JPH10253629A

JPH10253629A - 免疫測定試薬製造法

Info

Publication number: JPH10253629A
Application number: JP11805197A
Authority: JP
Inventors: Teiichi Tokunaga; 禎一徳永; Toshio Kusuba; 敏雄楠葉
Original assignee: Sekisui Chemical Co Ltd
Current assignee: Sekisui Chemical Co Ltd
Priority date: 1997-01-10
Filing date: 1997-05-08
Publication date: 1998-09-25

Abstract

(57)【要約】【課題】高感度を維持しつつ、プロゾーンの発生が抑
えられ、低濃度の検体も測定可能であり、バラツキが少
なく、試薬安定性もよい免疫測定試薬の製造法を提供す
る。【解決手段】ｐＨが４．０〜６．０の緩衝液（例、ｐ
Ｈ４．２のリン酸クエン酸緩衝液）中で抗体（例、抗β
₂マイクログロブリン抗体）又は抗原を不溶性担体
（例、ポリスチレン系ラテックス粒子）に担持させた
後、ｐＨが６．５〜９．０の緩衝液（例、ｐＨ８．０の
トリス緩衝液）に置換することを特徴とする免疫測定試
薬製造法。及び、ｐＨが４．０〜６．０であり、かつ温
度が３５〜５０℃の緩衝液中で抗体又は抗原を不溶性担
体に担持させることを特徴とする免疫測定試薬製造法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、不溶性担体を用い
た免疫測定試薬の製造法に関する。

【０００２】

【従来の技術】現在、病態と関連して生体液中に出現す
る蛋白質などの免疫学的活性物質を抗原抗体反応を利用
して測定し、診断に利用することが広く行われている。
このような免疫測定法の一つとして、不溶性担体を用い
た免疫測定法がある。この測定法の例としては、検体中
の被検出物質（免疫学的活性物質）を、例えば、微粒子
等の不溶性担体に感作させた抗体または抗原と免疫反応
により結合させ、結合によって生じる微粒子の凝集状態
を測定する方法が挙げられる。

【０００３】この免疫測定法において、検体中に高濃度
の被検出物質が存在するにもかかわらず測定結果が低濃
度にでる、いわゆるプロゾーン現象が起きて正確な測定
ができないことがあり、この問題に対して、例えば、特
公平４−５６２５８号公報にデキストランを反応媒体中
に存在させる方法が開示されているが、デキストランを
添加することにより感度が低下したり、また、バラツキ
も上昇することがあるという問題があった。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記の問題
を解決するものであり、高感度を維持しつつ、プロゾー
ンの発生が抑えられ、低濃度の検体も測定可能であり、
バラツキが少なく、試薬安定性もよい免疫測定試薬の製
造法を提供することを目的とする。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明の請求項１記載の
免疫測定試薬製造法（以下、本発明１という）は、ｐＨ
が４．０〜６．０の緩衝液中で抗体又は抗原を不溶性担
体に担持させた後、ｐＨを６．５〜９．０にすることを
特徴とする。

【０００６】本発明の請求項２記載の免疫測定試薬製造
法（以下、本発明２という）は、ｐＨが４．０〜６．０
であり、かつ温度が３５〜５０℃の緩衝液中で抗体又は
抗原を不溶性担体に担持させることを特徴とする。

【０００７】本発明の請求項３記載の免疫測定試薬製造
法（以下、本発明３という）は、請求項２記載の方法で
抗体又は抗原を不溶性担体に担持させた後、ｐＨを６．
５〜９．０にすることを特徴とする。

【０００８】本発明１〜３で用いられる不溶性担体とし
ては、従来、免疫測定の分野で使用されてきた不溶性担
体であれば特に限定されないが、特に、抗体（又は抗
原）が担持された不溶性担体の凝集により抗原（又は抗
体）の測定を行うために使用される不溶性担体が好まし
く、例えば、無機物質粉末、有機高分子物質粉末、微生
物、血球、細胞膜片などが挙げられる。

【０００９】上記無機物質としては、例えば、金、チタ
ン、鉄、ニッケル等の金属；アルミナ、チタニア等の金
属酸化物；シリカなどが挙げられる。

【００１０】上記有機高分子としては、特に限定されな
いが、例えば、スチレン重合体、スチレン−スチレンス
ルホン酸塩共重合体、メタクリル酸重合体、アクリル酸
重合体、アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン共重
合体、塩化ビニル−アクリル酸エステル共重合体、酢酸
ビニル−アクリル酸エステル共重合体などが挙げられ
る。

