JP4976634B2 - 止血活性ｖＷＦ含有調製物及びその調製方法 - Google Patents
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Description
【０００１】
本発明は、ヒト血漿の画分からのフォンウィルブランド(von Willebrand)因子（ｖＷＦ）を含む、ウイルス不活性化された止血活性(hemostatically active)調製物、及び本発明による方法によって得られ得る止血活性ｖＷＦ含有調製物に関する。
【０００２】
フォンウィルブランド病は、血友病Ａ又はＢとは異なり、柔らかい組織、特に粘膜中に出血として現れる、血液凝固異常である。いわゆるフォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）の欠乏が、この病気の原因であると確認された。今までのところ、この因子は、ｖＷＦも含有する第８因子調製物によって、患者に投与されているが、しばしば、不十分な品質かつ不十分な量のみで投与されている。遺伝子工学によるｖＷＦの調製が成功したが、献血者の血液又は血漿からｖＷＦを調製するために、改良された精製方法を適用することが、依然として強く(urgent)要求されている。
【０００３】
ＥＰ−Ａ−０ ９３４ ７４８には、１３個以上のプロトマー(protomers)（ＨＭＷ−ＶＷＦ多量体）からなる、少なくとも１５％のｖＷＦ多量体を含む高純度なｖＷＦが記載されている。それは、寒冷沈降反応の代わりに、グループ分離モードでゲル濾過が最初に行われ得る多段階クロマトグラフィー精製によって得られる。不活性ウイルスについては、例えば、溶媒及び洗浄剤による処理、並びに８０℃での７２時間にわたる凍結乾燥状態での熱処理が記載されている。
【０００４】
ヨジク(Josic)ら、“アニオン交換クロマトグラフィーによるヒト血漿からの第８因子及びｖＷＦ因子の精製（Purification of factor VIII and vWF factor from human plasma by anion-exchange chromatography）”, Journal of Chromatography B, 662 (1994), 181-190、及びシェウィン(Schwinn)ら、“溶媒／洗浄剤処理され、低温殺菌され、かつ高度に精製された第８因子濃縮物（A Solvent/detergent Treated, Pasteurized and Highly Purified Factor VIII Concentrate）”, Arzneimittel-Forschung 1 Drug Research 44 (1), 2, 188-191 (1994)は、イオン交換体による精製を達成し、かつウイルスの不活性化のための２つの独立した段階を行う、第８因子／ｖＷＦ複合体の精製に関する。安定化剤の存在下での溶媒／洗浄剤による処理、及び低温殺菌（６３℃で１０時間）が行われる。第８因子は、低温殺菌によってはほとんど変性されないが（９５％の残留活性）、ｖＷＦの活性及び多量体分布が変化し（８５％の残留抗原）、高分子量多量体の損失が起こり、その結果、ｖＷＦ抗原の活性比は２．２になる（抗原に対する活性＝０．５）。
【０００５】
ＵＳ−Ａ−５，７１４，５９０には、イオン交換クロマトグラフィーによる第８因子複合体の精製が記載されている。よって、ゲル浸透のためにも使用される、ＥＭＤ−ＴＭＡＥ−フラクトゲル(Fractogel)カラム材が使用される。ウイルス不活性化のために、溶媒／洗浄剤による処理が提案されている。熱処理は記載されていない。得られた生成物も、ｖＷＦを含んでおり、ｖＷＦ抗原性のみが記載されている。
【０００６】
本発明の目的は、ヒト血漿からのｖＷＦの精製のための新規な方法を提供することである。そのような方法により、品質及び有効性が向上したｖＷＦが得られる。
【０００７】
本発明の目的は、ヒト血漿の画分からのフォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）を含む止血活性調製物を調製するための方法であって、グラフト重合(grafted polymeric)構造（テンタクル(tentacle)材）上にアニオン交換基を有するアニオン交換体上でｖＷＦ含有血漿画分のクロマトグラフィー精製が行われ、ｖＷＦ含有画分が回収され、次いで、ゲル浸透を用いて画分の精製が行われ、ウイルス不活性化のために調製物が加熱されることを特徴とする方法によって達成される。本発明による方法において使用され得るテンタクル材が、特に、ＥＰ−Ａ−０ ３３７ １４４に開示されている。この公報は、ここで開示として援用される。前記材料は、メルク(Merck)、ダルムシュタット(Darmstadt)、ドイツによって提供されるフラクトゲル(Fractogel)（登録商標）のジオールとグラフトしたポリアクリルアミドテンタクルポリマーであることが好ましい。
