JP6927472B2 - トロンビン・アンチトロンビン複合体の測定試薬及び測定方法 - Google Patents
トロンビン・アンチトロンビン複合体の測定試薬及び測定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6927472B2 JP6927472B2 JP2017547362A JP2017547362A JP6927472B2 JP 6927472 B2 JP6927472 B2 JP 6927472B2 JP 2017547362 A JP2017547362 A JP 2017547362A JP 2017547362 A JP2017547362 A JP 2017547362A JP 6927472 B2 JP6927472 B2 JP 6927472B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tat
- antibody
- reagent
- antithrombin
- poly
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 102
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 title claims description 90
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 title claims description 40
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 title claims description 40
- 238000005259 measurement Methods 0.000 title description 24
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 title description 6
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims description 70
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims description 70
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 56
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 41
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 32
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims description 27
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 claims description 24
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 claims description 24
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims description 15
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 15
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 15
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 15
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 claims description 14
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 claims description 14
- 229950008679 protamine sulfate Drugs 0.000 claims description 14
- 108010072035 antithrombin III-protease complex Proteins 0.000 claims description 10
- -1 polyethyleneimino Polymers 0.000 claims description 10
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N Guanidine Chemical compound NC(N)=N ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 claims description 6
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 claims description 6
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 claims description 6
- 108010055896 polyornithine Proteins 0.000 claims description 6
- 229920002714 polyornithine Polymers 0.000 claims description 6
- ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N spermidine Chemical compound NCCCCNCCCN ATHGHQPFGPMSJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- DPBJAVGHACCNRL-UHFFFAOYSA-N 2-(dimethylamino)ethyl prop-2-enoate Chemical compound CN(C)CCOC(=O)C=C DPBJAVGHACCNRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- UAAGNEXELYDRHU-UHFFFAOYSA-M 3-hydroxypropyl-dimethyl-[2-(2-methylprop-2-enoyloxy)ethyl]azanium;chloride Chemical compound [Cl-].CC(=C)C(=O)OCC[N+](C)(C)CCCO UAAGNEXELYDRHU-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- HLZBIQSQHXRUIH-UHFFFAOYSA-N 5-(diethylamino)-2,3-dimethylpent-2-enoic acid Chemical compound C(C)N(CC)CCC(=C(C(=O)O)C)C HLZBIQSQHXRUIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 3
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N N-methyl-guanidine Natural products CNC(N)=N CHJJGSNFBQVOTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229920002518 Polyallylamine hydrochloride Polymers 0.000 claims description 3
- SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N dimethylaminoamidine Natural products CN(C)C(N)=N SWSQBOPZIKWTGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 3
- QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N n-propan-2-ylprop-2-enamide Chemical compound CC(C)NC(=O)C=C QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 claims description 3