【００１１】不溶性担体としては、上記有機高分子物質
粉末を水に均一に懸濁させてラテックスを形成するため
の、ラテックス粒子が好ましい。このラテックス粒子の
平均粒径としては、０．０５〜０．５μｍが好ましい。

【００１２】本発明１〜３で用いられる抗体としては、
被検出物質である抗原に対するポリクローナル抗体、モ
ノクローナル抗体等、通常の抗原に対して反応し得る抗
体が挙げられる。該抗体は複数の抗体からなるものでも
よく、通常の抗体を限定分解したもの、蛋白修飾したも
のでもよい。抗体としては、同一ロットで大量供給可能
な、ヤギなどの大型動物産生の抗体が好ましい。

【００１３】本発明１〜３で用いられる抗原としては、
被検出物質である抗体に対するエピトープを有するもの
であれば、特に限定されず、天然の抗原でも、天然の抗
原に何らかの操作を加えたものでも、遺伝子操作等によ
り人工的に作製されたものでも良い。

【００１４】以下、本発明１について説明する。本発明
１の製造法は、まず、緩衝液中で抗体又は抗原を不溶性
担体に担持させる。抗体又は抗原を不溶性担体に担持さ
せる際の緩衝液のｐＨは、低くなると抗体又は抗原が凝
集し易くなり、高くなると得られた免疫測定試薬を用い
た測定の際にプロゾーン抑制効果が低くなるので、４．
０〜６．０に限定され、４．２〜５．０が好ましい。

【００１５】上記の、緩衝液中で抗体又は抗原を不溶性
担体に担持させる際の時間は、１０〜１２０分が好まし
く、４０〜６０分がより好ましい。

【００１６】上記緩衝液の種類としては、ｐＨが４．０
〜６．０のものであれば、特に限定されないが、例え
ば、リン酸緩衝液、リン酸クエン酸緩衝液などが挙げら
れる。

【００１７】抗体又は抗原を不溶性担体に担持させる際
の機構としては、公知の物理吸着法又は化学的結合法が
用いられる。

【００１８】本発明１の製造法は、上記のようにして、
抗体又は抗原を不溶性担体に担持させた後、不溶性担体
の表面に、抗体又は抗原付着可能部位が残っている場合
には、該不溶性担体の使用時に非特異的吸着が起こらな
いように、該不溶性担体上の活性点を飽和させる操作、
いわゆるブロッキング操作を行うことが好ましい。

【００１９】上記ブロッキング操作方法としては、例え
ば、牛血清アルブミンを０．５〜３重量％濃度、より好
ましくは１〜２重量％濃度で含有し、ｐＨが４．０〜
６．０、より好ましくは４．２〜５．０、温度が４〜４
０℃、より好ましくは１５〜２５℃の緩衝液に、上記抗
体又は抗原が担持された不溶性担体を、１０〜１２０
分、より好ましくは４０〜６０分接触させる方法が挙げ
られる。

【００２０】本発明１の製造法は、抗体又は抗原を不溶
性担体に担持させた後、次いで、ｐＨを６．５〜９．０
にする。

【００２１】上記のｐＨを６．５〜９．０にする操作の
方法としては、抗体又は抗原が担持され、必要に応じ
て、ブロッキング操作が施された不溶性担体を含む緩衝
液を、遠心分離又はゲル濾過などにかけて、不溶性担体
の表面に付着していない抗体又は抗原を含む緩衝液と不
溶性担体とを分離し、次いで、分離された不溶性担体を
ｐＨを６．５〜９．０の緩衝液に懸濁する方法が挙げら
れる。この懸濁に用いる緩衝液のｐＨは、低くなると得
られた免疫測定試薬が自己凝集を起こし易くなったり、
不溶性担体に担持された抗体又は抗原の蛋白質が変性し
易くなったりし、高くなると得られた免疫測定試薬を用
いた抗原抗体反応が抑制され易くなるので、６．５〜
９．０に限定され、好ましくは、７．５〜８．５であ
る。

【００２２】上記緩衝液の種類としては、ｐＨが６．５
〜９．０のものであれば、特に限定されないが、例え
ば、リン酸緩衝液、トリス緩衝液、グリシン緩衝液など
が挙げられる。

