JP2909216B2 - 核酸増幅生成物のリアルタイム検出装置 - Google Patents
核酸増幅生成物のリアルタイム検出装置Info
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Description
cation)の分野に関し、より詳しくは、ポリメラーゼ連
鎖反応(polymerase chain reaction;PCR)のような核
酸増幅法からポリヌクレオチド生成物をリアルタイムに
測定する装置に関する。
分野において重要性が増している。例えば、Caskeyの
「サイエンス(Science)236」(1987年)第1223〜1228
頁;Landegren等の「サイエンス(Science)242」(1988
年、第229〜237頁);及びArnheim等の「年刊評論誌生
化学(Ann.Rev.Biochem.)61」(1992年、第131〜156
頁)を参照されたい。幾つかの核酸増幅体系の発展は、
この傾向に重要な役割を演じてきた。例えば、ポリメラ
ーゼ連鎖反応(PCR)については、Innis等の「PCRプロ
トコル(PCR Protocols)」(Academic Press社、ニュ
ーヨーク、1991年);McPherson等の「PCR:実際的適用
(PCR:A Practical Approach)」(IRL Press社、オッ
クスフォード、1991年)を、連結反応ベース増幅技術に
ついては、Baranyの「PCR法及びその適用(PCR Method
and Applications)1」(1991年、第5〜16頁)等を参
照されたい。
基配列決定、遺伝子地図、薬剤発見等への適用において
非常に重要な研究手段となっている。例えば、Arnheim
等の上記文献;Gilliland等の「Proc.Natl.Acad.Sci.,8
7」(1990年、2725〜2729頁);Bevan等の「PCR法及びそ
の適用1」(1992年、222〜228頁);Green等の「PCR法
及びその適用1」(1991年、77〜90頁);及びBlackwel
l等の「サイエンス250」(1990年、1104〜1110頁)を参
照されたい。
具が開発されている。例えば、Johnson等の米国特許第
5,038,852号(「コンピュータ制御形熱サイクラー(Com
puter−controlled thermal cycler)」);Wittwer等の
「核酸研究(Nucleic Acids Reserch)17」(1989年、4
353〜4357頁)(キャピラリチューブPCR);Hallsbyの米
国特許第5,187,084号(「空気ベース温度制御(air−ba
sed temperature control)」);Garner等の「バイオ技
術(Biotechniques)14」(1993年、第112〜115頁)(8
64枚のウェル板における高スループットPCR);Wilding
等の国際出願第PCT/US93/04039号(「微細加工構造にお
けるPCR(PCR in micro−machined structure)」);Sc
hnipelsky等の欧州特許第90301061.1(公開番号第03815
01 A2号)(「使い捨て形単一使用PCR装置(disposabl
e,single use PCR device)」)等を参照されたい。PCR
器具開発に重要な設計目的の基礎として、微細温度制
御、多試料熱サイクリングにおける試料−試料変異性
(sample−to−sample variability)の最小化、前/後
PCR処理段階の自動化、高速サイクリング、試料体積の
最小化、増幅生成物のリアルタイム測定、相互汚染又は
試料排出の最小化等がある。より詳しくは、PCRを閉鎖
反応チャンバ内で行ない且つリアルタイムにモニタリン
グできる器具の設計が強く望まれている。閉反応チャン
バは相互汚染を防止する上で好ましい。例えば、Higuch
i等の「バイオテクノロジー(Biotechnology)10」(19
92年、第413〜417頁)及び「バイオテクノロジー11」
(1993年、1026〜1030頁);及びHolland等の「Proc.Na
tl.Acad.Sci.88」(1991年、第7276〜7280頁)を参照さ
れたい。このような設計目的の成功裏の実現は、高頻度
の偽陽性及び偽陰性によってPCRベース処置の価値を極
めて低下させる虞れのある診断試料の分析に特に望まれ
ることは明らかである。濃い濃度の相対値は、PCR中に
相対濃度値のヒストリーを考慮に入れることにより求め
られるため、PCRのリアルタイムモニタリングにより、
多ターゲット増幅(multi−target amplification)に
おける出発ターゲットDNA濃度の一層正確な定量化が可
能になる。また、リアルタイムモニタリングは、PCRイ
ンヒビターが試料中に存在するか否かを示すPCRの効率
を評価することを可能にする。
文献には、PCR中に増幅生成物のリアルタイム測定を行
なう蛍光ベースアプローチが提案されている。このよう
なアプローチとして、(臭化エチジウムのような)挿入
染料(i−ntercalating dyes)を用いて、存在する二
重鎖DNAの量を表示するもの、又は、蛍光生成物(その
濃度は存在する二重鎖DNAの量に比例する)を放出させ
るため増幅中に切断される蛍光発光−消光対を含むプロ
ーブを用いるもの(いわゆる「タック−マン(Tac−Ma
n)」アプローチ)がある。
バックグラウンドに対して行なわなくてはならないの
で、これらのアプローチの成功裏の実施は妨げられてい
る。かくして、加熱サイクル及び冷却サイクル中のチャ
ンバ内の凝縮の形成、光路内での気泡、溶液中の粒子又
は屑片の形成、試料体積の差異(従って、信号の発生及
び吸収の差異)等の小さな器具雑音源であっても、蛍光
信号の信頼性のある測定を妨げている。
る増幅生成物の蛍光指標(fluorescent indicators)の
安定し且つ信頼性のあるリアルタイム測定が可能な装置
を提供することが望まれている。
測定を行なう装置に関する。本発明の好ましい実施例で
は、励起ビームは反応混合物中に合焦され、該反応混合
物は、(i)第1蛍光信号を発生できる第1蛍光指標を
含有し、第1蛍光信号の強度は、励起ビームにより照射
される反応混合物の体積中の増幅生成物の量に強度が比
例し、(ii)励起ビームにより照射される反応混合物の
体積に比例する第2蛍光信号を発生できる反応混合物の
全体に亘って均質に分散される第2蛍光指標を含有す
る。蛍光強度の比例性は、有機染料の蛍光発光に独立的
に影響を与える温度、pH、塩濃度等のパラメータの一定
の組に対して定まる。
鎖反応チャンバの壁の部分を通って、レンズにより反応
混合物中に合焦される。更に好ましくは、励起ビームに
応答してそれぞれ第1及び第2蛍光指標により発生され
る第1及び第2蛍光信号を収集するのに、同じレンズが
使用される。かくして、励起光学部品と収集光学部品と
の不整合による収集信号の変異性が防止される。この実
施例では、レンズが、励起ビームを、反応混合物とは接
触していない閉鎖反応チャンバの壁の部分を通るように
向ける。壁の前記部分は、レンズにより収集される蛍光
信号の光路内に反応混合物からの凝縮が形成されないよ
うに加熱され、これにより、収集される信号中の別の変
異性の原因が除去される。
(ここではチューブの底部と呼ぶ)と、開放端部(ここ
ではチューブの頂部と呼ぶ。漏洩防止シールが形成され
るようにキャップで閉鎖できる)とを有する。換言すれ
ば、ひとたび反応混合物をチューブ内に入れてキャップ
を取り付ければ、閉鎖反応チャンバが形成される。この
最も好ましい実施例では、(1)反応混合物がチューブ
の一部(一般には、チューブの底部)を充填し、チュー
ブのキャップと反応混合物の頂面との間に空所が残され
るようにし、(2)チューブの壁はつや消しにし(すな
わち、光を伝達し且つ散乱する材料でチューブの壁を作
り)、(3)レンズは、キャップに接触することなく、
キャップを通る励起ビームを、反応混合物の頂面を通し
て反応混合物中に合焦させ且つ第1及び第2蛍光指標に
より発生される蛍光を収集する。上記のように、励起ビ
ームが通るチューブの部分(この実施例ではキャップ)
は、収集される蛍光信号の測定における変異性の付加原
因ともなる凝縮の形成を防止すべく加熱される。第1及
び第2蛍光信号の連続的分析からじることがある潜在的
変異性は、例えば荷電結合素子(CCD)配列上に信号を
回折して、信号光をフォト検出器の配列上にスペクトル
的に分離し、信号を同時に分析することにより無くすこ
とができる。
ザ)により発生される励起ビームは、光ファイバによ
り、複数の閉鎖反応チャンバに便利に分散される。同様
に、複数の反応チャンバからの蛍光信号を同じ光ファイ
バで収集し、単一の検出/分析装置により分析すること
もできる。
合物の体積の変化とは無関係に安定した蛍光信号を発生
する装置及び蛍光試薬を設けることにより、核酸増幅反
応の正確なリアルタイムモニタリングを可能にする。増
幅反応の進行を示すデータが入手できると、目標核酸の
相対出発濃度のより正確な見積り及び増幅反応の効率の
迅速な評価が可能になり、且つ少量の試薬の使用及びフ
ィードバック反応制御の可能性が開かれる。
の好ましい実施例を示す概略図である。
識別反応により複数の増幅反応を同時モニタリングする
好ましい実施例を示す概略図である。
レセイン蛍光指標、及び後述の好ましい実施例のCCD配
列により自記される機器バックグラウンドに関するスペ
クトル的に分離された蛍光強度データを示す図面であ
る。
ルオレセイン染料及び一般的なPCR中に第2蛍光指標と
して用いられるテトラメチルローダミン染料からの蛍光
信号の時間依存を示す図面である。
テトラメチルローダミン染料(その時間依存データが第
3図に示されている)の強度との比のサイクル依存を示
す図面である。
のPCRのサイクル数に対する増幅生成物の量に関するデ
ータを示す図面である。
(stable)」は、雑音(ノイズ)による平方2乗偏差の
平方根(root means square(RMS)deviation)が平均
信号の大きさの2%以下であることを意味する。より好
ましくは、「安定」は、雑音による信号のRMS偏差が平
均信号の大きさの1%以下であることを意味する。
タリングする蛍光ベース装置である。本発明の装置に使
用する増幅体系の形式は厳格でないが、一般に、装置
は、エキソヌクレアーゼ活性をもつ核酸ポリメラーゼ、
又はモニタリングする反応中に増加する二重鎖DNAの集
団の使用を必要とする。本発明の装置に使用できる増幅
体系の例として、Walker等の「核酸研究20」(1992年、
第1691〜1696頁)に記載されているように、PCR、リガ
ーゼ鎖反応(ligase chain reaction(LCR))のような
リガーゼベース増幅体系、Qβレプリカーゼベース増幅
体系、鎖置換増幅(SDA)等がある。核酸増幅体系につ
いての分かりやすい説明が、Keller及びManakの「DNAプ
ローブ(DNA Probes)」(第2版、Stockton Press社、
1993年、ニューヨーク)になされている。本発明の装置
に必須なことは、第1蛍光指標の蛍光強度と、ここで第
2第2蛍光指標と呼ぶ内部基準との比を測定することで
ある。第1蛍光指標及び第2蛍光指標は、スペクトル的
に分解できなくてはならない。すなわち、これらのそれ
ぞれの発光スペクトルがオーバーラップせず、結合スペ
クトル中に別々の発光ピークが充分観察されるものでな
くてはならない。一般に、装置には、例えば、複数の蛍
光強度比をモニタリングして、単一反応における幾つか
の目標核酸の同時増幅をモニタリングできるように、複
数の第1蛍光指標を与えることができる。Fung等の米国
特許第4,855,225号、Menchen等の米国特許第5,188,934
号、Bergot等の国際出願PCT/US90/05565等には、このよ
うな実施例での使用に適したスペクトル的に分解可能な
幾つかの染料が開示されている。
鎖反応チャンバと関連作動する光学部品)を有し、該試
料インターフェースは、反応混合物中に励起ビームを合
焦させ且つこの結果生じる蛍光を収集するためのレンズ
と、光源からレンズに向かう励起ビーム及びレンズから
検出/分析手段に向かう蛍光信号の両方を伝達するため
の光ファイバとを有している。試料の相互汚染(いわゆ
る「キャリーオーバ」)を防止するため、反応混合物は
閉鎖反応チャンバ内に収容するのが好ましい。従って、
レンズは、励起ビームを合焦させ且つ閉鎖反応チャンバ
の壁の一部を通して蛍光を収集する。上記のように、好
ましい反応チャンバは、例えば慣用的なエッペンドルフ
チューブ(Eppendorf tube)の幾何学的形状及び体積を
もつチューブである。チューブは、該チューブの開放端
にキャップを取り付けることにより反応混合物を添加し
た後に閉じられる。PCR用試料インターフェースの好ま
しい実施例では、レンズが、第1図に示すように、チュ
ーブのキャップを通して励起ビームを向け且つ蛍光を収
集する。例示の構造では、光ファイバ2の第1端部は、
フェルール4、ハウジング6及びレンズ8と同心状のプ
レート10内に保持されている。光ファイバの第2端部
(図示せず)は、後で詳述するように、光源及び検出/
分析手段と関連作動する。光ファイバ2の端面とレンズ
8との間の距離は、光ファイバの開口数、チューブ18の
幾何学的形状、レンズ8の焦点距離、レンズ8の直径等
を含む幾つかのファクタにより決定される。任意の特定
実施例におけるこのような変数の値を選択するガイダン
スは、光学設計に関する標準テキスト(例えば、「光学
ガイド(Optics Guide)5」(Mellers,Griot,Irvine
等。CA、1990年)等)において容易に見出される。例示
の実施例では、レンズ8は8mmの直径を有し且つEdmund
Scientific社(ニュージャージ州、Barrington)から市
販されている材料BK7で作られている。光ファイバ2
は、0.2の開口数を有する。この設計は、反応混合物22
への励起ビーム28の伝達が最大になるようにするのが好
ましい。例えば、レンズ8、光ファイバ2の開口数、及
び光ファイバ2とレンズ8との間の距離は、レンズ8の
直径が励起ビーム28の直径(励起ビーム28が第1図に示
すようにレンズに衝突するところの直径)に等しいか大
きくなるように選択される。励起ビーム28は、キャップ
16、空所24、反応混合物22の頂面26を通って、光ファイ
バの直径の約1〜3倍の領域(例えば、表面26から1〜
3mm下の領域)に合焦される。この合焦の度合いはこの
実施例の厳格な特徴ではなく、重要なことは商業的に入
手できる熱サイクラーの試料ホルダの幾何学的形状及び
寸法に試料インターフェースを適合させることである。
他の実施例では、反応混合物中により鋭く合焦させる幾
何学的形状及び寸法にすることができる。
することができる。例えば、レンズは、例えばHlousek
の米国特許第5,037,199号、Hoppe等の米国特許第4,747,
87号、Morning等の米国特許第5,239,360号、Hirschfiel
dの米国特許第4,577,109号等に開示されているように、
球形、截頭球形、円筒形、截頭円筒形、偏球形、截頭偏
球形等の形状にし且つ任意の透明屈折材料で作ることが
できる。
により形成される光路とほぼ同じ光路に沿ってレンズ8
により収集され且つ光ファイバ2の端部上に合焦され
て、装置の光分離/分析部品に伝達される。
乱及び/又は吸収による変異性を低減させるには、光伝
達に使用される反応チャンバの壁の部分を加熱する手段
を試料インターフェースに設けることが好ましい。第1
図の実施例では、光伝達に使用される反応チャンバ(チ
ューブ18)の壁の部分はキャップ16である。従って、キ
ャップ16を加熱するのに、加熱要素12及び熱伝導プラテ
ン14が使用されている。加熱要素12は、抵抗加熱要素
と、キャップ16の温度のプログラム制御を可能にする温
度センサで構成するのが好ましい。キャップ16は、反応
混合物の成分の凝縮点より高い温度に維持される。一般
に、キャップ16は94〜110℃の範囲の温度に維持され
る。通常、反応混合物中の主要溶媒は水であるので、キ
ャップ16は約102〜105℃の範囲の温度に維持される。よ
り好ましくは、キャップ16は103℃に維持される。熱サ
イクリングを用いる実施例では、上記キャップ加熱部品
は、反応混合物22の温度を周期的に制御するのに使用さ
れる熱伝導部品20から断熱しておくのが好ましい。
導部品20の壁からのあらゆる偽反射を拡散又は散乱させ
て、このような反射によって信号が集合する傾向を低減
させるのが好ましい。
透明なチューブの壁が便利につや消しされる。
く知るところである。材料選択の基準例として、(i)
特に熱サイクリングを用いた増幅体系に対する熱膨張の
度合い及び光学部品の整合に及ぼすその影響、(ii)励
起波長及び使用する蛍光物質の発光波長の光伝達特性、
(iii)反応混合物の成分に対する反応チャンバの化学
的不活性度合い、(iv)例えばポリメラーゼ、目標核酸
等の重要な反応成分がチャンバ壁上に吸着される度合
い、(v)光路内での蛍光材料の最小化等がある。一般
に、増幅反応混合物を収容するチューブは、ポリプロピ
レン等の材料で作られる。
か、第2図に概略的に示すような単一器具における複数
の同一インターフェースのうちの1つとして使用するこ
とができる。図示の実施例では、ホルダ30(該ホルダ30
は、例えば、Mossa等の欧州特許出願第91311090.4号
(公開番号第0488769 A2号)に記載された熱サイクラー
32に関連する加熱ブロックで構成できる)に配列された
個々の試料インターフェース31は、光ファイバ34により
光ファイバマルチプレクサ36に連結され、該光ファイバ
マルチプレクサは、例えばプログラムされたマイクロプ
ロセッサによる制御の下で、個々の光ファイバとポート
35との間で選択的に伝達できるようにする。好ましい構
造では、光源52及びコントローラ54により発生された励
起ビーム41は、ビームスプリッタ40を通り且つレンズ38
によりポート35上に合焦される。ここで、励起ビーム41
は、光ファイバマルチプレクサ36により、所定組(又は
副組)の光ファイバ34の各々に向けられる。逆に、反応
