JP6782785B2 - 免疫学的測定方法および測定試薬 - Google Patents

Description

本発明は、被測定物質の免疫学的方法での測定において、異好性抗体やリウマトイド因子等の干渉物質（以下、干渉物質）による干渉作用を抑制し、抗原または抗体濃度を正確に測定することができる免疫学的測定方法、および免疫学的測定試薬に関するものである。

抗原と抗体との間の抗原抗体反応を利用した免疫学的測定方法は、生体中の蛋白質等の免疫学的活性物質を簡便、迅速に測定できることから、近年、各種疾患の診断に広く利用されている。このような免疫学的測定方法としては、放射免疫測定法（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）、免疫比濁法（ＴＩＡ）、ラテックス凝集法（ＬＡ）、イムノクロマトグラフィー法等の種々の方法が実用化されている。

しかしながら、免疫学的測定方法の測定対象となる検体の中には、抗原抗体反応に対して干渉する干渉物質等が含まれている場合がある。これら抗原抗体反応に干渉物質が含まれると、測定に影響するため正確な測定ができなくなり、特に臨床検査の分野では、正確な診断ができなくなるため、これまで、干渉物質の影響を軽減、あるいは抑制する方法が提案されている。

例えば、リウマトイド因子の混在による干渉作用の問題を解決するため、検体を予めヒトリウマトイド因子の結合部位に結合する動物由来抗体で前処理して、リウマトイド因子による干渉作用を低減させる免疫学的測定方法（特許文献１）や、反応液のｐＨを４．０〜６．０に保つことにより、リウマトイド因子の干渉作用を抑制する免疫学的測定方法（特許文献２）等が提案されている。

また、干渉物質による干渉作用を軽減あるいは抑制するため、免疫学的測定に使用する抗体のＦｃ部分を酵素反応で除去したＦ（ａｂ’）_２を使用する方法が提案されている（特許文献３）。しかしながら、この免疫学的測定方法では、抗原を測定する場合にしか利用できず、しかもＦ（ａｂ’）₂作製のための酵素反応や精製等の煩雑な工程が必要であり、コストアップや製造ロット間差という問題があった。

さらに、重合化または凝集した抗体分子を利用する、異好性抗体による干渉作用を抑制する方法も提案されている（特許文献４）が、異好性抗体による干渉作用を完全に抑制するためには大量の重合化または凝集した抗体分子が必要であり、コストが高くなるという問題がある。

これらの文献に記載された、干渉物質による干渉作用を抑制する方法では、確かに干渉物質による影響は改善されるものの、測定すべき試料中に干渉物質が高濃度で含まれる場合には、その干渉作用を抑制する効果は不十分であった。

測定すべき試料中に干渉物質が高濃度で含まれる場合であっても、干渉物質による干渉作用を抑制することができる、亜硫酸塩を利用するする方法（特許文献５）が提案されている。亜硫酸塩は非常に安価であり、高濃度の干渉物質の影響を十分に抑制できるような濃度で使用してもコストを上げることがなく、また、抗原抗体反応に影響を与えにくいという利点がある。

しかしながら、亜硫酸塩は測定試薬中の溶存酸素または空気中の酸素により徐々に硫酸塩に酸化されるため、干渉物質による干渉作用の抑制効果が経時的に低下する。すなわち、自動分析装置等で使用するために、開封状態で試薬庫等に保存することにより経時的に亜硫酸塩濃度が減少し、干渉物質の影響を十分に抑制できなくなるという問題がある。

特開平７−０１２８１８号公報 特開平８−１４６０００号公報 特開昭５４−１１９２９２号公報 特開平４−２２１７６２号公報 特開２００１−０７４７３９号公報

本発明者は、亜硫酸塩を含む測定試薬のｐＨを７．０以下にすることで、空気雰囲気下での亜硫酸塩の安定性が改善し、干渉物質による干渉作用の抑制効果を長期間にわたり維持でき、さらに、非常に高濃度の異好性抗体の干渉作用を十分に抑制できることを見出した。

しかしながら、亜硫酸塩を含む測定試薬のｐＨを７．０以下にすることで、溶血した試料を測定する場合にヘモグロビンの影響を受け、溶血した試料では正確な測定ができなくなるという問題に直面した。

このヘモグロビンによる影響は、特に、免疫凝集反応法に基づく免疫比濁法（ＴＩＡ法）やラテックス凝集法（ＬＩＡ法）等、Ｂ／Ｆ分離（Ｂｏｕｎｄ／Ｆｒｅｅ分離）を行わない免疫学的測定方法において大きな問題となる。

従って本発明は、上記の現状に着目してなされたものであって、測定する試料中に干渉物質が高濃度に含まれる場合であっても、これらによる干渉作用を長期間十分に抑制することができ、ヘモグロビンによる影響を受けずに正確に測定しうる免疫学的測定方法およびこれを用いた測定試薬を提供することを目的とする。

本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、亜硫酸塩を含む測定試薬のｐＨを７．４以下とし、アスコルビン酸またはその塩、チオール化合物等の還元性物質をさらに含有させることにより、長期間にわたり干渉物質に対する抑制効果がえられ、ヘモグロビンの影響を抑制できることを見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は以下の構成よりなる。
（１）免疫学的測定試薬を用いて、亜硫酸塩の存在下で、抗原抗体反応を行う免疫学的測定方法において、免疫学的測定試薬が、亜硫酸塩および還元性物質を含有することを特徴とする前記免疫学的測定方法。
（２）前記還元性物質の濃度が１ｍＭから３００ｍＭである（１）に記載の免疫学的測定方法。
（３）前記亜硫酸塩が５０ｍＭから６００ｍＭである（１）または（２）に記載の免疫学的測定方法。
（４）前記亜硫酸塩および前記還元性物質を含有する免疫学的測定試薬のｐＨが５．６から７．４の範囲である（１）から（３）のいずれか１項に記載の免疫学的測定方法。
（５）前記還元性物質が、アスコルビン酸もしくはその塩、またはチオール化合物から選ばれるいずれか１つ以上の還元性物質である（１）から（４）のいずれか１項に記載の免疫学的測定方法。
（６）前記チオール化合物が、２−メルカプトエチルアミン、２−ジメチルアミノエタンチオール、２−メルカプトエタノール、３−メルカプトプロパノール、ジチオスレイトール、システイン、Ｎ−アセチルシステイン、還元型グルタチオン、チオフェノールから選ばれるいずれか１つ以上のチオール化合物である（５）に記載の免疫学的測定方法。
（７）前記免疫学的測定試薬を含む第１試薬と、測定対象物と反応する抗体または抗原、もしくは測定対象物と反応する抗体または抗原を担持した担体を含む第２試薬とを混合する工程を含む、測定対象物を定量または定性測定する（１）から（６）のいずれか１項に記載の免疫学的測定方法。
（８）免疫学的測定方法が、ラテックス凝集法である（１）から（７）のいずれか１項に記載の免疫学的測定方法。