- 229920000083 poly(allylamine) Polymers 0.000 claims description 3
- 229920000333 poly(propyleneimine) Polymers 0.000 claims description 3
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 claims description 3
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 claims description 3
- 229920002717 polyvinylpyridine Polymers 0.000 claims description 3
- IZYCXLQBOZUYAR-UHFFFAOYSA-M trimethyl-[3-(2-methylprop-2-enoyloxy)propyl]azanium;bromide Chemical compound [Br-].CC(=C)C(=O)OCCC[N+](C)(C)C IZYCXLQBOZUYAR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 102100030009 Azurocidin Human genes 0.000 claims description 2
- 101710154607 Azurocidin Proteins 0.000 claims description 2
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 51
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 36
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 33
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 22
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 21
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 21
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 21
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 16
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 13
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 11
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 8
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012767 chemiluminescent enzyme immunoassay Methods 0.000 description 4
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 4
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 4
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 4
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 4
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 101100480622 Caenorhabditis elegans tat-5 gene Proteins 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- 208000009190 disseminated intravascular coagulation Diseases 0.000 description 3
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N Butadiene Chemical compound C=CC=C KAKZBPTYRLMSJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006173 Good's buffer Substances 0.000 description 2
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 2
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 102100035140 Vitronectin Human genes 0.000 description 2
- 108010031318 Vitronectin Proteins 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 2
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- MUCZHBLJLSDCSD-UHFFFAOYSA-N diisopropyl fluorophosphate Chemical compound CC(C)OP(F)(=O)OC(C)C MUCZHBLJLSDCSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 239000002683 reaction inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 2
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 2
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 2
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 2
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QLIBJPGWWSHWBF-UHFFFAOYSA-N 2-aminoethyl methacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCN QLIBJPGWWSHWBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N Acrylonitrile Chemical compound C=CC#N NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 101710085461 Alpha-tubulin N-acetyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- FCKYPQBAHLOOJQ-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane-1,2-diaminetetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)C1CCCCC1N(CC(O)=O)CC(O)=O FCKYPQBAHLOOJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000052510 DNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101710096438 DNA-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical compound CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 102100031000 Hepatoma-derived growth factor Human genes 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001083798 Homo sapiens Hepatoma-derived growth factor Proteins 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108010063045 Lactoferrin Proteins 0.000 description 1
