JP2022512766A - 組み合わせがん免疫療法 - Google Patents

Abstract

本明細書で提供されるのは、がんにおける複数の免疫抑制メカニズムを動的に制御及び標的化するための方法及び組成物である。いくつかの態様は、その各々が腫瘍の異なる免疫抑制メカニズムを調節する複数のエフェクター分子を産生するように操作された細胞、及びその細胞を卵巣癌、乳癌、または結腸癌などのがんを治療するために使用する方法を提供する。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１０月１７日に出願された米国仮出願第６２／７４７，１０９号、２０１８年１０月１７日に提出された同第６２／７４７，１１４号、及び２０１９年５月３日に提出された同第６２／８４３，１８０号の利益を主張し、その各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

配列表
本出願は、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる配列表を含む。２０ＸＸ年、ＸＸ月に作成された該ＡＳＣＩＩコピーは、ＸＸＸＸＸＵＳ＿ｓｅｑｕｅｎｃｅｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔと称され、サイズがＸ，ＸＸＸ，ＸＸＸバイトである。

背景
米国では毎年２２，０００を超える卵巣癌の新規症例、及び１４，０００を超える死亡が確認され（Ｓｉｅｇｅｌ ＲＬ，ｅｔ ａｌ．（２０１６）ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ ６６（１）：７－３０（非特許文献１））、６億ドルを超える推定年間医療負担を伴う（Ｄｉｚｏｎ Ｄ ＭＪ（２０１０）Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｏｎｃｏｌ １１６（３）（非特許文献２））。化学療法（例えば、カルボプラチン／シスプラチン及び／またはパクリタキセル）などの従来のアプローチでは、多くの場合に卵巣癌を治療することが不可能である。およそ７０％の患者が一次化学療法で寛解を達成せず、寛解を示した４０～５０％の患者は３年以内に再発する可能性がある。

他のがん、例えば、乳癌及び結腸癌などの治療は、それぞれ８５％及び６５％の５年生存率を伴う。多くの場合、治療には侵襲的外科手術及び化学療法の組み合わせが含まれる。

Ｓｉｅｇｅｌ ＲＬ，ｅｔ ａｌ．（２０１６）ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ Ｃｌｉｎ ６６（１）：７－３０ Ｄｉｚｏｎ Ｄ ＭＪ（２０１０）Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｏｎｃｏｌ １１６（３）

概要
本明細書で提供されるのは、いくつかの実施形態では、がん、例えば、卵巣癌、乳癌、結腸癌、肺癌、及び膵臓癌などの標的治療のための組み合わせ細胞系免疫療法である。本組み合わせ免疫療法は、腫瘍内及び／または腫瘍の近くで多因子を調節することができる操作された細胞回路（「腫瘍微小環境（ＴＭＥ）」）に依存する。組み合わせ免疫療法の興味深い進歩にもかかわらず、がんに対するその有効性は、部分的に以下の課題のために制限されている。重大な副作用を引き起こさずに最大の有効性を達成するために複数の療法を同時に提供することは困難である。臨床治験において、複数回の全身投与及び／または局所注入療法の適切な投与量及びタイミングを決定することも困難である。

しかしながら、本明細書で提供される組み合わせ免疫療法は、腫瘍特異的かつ有効的であるが、全身毒性を制限する。本組み合わせ免疫療法は、単一の送達媒体から複数の免疫調節エフェクター分子を腫瘍微小環境に送達する。送達ビヒクルの設計は、プロモーター、リンカー、シグナルペプチド、及び複数の免疫調節エフェクター分子の順序の最適化を含むがこれらに限定されない、がん治療における全体的な機能を改善するように最適化される。

有利なことに、本開示の細胞回路は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）において操作され、腫瘍（転移を含む）に選択的にホーミングすることができ、炎症誘発性／免疫刺激性セクレトーム及び特定の条件下で抗炎症性セクレトームを産生することができ、低免疫原性である。これらの特性は、とりわけ、重大な安全性の問題、副作用、または拒絶を伴わずに、同種異系の細胞療法に使用することを可能とする。

腫瘍が、細胞外マトリックス、癌関連間質細胞（ＭＳＣ及び線維芽細胞）、腫瘍血管系、及び免疫系を含む、腫瘍細胞と周囲の間質との間の複雑な相互作用であることが徐々に認識されている。ＴＭＥは、患者の自然免疫系及び適応免疫系の両方を標的とする複数のメカニズムを通じて、抗腫瘍免疫応答を抑制する。例えば、腫瘍は、ＣＣＬ２２などの特定のケモカインを産生することにより、従来のＴ細胞の抗腫瘍活性を抑制する制御性Ｔ細胞を動員及び誘導することができる。腫瘍は、ＰＤ－Ｌ１などの免疫チェックポイントなど、Ｔ細胞及びＮＫ細胞の活性を阻害する分子を発現することもできる。したがって、単一の経路を標的とすることは、固形腫瘍に対して強固な有効性を達成するには不十分である可能性が高い。

本開示に含まれるエフェクター分子の非限定的な例には、サイトカイン、抗体、ケモカイン、ヌクレオチド、ペプチド、酵素、及び腫瘍溶解性ウイルスが含まれる。例えば、ＭＳＣは、ＩＬ－１２、ＩＬ－１６、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－７、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＩＬ－１β、ＩＬ－２１、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０Ｌ、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＴＧＦβ抗体、抗ＴＮＦＲ２、ＭＩＰ１α（ＣＣＬ３）、ＭＩＰ１β（ＣＣＬ５）、ＣＣＬ２１、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド、及び抗腫瘍ペプチド（例えば、抗腫瘍活性を有する抗菌ペプチド、例えば、Ｇａｓｐａｒ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２０１３；４：２９４、Ｃｈｕ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１５；１０（５）：ｅ０１２６３９０、及びウェブサイト：ａｐｓ．ｕｎｍｃ．ｅｄｕ／ＡＰ／ｍａｉｎ．ｐｈｐ）のエフェクター分子のうちの少なくとも１つ、２つ、３つ以上を発現する（及び典型的には分泌する）ように操作され得る。

本明細書に提供されるのは、操作された細胞であって、
ａ）プロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結される、前記操作された細胞である。いくつかの態様では、操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される。

いくつかの態様では、細胞は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）である。いくつかの態様では、細胞は、幹細胞である。いくつかの態様では、細胞は、免疫細胞である。いくつかの態様では、細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。いくつかの態様では、細胞は、ＮＫＴ細胞である。いくつかの態様では、細胞は、自然リンパ球系細胞である。いくつかの態様では、細胞は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である。いくつかの態様では、細胞は、肥満細胞である。いくつかの態様では、細胞は、好酸球である。いくつかの態様では、細胞は、好塩基球である。いくつかの態様では、細胞は、単球である。いくつかの態様では、細胞は、マクロファージである。いくつかの態様では、細胞は、好中球である。いくつかの態様では、細胞は、骨髄細胞である。いくつかの態様では、細胞は、樹状細胞である。いくつかの態様では、細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの態様では、細胞は、ＣＤ８＋細胞である。いくつかの態様では、細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）である。いくつかの態様では、細胞は、ウイルス特異的Ｔ細胞である。いくつかの態様では、細胞は、ガンマデルタＴ細胞である。いくつかの態様では、細胞は、制御性Ｔ細胞である。いくつかの態様では、細胞は、Ｂ細胞である。

いくつかの態様では、プロモーターは、外因性プロモーターポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、プロモーターは、内因性プロモーターを含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドが、式Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２を含む単一のポリヌクレオチドとして転写されることができるように、プロモーターは、発現カセットと作動可能に連結される。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、別個のポリペプチドとしての第１のエフェクター分子及び第２のエフェクター分子の翻訳と作動可能に関連する。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、２Ａリボソームスキッピングタグをコードする。いくつかの態様では、２Ａリボソームスキップタグは、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、及びＦ２Ａからなる群から選択される。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、Ｔ２Ａリボソームスキッピングタグをコードする。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）をコードする。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、切断可能ポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、切断可能ポリペプチドは、フューリン認識ポリペプチド配列を含む。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、Ｇｌｙを含むものをさらにコードする。Ｓｅｒを含むもの、またはＧｌｙ－Ｓｅｒは、ポリペプチド配列、例えば、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列を含む。いくつかの態様では、リンカーポリペプチド配列は、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードする。

いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列が、第２のプロモーターをコードし、プロモーターが、式Ｓ１－Ｅ１を含む第１のポリヌクレオチドが転写されることができるように、発現カセットに作動可能に連結され、第２のプロモーターが、式Ｓ２－Ｅ２を含む第２のポリヌクレオチドが転写されることができるように、発現カセットに作動可能に連結され、第１及び第２のポリヌクレオチドが、別個のポリヌクレオチドである。いくつかの態様では、プロモーター及び第２のプロモーターは、同一である。いくつかの態様では、プロモーター及び第２のプロモーターは、異なる。

いくつかの態様では、操作された細胞は、治療的処置を必要とする対象を参照するＨＬＡ型である。いくつかの態様では、操作された細胞は、ヒト細胞である。いくつかの態様では、ヒト細胞は、対象、例えば、細胞を受け取る対象から単離された細胞である。いくつかの態様では、単離された細胞は、骨髄、脂肪組織、臍帯、胎児肝臓、筋肉、及び肺組織の群からなる組織から単離される。いくつかの態様では、操作された細胞は、培養細胞である。

いくつかの態様では、操作されたＭＳＣは、細胞マーカーＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、及びＣＤ９０＋を含む細胞マーカー表現型を含む。いくつかの態様では、細胞マーカー表現型は、ＣＤ４５、ＣＤ３４、ＣＤ１４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ７９α、ＣＤ１９、ＨＬＡクラスＩＩ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の細胞マーカーを欠く、または実質的に欠く表現型をさらに含む。いくつかの態様では、操作されたＭＳＣは、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ４５－、ＣＤ３４－、ＣＤ１４－を含む細胞マーカー表現型、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ７９α－を含む細胞マーカー表現型、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１９－、ＨＬＡクラスＩＩ－を含む細胞マーカー表現型、またはＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０５＋、及びＣＤ１６６＋、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１４－、ＣＤ１９－、ＣＤ３４－、ＣＤ４５－、及びＨＬＡ－ＤＲ－を含む細胞マーカー表現型を含む。いくつかの態様では、細胞マーカー表現型は、フローサイトメトリーにより決定されたか、または決定されている。

いくつかの態様では、操作された細胞は、Ｔ細胞を含む。いくつかの態様では、操作された細胞は、ＮＫ細胞を含む。いくつかの態様では、操作された細胞は、ＮＫＴ細胞を含む。

いくつかの態様では、細胞マーカー表現型は、操作された細胞において発現される第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、もしくは第１及び第２のエフェクター分子についての同族受容体または同族受容体リガンドを含む細胞マーカーをさらに含む。いくつかの態様では、受容体は、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＣＣＬ７、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

いくつかの態様では、プロモーター及び／または第２のプロモーターは、構成的プロモーターを含む。いくつかの態様では、構成的プロモーターは、ＣＭＶ、ＥＦＳ、ＳＦＦＶ、ＳＶ４０、ＭＮＤ、ＰＧＫ、ＵｂＣ、ｈＥＦ１ａＶ１、ｈＣＡＧＧ、ｈＥＦ１ａＶ２、ｈＡＣＴｂ、ｈｅＩＦ４Ａ１、ｈＧＡＰＤＨ、ｈＧＲＰ７８、ｈＧＲＰ９４、ｈＨＳＰ７０、ｈＫＩＮｂ、及びｈＵＢＩｂからなる群から選択される。いくつかの態様では、プロモーターは、ＳＦＦＶプロモーターを含む。いくつかの態様では、プロモーター及び／または第２のプロモーターは、誘導性プロモーターを含む。いくつかの態様では、誘導性プロモーターは、ｍｉｎＰ、ＮＦｋＢ応答要素、ＣＲＥＢ応答要素、ＮＦＡＴ応答要素、ＳＲＦ応答要素１、ＳＲＦ応答要素２、ＡＰ１応答要素、ＴＣＦ－ＬＥＦ応答要素プロモーター融合物、低酸素応答要素、ＳＭＡＤ結合要素、ＳＴＡＴ３結合部位、インデューサー分子応答性プロモーター、及びそれらのタンデムリピートからなる群から選択される。

いくつかの態様では、第１のシグナルペプチドまたは第２のシグナルペプチドは、それぞれ、第１のエフェクター分子または第２のエフェクター分子に対して本来のものである天然シグナルペプチドを含む。いくつかの態様では、第１のシグナルペプチドまたは第２のシグナルペプチドは、それぞれ、第１のエフェクター分子または第２のエフェクター分子に対して本来のものではない非天然シグナルペプチドを含む。いくつかの態様では、非天然シグナルペプチドは、ＩＬ１２、ＩＬ２、最適化ＩＬ２、トリプシノーゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、ネズミＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミンプレタンパク質、アズロシジンプレタンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ６、ＩＬ８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、及びＩＬ２１からなる群から選択される。

いくつかの態様では、第１のシグナルペプチド及び第２のシグナルペプチドは同一である。いくつかの態様では、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、コドン最適化ポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、第１の分泌ポリペプチドは、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドである。

いくつかの態様では、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、コドン最適化ポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、第２の分泌ポリペプチドは、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドである。

いくつかの態様では、第１のエフェクター分子は、治療クラスから選択され、治療クラスは、サイトカイン、ケモカイン、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境モディファイヤーａ、受容体、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、及び酵素からなる群から選択される。

いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、治療クラスから選択され、治療クラスは、サイトカイン、ケモカイン、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境モディファイヤー、受容体、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、及び酵素からなる群から選択される。いくつかの態様では、第１のエフェクター分子及び第２のエフェクター分子の治療クラスは異なる。

いくつかの態様では、第１のエフェクター分子及び／または第２のエフェクター分子は、改変エフェクター分子である。いくつかの態様では、第１のエフェクター分子及び／または第２のエフェクター分子は、細胞膜係留ドメインを含むように改変される。いくつかの態様では、細胞膜係留ドメインは、膜貫通－細胞内ドメインまたは膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、細胞膜係留ドメインは、細胞表面受容体、またはその細胞膜結合部分を含む。いくつかの態様では、改変エフェクター分子は、細胞表面受容体、またはその細胞膜結合部分を含む融合タンパク質である。いくつかの態様では、改変エフェクター分子は、エフェクター分子と細胞膜係留ドメインとの間のリンカーをさらに含む。いくつかの態様では、発現されると、改変エフェクター分子は、操作された細胞の細胞膜に係留される。

いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ１２、ＩＬ７、ＩＬ２１、ＩＬ１８、ＩＬ１５、Ｉ型インターフェロン、及びインターフェロンガンマからなる群から選択される。いくつかの態様では、ＩＬ１２サイトカインは、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質である。いくつかの態様では、ケモカインは、ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－１１融合、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１からなる群から選択される。いくつかの態様では、成長因子は、Ｆｌｔ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦからなる群から選択される。いくつかの態様では、共活性化分子は、４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌからなる群から選択される。いくつかの態様では、腫瘍微小環境モディファイヤーは、アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、及びＨＰＧＥ２からなる群から選択される。いくつかの態様では、ＴＧＦベータ阻害剤が、抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－トラップ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体を含む。いくつかの態様では、ＶＥＧＦ阻害剤は、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、またはそれらの組み合わせを含む。

いくつかの態様では、第１のエフェクター分子及び第２のエフェクター分子は、ヒト由来エフェクター分子である。

いくつかの態様では、第１のエフェクター分子は、インターロイキン１２（ＩＬ１２）、例えば、当技術分野で一般にＩＬ－１２ｐ７０と称される二量体としてのｐ３５及びｐ４０を含む。いくつかの態様では、第１のエフェクター分子は、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質である。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３７に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２は、配列番号１３７に示されるｐ３５サブユニットを含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２は、配列番号１３７に示されるｐ４０サブユニットを含む。

いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、ＣＣＬ２１ａを含む。いくつかの態様では、ＣＣＬ２１ａは、ヒトＣＣＬ２１ａである。いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、ＩＬ７を含む。いくつかの態様では、ＩＬ７は、ヒトＩＬ７である。いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、ＩＬ２１を含む。いくつかの態様では、ＩＬ２１は、ヒトＩＬ２１である。

いくつかの態様では、発現カセットは、第３のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含むＥ３をさらに含む。いくつかの態様では、第３のエフェクター分子は、Ｆｌｔ３Ｌを含む。いくつかの態様では、第３のエフェクター分子は、抗ＰＤ１を含む。例えば、抗ＰＤ１は、抗ＰＤ１抗体であり得る。いくつかの態様では、発現カセットは、第４のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含むＥ４をさらに含む。いくつかの態様では、第４のエフェクター分子は、アデノシンデアミナーゼを含む。いくつかの態様では、第３のエフェクター分子は、アデノシンデアミナーゼを含む。いくつかの態様では、第３のエフェクター分子は、ＣＤ４０Ｌを含む。いくつかの態様では、第３のエフェクター分子は、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質を含む。いくつかの態様では、第３のエフェクター分子は、ＸＣＬ１を含む。

いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、Ｆｌｔ３Ｌを含む。いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質を含む。いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、抗ＰＤ１を含む。いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、ＣＤ４０Ｌを含む。

いくつかの態様では、第１のエフェクター分子はインターフェロンベータを含み、第２のエフェクター分子はＦｌｔ３Ｌを含む。

いくつかの態様では、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列は、コドン最適化ポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列は、コドン最適化ポリヌクレオチド配列を含む。

いくつかの態様では、操作された細胞は、プロモーター及び発現カセットをコードするポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、外因性ポリヌクレオチド配列は、配列番号１４４に示される配列を含む。

いくつかの態様では、外因性ポリヌクレオチド配列は、操作された細胞のゲノムに組み込まれる。いくつかの態様では、外因性ポリヌクレオチド配列は、１つ以上のウイルスベクターポリヌクレオチド配列を含む。

いくつかの態様では、１つ以上のウイルスベクターポリヌクレオチド配列は、レンチウイルス、レトロウイルス、レトロトランスポゾン、またはアデノウイルスのポリヌクレオチド配列を含む。

いくつかの態様では、発現カセットは、Ｅ２に続いて、５’から３’の向きで
（Ｌ－Ｓ－Ｅ）_Ｘ
を含む式を含む追加の外因性ポリヌクレオチド配列をさらに含み、
式中、Ｓが、シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅが、エフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、Ｘ＝１～２０であり、プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、各Ｘについて、対応するシグナルペプチドが、エフェクター分子と作動可能に結合される。

本明細書にさらに提供されるのは、構築物を含む操作された細胞であって、構築物が、
ａ）ＳＦＦＶプロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、前記操作された細胞である。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３７に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３８に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１３６に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４２に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４３に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１４１に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１４０に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、配列番号１３９に示される配列を含む。いくつかの態様では、構築物は、配列番号１４４に示されるポリヌクレオチド配列を含む。

本明細書にさらに提供されるのは、構築物を含む操作された細胞であって、構築物が、
ａ）ＳＦＦＶプロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）である、前記操作された細胞である。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３７に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３８に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１３６に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４２に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４３に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１４１に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１４０に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、配列番号１３９に示される配列を含む。いくつかの態様では、構築物は、配列番号１４４に示されるポリヌクレオチド配列を含む。

本明細書にさらに提供されるのは、構築物を含む操作された細胞であって、構築物が、
ａ）ＳＦＦＶプロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）であり、ＭＳＣが、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０５＋、及びＣＤ１６６＋、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１４－、ＣＤ１９－、ＣＤ３４－、ＣＤ４５－、及びＨＬＡ－ＤＲ－を含む細胞マーカー表現型を含む、前記操作された細胞である。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３７に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３８に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１３６に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４２に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４３に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１４１に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１４０に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、配列番号１３９に示される配列を含む。いくつかの態様では、構築物は、配列番号１４４に示されるポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、細胞マーカー表現型は、フローサイトメトリーにより決定されたか、または決定されている。

本明細書にさらに提供されるのは、構築物を含む操作されたＭＳＣであって、構築物が、
ａ）ＳＦＦＶプロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、操作されたＭＳＣが、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０５＋、及びＣＤ１６６＋、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１４－、ＣＤ１９－、ＣＤ３４－、ＣＤ４５－、及びＨＬＡ－ＤＲ－を含む細胞マーカー表現型を含む、前記操作されたＭＳＣである。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３７に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３８に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１３６に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４２に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４３に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１４１に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１４０に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、配列番号１３９に示される配列を含む。いくつかの態様では、構築物は、配列番号１４４に示されるポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、細胞マーカー表現型は、フローサイトメトリーにより決定されたか、または決定されている。

本明細書にさらに提供されるのは、構築物を含む操作された細胞であって、構築物が、
ａ）ＳＦＦＶプロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、前記操作された細胞である。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３７に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３８に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１３６に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４２に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４３に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１４１に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１４０に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、配列番号１３９に示される配列を含む。いくつかの態様では、構築物は、配列番号１４４に示されるポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、細胞は、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）である。いくつかの態様では、細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。いくつかの態様では、細胞は、ＮＫＴ細胞である。いくつかの態様では、細胞は、自然リンパ球系細胞である。いくつかの態様では、細胞は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である。いくつかの態様では、細胞は、肥満細胞である。いくつかの態様では、細胞は、好酸球である。いくつかの態様では、細胞は、好塩基球である。いくつかの態様では、細胞は、単球である。いくつかの態様では、細胞は、マクロファージである。いくつかの態様では、細胞は、好中球である。いくつかの態様では、細胞は、骨髄細胞である。いくつかの態様では、細胞は、樹状細胞である。いくつかの態様では、細胞は、Ｔ細胞である。いくつかの態様では、細胞は、ＣＤ８＋細胞である。いくつかの態様では、細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞である。いくつかの態様では、細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）である。いくつかの態様では、細胞は、ウイルス特異的Ｔ細胞である。いくつかの態様では、細胞は、ガンマデルタＴ細胞である。いくつかの態様では、細胞は、制御性Ｔ細胞である。いくつかの態様では、細胞は、Ｂ細胞である。いくつかの態様では、細胞は、ヒト細胞である。

いくつかの態様では、操作された細胞は、治療的処置を必要とする対象を参照するＨＬＡ型である。いくつかの態様では、操作された細胞は、ヒト細胞である。いくつかの態様では、ヒト細胞は、対象、例えば、細胞を受け取る対象から単離された細胞である。いくつかの態様では、単離された細胞は、骨髄、脂肪組織、臍帯、胎児肝臓、筋肉、及び肺組織の群からなる組織から単離される。いくつかの態様では、操作された細胞は、培養細胞である。

いくつかの態様では、操作されたＭＳＣは、細胞マーカーＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、及びＣＤ９０＋を含む細胞マーカー表現型を含む。いくつかの態様では、細胞マーカー表現型は、ＣＤ４５、ＣＤ３４、ＣＤ１４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ７９α、ＣＤ１９、ＨＬＡクラスＩＩ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の細胞マーカーを欠く、または実質的に欠く表現型をさらに含む。いくつかの態様では、操作されたＭＳＣは、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ４５－、ＣＤ３４－、ＣＤ１４－を含む細胞マーカー表現型、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ７９α－を含む細胞マーカー表現型、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１９－、ＨＬＡクラスＩＩ－を含む細胞マーカー表現型、またはＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０５＋、及びＣＤ１６６＋、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１４－、ＣＤ１９－、ＣＤ３４－、ＣＤ４５－、及びＨＬＡ－ＤＲ－を含む細胞マーカー表現型を含む。いくつかの態様では、細胞マーカー表現型は、フローサイトメトリーにより決定されたか、または決定されている。

いくつかの態様では、操作された細胞は、Ｔ細胞を含む。いくつかの態様では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、または制御性Ｔ細胞である。いくつかの態様では、操作された細胞は、ＮＫ細胞を含む。いくつかの態様では、操作された細胞は、ＮＫＴ細胞を含む。いくつかの態様では、操作された細胞は、単球細胞を含む。いくつかの態様では、操作された細胞は、マクロファージを含む。いくつかの態様では、操作された細胞は、ＴＩＬを含む。

いくつかの態様では、外因性ポリヌクレオチド配列は、操作された細胞のゲノムに組み込まれる。いくつかの態様では、外因性ポリヌクレオチド配列は、１つ以上のウイルスベクターポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、１つ以上のウイルスベクターポリヌクレオチド配列は、レンチウイルス、レトロウイルス、レトロトランスポゾン、またはアデノウイルスのポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、１つ以上のウイルスベクターポリヌクレオチド配列は、レンチウイルスポリヌクレオチド配列を含む。

いくつかの態様では、細胞は、各エフェクター分子を分泌する。いくつかの態様では、第１のエフェクター分子は、第２のエフェクター分子の分泌と比較して１０倍高い比率で分泌される。

いくつかの態様では、細胞は、抗原認識受容体をさらに含む。いくつかの態様では、抗原認識受容体は、５Ｔ４、ＡＤＡＭ９、ＡＤＧＲＥ２、ＡＦＰ、ＡＸＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ６、Ｃ４．４、ＣＡ６、カドヘリン３、カドヘリン６、ＣＣＲ１、ＣＣＲ４、ＣＤ１１７、ＣＤ１２３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１６６、ＣＤ２５、ＣＤ２４４、ＣＤ３０、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ３３、ＣＤ３５２、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ９３、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、クローディン１８．２、ＣＬＥＣ１２Ａ、ｃＭｅｔ、ＣＳＰＧ４、ＣＴＬＡ、ＤＬＫ１、ＤＬＬ３、ＤＲ５、ＥＧＦＲ、ＥＭＢ、ＥＮＰＰ３、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、エフリンＡ４、ＥＴＢＲ、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＲアルファ、ＦＲｂ、ＦＬＴ３、ＧＡＰＴ、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＦＲａ４、ｇｐＡ３３、ＧＰＣ３、ｇｐＮＢＭ、ＧＰＲＣ５、ＨＥＲ２、ＩＬ－１ＲＡＰ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１３Ｒａ、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ１ＲＡＰ、インテグリンａＶ、ＫＩＴ、Ｌ１ＣＡＭ、ＬＡＭＰ１、ＬＡＴ２、ルイスＹ、ＬｅＹ、ＬＩＬＲＡ２、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＶ－１、ＬＲＲＣ、ＬＹ６Ｅ、ＭＣＳＰ、メソテリン、ＭＬＣ１、ＭＳ４Ａ３、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１Ｃ、ＭＹＡＤＭ、ＮａＰｉ２Ｂ、ネクチン４、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ３、ＮＹ ＥＳＯ１、Ｏｖａｒｉｎ、Ｐ－カドヘリン、汎Ｅｒｂ２、ＰＩＥＺＯ１、ＰＲＡＭ１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＲＯＲ１、Ｓ Ａｕｒｅｓ、ＳＣＴ、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＣ２２Ａ１６、ＳＬＣ１７Ａ９、ＳＬＩＴＲＫ６、ＳＰＮＳ３、ＳＳＴＲ２、ＳＴＥＡＰ１、サバイビン、ＴＤＧＦ１、ＴＩＭ１、ＴＲＯＰ２、ＶＳＴＭ１、及びＷＴ１からなる群から選択される抗原を認識する。

いくつかの態様では、抗原認識受容体は、抗原結合ドメインを含む。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの態様では、ｓｃＦｖは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの態様では、ＶＨ及びＶＬは、ペプチドリンカーによって分離される。いくつかの態様では、ｓｃＦｖは、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、Ｌはペプチドリンカーであり、ＶＬは軽鎖可変ドメインである。

いくつかの態様では、抗原認識受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。いくつかの態様では、抗原認識受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。いくつかの態様では、ＣＡＲは、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ９７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１１ａ－ＣＤ１８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１５４細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＺＡＰ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＧＩＴＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＨＶＥＭ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２細胞内シグナル伝達ドメイン、及びＭｙＤ８８細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される。いくつかの態様では、ＣＡＲは、膜貫通ドメインを含み、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ３ゼータ鎖膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０膜貫通ドメイン、ＩＣＯＳ膜貫通ドメイン、ＣＴＬＡ－４膜貫通ドメイン、ＰＤ－１膜貫通ドメイン、ＬＡＧ－３膜貫通ドメイン、２Ｂ４膜貫通ドメイン、及びＢＴＬＡ膜貫通ドメインからなる群から選択される。いくつかの態様では、ＣＡＲは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間にスペーサー領域を含む。

本明細書にさらに提供されるのは細胞の集団であり、細胞の集団は、本明細書に記載の操作された細胞のうちのいずれかを含む。いくつかの態様では、細胞の集団は、操作された細胞について濃縮される。

いくつかの態様では、操作された細胞において発現される第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子は、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子を発現しない集団内の細胞と比較して、成長、生存、または成長及び生存の増加を促進する。

いくつかの態様では、第１のエフェクター分子は、ＩＬ１２またはＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質である。いくつかの態様では、操作された細胞について濃縮された細胞の集団は、ＩＬ１２受容体β１もしくはその増加したレベル、ＩＬ１２受容体β２もしくはその増加したレベル、またはＩＬ１２受容体β１及びＩＬ１２受容体β２もしくはその増加したレベルを発現する。いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、ＩＬ２１である。いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、ＣＣＬ２１である。いくつかの態様では、操作された細胞について濃縮された細胞の集団は、ＣＣＬ２１受容体またはその増加したレベルを発現する。いくつかの態様では、ＣＣＬ２１受容体は、ＣＣＲ７である。

本明細書にさらに提供されるのは、対象において腫瘍細胞に対する細胞媒介免疫応答を刺激する方法であって、治療有効量の本明細書に記載の操作された細胞または細胞の集団のうちのいずれかを腫瘍を有する対象に投与することを含む、前記方法である。

本明細書にさらに提供されるのは、免疫応答を刺激する（例えば、誘導する）方法であって、治療有効量の本明細書に記載の操作された細胞または細胞の集団のうちのいずれかを対象に投与することを含む、前記方法である。

本明細書にさらに提供されるのは、対象において抗腫瘍免疫を提供する方法であって、治療有効量の本明細書に記載の操作された細胞または細胞の集団のうちのいずれかの操作された細胞をそれを必要とする対象に投与することを含む、前記方法である。

本明細書にさらに提供されるのは、がんを有する対象を治療する方法であって、治療有効量の本明細書に記載の操作された細胞または細胞の集団のうちのいずれかを腫瘍を有する対象に投与することを含む、前記方法である。

本明細書にさらに提供されるのは、対象において腫瘍体積を減少させる方法であって、治療有効量の本明細書に記載の操作された細胞または細胞の集団のうちのいずれかを腫瘍を有する対象に投与することを含む、前記方法である。

いくつかの態様では、操作された細胞は、対象に由来する。いくつかの態様では、操作された細胞は、対象に関して同種異系である。

いくつかの態様では、腫瘍は、腺癌、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病（ＢＡＬＬ）、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病（ＴＡＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、膀胱腫瘍、脳腫瘍、乳腫瘍、頸部腫瘍、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、結腸直腸腫瘍、食道腫瘍、神経膠腫、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、肺腫瘍、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、骨髄異形成症、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、形質細胞骨髄腫、前立腺腫瘍、皮膚腫瘍、甲状腺腫瘍、及び子宮腫瘍からなる群から選択される。いくつかの態様では、腫瘍は、卵巣腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍は、腹腔空間に位置する腫瘍である。

本明細書にさらに提供されるのは、操作された細胞であって、
ａ）プロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
（Ｌ－Ｓ－Ｅ）_Ｘ
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、Ｓが、シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅが、エフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、Ｘ＝２～２０であり、プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、（Ｌ－Ｓ－Ｅ）の第１の反復について単位Ｌは存在せず、各Ｘについて対応するシグナルペプチドが、エフェクター分子と作動可能に結合し、操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、前記操作された細胞である。

本明細書にさらに提供されるのは、１つ以上の操作された細胞を含む細胞の集団であって、１つ以上の操作された細胞が、
ａ）プロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、前記細胞の集団である。

本明細書にさらに提供されるのは、１つ以上の操作された細胞を含む細胞の集団であって、１つ以上の操作された細胞が、
ａ）プロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、操作された細胞において発現される第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子が、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子を発現しない集団内の細胞と比較して、成長、生存、または成長及び生存の増加を促進し、操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、前記細胞の集団である。

いくつかの態様では、１つ以上の操作された細胞は、操作された細胞において発現される第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、もしくは第１及び第２のエフェクター分子についての同族受容体または同族受容体リガンドを発現する。いくつかの態様では、第１のエフェクター分子は、ＩＬ１２またはＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質である。いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、ＩＬ２１である。いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、ＣＣＬ２１である。

本明細書にさらに提供されるのは、１つ以上の操作された細胞を含む細胞の集団であって、１つ以上の操作された細胞が、構築物を含み、構築物が、
ａ）ＳＦＦＶプロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、前記細胞の集団である。

本明細書にさらに提供されるのは、１つ以上の操作された細胞を含む細胞の集団であって、１つ以上の操作された細胞が、構築物を含み、構築物が、
ａ）ＳＦＦＶプロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、操作された細胞において発現される第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子は、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子を発現しない集団内の細胞と比較して、成長、生存、または成長及び生存の増加を促進し、操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、前記細胞の集団である。

いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３７に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３８に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１３６に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４２に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４３に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１４１に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１４０に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、配列番号１３９に示される配列を含む。いくつかの態様では、構築物は、配列番号１４４に示されるポリヌクレオチド配列を含む。

本明細書にさらに提供されるのは、１つ以上の受容体または受容体リガンドについて濃縮された細胞の集団を産生する方法であって、１つ以上の細胞が、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子と接触する条件下で１つ以上の細胞を培養することを含み、接触した細胞が、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、もしくは第１及び第２のエフェクター分子について１つ以上の同族受容体または同族受容体リガンドを発現し、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子が、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子の不在下で培養された細胞と比較して、接触した細胞の成長、生存、または成長及び生存を増加させる、前記方法である。

いくつかの態様では、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子は、１つ以上の細胞において異種発現され、１つ以上の細胞は、オートクリン様式で、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子と接触する。いくつかの態様では、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子は、１つ以上の追加の細胞において発現され、１つ以上の細胞は、パラクリン様式で、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子と接触する。いくつかの態様では、１つ以上の追加の細胞は、支持細胞である。いくつかの態様では、１つ以上の細胞は、培地中で培養される。

いくつかの態様では、１つ以上の細胞は、可溶性の第１のエフェクター分子、可溶性の第２のエフェクター分子、または可溶性の第１及び第２のエフェクター分子を培地に追加することにより、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子と接触させる。いくつかの態様では、可溶性の第１のエフェクター分子及び／または可溶性の第２のエフェクター分子は、組換えエフェクター分子である。

いくつかの態様では、１つ以上の細胞は、付着条件下で培養される。いくつかの態様では、１つ以上の細胞は、表面と付着する。いくつかの態様では、付着した細胞は、１つ以上の細胞を第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子に曝露することにより、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子と接触し、表面上に固定化される。

いくつかの態様では、第１のエフェクター分子は、ＩＬ１２またはＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質である。いくつかの態様では、細胞の集団は、ＩＬ１２受容体β１（ＩＬ１２Ｒβ１）について濃縮され、ＩＬ１２受容体β２（ＩＬ１２Ｒβ２）について濃縮され、またはＩＬ１２Ｒβ１及びＩＬ１２Ｒβ２について濃縮される。いくつかの態様では、ＭＳＣの集団は、細胞マーカーＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＩＬ１２Ｒβ１＋、及びＩＬ１２Ｒβ２＋を含む細胞マーカー表現型を含む。いくつかの態様では、細胞マーカー表現型は、ＣＤ４５、ＣＤ３４、ＣＤ１４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ７９α、ＣＤ１９、ＨＬＡクラスＩＩ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の細胞マーカーを欠く、または実質的に欠く表現型をさらに含む。

いくつかの態様では、細胞の集団は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される。いくつかの態様では、細胞の集団は、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、単球、マクロファージ、または骨髄由来細胞を含む。

いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、ＩＬ２１である。いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、ＣＣＬ２１である。いくつかの態様では、細胞の集団は、ＣＣＲ７について濃縮される。

いくつかの態様では、ＭＳＣの集団は、細胞マーカーＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＩＬ１２Ｒβ１＋、ＩＬ１２Ｒβ２＋、及びＣＣＲ７＋を含む細胞マーカー表現型を含む。いくつかの態様では、細胞マーカー表現型は、ＣＤ４５、ＣＤ３４、ＣＤ１４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ７９α、ＣＤ１９、ＨＬＡクラスＩＩ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の細胞マーカーを欠く、または実質的に欠く表現型をさらに含む。

本明細書にさらに提供されるのは、本明細書に記載の方法のうちのいずれかによって産生される１つ以上の受容体または受容体リガンドについて濃縮された細胞の集団である。

本明細書にさらに提供されるのは、ポリヌクレオチド配列によって発現される１つ以上のタンパク質であって、ポリヌクレオチド配列が、
プロモーターと、
５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットと
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結される、前記タンパク質である。

本明細書にさらに提供されるのは、ポリヌクレオチド配列によって発現される１つ以上のタンパク質であって、ポリヌクレオチド配列が、５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結される、前記タンパク質である。

本明細書にさらに提供されるのは、単離されたポリヌクレオチド配列であって、
プロモーターと、
５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットと
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結される、前記単離されたポリヌクレオチド配列である。

本明細書にさらに提供されるのは、単離されたポリヌクレオチド配列であって、５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結される、前記単離されたポリヌクレオチド配列である。

いくつかの態様では、プロモーターは、外因性プロモーターポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、プロモーターは、内因性プロモーターを含む。いくつかの態様では、ポリヌクレオチドが、式Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２を含む単一のポリヌクレオチドとして転写されることができるように、プロモーターは、発現カセットと作動可能に連結される。

いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、別個のポリペプチドとしての第１のエフェクター分子及び第２のエフェクター分子の翻訳と作動可能に関連する。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、２Ａリボソームスキッピングタグをコードする。いくつかの態様では、２Ａリボソームスキップタグは、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、及びＦ２Ａからなる群から選択される。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、Ｔ２Ａリボソームスキッピングタグをコードする。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）をコードする。

いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、切断可能ポリペプチドをコードする。いくつかの態様では、切断可能ポリペプチドは、フューリン認識ポリペプチド配列を含む。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、Ｇｌｙを含むものをさらにコードする。Ｓｅｒを含むもの、またはＧｌｙ－Ｓｅｒは、ポリペプチド配列、例えば、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列を含む。いくつかの態様では、リンカーポリペプチド配列は、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードする。

いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列が、第２のプロモーターをコードし、プロモーターが、式Ｓ１－Ｅ１を含む第１のポリヌクレオチドが転写されることができるように、発現カセットに作動可能に連結され、第２のプロモーターが、式Ｓ２－Ｅ２を含む第２のポリヌクレオチドが転写されることができるように、発現カセットに作動可能に連結され、第１及び第２のポリヌクレオチドが、別個のポリヌクレオチドである。いくつかの態様では、プロモーター及び第２のプロモーターは、同一である。いくつかの態様では、プロモーター及び第２のプロモーターは、異なる。

いくつかの態様では、プロモーター及び／または第２のプロモーターは、構成的プロモーターを含む。いくつかの態様では、構成的プロモーターは、ＣＭＶ、ＥＦＳ、ＳＦＦＶ、ＳＶ４０、ＭＮＤ、ＰＧＫ、ＵｂＣ、ｈＥＦ１ａＶ１、ｈＣＡＧＧ、ｈＥＦ１ａＶ２、ｈＡＣＴｂ、ｈｅＩＦ４Ａ１、ｈＧＡＰＤＨ、ｈＧＲＰ７８、ｈＧＲＰ９４、ｈＨＳＰ７０、ｈＫＩＮｂ、及びｈＵＢＩｂからなる群から選択される。いくつかの態様では、プロモーターは、ＳＦＦＶプロモーターを含む。いくつかの態様では、プロモーター及び／または第２のプロモーターは、誘導性プロモーターを含む。いくつかの態様では、誘導性プロモーターは、ｍｉｎＰ、ＮＦｋＢ応答要素、ＣＲＥＢ応答要素、ＮＦＡＴ応答要素、ＳＲＦ応答要素１、ＳＲＦ応答要素２、ＡＰ１応答要素、ＴＣＦ－ＬＥＦ応答要素プロモーター融合物、低酸素応答要素、ＳＭＡＤ結合要素、ＳＴＡＴ３結合部位、インデューサー分子応答性プロモーター、及びそれらのタンデムリピートからなる群から選択される。

いくつかの態様では、第１のシグナルペプチドまたは第２のシグナルペプチドは、それぞれ、第１のエフェクター分子または第２のエフェクター分子に対して本来のものである天然シグナルペプチドを含む。いくつかの態様では、第１のシグナルペプチドまたは第２のシグナルペプチドは、それぞれ、第１のエフェクター分子または第２のエフェクター分子に対して本来のものではない非天然シグナルペプチドを含む。いくつかの態様では、非天然シグナルペプチドは、ＩＬ１２、ＩＬ２、最適化ＩＬ２、トリプシノーゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、ネズミＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミンプレタンパク質、アズロシジンプレタンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ６、ＩＬ８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、及びＩＬ２１からなる群から選択される。いくつかの態様では、第１のシグナルペプチド及び第２のシグナルペプチドは同一である。いくつかの態様では、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、コドン最適化ポリヌクレオチド配列を含む。