【０００８】
図１は、アニオン交換クロマトグラフィーのみによって精製された生成物と比較した、本発明によって得られ得る生成物の安定性を示す。
【０００９】
驚くべきことに、この工程により、第８因子と比べて多量のｖＷＦを含有する生成物が得られる。ゲル浸透段階によって、本発明によるシーケンス(sequence)により、インター−α−トリプシン (inter-α-trypsin)阻害剤、並びに既知の調製方法において、生成物の品質の低減を引き起こし得る他の因子が除去される。本発明によるクロマトグラフィー段階のシーケンスにより、驚くほど安定なｖＷＦ調製物が得られる。驚くべきことに、本発明の方法を用いて得られ得るｖＷＦ画分は、長期間、室温において、水溶液中で本質的に安定である（測定は、１週間まで行われた）。また、本発明による調製物は、天然型のｖＷＦを含み、かつフラグメントを含まない。
【００１０】
好ましくは、熱的に安定な調製物及び加熱された調製物は、ＨＰＬＣゲル濾過分析において、単一ピークのみを示す。
【００１１】
特に、熱的に安定な調製物は、本方法により、凍結乾燥状態で、８０℃を超える温度で加熱され得る。本発明による方法の別の態様では、調製物は、９０℃を越える温度、特に１００℃で加熱される。本発明によれば、加熱は、少なくとも１時間〜５時間、特に２〜３時間の期間、行われることが好ましい。よって、輸血関連(transfusion-relevant)ウイルス、特に、パルボウイルスやＡ型関連ウイルスのような、脂質で被覆されていない(non-lipid-coated)ウイルスが不活性化される。驚くべきことに、本発明によって得られ得る生成物は、実質的な活性の損失なく、この過酷な(demanding)熱処理に耐える。
【００１２】
本発明によれば、少なくとも１つの吸着−及び／又はアフィニティクロマトグラフィー処理によって、ｖＷＦ含有画分の精製が更に行われ得る。
【００１３】
本発明によれば、貯留されたヒト血漿から得られ、かつ本発明による方法によって精製され得るｖＷＦ含有画分も使用され得る。
【００１４】
本発明は、本発明によって得られ得る止血活性ｖＷＦ含有調製物にも関する。
【００１５】
本発明による調製物は、伝染性の血液によって運ばれる(blood-borne)ウイルス、特に、ＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＡＶ及びパルボウイルスを含まない。
【００１６】
特に、本発明による調製物は、電気泳動分析において、最小で１３〜１６量体バンドを示す、高分子量型のｖＷＦを含む。多量体の数及びそれらの分布パターンは、血漿中の固有のｖＷＦを含むｖＷＦ調製物と類似の測定結果である。更に、本発明による調製物における、ｖＷＦ抗原に対する、ｖＷＦ活性のための代理マーカーとしてのリストシチン(ristocitin)共同因子の割合は、少なくとも０．８である。これは、完全な状態のｖＷＦ分子の別の測定結果である。
【００１７】
本発明による調製物は、天然型の第８因子を更に含むことが好ましい。フォンウィルブランド病の治療のための第８因子とｖＷＦとの複合体の使用が、臨床的使用において、特に有用であることが判明した。
【００１８】
更に、免疫化学的な検出限界より少ない(down to below an immunochemical detection limit)、以下の蛋白質：免疫グロブリン、フィブリノゲン、フィブロネクチン、及びインター−α−トリプシン阻害剤が、本発明による調製物から除去された。これは、おそらく、本発明による生成物の並外れた安定性に起因する。
【００１９】
【実施例】
本発明を、以下の実施例によって更に説明する。
約４７ｋｇの寒冷沈降物を、１５％（ｗ／ｗ）の２％（ｗ／ｗ）水酸化アルミニウム水溶液によって処理した。遠心分離後、０．３％ ＴｎＢＰ／１％ トリトン(Triton)Ｘ１００によって試料をウイルス不活性化する。次いで、油性抽出物をフラクトゲル(Fractogel)ＥＭＤ ＴＭＡＥ（メルク(Merck)、ダルムシュタット(Darmstadt)、ドイツによって供給されたテンタクルゲル）上でアニオン交換クロマトグラフィーにかける。
