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一种抗肝素干扰的肌酸激酶同工酶ck-mb检测试剂盒 Download PDF

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Abstract

本发明属于肌酸激酶同工酶CK‑MB生化诊断技术领域，公开了一种抗肝素干扰的肌酸激酶同工酶CK‑MB的检测试剂盒及检测方法。本发明的检测试剂盒中包括R1试剂和R2试剂，其中R1试剂包含PEI或亲水性大分子修饰的PEI，能够消除样本所含肝素引起的干扰。经过试验检测，通过在试剂中加入经修饰基团修饰的胺使肝素抗凝管测定结果与血清管相比，结果不再偏高，与血清管结果一致，从而提高了肌酸激酶同工酶CK‑MB的检测试剂盒准确性，增加了试剂盒的稳定性。

Description

一种抗肝素干扰的肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒
技术领域
本发明属于肌酸激酶同工酶CK-MB生化检测技术领域，涉及一种抗肝素干扰的肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒。
背景技术
肌酸激酶同工酶CK-MB主要分布于心肌中，急性心肌梗塞胸痛病发作后，血清中的CK-MB上升。血清中CK-MB是国内外公认诊断急性心肌梗死和确定有无心肌坏死的重要指标，特别是对于心电图无Q波的急性心肌梗死和再发性心肌梗死，血清中CK-MB升高具有决定诊断的作用。
肌酸激酶同工酶(CKMB)测定试剂盒是一个目前市面上较成熟，大多数IVD厂家均已注册的常规项目。现有的肌酸激酶同工酶(CK-MB)测定试剂盒存在以下缺陷：当用肝素管作为抗凝管时，所采集的血浆比相同条件下的血清管测定结果偏高。因此，提供一种准确度高、稳定性好的肌酸激酶MB型同工酶(CK-MB)试剂盒是目前我们亟需解决的问题。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种抗肝素干扰的肌酸激酶同工酶CK-MB的检测试剂盒及检测方法。本发明提供的试剂盒中添加PEI，可以消除肝素的影响，从而实现肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒的准确性和稳定性。
第一方面，一种抗肝素干扰的肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒，所述检测试剂盒包括R1试剂和R2试剂，
所述R1试剂包括：醋酸镁，聚乙烯亚胺(PEI)，PGE，丁二酸，葡萄糖，EDTA，AMP，ADP，NAD，5-磷酸二腺苷，N-乙酰半胱氨酸，己糖激酶，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶以及抗CK-MB抗体，
所述R2试剂包括：磷酸肌酸。
R1试剂与R2试剂中还可以分别包含缓冲液和防腐剂。R1试剂中的缓冲液的浓度为63.5mmol/L。
在某些实施例中，R2试剂为：
咪唑缓冲液 63.5mmol/L
磷酸肌酸 4.3g/L
防腐剂 13％。
在某些实施例中，所述聚乙烯亚胺为带阳离子含亲水基团聚合物，且为分枝状液体。
在某些实施例中，所述R1试剂中各个物质的浓度如下：
Figure BDA0002756485090000021
在某些实施例中，所述R1试剂与所述R2试剂中均含有防腐剂，所述防腐剂的体积浓度为1～20％。
在某些实施例中，所述PEI经修饰基团修饰。
在某些实施例中，所述修饰基团为聚乙二醇。
在某些实施例中，所述聚乙二醇的分子量为100-10000。
在某些实施例中，所述聚乙二醇通过丁二醇与PEI连接。
在某些实施例中，所述试剂盒中R1试剂和R2试剂的体积比是4:1。
在某些实施例中，所述R1试剂的pH值为6.5。
第二方面，本发明还提供了所述肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒的应用，具体地，
在检测的过程中以全自动日立生化分析仪7100为例。主波长为340nm(或附近)；副波长410nm(或附近)；比色杯光径为1.0cm；两点速率法；上升反应。
试剂加样比见表1：
表1试剂加样比
Figure BDA0002756485090000031
本试剂盒默认单位为：U/L。
样品中CKMB按下述公式计算：
Figure BDA0002756485090000041
本发明相对于现有技术具有的技术效果：
因为肝素会在一些临床化学检验项目的检测中导致非常严重的假性干扰。对于这种由肝素引起的假性偏高的原因，发明人推测可能是因为肌酸激酶测定试剂盒的缓冲液为酸性，而血液中很多蛋白等电点也为酸性，例如纤维蛋白原的等电点在为pH 5.2-5.6，大多数载脂蛋白的等电点也在5.0左右。在血液的生理条件下，这些蛋白大多带负电荷，但当这些样本加入到测定试剂盒酸性的缓冲液中，这些蛋白的负电荷被中和，甚至还可能带上正电荷。但肝素含有的硫酸基团为强酸性基团，其负电荷无法被中和掉。所以，带负电荷的肝素可能能够与带正电荷的血浆蛋白结合。当这样多个交互分子聚集在一起时，则可能形成大粒径的胶团，通过对光的散射而降低透射光的强度，因而干扰检测结果。使测定结果假性升高。但直接加入PEI并不能有效解除干扰，所以通过在R1试剂中加入经聚乙二醇修饰PEI能够极大地降低或完全阻止胶团的形成，完全消除肝素在这些临床检验项目中的干扰从而实现了提高肌酸激酶MB型同工酶(CK-MB)试剂盒抗肝素干扰、增加试剂盒稳定性的目的。然而线性PEI在常温下为固体不易溶解在试剂中而分枝状PEI为液体易溶于试剂中故选择分枝状PEI。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施案例所描述的内容仅用于说明和解释本发明，并不用于限制权利要求书中所详细描述的本发明。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备如无特别说明，均为常规方法，所使用的试验材料如无特别说明，均可从商业公司获取。
实施例1
本发明试剂盒包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括：醋酸镁，聚乙烯亚胺(PEI)，PGE，丁二酸，葡萄糖，EDTA，AMP，ADP，NAD，5-磷酸二腺苷，N-乙酰半胱氨酸，己糖激酶，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶以及抗CK-MB抗体，所述R2试剂包括：磷酸肌酸。
所述R1试剂中各个物质的浓度如下：
Figure BDA0002756485090000051
所述R2试剂中各个物质的浓度如下：
咪唑缓冲液 63.5mmol/L
磷酸肌酸 4.3g/L
防腐剂 13％。
R1试剂与R2试剂的体积比为3:1。
实施例2
采用本发明实施例1的试剂盒检测样品中肌酐的步骤如下：
在检测的过程中以全自动日立生化分析仪7100为例。主波长为340nm(或附近)；副波长410nm(或附近)；比色杯光径为1.0cm；两点速率法；上升反应。
试剂加样比见表2：
表2试剂加样比
Figure BDA0002756485090000061
本试剂盒默认单位为：U/L。
校准曲线的绘制：采用Linear 2点校准曲线定标法。以空白样本定值为0.00μmol/L，对校准品测定相应的△A，以△A为Y轴，浓度为X轴。在自动分析仪上，采用Linear 2点建立校准曲线。计算时根据样本的△A值在校准曲线上找到相应的浓度。
样品中CKMB按下述公式计算：
Figure BDA0002756485090000071
实施例3
为了验证发明的试剂盒与市售的肌酸激酶测定试剂盒假阳性测定的概率，最好的方法是使用第三方试剂盒进行验证，而选择的该第三方试剂盒是罗氏肌酸激酶测定试剂盒。
其中，三种试剂盒分别为：市售的未加PEI的肌酸激酶测定试剂盒(试剂盒I)、罗氏肌酸激酶试剂盒(试剂盒II)以及本实施方式中加肌酸激酶试剂盒(试剂盒III)。罗氏肌酸激试剂盒的参考范围是<25U/L，市售的肌酸激酶试剂盒的参考范围是<25U/L，本实施方式中试剂盒的参考范围是<25U/L。
标本来源：选取50名常规体检的男性作为研究对象，空腹状态下采集静脉血5ml加入肝素抗凝血管，将样本在低温条件下离心5min后随即用于以下分析。选择的样本应无明显溶血、黄疸或脂血。
三组试剂盒同时对50例样本中CKMB的进行检测，检测结果如表3所示：
表3三种试剂盒检测50例样本中的CKMB含量(U/L)
Figure BDA0002756485090000072
Figure BDA0002756485090000081
通过对表3中检测结果的统计分析，结果如表4所示，
表4三种试剂盒检测结果分析
Figure BDA0002756485090000091
以罗氏肌酸激酶试剂盒的检测结果为标准，不难发现，市售的未加PEI肌酸激酶试剂盒与罗氏的试剂盒及本实施方式中的肌酸激酶测定试剂盒相比，所测浓度都偏高，由此可以说明未加PEI的试剂盒中在检测反应的过程中带负电荷的肝素可与带正电荷的血浆蛋白结合。当这样多个交互分子聚集在一起时，则形成大粒径的胶团，通过对光的散射而降低透射光的强度，因而干扰检测结果，使测定结果假性升高。
加入PEI之后，其中的正电荷与肝素负电荷结合发生反应把肝素封闭起来使假阳性率明显降低，从而实现了提高肌酸激酶试剂盒准确性、增加试剂盒稳定性的目的。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。

Claims (10)

1.一种抗肝素干扰的肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括R1试剂和R2试剂，
所述R1试剂包括：醋酸镁，聚乙烯亚胺(PEI)，PGE，丁二酸，葡萄糖，EDTA，AMP，ADP，NAD，5-磷酸二腺苷，N-乙酰半胱氨酸，己糖激酶，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶以及抗CK-MB抗体，
所述R2试剂包括：磷酸肌酸。
2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述聚乙烯亚胺为带阳离子含亲水基团聚合物，且为分枝状液体。
3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂中各个物质的浓度如下：
Figure FDA0002756485080000011
4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂与所述R2试剂中均含有防腐剂，所述防腐剂的体积比为1～20％。
5.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述PEI经修饰基团修饰。
6.根据权利要求5所述的检测试剂盒，其特征在于，所述修饰基团为聚乙二醇。
7.根据权利要求6所述的检测试剂盒，其特征在于，所述聚乙二醇的分子量为100-10000。
8.根据权利要求7所述的检测试剂盒，其特征在于，所述聚乙二醇通过丁二酸与PEI连接。
9.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中R1试剂和R2试剂的体积比是4:1。
10.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂的pH值为6.5。
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