のサポニン分子が内方に突出する炭水化物残留物を介し て結合する、ミセル型配置を提案している。周囲におけるアグリコンはコレステ ロールと等モル化学量論で複合する。最近、タカギ氏はか（１９８２年）はジギ トニンと一連のコレステロール類似体との相互作用の研究に基づくサポニン−コ レステロール複合体についての構造モデルを提案している。タカギ氏はか（１９ ８２年）によるデータはジーマン氏（１９７４年）およびグラウレート氏はか（ １９６２年）により記載された構造と一致しないか、または矛盾している。

タカギ氏はか（１９８２年）によるデータでは、ジギトニンーコレステロール複 合体は、ジギトニン分子が結合してコレステロールがゲスト輸ｕｅｓ　ｔ）であ る疎水性ポケットを形成する包接化合物であることを提案している。タカギ氏は か（１９８２年）はコレステロール：ジギトニン複合体の化学量論が１：１であ ることを確めている。

多くの、しかしすべてではないが、サポニンは静真菌性（ｆｕｎｇｉｓｔａｔｉ ｃ）である。サポニンは赤血球を溶血できるために、サポニンは、一般に静脈注 射した場合に有毒である。しかしながら、サポニンは消化管から吸収されないた めに、多くのサポニンの経口毒性は全く低い。この場合に、飼料に比較的に高レ ベルで含ませたサポニンは家禽および単胃哺乳動物において生長速度を下げる傾 向があることが確められている。食物および飼料のもっとも一般的なサポニンは 有意な経口毒性がないように思われる。例えば、ひよこ、マウスおよびラットに 高濃度で供給した大豆サポニンは有害な効果が見られていない。血清コレステロ ールおよびトリグリセリドにおける潜在的に有益な減少が観察されることから、 日常の飼料に１％レベルで６ケ月にわたりアルファルファ　サポニンを与えたラ ットには悪い効果は見られていない。サル（またはマカカ　）　スジクー１ス（ Ｍａｃａｃａ　ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）として知られている霊長類）におい て、アルファルファ　トップ（ａｌｆａｌｆａ　ｔｏｐ）サポニンの規定しない 混合物を１８ケ月にわたって与えた後、悪い効果は観察されなかった。

セッケンボク（または　イーシア　サボ　■ア（Ｑｕｉｌｌａｊａｓａｐｏｎａ ｒｉａ＞として知られている）からのトリテルペノイドサポニンは食品添加物（ 発泡および乳化剤）としである国において広く用いられており、かつ毒物学試験 が行われている。かかる材料を１．５％のように高いレベルで与えたラットにつ いての短期間の飼育研究においても、またマウスに長期間にわたり与えても有毒 な効果は観察されていない。二ツカ植物（ユッカモハベンシス（Ｙｕｃｃａ　ｍ ｏｈａｖｅｎｓｉｓ）のサポニン含有抽出物は大豆の溶血より小さいことが確め られている。普通の王ユ互−与えた場合に、生長、飼料利用性、血球数、血液グ ルコースおよび非蛋白質Ｎ、または死後の総または組織見出物輸ｒｏｓｓ　ｏｒ ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ　ｆｉｎｄｉｎｇｓ　ｐｏｓｔ−ｍｏｒｔｅｍ）に関 して有害な効果は示されていない。

食物サポニンによる生長の抑制は先ずアルファルファを与えたひなどりにおいて 観察されている。効果は１％のコレステロールを飼料に加えることにより克服で き、これは消化管においてサポニンによる複合体が形成することによるものと思 われている。飼料サポニンによる生長抑制は鳥類種および他の単胃動物（特にブ タ）および研究用哺乳動物において観察されている。

トレフォイル（またはメー゛カゴ　ルプ’ＪＪ−（Ｍｅｄｉｃａｇｏ　Ｉｕｐｕ ｌｉｎａ）として知られている）から、およびキラヤ（Ｑｕｉｌｌａｊａ）およ びカスミソウ（Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌａ）種のような他の種類からの分離サポニン は、また舊歯動物において生長抑制を示している。霊長類は飼料サポニンの有害 な生物学的効果に極めて抵抗することが示されており、ある研究では霊長類は飼 料中のサポニンに適応するものと思われている。食物および飼料におけるサポニ ンは経口毒性の程度が低いものと思われている。

異なるサポニンは、種々の動物飼料に非毒性レベルで含ませた場合に、低コレス テリン血症効果に作用することが多くの研究者により観察されている（プライス 氏はか（１９８７年）参照）。

効果として、コレステロールが、消化管において、より多く結合してその吸収が 抑制されるものと思われている。また、サポニンは胆汁酸の糞排出物を増すこと が確められている。胆汁酸は体コレステロール（ｂｏｄｙ’ｓ　ｃｈｏｌｅｓｔ ｅｒｏｌ）から誘導されるから、この事はコレステロールの体負担（ｂｏｄｙ　 ｂｕｒｄｅｎ）を低下し、これにより血清コレステロールを下げる。サポニンの 低コレステリン血症効果はある生物医学研究を促進し、血清コレステロールを下 げる飼料にサポニン含有食物または飼料を用いることが提案されている。

サポニンは種々の一般の食物および飼料、並びに草木（ｈｅｒｂｓ　）および強 壮剤に存在する（プライス氏はが（１９８７年））。実質的濃度のサポニンを含 有するある食物、草木、調味料、健康食品、強壮剤および飼料を次の表１に示す 。