【００２０】
バッファー条件は、以下の通りである：
バッファーＡＭ、第一洗浄段階：
１２０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ クエン酸Ｎａ、１２０ｍＭ グリシン、１ｍＭ ＣａＣｌ2、ｐＨ ６．９−７．１； 浸透圧重量モル濃度： ３６０−４００ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ
バッファーＢＭ、第二洗浄段階：
２３５ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ クエン酸Ｎａ、１２０ｍＭ グリシン、１ｍＭ ＣａＣｌ2、ｐＨ ６．９−７．１； 浸透圧重量モル濃度： ５７０−６１０ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ
バッファーＣＭ、溶出：
７００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ クエン酸Ｎａ、１２０ｍＭ グリシン、１ｍＭ ＣａＣｌ2、ｐＨ ６．９−７．１； 浸透圧重量モル濃度： １３８０−１４８０ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ
バッファーＤＭ、第三洗浄段階：
１．５Ｍ ＮａＣｌ
【００２１】
ｖＷＦ／ＦＶＩＩＩ活性を示す画分を、フラクトゲル(Fractogel)ＥＭＤ Ｂｉｏ ＳＥＣ（メルク(Merck)、ダルムシュタット(Darmstadt)、ドイツによって供給されたゲル）上でサイズ排除クロマトグラフィーに付す。限外濾過／ダイアフィルトレーション(diafiltration)後、以下の組成：４００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ クエン酸Ｎａ、１ｍＭ ＣａＣｌ2、１３３ｍＭ グリシン、１％ 蔗糖を有する処方(formulation)が得られる。
【００２２】
次いで、これを滅菌濾過する。調製物を、バイアルに充填し、凍結乾燥した後、１００℃で加熱処理する。加熱処理は１２０分間行う。
【００２３】
図１は、アニオン交換クロマトグラフィーのみによって精製された生成物と比較した、本発明によって得られ得る生成物の安定性を示す。アニオン交換クロマトグラフィー後、本発明による生成物は、サイズ排除クロマトグラフィーによって処理された。本発明による生成物が、室温において、ヘパリンあり又はなしで貯蔵した場合、依然として８０％の活性を示したのに対し、サイズ排除クロマトグラフィーを行わなかった生成物は、７日後に、たった２０％の活性しか示さなかったことがわかる。
【図面の簡単な説明】
【図１】 アニオン交換クロマトグラフィーのみによって精製された生成物と比較した、本発明によって得られ得る生成物の安定性を示す。
本発明は、ヒト血漿の画分からのフォンウィルブランド(von Willebrand)因子（ｖＷＦ）を含む、ウイルス不活性化された止血活性(hemostatically active)調製物、及び本発明による方法によって得られ得る止血活性ｖＷＦ含有調製物に関する。
【０００２】
フォンウィルブランド病は、血友病Ａ又はＢとは異なり、柔らかい組織、特に粘膜中に出血として現れる、血液凝固異常である。いわゆるフォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）の欠乏が、この病気の原因であると確認された。今までのところ、この因子は、ｖＷＦも含有する第８因子調製物によって、患者に投与されているが、しばしば、不十分な品質かつ不十分な量のみで投与されている。遺伝子工学によるｖＷＦの調製が成功したが、献血者の血液又は血漿からｖＷＦを調製するために、改良された精製方法を適用することが、依然として強く(urgent)要求されている。
【０００３】
ＥＰ−Ａ−０ ９３４ ７４８には、１３個以上のプロトマー(protomers)（ＨＭＷ−ＶＷＦ多量体）からなる、少なくとも１５％のｖＷＦ多量体を含む高純度なｖＷＦが記載されている。それは、寒冷沈降反応の代わりに、グループ分離モードでゲル濾過が最初に行われ得る多段階クロマトグラフィー精製によって得られる。不活性ウイルスについては、例えば、溶媒及び洗浄剤による処理、並びに８０℃での７２時間にわたる凍結乾燥状態での熱処理が記載されている。