（９）亜硫酸塩の存在下で、抗原抗体反応を行う免疫学的測定方法に用いる試薬であって、亜硫酸塩および還元性物質を含有することを特徴とする前記免疫学的測定試薬。
（１０）前記還元性物質の濃度が１ｍＭから３００ｍＭである（９）に記載の免疫学的測定試薬。
（１１）前記亜硫酸塩が５０ｍＭから６００ｍＭである（９）または（１０）に記載の免疫学的測定試薬。
（１２）前記亜硫酸塩および前記還元性物質を含有する試薬のｐＨが５．６から７．４の範囲である（９）から（１１）のいずれか１項に記載の免疫学的測定試薬。
（１３）前記還元性物質が、アスコルビン酸もしくはその塩、またはチオール化合物から選ばれるいずれか１つ以上の還元性物質である（９）から（１２）のいずれか１項に記載の免疫学的測定試薬。
（１４）前記チオール化合物が、２−メルカプトエチルアミン、２−ジメチルアミノエタンチオール、２−メルカプトエタノール、３−メルカプトプロパノール、ジチオスレイトール、システイン、Ｎ−アセチルシステイン、還元型グルタチオン、チオフェノールから選ばれるいずれか１つ以上のチオール化合物である（１３）に記載の免疫学的測定試薬。
（１５）免疫学的測定方法が、ラテックス凝集法である（９）から（１４）のいずれか１項に記載の免疫学的測定試薬。
（１６）（９）から（１５）のいずれか１項に記載の免疫学的測定試薬を含む第１試薬と、測定対象物と反応する抗体または抗原、もしくは測定対象物と反応する抗体または抗原を担持した担体を含む第２試薬と、を含む免疫学的測定試薬キット。
本明細書は本願の優先権の基礎となる日本国特許出願番号2016-205056号の開示内容を包含する。

本発明は、亜硫酸塩を含むｐＨが７．４以下の免疫学的測定試薬に、アスコルビン酸もしくはその塩、またはチオール化合物等の還元性物質をさらに含有させることにより、測定対象である試料中に抗原抗体反応に対する干渉物質が高濃度で含まれる場合においても、干渉物質の影響を受けることなく免疫学的測定を行うことができる、安定性にすぐれた免疫学的測定試薬を提供する。さらに、測定対象である試料中に、ヘモグロビンが含まれる場合であっても、精度よく免疫学的測定を行うことができる、安定性にすぐれた免疫学的測定試薬を提供する。

そして、この免疫学的測定により得られる結果についても、信頼性の高いものとなることが期待される。

第１試薬がｐＨ７．４のときのヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的変化を示す。 第１試薬がｐＨ６．７のときのヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的変化を示す。 第１試薬がｐＨ６．７でアスコルビン酸ナトリウムを１０ｍＭ添加したときのヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的変化を示す。 第１試薬がｐＨ６．７で２−メルカプトエチルアミンを１０ｍＭ添加したときのヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的変化を示す。 第１試薬がｐＨ６．７で２−ジメチルアミノエタンチオールを１０ｍＭ添加したときのヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的変化を示す。 第１試薬がｐＨ６．７でジチオスレイトールを５ｍＭ添加したときのヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的変化を示す。 第１試薬がｐＨ６．７で２−メルカプトエタノールを１０ｍＭ添加したときのヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的変化を示す。 第１試薬がｐＨ６．７でシステインを１０ｍＭ添加したときのヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的変化を示す。 第１試薬がｐＨ６．７で還元型グルタチオンを１０ｍＭ添加したときのヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的変化を示す。 第１試薬がｐＨ６．７でアスコルビン酸ナトリウムを１０ｍＭ添加し、亜硫酸塩ナトリウムを除いたときのヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的変化を示す。 第１試薬がｐＨ６．７でアスコルビン酸ナトリウムを０．０１ｍＭ添加したときのヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的変化を示す。 第１試薬がｐＨ６．７でアスコルビン酸ナトリウムを０．１ｍＭ添加したときのヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的変化を示す。 第１試薬がｐＨ６．７で２−メルカプトエチルアミンを０．１ｍＭ添加したときのヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的変化を示す。 第１試薬がｐＨ６．７で２−メルカプトエチルアミンを１ｍＭ添加したときのヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的変化を示す。

以下、本発明の好適な実施形態について説明する。
本発明の一実施形態は、亜硫酸塩の存在下で、免疫学的測定試薬を用いて抗原抗体反応を行う免疫学的測定方法において、免疫学的測定試薬が亜硫酸塩および還元性物質を含有する免疫学的測定方法である 。

本発明において、「還元性物質」とは、水素イオン（プロトン）を放出しやすい物質をいう。

また、本発明において、「免疫学的測定方法」とは、測定対象である測定対象物と特異的に結合する物質（例えば、抗体または抗原）を用いて、測定対象物の存在の有無の判定（検出、定性測定）や、測定対象物が存在する場合にはその存在量の測定（定量）を行う方法であり、例えば、サンドイッチ法、競合法の原理に基づくＲＩＡ法やＥＬＩＳＡ法、免疫凝集反応法に基づく免疫比濁法（ＴＩＡ法）やラテックス凝集法（ＬＩＡ法）等が挙げられる。

本発明の「免疫学的測定試薬」とは、抗原抗体反応を行う免疫学的測定方法に用いる試薬であり、亜硫酸塩および還元性物質を含む。さらに、本発明の免疫学的測定試薬は測定対象物質を含む測定試料の前処理試薬として用いることができる。

本発明の「前処理試薬」とは、免疫学的測定方法を用いて測定対象物質を含む測定試料を測定する前に、測定試料を処理するために用いる試薬であり、亜硫酸塩および還元性物質を含む。前処理試薬によって処理した測定試料は、そのまま公知の免疫学的測定方法の測定試料とすることができる。

本発明に使用する亜硫酸塩は公知のものから適宜選択することができる。亜硫酸塩としては、例えば、亜硫酸ナトリウム、亜硫酸カリウム、亜硫酸カルシウム、亜硫酸アンモニウム、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸水素アンモニウム等が挙げられる。

本発明において、亜硫酸塩が免疫学的測定試薬または前処理試薬に含まれる場合、免疫学的測定試薬または前処理試薬中の亜硫酸塩濃度は、５０ｍＭ以上、好ましくは５０から６００ｍＭ、より好ましくは１００〜６００ｍＭ、さらに好ましくは２５０ｍＭから５００ｍＭである。亜硫酸塩の濃度が５０ｍＭ未満になると免疫反応に影響を与える干渉物質の影響を十分に抑制しにくく、６００ｍＭを超えても干渉物質の影響を効果的に抑制できなくなり、また、溶液の粘度上昇により測定に悪影響を与えうる。

また、本発明に使用する還元性物質も、公知のものから適選択することができる。還元性物質としては、例えば、アスコルビン酸またはその塩、チオール化合物等が挙げられる。

アスコルビン酸またはその塩は公知のものから適宜選択することができ、例えば、アスコルビン酸、アスコルビン酸ナトリウム、アスコルビン酸カリウム、アスコルビン酸カルシウム等が挙げられる。

チオール化合物も公知のものから適宜選択することができ、例えば、２−メルカプトエチルアミン、２−ジメチルアミノエタンチオール、２−メルカプトエタノール、３−メルカプトプロパノール、ジチオスレイトール、システイン、Ｎ−アセチルシステイン、還元型グルタチオン、チオフェノール等が挙げられる。

本発明において、還元性物質が免疫学的測定試薬または前処理試薬に含まれる場合、免疫学的測定試薬または前処理試薬中の還元性物質濃度は、１ｍＭ以上、好ましくは１〜３００ｍＭ、より好ましくは１〜１００ｍＭ、さらに好ましくは１〜５０ｍＭである。還元性物質の濃度が１ｍＭ以上であることにより、ヘモグロビンによる影響を効果的に回避することができるが、３００ｍＭを超えると、測定に悪影響を与え、正確な測定ができなくなることがある。

本発明の亜硫酸塩および還元性物質を含有する免疫学的測定試薬または前処理試薬のｐＨは、７．４以下が好ましく、ｐＨ５．６からｐＨ７．４の範囲がより好ましく、ｐＨ６．７からｐＨ６．９の範囲がさらに好ましい。ｐＨ５．６を下回ると蛋白質等の変性が起こりやすく正確な測定に影響を与えやすくなり、ｐＨ７．４を超えると干渉物質の影響の抑制効果が経時的に低下しやすくなる。

本発明においては、必要に応じて公知の蛋白質保護剤を加えて測定対象物質の安定性を高めることができる。このような蛋白質保護剤としては、アルブミンやゼラチン等の蛋白質や合成ポリマー素材、界面活性剤等を挙げることができる。

本発明の亜硫酸塩および還元性物質を含有する免疫学的測定試薬または前処理試薬によって干渉物質の影響を抑制した試料は、そのまま公知の免疫学的測定方法により測定することができる。免疫学的測定方法としては、例えば、サンドイッチ法、競合法の原理に基づくＲＩＡ法やＥＬＩＳＡ法、免疫凝集反応法に基づく免疫比濁法（ＴＩＡ法）やラテックス凝集法（ＬＩＡ法）等が挙げられる。

これらの免疫学的測定方法の中でも、特に測定試料中の被測定物質である抗原（または抗体）と測定試薬中の抗体（または抗原）とを反応させ、その結果生じる免疫凝集物を検出することを測定原理とする、免疫比濁法やラテックス凝集法が好ましい。

本発明の免疫学的測定試薬は、免疫比濁法やラテックス凝集法に用いることができ、緩衝液を含む第１試薬、および緩衝液に抗体または抗原、もしくは抗体または抗原を担持させた担体（好ましくはラテックス粒子）を含有させた第２試薬の２つの試薬から構成することができる。また、これら２つの試薬を、免疫学的測定試薬キットとして提供することもできる。

免疫比濁法やラテックス凝集法による免疫学的測定試薬に用いることができる緩衝液としては、ｐＨを一定に保てるものであれば特に限定されず、公知のものから適宜選択することができる。例えば、りん酸緩衝液、トリス緩衝液、グッド緩衝液等が挙げられる。

本発明の亜硫酸塩および還元性物質を含む免疫学的測定試薬を、前記２つの試薬から構成される免疫比濁法やラテックス凝集法等の免疫学的測定方法の第１試薬とすることもできる。すなわち、本発明の干渉物質の影響の抑制方法を用いた第１試薬に、測定試料を混合した後に、この混合液に抗体（または抗原）、あるいは抗体（または抗原）を担持したラテックス粒子等を含む第２試薬を混和して測定してもよい。

また、本発明の干渉物質の影響の抑制方法を用いた前処理試薬と測定試料を混合した後、この混合液を、ＥＬＩＳＡ法やラテックス凝集法等の免疫学的測定方法の測定試料として測定してもよい。

