TW201932838A - 將血紅素與血紅素結合球蛋白之複合體安定化之方法、及用以保存含有血紅素之檢體之保存溶液 - Google Patents
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Abstract
本發明之將血紅素-血紅素結合球蛋白複合體安定化之方法包括:將血紅素-血紅素結合球蛋白複合體於血紅素分解物之存在下保存之步驟。根據該方法,可將血紅素-血紅素結合球蛋白複合體安定化。
Description
本發明係關於一種將血紅素與血紅素結合球蛋白之複合體安定化之方法、用以保存血紅素與血紅素結合球蛋白之複合體之保存溶液、用以保存含有血紅素之檢體之保存溶液、及用以檢測檢體中之血紅素之方法及套組。
糞便、尿、唾液等中所含之血液之檢測對大多數疾病之診斷有用。例如,檢測糞便中之血液之糞便潛血檢查係用於大腸癌之檢查診斷。作為檢測潛血之方法,已知有使用抗血紅素抗體檢測糞便等檢體中之潛血中所含之血紅素之免疫方法。供潛血檢查之檢體通常由受驗者採集至放入有保存溶液之容器中,並送至醫院等檢查機構。多數情形時,含有檢體之保存溶液(試樣)亦時常於供實際檢查之前保管數天,於此期間置於高溫下。血紅素於溶液中不安定,於高溫條件下尤其容易改性或分解。若因血紅素改性或分解導致表位或其周邊部位之結構變化,則抗體無法識別血紅素,因此,利用免疫方法之血紅素之檢測之正確性降低。
又,於潛血檢查中,於利用免疫方法之血紅素濃度之測定中,廣泛使用可迅速且正確地分析多數之試樣之自動分析裝置。通常,於利用自動分析裝置之測定中,裝置之變化及用於測定之試劑之變化對測定結果產生較大影響,故而使用包含已知濃度之測定對象物質之校正液或對照液,定期地進行自動分析裝置之校正或精度管理。自動分析裝置之校正係藉由測定包含濃度已知之測定對象物質之校正液,並製作校準曲線而進行,自動分析裝置之精度管理係藉由測定包含已知濃度之測定對象物質之對照液,確認測定值是否在特定之範圍內而進行。然而,血紅素於溶液中不安定,若因校正液或對照液中所含之血紅素改性或分解導致表位或其周邊部位之結構變化,則抗體無法識別血紅素,無法正確地進行自動分析裝置之校正及精度管理,無法實現正確之測定。
於上述背景下,為了使試樣中之血紅素安定化而提出有各種方法。例如提出有:添加硫柳汞、雙氯苯雙胍己啶等抗菌劑之方法(例如,專利文獻1);添加人類以外之動物血紅素之方法(例如,專利文獻2);添加人類以外之動物之血清之方法(例如,專利文獻3);添加醣苷酶型溶菌酵素之方法(例如,專利文獻4);添加水溶性過渡金屬錯合物之方法(例如,專利文獻5);添加血紅素之酵素分解產物之方法(例如,專利文獻6);添加亞硫酸或二亞硫酸等之方法(例如,專利文獻7);添加蘋果酸等有機酸之方法(例如,專利文獻8);添加亞胺基羧酸之方法(例如,專利文獻9);添加乙醛酸之方法(例如,專利文獻10);添加鹵代烷磺酸之方法(例如,專利文獻11)等。
然而,血紅素非常不安定,故而即便為該等血紅素之安定化方法,亦無法充分抑制其改性或分解。另一方面,為了使血紅素安定化,亦已知有添加血紅素結合球蛋白之方法(例如,專利文獻12)。血紅素結合球蛋白係存在於廣泛之動物之血液中,藉由紅血球之溶血而發揮回收於血液中釋出之血紅素之作用的蛋白質。已知血紅素結合球蛋白與血紅素迅速地結合,形成安定之血紅素-血紅素結合球蛋白複合體(Hb-Hp複合體)。藉由將血紅素結合球蛋白預先添加至添加糞便等檢體之保存溶液等中,而於添加檢體時,可使檢體中所含之血紅素成為安定之血紅素-血紅素結合球蛋白複合體。