いくつかの態様では、第１の分泌ポリペプチドは、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドである。いくつかの態様では、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、コドン最適化ポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、第２の分泌ポリペプチドは、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドである。

いくつかの態様では、第１のエフェクター分子は、治療クラスから選択され、治療クラスは、サイトカイン、ケモカイン、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境モディファイヤーａ、受容体、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、及び酵素からなる群から選択される。いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、治療クラスから選択され、治療クラスは、サイトカイン、ケモカイン、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境モディファイヤー、受容体、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、及び酵素からなる群から選択される。いくつかの態様では、第１のエフェクター分子及び第２のエフェクター分子の治療クラスは異なる。いくつかの態様では、第１のエフェクター分子及び／または第２のエフェクター分子は、改変エフェクター分子である。

いくつかの態様では、第１のエフェクター分子及び／または第２のエフェクター分子は、細胞膜係留ドメインを含むように改変される。いくつかの態様では、細胞膜係留ドメインは、膜貫通－細胞内ドメインまたは膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、細胞膜係留ドメインは、細胞表面受容体、またはその細胞膜結合部分を含む。いくつかの態様では、改変エフェクター分子は、細胞表面受容体、またはその細胞膜結合部分を含む融合タンパク質である。いくつかの態様では、改変エフェクター分子は、エフェクター分子と細胞膜係留ドメインとの間のリンカーをさらに含む。いくつかの態様では、細胞において発現すると、改変エフェクター分子は、細胞の細胞膜に係留される。

いくつかの態様では、サイトカインは、ＩＬ１２、ＩＬ７、ＩＬ２１、ＩＬ１８、ＩＬ１５、Ｉ型インターフェロン、及びインターフェロンガンマからなる群から選択される。いくつかの態様では、ＩＬ１２サイトカインは、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質である。いくつかの態様では、ケモカインは、ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－１１融合、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１からなる群から選択される。いくつかの態様では、成長因子は、Ｆｌｔ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦからなる群から選択される。いくつかの態様では、共活性化分子は、４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌからなる群から選択される。いくつかの態様では、腫瘍微小環境モディファイヤーは、アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、及びＨＰＧＥ２からなる群から選択される。いくつかの態様では、ＴＧＦベータ阻害剤が、抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－トラップ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。いくつかの態様では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体を含む。いくつかの態様では、ＶＥＧＦ阻害剤は、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、またはそれらの組み合わせを含む。

いくつかの態様では、第１のエフェクター分子及び第２のエフェクター分子は、ヒト由来エフェクター分子である。

いくつかの態様では、第１のエフェクター分子は、ＩＬ１２を含む。いくつかの態様では、第１のエフェクター分子は、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質を含む。いくつかの態様では、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質である。

いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、ＣＣＬ２１ａを含む。いくつかの態様では、ＣＣＬ２１ａは、ヒトＣＣＬ２１ａである。いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、ＩＬ７を含む。いくつかの態様では、ＩＬ７は、ヒトＩＬ７である。いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、ＩＬ２１を含む。いくつかの態様では、ＩＬ２１は、ヒトＩＬ２１である。

いくつかの態様では、発現カセットは、第３のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含むＥ３をさらに含む。いくつかの態様では、第３のエフェクター分子は、Ｆｌｔ３Ｌを含む。いくつかの態様では、第３のエフェクター分子は、抗ＰＤ１を含む。

いくつかの態様では、発現カセットは、第４のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含むＥ４をさらに含む。いくつかの態様では、第４のエフェクター分子は、アデノシンデアミナーゼを含む。

いくつかの態様では、第３のエフェクター分子は、アデノシンデアミナーゼを含む。いくつかの態様では、第３のエフェクター分子は、ＣＤ４０Ｌを含む。いくつかの態様では、第３のエフェクター分子は、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質を含む。いくつかの態様では、第３のエフェクター分子は、ＸＣＬ１を含む。

いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、Ｆｌｔ３Ｌを含む。いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質を含む。いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、抗ＰＤ１を含む。いくつかの態様では、第２のエフェクター分子は、ＣＤ４０Ｌを含む。

いくつかの態様では、第１のエフェクター分子はインターフェロンベータを含み、第２のエフェクター分子はＦｌｔ３Ｌを含む。

いくつかの態様では、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列は、コドン最適化ポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列は、コドン最適化ポリヌクレオチド配列を含む。

いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３７に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３８に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１３６に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４２に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４３に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１４１に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１４０に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、配列番号１３９に示される配列を含む。いくつかの態様では、構築物は、配列番号１４４に示されるポリヌクレオチド配列を含む。

本明細書にさらに提供されるのは、外因性ポリヌクレオチド配列であって、
ＳＦＦＶプロモーターと、
５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットと
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結される、前記外因性ポリヌクレオチド配列である。

いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３７に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３８に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１３６に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４２に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４３に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１４１に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１４０に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、配列番号１３９に示される配列を含む。いくつかの態様では、構築物は、配列番号１４４に示されるポリヌクレオチド配列を含む。

本明細書にさらに提供されるのは、外因性ポリヌクレオチド配列であって、
ＳＦＦＶプロモーターと、
５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットと
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、ポリヌクレオチドが、式Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２を含む単一のポリヌクレオチドとして転写されることができるように、プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、ポリヌクレオチド配列が、配列番号１４４に示されるポリヌクレオチド配列を含む、前記外因性ポリヌクレオチド配列である。

いくつかの態様では、外因性ポリヌクレオチド配列は、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、及びネイキッドプラスミドからなる群から選択される核酸によってコードされる。

本明細書にさらに提供されるのは、本明細書に記載の外因性ポリヌクレオチド配列のうちのいずれかを含む発現ベクターである。いくつかの態様では、発現ベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの態様では、ウイルスベクターは、レンチウイルスベクターである。

本明細書にさらに提供されるのは、本明細書に記載の外因性ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか、及び薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物である。

本明細書にさらに提供されるのは、本明細書に記載の操作された細胞のうちのいずれか、及び薬学的に許容される担体を含む、薬学的組成物である。

単離された細胞は、本明細書に記載の外因性ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか、本明細書に記載の発現ベクターのうちのいずれか、または本明細書に記載の薬学的組成物のうちのいずれかを含む。

いくつかの態様では、単離された細胞は、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球系細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、赤血球、血小板細胞、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、ＭＳＣ、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される。

いくつかの態様では、単離された細胞は、ＭＳＣである。

いくつかの態様では、外因性ポリヌクレオチド配列は、細胞のゲノムに組み込まれる。いくつかの態様では、外因性ポリヌクレオチド配列は、１つ以上のウイルスベクターポリヌクレオチド配列を含む。

いくつかの態様では、１つ以上のウイルスベクターポリヌクレオチド配列は、レンチウイルス、レトロウイルス、レトロトランスポゾン、またはアデノウイルスのポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの態様では、１つ以上のウイルスベクターポリヌクレオチド配列は、レンチウイルスポリヌクレオチド配列を含む。

いくつかの態様では、操作された細胞は、治療的処置を必要とする対象を参照するＨＬＡ型である。いくつかの態様では、操作された細胞は、ヒト細胞である。いくつかの態様では、ヒト細胞は、対象、例えば、細胞を受け取る対象から単離された細胞である。いくつかの態様では、単離された細胞は、骨髄、脂肪組織、臍帯、胎児肝臓、筋肉、及び肺組織の群からなる組織から単離される。いくつかの態様では、細胞は、培養細胞である。

いくつかの態様では、ＭＳＣは、細胞マーカーＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、及びＣＤ９０＋を含む細胞マーカー表現型を含む。いくつかの態様では、細胞マーカー表現型は、ＣＤ４５、ＣＤ３４、ＣＤ１４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ７９α、ＣＤ１９、ＨＬＡクラスＩＩ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の細胞マーカーを欠く、または実質的に欠く表現型をさらに含む。いくつかの態様では、ＭＳＣは、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ４５－、ＣＤ３４－、ＣＤ１４－を含む細胞マーカー表現型、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ７９α－を含む細胞マーカー表現型、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１９－、ＨＬＡクラスＩＩ－を含む細胞マーカー表現型、またはＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０５＋、及びＣＤ１６６＋、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１４－、ＣＤ１９－、ＣＤ３４－、ＣＤ４５－、及びＨＬＡ－ＤＲ－を含む細胞マーカー表現型を含む。いくつかの態様では、細胞マーカー表現型は、フローサイトメトリーにより決定されたか、または決定されている。

いくつかの態様では、細胞マーカー表現型は、細胞において発現される第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、もしくは第１及び第２のエフェクター分子についての同族受容体または同族受容体リガンドを含む細胞マーカーをさらに含む。いくつかの態様では、受容体は、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＣＣＬ７、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される。

いくつかの態様では、細胞は、各エフェクター分子を分泌する。いくつかの態様では、第１のエフェクター分子は、第２のエフェクター分子の分泌と比較して１０倍高い比率で分泌される。

いくつかの態様では、細胞は、抗原認識受容体をさらに含む。いくつかの態様では、抗原認識受容体は、抗原結合ドメインを含む。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む。いくつかの態様では、抗原結合ドメインは、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。いくつかの態様では、ｓｃＦｖは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。いくつかの態様では、ＶＨ及びＶＬは、ペプチドリンカーによって分離される。いくつかの態様では、ｓｃＦｖは、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、Ｌはペプチドリンカーであり、ＶＬは軽鎖可変ドメインである。

いくつかの態様では、抗原認識受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。いくつかの態様では、抗原認識受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。いくつかの態様では、ＣＡＲは、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ９７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１１ａ－ＣＤ１８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１５４細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＺＡＰ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＧＩＴＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＨＶＥＭ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２細胞内シグナル伝達ドメイン、及びＭｙＤ８８細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される。いくつかの態様では、ＣＡＲは、膜貫通ドメインを含み、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ３ゼータ鎖膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０膜貫通ドメイン、ＩＣＯＳ膜貫通ドメイン、ＣＴＬＡ－４膜貫通ドメイン、ＰＤ－１膜貫通ドメイン、ＬＡＧ－３膜貫通ドメイン、２Ｂ４膜貫通ドメイン、及びＢＴＬＡ膜貫通ドメインからなる群から選択される。いくつかの態様では、ＣＡＲは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間にスペーサー領域を含む。

本明細書にさらに提供されるのは、本明細書に記載の外因性ポリヌクレオチド配列のうちのいずれか、または本明細書に記載の発現ベクターのうちのいずれかを含むウイルスである。いくつかの態様では、ウイルスは、レンチウイルス、レトロウイルス、レトロトランスポゾン、及びアデノウイルスからなる群から選択される。いくつかの態様では、ウイルスは、レンチウイルスである。

本明細書にさらに提供されるのは、対象において腫瘍体積を減少させる方法であって、方法が、腫瘍の体積を減少させるための有効量で、腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する複数のエフェクター分子を産生するように操作された細胞を含む組成物を、腫瘍を有する対象に送達することを含み、操作された細胞が、
ａ）プロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、前記方法である。

本明細書にさらに提供されるのは、対象において腫瘍体積を減少させる方法であって、方法が、腫瘍の体積を減少させるための有効量で、ＩＬ１２及びＩＬ２１を産生するように操作された細胞を含む組成物を、腫瘍を有する対象に送達することを含み、操作された細胞が、構築物を含み、構築物が、
ａ）ＳＦＦＶプロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、前記方法である。

本明細書にさらに提供されるのは、免疫応答を刺激する（例えば、誘導する）方法であって、方法が、免疫応答を誘導させるための有効量で、腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する複数のエフェクター分子を産生するように操作された細胞を含む組成物を対象に送達することを含み、操作された細胞が、
ａ）プロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、前記方法である。

本明細書にさらに提供されるのは、対象において免疫応答を刺激する（例えば、誘導する）方法であって、方法が、免疫応答を誘導させるための有効量で、ＩＬ１２及びＩＬ２１を産生するように操作された細胞を含む組成物を対象に送達することを含み、操作された細胞が、構築物を含み、構築物が、
ａ）ＳＦＦＶプロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、前記方法である。

いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３７に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３８に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１３６に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４２に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４３に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１４１に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１４０に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、配列番号１３９に示される配列を含む。いくつかの態様では、構築物は、配列番号１４４に示されるポリヌクレオチド配列を含む。

いくつかの態様では、方法は、チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－１Ｌ抗体、または抗ＣＴＬＡ－４抗体である。いくつかの態様では、方法は、抗ＣＤ４０抗体を投与することをさらに含む。

いくつかの態様では、腫瘍は、腺癌、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病（ＢＡＬＬ）、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病（ＴＡＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、膀胱腫瘍、脳腫瘍、乳腫瘍、頸部腫瘍、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、結腸直腸腫瘍、食道腫瘍、神経膠腫、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、肺腫瘍、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、骨髄異形成症、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、形質細胞骨髄腫、前立腺腫瘍、皮膚腫瘍、甲状腺腫瘍、及び子宮腫瘍からなる群から選択される。いくつかの態様では、腫瘍は、卵巣腫瘍である。いくつかの態様では、腫瘍は、腹腔空間に位置する腫瘍である。

いくつかの態様では、投与は、全身投与、腹腔内投与、または腫瘍内投与を含む。

いくつかの態様では、腫瘍の体積は、対照と比較して少なくとも２５％減少し、任意選択で、対照は未改変細胞である。いくつかの態様では、腫瘍の体積は、対照と比較して少なくとも５０％減少し、任意選択で、対照は未改変細胞である。いくつかの態様では、腫瘍の体積は、対照と比較して少なくとも７５％減少し、任意選択で、対照は未改変細胞である。

本明細書にさらに提供されるのは、対象において腫瘍体積を減少させる方法であって、方法が、腫瘍の体積を減少させるための有効量で、腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する複数のエフェクター分子を産生するように細胞を操作することができる組成物を、腫瘍を有する対象に送達することを含み、各操作された細胞が、
ａ）プロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、前記方法である。

本明細書にさらに提供されるのは、対象において腫瘍体積を減少させる方法であって、方法が、腫瘍の体積を減少させるための有効量で、ＩＬ１２及びＩＬ２１を産生するように細胞を操作することができる組成物を、腫瘍を有する対象に送達することを含み、操作された細胞が、構築物を含み、構築物が、
ａ）ＳＦＦＶプロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、前記方法である。

本明細書にさらに提供されるのは、対象において免疫応答を刺激する（例えば、誘導する）方法であって、方法が、免疫応答を誘導させるための有効量で、腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する複数のエフェクター分子を産生するように細胞を操作することができる組成物を対象に送達することを含み、操作された細胞が、
ａ）プロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、前記方法である。

本明細書にさらに提供されるのは、対象において免疫応答を刺激する（例えば、誘導する）方法であって、方法が、免疫応答を誘導させるための有効量で、ＩＬ１２及びＩＬ２１を産生するように細胞を操作することができる組成物を対象に送達することを含み、操作された細胞が、構築物を含み、構築物が、
ａ）ＳＦＦＶプロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、前記方法である。

いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３７に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質は、配列番号１３８に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１３６に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４２に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１は、配列番号１４３に示される配列を含む。いくつかの態様では、ヒトＩＬ２１をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１４１に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーは、配列番号１４０に示される配列を含む。いくつかの態様では、リンカーポリヌクレオチド配列は、配列番号１３９に示される配列を含む。いくつかの態様では、構築物は、配列番号１４４に示されるポリヌクレオチド配列を含む。

いくつかの態様では、組成物は、ウイルス系、トランスポゾン系、及びヌクレアーゼゲノム編集系からなる群から選択される送達系を含む。いくつかの態様では、ウイルス系は、レンチウイルス、レトロウイルス、レトロトランスポゾン、及びアデノウイルスからなる群から選択される。いくつかの態様では、ヌクレアーゼゲノム編集系は、ジジンクフィンガー系、ＴＡＬＥＮ系、及びＣＲＩＳＰＲ系からなる群から選択される。

いくつかの態様では、腫瘍は、腺癌、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病（ＢＡＬＬ）、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病（ＴＡＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、膀胱腫瘍、脳腫瘍、乳腫瘍、頸部腫瘍、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、結腸直腸腫瘍、食道腫瘍、神経膠腫、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、肺腫瘍、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、骨髄異形成症、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、形質細胞骨髄腫、前立腺腫瘍、皮膚腫瘍、甲状腺腫瘍、及び子宮腫瘍からなる群から選択される。

いくつかの態様では、投与は、全身投与、腹腔内投与、または腫瘍内投与を含む。

ＣＴ２６モデルにおいてＩＬ１２ｐ７０／ＣＣＬ２１ａを発現する同系及び同種異系ＭＳＣを使用した治療を示す。 ＣＴ２６モデルにおいてＩＬ１２ｐ７０／ＣＣＬ２１ａを発現する同系及び同種異系ＭＳＣを使用してＣＴ２６腫瘍を以前に治療した、腫瘍のないマウスへの再負荷を示す。 インビボで４Ｔ１乳癌細胞の腫瘍部位にホーミングする、腹腔内注入されたネズミＢＭ由来ＭＳＣ（ＢＭ－ＭＳＣ）を表すデータを示す。蛍光標識したＢＭ－ＭＳＣ（治療用細胞）を４Ｔ１乳腫瘍細胞を有するマウスに注入した。乳腫瘍細胞は、ルシフェラーゼレポーターを発現する。上の左から最初の２つのパネルは、示されるように、注入後１日目及び７日目に腫瘍を保有するマウスの治療用細胞（ＢＭ－ＭＳＣ）の画像を示す。上の左から３番目のパネルは、注入後７日目に腫瘍を保有するマウスの腫瘍細胞の画像を示す。下の左から２つのパネルは、示されるように、注入後１日目及び７日目に腫瘍を保有しない正常なマウスの治療用細胞の画像を示す。治療用細胞のホーミングに対する腫瘍の影響を示す概略図を右端に示す。 ＩＬ－１２及びＣＣＬ２１ａを発現する操作されたＭＳＣが、乳癌の同所性マウスモデルにおいて有意な腫瘍成長遅延を誘導したことを表すデータを示す。左のグラフは、マウス（ｎ＝８）における４Ｔ１乳腫瘍の成長に対する操作されたＭＳＣの有効性を示す。チャート内の各線は、０日目及び７日目に対照ＭＳＣ成長培地または操作されたＭＳＣのいずれかの腹腔内注入を受けたマウスにおける腫瘍体積を表す。マウスは、ＩＬ－１２を発現する操作されたＭＳＣ及びＣＣＬ２１ａを発現する操作されたＭＳＣの腹腔内注入を受けた。腫瘍体積は、１日おきのノギス測定によって決定した。データは平均±ＳＥＭを表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５は、対照培地群と比較した。右の概略図は、治療のタイムライン、及び治療されたマウスにおける腫瘍量に対する、操作されたＭＳＣで発現した組み合わせ遺伝子ＩＬ－１２及びＣＣＬ２１ａの有効性を示す。 図５Ａには、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２、ＣＣＬ２１ａ、またはそれらの組み合わせを発現する操作されたＭＳＣが、乳癌の同所性マウスモデル（４Ｔ１トリプルネガティブ乳癌）において腫瘍成長を阻害することを表すデータが含まれる。各エフェクターは、異なるＭＳＣによって発現され、ＭＳＣは、組み合わせ治療のために（１：１の比率で）組み合わされた。各チャートは、示された免疫療法を単独で、または組み合わせて発現する操作されたＭＳＣが、マウス（ｎ＝６～８）における４Ｔ１乳腫瘍の成長に対する有効性を示す。図５Ａの各線は、個々のマウスを表す。図５Ｂの左のグラフは、１４日目の各治療における個々のマウスの腫瘍重量を示す。図５Ｂの右のグラフは、経時的に各治療を受けたマウスの平均±ＳＥＭとして表された腫瘍体積を示す。 図５Ａの説明を参照のこと。 図６Ａには、ＯＸ４０Ｌ、ＴＲＡＩＬ、ＩＬ１５、ｃＧＡＳ、またはそれらの組み合わせを発現する操作されたＭＳＣが、乳癌の同所性マウスモデル（４Ｔ１トリプルネガティブ乳癌）において腫瘍成長を有意に阻害しないことを表すデータが含まれる。各エフェクターは、異なるＭＳＣによって発現され、ＭＳＣは、組み合わせ治療のために（１：１の比率で）組み合わされた。各チャートは、示された免疫療法を単独で、または組み合わせて発現する操作されたＭＳＣが、マウス（ｎ＝６～８）における４Ｔ１乳腫瘍の成長に対する有効性を示す。図６Ａの各線は、個々のマウスを表す。図６Ｂの左のグラフは、各治療における個々のマウスの腫瘍重量を示す。図６Ｂの右のグラフは、経時的に各治療を受けたマウスの平均±ＳＥＭとして表された体重を示す。 図６Ａの説明を参照のこと。 図７Ａには、ＩＬ－１２及びＣＣＬ２１ａを発現する操作されたＭＳＣが、乳癌の同所性マウスモデル（４Ｔ１トリプルネガティブ乳癌）において腫瘍成長を阻害するが、抗ＣＤ４０抗体の追加が、腫瘍成長を低減しないことを表すデータが含まれる。各エフェクターは、異なるＭＳＣによって発現され、ＭＳＣは、組み合わせ治療のために（１：１の比率で）組み合わされた。各チャートは、示された免疫療法を単独で、または組み合わせて発現する操作されたＭＳＣが、マウス（ｎ＝６～８）における４Ｔ１乳腫瘍の成長に対する有効性を示す。図７Ａの各線は、個々のマウスを表す。図７Ｂは、各治療における個々のマウスの腫瘍重量を示す。 図７Ａの説明を参照のこと。 図８Ａには、ＯＸ４０Ｌ、ＴＲＡＩＬ、ＩＬ１５、ＨＡＣｖＰＤ－１、またはそれらの組み合わせを発現する操作されたＭＳＣが、乳癌の皮下マウスモデル（４Ｔ１トリプルネガティブ乳癌）において腫瘍成長を有意に阻害しないことを表すデータが含まれる。各エフェクターは、異なるＭＳＣによって発現され、ＭＳＣは、組み合わせ治療のために（１：１の比率で）組み合わされた。各チャートは、示された免疫療法を単独で、または組み合わせて発現する操作されたＭＳＣが、マウス（ｎ＝６～８）における４Ｔ１乳腫瘍の成長に対する有効性を示す。図８Ａの各線は、個々のマウスを表す。図８Ｂの左のグラフは、各治療における個々のマウスの腫瘍重量を示す。図８Ｂの右のグラフは、経時的に各治療を受けたマウスの平均±ＳＥＭとして表された体重を示す。 図８Ａの説明を参照のこと。 図９Ａには、ＩＬ－１２及びＣＣＬ２１ａを発現する操作されたＭＳＣが、乳癌の同所性マウスモデル（４Ｔ１トリプルネガティブ乳癌）において腫瘍成長を阻害するが、ＣＣＬ２１ａ、ＩＬ－３６ガンマ、及びＩＬ－７を発現するＭＳＣの組み合わせが、腫瘍成長を低減しないことを表すデータが含まれる。しかしながら、試験したエフェクターのいくつかの組み合わせは、毒性を引き起こし得る。各エフェクターは、異なるＭＳＣによって発現され、ＭＳＣは、組み合わせ治療のために（１：１の比率で）組み合わされた。各チャートは、示された免疫療法を単独で、または組み合わせて発現する操作されたＭＳＣが、マウス（ｎ＝６～８）における４Ｔ１乳腫瘍の成長に対する有効性を示す。図９Ａの各線は、個々のマウスを表す。図９Ｂは、各治療における個々のマウスの腫瘍重量を示す。 図９Ａの説明を参照のこと。 図１０Ａ～１０Ｂは、毒性及びスクリーニングのためのＧＦＰ用量漸増研究からのデータを含む。図１０Ａは、ＧＦＰを発現する操作されたＭＳＣが、毒性を誘発しないことを示す。各エフェクターは、異なるＭＳＣによって発現され、ＭＳＣは、組み合わせ治療のために（１：１の比率で）組み合わされた。各チャートは、示された免疫療法を単独で、または組み合わせて発現する操作されたＭＳＣが、マウス（ｎ＝６～８）における４Ｔ１乳腫瘍の成長に対する有効性を示す。図１０Ａの各線は、個々のマウスを表す。図１０Ｂは、各治療における個々のマウスの腫瘍重量を示す。 図１０Ａの説明を参照のこと。 図１１Ａは、操作されたヒトＭＳＣが、マウス４Ｔ１腫瘍にホーミングしないことを示す。図１１Ｂは、各治療における個々のマウスの腫瘍重量を示す。有効性は、１日おきのノギス測定からの腫瘍体積によって決定した。 図１１Ａの説明を参照のこと。 ＩＬ－１２及びＣＣＬ２１ａが腫瘍拡大を低減することができることを示すデータを含む。 図１３Ａには、ＩＬ－１２及びＣＣＬ２１を発現する操作されたＭＳＣが、乳癌の同所性マウスモデル（４Ｔ１トリプルネガティブ乳癌）において腫瘍成長を阻害するのに十分であり、チェックポイント阻害剤（抗ＰＤ－１抗体または抗ＣＴＬＡ－４抗体）の追加が、有効性を増加しないことを表すデータが含まれる。各エフェクターは、異なるＭＳＣによって発現され、ＭＳＣは、組み合わせ治療のために（１：１の比率で）組み合わされ、チェックポイント阻害剤は別々に注入した。各チャートは、示された免疫療法を単独で、または組み合わせて発現する操作されたＭＳＣが、マウス（ｎ＝６～８）における４Ｔ１乳腫瘍の成長に対する有効性を示す。図１３Ａの各線は、個々のマウスを表す。図１３Ｂは、各治療における個々のマウスの腫瘍重量を示す。 図１３Ａの説明を参照のこと。 ＩＬ－１２及びＣＣＬ２１ａを発現する操作されたＭＳＣが、結腸直腸癌のマウスモデルにおいて有意な腫瘍成長遅延を誘導したことを表すデータを示す。左のグラフは、マウス（ｎ＝８）におけるＣＴ２６結腸直腸腫瘍の成長に対する操作されたＭＳＣの有効性を示す。チャート内の各線は、０日目及び７日目に対照ＭＳＣ成長培地または操作されたＭＳＣのいずれかの腹腔内注入を受けたマウスにおける腫瘍体積を表す。マウスは、ＩＬ－１２を発現する操作されたＭＳＣ及びＣＣＬ２１ａを発現する操作されたＭＳＣの腹腔内注入を受けた。腫瘍体積は、１日おきのノギス測定によって決定した。データは平均±ＳＥＭを表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．００５は、対照培地群と比較した。右の概略図は、治療のタイムライン、及び治療されたマウスにおける腫瘍量に対する、操作されたＭＳＣで発現した組み合わせ遺伝子ＩＬ－１２及びＣＣＬ２１ａの有効性を示す。 操作されたＭＳＣ細胞を投与するための最適な時間を決定するための、ＣＴ２６マウスモデルにおける腫瘍成長動態を示すグラフである。 図１６Ａ～図１６Ｂには、結腸癌の同系マウスモデルにおける平均腫瘍成長に対する、抗ＣＤ４０または抗ＣＴＬＡ４抗体と組み合わせたＩＬ－１２及びＣＣＬ２１ａを発現する操作されたＭＳＣの有効性を示すデータが含まれる。ＣＴ２６結腸腫瘍を保有するマウスは、７つの治療のうちの１つで治療された（治療群あたりｎ＝５～６）。ＭＳＣ－ＩＬ－１２＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａは、組み合わせ治療について、ＩＬ－１２を発現する操作された細胞、及びＣＣＬ２１ａを発現する操作された細胞（１：１の比率で）による治療を示す。図１６Ｂの左のグラフは、各治療における個々のマウスの腫瘍重量を示す。図１６Ｂの右のグラフは、経時的に各治療を受けたマウスの平均±ＳＥＭとして表された腫瘍体積を示す。 図１６Ａの説明を参照のこと。 図１７Ａ～図１７Ｂは、用量依存的な長期生存研究からのデータを含む。図１７Ａは、個々の群の腫瘍体積を示す。図１７Ｂは、体重（上）、腫瘍体積（下）、及び生存率（右）を示す。 図１７Ａの説明を参照のこと。 ＩＬ－１２、ＣＣＬ２１ａ、及びＩＬ１５またはＨＡＣｖＰＤ－１のいずれかを発現する操作されたＭＳＣが、マウスモデル結腸直腸癌における腫瘍成長を有意に阻害することを表すデータが含まれる。各エフェクターは、異なるＭＳＣによって発現され、ＭＳＣは、組み合わせ治療のために（１：１の比率で）組み合わされた。各チャートは、示された免疫療法を単独で、または組み合わせて発現する操作されたＭＳＣが、マウス（ｎ＝６～８）におけるＣＴ２６結腸直腸腫瘍の成長に対する有効性を示す。各線は、個々のマウスを表す。 各治療における個々のマウスの腫瘍重量を示す。 腫瘍微小環境内の浸潤免疫集団の代表的なグラフである。 全ＣＤ３集団における制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のパーセンテージを示す。操作されたＭＳＣ－ＩＬ２及びＣＣＬ２１ａで治療した腫瘍微小環境におけるＴｒｅｇの数において有意な減少があった。 免疫浸潤のパーセンテージを腫瘍重量と相関させた。高リンパ球（ＣＤ３＋）を伴う試料は低腫瘍重量と相関し、高骨髄性（ＣＤ１１ｂ＋）浸潤を伴う試料は高腫瘍量と相関することを見出した。 各治療における個々のマウスの腫瘍体積を示す。有効性は、１日おきのノギス測定からの腫瘍体積によって決定した。 各治療における個々のマウスの腫瘍重量を示す。有効性は、１日おきのノギス測定からの腫瘍体積によって決定した。 図２１Ａ～２１Ｂは、腹腔内空間におけるＣＴ２６－ＬＵＣ（ルシフェラーゼ）腫瘍成長の動態を示す。ＣＴ２６細胞株を０日目に注入し、３（３）匹のマウスを７日目、１０日目、１４日目、及び１８日目に採取して、腫瘍成長の動態を決定した。図２１Ａの第１の行は、腫瘍量をモニタリングするためにＩＶＩＳ画像でマウスの重量及びＲＯＩを測定する。第２の行は、各群における個々のマウスの腫瘍重量及び腫瘍のＲＯＩをモニタリングする。第３の行は、腫瘍の重量を全身ＲＯＩまたは腫瘍ＲＯＩのいずれかと相関させる。図２１Ｂは、腫瘍微小環境をより特徴付けするために、１８日目の群における３（３）匹のマウスの免疫プロファイルを示す。 図２１Ａの説明を参照のこと。 図２２Ａには、ＩＬ－１２及びＣＣＬ２１ａを発現する操作されたＭＳＣが、結腸直腸癌の皮下マウスモデルにおいて腫瘍成長を阻害するが、ＣＣＬ２１ａ及びＩＬ－３６ガンマまたはＩＬ－７を発現するＭＳＣの組み合わせが、腫瘍成長を低減しないことを表すデータが含まれる。各エフェクターは、異なるＭＳＣによって発現され、ＭＳＣは、組み合わせ治療のために（１：１の比率で）組み合わされた。各チャートは、示された免疫療法を単独で、または組み合わせて発現する操作されたＭＳＣが、マウス（ｎ＝６～８）におけるＣＴ２６結腸腫瘍の成長に対する有効性を示す。図２２Ａの各線は、個々のマウスを表す。図２２Ｂは、各治療群における個々のマウスの腫瘍重量を示す。 図２２Ａの説明を参照のこと。 図２３Ａ～２３Ｂは、図２２Ａ～図２２Ｂによって表される実験からの腫瘍免疫浸潤統計を含む。ＰＢＳ、ナイーブＭＳＣ、及びＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａ（組み合わせ）群から３匹のマウスを選択して、腫瘍微小環境の免疫プロファイルについてフローサイトメトリーを実行した。図２３Ａは、ナイーブＭＳＣを投与した群と比較して、組み合わせ群において浸潤性ＣＤ３及びＣＤ８細胞傷害性Ｔ集団の有意な増加を示す。図２３Ｂは、ナイーブＭＳＣで治療した群と比較して、組み合わせ群において顆粒球骨髄由来サプレッサー細胞（ｇＭＤＳＣ）及びマクロファージ集団の有意な減少を示す。 図２３Ａの説明を参照のこと。 図２４Ａ～２４Ｂは、図２２Ａ～図２２Ｂによって表される実験に関連する、免疫パーセンテージ及び腫瘍重量に関連するデータを含む。図２４Ａ及び図２４Ｂは、より多くのＣＤ３＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を伴う試料（左上及び中央のグラフ）が腫瘍重量の減少と強く相関することを示す。これらの図は、マクロファージ、樹状細胞、及びＭＤＳＣを含むＣＤ１１ｂ骨髄細胞が少ない試料では、腫瘍量がより少ないことをさらに示す（図２４Ａの下中央及び右のグラフならびに図２４Ｂの上段）。 図２４Ａの説明を参照のこと。 図２５Ａ～２５Ｂには、腹腔内及び皮下結腸直腸癌マウスモデルにおけるＭＳＣ－ＩＬ－１２＋ＣＣＬ２１ａ療法からのデータが含まれる。レンチウイルス形質導入株の３つの異なるロットを、ＭＳＣ－ＩＬ１２及びＣＣＬ２１ａについて試験した（ＴＬＯＯ８－３／４、ＴＬ０１９－０１／０２、及びＴＬ０２２－０１／０２；各ＴＬ番号は１ロットを表す）。図２５Ａは、ＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａの３つのロットすべてが、皮下及び腹腔内モデルの両方で腫瘍量を低減することができることを示す（最初の５つのグラフはＳＣモデルからであり、最後の３つはＩＰモデルからである）。すべてのマウスからの腫瘍を１１日目に収集した。図２５Ｂは、各群からの平均腫瘍重量を示す。 図２５Ａの説明を参照のこと。 図２６Ａには、ＭＳＣ－ＩＬ－１２＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａ、またはＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａ＋ＭＳＣ－ＩＦＮ－βの操作された組み合わせ療法が、結腸直腸癌の皮下マウスモデルにおいて腫瘍成長を阻害するが、ＣＣＬ２１ａ及びｓ４１ＢＢＬ を発現するＭＳＣの組み合わせが、腫瘍成長を低減しないことを表すデータが含まれる。各エフェクターは、異なるＭＳＣによって発現され、ＭＳＣは、組み合わせ治療のために（１：１の比率で）組み合わされた。各チャートは、示された免疫療法を単独で、または組み合わせて発現する操作されたＭＳＣが、マウス（ｎ＝６～８）におけるＣＴ２６腫瘍の成長に対する有効性を示す。図２６Ａの各線は、個々のマウスを表す。図２６Ｂは、各治療における個々のマウスの腫瘍重量を示す。ＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａは、ナイーブＭＳＣを注入したマウスと比較して最高の有効性を示す。治療有効性は、ＭＳＣ－ＩＦＮｂ＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａで治療した群でも観察した。 図２６Ａの説明を参照のこと。 図２７Ａ～２７Ｂは、図２６Ａ～図２６Ｂによって表される実験からの追加のデータを提供する。図２７Ａ～図２７Ｂは、示される操作されたＭＳＣで治療した各群の免疫プロファイルを示すグラフである。マクロファージ集団における一貫した減少を、ＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａで治療した後に観察した。（図２７Ａ）ナイーブＭＳＣに対してＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａで治療した群と比較した場合、ＣＤ３＋集団における増加した浸潤、及びＣＤ１１ｂ＋集団における減少した浸潤の一般的な傾向も観察した（図２７Ａ及び図２７Ｂ）。 図２７Ａの説明を参照のこと。 図２８Ａ～２８Ｂは、図２６Ａ～２６Ｂによって表される実験からの追加のデータをさらに提供する。図２８Ａ～２８Ｂは、免疫浸潤と腫瘍重量との相関を示す。低いマクロファージ及び樹状細胞を伴う試料は、低い腫瘍量を有する（図２８Ｂ、上中央及び右上）。 図２８Ａの説明を参照のこと。 上記の結腸直腸癌モデルからのインビボデータを組み合わせたグラフを示す（図２２Ａ及び図２６Ａ）。図２２Ａ及び図２６Ａからの組み合わされたＣＴ２６データは、腫瘍のみ（ＰＢＳ）、ナイーブＭＳＣで処理した、及びＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａで処理した、３つの群を捕捉する。 図３０Ａ～３０Ｃは、図２２Ａ及び図２６Ａからの組み合わされたデータをさらに示す。グラフは、フローサイトメトリー実験データからの免疫浸潤の平均数を示す。図３０ＡからのＣＤ８＋Ｔにおいて統計的有意性が観察され、ＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａが腫瘍微小環境を再分極し、より細胞傷害性Ｔ細胞浸潤を可能にする能力を示している。さらに、ＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａで治療した群では、ＣＤ１１ｂ＋骨髄性集団の浸潤が減少した（図３０Ｂ）。収集したデータは、樹状細胞及びマクロファージ集団が統計的に有意であったことを示す。 図３０Ａの説明を参照のこと。 ｐＬ１７Ｄのベクターマップを示す。 異なるエフェクター分子を単独でまたは組み合わせて発現するように操作されたＭＳＣ、及びＢＬＩレベルによって評価されるように、ＩＰ腫瘍モデルにおいてＣＴ２６腫瘍量を低減するそれらの有効性を示す。 異なるエフェクター分子を単独でまたは組み合わせて発現するように操作されたＭＳＣ、及びＢＬＩレベルによって評価されるように、ＩＰ腫瘍モデルにおいてＢ１６Ｆ１０腫瘍量を低減するそれらの有効性を示す。 単一のレンチウイルス発現ベクターからのヒトＩＬ１２（ｐ７０）及びヒトＣＣＬ２１ａの発現に関するレンチウイルス発現ベクターマップを示す。 サイトカインＥＬＩＳＡによって評価した、ｈＩＬ１２（図３５Ａ）及びｈＣＣＬ２１ａ（図３５Ｂ）の両方の生産操作されたｈＭＳＣを示す。 図３５Ａの説明を参照のこと。 ＩＦＮγ産生によって評価した、ＭＳＣから産生されたｈＩＬ１２による機能的Ｔ細胞調節を実証するトランスウェルアッセイを示す。 生物発光イメージングによって評価した、ＩＰ腫瘍保有マウス腫瘍におけるＭＳＣによる腫瘍へのホーミングを示す。図３７Ａ～Ｄは、ＣＴ２６腫瘍モデルにおけるホーミング（図３７Ａに示される画像、図３７Ｂの画像の定量化の要約）、定量的リアルタイムＰＣＲ（図３７Ｃ）、及びホタルルシフェラーゼに対する蛍光顕微鏡法（図３７Ｄ）を示す。図３７Ｅは、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍モデルにおけるホーミングを示す（画像の定量化の要約）。 図３７Ａの説明を参照のこと。 図３７Ａの説明を参照のこと。 図３７Ａの説明を参照のこと。 図３７Ａの説明を参照のこと。 ＢＬＩにより評価した腫瘍量の減少をもたらすＩＬ１２ｐ７０を発現するＭＳＣ（上パネル及び左下パネル）、及びＣＴ２６ ＩＰモデルにおける腫瘍重量により検出可能な腹腔内腫瘍の完全な排除（右下パネル）を示す。 ＢＬＩにより評価した腫瘍量の減少をもたらすＩＬ１２ｐ７０を発現するＭＳＣ（上パネル及び左下パネル）、及びＢ１６Ｆ１０ ＩＰモデルにおける腫瘍重量により検出可能な腹腔内腫瘍の完全な排除（右下パネル）を示す。 ＢＬＩにより評価した腫瘍量の減少をもたらすＩＬ１２ｐ７０／ＣＣＬ２１ａを発現するＭＳＣ（上パネル及び左下パネル）、及びＣＴ２６ ＩＰモデルにおける腫瘍重量により検出可能な腹腔内腫瘍の完全な排除（右下パネル）を示す。図４０Ａは、ＰＢＳ治療（丸）、ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ（「ナイーブＭＳＣ」四角）、及びＩＬ１２ｐ７０／ＣＣＬ２１ａ発現ＭＳＣ（三角）についてＢＬＩによって評価した平均腫瘍量を示す。図４０Ｂは、ＰＢＳ治療、ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ（「ナイーブＭＳＣ」）、及びＩＬ１２ｐ７０／ＣＣＬ２１ａ発現ＭＳＣ（それぞれ、左、中央、及び右のパネル）についてＢＬＩによって評価した個々のマウスにおける腫瘍量を示す。図４０Ｃは、ＩＬ１２ｐ７０／ＣＣＬ２１ａを発現するＭＳＣでの治療が延長された生存（９０日を超える１００％生存）をもたらしたのに対し、対照治療マウスはすべて死亡したか、または２０日目までに安楽死させたことを示す。 図４０Ａの説明を参照のこと。 図４０Ａの説明を参照のこと。 延長された生存をもたらしたＩＬ１２ｐ７０を発現するＭＳＣによる治療を示す。 ３つの別々のドナー（図４２Ａ、ドナー１；図４２Ｂ、ドナー２；図４２Ｃ、ドナー３）における異なるＭＯＩ（９５０００、９５００、９５０、または非感染）にわたる遺伝子操作されたＭＳＣの相対的な成長を示す。 図４２Ａの説明を参照のこと。 図４２Ａの説明を参照のこと。 ＥＧＦＰ発現を駆動する様々なプロモーターを含む構築物で形質導入した２つの異なるドナー（それぞれ上段及び下段）からの２つの独立したヒトＢＭ－ＭＳＣ細胞株を示す。形質導入後２５日目での操作された細胞のＧＦＰパーセント（左パネル）及びＭＦＩ（右パネル）を示す。 ＥＧＦＰ発現を駆動する様々なプロモーターを含む構築物で形質導入した２つの異なるドナーからの２つの独立したヒトＢＭ－ＭＳＣ細胞株を示す。示されているのは、２つの独立したヒトＢＭ－ＭＳＣ細胞株を個別に（左パネル）、または２つの独立したヒトＢＭ－ＭＳＣ細胞株からのデータを組み合わせて（右パネル）のいずれかで、経時的に（形質導入後７日目～２８日目）追跡したＥＧＦＰ ＭＦＩである。 ＥＬＩＳＡによって評価した操作されたＭＳＣによるＩＬ－１２ｐ７０の分泌を示す。 ＥＬＩＳＡによって評価した操作されたＭＳＣによるＩＬ－２１の分泌を示す。 ＥＬＩＳＡによって評価した操作されたＭＳＣにより分泌されたＩＬ－１２ｐ７０対ＩＬ－２１の比率を示す。 操作されたＭＳＣによるサイトカインの産生及び分泌を評価するために、ＳＴＡＴ４－ＳＥＡＰレポーターと共にＨＥＫ－２９３Ｔ細胞を使用したＩＬ－１２ｐ７０の機能的レポーターアッセイの結果を示す。 操作されたＭＳＣによるサイトカインの産生及び分泌を評価するために、細胞内ホスホフローを使用してＮＫ－９２ヒトナチュラルキラー細胞におけるホスホ－ＳＴＡＴ１及びホスホ－ＳＴＡＴ３（右パネル）を定量化したＩＬ－２１の機能レポーターアッセイの結果を示す。 操作されたＭＳＣによるサイトカインの産生及び分泌を評価するために、ＩＬ２１Ｒ－Ｕ２ＯＳ ＩＬ２１Ｒ／ＩＬ２ＲＧ二量体化レポーターを使用したＩＬ－１２の機能レポーターアッセイの結果を示す。 異なるエフェクター分子を単独でまたは組み合わせて発現するように操作されたＭＳＣ、及びＢＬＩレベルによって評価されるように、ＩＰ腫瘍モデルにおいてＣＴ２６腫瘍量を低減するそれらの有効性を示す。 異なるエフェクター分子を単独でまたは組み合わせて発現するように操作されたＭＳＣ、及びＢＬＩレベルによって評価されるように、ＩＰ腫瘍モデルにおいてＢ１６Ｆ１０腫瘍量を低減するそれらの有効性を示す。 ＣＴ２６モデルにおいてＢＬＩ（図５２Ａの左パネル）及び腫瘍重量（図５２Ａの右パネル）により評価した、ＩＬ１２ｐ７０を発現するＭＳＣ、ＩＬ２１を発現するＭＳＣ、ならびにＩＬ１２ｐ７０及びＩＬ２１を発現するＭＳＣの組み合わせを使用した治療の有効性を示す。 個々のマウスのＢＬＩルシフェラーゼ測定値を示す。 ＢＬＩにより評価した、低用量のＩＬ１２ｐ７０を発現するＭＳＣ、ならびにＩＬ１２ｐ７０及びＩＬ２１を発現するＭＳＣの組み合わせを使用した治療の有効性を示す（図５３Ａ；マウスの個々のＢＬＩ測定－左パネル；ＢＬＩ測定の要約－右パネル）。図５３Ｂは、治療群の生存曲線を示す。 図５３Ａの説明を参照のこと。 Ｂ１６Ｆ１０モデルにおいてＢＬＩ（図５４の左パネル）及び腫瘍重量（図５４の右パネル）により評価した、ＩＬ１２ｐ７０を発現するＭＳＣ、ＩＬ２１を発現するＭＳＣ、ならびにＩＬ１２ｐ７０及びＩＬ２１を発現するＭＳＣの組み合わせを使用した治療の有効性を示す。 Ｂ１６Ｆ１０モデルにおいてＩＬ１２ｐ７０を発現するＭＳＣ、ＩＬ２１を発現するＭＳＣ、ならびにＩＬ１２ｐ７０及びＩＬ２１を発現するＭＳＣの組み合わせを使用した治療後の個々のマウスのＢＬＩルシフェラーゼ測定を示す。 ＩＬ１２ｐ７０を発現するＭＳＣ、ＩＬ２１を発現するＭＳＣ、ＩＬ１２ｐ７０及びＩＬ２１を発現するＭＳＣの組み合わせ、抗ＰＤ１、またはＩＬ１２ｐ７０及び抗ＰＤ１の組み合わせを受けた治療群の生存曲線を示す。 腫瘍再負荷後のマウスの生存曲線を示す。ナイーブな未処理マウスを示す。 腫瘍再負荷後のマウスの生存曲線を示す。以前にＩＬ１２を発現するＭＳＣ単独の治療を受けたものを示す。 腫瘍再負荷後のマウスの生存曲線を示す。以前にＩＬ１２を発現するＭＳＣ及びＩＬ２１を発現するＭＳＣの組み合わせ治療を受けたマウスを示す。 ＣＴ２６腫瘍モデルにおいて、単一のレンチウイルス発現ベクターからネズミＩＬ１２（ｐ７０）及びネズミＩＬ２１を発現するように操作されたｍＭＳＣを使用した治療の用量依存的有効性を示す。図５８Ａは、１７日目対７日目で正規化した有効性の要約したＢＬＩ評価を示す。図５８Ｂ及び図５８Ｃは、個々のマウスの経時的なＢＬＩ測定値を示す。図５８Ｄは、治療群の生存曲線を示す。 図５８Ａの説明を参照のこと。 図５８Ａの説明を参照のこと。 図５８Ａの説明を参照のこと。 Ｂ１６Ｆ１０腫瘍モデルにおいて、単一のレンチウイルス発現ベクターからネズミＩＬ１２（ｐ７０）及びネズミＩＬ２１を発現するように操作されたｍＭＳＣを使用した治療の用量依存的有効性を示す。図５９Ａは、１７日目対７日目で正規化した有効性の要約したＢＬＩ評価を示す。図５９Ｂ及び図５９Ｃは、個々のマウスの経時的なＢＬＩ測定値を示す。図５９Ｄは、高用量を複数回投与した場合の個々のマウスの経時的なＢＬＩ測定値を示す。図５９Ｅは、治療群の生存曲線を示す。 図５９Ａの説明を参照のこと。 図５９Ａの説明を参照のこと。 図５９Ａの説明を参照のこと。 図５９Ａの説明を参照のこと。 ＭＣ－３８腫瘍モデルにおいて、単一のレンチウイルス発現ベクターからネズミＩＬ１２（ｐ７０）及びネズミＩＬ２１を発現するように操作されたｍＭＳＣを使用した治療の用量依存的有効性を示す。１８日目対９日目で正規化した有効性の要約したＢＬＩ評価を示す。 ＭＣ－３８腫瘍モデルにおいて、単一のレンチウイルス発現ベクターからネズミＩＬ１２（ｐ７０）及びネズミＩＬ２１を発現するように操作されたｍＭＳＣを使用した治療の用量依存的有効性を示す。個々のマウスの経時的なＢＬＩ測定値を示す。 ＭＣ－３８腫瘍モデルにおいて、単一のレンチウイルス発現ベクターからネズミＩＬ１２（ｐ７０）及びネズミＩＬ２１を発現するように操作されたｍＭＳＣを使用した治療の用量依存的有効性を示す。治療群の生存曲線を示す。 ヒトＭＳＣの優先的なホーミングを示す。要約したルシフェラーゼ定量化を示す。 ヒトＭＳＣの優先的なホーミングを示す。器官におけるルシフェラーゼシグナルの代表的な画像を示す。 ＯＶＣＡＲ８モデルにおける腹膜液（各時点の左のカラム）及び血清（各時点の右のカラム）でのヒトＩＬ１２（左パネル）及びにヒトＩＬ２１（右パネル）の産生を示す。 ＣＴ２６モデルにおける腹膜液（各時点の左のカラム）及び血清（各時点の右のカラム）でのネズミＩＬ１２（左パネル）及びにネズミＩＬ２１（右パネル）の一過性産生を示す。 ＣＴ２６モデルにおいて、サイトカインを産生するように操作されたＭＳＣで治療したか、または組換えサイトカイン療法で治療したかのいずれかでのマウスにおける有効性を示す。図６３Ａは、ＭＳＣ－ＩＬ１２対ｒＩＬ１２の生存曲線を示す。図６３Ｂは、ＭＳＣ－ＩＬ２１対ｒＩＬ２１の生存曲線を示す。図６３Ｃは、ＭＳＣ－ＩＬ１２／ＩＬ２１対ｒＩＬ１２＋ｒＩＬ２１の生存曲線を示す。図６３Ｄ及び図６３Ｅは、サイトカインを産生するように操作されたＭＳＣで治療したか、または組換えサイトカイン療法で治療したかのいずれかでのマウスにおける腫瘍量のＢＬＩ評価を示す。 図６３Ａの説明を参照のこと。 図６３Ａの説明を参照のこと。 図６３Ａの説明を参照のこと。 図６３Ａの説明を参照のこと。 Ｂ１６Ｆ１０モデルにおいて、サイトカインを産生するように操作されたＭＳＣで治療したか、または組換えサイトカイン療法で治療したかのいずれかでのマウスにおける有効性を示す。サイトカインを産生するように操作されたＭＳＣで治療したか、または組換えサイトカイン療法で治療したかのいずれかでのマウスにおける腫瘍量の腫瘍重量評価を示す。 Ｂ１６Ｆ１０モデルにおいて、サイトカインを産生するように操作されたＭＳＣで治療したか、または組換えサイトカイン療法で治療したかのいずれかでのマウスにおける有効性を示す。治療群の生存曲線を示す。 ＣＴ２６ ＩＰ腫瘍モデルにおいて、ＩＬ１２及びＩＬ２１の両方を産生するＭＳＣでの治療後のマウスの免疫プロファイルを示す。示されている結果は、治療に対する応答における免疫浸潤を特徴付けするために使用される多色フローサイトメトリー分析である。図６５Ａ及図６５Ｂは、Ｔ細胞サブセット及び活性化マーカー（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ８／ＣＤ３８＋、ＣＤ８／ＩＦＮｇ＋、ＣＤ８／Ｇｚｍｂ＋、ＮＫ／Ｇｚｍｂ＋、及びＣＤ８：Ｔｒｅｇｓ－ＦｏｘＰ３比率）を示す。図６５Ｃは、樹状細胞などの抗原提示細胞の免疫プロファイルを示す。 図６５Ａの説明を参照のこと。 図６５Ａの説明を参照のこと。

詳細な説明
間葉系幹細胞（ＭＳＣ）（間葉系間質細胞、多能性間質細胞、骨髄間質細胞、または多能性間葉系間質細胞とも称される）は、中胚葉に由来する非造血性成体幹細胞のサブセットである。それらは、軟骨細胞、骨細胞、及び脂肪細胞などの中胚葉系統だけでなく、外胚葉細胞及び内胚葉細胞への自己複製能力及び多系統分化を所有する。倫理的懸念及び奇形腫形成の両方を伴わないＭＳＣは、免疫疾患及び非免疫疾患の両方の治療のための細胞療法に使用される主要な幹細胞型である。それらは、骨髄、脂肪組織、臍帯、胎児肝臓、筋肉、及び肺から容易に単離することができ、インビボで正常に拡張することができる。ＭＳＣは、Ｄｏｍｉｎｉｃｉ，ｅｔ ａｌ．（Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ．２００６；８（４）：３１５－７）で詳細に考察されるように、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ４５－、ＣＤ３４－、ＣＤ１４－を含む細胞マーカー表現型、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ７９α－を含む細胞マーカー表現型、またはＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１９－、ＨＬＡクラスＩＩ－を含む細胞マーカー表現型を含む、細胞表面マーカー表現型によって定義することができ、あらゆる目的のために参照により組み込まれる。さらに、ＭＳＣが外因的かつ全身的にヒト及び動物に送達される場合、それらは、腫瘍微小環境及び転移領域を含む炎症を伴う損傷した組織部位にホーミングする（直接的に遊走する）傾向がある。炎症に向けられたＭＳＣホーミングは、ケモカイン、接着分子、及びマトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）を含む、いくつかの重要な細胞輸送関連分子が関与する。

本明細書で提供されるのは、異なる腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節するエフェクター分子を産生するための、ＭＳＣなどの細胞を操作する方法である。これらのＭＳＣは、本明細書では「操作されたＭＳＣ」と称される。典型的に、操作された核酸を含むこれらのＭＳＣは、自然界では発生しない。いくつかの実施形態では、ＭＳＣは、エフェクター分子、例えば、免疫応答を刺激するものをコードするヌクレオチド配列と作動可能に連結されたプロモーターを含む、核酸を含むように操作される。

本明細書でさらに提供されるのは、エフェクター分子を産生する、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄性細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞を含むがこれらに限定されない免疫細胞などの細胞を操作する方法である。ＭＳＣ及び免疫細胞の両方を含むこれらの細胞は、本明細書では「操作された細胞」と称される。典型的に、操作された核酸を含むこれらの細胞は、自然界では発生しない。いくつかの実施形態では、細胞は、エフェクター分子、例えば、免疫応答を刺激するものをコードするヌクレオチド配列と作動可能に連結されたプロモーターを含む、核酸を含むように操作される。

「エフェクター分子」は、別の分子と結合し、それが結合するその分子の生物学的活性を調節する分子（例えば、ＤＮＡもしくはＲＮＡなどの核酸、またはタンパク質（ポリペプチド）、またはペプチド）を指す。例えば、エフェクター分子は、酵素活性、遺伝子発現、または細胞シグナル伝達を増加または減少させるためのリガンドとして作用し得る。したがって、いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、異なる免疫調節メカニズムを調節（活性化または阻害）する。分子と直接的に結合して調節することにより、エフェクター分子は、第２の下流分子を間接的に調節し得る。いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、分泌分子であり、他の実施形態では、エフェクター分子は、細胞表面と結合するか、または細胞内に残存する。例えば、エフェクター分子には、細胞内転写因子、マイクロＲＮＡ、及びｓｈＲＮＡが含まれ、これらは内部の細胞状態を改変して、例えば、細胞の免疫調節活性、ホーミング特性、または残留性を増強する。エフェクター分子の非限定的な例には、サイトカイン、ケモカイン、代謝産物レベルを調節する酵素、サイトカイン、ホーミング分子、及び／またはインテグリンを調節する抗体またはデコイ分子が含まれる。

「調節する」という用語は、生物学的活性の維持、生物学的活性の阻害（部分的または完全）、及び生物学的活性の刺激／活性化（部分的または完全）を包含する。用語は、生物学的活性を減少または増加させる（例えば、増強する）ことも包含する。２つの異なるエフェクター分子は、一方のエフェクター分子（例えば、Ｔ細胞シグナル伝達を刺激する）が、他方のエフェクター分子（例えば、抗原提示及び／またはプロセシングを刺激する）によって調節される腫瘍媒介免疫抑制メカニズムとは異なる腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する場合、「異なる腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する」と見なされる。

エフェクター分子による調節は、直接的または間接的であり得る。直接的な調節は、エフェクター分子が別の分子と結合し、その分子の活性を調節する場合に生じる。間接的な調節は、エフェクター分子が別の分子と結合し、その分子の活性を調節し、その調節の結果として、さらに別の分子（エフェクター分子が結合されていない）の活性を調節する場合に生じる。

いくつかの実施形態では、少なくとも１つのエフェクター分子による腫瘍媒介免疫抑制メカニズムの調節は、免疫刺激性及び／または抗腫瘍免疫応答（例えば、全身的または腫瘍微小環境における）において少なくとも１０％（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、または２００％）の増加をもたらす。例えば、腫瘍媒介免疫抑制メカニズムの調節は、免疫刺激性及び／または抗腫瘍免疫応答において少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％の増加をもたらし得る。いくつかの実施形態では、腫瘍媒介免疫抑制メカニズムの調節は、免疫刺激性及び／または抗腫瘍免疫応答において１０～２０％、１０～３０％、１０～４０％、１０～５０％、１０～６０％、１０～７０％、１０～８０％、１０～９０％、１０～１００％、１０～２００％、２０～３０％、２０～４０％、２０～５０％、２０～６０％、２０～７０％、２０～８０％、２０～９０％、２０～１００％、２０～２００％、５０～６０％、５０～７０％、５０～８０％、５０～９０％、５０～１００％、または５０～２００％の増加をもたらし得る。免疫刺激性及び／または抗腫瘍免疫応答における「増加」は、例えば、全身的または腫瘍微小環境において、エフェクター分子（複数可）の不在下で、そうでなければ生じるであろう免疫刺激性及び／または抗腫瘍性免疫応答と関連することを理解されたい。

いくつかの実施形態では、少なくとも１つのエフェクター分子による腫瘍媒介免疫抑制メカニズムの調節は、免疫刺激性及び／または抗腫瘍免疫応答（例えば、全身的または腫瘍微小環境における）において少なくとも２倍（例えば、２、３、４、５、１０、２５、２０、２５、５０、または１００倍）の増加をもたらす。例えば、腫瘍媒介免疫抑制メカニズムの調節は、免疫刺激性及び／または抗腫瘍免疫応答において少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、または少なくとも１００倍の増加をもたらし得る。いくつかの実施形態では、腫瘍媒介免疫抑制メカニズムの調節は、免疫刺激性及び／または抗腫瘍免疫応答において２～１０、２～２０、２～３０、２～４０、２～５０、２～６０、２～７０、２～８０、２～９０、または２～１００倍の増加をもたらし得る。

免疫刺激性及び／または抗腫瘍免疫メカニズムの非限定的な例には、Ｔ細胞シグナル伝達、活性、及び／または動員、抗原提示及び／またはプロセシング、ナチュラルキラー細胞媒介細胞傷害性シグナル伝達、活性、及び／または動員、樹状細胞分化及び／または成熟、免疫細胞動員、炎症誘発性マクロファージシグナル伝達、活性、及び／または動員、間質分解、免疫刺激性代謝産物産生、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）シグナル伝達（ＩＦＮ及びＴｈ１分極の分泌を増加させ、抗腫瘍免疫応答を促進する）、及び／またはＩ型インターフェロンシグナル伝達が含まれる。エフェクター分子は、前述の免疫刺激メカニズムのうちの少なくとも１つ（１つ以上）を刺激し得、したがって、免疫刺激性応答の増加をもたらし得る。前述の免疫刺激性及び／または抗腫瘍免疫メカニズムの変化は、例えば、Ｔ細胞増殖または細胞傷害性についてのインビトロアッセイ、インビトロ抗原提示アッセイ、発現アッセイ（例えば、特定のマーカーの）、及び／または細胞分泌アッセイ（例えば、サイトカインの）を使用して評価され得る。

いくつかの実施形態では、少なくとも１つのエフェクター分子による腫瘍媒介免疫抑制メカニズムの調節は、免疫抑制応答（例えば、全身的または腫瘍微小環境における）において少なくとも１０％（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、または２００％）の減少をもたらす。例えば、腫瘍媒介免疫抑制メカニズムの調節は、免疫抑制応答において少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％の減少をもたらし得る。いくつかの実施形態では、腫瘍媒介免疫抑制メカニズムの調節は、免疫抑制応答において１０～２０％、１０～３０％、１０～４０％、１０～５０％、１０～６０％、１０～７０％、１０～８０％、１０～９０％、１０～１００％、１０～２００％、２０～３０％、２０～４０％、２０～５０％、２０～６０％、２０～７０％、２０～８０％、２０～９０％、２０～１００％、２０～２００％、５０～６０％、５０～７０％、５０～８０％、５０～９０％、５０～１００％、または５０～２００％の減少をもたらし得る。免疫抑制応答における「減少」は、例えば、全身的または腫瘍微小環境において、エフェクター分子（複数可）の不在下で、そうでなければ生じるであろう免疫抑制応答と関連することを理解されたい。

いくつかの実施形態では、少なくとも１つのエフェクター分子による腫瘍媒介免疫抑制メカニズムの調節は、免疫抑制応答（例えば、全身的または腫瘍微小環境における）において少なくとも２倍（例えば、２、３、４、５、１０、２５、２０、２５、５０、または１００倍）の減少をもたらす。例えば、腫瘍媒介免疫抑制メカニズムの調節は、免疫抑制応答において少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、または少なくとも１００倍の減少をもたらし得る。いくつかの実施形態では、腫瘍媒介免疫抑制メカニズムの調節は、免疫抑制応答において２～１０、２～２０、２～３０、２～４０、２～５０、２～６０、２～７０、２～８０、２～９０、または２～１００倍の減少をもたらし得る。

免疫抑制メカニズムの非限定的な例には、負の共刺激シグナル伝達、細胞傷害性細胞（例えば、Ｔ細胞及び／またはＮＫ細胞）のアポトーシス促進性シグナル伝達、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞シグナル伝達、腫瘍チェックポイント分子の産生／維持、骨髄由来サプレッサー細胞シグナル伝達、活性、及び／または動員、免疫抑制因子／代謝産物産生、及び／または血管内皮増殖因子のシグナル伝達が含まれる。エフェクター分子は、前述の免疫抑制メカニズムのうちの少なくとも１つ（１つ以上）を阻害し得、したがって、免疫抑制応答の減少をもたらし得る。前述の免疫抑制メカニズムの変化は、例えば、Ｔ細胞増殖の増加及び／またはＩＦＮγ産生の増加（負の共刺激シグナル伝達、Ｔ_ｒｅｇ細胞シグナル伝達及び／またはＭＤＳＣ）、アネキシンＶ／ＰＩフロー染色（アポトーシス促進シグナル伝達）、発現についてのフロー染色、例えば、ＰＤＬ１発現（腫瘍チェックポイント分子の産生／維持）、ＥＬＩＳＡ、ＬＵＭＩＮＥＸ（登録商標）、ｑＰＣＲを介したＲＮＡ、酵素アッセイ、例えば、ＩＤＯトリプトファン異化作用（免疫抑制因子／代謝物産生）、及びＰＩ３Ｋ、Ａｋｔ、ｐ３８のリン酸化（ＶＥＧＦシグナル伝達）についてアッセイすることによって評価され得る。

いくつかの実施形態では、ＭＳＣなどの細胞は、膜に係留される抗ＣＤ３及び／または抗ＣＤ２８アゴニストの細胞外ドメインを発現するように操作される。

いくつかの実施形態では、ＭＳＣなどの細胞は、少なくとも２つ（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個以上）のエフェクター分子を産生するように操作され、その各々が異なる腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する。他の実施形態では、細胞は、細胞によって天然に産生されない少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。かかるエフェクター分子は、例えば、細胞によって天然に産生されるエフェクター分子の機能を補完し得る。

いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、相加的に機能し、例えば、２つのエフェクター分子の効果は、別々に機能する２つのエフェクター分子の効果の合計に等しい可能性がある。他の実施形態では、エフェクター分子は相乗的に機能し、例えば、２つのエフェクター分子の効果は、別々に機能する２つのエフェクター分子の組み合わされた機能よりも大きい可能性がある。本開示は、エフェクター分子とそれらが産生される免疫細胞（例えば、ＭＳＣ）との間の相加性及び相乗効果も包含する。

腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節し、及び／または腫瘍微小環境を改変するエフェクター分子は、例えば、分泌因子（例えば、免疫系に関与する細胞外メカニズムを調節するサイトカイン、ケモカイン、抗体、及び／またはデコイ受容体）、阻害因子（例えば、抗体、抗体断片、リガンドトラップ及び／または小遮断ペプチド）、細胞状態を制御する細胞内因子（例えば、炎症誘発性を増強するために細胞状態を調節するマイクロＲＮＡ及び／または転写因子）、エクソソームに封入された因子（例えば、マイクロＲＮＡ、細胞質ゾル因子、及び／または細胞外因子）、表面に表示される要因（例えば、チェックポイント阻害因子、ＴＲＡＩＬ）、及び／または代謝遺伝子（例えば、代謝物もしくはアミノ酸を産生／調節または分解する酵素）であり得る。

いくつかの実施形態では、エフェクター分子は、サイトカイン、抗体、ケモカイン、ヌクレオチド、ペプチド、及び酵素の非限定的なクラスの分子から選択され得る。前述のクラスのエフェクター分子の非限定的な例を表１に列挙し、例示的なエフェクター分子をコードする特定の配列を表６に列挙する。エフェクター分子は、表１もしくは表６に列挙されるものなどのヒト、または表１もしくは表６に列挙されるネズミエフェクター分子のヒト等価物であり得る。エフェクター分子は、内因性ヒトエフェクター分子または機能について改変及び／または最適化されたエフェクター分子、例えば、発現を改善するために最適化された、安定性を改善するために改変された、またはそのシグナル配列で改変されたコドンなどのヒト由来であり得る（以下を参照されたい）。機能を最適化するための様々なプログラム及びアルゴリズムは当業者に即知であり、特定の種（例えば、ヒト、マウス、細菌など）のコドン最適化など、所望される改善に基づいて選択することができる。

（表１）例示的なエフェクター分子

いくつかの実施形態では、ＭＳＣなどの細胞は、エフェクター分子をコードするヌクレオチド配列と作動可能に連結されたプロモーターを含む、操作された核酸を含む。いくつかの実施形態では、操作された核酸は、少なくとも２つのエフェクター分子をコードするヌクレオチド配列と作動可能に連結されたプロモーターを含む。例えば、操作された核酸は、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、または少なくとも１０個のエフェクター分子をコードするヌクレオチド配列と作動可能に連結されたプロモーターを含み得る。いくつかの実施形態では、操作された核酸は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個以上のエフェクター分子をコードするヌクレオチド配列と作動可能に連結されたプロモーターを含む。

いくつかの実施形態では、操作されたＭＳＣなどの操作された細胞は、各々が少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、または３つ）のエフェクター分子をコードするヌクレオチド配列と作動可能に連結されたプロモーターを含む、少なくとも２つの操作された核酸を含むように操作される。例えば、細胞は、各々が少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、または３つ）のエフェクター分子をコードするヌクレオチド配列と作動可能に連結されたプロモーターを含む、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、または少なくとも１０個の操作された核酸を含むように操作され得る。いくつかの実施形態では、細胞は、各々が少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、または３つ）のエフェクター分子をコードするヌクレオチド配列と作動可能に連結されたプロモーターを含む、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０個以上の操作された核酸を含むように操作される。

「操作された核酸」は、自然界では発生しない核酸である。しかしながら、操作された核酸は全体として天然に発生するものではないが、天然に発生するヌクレオチド配列を含み得ることを理解されたい。いくつかの実施形態では、操作された核酸は、異なる生物（例えば、異なる種）からのヌクレオチド配列を含む。例えば、いくつかの実施形態では、操作された核酸は、ネズミヌクレオチド配列、細菌ヌクレオチド配列、ヒトヌクレオチド配列、及び／またはウイルスヌクレオチド配列を含む。「操作された核酸」という用語は、組換え核酸及び合成核酸を含む。「組換え核酸」は、核酸分子を連結することによって構築され、いくつかの実施形態では、生細胞内で複製することができる分子を指す。「合成核酸」は、増幅されるか、または化学的に、または他の手段によって合成される分子を指す。合成核酸には、化学的に改変された、または他の方法で改変されたものが含まれるが、天然に発生する核酸分子と塩基対を形成することができる。組換え核酸及び合成核酸には、前述のいずれかの複製から生じる分子も含まれる。本開示の操作された核酸は、単一の分子（例えば、同じプラスミドまたは他のベクターに含まれる）または複数の異なる分子（例えば、複数の異なる独立して複製する分子）によってコードされ得る。

本開示の操作された核酸は、標準的な分子生物学的方法を使用して産生され得る（例えば、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２０１２，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）。いくつかの実施形態では、操作された核酸構築物は、ＧＩＢＳＯＮ ＡＳＳＥＭＢＬＹ（登録商標）クローニングを使用して産生される（例えば、Ｇｉｂｓｏｎ，Ｄ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ，３４３－３４５，２００９、及びＧｉｂｓｏｎ，Ｄ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ，９０１－９０３，２０１０を参照されたく、その各々が参照により本明細書に組み込まれる）。ＧＩＢＳＯＮ ＡＳＳＥＭＢＬＹ（登録商標）は典型的に、シングルチューブ反応で３つの酵素活性、５’エキソヌクレアーゼ、ＤＮＡポリメラーゼの‘Ｙ伸長活性、及びＤＮＡリガーゼ活性を使用する。５’エキソヌクレアーゼ活性は、５’末端配列を噛み返し、アニーリングのために相補配列を露出させる。次に、ポリメラーゼ活性は、アニーリングされた領域のギャップを充填する。次に、ＤＮＡリガーゼがニックを密閉し、ＤＮＡ断片を一緒に共有結合させる。隣接する断片の重複する配列は、Ｇｏｌｄｅｎ Ｇａｔｅ組み立てで使用されるものよりもはるかに長く、したがって正しい組み立ての高いパーセンテージがもたらされる。いくつかの実施形態では、操作された核酸構築物は、ＩＮ－ＦＵＳＩＯＮ（登録商標）クローニング（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を使用して産生される。

「プロモーター」は、核酸配列の残りの部分の転写の開始及び速度が制御される、核酸配列の制御領域を指す。プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼ及び他の転写因子などの制御性タンパク質及び分子が結合し得るサブ領域も含み得る。プロモーターは、構成的、誘導的、抑制可能、組織特異的、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。プロモーターは、それが制御する核酸配列の発現または転写を駆動する。本明細書において、プロモーターは、それがその配列の転写開始及び／または発現を制御（「駆動」）するために調節する核酸配列に関して正しい機能的位置及び配向にある場合、「作動可能に連結される」と見なされる。

プロモーターは、所与の遺伝子または配列のコードセグメントの上流に位置する５’非コード配列を単離することによって取得され得るように、遺伝子または配列に自然に関連するものであり得る。かかるプロモーターは「内因性」と称され得る。いくつかの実施形態では、コード核酸配列は、組換えまたは異種プロモーターの制御下に配置され得、これは、その自然環境においてコード化された配列と通常は関連しないプロモーターを指す。かかるプロモーターは、他の遺伝子のプロモーター、他の細胞から単離されたプロモーター、ならびに例えば、当技術分野で即知である遺伝子工学の方法を通じて発現を変える異なる転写制御性領域及び／または変異の異なる要素を含むものなど、「天然に発生する」ものではない合成プロモーターまたはエンハンサーを含み得る。プロモーター及びエンハンサーの核酸配列を合成的に産生することに加えて、配列は、組換えクローニング及び／またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を含む核酸増幅技術を使用して産生され得る（例えば、米国特許第４，６８３，２０２号及び米国特許第５，９２８，９０６号を参照されたい）。

操作された核酸のプロモーターは、「誘導性プロモーター」であり得、これは、シグナルの存在下、シグナルによる影響を受ける、またはシグナルと接触した場合に、転写活性を制御する（例えば、開始または活性化する）ことを特徴とするプロモーターを指す。シグナルは、誘導性プロモーターからの転写活性の制御において活性であるような様式で誘導性プロモーターと接触する、内因性または通常は外因性の状態（例えば、光）、化合物（例えば、化合物または非化合物）、またはタンパク質（例えば、サイトカイン）であり得る。転写の活性化は、プロモーターに直接的に作用して転写を駆動すること、またはプロモーターが転写を駆動することを妨げている抑制因子を不活性化することによってプロモーターに間接的に作用することを含み得る。逆に、転写の非活性化は、転写を防ぐためにプロモーターに直接的に作用すること、または次にプロモーターに作用する抑制因子を活性化することによってプロモーターに間接的に作用することを含み得る。

プロモーターは、その状態またはシグナルの存在下で、プロモーターからの転写が活性化、非活性化、増加、または減少した場合、局所腫瘍状態（例えば、炎症または低酸素症）またはシグナルに「応答」または「調節」される。いくつかの実施形態では、プロモーターは、応答要素を含む。「応答要素」は、プロモーターからの遺伝子発現を調節（制御）する特定の分子（例えば、転写因子）と結合するプロモーター領域内のＤＮＡの短い配列である。本開示に従って使用され得る応答要素には、これらに限定されないが、フロレチン調節可能制御要素（ＰＥＡＣＥ）、ジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）、インターフェロンガンマ活性化配列（ＧＡＳ）（Ｄｅｃｋｅｒ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．１９９７ Ｍａｒ；１７（３）：１２１－３４、参照により本明細書に組み込まれる）、インターフェロン刺激応答要素（ＩＳＲＥ）（Ｈａｎ，Ｋ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００４ Ａｐｒ９；２７９（１５）：１５６５２－６１、参照により本明細書に組み込まれる）、ＮＦ－カッパＢ応答要素（Ｗａｎｇ，Ｖ．ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ．２０１２；２（４）：８２４－８３９、参照により本明細書に組み込まれる）、及びＳＴＡＴ３応答要素（Ｚｈａｎｇ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｊ ｏｆ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１９９６；２７１：９５０３－９５０９、参照により本明細書に組み込まれる）が含まれる。他の応答要素が本明細書に含まれる。応答要素は、その同族結合分子に対する応答要素の感受性を一般的に増強ためにタンデムリピート（例えば、応答要素をコードする同じヌクレオチド配列の連続した繰り返し）を含むこともできる。タンデムリピートには、２Ｘ、３Ｘ、４Ｘ、５Ｘなどの標識をし、存在するリピートの数を示すことができる。

応答性プロモーター（「誘導性プロモーター」とも称される）（例えば、ＴＧＦ－ベータ応答性プロモーター）の非限定的な例を表２に示し、これは、プロモーター及び転写因子の設計、ならびに転写因子（ＴＦ）及び導入遺伝子転写（Ｔ）に対するインデューサー分子の効果を示す（Ｂ、結合；Ｄ、解離；ｎ．ｄ．、未決定）（Ａ、活性化；ＤＡ、非活性化；ＤＲ、抑制解除）（Ｈｏｒｎｅｒ，Ｍ．＆Ｗｅｂｅｒ，Ｗ．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ５８６（２０１２）２０７８４－２０９６ｍ、及びそこに引用される参考文献を参照されたい）。誘導性プロモーターの他の非限定的な例には、表３に提示されたものが含まれる。

（表２）応答性プロモーターの例

（表３）例示的な誘導性プロモーター

プロモーターの他の非限定的な例には、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、伸長因子１－アルファ（ＥＦ１ａ）プロモーター、伸長因子（ＥＦＳ）プロモーター、ＭＮＤプロモーター（骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサーを伴う改変ＭｏＭｕＬＶ ＬＴＲのＵ３領域を含む合成プロモーター）、ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、脾フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）プロモーター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター、及びユビキチンＣ（ＵｂＣ）プロモーターが含まれる（表４を参照されたい）。

（表４）例示的な構成的プロモーター

いくつかの実施形態では、本開示のプロモーターは、腫瘍微小環境内のシグナルによって調節される。腫瘍微小環境は、腫瘍微小環境の存在下で、腫瘍微小環境の不在下でのプロモーターの活性と比較して、プロモーターの活性が少なくとも１０％増加または減少する場合にプロモーターを調節すると見なされる。いくつかの実施形態では、プロモーターの活性は、腫瘍微小環境の不在下でのプロモーターの活性と比較して、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％増加または減少する。例えば、プロモーターの活性は、腫瘍微小環境の不在下でのプロモーターの活性と比較して、１０～２０％、１０～３０％、１０～４０％、１０～５０％、１０～６０％、１０～７０％、１０～８０％、１０～９０％、１０～１００％、１０～２００％、２０～３０％、２０～４０％、２０～５０％、２０～６０％、２０～７０％、２０～８０％、２０～９０％、２０～１００％、２０～２００％、５０～６０％、５０～７０％、５０～８０％、５０～９０％、５０～１００％、または５０～２００％増加または減少する。

いくつかの実施形態では、プロモーターの活性は、腫瘍微小環境の不在下でのプロモーターの活性と比較して、少なくとも２倍（例えば、２、３、４、５、１０、２５、２０、２５、５０、または１００倍）増加または減少する。例えば、プロモーターの活性は、腫瘍微小環境の不在下でのプロモーターの活性と比較して、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、または少なくとも１００倍増加または減少する。いくつかの実施形態では、プロモーターの活性は、腫瘍微小環境の不在下でのプロモーターの活性と比較して、２～１０、２～２０、２～３０、２～４０、２～５０、２～６０、２～７０、２～８０、２～９０、または２～１００倍増加または減少する。

いくつかの実施形態では、本開示のプロモーターは、低酸素状態下で活性化される。「低酸素状態」は、身体または身体の領域が組織レベルで十分な酸素供給を欠乏する状態である。低酸素状態は、炎症を引き起こし得る（例えば、炎症性サイトカインのレベルは低酸素状態下で増加する）。いくつかの実施形態では、低酸素状態下で活性化されるプロモーターは、炎症性サイトカインの活性の発現を減少させるエフェクター分子をコードするヌクレオチドと作動可能に連結され、したがって、低酸素状態によって引き起こされる炎症を低減させる。いくつかの実施形態では、低酸素状態下で活性化されるプロモーターは、低酸素応答要素（ＨＲＥ）を含む。「低酸素応答要素（ＨＲＥ）」は、低酸素誘導因子（ＨＩＦ）に応答する応答要素である。いくつかの実施形態では、ＨＲＥは、コンセンサスモチーフＮＣＧＴＧ（Ｎは、ＡまたはＧのいずれかである）を含む。

いくつかの実施形態では、操作された細胞は、複数のエフェクター分子を産生する。例えば、細胞は、２～２０個の異なるエフェクター分子を産生するように操作され得る。いくつかの実施形態では、細胞は、２～２０、２～１９、２～１８、２～１７、２～１６、２～１５、２～１４、２～１３、２～１２、２～１１、２～１０、２～９、２～８、２～７、２～６、２～５、２～４、２～３、３～２０、３～１９、３～１８、３～１７、３～１６、３～１５、３～１４、３～１３、３～１２、３～１１、３～１０、３～９、３～８、３～７、３～６、３～５、３～４、４～２０、４～１９、４～１８、４～１７、４～１６、４～１５、４～１４、４～１３、４～１２、４～１１、４～１０、４～９、４～８、４～７、４～６、４～５、５～２０、５～１９、５～１８、５～１７、５～１６、５～１５、５～１４、５～１３、５～１２、５～１１、５～１０、５～９、５～８、５～７、５～６、６～２０、６～１９、６～１８、６～１７、６～１６、６～１５、６～１４、６～１３、６～１２、６～１１、６～１０、６～９、６～８、６～７、７～２０、７～１９、７～１８、７～１７、７～１６、７～１５、７～１４、７～１３、７～１２、７～１１、７～１０、７～９、７～８、８～２０、８～１９、８～１８、８～１７、８～１６、８～１５、８～１４、８～１３、８～１２、８～１１、８～１０、８～９、９～２０、９～１９、９～１８、９～１７、９～１６、９～１５、９～１４、９～１３、９～１２、９～１１、９～１０、１０～２０、１０～１９、１０～１８、１０～１７、１０～１６、１０～１５、１０～１４、１０～１３、１０～１２、１０～１１、１１～２０、１１～１９、１１～１８、１１～１７、１１～１６、１１～１５、１１～１４、１１～１３、１１～１２、１２～２０、１２～１９、１２～１８、１２～１７、１２～１６、１２～１５、１２～１４、１２～１３、１３～２０、１３～１９、１３～１８、１３～１７、１３～１６、１３～１５、１３～１４、１４～２０、１４～１９、１４～１８、１４～１７、１４～１６、１４～１５、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１５～１６、１６～２０、１６～１９、１６～１８、１６～１７、１７～２０、１７～１９、１７～１８、１８～２０、１８～１９、または１９～２０個のエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０個のエフェクター分子を産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、外因性配列は、マルチシストロン性であり得、すなわち、１つを超える別個のポリペプチド（例えば、複数のエフェクター分子）が単一のｍＲＮＡ転写物から産生され得る。外因性配列は、様々なリンカーを使用することを通じてマルチシストロン性にすることができ、例えば、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を、５’から３’の配向で、第１の遺伝子：リンカー：第２の遺伝子など、第２のエフェクター分子をコードするヌクレオチド配列と連結させることができる。リンカーは、Ｔ２Ａなどの２Ａリボソームスキッピング要素をコードすることができる。他の２Ａリボソームスキッピング要素には、これらに限定されないが、Ｅ２Ａ、Ｐ２Ａ、及びＦ２Ａが含まれる。２Ａリボソームスキッピング要素は、翻訳中に第１及び第２の遺伝子によってコードされる別個のポリペプチドの産生を可能にする。リンカーは、フューリン切断部位またはＴＥＶ切断部位などの切断可能リンカーポリペプチド配列をコードすることができ、発現に続いて、切断可能リンカーポリペプチドは、第１及び第２の遺伝子によってコードされる別個のポリペプチドが産生されるように切断される。切断可能リンカーは、切断をさらに促進する、柔軟性リンカー（例えば、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ配列）などのポリペプチド配列を含むことができる。

