JP2021003102A - 樹脂膜及び細胞培養用容器 - Google Patents

Abstract

【課題】細胞の播種後の定着性に優れる、樹脂膜を提供する。【解決手段】合成樹脂を含む、細胞培養用足場材料からなる樹脂膜であって、合成樹脂のカチオン変性度が、０．２モル％以上、５０モル％以下であり、樹脂膜の等電点が、２．８以上、６．０以下である、樹脂膜。【選択図】なし

Description

本発明は、細胞培養用足場材料からなる樹脂膜に関する。また、本発明は、上記樹脂膜を用いた細胞培養用容器にも関する。

近年、細胞医薬や幹細胞を用いた次世代医療が注目を集めている。なかでも、ヒト胚性幹細胞（ｈＥＳＣ）やヒト人工多能性幹細胞（ｈｉＰＳＣ）等のヒト多能性幹細胞（ｈＰＳＣ）は、創薬や再生医療への応用が期待されている。このような応用を果たすには、多能性幹細胞を安全に、かつ再現性良く培養し、増殖させることが必須である。特に、再生医療の産業上利用に際しては、幹細胞を未分化状態で多量に扱う必要がある。そのため、天然高分子及び合成高分子やフィーダー細胞を用いて多能性幹細胞の増殖を支持すると同時に、多分化能を維持する技術について広範な研究が行われている。

例えば、下記の非特許文献１では、ｉＰＳ細胞やＥＳ細胞の増殖用足場材料として、フィブロネクチンを縮合反応させたポリ（ビニルアルコール−ビニルアセタール−イタコン酸）共重合体が提案されている。この足場材料は、親水性及び耐水性に優れているとされている。

下記の特許文献１には、カチオンとして、ＤＭＡＥＭＡ、アニオンとしてアクリル酸、核酸、又はヘパリンを使用した、足場材料が開示されている。

また、下記の特許文献２には、ＥＳ細胞やｉＰＳ細胞の培養に用いられる足場材料として、親水性かつ柔軟なポリロタキサンゲルで被覆された表面を有する培養容器が開示されている。

特開２０１７−７０３０３号公報 特開２０１７−２３００８号公報

Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．５，１８１３６、２０１５年１２月１４日発行

幹細胞の未分化性や分化特性が、増殖性に関与していることが知られており、これを制御する技術が求められている。従来、天然高分子としてのラミニンやヴィトロネクチン等の接着たんぱく質や、マウス肉腫由来のマトリゲルを用いると、播種後の細胞形態が非常に良好であることが知られている。

もっとも、天然高分子やマウス肉腫由来のマトリゲル等を用いる方法では、操作が煩雑であり、コストが高くつきがちであった。また、安全性の面でも問題があった。そこで、前述した非特許文献１、特許文献１及び特許文献２に記載のような合成高分子を用いた足場材料が種々提案されている。

しかしながら、非特許文献１に記載の細胞足場材料では、フィブロネクチンを含まない場合、すなわち、合成高分子だけの場合には、細胞が伸展せずに収縮し、浮遊するという問題があった。

また、特許文献１に記載の細胞足場材料では、イオン性による親水性が高く、細胞塊の収縮や細胞の凝集を引き起こすという問題があった。

さらに、特許文献２に記載の細胞足場材料では、親水性が高いため、膨潤しやすかった。そのため、播種した細胞が培地交換や長期培養に際し足場材料から剥がれ易く、細胞の定着性が低いという問題があった。

本発明の目的は、細胞の播種後の定着性に優れる、樹脂膜及び細胞培養用容器を提供することにある。

本発明に係る樹脂膜は、合成樹脂を含む、細胞培養用足場材料からなる樹脂膜であって、前記合成樹脂のカチオン変性度が、０．２モル％以上、５０モル％以下であり、前記樹脂膜の等電点が、２．８以上、６．０以下である。

本発明に係る樹脂膜のある特定の局面では、表面自由エネルギーの分散項成分が２４．５ｍＪ／ｍ^２以上、４５．０ｍＪ／ｍ^２以下、かつ、極性項成分が１．０ｍＪ／ｍ^２以上、２０．０ｍＪ／ｍ^２以下である。

本発明に係る樹脂膜の他の特定の局面では、水膨潤倍率が５０％以下である。

本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、１００℃における貯蔵弾性率が、１．０×１０^４Ｐａ以上、１．０×１０^８Ｐａ以下であり、２５℃における貯蔵弾性率と１００℃における貯蔵弾性率との比（（２５℃における貯蔵弾性率）／（１００℃における貯蔵弾性率））が、１．０×１０^１以上、１．０×１０^５以下である。

本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、前記細胞培養用足場材料が、動物由来の原料を実質的に含まない。

本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、前記合成樹脂がビニル重合体を含む。

本発明に係る樹脂膜のさらに他の特定の局面では、前記合成樹脂が、少なくともポリビニルアルコール誘導体又はポリ（メタ）アクリル酸エステルを含む。

本発明に係る細胞培養用容器は、容器本体と、本発明に従って構成される樹脂膜とを備え、前記容器本体の表面上に、前記樹脂膜が配置されている。

本発明によれば、細胞の播種後の定着性に優れる、樹脂膜及び細胞培養用容器を提供することができる。

本発明の一実施形態に係る細胞培養用容器を示す模式的正面断面図である。

以下、図面を参照しつつ、本発明の具体的な実施形態を説明することにより、本発明を明らかにする。

本発明に係る樹脂膜は、細胞を培養するために用いられる。本発明の樹脂膜は、合成樹脂を含む細胞培養用足場材料からなる樹脂膜である。上記合成樹脂のカチオン変性度は、０．２モル％以上、５０モル％以下である。また、本発明において、樹脂膜の等電点は、２．８以上、６．０以下である。

等電点とは、アニオン性官能基とカチオン性官能基の双方を有する合成樹脂の電離後の電荷平均が０となるｐＨのことをいう。従って、等電点は、樹脂膜のゼータ電位が０となるｐＨである。

樹脂膜のゼータ電位は、樹脂膜を溶液中に配置した場合、界面である樹脂膜の表面と、樹脂膜の表面から十分に離れた溶液中のバルク部分との電位差である。本明細書におけるゼータ電位は、測定対象物の形状に応じて、流動電位法、電気泳動法、電気浸透法等の方法を適宜選択し求めることができる。

例えば、測定対象物が膜である場合は、流動電位法により測定することができる。また、測定対象物が繊維や粒子である場合は、電気浸透法により測定することができる。

従って、樹脂膜のゼータ電位は、流動電位法により測定されたゼータ電位であることが好ましい。流動電位法は、例えば、アントンパール社製、ゼータ電位測定機器により測定することができる。具体的には、ＫＣｌ希薄溶液中にて、後述の実施例に記載された方法により測定することができる。電気泳動法としては、例えば、ゼータ電位・粒径・分子量測定システム（大塚電子社製）を用いて、水中で光散乱することにより、測定する方法が挙げられる。

本発明の樹脂膜は、上記の構成を備えるので、細胞の播種後の定着性に優れている。

従来の天然高分子材料を用いた細胞培養用足場材料は、播種後の細胞の定着性を高めることができるものの、高価であったり、天然由来物質であるためロット間のばらつきが大きかったり、動物由来の成分による安全上の懸念があったりする。一方で、合成高分子材料を用いた足場材料は、天然高分子材料を用いた足場材料と比べて、操作性がよく、安価であり、ロット間のばらつきが小さく、かつ安全性に優れている。しかしながら、合成樹脂材料を用いた足場材料は、天然高分子材料を用いた足場材料と比べて、接着性が低いという問題がある。本発明者らは、イオン性の電離・変化により、培地交換や長期培養による足場材料からの細胞の剥がれが生じることを見出した。

従って、本発明者らは、合成樹脂のカチオン変性度及び足場材料からなる樹脂膜の等電点に着目し、この合成樹脂のカチオン変性度と樹脂膜の等電点をそれぞれ特定の範囲とすることにより、イオン性の電離・変化を制御することができ、それによって播種後の細胞との接着性を高め得ることを見出した。

従って、本発明によれば、播種後の細胞との接着性を高めることができ、培地交換や長期培養による樹脂膜からの細胞の剥がれを抑制することができる。

また、本発明の樹脂膜は、合成樹脂を含むので、天然高分子材料を用いた足場材料と比べて、操作性がよく、安価であり、ロット間のばらつきが小さく、かつ安全性に優れている。

本発明において、樹脂膜の等電点は、２．８以上、より好ましくは３．０以上、６．０以下、より好ましくは５．０以下である。この場合、細胞の播種後の定着率をより一層高めることができる。

なお、等電点は、例えば、上記合成樹脂においてアミノ基等のカチオン性官能基の含有量を増やすことにより、高くすることができる。また、上記等電点は、例えば、上記合成樹脂においてカルボキシル基等のアニオン性官能基の含有量を増やすことにより、低くすることができる。

本発明において、樹脂膜における表面自由エネルギーの分散項成分は、好ましくは２４．５ｍＪ／ｍ^２以上、４５．０ｍＪ／ｍ^２以下である。それによって、播種後の細胞との接着性をより一層高めることができる。上記分散項成分は、より好ましくは３０．０ｍＪ／ｍ^２以上、さらに好ましくは３３．０ｍＪ／ｍ^２以上、より好ましくは４０．０ｍＪ／ｍ^２以下、さらに好ましくは３８．０ｍＪ／ｍ^２以下である。

また、表面自由エネルギーの極性項成分は、好ましくは１．０ｍＪ／ｍ^２以上、２０．０ｍＪ／ｍ^２以下である。この場合においても、播種後の細胞との接着性をより一層高めることができる。上記極性項成分は、より好ましくは１．５ｍＪ／ｍ^２以上、さらに好ましくは２．０ｍＪ／ｍ^２以上、より好ましくは１０．０ｍＪ／ｍ^２以下、さらに好ましくは７．５ｍＪ／ｍ^２以下である。

なお、表面自由エネルギーの分散項成分γ^ｄ及び極性項成分である双極子成分γ^ｐは、Ｋａｅｌｂｌｅ−Ｕｙの理論式を用いて算出される。Ｋａｅｌｂｌｅ−Ｕｙの理論式は、下記式（１）で示されるように、トータル表面自由エネルギーγが、分散項成分γ^ｄと双極子成分γ^ｐとの和になるとの仮定に基づく理論式である。

また、Ｋａｅｌｂｌｅ−Ｕｙの理論式では、液体の表面自由エネルギーをγ_ｌ（ｍＪ／ｍ^２）とし、固体の表面自由エネルギーをγ_ｓ（ｍＪ／ｍ^２）とし、接触角をθ（°）とすると、下記式（２）が成立する。

従って、液体の表面自由エネルギーγ_ｌが既知である液体を２種類用いて、樹脂膜に対するそれぞれの接触角θを測定し、γ_ｓ ^ｄ及びγ_ｓ ^ｐの連立方程式を解くことにより、樹脂膜の表面自由エネルギーの分散項成分γ^ｄ及び双極子成分γ^ｐを求めることができる。

なお、本明細書においては、上記表面自由エネルギーγ_ｌが既知である２種類の上記液体として、純水及びジヨードメタンが用いられている。

接触角θは、接触角計（例えば、協和界面化学社製「ＤＭｏ−７０１」）を用いて、以下のようにして測定される。

樹脂膜の表面に、純水又はジヨードメタンを１μＬ滴下する。滴下してから３０秒後の純水と、樹脂膜とのなす角度を、純水に対する接触角θとする。また、同様に、滴下してから３０秒後のジヨードメタンと、樹脂膜とのなす角度を、ジヨードメタンに対する接触角θとする。

合成樹脂における疎水性官能基の含有率を高くしたり、環状構造を有する官能基の含有率を高くしたり、ブチル基の含有率を少なくしたりすることにより、上記表面自由エネルギーの分散項成分γ^ｄを小さくすることができる。また、合成樹脂における親水性官能基の含有率を高くしたり、ブチル基の含有率を高くしたりすることにより、上記表面自由エネルギーの双極子成分γ^ｐを小さくすることができる。

上記樹脂膜の１００℃における貯蔵弾性率が、好ましくは０．６×１０^４Ｐａ以上、より好ましくは０．８×１０^４Ｐａ以上、さらに好ましくは１．０×１０^４Ｐａ以上、好ましくは１．０×１０^８Ｐａ以下、より好ましくは０．８×１０^８Ｐａ以下、さらに好ましくは１．０×１０^７Ｐａ以下である。

特に、上記樹脂膜の２５℃における貯蔵弾性率と１００℃における貯蔵弾性率との比（（２５℃における貯蔵弾性率）／（１００℃における貯蔵弾性率））が、好ましくは１．０×１０^１以上、より好ましくは５．０×１０^１以上、さらに好ましくは８．０×１０^２以上、好ましくは１．０×１０^５以下、より好ましくは０．７５×１０^５以下、さらに好ましくは０．５×１０^５以下である。上記比を上記範囲内とすることにより、播種後の細胞の定着性をより一層高めることができる。

２５℃及び１００℃における貯蔵弾性率は、例えば、動的粘弾性測定装置（アイティー計測制御社製、ＤＶＡ−２００）を用いて、引張条件下、周波数１０Ｈｚ、ひずみ０．１％、温度範囲−１５０℃〜１５０℃、及び昇温速度５℃／分の測定条件で測定することにより求めることができる。得られた引張貯蔵弾性率のグラフから２５℃及び１００℃における貯蔵弾性率を求め、また、比（２５℃における貯蔵弾性率／１００℃における貯蔵弾性率）を算出する。なお、測定サンプルは、長さ５０ｍｍ、幅５ｍｍ〜２０ｍｍ、厚み０．１ｍｍ〜１．０ｍｍの測定サンプルのサイズとする。

上記２５℃及び１００℃における貯蔵弾性率は、例えば、上記合成樹脂における架橋度を高めること、上記合成樹脂を延伸すること等により、高めることができる。また、上記２５℃及び１００℃における貯蔵弾性率は、上記合成樹脂において数平均分子量を下げること、ガラス転移温度を下げること等により、低くすることができる。

上記樹脂膜の水膨潤倍率は、好ましくは５０％以下、より好ましくは４０％以下、さらに好ましくは３０％以下、特に好ましくは２０％以下である。この場合、播種後の細胞の定着性をより一層高めることができる。なお、水膨潤倍率の下限値は特に限定されないが、例えば、０．５％とすることができる。

水膨潤倍率は、以下のようにして測定することができる。例えば、長さ５０ｍｍ、幅１０ｍｍ、厚み０．０５ｍｍ〜０．１５ｍｍの細胞培養用足場材料からなる樹脂膜（測定サンプル）を、２５℃の水に２４時間浸漬する。浸漬前と後のサンプルの重さを測定し、水膨潤倍率＝（浸漬後のサンプル重量−浸漬前のサンプル重量）／（浸漬前のサンプル重量）×１００（％）を算出する。

上記水膨潤倍率は、例えば、上記合成樹脂の疎水性官能基を増やすこと、数平均分子量を下げること等により、小さくできる。

［合成樹脂］
本発明に用いる細胞培養用足場材料は、合成樹脂（以下、合成樹脂Ｘと記載することがある）を含む。なお、本明細書において、「構造単位」とは、合成樹脂を構成するモノマーの繰り返し単位をいう。なお、合成樹脂がグラフト鎖を有する場合は、そのグラフト鎖を構成するモノマーの繰り返し単位を含む。

合成樹脂Ｘの主鎖は、炭素鎖であることが好ましい。また、合成樹脂Ｘは、カチオン性官能基及びアニオン性官能基を含むことが好ましい。

合成樹脂Ｘに含まれるカチオン性官能基としては、アミノ基、イミノ基、アミド基などの構造を有する置換基挙げられる。カチオン性官能基としては、特に限定されないが、例えば、ヒドロキシアミノ基、ウレア基、グアニジン、ビグアニド等の共役アミン系官能基、ピペラジン、ピペリジン、ピロリジン、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン、ヘキサメチレンテトラアミン、モルホリン、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、ピロール、アザトロピリデン、ピリドン、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、ベンゾトリアゾール、ピラゾール、オキサゾール、イミダゾリン、トリアゾール、チアゾール、チアジン、テトラゾール、インドール、イソインドール、プリン、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、キノキサリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、アクリジン、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、メラミン等のヘテロ環アミノ系官能基、ポルフィリン、クロリン、コリン等の環状ピロール系官能基およびそれらの誘導体等が挙げられる。これらのカチオン性官能基は、１種を単独で用いてもよく、複数種を併用してもよい。

合成樹脂Ｘの構造単位中に含まれるカチオン性官能基の含有量、すなわちカチオン変性度は、０．２モル％以上、好ましくは２モル％以上、より好ましくは３モル％以上、５０モル％以下、好ましくは１０モル％以下、より好ましくは７モル％以下である。このような範囲内でカチオン性官能基を含有する合成樹脂Ｘを用いることにより、播種後の細胞の定着性をより一層高めることができる。

また、合成樹脂Ｘに含まれるアニオン性官能基としては、特に限定されないが、例えば、ヒドロキシ基（水酸基）、カルボキシル基、スルホン酸基、マレイン酸基、スルフィン酸基、スルフェン酸基、リン酸基、ホスホン酸基、及びこれらの誘導体等が挙げられる。ブレンステッド酸性基は、カルボキシル基が挙げられる。これらのアニオン性官能基は、１種を単独で用いてもよく、複数種を併用してもよい。

合成樹脂Ｘの構造単位中に含まれるアニオン性官能基の含有量、すなわちアニオン変性度は、好ましくは１モル％以上、より好ましくは５モル％以上、好ましくは２０モル％以下、より好ましくは１０モル％以下である。このような範囲内でアニオン性官能基を含有する合成樹脂Ｘを用いることにより、播種後の細胞の定着性をより一層高めることができる。

なお、カチオン性官能基を有する構造単位及びアニオン性官能基を有する構造単位の含有量は、例えば、^１Ｈ−ＮＭＲ（核磁気共鳴スペクトル）により測定することができる。

本発明に用いる細胞培養用足場材料が含有している上記合成樹脂Ｘとしては、上記特定のカチオン変性度及び上記特定の範囲の等電点を有する限り、特に限定されるものではない。

（ビニル重合体）
合成樹脂Ｘは、ビニル重合体を含むことが好ましく、ビニル重合体であることがより好ましい。なお、ビニル重合体とは、ビニル基又はビニリデン基を有する化合物の重合体である。上記合成樹脂Ｘがビニル重合体である場合、水中における細胞培養用足場材料の膨潤をより抑制しやすくすることができる。ビニル重合体としては、例えば、ポリビニルアルコール誘導体、ポリ（メタ）アクリル酸エステル、ポリビニルピロリドン、ポリスチレン、エチレン・酢酸ビニル共重合体等が挙げられる。ビニル重合体は、細胞との接着性をより高める観点から、ポリビニルアルコール誘導体又はポリ（メタ）アクリル酸エステルであることが好ましい。合成樹脂Ｘは、少なくともポリビニルアルコール誘導体又はポリ（メタ）アクリル酸エステルを含むことが好ましい。合成樹脂Ｘは、ポリビニルアルコール誘導体であることが好ましく、ポリ（メタ）アクリル酸エステルであることも好ましい。

（ポリビニルアセタール骨格を有する合成樹脂Ｘ）
細胞培養用足場材料は、ポリビニルアセタール骨格を有する合成樹脂Ｘを含むことが好ましい。上記合成樹脂Ｘは、ポリビニルアセタール骨格を有する合成樹脂を含むことが好ましく、ポリビニルアセタール骨格を有する合成樹脂であることがより好ましい。

本明細書において、「ポリビニルアセタール骨格を有する合成樹脂Ｘ」を、「ポリビニルアセタール樹脂Ｘ」と記載することがある。

従って、ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、ポリビニルアセタール骨格を有する樹脂である。

ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、側鎖にアセタール基と、アセチル基と、水酸基とを有する。

ポリビニルアセタール樹脂Ｘの合成方法は、ポリビニルアルコールをアルデヒドによりアセタール化する工程を少なくとも備える。

ポリビニルアセタール樹脂Ｘを得るためのポリビニルアルコールのアセタール化に用いられるアルデヒドは、特に限定されない。アルデヒドとしては、例えば、炭素数が１〜１０のアルデヒドが挙げられる。アルデヒドは、鎖状脂肪族基、環状脂肪族基又は芳香族基を有していてもよい。アルデヒドは、鎖状アルデヒドであってもよく、環状アルデヒドであってもよい。

上記アルデヒドとしては、ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、プロピオンアルデヒド、ブチルアルデヒド、ペンタナール、ヘキサナール、ヘプタナール、オクタナール、ノナナール、デカナール、アクロレイン、ベンズアルデヒド、シンナムアルデヒド、ペリルアルデヒド、ホルミルピリジン、ホルミルイミダゾール、ホルミルピロール、ホルミルピペリジン、ホルミルトリアゾール、ホルミルテトラゾール、ホルミルインドール、ホルミルイソインドール、ホルミルプリン、ホルミルベンゾイミダゾール、ホルミルベンゾトリアゾール、ホルミルキノリン、ホルミルイソキノリン、ホルミルキノキサリン、ホルミルシンノリン、ホルミルプテリジン、ホルミルフラン、ホルミルオキソラン、ホルミルオキサン、ホルミルチオフェン、ホルミルチオラン、ホルミルチアン、ホルミルアデニン、ホルミルグアニン、ホルミルシトシン、ホルミルチミン、又はホルミルウラシル等が挙げられる。これらのアルデヒドは、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。

アルデヒドは、ホルムアルデヒド、アセトアルデヒド、プロピオンアルデヒド、ブチルアルデヒド、又はペンタナールであることが好ましく、ブチルアルデヒドであることがより好ましい。したがって、ポリビニルアセタール骨格は、ポリビニルブチラール骨格であることが好ましい。ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、ポリビニルブチラール樹脂であることが好ましい。

ポリビニルアセタール樹脂Ｘには、ビニル化合物が共重合されていてもよい。すなわち、ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、ポリビニルアセタール樹脂の構造単位とビニル化合物との共重合体であってもよい。本発明では、ビニル基と共重合したポリビニルアセタール樹脂も、ポリビニルアセタール樹脂というものとする。

ビニル化合物は、ビニル基（Ｈ_２Ｃ＝ＣＨ−）を有する化合物である。ビニル化合物は、ビニル基を有する構造単位を有する重合体であってもよい。

上記共重合体は、ポリビニルアセタール樹脂とビニル化合物とのブロック共重合体であってもよく、ポリビニルアセタール樹脂にビニル化合物がグラフトしたグラフト共重合体であってもよい。上記共重合体は、グラフト共重合体であることが好ましい。

ビニル化合物としては、エチレン、アリルアミン、ビニルピロリドン、ビニルイミダゾール、無水マレイン酸、マレイミド、イタコン酸、（メタ）アクリル酸、ビニルアミン及、又は（メタ）アクリル酸エステル等が挙げられる。これらのビニル化合物は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。

細胞の接着性をより一層高める観点からは、ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、ブレンステッド塩基性基又はブレンステッド酸性基を有することが好ましく、ブレンステッド塩基性基を有することがより好ましい。すなわち、ポリビニルアセタール樹脂Ｘの一部がブレンステッド塩基性基又はブレンステッド酸性基により変性されていることが好ましく、ポリビニルアセタール樹脂Ｘの一部がブレンステッド塩基性基で変性されていることがより好ましい。

ブレンステッド塩基性基は、水素イオンＨ^＋を他の物質から受け取ることができる官能基の総称である。ブレンステッド塩基性基としては、イミン構造を有する置換基、イミド構造を有する置換基、アミン構造を有する置換基、又はアミド構造を有する置換基等のアミン系塩基性基が挙げられる。ブレンステッド塩基性基は、特に限定されないが、例えば、ヒドロキシアミノ基、ウレア基、グアニジン、ビグアニド等の共役アミン系官能基、ピペラジン、ピペリジン、ピロリジン、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン、ヘキサメチレンテトラアミン、モルホリン、ピリジン、ピリダジン、ピリミジン、ピラジン、ピロール、アザトロピリデン、ピリドン、イミダゾール、ベンゾイミダゾール、ベンゾトリアゾール、ピラゾール、オキサゾール、イミダゾリン、トリアゾール、チアゾール、チアジン、テトラゾール、インドール、イソインドール、プリン、キノリン、イソキノリン、キナゾリン、キノキサリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、アクリジン、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、メラミン等のヘテロ環アミノ系官能基、ポルフィリン、クロリン、コリン等の環状ピロール系官能基、又はそれらの誘導体等が挙げられる。

ブレンステッド酸性基としては、カルボキシル基、スルホン酸基、マレイン酸基、スルフィン酸基、スルフェン酸基、リン酸基、ホスホン酸基、又はこれらの塩等が挙げられる。ブレンステッド酸性基は、カルボキシル基であることが好ましい。

ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、イミン構造を有する構造単位、イミド構造を有する構造単位、アミン構造を有する構造単位、又はアミド構造を有する構造単位を有することが好ましく、イミン構造を有する構造単位、又はアミン構造を有する構造単位を有することがより好ましい。この場合、これらの構造単位のうちの１種のみを有していてもよく、２種以上を有していてもよい。

ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、イミン構造を有する構造単位を有していてもよい。イミン構造とは、Ｃ＝Ｎ結合を有する構造をいう。特に、ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、イミン構造を側鎖に有することが好ましい。

ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、イミド構造を有する構造単位を有していてもよい。イミド構造を有する構造単位は、イミノ基（＝ＮＨ）を有する構造単位であることが好ましい。

ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、イミノ基を側鎖に有することが好ましい。この場合、イミノ基は、ポリビニルアセタール樹脂Ｘの主鎖を構成する炭素原子に直接結合していてもよく、アルキレン基等の連結基を介して主鎖に結合していてもよい。

ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、アミン構造を有する構造単位を有していてもよい。上記アミン構造におけるアミン基は、第一級アミン基であってもよく、第二級アミン基であってもよく、第三級アミン基であってもよく、第四級アミン基であってもよい。

アミン構造を有する構造単位は、アミド構造を有する構造単位であってもよい。上記アミド構造とは、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−を有する構造をいう。

ポリビニルアセタール樹脂Ｘは、アミン構造又はイミン構造を側鎖に有することが好ましい。この場合、アミン構造又はイミン構造は、ポリビニルアセタール樹脂Ｘの主鎖を構成する炭素原子に直接結合していてもよく、アルキレン基等の連結基を介して主鎖に結合していてもよい。

なお、イミン構造を有する構造単位の含有率、イミド構造を有する構造単位の含有率、アミン構造を有する構造単位の含有率、アミド構造を有する構造単位の含有率は、^１Ｈ−ＮＭＲ（核磁気共鳴スペクトル）により測定することができる。

（ポリ（メタ）アクリル酸エステル骨格を有する合成樹脂Ｘ）
本発明に用いる細胞培養用足場材料は、ポリ（メタ）アクリル酸エステル骨格を有する合成樹脂Ｘを含むことが好ましい。上記合成樹脂Ｘは、ポリ（メタ）アクリル酸エステル骨格を有する合成樹脂を含むことが好ましく、ポリ（メタ）アクリル酸エステル骨格を有する合成樹脂であることがより好ましい。

本明細書において、「ポリ（メタ）アクリル酸エステル骨格を有する合成樹脂Ｘ」を、「ポリ（メタ）アクリル酸エステル樹脂Ｘ」と記載することがある。

従って、ポリ（メタ）アクリル酸エステル樹脂Ｘは、ポリ（メタ）アクリル酸エステル骨格を有する樹脂である。

ポリ（メタ）アクリル酸エステル樹脂Ｘは、（メタ）アクリル酸エステルの重合により、あるいは（メタ）アクリル酸エステルと、上記他のモノマーとの重合により得られる。

（メタ）アクリル酸エステルとしては、（メタ）アクリル酸アルキルエステル、（メタ）アクリル酸環状アルキルエステル、（メタ）アクリル酸アリールエステル、（メタ）アクリルアミド類、（メタ）アクリル酸ポリエチレングリコール類、（メタ）アクリル酸ホスホリルコリン等が挙げられる。

（メタ）アクリル酸アルキルエステルとしては、メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレート、ｎ−プロピル（メタ）アクリレート、イソプロピル（メタ）アクリレート、ｎ−ブチル（メタ）アクリレート、イソブチル（メタ）アクリレート、ｔ−ブチル（メタ）アクリレート、ｎ−オクチル（メタ）アクリレート、イソオクチル（メタ）アクリレート、２−エチルヘキシル（メタ）アクリレート、ノニル（メタ）アクリレート、イソノニル（メタ）アクリレート、デシル（メタ）アクリレート、イソデシル（メタ）アクリレート、ラウリル（メタ）アクリレート、又はステアリル（メタ）アクリレート、イソテトラデシル（メタ）アクリレート等が挙げられる。

なお、（メタ）アクリル酸アルキルエステルは、炭素数１〜３のアルコキシ基及びテトラヒドロフルフリル基等の置換基で置換されていてもよい。このような（メタ）アクリル酸アルキルエステルの例としては、メトキシエチルアクリレート、テトラヒドロフルフリルアクリレート等が挙げられる。

（メタ）アクリル酸環状アルキルエステルとしては、シクロヘキシル（メタ）アクリレート、又はイソボルニル（メタ）アクリレート等が挙げられる。

（メタ）アクリル酸アリールエステルとしては、フェニル（メタ）アクリレート、又はベンジル（メタ）アクリレート等が挙げられる。

（メタ）アクリルアミド類としては、（メタ）アクリルアミド、Ｎ−イソプロピル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ，Ｎ’−ジメチル（メタ）アクリルアミド、（３−（メタ）アクリルアミドプロピル）トリメチルアンモニウムクロリド、４−（メタ）アクリロイルモルホリン、３−（メタ）アクリロイル−２−オキサゾリジノン、Ｎ−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］（メタ）アクリルアミド、Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）（メタ）アクリルアミド、Ｎ−メチロール（メタ）アクリルアミド、又は６−（メタ）アクリルアミドヘキサン酸等が挙げられる。

（メタ）アクリル酸ポリエチレングリコール類としては、例えば、メトキシ−ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、エトキシ−ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、ヒドロキシ−ポリエチレングリコール（メタ）アクリレート、メトキシ−ジエチレングリコール（メタ）アクリレート、エトキシ−ジエチレングリコール（メタ）アクリレート、ヒドロキシ−ジエチレングリコール（メタ）アクリレート、メトキシ−トリエチレングリコール（メタ）アクリレート、エトキシ−トリエチレングリコール（メタ）アクリレート、又はヒドロキシ−トリエチレングリコール（メタ）アクリレート等が挙げられる。

（メタ）アクリル酸ホスホリルコリンとしては、２−（メタ）アクリロイルオキシエチルホスホリルコリン等が挙げられる。

（メタ）アクリル酸エステルと共重合される他のモノマーとしては、ビニル化合物が好適に用いられる。ビニル化合物としては、エチレン、アリルアミン、ビニルピロリドン、無水マレイン酸、マレイミド、イタコン酸、（メタ）アクリル酸、ビニルアミン、又は（メタ）アクリル酸エステル等が挙げられる。ビニル化合物は、１種のみが用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。

なお、本明細書において、「（メタ）アクリル」とは、「アクリル」又は「メタクリル」を意味し、「（メタ）アクリレート」とは、「アクリレート」又は「メタクリレート」を意味する。

また、ポリ（メタ）アクリル酸樹脂Ｘは、ポリビニルアセタール骨格を有する合成樹脂Ｘと同様に、一部にブレンステッド塩基性基、またはブレンステッド酸性基を有していてもよい。ブレンステッド塩基性基及びブレンステッド酸性基については、上述した通りである。

（合成樹脂Ｘ以外の樹脂）
細胞培養用足場材料は、合成樹脂Ｘ以外のポリマーを含んでいてもよい。該ポリマーとしては、ポリオレフィン樹脂、ポリエーテル樹脂、ポリビニルアルコール樹脂、ポリエステル、エポキシ樹脂、ポリアミド樹脂、ポリイミド樹脂、ポリウレタン樹脂、又はポリカーボネート樹脂等が挙げられる。

［細胞培養用足場材料］
本発明に用いる細胞培養用足場材料は、上記合成樹脂Ｘを含む。本発明の効果を効果的に発揮させる観点及び生産性を高める観点からは、上記細胞培養用足場材料１００重量％中、上記合成樹脂Ｘの含有量は、好ましくは９０重量％以上、より好ましくは９５重量％以上、更に好ましくは９７．５重量％以上、特に好ましくは９９重量％以上、最も好ましくは１００重量％（全量）である。したがって、上記細胞培養用足場材料は、上記合成樹脂Ｘであることが最も好ましい。上記合成樹脂Ｘの含有量が上記下限以上であると、本発明の効果をより一層効果的に発揮させることができる。

上記細胞培養用足場材料は、上記合成樹脂Ｘ以外の成分を含んでいてもよい。上記合成樹脂以外の成分としては、多糖類、セルロース、合成ペプチド、ポリペプチド等が挙げられる。

本発明の効果を効果的に発揮させる観点から、上記合成樹脂Ｘ以外の成分の含有量は少ないほどよい。上記細胞培養用足場材料１００重量％中、該成分の含有量は、好ましくは１０重量％以下、より好ましくは５重量％以下、更に好ましくは２．５重量％以下、特に好ましくは１重量％以下、最も好ましくは０重量％（未含有）である。したがって、細胞培養用足場材料は、合成樹脂Ｘ以外の成分を含まないことが最も好ましい。

上記細胞培養用足場材料は、動物由来の原料を実質的に含まないことが好ましい。動物由来の原料を含まないことにより、安全性が高く、かつ、製造時に品質のばらつきが少ない細胞培養用足場材料を提供することができる。なお、「動物由来の原料を実質的に含まない」とは、細胞培養用足場材料中における動物由来の原料が、３重量％以下であることをいう。上記細胞培養用足場材料は、細胞培養用足場材料中における動物由来の原料が、１重量％以下であることが好ましく、０重量％であることがより好ましい。すなわち、上記細胞培養用足場材料は、動物由来の原料を全く含まないことがより好ましい。

（細胞培養用足場材料からなる樹脂膜を用いた細胞培養）
細胞培養用足場材料は、細胞を培養するために用いられる。上記細胞培養用足場材料は、細胞を培養する際の該細胞の足場として用いられる。したがって、本発明に係る樹脂膜は、細胞を培養するために用いられ、また、細胞を培養する際の該細胞の足場として用いられる。

上記細胞としては、ヒト、マウス、ラット、ブタ、ウシ及びサル等の動物細胞が挙げられる。また、上記細胞としては、体細胞等が挙げられ、例えば、幹細胞、前駆細胞及び成熟細胞等が挙げられる。上記体細胞は、癌細胞であってもよい。

上記幹細胞としては、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、ｉＰＳ細胞、ＥＳ細胞、Ｍｕｓｅ細胞、胚性がん細胞、胚性生殖幹細胞、及びｍＧＳ細胞等が挙げられる。

上記成熟細胞としては、神経細胞、心筋細胞、網膜細胞及び肝細胞等が挙げられる。

（細胞培養用足場材料の形状）
本発明に係る樹脂膜は、細胞培養用足場材料により形成される。上記樹脂膜は、細胞培養用足場材料を用いて形成される。上記樹脂膜は、膜状の細胞培養用足場材料であることが好ましい。上記樹脂膜は、細胞培養用足場材料の膜状物であることが好ましい。上記樹脂膜の厚みは特に限定されない。

本明細書では、上記細胞培養用足場材料を含む、粒子、繊維、多孔体、又はフィルムも提供する。この場合、上記細胞培養用足場材料の形状は特に限定されず、粒子であっても、繊維であっても、多孔体であっても、フィルムであってもよい。なお、上記粒子、繊維、多孔体、又はフィルムは、上記細胞培養用足場材料以外の構成要素を含んでいてもよい。

上記細胞培養用足場材料を含むフィルムは、細胞を平面培養（二次元培養）するために用いられることが好ましい。また、上記細胞培養用足場材料を含む、粒子、繊維、又は多孔体は、細胞を三次元培養するために用いられることが好ましい。

（細胞培養用容器）
本発明は、細胞の培養領域の少なくとも一部に上記樹脂膜を備える、細胞培養用容器にも関する。図１は、本発明の一実施形態に係る細胞培養用容器を示す模式的正面断面図である。

細胞培養用容器１は、容器本体２と、樹脂膜３とを備える。容器本体２の表面２ａ上に樹脂膜３が配置されている。容器本体２の底面上に樹脂膜３が配置されている。細胞培養用容器１に液体培地を添加し、また、細胞を樹脂膜３の表面に播種することで、細胞を平面培養することができる。

なお、容器本体は、第１の容器本体の底面上にカバーガラス等の第２の容器本体を備えていてもよい。第１の容器本体と第２の容器本体とは分離可能であってもよい。この場合、第２の容器本体の表面上に、樹脂膜が配置されていてもよい。

上記容器本体として、従来公知の容器本体（容器）を用いることができる。上記容器本体の形状および大きさは特に限定されない。

上記容器本体としては、１個又は複数個のウェル（穴）を備える細胞培養用プレート、及び細胞培養用フラスコ等が挙げられる。上記プレートのウェル数は特に限定されない。該ウェル数としては、特に限定されないが、例えば、２、４、６、１２、２４、４８、９６、３８４等が挙げられる。上記ウェルの形状としては、特に限定されないが、真円、楕円、三角形、正方形、長方形、五角形等が挙げられる。上記ウェル底面の形状としては、特に限定されないが、平底、丸底、凹凸等が挙げられる。

上記容器本体の材質は特に限定されないが、樹脂、金属及び無機材料が挙げられる。上記樹脂としては、ポリスチレン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリカーボネート、ポリエステル、ポリイソプレン、シクロオレフィンポリマー、ポリイミド、ポリアミド、ポリアミドイミド、（メタ）アクリル樹脂、エポキシ樹脂、シリコーン等が挙げられる。上記金属としては、ステンレス、銅、鉄、ニッケル、アルミ、チタン、金、銀、白金等が挙げられる。上記無機材料としては、酸化ケイ素（ガラス）、酸化アルミ、酸化チタン、酸化ジルコニウム、酸化鉄、窒化ケイ素等が挙げられる。

次に、本発明の具体的な実施例及び比較例を挙げることにより本発明を明らかにする。なお、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

細胞培養用足場材料の原料として、以下の合成樹脂を合成した。

（実施例１）
攪拌装置を備えた反応機に、イオン交換水２７００ｍＬ、平均重合度１７００、鹸化度９８モル％、アセチル基度２ｍｏｌ％のポリビニルアルコールを３００重量部投入し、攪拌しながら加熱溶解し、溶液を得た。得られた溶液に、触媒として、塩酸濃度が０．２重量％となるように３５重量％塩酸を添加した。次いで、温度を１５℃に調整し、攪拌しながらｎ−ブチルアルデヒド２２重量部を添加した。次いで、ｎ−ブチルアルデヒド１４８重量部を添加し、白色粒子状のポリビニルブチラール樹脂を析出させた。析出してから１５分後に、塩酸濃度が１．８重量％となるように３５重量％塩酸を添加した後、５０℃に加熱し、５０℃で２時間保持した。次いで、溶液を冷却し、中和した後、ポリビニルブチラール樹脂を水洗し、乾燥させた。得られたポリビニルブチラール樹脂９９．７重量部を、２０重量％の溶液となるようにテトラヒドロフランに溶解させ、開始剤としてＩｒｇａｃｕｒｅ１８４を５重量部、及びジメチルアミノアクリレート０．３重量部を添加し、グラフト重合を行うことで、合成樹脂を得た。

得られた合成樹脂は、ブチラール化度７０．７モル（ｍｏｌ）％、アセチル化度１モル（ｍｏｌ）％、水酸基量２８モル（ｍｏｌ）％、カチオン変性度０．３モル（ｍｏｌ）％であった。なお、得られた合成樹脂における構造単位の含有率は、合成樹脂をＤＭＳＯ−ｄ６（ジメチルスルホキサイド）に溶解した後、^１Ｈ−ＮＭＲ（核磁気共鳴スペクトル）により測定した。以下の実施例及び比較例においても、同様にして測定した。

（実施例２）
実施例１と同様にして得られたポリビニルブチラール樹脂９８重量部を、２０重量％の溶液となるようにテトラヒドロフランに溶解させ、開始剤としてＩｒｇａｃｕｒｅ１８４を５重量部、及びジメチルアミノアクリレート２重量部を添加し、グラフト重合を行うことで、合成樹脂を得た。

（実施例３）
実施例１と同様にして得られたポリビニルブチラール樹脂９０重量部を、２０重量％の溶液となるようにテトラヒドロフランに溶解させ、開始剤としてＩｒｇａｃｕｒｅ１８４を５重量部、及びジメチルアミノアクリレート１０重量部を添加し、グラフト重合を行うことで、合成樹脂を得た。

（実施例４）
実施例１と同様にして得られたポリビニルブチラール樹脂９０重量部を、２０重量％の溶液となるようにテトラヒドロフランに溶解させ、開始剤としてＩｒｇａｃｕｒｅ１８４を５重量部、ビニルピロリドン５重量部、及びラウリルメタクリレート５重量部を添加し、グラフト重合を行うことで、合成樹脂を得た。

（実施例５）
実施例１と同様にして得られたポリビニルブチラール樹脂９０重量部を、２０重量％の溶液となるようにテトラヒドロフランに溶解させ、開始剤としてＩｒｇａｃｕｒｅ１８４を５重量部、及びビニルイミダゾール１０重量部を添加し、グラフト重合を行うことで、合成樹脂を得た。

（実施例６）
ビニルピロリドン５重量部、ブチルメタクリレート７１重量部、及びエチルアクリレート２４重量部を混合し、（メタ）アクリルモノマー溶液を得た。得られた（メタ）アクリルモノマー溶液にＩｒｇａｃｕｒｅ１８４（ＢＡＳＦ社製）０．１重量部を溶解させ、ＰＥＴフィルム上に塗布した。塗布物を２５℃にてアイグラフィックス社製、ＵＶコンベア装置「ＥＣＳ３０１Ｇ１」を用い、３６５ｎｍの波長の光を積算光量２０００ｍＪ／ｃｍ^２で照射することでポリ（メタ）アクリル酸エステル樹脂溶液を得た。得られたポリ（メタ）アクリル酸エステル樹脂溶液を８０℃、３時間真空乾燥させることでポリ（メタ）アクリル酸エステル樹脂としての合成樹脂を得た。

（比較例１）
合成樹脂として、ポリスチレン樹脂をそのまま用いた。

（比較例２）
合成樹脂として、ポリエチレンテレフタレート樹脂をそのまま用いた。

（比較例３）
合成樹脂として、ポリスチレン樹脂をそのまま用いた。

（比較例４）
合成樹脂として、ポリメタクリル酸メチル樹脂をそのまま用いた。

（比較例５）
合成樹脂として、ポリテトラフルオロエチレン樹脂をそのまま用いた。

（比較例６）
実施例１と同様にして得られたポリビニルブチラール樹脂Ａ ９０重量部を、２０重量％の溶液となるようにテトラヒドロフランに溶解させ、開始剤としてＩｒｇａｃｕｒｅ１８４を５重量部、及びアクリル酸１０重量部を添加し、グラフト重合を行うことで、合成樹脂を得た。

（比較例７）
実施例１と同様にして得られたポリビニルブチラール樹脂Ａ ９０重量部を、２０重量％の溶液となるようにテトラヒドロフランに溶解させ、開始剤としてＩｒｇａｃｕｒｅ１８４を５重量部、及びジエチルアミノアクリレート１０重量部を添加し、グラフト重合を行うことで、合成樹脂を得た。

［評価］
（等電点）
細胞培養用容器の作製；
実施例１〜６及び比較例１〜７で得られた各合成樹脂０．１重量部をブタノール・メタノール混合溶媒（９：１）１９．９重量部に溶解させた。得られた溶液２００μＬを、ポリスチレンディッシュにキャストした後、６０℃で１２０分間加熱して、表面が平滑な樹脂膜（細胞培養用足場材料からなる樹脂膜）が形成された細胞培養用容器を得た。なお、以下の測定には、この樹脂膜を用いた。

等電点の測定；
ゼータ電位測定機器（アントンパール社製、型番ＳＵＲＰＡＳＳ ３）を用いて、実施例１〜６及び比較例１〜７で得られた樹脂膜のゼータ電位をそれぞれ求めた。まず、０．１ｍＭのＫＣｌ溶液を用意した。次に、セルに足場材料の樹脂膜をセットしたあと、ｐＨ電極及び導電率計を設定した。ＨＣｌとＮａＯＨ溶液を用いて、ｐＨ３．０〜９．０まで滴定することでゼータ電位が０になるときのｐＨ（等電点）を測定した。

（貯蔵弾性率）
実施例１〜６及び比較例１〜７で得られた樹脂膜の２５℃及び１００℃における貯蔵弾性率は、動的粘弾性測定装置（アイティー計測制御社製、ＤＶＡ−２００）により引張条件下、周波数１０Ｈｚ、−１５０℃から１５０℃の温度範囲を昇温速度５℃／分にて測定した。得られた引張貯蔵弾性率のグラフから２５℃及び１００℃における貯蔵弾性率を求め、２５℃貯蔵弾性率／１００℃貯蔵弾性率を算出した。長さ５０ｍｍ、幅５ｍｍ〜２０ｍｍ、厚み０．１ｍｍ〜１．０ｍｍの測定サンプルを用いて、１０Ｈｚ、ひずみ０．１％、温度−１５０℃〜１５０℃、及び昇温速度５℃／ｍｉｎの条件で行った。また、得られた２５℃及び１００℃における貯蔵弾性率から、比（（２５℃における貯蔵弾性率）／（１００℃における貯蔵弾性率））を算出した。

（水膨潤倍率）
実施例１〜６及び比較例１〜７で得られた樹脂膜（測定サンプル）を、２５℃の水に２４時間浸漬した。浸漬前と後のサンプルの重さを測定し、水膨潤率＝（浸漬後のサンプル重量−浸漬前のサンプル重量）／（浸漬前のサンプル重量）×１００（％）を算出した。

（表面自由エネルギー）
実施例１〜６及び比較例１〜７で得られた樹脂膜の表面自由エネルギーについて接触角計（協和界面化学社製、ＤＭｏ−７０１）を用いて測定した。樹脂膜上に純水１μＬを滴下し、３０秒後の液滴像を撮影することで純水の接触角を得た。また、上記樹脂膜上にジヨードメタン１μＬを滴下し、３０秒後の液滴像を撮影することでジヨードメタンの接触角を得た。得られた接触角から、Ｋａｅｌｂｌｅ−Ｕｙの理論式を用いて表面自由エネルギーの分散項成分γ^ｄ（ｄＳＦＥ）及び双極子成分γ^ｐ（ｐＳＦＥ）を算出した。

（接着性）
得られた細胞培養用容器にリン酸緩衝生理食塩水１ｍＬを加えて３７℃のインキュベーター内で１時間静置後、培養容器内のリン酸緩衝生理食塩水を除いた。３５ｍｍディッシュにコンフルエント状態になったｈ−ｉＰＳ細胞２５３Ｇ１のコロニーを加え、次に１ｍＬの０．５ｍＭエチレンジアミン／リン酸緩衝溶液を加え、室温で２分静置した。その後、エチレンジアミン／リン酸緩衝溶液を除き、１．５ｍＬのＴｅＳＲＥ８培地でピペッティングにより５０μｍ〜２００μｍに砕かれた細胞塊を０．５×１０^５ｃｅｌｌｓ培養容器に播種し、培地ＴｅＳＲ Ｅ８（ＳＴＥＭ ＣＥＬＬ社製）１ｍＬおよび、ＲＯＣＫ−Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ（Ｙ２７６３２）１０μＭ存在下、３７℃、ＣＯ_２濃度５％のインキュベーター内で培養を行った。２４時間毎に培地を１０００μＬ除き、新たなＴｅＳＲ Ｅ８を１０００μＬ加えることで培地交換を行った。

細胞塊培養試験において、細胞塊が剥がれるまでの接着維持可能時間を測定した。また、以下の基準に従って評価した。

［評価基準］
〇〇…培地交換後７２時間以上接着維持した。
〇…培地交換後４８時間以上接着維持したが、７２時間未満で全ての細胞が剥離した。
×…培地交換後２４時間以下で全ての細胞が剥離した。

結果を下記の表１に示す。

１…細胞培養用容器
２…容器本体
２ａ…表面
３…樹脂膜

Claims (8)

1. 合成樹脂を含む、細胞培養用足場材料からなる樹脂膜であって、
   前記合成樹脂のカチオン変性度が、０．２モル％以上、５０モル％以下であり、
   前記樹脂膜の等電点が、２．８以上、６．０以下である、樹脂膜。
2. 表面自由エネルギーの分散項成分が２４．５ｍＪ／ｍ^２以上、４５．０ｍＪ／ｍ^２以下、かつ、極性項成分が１．０ｍＪ／ｍ^２以上、２０．０ｍＪ／ｍ^２以下である、請求項１に記載の樹脂膜。
3. 水膨潤倍率が５０％以下である、請求項１又は２に記載の樹脂膜。
4. １００℃における貯蔵弾性率が、１．０×１０^４Ｐａ以上、１．０×１０^８Ｐａ以下であり、
   ２５℃における貯蔵弾性率と１００℃における貯蔵弾性率との比（（２５℃における貯蔵弾性率）／（１００℃における貯蔵弾性率））が、１．０×１０^１以上、１．０×１０^５以下である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の樹脂膜。
5. 前記細胞培養用足場材料が、動物由来の原料を実質的に含まない、請求項１〜４のいずれか１項に記載の樹脂膜。
6. 前記合成樹脂がビニル重合体を含む、請求項１〜５のいずれか１項に記載の樹脂膜。
7. 前記合成樹脂が、少なくともポリビニルアルコール誘導体又はポリ（メタ）アクリル酸エステルを含む、請求項１〜６のいずれか１項に記載の樹脂膜。
8. 容器本体と、
   請求項１〜７のいずれか１項に記載の樹脂膜とを備え、
   前記容器本体の表面上に、前記樹脂膜が配置されている、細胞培養用容器。

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