JP4759612B2 - 癌治療化合物のin vitroにおける同定方法 - Google Patents
癌治療化合物のin vitroにおける同定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4759612B2 JP4759612B2 JP2008505911A JP2008505911A JP4759612B2 JP 4759612 B2 JP4759612 B2 JP 4759612B2 JP 2008505911 A JP2008505911 A JP 2008505911A JP 2008505911 A JP2008505911 A JP 2008505911A JP 4759612 B2 JP4759612 B2 JP 4759612B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- choline kinase
- cancer
- protein
- expression
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/48—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase
- C12Q1/485—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving transferase involving kinase
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/502—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects
- G01N33/5023—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing non-proliferative effects on expression patterns
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57415—Specifically defined cancers of breast
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
- G01N33/57496—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites involving intracellular compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/136—Screening for pharmacological compounds
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
a)当該個体の検体中の、コリンキナーゼαタンパク質、コリンキナーゼα遺伝子のmRNA、又は対応するcDNAを検出及び/又は定量化すること、及び
b)個体の検体中に検出された、コリンキナーゼαタンパク質の量、コリンキナーゼα遺伝子のmRNAの量、又は対応するcDNAの量を、対照の個体の検体中又は同一の個体の以前の検体中に検出されたコリンキナーゼαタンパク質の量、コリンキナーゼα遺伝子のmRNAの量、又は対応するcDNAの量と、或いは正常基準値と比較すること
を含む方法を提供する。
a)腫瘍細胞、好ましくは、肺、乳房、結腸又は直腸の腫瘍細胞の培養物を、適切な条件下で適切な期間、相互作用するように候補化合物と接触させること、
b)コリンキナーゼα遺伝子又はコリンキナーゼαタンパク質の発現レベルを検出及び定量化すること、及び
c)当該発現レベルを、候補化合物を用いて治療されていない腫瘍細胞の対照培養物の発現レベルと比較すること
を含む方法も提供する。
a)コリンキナーゼαタンパク質中に存在する1つ又は複数のエピトープに対して特異的である、抗体又は抗体の組合せ、好ましくは、ヒトモノクローナル抗体又はヒト化モノクローナル抗体(抗体の断片、一本鎖抗体又は抗イディオタイプ抗体であることもできる)、
b)コリンキナーゼαタンパク質の発現及び/又は活性を阻害する、小型の有機又は無機の分子、ペプチド、リンペプチド、アンチセンス分子、リボザイム、siRNA、三重らせん分子等を含むが、それらに限定されない、毒素、放射性原子を有する分子又は化学療法剤等の細胞障害性薬剤、並びに
c)コリンキナーゼαタンパク質の1つ又は複数の機能を阻害する、コリンキナーゼαタンパク質のアンタゴニスト化合物
によって形成される群から選ぶことができる。
アイソフォームのコリンキナーゼ活性
図1に示すように、酵素CKα2(52kDa、アミノ酸457個)及びCKβ1(45kDa、アミノ酸395個)は共に、ATP及びマグネシウムの存在下でコリンからホスホリルコリンを産生するそれらの能力によって決定すると、強力なコリンキナーゼ活性を有する(図1A)。この活性は、両方の組換え体、大腸菌(Escherichia coli)中にも、ヒトHEK293細胞内への形質移入後にも、発現しているのが認められる。しかし、両方の酵素はコリンキナーゼ活性を有するという事実にも関わらず、生存している細胞のホスホリルコリンの細胞内レベルは、同等には変化せず、コリンキナーゼβを過剰発現している細胞内では、実質的に検出不可能である(図1B)。これらの結果は、これらの2種のタンパク質の生理学的な調節及び生物学的な機能、したがって、腫瘍形成におけるこれらの挙動には、差がある可能性があることを示唆している。
抗体の特異性
