CN113502318A - 一种肌酸激酶同工酶ck-mb检测试剂盒及其检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及体外诊断试剂技术领域，具体涉及一种肌酸激酶同工酶CK‑MB检测试剂盒及其检测方法。所述肌酸激酶同工酶CK‑MB检测试剂盒包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括：烟酸铬、咪唑缓冲液、五磷酸二腺苷(AP5A)、腺苷一磷酸(AMP)、葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶、乙酸镁、葡萄糖和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)以及抗CK‑MB抗体；所述R2试剂包括：咪唑缓冲液、二磷酸腺苷(ADP)、磷酸肌酸、叠氮钠和葡萄糖激酶。同时，本发明还提供一种肌酸激酶同工酶CK‑MB含量或浓度的检测方法，该方法采用上述肌酸激酶同工酶CK‑MB检测试剂盒对肌酸激酶同工酶CK‑MB含量或浓度进行检测，可有效地提高检测的准确性。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断试剂技术领域，尤其涉及一种肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒及其检测方法。
背景技术
肌酸激酶同工酶CK-MB主要分布于心肌中，急性心肌梗塞胸痛病发作后，血清中的CK-MB上升。血清中CK-MB是国内外公认诊断急性心肌梗死和确定有无心肌坏死的重要指标，特别是对于心电图无Q波的急性心肌梗死和再发性心肌梗死，血清中CK-MB升高具有决定诊断的作用。
肌酸激酶同工酶(CKMB)测定试剂盒是一个目前市面上较成熟，大多数IVD厂家均已注册的常规项目。现有的肌酸激酶同工酶(CK-MB)测定试剂盒存在以下缺陷：肌酸激酶CK有三种同工酶，即CK-MM,CK-MB,CK-BB。心肌中含量较多的是肌酸激酶同工酶CK-MB，所以肌酸激酶同工酶CK-MB的测定对于早期诊断急性心肌梗死(AMI)有着非常重要的价值。溶血如何会导致肌酸激酶同工酶CK-MB测定结果偏高，其原因在于红细胞中含有极少量的肌酸激酶同工酶CK-MB，含有大量腺苷酸激酶AK，当标本溶血时腺苷酸激酶AK便会释放入血清中，腺苷酸激酶AK是二磷酸腺苷ADP与三磷酸腺苷ATP之间相互转化的酶，在仪器测定肌酸激酶同工酶CK-MB反应中，二磷酸腺苷ADP可在腺苷酸激酶AK的催化作用下，转化为三磷酸腺苷ATP，而三磷酸腺苷ATP会和试剂反应生成一定的产物,这种产物可干扰到比色反应，导致反应产物浓度增高，最终使所测得的肌酸激酶同工酶CK-MB假性增高。因此，提供一种准确度高、抗干扰强的肌酸激酶MB型同工酶(CK-MB)试剂盒是目前我们急需解决的问题。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒及其检测方法，所述血清淀粉样蛋白A的检测试剂盒
为达到上述技术效果，本发明采用了以下技术方案：
第一方面，本发明提供肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂：
所述R1试剂包括：烟酸铬、咪唑缓冲液、五磷酸二腺苷(AP5A)、腺苷一磷酸(AMP)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、乙酸镁、葡萄糖和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)以及抗CK-MB抗体；
所述R2试剂包括：咪唑缓冲液、二磷酸腺苷(ADP)、磷酸肌酸、叠氮钠和葡萄糖激酶。
进一步地，所述R1试剂中还包括防腐剂。
进一步地，所述防腐剂为叠氮钠或PC300。
进一步地，所述R1试剂包括：
进一步地，所述R2试剂包括：
进一步地，所述试剂盒中R1试剂和R2试剂的体积比是4:1。
第二方面，本发明还提供一种肌酸激酶同工酶CK-MB含量或浓度的检测方法，该方法采用上述的肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒对肌酸激酶同工酶CK-MB含量或浓度进行检测。
进一步地，所述检测采用速率B法进行检测，所述速率B法包括前半反应项目A和后半反应项目B，所述前半反应项目A可对样本空白和内源性干扰反应进行检测；后半反应项目B可对样本CKMB活性反应进行检测。对有溶血干扰影响的肌酸激酶同工酶CK-MB，项目A和项目B采用异波长检测。
进一步地，所述速率B法的检测参数设置为：温度为37℃，比色杯光径为1.0cm，样本量：10μl，项目A检测波长为546nm，项目B检测波长为340nm；项目A的读数点为8-16点，项目B的读数点为24-32点。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
第一方面，本发明提供的一种肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒，针对现有技术中存在的三磷酸腺苷ATP会和现有的检测试剂反应生成一定的产物,这种产物可干扰到比色反应从而导致测得的肌酸激酶同工酶CK-MB假性增高的问题，本申请提供的一种肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒通过在R1试剂中加入经PEI能够极大地降低或完全降解腺苷酸激酶AK的形成，可以极大地消除由于溶血因素在这些临床检验项目中的干扰，从而实现了提高肌酸激酶MB型同工酶(CK-MB)试剂盒抗溶血干扰、增加试剂盒准确性和稳定性的目的。
第二方面，本发明提供的一种肌酸激酶同工酶CK-MB检测方法，该方法通过采用速率B法，可以在同一反应杯中进行两个时段的测定，项目A段计算由于溶血带来干扰的反应速率，项目B段计算肌酸激酶同工酶CK-MB活性的反应速率，通过计算补偿两段测定的反应速率，可以有效地消除溶血对肌酸激酶同工酶CK-MB的干扰，从而提高了肌酸激酶同工酶CK-MB的检测试剂盒准确性。
附图说明
图1为实施例2的速率A法的检测结果；
图2为实施例2的速率B法的检测结果；
具体实施方式
下面将结合附图对本发明技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。如果无特殊说明，本发明的实施例中所采用的原料均为本领域常用的原料，实施例中所采用的方法，均为本领域的常规方法。
实施例1
按照下述配比制备肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒：
R1试剂：
R2试剂：
实施例2
2.1标本准备：正常健康体检人群标本40例，以上标本均无溶血、黄疸、脂血干扰。
2.2检测设备：仪器为日立7180全自动生化分析仪。
2.3检测方法：本次实施例提供两种检测测肌酸激酶同工酶CK-MB的参数设定方法，分别是常规参数设定方法参数A；本发明参数设定方法参数B。
参数A：
检测方法：速率A法(RATE-A)
温度为37℃；比色杯光径为1.0cm；样本量：10μlR1试剂：200μl；R2试剂：50μl；波长：546nm；读数点：24-32点。
参数B：
检测方法：速率B法(RATE-B)
温度为37℃；比色杯光径为1.0cm；样本量：10μl；R1试剂：200μl；R2试剂：50μl；波长：项目A 546nm；项目B 340nm；读数点：项目A为8-16点；项目B为24-32点。
2.4实施方法：
上述所准备40例标本，在参数A，参数B下分别检测CK-MB的浓度。
上述所准备40例标本，在认为溶血后(HB＜10g/L)，再次在参数A、参数B下分别检测CK-MB的浓度，采用仪器为日立7180全自动生化分析仪，检测结果分别如附图1和附图2所示。
在测定样本前，需要进行校准和质控程序，使用配套的校准品作校准曲线，校准曲线采用两点线性法定标。校准曲线每7天重新制作一次，当发生如下情形时，需要重新校准:试剂批号更换时，仪器更换零部件或者保养时，质控品或样本结果异常时。质控程序:采用配套的质控品，每天进行质控实验；每个浓度质控品重复测量10次，计算精密度CV，控制在质控品偏差范围内。
根据校准曲线，计算样本的肌酸激酶同工酶CK-MB活性：
2.5结果统计分析：
2.5按上述2.1和2.2实施方法可以分别实验得出测试结果如表所示：
表1正常标本和人为溶血标本在参数A和参数B下测定结果(U/L)
所有数据均采用SPSS统计软件分析处理，对应数据间的分析比较采用t检验及线性相关分析，配对样本统计及配对样本相关性统计结果分别如表2和表3所示：
表2配对样本统计
表3配对样本相关性
参数B设定条件下，采用速率B法分段测定，扣除了由于溶血带来的吸光度增加而导致的反应吸光度的假性升高。
实验中我们发现，在速率B法检测下，标本CK-MB的检测值明显要低于常规速率A法，其对比各个配对实验中的平均值、标准差、相关性都相差无异，所以通过本发明所用的参数设定法达到消除溶血因素的干扰。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。本发明未详细描述的技术、形状、构造部分均为公知技术。
Claims (9)
1.一种肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒，其特征在于，包括R1试剂和R2试剂：
所述R1试剂包括：烟酸铬、咪唑缓冲液、五磷酸二腺苷(AP5A)、腺苷一磷酸(AMP)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、乙酸镁、葡萄糖和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP+)以及抗CK-MB抗体；
所述R2试剂包括：咪唑缓冲液、二磷酸腺苷(ADP)、磷酸肌酸、叠氮钠和葡萄糖激酶。
2.如权利要求1所述的一种肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒，其特征在于：所述R1试剂中还包括防腐剂。
3.如权利要求2所述的一种肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒，其特征在于：所述防腐剂为叠氮钠或PC300。
4.如权利要求1所述的一种肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂包括：
5.如权利要求1所述的一种肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒，其特征在于，所述R2试剂包括：
6.如权利要求1所述的一种肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中R1试剂和R2试剂的体积比是4:1。
7.如权利要求1所述的一种肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒的检测方法，其特征在于：采用如权利要求1-6任意一项所述的肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒对肌酸激酶同工酶CK-MB含量或浓度进行检测。
8.如权利要求7所述的一种肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒的检测方法，其特征在于：所述检测采用速率B法进行检测，所述速率B法包括前半反应项目A和后半反应项目B，所述前半反应项目A可对样本空白和内源性干扰反应进行检测；后半反应项目B可对样本CKMB活性反应进行检测。对有溶血干扰影响的肌酸激酶同工酶CK-MB，项目A和项目B采用异波长检测。
9.如权利要求8所述的一种肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述速率B法的检测参数设置为：温度为37℃，比色杯光径为1.0cm，样本量：10μl，项目A检测波长为546nm，项目B检测波长为340nm；项目A的读数点为8-16点，项目B的读数点为24-32点。
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2021
- 2021-08-19 CN CN202110955435.1A patent/CN113502318A/zh active Pending
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