HU225992B1 - Haemostatically active preparation containing vwf and method for the production thereof - Google Patents
Haemostatically active preparation containing vwf and method for the production thereof Download PDFInfo
- Publication number
- HU225992B1 HU225992B1 HU0301211A HUP0301211A HU225992B1 HU 225992 B1 HU225992 B1 HU 225992B1 HU 0301211 A HU0301211 A HU 0301211A HU P0301211 A HUP0301211 A HU P0301211A HU 225992 B1 HU225992 B1 HU 225992B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- composition
- vwf
- fraction
- process according
- human plasma
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 24
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 3
- 102100036537 von Willebrand factor Human genes 0.000 claims description 44
- 108010047303 von Willebrand Factor Proteins 0.000 claims description 43
- 229960001134 von willebrand factor Drugs 0.000 claims description 43
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 39
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 11
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 8
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims description 6
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 5
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 4
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 claims description 3
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 claims description 3
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 claims description 3
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 claims description 3
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 3
- 108010093564 inter-alpha-inhibitor Proteins 0.000 claims description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 3
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims description 2
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims description 2
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 claims description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 2
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims description 2
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims description 2
- 230000000025 haemostatic effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 claims description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 claims 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 claims 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 claims 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 5
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 5
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000027276 Von Willebrand disease Diseases 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 208000012137 von Willebrand disease (hereditary or acquired) Diseases 0.000 description 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000012541 Fractogel® Substances 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical group 0.000 description 1
- 208000015294 blood coagulation disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
A jelen találmány tárgyát egy vírusinaktivált hemosztatikus aktivitású emberi vérplazmából készült von Willebrand-faktort (vWF) tartalmazó készítmény előállítására szolgáló eljárás képezi. A találmány tárgyát képezi továbbá maga a találmány szerinti eljárás útján kapható hemosztatikus aktivitású vWF-tartalmú készítmény is.
A von Willebrand-betegség egy olyan véralvadási rendellenesség, amely eltérően az A vagy B típusú vérzékenységtől a lágy szövetekben, főképpen a nyálkahártyán kialakuló vérzések formájában mutatkozik meg. Felismerték, hogy a betegséget az úgynevezett von Willebrand-faktor (vWF) hiánya okozza. Napjainkig ezt a faktort a betegeknek gyakran a vWF-faktort csak nem kielégítő minőségben és nem elegendő mennyiségben tartalmazó Vili faktor készítményeken keresztül adták be. Jóllehet a vWF génsebészeti úton történő előállítása sikerre vezetett, továbbra is sürgetően nagy szükség van javított tisztítási eljárások alkalmazásával donorvérből vagy -plazmából történő vWF előállításra.
Az EP-A-0-943 748 számú európai szabadalmi leírásban egy olyan nagy tisztaságú, legalább 15% vWFmultimert tartalmazó vWF-készítményt írnak le, amely 13 vagy annál több protomerből (HMW-vWF multimerekből) áll. Ezt többlépéses kromatográfiás tisztítás útján állítják elő, ahol a csoportelválasztási mód során kiindulásul a kriocsapadékképzés helyett gélszűrést lehet végrehajtani. A vírusinaktiválása céljából például oldószerekkel és detergensekkel való kezelést és liofilizált állapotban 72 órán keresztül 80 °C-os hőmérsékleten történő hőkezelést írnak le.
Josic et al., „Purification oFVIII and vWF factor from humán plasma by anionexchange chromatography, Journal of Chomatography B, 662 (1994), 181-190. és a Schwinnet al., „A Solvent/detergent Treated, Pasteurized and Highly Purified Factor Vili Concentrate, Arzneimittel-Forschung 1 Drug Research 44 (1), 2, 188-191 (1994) szakirodalmi hivatkozásokban a VIII/vWF komplex tisztítását ismertetik, amely eljárás során az elegyet ioncserélő anyagon keresztüljuttatva, majd két egymástól független vírusinaktiváló lépésben tisztítják. Oldószer/detergens eleggyel való kezelést, majd (10 órán keresztül 63 °C-os hőmérsékleten) stabilizátorok jelenlétében pasztőrözést végeznek. Jóllehet a Vili faktor pasztőrözés útján alig denaturálódik (95%-os maradék aktivitás), a vWF-aktivitása és multimer eloszlása (85%-os maradék antigén) megváltozik, és nagy molekulatömegű multimerveszteség jelentkezik 2,2-es vWF-antigén-aktivitás arányt eredményezve (antigénaktivitás=0,5).