コリンキナーゼα酵素、半精製され、産生段階では抗原として、過程の残りの段階では産生の対照として発現させたタンパク質、を認識するポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体が開発されている。コリンキナーゼαに対して開発されているにもかかわらず、両方の酵素(CKα及びCKβ)は、それらの配列を通して全体で65%の相同性を有し、コリン結合ドメイン及び触媒活性ドメイン等の一部の保存領域では相同性が75%に達するという事実から、どのアイソザイムが、産生されたポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体を認識することができるかを調べることが必要である。我々は、使用したポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体の両方が、コリンキナーゼαに対して特異的であり、これらは、コリンキナーゼβを認識しないことを確認している。このために、コリンキナーゼαタンパク質及びコリンキナーゼβタンパク質を、ヒトHEK293T細胞中で過剰発現させ、これらの2種のタンパク質が存在し、活性であることを調べた(図2A)後、それらを、これを用いて過去に研究されたポリクローナル抗体[Ramirez de Molina,A.,Gutierrez,R.,Ramos,M.A.,Silva,J.M.,Silva,J.,Sanchez,J.J.,Bonilla,F.,Lacal,J.C.Oncogene 21,4317−4322(2002);Ramirez de Molina,A.,Rodriguez−Gonzalez,A.,Gutierrez,R.,Martinez−Pinero,L.,Sanchez,J.J.,Bonilla,F.,Rosell,R.,Lacal,J.C.Biochem.Biophys.Res.Commun.296,580−583(2002)]、及びコリンキナーゼαに対して産生させた新たなモノクローナル抗体の両方を用いて、免疫検出の手法(ウエスタンブロット)によって分析した。図2Bに示すように、これは、これらの抗体のうちの2種を用いた例を示すが、活性が80倍増加する条件でのコリンキナーゼβの過剰発現によってさえも、これらの抗体のうちで、このアイソフォームを認識するものはないが、コリンキナーゼαは、全ての場合において同一の条件及び内在性の対照のレベルの両方において高度に認識されている。これらの結果は、このポリクローナル抗体を使用したこのグループの過去の研究は、コリンキナーゼαを、ヒト腫瘍に由来する細胞系内及び分析した腫瘍自体の中で過剰発現したアイソザイムとして定義していることを示している。
腫瘍に対する特異性:異なるヒト腫瘍中でのコリンキナーゼαの変化。
コリンキナーゼαに対する特異性が証明されている抗体が入手可能であることから、乳癌、結腸癌及び肺癌等の先進国で今日最も重要な腫瘍のうちのいくつかにおけるコリンキナーゼαの発現の可能な変化を研究ができるようになった。本研究を行うために、各患者がこれらのタイプの癌のうちの1種を有する38から50人の異なる患者からの検体のパラフィン切片を作製し、コリンキナーゼαの発現を免疫組織化学(IHQ)、細胞及び組織の不可欠な部分である生体分子成分を「in situ(生体内原位置)」において検出及び同定することを可能にし、且つどこの病院の病理解剖部でも自動化して行うことができる手法によって分析している。これらの患者の乳房、結腸又は肺の検体から、
*いずれの症例も、コリンキナーゼαを認識する抗体を用いた腫瘍の染色は、高度に特異的であり、腫瘍組織と正常な隣接する組織とを明確に区別することができ;
*正常な組織が染色された症例は1つもなく;
*コリンキナーゼα酵素は、このタイプの腫瘍では62から100%の間の範囲の発生率で過剰発現し、ヒトの腫瘍形成においては、本アイソフォーム、コリンキナーゼα、が深く関係することを実証していること
が見出された。
腫瘍に対する特異性:コリンキナーゼα酵素の発癌挙動
今日最も重要なヒト腫瘍のうちのいくつかにおけるコリンキナーゼαの調節不全の非常に高い発生率を考慮して、本タンパク質が単独で発癌能力を有するか否か、すなわち、コリンキナーゼαに発癌活性があるか否かを決定する研究を行った。本研究を行うために、まず、本遺伝子が足場非依存性培地中で増殖能を与えるか否かを研究した。これは、形質転換能を測定することになる。ヒトHEK293T細胞に、を対照としての空のベクター及びコリンキナーゼα発現ベクターを用い形質移入し、軟寒天中に播種した。図6に認められるように、本タンパク質の過剰発現は、ヒトHEK293T細胞及びイヌ上皮MDCK細胞の両方の発癌の形質転換を誘導するのに十分である。
薬理学的特異性
ヒト腫瘍におけるコリンキナーゼαアイソフォームの発癌活性及びその高い発生率の過剰発現を確認し、次いで、阻害剤MN58b[Hernandez−Alcoceba,R.,Saniger,L.,Campos,J.,Nunez,M.C.,Khaless,F.,Gallo,M.A.,Espinosa,A.,Lacal,J.C.Oncogene,15,2289−2301(1997);Hernandez−Alcoceba,R.,Fernandez,F.,Lacal J.C.Cancer Res.59,3112−3118(1999);Ramirez de Molina A.,Banez−Coronel M.,Gutierrez R.,Rodriguez Gonzalez A.,Olmeda D.,Megias D.,Lacal J.C.Cancer Res.64:6732−6739(2004)]の抗腫瘍効果が、本コリンキナーゼαアイソフォームに対して特異的であるか、そうではなく、阻害剤がコリンキナーゼβアイソフォームと相互作用することができることにも起因する可能性があるかを研究した。コリンキナーゼα及びコリンキナーゼβの2種のアイソフォームは、基質結合ドメイン及び触媒領域において75%もの相同性を有することから、この確認は必要である。そのために、2種のコリンキナーゼアイソフォーム(CKα及びCKβ)を、大腸菌株中で発現させた。この大腸菌は、コリンキナーゼ活性を欠き、したがって、何らかの酵素活性が観察されるとすると、それは、もっぱら組換えによって発現させたコリンキナーゼアイソフォームによるものである。図9に認められるように、コリンキナーゼαの酵素活性は、MN58bを用いた処理によって、同一の阻害剤がβアイソフォームに及ぼす効果より顕著な効果で影響を受けている。事実、MN58bは、コリンキナーゼαに対して、コリンキナーゼβに対してより20倍活性が高い。
遺伝子的特異性