[先前技術文獻]
[專利文獻]
[先前技術文獻]
[專利文獻]
[專利文獻1]日本專利特開昭63-271160號公報
[專利文獻2]日本專利特開平2-296149號公報
[專利文獻3]日本專利特開平4-145366號公報
[專利文獻4]日本專利特公平5-69466號公報
[專利文獻5]日本專利特開平7-229902號公報
[專利文獻6]日本專利特開平11-218533號公報
[專利文獻7]日本專利特開2000-258420號公報
[專利文獻8]日本專利特開2003-14768號公報
[專利文獻9]日本專利特開2009-097956號公報
[專利文獻10]日本專利特開2013-257216號公報
[專利文獻11]日本專利特開2016-191580號公報
[專利文獻12]日本專利特開平10-132824號公報
[專利文獻2]日本專利特開平2-296149號公報
[專利文獻3]日本專利特開平4-145366號公報
[專利文獻4]日本專利特公平5-69466號公報
[專利文獻5]日本專利特開平7-229902號公報
[專利文獻6]日本專利特開平11-218533號公報
[專利文獻7]日本專利特開2000-258420號公報
[專利文獻8]日本專利特開2003-14768號公報
[專利文獻9]日本專利特開2009-097956號公報
[專利文獻10]日本專利特開2013-257216號公報
[專利文獻11]日本專利特開2016-191580號公報
[專利文獻12]日本專利特開平10-132824號公報
[發明所欲解決之問題]
於源自活體之檢體、尤其是糞便中,存在大量引起血紅素之分解之細菌或蛋白質分解酵素,故而有即便為血紅素-血紅素結合球蛋白複合體,亦發生分解之情形。因此,本發明之目的在於將血紅素-血紅素結合球蛋白複合體安定化。
[解決問題之技術手段]
[解決問題之技術手段]
本發明之將血紅素-血紅素結合球蛋白複合體安定化之方法包括:將血紅素-血紅素結合球蛋白複合體於血紅素分解物之存在下保存之步驟。血紅素分解物可為由酵素所得之血紅素分解物。上述方法亦可包括:將血紅素與血紅素結合球蛋白之複合體於含有血紅素分解物之保存溶液中保存之步驟;血紅素分解物於保存溶液中之濃度以鐵當量計可為0.012 mg/L以上。血紅素與血紅素結合球蛋白之複合體可包含藉由使含有血紅素之檢體與血紅素結合球蛋白接觸所生成之血紅素與血紅素結合球蛋白之複合體。檢體可為糞便、唾液、或尿,亦可為糞便。
本發明之用以保存血紅素與血紅素結合球蛋白之複合體之保存溶液包含血紅素分解物。該保存溶液亦可進而包含血紅素與血紅素結合球蛋白之複合體,可用作校正液或對照液。
本發明之用以保存含有血紅素之檢體之保存溶液包含血紅素結合球蛋白、及血紅素分解物。檢體亦可為糞便、唾液、或尿。
血紅素分解物亦可為由酵素所得之血紅素分解物。血紅素分解物之濃度以鐵當量計可為0.012 mg/L以上。
本發明之檢測檢體中之血紅素之方法具備:將檢體添加至用以保存含有血紅素之檢體之上述保存溶液中而獲得含有檢體之試樣之步驟;及藉由免疫方法而檢測試樣中之血紅素之步驟;試樣中之血紅素與血紅素結合球蛋白形成複合體。
本發明之用以檢測檢體中之血紅素之套組包含:用以保存含有血紅素之檢體之上述保存溶液、及含有抗血紅素抗體之試劑。
[發明之效果]
[發明之效果]
根據本發明,可將血紅素-血紅素結合球蛋白複合體安定化。換言之,根據本發明,可抑制血紅素-血紅素結合球蛋白複合體中之血紅素之改性及分解。因此,根據本發明,可以更高之正確性,藉由免疫方法而檢測檢體中之血紅素。又,可提供保存安定性優異之校正液或對照液。
