JP2024504613A - 分泌性ペイロード調節 - Google Patents

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ミシェル エリザベス ハン
ラッセル モリソン ゴードリー
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センティ バイオサイエンシズ インコーポレイテッド
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Abstract

本明細書中に記載されるのは、膜切断可能なキメラタンパク質及びデグロン融合キメラタンパク質を含むキメラタンパク質である。また、本明細書中に記載されるのは、それに関する核酸、医薬組成物、方法、及び治療の方法である。【選択図】図１

Description

関連出願
本出願は、２０２１年１月１４日に出願された米国仮特許出願第６３／１３７，４１９号の利益を主張し、それは、全ての目的のためにその全体において参照により本明細書中に組み入れられる。
配列表
本出願には、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出され、その全体が参照により本明細書に援用される配列表が含まれる。当該ＡＳＣＩＩコピーは、２０２２年１月１３日に作成されたが、ＳＴＢ－０１９ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔ，と名付けられ、サイズは１８３，８０６バイトである。
背景
癌は、世界のすべての国において、主要な死亡の原因であり、増加する平均余命に対する重要な障壁としてランク付けされている。世界中で、推定１，９３０万人の新規癌症例及びほぼ１，０００万人の癌死が２０２０年に生じた。さらに、２０１９年の世界保健機関（ＷＨＯ）のＧｌｏｂｅｌ Ｈｅａｌｔｈ Ｅｓｔｉｍａｔｅｓによれば、癌は、分析された１８３ヶ国の１１２ヶ国において年齢７０歳以前での第一又は第二の死亡の原因であり、分析されたさらに２３ヶ国において第三位又は第四位にランク付けされた。その後、癌を伴う個人及び社会全体の両方に対して、癌の顕著な財政的負担もある。米国単独でも、癌ケアのための費用は、２０２０年には２，０８９億ドルと推定されている。当技術分野では、癌を治療するための改善された組成物及び方法についてのニーズが依然として存在する。
概要
本明細書中で提供されるのは、一部の実施形態では、癌、例えば卵巣癌、乳癌、結腸癌、肺癌、及び膵臓癌などの標的化治療のための組み合わせの細胞ベースの免疫療法である。免疫療法は、腫瘍内及び／又は腫瘍の近く（「腫瘍微小環境（ＴＭＥ）」）で多因子調節を可能にする、操作された細胞回路に頼る。免疫療法の興奮させる進歩にもかかわらず、癌に対するその有効性は、限定されてきた。
本明細書中で提供される免疫療法は、しかし、腫瘍特異的であり、有効的であるが、しかし、全身毒性を限定する。この免疫療法は、調節された様式において、目的の腫瘍微小環境タンパク質、例えば免疫調節エフェクター分子などに送達される。送達媒体の設計は、癌治療における全体的な機能を改善させるために最適化されており、限定されないが、プロモーター、リンカー、シグナルペプチド、送達方法、免疫調節エフェクター分子の組み合わせ、調節、及び順序の最適化を含む。
腫瘍が、腫瘍細胞と周囲の間質の間での複雑な相互作用であることがますます認識されており、それは、細胞外マトリックス、癌関連間質細胞（ＭＳＣ及び線維芽細胞）、腫瘍血管系、及び免疫系を含む。ＴＭＥは、患者の自然免疫系及び適応免疫系の両方を標的化する複数の機構を通じて、抗腫瘍免疫応答を抑制する。例えば、腫瘍は、特定のケモカイン、例えばＣＣＬ２２などを産生することにより、従来のＴ細胞の抗腫瘍活性を抑制する調節性Ｔ細胞を動員及び誘導することができる。腫瘍はまた、Ｔ細胞及びＮＫ細胞の活性を阻害する分子、例えば免疫チェックポイント、例えばＰＤ－Ｌ１などを発現することができる。このように、単一の経路を標的化することは、固形腫瘍に対して頑強な有効性を達成するために不十分である可能性が高い。
本開示により包含されるエフェクター分子の非限定的な例は、サイトカイン、抗体、ケモカイン、ヌクレオチド、ペプチド、酵素、及び腫瘍溶解性ウイルスを含む。例えば、細胞は、以下のエフェクター分子の少なくとも一つ、二つ、三つ又はそれ以上を、調節された様式において発現及び分泌するように操作され得る：ＩＬ－１２、ＩＬ－１６、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－７、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＩＬ－１β、ＩＬ－２１、ＯＸ４０リガンド、ＣＤ４０Ｌ、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＴＧＦβ抗体、抗ＴＮＦＲ２、ＭＩＰ１α（ＣＣＬ３）、ＭＩＰ１β（ＣＣＬ５）、ＣＣＬ２１、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド、及び抗腫瘍ペプチド（例、抗腫瘍活性を有する抗菌ペプチド。例えば、Ｇａｓｐａｒ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．ＦｒｏｎｔＭｉｃｒｏｂｉｏｌ．２０１３；４：２９４；Ｃｈｕ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１５；１０（５）：ｅ０１２６３９０、及びｗｅｂｓｉｔｅ：ａｐｓ．ｕｎｍｃ．ｅｄｕ／ＡＰ／ｍａｉｎ．ｐｈｐを参照のこと）。
本明細書中で提供されるのは、プロモーターと膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列とを含む発現カセットを含む、操作された核酸であって、Ｎ末端からＣ末端に向かって配向されており、式：Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有し、それにおいて、Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、かつＤはデグロンを含み、それにおいて、プロモーターは、外因性ポリヌクレオチド配列に動作可能に連結され、かつ、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄは、単一ポリペプチドとして発現されるように構成されている。一部の態様では、操作された核酸は、以下からなる群から選択される：ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、及びネイキッドプラスミド。
一部の態様では、プロモーターは、構成的プロモーターである。一部の態様では、構成的プロモーターは、以下からなる群から選択される：ＣＡＧ、ＨＬＰ、ＣＭＶ、ＥＦＳ、ＳＦＦＶ、ＳＶ４０、ＭＮＤ、ＰＧＫ、ＵｂＣ、ｈＥＦ１ａＶ１、ｈＣＡＧＧ、ｈＥＦ１ａＶ２、ｈＡＣＴｂ、ｈｅＩＦ４Ａ１、ｈＧＡＰＤＨ、ｈＧＲＰ７８、ｈＧＲＰ９４、ｈＨＳＰ７０、ｈＫＩＮｂ、及びｈＵＢＩｂ。一部の態様では、プロモーターは、誘導性プロモーターである。一部の態様では、誘導性プロモーターは、以下からなる群から選択される：ｍｉｎＰ、ＮＦｋＢ応答エレメント、ＣＲＥＢ応答エレメント、ＮＦＡＴ応答エレメント、ＳＲＦ応答エレメント１、ＳＲＦ応答エレメント２、ＡＰ１応答エレメント、ＴＣＦ－ＬＥＦ応答エレメントプロモーター融合体、低酸素応答性エレメント、ＳＭＡＤ結合エレメント、ＳＴＡＴ３結合部位、ｍｉｎＣＭＶ、ＹＢ＿ＴＡＴＡ、ｍｉｎＴＫ、インデューサー分子応答性プロモーター、及びそれらのタンデムリピート。一部の態様では、プロモーターは、合成プロモーターである。一部の態様では、プロモーターは、組織特異的プロモーターである。
一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、分泌性エフェクター分子に対して天然である天然シグナルペプチドを含む。一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、分泌性エフェクター分子に対して非天然である非天然シグナルペプチドを含む。一部の態様では、非天然シグナルペプチドは、以下からなる群から選択される：ＩＬ１２、ＩＬ２、最適化ＩＬ２、トリプシオンゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、マウスＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミンプレタンパク質、アズロシジンプレタンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ６、ＩＬ８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、ＩＬ２１、ＣＤ８、及びＧＭＣＳＦ。
一部の態様では、分泌性エフェクター分子は治療クラスから選択され、それにおいて、治療クラスは、以下からなる群から選択される：サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ペプチド、及び酵素。一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、ヒト由来エフェクター分子である。一部の態様では、サイトカインは、以下からなる群から選択される：ＩＬ１－ベータ、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ１５、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１８、ＩＬ２１、ＩＬ２２、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン－ガンマ、及びＴＮＦ－アルファ。一部の態様では、ケモカインは、以下からなる群から選択される：ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１。一部の態様では、ホーミング分子は、以下からなる群から選択される：抗インテグリンアルファ４、ベータ７；抗ＭＡｄＣＡＭ；ＳＤＦｌ；及びＭＭＰ－２。一部の態様では、成長因子は、以下からなる群から選択される：ＦＬＴ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦ。一部の態様では、共活性化分子は、以下からなる群から選択される：４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌ。一部の態様では、腫瘍微小環境修飾因子は、以下からなる群から選択される：アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータインヒビター、免疫チェックポイントインヒビター、ＶＥＧＦインヒビター、及びＨＰＧＥ２。一部の態様では、ＴＧＦベータインヒビターは、以下からなる群から選択される：抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－ＴＲＡＰ、及びそれらの組み合わせ。一部の態様では、免疫チェックポイントインヒビターは、以下からなる群から選択される：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体。一部の態様では、ＶＥＧＦインヒビターは、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、又はそれらの組み合わせを含む。
一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、以下からなる群から選択されるプロテアーゼにより切断可能である：１型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ切断部位、ＳＩＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、フリンプロテアーゼ切断部位、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ切断部位、マトリプターゼプロテアーゼ切断部位、マトリプターゼ－２プロテアーゼ切断部位、ＭＭＰ９プロテアーゼ切断部位、及びＮＳ３プロテアーゼ切断部位。一部の態様では、細胞膜係留ドメインは、膜貫通－細胞内ドメイン又は膜貫通ドメインを含む。一部の態様では、膜貫通－細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインは、ＰＤＧＦＲベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＥｐｏＲ、又はＢＴＬＡから由来する。一部の態様では、細胞膜係留ドメインは、細胞表面受容体、又はその細胞膜結合部分を含む。一部の態様では、細胞中で発現された場合、分泌性エフェクター分子は、細胞の細胞膜に係留される。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼを発現する細胞中で発現される場合、分泌性エフェクター分子は、細胞膜から放出される。一部の態様では、細胞膜上に発現されるプロテアーゼは、細胞に対して内因性である。一部の態様では、プロテアーゼは、以下からなる群から選択される：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ－２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼ。一部の態様では、細胞膜上に発現されるプロテアーゼは、細胞に対して異種である。一部の態様では、プロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含む。一部の態様では、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ接合点切断部位を含む。一部の態様では、プロテアーゼは、プロテアーゼインヒビターによって抑制され得る。一部の態様では、プロテアーゼインヒビターは、以下からなる群から選択される：シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシロプレビル。一部の態様では、プロテアーゼの発現は、調節が可能である。
一部の態様では、免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）への応答においてセレブロン（ＣＲＢＮ）に結合することが可能でありそれにより分泌性エフェクター分子のユビキチン経路媒介性分解を促進するセレブロン（ＣＲＢＮ）ポリペプチド基質ドメインを、デグロンは含む。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、以下からなる群から選択される：ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫlａ、ＺＦＰ９１、ＧＳＰＴ１、ＭＥＩＳ２、ＧＳＳ Ｅ４Ｆ１、ＺＮ２７６、ＺＮ５１７、ＺＮ５８２、ＺＮ６５３、ＺＮ６５４、ＺＮ６９２、ＺＮ７８７、及びＺＮ８２７、又はＣＲＢＮの薬物誘導性結合が可能なその断片。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、天然ＣＲＢＮポリペプチド配列のキメラ融合産物である。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、ＦＮＶＬＭ ＶＨＫＲＳ ＨＴＧＥＲ ＰＬＱＣＥ ＩＣＧＦＴ ＣＲＱＫＧ ＮＬＬＲＨ ＩＫＬＨＴ ＧＥＫＰＦ ＫＣＨＬＣ ＮＹＡＣＱ ＲＲＤＡＬ（配列番号１８９）のアミノ酸配列を有するＩＫＺＦ３／ＺＦＰ９１／ＩＫＺＦ３キメラ融合産物である。一部の態様では、ＩＭｉＤはＦＤＡ承認薬物であり、それにおいて、ＩＭｉＤは、以下からなる群から選択される：サリドマイド、レナリドミド、及びポマリドミド。一部の態様では、デグロンは、ＨＣＶ ＮＳ４デグロン、ＰＥＳＴ（ヒトＩκＢαの残基２７７～３０７の二つのコピー）、ＧＲＲ（ヒトｐ１０５の残基３５２～４０８）、ＤＲＲ（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０～２９５）、ＳＮＳ（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（Ａ型インフルエンザ又はＢ型インフルエンザのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２）、ＲＰＢ（酵母ＲＰＢの残基１６８８～１７０２の四つのコピー）、ＳＰｍｉｘ（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（Ａ型インフルエンザウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２）、ＮＳ２（Ａ型インフルエンザウイルスＮＳタンパク質の残基７９～９３の三つのコピー）、ＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼの残基１０６～１４２）、Ｎｅｋ２Ａ、マウスＯＤＣ（残基４２２～４６１）、マウスＯＤＣ＿ＤＡ（Ｄ４３３Ａ及びＤ４３４Ａ点変異を含むｍＯＤＣの残基４２２～４６１）、ＡＰＣ／Ｃデグロン、ＣＯＰ１ Ｅ３リガーゼ結合デグロンモチーフ、ＣＲＬ４－Ｃｄｔ２結合ＰＩＰデグロン、アクチンフィリン結合デグロン、ＫＥＡＰ１結合デグロン、ＫＬＨＬ２及びＫＬＨＬ３結合デグロン、ＭＤＭ２結合モチーフ、Ｎ－デグロン、低酸素シグナル伝達におけるヒドロキシプロリン修飾、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＤＳＧｘｘＳ（配列番号１９０）リン依存的デグロン、Ｓｉａｈ結合モチーフ、ＳＰＯＰ ＳＢＣドッキングモチーフ、ならびにＰＣＮＡ結合ＰＩＰボックスからなる群から選択される。一部の態様では、デグロンは、細胞膜係留ドメインのＣ末端に局在化されている。
また、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかを含む発現ベクターである。一部の態様では、発現ベクターはウイルスベクターである。
また、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかによりコードされる膜切断可能なキメラタンパク質である。
また、本明細書中で提供されるのは、Ｎ末端からＣ末端に配向された膜切断可能なキメラタンパク質であって、式：Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有し、それにおいて、Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、Ｄはデグロンを含み、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄは、単一ポリペプチドとして発現されるように構成されている。
また、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか、又は本明細書中に記載される発現ベクターのいずれか、又は本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質のいずれかを含む単離細胞である。一部の態様では、細胞は、以下からなる群から選択される自己細胞又は同種細胞である：Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、赤血球、血小板細胞、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、及びｉＰＳＣ由来細胞。
また、本明細書中で提供されるのは、操作された核酸を含む単離細胞であって、それにおいて、操作された核酸は、プロモーターと膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列とを含む発現カセットを含み、Ｎ末端からＣ末端に配向されており、式：Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有し、それにおいて、Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、かつＤはデグロンを含み、それにおいて、プロモーターは、外因性ポリヌクレオチド配列に動作可能に連結され、かつ、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄは、単一ポリペプチドとして発現されるように構成されている。一部の態様では、細胞は、以下からなる群から選択される自己細胞又は同種細胞である：Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、赤血球、血小板細胞、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、及びｉＰＳＣ由来細胞。
一部の態様では、細胞は、抗原認識受容体をさらに含む。一部の態様では、抗原認識受容体は、以下からなる群から選択される抗原を認識する：５Ｔ４、ＡＤＡＭ９、ＡＦＰ、ＡＸＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ６、Ｃ４．４、ＣＡ６、カドヘリン３、カドヘリン６、ＣＣＲ４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１６６、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３５２、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、クローディン１８．２、ｃＭｅｔ、ＣＳＰＧ４、ＣＴＬＡ、ＤＬＫ１、ＤＬＬ３、ＤＲ５、ＥＧＦＲ、ＥＮＰＰ３、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、エフリンＡ４、ＥＴＢＲ、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＲアルファ、ＦＲｂ、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＦＲａ４、ｇｐＡ３３、ＧＰＣ３、ｇｐＮＢＭ、ＧＰＲＣ５、ＨＥＲ２、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１３Ｒａ、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ１ＲＡＰ、インテグリンａＶ、ＫＩＴ、Ｌ１ＣＡＭ、ＬＡＭＰ１、ルイスＹ、ＬｅＹ、ＬＩＶ－１、ＬＲＲＣ、ＬＹ６Ｅ、ＭＣＳＰ、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１Ｃ、ＮａＰｉ２Ｂ、ネクチン４、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ３、ＮＹ ＥＳＯ １、オバリン、Ｐカドヘリン、ｐａｎ－Ｅｒｂ２、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＲＯＲ１、Ｓ Ａｕｒｅｓ、ＳＣＴ、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＩＴＲＫ６、ＳＳＴＲ２、ＳＴＥＡＰ１、サバイビン、ＴＤＧＦ１、ＴＩＭ１、ＴＲＯＰ２、及びＷＴ１。一部の態様では、抗原認識受容体は、抗原結合ドメインを含む。一部の態様では、抗原結合ドメインは、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む。一部の態様では、ｓｃＦｖは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。一部の態様では、ＶＨ及びＶＬは、ペプチドリンカーにより分離される。一部の態様では、ｓｃＦｖは、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬ又はＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、それにおいて、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、Ｌはペプチドリンカーであり、かつＶＬは軽鎖可変ドメインである。一部の態様では、抗原認識受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。一部の態様では、ＣＡＲは、一つ又は複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、一つ又は複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、以下からなる群から選択される：ＣＤ３ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ９７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１１ａ－ＣＤ１８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１５４細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＺＡＰ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＧＩＴＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＨＶＥＭ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２細胞内シグナル伝達ドメイン、及びＭｙＤ８８細胞内シグナル伝達ドメイン。一部の態様では、ＣＡＲは、膜貫通ドメインを含み、膜貫通ドメインは、以下からなる群から選択される：ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ３ゼータ鎖膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０膜貫通ドメイン、ＩＣＯＳ膜貫通ドメイン、ＣＴＬＡ－４膜貫通ドメイン、ＰＤ－１膜貫通ドメイン、ＬＡＧ－３膜貫通ドメイン、２Ｂ４膜貫通ドメイン、及びＢＴＬＡ膜貫通ドメイン。一部の態様では、ＣＡＲは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの間にスペーサー領域を含む。
また、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか、本明細書中に記載される発現ベクターのいずれか、本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質のいずれか、又は本明細書中に記載される単離細胞いずれか、及び医薬的に許容可能な担体、医薬的に許容可能な賦形剤、又はその組み合わせを含む組成物である。
また、本明細書中で提供されるのは、それを必要とする対象を治療する方法であって、この方法は、本明細書中に記載される操作された核酸のいずれか、本明細書中に記載される発現ベクターのいずれか、本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質のいずれか、本明細書中に記載される単離細胞のいずれか、又は本明細書中に記載される組成物のいずれかを投与することを含む。
本明細書中で提供されるのは、プロモーターと膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列とを含む発現カセットを含む、操作された核酸であって、Ｎ末端からＣ末端に向かって配向されており、式：Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有し、それにおいて、Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、かつＤはデグロンを含み、それにおいて、プロモーターは、外因性ポリヌクレオチド配列に動作可能に連結され、かつ、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄは、単一ポリペプチドとして発現されるように構成されている。
一部の態様では、プロモーターは、構成的プロモーターである。一部の態様では、構成的プロモーターは、以下からなる群から選択される：ＣＡＧ、ＨＬＰ、ＣＭＶ、ＥＦＳ、ＳＦＦＶ、ＳＶ４０、ＭＮＤ、ＰＧＫ、ＵｂＣ、ｈＥＦ１ａＶ１、ｈＣＡＧＧ、ｈＥＦ１ａＶ２、ｈＡＣＴｂ、ｈｅＩＦ４Ａ１、ｈＧＡＰＤＨ、ｈＧＲＰ７８、ｈＧＲＰ９４、ｈＨＳＰ７０、ｈＫＩＮｂ、及びｈＵＢＩｂ。一部の態様では、プロモーターは、誘導性プロモーターである。一部の態様では、誘導性プロモーターは、以下からなる群から選択される：ｍｉｎＰ、ＮＦｋＢ応答エレメント、ＣＲＥＢ応答エレメント、ＮＦＡＴ応答エレメント、ＳＲＦ応答エレメント１、ＳＲＦ応答エレメント２、ＡＰ１応答エレメント、ＴＣＦ－ＬＥＦ応答エレメントプロモーター融合体、低酸素応答性エレメント、ＳＭＡＤ結合エレメント、ＳＴＡＴ３結合部位、ｍｉｎＣＭＶ、ＹＢ＿ＴＡＴＡ、ｍｉｎＴＫ、インデューサー分子応答性プロモーター、及びそれらのタンデムリピート。一部の態様では、プロモーターは、合成プロモーターである。一部の態様では、プロモーターは、組織特異的プロモーターである。
一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、シグナルペプチドを含む。一部の態様では、シグナルペプチドは、分泌性エフェクター分子に対して天然である天然シグナルペプチドを含む。一部の態様では、シグナルペプチドは、分泌性エフェクター分子に対して非天然である非天然シグナルペプチドを含む。一部の態様では、非天然シグナルペプチドは、以下からなる群から選択される：ＩＬ１２、ＩＬ２、最適化ＩＬ２、トリプシオンゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、マウスＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミンプレタンパク質、アズロシジンプレタンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ６、ＩＬ８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、ＩＬ２１、ＣＤ８、及びＧＭＣＳＦ。
一部の態様では、分泌性エフェクター分子は治療クラスから選択され、それにおいて、治療クラスは、以下からなる群から選択される：サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ペプチド、及び酵素。一部の態様では、サイトカインは、以下からなる群から選択される：ＩＬ１－ベータ、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ１５、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１８、ＩＬ２１、ＩＬ２２、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン－ガンマ、及びＴＮＦ－アルファ。一部の態様では、ケモカインは、以下からなる群から選択される：ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１。一部の態様では、ホーミング分子は、以下からなる群から選択される：抗インテグリンアルファ４、ベータ７；抗ＭＡｄＣＡＭ；ＳＤＦｌ；及びＭＭＰ－２。一部の態様では、成長因子は、以下からなる群から選択される：ＦＬＴ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦ。一部の態様では、共活性化分子は、以下からなる群から選択される：４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌ。一部の態様では、腫瘍微小環境修飾因子は、以下からなる群から選択される：アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータインヒビター、免疫チェックポイントインヒビター、ＶＥＧＦインヒビター、及びＨＰＧＥ２。一部の態様では、ＴＧＦベータインヒビターは、以下からなる群から選択される：抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－ＴＲＡＰ、及びそれらの組み合わせ。一部の態様では、免疫チェックポイントインヒビターは、以下からなる群から選択される：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭｌ抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体。一部の態様では、ＶＥＧＦインヒビターは、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、又はそれらの組み合わせを含む。一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、ヒト由来エフェクター分子である。
一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、以下からなる群から選択されるプロテアーゼにより切断可能である：１型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ切断部位、ＳＩＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、フリンプロテアーゼ切断部位、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ切断部位、マトリプターゼプロテアーゼ切断部位、マトリプターゼ－２プロテアーゼ切断部位、ＭＭＰ９プロテアーゼ切断部位、及びＮＳ３プロテアーゼ切断部位。
一部の態様では、細胞膜係留ドメインは、膜貫通－細胞内ドメイン又は膜貫通ドメインを含む。一部の態様では、膜貫通－細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインは、ＰＤＧＦＲ ベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＥｐｏＲ、又はＢＴＬＡから由来する。一部の態様では、細胞膜係留ドメインは、細胞表面受容体、又はその細胞膜結合部分を含む。
一部の態様では、細胞中で発現された場合、分泌性エフェクター分子は、細胞の細胞膜に係留される。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼを発現する細胞中で発現される場合、分泌性エフェクター分子は、細胞膜から放出される。一部の態様では、細胞膜上に発現されるプロテアーゼは、細胞に対して内因性である。一部の態様では、プロテアーゼは、以下からなる群から選択される：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ－２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼ。一部の態様では、細胞膜上に発現されるプロテアーゼは、細胞に対して異種である。一部の態様では、プロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含む。一部の態様では、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ接合点切断部位を含む。一部の態様では、プロテアーゼは、プロテアーゼインヒビターによって抑制され得る。一部の態様では、プロテアーゼインヒビターは、以下からなる群から選択される：シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシロプレビル。一部の態様では、プロテアーゼの発現は、調節が可能である。
一部の態様では、免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）への応答においてセレブロン（ＣＲＢＮ）に結合することが可能でありそれにより分泌性エフェクター分子のユビキチン経路媒介性分解を促進するセレブロン（ＣＲＢＮ）ポリペプチド基質ドメインを、デグロンは含む。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、以下からなる群から選択される：ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫlａ、ＺＦＰ９１、ＧＳＰＴ１、ＭＥＩＳ２、ＧＳＳ Ｅ４Ｆ１、ＺＮ２７６、ＺＮ５１７、ＺＮ５８２、ＺＮ６５３、ＺＮ６５４、ＺＮ６９２、ＺＮ７８７、及びＺＮ８２７、又はＣＲＢＮの薬物誘導性結合が可能なその断片。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、天然ＣＲＢＮポリペプチド配列のキメラ融合産物である。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、ＦＮＶＬＭ ＶＨＫＲＳ ＨＴＧＥＲ ＰＬＱＣＥ ＩＣＧＦＴ ＣＲＱＫＧ ＮＬＬＲＨ ＩＫＬＨＴ ＧＥＫＰＦ ＫＣＨＬＣ ＮＹＡＣＱ ＲＲＤＡＬ（配列番号１８９）のアミノ酸配列を有するＩＫＺＦ３／ＺＦＰ９１／ＩＫＺＦ３キメラ融合産物である。一部の態様では、ＩＭｉＤは、ＦＤＡ承認薬物である。一部の態様では、ＩＭｉＤは、以下からなる群から選択される：サリドマイド、レナリドミド、及びポマリドミド。
一部の態様では、デグロンは、ＨＣＶ ＮＳ４デグロン、ＰＥＳＴ（ヒトＩκＢαの残基２７７～３０７の二つのコピー）、ＧＲＲ（ヒトｐ１０５の残基３５２～４０８）、ＤＲＲ（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０～２９５）、ＳＮＳ（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（Ａ型インフルエンザ又はＢ型インフルエンザのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２）、ＲＰＢ（酵母ＲＰＢの残基１６８８～１７０２の四つのコピー）、ＳＰｍｉｘ（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（Ａ型インフルエンザウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２）、ＮＳ２（Ａ型インフルエンザウイルスＮＳタンパク質の残基７９～９３の三つのコピー）、ＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼの残基１０６～１４２）、Ｎｅｋ２Ａ、マウスＯＤＣ（残基４２２～４６１）、マウスＯＤＣ＿ＤＡ（Ｄ４３３Ａ及びＤ４３４Ａ点変異を含むｍＯＤＣの残基４２２～４６１）、ＡＰＣ／Ｃデグロン、ＣＯＰ１ Ｅ３リガーゼ結合デグロンモチーフ、ＣＲＬ４－Ｃｄｔ２結合ＰＩＰデグロン、アクチンフィリン結合デグロン、ＫＥＡＰ１結合デグロン、ＫＬＨＬ２及びＫＬＨＬ３結合デグロン、ＭＤＭ２結合モチーフ、Ｎ－デグロン、低酸素シグナル伝達におけるヒドロキシプロリン修飾、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＤＳＧｘｘＳ（配列番号１９０）リン依存的デグロン、Ｓｉａｈ結合モチーフ、ＳＰＯＰ ＳＢＣドッキングモチーフ、ならびにＰＣＮＡ結合ＰＩＰボックスからなる群から選択される。一部の態様では、デグロンは、細胞膜係留ドメインのＣ末端に局在化されている。
一部の態様では、操作された核酸は、以下からなる群から選択される：ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、及びネイキッドプラスミド。
また、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかを含む発現ベクターである。一部の態様では、発現ベクターはウイルスベクターである。一部の態様では、ウイルスベクターはレンチウイルスベクターである。
また、本明細書中で提供されるのは、Ｎ末端からＣ末端に配向された膜切断可能なキメラタンパク質であって、式：Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有し、それにおいて、Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、Ｄはデグロンを含み、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄは、単一ポリペプチドとして発現されるように構成されている。
一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、シグナルペプチドを含む。一部の態様では、シグナルペプチドは、分泌性エフェクター分子に対して天然である天然シグナルペプチドを含む。一部の態様では、シグナルペプチドは、分泌性エフェクター分子に対して非天然である非天然シグナルペプチドを含む。一部の態様では、非天然シグナルペプチドは、以下からなる群から選択される：ＩＬ１２、ＩＬ２、最適化ＩＬ２、トリプシオンゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、マウスＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミンプレタンパク質、アズロシジンプレタンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ６、ＩＬ８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、ＩＬ２１、ＣＤ８、及びＧＭＣＳＦ。
一部の態様では、分泌性エフェクター分子は治療クラスから選択され、それにおいて、治療クラスは、以下からなる群から選択される：サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ペプチド、及び酵素。一部の態様では、サイトカインは、以下からなる群から選択される：ＩＬ１－ベータ、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ１５、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１８、ＩＬ２１、ＩＬ２２、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン－ガンマ、及びＴＮＦ－アルファ。一部の態様では、ケモカインは、以下からなる群から選択される：ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１。一部の態様では、ホーミング分子は、以下からなる群から選択される：抗インテグリンアルファ４、ベータ７；抗ＭＡｄＣＡＭ；ＳＤＦｌ；及びＭＭＰ－２。一部の態様では、成長因子は、以下からなる群から選択される：ＦＬＴ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦ。一部の態様では、共活性化分子は、以下からなる群から選択される：４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌ。一部の態様では、腫瘍微小環境修飾因子は、以下からなる群から選択される：アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータインヒビター、免疫チェックポイントインヒビター、ＶＥＧＦインヒビター、及びＨＰＧＥ２。一部の態様では、ＴＧＦベータインヒビターは、以下からなる群から選択される：抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－ＴＲＡＰ、及びそれらの組み合わせ。一部の態様では、免疫チェックポイントインヒビターは、以下からなる群から選択される：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭｌ抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体。一部の態様では、ＶＥＧＦインヒビターは、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、又はそれらの組み合わせを含む。一部の態様では、分泌性エフェクター分子は、ヒト由来エフェクター分子である。
一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、以下からなる群から選択されるプロテアーゼにより切断可能である：１型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ切断部位、ＳＩＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、フリンプロテアーゼ切断部位、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ切断部位、マトリプターゼプロテアーゼ切断部位、マトリプターゼ－２プロテアーゼ切断部位、ＭＭＰ９プロテアーゼ切断部位、及びＮＳ３プロテアーゼ切断部位。
一部の態様では、細胞膜係留ドメインは、膜貫通－細胞内ドメイン又は膜貫通ドメインを含む。一部の態様では、膜貫通－細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインは、ＰＤＧＦＲ ベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＥｐｏＲ、又はＢＴＬＡから由来する。一部の態様では、細胞膜係留ドメインは、細胞表面受容体、又はその細胞膜結合部分を含む。一部の態様では、細胞中で発現された場合、分泌性エフェクター分子は、細胞の細胞膜に係留される。
一部の態様では、プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼを発現する細胞中で発現される場合、分泌性エフェクター分子は、細胞膜から放出される。一部の態様では、細胞膜上に発現されるプロテアーゼは、細胞に対して内因性である。一部の態様では、プロテアーゼは、以下からなる群から選択される：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ－２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼ。一部の態様では、細胞膜上に発現されるプロテアーゼは、細胞に対して異種である。一部の態様では、プロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含む。一部の態様では、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ接合点切断部位を含む。
一部の態様では、プロテアーゼは、プロテアーゼインヒビターによって抑制され得る。一部の態様では、プロテアーゼインヒビターは、以下からなる群から選択される：シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシロプレビル。
一部の態様では、プロテアーゼは、デグロンをさらに含む。一部の態様では、プロテアーゼの発現は、調節が可能である。
一部の態様では、免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）への応答においてセレブロン（ＣＲＢＮ）に結合することが可能でありそれにより分泌性エフェクター分子のユビキチン経路媒介性分解を促進するセレブロン（ＣＲＢＮ）ポリペプチド基質ドメインを、デグロンは含む。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、以下からなる群から選択される：ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫlａ、ＺＦＰ９１、ＧＳＰＴ１、ＭＥＩＳ２、ＧＳＳ Ｅ４Ｆ１、ＺＮ２７６、ＺＮ５１７、ＺＮ５８２、ＺＮ６５３、ＺＮ６５４、ＺＮ６９２、ＺＮ７８７、及びＺＮ８２７、又はＣＲＢＮの薬物誘導性結合が可能なその断片。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、天然ＣＲＢＮポリペプチド配列のキメラ融合産物である。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、ＦＮＶＬＭ ＶＨＫＲＳ ＨＴＧＥＲ ＰＬＱＣＥ ＩＣＧＦＴ ＣＲＱＫＧ ＮＬＬＲＨ ＩＫＬＨＴ ＧＥＫＰＦ ＫＣＨＬＣ ＮＹＡＣＱ ＲＲＤＡＬ（配列番号１８９）のアミノ酸配列を有するＩＫＺＦ３／ＺＦＰ９１／ＩＫＺＦ３キメラ融合産物である。一部の態様では、ＩＭｉＤは、ＦＤＡ承認薬物である。一部の態様では、ＩＭｉＤは、以下からなる群から選択される：サリドマイド、レナリドミド、及びポマリドミド。
一部の態様では、デグロンは、ＨＣＶ ＮＳ４デグロン、ＰＥＳＴ（ヒトＩκＢαの残基２７７～３０７の二つのコピー）、ＧＲＲ（ヒトｐ１０５の残基３５２～４０８）、ＤＲＲ（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０～２９５）、ＳＮＳ（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（Ａ型インフルエンザ又はＢ型インフルエンザのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２）、ＲＰＢ（酵母ＲＰＢの残基１６８８～１７０２の四つのコピー）、ＳＰｍｉｘ（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（Ａ型インフルエンザウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２）、ＮＳ２（Ａ型インフルエンザウイルスＮＳタンパク質の残基７９～９３の三つのコピー）、ＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼの残基１０６～１４２）、Ｎｅｋ２Ａ、マウスＯＤＣ（残基４２２～４６１）、マウスＯＤＣ＿ＤＡ（Ｄ４３３Ａ及びＤ４３４Ａ点変異を含むｍＯＤＣの残基４２２～４６１）、ＡＰＣ／Ｃデグロン、ＣＯＰ１ Ｅ３リガーゼ結合デグロンモチーフ、ＣＲＬ４－Ｃｄｔ２結合ＰＩＰデグロン、アクチンフィリン結合デグロン、ＫＥＡＰ１結合デグロン、ＫＬＨＬ２及びＫＬＨＬ３結合デグロン、ＭＤＭ２結合モチーフ、Ｎ－デグロン、低酸素シグナル伝達におけるヒドロキシプロリン修飾、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＤＳＧｘｘＳ（配列番号１９０）リン依存的デグロン、Ｓｉａｈ結合モチーフ、ＳＰＯＰ ＳＢＣドッキングモチーフ、ならびにＰＣＮＡ結合ＰＩＰボックスからなる群から選択される。一部の態様では、デグロンは、細胞膜係留ドメインのＣ末端に局在化されている。
また、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか、又は本明細書中に記載される発現ベクターのいずれか、又は本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質のいずれか、及び医薬的に許容可能な担体を含む組成物である。
また、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか、又は本明細書中に記載される発現ベクターのいずれか、又は本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質のいずれかを含む単離細胞である。
また、本明細書中で提供されるのは、操作された核酸を含む単離細胞であって、それにおいて、操作された核酸は、プロモーターと膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列とを含む発現カセットを含み、Ｎ末端からＣ末端に配向されており、式：Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有し、それにおいて、Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、かつＤはデグロンを含み、それにおいて、プロモーターは、外因性ポリヌクレオチド配列に動作可能に連結され、かつ、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄは、単一ポリペプチドとして発現されるように構成されている。
一部の態様では、操作された核酸を、組換え発現させる。一部の態様では、操作された核酸を、ベクター、又は細胞のゲノムからの選択された遺伝子座から発現させる。
また、本明細書中で提供されるのは、膜切断可能なキメラタンパク質を含む単離細胞であって、それにおいて、Ｎ末端からＣ末端に配向された膜切断可能なキメラタンパク質は、式：Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有し、それにおいて、Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、Ｄはデグロンを含み、ならびに、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄは、単一ポリペプチドとして発現されるように構成されている。
一部の態様では、細胞は、以下からなる群から選択される：Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、赤血球、血小板細胞、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、及びｉＰＳＣ由来細胞。一部の態様では、細胞は、自家である。一部の態様では、細胞は、同種である。一部の態様では、細胞は、以下からなる群から選択される腫瘍細胞である：膀胱腫瘍細胞、脳腫瘍細胞、乳房腫瘍細胞、子宮頸部腫瘍細胞、結腸直腸腫瘍細胞、食道腫瘍細胞、神経膠腫細胞、腎臓腫瘍細胞、肝臓腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、メラノーマ細胞、卵巣腫瘍細胞、膵臓腫瘍細胞、前立腺腫瘍細胞、皮膚腫瘍細胞、甲状腺腫瘍細胞、及び子宮腫瘍細胞。
一部の態様では、細胞を、腫瘍溶解性ウイルスを用いた形質導入を介して操作した。一部の態様では、腫瘍溶解性ウイルスは、以下からなる群から選択される：腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス、腫瘍溶解性アデノウイルス、腫瘍溶解性麻疹ウイルス、腫瘍溶解性インフルエンザウイルス、腫瘍溶解性インディアナベシクロウイルス、腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、腫瘍溶解性ポリオウイルス、腫瘍溶解性粘液腫ウイルス、腫瘍溶解性レオウイルス、腫瘍溶解性ムンプスウイルス、腫瘍溶解性マラバウイルス、腫瘍溶解性狂犬病ウイルス、腫瘍溶解性ロタウイルス、腫瘍溶解性肝炎ウイルス、腫瘍溶解性ルベラウイルス、腫瘍溶解性デングウイルス、腫瘍溶解性チクングニアウイルス、腫瘍溶解性呼吸器合胞体ウイルス、腫瘍溶解性リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、腫瘍溶解性モルビリウイルス、腫瘍溶解性レンチウイルス、腫瘍溶解性複製レトロウイルス、腫瘍溶解性ラブドウイルス、腫瘍溶解性セネカバレーウイルス、腫瘍溶解性シンドビスウイルス、及びそれらの任意のバリアント又は誘導体。一部の態様では、腫瘍溶解性ウイルスは、第一の発現カセット及び第二の発現カセットを含む組換え腫瘍溶解性ウイルスである。
一部の態様では、細胞は、プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼをさらに含む。一部の態様では、プロテアーゼは、内因性プロテアーゼを含む。一部の態様では、内因性プロテアーゼは、以下からなる群から選択される：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ－２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼ。一部の態様では、プロテアーゼは、異種プロテアーゼである。一部の態様では、異種プロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である。一部の態様では、プロテアーゼは、細胞の細胞膜上に発現される。一部の態様では、プロテアーゼは、プロテアーゼ切断部位を切断することが可能である。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位の切断によって、細胞の細胞膜から分泌性エフェクター分子が放出される。
一部の態様では、細胞は、抗原認識受容体をさらに含む。一部の態様では、抗原認識受容体は、以下からなる群から選択される抗原を認識する：５Ｔ４、ＡＤＡＭ９、ＡＦＰ、ＡＸＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ６、Ｃ４．４、ＣＡ６、カドヘリン３、カドヘリン６、ＣＣＲ４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１６６、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３５２、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、クローディン１８．２、ｃＭｅｔ、ＣＳＰＧ４、ＣＴＬＡ、ＤＬＫ１、ＤＬＬ３、ＤＲ５、ＥＧＦＲ、ＥＮＰＰ３、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、エフリンＡ４、ＥＴＢＲ、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＲアルファ、ＦＲｂ、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＦＲａ４、ｇｐＡ３３、ＧＰＣ３、ｇｐＮＢＭ、ＧＰＲＣ５、ＨＥＲ２、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１３Ｒａ、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ１ＲＡＰ、インテグリンａＶ、ＫＩＴ、Ｌ１ＣＡＭ、ＬＡＭＰ１、ルイスＹ、ＬｅＹ、ＬＩＶ－１、ＬＲＲＣ、ＬＹ６Ｅ、ＭＣＳＰ、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１Ｃ、ＮａＰｉ２Ｂ、ネクチン４、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ３、ＮＹ ＥＳＯ １、オバリン、Ｐカドヘリン、ｐａｎ－Ｅｒｂ２、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＲＯＲ１、Ｓ Ａｕｒｅｓ、ＳＣＴ、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＩＴＲＫ６、ＳＳＴＲ２、ＳＴＥＡＰ１、サバイビン、ＴＤＧＦ１、ＴＩＭ１、ＴＲＯＰ２、及びＷＴ１。一部の態様では、抗原認識受容体は、抗原結合ドメインを含む。一部の態様では、抗原結合ドメインは、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む。一部の態様では、抗原結合ドメインは、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。一部の態様では、ｓｃＦｖは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。一部の態様では、ＶＨ及びＶＬは、ペプチドリンカーにより分離される。一部の態様では、ｓｃＦｖは、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬ又はＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、それにおいて、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、Ｌはペプチドリンカーであり、かつＶＬは軽鎖可変ドメインである。一部の態様では、抗原認識受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。一部の態様では、抗原認識受容体が、ＰＦ－０６２６３５０７、ＡＳＮ００４、ＧＥＮ１０４４、ＭＧＡ０２１、ＹＷ３２７．６Ｓ２、Ｄ９、Ｅ８、Ｍａｂ１７３、オブリダタマブ、ｍＡｂ３７８．９６、ＸＭＴ－１６６０、ルパルツマブ アマドチン、ＨＫＴ２８８、モガムリズマブ、ＣＳＬ３６２、ＡＣ１３３、ＡＣ１４１、ＶＩＳ８３２、ＣＸ－２００９、ダクリズマブ、バシリキシマブ、ブレンツキシマブ ベドチン、ＳＧＮ－ＣＤ３５２Ａ、ＩＭＧＮ５２９、リロトマブ、ダラツムマブ、ビバツズマブ、ｍ９００、ｍ９０６、ラベツズマブ、ＲＯ６９５８６８８、ＭＦＥ－２３、ＡＲＧＸ－１１０、ボルセツズマブ マホドチン、ＩＮＡ０１、ミラツズマブ、ポラツズマブ ベドチン、ガリキシマブ、ポラツズマブ ベドチン、ガリキシマブ、クラウディキシマブ、ゾルベツキシマブ、アミバンタマブ、オナルツズマブ、エミベツズマブ、ＡＲＧＸ－１１１、ＹＹＢ－１０１、ＴＰ４１．２、イピリムマブ、ＡＫ１０４、ロバルピツズマブ テシリン、ＴＲＡ－８、ザパジシン－１、セツキシマブ、パニツムマブ、アデカツムマブ、ＤＳ－８８９５ａ、ＰＦ－０６６４７２６３、ＤＥＤＮ６５２６Ａ、ＢＡＹ １１７９４７０、ベマリツズマブ、ＭＯＲＡｂ－００３、ＩＭＧＮ８５３、ＭＬＮ０２６４、ＴＡＫ－２６４、ジヌツキシマブ、ＭＧＤ００７、Ａ３３ｓｃＦｖ－Ｆｃ、コドリツズマブ、ＥＲＹ９７４、グレンバツムマブ（ＣＲ０１１）、タケタマブ、トラスツズマブ、ＡＳＬＡＮ００４、ＡＢＸ－ＩＬ８、ＢＭＳ－９８６２５３、ＫＤ０３３、ＫＴＮ０１５８、ｍ３ｓ１９３ＢｓＡｂ、ｈｕ３Ｓ１９３、ＳＧＮ－ＬＩＶ１Ａ、ＤＬＹＥ５９５３Ａ、ＭＭＯＴ０５３０Ａ、ＢＭＳ－９８６１４８、アネツマブ ラヴタシン、ペムツモマブ、ガチポツズマブ、オレゴボマブ、アバゴボマブ、Ｍａｂ－ＡＲ－９．６、ＸＭＴ－１５９２、ウピフィタマブ リルソドチン、リファツズマブ ベドチン、エフォルツマブ ベドチン、ＮＮＣ０１４２－０００２、ＰＦ－０３７３２０１０、ＡＧＳ－１Ｃ４Ｄ４、ＫＭ２７７７、ＫＭ２８１２、ＭＴ１１２、コフェツズマブペリドチン、ジロベルタマブ ベドチン、エロツズマブ、ＡＳＧ－１５ＭＥ、チデュタマブ、バンドルツズマブ ベドチン、ＡＭＧ５０９、ＢＩＩＢ０１５、ＲＭＴ１－１０、サシツズマブ ゴビテカン－ｈｚｉｙ、又はＦ７ＡＫ３から由来する抗原結合ドメインを含む。
一部の態様では、抗原認識受容体は、ＣＡＲである。一部の態様では、ＣＡＲは、一つ又は複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、一つ又は複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、以下からなる群から選択される：ＣＤ３ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ９７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１１ａ－ＣＤ１８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１５４細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＺＡＰ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＧＩＴＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＨＶＥＭ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２細胞内シグナル伝達ドメイン、及びＭｙＤ８８細胞内シグナル伝達ドメイン。一部の態様では、ＣＡＲは、膜貫通ドメインを含み、膜貫通ドメインは、以下からなる群から選択される：ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ３ゼータ鎖膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０膜貫通ドメイン、ＩＣＯＳ膜貫通ドメイン、ＣＴＬＡ－４膜貫通ドメイン、ＰＤ－１膜貫通ドメイン、ＬＡＧ－３膜貫通ドメイン、２Ｂ４膜貫通ドメイン、及びＢＴＬＡ膜貫通ドメイン。一部の態様では、ＣＡＲは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの間にスペーサー領域を含む。
また、本明細書中で提供されているのは、本明細書中に記載されている、単離細胞のいずれか、及び医薬的に許容可能な担体を含む組成物である。
また、本明細書中で提供されているのは、それを必要とする対象を治療する方法であって、この方法は、本明細書中に記載されている、治療有効用量の単離細胞又は本明細書中に記載されている組成物のいずれかを投与することを含む。一部の態様では、単離細胞は、対象から由来する。一部の態様では、単離細胞は、対象に関して同種である。一部の態様では、方法は、チェックポイントインヒビターを投与することをさらに含む。一部の態様では、このチェックポイントインヒビターは、以下からなる群から選択される：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体。一部の態様では、方法は、抗ＣＤ４０抗体を投与することをさらに含む。
また、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか、又は本明細書中に記載される発現ベクターのいずれか、又は本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質のいずれかを含む脂質ベースの構造体である。一部の態様では、脂質ベースの構造体は、細胞外小胞を含む。一部の態様では、細胞外小胞は、以下からなる群から選択される：ナノ小胞及びエキソソーム。一部の態様では、脂質ベースの構造は、脂質ナノ粒子又はミセルを含む。一部の態様では、脂質ベースの構造は、リポソームを含む。
また、本明細書中で提供されているのは、、本明細書中に記載される脂質ベースの構造のいずれか、及び医薬的に許容可能な担体を含む組成物である。
また、本明細書中で提供されているのは、それを必要とする対象を治療する方法であって、この方法は、本明細書中に記載される、治療有効用量の脂質ベースの構造のいずれか又は本明細書中に記載される組成物のいずれかを投与することを含む。一部の態様では、投与は、全身投与を含む。一部の態様では、脂質ベースの構造は、対象において細胞を操作することが可能である。一部の態様では、方法は、チェックポイントインヒビターを投与することをさらに含む。一部の態様では、このチェックポイントインヒビターは、以下からなる群から選択される：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体。一部の態様では、方法は、抗ＣＤ４０抗体を投与することをさらに含む。
また、本明細書中で提供されているのは、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか、又は本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質のいずれかを含むナノ粒子である。一部の態様では、ナノ粒子は無機材料を含む。
また、本明細書中で提供されているのは、本明細書中に記載されるナノ粒子のいずれかを含む組成物である。
また、本明細書中で提供されているのは、それを必要とする対象を治療する方法であって、この方法は、本明細書中に記載される、治療有効用量のナノ粒子のいずれか、又は本明細書中に記載される組成物のいずれかを投与することを含む。一部の態様では、投与は、全身投与を含む。一部の態様では、このナノ粒子は、対象において細胞を改変することが可能である。一部の態様では、方法は、チェックポイントインヒビターを投与することをさらに含む。一部の態様では、このチェックポイントインヒビターは、以下からなる群から選択される：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体。一部の態様では、方法は、抗ＣＤ４０抗体を投与することをさらに含む。
また、本明細書中で提供されているのは、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか、又は本明細書中に記載される発現ベクターのいずれかを含むように操作されたウイルスである。一部の態様では、ウイルスは、以下からなる群から選択される：レンチウイルス、レトロウイルス、腫瘍溶解性ウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、及びウイルス様粒子（ＶＬＰ）。
また、本明細書中で提供されているのは、本明細書中に記載される、操作されたウイルスのいずれか、及び医薬的に許容可能な担体を含む組成物である。
また、本明細書中で提供されているのは、それを必要とする対象を治療する方法であって、この方法は、本明細書中に記載される操作されたウイルスのいずれか、又は本明細書中に記載される組成物のいずれかの治療有効用量を投与することを含む。一部の態様では、投与は、全身投与を含む。一部の態様では、操作されたウイルスは、対象において細胞に感染して、発現カセットを発現する。一部の態様では、方法は、チェックポイントインヒビターを投与することをさらに含む。一部の態様では、このチェックポイントインヒビターは、以下からなる群から選択される：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体。一部の態様では、方法は、抗ＣＤ４０抗体を投与することをさらに含む。
また、本明細書中で提供されるのは、膜係留エフェクター分子の放出を誘導する方法であって、以下を含む：ａ）細胞を提供することであって、それにおいて、細胞は、膜結合プロテアーゼ及び膜切断可能なキメラタンパク質を含み、Ｎ末端からＣ末端に配向されており、式：Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有し、それにおいて、Ｓはエフェクター分子を含み、Ｃは同族膜結合プロテアーゼ切断部位を含み、ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、Ｄはデグロンを含み、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄは、単一ポリペプチドとして発現されるように構成されている、提供すること；ならびにｂ）膜結合プロテアーゼ及び膜切断可能なキメラタンパク質の発現のために適切な条件下で細胞を培養することであって、それにおいて、発現時に、膜切断可能なキメラタンパク質は、細胞の細胞膜に係留され、それにおいて、発現時に、膜結合プロテアーゼは、膜切断可能なキメラタンパク質の同族膜結合プロテアーゼ切断部位を切断し、それにより、エフェクター分子を細胞膜から放出する、培養すること。一部の態様では、デグロンは、薬物誘導性デグロンである。一部の態様では、方法は、細胞に、デグロンを誘導する薬物を接触させることをさらに含む。一部の態様では、デグロンの誘導によって、膜切断可能なキメラタンパク質が分解される。
また、本明細書中で提供されるのは、膜係留エフェクター分子を分解する方法であって、以下を含む：ａ）細胞を提供することであって、それにおいて、細胞は、膜結合プロテアーゼ及び膜切断可能なキメラタンパク質を含み、Ｎ末端からＣ末端に配向されており、式：Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有し、それにおいて、Ｓはエフェクター分子を含み、Ｃは同族膜結合プロテアーゼ切断部位を含み、ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、Ｄは薬物誘導性デグロンを含み、それにおいて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄは、単一ポリペプチドとして発現されるように構成されている、提供すること；ｂ）膜結合プロテアーゼ及び膜切断可能なキメラタンパク質の発現のために適切な条件下で細胞を培養することであって、それにおいて、発現時に、膜切断可能なキメラタンパク質は、細胞の細胞膜に係留される、培養すること；ならびにｃ）細胞を薬物と接触させることによりデグロンを誘導することであって、それにおいて、デグロンのデグロン誘導によって、膜切断可能なキメラタンパク質が分解される、誘導すること。一部の態様では、エフェクター分子は、シグナルペプチドを含む。
一部の態様では、シグナルペプチドは、エフェクター分子に対して天然である天然シグナルペプチドを含む。一部の態様では、シグナルペプチドは、エフェクター分子に対して非天然である非天然シグナルペプチドを含む。一部の態様では、非天然シグナルペプチドは、以下からなる群から選択される：ＩＬ１２、ＩＬ２、最適化ＩＬ２、トリプシオンゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、マウスＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミンプレタンパク質、アズロシジンプレタンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ６、ＩＬ８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、ＩＬ２１、ＣＤ８、及びＧＭＣＳＦ。
一部の態様では、エフェクター分子は治療クラスから選択され、それにおいて、治療クラスは、以下からなる群から選択される：サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、及び酵素。一部の態様では、サイトカインは、以下からなる群から選択される：ＩＬ１－ベータ、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ１５、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１８、ＩＬ２１、ＩＬ２２、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン－ガンマ、及びＴＮＦ－アルファ。一部の態様では、ケモカインは、以下からなる群から選択される：ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１。一部の態様では、ホーミング分子は、以下からなる群から選択される：抗インテグリンアルファ４、ベータ７；抗ＭＡｄＣＡＭ；ＳＤＦｌ；及びＭＭＰ－２。一部の態様では、成長因子は、以下からなる群から選択される：ＦＬＴ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦ。一部の態様では、共活性化分子は、以下からなる群から選択される：４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌ。一部の態様では、腫瘍微小環境修飾因子は、以下からなる群から選択される：アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータインヒビター、免疫チェックポイントインヒビター、ＶＥＧＦインヒビター、及びＨＰＧＥ２。一部の態様では、ＴＧＦベータインヒビターは、以下からなる群から選択される：抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－ＴＲＡＰ、及びそれらの組み合わせ。一部の態様では、免疫チェックポイントインヒビターは、以下からなる群から選択される：抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭｌ抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体。一部の態様では、ＶＥＧＦインヒビターは、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、又はそれらの組み合わせを含む。一部の態様では、エフェクター分子は、ヒト由来エフェクター分子である。
一部の態様では、同族プロテアーゼ切断部位は、以下からなる群から選択されるプロテアーゼにより切断可能である：１型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ切断部位、ＳＩＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、フリンプロテアーゼ切断部位、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ切断部位、マトリプターゼプロテアーゼ切断部位、マトリプターゼ－２プロテアーゼ切断部位、ＭＭＰ９プロテアーゼ切断部位、及びＮＳ３プロテアーゼ切断部位。
一部の態様では、細胞膜係留ドメインは、膜貫通－細胞内ドメイン又は膜貫通ドメインを含む。一部の態様では、膜貫通－細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインは、ＰＤＧＦＲ ベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＥｐｏＲ、又はＢＴＬＡから由来する。一部の態様では、細胞膜係留ドメインは、細胞表面受容体、又はその細胞膜結合部分を含む。
一部の態様では、プロテアーゼは、細胞に対して内因性である。一部の態様では、プロテアーゼは、以下からなる群から選択される：１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ－２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼ。一部の態様では、プロテアーゼは、細胞に対して異種である。一部の態様では、プロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である。一部の態様では、プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含む。一部の態様では、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ接合点切断部位を含む。
一部の態様では、プロテアーゼは、プロテアーゼインヒビターによって抑制され得る。一部の態様では、プロテアーゼインヒビターは、以下からなる群から選択される：シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシロプレビル。
一部の態様では、プロテアーゼは、デグロンをさらに含む。一部の態様では、プロテアーゼの発現は、調節が可能である。
一部の態様では、免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）への応答においてセレブロン（ＣＲＢＮ）に結合することが可能でありそれにより分泌性エフェクター分子のユビキチン経路媒介性分解を促進するセレブロン（ＣＲＢＮ）ポリペプチド基質ドメインを、デグロンは含む。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、以下からなる群から選択される：ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫlａ、ＺＦＰ９１、ＧＳＰＴ１、ＭＥＩＳ２、ＧＳＳ Ｅ４Ｆ１、ＺＮ２７６、ＺＮ５１７、ＺＮ５８２、ＺＮ６５３、ＺＮ６５４、ＺＮ６９２、ＺＮ７８７、及びＺＮ８２７、又はＣＲＢＮの薬物誘導性結合が可能なその断片。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、天然ＣＲＢＮポリペプチド配列のキメラ融合産物である。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、ＦＮＶＬＭ ＶＨＫＲＳ ＨＴＧＥＲ ＰＬＱＣＥ ＩＣＧＦＴ ＣＲＱＫＧ ＮＬＬＲＨ ＩＫＬＨＴ ＧＥＫＰＦ ＫＣＨＬＣ ＮＹＡＣＱ ＲＲＤＡＬ（配列番号１８９）のアミノ酸配列を有するＩＫＺＦ３／ＺＦＰ９１／ＩＫＺＦ３キメラ融合産物である。一部の態様では、ＩＭｉＤは、ＦＤＡ承認薬物である。一部の態様では、ＩＭｉＤは、以下からなる群から選択される：サリドマイド、レナリドミド、及びポマリドミド。
一部の態様では、デグロンは、ＨＣＶ ＮＳ４デグロン、ＰＥＳＴ（ヒトＩκＢαの残基２７７～３０７の二つのコピー）、ＧＲＲ（ヒトｐ１０５の残基３５２～４０８）、ＤＲＲ（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０～２９５）、ＳＮＳ（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（Ａ型インフルエンザ又はＢ型インフルエンザのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２）、ＲＰＢ（酵母ＲＰＢの残基１６８８～１７０２の四つのコピー）、ＳＰｍｉｘ（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（Ａ型インフルエンザウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２）、ＮＳ２（Ａ型インフルエンザウイルスＮＳタンパク質の残基７９～９３の三つのコピー）、ＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼの残基１０６～１４２）、Ｎｅｋ２Ａ、マウスＯＤＣ（残基４２２～４６１）、マウスＯＤＣ＿ＤＡ（Ｄ４３３Ａ及びＤ４３４Ａ点変異を含むｍＯＤＣの残基４２２～４６１）、ＡＰＣ／Ｃデグロン、ＣＯＰ１ Ｅ３リガーゼ結合デグロンモチーフ、ＣＲＬ４－Ｃｄｔ２結合ＰＩＰデグロン、アクチンフィリン結合デグロン、ＫＥＡＰ１結合デグロン、ＫＬＨＬ２及びＫＬＨＬ３結合デグロン、ＭＤＭ２結合モチーフ、Ｎ－デグロン、低酸素シグナル伝達におけるヒドロキシプロリン修飾、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＤＳＧｘｘＳ（配列番号１９０）リン依存的デグロン、Ｓｉａｈ結合モチーフ、ＳＰＯＰ ＳＢＣドッキングモチーフ、ならびにＰＣＮＡ結合ＰＩＰボックスからなる群から選択される。一部の態様では、デグロンは、細胞膜係留ドメインのＣ末端に局在化されている。
また、本明細書中で提供されるのは、異種核酸を発現するように操作されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）であって、それにおいて、異種核酸は、デグロン融合キメラタンパク質をコードし、それにおいて、デグロン融合キメラタンパク質は、目的のタンパク質に融合されたデグロンを含む。
一部の態様では、免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）への応答においてセレブロン（ＣＲＢＮ）に結合することが可能でありそれにより目的のタンパク質のユビキチン経路媒介性の分解を促進するセレブロン（ＣＲＢＮ）ポリペプチド基質ドメインを、デグロンは含む。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、以下からなる群から選択される：ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫlａ、ＺＦＰ９１、ＧＳＰＴ１、ＭＥＩＳ２、ＧＳＳ Ｅ４Ｆ１、ＺＮ２７６、ＺＮ５１７、ＺＮ５８２、ＺＮ６５３、ＺＮ６５４、ＺＮ６９２、ＺＮ７８７、及びＺＮ８２７、又はＣＲＢＮの薬物誘導性結合が可能なその断片。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、天然ＣＲＢＮポリペプチド配列のキメラ融合産物である。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、ＦＮＶＬＭ ＶＨＫＲＳ ＨＴＧＥＲ ＰＬＱＣＥ ＩＣＧＦＴ ＣＲＱＫＧ ＮＬＬＲＨ ＩＫＬＨＴ ＧＥＫＰＦ ＫＣＨＬＣ ＮＹＡＣＱ ＲＲＤＡＬ（配列番号１８９）のアミノ酸配列を有するＩＫＺＦ３／ＺＦＰ９１／ＩＫＺＦ３キメラ融合産物である。一部の態様では、ＩＭｉＤは、ＦＤＡ承認薬物である。一部の態様では、ＩＭｉＤは、以下からなる群から選択される：サリドマイド、レナリドミド、及びポマリドミド。一部の態様では、デグロンは、ＨＣＶ ＮＳ４デグロン、ＰＥＳＴ（ヒトＩκＢαの残基２７７～３０７の二つのコピー）、ＧＲＲ（ヒトｐ１０５の残基３５２～４０８）、ＤＲＲ（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０～２９５）、ＳＮＳ（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（Ａ型インフルエンザ又はＢ型インフルエンザのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２）、ＲＰＢ（酵母ＲＰＢの残基１６８８～１７０２の四つのコピー）、ＳＰｍｉｘ（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（Ａ型インフルエンザウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２）、ＮＳ２（Ａ型インフルエンザウイルスＮＳタンパク質の残基７９～９３の三つのコピー）、ＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼの残基１０６～１４２）、Ｎｅｋ２Ａ、マウスＯＤＣ（残基４２２～４６１）、マウスＯＤＣ＿ＤＡ（Ｄ４３３Ａ及びＤ４３４Ａ点変異を含むｍＯＤＣの残基４２２～４６１）、ＡＰＣ／Ｃデグロン、ＣＯＰ１ Ｅ３リガーゼ結合デグロンモチーフ、ＣＲＬ４－Ｃｄｔ２結合ＰＩＰデグロン、アクチンフィリン結合デグロン、ＫＥＡＰ１結合デグロン、ＫＬＨＬ２及びＫＬＨＬ３結合デグロン、ＭＤＭ２結合モチーフ、Ｎ－デグロン、低酸素シグナル伝達におけるヒドロキシプロリン修飾、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＤＳＧｘｘＳ（配列番号１９０）リン依存的デグロン、Ｓｉａｈ結合モチーフ、ＳＰＯＰ ＳＢＣドッキングモチーフ、ならびにＰＣＮＡ結合ＰＩＰボックスからなる群から選択される。
一部の態様では、ＡＡＶは、以下からなる群から選択される：ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ．Ｒｈ１０、ＡＡＶ１１、及びそれらのバリアント。
一部の態様では、目的のタンパク質は治療クラスから選択され、それにおいて、治療クラスは、以下からなる群から選択される：サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、及び酵素。
また、本明細書中で提供されるのは、異種核酸を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、それにおいて、異種核酸は、デグロン融合キメラタンパク質をコードし、それにおいて、デグロン融合キメラタンパク質は、目的のタンパク質に融合されたデグロンを含む。
一部の態様では、免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）への応答においてセレブロン（ＣＲＢＮ）に結合することが可能でありそれにより目的のタンパク質のユビキチン経路媒介性の分解を促進するセレブロン（ＣＲＢＮ）ポリペプチド基質ドメインを、デグロンは含む。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、以下からなる群から選択される：ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫlａ、ＺＦＰ９１、ＧＳＰＴ１、ＭＥＩＳ２、ＧＳＳ Ｅ４Ｆ１、ＺＮ２７６、ＺＮ５１７、ＺＮ５８２、ＺＮ６５３、ＺＮ６５４、ＺＮ６９２、ＺＮ７８７、及びＺＮ８２７、又はＣＲＢＮの薬物誘導性結合が可能なその断片。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、天然ＣＲＢＮポリペプチド配列のキメラ融合産物である。一部の態様では、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、ＦＮＶＬＭ ＶＨＫＲＳ ＨＴＧＥＲ ＰＬＱＣＥ ＩＣＧＦＴ ＣＲＱＫＧ ＮＬＬＲＨ ＩＫＬＨＴ ＧＥＫＰＦ ＫＣＨＬＣ ＮＹＡＣＱ ＲＲＤＡＬ（配列番号１８９）のアミノ酸配列を有するＩＫＺＦ３／ＺＦＰ９１／ＩＫＺＦ３キメラ融合産物である。一部の態様では、ＩＭｉＤは、ＦＤＡ承認薬物である。一部の態様では、ＩＭｉＤは、以下からなる群から選択される：サリドマイド、レナリドミド、及びポマリドミド。一部の態様では、デグロンは、ＨＣＶ ＮＳ４デグロン、ＰＥＳＴ（ヒトＩκＢαの残基２７７～３０７の二つのコピー）、ＧＲＲ（ヒトｐ１０５の残基３５２～４０８）、ＤＲＲ（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０～２９５）、ＳＮＳ（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（Ａ型インフルエンザ又はＢ型インフルエンザのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２）、ＲＰＢ（酵母ＲＰＢの残基１６８８～１７０２の四つのコピー）、ＳＰｍｉｘ（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（Ａ型インフルエンザウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２）、ＮＳ２（Ａ型インフルエンザウイルスＮＳタンパク質の残基７９～９３の三つのコピー）、ＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼの残基１０６～１４２）、Ｎｅｋ２Ａ、マウスＯＤＣ（残基４２２～４６１）、マウスＯＤＣ＿ＤＡ（Ｄ４３３Ａ及びＤ４３４Ａ点変異を含むｍＯＤＣの残基４２２～４６１）、ＡＰＣ／Ｃデグロン、ＣＯＰ１ Ｅ３リガーゼ結合デグロンモチーフ、ＣＲＬ４－Ｃｄｔ２結合ＰＩＰデグロン、アクチンフィリン結合デグロン、ＫＥＡＰ１結合デグロン、ＫＬＨＬ２及びＫＬＨＬ３結合デグロン、ＭＤＭ２結合モチーフ、Ｎ－デグロン、低酸素シグナル伝達におけるヒドロキシプロリン修飾、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＤＳＧｘｘＳ（配列番号１９０）リン依存的デグロン、Ｓｉａｈ結合モチーフ、ＳＰＯＰ ＳＢＣドッキングモチーフ、ならびにＰＣＮＡ結合ＰＩＰボックスからなる群から選択される。
一部の態様では、ＡＡＶは、以下からなる群から選択される：ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ．Ｒｈ１０、ＡＡＶ１１、及びそれらのバリアント。
一部の態様では、目的のタンパク質は治療クラスから選択され、それにおいて、治療クラスは、以下からなる群から選択される：サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、及び酵素。
また、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載される、操作されたＡＡＶウイルスのいずれか又は本明細書中に記載されるＡＡＶベクターのいずれか、及び医薬的に許容可能な担体を含む医薬組成物である。
また、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載される、操作されたＡＡＶウイルスのいずれか又は本明細書中に記載されるＡＡＶベクターのいずれかを含む単離細胞である。
また、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載される、操作されたＡＡＶウイルス又は本明細書中に記載されるＡＡＶベクターのいずれかを、それを必要とする対象に投与することを含む、インビボで調節されたタンパク質発現のための方法である。
また、本明細書中で提供されるのは、タンパク質発現を調節するための方法であって、操作されたＡＡＶウイルス又はＡＡＶベクターの発現のための適切な条件下で、細胞を、本明細書中に記載される任意の操作されたＡＡＶウイルス又は本明細書中に記載されるＡＡＶベクターのいずれかと接触させることを含む。
図１は、デグロンを伴わないＳＥＡＰ（「４１９」）又は様々なリンカーを使用してＳＥＡＰに融合されたＣ末端デグロンを伴うＳＥＡＰキメラタンパク質（「１１１８」、「１１４１」、「１１４３」、「１１４４」）のいずれかを発現したウイルス構築物での形質導入後のＨＥＫ２９３Ｆｔ細胞（左パネル）及びドナー由来Ｔ細胞（右パネル）の両方からの上清、あるいは非形質導入細胞（「ウイルスなし」）からの上清中でのＳＥＡＰ酵素活性を示す。示されるのは、薬物が加えられていない（それぞれ各構築物について右列）又は１μＭレナリドミド（それぞれ各構築物について左列）のいずれかでの、平均化された複製物である。 図２は、所望のペイロードが、ペイロードとデグロンドメインの間に挿入された切断可能な膜係留ドメイン（例、本明細書中に示されるように、ＰＤＧＦＲｂ膜貫通ドメインに融合されたＡＤＡＭ１０／１７切断部位）を伴う膜切断可能なキメラタンパク質として発現される、代表的な膜切断可能なデグロン系を例証する。 図３は、デグロンを伴わないＳＥＡＰ（「４１９」）又は膜切断可能なデグロン系フォーマット中のＳＥＡＰキメラタンパク質（Ｄ－ＭＴ－Ｃ－Ｓ「１２０８」；Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ「１２０９」）のいずれかを発現したウイルス構築物での形質導入後のＨＥＫ２９３Ｆｔ細胞（「ＨＥＫ２９３Ｔ」）及びドナー由来Ｔ細胞（「Ｔ細胞」）の両方からの上清、あるいは非形質導入細胞（「ウイルスなし」）からの上清中でのＳＥＡＰ酵素活性を示す。示されるのは、薬物が加えられていない（それぞれ各構築物について右列）又は１μＭレナリドミド（それぞれ各構築物について左列）のいずれかでの、平均化された複製物である。 図４は、デグロンを伴わないＳＥＡＰ（「４１９」）又は膜切断可能なデグロン系フォーマット中のＳＥＡＰキメラタンパク質（Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ「１２０９」）のいずれかを発現したウイルス構築物での形質導入後のＨＥＫ２９３Ｆｔ細胞（「ＨＥＫ２９３Ｔ」）からの上清中でのＳＥＡＰ酵素活性を示す。示されるのは、薬物が加えられていない（それぞれ各構築物について右列）又は１μＭレナリドミド（それぞれ各構築物について左列）のいずれかでの、平均化された複製物である。 図５は、デグロンを伴わないＳＥＡＰ（「４１９」）、様々なリンカーを使用してＳＥＡＰに融合されたＣ末端デグロンを伴うＳＥＡＰキメラタンパク質（「１１１８」、「１１４１」、「１１４３」、「１１４４」）、又は膜切断可能なデグロン系フォーマット中のＳＥＡＰキメラタンパク質（Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ「１２０９」）のいずれかを発現したウイルス構築物での形質導入後のＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞からの上清、あるいは感染対照として使用された無関係のウイルス構築物での形質導入後の上清（「１３２１」）中でのＳＥＡＰ酵素活性を示す。示されるのは、薬物が加えられていない（それぞれ各構築物について左列）又は１μＭレナリドミド（それぞれ各構築物について右列）のいずれかでの、平均化された複製物である。 図６は、ヒトＩＬ－１０（ｈＩＬ－１０）をその天然形態（「１５８４」）において、又は膜切断可能なデグロンに融合された膜切断可能なキメラタンパク質（「１５８５」）として発現するように操作されたウイルスベクターｐＬ１７ｄベースの構築物を例証する。ウイルスベクターはまた、細胞数、生存率、及び形質導入効率についての標準化対照としての役目を果たすために、別々のプロモーターからヒトＩＬ－１２（ｈＩＬ－１２）を発現するように操作される。 図７は、ＩＬ－１２発現に対して標準化された、ドナー由来Ｔ細胞からの上清中のｈＩＬ－１０分泌を示す（ｈＩＬ１０／ｈＩＬ１２比率）。テストされた構築物は、デグロンを伴わない天然ｈＩＬ－１０（「１５８４」）を発現した、デグロンを伴わない陰性対照タンパク質（「１０４３」）を発現した、又はＳ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ配向の膜切断可能なデグロン系中のｈＩＬ－１０膜切断可能なキメラタンパク質（「１５８５」）を発現した。示されるのは、薬物が加えられていない（それぞれ各構築物について左列）又は１μＭレナリドミド（それぞれ各構築物について右列）のいずれかでの、平均化された複製物である。 図８は、デグロンドメインを含むナノルシフェラーゼデグロン融合キメラタンパク質を発現するＡＡＶ２ベースの（左パネル）又はＡＡＶ８ベースの（右パネル）構築物のいずれかで形質導入されたＨｅｐ３Ｂ細胞中でのルシフェラーゼ活性を示す。示されるのは、薬物が加えられていない（それぞれ各構築物について左列）又は１μＭレナリドミド（それぞれ各構築物について右列）のいずれかでの、平均化された複製物である。 図９は、１～０．０１μＭレナリドミド（左パネル）又はポマリドミド（左右パネル）の二つのＩＭｉＤで処理されたデグロンドメインを含むナノルシフェラーゼデグロン融合キメラタンパク質を発現するＡＡＶ２ベースの構築物で形質導入されたＨｅｐ３Ｂ細胞中のルシフェラーゼ活性を示す。
詳細な説明
本明細書中で提供されるのは、腫瘍内及び／又は近傍（腫瘍微小環境（ＴＭＥ））で異なる腫瘍媒介性免疫抑制機構を調節することを対象とする免疫療法組成物及び方法である。
キメラタンパク質（又はキメラタンパク質をコードする操作された核酸）が、本明細書中で提供され、デグロンドメインを有する。
一部の態様では、膜切断可能なキメラタンパク質（又はキメラタンパク質をコードする操作された核酸）が本明細書中で提供され、Ｎ末端からＣ末端に配向され、単一ポリペプチドとして発現される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する。Ｓは分泌性エフェクター分子を指す。Ｃはプロテアーゼ切断部位を指す。ＭＴは細胞膜係留ドメインを指す。Ｄはデグロンを指す。膜切断可能なキメラタンパク質が操作され、エフェクター分子の分泌が、薬物依存的な様式において調節されることができるようにする。具体的には、膜切断可能なキメラタンパク質を操作して、エフェクター分子の分泌が、「膜切断可能なデグロン」系の一部として調節され得るようにし、ここで、プロテアーゼ切断部位（「Ｃ」）、細胞膜係留ドメイン（「ＭＴ」）、及びデグロン（「Ｄ」）の組み入れによって、薬物依存的な様式においてエフェクター分子の調節された分泌が可能になる。理論により拘束されることを望まないが、膜切断可能なキメラタンパク質中に存在する膜切断可能なデグロン系の構成要素によって、一般的に、以下の細胞過程を通して分泌が調節される：
－ＭＴ：細胞膜係留ドメインは、細胞膜中に挿入されるように、又は細胞膜と会合される（係留される）ように、キメラタンパク質の細胞輸送を方向付ける膜貫通ドメイン（又は膜貫通－細胞内ドメイン）を含む。
－Ｄ：免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）の存在において、デグロンは、キメラタンパク質のユビキチン媒介性分解を方向付け、エフェクター分子の分泌が低下又は排除されるようにする。一般的に、細胞膜中へのキメラタンパク質の発現及び局在化によって、デグロン／ユビキチン媒介性分解が促進される。
－Ｃ：ＩＭｉＤの非存在において、キメラタンパク質のデグロン／ユビキチン媒介性分解は生じない。細胞膜中へのキメラタンパク質の発現及び局在化に続いて、プロテアーゼ切断部位によって、キメラタンパク質の切断が方向付けられ、エフェクター分子が細胞外空間中に放出（「分泌」）されるようにする。
一部の態様では、デグロン融合キメラタンパク質（又はデグロン融合キメラタンパク質をコードする操作された核酸）が本明細書中で提供され、目的のタンパク質（例、本明細書中に記載されるエフェクター分子のいずれか）及びデグロンを有する。
「エフェクター分子」は、別の分子と結合し、それが結合するその分子の生物学的活性を調節する分子（例、核酸、例えばＤＮＡもしくはＲＮＡなど、又はタンパク質（ポリペプチド）もしくはペプチド）を指す。例えば、エフェクター分子は、酵素活性、遺伝子発現、又は細胞シグナル伝達を増加又は減少させるためのリガンドとして作用し得る。このように、一部の実施形態では、エフェクター分子は、異なる免疫調節機構を調節（活性化又は阻害）する。分子と直接的に結合して調節することにより、エフェクター分子はまた、第二の、下流分子を間接的に調節し得る。
本明細書中に記載される特定の実施形態では（例、一般的に、本明細書中に記載される全ての膜切断可能なキメラタンパク質について）、エフェクター分子は、分泌性エフェクター分子（例、本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質について、式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ中で「Ｓ」として言及される）である。エフェクター分子の非限定的な例は、サイトカイン、ケモカイン、代謝物レベルを調節する酵素、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、ペプチド、酵素、抗体、サイトカイン、ホーミング分子、及び／又はインテグリンを調節する抗体又はデコイ分子を含む。
用語「調節する」は、生物学的活性の維持、生物学的活性の阻害（部分的又は完全）、及び生物学的活性の刺激／活性化（部分的又は完全）を包含する。この用語はまた、生物学的活性を減少又は増加させる（例、増強させる）ことを包含する。二つの異なるエフェクター分子は、一つのエフェクター分子が、他のエフェクター分子（例、抗原提示及び／又はプロセシングを刺激する）により調節される腫瘍媒介性の免疫抑制機構とは異なる腫瘍媒介性の免疫抑制機構（例、Ｔ細胞シグナル伝達を刺激する）を調節する場合、「異なる腫瘍媒介性の免疫抑制機構を調節する」と考えられる。
エフェクター分子による調節は、直接的又は間接的であり得る。直接的な調節は、エフェクター分子が別の分子と結合して、その分子の活性を調節する場合に生じる。間接的な調節は、エフェクター分子が別の分子と結合して、その分子の活性を調節し、その調節の結果として、さらに別の分子（エフェクター分子が結合されていない）の活性を調節する場合に生じる。
一部の実施形態では、少なくとも一つのエフェクター分子による腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫刺激性及び／又は抗腫瘍免疫応答（例、全身的又は腫瘍微小環境における）における少なくとも１０％（例、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、又は２００％）だけの増加をもたらす。例えば、腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫刺激性及び／又は抗腫瘍免疫応答において少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％だけの増加をもたらし得る。一部の実施形態では、腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫刺激性及び／又は抗腫瘍免疫応答における１０～２０％、１０～３０％、１０～４０％、１０～５０％、１０～６０％、１０～７０％、１０～８０％、１０～９０％、１０～１００％、１０～２００％、２０～３０％、２０～４０％、２０～５０％、２０～６０％、２０～７０％、２０～８０％、２０～９０％、２０～１００％、２０～２００％、５０～６０％、５０～７０％、５０～８０％、５０～９０％、５０～１００％、又は５０～２００％の増加をもたらす。免疫刺激性及び／又は抗腫瘍免疫応答における「増加」は、例えば、全身的に又は腫瘍微小環境において、エフェクター分子の非存在において、そうでなければ生じるであろう免疫刺激性及び／又は抗腫瘍性免疫応答と関連することを理解すべきである。
一部の実施形態では、少なくとも一つのエフェクター分子による腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫刺激性及び／又は抗腫瘍免疫応答（例、全身的又は腫瘍微小環境における）において少なくとも２倍（例、２、３、４、５、１０、２５、２０、２５、５０、又は１００倍）だけの増加をもたらす。例えば、腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫刺激性及び／又は抗腫瘍免疫応答において少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、又は少なくとも１００倍だけの増加をもたらし得る。一部の実施形態では、腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫刺激性及び／又は抗腫瘍免疫応答において２～１０、２～２０、２～３０、２～４０、２～５０、２～６０、２～７０、２～８０、２～９０、又は２～１００倍だけの増加をもたらす。
免疫刺激性及び／又は抗腫瘍免疫機構の非限定的な例は、Ｔ細胞シグナル伝達、活性及び／又は動員、抗原提示及び／又はプロセシング、ナチュラルキラー細胞媒介性の細胞傷害性シグナル伝達、活性及び／又は動員、樹状細胞の分化及び／又は成熟、免疫細胞動員、炎症誘発性マクロファージシグナル伝達、活性及び／又は動員、間質分解、免疫刺激性代謝物の産生、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）シグナル伝達（それは、ＩＦＮ及びＴｈ１分極の分泌を増加させ、抗腫瘍免疫応答を促進する）、及び／又はＩ型インターフェロンシグナル伝達を含む。エフェクター分子は、前述の免疫刺激機構の少なくとも一つ（一つ又は複数）を刺激し得るが、このように、免疫刺激性応答における増加をもたらし得る。前述の免疫刺激性及び／又は抗腫瘍免疫機構における変化は、例えば、Ｔ細胞増殖又は細胞傷害性についてのインビトロアッセイ、インビトロ抗原提示アッセイ、発現アッセイ（例、特定のマーカーの）、及び／又は細胞分泌アッセイ（例、サイトカインの）を使用して評価され得る。
一部の実施形態では、少なくとも一つのエフェクター分子による腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫抑制応答（例、全身的又は腫瘍微小環境における）において少なくとも１０％（例、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、又は２００％）だけの減少をもたらす。例えば、腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫抑制応答において少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％だけの減少をもたらし得る。一部の実施形態では、腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫抑制応答において１０～２０％、１０～３０％、１０～４０％、１０～５０％、１０～６０％、１０～７０％、１０～８０％、１０～９０％、１０～１００％、１０～２００％、２０～３０％、２０～４０％、２０～５０％、２０～６０％、２０～７０％、２０～８０％、２０～９０％、２０～１００％、２０～２００％、５０～６０％、５０～７０％、５０～８０％、５０～９０％、５０～１００％、又は５０～２００％の減少をもたらす。免疫抑制応答における「減少」は、例えば、全身的又は腫瘍微小環境において、エフェクター分子の非存在において、そうでなければ生じるであろう免疫抑制応答に関連していることを理解すべきである。
一部の実施形態では、少なくとも一つのエフェクター分子による腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫抑制応答（例、全身的又は腫瘍微小環境における）において少なくとも２倍（例、２、３、４、５、１０、２５、２０、２５、５０、又は１００倍）だけの減少をもたらす。例えば、腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫抑制応答において少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、又は少なくとも１００倍だけの減少をもたらし得る。一部の実施形態では、腫瘍媒介性免疫抑制機構の調節は、免疫抑制応答において２～１０、２～２０、２～３０、２～４０、２～５０、２～６０、２～７０、２～８０、２～９０、又は２～１００倍だけの減少をもたらす。
免疫抑制機構の非限定的な例は、負の共刺激シグナル伝達、細胞傷害性細胞（例、Ｔ細胞及び／又はＮＫ細胞）のアポトーシス促進性シグナル伝達、Ｔ調節性（Ｔｒｅｇ）細胞シグナル伝達、腫瘍チェックポイント分子の産生／維持、骨髄由来サプレッサー細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員、免疫抑制因子／代謝物産生、及び／又は血管内皮成長因子のシグナル伝達を含む。エフェクター分子は、前述の免疫抑制機構の少なくとも一つ（一つ又は複数）を阻害し、このように、免疫抑制応答における減少をもたらし得る。前述の免疫抑制機構における変化は、例えば、Ｔ細胞増殖における増加及び／又はＩＦＮγ産生における増加（負の共刺激シグナル伝達、Ｔｒｅｇ細胞シグナル伝達、及び／又はＭＤＳＣ）；アネキシンＶ／ＰＩフロー染色（アポトーシス促進シグナル伝達）；発現についてのフロー染色、例えば、ＰＤＬ１発現（腫瘍チェックポイント分子の産生／維持）；ＥＬＩＳＡ、ＬＵＭＩＮＥＸ（登録商標）、ｑＰＣＲを介したＲＮＡ、酵素アッセイ、例えば、ＩＤＯトリプトファン異化作用（免疫抑制因子／代謝物産生）；及びＰＩ３Ｋ、Ａｋｔ、ｐ３８のリン酸化（ＶＥＧＦシグナル伝達）についてアッセイすることにより評価され得る。
一部の実施形態では、エフェクター分子は、相加的に機能する：二つのエフェクター分子の効果が、例えば、別々に機能する二つのエフェクター分子の効果の合計に等しくなり得る。他の実施形態では、エフェクター分子は相乗的に機能する：二つのエフェクター分子の効果が、例えば、二つのエフェクター分子の組み合わされた機能よりも大きくなり得る。
腫瘍媒介性免疫抑制機構を調節し、及び／又は腫瘍微小環境を修飾するエフェクター分子は、例えば、分泌因子（例、免疫系において含まれる細胞外機構を調節するサイトカイン、ケモカイン、抗体、及び／又はデコイ受容体）、インヒビター（例、抗体、抗体断片、リガンドＴＲＡＰ、及び／又は小遮断ペプチド）、細胞状態を制御する細胞内因子（例、炎症誘発性を増強するために細胞の状態を調節するマイクロＲＮＡ及び／又は転写因子）、エキソソーム中にパッケージングされた因子（例、マイクロＲＮＡ、サイトゾル因子、及び／又は細胞外因子）、表面に呈示される因子（例、チェックポイントインヒビター、ＴＲＡＩＬ）、ならびに、及び／又は代謝遺伝子（例、代謝物もしくはアミノ酸を産生／調節又は分解する酵素）であり得る。
一部の実施形態では、エフェクター分子の少なくとも一つは、腫瘍微小環境において免疫刺激機構を刺激し、及び／又は腫瘍微小環境における免疫抑制機構を阻害する。
一部の実施形態では、エフェクター分子の少なくとも一つは、（ａ）Ｔ細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員を刺激し、（ｂ）抗原提示及び／又はプロセシングを刺激し、（ｃ）ナチュラルキラー細胞媒介性の細胞傷害性シグナル伝達、活性、及び／又は動員を刺激し、（ｄ）樹状細胞分化及び／又は成熟を刺激し、（ｅ）免疫細胞動員を刺激し、（ｆ）炎症誘発性マクロファージシグナル伝達、活性、及び／又は動員を刺激する、あるいは抗炎症性マクロファージシグナル伝達、活性、及び／又は動員を阻害し、（ｇ）間質分解を刺激し、（ｈ）免疫刺激性代謝物産生を刺激し、（ｉ）Ｉ型インターフェロンシグナル伝達を刺激し、（ｊ）負の共刺激シグナル伝達を阻害し、（ｋ）抗腫瘍免疫細胞のアポトーシス促進性シグナル伝達を阻害し、（ｌ）調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員を阻害し、（ｍ）腫瘍チェックポイント分子を阻害し、（ｎ）インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）シグナル伝達を刺激し、（ｏ）骨髄由来のサプレッサー細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員を阻害し、（ｐ）免疫抑制因子／代謝物を分解し、（ｑ）血管内皮成長因子シグナル伝達を阻害し、ならびに／あるいは（ｒ）腫瘍細胞を直接的に殺傷する。
一部の実施形態では、エフェクター分子は、以下の非限定的なクラスの分子から選択され得る：サイトカイン、抗体、ケモカイン、ヌクレオチド、ペプチド、及び酵素。前述のクラスのエフェクター分子の非限定的な例を表１中に列挙し、例示的なエフェクター分子をコードする特定の配列を表２中に列挙する。エフェクター分子は、ヒト、表１もしくは表２中に列挙されるものなど、又は表１もしくは表２中に列挙されるマウスエフェクター分子のヒト等価物であり得る。エフェクター分子はヒト由来であり得るが、例えば内因性ヒトエフェクター分子又は機能について修飾及び／又は最適化されたエフェクター分子、例えば、発現を改善するために最適化された、安定性を改善するために修飾された、又はそのシグナル配列で修飾されたコドンなどである（以下を参照のこと）。機能を最適化するための様々なプログラム及びアルゴリズムが、当業者に公知であり、所望される改善、例えば、特定の種（例、ヒト、マウス、細菌など）についてのコドン最適化などに基づいて選択することができる。
（表１）例示的なエフェクター分子
Figure 2024504613000002
Figure 2024504613000003
（表２）例示的なエフェクター分子をコードする配列
Figure 2024504613000004
Figure 2024504613000005
Figure 2024504613000006
Figure 2024504613000007
Figure 2024504613000008
Figure 2024504613000009
Figure 2024504613000010
Figure 2024504613000011
Figure 2024504613000012
Figure 2024504613000013
Figure 2024504613000014
Figure 2024504613000015
Figure 2024504613000016
Figure 2024504613000017
Figure 2024504613000018
分泌シグナル
本明細書中で提供されるキメラタンパク質の一つ又は複数のエフェクター分子は、分泌又は膜局在化（また、膜挿入として言及される）が運命づけられた、新たに合成されたタンパク質を、適したタンパク質プロセシング経路に方向付ける、エフェクター分子のＮ末端に分泌シグナルペプチド（また、シグナルペプチド又はシグナル配列として言及される）を有する分泌性エフェクター分子であり得る。一般的に、本明細書中に記載される全ての膜切断可能なキメラタンパク質について、一つ又は複数のエフェクター分子は、分泌性エフェクター分子（式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ中で「Ｓ」として言及される）である。二つ以上のエフェクター分子を伴う実施形態では、各エフェクター分子は分泌シグナルを含むことができる。二つ以上のエフェクター分子を伴う実施形態では、各エフェクター分子は分泌シグナルを含むことができ、各エフェクター分子が、操作された細胞から分泌されるようにする。
エフェクター分子と動作可能に関連する分泌シグナルペプチドは、天然分泌シグナルペプチド天然分泌シグナルペプチド（例、所与のエフェクター分子と一般的に内在的に関連する分泌シグナルペプチド）であり得る。エフェクター分子と動作可能に関連する分泌シグナルペプチドは、非天然分泌シグナルペプチド天然分泌シグナルペプチドであり得る。非天然分泌シグナルペプチドは、特定の環境、例えば腫瘍微小環境などにおいて、改善された発現及び機能、例えば、維持された分泌などを促進することができる。非天然分泌シグナルペプチドの非限定的な例を表３中に示す。
（表３）例示的なシグナル分泌ペプチド
Figure 2024504613000019
Figure 2024504613000020
Figure 2024504613000021
プロテアーゼ切断部位
特定の実施形態では、本明細書中で提供されるキメラタンパク質（例、一般的に、本明細書中に記載される全ての膜切断可能なキメラタンパク質について）は、プロテアーゼ切断部位（例、本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質について、式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄにおいて「Ｃ」として言及される）を含む。一般的に、プロテアーゼ切断部位は、プロテアーゼにより切断されることが可能な任意のアミノ酸配列モチーフであることができる。プロテアーゼ切断部位の例は、限定されないが、１型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ切断部位、ＳＩＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、フリンプロテアーゼ切断部位、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ切断部位、マトリプターゼプロテアーゼ切断部位、マトリプターゼ－２プロテアーゼ切断部位、ＭＭＰ９プロテアーゼ切断部位、又はＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含む。プロテアーゼ切断部位の特定の例は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造的タンパク質３（ＮＳ３）プロテアーゼ切断部位であり、限定されないが、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ切断部位を含む。ＨＣＶの様々な株についてのＮＳ３プロテアーゼ及びその切断部位の代表的な配列の説明については、例えば、Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｃ Ｖｉｒｕｓｅｓ：Ｇｅｎｏｍｅｓ ａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｓ．Ｌ．Ｔａｎ ｅｄ．，Ｔａｙｌｏｒ ＆Ｆｒａｎｃｉｓ，２００６），Ｃｈａｐｔｅｒ ６，ｐｐ．１６３－２０６を参照のこと；その全体において、参照により本明細書中に組み入れられる。例えば、ＨＣＶ ＮＳ４Ａ／４Ｂプロテアーゼ切断部位；ＨＣＶ ＮＳ５Ａ／５Ｂプロテアーゼ切断部位；ＮＳ４Ａ／４Ｂプロテアーゼ切断部位を伴うＣ末端デグロン；ＨＣＶ ＮＳ５Ａ／５Ｂプロテアーゼ切断部位を伴うＮ末端デグロンの配列が提供される。代表的なＮＳ３配列は、アメリカ国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ））データベース中に列挙されている。例えば、ＮＣＢＩエントリー：受託番号：ＹＰ＿００１４９１５５３、ＹＰ＿００１４６９６３１、ＹＰ＿００１４６９６３２、ＮＰ＿８０３１４４、ＮＰ＿６７１４９１、ＹＰ＿００１４６９６３４、ＹＰ＿００１４６９６３０、ＹＰ＿００１４６９６３３、ＡＤＡ６８３１１、ＡＤＡ６８３０７、ＡＦＰ９９０００、ＡＦＰ９８９８７、ＡＤＡ６８３２２、ＡＦＰ９９０３３、ＡＤＡ６８３３０、ＡＦＰ９９０５６、ＡＦＰ９９０４１、ＣＢＦ６０９８２、ＣＢＦ６０８１７、ＡＨＨ２９５７５、ＡＩＺ００７４７、ＡＩＺ００７４４、ＡＢＩ３６９６９、ＡＢＮ０５２２６、ＫＦ５１６０７５、ＫＦ５１６０７４、ＫＦ５１６０５６、ＡＢ８２６６８４、ＡＢ８２６６８３、ＪＸ１７１００９、ＪＸ１７１００８、ＪＸ１７１０００、ＥＵ８４７４５５、ＥＦ１５４７１４、ＧＵ０８５４８７、ＪＸ１７１０６５、ＪＸ１７１０６３を参照のこと；それらの配列の全て（本出願の出願日までに入力されるとおり）が、参照により本明細書中に組み入れられる。
プロテアーゼ切断部位は、分泌性エフェクター分子のＣ末端であり得る。プロテアーゼ切断部位は、分泌性エフェクター分子のＮ末端であり得る。一般的に、本明細書中に記載される全ての膜切断可能なキメラタンパク質について、プロテアーゼ切断部位は、分泌性エフェクター分子のＣ末端及び細胞膜係留ドメインのＮ末端である（言い換えれば、プロテアーゼ切断部位は、分泌性エフェクター分子と細胞膜係留ドメインの間にある）。プロテアーゼ切断部位は、ポリペプチドリンカー、即ち、一般的にはエフェクター分子又はプロテアーゼ切断部位の一部とは考えられないポリペプチド配列により、分泌性エフェクター分子に接続されることができる。プロテアーゼ切断部位は、ポリペプチドリンカー、即ち、一般的には細胞膜係留ドメイン又はプロテアーゼ切断部位の一部とは考えられないポリペプチド配列により、細胞膜係留ドメインに接続されることができる。ポリペプチドリンカーは、第一のポリペプチド配列及び第二のポリペプチド配列を接続する任意のアミノ酸配列であり得る。ポリペプチドリンカーは、可動性リンカー（例、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ配列）であり得る。ポリペプチドリンカーの例は、限定されないが、ＧＳＧリンカー（例、［ＧＳ］４ＧＧ［配列番号１８２］）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）３Ａ（配列番号１８３）、及びＷｈｉｔｌｏｗリンカー（例、「ＫＥＧＳ」リンカー、例えばアミノ酸配列ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１８４）など、ＥＧＫリンカー、例えばアミノ酸配列ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号１８５）、及び、参照により本明細書中に組み入れられる、発行された米国特許第５，９９０，２７５号においてより詳細に記載されているリンカー）を含む。他のポリペプチドリンカーは、所望の特性（例、長さ、可動性、アミノ酸組成物など）に基づいて選択されてもよく、当業者に公知である。
膜切断可能なデグロン系では、細胞膜中へのキメラタンパク質の発現及び局在化に続いて、プロテアーゼ切断部位によって、キメラタンパク質の切断が方向付けられて、エフェクター分子が、細胞の細胞外空間中に放出される（「分泌される」）ようにする。
一般的に、プロテアーゼ切断部位を切断するプロテアーゼは、その特定のプロテアーゼ切断部位について特異的なプロテアーゼである。例えば、ディスインテグリン及びメタロプロテイナーゼ（ＡＤＡＭ）ファミリープロテアーゼの場合では、特定のＡＤＡＭプロテアーゼ切断部位を切断するプロテアーゼは、一般的に、特定のＡＤＡＭプロテアーゼ切断部位モチーフを特異的に認識するＡＤＡＭプロテアーゼに限定される。プロテアーゼは、膜結合又は膜会合し得る。プロテアーゼは、例えば、特定の細胞環境、例えば腫瘍微小環境（「ＴＭＥ」）などにおいて分泌され得る。
キメラタンパク質のプロテアーゼ切断部位を切断するプロテアーゼは、キメラタンパク質を発現する同じ細胞において発現され得る。キメラタンパク質のプロテアーゼ切断部位を切断するプロテアーゼは、キメラタンパク質を発現する細胞に対して内因性であり得る。言い換えれば、キメラタンパク質を発現するように操作された細胞は、キメラタンパク質中に存在するプロテアーゼ切断部位について特異的なプロテアーゼを内因性に発現することができる。プロテアーゼの内因性発現は、一般的に、恒常性条件下（例、一般的に健康であると考えられる細胞）での発現、及び、また、非恒常性条件下（例、腫瘍細胞における上方調節された発現）での差次的発現の両方を指す。プロテアーゼ切断部位は、所望の細胞集団により内因性に発現される公知のプロテアーゼに基づいて選択することができる。例えば、プロテアーゼ切断部位は、目的の特定の腫瘍集団において（例、キメラタンパク質を発現するように操作された特定の腫瘍細胞において）発現されることが公知である特定の腫瘍関連プロテアーゼについて選択され得る。プロテアーゼ及び／又は発現データベースを使用して、適したプロテアーゼ切断部位を選択し、例えば、Ｏｎｃｏｍｉｎｅ（ｗｗｗ．ｏｎｃｏｍｉｎｅ．ｏｒｇ）、欧州バイオインフォマティクス研究所（ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ）、特に（ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／ｇｘａ），ＰＭＡＰ（ｗｗｗ．ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ．ｏｒｇ）、ＥｘＰＡＳｙ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｃｕｔｔｅｒ（ｃａ．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ／ｔｏｏｌｓ／ｐｅｐｔｉｄｅ ｃｕｔｔｅｒ）及びＰＭＡＰ．ＣｕｔＤＢ（ｃｕｔｄｂ．ｂｕｒｎｈａｍ．ｏｒｇ）に相談することを通じて、腫瘍関連プロテアーゼにより切断されるプロテアーゼ切断部位を選択するなど、それらの各々が、全ての目的のために参照により組み入れられる。
キメラタンパク質のプロテアーゼ切断部位を切断するプロテアーゼは、キメラタンパク質を発現する細胞に対して異種であり得る。例えば、キメラタンパク質を発現するように操作された細胞は、キメラタンパク質中に存在するプロテアーゼ切断部位について特異的である細胞により一般的に発現されないプロテアーゼを発現するように操作され得る。キメラタンパク質及びプロテアーゼの両方を発現するように操作された細胞は、別々の操作された核酸から又はマルチシストロン系から各々を発現するように操作することができる（マルチシストロン系及びマルチプロモーター系は、「マルチシストロン及びマルチプロモーター系」と表題の付けられた、本明細書中のセクションにおいてより詳細に記載されている）。異種プロテアーゼ及びそれらの対応するプロテアーゼ切断部位は、内因性プロテアーゼを参照して、上に記載されるように選択することができる。
キメラタンパク質のプロテアーゼ切断部位を切断するプロテアーゼは、キメラタンパク質を発現する細胞よりも、別々の異なる細胞上に発現され得る。例えば、プロテアーゼは、一般的に、特定の細胞環境、例えば腫瘍微小環境などにおいて発現され得る。そのような場合では、一般的に、プロテアーゼ切断部位の切断は、プロテアーゼ切断部位と接触する必要がある環境制限プロテアーゼに起因して、目的の細胞環境（例、腫瘍微小環境）のみに制限され得る。膜切断可能なキメラタンパク質を有する実施形態では、一般的に、エフェクター分子の分泌は、プロテアーゼ切断部位と接触する必要がある環境限定プロテアーゼに起因して、目的の細胞環境（例、腫瘍微小環境）のみに制限され得る。キメラタンパク質のプロテアーゼ切断部位を切断するプロテアーゼは、別々の異なる細胞に対して内因性であり得る。キメラタンパク質のプロテアーゼ切断部位を切断するプロテアーゼは、別々の異なる細胞に対して異種であり得る。例えば、別々の異なる細胞は、別々の異なる細胞により一般的に発現されないプロテアーゼを発現するように操作することができる。
プロテアーゼは、限定されないが、１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ－２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼを含む。プロテアーゼは、ＮＳ３プロテアーゼであり得る。
プロテアーゼは、腫瘍関連プロテアーゼ、例えばカテプシン、システインプロテアーゼ、アスパルチルプロテアーゼ、セリンプロテアーゼ、又はメタロプロテアーゼなどであり得る。腫瘍関連プロテアーゼの具体的な例は、カテプシンＢ、カテプシンＬ、カテプシンＳ、カテプシンＤ、カテプシンＥ、カテプシンＡ、カテプシンＧ、トロンビン、プラスミン、ウロキナーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター、メタロプロテイナーゼ１（ＭＭＰ１）、ＭＭＰ２、ＭＭＰ３、ＭＭＰ４、ＭＭＰ７、ＭＭＰ８、ＭＭＰ９、ＭＭＰ１０、ＭＭＰ１１、ＭＭＰ１２、ＭＭＰ１３、ＭＭＰ１４、ＭＭＰ１５、ＭＭＰ１６、ＭＭＰ１７、ＭＭＰ２０、ＭＭＰ２１、ＭＭＰ２３、ＭＭＰ２４、ＭＭＰ２５、ＭＭＰ２６、ＭＭＰ２８、ＡＤＡＭ、ＡＤＡＭＴＳ、ＣＤ１０（ＣＡＬＬＡ）、又は前立腺特異抗原を含む。プロテアーゼはまた、限定されないが、以下の表４中に列挙されるプロテアーゼを含む。特定のプロテアーゼについての例示的な同族プロテアーゼ切断部位がまた、表４中に列挙されている。
（表４）同族切断部位及びインヒビターを伴う例示的なプロテアーゼ
Figure 2024504613000022
Figure 2024504613000023
Figure 2024504613000024
Figure 2024504613000025
Figure 2024504613000026
Figure 2024504613000027
Figure 2024504613000028
Figure 2024504613000029
Figure 2024504613000030
Figure 2024504613000031
Figure 2024504613000032
Figure 2024504613000033