これらの結果は全て、新たな抗腫瘍戦略の設計のための新しい治療標的としてのコリンキナーゼαの可能性を支持している。しかし、阻害剤MN58bの場合のように、化学阻害剤が特異的に特定の酵素に対して設計されているにもかかわらず、それらの抗増殖作用は、研究者が気づいていない効果を用いてもたらされている場合がある。文献には、特異的にキナーゼに対して設計された阻害剤が、相互に密接に関連してすらいない、その他のキナーゼにも影響を与えることを示す多数の実例が存在する。siRNA(短い干渉RNA)の使用によって、特定の酵素との干渉の効果をより正確に確立することを可能にする最近の過去数年で開発されたアプローチがある。これは、特定のタンパク質に対するmRNAを、残りの細胞タンパク質に影響を与えることなく、正確に且つ選択的に排除することができる。ここでは、コリンキナーゼαに対して特異的な阻害剤MN58bの使用による薬理学的な干渉は、siRNAの手法によるコリンキナーゼαの特異的阻害によって、遺伝子レベルで確証されることを確認した。本手法は、ChoKαを、癌における新たな治療標的として決定的に確証することを可能にするであろう。この目的のために、コリンキナーゼαのメッセンジャーRNAとハイブリダイズすることができる、したがって、本タンパク質の発現を特異的に遮断することができるオリゴヌクレオチド(これは、siCHKAと呼ばれている)を生成した。まず、本siRNAが、ヒトHEK293T細胞におけるコリンキナーゼα、内在性のタンパク質及びGSTに融合させて同一の細胞に形質移入したChoKαの両方、の発現を効率的に遮断することを確認した(図11)。
コリンキナーゼαの乳癌に対する効果:生存率
コリンキナーゼαの腫瘍の発生及び発展における関与を確証する定量的なデータを得るために、コリンキナーゼαが特異的に関係すると思われるタイプの癌(乳癌、肺癌及び膀胱癌)を有する患者における発現及び当該患者の発展の予後との可能な関係を定量化する追加のアッセイを行った。
コリンキナーゼαの肺癌における効果:過剰発現レベル及び生存率
肺癌におけるコリンキナーゼαの過剰発現の重要性に関する研究を補完するために、いくつかの試験を行った。
a腫瘍が小さく、リンパ節の関与は殆ど又は全くなく、転移もない段階
b腫瘍がより大きく、リンパ節が関与し、転移がある段階
コリンキナーゼαの膀胱癌における効果:過剰発現レベル及び生存率
また、膀胱癌の患者においても、類似の研究を行った。まず、膀胱癌の患者に由来する細胞系の当該酵素に対応するmRNAのレベルを、ここでも、肺癌の場合に関する実施例8で記載したものと同様の、特異的なTaqmanプローブを用いる自動化リアルタイム定量PCR反応によって検出した。HT1376、J82、SW780、TCCSup及びUMVC3の系を使用し、データを、正常な不死化膀胱細胞UrotSaに対して対数目盛で表した。結果を、図19aに示す。データは、モノクローナル抗体を用いる免疫測定法による各々のこれらの細胞系中のタンパク質のレベルに関する検出データ(図19b)、及びその中の検出可能な酵素活性の評価(図19c)で補完された。異なる細胞系は、正常な不死化UrotSa細胞と比較して増加したChoKαのレベルを示し、また、膀胱癌に由来する細胞中の本タンパク質の発現の増加にも、コリンキナーゼ酵素の活性の同様な増加が伴うことを観察することができる。
遺伝子的特異性:誘導性の干渉のモデル
トランジェントアッセイで行った、実施例6に記載したアッセイで実証したように、腫瘍細胞におけるChoKαの干渉は、アポトーシスによる細胞死を誘導し、致命的であることを考慮すると、この種の研究で干渉構築物を発現する安定した細胞集団を得ることは不可能ではない。トランジェントアッセイでは、少ないパーセントの可変性の細胞集団が影響を受けるが、全集団が影響を受けることはなく、これが、結果を覆い隠してしまう。構築物の効果を、構築物を均質に発現する集団上で研究するのがよりよいであろう。したがって、体質的に安定なモデルである必要はないであろう。このことから、ChoKαの発現が均質に干渉される集団を得ることができる誘導性の干渉モデルが必要になる。
発癌におけるChokβの過剰発現の可能な効果の評価
発癌においてコリンキナーゼβ(ChoKβ)の過剰発現が有する可能性がある効果を評価し、異なる癌性の組織及び癌性の組織に由来する細胞系に認められるコリンキナーゼの活性の増加の原因は、もっぱらコリンキナーゼαとしてもよかろうものなのか、それともコリンキナーゼβも関与する可能性があるものなのかを確証するために、いくつかのアッセイを行った。
Claims (5)
- 癌を有する患者の予後を検定するためのin vitroにおける方法であって、
患者から抽出した癌性の組織検体中のコリンキナーゼαタンパク質の発現レベルを、前記検体中の、コリンキナーゼαタンパク質のメッセンジャーRNAのレベル、前記タンパク質の濃度及びその酵素活性から選択される、コリンキナーゼαタンパク質に関連のある少なくとも1種のパラメータを測定し、得られた値を1つ又は複数の正常な非癌性の組織検体に対応する値と比較することによって評価することを含む、方法。 - 前記患者の生存期間を検定するための請求項1に記載の方法。
- 前記癌が、肺癌、乳癌、結腸直腸癌又は膀胱癌である、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記メッセンジャーRNAのレベルを、全RNA抽出液に存在するmRNAを増幅し、前記mRNAの増幅産物を定量することにより測定する、請求項1から3の何れか1項に記載の方法。
- リアルタイム定量PCRによって実行される、請求項4に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
ESP200500875 | 2005-04-13 | ||
ES200500875 | 2005-04-13 | ||
PCT/ES2006/070047 WO2006108905A1 (es) | 2005-04-13 | 2006-04-12 | Método in vitro para identificar compuestos para terapia del cáncer |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2008535511A JP2008535511A (ja) | 2008-09-04 |