本發明之將血紅素-血紅素結合球蛋白複合體安定化之方法包括:將血紅素-血紅素結合球蛋白複合體於血紅素分解物之存在下保存之步驟。
血紅素分解物係將血紅素片段化而成者,作為片段化之方法,可列舉:酵素分解法、化學分解法等方法。血紅素分解物較佳為先前所使用之由酵素所得之血紅素分解物。酵素可為胰蛋白酶、胃蛋白酶、鹼性蛋白酶等蛋白質分解酵素。血紅素分解物可為完全分解之血紅素,亦可為部分分解之血紅素,亦可為該等之混合物。所謂完全分解之血紅素,意指於由酵素所致之分解反應結束時所獲得之血紅素分解物、或與其相同且藉由化學分解法所獲得之血紅素分解物。所謂部分分解之血紅素,意指於由酵素所致之分解反應結束前之任意階段所獲得之血紅素分解物、或與其相同且藉由化學分解法所獲得之血紅素分解物。作為血紅素分解物,較佳為部分分解之血紅素。即,作為血紅素分解物,較佳為血紅素之酵素部分分解物。部分分解之血紅素具有優異之溶解性,又,可期待由血球蛋白片段所得之血紅素-血紅素結合球蛋白複合體之輔助安定化效果。血紅素分解物較佳為包含作為鐵與卟啉之錯合物之原血紅素,且包含分解至不顯示抗原性之程度之血球蛋白。進而,血紅素分解物較佳為分解至不與血紅素結合球蛋白形成複合體之程度。血紅素分解物之來源動物並無限定,例如可為人類或具有血紅素之人類以外之脊椎動物,亦可為豬、牛、馬、綿羊、山羊、兔等哺乳類、鳥類、魚類等。
本方法之一態樣包括:將血紅素-血紅素結合球蛋白複合體於含有血紅素分解物之保存溶液中保存之步驟。
保存溶液可為含有2-𠰌啉基乙磺酸(MES)、羥基乙基哌𠯤-2-乙磺酸(HEPES)、哌𠯤-雙(2-乙磺酸)(PIPES)等古德緩衝劑之緩衝液,亦可為磷酸緩衝液、三羥甲基胺基甲烷緩衝液或甘胺酸緩衝液等。
血紅素分解物之濃度較佳為以鐵當量計為0.012 mg/L以上、0.012 mg/L~60 mg/L、0.12 mg/L~12 mg/L、1.2 mg/L~6.3 mg/L、或1.2 mg/L~3.6 mg/L。若血紅素分解物之濃度以鐵當量計為60 mg/L以下,則保存溶液之黏度不會過度升高,故而容易測定試樣中之血紅素或血紅素-血紅素結合球蛋白複合體之濃度。又,若血紅素分解物之濃度以鐵當量計為60 mg/L以下,則可抑制因血紅素分解物導致之保存溶液之著色。所謂鐵當量,意指血紅素分解物中所含之鐵原子之量(mg Fe/L)。血紅素分解物之鐵當量可藉由鄰啡啉比色法或原子吸光法等而求出。
保存溶液之pH值可為5~10,亦可為6~8。
於保存溶液中,亦可進而添加疊氮化鈉(NaN3
)等抗菌劑、pH調整劑、用以調節離子強度之鹽等在血紅素之保存時可使用之公知之添加劑。抗菌劑包含抗生物質及溶菌酵素。於添加劑之例中,亦包含離胺酸、組胺酸等胺基酸、白蛋白、蛋白質分解酵素抑制劑、過渡金屬離子之水溶性錯合物、乙二胺四乙酸(EDTA)等已知具有將血紅素安定化之作用之公知之成分。於白蛋白之例中,包含牛血清白蛋白(BSA)等血清白蛋白、及源自蛋白之白蛋白(卵白蛋白)。
藉由於具有上述組成之保存溶液中,進而添加濃度已知之血紅素-血紅素結合球蛋白複合體,可將上述保存溶液用作用以檢測或分析血紅素-血紅素結合球蛋白複合體之校正液或對照液。此種校正液或對照液係藉由血紅素分解物而將血紅素-血紅素結合球蛋白複合體安定化,故而即便於高溫條件下亦可安定地保存。
本方法之更具體之一態樣包括:將藉由使含有血紅素之檢體與血紅素結合球蛋白接觸所生成之血紅素-血紅素結合球蛋白複合體於上述保存溶液中保存之步驟。含有血紅素之檢體可為糞便、唾液、或尿。於糞便中,尤其大量存在引起血紅素之分解之細菌或蛋白質分解酵素,故而本發明之方法尤其有效。