【０００４】
ヨジク(Josic)ら、“アニオン交換クロマトグラフィーによるヒト血漿からの第８因子及びｖＷＦ因子の精製（Purification of factor VIII and vWF factor from human plasma by anion-exchange chromatography）”, Journal of Chromatography B, 662 (1994), 181-190、及びシェウィン(Schwinn)ら、“溶媒／洗浄剤処理され、低温殺菌され、かつ高度に精製された第８因子濃縮物（A Solvent/detergent Treated, Pasteurized and Highly Purified Factor VIII Concentrate）”, Arzneimittel-Forschung 1 Drug Research 44 (1), 2, 188-191 (1994)は、イオン交換体による精製を達成し、かつウイルスの不活性化のための２つの独立した段階を行う、第８因子／ｖＷＦ複合体の精製に関する。安定化剤の存在下での溶媒／洗浄剤による処理、及び低温殺菌（６３℃で１０時間）が行われる。第８因子は、低温殺菌によってはほとんど変性されないが（９５％の残留活性）、ｖＷＦの活性及び多量体分布が変化し（８５％の残留抗原）、高分子量多量体の損失が起こり、その結果、ｖＷＦ抗原の活性比は２．２になる（抗原に対する活性＝０．５）。
【０００５】
ＵＳ−Ａ−５，７１４，５９０には、イオン交換クロマトグラフィーによる第８因子複合体の精製が記載されている。よって、ゲル浸透のためにも使用される、ＥＭＤ−ＴＭＡＥ−フラクトゲル(Fractogel)カラム材が使用される。ウイルス不活性化のために、溶媒／洗浄剤による処理が提案されている。熱処理は記載されていない。得られた生成物も、ｖＷＦを含んでおり、ｖＷＦ抗原性のみが記載されている。
【０００６】
本発明の目的は、ヒト血漿からのｖＷＦの精製のための新規な方法を提供することである。そのような方法により、品質及び有効性が向上したｖＷＦが得られる。
【０００７】
本発明の目的は、ヒト血漿の画分からのフォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）を含む止血活性調製物を調製するための方法であって、グラフト重合(grafted polymeric)構造（テンタクル(tentacle)材）上にアニオン交換基を有するアニオン交換体上でｖＷＦ含有血漿画分のクロマトグラフィー精製が行われ、ｖＷＦ含有画分が回収され、次いで、ゲル浸透を用いて画分の精製が行われ、ウイルス不活性化のために調製物が加熱されることを特徴とする方法によって達成される。本発明による方法において使用され得るテンタクル材が、特に、ＥＰ−Ａ−０ ３３７ １４４に開示されている。この公報は、ここで開示として援用される。前記材料は、メルク(Merck)、ダルムシュタット(Darmstadt)、ドイツによって提供されるフラクトゲル(Fractogel)（登録商標）のジオールとグラフトしたポリアクリルアミドテンタクルポリマーであることが好ましい。
【０００８】
図１は、アニオン交換クロマトグラフィーのみによって精製された生成物と比較した、本発明によって得られ得る生成物の安定性を示す。
【０００９】
驚くべきことに、この工程により、第８因子と比べて多量のｖＷＦを含有する生成物が得られる。ゲル浸透段階によって、本発明によるシーケンス(sequence)により、インター−α−トリプシン (inter-α-trypsin)阻害剤、並びに既知の調製方法において、生成物の品質の低減を引き起こし得る他の因子が除去される。本発明によるクロマトグラフィー段階のシーケンスにより、驚くほど安定なｖＷＦ調製物が得られる。驚くべきことに、本発明の方法を用いて得られ得るｖＷＦ画分は、長期間、室温において、水溶液中で本質的に安定である（測定は、１週間まで行われた）。また、本発明による調製物は、天然型のｖＷＦを含み、かつフラグメントを含まない。
【００１０】
好ましくは、熱的に安定な調製物及び加熱された調製物は、ＨＰＬＣゲル濾過分析において、単一ピークのみを示す。
【００１１】
