ES2374458T3 - Vacunas y agentes inmunoterapéuticos que utilizan il-15 optimizada en codones, y métodos para utilización de los mismos. - Google Patents

Vacunas y agentes inmunoterapéuticos que utilizan il-15 optimizada en codones, y métodos para utilización de los mismos. Download PDF

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Abstract

Una molécula de ácido nucleico que comprende SEQ. ID. NO: 1.

Description

Vacunas y agentes inmunoterapeuticos que utilizan IL15 optimizada en codones, y metodos para utilizaci6n de los mismos.
Campo de la invenci6n
5 La presente invenci6n se refiere a moleculas de acido nucleico que incluyen una secuencia de acido nucleico optimizada en codones que codifica IL15, vacunas mejoradas, metodos mejorados para inmunizar profilactica y/o terapeuticamente individuos contra inmun6genos, y a composiciones inmunoterapeuticas mejoradas y metodos mejorados de inmunoterapia.
Antecedentes de la invenci6n
10 La inmunoterapia se refiere a la modulaci6n de las respuestas inmunes de una persona para impartir un efecto terapeutico deseable. Los agentes inmunoterapeuticos hacen referencia a aquellas composiciones que, cuando se administran a un individuo, modulan el sistema inmunol6gico del individuo lo suficiente para reducir finalmente los sfntomas que estan asociados con respuestas inmunes indeseables o aliviar finalmente los sfntomas por aumento de respuestas inmunes deseables. En algunos casos, la inmunoterapia forma parte de un protocolo de vacunaci6n
15 en el cual se administra al individuo una vacuna que expone el individuo a un inmun6geno contra el cual el individuo genera una respuesta inmune. En tales casos, el agente inmunoterapeutico aumenta la respuesta inmune y/o mejora selectivamente una porci6n de la respuesta inmune (tal como la rama celular o la rama humoral) que es deseable para tratar o prevenir la afecci6n, infecci6n o enfermedad particular.
Las vacunas son utiles para inmunizar individuos contra antfgenos diana tales como alergenos, antfgenos pat6genos
20 o antfgenos asociados con celulas implicadas en enfermedades humanas. Los antfgenos asociados con celulas implicadas en enfermedades humanas incluyen antfgenos tumorales asociados con el cancer y antfgenos asociados con celulas implicadas en enfermedades autoinmunes.
En el diseno de tales vacunas, se ha reconocido que las vacunas que producen el antfgeno diana en las celulas del individuo vacunado son eficaces para inducir la rama celular del sistema inmunol6gico. Especfficamente, las vacu
25 nas vivas atenuadas, vacunas recombinantes que utilizan vectores avirulentos, y vacunas de DNA conducen cada una a la producci6n de antfgenos en la celula del individuo vacunado, lo cual da como resultado la inducci6n de la rama celular del sistema inmunol6gico. Por otra parte, las vacunas muertas o desactivadas, y las vacunas de subunidades que comprenden unicamente protefnas no inducen respuestas inmunitarias celulares satisfactorias aun cuando inducen una respuesta humoral.
30 Una respuesta inmune celular es a menudo necesaria para proporcionar protecci6n contra infecciones por pat6genos y para proporcionar una terapia eficaz mediada por inmunidad para tratamiento de infecciones causadas por pat6genos, cancer o enfermedades autoinmunes. De acuerdo con ello, se prefieren a menudo vacunas que producen el antfgeno diana en las celulas del individuo vacunado tales como vacunas vivas atenuadas, vacunas recombinantes que utilizan vectores avirulentos, y vacunas de DNA.
35 Si bien tales vacunas son eficaces a menudo para inmunizar individuos profilactica o terapeuticamente contra infecci6n por pat6genos o enfermedades humanas, existe necesidad de vacunas mejoradas. Existe necesidad de composiciones y metodos que produzcan una respuesta inmune mejorada.
Analogamente, si bien algunos agentes inmunoterapeuticos son utiles para moderar la respuesta inmune en un paciente, persiste la necesidad de composiciones y metodos inmunoterapeuticos mejorados.
40 Sumario de la invenci6n
La presente invenci6n se refiere a moleculas de acido nucleico que comprenden secuencias de acido nucleico que codifican la protefna IL15 que comprende SEQ ID NO: 1.
La presente invenci6n se refiere a moleculas de acido nucleico que comprenden SEQ ID NO: 1 que estan exentas de secuencia codificante para una secuencia de senal de IL15 y/o exentas de la regi6n Kozak de IL15 y/o la regi6n
45 5' no traducida de IL15 y/o la regi6n 3' no traducida de IL15 y/o que comprenden una secuencia codificante de una secuencia de senal distinta de IL15.
La presente invenci6n se refiere a moleculas de acido nucleico que comprenden una secuencia de acido nucleico que codifica la protefna IL15 que comprende SEQ ID NO: 1 y que comprenden adicionalmente una secuencia codificante de un inmun6geno.
50 La presente invenci6n se refiere a composiciones que comprenden una molecula de acido nucleico que comprende una secuencia de acido nucleico que comprende SEQ ID NO: 1 y una molecula de acido nucleico que comprende una secuencia de acido nucleico que codifica un inmun6geno.
La presente invenci6n se refiere adicionalmente a metodos de modulaci6n de una respuesta inmune en un individuo que comprenden administrar a dicho individuo una molecula de acido nucleico que comprende SEQ ID NO: 1.
La presente invenci6n se refiere adicionalmente a vacunas recombinantes que comprenden una molecula de acido nucleico que comprende SEQ ID NO: 1.
La presente invenci6n se refiere a metodos de inducci6n de una respuesta inmune en un individuo contra un inmun6geno que comprenden administrar a dicho individuo una molecula de acido nucleico que comprende SEQ ID NO: 1 como parte o en combinaci6n con una molecula de acido nucleico que codifica un inmun6geno o en combinaci6n con un inmun6geno.
Breve descripci6n de los dibujos
La Figura 1 muestra SEQ ID NO: 1.
Descripci6n detallada de realizaciones preferidas
Definiciones
Como se utiliza en esta memoria, debe entenderse que el termino "protefna diana" hace referencia a peptidos y protefnas codificados por constructos genicos de la presente invenci6n que actuan como protefnas diana para una respuesta inmune. Los terminos "protefna diana" e "inmun6geno" se utilizan intercambiablemente y hacen referencia a una protefna contra la cual puede suscitarse una respuesta inmune. La protefna diana es una protefna inmun6gena que comparte al menos un epftope con una protefna del pat6geno o tipo de celula indeseable tal como una celula de cancer o una celula implicada en una enfermedad autoinmune contra la cual se desea una respuesta inmune. La respuesta inmune dirigida contra la protefna diana protegera al individuo contra y/o tratara el individuo en lo referente a la infecci6n o enfermedad especffica con la cual esta asociada la protefna diana.
Como se utiliza en esta memoria, el termino "constructo genetico" hace referencia a moleculas de DNA o RNA que comprenden una secuencia de nucle6tidos que codifica una protefna diana o protefna inmunomoduladora. La secuencia codificante incluye senales de iniciaci6n y terminaci6n enlazadas operativamente a elementos reguladores que incluyen un promotor y una senal de poliadenilaci6n capaz de dirigir la expresi6n en las celulas del individuo al que se administra la molecula de acido nucleico.
Como se utiliza en esta memoria, el termino "forma expresable" se refiere a constructos genicos que contienen los elementos reguladores necesarios enlazados operativamente a una secuencia codificante que codifica una protefna diana o una protefna inmunomoduladora, de tal modo que cuando esta presente en la celula o el individuo, la secuencia codificante se expresara.
Como se utiliza en esta memoria, el termino "compartici6n de un epftope" se refiere a protefnas que comprenden al menos un epftope que es identico a o sustancialmente similar a un epftope de otra protefna.
Como se utiliza en esta memoria, debe entenderse que hace referencia a un epftope que tiene una estructura que no es identica a un epftope de una protefna pero que sin embargo suscita una respuesta inmune celular o humoral que reacciona de modo cruzado con dicha protefna.
Como se utiliza en esta memoria, debe entenderse que el termino "pat6geno intracelular" hace referencia a un virus u organismo pat6geno que, al menos en parte de su ciclo reproductivo o ciclo vital, existe dentro de una celula hospedadora y en el cual produce o hace que se produzcan protefnas pat6genas.
Como se utiliza en esta memoria, debe entenderse que el termino "enfermedades hiperproliferativas" hace referencia a aquellas enfermedades y trastornos caracterizados por hiperproliferaci6n de celulas.
Como se utiliza en esta memoria, debe entenderse que el termino "protefna asociada con la hiperproliferaci6n" hace referencia a protefnas que estan asociadas con una enfermedad hiperproliferativa.
Como se utiliza en esta memoria, el termino "protefna inmunomoduladora" hace referencia a una protefna que modula el sistema inmunol6gico de una persona a la que se suministra la protefna inmunomoduladora. Ejemplos de protefnas inmunomoduladoras incluyen: IL15, CD40L, TRAIL; TRAILrecDRC5, TRAILR2, TRAILR3, TRAILR4, RANK, RANK LIGAND, Ox40, Ox40 LIGAND, NKG2D, F461811 o MICA, MICB, NKG2A, NKG2B, NKG2C, NKG2E, NKG2F, CD30, CD153 (CD30L), Fos, cjun, Sp1, Apl, Ap2, p38, p65Rel, MyD88, IRAK, TRAF6, IkB, NIK, SAP K, SAP1, JNK2, JNK1B2, JNK1B1, JNK2B2, JNK2B1, JNK1A2, JNK2A1, JNK3A1, JNK3A2, NFkappaB2, p49 forma remodelada, NFkappaB2, p100 forma remodelada, NFkappaB2, p105 forma remodelada, NFkappaB 50K precursor de cadena, NFkB p50, IL1 a humana, IL2 humana, IL4 humana, IL4 murina, IL5 humana, IL10 humana, IL15 humana, IL18 humana, TNFa humana, TNF� humana , interleuquina 12 humana, MadCAM1, NGF IL7, VEGF, TNFR, Fas, CD40L, IL4, CSF, GCSF, GMCSF, MCSF, LFA3, ICAM3, ICAM2, ICAM1, PECAM, P150.95, Mac1, LFA1, CD34, RANTES, IL8, MIP1a, Eselectina, CD2, MCP1, Lselectina, Pselectina, FLT, Apo1, Fas, TNFR1, p55, WSL1, DR3, TRAMP, Apo3, AIR, LARD, NGRF, DR4(TRAIL), DR5, KILLER, TRAILR2, TRICK2, DR6, ICE, VLA1, y CD86 (B7.2).
Visi6n de Conjunto
La invenci6n proporciona una secuencia de acido nucleico que codifica IL15 que proporciona una expresi6n mejorada de protefnas con relaci6n a la secuencia nativa. La secuencia codificante de IL15 mejorada puede utilizarse en combinaci6n con los descubrimientos expuestos en la solicitud PCT/US04/18962 presentada el 14 de junio de 2004, la Solicitud Provisional U.S. Numero 60/478210 presentada el 13 de junio de 2003 y la Solicitud Provisional U.S. Numero 60/478205 presentada el 13 de junio de 2003, particularmente aquellas que proporcionan secuencias codificantes de la protefna IL15 enlazadas a un peptido de senal distinto de IL15, particularmente el peptido de senal IgE, y al uso de tales constructos en vacunas y en constructos para el suministro de la protefna IL15 como protefna inmunomoduladora. En algunas realizaciones preferidas, la invenci6n proporciona vectores, vacunas y composiciones inmunomoduladoras y metodos que comprenden moleculas de acido nucleico que comprenden la secuencia de nucle6tidos de SEQ ID NO: 1. En algunas realizaciones preferidas, tales moleculas de acido nucleico se proporcionan exentas de secuencias codificantes para la secuencia de senal de IL15, y mas preferiblemente exentas de la regi6n Kozak de IL15 y regiones no traducidas. En algunas realizaciones preferidas, la invenci6n proporciona vectores, vacunas y composiciones inmunomoduladoras y metodos que comprenden moleculas de acido nucleico que comprenden SEQ ID NO: 1 que estan unidas a secuencias codificantes para la secuencia de senal de IgE humana.
Secuencias nativas que codifican IL15 han sido modificadas para mejorar la expresi6n. En mejoras anteriores, elementos tales como secuencias codificantes para la secuencia IL15 y regiones no traducidas se delecionaron para mejorar la expresi6n. Estas mejoras anteriores pueden incorporarse y utilizarse en conjunci6n con la secuencia codificante mejorada de la protefna IL15 madura indicada en SEQ ID NO: 1. En realizaciones preferidas, la molecula de acido nucleico que incluye SEQ ID NO: 1 esta exenta de la secuencia codificante para el peptido senal de IL15, y preferiblemente se proporciona en su lugar otra protefna de senal tal como la protefna de senal de IgE. Ademas, la regi6n Kozak de IL15 y regiones no traducidas se retiran tambien para eliminar elementos inhibidores. Las unicas secuencias de IL15 que incluyen preferiblemente los constructos son las secuencias de IL15 que codifican la secuencia de aminoacidos de la protefna IL15 madura exenta del peptido de senal de IL15.
De acuerdo con algunas realizaciones, se proporcionan composiciones que comprenden una molecula de acido nucleico aislada que comprende una secuencia de acido nucleico que codifica una protefna de fusi6n que comprende una secuencia de senal distinta de IL15 unida a la protefna IL15 codificada por SEQ ID NO: 1. En algunas realizaciones preferidas, la molecula esta exenta de la secuencia codificante para la secuencia de senal de IL15. En algunas realizaciones preferidas, la protefna de fusi6n es no inmun6gena en un humano.
De acuerdo con algunas realizaciones, se proporcionan composiciones que incluyen un constructo de acido nucleico que comprende SEQ ID NO: 1 y opcionalmente las otras mejoras anteriores arriba descritas pueden incluir tambien en la misma molecula de acido nucleico o una molecula de acido nucleico diferente, una secuencia de acido nucleico que codifica un inmun6geno. Generalmente, los inmun6genos, que se exponen mas adelante, pueden ser cualquier protefna inmun6gena que incluya alergenos, antfgenos pat6genos, antfgenos asociados con cancer o antfgenos unidos a celulas asociadas con enfermedades autoinmunes. En realizaciones preferidas, el inmun6geno es un antfgeno pat6geno, muy preferiblemente un pat6geno seleccionado del grupo constituido por HIV, HSV, HCV, y WNV.
En algunas realizaciones preferidas, los constructos de acido nucleico son plasmidos. En algunas realizaciones preferidas, la molecula de acido nucleico se incorpora en un vector viral tal como vaccinia, adenovirus, virus asociado con adenovirus, retrovirus, RSV, VSV, poxvirus o cualquier otro vector viral aceptable util como vacuna o vector de terapia genica.
Constructos geneticos que comprenden SEQ ID NO: 1 pueden incorporarse directamente en pat6genos vivos atenuados de acuerdo con algun aspecto de la invenci6n. Ejemplos de tales pat6genos utiles como vacunas se exponen mas adelante. En realizaciones preferidas, la IL15 humana, preferiblemente exenta de la secuencia de senal de IL15, esta enlazada a la secuencia de senal de IgE humana.
Composiciones que incluyen secuencias codificantes para inmun6genos son utiles como vacunas. Las composiciones que no incluyen secuencias codificantes para inmun6genos pueden ser utiles como composiciones inmunomoduladoras. En algunas realizaciones, se proporcionan tambien inmun6genos protefnicos como diana para la respuesta inmune que sera mejorada por la expresi6n de IL15.
En algunas realizaciones preferidas, los constructos de acido nucleico son plasmidos. En algunas realizaciones preferidas, la molecula de acido nucleico se incorpora en un vector viral tal como vaccinia, adenovirus, virus asociado con adenovirus, retrovirus, o cualquier otro vector viral aceptable util como vacuna o vector de terapia genica.
Constructos geneticos que comprenden SEQ ID NO: 1 pueden incorporarse directamente en pat6genos vivos atenuados de acuerdo con algunos aspectos de la invenci6n. Ejemplos de tales pat6genos utiles como vacunas se exponen mas adelante. En realizaciones preferidas, la IL15 humana, preferiblemente exenta de la secuencia de senal de IL15, esta enlazada a la secuencia de senal de IgE humana.
De acuerdo con algunas realizaciones de la invenci6n, las composiciones de la invenci6n comprenden constructos geneticos que incluyen secuencias codificantes para inmun6genos y/o protefnas inmun6genas. Tales composiciones se suministran a un individuo para modular la actividad del sistema inmunol6gico del individuo y mejorar de este
modo la respuesta inmune contra el inmun6geno. Cuando las moleculas de acido nucleico que codifican una protefna inmunomoduladora son absorbidas por las celulas del individuo, las secuencias de nucle6tidos que codifican la protefna inmunomoduladora se expresan en las celulas y las protefnas se suministran de este modo al individuo. Aspectos de la invenci6n proporcionan metodos de suministro de las secuencias codificantes de las protefnas en una molecula de acido nucleico individual, en composiciones que comprenden diferentes moleculas de acido nucleico que codifican uno o mas de los diversos factores de transcripci6n o factores intermedios, como parte de vacunas recombinantes y como parte de vacunas atenuadas.
De acuerdo con algunos aspectos de la presente invenci6n, se proporcionan composiciones y metodos que inmunizan profilactica y/o terapeuticamente a un individuo contra un pat6geno o celulas anormales, relacionadas con enfermedades. La vacuna puede ser cualquier tipo de vacuna tal como una vacuna viva atenuada, una vacuna de celulas, una vacuna recombinante o una vacuna de acido nucleico o DNA.
La presente invenci6n se refiere a composiciones para suministro de las protefnas inmunomoduladoras y metodos de utilizaci6n de las mismas.
Las moleculas de acido nucleico pueden suministrarse utilizando cualquiera de varias tecnologfas bien conocidas que incluyen inyecci6n de DNA (a lo que se hace referencia tambien como vacunaci6n con DNA), vectores recombinantes tales como adenovirus recombinante, virus asociado con adenovirus recombinante, y vaccinia recombinante.
Vacunas de DNA se describen en las Patentes U.S. Nums. 5.593.972, 5.739.118, 5.817.637, 5.830.876, 5.962.428, 5.981.505, 5.580.859, 5.703.055, 5.676.594, y las solicitudes de prioridad citadas en esta memoria. Ademas de los protocolos de suministro descritos en dichas solicitudes, metodos alternativos de suministro de DNA se describen en las Patentes U.S. Nums. 4.945.050 y 5.036.066.
Las rutas de administraci6n incluyen, pero sin caracter limitante, intramuscular, intranasal, intraperitoneal, intradermica, subcutanea, intravenosa, intraarterial, intraocular y oral asf como las rutas t6pica, transdermica, por inhalaci6n
o supositorio o al tejido mucosal, por ejemplo por lavado hasta tejido vaginal, rectal, uretral, bucal y sublingual. Rutas de administraci6n preferidas incluyen inyecci6n en el tejido mucosal, intramuscular, intraperitoneal, intradermico y subcutaneo. Los constructos geneticos pueden administrarse por medios que incluyen, pero sin caracter limitante, jeringuillas tradicionales, dispositivos de inyecci6n sin aguja, o canones genicos de bombardeo con microproyectiles".
Cuando es/son capturado(s) por una celula, el o los constructos geneticos pueden mantenerse presentes en la celula como una molecula funcional extracromos6mica, y/o integrarse en el DNA cromos6mico de la celula. El DNA puede introducirse en las celulas en las que se mantiene como material genetico separado en forma de un plasmido o plasmidos. Alternativamente, el DNA lineal que puede integrarse en el cromosoma se puede introducir en la celula. Cuando se introduce DNA en la celula, pueden anadirse reactivos que promueven la integraci6n del DNA en los cromosomas. Secuencias de DNA que son utiles para promover integraci6n pueden incluirse tambien en la molecula de DNA. Alternativamente, puede administrarse RNA a la celula. Se contempla tambien proporcionar el constructo genetico como un minicromosoma lineal que incluye un centr6mero, tel6meros y un origen de replicaci6n. Los constructos genicos pueden mantenerse como parte del material genetico en microorganismos vivos atenuados o vectores microbianos recombinantes que viven en las celulas. Los constructos genicos pueden formar parte de genomas de vacunas virales recombinantes en donde el material genetico se integra en el cromosoma de la celula o se mantiene extracromos6mico. Los constructos geneticos incluyen elementos reguladores necesarios para la expresi6n genica de una molecula de acido nucleico. Los elementos incluyen: un promotor, un cod6n de iniciaci6n, un cod6n de parada, y una senal de poliadenilaci6n. Adicionalmente, a menudo se requieren intensificadores para la expresi6n genica de la secuencia que codifica la protefna diana o la protefna inmunomoduladora. Es necesario que estos elementos esten enlazados operativamente a la secuencia que codifica las protefnas deseadas y que los elementos reguladores sean operativos en el individuo al que se administran.
Los codones de iniciaci6n y el cod6n de parada se consideran generalmente parte de una secuencia de nucle6tidos que codifica la protefna deseada. Sin embargo, es necesario que estos elementos sean funcionales en el individuo al que se administra el constructo genico. Los codones de iniciaci6n y terminaci6n deben estar en marco con la secuencia codificante.
Los promotores y senales de poliadenilaci6n utilizados tienen que ser funcionales dentro de las celulas del individuo.
Ejemplos de promotores utiles para la practica de la presente invenci6n, especialmente en la producci6n de una vacuna genetica para humanos, incluyen, pero sin caracter limitante, los promotores del Virus 40 de los Simios (SV40), el promotor del Virus del Tumor Mamario del Rat6n (MMTV), el Virus de la Inmunodeficiencia Humana (MV) tal como el promotor de la Repetici6n Terminal Larga (LTR) BIV, el Virus Moloney, ALV, Citomegalovirus (CMV) tal como el promotor temprano inmediato del CMV, el Virus Epstein Barr (EBV), el Virus del Sarcoma de Rous (RSV), asf como promotores de genes humanos tales como actina humana, miosina humana, hemoglobina humana, creatina muscular humana y metalotionefna humana.
Ejemplos de senales de poliadenilaci6n utiles para la practica de la presente invenci6n, especialmente en la producci6n de una vacuna genetica para humanos, incluyen pero sin caracter limitante senales de poliadenilaci6n de SV40
y senales de poliadenilaci6n de LTR. En particular, se utiliza la senal de poliadenilaci6n de SV40 que se encuentra en el plasmido pCEP4 (Invitrogen, San Diego, CA), a la que se hace referencia como la senal de poliadenilaci6n de SV40.
Ademas de los efectos reguladores requeridos para la expresi6n del DNA, pueden incluirse tambien otros elementos en la molecula de DNA. Tales elementos adicionales incluyen intensificadores. El intensificador puede seleccionarse del grupo que incluye, pero sin caracter limitante: Actina humana, Miosina humana, Hemoglobina humana, Creatina muscular humana e intensificadores virales tales como los de CMV, RSV y EBV.
Pueden proporcionarse constructos geneticos con origen de replicaci6n de mamffero a fin de mantener el constructo extracromos6micamente y producir copias multiples del constructo en la celula. Los plasmidos pVAX1, pCEP4 y pREP4 de Invitrogen (San Diego, CA) contienen el origen de replicaci6n del virus Epstein Barr y la regi6n codificante del antfgeno nuclear EBNA1 que produce replicaci6n epis6mica de alto numero de copias sin integraci6n.
En algunas realizaciones preferidas relacionadas con aplicaciones de inmunizaci6n, se suministran una o mas moleculas de acido nucleico que incluyen secuencias de nucle6tidos que codifican una protefna diana, la protefna inmunomoduladora y, inicialmente, genes de protefnas que intensifican adicionalmente la respuesta inmune contra tales protefnas diana. Ejemplos de tales genes son los que codifican otras citoquinas y linfoquinas tales como interfer6n alfa, interfer6n gamma, factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF), TNF, GMGSF, factor de crecimiento epidermico (EGF), IL1, IL2, IL4, IL6, IL10, IL12 e IL15 con inclusi6n de IL15 que tiene la secuencia de senal delecionada, y con inclusi6n, opcionalmente, de la secuencia de senal de IgE.
Puede anadirse un elemento adicional que sirve como diana para destrucci6n celular si se desea eliminar las celulas que reciben el constructo genetico por cualquier raz6n. En el constructo genetico puede incluirse un gen de timidinaquinasa (TK) de herpes en una forma expresable. El farmaco ganciclovir puede administrarse al individuo y dicho farmaco causara la destrucci6n selectiva de cualquier celula productora de tk, proporcionando asf el medio para la destrucci6n selectiva de celulas con el constructo genetico.
Con objeto de maximizar la producci6n de protefnas, pueden seleccionarse secuencias reguladoras que son muy adecuadas para expresi6n genica en las celulas a las que se administra el constructo. Ademas, pueden seleccionarse codones que se transcriben muy eficientemente en la celula. Una persona con experiencia ordinaria en la tecnica puede producir constructos de DNA que son funcionales en las celulas.
En algunas realizaciones, pueden proporcionarse constructos genicos a fin de producir secuencias codificantes para las protefnas inmunomoduladoras descritas en esta memoria enlazadas al peptido de senal de IgE.
Un metodo de la presente invenci6n comprende los pasos de administrar moleculas de acido nucleico por vfa intramuscular, intranasal, intraperitoneal, subcutanea, intradermica, o t6pica o por lavado a tejido mucosal seleccionado del grupo constituido por inhalaci6n, vaginal, rectal, uretral, bucal y sublingual.
En algunas realizaciones, la molecula de acido nucleico se suministra a las celulas en conjunci6n con la administraci6n de un intensificador de la funci6n de los polinucle6tidos o un agente facilitador de vacunas geneticas. Intensificadores de la funci6n de los polinucle6tidos se describen en U.S. Numero de Serie 5.593.972, 5.962.428 y la Solicitud Internacional Numero de Serie PCT/US94/00899, presentada el 26 de enero de 1994. Agentes facilitadores de vacunas geneticas se describen en U.S. Numero de Serie 021579 presentada el 1 de abril de 1994. Los coagentes que se administran en conjunci6n con moleculas de acido nucleico pueden administrarse como una mixtura con la molecula de acido nucleico o administrarse por separado simultaneamente, antes o despues de la administraci6n de las moleculas de acido nucleico. Adicionalmente, otros agentes que pueden funcionar como agentes de transfecci6n y/o agentes de replicaci6n y/o agentes inflamatorios y que pueden coadministrarse con un GVF incluyen factores de crecimiento, citoquinas y linfoquinas tales como interfer6n a, interfer6n gamma, GMCSF, factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF), TNF, factor de crecimiento epidermico (EGF), ILA, IL2, IL4, IL6, IL10, IL12 e IL15 asf como factor de crecimiento de fibroblastos, agentes tensioactivos tales como complejos inmunoestimuladores (ISCOMS), adyuvante de Freund incompleto, analogos de LPS que incluyen el lfpido monofosforilado A (WL), muramilpeptidos, analogos de quinonas y vesfculas tales como escualeno y escualano, y acido hialur6nico pueden utilizarse tambien administrados en conjunci6n con el constructo genetico. En algunas realizaciones, una protefna inmunomoduladora puede utilizarse como un GVF. En algunas realizaciones, la molecula de acido nucleico se proporciona en asociaci6n con PLG para intensificar el suministro/la captura.
Las composiciones farmaceuticas de acuerdo con la presente invenci6n comprenden aproximadamente 1 nanogramo a aproximadamente 2000 microgramos de DNA. En algunas realizaciones preferidas, las composiciones farmaceuticas de acuerdo con la presente invenci6n comprenden aproximadamente 5 nanogramos a aproximadamente 1000 microgramos de DNA. En algunas realizaciones preferidas, las composiciones farmaceuticas contienen aproximadamente 10 nanogramos a aproximadamente 800 microgramos de DNA. . En algunas realizaciones preferidas, las composiciones farmaceuticas contienen aproximadamente 0,1 a aproximadamente 500 microgramos de DNA. En algunas realizaciones preferidas, las composiciones farmaceuticas contienen aproximadamente 1 a aproximadamente 350 microgramos de DNA. En algunas realizaciones preferidas, las composiciones farmaceuticas contienen aproximadamente 25 a aproximadamente 250 microgramos de DNA. En algunas realizaciones preferidas, las composiciones farmaceuticas contienen aproximadamente 100 a aproximadamente 200 microgramos de DNA.
Las composiciones farmaceuticas de acuerdo con la presente invenci6n se formulan de acuerdo con el modo de administraci6n a utilizar. En los casos en que las composiciones farmaceuticas son composiciones farmaceuticas inyectables, las mismas son esteriles, exentas de pir6genos y exentas de partfculas. Preferiblemente se utiliza una formulaci6n isot6nica. Por regla general, los aditivos para la isotonicidad pueden incluir cloruro de sodio, dextrosa, manitol, sorbitol y lactosa. En algunos casos, se prefieren soluciones isot6nicas tales como soluci6n salina tamponada con fosfato. Los estabilizadores incluyen gelatina y albumina. En algunas realizaciones, se anade a la formulaci6n un agente de vasoconstricci6n.
De acuerdo con algunas realizaciones de la invenci6n, se proporcionan metodos de inducci6n de respuestas inmunes contra un inmun6geno por el suministro de las composiciones de la invenci6n a un individuo. La vacuna puede ser una vacuna viva atenuada, una vacuna de celulas, una vacuna recombinante o una vacuna de acido nucleico o DNA.
Ademas de la utilizaci6n de formas expresables de la secuencia codificante de la protefna inmunomoduladora para mejorar las vacunas geneticas, la presente invenci6n se refiere a vacunas atenuadas vivas mejoradas y vacunas mejoradas que utilizan vectores recombinantes para suministrar genes extranos que codifican antfgenos. Ejemplos de vacunas atenuadas vivas y aquellas que utilizan vectores recombinantes para suministrar antfgenos extranos se describen en las Patentes U.S. Nums.: 4,722,848; 5,017,487; 5,077,044; 5,110,587; 5,112,749; 5,174,993; 5,223,424; 5,225,336; 5,240,703; 5,242,829; 5,294,441; 5,294,548; 5,310,668; 5,387,744; 5,389,368; 5,424,065; 5,451,499; 5,453,364; 5,462,734; 5,470,734; y 5,482,713. Se proporcionan constructos genicos que incluyen la secuencia de nucle6tidos que codifica una protefna inmunomoduladora que esta enlazada operativamente a secuencias reguladoras que pueden funcionar en la vacuna para efectuar la expresi6n. Los constructos genicos se incorporan en las vacunas vivas atenuadas y vacunas recombinantes para producir vacunas mejoradas de acuerdo con la invenci6n.
La presente invenci6n proporciona un metodo mejorado de inmunizaci6n de individuos que comprende el paso de suministrar constructos genicos a las celulas de individuos como parte de composiciones de vacuna que incluyen vacunas de DNA, vacunas atenuadas vivas y vacunas recombinantes. Los constructos genicos comprenden una secuencia de nucle6tidos que codifica una protefna inmunomoduladora y que esta enlazada operativamente a secuencias reguladoras que pueden funcionar en la vacuna para efectuar la expresi6n. Las vacunas mejoradas dan como resultado una respuesta inmune celular intensificada.
La presente invenci6n es util para provocar respuestas inmunes intensificadas contra una protefna diana, es decir protefnas asociadas especfficamente con pat6genos, alergenos o las celulas "anormales" del propio individuo. La presente invenci6n es util para inmunizar individuos contra agentes pat6genos y organismos de tal modo que una respuesta inmune contra una protefna pat6gena proporciona inmunidad protectora contra el pat6geno. La presente invenci6n es util para combatir enfermedades y trastornos hiperproliferativos tales como el cancer por suscitar una respuesta inmune contra una protefna diana que esta asociada especfficamente con las celulas hiperproliferativas. La presente invenci6n es util para combatir enfermedades y trastornos autoinmunes por suscitar una respuesta inmune contra una protefna diana que esta asociada especfficamente con celulas implicadas en la afecci6n autoinmune.
De acuerdo con algunos aspectos de la presente invenci6n, se introduce DNA o RNA que codifica una protefna diana y protefnas inmunomoduladoras en las celulas o tejidos de un individuo en el que se expresa el mismo, produciendo asf las protefnas codificadas. Las secuencias de DNA o RNA que codifican la protefna diana o una o ambas protefnas inmunomoduladoras estan enlazadas a elementos reguladores necesarios para la expresi6n en las celulas del individuo. Elementos reguladores para la expresi6n de DNA incluyen un promotor y una senal de poliadenilaci6n. Adicionalmente, otros elementos, tales como una regi6n Kozak, pueden incluirse tambien en el constructo genetico.
En algunas realizaciones, formas expresables de secuencias que codifican la protefna diana y formas expresables de secuencias que codifican ambas protefnas inmunomoduladoras, se encuentran en la misma molecula de acido nucleico que se suministra al individuo.
En algunas realizaciones, formas expresables de secuencias que codifican la protefna diana se encuentran en una molecula de acido nucleico separada de las moleculas de acido nucleico que contienen formas expresables de secuencias que codifican una o mas protefnas inmunomoduladoras. En algunas realizaciones, formas expresables de secuencias que codifican la protefna diana y formas expresables de secuencias que codifican una o mas de las protefnas inmunomoduladoras se encuentran en una molecula de acido nucleico que esta separada de la molecula de acido nucleico que contiene formas expresables de secuencias que codifican una o mas de las protefnas inmunomoduladoras. Moleculas de acido nucleico diferentes multiples pueden producirse y suministrarse de acuerdo con la presente invenci6n y suministrarse al individuo. Por ejemplo, en algunas realizaciones, formas expresables de secuencias que codifican la protefna diana se encuentran en moleculas de acido nucleico separadas de las moleculas de acido nucleico que contienen formas expresables de secuencias que codifican una o mas de las dos protefnas inmunomoduladoras que se encuentran en moleculas de acido nucleico separadas de las moleculas de acido nucleico que contienen formas expresables de secuencias que codifican una o mas protefnas inmunomoduladoras. En tales casos, se suministra al individuo la totalidad de las tres moleculas.
La o las moleculas de acido nucleico pueden proporcionarse como DNA plasmfdico, las moleculas de acido nucleico de vectores recombinantes o como parte del material genetico proporcionado en una vacuna atenuada o vacuna de
celulas. Alternativamente, en algunas realizaciones, la protefna diana y/o cualquiera o ambas protefnas inmunomoduladoras pueden suministrarse como una protefna adicionalmente a las moleculas de acido nucleico que codifican las mismas o en lugar de las moleculas de acido nucleico que codifican las mismas.
Los constructos geneticos pueden comprender una secuencia de nucle6tidos que codifica una protefna diana o una protefna inmunomoduladora enlazada operativamente a elementos reguladores necesarios para la expresi6n genica. De acuerdo con la invenci6n, se proporcionan combinaciones de constructos genicos que incluyen uno que comprende una forma expresable de la secuencia de nucle6tidos que codifica una protefna diana y uno que incluye una forma expresable de la secuencia de nucle6tidos que codifica una protefna inmunomoduladora. La incorporaci6n en una celula viva de la o las moleculas de DNA o RNA que incluyen la combinaci6n de constructos genicos da como resultado la expresi6n del DNA o RNA y la producci6n de la protefna diana y una o mas protefnas inmunomoduladoras. De ello resulta una respuesta inmune intensificada contra la protefna diana.
La presente invenci6n puede utilizarse para inmunizar un individuo contra la totalidad de pat6genos tales como virus, organismos procariotas y organismos eucariotas pat6genos tales como organismos pat6genos unicelulares y parasitos multicelulares. La presente invenci6n es particularmente util para inmunizar un individuo contra aquellos pat6genos que infectan las celulas y que no estan encapsulados tales como virus, y procariotas tales como gonorrea, listeria y shigella. Adicionalmente, la presente invenci6n es util tambien para inmunizar un individuo contra pat6genos protozoarios que incluyen una etapa en el ciclo vital en la cual los mismos son pat6genos intracelulares. La Tabla 1 proporciona un listado de algunas de las familias y generos de virus para los cuales pueden producirse vacunas de acuerdo con la presente invenci6n. Los constructos de DNA que comprenden secuencias de DNA que codifican los peptidos que comprenden al menos un epftope identico o sustancialmente similar a un epftope presentado sobre un antfgeno pat6geno tales como los antfgenos listados en las tablas, son utiles en vacunas. Ademas, la presente invenci6n es util tambien para inmunizar un individuo contra otros pat6genos que incluyen pat6genos protozoarios procariotas y eucariotas asf como parasitos multicelulares tales como los enumerados en la Tabla 2.
Con objeto de producir una vacuna genetica para conferir protecci6n contra la infecci6n por pat6genos, material genetico que codifica protefnas inmun6genas contra las cuales puede montarse una respuesta inmune protectora, tiene que incluirse en un constructo genetico como la secuencia codificante de la diana. Tanto si el pat6geno infecta por vfa intracelular, para lo cual es particularmente util la presente invenci6n, como si lo hace extracelularmente, es improbable que todos los antfgenos pat6genos susciten una respuesta protectora. Dado que DNA y RNA son ambos relativamente pequenos y pueden producirse con relativa facilidad, la presente invenci6n proporciona la ventaja adicional de permitir la vacunaci6n con antfgenos pat6genos multiples. El constructo genetico utilizado en la vacuna genetica puede incluir material genetico que codifica muchos antfgenos pat6genos. Por ejemplo, pueden incluirse varios genes virales en un solo constructo proporcionando con ello dianas multiples.
Las Tablas 1 y 2 incluyen listas de algunos de los agentes y organismos pat6genos para los cuales pueden prepararse vacunas geneticas a fin de proteger un individuo contra la infecci6n por los mismos. En algunas realizaciones preferidas, los metodos de inmunizaci6n de un individuo contra un pat6geno estan dirigidos contra HIV, HSV, HCV, WNV o HBV.
Otro aspecto de la presente invenci6n proporciona un metodo de conferir una respuesta inmune protectora contra celulas hiperproliferantes que son caracterfsticas en enfermedades hiperproliferativas y un metodo de tratamiento de individuos que sufren enfermedades hiperproliferativas. Ejemplos de enfermedades hiperproliferativas incluyen todas las formas de cancer y psoriasis.
Se ha descubierto que la introducci6n de un constructo genetico que incluye una secuencia de nucle6tidos que codifica una protefna inmun6gena asociada a "celulas hiperproliferantes" en las celulas de un individuo da como resultado la producci6n de dichas protefnas en las celulas vacunadas de un individuo. Para inmunizar contra enfermedades hiperproliferativas, se administra a un individuo un constructo genetico que incluye una secuencia de nucle6tidos que codifica una protefna que esta asociada con una enfermedad hiperproliferativa.
Para que la protefna hiperproliferativaasociada sea una diana inmun6gena eficaz, la misma tiene que ser una protefna que sea producida exclusivamente o a niveles mas altos en celulas hiperproliferativas en comparaci6n con las celulas normales. Antfgenos diana incluyen tales protefnas, fragmentos de las mismas y peptidos, que comprenden al menos un epftope encontrado en tales protefnas. En algunos casos, una protefna hiperproliferativaasociada es el producto de una mutaci6n de un gen que codifica una protefna. El gen mutado codifica una protefna que es practicamente identica a la protefna normal, excepto que tiene una secuencia de aminoacidos ligeramente diferente que da como resultado un epftope diferente no encontrado en la protefna normal. Tales protefnas diana incluyen aquellas que son protefnas codificadas por oncogenes tales como myb, mye, fyn, y el gen de translocaci6n ber/abl, ras, sre, P53, neu, trk y EGRF. Ademas de productos oncogenicos como antfgenos diana, las protefnas diana para tratamientos anticancer y regfmenes protectores incluyen regiones variables de anticuerpos constituidos por linfomas de celulas B y regiones variables de receptores de celulas T de linfomas de celulas T que, en algunas realizaciones, son antfgenos diana utilizados tambien para enfermedades autoinmunes. Otras protefnas asociadas a tumores pueden utilizarse como protefnas diana, tales como protefnas que se encuentran a niveles mas altos en celulas tumorales, con inclusi6n de la protefna reconocida por el anticuerpo monoclonal 17IA, y protefnas de fijaci6n de folato o PSA.
Si bien la presente invenci6n puede utilizarse para inmunizar un individuo contra una o mas de varias formas de cancer, la presente invenci6n es particularmente util para inmunizar profilacticamente un individuo que esta predispuesto a desarrollar un cancer particular o que ha padecido cancer y es por tanto susceptible de sufrir una recidiva. Los desarrollos en la genetica y la tecnologfa asf como la epidemiologfa permiten la determinaci6n de la evaluaci6n de probabilidad y riesgo de desarrollo de cancer en un individuo. Por utilizaci6n de cribado genetico y/o historias de salud familiar, es posible predecir la probabilidad que tiene un individuo particular de desarrollar uno cualquiera de varios tipos de cancer.
Analogamente, aquellos individuos que han desarrollado ya un cancer y que han sido tratados para eliminar el cancer o se encuentran en cualquier otro caso en remisi6n son particularmente propensos a recidiva y reaparici6n. Como parte de un regimen de tratamiento, tales individuos pueden inmunizarse contra el cancer que les ha sido diagnosticado, a fin de combatir una recurrencia. Asf, una vez que se sabe que un individuo ha sufrido un tipo de cancer y se encuentra en riesgo de sufrir una recidiva, el mismo puede inmunizarse a fin de preparar su sistema inmunol6gico para combatir cualquier aparici6n futura del cancer.
La presente invenci6n proporciona un metodo de tratamiento de individuos que sufren enfermedades hiperproliferativas. En tales metodos, la introducci6n de constructos geneticos sirve como inmunoterapeutico, dirigiendo y promoviendo el sistema inmunol6gico del individuo para combatir las celulas hiperproliferativas que producen la protefna diana.
La presente invenci6n proporciona un metodo de tratamiento de individuos que sufren enfermedades y trastornos autoinmunes por conferir una respuesta inmune protectora de base amplia contra las dianas que estan asociadas con la autoinmunidad, con inclusi6n de receptores celulares y celulas que producen anticuerpos dirigidos contra uno mismo.
Enfermedades autoinmunes mediadas por las celulas T incluyen artritis reumatoide (RA), esclerosis multiple (MS), sfndrome de Sjogren, sarcoidosis, diabetes mellitus dependiente de insulina (IDDM), tiroiditis autoinmune, artritis reactiva, espondilitis anquilosante, escleroderma, polimiositis, dermatomiositis, psoriasis, vasculitis, granulomatosis de Wegener, enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa. Cada una de estas enfermedades se caracteriza por receptores de celulas T que se fijan a antfgenos end6genos e inician la cascada inflamatoria asociada con las enfermedades autoinmunes. La vacunaci6n contra la regi6n variable de las celulas T podrfa suscitar una respuesta inmune que incluyera CTLs para eliminar dichas celulas T.
En la RA, han sido caracterizadas varias regiones variables especfficas de receptores de celulas T (TCRs) que estan implicadas en la enfermedad. Estas TCRs incluyen V� 3, V 14, 20V� 17 y Va17. Asf, la vacunaci6n con un constructo de DNA que codifica al menos una de estas protefnas suscitara una respuesta inmune que direccionara las celulas T implicadas en la RA. Vease Howell, M.D., et al., 1991 Proc. Nat. Acad. Sci. USA 88:1092110925; Piliard, X., et al, 1991 Science 253:325329; Williams, W.V., et al., 1992 J Clin. Invest. 90:326333. En la MS, han sido caracterizadas varias regiones variables especfficas de TCRs que estan implicadas en la enfermedad. Estas TCRs incluyen VfP y Va10. Asf, la vacunaci6n con un constructo de DNA que codifica al menos una de estas protefnas suscitara una respuesta inmune que direccionara las celulas T implicadas en la MS. Vease: Wucherpfennig, K.W., et al., 1990 Science 248:10161019; Oksenberg, J.R., et al, 1990 Nature 345:344346.
En el escleroderma, han sido caracterizadas varias regiones variables especfficas de TCRs que estan implicadas en la enfermedad. Estas TCRs incluyen V�6, V 8, V 14 y Va16, Va3C, Va7, Va14, Va15, Va16, Va28 y Va12. Asf, la vacunaci6n con un constructo de DNA que codifica al menos una de estas protefnas suscitara una respuesta inmune que direccionara las celulas T implicadas en el escleroderma.
A fin de tratar pacientes que sufren una enfermedad autoinmune mediada por las celulas T, particularmente aquellas para las cuales la regi6n variable de la TCR no ha sido caracterizada todavfa, puede realizarse una biopsia sinovial. Pueden tomarse muestras de las celulas T presentes e identificarse la regi6n variable de dichas TCRs utilizando tecnicas estandar. Utilizando esta informaci6n se pueden preparar vacunas geneticas.
Enfermedades autoinmunes mediadas por celulas B incluyen Lupus (SLE), enfermedad de Grave, miastenia grave, anemia hemolftica autoinmune, trombocitopenia autoinmune, asma, crioglobulinemia, esclerosis biliar primaria y anemia perniciosa. Cada una de estas enfermedades se caracteriza por anticuerpos que se fijan a antfgenos end6genos e inician la cascada inflamatoria asociada con las enfermedades autoinmunes. La vacunaci6n contra la regi6n variable de los anticuerpos podrfa suscitar una respuesta inmune que incluyera CTLs para eliminar dichas celulas B que producen el anticuerpo.
Para tratar pacientes que sufren una enfermedad autoinmune medida por celulas B, tiene que identificarse la regi6n variable de los anticuerpos implicados en la actividad autoinmune. Puede realizarse una biopsia y pueden tomarse muestras de los anticuerpos presentes en un sitio de inflamaci6n. La regi6n variable de dichos anticuerpos puede identificarse utilizando tecnicas estandar. Utilizando esta informaci6n pueden prepararse vacunas geneticas.
En el caso de la SLE, se cree que un antfgeno es DNA. Asf, en pacientes que deban inmunizarse contra la SLE, pueden cribarse sus sueros respecto a anticuerpos antiDNA y puede prepararse una vacuna que incluye constructos de DNA que codifican la regi6n variable de dichos anticuerpos antiDNA encontrados en los sueros.
Las caracterfsticas estructurales comunes entre las regiones variables tanto de TCRs como de los anticuerpos son
5 bien conocidas. La secuencia de DNA que codifica una TCR o anticuerpo particular puede encontrarse generalmente siguiendo metodos bien conocidos tales como los descritos en Kabat, et al. 1987, Sequence of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Humana Services, Bethesda MD. Adicionalmente, un metodo general para clonaci6n de genes variables funcionales de anticuerpos puede encontrarse en Chaudhary, V.K., et al., 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:1066.
10 Tabla 1
Familia Picornavirus
Generos: Rinovirus: (Medicinales) responsables de 50% casos del resfriado comun. Enterovirus: (Medicinales) incluye poliovirus, coxsackievirus, ecovirus, y enterovirus humanos tales como el virus de la hepatitis A. Aptovirus: (Veterinarios) estos son los virus de la fiebre aftosa.
Antfgenos diana: VP1, VP2, VP3, VP4, VP5
Familia Calcivirus Generos: Grupo de Virus Norwalk: (Medicinales) estos virus son un agente causante importante de la gastroenteritis epidemica.
Familia Togavirus Generos: Alfavirus: (Medicinales y Veterinarios) ejemplos incluyen: Virus Senilis, virus RossRiver y encefalitis equina Oriental y Occidental Reovirus: (Medicinales) virus de la rubeola.
Familia Flaviviridae Ejemplos incluyen: (Medicinales) dengue, fiebre amarilla, encefalitis japonesa, encefalitis de San Luis y virus de la encefalitis transportada por acaros. Virus del Nilo Occidental (GenBank NC001563, AF533540, AF404757, AF404756, AF404755, AF404754, AF404753, AF481864, M12294, AF317203, AF196835, AF260969, AF260968, AF260967, AF206518 y AF202541)
Antfgenos Diana Representativos E NS5 C
Virus de la Hepatitis C: (Medicinales) estos virus no se han incluido todavfa en una familia, pero se cree que son un
togavirus o un flavivirus. Su maxima semejanza es con la familia togavirus.
(continuaci6n)
Familia Coronavirus: (Medicinales y Veterinarios)
Virus de la bronquitis infecciosa (aves de corral) Virus de la gastroenteritis transmisible de los porci nos (cerdo) Virus de la encefalomielitis hemaglutinante de los porcinos (cerdo) Virus de la peritonitis infecciosa de los felinos (ga tos)
Coronavirus enterico de los felinos (gato) Coronavirus de los canidos (perro) Coronavirus asociado a SARS Los coronavirus respiratorios humanos causan 40 casos del resfriado co mun. EX.224E, OC43 Nota - los coronavirus pueden causar hepatitis noA, B o C
Antfgenos diana: E1 -denominado tambien protefna M o matriz E2 - denominado tambien protefna S o Spike E3 -denominando tambien BE o glicoprotefna hemaglutinaelterosa (no presente en todos los coronavirus) N nucleocapsida
Familia rhabdovirus Generos: Vesiliovirus Lyssavirus: (Medicinales y Veterinarios) rabia Antfgenodiana: Protefna G Protefna N
Familia Filoviridae: (Medicinales) Virus de la fiebre hemorragica tales como los virus Marburg y Ebola
Familia Paramixovirus:
Generos: Paramixovirus: (Medicinales y Veterinarios) Virus de las paperas, virus de la enfermedad de Newcastle (pat6geno importante en los pollos) Morbilivirus: (Medicinales y Veterinarios) Sarampi6n, moquillo de los canidos Pneumovirus: (Medicinales y Veterinarios) Virus respiratorio sincitial
Familia Ortomixovirus (Medicinales) (continuaci6n) Familia Coronavirus: (Medicinales y Veterinarios)
El virus de la gripe
Familia Bunyavirus
Generos:
Bunyavirus: (Medicinales): encefalitis de California,
La Crosse
Flebovirus:
(Medicinales): fiebre del Valle de Rift
Hantavirus
Puremala es un virus de la fiebre hemo
rragica
Nairvirus:
(Veterinarios) enfermedad de las ovejas
de Nairobi
Ademas:
muchos bunyavirus no asignados
Familia Arenavirus (Medicinales)
LCM, Virus de la fiebre de Lassi
Familia Reovirus
Generos:
Reovirus: un posible
pat6geno humano
Rotavirus: gastroenteritis aguda en los ninos Orbivirus: (Medicinales y Veterinarios), fiebre del acaro de Colorado, Lebombo (humanos), encefalosis de los equinos, lengua azul
Familia Retrovirus
Subfamilia: Oncorivirinal: (Veterinarios) (Medicinales): virus de la leucemia de los felinos, HTLVI y HTLVII Lentivirinae: (Medicinales y Veterinarios) HIV, virus de la inmunodeficiencia de los felinos, infecciones de los equinos, virus de la anemia Spumavirinae
Familia Papovavirus
Subfamilia: Poliomavirus: (Medicinales), virus BKU y JCU
Subfamilia Papilomavirus: (Medicinales) muchos tipos de virus asociados con canceres o progresi6n maligna del papiloma.
Adenovirus (Medicinales) EX AD7, ARD., O.B. -causan enfermedad respiratoria - algunos adenovirus tales como el 275 causan enteritis
Familia Parvovirus (Veterinarios) Parvovirus de los felinos: Causa enteritis de los felinos Felinos Panleucopeniavirus Parvovirus de los canidos Parvovirus de los porcinos
Familia Herpesvirus Subfamilia: Alfaherpesviridae Generos: Simplexvirus (Medicinales)
HSVI (GenBank X14112, NC001806), HSVII (NC001798) Varicellovirus: (Medicinales y Veterinarios) Zoster de la pseudorrabiavaricela
Subfamilia: Betaherpesviridae
Generos: Citomegalovirus (Medicinales) HCMV Muromegalovirus
Subfamilia: Gammaherpesviridae Generos: Linfocriptovirus (Medicinales)
(continuaci6n)
Familia Coronavirus: (Medicinales y Veterinarios)
EBV -(Burkitts linfo)
Rhadinovirus
Familia Poxvirus
Subfamilia:
Chordopoxviridae (Medicinales
Veterinarios)
Generos
Variola (Viruela)
Vaccinia (Viruela vacuna)
Parapoxvirus Veterinarios
Avipoxvirus -Veterinarios
Capripoxvirus
Leporipoxvirus
Suipoxvirus
Subfamilia:
Enteropoxviridae
Familia Hepadnavirus
Virus de la hepatitis B
Sin clasificar
Virus de la hepatitis delta
Tabla 2
Pat6genos bacterianos
Cocos pat6genos grampositivos incluyen: neumococos; estafilococos, y estrepto cocos. Cocos pat6genos gramnegativos incluyen: meningococos, y gonococos. Bacilos pat6genos gramnegativos entericos incluyen: enterobacteriaceas, pseu domonas, acinetobacterias y eikenella, melioidosis; salmonella; shigellosis; hemo philus; chancroide; brucelosis; tularemia; yersinia (pasteurella); streptobacillus mortiliformis y spirillum; listeria monocitogenes; erisipelothrix rhusiopathiae; difteria, c6lera, antrax; donovanosis (granuloma inguinal); y bartonellosis. Bacterias pat6genas anaerobias incluyen: tetanos; botulismo; otros clostridios; tuberculosis; lepra; y otras micobacterias. Enfermedades pat6genas causadas por espiroquetas incluyen: sffilis; treponematosis: yaws, pinta y sffilis endemica; y lep tospirosis. Otras infecciones causadas por bacterias pat6genas superiores y hongos pat6ge nos incluyen: actinomicosis; nocardiosis; criptococosis, blastomicosis, histoplasmosis y coccidioi domicosis; candidiasis, aspergillosis y mucomicosis; esporotricosis; paracoccidio micosis, petriellidiosis, torulopsosis, micetoma, y cromomicosis; y dermatofitosis. Infecciones por rickettsias incluyen ricketsiales y ricketsiasis.
Ejemplos de infecciones de micoplasmas y clamidias incluyen: micoplasma pneumoniae; linfogranuloma venereum; psittacosis; e infecciones perinatales de clamidia.
Eucariotas pat6genos Protozoos y helmintos pat6genos e infecciones causadas por ellos incluyen: abediasis; malaria, leishmaniasis; tripanosomiasis; toxoplasmosis; pneumocystis carinii; babesiosis; giardiasis; triquinosis; filariasis; esquistosomiasis; nematodos; trematodos o flukes; e infec ciones causadas por cestodos (solitaria)

Claims (14)

  1. REIVINDICACIONES
    1.Una molecula de acido nucleico que comprende SEQ ID NO: 1.
  2. 2.La molecula de acido nucleico de la reivindicaci6n 1 exenta de una o mas secuencias seleccionadas del grupo
    constituido por:
    1) secuencia codificante para una secuencia de senal de IL15;
    2) regi6n Kozak de IL15;
    3) regi6n 5' no traducida de IL15;
    4) regi6n 3' no traducida de IL15; y que comprende opcionalmente una secuencia codificante para una secuencia de senal no perteneciente a IL15.
  3. 3.La molecula de acido nucleico de las reivindicaciones 1 6 2 que comprende una o mas secuencias seleccionadas
    del grupo constituido por:
    1) una secuencia codificante para una secuencia de senal de IgE; y
    2) una secuencia codificante para un inmun6geno.
  4. 4.La molecula de acido nucleico de las reivindicaciones 13, que comprende una secuencia codificante para un
    inmun6geno, en donde el inmun6geno se selecciona del grupo constituido por:
    1) un antfgeno pat6geno;
    2) un antfgeno asociado con cancer; y
    3) un antfgeno ligado a celulas asociadas con enfermedades autoinmunes.
  5. 5.La molecula de acido nucleico de la reivindicaci6n 4, en donde el inmun6geno es un antfgeno pat6geno, en donde el pat6geno se selecciona del grupo constituido por HIV, HSV, HCV, y WNV.
  6. 6.La molecula de acido nucleico de las reivindicaciones 15, en donde la molecula de acido nucleico se incorpora
    en uno de:
    1) un plasmido;
    2) un vector viral; o
    3) un pat6geno vivo atenuado.
  7. 7.Una vacuna recombinante que comprende una secuencia de acido nucleico de las reivindicaciones 15 y una secuencia de acido nucleico que codifica un inmun6geno.
  8. 8.La vacuna recombinante de la reivindicaci6n 7, en donde dicha vacuna recombinante en un virus Vaccinia recombinante.
  9. 9.Una composici6n que comprende una molecula de acido nucleico de las reivindicaciones 15 y una molecula de acido nucleico que codifica un inmun6geno.
  10. 10. La composici6n de la reivindicaci6n 9 en donde dichas moleculas de acido nucleico son plasmidos.
  11. 11.Una composici6n farmaceutica inyectable que comprende las moleculas de acido nucleico de las reivindicaciones 15 y opcionalmente una secuencia de acido nucleico que codifica un inmun6geno.
  12. 12.La composici6n farmaceutica inyectable de la reivindicaci6n 11, en la cual la molecula de acido nucleico de las
    reivindicaciones 1 a 5 se incorpora en uno de:
    1) un plasmido;
    2) un vector viral; o
    3) un pat6geno vivo atenuado.
  13. 13.La molecula de acido nucleico de las reivindicaciones 15 para uso en la modulaci6n de una respuesta inmune en un individuo.
  14. 14.La composici6n de las reivindicaciones 9 6 10 para uso en la inducci6n de una respuesta inmune en un individuo contra un inmun6geno.
    FIGURA 1
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