Az 5 714 590 lajstromszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban ioncserélő kromatográfiás eljárással történő Vili faktor tisztítása kerül ismertetésre. Ennek során egy EMD-TMAE-Fractogel kolonnaanyagot alkalmaznak, amelyet gél permeációra/átitatásra is felhasználnak. Vírusinaktiváláshoz oldószer/detergens eleggyel való kezelést javasolnak. Hőkezelést nem említenek. A kapott termék tartalmaz vWFfaktort is, csupán a vWF-antigenitást említik meg.
A jelen találmány tárgya az emberi plazmából származó vWF tisztítására szolgáló új eljárás. Ezzel az eljárással jobb minőségben és hatékonyabban nyerhető ki vWF.
A jelen találmány szerinti célkitűzés egy olyan emberi plazmafrakcióból származó von Willebrand-faktort (vWF) tartalmazó hemosztatikus aktivitású készítmény előállítására szolgáló eljárás, amely során a vWF-tartalmú plazmafrakciót a beoltott polimerstruktúrákon (sűrűn elágazó láncokból álló anyagok) anioncserélő csoportokkal rendelkező anioncserélő anyagon kromatográfiás úton tisztítjuk, a vWF-t tartalmazó frakciót elválasztjuk, amelyet a frakció gélpermeációs módszerrel történő tisztítása követ, majd a kapott készítményt vírusinaktiválás érdekében melegítjük. A találmány szerinti eljárásban alkalmazható sűrűn elágazó láncokból álló anyagok a szakirodalomban ismertek, különösen az EP-A-0 337 144 számú európai szabadalmi bejelentésben kerülnek ismertetésre. Ennek a szabadalmi publikációnak a tartalma a jelen találmányhoz tartozó technika állásának a részét képezi. Ezek az anyagok előnyösen poliakrilamid elágazó láncokból álló, a Merck (Darmstadt Németország) által gyártott Fractogel® diolokba oltott polimerek.
Az 1. ábrán mutatjuk be a találmány szerinti módon kapható termék stabilitását a csupán anioncserélő kromatográfiás úton tisztított termékekkel összehasonlítva.
Ez az eljárás meglepő módon egy olyan terméket eredményez, amelynek vWF-tartalma az F Vlll-as faktortartalomhoz képest nagyobb. A gélpermeációs lépésnek köszönhetően a találmány szerinti eljárási sorrend az inter-a-tripszin-inhibitor mellett egyéb olyan faktorok eltávolítását is eredményezi, amelyek közrejátszhatnak az ismert előállítási eljárásokban kapott termék minőségének romlásában. A találmány szerinti kromatográfiás lépések sorrendje olyan vWF-készítményt eredményez, amely meglepően stabil. Meglepő módon a jelen találmány szerinti eljárás alkalmazásával kapható vWF-frakció vizes oldatban szobahőmérsékleten hosszabb időtartam alatt (a mérés legfeljebb egy hétig tartott) lényegében stabil. Emellett a jelen találmány szerinti készítmény a vWF-faktort természetes és a fragmentumoktól mentes formában tartalmazza.
Előnyösen a hőstabil készítmény és a melegített készítmény a HPLC gélszűrés-analízis során csak egy csúcsot eredményez.