【００２３】ｐＨを６．５〜９．０にする操作の他の方
法としては、抗体又は抗原が担持され、必要に応じて、
ブロッキング操作が施された不溶性担体を含む緩衝液
に、ｐＨの高い緩衝液を添加して、最終ｐＨが６．５〜
９．０にする方法が挙げられる。

【００２４】また、上記のｐＨを６．５〜９．０にする
操作に用いる緩衝液中に、得られる免疫測定試薬の、凝
集反応を促進させる目的でポリエチレングリコールな
ど、保存安定性を向上させる目的で、例えば、アジ化ナ
トリウムなど、感度を上げる目的で、例えば、ＢＳＡ、
ポリビニルピロリドンなどの添加剤を加えてもよい。

【００２５】本発明１の製造法で得られる免疫測定試薬
が、不溶性担体としてラテックス粒子を用いた試薬（以
下、ラテックス試薬という）である場合、上記ポリエチ
レングリコールの使用量は、被検出物質を含む検体、ラ
テックス試薬及びラテックス試薬希釈用液などが混合さ
れて抗原抗体反応が行われる際の濃度として、０．１〜
３重量％となるように用いられるのが好ましい。上記濃
度が低くなると、凝集反応を促進させる効果が小さくな
り、高くなると抗体又は抗原が担持された不溶性担体の
非特異的凝集が起こり易くなる。また、上記ポリエチレ
ングリコールの平均分子量は、３０００以上が好まし
い。上記平均分子量は大きくなるにつれてラテックス凝
集時の光学的強度が大きくなるが、平均分子量が１０万
を超えると抗原抗体反応時の粘度が高くなりすぎるので
好ましくない。なお、このポリエチレングリコールは、
ラテックス試薬及びラテックス試薬希釈用液のいずれに
添加されてもよいし、また、その両方に添加されてもよ
い。

【００２６】以下、本発明２について説明する。本発明
２の製造法は、まず、緩衝液中で抗体又は抗原を不溶性
担体に担持させる。抗体又は抗原を不溶性担体に担持さ
せる際の緩衝液のｐＨは、低くなると抗体又は抗原が凝
集し易くなり、高くなると得られた免疫測定試薬を用い
た測定の際にプロゾーン抑制効果が低くなるので、４．
０〜６．０に限定され、４．２〜５．０が好ましい。こ
の際、緩衝液の温度は、低くなると得られた免疫測定試
薬を用いた測定の際にプロゾーン抑制効果が低くなり、
温度が高くなると抗体又は抗原が失活し易くなるので、
３５〜５０℃に限定され、好ましくは３７〜４５℃であ
る。

【００２７】上記緩衝液の種類としては、本発明１のも
のと同様である。

【００２８】本発明２において、緩衝液中で抗体又は抗
原を不溶性担体に担持させる際の時間は、１０〜１２０
分が好ましく、４０〜６０分がより好ましい。

【００２９】抗体又は抗原を不溶性担体に担持させる際
の機構としては、本発明１と同様に、公知の物理吸着法
又は化学的結合法が用いられる。

【００３０】本発明２の製造法は、上記のようにして、
抗体又は抗原を不溶性担体に担持させた後、不溶性担体
の表面に、抗体又は抗原付着可能部位が残っている場合
には、該不溶性担体の使用時に非特異的吸着が起こらな
いように、該不溶性担体上の活性点を飽和させる操作、
いわゆるブロッキング操作を行うことが好ましい。

【００３１】上記ブロッキング操作方法としては、例え
ば、牛血清アルブミンを０．５〜３重量％濃度、より好
ましくは１〜２重量％濃度で含有し、ｐＨが４．０〜
６．０、より好ましくは４．２〜５．０、温度が３５〜
５０℃、より好ましくは３７〜４５℃の緩衝液に、上記
抗体又は抗原が担持された不溶性担体を、１０〜１２０
分、より好ましくは４０〜６０分接触させる方法が挙げ
られる。この際の温度が低いと、得られた免疫測定試薬
を用いた測定の際に、プロゾーン抑制効果が低くなり、
温度が高いと、抗体又は抗原が失活し易くなる。

【００３２】以下、本発明３について説明する。本発明
３の製造法は、本発明２の方法で抗体又は抗原を不溶性
担体に担持させた後、次いで、ｐＨを６．５〜９．０に
する。