含有血紅素之檢體與血紅素結合球蛋白可任意接觸。較佳為亦可於進而含有血紅素結合球蛋白之上述保存溶液中,添加含有血紅素之檢體。檢體中之血紅素係與保存溶液中之血紅素結合球蛋白迅速地反應而形成血紅素-血紅素結合球蛋白複合體。並且,藉由將檢體預先直接保存於保存溶液中,可安定地保存血紅素-血紅素結合球蛋白複合體。換言之,根據將血紅素-血紅素結合球蛋白複合體安定化之上述方法,可於維持血紅素-血紅素結合球蛋白複合體中之血紅素之表位及其周邊部位之結構之情況下保存檢體。因此,本發明亦可謂提供用以保存含有血紅素之檢體之保存溶液。再者,於血紅素與血紅素結合球蛋白形成複合體時,血紅素係自α鏈與β鏈各兩個締合而成之四聚物(α2β2)解離為兩個二聚物(αβ),但該現象不相當於本說明書中之「分解」及「改性」。
於本說明書中,血紅素結合球蛋白只要為與血紅素複合化而生成血紅素-血紅素結合球蛋白複合體者,則並無特別限定。血紅素與血紅素結合球蛋白之結合之生物種特異性較低,故而可利用源自廣泛之生物種之血紅素結合球蛋白。於檢體中之血紅素為人類血紅素時,可利用源自以人類為代表之馬、豬、猴、狗、兔、鼠等動物之血紅素結合球蛋白。血紅素結合球蛋白並非必須高度精製。
本發明之用以保存含有血紅素之檢體之保存溶液係於含有血紅素分解物之上述之保存溶液中進而添加有血紅素結合球蛋白者。保存溶液中之血紅素結合球蛋白之濃度亦取決於檢體之量,例如為0.05單位/L~50單位/L、0.1單位/L~10單位/L、或0.2單位/L~2單位/L。此處,1單位表示與1 mg之血紅素結合之血紅素結合球蛋白量。血紅素結合球蛋白濃度較佳為將檢體中之所有血紅素調整為用以與血紅素結合球蛋白形成複合體之充分之濃度。
根據上述安定化方法或保存溶液,可將檢體中之血紅素以血紅素-血紅素結合球蛋白複合體之形態安定化。換言之,根據上述方法或保存溶液,可抑制檢體中之血紅素之改性及分解,因此,可維持血紅素之表位及其周邊部位之結構。因此,於藉由免疫方法而檢測檢體中之血紅素之情形時,期待檢測之正確性提高。
由本發明所提供之檢測檢體中之血紅素之方法具備:於用以保存含有血紅素之檢體之上述保存溶液中添加檢體,而獲得含有檢體之試樣之步驟;及藉由免疫方法而檢測試樣中之血紅素之步驟。
免疫方法係利用抗血紅素抗體之方法,可使用公知之免疫方法。免疫方法例如可為免疫凝集法(例如,乳膠凝集法、或金膠體凝集法)、免疫膠體層析法、或ELISA(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,酶聯免疫吸附分析)法。
檢體中之血紅素之檢測例如可如下般進行。首先,於放入有保存溶液之容器中採集檢體。於檢體中存在血紅素之情形時,血紅素形成血紅素-血紅素結合球蛋白複合體。無需使檢體中之所有血紅素形成複合體,於含有檢體之保存溶液(試樣)中,亦可存在未與血紅素結合球蛋白形成複合體之血紅素,但較佳為檢體中之實質上所有血紅素與血紅素結合球蛋白形成複合體。於容器內將檢體保存任意時間後,過濾含有檢體之保存溶液。繼而,藉由乳膠凝集法而檢測濾液中之血紅素。更具體而言,將含有表面結合有乳膠粒子之抗血紅素抗體之試劑添加至濾液中。抗血紅素抗體較佳為可識別血紅素-血紅素結合球蛋白複合體中之血紅素之表位,且不與血紅素結合球蛋白引起交叉反應。於濾液中存在血紅素之情形時,抗血紅素抗體識別血紅素,與抗體結合之乳膠粒子凝集。測定由凝集所致之濁度之變化,藉由使用血紅素濃度已知之包含血紅素-血紅素結合球蛋白複合體之校正液所製作之校準曲線,而求出濾液中之血紅素濃度。又,亦可藉由基於校正液之血紅素-血紅素結合球蛋白複合體之濃度所製作之校準曲線,而求出濾液中之血紅素-血紅素結合球蛋白複合體之濃度。