（プライス氏はか（１９８７年）参照）菫宣１益　上！三ノ」と 食品 大豆−全脂肪　０．２２−５．６　乾量蛋白質分離物　０．３−２．５　乾量 ０．７６　乾量 脱脂大豆粉　０．６７　乾量 発酵大豆製品　０．２５−０．８４乾量トウフ　０．３０−２．１　乾量 ライマメ　０．１０　乾量 インゲンマメ　０．２−１．６乾量 白いインゲンマメ　０．４−２．１乾量かん詰めにしたベークド　ビーンズ　０ ．４５　乾量グリンピース　０．１８−４．２　乾量落花生　０．００１−１． ６乾量 アスパラガス　１．５乾量 ニンニク　０，３乾量 アルフアルフアの芽　８．０−８．７乾量１立１苗　世ｊ三べべ躬− 食品 オンハク　０．１−０．１３　乾量 ゴマの実　０．３０　乾量 トマトの実　１．０乾量 茶 草木、調味料、健康食品、強壮剤 サルビアの葉 コロハ アルファルファ　０．１７−１．７１ アルフアルフア粉　１．２６ セイヨウトキノキ　３−６ 表１から明らかなように、サポニンはヒトにより消費される広範囲にわたる種々 の植物に存在していることがわかる。また、普通の動物飼料は実質的な量のサポ ニンを含んでいる。１０％サポニンを含有する王立ｉ＄　（Ｑｕｉｌｌａｊａ　 ５ａｐｏｎａｒｉａ）（セッケンポク）（プライス氏はか（１９８７年））およ び王工左天ハベネンシス（Ｙｕｃｃａ　ｍｏｈａｖｅｎｅｓｉｓ）（サポニンに 冨んでいる）は、明らかに制限されない食品添加物として米国において明らかに 提案されている（フリア氏（１９８０年））。これらのサポニン源の粗抽出物は 、一般に利用されており、比較的に安価である。

ベンゼンを用いる分析手順は、哺乳動物、例えばヒトについて知られている規定 された中毒心臓刺激であるビギトニンを用いる乳脂肪中のコレステロールを除去 および確定することについて記載するために報告されている（Ｄ、Ｐ、シュワル ツ氏はか（１９６７年））。ベンゼン溶剤の使用は困難さを有し、高価であり、 かつ食物に適用することができない。

それ故、食物に使用できる酪農製品からコレステロールを大規模で除去するのに 植物性サポニン（食物等級）の安価な粗抽出物を用いることは、極めて評価する ことができる。本発明はかかる手順を提供することである。

主里皇皿１ 本発明はサポニンまたはその混合物を用いて酪農製品からコレステロールを除去 する方法に関する。この本発明の方法は：（ａ）加工または未加工酪農製品を得 ；（ｂ）この酪農製品を、該酪農製品に存在する約９０％またはこれ以上のコレ ステロールに結合するのに有効量の無毒性サポニンで、約３５〜８０°Ｃの範囲 の温度で処理し；（Ｃ）約３５〜８０°Ｃの範囲の温度で、コレステロール：サ ポニン複合体を有効量の固体吸着側で処理し； （ｄ）不溶性固体コレステロール：サポニン複合体を液体から遠心分離または濾 過により分離し；および（ｅ）他の哺乳動物により摂取することのできる減少し た含有量のコレステロールを有する酪農製品を回収する段階を含んでいることに 特徴を有している。

牛乳またはクリームについての例においては、通常、若干の水が存在している。

バターまたはバター油脂の場合、段階（ｂ）において、水（全試料重量に対して １０〜２０倍過剰）を添加し、および段階（ｄ）において、固体複合体を通常、 遠心分離により除去し、次いでパター油脂および水相を、通常、遠心分離により 分離する。

好適例において、酪農製品は約３５〜５５°Ｃ１特に４０°Ｃでサポニンと接触 させた約０．０２〜０．２ｇ／　ｄの範囲のコレステロール濃度を有するパター 油脂である。

他の好適例において、酪農製品は５６〜７５°Ｃ１特に約６５°Ｃでサポニン処 理してコレステロールを除去した牛乳またはクリーム図１はコレステロールを除 去するプロセスを示す工程図である。

図２はコレステロールをパター油脂から除去する１例のプロセスを示す工程図で ある。

図３はコレステロールを全牛乳から除去する１例のプロセスを示す工程図である 。

図４は対照試料における、および液体または固体サポニンの使用による処理バタ ー油脂におけるコレステロール　レヘルを示す柱状グラフである。

図５は本発明のプロセスを用い６５°Ｃで牛乳からコレステロールを除去した組 成の状態を示す柱状グラフである。最初、未処理の全牛乳は脂肪のグラム（ｇ） 当り約２．５ｍｇのコレステロールが存在することを示している（８回の実験の 組成）。サポニン−処理牛乳は脂肪のグラム当り約０．２５ｍｇのコレステロー ル　レベルを有していることを示している（３回の実験）。