リンカーは、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）をコードすることができ、翻訳中に第１及び第２の遺伝子によってコードされる別個のポリペプチドが産生される。リンカーは、ウイルススプライス受容部位などのスプライス受容部位をコードすることができる。

リンカーは、２Ａリボソームスキッピングとそれに続く２Ａ残基の完全な除去を可能にするためのフューリン部位のさらなる切断を通じて別個のポリペプチドを産生することができる、フューリン－２Ａリンカーなどのリンカーの組み合わせであり得る。いくつかの実施形態では、リンカーの組み合わせは、フューリン配列、柔軟性リンカー、及び２Ａリンカーを含むことができる。したがって、いくつかの実施形態では、リンカーは、フューリン－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－２Ａ融合ポリペプチドである。いくつかの実施形態では、本開示のリンカーは、フューリン－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｔ２Ａ融合ポリペプチドである。

一般に、マルチシストロン系は、リンカーの任意の数または組み合わせを使用して、任意の数の遺伝子またはその部分を発現することができる（例えば、外因性配列は、第１、第２、及び第３のエフェクター分子によってコードされる別個のポリペプチドが産生されるように、各々がリンカーによって分離される第１、第２、及び第３のエフェクター分子をコードすることができる）。

外因性配列は、複数のプロモーターを使用して、複数のＯＲＦから遺伝子を発現させることができ、すなわち、１つを超える別個のｍＲＮＡ転写産物が外因性配列から産生され得る。例えば、第１のプロモーターは、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列と作動可能に連結することができ、第２のプロモーターは、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列と作動可能に連結することができる。

本明細書で使用される「リンカー」は、第１のポリペプチド配列及び第２のポリペプチド配列を連結するポリペプチド、上述のマルチシストロン性リンカー、または上述の追加のＯＲＦと作動可能に連結される追加のプロモーターを指すことができる。

本開示のＭＳＣなどの操作された細胞は、典型的には、複数のエフェクター分子を産生し、そのうちの少なくとも２つは、異なる腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する。いくつかの実施形態では、エフェクター分子の少なくとも１つは、腫瘍微小環境における炎症性経路を刺激し、エフェクター分子の少なくとも１つは、腫瘍微小環境における炎症の負の制御因子を阻害する。

「腫瘍微小環境」とは、周囲の血管、免疫細胞、線維芽細胞、骨髄由来炎症性細胞、リンパ球、シグナル伝達分子、及び細胞外マトリックス（ＥＣＭ）を含む、腫瘍が存在する細胞環境である（例えば、Ｐａｔｔａｂｉｒａｍａｎ，Ｄ．Ｒ．＆Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ｒ．Ａ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ１３，４９７－５１２（２０１４）、Ｂａｌｋｗｉｌｌ，Ｆ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ１２５，５５９１－５５９６，２０１２、及びＬｉ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ１０１（４），８０５－１５，２００７を参照されたい）。

いくつかの実施形態では、細胞は、少なくとも１つのホーミング分子を産生するように操作される。「ホーミング」は、標的部位（例えば、細胞、組織（例えば、腫瘍）、または器官）への細胞の能動的ナビゲーション（遊走）を指す。「ホーミング分子」は、細胞を標的部位に指向する分子を指す。いくつかの実施形態では、ホーミング分子は、標的部位への細胞の相互作用を認識及び／または開始するように機能する。ホーミング分子の非限定的な例には、ＣＸＣＲ１、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＦＰＲ２、ＶＥＧＦＲ、ＩＬ６Ｒ、ＣＸＣＲ１、ＣＳＣＲ７、及びＰＤＧＦＲが挙げられる。

いくつかの実施形態では、ホーミング分子は、ケモカイン受容体（ケモカインと結合する細胞表面分子）である。ケモカインは、細胞内で指向性ケモタキシスを誘導することができる、細胞により分泌される小さなサイトカインまたはシグナル伝達タンパク質である。ケモカインは、ＣＸＣ、ＣＣ、ＣＸ３Ｃ、及びＸＣの４つの主要なサブファミリーに分類することができ、これらのすべてが、標的細胞の表面上に位置するケモカイン受容体と選択的に結合することにより生物学的効果を発揮する。いくつかの実施形態では、細胞は、間質細胞由来因子１（ＳＤＦ１、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン１２、及びＣＸＣＬ１２としても知られる）を発現する細胞、組織、または腫瘍に向かうケモカイン勾配に沿って細胞がホーミングすることを可能にするケモカイン受容体であるＣＸＣＲ４を産生するように操作される。本開示の操作された細胞によって産生され得るケモカイン受容体の非限定的な例には、ＣＸＣケモカイン受容体（例えば、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、及びＣＸＣＲ７）、ＣＣケモカイン受容体（ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、及びＣＣＲ１１）、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体（例えば、ＣＸ３ＣＬ１と結合するＣＸ３ＣＲ１）、及びＸＣケモカイン受容体（例えば、ＸＣＲ１）が挙げられる。いくつかの実施形態では、ケモカイン受容体は、Ｇタンパク質結合膜貫通受容体、または腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂを含むがこれらに限定されない）のメンバーである。いくつかの実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、及び／またはＣＸＣＬ１０、１１、あるいはＣＸＣＬ１０及びＣＸＣＬ１１（Ｔ細胞動員を促進する）、ＣＣＬ３及び／またはＣＸＣＬ５、ＣＣＬ２１（Ｔｈ１動員及び分極）を包含する融合タンパク質を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、Ｂ細胞動員を促進するためにＣＸＣＬ１３を産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞は、Ｎ－ホルミル化含有オリゴペプチド（ＦＰＲ２及びＦＰＲＬ１を含むがこれらに限定されない）を検出するＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）を産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞は、インターロイキン（ＩＬ６Ｒを含むがこれに限定されない）を検出する受容体を産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞は、他の細胞、組織、または腫瘍から分泌される成長因子を検出する受容体（ＦＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＥＧＦＲ、ならびにＶＥＧＦ－Ｃ及びＶＥＧＦ－Ｄを含むがこれらに限定されないＶＥＧＦファミリーの受容体を含むがこれらに限定されない）を産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、ホーミング分子は、インテグリンである。インテグリンは、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）接着を促進する膜貫通型受容体である。インテグリンは、α（アルファ）及びβ（ベータ）の２つのサブユニットを有する必須のヘテロ二量体である。インテグリンのαサブユニットは、限定されないが、ＩＴＧＡ１、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ５、ＩＴＧＡ６、ＩＧＴＡ７、ＩＴＧＡ８、ＩＴＧＡ９、ＩＧＴＡ１０、ＩＧＴＡ１１、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＡ２Ｂ、ＩＴＧＡＸであり得る。インテグリンのβサブユニットは、これらに限定されないが、ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ３、ＩＴＧＢ４、ＩＴＧＢ５、ＩＴＧＢ６、ＩＴＧＢ７、及びＩＴＧＢ８であり得る。本開示の細胞は、インテグリンα及びβサブユニットの任意の組み合わせを産生するように操作され得る。

いくつかの実施形態では、ホーミング分子は、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）である。ＭＭＰは、内皮細胞壁の基礎となる基底膜の成分を切断する酵素である。ＭＭＰの非限定的な例には、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９、及びＭＭＰが含まれる。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＭＰを阻害する分子（例えば、タンパク質）の阻害剤を産生するように操作される。例えば、細胞は、１型膜ＭＭＰ（ＭＴ１－ＭＭＰ）またはＴＩＭＰメタロペプチダーゼ阻害剤１（ＴＩＭＰ－１）の阻害剤（例えば、ＲＮＡｉ分子）を発現するように操作され得る。

いくつかの実施形態では、ホーミング分子は、例えば、標的組織の内皮上のセレクチン（例えば、造血細胞Ｅ－／Ｌ－セレクチンリガンド（ＨＣＥＬＬ）、Ｄｙｋｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ．２０１６ Ｏｃｔ；３４（１０）：２５０１－２５１１）と結合するリガンドである。

「ホーミング分子」という用語は、細胞のホーミングを改善／増強する分子の産生を制御する転写因子も包含する。

いくつかの実施形態では、細胞ホーミングは、対象における腫瘍／がん細胞を局所的に照射することによって増加する。放射線組織損傷は、細胞ホーミング、及びその損傷した組織への内因性Ｔ細胞ホーミングを助ける。

操作された細胞の例
本明細書で提供される細胞（例えば、ＭＳＣ）は、複数のエフェクター分子を産生するように操作され、そのうちの少なくとも２つは、異なる腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ以上）のエフェクター分子は、腫瘍微小環境における少なくとも１つの免疫刺激メカニズムを刺激するか、または腫瘍微小環境における少なくとも１つの免疫抑制メカニズムを阻害する。いくつかの実施形態では、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ以上）のエフェクター分子は、腫瘍微小環境における少なくとも１つの免疫抑制メカニズムを阻害し、少なくとも１つ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ以上）のエフェクター分子は、腫瘍微小環境における少なくとも１つの免疫抑制メカニズムを阻害する。さらに他の実施形態では、少なくとも２つ（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ以上）のエフェクター分子は、腫瘍微小環境における少なくとも１つの免疫刺激メカニズムを刺激する。さらに他の実施形態では、少なくとも２つ（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ以上）のエフェクター分子は、腫瘍微小環境における少なくとも１つの免疫抑制メカニズムを阻害する。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、Ｔ細胞シグナル伝達、活性、及び／または動員を刺激する少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、抗原提示及び／またはプロセシングを刺激する少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ナチュラルキラー細胞媒介細胞傷害性シグナル伝達、活性、及び／または動員を刺激する少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、樹状細胞分化及び／または成熟を刺激する少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、免疫細胞動員を刺激する少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、Ｍ１マクロファージシグナル伝達、活性、及び／または動員を刺激する少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、Ｔｈ１分極を刺激する少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、間質分解を刺激する少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、免疫刺激性代謝産物産生を刺激する少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、Ｉ型インターフェロンシグナル伝達を刺激する少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、負の共刺激シグナル伝達を阻害する少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、抗腫瘍免疫細胞のアポトーシス促進性シグナル伝達（例えば、ＴＲＡＩＬを介して）を阻害する少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、制御性Ｔ（Ｔ_ｒｅｇ）細胞シグナル伝達、活性、及び／または動員を阻害する少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、腫瘍チェックポイント分子を阻害する少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）シグナル伝達を活性化する少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、骨髄由来のサプレッサー細胞シグナル伝達、活性、及び／または動員を阻害する少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、免疫抑制因子／代謝物を分解する少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、血管内皮成長因子シグナル伝達を阻害する少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、腫瘍細胞を直接的に殺傷する少なくとも１つのエフェクター分子（例えば、グランザイム、パーフォリン、腫瘍溶解性ウイルス、細胞溶解性ペプチド、及び酵素、例えば、ＡＤＣＣを誘発する抗腫瘍抗体）を産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、少なくとも１つのエフェクター分子は、Ｔ細胞シグナル伝達、活性、及び／または動員を刺激し、抗原提示及び／またはプロセシングを刺激し、ナチュラルキラー細胞媒介細胞傷害性シグナル伝達、活性、及び／または動員を刺激し、樹状細胞分化及び／または成熟を刺激し、免疫細胞動員を刺激し、マクロファージシグナル伝達を刺激し、間質分解を刺激し、免疫刺激性代謝産物産生を刺激し、またはＩ型インターフェロンシグナル伝達を刺激し、少なくとも１つのエフェクター分子は、負の共刺激シグナル伝達を阻害し、抗腫瘍免疫細胞のアポトーシス促進性シグナル伝達を阻害し、制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞シグナル伝達、活性、及び／または動員を阻害し、腫瘍チェックポイント分子を阻害し、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）シグナル伝達を活性化し、骨髄由来のサプレッサー細胞シグナル伝達、活性、及び／または動員を阻害し、免疫抑制因子／代謝物を分解し、血管内皮成長因子シグナル伝達を阻害し、または腫瘍細胞を直接的に殺傷する。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）はＩＬ－１２、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－７、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＩＬ－１β、ＯＸ４０リガンド、及びＣＤ４０Ｌから選択される少なくとも１つのエフェクター分子、及び／または抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、及び抗ＩＬ－３５抗体から選択される少なくとも１つのエフェクター分子、及び／またはＭＩＰ１α（ＣＣＬ３）、ＭＩＰ１β（ＣＣＬ５）、及びＣＣＬ２１から選択される少なくとも１つのエフェクター分子、及び／またはＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドから選択される少なくとも１つのエフェクター分子、及び／または微生物ペプチドから選択される少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、ならびにサイトカイン、抗体、ケモカイン、ヌクレオチド、ペプチド、酵素、及びインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）から選択される少なくとも１つのエフェクター分子を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及び少なくとも１つのサイトカインまたは受容体／リガンド（例えば、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－７、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＩＬ－１β、ＯＸ４０－リガンド、及び／またはＣＤ４０Ｌ）を産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及び少なくとも１つのサイトカインまたは受容体／リガンド（例えば、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－７、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＩＬ－１β、ＯＸ４０－リガンド、及び／またはＣＤ４０Ｌ）を産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、サイトカインは、サイトカインと自己結合して、抗体断片と融合したＩＬ－２などの細胞特異的標的結合を誘導し、Ｔｒｅｇ細胞との結合を防止し、ＣＤ８及びＮＫ細胞との優先的な結合を防止する、抗体、抗体断片、または受容体との操作された融合タンパク質として産生される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及び少なくとも１つの抗体（例えば、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＶＥＧＦ、抗ＴＧＦ－β、抗ＩＬ－１０、抗ＴＮＦ－α、及び／または抗－ＩＬ－３５抗体）を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及び少なくとも１つのケモカイン（ＭＩＰ１α（ＣＣＬ３）、ＭＩＰ１β（ＣＣＬ５）、及び／またはＣＣＬ２１）を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及び少なくとも１つのヌクレオチド（例えば、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド）を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及び少なくとも１つのペプチド（例えば、抗腫瘍ペプチド）を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及び少なくとも１つの酵素を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及び少なくとも１つのＳＴＩＮＧ活性化因子を産生するように操作される。いくつかの実施形態において、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及び直接的な抗腫瘍活性を有する少なくとも１つのエフェクター（例えば、腫瘍溶解性ウイルス）を産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－α、及びＭＩＰ１－αを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－α、及びＭＩＰ１－βを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－α、及びＣＸＣＬ９を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－α、及びＣＸＣＬ１０を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－α、及びＣＸＣＬ１１を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－α、及びＣＣＬ２１を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ３６－γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／または４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／またはＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及びＭＩＰ１－αを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及びＭＩＰ１－βを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及びＣＸＣＬ９を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及びＣＸＣＬ１０を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及びＣＸＣＬ１１を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及びＣＣＬ２１を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ３６－γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／または４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／またはＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－１２、及びＭＩＰ１－αを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－１２、及びＭＩＰ１－βを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－１２、及びＣＸＣＬ９を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－１２、及びＣＸＣＬ１０を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－１２、及びＣＸＣＬ１１を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－１２、及びＣＣＬ２１を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ３６－γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／または４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／またはＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、及びＭＩＰ１－αを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＴＲＡＩＬ、及びＭＩＰ１－βを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＴＲＡＩＬ、及びＣＸＣＬ９を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＴＲＡＩＬ、及びＣＸＣＬ１０を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＴＲＡＩＬ、及びＣＸＣＬ１１を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＴＲＡＩＬ、及びＣＣＬ２１を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ３６－γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／または４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／またはＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）、及びＭＩＰ１－αを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＳＴＩＮＧ、及びＭＩＰ１－βを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＳＴＩＮＧ、及びＣＸＣＬ９を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＳＴＩＮＧ、及びＣＸＣＬ１０を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＳＴＩＮＧ、及びＣＸＣＬ１１を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＳＴＩＮＧ、及びＣＣＬ２１を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ３６－γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／または４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／またはＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及びＭＩＰ１－αを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及びＭＩＰ１－βを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及びＣＸＣＬ９を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及びＣＸＣＬ１０を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及びＣＸＣＬ１１を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及びＣＣＬ２１を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ３６－γ、ＩＬ－１８、及び／または４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／またはＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、シトシンデアミナーゼ、及びＭＩＰ１－αを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、シトシンデアミナーゼ、及びＭＩＰ１－βを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、シトシンデアミナーゼ、及びＣＸＣＬ９を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、シトシンデアミナーゼ、及びＣＸＣＬ１０を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、シトシンデアミナーゼ、及びＣＸＣＬ１１を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、シトシンデアミナーゼ、及びＣＣＬ２１を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ３６－γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／または４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／またはＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－α、及びＩＬ－１２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－α、及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－α、及びＩＬ－２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－α、及びＩＬ－７を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－α、及びＩＬ－１５を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－α、及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－α、及びＩＬ－１８を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－α、及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－α、及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１０－１１融合、ＣＸＣＬ１３、及び／またはＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／またはＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及びＩＬ－１２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及びＩＬ－２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及びＩＬ－７を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及びＩＬ－１５を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及びＩＬ－１８を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／またはＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、及びＩＬ－１２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＴＲＡＩＬ、及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＴＲＡＩＬ、及びＩＬ－２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＴＲＡＩＬ、及びＩＬ－７を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＴＲＡＩＬ、及びＩＬ－１５を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＴＲＡＩＬ、及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＴＲＡＩＬ、及びＩＬ－１８を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＴＲＡＩＬ、及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＴＲＡＩＬ、及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／またはＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）、及びＩＬ－１２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＳＴＩＮＧ、及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＳＴＩＮＧ、及びＩＬ－２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＳＴＩＮＧ、及びＩＬ－７を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＳＴＩＮＧ、及びＩＬ－１５を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＳＴＩＮＧ、及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＳＴＩＮＧ、及びＩＬ－１８を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＳＴＩＮＧ、及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＳＴＩＮＧ、及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／またはＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及びＩＬ－１２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及びＩＬ－２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及びＩＬ－７を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及びＩＬ－１５を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及びＩＬ－１８を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／またはＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、シトシンデアミナーゼ、及びＩＬ－１２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、シトシンデアミナーゼ、及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、シトシンデアミナーゼ、及びＩＬ－２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、シトシンデアミナーゼ、及びＩＬ－７を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、シトシンデアミナーゼ、及びＩＬ－１５を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、シトシンデアミナーゼ、及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、シトシンデアミナーゼ、及びＩＬ－１８を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、シトシンデアミナーゼ、及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、シトシンデアミナーゼ、及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／またはＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－α、及びＩＬ－１２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－α、及びＭＩＰ１－γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－α、及びＩＬ－２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－α、及びＩＬ－７を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－α、及びＩＬ－１５を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－α、及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－α、及びＩＬ－１８を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－α、及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－α、及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／またはＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－β、及びＩＬ－１２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－β、及びＭＩＰ１－γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－β、及びＩＬ－２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－β、及びＩＬ－７を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－β、及びＩＬ－１５を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－β、及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－β、及びＩＬ－１８を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－β、及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－β、及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／またはＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ９、及びＩＬ－１２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ９、及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ９、及びＩＬ－２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ９、及びＩＬ－７を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ９、及びＩＬ－１５を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ９、及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ９、及びＩＬ－１８を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ９、及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ９、及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／またはＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１０、及びＩＬ－１２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１０、及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１０、及びＩＬ－２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１０、及びＩＬ－７を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１０、及びＩＬ－１５を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１０、及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１０、及びＩＬ－１８を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１０、及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１０、及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／またはＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１１、及びＩＬ－１２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１１、及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１１、及びＩＬ－２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１１、及びＩＬ－７を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１１、及びＩＬ－１５を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１１、及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１１、及びＩＬ－１８を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１１、及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／またはＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＣＬ２１、及びＩＬ－１２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＣＬ２１、及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＣＬ２１、及びＩＬ－２を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＣＬ２１、及びＩＬ－７を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＣＬ２１、及びＩＬ－１５を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＣＬ２１、及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＣＬ２１、及びＩＬ－１８を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＣＬ２１、及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＣＬ２１、及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／またはＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－α、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－α、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－α、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－α、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＸＣＬ２１をさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／または４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－β、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＸＣＬ２１をさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／または４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＴＲＡＩＬ、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＴＲＡＩＬ、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＴＲＡＩＬ、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＴＲＡＩＬ、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＸＣＬ２１をさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／または４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＳＴＩＮＧ、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＳＴＩＮＧ、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＳＴＩＮＧ、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＳＴＩＮＧ、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＸＣＬ２１をさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／または４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＸＣＬ２１をさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／または４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、シトシンデアミナーゼ、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、シトシンデアミナーゼ、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、シトシンデアミナーゼ、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、シトシンデアミナーゼ、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＸＣＬ２１をさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／または４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－α、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－α、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－α、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－α、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／または４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－β、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－β、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－β、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＭＩＰ１－β、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／または４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ９、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ９、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ９、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ９、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／または４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１０、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１０、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１０、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１０、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／または４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１１、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１１、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１１、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＸＣＬ１１、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／または４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＣＬ２１、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＣＬ２１、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＣＬ２１、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＣＬ２１、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／または４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－１２、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－１２、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－１２、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－１２、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－γ、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－γ、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－γ、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＦＮ－γ、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－２、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－２、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－２、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－２、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－７、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－７、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－７、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－７、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－１５、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－１５、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－１５、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－１５、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－３６－γ、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－３６－γ、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－３６－γ、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－３６－γ、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－１８、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－１８、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－１８、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＩＬ－１８、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、ＣＤ４０Ｌ、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。

いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、４１ＢＢ－Ｌ、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、４１ＢＢ－Ｌ、及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、４１ＢＢ－Ｌ、及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞（例えば、ＭＳＣ）は、４１ＢＢ－Ｌ、及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／またはシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／またはＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。

分泌シグナル
一般に、１つ以上のエフェクター分子は、エフェクター分子のＮ末端に分泌シグナルペプチド（シグナルペプチドまたはシグナル配列とも称される）を含み、分泌または膜挿入を目的とした新たに合成されたタンパク質を適切なタンパク質プロセシング経路に指向する。エフェクター分子と作動可能に結合する分泌シグナルペプチドは、天然分泌シグナルペプチド、天然分泌シグナルペプチド（例えば、所与のエフェクター分子と一般に内因的に関連する分泌シグナルペプチド）であり得る。エフェクター分子と作動可能に結合する分泌シグナルペプチドは、非天然分泌シグナルペプチド、天然分泌シグナルペプチドであり得る。非天然分泌シグナルペプチドは、腫瘍微小環境などの特定の環境において、分泌の維持などの発現及び機能の改善を促進することができる。非天然分泌シグナルペプチドの非限定的な例を表５に示す。

（表５）例示的なシグナル分泌ペプチド

細胞型
本開示は、複数のエフェクター分子を産生するように操作された間葉系幹細胞（ＭＳＣ）（例えば、ヒトＭＳＣ）に言及する。本明細書で提供されるように、操作された細胞（エフェクター分子を産生するように操作された）は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、及び制御性Ｔ細胞（Ｄ４^＋、ＦＯＸＰ３^＋、ＣＤ２５^＋））から選択することもできる。しかしながら、ＭＳＣ操作へのあらゆる言及は、他の細胞型（例えば、免疫系の細胞型）にも適用することができることを理解されたい。

いくつかの実施形態では、操作された細胞（例えば、ＭＳＣ）は、骨髄からである（例えば、それから得られるか、または由来する）。いくつかの実施形態では、操作された間葉系幹細胞は、脂肪組織からである（例えば、それから得られるか、または由来する）。いくつかの実施形態では、操作された間葉系幹細胞は、臍帯からである（例えば、それから得られるか、または由来する）。いくつかの実施形態では、操作された間葉系幹細胞は、多能性幹細胞（例えば、胚性幹細胞または人工多能性幹細胞）からである。

したがって、本開示は、複数のエフェクター分子を産生するように操作されたＴ細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、または制御性Ｔ細胞（ＣＤ４^＋、ＦＯＸＰ３^＋、ＣＤ２５^＋））を提供し、そのうちの少なくとも２つは、異なる腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞は、複数のエフェクター分子を産生するように操作され、そのうちの少なくとも２つは、異なる腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は、複数のエフェクター分子を産生するように操作され、そのうちの少なくとも２つは、異なる腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する。いくつかの実施形態では、ＮＫＴ細胞は、複数のエフェクター分子を産生するように操作され、そのうちの少なくとも２つは、異なる腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する。いくつかの実施形態では、自然リンパ球系細胞は、複数のエフェクター分子を産生するように操作され、そのうちの少なくとも２つは、異なる腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する。いくつかの実施形態では、肥満細胞は、複数のエフェクター分子を産生するように操作され、そのうちの少なくとも２つは、異なる腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する。いくつかの実施形態では、好酸球は、複数のエフェクター分子を産生するように操作され、そのうちの少なくとも２つは、異なる腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する。いくつかの実施形態では、好塩基球は、複数のエフェクター分子を産生するように操作され、そのうちの少なくとも２つは、異なる腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する。いくつかの実施形態では、マクロファージは、複数のエフェクター分子を産生するように操作され、そのうちの少なくとも２つは、異なる腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する。いくつかの実施形態では、好中球は、複数のエフェクター分子を産生するように操作され、そのうちの少なくとも２つは、異なる腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する。いくつかの実施形態では、樹状細胞は、複数のエフェクター分子を産生するように操作され、そのうちの少なくとも２つは、異なる腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する。

いくつかの実施形態では、エフェクター分子の少なくとも１つは、腫瘍微小環境における免疫刺激メカニズムを刺激し、及び／または腫瘍微小環境における免疫抑制メカニズムを阻害する。

いくつかの実施形態では、エフェクター分子の少なくとも１つは、（ａ）Ｔ細胞シグナル伝達、活性、及び／または動員を刺激し、（ｂ）抗原提示及び／またはプロセシングを刺激し、（ｃ）ナチュラルキラー細胞媒介細胞傷害性シグナル伝達、活性、及び／または動員を刺激し、（ｄ）樹状細胞分化及び／または成熟を刺激し、（ｅ）免疫細胞動員を刺激し、（ｆ）炎症誘発性マクロファージシグナル伝達、活性、及び／または動員を刺激するか、または抗炎症性マクロファージシグナル伝達、活性、及び／または動員を阻害し、（ｇ）間質分解を刺激し、（ｈ）免疫刺激性代謝産物産生を刺激し、（ｉ）Ｉ型インターフェロンシグナル伝達を刺激し、（ｊ）負の共刺激シグナル伝達を阻害し、（ｋ）抗腫瘍免疫細胞のアポトーシス促進性シグナル伝達を阻害し、（ｌ）制御性Ｔ（Ｔ_ｒｅｇ）細胞シグナル伝達、活性、及び／または動員を阻害し、（ｍ）腫瘍チェックポイント分子を阻害し、（ｎ）インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）シグナル伝達を刺激し、（ｏ）骨髄由来のサプレッサー細胞シグナル伝達、活性、及び／または動員を阻害し、（ｐ）免疫抑制因子／代謝物を分解し、（ｑ）血管内皮成長因子シグナル伝達を阻害し、及び／または（ｒ）腫瘍細胞を直接的に殺傷する。

方法
本明細書でさらに提供されるのは、本開示の操作されたＭＳＣ（または他の操作された免疫細胞）を培養することを含む方法である。ＭＳＣを培養する方法は即知である。いくつかの実施形態では、ＭＳＣは、増殖培地（例えば、ＭＳＣＧＭ ｈｕｍａｎ Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ ＢＵＬＬＥＴＫＩＴ（商標）Ｍｅｄｉｕｍ（血清含有）、ＴＨＥＲＡＰＥＡＫ（商標）ＭＳＣＧＭ－ＣＤ（商標）Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ Ｄｅｆｉｎｅｄ Ｍｅｄｉｕｍ（無血清）、またはＲｏｏｓｔｅｒＢｉｏ無ｘｅｎｏ ＭＳＣ培地）中で培養する。免疫細胞などの他の細胞を培養する方法は、当業者に即知である。

本明細書でさらに提供されるのは、細胞によって産生される少なくとも１つのエフェクター分子をインビボで産生するための、本明細書で提供される操作された細胞を対象（例えば、ヒト対象）に送達または投与することを含む方法である。いくつかの実施形態では、細胞は、静脈内、腹腔内、気管内、皮下、腫瘍内、経口、肛門、鼻腔内（例えば、送達粒子に封入される）、または動脈（例えば、内頸動脈）経路を介して投与される。したがって、細胞は、全身的または局所的に（例えば、ＴＭＥに）投与され得る。

本明細書に記載の操作された細胞またはポリヌクレオチドは、薬学的に許容される担体、例えば、水性担体を含む組成物中にあり得る。様々な水性担体は、例えば、水、緩衝水、０．９％生理食塩水、０．３％グリシン、ヒアルロン酸などを使用することができる。これらの組成物は、従来の滅菌技法によって滅菌され得るか、または滅菌濾過され得る。得られた水性溶液は、そのままで使用するために包装するか、または凍結乾燥することができ、凍結乾燥された調製物は、投与前に滅菌溶液と組み合わされる。組成物は、ｐＨ調整剤及び緩衝剤、張性調整剤、湿潤剤など、例えば、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、モノラウリン酸ソルビタン、オレイン酸トリエタノールアミンなどの生理的条件に近づけるために必要とされる、薬学的に許容される補助物質を含み得る。

いくつかの方法は、腫瘍（またはがん）を有する対象（または患者集団）を選択し、その対象を操作された細胞で治療することを含む。

本開示の操作された細胞は、いくつかの事例では、卵巣癌などのがんを治療するために使用され得る。他のがんが本明細書に記載される。例えば、操作された細胞は、膀胱腫瘍、脳腫瘍、乳腫瘍、頸部腫瘍、結腸直腸腫瘍、食道腫瘍、神経膠腫、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、肺腫瘍、黒色腫、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、皮膚腫瘍、甲状腺腫瘍、及び／または子宮腫瘍を治療するために使用され得る。

本明細書で提供される方法は、操作された細胞などの操作された細胞の調製物を送達することを含む。調製物は、いくつかの実施形態では、例えば、細胞以外の細胞を５％未満（例えば、４％、３％、２％、または１％未満）で含む、実質的に純粋な調製物である。調製物は、操作された細胞などを１×１０^５細胞／ｋｇ～１×１０^７細胞／ｋｇで含み得る。

本明細書で提供される方法は、インビボでレンチウイルスを送達するなど、本明細書に記載の操作された細胞を産生することができる組成物をインビボで送達することも含む。ウイルス送達系（例えば、レトロウイルスまたはアデノウイルス系）、トランスポゾン（例えば、スリーピングビューティー及びＰｉｇｇｙＢａｃトランスポゾン系）、ＰｈｉＣ３１を使用するか、またはヌクレアーゼを使用してゲノム偽部位に組み込むもの、例えば、ジンクフィンガー（ＺＦ）、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）、または転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）など、ヒト療法における使用について即知であるものを含む、他のインビボ送達メカニズム及び系も使用することができる。