チャンバ内で発生された蛍光信号は、レンズ8により収
集され且つ光ファイバ上に合焦される。次に、光ファイ
バは、蛍光信号を、可能ならば光ファイバマルチプレク
サを介して、検出/分析手段に伝達する。第2図に戻っ
て説明すると、試料インターフェースにより収集された
蛍光信号は、光ファイバマルチプレクサ36に向けられ、
ポート35を通って光ファイバマルチプレクサ36から出
て、レンズ38により収集され且つ光軸に対して平行にさ
れる。レンズ38は、蛍光信号をビームスプリッタ40に向
かわせ、該ビームスプリッタ40は蛍光信号を選択的にカ
ットオフフィルタ42に向かわせる。カットオフフィルタ
42は、励起ビームからの光が信号検出部品に到達するこ
とを防止する。ビームスプリッタ40は、慣用的なダイク
ロイックミラー又は励起ビームが通る孔を備えた完全反
射ミラー(例えば、米国特許第4,577,109号に開示され
ているようなミラー)等で構成できる。カットオフフィ
ルタ42を通過後、蛍光信号はレンズ44によりスペクトル
分析器に導かれる。スペクトル分析器は、蛍光信号をス
ペクトル的に分離し且つ信号の複数のスペクトル成分の
強度を測定する。一般に、スペクトル分析器は、蛍光信
号をそのスペクトル成分に分離するためのプリズムのよ
うなスペクトル部品及び回折格子等と、ダイオード配
列、荷電結合素子(CCD)装置、バンドパスフィルタの
配列及び光電子増倍管等のフォト検出器の配列とからな
る。第2図の好ましい実施例では、スペクトル分析器
は、回折格子46(例えば、ニュージャージ州、Jobin−Y
von社のモデルCP−140)及びCCDコントローラ50にリン
クされたCCD配列48(例えば、ニュージャージ州、Princ
eton Instruments社のモデルS2135)からなる。
光信号を分析するのに適した一例としてのCCD配列は、
スペクトルの500〜650nm領域に跨がる21個の収集ビンに
区分される。各ビンは、8.5nm窓を越える光を収集す
る。他の多くの構成を使用できることも明らかである。
スペクトル分析のためのCCD配列の適用例が、Karger等
の「核酸研究19」(1991年、第4955〜4962頁)に記載さ
れている。
たデータに基づいて行うのが好ましい。なぜならば、1
つ以上の第1及び第2蛍光指標(これらの指標から強度
比が計算される)を、例えば多ビームスプリッタ、フィ
ルタ及び光電子増倍管の不整合により生じることがある
波長特定装置の変異性を導入することなく、同時に分析
できるからである。また、スペクトル分析器は、「バー
チャルフィルタ」の使用、すなわちフォト検出器の配列
から得られるデータのプログラム操作(該操作では、関
連するマイクロプロセッサを介してのプログラム制御下
で、物理的バンドパスフィルタと同様に複数の別々の波
長範囲がサンプリングされる)が可能になる。この能力
により、第1及び第2蛍光指標としての染料の選択に高
度のフレキシビリティが得られる。
より発生される信号の強度比を反映する読取り値が得ら
れる任意の検出装置で構成できる。このような装置は、
米国特許第4,577,109号及び第4,786,886号及び「光技術
の設計及び適用ハンドブック(The Photonics Design
& Applications Handbook)第39版)」(1993年、Laur
in Publishing社、マサチューセッツ州、Pittsfield)
に例示されているように、当該技術分野で良く知られて
いる。
ましいけれども、LCRのような他の種々の増幅体系にも
使用できる。PCRを行なうための説明及びガイダンス
は、例えば上記Innis等及びMcPherson等の文献を含む広
範囲の文献においてなされている。簡単にいえば、PCR
では、DNAポリメラーゼを触媒とする一連の合成反応の
プライマーとして、2つのオリゴヌクレオチドが使用さ
れる。一般に、これらのオリゴヌクレオチドは異なるシ
ーケンスを有し、且つ、(i)テンプレートすなわち目
標DNAの対向鎖上にあり、(ii)増幅すべきDNAのセグメ
ントをフランキングするシーケンスを補完する。目標DN
Aは、1モルを大きく超える量の2つのオリゴヌクレオ
チド及び4つのデオキシヌクレオチド三リン酸(dNTP)
の各々の存在下で加熱することにより、最初に変性が引
き起こされる。次に、反応混合物は、オリゴヌクレオチ
ドプライマーをこれらの目標シーケンスにアニーリング
できる温度に冷却され、この後に、アニーリングされた
プライマーがDNAポリメラーゼと共に拡張(extend)さ
れる。次に、変性、アニーリング及び拡張が多数回(一
般に25〜35回)反復される。1回目の増幅の生成物は次
回の目標核酸として機能するので、各連続サイクルが、
目標DNAの量すなわち増幅生成物の量を本質的に倍化す
る。
蛍光指標として使用される蛍光染料にある。指標の蛍光
強度の比を試験することにより、強度の点のみにおいて
明らかな系統的な変異性の大部分の源の作用を無くすこ
とができる。一般に、本発明によれば、第1蛍光指標は
錯体形成染料、又は信号を発生させる重合化ステップ中
に分解されるオリゴヌクレオチドプローブに共有結合さ
れた染料で構成できる。この後者の実施例は、Holland
等の「Proc.Natl.Acad.Sci.88」(1991年、第7276〜728
0頁)に記載されたいわゆる「Tacman」アプローチに関
する。染料に関連して本願で使用する用語「錯体形成
(complex−forming」は、染料が、二重鎖又は三重鎖核
酸構造(通常、DNA)をもつ安定した非共有結合鎖体を
形成できること、及び染料の蛍光特性が、非鎖体状態
(すなわち、通常、自由溶液(free−solution)状態)
と比べて、錯体状態にある点で実質的に異なっているこ
とを意味する。好ましくは、錯体形成染料の蛍光の量子
効率は、自由溶液状態と比べ、錯体状態において高めら
れ、これにより錯体形成時に強い蛍光が得られる。錯体
形成染料の例として、Hoechst 33258及びHoechst 33342
のような臭化エチジウム、ヨウ化プロピジウム(propid
ium iodide)、チアゾールオレンジ、ダウノマイシン、
メパクリン、4′,6′−ジアミニジノ−2−フェニリン
ドール(DAPI)、オキサゾールオレンジ、ビスベンジミ
ダグゾール(bisbenzimidaxole)染料、及びエチジウ
ム、アクリジン、チアゾリウム及びオキサゾリウム染料
(これらの頭字語POPRO、BOPRO、YOPRO及びTOPROとして
知られている)のような種々の挿入染料がある。これら
は、次の文献、すなわち「蛍光プローブ及び調査薬品ハ
ンドブック(Handbook of Fluorescent Probes and Res
erch Chemicals)」第5版(1992年、Molecular Probe
s,Inc.社、Eugene、第221〜229頁、Haugland);Sriniva
san等の「電気泳動の理論及び応用(Applied and Theor
etical Electrophoresis)3」(1993年、第235〜239
頁);Kapuscinski等の「年刊生化学3」(1977年、第25
2〜257頁);Hillの「年刊生化学70」(1976年、第635〜
638頁);Setaro等の「年刊生化学71」(1976年、第313
〜317頁);Latt等の「J.Histochem.Cytochem.24」(197
6年、第24〜33頁);及びRye等の「核酸研究20」(1992
年、第2803〜2812頁)に記載されている。第1蛍光指標
として錯体形成染料を用いる場合には、このような染料
は、チアゾールオレンジ、臭化エチジウム及びTOPROか
らなる群から選択するのが好ましい。
鎖DNAの存在すなわち二重鎖DNAとの関連により蛍光特性
が実質的に影響を受けない蛍光染料である。このような
染料として、この基準を満たし且つ使用されるあらゆる
第1蛍光指標からスペクトル的に分解できる事実上全て
の蛍光染料がある。好ましい第2蛍光指標としてローダ
ミン染料がある。より詳しくは、第2蛍光指標として、
テトラメチルローダミン又は2′,4′,5′,7′−テトラ
クロロ−4,7,−ジクロロフルオレセインがあり、後者は
Menchen等の米国特許第5,188,934号に開示されている。
年、第3761〜3766頁)に記載されているように、第1及
び第2蛍光指標は、両方共、オリゴヌクレオチドプロー
ブに共有結合される。より詳しくは、第1蛍光指標とし
てフルオレセインを使用し且つ第2蛍光指標としてテト
ラメチルローダミンを使用して、テトラメチルローダミ
ンの部分(moiety)が、フルオレセインの部分によるあ
らゆる蛍光の発光を実質的に消光(クエンチング)する
ようにする。かくして、両染料が同じオリゴヌクレオチ
ドに付着すると、テトラメチルローダミンのみが蛍光信
号を発生することができる。オリゴヌクレオチドが、例
えば、DNAポリメラーゼの5′−>3′エキソヌクレア
ーゼ活性を介して切断され、2つの染料を分離すると、
フルオレセインは蛍光信号を発生できるようになる。こ
の実施例では、励起ビームは、アルゴンイオンレーザの
488nm発光ラインから発生させるのが好ましい。本発明
によれば、PCRでは、この実施例における「自由」フル
オレセインの生成は、使用されるDNAポリメラーゼを触
媒とするDNA合成の量(従って、増幅生成物の量)に比
例する。この実施例では、第1蛍光指標はフルオレセイ
ン(例えば、Foster CityのApplied Biosystems社から
市販されている6−FAM)、第2蛍光指標はテトラメチ
ルローダミン又は2′,4′,5′,7′−テトラクロロ−4,
7,−ジクロロフルオレセインとするのが好ましい。
多数のアプローチにより合成できる。例えば、Ozaki等
の「核酸研究20」(1992年、第5205〜5214頁);Agrawal
等の「核酸研究18」(1990年、第5419〜5423頁)等を参
照されたい。オリゴヌクレオチドプローブは、ホスホル
アミダイト化学(例えば、Applied Biosystems,Inc.社
のモデル392又は394DNA合成装置(カリフォルニア州、F
oster City))を用いた自動化された固相DNA合成装置
で合成される。第1及び第2蛍光指標は、反応基を含む
ヌクレオシドホスホルアミダイトモノマーを用いること
により、オリゴヌクレオチドの所定のヌクレオチドに共
有結合できる。例えば、このような反応基は、リン酸基
又はリン酸基類似基にあるもの(例えばAgrawal等の上
記文献参照)、5′末端ヌクレオチドに付着する場合に
は5′ヒドロキシルにあるもの(例えばFung等の米国特
許第4,757,141号又はHobbs Jr.の米国特許第4,997,928
号参照)、及び塩基部分にあるものでよい(例えばRuth
の米国特許第4,948,882号;Haralambidis等の「核酸研究
15(1987年、第4857〜4876頁);Urdea等の米国特許第5,
093,232号;Cruic−kshankの米国特許第5,091,519号;Hob
bs Jr.等の米国特許第5,151,507号等を参照)。ピリミ
ジン部分をもつヌクレオチドを誘導するのが最も好まし
い。更に好ましくは、オリゴヌクレオチドプローブの
3′末端ヌクレオチドは、核酸ポリメラーゼによりブロ
ックすなわち伸長できないようにされる。このようなブ
ロッキングは、例えばHorn及びUrdeaの「Tetrahedron L
ett.27%(1986年、第4705頁)に記載されており且つ
5′リン酸−ON(商標)としてClontech Laboratories
社(カリフォルニア州、Palo Alto)から市販されてい
る試薬を用いて、リン酸基の付着により行なうのが便利
である。好ましくは、オリゴヌクレオチドプローブの長
さは、15〜60ヌクレオチドの範囲内にあるのが好まし
い。より好ましくは、オリゴヌクレオチドプローブの長
さは、18〜30ヌクレオチドの範囲内にある。
標の分離は、第1及び第2蛍光指標の性質、該蛍光指標
が付着する態様、発光源等に基づいて変化できる。所与
の実施例についての適当な距離の選択に関するガイダン
スを、蛍光分子と消光分子(それぞれ、「ドナー分子」
及び「アクセプタ」分子と呼ぶことがある)との間の共
鳴エネルギ伝播に関する多数の参考文献に見出すことが
でき、例えば、Stryer及びHauglandの「Proc.Natl.Aca
d.Sci.58」(1967年、第719〜726頁);Cleggの「Meth.E
nzymol 211」(1992年、第353〜388頁);Cardullo等の
「Proc.Natl.Acad.Sci.85」(1988年、第8790〜8794
頁);Ozaki等の上記文献;Hauglandの上記文献;Heller等
の「Fed.Proc.46」(1987年、第1968頁)等を参照され
たい。第1及び第2蛍光指標は、第1蛍光指標からの蛍
光の実質的に全て(例えば90%)が消光されるように、
充分近い関係にある必要がある。一般に、エネルギ伝播
ベース消光については、第1蛍光指標と第2蛍光指標と
の間の距離は10〜100オングストロームの範囲内にある
必要がある。一実施例では、第1及び第2蛍光指標は、
ヘアピン等のような介在2次構造が存在しないという条
件で、約4〜10ヌクレオチドの間、より好ましくは4〜
6ヌクレオチドの間で分離される。好ましくは、第1蛍
光指標又は第2蛍光指標のいずれかが、オリゴヌクレオ
チドプローブの5′に付着される。
両端部に付着された第1及び第2蛍光指標が設けられ
る。この構成は、自由溶液中で、エネルギ伝播範囲内で
第1及び第2蛍光指標をもたらすランダムコイルを形成
するより便利に合成されるプローブを可能にする。かく
して、非ハイブリッド形成状態では、励起された蛍光部
分が消光される。ハイブリッド形成状態では、エネルギ
伝播が無視されて、励起された蛍光部分が蛍光を発する
ことができるように、蛍光部分及び消光剤が引き離され
る。
付着させるための多くの連鎖部分及び方法があり、下記
の参考文献、すなわちEckstein編「オリゴヌクレオチド
及び類似物:実際のアプローチ(Oligonucleotides and
Analogues:A Practical Approach)」(1991年、IRL P
ress社、Oxford);Zu−ckerman等の「核酸研究15」(19
87年、第5305〜5321頁)(オリゴヌクレオチドの3′チ
オール基);Sharma等の「核酸研究19」(1991年、第301
9頁)(3′スルフヒドリル);Giusti等の「PCR法及び
適用(PCR Methods and Applications 2」(1993年、第
223〜227頁);Fung等の米国特許第4,757,141号(カリフ
ォルニア州、Foster CityのApplied Biosystems社から
市販されているAminolink(商標)による5′ホスホア
ミノ基);Stabinskyの米国特許第4,739,044号(3′ア
ミノアルキルホスホリル基);Agrawal等の「四面体文字
(Tetrahedron Letters)31」(1990年、第1543〜1546
頁)(ホスホルアミデート連鎖による付着);Sproat等
の「核酸研究15」(1987年、第4837頁)(5′メルカプ
ト基);及びNelson等の「核酸研究17」(1989年、第71
87〜7194頁)(5′アミノ基)に例示されている。
部分(例えば、Clontech Laboratories社(カリフォル
ニア州、Palo Alto)から市販されている)を使用する
のが好ましい。
の米国特許第4,997,928号に記載されているように、ロ
ーダミン及びフルオレセイン染料は、ホスホルアミデー
ト部分で誘導される染料により、固相合成の終時にオリ
ゴヌクレオチドの5′ヒドロキシルに便利に付着され
る。
が、第2蛍光指標ではなく他の非蛍光消光分子によりオ
リゴヌクレオチドプローブに付着される構成の実施例を
使用できることも明らかである。このような実施例で
は、第2蛍光指標は、増幅生成物と相互作用しないスペ
クトル的に分解可能な事実上全ての蛍光染料で形成でき
る。
チンのPCR増幅のリアルタイムモニタリング 目標DNAをコード化する人のβ−アクチンの296塩基対
セグメントを、目標DNAの5×103〜1×106コピーの範
囲内の種々の出発量からPCRにより増幅した。次のプラ
イマー及びプローブを使用した。
に従って、フルオレセインの6炭素に付着したNHSエス
テル基と、オリゴヌクレオチドの5′−末端デオキシア
デノシンに付着した5′−アミノリン酸とを反応させる
ことにより、オリゴヌクレオチドに結合されたフルオレ
セイン分子を示し、また、「TMR」は、Urdea等の米国特
許第5,093,232号に開示されたアミノ連鎖剤により隣接
チミジンの塩基部分に結合されたテトラメチルローダミ
ン分子を示す。
ブ(Perkin−Elmer社、コネチカット州、Norwalk)内で
行なった。使用した成分は、10mM Tris−HCl、pH8.3、5
0mM KCl、3.5mM MgCl2、200μM、各ヌクレオシドトリ
ホスフェート(相互汚染を防止すべく、米国特許第5,03
5,996号に従って、dTTPの代わりにdUTPを用いる)、300
nM、各正プライマー及び逆プライマー、AmpliTaq(Perk
in−Elmer社、コネチカット州、Norwalk)である。この
混合物には、10ng/μLで5μLのRaijDNA(Applied Bi
osystems社、コネチカット州、Foster City)、2μL
で5μLのプローブ、及び1単位/μLで1μLのウラ
シルN−グリコシラーゼを添加し、反応体積を51μLに
した。加熱サイクル及び冷却サイクルは、本発明の試料
インターフェース成分を収容する試料ホルダカバーが設
けられたモデル9600 Thermal Cycler(Perkin−Elmer
社、コネチカット州、Norwalk)内で行なわれた。次の
温度分布を使用した。すなわち、500℃で2分間保持
し、95℃で10分間保持し、且つ次の温度(92℃で、15秒
間、54℃で15秒間、72℃で1分間)を通じて40回反復
し、次に72℃で保持した。
テトラメチルローダミン染料及び装置の部外光源による
蛍光の発光スペクトルのデータを示す。