【００３３】上記のｐＨを６．５〜９．０にする操作の
方法としては、抗体又は抗原が担持され、必要に応じ
て、ブロッキング操作が施された不溶性担体を含む緩衝
液を、遠心分離又はゲル濾過などにかけて、不溶性担体
の表面に付着していない抗体又は抗原を含む緩衝液と不
溶性担体とを分離し、次いで、分離された不溶性担体を
ｐＨを６．５〜９．０の緩衝液に懸濁する方法が挙げら
れる。この懸濁に用いる緩衝液のｐＨは、低くなると得
られた免疫測定試薬が自己凝集を起こし易くなったり、
不溶性担体に担持された抗体又は抗原の蛋白質が変性し
易くなったりし、高くなると得られた免疫測定試薬を用
いた抗原抗体反応が抑制され易くなるので、６．５〜
９．０に限定され、好ましくは、７．５〜８．５であ
る。

【００３４】上記緩衝液の種類としては、ｐＨが６．５
〜９．０のものであれば、特に限定されないが、例え
ば、リン酸緩衝液、トリス緩衝液、グリシン緩衝液など
が挙げられる。

【００３５】ｐＨを６．５〜９．０にする操作の他の方
法としては、抗体又は抗原が担持され、必要に応じて、
ブロッキング操作が施された不溶性担体を含む緩衝液
に、ｐＨの高い緩衝液を添加して、最終ｐＨが６．５〜
９．０にする方法が挙げられる。

【００３６】また、上記のｐＨを６．５〜９．０にする
操作に用いる緩衝液中に、得られる免疫測定試薬の、凝
集反応を促進させる目的でポリエチレングリコールな
ど、保存安定性を向上させる目的で、例えば、アジ化ナ
トリウムなど、感度を上げる目的で、例えば、ＢＳＡ、
ポリビニルピロリドンなどの添加剤を加えてもよい。

【００３７】本発明３の製造法で得られる免疫測定試薬
が、不溶性担体としてラテックス粒子を用いた試薬であ
る場合、上記ポリエチレングリコールの使用量及び平均
分子量などは、本発明１と同様である。

【００３８】以下、本発明１〜３の製造法で得られる免
疫測定試薬により、検体中の被検出物質を測定する方法
について、免疫測定試薬がラテックス試薬である場合に
ついて説明する。

【００３９】検体中の被検出物質を測定するには、光学
的に測定する方法または肉眼で測定する方法のいずれで
もよい。光学的に測定するには、例えば、まず、検体を
反応容器に分注し、これに、該免疫測定試薬を分注混合
し反応させる。この際、通常、該検体及び／又は該免疫
測定試薬は適当な緩衝液で希釈される。この工程におい
て検体および試薬の分注順序は、上記方法の逆でも同時
でもよい。反応におけるｐＨは、６．５〜９．０が好ま
しく、より好ましくは７．５〜８．５である。使用され
る緩衝液としては、例えば、リン酸緩衝液、トリス緩衝
液、グリシン緩衝液などが挙げられる。反応温度は、０
〜５０℃が好ましく、より好ましくは２０〜４０℃であ
る。凝集反応時間は、２０秒〜３０分が好ましく、より
好ましくは１〜１５分である。なお、上記測定時のラテ
ックスの固形分濃度は、吸光度の測定の容易さの点から
０．０５重量％以下が好ましく、抗原抗体反応を十分に
行わせる点から０．０１重量％以上が好ましい。

【００４０】このようにして得られる凝集物の生成量ま
たは生成速度を吸光度等を測定することによって、検体
中の被検出物質の濃度を算出する。これには、例えば、
吸光度を１回測定する方法、吸光度を２回測定する方法
などがある。また、吸光度を測定する代わりに散乱光を
測定する方法も用い得る。測定は３００〜１０００ｎｍ
の適当な波長で行うことができるが、ラテックスの粒径
に対して十分長い波長を用いることが好ましい。このよ
うな光学的測定の装置は既知のものを使用できる。例え
ば、吸光度を測定する通常の分光光度計、光の散乱強度
を測定する装置、粒子数および／または粒子径を測定す
るための装置などが用いられる。上記凝集反応を測定す
るための専用装置としては、分光光度計を組み込んだ生
化学自動分析装置、免疫比濁法による凝集反応を測定す
るための専用装置、フローインジェクションを利用して
凝集反応を測定するための専用装置、ラテックス凝集反
応を測定するための専用装置などがある。

【００４１】本発明１〜３の製造法で得られる免疫測定
試薬により測定することのできる検体は、抗原や抗体な
どの免疫学的に活性な物質を含有する試料、特に生体試
料（例えば、血液、胸水、腹水、リンパ液などの体液、
尿、便、汗などの排泄物、又は組織の抽出物など）であ
る。

【００４２】本発明１〜３で得られる免疫測定試薬によ
る被検出物質としては、担持された抗体（又は抗原）と
反応する抗原（又は抗体）であり、通常、免疫学的に抗
原又は抗体に属するあらゆる物質が包含される。例え
ば、β₂マイクログロブリン（ＢＭＧ）、α−ヘトプロ
ティン（ＡＦＰ）等の腫瘍関連物質、Ｃ反応性蛋白（Ｃ
ＲＰ）、リューマチ因子（ＲＦ）、アンチストレプトリ
ジンＯ（ＡＳＯ）、トランスフェリン等の血漿蛋白、Ｈ
Ｂｓ抗原、ＨＢｓ抗体、ＨＢｅ抗原、ＨＢｅ抗体等のウ
イルス肝炎の抗原又は抗体等の各種生体成分が挙げられ
る。

【００４３】

【発明の実施の形態】以下に実施例を掲げて本発明１〜
３を更に詳しく説明するが、本発明１〜３はこれら実施
例のみに限定されるものではない。以下の実施例及び比
較例においては、β₂マイクログロブリン（以下、ＢＭ
Ｇとする）を測定するためのラテックス試薬を作製し、
その性能を調べた。

【００４４】実施例１（１）抗ＢＭＧ抗体担持ラテックス試薬の調製抗体の不溶性担体への担持工程抗ヒトＢＭＧ山羊産生抗体（ＡＴＡＢ社製）を、蛋白質
として１．８ｍｇ／ｍｌの濃度でリン酸クエン酸緩衝液
（ｐＨ４．２）に溶解した液５ｍｌに、平均粒径が０．
１μｍのポリスチレン系ラテックス（固形分量１０重量
％、積水化学工業社製）５００μｌを添加し、２５℃に
て１時間攪拌した。

【００４５】担持抗体のブロッキング工程次に、牛血清アルブミン（以下、ＢＳＡという）を２重
量％濃度で含有した上記緩衝液（ｐＨ４．２）５ｍｌ
を、上記の抗ヒトＢＭＧ山羊産生抗体保持ラテックス懸
濁液に加え、２５℃で１時間攪拌を続けた。

【００４６】緩衝液の置換工程上記工程で得られた懸濁液を、１５℃、１８０００ｒｐ
ｍの条件で３０分間遠心分離を行い上清を廃棄し、不溶
性担体に担持されていない抗体を取り除いた。次いで、
０．１重量％でアジ化ナトリウムを、及び１重量％でＢ
ＳＡを溶解したトリス緩衝液（ｐＨ８．０）５ｍｌで沈
殿を再度溶解した。この工程を２回繰り返し、抗ＢＭＧ
抗体担持ラテックス試薬（以下、ＢＭＧ測定用試薬とい
う）を製造した。

【００４７】（２）ＢＭＧの光学的測定上記ＢＭＧ測定用試薬９０μｌを、ラテックス試薬希釈
用液〔ＢＳＡを１重量％、ポリエチレングリコール（ポ
リエチレングリコール６０００、平均分子量７５００、
和光純薬工業社製）を０．５重量％の濃度で溶解する
０．３５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）〕１８０μｌに
て希釈し、これにＢＭＧ陽性血清（ＢＭＧ濃度：０、
１、２、４、１０、１６、２０、６０μｇ／ｍｌの８種
類、ヒト由来）６μｌを添加、攪拌し、４分後の波長８
００ｎｍの吸光度を１回測定し、得られた吸光度（実際
の吸光度の測定値を１００００倍した値）とＢＭＧ濃度
との関係を図１に示した。

【００４８】また、試薬安定性を評価するために、４℃
又は３０℃で３日間保存した、上記ＢＭＧ測定用試薬９
０μｌ及びラテックス試薬希釈用液１８０μｌを用い
て、上記と同様にして、ＢＭＧ測定用試薬をラテックス
試薬希釈用液にて希釈し、これにＢＭＧ陽性血清（ＢＭ
Ｇ濃度：０．５μｇ／ｍｌ、ヒト由来）６μｌを添加、
攪拌し、４分後の波長８００ｎｍの吸光度を測定した。
同様の測定を１０回繰り返し、得られた吸光度（実際の
吸光度の測定値を１００００倍した値）の平均値とその
変動係数〔（標準偏差／平均値）×１００〕（％）を表
１に示した。