プロテアーゼは、以下のヒトプロテアーゼのいずれかであり得る（括弧中に提供されるＭＥＲＯＰＳペプチダーゼデータベース番号；Ｒａｗｌｉｎｇｓ Ｎ．Ｄ．，Ｍｏｒｔｏｎ Ｆ．Ｒ．，Ｋｏｋ，Ｃ．Ｙ．，Ｋｏｎｇ，Ｊ．＆Ｂａｒｒｅｔｔ Ａ．Ｊ．（２００８）ＭＥＲＯＰＳ：ｔｈｅ ｐｅｐｔｉｄａｓｅＤａｔａｂａｓｅ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．３６Ｄａｔａｂａｓｅ ｉｓｓｕｅ，Ｄ３２０－３２５；全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる）：ペプシンＡ（ＭＥＲ０００８８５）、ガストリシン（ＭＥＲ０００８９４）、メマプシン－２（ＭＥＲ００５８７０）、レニン（ＭＥＲ０００９１７）、カテプシンＤ（ＭＥＲ０００９１１）、カテプシンＥ（ＭＥＲ０００９４４）、メマプシン－１（ＭＥＲ００５５３４）、ナプシン Ａ（ＭＥＲ００４９８１）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０３４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４０３８）、ペプシンＡ４（ＭＥＲ０３７２９０）、ペプシンＡ５（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０３７２９１）、ｈＣＧ１７３３５７２（ホモサピエンス）型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ１０７３８６）、ナプシンＢ偽遺伝子（ＭＥＲ００４９８２）、ＣＹＭＰ ｇ．ｐ．（ホモサピエンス）（ＭＥＲ００２９２９）、サブファミリーＡ１Ａ未割り当てペプチダーゼｓ（ＭＥＲ１８１５５９）、マウス乳房腫瘍ウイルスレトロペプシン（ＭＥＲ０４８０３０）、ウサギ内因性レトロウイルスエンドペプチダーゼ（ＭＥＲ０４３６５０）、Ｓ７１関連ヒト内因性レトロペプシン（ＭＥＲ００１８１２）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７１１７）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７１３３）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７１６０）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２０６）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２５３）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２６０）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２９１）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７４１８）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７４４０）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７４７９）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７５５９）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７５８３）、ＲＴＶＬ－Ｈ型推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５４４６）、ヒト内因性レトロウイルスレトロペプシンホモログ１（ＭＥＲ０１５４７９）、ヒト内因性レトロウイルスレトロペプシンホモログ２（ＭＥＲ０１５４８１）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１（ホモサピエンス染色体１４）（ＭＥＲ０２９９７７）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２（ホモサピエンス染色体８）（ＭＥＲ０２９６６５）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子３（ホモサピエンス染色体１７）（ＭＥＲ００２６６０）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子３（ホモサピエンス染色体１７）（ＭＥＲ０３０２８６）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子３（ホモサピエンス染色体１７）（ＭＥＲ０４７１４４）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子５（ホモサピエンス染色体１２）（ＭＥＲ０２９６６４）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子６（ホモサピエンス染色体７）（ＭＥＲ００２０９４）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子７（ホモサピエンス染色体６）（ＭＥＲ０２９７７６）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子８（ホモサピエンス染色体Ｙ）（ＭＥＲ０３０２９１）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子９（ホモサピエンス染色体１９）（ＭＥＲ０２９６８０）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１０（ホモサピエンス染色体１２）（ＭＥＲ００２８４８）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１１（ホモサピエンス染色体１７）（ＭＥＲ００４３７８）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１２（ホモサピエンス染色体１１）（ＭＥＲ００３３４４）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１３（ホモサピエンス染色体２及び同様のもの）（ＭＥＲ０２９７７９）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１４（ホモサピエンス染色体２）（ＭＥＲ０２９７７８）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１５（ホモサピエンス染色体４）（ＭＥＲ０４７１５８）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１５（ホモサピエンス染色体４）（ＭＥＲ０４７３３２）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１５（ホモサピエンス染色体４）（ＭＥＲ００３１８２）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７１６５）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７１７８）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７２００）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７３１５）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０４７４０５）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１６（ＭＥＲ０３０２９２）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１７（ホモサピエンス染色体８）（ＭＥＲ００５３０５）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１８（ホモサピエンス染色体４）（ＭＥＲ０３０２８８）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子１９（ホモサピエンス染色体１６）（ＭＥＲ００１７４０）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２１（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４７２２２）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２１（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４７４５４）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２１（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４７４７７）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２１（ホモサピエンス）（ＭＥＲ００４４０３）、内因性レトロウイルスレトロペプシン偽遺伝子２２（ホモサピエンス染色体Ｘ）（ＭＥＲ０３０２８７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０４６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０５２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０７６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０８０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０８８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０８９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０９１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０９２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０９３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０９４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０９７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７０９９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログＭＥＲ０４７１０１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１０２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１０７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１０８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１０９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１１０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログＭＥＲ０４７１１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１１４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１１８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１２１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１２２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１２６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１２９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１３０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１３４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１３５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１３７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１４０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１４１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１４２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１４８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１４９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１５１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１５４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１５５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１５６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１５７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１５９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１６１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１６３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１６６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１７１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１７３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１７４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１７９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１８３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１８６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１９０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１９１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１９６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１９８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７１９９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２０８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２１９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２２１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２２４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２２５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２２６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２２７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼ
ホモログ（ＭＥＲ０４７２３６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２３９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２４０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２４２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２４３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２４９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２５１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２５２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２５４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２５５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２６３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２６５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２６６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２６７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２６８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２６９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２７２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２７３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２７４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２７５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２７６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２７９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２８０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２８１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２８２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２８４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２８５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２８９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２９０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２９４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２９５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７２９８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３００）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３０２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３０４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３０５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３０６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３０７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３１０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３１４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３１８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３２０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３２１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３２２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３２６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３２７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３３０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３３３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３６２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３６６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３６９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３７０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３７１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３７５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３７６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３８１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３８３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３８４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３８５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３８８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３８９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３９１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３９４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７３９６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４００）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４０１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４０３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４０６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４０７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４１０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４１３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４１４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４１６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４１７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４２０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４２３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４２４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４２８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４２９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４３１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４３４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４３９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４４２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４４５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４４９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４５０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４５２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４５５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４５７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４５８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４５９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４６３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４６８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４６９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４７０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４７６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４７８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４８３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４８８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４８９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７４９９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５０２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５０４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５１１）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５１３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５１４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５１５）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５１６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５２０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５３３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５３７）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５６９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５７０）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７５８４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６０３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６０４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６０６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６０９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６１６）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６１９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６４８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６４９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４７６６２）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４８００４）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４８０１８）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４８０１９）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４８０２３）、サブファミリーＡ２Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０４８０３７）、サブファミリーＡ２Ａ未割り当てペプチダーゼｓ（ＭＥＲ０４７１６４）、サブファミリーＡ２Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ０４７２３１）、サブファミリーＡ２Ａ未割り当てペプチダーゼｓ（ＭＥＲ０４７３８６）、皮膚アスパラギン酸プロテアーゼ（ＭＥＲ０５７０９７）、プレセニリン１（ＭＥＲ００５２２１）、プレセニリン２（ＭＥＲ００５２２３）、ｉｍｐａｓ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７０１）、ｉｍｐａｓ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ１８４７２２）、ｉｍｐａｓ４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７１５）、ｉｍｐａｓ２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７０８）、ｉｍｐａｓ５ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７１２）、ｉｍｐａｓ３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１９７１１）、可能なファミリーＡ２２偽遺伝子（ホモサピエンス染色体１８）（ＭＥＲ０２９９７４）、可能なファミリーＡ２２偽遺伝子（ホモサピエンス染色体１１）（ＭＥＲ０２３１５９）、カテプシンＶ（ＭＥＲ００４４３７）、カテプシンＸ（ＭＥＲ００４５０８）、カテプシンＦ（ＭＥＲ００４９８０）、カテプシンＬ（ＭＥＲ０００６２２）、カテプシンＳ（ＭＥＲ０００６３３）、カテプシンＯ（ＭＥＲ００１６９０）、カテプシンＫ（ＭＥＲ０００６４４）、カテプシンＷ（ＭＥＲ００３７５６）、カテプシンＨ（ＭＥＲ０００６２９）、カテプシンＢ（ＭＥＲ０００６８６）、ジペプチジル－ペプチダーゼＩ（ＭＥＲ００１９３７）、ブレオマイシンヒドロラーゼ（動物）（Ｍ
ＥＲ００２４８１）、尿細管間質性腎炎抗原（ＭＥＲ０１６１３７）、尿細管間質性腎炎抗原関連タンパク質（ＭＥＲ０２１７９９）、カテプシンＬ様偽遺伝子１（ホモサピエンス）（ＭＥＲ００２７８９）、カテプシンＢ様偽遺伝子（染色体４、ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２９４６９）、カテプシンＢ様偽遺伝子（染色体１、ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２９４５７）、ＣＴＳＬＬ２ｇ．ｐ．（ホモサピエンス）（ＭＥＲ００５２１０）、ＣＴＳＬＬ３ｇ．ｐ．（ホモサピエンス）（ＭＥＲ００５２０９）、カルパイン－１（ＭＥＲ０００７７０）、カルパイン－２（ＭＥＲ０００９６４）、カルパイン－３（ＭＥＲ００１４４６）、カルパイン－９（ＭＥＲ００４０４２）、カルパイン－８（ＭＥＲ０２１４７４）、カルパイン－１５（ＭＥＲ００４７４５）、カルパイン－５（ＭＥＲ００２９３９）、カルパイン－１１（ＭＥＲ００５８４４）、カルパイン－１２（ＭＥＲ０２９８８９）、カルパイン－１０（ＭＥＲ０１３５１０）、カルパイン－１３（ＭＥＲ０２０１３９）、カルパイン－１４（ＭＥＲ０２９７４４）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２５３ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５３７）、カルパモジュリン（ＭＥＲ０００７１８）、仮想タンパク質９４０２５１（ＭＥＲ００３２０１）、ユビキチニルヒドロラーゼ－Ｌ１（ＭＥＲ０００８３２）、ユビキチニルヒドロラーゼ－Ｌ３（ＭＥＲ０００８３６）、ユビキチニルヒドロラーゼ－ＢＡＰ１（ＭＥＲ００３９８９）、ユビキチニルヒドロラーゼ－ＵＣＨ３７（ＭＥＲ００５５３９）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５（ＭＥＲ００２０６６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ６（ＭＥＲ０００８６３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４（ＭＥＲ００１７９５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ８（ＭＥＲ００１８８４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１３（ＭＥＲ００２６２７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２（ＭＥＲ００４８３４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１１（ＭＥＲ００２６９３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１４（ＭＥＲ００２６６７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ７（ＭＥＲ００２８９６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ９Ｘ（ＭＥＲ００５８７７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１０（ＭＥＲ００４４３９）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１（ＭＥＲ００４９７８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１２（ＭＥＲ００５４５４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１６（ＭＥＲ００５４９３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１５（ＭＥＲ００５４２７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１７（ＭＥＲ００２９００）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１９（ＭＥＲ００５４２８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２０（ＭＥＲ００５４９４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３（ＭＥＲ００５５１３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ９Ｙ（ＭＥＲ００４３１４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ１８（ＭＥＲ００５６４１）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２１（ＭＥＲ００６２５８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２２（ＭＥＲ０１２１３０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３３（ＭＥＲ０１４３３５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２９（ＭＥＲ０１２０９３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２５（ＭＥＲ０１１１１５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３６（ＭＥＲ０１４０３３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３２（ＭＥＲ０１４２９０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２６（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０１４２９２）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２４（ＭＥＲ００５７０６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４２（ＭＥＲ０１１８５２）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４６（ＭＥＲ０１４６２９）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３７（ＭＥＲ０１４６３３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ２８（ＭＥＲ０１４６３４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４７（ＭＥＲ０１４６３６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３８（ＭＥＲ０１４６３７）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４４（ＭＥＲ０１４６３８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５０（ＭＥＲ０３０３１５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３５（ＭＥＲ０１４６４６）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３０（ＭＥＲ０１４６４９）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０９１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４７４３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４５（ＭＥＲ０３０３１４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５１（ＭＥＲ０１４７６９）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３４（ＭＥＲ０１４７８０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４８（ＭＥＲ０６４６２０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４０（ＭＥＲ０１５４８３）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４１（ＭＥＲ０４５２６８）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ３１（ＭＥＲ０１５４９３）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１２９ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６４８５）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４９（ＭＥＲ０１６４８６）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１８７ペプチダーゼ（ＭＥＲ０５２５７９）、ＵＳＰ１７様ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３０１９２）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５４（ＭＥＲ０２８７１４）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５３（ＭＥＲ０２７３２９）、ユビキチン特異的エンドペプチダーゼ３９［ミスリード］（ＭＥＲ０６４６２１）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０９０非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０１４７３９）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ４３［ミスリード］（ＭＥＲ０３０１４０）、ユビキチン特異的ペプチダーゼ５２［ミスリード］（ＭＥＲ０３０３１７）、ＮＥＫ２偽遺伝子（ＭＥＲ０１４７３６）、Ｃ１９偽遺伝子（ホモサピエンス：第５染色体）（ＭＥＲ０２９９７２）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０８８ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４７５０）、オートファジン－２（ＭＥＲ０１３５６４）、オートファジン－１（ＭＥＲ０１３５６１）、オートファジン－３（ＭＥＲ０１４３１６）、オートファジン－４（ＭＥＲ０６４６２２）、セザンヌ脱ユビキチン化ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９０４２）、セザンヌ－２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９０４４）、腫瘍壊死因子アルファ誘導タンパク質３（ＭＥＲ０２９０５０）、ｔｒａｂｉｄペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９０５２）、ＶＣＩＰ１３５脱ユビキチン化ペプチダーゼ（ＭＥＲ１５２３０４）、ｏｔｕｂａｉｎ－１（ＭＥＲ０２９０５６）、ｏｔｕｂａｉｎ－２（ＭＥＲ０２９０６１）、ＣｙｌＤ タンパク質（ＭＥＲ０３０１０４）、ＵｆＳＰ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４２７２４）、ＵｆＳＰ２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０６０３０６）、ＤＵＢＡ脱ユビキチン化酵素（ＭＥＲ０８６０９８）、ＫＩＡＡ０４５９（ホモサピエンス）様タンパク質（ＭＥＲ１２２４６７）、Ｏｔｕｄ１タンパク質（ＭＥＲ１２５４５７）、グリコシルトランスフェラーゼ２８ドメイン含有１、アイソフォームＣＲＡ＿ｃ（ホモサピエンス）様（ＭＥＲ１２３６０６）、ｈｉｎ１Ｌ ｇ．ｐ．（ホモサピエンス）（ＭＥＲ１３９８１６）、アタキシン－３（ＭＥＲ０９９９９８）、ＡＴＸＮ３Ｌ推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ１１５２６１）、ジョセフィンドメイン含有１（ホモサピエンス）（ＭＥＲ１２５３３４）、ジョセフィンドメイン含有２（ホモサピエンス）（ＭＥＲ１２４０６８）、ＹＯＤ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ１１６５５９）、レグマイン（植物アルファ型）（ＭＥＲ０４４５９１）、レグマイン（ＭＥＲ００１８００）、グリコシルホスファチジルイノシトール：タンパク質トランスアミダーゼ（ＭＥＲ００２４７９）、レグマイン偽遺伝子（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２９７４１）、ファミリーＣ１３未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１７５８１３）、カスパーゼ－１（ＭＥＲ０００８５０）、カスパーゼ－３（ＭＥＲ０００８５３）、カスパーゼ－７（ＭＥＲ００２７０５）、カスパーゼ－６（ＭＥＲ００２７０８）、カスパーゼ－２（ＭＥＲ００１６４４）、カスパーゼ－４（ＭＥＲ００１９３８）、カスパーゼ－５（ＭＥＲ００２２４０）、カスパーゼ－８（ＭＥＲ００２８４９）、カスパーゼ－９（ＭＥＲ００２７０７）、カスパーゼ－１０（ＭＥＲ００２５７９）、カスパーゼ－１４（ＭＥＲ０１２０８３）、パラカスパーゼ（ＭＥＲ０１９３２５）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１４３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２１３０４）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１８６ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２０５１６）、推定カスパーゼ（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２１４６３）、ＦＬＩＰタンパク質（ＭＥＲ００３０２６）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１４２タンパク質（ＭＥＲ０２１３１６）、カスパーゼ１２偽遺伝子（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０１９６９８）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０９３カスパーゼ偽遺伝子（ＭＥＲ０１４７６６）、サブファミリーＣ１４Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８５３２９）、サブファミリーＣ１４Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７９９５６）、セパリン（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０１１７７５）、セパラーゼ様偽遺伝子（ＭＥＲ０１４７９７）、ＳＥＮＰ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１１０１２）、ＳＥＮＰ３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１１０１９）、ＳＥＮＰ６ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１１１０９）、ＳＥＮＰ２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１２１８３）、ＳＥＮＰ５ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４０３２）、ＳＥＮＰ７ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４０９５）、ＳＥＮＰ８ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６１６１）、ＳＥＮＰ４ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５５７）、ピログルタミル－ペプチダーゼＩ（脊索動物）（ＭＥＲ０１１０３２）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０７３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９９７８）、ソニックヘッジホッグタンパク質（ＭＥＲ００２５３９）、インディアンヘッジホッグタンパク質（ＭＥＲ００２５３８）、デザートヘッジホッグタンパク質（ＭＥＲ０１２１７０）、ジペプチジル－ペプチダーゼＩＩＩ（ＭＥＲ００４２５２）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１６４タンパク質（ＭＥＲ０２０４１０）、ＬＯＣ１３８９７１ｇ．ｐ．（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２００７４）、Ａｔｐ２３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０６０６４２）、プレニルペプチダーゼ１（ＭＥＲ００４２４６）、アミノペプチダーゼＮ（ＭＥＲ０００９９７）、アミノペプチダーゼＡ（ＭＥＲ００１０１２）、ロイコトリエンＡ４ヒドロラーゼ（ＭＥＲ００１０１３）、ピログルタミル－ペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ０１２２２１）、サイトゾルアラニルアミノペプチダーゼ（ＭＥＲ００２７４６）、シスチニルアミノペプチダーゼ（ＭＥＲ００２０６０）、アミノペプチダーゼＢ（ＭＥＲ００１４９４）、アミノペプチダーゼＰＩＬＳ（ＭＥＲ００５３３１）、アルギニルアミノペプチダーゼ様１（ＭＥＲ０１２２７１）、白血球由来アルギニンアミノペプチダーゼ（ＭＥＲ００２９６８）、アミノペプチダーゼＱ（ＭＥＲ０５２５９５）、アミノペプチダーゼＯ（ＭＥＲ０１９７３０）、Ｔａｔａ結合タンパク質関連因子（ＭＥＲ０２６４９３）、アンギオテンシン変換酵素ペプチダーゼユニット１（ＭＥＲ００４９６７）、アンギオテンシン変換酵素ペプチダーゼユニット２（ＭＥＲ００１０１９）、アンギオテンシン変換酵素－２（ＭＥＲ０１１０６１）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１５３タンパク質（ＭＥＲ０２０５１４）、チメットオリゴペプチダーゼ（ＭＥＲ００１７３７）、ニューロリシン（ＭＥＲ０１０９９１）、ミトコンドリア中間体ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３６６５）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１５４タンパク質（ＭＥＲ０２１３１７）、レイシマノリシン－２（ＭＥＲ０１４４９２）、レイシマノリシン－３（ＭＥＲ１８００３１）、マトリックスメタロペプチダーゼ－１（ＭＥＲ００１０６３）、マトリックスメタロペプチダーゼ－８（ＭＥＲ００１０８４）、マトリックスメタロペプチダーゼ－２（ＭＥＲ００１０８０）、マトリックスメタロペプチダーゼ－９（ＭＥＲ００１０８５）、マトリックスメタロペプチダーゼ－３（ＭＥＲ００１０６８）、マトリックスメタロペプチダーゼ－１０（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ００１０７２）、マトリックスメタロペプチダーゼ－１１（ＭＥＲ００１０７５）、マトリックスメタロペプチダーゼ－７（ＭＥＲ００１０９２）、マトリックスメタロペプチダーゼ－１２（ＭＥＲ００１０８９）、マトリックスメタロペプチダーゼ－１３（ＭＥＲ００１４１１）、膜型
マトリックスメタロペプチダーゼ－１（ＭＥＲ００１０７７）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ－２（ＭＥＲ００２３８３）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ－３（ＭＥＲ００２３８４）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ－４（ＭＥＲ００２５９５）、マトリックスメタロペプチダーゼ－２０（ＭＥＲ００３０２１）、マトリックスメタロペプチダーゼ－１９（ＭＥＲ００２０７６）、マトリックスメタロペプチダーゼ－２３Ｂ（ＭＥＲ００４７６６）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ－５（ＭＥＲ００５６３８）、膜型マトリックスメタロペプチダーゼ－６（ＭＥＲ０１２０７１）、マトリックスメタロペプチダーゼ－２１（ＭＥＲ００６１０１）、マトリックスメタロペプチダーゼ－２２（ＭＥＲ０１４０９８）、マトリックスメタロペプチダーゼ－２６（ＭＥＲ０１２０７２）、マトリックスメタロペプチダーゼ－２８（ＭＥＲ０１３５８７）、マトリックスメタロペプチダーゼ－２３Ａ（ＭＥＲ０３７２１７）、マクロファージエラスターゼホモログ（第８染色体、ホモサピエンス）（ＭＥＲ０３００３５）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１５６タンパク質（ＭＥＲ０２１３０９）、マトリックスメタロペプチダーゼ様１（ＭＥＲ０４５２８０）、サブファミリーＭ１０Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７５９１２）、サブファミリーＭ１０Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８７９９７）、サブファミリーＭ１０Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８７９９８）、サブファミリーＭ１０Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８００００）、メプリン アルファ サブユニット（ＭＥＲ００１１１１）、メプリンベータサブユニット（ＭＥＲ００５２１３）、プロコラーゲンＣ－ペプチダーゼ（ＭＥＲ００１１１３）、哺乳動物トロイド様１タンパク質（ＭＥＲ００５１２４）、哺乳動物型トロイド様 ２タンパク質（ＭＥＲ００５８６６）、ＡＤＡＭＴＳ９ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１２０９２）、ＡＤＡＭＴＳ１４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６７００）、ＡＤＡＭＴＳ１５ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７０２９）、ＡＤＡＭＴＳ１６ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５６８９）、ＡＤＡＭＴＳ１７ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６３０２）、ＡＤＡＭＴＳ１８ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６０９０）、ＡＤＡＭＴＳ１９ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５６６３）、ＡＤＡＭ８ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３９０２）、ＡＤＡＭ９ペプチダーゼ（ＭＥＲ００１１４０）、ＡＤＡＭ１０ペプチダーゼ（ＭＥＲ００２３８２）、ＡＤＡＭ１２ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５１０７）、ＡＤＡＭ１９ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１２２４１）、ＡＤＡＭ１５ペプチダーゼ（ＭＥＲ００２３８６）、ＡＤＡＭ１７ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３０９４）、ＡＤＡＭ２０ペプチダーゼ（ＭＥＲ００４７２５）、ＡＤＡＭＤＥＣ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０００７４３）、ＡＤＡＭＴＳ３ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５１００）、ＡＤＡＭＴＳ４ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５１０１）、ＡＤＡＭＴＳ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５４６）、ＡＤＡＭ２８ペプチダーゼ（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ００５４９５）、ＡＤＡＭＴＳ５ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５４８）、ＡＤＡＭＴＳ８ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５４５）、ＡＤＡＭＴＳ６ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５８９３）、ＡＤＡＭＴＳ７ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５８９４）、ＡＤＡＭ３０ペプチダーゼ（ＭＥＲ００６２６８）、ＡＤＡＭ２１ペプチダーゼ（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ００４７２６）、ＡＤＡＭＴＳ１０ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４３３１）、ＡＤＡＭＴＳ１２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４３３７）、ＡＤＡＭＴＳ１３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５４５０）、ＡＤＡＭ３３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５１４３）、オバスタシン（ＭＥＲ０２９９９６）、ＡＤＡＭＴＳ２０ペプチダーゼ（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０２６９０６）、プロコラーゲンＩ 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プロセッシングペプチダーゼベータサブユニット（ＭＥＲ００４４９７）、ナルディライジン（ＭＥＲ００３８８３）、ユーピトリリジン（ＭＥＲ００４８７７）、ミトコンドリア プロセッシングペプチダーゼ非ペプチダーゼアルファサブユニット（ＭＥＲ００１４１３）、ユビキノール－シトクロムｃレダクターゼコアタンパク質Ｉ（ＭＥＲ００３５４３）、ユビキノール－シトクロムｃレダクターゼコアタンパク質ＩＩ（ＭＥＲ００３５４４）、ユビキノール－シトクロムｃレダクターゼコアタンパク質ドメイン２（ＭＥＲ０４３９９８）、インスリシンユニット２（ＭＥＲ０４６８２１）、ナルディライジンユニット２（ＭＥＲ０４６８７４）、インスリシンユニット３（ＭＥＲ０７８７５３）、ミトコンドリア プロセッシングペプチダーゼサブユニットアルファ ユニット２（ＭＥＲ１２４４８９）、ナルディライジンユニット３（ＭＥＲ１４２８５６）、ＬＯＣ１３３０８３ｇ．ｐ．（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２１８７６）、サブファミリーＭ１６Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１８８７５７）、ロイシルアミノペプチダーゼ（動物）（ＭＥＲ００３１００）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０４０ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３９１９）、ロイシルアミノペプチダーゼ－１（セノラブディティス型）（ＭＥＲ０１３４１６）、メチオニルアミノペプチダーゼ１（ＭＥＲ００１３４２）、メチオニルアミノペプチダーゼ２（ＭＥＲ００１７２８）、アミノペプチダーゼＰ２（ＭＥＲ００４４９８）、Ｘａａ－Ｐｒｏジペプチダーゼ（真核生物）（ＭＥＲ００１２４８）、アミノペプチダーゼＰ１（ＭＥＲ００４３２１）、ミトコンドリア中間切断ペプチダーゼ５５ｋＤａ（ＭＥＲ０１３４６３）、ミトコンドリアメチオニルアミノペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４０５５）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０２０ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０１０９７２）、増殖関連タンパク質１（ＭＥＲ００５４９７）、クロマチン特異的転写伸長因子１４０ｋＤａサブユニット（ＭＥＲ０２６４９５）、増殖関連タンパク質１様（ヒト染色体Ｘ）（ＭＥＲ０２９９８３）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２２６ペプチダーゼホモログ（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０５６２６２）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２２７ペプチダーゼホモログ（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４７２９９）、サブファミリーＭ２４Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７９８９３）、アスパルチルアミノペプチダーゼ（ＭＥＲ００３３７３）、Ｇｌｙ－Ｘａａカルボキシペプチダーゼ（ＭＥＲ０３３１８２）、カルノシンジペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ０１４５５１）、カルノシンジペプチダーゼＩ（ＭＥＲ０１５１４２）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１６１タンパク質（ＭＥＲ０２１８７３）、アミノアシラーゼ（ＭＥＲ００１２７１）、グルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ００２１０４）、ＮＡＡＬＡＤＡＳＥ Ｌペプチダーゼ（ＭＥＲ００５２３９）、グルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩＩ（ＭＥＲ００５２３８）、血漿グルタミン酸カルボキシペプチダーゼ（ＭＥＲ００５２４４）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１０３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１５０９１）、Ｆｘｎａペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９９６５）、トランスフェリン受容体タンパク質（ＭＥＲ００２１０５）、トランスフェリン受容体２タンパク質（ＭＥＲ００５１５２）、グルタミニルシクリーゼ（ＭＥＲ０１５０９５）、グルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩ（ホモサピエンス）型非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０２６９７１）、ニカリン（ＭＥＲ０４４６２７）、膜ジペプチダーゼ（ＭＥＲ００１２６０）、膜結合ジペプチダーゼ２（ＭＥＲ０１３４９９）、膜結合ジペプチダーゼ３（ＭＥＲ０１３４９６）、ジヒドロオロターゼ（ＭＥＲ００５７６７）、ジヒドロピリミジナーゼ（ＭＥＲ０３３２６６）、ジヒド
ロピリミジナーゼ関連タンパク質－１（ＭＥＲ０３０１４３）、ジヒドロピリミジナーゼ関連タンパク質－２（ＭＥＲ０３０１５５）、ジヒドロピリミジナーゼ関連タンパク質－３（ＭＥＲ０３０１５１）、ジヒドロピリミジナーゼ関連タンパク質－４（ＭＥＲ０３０１４９）、ジヒドロピリミジナーゼ関連タンパク質－５（ＭＥＲ０３０１３６）、５７３０４５７Ｆ１１ＲＩＫ（ＭＥＲ０３３１８４）のような仮想タンパク質、１３０００１９ｊ０８ｒｉｋタンパク質（ＭＥＲ０３３１８６））、グアニンアミノヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３７７１４）、Ｋａｅ１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ００１５７７）、ＯＳＧＥＰＬ１様タンパク質（ＭＥＲ０１３４９８）、Ｓ２Ｐペプチダーゼ（ＭＥＲ００４４５８）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９９８４５）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９９８４６）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９９８４７）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１３７３２０）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ２０１５５７）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９９４１７）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９９４１８）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９９４１９）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９９４２０）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７５９３２）、サブファミリーＭ２３Ｂ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９９６６５）、Ｐｏｈ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２０３８２）、Ｊａｂ１／ＭＰＮドメイン金属酵素（ＭＥＲ０２２０５７）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１６５ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２１８６５）、Ｂｒｃｃ３６イソペプチダーゼ（ＭＥＲ０２１８９０）、ヒストンＨ２Ａ脱ユビキチン化酵素ＭＹＳＭ１（ＭＥＲ０２１８８７）、ＡＭＳＨ脱ユビキチン化ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３０１４６）、推定ペプチダーゼ（ホモサピエンス染色体２）（ＭＥＲ０２９９７０）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１６８タンパク質（ＭＥＲ０２１８８６）、ＣＯＰ９シグナロソームサブユニット６（ＭＥＲ０３０１３７）、２６Ｓプロテアソーム非ＡＴＰａｓｅ調節サブユニット７（ＭＥＲ０３０１３４）、真核生物翻訳開始因子３サブユニット５（ＭＥＲ０３０１３３）、ＩＦＰ３８ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０３０１３２）、サブファミリーＭ６７Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９１１８１）、サブファミリーＭ６７Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１１４４）、グランザイムＢ（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０００１６８）、テスティシン（ＭＥＲ００５２１２）、トリプターゼベータ（ＭＥＲ０００１３６）、カリクレイン関連ペプチダーゼ５（ＭＥＲ００５５４４）、コリン（ＭＥＲ００５８８１）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１２（ＭＥＲ００６０３８）、ＤＥＳＣ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ００６２９８）、トリプターゼガンマ１（ＭＥＲ０１１０３６）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１４（ＭＥＲ０１１０３８）、ヒアルロン酸結合ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３６１２）、膜貫通ペプチダーゼ、セリン４（ＭＥＲ０１１１０４）、腸内セリンペプチダーゼ（げっ歯類）（ＭＥＲ０１６１３０）、副腎分泌型セリンペプチダーゼ（ＭＥＲ００３７３４）、トリプターゼデルタ１（ホモサピエンス）（ＭＥＲ００５９４８）、マトリプターゼ－３（ＭＥＲ０２９９０２）、マラプシン（ＭＥＲ００６１１９）、トリプターゼ－６（ＭＥＲ００６１１８）、オボキマーゼ－１ドメイン１（ＭＥＲ０９９１８２）、膜貫通ペプチダーゼ、セリン３（ＭＥＲ００５９２６）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１５（ＭＥＲ００００６４）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０３１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４０５４）、ＴＭＰＲＳＳ１３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４２２６）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ０３８ペプチダーゼ（ＭＥＲ０６２８４８）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２０４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９９８０）、カチオン性トリプシン（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ００００２０）、エラスターゼ－２（ＭＥＲ０００１１８）、マンナン結合レクチン関連セリンペプチダーゼ－３（ＭＥＲ０３１９６８）、カテプシンＧ（ＭＥＲ００００８２）、ミエロブラスチン（ＭＥＲ０００１７０）、グランザイムＡ（ＭＥＲ００１３７９）、グランザイムＭ（ＭＥＲ００１５４１）、キマーゼ（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０００１２３）、トリプターゼアルファ（ＭＥＲ０００１３５）、グランザイムＫ（ＭＥＲ００１９３６）、グランザイムＨ（ＭＥＲ０００１６６）、キモトリプシンＢ（ＭＥＲ０００００１）、エラスターゼ－１（ＭＥＲ００３７３３）、膵臓エンドペプチダーゼＥ（ＭＥＲ０００１４９）、膵臓エラスターゼＩＩ（ＭＥＲ０００１４６）、エンテロペプチダーゼ（ＭＥＲ００２０６８）、キモトリプシンＣ（ＭＥＲ０００７６１）、プロスタシン（ＭＥＲ００２４６０）、カリクレイン１（ＭＥＲ００００９３）、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ＭＥＲ００００９４）、カリクレイン関連ペプチダーゼ３（ＭＥＲ０００１１５）、メソトリプシン（ＭＥＲ００００２２）、補体成分Ｃ１ｒ様ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６３５２）、補体因子Ｄ（ＭＥＲ０００１３０）、補体成分活性化Ｃ１ｒ（ＭＥＲ０００２３８）、補体成分活性化Ｃ１ｓ（ＭＥＲ０００２３９）、補体成分Ｃ２ａ（ＭＥＲ０００２３１）、補体因子Ｂ（ＭＥＲ０００２２９）、マンナン結合レクチン関連セリンペプチダーゼ１（ＭＥＲ０００２４４）、補体因子Ｉ（ＭＥＲ０００２２８）、膵臓エンドペプチダーゼＥフォームＢ（ＭＥＲ０００１５０）、膵臓エラスターゼＩＩＢ（ＭＥＲ０００１４７）、凝固因子ＸＩＩａ（ＭＥＲ０００１８７）、血漿カリクレイン（ＭＥＲ０００２０３）凝固因子Ｘｉａ（ＭＥＲ０００２１０）、凝固因子ＩＸａ（ＭＥＲ０００２１６）、凝固因子Ｖｉｌａ（ＭＥＲ０００２１５）、凝固因子Ｘａ（ＭＥＲ０００２１２）、トロンビン（ＭＥＲ０００１８８）、プロテインＣ（活性型）（ＭＥＲ０００２２２）、アクロシン（ＭＥＲ００００７８）、ヘプシン（ＭＥＲ０００１５６）、肝細胞成長因子アクチベーター（ＭＥＲ０００１８６）、マンナン結合レクチン関連セリンペプチダーゼ２（ＭＥＲ００２７５８）、ｕ－プラスミノーゲンアクチベーター（ＭＥＲ０００１９５）、ｔ－プラスミノーゲンアクチベーター（ＭＥＲ０００１９２）、プラスミン（ＭＥＲ０００１７５）、カリクレイン関連ペプチダーゼ６（ＭＥＲ００２５８０）、ニューロトリプシン（ＭＥＲ００４１７１）、カリクレイン関連ペプチダーゼ８（ＭＥＲ００５４００）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１０（ＭＥＲ００３６４５）、エピセリアシン（ＭＥＲ００３７３６）、カリクレイン関連ペプチダーゼ４（ＭＥＲ００５２６６）、プロセミン（ＭＥＲ００４２１４）、キモパシン（ＭＥＲ００１５０３）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１１（ＭＥＲ００４８６１）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１１（ＭＥＲ２１６１４２）、トリプシン２Ａ型（ＭＥＲ００００２１）、ＨｔｒＡ１ペプチダーゼ（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ００２５７７）、ＨｔｒＡ２ペプチダーゼ（ＭＥＲ２０８４１３）、ＨｔｒＡ２ペプチダーゼ（ＭＥＲ００４０９３）、ＨｔｒＡ３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４７９５）、ＨｔｒＡ４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１６３５１）、Ｔｙｓｎｄ１ペプチダーゼ（ＭＥＲ０５０４６１）、ＴＭＰＲＳＳ１２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７０８５）、ＨＡＴ様推定ペプチダーゼ２（ＭＥＲ０２１８８４）、トリプシンＣ（ＭＥＲ０２１８９８）、カリクレイン関連ペプチダーゼ７（ＭＥＲ００２００１）、マトリプターゼ（ＭＥＲ００３７３５）、カリクレイン関連ペプチダーゼ１３（ＭＥＲ００５２６９）、カリクレイン関連ペプチダーゼ９（ＭＥＲ００５２７０）、マトリプターゼ－２（ＭＥＲ００５２７８）、臍静脈ペプチダーゼ（ＭＥＲ００５４２１）、ＬＣＬＰペプチダーゼ（ＭＥＲ００１９００）、スピネシン（ＭＥＲ０１４３８５）、マラプシン－２（ＭＥＲ０２１９２９）、補体因子Ｄ様推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０５６１６４）、オボキマーゼ－２（ＭＥＲ０２２４１０）、ＨＡＴ様４ペプチダーゼ（ＭＥＲ０４４５８９）、オボキマーゼ１ドメイン１（ＭＥＲ０２２４１２）、表皮特異的ＳＰ様推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２９９００）、精巣セリンペプチダーゼ５（ＭＥＲ０２９９０１）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２５８ペプチダーゼ（ＭＥＲ０００２８５）、ポリセラーゼＩＡユニット１（ＭＥＲ０３０８７９）、ポリセラーゼ－ＩＡユニット２（ＭＥＲ０３０８８０）、精巣セリンペプチダーゼ２（ヒト型）（ＭＥＲ０３３１８７）、仮想アクロシン様ペプチダーゼ（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０３３２５３）、ＨＡＴ様５ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２８２１５）、ポリセラーゼ－３ユニット１（ＭＥＲ０６１７６３）、ポリセラーゼ－３ユニット２（ＭＥＲ０６１７４８）、トリプトファン／セリンプロテアーゼに類似したペプチダーゼ（ＭＥＲ０５６２６３）、ポリセラーゼ２ユニット１（ＭＥＲ０６１７７７）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１２３ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２１９３０）、ＨＡＴ様２ペプチダーゼ（ＭＥＲ０９９１８４）、ｈＣＧ２０４１４５２様タンパク質（ＭＥＲ０９９１７２）、ｈＣＧ２２０６７（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０９９１６９）、脳レスキュー因子－１（ヒト）（ＭＥＲ０９８８７３）、ｈＣＧ２０４１１０８（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０９９１７３）、ポリセラーゼ－２ユニット２（ＭＥＲ０６１７６０）、ポリセラーゼ－２ユニット３（ＭＥＲ０６５６９４）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２０１（ペプチダーゼホモログ）ＭＥＲ０９９１７５、分泌型トリプシン様セリンペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０３００００）、ポリセラーゼ－１Ａユニット３（ＭＥＲ０２９８８０）、アズロシジン（ＭＥＲ０００１１９）、ハプトグロビン－１（ＭＥＲ０００２３３）、ハプトグロビン関連タンパク質（ＭＥＲ０００２３５）、マクロファージ刺激タンパク質（ＭＥＲ００１５４６）、肝細胞増殖因子（ＭＥＲ０００１８５）、プロテインＺ（ＭＥＲ０００２２７）、ＴＥＳＰ１タンパク質（ＭＥＲ０４７２１４）、ＬＯＣ１３６２４２タンパク質（ＭＥＲ０１６１３２）、血漿カリクレイン様タンパク質４（ＭＥＲ０１６３４６）、ＰＲＳＳ３５タンパク質（ＭＥＲ０１６３５０）、ＤＫＦＺｐ５８６Ｈ２１２３様タンパク質（ＭＥＲ０６６４７４）、アポリポタンパク質（ＭＥＲ０００１８３）、ｐｓｉ－ＫＬＫ１偽遺伝子（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０３３２８７）、トリプターゼ偽遺伝子Ｉ（ＭＥＲ０１５０７７）、トリプターゼ偽遺伝子ＩＩ（ＭＥＲ０１５０７８）、トリプターゼ偽遺伝子ＩＩＩ（ＭＥＲ０１５０７９）、サブファミリーＳ１Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２１６９８２）、サブファミリーＳ１Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２１６１４８）、アミドホスホリボシルトランスフェラーゼ前駆体（ＭＥＲ００３３１４）、グルタミン－フルクトース－６－リン酸トランスアミナーゼ１（ＭＥＲ００３３２２）、グルタミン：フルクトース－６－リン酸アミドトランスフェラーゼ（ＭＥＲ０１２１５８）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１４４タンパク質（ＭＥＲ０２１３１９）、アスパラギン合成酵素（ＭＥＲ０３３２５４）、ファミリーＣ４４非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１５９２８６）、ファミリーＣ４４未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１８５６２５）ファミリーＣ４４未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１８５６２６）、セセルニン１（ＭＥＲ０４５３７６）、セセルニン２（ＭＥＲ０６４５７３）、セセルニン３（ＭＥＲ０６４５８２）、酸性セラミダーゼ前駆体（ＭＥＲ１００７９４）、Ｎ－アシルエタノールアミノ酸酸アミダーゼ前駆体（ＭＥＲ１４１６６７）、プロテアソーム触媒サブユニット１（ＭＥＲ０００５５６）、プロテアソーム触媒サブユニット２（ＭＥＲ００２６２５）、プロテアソーム触媒サブユニット３（ＭＥＲ００２１４９）、プロテアソーム触媒サブユニット１ｉ（ＭＥＲ０００５５２）、プロテアソーム触媒
サブユニット２ｉ（ＭＥＲ００１５１５）、プロテアソーム触媒サブユニット３ｉ（ＭＥＲ０００５５５）、プロテアソーム触媒サブユニット５ｔ（ＭＥＲ０２６２０３）、プロテインセリンキナーゼｃ１７（ＭＥＲ０２６４９７）、プロテアソームサブユニットアルファ６（ＭＥＲ０００５５７）、プロテアソームサブユニットアルファ２（ＭＥＲ０００５５０）、プロテアソームサブユニットアルファ４（ＭＥＲ０００５５４）、プロテアソームサブユニットアルファ７（ＭＥＲ０３３２５０）、プロテアソームサブユニットアルファ５（ＭＥＲ０００５５８）、プロテアソームサブユニットアルファ１（ＭＥＲ０００５４９）、プロテアソームサブユニットアルファ３（ＭＥＲ０００５５３）、プロテアソームサブユニットＸＡＰＣ７（ＭＥＲ００４３７２）、プロテアソームサブユニットベータ３（ＭＥＲ００１７１０）、プロテアソームサブユニットベータ２（ＭＥＲ００２６７６）、プロテアソームサブユニットベータ１（ＭＥＲ０００５５１）、プロテアソームサブユニットベータ４（ＭＥＲ００１７１１）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２３０ペプチダーゼホモログ（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４７３２９）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２３１偽遺伝子（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４７１７２）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２３２偽遺伝子（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４７３１６）、グリコシルアスパラギナーゼ前駆体（ＭＥＲ００３２９９）、イソアスパルチルジペプチダーゼ（スレオニン型）（ＭＥＲ０３１６２２）、タスパーゼ－１（ＭＥＲ０１６９６９）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ５（哺乳動物型）（ＭＥＲ００１９７７）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ１（哺乳動物型）（ＭＥＲ００１６２９）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ２（ホモサピエンス）（ＭＥＲ００１９７６）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ様タンパク質４（ＭＥＲ００２７２１）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ様タンパク質３（ＭＥＲ０１６９７０）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ１前駆体（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２６２０４）に類似、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ１前駆体（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２６２０５）に類似、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２１１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２６２０７）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ６（ＭＥＲ１５９２８３）、ガンマ－グルタミルトランスペプチダーゼホモログ（染色体２、ホモサピエンス）（ＭＥＲ０３７２４１）、ポリシスチン－１（ＭＥＲ１２６８２４）、ＫＩＡＡ１８７９タンパク質（ＭＥＲ１５９３２９）、多発性嚢胞腎１様３（ＭＥＲ１７２５５４）、ガンマ－グルタミルヒドロラーゼ（ＭＥＲ００２９６３）、グアニン５’ ’－一リン酸シンターゼ（ＭＥＲ０４３３８７）、カルバモイルリン酸シンターゼ（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０７８６４０）、ジヒドロオロターゼ（Ｎ末端ユニット）（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０６０６４７）、ＤＪ－１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３３９０）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１００推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４８０２）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１０１非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０１４８０３）、ＫＩＡＡ０３６１タンパク質（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０４２８２７）、Ｆ１１３４２８３タンパク質（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４４５５３）、非ペプチダーゼホモログ染色体２１オープンリーディングフレーム３３（ホモサピエンス）（ＭＥＲ１６００９４）、ファミリーＣ５６非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７７０１６）、ファミリーＣ５６非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７６６１３）、ファミリーＣ５６非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７６９１８）、ムチン様ホルモン受容体様２（ＭＥＲ０３７２３０）を含むＥＧＦ様モジュール、ＣＤ９７抗原（ヒト型）（ＭＥＲ０３７２８６）、ムチン様ホルモン受容体様３を含むＥＧＦ様モジュール（ＭＥＲ０３７２８８）、ムチン様ホルモン受容体様１を含むＥＧＦ様モジュール（ＭＥＲ０３７２７８）、ムチン様ホルモン受容体様４を含むＥＧＦ様モジュール（ＭＥＲ０３７２９４）、カドヘリンＥＧＦＬＡＧ７パスＧ型受容体２前駆体（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４５３９７）、Ｇｐｒ６４（ハツカネズミ）型タンパク質（ＭＥＲ１２３２０５）、ＧＰＲ５６（ホモサピエンス）型タンパク質（ＭＥＲ１２２０５７）、ラトロフィリン２（ＭＥＲ１２２１９９）、ラトロフィリン－１（ＭＥＲ１２６３８０）、ラトロフィリン３（ＭＥＲ１２４６１２）、プロトカドヘリンフラミンゴ２（ＭＥＲ１２４２３９）、ＥＴＬタンパク質（ＭＥＲ１２６２６７）、Ｇタンパク質共役型受容体１１２（ＭＥＲ１２６１１４）、７回膜貫通ヘリックス受容体（ＭＥＲ１２５４４８）、Ｇｐｒ１１４タンパク質（ＭＥＲ１５９３２０）、ＧＰＲ１２６血管誘導性Ｇタンパク質共役型受容体（ＭＥＲ１４００１５）、ＧＰＲ１２５（ホモサピエンス）型タンパク質（ＭＥＲ１５９２７９）、ＧＰＲ１１６（ホモサピエンス）型Ｇタンパク質共役型受容体（ＭＥＲ１５９２８０）、ＧＰＲ１２８（ホモサピエンス）型Ｇタンパク質共役型受容体（ＭＥＲ１６２０１５）、ＧＰＲ１３３（ホモサピエンス）型Ｇタンパク質共役型受容体（ＭＥＲ１５９３３４）、ＧＰＲ１１０Ｇタンパク質共役型受容体（ＭＥＲ１５９２７７）、ＧＰＲ９７タンパク質（ＭＥＲ１５９３２２）、ＫＰＧ＿００６タンパク質（ＭＥＲ１６１７７３）、ＫＰＧ＿００８タンパク質（ＭＥＲ１６１８３５）、ＫＰＧ＿００９タンパク質（ＭＥＲ１５９３３５）、未割り当てホモログ（ＭＥＲ１６６２６９）、ＧＰＲ１１３タンパク質（ＭＥＲ１５９３５２）、脳特異的血管新生インヒビター２（ＭＥＲ１５９７４６）、ＰＩＤＤ自動処理タンパク質ユニット１（ＭＥＲ０２０００１）、ＰＩＤＤ自動処理タンパク質ユニット２（ＭＥＲ０６３６９０）、ＭＵＣ１自己切断性ムチン（ＭＥＲ０７４２６０）、ジストログリカン（ＭＥＲ０５４７４１）、プロタンパク質転換酵素９（ＭＥＲ０２２４１６）、サイト１ペプチダーゼ（ＭＥＲ００１９４８）、フリン（ＭＥＲ０００３７５）、プロタンパク質転換酵素１（ＭＥＲ０００３７６）、プロタンパク質転換酵素２（ＭＥＲ０００３７７）、プロタンパク質転換酵素４（ＭＥＲ０２８２５５）、ＰＡＣＥ４プロタンパク質転換酵素（ＭＥＲ０００３８３）、プロタンパク質転換酵素５（ＭＥＲ００２５７８）、プロタンパク質転換酵素７（ＭＥＲ００２９８４）、トリペプチジルペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ０００３５５）、サブファミリーＳ８Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ２０１３３９）、サブファミリーＳ８Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９１６１３）、サブファミリーＳ８Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１１）、サブファミリーＳ８Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１２）、サブファミリーＳ８Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１４）、トリペプチジルペプチダーゼＩ（ＭＥＲ００３５７５）、プロリルオリゴペプチダーゼ（ＭＥＲ０００３９３）、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（真核生物）（ＭＥＲ０００４０１）、アシルアミノアシルペプチダーゼ（ＭＥＲ０００４０８）、線維芽細胞活性化タンパク質アルファサブユニット（ＭＥＲ０００３９９）、ＰＲＥＰＬＡタンパク質（ＭＥＲ００４２２７）、ジペプチジルペプチダーゼ８（ＭＥＲ０１３４８４）、ジペプチジルペプチダーゼ９（ＭＥＲ００４９２３）、ＦＬＪ１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７２４０）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１９４推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３５３）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１９５推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３６７）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１９６推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３６８）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１９７推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３７１）、Ｃ１４ｏｒｆ２９タンパク質（ＭＥＲ０３３２４４）、仮想タンパク質（ＭＥＲ０３３２４５）、仮想エステラーゼ／リパーゼ／チオエステラーゼ（ＭＥＲ０４７３０９）、タンパク質ｂａｔ５（ＭＥＲ０３７８４０）、仮想タンパク質ｆｌｊ４０２１９（ＭＥＲ０３３２１２）、仮想タンパク質ｆｌｊ３７４６４（ＭＥＲ０３３２４０）、仮想タンパク質ｆｌｊ３３６７８（ＭＥＲ０３３２４１）、ジペプチジルペプチダーゼホモログＤＰＰ６（ＭＥＲ０００４０３）、ジペプチジルペプチダーゼホモログＤＰＰ１０（ＭＥＲ００５９８８）、ハツカネズミ染色体２０オープンリーディングフレーム１３５に類似したタンパク質（ＭＥＲ０３７８４５）、キヌレニンホルムアミダーゼ（ＭＥＲ０４６０２０）、チログロブリン前駆体（ＭＥＲ０１１６０４）、アセチルコリンエステラーゼ（ＭＥＲ０３３１８８）、コリンエステラーゼ（ＭＥＲ０３３１９８）、カルボキシルエステラーゼＤ１（ＭＥＲ０３３２１３）、肝臓カルボキシルエステラーゼ（ＭＥＲ０３３２２０）、カルボキシルエステラーゼ３（ＭＥＲ０３３２２４）、カルボキシルエステラーゼ２（ＭＥＲ０３３２２６）、胆汁酸塩依存的リパーゼ（ＭＥＲ０３３２２７）、カルボキシルエステラーゼ関連タンパク質（ＭＥＲ０３３２３１）、ニューロリギン３（ＭＥＲ０３３２３２）、ニューロリギン４、Ｘ結合型（ＭＥＲ０３３２３５）、ニューロリギン４、Ｙ結合（ＭＥＲ０３３２３６）、エステラーゼＤ（ＭＥＲ０４３１２６）、アリールアセトアミドデアセチラーゼ（ＭＥＲ０３３２３７）、ＫＩＡＡ１３６３様タンパク質（ＭＥＲ０３３２４２）、ホルモン感受性リパーゼ（ＭＥＲ０３３２７４）、ニューロリギン１（ＭＥＲ０３３２８０）、ニューロリギン２（ＭＥＲ０３３２８３）、ファミリーＳ９非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ２１２９３９）、ファミリーＳ９非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ２１１４９０）、サブファミリーＳ９Ｃ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９２３４１）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９１８１）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２００４３４）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９５０７）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９１４２）、セリンカルボキシペプチダーゼＡ（ＭＥＲ０００４３０）、卵黄形成性カルボキシペプチダーゼ様タンパク質（ＭＥＲ００５４９２）、ＲＩＳＣペプチダーゼ（ＭＥＲ０１０９６０）、ファミリーＳ１５未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９９４４２）、ファミリーＳ１５未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２００４３７）、ファミリーＳ１５未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２１２８２５）、リソソームＰｒｏ－Ｘａａカルボキシペプチダーゼ（ＭＥＲ０００４４６）、ジペプチジルペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ００４９５２）、胸腺特異的セリンペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５３８）、エポキシドヒドロラーゼ様推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３１６１４）、Ｌｏｃ３２８５７４様タンパク質（ＭＥＲ０３３２４６）、アブヒドロラーゼドメイン含有タンパク質４（ＭＥＲ０３１６１６）、エポキシド加水分解酵素（ＭＥＲ０００４３２）、中胚葉特異的転写タンパク質（ＭＥＲ１９９８９０）、中胚葉特異的転写タンパク質（ＭＥＲ０１７１２３）、サイトゾルエポキシド加水分解酵素（ＭＥＲ０２９９９７）、仮想タンパク質ＦＬＪ２２４０８（ＭＥＲ０３１６０８）に類似した細胞質エポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ２１３８６６）、ＣＧＩ－５８推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３０１６３）、ウィリアムズ・ビューレン症候群臨界領域タンパク質２１エポキシド加水分解酵素（ＭＥＲ０３１６１０）、エポキシド加水分解酵素（ＭＥＲ０３１６１２）、仮想タンパク質９２２４０８（エポキシドヒドロラーゼ）（ＭＥＲ０３１６１７）、モノグリセリドリパーゼ（ＭＥＲ０３３２４７）、仮想タンパク質（ＭＥＲ０３３２４９）、バラシクロビル加水分解酵素（ＭＥＲ０３３２５９）、Ｃｃｇ１相互作用因子ｂ（ＭＥＲ２１０７３８）、グリコシルアスパラギナーゼ前駆体（ＭＥＲ００３２９９）、イソアスパルチルジペプチダーゼ（スレオニン型）（ＭＥＲ０３１６２２）。タスパーゼ－１（ＭＥＲ０１６９６９）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ５（哺乳動物型）（ＭＥＲ００１９７７）、ガンマ－グルタミルトランス
フェラーゼ１（哺乳動物型）（ＭＥＲ００１６２９）、ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ２（ヒト）（ＭＥＲ００１９７６）、ガンマグルタミルトランスフェラーゼ様タンパク質４（ＭＥＲ００２７２１）。ガンマグルタミルトランスフェラーゼ様タンパク質３（ＭＥＲ０１６９７０）。ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ１前駆体（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２６２０４）に類似。ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ１前駆体（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０２６２０５）に類似。Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ２１１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０２６２０７）。ガンマ－グルタミルトランスフェラーゼ６（ＭＥＲ１５９２８３）。ガンマ－グルタミルトランスペプチダーゼホモログ（第２染色体、ホモサピエンス）（ＭＥＲ０３７２４１）。ポリシスチン－１（ＭＥＲ１２６８２４）、ＫＩＡＡ１８７９タンパク質（ＭＥＲ１５９３２９）。多発性嚢胞腎１様３（ＭＥＲ１７２５５４）。ガンマ－グルタミルヒドロラーゼ（ＭＥＲ００２９６３）。グアニン５″一リン酸シンテターゼ（ＭＥＲ０４３３８７）。カルバモイルリン酸シンターゼ（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０７８６４０）。ジヒドロオロターゼ（Ｎ末端ユニット）（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０６０６４７）。ＤＪ－１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ００３３９０）。Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１００推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１４８０２）。Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１０１非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ０１４８０３）。ＫＩＡＡ０３６１タンパク質（ホモサピエンス型）（ＭＥＲ０４２８２７）。Ｆ１１３４２８３タンパク質（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４４５５３）。非ペプチダーゼホモログ染色体２１オープンリーディングフレーム３３（ホモサピエンス）（ＭＥＲ１６００９４）。ファミリーＣ５６非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７７０１６）、ファミリーＣ５６非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７６６１３）。ファミリーＣ５６非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１７６９１８）。ムチン様ホルモン受容体様２を含むＥＧＦ様モジュール（ＭＥＲ０３７２３０）。ＣＤ９７抗原（ヒト型）（ＭＥＲ０３７２８６）。ムチン様ホルモン受容体様３を含むＥＧＦ様モジュール（ＭＥＲ０３７２８８）。ムチン様ホルモン受容体様１を含むＥＧＦ様モジュール（ＭＥＲ０３７２７８）。ムチン様ホルモン受容体様４を含むＥＧＦ様モジュール（ＭＥＲ０３７２９４）。カドヘリンＥＧＦ ＬＡＧの７回膜貫通Ｇ型受容体２前駆体（ホモサピエンス）（ＭＥＲ０４５３９７）、Ｇｐｒ６４（ハツカネズミ）型タンパク質（ＭＥＲ１２３２０５）。ＧＰＲ５６（ホモサピエンス）型タンパク質（ＭＥＲ１２２０５７）、ラトロフィリン２（ＭＥＲ１２２１９９）、ラトロフィリン－１（ＭＥＲ１２６３８０）、ラトロフィリン３（ＭＥＲ１２４６１２）、プロトカドヘリンＦｌａｍｉｎｇｏ ２（ＭＥＲ１２４２３９）。ＥＴＬタンパク質（ＭＥＲ１２６２６７）。Ｇタンパク質共役受容体１１２（ＭＥＲ１２６１１４）。７回膜貫通ヘリックス受容体（ＭＥＲ１２５４４８）。Ｇｐｒ１１４タンパク質（ＭＥＲ１５９３２０）。ＧＰＲ１２６血管誘導性Ｇタンパク質共役受容体（ＭＥＲ１４００１５）。ＧＰＲ１２５（ホモサピエンス）型タンパク質（ＭＥＲ１５９２７９）。ＧＰＲ１１６（ホモサピエンス）型Ｇタンパク質共役受容体（ＭＥＲ１５９２８０）。ＧＰＲ１２８（ホモサピエンス）型Ｇタンパク質共役受容体（ＭＥＲ１６２０１５）。ＧＰＲ１３３（ホモサピエンス）型タンパク質（ＭＥＲ１５９３３４）ＧＰＲ１１０Ｇタンパク質共役型受容体（ＭＥＲ１５９２７７）、ＧＰＲ９７タンパク質（ＭＥＲ１５９３２２）、ＫＰＧ＿００６タンパク質（ＭＥＲ１６１７７３）、ＫＰＧ＿００８タンパク質（ＭＥＲ１６１８３５）、ＫＰＧ＿００９タンパク質（ＭＥＲ１５９３３５）、未割り当てホモログ（ＭＥＲ１６６２６９）、ＧＰＲ１１３タンパク質（ＭＥＲ１５９３５２）、脳特異的血管新生インヒビター２（ＭＥＲ１５９７４６）、ＰＩＤＤ自動プロセシングタンパク質ユニット１（ＭＥＲ０２０００１）、ＰＩＤＤ自動プロセシングタンパク質ユニット２（ＭＥＲ０６３６９０）、ＭＵＣ１自己切断ムチン（ＭＥＲ０７４２６０）、ジストログリカン（ＭＥＲ０５４７４１）、プロタンパク質コンバターゼ９（ＭＥＲ０２２４１６）、サイト１ペプチダーゼ（ＭＥＲ００１９４８）、フリン（ＭＥＲ０００３７５）、プロタンパク質コンバターゼ１（ＭＥＲ０００３７６）、プロタンパク質コンバターゼ２（ＭＥＲ０００３７７）、プロタンパク質コンバターゼ４（ＭＥＲ０２８２５５）、ＰＡＣＥ４プロタンパク質コンバターゼ（ＭＥＲ０００３８３）、プロプロテインコンバターゼ５（ＭＥＲ００２５７８）、プロプロテインコンバターゼ７（ＭＥＲ００２９８４）、トリペプチジルペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ０００３５５）、サブファミリーＳ８Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ２０１３３９）、サブファミリーＳ８Ａ非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ１９１６１３）、サブファミリーＳ８Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１１）、サブファミリーＳ８Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１２）、サブファミリーＳ８Ａ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９１６１４）、トリペプチジルペプチダーゼＩ（ＭＥＲ００３５７５）、プロリルオリゴペプチダーゼ（ＭＥＲ０００３９３）、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（真核生物）（ＭＥＲ０００４０１）、アシルアミノアシルペプチダーゼ（ＭＥＲ０００４０８）、線維芽細胞活性化タンパク質アルファサブユニット（ＭＥＲ０００３９９）、ＰＲＥＰＬ Ａタンパク質（ＭＥＲ００４２２７）、ジペプチジルペプチダーゼ８（ＭＥＲ０１３４８４）、ジペプチジルペプチダーゼ９（ＭＥＲ００４９２３）、ＦＬＪ１推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７２４０）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１９４推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３５３）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１９５推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３６７）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１９６推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３６８）、Ｍｅｒｎａｍｅ－ＡＡ１９７推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０１７３７１）、Ｃ１４ｏｒｆ２９タンパク質（ＭＥＲ０３３２４４）、仮想タンパク質（ＭＥＲ０３３２４５）、仮想エステラーゼ／リパーゼ／チオエステラーゼ（ＭＥＲ０４７３０９）、プロテインバット５（ＭＥＲ０３７８４０）、仮説タンパク質ｆｌｊ４０２１９（ＭＥＲ０３３２１２）、仮説タンパク質ｆｌｊ３７４６４（ＭＥＲ０３３２４０）、仮説タンパク質ｆｌｊ３３６７８（ＭＥＲ０３３２４１）、ジペプチジルペプチダーゼホモログＤＰＰ６（ＭＥＲ０００４０３）、ジペプチジルペプチダーゼホモログＤＰＰ１０（ＭＥＲ００５９８８）、ハツカネズミ染色体２０オープンリーディングフレーム１３５に類似したタンパク質（ＭＥＲ０３７８４５）、キヌレニンホルムアミダーゼ（ＭＥＲ０４６０２０）、チログロブリン前駆体（ＭＥＲ０１１６０４）、アセチルコリンエステラーゼ（ＭＥＲ０３３１８８）、コリンエステラーゼ（ＭＥＲ０３３１９８）、カルボキシルエステラーゼＤ１（ＭＥＲ０３３２１３）、肝臓カルボキシルエステラーゼ（ＭＥＲ０３３２２０）、カルボキシルエステラーゼ３（ＭＥＲ０３３２２４）、カルボキシルエステラーゼ２（ＭＥＲ０３３２２６）、胆汁酸塩依存的リパーゼ（ＭＥＲ０３３２２７）、カルボキシルエステラーゼ関連タンパク質（ＭＥＲ０３３２３１）、ニューロリジン３（ＭＥＲ０３３２３２）、ニューロリギン４、Ｘ連鎖（ＭＥＲ０３３２３５）、ニューロリギン４、Ｙ連鎖（ＭＥＲ０３３２３６）、エステラーゼＤ（ＭＥＲ０４３１２６）、アリールアセトアミドデアセチラーゼ（ＭＥＲ０３３２３７）、ＫＩＡＡ１３６３様タンパク質（ＭＥＲ０３３２４２）、ホルモン感受性リパーゼ（ＭＥＲ０３３２７４）、ニューロリギン１（ＭＥＲ０３３２８０）、ニューロリギン２（ＭＥＲ０３３２８３）、ファミリーＳ９非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ２１２９３９）、ファミリーＳ９非ペプチダーゼホモログ（ＭＥＲ２１１４９０）、サブファミリーＳ９Ｃ未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９２３４１）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９１８１）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２００４３４）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９５０７）、ファミリーＳ９未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２０９１４２）、セリンカルボキシペプチダーゼＡ（ＭＥＲ０００４３０）、卵黄形成性カルボキシペプチダーゼ様タンパク質（ＭＥＲ００５４９２）、ＲＩＳＣペプチダーゼ（ＭＥＲ０１０９６０）、ファミリーＳ１５未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ１９９４４２）、ファミリーＳ１５未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２００４３７）、ファミリーＳ１５未割り当てペプチダーゼ（ＭＥＲ２１２８２５）、リソソームＰｒｏ－Ｘａａカルボキシペプチダーゼ（ＭＥＲ０００４４６）、ジペプチジルペプチダーゼＩＩ（ＭＥＲ００４９５２）、胸腺特異的セリンペプチダーゼ（ＭＥＲ００５５３８）、エポキシドヒドロラーゼ様推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３１６１４）、Ｌｏｃ３２８５７４様タンパク質（ＭＥＲ０３３２４６）、アブヒドロラーゼドメイン含有タンパク質４（ＭＥＲ０３１６１６）、エポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０００４３２）、中胚葉特異的転写タンパク質（ＭＥＲ１９９８９０）、中胚葉特異的転写タンパク質（ＭＥＲ０１７１２３）、サイトゾルエポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０２９９９７）、サイトゾルエポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ２１３８６６）、仮想タンパク質ＦＬＪ２２４０８（ＭＥＲ０３１６０８）に類似、ＣＧＩ－５８推定ペプチダーゼ（ＭＥＲ０３０１６３）、ウィリアムズ・ビューレン症候群臨界領域タンパク質２１エポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３１６１０）、エポキシドヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３１６１２）、仮説タンパク質ｆｌｊ２２４０８（エポキシドヒドロラーゼ）（ＭＥＲ０３１６１７）、モノグリセリドリパーゼ（ＭＥＲ０３３２４７）、仮想タンパク質（ＭＥＲ０３３２４９）、バラシクロビルヒドロラーゼ（ＭＥＲ０３３２５９）、Ｃｃｇ１相互作用因子ｂ（ＭＥＲ２１０７３８）。
プロテアーゼ酵素活性は調節することができる。例えば、特定のプロテアーゼは、特定のインヒビター、例えば特定の小分子インヒビターなどにより阻害される。特定のプロテアーゼについての例示的なインヒビターを、表４中に列挙する。例えば、限定されないが、シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシロプレビルを含むプロテアーゼインヒビターにより、ＮＳ３プロテアーゼを抑制することができる。別の実施例では、プロテアーゼ活性は、プロテアーゼ自体の発現を調節することを通じて調節することができ、例えば、誘導性プロモーター系（例、Ｔｅｔ Ｏｎ／Ｏｆｆ系）又は細胞特異的プロモーター（異種プロテアーゼを発現するために使用することができるプロモーターは、本明細書中の項に「プロモーター」と題してより詳細に記載されている）を使用して、プロテアーゼを発現するように細胞を操作することなどである。プロテアーゼはまた、デグロン、例えば本明細書中に記載されるデグロンのいずれかなどを含むことができ、本明細書中に記載されるデグロン系のいずれかを使用して調節することができる。
細胞膜係留ドメイン
本明細書中で提供される膜切断可能なキメラタンパク質は、細胞膜係留ドメイン（式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ中で「ＭＴ」として言及される）を含む。一般的に、細胞膜係留ドメインは、キメラタンパク質を発現する細胞の細胞膜に局在化される（例、その中に挿入される）、又はそうでなければ、それと会合するようにキメラタンパク質を方向付けることが可能な任意のアミノ酸配列モチーフであり得る。細胞膜係留ドメインは、膜貫通－細胞内ドメインであり得る。細胞膜係留ドメインは、膜貫通ドメインであり得る。細胞膜係留ドメインは、内因性タンパク質ドメイン（例、膜貫通ドメイン）であり得る。細胞膜係留ドメインの例は、限定されないが、ＰＤＧＦＲベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＥｐｏＲ、又はＢＴＬＡから由来する膜貫通‐細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインを含む。細胞膜係留ドメインは、細胞表面受容体又はその細胞膜結合部分であり得る。
一般的に、本明細書中に記載される全ての膜切断可能なキメラタンパク質について、細胞膜係留ドメインは、プロテアーゼ切断部位のＣ末端及びデグロンのＮ末端である（言い換えれば、細胞膜係留ドメインは、プロテアーゼ切断部位とデグロンの間にある）。細胞膜係留ドメインは、ポリペプチドリンカー、即ち、一般的に細胞膜係留ドメイン又はプロテアーゼ切断部位の一部とは考えられないポリペプチド配列により、プロテアーゼ切断部位に接続することができる。細胞膜係留ドメインは、ポリペプチドリンカー、即ち、一般的に細胞膜係留ドメイン又はデグロンの一部とは考えられないポリペプチド配列により、デグロンに接続することができる。ポリペプチドリンカーは、第一のポリペプチド配列及び第二のポリペプチド配列を接続する任意のアミノ酸配列であり得る。ポリペプチドリンカーは、可動性リンカー（例、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ配列）であり得る。ポリペプチドリンカーの例は、限定されないが、ＧＳＧリンカー（例、［ＧＳ］４ＧＧ［配列番号１８２］）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）３Ａ（配列番号１８３）、及びＷｈｉｔｌｏｗリンカー（例、「ＫＥＧＳ」リンカー、例えばアミノ酸配列ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１８４）など、ＥＧＫリンカー、例えばアミノ酸配列ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号１８５）、及び、参照により本明細書中に組み入れられる、発行された米国特許第５，９９０，２７５号においてより詳細に記載されているリンカー）を含む。他のポリペプチドリンカーは、所望の特性（例、長さ、可動性、アミノ酸組成物など）に基づいて選択されてもよく、当業者に公知である。
一般的に、細胞膜係留ドメインは、分泌されたエフェクター分子及びプロテアーゼ切断部位が、細胞膜中への挿入又はそれとの会合の後に細胞外に曝露されるように配向され、プロテアーゼ切断部位は、そのそれぞれのプロテアーゼにより切断され、エフェクター分子を細胞外空間中に放出（分泌）することが可能であるようにする。
デグロン
本明細書中に提供されるキメラタンパク質は、デグロン（例、本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質について、式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ中で「Ｄ」として言及される）を含む。一般的に、デグロンは、キメラタンパク質の調節された分解、例えばユビキチン媒介性経路を通じた調節された分解などを通じて方向付けることが可能な任意のアミノ酸配列モチーフであり得る。デグロンは、限定されないが、ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫｌａ、ＺＦＰ９１、ＧＳＰＴ１、ＭＥＩＳ２、ＧＳＳ Ｅ４Ｆ１、ＺＮ２７６、ＺＮ５１７、ＺＮ５８２、ＺＮ６５３、ＺＮ６５４、ＺＮ６９２、ＺＮ７８７、及びＺＮ８２７、又はＣＲＢＮの薬物誘導性結合が可能であるその断片を含む、免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）への応答においてセレブロン（ＣＲＢＮ）に結合することが可能なセレブロン（ＣＲＢＮ）ポリペプチド基質ドメインであり得る。ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、天然ＣＲＢＮポリペプチド配列のキメラ融合産物、例えばＦＮＶＬＭ ＶＨＫＲＳ ＨＴＧＥＲ ＰＬＱＣＥ ＩＣＧＦＴ ＣＲＱＫＧ ＮＬＬＲＨ ＩＫＬＨＴ ＧＥＫＰＦ ＫＣＨＬＣ ＮＹＡＣＱ ＲＲＤＡＬ（配列番号１８９）のアミノ酸配列を有するＩＫＺＦ３／ＺＦＰ９１／ＩＫＺＦ３キメラ融合産物などであり得る。デグロンドメイン、及び特にＣＲＢＮデグロン系は、国際出願公開第ＷＯ２０１９／０８９５９２Ａｌ号においてより詳細に記載されており、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。デグロンドメインの他の例は、限定されないが、ＨＣＶ ＮＳ４デグロン、ＰＥＳＴ（ヒトＩκＢαの残基２７７－３０７の二つのコピー；配列番号１６１）、ＧＲＲ（ヒトｐ１０５の残基３５２～４０８；配列番号１６２）、ＤＲＲ（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０～２９５；配列番号１６３）、ＳＮＳ（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（インフルエンザＡ又はインフルエンザＢのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２、例、配列番号１６４）、ＲＰＢ（酵母ＲＰＢの残基１６８８～１７０２の四つのコピー；配列番号１６５）、ＳＰｍｉｘ（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（Ａ型インフルエンザウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２；配列番号１６６）、ＮＳ２（Ａ型インフルエンザウイルスＮＳタンパク質の残基７９～９３の三つのコピー；配列番号１６７）、ＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼの残基１０６～１４２；配列番号１６８）、Ｎｅｋ２Ａ、マウスＯＤＣ（残基４２２～４６１、配列番号１６９）、マウスＯＤＣ＿ＤＡ（Ｄ４３３Ａ及びＤ４３４Ａ点変異を含むｍＯＤＣの残基４２２～４６１）、ＡＰＣ／Ｃデグロン、ＣＯＰ１ Ｅ３リガーゼ結合デグロンモチーフ、ＣＲＬ４－Ｃｄｔ２結合ＰＩＰデグロン、アクチンフィリン結合デグロン、ＫＥＡＰ１結合デグロン、ＫＬＨＬ２及びＫＬＨＬ３結合デグロン、ＭＤＭ２結合モチーフ、Ｎ－デグロン、低酸素シグナル伝達におけるヒドロキシプロリン修飾、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＤＳＧｘｘＳ（配列番号１９０）リン酸依存的デグロン、Ｓｉａｈ結合モチーフ、ＳＰＯＰ ＳＢＣドッキングモチーフ、又はＰＣＮＡ結合ＰＩＰボックスを含む。
調節された分解は、薬物誘導性であり得る。分解を媒介／調節することが可能な薬物は、小分子化合物であり得る。分解を媒介／調節することが可能な薬物は、「免疫調節薬物」（ＩＭｉＤ）を含み得る。一般的に、本明細書中で使用されるように、ＩＭｉＤは、イミド基を含む小分子免疫調節薬物のクラスを指す。セレブロン（ＣＲＢＮ）は、ＩＭｉＤの公知の標的であり、ＣＲＢＮ又はＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインへのＩＭｉＤの結合によって、ＣＲＢＮ Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体の基質特異性が変化して、ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインを有するタンパク質（例、本明細書中に記載される分泌性エフェクター分子又は目的の他のタンパク質）の分解に導く。ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインを有するデグロンについては、イミド含有ＩＭｉＤの例は、限定されないが、サリドマイド、レナリドミド、又はポマリドミドを含む。ＩＭｉＤは、ＦＤＡ承認薬物であり得る。
一般的に、本明細書中に記載される全ての膜切断可能なキメラタンパク質について、デグロンは、細胞膜係留ドメインのＣ末端である。デグロンは、ポリペプチドリンカー、即ち、一般的に細胞膜係留ドメイン又はデグロンの一部とは考えられないポリペプチド配列により、細胞膜係留ドメインに接続することができる。ポリペプチドリンカーは、第一のポリペプチド配列及び第二のポリペプチド配列を接続する任意のアミノ酸配列であり得る。ポリペプチドリンカーは、可動性リンカー（例、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ配列）であり得る。ポリペプチドリンカーの例は、限定されないが、ＧＳＧリンカー（例、［ＧＳ］４ＧＧ［配列番号１８２］）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）３Ａ（配列番号１８３）、及びＷｈｉｔｌｏｗリンカー（例、「ＫＥＧＳ」リンカー、例えばアミノ酸配列ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１８４）など、ＥＧＫリンカー、例えばアミノ酸配列ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号１８５）、及び、参照により本明細書中に組み入れられる、発行された米国特許第５，９９０，２７５号においてより詳細に記載されているリンカー）を含む。他のポリペプチドリンカーは、所望の特性（例、長さ、可動性、アミノ酸組成物など）に基づいて選択されてもよく、当業者に公知である。一般的に、デグロンは、細胞膜係留ドメインに関連して配向され、デグロンは、細胞膜への局在化後にサイトゾルに曝露されるようにし、デグロンが、分解（例、サイトゾル及びサイトゾルへの曝露）を媒介することが可能であり、ユビキチン媒介性分解を媒介することが可能であるようにする。
デグロン融合キメラタンパク質については、デグロンは、目的のタンパク質のＮ末端又はＣ末端、例えば、エフェクター分子であることができる。デグロンは、ポリペプチドリンカー、即ち、一般的に目的のタンパク質又はデグロンの一部とは考えられないポリペプチド配列により、目的のタンパク質に接続することができる。ポリペプチドリンカーは、第一のポリペプチド配列及び第二のポリペプチド配列を接続する任意のアミノ酸配列であり得る。ポリペプチドリンカーは、可動性リンカー（例、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ配列）であり得る。ポリペプチドリンカーの例は、限定されないが、ＧＳＧリンカー（例、［ＧＳ］４ＧＧ［配列番号１８２］）、Ａ（ＥＡＡＡＫ）３Ａ（配列番号１８３）、及びＷｈｉｔｌｏｗリンカー（例、「ＫＥＧＳ」リンカー、例えばアミノ酸配列ＫＥＳＧＳＶＳＳＥＱＬＡＱＦＲＳＬＤ（配列番号１８４）など、ＥＧＫリンカー、例えばアミノ酸配列ＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴ（配列番号１８５）、及び、参照により本明細書中に組み入れられる、発行された米国特許第５，９９０，２７５号においてより詳細に記載されているリンカー）を含む。他のポリペプチドリンカーは、所望の特性（例、長さ、可動性、アミノ酸組成物など）に基づいて選択されてもよく、当業者に公知である。ポリペプチドリンカーは、切断可能、例えば、本明細書中に記載されるプロテアーゼ切断部位のいずれかであり得る。
ホーミング分子
「腫瘍微小環境」は、腫瘍が存在する細胞環境であって、周囲の血管、免疫細胞、線維芽細胞、骨髄由来炎症性細胞、リンパ球、シグナル伝達分子、及び細胞外マトリックス（ＥＣＭ）を含む、（例、Ｐａｔｔａｂｉｒａｍａｎ，Ｄ．Ｒ．＆Ｗｅｉｎｂｅｒｇ，Ｒ．Ａ．Ｎａｔｕｒｅ ＲｅｖｉｅｗｓＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙ１３，４９７－５１２（２０１４）；Ｂａｌｋｗｉｌｌ，Ｆ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ １２５，５５９１－５５９６，２０１２；及びＬｉ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ １０１（４），８０５－１５，２００７を参照のこと）。
一部の実施形態では、操作された核酸は、少なくとも一つのホーミング分子を産生するように構成される。例えば、デグロンドメインに融合された目的のタンパク質を含む、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質（例、本明細書中で他に記載される、操作されたＡＡＶベクター及びウイルスに関連する融合タンパク質を参照のこと）において、目的のタンパク質は、ホーミング分子であり得る。「ホーミング」は、標的部位（例、細胞、組織（例、腫瘍）、又は器官）への細胞の能動的ナビゲーション（遊走）を指す。「ホーミング分子」は、細胞を標的部位に向かわせる分子を指す。一部の実施形態では、ホーミング分子は、標的部位への、操作された細胞の相互作用を認識及び／又は開始するように機能する。ホーミング分子の非限定的な例は、ＣＸＣＲ１、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＦＰＲ２、ＶＥＧＦＲ、ＩＬ６Ｒ、ＣＸＣＲ１、ＣＳＣＲ７、及びＰＤＧＦＲを含む。
一部の実施形態では、ホーミング分子は、ケモカイン受容体（ケモカインに結合する細胞表面分子）である。ケモカインは、細胞により分泌される小さなサイトカイン又はシグナル伝達タンパク質であり、それらは、細胞中で定向性の走化性を誘導することができる。ケモカインは、四つの主なサブファミリー中に分類することができる：ＣＸＣ、ＣＣ、ＣＸ３Ｃ、及びＸＣは、それらの全てが、標的細胞の表面上に位置するケモカイン受容体に選択的に結合することにより生物学的効果を発揮する。一部の実施形態では、操作された核酸は、ＣＸＣＲ４、間質細胞由来因子１（また、ＳＤＦ１、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン１２、及びＣＸＣＬ１２として公知である）発現細胞、組織、又は腫瘍に向かうケモカイン勾配に沿って、操作された細胞がホーミングすることを可能にするケモカイン受容体を産生するように構成される。本開示の操作された核酸によりコードされ得るケモカイン受容体の非限定的な例は、以下を含む：ＣＸＣケモカイン受容体（例、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、及びＣＸＣＲ７）、ＣＣケモカイン受容体（ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、及びＣＣＲ１１）、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体（例、ＣＸ３ＣＬ１に結合するＣＸ３ＣＲ１）、及びＸＣケモカイン受容体（例、ＸＣＲ１）。一部の実施形態では、ケモカイン受容体は、Ｇタンパク質連結膜貫通受容体、又は腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリー（限定されないが、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂを含む）のメンバーである。一部の実施形態では、操作された核酸は、ＣＸＣＬ８，ＣＸＣＬ９、及び／又はＣＸＣＬ１０（Ｔ細胞動員を促進する）、ＣＣＬ３及び／又はＣＸＣＬ５，ＣＣＬ２１（Ｔｈ１動員及び極性化）を産生するように構成される。
一部の実施形態では、操作された核酸は、Ｎ－ホルミル化含有オリゴペプチド（限定されないが、ＦＰＲ２及びＦＰＲＬ１を含む）を検出するＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）を産生するように構成されている。
一部の実施形態では、操作された核酸は、インターロイキン（限定されないが、ＩＬ６Ｒを含む）を検出する受容体を産生するように構成されている。
一部の実施形態では、操作された核酸は、他の細胞、組織、又は腫瘍から分泌された成長因子を検出する受容体（限定されないが、ＦＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＥＧＦＲを含み、ならびにＶＥＧＦファミリーの受容体、限定されないが、ＶＥＧＦ－Ｃ及びＶＥＧＦ－Ｄを含む）を産生するように構成されている。
一部の実施形態では、ホーミング分子はインテグリンである。インテグリンは、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）接着を促進する膜貫通型受容体である。インテグリンは、二つのサブユニット：α（アルファ）及びβ（ベータ）を有する必須のヘテロ二量体である。インテグリンのαサブユニットは、限定されないが、以下であり得る：ＩＴＧＡ１、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ５、ＩＴＧＡ６、ＩＧＴＡ７、ＩＴＧＡ８、ＩＴＧＡ９、ＩＧＴＡ１０、ＩＧＴＡ１１、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＡ２Ｂ、ＩＴＧＡＸ。インテグリンのβサブユニットは、限定されないが、以下であり得る：ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ３、ＩＴＧＢ４、ＩＴＧＢ５、ＩＴＧＢ６、ＩＴＧＢ７、及びＩＴＧＢ８。操作された核酸は、インテグリンα及びβサブユニットの任意の組み合わせを産生するように構成され得る。
一部の実施形態では、ホーミング分子は、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）である。ＭＭＰは、内皮細胞壁の基礎となる基底膜の成分を切断する酵素である。ＭＭＰの非限定的な例は、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９、及びＭＭＰを含む。一部の実施形態では、操作された核酸は、ＭＭＰを阻害する分子（例、タンパク質）のインヒビターを産生するように構成される。例えば、操作された核酸は、膜１型ＭＭＰ（ＭＴ１－ＭＭＰ）のインヒビター（例、ＲＮＡｉ分子）又はＴＩＭＰメタロペプチダーゼインヒビター１（ＴＩＭＰ－１）を発現するように構成され得る。
一部の実施形態では、ホーミング分子は、例えば、標的組織の内皮上のセレクチンに結合するリガンド（例、造血細胞 Ｅ－／Ｌ－セレクチンリガンド（ＨＣＥＬＬ）、Ｄｙｋｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ．２０１６ Ｏｃｔ；３４（１０）：２５０１－２５１１）である。
用語「ホーミング分子」はまた、細胞のホーミングを改善／増強する分子の産生を調節する転写因子を包含する。
操作された核酸
本明細書中で提供されるのは、本開示の少なくとも一つのキメラタンパク質、例えば、例えば本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質又は本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質などをコードする、操作された核酸である。本明細書中で提供されるのは、二つ以上のキメラタンパク質をコードする、操作された核酸である。
本明細書中に記載される特定の実施形態では、操作された核酸は、プロモーターと膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列とを含む発現カセットをコードし、Ｎ末端からＣ末端に配向されており、式：Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する。Ｓは、分泌性エフェクター分子を指す。Ｃはプロテアーゼ切断部位を指す。ＭＴは細胞膜係留ドメインを指す。Ｄはデグロンを指す。このプロモーターは、外因性ポリヌクレオチド配列に動作可能に連結され、Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄは、単一ポリペプチドとして発現されるよう構成される。
本明細書中に記載される特定の実施形態では、操作された核酸は、プロモーター、ならびに目的のタンパク質（例、本明細書中に記載されるエフェクター分子のいずれか）及びデグロンを有するデグロン融合キメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列を含む発現カセットをコードする。このプロモーターは、外因性ポリヌクレオチド配列に動作可能に連結され、デグロン融合キメラタンパク質は、単一ポリペプチドとして発現されるように構成されている。
「操作された核酸」は、自然において生じない核酸である。しかし、操作された核酸は、全体として非天然である一方で、それは、天然において生じるヌクレオチド配列を含み得ることを理解すべきである。一部の実施形態では、操作された核酸は、異なる生物からの（例、異なる種からの）ヌクレオチド配列を含む。例えば、一部の実施形態では、操作された核酸は、マウスヌクレオチド配列、細菌ヌクレオチド配列、ヒトヌクレオチド配列、及び／又はウイルスヌクレオチド配列を含む。用語「操作された核酸」は、組換え核酸及び合成核酸を含む。「組換え核酸」は、核酸分子を連結することにより構築され、一部の実施形態では、生細胞中で複製することができる分子を指す。「合成核酸」は、増幅される、又は化学的に、もしくは他の手段により合成される分子を指す。合成核酸は、化学的に修飾された、又は他の方法で修飾されたものを含むが、しかし、天然核酸分子と塩基対合することができる。修飾は、限定されないが、一つ又は複数の修飾されたヌクレオチド間連結及び非天然核酸を含む。修飾は、米国特許第６，６７３，６１１号及び米国特許出願公開２００４／００１９００１においてさらに詳細に記載されており、それらの各々が、それらの全体において参照により組み入れられる。修飾されたヌクレオチド間連結は、ホスホロジチオエート又はホスホロチオエート連結であり得る。非天然核酸は、ロックド核酸（ＬＮＡ）、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、グリコール核酸（ＧＮＡ）、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマー（ＰＭＯ又は「モルホリノ」）、及びトレオース核酸（ＴＮＡ）であり得る。非天然核酸は、国際出願ＷＯ１９９８／０３９３５２、米国出願公開第２０１３／０１５６８４９号、及び米国特許第６，６７０，４６１号；第５，５３９，０８２号；第５，１８５，４４４号においてさらに詳細に記載されており、各々が、それらの全体において参照により本明細書中に組み入れられる。組換え核酸及び合成核酸はまた、前述のいずれかの複製から起因する分子を含む。本開示の操作された核酸は、単一の分子（例、同じプラスミド又は他のベクター中に含まれる）により、又は複数の異なる分子（例、複数の異なる独立して複製する分子）によりコードされ得る。操作された核酸は、単離された核酸であり得る。単離核酸は、限定されないが、ｃＤＮＡポリヌクレオチド、ＲＮＡポリヌクレオチド、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチド（例、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｈＲＮＡなど）、ｍＲＮＡポリヌクレオチド、環状プラスミド、直線状ＤＮＡ断片、ベクター、ミニサークル、ｓｓＤＮＡ、及びオリゴヌクレオチドを含む。
本開示の操作された核酸は、標準的な分子生物学方法（例、Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，２０１２，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照のこと）を使用して産生され得る。一部の実施形態では、操作された核酸構築物は、ＧＩＢＳＯＮ ＡＳＳＥＭＢＬＹ（登録商標）クローニング（例、Ｇｉｂｓｏｎ，Ｄ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．ＮａｔｕｒｅＭｅｔｈｏｄｓ，３４３－３４５，２００９；及びＧｉｂｓｏｎ，Ｄ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．ＮａｔｕｒｅＭｅｔｈｏｄｓ，９０１－９０３，２０１０を参照のこと。それらの各々が、参照により本明細書中に組み入れられる）を使用して産生される。ＧＩＢＳＯＮ ＡＳＳＥＭＢＬＹ（登録商標）は、典型的には、単一チューブ反応において三つの酵素活性を使用する：５’エキソヌクレアーゼ、ＤＮＡポリメラーゼのγ伸長活性、及びＤＮＡリガーゼ活性。５’エキソヌクレアーゼ活性は、５’末端配列を噛み返し、アニーリングのために相補配列を露出させる。ポリメラーゼ活性は次に、アニーリングされた領域上のギャップを埋める。ＤＮＡリガーゼは次に、ニックを密閉し、ＤＮＡ断片を一緒に共有結合的に連結させる。隣接する断片の重複する配列は、Ｇｏｌｄｅｎ Ｇａｔｅ Ａｓｓｅｍｂｌｙにおいて使用されるものよりもずっと長く、従って、正しい組み立ての高いパーセンテージがもたらされる。一部の実施形態では、操作された核酸構築物は、ＩＮ－ＦＵＳＩＯＮ（登録商標）クローニング（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を使用して産生される。
プロモーター
一般的に、本明細書中に記載される全ての実施形態では、一つ又は複数のキメラタンパク質をコードする操作された核酸は、プロモーターを含む発現カセットをコードする。一部の実施形態では、操作された核酸（例、発現カセットを含む操作された核酸）は、少なくとも２つのキメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列（例、外因性ポリヌクレオチド配列）に動作可能に連結されたプロモーターを含む。例えば、操作された核酸は、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、又は少なくとも１０のキメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列に動作可能に連結されたプロモーターを含み得る。一部の実施形態では、操作された核酸は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０、又はそれ以上のキメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列に動作可能に連結されたプロモーターを含む。
「プロモーター」は、核酸配列の残りの転写の開始及び速度が制御される核酸配列の制御領域を指す。プロモーターはまた、調節タンパク質及び分子、例えばＲＮＡポリメラーゼ及び他の転写因子などが結合し得る小領域を含み得る。プロモーターは、構成的、誘導的、抑制的、組織特異的、又はそれらの任意の組み合わせであり得る。プロモーターは、それが調節する核酸配列の発現を駆動する又は転写を駆動する。本明細書中では、プロモーターは、それが調節する核酸配列に関係して、正しい機能的位置及び配向にある場合、その配列の転写開始及び／又は発現を制御する（駆動する）ために、「動作可能に連結されている」と考えられる。
プロモーターは、所与の遺伝子又は配列のコードセグメントの上流に位置する５’非コード配列を単離することにより得られ得るように、遺伝子又は配列と天然に関連付けられるプロモーターであり得る。そのようなプロモーターは「内因性」として言及され得る。一部の実施形態では、コード核酸配列は、組換え又は異種プロモーターの制御下に配置され得るが、それは、その天然の環境においてコード化された配列と通常は関連付けられないプロモーターを指す。そのようなプロモーターは、他の遺伝子のプロモーター；任意の他の細胞から単離されたプロモーター；ならびに「天然」ではない合成プロモーター又はエンハンサー、例えば、当技術分野において公知である遺伝子操作の方法を通じて発現を改変する異なる転写調節領域の異なるエレメント及び／又は変異を含むものなどを含み得る。プロモーター及びエンハンサーの核酸配列を合成的に産生することに加えて、配列は、組換えクローニング及び／又はポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を含む核酸増幅技術を使用して産生され得る（例、米国特許第４，６８３，２０２号及び米国特許第５，９２８，９０６号を参照のこと）。
操作された核酸のプロモーターは、「誘導性プロモーター」であり得るが、それは、シグナルの存在において、シグナルにより影響される、又はシグナルにより接触される場合に、転写活性を調節する（例、開始又は活性化する）ことにより特徴付けられるプロモーターを指す。このシグナルは、誘導性プロモーターからの転写活性を調節する際に活性であるような方法において、誘導性プロモーターと接触する内因性又は通常は外因性の状態（例、光）、化合物（例、化学的又は非化学的化合物）、又はタンパク質（例、サイトカイン）であり得る。転写の活性化は、プロモーターに直接的に作用して転写を駆動すること、又はプロモーターが転写を駆動することを防止しているリプレッサーの不活化によりプロモーターに間接的に作用することを含み得る。逆に、転写の不活化は、転写を防止するためにプロモーターに直接的に作用すること、又は、次にプロモーターに作用するリプレッサーを活性化することによりプロモーターに間接的に作用することを含み得る。
プロモーターは、局所的な腫瘍状態（例、炎症又は低酸素）、あるいは、その状態又はシグナルの存在において、プロモーターからの転写が活性化、不活化、増加、又は減少する場合にはシグナルに「応答性」である又は「により調節」される。一部の実施形態では、プロモーターは応答エレメントを含む。「応答エレメント」は、プロモーター領域内のＤＮＡの短い配列であり、それは、プロモーターから遺伝子発現を調節する（ｍｏｄｕｌａｔｅ）（調節する（ｒｅｇｕｌａｔｅ））特定の分子（例、転写因子）に結合する。本開示に従って使用され得る応答エレメントは、限定されないが、フロレチン調整可能制御要素（ＰＥＡＣＥ）、ジンクフィンガーＤＮＡ結合ドメイン（ＤＢＤ）、インターフェロンガンマ活性化配列（ＧＡＳ）（Ｄｅｃｋｅｒ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．１９９７Ｍａｒ；１７（３）：１２１－３４、参照により本明細書中に組み入れられる）、インターフェロン刺激応答エレメント（ＩＲＥ）（Ｈａｎ，Ｋ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００４ Ａｐｒ ９；２７９（１５）：１５６５２－６１、参照により本明細書中に組み入れられる）、ＮＦ－カッパＢ応答エレメント（Ｗａｎｇ，Ｖ．ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｒｔｓ．２０１２；２（４）：８２４－８３９、参照により本明細書中に組み入れられる）、及びＳＴＡＴ３応答エレメント（Ｚｈａｎｇ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．Ｊ ｏｆ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．１９９６；２７１：９５０３－９５０９、参照により本明細書中に組み入れられる）を含む。他の応答エレメントが本明細書中に包含される。応答エレメントはまた、その同族結合分子に対する応答エレメントの感受性を一般的に増加させるために、タンデムリピート（例、応答エレメントをコードする同じヌクレオチド配列の連続リピート）を含むことができる。タンデムリピートは、２×、３×、４×、５×などとラベル付けして、存在するリピートの数を表示することができる。
応答性プロモーター（また、「誘導性プロモーター」として言及される）の非限定的な例（例、ＴＧＦ－ベータ応答性プロモーター）を表５Ａ中に列挙し、それは、プロモーター及び転写因子の設計を示し、ならびに転写因子（ＴＦ）及び導入遺伝子転写（Ｔ）に向かうインデューサー分子の効果が示されている（Ｂ、結合；Ｄ、解離；ｎ．ｄ．、未決定）（Ａ、活性化；ＤＡ、非活性化；ＤＲ、抑制）（Ｈｏｒｎｅｒ，Ｍ．＆Ｗｅｂｅｒ，Ｗ．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｅｒｓ ５８６（２０１２）２０７８４－２０９６ｍ、及びそれにおいて引用される参考文献を参照のこと）。誘導性プロモーターの他の非限定的な例は、表５Ｂ中に提示されるものを含む。
（表５Ａ）応答性プロモーターの例
Figure 2024504613000034
Figure 2024504613000035
Figure 2024504613000036
（表５Ｂ）例示的な誘導性プロモーター
Figure 2024504613000037
プロモーターの他の非限定的な例は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、伸長因子１－アルファ（ＥＦ１ａ）プロモーター、伸長因子（ＥＦＳ）プロモーター、ＭＮＤプロモーター（骨髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサーを伴う修飾ＭｏＭｕＬＶ ＬＴＲのＵ３領域を含む合成プロモーター）、ホスホグリセレートキナーゼ（ＰＧＫ）プロモーター、脾フォーカス形成ウイルス（ＳＦＦＶ）プロモーター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター、及びユビキチンＣ（ＵｂＣ）プロモーターを含む（表５Ｃを参照のこと）。
（表５Ｃ）例示的な構成的プロモーター
Figure 2024504613000038
Figure 2024504613000039
Figure 2024504613000040
Figure 2024504613000041
Figure 2024504613000042
Figure 2024504613000043
プロモーターは、組織特異的プロモーターであり得る。一般的に、組織特異的プロモーターは、核酸（例、キメラタンパク質、例えば式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質などをコードする操作された核酸）の転写を方向付けて、発現が特定の細胞型、オルガネラ、又は組織に限定されるようにする。組織特異的プロモーターは、限定されないが、アルブミン（肝臓特異的、Ｐｉｎｋｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，（１９８７））、リンパ球特異的プロモーター（Ｃａｌａｍｅ ａｎｄ Ｅａｔｏｎ，１９８８）、Ｔ細胞受容体の特定のプロモーター（Ｗｉｎｏｔｏ ａｎｄ Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，（１９８９））、及びイムノグロブリン；Ｂａｎｅｒｊｉ ｅｔ ａｌ．，（１９８３）；Ｑｕｅｅｎ ａｎｄ Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，１９８３）、ニューロン特異的プロモーター（例、神経フィラメントプロモーター；Ｂｙｒｎｅ ａｎｄ Ｒｕｄｄｌｅ，１９８９）、膵臓特異的プロモーター（Ｅｄｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８５））、又は乳腺特異的プロモーター（乳白色プロモーター、米国特許第４，８７３，３１６号及び欧州出願公開第２６４，１６６号）、ならびに発生的に調節されるプロモーター、例えばマウスホックスプロモーター（Ｋｅｓｓｅｌ ａｎｄ Ｇｒｕｓｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：３７４－３７９（１９９０））、又はα－フェトプロテインプロモーター（Ｃａｍｐｅｓ ａｎｄ Ｔｉｌｇｈｍａｎ，ＧｅｎｅｓＤｅｖ．３：５３７－５４６（１９８９））などを含み、それら各々の内容が、参照により本明細書中に完全に組み入れられる。プロモーターは、それぞれの特定の細胞型、オルガネラ、又は組織において構成的であり得る。組織特異的プロモーター及び／又は調節エレメントはまた、結腸上皮細胞について特異的な肝臓脂肪酸結合（ＦＡＢ）タンパク質遺伝子；膵臓細胞について特異的なインスリン遺伝子；肝細胞についての特異的なトランスフィレチン、アルファ１－アンチトリプシン、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター１型（ＰＡＩ－Ｉ）、アポリポタンパク質ＡＩ及びＬＤＬ受容体遺伝子；オリゴデンドロサイトについて特異的なミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）遺伝子；グリア細胞について特異的なグリア原線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）遺伝子；眼を標的化するために特異的なＯＰＳＩＮからのプロモーター；ならびに神経細胞について特異的である神経特異的エノラーゼ（ＮＳＥ）プロモーターを含むことができる。組織特異的プロモーターの例は、限定されないが、クレアチンキナーゼについてのプロモーターを含み、それは、筋肉及び心臓組織における発現ならびにＢ細胞における発現についてのイムノグロブリン重鎖又は軽鎖プロモーターを方向付けるために使用されている。他の組織特異的プロモーターは、ヒト平滑筋アルファ－アクチンプロモーターを含む。肝臓についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、ＨＭＧ－ＣＯＡレダクターゼプロモーター、ステロール調節エレメント１、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ）プロモーター、ヒトＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）プロモーター、ヒトグルコキナーゼプロモーター、コレステロールＬ７－アルファヒドロイラーゼ（ＣＹＰ－７）プロモーター、ベータ－ガラクトシダーゼアルファ－２，６シアリルカンスフェラーゼプロモーター、インスリン様成長因子結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ－Ｉ）プロモーター、アルドラーゼＢプロモーター、ヒトトランスフェリンプロモーター、及びコラーゲンＩ型プロモーターを含む。前立腺についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）プロモーター、９４（ＳＰＳ９４）プロモーターの前立腺分泌タンパク質、前立腺特異的抗原複合体プロモーター、及びヒト腺性カリクレイン遺伝子プロモーター（ｈｇｔ－１）を含む。胃組織についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、ヒトＨ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅアルファサブユニットプロモーターを含む。膵臓についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、膵炎関連タンパク質プロモーター（ＰＡＰ）、エラスターゼ１転写エンハンサー、膵臓特異的アミラーゼ及びエラスターゼエンハンサープロモーター、ならびに膵臓コレステロールエステラーゼ遺伝子プロモーターを含む。子宮内膜についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、子宮グロビンプロモーターを含む。副腎細胞についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、コレステロール側鎖切断（ＳＣＣ）プロモーターを含む。一般的な神経系についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、ガンマ－ガンマエノラーゼ（ニューロン特異的エノラーゼ、ＮＳＥ）プロモーターを含む。脳についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、神経フィラメント重鎖（ＮＦ－Ｈ）プロモーターを含む。リンパ球についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、ヒトＣＧＬ－１／グランザイムＢプロモーター、末端デオキシトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）、ラムダ５、ＶｐｒｅＢ、及びｌｃｋ（リンパ球特異的チロシンタンパク質キナーゼｐ５６１ｃｋ）プロモーター、ヒトＣＤ２プロモーター及びその３’転写エンハンサー、ならびにヒトＮＫ及びＴ細胞特異的活性化（ＮＫＧ５）プロモーターを含む。結腸についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、ｐｐ６０ｃ－ｓｒｃチロシンキナーゼプロモーター、器官特異的ネオ抗原（ＯＳＮ）プロモーター、及び結腸特異的抗原－Ｐプロモーターを含む。乳房細胞についての組織特異的発現エレメントは、例えば、限定されないが、ヒトアルファ－ラクトアルブミンプロモーターである。肺についての例示的な組織特異的発現エレメントは、限定されないが、嚢胞性線維症膜貫通コンダクタンスレギュレーター（ＣＦＴＲ）遺伝子プロモーターを含む。
一部の実施形態では、本開示のプロモーターは、腫瘍微小環境内のシグナルにより調節される。腫瘍微小環境は、腫瘍微小環境の存在において、腫瘍微小環境の非存在におけるプロモーターの活性と比べて、プロモーターの活性が少なくとも１０％だけ増加又は減少する場合に、プロモーターを調節すると考えられる。一部の実施形態では、プロモーターの活性は、腫瘍微小環境の非存在におけるプロモーターの活性と比べて、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも１００％だけ増加又は減少する。例えば、プロモーターの活性は、腫瘍微小環境の非存在におけるプロモーターの活性と比べて、１０～２０％、１０～３０％、１０～４０％、１０～５０％、１０～６０％、１０～７０％、１０～８０％、１０～９０％、１０～１００％、１０～２００％、２０～３０％、２０～４０％、２０～５０％、２０～６０％、２０～７０％、２０～８０％、２０～９０％、２０～１００％、２０～２００％、５０～６０％、５０～７０％、５０～８０％、５０～９０％、５０～１００％、又は５０～２００％だけ増加又は減少する。
一部の実施形態では、プロモーターの活性は、腫瘍微小環境の非存在におけるプロモーターの活性と比べて、少なくとも２倍（例、２、３、４、５、１０、２５、２０、２５、５０、又は１００倍）増加又は減少する。例えば、プロモーターの活性は、腫瘍微小環境の非存在におけるプロモーターの活性と比べて、少なくとも３倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、又は少なくとも１００倍増加又は減少する。一部の実施形態では、プロモーターの活性は、腫瘍微小環境の非存在におけるプロモーターの活性と比べて、２～１０、２～２０、２～３０、２～４０、２～５０、２～６０、２～７０、２～８０、２～９０、又は２～１００倍増加又は減少する。
一部の実施形態では、本開示のプロモーターは、低酸素状態下で活性化される。「低酸素状態」は、身体又は身体の領域が、組織レベルで十分な酸素供給を欠乏する状態である。低酸素状態は、炎症を起こし得る（例、炎症性サイトカインのレベルは、低酸素状態下で増加する）。一部の実施形態では、低酸素状態下で活性化されるプロモーターは、炎症性サイトカインの活性の発現を減少させるキメラタンパク質をコードするヌクレオチドと動作可能に連結され、このように、低酸素状態により起こされる炎症を低下させる。一部の実施形態では、低酸素状態下で活性化されるプロモーターは、低酸素応答エレメント（ＨＲＥ）を含む。「低酸素応答エレメント（ＨＲＥ）」は、低酸素誘導因子（ＨＩＦ）に応答する応答エレメントである。ＨＲＥは、一部の実施形態では、コンセンサスモチーフＮＣＧＴＧ（ここで、ＮはＡ又はＧのいずれかである）を含む。
マルチシストロン系及び複数のプロモーター系
一部の実施形態では、操作された核酸（例、発現カセットを含む、操作された核酸）は、複数のキメラタンパク質を産生するように構成される。例えば、核酸を、２～２０の異なるキメラタンパク質を産生するように構成してもよい。一部の実施形態では、核酸は、２～２０、２～１９、２～１８、２～１７、２～１６、２～１５、２～１４、２～１３、２～１２、２～１１、２～１０、２～９、２～８、２～７、２～６、２～５、２～４、２～３、３～２０、３～１９、３～１８、３～１７、３～１６、３～１５、３～１４、３～１３、３～１２、３～１１、３～１０、３～９、３～８、３～７、３～６、３～５、３～４、４～２０、４～１９、４～１８、４～１７、４～１６、４～１５、４～１４、４～１３、４～１２、４～１１、４～１０、４～９、４～８、４～７、４～６、４～５、５～２０、５～１９、５～１８、５～１７、５～１６、５～１５、５～１４、５～１３、５～１２、５～１１、５～１０、５～９、５～８、５～７、５～６、６～２０、６～１９、６～１８、６～１７、６～１６、６～１５、６～１４、６～１３、６～１２、６～１１、６～１０、６～９、６～８、６～７、７～２０、７～１９、７～１８、７～１７、７～１６、７～１５、７～１４、７～１３、７～１２、７～１１、７～１０、７～９、７～８、８～２０、８～１９、８～１８、８～１７、８～１６、８～１５、８～１４、８～１３、８～１２、８～１１、８～１０、８～９、９～２０、９～１９、９～１８、９～１７、９～１６、９～１５、９～１４、９～１３、９～１２、９～１１、９～１０、１０～２０、１０～１９、１０～１８、１０～１７、１０～１６、１０～１５、１０～１４、１０～１３、１０～１２、１０～１１、１１～２０、１１～１９、１１～１８、１１～１７、１１～１６、１１～１５、１１～１４、１１～１３、１１～１２、１２～２０、１２～１９、１２～１８、１２～１７、１２～１６、１２～１５、１２～１４、１２～１３、１３～２０、１３～１９、１３～１８、１３～１７、１３～１６、１３～１５、１３～１４、１４～２０、１４～１９、１４～１８、１４～１７、１４～１６、１４～１５、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１５～１６、１６～２０、１６～１９、１６～１８、１６～１７、１７～２０、１７～１９、１７～１８、１８～２０、１８～１９、又は１９～２０のキメラタンパク質を産生するように構成される。一部の実施形態では、核酸は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０のキメラタンパク質を産生するように構成される。
一部の実施形態では、操作された核酸は、マルチシストロンであり得、即ち、二つ以上の別々のポリペプチド（例、複数のキメラタンパク質）が単一のｍＲＮＡ転写物から産生され得る。操作された核酸は、様々なリンカーの使用を通じてマルチシストロンであることができ、例えば、第一のキメラタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を、第二のキメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列に連結することができる（例えば、５’から３’方向に、第一の遺伝子：リンカー：第二の遺伝子など）。リンカーは、２Ａリボソームスキッピングエレメント、例えばＴ２Ａなどをコードすることができる。他の２Ａリボソームスキッピングエレメントは、限定されないが、Ｅ２Ａ、Ｐ２Ａ、及びＦ２Ａを含む。２Ａリボソームスキッピングエレメントによって、第一及び第二の遺伝子によりコードされる別々のポリペプチドの産生が翻訳中に可能になる。リンカーは、切断可能なリンカーポリペプチド配列、例えばフリン切断部位又はＴＥＶ切断部位などをコードすることができ、それにおいて、発現に続いて、切断可能なリンカーポリペプチドは、第一及び第二の遺伝子によりコードされる別々のポリペプチドが産生されるように切断される。切断可能リンカーは、切断をさらに促進する、ポリペプチド配列、例えば可動性リンカー（例、Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ配列）などを含むことができる。
リンカーは、配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）をコードすることができ、第一及び第二の遺伝子によりコードされる別々のポリペプチドが、翻訳中に産生されるようにする。リンカーは、スプライスアクセプター、例えばウイルススプライスアクセプターなどをコードすることができる。
リンカーは、２Ａリボソームスキッピング、それに続く、２Ａ残基の完全な除去を可能にするフリン部位のさらなる切断を通じて別々のポリペプチドを産生することができるリンカー、例えばフリン－２Ａリンカーなどの組み合わせであり得る。一部の実施形態では、リンカーの組み合わせは、フリン配列、可動性リンカー、及び２Ａリンカーを含むことができる。したがって、一部の実施形態では、リンカーは、フリン－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－２Ａ融合ポリペプチドである。一部の実施形態では、本開示のリンカーは、フリン－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ－Ｔ２Ａ融合ポリペプチドである。
一般的に、マルチシストロン系は、任意の数又は組み合わせのリンカーを使用して、任意の数の遺伝子又はその部分を発現することができる（例、操作された核酸は、第一、第二、及び第三のキメラタンパク質によりコードされる別々のポリペプチドが産生されるように、各々がリンカーにより分けられている、第一、第二、及び第三のキメラタンパク質をコードすることができる）。
操作された核酸は、複数のプロモーターを使用して、複数のＯＲＦからの遺伝子を発現することができ、即ち、二つ以上の別々のｍＲＮＡ転写物を、単一の操作された核酸から産生することができる。例えば、第一のプロモーターは、第一のキメラタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列と動作可能に連結することができ、第二のプロモーターは、第二のキメラタンパク質をコードするポリヌクレオチド配列と動作可能に連結することができる。一般的に、任意の数のプロモーターを使用して、任意の数のキメラタンパク質を発現することができる。一部の実施形態では、複数のプロモーターから発現されるＯＲＦの少なくとも一つは、マルチシストロンであり得る。
本明細書中で使用される「リンカー」は、第一のポリペプチド配列及び第二のポリペプチド配列を連結するポリペプチド、上に記載されるマルチシストロンリンカー、又は上に記載される追加のＯＲＦと動作可能に連結される追加のプロモーターを指すことができる。
操作された細胞
本明細書中で提供されるのは、異なる腫瘍媒介性免疫抑制機構を調節するキメラタンパク質を産生する操作された細胞、及び操作された細胞を産生する方法である。一般的に、本開示の操作された細胞は、本明細書中で提供されるキメラタンパク質、例えば本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質又は本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質などを発現するように操作されてもよい。これらの細胞は、本明細書中では「操作された細胞」として言及される。これらの細胞は、典型的には、操作された核酸を含み、自然において生じない。一部の実施形態では、細胞は、キメラタンパク質、例えば、免疫応答を刺激するものをコードするヌクレオチド配列に動作可能に連結されたプロモーターを含む、核酸を含むように操作される。本開示の操作された細胞は、細胞のゲノム中に組み込まれた、操作された核酸を含み得る。操作された細胞は、例えば、一過性発現系、例えばプラスミド又はｍＲＮＡなどで改変された、細胞のゲノム中に組み込まれることなく発現が可能な、操作された核酸を含み得る。
本開示はまた、キメラタンパク質と、それらが産生される、操作された細胞の間の相加性及び相乗性を包含する。一部の実施形態では、細胞は、少なくとも二つ（例、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０又はそれ以上）のキメラタンパク質を産生するように操作され、それらの各々が、異なる腫瘍媒介性免疫抑制機構を調節する。他の実施形態では、細胞は、細胞により天然に産生されないエフェクター分子を有する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。そのようなエフェクター分子は、例えば、細胞により天然に産生されるエフェクター分子の機能を補完し得る。
一部の実施形態では、細胞は、膜に係留される抗ＣＤ３及び／又は抗ＣＤ２８アゴニストの細胞外ドメインを発現するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、複数のキメラタンパク質を産生するように操作される。例えば、細胞は、２～２０の異なるキメラタンパク質を産生するように操作され得る。一部の実施形態では、２～２０、２～１９、２～１８、２～１７、２～１６、２～１５、２～１４、２～１３、２～１２、２～１１、２～１０、２～９、２～８、２～７、２～６、２～５、２～４、２～３、３～２０、３～１９、３～１８、３～１７、３～１６、３～１５、３～１４、３～１３、３～１２、３～１１、３～１０、３～９、３～８、３～７、３～６、３～５、３～４、４～２０、４～１９、４～１８、４～１７、４～１６、４～１５、４～１４、４～１３、４～１２、４～１１、４～１０、４～９、４～８、４～７、４～６、４～５、５～２０、５～１９、５～１８、５～１７、５～１６、５～１５、５～１４、５～１３、５～１２、５～１１、５～１０、５～９、５～８、５～７、５～６、６～２０、６～１９、６～１８、６～１７、６～１６、６～１５、６～１４、６～１３、６～１２、６～１１、６～１０、６～９、６～８、６～７、７～２０、７～１９、７～１８、７～１７、７～１６、７～１５、７～１４、７～１３、７～１２、７～１１、７～１０、７～９、７～８、８～２０、８～１９、８～１８、８～１７、８～１６、８～１５、８～１４、８～１３、８～１２、８～１１、８～１０、８～９、９～２０、９～１９、９～１８、９～１７、９～１６、９～１５、９～１４、９～１３、９～１２、９～１１、９～１０、１０～２０、１０～１９、１０～１８、１０～１７、１０～１６、１０～１５、１０～１４、１０～１３、１０～１２、１０～１１、１１～２０、１１～１９、１１～１８、１１～１７、１１～１６、１１～１５、１１～１４、１１～１３、１１～１２、１２～２０、１２～１９、１２～１８、１２～１７、１２～１６、１２～１５、１２～１４、１２～１３、１３～２０、１３～１９、１３～１８、１３～１７、１３～１６、１３～１５、１３～１４、１４～２０、１４～１９、１４～１８、１４～１７、１４～１６、１４～１５、１５～２０、１５～１９、１５～１８、１５～１７、１５～１６、１６～２０、１６～１９、１６～１８、１６～１７、１７～２０、１７～１９、１７～１８、１８～２０、１８～１９、又は１９～２０のキメラタンパク質を産生するように操作された細胞。一部の実施形態では、細胞は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０のキメラタンパク質を産生するように操作される。
一部の実施形態では、操作された細胞は、キメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列に動作可能に連結されたプロモーターをコードする、一つ又は複数の操作された核酸を含む。一部の実施形態では、細胞は、複数の操作された核酸、例えば、少なくとも二つの操作された核酸を含むように操作され、各々が、少なくとも一つの（例、１、２、又は３）キメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列に動作可能に連結されたプロモーターをコードする。例えば、細胞は、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、又は少なくとも１０の操作された核酸を含むように操作され得るが、各々が、少なくとも一つ（例、１つ、２つ、又は３つ）のキメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列と動作可能に連結されたプロモーターをコードする。一部の実施形態では、細胞は、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、１０又はそれ以上の操作された核酸を含むように操作され、各々が、少なくとも一つ（例、１つ、２つ、又は３つ）のキメラタンパク質をコードするヌクレオチド配列に動作可能に連結されたプロモーターをコードする。操作された細胞は、上に記載されるリンカーの少なくとも一つをコードする操作された核酸、例えば、第一のポリペプチド配列と第二のポリペプチド配列を連結するポリペプチド、上に記載される一つ又は複数のマルチシストロンリンカー、追加のＯＲＦに動作可能に連結された一つ又は複数の追加のプロモーター、又はそれらの組み合わせを含み得る。
本開示の操作された細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、典型的には複数のキメラタンパク質を産生し、それらの少なくとも二つが、異なる腫瘍媒介性免疫抑制機構を調節する。一部の実施形態では、キメラタンパク質の少なくとも一つが、腫瘍微小環境における炎症性経路を刺激し、キメラタンパク質の少なくとも一つが、腫瘍微小環境における炎症の負のレギュレーターを阻害する。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、少なくとも一つのホーミング分子を産生するように操作される。「ホーミング」は、標的部位（例、細胞、組織（例、腫瘍）、又は器官）への細胞の能動的ナビゲーション（遊走）を指す。「ホーミング分子」は、細胞を標的部位に向かわせる分子を指す。一部の実施形態では、ホーミング分子は、標的部位への、操作された細胞の相互作用を認識及び／又は開始するように機能する。ホーミング分子の非限定的な例は、ＣＸＣＲ１、ＣＣＲ９、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ２、ＣＣＲ４、ＦＰＲ２、ＶＥＧＦＲ、ＩＬ６Ｒ、ＣＸＣＲ１、ＣＳＣＲ７、及びＰＤＧＦＲを含む。
一部の実施形態では、ホーミング分子は、ケモカイン受容体（ケモカインに結合する細胞表面分子）である。本開示の操作された細胞により産生され得るケモカイン受容体の非限定的な例は、以下を含む：ＣＸＣケモカイン受容体（例、ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、ＣＸＣＲ５、ＣＸＣＲ６、及びＣＸＣＲ７）、ＣＣケモカイン受容体（ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、及びＣＣＲ１１）、ＣＸ３Ｃケモカイン受容体（例、ＣＸ３ＣＬ１に結合するＣＸ３ＣＲ１）、及びＸＣケモカイン受容体（例、ＸＣＲ１）。一部の実施形態では、ケモカイン受容体は、Ｇタンパク質連結膜貫通受容体、又は腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリー（限定されないが、ＴＮＦＲＳＦ１Ａ、ＴＮＦＲＳＦ１Ｂを含む）のメンバーである。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ８、ＣＸＣＬ９、及び／又はＣＸＣＬ１０（Ｔ細胞動員を促進する）、ＣＣＬ３及び／又はＣＸＣＬ５、ＣＣＬ２１（Ｔｈ１動員及び分極）を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＲ４を産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、Ｎ－ホルミル化含有オリゴペプチド（限定されないが、ＦＰＲ２及びＦＰＲＬ１を含む）を検出するＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）を産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、インターロイキン（限定されないが、ＩＬ６Ｒを含む）を検出する受容体を産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、他の細胞、組織、又は腫瘍から分泌される成長因子を検出する受容体（限定されないが、ＦＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＥＧＦＲ、ならびに限定されないがＶＥＧＦ－Ｃ及びＶＥＧＦ－Ｄを含むＶＥＧＦファミリーの受容体を含む）を産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、一つ又は複数のインテグリンを産生するように操作される。本開示の細胞は、インテグリンα及びβサブユニットの任意の組み合わせを産生するように操作され得る。インテグリンのαサブユニットは、限定されないが、以下であり得る：ＩＴＧＡ１、ＩＴＧＡ２、ＩＴＧＡ３、ＩＴＧＡ４、ＩＴＧＡ５、ＩＴＧＡ６、ＩＧＴＡ７、ＩＴＧＡ８、ＩＴＧＡ９、ＩＧＴＡ１０、ＩＧＴＡ１１、ＩＴＧＡＤ、ＩＴＧＡＥ、ＩＴＧＡＬ、ＩＴＧＡＭ、ＩＴＧＡＶ、ＩＴＧＡ２Ｂ、ＩＴＧＡＸ。インテグリンのβサブユニットは、限定されないが、以下であり得る：ＩＴＧＢ１、ＩＴＧＢ２、ＩＴＧＢ３、ＩＴＧＢ４、ＩＴＧＢ５、ＩＴＧＢ６、ＩＴＧＢ７、及びＩＴＧＢ８。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、一つ又は複数のマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）を産生するように操作される。ＭＭＰの非限定的な例は、ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９、及びＭＭＰを含む。一部の実施形態では、細胞は、ＭＭＰを阻害する分子（例、タンパク質）のインヒビターを産生するように操作される。例えば、細胞は、膜１型ＭＭＰ（ＭＴ１－ＭＭＰ）のインヒビター（例、ＲＮＡｉ分子）又はＴＩＭＰメタロペプチダーゼインヒビター１（ＴＩＭＰ－１）を発現するように操作され得る。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、例えば、標的組織の内皮上でセレクチン（例、造血細胞Ｅ－／Ｌ－セレクチンリガンド（ＨＣＥＬＬ）、Ｄｙｋｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ．２０１６ Ｏｃｔ；３４（１０）：２５０１－２５１１）に結合するリガンドを産生するように操作される。
用語「ホーミング分子」はまた、細胞のホーミングを改善／増強する分子の産生を調節する転写因子を包含する。
また、本明細書中で提供されるのは、複数のキメラタンパク質を産生するように操作された、操作された細胞（例、腫瘍細胞、赤血球、血小板細胞、又は細菌細胞）であって、それらの少なくとも二つは、異なる腫瘍媒介性免疫抑制機構を調節する。一部の実施形態では、少なくとも一つ（例、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上）のキメラタンパク質は、腫瘍微小環境において少なくとも一つの免疫刺激機構を刺激する、又は腫瘍微小環境において少なくとも一つの免疫抑制機構を阻害する。一部の実施形態では、少なくとも一つ（例、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上）のキメラタンパク質は、腫瘍微小環境において少なくとも一つの免疫抑制機構を阻害し、少なくとも一つのキメラタンパク質（例、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上）は、腫瘍微小環境において少なくとも一つの免疫抑制機構を阻害する。さらに他の実施形態では、少なくとも二つ（例、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上）のキメラタンパク質は、腫瘍微小環境において少なくとも一つの免疫刺激機構を刺激する。さらに他の実施形態では、少なくとも二つ（例、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれ以上）のキメラタンパク質は、腫瘍微小環境において少なくとも一つの免疫抑制機構を阻害する。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、Ｔ細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員を刺激する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗原提示及び／又はプロセシングを刺激する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ナチュラルキラー細胞媒介性の細胞傷害性シグナル伝達、活性、及び／又は動員を刺激する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、樹状細胞分化及び／又は成熟を刺激する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、免疫細胞動員を刺激する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、Ｍ１マクロファージシグナル伝達、活性、及び／又は動員を刺激する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、Ｔｈ１分極を刺激する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、間質分解を刺激する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、免疫刺激性代謝物産生を刺激する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、Ｉ型インターフェロンシグナル伝達を刺激する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、負の共刺激シグナル伝達を阻害する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗腫瘍免疫細胞のアポトーシス促進性シグナル伝達（例、ＴＲＡＩＬを介する）を阻害する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、Ｔ調節性（Ｔｒｅｇ）細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員を阻害する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、腫瘍チェックポイント分子を阻害する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）シグナル伝達を活性化する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、骨髄由来のサプレッサー細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員を阻害する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、免疫抑制因子／代謝物を分解する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、血管内皮成長因子シグナル伝達を阻害する少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、腫瘍細胞を直接的に殺傷する少なくとも一つのキメラタンパク質（例、グランザイム、パーフォリン、腫瘍溶解性ウイルス、細胞溶解性ペプチド、及び酵素、例えば、ＡＤＣＣを誘発する抗腫瘍抗体）を産生するように操作される。
一部の実施形態では、少なくとも一つのキメラタンパク質は、Ｔ細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員を刺激し、抗原提示及び／又はプロセシングを刺激し、ナチュラルキラー細胞媒介性細胞傷害性シグナル伝達、活性、及び／又は動員を刺激し、樹状細胞分化及び／又は成熟を刺激し、免疫細胞動員を刺激し、マクロファージシグナル伝達を刺激し、間質分解を刺激し、免疫刺激性代謝物産生を刺激し、又はＩ型インターフェロンシグナル伝達を刺激し；ならびに、少なくとも一つのキメラタンパク質は、負の共刺激シグナル伝達を阻害し、抗腫瘍免疫細胞のアポトーシス促進性シグナル伝達を阻害し、調節性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員を阻害し、腫瘍チェックポイント分子を阻害し、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）シグナル伝達を活性化し、骨髄由来のサプレッサー細胞シグナル伝達、活性、及び／又は動員を阻害し、免疫抑制因子／代謝物を分解し、血管内皮成長因子シグナル伝達を阻害し、又は腫瘍細胞を直接的に殺傷する。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－７、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８，ＩＬ－１β、ＯＸ４０リガンド、及びＣＤ４０Ｌから選択される少なくとも一つのキメラタンパク質；ならびに／あるいはチェックポイントインヒビターから選択される少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。遮断又は阻害のために標的化することができる例証的な免疫チェックポイント分子は、限定されないが、ＣＴＬＡ－４、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４（ＣＤ２ファミリーの分子に属し、全てのＮＫ、γδＴ、及びメモリーＣＤ８＋（αβ）Ｔ細胞上で発現される）、ＣＤ１６０（また、ＢＹ５５として言及される）、及びＣＧＥＮ－１５０４９を含む。免疫チェックポイントインヒビターは、ＣＴＬＡ－４、ＰＤＬ１、ＰＤＬ２、ＰＤ１、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＨＶＥＭ、ＴＩＭ３、ＧＡＬ９、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、２Ｂ４、ＣＤ１６０、及びＣＧＥＮ－１５０４９の一つ又は複数に結合して、その活性を遮断又は阻害する抗体、又はその抗原結合断片、又は他の結合タンパク質を含む。例示的なチェックポイントインヒビターは、限定されないが、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭｌ抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体を含む。例証的な免疫チェックポイントインヒビターは、ペムブロリズマブ（抗ＰＤ－１；ＭＫ－３４７５／Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）－Ｍｅｒｃｋ）、ニボルマブ（抗ＰＤ－１；Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）－ＢＭＳ）、ピディリズマブ（抗ＰＤ－１抗体；ＣＴ－０１１－Ｔｅｖａ／ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＡＭＰ２２４（抗ＰＤ－１；ＮＣＩ）、アベルマブ（抗ＰＤ－Ｌ１；Ｂａｖｅｎｃｉｏ（登録商標）－Ｐｆｉｚｅｒ）、デュルバルマブ（抗ＰＤ－Ｌ１；ＭＥＤＩ４７３６／Ｉｍｆｉｎｚｉ（登録商標）－Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、アテゾリズマブ（抗ＰＤ－Ｌ１）；Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標）－Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＢＭＳ－９３６５５９（抗ＰＤ－Ｌ１－ＢＭＳ）、トレメリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４；Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４；Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）－ＢＭＳ）、リリルマブ（抗ＫＩＲ；ＢＭＳ）、モナリズマブ（抗ＮＫＧ２Ａ；Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）を含む。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－７、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＩＬ－１β、ＯＸ４０リガンド、及びＣＤ４０Ｌから選択される少なくとも一つのキメラタンパク質；ならびに／あるいは抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、及び抗ＩＬ－３５抗体から選択される少なくとも一つのキメラタンパク質；ならびに／あるいはＭＩＰ１α（ＣＣＬ３）、ＭＩＰ１β（ＣＣＬ５）、及びＣＣＬ２１から選択される少なくとも一つのキメラタンパク質；ならびに／あるいはＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドから選択される少なくとも一つのキメラタンパク質；ならびに／あるいは微生物ペプチドから選択される少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＦＮ－β、ならびにサイトカイン、抗体、ケモカイン、ヌクレオチド、ペプチド、酵素、及びインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）から選択される少なくとも一つのキメラタンパク質を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及び少なくとも一つのサイトカイン又は受容体／リガンド（例、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－７、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＩＬ－１β、ＯＸ４０－リガンド、及び／又はＣＤ４０Ｌ）を産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＦＮ－β及び少なくとも一つのサイトカイン又は受容体／リガンド（例、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－７、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＩＬ－１β、ＯＸ４０－リガンド、及び／又はＣＤ４０Ｌ）を産生するように操作される。
一部の実施形態では、サイトカインは、サイトカインと自己結合して、例えば抗体断片と融合されたＩＬ－２などとの細胞特異的な標的化結合を誘導し、それがＴｒｅｇ細胞と結合することを防止し、ＣＤ８及びＮＫ細胞と優先的に結合する、抗体、抗体断片、又は受容体を伴う、操作された融合タンパク質として産生される。一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＦＮ－β及び少なくとも一つの抗体（例、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＶＥＧＦ、抗ＴＧＦ－β、抗ＩＬ－１０、抗ＴＮＦ－α、及び／又は抗ＩＬ－３５抗体）を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及び少なくとも一つのケモカイン（ＭＩＰ１α（ＣＣＬ３）、ＭＩＰ１β（ＣＣＬ５）、及び／又はＣＣＬ２１）を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及び少なくとも一つのヌクレオチド（例、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド）を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及び少なくとも一つのペプチド（例、抗腫瘍ペプチド）を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及び少なくとも一つの酵素を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及び少なくとも一つのＳＴＩＮＧアクチベーターを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β、及び直接的な抗腫瘍活性を伴う少なくとも一つのエフェクター（例、腫瘍溶解性ウイルス）を産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＦＮ－α及びＭＩＰ１－αを発現するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α及びＭＩＰ１－βを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α及びＣＸＣＬ９を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α及びＣＸＣＬ１０を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α及びＣＸＣＬ１１を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α及びＣＣＬ２１を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ３６－γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／又は４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又はＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＦＮ－β及びＭＩＰ１－αを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及びＭＩＰ１－βを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及びＣＸＣＬ９を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及びＣＸＣＬ１０を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及びＣＸＣＬ１１を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及びＣＣＬ２１を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ３６－γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／又は４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又はＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＬ－１２及びＭＩＰ１－αを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２及びＭＩＰ１－βを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２及びＣＸＣＬ９を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２及びＣＸＣＬ１０を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２及びＣＸＣＬ１１を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２及びＣＣＬ２１を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ３６－γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／又は４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又はＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）及びＭＩＰ１－αを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＴＲＡＩＬ及びＭＩＰ１－βを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＴＲＡＩＬ及びＣＸＣＬ９を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＴＲＡＩＬ及びＣＸＣＬ１０を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＴＲＡＩＬ及びＣＸＣＬ１１を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＴＲＡＩＬ及びＣＣＬ２１を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ３６－γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／又は４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又はＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）、及びＭＩＰ１－αを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＳＴＩＮＧ及びＭＩＰ１－βを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＳＴＩＮＧ及びＣＸＣＬ９を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＳＴＩＮＧ及びＣＸＣＬ１０を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＳＴＩＮＧ及びＣＸＣＬ１１を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＳＴＩＮＧ及びＣＣＬ２１を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ３６－γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／又は４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又はＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＣＤ４０Ｌ及びＭＩＰ１－αを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４０Ｌ及びＭＩＰ１－βを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ９を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１０を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４０Ｌ及びＣＸＣＬ１１を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４０Ｌ及びＣＣＬ２１を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ３６－γ、ＩＬ－１８、及び／又は４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又はＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、シトシンデアミナーゼ及びＭＩＰ１－αを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、シトシンデアミナーゼ及びＭＩＰ１－βを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、シトシンデアミナーゼ及びＣＸＣＬ９を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、シトシンデアミナーゼ及びＣＸＣＬ１０を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、シトシンデアミナーゼ及びＣＸＣＬ１１を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、シトシンデアミナーゼ及びＣＣＬ２１を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ３６－γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／又は４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又はＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＦＮ－α及びＩＬ－１２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α及びＩＬ－２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α及びＩＬ－７を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α及びＩＬ－１５を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α及びＩＬ－１８を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又はＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＦＮ－β及びＩＬ－１２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及びＩＬ－２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及びＩＬ－７を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及びＩＬ－１５を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及びＩＬ－１８を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又はＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）及びＩＬ－１２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＴＲＡＩＬ及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＴＲＡＩＬ及びＩＬ－２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＴＲＡＩＬ及びＩＬ－７を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＴＲＡＩＬ及びＩＬ－１５を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＴＲＡＩＬ及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＴＲＡＩＬ及びＩＬ－１８を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＴＲＡＩＬ及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＴＲＡＩＬ及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又はＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、インターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）及びＩＬ－１２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＳＴＩＮＧ及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＳＴＩＮＧ及びＩＬ－２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＳＴＩＮＧ及びＩＬ－７を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＳＴＩＮＧ及びＩＬ－１５を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＳＴＩＮＧ及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＳＴＩＮＧ及びＩＬ－１８を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＳＴＩＮＧ及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＳＴＩＮＧ及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又はＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＣＤ４０Ｌ及びＩＬ－１２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４０Ｌ及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４０Ｌ及びＩＬ－２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４０Ｌ及びＩＬ－７を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４０Ｌ及びＩＬ－１５を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４０Ｌ及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４０Ｌ及びＩＬ－１８を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４０Ｌ及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又はＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、シトシンデアミナーゼ及びＩＬ－１２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、シトシンデアミナーゼ及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、シトシンデアミナーゼ及びＩＬ－２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、シトシンデアミナーゼ及びＩＬ－７を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、シトシンデアミナーゼ及びＩＬ－１５を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、シトシンデアミナーゼ及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、シトシンデアミナーゼ及びＩＬ－１８を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、シトシンデアミナーゼ及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、シトシンデアミナーゼ及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又はＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＭＩＰ１－α及びＩＬ－１２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α及びＭＩＰ１－γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α及びＩＬ－２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α及びＩＬ－７を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α及びＩＬ－１５を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α及びＩＬ－１８を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又はＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＭＩＰ１－β及びＩＬ－１２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－β及びＭＩＰ１－γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－β及びＩＬ－２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－β及びＩＬ－７を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－β及びＩＬ－１５を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－β及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－β及びＩＬ－１８を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－β及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－β及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又はＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＣＸＣＬ９及びＩＬ－１２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ９及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ９及びＩＬ－２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ９及びＩＬ－７を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ９及びＩＬ－１５を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ９及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ９及びＩＬ－１８を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ９及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ９及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又はＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＣＸＣＬ１０及びＩＬ－１２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１０及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１０及びＩＬ－２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１０及びＩＬ－７を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１０及びＩＬ－１５を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１０及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１０及びＩＬ－１８を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１０及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１０及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又はＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＣＸＣＬ１１及びＩＬ－１２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１１及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１１及びＩＬ－２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１１及びＩＬ－７を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１１及びＩＬ－１５を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１１及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１１及びＩＬ－１８を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１１及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又はＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＣＣＬ２１及びＩＬ－１２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＣＬ２１及びＩＦＮ－γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＣＬ２１及びＩＬ－２を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＣＬ２１及びＩＬ－７を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＣＬ２１及びＩＬ－１５を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＣＬ２１及びＩＬ－３６γを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＣＬ２１及びＩＬ－１８を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＣＬ２１及びＣＤ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＣＬ２１及び４１ＢＢ－Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、抗ＣＤ４０抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、及び／又はＯＸ４０Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＦＮ－α及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＸＣＬ２１をさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／又は４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＦＮ－β及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－β及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＸＣＬ２１をさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／又は４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＴＲＡＩＬ及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＴＲＡＩＬ及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＴＲＡＩＬ及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＴＲＡＩＬ及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＸＣＬ２１をさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／又は４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＳＴＩＮＧ及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＳＴＩＮＧ及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＳＴＩＮＧ及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＳＴＩＮＧ及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＸＣＬ２１をさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／又は４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＣＤ４０Ｌ及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４０Ｌ及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４０Ｌ及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４０Ｌ及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＸＣＬ２１をさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／又は４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、シトシンデアミナーゼ及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、シトシンデアミナーゼ及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、シトシンデアミナーゼ及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、シトシンデアミナーゼ及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＸＣＬ２１をさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／又は４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＭＩＰ１－α及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／又は４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＭＩＰ１－β及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－β及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－β及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－β及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／又は４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＣＸＣＬ９及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ９及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ９及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ９及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／又は４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＣＸＣＬ１０及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１０及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１０及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１０及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／又は４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＣＸＣＬ１１及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１１及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１１及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＸＣＬ１１及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／又は４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＣＣＬ２１及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＣＬ２１及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＣＬ２１及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＣＬ２１及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１５、ＩＬ－３６γ、ＩＬ－１８、ＣＤ４０Ｌ、及び／又は４１ＢＢ－Ｌをさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＬ－１２及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１２及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＦＮ－γ及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－γ及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－γ及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－γ及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＬ－２及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－２及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－２及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－２及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＬ－７及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－７及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－７及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－７及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＬ－１５及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１５及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１５及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１５及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＬ－３６－γ及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－３６－γ及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－３６－γ及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－３６－γ及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＩＬ－１８及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１８及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１８及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＬ－１８及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、ＣＤ４０Ｌ及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４０Ｌ及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４０Ｌ及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＣＤ４０Ｌ及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。
一部の実施形態では、細胞（例、免疫細胞又は幹細胞）は、４１ＢＢ－Ｌ及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、４１ＢＢ－Ｌ及びＯＸ４０Ｌを産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、４１ＢＢ－Ｌ及び抗ＣＴＬＡ４抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、４１ＢＢ－Ｌ及び抗ＣＤ４７抗体を産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＩＦＮ－α、ＩＦＮ－β、ＴＲＡＩＬ、ＳＴＩＮＧ、ＣＤ４０Ｌ、及び／又はシトシンデアミナーゼをさらに産生するように操作される。一部の実施形態では、細胞は、ＭＩＰ１－α、ＭＩＰ１－β、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、及び／又はＣＣＬ２１をさらに産生するように操作される。
細胞はまた、本明細書中に記載されるキメラタンパク質（例、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質又は本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質）、目的のタンパク質、又はエフェクター分子に加えて、追加のタンパク質を発現するようにさらに操作することができる。細胞をさらに操作して、抗原認識受容体を発現させることができる。抗原認識受容体の例は、限定されないが、５Ｔ４、ＡＤＡＭ９、ＡＦＰ、ＡＸＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ６、Ｃ４．４、ＣＡ６、カドヘリン３、カドヘリン６、ＣＣＲ４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１６６、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３５２、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、クローディン１８．２、ｃＭｅｔ、ＣＳＰＧ４、ＣＴＬＡ、ＤＬＫ１、ＤＬＬ３、ＤＲ５、ＥＧＦＲ、ＥＮＰＰ３、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、エフリンＡ４、ＥＴＢＲ、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＲアルファ、ＦＲｂ、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＦＲａ４、ｇｐＡ３３、ＧＰＣ３、ｇｐＮＢＭ、ＧＰＲＣ５、ＨＥＲ２、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１３Ｒａ、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ１ＲＡＰ、インテグリンａＶ、ＫＩＴ、Ｌ１ＣＡＭ、ＬＡＭＰ１、ルイスＹ、ＬｅＹ、ＬＩＶ－１、ＬＲＲＣ、ＬＹ６Ｅ、ＭＣＳＰ、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１Ｃ、ＮａＰｉ２Ｂ、ネクチン４、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ３、ＮＹ ＥＳＯ １、オバリン、Ｐカドヘリン、ｐａｎ－Ｅｒｂ２、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＲＯＲ１、Ｓ Ａｕｒｅｓ、ＳＣＴ、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＩＴＲＫ６、ＳＳＴＲ２、ＳＴＥＡＰ１、サバイビン、ＴＤＧＦ１、ＴＩＭ１、ＴＲＯＰ２、及びＷＴ１を含む。
抗原認識受容体は、抗原結合ドメイン、例えば、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含み得る。抗原認識受容体は、ｓｃＦｖを含み得る。ｓｃＦｖは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み得るが、それらは、ペプチドリンカーにより分離され得る。例えば、ｓｃＦｖは、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬ又はＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み得るが、それにおいて、ＶＨは重鎖可変ドメインであり、Ｌはペプチドリンカーであり、かつＶＬは軽鎖可変ドメインである。
抗原認識受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であり得る。ＣＡＲは、一つ又は複数の細胞内シグナル伝達ドメイン、例えばＣＤ３ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ９７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１１ａ－ＣＤ１８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１５４細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＺＡＰ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＧＩＴＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＨＶＥＭ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２細胞内シグナル伝達ドメイン、ＭｙＤ８８細胞内シグナル伝達ドメイン、それらの断片、それらの組み合わせ、又はそれらの断片の組み合わせなどを有し得る。ＣＡＲは、膜貫通ドメイン、例えばＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ３ゼータ鎖膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０膜貫通ドメイン、ＩＣＯＳ膜貫通ドメイン、ＣＴＬＡ－４膜貫通ドメイン、ＰＤ－１膜貫通ドメイン、ＬＡＧ－３膜貫通ドメイン、２Ｂ４膜貫通ドメイン、ＢＴＬＡ膜貫通ドメイン、それらの断片、それらの組み合わせ、又はそれらの断片の組み合わせなどを有し得る。ＣＡＲは、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの間にスペーサー領域を有することができる。
抗原認識受容体は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）であり得る。
操作された細胞型
また、本明細書中で提供されるのは、操作された細胞である。細胞は、本明細書中に記載される操作された核酸のいずれか（例、本明細書中に記載されるキメラタンパク質をコードする操作された核酸のいずれか）を含むように操作することができる。細胞は、本明細書中に記載される操作された細胞のいずれかの特色のいずれかを持つように操作され得る。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、一つ又は複数のキメラタンパク質を産生するように操作された細胞であって、それにおいて、一つ又は複数のキメラタンパク質は、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質又は本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質である。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、二つ以上のキメラタンパク質を産生するように操作された細胞である。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質の二つ以上を産生するように操作された細胞であり、ここで、各キメラタンパク質は、異なる目的のタンパク質又はエフェクター分子である。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質のいずれかを産生するように操作され、異なるエフェクター分子又は目的のタンパク質（例、ホーミング分子、抗原受容体など）を別々に産生するように操作された細胞である。
操作された細胞は、限定されないが、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタ（γδ）Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、又は樹状細胞を含む、免疫細胞であり得る。
操作された細胞は、限定されないが、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、又はｉＰＳＣ由来細胞を含む、幹細胞であり得る。
操作された細胞は、腫瘍由来細胞であり得る。腫瘍細胞の例は、限定されないが、膀胱腫瘍細胞、脳腫瘍細胞、乳房腫瘍細胞、子宮頸部腫瘍細胞、結腸直腸腫瘍細胞、食道腫瘍細胞、神経膠腫細胞、腎臓腫瘍細胞、肝臓腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、メラノーマ細胞、卵巣腫瘍細胞、膵臓腫瘍細胞、前立腺腫瘍細胞、皮膚腫瘍細胞、甲状腺腫瘍細胞、及び子宮腫瘍細胞を含む。
細胞を操作して、当業者に公知の方法を使用してキメラタンパク質を産生することができる。例えば、細胞を形質導入して腫瘍を操作することができる。一実施形態では、細胞は、ウイルスを使用して形質導入される。
特定の実施形態では、細胞は、腫瘍溶解性ウイルスを使用して形質導入される。腫瘍溶解性ウイルスの例は、限定されないが、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス、腫瘍溶解性アデノウイルス、腫瘍溶解性麻疹ウイルス、腫瘍溶解性インフルエンザウイルス、腫瘍溶解性インディアナベシクロウイルス、腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、腫瘍溶解性ポリオウイルス、腫瘍溶解性粘液腫ウイルス、腫瘍溶解性レオウイルス、腫瘍溶解性ムンプスウイルス、腫瘍溶解性マラバウイルス、腫瘍溶解性狂犬病ウイルス、腫瘍溶解性ロタウイルス、腫瘍溶解性肝炎ウイルス、腫瘍溶解性ルベラウイルス、腫瘍溶解性デングウイルス、腫瘍溶解性チクングニアウイルス、腫瘍溶解性呼吸器合胞体ウイルス、腫瘍溶解性リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、腫瘍溶解性モルビリウイルス、腫瘍溶解性レンチウイルス、腫瘍溶解性複製レトロウイルス、腫瘍溶解性ラブドウイルス、腫瘍溶解性セネカバレーウイルス、腫瘍溶解性シンドビスウイルス、及びそれらの任意のバリアント又は誘導体を含む。
ウイルスは、本明細書中に記載される腫瘍溶解性ウイルスのいずれかを含み、一つ又は複数のキメラタンパク質、例えば本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかなどをコードするもう一つの導入遺伝子をコードする組換えウイルスであり得る。ウイルスは、本明細書中に記載される腫瘍溶解性ウイルスのいずれかを含み、二つ以上のキメラタンパク質、例えば本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかなどの一つ又は複数をコードするもう一つの導入遺伝子をコードする組換えウイルスであり得る。
また、本明細書中で提供されるのは、操作された赤血球である。赤血球は、本明細書中に記載される操作された核酸のいずれかを含むように操作され得る。赤血球は、本明細書中に記載される操作された細胞のいずれかの特徴のいずれかを持つように操作され得る。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質の一つ又は複数を産生するように操作された赤血球である。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質の二つ以上を産生するように操作された赤血球である。
また、本明細書中で提供されるのは、操作された血小板細胞である。血小板細胞は、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかを含むように操作することができる。血小板細胞は、本明細書中に記載される、操作された細胞のいずれかの特徴のいずれかを持つように操作することができる。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質の一つ又は複数を産生するように操作された血小板細胞である。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質の二つ以上を産生するように操作された血小板細胞である。
また、本明細書中で提供されるのは、操作された細菌細胞である。細菌細胞は、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかを含むように操作することができる。細菌細胞は、本明細書中に記載される、操作された細胞のいずれかの特徴のいずれかを持つように操作することができる。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質の二つ以上を産生するように操作された細菌細胞である。細菌細胞は、一つ又は複数の哺乳動物由来のキメラタンパク質を産生するように操作することができる。細菌細胞は、二つ以上の哺乳動物由来のキメラタンパク質を産生するように操作することができる。細菌細胞の例は、限定されないが、クロストリジウム・ベイジェリンキー、クロストリジウム・スポロジェネス、クロストリジウム・ノヴィ、エシェリヒア・コリ、シュードモナス・エルジノーサ、リステリア・モノサイトゲネス、サルモネラ・チフィリウム、及びサルモネラ・コレラエスイスを含む。
操作された細胞は、ヒト細胞であり得る。操作された細胞は、ヒト初代細胞であり得る。操作された初代細胞は、腫瘍浸潤性初代細胞であり得る。操作された初代細胞は、初代Ｔ細胞であり得る。操作された初代細胞は、造血幹細胞（ＨＳＣ）であり得る。操作された初代細胞は、ナチュラルキラー細胞であり得る。操作された初代細胞は、任意の体細胞であり得る。操作された初代細胞は、ＭＳＣであり得る。ヒト細胞（例、免疫細胞）は、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかを含むように操作することができる。ヒト細胞（例、免疫細胞）は、本明細書中に記載される、操作された細胞のいずれかの特徴のいずれかを持つように操作することができる。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質の一つ又は複数を産生するように操作されたヒト細胞（例、免疫細胞）である。特定の態様では、本明細書中で提供されるのは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質の二つ以上を産生するように操作されたヒト細胞（例、免疫細胞）である。
操作された細胞は、対象（自己）、例えば、癌を有することが公知である、又は疑われる対象などから単離することができる。細胞単離方法は当業者に公知であり、限定されないが、細胞表面マーカー発現に基づくソーティング技術、例えば、ＦＡＣＳソーティング、ポジティブ単離技術、及びネガティブ単離、磁気単離、ならびにそれらの組み合わせを含む。操作された細胞は、治療が施されている対象に関して同種であり得る。同種改変細胞は、治療が施されている対象にＨＬＡ適合させることができる。操作された細胞は、培養細胞、例えばエクスビボ培養細胞などであり得る。操作された細胞は、エクスビボ培養細胞、例えば対象から単離された初代細胞などであり得る。培養細胞は、一つ又は複数のサイトカインと培養することができる。
また、本明細書中で提供されるのは、本開示の操作された細胞を培養することを含む方法である。本明細書中に記載される、操作された細胞を培養する方法は、公知である。当業者は、培養条件が、目的の特定の操作された細胞に依存することを認識するであろう。当業者は、培養条件が、操作された細胞の特定の下流の使用、例えば、対象への、操作された細胞のその後の投与のための特定の培養条件に依存することを認識するであろう。
細胞を操作する方法
また、本明細書中で提供されるのは、一つ又は複数の目的のタンパク質又はエフェクター分子（例、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質又は本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質）を産生するために細胞を操作するための組成物及び方法である。
一般的に、細胞は、細胞のサイトゾル及び／又は核中への、一つ又は複数の目的のタンパク質又はエフェクター分子、例えば、目的のタンパク質又はエフェクター分子を有する、本明細書中に記載されているキメラタンパク質をコードするポリヌクレオチドの導入（即ち、送達）を通じて、目的のタンパク質又はエフェクター分子を産生するように操作される。例えば、一つ又は複数のキメラタンパク質をコードするポリヌクレオチドは、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質又は本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質をコードする操作された核酸のいずれかであることができる。送達方法は、限定されないが、ウイルス媒介性送達、脂質媒介性トランスフェクション、ナノ粒子送達、エレクトロポレーション、超音波処理、及び物理的手段による細胞膜変形を含む。当業者は、送達方法の選択が、操作しようとする特定の細胞型に依存し得ることを理解するであろう。
ウイルス媒介性送達
ウイルスベクターベースの送達プラットフォームを使用して、細胞を操作することができる。一般的に、ウイルスベクターベースの送達プラットフォームによって、宿主細胞中へ導入する（即ち、送達する）ことを通じて細胞が操作される。例えば、ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、本明細書中に記載される操作された核酸のいずれか（例、本明細書中に記載されるキメラタンパク質、例えば、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質又は本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質などをコードする外因性ポリヌクレオチド配列のいずれか、ならびに／あるいは、Ｎ末端からＣ末端に配向された、プロモーターとキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列とを含む、本明細書中に記載される発現カセットのいずれか）を導入することにより細胞を操作することができる。ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは核酸であり得るが、そのようなものとして、操作された核酸はまた、操作されたウイルス由来の核酸を包含し得る。そのような操作されたウイルス由来の核酸はまた、組換えウイルス又は操作されたウイルスとして言及され得る。
ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、同じ核酸内に二つ以上の操作された核酸、遺伝子、又は導入遺伝子をコードし得る。例えば、操作されたウイルス由来の核酸、例えば、組換えウイルス又は操作されたウイルスは、限定されないが、本明細書中に記載されるキメラタンパク質の一つ又は複数をコードする本明細書中に記載される操作された核酸のいずれかを含む、一つ又は複数の導入遺伝子をコードし得る。一つ又は複数のキメラタンパク質をコードする一つ又は複数の導入遺伝子は、一つ又は複数のキメラタンパク質及び／又は目的の他のタンパク質を発現するように構成され得る。ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、一つ又は複数の導入遺伝子（例、一つ又は複数のキメラタンパク質及び／又は他の目的のタンパク質をコードする導入遺伝子）に加えて、シス作用性エレメント又は遺伝子として言及される、一つ又は複数の遺伝子、例えば、ウイルス感染性及び／又はウイルス産生のために必要とされるウイルス遺伝子（例、キャプシドタンパク質、エンベロープタンパク質、ウイルスポリメラーゼ、ウイルス転写酵素など）をコードすることができる。
ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、二つ以上のウイルスベクター、例えば、本明細書中に記載され、トランス作用性エレメント又は遺伝子として言及される、操作された核酸、遺伝子、又は導入遺伝子をコードする別々のウイルスベクターなどを含むことができる。例えば、ヘルパー依存的ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、一つ又は複数のキメラタンパク質及び／又は他の目的のタンパク質をコードするベクターに加えて、一つ又は複数の追加の別々のベクター上にウイルス感染性及び／又はウイルス産生のために必要とされる追加の遺伝子を提供することができる。一つのウイルスベクターによって、二つ以上の操作された核酸を送達することができ、例えば、二つ以上のキメラタンパク質及び／又は他の目的のタンパク質を産生するように構成された、操作された核酸を送達する一つのベクターなどである。二つ以上のウイルスベクターによって、二つ以上の操作された核酸を送達することができ、例えば、一つ又は複数のキメラタンパク質及び／又は他の目的のタンパク質を産生するように構成された一つ又は複数の操作された核酸を送達する二つ以上のベクターなどである。使用されるウイルスベクターの数は、上で言及されるウイルスベクターベースのワクチンプラットフォームのパッケージング容量に依存し得るが、当業者は、適した数のウイルスベクターを選択することができる。
一般的に、ウイルスベクターベースの系のいずれかは、分子、例えば、本明細書中に記載されるキメラタンパク質、エフェクター分子、及び／又は他の目的のタンパク質などのインビトロ生産のために使用することができる、あるいは、例えば、一つ又は複数のキメラタンパク質及び／又は他の目的のタンパク質をコードする操作された核酸のインビボ送達のために、インビボ及びエクスビボ遺伝子治療手順において使用することができる。適したウイルスベクターベースの系の選択は、様々な要因、例えばカーゴ／ペイロードのサイズ、ウイルス系の免疫原性、目的の標的細胞、遺伝子発現の強度及びタイミング、及び当業者により認識される他の要因などに依存する。
ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、ＲＮＡベースのウイルス又はＤＮＡベースのウイルスであり得る。例示的なウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、限定されないが、単純ヘルペスウイルス、アデノウイルス、麻疹ウイルス、インフルエンザウイルス、インディアナベシクロウイルス、ニューカッスル病ウイルス、ワクシニアウイルス、ポリオウイルス、粘液腫ウイルス、レオウイルス、ムンプスウイルス、マラバウイルス、狂犬病ウイルス、ロタウイルス、肝炎ウイルス、風疹ウイルス、デングウイルス、チクングニアウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、モルビリウイルス、レンチウイルス、複製レトロウイルス、ラブドウイルス、セネカバレーウイルス、シンドビスウイルス、及びそれらの任意のバリアント又は誘導体を含む。他の例示的なウイルスベクターベースの送達プラットフォームが、当技術分野において記載されており、例えばワクシニア、鶏痘、自己複製アルファウイルス、マラバウイルス、アデノウイルス（例、Ｔａｔｓｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｅｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ（２００４）１０，６１６－６２９を参照のこと）、又はレンチウイルスなどであり、限定されないが、特定の細胞型又は受容体を標的化するように設計された第二、第三又はハイブリッド第二／第三世代レンチウイルス及び任意の世代の組換えレンチウイルスを含む（例、Ｈｕ ｅｔ ａｌ．，ＩｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎＤｅｌｉｖｅｒｅｄ ｂｙ Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＤｉｓｅａｓｅｓ，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．（２０１１）２３９（１）：４５－６１、Ｓａｋｕｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ：ｂａｓｉｃ ｔｏ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．（２０１２）４４３（３）：６０３－１８、Ｃｏｏｐｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｓｃｕｅ ｏｆ ｓｐｌｉｃｉｎｇ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｉｎｔｒｏｎ ｌｏｓｓＭａｘｉｍｉｚｅｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｌｅｎｔｉｖｉｒａｌ ｖｅｃｔｏｒｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ Ｃ ｐｒｏｍｏｔｅｒ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．（２０１５）４３（１）：６８２－６９０、Ｚｕｆｆｅｒｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｌｆ－Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｎｇ Ｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓ Ｖｅｃｔｏｒ ｆｏｒ Ｓａｆｅ ａｎｄ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ Ｉｎ ｖｉｖｏ ＧｅｎｅＤｅｌｉｖｅｒｙ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（１９９８）７２（１２）：９８７３－９８８０を参照のこと）。
この配列は、細胞内コンパートメントを標的化する一つ又は複数の配列で先行されてもよい。宿主細胞中への導入（即ち、送達）時に、感染細胞（即ち、操作された細胞）は、目的のキメラタンパク質及び／又は他のタンパク質を発現することができる。免疫化プロトコールにおいて有用なワクシニアベクター及び方法が、例えば、米国特許第４，７２２，８４８号において記載されている。別のベクターはＢＣＧ（Ｂａｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅｔｔｅ Ｇｕｅｒｉｎ）である。ＢＣＧベクターは、Ｓｔｏｖｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ ３５１：４５６－４６０（１９９１））において記載されている。操作された核酸の導入（即ち、送達）のために有用な多種多様な他のベクター、例えば、サルモネラ・チフィベクター、及び同様のものが、本明細書中の記載から当業者に明らかであろう。
ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、細胞を標的化するウイルスであり得るが、本明細書中では腫瘍溶解性ウイルスとして言及される。腫瘍溶解性ウイルスの例は、限定されないが、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス、腫瘍溶解性アデノウイルス、腫瘍溶解性麻疹ウイルス、腫瘍溶解性インフルエンザウイルス、腫瘍溶解性インディアナベシクロウイルス、腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、腫瘍溶解性ポリオウイルス、腫瘍溶解性粘液腫ウイルス、腫瘍溶解性レオウイルス、腫瘍溶解性ムンプスウイルス、腫瘍溶解性マラバウイルス、腫瘍溶解性狂犬病ウイルス、腫瘍溶解性ロタウイルス、腫瘍溶解性肝炎ウイルス、腫瘍溶解性ルベラウイルス、腫瘍溶解性デングウイルス、腫瘍溶解性チクングニアウイルス、腫瘍溶解性呼吸器合胞体ウイルス、腫瘍溶解性リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、腫瘍溶解性モルビリウイルス、腫瘍溶解性レンチウイルス、腫瘍溶解性複製レトロウイルス、腫瘍溶解性ラブドウイルス、腫瘍溶解性セネカバレーウイルス、腫瘍溶解性シンドビスウイルス、及びそれらの任意のバリアント又は誘導体を含む。本明細書中に記載される腫瘍溶解性ウイルスのいずれも、目的の一つ又は複数のキメラタンパク質及び／又は他のタンパク質をコードする一つのさらなる導入遺伝子（例、操作された核酸）を含む組換え腫瘍溶解性ウイルスであり得る。目的の一つ又は複数のキメラタンパク質及び／又は他のタンパク質をコードする導入遺伝子は、目的のキメラタンパク質及び／又は他のタンパク質を発現するように構成され得る。
ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、レトロウイルスベースであり得る。一般的に、レトロウイルスベクターは、６～１０ｋｂまでの外来配列についてのパッケージング能力を伴う、シス作用性の長い末端反復で構成されている。最小のシス作用性ＬＴＲは、ベクターの複製及びパッケージングのために十分であり、それは次に、一つ又は複数の操作された核酸（例、一つ又は複数のキメラタンパク質及び／又は他の目的のタンパク質をコードする導入遺伝子）を標的細胞中に組み込んで、永続的な導入遺伝子の発現を提供するために使用される。レトロウイルスベースの送達系は、限定されないが、マウス白血病、ウイルス（ＭｕＬＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、及びそれらの組み合わせに基づく送達系を含む（例、Ｂｕｃｈｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６：２７３１－２７３９（１９９２）；Ｊｏｈａｎｎ ｅｔ ａｈ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６６：１６３５－１６４０（１９９２）；Ｓｏｍｍｎｅｒｆｅｌｔ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌ．１７６：５８－５９（１９９０）；Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｈ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３：２３７４－２３７８（１９８９）；Ｍｉｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｊ，Ｖｉｒｏｌ．６５：２２２０－２２２４（１９９１）；ＰＣＴ／ＵＳ９４／０５７００を参照のこと）。他のレトロウイルス系は、Ｐｈｏｅｎｉｘレトロウイルス系を含む。
ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、レンチウイルスベースであり得る。一般的に、レンチウイルスベクターは、非分裂細胞に形質導入させる又は感染させることができ、典型的には、高いウイルス力価を産生するレトロウイルスベクターである。レンチウイルスベースの送達プラットフォームは、ＨＩＶベース、例えばＶｉｒａＰｏｗｅｒ系（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）又はｐＬｅｎｔｉ系（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ）などであり得る。レンチウイルスベースの送達プラットフォームは、ＳＩＶ又はＦＩＶベースであり得る。他の例示的なレンチウイルスベースの送達プラットフォームが、米国特許第７，３１１，９０７号；第７，２６２，０４９号；第７，２５０，２９９号；第７，２２６，７８０号；第７，２２０，５７８号；第７，２１１，２４７号；第７，１６０，７２１号；第７，０７８，０３１号；第７，０７０，９９３号；第７，０５６，６９９号；第６，９５５，９１９号においてさらに詳細に記載されており、各々が、参照により全ての目的のために本明細書中に組み入れられる。
ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、アデノウイルスベースであり得る。一般的に、アデノウイルスベースのベクターは、多くの細胞型において非常に高い形質導入効率が可能であり、細胞分裂を要求せず、高い力価及び発現のレベルを達成し、比較的単純な系において大量に産生することができる。一般的に、アデノウイルスは、感染細胞内での導入遺伝子の一過性発現のために使用することができる。なぜなら、アデノウイルスは、典型的には、宿主のゲノム中に組み込まれないためである。アデノウイルスベースの送達プラットフォームが、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ ３５：２５４３２５４９，１９９４；Ｂｏｒｒａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ６：５１５ ５２４，１９９９；Ｌｉ ａｎｄＤａｖｉｄｓｏｎ，ＰＮＡＳ ９２：７７００ ７７０４，１９９５；Ｓａｋａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ５：１０８８ １０９７，１９９９；ＷＯ９４／１２６４９、ＷＯ９３／０３７６９；ＷＯ９３／１９１９１；ＷＯ９４／２８９３８；ＷＯ９５／１１９８４及びＷＯ９５／００６５５においてより詳細に記載されており、各々が、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。他の例示的なアデノウイルスベースの送達プラットフォームが、米国特許第５５８５３６２号；第６，０８３，７１６号、第７，３７１，５７０号；第７，３４８，１７８号；第７，３２３，１７７号；第７，３１９，０３３号；第７，３１８，９１９号；及び第７，３０６，７９３号ならびに国際特許出願ＷＯ９６／１３５９７においてより詳細に記載されており、各々が、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。
ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベースであり得る。アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを使用して、操作された核酸（例、本明細書中に記載される操作された核酸のいずれか）で細胞を形質導入してもよい。ＡＡＶ系は、目的のタンパク質、例えば本明細書中に記載されるキメラタンパク質及び／又はエフェクター分子などのインビトロ産生のために使用することができ、あるいは、例えば、一つ又は複数のキメラタンパク質及び／又は他の目的のタンパク質をコードする操作された核酸のインビボ送達のために、インビボ及びエクスビボ遺伝子治療手順において使用することができる（例、Ｗｅｓｔ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １６０：３８－４７（１９８７）；米国特許第４，７９７，３６８号；第５，４３６，１４６号；第６，６３２，６７０号；第６，６４２，０５１号；第７，０７８，３８７号；第７，３１４，９１２号；第６，４９８，２４４号；第７，９０６，１１１号；米国特許公開ＵＳ２００３－０１３８７７２、ＵＳ ２００７／００３６７６０、及びＵＳ ２００９／０１９７３３８；Ｇａｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ，７８（１２）：６３８１－６３８８（２００４年６月）；Ｇａｏ，ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１００（１０）：６０８１－６０８６（２００３年５月１３日）；ならびに国際特許出願ＷＯ２０１０／１３８２６３及びＷＯ９３／２４６４１；Ｋｏｔｉｎ，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ５：７９３－８０１（１９９４）；Ｍｕｚｙｃｚｋａ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９４：１３５１（１９９４）、各々が、全ての目的のために、参照により本明細書中に組み入れられる）。組換えＡＡＶベクターを構築するための例示的な方法が、米国特許第５，１７３，４１４号；Ｔｒａｔｓｃｈｉｎ ｅｔ ａｈ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：３２５１－３２６０（１９８５）；Ｔｒａｔｓｃｈｉｎ，ｅｔ ａｈ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ，Ｂｉｏｌ．４：２０７２－２０８１（１９８４）；Ｈｅｒｍｏｎａｔ ＆ａｍｐ；Ｍｕｚｙｃｚｋａ，ＰＮＡＳ ８１：６４６６６４７０（１９８４）；及びＳａｍｕｉｓｋｉ ｅｔ ａｈ，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３：０３８２２－３８２８（１９８９）においてさらに詳細に記載されており、各々が、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。一般的に、ＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ．Ｒｈ１０、ＡＡＶ１１及びそれらのバリアントのいずれか一つに対応するアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質を含む。特定の例では、ＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ２に対応するアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質を有する。特定の例では、ＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ８に対応するアミノ酸配列を有するキャプシドタンパク質を有する。
ＡＡＶベクターは、式：Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する、本明細書中に記載される膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列のいずれかを有するように操作することができる。
ＡＡＶベクターは、異種核酸を発現するように操作することができ、それにおいて、異種核酸は、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質のいずれかをコードする。デグロン融合キメラタンパク質中の目的のタンパク質は、分泌性であることができる。デグロン融合キメラタンパク質中の目的のタンパク質は、非分泌性であることができる。デグロンドメインは、本明細書中の他でより詳細に記載されるデグロンドメインのいずれか、例えば、免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）への応答においてセレブロン（ＣＲＢＮ）に結合することが可能でありそれにより目的のタンパク質のユビキチン経路媒介性分解を促進する、セレブロン（ＣＲＢＮ）ポリペプチド基質ドメインなどであることができる。ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、本明細書中の他でより詳細に記載されているＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインのいずれかであることができ、例えばＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫｌａ、ＺＦＰ９１、ＧＳＰＴ１、ＭＥＩＳ２、ＧＳＳ Ｅ４Ｆ１、ＺＮ２７６、ＺＮ５１７、ＺＮ５８２、ＺＮ６５３、ＺＮ６５４、ＺＮ６９２、ＺＮ７８７、及びＺＮ８２７など、又はＣＲＢＮの薬物誘導性結合が可能であるその断片であり得る。ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、天然ＣＲＢＮポリペプチド配列のキメラ融合産物、例えばＦＮＶＬＭ ＶＨＫＲＳ ＨＴＧＥＲ ＰＬＱＣＥ ＩＣＧＦＴ ＣＲＱＫＧ ＮＬＬＲＨ ＩＫＬＨＴ ＧＥＫＰＦ ＫＣＨＬＣ ＮＹＡＣＱ ＲＲＤＡＬ（配列番号１８９）のアミノ酸配列を有するＩＫＺＦ３／ＺＦＰ９１／ＩＫＺＦ３キメラ融合産物などであり得る。調節された分解は、薬物誘導性であり得る。分解を媒介／調節することが可能な薬物は、小分子インヒビターであり得る。分解を媒介／調節することが可能な薬物は、本明細書中の他でより詳細に記載されるように、ＩＭｉＤを含み得る。ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインを有するデグロンについては、イミド含有ＩＭｉＤの例は、限定されないが、サリドマイド、レナリドミド、又はポマリドミドを含む。ＩＭｉＤは、ＦＤＡ承認薬物であり得る。融合タンパク質中のデグロンの他の例は、限定されないが、ＨＣＶ ＮＳ４デグロン、ＰＥＳＴ（ヒトＩκＢαの残基２７７～３０７の二つのコピー）、ＧＲＲ（ヒトｐ１０５の残基３５２～４０８）、ＤＲＲ（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０～２９５）、ＳＮＳ（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（Ａ型インフルエンザ又はＢ型インフルエンザのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２）、ＲＰＢ（酵母ＲＰＢの残基１６８８～１７０２の四つのコピー）、ＳＰｍｉｘ（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（Ａ型インフルエンザウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２）、ＮＳ２（Ａ型インフルエンザウイルスＮＳタンパク質の残基７９～９３の三つのコピー）、ＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼの残基１０６～１４２）、Ｎｅｋ２Ａ、マウスＯＤＣ（残基４２２～４６１）、マウスＯＤＣ＿ＤＡ（Ｄ４３３Ａ及びＤ４３４Ａ点変異を含むｍＯＤＣの残基４２２～４６１）、ＡＰＣ／Ｃデグロン、ＣＯＰ１ Ｅ３リガーゼ結合デグロンモチーフ、ＣＲＬ４－Ｃｄｔ２結合ＰＩＰデグロン、アクチンフィリン結合デグロン、ＫＥＡＰ１結合デグロン、ＫＬＨＬ２及びＫＬＨＬ３結合デグロン、ＭＤＭ２結合モチーフ、Ｎ－デグロン、低酸素シグナル伝達におけるヒドロキシプロリン修飾、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＤＳＧｘｘＳ（配列番号１９０）リン依存的デグロン、Ｓｉａｈ結合モチーフ、ＳＰＯＰ ＳＢＣドッキングモチーフ、ならびにＰＣＮＡ結合ＰＩＰボックスを含む。融合タンパク質中の目的のタンパク質の例は、限定されないが、サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、又は酵素を含む治療クラスから選択されるタンパク質であることができる。
本明細書中に記載されるのは、異種核酸を発現するように操作されたＡＡＶであって、それにおいて、異種核酸は、デグロン融合キメラタンパク質をコードし、それにおいて、デグロン融合キメラタンパク質は、目的のタンパク質に融合されたデグロンを含む。例えば、デグロン融合キメラタンパク質（例、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラのいずれか）を発現するように操作されたＡＡＶは、本明細書中に記載されるＡＡＶベクターのいずれかを使用して産生することができる。ＡＡＶベクター及び／又は操作されたＡＡＶウイルスは、医薬的に許容可能な担体と組み合わせることができる。
ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）プラットフォームであり得る。一般的に、ＶＬＰは、ウイルス構造タンパク質を産生し、結果として得られたウイルス粒子を精製することにより構築される。次に、精製後、カーゴ／ペイロード（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか）を、精製した粒子内にエクスビボでカプセル化する。したがって、ＶＬＰの産生によって、ウイルス構造タンパク質をコードする核酸及びカーゴ／ペイロードをコードする核酸の分離が維持される。ＶＬＰ産生において使用されるウイルス構造タンパク質は、哺乳動物、酵母、昆虫、細菌、又はインビボ翻訳発現の系を含む、様々な発現系において産生することができる。精製されたウイルス粒子を、当業者に公知の方法を使用して、所望のカーゴの存在において変性及び再形成して、ＶＬＰを産生することができる。ＶＬＰの産生は、Ｓｅｏｗ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２００９Ｍａｙ；１７（５）：７６７－７７７）においてより詳細に記載されており、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。
ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、ある範囲の細胞を標的化する（即ち、感染させる）、狭いサブセットの細胞を標的化する、又は特定の細胞を標的化するように操作することができる。一般的に、ウイルスベクターベースの送達プラットフォーム用に選ばれたエンベロープタンパク質によって、ウイルスの向性が決定される。ウイルスベクターベースの送達プラットフォームにおいて使用されるウイルスは、目的の特定の細胞を標的化するようにシュードタイプ化することができる。ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、汎親和性であり、ある範囲の細胞に感染することができる。例えば、汎親和性ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、ＶＳＶ－Ｇエンベロープを含むことができる。ウイルスベクターベースの送達プラットフォームは、両種指向性であり、哺乳動物細胞に感染することができる。したがって、当業者は、所望の細胞型を標的化するための適した向性、シュードタイプ、及び／又はエンベロープタンパク質を選択することができる。
脂質構造体送達系
操作された核酸（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか）は、脂質媒介性送達系を使用して細胞中に導入することができる。一般的に、脂質媒介性送達系は、内部コンパートメントを包む外部脂質膜で構成される構造を使用する。脂質ベースの構造体の例は、限定されないが、脂質ベースのナノ粒子、リポソーム、ミセル、エキソソーム、小胞、細胞外小胞、細胞、又は組織を含む。脂質構造体送達系は、インビトロ、インビボ、又はエクスビボで、カーゴ／ペイロード（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか）を送達することができる。
脂質ベースのナノ粒子は、限定されないが、単層リポソーム、多層リポソーム、及び脂質調製物を含むことができる。本明細書中で使用されるように、「リポソーム」は、所望のカーゴ、例えば、操作された核酸、例えば、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかなどを、脂質シェル又は脂質凝集体内に封入することにより形成される脂質媒体のインビトロ調製物を包含する一般名である。リポソームは、一般的にリン脂質を含む二分子膜を伴う小胞構造、及び一般的に水性組成物を含む内部媒質を有するとして特徴付けられ得る。リポソームは、限定されないが、エマルジョン、発泡体、ミセル、不溶性単層、液晶、リン脂質分散液、層状層及び同様のものを含む。リポソームは単層リポソームであり得る。リポソームは多層リポソームであり得る。リポソームは多胞性リポソームであり得る。リポソームは、正に荷電し得る、負に荷電し得る、又は中性に荷電し得る。特定の実施形態では、リポソームは中性に荷電している。リポソームは、標準的な小胞形成脂質から形成することができ、それは、一般的に、中性及び負に荷電したリン脂質ならびにステロール、例えばコレステロールなどを含む。脂質の選択は、一般的に、所望の目的、例えば、インビボ送達についての基準、例えばリポソームのサイズ、酸の不安定性、及び血流中でのリポソームの安定性などの考慮により導かれる。多様な方法が、リポソームを調製するために利用可能であり、例えば、Ｓｚｏｋａｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．９；４６７（１９８０）、米国特許第４，２３５，８７１号、第４，５０１，７２８号、第４，５０１，７２８号、第４，８３７，０２８号、及び第５，０１９，３６９号において記載されているとおりであり、各々が、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。
多重層リポソームが、一般的に、リン脂質を含む脂質を過剰の水溶液中に懸濁した場合に自発的に生成されて、複数の脂質層が水性媒質により分離されるようになる。水及び溶解された溶質は、脂質成分の自己再構成後に、脂質二重層の間の閉じた構造中に封入される。所望のカーゴ（例、ポリペプチド、核酸、小分子薬、操作された核酸、例えば、本明細書中に記載される操作された核酸のいずれかなど、ウイルスベクター、ウイルスベースの送達系など）を、リポソームの水性内部中にカプセル化するか、リポソーム及びポリペプチド／核酸の両方に会合する連結分子を介してリポソームに付着させるか、リポソームの脂質二重層内に散在させるか、リポソーム中に封入するか、リポソームと複合体を形成させるか、又は、そうでなければ、リポソームと会合させることができ、それを標的実体に送達できるようにする。親油性分子又は親油性領域を伴う分子がまた、脂質二重層中に溶解し得る又はそれと会合し得る。
本実施形態に従って使用されるリポソームは、当業者に公知であり得るように、異なる方法により作製することができる。リポソームの調製は、ＷＯ２０１６／２０１３２３、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ８５／０１１６１及びＰＣＴ／ＵＳ８９／０５０４０、ならびに米国特許４，７２８，５７８、４，７２８，５７５、４，７３７，３２３、４，５３３，２５４、４，１６２，２８２、４，３１０，５０５、及び４，９２１，７０６においてさらに詳細に記載されており；各々が、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。
リポソームはカチオン性リポソームであり得る。カチオン性リポソームの例は、米国特許第５，９６２，０１６号；第５，０３０，４５３号；第６，６８０，０６８号、米国出願２００４／０２０８９２１、ならびに国際特許出願ＷＯ０３／０１５７５７Ａ１、ＷＯ０４０２９２１３Ａ２、及びＷＯ０２／１００４３５Ａ１においてさらに詳細に記載されており、各々が、それらの全体において、参照により本明細書により組み入れられる。
脂質媒介性遺伝子送達方法は、例えば、ＷＯ９６／１８３７２；ＷＯ９３／２４６４０；Ｍａｎｎｉｎｏ ＆Ｇｏｕｌｄ－Ｆｏｇｅｒｉｔｅ，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６（７）：６８２－６９１（１９８８）；米国特許第５，２７９，８３３号 Ｒｏｓｅ 米国特許第５，２７９，８３３号；ＷＯ９１／０６３０９；及びＦｅｌｇｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８４：７４１３－７４１４（１９８７）において記載されており、各々が、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。
エキソソームは、エンドサイトーシス起源の小さな膜小胞であり、それは、多小胞体と原形質膜との融合後に細胞外環境中に放出される。エキソソームのサイズは、直径３０～１００ｎｍの間の範囲である。それらの表面は、ドナー細胞の細胞膜からの脂質二重層からなり、それらは、エキソソームを産生した細胞からのサイトゾルを含み、表面上に親細胞からの膜タンパク質を示す。核酸の送達のために有用なエキソソームは、当業者に公知であり、例えば、米国特許第９，８８９，２１０号においてより詳細に記載されているエキソソームであり、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。
本明細書中で使用されるように、用語「細胞外小胞」又は「ＥＶ」は、内部空間を封入する膜を含む細胞由来の小胞を指す。一般的に、細胞外小胞は、それらが由来する細胞よりも小さな直径を有する全ての膜結合小胞を含む。一般的に、細胞外小胞は、直径２０ｎｍ～１０００ｎｍの範囲であり、細胞外小胞の外面上に呈される内部空間内で、及び／又は膜にわたるかのいずれかの、様々な高分子カーゴを含み得る。カーゴは、核酸（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか）、タンパク質、炭水化物、脂質、小分子、及び／又はそれらの組み合わせを含み得る。例として、限定されないが、細胞外小胞は、アポトーシス小体、細胞の断片、直接又は間接操作（例、連続的な押し出し又はアルカリ溶液での処理による）による細胞から由来する小胞、小胞化オルガネラ、及び生細胞により産生される小胞（例、直接的な原形質膜の出芽又は後期エンドソームと原形質膜との融合による）を含む。細胞外小胞は、生存生物又は死滅生物、外植された組織もしくは器官、及び／又は培養細胞に由来し得る。
本明細書中で使用されるように、用語「エキソソーム」は、内部空間を取り囲む膜を含み、直接的な原形質膜の出芽又は後期エンドソームと原形質膜との融合により細胞から生成される細胞由来の小さな（直径２０～３００ｎｍ、より好ましくは直径４０～２００ｎｍの）小胞を指す。エキソソームは、脂質又は脂肪酸及びポリペプチドを含み、場合により、ペイロード（例、治療薬剤）、レシーバ（例、標的化部分）、ポリヌクレオチド（例、核酸、ＲＮＡ、又はＤＮＡ、例えば、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかなど）、糖（例、単糖、多糖、又はグリカン）、又は他の分子を含む。エキソソームは、産生細胞から由来し、そのサイズ、密度、生化学的パラメーター、又はそれらの組み合わせに基づいて産生細胞から単離することができる。エキソソームは、細胞外小胞の一種である。一般的に、エキソソーム産生／生合成は、産生細胞の破壊をもたらさない。エキソソーム及びエキソソームの調製は、ＷＯ２０１６／２０１３２３においてさらに詳細に記載されており、それは、その全体において参照により本明細書により組み入れられる。
本明細書中で使用されるように、用語「ナノ小胞」（また、「マイクロ小胞」として言及される）は、内部空間を取り囲む膜を含み、直接又は間接操作により細胞から生成される、細胞由来の小さな（直径２０～２５０ｎｍ、より好ましくは直径３０～１５０ｎｍの間の）小胞を指し、当該ナノ小胞は、当該操作を伴うことなく、当該産生細胞により産生されないようにする。一般的に、ナノ小胞は、細胞外小胞の亜種である。産生細胞の適した操作は、限定されないが、連続押出し、アルカリ性溶液での処理、超音波処理、又はそれらの組み合わせを含む。ナノ小胞の産生は、一部の例では、当該産生細胞の破壊をもたらし得る。好ましくは、ナノ小胞の集団は、原形質膜からの直接出芽又は後期エンドソームと原形質膜との融合により産生細胞から由来する小胞を実質的に含まない。ナノ小胞は、脂質又は脂肪酸及びポリペプチドを含み、場合により、ペイロード（例、治療薬剤）、レシーバ（例、標的化部分）、ポリヌクレオチド（例、核酸、ＲＮＡ、又はＤＮＡ、例えば、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかなど）、糖（例、単糖、多糖、又はグリカン）、又は他の分子を含む。ナノ小胞は、一度、それが当該操作に従って産生細胞から誘導されると、そのサイズ、密度、生化学的パラメーター、又はそれらの組み合わせに基づいて産生細胞から単離され得る。
脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）は、一般的に、脂質の両親媒性の性質に依存して膜及び小胞様の構造を形成する合成脂質構造である（Ｒｉｌｅｙ ２０１７）。一般的に、これらの小胞は、標的細胞の膜中に吸収され、カーゴをサイトゾル中に放出することにより、カーゴ／ペイロード、例えば、本明細書中に記載される、操作された核酸又はウイルス系のいずれかなどを送達する。ＬＮＰ形成において使用される脂質は、カチオン性、アニオン性、又は中性であり得る。脂質は、合成又は天然由来、一部の例では生分解性であり得る。脂質は、脂肪、コレステロール、リン脂質、限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）コンジュゲート（ＰＥＧ化脂質）を含む脂質コンジュゲート、ワックス、油、グリセリド、及び脂溶性ビタミンを含み得る。脂質組成物は、一般的に、材料の定義された混合物、例えばカチオン性、中性、アニオン性、及び両親媒性脂質などを含む。一部の例では、特定の脂質を含めて、ＬＮＰ凝集を防止する、脂質酸化を防止する、又は追加部分の付着を促進する機能的な化学基を提供する。脂質組成は、全体的なＬＮＰサイズ及び安定性に影響し得る。一例では、脂質組成物は、ジリノレイルメチル－４－ジメチルアミノブチレート（ＭＣ３）又はＭＣ３様分子を含む。ＭＣ３及びＭＣ３様脂質組成物は、一つ又は複数の他の脂質、例えばＰＥＧ又はＰＥＧコンジュゲート脂質、ステロール、又は中性脂質などを含むように製剤化することができる。また、ＬＮＰをさらに操作又は機能化して、特定の細胞型の標的化を促進することができる。ＬＮＰ設計における別の考慮事項は、標的化効率と細胞傷害性のバランスである。
ミセルは、一般的に、単鎖脂質を使用して形成される球状の合成脂質構造であり、ここで、単鎖脂質の親水性の頭部が外層又は膜を形成し、単鎖脂質の疎水性の尾部がミセル中心を形成する。ミセルは、典型的には、脂質単層のみを含む脂質構造を指す。ミセルは、Ｑｕａｄｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１７ Ｊｕｌ ５；２５（７）：１５０１－１５１３）においてさらに詳細に記載されており、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。
核酸ベクター、例えば、血清に直接曝露された発現ベクターなどは、血清ヌクレアーゼによる核酸の分解又は遊離核酸による免疫系のオフターゲット刺激を含む、いくつかの望ましくない結果を有し得る。同様に、血清に直接曝露されたウイルス送達系は、望ましくない免疫応答及び／又はウイルス送達系の中和を誘発し得る。従って、操作された核酸及び／又はウイルス送達系のカプセル化を使用して、分解を回避する一方で、また、潜在的なオフターゲットの影響を回避することができる。特定の例では、操作された核酸及び／又はウイルス送達系は、送達媒体内、例えばＬＮＰの水性内部内に完全にカプセル化される。ＬＮＰ内での操作された核酸及び／又はウイルス送達系のカプセル化は、当業者に周知の技術、例えば、マイクロ流体混合及びマイクロ流体液滴生成デバイス上で行われる液滴生成などにより行うことができる。そのようなデバイスは、限定されないが、標準的なＴジャンクションデバイス又はフローフォーカシングデバイスを含む。一例では、所望の脂質製剤、例えばＭＣ３又はＭＣ３様含有組成物が、操作された核酸又はウイルス送達系及び任意の他の所望の薬剤と並行して液滴生成デバイスに提供され、送達ベクター及び所望の薬剤を、ＭＣ３又はＭＣ３様ベースのＬＮＰの内部内に完全にカプセル化するようにする。一例では、液滴生成デバイスは、産生されるＬＮＰのサイズ範囲及びサイズ分布を制御することができる。例えば、ＬＮＰは、直径１～１０００ナノメートルの範囲のサイズ、例えば、１、１０、５０、１００、５００、又は１０００ナノメートルを有し得る。液滴生成に続いて、カーゴ／ペイロードをカプセル化する送達媒体（例、操作された核酸及び／又はウイルス送達系）をさらに処理又は操作して、投与用にそれらを調製することができる。
ナノ粒子送達
ナノ材料を使用して、操作された核酸（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか）を送達することができる。ナノ材料媒体は、重要なことに、非免疫原性材料で作ることができ、一般的に、その送達ベクター自体に対する免疫を誘発することを回避することができる。これらの材料は、限定されないが、脂質（以前に記載されたとおり）、無機ナノ材料、及び他の高分子材料を含む。ナノ材料粒子は、Ｒｉｌｅｙ ｅｔ ａｌ．（Ｒｅｃｅｎｔ Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｎａｎｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ｆｏｒ ＧｅｎｅＤｅｌｉｖｅｒｙ－Ａ Ｒｅｖｉｅｗ．Ｎａｎｏｍａｔｅｒｉａｌｓ ２０１７，７（５），９４）において詳細に記載されており、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。
ゲノム編集系
ゲノム編集系は、操作された核酸、例えばキメラタンパク質（例、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質あるいは本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質のいずれか）の一つ又は複数をコードする操作された核酸などをコードするように、宿主ゲノムを操作するために使用することができる。一般的に、「ゲノム編集系」は、外来性遺伝子を宿主細胞のゲノム中に組み込むための任意の系を指す。ゲノム編集系は、限定されないが、トランスポゾン系、ヌクレアーゼゲノム編集系、及びウイルスベクターベースの送達プラットフォームを含む。
トランスポゾン系を使用して、操作された核酸、例えばキメラタンパク質（例、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質あるいは本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質のいずれか）の一つ又は複数をコードする操作された核酸などを宿主ゲノム中に組み込むことができる。トランスポゾンは、一般的に、カーゴ／ペイロード核酸及びトランスポザーゼに隣接する末端逆位反復（ＴＩＲ）を含む。トランスポゾン系は、ＴＩＲ隣接カーゴを伴って、シスにおいて又はトランスにおいてトランスポゾンを提供することができる。トランスポゾン系は、レトロトランスポゾン系又はＤＮＡトランスポゾン系であり得る。一般的に、トランスポゾン系は、カーゴ／ペイロード（例、操作された核酸）をランダムに宿主ゲノム中に組み込む。トランスポゾン系の例は、Ｔｃ１／ｍａｒｉｎｅｒトランスポゾンスーパーファミリーのトランスポゾン、例えばＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙトランスポゾン系などを使用した系を含み、Ｈｕｄｅｃｅｋ ｅｔ ａｌ．（Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ ＢｉｏｃｈｅｍＭｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１７ Ａｕｇ；５２（４）：３５５－３８０）、ならびに米国特許第６，４８９，４５８号、第６，６１３，７５２号、及び第７，９８５，７３９号においてさらに詳細に記載されており、それらの各々が、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。トランスポゾン系の別の例は、ＰｉｇｇｙＢａｃトランスポゾン系を含み、米国特許第６，２１８，１８５号及び第６，９６２，８１０号においてさらに詳細に記載されており、それらの各々が、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。
ヌクレアーゼゲノム編集系は、操作された核酸、例えばキメラタンパク質（例、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質あるいは本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質のいずれか）の一つ又は複数をコードする操作された核酸などをコードするように、宿主ゲノムを操作するために使用することができる。理論に拘泥することを望まないが、一般的に、外来性遺伝子を導入するために使用されるヌクレアーゼ媒介性遺伝子編集系は、細胞の天然ＤＮＡ修復機構、特に相同組換え（ＨＲ）修復経路を利用する。簡単には、ゲノムＤＮＡへの損傷（典型的には二本鎖切断）に続いて、細胞は、損傷を修復するためのＤＮＡ合成時に、その５’と３’の両方の末端に同一又は実質的に同一の配列を有する別のＤＮＡ供給源をテンプレートとして使用することにより、損傷を解消することができる。天然の状況では、ＨＤＲは、細胞中に存在する他の染色体をテンプレートとして使用することができる。遺伝子編集系では、外来性ポリヌクレオチドを細胞中に導入し、相同組換えテンプレート（ＨＲＴ又はＨＲテンプレート）として使用する。一般的に、ＨＲＴ（例、遺伝子又は遺伝子の一部）内の５’及び３’相補的末端の間に含まれる損傷を伴う、染色体に本来は見出されない任意の追加の外来性配列を、テンプレート化されたＨＤＲ中に所与のゲノム遺伝子座中に組み入れる（即ち、組み込む）ことができる。このように、所与のゲノム遺伝子座についての典型的なＨＲテンプレートは、内因性ゲノム標的遺伝子座の第一領域と同一のヌクレオチド配列、内因性ゲノム標的遺伝子座の第二領域と同一のヌクレオチド配列、及びカーゴ／ペイロードヌクレオチド配列（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか、例えば、一つ又は複数のキメラタンパク質をコードする操作された核酸のいずれか（例、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質あるいは本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質のいずれか））をコードするヌクレオチド配列を有する。
一部の例では、ＨＲテンプレートは直線状であり得る。直線状ＨＲテンプレートの例は、限定されないが、直線化したプラスミドベクター、ｓｓＤＮＡ、合成ＤＮＡ、及びＰＣＲ増幅ＤＮＡを含む。特定の例では、ＨＲテンプレートは環状であり得る、例えばプラスミドなど。環状テンプレートは、スーパーコイル状のテンプレートを含み得る。
ＨＲテンプレートの５’及び３’末端で見出される同一又は実質的に同一の配列は、導入される外来性配列に関して、一般的にアーム（ＨＲアーム）として言及される。ＨＲアームは、内因性ゲノム標的遺伝子座の領域と同一（即ち、１００％同一）であり得る。ＨＲアームは、一部の例では、内因性ゲノム標的遺伝子座の領域と実質的に同一であり得る。実質的に同一のＨＲアームを使用することができる一方で、ＨＲアームが同一であることが有利であり得るが、なぜなら、ＨＤＲ経路の効率は、１００％未満の同一性を有するＨＲアームにより影響され得るためである。
各ＨＲアーム、即ち５’及び３’ＨＲアームは、同じサイズ又は異なるサイズであり得る。各ＨＲアームの長さは、各々が、５０、１００、２００、３００、４００、もしくは５００塩基を上回る又はそれと等しくすることができる。ＨＲアームは、一般的に、任意の長さとすることができるが、実際的な考慮事項、例えば全体的な編集効率に対するＨＲアームの長さ及び全体的なテンプレートサイズの影響なども考慮に入れることができる。ＨＲアームは、切断部位に直に隣接する内因性ゲノム標的遺伝子座の領域と同一、又は実質的に同一であり得る。各ＨＲアームは、切断部位に直に隣接する内因性ゲノム標的遺伝子座の領域と同一、又は実質的に同一であり得る。各ＨＲアームは、切断部位からある特定の距離内、例えば、互いに１塩基対、１０塩基対未満もしくはそれと等しい、５０塩基対未満もしくはそれと等しい、又は１００塩基対未満もしくはそれと等しい、などにある内因性ゲノム標的遺伝子座の領域と同一、又は実質的に同一であり得る。
ヌクレアーゼゲノム編集系は、限定されないが、クラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）ファミリーヌクレアーゼ又はその誘導体、転写アクチベーター様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）又はその誘導体、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）又はその誘導体、及びホーミングエンドヌクレアーゼ（ＨＥ）又はその誘導体を含む、様々なヌクレアーゼを使用して、標的ゲノム遺伝子座を切断することができる。
ＣＲＩＳＰＲ媒介性遺伝子編集系は、操作された核酸、例えばキメラタンパク質（例、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質あるいは本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質のいずれか）の一つ又は複数をコードする操作された核酸などをコードするように、宿主ゲノムを操作するために使用することができる。ＣＲＩＳＰＲ系は、Ｍ．Ａｄｌｉ（“Ｔｈｅ ＣＲＩＳＰＲ ｔｏｏｌ ｋｉｔ ｆｏｒ ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ ａｎｄ ｂｅｙｏｎｄ” Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ；ｖｏｌｕｍｅ ９（２０１８），Ａｒｔｉｃｌｅ ｎｕｍｂｅｒ：１９１１）においてさらに詳細に記載されており、それが教示する全てについて、参照により本明細書中に組み入れられる。一般的に、ＣＲＩＳＰＲ媒介性の遺伝子編集系は、ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）ヌクレアーゼ及び特定の標的配列に切断を方向付けるＲＮＡを含む。例示的なＣＲＩＳＰＲ媒介性の遺伝子編集系は、Ｃａｓ９ヌクレアーゼならびにＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ（ｃｒＲＮＡ）ドメイン及びトランス活性化ＣＲＩＳＰＲ（ｔｒａｃｒＲＮＡ）ドメインを有するＲＮＡで構成されるＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９系である。ｃｒＲＮＡは、典型的には、二つのＲＮＡドメイン：塩基対ハイブリダイゼーションを通じて標的配列（「定義されたヌクレオチド配列」）、例えば、ゲノム配列に特異性を方向付けるガイドＲＮＡ配列（ｇＲＮＡ）；及びｔｒａｃｒＲＮＡにハイブリダイズするＲＮＡドメインを有する。ｔｒａｃｒＲＮＡは、ヌクレアーゼ（例、Ｃａｓ９）と相互作用し、それにより、ゲノム遺伝子座への動員を促進することができる。ｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡポリヌクレオチドは、別々のポリヌクレオチドであり得る。ｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡポリヌクレオチドは、単一のポリヌクレオチドであり得るが、単一のガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）としても言及される。Ｃａｓ９系を本明細書中に例証する一方で、他のＣＲＩＳＰＲ系を使用することができ、例えばＣｐｆ１系などである。ヌクレアーゼは、その誘導体、例えばＣａｓ９機能性変異体など、例えば、Ｃａｓ９酵素により典型的に産生される完全な二本鎖切断とは対照的に、一般的に、定義されたヌクレオチド配列の一本鎖のみの切断を媒介するＣａｓ９「ニッカーゼ」変異体を含み得る。
一般的に、ＣＲＩＳＰＲ系の成分は、互いに相互作用してリボ核タンパク質（ＲＮＰ）複合体を形成し、配列特異的な切断を媒介する。一部のＣＲＩＳＰＲ系では、各成分を別々に産生し、使用して、ＲＮＰ複合体を形成することができる。一部のＣＲＩＳＰＲ系では、各成分をインビトロで別々に産生し、インビトロで互いに接触させて（即ち、「複合体化させて」）ＲＮＰ複合体を形成することができる。インビトロで産生されたＲＮＰを次に、細胞のサイトゾル及び／又は核、例えば、Ｔ細胞のサイトゾル及び／又は核中に導入（即ち、「送達」）することができる。限定されないが、エレクトロポレーション、脂質媒介性トランスフェクション、物理的手段による細胞膜変形、脂質ナノ粒子（ＬＮＰ）、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）、及び超音波処理を含む、様々な手段により、インビトロで産生されたＲＮＰ複合体は細胞に送達することができる。特定の例では、インビトロで産生されたＲＮＰ複合体を、Ｎｕｃｌｅｏｆａｃｔｏｒ／Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｉｏｎ（登録商標）エレクトロポレーションベースの送達系（Ｌｏｎｚａ（登録商標））を使用して細胞に送達することができる。他のエレクトロポレーション系は、限定されないが、ＭａｘＣｙｔｅエレクトロポレーション系、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＣｌｉｎｉＭＡＣＳエレクトロポレーション系、Ｎｅｏｎエレクトロポレーション系、及びＢＴＸエレクトロポレーション系を含む。ＣＲＩＳＰＲヌクレアーゼ、例えば、Ｃａｓ９は、当技術分野において公知の様々なタンパク質産生技術を使用して、インビトロで産生（即ち、合成及び精製）することができる。ＣＲＩＳＰＲ系ＲＮＡ、例えば、ｓｇＲＮＡは、当業者に公知の様々なＲＮＡ生成技術、例えばインビトロ転写又は化学合成などを使用して、インビトロで産生（即ち、合成及び精製）することができる。
インビトロで産生されたＲＮＰ複合体は、ヌクレアーゼとｇＲＮＡの異なる比率で複合体化することができる。インビトロで産生されたＲＮＰ複合体はまた、ＣＲＩＳＰＲ媒介性の編集系において異なる量で使用することができる。例えば、編集されることが望まれる細胞の数に依存して、加えられるＲＮＰの総量を調整することができ、例えば、反応において多数の細胞を編集する場合に加えられるＲＮＰ複合体の量における低下などである。
一部のＣＲＩＳＰＲ系では、各成分（例、Ｃａｓ９及びｓｇＲＮＡ）は、ポリヌクレオチドにより別々にコードされ、各ポリヌクレオチドは一緒に又は別々に細胞中に導入することができる。一部のＣＲＩＳＰＲ系では、各成分は、単一のポリヌクレオチド（即ち、マルチプロモーター又はマルチシストロンベクター、以下の例示的なマルチシストロン系の説明を参照のこと）によりコードされ、細胞中に導入することができる。細胞内での各ポリヌクレオチドにコードされたＣＲＩＳＰＲ成分の発現（例、ヌクレアーゼの翻訳及びＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡの転写）後、ＲＮＰ複合体を細胞内で形成させることができ、次に、部位特異的切断に方向付けることができる。
一部のＲＮＰは、核中へのＲＮＰの送達を促進する部分を有するように操作することができる。例えば、Ｃａｓ９ヌクレアーゼは、核局在化シグナル（ＮＬＳ）ドメインを有し得るが、Ｃａｓ９ ＲＮＰ複合体が、細胞のサイトゾル中に送達される場合、又はＣａｓ９の翻訳及びその後のＲＮＰ形成後に、ＮＬＳは、核中へのＣａｓ９ ＲＮＰのさらなる輸送を促進することができる。
本明細書中に記載されている、操作された細胞は、非ウイルス方法を使用して操作することができ、例えば、本明細書中に記載されるヌクレアーゼ及び／又はＣＲＩＳＰＲ媒介性の遺伝子編集系は、非ウイルス方法を使用して細胞に送達することができる。本明細書中に記載されている、操作された細胞は、ウイルス方法を使用して操作することができ、例えば、本明細書中に記載されるヌクレアーゼ及び／又はＣＲＩＳＰＲ媒介性の遺伝子編集系は、ウイルス方法、例えばアデノウイルス、レトロウイルス、レンチウイルス、又は本明細書中に記載される他のウイルスベースの送達方法のいずれかを使用して細胞に送達することができる。
一部のＣＲＩＳＰＲ系では、二つ以上のＣＲＩＳＰＲ組成物を提供することができ、各々が、同じ遺伝子又は一般的なゲノム遺伝子座を、二つ以上の標的ヌクレオチド配列で別々に標的化するようにする。例えば、二つの別々のＣＲＩＳＰＲ組成物を提供して、互いの特定の距離内の二つの異なる標的ヌクレオチド配列での切断に方向付けることができる。一部のＣＲＩＳＰＲ系では、二つ以上のＣＲＩＳＰＲ組成物を提供することができ、各々が、同じ遺伝子又は一般的なゲノム遺伝子座の逆ストランドを別々に標的化するようにする。例えば、二つの別々のＣＲＩＳＰＲ「ニッカーゼ」組成物を提供して、逆ストランド上の同じ遺伝子又は一般的なゲノム遺伝子座で切断に方向付けることができる。
一般的に、本明細書中に記載されるＣＲＩＳＰＲ媒介性の編集系の特色を、他のヌクレアーゼベースのゲノム編集系に適用することができる。ＴＡＬＥＮは、操作された部位特異的ヌクレアーゼであって、それは、ＴＡＬＥ（転写アクチベーター様エフェクター）のＤＮＡ結合ドメイン及び制限エンドヌクレアーゼＦｏｋｌの触媒ドメインで構成される。ＤＮＡ結合ドメインの単量体の高度に可変的な残基領域中に存在するアミノ酸を変化させることにより、異なる人工ＴＡＬＥＮを作製して様々なヌクレオチド配列を標的化することができる。ＤＮＡ結合ドメインによって、その後、ヌクレアーゼが標的配列に方向付けられ、二本鎖切断が作製される。ＴＡＬＥＮベースの系は、米国通し番号第１２／９６５，５９０号；米国特許第８，４５０，４７１号；米国特許第８，４４０，４３１号；米国特許第８，４４０，４３２号；米国特許第１０，１７２，８８０号；及び米国通し番号第１３／７３８，３８１号においてより詳細に記載されており、それらの全てが、それらの全体において参照により本明細書中に組み入れられる。ＴＡＬＥＮベースの編集系は、米国特許第６，４５３，２４２号；第６，５３４，２６１号；第６，５９９，６９２号；第６，５０３，７１７号；第６，６８９，５５８号；第７，０３０，２１５号；第６，７９４，１３６号；第７，０６７，３１７号；第７，２６２，０５４号；第７，０７０，９３４号；第７，３６１，６３５号；第７，２５３，２７３号；及び米国特許公開第２００５／００６４４７４号；第２００７／０２１８５２８号；第２００５／０２６７０６１号においてさらに詳細に記載されており、全てが、それらの全体において、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。
他の改変送達系
操作された核酸（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか）を細胞又は他の標的レシピエント実体、例えば、本明細書中に記載される脂質構造のいずれかなどの中に導入するための様々な追加の手段。
エレクトロポレーションを使用して、ポリヌクレオチドをレシピエント実体に送達することができる。エレクトロポレーションは、電界を適用して、標的細胞又は実体の外膜又はシェルを一時的に透過させることを通じて、カーゴ／ペイロードを標的細胞又は実体の内部コンパートメント中に内在化させる方法である。一般的に、この方法は、目的のカーゴ（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか）を含む溶液中の二つの電極の間に細胞又は標的実体を配置することを含む。細胞の脂質膜を次に、一過性の設定電圧を適用することにより破壊、即ち、透過させ、それによって、カーゴが、実体の内部、例えば、細胞の細胞質に進入することが可能になる。細胞の例では、細胞の大部分ではないが、少なくとも一部は生存可能なままである。細胞及び他の実体を、インビトロ、インビボ、又はエクスビボでエレクトロポレーションすることができる。エレクトロポレーション条件（例、細胞の数、カーゴの濃度、回復条件、電圧、時間、容量、パルスタイプ、パルス長、容積、キュベット長、エレクトロポレーション溶液の組成など）は、限定されないが、細胞又は他のレシピエント実体の種類、送達されるカーゴ、所望の内在化の効率、及び所望の生存率を含む、いくつかの要因に依存して変動する。そのような基準の最適化は、当業者の技術の範囲内である。様々なデバイス及びプロトコールをエレクトロポレーションのために使用することができる。例は、限定されないが、Ｎｅｏｎ（登録商標）トランスフェクション系、ＭａｘＣｙｔｅ（登録商標）Ｆｌｏｗ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ（商標）、Ｌｏｎｚａ（登録商標）Ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ（商標）系、及びＢｉｏ－Ｒａｄ（登録商標）エレクトロポレーション系を含む。
操作された核酸（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか）を細胞又は他の標的レシピエント実体中に導入するための他の手段は、限定されないが、超音波処理、遺伝子銃、流体力学的注射、及び物理的手段による細胞膜変形を含む。
操作されたｍＲＮＡ、例えばネイキッドプラスミド又はｍＲＮＡなどをインビボで送達するための組成物及び方法が、Ｋｏｗａｌｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（Ｍｏｌ Ｔｈｅｒ．２０１９ Ａｐｒ １０；２７（４）：７１０－７２８）及びＫａｃｚｍａｒｅｋ ｅｔ ａｌ．（ＧｅｎｏｍｅＭｅｄ．２０１７；９：６０）において詳細に記載されており、各々が、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。
送達媒体
また、本明細書中で提供されるのは、カーゴ／ペイロード（「送達媒体」）を送達するための組成物である。
カーゴは、上に記載されるように、核酸（例、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれか、例えば、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質あるいは本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質を含むキメラタンパク質をコードする、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかなど）を含み得る。カーゴは、タンパク質、炭水化物、脂質、小分子、及び／又はそれらの組み合わせを含み得る。カーゴは、本明細書中で提供されるキメラタンパク質のいずれか（例、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質あるいは本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質のいずれか）であることができる。カーゴは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質、例えば、本明細書中に記載されるキメラタンパク質の二つ以上の組み合わせであることができる。カーゴは、本明細書中に記載されるキメラタンパク質と、目的の別のカーゴ、例えば別のタンパク質、炭水化物、脂質、小分子、及び／又はそれらの組み合わせなどとの組み合わせであることができる。
送達媒体は、カーゴを送達するために適切な任意の組成物を含み得る。送達媒体は、タンパク質（例、本明細書中に記載されるキメラタンパク質のいずれか）を送達するために適切な任意の組成物を含み得る。送達媒体は、本明細書中に記載される脂質構造送達系のいずれかであることができる。例えば、送達媒体は、限定されないが、脂質ベースのナノ粒子、リポソーム、ミセル、エキソソーム、小胞、細胞外小胞、細胞、又は組織を含む、脂質ベースの構造体であることができる。送達媒体は、本明細書中に記載されるナノ粒子、例えば脂質（以前に記載されたとおり）、無機ナノ材料、及び他の高分子材料を含むナノ粒子などのいずれかであることができる。
送達媒体は、カーゴを細胞に送達する、例えば、本明細書中に記載されるキメラタンパク質のいずれかを細胞に送達するなど、が可能であり得る。送達媒体は、カーゴを細胞に送達する、例えば、本明細書中に記載されるキメラタンパク質のいずれかを細胞に送達するなど、が可能であり得る。送達媒体は、特定の細胞を標的化するよう構成する、例えば、特定の細胞を標的化するための再配向抗体を用いて構成する、などができる。送達媒体は、カーゴを細胞にインビボで送達することが可能であり得る。
送達媒体は、組織又は組織環境（例、腫瘍微小環境）にカーゴを送達する、本明細書中に記載されるキメラタンパク質のいずれかを組織又は組織環境にインビボで送達する、などが可能であり得る。カーゴを送達することは、カーゴを分泌すること、例えば、本明細書中に記載されるキメラタンパク質のいずれかを分泌することなどを含み得る。したがって、送達媒体は、カーゴを分泌すること、例えば、本明細書中に記載されるキメラタンパク質のいずれかを分泌すること、などが可能であり得る。送達媒体は、組織又は組織環境（例、腫瘍微小環境）にカーゴを分泌すること、例えば、本明細書中に記載されるキメラタンパク質のいずれかを組織又は組織環境中に分泌すること、などが可能であり得る。送達媒体は、特定の組織又は組織環境（例、腫瘍微小環境）を標的化するように構成され得る、例えば、特定の組織又は組織環境を標的化するように再配向抗体を用いて構成され得る。
治療の方法
さらに本明細書中で提供されるのは、操作された細胞により産生される、少なくとも一つの目的のタンパク質（例、本明細書中で提供されるキメラタンパク質のいずれか、例えば、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質あるいは本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質など、あるいはキメラタンパク質のプロテアーゼ切断後に本明細書中で提供される分泌エフェクター分子）をインビボで産生するために、本明細書中で提供される操作された細胞を対象（例、ヒト対象）に送達する、又は投与することを含む方法である。本明細書中でさらに提供されるのは、操作された細胞により産生される、目的の少なくとも二つのタンパク質、例えば、本明細書中で提供されるキメラタンパク質の少なくとも二つ、例えば、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質あるいは本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質などをインビボで産生するために、本明細書中で提供される、操作された細胞を対象（例、ヒト対象）に送達する、又は投与することを含む方法である。
本明細書中でさらに提供されるのは、本明細書中に記載される送達媒体のいずれか、例えば、本明細書中に記載される目的のタンパク質のいずれか、例えば、本明細書中で提供されるキメラタンパク質のいずれか、例えば、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質あるいは本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質などを含む、本明細書中に記載される送達媒体のいずれかなどを対象（例、ヒト対象）に送達する、又は投与することを含む方法である。本明細書中でさらに提供されるのは、本明細書中に記載される送達媒体のいずれか、例えば、本明細書中で提供されるキメラタンパク質、例えば、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質あるいは本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質などの二つ以上のタンパク質、例えば、少なくとも二つを含む、本明細書中に記載される送達媒体のいずれかなどを対象（例、ヒト対象）に送達する、又は投与することを含む方法。
一部の実施形態では、操作された細胞又は送達媒体は、静脈内、腹腔内、気管内、皮下、腫瘍内、経口、肛門、鼻腔内（例、送達粒子中に封入される）、又は動脈（例、内頸動脈）経路を介して投与される。このよに、操作された細胞又は送達媒体は、全身的又は局所的に（例、ＴＭＥに、又は腫瘍内投与を介して）投与され得る。操作された細胞は、対象、例えば、癌を有することが公知である又は疑われる対象などから単離することができる。操作された細胞は、治療が施されている対象に関して同種であり得る。同種改変細胞は、治療が施されている対象にＨＬＡ適合させることができる。送達媒体は、本明細書中に記載される脂質構造送達系のいずれかであることができる。送達媒体は、本明細書中に記載されるナノ粒子のいずれかであることができる。
操作された細胞又は送達媒体は、治療すべき状態に依存的に、単独で、又は他の治療との組み合わせにおいて、同時投与又は連続的のいずれかで投与することができる。例えば、操作された細胞又は送達媒体は、本明細書中に記載される一つ又は複数のＩＭｉＤとの組み合わせにおいて投与することができる。ＦＤＡ承認済みＩＭｉＤは、それらの承認された様式において投与することができる。別の実施例では、操作された細胞又は送達媒体は、チェックポイントインヒビター治療との組み合わせにおいて投与することができる。例示的なチェックポイントインヒビターは、限定されないが、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭl抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体を含む。例証的な免疫チェックポイントインヒビターは、ペムブロリズマブ（抗ＰＤ－１；ＭＫ－３４７５／Ｋｅｙｔｒｕｄａ（登録商標）－Ｍｅｒｃｋ）、ニボルマブ（抗ＰＤ－１；Ｏｐｄｉｖｏ（登録商標）－ＢＭＳ）、ピディリズマブ（抗ＰＤ－１抗体；ＣＴ－０１１－Ｔｅｖａ／ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＡＭＰ２２４（抗ＰＤ－１；ＮＣＩ）、アベルマブ（抗ＰＤ－Ｌ１；Ｂａｖｅｎｃｉｏ（登録商標）－Ｐｆｉｚｅｒ）、デュルバルマブ（抗ＰＤ－Ｌ１；ＭＥＤＩ４７３６／Ｉｍｆｉｎｚｉ（登録商標）－Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、アテゾリズマブ（抗ＰＤ－Ｌ１）；Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ（登録商標）－Ｒｏｃｈｅ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＢＭＳ－９３６５５９（抗ＰＤ－Ｌ１－ＢＭＳ）、トレメリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４；Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、イピリムマブ（抗ＣＴＬＡ－４；Ｙｅｒｖｏｙ（登録商標）－ＢＭＳ）、リリルマブ（抗ＫＩＲ；ＢＭＳ）、モナリズマブ（抗ＮＫＧ２Ａ；Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）を含む。他の例では、操作された細胞又は送達媒体は、ＴＧＦベータインヒビター、ＶＥＧＦインヒビター、又はＨＰＧＥ２との組み合わせにおいて投与することができる。別の例では、操作された細胞又は送達媒体は、抗ＣＤ４０抗体との組み合わせにおいて投与することができる。
一部の方法は、腫瘍（又は癌）を有する対象（又は患者集団）を選択すること、及び、その対象を、腫瘍媒介性免疫抑制機構を調節する、操作された細胞又は送達媒体で治療することを含む。
本開示の操作された細胞又は送達媒体は、一部の例では、癌、例えば卵巣癌などを治療するために使用され得る。他の癌が本明細書中に記載されている。例えば、操作された細胞は、膀胱腫瘍、脳腫瘍、乳房腫瘍、頸部腫瘍、結腸直腸腫瘍、食道腫瘍、神経膠腫、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、肺腫瘍、メラノーマ、卵巣腫瘍、膵臓腫瘍、前立腺腫瘍、皮膚腫瘍、甲状腺腫瘍、及び／又は子宮腫瘍を治療するために使用され得る。本開示の操作された細胞又は送達媒体は、対象の腹膜腔中に位置する腫瘍を伴う癌を治療するために使用することができる。
本明細書中で提供される方法はまた、操作された細胞又は送達媒体の調製物を送達することを含む。調製物は、一部の実施形態では、例えば、操作された細胞以外の細胞を５％未満（例、４％、３％、２％、又は１％未満）で含む、実質的に純粋な調製物である。調製物は、１×１０５細胞／ｋｇから１×１０７細胞／ｋｇの細胞を含み得る。操作された細胞又は送達媒体の調製は、一つ又は複数の医薬的に許容可能な担体を有する医薬組成物を含むことができる。例えば、操作された細胞又は送達媒体の調製物は、操作されたウイルス、例えば操作されたＡＡＶウイルスなどのいずれか、又は操作されたウイルスベクター、例えば本明細書中に記載されるＡＡＶベクターなどのいずれかを含むことができる。
インビボ発現
本明細書中で提供される方法はまた、本明細書中に記載される、操作された細胞を産生することが可能である、例えば、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかをインビボで細胞に送達することが可能である組成物をインビボで送達することを含む。そのような組成物は、ウイルス媒介性送達プラットフォームのいずれか、脂質構造送達系のいずれか、ナノ粒子送達系のいずれか、ゲノム編集系のいずれか、又は細胞をインビボで操作することが可能である、本明細書中に記載される他の操作送達系のいずれかを含む。
本明細書中で提供される方法はまた、本明細書中に記載される目的のタンパク質のいずれか、例えば、本明細書中で提供されるキメラタンパク質、例えば、本明細書中に記載されるデグロン融合キメラタンパク質あるいは本明細書中に記載される式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有する膜切断可能なキメラタンパク質などのいずれかを産生することが可能な組成物をインビボで送達することを含む。本明細書中で提供される方法はまた、本明細書中に記載される、目的のタンパク質の二つ以上を産生することが可能な組成物をインビボで送達することを含む。目的のタンパク質のインビボ産生が可能な組成物は、限定されないが、本明細書中に記載される、操作された核酸のいずれかを含む。目的のタンパク質のインビボ産生が可能な組成物は、ネイキッドｍＲＮＡ又はネイキッドプラスミドであり得る。
追加の実施形態
以下の段落は、追加の列挙される実施形態を提供する。
１．プロモーターと膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列とを含む発現カセットを含む操作された核酸であって、Ｎ末端からＣ末端に配向されており、式：
Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有し、
式中、
Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、
Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、
ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、かつ
Ｄはデグロンを含み、
プロモーターは、外因性ポリヌクレオチド配列に動作可能に連結され、かつＳ－Ｃ－ＭＴ－Ｄは、単一ポリペプチドとして発現されるように構成されている、操作された核酸。
２．プロモーターが構成的プロモーターである、段落１の操作された核酸。
３．構成的プロモーターが、ＣＡＧ、ＨＬＰ、ＣＭＶ、ＥＦＳ、ＳＦＦＶ、ＳＶ４０、ＭＮＤ、ＰＧＫ、ＵｂＣ、ｈＥＦ１ａＶ１、ｈＣＡＧＧ、ｈＥＦ１ａＶ２、ｈＡＣＴｂ、ｈｅＩＦ４Ａ１、ｈＧＡＰＤＨ、ｈＧＲＰ７８、ｈＧＲＰ９４、ｈＨＳＰ７０、ｈＫＩＮｂ、及びｈＵＢＩｂからなる群から選択される、段落２の操作された核酸。
４．プロモーターが誘導性プロモーターである、段落１～３のいずれか一つの操作された核酸。
５．誘導性プロモーターが、ｍｉｎＰ、ＮＦｋＢ応答エレメント、ＣＲＥＢ応答エレメント、ＮＦＡＴ応答エレメント、ＳＲＦ応答エレメント１、ＳＲＦ応答エレメント２、ＡＰ１応答エレメント、ＴＣＦ－ＬＥＦ応答エレメントプロモーター融合体、低酸素応答エレメント、ＳＭＡＤ結合エレメント、ＳＴＡＴ３結合部位、ｍｉｎＣＭＶ、ＹＢ＿ＴＡＴＡ、ｍｉｎＴＫ、誘導因子分子応答性プロモーター、及びそれらのタンデムリピートからなる群から選択される、段落４の操作された核酸。
６．プロモーターが合成プロモーターを含む、段落１～３のいずれか一つの操作された核酸。
７．プロモーターが組織特異的プロモーターである、段落１～３のいずれか一つの操作された核酸。
８．分泌性エフェクター分子がシグナルペプチドを含む、段落１～７のいずれか一つの操作された核酸。
９．シグナルペプチドが、分泌性エフェクター分子に対して天然である天然シグナルペプチドを含む、段落８の操作された核酸。
１０．シグナルペプチドが、分泌性エフェクター分子に対して非天然である非天然シグナルペプチドを含む、段落８の操作された核酸。
１１．非天然シグナルペプチドが、ＩＬ１２、ＩＬ２、最適化ＩＬ２、トリプシオンゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、マウスＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミンプレタンパク質、アズロシジンプレタンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ６、ＩＬ８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、ＩＬ２１、ＣＤ８、及びＧＭＣＳＦからなる群から選択される、段落１０の操作された核酸。
１２．分泌性エフェクター分子が治療クラスから選択され、治療クラスが、サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ペプチド、及び酵素からなる群から選択される、段落１～１１のいずれか一つの操作された核酸。
１３．サイトカインが、ＩＬ１－ベータ、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ１５、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１８、ＩＬ２１、ＩＬ２２、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン－ガンマ、及びＴＮＦ－アルファからなる群から選択される、段落１２の操作された核酸。
１４．ケモカインが、ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１からなる群から選択される、段落１２の操作された核酸。
１５．ホーミング分子が、抗インテグリンアルファ４、ベータ７；抗ＭＡｄＣＡＭ；ＳＤＦｌ；及びＭＭＰ－２からなる群から選択される、段落１２の操作された核酸。
１６．成長因子が、ＦＬＴ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦからなる群から選択される、段落１２の操作された核酸。
１７．共活性化分子が、４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌからなる群から選択される、段落１２の操作された核酸。
１８．腫瘍微小環境修飾因子が、アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータインヒビター、免疫チェックポイントインヒビター、ＶＥＧＦインヒビター、及びＨＰＧＥ２からなる群から選択される、段落１２の操作された核酸。
１９．ＴＧＦベータインヒビターが、抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－ＴＲＡＰ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、段落１８の操作された核酸。
２０．免疫チェックポイントインヒビターが、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭｌ抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体からなる群から選択される、段落１８の操作された核酸。
２１．ＶＥＧＦインヒビターが、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、又はそれらの組み合わせを含む、段落１８の操作された核酸。
２２．分泌性エフェクター分子がヒト由来エフェクター分子である、段落１～１８のいずれか一つの操作された核酸。
２３．プロテアーゼ切断部位が、１型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ切断部位、ＳＩＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、フリンプロテアーゼ切断部位、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ切断部位、マトリプターゼプロテアーゼ切断部位、マトリプターゼ－２プロテアーゼ切断部位、ＭＭＰ９プロテアーゼ切断部位、及びＮＳ３プロテアーゼ切断部位からなる群から選択されるプロテアーゼにより切断可能である、段落１～２２のいずれか一つの操作された核酸。
２４．細胞膜係留ドメインが膜貫通－細胞内ドメイン又は膜貫通ドメインを含む、段落１～２３のいずれか一つの操作された核酸。
２５．膜貫通－細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインが、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＥｐｏＲ、又はＢＴＬＡから由来する、段落２４の操作された核酸。
２６．細胞膜係留ドメインが細胞表面受容体、又はその細胞膜結合部分を含む、段落１～２３のいずれか一つの操作された核酸。
２７．細胞中で発現された場合、分泌性エフェクター分子が、細胞の細胞膜に係留される、段落１～２６のいずれか一つの操作された核酸。
２８．プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼを発現する細胞中で発現された場合、分泌性エフェクター分子が細胞膜から放出される、段落２７の操作された核酸。
２９．細胞膜上に発現されるプロテアーゼが、細胞に対して内因性である、段落２８の操作された核酸。
３０．プロテアーゼが、１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ－２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼからなる群から選択される、段落２９の操作された核酸。
３１．細胞膜上に発現されるプロテアーゼが、細胞に対して異種である、段落２８の操作された核酸。
３２．プロテアーゼがＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である、段落３１の操作された核酸。
３３．プロテアーゼ切断部位がＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含む、段落３２の操作された核酸。
３４．ＮＳ３プロテアーゼ切断部位が、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ接合部切断部位を含む、段落３３の操作された核酸。
３５．プロテアーゼが、プロテアーゼインヒビターにより抑制され得る、段落２８～３４のいずれか一つの操作された核酸。
３６．プロテアーゼインヒビターが、シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシロプレビルからなる群から選択される、段落３５の操作された核酸。
３７．プロテアーゼの発現が、調節が可能である、段落２８～３６のいずれか一つの操作された核酸。
３８．免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）への応答においてセレブロン（ＣＲＢＮ）に結合することが可能でありそれにより分泌性エフェクター分子のユビキチン経路媒介性分解を促進するセレブロン（ＣＲＢＮ）ポリペプチド基質ドメインを、デグロンが含む、段落１～３７のいずれか一つの操作された核酸。
３９．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインが、ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫlａ、ＺＦＰ９１、ＧＳＰＴ１、ＭＥＩＳ２、ＧＳＳ Ｅ４Ｆ１、ＺＮ２７６、ＺＮ５１７、ＺＮ５８２、ＺＮ６５３、ＺＮ６５４、ＺＮ６９２、ＺＮ７８７、及びＺＮ８２７、又はＣＲＢＮの薬物誘導性結合が可能なその断片からなる群から選択される、段落３８の操作された核酸。
４０．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインが、天然ＣＲＢＮポリペプチド配列のキメラ融合産物である、段落３８の操作された核酸。
４１． ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインが、ＦＮＶＬＭ ＶＨＫＲＳ ＨＴＧＣＥ ＩＣＧＦＴ ＣＲＱＫＧ ＮＬＬＲＨ ＩＫＬＨＴ ＧＥＫＰＦ ＫＣＨＬＣ ＮＹＡＣＱ ＲＲＤＡＬ（配列番号１８９）のアミノ酸配列を有するＩＫＺＦ３／ＺＦＰ９１／ＩＫＺＦ３キメラ融合産物である、段落３８の操作された核酸。
４２．ＩＭｉＤがＦＤＡ承認薬物である、段落３８～４１のいずれか一つの操作された核酸。
４３．ＩＭｉＤが、サリドマイド、レナリドミド、及びポマリドミドからなる群から選択される、段落３８～４２のいずれか一つの操作された核酸。
４４．デグロンが、ＨＣＶ ＮＳ４デグロン、ＰＥＳＴ（ヒトＩκＢαの残基２７７～３０７の二つのコピー）、ＧＲＲ（ヒトｐ１０５の残基３５２～４０８）、ＤＲＲ（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０～２９５）、ＳＮＳ（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（Ａ型インフルエンザ又はＢ型インフルエンザのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２）、ＲＰＢ（酵母ＲＰＢの残基１６８８～１７０２の四つのコピー）、ＳＰｍｉｘ（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（Ａ型インフルエンザウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２）、ＮＳ２（Ａ型インフルエンザウイルスＮＳタンパク質の残基７９～９３の三つのコピー）、ＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼの残基１０６～１４２）、Ｎｅｋ２Ａ、マウスＯＤＣ（残基４２２～４６１）、マウスＯＤＣ＿ＤＡ（Ｄ４３３Ａ及びＤ４３４Ａ点変異を含むｍＯＤＣの残基４２２～４６１）、ＡＰＣ／Ｃデグロン、ＣＯＰ１ Ｅ３リガーゼ結合デグロンモチーフ、ＣＲＬ４－Ｃｄｔ２結合ＰＩＰデグロン、アクチンフィリン結合デグロン、ＫＥＡＰ１結合デグロン、ＫＬＨＬ２及びＫＬＨＬ３結合デグロン、ＭＤＭ２結合モチーフ、Ｎ－デグロン、低酸素シグナル伝達におけるヒドロキシプロリン修飾、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＤＳＧｘｘＳ（配列番号１９０）リン依存的デグロン、Ｓｉａｈ結合モチーフ、ＳＰＯＰ ＳＢＣドッキングモチーフ、ならびにＰＣＮＡ結合ＰＩＰボックスからなる群から選択される、段落１～３６のいずれか一つの操作された核酸。
４５．デグロンが、細胞膜係留ドメインのＣ末端に局在化されている、段落１～４４のいずれか一つの操作された核酸。
４６．操作された核酸が、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、及びネイキッドプラスミドからなる群から選択される、段落１～４５のいずれか一つの操作された核酸。
４７．段落１～４６のいずれか一つの操作された核酸を含む発現ベクター。
４８．発現ベクターがウイルスベクターである、段落４７の発現ベクター。
４９．ウイルスベクターがレンチウイルスベクターである、段落４８の発現ベクター。
５０．Ｎ末端からＣ末端に配向された膜切断可能なキメラタンパク質であって、式：
Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有し、
式中、
Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、
Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、
ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、
Ｄはデグロンを含み、かつ
Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄは、単一ポリペプチドとして発現されるように構成されている、膜切断可能なキメラタンパク質。
５１．分泌性エフェクター分子がシグナルペプチドを含む、段落５０のキメラタンパク質。
５２．シグナルペプチドが、分泌性エフェクター分子に対して天然である天然シグナルペプチドを含む、段落５１のキメラタンパク質。
５３．シグナルペプチドが、分泌性エフェクター分子に対して非天然である非天然シグナルペプチドを含む、段落５１のキメラタンパク質。
５４．非天然シグナルペプチドが、ＩＬ１２、ＩＬ２、最適化ＩＬ２、トリプシオンゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、マウスＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミンプレタンパク質、アズロシジンプレタンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ６、ＩＬ８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、ＩＬ２１、ＣＤ８、及びＧＭＣＳＦからなる群から選択される、段落５３のキメラタンパク質。
５５．分泌性エフェクター分子が治療クラスから選択され、治療クラスが、サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ペプチド、及び酵素からなる群から選択される、段落５０～５４のいずれか一つのキメラタンパク質。
５６．サイトカインが、ＩＬ１－ベータ、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ１５、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１８、ＩＬ２１、ＩＬ２２、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン－ガンマ、及びＴＮＦ－アルファからなる群から選択される、段落５５のキメラタンパク質。
５７．ケモカインが、ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１からなる群から選択される、段落５５のキメラタンパク質。
５８．ホーミング分子が、抗インテグリンアルファ４、ベータ７；抗ＭＡｄＣＡＭ；ＳＤＦｌ；及びＭＭＰ－２からなる群から選択される、段落５５のキメラタンパク質。
５９．成長因子が、ＦＬＴ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦからなる群から選択される、段落５５のキメラタンパク質。
６０．共活性化分子が、４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌからなる群から選択される、段落５５のキメラタンパク質。
６１．腫瘍微小環境修飾因子が、アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータインヒビター、免疫チェックポイントインヒビター、ＶＥＧＦインヒビター、及びＨＰＧＥ２からなる群から選択される、段落５５のキメラタンパク質。
６２．ＴＧＦベータインヒビターが、抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－ＴＲＡＰ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、段落６１のキメラタンパク質。
６３．免疫チェックポイントインヒビターが、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭｌ抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体からなる群から選択される、段落６１のキメラタンパク質。
６４．ＶＥＧＦインヒビターが、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、又はそれらの組み合わせを含む、段落６１のキメラタンパク質。
６５．分泌性エフェクター分子がヒト由来エフェクター分子である、段落５０～６１のいずれか一つのキメラタンパク質。
６６．プロテアーゼ切断部位が、１型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ切断部位、ＳＩＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、フリンプロテアーゼ切断部位、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ切断部位、マトリプターゼプロテアーゼ切断部位、マトリプターゼ－２プロテアーゼ切断部位、ＭＭＰ９プロテアーゼ切断部位、及びＮＳ３プロテアーゼ切断部位からなる群から選択されるプロテアーゼにより切断可能である、段落５０～６５のいずれか一つのキメラタンパク質。
６７．細胞膜係留ドメインが膜貫通－細胞内ドメイン又は膜貫通ドメインを含む、段落５０～６６のいずれか一つのキメラタンパク質。
６８．膜貫通－細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインが、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＥｐｏＲ、又はＢＴＬＡから由来する、段落６７のキメラタンパク質。
６９．細胞膜係留ドメインが細胞表面受容体、又はその細胞膜結合部分を含む、段落５０～６６のいずれか一つのキメラタンパク質。
７０．細胞中で発現された場合、分泌性エフェクター分子が、細胞の細胞膜に係留される、段落５０～６９のいずれか一つのキメラタンパク質。
７１．プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼを発現する細胞中で発現された場合、分泌性エフェクター分子が細胞膜から放出される、段落７０のキメラタンパク質。
７２．細胞膜上に発現されるプロテアーゼが、細胞に対して内因性である、段落７１のキメラタンパク質。
７３．プロテアーゼが、１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ－２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼからなる群から選択される、段落７２のキメラタンパク質。
７４．細胞膜上に発現されるプロテアーゼが、細胞に対して異種である、段落７１のキメラタンパク質。
７５．プロテアーゼがＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である、段落７４のキメラタンパク質。
７６．プロテアーゼ切断部位がＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含む、段落７５のキメラタンパク質。
７７．ＮＳ３プロテアーゼ切断部位がＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ接合部切断部位を含む、段落７６のキメラタンパク質。
７８．プロテアーゼが、プロテアーゼインヒビターにより抑制され得る、段落７１～７７のいずれか一つのキメラタンパク質。
７９．プロテアーゼインヒビターが、シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシロプレビルからなる群から選択される、段落７８のキメラタンパク質。
８０．プロテアーゼがデグロンをさらに含む、段落７１～７９のいずれか一つのキメラタンパク質。
８１．プロテアーゼの発現が調節が可能である、段落７１～８０のいずれか一つのキメラタンパク質。
８２．免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）への応答においてセレブロン（ＣＲＢＮ）に結合することが可能でありそれにより分泌性エフェクター分子のユビキチン経路媒介性分解を促進するセレブロン（ＣＲＢＮ）ポリペプチド基質ドメインを、デグロンが含む、段落５０～８１のキメラタンパク質。
８３．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインが、ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫlａ、ＺＦＰ９１、ＧＳＰＴ１、ＭＥＩＳ２、ＧＳＳ Ｅ４Ｆ１、ＺＮ２７６、ＺＮ５１７、ＺＮ５８２、ＺＮ６５３、ＺＮ６５４、ＺＮ６９２、ＺＮ７８７、及びＺＮ８２７、又はＣＲＢＮの薬物誘導性結合が可能なその断片からなる群から選択される、段落８２のキメラタンパク質。
８４．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインが、天然ＣＲＢＮポリペプチド配列のキメラ融合産物である、段落８２のキメラタンパク質。
８５．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインが、ＦＮＶＬＭ ＶＨＫＲＳ ＨＴＧＥＲ ＰＬＱＣＥ ＩＣＧＦＴ ＣＲＱＫＧ ＮＬＬＲＨ ＩＫＬＨＴ ＧＥＫＰＦ ＫＣＨＬＣ ＮＹＡＣＱ ＲＲＤＡＬ（配列番号１８９）のアミノ酸配列を有するＩＫＺＦ３／ＺＦＰ９１／ＩＫＺＦ３キメラ融合産物である、段落８２のキメラタンパク質。
８６．ＩＭｉＤがＦＤＡ承認薬物である、段落８２～８５のいずれか一つのキメラタンパク質。
８７．ＩＭｉＤが、サリドマイド、レナリドミド、及びポマリドミドからなる群から選択される、段落８２～８６のいずれか一つのキメラタンパク質。
８８．デグロンが、ＨＣＶ ＮＳ４デグロン、ＰＥＳＴ（ヒトＩκＢαの残基２７７～３０７の二つのコピー）、ＧＲＲ（ヒトｐ１０５の残基３５２～４０８）、ＤＲＲ（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０～２９５）、ＳＮＳ（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（Ａ型インフルエンザ又はＢ型インフルエンザのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２）、ＲＰＢ（酵母ＲＰＢの残基１６８８～１７０２の四つのコピー）、ＳＰｍｉｘ（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（Ａ型インフルエンザウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２）、ＮＳ２（Ａ型インフルエンザウイルスＮＳタンパク質の残基７９～９３の三つのコピー）、ＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼの残基１０６～１４２）、Ｎｅｋ２Ａ、マウスＯＤＣ（残基４２２～４６１）、マウスＯＤＣ＿ＤＡ（Ｄ４３３Ａ及びＤ４３４Ａ点変異を含むｍＯＤＣの残基４２２～４６１）、ＡＰＣ／Ｃデグロン、ＣＯＰ１ Ｅ３リガーゼ結合デグロンモチーフ、ＣＲＬ４－Ｃｄｔ２結合ＰＩＰデグロン、アクチンフィリン結合デグロン、ＫＥＡＰ１結合デグロン、ＫＬＨＬ２及びＫＬＨＬ３結合デグロン、ＭＤＭ２結合モチーフ、Ｎ－デグロン、低酸素シグナル伝達におけるヒドロキシプロリン修飾、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＤＳＧｘｘＳ（配列番号１９０）リン依存的デグロン、Ｓｉａｈ結合モチーフ、ＳＰＯＰ ＳＢＣドッキングモチーフ、ならびにＰＣＮＡ結合ＰＩＰボックスからなる群から選択される、段落５０～８０のいずれか一つのキメラタンパク質。
８９．デグロンが、細胞膜係留ドメインのＣ末端に局在化されている、段落５０～８８のいずれか一つのキメラタンパク質。
９０．段落１～４６のいずれか一つの操作された核酸、又は段落４７～４９のいずれか一つの発現ベクター、又は段落５０～８９のいずれか一つの膜切断可能なキメラタンパク質、及び医薬的に許容可能な担体を含む組成物。
９１．段落１～４６のいずれか一つの操作された核酸、又は段落４７～４９のいずれか一つの発現ベクター、又は段落５０～８９のいずれか一つの膜切断可能なキメラタンパク質を含む単離細胞。
９２．操作された核酸を含む単離細胞であって、操作された核酸は、プロモーターと膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列とを含む発現カセットを含み、Ｎ末端からＣ末端に配向されており、式：
Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有し、
式中、
Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、
Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、
ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、かつ
Ｄはデグロンを含み、
プロモーターは、外因性ポリヌクレオチド配列に動作可能に連結され、かつＳ－Ｃ－ＭＴ－Ｄは、単一ポリペプチドとして発現されるように構成されている、単離細胞。
９３．操作された核酸を組換え発現させる、段落９１又は段落９２の単離細胞。
９４．操作された核酸を、ベクター又は細胞のゲノムからの選択された遺伝子座から発現させる、段落９１～９３のいずれか一つの単離細胞。
９５．Ｎ末端からＣ末端に配向された膜切断可能なキメラタンパク質が、式：
Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有し、
式中、
Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、
Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、
ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、
Ｄはデグロンを含み、かつ
ならびにＳ－Ｃ－ＭＴ－Ｄは、単一ポリペプチドとして発現されるように構成されている、膜切断可能なキメラタンパク質を含む単離細胞。
９６．細胞が、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、赤血球、血小板細胞、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される、段落９１～９５のいずれか一つの単離細胞。
９７．細胞が自家である、段落９１～９６のいずれか一つの単離細胞。
９８．細胞が同種である、段落９１～９６のいずれか一つの単離細胞。
９９．細胞が、膀胱腫瘍細胞、脳腫瘍細胞、乳房腫瘍細胞、子宮頸部腫瘍細胞、結腸直腸腫瘍細胞、食道腫瘍細胞、神経膠腫細胞、腎臓腫瘍細胞、肝臓腫瘍細胞、肺腫瘍細胞、メラノーマ細胞、卵巣腫瘍細胞、膵臓腫瘍細胞、前立腺腫瘍細胞、皮膚腫瘍細胞、甲状腺腫瘍細胞、及び子宮腫瘍細胞からなる群から選択される腫瘍細胞である、段落９１～９５のいずれか一つの単離細胞。
１００．細胞が、腫瘍溶解性ウイルスでの形質導入を介して操作された、段落９９の単離細胞。
１０１．腫瘍溶解性ウイルスが、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス、腫瘍溶解性アデノウイルス、腫瘍溶解性麻疹ウイルス、腫瘍溶解性インフルエンザウイルス、腫瘍溶解性インディアナベシクロウイルス、腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、腫瘍溶解性ポリオウイルス、腫瘍溶解性粘液腫ウイルス、腫瘍溶解性レオウイルス、腫瘍溶解性ムンプスウイルス、腫瘍溶解性マラバウイルス、腫瘍溶解性狂犬病ウイルス、腫瘍溶解性ロタウイルス、腫瘍溶解性肝炎ウイルス、腫瘍溶解性ルベラウイルス、腫瘍溶解性デングウイルス、腫瘍溶解性チクングニアウイルス、腫瘍溶解性呼吸器合胞体ウイルス、腫瘍溶解性リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、腫瘍溶解性モルビリウイルス、腫瘍溶解性レンチウイルス、腫瘍溶解性複製レトロウイルス、腫瘍溶解性ラブドウイルス、腫瘍溶解性セネカバレーウイルス、腫瘍溶解性シンドビスウイルス、及びそれらの任意のバリアント又は誘導体からなる群から選択される、段落１００の単離細胞。
１０２．腫瘍溶解性ウイルスが、第一の発現カセット及び第二の発現カセットを含む組換え腫瘍溶解性ウイルスである、段落１００又は段落１０１の単離細胞。
１０３．細胞が、プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼをさらに含む、段落９１～１０２のいずれか一つの単離細胞。
１０４．プロテアーゼが内因性プロテアーゼである、段落１０３の単離細胞。
１０５．内因性プロテアーゼが、１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ－２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼからなる群から選択される、段落１０４の単離細胞。
１０６．プロテアーゼが異種プロテアーゼである、段落１０３の単離細胞。
１０７．異種プロテアーゼがＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である、段落１０６の単離細胞。
１０８．プロテアーゼが、細胞の細胞膜上に発現される、実施形態１０３～１０７のいずれか一つの単離細胞。
１０９．プロテアーゼが、プロテアーゼ切断部位を切断することが可能である、段落１０８の単離細胞。
１１０．プロテアーゼ切断部位の切断によって、細胞の細胞膜から分泌性エフェクター分子が放出される、段落１０９の単離細胞。
１１１．細胞が抗原認識受容体をさらに含む、段落９１～１１０のいずれか一つの単離細胞。
１１２．抗原認識受容体が、５Ｔ４、ＡＤＡＭ９、ＡＦＰ、ＡＸＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ６、Ｃ４．４、ＣＡ６、カドヘリン３、カドヘリン６、ＣＣＲ４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１６６、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３５２、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、クローディン１８．２、ｃＭｅｔ、ＣＳＰＧ４、ＣＴＬＡ、ＤＬＫ１、ＤＬＬ３、ＤＲ５、ＥＧＦＲ、ＥＮＰＰ３、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、エフリンＡ４、ＥＴＢＲ、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＲアルファ、ＦＲｂ、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＦＲａ４、ｇｐＡ３３、ＧＰＣ３、ｇｐＮＢＭ、ＧＰＲＣ５、ＨＥＲ２、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１３Ｒａ、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ１ＲＡＰ、インテグリンａＶ、ＫＩＴ、Ｌ１ＣＡＭ、ＬＡＭＰ１、ルイスＹ、ＬｅＹ、ＬＩＶ－１、ＬＲＲＣ、ＬＹ６Ｅ、ＭＣＳＰ、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１Ｃ、ＮａＰｉ２Ｂ、ネクチン４、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ３、ＮＹ ＥＳＯ １、オバリン、Ｐカドヘリン、ｐａｎ－Ｅｒｂ２、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＲＯＲ１、Ｓ Ａｕｒｅｓ、ＳＣＴ、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＩＴＲＫ６、ＳＳＴＲ２、ＳＴＥＡＰ１、サバイビン、ＴＤＧＦ１、ＴＩＭ１、ＴＲＯＰ２、及びＷＴ１からなる群から選択される抗原を認識する、段落１１１の単離細胞。
１１３．抗原認識受容体が抗原結合ドメインを含む、段落１１１又は段落１１２の単離細胞。
１１４．抗原結合ドメインが、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含む、段落１１３の単離細胞。
１１５．抗原結合ドメインが一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む、段落１１３の単離細胞。
１１６．ｓｃＦｖが、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、段落１１５の単離細胞。
１１７．ＶＨ及びＶＬが、ペプチドリンカーにより分離される、段落１１６の単離細胞。
１１８．ｓｃＦｖが、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬ又はＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨが重鎖可変ドメインであり、Ｌがペプチドリンカーであり、ＶＬが軽鎖可変ドメインである、段落１１７の単離細胞。
１１９．抗原認識受容体がキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又はＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、段落１１１～１１８のいずれか一つの単離細胞。
１２０．抗原認識受容体がＣＡＲである、段落１１１～１１８のいずれか一つの単離細胞。
１２１．ＣＡＲが一つ又は複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、一つ又は複数の細胞内シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ９７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１１ａ－ＣＤ１８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１５４細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＺＡＰ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＧＩＴＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＨＶＥＭ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２細胞内シグナル伝達ドメイン、及びＭｙＤ８８細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択される、段落１２０の単離細胞。
１２２．ＣＡＲが膜貫通ドメインを含み、膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ３ゼータ鎖膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０膜貫通ドメイン、ＩＣＯＳ膜貫通ドメイン、ＣＴＬＡ－４膜貫通ドメイン、ＰＤ－１膜貫通ドメイン、ＬＡＧ－３膜貫通ドメイン、２Ｂ４膜貫通ドメイン、及びＢＴＬＡ膜貫通ドメインからなる群から選択される、段落１２０又は段落１２１の単離細胞。
１２３．ＣＡＲが、抗原結合ドメインと膜貫通ドメインの間にスペーサー領域を含む、段落１２０～１２２のいずれか一つの単離細胞。
１２４．段落９１～１２３のいずれか一つの単離細胞、及び医薬的に許容可能な担体を含む組成物。
１２５．段落９１～１２３のいずれか一つの単離細胞又は段落１２４の組成物のいずれかの治療有効用量を投与することを含む、それを必要とする対象を治療する方法。
１２６．単離細胞が対象から由来する、段落１２５の方法。
１２７．単離細胞が、対象に関して同種である、段落１２５又は段落１２６の方法。
１２８．方法が、チェックポイントインヒビターを投与することをさらに含む、段落１２５～１２７のいずれか一つの方法。
１２９．チェックポイントインヒビターが、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体からなる群から選択される、段落１２８の方法。
１３０．方法が、抗ＣＤ４０抗体を投与することをさらに含む、段落１２５～１２９のいずれか一つの方法。
１３１．段落１～４６のいずれか一つの操作された核酸、又は段落４７～４９のいずれか一つの発現ベクター、又は段落５０～８９のいずれか一つの膜切断可能なキメラタンパク質を含む脂質ベースの構造体。
１３２．脂質ベースの構造体が、細胞外小胞を含む、段落１３１の脂質ベースの構造体。
１３３．細胞外小胞が、ナノ小胞及びエキソソームからなる群から選択される、段落１３２の脂質ベースの構造体。
１３４．脂質ベースの構造体が、脂質ナノ粒子又はミセルを含む、段落１３１の脂質ベースの構造体。
１３５．脂質ベースの構造体が、リポソームを含む、段落１３１の脂質ベースの構造体。
１３６．段落１３１～１３５のいずれか一つの脂質ベースの構造体、及び医薬的に許容可能な担体を含む組成物。
１３７．段落１３１～１３５のいずれか一つの治療有効用量の脂質ベースの構造体のいずれか又は段落１３６の組成物を投与することを含む、治療を必要とする対象を治療する方法。
１３８．投与することが全身投与を含む、段落１３７の方法。
１３９．脂質ベースの構造体によって、対象において細胞を操作することが可能である、段落１３７又は段落１３８の方法。
１４０．方法が、チェックポイントインヒビターを投与することをさらに含む、段落１３７～１３９のいずれか一つの方法。
１４１．チェックポイントインヒビターが、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体からなる群から選択される、段落１４０の方法。
１４２．方法が、抗ＣＤ４０抗体を投与することをさらに含む、段落１３７～１４１のいずれか一つの方法。
１４３．段落１～４６のいずれか一つの操作された核酸又は段落５０～８９のいずれか一つの膜切断可能なキメラタンパク質を含むナノ粒子。
１４４．ナノ粒子が無機材料を含む、段落１４３のナノ粒子。
１４５．段落１４３又は段落１４４のナノ粒子を含む組成物。
１４６．段落１４３もしくは段落１４４のナノ粒子のいずれか、又は段落１４５の組成物の治療有効用量を投与することを含む、治療を必要とする対象を治療する方法。
１４７．投与することが全身投与を含む、段落１４６の方法。
１４８．ナノ粒子によって、対象において細胞を操作することが可能である、段落１４６又は段落１４７の方法。
１４９．方法が、チェックポイントインヒビターを投与することをさらに含む、段落１４６～１４８のいずれか一つの方法。
１５０．チェックポイントインヒビターが、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体からなる群から選択される、段落１４９の方法。
１５１．方法が、抗ＣＤ４０抗体を投与することをさらに含む、段落１４６～１５０のいずれか一つの方法。
１５２．段落１～４６のいずれか一つの操作された核酸、又は段落４７～４９のいずれか一つの発現ベクターを含むように操作されたウイルス。
１５３．ウイルスが、レンチウイルス、レトロウイルス、腫瘍溶解性ウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、及びウイルス様粒子（ＶＬＰ）からなる群から選択される、段落１５２の操作されたウイルス。
１５４．段落１５２又は段落１５３の操作されたウイルス、及び医薬的に許容可能な担体を含む組成物。
１５５．段落１５２もしくは段落１５３の操作されたウイルス、又は段落１５４の組成物の治療有効用量を投与することを含む、治療を必要とする対象を治療する方法。
１５６．投与することが全身投与を含む、段落１５５の方法。
１５７．操作されたウイルスが、対象において細胞に感染し、発現カセットを発現する、段落１５５又は段落１５６の方法。
１５８．方法が、チェックポイントインヒビターを投与することをさらに含む、段落１５５～１５７のいずれか一つの方法。
１５９．チェックポイントインヒビターが、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体からなる群から選択される、段落１５８の方法。
１６０．方法が、抗ＣＤ４０抗体を投与することをさらに含む、段落１５５～１５９のいずれか一つの方法。
１６１．膜係留エフェクター分子の放出を誘導する方法であって、
ａ）細胞を提供すること、それにおいて、細胞は、膜結合プロテアーゼ及び膜切断可能なキメラタンパク質を含み、Ｎ末端からＣ末端に配向されており、式：
Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有し、
式中、
Ｓはエフェクター分子を含み、
Ｃは同族膜結合プロテアーゼ切断部位を含み、
ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、
Ｄはデグロンを含み、かつ
Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄは、単一ポリペプチドとして発現されるように構成され；ならびに
ｂ）膜結合プロテアーゼ及び膜切断可能なキメラタンパク質の発現のために適切な条件下で細胞を培養すること、
それにおいて、発現時に、膜切断可能なキメラタンパク質は、細胞の細胞膜に係留され、かつ
それにおいて、発現時に、膜結合プロテアーゼは、膜切断可能なキメラタンパク質の同族膜結合プロテアーゼ切断部位を切断し、それにより、エフェクター分子を細胞膜から放出する、ことを含む方法。
１６２．デグロンが薬物誘導性デグロンである、段落１６１の方法。
１６３．細胞に、デグロンを誘導する薬物を接触させることをさらに含む、段落１６２の方法。
１６４．デグロンの誘導によって、膜切断可能なキメラタンパク質が分解される、段落１６３の方法。
１６５．膜係留エフェクター分子を分解する方法であって、
ａ）細胞を提供すること、それにおいて、細胞は、膜結合プロテアーゼ及び膜切断可能なキメラタンパク質を含み、Ｎ末端からＣ末端に配向されており、式：
Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有し、
式中、
Ｓはエフェクター分子を含み、
Ｃは同族膜結合プロテアーゼ切断部位を含み、
ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、
Ｄは薬物誘導性デグロンを含み、かつ
Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄは、単一ポリペプチドとして発現されるように構成され；
ｂ）膜結合プロテアーゼ及び膜切断可能なキメラタンパク質の発現のために適切な条件下で前記細胞を培養すること、それにおいて、発現時に、膜切断可能なキメラタンパク質が、細胞の前記細胞膜に係留され；ならびに
ｃ）細胞を薬物と接触させることによりデグロンを誘導すること、それにおいて、デグロンのデグロン誘導によって、膜切断可能なキメラタンパク質が分解される、方法。
１６６．エフェクター分子がシグナルペプチドを含む、段落１６１～１６５のいずれか一つの方法。
１６７．シグナルペプチドが、エフェクター分子に対して天然である天然シグナルペプチドを含む、段落１６６の方法。
１６８．シグナルペプチドが、エフェクター分子に対して非天然である非天然シグナルペプチドを含む、段落１６６の方法。
１６９．非天然シグナルペプチドが、ＩＬ１２、ＩＬ２、最適化ＩＬ２、トリプシオンゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、マウスＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミンプレタンパク質、アズロシジンプレタンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ６、ＩＬ８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、ＩＬ２１、ＣＤ８、及びＧＭＣＳＦからなる群から選択される、段落１６８の方法。
１７０．エフェクター分子が治療クラスから選択され、それにおいて、治療クラスは、サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、及び酵素からなる群から選択される、段落１６１～１６９のいずれか一つの方法。
１７１．サイトカインが、ＩＬ１－ベータ、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ１５、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１８、ＩＬ２１、ＩＬ２２、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン－ガンマ、及びＴＮＦ－アルファからなる群から選択される、段落１７０の方法。
１７２．ケモカインが、ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１からなる群から選択される、段落１７０の方法。
１７３．ホーミング分子が、抗インテグリンアルファ４、ベータ７；抗ＭＡｄＣＡＭ；ＳＤＦｌ；及びＭＭＰ－２からなる群から選択される、段落１７０の方法。
１７４．成長因子が、ＦＬＴ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦからなる群から選択される、段落１７０の方法。
１７５．共活性化分子が、４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌからなる群から選択される、段落１７０の方法。
１７６．腫瘍微小環境修飾因子が、アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータインヒビター、免疫チェックポイントインヒビター、ＶＥＧＦインヒビター、及びＨＰＧＥ２からなる群から選択される、段落１７０の方法。
１７７．ＴＧＦベータインヒビターが、抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－ＴＲＡＰ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択される、段落１７６の方法。
１７８．免疫チェックポイントインヒビターが、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭｌ抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体からなる群から選択される、段落１７６の方法。
１７９．ＶＥＧＦインヒビターが、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、又はそれらの組み合わせを含む、段落１７６の方法。
１８０．エフェクター分子がヒト由来エフェクター分子である、段落１６１～１７５のいずれか一つの方法。
１８１．同族プロテアーゼ切断部位が、１型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ切断部位、ＳＩＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、フリンプロテアーゼ切断部位、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ切断部位、マトリプターゼプロテアーゼ切断部位、マトリプターゼ－２プロテアーゼ切断部位、ＭＭＰ９プロテアーゼ切断部位、及びＮＳ３プロテアーゼ切断部位からなる群から選択されるプロテアーゼにより切断可能である、段落１６１～１８０のいずれか一つの方法。
１８２．細胞膜係留ドメインが膜貫通－細胞内ドメイン又は膜貫通ドメインを含む、段落１６１～１８１のいずれか一つの方法。
１８３．膜貫通－細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインが、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＥｐｏＲ、又はＢＴＬＡから由来する、段落１８２の方法。
１８４．細胞膜係留ドメインが、細胞表面受容体、又はその細胞膜結合部分を含む、段落１６１～１８１のいずれか一つの方法。
１８５．プロテアーゼが、細胞に対して内因性である、段落１６１～１８４のいずれか一つの方法。
１８６．プロテアーゼが、１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ－２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼからなる群から選択される、段落１８５の方法。
１８７．プロテアーゼが、細胞に対して異種である、段落１６１～１８４のいずれか一つの方法。
１８８．プロテアーゼが、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）である、段落１８７の方法。
１８９．プロテアーゼ切断部位が、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含む、段落１８８の方法。
１９０．ＮＳ３プロテアーゼ切断部位が、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ接合部切断部位を含む、段落１８９の方法。
１９１．プロテアーゼが、プロテアーゼインヒビターにより抑制され得る、段落１６１～１９０のいずれか一つの方法。
１９２．プロテアーゼインヒビターが、シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシロプレビルからなる群から選択される、段落１９１の方法。
１９３．プロテアーゼがデグロンをさらに含む、段落１６１～１９２のいずれか一つの方法。
１９４．プロテアーゼの発現が、調節が可能である、段落１６１～１９３のいずれか一つの方法。
１９５．免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）への応答においてセレブロン（ＣＲＢＮ）に結合することが可能でありそれにより分泌性エフェクター分子のユビキチン経路媒介性分解を促進するセレブロン（ＣＲＢＮ）ポリペプチド基質ドメインを、デグロンが含む、段落１６１～１９４のいずれか一つの方法。
１９６．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインが、ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫlａ、ＺＦＰ９１、ＧＳＰＴ１、ＭＥＩＳ２、ＧＳＳ Ｅ４Ｆ１、ＺＮ２７６、ＺＮ５１７、ＺＮ５８２、ＺＮ６５３、ＺＮ６５４、ＺＮ６９２、ＺＮ７８７、及びＺＮ８２７、又はＣＲＢＮの薬物誘導性結合が可能なその断片からなる群から選択される、段落１９５の方法。
１９７．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインが、天然ＣＲＢＮポリペプチド配列のキメラ融合産物である、段落１９５の方法。
１９８．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインが、ＦＮＶＬＭ ＶＨＫＲＳ ＨＴＧＥＲ ＰＬＱＣＥ ＩＣＧＦＴ ＣＲＱＫＧ ＮＬＬＲＨ ＩＫＬＨＴ ＧＥＫＰＦ ＫＣＨＬＣ ＮＹＡＣＱ ＲＲＤＡＬ（配列番号１８９）のアミノ酸配列を有するＩＫＺＦ３／ＺＦＰ９１／ＩＫＺＦ３キメラ融合産物である、段落１９５の方法。
１９９．ＩＭｉＤがＦＤＡ承認薬物である、段落１９５～１９８のいずれか一つの方法。
２００．ＩＭｉＤが、サリドマイド、レナリドミド、及びポマリドミドからなる群から選択される、段落１９５～１９９のいずれか一つの方法。
２０１．デグロンが、ＨＣＶ ＮＳ４デグロン、ＰＥＳＴ（ヒトＩκＢαの残基２７７～３０７の二つのコピー）、ＧＲＲ（ヒトｐ１０５の残基３５２～４０８）、ＤＲＲ（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０～２９５）、ＳＮＳ（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（Ａ型インフルエンザ又はＢ型インフルエンザのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２）、ＲＰＢ（酵母ＲＰＢの残基１６８８～１７０２の四つのコピー）、ＳＰｍｉｘ（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（Ａ型インフルエンザウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２）、ＮＳ２（Ａ型インフルエンザウイルスＮＳタンパク質の残基７９～９３の三つのコピー）、ＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼの残基１０６～１４２）、Ｎｅｋ２Ａ、マウスＯＤＣ（残基４２２～４６１）、マウスＯＤＣ＿ＤＡ（Ｄ４３３Ａ及びＤ４３４Ａ点変異を含むｍＯＤＣの残基４２２～４６１）、ＡＰＣ／Ｃデグロン、ＣＯＰ１ Ｅ３リガーゼ結合デグロンモチーフ、ＣＲＬ４－Ｃｄｔ２結合ＰＩＰデグロン、アクチンフィリン結合デグロン、ＫＥＡＰ１結合デグロン、ＫＬＨＬ２及びＫＬＨＬ３結合デグロン、ＭＤＭ２結合モチーフ、Ｎ－デグロン、低酸素シグナル伝達におけるヒドロキシプロリン修飾、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＤＳＧｘｘＳ（配列番号１９０）リン依存的デグロン、Ｓｉａｈ結合モチーフ、ＳＰＯＰ ＳＢＣドッキングモチーフ、ならびにＰＣＮＡ結合ＰＩＰボックスからなる群から選択される、段落１６１～１９３のいずれか一つの方法。
２０２．デグロンが、細胞膜係留ドメインのＣ末端に局在化されている、段落１６１～２０１のいずれか一つの方法。
２０３．異種核酸が、デグロン融合キメラタンパク質をコードし、それにおいて、デグロン融合キメラタンパク質は、目的のタンパク質に融合されたデグロンを含む、異種核酸を発現するように操作されたアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）。
２０４．免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）への応答においてセレブロン（ＣＲＢＮ）に結合することが可能でありそれにより目的のタンパク質のユビキチン経路媒介性の分解を促進するセレブロン（ＣＲＢＮ）ポリペプチド基質ドメインを、デグロンが含む、段落２０３の操作されたウイルス。
２０５．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインが、ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫlａ、ＺＦＰ９１、ＧＳＰＴ１、ＭＥＩＳ２、ＧＳＳ Ｅ４Ｆ１、ＺＮ２７６、ＺＮ５１７、ＺＮ５８２、ＺＮ６５３、ＺＮ６５４、ＺＮ６９２、ＺＮ７８７、及びＺＮ８２７、又はＣＲＢＮの薬物誘導性結合が可能なその断片からなる群から選択される、段落２０４の操作されたウイルス。
２０６．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインが、天然ＣＲＢＮポリペプチド配列のキメラ融合産物である、段落２０４の操作されたウイルス。
２０７．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインが、ＦＮＶＬＭ ＶＨＫＲＳ ＨＴＧＥＲ ＰＬＱＣＥ ＩＣＧＦＴ ＣＲＱＫＧ ＮＬＬＲＨ ＩＫＬＨＴ ＧＥＫＰＦ ＫＣＨＬＣ ＮＹＡＣＱ ＲＲＤＡＬ（配列番号１８９）のアミノ酸配列を有するＩＫＺＦ３／ＺＦＰ９１／ＩＫＺＦ３キメラ融合産物である、段落２０４の操作されたウイルス。
２０８．ＩＭｉＤがＦＤＡ承認薬物である、段落２０４～２０７のいずれか一つの操作されたウイルス。
２０９．ＩＭｉＤが、サリドマイド、レナリドミド、及びポマリドミドからなる群から選択される、段落２０４～２０８のいずれか一つの操作されたウイルス。
２１０．デグロンが、ＨＣＶ ＮＳ４デグロン、ＰＥＳＴ（ヒトＩκＢαの残基２７７～３０７の二つのコピー）、ＧＲＲ（ヒトｐ１０５の残基３５２～４０８）、ＤＲＲ（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０～２９５）、ＳＮＳ（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（Ａ型インフルエンザ又はＢ型インフルエンザのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２）、ＲＰＢ（酵母ＲＰＢの残基１６８８～１７０２の四つのコピー）、ＳＰｍｉｘ（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（Ａ型インフルエンザウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２）、ＮＳ２（Ａ型インフルエンザウイルスＮＳタンパク質の残基７９～９３の三つのコピー）、ＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼの残基１０６～１４２）、Ｎｅｋ２Ａ、マウスＯＤＣ（残基４２２～４６１）、マウスＯＤＣ＿ＤＡ（Ｄ４３３Ａ及びＤ４３４Ａ点変異を含むｍＯＤＣの残基４２２～４６１）、ＡＰＣ／Ｃデグロン、ＣＯＰ１ Ｅ３リガーゼ結合デグロンモチーフ、ＣＲＬ４－Ｃｄｔ２結合ＰＩＰデグロン、アクチンフィリン結合デグロン、ＫＥＡＰ１結合デグロン、ＫＬＨＬ２及びＫＬＨＬ３結合デグロン、ＭＤＭ２結合モチーフ、Ｎ－デグロン、低酸素シグナル伝達におけるヒドロキシプロリン修飾、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＤＳＧｘｘＳ（配列番号１９０）リン依存的デグロン、Ｓｉａｈ結合モチーフ、ＳＰＯＰ ＳＢＣドッキングモチーフ、ならびにＰＣＮＡ結合ＰＩＰボックスからなる群から選択される、段落２０３の操作されたウイルス。
２１１．ＡＡＶが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ．Ｒｈ１０、ＡＡＶ１１、及びそれらのバリアントからなる群から選択される、段落２０３～２１０のいずれか一つの操作されたウイルス。
２１２．目的のタンパク質が治療クラスから選択され、それにおいて、治療クラスは、サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、及び酵素からなる群から選択される、段落２０３～２１１のいずれか一つの操作されたウイルス。
２１３．異種核酸が、デグロン融合キメラタンパク質をコードし、それにおいて、デグロン融合キメラタンパク質は、目的のタンパク質に融合されたデグロンを含む、異種核酸を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
２１４．免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）への応答においてセレブロン（ＣＲＢＮ）に結合することが可能でありそれにより目的のタンパク質のユビキチン経路媒介性の分解を促進するセレブロン（ＣＲＢＮ）ポリペプチド基質ドメインを、デグロンが含む、段落２１３のＡＡＶベクター。
２１５．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインが、ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫlａ、ＺＦＰ９１、ＧＳＰＴ１、ＭＥＩＳ２、ＧＳＳ Ｅ４Ｆ１、ＺＮ２７６、ＺＮ５１７、ＺＮ５８２、ＺＮ６５３、ＺＮ６５４、ＺＮ６９２、ＺＮ７８７、及びＺＮ８２７、又はＣＲＢＮの薬物誘導性結合が可能なその断片からなる群から選択される、段落２１４のＡＡＶベクター。
２１６．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインが、天然ＣＲＢＮポリペプチド配列のキメラ融合産物である、段落２１４のＡＡＶベクター。
２１７．ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインが、ＦＮＶＬＭ ＶＨＫＲＳ ＨＴＧＥＲ ＰＬＱＣＥ ＩＣＧＦＴ ＣＲＱＫＧ ＮＬＬＲＨ ＩＫＬＨＴ ＧＥＫＰＦ ＫＣＨＬＣ ＮＹＡＣＱ ＲＲＤＡＬ（配列番号１８９）のアミノ酸配列を有するＩＫＺＦ３／ＺＦＰ９１／ＩＫＺＦ３キメラ融合産物である、段落２１４のＡＡＶベクター。
２１８．ＩＭｉＤがＦＤＡ承認薬物である、段落２１３～２１７のいずれか一つのＡＡＶベクター。
２１９．ＩＭｉＤが、サリドマイド、レナリドミド、及びポマリドミドからなる群から選択される、段落２１３～２１８のいずれか一つのＡＡＶベクター。
２２０．デグロンが、ＨＣＶ ＮＳ４デグロン、ＰＥＳＴ（ヒトＩκＢαの残基２７７～３０７の二つのコピー）、ＧＲＲ（ヒトｐ１０５の残基３５２～４０８）、ＤＲＲ（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０～２９５）、ＳＮＳ（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（Ａ型インフルエンザ又はＢ型インフルエンザのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２）、ＲＰＢ（酵母ＲＰＢの残基１６８８～１７０２の四つのコピー）、ＳＰｍｉｘ（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（Ａ型インフルエンザウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２）、ＮＳ２（Ａ型インフルエンザウイルスＮＳタンパク質の残基７９～９３の三つのコピー）、ＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼの残基１０６～１４２）、Ｎｅｋ２Ａ、マウスＯＤＣ（残基４２２～４６１）、マウスＯＤＣ＿ＤＡ（Ｄ４３３Ａ及びＤ４３４Ａ点変異を含むｍＯＤＣの残基４２２～４６１）、ＡＰＣ／Ｃデグロン、ＣＯＰ１ Ｅ３リガーゼ結合デグロンモチーフ、ＣＲＬ４－Ｃｄｔ２結合ＰＩＰデグロン、アクチンフィリン結合デグロン、ＫＥＡＰ１結合デグロン、ＫＬＨＬ２及びＫＬＨＬ３結合デグロン、ＭＤＭ２結合モチーフ、Ｎ－デグロン、低酸素シグナル伝達におけるヒドロキシプロリン修飾、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＤＳＧｘｘＳ（配列番号１９０）リン依存的デグロン、Ｓｉａｈ結合モチーフ、ＳＰＯＰ ＳＢＣドッキングモチーフ、ならびにＰＣＮＡ結合ＰＩＰボックスからなる群から選択される、段落２１３のＡＡＶベクター。
２２１．ＡＡＶが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ．Ｒｈ１０、ＡＡＶ１１、及びそれらのバリアントからなる群から選択される、段落２１３～２２０のいずれか一つのＡＡＶベクター。
２２２．目的のタンパク質が治療クラスから選択され、それにおいて、治療クラスは、サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ポリヌクレオチド、ペプチド、及び酵素からなる群から選択される、段落２１３～２２１のいずれか一つのＡＡＶベクター。
２２３．段落２０３～２１２のいずれか一つの操作されたウイルス、又は段落２１３～２２２のいずれか一つのＡＡＶベクター、及び医薬的に許容可能な担体を含む医薬組成物。
２２４．段落２０３～２１２のいずれか一つの操作されたウイルス又は段落２１３～２２２のいずれか一つのＡＡＶベクターを含む単離細胞。
２２５．それを必要とする対象に、段落２０３～２１２のいずれか一つの操作されたウイルス又は段落２１３～２２２のいずれか一つのＡＡＶベクターを投与することを含む、インビボで調節されたタンパク質発現のための方法。
２２６．細胞を、段落２０３～２１２のいずれか一つの操作されたウイルス又は段落２１３～２２２のいずれか一つのＡＡＶベクターと、操作されたウイルス又はＡＡＶベクターの発現のために適切な条件下で接触させることを含む、タンパク質発現を調節するための方法。
以下は、本開示を行うための特定の実施形態の実施例である。実施例は、例証的な目的のみのために与えられており、任意の方法において本発明の範囲を限定することを意図しない。例えば、以下に記載及び実施される実験によって、ペイロード（例、エフェクター分子）を分泌するように細胞を操作すること、及びそれらの細胞を送達して腫瘍に対する免疫原性応答を誘導することの一般的な有用性が実証される。具体的には、以下に記載される実施例は、本明細書中に記載される様々なエフェクター分子を分泌する操作された間葉系幹細胞（ＭＳＣ）の送達を通じた、腫瘍に対する免疫原性応答を誘導する能力を実証する。ＭＳＣの使用は、本明細書中に記載される細胞を操作することに関する、本発明の範囲を限定することを意図しない。
努力が、使用される数（例、量、温度など）に関する正確さを確実にするためになされてきたが、しかし、一部の実験誤差及び偏差が、無論、許容されるべきである。
実施例１－デグロンドメイン単独によって、分泌は調節されない。
デグロンドメインの付着を通じて分子の分泌を調節する能力を評価した。
方法
一連のｐＬ１７ｄベースのウイルスベクター構築物が、表６Ｂ中に列挙される配列を伴う表６Ａ中に記載されるように、様々なリンカーを使用して、デグロン（ｄ９１３スーパーデグロン）に融合された分泌アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）を使用して生成された。ｄ９１３スーパーデグロンが、国際出願公開 ＷＯ２０１９／０８９５９２Ａｌ号においてより詳細に記載されており、全ての目的のために参照により本明細書中に組み入れられる。
ＳＥＡＰアッセイを、ＱｕａｎｔｉＢｌｕｅキット（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ；ｒｅｐ－ｑｂ１）を使用して実施した。ＨＥＫ２９３Ｆｔ細胞において実施された実験については、以下のプロトコールに従った：
－ 細胞を２ｅ５細胞／ウェルで１２ウェルプレート中に０日目に播種した。
－ １日目に、細胞に３００Ｋ ＧＳ単位のウイルスで形質導入した。
－ ２日目に、細胞を６ウェルプレート＋／－１μＭレナリドミド中の２つのウェル中に分割した。
－ ４日目に、細胞を継代し、レナリドミド処理を継続した。
－ ７日目に、各ウェルからの２０ｕＬの上清を回収し、１８０ｕＬのＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）で１時間にわたり３７℃でインキュベートし、ＳＥＡＰ活性をプレートリーダー上で、６５５ｎｍで読み取った（細胞は接着性であるため、培地からペレット化する必要はない）。
ドナー由来Ｔ細胞において実施された実験については、以下のプロトコールに従った：
－ Ｔ細胞を、抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８磁気ビーズを使用して、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ Ｐｒｏｄｉｇｙ機器上で標的１：１の比率で、白血球アフェレーシス材料から濃縮した。ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ Ｐｒｏｄｉｇｙでは、多くの異なる細胞型について、閉鎖系の使い捨て使い捨てキットが利用される。自動プログラムによって、血小板洗浄、ＣＤ４＋＆ＣＤ８＋ビーズ標識、及び磁石上でのポジティブ選択が実施され、高純度を伴う細胞懸濁液がもたらされる。ポジティブ選択されたＴ細胞を次にサンプリングし、フローサイトメトリーを介して細胞表面表現型について分析し、制御速度の冷凍庫を介して凍結保存した。
－ 細胞を次に解凍し、０日目に活性化した（２４ウェルプレート中の１ｅ６細胞／ｍＬを、ＣＤ３／ＣＤ２８Ｄｙｎａｂｅａｄｓで３：１活性化した）。
－ １日目に、１００Ｋ ＧＳ単位のウイルスを細胞に加えた。
－ ２日目に、新鮮な培地をＴ細胞に加えた。
－ ４日目に、各ウェルを、＋／－１μＭのレナリドミドを伴う６ウェルプレートの２ウェル中に分割した。
－ ７日目に、細胞をペレット化し、各ウェルからの２０ｕＬの上清を回収し、１８０ｕＬのＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と３７度で１時間にわたりインキュベートし、ＳＥＡＰ活性をプレートリーダー上で、６５５ｎｍで読み取った。
（表６Ａ）ＳＥＡＰ／デグロン構築物の構成
Figure 2024504613000044
（表６Ｂ）ＳＥＡＰ／デグロン構築物配列
Figure 2024504613000045
Figure 2024504613000046
Figure 2024504613000047
Figure 2024504613000048
Figure 2024504613000049
結果
ＳＥＡＰアッセイを、条件付けされた培地（細胞を含まない）中の分泌ＳＥＡＰ活性を評価することを通じて、分子の分泌を調節するデグロンドメインの能力の有効性をテストするように設計した。ＣＲＢＮベースのデグロン系が使用されたが、それにおいて、レナリドミド依存的分解が、膜関連タンパク質の調節された分解において示されている（ＷＯ２０１９／０８９５９２Ａｌ）。図１中に示すように、ＳＥＡＰ酵素活性を、ＨＥＫ２９３Ｆｔ細胞（左パネル）及びドナー由来Ｔ細胞（右パネル）の両方からの上清中で決定した。ＳＥＡＰ酵素活性を、「オン」（レナリドミドなし）に対する「オフ」（＋レナリドミド）のパーセンテージとして定量化し、表７Ａ（ＨＥＫ）及び表７Ｂ（Ｔ細胞）中に提示した。加えて、ＳＥＡＰ酵素活性の定量化を、また、ＳＥＡＰ吸光度を、ウェル当たりの細胞カウント（Ｃｏｕｎｔｅｓｓから）により割ることにより、細胞数に対して標準化した。表７Ａ及び表７Ｂを参照のこと。注目すべきことに、レナリドミドの添加によって、テストされた構築物のいずれにおいてもＳＥＡＰの低下分泌はもたらされなかった。結果は、デグロンドメイン単独を分泌分子に加えることによって、薬物依存的分解／調節が可能にならないことを示す。
（表７Ａ）ＳＥＡＰ／デグロンＱｕａｎｔｉＢｌｕｅアッセイ（ＨＥＫ細胞）
Figure 2024504613000050
（表７Ｂ）ＳＥＡＰ／デグロンＱｕａｎｔｉＢｌｕｅアッセイ（Ｔ細胞）
Figure 2024504613000051
実施例２－膜切断可能なデグロン系
切断可能な膜係留ドメインと併せたデグロンドメインの付着を通じた分子の分泌を調節する能力を評価した。
方法
一連のｐＬ１７ｄベースのウイルスベクター構築物が、表８Ｂ中に列挙される配列を伴う表８Ａ中に記載されるように、リンカーを含む膜貫通ドメインを含む様々なリンカーを使用して、デグロン（ｄ９１３スーパーデグロン）に融合された分泌アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）を使用して生成された。
ＳＥＡＰアッセイを、ＱｕａｎｔｉＢｌｕｅキット（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ；ｒｅｐ－ｑｂ１）を使用して実施した。ＨＥＫ２９３Ｆｔ細胞において実施された実験については、以下のプロトコールに従った：
－ 細胞を１ｅ５細胞／ウェルで２４ウェルプレート中に０日目に播種した。
－ １日目に、細胞に１００Ｋ ＧＳ単位のウイルスで形質導入した。
－ ２日目に、細胞を１２ウェルプレート＋／－１μＭレナリドミド中の２ウェル中に分割した。
－ ４日目に、細胞を三通りに、２４ウェルプレート中に継代し、レナリドミド処理を継続した。
－ ７日目に、各ウェルからの２０ｕＬの上清を回収し、１８０ｕＬのＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）で１時間にわたり３７℃でインキュベートし、ＳＥＡＰ活性をプレートリーダー上で、６５５ｎｍで読み取った（細胞は接着性であるため、培地からペレット化する必要はない）。
ドナー由来Ｔ細胞において実施された実験については、以下のプロトコールに従った：
－ Ｔ細胞を、抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８磁気ビーズを使用して、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ Ｐｒｏｄｉｇｙ機器上で標的１：１の比率で、白血球アフェレーシス材料から濃縮した。ＣｌｉｎｉＭＡＣＳ Ｐｒｏｄｉｇｙでは、多くの異なる細胞型について、閉鎖系の使い捨て使い捨てキットが利用される。自動プログラムによって、血小板洗浄、ＣＤ４＋＆ＣＤ８＋ビーズ標識、及び磁石上でのポジティブ選択が実施され、高純度を伴う細胞懸濁液がもたらされる。ポジティブ選択されたＴ細胞を次にサンプリングし、フローサイトメトリーを介して細胞表面表現型について分析し、制御速度の冷凍庫を介して凍結保存した。
－ 細胞を次に解凍し、０日目に活性化した（２４ウェルプレート中の１ｅ６細胞／ｍＬを、ＣＤ３／ＣＤ２８Ｄｙｎａｂｅａｄｓで３：１活性化した）。
－ １日目に、１００Ｋ ＧＳ単位のウイルスを細胞に加えた。
－ ２日目に、新鮮な培地をＴ細胞に加えた。
－ ４日目に、各ウェルを、＋／－ １μＭのレナリドミドを伴う４８ウェルプレートの６ウェル中に分割した（薬物を伴う３ウェル、伴わない３ウェル）。
－ ７日目に、細胞をペレット化し、各ウェルからの２０ｕＬの上清を回収し、１８０ｕＬのＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と３７度で１時間にわたりインキュベートし、ＳＥＡＰ活性をプレートリーダー上で、６５５ｎｍで読み取った。
（表８Ａ）ＳＥＡＰ／デグロン／膜切断可能な構築物の構成
Figure 2024504613000052
（表８Ｂ）ＳＥＡＰ／デグロン／膜切断可能な構築物の配列
Figure 2024504613000053
Figure 2024504613000054
Figure 2024504613000055
結果
分子の分泌を調節するために、デグロンドメインと切断可能な膜結合ドメインを組み合わせることを評価した。一般的に、この系（「膜切断可能デグロン」系として言及される）では、式Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ（Ｎ末端からＣ末端に配向）を有するキメラタンパク質が使用され、それにおいて、Ｓは分泌性ペイロード（例、エフェクター分子）を指し、Ｃはプロテアーゼ切断部位を指し、ＭＴは細胞膜係留ドメインを指し、及びＤはデグロンを指す。図２は、切断可能な膜係留ドメイン（例、ＰＤＧＦＲｂ膜貫通ドメインに融合されたＡＤＡＭ１０／１７切断部位）がペイロードとデグロンドメインの間に挿入されている、所望のペイロードがキメラタンパク質として発現される代表的な膜切断可能なデグロン系を例証する。
ＳＥＡＰアッセイを、条件付けされた培地（細胞を含まない）中の分泌ＳＥＡＰ活性を評価することを通じて、膜切断可能なデグロン系の有効性をテストするように設計した。テストされた構築物についてのドメインを以下に概説する：
ＳＢ０１２０８（Ｄ－ＭＴ－Ｃ－Ｓ配向）：
－ＳはＳＥＡＰである。
－ＣはＡＤＡＭ１０／１７切断部位である。
－ＭＴはＩＩ型膜貫通ドメイン（ヒトＦａｓＬ）である。
－ＤはＣＲＢＮベースのデグロン（ｄ９１３）である。
ＳＢ０１２０９（Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ配向）：
－ＳはＳＥＡＰである。
－ＣはＡＤＡＭ１０／１７切断部位である。
－ＭＴはＰＤＧＦＲｂ膜貫通ドメインである。
－ＤはＣＲＢＮベースのデグロン（ｄ９１３）である。
図３中に示すように、ＳＥＡＰ酵素活性を、ＨＥＫ２９３Ｆｔ細胞（「ＨＥＫ２９３Ｔ」）及びドナー由来Ｔ細胞（「Ｔ細胞」）の両方からの上清中で決定した。ＳＥＡＰ酵素活性を、「オン」（レナリドミドなし）に対する「オフ」（＋レナリドミド）のパーセンテージとして定量化し、表９Ａ（ＨＥＫ）及び表９Ｂ（Ｔ細胞）中に提示する。ＳＥＡＰ分泌が、Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ配向を有する膜切断可能なデグロン構築物（「１２０９」）についてのＨＥＫ２９３Ｆｔ細胞及びドナー由来Ｔ細胞におけるレナリドミドの添加時に低下した。図４中に示し、表９Ａ中で定量化しているように、ＳＥＡＰ酵素活性を、また、ＨＥＫ２９３Ｆｔ細胞における細胞数に対して標準化した。標準化を、ＳＥＡＰ吸光度をウェル当たりの細胞カウント（Ｃｏｕｎｔｅｓｓから）で割ることにより実施した。ＳＥＡＰ分泌を、ＨＥＫ２９３Ｆｔ細胞において、デグロンを伴わない構築物（「４１９」）についてのＳＥＡＰ活性と比べて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ配向構築物（１２０９）について、レナリドミド依存的に低下させた。この結果は、膜係留ＳＥＡＰの分解が、免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）レナリドミドの存在において生じたことを示唆する。配向Ｄ－ＭＴ－Ｃ－Ｓ（「１２０８」）を有する膜切断可能なデグロン構築物によって、ＳＥＡＰの機能的分泌はもたらされなかった。結果は、Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ配向におけるキメラタンパク質を使用した膜切断可能なデグロン系によって、分泌分子の薬物依存的分解／調節が可能となることを示す。
（表９Ａ）ＳＥＡＰ／デグロン／膜切断可能なＱｕａｎｔｉＢｌｕｅアッセイ（ＨＥＫ細胞）
Figure 2024504613000056
（表９Ｂ）ＳＥＡＰ／デグロン／膜切断可能なＱｕａｎｔｉＢｌｕｅアッセイ（Ｔ細胞）
Figure 2024504613000057
実施例３－Ｊｕｒｋａｔにおける膜切断可能なデグロン系
膜切断可能なデグロン系をＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞株においてさらに評価した。
方法
ウイルスベクター構築物を、上に記載するように、リンカーを含む膜貫通ドメインを含む、様々なリンカーを伴うデグロン（ｄ９１３スーパーデグロン）に融合された分泌アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）を使用して生成した。調べた構築物を表１０中に記載する。
ＳＥＡＰアッセイを、ＱｕａｎｔｉＢｌｕｅキット（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ；ｒｅｐ－ｑｂ１）を使用して実施した。Ｊｕｒｋａｔ細胞において実施された実験については、以下のプロトコールに従った：
－ １日目に、細胞を１ｍＬ中の１ｅ６細胞で２４ウェルプレート中に播種し、３００ｋ ＧＳ単位のウイルスを加えた。
－ ３日目に、細胞を４８ウェルプレートの６つのウェル中に分割し（０．５ｍＬ中の１ｅ５細胞）、薬物をこれらのウェルの３つに加えた（１Ｍレナリドミド）。
－ ６日目に、細胞をペレット化し、各ウェルからの２０ｕＬの上清を回収し、１８０ｕＬのＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と３７度で１時間にわたりインキュベートし、ＳＥＡＰ活性をプレートリーダー上で６５５ｎｍで読み取った。
（表１０）ＳＥＡＰ／デグロン及びＳＥＡＰ／デグロン／膜切断可能な構築物の構成
Figure 2024504613000058
結果
膜切断可能なデグロン系を、ＳＥＡＰ活性アッセイを使用して、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞株においてさらに評価した。テストされた構築物は、デグロンなし（「４１９」）、様々なリンカーのみを伴うＣ末端デグロン（「１１１８」、「１１４１」、「１１４３」、「１１４４」）、感染対照として使用される無関係なウイルス構築物（「１３２１」）を有した、又は以下の膜切断可能なデグロン系であった：
ＳＢ０１２０９（Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ配向）：
－ ＳはＳＥＡＰである。
－ＣはＡＤＡＭ１０／１７切断部位である。
－ＭＴはＰＤＧＦＲｂ膜貫通ドメインである。
－ＤはＣＲＢＮベースのデグロン（ｄ９１３）である。
図５中に示すように、ＳＥＡＰ酵素活性を、Ｊｕｒｋａｔ Ｔ細胞からの上清中で決定した。ＳＥＡＰ酵素活性を、「オン」（レナリドミドなし）に対する「オフ」（＋レナリドミド）のパーセンテージとして定量化し、表１１中に提示した。ＳＥＡＰ分泌が、Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ配向を有する膜切断可能なデグロン構築物（「１２０９」）についてのＪｕｒｋａｔ Ｔ細胞におけるレナリドミドの添加時に有意に低下した。ＳＥＡＰ分泌はまた、デグロンを伴わない構築物（「４１９」）についてのＳＥＡＰ活性と比べて、Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ配向構築物（「１２０９」）について、レナリドミド依存的に低下した。結果は、膜係留ＳＥＡＰの分解が、免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）レナリドミドの存在において生じたことを示唆し、Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ配向においてキメラタンパク質を使用した膜切断可能なデグロン系によって、分泌分子の薬物依存的分解／調節が可能になることを示す。
（表１１）ＳＥＡＰ／デグロン／膜切断可能なＱｕａｎｔｉＢｌｕｅアッセイ（Ｊｕｒｋａｔ細胞）
Figure 2024504613000059
実施例４－膜切断可能なデグロン系を使用した、調節されたサイトカイン分泌
膜切断可能なデグロン系を、サイトカインの分泌を調節する能力についてさらに評価した。
方法
図６中に例証するように、ｐＬ１７ｄウイルスベクター構築物を生成し、それは、その天然形態（「１５８４」）において、又は膜切断可能なデグロンに融合されたキメラタンパク質（「１５８５」）として、ヒトＩＬ－１０（ｈＩＬ－１０）を発現した。ウイルスベクターはまた、細胞数、生存率、及び形質導入効率についての標準化対照として、別々のプロモーターからヒトＩＬ－１２（ｈＩＬ－１２）を発現した。調べられた構築物を、表１２Ｂ中に列挙される関連配列を伴って、表１２Ａ中に記載する。
サイトカイン分泌を、以下の全般的プロトコールに従って評価した：
－０日目：ドナーＴ細胞（以前に、上に記載されたように濃縮された）を解凍し、ＣＤ３／ＣＤ２８Ｄｙｎａｂｅａｄｓで活性化した。
－１日目：Ｔ細胞をウイルス構築物で形質導入した（１ｅ６細胞当たり１００ｋのＧｏＳｔｉｘ値）。
－２日目：培地を変えた。
－４日目：細胞を継代した。
－７日目：細胞をスピンダウンし、培地で３回洗浄し、次に培地＋／－ １μＭのレナリドミド中に再懸濁した。
－９日目：上清を回収し、ＬｕｍｉｎｅｘアッセイによりｈＩＬ１０及びｈＩＬ１２濃度について評価した。
（表１２Ａ）ＩＬ－１０／デグロン／膜切断可能な構築物の構成
Figure 2024504613000060
（表１２Ｂ）ＩＬ－１０／デグロン／膜切断可能な構築物の配列
Figure 2024504613000061
Figure 2024504613000062
Figure 2024504613000063
結果
膜切断可能なデグロン系を、サイトカインの分泌を調節する能力についてさらに評価する。テストされた構築物は、以下に記載される膜切断可能なデグロン系において、デグロンを伴わない天然ｈＩＬ－１０（「１５８４」）を発現し、デグロンを伴わない陰性対照タンパク質（「１０４３」）を発現し、又はｈＩＬ－１０キメラタンパク質を発現した：
１５８５（Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄ配向）：
－ＳはｈＩＬ－１２である。
－ＣはＡＤＡＭ１０／１７切断部位である。
－ＭＴはＰＤＧＦＲｂ膜貫通ドメインである。
－ＤはＣＲＢＮベースのデグロン（ｄ９１３）である。
図７中に示すように、ｈＩＬ－１０分泌を、ＩＬ－１２発現に対して標準化されたように、ドナー由来Ｔ細胞からの上清中で決定し、表１３中に提示する。ｈＩＬ－１０は、無関係なタンパク質を発現する構築物で形質導入されたＴ細胞（「１０４３」）については検出されなかった。レナリドミドの添加によって、天然ｈＩＬ－１０を発現するウイルス構築物（「１５８４」）の低下分泌はもたらされなかった。対照的に、レナリドミドの添加によって、上清中で検出されたｈＩＬ－１０における約５０％減少がもたらされ、膜切断可能なデグロンフォーマットによって、初代Ｔ細胞からのｈＩＬ－１０分泌の調節が可能になったことを示している。
（表１３）
Figure 2024504613000064
実施例５－ＡＡＶデグロン系
デグロン媒介性調節を、ＡＡＶベースの送達系を使用して評価した。
方法
ＡＡＶ２及びＡＡＶ８ウイルスベクター構築物を生成したが、それらは、Ａ（ＥＡＡＫ）３Ａリンカー（配列番号１９３）を使用して、Ｃ末端デグロンに融合されたキメラタンパク質としてナノルシフェラーゼを発現した。構築物は、ＡＡＶ２又はＡＡＶ８キャプシドタンパク質のいずれかを用いたパッケージングベクターを使用して生成した。構築物ナノルシフェラーゼ／デグロン融合体の配列を表１４中に列挙する。
ルシフェラーゼ活性を、以下の一般的なプロトコールに従って評価した：
－０日目：Ｈｅｐ３ｂ細胞を、９６ウェルプレート中のウェル当たり５０，０００個の細胞で播種した。
－１日目：１ｅ６ｖｇ／細胞ＡＡＶ２又は３ｅ６ｖｇ／細胞ＡＡＶ８を、１μＭのレナリドミド（又は１μＭ～．０１μＭのレナリドミド又はポマリドミド）の存在又は非存在において細胞に加えた。
－３日目：細胞を溶解し、ルシフェラーゼ活性を、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｎａｎｏｇｌｏキットを用いて測定した。
（表１４）ナノルシフェラーゼ／デグロン構築物の配列
Figure 2024504613000065
Figure 2024504613000066
Figure 2024504613000067
Figure 2024504613000068
結果
ＡＡＶベースの送達系を、タンパク質発現のデグロン媒介性調節について評価した。テストされた構築物は、デグロンドメインを含むナノルシフェラーゼキメラタンパク質を発現した。図８中に示すように、ＡＡＶ２ベースの（左パネル）又はＡＡＶ８ベースの（右パネル）構築物のいずれかで形質導入され、レナリドミドで処理されたＨｅｐ３Ｂ細胞によって、レナリドミドで処理されていない細胞と比べて、ルシフェラーゼ活性における有意な減少（約４０～８０倍）がもたらされたが、デグロン系が、タンパク質発現の制御を可能にするＡＡＶベースのフォーマットにおいて機能的であったことを示す。
デグロン系の薬剤反応性を、ＡＡＶベースのフォーマットにおいてさらに評価した。ＡＡＶ２ベースの構築物を使用して、二つのＩＭｉＤ（レナリドミド及びポマリドミド）を滴定し、インビトロで最小有効量を決定した。図９中に示すように、表１５中で定量化したように、ＡＡＶ２構築物で形質導入され、１～０．０１μＭレナリドミド（左パネル）又はポマリドミド（左パネル）のいずれかで処理されたＨｅｐ３Ｂ細胞によって、レナリドミドで処理されなかった細胞と比べて、テストした全ての濃度でルシフェラーゼ活性における有意な減少がもたらされた。注目すべきことに、ナノルシフェラーゼシグナルは、いずれの薬物でも０．０５から０．０１μＭに増加し、（マウスにおけるＰＫ試験に基づく）薬物の生理学的濃度で有効性を実証し、０．０１μＭ濃度が最小有効用量に近づき得ることを示している。
（表１５）ＩＭｉＤに対するナノルシフェラーゼ／デグロンキメラ応答
Figure 2024504613000069
他の配列
ＨＩＶ－１プロテアーゼ（配列番号１４４）：ＰＱＶＴＬＷＱＲＰＬＶＴＩＫＩＧＧＱＬＫＥＡＬＬＤＴＧＡＤＤＴＶＬＥＥＭＳＬＰＧＲＷＫＰＫＭＩＧＧＩＧＧＦＩＫＶＲＱＹＤＱＩＬＩＥＩＣＧＨＫＡＩＧＴＶＬＶＧＰＴＰＶＮＩＩＧＲＮＬＬＴＱＩＧＣＴＬＮＦ

アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）（配列番号１５６）：
ＭＧＡＡＳＧＲＲＧＰＧＬＬＬＰＬＰＬＬＬＬＬＰＰＱＰＡＬＡＬＤＰＧＬＱＰＧＮＦＳＡＤＥＡＧＡＱＬＦＡＱＳＹＮＳＳＡＥＱＶＬＦＱＳＶＡＡＳＷＡＨＤＴＮＩＴＡＥＮＡＲＲＱＥＥＡＡＬＬＳＱＥＦＡＥＡＷＧＱＫＡＫＥＬＹＥＰＩＷＱＮＦＴＤＰＱＬＲＲＩＩＧＡＶＲＴＬＧＳＡＮＬＰＬＡＫＲＱＱＹＮＡＬＬＳＮＭＳＲＩＹＳＴＡＫＶＣＬＰＮＫＴＡＴＣＷＳＬＤＰＤＬＴＮＩＬＡＳＳＲＳＹＡＭＬＬＦＡＷＥＧＷＨＮＡＡＧＩＰＬＫＰＬＹＥＤＦＴＡＬＳＮＥＡＹＫＱＤＧＦＴＤＴＧＡＹＷＲＳＷＹＮＳＰＴＦＥＤＤＬＥＨＬＹＱＱＬＥＰＬＹＬＮＬＨＡＦＶＲＲＡＬＨＲＲＹＧＤＲＹＩＮＬＲＧＰＩＰＡＨＬＬＧＤＭＷＡＱＳＷＥＮＩＹＤＭＶＶＰＦＰＤＫＰＮＬＤＶＴＳＴＭＬＱＱＧＷＮＡＴＨＭＦＲＶＡＥＥＦＦＴＳＬＥＬＳＰＭＰＰＥＦＷＥＧＳＭＬＥＫＰＡＤＧＲＥＶＶＣＨＡＳＡＷＤＦＹＮＲＫＤＦＲＩＫＱＣＴＲＶＴＭＤＱＬＳＴＶＨＨＥＭＧＨＩＱＹＹＬＱＹＫＤＬＰＶＳＬＲＲＧＡＮＰＧＦＨＥＡＩＧＤＶＬＡＬＳＶＳＴＰＥＨＬＨＫＩＧＬＬＤＲＶＴＮＤＴＥＳＤＩＮＹＬＬＫＭＡＬＥＫＩＡＦＬＰＦＧＹＬＶＤＱＷＲＷＧＶＦＳＧＲＴＰＰＳＲＹＮＦＤＷＷＹＬＲＴＫＹＱＧＩＣＰＰＶＴＲＮＥＴＨＦＤＡＧＡＫＦＨＶＰＮＶＴＰＹＩＲＹＦＶＳＦＶＬＱＦＱＦＨＥＡＬＣＫＥＡＧＹＥＧＰＬＨＱＣＤＩＹＲＳＴＫＡＧＡＫＬＲＫＶＬＱＡＧＳＳＲＰＷＱＥＶＬＫＤＭＶＧＬＤＡＬＤＡＱＰＬＬＫＹＦＱＰＶＴＱＷＬＱＥＱＮＱＱＮＧＥＶＬＧＷＰＥＹＱＷＨＰＰＬＰＤＮＹＰＥＧＩＤＬＶＴＤＥＡＥＡＳＫＦＶＥＥＹＤＲＴＳＱＶＶＷＮＥＹＡＥＡＮＷＮＹＮＴＮＩＴＴＥＴＳＫＩＬＬＱＫＮＭＱＩＡＮＨＴＬＫＹＧＴＱＡＲＫＦＤＶＮＱＬＱＮＴＴＩＫＲＩＩＫＫＶＱＤＬＥＲＡＡＬＰＡＱＥＬＥＥＹＮＫＩＬＬＤＭＥＴＴＹＳＶＡＴＶＣＨＰＮＧＳＣＬＱＬＥＰＤＬＴＮＶＭＡＴＳＲＫＹＥＤＬＬＷＡＷＥＧＷＲＤＫＡＧＲＡＩＬＱＦＹＰＫＹＶＥＬＩＮＱＡＡＲＬＮＧＹＶＤＡＧＤＳＷＲＳＭＹＥＴＰＳＬＥＱＤＬＥＲＬＦＱＥＬＱＰＬＹＬＮＬＨＡＹＶＲＲＡＬＨＲＨＹＧＡＱＨＩＮＬＥＧＰＩＰＡＨＬＬＧＮＭＷＡＱＴＷＳＮＩＹＤＬＶＶＰＦＰＳＡＰＳＭＤＴＴＥＡＭＬＫＱＧＷＴＰＲＲＭＦＫＥＡＤＤＦＦＴＳＬＧＬＬＰＶＰＰＥＦＷＮＫＳＭＬＥＫＰＴＤＧＲＥＶＶＣＨＡＳＡＷＤＦＹＮＧＫＤＦＲＩＫＱＣＴＴＶＮＬＥＤＬＶＶＡＨＨＥＭＧＨＩＱＹＦＭＱＹＫＤＬＰＶＡＬＲＥＧＡＮＰＧＦＨＥＡＩＧＤＶＬＡＬＳＶＳＴＰＫＨＬＨＳＬＮＬＬＳＳＥＧＧＳＤＥＨＤＩＮＦＬＭＫＭＡＬＤＫＩＡＦＩＰＦＳＹＬＶＤＱＷＲＷＲＶＦＤＧＳＩＴＫＥＮＹＮＱＥＷＷＳＬＲＬＫＹＱＧＬＣＰＰＶＰＲＴＱＧＤＦＤＰＧＡＫＦＨＩＰＳＳＶＰＹＩＲＹＦＶＳＦＩＩＱＦＱＦＨＥＡＬＣＱＡＡＧＨＴＧＰＬＨＫＣＤＩＹＱＳＫＥＡＧＱＲＬＡＴＡＭＫＬＧＦＳＲＰＷＰＥＡＭＱＬＩＴＧＱＰＮＭＳＡＳＡＭＬＳＹＦＫＰＬＬＤＷＬＲＴＥＮＥＬＨＧＥＫＬＧＷＰＱＹＮＷＴＰＮＳＡＲＳＥＧＰＬＰＤＳＧＲＶＳＦＬＧＬＤＬＤＡＱＱＡＲＶＧＱＷＬＬＬＦＬＧＩＡＬＬＶＡＴＬＧＬＳＱＲＬＦＳＩＲＨＲＳＬＨＲＨＳＨＧＰＱＦＧＳＥＶＥＬＲＨＳ

ＤＥＮＶ ＮＳ３ｐｒｏ（ＮＳ２Ｂ／ＮＳ３）＞ｓｐ｜Ｐ３３４７８｜１４７５－２０９３（配列番号１５７）：
ＳＧＶＬＷＤＴＰＳＰＰＥＶＥＲＡＶＬＤＤＧＩＹＲＩＭＱＲＧＬＬＧＲＳＱＶＧＶＧＶＦＱＤＧＶＦＨＴＭＷＨＶＴＲＧＡＶＬＭＹＱＧＫＲＬＥＰＳＷＡＳＶＫＫＤＬＩＳＹＧＧＧＷＲＦＱＧＳＷＮＴＧＥＥＶＱＶＩＡＶＥＰＧＫＮＰＫＮＶＱＴＡＰＧＴＦＫＴＰＥＧＥＶＧＡＩＡＬＤＦＫＰＧＴＳＧＳＰＩＶＮＲＥＧＫＩＶＧＬＹＧＮＧＶＶＴＴＳＧＴＹＶＳＡＩＡＱＡＫＡＳＱＥＧＰＬＰＥＩＥＤＥＶＦＲＫＲＮＬＴＩＭＤＬＨＰＧＳＧＫＴＲＲＹＬＰＡＩＶＲＥＡＩＲＲＮＶＲＴＬＩＬＡＰＴＲＶＶＡＳＥＭＡＥＡＬＫＧＭＰＩＲＹＱＴＴＡＶＫＳＥＨＴＧＫＥＩＶＤＬＭＣＨＡＴＦＴＭＲＬＬＳＰＶＲＶＰＮＹＮＭＩＩＭＤＥＡＨＦＴＤＰＡＳＩＡＲＲＧＹＩＳＴＲＶＧＭＧＥＡＡＡＩＦＭＴＡＴＰＰＧＳＶＥＡＦＰＱＳＮＡＶＩＱＤＥＥＲＤＩＰＥＲＳＷＮＳＧＹＥＷＩＴＤＦＰＧＫＴＶＷＦＶＰＳＩＫＳＧＮＤＩＡＮＣＬＲＫＮＧＫＲＶＩＱＬＳＲＫＴＦＤＴＥＹＱＫＴＫＮＮＤＷＤＹＶＶＴＴＤＩＳＥＭＧＡＮＦＲＡＤＲＶＩＤＰＲＲＣＬＫＰＶＩＬＫＤＧＰＥＲＶＩＬＡＧＰＭＰＶＴＶＡＳＡＡＱＲＲＧＲＩＧＲＮＱＮＫＥＧＤＱＹＶＹＭＧＱＰＬＮＮＤＥＤＨＡＨＷＴＥＡＫＭＬＬＤＮＩＮＴＰＥＧＩＩＰＡＬＦＥＰＥＲＥＫＳＡＡＩＤＧＥＹＲＬＲＧＥＡＲＫＴＦＶＥＬＭＲＲＧＤＬＰＶＷＬＳＹＫＶＡＳＥＧＦＱＹＳＤＲＲＷＣＦＤＧＥＲＮＮＱＶＬＥＥＮＭＤＶＥＭＷＴＫＥＧＥＲＫＫＬＲＰＲＷＬＤＡＲＴＹＳＤＰＬＡＬＲＥＦＫＥＦＡＡＧＲＲ

ＤＥＮＶ ＮＳ３ｐｒｏ（ＮＳ２Ｂ／ＮＳ３）＞ｓｐ｜Ｐ１４３４０｜１４７６－２０９３（配列番号１５８）：
ＡＧＶＬＷＤＶＰＳＰＰＰＶＧＫＡＥＬＥＤＧＡＹＲＩＫＱＫＧＩＬＧＹＳＱＩＧＡＧＶＹＫＥＧＴＦＨＴＭＷＨＶＴＲＧＡＶＬＭＨＫＧＫＲＩＥＰＳＷＡＤＶＫＫＤＬＩＳＹＧＧＧＷＫＬＥＧＥＷＫＥＧＥＥＶＱＶＬＡＬＥＰＧＫＮＰＲＡＶＱＴＫＰＧＬＦＫＴＮＡＧＴＩＧＡＶＳＬＤＦＳＰＧＴＳＧＳＰＩＩＤＫＫＧＫＶＶＧＬＹＧＮＧＶＶＴＲＳＧＡＹＶＳＡＩＡＱＴＥＫＳＩＥＤＮＰＥＩＥＤＤＩＦＲＫＲＫＬＴＩＭＤＬＨＰＧＡＧＫＴＫＲＹＬＰＡＩＶＲＥＡＩＫＲＧＬＲＴＬＩＬＡＰＴＲＶＶＡＡＥＭＥＥＡＬＲＧＬＰＩＲＹＱＴＰＡＩＲＡＥＨＴＧＲＥＩＶＤＬＭＣＨＡＴＦＴＭＲＬＬＳＰＶＲＶＰＮＹＮＬＩＩＭＤＥＡＨＦＴＤＰＡＳＩＡＡＲＧＹＩＳＴＲＶＥＭＧＥＡＡＧＩＦＭＴＡＴＰＰＧＳＲＤＰＦＰＱＳＮＡＰＩＭＤＥＥＲＥＩＰＥＲＳＷＳＳＧＨＥＷＶＴＤＦＫＧＫＴＶＷＦＶＰＳＩＫＡＧＮＤＩＡＡＣＬＲＫＮＧＫＫＶＩＱＬＳＲＫＴＦＤＳＥＹＶＫＴＲＴＮＤＷＤＦＶＶＴＴＤＩＳＥＭＧＡＮＦＫＡＥＲＶＩＤＰＲＲＣＭＫＰＶＩＬＴＤＧＥＥＲＶＩＬＡＧＰＭＰＶＴＨＳＳＡＡＱＲＲＧＲＩＧＲＮＰＫＮＥＮＤＱＹＩＹＭＧＥＰＬＥＮＤＥＤＣＡＨＷＫＥＡＫＭＬＬＤＮＩＮＴＰＥＧＩＩＰＳＭＦＥＰＥＲＥＫＶＤＡＩＤＧＥＹＲＬＲＧＥＡＲＫＴＦＶＤＬＭＲＲＧＤＬＰＶＷＬＡＹＲＶＡＡＥＧＩＮＹＡＤＲＲＷＣＦＤＧＩＫＮＮＱＩＬＥＥＮＶＥＶＥＩＷＴＫＥＧＥＲＫＫＬＫＰＲＷＬＤＡＫＩＹＳＤＰＬＡＬＫＥＦＫＥＦＡＡＧＲＫ

ＤＥＮＶ ＮＳ３ｐｒｏ（ＮＳ２Ｂ／ＮＳ３）＞ｓｐ｜Ｑ９９Ｄ３５｜１４７４－２０９２（配列番号１５９）：
ＳＧＶＬＷＤＶＰＳＰＰＥＴＱＫＡＥＬＥＥＧＶＹＲＩＫＱＱＧＩＦＧＫＴＱＶＧＶＧＶＱＫＥＧＶＦＨＴＭＷＨＶＴＲＧＡＶＬＴＨＮＧＫＲＬＥＰＮＷＡＳＶＫＫＤＬＩＳＹＧＧＧＷＲＬＳＡＱＷＱＫＧＥＥＶＱＶＩＡＶＥＰＧＫＮＰＫＮＦＱＴＭＰＧＩＦＱＴＴＴＧＥＩＧＡＩＡＬＤＦＫＰＧＴＳＧＳＰＩＩＮＲＥＧＫＶＶＧＬＹＧＮＧＶＶＴＫＮＧＧＹＶＳＧＩＡＱＴＮＡＥＰＤＧＰＴＰＥＬＥＥＥＭＦＫＫＲＮＬＴＩＭＤＬＨＰＧＳＧＫＴＲＫＹＬＰＡＩＶＲＥＡＩＫＲＲＬＲＴＬＩＬＡＰＴＲＶＶＡＡＥＭＥＥＡＬＫＧＬＰＩＲＹＱＴＴＡＴＫＳＥＨＴＧＲＥＩＶＤＬＭＣＨＡＴＦＴＭＲＬＬＳＰＶＲＶＰＮＹＮＬＩＩＭＤＥＡＨＦＴＤＰＡＳＩＡＡＲＧＹＩＳＴＲＶＧＭＧＥＡＡＡＩＦＭＴＡＴＰＰＧＴＡＤＡＦＰＱＳＮＡＰＩＱＤＥＥＲＤＩＰＥＲＳＷＮＳＧＮＥＷＩＴＤＦＶＧＫＴＶＷＦＶＰＳＩＫＡＧＮＤＩＡＮＣＬＲＫＮＧＫＫＶＩＱＬＳＲＫＴＦＤＴＥＹＱＫＴＫＬＮＤＷＤＦＶＶＴＴＤＩＳＥＭＧＡＮＦＫＡＤＲＶＩＤＰＲＲＣＬＫＰＶＩＬＴＤＧＰＥＲＶＩＬＡＧＰＭＰＶＴＶＡＳＡＡＱＲＲＧＲＶＧＲＮＰＱＫＥＮＤＱＹＩＦＭＧＱＰＬＮＫＤＥＤＨＡＨＷＴＥＡＫＭＬＬＤＮＩＮＴＰＥＧＩＩＰＡＬＦＥＰＥＲＥＫＳＡＡＩＤＧＥＹＲＬＫＧＥＳＲＫＴＦＶＥＬＭＲＲＧＤＬＰＶＷＬＡＨＫＶＡＳＥＧＩＫＹＴＤＲＫＷＣＦＤＧＥＲＮＮＱＩＬＥＥＮＭＤＶＥＩＷＴＫＥＧＥＫＫＫＬＲＰＲＷＬＤＡＲＴＹＳＤＰＬＡＬＫＥＦＫＤＦＡＡＧＲＫ

ＤＥＮＶ ＮＳ３ｐｒｏ（ＮＳ２Ｂ／ＮＳ３）＞ｓｐ｜Ｑ５ＵＣＢ８｜１４７５－２０９２（配列番号１６０）：
ＳＧＡＬＷＤＶＰＳＰＡＡＴＱＫＡＡＬＳＥＧＶＹＲＩＭＱＲＧＬＦＧＫＴＱＶＧＶＧＩＨＩＥＧＶＦＨＴＭＷＨＶＴＲＧＳＶＩＣＨＥＴＧＲＬＥＰＳＷＡＤＶＲＮＤＭＩＳＹＧＧＧＷＲＬＧＤＫＷＤＫＥＥＤＶＱＶＬＡＩＥＰＧＫＮＰＫＨＶＱＴＫＰＧＬＦＫＴＬＴＧＥＩＧＡＶＴＬＤＦＫＰＧＴＳＧＳＰＩＩＮＲＫＧＫＶＩＧＬＹＧＮＧＶＶＴＫＳＧＤＹＶＳＡＩＴＱＡＥＲＩＧＥＰＤＹＥＶＤＥＤＩＦＲＫＫＲＬＴＩＭＤＬＨＰＧＡＧＫＴＫＲＩＬＰＳＩＶＲＥＡＬＫＲＲＬＲＴＬＩＬＡＰＴＲＶＶＡＡＥＭＥＥＡＬＲＧＬＰＩＲＹＱＴＰＡＶＫＳＥＨＴＧＲＥＩＶＤＬＭＣＨＡＴＦＴＴＲＬＬＳＳＴＲＶＰＮＹＮＬＩＶＭＤＥＡＨＦＴＤＰＳＳＶＡＡＲＧＹＩＳＴＲＶＥＭＧＥＡＡＡＩＦＭＴＡＴＰＰＧＴＴＤＰＦＰＱＳＮＳＰＩＥＤＩＥＲＥＩＰＥＲＳＷＮＴＧＦＤＷＩＴＤＹＱＧＫＴＶＷＦＶＰＳＩＫＡＧＮＤＩＡＮＣＬＲＫＳＧＫＫＶＩＱＬＳＲＫＴＦＤＴＥＹＰＫＴＫＬＴＤＷＤＦＶＶＴＴＤＩＳＥＭＧＡＮＦＲＡＧＲＶＩＤＰＲＲＣＬＫＰＶＩＬＰＤＧＰＥＲＶＩＬＡＧＰＩＰＶＴＰＡＳＡＡＱＲＲＧＲＩＧＲＮＰＡＱＥＤＤＱＹＶＦＳＧＤＰＬＫＮＤＥＤＨＡＨＷＴＥＡＫＭＬＬＤＮＩＹＴＰＥＧＩＩＰＴＬＦＧＰＥＲＥＫＴＱＡＩＤＧＥＦＲＬＲＧＥＱＲＫＴＦＶＥＬＭＲＲＧＤＬＰＶＷＬＳＹＫＶＡＳＡＧＩＳＹＫＤＲＥＷＣＦＴＧＥＲＮＮＱＩＬＥＥＮＭＥＶＥＩＷＴＲＥＧＥＫＫＫＬＲＰＫＷＬＤＡＲＶＹＡＤＰＭＡＬＫＤＦＫＥＦＡＳＧＲＫ

ＰＥＳＴ（ヒトＩκＢαの残基２７７－３０７の二つのコピー；配列番号１６１）：
ＬＱＭＬＰＥＳＥＤＥＥＳＹＤＴＥＳＥＦＴＥＦＴＥＤＥＬＰＹＤＤＧＳＬＱＭＬＰＥＳＥＤＥＥＳＹＤＴＥＳＥＦＴＥＦＴＥＤＥＬＰＹＤＤ

ＧＲＲ（ヒトｐ１０５の残基３５２－４０８；配列番号１６２）：
ＥＩＫＤＫＥＥＶＱＲＫＲＱＫＬＭＰＮＦＳＤＳＦＧＧＧＳＧＡＧＡＧＧＧＧＭＦＧＳＧＧＧＧＧＧＴＧＳＴＧＰＧＹＳＦＰＨ

ＤＲＲ（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０－２９５；配列番号１６３）：
ＩＤＤＥＮＧＳＶＩＬＱＤＤＤＹＤＤＧＮＮＨＩＰＦＥＤＤＤＶＹＮＹＮＤＮＤＤＤＤＥＲＩＥＦＥＤＤＤＤＤＤＤＤＳＩＤＮＤＳＶＭＤＲＫＱＰＨＫＡＥＤＥＳＥＤＶＥＤＶＥＲＶＳＫＫＤ

ＳＮＳ（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（インフルエンザＡ又はインフルエンザＢのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２；例、配列番号１６４）：
ＰＥＳＭＲＥＥＹＲＫＥＧＳＫＲＩＫＣＰＤＣＥＰＦＣＮＫＲＧＳＰＥＳＭＲＥＥＹＲＫＥ

ＲＰＢ（酵母ＲＰＢの残基１６８８－１７０２の四つのコピー；配列番号１６５）：
ＲＳＹＳＰＴＳＰＮＹＳＰＴＳＰＳＧＳＹＳＰＴＳＰＮＹＳＰＴＳＰＳＧＧＳＲＳＹＳＰＴＳＰＮＹＳＰＴＳＰＳＧＳＹＳＰＴＳＰＮＹＳＰＴＳＰＳＧ

ＳＰｍｉｘ（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（インフルエンザＡウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２；配列番号１６６）：
ＰＥＳＭＲＥＥＹＲＫＥＧＳＳＬＬＴＥＶＥＴＰＧＳＰＥＳＭＲＥＥＹＲＫＥＧＳＳＬＬＴＥＶＥＴＰＧＳＰＥＳＭＲＥＥＹＲＫＥ

ＮＳ２（インフルエンザＡウイルスＮＳタンパク質の残基７９－９３の三つのコピー；配列番号１６７）：
ＬＩＥＥＶＲＨＲＬＫＴＴＥＮＳＧＳＬＩＥＥＶＲＨＲＬＫＴＴＥＮＳＧＳＬＩＥＥＶＲＨＲＬＫＴＴＥＮＳＧＳ

ＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼの残基１０６－１４２、配列番号１６８）：
ＦＰＰＥＶＥＥＱＤＤＧＴＬＰＭＳＣＡＱＥＳＧＭＤＲＨＰＡＡＣＡＳＡＲＩＮＶ

マウスＯＤＣ（残基４２２－４６１；配列番号１６９）：
ＳＨＧＦＰＰＥＶＥＥＱＡＡＧＴＬＰＭＳＣＡＱＥＳＧＭＤＲＨＰＡＡＣＡＳＡＲＩＮＶ
解釈
本明細書中に開示される全ての参考文献、特許、及び特許出願は、その各々が引用される主題に関して参照により組み入れられ、それらは、一部の場合では、文書の全体を包含し得る。
本明細書及び特許請求の範囲において本明細書中で使用される不定冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、反対に明確に示されない場合、「少なくとも一つ」を意味すると理解されるべきである。
反対に明確に示されない場合、二つ以上の工程又は行為を含む、本明細書中で請求される任意の方法において、方法の工程又は行為の順序が、方法の工程又は行為が、記載されている順序に必ずしも限定されないことも理解すべきである。
特許請求の範囲において、ならびに上の明細書において、全ての移行句、例えば「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「運ぶ（ｃａｒｒｙｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ）」、「保持する（ｈｏｌｄｉｎｇ）」、「で構成される（ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ）」など、及び同様のものが、無制限である、即ち、含むが、限定されないことを意味すると理解すべきである。移行句「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ」（からなる）及び「ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ」（から本質的になる）のみが、米国特許庁特許審査手続マニュアルのセクション２１１１．０３において記載されているように、それぞれクローズド又はセミクローズドの移行句であるものとする。

Claims (18)

  1. プロモーターと膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列とを含む発現カセットを含む操作された核酸であって、Ｎ末端からＣ末端に配向されており、式：
    Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有し、
    式中、
    Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、
    Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、
    ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、かつ
    Ｄはデグロンを含み、
    前記プロモーターは、前記外因性ポリヌクレオチド配列に動作可能に連結され、かつＳ－Ｃ－ＭＴ－Ｄが、単一ポリペプチドとして発現されるように構成されており、
    場合により、前記操作された核酸は、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、及びネイキッドプラスミドからなる群から選択される、
    操作された核酸。
  2. ａ）前記プロモーターは構成的プロモーターであり、
    場合により、前記構成的プロモーターは、ＣＡＧ、ＨＬＰ、ＣＭＶ、ＥＦＳ、ＳＦＦＶ、ＳＶ４０、ＭＮＤ、ＰＧＫ、ＵｂＣ、ｈＥＦ１ａＶ１、ｈＣＡＧＧ、ｈＥＦ１ａＶ２、ｈＡＣＴｂ、ｈｅＩＦ４Ａ１、ｈＧＡＰＤＨ、ｈＧＲＰ７８、ｈＧＲＰ９４、ｈＨＳＰ７０、ｈＫＩＮｂ、及びｈＵＢＩｂからなる群から選択され；ならびに／あるいは
    ｂ）前記プロモーターは誘導性プロモーターであり、
    場合により、前記誘導性プロモーターは、ｍｉｎＰ、ＮＦｋＢ応答エレメント、ＣＲＥＢ応答エレメント、ＮＦＡＴ応答エレメント、ＳＲＦ応答エレメント１、ＳＲＦ応答エレメント２、ＡＰ１応答エレメント、ＴＣＦ－ＬＥＦ応答エレメントプロモーター融合体、低酸素応答性エレメント、ＳＭＡＤ結合エレメント、ＳＴＡＴ３結合部位、ｍｉｎＣＭＶ、ＹＢ＿ＴＡＴＡ、ｍｉｎＴＫ、インデューサー分子応答性プロモーター、及びそれらのタンデムリピートからなる群から選択され；ならびに／あるいは
    ｃ）前記プロモーターは合成プロモーターであり；ならびに／あるいは
    ｄ）前記プロモーターは組織特異的プロモーターである、
    請求項１に記載の操作された核酸。
  3. ａ）前記分泌性エフェクター分子は、前記分泌性エフェクター分子に対して天然の天然シグナルペプチドを含み；あるいは
    ｂ）前記分泌性エフェクター分子は、前記分泌性エフェクター分子に対して非天然の非天然シグナルペプチドを含み、
    場合により、前記非天然シグナルペプチドは、ＩＬ１２、ＩＬ２、最適化ＩＬ２、トリプシオンゲン－２、ガウシアルシフェラーゼ、ＣＤ５、ヒトＩｇＫＶＩＩ、マウスＩｇＫＶＩＩ、ＶＳＶ－Ｇ、プロラクチン、血清アルブミンプレタンパク質、アズロシジンプレタンパク質、オステオネクチン、ＣＤ３３、ＩＬ６、ＩＬ８、ＣＣＬ２、ＴＩＭＰ２、ＶＥＧＦＢ、オステオプロテゲリン、セルピンＥ１、ＧＲＯアルファ、ＣＸＣＬ１２、ＩＬ２１、ＣＤ８、及びＧＭＣＳＦからなる群から選択される、
    請求項１又は請求項２に記載の操作された核酸。
  4. 前記分泌性エフェクター分子は、治療クラスから選択され、
    前記治療クラスは、サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ペプチド、及び酵素からなる群から選択され、
    場合により、前記分泌性エフェクター分子は、ヒト由来エフェクター分子であり、
    場合により、前記サイトカインは、ＩＬ１－ベータ、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ１５、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１８、ＩＬ２１、ＩＬ２２、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン－ガンマ、及びＴＮＦ－アルファからなる群から選択され、
    場合により、前記ケモカインは、ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１からなる群から選択され、
    場合により、前記ホーミング分子は、抗インテグリンアルファ４、ベータ７；抗ＭＡｄＣＡＭ；ＳＤＦｌ；及びＭＭＰ－２からなる群から選択され、
    場合により、前記成長因子は、ＦＬＴ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦからなる群から選択され、
    場合により、前記共活性化分子は、４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌからなる群から選択され、
    場合により、前記腫瘍微小環境修飾因子は、アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータインヒビター、免疫チェックポイントインヒビター、ＶＥＧＦインヒビター、及びＨＰＧＥ２からなる群から選択され、
    場合により、前記ＴＧＦベータインヒビターは、抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－ＴＲＡＰ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、
    場合により、前記免疫チェックポイントインヒビターは、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭ１抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体からなる群から選択され、ならびに
    場合により、前記ＶＥＧＦインヒビターは、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、又はそれらの組み合わせを含む、
    請求項１～３のいずれか一項に記載の操作された核酸。
  5. ａ）前記プロテアーゼ切断部位は、１型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ切断部位、ＳＩＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、フリンプロテアーゼ切断部位、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ切断部位、マトリプターゼプロテアーゼ切断部位、マトリプターゼ－２プロテアーゼ切断部位、ＭＭＰ９プロテアーゼ切断部位、及びＮＳ３プロテアーゼ切断部位からなる群から選択されるプロテアーゼにより切断可能であり；ならびに／あるいは
    ｂ）前記細胞膜係留ドメインは、膜貫通－細胞内ドメイン又は膜貫通ドメインを含み；ならびに／あるいは
    ｃ）前記膜貫通－細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインは、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＥｐｏＲ、又はＢＴＬＡから由来し；ならびに／あるいは
    ｄ）前記細胞膜係留ドメインは、細胞表面受容体、又はその細胞膜結合部分を含み；ならびに／あるいは
    ｅ）細胞中で発現された場合、前記分泌性エフェクター分子は、前記細胞の細胞膜に係留され；ならびに／あるいは
    ｆ）前記プロテアーゼ切断部位を切断することが可能なプロテアーゼを発現する細胞中で発現された場合、前記分泌性エフェクター分子が前記細胞膜から放出され；ならびに／あるいは
    ｇ）前記細胞膜上に発現される前記プロテアーゼは、前記細胞に対して内因性であり；ならびに／あるいは
    ｈ）前記プロテアーゼは、１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ－２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼからなる群から選択され；ならびに／あるいは
    ｉ）前記細胞膜上に発現される前記プロテアーゼは、前記細胞に対して異種であり；
    ｊ）前記プロテアーゼは、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）であり；ならびに／あるいは
    ｋ）前記プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含み；ならびに／あるいは
    ｌ）前記ＮＳ３プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ接合点切断部位を含み；ならびに／あるいは
    ｍ）前記プロテアーゼは、プロテアーゼインヒビターにより抑制され得、
    場合により、前記プロテアーゼインヒビターは、シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシロプレビルからなる群から選択され；ならびに／あるいは
    ｎ）前記プロテアーゼの発現は、調節が可能である、
    請求項１～４のいずれか一項に記載の操作された核酸。
  6. 免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）への応答においてセレブロン（ＣＲＢＮ）に結合することが可能でありそれにより前記分泌性エフェクター分子のユビキチン経路媒介性分解を促進するセレブロン（ＣＲＢＮ）ポリペプチド基質ドメインを、前記デグロンは含み、
    場合により、前記ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫlａ、ＺＦＰ９１、ＧＳＰＴ１、ＭＥＩＳ２、ＧＳＳ Ｅ４Ｆ１、ＺＮ２７６、ＺＮ５１７、ＺＮ５８２、ＺＮ６５３、ＺＮ６５４、ＺＮ６９２、ＺＮ７８７、及びＺＮ８２７、又はＣＲＢＮの薬物誘導性結合が可能なその断片からなる群から選択され、
    場合により、前記ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、天然ＣＲＢＮポリペプチド配列のキメラ融合産物であり、
    場合により、前記ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、ＦＮＶＬＭ ＶＨＫＲＳ ＨＴＧＥＲ ＰＬＱＣＥ ＩＣＧＦＴ ＣＲＱＫＧ ＮＬＬＲＨ ＩＫＬＨＴ ＧＥＫＰＦ ＫＣＨＬＣ ＮＹＡＣＱ ＲＲＤＡＬ（配列番号１８９）のアミノ酸配列を有するＩＫＺＦ３／ＺＦＰ９１／ＩＫＺＦ３キメラ融合産物であり、
    場合により、前記ＩＭｉＤはＦＤＡ承認薬物であり、前記ＩＭｉＤは、サリドマイド、レナリドミド、及びポマリドミドからなる群から選択され、
    場合により、前記デグロンは、ＨＣＶ ＮＳ４デグロン、ＰＥＳＴ（ヒトＩκＢαの残基２７７～３０７の二つのコピー）、ＧＲＲ（ヒトｐ１０５の残基３５２～４０８）、ＤＲＲ（酵母Ｃｄｃ３４の残基２１０～２９５）、ＳＮＳ（ＳＰ２及びＮＢのタンデムリピート（Ａ型インフルエンザ又はＢ型インフルエンザのＳＰ２－ＮＢ－ＳＰ２）、ＲＰＢ（酵母ＲＰＢの残基１６８８～１７０２の四つのコピー）、ＳＰｍｉｘ（ＳＰ１及びＳＰ２のタンデムリピート（Ａ型インフルエンザウイルスＭ２タンパク質のＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２－ＳＰ１－ＳＰ２）、ＮＳ２（Ａ型インフルエンザウイルスＮＳタンパク質の残基７９～９３の三つのコピー）、ＯＤＣ（オルニチンデカルボキシラーゼの残基１０６～１４２）、Ｎｅｋ２Ａ、マウスＯＤＣ（残基４２２～４６１）、マウスＯＤＣ＿ＤＡ（Ｄ４３３Ａ及びＤ４３４Ａ点変異を含むｍＯＤＣの残基４２２～４６１）、ＡＰＣ／Ｃデグロン、ＣＯＰ１ Ｅ３リガーゼ結合デグロンモチーフ、ＣＲＬ４－Ｃｄｔ２結合ＰＩＰデグロン、アクチンフィリン結合デグロン、ＫＥＡＰ１結合デグロン、ＫＬＨＬ２及びＫＬＨＬ３結合デグロン、ＭＤＭ２結合モチーフ、Ｎ－デグロン、低酸素シグナル伝達におけるヒドロキシプロリン修飾、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＳＣＦユビキチンリガーゼ結合ホスホデグロン、植物ホルモン依存的ＳＣＦ－ＬＲＲ結合デグロン、ＤＳＧｘｘＳ（配列番号１９０）リン依存的デグロン、Ｓｉａｈ結合モチーフ、ＳＰＯＰ ＳＢＣドッキングモチーフ、ならびにＰＣＮＡ結合ＰＩＰボックスからなる群から選択され、あるいは
    場合により、前記デグロンは、前記細胞膜係留ドメインのＣ末端に局在化されている、
    請求項１～５のいずれか一項に記載の操作された核酸。
  7. 請求項１～６のいずれか一項に記載の操作された核酸を含む発現ベクターであって、場合により、ウイルスベクターである、発現ベクター。
  8. 請求項１～６のいずれか一項に記載の操作された核酸によりコードされる、膜切断可能なキメラタンパク質。
  9. Ｎ末端からＣ末端に配向された膜切断可能なキメラタンパク質であって、式：
    Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有し、
    式中、
    Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、
    Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、
    ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、
    Ｄはデグロンを含み、かつ
    Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄは、単一ポリペプチドとして発現されるように構成されている、
    膜切断可能なキメラタンパク質。
  10. 請求項１～６のいずれか一項に記載の操作された核酸、又は請求項７に記載の発現ベクター、又は請求項８もしくは請求項９に記載の膜切断可能なキメラタンパク質を含む、単離細胞であって、
    場合により、前記細胞は、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、赤血球、血小板細胞、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される自己細胞又は同種細胞である、
    単離細胞。
  11. 操作された核酸を含む単離細胞であって、前記操作された核酸は、プロモーターと膜切断可能なキメラタンパク質をコードする外因性ポリヌクレオチド配列とを含む発現カセットを含み、Ｎ末端からＣ末端に配向されており、式：
    Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有し、
    式中、
    Ｓは分泌性エフェクター分子を含み、
    Ｃはプロテアーゼ切断部位を含み、
    ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、かつ
    Ｄはデグロンを含み、
    前記プロモーターは、前記外因性ポリヌクレオチド配列に動作可能に連結され、かつＳ－Ｃ－ＭＴ－Ｄが、単一ポリペプチドとして発現されるように構成されており、
    場合により、前記細胞は、Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ガンマデルタＴ細胞、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）、調節性Ｔ細胞、ウイルス特異的Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、Ｂ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、自然リンパ球細胞、肥満細胞、好酸球、好塩基球、好中球、骨髄細胞、マクロファージ、単球、樹状細胞、赤血球、血小板細胞、ヒト胚性幹細胞（ＥＳＣ）、ＥＳＣ由来細胞、多能性幹細胞、間葉系間質細胞（ＭＳＣ）、人工多能性幹細胞（ｉＰＳＣ）、及びｉＰＳＣ由来細胞からなる群から選択される自己細胞又は同種細胞である、
    単離細胞。
  12. 前記細胞は抗原認識受容体をさらに含み、
    場合により、前記抗原認識受容体は、５Ｔ４、ＡＤＡＭ９、ＡＦＰ、ＡＸＬ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｂ７－Ｈ６、Ｃ４．４、ＣＡ６、カドヘリン３、カドヘリン６、ＣＣＲ４、ＣＤ１２３、ＣＤ１３３、ＣＤ１３８、ＣＤ１４２、ＣＤ１６６、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３５２、ＣＤ３７、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５６、ＣＤ６６ｅ、ＣＤ７０、ＣＤ７１、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＥＡ、ＣＥＡＣＡＭ５、クローディン１８．２、ｃＭｅｔ、ＣＳＰＧ４、ＣＴＬＡ、ＤＬＫ１、ＤＬＬ３、ＤＲ５、ＥＧＦＲ、ＥＮＰＰ３、ＥｐＣＡＭ、ＥｐｈＡ２、エフリンＡ４、ＥＴＢＲ、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ＦＲアルファ、ＦＲｂ、ＧＣＣ、ＧＤ２、ＧＦＲａ４、ｇｐＡ３３、ＧＰＣ３、ｇｐＮＢＭ、ＧＰＲＣ５、ＨＥＲ２、ＩＬ－１３Ｒ、ＩＬ－１３Ｒａ、ＩＬ－１３Ｒａ２、ＩＬ－８、ＩＬ－１５、ＩＬ１ＲＡＰ、インテグリンａＶ、ＫＩＴ、Ｌ１ＣＡＭ、ＬＡＭＰ１、ルイスＹ、ＬｅＹ、ＬＩＶ－１、ＬＲＲＣ、ＬＹ６Ｅ、ＭＣＳＰ、メソテリン、ＭＵＣ１、ＭＵＣ１６、ＭＵＣ１Ｃ、ＮａＰｉ２Ｂ、ネクチン４、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＯＴＣＨ３、ＮＹ ＥＳＯ １、オバリン、Ｐカドヘリン、ｐａｎ－Ｅｒｂ２、ＰＳＣＡ、ＰＳＭＡ、ＰＴＫ７、ＲＯＲ１、Ｓ Ａｕｒｅｓ、ＳＣＴ、ＳＬＡＭＦ７、ＳＬＩＴＲＫ６、ＳＳＴＲ２、ＳＴＥＡＰ１、サバイビン、ＴＤＧＦ１、ＴＩＭ１、ＴＲＯＰ２、及びＷＴ１からなる群から選択される抗原を認識し、
    場合により、前記抗原認識受容体は、抗原結合ドメインを含み、
    場合により、前記抗原結合ドメインは、抗体、抗体の抗原結合断片、Ｆ（ａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）断片、一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又は単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を含み、
    場合により、前記ｓｃＦｖは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含み、
    場合により、前記ＶＨ及びＶＬは、ペプチドリンカーにより分離されており、
    場合により、前記ｓｃＦｖは、構造ＶＨ－Ｌ－ＶＬ又はＶＬ－Ｌ－ＶＨを含み、ＶＨは前記重鎖可変ドメインであり、Ｌは前記ペプチドリンカーであり、かつＶＬは前記軽鎖可変ドメインであり、
    場合により、前記抗原認識受容体はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）であり、
    場合により、前記ＣＡＲは一つ又は複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含み、かつ前記一つ又は複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ鎖細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ９７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１１ａ－ＣＤ１８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２細胞内シグナル伝達ドメイン、ＩＣＯＳ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２７細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ１５４細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＯＸ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８細胞内シグナル伝達ドメイン、ＺＡＰ４０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＣＤ３０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＧＩＴＲ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＨＶＥＭ細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１０細胞内シグナル伝達ドメイン、ＤＡＰ１２細胞内シグナル伝達ドメイン、及びＭｙＤ８８細胞内シグナル伝達ドメインからなる群から選択され、
    場合により、前記ＣＡＲは膜貫通ドメインを含み、かつ前記膜貫通ドメインは、ＣＤ８膜貫通ドメイン、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、ＣＤ３ゼータ鎖膜貫通ドメイン、ＣＤ４膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ膜貫通ドメイン、ＯＸ４０膜貫通ドメイン、ＩＣＯＳ膜貫通ドメイン、ＣＴＬＡ－４膜貫通ドメイン、ＰＤ－１膜貫通ドメイン、ＬＡＧ－３膜貫通ドメイン、２Ｂ４膜貫通ドメイン、及びＢＴＬＡ膜貫通ドメインからなる群から選択され、ならびに／あるいは
    場合により、前記ＣＡＲは、前記抗原結合ドメインと前記膜貫通ドメインの間にスペーサー領域を含む、
    請求項１０又は請求項１１に記載の単離細胞。
  13. 請求項１～６のいずれか一項に記載の操作された核酸、請求項７に記載の発現ベクター、請求項８もしくは請求項９に記載の膜切断可能なキメラタンパク質、又は請求項１０～１２のいずれか一項に記載の単離細胞、及び医薬的に許容可能な担体、医薬的に許容可能な賦形剤、又はそれらの組み合わせを含む、組成物。
  14. 請求項１～６のいずれか一項に記載の操作された核酸、請求項７に記載の発現ベクター、請求項８もしくは請求項９に記載の膜切断可能なキメラタンパク質、請求項１０～１２のいずれか一項に記載の単離細胞、又は請求項１３に記載の組成物を投与することを含む、それを必要とする対象を治療する方法。
  15. 膜係留エフェクター分子の放出を誘導する方法であって、
    ａ）細胞を提供することであって、前記細胞は、膜結合プロテアーゼ及び膜切断可能なキメラタンパク質を含み、Ｎ末端からＣ末端に配向されており、式：
    Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄを有し、
    式中、
    Ｓはエフェクター分子を含み、
    Ｃは同族膜結合プロテアーゼ切断部位を含み、
    ＭＴは細胞膜係留ドメインを含み、
    Ｄは薬物誘導性デグロンを含み、かつ
    Ｓ－Ｃ－ＭＴ－Ｄは、単一ポリペプチドとして発現されるように構成されている、
    提供すること；ならびに
    ｂ）前記膜結合プロテアーゼ及び前記膜切断可能なキメラタンパク質の発現のために適切な条件下で前記細胞を培養すること、
    を含み、
    発現時に、前記膜切断可能なキメラタンパク質は、前記細胞の前記細胞膜に係留され、かつ
    発現時に、前記膜結合プロテアーゼは、前記膜切断可能なキメラタンパク質の前記同族膜結合プロテアーゼ切断部位を切断し、それにより前記エフェクター分子を前記細胞膜から放出する、
    方法。
  16. 前記細胞を、前記デグロンを誘導する薬物と接触させることをさらに含み、
    場合により、前記デグロンの誘導によって、前記膜切断可能なキメラタンパク質が分解される、
    請求項１５に記載の方法。
  17. 前記分泌性エフェクター分子は、治療クラスから選択され、
    前記治療クラスは、サイトカイン、ケモカイン、ホーミング分子、成長因子、共活性化分子、腫瘍微小環境修飾因子、リガンド、抗体、ペプチド、及び酵素からなる群から選択され、
    場合により、前記分泌性エフェクター分子は、ヒト由来エフェクター分子であり、
    場合により、前記サイトカインは、ＩＬ１－ベータ、ＩＬ２、ＩＬ４、ＩＬ６、ＩＬ７、ＩＬ１０、ＩＬ１２、ＩＬ１２ｐ７０融合タンパク質、ＩＬ１５、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１８、ＩＬ２１、ＩＬ２２、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン－ガンマ、及びＴＮＦ－アルファからなる群から選択され、
    場合により、前記ケモカインは、ＣＣＬ２１ａ、ＣＸＣＬ１０、ＣＸＣＬ１１、ＣＸＣＬ１３、ＣＸＣＬ１０－ＣＸＣＬ１１融合タンパク質、ＣＣＬ１９、ＣＸＣＬ９、及びＸＣＬ１からなる群から選択され、
    場合により、前記ホーミング分子は、抗インテグリンアルファ４、ベータ７；抗ＭＡｄＣＡＭ；ＳＤＦｌ；及びＭＭＰ－２からなる群から選択され、
    場合により、前記成長因子は、ＦＬＴ３Ｌ及びＧＭ－ＣＳＦからなる群から選択され、
    場合により、前記共活性化分子は、４－１ＢＢＬ及びＣＤ４０Ｌからなる群から選択され、
    場合により、前記腫瘍微小環境修飾因子は、アデノシンデアミナーゼ、ＴＧＦベータインヒビター、免疫チェックポイントインヒビター、ＶＥＧＦインヒビター、及びＨＰＧＥ２からなる群から選択され、
    場合により、前記ＴＧＦベータインヒビターは、抗ＴＧＦベータペプチド、抗ＴＧＦベータ抗体、ＴＧＦｂ－ＴＲＡＰ、及びそれらの組み合わせからなる群から選択され、
    場合により、前記免疫チェックポイントインヒビターは、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＰＤ－Ｌ２抗体、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＬＡＧ－３抗体、抗ＴＩＭ－３抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＫＩＲ抗体、抗Ｂ７－Ｈ３抗体、抗Ｂ７－Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗ＢＴＬＡ抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＴＮＦａ抗体、抗ＴＲＥＭｌ抗体、及び抗ＴＲＥＭ２抗体からなる群から選択され、ならびに
    場合により、前記ＶＥＧＦインヒビターは、抗ＶＥＧＦ抗体、抗ＶＥＧＦペプチド、又はそれらの組み合わせを含む、
    請求項１５又は請求項１６に記載の方法。
  18. ａ）前記同族プロテアーゼ切断部位は、１型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ切断部位、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ切断部位、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ切断部位、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ切断部位、ＳＩＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ切断部位、フリンプロテアーゼ切断部位、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ切断部位、マトリプターゼプロテアーゼ切断部位、マトリプターゼ－２プロテアーゼ切断部位、ＭＭＰ９プロテアーゼ切断部位、及びＮＳ３プロテアーゼ切断部位からなる群から選択されるプロテアーゼにより切断可能であり；ならびに／あるいは
    ｂ）前記細胞膜係留ドメインは、膜貫通－細胞内ドメイン又は膜貫通ドメインを含み、
    場合により、前記膜貫通－細胞内ドメイン及び／又は膜貫通ドメインは、ＰＤＧＦＲ－ベータ、ＣＤ８、ＣＤ２８、ＣＤ３ゼータ鎖、ＣＤ４、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－１、ＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＬＮＧＦＲ、ＥｐｏＲ、又はＢＴＬＡから由来し；ならびに／あるいは
    ｃ）前記細胞膜係留ドメインは、細胞表面受容体、又はその細胞膜結合部分を含み；ならびに／あるいは
    ｄ）前記プロテアーゼは、前記細胞に対して内因性であり、かつ１型膜貫通プロテアーゼ、ＩＩ型膜貫通プロテアーゼ、ＧＰＩアンカー型プロテアーゼ、ＡＤＡＭ８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１２プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１５プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１７プロテアーゼ、ＡＤＡＭ１９プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２１プロテアーゼ、ＡＤＡＭ２８プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３０プロテアーゼ、ＡＤＡＭ３３プロテアーゼ、ＢＡＣＥ１プロテアーゼ、ＢＡＣＥ２プロテアーゼ、ＳＩＰプロテアーゼ、ＭＴ１－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ３－ＭＭＰプロテアーゼ、ＭＴ５－ＭＭＰプロテアーゼ、フリンプロテアーゼ、ＰＣＳＫ７プロテアーゼ、マトリプターゼプロテアーゼ、マトリプターゼ－２プロテアーゼ、及びＭＭＰ９プロテアーゼからなる群から選択され；ならびに／あるいは
    ｅ）前記プロテアーゼは、前記細胞に対して異種であり、場合により、前記プロテアーゼが、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）非構造タンパク質３（ＮＳ３）であり；ならびに／あるいは
    ｆ）前記プロテアーゼ切断部位は、ＮＳ３プロテアーゼ切断部位を含み、場合により、前記ＮＳ３プロテアーゼ切断部位が、ＮＳ３／ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ／ＮＳ５Ａ、又はＮＳ５Ａ／ＮＳ５Ｂ接合部切断部位を含み；ならびに／あるいは
    ｇ）前記プロテアーゼは、プロテアーゼインヒビターにより抑制することができ、場合により、前記プロテアーゼインヒビターは、シメプレビル、ダノプレビル、アスナプレビル、シルプレビル、ボセプレビル、ソバプレビル、パリタプレビル、テラプレビル、グラゾプレビル、グレカプレビル、及びボキシロプレビルからなる群から選択され；ならびに／あるいは
    ｈ）前記プロテアーゼは、デグロンをさらに含み、場合により、前記プロテアーゼの発現が、調節が可能であり、
    場合により、免疫調節薬物（ＩＭｉＤ）への応答においてセレブロン（ＣＲＢＮ）に結合することが可能でありそれにより前記分泌性エフェクター分子のユビキチン経路媒介性分解を促進するセレブロン（ＣＲＢＮ）ポリペプチド基質ドメインを、前記デグロンは含み、
    場合により、前記ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、ＩＫＺＦ１、ＩＫＺＦ３、ＣＫlａ、ＺＦＰ９１、ＧＳＰＴ１、ＭＥＩＳ２、ＧＳＳ Ｅ４Ｆ１、ＺＮ２７６、ＺＮ５１７、ＺＮ５８２、ＺＮ６５３、ＺＮ６５４、ＺＮ６９２、ＺＮ７８７、及びＺＮ８２７、又はＣＲＢＮの薬物誘導性結合が可能なその断片からなる群から選択され、
    場合により、前記ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインは、天然ＣＲＢＮポリペプチド配列のキメラ融合産物であり、場合により、前記ＣＲＢＮポリペプチド基質ドメインが、ＦＮＶＬＭ ＶＨＫＲＳ ＨＴＧＥＲ ＰＬＱＣＥ ＩＣＧＦＴ ＣＲＱＫＧ ＮＬＬＲＨ ＩＫＬＨＴ ＧＥＫＰＦ ＫＣＨＬＣ ＮＹＡＣＱ ＲＲＤＡＬ（配列番号１８９）のアミノ酸配列を有するＩＫＺＦ３／ＺＦＰ９１／ＩＫＺＦ３キメラ融合産物であり、ならびに
    場合により、前記ＩＭｉＤは、サリドマイド、レナリドミド、及びポマリドミドからなる群から選択されるＦＤＡ承認薬物である、
    請求項１５～１７のいずれか一項に記載の方法。
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