（表６）例示的なエフェクター分子をコードする配列

追加の実施形態
以下に提供されるのは、特定の実施形態を説明する列挙された段落である：
１．
ａ）プロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含む、操作された細胞であって、
式中、
Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、
Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、
操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、
前記操作された細胞。
２．プロモーターが、外因性プロモーターポリヌクレオチド配列を含む、段落１に記載の操作された細胞。
３．プロモーターが、内因性プロモーターを含む、段落１に記載の操作された細胞。
４．ポリヌクレオチドが、式Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２を含む単一のポリヌクレオチドとして転写されることができるように、プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結される、段落１～３のいずれか１つに記載の操作された細胞。
５．リンカーポリヌクレオチド配列が、別個のポリペプチドとしての第４のエフェクター分子及び第２のエフェクター分子の翻訳と作動可能に関連する、段落４に記載の操作された細胞。
６．リンカーポリヌクレオチド配列が、２Ａリボソームスキッピングタグをコードする、段落５に記載の操作された細胞。
７．２Ａリボソームスキップタグが、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、及びＦ２Ａからなる群から選択される、段落６に記載の操作された細胞。
８．リンカーポリヌクレオチド配列が、Ｔ２Ａリボソームスキッピングタグをコードする、段落５に記載の操作された細胞。
９．リンカーポリヌクレオチド配列が、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）をコードする、段落５に記載の操作された細胞。
１０．リンカーポリヌクレオチド配列が、切断可能ポリペプチドをコードする、段落５～９のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１１．切断可能ポリペプチドが、フューリン認識ポリペプチド配列を含む、段落１０に記載の操作された細胞。
１２．リンカーポリヌクレオチド配列が、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列をさらにコードする、段落５～９のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１３．リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードする、段落１～５のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１４．リンカーポリヌクレオチド配列が、第２のプロモーターをコードし、
プロモーターが、式Ｓ１－Ｅ１を含む第１のポリヌクレオチドが転写されることができるように、発現カセットに作動可能に連結され、
第２のプロモーターが、式Ｓ２－Ｅ２を含む第２のポリヌクレオチドが転写されることができるように、発現カセットに作動可能に連結され、第１及び第２のポリヌクレオチドが、別個のポリヌクレオチドである、段落１～３のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１５．プロモーター及び第２のプロモーターが、同一である、段落１４に記載の操作された細胞。
１６．プロモーター及び第２のプロモーターが、異なる、段落１４に記載の操作された細胞。
１７．操作された細胞が、治療的処置を必要とする対象を参照するＨＬＡ型である、段落１～１６のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１８．操作された細胞が、ヒト細胞である、段落１～１７のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１９．ヒト細胞が、対象から単離された細胞である、段落１８に記載の操作された細胞。
２０．単離された細胞が、骨髄、脂肪組織、臍帯、胎児肝臓、筋肉、及び肺組織の群からなる組織から単離される、段落１９に記載の操作された細胞。
２１．操作された細胞が、培養細胞である、段落１～２０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
２２．操作されたＭＳＣが、細胞マーカーＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、及びＣＤ９０＋を含む細胞マーカー表現型を含む、段落１～２１のいずれか１つに記載の操作された細胞。
２３．細胞マーカー表現型が、ＣＤ４５、ＣＤ３４、ＣＤ１４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ７９α、ＣＤ１９、ＨＬＡクラスＩＩ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の細胞マーカーを欠く、または実質的に欠く表現型をさらに含む、段落２２に記載の操作された細胞。
２４．操作されたＭＳＣが、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ４５－、ＣＤ３４－、ＣＤ１４－を含む細胞マーカー表現型、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ７９α－を含む細胞マーカー表現型、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１９－、ＨＬＡクラスＩＩ－を含む細胞マーカー表現型、またはＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０５＋、及びＣＤ１６６＋、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１４－、ＣＤ１９－、ＣＤ３４－、ＣＤ４５－、及びＨＬＡ－ＤＲ－を含む細胞マーカー表現型を含む、段落１～２１のいずれか１つに記載の操作された細胞。
２５．細胞マーカー表現型が、フローサイトメトリーにより決定されたか、または決定されている、段２２～２４のいずれか１つに記載の操作された細胞。
２６．操作された細胞が、Ｔ細胞を含む、段落１～２１のいずれか１つに記載の操作された細胞。
２７．操作された細胞が、ＮＫ細胞を含む、段落１～２１のいずれか１つに記載の操作された細胞。
２８．操作された細胞が、ＮＫＴ細胞を含む、段落１～２１のいずれか１つに記載の操作された細胞。
２９．細胞マーカー表現型が、操作された細胞において発現される第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、もしくは第１及び第２のエフェクター分子についての同族受容体または同族受容体リガンドを含む細胞マーカーをさらに含む、段落２２～２８のいずれか１つに記載の操作された細胞。
３０．受容体が、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＣＣＬ７、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、段落２９に記載の操作された細胞。
３１．プロモーター及び／または第２のプロモーターが、構成的プロモーターを含む、段落１～３０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
３２．構成的プロモーターが、ＣＭＶ、ＥＦＳ、ＳＦＦＶ、ＳＶ４０、ＭＮＤ、ＰＧＫ、ＵｂＣ、ｈＥＦ１ａＶ１、ｈＣＡＧＧ、ｈＥＦ１ａＶ２、ｈＡＣＴｂ、ｈｅＩＦ４Ａ１、ｈＧＡＰＤＨ、ｈＧＲＰ７８、ｈＧＲＰ９４、ｈＨＳＰ７０、ｈＫＩＮｂ、及びｈＵＢＩｂからなる群から選択される、段落３１に記載の操作された細胞。
３３．プロモーターが、ＳＦＦＶプロモーターを含む、段落１～３０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
３４．プロモーター及び／または第２のプロモーターが、誘導性プロモーターを含む、段落１～３０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
３５．誘導性プロモーターが、ｍｉｎＰ、ＮＦｋＢ応答要素、ＣＲＥＢ応答要素、ＮＦＡＴ応答要素、ＳＲＦ応答要素１、ＳＲＦ応答要素２、ＡＰ１応答要素、ＴＣＦ－ＬＥＦ応答要素プロモーター融合物、低酸素応答要素、ＳＭＡＤ結合要素、ＳＴＡＴ３結合部位、インデューサー分子応答性プロモーター、及びそれらのタンデムリピートからなる群から選択される、段落３４に記載の操作された細胞。
３６．第１のシグナルペプチドまたは第２のシグナルペプチドが、それぞれ、第１のエフェクター分子または第２のエフェクター分子に対して本来のものである天然シグナルペプチドを含む、段落１～３５のいずれか１つに記載の操作された細胞。
３７．第１のシグナルペプチドまたは第２のシグナルペプチドが、それぞれ、第１のエフェクター分子または第２のエフェクター分子に対して本来のものではない非天然シグナルペプチドを含む、段落１～３６のいずれか１つに記載の操作された細胞。
３８．非天然シグナルペプチドが、ＩＬ１２、ＩＬ２、最適化ＩＬ２、トリプシノーゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、ネズミＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミンプレタンパク質、アズロシジンプレタンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ６、ＩＬ８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、及びＩＬ２１からなる群から選択される、段落３７に記載の操作された細胞。
３９．第１のシグナルペプチド及び第２のシグナルペプチドが同一である、段落１～３８のいずれか１つに記載の操作された細胞。
４０．第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、コドン最適化ポリヌクレオチド配列を含む、段落１～３９のいずれか１つに記載の操作された細胞。
４１．第１の分泌ポリペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドである、段落１～０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
４２．第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、コドン最適化ポリヌクレオチド配列を含む、段落１～０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
４３．第２の分泌ポリペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドである、段落１～０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
４４．第１のエフェクター分子が、治療クラスから選択され、治療クラスが、サイトカイン、ケモカイン、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境モディファイヤーａ、受容体、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、及び酵素からなる群から選択される、段落１～０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
４５．第２のエフェクター分子が、治療クラスから選択され、治療クラスが、サイトカイン、ケモカイン、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境モディファイヤー、受容体、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、及び酵素からなる群から選択される、段落１～４４のいずれか１つに記載の操作された細胞。
４６．第１のエフェクター分子及び第２のエフェクター分子の治療クラスが異なる、段落４５に記載の操作された細胞。
４７．第１のエフェクター分子及び／または第２のエフェクター分子が、改変エフェクター分子である、段落１～４６のいずれか１つに記載の操作された細胞。
４８．第１のエフェクター分子及び／または第２のエフェクター分子が、細胞膜係留ドメインを含むように改変される、段落４７に記載の操作された細胞。
４９．細胞膜係留ドメインが、膜貫通－細胞内ドメインまたは膜貫通ドメインを含む、段落４８に記載の操作された細胞。
５０．細胞膜係留ドメインが、細胞表面受容体、またはその細胞膜結合部分を含む、段落４８に記載の操作された細胞。
５１．改変エフェクター分子が、細胞表面受容体、またはその細胞膜結合部分を含む融合タンパク質である、段落５０に記載の操作された細胞。
５２．改変エフェクター分子が、エフェクター分子と細胞膜係留ドメインとの間のリンカーをさらに含む、段落４８～５１のいずれか１つに記載の操作された細胞。
５３．発現されると、改変エフェクター分子が、操作された細胞の細胞膜に係留される、段落４７～５２のいずれか１つに記載の操作された細胞。
５４．サイトカインが、ＩＬ１２、ＩＬ７、ＩＬ２１、ＩＬ１８、ＩＬ１５、Ｉ型インターフェロン、及びインターフェロンガンマからなる群から選択される、段落４４～５３のいずれか１つに記載の操作された細胞。
５５．ＩＬ１２サイトカインが、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質である、段落５４に記載の操作された細胞。
５６．ケモカインが、ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－１１融合、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１からなる群から選択される、段落４４～５５のいずれか１つに記載の操作された細胞。
５７．成長因子が、Ｆｌｔ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦからなる群から選択される、段落４４～５６のいずれか１つに記載の操作された細胞。
５８．共活性化分子が、４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌからなる群から選択される、段落４４～５７のいずれか１つに記載の操作された細胞。
５９．腫瘍微小環境モディファイヤーが、アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、及びＨＰＧＥ２からなる群から選択される、段落３４～４１のいずれか１つに記載の操作された細胞。
６０．６０．ＴＧＦベータ阻害剤が、抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－トラップ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、段落５９に記載の操作された細胞。
６１．免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体を含む、段落５９に記載の操作された細胞。
６２．ＶＥＧＦ阻害剤が、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、またはそれらの組み合わせを含む、段落５９に記載の操作された細胞。
６３．第１のエフェクター分子及び第２のエフェクター分子が、ヒト由来エフェクター分子である、段落１～５９のいずれか１つに記載の操作された細胞。
６４．第１のエフェクター分子が、ＩＬ１２を含む、段落１～６３のいずれか１つに記載の操作された細胞。
６５．第１のエフェクター分子が、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質を含む、段落１～６３のいずれか１つに記載の操作された細胞。
６６．ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質である、段落１５に記載の操作された細胞。
６７．第２のエフェクター分子が、ＣＣＬ２１ａを含む、段落６４～６６のいずれか１つに記載の操作された細胞。
６８．ＣＣＬ２１ａが、ヒトＣＣＬ２１ａである、段落６７に記載の操作された細胞。
６９．第２のエフェクター分子が、ＩＬ７を含む、段落６４～６６のいずれか１つに記載の操作された細胞。
７０．ＩＬ７が、ヒトＩＬ７である、段落６９に記載の操作された細胞。
７１．第２のエフェクター分子が、ＩＬ２１を含む、段落６４～６６のいずれか１つに記載の操作された細胞。
７２．ＩＬ２１が、ヒトＩＬ２１である、段落７１に記載の操作された細胞。
７３．発現カセットが、第３のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含むＥ３をさらに含む、段落１～７２のいずれか１つに記載の操作された細胞。
７４．第３のエフェクター分子が、Ｆｌｔ３Ｌを含む、段落７３に記載の操作された細胞。
７５．第３のエフェクター分子が、抗ＰＤ１を含む、段落７３に記載の操作された細胞。
７６．発現カセットが、第４のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含むＥ４をさらに含む、段落７５に記載の操作された細胞。
７７．第４のエフェクター分子が、アデノシンデアミナーゼを含む、段落７６に記載の操作された細胞。
７８．第３のエフェクター分子が、アデノシンデアミナーゼを含む、段落７３に記載の操作された細胞。
７９．第３のエフェクター分子が、ＣＤ４０Ｌを含む、段落７３に記載の操作された細胞。
８０．第３のエフェクター分子が、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質を含む、段落７３に記載の操作された細胞。
８１．第３のエフェクター分子が、ＸＣＬ１を含む、段落７３に記載の操作された細胞。
８２．第２のエフェクター分子が、Ｆｌｔ３Ｌを含む、段落６４に記載の操作された細胞。
８３．第２のエフェクター分子が、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質を含む、段落６４に記載の操作された細胞。
８４．第２のエフェクター分子が、抗ＰＤ１を含む、段落６４に記載の操作された細胞。
８５．第２のエフェクター分子が、ＣＤ４０Ｌを含む、段落６４に記載の操作された細胞。
８６．第１のエフェクター分子がインターフェロンベータを含み、第２のエフェクター分子がＦｌｔ３Ｌを含む、段落１～６３のいずれか１つに記載の操作された細胞。
８７．第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列が、コドン最適化ポリヌクレオチド配列を含む、段落１～８６のいずれか１つに記載の操作された細胞。
８８．第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列が、コドン最適化ポリヌクレオチド配列を含む、段落１～８７のいずれか１つに記載の操作された細胞。
８９．操作された細胞が、プロモーター及び発現カセットをコードするポリヌクレオチド配列を含む、段落１～０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
９０．外因性ポリヌクレオチド配列が、配列番号１４４に示される配列を含む、段落８９に記載の操作された細胞。
９１．外因性ポリヌクレオチド配列が、操作された細胞のゲノムに組み込まれる、段落１～９０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
９２．外因性ポリヌクレオチド配列が、１つ以上のウイルスベクターポリヌクレオチド配列を含む、段落１～９１のいずれか１つに記載の操作された細胞。
９３．１つ以上のウイルスベクターポリヌクレオチド配列が、レンチウイルス、レトロウイルス、レトロトランスポゾン、またはアデノウイルスのポリヌクレオチド配列を含む、段落９２に記載の操作された細胞。
９４．発現カセットが、Ｅ２に続いて、５’から３’の向きで
（Ｌ－Ｓ－Ｅ）_Ｘ
を含む式を含む追加の外因性ポリヌクレオチド配列をさらに含み、
式中、
Ｓが、シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｅが、エフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、
Ｘ＝１～２０であり、
プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、各Ｘについて、対応するシグナルペプチドが、エフェクター分子と作動可能に結合する、
段落１～９３のいずれか１つに記載の操作された細胞。
９５．構築物を含む操作された細胞であって、構築物が、
ａ）ＳＦＦＶプロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、
Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、
Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、
Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、
Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、
Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、
ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、
操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、
前記操作された細胞。
９６．構築物が、配列番号１４４に示されるポリヌクレオチド配列を含む、段落１７に記載の操作された細胞。
９７．操作された細胞が、治療的処置を必要とする対象を参照するＨＬＡ型である、段落１７または段落１８に記載の操作された細胞。
９８．操作された細胞が、ヒト細胞である、段落１７～０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
９９．ヒト細胞が、対象から単離された細胞である、段落０に記載の操作された細胞。
１００．単離された細胞が、骨髄、脂肪組織、臍帯、胎児肝臓、筋肉、及び肺組織の群からなる組織から単離される、段落０に記載の操作された細胞。
１０１．操作された細胞が、培養細胞である、段落１７～０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１０２．操作されたＭＳＣが、細胞マーカーＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、及びＣＤ９０＋を含む細胞マーカー表現型を含む、段落１７～０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１０３．細胞マーカー表現型が、ＣＤ４５、ＣＤ３４、ＣＤ１４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ７９α、ＣＤ１９、ＨＬＡクラスＩＩ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の細胞マーカーを欠く、または実質的に欠く表現型をさらに含む、段落０に記載の操作された細胞。
１０４．操作されたＭＳＣが、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ４５－、ＣＤ３４－、ＣＤ１４－を含む細胞マーカー表現型、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ７９α－を含む細胞マーカー表現型、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１９－、ＨＬＡクラスＩＩ－を含む細胞マーカー表現型、またはＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０５＋、及びＣＤ１６６＋、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１４－、ＣＤ１９－、ＣＤ３４－、ＣＤ４５－、及びＨＬＡ－ＤＲ－を含む細胞マーカー表現型を含む、段落１７～０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１０５．操作された細胞が、Ｔ細胞を含む、段落１７～０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１０６．Ｔ細胞が、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、または制御性Ｔ細胞である、段落１０５に記載の操作された細胞。
１０７．操作された細胞が、ＮＫ細胞を含む、段落１７～０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１０８．操作された細胞が、ＮＫＴ細胞を含む、段落１７～０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１０９．操作された細胞が、単球細胞を含む、段落１７～０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１１０．操作された細胞が、マクロファージを含む、段落１７～０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１１１．操作された細胞が、ＴＩＬを含む、段落１７～０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１１２．外因性ポリヌクレオチド配列が、操作された細胞のゲノムに組み込まれる、段落１７～１１１のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１１３．外因性ポリヌクレオチド配列が、１つ以上のウイルスベクターポリヌクレオチド配列を含む、段落１７～０のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１１４．１つ以上のウイルスベクターポリヌクレオチド配列が、レンチウイルス、レトロウイルス、レトロトランスポゾン、またはアデノウイルスのポリヌクレオチド配列を含む、段落０に記載の操作された細胞。
１１５．１つ以上のウイルスベクターポリヌクレオチド配列が、レンチウイルスポリヌクレオチド配列を含む、段落０に記載の操作された細胞。
１１６．細胞が、各エフェクター分子を分泌する、段落１～１１５のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１１７．第１のエフェクター分子が、第２のエフェクター分子の分泌と比較して１０倍高い比率で分泌される、段落１１６に記載の操作された細胞。
１１８．細胞が、抗原認識受容体をさらに含む、段落１～１１７のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１１９．抗原認識受容体が、５Ｔ４、ＡＤＡＭ９、ＡＤＧＲＥ２、ＡＦＰ、ＡＸＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ６、Ｃ４．４、ＣＡ６、カドヘリン３、カドヘリン６、ＣＣＲ１、ＣＣＲ４、ＣＤ１１７、ＣＤ１２３、ＣＤ１３１、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１６６、ＣＤ２５、ＣＤ２４４、ＣＤ３０、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＤ３３、ＣＤ３５２、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ９３、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、クローディン１８．２、ＣＬＥＣ１２Ａ、ｃＭｅｔ、ＣＳＰＧ４、ＣＴＬＡ、ＤＬＫ１、ＤＬＬ３、ＤＲ５、ＥＧＦＲ、ＥＭＢ、ＥＮＰＰ３、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、エフリンＡ４、ＥＴＢＲ、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＲアルファ、ＦＲｂ、ＦＬＴ３、ＧＡＰＴ、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＦＲａ４、ｇｐＡ３３、ＧＰＣ３、ｇｐＮＢＭ、ＧＰＲＣ５、ＨＥＲ２、ＩＬ－１ＲＡＰ、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１３Ｒａ、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ１ＲＡＰ、インテグリンａＶ、ＫＩＴ、Ｌ１ＣＡＭ、ＬＡＭＰ１、ＬＡＴ２、ルイスＹ、ＬｅＹ、ＬＩＬＲＡ２、ＬＩＬＲＢ２、ＬＩＶ－１、ＬＲＲＣ、ＬＹ６Ｅ、ＭＣＳＰ、メソテリン、ＭＬＣ１、ＭＳ４Ａ３、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１Ｃ、ＭＹＡＤＭ、ＮａＰｉ２Ｂ、ネクチン４、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ３、ＮＹ ＥＳＯ１、Ｏｖａｒｉｎ、Ｐ－カドヘリン、汎Ｅｒｂ２、ＰＩＥＺＯ１、ＰＲＡＭ１、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＲＯＲ１、Ｓ Ａｕｒｅｓ、ＳＣＴ、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＣ２２Ａ１６、ＳＬＣ１７Ａ９、ＳＬＩＴＲＫ６、ＳＰＮＳ３、ＳＳＴＲ２、ＳＴＥＡＰ１、サバイビン、ＴＤＧＦ１、ＴＩＭ１、ＴＲＯＰ２、ＶＳＴＭ１、及びＷＴ１からなる群から選択される抗原を認識する、段落１１８に記載の操作された細胞。
１２０．抗原認識受容体が、抗原結合ドメインを含む、段落１１８または段落１１９に記載の操作された細胞。
１２１．抗原結合ドメインが、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む、段落１２０に記載の操作された細胞。
１２２．抗原結合ドメインが、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、段落１２０に記載の操作された細胞。
１２３．ｓｃＦｖが、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、段落１２２に記載の操作された細胞。
１２４．ＶＨ及びＶＬが、ペプチドリンカーによって分離される、段落１２３に記載の操作された細胞。
１２５．ｓｃＦｖが、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨが重鎖可変ドメインであり、Ｌがペプチドリンカーであり、ＶＬが軽鎖可変ドメインである、段落１２４に記載の操作された細胞。
１２６．抗原認識受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、段落１１８～１２５のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１２７．抗原認識受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、段落１１８～１２５のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１２８．ＣＡＲが、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ９７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１１ａ－ＣＤ１８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１５４細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＺＡＰ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＧＩＴＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＨＶＥＭ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２細胞内シグナル伝達ドメイン、及びＭｙＤ８８細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される、段落１２７に記載の操作された細胞。
１２９．ＣＡＲが、膜貫通ドメインを含み、膜貫通ドメインが、ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ３ゼータ鎖膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０膜貫通ドメイン、ＩＣＯＳ膜貫通ドメイン、ＣＴＬＡ－４膜貫通ドメイン、ＰＤ－１膜貫通ドメイン、ＬＡＧ－３膜貫通ドメイン、２Ｂ４膜貫通ドメイン、及びＢＴＬＡ膜貫通ドメインからなる群から選択される、段落１２７または段落１２８に記載の操作された細胞。
１３０．ＣＡＲが、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間にスペーサー領域を含む、段落１２７～１２９のいずれか１つに記載の操作された細胞。
１３１．細胞の集団であって、段落１～１３０のいずれか１つに記載の操作された細胞のうちのいずれかを含む、細胞の集団。
１３２．細胞の集団が、操作された細胞について濃縮される、段落１９に記載の細胞の集団。
１３３．操作された細胞において発現される第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子が、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子を発現しない集団内の細胞と比較して、成長、生存、または成長及び生存の増加を促進する、段落１９または段落１３２に記載の細胞の集団。
１３４．第１のエフェクター分子が、ＩＬ１２またはＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質である、段落１３３に記載の細胞の集団。
１３５．操作された細胞について濃縮された細胞の集団が、ＩＬ１２受容体１もしくはその増加したレベル、ＩＬ１２受容体２もしくはその増加したレベル、またはＩＬ１２受容体１及びＩＬ１２受容体２もしくはその増加したレベルを発現する、段落１３４に記載の細胞の集団。
１３６．第２のエフェクター分子が、ＩＬ２１である、段落１３３～１３５のいずれかに記載の細胞の集団。
１３７．第２のエフェクター分子が、ＣＣＬ２１である、段落１３３～１３５５のいずれかに記載の細胞の集団。
１３８．操作された細胞について濃縮された細胞の集団が、ＣＣＬ２１受容体またはその増加したレベルを発現する、段落１３７に記載の細胞の集団。
１３９．ＣＣＬ２１受容体が、ＣＣＲ７である、段落１３８に記載の細胞の集団。
１４０．対象において腫瘍細胞に対する細胞媒介免疫応答を刺激する方法であって、方法が、治療有効量の段落１～０のいずれか１つに記載の操作された細胞または段落１９～１３９のいずれかに記載の細胞の集団のうちのいずれかを腫瘍を有する対象に投与することを含む、方法。
１４１．対象において抗腫瘍免疫を提供する方法であって、方法が、治療有効量の段落１～０のいずれか１つに記載の操作された細胞または段落１９～１３９のいずれかに記載の細胞の集団のうちのいずれかをそれを必要とする対象に投与することを含む、方法。
１４２．がんを有する対象を治療する方法であって、方法が、治療有効量の段落１～０のいずれか１つに記載の操作された細胞または段落１９～１３９のいずれかに記載の細胞の集団のうちのいずれかを腫瘍を有する対象に投与することを含む、方法。
１４３．対象において腫瘍体積を減少させる方法であって、方法が、治療有効量の段落１～０のいずれか１つに記載の操作された細胞または段落１９～１３９のいずれかに記載の細胞の集団のうちのいずれかを腫瘍を有する対象に投与することを含む、方法。
１４４．操作された細胞が、対象に由来する、段落１４０～１４３のいずれか１つに記載の方法。
１４５．操作された細胞が、対象に関して同種異系である、段落１４０～１４３のいずれか１つに記載の方法。
１４６．腫瘍が、腺癌、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病（ＢＡＬＬ）、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病（ＴＡＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、膀胱腫瘍、脳腫瘍、乳腫瘍、頸部腫瘍、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、結腸直腸腫瘍、食道腫瘍、神経膠腫、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、肺腫瘍、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、骨髄異形成症、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、形質細胞骨髄腫、前立腺腫瘍、皮膚腫瘍、甲状腺腫瘍、及び子宮腫瘍からなる群から選択される、段落１４０～１４５のいずれか１つに記載の方法。
１４７．腫瘍が、卵巣腫瘍である、段落１４０～１４５のいずれか１つに記載の方法。
１４８．腫瘍が、腹腔空間に位置する腫瘍である、段落１４０～１４７のいずれか１つに記載の方法。
１４９．
ａ）プロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
（Ｌ－Ｓ－Ｅ）_Ｘ
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含む、操作された細胞であって、
式中、
Ｓが、シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｅが、エフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、
Ｘ＝２～２０であり、
プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、（Ｌ－Ｓ－Ｅ）の第１の反復について単位Ｌが存在せず、各Ｘについて、対応するシグナルペプチドが、エフェクター分子と作動可能に結合し、
操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、
前記操作された細胞。
１５０．１つ以上の操作された細胞を含む細胞の集団であって、１つ以上の操作された細胞が、
ａ）プロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、
Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、
Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、
操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、
前記細胞の集団。
１５１．１つ以上の操作された細胞を含む細胞の集団であって、１つ以上の操作された細胞が、
ａ）プロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、
Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、
Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、
操作された細胞において発現される第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子が、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子を発現しない集団内の細胞と比較して、成長、生存、または成長及び生存の増加を促進し、
操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、
前記細胞の集団。
１５２．１つ以上の操作された細胞が、操作された細胞において発現される第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、もしくは第１及び第２のエフェクター分子についての同族受容体または同族受容体リガンドを発現する、段落１５１に記載の細胞の集団。
１５３．第１のエフェクター分子が、ＩＬ１２またはＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質である、段落１５１または段落１５２に記載の細胞の集団。
１５４．第２のエフェクター分子が、ＩＬ２１である、段落１５１～１５３のいずれかに記載の細胞の集団。
１５５．第２のエフェクター分子が、ＣＣＬ２１である、段落１５１～１５３のいずれかに記載の細胞の集団。
１５６．１つ以上の操作された細胞を含む細胞の集団であって、１つ以上の操作された細胞が、構築物を含み、構築物が、
ａ）ＳＦＦＶプロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、
Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、
Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、
Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、
Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、
Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、
ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、
操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、
前記細胞の集団。
１５７．１つ以上の操作された細胞を含む細胞の集団であって、１つ以上の操作された細胞が、構築物を含み、構築物が、
ａ）ＳＦＦＶプロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、
Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、
Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、
Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、
Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、
Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、
ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、
操作された細胞において発現される第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子が、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子を発現しない集団内の細胞と比較して、成長、生存、または成長及び生存の増加を促進し、
操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、
前記細胞の集団。
１５８．構築物が、配列番号１４４に示されるポリヌクレオチド配列を含む、段落０または段落０に記載の細胞の集団。
１５９．１つ以上の受容体または受容体リガンドについて濃縮された細胞の集団を産生する方法であって、１つ以上の細胞が、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子と接触する条件下で１つ以上の細胞を培養することを含み、接触した細胞が、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、もしくは第１及び第２のエフェクター分子について１つ以上の同族受容体または同族受容体リガンドを発現し、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子が、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子の不在下で培養された細胞と比較して、接触した細胞の成長、生存、または成長及び生存を増加させる、方法。
１６０．第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子が、１つ以上の細胞において異種発現され、１つ以上の細胞が、オートクリン様式で、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子と接触する、段落０に記載の方法。
１６１．第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子が、１つ以上の追加の細胞において発現され、１つ以上の細胞は、パラクリン様式で、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子と接触する、段落０に記載の方法。
１６２．１つ以上の追加の細胞が、支持細胞である、段落０に記載の方法。
１６３．１つ以上の細胞が、培地中で培養される、段落０に記載の方法。
１６４．１つ以上の細胞が、可溶性の第１のエフェクター分子、可溶性の第２のエフェクター分子、または可溶性の第１及び第２のエフェクター分子を培地に追加することにより、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子と接触させる、段落０に記載の方法。
１６５．可溶性の第１のエフェクター分子及び／または可溶性の第２のエフェクター分子が、組換えエフェクター分子である、段落０または段落０に記載の方法。
１６６．１つ以上の細胞が、付着条件下で培養される、段落０に記載の方法。
１６７．１つ以上の細胞が、表面と付着する、段落０に記載の方法。
１６８．付着した細胞が、１つ以上の細胞を第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子に曝露することにより、第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、または第１及び第２のエフェクター分子と接触し、表面上に固定化される、段落０に記載の方法。
１６９．第１のエフェクター分子が、ＩＬ１２またはＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質である、段落０～１６８のいずれか１つに記載の方法。
１７０．細胞の集団が、ＩＬ１２受容体β１（ＩＬ１２Ｒβ１）について濃縮され、ＩＬ１２受容体β２（ＩＬ１２Ｒβ２）について濃縮され、またはＩＬ１２Ｒβ１及びＩＬ１２Ｒβ２について濃縮される、段落１６９に記載の方法。
１７１．ＭＳＣの集団が、細胞マーカーＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＩＬ１２Ｒβ１＋、及びＩＬ１２Ｒβ２＋を含む細胞マーカー表現型を含む、段落０に記載の方法。
１７２．細胞マーカー表現型が、ＣＤ４５、ＣＤ３４、ＣＤ１４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ７９α、ＣＤ１９、ＨＬＡクラスＩＩ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の細胞マーカーを欠く、または実質的に欠く表現型をさらに含む、段落０に記載の方法。
１７３．細胞の集団が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、段落０に記載の方法。
１７４．細胞の集団が、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、単球、マクロファージ、または骨髄由来細胞を含む、段落１７３に記載の方法。
１７５．第２のエフェクター分子が、ＩＬ２１である、段落０～１７４のいずれか１つに記載の方法。
１７６．第２のエフェクター分子が、ＣＣＬ２１である、段落０～１７４のいずれか１つに記載の方法。
１７７．細胞の集団が、ＣＣＲ７について濃縮される、段落１７６に記載の方法。
１７８．ＭＳＣの集団が、細胞マーカーＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＩＬ１２Ｒβ１＋、ＩＬ１２Ｒβ２＋、及びＣＣＲ７＋を含む細胞マーカー表現型を含む、段落０に記載の方法。
１７９．細胞マーカー表現型が、ＣＤ４５、ＣＤ３４、ＣＤ１４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ７９α、ＣＤ１９、ＨＬＡクラスＩＩ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の細胞マーカーを欠く、または実質的に欠く表現型をさらに含む、段落０に記載の方法。
１８０．段落０～０のいずれか１つに記載の方法によって産生される１つ以上の受容体または受容体リガンドについて濃縮された、細胞の集団。
１８１．
プロモーターと、
５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットと
を含む、外因性ポリヌクレオチド配列であって、
式中、
Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、
Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結される、
前記外因性ポリヌクレオチド配列。
１８２．プロモーターが、外因性プロモーターポリヌクレオチド配列を含む、段落１８１に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
１８３．プロモーターが、内因性プロモーターを含む、段落１８１に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
１８４．ポリヌクレオチドが、式Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２を含む単一のポリヌクレオチドとして転写されることができるように、プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結される、段落１８１～１８３のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
１８５．リンカーポリヌクレオチド配列が、別個のポリペプチドとしての第１８４のエフェクター分子及び第２のエフェクター分子の翻訳と作動可能に関連する、段落１８４に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
１８６．リンカーポリヌクレオチド配列が、２Ａリボソームスキッピングタグをコードする、段落１８５に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
１８７．２Ａリボソームスキップタグが、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、及びＦ２Ａからなる群から選択される、段落１８６に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
１８８．リンカーポリヌクレオチド配列が、Ｔ２Ａリボソームスキッピングタグをコードする、段落１８５に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
１８９．リンカーポリヌクレオチド配列が、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）をコードする、段落１８５に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
１９０．リンカーポリヌクレオチド配列が、切断可能ポリペプチドをコードする、段落１８５～１８９のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
１９１．切断可能ポリペプチドが、フューリン認識ポリペプチド配列を含む、段落１８１に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
１９２．リンカーポリヌクレオチド配列が、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列をさらにコードする、段落１８５～１８９のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
１９３．リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードする、段落１８１～１８５のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
１９４．リンカーポリヌクレオチド配列が、第２のプロモーターをコードし、
プロモーターが、式Ｓ１－Ｅ１を含む第１のポリヌクレオチドが転写されることができるように、発現カセットに作動可能に連結され、
第２のプロモーターが、式Ｓ２－Ｅ２を含む第２のポリヌクレオチドが転写されることができるように、発現カセットに作動可能に連結され、第１及び第２のポリヌクレオチドが、別個のポリヌクレオチドである、段落１８１～１８３のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
１９５．プロモーター及び第２のプロモーターが、同一である、段落１８１に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
１９６．プロモーター及び第２のプロモーターが、異なる、段落１８１に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
１９７．プロモーター及び／または第２のプロモーターが、構成的プロモーターを含む、段落１８１～１９６のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
１９８．構成的プロモーターが、ＣＭＶ、ＥＦＳ、ＳＦＦＶ、ＳＶ４０、ＭＮＤ、ＰＧＫ、ＵｂＣ、ｈＥＦ１ａＶ１、ｈＣＡＧＧ、ｈＥＦ１ａＶ２、ｈＡＣＴｂ、ｈｅＩＦ４Ａ１、ｈＧＡＰＤＨ、ｈＧＲＰ７８、ｈＧＲＰ９４、ｈＨＳＰ７０、ｈＫＩＮｂ、及びｈＵＢＩｂからなる群から選択される、段落１９７に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
１９９．プロモーターが、ＳＦＦＶプロモーターを含む、段落１８１～１９６のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２００．プロモーター及び／または第２のプロモーターが、誘導性プロモーターを含む、段落１８１～１９６のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２０１．誘導性プロモーターが、ｍｉｎＰ、ＮＦｋＢ応答要素、ＣＲＥＢ応答要素、ＮＦＡＴ応答要素、ＳＲＦ応答要素１、ＳＲＦ応答要素２、ＡＰ１応答要素、ＴＣＦ－ＬＥＦ応答要素プロモーター融合物、低酸素応答要素、ＳＭＡＤ結合要素、ＳＴＡＴ３結合部位、インデューサー分子応答性プロモーター、及びそれらのタンデムリピートからなる群から選択される、段落２００に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２０２．第１のシグナルペプチドまたは第２のシグナルペプチドが、それぞれ、第１のエフェクター分子または第２のエフェクター分子に対して本来のものである天然シグナルペプチドを含む、段落１８１～２０１のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２０３．第１のシグナルペプチドまたは第２のシグナルペプチドが、それぞれ、第１のエフェクター分子または第２のエフェクター分子に対して本来のものではない非天然シグナルペプチドを含む、段落１８１～２０２のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２０４．非天然シグナルペプチドが、ＩＬ１２、ＩＬ２、最適化ＩＬ２、トリプシノーゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、ネズミＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミンプレタンパク質、アズロシジンプレタンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ６、ＩＬ８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、及びＩＬ２１からなる群から選択される、段落２０３に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２０５．第１のシグナルペプチド及び第２のシグナルペプチドが同一である、段落１８１～２０４のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２０６．第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、コドン最適化ポリヌクレオチド配列を含む、段落１８１～２０５のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２０７．第１の分泌ポリペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドである、段落１８１～２０６のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２０８．第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列は、コドン最適化ポリヌクレオチド配列を含む、段落１８１～２０６のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２０９．第２の分泌ポリペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドである、段落１８１～２０８のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２１０．第１のエフェクター分子が、治療クラスから選択され、治療クラスが、サイトカイン、ケモカイン、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境モディファイヤーａ、受容体、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、及び酵素からなる群から選択される、段落１８１～２０８のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２１１．第２のエフェクター分子が、治療クラスから選択され、治療クラスが、サイトカイン、ケモカイン、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境モディファイヤー、受容体、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、及び酵素からなる群から選択される、段落１８１～２１０のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２１２．第１のエフェクター分子及び第２のエフェクター分子の治療クラスが異なる、段落２１１に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２１３．第１のエフェクター分子及び／または第２のエフェクター分子が、改変エフェクター分子である、段落１８１～２１２のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２１４．第１のエフェクター分子及び／または第２のエフェクター分子が、細胞膜係留ドメインを含むように改変される、段落２１３に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２１５．細胞膜係留ドメインが、膜貫通－細胞内ドメインまたは膜貫通ドメインを含む、段落２１４に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２１６．細胞膜係留ドメインが、細胞表面受容体、またはその細胞膜結合部分を含む、段落２１４に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２１７．改変エフェクター分子が、細胞表面受容体、またはその細胞膜結合部分を含む融合タンパク質である、段落２１６に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２１８．改変エフェクター分子が、エフェクター分子と細胞膜係留ドメインとの間のリンカーをさらに含む、段落２１４～２１７のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２１９．発現されると、改変エフェクター分子が、細胞の細胞膜に係留される、段落２１３～２１８のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２２０．サイトカインが、ＩＬ１２、ＩＬ７、ＩＬ２１、ＩＬ１８、ＩＬ１５、Ｉ型インターフェロン、及びインターフェロンガンマからなる群から選択される、段落２１０～２１９のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２２１．ＩＬ１２サイトカインが、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質である、段落２２０に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２２２．ケモカインが、ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－１１融合、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１からなる群から選択される、段落２１０～２２１のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２２３．成長因子が、Ｆｌｔ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦからなる群から選択される、段落２１０～２２２のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２２４．共活性化分子が、４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌからなる群から選択される、段落２１０～２２３のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２２５．腫瘍微小環境モディファイヤーが、アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、及びＨＰＧＥ２からなる群から選択される、段落２１０～２２４のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２２６．ＴＧＦベータ阻害剤が、抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－トラップ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、段落２２５に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２２７．免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体を含む、段落２２５に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２２８．ＶＥＧＦ阻害剤が、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、またはそれらの組み合わせを含む、段落２２５に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２２９．第１のエフェクター分子及び第２のエフェクター分子が、ヒト由来エフェクター分子である、段落１８１～２２５のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２３０．第１のエフェクター分子が、ＩＬ１２を含む、段落１８１～２２９のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２３１．第１のエフェクター分子が、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質を含む、段落１８１～２２９のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２３２．ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質である、段落２３１に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２３３．第２のエフェクター分子が、ＣＣＬ２１ａを含む、段落２３０～２３２のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２３４．ＣＣＬ２１ａが、ヒトＣＣＬ２１ａである、段落２３３に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２３５．第２のエフェクター分子が、ＩＬ７を含む、段落２３０～２３２のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２３６．ＩＬ７が、ヒトＩＬ７である、段落２３５に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２３７．第２のエフェクター分子が、ＩＬ２１を含む、段落２３０～２３２のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２３８．ＩＬ２１が、ヒトＩＬ２１である、段落２３７に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２３９．発現カセットが、第３のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含むＥ３をさらに含む、段落１８１～２３８のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２４０．第３のエフェクター分子が、Ｆｌｔ３Ｌを含む、段落２３９に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２４１．第３のエフェクター分子が、抗ＰＤ１を含む、段落２３９に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２４２．発現カセットが、第４のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含むＥ４をさらに含む、段落２４１に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２４３．第４のエフェクター分子が、アデノシンデアミナーゼを含む、段落２４２に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２４４．第３のエフェクター分子が、アデノシンデアミナーゼを含む、段落２３９に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２４５．第３のエフェクター分子が、ＣＤ４０Ｌを含む、段落２３９に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２４６．第３のエフェクター分子が、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質を含む、段落２３９に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２４７．第３のエフェクター分子が、ＸＣＬ１を含む、段落２３９に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２４８．第２のエフェクター分子が、Ｆｌｔ３Ｌを含む、段落２３０に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２４９．第２のエフェクター分子が、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質を含む、段落２３０に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２５０．第２のエフェクター分子が、抗ＰＤ１を含む、段落２３０に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２５１．第２のエフェクター分子が、ＣＤ４０Ｌを含む、段落２３０に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２５２．第１のエフェクター分子がインターフェロンベータを含み、第２のエフェクター分子がＦｌｔ３Ｌを含む、段落１８１～２２９のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２５３．第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列が、コドン最適化ポリヌクレオチド配列を含む、段落１８１～２５２のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２５４．第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列が、コドン最適化ポリヌクレオチド配列を含む、段落１８１～２５３のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２５５．外因性ポリヌクレオチド配列が、配列番号１４４に示されるポリヌクレオチド配列を含む、段落１８１～２５４のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２５６．
ＳＦＦＶプロモーターと、
５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットと
を含む、外因性ポリヌクレオチド配列であって、
式中、
Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、
Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、
Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、
Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、
Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、
ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結される、
前記外因性ポリヌクレオチド配列。
２５７．ポリヌクレオチド配列が、配列番号１４４に示されるポリヌクレオチド配列を含む、段落２５６に記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２５８．
ＳＦＦＶプロモーターと、
５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットと
を含む、外因性ポリヌクレオチド配列であって、
式中、
Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、
Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、
Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、
Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、
Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、
ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、
ポリヌクレオチドが、式Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２を含む単一のポリヌクレオチドとして転写されることができるように、プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、
ポリヌクレオチド配列が、配列番号１４４に示されるポリヌクレオチド配列を含む、
前記外因性ポリヌクレオチド配列。
２５９．外因性ポリヌクレオチド配列が、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、及びネイキッドプラスミドからなる群から選択される核酸によってコードされる、段落１８１～２５８のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列。
２６０．段落１８１～２５９のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列を含む、発現ベクター。
２６１．発現ベクターが、ウイルスベクターである、段落２６０に記載の発現ベクター。
２６２．ウイルスベクターが、レンチウイルスベクターである、段落２６１に記載の発現ベクター。
２６３．段落１８１～２５９のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列、及び薬学的に許容される担体を含む、組成物。
２６４．段落１８１～２５９のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列、段落２６０～２６２のいずれか１つに記載の発現ベクター、または段落２６３に記載の構築物を含む、単離された細胞。
２６５．単離された細胞が、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、制御性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球系細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、赤血球、血小板細胞、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、ＭＳＣ、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される、段落２６４に記載の単離された細胞。
２６６．単離された細胞が、ＭＳＣである、段落２６４に記載の単離された細胞。
２６７．外因性ポリヌクレオチド配列が、細胞のゲノムに組み込まれる、段落２６４～２６６のいずれか１つに記載の単離された細胞。
２６８．外因性ポリヌクレオチド配列が、１つ以上のウイルスベクターポリヌクレオチド配列を含む、段落２６４～２６７のいずれか１つに記載の単離された細胞。
２６９．１つ以上のウイルスベクターポリヌクレオチド配列が、レンチウイルス、レトロウイルス、レトロトランスポゾン、またはアデノウイルスのポリヌクレオチド配列を含む、段落２６８に記載の単離された細胞。
２７０．１つ以上のウイルスベクターポリヌクレオチド配列が、レンチウイルスポリヌクレオチド配列を含む、段落２６８に記載の単離された細胞。
２７１．操作された細胞が、治療的処置を必要とする対象を参照するＨＬＡ型である、段落２６４～２７０のいずれか１つに記載の単離された細胞。
２７２．操作された細胞が、ヒト細胞である、段落２６４～２７１のいずれか１つに記載の単離された細胞。
２７３．ヒト細胞が、対象から単離された細胞である、段落２７２に記載の単離された細胞。
２７４．単離された細胞が、骨髄、脂肪組織、臍帯、胎児肝臓、筋肉、及び肺組織の群からなる組織から単離される、段落２７３に記載の単離された細胞。
２７５．細胞が、培養細胞である、段落２６４～２７２のいずれか１つに記載の単離された細胞。
２７６．細胞が、細胞マーカーＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、及びＣＤ９０＋を含む細胞マーカー表現型を含む、段落２６４～２７５のいずれか１つに記載の単離された細胞。
２７７．細胞マーカー表現型が、ＣＤ４５、ＣＤ３４、ＣＤ１４、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ７９α、ＣＤ１９、ＨＬＡクラスＩＩ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される１つ以上の細胞マーカーを欠く、または実質的に欠く表現型をさらに含む、段落２７６に記載の単離された細胞。
２７８．細胞が、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ４５－、ＣＤ３４－、ＣＤ１４－を含む細胞マーカー表現型、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ７９α－を含む細胞マーカー表現型、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１９－、ＨＬＡクラスＩＩ－を含む細胞マーカー表現型、またはＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０５＋、及びＣＤ１６６＋、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１４－、ＣＤ１９－、ＣＤ３４－、ＣＤ４５－、及びＨＬＡ－ＤＲ－を含む細胞マーカー表現型を含む、段落２６４～２７５のいずれか１つに記載の単離された細胞。
２７９．細胞マーカー表現型が、細胞において発現される第１のエフェクター分子、第２のエフェクター分子、もしくは第１及び第２のエフェクター分子についての同族受容体または同族受容体リガンドを含む細胞マーカーをさらに含む、段落２６４～２７８のいずれか１つに記載の単離された細胞。
２８０．受容体が、ＩＬ１２ＲＢ１、ＩＬ１２ＲＢ２、ＣＣＬ７、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、段落２７９に記載の単離された細胞。
２８１．細胞が、各エフェクター分子を分泌する、段落２６４～２８０のいずれか１つに記載の単離された細胞。
２８２．第１のエフェクター分子が、第２のエフェクター分子の分泌と比較して１０倍高い比率で分泌される、段落２８１に記載の単離された細胞。
２８３．細胞が、抗原認識受容体をさらに含む、段落２６４～２８２のいずれか１つに記載の単離された細胞。
２８４．抗原認識受容体が、抗原結合ドメインを含む、段落２８３に記載の単離された細胞。
２８５．抗原結合ドメインが、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む、段落２８４に記載の単離された細胞。
２８６．抗原結合ドメインが、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、段落２８４に記載の単離された細胞。
２８７．ｓｃＦｖが、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、段落２８６に記載の単離された細胞。
２８８．ＶＨ及びＶＬが、ペプチドリンカーによって分離される、段落２８７に記載の単離された細胞。
２８９．ｓｃＦｖが、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬまたはＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨが重鎖可変ドメインであり、Ｌがペプチドリンカーであり、ＶＬが軽鎖可変ドメインである、段落２８８に記載の単離された細胞。
２９０．抗原認識受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、段落２８３～２８９のいずれか１つに記載の単離された細胞。
２９１．抗原認識受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、段落２８３～２８９のいずれか１つに記載の単離された細胞。
２９２．ＣＡＲが、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、１つ以上の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ９７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１１ａ－ＣＤ１８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１５４細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＺＡＰ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＧＩＴＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＨＶＥＭ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２細胞内シグナル伝達ドメイン、及びＭｙＤ８８細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される、段落２９１に記載の単離された細胞。
２９３．ＣＡＲが、膜貫通ドメインを含み、膜貫通ドメインが、ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ３ゼータ鎖膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０膜貫通ドメイン、ＩＣＯＳ膜貫通ドメイン、ＣＴＬＡ－４膜貫通ドメイン、ＰＤ－１膜貫通ドメイン、ＬＡＧ－３膜貫通ドメイン、２Ｂ４膜貫通ドメイン、及びＢＴＬＡ膜貫通ドメインからなる群から選択される、段落２９１または段落２９２に記載の単離された細胞。
２９４．ＣＡＲが、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間にスペーサー領域を含む、段落２９１～２９３のいずれか１つに記載の単離された細胞。
２９５．段落１８１～２５９のいずれか１つに記載の外因性ポリヌクレオチド配列、または段落２６０～２６２のいずれか１つに記載の発現ベクターを含む、ウイルス。
２９６．ウイルスが、レンチウイルス、レトロウイルス、レトロトランスポゾン、及びアデノウイルスからなる群から選択される、段落２９５に記載のウイルス。
２９７．ウイルスが、レンチウイルスである、段落２９５に記載のウイルス。
２９８．対象において腫瘍体積を減少させる方法であって、方法が、腫瘍の体積を減少させるための有効量で、腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する複数のエフェクター分子を産生するように操作された細胞を含む組成物を、腫瘍を有する対象に送達することを含み、操作された細胞が、
ａ）プロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、
Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、
Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、
操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、
前記方法。
２９９．対象において腫瘍体積を減少させる方法であって、方法が、腫瘍の体積を減少させるための有効量で、ＩＬ１２及びＩＬ２１を産生するように操作された細胞を含む組成物を、腫瘍を有する対象に送達することを含み、操作された細胞が、構築物を含み、構築物が、
ａ）ＳＦＦＶプロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、
Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、
Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、
Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、
Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、
Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、
ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、
操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、
前記方法。
３００．構築物が、配列番号１４４に示されるポリヌクレオチド配列を含む、段落０に記載の方法。
３０１．方法が、チェックポイント阻害剤を投与することをさらに含む、段落２９８～３００のいずれか１つに記載の方法。
３０２．チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－１Ｌ抗体、または抗ＣＴＬＡ－４抗体である、段落０に記載の方法。
３０３．方法が、抗ＣＤ４０抗体を投与することをさらに含む、段落２９８～３０２のいずれか１つに記載の方法。
３０４．腫瘍が、腺癌、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病（ＢＡＬＬ）、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病（ＴＡＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、膀胱腫瘍、脳腫瘍、乳腫瘍、頸部腫瘍、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、結腸直腸腫瘍、食道腫瘍、神経膠腫、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、肺腫瘍、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、骨髄異形成症、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、形質細胞骨髄腫、前立腺腫瘍、皮膚腫瘍、甲状腺腫瘍、及び子宮腫瘍からなる群から選択される、段落２９８～３０３のいずれか１つに記載の方法。
３０５．腫瘍が、卵巣腫瘍である、段落２９８～３０３のいずれか１つに記載の方法。
３０６．腫瘍が、腹腔空間に位置する腫瘍である、段落２９８～３０３のいずれか１つに記載の方法。
３０７．投与が、全身投与、腹腔内投与、または腫瘍内投与を含む、段落２９８～３０６のいずれか１つに記載の方法。
３０８．腫瘍の体積が、対照と比較して少なくとも２５％減少し、任意選択で、対照が未改変細胞である、段落２９８～３０７のいずれか１つに記載の方法。
３０９．腫瘍の体積が、対照と比較して少なくとも５０％減少し、任意選択で、対照が未改変細胞である、段落３０７に記載の方法。
３１０．腫瘍の体積が、対照と比較して少なくとも７５％減少し、任意選択で、対照が未改変細胞である、段落３０９に記載の方法。
３１１．対象において腫瘍体積を減少させる方法であって、方法が、腫瘍の体積を減少させるための有効量で、腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する複数のエフェクター分子を産生するように細胞を操作することができる組成物を、腫瘍を有する対象に送達することを含み、各操作された細胞が、
ａ）プロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、
Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、
Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、
操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、
前記方法。
３１２．対象において腫瘍体積を減少させる方法であって、方法が、腫瘍の体積を減少させるための有効量で、ＩＬ１２及びＩＬ２１を産生するように細胞を操作することができる組成物を、腫瘍を有する対象に送達することを含み、操作された細胞が、構築物を含み、構築物が、
ａ）ＳＦＦＶプロモーターと、
ｂ）５’から３’の向きで
Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
を含み、
式中、
Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、
Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、
Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、
Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、
Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、
ＳＦＦＶプロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、
操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、
前記方法。
３１３．構築物が、配列番号１４４に示されるポリヌクレオチド配列を含む、段落０に記載の方法。
３１４．組成物が、ウイルス系、トランスポゾン系、及びヌクレアーゼゲノム編集系からなる群から選択される送達系を含む、段落３１１～３１３のいずれか１つに記載の方法。
３１５．ウイルス系が、レンチウイルス、レトロウイルス、レトロトランスポゾン、及びアデノウイルスからなる群から選択される、段落０に記載の方法。
３１６．ヌクレアーゼゲノム編集系が、ジジンクフィンガー系、ＴＡＬＥＮ系、及びＣＲＩＳＰＲ系からなる群から選択される、段落０に記載の方法。
３１７．腫瘍が、腺癌、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性Ｂ細胞白血病（ＢＡＬＬ）、急性リンパ芽球性Ｔ細胞白血病（ＴＡＬＬ）、Ｂ細胞前リンパ球性白血病、膀胱腫瘍、脳腫瘍、乳腫瘍、頸部腫瘍、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、結腸直腸腫瘍、食道腫瘍、神経膠腫、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、肺腫瘍、リンパ腫、黒色腫、中皮腫、骨髄異形成症、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、形質細胞骨髄腫、前立腺腫瘍、皮膚腫瘍、甲状腺腫瘍、及び子宮腫瘍からなる群から選択される、段落３１１～３１６のいずれか１つに記載の方法。
３１８．投与が、全身投与、腹腔内投与、または腫瘍内投与を含む、段落３１１～３１７のいずれか１つに記載の方法。

実施例１
この実施例では、個々及び組み合わせの免疫療法ペイロードを伴うＭＳＣのインビトロでの特徴付けについて記載する。がん細胞に対する免疫療法発現ＭＳＣの直接的な抗がん効果を最初に測定する。次に、初代免疫細胞（Ｔ細胞に焦点を当てる）及びがん細胞との共培養での免疫療法発現ＭＳＣの有効性を測定する。免疫療法発現ＭＳＣの免疫刺激特性は、マウス及びヒトの両方の細胞系における炎症性バイオマーカーパネルに基づいてランク付けされる。それ自体で、またはＴ細胞と共にのいずれかでがん細胞殺傷を有意に増強する免疫療法発現ＭＳＣを特定し、インビボ試験に進むための上位の候補を選択する。

方法：免疫療法発現ＭＳＣは、表１に列挙したエフェクター分子を発現するように操作され、がん療法に関連するインビトロモデルを使用してその機能的有効性を評価される。ヒト卵巣癌細胞（例えば、ＯＶＣＡＲ８及びＳＫＯＶ３）、及び循環ＰＢＭＣから単離したヒト免疫細胞は、ｈＩＴを発現するｈＭＳＣを試験するために使用される。マウス卵巣癌細胞（例えば、ＩＤ８）、及びマウス免疫細胞は、ｍＩＴを発現するｍＭＳＣを試験するために使用される。

チェックポイント阻害剤。細胞結合アッセイは、発現した抗体の活性を確認するために使用される。抗体の標的であるＣＴＬＡ４及びＰＤ１の両方がＴ細胞を負に制御するが、それらはＴ細胞活性化の異なる段階で上方制御される（Ｂｏｕｔｒｏｓ Ｃ，ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ１３（８）：４７３－４８６、Ｖａｌｓｅｃｃｈｉ ＭＥ（２０１５）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ３７３（１３）：１２７０－１２７０）。ＣＴＬＡ４は、プライミング期で一時的に上方制御され、ＰＤ１は、Ｔ細胞活性化のエフェクター期で一貫して発現する（Ｐａｒｄｏｌｌ ＤＭ （２０１２）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ１２（４）：２５２－２６４、Ｌｅｇａｔ Ａ，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ４：４５５）。抗ＣＴＬＡ４抗体は、Ｔ細胞表面上のＣＴＬＡ４と結合し、初期段階でＴ細胞の活性化を停止するＣＴＬＡ４を遮断し、ヒト抗ＰＤ１抗体は、ＰＤ１と結合し、Ｔ細胞の活性を阻害する腫瘍細胞を防ぐ。

Ｔ細胞は、ＥＡＳＹＳＥＰ（商標）磁気ビーズ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用して負の選択によってＰＢＭＣから単離される。単離されたＴ細胞は、Ｈｕｍａｎ Ｔ－Ａｃｔｉｖａｔｏｒ ＣＤ３／２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）によって活性化され、ＣＴＬＡ－４及びＰＤ－１の発現を５日間にわたってモニターされ、各表面マーカーの発現の最適なタイミングについて選択する。適切な日に、ＣＴＬＡ－４もしくはＰＤ－１に対する抗体を発現するＭＳＣからの馴化培地、または非発現ＭＳＣからの対照馴化培地を活性化Ｔ細胞に適用して、これらの抗体の直接的な細胞表面受容体結合を検証する。フローサイトメトリーと一緒に蛍光色素標識二次検出抗体は、結合を確認する必要がある。

ケモカイン。ＣＣＬ２１ケモカインの機能は、細胞遊走アッセイ、及びＣＣＬ２１ケモタキシスに応答するケモカイン受容体ＣＣＲ７を発現する単離したナイーブＴ細胞を使用して確認する。詳細には、ＣＣＬ２１発現または対照ＭＳＣをトランスウェルの一方の区画に追加し、次に細胞遊走を他方の区画から単離されたナイーブＴ細胞によって評価し、続いて遊走したＴ細胞の数を数える（Ｊｕｓｔｕｓ ＣＲ，ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｊ Ｖｉｓ Ｅｘｐ（８８））。

サイトカイン。ＩＬ２、ＩＬ１２、及びＩＬ１５の活性を測定する。ＩＬ２、ＩＬ１２、及びＩＬ１５に特異的なＥＬＩＳＡアッセイは、ＭＳＣ上清中のこれらのサイトカインのレベルを検出するために使用される。機能的生物活性アッセイは、ＣＴＬＬ－２細胞株を用いてＩＬ２もしくはＩＬ１５媒介増殖を評価するか、またはＮＫＧ細胞株を用いてＭＳＣ上清によるＩＬ１２媒介ＩＦＮ－ガンマ産生を評価する。ＬＵＭＩＮＥＸ（登録商標）テクノロジーを使用する多重サイトカイン特性アッセイを使用して、サイトカイン発現及び免疫細胞への影響を評価することもできる。

ＳＴＩＮＧ経路。ＳＴＩＮＧ経路活性化は、構成的なＳＴＩＮＧ変異ペイロードで測定される。ＬＵＭＩＮＥＸ（登録商標）ビーズを使用して、ＳＴＩＮＧ変異の発現を伴うＩ型インターフェロン（例えば、ＩＦＮ－アルファ２及びＩＦＮ－ベータ）の分泌をＭＳＣにおいて特徴付けする。

卵巣癌細胞に対する免疫療法発現ＭＳＣの直接的な有効性。卵巣癌細胞の成長及び生存率に対するＭＳＣのあらゆる直接的な有効性を、インビトロで試験する。例えば、ｍＭＳＣまたはｈＭＳＣ候補は、マウス卵巣癌細胞株（ＩＤ８）またはヒト卵巣癌細胞株（ＯＶＣＡＲ８及びＳＫＯＶ３）と共培養し、がん細胞の細胞傷害性は、十分に特徴付された乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）アッセイによって測定される。共培養の２４時間後、上清を収集し、その後プレートリーダー上で比吸光度によって定量化される、酵素反応を介して細胞死と相関するＬＤＨレベルを測定する。さらに、がん細胞数は、トリパンブルー排除による生対死細胞のカウント、ならびにアネキシンＶ及びヨウ化プロピジウム染色を使用するフローサイトメトリー測定による生対アポトーシス／死細胞のカウントによって評価される。

Ｔ細胞及び卵巣癌細胞共培養系に対する免疫療法発現ＭＳＣの有効性。試験は、免疫療法発現ＭＳＣがＴ細胞などの免疫細胞を刺激して、インビトロで卵巣癌細胞に対する抗がん活性を改善したかどうかを決定する。詳細には、ｍＭＳＣ－ｍＩＴ候補は、マウス脾細胞及びＩＤ８癌細胞株と共培養されるか、またはｈＭＳＣ－ｈＩＴ候補は、ヒトＰＢＭＣ及びＯＶＣＡＲ８もしくはＳＫＯＶ３細胞株と共培養される。共培養アッセイは、ＭＳＣを伴うかまたは伴わずに、卵巣癌細胞と共にＰＢＭＣ／脾細胞を使用し、抗ＣＤ３／２８ビーズで刺激する。がん細胞死を評価するために、１６時間の殺傷アッセイは、ＬＤＨ細胞傷害性測定、色素標識卵巣癌細胞と非標識エフェクターＰＢＭＣ／脾細胞との一定の比率での組み合わせ、フローサイトメトリーによる殺傷のアッセイ（Ｊｅｄｅｍａ Ｉ，ｅｔ ａｌ．（２００４）Ｂｌｏｏｄ１０３（７）：２６７７－２６８２）、ヨウ化プロピジウムを含むアネキシンＶを使用するフローサイトメトリーによるアポトーシスの読み取りなどの手法を使用して実施される。Ｔ細胞活性化／増殖は、３～５日でのＣＦＳＥ細胞分裂、及び１～３日でのＩＦＮ－ガンマのサイトカイン産生によって特異的にアッセイされる。

ＣＴＬＡ－４及びＰＤ１を発現するＴ細胞を生成する代替的な戦略は、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）で活性化して、細胞表面受容体ＰＤ１及びＣＴＬＡ４を発現させることである。３日目に、約９９％の活性化Ｔ細胞がＰＤ１を発現し、約１５％がＣＴＬＡ４を発現するであろう（Ｐａｒｄｏｌｌ ＤＭ（２０１２）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ１２（４）：２５２－２６４、Ｌｅｇａｔ Ａ，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ４：４５５）。１０日目に、ＣＴＬＡ４発現が下方制御されるが、ＰＤ１発現が維持されている場合、活性化Ｔ細胞はエフェクター期にあるはずである。これらの抗体の直接的な細胞表面受容体結合を評価する。誘導後３日目及び１０日目に、それぞれのチェックポイント阻害剤抗体発現構築物を伴うＭＳＣをＴ細胞培養に適用する。標識検出抗体は、結合を確認するためにフローサイトメトリーと一緒に使用される。市販の抗体を対照として使用される。

実施例２
この実施例では、同系卵巣癌モデルにおいて免疫療法ペイロードを発現するＭＳＣのインビボでの特徴付けについて記載する。免疫療法発現ＭＳＣの抗腫瘍効果は、卵巣癌の同系マウスモデル（マウス免疫系を備えたｍＭＳＣ－ｍＩＴ）を使用して特徴付けられる。同系卵巣マウスモデルにおける操作されたＭＳＣの腫瘍ホーミング、ならびに個々及び組み合わせ免疫療法の発現を測定する。操作されたＭＳＣ治療による卵巣腫瘍量及びマウス生存も測定される。この実施例は、ＴＭＥへの操作されたＭＳＣの選択的ホーミング、及び卵巣腫瘍対他の身体部位における免疫療法因子の局所的産生を実証するであろう。この実施例はまた、免疫療法発現の操作されたＭＳＣによる腫瘍量の有意な減少及びマウス生存の延長を実証するであろう。

方法：マウス卵巣上皮表面細胞（ＭＯＳＥ）の自発的形質転換に由来するマウスＩＤ８細胞株を使用して、同系卵巣腫瘍モデルを作製する（Ｒｏｂｙ ＫＦ，ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ２１（４）：５８５－５９１）。ＩＤ８細胞株の誘導体も使用される（例えば、ＩＤ８－ＶＥＧＦ（ＩＤ８－Ｄｅｆｂ２９／Ｖｅｇｆ－ａ）、ＩＤ８－Ｐ５３ＤＮ、ＩＤ８－Ｐ５３ＫＯ－ＰＴＥＮ ＫＯ、ＩＤ８－Ｐ５３ＫＯ－ＢＲＣＡ２ ＫＯ、ＩＤ８－Ｐ５３ＫＯ－ＢＲＣＡ１ ＫＯ、ＩＤ８－ＰＤ５３ＫＯ－Ｎｆ１ＫＯ）。ＩＤ８細胞株を、ウミシイタケシフェラーゼ（ｒＬｕｃ）を発現するレンチウイルスに感染させ、ホタルルシフェラーゼ（ｆｆＬｕｃ）を発現するＭＳＣに直交するインビボ生物発光イメージングを可能にする。成功したｒＬｕｃ発現は、マウスにおける同系卵巣癌モデルを確立する前に、インビトロでＩＤ８を確認する。同系モデルの場合、５×１０^５個のＩＤ８細胞を、６～８週齢のＣ５７ＢＬ／６マウスの腹腔内に注入する（３６、５４）。ＭＳＣは、ｆｆＬｕｃ発現プラスミドと共に、実施例１のように操作される。

ｍＭＳＣ－ｍＩＴ候補は、２５日目（腫瘍細胞注入後）に開始して、動物１匹あたり１０^６ＭＳＣの用量で週１回５週間、同系マウスモデルに導入される（Ｄｅｍｂｉｎｓｋｉ ＪＬ，ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ１５（１）：２０－３２）。卵巣腫瘍量及びｍＭＳＣ－ｍＩＴ候補は、それぞれｒＬｕｃ及びｆｆＬｕｃ生物発光イメージング、ならびに終末時点後の組織学的分析を通じて経時的に視覚化される。マウスは、体重減少、毛の波打ち、貧弱な身体姿勢、腹部膨隆、及び黄疸などの貧苦の兆候が発症した場合は安楽死させる。マウスの生存曲線を測定する。腫瘍細胞の遠位転移は、生物発光イメージング（ＢＬＩ）及び安楽死時の剖検によって定量化する。免疫系特性及び活性は、療法に対する応答のバイオマーカーとして異なる時点で測定される。

ＭＳＣの予想される抗腫瘍効果の変動性を評価するために、モデルを確立するために使用されるＩＤ８細胞の用量を変動させ（例えば、細胞数を５×１０^６に増加させる）、使用するＭＳＣの用量を変更し、ＭＳＣが腫瘍確立後に送達される時間を調整する。

ｍＭＳＣは、マウスモデルにおいて卵巣腫瘍にホーミングすることが示されているが、一部のペイロードがこのホーミング活性を妨害する可能性がある。これらの事例では、これらのペイロードの発現は、誘導性であるように操作され得る。これは、例えば、フロレチン誘導性系で達成することができる（Ｇｉｔｚｉｎｇｅｒ Ｍ，ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ１０６（２６）：１０６３８－１０６４３）。代替的に、二量体化系を使用して、合成ジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメインを小分子を使用してトランス活性化因子ドメインと連結することができる（Ｃｌａｃｋｓｏｎ Ｔ，ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ９５（１８）：１０４３７－１０４４２）。代替的または追加的に、低Ｏ_２などのシグナルに基づいて腫瘍微小環境において誘発される誘導性ペイロード発現構築物を構築することができる。

レンチウイルスｆｆＬｕｃ構築物を使用してＭＳＣを感染させることもできる。

実施例３
この実施例は、ヒト免疫細胞を有するマウスにおけるヒト卵巣癌の異種移植モデルにおいて、免疫療法ペイロードを発現するＭＳＣの有効性のインビボでの特徴付けについて記載する。ＣＤ３４＋細胞移植（ヒト化免疫系を有するｈＭＳＣ－ｈＩＴ）を介してヒト免疫細胞を移植した免疫不全マウスのヒト卵巣癌モデルにおける操作されたＭＳＣの活性を試験する。ヒト免疫細胞を有するマウスのヒト異種移植卵巣腫瘍における操作されたＭＳＣのホーミング、ならびに個々及び組み合わせ免疫療法の発現を測定する。操作されたＭＳＣ治療による卵巣腫瘍量及びマウス生存も試験される。この実施例は、操作されたＭＳＣのホーミングの上昇、及びマウスにおけるヒト異種移植卵巣腫瘍対他の身体部位への免疫療法因子の局所的産生を実証するであろう。この実施例はまた、免疫系組成の変化と相関する免疫療法発現の操作されたＭＳＣによる腫瘍量の有意な減少及びマウス生存の延長を実証するであろう。

方法。操作されたＭＳＣのヒト臨床治験への橋渡しを可能にするために、ｈＭＳＣ－ｈＩＴ構築物をヒトがんのヒト化マウスモデルにおいて試験する。マウスにおける免疫療法発現ｈＭＳＣの有効性は、ＣＤ３４^＋造血幹細胞（ＨＳＣ）を移植した免疫不全マウス（ＮＳＧ）において、ヒト卵巣癌細胞株の異種移植片を使用してモデル化される。

ヒト卵巣癌細胞について、ＯＶＣＡＲ８及びＳＫＯＶ３細胞株を使用する。実施例３に記載されるのと同様のアッセイを使用して、腫瘍量及びマウス生存を経時的に調査する。

２つの代替的アプローチを使用することもできる。（１）ヒトＴ細胞をマウスに注入することができる。（２）ヒトＰＢＭＣをマウスに注入することができる。

発現ベクター：ｐＬ＋ＭＣＳ

実施例４．４Ｔ１トリプルネガティブ乳癌
以下の実験では、ＭＳＣは、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＬ１２、ＩＬ１５、ＩＬ３６γ、ＩＬ７、ＴＲＡＩＬ、ｃＧＡＳ、ＣＣＬ２１ａ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４０Ｌ、またはＨＡＣｖ－ＰＤ１のエフェクター分子のうちの１つを発現するように操作され、次いで同所性乳癌マウスモデルに単独または組み合わせて投与された。いくつかの例では、チェックポイント阻害剤（抗ＣＤ４０、抗ＰＤ１、または抗ＣＴＬＡ－４抗体）を、操作されたＭＳＣ投与と組み合わせて注入した。

ＭＳＣホーミング
以下の実験は、ネズミＭＳＣが乳癌の同所性マウスモデルの腫瘍にホーミングすることを示す。ルシフェラーゼ発現４Ｔ１乳腫瘍細胞（５×１０^５）を、雌のＢＡＬＢ／ｃＪマウスマウスの背側脂肪パッドに同所的に移植した。５日後、マウスに１００万個の蛍光標識（ＸｅｎｏＬｉｇｈｔ ＤｉＲ（Ｃａｌｉｐｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いる）されたネズミＢＭ由来ＭＳＣ（ＢＭ－ＭＳＣ、治療用細胞）を腹腔内注入した。ＭＳＣ注入後１日目及び７日目に、蛍光分析を使用して、Ａｍｉ ＨＴ生動物画像（Ｓｐｅｃｔｒａｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用してＭＳＣ局在を決定した。７日目に、腫瘍局在及びサイズを、Ａｍｉ ＨＴ画像を使用して４Ｔ１細胞のルシフェラーゼ生物発光レポーターを介して決定した。図３に示すように、注入したＭＳＣは腫瘍の部位に共局在し、これらの細胞が実際にインビボで４Ｔ１乳房腫瘍の部位に特異的にホーミングすることを示している。注入したＭＳＣは、１日以内に腫瘍にホーミングし、７日を超えて持続する。対照的に、注入されたＭＳＣは、正常なマウスにおける腫瘍の不在下で、背側にホーミングしない。これらの結果は、ＭＳＣが抗がん分子、タンパク質、または化合物の送達媒体として使用され得ることを示唆する。

操作されたヒトＭＳＣがマウス腫瘍に向けてホーミングすることができるかを決定するために、ＧＦＰ、ＩＬ２、またはＣＣＬ２１ａのいずれかを発現する操作されたヒトＭＳＣの異なる系統を、４Ｔ１腫瘍を有するＢＡＬＢ／ｃマウスに注入した。有効性は、１日おきのノギス測定からの腫瘍体積によって決定された。図１１Ａ～１１Ｂは、ヒトＭＳＣが、マウス４Ｔ１腫瘍にホーミングしないことを示す。

インビボでの有効性
以下の実験は、乳癌の同所性モデルにおいて、免疫療法エフェクター（ペイロード）を発現するＭＳＣのインビトロでの有効性を示す。４Ｔ１－Ｎｅｏ－Ｆｌｕｃマウス乳腫瘍細胞（Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、５×１０^５個の細胞）を、雌のＢＡＬＢ／ｃＪマウス（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）の背側脂肪パッドに同所的に移植した。次に、マウスを腫瘍移植の５日後に治療群に無作為化した。マウスは、対照ＭＳＣ成長培地、または異なる免疫療法エフェクター（ペイロード）を発現する操作されたＭＳＣ（２×１０^６細胞）のいずれかを週に１回、２週間腹腔内注入した。各免疫療法は、異なるＭＳＣによって発現され、ＭＳＣは、組み合わせ治療のために（１：１の比率）組み合わされた。腫瘍成長を１日おきにノギス測定によってモニターし、マウス体重を週に２回記録した。マウスを最初のＭＳＣ治療の１４日後に安楽死させ、組織をさらなる分析のために収集した。

図４は、培地で処理した対照と比較して、組み合わせ遺伝子ＩＬ－１２及びＣＣＬ２１ａを発現する操作されたＭＳＣで処理したマウスにおいて腫瘍増殖が遅延したことを示す。

図５Ａ～５Ｃは、単一の免疫療法エフェクター（例えば、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２、またはＣＣＬ２１ａ）を発現する操作されたＭＳＣが、培地処理マウスと比較して同系４Ｔ１マウス腫瘍の成長を阻害したことを示す。驚くべきことに、免疫療法エフェクターを組み合わせた場合、特にＩＬ－１２及びＣＣＬ２１ａの組み合わせ、ならびにＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２、及びＣＣＬ２１ａの組み合わせが、腫瘍成長に対する相乗的な有効性を観察した。

図６Ａ～６Ｂは、ＯＸ４０Ｌ、ＴＲＡＩＬ、ＩＬ１５、ｃＧＡＳ、またはそれらの組み合わせを発現する操作されたＭＳＣが腫瘍成長を阻害しないことを示す。

図７Ａ～７Ｂは、ＩＬ－１２及びＣＣＬ２１ａを発現する操作されたＭＳＣが腫瘍成長を阻害するが、抗ＣＤ４０抗体の追加が、腫瘍成長を低減しないことを示す。

図８Ａ～８Ｂは、ＯＸ４０Ｌ、ＴＲＡＩＬ、ＩＬ１５、ＨＡＣｖＰＤ－１、またはそれらの組み合わせを発現する操作されたＭＳＣが、皮下乳癌モデルにおいて腫瘍成長を有意に阻害しないことを示す。

図９Ａ～９Ｂは、ＩＬ－１２及びＣＣＬ２１ａを発現する操作されたＭＳＣが腫瘍成長を阻害するが、ＣＣＬ２１ａ、ＩＬ－３６ガンマ、及びＩＬ－７を発現するＭＳＣの組み合わせが腫瘍成長を低減しないことを示す。しかしながら、試験したエフェクターのいくつかの組み合わせは、毒性を引き起こし得る。

用量漸増
用量漸増研究を実施した。この実験は、ＧＦＰを発現する操作されたＭＳＣ細胞が毒性を誘発しないことを決定した（図１０Ａ～１０Ｂ）。

大きな腫瘍への有効性
この実験では、ＩＬ１２及びＣＣＬ２１ａを発現する操作されたマウスＭＳＣが、より大きな腫瘍（８００ｍｍ^３を超える）からの腫瘍量を低減することができるかを試験した。大きな腫瘍は小さな腫瘍よりも治療が困難であり、この実験は、このエフェクターの組み合わせが腫瘍拡大を低減することができることを示す（図１２Ａ～１２Ｂ）。

チェックポイント阻害剤
図１３Ａは、ＩＬ－１２及びＣＣＬ２１を発現する操作されたＭＳＣが、腫瘍成長を阻害するのに十分であるが、注入によるチェックポイント阻害剤（抗ＰＤ－１抗体または抗ＣＴＬＡ－４抗体）の追加が、皮下腫瘍モデルにおいて有効性を増加しないことを示す。

実施例５．ＣＴ２６結腸直腸癌
以下の実験では、ＭＳＣは、ＩＦＮβ、ＩＬ１２、ＩＬ１５、ＩＬ３６γ、ＩＬ７、ＣＣＬ２１ａ、ＨＡＣｖ－ＰＤ１、または４１ＢＢのエフェクター分子のうちの１つを発現するように操作し、次いで結腸直腸癌マウスモデルに単独または組み合わせて投与した。いくつかの例では、チェックポイント阻害剤（抗ＣＤ４０または抗ＣＴＬＡ－４抗体）を、操作されたＭＳＣ投与と組み合わせて注入した。

図１４は、ＩＬ－１２及びＣＣＬ２１ａを発現する操作されたＭＳＣが、有意な腫瘍成長遅延を誘導したことを示す。

図１５は、操作されたＭＳＣ細胞を投与するための最適な時間を決定するための、ＣＴ２６マウスモデルにおける腫瘍成長動態を示す。

インビボでの有効性
以下の実験は、結腸（結腸直腸）癌の皮下マウスモデルにおいて、免疫療法エフェクター（ペイロード）を発現するＭＳＣのインビトロでの有効性を示す。ＣＴ２６－Ｎｅｏ－Ｆｌｕｃマウス結腸癌細胞（Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、５×１０^５）を、雌のＢＡＬＢ／ｃＪマウス（Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）の側腹部に皮下注入した。腫瘍移植の７日後、次にマウスを、対照ＭＳＣ成長培地、操作されたＭＳＣ（ＭＳＣ－１２＋ＣＣＬ２１ａ）、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体（ＢｉｏＸ細胞）、抗ＣＤ４０抗体と組み合わせたＭＳＣ－１２＋ＣＣＬ２１ａ、または抗ＣＴＬＡ４抗体と組み合わせたＭＳＣ－１２＋ＣＣＬ２１ａの治療群に無作為化した。操作されたＭＳＣ（２×１０^６細胞）を、週に１回、２週間（０日目及び７日目）腹腔内（ｉｐ）注入した。抗ＣＤ４０抗体は、０及び３日目にｉｐで注入した（１００μｇ）。抗ＣＴＬＡ４抗体は、０、３、及び７日目にｉｐで注入した（１００μｇ）。腫瘍成長を１日おきにノギス測定によってモニターし、マウス体重を週に２回記録した。マウスを最初のＭＳＣ治療の１１日後に安楽死させ、腫瘍を収集して秤量した。各治療群における個々のマウスの腫瘍重量を測定し、その結果を図１６Ｂの左下に示す（左のグラフ）。各治療群の平均腫瘍体積を経時的にモニターした（図１６Ｂ、右のグラフ）。治療群２（ＩＬ－１２＋ＣＣＬ２１ａ＋抗ＣＴＬＡ４抗体）、４（ＩＬ－１２＋ＣＣＬ２１ａ）、及び７（ＩＬ－１２＋ＣＣＬ２１ａ＋抗ＣＤ４０抗体）は、ＧＦＰ処理マウスと比較してＣＴ２６結腸腫瘍の平均成長を阻害した（図１６Ｂ、右のグラフ）。各治療群における個々のマウスの腫瘍体積を経時的に測定した場合にも、同様の結果を観察した（図１６Ａ）。したがって、免疫療法発現ＭＳＣとの組み合わせ治療は、インビボで結腸癌細胞の成長を阻害した。

図１８Ａは、ＩＬ－１２、ＣＣＬ２１ａ、及びＩＬ１５またはＨＡＣｖＰＤ－１のいずれかを発現する操作されたＭＳＣが、マウスモデル結腸直腸癌における腫瘍成長を有意に阻害することを示す。図１８Ｂは、各治療における個々のマウスの腫瘍重量を示す。図１８Ｃは、腫瘍微小環境内の浸潤免疫集団の代表的なグラフである。図１８Ｄは、全ＣＤ３集団における制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のパーセンテージを示す。操作されたＭＳＣ－ＩＬ２及びＣＣＬ２１ａで治療した腫瘍微小環境におけるＴｒｅｇの数において有意な減少があった。図１８Ｅは、免疫浸潤のパーセンテージを腫瘍重量と相関させた。リンパ球（ＣＤ３＋）が増加した試料は低腫瘍重量と相関し、高骨髄性（ＣＤ１１ｂ＋）浸潤を伴う試料は高腫瘍量と相関することを見出した。

長期生存
注入した抗ＣＤ４０抗体と組み合わせて、異なる濃度の操作されたＭＳＣ－ＩＬ１２及びＣＣＬ２１ａ療法をマウスに２回投与した。第２の用量後、腫瘍量が１５００ｍｍ^３を超えるまで腫瘍体積を週に２回モニターし、マウスを犠牲にした。図１７Ａは、個々の群の腫瘍体積を示す。図１７Ｂの左のグラフは、経時的な個々の群からのマウスの体重及び腫瘍体積を追跡する。図１７Ｂの右のグラフは、異なる群の生存プロットを示す。

ＭＳＣ有効性
図２０Ａは、各治療における個々のマウスの腫瘍体積を示す。図２０Ｂは、各治療における個々のマウスの腫瘍重量を示す。有効性は、１日おきのノギス測定からの腫瘍体積によって決定した。

腫瘍成長動態
図２１Ａ～２１Ｂは、腹腔内空間におけるＣＴ２６－ＬＵＣ（ルシフェラーゼ）腫瘍成長の動態を示す。ＣＴ２６細胞株を０日目に注入し、３（３）匹のマウスを７日目、１０日目、１４日目、及び１８日目に採取して、腫瘍成長の動態を決定した。図２１Ａの第１の行は、腫瘍量をモニタリングするためにＩＶＩＳ画像でマウスの重量及びＲＯＩを測定する。第２の行は、各群における個々のマウスの腫瘍重量及び腫瘍のＲＯＩをモニタリングする。第３の行は、腫瘍の重量を全身ＲＯＩまたは腫瘍ＲＯＩのいずれかと相関させる。図２１Ｂは、腫瘍微小環境をより理解するために、１８日目の群における３（３）匹のマウスの免疫プロファイルを示す。

腫瘍浸潤統計／免疫パーセンテージ／腫瘍重量
皮下マウスモデル
図２２Ａには、ＩＬ－１２及びＣＣＬ２１ａを発現する操作されたＭＳＣが、結腸直腸癌の皮下マウスモデルにおいて腫瘍成長を阻害するが、ＣＣＬ２１ａ及びＩＬ－３６ガンマまたはＩＬ－７を発現するＭＳＣの組み合わせが、腫瘍成長を低減しないことを表すデータが含まれる。図２３Ａ～２３Ｂには、腫瘍免疫浸潤統計が含まれる。ＰＢＳ、ナイーブＭＳＣ、及びＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａ（組み合わせ）群から３匹のマウスを選択して、腫瘍微小環境の免疫プロファイルについてフローサイトメトリーを実行した。図２３Ａは、ナイーブＭＳＣを投与した群と比較して、組み合わせ群において浸潤性ＣＤ３及びＣＤ８細胞傷害性Ｔ集団の有意な増加を示す。図２３Ｂは、ナイーブＭＳＣで治療した群と比較して、組み合わせ群において顆粒球骨髄由来サプレッサー細胞（ｇＭＤＳＣ）及びマクロファージ集団の有意な減少を示す。

図２４Ａ～２４Ｂは、免疫パーセンテージ及び腫瘍重量に関するデータを含み、より多くのＣＤ３＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞を伴う試料（左上及び中央のグラフ）が腫瘍重量の減少と強く相関することを示す。これらの図は、マクロファージ、樹状細胞、及びＭＤＳＣを含むＣＤ１１ｂ骨髄細胞が少ない試料では、腫瘍量がより少ないことをさらに示す（図２４Ａの下中央及び右のグラフならびに図２４Ｂの上段）。

同所性マウスモデル
図２６Ａは、ＩＬ－１２及びＣＣＬ２１ａ、またはＣＣＬ２１ａ及びＩＦＮ－βを発現する操作されたＭＳＣが、結腸直腸癌の同所性マウスモデルにおいて腫瘍増殖を阻害するが、ＣＣＬ２１ａ及びｓ４１ＢＢＬを発現するＭＳＣの組み合わせが、腫瘍成長を低減しないことを示す。各エフェクターは、異なるＭＳＣによって発現され、ＭＳＣは、組み合わせ治療のために（１：１の比率で）組み合わされた。各チャートは、示された免疫療法を単独で、または組み合わせて発現する操作されたＭＳＣが、マウス（ｎ＝６～８）における４Ｔ１乳腫瘍の成長に対する有効性を示す。図２６Ａの各線は、個々のマウスを表す。図２６Ｂは、各治療における個々のマウスの腫瘍重量を示す。ＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａは、ナイーブＭＳＣを注入したマウスと比較して最高の有効性を示す。治療有効性は、ＭＳＣ－ＩＦＮｂ＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａで治療した群でも観察された。

図２７Ａ～図２７Ｂは、示される操作されたＭＳＣで治療された各群の免疫プロファイルを示すグラフである。マクロファージ集団における一貫した減少を、ＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａでの治療後に観察された。（図２７Ａ）ナイーブＭＳＣに対してＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａで治療された群と比較した場合、ＣＤ３＋集団における増加した浸潤、及びＣＤ１１ｂ＋集団における減少した浸潤の一般的な傾向も観察された（図２７Ａ及び図２７Ｂ）。

図２８Ａ～２８Ｂは、免疫浸潤と腫瘍重量との相関を示す。低いマクロファージ及び樹状細胞を伴う試料は、低い腫瘍量を有する（図２８Ｂ、上中央及び右上）。図２８Ｃは、各群からの平均腫瘍重量を示す。統計的有意性は、ナイーブＭＳＣと比較して、ＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａまたはＭＳＣ－ＩＦＮｂ＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａの両方で観察された。

図２９は、上記の結腸直腸癌モデルからのインビボデータを組み合わせたグラフを示す（図２２Ａ及び図２６Ａ）。図２２Ａ及び図２６Ａからの組み合わされたＣＴ２６データは、腫瘍のみ（ＰＢＳ）、ナイーブＭＳＣで処理した、及びＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａで処理した、３つの群を捕捉する。

図３０Ａ～３０Ｃは、図２２Ａ及び図２６Ａからの組み合わされたデータをさらに示す。グラフは、フローサイトメトリー実験データからの免疫浸潤の平均数を示す。図３０ＡからのＣＤ８＋Ｔにおいて統計的有意性が観察され、ＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａが腫瘍微小環境を再分極し、より細胞傷害性Ｔ細胞浸潤を可能にする能力を示している。さらに、ＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａで治療された群では、ＣＤ１１ｂ＋骨髄性集団の浸潤が減少した（図３０Ｂ）。樹状細胞及びマクロファージ集団を使用して収集したデータは、統計的に有意であった。

結腸直腸癌の腹腔内及び皮下マウスモデルにおけるＩＬ１２ならびにＣＣＬ２１ａ療法
図２５Ａ～２５Ｂには、腹腔内及び皮下結腸直腸癌マウスモデルにおけるＭＳＣ－ＩＬ－１２＋ＣＣＬ２１ａ療法からのデータが含まれる。レンチウイルス形質導入株の３つの異なるロットを、ＭＳＣ－ＩＬ１２及びＣＣＬ２１ａについて試験した（ＴＬＯＯ８－３／４、ＴＬ０１９－０１／０２、及びＴＬ０２２－０１／０２；各ＴＬ番号は１ロットを表す）。図２５Ａは、ＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＭＳＣ－ＣＣＬ２１ａの３つのロットすべてが、皮下及び腹腔内モデルの両方で腫瘍量を低減することができることを示す（最初の５つのグラフはＳＣモデルからであり、最後の３つはＩＰモデルからである）。すべてのマウスからの腫瘍を１１日目に収集した。図２５Ｂは、各群からの平均腫瘍重量を示す。

実施例６．ＭＳＣ組み合わせサイトカイン療法の方法
以下の方法を示すように実験で使用した。

方法：
ＭＳＣ培養
骨髄由来のＣ５７ＢＬ／６及びＢａｌｂ／ＣネズミＭＳＣ（ｍＭＳＣ）をＣｙａｇｅｎから購入した（それぞれカタログ番号ＭＵＢＭＸ－０１００１及びＭＵＣＭＸ－０１００１）。ｍＭＳＣ培養培地は、ＭＥＭ（Ｃｏｒｎｉｎｇ、カタログ番号１０－０２２－ＣＶ）（５００ｍｌ）＋ＭＳＣ ＦＢＳ（Ｇｉｂｃｏ、カタログ番号１２６６２－０２９）（最終濃度１０％）＋Ｌ－Ｇｌｕｔ（２００ｍＭ）（Ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ、０７１００）（最終濃度２ｍＭ）＋ＰｅｎＳｔｒｅｐ １００Ｘ（ＶＷＲ、カタログ番号９７０６３－７０８）（最終濃度１×）＋ネズミＦＧＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ、カタログ番号４５０－３３－１００ｕＧ）（最終濃度１：１０，０００希釈）を含む。ＴｒｙｐＬＥ Ｅｘｐｒｅｓｓを購入した（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ－＃１２６０４０２１）。ＰＢＳには、マグネシウム、カルシウム、またはフェノールレッドは含まれない。

ｍＭＳＣは、以下のプロトコルに従って継代した：
１．ｍＭＳＣは、７０～９０％コンフルエントで継代する必要がある。
２．ディッシュ／フラスコから培地を吸引する。
３．プレートをＰＢＳで濯ぐ（例えば、１０ｃｍディッシュの場合は２ｍＬ、１５ｃｍディッシュの場合は３ｍｌ）。
４．ＴｒｙｐＬＥ Ｅｘｐｒｅｓｓを追加する（例えば、１０ｃｍディッシュの場合は２ ｍＬ、１５ｃｍディッシュの場合は３ｍｌ）
５．３７度で３～４分間インキュベートする。
６．細胞を取り外すために、プレート側面を叩く。大部分の細胞が取り外されていることを顕微鏡で確認する。
７．培地を使用してプレートから細胞を洗い流す（例えば、１０ｃｍディッシュの場合は８ｍＬ）。
８．細胞を１５コニカルに入れ、４００Ｘｇで５分間遠心分離する。
９．培地を吸引する。
１０．細胞を適切な培地に再懸濁し、細胞を新しいプレート／フラスコに播種する。注：７０％コンフルエントな細胞は、
１：３に分割され得る。９０％コンフルエントな細胞は、１：４に分割され得る。代替的に、細胞は、３０００～５０００細胞／ｃｍ２で播種され得る。

骨髄由来のヒトＭＳＣを購入した（ＲｏｏｓｔｅｒＢａｎｋ－ｈＢＭ－１Ｍ－ＸＦ、ＲｏｏｓｔｅｒＢｉｏ）。様々なｈＭＳＣ培養培地、無ｘｅｎｏ ＭＳＣ培地（ＲｏｏｓｔｅｒＢｉｏ－＃ＫＴ－０１６）、＋ＦＢＳ（血清含有）ｈＭＳＣ培地（Ｌｏｎｚａ－ＭＳＣＧＭ培地－＃ＰＴ－３００１）を購入した。ＴｒｙｐＬＥ Ｅｘｐｒｅｓｓを購入した（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ－＃１２６０４０２１）。ＰＢＳには、マグネシウム、カルシウム、またはフェノールレッドは含まれない。

ｈＭＳＣは、以下の例示的なプロトコルに従って継代した：
１．ｈＭＳＣは、７０～９０％コンフルエントで継代する必要がある。
２．ディッシュ／フラスコから培地を吸引する。
３．プレートをＰＢＳで濯ぐ（例えば、１０ｃｍディッシュの場合は２ｍＬ）。
４．ＴｒｙｐＬＥ Ｅｘｐｒｅｓｓを追加する（例えば、１０ｃｍディッシュの場合は２ ｍＬ）
５．３７度で３～４分間、または室温で５分間インキュベートする。
６．細胞を取り外すために、プレート側面を叩く。大部分の細胞が取り外されていることを顕微鏡で確認する。
７．Ｌｏｎｚａ ＭＳＣＧＭ培地を使用してプレートから細胞を洗い流す（例えば、１０ｃｍディッシュの場合は８ｍＬ）。
８．細胞を１５コニカルに入れ、４００Ｘｇで５分間遠心分離する。
９．培地を吸引する。
１０．細胞をＲｏｏｓｔｅｒの無ｘｅｎｏ培地に再懸濁し、細胞を新しいプレート／フラスコに播種する。注：７０％コンフルエントな細胞は、１：３に分割され得る。９０％コンフルエントな細胞は、１：４に分割され得る。代替的に、細胞は、３０００～５０００細胞／ｃｍ２で播種され得る。

ｈＭＳＣは、以下の例示的なプロトコルに従って解凍した：
１．ｈＭＳＣ培地を３７°に予熱する。
２．液体窒素からｈＭＳＣアリコートを取り出す。
３．凍結試料の２／３が解凍するまで、チューブの１／２を３７°の槽に沈めたまま６０～９０秒間解凍する。
４．チューブを７０％エタノールで拭いて、チューブを滅菌する。
５．０．５ｍＬの培地をクライオチューブに加え、２～３回静かにピペッティングして、次に１５ｍＬコニカルチューブ内の９ｍＬの培地（合計１０ｍＬ）に細胞を移す。
６．４００Ｘｇで５分間遠心分離する。
７．培地を吸引し、ペレットを適切な量のＲｏｏｓｔｅｒの無ｘｅｎｏ培地に静かに再懸濁する。細胞を、３０００～５０００細胞／ｃｍ２の濃度で播種する。

レンチウイルス生産
レンチウイルスは、Ｌｅｎｔｉ－Ｘ２９３Ｔパッケージング細胞株（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、カタログ番号６３２１８０）；抗生物質を含まない、ＬＸ２９３Ｔ完全増殖培地；ＤＭＥＭ、高グルコース；１ｍＭピルビン酸ナトリウム、１０％ＦＢＳ、熱不活化；Ｏｐｔｉ－Ｍｅｍ Ｉ低血清培地（Ｇｉｂｃｏ／Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ；カタログ番号３１９８５）；ＦｕＧｅｎｅ ＨＤ（Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号Ｅ２３１１）；エンベロープ、パッケージング、及びトランスファーベクタープラスミド；ＶＳＶ－Ｇ－シュードタイプエンベロープベクター（ｐＭＤ２．Ｇ）；第２世代及び第３世代のトランスファーベクターで使用され得るＧａｇ、Ｐｏｌ、Ｒｅｖ、及びＴａｔを含むパッケージングベクター（ｐｓＭＡＸ２）を使用して生産した。９０％コンフルエントな１０ｃｍディッシュから２９３Ｔ（ＦＴ）細胞を剥がし、トランスフェクションの前日の午後遅くに１：３希釈で分注し、細胞を通常どおり３７°Ｃ、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした（細胞はトランスフェクションの翌日に６０～８５％コンフルエントになる必要がある）。

トランスフェクション反応は、以下のプロトコルに従って各１０ｃｍディッシュについて調整した。

１．別個の１．７ｍＬチューブ内で各１０ｃｍディッシュについてトランスフェクション反応を調整する。
２．室温で９００ｕＬのＯｐｔｉ－ＭｅｍＩを追加する。
３．反応あたり９ｕｇのベクター骨格（目的の遺伝子を含む）を追加する。
４．反応あたり８ｕｇのパッケージングベクターを追加する。
５．反応あたり１ｕｇのエンベロープベクター（ｐＭＤ２．Ｇ）を追加する。
６．３秒間急速にボルテックスして、完全に混合する。
７．反応あたり５５ｕＬのＦｕｇｅｎｅ ＨＤを追加する。
８．２０～３０回急速に上下にピペッティングして混合する。
９．室温で１０分間放置する（ＤＮＡ複合体を形成させる）。
１０．ディッシュの周りにゆっくりと混合物を滴下し、次に５～１０秒間穏やかに前後上下に揺り動かして混合する（回旋させない）。
１１．ディッシュをウイルスインキュベーターに配置する。

ウイルス上清を、血清学的ピペットを使用して２及び３日目に回収した。細胞細片をＭｉｌｌｉｐｏｒｅ ｓｔｅｒｉｆｌｉｐ ０．４５ｕｍフィルタを使用して除去した。Ｌｅｎｔｉ－Ｘ濃縮試薬（カタログ番号６３１２３１及び６３１２３２）をプロトコルに従って使用した：１）１容量のＬｅｎｔｉ－Ｘ濃縮試薬を３容量の清澄化した上清と組み合わせる。穏やかに反転させて混合する。２）混合物を氷上または４℃で３０分～一晩インキュベートする。（３）試料を１，５００ｘｇで４５分間、４°Ｃで遠心分離する。（４）ペレットを崩さないように注意しながら、上澄みを注意深く取り除き、除去する。（５）滅菌ＰＢＳ＋０．１％ＢＳＡを使用して、ペレットを元の容量の１／１０～１／１００に穏やかに再懸濁する。

ベクター
サイトカイン発現カセットをｐＬ１７Ｄにクローニングし、そのベクターマップを図３１に示し、顕著な特徴、例えば、ＳＦＦＶプロモーター、ＦＬＡＧ、及びＭＹＣエピトープタグ、ＬＴＲなどに注釈を付けた。

レンチウイルス形質導入
ネズミＭＳＣを、６ウェルプレートに播種し、細胞が５０％コンフルエントになったときに感染させた。ウイルスを適切なＭＯＩで追加し、３時間インキュベートして細胞に形質導入した。感染後、新鮮な培地を細胞に追加した。

ヒトＭＳＣは、以下の例示的なプロトコルに従って形質導入した：
１．２００，０００個のヒトＭＳＣを、６ウェルプレートの各ウェルに２ｍＬの無ｘｅｎｏヒトＭＳＣ培地で播種した。
２．２時間後、培地を除去し、１ｍＬのＰＢＳと交換した。
３．以下のＭＯＩで示すように、適切な量のウイルスを各ウェルに追加し、細胞をウイルスと共に３時間、３７度及び５％ＣＯ２で時折揺り動かしながらインキュベートした。
４．ウイルスを３時間後に除去し、プレートを培地で洗浄し、次にＭＳＣを、細胞が老化するまで正常に培養した（上記のとおり）。総細胞数を決定することができるように、各継代で細胞を数えた。

実施例７：ＭＳＣ組み合わせサイトカイン療法（ＣＴ２６）
以下の実施例では、ｂａｌｂ／ｃ ｍＭＳＣを、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用して様々なサイトカインを発現するように操作した。

ルシフェラーゼ酵素（カタログ番号：ＣＬ０４３、ロット番号：ＣＬ－ＩＭ１４７ Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を構成的に発現するように改変したＣＴ２６腫瘍細胞（１００μｌ中に５ｘ１０^４個の細胞）を、免疫適格性ｂａｌｂ／ｃ（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。腫瘍移植の１週間後に、腫瘍量をＡＭＩ画像を使用したルシフェラーゼイメージング（ＢＬＩ）によって測定した。マウスを、治療群に無作為化し、エフェクター分子を単剤として、またはｍＭＳＣの組み合わせとして発現するｍＭＳＣ（１ｘ１０^６個）を腹腔内送達して治療し、薬剤の組み合わせを送達した。ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ及びＰＢＳを陰性対照として使用した。腫瘍量を１２日目及び１７日目に評価した。生物発光シグナル（光子／秒）は、初期シグナル（治療前）と比較して、個々のマウスごとに正規化した。１００倍（０．０１）を超えるＢＬＩシグナルの減少は、完治と同等であった（腫瘍は剖検時に明らかに存在しなかった）。図３２に示すように、異なるエフェクター分子を単独または組み合わせて発現するように操作されたＭＳＣは、ＢＬＩレベルによって評価したＩＰ腫瘍モデルにおいてＣＴ２６腫瘍量を低減する有効性を示した。

実施例８：ＭＳＣ組み合わせサイトカイン療法（Ｂ１６Ｆ１０）
以下の実施例では、Ｃ５７ＢＬ／６ ｍＭＳＣを、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用して様々なサイトカインを発現するように操作した。

ルシフェラーゼ酵素（Ｂ１６Ｆ１０－Ｆｌｕｃ－Ｐｕｒｏ、カタログ番号：ＣＬ０５２、ロット番号：ＣＬ－ＩＭ１５０ Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を構成的に発現するように改変したＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞（１００μｌ中に５ｘ１０^４個の細胞）を、免疫適格性Ｃ５７ＢＬ／６（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。腫瘍移植の１週間後に、腫瘍量をＡＭＩ画像を使用したルシフェラーゼイメージング（ＢＬＩ）によって測定した。マウスを、治療群に無作為化し、エフェクター分子を単剤として、またはｍＭＳＣの組み合わせとして発現するｍＭＳＣ（１ｘ１０^６個）を腹腔内送達して治療し、薬剤の組み合わせを送達した。ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ及びＰＢＳを陰性対照として使用した。腫瘍量を１２日目及び１７日目に評価した。生物発光シグナル（光子／秒）は、初期シグナル（治療前）と比較して、個々のマウスごとに正規化した。１００倍（０．０１）を超えるＢＬＩシグナルの減少は、完治と同等であった（腫瘍は剖検時に明らかに存在しなかった）。図３３に示すように、異なるエフェクター分子を単独または組み合わせて発現するように操作されたＭＳＣは、ＢＬＩレベルによって評価したＩＰ腫瘍モデルにおいてＢ１６Ｆ１０腫瘍量を低減する有効性を示した。

実施例９：操作されたヒトＭＳＣサイトカイン産生
以下の実施例では、骨髄由来ｈＭＳＣ（３人のヒトのボランティアの健康なドナーに由来する）を、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用して、単一のレンチウイルス発現ベクターからヒトＩＬ１２（ｐ７０）及びヒトＣＣＬ２１ａを発現するように操作した。レンチウイルス発現ベクター（その概略ベクターマップは図３４に示す）は、２Ａリボソームスキッピング要素を使用して、単一の転写物から両方のサイトカインを発現する。

図３５に示すように、操作されたｈＭＳＣは、サイトカインＥＬＩＳＡによって評価したように、ｈＩＬ１２（図３５Ａ）及びｈＣＣＬ２１ａ（図３５Ｂ）の両方を産生することができた。特に、タンパク質分泌は、ＭＳＣの形質導入中に使用したウイルス粒子（ＭＯＩ）の量と相関した。

実施例１０：操作されたヒトＭＳＣの機能評価
以下の実施例では、骨髄由来ｈＭＳＣを、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用して、ヒトＩＬ１２（ｐ７０）を発現するように操作した。操作されたｈＭＳＣは、健康な血液ドナーから単離したヒトＴ細胞と共に０．４μｍトランスウェルインサート内で共培養した（トランスウェルアッセイの概略図を図３６Ａに示す）。活性化されたナイーブＴ細胞でＩＬ１２が誘導するＴｈ１分極を評価するために、Ｔ細胞によるＩＦＮγ産生を下部区画（Ｔ細胞）から収集した上清でＥＬＩＳＡによって測定した。図３６Ｂに示すように、ＩＦＮγ産生は、ＩＬ１２ｐ７０を発現するｈＭＳＣとＣＤ３ Ｔ細胞を共培養することにより、ＭＯＩ用量依存的に増加した。

実施例１１：ＩＰモデルにおける腫瘍へのＭＳＣのホーミング
以下の実施例では、ｆＬＵＣを発現するｂａｌｂ／ｃ ＭＳＣ（２ｘ１０^６個の細胞）を、ＣＴ－２６ ＩＰ腫瘍保有マウスにＩＰ注入した。マウスを安楽死させ、注入の２４時間後に組織を収集した。図３７に示すように、ｆＬＵＣ－ＭＳＣは、生物発光イメージング（図３７Ａに示される画像、図３７Ｂの画像の定量化）、定量的リアルタイムＰＣＲ（図３７Ｃ）、及びホタルルシフェラーゼに対する蛍光顕微鏡法（図３７Ｄ）で検出されるように、腫瘍で有意に濃縮された。

さらに、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに５×１０^４個のＢ１６Ｆ１０－Ｆｌｕｃ細胞をＩＰで移植した。腫瘍移植の７日後、Ｎａｎｏｌｕｃ－ＥＧＦＰを発現するように操作された１ｘ１０^６個のＣ５７Ｂｌ／６ネズミＢＭ－ＭＳＣをＩＰ注入した。マウスをＭＳＣの注入後２４時間で安楽死させ、腹腔器官（胃、腎臓、肝臓、結腸、脾臓、膵臓、大網／腫瘍、卵巣、及び卵管）をｎａｎｏｌｕｃシグナル伝達についてエクスビボで画像化した（ＮａｎｏＧｌｏ基質キット、供給元：Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号：Ｎ１１１０）。図３７Ｅに示すように、ネズミＭＳＣ ｎａｎｏｌｕｃシグナルは、Ｂ１６Ｆ１０腫瘍モデルにおける腹腔内の他の器官と比較して、腫瘍において優先的に濃縮された。

実施例１２：ＩＰモデルにおけるＣＴ２６腫瘍量を低減するＩＬ１２を産生するＭＳＣ
以下の実施例では、ｂａｌｂ／ｃ ｍＭＳＣを、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用してネズミＩＬ１２ｐ７０を発現するように操作した。

ルシフェラーゼ酵素（カタログ番号：ＣＬ０４３、ロット番号：ＣＬ－ＩＭ１４７ Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を構成的に発現するように改変したＣＴ２６腫瘍細胞（１００μｌ中に５ｘ１０^４個の細胞）を、免疫適格性ｂａｌｂ／ｃ（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。腫瘍移植の１週間後に、腫瘍量をＡＭＩ画像を使用したルシフェラーゼイメージング（ＢＬＩ）によって測定した。マウスを、治療群に無作為化し、ＩＬ１２ｐ７０を発現するｍＭＳＣ（１ｘ１０^６個）を腹腔内送達して治療した。ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ及びＰＢＳを陰性対照として使用した。図３８に示すように、ＢＬＩにより評価した腫瘍量の減少をもたらすＩＬ１２ｐ７０を発現するＭＳＣ（上パネル及び左下パネル）、及びＣＴ２６モデルにおける腫瘍重量により検出可能な腹腔内腫瘍の完全な排除（右下パネル）を示す。

実施例１３：ＩＰモデルにおけるＢ１６Ｆ１０腫瘍量を低減するＩＬ１２を産生するＭＳＣ
以下の実施例では、Ｃ５７ＢＬ／６ ｍＭＳＣを、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用してネズミＩＬ１２ｐ７０を発現するように操作した。

ルシフェラーゼ酵素（Ｂ１６Ｆ１０－Ｆｌｕｃ－Ｐｕｒｏ、カタログ番号：ＣＬ０５２、ロット番号：ＣＬ－ＩＭ１５０ Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を構成的に発現するように改変したＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞（１００μｌ中に５ｘ１０^４個の細胞）を、免疫適格性Ｃ５７ＢＬ／６（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。腫瘍移植の１週間後に、腫瘍量をＡＭＩ画像を使用したルシフェラーゼイメージング（ＢＬＩ）によって測定した。マウスを、治療群に無作為化し、ＩＬ１２ｐ７０を発現する１ｘ１０^６個のｍＭＳＣを腹腔内送達して治療した。ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ及びＰＢＳを陰性対照として使用した。図３９に示すように、ＢＬＩにより評価した腫瘍量の減少をもたらすＩＬ１２ｐ７０を発現するＭＳＣ（上パネル及び左下パネル）、及びＢ１６Ｆ１０モデルにおける腫瘍重量により検出可能な腹腔内腫瘍の完全な排除（右下パネル）を示す。

実施例１４：ＣＴ２６ ＩＰ腫瘍モデルにおける腫瘍量を低減し、生存を延長するＩＬ１２及びＣＣＬ２１ａを産生するＭＳＣ
以下の実施例では、ｂａｌｂ／ｃ ｍＭＳＣを、単一のレンチウイルス発現ベクターからネズミＩＬ１２（ｐ７０）及びネズミＣＣＬ２１ａを発現するように操作した。レンチウイルス発現ベクターは、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用して、単一の転写物から両方のサイトカインを発現するように２Ａリボソームスキップ要素を使用した。

ルシフェラーゼ酵素（カタログ番号：ＣＬ０４３、ロット番号：ＣＬ－ＩＭ１４７ Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を構成的に発現するように改変したＣＴ２６腫瘍細胞（１ｘ１０^６個の細胞）を、免疫適格性ｂａｌｂ／ｃマウス（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。腫瘍移植の１週間後に、腫瘍量をＡＭＩ画像を使用したルシフェラーゼイメージング（ＢＬＩ）によって測定した。マウスを、治療群に無作為化し、同一のＭＳＣによってＩＬ１２ｐ７０及びＣＣＬ２１ａを発現する１ｘ１０^６個のｍＭＳＣ（「ＭＳＣ－ＩＬ－１２ｐ７０＿２Ａ＿ＣＣＬ２１ａ」）を腹腔内送達して治療した。ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ及びＰＢＳを陰性対照として使用した。図４０に示すように、ＢＬＩにより評価した腫瘍量の減少をもたらすＩＬ１２ｐ７０／ＣＣＬ２１ａを発現するＭＳＣ（上パネル及び左下パネル）、及びＣＴ２６モデルにおける腫瘍重量により検出可能な腹腔内腫瘍の完全な排除（右下パネル）を示す。図４０Ａは、ＰＢＳ処理（丸）、ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ（「ナイーブＭＳＣ」、四角）、及びＩＬ１２ｐ７０／ＣＣＬ２１ａ発現ＭＳＣ（三角）についてＢＬＩにより評価した平均腫瘍量を示す。図４０Ｂは、ＰＢＳ処理、ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ（「ナイーブＭＳＣ」）、及びＩＬ１２ｐ７０／ＣＣＬ２１ａ発現ＭＳＣ（それぞれ、左、中央、及び右パネル）についてＢＬＩにより評価した個々のマウスにおける腫瘍量を示す。特に、図４０Ｃに示すように、ＩＬ１２ｐ７０／ＣＣＬ２１ａ発現ＭＳＣでの治療は、生存の延長（９０日を超える１００％生存）をもたらしたが、すべての対照処理マウスは、２０日目までに死亡したか、または安楽死させた。

実施例１５：Ｂ１６Ｆ１０ ＩＰ腫瘍モデルにおける腫瘍量を低減し、生存を延長するＩＬ１２及びＩＬ２１を産生するＭＳＣ
以下の実施例では、Ｃ５７ＢＬ／６ ｍＭＳＣを、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用してネズミＩＬ１２（ｐ７０）またはネズミＩＬ２１（すなわち、各ＭＳＣは、単一の因子のみを発現するように操作した）を発現するように操作した。

ルシフェラーゼ酵素（Ｂ１６Ｆ１０－Ｆｌｕｃ－Ｐｕｒｏ、カタログ番号：ＣＬ０５２、ロット番号：ＣＬ－ＩＭ１５０ Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を構成的に発現するように改変したＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞（１００μｌ中に５ｘ１０^４個の細胞）を、免疫適格性Ｃ５７ＢＬ／６（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。腫瘍移植の１週間後に、腫瘍量をＡＭＩ画像を使用したルシフェラーゼイメージング（ＢＬＩ）によって測定した。マウスを、治療群に無作為化し、ＩＬ２１を発現するｍＭＳＣ（１ｘ１０^６個の細胞）と組み合わせたＩＬ１２ｐ７０を発現するｍＭＳＣ（１ｘ１０^６個の細胞）、またはＩＬ１２ｐ７０を発現するｍＭＳＣ（１ｘ１０^６個の細胞）単独を腹腔内送達して治療した。ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ及びＰＢＳを陰性対照として使用した。図４１に示すように、ＩＬ１２ｐ７０発現ＭＳＣでの治療は、対照処理マウスと比較して生存の延長をもたらしたが、すべてのマウスは依然として、５０日目までにすべて死亡したか、または安楽死させた。対照的に、ＩＬ２１発現ＭＳＣと組み合わせたＩＬ１２ｐ７０発現ＭＳＣでの治療は、ＩＬ１２ｐ７０発現ＭＳＣでの治療と比較して生存の延長をもたらした（６０日を超えた６０％生存）。したがって、ＭＳＣによるＩＬ２１発現は、ＩＬ１２ｐ７０発現ＭＳＣの有効性を増強した。

実施例１６：ＣＴ２６ ＩＰ腫瘍モデルにおける腫瘍量を低減し、生存を延長するＩＬ１２及びＣＣＬ２１ａを産生する同種異系ＭＳＣ
以下の実施例では、ｂａｌｂ／ｃ ｍＭＳＣ（同系）及びＣ５７ＢＬ／６ ｍＭＳＣ（同種異系）を、単一のレンチウイルス発現ベクターからネズミＩＬ１２（ｐ７０）及びネズミＣＣＬ２１ａを発現するように操作した。レンチウイルス発現ベクターは、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用して、単一の転写物から両方のサイトカインを発現するように２Ａリボソームスキップ要素を使用した。

ルシフェラーゼ酵素（カタログ番号：ＣＬ０４３、ロット番号：ＣＬ－ＩＭ１４７ Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を構成的に発現するように改変したＣＴ２６腫瘍細胞（１ｘ１０^６個の細胞）を、免疫適格性ｂａｌｂ／ｃマウス（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。腫瘍移植の１週間後に、腫瘍量をＡＭＩ画像を使用したルシフェラーゼイメージング（ＢＬＩ）によって測定した。マウスを、治療群に無作為化し、同一のＭＳＣによってＩＬ１２ｐ７０及びＣＣＬ２１ａを発現するｍＭＳＣ（１ｘ１０^６個の細胞）（「ＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＣＣＬ２１」）を腹腔内送達して治療した。ｂａｌｂ／ｃ対照ｍＭＳＣ（同系）及びＣ５７ＢＬ／６対照ｍＭＳＣ（同種異系）の両方を、ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ（「ナイーブ」）を発現するように操作した。ＰＢＳをさらに陰性対照として使用した。図１に示すように、ＩＬ１２ｐ７０／ＣＣＬ２１ａを発現する同系及び同種異系ＭＳＣの両方が、ＣＴ２６モデルにおいてＢＬＩにより評価した腫瘍量の低減をもたらしたが、対照治療はそうでなかった。さらに、図２Ａに図式化したように、同系及び同種異系モデルの両方でＩＬ１２ｐ７０ならびにＣＣＬ２１ａを発現するｍＭＳＣで以前に治療したマウスは、９０日間腫瘍なしと決定された後に、ＣＴ２６腫瘍細胞（１００μｌ ＰＢＳ中に０．５ｘ１０^６個の細胞）を大腿部の皮下に移植して再負荷した。図２Ｂに示すように、腫瘍が確立されたナイーブ対照マウスとは対照的に、腫瘍なしのマウスは腫瘍移植片を拒絶した。したがって、ＩＬ１２ｐ７０／ＣＣＬ２１ａを発現するＭＳＣでの治療は、長期にわたる腫瘍量の低減及び免疫記憶をもたらした。

実施例１７：未改変細胞と比較して増強した増殖を示すＩＬ１２及びＣＣＬ２１ａを産生するＭＳＣ
以下の実施例では、３人の異なるドナーからのヒトＭＳＣを、単一のレンチウイルス発現ベクターからヒトＩＬ－１２及びヒトＣＣＬ２１ａを発現ならびに分泌するように異なる感染多重度（ＭＯＩ）で操作した。レンチウイルス発現ベクターは、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用して、単一の転写物から両方のサイトカインを発現するように２Ａリボソームスキップ要素を使用した。

図４２に示すように、遺伝的に操作されたＭＳＣ（ＭＯＩ＝９５０００、９５００、または９５０）は、試験した３人のドナーにおいて遺伝的に操作されていないヒトＭＳＣ（ＭＯＩ＝０）と比較して、増強した細胞増殖及び成長を示した（図４２Ａ、ドナー１；図４２Ｂ、ドナー２；図４２Ｃ、ドナー３）。ＧＦＰを発現するようにレンチウイルスで遺伝的に操作されたヒトＭＳＣは、同様の増強した細胞増殖または増殖表現型を示さなかった（データは示されていない）。

実施例１８：ヒト骨髄ＭＳＣ（ＢＭ－ＭＳＣ）における持続的タンパク質発現のためのプロモーターの選択
以下の実施例では、様々なプロモーターを、ヒトＭＳＣにおけるレポーターＥＧＦＰ構築物の発現を駆動するために試験した。試験したプロモーターは、ＣＭＶ、ＳＦＦＶ、ＥＦ１ａ、ＥＦ１ａ－ＬＴＲ、ＥＦＳ、ＭＮＤ、ＰＧＫ、ＵｂＣである（表４を参照されたい）。細胞は、実施例に記載のレンチウイルス形質導入を使用して、同等のＭＯＩ（感染多重度）を使用して形質導入した。ＥＧＦＰパーセンテージ及び中央値蛍光強度（ＭＦＩ）は、フローサイトメトリーを使用して連続的な経過にわたって定量化した。

図４３に示すように、２人の異なるドナーからの２つの独立したヒトＢＭ－ＭＳＣ細胞株（それぞれ上段及び下段）を操作し、操作した細胞のＧＦＰパーセント（左パネル）及びＭＦＩ（右パネル）を形質導入後２５日目に評価した。ＳＦＦＶプロモーターは、ＧＦＰパーセンテージ及びＭＦＩの両方によって両方の細胞株においてＧＦＰ発現を示した。

図４４に示すように、ＥＧＦＰ ＭＦＩは、２つの独立したヒトＢＭ－ＭＳＣ細胞株を個別に（左パネル）、または２つの独立したヒトＢＭ－ＭＳＣ細胞株からのデータを組み合わせて（右パネル）のいずれかで、経時的に（形質導入後７日目～２８日目）追跡した。タンパク質発現は、２８日間を超えて安定性であった。さらに、ＥＦ１ａプロモーターと比較して、ＳＦＦＶプロモーターは、ＭＦＩによって定量化したように、一貫してほぼ１０倍多くのタンパク質発現を駆動した。

実施例１９：ＩＬ１２及びＩＬ２１を産生するためにヒトＭＳＣを操作する
以下の実施例では、ヒト骨髄ＭＳＣは、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用して、様々な構築物からＩＬ１２ｐ７０及びＩＬ２１を発現するように安定的に形質導入した。細胞を形質導入後に３～４回継代して増殖させ、０．２ｘ１０^６個の細胞を４ｍＬの培地で６ウェルプレートに播種した。馴化培地を２４時間後に収集し、ＥＬＩＳＡを実施して、産生されたＩＬ－１２及びＩＬ－２１濃度を決定した。

プロモーター－シグナル配列１－サイトカイン１－２Ａリンカー－シグナル配列２－サイトカイン２の異なる組み合わせ、及び／または配置を用いて、様々な構築物を試験した。試験した組み合わせを以下の表７に示す。構築物ＳＢ００８８０の特定な詳細を以下の表８に示す。

（表７）ＩＬ－１２及びＩＬ－２１発現構築物

＊ｆＴ２Ａはフューリン－Ｔ２Ａを指す

（表８）ＳＢ００８８０発現構築物配列

操作されたＭＳＣによるＩＬ－１２ｐ７０及びＩＬ－２１の分泌は、ＥＬＩＳＡによって評価したように、それぞれ図４５及び図４６に示した。ＳＢ００８８０は、試験した構築物の大部分よりも高いレベルで、操作されたＭＳＣによる両方のサイトカインの発現を示した。さらに、ＩＬ－１２対ＩＬ－２１の比率は、ＥＬＩＳＡによって評価し、図４７に示すように、決定した。ＳＢ００８８０を使用して操作されたＭＳＣは、ＩＬ－２１と比較してＩＬ－１２ｐ７０の比率が１０倍高いことを示した。特に、１０：１の比率は前臨床効果を示していた（データは示されていない）。

操作されたＭＳＣによるＩＬ－１２ｐ７０の発現を実証する機能アッセイを実施した。ＩＬ１２ｐ７０がその受容体と結合し、ＪＡＫ－ＳＴＡＴ４経路を介してシグナル伝達することを報告する、ＳＴＡＴ４－ＳＥＡＰレポーターを含むＨＥＫ－２９３Ｔ細胞を使用して、操作されたｈＭＳＣによって産生されたＩＬ１２ｐ７０の効力及び活性を測定した。操作されたＭＳＣを２４時間培養し、培地を収集して、ＨＥＫ－２９３Ｔ ＳＴＡＴ４－ＳＥＡＰレポーター細胞とインキュベートした。ＳＥＡＰ産生は、分光光度計で測定した。図４８に示すように、ＩＬ－１２をコードするすべての構築物が、機能的なＩＬ１２ｐ７０シグナル伝達を示すレポーター活性を示した。

操作されたＭＳＣによるＩＬ－２１の発現を実証する機能アッセイを実施した。ＮＫ－９２ヒトナチュラルキラー細胞を使用して、操作されたｈＭＳＣによって産生されたＩＬ－２１の機能を決定した。操作されたｈＭＳＣを２４時間培養し、馴化培地を収集して、ＩＬ－２を欠乏するＮＫ－９２細胞を治療するために使用した。細胞内ホスホフローを実施して、ＩＬ－２１活性の読み取りとしてホスホ－ＳＴＡＴ１及びホスホ－ＳＴＡＴ３活性化を定量化した。図４９に示すように、ＩＬ－２１をコードするすべての構築物は、機能的なＩＬ－２１シグナル伝達を示す、ＳＴＡＴ１（左パネル）及びＳＴＡＴ３（右パネル）リン酸化を示す。

ＩＬ－２１の機能的なアッセイは、ＩＬ２１Ｒ－Ｕ２ＯＳ ＩＬ２１Ｒ／ＩＬ２ＲＧ二量体化レポーター（ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）Ｕ２ＯＳ ＩＬ２１Ｒ／ＩＬ２ＲＧ二量体化細胞株、ＤｉｓｃｏｖｅｒＸ、カタログ番号：９３－１０３５Ｃ３）を使用して実施した。レポーター細胞は、操作されたヒトＭＳＣ、または適切な陽性（組換えサイトカイン）もしくは陰性対照からの馴化培地と共にインキュベートした。図５０に示すように、ＩＬ－２１をコードするすべての構築物が、二量体化を示した。

実施例２０：ＣＴ２６腫瘍モデルにおける操作されたＭＳＣの有効性
以下の実施例では、ｂａｌｂ／ｃ ｍＭＳＣを、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用して、図５１Ａに示す様々なネズミ免疫エフェクターの各々を発現するように操作した。各ＭＳＣは、単一のエー因子のみを表現するように操作した。ルシフェラーゼ酵素（カタログ番号：ＣＬ０４３、ロット番号：ＣＬ－ＩＭ１４７ Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を構成的に発現するように改変したＣＴ２６腫瘍細胞（１００μｌ中に５ｘ１０^４個の細胞）を、免疫適格性ｂａｌｂ／ｃ雌マウス（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。腫瘍移植の１週間後に、腫瘍量をＡＭＩ画像を使用したルシフェラーゼイメージング（ＢＬＩ）によって測定した。マウスを、治療群に無作為化し、操作されたｍＭＳＣ（１ｘ１０^６個）を腹腔内送達して治療した。ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ及びＰＢＳを陰性対照として使用した。

図５１Ａに示すように、腫瘍量の有意な低減は、ＣＴ２６同系腫瘍モデルにおける選択エフェクターを産生する操作されたＭＳＣ及び選択エフェクターを産生する操作されたＭＳＣで達成した。腫瘍量倍率変化を、治療後のＢＬＩ（１０日目）対治療前のＢＬＩを正規化することにより、個々のマウスについて計算した。腫瘍量倍率変化が１未満（点線）の場合のすべての事例が、腫瘍量の低減を表す。腫瘍量の有意な低減を達成した上位のＭＳＣエフェクターは、ＩＬ１２、ＩＬ１５、ＩＬ１２＋抗ＰＤ１（微小体）、ＩＬ１２＋ＩＬ２１、ＩＬ１２＋ＣＣＬ２１ａ、ＩＬ１２＋ＣＸＣＬ１０、ＩＬ１２＋ＣＸＣＬ１１、ＩＬ２１＋ＣＸＣＬ１１、ＩＬ２１＋ＣＣＬ２１ａ、ＩＬ１５＋ＣＸＣＬ１０、ＧＭ－ＣＳＦ＋ＩＬ１２、ＩＬ１２＋ＩＬ２１＋ＣＣＬ２１ａであった。

実施例２１：Ｂ１６Ｆ１０腫瘍モデルにおける操作されたＭＳＣの有効性
以下の実施例では、Ｃ５７ＢＬ／６ ｍＭＳＣを、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用して、図５１Ｂに示す様々なネズミ免疫エフェクターの各々を発現するように操作した。各ＭＳＣは、単一のエー因子のみを表現するように操作した。ルシフェラーゼ酵素（Ｂ１６Ｆ１０－Ｆｌｕｃ－Ｐｕｒｏ、カタログ番号：ＣＬ０５２、ロット番号：ＣＬ－ＩＭ１５０ Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を構成的に発現するように改変したＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞（１００μｌ中に５ｘ１０^４個の細胞）を、免疫適格性Ｃ５７ＢＬ／６雌マウス（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。腫瘍移植の１週間後に、腫瘍量をＡＭＩ画像を使用したルシフェラーゼイメージング（ＢＬＩ）によって測定した。マウスを、治療群に無作為化し、ＩＬ１２ｐ７０などの免疫調節性サイトカインまたはケモカインを発現する１ｘ１０^６個のｍＭＳＣを腹腔内送達して治療した。ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ及びＰＢＳを陰性対照として使用した。

図５１Ｂに示すように、腫瘍量の有意な低減は、ＣＴ２６同系腫瘍モデルにおける選択エフェクターを産生する操作されたＭＳＣ及び選択エフェクターを産生する操作されたＭＳＣで達成した。選択したエフェクターまたは組み合わせは、腫瘍量の有意な低減を達成した：ＩＬ１２、ＩＬ１２＋ＣＤ４０Ｌ、ＩＬ１２＋ＣＸＣＬ１０、ＩＬ１２＋ＩＬ２１、ＩＬ１２＋ＩＬ２１＋Ｆｌｔ３Ｌ、ＩＬ１２＋ＩＬ２１＋ＣＸＣＬ１０、ＩＬ１２＋ＣＣＬ２１ａ＋Ｆｌｔ３Ｌ。

実施例２２：ＩＰモデルにおけるＣＴ２６腫瘍量を低減するＩＬ１２を産生するＭＳＣ
以下の実施例では、ｂａｌｂ／ｃ ｍＭＳＣを、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用してネズミＩＬ１２ｐ７０またはネズミＩＬ２１（すなわち、各ＭＳＣは単一の因子のみを発現するように操作した）を発現するように操作した。ルシフェラーゼ酵素（カタログ番号：ＣＬ０４３、ロット番号：ＣＬ－ＩＭ１４７ Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を構成的に発現するように改変したＣＴ２６腫瘍細胞（１００μｌ中に５ｘ１０^４個の細胞）を、免疫適格性ｂａｌｂ／ｃ（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。腫瘍移植の１週間後に、腫瘍量をＡＭＩ画像を使用したルシフェラーゼイメージング（ＢＬＩ）によって測定した。さらに、腫瘍重量は、終了時（腫瘍移植後１７日目）に決定した。マウスを、治療群に無作為化し、ｍＭＳＣ（１ｘ１０^６個）を腹腔内送達して治療した。ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ及びＰＢＳを陰性対照として使用した。実験コホートには、ネズミＩＬ１２発現ネズミＭＳＣ、ネズミＩＬ２１発現ネズミＭＳＣ、及びネズミＩＬ１２発現ネズミＭＳＣ及びネズミＩＬ２１発現ネズミＭＳＣの組み合わせ療法（組み合わせでは各々１ｘ１０^６個の細胞を送達）が含まれる。

図５２Ａ及び図５２Ｂに示すように、ＩＬ１２ｐ７０発現ＭＳＣ、ＩＬ２１発現ＭＳＣ、ＩＬ１２ｐ７０及びＩＬ２１発現ＭＳＣの組み合わせを受けた群は、対照と比較して、組み合わせ療法における有意な低減を含む、ＣＴ２６モデルにおけるＢＬＩ（図５２Ａの左パネル）及びの腫瘍重量（図５２Ａの右パネル）によって評価される腫瘍量の低減をもたらした。図５２Ｂは、個々のマウスのＢＬＩルシフェラーゼ測定を示す（結果は図５２Ａの左パネルに要約した）。

上記の実験を、低用量の操作されたｍＭＳＣ（１ｘ１０^５個の細胞）を送達するという修正を加えて繰り返した。図５３Ａに示すように、ＩＬ１２ｐ７０発現ＭＳＣ、ＩＬ１２ｐ７０及びＩＬ２１発現ＭＳＣの組み合わせを受けた群は、対照と比較して、組み合わせ療法における有意な低減を含む、ＣＴ２６モデルにおけるＢＬＩ（図５３Ａ；マウスの個々のＢＬＩ測定－左パネル；ＢＬＩ測定の要約－右パネル）によって評価される腫瘍量の低減をもたらした。さらに、組み合わせ療法は、ＩＬ１２ｐ７０発現ＭＳＣ単独を受けた群と比較して増加した有効性を示した。図５３Ｂに示すように、１ｘ１０^５個のＩＬ２１発現ＭＳＣと組み合わせた１ｘ１０^５個のＩＬ１２ｐ７０発現ＭＳＣでの治療は、治療したすべてのマウスで最大４０日間の腫瘍のない生存をもたらした（ｎ＝８；生存中央値に達していない）。対照的に、１ｘ１０^５個のＩＬ１２ｐ７０発現ＭＳＣ単独のみでの治療は、４０日目までに２５％の生存率をもたらした（ｎ＝８；１９日の生存中央値）。ＦＬＡＧ－ＭＳＣのためにＰＢＳで治療した対照群は、４０日目までに０％の生存率をもたらした（各ｎ＝８；各１２日の生存中央値）。したがって、ＭＳＣによるＩＬ２１発現は、ＩＬ１２ｐ７０発現ＭＳＣの有効性を増強した。

実施例２３：ＩＰモデルにおけるＢ１６Ｆ１０腫瘍量を低減するＩＬ１２を産生するＭＳＣ
以下の実施例では、Ｃ５７ＢＬ／６ ｍＭＳＣを、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用してネズミＩＬ１２ｐ７０またはネズミＩＬ２１（すなわち、各，ＭＳＣは単一の因子のみを発現するように操作した）を発現するように操作した。ルシフェラーゼ酵素（Ｂ１６Ｆ１０－Ｆｌｕｃ－Ｐｕｒｏ、カタログ番号：ＣＬ０５２、ロット番号：ＣＬ－ＩＭ１５０ Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を構成的に発現するように改変したＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞（１００μｌ中に５ｘ１０^４個の細胞）を、免疫適格性Ｃ５７ＢＬ／６（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。腫瘍移植の１週間後に、腫瘍量をＡＭＩ画像を使用したルシフェラーゼイメージング（ＢＬＩ）によって測定した。さらに、腫瘍重量は、終了時（腫瘍移植後１７日目）に決定した。マウスを、治療群に無作為化し、ｍＭＳＣ（１ｘ１０^６個）を腹腔内送達して治療した。ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ及びＰＢＳを陰性対照として使用した。実験コホートには、ネズミＩＬ１２発現ネズミＭＳＣ、ネズミＩＬ２１発現ネズミＭＳＣ、及びネズミＩＬ１２発現ネズミＭＳＣ及びネズミＩＬ２１発現ネズミＭＳＣの組み合わせ療法（組み合わせでは各々１ｘ１０^６個の細胞を送達）が含まれる。

図５４及び図５５に示すように、ＩＬ１２ｐ７０発現ＭＳＣ、ＩＬ１２ｐ７０及びＩＬ２１発現ＭＳＣの組み合わせを受けた群は、対照と比較して、組み合わせ療法における有意な低減を含む、Ｂ１６Ｆ１０モデルにおけるＢＬＩ（図５４の左パネル）及びの腫瘍重量（図５４の右パネル）によって評価される腫瘍量の低減をもたらした。特に、ＩＬ２１発現ＭＳＣ単独は、腫瘍量または腫瘍重量の有意な低減を示さなかった。図５５は、対照ＦＬＡＧ発現ＭＳＣ、ならびにＩＬ１２発現ＭＳＣ及びＩＬ２１発現ＭＳＣの組み合わせに対する個々のマウスのＢＬＩルシフェラーゼ測定を示す（結果は図５４の左パネルに要約した）。

実施例２４：Ｂ１６Ｆ１０ ＩＰ腫瘍モデルにおける腫瘍のない生存を延長し、腫瘍再負荷について残存するＩＬ１２及びＩＬ２１を産生するＭＳＣ
以下の実施例では、Ｃ５７ＢＬ／６ ｍＭＳＣを、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用してネズミＩＬ１２（ｐ７０）またはネズミＩＬ２１（すなわち、各ＭＳＣは単一の因子のみを発現するように操作した）を発現するように操作した。ルシフェラーゼ酵素（Ｂ１６Ｆ１０－Ｆｌｕｃ－Ｐｕｒｏ、カタログ番号：ＣＬ０５２、ロット番号：ＣＬ－ＩＭ１５０ Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を構成的に発現するように改変したＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞（１００μｌ中に５ｘ１０^４個の細胞）を、免疫適格性Ｃ５７ＢＬ／６（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。マウスを、治療群に無作為化し、ｍＭＳＣ（１ｘ１０^６個）を腹腔内送達して治療した。ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ及びＰＢＳを陰性対照として使用した。実験コホートには、ネズミＩＬ１２発現ネズミＭＳＣ、ネズミＩＬ２１発現ネズミＭＳＣ、及びネズミＩＬ１２発現ネズミＭＳＣ及びネズミＩＬ２１発現ネズミＭＳＣの組み合わせ療法（組み合わせでは各々１ｘ１０^６個の細胞を送達）が含まれる。

図５６に示すように、ＩＬ１２ｐ７０発現ＭＳＣでの治療は、対照治療マウスと比較して生存の延長（治療後２７日の生存中央値）をもたらした（ＰＢＳ処理及びＦＬＡＧ発現ＭＳＣの両方の処理後８日の生存中央値）。ＩＬ２１発現ＭＳＣと組み合わせたＩＬ１２ｐ７０発現ＭＳＣでの治療は、ＩＬ１２ｐ７０発現ＭＳＣ単独での治療と比較して、延長した生存（５４．５％生存；生存中央値に達していない）をもたらした。したがって、ＭＳＣによるＩＬ２１発現は、ＩＬ１２ｐ７０発現ＭＳＣの有効性を増強した。

さらに、９０日を超えて腫瘍なしのマウスは、その後、Ｂ１６－Ｆ１０腫瘍細胞を側腹部に移植して（１ｘ１０^６個の細胞）再負荷した。ナイーブな未処理マウスを対照と同時に移植した。皮下腫瘍量はノギスで測定した。図５７Ｃに示すように、以前にＩＬ１２発現ＭＳＣ及びＩＬ２１発現ＭＳＣの組み合わせ治療を受けたすべてのマウス（ｎ＝４）は、新たに移植した腫瘍を拒絶し、治療が抗腫瘍免疫記憶の達成をもたらしたことを示している。以前にＩＬ１２発現ＭＳＣ単独の治療を受けたマウスは、５０％の腫瘍拒絶率を有した（４匹中２匹のマウス；図５７Ｂ）。対照的に、腫瘍は、ナイーブマウスの６０％で確立された（５匹中３匹のマウス；図５７Ａ）。

実施例２５：Ｂ１６Ｆ１０ ＩＰ腫瘍モデルにおける生存を延長する、免疫チェックポイント療法と組み合わせたＩＬ１２を産生するＭＳＣ
以下の実施例では、Ｃ５７ＢＬ／６ ｍＭＳＣを、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用してネズミＩＬ１２（ｐ７０）を発現するように操作した。ルシフェラーゼ酵素（Ｂ１６Ｆ１０－Ｆｌｕｃ－Ｐｕｒｏ、カタログ番号：ＣＬ０５２、ロット番号：ＣＬ－ＩＭ１５０ Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を構成的に発現するように改変したＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞（１００μｌ中に５ｘ１０^４個の細胞）を、免疫適格性Ｃ５７ＢＬ／６（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。マウスを、治療群に無作為化し、抗ＰＤ１抗体（クローンＲＭＰ１－１４）を２００ｍｇ／ｋｇの用量で単独で、または低用量（１ｅ５）のＩＬ１２発現ネズミＭＳＣと組み合わせてＩＰ投与することで治療した。

図５６に示すように、抗ＰＤ１単独での治療は、１２．５％の生存率及び２３日間の生存中央値をもたらした（図５６「抗ＰＤ１」；８匹中１匹のマウスが長期の腫瘍なしの生存を有した）。対照的に、ＩＬ１２ｐ７０発現ＭＳＣとの抗ＰＤ１の組み合わせ治療は、５０％の生存率をもたらした（図５６「ＭＳＣ－ＩＬ１２（ｐ７０）＋抗ＰＤ１」；８匹中４匹のマウスが長期の腫瘍なし生存を有した；生存中央値は依然として確立されていない）。したがって、ＭＳＣによるＩＬ１２の発現は、抗ＰＤ１免疫チェックポイント療法の有効性を増強し、チェックポイント抵抗性または耐性モデル（Ｂ１６Ｆ１０）を応答性に変換する。

実施例２６：ＣＴ２６ ＩＰ腫瘍モデルにおける腫瘍量を低減する、ＩＬ１２及びＩＬ２１の両方を産生するＭＳＣ
以下の実施例では、ｂａｌｂ／ｃ ｍＭＳＣを、単一のレンチウイルス発現ベクターからネズミＩＬ１２（ｐ７０）及びネズミＩＬ２１を発現するように操作した。レンチウイルス発現ベクターは、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用して、単一の転写物から両方のサイトカインを発現するように２Ａリボソームスキップ要素を使用した。ルシフェラーゼ酵素（カタログ番号：ＣＬ０４３、ロット番号：ＣＬ－ＩＭ１４７ Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を構成的に発現するように改変したＣＴ２６腫瘍細胞（１００μｌ中に１ｘ１０^５個の細胞）を、免疫適格性雌ｂａｌｂ／ｃマウス（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。腫瘍移植の１週間後に、腫瘍量をＡＭＩ画像を使用したルシフェラーゼイメージング（ＢＬＩ）によって測定した。マウスを、治療群に無作為化し、１ｘ１０^４～１ｘ１０^６個の細胞の範囲のｍＭＳＣの異なる量でＩＰ治療した。ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ（１ｘ１０^６個の細胞）及びＰＢＳを陰性対照として使用した。

図５８Ａ～Ｃに示すように、抗腫瘍活性は、ＢＬＩによって評価したように、ＩＬ１２及びＩＬ２１の両方を発現するＭＳＣの用量依存的様式で観察した（図５８Ａは１７日目対７日目で正規化した；図５８Ｂ及び図５８Ｃは個々のマウスの経時的なＢＬＩである）。有効性は、対照ＦＬＡＧまたはＰＢＳマウスでは観察されなかった（図５８Ａ及び図５８Ｂ）。対照的に、最小有効性は、１ｘ１０^４の用量で観察され、有効性は用量が増加するごとに増加した（図５８Ａ及び図５８Ｃ）図５８Ｄに示すように、腫瘍移植後最大６０日間の長期の腫瘍なしの生存が用量依存的な様式で観察され、１ｘ１０^６～１ｘ１０^５で治療したマウスは、有意に延長された腫瘍なしの生存を有した（移植後の生存中央値：ＰＢＳ／ＦＬＡＧ－１９日；１ｘ１０^６～１ｘ１０^５－達成されない；３ｘ１０^４－５３日；１ｘ１０^４－１８～１９日）。

実施例２７：Ｂ１６Ｆ１０ ＩＰ腫瘍モデルにおける腫瘍量を低減する、ＩＬ１２及びＩＬ２１の両方を産生するＭＳＣ
以下の実施例では、Ｃ５７ＢＬ／６ ｍＭＳＣを、単一のレンチウイルス発現ベクターからネズミＩＬ１２（ｐ７０）及びネズミＩＬ２１を発現するように操作した。レンチウイルス発現ベクターは、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用して、単一の転写物から両方のサイトカインを発現するように２Ａリボソームスキップ要素を使用した。ルシフェラーゼ酵素（Ｂ１６Ｆ１０－Ｆｌｕｃ－Ｐｕｒｏ、カタログ番号：ＣＬ０５２、ロット番号：ＣＬ－ＩＭ１５０ Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を構成的に発現するように改変したＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞（１００μｌ中に５ｘ１０^４個の細胞）を、免疫適格性Ｃ５７ＢＬ／６（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。腫瘍移植の１週間後に、腫瘍量をＡＭＩ画像を使用したルシフェラーゼイメージング（ＢＬＩ）によって測定した。マウスを、治療群に無作為化し、１ｘ１０^５～１ｘ１０^７個の細胞の範囲のｍＭＳＣの異なる量で治療した。ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ（３ｘ１０^６個の細胞）及びＰＢＳを陰性対照として使用した。いくつかの群は、５日間隔で複数用量で治療した（腫瘍移植後７、１２、１７日目で治療）。

図５９Ａ～Ｄに示すように、抗腫瘍活性は、ＢＬＩによって評価したように、ＩＬ１２及びＩＬ２１の両方を発現するＭＳＣの用量依存的様式で観察した（図５９Ａは１７日目対７日目で正規化した；図５９Ｂ～Ｄは個々のマウスの経時的なＢＬＩである）。有効性は、対照ＦＬＡＧまたはＰＢＳマウスでは観察されなかった（図５９Ａ及び図５９Ｂ）。有効性はまた、１×１０^５または３×１０^５個の細胞の用量では観察されなかった（図５９Ａ及び図５９Ｃ）。対照的に、最小有効性は、１ｘ１０^６の用量で観察され、有効性は用量が増加するごとに増加した（図５９Ａ及び図５９Ｃ）有効性はまた、高用量の複数回投与後にも観察された（図５９Ｄ）。図５９Ｅに示すように、長期の腫瘍なしの生存は、用量依存的な様式で観察され、より高い用量の複数回の投与後にも観察された（移植後の生存中央値：ＰＢＳ－２０日；ＦＬＡＧ（ｘ３）－２７日；１ｘ１０^７－３１．５日；３ｘ１０^６－３６日；３ｘ１０^６（ｘ３）－３９日；１ｘ１０^６－３３日；１ｘ１０^６（ｘ３）－３９日；３ｘ１０^５－２７日；３ｘ１０^５（ｘ３）－２７日［曲線は３ｘ１０^５治療と重複する］；１ｘ１０^５－２４日）。

実施例２８：ＭＣ－３８ ＩＰ腫瘍モデルにおける腫瘍量を低減する、ＩＬ１２及びＩＬ２１の両方を産生するＭＳＣ
以下の実施例では、Ｃ５７ＢＬ／６ ｍＭＳＣを、単一のレンチウイルス発現ベクターからネズミＩＬ１２（ｐ７０）及びネズミＩＬ２１を発現するように操作した。レンチウイルス発現ベクターは、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用して、単一の転写物から両方のサイトカインを発現するように２Ａリボソームスキップ要素を使用した。ＭＣ－３８腫瘍細胞にｆＬＵＣ－ＥＧＦＰ構築物を形質導入し、ＥＧＦＰ蛍光に基づいて選別し、次いで５ｘ１０^５個の細胞を免疫適格性Ｃ５７ＢＬ／６（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。腫瘍移植の９日後に、腫瘍量をＡＭＩ画像を使用したルシフェラーゼイメージング（ＢＬＩ）によって測定した。マウスを、治療群に無作為化し、３ｘ１０^４～１ｘ１０^６個の細胞の範囲のｍＭＳＣの異なる量で治療した。ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ及びＰＢＳを陰性対照として使用した。

図６０Ａ及び図６０Ｂに示すように、抗腫瘍活性は、ＢＬＩによって評価したように、ＩＬ１２及びＩＬ２１の両方を発現するＭＳＣの用量依存的様式で観察した（図６０Ａは１８日目対９日目で正規化した；図６０Ｂは個々のマウスの経時的なＢＬＩである）。有効性は、対照ＦＬＡＧまたはＰＢＳマウスでは観察されなかった（図６０Ａ及び図６０Ｂ）。有効性はまた、１×１０^５または３×１０^４個の細胞の用量では観察されなかった（図６０Ａ及び図６０Ｂ）。対照的に、最小有効性は、３ｘ１０^５の用量で観察され、有効性は１ｘ１０^６個の細胞の増加した用量で増加した（図６０Ａ及び図６０Ｂ）図６０Ｃに示すように、長期の腫瘍なしの生存は用量依存的な様式で観察され、１ｘ１０^６個の細胞で治療したすべてのマウスは少なくとも３０日を経過しても生存した（移植後の生存中央値：ＰＢＳ－２１日；ＦＬＡＧ－２９日；１ｘ１０^６－達成されない；３ｘ１０^５－２８日；１ｘ１０^５－２１日；３ｘ１０^４－２１日［ＰＢＳ、１ｘ１０^５、及び３ｘ１０^４と重複する）。したがって、ネズミＩＬ１２（ｐ７０）及びネズミＩＬ２１を発現するように操作されたｍＭＳＣは、ＭＣ－３８腫瘍モデルにおいて有効性を示した。

実施例２９：ＩＰモデルにおける腫瘍へのヒトＭＳＣのホーミング
以下の実施例では、ＮＳＧマウスにＩＰでＯＶＣＡＲ８－ｆＬＵＣ細胞を移植した。腫瘍移植の１４～２１日後、Ｎａｎｏｌｕｃ－ＥＧＦＰを発現するように操作された１ｘ１０^６個のヒトＢＭ－ＭＳＣをＩＰで送達した。マウスをＭＳＣの注入後２４時間で安楽死させ、腹腔器官（胃、腎臓、肝臓、結腸、脾臓、膵臓、大網／腫瘍、卵巣、及び卵管）をＮａｎｏＬｕｃシグナル伝達についてエクスビボで画像化した（ＮａｎｏＧｌｏ基質キット、供給元：Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号：Ｎ１１１０）。ヒトＭＳＣは、注入の２４時間後及び２２日後に収集した腫瘍切片のＥＧＦＰ蛍光によって画像化した。

図６１Ａ及び図６１Ｂに示すように、ヒトＭＳＣ ＮａｎｏＬｕｃシグナルは、腹腔内の他の器官と比較して、腫瘍において優先的に濃縮された（図６１Ａはルシフェラーゼ定量化を要約した；図６１Ｂはルシフェラーゼシグナルの代表的な画像である）。さらに、ＭＳＣの持続性は２２日未満であり、最後の時点では細胞を検出しなかった（図６１Ｂの右端のパネル）。

実施例３０：エフェクターサイトカインの生体内分布及びＰＫ
以下の実施例では、操作されたＭＳＣによって産生されたエフェクターサイトカインの生体内分布及びＰＫを評価した。

最初の実験では、ＮＳＧマウスにＩＰで５×１０^６個のＯＶＣＡＲ８－ｆＬＵＣ細胞腫瘍細胞を移植した。腫瘍移植の２１～２７日後に、マウスをＢＬＩによって測定した腫瘍量に基づいて無作為化し、単一のレンチウイルス発現ベクターからヒトＩＬ１２（ｐ７０）及びヒトＩＬ２１を発現するように操作された１ｘ１０^６個のｈＭＳＣで治療した。レンチウイルス発現ベクターは、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用して、単一の転写物から両方のサイトカインを発現するように２Ａリボソームスキップ要素を使用した。マウスをＭＳＣ治療の１６～２４時間または３、４、７日後に安楽死させ、１ｍＬのＰＢＳを腹腔空間に注入してそれを採取することによりＩＰ洗浄を介した腹腔液を収集した。血清は、心臓内穿刺後に全血から分離した。ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、各時点及び治療種について各区画（腹腔液対血清）のタンパク質量を決定した。

図６２Ａに示すように、ヒトＩＬ１２（左パネル）及びヒトＩＬ２１（右パネル）の両方の一過性産生が、腹腔液（各時点の左のカラム）及び血清（各時点の右のカラム）の両方で観察された。全身（血清）と比較して腹膜腔（局所）で少なくとも１０倍増加したタンパク質量が観察され、操作されたＭＳＣによるサイトカインの局所的な送達を示している。

別の実験では、ｂａｌｂ／ｃ ｍＭＳＣを、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用してネズミＩＬ１２ｐ７０またはネズミＩＬ２１（すなわち、各ＭＳＣは単一の因子のみを発現するように操作した）を発現するように操作した。ＣＴ２６－ｆＬＵＣ腫瘍細胞（１００μｌ中に１ｘ１０^５個の細胞）を、免疫適格性ｂａｌｂ／ｃ（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。ネズミＩＬ１２発現ネズミＭＳＣ及びネズミＩＬ２１発現ネズミＭＳＣ（組み合わせでは各々１ｘ１０^６個の細胞を送達）をＩＰで送達した。マウスをＭＳＣ治療の２４または７２時間後に安楽死させ、１ｍＬのＰＢＳを腹腔空間に注入してそれを採取することによりＩＰ洗浄を介した腹腔液を収集した。血清は、心臓内穿刺後に全血から分離した。Ｌｕｍｉｎｅｘ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して、各時点及び治療種について各区画（腹腔液対血清）のタンパク質量を決定した。

図６２Ｂに示すように、ネズミＩＬ１２（左パネル）及びネズミＩＬ２１（右パネル）の両方の一過性産生が、腹腔液（各時点の左のカラム）及び血清（各時点の右のカラム）の両方で観察された。全身（血清）と比較して腹膜腔（局所）で少なくとも１０倍増加したタンパク質量が観察され、操作されたＭＳＣによるサイトカインの局所的な送達を示している。

実施例３１：ＣＴ２６ ＩＰ腫瘍モデルにおけるＭＳＣ治療及び組換えサイトカイン治療の比較
以下の実施例では、ｂａｌｂ／ｃ ｍＭＳＣを、単一のレンチウイルス発現ベクターからネズミＩＬ１２（ｐ７０）及びネズミＩＬ２１を発現するように操作した。Ｂａｌｂ／ｃ ｍＭＳＣは、ネズミＩＬ１２（ｐ７０）またはネズミＩＬ２１のいずれかを発現するように操作した。レンチウイルス発現ベクターは、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用して、単一の転写物から両方のサイトカインを発現するように２Ａリボソームスキップ要素を使用した。ルシフェラーゼ酵素（カタログ番号：ＣＬ０４３、ロット番号：ＣＬ－ＩＭ１４７ Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を構成的に発現するように改変したＣＴ２６腫瘍細胞（１００μｌ中に１ｘ１０^５個の細胞）を、免疫適格性雌ｂａｌｂ／ｃマウス（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。腫瘍移植の１週間後に、腫瘍量をＡＭＩ画像を使用したルシフェラーゼイメージング（ＢＬＩ）によって測定した。ＭＳＣで治療したマウスについて、マウスを、治療群に無作為化し、ネズミＩＬ１２発現ネズミＭＳＣ、ネズミＩＬ２１発現ネズミＭＳＣ、またはネズミＩＬ１２及びＩＬ２１発現ネズミＭＳＣを受けるように、ｍＭＳＣ（１ｘ１０^６個）を腹腔内送達して治療し、ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ及びＰＢＳを陰性対照として使用した。さらに、治療群には、インビトロでＭＳＣによって産生される量の４倍の用量でそれぞれの組換えサイトカインのボーラス用量を受けたマウスも含まれた（ＥＬＩＳＡによって測定した－組換えＩＬ１２：５ｕｇ／マウス；組換えＩＬ２１：０．４ｕｇ／マウス） 。腫瘍量は、ｆＬＵＣ ＢＬＩによって複数の時点で測定し、マウスを腫瘍量のためにエンドポイント基準に達したときに安楽死させた。カプランマイヤー生存曲線は、腫瘍なしの生存を計算するために決定した。

図６３Ａ～Ｃに示すように、サイトカインを産生するように操作されたＭＳＣで治療したマウスは、すべての事例において、腫瘍なしの生存の延長という点で組換えサイトカイン療法よりも優れていた（図６３Ａ－ＭＳＣ－ＩＬ１２対ｒＩＬ１２；図６３Ｂ－ＭＳＣ－ＩＬ２１対ｒＩＬ２１；図６３Ｃ－ＭＳＣ－ＩＬ１２／ＩＬ２１対ｒＩＬ１２＋ｒＩＬ２１）。さらに、図６３Ｄ～Ｅに示すように、サイトカインを産生するように操作されたＭＳＣで治療したマウスは、すべての事例において、腫瘍量ＢＬＩ）によって評価したように組換えサイトカイン療法よりも優れていた（図６３Ｄ－下の行－ＭＳＣ－ＩＬ１２対ｒＩＬ１２；図６３Ｅ－上の行－ＭＳＣ－ＩＬ２１対ｒＩＬ２１；図６３Ｅ－下の行－ＭＳＣ－ＩＬ１２／ＩＬ２１対ｒＩＬ１２＋ｒＩＬ２１）。

実施例３２：Ｂ１６Ｆ１０ ＩＰ腫瘍モデルにおけるＭＳＣ治療及び組換えサイトカイン治療の比較
以下の実施例では、Ｃ５７ＢＬ／６ ｍＭＳＣを、単一のレンチウイルス発現ベクターからネズミＩＬ１２（ｐ７０）及びネズミＩＬ２１を発現するように操作した。Ｃ５７ＢＬ／６ ｍＭＳＣは、ネズミＩＬ１２（ｐ７０）またはネズミＩＬ２１のいずれかを発現するように操作した。レンチウイルス発現ベクターは、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用して、単一の転写物から両方のサイトカインを発現するように２Ａリボソームスキップ要素を使用した。ルシフェラーゼ酵素（カタログ番号：ＣＬ０４３、ロット番号：ＣＬ－ＩＭ１４７ Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を構成的に発現するように改変したＢ１６Ｆ１０腫瘍細胞（１００μｌ中に１ｘ１０^５個の細胞）を、免疫適格性雌ｂａｌｂ／ｃマウス（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。腫瘍移植の１週間後に、腫瘍量をＡＭＩ画像を使用したルシフェラーゼイメージング（ＢＬＩ）によって測定した。ＭＳＣで治療したマウスについて、マウスを、治療群に無作為化し、ＩＬ１２及びＩＬ２１発現ネズミＭＳＣがその両方を発現するように操作されたｍＭＳＣ（３ｘ１０^６個）を腹腔内送達して治療し、ＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ及びＰＢＳを陰性対照として使用した。さらに、治療群には、インビトロでＭＳＣによって産生される量の４倍の用量でそれぞれの組換えサイトカインのボーラス用量を受けたマウスも含まれた（ＥＬＩＳＡによって測定した－組換えＩＬ１２：３ｕｇ／マウス；組換えＩＬ２１：０．０３ｕｇ／マウス）。腫瘍量は、治療後７日目の腫瘍重量によって測定し、マウスを腫瘍量のためにエンドポイント基準に達したときに安楽死させた。カプランマイヤー生存曲線は、腫瘍なしの生存を計算するために決定した。

図６４Ａに示すように、ＩＬ１２及びＩＬ２１の両方を産生するように操作されたＭＳＣで治療したマウスは、腫瘍重量によって評価したように組換えサイトカイン療法よりも優れていた。さらに、図６４Ｂに示すように、ＩＬ１２及びＩＬ２１の両方を産生するように操作されたＭＳＣで治療したマウスは、腫瘍なしの延長された生存によって評価したように組換えサイトカイン療法よりも優れていた。

実施例３３：ＣＴ２６ ＩＰ腫瘍モデルにおいてＩＬ１２及びＩＬ２１の両方を産生するＭＳＣでの治療後の免疫プロファイル
以下の実施例では、ｂａｌｂ／ｃ ｍＭＳＣを、実施例６に記載のレンチウイルス形質導入を使用してネズミＩＬ１２ｐ７０またはネズミＩＬ２１（すなわち、各ＭＳＣは単一の因子のみを発現するように操作した）を発現するように操作した。ルシフェラーゼ酵素（カタログ番号：ＣＬ０４３、ロット番号：ＣＬ－ＩＭ１４７ Ｉｍａｎｉｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を構成的に発現するように改変したＣＴ２６腫瘍細胞（１ｘ１０^５個の細胞）を、免疫適格性ｂａｌｂ／ｃ（６～８週齢）の腹腔空間に注入した。腫瘍移植の１週間後に、腫瘍量をＡＭＩ画像を使用したルシフェラーゼイメージング（ＢＬＩ）によって測定した。マウスを、治療群に無作為化し、ネズミＩＬ１２発現ネズミＭＳＣ及びネズミＩＬ２１発現ネズミＭＳＣの組み合わせ治療（組み合わせでは各々１ｘ１０^６個の細胞を送達）、または陰性対照としてＭＳＣ－Ｆｌａｇ－Ｍｙｃ及びＰＢＳを腹腔内送達して治療した。マウスを治療の７２時間後に安楽死させ、器官を収集した。多彩フローサイトメトリーを使用して、治療に対する応答における免疫浸潤を特徴付けした。

図６５Ａ及図６５Ｂに示すように、Ｔ細胞サブセット及び活性化マーカー（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ８／ＣＤ３８＋、ＣＤ８／ＩＦＮｇ＋、ＣＤ８／Ｇｚｍｂ＋、ＮＫ／Ｇｚｍｂ＋、及びＣＤ８：Ｔｒｅｇｓ－ＦｏｘＰ３比率）は、ＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＭＳＣ ＩＬ２１での治療後に腹膜液で有意に増加した。さらに、図６５Ｃに示すように、樹状細胞（ＣＤ１１ｃ／ＭＨＣ－ＩＩ高、ＣＤ８６＋、ＣＤ１０３＋、ＣＤ１１ｂ＋）などの抗原提示細胞も、ＭＳＣ－ＩＬ１２＋ＭＳＣ－ＩＬ２１での治療後に腹膜腫瘍排出リンパ節で有意に増加した。したがって、ネズミＩＬ１２発現ネズミＭＳＣ及びネズミＩＬ２１発現ネズミＭＳＣの組み合わせ治療は、活性化した免疫プロファイルを示した。

実施例３４：シグナルペプチド配列の最適化
以下の実施例では、エフェクター分子は、それらの天然シグナルペプチド配列を外因性シグナルペプチド配列で置き換えるように改変した（試験した例示的なシグナルペプチド配列については表５を参照されたい）。改変したエフェクター分子は、特定の環境（例えば、腫瘍微小環境）などにおいて、発現の改善及び分泌の維持などの機能的な改善について試験した。改変したエフェクター分子の機能的な性能は、腫瘍モデルでも試験した（例えば、腫瘍を除去する改善した能力、異なる環境で腫瘍を除去する改善した能力、または異なる種類の腫瘍を除去する改善した能力）。

実施例３５：操作されたＭＳＣの濃縮。
以下の実施例では、ＭＳＣは、未改変ＭＳＣなどの未改変細胞を含む細胞集団内でエフェクター分子を発現するように操作した。操作されたＭＳＣは、濃縮したそれらの操作されたＭＳＣが成長因子の受容体または受容体リガンドを発現する操作されたＭＳＣの亜集団であるように、操作されたＭＳＣを成長因子（表１に記載されるエフェクター分子など）と接触させることによって集団内で濃縮した。目的の操作されたＭＳＣの亜集団は、様々な様式で成長因子と接触させた：
１．遺伝子的な操作によってＭＳＣ自体が因子を発現するような、オートクリン様式。
２．遺伝子的な操作によって支持もしくは補助細胞が因子を発現することによりそれらの因子をＭＳＣに供給するか、または支持もしくは補助細胞（２９３Ｔなど）からの因子を含む馴化培地を使用することによって因子を発現するような、パラクリン様式。
３．ＭＳＣ移植後の患者にこれらの因子の組換えタンパク質または核酸バージョンを注入することによる、内分泌性の様式。
４．これらの因子の可溶性組換えタンパク質バージョンをＭＳＣ培養条件に追加することを介して。
５．これらの因子の組換えバージョンによるＭＳＣ増殖に使用される組織培養プレート／フラスコ表面のコーティングを介して。

参考文献

本明細書に開示されるすべての参考文献、特許、及び特許出願は、その各々が引用される主題に関して参照により組み込まれ、場合によっては、文書全体を包含し得る。

本明細書及び特許請求の範囲で本明細書で使用される不定冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、反対に明確に示されない限り、「少なくとも１つ」を意味すると理解されるべきである。

反対に明確に示されない限り、１つを超えるステップまたは行為を含む本明細書に記載のあらゆる方法において、方法のステップまたは行為の順序が、必ずしも方法のステップまたは行為が記載されている順序に限定されないことを理解されるべきである。

特許請求の範囲及び上記の明細書において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「運ぶ」、「有する」、「含有する」、「伴う」、「保持する」、「構成する」などのすべての過渡的な語句は、限定的でないことを理解されるべきであり、すなわち、それ含むが限定されないことを意味する。米国特許庁の特許審査基準便覧のセクション２１１１．０３に記載されているように、「からなる」及び「本質的にからなる」の過渡的な語句のみが、それぞれ閉鎖的または半閉鎖的な過渡的な語句であるものとする。

Claims (29)

1. ａ）プロモーターと、
   ｂ）５’から３’の向きで
   Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
   を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
   を含む、操作された細胞であって、
   式中、
   Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
   Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
   Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、
   Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
   Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
   前記プロモーターが、前記発現カセットと作動可能に連結され、前記第１のシグナルペプチドが、前記第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、前記第２のシグナルペプチドが、前記第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、
   前記操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、
   前記操作された細胞。
2. 前記ポリヌクレオチドが、式Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２を含む単一のポリヌクレオチドとして転写されることができるように、前記プロモーターが、前記発現カセットと作動可能に連結される、請求項１に記載の操作された細胞。
3. 前記リンカーポリヌクレオチド配列が、別個のポリペプチドとしての前記第１のエフェクター分子及び前記第２のエフェクター分子の翻訳と作動可能に関連する、請求項１または請求項２に記載の操作された細胞。
4. 前記リンカーポリヌクレオチド配列が、２Ａリボソームスキッピングタグをコードするか、または配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）をコードし、任意選択で、前記リンカーポリヌクレオチド配列が２Ａリボソームスキッピングタグをコードする場合、前記２Ａリボソームスキッピングタグが、Ｐ２Ａ、Ｔ２Ａ、Ｅ２Ａ、及びＦ２Ａからなる群から選択される、請求項３に記載の操作された細胞。
5. 前記リンカーポリヌクレオチド配列が、第２のプロモーターをコードし、
   前記プロモーターが、式Ｓ１－Ｅ１を含む第１のポリヌクレオチドが転写されることができるように、前記発現カセットに作動可能に連結され、
   前記第２のプロモーターが、式Ｓ２－Ｅ２を含む第２のポリヌクレオチドが転写されることができるように、前記発現カセットに作動可能に連結され、
   前記第１及び第２のポリヌクレオチドが、別個のポリヌクレオチドである、
   請求項１に記載の操作された細胞。
6. 前記操作された細胞が、ヒト細胞であり、任意選択で、前記ヒト細胞が、骨髄、脂肪組織、臍帯、胎児肝臓、筋肉、及び肺組織からなる群から選択される組織から単離される、請求項１～５のいずれか１項に記載の操作された細胞。
7. 前記操作された細胞が、ＭＳＣであり、ＭＳＣが、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ４５－、ＣＤ３４－、ＣＤ１４－を含む細胞マーカー表現型、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ７９α－を含む細胞マーカー表現型、ＣＤ１０５＋、ＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１９－、ＨＬＡクラスＩＩ－を含む細胞マーカー表現型、またはＣＤ７３＋、ＣＤ９０＋、ＣＤ１０５＋、及びＣＤ１６６＋、ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１４－、ＣＤ１９－、ＣＤ３４－、ＣＤ４５－、及びＨＬＡ－ＤＲ－を含む細胞マーカー表現型を含む、請求項１～６のいずれか１項に記載の操作された細胞。
8. 前記プロモーター及び／または前記第２のプロモーターが、構成的プロモーターを含み、任意選択で、前記構成的プロモーターが、ＣＭＶ、ＥＦＳ、ＳＦＦＶ、ＳＶ４０、ＭＮＤ、ＰＧＫ、ＵｂＣ、ｈＥＦ１ａＶ１、ｈＣＡＧＧ、ｈＥＦ１ａＶ２、ｈＡＣＴｂ、ｈｅＩＦ４Ａ１、ｈＧＡＰＤＨ、ｈＧＲＰ７８、ｈＧＲＰ９４、ｈＨＳＰ７０、ｈＫＩＮｂ、及びｈＵＢＩｂからなる群から選択される、請求項１～７のいずれか１項に記載の操作された細胞。
9. 前記プロモーター及び／または第２のプロモーターが、誘導性プロモーターを含み、任意選択で、前記誘導性プロモーターが、ｍｉｎＰ、ＮＦｋＢ応答要素、ＣＲＥＢ応答要素、ＮＦＡＴ応答要素、ＳＲＦ応答要素１、ＳＲＦ応答要素２、ＡＰ１応答要素、ＴＣＦ－ＬＥＦ応答要素プロモーター融合物、低酸素応答要素、ＳＭＡＤ結合要素、ＳＴＡＴ３結合部位、インデューサー分子応答性プロモーター、及びそれらのタンデムリピートからなる群から選択される、請求項１～７のいずれか１項に記載の操作された細胞。
10. 前記第１のシグナルペプチドまたは前記第２のシグナルペプチドが、それぞれ、前記第１のエフェクター分子または前記第２のエフェクター分子に対して本来のものである天然シグナルペプチドを含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の操作された細胞。
11. 前記第１のシグナルペプチドまたは前記第２のシグナルペプチドが、それぞれ、前記第１のエフェクター分子または前記第２のエフェクター分子に対して本来のものではない非天然シグナルペプチドを含み、任意選択で、前記非天然シグナルペプチドが、ＩＬ１２、ＩＬ２、最適化ＩＬ２、トリプシノーゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、ネズミＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミンプレタンパク質、アズロシジンプレタンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ６、ＩＬ８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、及びＩＬ２１からなる群から選択される、請求項１～９のいずれか１項に記載の操作された細胞。
12. 前記第１のシグナルペプチド及び前記第２のシグナルペプチドが同一である、請求項１～１１のいずれか１項に記載の操作された細胞。
13. 各エフェクター分子が独立して、治療クラスから選択され、前記治療クラスが、サイトカイン、ケモカイン、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境モディファイヤーａ、受容体、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、及び酵素からなる群から選択され、任意選択で、前記第１のエフェクター分子及び前記第２のエフェクター分子の前記治療クラスが異なり、任意選択で、前記第１のエフェクター分子及び／または前記第２のエフェクター分子が、発現すると、操作されたＭＳＣの細胞膜に係留される、改変されたエフェクター分子である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の操作された細胞。
14. ｉ）前記サイトカインが、ＩＬ１２、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ７、ＩＬ２１、ＩＬ１８、ＩＬ１５、Ｉ型インターフェロン、及びインターフェロンガンマからなる群から選択され、
    ｉｉ）前記ケモカインが、ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１からなる群から選択され、
    ｉｉｉ）前記成長因子が、Ｆｌｔ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦからなる群から選択され、
    ｉｖ）前記共活性化分子が、４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌからなる群から選択され、
    ｖ）前記腫瘍微小環境モディファイヤーが、アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、及びＨＰＧＥ２からなる群から選択され、
    任意選択で、前記ＴＧＦベータ阻害剤が、抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－トラップ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、
    任意選択で、前記免疫チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体を含み、
    任意選択で、前記ＶＥＧＦ阻害剤が、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、またはそれらの組み合わせを含む、
    請求項１３に記載の操作された細胞。
15. 前記第１のエフェクター分子が、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質を含み、前記第２のエフェクター分子が、ＣＣＬ２１ａ、ＩＬ７、ＩＬ１５、ＩＬ２１、Ｆｌｔ３Ｌ、抗ＰＤ１抗体、ＣＤ４０Ｌ、またはＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質を含む、請求項１～１４のいずれか１項に記載の操作された細胞。
16. 前記発現カセットが、Ｅ２に続いて、５’から３’の向きで
    （Ｌ－Ｓ－Ｅ）_Ｘ
    を含む式を含む追加の外因性ポリヌクレオチド配列をさらに含み、
    式中、
    Ｓが、シグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
    Ｅが、エフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
    Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、
    Ｘ＝１～２０であり、
    前記プロモーターが、前記発現カセットと作動可能に連結され、各Ｘについて、対応するシグナルペプチドが、前記エフェクター分子と作動可能に結合し、
    任意選択で、追加のエフェクター分子の１つ以上が、ＩＬ１５、Ｆｌｔ３Ｌ、抗ＰＤ１抗体、アデノシンデアミナーゼ、ＣＤ４０Ｌ、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、及び／またはＸＣＬ１を含む、
    請求項１～１５のいずれか１項に記載の操作された細胞。
17. 構築物が、
    ａ）ＳＦＦＶプロモーターと、
    ｂ）５’から３’の向きで
    Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
    を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
    を含み、
    式中、
    Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、
    Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、
    Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、前記リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、
    Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、
    Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、
    前記ＳＦＦＶプロモーターが、前記発現カセットと作動可能に連結され、前記第１のシグナルペプチドが、前記第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、前記第２のシグナルペプチドが、前記第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、
    任意選択で、前記構築物が、配列番号１４４に示される前記ポリヌクレオチド配列を含む、
    請求項１～１６のいずれか１項に記載の操作された細胞。
18. 前記外因性ポリヌクレオチド配列が、１つ以上のウイルスベクターポリヌクレオチド配列を含み、任意選択で、前記１つ以上のウイルスベクターポリヌクレオチド配列が、レンチウイルス、レトロウイルス、レトロトランスポゾン、またはアデノウイルスのポリヌクレオチド配列を含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載の操作された細胞。
19. 請求項１～１８のいずれか１項に記載の１つ以上の操作された細胞を含む、細胞の集団。
20. 請求項１～１８のいずれか１項に記載の操作された細胞、または請求項１９に記載の細胞の集団を含む、薬学的組成物。
21. 対象において腫瘍体積を減少させる方法であって、前記方法が、請求項１～１８のいずれか１項に記載の操作された細胞、請求項１９に記載の細胞の集団のうちのいずれかを含む組成物、または請求項２０に記載の薬学的組成物を、腫瘍を有する対象に送達することを含み、任意選択で、前記操作された細胞が、前記対象に関して同種異系である、前記方法。
22. 対象において免疫応答を誘導する方法であって、前記方法が、治療有効量の請求項１～１８のいずれか１項に記載の操作された細胞、請求項１９に記載の細胞の集団、または請求項２０に記載の薬学的組成物のうちのいずれかを投与することを含み、任意選択で、前記操作された細胞が、前記対象に関して同種異系である、前記方法。
23. プロモーターと、
    ５’から３’の向きで
    Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
    を含む式で説明される発現カセットと
    を含む、外因性ポリヌクレオチド配列であって、
    式中、
    Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
    Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
    Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、
    Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
    Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
    前記プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結される、
    前記外因性ポリヌクレオチド配列。
24. 前記外因性ポリヌクレオチドが、
    ＳＦＦＶプロモーターと、
    ５’から３’の向きで
    Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
    を含む式で説明される発現カセットと
    を含む配列を含み、
    式中、
    Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ１２シグナルペプチドであり、
    Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第１のエフェクター分子が、ヒトＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質であり、
    Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、リンカーポリペプチド配列が、フューリン認識ポリペプチド配列、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙポリペプチド配列、及びＴ２Ａリボソームスキップタグを、Ｎ末端からＣ末端に向かって、フューリン：Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ：Ｔ２Ａの配置でコードし、
    Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のシグナルペプチドが、ヒトＩＬ２１シグナルペプチドであり、
    Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、第２のエフェクター分子が、ヒトＩＬ２１であり、
    前記ＳＦＦＶプロモーターが、前記発現カセットと作動可能に連結され、前記第１のシグナルペプチドが、前記第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、前記第２のシグナルペプチドが、前記第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、任意選択で、前記ポリヌクレオチド配列が、配列番号１４４に示される前記ポリヌクレオチド配列を含む、
    請求項２３に記載の外因性ポリヌクレオチド。
25. 対象において免疫応答を誘導する方法であって、前記方法が、免疫応答を誘導するのに有効な量で、腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する複数のエフェクター分子を産生するように操作された細胞を含む組成物を対象に送達することを含み、各操作された細胞が、
    ａ）プロモーターと、
    ｂ）５’から３’の向きで
    Ｓ１－Ｅ１－Ｌ－Ｓ２－Ｅ２
    を含む式で説明される発現カセットを含む、外因性ポリヌクレオチド配列と
    を含み、
    式中、
    Ｓ１が、第１のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
    Ｅ１が、第１のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
    Ｌが、リンカーポリヌクレオチド配列を含み、
    Ｓ２が、第２のシグナルペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含み、
    Ｅ２が、第２のエフェクター分子をコードするポリヌクレオチド配列を含み、
    前記プロモーターが、発現カセットと作動可能に連結され、第１のシグナルペプチドが、第１のエフェクター分子と作動可能に連結され、第２のシグナルペプチドが、第２のエフェクター分子と作動可能に連結され、
    前記操作された細胞が、間葉系幹細胞（ＭＳＣ）、幹細胞、免疫細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ＮＫＴ細胞、自然リンパ球系細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、肥満細胞、好酸球、好塩基球、単球、マクロファージ、好中球、骨髄細胞、樹状細胞、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、ウイルス特異的Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、制御性Ｔ細胞、及びＢ細胞からなる群から選択される、
    前記方法。
26. 前記構築物が、配列番号１４４に示されるポリヌクレオチド配列を含む、請求項２５に記載の方法。
27. 対象において免疫応答を誘導する方法であって、前記方法が、免疫応答を誘導するのに有効な量で、腫瘍媒介免疫抑制メカニズムを調節する複数のエフェクター分子を産生するように細胞を操作することができる組成物を対象に送達することを含み、前記組成物が、請求項２３または請求項２４に記載の外因性ポリヌクレオチドを含む、前記方法。
28. 前記組成物が、ウイルス系、トランスポゾン系、及びヌクレアーゼゲノム編集系からなる群から選択される送達系を含み、
    任意選択で、前記ウイルス系が、レンチウイルス、レトロウイルス、レトロトランスポゾン、及びアデノウイルスからなる群から選択され、
    任意選択で、前記ヌクレアーゼゲノム編集系が、ジンクフィンガー系、ＴＡＬＥＮ系、及びＣＲＩＳＰＲ系からなる群から選択される、
    請求項２７に記載の方法。
29. 前記方法が、チェックポイント阻害剤及び／または抗ＣＤ４０抗体を投与することをさらに含み、任意選択で、前記チェックポイント阻害剤が、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－１Ｌ抗体、または抗ＣＴＬＡ－４抗体である、請求項２５～２８のいずれか１項に記載の方法。

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