Az eljárásnak megfelelően a hőstabil készítmény főként liofilizált állapotban 80 °C feletti hőmérsékleten melegíthető. A jelen találmány szerinti eljárás egy másik megvalósítási módja szerint a készítményt 90 °C feletti, különösen 100 °C feletti hőmérsékleten melegítjük. A találmány szerinti megoldás értelmében a melegítést előnyösen legalább 1 óra és legfeljebb 5 óra időtartamon keresztül, különösen 2-3 óra közötti ideig végezzük. Ily módon, az összes vérátömlesztés szempontjából releváns vírus, főként a lipidréteggel nem fedett vírusok, mint a parvovírusok vagy a hepatitis A-vírusok, inaktiválódnak. Meglepő módon a jelen találmány szerinti eljárással kapható termék ellenáll ennek a nagy fizikai igénybevétellel járó hőkezelésnek anélkül, hogy lényeges hatáscsökkenés következne be.
HU 225 992 Β1
A jelen találmány értelmében a vWF-tartalmú frakció tisztítása emellett végrehajtható legalább egy adszorpciós- és/vagy affinitáskromatográfiás kezeléssel.
A jelen találmány értelmében alkalmazhatunk összegyűjtött emberi vérplazmából nyert és a jelen találmány szerinti eljárással tisztítható vWF-tartalmú frakciót is.
A jelen találmány tárgyát képezi az a hemosztatikus aktivitású vWF-tartalmú készítmény is, amely a találmány szerinti eljárással állítható elő.
A jelen találmány szerinti készítmény vérből származó fertőző vírusoktól, főként a HIV-, HBV-, HCV-, HAV- és parvovírusoktól, mentes.
Speciálisan a jelen találmány szerinti készítmény a vWF-faktort nagy molekulatömegű formában tartalmazza, amely elektroforézisvizsgálat során minimum 13 és 16 közötti multimersávot mutat. A multimerek száma és azok eloszlási mintázata egyfajta mérése a vWF-készítmény a vérplazmában található natív vWFfaktorral való hasonlóságának. Továbbá a ristocitin kofaktornak, mint vWF-aktivitás-helyettesítő markernek, a vWF-antigénhez viszonyított aránya a találmány szerinti készítményben legalább 0,8. Ez egy másik mérési módja a vWF-molekula épségének.
A jelen találmány szerinti készítmény előnyösen tartalmaz továbbá natív formájú Vili faktort. Az FVIII és a vWF komplexek von Willebrand-betegség kezelésére történő felhasználása a klinikai gyakorlatban különösen jól bevált.
Ezen túlmenően a találmány szerinti készítményből az alábbi fehérjéket távolítottuk el, melyek mennyisége így az immunokémiai detektálási határérték alá csökkent: immunoglobulinok, fibrinogén, fibronektin, valamint inter-a-tripszin-inhibitor. Feltehetően ez az oka a jelen találmány szerinti termék rendkívüli stabilitásának.
A találmányt a következő példákkal szemléltetjük.
Kiviteli példák
Körülbelül 47 kg kriocsapadékot 15% (w/w) 2% (w/w) alumínium-hidroxid-oldattal kezelünk. Centrifugálást követően a mintát 0,3% TnBP/1% Triton X 100 oldattal kezeljük vírusinaktiválás céljából. Az olajextrakciót követően anioncserélő kromatográfiás eljárást végzünk Fractogel EMD TMAE (sűrűn elágazó láncú gél, gyártja Merck, Darmstadt, Németország).
A pufferparaméterek a következők:
Puffer AM, első mosási lépés:
120 mM NaCI, 10 mM Na-citrát, 120 mM glicin, 1 mM CaCI2, pH 6,9-7,1; ozmolalitás: 360-400 mozmol/kg. Puffer BM, második mosási lépés:
235 mM NaCI, 10 mM Na-citrát, 120 mM glicin, 1 mM CaCl2, pH 6,9-7,1; ozmolalitás: 570-610 mozmol/kg. Puffer CM, elúció
700 mM NaCI, 10 mM Na-citrát, 120 mM glicin, 1 mM CaCI2, pH 6,9-7,1: ozmolalitás: 1380-1480 mozmol/kg.