蛍光強度(fluorescein fluorescent intensity)及び
テトラメチルローダミン蛍光強度のデータを示す。強度
における高周波数の振動は、2つの染料の蛍光発光の温
度依存性を反映している。10サイクルと28サイクルとの
間での両染料についてのベースライン蛍光の増大は、装
置ベースの変化である。同じデータからのテトラメチル
ローダミン蛍光強度に対するフルオレセイン蛍光強度の
比を示す第5図において、装置ベースの変化は無くな
り、読取り信号の変動のRMS(すなわち蛍光強度の比)
は、測定した比の平均大きさの1%より小さい。
子の範囲の両から出発するβアクチンDNAのPCRからのデ
ータを示す。
Claims (46)
- 【請求項1】核酸増幅反応生成物の形成をリアルタイム
でモニタリングする装置において、 増幅すべき核酸サンプルを保持するサンプルホルダー
と、 前記サンプル体積を励起ビームで照射するための光ファ
イバーケーブルと、 励起ビームをサンプルの体積中に合焦させ、増幅反応生
成物の濃度にその強度が比例する第1の蛍光信号およ
び、励起ビームによって照射されるサンプルの体積にそ
の強度が比例する第2の蛍光信号をサンプルから収集
し、前記光ファイバーケーブルに伝達するための同軸状
に配置されたレンズと、 核酸増幅の過程の複数の時点で光ファイバーケーブルか
らの第1および第2の蛍光信号を受け取るための検出及
び分析機構とを含み、前記検出及び分析機構が、第1お
よび第2の蛍光信号強度を複数の時点で測定するもので
あり、修正された複数の強度信号を生成し、各修正強度
信号が任意の時点における第1及び第2の蛍光信号間の
関係に対応することを特徴とする装置。 - 【請求項2】検出および分析機構が修正された複数の強
度信号に対応する読み取りを時間の関数として与える、
請求項1に記載の装置。 - 【請求項3】複数のサンプルを保持するための複数のサ
ンプルホルダーと、 複数のサンプルの体積を照射するための光ファイバーケ
ーフルと、 励起ビームをサンプル中に合焦させるために光ファイバ
ーケーブルの第1の端と同軸状に配置された複数のレン
ズと、 複数の各該光ファイバーケーブルの第2の端に検出及び
分析機構を接続するための光ファイバーマルチプレクサ
ーを含む、請求項1に記載の装置。 - 【請求項4】サンプルホルダーがサンプルを保持するた
めの取り外し可能な反応チャンバーを含む、請求項1に
記載の装置。 - 【請求項5】取り外し可能な反応チャンバーがシール可
能である、請求項1に記載の装置。 - 【請求項6】サンプルホルダーがサンプルを保持するた
めのシール可能な反応チャンバーを含む、請求項1に記
載の装置。 - 【請求項7】サンプルホルダーが、レンズからサンプル
中へ伝達される励起ビームが通る光学インターフェース
を含む、請求項1に記載の装置。 - 【請求項8】サンプルホルダーが、サンプルを保持する
ためのシール可能な反応チャンバーを含み、光学インタ
ーフェースが前記反応チャンバーの壁を形成する、請求
項7に記載の装置。 - 【請求項9】光学インターフェースを加熱して、前記光
学インターフェース上へのサンプルの凝縮を減少させる
機構を更に含む、請求項7に記載の装置。 - 【請求項10】サンプルホルダーが、サンプルを保持す
るためのシール可能な反応チャンバーを含み、光学イン
ターフェースが前記反応チャンバーの壁を形成する、請
求項9に記載の装置。 - 【請求項11】サンプルホルダーが、サンプルを保持す
るための取り外し可能な反応チャンバーを含み、光学イ
ンターフェースが、サンプルの少なくとも一部を覆い、
かつエアギャップでサンプルから隔てられる、前記反応
チャンバーの壁を形成する、請求項7に記載の装置。 - 【請求項12】核酸増幅が複数の増幅サイクルを含むも
のであり、 検出及び解析機構が第1および第2の蛍光信号を光ファ
イバーカーブルから1増幅サイクルごとに少なくとも1
回受け、第1及び第2の蛍光信号の強度を増幅サイクル
ごとに少なくとも1回測定する、請求項1に記載の装
置。 - 【請求項13】検出及び解析機構が増幅サイクルごとに
少なくとも1つの修正された強度信号を作り出す、請求
項12に記載の装置。 - 【請求項14】核酸増幅反応生成物の形成をリアルタイ
ムでモニタリングする方法において、 核酸増幅反応生成物を形成させるための増幅すべき核酸
配列を含むサンプルホルダーと、 励起ビームを照射したときに前記サンプル中の増幅反応
生成物の濃度にその強度が比例する第1の蛍光信号を発
する第1の蛍光指標と、 励起ビームを照射したときに前記サンプルの体積にその
強度が比例する第2の蛍光信号を発する第2の蛍光指標
とを使用し、 前記サンプルホルダー中で核酸配列の増幅を行い、 増幅中の複数の時点でサンプルホルダー中に励起ビーム
を伝達し、第1及び第2の蛍光信号強度を複数の時点で
測定し、 複数の修正された強度信号を計算することによりリアル
タイムで核酸増幅反応生成物の形成をモニタリングし、
修正された各強度信号が複数の時点で測定された第1の
蛍光信号と第2の蛍光信号の強度間の関係に対応するも
のであり、修正された強度信号における時間変化が核酸
増幅反応生成物の形成を示すものであることを特徴とす
る方法。 - 【請求項15】核酸増幅反応生成物の形成をリアルタイ
ムでモニタリングする方法において、 マルチサンプルホルダーであって、各サンプルホルダー
が核酸増幅反応生成物を形成させるための増幅すべき核
酸配列を含むものと、 励起ビームを照射したときに前記サンプル中の増幅反応
生成物の濃度にその強度が比例する第1の蛍光信号を発
する第1の蛍光指標と、 励起ビームを照射したときに前記サンプルの体積にその
強度が比例する第2の蛍光信号を発する第2の蛍光指標
とを使用し、 前記マルチサンプルホルダー中で核酸配列の増幅を行
い、 増幅中の複数の時点で前記マルチサンプルホルダー中に
励起ビームを伝達して第1及び第2の蛍光信号強度を複
数の時点で測定し、 複数の修正された強度信号を計算することによりリアル
タイムで前記マルチサンプルホルダー中の核酸増幅反応
生成物の形成をモニタリングし、修正された各強度信号
が複数の時点で測定された第1の蛍光信号と第2の蛍光
信号の強度間の関係に対応するものであり、修正された
強度信号における時間変化が核酸増幅反応生成物の形成
を示すものであることを特徴とする方法。 - 【請求項16】複数の核酸増幅反応生成物の形成をリア
ルタイムでモニタリングする方法において、 複数の核酸増幅反応生成物を形成させるための、増幅す
べき複数の核酸配列を含むサンプルホルダーと、 励起ビームを照射したときに前記サンプル中の増幅反応
生成物の濃度にその強度が比例する第1の蛍光信号を発
する複数の第1の蛍光指標と、 励起ビームを照射したときに前記サンプルの体積にその
強度が比例する第2の蛍光信号を発する第2の蛍光指標
とを使用し、 前記サンプルホルダー中で核酸配列の増幅を行い、 増幅中の複数の時点でサンプルホルダー中に励起ビーム
を伝達し、第1及び第2の蛍光信号強度を複数の時点で
測定し、 複数の時点でサンプルフォルダー中の複数の核酸配列の
それぞれについて複数の修正された強度信号を計算する
ことによりリアルタイムでサンプルホルダー中の複数の
核酸増幅反応生成物の形成をモニタリングし、修正され
た各強度信号が複数の時点で測定された第1の蛍光信号
と第2の蛍光信号の強度間の関係に対応するものであ
り、修正された強度信号における時間変化が核酸増幅反
応生成物の形成を示すものであることを特徴とする方
法。 - 【請求項17】核酸増幅反応生成物の形成をリアルタイ
ムでモニタリングする方法において、 核酸増幅反応生成物を形成させるための、増幅すべき核
酸配列を含むサンプルホルダーと、 増幅反応生成物にハイブリダイズすることができるオリ
ゴヌクレオチドに共有結合した第1及び第2の蛍光指標
であって、前記第1の蛍光指標は励起ビームを照射した
ときに前記サンプル中の増幅反応生成物の濃度にその強
度が比例するものであり、前記第2の蛍光指標は励起ビ
ームを照射したときに前記サンプルの体積にその強度が
比例する第2の蛍光信号を発するものであり、前記第2
の蛍光指標が第1の蛍光指標を消光するものとを使用
し、 前記サンプルホルダー中で核酸配列の増幅を行い、 増幅中の複数の時点でサンプルホルダー中に励起ビーム
を伝達して第1及び第2の蛍光信号強度を複数の時点で
測定し、 複数の修正された強度信号を計算することによりリアル
タイムで核酸増幅反応生成物の形成をモニタリングし、
修正された各強度信号が複数の時点での第1の蛍光信号
と第2の蛍光信号の強度間の関係に対応するものであ
り、修正された強度信号における時間変化が核酸増幅反
応生成物の形成を示すものであることを特徴とする方
法。 - 【請求項18】第1の蛍光指標が錯体形成色素である、
請求項14〜17のいずれか1項に記載の方法。 - 【請求項19】サンプルホルダー中に励起ビームを伝達
する前にサンプルホルダー内にサンプルをシールするス
テップを更に含む、請求項14〜17のいずれか1項に記載
の方法。 - 【請求項20】サンプルホルダーが、サンプルに伝達さ
れる励起ビームが通る光学インターフェースを有し、前
記サンプルホルダーがまた光学インターフェースをサン
プルから隔てるエアギャップを含み、さらに前記光学イ
ンターフェースを加熱して光学インターフェース上への
サンプルの凝縮を減少させるステップを含む、請求項14
〜17のいずれか1項に記載の方法。 - 【請求項21】励起ビームをサンプル中に伝達する前
に、サンプルホルダー内のホルダーをシールするステッ
プを更に含む、請求項20に記載の方法。 - 【請求項22】サンプルホルダーを使用するステップ
が、サンプルホルダーから取り外せる反応チャンバーに
サンプルを加え、前記取り外し可能な反応チャンバーを
サンプルポルダーに加えることを含む、請求項14〜17に
記載の方法。 - 【請求項23】取り外し可能な反応チャンバー内にサン
プルをシールするステップを更に含む、請求項22に記載
の方法。 - 【請求項24】取り外し可能な反応チャンバーが、レン
ズからサンプルへ伝達される励起ビームが通る光学イン
ターフェースと、前記光学インターフェースをサンプル
から隔てるエアギャップを含むものであり、光学インタ
ーフェースを加熱して光学インターフェース上へのサン
プルの凝縮を減少させるステップを更に含む、請求項23
に記載の方法。 - 【請求項25】増幅の実行がポリメラーゼ連鎖反応を少
なくとも1サイクル行うものである、請求項14〜17に記
載の方法。 - 【請求項26】増幅の実行がリガーゼ連鎖反応を少なく
とも1サイクル行うものである、請求項14〜17に記載の
方法。 - 【請求項27】増幅の実行が、複数の増幅サイクルを行
うことを含むものであり、 増幅の過程の複数の時点におけるサンプルホルダー中へ
の励起ビームの伝達が、増幅サイクルごとに少なくとも
1回励起ビームを伝達することを含むものである、請求
項14〜17のいずれか1項に記載の方法。 - 【請求項28】核酸増幅反応生成物の形成のモニタリン
グが、増幅サイクルごとに少なくとも1回修正された強
度信号を計算するものである、請求項27に記載の方法。 - 【請求項29】光学インターフェースを含む反応チャン
バーを保持するためのサンプルホルダーと、 前記反応チャンバー内部に収納されたサンプルに励起ビ
ームを伝達し、および、サンプルから放射される光を受
けるための光ファイバーケーブルと、 前記光ファイバーケーブルと同軸状に配置され、励起ビ
ームを光学インターフェースを通して、かつ、サンプル
の体積内に合焦させ、前記サンプルの体積内部から放射
される光を収集して光ファイバーケーブルに伝達するた
めに反応チャンバー外部で位置決めされたレンズ、とを
含む装置。 - 【請求項30】光学インターフェースを含む反応チャン
バーと、 前記反応チャンバー内部に収納されたサンプルに励起ビ
ームを伝達し、かつ、サンプルから放射される光を受け
るための光ファイバーケーブルと、 該光ファイバーケーブルと同軸状に配置され、励起ビー
ムを光学インターフェースを通してサンプルの体積内に
合焦させ、前記サンプルの体積内部から放射される光を
収集して光ファイバーケーブルに伝達するために反応チ
ャンバー外部で位置決めされたレンズ、とを含む装置。 - 【請求項31】サンプルホルダーが、サンプルを保持す
るための取り外し可能な反応チャンバーを含む、請求項
29に記載の装置。 - 【請求項32】反応チャンバーが取り外し可能である、
請求項30に記載の装置。 - 【請求項33】光学インターフェースが反応チャバーの
壁である、請求項29〜32のいずれか1項に記載の装置。 - 【請求項34】レンズが反応チャンバーと接触していな
い、請求項29〜32のいずれか1項に記載の装置。 - 【請求項35】レンズがエアギャップによって反応チャ
ンバーから隔離されている、請求項29〜32のいずれか1
項に記載の装置。 - 【請求項36】レンズが、光学インターフェースとサン
プルの間に配置されたエアギャップを通して励起ビーム
を合焦させる、請求項29〜33のいずれか1項に記載の装
置。 - 【請求項37】光学インターフェースを加熱し、光学イ
ンターフェース上へのサンプルの凝縮を減少させるため
の機構を更に含む、請求項29〜33のいずれか1項に記載
の装置。 - 【請求項38】第1および第2の蛍光信号を光ファイバ
ーケーブルから受けるための検出および解析機構を更に
含む、請求項29〜33のいずれか1項に記載の装置。 - 【請求項39】それぞれが光学インターフェースを含む
複数の反応チャンバーを保持するための複数のサンプル
ホルダーと、 複数の反応チャンバー内部に収納されたサンプルに励起
ビームを伝達し、サンプルから放射される光を受けるた
めの複数の光ファイバーケーブルと、 前記光ファイバーケーブルと同軸状に配置され、励起ビ
ームを光学インターフェースを通して、かつ、サンプル
の体積内に合焦させ、サンプルの体積内部から放射され
る光を収集して光ファイバーケーブルに伝達するために
反応チャンバー外部で位置決めされた複数のレンズ、と
を含む請求項29に記載の装置。 - 【請求項40】それぞれが光学インターフェースを含む
複数の反応チャンバーと、 複数の反応チャンバー内部に収納されたサンプルに励起
ビームを伝達し、サンプルから放射される光を受けるた
めの複数の光ファイバーケーブルと、 前記光ファイバーケーブルと同軸状に配置され、励起ビ
ームを光学インターフェースを通して、かつ、サンプル
の体積内に合焦させ、前記サンプルの体積内部から放射
される光を収集して光ファイバーケーブルに伝達するた
めに反応チャンバー外部で位置決めされた複数のレン
ズ、とを含む請求項30に記載の装置。 - 【請求項41】核酸増幅反応生成物の形成をモニタリン
グする方法であって、 光学インターフェースを含む反応チャンバー内のサンプ
ル中の核酸配列を増幅させ、 反応チャンバー外部で位置決めされたレンズを用いてサ
ンプル体積内部に励起ビームを合焦させ、 前記レンズを用いてサンプル体積内部で放射される光を
収集することを含む方法。 - 【請求項42】レンズが反応チャンバーと接触していな
い、請求項41に記載の方法。 - 【請求項43】レンズが反応チャンバーからエアギャッ
プにより隔てられている、請求項41に記載の方法。 - 【請求項44】レンズが、光学インターフェースとサン
プルの間に配置されたエアギャップを通して励起ビーム
を合焦させる、請求項41に記載の方法。 - 【請求項45】サンプルを反応チャンバー内にシール
し、光学インターフェースを加熱して光学インターフェ
ース上へのサンプルの凝集を減少させるステップを含
む、請求項41に記載の方法。 - 【請求項46】収集した放射光を検出および解析機構へ
伝達するステップを含む、請求項41の方法。
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Publication Number | Publication Date |
---|---|
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---|---|---|---|
JP7528282A Expired - Lifetime JP2909216B2 (ja) | 1994-04-29 | 1995-04-19 | 核酸増幅生成物のリアルタイム検出装置 |
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---|---|
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DE (1) | DE69519783T2 (ja) |
WO (1) | WO1995030139A1 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007102400A1 (ja) | 2006-03-06 | 2007-09-13 | Sanyo Electric Co., Ltd. | 核酸増幅生成物のリアルタイム検出装置 |
JP2008544254A (ja) * | 2005-06-13 | 2008-12-04 | ストラタジーン カリフォルニア | 別個の光学経路を有している蛍光の励起および検出のためのシステムおよび方法 |
Families Citing this family (276)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7560273B2 (en) | 2002-07-23 | 2009-07-14 | Applied Biosystems, Llc | Slip cover for heated platen assembly |
US7081226B1 (en) | 1996-06-04 | 2006-07-25 | University Of Utah Research Foundation | System and method for fluorescence monitoring |
US5935522A (en) * | 1990-06-04 | 1999-08-10 | University Of Utah Research Foundation | On-line DNA analysis system with rapid thermal cycling |
US7273749B1 (en) | 1990-06-04 | 2007-09-25 | University Of Utah Research Foundation | Container for carrying out and monitoring biological processes |
US5972716A (en) * | 1994-04-29 | 1999-10-26 | The Perkin-Elmer Corporation | Fluorescence monitoring device with textured optical tube and method for reducing background fluorescence |
DE19621312A1 (de) | 1996-05-28 | 1997-12-04 | Bayer Ag | Maskierung der Hintergrundfluoreszenz und Signalverstärkung bei der optischen Analyse biologisch medizinischer Assays |
ATE260988T1 (de) * | 1996-06-04 | 2004-03-15 | Univ Utah Res Found | Vorrichtung und verfahren zur durchführung und überwachung von polymerase kettenreaktionen |
US5736333A (en) * | 1996-06-04 | 1998-04-07 | The Perkin-Elmer Corporation | Passive internal references for the detection of nucleic acid amplification products |
ES2243393T3 (es) | 1996-06-04 | 2005-12-01 | University Of Utah Research Foundation | Monitorizacion de la hibridacion durante la pcr. |
GB9616540D0 (en) * | 1996-08-06 | 1996-09-25 | Cavendish Kinetics Ltd | Integrated circuit device manufacture |
US6565815B1 (en) | 1997-02-28 | 2003-05-20 | Cepheid | Heat exchanging, optically interrogated chemical reaction assembly |
US8293064B2 (en) * | 1998-03-02 | 2012-10-23 | Cepheid | Method for fabricating a reaction vessel |
US7133726B1 (en) * | 1997-03-28 | 2006-11-07 | Applera Corporation | Thermal cycler for PCR |
US5863736A (en) * | 1997-05-23 | 1999-01-26 | Becton, Dickinson And Company | Method, apparatus and computer program products for determining quantities of nucleic acid sequences in samples |
US6597450B1 (en) | 1997-09-15 | 2003-07-22 | Becton, Dickinson And Company | Automated Optical Reader for Nucleic Acid Assays |
US6893877B2 (en) | 1998-01-12 | 2005-05-17 | Massachusetts Institute Of Technology | Methods for screening substances in a microwell array |
US6660228B1 (en) | 1998-03-02 | 2003-12-09 | Cepheid | Apparatus for performing heat-exchanging, chemical reactions |
US6369893B1 (en) | 1998-05-19 | 2002-04-09 | Cepheid | Multi-channel optical detection system |
WO1999047922A2 (en) * | 1998-03-18 | 1999-09-23 | Massachusetts Institute Of Technology | Vascularized perfused microtissue/micro-organ arrays |
US7188001B2 (en) * | 1998-03-23 | 2007-03-06 | Cepheid | System and method for temperature control |
EP0953838A1 (en) * | 1998-05-01 | 1999-11-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Apparatus for simultaneously monitoring reactions taking place in a plurality of reaction vessels |
DE69940647D1 (de) | 1998-05-01 | 2009-05-07 | Gen Probe Inc | Automatische diagnostische Analysevorrichtung |
US7498164B2 (en) | 1998-05-16 | 2009-03-03 | Applied Biosystems, Llc | Instrument for monitoring nucleic acid sequence amplification reaction |
US6818437B1 (en) | 1998-05-16 | 2004-11-16 | Applera Corporation | Instrument for monitoring polymerase chain reaction of DNA |
EP1978351B1 (en) | 1998-05-16 | 2011-11-30 | Life Technologies Corporation | Instrument for monitoring polymerase chain reaction of dna |
US6066458A (en) * | 1998-05-18 | 2000-05-23 | Becton, Dickinson And Company | Methods, apparatus and computer program products for determining quantities of nucleic acid sequences in samples using standard curves and amplification ratio estimates |
ES2183563T3 (es) * | 1998-05-19 | 2003-03-16 | Cepheid | Sistema de deteccion optico multicanal. |
US6821402B1 (en) | 1998-09-16 | 2004-11-23 | Applera Corporation | Spectral calibration of fluorescent polynucleotide separation apparatus |
US6413780B1 (en) | 1998-10-14 | 2002-07-02 | Abbott Laboratories | Structure and method for performing a determination of an item of interest in a sample |
US6906292B2 (en) | 1998-10-29 | 2005-06-14 | Applera Corporation | Sample tray heater module |
US6896849B2 (en) | 1998-10-29 | 2005-05-24 | Applera Corporation | Manually-operable multi-well microfiltration apparatus and method |
US6159368A (en) | 1998-10-29 | 2000-12-12 | The Perkin-Elmer Corporation | Multi-well microfiltration apparatus |
US6419827B1 (en) | 1998-10-29 | 2002-07-16 | Applera Corporation | Purification apparatus and method |
US6216049B1 (en) * | 1998-11-20 | 2001-04-10 | Becton, Dickinson And Company | Computerized method and apparatus for analyzing nucleic acid assay readings |
US6927024B2 (en) | 1998-11-30 | 2005-08-09 | Genentech, Inc. | PCR assay |
US7101510B2 (en) | 1999-02-16 | 2006-09-05 | Applera Corporation | Matrix storage and dispensing system |
NZ513390A (en) | 1999-03-19 | 2003-01-31 | Genencor Int | Multi-through hole testing plate for high throughput screening |
US20050279949A1 (en) | 1999-05-17 | 2005-12-22 | Applera Corporation | Temperature control for light-emitting diode stabilization |
US7423750B2 (en) | 2001-11-29 | 2008-09-09 | Applera Corporation | Configurations, systems, and methods for optical scanning with at least one first relative angular motion and at least one second angular motion or at least one linear motion |
US7410793B2 (en) | 1999-05-17 | 2008-08-12 | Applera Corporation | Optical instrument including excitation source |
GB9915034D0 (en) * | 1999-06-29 | 1999-08-25 | Cambridge Imaging Ltd | Improved assay analysis |
US6440706B1 (en) | 1999-08-02 | 2002-08-27 | Johns Hopkins University | Digital amplification |
ATE237399T1 (de) | 1999-09-29 | 2003-05-15 | Tecan Trading Ag | Thermocycler sowie hebeelement für mikrotiterplatte |
EP1369699A1 (en) * | 1999-10-15 | 2003-12-10 | PE Corporation (NY) | System and method for filling a substrate with a liquid sample |
US6272939B1 (en) * | 1999-10-15 | 2001-08-14 | Applera Corporation | System and method for filling a substrate with a liquid sample |
EP1921440A3 (en) * | 1999-11-12 | 2008-06-04 | E.I. Dupont De Nemours And Company | Fluorometer with low heat-generating light source |
JP4846152B2 (ja) * | 1999-11-12 | 2011-12-28 | イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー | 低発熱光源を有する蛍光測定器 |
US6852986B1 (en) | 1999-11-12 | 2005-02-08 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Fluorometer with low heat-generating light source |
US7169355B1 (en) | 2000-02-02 | 2007-01-30 | Applera Corporation | Apparatus and method for ejecting sample well trays |
US6403037B1 (en) * | 2000-02-04 | 2002-06-11 | Cepheid | Reaction vessel and temperature control system |
US20020151040A1 (en) | 2000-02-18 | 2002-10-17 | Matthew O' Keefe | Apparatus and methods for parallel processing of microvolume liquid reactions |
US6719949B1 (en) * | 2000-06-29 | 2004-04-13 | Applera Corporation | Apparatus and method for transporting sample well trays |
US20030160957A1 (en) * | 2000-07-14 | 2003-08-28 | Applera Corporation | Scanning system and method for scanning a plurality of samples |
US6563581B1 (en) | 2000-07-14 | 2003-05-13 | Applera Corporation | Scanning system and method for scanning a plurality of samples |
GB0029617D0 (en) * | 2000-12-05 | 2001-01-17 | Norchip As | Ligand detection method |
JP2004527742A (ja) * | 2001-03-09 | 2004-09-09 | グノーティス ホールディング ソシエテ アノニム | 蛍光−相関分光法による分析物の測定 |
DK1373573T3 (da) * | 2001-03-09 | 2014-01-20 | Trovagene Inc | Konjugatsonder og optisk detektion af analytter |
DE10111420A1 (de) * | 2001-03-09 | 2002-09-12 | Gnothis Holding Sa Ecublens | Bestimmung von Analyten durch Fluoreszenz-Korrelationsspektroskopie |
US7267945B2 (en) * | 2001-03-26 | 2007-09-11 | Applera Corporation | Methods of determining the presence of polynucleotides employing amplification |
US20030143554A1 (en) * | 2001-03-31 | 2003-07-31 | Berres Mark E. | Method of genotyping by determination of allele copy number |
WO2003002959A1 (en) * | 2001-06-15 | 2003-01-09 | Mj Research, Inc. | Controller for a fluorometer |
DE10131687A1 (de) * | 2001-06-29 | 2003-01-16 | Eppendorf Ag | Vorrichtung zur Durchführung von Nukleinsäure-Amplifikationsreaktionen bei gleichzeitiger Verfolgung der Bildung von Amplifikationsprodukten |
US6514750B2 (en) * | 2001-07-03 | 2003-02-04 | Pe Corporation (Ny) | PCR sample handling device |
US7363168B2 (en) * | 2001-10-02 | 2008-04-22 | Stratagene California | Adaptive baseline algorithm for quantitative PCR |
US6942836B2 (en) * | 2001-10-16 | 2005-09-13 | Applera Corporation | System for filling substrate chambers with liquid |
US7635588B2 (en) * | 2001-11-29 | 2009-12-22 | Applied Biosystems, Llc | Apparatus and method for differentiating multiple fluorescence signals by excitation wavelength |
WO2003055973A1 (fr) * | 2001-12-26 | 2003-07-10 | Olympus Corporation | Recipient a reaction et mecanisme de retenue de recipient a reaction |
US6677151B2 (en) * | 2002-01-30 | 2004-01-13 | Applera Corporation | Device and method for thermal cycling |
US9157860B2 (en) | 2002-05-16 | 2015-10-13 | Applied Biosystems, Llc | Achromatic lens array |
US7176002B2 (en) * | 2002-05-16 | 2007-02-13 | Applera Corporation | Universal-tagged oligonucleotide primers and methods of use |
US6982166B2 (en) | 2002-05-16 | 2006-01-03 | Applera Corporation | Lens assembly for biological testing |
AU2003245302A1 (en) | 2002-05-17 | 2003-12-02 | Applera Corporation | Apparatus and method for differentiating multiple fluorescence signals by excitation wavelength |
EP1506413B1 (en) | 2002-05-17 | 2016-07-06 | Becton Dickinson and Company | Automated system for isolating, amplyifying and detecting a target nucleic acid sequence |
JP2005526252A (ja) * | 2002-05-17 | 2005-09-02 | アプレラ コーポレイション | 励起源を備える光学機器 |
US20030219754A1 (en) * | 2002-05-23 | 2003-11-27 | Oleksy Jerome E. | Fluorescence polarization detection of nucleic acids |
KR100794699B1 (ko) * | 2002-06-18 | 2008-01-14 | (주)바이오니아 | 핵산증폭반응 산물의 실시간 모니터링 장치 |
US7083974B2 (en) * | 2002-07-12 | 2006-08-01 | Applera Corporation | Rotatable sample disk and method of loading a sample disk |
US7452712B2 (en) * | 2002-07-30 | 2008-11-18 | Applied Biosystems Inc. | Sample block apparatus and method of maintaining a microcard on a sample block |
CA2495051C (en) * | 2002-08-05 | 2012-04-24 | Quanta Biosciences | Improved compositions for in vitro amplification of nucleic acids |
US8277753B2 (en) | 2002-08-23 | 2012-10-02 | Life Technologies Corporation | Microfluidic transfer pin |
WO2004027023A2 (en) * | 2002-09-17 | 2004-04-01 | Pharmacia Corporation | Preservation of rna and reverse transcriptase during automated liquid handling |
US20040062683A1 (en) * | 2002-09-30 | 2004-04-01 | The University Of Hong Kong | Sensitive single-layer sensing device of covalently attached luminescent indicator on glass surface for measuring the concentration of analytes |
US6730883B2 (en) * | 2002-10-02 | 2004-05-04 | Stratagene | Flexible heating cover assembly for thermal cycling of samples of biological material |
ES2527068T3 (es) | 2002-10-23 | 2015-01-19 | University Of Utah Research Foundation | Análisis de fusión de amplicones con colorantes de saturación |
US7169602B2 (en) * | 2002-12-04 | 2007-01-30 | Applera Corporation | Sample substrate for use in biological testing and method for filling a sample substrate |
CA2521999A1 (en) | 2002-12-20 | 2004-09-02 | Biotrove, Inc. | Assay apparatus and method using microfluidic arrays |
US8641987B2 (en) * | 2003-01-24 | 2014-02-04 | Applied Biosystems, Llc | Sample chamber array and method for processing a biological sample |
US7332348B2 (en) | 2003-02-28 | 2008-02-19 | Applera Corporation | Sample substrate having a divided sample chamber and method of loading thereof |
US7041481B2 (en) | 2003-03-14 | 2006-05-09 | The Regents Of The University Of California | Chemical amplification based on fluid partitioning |
US20060192960A1 (en) * | 2003-03-24 | 2006-08-31 | Rencs Erik V | Polarization detection |
EP1613771B1 (en) | 2003-04-04 | 2012-03-21 | Roche Diagnostics GmbH | Improved system for multi color real time pcr |
WO2004092327A2 (en) * | 2003-04-11 | 2004-10-28 | Applera Corporation | Method of generating size standard nucleic acids |
WO2004092330A2 (en) * | 2003-04-11 | 2004-10-28 | Applera Corporation | Method of generating long nucleic acid molecules of defined sequence |
US7148043B2 (en) * | 2003-05-08 | 2006-12-12 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Systems and methods for fluorescence detection with a movable detection module |
DE602004011340T2 (de) | 2003-05-20 | 2008-11-06 | Bayer Healthcare Llc | Diaryl-harnstoffe mit kinasehemmender wirkung |
AU2004243070B2 (en) | 2003-05-23 | 2010-04-15 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Localized temperature control for spatial arrays of reaction media |
US20040258563A1 (en) | 2003-06-23 | 2004-12-23 | Applera Corporation | Caps for sample wells and microcards for biological materials |
EP1508809B1 (en) * | 2003-08-20 | 2007-02-28 | Sysmex Corporation | Sample analyzer and nucleic acid detector |
JP2005069973A (ja) * | 2003-08-27 | 2005-03-17 | Kyocera Corp | 遺伝子反応管および遺伝子検出装置 |
US20050112634A1 (en) * | 2003-09-19 | 2005-05-26 | Woudenberg Timothy M. | High density sequence detection methods and apparatus |
US7570443B2 (en) | 2003-09-19 | 2009-08-04 | Applied Biosystems, Llc | Optical camera alignment |
KR100580639B1 (ko) * | 2003-12-30 | 2006-05-16 | 삼성전자주식회사 | 미세유체 검출을 위한 형광검출기 |
US8105554B2 (en) | 2004-03-12 | 2012-01-31 | Life Technologies Corporation | Nanoliter array loading |
EP1745120A4 (en) * | 2004-04-16 | 2010-04-14 | Spartan Bioscience Inc | SYSTEM FOR RAPID AMPLIFICATION AND DETECTION OF NUCLEIC ACIDS |
US9657347B2 (en) | 2004-04-20 | 2017-05-23 | University of Utah Research Foundation and BioFire Defense, LLC | Nucleic acid melting analysis with saturation dyes |
US7387887B2 (en) * | 2004-04-20 | 2008-06-17 | University Of Utah Research Foundation | Nucleic acid melting analysis with saturation dyes |
PL1773978T3 (pl) * | 2004-05-19 | 2014-09-30 | Massachusetts Inst Technology | Trójwymiarowe perfuzyjne modele tkankowo-komórkowe chorób |
DE102004025538A1 (de) * | 2004-05-25 | 2005-12-22 | Advalytix Ag | Temperierverfahren und -vorrichtung für die Temperaturbehandlung kleiner Flüssigkeitsmengen |
US7622296B2 (en) * | 2004-05-28 | 2009-11-24 | Wafergen, Inc. | Apparatus and method for multiplex analysis |
US20050282270A1 (en) * | 2004-06-21 | 2005-12-22 | Applera Corporation | System for thermally cycling biological samples with heated lid and pneumatic actuator |
US20060009916A1 (en) * | 2004-07-06 | 2006-01-12 | Xitong Li | Quantitative PCR data analysis system (QDAS) |
WO2006012468A2 (en) * | 2004-07-23 | 2006-02-02 | (Osi) Eyetech, Inc. | Detection of oligonuleotides by dual hybridization |
WO2006017724A1 (en) * | 2004-08-06 | 2006-02-16 | Becton, Dickinson And Company | Sequences and methods for detection of cytomegalovirus |
EP2371927B1 (en) | 2004-09-16 | 2020-03-11 | Life Technologies Corporation | Fluorescent dye compounds, conjugates and uses thereof |
EP1791982B1 (en) | 2004-09-21 | 2011-01-05 | Life Technologies Corporation | TWO-COLOR REAL-TIME/END-POINT QUANTITATION OF MICRORNAS (MIRNAs) |
US7429923B2 (en) * | 2004-10-22 | 2008-09-30 | Honeywell International Inc. | Neuronal sensor networks |
US20060088844A1 (en) * | 2004-10-22 | 2006-04-27 | Honeywell International Inc. | Real-time PCR microarray based on evanescent wave biosensor |
CA2587670A1 (en) | 2004-11-01 | 2006-05-11 | George Mason University | Compositions and methods for diagnosing colon disorders |
EP1788095B1 (en) | 2005-11-18 | 2011-04-13 | Eppendorf Array Technologies SA | Reaction chamber for real time PCR comprising capture probes and permitting detection of the PCR product by hybridisation without opening the PCR vessel |
ATE482288T1 (de) | 2004-11-18 | 2010-10-15 | Eppendorf Array Technologies | Echtzeit-pcr von zielen auf einem mikroarray |
US8084260B2 (en) * | 2004-11-24 | 2011-12-27 | Applied Biosystems, Llc | Spectral calibration method and system for multiple instruments |
US20060133080A1 (en) * | 2004-12-17 | 2006-06-22 | Bio-Rad Laboratories, Inc., A Corporation Of The State Of Delaware | Multiple light source orientation system for multi-well reaction plate |
US7315376B2 (en) * | 2005-01-07 | 2008-01-01 | Advanced Molecular Systems, Llc | Fluorescence detection system |
US7709249B2 (en) * | 2005-04-01 | 2010-05-04 | 3M Innovative Properties Company | Multiplex fluorescence detection device having fiber bundle coupling multiple optical modules to a common detector |
US7507575B2 (en) * | 2005-04-01 | 2009-03-24 | 3M Innovative Properties Company | Multiplex fluorescence detection device having removable optical modules |
DE102005027555B3 (de) * | 2005-06-14 | 2006-10-05 | Eppendorf Ag | Thermocycler |
US20070009382A1 (en) * | 2005-07-05 | 2007-01-11 | William Bedingham | Heating element for a rotating multiplex fluorescence detection device |
US7527763B2 (en) | 2005-07-05 | 2009-05-05 | 3M Innovative Properties Company | Valve control system for a rotating multiplex fluorescence detection device |
CA2624634A1 (en) | 2005-10-03 | 2007-04-12 | Applera Corporation | Compositions, methods, and kits for amplifying nucleic acids |
CA2624917C (en) * | 2005-10-05 | 2013-07-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Non-fluorescent energy transfer |
US7727473B2 (en) | 2005-10-19 | 2010-06-01 | Progentech Limited | Cassette for sample preparation |
US7754148B2 (en) | 2006-12-27 | 2010-07-13 | Progentech Limited | Instrument for cassette for sample preparation |
US20070098594A1 (en) * | 2005-11-03 | 2007-05-03 | Roche Molecular Systems, Inc. | Analytical multi-spectral optical detection system |
US8232091B2 (en) | 2006-05-17 | 2012-07-31 | California Institute Of Technology | Thermal cycling system |
US7629124B2 (en) * | 2006-06-30 | 2009-12-08 | Canon U.S. Life Sciences, Inc. | Real-time PCR in micro-channels |
DE102006036171B4 (de) * | 2006-07-28 | 2008-10-09 | Analytik Jena Ag | Anordnung und Verfahren zur mehrkanaligen Fluoreszenzmessung in PCR-Proben |
WO2008079972A2 (en) | 2006-12-20 | 2008-07-03 | Bayer Healthcare Llc | 4-{4- [ ({3-tert-butyl-1- [3- (hydroxymethyl) phenyl] - 1h- pyrazol- 5 -yl } carbamoyl) -amin o] -3-chlorophenoxy} -n-methylpyridine-2-carboxamide as an inhibitor of the vegfr kinase for the treatment of cancer |
WO2008092291A1 (en) * | 2007-01-17 | 2008-08-07 | Honeywell International Inc. | Microarray reader based on evanescent wave detection and method of reading a microarray |
EP2109627A4 (en) | 2007-01-22 | 2014-07-23 | Wafergen Inc | APPARATUS FOR IMPLEMENTING HIGH-PERFORMANCE CHEMICAL REACTIONS |
US7700928B2 (en) * | 2007-01-25 | 2010-04-20 | Etaluma, Inc. | Apparatus and method for interleaving detection of fluorescence and luminescence |
KR101422467B1 (ko) * | 2007-02-08 | 2014-07-24 | 삼성전자주식회사 | 미세유체 칩 내의 형광을 검출하기 위한 시스템 및 형광검출 방법 |
KR101334183B1 (ko) * | 2007-06-01 | 2013-12-02 | 삼성전자주식회사 | 미세 반응을 위한 형광 검출 모듈과 이를 구비한 형광 검출시스템 |
US20090018776A1 (en) * | 2007-07-10 | 2009-01-15 | Taylor Roger H | System and method for normalizing data in nucleic acid amplification procedures |
WO2009081305A1 (en) * | 2007-12-19 | 2009-07-02 | Koninklijke Philips Electronics N.V. | Detection system and method |
JP2011510675A (ja) * | 2008-02-07 | 2011-04-07 | フォレンシック サイエンシーズ サーヴィス リミテッド | 分析の及び分析に関する改善 |
CN101945706B (zh) * | 2008-02-15 | 2013-11-20 | 艾本德股份有限公司 | 热设备 |
WO2009103003A2 (en) * | 2008-02-15 | 2009-08-20 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Scanning fluorescent reader with diffuser system |
EP2107125A1 (en) | 2008-03-31 | 2009-10-07 | Eppendorf Array Technologies SA (EAT) | Real-time PCR of targets on a micro-array |
EP2108451A1 (de) | 2008-04-11 | 2009-10-14 | Eppendorf AG | Vorrichtung zum Durchführen von Reaktionen in Proben |
DE102008001322A1 (de) * | 2008-04-22 | 2009-10-29 | Linos Photonics Gmbh & Co. Kg | System zur optischen Analyse von Probenarrays |
EP2276849B1 (en) * | 2008-04-24 | 2014-12-03 | 3M Innovative Properties Company | Analysis of nucleic acid amplification curves using wavelet transformation |
KR101390250B1 (ko) * | 2008-06-23 | 2014-05-02 | (주)바이오니아 | 중합효소 연쇄반응 블록 및 이를 이용한 연속형 실시간 모니터링 장치 |
US9017946B2 (en) * | 2008-06-23 | 2015-04-28 | Canon U.S. Life Sciences, Inc. | Systems and methods for monitoring the amplification of DNA |
EP2321427B1 (en) | 2008-08-12 | 2017-11-29 | Stokes Bio Limited | Methods for digital pcr |
US9417190B2 (en) | 2008-09-23 | 2016-08-16 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Calibrations and controls for droplet-based assays |
US9598725B2 (en) * | 2010-03-02 | 2017-03-21 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Emulsion chemistry for encapsulated droplets |
US9492797B2 (en) | 2008-09-23 | 2016-11-15 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | System for detection of spaced droplets |
US9132394B2 (en) | 2008-09-23 | 2015-09-15 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | System for detection of spaced droplets |
WO2011120024A1 (en) | 2010-03-25 | 2011-09-29 | Quantalife, Inc. | Droplet generation for droplet-based assays |
US10512910B2 (en) | 2008-09-23 | 2019-12-24 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Droplet-based analysis method |
US8633015B2 (en) | 2008-09-23 | 2014-01-21 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Flow-based thermocycling system with thermoelectric cooler |
US8951939B2 (en) | 2011-07-12 | 2015-02-10 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Digital assays with multiplexed detection of two or more targets in the same optical channel |
US11130128B2 (en) | 2008-09-23 | 2021-09-28 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Detection method for a target nucleic acid |
US8709762B2 (en) | 2010-03-02 | 2014-04-29 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | System for hot-start amplification via a multiple emulsion |
US8663920B2 (en) | 2011-07-29 | 2014-03-04 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Library characterization by digital assay |
US9399215B2 (en) | 2012-04-13 | 2016-07-26 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Sample holder with a well having a wicking promoter |
US9194861B2 (en) | 2009-09-02 | 2015-11-24 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Method of mixing fluids by coalescence of multiple emulsions |
US9156010B2 (en) | 2008-09-23 | 2015-10-13 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Droplet-based assay system |
US9764322B2 (en) | 2008-09-23 | 2017-09-19 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | System for generating droplets with pressure monitoring |
EP2376659B1 (en) | 2008-12-17 | 2015-12-02 | Life Technologies Corporation | Methods, compositions, and kits for detecting allelic variants |
WO2012033396A1 (en) * | 2008-12-18 | 2012-03-15 | Universiti Sains Malaysia | A disposable multiplex polymerase chain reaction (pcr) chip and device |
JP5864262B2 (ja) * | 2009-01-08 | 2016-02-17 | アイティ−アイエス インターナショナル リミテッドIt−Is International Ltd | 化学および/または生化学反応のための光学システム |
US8628923B2 (en) | 2009-01-13 | 2014-01-14 | Fluidigm Corporation | Single cell nucleic acid analysis |
US20100213063A1 (en) * | 2009-02-09 | 2010-08-26 | Frederic Zenhausern | Analysis |
JP5805064B2 (ja) * | 2009-03-27 | 2015-11-04 | ライフ テクノロジーズ コーポレーション | 対立遺伝子変種を検出するための方法、組成物、およびキット |
WO2010115160A2 (en) * | 2009-04-03 | 2010-10-07 | Helixis, Inc. | Devices and methods for heating biological samples |
WO2010118539A2 (en) | 2009-04-14 | 2010-10-21 | Biocartis Sa | Hifu induced cavitation with reduced power threshold |
ES2822105T3 (es) | 2009-04-15 | 2021-04-29 | Biocartis Nv | Sistema de detección óptica para monitorizar la reacción rtPCR |
CA2752823C (en) | 2009-04-15 | 2016-08-30 | Biocartis Sa | Protection of bioanalytical sample chambers |
JP5766180B2 (ja) | 2009-05-06 | 2015-08-19 | ビオカルティ ナームローゼ フェノーツハップBiocartis NV | 試料キャリヤを切断するための装置 |
EP2290102A1 (en) | 2009-07-08 | 2011-03-02 | Administración General De La Communidad Autónoma De Euskadi | Methods for the diagnosis of multiple sclerosis based on its microRNA expression profiling |
EP2301666B1 (en) * | 2009-09-09 | 2021-06-30 | Cole-Parmer Ltd. | Optical system for multiple reactions |
CA2977845C (en) | 2010-02-23 | 2020-08-04 | Luminex Corporation | Apparatus and methods for integrated sample preparation, reaction and detection |
CA2767113A1 (en) | 2010-03-25 | 2011-09-29 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Detection system for droplet-based assays |
CA2767114A1 (en) | 2010-03-25 | 2011-09-29 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Droplet transport system for detection |
DE102010016382B4 (de) | 2010-04-09 | 2022-06-02 | Leica Microsystems Cms Gmbh | Fluoreszenzmikroskop und Verfahren zur Durchführung von Multipositionierungen in einer Screening-Applikation |
CA2796744A1 (en) | 2010-04-17 | 2011-10-20 | Bayer Healthcare Llc | Synthetic metabolites of fluoro substituted omega-carboxyaryl diphenyl urea for the treatment and prevention of diseases and conditions |
WO2011143791A1 (en) | 2010-05-20 | 2011-11-24 | Honeywell International Inc. | Microarray reader based on evanescent wave detection |
DE102010023486A1 (de) * | 2010-06-11 | 2011-12-15 | B. Braun Avitum Ag | Nachweisvorrichtung und -verfahren |
CA2802741C (en) | 2010-06-30 | 2020-07-07 | Gen-Probe Incorporated | Method and apparatus for identifying analyte-containing samples using single-read determination of analyte and process control signals |
BR112013001647A2 (pt) | 2010-07-23 | 2016-05-24 | Beckman Coulter Inc | sistema e método contendo unidades analíticas |
JP5887041B2 (ja) | 2010-08-02 | 2016-03-16 | ウェイト、ブレント、エル. | ポリメラーゼ連鎖反応のための加圧可能なカートリッジ |
CN103429331B (zh) | 2010-11-01 | 2016-09-28 | 伯乐生命医学产品有限公司 | 用于形成乳液的系统 |
EP3151015A1 (en) | 2010-11-15 | 2017-04-05 | F. Hoffmann-La Roche AG | Instrument and method for the automated thermal treatment of liquid samples |
EP2913408A1 (en) * | 2010-12-29 | 2015-09-02 | Life Technologies Corporation | Ddao compounds as fluorescent reference standards |
EP2686449B1 (en) | 2011-03-18 | 2020-11-18 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Multiplexed digital assays with combinatorial use of signals |
WO2012149042A2 (en) | 2011-04-25 | 2012-11-01 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Methods and compositions for nucleic acid analysis |
CN107338189B (zh) | 2011-05-04 | 2021-02-02 | 卢米耐克斯公司 | 用于集成的样品制备、反应和检测的设备与方法 |
CN103635594B (zh) | 2011-05-09 | 2018-02-13 | 富鲁达公司 | 基于探针的核酸检测 |
EP2525211B1 (en) | 2011-05-16 | 2018-01-03 | F. Hoffmann-La Roche AG | Instrument and method for detecting analytes |
BR112013027990B1 (pt) | 2011-05-18 | 2020-11-03 | Diasorin S.P.A. | estrutura de válvulas em um dispositivo de processamento de amostras e método para funcionamento de válvulas em um dispositivo de processamento de amostras |
EP2709761B1 (en) | 2011-05-18 | 2019-08-14 | DiaSorin S.p.A. | Systems and methods for volumetric metering on a sample processing device |
MX337943B (es) | 2011-05-18 | 2016-03-29 | Focus Diagnostics Inc | Sistemas y metodos para detectar la presencia de un volumen seleccionado de material en un dispositivo de procesamiento de muestra. |
WO2012159025A2 (en) | 2011-05-18 | 2012-11-22 | Life Technologies Corporation | Chromosome conformation analysis |
USD672467S1 (en) | 2011-05-18 | 2012-12-11 | 3M Innovative Properties Company | Rotatable sample processing disk |
EP2546358A1 (en) | 2011-07-15 | 2013-01-16 | Laboratorios Del. Dr. Esteve, S.A. | Methods and reagents for efficient control of HIV progression |
AU2012296385A1 (en) | 2011-08-18 | 2014-02-20 | Nestec S.A. | Compositions and methods for detecting allelic variants |
ITMI20111893A1 (it) * | 2011-10-19 | 2013-04-20 | St Microelectronics Srl | Apparecchio diagnostico, in particolare per l'effettuazione di operazioni di termociclazione durante una reazione rt-pcr, con rilevamento ottico |
BR112014011048A2 (pt) | 2011-11-07 | 2017-05-02 | Beckman Coulter Inc | braço robótico |
KR20140091032A (ko) | 2011-11-07 | 2014-07-18 | 베크만 컬터, 인코포레이티드 | 검체 수송 시스템의 자기 감쇠 |
WO2013070740A1 (en) | 2011-11-07 | 2013-05-16 | Beckman Coulter, Inc. | Aliquotter system and workflow |
WO2013070756A2 (en) | 2011-11-07 | 2013-05-16 | Beckman Coulter, Inc. | System and method for processing samples |
ES2729283T3 (es) | 2011-11-07 | 2019-10-31 | Beckman Coulter Inc | Sistema de centrífuga y flujo de trabajo |
EP2776844B1 (en) | 2011-11-07 | 2020-09-30 | Beckman Coulter, Inc. | Specimen container detection |
ES2434853B1 (es) | 2012-06-12 | 2014-09-30 | Fundación Centro Nacional De Investigaciones Cardiovasculares Carlos Iii | Marcador molecular de potencia terapéutica de células madre mesenquimales humanas y sus usos |
EP3643793A1 (en) | 2012-06-14 | 2020-04-29 | Life Technologies Corporation | Novel compositions, methods and kits for polymerase chain reaction (pcr) |
EP2883039A1 (en) | 2012-08-10 | 2015-06-17 | Streck Inc. | Real-time optical system for polymerase chain reaction |
US10174373B2 (en) | 2012-10-18 | 2019-01-08 | Idexx Laboratories, Inc. | Nucleic acid amplification controls and kits and methods of use thereof |
KR102003784B1 (ko) * | 2012-10-19 | 2019-07-25 | 주식회사 미코바이오메드 | 마이크로 pcr 칩 및 이를 포함하는 실시간 pcr 장치 |
WO2014113204A1 (en) | 2013-01-17 | 2014-07-24 | Personalis, Inc. | Methods and systems for genetic analysis |
CN107233945B (zh) | 2013-03-19 | 2019-10-11 | 生命科技股份有限公司 | 热循环仪封盖 |
EP3014251A1 (en) | 2013-06-28 | 2016-05-04 | Streck Inc. | Devices for real-time polymerase chain reaction |
DE102013215210B3 (de) * | 2013-08-02 | 2014-10-16 | Analytik Jena Ag | Reaktionsgefäß, Reaktionsgefäßanordnung und Verfahren zur Analyseeiner Substanz |
KR102351838B1 (ko) | 2013-08-05 | 2022-01-18 | 트위스트 바이오사이언스 코포레이션 | 드 노보 합성된 유전자 라이브러리 |
WO2015022669A2 (en) | 2013-08-15 | 2015-02-19 | Centre Hospitalier Universitarie Vaudois | Methods for typing hla alleles |
EP3039161B1 (en) | 2013-08-30 | 2021-10-06 | Personalis, Inc. | Methods and systems for genomic analysis |
GB2535066A (en) | 2013-10-03 | 2016-08-10 | Personalis Inc | Methods for analyzing genotypes |
US9630182B2 (en) * | 2013-12-04 | 2017-04-25 | Leidos Innovations Technology, Inc. | Non-contact infrared thermocycling |
JP6229505B2 (ja) * | 2014-01-15 | 2017-11-15 | 富士レビオ株式会社 | 温調システム |
EP2942401A1 (en) | 2014-05-09 | 2015-11-11 | Lifecodexx AG | Detection of DNA that originates from a specific cell-type |
CA2985134A1 (en) | 2014-05-09 | 2015-11-12 | Sebastian Gromminger | Detection of dna that originates from a specific cell-type and related methods |
EP2942400A1 (en) | 2014-05-09 | 2015-11-11 | Lifecodexx AG | Multiplex detection of DNA that originates from a specific cell-type |
DE102014113163B3 (de) * | 2014-09-12 | 2015-12-17 | Analytik Jena Ag | Reaktionsgefäß, Reaktionsgefäßanordnung und Verfahren zur Analyse einer Substanz |
DE202014104316U1 (de) | 2014-09-12 | 2014-12-08 | Analytik Jena Gmbh | Reaktionsgefäß und Reaktionsgefäßanordnung zur Analyse einer Substanz |
WO2016070131A1 (en) | 2014-10-30 | 2016-05-06 | Personalis, Inc. | Methods for using mosaicism in nucleic acids sampled distal to their origin |
WO2016126987A1 (en) | 2015-02-04 | 2016-08-11 | Twist Bioscience Corporation | Compositions and methods for synthetic gene assembly |
WO2016126882A1 (en) | 2015-02-04 | 2016-08-11 | Twist Bioscience Corporation | Methods and devices for de novo oligonucleic acid assembly |
EP3259602B9 (en) | 2015-02-20 | 2021-05-19 | Takara Bio USA, Inc. | Method for rapid accurate dispensing, visualization and analysis of single cells |
US9981239B2 (en) | 2015-04-21 | 2018-05-29 | Twist Bioscience Corporation | Devices and methods for oligonucleic acid library synthesis |
CA2998169A1 (en) | 2015-09-18 | 2017-03-23 | Twist Bioscience Corporation | Oligonucleic acid variant libraries and synthesis thereof |
WO2017053450A1 (en) | 2015-09-22 | 2017-03-30 | Twist Bioscience Corporation | Flexible substrates for nucleic acid synthesis |
HUE050491T2 (hu) | 2015-11-10 | 2020-12-28 | Eurofins Lifecodexx Gmbh | Magzati kromoszomális aneuploidiák kimutatása olyan DNS régiókat alkalmazva, amelyek különbözõképpen vannak metilezve a magzat és a terhes nõstény között |
CA3006867A1 (en) | 2015-12-01 | 2017-06-08 | Twist Bioscience Corporation | Functionalized surfaces and preparation thereof |
DE102015121362B4 (de) | 2015-12-08 | 2018-05-24 | Analytik Jena Ag | Temperiervorrichtung mit einem Reaktionsgefäß |
EP3387107B1 (en) | 2015-12-11 | 2020-08-12 | Spartan Bioscience Inc. | Tube sealing system and methods for nucleic acid amplification |
US11299783B2 (en) | 2016-05-27 | 2022-04-12 | Personalis, Inc. | Methods and systems for genetic analysis |
US11460405B2 (en) | 2016-07-21 | 2022-10-04 | Takara Bio Usa, Inc. | Multi-Z imaging and dispensing with multi-well devices |
SG11201901563UA (en) | 2016-08-22 | 2019-03-28 | Twist Bioscience Corp | De novo synthesized nucleic acid libraries |
WO2018057526A2 (en) | 2016-09-21 | 2018-03-29 | Twist Bioscience Corporation | Nucleic acid based data storage |
CA3047128A1 (en) | 2016-12-16 | 2018-06-21 | Twist Bioscience Corporation | Variant libraries of the immunological synapse and synthesis thereof |
US10427162B2 (en) | 2016-12-21 | 2019-10-01 | Quandx Inc. | Systems and methods for molecular diagnostics |
CN110892485B (zh) | 2017-02-22 | 2024-03-22 | 特韦斯特生物科学公司 | 基于核酸的数据存储 |
CN110913865A (zh) | 2017-03-15 | 2020-03-24 | 特韦斯特生物科学公司 | 免疫突触的变体文库及其合成 |
CN106906130A (zh) * | 2017-04-19 | 2017-06-30 | 北京倍肯创新诊断技术研究院有限责任公司 | 一种高透光平底pcr反应管 |
WO2018231864A1 (en) | 2017-06-12 | 2018-12-20 | Twist Bioscience Corporation | Methods for seamless nucleic acid assembly |
US10696965B2 (en) | 2017-06-12 | 2020-06-30 | Twist Bioscience Corporation | Methods for seamless nucleic acid assembly |
CN111566125A (zh) | 2017-09-11 | 2020-08-21 | 特韦斯特生物科学公司 | Gpcr结合蛋白及其合成 |
CN111565834B (zh) | 2017-10-20 | 2022-08-26 | 特韦斯特生物科学公司 | 用于多核苷酸合成的加热的纳米孔 |
AU2019205269A1 (en) | 2018-01-04 | 2020-07-30 | Twist Bioscience Corporation | DNA-based digital information storage |
KR102133633B1 (ko) | 2018-04-17 | 2020-07-13 | (주)로고스바이오시스템스 | 핵산증폭반응산물을 실시간으로 검출하는 장치 |
SG11202011467RA (en) | 2018-05-18 | 2020-12-30 | Twist Bioscience Corp | Polynucleotides, reagents, and methods for nucleic acid hybridization |
US11814750B2 (en) | 2018-05-31 | 2023-11-14 | Personalis, Inc. | Compositions, methods and systems for processing or analyzing multi-species nucleic acid samples |
US10801064B2 (en) | 2018-05-31 | 2020-10-13 | Personalis, Inc. | Compositions, methods and systems for processing or analyzing multi-species nucleic acid samples |
US20210324461A1 (en) | 2018-08-16 | 2021-10-21 | Life Technologies Corporation | Reagents, mixtures, kits and methods for amplification of nucleic acids |
EP3930753A4 (en) | 2019-02-26 | 2023-03-29 | Twist Bioscience Corporation | NUCLEIC ACID VARIANT BANKS FOR THE GLP1 RECEPTOR |
SG11202109283UA (en) | 2019-02-26 | 2021-09-29 | Twist Bioscience Corp | Variant nucleic acid libraries for antibody optimization |
WO2020174495A1 (en) * | 2019-02-27 | 2020-09-03 | V Suri | Endpoint fluorescence detection system for amplified nucleic acid |
US11332738B2 (en) | 2019-06-21 | 2022-05-17 | Twist Bioscience Corporation | Barcode-based nucleic acid sequence assembly |
KR102368556B1 (ko) * | 2019-11-21 | 2022-02-28 | 주식회사 코사이언스 | 유전체 분자 진단용 휴대용 램프 pcr 장치 |
DE102020108957B4 (de) | 2020-03-31 | 2021-10-07 | Otto-Von-Guericke-Universität Magdeburg | Vorrichtung, Verfahren und Computerprogramm zur Fluoreszenzmessung |
WO2021213636A1 (de) * | 2020-04-21 | 2021-10-28 | Hombrechtikon Systems Engineering Ag | Probenbehältnis und verfahren zur analyse einer probe |
DE202020005538U1 (de) | 2020-05-29 | 2021-10-27 | Analytik Jena Gmbh | Temperiervorrichtung mit optischer Einheit |
DE102020114414A1 (de) | 2020-05-29 | 2021-12-02 | Analytik Jena Gmbh | Temperiervorrichtung mit optischer Einheit |
EP4326899A1 (en) | 2021-04-20 | 2024-02-28 | Simsen Diagnostics AB | Compositions and methods for cell-free nucleic acid isolation |
WO2023035003A1 (en) | 2021-09-03 | 2023-03-09 | Elegen Corp. | Multi-way bead-sorting devices, systems, and methods of use thereof using pressure sources |
WO2023067110A1 (en) | 2021-10-20 | 2023-04-27 | Tataa Biocenter Ab | Methods and compositions for detection of mutant nucleic acid sequences |
Family Cites Families (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4150295A (en) * | 1978-01-05 | 1979-04-17 | Analytical Radiation Corporation | Method and apparatus for background correction in photoluminescent analysis |
US4577109A (en) * | 1980-10-06 | 1986-03-18 | Regents Of The University Of California | Remote multi-position information gathering system and method |
US4501970A (en) * | 1982-10-12 | 1985-02-26 | Dynatech Laboratories Incorporated | Fluorometer |
US4747687A (en) * | 1984-06-08 | 1988-05-31 | Milton Roy Company | Ball cell windows for spectrophotometers |
US5038852A (en) * | 1986-02-25 | 1991-08-13 | Cetus Corporation | Apparatus and method for performing automated amplification of nucleic acid sequences and assays using heating and cooling steps |
US4916060A (en) * | 1985-09-17 | 1990-04-10 | Massachusetts Institute Of Technology | Process for chemical measurement in small volume samples by fluorescent indicators |
US5135717A (en) * | 1986-12-24 | 1992-08-04 | British Technology Group Usa Inc. | Tetrabenztriazaporphyrin reagents and kits containing the same |
US4954435A (en) * | 1987-01-12 | 1990-09-04 | Becton, Dickinson And Company | Indirect colorimetric detection of an analyte in a sample using ratio of light signals |
CA1340460C (en) * | 1987-11-04 | 1999-03-23 | Richard J. Massey | Electrochemiluminescent rhenium moieties and methods for their use |
US5239360A (en) * | 1988-10-21 | 1993-08-24 | Applied Biosystems, Inc. | Lens for capillary electrophoresis and chromatography |
US5037199A (en) * | 1989-02-22 | 1991-08-06 | Linear Instruments Corporation | Ball lens micro-cell |
US5018866A (en) * | 1989-09-12 | 1991-05-28 | Packard Instrument Company | Method and apparatus for performing high sensitivity fluorescence measurements |
US5210015A (en) * | 1990-08-06 | 1993-05-11 | Hoffman-La Roche Inc. | Homogeneous assay system using the nuclease activity of a nucleic acid polymerase |
KR100236506B1 (ko) * | 1990-11-29 | 2000-01-15 | 퍼킨-엘머시터스인스트루먼츠 | 폴리머라제 연쇄 반응 수행 장치 |
US5556751A (en) * | 1991-04-25 | 1996-09-17 | Amoco Corporation | Selective amplification system using Q-β replicase |
US5994056A (en) * | 1991-05-02 | 1999-11-30 | Roche Molecular Systems, Inc. | Homogeneous methods for nucleic acid amplification and detection |
JP2912957B2 (ja) * | 1991-06-18 | 1999-06-28 | 東ソー株式会社 | 酵素活性測定方法及び装置 |
AU4047893A (en) * | 1992-04-06 | 1993-11-08 | Abbott Laboratories | Method and device for detection of nucleic acid or analyte using total internal reflectance |
US5538848A (en) * | 1994-11-16 | 1996-07-23 | Applied Biosystems Division, Perkin-Elmer Corp. | Method for detecting nucleic acid amplification using self-quenching fluorescence probe |
US5547861A (en) * | 1994-04-18 | 1996-08-20 | Becton, Dickinson And Company | Detection of nucleic acid amplification |
-
1995
- 1995-04-19 AT AT95917064T patent/ATE198511T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-04-19 AU AU23896/95A patent/AU698953B2/en not_active Expired
- 1995-04-19 DE DE69519783T patent/DE69519783T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-19 CA CA002159830A patent/CA2159830C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-19 JP JP7528282A patent/JP2909216B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-19 EP EP95917064A patent/EP0706649B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-19 WO PCT/US1995/004818 patent/WO1995030139A1/en active IP Right Grant
-
1996
- 1996-12-02 US US08/752,973 patent/US5928907A/en not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-03-20 US US09/046,114 patent/US6015674A/en not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
BIO/TECHNOLOGY,Vol.10,p413−417(1992) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008544254A (ja) * | 2005-06-13 | 2008-12-04 | ストラタジーン カリフォルニア | 別個の光学経路を有している蛍光の励起および検出のためのシステムおよび方法 |
WO2007102400A1 (ja) | 2006-03-06 | 2007-09-13 | Sanyo Electric Co., Ltd. | 核酸増幅生成物のリアルタイム検出装置 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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US6015674A (en) | 2000-01-18 |
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ATE198511T1 (de) | 2001-01-15 |
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