本發明亦提供一種可用於檢測檢體中之血紅素之試樣。試樣包含血紅素與血紅素結合球蛋白之複合體及血紅素分解物。更具體而言,試樣包含:藉由血紅素結合球蛋白與檢體中之血紅素所生成之血紅素與血紅素結合球蛋白之複合體、及血紅素分解物。於該試樣中,將血紅素與血紅素結合球蛋白之複合體安定化,故而可以更高之正確性檢測檢體中之血紅素。
本發明進而提供於藉由上述之方法而檢測檢體中之血紅素時可使用之套組。套組包含:用以保存含有血紅素之檢體之上述保存溶液、及含有抗血紅素抗體之試劑。抗血紅素抗體並無限制,可為多株抗體,亦可為單株抗體,或亦可為可識別血紅素之抗血紅素抗體之片段。抗血紅素抗體上亦可結合乳膠等檢測所需之物質。套組亦可進而包含:用以採集檢體之器具及容器、校正液、對照液、用以稀釋檢體之溶液等任意之構成。
[實施例]
[實施例]
(試驗例1-1)
製備添加有50 mM之HEPES(pH值7.4)、0.1%之BSA、0.1%之NaN3 、及0~5000 mg/L(以鐵當量計為0~60 mg Fe/L)之血紅素分解物(Hb分解物)之保存溶液。作為血紅素分解物,使用由蛋白質分解酵素所得之源自豬之血紅素分解物(ILS股份有限公司製造)。利用SDS-PAGE分析血紅素分解物,結果於分子量3 kDa~9 kDa之位置觀察到寬帶。由鐵之含量所推定之血紅素分解物之平均分子量為4.6 kDa。血紅素分解物係確認分解至不與血紅素結合球蛋白形成複合體之程度而使用。於保存溶液中添加血紅素-血紅素結合球蛋白複合體(作為構成成分,包含約900 μg/L之血紅素及約0.9單位/L之血紅素結合球蛋白),於4、25、37、45、或56℃下保存0、3、7、12及20天。藉由乳膠凝集法而測定保存之試樣中之Hb-Hp複合體之濃度(μg/L)。Hb-Hp複合體之濃度係利用Hb-Hp複合體中之血紅素之含量而求出。
製備添加有50 mM之HEPES(pH值7.4)、0.1%之BSA、0.1%之NaN3 、及0~5000 mg/L(以鐵當量計為0~60 mg Fe/L)之血紅素分解物(Hb分解物)之保存溶液。作為血紅素分解物,使用由蛋白質分解酵素所得之源自豬之血紅素分解物(ILS股份有限公司製造)。利用SDS-PAGE分析血紅素分解物,結果於分子量3 kDa~9 kDa之位置觀察到寬帶。由鐵之含量所推定之血紅素分解物之平均分子量為4.6 kDa。血紅素分解物係確認分解至不與血紅素結合球蛋白形成複合體之程度而使用。於保存溶液中添加血紅素-血紅素結合球蛋白複合體(作為構成成分,包含約900 μg/L之血紅素及約0.9單位/L之血紅素結合球蛋白),於4、25、37、45、或56℃下保存0、3、7、12及20天。藉由乳膠凝集法而測定保存之試樣中之Hb-Hp複合體之濃度(μg/L)。Hb-Hp複合體之濃度係利用Hb-Hp複合體中之血紅素之含量而求出。
Hb-Hp複合體之濃度係使用測定試劑「OC-Hemodia(註冊商標)Auto S‘榮研’」(榮研化學股份有限公司製造)、及測定裝置「JCA-BM2250」(日本電子股份有限公司製造)而測定。於上述測定試劑中,包含抗人類血紅素兔多株抗體致敏乳膠粒子。
JCA-BM2250之測定條件係如下所述。
檢體量:7.0 μL
第1試劑:40 μL
第2試劑:20 μL
測定波長:658 nm
JCA-BM2250之測定條件係如下所述。
檢體量:7.0 μL
第1試劑:40 μL
第2試劑:20 μL
測定波長:658 nm
根據所測定之Hb-Hp複合體之濃度,以剛添加Hb-Hp複合體後之Hb-Hp複合體之濃度(即,添加Hb-Hp複合體後0天後之濃度)作為基準,算出Hb-Hp複合體之回收率(%)。將結果示於表1、圖1及圖2。於表1中,Hb分解物之濃度係以鐵當量之濃度(mg Fe/L)表示。如該等表及圖所示,藉由添加Hb分解物,而Hb-Hp複合體之回收率提高。於37℃之保存中20天後之回收率為80%以上(圖1),於56℃之保存中3天後之回收率為50%以上(圖2),即便於高溫環境下之保存中,亦可獲得Hb-Hp複合體較高之保存安定性。又,回收率(%)係依賴於血紅素分解物之添加濃度而提高。由該結果顯示Hb分解物將Hb-Hp複合體安定化。再者,不顯示溫度為25℃及45℃之情形之試驗結果,但即便於該等溫度下,亦可獲得導出與上述同樣之結論之結果。
[表1]
(試驗例1-2)
作為參考,代替Hb-Hp複合體而將血紅素添加至保存溶液中,進行與試驗例1-1相同之試驗。將算出血紅素之回收率(%)之結果示於表2、圖3及圖4。如該等表及圖所示,雖然藉由添加Hb分解物而血紅素之回收率提高,但和與血紅素結合球蛋白形成複合體之血紅素(試驗例1-1)相比,回收率較低。於37℃之保存中20天後之回收率最大為35%(圖3),於56℃之保存中3天後之回收率為2%以下(圖4),於高溫環境下之保存中之血紅素之保存安定性明顯低。
作為參考,代替Hb-Hp複合體而將血紅素添加至保存溶液中,進行與試驗例1-1相同之試驗。將算出血紅素之回收率(%)之結果示於表2、圖3及圖4。如該等表及圖所示,雖然藉由添加Hb分解物而血紅素之回收率提高,但和與血紅素結合球蛋白形成複合體之血紅素(試驗例1-1)相比,回收率較低。於37℃之保存中20天後之回收率最大為35%(圖3),於56℃之保存中3天後之回收率為2%以下(圖4),於高溫環境下之保存中之血紅素之保存安定性明顯低。
[表2]
(試驗例2-1)
製備添加有50 mM之HEPES(pH值6.8)、0.1%之BSA、0.1%之NaN3 、0~1000 mg/L(以鐵當量計為0~12 mg Fe/L)之血紅素分解物(ILS股份有限公司製造)、及1單位/L之血紅素結合球蛋白之保存溶液。將添加有血紅素之糞便檢體以糞便濃度成為0.5質量%之方式添加至保存溶液中,於37℃下保存0、7、及14天。藉由乳膠凝集法而測定所保存之試樣中之血紅素之濃度(μg/L)。再者,於糞便檢體中,添加試樣中之血紅素濃度成為約500 μg/L之量之血紅素。
製備添加有50 mM之HEPES(pH值6.8)、0.1%之BSA、0.1%之NaN3 、0~1000 mg/L(以鐵當量計為0~12 mg Fe/L)之血紅素分解物(ILS股份有限公司製造)、及1單位/L之血紅素結合球蛋白之保存溶液。將添加有血紅素之糞便檢體以糞便濃度成為0.5質量%之方式添加至保存溶液中,於37℃下保存0、7、及14天。藉由乳膠凝集法而測定所保存之試樣中之血紅素之濃度(μg/L)。再者,於糞便檢體中,添加試樣中之血紅素濃度成為約500 μg/L之量之血紅素。
血紅素之濃度係使用測定試劑「OC-Hemodia(註冊商標)Auto III‘榮研’」(榮研化學股份有限公司製造)、及測定裝置「OC Sensor DIANA」(榮研化學股份有限公司製造)而測定。於上述測定試劑中包含抗人類血紅素兔多株抗體致敏乳膠粒子。