本発明においては、担体に担持させる抗体または抗原としては、特に限定されず、公知のものから適宜選択することができる。担体に担持させる抗体または抗原としては、例えば、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）、トランスフェリン等の血漿蛋白質に対する抗体、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、サイロキシン、インスリン、ヒト胎盤性ラクトーゲン等のホルモンに対する抗体、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、β２−マイクログロブリン、α―フェトプロテイン（ＡＦＰ）等の腫瘍関連物質に対する抗体、ＨＢｓ抗原、ＨＢｅ抗原等のウイルス性肝炎の抗原に対する抗体およびＨＢｓ抗体、ＨＢｅ抗体等のウイルス性肝炎の抗体に対する抗原、ヘルペス、麻疹、風疹等のウイルス、各種生体成分に対する抗体または抗原、フェノバルビタール、アセトアミノフェン、サイクロスポリン等の各種薬剤に対する抗体等が挙げられる。

本発明において、抗体または抗原を担持させる担体としては、特に限定されず、公知のものから適宜選択することができる。抗体または抗原を担持させる担体としては、ポリスチレンプレート、ポリスチレンビーズ、ラテックス粒子、金属コロイド粒子、シリカコロイド粒子等が挙げられる。

本発明で使用できる上記抗体としては、由来する動物種は特に限定されず、例えば、ウサギ、ヤギ、マウス、ラット、ウマ、ヒツジ等の動物に由来する抗体が挙げられ、測定対象物を免疫した動物の血清から得られるポリクローナル、測定対象物を免疫した動物の脾臓をミエローマ細胞と細胞融合して得られるモノクローナル抗体のいずれを用いてもよい。

本発明において、測定試料は特に限定されず、例えば、血液、血清、血漿、尿、リンパ液、刺液、髄液、汗、唾液、胃液、肺洗浄液、糞便等が挙げられる。これらのうち、血清、血漿が特に好ましい。本発明によれば、血清、血漿等の測定試料が溶血している場合に、ヘモグロビンの影響を回避した正確な測定ができる。

また、本発明において、測定対象物質についても特に限定されず、例えば、Ｃ反応性蛋白（ＣＲＰ）、トランスフェリン等の血漿蛋白質、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、サイロキシン、インスリン、ヒト胎盤性ラクトーゲン等のホルモン、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、β２−マイクログロブリン、α―フェトプロテイン（ＡＦＰ）等の腫瘍関連物質、ＨＢｓ抗原、ＨＢｅ抗原等のウイルス性肝炎の抗原およびＨＢｓ抗体、ＨＢｅ抗体等のウイルス性肝炎の抗体、ヘルペス、麻疹、風疹等のウイルス、各種生体成分に対する抗体または抗原、フェノバルビタール、アセトアミノフェン、サイクロスポリン等の各種薬剤等が挙げられる。

以下、実施例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
実施例１ 干渉反応抑制効果に対する亜硫酸塩濃度の影響
亜硫酸ナトリウム添加による干渉反応の抑制に対する亜硫酸塩濃度の影響を評価した。また、亜硫酸塩の酸化を促進する条件（試薬容器に半分充填し４℃で３週間振とう）で保存して安定性を評価した。

（１）試薬
第１試薬として、０ｍＭ、５０ｍＭ、１００ｍＭ、２５０ｍＭ、３５０ｍＭ、５００ｍＭまたは６００ｍＭの亜硫酸ナトリウムを含む５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４）を調製した。また、調製した第１試薬を試薬容器に半分充填し、４℃で３週間振とうして、亜硫酸塩の空気中の酸素による酸化を促進させた。
また、第２試薬として抗ＫＬ−６抗体担持ポリスチレンラテックス液を含む５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４）を調製した。

上記の抗ＫＬ−６担持ラテックス液は、公知の方法により調製した。すなわち、抗ＫＬ−６抗体とポリスチレンラテックスを混合して、ポリスチレンラテックス表面に抗ＫＬ−６抗体を担持することにより調製した。

（２）測定試料
プール血清に干渉チェックＲＦプラス（シスメックス株式会社）をリウマトイド因子（ＲＦ）濃度が、０、１００、２００、３００、４００、５００または１０００ＩＵ／ｍＬとなるように添加してＲＦ試料を調製した。

（３）評価方法
前記ＲＦ試料２．０μＬに第１試薬１２０μＬを混合し３７℃で５分間インキュベーションした後、この混合液に第２試薬を４０μＬ混合し３７℃で反応させ、第２試薬混合後約５分間の６６０ｎｍの吸光度変化を測定した。なお、一連の測定は日立７１８０形自動分析装置（株式会社日立ハイテクノロジーズ）を用いて行った。
ＫＬ−６の濃度を定量するため、ＫＬ−６の標準物質を測定して得られた検量線から、血清検体中のＫＬ−６濃度を算出した。調製直後の結果を表１に、亜硫酸塩の酸化を促進させた場合の結果を表２に示す。

表１より、亜硫酸塩濃度５０ｍＭ以上でＲＦによる干渉反応の抑制効果がみられ、亜硫酸塩濃度５０ｍＭにおいても、ＲＦによる干渉反応を亜硫酸塩無添加時（０ｍＭ）の約１／２に抑制できることがわかった。また、干渉反応の抑制効果は、亜硫酸塩濃度に依存して向上し、亜硫酸塩濃度２５０ｍＭから５００ｍＭで抑制効果は最大となり、亜硫酸塩濃度６００ｍＭでは低下することがわかった。亜硫酸塩濃度は５０ｍＭ以上が好ましく、１００ｍＭから６００ｍＭが更に好ましく、２５０〜５００ｍＭが最も好ましい。

また、表１と表２より、亜硫酸塩濃度が５０ｍＭの場合には、亜硫酸塩の酸化により干渉反応の抑制効果が低下している。干渉反応の抑制効果に対する亜硫酸塩の酸化の影響は、亜硫酸塩濃度に依存して軽減され、亜硫酸塩濃度２５０ｍＭから５００ｍＭで最も影響が小さくなり安定性が向上したが、亜硫酸濃度が６００ｍＭの場合には、亜硫酸塩の酸化により干渉反応の抑制効果が低下することがわかった。

実施例２ 亜硫酸塩の干渉反応の抑制に対するｐＨの影響
亜硫酸ナトリウムを２５０ｍＭとして、干渉物質の干渉反応の抑制に対するｐＨの影響を評価した。

（１）試薬
第１試薬として、２５０ｍＭ 亜硫酸ナトリウムを含む、５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ６．４または６．８）または５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４、７．８または８．２）を調製した。第２試薬は、実施例１と同様である。
（２）測定試料
プール血清に干渉チェックＲＦプラス（シスメックス株式会社）をリウマトイド因子濃度が、０、１００、２００、３００、４００、または５００ＩＵ／ｍＬとなるように添加してＲＦ試料を調製したＲＦ試料に加え、正常検体（異好性抗体およびＲＦ陰性のヒト血清試料）および異常検体（異好性抗体およびＲＦ陽性のヒト血清試料）を測定試料とした。
（３）評価方法
実施例１と同様に試料を測定した。ＲＦ試料の結果を表３に、ヒト血清試料の結果を表４に示す。

表３より明らかなように、亜硫酸塩によるＲＦの干渉反応の抑制効果は、ｐＨ７．８以上では高ｐＨほど顕著に低下し、測定値の正誤差が拡大する。しかし、ｐＨ７．４以下での亜硫酸塩によるＲＦの干渉反応の抑制効果には大きな差異は見られない。

また、表４より、正常検体では亜硫酸塩による干渉反応の抑制に対するｐＨの影響は、ほとんど見られない。これに対し、干渉物質が存在する異常検体では、高ｐＨほど亜硫酸塩の干渉反応の抑制効果が顕著に低下し測定値が高値化したが、ｐＨ６．４および６．８での測定値の変動は小さく、効果的に干渉反応が抑制されていることがわかる。

実施例３ ヘモグロビンの影響に対する亜硫酸塩含有試薬のｐＨの影響
亜硫酸ナトリウムを２５０ｍＭとして、ヘモグロビン（Ｈｂ）の影響、およびリウマトイド因子の干渉反応の抑制に対するｐＨの影響を評価した。

（１）試薬
第１試薬として、２５０ｍＭ 亜硫酸ナトリウムを含む５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ６．７）または５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４）を調製した。第２試薬は、実施例１と同様である。
（２）測定試料
プール血清に干渉チェックＲＦプラス（シスメックス株式会社）をリウマトイド因子濃度が、０、１００、２００、３００、４００、５００または１０００ＩＵ／ｍＬとなるように添加してＲＦ試料を調製した。また、プール血清に干渉チェックＡプラス 溶血ヘモグロビン（シスメックス株式会社）をヘモグロビン濃度が、０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、８００または１０００ｍｇ／ｄＬとなるように添加してＨｂ試料を調製した。
（３）評価方法
実施例１と同様に試料を測定した。結果を表５に示す。

表５から明らかなように、亜硫酸塩を含有する試薬がｐＨ７．４の場合はＲＦによる干渉反応が見られるのに対し、ｐＨ６．７ではＲＦによる干渉反応は抑制されている。これに対し、測定値に対するヘモグロビンの影響は、ｐＨ７．４では見られないのに対して、ｐＨ６．７ではヘモグロビン濃度に依存した正の影響が見られる。

実施例４ ヘモグロビンの影響の原因の確認
亜硫酸ナトリウム濃度を２５０ｍＭとして、ヘモグロビンの吸収スペクトルに対するｐＨの影響を評価した。

（１）試薬
第１試薬は、実施例３と同様である。第２試薬として、実施例１の組成から抗ＫＬ−６抗体担持ラテックスを除いたものを調製した。
（２）測定試料
プール血清に干渉チェックＡプラス 溶血ヘモグロビン（シスメックス株式会社）をヘモグロビン濃度が５００ｍｇ／ｄＬになるように添加してＨｂ試料を調製した。
（３）評価方法
Ｈｂ試料１０μＬに第１試薬６００μＬを添加し、この混合物に第２試薬を添加後、ＳＨＩＭＡＤＺＵ ＵＶ−２６００（株式会社島津製作所）にて波長８００ｎｍから４００ｎｍで吸収スペクトルを測定した。吸収スペクトル測定終了後、混合液を３７℃で加温し、加温開始５分後に波長８００ｎｍから４００ｎｍで吸収スペクトルを測定し、その後５分おきに波長８００ｎｍから４００ｎｍで吸収スペクトルを測定した。結果を図１および図２に示す。

図１から明らかなように、亜硫酸塩を含有する第１試薬のｐＨが７．４の場合、ヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的変化は見られない。これに対して、図２のように、亜硫酸塩を含有する第１試薬のｐＨが６．７の場合には、ヘモグロビンの吸収スペクトルが経時的に変化することがわかった。このヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的変化が、免疫比濁法やラテックス凝集法等のＢ／Ｆ分離を行わない免疫学的測定方法の測定値に影響を与えるものであり、測定値に対する影響の原因がヘモグロビンであることを示すものである。

実施例５ ヘモグロビンの影響に対する還元性物質の効果
亜硫酸ナトリウムを２５０ｍＭ、ｐＨを６．７として、還元性物質のアスコルビン酸ナトリウム（ＡＡ）、２−メルカプトエチルアミン（２−ＭＥＡ）、２−ジメチルアミノエタンチオール（２−ＤＡＥＴ）、およびジチオスレイトール（ＤＴＴ）の効果を評価した。

（１）試薬
第１試薬として、２５０ｍＭ 亜硫酸ナトリウム、および１０ｍＭ還元性物質（ＤＴＴは５ｍＭ）を含む５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ６．７）を調製した。また、比較例として、還元性物質を添加しないものも調製した。さらに、アスコルビン酸ナトリウムおよび２−メルカプトエチルアミンについては、亜硫酸ナトリウムを除いたものも調製した。
第２試薬は、実施例１と同様である。
（２）測定試料
実施例３と同様に調製した。
（３）評価方法
実施例１と同様に試料を測定した。結果を表６および表７に示す。

表６から明らかなように、亜硫酸ナトリウムを含有する第１試薬に、アスコルビン酸ナトリウム、２−メルカプトエチルアミン、２−ジメチルアミノエタンチオールまたはジチオスレイトールを添加しても、比較例と同様にＲＦによる干渉反応は見らない。これに対して、亜硫酸ナトリウムを含有せず、アスコルビン酸ナトリウムまたは２−メルカプトエチルアミンを単独で用いた場合は、ＲＦによる干渉反応が見られる。

表７から明らかなように、比較例がヘモグロビンの影響を顕著に受けるのに対し、アスコルビン酸ナトリウム、２−メルカプトエチルアミン、２−ジメチルアミノエタンチオールまたはジチオスレイトールを等の還元性物質を添加することでヘモグロビンの影響が抑制されることがわかった。アスコルビン酸ナトリウム単独ではヘモグロビンの影響が見られるが、同様に単独での添加ではヘモグロビンの影響が見られる亜硫酸塩（比較例）と組み合わせることで、ヘモグロビンの影響を抑制できることは驚くべきことである。

実施例６ 還元性物質の添加効果の確認
亜硫酸ナトリウム濃度を２５０ｍＭ、ｐＨを６．７として、還元性物質のアスコルビン酸ナトリウム（ＡＡ）、２−メルカプトエチルアミン（２−ＭＥＡ）、２−ジメチルアミノエタンチオール（２−ＤＡＥＴ）、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、２−メルカプトエタノール（２−ＭＥ）、システインまたは還元型グルタチオンのヘモグロビンの吸収スペクトルに対する効果を評価した。

（試薬）
第１試薬として、実施例５に加え、２−メルカプトエタノール、システインまたは還元型グルタチオンをそれぞれ１０ｍＭ添加したものも調製した。第２試薬は、実施例４と同様である。
（２）測定試料
実施例４と同様に調製した。
（３）評価方法
実施例４と同様にヘモグロビンの吸収スペクトルの経時変化を測定した。結果を図３から図１０に示す。

図３から図９から明らかなように、第１試薬に亜硫酸ナトリウムに加えて、アスコルビン酸ナトリウム、２−メルカプトエチルアミン、２−ジメチルアミノエタンチオール、ジチオスレイトール、２−メルカプトエタノール、システインまたは還元型グルタチオン等の還元性物質を含む場合には、ヘモグロビンの吸収スペクトルは経時的に変化せず安定している。これに対し、アスコルビン酸ナトリウムは亜硫酸ナトリウムを除き単独で添加すると（図１０）、ヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的な変化が見られる。

実施例７ 亜硫酸塩および２−メルカプトエチルアミン添加組成でのｐＨ影響
亜硫酸ナトリウム２５０ｍＭ、２−メルカプトエチルアミン１０ｍＭとして、リウマトイド因子の干渉反応やヘモグロビンの影響に対するｐＨの影響を評価した。

（１）試薬
第１試薬として、２５０ｍＭ 亜硫酸ナトリウム、１０ｍＭ ２−メルカプトエチルアミンを含む５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ６．０、６．２、６．７または６．９）または５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４または８．０）を調製した。第２試薬は、実施例１と同様である。
（２）測定試料
プール血清に干渉チェックＲＦプラス（シスメックス株式会社）をリウマトイド因子濃度が、０、２５０または５００ＩＵ／ｍＬとなるように添加してＲＦ試料を調製した。また、プール血清に干渉チェックＡプラス 溶血ヘモグロビン（シスメックス株式会社）をヘモグロビン濃度が、０、２５０または５００ｍｇ／ｄＬとなるように添加してＨｂ試料を調製した。
（３）評価方法
実施例１と同様に試料を測定した。結果を表８および表９に示す。

表８から明らかなように、ｐＨ６．０から７．４ではリウマトイド因子の干渉反応が抑制されるのに対し、ｐＨ８．０ではＲＦ濃度に依存してリウマトイド因子の干渉反応が見られており、亜硫酸塩の干渉反応の抑制効果が低下している。

また、表９から明らかなように、亜硫酸塩に２−メルカプトエチルアミンを添加することで、ｐＨ６．０から８．０の範囲でヘモグロビンの影響が抑制されている。亜硫酸塩に２−メルカプトエチルアミンを混合した免疫学的測定試薬のｐＨは７．４以下が好ましい。

実施例８ 亜硫酸塩およびアスコルビン酸塩添加組成でのｐＨ影響
亜硫酸ナトリウム２５０ｍＭ、アスコルビン酸ナトリウム１０ｍＭとして、リウマトイド因子の干渉反応およびヘモグロビンの影響に対するｐＨの影響を評価した。また、亜硫酸塩やアスコルビン酸塩の酸化を抑制する条件（試薬容器一杯に充填し４℃で静置）と、酸化を促進する条件（試薬容器に半分充填し４℃で３週間振とう）で保存して、亜硫酸塩やアスコルビン酸塩の酸化の影響を評価した。

（１）試薬
第１試薬として、２５０ｍＭ 亜硫酸ナトリウム、１０ｍＭ アスコルビン酸ナトリウムを含む５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ５．６、６．０、６．２、６．４、６．７または６．９）または５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．２または７．４）を調製した。第２試薬は、実施例１と同様である。
（２）測定試料
プール血清に干渉チェックＲＦプラス（シスメックス株式会社）をリウマトイド因子濃度が、０、１００、２００、３００、４００または５００ＩＵ／ｍＬとなるように添加してＲＦ試料を調製した。また、プール血清に干渉チェックＡプラス 溶血ヘモグロビン（シスメックス株式会社）をヘモグロビン濃度が、０、１００、２００、３００、４００または５００または５００ｍｇ／ｄＬとなるように添加してＨｂ試料を調製した。
（３）評価方法
実施例１と同様に試料を測定した。結果を表１０および表１１に示す。

表１０から明らかなように、ｐＨ５．６から７．４のｐＨ範囲では、リウマトイド因子の干渉反応が抑制されるが、ｐＨ７．２以上では抑制効果が低下することがわかった。しかし、ｐＨ５．６から７．４のｐＨ範囲では亜硫酸塩およびアスコルビン酸塩の酸化を促進する保存条件でも、リウマトイド因子の干渉反応の抑制効果の低下が見られない。

また、表１１から明らかなように、ヘモグロビンの影響に対するｐＨの影響はみられず、また、保存条件による差異も見られない。亜硫酸塩にアスコルビン酸塩を混合した免疫学的測定試薬のｐＨは７．４以下が好ましく、ｐＨ５．６から７．４がより好ましく、ｐＨ５．６から６．９がさらに好ましい。

実施例９ チオール化合物の濃度の影響
亜硫酸ナトリウム２５０ｍＭ、ｐＨ６．７として、リウマトイド因子の干渉反応およびヘモグロビンの影響に対する２−メルカプトエチルアミン濃度の影響を評価した。

（１）試薬
第１試薬として、２５０ｍＭ 亜硫酸ナトリウム、０（比較例）、１０、５０、または１００ｍＭ ２−メルカプトエチルアミンを含む５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ６，７）を調製した。さらに、１０ｍＭおよび５０ｍＭの２−メルカプトエチルアミンを添加した試薬については、亜硫酸ナトリウムを除いたものも調製した。第２試薬は、実施例１と同様である。
（２）測定試料
実施例８と同様に調製した。
（３）評価方法
実施例１と同様に試料を測定した。結果を表１２および表１３に示す。

表１２から明らかなように、亜硫酸塩に２−メルカプトエチルアミンを混合した場合は、リウマトイド因子の干渉反応の抑制に対する、２−メルカプトエチルアミンの濃度の影響は見られない。これに対し、亜硫酸塩を添加せず２−メルカプトエチルアミン単独を添加した試薬では、濃度による差がみられ、１０ｍＭではリウマトイド因子による干渉反応が見られる。

表１３から明らかなように、２−メルカプトエチルアミンを混合しない比較例では、ヘモグロビンの影響が見られるのに対し、亜硫酸塩に２−メルカプトエチルアミンを混合した場合は、ヘモグロビンの影響は見られず、２−メルカプトエチルアミンの濃度の影響も見られない。

実施例１０ アスコルビン酸濃度
亜硫酸ナトリウム２５０ｍＭ、ｐＨ６．７として、ヘモグロビンの影響に対するアスコルビン酸濃度の影響を評価した。

（１）試薬
第１試薬として、２５０ｍＭ 亜硫酸ナトリウム、１、２、５、１０、３０、５０、１００または３００ｍＭ アスコルビン酸ナトリウムを含む５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ６．７）を調製した。第２試薬は、実施例１と同様である。
（２）測定試料
実施例８のＨｂ試料と同様に調製した。
（３）評価方法
実施例１と同様に試料を測定して、ヘモグロビン（Ｈｂ）の影響に対するアスコルビン酸ナトリウム濃度の影響を評価した。結果を表１４に示す。

表１４から明らかなように、アスコルビン酸無添加で見られるヘモグロビンの影響は、アスコルビン酸ナトリウムを１ｍＭ以上添加することで完全に抑制することができることがわかった。また、３００ｍＭ添加した場合でも、正確に測定できることがわかった。

実施例１１ 還元性物質添加濃度の下限の確認
亜硫酸ナトリウム濃度を２５０ｍＭ、ｐＨを６．７として、還元性物質のアスコルビン酸ナトリウム、または２−メルカプトエチルアミン（２−ＭＥＡ）の添加濃度の下限を、ヘモグロビンの吸収スペクトルの経時変化に対する効果により評価した。

（試薬）
アスコルビン酸ナトリウム濃度を０．０１ｍＭ、または０．１ｍＭ、２−メルカプトエチルアミン濃度を０．１ｍＭまたは１．０ｍＭとして、実施例５と同様に第１試薬を調製した。第２試薬は、実施例４と同様である。
（２）測定試料
実施例４と同様に調製した。
（３）評価方法
実施例４と同様にヘモグロビンの吸収スペクトルの経時変化を測定した。結果を図１１から図１４に示す。

図１３から図１４より、２−メルカプトエチルアミンは１ｍＭの添加で、ヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的な変化が抑制されることがわかった。また、図１２より、アスコルビン酸ナトリウム０．１ｍＭの添加では、ヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的な変化が若干みられるが、同濃度の２−メルカプトエチルアミンに比べ経時的な変化が小さいことから、２−メルカプトエチルアミンと同様１ｍＭの添加で、ヘモグロビンの吸収スペクトルの経時的な変化が抑制されると考えられる。

実施例１２ 亜硫酸塩およびアスコルビン酸塩を含有する試薬の安定性の評価
亜硫酸ナトリウムおよびアスコルビン酸を添加した第１試薬を４℃で、１２ヶ月間保存後に、調製直後の第１試薬を対照に、干渉物質を含むヒト血清検体を測定して、干渉反応の抑制効果の安定性を評価した。

（１）試薬
第１試薬として、２５０ｍＭ 亜硫酸ナトリウム、１０ｍＭ アスコルビン酸ナトリウムを含む５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液（６．７）を調製した。また、前記組成からアスコルビン酸ナトリウムを除いた第1試薬も調製した。第２試薬は、実施例１と同様である。
（２）測定試料
異好性抗体（ＨＡＲＡ、ＨＡＧＡ、ＨＡＭＡまたはＨＡＨＡ）及び／またはリウマトイド因子を含むヒト血清検体を試料とした。
（３）評価方法
実施例１と同様に試料を測定した。結果を表１５に示す。

表１５より、４℃で１２ヶ月保存した第１試薬での異好性抗体及び／またはリウマトイド因子を含む血清検体の測定値は、調製直後の第１試薬での測定値と同様であり、４℃で１２ヶ月保存しても干渉反応の抑制効果の低下は見られず、長期間安定であった。また、アスコルビン酸ナトリウムの有無による安定性の差異も見られないが、アスコルビン酸を含有しない場合は、実施例５等に示したようにヘモグロビンの影響を受ける。

実施例１３ ＭＭＰ−３測定試薬での効果
さらに、測定対象物質をＭＭＰ−３に変えて本発明の効果を確認した。

（１）試薬
第１試薬として、２５０ｍＭ 亜硫酸ナトリウム、１０ｍＭ アスコルビン酸ナトリウムを含む５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ６．７）を調製した。また、前記組成からアスコルビン酸ナトリウムを除いた第１試薬、および前記アスコルビン酸ナトリウムを除いた第１試薬のＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ６．７）をＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４）としたものも調製した。
第２試薬として、抗ＭＭＰ−３抗体担持ポリスチレンラテックス液を含む５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４）を調製した。

上記の抗ＭＭＰ−３担持ラテックス液は、公知の方法により調製した。すなわち、抗ＭＭＰ−３抗体とポリスチレンラテックスを混合して、ポリスチレンラテックス表面に抗ＭＭＰ−３抗体を担持することにより調製した。

（２）測定試料
異好性抗体またはリウマトイド因子陽性のヒト血清検体、および実施例８と同様にＨｂ試料を調製した。

（３）評価方法
試料２．４μＬに第１試薬１２０μＬを混合し３７℃で５分間インキュベーションした後、この混合液に第２試薬を４０μＬ混合し３７℃で反応させ、第２試薬混合後約５分間の主波長５７０ｎｍおよび副波長８００ｎｍの二波長における吸光度変化を測定した。なお、一連の測定は日立７１８０形自動分析装置（株式会社日立ハイテクノロジーズ）を用いて行った。
ＭＭＰ−３の濃度を定量するため、ＭＭＰ−３の標準物質を測定して得られた検量線から、試料中のＭＭＰ−３濃度を算出した。結果を表１６および表１７に示す。

表１６から明らかなように、アスコルビン酸ナトリウムの有無によらず、第１試薬をｐＨ６．７とすることで、干渉物質による干渉反応を抑制できるのに対し、第１試薬をｐＨ７．４すると干渉物質が高濃度で含まれる血清（血清１、血清２、血清１２および血清１４）では、干渉物質による干渉反応を十分に抑制できず、ＭＭＰ−３測定値が高値化した。

表１７から明らかなように、ＭＭＰ−３においても、第１試薬をｐＨ６．７とし、アスコルビン酸塩を添加しない場合は、ヘモグロビンの影響が見られるのに対し、アスコルビン酸塩の添加によりヘモグロビンの影響を抑制することができる。

以上のように、本発明によれば、測定する試料中に異好性抗体やリウマトイド因子等の干渉物質が高濃度に含まれる場合であっても、これらによる干渉作用を長期間十分に抑制することができ、ヘモグロビンによる影響を受けない、測定対象物を正確に測定ができる免疫学的測定方法および免疫学的測定試薬の提供が可能となる。
本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願はそのまま引用により本明細書に組み入れられるものとする。

Claims (18)

1. 亜硫酸塩及び還元性物質を含有し、且つ8.0以下のpHを有する免疫学的測定試薬の存在下で、ヘモグロビンの影響を抑制させて抗原抗体反応を行う工程を含む、免疫学的測定方法。
2. 前記還元性物質の濃度が1mM〜300mMである、請求項１記載の免疫学的測定方法。
3. 前記亜硫酸塩の濃度が50mM〜600mMである、請求項１又は２記載の免疫学的測定方法。
4. 前記免疫学的測定試薬のpHが7.4以下である、請求項１〜３のいずれか１項記載の免疫学的測定方法。
5. 前記免疫学的測定試薬のpHが5.6〜7.4の範囲である、請求項４記載の免疫学的測定方法。
6. 前記還元性物質が、アスコルビン酸若しくはその塩、又はチオール化合物から選ばれるいずれか1つ以上の還元性物質である、請求項１〜５のいずれか１項記載の免疫学的測定方法。
7. 前記チオール化合物が、2-メルカプトエチルアミン、2-ジメチルアミノエタンチオール、2-メルカプトエタノール、3-メルカプトプロパノール、ジチオスレイトール、システイン、N-アセチルシステイン、還元型グルタチオン、チオフェノールから選ばれるいずれか1つ以上のチオール化合物である、請求項６記載の免疫学的測定方法。
8. 前記免疫学的測定試薬を含む第１試薬と、測定対象物と反応する抗体若しくは抗原、又は測定対象物と反応する抗体若しくは抗原を担持した担体を含む第２試薬とを混合する工程をさらに含み、該測定対象物を定量又は定性測定する、請求項１〜７のいずれか１項記載の免疫学的測定方法。
9. 免疫学的測定方法がラテックス凝集法である、請求項１〜８のいずれか１項記載の免疫学的測定方法。
10. 請求項１〜９のいずれか１項記載の免疫学的測定方法に用いるための免疫学的測定試薬であって、亜硫酸塩及び還元性物質を含有し、且つ8.0以下のpHを有する、前記免疫学的測定試薬。
11. 前記還元性物質の濃度が1mM〜300mMである、請求項１０記載の免疫学的測定試薬。
12. 前記亜硫酸塩の濃度が50mM〜600mMである、請求項１０又は１１記載の免疫学的測定試薬。
13. 前記免疫学的測定試薬のpHが7.4以下である、請求項１０〜１２のいずれか１項記載の免疫学的測定試薬。
14. 前記免疫学的測定試薬のpHが5.6〜7.4の範囲である、請求項１３記載の免疫学的測定試薬。
15. 前記還元性物質が、アスコルビン酸若しくはその塩、又はチオール化合物から選ばれるいずれか1つ以上の還元性物質である、請求項１０〜１４のいずれか１項記載の免疫学的測定試薬。
16. 前記チオール化合物が、2-メルカプトエチルアミン、2-ジメチルアミノエタンチオール、2-メルカプトエタノール、3-メルカプトプロパノール、ジチオスレイトール、システイン、N-アセチルシステイン、還元型グルタチオン、チオフェノールから選ばれるいずれか1つ以上のチオール化合物である、請求項１５記載の免疫学的測定試薬。
17. 免疫学的測定方法がラテックス凝集法である、請求項１０〜１６のいずれか１項記載の免疫学的測定試薬。
18. 請求項１０〜１７のいずれか１項記載の免疫学的測定試薬を含む第１試薬と、測定対象物と反応する抗体若しくは抗原、又は測定対象物と反応する抗体若しくは抗原を担持した担体を含む第２試薬とを含む、請求項１〜９のいずれか１項記載の免疫学的測定方法に用いるための免疫学的測定試薬キット。

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