特に、熱的に安定な調製物は、本方法により、凍結乾燥状態で、８０℃を超える温度で加熱され得る。本発明による方法の別の態様では、調製物は、９０℃を越える温度、特に１００℃で加熱される。本発明によれば、加熱は、少なくとも１時間〜５時間、特に２〜３時間の期間、行われることが好ましい。よって、輸血関連(transfusion-relevant)ウイルス、特に、パルボウイルスやＡ型関連ウイルスのような、脂質で被覆されていない(non-lipid-coated)ウイルスが不活性化される。驚くべきことに、本発明によって得られ得る生成物は、実質的な活性の損失なく、この過酷な(demanding)熱処理に耐える。
【００１２】
本発明によれば、少なくとも１つの吸着−及び／又はアフィニティクロマトグラフィー処理によって、ｖＷＦ含有画分の精製が更に行われ得る。
【００１３】
本発明によれば、貯留されたヒト血漿から得られ、かつ本発明による方法によって精製され得るｖＷＦ含有画分も使用され得る。
【００１４】
本発明は、本発明によって得られ得る止血活性ｖＷＦ含有調製物にも関する。
【００１５】
本発明による調製物は、伝染性の血液によって運ばれる(blood-borne)ウイルス、特に、ＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＡＶ及びパルボウイルスを含まない。
【００１６】
特に、本発明による調製物は、電気泳動分析において、最小で１３〜１６量体バンドを示す、高分子量型のｖＷＦを含む。多量体の数及びそれらの分布パターンは、血漿中の固有のｖＷＦを含むｖＷＦ調製物と類似の測定結果である。更に、本発明による調製物における、ｖＷＦ抗原に対する、ｖＷＦ活性のための代理マーカーとしてのリストシチン(ristocitin)共同因子の割合は、少なくとも０．８である。これは、完全な状態のｖＷＦ分子の別の測定結果である。
【００１７】
本発明による調製物は、天然型の第８因子を更に含むことが好ましい。フォンウィルブランド病の治療のための第８因子とｖＷＦとの複合体の使用が、臨床的使用において、特に有用であることが判明した。
【００１８】
更に、免疫化学的な検出限界より少ない(down to below an immunochemical detection limit)、以下の蛋白質：免疫グロブリン、フィブリノゲン、フィブロネクチン、及びインター−α−トリプシン阻害剤が、本発明による調製物から除去された。これは、おそらく、本発明による生成物の並外れた安定性に起因する。
【００１９】
【実施例】
本発明を、以下の実施例によって更に説明する。
約４７ｋｇの寒冷沈降物を、１５％（ｗ／ｗ）の２％（ｗ／ｗ）水酸化アルミニウム水溶液によって処理した。遠心分離後、０．３％ ＴｎＢＰ／１％ トリトン(Triton)Ｘ１００によって試料をウイルス不活性化する。次いで、油性抽出物をフラクトゲル(Fractogel)ＥＭＤ ＴＭＡＥ（メルク(Merck)、ダルムシュタット(Darmstadt)、ドイツによって供給されたテンタクルゲル）上でアニオン交換クロマトグラフィーにかける。
【００２０】
バッファー条件は、以下の通りである：
バッファーＡＭ、第一洗浄段階：
１２０ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ クエン酸Ｎａ、１２０ｍＭ グリシン、１ｍＭ ＣａＣｌ2、ｐＨ ６．９−７．１； 浸透圧重量モル濃度： ３６０−４００ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ
バッファーＢＭ、第二洗浄段階：
２３５ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ クエン酸Ｎａ、１２０ｍＭ グリシン、１ｍＭ ＣａＣｌ2、ｐＨ ６．９−７．１； 浸透圧重量モル濃度： ５７０−６１０ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ
バッファーＣＭ、溶出：
７００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ クエン酸Ｎａ、１２０ｍＭ グリシン、１ｍＭ ＣａＣｌ2、ｐＨ ６．９−７．１； 浸透圧重量モル濃度： １３８０−１４８０ｍｏｓｍｏｌ／ｋｇ
バッファーＤＭ、第三洗浄段階：
１．５Ｍ ＮａＣｌ
【００２１】
ｖＷＦ／ＦＶＩＩＩ活性を示す画分を、フラクトゲル(Fractogel)ＥＭＤ Ｂｉｏ ＳＥＣ（メルク(Merck)、ダルムシュタット(Darmstadt)、ドイツによって供給されたゲル）上でサイズ排除クロマトグラフィーに付す。限外濾過／ダイアフィルトレーション(diafiltration)後、以下の組成：４００ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ クエン酸Ｎａ、１ｍＭ ＣａＣｌ2、１３３ｍＭ グリシン、１％ 蔗糖を有する処方(formulation)が得られる。
【００２２】
次いで、これを滅菌濾過する。調製物を、バイアルに充填し、凍結乾燥した後、１００℃で加熱処理する。加熱処理は１２０分間行う。
【００２３】
図１は、アニオン交換クロマトグラフィーのみによって精製された生成物と比較した、本発明によって得られ得る生成物の安定性を示す。アニオン交換クロマトグラフィー後、本発明による生成物は、サイズ排除クロマトグラフィーによって処理された。本発明による生成物が、室温において、ヘパリンあり又はなしで貯蔵した場合、依然として８０％の活性を示したのに対し、サイズ排除クロマトグラフィーを行わなかった生成物は、７日後に、たった２０％の活性しか示さなかったことがわかる。
【図面の簡単な説明】
【図１】 アニオン交換クロマトグラフィーのみによって精製された生成物と比較した、本発明によって得られ得る生成物の安定性を示す。
Claims (17)
- Ｉ．グラフト重合構造上にアニオン交換基を有するアニオン交換体上でのフォンウィルブランド因子（ｖＷＦ）含有血漿画分のクロマトグラフィー精製、ｖＷＦ含有画分の回収、次いで
ＩＩ．精製された熱的に安定なｖＷＦ含有調製物の調製のための、サイズ排除クロマトグラフィーによる前記画分の精製；及び
ＩＩＩ．ウイルス不活性化のための、凍結乾燥状態の調製物の８０℃を超える温度での加熱
による、ヒト血漿の画分からのｖＷＦを含有する止血活性調製物の調製方法。 - 熱的に安定な調製物及び加熱された調製物が、ＨＰＬＣサイズ排除分析において、単一ピークのみを示すことを特徴とする請求項１に記載の方法。
- 調製物が、９０℃を超える温度で加熱されることを特徴とする請求項１または２に記載の方法。
- 調製物が、１００℃で加熱されることを特徴とする請求項３に記載の方法。
- 調製物が、少なくとも１時間〜５時間加熱されることを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
- 調製物が、２〜３時間加熱されることを特徴とする請求項５に記載の方法。
- 画分が、少なくとも１つの吸着及び／またはアフィニティクロマトグラフィーによって更に精製されることを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
- 前記サイズ排除による精製が、蛋白質精製のための最終手段として行われることを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
- 前記画分が、貯留されたヒト血漿から精製されることを特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
- 請求項１〜９のいずれかに記載の方法によって得られた止血活性ｖＷＦ含有調製物。
- 前記調製物が、伝染性の血液によって運ばれるウイルスを含まないことを特徴とする請求項１０に記載の調製物。
- 前記調製物が、ＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＡＶ及びパルボウイルスからなる群より選択される伝染性の血液によって運ばれるウイルスを含まないことを特徴とする請求項１０に記載の調製物。
- 高分子量ｖＷＦを含有し、かつ電気泳動分析において、最小で１３〜１６量体バンドを示すことを特徴とする請求項１０〜１２のいずれか一項に記載の調製物。
- ｖＷＦ抗原に対するリストシチン共同因子として測定されるｖＷＦ活性の割合が、少なくとも０．８であることを特徴とする請求項１０〜１３のいずれかに記載の調製物。
- 天然型の第８因子を更に含有することを特徴とする請求項１０〜１４のいずれかに記載の調製物。
- 免疫化学的な検出限界より少ないレベルで、免疫グロブリン、フィブリノゲン、フィブロネクチン、及びインター−α−トリプシン阻害剤を含むことを特徴とする請求項１０〜１５のいずれかに記載の調製物。
- 天然型のｖＷＦを含有し、かつフラグメントを含まないことを特徴とする請求項１０〜１６のいずれかに記載の調製物。
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