根據所測定之血紅素之濃度,以將糞便檢體剛添加至保存溶液後之血紅素之濃度(即,添加糞便檢體後0天後之濃度)作為基準,算出糞便試樣中之血紅素之回收率(%)。將結果示於表3、圖5及圖6。圖5、圖6係分別表示糞便試樣1、糞便試樣2之結果。於表3中,Hb分解物之濃度係以鐵當量之濃度(mg Fe/L)表示。如該等表及圖所示,於糞便1、糞便2之任一糞便試樣中,亦藉由添加Hb分解物,而試樣中之血紅素之回收率濃度依賴性地提高。由該結果顯示Hb分解物將血紅素安定化。再者,試樣中之血紅素係於與保存溶液中所含之血紅素結合球蛋白結合而成之Hb-Hp複合體之狀態下存在,故而上述結果表示Hb分解物將Hb-Hp複合體安定化。
[表3]
(試驗例2-2)
將添加至保存溶液中之血紅素分解物之濃度固定為300 mg/L(以鐵當量計為3.6 mg Fe/L),與試驗例2-1同樣地進行試驗。又,作為比較例,不將血紅素分解物添加至保存溶液中,進行相同之試驗。將結果示於表4、圖7及8。圖7、圖8係分別表示不添加血紅素分解物之例、添加血紅素分解物之例之結果。如該等表及圖所示,藉由添加Hb分解物,而試樣中之血紅素之回收率提高。由該結果顯示Hb分解物將血紅素安定化。再者,試樣中之血紅素係於與保存溶液中所含之血紅素結合球蛋白結合而成之Hb-Hp複合體之狀態下存在,故而上述結果表示Hb分解物將Hb-Hp複合體安定化。
將添加至保存溶液中之血紅素分解物之濃度固定為300 mg/L(以鐵當量計為3.6 mg Fe/L),與試驗例2-1同樣地進行試驗。又,作為比較例,不將血紅素分解物添加至保存溶液中,進行相同之試驗。將結果示於表4、圖7及8。圖7、圖8係分別表示不添加血紅素分解物之例、添加血紅素分解物之例之結果。如該等表及圖所示,藉由添加Hb分解物,而試樣中之血紅素之回收率提高。由該結果顯示Hb分解物將血紅素安定化。再者,試樣中之血紅素係於與保存溶液中所含之血紅素結合球蛋白結合而成之Hb-Hp複合體之狀態下存在,故而上述結果表示Hb分解物將Hb-Hp複合體安定化。
[表4]
(試驗例2-3)
作為參考,於保存溶液中不添加血紅素結合球蛋白,進行與試驗例2-2相同之試驗。將結果示於表5、圖9及圖10。圖9、圖10係分別表示不添加血紅素分解物之例、添加血紅素分解物之例之結果。如該等表及圖所示,和與血紅素結合球蛋白形成複合體之血紅素(試驗例2-2)相比,血紅素之回收率較低。
[表5]
作為參考,於保存溶液中不添加血紅素結合球蛋白,進行與試驗例2-2相同之試驗。將結果示於表5、圖9及圖10。圖9、圖10係分別表示不添加血紅素分解物之例、添加血紅素分解物之例之結果。如該等表及圖所示,和與血紅素結合球蛋白形成複合體之血紅素(試驗例2-2)相比,血紅素之回收率較低。
[表5]
圖1係表示血紅素分解物之添加於37℃下對血紅素-血紅素結合球蛋白複合體之回收率產生之影響之圖表。
圖2係表示血紅素分解物之添加於56℃下對血紅素-血紅素結合球蛋白複合體之回收率產生之影響之圖表。
圖3係表示血紅素分解物之添加於37℃下對血紅素之回收率產生之影響之圖表。
圖4係表示血紅素分解物之添加於56℃下對血紅素之回收率產生之影響之圖表。
圖5係表示血紅素分解物之濃度、與糞便中之血紅素之回收率之關係之圖表。
圖6係表示血紅素分解物之濃度、與糞便中之血紅素之回收率之關係之圖表。
圖7係表示添加血紅素結合球蛋白且不添加血紅素分解物之情形之糞便中之血紅素之回收率之圖表。
圖8係表示添加有血紅素結合球蛋白及血紅素分解物之情形之血紅素之回收率之圖表。
圖9係表示不添加血紅素結合球蛋白及血紅素分解物之情形之血紅素之回收率之圖表。
圖10係表示不添加血紅素結合球蛋白而添加血紅素分解物之情形之血紅素之回收率之圖表。
Claims (13)
- 一種將血紅素與血紅素結合球蛋白之複合體安定化之方法,其包括: 將血紅素與血紅素結合球蛋白之複合體於血紅素分解物之存在下保存之步驟。
- 如請求項1之方法,其中血紅素分解物係由酵素所得之血紅素分解物。
- 如請求項1或2之方法,其包括: 將血紅素與血紅素結合球蛋白之複合體於含有血紅素分解物之保存溶液中保存之步驟;且 血紅素分解物之保存溶液中之濃度以鐵當量計為0.012 mg/L以上。
- 如請求項1至3中任一項之方法,其中血紅素與血紅素結合球蛋白之複合體包含藉由使含有血紅素之檢體與血紅素結合球蛋白接觸所生成之血紅素與血紅素結合球蛋白之複合體。
- 如請求項4之方法,其中檢體為糞便、唾液、或尿。
- 一種用以保存血紅素與血紅素結合球蛋白之複合體之保存溶液,其包含血紅素分解物。
- 一種用以保存含有血紅素之檢體之保存溶液,其包含血紅素結合球蛋白、及血紅素分解物。
- 如請求項7之保存溶液,其中檢體為糞便、唾液、或尿。
- 如請求項6之保存溶液,其進而包含血紅素與血紅素結合球蛋白之複合體,且用作校正液或對照液。
- 如請求項6至9中任一項之保存溶液,其中血紅素分解物係由酵素所得之血紅素分解物。
- 如請求項6至10中任一項之保存溶液,其中血紅素分解物之濃度以鐵當量計為0.012 mg/L以上。
- 一種檢測檢體中之血紅素之方法,其具備: 將檢體添加至如請求項7或8之保存溶液中而獲得含有檢體之試樣之步驟;及 藉由免疫方法而檢測試樣中之血紅素之步驟;且 試樣中之血紅素係與血紅素結合球蛋白形成複合體。
- 一種用以檢測檢體中之血紅素之套組,其包含: 如請求項7或8之保存溶液、及 含有抗血紅素抗體之試劑。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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JP2017-231564 | 2017-12-01 | ||
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TW201932838A true TW201932838A (zh) | 2019-08-16 |
TWI841542B TWI841542B (zh) | 2024-05-11 |
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
TWI832901B (zh) * | 2018-09-26 | 2024-02-21 | 日商榮研化學股份有限公司 | 血紅素之測定試劑、測定套組及測定方法 |
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JPWO2019107414A1 (ja) | 2020-12-17 |
EP3719496A1 (en) | 2020-10-07 |
JP2023100882A (ja) | 2023-07-19 |
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WO2019107414A1 (ja) | 2019-06-06 |
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