JP4759612B2 true JP4759612B2 (ja) | 2011-08-31 |
Family
ID=37087793
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008505911A Expired - Fee Related JP4759612B2 (ja) | 2005-04-13 | 2006-04-12 | 癌治療化合物のin vitroにおける同定方法 |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US8481256B2 (ja) |
EP (2) | EP1889920B1 (ja) |
JP (1) | JP4759612B2 (ja) |
KR (3) | KR101352142B1 (ja) |
CN (3) | CN103215351A (ja) |
AT (1) | ATE454465T1 (ja) |
BR (1) | BRPI0607507A2 (ja) |
CA (1) | CA2604803A1 (ja) |
DE (1) | DE602006011607D1 (ja) |
DK (1) | DK1889920T3 (ja) |
ES (1) | ES2341729T3 (ja) |
MX (1) | MX2007012668A (ja) |
PL (1) | PL1889920T3 (ja) |
PT (1) | PT1889920E (ja) |
RU (1) | RU2434946C2 (ja) |
WO (1) | WO2006108905A1 (ja) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007138143A2 (es) | 2006-05-29 | 2007-12-06 | Consejo Superior De Investigaciones Cientificas | Anticuerpos monoclonales anti-colina quinasa alfa y su uso en técnicas analíticas, de diagnóstico del cáncer y en la preparación de medicamentos |
KR20100136997A (ko) | 2008-04-11 | 2010-12-29 | 싸이토테크 랩스, 엘엘씨 | 암세포에서 아폽토시스를 유도하는 방법 및 용도 |
MX2011000147A (es) * | 2008-07-04 | 2011-05-24 | Traslational Cancer Drugs Pharma S L | Metodos para el tratamiento y diagnostico del cancer. |
US20100068302A1 (en) * | 2008-09-17 | 2010-03-18 | Traslational Cancer Drugs Pharma, S.L. | Methods and compositions for the treatment of cancer |
EP2721174A1 (en) * | 2011-06-20 | 2014-04-23 | Traslational Cancer Drugs Pharma, S.L. | Method for predicting the clinical response to chemotherapy in a subject with cancer |
JP2013230145A (ja) * | 2012-04-30 | 2013-11-14 | Masahiko Sato | 細胞集団の状態を評価するための方法、候補化合物の発癌性を評価するための方法、潜在的な抗癌化合物の抗癌活性を評価するための方法及び治療用細胞集団の品質を評価するための方法 |
US9212224B2 (en) | 2012-05-15 | 2015-12-15 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibodies that bind PD-L1 and uses thereof |
WO2015028662A1 (en) | 2013-08-30 | 2015-03-05 | Consejo Superior De Investigaciones Cientificas (Csic) | Compositions and methods for characterization and amelioration of rheumatoid arthritis |
RU2552305C1 (ru) * | 2014-04-04 | 2015-06-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт физиологии природных адаптаций Уральского отделения Российской академии наук | Способ прогнозирования риска развития злокачественных новообразований |
JP6932693B2 (ja) | 2015-10-08 | 2021-09-08 | ザイムワークス,インコーポレイテッド | カッパ及びラムダ軽鎖を含む抗原結合ポリペプチド構築物及びその使用 |
RU2657417C1 (ru) * | 2017-05-29 | 2018-06-13 | Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Московской области "Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского" (ГБУЗ МО МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского) | Способ прогнозирования риска озлокачествления узловых образований у больных с эндокринологическими заболеваниями |
RU2713795C1 (ru) * | 2019-06-13 | 2020-02-07 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Способ прогнозирования возможности озлокачествления опухоли яичника у женщин репродуктивного возраста |
CN117849343A (zh) * | 2021-05-31 | 2024-04-09 | 浙江大学 | 基于CHKα的非代谢功能作为癌症治疗、诊断和预后预测之靶标的应用 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08500729A (ja) * | 1992-06-26 | 1996-01-30 | ザ トラスティーズ オブ プリンストン ユニバーシティ | P90抗体またはプローブを用いた前癌細胞または癌細胞の検出方法 |
JPH11510393A (ja) * | 1995-08-09 | 1999-09-14 | インスティチュート ナショナル ドゥ ラ セント エト ドゥ ラ リサーチェ メディカル | 白血病マーカーとしておよび乳癌の予後において有用な単離された核酸分子 |
JP2004515225A (ja) * | 2000-09-15 | 2004-05-27 | イオス バイオテクノロジー, インコーポレイテッド | 結腸直腸癌の診断方法、組成物および結腸直腸癌モジュレーターについてスクリーニングする方法 |
JP2004201684A (ja) * | 2002-12-16 | 2004-07-22 | Targetgen Inc | 乳癌の治療方法 |
WO2005001089A1 (ja) * | 2003-06-27 | 2005-01-06 | Seikagaku Corporation | 癌の検出方法 |
JP2005073548A (ja) * | 2003-08-29 | 2005-03-24 | National Cancer Center-Japan | 卵巣明細胞腺癌の検査、治療、および治療薬のスクリーニングのための、HNF−1βの利用 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4683195A (en) | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
JPH05243020A (ja) * | 1992-03-02 | 1993-09-21 | Rohm Co Ltd | チップネットワーク型抵抗器 |
JP3756612B2 (ja) * | 1997-03-18 | 2006-03-15 | ローム株式会社 | チップ型抵抗器の構造及びその製造方法 |
WO1999001876A1 (fr) * | 1997-07-03 | 1999-01-14 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Resistance et procede de fabrication |
JP4078042B2 (ja) * | 2001-06-12 | 2008-04-23 | ローム株式会社 | 複数の素子を有するチップ型電子部品の製造方法 |
JP3846312B2 (ja) * | 2002-01-15 | 2006-11-15 | 松下電器産業株式会社 | 多連チップ抵抗器の製造方法 |
US20030186241A1 (en) * | 2002-03-20 | 2003-10-02 | Ken-Shwo Dai | Human choline/ethanolamine kinase (HCEK)-related gene variant associated with lung cancers |
ES2277568B1 (es) | 2005-12-30 | 2008-04-01 | Consejo Superior De Investigaciones Cientificas | Derivados de triterpenoquinona y triterpenofenoles y su aplicacion para el tratamiento de tumores y enfermedades parasitarias. |
-
2006
- 2006-04-12 PT PT06725852T patent/PT1889920E/pt unknown
- 2006-04-12 KR KR20077026322A patent/KR101352142B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2006-04-12 BR BRPI0607507-0A patent/BRPI0607507A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2006-04-12 CA CA 2604803 patent/CA2604803A1/en not_active Abandoned
- 2006-04-12 KR KR1020137014648A patent/KR20130086060A/ko active IP Right Grant
- 2006-04-12 CN CN2013100987593A patent/CN103215351A/zh active Pending
- 2006-04-12 MX MX2007012668A patent/MX2007012668A/es active IP Right Grant
- 2006-04-12 ES ES06725852T patent/ES2341729T3/es active Active
- 2006-04-12 EP EP20060725852 patent/EP1889920B1/en not_active Not-in-force
- 2006-04-12 US US11/911,513 patent/US8481256B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-04-12 DK DK06725852T patent/DK1889920T3/da active
- 2006-04-12 CN CN2006800180309A patent/CN101405403B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2006-04-12 DE DE200660011607 patent/DE602006011607D1/de active Active
- 2006-04-12 CN CN2011101010882A patent/CN102228689A/zh active Pending
- 2006-04-12 AT AT06725852T patent/ATE454465T1/de active
- 2006-04-12 RU RU2007141930A patent/RU2434946C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2006-04-12 PL PL06725852T patent/PL1889920T3/pl unknown
- 2006-04-12 KR KR1020127031248A patent/KR101322705B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2006-04-12 JP JP2008505911A patent/JP4759612B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2006-04-12 EP EP10150087.4A patent/EP2246441B1/en not_active Not-in-force
- 2006-04-12 WO PCT/ES2006/070047 patent/WO2006108905A1/es active Application Filing
-
2011
- 2011-05-02 US US13/099,195 patent/US8901096B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2013
- 2013-06-06 US US13/911,753 patent/US20140023657A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08500729A (ja) * | 1992-06-26 | 1996-01-30 | ザ トラスティーズ オブ プリンストン ユニバーシティ | P90抗体またはプローブを用いた前癌細胞または癌細胞の検出方法 |
JPH11510393A (ja) * | 1995-08-09 | 1999-09-14 | インスティチュート ナショナル ドゥ ラ セント エト ドゥ ラ リサーチェ メディカル | 白血病マーカーとしておよび乳癌の予後において有用な単離された核酸分子 |
JP2004515225A (ja) * | 2000-09-15 | 2004-05-27 | イオス バイオテクノロジー, インコーポレイテッド | 結腸直腸癌の診断方法、組成物および結腸直腸癌モジュレーターについてスクリーニングする方法 |
JP2004201684A (ja) * | 2002-12-16 | 2004-07-22 | Targetgen Inc | 乳癌の治療方法 |
WO2005001089A1 (ja) * | 2003-06-27 | 2005-01-06 | Seikagaku Corporation | 癌の検出方法 |
JP2005073548A (ja) * | 2003-08-29 | 2005-03-24 | National Cancer Center-Japan | 卵巣明細胞腺癌の検査、治療、および治療薬のスクリーニングのための、HNF−1βの利用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
MX2007012668A (es) | 2008-03-11 |
DK1889920T3 (da) | 2010-05-10 |
EP2246441B1 (en) | 2015-12-16 |
KR101352142B1 (ko) | 2014-02-17 |
US8901096B2 (en) | 2014-12-02 |
PL1889920T3 (pl) | 2010-06-30 |
JP2008535511A (ja) | 2008-09-04 |
CN101405403B (zh) | 2013-07-10 |
BRPI0607507A2 (pt) | 2009-09-08 |
CA2604803A1 (en) | 2006-10-19 |
ATE454465T1 (de) | 2010-01-15 |
WO2006108905A1 (es) | 2006-10-19 |
CN101405403A (zh) | 2009-04-08 |
RU2434946C2 (ru) | 2011-11-27 |
US8481256B2 (en) | 2013-07-09 |
EP1889920B1 (en) | 2010-01-06 |
KR101322705B1 (ko) | 2013-10-29 |
PT1889920E (pt) | 2010-04-14 |
KR20130006703A (ko) | 2013-01-17 |
EP2246441A1 (en) | 2010-11-03 |
CN103215351A (zh) | 2013-07-24 |
EP1889920A1 (en) | 2008-02-20 |
KR20080080430A (ko) | 2008-09-04 |
ES2341729T3 (es) | 2010-06-25 |
KR20130086060A (ko) | 2013-07-30 |
US20090304575A1 (en) | 2009-12-10 |
US20110269948A1 (en) | 2011-11-03 |
DE602006011607D1 (de) | 2010-02-25 |
RU2007141930A (ru) | 2009-05-20 |
CN102228689A (zh) | 2011-11-02 |
US20140023657A1 (en) | 2014-01-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4759612B2 (ja) | 癌治療化合物のin vitroにおける同定方法 | |
JP4251357B2 (ja) | 前立腺癌発現プロファイル | |
JP5512125B2 (ja) | 前立腺癌における再発性遺伝子融合 | |
RU2651474C2 (ru) | Фосфодиэстераза 4d7 как маркер рака предстательной железы | |
AU2013284448B2 (en) | Use of markers in the diagnosis and treatment of prostate cancer | |
MX2010014280A (es) | Distintivos y determinantes asociados con metástasis y método para utilizarlos. | |
JP2023533873A (ja) | 癌用の予後バイオマーカー | |
JP4820092B2 (ja) | 転移のための新規な因子及びその使用 | |
KR20170141951A (ko) | Nckap1을 유효성분으로 포함하는 대장암 진단 또는 대장암 전이 예후 예측용 바이오마커 조성물 | |
MX2014000661A (es) | Letalidad sintetica y el tratamiento de cancer. | |
KR20180030347A (ko) | 폐암 질환의 진단용 마커 | |
JPWO2016143697A1 (ja) | Syt13、syt8、anos1発現量による胃癌腹膜播種の検査方法、検査キット、分子標的治療薬スクリーニング方法、及び治療薬 | |
KR20110096292A (ko) | 간암 진단용 마커로서의 socs6의 용도 | |
JP2011520456A (ja) | 抗癌療法に対する応答を予測するための組み合わせ方法 | |
WO2011153287A2 (en) | Materials and methods for diagnosing and predicting the course of prostate cancer | |
US20080015143A1 (en) | In Vitro Methods for Detecting Renal Cancer | |
EP1440080A2 (en) | Methods and compositions for the diagnosis and treatment of cellular proliferation disorders using 20750 | |
KR101927577B1 (ko) | 간암 바이오 마커로서 h2a.z.1의 용도 | |
US20130261167A1 (en) | ANCCA as a Diagnostic Biomarker and Therapeutic Target for Breast Cancers | |
Lacal et al. | In vitro cancer therapy compound identification method. | |
KR20220063630A (ko) | 췌장암 진단 또는 예후 예측용 조성물 및 이의 용도 | |
Class et al. | Patent application title: PROGNOSTIC AND/OR PREDICTIVE BIOMARKERS AND BIOLOGICAL APPLICATIONS THEREOF Inventors: Lorenzo Galluzzi (Paris, FR) Annick Harel-Bellan (Paris, FR) Guido Kroemer (Paris, FR) Ken Olaussen (Paris, FR) Jean-Charles Soria (Igny, FR) Assignees: INSTITUT GUSTAVE ROUSSY |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20090313 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100625 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20100927 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20101004 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20101025 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20101101 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20101122 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20101122 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20110506 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20110606 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140610 Year of fee payment: 3 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |