CN112485441A - 一种抗链球菌溶血素o检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗链球菌溶血素O检测试剂盒，属于临床体外检测试剂技术领域。本发明试剂盒包含试剂R1、R2和校准品。其中：所述试剂R1的成分如下：氨基乙酸缓冲液、α‑酮戊二酸、庆大霉素、NADH、L‑亮氨酸以及一种或多种生物酶；试剂R2的成分如下：链球菌素O胶乳颗粒、庆大霉素、氯化铵。本发明能够有效提高试剂的灵敏度和抗干扰能力，同时拥有很好的稳定性，有利于在市场中进一步的推广使用。
Description
技术领域
本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，具体涉及一种抗链球菌溶血素O检测试剂盒。
背景技术
链球菌溶血素是A群链球菌产生的一种外毒素，简称抗“O”或ASO，能溶解红细胞，并对机体多种细胞有毒性作用。人体感染溶血性链球菌后，血清中可出现大量抗链球菌溶血素O抗体，ASO测定对于诊断A族链球菌感染很有价值，有助于诊断由溶血性链球菌引起的疾病如类风湿、急性肾小球疾病、猩红热和扁桃体炎等疾病，其存在及含量可反映感染的严重程度。如果ASO滴度不下降，提示可能存在复发性感染或慢性感染；经过多次测定，若抗体效价逐渐下降，说明病情缓解。
血清中抗链球菌溶血素O(ASO)的含量检测方法目前有溶血抑制法和乳胶法两种，但是溶血抑制法操作比较繁琐，对人员要求较高，操作环境易受外界环境等因素影响，造成对ASO含量检测的不准确。而乳胶免疫法较溶血抑制法而言操作更简便、影响因素少、灵敏度较高且检测时间短，目前在临床链球菌感染疾病辅助诊断中应用较为广泛。
抗链球菌溶血素O检测试剂盒(胶乳免疫比浊法)是一种无需预处理样本，技术和设备要求不高，而精密度和特异性更高的分析方法，由于该方法不需要昂贵的设备，可以实现自动化，且可测定大量标本，因此受到临床广泛推广。
发明内容
本发明提供了一种抗链球菌溶血素O检测试剂盒。该试剂盒与与常规的试剂盒准确度、线性范围、稳定性等性能指标一致的前提下，通过缓冲液体系和酶活性保持，提高了分析灵敏度和抗干扰能力，有利于试剂在临床上的推广应用。
基本原理
本试剂盒对于抗链球菌溶血素O检测的方法是乳胶免疫比浊法，主要是将抗体肽键吸附于乳胶粒颗粒上，通过孵育使稀释的人血清中的特异性抗体与抗原结合，经孵育后，产生的吸亮度变化量与检测样本中的特异性抗体浓度成正比。
本发明是通过以下措施实现的：
一种抗链球菌溶血素O检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R1、R2和校准品，其中试剂R1成分和含量为：
试剂R2成分和含量为：
链球菌素O胶乳颗粒 0.01-0.20w/v％，
庆大霉素 0.01-0.05mg/L，
氯化铵 0.1-0.5mg/L；
进一步的，所述试剂R1中的缓冲液为pH值＝2.25-5.0的氨基乙酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中的一种或多种。
进一步的，所述校准品和所述试剂在使用时的体积比例为校准品：R1：R2＝3μL：240μL：60μL。
进一步的，所述生物酶为蛋白酶、脂肪酶、抗凝血酶、过氧化氢酶、胆红素氧化酶、抗坏血酸氧化酶其中的一种或者多种。
进一步的，所述生物酶的组成及浓度为：
与现有技术相比，本发明的有益效果体现在以下几个方面：
本发明的抗链球菌溶血素O检测试剂盒采用乳胶免疫比浊法，在试剂中添加α-酮戊二酸、庆大霉素、NADH、L-亮氨酸等优化反应体系，可以显著提高试剂的灵敏度；添加一种或多种生物酶可以有效避免血红蛋白、肝素和胆红素的干扰，大大增强试剂的抗干扰能力；试剂的准确度和稳定性良好，灵敏度高，抗干扰性强，使用方便，完全可以满足临床需要。
附图说明
图1为本发明抗链球菌溶血素O检测试剂盒实施例1与对比例1相关性曲线图；
图2为本发明抗链球菌溶血素O检测试剂盒实施例2与对比例1相关性曲线图；
图3为本发明抗链球菌溶血素O检测试剂盒实施例3与对比例1相关性曲线图；
图4为本发明抗链球菌溶血素O检测试剂盒实施例4与对比例1相关性曲线图；
图5为本发明抗链球菌溶血素O检测试剂盒实施例1-4稳定性验证实验检测结果与对比例1检测结果曲线图。
具体实施方式
为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例和附图进行详细描述。
实施例1
本实施例的抗链球菌溶血素O检测试剂盒包括试剂R1、R2和校准品，所述试剂组成如下：
其中试剂R1的成分和组成如下：
试剂R2的成分和组成如下：
链球菌素O胶乳颗粒 0.01w/v％，
庆大霉素 0.01mg/L，
氯化铵· 0.1mg/L；
校准品组成为北京九强公司生产的校准品。
本实施例的检测方法：采用自动生化分析仪(如日立7180全自动分析仪)对上述实施例中制得的试剂盒分析性能进行实验验证，具体操作是将上述试剂R1(试剂1)放置到对应的试剂位上，在样品盘的对应位置放置好生理盐水、校准品和样本，然后加入R2(试剂2)，具体操作如表1：
表1
实施例2
本实施例的抗链球菌溶血素O检测试剂盒包括试剂R1、R2和校准品，所述试剂组成如下：
其中试剂R1的成分和组成如下：
试剂R2的成分和组成如下：
链球菌素O胶乳颗粒 0.20w/v％，
庆大霉素 0.05mg/L，
氯化铵· 0.5mg/L；
校准品组成为北京九强公司生产的校准品。
本实施例的检测方法中样本浓度为20U/mL，具体操作方式同实施例1。
实施例3
本实施例的抗链球菌溶血素O检测试剂盒包括试剂R1、R2和校准品，所述试剂组成如下：
其中试剂R1的成分和组成如下：
试剂R2成分和含量为：
链球菌素O胶乳颗粒 0.01w/v％，
庆大霉素 0.01mg/L，
氯化铵 0.1mg/L；
校准品组成为北京九强公司生产的校准品。
本实施例的检测方法具体操作步骤如下：
步骤1：取样本5等份，加入不同的干扰物质，使其在样本中的浓度达到表2-2的要求，形成实施例所测样本；
步骤2的具体实施方法同实施例1。
计算：相对偏差(％)＝(干扰样本的测定均值－对照样本的测定均值)/对照样本的测定均值×100％。
实施例4
本实施例的抗链球菌溶血素O抗体检测试剂盒包括试剂R1、R2和校准品，所述试剂组成如下：
试剂R1的成分和组成如下：
试剂R2成分和含量为：
链球菌素O胶乳颗粒 0.20w/v％，
庆大霉素 0.05mg/L，
氯化铵 0.5mg/L；
校准品组成为北京九强公司生产的校准品。
具体操作步骤是将上述试剂均匀分装13组，每组的试剂量组成为20mL的R1，5mL的R2，放置到2-8℃冰箱中，每月的同一天取出一组试剂，然后按照实施例1的操作步骤检测ASO质控品(靶值为182μmol/L)。
对比例1
市场上获得认可的一种准确度优异的试剂盒，其组成包括校准品、试剂1、试剂2，本对比例检测方法同实施例1-4的检测方法(但对比例试剂组成及比例保持不变)，以测得对比例的线性、灵敏度、抗干扰性及稳定性数据。
线性数据及灵敏度实验
用本发明的抗链球菌溶血素O检测试剂盒实施例1-4测试其线性相关数据，其结果如图1，图中可看出实施例1-4与对比例的线性相关系数R2接近1，线性相关较好。
灵敏度的检测方法是测试已知浓度在20U/mL的样本，记录吸光度变化率(ΔA/min)。分别利用对比例、实施例1-4的试剂盒进行实验。检测结果如表3-1所示：
表2-1灵敏度实验结果
通过上述检测数据可以看出，实施例1-4检测结果计算出的ΔA值明显高于对比例中的ΔA，即一定时间内吸光度的变化量更大，说明本发明试剂盒添加的α-酮戊二酸、庆大霉素、NADH、L-亮氨酸可以显著提高试剂的灵敏度。
抗干扰性试验
取5等份样品，加入不同的干扰物质，使其在血清中的浓度达到表2的要求。然后分别用对比例试剂盒及实施例1-4所得试剂同样测定样品中抗链球菌溶血素O的含量，对照组测定结果与加入不同干扰物质后各组的测定结果见表2-2。
表2-2实施例试剂抗干扰性能比较
由表2-2可以看出，在样本中中加入干扰物后，胆红素≤60μmol/L、血红蛋白≤12mg/dL、肝素≤20IU/mL、EDTA≤300μmol/L时对实施例1-4试剂的测试结果相对偏差较小，没有明显干扰。而对比例3试剂在上述浓度干扰物质存在时，相对偏差都在10％以上，受到明显干扰，这表明本试剂盒通过添加本发明中所述的生物酶，优化反应缓冲体系，抗干扰性能显著提高，远远优于对比试剂。
稳定性实验
取本发明的实施例1-4检测试剂盒各13组与对比例1试剂盒，经冰箱放置一段时间后检测结果如图2所示(靶值为182μmol/L)，对比例检测结果围绕靶值浮动程度比实施例1-4更大，说明实施例1-4试剂在2-8℃储存条件下比市场上这种抗链球菌溶血素O试剂盒更加稳定。
综上所述，本发明的抗链球菌溶血素O检测试剂盒通过在试剂中添加α-酮戊二酸、庆大霉素、NADH、L-亮氨酸及生物酶优化反应体系，既可以显著提高试剂的灵敏度，也可以有效避免血红蛋白、肝素和胆红素的干扰，大大增强试剂的抗干扰能力。同类检测试剂对比，本发明试剂盒检测结果相关性好，临床检测样本结果一致，能够达到市场对产品的应用要求，并且灵敏度高、抗干扰性能好，是一种更加稳定、良好的抗链球菌溶血素O检测试剂盒。
以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (5)
1.一种抗链球菌溶血素O检测试剂盒，其特征在于，它包含试剂R1、R2和校准品，其中试剂R1成分和含量为：
试剂R2成分和含量为：
链球菌素O胶乳颗粒 0.01-0.20w/v％，
庆大霉素 0.01-0.05mg/L，
氯化铵 0.1-0.5mg/L。
2.根据权利要求1所述的抗链球菌溶血素O检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1中的缓冲液为pH值＝2.25-5.0的氨基乙酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的抗链球菌溶血素O检测试剂盒，其特征在于，所述校准品和所述试剂在使用时的体积比例为校准品：R1：R2＝3μL：240μL：60μL。
4.根据权利要求1所述的抗链球菌溶血素O检测试剂盒，其特征在于，所述生物酶为蛋白酶、脂肪酶、抗凝血酶、过氧化氢酶、胆红素氧化酶、抗坏血酸氧化酶中的一种或者多种。
5.根据权利要求4所述的抗链球菌溶血素O检测试剂盒，其特征在于，所述生物酶的组成及浓度为：
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