Puffer DM, harmadik mosási lépés:
1,5 mM NaCI.
A vWF/FVIII aktivitást mutató frakciókat a Merck cég (Darmstadt, Németország) által gyártott Fractogel EMD
Bio SEC alkalmazásával méret kiszorításos kromatográfiás úton választjuk el. Az ultra-, diaszűrést követően a kapott készítményt 400 mM NaCI, 10 mM Na-citrát, 1 mM CaCI2, 133 mM glicin és 1% szukrózból álló eleggyel kezeljük.
Ezt az eljárási lépést steril szűrés követi. A készítményt kémcsövekbe töltjük és liofilizáljuk, majd 100 °C-os hőmérsékleten hőkezeljük. A hőkezelést 120 percig végezzük.
A mellékelt 1. ábrán a találmány szerinti eljárással kapható termék stabilitása látható összehasonlítva a pusztán anioncserélő kromatográfiás úton tisztított termékekkel. Az FVIII-koncentrátumokat egyenként adinj. mennyiségű víz és ad inj. mennyiségű 5 IU Heparin/ml koncentrációjú vizes oldat hozzáadásával állítottuk elő. Az infúziós mintákat zsákokba töltöttük, majd szobahőmérsékleten tároltuk. Adott időpontokban a jelzett mintákat lehúztuk és FVIILC aktivitásra (kromogenitás) vizsgáltuk. A diagramon az FVIII-regenerálódást a kiindulási aktivitás százalékában fejeztük ki.
Az anioncserélő kromatográfiát követően a találmány szerinti terméket méretkiszorításos kromatográfiás eljárással kezeltük. Azt találtuk, hogy a találmány szerinti terméknek még mindig 80%-os volt az aktivitása heparinnal vagy a nélkül vizes oldat formájában szobahőmérsékleten történő tárolást követően, míg azok a termékek, amelyeken nem végeztünk méretkiszorításos kromatográfiát 7 nap elteltével csupán 20%-os aktivitást mutattak.
Claims (14)
1. Eljárás von Willebrand-faktort (vWF) tartalmazó hemosztatikus aktivitású készítmény előállítására emberi vérplazmafrakcióból oly módon, hogy
1. a vWF-t tartalmazó emberi vérplazmafrakciót kromatográfiás úton olyan anioncserélő anyagon tisztítjuk, amelyen az anioncserélő csoportok oltott polimerstruktúrákon (sűrűn elágazó polimer anyagokon) találhatók, leválasztva a vWF-t tartalmazó frakciót, azzal jellemezve, hogy
II. a kapott frakciót ezután méretkizárásos kromatográfiával tisztítjuk hőstabil vWF-tartalmú készítményt állítva elő; és
III. a készítményt liofilizált állapotban a vírusinaktiválás céljából 80 °C feletti hőmérsékletre hevítjük.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a hőstabil készítmény és a hőkezelt készítmény a HPLC gélszűréses elemzéskor csak egy csúcsot eredményez.
3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a készítményt 90 °C feletti hőmérsékletre, különösen 100 °C-ra melegítjük.
4. A 2. vagy 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a készítményt legalább 1 óra és 5 óra közötti ideig, előnyösen 2-3 óra közötti ideig melegítjük.
5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a frakciót emellett legalább egy
HU 225 992 Β1 adszorpciós és/vagy affinitáskromatográfiás eljárással is tisztítjuk.
6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a méretkizárásos kromatográfiás tisztítást a fehérjetisztítás utolsó lépéseként hajtjuk 5 végre.
7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az említett frakciót összegyűjtött emberi plazmából tisztítjuk.
8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás- 10 sál előállítható vWF-t tartalmazó véralvadásgátló hatású készítmény.
9. A 8. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a készítmény nem tartalmaz fertőző vérből származó vírusokat, főként HIV-, HBV-, HCV-, 15 HAV- és parvovírusokat.