図６はサポニンを用い、６５°Ｃでパター油脂からコレステロールの除去状態を 示す一連のＨＰＬＣクロマトグラムである。

図６Ａはコレステロールの標準対照試料についての高圧液体クロマトグラムであ る。

図６Ｂは脂肪のグラム当り２．５ｍｇのコレステロールを含有するバター油脂対 照試料の高圧液体クロマトグラムである。

図６０はコレステロールを９３．４％除去（脂肪のグラム当り０．１７ｍｇのコ レステロールに対して）した状態を示す処理バター油脂の高圧液体クロマトグラ ムである。

図７は存在する脂肪のグラム当り異なる濃度のサポニンを用い、６５°Ｃでクリ ームからコレステロールを除去した状態を示す一連のＨＰＬＣクロマトグラムで ある。

図７Ａは脂肪のグラム当り３．７ｍｇのコレステロールを含有スる対照クリーム からの乳脂肪の高圧液体クロマトグラムである。

図７Ｂは３５％のコレステロール除去を示す脂肪のグラム当り０．０４ｇのサポ ニンで処理したクリームの気液クロマトグラムである。

図７０は６５％のコレステロール除去を示す脂肪のグラム当り０．１ｇのサポニ ンで処理したクリームの高圧液体クロマトグラムである。

図７０は９２％のコレステロール除去を示す脂肪のグラム当り０．０４ｇのジギ トニンで処理したクリームの対照試料の高圧液体クロマトグラムである。

「バター油脂（ｂｕｔｔｅｒｏｉｌ）　Ｊとは牛乳または他の酪農製品から誘導 した油脂（ｏｉｌ）または無水乳脂肪を意味する。

「セリットＴ′４（ＣＥＬＩＴＥ　”）　Ｊは珪藻土および関連する製品につい ての登録商標である。

「珪藻土」とは珪藻から誘導し、二酸化珪素の形態である固体濾過助剤および吸 着剤を意味する。

「低温殺菌クリーム」とは６５°Ｃで３０分間にわたり加熱する普通の低温殺菌 条件で処理されたクリームを意味する。

「低温殺菌牛乳」とは７１．６°Ｃで約１５秒間、加熱する普通の低温殺菌条件 で処理された牛乳を意味する。

「生クリーム（ｒａｗ　ｃｒｅａｍ）　Ｊとは未加工牛乳から得たクリームを意 味する。

「未加工牛乳（ｒａｉ＋　ｍ１ｌｋ）」とは授乳期の哺乳動物から得た牛乳を意 味する。

「サポニン」とは３−βＯＨステロールと効果的に結合する植物において主とし て、しかも排他的でなく生ずるグリコシドを意味する。

罷綴星説里 本発明の目的はパター油脂、酪農製品、および食物、例えば卵、エビジャコなど を含む他のコレステロールからコレステロールを除去する改良方法を提供するこ とである。かようにして得たヒトの食物等級の食品（例えば酪農製品）は極めて 低いコレステロール　レベルを有するか、または実質的にコレステロールを含ん でいない。

本発明においては、まずパター油脂を一定量の食物等級のサポニンと混合し、必 要に応じて食物等級の石油エーテルまたはアルキル　エーテルで洗浄して脂質可 溶性材料を除去する場合に、不溶性コレステロール−サポニン複合体を実質的に 定量的に生成し、存在するコレステロールを約８０％または９０％またはこれ以 上に除去できることを確めた。

必要に応じて、１〜８０倍、好ましくは５〜３０倍の量の水を食品に、食物等級 サポニンを添加する前、添加中、または添加後に加える。コレステロールの任意 の添加物からの除去は、一般に当量のように思われる。

次いで、珪藻土のような粉末吸着剤、例えばセリットを加え、混合する。

固体生成物を連続的手段または回分式手段で、普通の遠心分離または濾過により 除去する。予備パイロン）　（ｐｒｅｐｉｌｏｔ）状態のモデルで用いる普通の 酪農用遠心機はウエストファリア　セパレータ（Ｗｅｓｔｆａｌｉａ　５ｅｐａ ｒａｔｏｒ）Ａ、　Ｇ、（ドイツ国、エールド）、またはそのアメリカン　セン トリコ　インコーポレーション（カリフォルニア州　９４４０４　、フォスター 　シティ　第３通り、３４００）から入手することができる。また、大型のパイ ロットプラントおよび商業規模の分離装置はセントリコ　インコーポレーション から入手することができる。

水が存在する場合には、非混和性相を遠心機を用いて、または濾過により分離す ることにより除去する。

ヒト食物等級のバター油脂含有食品（例えば酪農製品）は約８０〜９０％または これ以上に除去するコレステロールを有している。

本発明の代表的なバター油脂からコレステロールを除去することについて例示す る。この方法は酪農製品からのコレステロールの除去に用いるのに好ましいが、 しかし特に食物に用いる任意の脂質混合物から自然に生ずる（３β−ヒドロキシ ）ステロールを分離するのに適用することができる。これらの他のコレステロー ルは菌類からのエルゴステロールおよびチモテスロール、および植物からのスチ グマステロール、スピナステロールおよび他の植物ステロールを包含している。

酪農製品は本発明の第１の観点であるけれども、任意のコレステロール含有食物 はそのコレステロール　レベルを本発明により減少することができる。卵（また は卵黄）は裏ごしくｐｕｒｅｅｄ）（液体卵（ｌｉｑｕｉｄ　ｅｇｇｓ））　、 必要に応じて有機溶剤および／または水に溶解し、サポニン／吸着剤（セリット ＴＭ）で処理することができる。コレステロールは分離でき、コレステロールの 少ない粉末卵を濃縮により回収することができる。

添付図面において、図１はコレステロール除去プロセスの１例の工程を示してい る。酪農製品１０（または他のコレステロールを含有する材料、例えば卵）を食 物等級のサポニン１１と、コレステロール：サポニンが複合するのに効果的な時 間にわたって撹拌して混合物１２を生成する。水はパター油脂に加えるのが好ま しい。パター油脂の重量の約１〜８０倍、好ましくは約５〜３０倍、用いること ができる。珪藻±１３（または他の吸着剤１４）を加え、撹拌する。不溶性のコ レステロール：サポニン：吸着剤複合体１５を遠心分離または濾過１６によって 分離する。さらに、ができる。液体濾過物１７は減少したコレステロール含有量 を有し、次の製品、例えば食物等級の酪農製品にすることができる。

液体／固体を、この技術における標準装備であるポンプ、パイプなどで運搬する 。

図２はコレステロールをパター油脂から除去するプロセスの工程を示している。

パター油脂（約３００ｇ）　２１およびサポニン（約１２ｇ）２２を懸濁させ、 容器２４において４０〜８０°Ｃで撹拌機２３を用いて撹拌する。水２２Ａ（重 量で１〜８０倍、好ましくは５〜３０倍）を４０°Ｃで添加する。パター油脂は 生長する病原体および／または細菌についての良好な媒質でないため、この低い プロセス温度（４０°Ｃ）は利用できる。コレステロールに対して、サポニンを 約０．０２４〜０．２４ｇ／ｇの範囲の少量の脂肪、好ましくは約２０．２４ｇ ／ｇの脂肪において吸着剤２５、例えばセリット５４５に加えることができる。

この混合物を４０°Ｃで１〜２０時間（好ましくは１２時間）にわたって撹拌す る。バター油脂コレステロール：サボニン：セリットをポンプ２６により、約４ ０°ｃで約１００〜１００００ｇ　（好ましくは１０００ｇ　）の範囲で作動す る遠心機２７に圧送する。不溶性サポニン　コレステロール：サポニン：吸着剤 ２８を除去する。

液体をポンプ２９の使用により圧送し、フィルター（例えばセリット）３０を介 して加温濾過して残留固体を除去する。コレステロールの減少したパター油脂を 回収する。必要に応じて、バター油脂／水は液体の分離に適応する遠心機２７Ａ を通す。水を除去し、コレステロールの減少したパター油脂を回収する。

図３はコレステロールを全牛乳（またはクリーム）から除去する一般のプロセス の工程を示している。全牛乳１０Ａおよびサポニンをミルク　タンク１１におい て６５℃で混合し、約０．５〜２時間の範囲、好ましくは約１時間にわたって撹 拌する。生成物をポンプ３１を用いて圧送する。次いで、生成物をタンク３３に 送り、ここでタンク３３に吸着剤、例えばセリット５４５を加えてエマルジョン を破壊する。固体吸着剤：コレステロール：サポニン複合体を上述するように遠 心機を用いて分離する。コレステロールの減少した牛乳を直接に、または食品に 用いることができる。

図４はコレステロールをパター油脂から異なる等級のサポニンを用いて除去する ことを示している。

図５はコレステロールを牛乳から除去することを示している。

約８０％除去されることが観察される。

バ　−′°　ヒ　たは　２１′コレスーロールの、（ａ）粗サポニン（約０．６ ｇ）をリントバーストのペンフ（Ｐｅｎｃｏ）から得る。

（ｂ）パター油脂を１０〜１００ｍｇ／ｒｄ（好ましくは４５ｍｇ／　ｄ）のサ ポニン溶液と混合し、パター油脂のグラム当り１０〜１００ｍｇ　（好ましくは ４抛ｇ）の最終濃度のサポニン抽出物が存在する。この事は乳脂肪におけるコレ ステロールの約２０倍（重量で）である。

２０℃または冷やして著しく泡立てたクリームにおいてマヨネーズの粘度および 外観を有するエマルジョンを生成する。

（ｃ）パター油脂および水溶液を、標準水浴振盪機において約１００〜３００ｒ ｐｍの範囲（好ましくは２００ｒｐｍ）で、３５〜７５℃、好ましくは４０°Ｃ で、約１〜２４時間、好ましくは約８〜１６時間、特に好ましくは約１２時間に わたり振盪する。

（ｄ）エマルジョンに、パター油脂のグラム当り約２０〜１０００■、好ましく は１００■のセリット＃５３５を加える。反応混合物を約３５〜７５゛Ｃ１好ま しくは４０゛Ｃで約１〜２４時間、好ましくは２時間にわたり約１５０〜３００ ｒｐｍ、好ましくは約２０Ｏｒｐｍで振盪しながら維持する。

（ｅ）エマルジョンを約４０〜７５°Ｃ１好ましくは５０〜５５°Ｃ１特に好ま しくは５２°Ｃでセリシト５６０濾過ケークに通して濾過する。バター油脂の粘 度が低温度で高いために、温度を上げる。

（ｆ）濾液を、好ましくは４０°Ｃで２つの液相に分離し、精製バター油脂を回 収する。

（ｇ）上述するー、Ｊ、バースト氏ほかによる高圧液体クロマトグラフィー手順 を用いて、バター油脂に残留するコレステロールのレベルを測定するために、少 量（０，１ｇ）の脂肪を除去する。

１−ム　たは　）゛コレスーロールの、（ａ）牛乳またはクリームを食物等級の サポニン抽出物（乾燥粉末が好ましい）と、牛乳またはクリーム中の脂肪のグラ ム当り約１０〜１００■（好ましくは４０■）のサポニンを用いて混合する。

（ｂ）サポニン−牛乳混合物を水浴振盪機において５６〜７５°Ｃ（好ましくは ６５°Ｃ）で１〜２４時間、好ましくは２時間にわたり振盪（２５Ｏｒｐｍ）す る。

（ｃ）セリット１ｔ５４５　（マンビレ　コーポレーション（Ｍａｎｖｉｌｌｅ ｃｏｒｐ、）　、コロラド州　デンヴアー）を振盪機フラスコに加え（牛乳中の 脂肪のグラム当り１００■のセリット）　、２５０ｒｐｍで１時間にわたり振盪 する。

（ｄ）反応混合物を、ウォーター　バキューム（ｗａｔｅｒ　ｖａｃｕｕｍ）を 用いて、６５°Ｃでセリット＃５６０濾過ケーク（約１７４インチ厚さ）を通し て濾過する。

（ｅ）この点において、濾過牛乳を回収し、コレステロールヲ引用例として上述 するＷＪ、バースト氏ほかによるＨＰＬＣ手順により調べる。

１例において、バター油脂を約３５〜５０°Ｃの範囲、好ましくは約４０°Ｃで 請求の範囲に規定するプロセスの全段階に従って処理する。

他の例において、未加工牛乳、低温殺菌牛乳、生クリームおよび低温殺菌クリー ムを約５６〜７５°Ｃの範囲で請求の範囲に規定するプロセスの全段階に従って 処理する。また、牛乳は均質化しないのが好ましい。

１例において、キラヤ（４０■）からのサポニン抽出物を牛乳中のバター油脂の グラムについて混合する。この混合物を６５℃±０．１°Ｃで２時間にわたり振 盪する。次いで、混合物を２５ｇのセリット＃５６０で、６５°Ｃ±１°Ｃで１ 時間にわたり２００ｒｐｍで振盪しながら処理する。次いで、牛乳をセリット５ ６０の濾過ケークを通し、６５°Ｃで加温濾過する。このように処理した牛乳は 、牛乳において最初に確めたコレステロールの約２５重量％に減少したコレステ ロール　レベルを有している。

次に記載する例は例示的に記載している。これらの例はいかなる手段を制限する ものでない。

財↑Ｌ骸よ工」【置 ギロタリー　ウォーターバス（Ｇｙｒｏｔａｒｙ　Ｗａｔｅｒｂａｔｈ）振盪機 、モデルＧ７６、ニュ　ブラウンシュヴアイク　サイエンティフィック、エディ マン、ニューシャーシー州。

パリアン（Ｖａｒｉａｎ）高圧液体クロマトグラフ（モデル５０２０　）、カリ フォルニア州　ウオールナツツ　クリーク、ミッチェルドライブ　２７００゜カ ラム　アルチッチ（Ｃｏｌｕｍｎ　ＡＬＴＥＣＨ）　＄２８０２４パーサパック （ＶＥＲＳＡＰＡＣＫ）　Ｃ１Ｃ１３１０Ｕ−２５０および直径４．１ｍｍ、溶 離剤は窒素雰囲気下に貯蔵した１％イソプロパツール／ヘキサンにする。

本発明において用いたセリットはマンビレ　コーポレーション（Ｍａｎｖｉｌｌ ｅ　Ｃｏｒｐ、）　、コロラド州　デンヴアーから入手することができる。セリ ット５６０およびセリット５４５は本発明におｌＩｒ３）゛コレスーロールの、 （ａ）キラヤ、０．６ｇ　（１００ｄｌのジエチルエーテルで２回、予備洗浄し た）を次に示す牛乳の６種の比較試料のそれぞれに加えた：Ａ、対照−サポニン を含まない Ｂ、均質化牛乳、３７℃＋１Ｈ１ＮａｐｓＣ０非均質化牛乳、３７°（：　＋１ ｄ　Ｎａ１Ｊ＋Ｄ、均質化、４°Ｃ Ｅ、　非均質化、４°Ｃ Ｆ、　クリーム、３７°Ｃ，ＩＩｄＮａＮ。

Ｇ、　クリーム、４°Ｃ （ｂ）試料Ａ−Ｇを振盪機（２５０ｒｐｍ）を用い、示している温度で、４時間 にわたり振動させた。

（Ｃ）各試料に、セリット＃５４５　（例えばマンビレ　コーポレーションから の）（２ｇ）を加えた。

（ｄ）各試料をそれぞれの上記温度で１時間にわたり、再び振動させた。

（ｅ）牛乳試料Ａ、Ｂ、Ｃ，Ｄ、Ｅ、ＦおよびＧを７２°Ｃに５分間にわたり加 熱した。

（ｆ）次いで、各試料をセリフ）　１１５４５濾過ケークを介して濾過し、５０ ｄのスクリュー−トップ試験管（ｓｃｒｅｗ−ｔｏｐ　ｔｅｓｔ　ｔｕｂｅ）に 回収した。

輸）次いで、これらの処理した酪農製品試料を、例２に従ってコレステロールに ついて分析した。

Ｌａのコレステロール′ （ａ）９Ｉ！ｄｌの牛乳またはクリームからの０．１ｇの処理バター油脂を次の コレステロール分析のためにけん化した（ｓａｐｏｎｉｆｉｅｄ）　：（ｂ）各 試料を、５ｄの２Ｎメタノール性ＫＯＨと試験管に入れてけん化した； （ｃ）けん化を６５°Ｃ水浴において４５〜６０分間にわたり継続した。

（ｄ）各試料および試験管を周囲温度（約２０″Ｃ）に冷却した。

（ｅ）各試験管に、５ｄの水および１戚の１０％塩化ナトリウム溶液を加えた。

（ｆ）次いで、各試料を１０Ｉｎ１石油エーテル／ジエチルエーテル（１／１　 ：　Ｖ／Ｖ）で２回抽出した。水相を捨てた。

（ｇ）２つの有機相を合わせ、温水浴からゆるやかに加熱される窒素流を用いて 蒸発させた。

（ｈ）残留物を２０ｄの石油エーテルに再懸濁させた。

（ｉ）　１０ｄの有機相をシリカン（ｓｉｌｉｃａｎ）　５ＥＰ−ＰＡＣＣ−１ ８、Ｗａ　ｔｅｒｓＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ（マサチューセッツ州　メトフォード ）に通し流出液を捨てた。

（ｊ）　５ＥＰ−ＰＡＣを、試験管から捨てたＩＯＭＩ！の７％エチルエーテル −石油エーテルで洗浄し、５ＥＰ−ＰＡを７５％エチルエーテル石油で溶離した 。溶出液（ｅｌａｖａｎｔ）を１５　ｙｔｌの試験管に導入した。

（ｋ）有機溶剤を温水浴からのゆるやかな熱を用いる窒素流で蒸発させた。

（１）固形物を２　ｄのＨＰＬＣ移動相ヘキサン：イソプロパツール（９９，９ １０，１：　Ｖ／Ｖ）　”ｉ：’再懸濁した。

（ｍ）次いで、各試料をバースト氏ほかの方法によるコレステロールについての （ｌ（ＰＬＣ）分析に供した。

結果を図６〜７に示す。

皇狂ｉ王皿 ■１ ハ　−ゞ　８　たは　５　）゛コレステロールの、（ａ）供給物（約０．６ｇ） からの粗サポニンを約１００戚のジエチルエーテルで２回抽出した。エーテルを 抽出物から真空を用いて乾燥することによって除去した。

（ｂ）バター油脂を洗浄サポニン溶液４５■／戚と混合し、バター油脂のクラム 当り４０■の最終濃度のサポニンを存在させた。２０°Ｃまたは冷却した著しく 泡立てたクリームにおいてマヨネーズの粘度および外観を有するエマルジョンを 生成した。

（ｃ）バター油脂および水溶液を標準水浴振盪機において２００ｒｐｍで、４０ °Ｃ１１２時間にわたって振盪させた。

（ｄ）エマルジョンに、１００■のセリット＃５３５　（バター油脂のクラム当 ／））を加えた。反応混合物を約４０℃で約２時間にわたり約２０Ｏｒｐｍで振 盪させながら維持した。

（ｅ）エマルジョンをセリット＃５６０濾過ケークに約５２°Ｃで通して濾過し た。バター油脂の粘度が低温度で高くなるために、温度を高めた。

（ｆ）゛濾液を４０°Ｃで２相に分離し、精製バター脂肪（ｂｕｔｔｅｒ　ｆａ ｔ）を回収した。

（ｇ）上述するー、Ｊバースト氏ほかによる高圧液体クロマトグラフィー手順を 用いて、バター油脂に残留するコレステロールレベルを測定するために、１部を 除去した。

拠土 パ　−　パイロ・・　プーント　１゛コレス一ロール辺ＪＬ友 （ａ）酪農協同組合（カリフォルニア州ツラレ　サウスＭストリート４００）か らのバター（３００ｇ）を普通の形式のミキサーに添加した。このミキサーは、 撹拌中の渦を避けるように構成した。

実験において、後で示す表Ａに示すように、高さ約１７ｃｍおよび内径６．８　 ｃｍの開放チャンバーを有する水ジャケット付一温度制御プレキジグラス　シリ ンダー（ＰＬＥＸＩＧＬＡＳ　ｃｙｌｉｎｄｅｒ　）を用いた。チャンバー内に 、４個の等しく離間した（０．９０．１８０．２７０°）平行バリヤーを有する 可動性バッフルを設け、これらのバリヤーはシリンダーの絶頂に位置させた。バ リヤーは所望の撹拌量により寸法を変えるようにした。これらのバリヤーは弯曲 表面の中心に向は約０．８　ｃｍｌ突出させた。このミキサー配置は撹拌の進展 が観察できるようにするのが有利である。微粉末の固体サポニン（１２ｇ　）を ２〜５分間にわたり添加した。次いで、混合物を普通の羽根車式撹拌機を用い、 ４０”Ｃで６０分間にわたり５０ｒｐｍでかきまぜた。エマルジョンを生成した 。このエマルジョン（２６または２６０ｇ　）を粉末セリノド＃５４５　（マン ビレ　コーポレーション、コロラド州　デンヴアー）６または６０ｇを含有する 水に添加した。次いで、この混合物を４０〜８０°Ｃで、４３５ｒｐｍで１０〜 ６０分間にわたりすみやかに撹拌した。油、水および固形物の３相系を生成した 。次いで、混合物を遠心清澄／分離機、予備パイロット規模の遠心機（ウエスト ファリア　セパレータ（Ｗｅｓｔｆａｌｉａ　５ｅｐａｒａｔｏｒ）　Ａ、Ｇ、 ドイツ国　オエルドＰ、Ｏ，Ｂｏｘ。

３７２０、またはセントリコ　インコーポレーション（Ｃｅｎｔｒｉｃｏ　Ｉｎ ｃ、）カリフォルニア州　フォフター　シティ−サード　アベニュ３４００、タ イプＴＡ　０５−００−１０５から販売された）に回分式で、または連続的に移 送した。混合物を４０〜８０″ＣＣ１８０００ｒｐで遠心して清澄にし固形分を 除去した。次いで、遠心装置を遠心ボウルを変えることによって液体分離機に転 換し、バター油脂および水相を６５〜８０°ＣＣ１１３７００ｒｐで分離した。

８０％以上のコレステロールをバター油脂から除去することができた。特定の反 応条件を表Ａに示す。

表Ａ パター油脂からコレステロールの除去 １　２．７０　１０．００　８０　６０　１７４０　２６０　７２　２．４２　 １９．３３　８０　６　１７４０　２６０　９３　０．６０　８０．００　４０ 　６　１９７４　２６　９４　０．５６　８１．３３　８０　６　１７４０　２ ６０　７り１−ム　たは　）゛コレスーロールの、（ａ）サポニン粗抽出物をジ エチルエーテル（粗抽出物約０．６ｇ当り１００ｍ１の抽出（２回））で抽出し た。エーテルを乾燥により除去した。

（ｂ）牛乳またはクリームをサポニン抽出物（乾燥粉末が好ましい）と、牛乳ま たはクリーム中の脂肪のグラム当り約４０■のサポニンを用いて混合した。

（ｃ）サポニン−牛乳混合物を振盪水浴中、６５゛Ｃで２時間にわたり振盪させ た（２５０ｒｐｍ）。

（ｄ）セリット＃５４５　（マンビレ　コーポレーション、コロラド州デンヴア ー）を振盪機フラスコに添加しく牛乳中の脂肪のグラム当り１００■のセリント ）、１時間にねたり２５０ｒｐｍで振盪させた。

（ｅ）反応混合物をセリント＃５６０濾過ケーク（約１７４インチ厚さ）に６５ °Ｃで、ウォーター　バキュームを用いて通して濾過した。

（ｆ）濾過牛乳を回収し、上述するＷ、Ｊ、バースト氏ほかによるＨＰＬＣ手順 により調べた。

通常、本発明の方法を用いて酪農製品からコレステロールを約６０〜１００χの 範囲を除去することができる。サポニンと複合しない酪農製品に存在する３−β −コレステロール　エステルは除去できない。通常コレステロールは１回の分離 において約９０％またはよくて、しばしば９５％またはこれ以上である。酪農製 品において低い量のコレステロールが好ましい場合には、サポニンと多数回処理 することができる。

五ｉ たはり１−ム）゛コレスーロールの、 乳脂肪のグラム当り２．０４〜２．５６■の範囲のコレステロールを含むコレス テロール濃度を有する牛乳試料を用いた。

−２についての−１１ ａ、　牛乳試料（約２００ｇ　：約３．５％脂肪を有する）を、６５°Ｃで食物 等級の固体粉末サポニン（リントバースト　コーポレーション（Ｌｙｎｄｈｕｒ ｓｔ　Ｃｏｒｐ、）製）（脂肪のグラム当り０．２ｇ）とかきまぜた。次いで、 試料を６０〜６５°Ｃで１〜２ｇのセリット＃５４５濾過ケークに通して加温濾 過した。

牛乳試料（低温殺菌しない、不均質化未加工試料）をコレステロールについて分 析した。特定試料についての結果を次の表試料　対照濃度　処理濃度　コレステ ロール除去率％１　２．５６■　０．４３■／ｇ８３ ２　２．５６　０．５３　７９ ３　２．４３　０．８２　６６ ４　２．５２　０．５２　７９ り１−ム゛　２についての−川 （ｂ）約４０％の脂肪を有するクリーム試料（低温殺菌しない、不均質化生クリ ーム、約５０ｇ）を食物等級の固体粉末サポニン（脂肪のグラム当り０．１ｇ、 ニューシャーシー州０７０７１　、リントバースト　ニューヨーク　アベニュー ５４０のリントバーストコーポレーションのベンフ（Ｐｅｎｃｏ）から入手）と かきまぜた。

混合物を普通の回転振盪機で６５°Ｃ１１時間にわかりかきまぜた。温生成物を セリット＃５４５濾過ケーク（１〜２ｇ）に通して濾過した。特定の例について の結果を次の表Ｃに示す。

盗−二９ 試料　対照濃度　処理濃度　コレステロール除去率％１　１．５０　０．５８■ ／ｇ６１ ２　１．６２　０．７２　５６ ３　２．２８　０．５２　７７ およびりＩ−ムについてのコレステロールゝ（ｄ）セリット濾過試料を５０戚の スクリュー　カップ試験管に回収した。

牛乳またはクリーム試料を４　’Ｃで１５分間にわたり１００００ｇで遠心処理 して約９０％脂肪のプラスチック　クリーム層を集めた。

３ｇのプラスチック　クリームを円錐試験管に入れ、これに１１ｄのＨ，Ｏおよ び１００μｌのテルジトール（ＴＥＲＧＩＴＯＬ）　７　（シグマ　ケミカル（ Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ）、ミズリー州　６３１７８　、ルイスス）　Ｉ Ｊ　−ト、Ｐ、０．　ＢＯＸ　１４５０８）を添加した。

この混合物を１００°Ｃで４５分間にわたり加熱し、次いで５分間にねたり１７ ００ｘｇで遠心処理して純粋のパター油脂を回収した（ホント）。

このバター油脂０．１ｇを取り出し、上述するようにコレステロールについて分 析した。

本発明の二三の一般的な例について記載したが、酪農製品および他のコレステロ ール含有製品からサポニンを用いてコレステロールを除去することができ、しか も、本発明は本発明の要旨および請求の範囲を逸脱しないかぎり、種々変更を加 えることができる。

ＦＩＧ、−１ Ｃ ＦＩＧ、６Ｃ 国際調査報告

Claims (19)

【特許請求の範囲】
1. １．（ａ）コレステロールを含有する加工または未加工酪農製品を得； （ｂ）酪農製品を、約３５〜８０℃の範囲の温度で前記酪農製品に存在する約９ ０％またはこれ以上のコレステロールと結合する有効量の無毒性食物等級のサポ ニンで処理し；（ｃ）段階（ｂ）のコレステロール：サポニン生成物を、約３５ 〜８０℃の範囲の温度で有効量の珪藻土または他の吸着剤で処理し； （ｄ）不溶性コレステロール：サポニン：吸着剤複合体を分離し；および （ｅ）減少した含有量のコレステロールを有する酪農製品を回収する各段階から なることを特徴とする加工または未加工酪農製品からコレステロールを除去する 方法。
2. ２．酪農製品は未加工牛乳、低温殺菌牛乳、生クリーム、低温殺菌クリーム、バ ターミルク、バター油脂または無水乳脂肪から選択する請求の範囲１記載の方法 。
3. ３．酪農製品をバター油脂とし、段階（ｂ）〜（ｅ）のプロセスを 約３５〜５０℃の範囲の温度で行う請求の範囲２記載の方法。
4. ４．段階（ｂ）において、サポニンを存在するコレステロールの約２０倍過剰に 存在させ、および接触時間を約５〜１６時間の範囲にし；段階（ｃ）において、 温度を約３５〜５０℃の範囲にし、および吸着剤をセリット、シリカ、アルミナ 、酸化アルミニウムまたはベントナイトから選択し；および段階（ｄ）において 、不溶性コレステロール／サポニン／吸着剤複合体を遠心処理により除去する請 求の範囲３記載の方法。
5. ５．段階（ｂ）において、サポニンを有機溶剤で予備洗浄して若干の可溶性有機 材料を除去し、およびサポニンをキラヤまたはユッカ植物から得て食物等級品位 にし、および段階（ｃ）において、吸着剤をセリット＃５３５珪藻土とする請求 の範囲４記載の方法。
6. ６．食品をバター油脂とし、段階（ｂ）において水をバター油脂の約１〜８０倍 （重量で）過剰で加え、およびバター油脂／水／固体生成物から固形分を遠心分 離により分離し、次いで遠心分離をバター油脂および水の分離に適用する請求の 範囲５記載の方法。
7. ７．不溶性コレステロール：サポニン：珪藻土をその３成分に分離する段階（ｆ ）を含む請求の範囲１記載の方法。
8. ８．酪農製品を未加工牛乳、低温殺菌牛乳、生クリームまたは低温殺菌クリーム から選択する請求の範囲２記載の方法。
9. ９．段階（ｂ）および（ｃ）において、約４０℃で行い、および吸着剤をセリッ ト＃５４５にし、および段階（ｄ）において、不溶性複合体をセリット５６０を 通す真空濾過を用い、約５５〜６０℃の範囲の温度で分離する請求の範囲８記載 の方法。
10. １０．コレステロールのバター油脂からの除去を約４０℃で行い、およびコレス テロールの牛乳またはクリームからの除去を約６５℃行う請求の範囲１記載の方 法。
11. １１．（ａ）コレステロールを含有する製品を得；（ｂ）前記製品を約３５〜８ ０℃の範囲の温度で、前記製品に存在するコレステロールを結合するのに有効量 のサポニンで処理し； （ｃ）約３５〜８０℃の範囲の温度で、コレステロール：サポニンを有効量の珪 藻土または他の吸着剤で処理し；（ｄ）不溶性コレステロール：サポニン：珪藻 土または他の吸着剤を沈降、濾過または遠心処理により分離し；および（ｅ）約 ９０％のコレステロールを除去した製品を回収する各段階からなることを特徴と するコレステロール含有製品からコレステロールを除去する方法。
12. １２．製品を酪農製品、液体または卵から選択する請求の範囲１１記載の方法。
13. １３．段階（ｂ）〜（ｅ）のプロセスを約３５〜５０℃の範囲の温度で行う請求 の範囲１２記載の方法。
14. １４．段階（ｂ）において、サポニンを存在するコレステロールの約２０倍過剰 に存在させ、および接触時間を約１〜１６時間にし；段階（ｃ）において、温度 を約３５〜５０℃の範囲の温度にし、および吸着剤をセリット、シリカ、アルミ ナ、酸化アルミニウムまたはベントナイトから選択し；および段階（ｄ）におい て不溶性コレステロール／サポニン／吸着剤複合体を遠心処理により除去する請 求の範囲１３記載の方法。
15. １５．段階（ｂ） において、 サポニンを有機溶剤で予備洗浄して若 干の可溶性有機材料を除去し、およびサポニンをキラヤまたはユッカ植物から得 て食物等級品位にし、および段階（ｃ）において珪藻土をセリット＃５３５にす る請求の範囲１４記載の方法。
16. １６．サポニンをユッカから得る請求の範囲１５記載の方法。
17. １７．不溶性コレステロール：サポニン：珪藻土をその３成分に分離する段階（ ｆ）を含む請求の範囲１１記載の方法。
18. １８．製品を卵とする請求の範囲１２記載の方法。
19. １９．段階（ｂ）および（ｃ）における混合を約４０℃で行い、吸着剤をセリッ ト＃５４５とし、および段階（ｄ）において、不溶性反応物をセリット＃５６０ に通す真空濾過を用い、約５５〜６０℃の範囲の温度で分離する請求の範囲１８ 記載の方法。