【００４９】比較例１実施例１における抗体の不溶性担体への担持工程及び担
持抗体のブロッキング工程において、緩衝液のｐＨを共
に７．０にしたことの他は、実施例１と同様にしてＢＭ
Ｇ測定用試薬を製造し、実施例１と同様にして、吸光度
とＢＭＧ濃度との関係と、試薬安定性を評価し、結果を
それぞれ図１と表１に示した。

【００５０】比較例２実施例１における緩衝液の置換工程において、緩衝液の
ｐＨを４．２にしたことの他は、実施例１と同様にして
ＢＭＧ測定用試薬を製造し、実施例１と同様にして、吸
光度とＢＭＧ濃度との関係と、試薬安定性を評価し、結
果をそれぞれ図１と表１に示した。

【００５１】比較例３比較例１と同様にしてＢＭＧ測定用試薬を製造し、得ら
れたＢＭＧ測定用試薬を用いた、ＢＭＧの光学的測定に
おいて、ラテックス試薬希釈用液作製に際してポリエチ
レングリコールに代えてデキストランを濃度１重量％に
なるように添加したことの他は、実施例１の（２）ＢＭ
Ｇの光学的測定の項と同様にして、吸光度とＢＭＧ濃度
との関係と、試薬安定性を評価し、結果をそれぞれ図１
と表１に示した。

【００５２】

【表１】

【００５３】図１から分かるように、実施例１で得られ
たＢＭＧ測定用試薬は、抗体の不溶性担体への担持工程
及び担持抗体のブロッキング工程において、緩衝液のｐ
Ｈを共に７．０にした比較例１と比較してプロゾーンが
抑えられている。また、緩衝液の置換工程における緩衝
液のｐＨを４．２にした比較例２、及び、ラテックス試
薬希釈用液にデキストランを１重量％添加した比較例３
では、プロゾーンは抑えられているが、表１から分かる
ように、４℃で保存したものに比べ、３０℃で保存する
と変動係数（バラツキ）が２倍程度上昇しているが、実
施例１で得られたＢＭＧ測定用試薬は、変動係数は殆ど
変化していない。

【００５４】実施例２（１）抗ＢＭＧ抗体担持ラテックス試薬の調製抗体の不溶性担体への担持工程抗ヒトＢＭＧ山羊産生抗体（ＡＴＡＢ社製）を、蛋白質
として１．８ｍｇ／ｍｌの濃度でリン酸クエン酸緩衝液
（ｐＨ５．０）に溶解した液５ｍｌに、平均粒径が０．
１μｍのポリスチレン系ラテックス（固形分量１０重量
％、積水化学工業社製）５００μｌを添加し、３７℃に
て１時間攪拌した。

【００５５】担持抗体のブロッキング工程次に、ＢＳＡを２重量％濃度で含有した上記緩衝液（ｐ
Ｈ５．０）５ｍｌを、上記の抗ヒトＢＭＧ山羊産生抗体
保持ラテックス懸濁液に加え、３７℃で１時間攪拌を続
けた。

【００５６】緩衝液の置換工程上記工程で得られた懸濁液を用いたことの他は、実施例
１の（１）緩衝液の置換工程の項と同様に行い、ＢＭ
Ｇ測定用試薬を製造した。

【００５７】（２）ＢＭＧの光学的測定上記ＢＭＧ測定用試薬９０μｌを、ラテックス試薬希釈
用液（実施例１（２）ＢＭＧの光学的測定の項で用いた
ものと同様のもの）１８０μｌにて希釈し、これにＢＭ
Ｇ陽性血清（ＢＭＧ濃度：０、４、８、１６、２０、６
０、１２０μｇ／ｍｌの７種類、ヒト由来）６μｌを添
加、攪拌し、４分後の波長８００ｎｍの吸光度を１回測
定し、得られた吸光度（実際の吸光度の測定値を１００
００倍した値）とＢＭＧ濃度との関係を図２に示した。

【００５８】（３）同時再現性試験また、上記ＢＭＧ測定用試薬９０μｌ及びラテックス試
薬希釈用液１８０μｌを用いて、上記と同様にして、Ｂ
ＭＧ測定用試薬をラテックス試薬希釈用液にて希釈し、
これにＢＭＧ陽性血清（ＢＭＧ濃度：０．５μｇ／ｍ
ｌ、ヒト由来）６μｌを添加、攪拌し、４分後の波長８
００ｎｍの吸光度を測定した。同様の測定を１０回繰り
返し、得られた吸光度（実際の吸光度の測定値を１００
００倍した値）の平均値とその変動係数〔（標準偏差／
平均値）×１００〕（％）を表２に示した。

【００５９】実施例３実施例２における、抗体の不溶性担体への担持工程及び
担持抗体のブロッキング工程において、担持温度を４５
℃に代えたことの他は、実施例２と同様に操作し、ＢＭ
Ｇの光学的測定の結果を図２に、同時再現性試験の結果
を表２に示した。

【００６０】比較例４（本発明２及び３の比較例）実施例２における、抗体の不溶性担体への担持工程及び
担持抗体のブロッキング工程において、担持温度を２５
℃に代えたことの他は、実施例２と同様に操作し、ＢＭ
Ｇの光学的測定の結果を図２に、同時再現性試験の結果
を表２に示した。

【００６１】比較例５（本発明２及び３の比較例）比較例４と同様にしてＢＭＧ測定用試薬を製造し、得ら
れたＢＭＧ測定用試薬を用いた、ＢＭＧの光学的測定及
び同時再現性試験において、ラテックス試薬希釈用液作
製に際してポリエチレングリコールに代えてデキストラ
ンを濃度１重量％になるように添加したことの他は、実
施例２の（２）ＢＭＧの光学的測定及び（３）同時再現
性試験の項と同様に操作し、ＢＭＧの光学的測定の結果
を図２に、同時再現性試験の結果を表２に示した。

【００６２】

【表２】

【００６３】図２から分かるように、実施例２及び３で
得られたＢＭＧ測定用試薬は、抗体の不溶性担体への担
持工程及び担持抗体のブロッキング工程において、担持
温度を２５℃にした比較例４と比較してプロゾーンが抑
えられており、感度も上昇している。また、ラテックス
試薬希釈用液にデキストランを濃度１重量％になるよう
に添加した比較例５では、プロゾーンは抑えられている
が、表２から分かるように、変動係数（バラツキ）が実
施例２と比較して２倍程度上昇している。

【００６４】

【発明の効果】本発明１の免疫測定試薬製造法の構成
は、上記の通りであり、本発明１の製造法を用いると、
高感度を維持しつつ、プロゾーンの発生が抑えられ、低
濃度の検体も測定可能であり、バラツキが少なく、試薬
安定性もよい免疫測定試薬を得ることができる。

【００６５】本発明２の免疫測定試薬製造法の構成は、
上記の通りであり、本発明２の製造法を用いると、高感
度を維持しつつ、プロゾーンの発生が抑えられ、低濃度
の検体も測定可能であり、バラツキが少なく、試薬安定
性もよい免疫測定試薬を得ることができる。

【００６６】本発明３の免疫測定試薬製造法の構成は、
上記の通りであり、本発明３の製造法を用いると、より
高感度を維持しつつ、よりプロゾーンの発生が抑えら
れ、低濃度の検体も測定可能であり、よりバラツキが少
なく、試薬安定性もよい免疫測定試薬を得ることができ
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１及び比較例１〜３における、吸光度と
ＢＭＧ濃度の関係を示すグラフ。縦軸は、吸光度（実際
の吸光度の測定値を１００００倍した値）を、横軸は、
ＢＭＧ濃度（μｇ／ｍｌ）を表す。

【図２】実施例２、３及び比較例４、５における、吸光
度とＢＭＧ濃度の関係を示すグラフ。縦軸は、吸光度
（実際の吸光度の測定値を１００００倍した値）を、横
軸は、ＢＭＧ濃度（μｇ／ｍｌ）を表す。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ｐＨが４．０〜６．０の緩衝液中で抗体
又は抗原を不溶性担体に担持させた後、ｐＨを６．５〜
９．０にすることを特徴とする免疫測定試薬製造法。
【請求項２】ｐＨが４．０〜６．０であり、かつ温度
が３５〜５０℃の緩衝液中で抗体又は抗原を不溶性担体
に担持させることを特徴とする免疫測定試薬製造法。
【請求項３】請求項２記載の方法で抗体又は抗原を不
溶性担体に担持させた後、ｐＨを６．５〜９．０にする
ことを特徴とする免疫測定試薬製造法。