10. A 8. vagy 9. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy nagy molekulatömegű vWF-t tartalmaz, és az elektroforéziselemzés minimum 13-16 multimersávot jelez.
11. A 8-10. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a ristocitin kofaktor vWFantigénhez viszonyított arányával mért vWF-aktivitási arány legalább 0,8.
12. A 8-11. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy natív formájú Vili faktort is tartalmaz.
13. A 8-12. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy immunoglobulinokat, fibrinogént, fibronectint, valamint inter-alfa-tripszin-inhibitort az immunokémiai detektálási határ alatti mennyiségben tartalmaz.
14. A 8-13. igénypontok bármelyike szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy vWF-faktort natív formában és fragmentumoktól mentesen tartalmazza.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP00108430A EP1148063A1 (de) | 2000-04-18 | 2000-04-18 | Haemostatisch aktives vWF enthaltendes Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung |
| PCT/EP2001/003819 WO2001079260A1 (de) | 2000-04-18 | 2001-04-04 | Haemostatisch aktives vwf enthaltendes präparat und verfahren zu seiner herstellung |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0301211A2 HUP0301211A2 (hu) | 2003-07-28 |
| HUP0301211A3 HUP0301211A3 (en) | 2005-12-28 |
| HU225992B1 true HU225992B1 (en) | 2008-02-28 |
Family
ID=8168496
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0301211A HU225992B1 (en) | 2000-04-18 | 2001-04-04 | Haemostatically active preparation containing vwf and method for the production thereof |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7166709B2 (hu) |
| EP (2) | EP1148063A1 (hu) |
| JP (1) | JP4976634B2 (hu) |
| KR (1) | KR100685448B1 (hu) |
| CN (1) | CN100448888C (hu) |
| AT (1) | ATE306494T1 (hu) |
| AU (2) | AU6383501A (hu) |
| BR (1) | BR0110193A (hu) |
| CA (1) | CA2406626C (hu) |
| CZ (1) | CZ303932B6 (hu) |
| DE (1) | DE50107689D1 (hu) |
| DK (1) | DK1274721T3 (hu) |
| EA (1) | EA006209B1 (hu) |
| EE (1) | EE200200595A (hu) |
| ES (1) | ES2247117T3 (hu) |
| HU (1) | HU225992B1 (hu) |
| IL (2) | IL152173A0 (hu) |
| MX (1) | MXPA02010017A (hu) |
| NO (1) | NO324773B1 (hu) |
| RS (1) | RS50835B (hu) |
| SI (1) | SI1274721T1 (hu) |
| UA (1) | UA76714C2 (hu) |
| WO (1) | WO2001079260A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA200208396B (hu) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1148063A1 (de) * | 2000-04-18 | 2001-10-24 | Octapharma AG | Haemostatisch aktives vWF enthaltendes Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung |
| ITLU20070007A1 (it) * | 2007-05-07 | 2008-11-08 | Kedrion Spa | Processo cromatografico per l'ottenimento di un complesso fviii/vwf con differenti rapporti tra le due proteine da utilizzare nella terapia della emofilia a e nella malattia di von willebrand. |
| FR2920429B1 (fr) * | 2007-08-30 | 2012-10-05 | Lfb Biotechnologies | Procede de purification du facteur viii et du facteur von willebrand |
| US11197916B2 (en) | 2007-12-28 | 2021-12-14 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Lyophilized recombinant VWF formulations |
| BRPI0821474B8 (pt) | 2007-12-28 | 2021-05-25 | Baxalta GmbH | formulação farmacêutica líquida estável |
| KR101507718B1 (ko) | 2008-06-24 | 2015-04-10 | 체에스엘 베링 게엠베하 | 연장된 생체내 반감기를 갖는 인자 ｖｉｉｉ, 폰 빌레브란트 인자 또는 이들의 복합체 |
| TWI508735B (zh) | 2008-10-21 | 2015-11-21 | 巴克斯特國際公司 | 凍乾的重組ｖｗｆ調配物 |
| IT1396528B1 (it) * | 2009-01-19 | 2012-12-14 | Kedrion Spa | Nuovo processo di purificazione altamente selettivo di due proteine plasmatiche: von willebrand factor (vwf) e fibronectina (fn). |
| CA2801116C (en) * | 2010-06-01 | 2019-02-12 | Baxter International Inc. | Process for making dry and stable hemostatic compositions |
| US9371355B2 (en) | 2010-09-20 | 2016-06-21 | Octapharma Ag | Process for production of fibrinogen |
| US9488625B2 (en) | 2010-12-15 | 2016-11-08 | Baxalta GmbH | Purification of factor VIII using a conductivity gradient |
| US10064406B2 (en) * | 2011-01-06 | 2018-09-04 | Cytosorbents Corporation | Polymeric sorbent for removal of impurities from whole blood and blood products |
| CN104321340B (zh) | 2012-03-13 | 2018-11-09 | 欧克塔医药公司 | 用于生产纤维蛋白原的改进工艺及其生产的纤维蛋白原 |
| CN104411716B (zh) | 2012-04-24 | 2018-09-07 | 诺和诺德股份有限公司 | 适用于治疗血友病的化合物 |
| EP2796145B1 (en) | 2013-04-22 | 2017-11-01 | CSL Ltd. | A covalent complex of von willebrand factor and faktor viii linked by a disulphide bridge |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT389815B (de) * | 1984-03-09 | 1990-02-12 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutprodukten |
| FR2632309B1 (fr) | 1988-06-07 | 1990-08-24 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de purification par voie chromatographique de proteines, notamment de facteur viii, et les produits obtenus |
| ES2053684T3 (es) | 1988-11-05 | 1994-08-01 | Octapharma Ag | Procedimiento para preparar un factor antihemofilico, altamente puro, no infeccioso, mediante cromatografia. |
| FR2673632A1 (fr) * | 1991-03-08 | 1992-09-11 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de preparation de concentre de facteur von willebrand humain de tres haute purete, approprie a un usage therapeutique. |
| FR2681867B1 (fr) * | 1991-09-26 | 1993-12-31 | Pasteur Merieux Serums Vaccins | Procede de purification du facteur viii et preparations obtenues. |
| DE4204694C3 (de) * | 1992-02-01 | 1995-10-12 | Octapharma Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem Faktor VIII mittels Anionenaustauscher-Chromatographie |
| JP3133338B2 (ja) * | 1992-12-16 | 2001-02-05 | イムノ・アクチエンゲゼルシャフト | ウイルス的に安全な生物学的組成物の調製方法 |
| DE4435392B4 (de) * | 1994-10-04 | 2008-02-07 | Immuno Ag | Verfahren zur Trennung von vWF in hochmolekularen vWF und niedermolekularen vWF |
| DE4437544A1 (de) * | 1994-10-20 | 1996-04-25 | Behringwerke Ag | Einsatz von vWF-enthaltenden Konzentraten als Kombinationstherapie bei Therapie mit Antithrombotika und Fibrinolytika |
| US6005077A (en) * | 1995-11-10 | 1999-12-21 | Immuno Aktiengesellschaft | Use of von willebrand factor and pharmaceutical formulation |
| AT403764B (de) * | 1996-03-15 | 1998-05-25 | Immuno Ag | Stabiler faktor viii/vwf-komplex |
| AT404358B (de) * | 1997-02-04 | 1998-11-25 | Immuno Ag | Verfahren zur chromatographischen reinigung bzw. fraktionierung von von willebrand-faktor aus einem vwf-hältigen ausgangsmaterial |
| US6531577B1 (en) * | 1997-12-15 | 2003-03-11 | Hemasure Denmark A/S | von Willebrand factor (vWF)-containing preparation, process for preparing vWF-containing preparations, and use of such preparations |
| EP1148063A1 (de) * | 2000-04-18 | 2001-10-24 | Octapharma AG | Haemostatisch aktives vWF enthaltendes Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung |
-
2000
- 2000-04-18 EP EP00108430A patent/EP1148063A1/de not_active Withdrawn
-
2001
- 2001-04-04 IL IL15217301A patent/IL152173A0/xx active IP Right Grant
- 2001-04-04 SI SI200130460T patent/SI1274721T1/sl unknown
- 2001-04-04 MX MXPA02010017A patent/MXPA02010017A/es active IP Right Grant
- 2001-04-04 KR KR1020027013892A patent/KR100685448B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-04-04 RS YUP-784/02A patent/RS50835B/sr unknown
- 2001-04-04 AU AU6383501A patent/AU6383501A/xx active Pending
- 2001-04-04 EP EP01938084A patent/EP1274721B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-04 US US10/257,375 patent/US7166709B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-04 EA EA200201104A patent/EA006209B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-04-04 JP JP2001576857A patent/JP4976634B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-04 CZ CZ20023454A patent/CZ303932B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-04-04 DK DK01938084T patent/DK1274721T3/da active
- 2001-04-04 CA CA2406626A patent/CA2406626C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-04 AT AT01938084T patent/ATE306494T1/de active
- 2001-04-04 EE EEP200200595A patent/EE200200595A/xx unknown
- 2001-04-04 WO PCT/EP2001/003819 patent/WO2001079260A1/de active IP Right Grant
- 2001-04-04 DE DE50107689T patent/DE50107689D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-04 BR BR0110193-5A patent/BR0110193A/pt not_active Application Discontinuation
- 2001-04-04 HU HU0301211A patent/HU225992B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2001-04-04 UA UA2002108257A patent/UA76714C2/uk unknown
- 2001-04-04 ES ES01938084T patent/ES2247117T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-04-04 CN CNB018082297A patent/CN100448888C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-04-04 AU AU2001263835A patent/AU2001263835B2/en not_active Ceased
-
2002
- 2002-10-08 IL IL152173A patent/IL152173A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-10-17 NO NO20025007A patent/NO324773B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-10-17 ZA ZA200208396A patent/ZA200208396B/en unknown
-
2007
- 2007-01-04 US US11/649,357 patent/US7985846B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7985846B2 (en) | Hemostatically active vWF-containing preparation and process for the preparation thereof | |
| AU645172B2 (en) | Process for an industrial-scale preparation of a standardized human von Willebrand factor concentrate of very high purity and suitable for therapeutic use | |
| CA1329542C (en) | Plasma and recombinant protein formulations in low ionic strength media | |
| JP5662988B2 (ja) | 可溶化血漿フラクションから蛋白質フィブリノーゲン、第ｘｉｉｉ因子および生物学的グルーを分離し、そして該蛋白質の凍結乾燥濃縮物を調製するための方法 | |
| CA2491716C (en) | Processes for the preparation of fibrinogen | |
| JP4250771B2 (ja) | カチオン交換クロマトグラフィーによる因子ＶＩＩＩ／ｖＷＦ複合体の精製方法 | |
| DK1632501T3 (en) | A process for the preparation of a concentrate of von Willebrand factor (FVW) by means of chromatography, and the concentrate of FVW and may therefore be obtained | |
| WO1998030230A1 (fr) | Compositions proteinees et procede de production | |
| CA2208928C (en) | Selective stabilization of protein during viral inactivation | |
| PL203508B1 (pl) | Sposób uzyskiwania z frakcji osocza ludzkiego preparatu aktywnego hemostatycznie oraz preparat aktywny hemostatycznie otrzymany tym sposobem | |
| JP2931319B2 (ja) | 血液凝固第▲ｖｉｉｉ▼因子の製造法 | |
| JPH1053534A (ja) | α２プラスミンインヒビターの製造方法 | |
| Teh | Preparation of intermediate-purity factor VIII concentrate by direct gel filtration of cryoprecipitate | |
| LV10193B (en) | Highly clean and therapeutically usable standardized method for producing Willebrand factor concentrate for industrial production |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |