JP2024033003A - 細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜、細胞培養用担体及び細胞培養用容器 - Google Patents

Abstract

【課題】細胞の播種後の定着性に優れ、細胞の増殖率を高めることができる、細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜を提供する。【解決手段】細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜であって、細胞培養用足場材料は、ポリビニルアセタール骨格を有する合成樹脂を含み、樹脂膜が、少なくとも第１の相及び第２の相を含む、相分離構造を有し、第１の相及び第２の相のうち一方の相の表面全体に対する表面積の比が、０．０１以上、０．９５以下である、樹脂膜。【選択図】図１

Description

本発明は、細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜に関する。また、本発明は、上記樹脂膜を備える細胞培養用担体及び細胞培養用容器にも関する。

近年、細胞医薬や幹細胞を用いた次世代医療が注目を集めている。なかでも、再生医療ヒト胚性幹細胞（ｈＥＳＣ）や、ヒト人工多能性幹細胞（ｈｉＰＳＣ）などのヒト多能性幹細胞（ｈＰＳＣ）、あるいはそれらから誘導される分化細胞は、創薬や再生医療への応用が期待されている。このような応用を果たすには、多能性幹細胞や、分化細胞を安全に、かつ再現性よく培養し、増殖させることが必要となる。

特に、再生医療の産業利用上においては、幹細胞を多量に扱う必要があることから、天然高分子材料や合成高分子材料、あるいはフィーダー細胞を用いて多能性幹細胞の増殖を支持することが必要となる。そのため、天然高分子材料や合成高分子材料等の足場材料を用いた培養方法について種々検討されている。

例えば、下記の特許文献１には、ポリビニルアセタール化合物からなる成形物又は該ポリビニルアセタール化合物と水溶性多糖類とからなる成形物からなり、該ポリビニルアセタール化合物のアセタール化度が２０～６０モル％である細胞培養用担体が開示されている。

下記の特許文献２には、第１の繊維ポリマー足場材を含む組成物であって、第１の繊維ポリマー足場材の繊維が整列されている、組成物が開示されている。上記第１の繊維ポリマー足場材を構成する繊維は、ポリグリコール酸やポリ乳酸などの脂肪族ポリエステルにより構成されることが記載されている。

また、下記の特許文献３には、多能性幹細胞の未分化性を維持するための細胞培養方法であって、ポリロタキサンブロック共重合体で被覆された表面を有する培養器上で該多能性幹細胞を培養する工程を含む方法が開示されている。

特開２００６－３１４２８５号公報 特表２００９－５２４５０７号公報 特開２０１７－２３００８号公報

ところで、足場材料として天然高分子材料を用いた場合、播種後の細胞の定着性を高めることができる。特に、天然高分子材料としてラミニン、ヴィトロネクチンなどの接着タンパク質やマウス肉腫由来のマトリゲルを使用すると、播種後の細胞の定着性が非常に高いことが知られている。一方、天然高分子材料は、高価であったり、天然由来物質であるためロット間のばらつきが大きかったり、動物由来の成分による安全上の懸念があったりする。

これに対して、合成樹脂を用いた足場材料は、天然高分子材料を用いた足場材料と比べて、操作性がよく、安価であり、ロット間のばらつきが小さく、かつ安全性に優れている。しかしながら、特許文献１～３のような合成樹脂を用いた足場材料では、親水性が高い合成樹脂が用いられているために合成樹脂が過度に膨潤したりする。また、合成樹脂は、天然高分子材料に比べて、細胞との親和性が低いことから、培養中に細胞塊が剥離してしまうことがある。このように合成樹脂を用いた足場材料は、細胞の播種後の定着性が低く、細胞が十分に増殖しないことがある。

本発明の目的は、細胞の播種後の定着性に優れ、細胞の増殖率を高めることができる、細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜、細胞培養用担体及び細胞培養用容器を提供することにある。

本発明に係る細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜は、前記細胞培養用足場材料が合成樹脂を含み、前記樹脂膜が、少なくとも第１の相及び第２の相を含む、相分離構造を有し、前記第１の相及び第２の相のうち一方の相の表面全体に対する表面積の比が、０．０１以上、０．９５以下である。

本発明に係る樹脂膜のある特定の局面では、前記第２の相の面積に対する周囲長の比（周囲長／面積）が、０．００１（１／ｎｍ）以上、０．４０（１／ｎｍ）以下である。

本発明に係る樹脂膜の他の特定の局面では、前記相分離構造が、海島構造であり、前記第１の相が海部であり、前記第２の相が島部である。

本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、前記島部である前記第２の相の個数が、１個／μｍ^２以上、５０００個／μｍ^２以下である。

本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、前記相分離構造が、前記合成樹脂の分子内における相分離構造により構成されている。

本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、表面自由エネルギーの分散項成分が２５．０ｍＪ／ｍ^２以上、５０．０ｍＪ／ｍ^２以下、かつ、極性項成分が１．０ｍＪ／ｍ^２以上、２０．０ｍＪ／ｍ^２以下である。

本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、前記合成樹脂が、カチオン性官能基を有し、前記合成樹脂の構造単位中に含まれる前記カチオン性官能基の含有量が、０．２モル％以上、５０モル％以下である。

本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、前記第２の相が、ペプチド部を有する。

本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、前記ペプチド部が、細胞接着性のアミノ酸配列を有する。

本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、水膨潤倍率が５０％以下である。

本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、１００℃における貯蔵弾性率が、１．０×１０^４Ｐａ以上、１．０×１０^８Ｐａ以下であり、２５℃における貯蔵弾性率と１００℃における貯蔵弾性率との比（（２５℃における貯蔵弾性率）／（１００℃における貯蔵弾性率））が、１．０×１０^１以上、１．０×１０^５以下である。

本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、前記細胞培養用足場材料は、動物由来の原料を実質的に含まない。

本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、前記合成樹脂がビニル重合体を含む。

本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、前記合成樹脂が、少なくともポリビニルアルコール誘導体又はポリ（メタ）アクリル酸エステルを含む。

本発明に係る細胞培養用担体は、担体と、本発明に従って構成される樹脂膜と、を備え、前記担体の表面上に、前記樹脂膜が配置されている。

本発明に係る細胞培養用容器は、容器本体と、本発明に従って構成される樹脂膜とを備え、前記容器本体の表面上に、前記樹脂膜が配置されている。

本発明によれば、細胞の播種後の定着性に優れ、細胞の増殖率を高めることができる、細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜、細胞培養用担体及び細胞培養用容器を提供することができる。

本発明の一実施形態に係る細胞培養用容器を示す模式的正面断面図である。 実施例３で得られた樹脂膜の原子間力顕微鏡写真である。 実施例１４で得られた樹脂膜の原子間力顕微鏡写真である。

以下、図面を参照しつつ、本発明の具体的な実施形態を説明することにより、本発明を明らかにする。

本発明は、細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜に関する。上記細胞培養用足場材料は、合成樹脂を含む。本発明の樹脂膜は、少なくとも第１の相及び第２の相を含む、相分離構造を有する。本発明の樹脂膜では、第１の相及び第２の相のうち一方の相の表面全体に対する表面積の比が、０．０１以上、０．９５以下である。

本発明の樹脂膜は、上記の構成を備えるので、細胞の播種後の定着性に優れ、細胞の増殖率を高めることができる。

従来の天然高分子材料を用いた細胞培養用足場材料は、播種後の細胞の定着性を高めることができるものの、高価であったり、天然由来物質であるためロット間のばらつきが大きかったり、動物由来の成分による安全上の懸念があったりする。一方で、合成樹脂を用いた従来の足場材料では、合成樹脂が過度に膨潤したり、細胞との親和性が低かったりするので、培養中に細胞塊が剥離してしまうことがある。従って、合成樹脂を用いた従来の足場材料は、細胞の播種後の定着性が低く、細胞が十分に増殖しないことがある。

本発明者らは、細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜の相分離構造に着目し、第１の相及び第２の相のうち一方の相の表面全体に対する表面積の比が上記特定の範囲となるような相分離構造とすることにより、細胞との親和性を高め、それによって播種後の接着性を高めることができ、ひいては細胞の増殖率を高め得ることを見出した。この理由については定かではないが、このような相分離構造を有する場合、エネルギー分配が円滑に進むことや、親和性や強度の異なる第１の相及び第２の相の存在位置や存在比率を調整できるため、細胞の種類に関わらず親和性を高め、細胞もしくは細胞表面たんぱく質の集積及び吸着効果が実現できるものと考えられる。

従って、本発明の樹脂膜によれば、播種後の細胞との接着性を高めることができ、細胞の増殖率を高めることができる。

また、本発明においては、上記のように合成樹脂を用いることができるので、天然高分子材料を用いた足場材料と比べて、操作性がよく、安価であり、ロット間のばらつきが小さく、かつ安全性に優れている。

なお、本発明においては、上記合成樹脂として、ペプチド部を有する合成樹脂を用いてもよい。ペプチド部を有する合成樹脂の詳細については、後述する。

本発明において、第１の相及び第２の相のうち一方の相の表面全体に対する表面積の比（表面積分率）は、０．０１以上、好ましくは０．１０以上、０．９５以下、より好ましくは０．９０以下である。表面積分率が上記範囲内にある場合、播種後の細胞との接着性をより一層高めることができ、細胞の増殖率をより一層高めることができる。

本発明において、相分離構造としては、例えば、海島構造、シリンダー構造、ジャイロイド構造、又はラメラ構造等のミクロ相分離構造が挙げられる。海島構造では、例えば、第１の相を海部とし、第２の相を島部とすることができる。シリンダー構造、ジャイロイド構造、又はラメラ構造では、例えば、表面積が最も大きい相を第１の相とし、表面積が２番目に大きい相を第２の相とすることができる。これらの中でも、相分離構造としては海島構造が好ましい。このように、連続相と、不連続相とを有することで、細胞との親和性を高め、播種後の細胞との接着性をより一層高めることができ、それによって細胞の増殖率をより一層高めることができる。

上記相分離構造が海島構造である場合、第２の相の表面全体に対する表面積分率は、０．０１以上、好ましくは０．１以上、より好ましくは０．２以上であり、また、０．９５以下、好ましくは０．９以下、より好ましくは０．８以下である。表面積分率が上記範囲内にある場合、播種後の細胞との接着性をより一層高めることができ、細胞の増殖率をより一層高めることができる。

第２の相の面積に対する周囲長の比（周囲長／面積）は、好ましくは０．００１（１／ｎｍ）以上、より好ましくは０．００１５（１／ｎｍ）以上、さらに好ましくは０．００８（１／ｎｍ）以上である。第２の相の面積に対する周囲長の比（周囲長／面積）は、好ましくは０．４０（１／ｎｍ）以下、より好ましくは０．２０（１／ｎｍ）以下、さらに好ましくは０．０８（１／ｎｍ）以下、特に好ましくは０．０１３（１／ｎｍ）以下である。比（周囲長／面積）が上記範囲内にある場合、播種後の細胞との接着性をより一層高めることができ、細胞の増殖率をより一層高めることができる。

合成樹脂がペプチド部を有さない場合に、第２の相の面積に対する周囲長の比（周囲長／面積）は、好ましくは０．００１（１／ｎｍ）以上、より好ましくは０．００１５（１／ｎｍ）以上、好ましくは０．０８（１／ｎｍ）以下、より好ましくは０．０１３（１／ｎｍ）以下である。比（周囲長／面積）が上記範囲内にある場合、播種後の細胞との接着性をより一層高めることができ、細胞の増殖率をより一層高めることができる。

合成樹脂がペプチド部を有する場合に、第２の相の面積に対する周囲長の比（周囲長／面積）は、好ましくは０．００８（１／ｎｍ）以上、より好ましくは０．０１３（１／ｎｍ）以上、好ましくは０．４０（１／ｎｍ）以下、より好ましくは０．２０（１／ｎｍ）以下、さらに好ましくは０．１０（１／ｎｍ）以下である。比（周囲長／面積）が上記範囲内にある場合、播種後の細胞との接着性をより一層高めることができ、細胞の増殖率をより一層高めることができる。

島部である第２の相の個数は、好ましくは１個／μｍ^２以上、より好ましくは２個／μｍ^２以上、さらに好ましくは１０個／μｍ^２以上、好ましくは５０００個／μｍ^２以下、より好ましくは１０００個／μｍ^２以下、さらに好ましくは５００個以下／μｍ^２、特に好ましくは３００個／μｍ^２以下である。この場合、播種後の細胞との接着性をより一層高めることができ、細胞の増殖率をより一層高めることができる。

島部である第２の相の径の平均は、好ましくは２０ｎｍ以上、より好ましくは３０ｎｍ以上、さらに好ましくは５０ｎｍ以上、特に好ましくは８０ｎｍ以上、好ましくは３．５μｍ以下、より好ましくは３．０μｍ以下、さらに好ましくは１．５μｍ以下である。第２の相の径の平均が上記範囲内にある場合、播種後の細胞との接着性をより一層高めることができ、細胞の増殖率をより一層高めることができる。

合成樹脂がペプチド部を有さない場合に、島部である第２の相の径の平均は、好ましくは５０ｎｍ以上、より好ましくは１００ｎｍ以上、さらに好ましくは１２０ｎｍ以上、特に好ましくは２００ｎｍ以上、好ましくは１μｍ以下、より好ましくは３００ｎｍ以下、さらに好ましくは２５０ｎｍ以下である。第２の相の径の平均が上記範囲内にある場合、播種後の細胞との接着性をより一層高めることができ、細胞の増殖率をより一層高めることができる。

合成樹脂がペプチド部を有する場合に、島部である第２の相の径の平均は、好ましくは１０ｎｍ以上、より好ましくは２０ｎｍ以上、さらに好ましくは４０ｎｍ以上、好ましくは１μｍ以下、より好ましくは３００ｎｍ以下、さらに好ましくは１００ｎｍ以下である。第２の相の径の平均が上記範囲内にある場合、播種後の細胞との接着性をより一層高めることができ、細胞の増殖率をより一層高めることができる。

なお、相分離構造の有無や、上記のような相分離構造を示すパラメータは、例えば、原子間力顕微鏡（ＡＦＭ）や、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）、走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）等により確認することができる。

具体的に、第１の相及び第２の相のうち一方の相の表面全体に対する表面積の比（表面積分率）、第２の相の周囲長と面積との比（周囲長／面積）、島部である第２の相の個数、及びその平均径サイズは、前述の顕微鏡観察画像から例えばＩｍａｇｅＪなどの画像解析ソフトを用いて求めることができる。

第１の相及び第２の相のうち一方の相の表面全体に対する表面積の比（表面積分率）は、観察領域（３０μｍ×３０μｍ）内において、第１の相及び第２の相のうち一方の相が占める表面積を、観察領域の面積で除することにより求められる。

第２の相の面積に対する周囲長の比（周囲長／面積）は、観察領域（３０μｍ×３０μｍ）内において、第２の相の周囲長の合計を、第２の相の面積の合計で除することにより求められる。

相分離構造が海島構造である場合、島部である第２の相の個数は、観察領域（３０μｍ×３０μｍ）内における第２の相の個数を、観察領域の面積で除することにより求められる。また、島部である第２の相の平均径は、同面積の円の平均直径として求められる。

また、上記のような相分離構造は、例えば、異なる少なくとも２種類のポリマーをブレンドしたり、共重合したり、グラフト共重合したり、ペプチド部を有する合成樹脂を用いたりすることにより、合成樹脂の分子間又は分子内に相分離構造を形成することによって得ることができる。なかでも、細胞の接着性をより一層高めることができる観点から、上記相分離構造が分子内の相分離構造により形成されていることが好ましい。すなわち、上記合成樹脂は、異なる少なくとも２種類のポリマーの共重合体であるか又はペプチド部を有する合成樹脂であることが好ましく、グラフト共重合体であるか又はペプチド部を有する合成樹脂であることがより好ましい。

上記のような相分離構造は、溶解度パラメータ（ＳＰ値）が０．１以上、好ましくは０．５以上、より好ましくは１以上で異なる２種類以上のポリマー（モノマー）を共重合することにより得ることが好ましい。この場合、海島構造をより一層容易に形成することができる。

ＳＰ値は、溶媒－溶質間に作用する分子間力を表す尺度であり、物質間の親和性の尺度である。ＳＰ値は、Ｈｉｄｅｂｒａｎｄの正則溶液の理論に基づき求めることができる。また、ＳＰ値は、文献情報から得ることができるほか、ＨａｎｓｅｎやＨｏｙの計算方法、Ｆｅｄｏｒｓの推算法等により得ることができる。本明細書では、Ｆｅｄｏｒｓの式δ^２＝ΣＥ／ΣＶ（δはＳＰ値、Ｅは蒸発エネルギー、Ｖはモル体積を意味する。）により算出される計算値を意味する。なお、ＳＰ値の単位は（ｃａｌ／ｃｍ^３）^０．５である。Ｆｅｄｏｒｓの方法については、日本接着協会誌、１９８６年２２巻５６６ページに記載されている。

なお、表面積分率などの相分離構造を示す相分離パラメータは、例えば、２種類のポリマーの配合比率やポリマーの構造を制御したり、ペプチド部の含有率を制御したりすることにより調整することができる。

なお、本発明においては、第１の相及び第２の相とは異なる他の相が存在していてもよい。他の相は、１つの相であってもよく、複数の相であってもよい。このような相は、例えば、ＳＰ値の異なるさらに他のポリマー（モノマー）をグラフトなどの共重合をすることにより得ることができる。この場合は、樹脂膜の表面を占める面積が大きい２つの相を上記第１の相及び上記第２の相とする。

合成樹脂がペプチド部を有さない場合に、細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜における表面自由エネルギーの分散項成分は、好ましくは２５．０ｍＪ／ｍ^２以上、５０．０ｍＪ／ｍ^２以下である。この場合、細胞培養用足場材料の親水性を適度に調整することができ、相分離構造との相乗効果により、播種後の細胞との界面接着性をより一層高めることができ、細胞の増殖率をより一層高めることができる。上記分散項成分は、より好ましくは３０．０ｍＪ／ｍ^２以上、さらに好ましくは３５．０ｍＪ／ｍ^２以上、より好ましくは４７．０ｍＪ／ｍ^２以下、さらに好ましくは４５．５ｍＪ／ｍ^２以下である。

合成樹脂がペプチド部を有さない場合に、細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜における表面自由エネルギーの極性項成分は、好ましくは１．０ｍＪ／ｍ^２以上、２０．０ｍＪ／ｍ^２以下である。この場合、播種後の細胞との接着性をより一層高め、細胞の増殖率をより一層高めることができる。上記極性項成分は、より好ましくは２．０ｍＪ／ｍ^２以上、さらに好ましくは３．０ｍＪ／ｍ^２以上、より好ましくは１０．０ｍＪ／ｍ^２以下、さらに好ましくは５．０ｍＪ／ｍ^２以下である。

なお、表面自由エネルギーの分散項成分γ^ｄ及び極性項成分である双極子成分γ^ｐは、Ｋａｅｌｂｌｅ－Ｕｙの理論式を用いて算出される。Ｋａｅｌｂｌｅ－Ｕｙの理論式は、下記式（１）で示されるように、トータル表面自由エネルギーγが、分散項成分γ^ｄと双極子成分γ^ｐとの和になるとの仮定に基づく理論式である。

また、Ｋａｅｌｂｌｅ－Ｕｙの理論式では、液体の表面自由エネルギーをγ_ｌ（ｍＪ／ｍ^２）とし、固体の表面自由エネルギーをγ_ｓ（ｍＪ／ｍ^２）とし、接触角をθ（°）とすると、下記式（２）が成立する。

従って、液体の表面自由エネルギーγ_ｌが既知である液体を２種類用いて、細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜に対するそれぞれの接触角θを測定し、γ_ｓ ^ｄ及びγ_ｓ ^ｐの連立方程式を解くことにより、細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜の表面自由エネルギーの分散項成分γ^ｄ及び双極子成分γ^ｐを求めることができる。

なお、本明細書においては、上記表面自由エネルギーγ_ｌが既知である２種類の上記液体として、純水及びジヨードメタンが用いられている。

接触角θは、接触角計（例えば、協和界面化学社製「ＤＭｏ－７０１」）を用いて、以下のようにして測定される。

細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜の表面に、純水又はジヨードメタンを１μＬ滴下する。滴下してから３０秒後の純水と、樹脂膜とのなす角度を、純水に対する接触角θとする。また、同様に、滴下してから３０秒後のジヨードメタンと、樹脂膜とのなす角度を、ジヨードメタンに対する接触角θとする。

合成樹脂における疎水性官能基の含有率を高くしたり、環状構造を有する官能基の含有率を高くしたり、ブチル基の含有率を少なくしたりすることにより、上記表面自由エネルギーの分散項成分γ^ｄを小さくすることができる。また、合成樹脂における親水性官能基の含有率を高くしたり、ブチル基の含有率を高くしたりすることにより、上記表面自由エネルギーの双極子成分γ^ｐを小さくすることができる。

本発明の細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜においては、１００℃における貯蔵弾性率が、好ましくは０．６×１０^４Ｐａ以上、より好ましくは０．８×１０^４Ｐａ以上、さらに好ましくは１．０×１０^４Ｐａ以上、好ましくは１．０×１０^８Ｐａ以下、より好ましくは０．８×１０^８Ｐａ以下、さらに好ましくは１．０×１０^７Ｐａ以下である。

特に、本発明の細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜は、２５℃における貯蔵弾性率と１００℃における貯蔵弾性率との比（（２５℃における貯蔵弾性率）／（１００℃における貯蔵弾性率））が、好ましくは１．０×１０^１以上、より好ましくは５．０×１０^１以上、さらに好ましくは８．０×１０^２以上、好ましくは１．０×１０^５以下、より好ましくは０．７５×１０^５以下、さらに好ましくは０．５×１０^５以下である。貯蔵弾性率を上記範囲内とすることにより、播種後の細胞の定着性をより一層高めることができる。

なお、２５℃及び１００℃の貯蔵弾性率は、例えば、動的粘弾性測定装置（アイティー計測制御社製、ＤＶＡ－２００）により引張条件下、周波数１０Ｈｚ、－１５０℃から１５０℃の温度範囲を昇温速度５℃／分にて測定する。得られた引張貯蔵弾性率のグラフから２５℃及び１００℃における貯蔵弾性率を求め、２５℃貯蔵弾性率／１００℃貯蔵弾性率を算出する。長さ５０ｍｍ、幅５～２０ｍｍ、厚み０．１～１．０ｍｍの測定サンプルを用いて、１０Ｈｚ、ひずみ０．１％、温度－１５０℃～１５０℃、及び昇温速度５℃／ｍｉｎの条件で行う。

上記２５℃及び１００℃の貯蔵弾性率は、例えば、上記合成樹脂における架橋度を高めること、上記合成樹脂を延伸すること等により、高めることができる。また、上記２５℃及び１００℃の貯蔵弾性率は、上記合成樹脂において数平均分子量を下げること、ガラス転移温度を下げること等により、低くすることができる。

本発明の細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜は、水膨潤倍率が、好ましくは５０％以下、より好ましくは４０％以下である。この場合、播種後の細胞の定着性をより一層高めることができる。なお、水膨潤倍率の下限値は特に限定されないが、例えば、０．５％とすることができる。水膨潤倍率は、以下のようにして測定することができる。例えば、長さ５０ｍｍ、幅１０ｍｍ、厚み０．０５ｍｍ～０．１５ｍｍの細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜（測定サンプル）を、２５℃の水に２４時間浸漬する。浸漬前と後のサンプルの重さを測定し、水膨潤倍率＝（浸漬後のサンプル重量－浸漬前のサンプル重量）／（浸漬前のサンプル重量）×１００（％）を算出する。

上記水膨潤倍率は、例えば、上記合成樹脂の疎水性官能基を増やすこと、数平均分子量を下げること等により、小さくすることができる。

（合成樹脂）
細胞培養用足場材料は、合成樹脂（以下、合成樹脂Ｘと記載することがある）を含む。合成樹脂Ｘの主鎖は、炭素鎖であることが好ましい。なお、本明細書において、「構造単位」とは、合成樹脂を構成するモノマーの繰り返し単位をいう。なお、合成樹脂がグラフト鎖を有する場合は、そのグラフト鎖を構成するモノマーの繰り返し単位を含む。

合成樹脂Ｘがペプチド部を有さない場合に、合成樹脂Ｘは、カチオン性官能基を有することが好ましい。合成樹脂Ｘがペプチド部を有する場合に、ペプチド部を有する合成樹脂Ｘは、該ペプチド部以外の構造部分において、カチオン性官能基を有していてもよく、有していなくてもよい。カチオン性官能基としては、アミノ基、イミノ基、アミド基などの構造を有する置換基が挙げられる。例えば、特に限定されないが、ヒドロキシアミノ基、ウレア基、グアニジン、ビグアニド等の共役アミン系官能基、ピペラジン、ピペリジン、ピロリジン、１，４－ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン、ヘキサメチレンテトラアミン、モルホリン、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、ピロール、アザトロピリデン、ピリドン、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、ベンゾトリアゾール、ピラゾール、オキサゾール、イミダゾリン、トリアゾール、チアゾール、チアジン、テトラゾール、インドール、イソインドール、プリン、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、キノキサリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、アクリジン、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、メラミン等のヘテロ環アミノ系官能基、ポルフィリン、クロリン、コリン等の環状ピロール系官能基およびそれらの誘導体等が挙げられる。これらのカチオン性官能基は、１種を単独で用いてもよく、複数種を併用してもよい。

本発明において、合成樹脂Ｘの構造単位中に含まれるカチオン性官能基の含有量は、好ましくは０．２モル％以上、好ましくは２モル％以上、より好ましくは３モル％以上、５０モル％以下、好ましくは１０モル％以下、より好ましくは７モル％以下である。このような範囲内でカチオン性官能基を含有する合成樹脂Ｘを用いることにより、播種後の細胞の定着性をより一層高めることができ、細胞の増殖率をより一層高めることができる。なお、カチオン性官能基の含有量は、例えば、^１Ｈ－ＮＭＲ（核磁気共鳴スペクトル）により測定することができる。

（ビニル重合体）
合成樹脂Ｘは、ビニル重合体を含むことが好ましく、ビニル重合体であることがより好ましい。なお、ビニル重合体とは、ビニル基又はビニリデン基を有する化合物の重合体である。上記合成樹脂Ｘがビニル重合体である場合、水中における細胞培養用足場材料の膨潤をより抑制しやすくすることができる。ビニル重合体としては、例えば、ポリビニルアルコール誘導体、ポリ（メタ）アクリル酸エステル、ポリビニルピロリドン、ポリスチレン、エチレン・酢酸ビニル共重合体等が挙げられる。さらに、ビニル重合体としては、細胞との接着性をより高めやすい観点から、ポリビニルアルコール誘導体又はポリ（メタ）アクリル酸エステルであることが好ましい。

（ポリビニルアセタール骨格を有する合成樹脂Ｘ）
細胞培養用足場材料は、ポリビニルアセタール骨格を有する合成樹脂Ｘを含むことが好ましい。本発明において、ポリビニルアセタール骨格を有する合成樹脂Ｘは、ポリビニルアセタール樹脂の構造単位とビニル化合物及び／又はビニリデン化合物との共重合体であることが好ましい。ビニル化合物は、ビニル基（Ｈ_２Ｃ＝ＣＨ－）を有する化合物である。ビニリデン化合物は、ビニリデン基（Ｈ_２Ｃ＝ＣＲ－）を有する化合物である。ビニル化合物又はビニリデン化合物は、その重合体であるビニル重合体であってもよい。なお、以下の説明では、ポリビニルアセタール樹脂に共重合されるビニル化合物、ビニリデン化合物、及びビニル重合体を総称して「ビニル化合物Ａ」とすることがある。

本発明において、上記共重合体は、ポリビニルアセタール樹脂とビニル化合物Ａとのブロック共重合体であってもよく、ポリビニルアセタール樹脂にビニル化合物Ａがグラフトしたグラフト共重合体であってもよい。上記共重合体は、グラフト共重合体であることが好ましい。この場合、相分離構造をより一層容易に形成することができる。

上記ビニル化合物及びビニリデン化合物としては、エチレン、アリルアミン、ビニルピロリドン、無水マレイン酸、マレイミド、イタコン酸、（メタ）アクリル酸、ビニルアミン、及び（メタ）アクリル酸エステル等が挙げられる。これらのビニル化合物は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。従って、これらのビニル化合物が共重合したビニル重合体であってもよい。

上記共重合体においては、ポリビニルアセタール樹脂と、ビニル化合物ＡとのＳＰ値の差が０．５以上であることが好ましい。この場合、相分離構造をより一層容易に形成することができる。ポリビニルアセタール樹脂と、ビニル化合物ＡとのＳＰ値の差は、より好ましくは１．０以上である。なお、ＳＰ値の差の上限値は、特に限定されないが、例えば、１０．０とすることができる。

上記共重合体は、第１の相がポリビニルアセタール樹脂であり、第２の相がビニル化合物Ａであることが好ましい。上記共重合体のポリビニルアセタール樹脂部分により第１の相が形成されており、ビニル化合物Ａ部分により第２の相が形成されていることが好ましい。この場合、ポリビニルアセタール樹脂の第１の相が海部であり、ビニル化合物Ａの第２の相が島部であることが好ましい。もっとも、ビニル化合物Ａの第１の相が海部であり、ポリビニルアセタール樹脂の第２の相が島部であってもよい。

共重合体中における、ビニル化合物Ａの含有分率（モル／モル）は、好ましくは０．０１５以上、より好ましくは０．３以上、好ましくは０．９５以下、より好ましくは０．９０以下、さらに好ましくは０．７０以下である。上記含有分率が上記下限以上にある場合、相分離構造をより一層容易に形成することができる。上記含有分率が上記上限以下にある場合、細胞の増殖率をより一層高めることができる。

＜ポリビニルアセタール樹脂＞
以下、ポリビニルアセタール樹脂（共重合体のポリビニルアセタール樹脂部分）についてより詳細に説明する。

ポリビニルアセタール樹脂は、側鎖にアセタール基と、アセチル基と、水酸基とを有する。

ポリビニルアセタール樹脂の合成方法は、ポリビニルアルコールをアルデヒドによりアセタール化する工程を少なくとも備える。

ポリビニルアセタール樹脂を得るためのポリビニルアルコールのアセタール化に用いられるアルデヒドは、特に限定されない。アルデヒドとしては、例えば、炭素数が１～１０のアルデヒドが挙げられる。アルデヒドは、鎖状脂肪族基、環状脂肪族基又は芳香族基を有していてもよい。アルデヒドは、鎖状アルデヒドであってもよく、環状アルデヒドであってもよい。

上記アルデヒドとしては、ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、プロピオンアルデヒド、ブチルアルデヒド、ペンタナール、ヘキサナール、ヘプタナール、オクタナール、ノナナール、デカナール、アクロレイン、ベンズアルデヒド、シンナムアルデヒド、ペリルアルデヒド、ホルミルピリジン、ホルミルイミダゾール、ホルミルピロール、ホルミルピペリジン、ホルミルトリアゾール、ホルミルテトラゾール、ホルミルインドール、ホルミルイソインドール、ホルミルプリン、ホルミルベンゾイミダゾール、ホルミルベンゾトリアゾール、ホルミルキノリン、ホルミルイソキノリン、ホルミルキノキサリン、ホルミルシンノリン、ホルミルプテリジン、ホルミルフラン、ホルミルオキソラン、ホルミルオキサン、ホルミルチオフェン、ホルミルチオラン、ホルミルチアン、ホルミルアデニン、ホルミルグアニン、ホルミルシトシン、ホルミルチミン、又はホルミルウラシル等が挙げられる。これらのアルデヒドは、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。

アルデヒドは、ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、プロピオンアルデヒド、ブチルアルデヒド、又はペンタナールであることが好ましく、ブチルアルデヒドであることがより好ましい。したがって、ポリビニルアセタール骨格は、ポリビニルブチラール骨格であることが好ましい。ポリビニルアセタール樹脂は、ポリビニルブチラール樹脂であることが好ましい。

細胞の接着性をより一層高める観点からは、ポリビニルアセタール樹脂は、ブレンステッド塩基性基又はブレンステッド酸性基を有することが好ましく、ブレンステッド塩基性基を有することがより好ましい。すなわち、ポリビニルアセタール樹脂の一部がブレンステッド塩基性基又はブレンステッド酸性基により変性されていることが好ましく、ポリビニルアセタール樹脂の一部がブレンステッド塩基性基で変性されていることがより好ましい。

ブレンステッド塩基性基は、水素イオンＨ^＋を他の物質から受け取ることができる官能基の総称である。ブレンステッド塩基性基としては、イミン構造を有する置換基、イミド構造を有する置換基、アミン構造を有する置換基、又はアミド構造を有する置換基等のアミン系塩基性基が挙げられる。ブレンステッド塩基性基は、特に限定されないが、例えば、ヒドロキシアミノ基、ウレア基、グアニジン、ビグアニド等の共役アミン系官能基、ピペラジン、ピペリジン、ピロリジン、１，４－ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン、ヘキサメチレンテトラアミン、モルホリン、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、ピロール、アザトロピリデン、ピリドン、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、ベンゾトリアゾール、ピラゾール、オキサゾール、イミダゾリン、トリアゾール、チアゾール、チアジン、テトラゾール、インドール、イソインドール、プリン、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、キノキサリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、アクリジン、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、メラミン等のヘテロ環アミノ系官能基、ポルフィリン、クロリン、コリン等の環状ピロール系官能基、又はそれらの誘導体等が挙げられる。

ブレンステッド酸性基としては、カルボキシル基、スルホン酸基、マレイン酸基、スルフィン酸基、スルフェン酸基、リン酸基、ホスホン酸基、又はこれらの塩等が挙げられる。ブレンステッド酸性基は、カルボキシル基であることが好ましい。

ポリビニルアセタール樹脂は、イミン構造を有する構造単位、イミド構造を有する構造単位、アミン構造を有する構造単位、又はアミド構造を有する構造単位を有することが好ましい。この場合、これらの構造単位のうちの１種のみを有していてもよく、２種以上を有していてもよい。

ポリビニルアセタール樹脂は、イミン構造を有する構造単位を有していてもよい。イミン構造とは、Ｃ＝Ｎ結合を有する構造をいう。特に、ポリビニルアセタール樹脂は、イミン構造を側鎖に有することが好ましい。

ポリビニルアセタール樹脂は、イミド構造を有する構造単位を有していてもよい。イミド構造を有する構造単位は、イミノ基（＝ＮＨ）を有する構造単位であることが好ましい。

ポリビニルアセタール樹脂は、イミノ基を側鎖に有することが好ましい。この場合、イミノ基は、ポリビニルアセタール樹脂の主鎖を構成する炭素原子に直接結合していてもよく、アルキレン基等の連結基を介して主鎖に結合していてもよい。

ポリビニルアセタール樹脂は、アミン構造を有する構造単位を有していてもよい。上記アミン構造におけるアミン基は、第一級アミン基であってもよく、第二級アミン基であってもよく、第三級アミン基であってもよく、第四級アミン基であってもよい。

アミン構造を有する構造単位は、アミド構造を有する構造単位であってもよい。上記アミド構造とは、－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ－を有する構造をいう。

ポリビニルアセタール樹脂は、アミン構造又はアミド構造を側鎖に有することが好ましい。この場合、アミン構造又はアミド構造は、ポリビニルアセタール樹脂の主鎖を構成する炭素原子に直接結合していてもよく、アルキレン基等の連結基を介して主鎖に結合していてもよい。

なお、イミン構造を有する構造単位の含有率、イミド構造を有する構造単位の含有率、アミン構造を有する構造単位の含有率、アミド構造を有する構造単位の含有率は、^１Ｈ－ＮＭＲ（核磁気共鳴スペクトル）により測定することができる。

＜ビニル化合物Ａ＞
以下、ビニル化合物Ａについてより詳細に説明する。

ビニル化合物Ａは、（メタ）アクリル酸エステル又はポリ（メタ）アクリル酸エステル樹脂であることが好ましい。特に、合成樹脂Ｘが、ポリビニルアセタール樹脂に、（メタ）アクリル酸エステル又はその重合体であるポリ（メタ）アクリル酸エステル樹脂がグラフト共重合した共重合体であることが好ましい。

ポリ（メタ）アクリル酸エステル樹脂は、（メタ）アクリル酸エステルの重合により、あるいは（メタ）アクリル酸エステルと、上記他のモノマーとの重合により得られる。

（メタ）アクリル酸エステルとしては、（メタ）アクリル酸アルキルエステル、（メタ）アクリル酸環状アルキルエステル、（メタ）アクリル酸アリールエステル、（メタ）アクリルアミド類、（メタ）アクリル酸ポリエチレングリコール類、（メタ）アクリル酸ホスホリルコリン等が挙げられる。

（メタ）アクリル酸アルキルエステルとしては、メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、ｎ－プロピル（メタ）アクリレート、イソプロピル（メタ）アクリレート、ｎ－ブチル（メタ）アクリレート、イソブチル（メタ）アクリレート、ｔ－ブチル（メタ）アクリレート、ｎ－オクチル（メタ）アクリレート、イソオクチル（メタ）アクリレート、２－エチルヘキシル（メタ）アクリレート、ノニル（メタ）アクリレート、イソノニル（メタ）アクリレート、デシル（メタ）アクリレート、イソデシル（メタ）アクリレート、ラウリル（メタ）アクリレート、又はステアリル（メタ）アクリレート、イソテトラデシル（メタ）アクリレート等が挙げられる。

なお、（メタ）アクリル酸アルキルエステルは、炭素数１～３のアルコキシ基及びテトラヒドロフルフリル基等の置換基で置換されていてもよい。このような（メタ）アクリル酸アルキルエステルの例としては、メトキシエチルアクリレート、テトラヒドロフルフリルアクリレート等が挙げられる。

（メタ）アクリル酸環状アルキルエステルとしては、シクロヘキシル（メタ）アクリレート、又はイソボルニル（メタ）アクリレート等が挙げられる。

（メタ）アクリル酸アリールエステルとしては、フェニル（メタ）アクリレート、又はベンジル（メタ）アクリレート等が挙げられる。

（メタ）アクリルアミド類としては、（メタ）アクリルアミド、Ｎ－イソプロピル（メタ）アクリルアミド、Ｎ－ｔｅｒｔ－ブチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ’－ジメチル（メタ）アクリルアミド、（３－（メタ）アクリルアミドプロピル）トリメチルアンモニウムクロリド、４－（メタ）アクリロイルモルホリン、３－（メタ）アクリロイル－２－オキサゾリジノン、Ｎ－［３－（ジメチルアミノ）プロピル］（メタ）アクリルアミド、Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）（メタ）アクリルアミド、Ｎ－メチロール（メタ）アクリルアミド、又は６－（メタ）アクリルアミドヘキサン酸等が挙げられる。

（メタ）アクリル酸ポリエチレングリコール類としては、例えば、メトキシ－ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、エトキシ－ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、ヒドロキシ－ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、メトキシ－ジエチレングリコール（メタ）アクリレート、エトキシ－ジエチレングリコール（メタ）アクリレート、ヒドロキシ－ジエチレングリコール（メタ）アクリレート、メトキシ－トリエチレングリコール（メタ）アクリレート、エトキシ－トリエチレングリコール（メタ）アクリレート、又はヒドロキシ－トリエチレングリコール（メタ）アクリレート等が挙げられる。

（メタ）アクリル酸ホスホリルコリンとしては、２－（メタ）アクリロイルオキシエチルホスホリルコリン等が挙げられる。

（メタ）アクリル酸エステルと共重合される他のモノマーとしては、ビニル化合物が好適に用いられる。ビニル化合物としては、エチレン、アリルアミン、ビニルピロリドン、ビニルイミダゾール、無水マレイン酸、マレイミド、イタコン酸、（メタ）アクリル酸、ビニルアミン、又は（メタ）アクリル酸エステル等が挙げられる。ビニル化合物は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。

なお、本明細書において、「（メタ）アクリル」とは、「アクリル」又は「メタクリル」を意味し、「（メタ）アクリレート」とは、「アクリレート」又は「メタクリレート」を意味する。

なお、本発明において、合成樹脂Ｘは、本発明の相分離構造を形成できる限りにおいて、ポリ（メタ）アクリル酸エステル骨格を有する樹脂と他のビニル化合物との共重合体であってもよい。

この場合の他のビニル化合物は、エチレン、アリルアミン、ビニルピロリドン、無水マレイン酸、マレイミド、イタコン酸、（メタ）アクリル酸、ビニルアミン、又はＳＰ値の異なる他の（メタ）アクリル酸エステル等を用いることができる。

（ペプチド部を有する合成樹脂Ｘ）
細胞培養用足場材料は、ペプチド部を有する合成樹脂Ｘを含むことが好ましい。ペプチド部を有する合成樹脂Ｘは、合成樹脂Ｘと、リンカーと、ペプチドとを反応させて得ることができる。ペプチド部を有する合成樹脂Ｘは、ポリビニルアセタール樹脂部と、リンカー部と、ペプチド部とを有するペプチド含有ポリビニルアセタール樹脂であることが好ましく、ポリビニルブチラール樹脂部と、リンカー部と、ペプチド部とを有するペプチド含有ポリビニルブチラール樹脂であることがより好ましい。ペプチド部を有する合成樹脂Ｘは、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。

上記ペプチド部は、３個以上のアミノ酸により構成されることが好ましく、４個以上のアミノ酸により構成されることがより好ましく、５個以上のアミノ酸により構成されることが更に好ましく、１０個以下のアミノ酸により構成されることが好ましく、６個以下のアミノ酸により構成されることがより好ましい。上記ペプチド部を構成するアミノ酸の個数が上記下限以上及び上記上限以下であると、播種後の細胞との接着性をより一層高めることができ、細胞の増殖率をより一層高めることができる。

上記ペプチド部は、細胞接着性のアミノ酸配列を有することが好ましい。なお、細胞接着性のアミノ酸配列とは、ファージディスプレイ法、セファローズビーズ法、又はプレートコート法によって細胞接着活性が確認されているアミノ酸配列をいう。上記ファージディスプレイ法としては、例えば、「The Journal of Cell Biology, Volume 130, Number 5, September 1995 1189-1196」に記載の方法を用いることができる。上記セファローズビーズ法としては、例えば「蛋白質 核酸 酵素 Ｖｏｌ．４５ Ｎｏ．１５ （２０００） ２４７７」に記載の方法を用いることができる。上記プレートコート法としては、例えば「蛋白質 核酸 酵素 Ｖｏｌ．４５ Ｎｏ．１５ （２０００） ２４７７」に記載の方法を用いることができる。

上記細胞接着性のアミノ酸配列としては、例えば、ＲＧＤ配列（Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ）、ＹＩＧＳＲ配列（Ｔｙｒ－Ｉｌｅ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ）、ＰＤＳＧＲ配列（Ｐｒｏ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ）、ＨＡＶ配列（Ｈｉｓ－Ａｌａ－Ｖａｌ）、ＡＤＴ配列（Ａｌａ－Ａｓｐ－Ｔｈｒ）、ＱＡＶ配列（Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ｖａｌ）、ＬＤＶ配列（Ｌｅｕ－Ａｓｐ－Ｖａｌ）、ＩＤＳ配列（Ｉｌｅ－Ａｓｐ－Ｓｅｒ）、ＲＥＤＶ配列（Ａｒｇ－Ｇｌｕ－Ａｓｐ－Ｖａｌ）、ＩＤＡＰＳ配列（Ｉｌｅ－Ａｓｐ－Ａｌａ－Ｐｒｏ－Ｓｅｒ）、ＫＱＡＧＤＶ配列（Ｌｙｓ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｖａｌ）、及びＴＤＥ配列（Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ｇｌｕ）等が挙げられる。また、上記細胞接着性のアミノ酸配列としては、「病態生理、第９巻 第７号、５２７～５３５頁、１９９０年」、及び「大阪府立母子医療センター雑誌、第８巻 第１号、５８～６６頁、１９９２年」に記載されている配列等も挙げられる。上記ペプチド部は、上記細胞接着性のアミノ酸配列を１種のみ有していてもよく、２種以上を有してもよい。

上記細胞接着性のアミノ酸配列は、上述した細胞接着性のアミノ酸配列の内の少なくともいずれかを有することが好ましく、ＲＧＤ配列、ＹＩＧＳＲ配列、又はＰＤＳＧＲ配列を少なくとも有することがより好ましく、下記式（１）で表されるＲＧＤ配列を少なくとも有することが更に好ましい。この場合には、播種後の細胞との接着性をより一層高め、細胞の増殖率をより一層高めることができる。

Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｘ ・・・式（１）

上記式（１）中、Ｘは、Ｇｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ、Ｐｒｏ、又はＡｓｎを表す。

上記ペプチド部は、直鎖状であってもよく、環状ペプチド骨格を有していてもよい。上記環状ペプチド骨格とは、複数個のアミノ酸より構成された環状骨格である。本発明の効果を一層効果的に発揮させる観点からは、上記環状ペプチド骨格は、４個以上のアミノ酸により構成されることが好ましく、５個以上のアミノ酸により構成されることが好ましく、１０個以下のアミノ酸により構成されることが好ましい。

ペプチド部を有する合成樹脂Ｘにおいて、上記ペプチド部の含有率は、好ましくは０．１モル％以上、より好ましくは１モル％以上、さらに好ましくは５モル％以上、特に好ましくは１０モル％以上である。ペプチド部を有する合成樹脂Ｘにおいて、上記ペプチド部の含有率は、好ましくは６０モル％以下、より好ましくは５０モル％以下、さらに好ましくは３５モル％以下、特に好ましくは２５モル％以下である。上記ペプチド部の含有率が上記下限以上であると、相分離構造をより一層容易に形成することができる。上記ペプチド部の含有率が上記下限以上であると、播種後の細胞との接着性をより一層高めることができ、細胞の増殖率をより一層高めることができる。また、上記ペプチド部の含有率が上記上限以下であると、製造コストを抑えることができる。なお、上記ペプチド部の含有率（モル％）は、ペプチド部を有する合成樹脂Ｘを構成する各構造単位の物質量の総和に対する上記ペプチド部の物質量である。

上記ペプチド部の含有率は、ＦＴ－ＩＲ又はＬＣ－ＭＳにより測定することができる。

播種後の細胞との接着性をより一層高める観点及び細胞の増殖率をより一層高める観点から、ペプチド部を有する合成樹脂Ｘでは、第２の相がペプチド部を有することが好ましく、該ペプチド部が上記細胞接着性のアミノ酸配列を有することがより好ましい。ペプチド部を有する合成樹脂Ｘのペプチド部部分により第２の相が形成されていることが好ましい。この場合、ペプチド部を有する第２の相が島部であることが好ましい。もっとも、第１の相がペプチド部を有していてもよく、ペプチド部を有する第２の相が海部であってもよい。

ペプチド部を有する合成樹脂Ｘにおいて、合成樹脂Ｘ部分とペプチド部とは、リンカーを介して結合していることが好ましい。すなわち、ペプチド部を有する合成樹脂Ｘは、ペプチド部とリンカー部とを有する合成樹脂Ｘであることが好ましい。上記リンカーは、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。

上記リンカーは、上記ペプチドのカルボキシル基又はアミノ基と縮合可能な官能基を有する化合物であることが好ましい。上記ペプチドのカルボキシル基又はアミノ基と縮合可能な官能基としては、カルボキシル基、チオール基及びアミノ基等が挙げられる。ペプチドと良好に反応させる観点からは、上記リンカーは、カルボキシル基を有する化合物であることが好ましい。上記リンカーとして、上述したビニル化合物Ａを用いることもできる。

上記カルボキシル基を有するリンカーとしては、（メタ）アクリル酸及びカルボキシル基含有アクリルアミド等が挙げられる。上記カルボキシル基を有するリンカーとして重合性不飽和基を有するカルボン酸（カルボン酸モノマー）を用いることにより、リンカーと合成樹脂Ｘとを反応させる際に、グラフト重合により該カルボン酸モノマーを重合させることができるため、ペプチドと反応させることができるカルボキシル基の個数を増やすことができる。

［細胞培養用足場材料］
細胞培養用足場材料は、上記合成樹脂Ｘを含む。本発明の効果を効果的に発揮させる観点及び生産性を高める観点からは、上記細胞培養用足場材料１００重量％中、上記合成樹脂Ｘの含有量は、好ましくは９０重量％以上、より好ましくは９５重量％以上、更に好ましくは９７．５重量％以上、特に好ましくは９９重量％以上、最も好ましくは１００重量％（全量）である。したがって、上記細胞培養用足場材料は、上記合成樹脂Ｘであることが最も好ましい。上記合成樹脂Ｘの含有量が上記下限以上であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮させることができる。

上記細胞培養用足場材料は、上記合成樹脂Ｘ以外の成分を含んでいてもよい。上記合成樹脂Ｘ以外の成分としては、ポリオレフィン樹脂、ポリエーテル樹脂、ポリビニルアルコール樹脂、ポリエステル、エポキシ樹脂、ポリアミド樹脂、ポリイミド樹脂、ポリウレタン樹脂、ポリカーボネート樹脂、多糖類、セルロース、ポリペプチド、合成ペプチド等が挙げられる。

本発明の効果を効果的に発揮させる観点から、上記合成樹脂Ｘ以外の成分の含有量は少ないほどよい。上記細胞培養用足場材料１００重量％中、該成分の含有量は、好ましくは１０重量％以下、より好ましくは５重量％以下、更に好ましくは２．５重量％以下、特に好ましくは１重量％以下、最も好ましくは０重量％（未含有）である。したがって、細胞培養用足場材料は、合成樹脂Ｘ以外の成分を含まないことが最も好ましい。

上記細胞培養用足場材料は、動物由来の原料を実質的に含まないことが好ましい。動物由来の原料を含まないことにより、安全性が高く、かつ、製造時に品質のばらつきが少ない細胞培養用足場材料を提供することができる。なお、「動物由来の原料を実質的に含まない」とは、細胞培養用足場材料中における動物由来の原料が、３重量％以下であることを意味する。上記細胞培養用足場材料は、細胞培養用足場材料中における動物由来の原料が、１重量％以下であることが好ましく、０重量％であることがより好ましい。すなわち、上記細胞培養用足場材料は、動物由来の原料を全く含まないことがより好ましい。

（細胞培養用足場材料を用いた細胞培養）
上記細胞培養用足場材料は、細胞を培養するために用いられる。上記細胞培養用足場材料は、細胞を培養する際の該細胞の足場として用いられる。したがって、本発明の細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜は、細胞を培養するために用いられ、また、細胞を培養する際の該細胞の足場として用いられる。

上記細胞としては、ヒト、マウス、ラット、ブタ、ウシ及びサル等の動物細胞が挙げられる。また、上記細胞としては、体細胞等が挙げられ、例えば、幹細胞、前駆細胞及び成熟細胞等が挙げられる。上記体細胞は、癌細胞であってもよい。

上記成熟細胞としては、神経細胞、心筋細胞、網膜細胞及び肝細胞等が挙げられる。

上記幹細胞としては、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、ｉＰＳ細胞、ＥＳ細胞、Ｍｕｓｅ細胞、胚性がん細胞、胚性生殖幹細胞、及びｍＧＳ細胞等が挙げられる。

（細胞培養用足場材料の形状）
本発明の樹脂膜は、細胞培養用足場材料により形成される。上記樹脂膜は、細胞培養用足場材料を用いて形成される。上記樹脂膜は、膜状の細胞培養用足場材料であることが好ましい。上記樹脂膜は、細胞培養用足場材料の膜状物であることが好ましい。

本明細書では、上記細胞培養用足場材料を含む、粒子、繊維、多孔体、又はフィルムも提供する。この場合、上記細胞培養用足場材料の形状は特に限定されず、粒子であっても、繊維であっても、多孔体であっても、フィルムであってもよい。なお、上記粒子、繊維、多孔体、又はフィルムは、上記細胞培養用足場材料以外の構成要素を含んでいてもよい。

上記細胞培養用足場材料を含むフィルムは、細胞を平面培養（二次元培養）するために用いられることが好ましい。また、上記細胞培養用足場材料を含む、粒子、繊維、又は多孔体は、細胞を三次元培養するために用いられることが好ましい。

（細胞培養用担体）
本発明は、担体の表面上に上記樹脂膜が配置されている、細胞培養用担体にも関する。本発明の細胞培養用担体は、例えば、担体の表面上に上記樹脂膜をコーティング等によって配置することによって得ることができる。上記担体の形状は、粒子、繊維、多孔体、又はフィルムであってもよい。すなわち、本発明の細胞培養用担体は、粒子、繊維、多孔体、又はフィルムの形状であってもよい。なお、本発明の細胞培養用担体は、上記担体及び上記樹脂膜以外の構成要素を含んでいてもよい。

（細胞培養用容器）
本発明は、細胞の培養領域の少なくとも一部に上記樹脂膜を備える、細胞培養用容器にも関する。図１は、本発明の一実施形態に係る細胞培養用容器を模式的に示す断面図である。

細胞培養用容器１は、容器本体２と、細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜３とを備える。容器本体２の表面２ａ上に樹脂膜３が配置されている。容器本体２の底面上に樹脂膜３が配置されている。細胞培養用容器１に液体培地を添加し、また、細胞を樹脂膜３の表面に播種することで、細胞を平面培養することができる。

なお、容器本体は、第１の容器本体と、該第１の容器本体の底面上にカバーガラス等の第２の容器本体とを備えていてもよい。第１の容器本体と第２の容器本体とは分離可能であってもよい。この場合、第２の容器本体の表面上に、該細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜が配置されていてもよい。

上記容器本体として、従来公知の容器本体（容器）を用いることができる。上記容器本体の形状および大きさは特に限定されない。

上記容器本体としては、１個又は複数個のウェル（穴）を備える細胞培養用プレート、及び細胞培養用フラスコ等が挙げられる。上記プレートのウェル数は特に限定されない。該ウェル数としては、特に限定されないが、例えば、２、４、６、１２、２４、４８、９６、３８４等が挙げられる。上記ウェルの形状としては、特に限定されないが、真円、楕円、三角形、正方形、長方形、五角形等が挙げられる。上記ウェル底面の形状としては、特に限定されないが、平底、丸底、凹凸等が挙げられる。

上記容器本体の材質は特に限定されないが、樹脂、金属及び無機材料が挙げられる。上記樹脂としては、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート、ポリエステル、ポリイソプレン、シクロオレフィンポリマー、ポリイミド、ポリアミド、ポリアミドイミド、（メタ）アクリル樹脂、エポキシ樹脂、シリコーン等が挙げられる。上記金属としては、ステンレス、銅、鉄、ニッケル、アルミ、チタン、金、銀、白金等が挙げられる。上記無機材料としては、酸化ケイ素（ガラス）、酸化アルミ、酸化チタン、酸化ジルコニウム、酸化鉄、窒化ケイ素等が挙げられる。

次に、本発明の具体的な実施例及び比較例を挙げることにより本発明を明らかにする。なお、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

細胞培養用足場材料の原料として、以下の合成樹脂を合成した。

（実施例１）
攪拌装置を備えた反応機に、イオン交換水２７００ｍＬ、平均重合度１７００、鹸化度９８モル％のポリビニルアルコールを３００重量部投入し、攪拌しながら加熱溶解し、溶液を得た。得られた溶液に、触媒として、塩酸濃度が０．２重量％となるように３５重量％塩酸を添加した。次いで、温度を１５℃に調整し、攪拌しながらｎ－ブチルアルデヒド２２重量部を添加した。次いで、ｎ－ブチルアルデヒド１４８重量部を添加し、白色粒子状のポリビニルブチラール樹脂を析出させた。析出してから１５分後に、塩酸濃度が１．８重量％となるように３５重量％塩酸を添加した後、５０℃に加熱し、５０℃で２時間保持した。次いで、溶液を冷却し、中和した後、水洗し、乾燥させることにより、ポリビニルアセタール樹脂としてのポリビニルブチラール樹脂（ＰＶＢ、ＳＰ値：９．９）を得た。得られたポリビニルブチラール樹脂９０重量部を、１重量％の溶液となるようにテトラヒドロフランに溶解させ、開始剤としてＩｒｇａｃｕｒｅ１８４を５重量部、Ｎ－ビニルピロリドン（ＳＰ値：１１．７）２重量部及びｎ－ラウリルメタクリレート（ＳＰ値：８．２）８重量部を添加し、グラフト重合を行うことで、合成樹脂を得た。得られた合成樹脂は、アセタール化度（ブチラール化度）６９モル％、水酸基量２７．５モル％、アセチル化度２．０モル％、ビニルピロリドン基の含有率０．３モル％、ｎ－ラウリルメタクリレート部の含有率１．２モル％であった。

（実施例２～１１及び比較例１）
ポリビニルブチラール樹脂、Ｎ－ビニルピロリドン、及びｎ－ラウリルメタクリレートの重量比率を変更したこと以外は、実施例１と同様にして合成樹脂を得た。実施例２～１１及び比較例１で得られた合成樹脂のアセタール化度（ブチラール化度）、水酸基量、アセチル化度、ビニルピロリドン基の含有率、ｎ-ラウリルメタクリレート部の含有率を表１、表２、及び表４に示す。

（実施例１２）
攪拌装置を備えた反応機に、イオン交換水２７００ｍＬ、平均重合度１７００、鹸化度９９モル％のポリビニルアルコールを３００重量部投入し、攪拌しながら加熱溶解し、溶液を得た。得られた溶液に、触媒として、塩酸濃度が０．２重量％となるように３５重量％塩酸を添加した。次いで、温度を１５℃に調整し、攪拌しながらｎ－ブチルアルデヒド２２重量部を添加した。次いで、ｎ－ブチルアルデヒド１４８重量部を添加し、白色粒子状のポリビニルアセタール樹脂（ポリビニルブチラール樹脂）を析出させた。析出してから１５分後に、塩酸濃度が１．８重量％になるように３５重量％塩酸を添加した後、５０℃に加熱し、５０℃で２時間保持した。次いで、溶液を冷却し、中和した後、ポリビニルブチラール樹脂を水洗し、乾燥させて、ポリビニルアセタール樹脂（ポリビニルブチラール樹脂、平均重合度１７００、アセタール化度（ブチラール化度）７０モル％、水酸基量２７モル％、アセチル化度３モル％）を得た。

リンカーの導入：
得られたポリビニルアセタール樹脂９９重量部と、アクリル酸（リンカー）１重量部とをＴＨＦ３００重量部に溶解し、光ラジカル重合開始剤の存在下で、紫外線照射下で２０分間反応させ、ポリビニルアセタール樹脂とアクリル酸とをグラフト共重合させることにより、リンカーを導入した。リンカーを導入したポリビニルアセタール樹脂１重量部をブタノール１９重量部に溶解させた。得られた溶液１５０μＬを、エアダスターで除塵したφ２２ｍｍのカバーガラス（松浪社製「２２丸Ｎｏ．１」）の表面上に吐出し、スピンコーターを用いて２０００ｒｐｍ、２０秒回転させた後、６０℃で６０分間加熱して、表面が平滑な樹脂膜を得た。

ペプチド部の形成：
Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｓｅｒのアミノ酸配列を有する直鎖状のペプチド（アミノ酸残基数５個、表ではＧＲＧＤＳと記載）を用意した。このペプチド１０重量部と、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（縮合剤）１重量部とを、カルシウム及びマグネシウムの双方を含まないリン酸緩衝生理食塩水に該ペプチドの終濃度が１ｍＭとなるよう添加し、ペプチド含有液を作製した。このペプチド含有液１重量部を、スピンコートした樹脂膜（リンカーを形成したポリビニルアセタール樹脂）に添加し、反応させて、リンカーのカルボキシル基と、ペプチドのＧｌｙのアミノ基とを脱水縮合した。このようにして、ポリビニルアセタール樹脂部と、リンカー部と、ペプチド部とを有するペプチド含有ポリビニルアセタール樹脂を作製した。

得られたペプチド含有ポリビニルアセタール樹脂は、アセタール化度（ブチラール化度）６９モル％、水酸基量２７モル％、アセチル化度３モル％、カルボキシル基の含有率０.１モル％、ペプチド部の含有率１.０モル％であった。

（実施例１３）
リンカーの導入において、８５重量部のポリビニルアセタール樹脂と１５重量部のアクリル酸（リンカー）とを用いたこと、ペプチドの形成において、ペプチドの添加量を１５重量部に変更したこと以外は、実施例１２と同様にして、ペプチド含有ポリビニルアセタール樹脂を作製した。

（実施例１４）
リンカーの導入において、７０重量部のポリビニルアセタール樹脂と３０重量部のアクリル酸（リンカー）とを用いたこと、ペプチドの形成において、ペプチドの添加量を３０重量部に変更したこと以外は、実施例１２と同様にして、ペプチド含有ポリビニルアセタール樹脂を作製した。

（実施例１５）
リンカーの導入において、６７重量部のポリビニルアセタール樹脂と３３重量部のアクリル酸（リンカー）とを用いたこと、ペプチドの形成において、ペプチドの添加量を３３重量部に変更したこと以外は、実施例１２と同様にして、ペプチド含有ポリビニルアセタール樹脂を作製した。

（実施例１６）
リンカーの導入において、６３重量部のポリビニルアセタール樹脂と３７重量部のアクリル酸（リンカー）とを用いたこと、ペプチドの形成において、ペプチドの添加量を３７重量部に変更したこと以外は、実施例１２と同様にして、ペプチド含有ポリビニルアセタール樹脂を作製した。

（実施例１７）
リンカーの導入において、３０重量部のポリビニルアセタール樹脂と７０重量部のアクリル酸（リンカー）とを用いたこと、ペプチドの形成において、ペプチドの添加量を７０重量部に変更したこと以外は、実施例１２と同様にして、ペプチド含有ポリビニルアセタール樹脂を作製した。

（比較例２）
合成樹脂として、ポリスチレン樹脂をそのまま用いた。

（比較例３）
攪拌装置を備えた反応機に、イオン交換水２７００ｍＬ、平均重合度１７００、鹸化度９８モル％のポリビニルアルコールを３００重量部投入し、攪拌しながら加熱溶解し、溶液を得た。得られた溶液に、触媒として、塩酸濃度が０．２重量％となるように３５重量％塩酸を添加した。次いで、温度を１５℃に調整し、攪拌しながらｎ－ブチルアルデヒド２２重量部を添加した。次いで、ｎ－ブチルアルデヒド１４８重量部を添加し、白色粒子状のポリビニルブチラール樹脂を析出させた。析出してから１５分後に、塩酸濃度が１．８重量％となるように３５重量％塩酸を添加した後、５０℃に加熱し、５０℃で２時間保持した。次いで、溶液を冷却し、中和した後、水洗し、乾燥させることによりポリビニルブチラール樹脂（ＳＰ値：９．９）を得た。すなわち、ビニル化合物が共重合していないポリビニルブチラール樹脂（合成樹脂）を得た。

（比較例４）
Ｎ－ビニルピロリドン１７重量部及びｎ－ラウリルメタクリレート８３重量部を混合し、（メタ）アクリルモノマー溶液を得た。得られた（メタ）アクリルモノマー溶液にＩｒｇａｃｕｒｅ１８４（ＢＡＳＦ社製）１重量部を溶解させ、ＰＥＴフィルム上に塗布した。塗布物を２５℃にてアイグラフィックス社製、ＵＶコンベア装置「ＥＣＳ３０１Ｇ１」を用い、３６５ｎｍの波長の光を積算光量２０００ｍＪ／ｃｍ^２で照射することでポリ（メタ）アクリル酸エステル樹脂溶液を得た。得られたポリ（メタ）アクリル酸エステル樹脂溶液を８０℃、３時間真空乾燥させることでポリ（メタ）アクリル酸エステル樹脂としての合成樹脂を得た。

（参考例Ａ）
天然物由来の足場材の作製：
リン酸バッファー（ＰＢＳ）中に５μｇ／ｍｌに調整したＶｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎ（コーニング社製）溶液をφ３５ｍｍディッシュに１ｍｌ添加した。そこにφ２２ｍｍのカバーガラス（松浪社製「２２丸Ｎｏ．１」）を浸漬させ、３７℃で１時間養生することでＶｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎが表面に平滑に吸着した天然物由来の足場材（表中ではＶＴＮと記載）を得た。

細胞培養用容器の作製：
Ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎとカバーガラスとの積層体を、φ２２ｍｍのポリスチレンディッシュに配置することにより細胞培養用容器を得た。なお、Ｖｉｔｒｏｎｅｃｔｉｎは乾燥すると変性し、接着性能が大きく低下してしまうため、細胞培養用容器の作製後すぐにＰＢＳ溶液で浸漬した。

［評価］
（アセタール化度及びカチオン性基変性度）
実施例及び比較例で得られた合成樹脂のアセタール化度及びカチオン性基変性度は、合成樹脂をＤＭＳＯ－ｄ６（ジメチルスルホキサイド）に溶解した後、^１Ｈ－ＮＭＲ（核磁気共鳴スペクトル）により測定した。

（貯蔵弾性率）
各足場材料の２５℃及び１００℃の貯蔵弾性率は、動的粘弾性測定装置（アイティー計測制御社製、ＤＶＡ－２００）により引張条件下、周波数１０Ｈｚ、－１５０℃から１５０℃の温度範囲を昇温速度５℃／分にて測定した。得られた引張貯蔵弾性率のグラフから２５℃及び１００℃における貯蔵弾性率を求め、２５℃貯蔵弾性率／１００℃貯蔵弾性率を算出した。長さ５０ｍｍ、幅５～２０ｍｍ、厚み０．１～１．０ｍｍの測定サンプルを用いて、１０Ｈｚ、ひずみ０．１％、温度－１５０℃～１５０℃、および昇温速度５℃／ｍｉｎの条件で行った。

（水膨潤倍率）
長さ５０ｍｍ、幅１０ｍｍ、厚み０．０５ｍｍ～０．１５ｍｍの各足場材料からなる樹脂膜（測定サンプル）を、２５℃の水に２４時間浸漬した。浸漬前と後のサンプルの重さを測定し、水膨潤倍率＝（浸漬後のサンプル重量－浸漬前のサンプル重量）／（浸漬前のサンプル重量）×１００（％）を算出した。

（細胞培養用容器の作製）
実施例１～１１及び比較例１～４では、得られた合成樹脂１ｇをブタノール１９ｇに溶解させることで、樹脂溶液を得た。得られた樹脂溶液１５０μＬをφ２２ｍｍのカバーガラス（松浪社製、２２丸Ｎｏ．１をエアダスターで除塵して使用）上に吐出し、スピンコーターを用いて２０００ｒｐｍ、２０秒回転させて平滑な樹脂膜を得た。得られた上記樹脂膜をカバー２６ガラスごとφ２２ｍｍのポリスチレンディッシュに配置することにより細胞培養用容器を得た。実施例１２～１７では、得られたペプチド含有ポリビニルアセタール樹脂とカバーガラスとの積層体を、φ２２ｍｍのポリスチレンディッシュに配置することにより細胞培養用容器を得た。

（表面自由エネルギー）
細胞培養用容器の調製の欄で得られた樹脂膜の表面自由エネルギーについて接触角計（協和界面化学社製、ＤＭｏ－７０１）を用いて測定した。樹脂膜上に純水１μＬを滴下し、３０秒後の液滴像を撮影することで純水の接触角を得た。また、上記樹脂膜上にジヨードメタン１μＬを滴下し、３０秒後の液滴像を撮影することでジヨードメタンの接触角を得た。得られた接触角から、Ｋａｅｌｂｌｅ－Ｕｙの理論式を用いて表面自由エネルギーの分散項成分γ^ｄ（ｄＳＦＥ）及び極性項成分である双極子成分γ^ｐ（ｐＳＦＥ）を算出した。

（相分離パラメータ）
細胞培養用容器の調製の欄で得られた樹脂膜を原子間力顕微鏡（ＡＦＭ、ブルカー社製、品番「Ｄｉｍｅｎｓｉｏｎ ＸＲ」）により観察した。カンチレバーはＳＣＡＮ ＡＳＹＳＴ ＡＩＲを使用した。その結果、図２に示すように、実施例３の樹脂膜では、第１の相としてのポリビニルブチラール樹脂部が海部を形成し、第２の相としての（メタ）アクリル酸エステル及びビニル化合物を有する樹脂部（Ｎ－ビニルピロリドン及びｎ－ラウリルメタクリレートの共重合体部）が島部を形成する海島構造が観察された。同様に、実施例１～２，４～１１においても、第１の相としてのポリビニルブチラール樹脂部が海部を形成し、第２の相としての（メタ）アクリル酸エステル及びビニル化合物を有する樹脂部（Ｎ－ビニルピロリドン及びｎ－ラウリルメタクリレートの共重合体部）が島部を形成する海島構造が観察された。また、実施例１２～１７においても、第１の相としてのポリビニルブチラール樹脂部が海部を形成し、第２の相としてのペプチド部が島部を形成する海島構造が観察された。他方、比較例１～４では、相分離構造が観察されなかった。

また、原子間力顕微鏡により得られた画像から画像解析ソフト（ＩｍａｇｅＪ）を用いて、上述した方法により第２の相の表面全体に対する表面積の比（相分離構造の表面積分率）、第２の相の周囲長と面積との比（周囲長／面積）、島部である第２の相の個数（島個数）、及び島部の径の平均（平均島サイズ）を求めた。

（細胞増殖率）
得られた細胞培養用容器にリン酸緩衝生理食塩水１ｍＬを加えて３７℃のインキュベーター内で１時間静置後、培養容器内のリン酸緩衝生理食塩水を除いた。３５ｍｍディッシュにコンフルエント状態になったｈ－ｉＰＳ細胞２５３Ｇ１のコロニーを加え、次に１ｍＬの０．５ｍＭエチレンジアミン／リン酸緩衝溶液を加え、室温で２分静置した。その後、エチレンジアミン／リン酸緩衝溶液を除き、１ｍＬのＴｅＳＲＥ８培地でピペッティングにより５０～２００μｍに砕かれた細胞塊（０．５×１０^５ｃｅｌｌｓ）を培養容器に播種した。培地ＴｅＳＲ Ｅ８（ＳＴＥＭ ＣＥＬＬ社製）１．７ｍＬ、及び、ＲＯＣＫ－Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（Ｙ２７６３２）１０μＭの存在下で、３７℃及びＣＯ_２濃度５％のインキュベーター内で培養を行った。２４時間毎に培地を１ｍＬ除き、新たなＴｅＳＲ Ｅ８を１ｍＬ加えることで培地交換を行った。５日後における定着細胞塊を、ＴｒｙＰＬＥ Ｅｘｐｒｅｓｓ剥離液 １．０ｍＬを用いて剥離し、セルカウンター（Ｎｕｃｌｅｏｃｏｕｎｔｅｒ ＮＣ－３０００、Ｃｈｅｍｏｍｅｔｅｃ社製）を用いて細胞数をカウントした。

下記式を用いて参考例Ａに対する細胞増殖率を求めた。

参考例Ａに対する細胞増殖率（％）＝（実施例・比較例における細胞数）／（参考例Ａにおける細胞数）×１００

細胞増殖率について、以下の基準に従って評価した。

［評価基準］
ＡＡＡ…参考例Ａに対する細胞増殖率が、７０％以上
ＡＡ…参考例Ａに対する細胞増殖率が、６０％以上、７０％未満
Ａ…参考例Ａに対する細胞増殖率が、５０％以上、６０％未満
Ｂ…参考例Ａに対する細胞増殖率が、４０％以上、５０％未満
Ｃ…参考例Ａに対する細胞増殖率が、３０％以上、４０％未満
Ｄ…参考例Ａに対する細胞増殖率が、３０％未満

結果を下記の表１～４に示す。

１…細胞培養用容器
２…容器本体
２ａ…表面
３…樹脂膜

Claims (14)

1. 細胞培養用足場材料により形成された樹脂膜であって、
   前記細胞培養用足場材料は、ポリビニルアセタール骨格を有する合成樹脂を含み、
   前記樹脂膜が、少なくとも第１の相及び第２の相を含む、相分離構造を有し、
   前記第１の相及び第２の相のうち一方の相の表面全体に対する表面積の比が、０．０１以上、０．９５以下である、樹脂膜。
2. 前記第２の相の面積に対する周囲長の比（周囲長／面積）が、０．００１（１／ｎｍ）以上、０．４０（１／ｎｍ）以下である、請求項１に記載の樹脂膜。
3. 前記相分離構造が、海島構造であり、
   前記第１の相が海部であり、前記第２の相が島部である、請求項１又は２に記載の樹脂膜。
4. 前記島部である前記第２の相の個数が、１個／μｍ^２以上、５０００個／μｍ^２以下である、請求項３に記載の樹脂膜。
5. 前記相分離構造が、前記合成樹脂の分子内における相分離構造により構成されている、請求項１～４のいずれか１項に記載の樹脂膜。
6. 表面自由エネルギーの分散項成分が２５．０ｍＪ／ｍ^２以上、５０．０ｍＪ／ｍ^２以下、かつ、極性項成分が１．０ｍＪ／ｍ^２以上、２０．０ｍＪ／ｍ^２以下である、請求項１～５のいずれか１項に記載の樹脂膜。
7. 前記合成樹脂が、カチオン性官能基を有し、
   前記合成樹脂の構造単位中に含まれる前記カチオン性官能基の含有量が、０．２モル％以上、５０モル％以下である、請求項１～６のいずれか１項に記載の樹脂膜。
8. 前記第２の相が、ペプチド部を有する、請求項１～５のいずれか１項に記載の樹脂膜。
9. 前記ペプチド部が、細胞接着性のアミノ酸配列を有する、請求項８に記載の樹脂膜。
10. 水膨潤倍率が５０％以下である、請求項１～９のいずれか１項に記載の樹脂膜。
11. １００℃における貯蔵弾性率が、１．０×１０^４Ｐａ以上、１．０×１０^８Ｐａ以下であり、
    ２５℃における貯蔵弾性率と１００℃における貯蔵弾性率との比（（２５℃における貯蔵弾性率）／（１００℃における貯蔵弾性率））が、１．０×１０^１以上、１．０×１０^５以下である、請求項１～１０のいずれか１項に記載の樹脂膜。
12. 前記細胞培養用足場材料は、動物由来の原料を実質的に含まない、請求項１～１１のいずれか１項に記載の樹脂膜。
13. 担体と、
    請求項１～１２のいずれか１項に記載の樹脂膜と、を備え、
    前記担体の表面上に、前記樹脂膜が配置されている、細胞培養用担体。
14. 容器本体と、
    請求項１～１２のいずれか１項に記載の樹脂膜と、を備え、
    前記容器本体の表面上に、前記樹脂膜が配置されている、細胞培養用容器。

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