- 102100032241 Lactotransferrin Human genes 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 229920001030 Polyethylene Glycol 4000 Polymers 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- HDSBZMRLPLPFLQ-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol alginate Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(C(O)=O)C1OC1C(O)C(O)C(C)C(C(=O)OCC(C)O)O1 HDSBZMRLPLPFLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 108010085012 Steroid Receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- 208000001435 Thromboembolism Diseases 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N Vinyl acetate Chemical compound CC(=O)OC=C XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N Vinyl chloride Chemical compound ClC=C BZHJMEDXRYGGRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 125000005396 acrylic acid ester group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 150000005215 alkyl ethers Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005037 alkyl phenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- BZRLYGTWEDFWCR-UHFFFAOYSA-N amino 2-methylpent-2-enoate Chemical compound CCC=C(C)C(=O)ON BZRLYGTWEDFWCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- KLIYQWXIWMRMGR-UHFFFAOYSA-N buta-1,3-diene;methyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound C=CC=C.COC(=O)C(C)=C KLIYQWXIWMRMGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 235000011132 calcium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 238000003163 cell fusion method Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000004581 coalescence Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 1
- 229960005051 fluostigmine Drugs 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229940031574 hydroxymethyl cellulose Drugs 0.000 description 1
- 229920003063 hydroxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N l-phenylalanyl-l-lysyl-l-cysteinyl-l-arginyl-l-arginyl-l-tryptophyl-l-glutaminyl-l-tryptophyl-l-arginyl-l-methionyl-l-lysyl-l-lysyl-l-leucylglycyl-l-alanyl-l-prolyl-l-seryl-l-isoleucyl-l-threonyl-l-cysteinyl-l-valyl-l-arginyl-l-arginyl-l-alanyl-l-phenylal Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CSSYQJWUGATIHM-IKGCZBKSSA-N 0.000 description 1
- 229940078795 lactoferrin Drugs 0.000 description 1
- 235000021242 lactoferrin Nutrition 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 125000005397 methacrylic acid ester group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920000371 poly(diallyldimethylammonium chloride) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001281 polyalkylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 229940068984 polyvinyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000770 propane-1,2-diol alginate Substances 0.000 description 1
- 235000010409 propane-1,2-diol alginate Nutrition 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 229940063673 spermidine Drugs 0.000 description 1
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 102000005969 steroid hormone receptors Human genes 0.000 description 1
- 229920003048 styrene butadiene rubber Polymers 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 229960003766 thrombin (human) Drugs 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/536—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with immune complex formed in liquid phase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/544—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being organic
- G01N33/545—Synthetic resin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/81—Protease inhibitors
- G01N2333/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
- G01N2333/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
- G01N2333/8121—Serpins
- G01N2333/8128—Antithrombin III
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/974—Thrombin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/22—Haematology
- G01N2800/226—Thrombotic disorders, i.e. thrombo-embolism irrespective of location/organ involved, e.g. renal vein thrombosis, venous thrombosis
Description
現在主流のTAT定量法は、シーメンス社のエンザイグノスト(登録商標)TAT micro等の酵素免疫測定法(ELISA)を用いる試薬キット、およびLSIメディエンス社のステイシア(登録商標) CLEIA TAT等の化学発光酵素免疫測定法(CLEIA)を用いる試薬キットを用いる方法があるが、いずれも固相・液相分離(B/F分離)が必要な測定法で、煩雑な洗浄作業が要り、手作業あるいは専用機器が必要である。
従って、測定が簡便なラテックス凝集法において、高感度・高精度に生体試料中のTATを測定する試薬及び方法が求められていた。
しかしながら、特許文献6,7で用いられているようなTATのアンチトロンビン側に結合する抗体として、TATに対する反応がアンチトロンビンに対する反応の100倍以上のモノクローナル抗体を用いたときでも、血栓塞栓症やDICの治療などで抗凝固薬として用いられるヘパリン(特に未分画ヘパリン)の影響で非特異的な反応が生じ、不正確な測定結果となることが本発明者らの検討で明らかとなった。これはおそらくヘパリンが血中でアンチトロンビンと複合体を形成しアンチトロンビンを多量体化することに起因すると考えられる。このようなヘパリン−アンチトロンビン複合体は通常のアンチトロンビンに比べ、よりTATを形成した際のアンチトロンビンの構造に近いと考えられ、さらに多量体を形成していると考えられる。よって、ヘパリン投与患者の検体を測定すると、TATに対する反応がアンチトロンビンに対する反応の100倍以上のモノクローナル抗体を結合したラテックス粒子を用いても、それがヘパリン−アンチトロンビン複合体を認識し、それ単独で凝集が生じ、これが非特異反応として本反応に上乗せされてしまう。このようなヘパリン−アンチトロンビン複合体による非特異的反応はB/F分離が可能な測定法では生じない問題であり、本発明者が初めて発見したラテックス凝集法を用いたTAT測定試薬に特有の問題である。
従来ラテックス凝集法によるTAT測定試薬におけるアンチトロンビンの影響回避法としては特許文献1,2のような方法が知られているが、ヘパリンによりアンチトロンビン多量体が生じること、ヘパリンにより多量体化したアンチトロンビンの影響回避策については何ら示唆されていない。
そこで、本発明は、B/F分離や洗浄作業を必須としないラテックス凝集法を用いた、生体試料中のTATの測定試薬および測定方法において、ヘパリン等の影響を回避して正確にTATの測定を行うことのできる試薬及び方法を提供することである。
[1] 被検者由来の血液試料中のトロンビン・アンチトロンビン複合体(TAT)をラテックス凝集法によって測定するための試薬であって、ポリカチオンを含むことを特徴とする、試薬。
[2] 前記被検者がヘパリン投与された患者である、[1]に記載の試薬。
[3] 前記ポリカチオンが、臭化ヘキサジメトリン、キトサン類、変性デキストラン、アミノデキストラン、ヒドロキシメチルセルローストリメチルアミン、リゾチーム、スペルミン、スペルミジン、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、硫酸プロタミン、ヒドロキシエチルセルローストリメチルアミン、ヘパリン結合タンパク質、ポリアリルアミン、塩酸ポリアリルアミン、ポリ(ジアリルジアルキルアミン)、ポリアミドアミン、ポリアミン、塩化ポリビニルベンジルトリメチルアンモニウム、塩化ポリジアリルジメチルアンモニウム、ポリエチレンイミン、ポリプロピレンイミン、ポリプロピルエチレンイミン、ポリイミダゾリン、ポリビニルアミン、ポリビニルピリジン、ポリ(アクリルアミド/臭化メタクリルオキシプロピルトリメチルアンモニウム)、ポリ(塩化ジアリールジメチルアンモニウム/N−イソプロピルアクリルアミド)、ポリ(ジメチルアミノエチルアクリレート/アクリルアミド)、ポリジメチルアミノエチルメタクリレート、ポリジメチルアミノエピクロルヒドリン、ポリエチレンイミノエピクロルヒドリン、臭化ポリメタクリルオキシエチルトリメチルアンモニウム、塩化ヒドロキシプロピルメタクリロイルオキシエチルジメチルアンモニウム、ポリ(メチルジエチルアミノエチルメタクリレート/アクリルアミド)、ポリ(メチル/グアニジン)、臭化ポリメチルビニルピリジニウム、ポリ(ビニルピロリドン−ジメチルアミノエチルメタクリレート)および臭化ポリビニルメチルピリジニウムからなる群より選択される、[1]又は[2]に記載の試薬。
[4]前記ポリカチオンが臭化ヘキサジメトリン、ポリエチレンイミン、ポリプロピルエチレンイミンなどのポリアルキレンアミン、硫酸プロタミン、ポリリジン、ポリオルニチン、およびアミノデキストランからなる群より選択される、[1]又は[2]に記載の試薬。
[5] 前記試薬が、ラテックスに結合したアンチトロンビン側に結合してTATを認識する第1抗TAT抗体と、ラテックスに結合したトロンビン側に結合してTATを認識する第2抗TAT抗体とを含む、[1]乃至[4]のいずれかに記載の試薬。
[6] 前記第1抗TAT抗体が、TATに対する反応性が遊離アンチトロンビンに対する反応性の100倍以上である抗体である、[5]に記載の試薬。
[7] 被検者由来の血液試料中に存在するTATを測定する方法であって、[1]乃至[6]のいずれかに記載の試薬を用いてラテックス凝集法を行うことによりTATを測定することを特徴とする方法。
[8] 前記被検者がヘパリン投与された患者である、[7]に記載の方法。
被検者由来の血液試料中のトロンビン・アンチトロンビン複合体(TAT)をラテックス凝集法によって測定するための試薬であって、ポリカチオンを含む。
本発明のTAT測定試薬は、好ましくは、生体試料中のTATを測定するための、2種類の抗TAT抗体をそれぞれ結合させたラテックス粒子を用いた、サンドイッチ系でのラテックス凝集法による免疫測定試薬である。
第1抗体としては、アンチトロンビン側に結合してTATを認識することができる抗体であればよい。TATに対する反応性と遊離アンチトロンビンに対する反応性に少なくとも100倍以上の差を有する抗体が好ましく用いられる。第1抗体のTATに対する反応性は遊離アンチトロンビンに対する反応性より100倍以上であればよく、200倍以上がより好ましく、1,000倍以上であることがさらに好ましく、10,000倍以上であることが特に好ましい。交差反応性は少ないほどよいので上限は特にないが、例えば、100,000倍未満、または50,000倍未満であってもよい。
該抗体を調製するにあたっては、ヒト以外の動物に対して、遊離アンチトロンビンを免疫したものであっても、TATを免疫したものであってもよく、アンチトロンビン側に結合してTATを認識することができる抗体であれば、本発明に使用することができる。
遊離型構造アンチトロンビンは、複合体型構造アンチトロンビンと異なる構造を有する。それは、遊離型構造アンチトロンビンは、遊離トロンビンと結合して複合体を形成することによってその構造が変化した状態で存在するためである。
まず、アンチトロンビン側に結合してTATを認識する抗体(第1抗体の候補抗体)を用意する。このような抗体は、後述のハイブリドーマによるモノクローナル抗体産生法等により抗体を得たのち、結合部位がアンチトロンビン側である、TATを認識する抗体を選択すればよい。もちろん、あらかじめ、結合部位がアンチトロンビン側である、TATを認識する抗体が存在する場合はそれを以下の評価系に供すればよい。
該抗体の反応を阻害する抗原が存在しない条件で、各濃度(例えば0.04〜1μg/mL)の上記第1抗体の候補抗体を、上記TATを固定化した基材と一定時間反応させる。その後、洗浄操作を行った後、標識2次抗体(抗マウスIgG−HRP)を用いて、基材上のTATに結合した抗体の量を測定する。吸光度が1.0付近(表1の記載方法だと1000)となる抗体濃度を決定する。この抗体濃度を、抗原による阻害時の抗体濃度とすることができる(表3;反応時濃度(μg/mL))。
次に上記方法で決定した濃度の候補抗体と一定量(例えば、0.1、0.5、1、5、10、50μg/mL)のTATまたは遊離アンチトロンビンを含む溶液とを十分な時間(例えば、12時間)反応させる。次いで、前記反応液をTATを固定化した基材と一定時間反応させる。その後、洗浄操作を行った後、標識2次抗体(抗マウスIgG−HRP)を用いて基材上のTATに結合した抗体の量(抗体残存率)を測定する。
なお、抗体残存率は、抗原による吸収が未実施の時に得られる検出値を100%として算出できる。
この抗体残存率を、最初にTATと抗体とを反応させた(阻害反応をTATで行った)後に、反応液を固体化TATと反応させたときの抗体残存率と比較する。
このようにして選択された抗体を第1抗体として選択することができる。なお、第1抗体は、モノクローナル抗体の場合、TATに対する親和性(Kd)が10−8以下であることが好ましいが、当業者であればTATに対する親和性の値を参考としてラテックス試薬に適した抗体の選択を適宜することが可能である。
該抗体を調製するにあたっては、ヒト以外の動物に対して、遊離トロンビンを免疫したものであっても、TATを免疫したものであってもよく、トロンビン側に結合してTATを認識することができる抗体であれば、本発明に使用することができる。
ここで、本発明においてトロンビン側に結合するとは、試料中に存在している遊離した状態のトロンビンが、アンチトロンビンに結合して複合体(TAT)を形成している状態のトロンビンに結合することを意味する。従って、複合体を形成した時の構造を有するトロンビンを複合体型構造トロンビン、複合体を形成していない時の構造を有するトロンビンを遊離型構造トロンビンと称した場合、トロンビン側に結合するとは、複合体型構造トロンビンに結合することを意味する。
遊離型構造トロンビンは、複合体型構造トロンビンと異なる構造を有する可能性が考えられる。それは、遊離型構造トロンビンは、アンチトロンビンと結合して複合体を形成することによってその構造が変化した状態で存在することによる。
抗体作製用に免疫原を免疫する動物としては、ヒツジ、ウマ、ヤギ、ウサギ、マウス、ラット等が使用可能であり、特にポリクローナル抗体作製にはウサギ、ヤギなどが好ましい。また、ハイブリドーマ細胞を作製する公知の方法によりモノクローナル抗体を得ることも可能であり、この場合はマウス、ラット或いはウサギ等が好ましい。ハイブリドーマ及びモノクローナル抗体の調製は、定法、例えば、続生化学実験講座(日本生化学会編)又は免疫生化学研究法(日本生化学会編)に記載の方法に従って行うことができる。
これらの免疫原は、生体から採取された試料を原料として精製されたTATを使用してもよいし、遊離トロンビンと遊離アンチトロンビンを混合してinvitroで合成したTATを使用してもよい。合成TATとしては、例えば、生物製剤として入手可能なトロンビンとアンチトロンビンを試験管内でインキュベートして得られるTATでもよいし、大腸菌や哺乳動物細胞、バキュロウイルスを感染させた昆虫細胞等、既知の翻訳発現系を使用して発現させたものを回収して精製したものを免疫原として使用してもよい。
また、立体構造の違いを部分的なペプチドのみで免疫させることが可能である場合、具体的に抗体の結合部位を特定して抗体を作製したい場合には第1抗体の場合はアンチトロンビン、第2抗体の場合はトロンビンの部分ペプチドを用いて作製することもできる。その場合の抗原としてのペプチド配列の選択やペプチド断片の合成方法、免疫方法は既知の方法を使用することができる。
TAT測定試薬に求められる感度は、健常人と患者とを明確に区別できる基準値、或いはその2倍の濃度を測定できることが必要であるため、本発明の試薬は生体試料中の10〜15ng/mLのTATを定量できる試薬であることが好ましく、3〜4ng/mLのTATを定量できる試薬であることがより好ましく、1ng/mL程度の濃度でも定量できる試薬であることがさらに好ましい。
使用するラテックス粒子の種類は、1種類のラテックス粒子のみを使用してもよいし、複数種のラテックス粒子を使用してもよい。例えば、粒子径の異なるラテックス粒子を組み合わせて使用することができる。ラテックス粒子は単一粒径で製造することは実質的に困難であることから、粒子全体の平均粒子径として規定される。従って、平均粒子径0.05μm〜0.5μmという場合、当該範囲に含まれないラテックス粒子を含む場合であっても、本発明に該当する場合がある。当業者にとって、粒径が異なるラテックス粒子が含まれることは常識の範囲内であり、当業者であれば、その粒径の分布に大きく偏りの無い粒子群を含む溶液を使用してラテックス試薬の構築することが可能である。
なお、この平均粒子径は、公知の方法で測定することが可能であり、例えば、透過型電子顕微鏡装置を用いた画像解析により算出される。
ラテックス粒子に抗体を結合させる際には、抗体が、上記のTATに対する反応性および特異性を維持できる条件で行う。
好適な試薬の調製が行いやすいことから、第1抗体を固相した第1のラテックス粒子、第2抗体を固相した第2のラテックス粒子として、抗体の種類ごとに固相ラテックス液を調製することもできるし、1種類のラテックス粒子に第1の抗体と第2の抗体を固相させて試薬の調製を行うこともできる。抗体とラテックス粒子をどのように固相させて試薬の調製を行うかは、当業者であれば適宜設計することができる。
天然に生じるポリカチオンとしては、メチルグリコールキトサン等のキトサン類、ジエチルアミノエチル変性デキストランなどの変性デキストラン、アミノデキストラン、ヒドロキシメチルセルローストリメチルアミン、リゾチーム、スペルミン、スペルミジン、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、硫酸プロタミン、ヒドロキシエチルセルローストリメチルアミンおよびタンパク質が挙げられる。
タンパク質としては、ヘパリンに結合する性質を有していればよく、ヘパリン結合モチーフ・ペプチドとして既知の、BXXB、BBXB、BBBXXB、BXXBBXB(ここでBは塩基性アミノ酸、Xは任意のアミノ酸を意味する)の配列を有するタンパク質・ペプチドを使用することができる。具体的には、活性化第X因子、ヘパリン結合性成長因子、ラクトフェリン、トランスフェリン、ビトロネクチン、エンドヌクレアーゼ、リパーゼ、ステロイドレセプター、ヒストン等のDNA結合タンパク質、PF4等である。
合成ポリカチオンの例は、ポリアリルアミン、塩酸ポリアリルアミン、ポリ(ジアリルジアルキルアミン)、ポリアミドアミン、ポリアミン、塩化ポリビニルベンジルトリメチルアンモニウム、臭化ヘキサジメトリン、塩化ポリジアリルジメチルアンモニウム、ポリエチレンイミン、ポリプロピレンイミン、ポリプロピルエチレンイミン、ポリイミダゾリン、ポリビニルアミン、ポリビニルピリジン、ポリ(アクリルアミド/臭化メタクリルオキシプロピルトリメチルアンモニウム)、ポリ(塩化ジアリールジメチルアンモニウム/N−イソプロピルアクリルアミド)、ポリ(ジメチルアミノエチルアクリレート/アクリルアミド)、ポリジメチルアミノエチルメタクリレート、ポリジメチルアミノエピクロルヒドリン、ポリエチレンイミノエピクロルヒドリン、臭化ポリメタクリルオキシエチルトリメチルアンモニウム、塩化ヒドロキシプロピルメタクリロイルオキシエチルジメチルアンモニウム、ポリ(メチルジエチルアミノエチルメタクリレート/アクリルアミド)、ポリ(メチル/グアニジン)、臭化ポリメチルビニルピリジニウム、ポリ(ビニルピロリドン−ジメチルアミノエチルメタクリレート)および臭化ポリビニルメチルピリジニウムである。
これらのポリカチオンの中では、臭化ヘキサジメトリン、ポリエチレンイミン、ポリプロピルエチレンイミンなどのポリアルキレンアミン、硫酸プロタミン、ポリリジン、ポリオルニチン、アミノデキストランなどが挙げられ、特に、臭化ヘキサジメトリン或いは硫酸プロタミンを使用することが好ましい。
ポリカチオンの分子量としては、質量平均分子量で数百〜数百万が知られているが、本発明において好ましく用いることができるものは、分子量1,000〜100,000であり、より好ましくは1,000〜10,000のポリカチオンを使用することができる。
ポリカチオンは、反応系に最終濃度0.0002〜1w/v%で存在させることが好ましく、0.0005〜0.1w/v%で存在させることがより好ましく、0.001〜0.05w/v%で存在させることがさらに好ましい。
pHはpH調節剤によって調節されてもよいが、緩衝液により調整されることが好ましい。トリス緩衝液、ビス−トリス緩衝液、リン酸緩衝液、又はグッド緩衝液などが好適に使用され、反応時の緩衝液濃度は10〜500mmol/Lであることが好ましく、20〜200mmol/Lであることがより好ましい。
市販のヒトトロンビン製剤(日本血液製剤機構製)とアンチトロンビン製剤(日本血液製剤機構製)をPBS(ダルベッコPBS(−)粉末「ニッスイ(日水製薬株式会社製)」、を9.6g/Lで溶解)で希釈し、1:3のモル比で混合後、37℃で30分間反応させた。30分後、DFP(フルオロリン酸ジイソプロピル、和光純薬社製)を0.75mMになるように添加し反応を停止した。
得られた反応物には未反応のトロンビン、アンチトロンビンが含まれるため、予め500mMのNaClを含む50mM Tris−HCl緩衝液(pH7.4)で平衡化したHiload 26/60 Superdex 200 HR(GEヘルスケア社製)によって精製した。
TAT画分はSDS−PAGEで確認した後、回収した。得られたTATは0.5%のBSAを含む生理食塩水で希釈し、CLEIA試薬(ステイシア(登録商標) CLEIA TAT、LSIメディエンス社製)を用いて値付けした。これを合成TATとして使用した。
細胞融合法は、安藤民衛・岩崎辰夫/著「単クローン抗体/ハイブリドーマとELISA」(講談社)に従って実施した。
実施例1で調製した合成TAT 50μgをフロインド完全アジュバント(DIFCO社製)と混合し、投与抗原とした。
BALB/cマウス(メス、4週令)に2週間間隔で3回投与し、4回目の投与は半量の25μgを静注した。
1週間後、脾臓よりリンパ球を分離し、ミエローマ細胞P3x63−Ag.8と混合した後、ポリエチレングリコール(PEG4000、メルク社製)を用いて細胞融合を実施した。
HAT選択培地によりハイブリドーマを選択し、1週間後目的の抗体を産生しているハイブリドーマを合成TATに対する結合活性を指標にスクリーニングした。すなわち、0.05M炭酸緩衝液(pH9.5)で合成TATをそれぞれ0.2μg/mLに希釈し、イムノプレート(Maxisorp、NUNC社製)に50μL/ウェル添加した。4℃、Over Nightで反応後、0.05% Tween−20を含むPBSで3回洗浄し、1.0%BSAを含むPBSを各ウェルに100μL添加しブロッキングを行った。 次に、培養上清各ウェルに50μL添加し、37℃で1時間反応させた後、0.05%Tween−20を含むPBSで3回洗浄した。ペルオキシダーゼ標識抗マウスイムノグロブリン抗体(Dako社製)を、0.05% Tween−20を含むPBSで1000倍に希釈し、各ウェルに50μL添加した。
37℃、1時間反応後、同様に5回洗浄しo−フェニレンジアミン溶液(和光純薬社製)を各ウェル50μL添加した。室温で5〜10分間反応後、2N硫酸溶液で反応を停止した。
プレート分光光度計(EL312e、BIO−TEK INSTRUMENTS社製)で492nmの吸光度を測定した。合成TATとの反応が良好な抗体を産生している細胞を選択し、限界希釈法によりクローニングを行った。10日後、スクリーニングを行い、合成TATと反応する抗体を産生するハイブリドーマを取得した。
実施例2と同様の方法で免疫抗原をトロンビンとして、抗トロンビン抗体を得た。トロンビンに対して特異的に反応する抗体を選択し、このうちの1クローンを抗トロンビン抗体(T−1)として使用した。
間接阻害ELISA法によって、各抗体の反応性の評価を行った。間接阻害ELISA法による反応系の模式図を図2に示す。
評価しようとする0.04〜0.4μg/mLの濃度のTATを認識する抗体(抗TAT抗体)候補を阻害抗原(プロトロンビン(エンザイムリサーチ社製)、トロンビン、アンチトロンビン、合成TAT)と混合し、インキュベートした。一部阻害された該抗体候補を一次抗体として、96ウェルプレートに固相化した合成TATと結合させた。さらにペルオキシダーゼ標識抗マウスイムノグロブリン抗体(Dako社製)を二次抗体として結合させ、発色基質を添加し吸光度を測定した。また、発色の変化率から、抗体の残存率を計算した。
特定の抗体(TAT−5)について、各阻害抗原を用いた時の吸光度を表1に、吸光度から計算された抗体の残存率を表2に示した。
例えば、TATの阻害抗原濃度が10μg/mLの時の残存率は、285/1066×100=26.7(%)となる。各抗体の各抗原濃度について残存率を算出した。なお、表中において、Pro−Tはプロトロンビンを、Tはトロンビンを、ATはアンチトロンビンを示す。
例えば、TAT−5の場合、アンチトロンビン 50 μg/mLの残存率は、74.0%でありその残存率と同様となるTAT抗原量は1.144 μg/mLである。すなわち、反応性の差は50/1.144=44倍となる。(図3)。
第1試薬:100mM Bis−tris(同仁化学社製) pH6.2、700mM NaCl(和光純薬社製)、0.05% エマルゲン150(花王社製)、0.20% アルギン酸ナトリウム(和光純薬社製)、0.15% BSA(シグマアルドリッチ社製)、0.05% 臭化ヘキサジメトリン(シグマアルドリッチ社製)を第1試薬として用いた。また、比較例は上記第1試薬より臭化ヘキサジメトリンを除いたものを用いた。
パラメータ:サンプル量12μL、第1試薬90μL、第2試薬90μL、主波長570nm、副波長800nmに設定し、測光ポイント34ポイント目の吸光度から20ポイント目の吸光度を差し引きしたものをΔAbsとして測定を実施した。
結果を図4に示す。比較例(臭化ヘキサジメトリンなし)の第1試薬を用いた場合、第2試薬A、Bともにヘパリンの濃度依存的な非特異的凝集が同程度認められたのに対し、実施例(臭化ヘキサジメトリンあり)の第1試薬を用いた場合はいずれも凝集を認めなかった。このことから、ヘパリン−アンチトロンビン複合体による非特異的凝集はTATのアンチトロンビン側を認識する抗体を吸着した粒子により引き起こされ、臭化ヘキサジメトリンを添加することでヘパリン−アンチトロンビン複合体が解消されることが示唆された。
第1試薬:臭化ヘキサジメトリン添加量を0〜0.05w/v%の間で変化させたこと以外は実施例5と同様。
第2試薬:実施例5の第2試薬Aを用いた。
サンプル:ヘパリンナトリウム注「タナベ」を2U/mL添加した正常ヒトプール血漿またはヘパリンナトリウム注「タナベ」を2U/mL添加し、TAT濃度が50ng/mLになるように血清を添加した正常ヒトプール血漿
測定機器・パラメータ:実施例5と同様に行った。
なお、図6(a)に示されるように、ポリカチオンの添加によっても、目的とするTAT検出反応に大きな影響を及ぼさないことが確認された。図6(b)は、ベースライン付近を拡大した図である。
第1試薬:臭化ヘキサジメトリンに代えて硫酸プロタミン(和光純薬社製)の添加量を0〜0.01w/v%の間で変化させたこと以外は実施例5と同様に調製した。
第2試薬:実施例5の第2試薬Aを用いた。
サンプル:ヘパリンナトリウム注「タナベ」を2U/mL添加した正常ヒトプール血漿 測定機器・パラメータ:実施例5と同様に行った。
結果を図7に示す。硫酸プロタミンを添加しなかった場合に比べて、硫酸プロタミンを0.001%(終濃度0.0005%)以上添加した場合には、ヘパリン添加血漿の吸光度が大幅に減少し改善が見られた。更に、硫酸プロタミンを0.01%(終濃度0.005%)添加した場合には臭化ヘキサジメトリン添加時同様に、ヘパリン添加による非特異的凝集がほぼ抑えられることが確認された。したがって、硫酸プロタミンは0.001%(終濃度0.0005%)以上が好ましく、0.01%(終濃度0.005%)以上がより好ましいことが分かった。
第1試薬:実施例5と同様。
第2試薬:実施例5の第2試薬A、Bを用いた。
サンプル:非特異反応が認められたことから、ヘパリン製剤が投与されたと推定される、クエン酸Na血漿(検体1、2)2検体を用いた。
測定機器・パラメータ:実施例5と同様に行った。
結果を図8に示す。臭化ヘキサジメトリンを添加しないときは第2試薬A、第2試薬Bのいずれを用いた場合でも高いシグナルが検出された。一方、臭化ヘキサジメトリンの添加により非特異的凝集が解消され、第2試薬A、すなわち、2種類の抗体を使用した場合にTAT特異的な検出が可能になった。以上より、実際の血漿検体でも臭化ヘキサジメトリンの効果が確認された。
Claims (6)
- ヘパリンを投与された患者由来の血液試料中のトロンビン・アンチトロンビン複合体(TAT)をラテックス凝集法によって測定するための試薬であって、ポリカチオンを含むことを特徴とする、試薬。
- 前記ポリカチオンが、臭化ヘキサジメトリン、キトサン類、変性デキストラン、アミノデキストラン、ヒドロキシメチルセルローストリメチルアミン、リゾチーム、スペルミン、スペルミジン、ポリリジン、ポリアルギニン、ポリオルニチン、硫酸プロタミン、ヒドロキシエチルセルローストリメチルアミン、ヘパリン結合タンパク質、ポリアリルアミン、塩酸ポリアリルアミン、ポリ(ジアリルジアルキルアミン)、ポリアミドアミン、ポリアミン、塩化ポリビニルベンジルトリメチルアンモニウム、塩化ポリジアリルジメチルアンモニウム、ポリエチレンイミン、ポリプロピレンイミン、ポリプロピルエチレンイミン、ポリイミダゾリン、ポリビニルアミン、ポリビニルピリジン、ポリ(アクリルアミド/臭化メタクリルオキシプロピルトリメチルアンモニウム)、ポリ(塩化ジアリールジメチルアンモニウム/N−イソプロピルアクリルアミド)、ポリ(ジメチルアミノエチルアクリレート/アクリルアミド)、ポリジメチルアミノエチルメタクリレート、ポリジメチルアミノエピクロルヒドリン、ポリエチレンイミノエピクロルヒドリン、臭化ポリメタクリルオキシエチルトリメチルアンモニウム、塩化ヒドロキシプロピルメタクリロイルオキシエチルジメチルアンモニウム、ポリ(メチルジエチルアミノエチルメタクリレート/アクリルアミド)、ポリ(メチル/グアニジン)、臭化ポリメチルビニルピリジニウム、ポリ(ビニルピロリドン−ジメチルアミノエチルメタクリレート)および臭化ポリビニルメチルピリジニウムからなる群より選択される、請求項1に記載の試薬。
- 前記ポリカチオンが臭化ヘキサジメトリン、ポリエチレンイミン、ポリプロピルエチレンイミンなどのポリアルキレンアミン、硫酸プロタミン、ポリリジン、ポリオルニチン、およびアミノデキストランからなる群より選択される、請求項1に記載の試薬。
- 前記試薬が、ラテックスに結合したアンチトロンビン側に結合してTATを認識する第1抗TAT抗体と、ラテックスに結合したトロンビン側に結合してTATを認識する第2抗TAT抗体とを含む、請求項1乃至3のいずれか一項に記載の試薬。
- 前記第1抗TAT抗体が、TATに対する反応性が遊離アンチトロンビンに対する反応性の100倍以上である抗体である、請求項4に記載の試薬。
- ヘパリンを投与された患者由来の血液試料中に存在するTATを測定する方法であって、請求項1乃至5のいずれか一項に記載の試薬を用いてラテックス凝集法を行うことによりTATを測定することを特徴とする方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2015215162 | 2015-10-30 | ||
JP2015215162 | 2015-10-30 | ||
PCT/JP2016/082364 WO2017073795A1 (ja) | 2015-10-30 | 2016-10-31 | トロンビン・アンチトロンビン複合体の測定試薬及び測定方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2017073795A1 JPWO2017073795A1 (ja) | 2018-08-16 |
JP6927472B2 true JP6927472B2 (ja) | 2021-09-01 |
Family
ID=58630527
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017547362A Active JP6927472B2 (ja) | 2015-10-30 | 2016-10-31 | トロンビン・アンチトロンビン複合体の測定試薬及び測定方法 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11378577B2 (ja) |
EP (1) | EP3370064B1 (ja) |
JP (1) | JP6927472B2 (ja) |
KR (1) | KR102528090B1 (ja) |
CN (1) | CN108291911A (ja) |
ES (1) | ES2965910T3 (ja) |
WO (1) | WO2017073795A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3680005A1 (en) * | 2019-01-10 | 2020-07-15 | Gambro Lundia AB | Membrane with immobilized anticoagulant and process for producing same |
GB201906331D0 (en) * | 2019-05-03 | 2019-06-19 | Governing Council Of The Univ Of Toronto | Digital microfluidic agglutination assays |
CN110186862B (zh) * | 2019-05-23 | 2021-08-03 | 天津大学 | 一种基于钯纳米过氧化物酶可视化检测鱼精蛋白的试剂盒 |
CN112379091A (zh) * | 2020-11-02 | 2021-02-19 | 上海科华生物工程股份有限公司 | 一种抗肝素干扰的肌酸激酶同工酶ck-mb检测试剂盒 |
CN117030997A (zh) * | 2023-08-01 | 2023-11-10 | 美康生物科技股份有限公司 | 一种小分子化合物的均相免疫分析方法 |
Family Cites Families (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4199502A (en) * | 1978-08-04 | 1980-04-22 | Warner-Lambert Company | Removal of heparin from blood plasma samples using an insoluble protamine reaction product |
US4250041A (en) * | 1979-06-25 | 1981-02-10 | Warner-Lambert Company | Removal of heparin from blood plasma samples using an insoluble protamine reaction product |
JPH0644876B2 (ja) | 1985-12-13 | 1994-06-15 | 株式会社ヤトロン | 抗トロンビン・アンチトロンビン3複合体モノクローナル抗体、及びその製造方法、並びにそれを用いるトロンビン・アンチトロンビン3複合体の免疫定量法、及びそれを用いるトロンビン・アンチトロンビン3複合体の精製方法 |
JPH0348158A (ja) | 1989-04-07 | 1991-03-01 | Teijin Ltd | ヒト・トロンビン・アンチトロンビン3複合体の免疫学的測定方法、そのための測定試薬およびキット |
AU628960B2 (en) | 1989-04-07 | 1992-09-24 | Teijin Limited | Method of immunologically assaying human thrombin- antithrombin III complex, assay reagent and kit therefor |
JPH07238099A (ja) | 1994-02-25 | 1995-09-12 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | モノクローナル抗体及びこれを用いる免疫学的測定法 |
DE4429660B4 (de) * | 1994-08-20 | 2004-02-12 | Dade Behring Marburg Gmbh | Zusatzmittel für diagnostische Tests zur Bestimmung der Gerinnungsfähigkeit des Blutes, Verfahren zur Reduzierung der Beeinflussung von diagnostischen Tests durch Heparin und Verwendung von Metallsalzen zu diesen Zwecken |
JPH1026621A (ja) | 1996-07-12 | 1998-01-27 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | イムノアッセイ法 |
JPH10104233A (ja) * | 1996-09-30 | 1998-04-24 | Sekisui Chem Co Ltd | ヒトアンチトロンビンiiiの定量方法及び測定キット |
FR2774473B1 (fr) * | 1998-02-05 | 2000-05-12 | Pasteur Sanofi Diagnostics | Procede de dosage des troponines dans des milieux biologiques permettant d'eviter les interferences dues a l'heparine |
JP2001221800A (ja) | 2000-02-14 | 2001-08-17 | Internatl Reagents Corp | 複合体の測定方法 |
JP4390963B2 (ja) | 2000-04-05 | 2009-12-24 | シスメックス株式会社 | 免疫測定方法及び試薬キット |
JP2002316999A (ja) | 2001-04-17 | 2002-10-31 | Dai Ichi Pure Chem Co Ltd | モノクローナル抗体 |
JP5334742B2 (ja) * | 2009-08-11 | 2013-11-06 | 関東化学株式会社 | 水溶性アンモニウムポリマーを含有する検体前処理試薬、および検体前処理方法 |
US10627393B2 (en) * | 2012-07-31 | 2020-04-21 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Latex agglutination inhibition immunoassay |
WO2014066153A1 (en) | 2012-10-23 | 2014-05-01 | Tessera, Inc. | Multiple die stacking for two or more die |
JP5664832B2 (ja) | 2012-11-22 | 2015-02-04 | Jnc株式会社 | カーボンナノチューブアレイの製造方法、紡績源部材、およびカーボンナノチューブを備える構造体 |
ES2908437T3 (es) | 2015-03-31 | 2022-04-29 | Lsi Medience Corp | Reactivo y procedimiento para la prueba del complejo trombina antitrombina |
JP6615474B2 (ja) | 2015-03-31 | 2019-12-04 | 株式会社Lsiメディエンス | トロンビン・アンチトロンビン複合体の測定試薬及び測定方法 |
JP6594641B2 (ja) | 2015-03-31 | 2019-10-23 | 株式会社Lsiメディエンス | トロンビン・アンチトロンビン複合体の測定試薬及び測定方法 |
-
2016
- 2016-10-31 JP JP2017547362A patent/JP6927472B2/ja active Active
- 2016-10-31 ES ES16860023T patent/ES2965910T3/es active Active
- 2016-10-31 KR KR1020187015269A patent/KR102528090B1/ko active IP Right Grant
- 2016-10-31 CN CN201680063613.7A patent/CN108291911A/zh active Pending
- 2016-10-31 WO PCT/JP2016/082364 patent/WO2017073795A1/ja active Application Filing
- 2016-10-31 EP EP16860023.7A patent/EP3370064B1/en active Active
- 2016-10-31 US US15/772,037 patent/US11378577B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPWO2017073795A1 (ja) | 2018-08-16 |
EP3370064B1 (en) | 2023-10-04 |
KR102528090B1 (ko) | 2023-05-02 |
CN108291911A (zh) | 2018-07-17 |
ES2965910T3 (es) | 2024-04-17 |
US11378577B2 (en) | 2022-07-05 |
KR20180069913A (ko) | 2018-06-25 |
EP3370064A4 (en) | 2019-03-27 |
EP3370064A1 (en) | 2018-09-05 |
WO2017073795A1 (ja) | 2017-05-04 |
US20180238871A1 (en) | 2018-08-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6927472B2 (ja) | トロンビン・アンチトロンビン複合体の測定試薬及び測定方法 | |
JP5807300B2 (ja) | 試料中のc反応性蛋白質の測定方法及び測定試薬 | |
US11237157B2 (en) | Reagent and method for assaying thrombin-antithrombin complex | |
CA3081801C (en) | Target interference suppressed anti-drug antibody assay | |
WO2007003090A1 (fr) | Composition remplaçant un sérum positif utilisée comme témoin dans un agent de diagnostic et application de celle-ci | |
JP5147709B2 (ja) | ヒトシスタチンcを評価するための比濁イムノアッセイ | |
JP6594641B2 (ja) | トロンビン・アンチトロンビン複合体の測定試薬及び測定方法 | |
JP7315968B2 (ja) | 生物学的試料中の遊離aimの免疫学的分析方法及び対象におけるnashの検出方法 | |
JP6615474B2 (ja) | トロンビン・アンチトロンビン複合体の測定試薬及び測定方法 | |
JP6687183B2 (ja) | トロンビン・アンチトロンビン複合体の測定試薬及び測定方法 | |
JP7054378B2 (ja) | Ca19-9測定方法及びca19-9測定キット、並びに、これらに用いる抗体固定化担体及びその製造方法 | |
JP7315966B2 (ja) | 生物学的試料中の遊離aimの免疫学的分析方法 | |
JP4636225B2 (ja) | 検査試薬キット | |
JP2023146555A (ja) | Aim関連疾患の検査方法、検査薬、および検査キット | |
JP5585587B2 (ja) | 5.9kDaペプチドの免疫学的測定方法 | |
JPWO2019039557A1 (ja) | ジカウイルスを検出する方法及びキット | |
JP2019140988A (ja) | モノクローナル抗体および非特異反応抑制剤 | |
JP2019140987A (ja) | モノクローナル抗体および非特異反応抑制剤 | |
JPH0552845A (ja) | 免疫測定用試薬 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20180404 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20191021 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20201110 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210107 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210706 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210721 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6927472 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |