RU2751252C1 - Мезотелин-нацеленные вакцины от рака и их применение - Google Patents
Мезотелин-нацеленные вакцины от рака и их применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2751252C1 RU2751252C1 RU2020122868A RU2020122868A RU2751252C1 RU 2751252 C1 RU2751252 C1 RU 2751252C1 RU 2020122868 A RU2020122868 A RU 2020122868A RU 2020122868 A RU2020122868 A RU 2020122868A RU 2751252 C1 RU2751252 C1 RU 2751252C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nucleic acid
- seq
- amino acid
- mesothelin
- acid sequence
- Prior art date
Links
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 title description 6
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 title description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 307
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 204
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 204
- 108090000015 Mesothelin Proteins 0.000 claims abstract description 187
- 102000003735 Mesothelin Human genes 0.000 claims abstract description 185
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 171
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 170
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 169
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 161
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 101
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 76
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 56
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 47
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 113
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 83
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 82
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 82
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 76
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 68
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 67
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 63
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 59
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 claims description 44
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 37
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 32
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims description 25
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 25
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 claims description 24
- -1 IL-28 Proteins 0.000 claims description 22
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 20
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 14
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 14
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 14
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 12
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 claims description 11
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 claims description 11
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 10
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 9
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 8
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 8
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 7
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 claims description 6
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 claims description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 5
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 102000001327 Chemokine CCL5 Human genes 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 121
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 95
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 93
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 59
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 59
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 55
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 45
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 45
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 43
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 42
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 38
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 31
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 28
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 26
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 26
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 24
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 24
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 24
- 101000623901 Homo sapiens Mucin-16 Proteins 0.000 description 23
- 102100023123 Mucin-16 Human genes 0.000 description 23
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 19
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 18
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 17
- 101001023379 Homo sapiens Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Proteins 0.000 description 16
- 102100035133 Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Human genes 0.000 description 16
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 15
- 229940126546 immune checkpoint molecule Drugs 0.000 description 15
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 15
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 15
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 14
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 14
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 14
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 13
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 13
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 13
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 13
- 229940076838 Immune checkpoint inhibitor Drugs 0.000 description 12
- 102000037982 Immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 12
- 108091008036 Immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 12
- 239000012274 immune-checkpoint protein inhibitor Substances 0.000 description 12
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 12
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 11
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 11
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 11
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 11
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 11
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 10
- 102100032367 C-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 description 10
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 10
- 102000037984 Inhibitory immune checkpoint proteins Human genes 0.000 description 10
- 108091008026 Inhibitory immune checkpoint proteins Proteins 0.000 description 10
- 102100022203 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 25 Human genes 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 10
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 10
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 10
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 10
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 9
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 9
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 9
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 9
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 9
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 8
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 8
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 8
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 8
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 8
- 102100031132 Glucose-6-phosphate isomerase Human genes 0.000 description 7
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 7
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 7
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 7
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 7
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 7
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 7
- 241000894007 species Species 0.000 description 7
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 7
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 7
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 6
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 6
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 6
- 101000679903 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 25 Proteins 0.000 description 6
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 6
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 6
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 6
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 102100021933 C-C motif chemokine 25 Human genes 0.000 description 5
- 101710112540 C-C motif chemokine 25 Proteins 0.000 description 5
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 5
- 102100040112 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10B Human genes 0.000 description 5
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 5
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 5
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 5
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 5
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 5
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100021936 C-C motif chemokine 27 Human genes 0.000 description 4
- 101710112538 C-C motif chemokine 27 Proteins 0.000 description 4
- 101100463133 Caenorhabditis elegans pdl-1 gene Proteins 0.000 description 4
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 4
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101000576802 Homo sapiens Mesothelin Proteins 0.000 description 4
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 4
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 4
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 description 4
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 4
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 4
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 4
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 4
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 4
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 4
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 3
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 3
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 3
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 3
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 3
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 101000610604 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10B Proteins 0.000 description 3
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 3
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 3
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 3
- 108700001237 Nucleic Acid-Based Vaccines Proteins 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 3
- 238000008050 Total Bilirubin Reagent Methods 0.000 description 3
- PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N [N].NC(N)=O Chemical compound [N].NC(N)=O PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 3
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 3
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 3
- 229940023146 nucleic acid vaccine Drugs 0.000 description 3
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 201000009410 rhabdomyosarcoma Diseases 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OMMDTNGURYRDAC-NRPADANISA-N Ala-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O OMMDTNGURYRDAC-NRPADANISA-N 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- 102100030343 Antigen peptide transporter 2 Human genes 0.000 description 2
- PAYPSKIBMDHZPI-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PAYPSKIBMDHZPI-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000714230 Avian leukemia virus Species 0.000 description 2
- 241000713704 Bovine immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 102100021942 C-C motif chemokine 28 Human genes 0.000 description 2
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 2
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 2
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 2
- 108010084313 CD58 Antigens Proteins 0.000 description 2
- 101100289995 Caenorhabditis elegans mac-1 gene Proteins 0.000 description 2
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 2
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 2
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 101710088341 Dermatopontin Proteins 0.000 description 2
- 241000701832 Enterobacteria phage T3 Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 108010039471 Fas Ligand Protein Proteins 0.000 description 2
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- MCAVASRGVBVPMX-FXQIFTODSA-N Gln-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O MCAVASRGVBVPMX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 2
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 101000897477 Homo sapiens C-C motif chemokine 28 Proteins 0.000 description 2
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 2
- 101000991061 Homo sapiens MHC class I polypeptide-related sequence B Proteins 0.000 description 2
- 101001109503 Homo sapiens NKG2-C type II integral membrane protein Proteins 0.000 description 2
- 101001109501 Homo sapiens NKG2-D type II integral membrane protein Proteins 0.000 description 2
- 101000934346 Homo sapiens T-cell surface antigen CD2 Proteins 0.000 description 2
- 101100100117 Homo sapiens TNFRSF10B gene Proteins 0.000 description 2
- 101001050288 Homo sapiens Transcription factor Jun Proteins 0.000 description 2
- 101000610602 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10C Proteins 0.000 description 2
- 101000679921 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 21 Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 2
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 2
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 2
- 241001135569 Human adenovirus 5 Species 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 102100025323 Integrin alpha-1 Human genes 0.000 description 2
- 102100022339 Integrin alpha-L Human genes 0.000 description 2
- 108010041341 Integrin alpha1 Proteins 0.000 description 2
- 108010055795 Integrin alpha1beta1 Proteins 0.000 description 2
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 2
- 108010064600 Intercellular Adhesion Molecule-3 Proteins 0.000 description 2
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710148794 Intercellular adhesion molecule 2 Proteins 0.000 description 2
- 102100037872 Intercellular adhesion molecule 2 Human genes 0.000 description 2
- 102100037871 Intercellular adhesion molecule 3 Human genes 0.000 description 2
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 2
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 2
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 2
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 2
- 102100036342 Interleukin-1 receptor-associated kinase 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 2
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 2
- 108020003285 Isocitrate lyase Proteins 0.000 description 2
- 101150069255 KLRC1 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150074862 KLRC3 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150018199 KLRC4 gene Proteins 0.000 description 2
- 108010092694 L-Selectin Proteins 0.000 description 2
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N Leu-Leu-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)N1CCCC1C(O)=O XVZCXCTYGHPNEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZRHDPZAAWLXXIR-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZRHDPZAAWLXXIR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- SBANPBVRHYIMRR-GARJFASQSA-N Leu-Ser-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N SBANPBVRHYIMRR-GARJFASQSA-N 0.000 description 2
- SBANPBVRHYIMRR-UHFFFAOYSA-N Leu-Ser-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CO)C(=O)N1CCCC1C(O)=O SBANPBVRHYIMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010064548 Lymphocyte Function-Associated Antigen-1 Proteins 0.000 description 2
- 102100030301 MHC class I polypeptide-related sequence A Human genes 0.000 description 2
- 102100030300 MHC class I polypeptide-related sequence B Human genes 0.000 description 2
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 2
- 101100404845 Macaca mulatta NKG2A gene Proteins 0.000 description 2
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100028123 Macrophage colony-stimulating factor 1 Human genes 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- 108010060408 Member 25 Tumor Necrosis Factor Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 2
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 2
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 102000003505 Myosin Human genes 0.000 description 2
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 2
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100022682 NKG2-A/NKG2-B type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 2
- 102100022683 NKG2-C type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 2
- 102100022680 NKG2-D type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 2
- 102100022701 NKG2-E type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 2
- 102100022700 NKG2-F type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 2
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 208000007571 Ovarian Epithelial Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108010035766 P-Selectin Proteins 0.000 description 2
- 102100023472 P-selectin Human genes 0.000 description 2
- 101150044441 PECAM1 gene Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 102100028688 Putative glycosylation-dependent cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N Sodium cation Chemical compound [Na+] FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 2
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 description 2
- 102000003714 TNF receptor-associated factor 6 Human genes 0.000 description 2
- 108090000009 TNF receptor-associated factor 6 Proteins 0.000 description 2
- 101800000849 Tachykinin-associated peptide 2 Proteins 0.000 description 2
- 102100023132 Transcription factor Jun Human genes 0.000 description 2
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 2
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 2
- 102100031988 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Human genes 0.000 description 2
- 102100040115 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10C Human genes 0.000 description 2
- 102100022205 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 21 Human genes 0.000 description 2
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004436 artificial bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 210000001106 artificial yeast chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 108010038633 aspartylglutamate Proteins 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 2
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 2
- 229960003624 creatine Drugs 0.000 description 2
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 2
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 2
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 2
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 2
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 210000005008 immunosuppressive cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000010468 interferon response Effects 0.000 description 2
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- DRAVOWXCEBXPTN-UHFFFAOYSA-N isoguanine Chemical compound NC1=NC(=O)NC2=C1NC=N2 DRAVOWXCEBXPTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 108010083708 leucyl-aspartyl-valine Proteins 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000010445 mica Substances 0.000 description 2
- 229910052618 mica group Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 2
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 2
- 210000004479 myeloid suppressor cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 229940021222 peritoneal dialysis isotonic solution Drugs 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 108020003519 protein disulfide isomerase Proteins 0.000 description 2
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 2
- 150000004053 quinones Chemical class 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 2
- 108010012704 sulfated glycoprotein p50 Proteins 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 2
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 2
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 2
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 2
- 210000004981 tumor-associated macrophage Anatomy 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical class [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 2
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 2
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 2
- 230000006444 vascular growth Effects 0.000 description 2
- 239000005526 vasoconstrictor agent Substances 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XVZCXCTYGHPNEM-IHRRRGAJSA-N (2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-2-amino-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O XVZCXCTYGHPNEM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- XQCZBXHVTFVIFE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-hydroxypyrimidine Chemical compound NC1=NC=CC(O)=N1 XQCZBXHVTFVIFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BUANFPRKJKJSRR-ACZMJKKPSA-N Ala-Ala-Gln Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CCC(N)=O BUANFPRKJKJSRR-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- KQFRUSHJPKXBMB-BHDSKKPTSA-N Ala-Ala-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)C)C(O)=O)=CNC2=C1 KQFRUSHJPKXBMB-BHDSKKPTSA-N 0.000 description 1
- ZIBWKCRKNFYTPT-ZKWXMUAHSA-N Ala-Asn-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ZIBWKCRKNFYTPT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- PUBLUECXJRHTBK-ACZMJKKPSA-N Ala-Glu-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PUBLUECXJRHTBK-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- ZPXCNXMJEZKRLU-LSJOCFKGSA-N Ala-His-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CN=CN1 ZPXCNXMJEZKRLU-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- SUMYEVXWCAYLLJ-GUBZILKMSA-N Ala-Leu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O SUMYEVXWCAYLLJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- KYDYGANDJHFBCW-DRZSPHRISA-N Ala-Phe-Gln Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N KYDYGANDJHFBCW-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- DXTYEWAQOXYRHZ-KKXDTOCCSA-N Ala-Phe-Tyr Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=C(C=C2)O)C(=O)O)N DXTYEWAQOXYRHZ-KKXDTOCCSA-N 0.000 description 1
- IORKCNUBHNIMKY-CIUDSAMLSA-N Ala-Pro-Glu Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O IORKCNUBHNIMKY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- IOFVWPYSRSCWHI-JXUBOQSCSA-N Ala-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](C)N IOFVWPYSRSCWHI-JXUBOQSCSA-N 0.000 description 1
- JJHBEVZAZXZREW-LFSVMHDDSA-N Ala-Thr-Phe Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](NC(=O)[C@H](C)N)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O JJHBEVZAZXZREW-LFSVMHDDSA-N 0.000 description 1
- 244000303258 Annona diversifolia Species 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- BIOCIVSVEDFKDJ-GUBZILKMSA-N Arg-Arg-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O BIOCIVSVEDFKDJ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ASQYTJJWAMDISW-BPUTZDHNSA-N Arg-Asp-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N ASQYTJJWAMDISW-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- IGULQRCJLQQPSM-DCAQKATOSA-N Arg-Cys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IGULQRCJLQQPSM-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- GIVWETPOBCRTND-DCAQKATOSA-N Arg-Gln-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O GIVWETPOBCRTND-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- PTVGLOCPAVYPFG-CIUDSAMLSA-N Arg-Gln-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PTVGLOCPAVYPFG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VNFWDYWTSHFRRG-SRVKXCTJSA-N Arg-Gln-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VNFWDYWTSHFRRG-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- YNSGXDWWPCGGQS-YUMQZZPRSA-N Arg-Gly-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O YNSGXDWWPCGGQS-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- WVNFNPGXYADPPO-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Ser Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WVNFNPGXYADPPO-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- SLQQPJBDBVPVQV-JYJNAYRXSA-N Arg-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SLQQPJBDBVPVQV-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- KNENKKKUYGEZIO-FXQIFTODSA-N Asn-Met-Asn Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N KNENKKKUYGEZIO-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- PQKSVQSMTHPRIB-ZKWXMUAHSA-N Asn-Val-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PQKSVQSMTHPRIB-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N Asp-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PBVLJOIPOGUQQP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- XYBJLTKSGFBLCS-QXEWZRGKSA-N Asp-Arg-Val Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O XYBJLTKSGFBLCS-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- UJGRZQYSNYTCAX-SRVKXCTJSA-N Asp-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O UJGRZQYSNYTCAX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- FAUPLTGRUBTXNU-FXQIFTODSA-N Asp-Pro-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FAUPLTGRUBTXNU-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- ITGFVUYOLWBPQW-KKHAAJSZSA-N Asp-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ITGFVUYOLWBPQW-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 1
- 241000283726 Bison Species 0.000 description 1
- 241000282817 Bovidae Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000030939 Bubalus bubalis Species 0.000 description 1
- 102100036848 C-C motif chemokine 20 Human genes 0.000 description 1
- 238000011748 CB6F1 mouse Methods 0.000 description 1
- 210000001239 CD8-positive, alpha-beta cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- IZUNQDRIAOLWCN-YUMQZZPRSA-N Cys-Leu-Gly Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N IZUNQDRIAOLWCN-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- YWEHYKGJWHPGPY-XGEHTFHBSA-N Cys-Thr-Arg Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N)O YWEHYKGJWHPGPY-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- DGQJGBDBFVGLGL-ZKWXMUAHSA-N Cys-Val-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N DGQJGBDBFVGLGL-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- VIOQRFNAZDMVLO-NRPADANISA-N Cys-Val-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VIOQRFNAZDMVLO-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- 238000011238 DNA vaccination Methods 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 108010024212 E-Selectin Proteins 0.000 description 1
- 102100023471 E-selectin Human genes 0.000 description 1
- 108010031111 EBV-encoded nuclear antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 101710130332 ETS domain-containing protein Elk-4 Proteins 0.000 description 1
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000289659 Erinaceidae Species 0.000 description 1
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 1
- 102100035233 Furin Human genes 0.000 description 1
- 108090001126 Furin Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108700023863 Gene Components Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- RKAQZCDMSUQTSS-FXQIFTODSA-N Gln-Asp-Gln Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N RKAQZCDMSUQTSS-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- GNMQDOGFWYWPNM-LAEOZQHASA-N Gln-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O)C(O)=O GNMQDOGFWYWPNM-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- QBLMTCRYYTVUQY-GUBZILKMSA-N Gln-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O QBLMTCRYYTVUQY-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- FKXCBKCOSVIGCT-AVGNSLFASA-N Gln-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FKXCBKCOSVIGCT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- PVBBEKPHARMPHX-DCAQKATOSA-N Glu-Gln-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O PVBBEKPHARMPHX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- ILGFBUGLBSAQQB-GUBZILKMSA-N Glu-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O ILGFBUGLBSAQQB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- LGYCLOCORAEQSZ-PEFMBERDSA-N Glu-Ile-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O LGYCLOCORAEQSZ-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- FBEJIDRSQCGFJI-GUBZILKMSA-N Glu-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FBEJIDRSQCGFJI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- IOUQWHIEQYQVFD-JYJNAYRXSA-N Glu-Leu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O IOUQWHIEQYQVFD-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- HQOGXFLBAKJUMH-CIUDSAMLSA-N Glu-Met-Ser Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N HQOGXFLBAKJUMH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N Glu-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IDEODOAVGCMUQV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- GPSHCSTUYOQPAI-JHEQGTHGSA-N Glu-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O GPSHCSTUYOQPAI-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 1
- YQAQQKPWFOBSMU-WDCWCFNPSA-N Glu-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YQAQQKPWFOBSMU-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- UZWUBBRJWFTHTD-LAEOZQHASA-N Glu-Val-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O UZWUBBRJWFTHTD-LAEOZQHASA-N 0.000 description 1
- QXPRJQPCFXMCIY-NKWVEPMBSA-N Gly-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)CN QXPRJQPCFXMCIY-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- PABFFPWEJMEVEC-JGVFFNPUSA-N Gly-Gln-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)CN)C(=O)O PABFFPWEJMEVEC-JGVFFNPUSA-N 0.000 description 1
- XMPXVJIDADUOQB-RCOVLWMOSA-N Gly-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)CNC(=O)C[NH3+] XMPXVJIDADUOQB-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- IEGFSKKANYKBDU-QWHCGFSZSA-N Gly-Phe-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)NC(=O)CN)C(=O)O IEGFSKKANYKBDU-QWHCGFSZSA-N 0.000 description 1
- ZZJVYSAQQMDIRD-UWVGGRQHSA-N Gly-Pro-His Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O ZZJVYSAQQMDIRD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- OOCFXNOVSLSHAB-IUCAKERBSA-N Gly-Pro-Pro Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 OOCFXNOVSLSHAB-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- FGPLUIQCSKGLTI-WDSKDSINSA-N Gly-Ser-Glu Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O FGPLUIQCSKGLTI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N H-Lys-Trp-OH Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)CCCCN)C(O)=O)=CNC2=C1 RVKIPWVMZANZLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- PROLDOGUBQJNPG-RWMBFGLXSA-N His-Arg-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)C(=O)O PROLDOGUBQJNPG-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 1
- AIPUZFXMXAHZKY-QWRGUYRKSA-N His-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O AIPUZFXMXAHZKY-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- VIJMRAIWYWRXSR-CIUDSAMLSA-N His-Ser-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 VIJMRAIWYWRXSR-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 241001272567 Hominoidea Species 0.000 description 1
- 101000713099 Homo sapiens C-C motif chemokine 20 Proteins 0.000 description 1
- 101000899111 Homo sapiens Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 101100519206 Homo sapiens PDCD1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 101000610609 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10D Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YOTNPRLPIPHQSB-XUXIUFHCSA-N Ile-Arg-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N YOTNPRLPIPHQSB-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- OVPYIUNCVSOVNF-KQXIARHKSA-N Ile-Gln-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N OVPYIUNCVSOVNF-KQXIARHKSA-N 0.000 description 1
- OVPYIUNCVSOVNF-ZPFDUUQYSA-N Ile-Gln-Pro Natural products CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O OVPYIUNCVSOVNF-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- NZOCIWKZUVUNDW-ZKWXMUAHSA-N Ile-Gly-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NZOCIWKZUVUNDW-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- HQEPKOFULQTSFV-JURCDPSOSA-N Ile-Phe-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)O)N HQEPKOFULQTSFV-JURCDPSOSA-N 0.000 description 1
- CIJLNXXMDUOFPH-HJWJTTGWSA-N Ile-Pro-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 CIJLNXXMDUOFPH-HJWJTTGWSA-N 0.000 description 1
- PXKACEXYLPBMAD-JBDRJPRFSA-N Ile-Ser-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N PXKACEXYLPBMAD-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 101000668058 Infectious salmon anemia virus (isolate Atlantic salmon/Norway/810/9/99) RNA-directed RNA polymerase catalytic subunit Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 101710199015 Interleukin-1 receptor-associated kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 description 1
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 1
- 108010055717 JNK Mitogen-Activated Protein Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000019145 JUN kinase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- IBMVEYRWAWIOTN-UHFFFAOYSA-N L-Leucyl-L-Arginyl-L-Proline Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCCC1C(O)=O IBMVEYRWAWIOTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N L-leucyl-L-arginine Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCN=C(N)N SENJXOPIZNYLHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 description 1
- 101150030213 Lag3 gene Proteins 0.000 description 1
- CZCSUZMIRKFFFA-CIUDSAMLSA-N Leu-Ala-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O CZCSUZMIRKFFFA-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N Leu-Ala-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O WNGVUZWBXZKQES-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- GRZSCTXVCDUIPO-SRVKXCTJSA-N Leu-Arg-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O GRZSCTXVCDUIPO-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ULXYQAJWJGLCNR-YUMQZZPRSA-N Leu-Asp-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O ULXYQAJWJGLCNR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- MYGQXVYRZMKRDB-SRVKXCTJSA-N Leu-Asp-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN MYGQXVYRZMKRDB-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- QCSFMCFHVGTLFF-NHCYSSNCSA-N Leu-Asp-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QCSFMCFHVGTLFF-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- PNUCWVAGVNLUMW-CIUDSAMLSA-N Leu-Cys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O PNUCWVAGVNLUMW-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N Leu-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DZQMXBALGUHGJT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- HYIFFZAQXPUEAU-QWRGUYRKSA-N Leu-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C HYIFFZAQXPUEAU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- YFBBUHJJUXXZOF-UWVGGRQHSA-N Leu-Gly-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O YFBBUHJJUXXZOF-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- REPBGZHJKYWFMJ-KKUMJFAQSA-N Leu-Lys-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N REPBGZHJKYWFMJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- VVQJGYPTIYOFBR-IHRRRGAJSA-N Leu-Lys-Met Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N VVQJGYPTIYOFBR-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N Leu-Pro-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- JDBQSGMJBMPNFT-AVGNSLFASA-N Leu-Pro-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JDBQSGMJBMPNFT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- IRMLZWSRWSGTOP-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Ala Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IRMLZWSRWSGTOP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- JIHDFWWRYHSAQB-GUBZILKMSA-N Leu-Ser-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O JIHDFWWRYHSAQB-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- PPGBXYKMUMHFBF-KATARQTJSA-N Leu-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PPGBXYKMUMHFBF-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O AIQWYVFNBNNOLU-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- AXVIGSRGTMNSJU-YESZJQIVSA-N Leu-Tyr-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N AXVIGSRGTMNSJU-YESZJQIVSA-N 0.000 description 1
- VKVDRTGWLVZJOM-DCAQKATOSA-N Leu-Val-Ser Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VKVDRTGWLVZJOM-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 1
- KCXUCYYZNZFGLL-SRVKXCTJSA-N Lys-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KCXUCYYZNZFGLL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- UETQMSASAVBGJY-QWRGUYRKSA-N Lys-Gly-His Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 UETQMSASAVBGJY-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- MUXNCRWTWBMNHX-SRVKXCTJSA-N Lys-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O MUXNCRWTWBMNHX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- XGZDDOKIHSYHTO-SZMVWBNQSA-N Lys-Trp-Glu Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 XGZDDOKIHSYHTO-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- BWECSLVQIWEMSC-IHRRRGAJSA-N Lys-Val-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N BWECSLVQIWEMSC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 101150001976 MUC16 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- SQUTUWHAAWJYES-GUBZILKMSA-N Met-Asp-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SQUTUWHAAWJYES-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- OSOLWRWQADPDIQ-DCAQKATOSA-N Met-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OSOLWRWQADPDIQ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- HSJIGJRZYUADSS-IHRRRGAJSA-N Met-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O HSJIGJRZYUADSS-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 101710151805 Mitochondrial intermediate peptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 229930191564 Monensin Natural products 0.000 description 1
- GAOZTHIDHYLHMS-UHFFFAOYSA-N Monensin A Natural products O1C(CC)(C2C(CC(O2)C2C(CC(C)C(O)(CO)O2)C)C)CCC1C(O1)(C)CCC21CC(O)C(C)C(C(C)C(OC)C(C)C(O)=O)O2 GAOZTHIDHYLHMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101000576803 Mus musculus Mesothelin Proteins 0.000 description 1
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000010168 Myeloid Differentiation Factor 88 Human genes 0.000 description 1
- 108010077432 Myeloid Differentiation Factor 88 Proteins 0.000 description 1
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-valine Natural products CC(C)C(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O SITLTJHOQZFJGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101150087384 PDCD1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N Phe-Leu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 SMFGCTXUBWEPKM-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- GPLWGAYGROGDEN-BZSNNMDCSA-N Phe-Phe-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GPLWGAYGROGDEN-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- BPCLGWHVPVTTFM-QWRGUYRKSA-N Phe-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O BPCLGWHVPVTTFM-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 101710182846 Polyhedrin Proteins 0.000 description 1
- HPXVFFIIGOAQRV-DCAQKATOSA-N Pro-Arg-Gln Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O HPXVFFIIGOAQRV-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- BNBBNGZZKQUWCD-IUCAKERBSA-N Pro-Arg-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 BNBBNGZZKQUWCD-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- KDIIENQUNVNWHR-JYJNAYRXSA-N Pro-Arg-Phe Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O KDIIENQUNVNWHR-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- XROLYVMNVIKVEM-BQBZGAKWSA-N Pro-Asn-Gly Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O XROLYVMNVIKVEM-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- UTAUEDINXUMHLG-FXQIFTODSA-N Pro-Asp-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 UTAUEDINXUMHLG-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- NOXSEHJOXCWRHK-DCAQKATOSA-N Pro-Cys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 NOXSEHJOXCWRHK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- JFNPBBOGGNMSRX-CIUDSAMLSA-N Pro-Gln-Ala Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JFNPBBOGGNMSRX-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- ZPPVJIJMIKTERM-YUMQZZPRSA-N Pro-Gln-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 ZPPVJIJMIKTERM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- UAYHMOIGIQZLFR-NHCYSSNCSA-N Pro-Gln-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O UAYHMOIGIQZLFR-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- PULPZRAHVFBVTO-DCAQKATOSA-N Pro-Glu-Arg Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O PULPZRAHVFBVTO-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- QEWBZBLXDKIQPS-STQMWFEESA-N Pro-Gly-Tyr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O QEWBZBLXDKIQPS-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- CLJLVCYFABNTHP-DCAQKATOSA-N Pro-Leu-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O CLJLVCYFABNTHP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- FHZJRBVMLGOHBX-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H]1CCCN1)C(O)=O FHZJRBVMLGOHBX-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- AJNGQVUFQUVRQT-JYJNAYRXSA-N Pro-Pro-Tyr Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=C(O)C=C1 AJNGQVUFQUVRQT-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- MKGIILKDUGDRRO-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 MKGIILKDUGDRRO-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 241000283080 Proboscidea <mammal> Species 0.000 description 1
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 229940022005 RNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 101710138742 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase H Proteins 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 102400000830 Saposin-B Human genes 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 108090000184 Selectins Proteins 0.000 description 1
- 102000003800 Selectins Human genes 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- IXUGADGDCQDLSA-FXQIFTODSA-N Ser-Gln-Gln Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N IXUGADGDCQDLSA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- WSTIOCFMWXNOCX-YUMQZZPRSA-N Ser-Gly-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)N WSTIOCFMWXNOCX-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- MOINZPRHJGTCHZ-MMWGEVLESA-N Ser-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N MOINZPRHJGTCHZ-MMWGEVLESA-N 0.000 description 1
- BSXKBOUZDAZXHE-CIUDSAMLSA-N Ser-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BSXKBOUZDAZXHE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- KQNDIKOYWZTZIX-FXQIFTODSA-N Ser-Ser-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N KQNDIKOYWZTZIX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- NADLKBTYNKUJEP-KATARQTJSA-N Ser-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O NADLKBTYNKUJEP-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- IAOHCSQDQDWRQU-GUBZILKMSA-N Ser-Val-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O IAOHCSQDQDWRQU-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- ANOQEBQWIAYIMV-AEJSXWLSSA-N Ser-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N ANOQEBQWIAYIMV-AEJSXWLSSA-N 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- YRNBANYVJJBGDI-VZFHVOOUSA-N Thr-Ala-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O YRNBANYVJJBGDI-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- LMMDEZPNUTZJAY-GCJQMDKQSA-N Thr-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O LMMDEZPNUTZJAY-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- KZUJCMPVNXOBAF-LKXGYXEUSA-N Thr-Cys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O KZUJCMPVNXOBAF-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- LGNBRHZANHMZHK-NUMRIWBASA-N Thr-Glu-Asp Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N)O LGNBRHZANHMZHK-NUMRIWBASA-N 0.000 description 1
- JKGGPMOUIAAJAA-YEPSODPASA-N Thr-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JKGGPMOUIAAJAA-YEPSODPASA-N 0.000 description 1
- RFKVQLIXNVEOMB-WEDXCCLWSA-N Thr-Leu-Gly Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)O)N)O RFKVQLIXNVEOMB-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N Thr-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VRUFCJZQDACGLH-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- AHERARIZBPOMNU-KATARQTJSA-N Thr-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AHERARIZBPOMNU-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- REJRKTOJTCPDPO-IRIUXVKKSA-N Thr-Tyr-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O REJRKTOJTCPDPO-IRIUXVKKSA-N 0.000 description 1
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 1
- RSUXQZNWAOTBQF-XIRDDKMYSA-N Trp-Arg-Gln Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N RSUXQZNWAOTBQF-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- XZSJDSBPEJBEFZ-QRTARXTBSA-N Trp-Asn-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O XZSJDSBPEJBEFZ-QRTARXTBSA-N 0.000 description 1
- UMIACFRBELJMGT-GQGQLFGLSA-N Trp-Ser-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)N UMIACFRBELJMGT-GQGQLFGLSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102100040110 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 10D Human genes 0.000 description 1
- 206010064390 Tumour invasion Diseases 0.000 description 1
- WDGDKHLSDIOXQC-ACRUOGEOSA-N Tyr-Leu-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WDGDKHLSDIOXQC-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- FGVFBDZSGQTYQX-UFYCRDLUSA-N Tyr-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O FGVFBDZSGQTYQX-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- QKXAEWMHAAVVGS-KKUMJFAQSA-N Tyr-Pro-Glu Chemical compound N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O QKXAEWMHAAVVGS-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- RUCNAYOMFXRIKJ-DCAQKATOSA-N Val-Ala-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN RUCNAYOMFXRIKJ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- CVUDMNSZAIZFAE-TUAOUCFPSA-N Val-Arg-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N CVUDMNSZAIZFAE-TUAOUCFPSA-N 0.000 description 1
- CVUDMNSZAIZFAE-UHFFFAOYSA-N Val-Arg-Pro Natural products NC(N)=NCCCC(NC(=O)C(N)C(C)C)C(=O)N1CCCC1C(O)=O CVUDMNSZAIZFAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QPZMOUMNTGTEFR-ZKWXMUAHSA-N Val-Asn-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](C(C)C)N QPZMOUMNTGTEFR-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- VVZDBPBZHLQPPB-XVKPBYJWSA-N Val-Glu-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O VVZDBPBZHLQPPB-XVKPBYJWSA-N 0.000 description 1
- ZXAGTABZUOMUDO-GVXVVHGQSA-N Val-Glu-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N ZXAGTABZUOMUDO-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- KDKLLPMFFGYQJD-CYDGBPFRSA-N Val-Ile-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N KDKLLPMFFGYQJD-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- OTJMMKPMLUNTQT-AVGNSLFASA-N Val-Leu-Arg Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N OTJMMKPMLUNTQT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- AGXGCFSECFQMKB-NHCYSSNCSA-N Val-Leu-Asp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N AGXGCFSECFQMKB-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- ZHQWPWQNVRCXAX-XQQFMLRXSA-N Val-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N ZHQWPWQNVRCXAX-XQQFMLRXSA-N 0.000 description 1
- DIOSYUIWOQCXNR-ONGXEEELSA-N Val-Lys-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O DIOSYUIWOQCXNR-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- UGFMVXRXULGLNO-XPUUQOCRSA-N Val-Ser-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O UGFMVXRXULGLNO-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- UQMPYVLTQCGRSK-IFFSRLJSSA-N Val-Thr-Gln Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O UQMPYVLTQCGRSK-IFFSRLJSSA-N 0.000 description 1
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 1
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 241001416177 Vicugna pacos Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PVNJLUVGTFULAE-UHFFFAOYSA-N [NH4+].[Cl-].[K] Chemical compound [NH4+].[Cl-].[K] PVNJLUVGTFULAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 108010087924 alanylproline Proteins 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 230000005911 anti-cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000781 anti-lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001857 anti-mycotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000002543 antimycotic Substances 0.000 description 1
- 238000003782 apoptosis assay Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010040443 aspartyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N brefeldin A Chemical compound O[C@@H]1\C=C\C(=O)O[C@@H](C)CCC\C=C\[C@@H]2C[C@H](O)C[C@H]21 KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N 0.000 description 1
- JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N brefeldin-A Natural products CC1CCCC=CC2(C)CC(O)CC2(C)C(O)C=CC(=O)O1 JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 1
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 description 1
- 239000012830 cancer therapeutic Substances 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 239000008004 cell lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000002975 chemoattractant Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 108010060199 cysteinylproline Proteins 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000000368 destabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001827 electrotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000010502 episomal replication Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000008713 feedback mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012595 freezing medium Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010057083 glutamyl-aspartyl-leucine Proteins 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010027668 glycyl-alanyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 108010051307 glycyl-glycyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000008629 immune suppression Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 108010074109 interleukin-22 Proteins 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N ionomycin Chemical compound O1[C@H](C[C@H](O)[C@H](C)[C@H](O)[C@H](C)/C=C/C[C@@H](C)C[C@@H](C)C(/O)=C/C(=O)[C@@H](C)C[C@@H](C)C[C@@H](CCC(O)=O)C)CC[C@@]1(C)[C@@H]1O[C@](C)([C@@H](C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-ADZNBVRBSA-N 0.000 description 1
- PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N ionomycin Natural products O1C(CC(O)C(C)C(O)C(C)C=CCC(C)CC(C)C(O)=CC(=O)C(C)CC(C)CC(CCC(O)=O)C)CCC1(C)C1OC(C)(C(C)O)CC1 PGHMRUGBZOYCAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 108010044311 leucyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010051673 leucyl-glycyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 108010000761 leucylarginine Proteins 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 235000011475 lollipops Nutrition 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 108700021021 mRNA Vaccine Proteins 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 201000006512 mast cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000006971 mastocytoma Diseases 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 229960005358 monensin Drugs 0.000 description 1
- GAOZTHIDHYLHMS-KEOBGNEYSA-N monensin A Chemical compound C([C@@](O1)(C)[C@H]2CC[C@@](O2)(CC)[C@H]2[C@H](C[C@@H](O2)[C@@H]2[C@H](C[C@@H](C)[C@](O)(CO)O2)C)C)C[C@@]21C[C@H](O)[C@@H](C)[C@@H]([C@@H](C)[C@@H](OC)[C@H](C)C(O)=O)O2 GAOZTHIDHYLHMS-KEOBGNEYSA-N 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 101710135378 pH 6 antigen Proteins 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 108010074082 phenylalanyl-alanyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 108010082795 phenylalanyl-arginyl-arginine Proteins 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 230000009894 physiological stress Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 210000001948 pro-b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000005522 programmed cell death Effects 0.000 description 1
- 108010031719 prolyl-serine Proteins 0.000 description 1
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000026447 protein localization Effects 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 108010026333 seryl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000008646 thermal stress Effects 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 108010015385 valyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 1
- 229940114727 vet one Drugs 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001166—Adhesion molecules, e.g. NRCAM, EpCAM or cadherins
- A61K39/001168—Mesothelin [MSLN]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4748—Tumour specific antigens; Tumour rejection antigen precursors [TRAP], e.g. MAGE
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K2039/55527—Interleukins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K2039/55527—Interleukins
- A61K2039/55538—IL-12
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/50—Vector systems having a special element relevant for transcription regulating RNA stability, not being an intron, e.g. poly A signal
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. В данном изобретении раскрыты молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие одну или более последовательностей нуклеиновой кислоты, кодирующих модифицированный консенсусный мезотелиновый антиген. Описаны векторы, композиции и вакцины, содержащие одну или более последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих модифицированный консенсусный мезотелиновый антиген. Раскрыты способы лечения субъекта с мезотелин-экспрессирующей опухолью и способы профилактики мезотелин-экспрессирующей опухоли. Раскрыт модифицированный консенсусный мезотелиновый антиген. Изобретение позволяет получитьбезопасные и эффективные вакцины в данной области, которые могут быть применены к мезотелин-экспрессирующим опухолям, обеспечивая таким образом лечение и способствуя выживанию субъектов, пораженных этими видами рака. 12 н. и 10 з.п. ф-лы, 22 ил., 17 табл., 7 пр.
Description
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[1] Данная заявка претендует на приоритет и преимущество перед предварительной патентной заявкой Соединенных Штатов Америки № 62/598289, поданной 13 декабря 2017 г., раскрытие которой включено в настоящее описание в качестве ссылки во всей своей полноте.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
[2] Данная заявка содержит перечень последовательностей, который был представлен в электронном виде в формате ASCII и включен в настоящее описание в качестве ссылки во всей своей полноте. Указанная ASCII-копия, созданная 11 декабря 2018 года, называется 104409_000444_sequence_listing.txt размером 8 223 байта.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[3] Настоящее изобретение относится к мезотелиновым антигенам и кодирующим их молекулам нуклеиновых кислот. Настоящее изобретение также относится к вакцинам, включающим антигены мезотелина и/или молекулы нуклеиновых кислот. Настоящее изобретение также относится к способам применения вакцин для индукции иммунных реакций и профилактики и/или лечения субъектов с мезотелин-экспрессирующими раковыми клетками.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[4] Рак продолжает быть основной причиной смерти в США и во всем мире. Рынок противораковых вакцин быстро растет. Эффективные противоопухолевые вакцины могут быть полезными для предотвращения роста опухоли и/или могут быть полезны в качестве более эффективной, менее токсичной альтернативы стандартному лечению пациентов на поздних стадиях рака. Антигеном, ассоциированным с раком и, следовательно, мишенью для противоопухолевых вакцин, является мезотелин.
[5] Мезотелин представляет собой белок с молекулярной массой 71 кДа, состоящий из двух субъединиц: фактора потенцирования мегакариоцитов размером 30 кДа и ГФИ-заякоренного, связанного с мембраной зрелого мезотелина размером 41 кДа. Не смотря на то, что функция мезотелина неизвестна, недавние исследования показывают, что мезотелин может играть роль в метастазировании рака яичника, связываясь с геном MUC16, который также экспрессируется в больших количествах на поверхности раковых клеток яичника. По данным Института здравоохранения (IHC), экспрессия мезотелина наблюдалась в 82-100% случаев серозных яичниковых карцином. Hassan, R. European journal of cancer 44, 46-53 (2008); Ordonez, N. G. The American journal of surgical pathology 27, 1418-1428 (2003). Мезотелин является привлекательной мишенью для противораковой терапевтической вакцины из-за его высокой экспрессии при раке яичников, а также из-за его связи с опухолевыми инвазиями.
[6] Вакцины для лечения и профилактики рака представляют большой интерес. Существующие вакцины, нацеленные на антигены опухолевых клеток, часто ограничены низкой экспрессией антигена in vivo. В связи с этим, остается потребность в разработке безопасных и эффективных вакцин в данной области, которые могут быть применены к мезотелин-экспрессирующим опухолям, обеспечивая таким образом лечение и способствуя выживанию субъектов, пораженных этими видами рака.
РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[7] В данном изобретении предложены молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие одну или более последовательностей нуклеиновых кислот, выбранных из группы, состоящей из: (а) последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует аминокислоты 19-607 последовательности SEQ ID NO: 2; (б) последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует фрагмент, включающий по меньшей мере 90% всей длины белка, содержащего аминокислоты 19-607 SEQ ID NO: 2; (в) последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует белок, идентичный не менее, чем на 96% аминокислотам 19-607 последовательности SEQ ID NO: 2; и (г) последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует фрагмент, содержащий не менее 90% полной длины белка, идентичного аминокислотам 19-607 последовательности SEQ ID NO: 2 не менее, чем на 96%.
[8] В настоящем изобретении также предложены молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие одну или более последовательностей нуклеиновой кислоты, выбранных из группы, состоящей из: нуклеотидов 55-1821 SEQ ID NO: 1; (б) фрагмента, содержащего по меньшей мере 90% всей длины молекулы нуклеиновой кислоты, включающей нуклеотиды 55-1821 SEQ ID NO: 1; (в) фрагмента, который, по меньшей мере, на 96% идентичен нуклеотидам 55-1821 SEQ ID NO: 1; и (г) фрагмента, содержащего по меньшей мере 90% всей длины последовательности нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 96% идентична нуклеотидам 55-1821 SEQ ID NO: 1.
[9] В настоящем документе предложены молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие одну или более последовательностей нуклеиновой кислоты, выбранные из группы, состоящей из: (а) последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует SEQ ID NO: 2; (б) последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует фрагмент, составляющий по меньшей мере 90% всей длины SEQ ID NO: 2; (в) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, идентичный не менее, чем на 96% SEQ ID NO: 2; и (г) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей фрагмент, включающий не менее 90% всей длины белка, идентичного SEQ ID NO: 2 по меньшей мере на 96%.
[10] Также, в данном изобретении предложены молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие одну или более последовательностей нуклеиновой кислоты, выбранные из группы, состоящей из: (a) SEQ ID NO: 1; (б) фрагмента, включающего по меньшей мере 90% всей длины SEQ ID NO: 1; (в) фрагмента, который не менее, чем на 96% идентичен SEQ ID NO: 1; и (г) фрагмента, содержащего не менее 90% всей длины последовательности нуклеиновой кислоты, идентичной последовательности SEQ ID NO: 1 по меньшей мере на 96%. В некоторых вариантах воплощения изобретения, молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеиновой кислоты, изложенную в SEQ ID NO: 1.
[11] Молекулы нуклеиновой кислоты, описанные в данном изобретении, могут быть встроены в вектор, такой как плазмида или вирусный вектор. Молекулы нуклеиновой кислоты, описанные в данном изобретении, могут быть встроены в вектор, такой как плазмида или вирусный вектор. В некоторых вариантах воплощения изобретения, вектор содержит молекулы нуклеиновой кислоты, включающие одну или более последовательностей нуклеиновой кислоты, выбранные из группы, состоящей из: (а) последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует аминокислоты 19-607 SEQ ID NO: 2; (б) последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует фрагмент, включающий по меньшей мере 90% всей длины белка, содержащего аминокислоты 19-607 SEQ ID NO: 2; (в) последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует белок, идентичный аминокислотам 19-607 SEQ ID NO: 2 не менее, чем на 96%; и (г) последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует фрагмент, включающий по меньшей мере 90% полной длины белка, идентичный аминокислотам 19-607 SEQ ID NO: 2 не менее, чем на 96%. В дополнительных вариантах воплощения изобретения, вектор содержит молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие одну или более последовательностей нуклеиновой кислоты, выбранные из группы, состоящей из: нуклеотидов 55-1821 SEQ ID NO: 1; (б) фрагмента, содержащего по меньшей мере 90% всей длины молекулы нуклеиновой кислоты, включающего нуклеотиды 55-1821 SEQ ID NO: 1; (в) фрагмента, идентичного нуклеотидам 55-1821 SEQ ID NO: 1 по меньшей мере на 96%; и (г) фрагмента, содержащего по меньшей мере 90% всей длины последовательности нуклеиновой кислоты, которая идентична нуклеотидам 55-1821 SEQ ID NO: 1 не менее, чем на 96%. И еще, в других вариантах воплощения изобретения, вектор содержит молекулы нуклеиновой кислоты, включающие одну или более последовательностей нуклеиновых кислот, выбранных из группы, состоящей из: (а) последовательности нуклеиновых кислот, кодирующей SEQ ID NO: 2; (б) последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует фрагмент, составляющий по меньшей мере 90% всей длины SEQ ID NO: 2; (в) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, который по меньшей мере на 96% идентичен SEQ ID NO: 2; и (г) последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует фрагмент, содержащий по меньшей мере 90% полной длины белка, идентичного SEQ ID NO: 2 не менее, чем на 96%. В дополнительных вариантах воплощения изобретения, вектор содержит молекулы нуклеиновой кислоты, включающие одну или более последовательностей нуклеиновых кислот, выбранных из группы, состоящей из: (а) SEQ ID NO: 1; (б) фрагмента, включающего по меньшей мере 90% всей длины SEQ ID NO: 1; (в) фрагмента, который по меньшей мере на 96% идентичен SEQ ID NO: 1; и (г) фрагмента, содержащего по меньшей мере 90% всей длины последовательности нуклеиновой кислоты, идентичной последовательности SEQ ID NO: 1 не менее, чем на 96%. В других вариантах воплощения изобретения, вектор содержит последовательность нуклеиновой кислоты, представленную в SEQ ID NO: 1.
[12] В некоторых вариантах воплощения изобретения, описанные здесь нуклеиновые кислоты функционально связаны с регуляторным элементом. В некоторых вариантах воплощения изобретения, регуляторный элемент представляет собой промотор и/или сигнальную последовательность полиаденилирования. В других вариантах воплощения изобретения, промотор представляет собой промотор цитомегаловируса человека немедленно-раннего ответа (промотор hCMV). В других вариантах воплощения изобретения, сигнальная последовательность (сигнал) полиаденилирования является сигнальной последовательностью полиаденилирования гормона роста крупного рогатого скота (bGH поли-A).
[13] Также, в данном изобретении предложны и описаны композиции, содержащие одну или более молекул нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах воплощения изобретения, композиции содержат фармацевтически приемлемый носитель.
[14] Далее, в изобретении предложены антигенные мезотелиновые белки, содержащие аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: (а) аминокислот 19-607 SEQ ID NO: 2; (б) фрагмента, включающего по меньшей мере 90% всей длины белка, содержащего аминокислоты 19-607 SEQ ID NO: 2; (в) аминокислотной последовательности, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотам 19-607 SEQ ID NO: 2; и (г) фрагмента, содержащего по меньшей мере 90% всей длины аминокислотной последовательности, идентичной аминокислотам 19-607 SEQ ID NO: 2 не менее, чем на 95%.
[15] Далее, в изобретении предложены мезотелиновые антигенные белки, содержащие аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: (a) SEQ ID NO: 2; (б) фрагмента, включающего по меньшей мере 90% всей длины SEQ ID NO: 2; (в) аминокислотной последовательности, которая идентична SEQ ID NO: 2 по меньшей мере на 96%; и (в) фрагмента, содержащего по меньшей мере 90% всей длины аминокислотной последовательности, идентичной SEQ ID NO: 2 не менее, чем на 96%. В некоторых вариантах воплощения изобретения, белок содержит аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 2.
[16] Также, в изобретении предложены вакцины, содержащие мезотелиновый антиген отличающийся тем, что данный антиген содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах воплощения изобретения, антиген кодируется последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 1.
[17] Кроме того, в данном изобретении предложены вакцины, содержащие молекулу нуклеиновой кислоты, отличающуюся содержанием последовательности нуклеиновой кислоты, идентичной последовательности SEQ ID NO: 1 не менее, чем приблизительно 96% по всей длине нуклеиновой кислоты. Также предложены вакцины, содержащие молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую мезотелиновый антиген, содержащий аминокислотную последовательность, идентичную не менее, чем на приблизительно 96% по всей длине аминокислотной последовательности, изложенной в SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах изобретения последовательность молекулы нуклеиновой кислоты может содержать вектор экспрессии. Вакцины могут дополнительно содержать фармацевтически приемлемый наполнитель. В некоторых вариантах воплощения изобретения, адъювант может быть дополнительно добавлен в вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, адъювант представляет собой ИЛ (IL)-12, ИЛ-15, ИЛ-28 или цитокин А5 (RANTES).
[18] Также в настоящем документе предложены вакцины, содержащие мезотелиновый антиген, содержащий аминокислотную последовательность, идентичную последовательности SEQ ID NO: 2 по меньшей мере приблизительно на 90% по всей длине.
[19] Далее в изобретении предложены способы лечения субъекта с мезотелин-экспрессирующими раковыми клетками, включающие в себя введение терапевтически эффективного количества вакцины, описанной в данном изобретении. В некоторых вариантах воплощения изобретения, введение включает стадию электропорации. В других вариантах изобретения введение происходит в одном или более сайтах субъекта.
[20] Также в изобретении предложены способы вакцинации субъекта против мезотелин-экспрессирующих раковых клеток, включающие введение описанного в изобретении количества вакцины, эффективного для индукции гуморального иммунного ответа. В некоторых вариантах воплощения изобретения, введение включает стадию электропорации. В других вариантах воплощения изобретения, введение происходит в одном или более сайтах субъекта.
[21] В данном изобретении также предложены молекулы нуклеиновой кислоты для применения в качестве лекарственного средства, содержащие одну или более последовательностей нуклеиновой кислоты, выбранных из группы, состоящей из: (а) последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует SEQ ID NO: 2; (б) последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует фрагмент, составляющий по меньшей мере 90% всей длины SEQ ID NO: 2; (в) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок по меньшей мере на 96% идентичный SEQ ID NO: 2; и (г) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей фрагмент, включающий по меньшей мере 90% всей длины белка, идентичного SEQ ID NO: 2 по меньшей мере на 96%. В некоторых вариантах воплощения изобретения, молекулы нуклеиновой кислоты, описанные в данном изобретении, предназначены для применения в качестве лекарственного средства при лечении рака. В некоторых вариантах воплощения изобретения, описанные здесь молекулы нуклеиновой кислоты предназначены для использования при приготовлении лекарственного средства. В некоторых вариантах воплощения изобретения, молекулы нуклеиновой кислоты, описанные в настоящем документе, предназначены для использования при приготовлении лекарственного средства для лечения рака.
[22] В данном изобретении также предложены молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие одну или более последовательностей нуклеиновой кислоты, выбранных из группы, состоящей из: (a) SEQ ID NO: 1; (б) фрагмента, включающего по меньшей мере 90% всей длины SEQ ID NO: 1; (в) фрагмента, который по меньшей мере на 96% идентичен SEQ ID NO: 1; и (г) фрагмента, содержащего по меньшей мере 90% всей длины последовательности нуклеиновой кислоты, идентичной последовательности SEQ ID NO: 1 не менее, чем на 96%. В некоторых вариантах воплощения изобретения, при использовании в качестве лекарственного средства, молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеиновой кислоты, изложенную в SEQ. ID № 1. В некоторых вариантах воплощения изобретения, молекулы нуклеиновой кислоты, описанные в настоящем документе, предназначены для применения в качестве лекарственного средства при лечении рака. В некоторых вариантах воплощения изобретения, молекулы нуклеиновой кислоты, описанные в настоящем документе, предназначены для использования при приготовлении лекарственного средства. В некоторых вариантах осуществления, изобретения, молекулы нуклеиновой кислоты, описанные в настоящем документе, предназначены для использования при приготовлении лекарственного средства для лечения рака.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ РИСУНКОВ
[23] ФИГ. 1 иллюстрирует поколение мезотелиновых мутантов.
[24] ФИГ. 2 схематическое изображение структуры белка-предшественника ГФИ-заякоренного мезотелина.
[25] ФИГ. 3 схема синтетического консенсусного мезотелина.
[26] ФИГ. 4 схематическое представление модифицированной конструкции (pGX0001).
[27] ФИГ. 5 схематическая карта плазмиды pGX1438.
[28] ФИГ. 6 результат вестерн-блота экспрессии синтетического консенсусного антигена мезотелина в клетках рабдомиосаркомы человека.
[29] ФИГ. 7A-7B иллюстрируют иммуногенность синтетического консенсусного мезотелина с использованием варианта воплощения изобретения.
[30] ФИГ. 8 иллюстрирует стратегию гейтинга проточной цитометрии с использованием варианта воплощения изобретения.
[31] ФИГ. 9A-9D иллюстрируют клеточные иммунные ответы, индуцированные pGX1430. На ФИГ. 9A показаны синтетические консенсусные мезотелин-индуцированные частоты ответов антиген-специфических CD4+ Т-клеток. На ФИГ. 9B показаны частоты синтетического консенсусного мезотелин-индуцированного ответа антиген-специфических CD8+ Т-клеток. На ФИГ. 9C показан цитокиновый профиль синтетических консенсусных мезотелин-специфических CD4+Т-клеток. На ФИГ. 9D показан цитокиновый профиль синтетических консенсусных мезотелин-специфических CD8+T-клеток.
[32] ФИГ. 10A-10D иллюстрируют цитолитический потенциал синтетических консенсусных мезотелин-специфических Т-клеток. ФИГ. 10А показывает частоту антиген-специфических CD4+CD107a+Т-клеток. ФИГ. 10B показывает частоту антиген-специфических CD8+CD107a+T-клеток. ФИГ. 10C показывает профиль цитокинов синтетических консенсусных мезотелин-специфических CD4+CD107a+T-клеток. ФИГ. 10D показывает профиль цитокинов синтетических консенсусных мезотелин-специфических CD8+CD107a+T-клеток.
[33] ФИГ. 11А-11С иллюстрируют мезотелин-специфические ИФНу СОЕ/106 МКПК отдельных низших приматов с использованием варианта воплощения изобретения. ФИГ. 11А показывает только мезотелин, ФИГ. 11B показывает мезотелин с низкой дозой ИЛ-12 (0,04 мг) и ФИГ. 11C показывает мезотелин с высокой дозой ИЛ-12 (0,2 мг).
[34] ФИГ. 12A-12C показывают усредненные мезотелин-специфические ИФНy СОЕ/106 МКПК с использованием варианта воплощения изобретения. ФИГ. 12А показывает только мезотелин, ФИГ. 12В показывает мезотелин с низкой дозой ИЛ-12 (0,04 мг) и ФИГ. 12С показывает мезотелин с высокой дозой ИЛ-12 (0,2 мг).
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ
[35] Настоящее изобретение относится к вакцинам, содержащим антиген мезотелина. Мезотелин экспрессируется во многих опухолях. Соответственно, вакцины обеспечивают лечение рака или опухоли, экспрессирующей мезотелин. Вакцина, описанная в изобретении, может быть представлена в любой комбинации частных раковых антигенов для частной профилактики или лечения рака у субъекта, нуждающегося в лечении.
[36] Одним из способов создания нуклеиновой кислоты и ее кодирующей аминокислотной последовательности рекомбинантного ракового антигена является введение мутаций, изменяющих определенные аминокислоты в общей аминокислотной последовательности нативного ракового антигена. Хотя введение мутаций и не изменяет раковый антиген до такой степени, чтоб его нельзя было универсально применять к субъектам-млекопитающим, и, предпочтительно, субъектам-людям или собакам, но оно приводит к таким изменениям, при которых полученная аминокислотная последовательность нарушает толерантность организма или же считается чужеродным антигеном, и это необходимо для генерации иммунного ответа. Другим способом может быть создание консенсусного рекомбинантного ракового антигена, имеющего идентичность аминокислотной последовательности с соответствующим нативным антигеном рака по меньшей мере от 85% до 99%; с предпочтительной идентичностью последовательности по меньшей мере от 90% и до 98%; и еще более предпочтительной идентичностью последовательности по меньшей мере от 93% и до 98%; или даже наиболее предпочтительной идентичностью последовательности по меньшей мере от 95% и до 98%. В некоторых случаях, рекомбинантный раковый антиген идентичен относительно нативной аминокислотной последовательности антигена рака на 95, 96, 97, 98% или 99%. Нативный антиген рака является антигеном, обычно ассоциированным с конкретным типом рака или раковой опухоли. В зависимости от ракового антигена, консенсусная последовательность ракового антигена может встречаться у разных видов млекопитающих или внутри подтипов вида, или среди вирусных штаммов или серотипов. Некоторые раковые антигены не сильно отличаются от аминокислотной последовательности дикого типа ракового антигена. Некоторые раковые антигены имеют последовательности нуклеиновых кислот/аминокислот, которые настолько различаются между видами, что для них невозможно получить общую консенсусную последовательность. В этих случаях разрабатывают рекомбинантный раковый антиген, нарушающий толерантность и генерирующий иммунный ответ, и имеющий идентичность аминокислотной последовательности с соответствующим нативным антигеном рака по меньшей мере от 85% до 99%; с предпочтительной идентичностью последовательности по меньшей мере от 90% и до 98%; с более предпочтительной идентичностью последовательности по меньшей мере от 93% и до 98%; или даже с наиболее предпочтительной идентичностью последовательность по меньшей мере от 95% и до 98%. В некоторых случаях, рекомбинантный раковый антиген идентичен по аминокислотной последовательности соответствующему нативному антигену рака на 95, 96, 97, 98% или 99%. Вышеупомянутые подходы могут быть объединены таким образом, чтобы конечный рекомбинантный раковый антиген имел процентное сходство с аминокислотной последовательностью нативного ракового антигена так, как это обсуждалось выше.
[37] Мезотелиновый антиген может быть консенсусным мезотелиновым антигеном, частично полученным из разных видов или разных изоформ последовательностей мезотелина в пределах вида, и, таким образом, консенсусный антиген мезотелина не является нативным. Модификации могут включать мутации в связывающем домене MUC16 и/или ГФИ-связанном сигнальном участке, а так же добавление предшествующих лидерных последовательностей Козак и IgE к N-концу мезотелинового антигена.
[38] Синтетический мезотелин может индуцировать антиген-специфические Т-клеточные иммунные ответы и/или ответы с образованием высокого титра антител, тем самым вызывая или активируя иммунный ответ, направленный или реагирующий на рак или опухоль, экспрессирующую антиген. В некоторых вариантах воплощения изобретения, индуцированный или активированный иммунный ответ может быть клеточным, гуморальным или же, как клеточным, так и гуморальным иммунным ответом. В некоторых вариантах воплощения изобретения, индуцированный или активированный клеточный иммунный ответ может включать индукцию или секрецию интерферона-гамма (ИФНy) и/или фактора некроза опухоли альфа (ФНО-a). В других вариантах воплощения изобретения, индуцированный или активированный иммунный ответ может уменьшать или ингибировать один или более факторов иммуносупрессии, которые способствуют росту опухоли или рака, экспрессирующего антиген, например, факторы, подавляющие презентацию главного комплекса гистосовместимости (МНС), повышающие регуляцию антигенспецифических регуляторных Т-клеток (Tregs), PD-L1, FasL, цитокинов, таких как ИЛ-10 и трансформирующий ростовой фактор (TFG-β), опухолевых ассоциированных макрофагов, ассоциированных с опухолью фибробластов, растворимых факторов, продуцируемых иммуносупрессорными клетками, антигенов 4 цитотоксических Т-лимфоцитов (CTLA-4), PD -1, МЛСК, моноцитарных хемоатрактических белков (MCP-1) и молекул контрольных точек иммунного ответа, но, не ограничиваясь ими.
[39] Вакцина может быть дополнительно комбинирована с антителами к ингибиторам контрольных точек иммунного ответа, таким как PD-1 и PDL-1, для усиления стимуляции как клеточного, так и гуморального иммунного ответа. Использование антител против PD-1 или против PDL-1 не позволяет PD-1 или PDL-1 подавлять иммунные ответы Т-клеток и/или В-клеток. В целом, проектирование антигенов рака, распознаваемых иммунной системой, помогает преодолеть другие формы подавления иммунитета опухолевыми клетками, поэтому такие вакцины можно использовать в сочетании с терапией подавления или ингибирования (например, анти-PD-1 и анти-PDL-1 терапия антителами) для дальнейшего усиления Т-клеточного и/или В-клеточного иммунных ответов.
Определения
[40] Все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют то же значение, которое обычно известно специалистам в данной области техники, если не указано иное. В случае конфликта, настоящим документом с определениями включительно будут контролироваться предпочтительные способы и материалы, описанные ниже, хотя способы и материалы, подобные или эквивалентные тем, которые описаны в данном документе, так же могут использоваться на практике или при тестировании настоящего изобретения. Все публикации, заявки на патенты, патенты и другие ссылки, упомянутые здесь, включены в качестве ссылки во всей их полноте. Материалы, способы и примеры, раскрытые в данном документе, являются только иллюстративными, а не ограничивающими. Используемая здесь терминология предназначена только для описания конкретных вариантов осуществления, а не для ограничения.
[41] Термины «содержит(ат)», «включает(ют)», «имеет(ют)», «имеющий», «могут», «состоит(ят)» и их варианты, используемые в настоящем документе, являются неограничивающими переходными фразами, терминами или словами, которые не исключают возможных дополнительных действий или структур. Союз «и» и артикли «а» и «the» (в оригинальном английском варианте) в единственном числе включают множественные отсылки, кроме случаев когда контекст явно указывает иное. В настоящем раскрытии изобретения также рассматриваются другие варианты воплощения изобретения, «содержащие», «состоящие из» и «состоящие, по существу из» представленных в данном документе вариантов воплощения или элементов, независимо от того, изложены они явно или нет.
[42] Для перечисления числовых диапазонов в настоящем документе предусматривается, что каждое промежуточное значение имеет ту же степень точности, что минимум и максимум приведенного диапазона. Например, очевидно, что в диапазоне 6-9 числа 6 и 9 дополняют числа 7 и 8, а в диапазоне 6.0-7.0 очевидно предусмотрен ряд чисел 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9 и 7.0.
[43] Термин «адъювант», в контексте данного документа, означает любую молекулу, добавленную к вакцинам, описанным в настоящем документе, для усиления иммуногенности антигенов мезотелина и/или молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих антигены, как описано в данном документе.
[44] Термин «антитело», в контексте данного документа, означает антитело, принадлежащее к классам IgG, IgM, IgA, IgD или IgE или его фрагменты, или производные, включая Fab, F(ab’)2, Fd и одноцепочечные антитела, диатела, биспецифичные антитела, бифункциональные антитела и их производные. Антитело может быть антителом, выделенным из образца сыворотки млекопитающего, поликлональным антителом, аффинно-очищенным антителом или любой их смесью, которая проявляет достаточную специфичность связывания с желаемым эпитопом или полученной из него последовательностью.
[45] Термин «мезотелиновый антиген» относится к: белкам, имеющим мутированные аминокислотные последовательности мезотелина, включая аминокислоты 19-607 SEQ ID NO: 2; SEQ ID NO: 2; соответствующим фрагментам длиной, указанной в данном документе, вариантам, а именно, белкам с последовательностями, идентичными SEQ ID NO: 2, указанном в данном документе, фрагментам вариантов длиной, указанной в данном документе, SEQ ID NO: 2; их фрагменты с длинами, изложенными здесь, вариантам, то есть белкам с последовательностями, идентичными указанному в данном документе SEQ ID NO: 2, фрагментам вариантов длиной, указанной в данном документе, и их комбинации. Антигены могут включать сигнальные пептиды, такие как пептиды других белков, но это необязательно.
[46] Термины «кодирующая последовательность» или «кодирующая нуклеиновая кислота», в контексте данного документа, изобретения означают нуклеиновые кислоты (молекулы РНК или ДНК), которые содержат нуклеотидную последовательность, кодирующую белок. Кодирующая последовательность может дополнительно включать сигнальные последовательности инициации и терминации, функционально связанные с регуляторными элементами, включая сигнальные последовательности промотора и полиаденилирования, способные управлять экспрессией в клетках субъекта или млекопитающего, к которому применяют нуклеиновую кислоту.
[47] Термины «комплементарный» или «комплементарность», используемые в данном документе, означают, что нуклеиновая кислота может образовывать пары с другими нуклеиновыми кислотами, нуклеотидными аналогами или молекулами по правилу Уотсона-Крика (например, A-T/U и C-G) или Хугстина.
[48] Термины «консенсус» или «консенсусная последовательность», в контексте данного документа, означают полипептидную последовательность, основанную на анализе выравнивания множества последовательностей для одного и того же гена разных организмов. Могут быть получены последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие консенсусную полипептидную последовательность. Вакцины, содержащие белки, которые содержат консенсусные последовательности и/или молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие такие белки, могут быть использованы для индукции обширного иммунитета по отношению к антигену.
[49] Термин «постоянный ток», используемый в данном документе, описывает ток, который воспринимается или которому подвергается ткань или клетки, определяющие указанную ткань, в течение воздействия электрического импульса, доставляемого в ту же ткань. Электрический импульс подается от устройств электропорации (электропораторов, ЭП), описанных в данном документе. Плотность тока остается постоянной в указанной ткани в течение всего времени воздействия электрического импульса, поскольку устройство для электропорации, предложенное в настоящем документе, имеет элемент обратной связи, предпочтительно обладающий мгновенной обратной связью. Элемент обратной связи позволяет измерять сопротивление ткани (или клеток) на протяжении всего времени воздействия импульса и заставлять устройство электропорации измененять выходную электрическую мощность (например, увеличивать напряжение) таким образом, чтобы плотность тока в одной и той же ткани оставалась постоянной в течение всего времени воздействия электрического импульса (порядка микросекунд) и от импульса к импульсу. В некоторых вариантах воплощения изобретения, элемент обратной связи содержит контроллер.
[50] Термины «обратная связь по току» или «обратная связь», используемые в данном документе, могут использоваться взаимозаменяемо и могут означать активную реакцию предложенных устройств электропорации, которая включает в себя измерение тока в ткани между электродами и соответствующее изменение мощности, передаваемой устройством ЭП для поддержания плотности тока на постоянном уровне. Этот постоянный уровень задается пользователем до начала импульсного режима или процесса электротерапиии. Обратная связь может быть обеспечена компонентом электропоратора, например, контроллером, поскольку его электрическая цепь способна непрерывно контролировать ток в ткани между электродами, сравнивать этот контролируемый ток (или ток в ткани) с заданным током и непрерывно производить регулировку выходной мощности для поддержания контролируемого тока на заданных уровнях. Цикл обратной связи может быть мгновенным, поскольку он является аналоговой замкнутой обратной связью.
[51] Термин «децентрализованный ток», используемый в данном документе, может означать паттерн электрических токов, подаваемых из различных массивов игольчатых электродов электропораторов, описанных в данном документе, при этом паттерны минимизируют или предпочтительно устраняют возникновение теплового напряжения, связанного с электропорацией, в любой области электропорируемой ткани.
[52] Термины «электропорация», «электропермеабилизация» или «электрокинетическое усиление» («ЭП»), используемые в данном документе взаимозаменяемо, означают использование трансмембранного импульса электрического поля для индукции микроскопических отверстий (пор) в биомембране; их присутствие позволяет таким биомолекулам, как плазмиды, олигонуклеотиды, миРНК, лекарства, ионы и вода, проходить с одной стороны клеточной мембраны на другую.
[53] Термин «фрагмент», используемый в данном документе в отношении последовательностей нуклеиновой кислоты, означает последовательность нуклеиновой кислоты или ее часть, кодирующую полипептид, способный вызывать иммунный ответ у млекопитающего, перекрестно реагирующего с антигеном, описанным в данном документе. Под фрагментами могут понимать фрагменты ДНК, выбранные по меньшей мере из одной из различных нуклеотидных последовательностей, кодирующих фрагменты белка, изложенных ниже. Фрагменты могут содержать по меньшей мере 10% по меньшей мере 20% по меньшей мере 30% по меньшей мере 40% по меньшей мере 50% по меньшей мере 60% по меньшей мере 70% по меньшей мере 80% по меньшей мере 90%, или по меньшей мере, 95% от всей длины одной или более последовательностей нуклеиновых кислот, описанных в настоящем документе, за исключением любого добавленного гетерологичного сигнального пептида. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фрагменты могут составлять по меньшей мере 90% по меньшей мере 91% по меньшей мере 92% по меньшей мере 93% по меньшей мере 94% по меньшей мере 95% по меньшей мере 96% по меньшей мере 97% по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% от всей длины одной или более последовательностей нуклеиновых кислот, указанных ниже, за исключением любого добавленного гетерологичного сигнального пептида.
[54] В некоторых вариантах воплощения изобретения, фрагменты могут составлять по меньшей мере 10% по меньшей мере 20% по меньшей мере 30% по меньшей мере 40% по меньшей мере 50% по меньшей мере 60% по меньшей мере 70% по меньшей мере 80% по меньшей мере на 90% или по меньшей мере 95% идентичности к одной или более последовательностям нуклеиновых кислот, описанным в настоящем документе, за исключением любого гетерологичного сигнального пептида. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фрагменты могут быть по меньшей мере на 96% по меньшей мере на 97% по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны одной или более последовательностям нуклеиновой кислоты, приведенным ниже, за исключением любого добавленного гетерологичного сигнального пептида.
[55] В дополнительных вариантах воплощения изобретения, фрагменты могут дополнительно содержать последовательность, кодирующую гетерологичный сигнальный пептид, который не учитывается при расчете процента идентичности. Фрагменты также могут содержать кодирующие последовательности для сигнального пептида, такого как сигнальный пептид иммуноглобулина, например сигнальный пептид IgE или IgG. Кодирующая последовательность, кодирующая N-концевой метионин и/или сигнальный пептид, может быть связана с фрагментом кодирующей последовательности.
[56] В некоторых вариантах воплощения изобретения, фрагменты могут содержать по меньшей мере 1500 нуклеотидов или более , 1510 нуклеотидов или более, 1520 нуклеотидов или более, 1530 нуклеотидов или более, 1540 нуклеотидов или более, 1550 нуклеотидов или более, 1560 нуклеотидов или более, 1570 нуклеотидов или более, 1580 нуклеотидов или более, 1590 нуклеотидов или более, 1600 нуклеотидов или более, 1610 нуклеотидов или более, 1620 нуклеотидов или более, или 1630 нуклеотидов или более, 1640 нуклеотидов или более, 1650 нуклеотидов или более, 1660 нуклеотидов или более, 1670 нуклеотидов или более, 1680 нуклеотидов или более, 1690 нуклеотидов или более, 1700 нуклеотидов или более, 1710 нуклеотидов или более, 1720 нуклеотидов или более, 1730 нуклеотидов или более, 1740 нуклеотидов или более, 1750 нуклеотидов или более, 1760 нуклеотидов или более, 1770 нуклеотидов или более, 1780 нуклеотидов или более, 1790 нуклеотидов или более, 1800 нуклеотидов или более, 1810 нуклеотидов или более или 1820 нуклеотидов или более в по меньшей мере одной из последовательностей нуклеиновых кислот, указанных ниже.
[57] Термины «фрагмент» или «иммуногенный фрагмент» в отношении полипептидных последовательностей означают полипептид, способный вызывать иммунный ответ у млекопитающего, перекрестно реагирующий с антигеном, описанным в данном документе. Фрагменты могут быть полипептидными фрагментами, выбранными по меньшей мере из одной из различных аминокислотных последовательностей, описанных в настоящем документе. Фрагменты консенсусных белков могут составлять по меньшей мере 10% по меньшей мере 20% по меньшей мере 30% по меньшей мере 40% по меньшей мере 50% по меньшей мере 60% по меньшей мере 70% по меньшей мере 80% по меньшей мере 90% или по меньшей мере 95% от всей длины консенсусного белка, за исключением любого добавленного гетерологичного сигнального пептида. В некоторых вариантах раскрытия изобретения, фрагмент может содержать по меньшей мере 90% по меньшей мере 91% по меньшей мере 92% по меньшей мере 93% по меньшей мере 94% по меньшей мере 95% по меньшей мере 96% по меньшей мере 97%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% от длины одной или более аминокислотных последовательностей, указанных ниже, за исключением любого добавленного гетерологичного сигнального пептида.
[58] В некоторых вариантах воплощения изобретения, фрагменты могут составлять по меньшей мере 10% по меньшей мере 20% по меньшей мере 30% по меньшей мере 40% по меньшей мере 50% по меньшей мере 60% по меньшей мере 70% по меньшей мере 80% по меньшей мере на 90% или по меньшей мере 95% идентичности к одной или более аминокислотным последовательностям, описанным в настоящем документе, за исключением любого гетерологичного сигнального пептида. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фрагменты могут быть по меньшей мере на 96% по меньшей мере на 97% по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентичны одной или более аминокислотным последовательностям, указанным ниже, за исключением любого добавленного гетерологичного сигнального пептида
[59] В дополнительных вариантах воплощения изобретения, фрагменты могут содержать последовательность, кодирующую гетерологичный сигнальный пептид, который не учитывается при расчете процента идентичности, но это необязательно. Фрагменты могут дополнительно содержать такой пептид, как сигнальный пептид иммуноглобулина, например сигнальный пептид IgE или IgG.
[60] В некоторых вариантах воплощения изобретения, фрагменты консенсусных белков могут содержать по меньшей мере 546 нуклеиновых кислот или более, 547 нуклеиновых кислот или более, 548 нуклеиновых кислот или более, 549 нуклеиновых кислот или более, 550 нуклеиновых кислот или более, 551 нуклеиновых кислот или более, 552 нуклеиновых кислот или более, 553 нуклеиновых кислот или более, 554 нуклеиновых кислот или более, 555 нуклеиновых кислот или более, 556 нуклеиновых кислот или более, 557 нуклеиновых кислот или более, 558 нуклеиновых кислот или более, 559 нуклеиновых кислот или более, 560 нуклеиновых кислот или более, 561 нуклеиновых кислот или более, 562 нуклеиновых кислот или более, 563 нуклеиновых кислот или более, 564 нуклеиновых кислот или более, 565 нуклеиновых кислот или более, 566 нуклеиновых кислот или более, 567 нуклеиновых кислот или более, 568 нуклеиновых кислот или более, 569 нуклеиновых кислот или более, 570 нуклеиновых кислот или более, 571 нуклеиновых кислот или более, 572 нуклеиновых кислот или более, 573 нуклеиновых кислот или более, 574 нуклеиновых кислот или более, 575 нуклеиновых кислот или более, 576 нуклеиновых кислот или более, 577 нуклеиновых кислот или более, 578 нуклеиновых кислот или более, 579 нуклеиновых кислот или более, 580 нуклеиновых кислот или более, 581 нуклеиновых кислот или более, 582 нуклеиновых кислот или более, 583 нуклеиновых кислот или более, 584 нуклеиновых кислот или более, 585 нуклеиновых кислот или более, 586 нуклеиновых кислот или более, 587 нуклеиновых кислот или более, 588 нуклеиновых кислот или более, 589 нуклеиновых кислот или более, 590 нуклеиновых кислот или более, 591 нуклеиновых кислот или более, 592 нуклеиновых кислот или более, 593 нуклеиновых кислот или более, 594 нуклеиновых кислот или более, 595 нуклеиновых кислот или более, 596 нуклеиновых кислот или более, 597 нуклеиновых кислот или более, 598 нуклеиновых кислот или более, 599 нуклеиновых кислот или более, 600 нуклеиновых кислот или более, 601 нуклеиновых кислот или более, 602 нуклеиновых кислот или более, 603 нуклеиновых кислот или более, 604 нуклеиновых кислот или более, 605 нуклеиновых кислот или более, 606 нуклеиновых кислот или более, 607 нуклеиновых кислот, описанной в данном документе последовательности белка.
[61] Используемый в данном документе термин «генетическая конструкция» относится к молекулам ДНК или РНК, которые содержат нуклеотидную последовательность, кодирующую белок. Кодирующая последовательность включает сигналы инициации и терминации, функционально связанные с регуляторными элементами, включая сигнал промотора и полиаденилирования, способный управлять экспрессией в клетках субъекта, к которому применяют молекулу нуклеиновой кислоты. Используемый в данном документе термин «экспрессируемая форма» относится к генной конструкции, которая содержит необходимые регуляторные элементы, функционально связанные с кодирующей белок последовательностью таким образом, что кодирующая последовательность будет экспрессироваться при присутствии в клетке субъекта.
[62] Используемый в данном документе термин «гомология» относится к степени комплементарности. Может быть частичная гомология или полная гомология (то есть идентичность). Частично комплементарная последовательность, которая, как минимум, частично ингибирует гибридизацию полностью комплементарной последовательности с нуклеиновой кислотой-мишенью, называется функциональным термином «гомологичная, по существу». При использовании термина «по существу, гомологичный» в отношении двухцепочечной последовательности нуклеиновой кислоты, такой как кДНК или геномный клон, так, как он используется в настоящем документе, термин относится к зонду, который может гибридизоваться с цепью двухцепочечной последовательности нуклеиновой кислоты в условия низкой жесткости. При использовании термина «по существу, гомологичный» в отношении последовательности одноцепочечной нуклеиновой кислоты так, как он используется в настоящем документе, термин относится к зонду, который может гибридизоваться (то есть быть комплементом) с одноцепочечной матричной последовательностью нуклеиновой кислоты в условиях низкой жесткости.
[63] Используемые в данном документе термины «идентичный» или «идентичность» относительно двух или более последовательностей нуклеиновых кислот или полипептидов означают, что последовательности имеют определенный процент остатков, одинаковых в указанной области. Процент может быть рассчитан путем оптимального выравнивания двух последовательностей, сравнения двух последовательностей в указанной области, определения количества позиций, в которых одинаковый остаток встречается в обеих последовательностях для получения количества совпадающих позиций, деления количества совпавших позиций на общее количество позиций в указанной области и умножение результата на 100 для получения процента идентичности последовательности. В тех случаях, когда две последовательности имеют разную длину или выравнивание приводит к одному или более ступенчатым разрывам и указанная область сравнения включает только одну последовательность, при вычислении, остатки одной последовательности включаются в знаменатель, но не в числитель. При сравнении ДНК и РНК тимин (T) и урацил (U) можно считать эквивалентными. Идентификация может быть выполнена вручную или с помощью компьютерного алгоритма для последовательности, такого как BLAST или BLAST 2.0.
[64] Термин «импеданс», используемый в данном документе, может использоваться при рассмотрении в деталях механизма обратной связи и может быть преобразован в текущее значение в соответствии с законом Ома для сравнения с заданным параметром тока.
[65] Термин «иммунный ответ», в контексте данного документа, означает активацию иммунной системы хозяина, например, млекопитающего, в ответ на введение антигена. Иммунный ответ может быть в форме клеточного или гуморального ответа, или в обеих формах.
[66] Термины «нуклеиновая кислота» или «олигонуклеотид» или «полинуклеотид», в контексте данного документа, означают по меньшей мере два нуклеотида ковалентно связанных друг с другом. Изображение одной цепи также определяет последовательность комплементарной цепи. Таким образом, нуклеиновая кислота также включает комплементарную цепь изображенной одиночной цепи. Многие варианты нуклеиновой кислоты могут быть использованы для той же цели, что и приведенная нуклеиновая кислота. Таким образом, нуклеиновая кислота также включает идентичные, по существу, нуклеиновые кислоты и их дополнения. Одиночная цепь также включает зонд, который может гибридизоваться с последовательностью-мишенью при жестких условиях гибридизации. Таким образом, нуклеиновая кислота также включает зонд, который гибридизуется в жестких условиях гибридизации.
[67] Нуклеиновые кислоты могут быть одноцепочечными или двухцепочечными, или могут содержать части как двухцепочечной, так и одноцепочечной последовательности. Нуклеиновая кислота может быть ДНК, как геномной, так и кДНК, РНК или гибридной, где нуклеиновая кислота может содержать комбинации дезоксирибо- и рибонуклеотидов и комбинации оснований, включая урацил, аденин, тимин, цитозин, гуанин, инозин, ксантин, гипоксантин, изоцитозин и изогуанин. Нуклеиновые кислоты могут быть получены методами химического синтеза или рекомбинантными методами.
[68] Термин «Функционально связанный», в контексте данного документа, означает, что экспрессия гена находится под контролем промотора, с которым он пространственно связан. Промотор может быть расположен на 5 '-(слева) или 3'- (справа) конце подконтрольного гена. Расстояние между промотором и геном может быть приблизительно таким же, как расстояние между этим промотором и геном, который он контролирует и откуда происходит. Как уже известно в данной области техники, изменение этого расстояния может быть осуществлено без потери функции промотора.
[69] Термины «пептид», «белок» или «полипептид», в контексте данного документа, могут означать связанную последовательность аминокислот и могут быть природными, синтетическими или модифицированными, или комбинированными из природных и синтетических.
[70] Термин «промотор», в контексте данного документа, означает синтетическую или полученную в природе молекулу, которая способна придавать, активировать или усиливать экспрессию нуклеиновой кислоты в клетке. Промотор может содержать одну или более специфических регуляторных транскрипционных последовательностей для дополнительного усиления экспрессии и/или изменения пространственной экспрессии и /или временной экспрессии нуклеиновой кислоты в клетке. Промотор также может содержать дистальные энхансерные или репрессорные элементы, которые могут находиться на расстоянии до нескольких тысяч пар оснований от стартового сайта транскрипции. Промотор может быть получен из источников, включая вирусные, бактериальные, грибковые, растительные, насекомые и животные. Промотор может регулировать экспрессию генного компонента конститутивно или дифференциально по отношению к клетке, ткани или органу, в котором происходит экспрессия, или относительно стадии развития, на которой происходит экспрессия, или в ответ на внешние раздражители, такие как физиологические стрессы, патогены, ионы металлов или возбуждающие агенты. Типичные примеры промоторов включают промотор бактериофага Т7, промотор бактериофага Т3, промотор SP6, оператор-промотор lac, промотор tac, поздний промотор SV40, ранний промотор SV40, промотор RSV-LTR, промотор CMV IE, ранний промотор SV40 или поздний промотор SV40, промотор CMV IE и промотор цитомегаловируса человека немедленно-раннего ответа (hCMV). В некоторых вариантах воплощения изобретения, промотор представляет собой промотор hCMV.
[71] Термины «сигнальный пептид» и «лидерная последовательность» используются в данном документе взаимозаменяемо и относятся к аминокислотной последовательности, которая может быть связана с аминогруппой на конце белка, изложенного в данном документе. Сигнальные пептиды/лидерные последовательности обычно направляют локализацию белка. Используемые здесь сигнальные пептиды/лидерные последовательности оптимально облегчают секрецию белка из клетки, в которой он продуцируется. При секреции из клетки, сигнальные пептиды/лидерные последовательности часто отщепляются от остатка белка, обычно называемого зрелым белком. Сигнальные пептиды/лидерные последовательности связаны на амино-конце (то есть на N-конце) белка.
[72] Термин «жесткие условия гибридизации», в контексте данного документа, означает условия, при которых первая последовательность нуклеиновой кислоты (например, зонд) будет гибридизоваться со второй последовательностью нуклеиновой кислоты (например, мишенью) в сложной смеси нуклеиновых кислот. Жесткие условия зависят от последовательности и будут разными в разных обстоятельствах. Жесткие условия могут быть выбраны приблизительно на 5-10°C ниже, чем температура плавления (Tm) для конкретной последовательности при определенном pH ионной силы. Tm может быть температурой (при определенной ионной силе, pH и концентрации нуклеинов), при которой 50% зондов, комплементарных мишени, гибридизуются с последовательностью-мишенью в равновесии (так как последовательности мишени присутствуют в избытке, при Tm, 50% зондов равновесно связаны). При жестких условиях концентрация соли может составлять менее, чем приблизительно 1,0 М иона натрия, например, концентрация приблизительно 0,01-1,0 М иона натрия (или других солей) при рН 7,0-8,3, и температура, по меньшей мере, приблизительно 30°С для коротких зондов (например, приблизительно 10-50 нуклеотидов) и по меньшей мере приблизительно 60°С для длинных зондов (например, больше, чем приблизительно 50 нуклеотидов). Жесткие условия также могут быть достигнуты благодаря добавлению дестабилизирующих агентов, таких как формамид. При селективной или специфической гибридизации, положительный сигнал может по меньшей мере в 2-10 раз превышать фоновую гибридизацию. Примерные жесткие условия гибридизации включают следующие: 50% формамид, 5x стандартный солевой раствор и 1% СДС, инкубирование при 42°C или 5x стандартный солевой раствор, 1% СДС, инкубирование при 65°C, с отмывкой в 0,2x стандартном солевом растворе и 0,1% СДС при 65°С.
[73] Термин «субъект» в данном описании может означать млекопитающее, которому необходима или требуется иммунизация, описанными здесь вакцинами. Млекопитающее может быть человеком, низшим приматом, таким как шимпанзе, собакой, кошкой, лошадью, коровой, мышью или крысой.
[74] Термин «существенно комплементарный», используемый в данном документе, означает, что первая последовательность составляет по меньшей мере 60, 65, 70, 75, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86. , 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98% или 99% идентичности комплементу второй последовательности покрывая участок из 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 180, 270, 360, 450, 540 или более нуклеотидов или аминокислот, или что две последовательности гибридизуются в жестких условиях гибридизации.
[75] Термин «сущетсвенно идентичный», используемый в данном документе, означает, что первая и вторая последовательности составляют по меньшей мере 60, 65, 70, 75, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98% или 99% идентичности покрывая участок из 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 180, 270, 360, 450, 540 или более нуклеотидов, или аминокислот, или по отношению к нуклеиновым кислотам, если первая последовательность является, по существу, комплементарной комплементу второй последовательности.
[76] Термины «лечить», «лечение», «лечащий», используемые в данном документе, могут означать защиту животного от заболевания посредством средств предотвращения, подавления, угнетения или полного устранения заболевания. Профилактика заболевания включает введение вакцины, описанной в настоящем изобретении, животному до начала заболевания. Подавление заболевания включает введение вакцины, описанной в настоящем изобретении, животному после индукции заболевания, но до его клинического проявления. Подавление заболевания включает введение вакцины, описанной в настоящем изобретении, животному после клинического проявления заболевания.
[77] Термин «вариант», используемый в данном документе в отношении нуклеиновой кислоты, означает (i) часть или фрагмент указанной нуклеотидной последовательности; (ii) комплемент эталонной нуклеотидной последовательности или ее части; (iii) нуклеиновую кислоту, которая существенно идентична указанной нуклеиновой кислоте или ее комплементу; или (iv) нуклеиновую кислоту, которая гибридизуется в жестких условиях с указанной нуклеиновой кислотой, ее комплементом или последовательностью, существенно ей идентичной.
[78] Термин «вариант», используемый в данном документе в отношении пептида или полипептида, означает пептид или полипептид, который отличается по аминокислотной последовательности вставкой, делецией или консервативной заменой аминокислот, но сохраняет по меньшей мере одну биологическую активность. Вариант также может означать белок с аминокислотной последовательностью, которая существенно идентична эталонному белку с аминокислотной последовательностью, которая сохраняет по меньшей мере одну биологическую активность. Консервативное замещение аминокислоты, то есть замена аминокислоты другой аминокислотой со схожими свойствами (например, гидрофильностью, степенью и распределением заряженных областей), как известно, в данной области техники обычно включает незначительные изменения. Эти незначительные изменения могут быть идентифицированы, частично, с учетом гидропатического индекса аминокислот, что является известным в данной области техники. Kyte et al., J. Mol. Biol. 157: 105-132 (1982). Гидропатический индекс аминокислоты основан на учете ее гидрофобности и заряда. В данной области техники известно, что аминокислоты с подобными гидропатическими индексами могут быть замещены друг другом с одновременным сохранением функции белка. В одном аспекте, аминокислоты, имеющие гидропатические индексы ± 2, являются замещенными. Гидрофильность аминокислот также может быть использована для выявления замещений с сохранением биологической функции. Рассмотрение гидрофильности аминокислот в отношении пептида позволяет рассчитать наибольшую локальную среднюю гидрофильность этого пептида, что является полезным оценочным критерием, который, как упоминалось, хорошо коррелирует с антигенностью и иммуногенностью. Патент США № 4554101 полностью включен в данный документ в качестве ссылки. Замена аминокислот, имеющих сходные значения гидрофильности, может привести к сохранению пептидами биологической активности, например иммуногенности, подразумеваемой данной областью техники. Для замены можно использовать аминокислоты, имеющие значения гидрофильности в пределах ± 2 друг для друга. На индекс гидрофобности и значение гидрофильности аминокислот влияет определенная боковая цепь этой аминокислоты. В соответствии с этим наблюдением считается, что аминокислотные замены, совместимые с биологической функцией, зависят от относительного сходства аминокислот и, в частности, от боковых цепей этих аминокислот, что проявляется в гидрофобности, гидрофильности, заряде, размере и других свойствах.
[79] Вариант может быть последовательностью нуклеиновой кислоты, которая практически идентична по всей длине полной последовательности гена или ее фрагмента. Последовательность нуклеиновой кислоты может составлять 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94 95, 96, 97, 98, 99% или 100% идентичность по всей длине генной последовательности или ее фрагмента. Вариант может быть аминокислотной последовательностью, которая существенно идентична по всей длине аминокислотной последовательности или ее фрагмента. Аминокислотная последовательность может составлять 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94 95, 96, 97, 98, 99% или 100% идентичности по всей длине аминокислотной последовательности или ее фрагмента.
[80] Термин «вектор», в контексте дпнного документа, означает последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую источник репликации. Вектор может быть вирусным вектором, бактериофагом, бактериальной искусственной хромосомой или дрожжевой искусственной хромосомой. Вектор может быть вектором ДНК или РНК. Вектор может быть самореплицирующимся внехромосомным вектором и, оптимально, представляет собой плазмиду ДНК. Вектор может содержать или включать одну или более гетерологичных последовательностей нуклеиновых кислот.
Вакцина
[81] В настоящем документе предложены вакцины, содержащие мезотелиновый антиген или молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую мезотелиновый антиген, согласно настоящему описанию. В некоторых вариантах воплощения изобретения, вакцины содержат одну или более молекул нуклеиновой кислоты, кодирующих мезотелиновый антиген, согласно настоящему описанию. В некоторых вариантах воплощения изобретения, вакцины содержат одну или более молекул нуклеиновой кислоты, содержащих последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислоты 19-607 SEQ ID NO: 2; последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую фрагмент, содержащий по меньшей мере 90% всей длины белка, содержащего аминокислоты 19-607 SEQ ID NO: 2; последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок, который по меньшей мере на 96% идентичен аминокислотам 19-607 SEQ ID NO: 2; и/или последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует фрагмент, включающий по меньшей мере 90% всей длины белка, идентичного по меньшей мере на 96% аминокислотам 19-607 SEQ ID NO: 2.
[82] В некоторых вариантах воплощения изобретения, вакцины содержат одну или более молекул нуклеиновой кислоты, содержащих последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую SEQ ID NO: 2; последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую фрагмент, составляющий по меньшей мере 90% длины SEQ ID NO: 2; последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок, идентичный SEQ ID NO: 2 по меньшей мере на 96%; и или последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую фрагмент, включающий по меньшей мере 90% всей длины белка, идентичный SEQ ID NO: 2 по меньшей мере на 96%.
[83] В некоторых вариантах воплощения изобретения, вакцины содержат одну или более молекул нуклеиновой кислоты, включающих нуклеотиды 55-1821 SEQ ID NO: 1; фрагмент, содержащий по меньшей мере 90% всей длины молекулы нуклеиновой кислоты, включающий нуклеотиды 55-1821 SEQ ID NO: 1; фрагмент, идентичный нуклеотидам 55-1821 SEQ ID NO: 1 по меньшей мере на 96%; и/или фрагмент, включающий по меньшей мере 90% всей длины последовательности нуклеиновой кислоты, идентичной нуклеотидам 55-1821 SEQ ID NO: 1 по меньшей мере на 96%.
[84] В некоторых вариантах воплощения изобретения, вакцины содержат одну или более молекул нуклеиновой кислоты, включающих SEQ ID NO: 1; фрагмент, составляющий не менее 90% всей длины SEQ ID NO: 1; фрагмент, который по меньшей мере на 96% идентичен SEQ ID NO: 1; и/или фрагмент, включающий по меньшей мере 90% всей длины последовательности нуклеиновой кислоты, идентичной последовательности SEQ ID NO: 1 по меньшей мере на 96%.
[85] В некоторых вариантах воплощения изобретения, вакцина содержит антиген MUC16, отличающийся содержанием аминокислоты 19-607 SEQ ID NO: 2; фрагмент, содержащий по меньшей мере 90% от всей длины белка, содержащего аминокислоты 19-607 SEQ ID NO: 2; аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотам 19-607 SEQ ID NO: 2; и/или фрагмент, содержащий по меньшей мере 90% всей длины аминокислотной последовательности, идентичной аминокислотам 19-607 SEQ ID NO: 2 по меньшей мере на 95%.
[86] В некоторых вариантах воплощения изобретения, вакцина содержит антиген MUC16, отличающийся содержанием антигена SEQ ID NO: 2; фрагмент, составляющий по меньшей мере 90% длины SEQ ID NO 2; аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 96% идентична SEQ ID NO: 2; и/или фрагмент, содержащий по меньшей мере 90% от всей длины белка, идентичный SEQ ID NO: 2 по меньшей мере на 96%.
[87] Вакцины могут вызывать иммунный ответ субъекта по отношению к антигену. Иммунный ответ может быть терапевтическим или профилактическим. Вакцины могут быть использованы для защиты от рака, такого как мезотелин-экспрессирующий рак или опухоль. Вакцины могут быть использованы для предотвращения и/или лечения мезотелин-экспрессирующей опухоли у нуждающегося в этом субъекта. Вакцины могут вызывать клеточные и/или гуморальные ответы по отношению к мезотелину и мезотелин-экспрессирующим опухолям. В одном варианте воплощения изобретения, вакцины могут быть использованы для защиты от, предотвращения и/или лечения, или индукции клеточного и/или гуморального ответа по отношению к мезотелин-экспрессирующим клеткам рака яичников, а именно, мезотелин-экспрессирующим клеткам эпителиального рака яичников, и если быть более точным, то мезотелин-экспрессирующим клеткам серозного рака яичников.
[88] Разработка противораковой вакцины, описанной в данном изобретении, включает идентификацию ракового антигена, например мезотелина, который не распознается иммунной системой и является аберрантно экспрессируемым аутоантигеном. Для распознавания иммунной системой, идентифицированный раковый антиген заменяется с аутоантигена на чужеродный антиген. Переконструирование нуклеиновой кислоты и аминокислотных последовательностей рекомбинантного ракового антигена с нативных на чужеродный антиген нарушает толерантность антигена в иммунной системе. Для нарушения толерантности, к раковому антигену могут быть применены несколько способов переконструирования, описанные ниже.
[89] Рекомбинантный раковый антиген вакцины не распознается как нативный, тем самым нарушая толерантность. Нарушение толерантности может индуцировать антиген-специфические ответы Т-клеток и/или высокий титр антител, вызывая или активируя иммунный ответ, направленный или реагирующий на рак или опухоль, экспрессирующую антиген. В некоторых вариантах воплощения изобретения, вызванный или активированный иммунный ответ может быть клеточным, гуморальным или как клеточным, так и гуморальным. В некоторых вариантах воплощения изобретения, вызванный или активированный клеточный иммунный ответ может включать индукцию или секрецию интерферона-гамма (ИФНy) и/или фактора некроза опухоли альфа (ФНО-a). В других вариантах воплощения изобретения, вызванный или активированный иммунный ответ может уменьшать или ингибировать один или более факторов иммуносупрессии, способствующих росту опухоли или рака, экспрессирующего антиген, например, факторов, подавляющих презентацию главного комплекса гистосовместимости (МНС), усиливающих антиген-специфичные регуляторные Т-клетки (Tregs), PD-L1, FasL, цитокинов, таких как ИЛ-10 и трансформирующий ростовой фактор TFG-β, ассоциированных с опухолью макрофагов, ассоциированных с опухолью фибробластов, растворимых факторов, продуцируемых иммуносупрессорными клетками, CTLA-4, PD-1 , МЛСК, MCP-1 и молекул иммунных контрольных точек, но, не ограничиваясь ими.
[90] Вакцина может быть ДНК-вакциной. ДНК-вакцины раскрыты в патентах США № 5,593,972, 5739118, 5817637, 5830876, 5,962,428, 5,981,505, 5,580,859, 5,703,055 и 5,676,594, ссылки на которые полностью включены в настоящее описание. В некоторых вариантах воплощения изобретения, молекула нуклеиновой кислоты может содержать вектор экспрессии. ДНК-вакцина может дополнительно содержать элементы или реагенты, препятствующие ее интеграции в хромосому.
[91] Вакцина может включать РНК, кодирующую раковый антиген. РНК-вакцина может быть введена в клетку.
[92] Вакцина может быть аттенуированной живой вакциной, вакциной, с использованием рекомбинантных векторов доставки антигена, субъединичной вакциной и гликопротеиновой вакциной, например, вакциной, описанной в патентах США № 4510245; 4797368; 4722848; 4790987; 4920209; 5017487; 5077044; 5110587; 5112749; 5174993; 5223424; 5225336; 5240703; 5242829; 5294441; 5294548; 5310668; 5387744; 5389368; 5424065; 5451499; 5,453,364; 5462734; 5470734; 5474935; 5482713; 5591439; 5643579; 5650309; 5698202; 5955088; 6034298; 6042836; 6,156,319 и 6,589,529, ссылка на каждый из которых включена в данный документ, но, не ограничиваясь ими.
[93] В некоторых вариантах воплощения изобретения, вакцина на основе нуклеиновой кислоты может дополнительно содержать молекулярный адъювант, в некоторых случаях молекулярным адъювантов могут быть ИЛ-12, ИЛ-15, ИЛ-28, ИЛ-31, ИЛ-33 и/или RANTES, и в некоторых случаях молекулярный адъювант является ингибитором контрольной точки, включая антицитотоксический антиген 4 Т-лимфоцитов (CTLA-4), анти-запрограммированный рецептор смерти-1 (PD-1) и антилимфоцитарный ген активации (LAG- 3). Кодирующая последовательность для ИЛ-12, ИЛ-15, ИЛ-28 и/или RANTES может быть включена в одну или более молекул нуклеиновой кислоты, содержащих кодирующую последовательность для одного или более антигенов. Кодирующая последовательность для ИЛ-12, ИЛ-15, ИЛ-28, ИЛ-31, ИЛ-33 и /или RANTES может кодироваться вакциной, состоящей из нуклеиновой кислоты, в общей плазмиде, или последовательность может быть включена в отдельную молекулу нуклеиновой кислоты, например, отдельную плазмиду.
[94] Вакцина, описанная в настоящем изобретении, может обладать свойствами, необходимыми для эффективных вакцин, такими как безопасность, когда сама вакцина не способна вызывать заболевание или смерть; защита от болезней; индукция нейтрализующего антитела; индукция защитного Т-клеточного ответа; и обеспечение простоты применения, небольшое количество побочных эффектов, биологическая стабильность и низкая стоимость дозы. Вакцина, содержащая раковый антиген, может иметь некоторые или все эти особенности, как оговорено ниже.
[95] Вакцина может дополнительно содержать один или более ингибиторов одной или более молекул иммунной контрольной точки (то есть ингибитор иммунной контрольной точки). Молекулы иммунной контрольной точки описаны ниже более подробно. Ингибитором иммунной контрольной точки является любая нуклеиновая кислота или белок, который предотвращает подавление любого компонента в иммунной системе, такого как презентация комплекса гистосовместимости MHC, презентация и/или дифференцировка Т-клеток, презентация и/или дифференцировка В-клеток, любой цитокин, хемокин или сигнал пролиферации и/или дифференцировки иммунных клеток. Кроме того, ниже более подробно описано, что вакцина может быть дополнительно скомбинирована с антителами к ингибиторам контрольной точки, таким как PD-1 и PDL-1, для усиления стимуляции как клеточного, так и гуморального иммунного ответа. Использование антител против PD-1 или против PDL-1 не позволяет PD-1 или PDL-1 подавлять ответы Т-клеток и/или В-клеток.
Антиген
[96] Как описано выше, вакцина может содержать антиген или молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую антиген. Антигеном может быть мезотелин, его фрагмент, его вариант или их комбинация.
[97] Мезотелин представляет собой белок размером 71 кДа, который расщепляется на два продукта: потенцирующий фактор мегакариоцитов размером 30 кДа и ГФИ-заякоренный связанный с мембраной зрелый мезотелин размером 41 кДа. Функция мезотелина неизвестна, однако недавние исследования показывают, что мезотелин может играть роль в метастазировании рака яичника, связываясь с MUC16, который также высоко экспрессируется на поверхности раковых клеток яичника. Согласно данным Института здравоохранения (IHC), экспрессия мезотелина наблюдалась в 82-100% серозных яичниковых карцином. Hassan, R. European journal of cancer 44, 46-53 (2008); Ordonez, N. G. The American journal of surgical pathology 27, 1418-1428 (2003).
[98] Соответственно, вакцина может быть использована для лечения субъектов, страдающих от мезотелин-экспрессирующего рака или опухолей. В некоторых вариантах воплощения изобретения, рак представляет собой рак яичника. Антиген мезотелина может отличаться от нативного, «нормального» мезотелина и, таким образом, обеспечивать терапию или профилактику опухоли, экспрессирующей мезотелиновый антиген. Соответственно, в данном документе предложены последовательности мезотелинового антигена, которые отличаются от нативного гена мезотелина (то есть рекомбинантные или мутированные гены, или последовательности мезотелина).
[99] Предложены молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие вышеописанные гетерологичные последовательности. Предложены молекулы нуклеиновой кислоты, состоящие из вышеописанных гетерологичных последовательностей. В некоторых вариантах воплощения изобретения, молекулы нуклеиновой кислоты содержат одну или более последовательностей нуклеиновой кислоты, выбранных из группы, состоящей из: (а) нуклеотидов 55-1821 SEQ ID NO: 1; (б) фрагмента, содержащего нуклеотиды 55-1821 SEQ ID NO: 1 по меньшей мере 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98% или 99% по всей длине молекулы нуклеиновой кислоты; (в) фрагмента, который по меньшей мере на 96, 97, 98% или 99% идентичен нуклеотидам 55-1821 SEQ ID NO: 1; и (г) фрагмента, включающего по меньшей мере 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98% или 99% всей длины последовательности нуклеиновой кислоты, которая идентична нуклеотидам 55-1821 SEQ ID NO: по меньшей мере на 96, 97, 98% или 99%. В некоторых вариантах воплощения изобретения, молекулы нуклеиновой кислоты содержат одну или более последовательностей нуклеиновой кислоты, выбранных из группы, состоящей из: (a) SEQ ID NO: 1; (б) фрагмента, включающего по меньшей мере 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98% или 99% всей длины SEQ ID NO: 1; (в) фрагмента, который по меньшей мере на 96, 97, 98% или 99% идентичен SEQ ID NO: 1; и (г) фрагмента, содержащего по меньшей мере 90% всей длины последовательности нуклеиновой кислоты, которая идентична последовательности SEQ ID NO: 1 по меньшей мере на 96, 97, 98% или 99%. В некоторых вариантах воплощения изобретения, молекула нуклеиновой кислоты содержит последовательность нуклеиновой кислоты, изложенную в SEQ ID NO: 1.
[100] В данном документе предложены последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие мезотелиновые антигены. В некоторых вариантах изобретения, молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие одну или более нуклеиновых кислот, выбраны из (а) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей аминокислоты 19-607 SEQ ID NO: 2; (б) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей фрагмент, содержащий по меньшей мере 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98% или 99% всей длины белка содержащего аминокислоты 19-607 из SEQ ID NO: 2; (в) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, который по меньшей мере на 96, 97, 98% или 99% идентичен аминокислотам 19-607 SEQ ID NO: 2; и (г) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей фрагмент, включающий по меньшей мере 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98% или 99% всей длины белка, идентичный аминокислотам 19-607 SEQ ID NO: 2 по меньшей мере на 96%, 97%, 98% или 99%. В некоторых вариантах изобретения молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие одну или более последовательностей нуклеиновой кислоты, выбраны из группы, состоящей из: (а) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей SEQ ID NO: 2; (б) последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует фрагмент, включающий по меньшей мере 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98% или 99% всей длины SEQ ID NO: 2; (в) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, идентичный SEQ ID NO:2 по меньшей мере на 96, 97, 98% или 99% ; и (d), последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей фрагмент, содержащий по меньшей мере 90% всей длины белка, идентичный SEQ ID NO: 2 по меньшей мере на 96, 97, 98 или 99%.
[101] Изолированные молекулы нуклеиновой кислоты, содержащие вышеописанные гетерологичные последовательности, могут быть включены в векторы, такие как плазмиды, вирусные векторы и другие формы молекул нуклеиновой кислоты, как приведено ниже.
[102] Предложены молекулы белка, содержащие описанные выше гетерологичные аминокислотные последовательности. предложены молекулы белка, состоящие из описанных выше гетерологичных аминокислотных последовательностей. В данном документе предложены белки и полипептиды, включающие вышеописанные последовательности. Белки и полипептид могут называть мезотелиновыми антигенами и мезотелиновыми иммуногенами. Мезотелиновые антигены способны вызывать иммунный ответ против антигена мезотелин-экспрессирующих опухолей. В некоторых вариантах воплощения изобретения, белки, содержащие аминокислотную последовательность, выбраны из группы, состоящей из: (а) аминокислот 19-607 из SEQ ID NO: 2; (б) фрагмента, содержащего аминокислоты 19-607 SEQ ID NO: 2 по меньшей мере 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98% или 99% от всей длины белка; (в) аминокислотной последовательности, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотам 19-607 SEQ ID NO: 2; и (г) фрагмента, содержащего по меньшей мере 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98% или 99% всей длины аминокислотной последовательности, идентичной аминокислотам 19-607 SEQ ID NO: 2 по меньшей мере на 96, 97, 98% или 99%. В некоторых вариантах воплощения изобретения, белки, содержащие аминокислотную последовательность, выбраны из группы, состоящей из: (a) SEQ ID NO: 2; (б) фрагмента, включающего по меньшей мере 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98% или 99% всей длины SEQ ID NO: 2; (в) аминокислотной последовательности, которая по меньшей мере на 96, 97, 98 или 99% идентична последовательности SEQ ID NO: 2; и (в) фрагмента, содержащего по меньшей мере 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98% или 99% всей длины аминокислотной последовательности, идентичной SEQ ID NO: 2 не менее, чем на 96, 97, 98% или 99%,. В некоторых вариантах воплощения изобретения, белок содержит аминокислотную последовательность, изложенную в SEQ ID NO: 2.
[103] В одном аспекте изобретения, желательно обеспечение улучшения транскрипции и трансляции с помощью консенсусного антигена, включая наличие одного или более пунктов из перечисленных: лидерной последовательности с низким содержанием GC для улучшения транскрипции; стабильности мРНК и оптимизации кодонов; и, насколько это возможно, устранения мотивов последовательности действующей в цис-положении (то есть внутренних TATA-боксов).
[104] Мезотелиновый антиген может быть консенсусной антигенной (или иммуногенной) последовательностю, происходящей из двух или более видов. Консенсусный мезотелиновый антиген может содержать одну или более мутаций, которые могут включать замену одной или более аминокислот в связывающем домене MUC-16. Одна или более мутаций могут включать мутации нуклеиновых кислот, приводящие к замене тирозина на аланин. Одна или более мутаций могут включать замену одной или более аминокислот в ГФИ-заякоренном сигнале. Одна или более мутаций могут включать замену серина на треонин и/или треонина на валин. Соответственно, в некоторых вариантах воплощения изобретения, одна или более мутаций могут заменять 1, 2 или 3 аминокислоты в сигнале связывания мезотелина MUC16 и/или сигнала ГФИ-якоря.
[105] Мезотелиновый антиген может включать модификации для улучшения экспрессии. Модификация может включать оптимизацию кодонов, оптимизацию РНК, добавление последовательности Козак (например, GCCACC) для увеличения инициации трансляции и/или добавление лидерной последовательности иммуноглобулина для повышения иммуногенности мезотелинового антигена. Мезотелиновый антиген может содержать сигнальный пептид, такой как сигнальный пептид иммуноглобулина, например, сигнальный пептид иммуноглобулина E (IgE) или иммуноглобулина G (IgG), но, не ограничиваясь ими.
Вакцина в комбинации с ингибитором иммунной контрольной точки
[106] Вакцина может дополнительно содержать один или более ингибиторов одной или более молекул иммунной контрольной точки (то есть ингибитора иммунной контрольной точки). Молекулы иммунной контрольной точки описаны ниже более подробно. Ингибитором иммунной контрольной точки является любая нуклеиновая кислота или белок, предотвращающий подавление любого компонента иммунной системы, такого как антигенпрезентующий комплекс MHC, презентация и/или дифференцировка Т-клеток, презентация и/или дифференцировка В-клеток, любой цитокин, хемокин или сигнальниый путь пролиферация и/или дифференцировки иммунных клеток.
[107] Таким ингибитором может быть последовательность нуклеиновой кислоты, аминокислотная последовательность, малая молекула или их комбинация. Последовательность нуклеиновой кислоты может быть ДНК, РНК, кДНК, их вариантом, их фрагментом или их комбинацией. Нуклеиновая кислота также может включать дополнительные последовательности, кодирующие последовательности линкера или экспрессирующего маркера, связанные с ингибитором иммунной контрольной точки пептидной связью. Малой молекулой может быть молекула с небольшим молекулярным весом, например, менее 800 Дальтон, органическое или неорганическое соединение, которое может служить субстратом фермента, лиганд (или его аналог), связанный с белком или нуклеиновой кислотой, или регулятор биологического процесса. Аминокислотная последовательность может быть белком, пептидом, его вариантом, его фрагментом или их комбинацией.
[108] В некоторых вариантах воплощения изобретения, ингибитор иммунной контрольной точки может быть одной или более последовательностями нуклеиновых кислот, кодирующих антитело, его вариант, его фрагмент или их комбинацию. В других вариантах воплощения изобретения, ингибитор иммунной контрольной точки может быть антителом, его вариантом, его фрагментом или их комбинацией.
a. Молекула имунной контрольной точки
[109] Молекула иммунной контрольной точки может быть последовательностью нуклеиновой кислоты, аминокислотной последовательностью, небольшой молекулой или их комбинацией. Последовательность нуклеиновой кислоты быть ДНК, РНК, кДНК, их вариантом, их фрагментом или их комбинацией. Нуклеиновая кислота также может включать дополнительные последовательности, которые кодируют последовательности линкера или экспрессирующего маркера, которые связаны с ингибитором иммунной контрольной точки пептидной связью. Малой молекулой может быть молекула с небольшим молекулярным весом, например, менее 800 Дальтон, органическое или неорганическое соединение, которое может служить субстратом фермента, лиганд (или его аналог), связанный с белком или нуклеиновой кислотой, или регулятор биологического процесса. Аминокислотная последовательность может быть белком, пептидом, его вариантом, его фрагментом или их комбинацией.
(1) PD-1 и PD-L1
[110] Молекула иммунной контрольной точки может программировать белок клеточной гибели-1 (PD-1), лиганд программированной клеточной гибели-1 (PD-L1), его фрагмент, его вариант или их комбинацию. PD-1 представляет собой белок клеточной поверхности, кодируемый геном PDCD1. PD-1 является членом суперсемейства иммуноглобулинов и экспрессируется на Т-клетках и про-В-клетках и, таким образом, способствует участию и/или дифференцировке этих клеток. В частности, PD-1 является мембранным белком типа 1 семейства регуляторов Т-клеток CD28/CTLA-4 и отрицательно регулирует сигналы рецептора Т-клеток (TCR), тем самым отрицательно регулируя иммунные ответы. PD-1 может отрицательно регулировать ответы CD8+T-клеток и, таким образом, ингибировать опосредованную CD8 цитотоксичность и усиливать рост опухоли.
[111] PD-1 имеет два лиганда, PD-L1 и PD-L2, которые являются членами семейства B7. PD-L1 активируется на макрофагах и дендритных клетках (ДК) в ответ на обработку ЛПС и ГМ-КСФ, а также на T-клетках и B-клетках при передаче рецепторами сигналов TCR и B-клеток. PD-L1 экспрессируется многими линиями опухолевых клеток, включая миеломы, мастоцитомы и меланомы.
b. Антитело молекулы анти-имунной контрольной точки
[112] Как описано выше, ингибитор иммунной контрольной точки может быть антителом. Антитело может связываться или реагировать с антигеном (т.е. молекулой иммунной контрольной точки, описанной выше). Соответственно, антитело может рассматриваться как антитело молекулы анти-иммунной контрольной точки или антитело молекулы иммунной контрольной точки. Антитело может кодироваться последовательностью нуклеиновой кислоты, содержащейся в документе.
[113] Антитело может включать полипептид тяжелой цепи и полипептид легкой цепи. Полипептид тяжелой цепи может включать регион вариабельной тяжелой цепи (VH) и/или по меньшей мере один регион константной тяжелой цепи (CH). По меньшей мере, один константный регион тяжелой цепи может включать константный регион тяжелой цепи-1 (CHI), константный регион тяжелой цепи-2 (CH2) и константный регион тяжелой цепи-3 (CH3), и/или шарнирный регион.
[114] В некоторых вариантах воплощения изобретения, полипептид тяжелой цепи может включать регион VH и регион CHI. В других вариантах воплощения изобретения, полипептид тяжелой цепи может включать регион VH, регион CHI, шарнирный регион, регион CH2 и регион CH3.
[115] Полипептид тяжелой цепи может включать набор регионов, определяющих комплементарность («CDR»). Набор CDR может содержать три гипервариабельных региона VH региона. Исходя из N-конца полипептида тяжелой цепи, эти CDR обозначены как «CDR1», «CDR2» и «CDR3» соответственно. CDR1, CDR2 и CDR3 полипептида тяжелой цепи могут способствовать связыванию или распознаванию антигена.
[116] Полипептид легкой цепи может включать регион вариабельной легкой цепи (VL) и/или регион константной легкой цепи (CL). Полипептид легкой цепи может включать набор регионов, определяющих комплементарность («CDR»). Набор CDR может содержать три гипервариабельных региона VL региона. Исходя из N-конца полипептида легкой цепи, эти CDR обозначены как «CDR1», «CDR2» и «CDR3» соответственно. CDR1, CDR2 и CDR3 полипептида легкой цепи могут способствовать связыванию или распознаванию антигена.
[117] Антитело может содержать регион, определяющий комплементарность легкой цепи и тяжелой цепи («CDR»), соответственно, расположенный в каркасном участке тяжелой и легкой цепей («FR»), обеспечивая поддержку CDR и определяя пространственные отношения CDR относительно друг друга. Набор CDR может содержать три гипервариабельных участка V-области тяжелой или легкой цепи. Исходя из N-конца тяжелой или легкой цепи, эти области обозначены как «CDR1», «CDR2» и «CDR3» соответственно. Следовательно, антигенсвязывающий сайт может включать шесть CDR, включающих набор CDR каждой V-области тяжелой и легкой цепи.
[118] Антитело может быть иммуноглобулином (Ig). Ig может являться, например, IgA, IgM, IgD, IgE и IgG. Иммуноглобулин может включать полипептид тяжелой цепи и полипептид легкой цепи. Полипептид тяжелой цепи иммуноглобулина может включать регион VH, регион CHI, шарнирный регион, регион CH2 и регион CH3. Полипептид легкой цепи иммуноглобулина может включать регион VL и регион CL.
[119] Кроме того, протеолитический фермент папаин предпочтительно расщепляет молекулы IgG с образованием нескольких фрагментов, два из которых (фрагменты F (ab)) содержат ковалентный гетеродимер, который включает интактный антигенсвязывающий сайт. Фермент пепсин способен расщеплять молекулы IgG с образованием нескольких фрагментов, включая фрагмент F (ab ') 2, который содержит оба антигенсвязывающих сайта. Соответственно, антитело может быть Fab или F (ab ') 2. Fab может включать полипептид тяжелой цепи и полипептид легкой цепи. Полипептид тяжелой цепи Fab может включать регион VH и регион CHI. Легкая цепь Fab может включать регион VL и регион CL.
[120] Антитело может быть поликлональным или моноклональным. Антитело может быть химерным, одноцепочечным антителом, антителом со зрелой аффинностью, человеческим антителом, гуманизированным антителом или полностью человеческим антителом. Гуманизированное антитело может быть антителом, полученным от вида не являющегося человеком, которое связывает желаемый антиген, имеющий одну или более областей, определяющих комплементарность (CDR) и каркасные участки молекулы иммуноглобулина человека.
(1) PD-1 Антитело
[121] Антитело молекулы анти-имунной контрольной точки может быть антителом анти-PD-1 (также называемым в настоящем документе «PD-1 антитело»), его вариант, его фрагмент или их комбинацию. Антитело анти-PD-1 может быть ниволумабом. Антитело анти- PD-1 может ингибировать активность PD-1, таким образом, вызывая, активируя или усиливая иммунный ответ против опухоли или рака и уменьшая рост опухоли.
(2) PD-L1 Антитело
[122] Антитело молекулы анти-имунной контрольной точки может быть анти-PD-L1 антителом (также обозначаемым здесь как «PD-L1 антитело»), его вариантом, его фрагментом или их комбинацией. Антитело анти-PD-L1 может ингибировать активность PD-L1, таким образом вызывая, активируя или усиливая иммунный ответ против опухоли или рака и уменьшая рост опухоли.
Вектор
[123] Вакцина может содержать один или более векторов, которые включают гетерологичную нуклеиновую кислоту, кодирующую мезотелиновый антиген. Один или более векторов могут быть способны экспрессировать антиген в количестве, эффективном для вызывания иммунного ответа у млекопитающего. Вектор может содержать гетерологичную нуклеиновую кислоту, кодирующую антиген. Вектор может иметь последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую источник репликации. Вектор может быть плазмидой, бактериофагом, бактериальной искусственной хромосомой или дрожжевой искусственной хромосомой. Вектор может быть либо самореплицирующимся внехромосомным вектором, либо вектором, который интегрируется в геном хозяина.
[124] Один или более векторов могут быть экспрессирующей конструкцией, которая обычно является плазмидой, используемой для введения определенного гена в клетку-мишень. Как только вектор экспрессии оказывается внутри клетки, белок, кодируемый геном, начинает продуцироваться рибосомными внутриклеточными комплексами транскрипции и трансляции. Плазмиду часто конструируют так, чтобы она содержала регуляторные последовательности, действующие как энхансерные и промоторные регионы для обеспечения эффективной транскрипции гена, помещенного в экспрессирующий вектор. Векторы, описанные в настоящем изобретении, экспрессируют большие количества стабильной мессенджерной РНК и, как следствие, белков.
[125] Векторы могут включать сигналы экспрессии, такие как сильный промотор, сильный кодон терминации, регулирование расстояния между промотором и клонированным геном, вставка последовательности терминации транскрипции и PTIS (портативная последовательность инициации трансляции).
[126] Векторы могут содержать последовательности нуклеиновых кислот, функционально связанные с регуляторным элементом, таким как сигнал промотора или полиаденилирования. В некоторых вариантах воплощения изобретения, промотор является промотором цитомегаловируса человека немедленно-раннего ответа (промотор hCMV). В некоторых вариантах воплощения изобретения, сигнал полиаденилирования является сигнальной последовательностью полиаденилирования гормона роста крупного рогатого скота (bGH поли-A).
[127] Вектор может быть кольцевой плазмидой или линейной нуклеиновой кислотой. Кольцевая плазмида и линейная нуклеиновая кислота способны управлять экспрессией конкретной нуклеотидной последовательности в соответствующей клетке субъекта. Вектор может содержать промотор, функционально связанный с нуклеотидной последовательностью кодирующей антиген, и который может быть функционально связан с сигналами терминации. Вектор также может содержать последовательности, необходимые для правильной трансляции нуклеотидной последовательности, а также последовательности для клонирования и субклонирования вектора и его фрагментов. Вектор, содержащий целевую нуклеотидную последовательность, может быть химерным, что означает, что по меньшей мере один из его компонентов является гетерологичным по отношению, как минимум, к одному из других компонентов. Экспрессия нуклеотидной последовательности в кассете экспрессии может находиться под контролем конститутивного промотора или индуцибельного промотора, который инициирует транскрипцию только тогда, когда на клетку-хозяина воздействует какой-то конкретный внешний стимул. В случае многоклеточного организма, промотор также может быть специфичным для конкретной ткани или органа, или стадии развития.
[128] Вектор может быть плазмидой. Плазмида может использоваться для трансфекции клеток нуклеиновой кислотой, кодирующей антиген, которую культивируют трансформированные клетки-хозяева и поддерживают в условиях, подходящих для экспрессии антигена.
[129] Плазмида может содержать последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую один или более различных антигенов, описанных выше, включая последовательности, кодирующие синтетический консенсусный антиген, способный вызывать иммунный ответ к антигену, фрагменты таких белков, варианты таких белков, фрагменты вариантов или слитые белки, состоящие из комбинаций консенсусных белков и/или фрагментов консенсусного белка, и/или вариантов консенсусного белка, и/или фрагментов вариантов консенсусных белков.
[130] В некоторых вариантах воплощения изобретения, плазмида может дополнительно содержать последовательность, кодирующую CCR20 отдельно или как часть одной из этих плазмид. Аналогично, плазмиды могут дополнительно содержать кодирующие последовательности для ИЛ-12, ИЛ-15 и/или ИЛ-28.
[131] Плазмида может дополнительно содержать кодон инициации, который может находиться выше кодирующей последовательности, и стоп-кодон, который может находиться ниже кодирующей последовательности. Кодоны инициации и стоп могут находиться в рамке считывания кодирующей последовательности.
[132] Плазмида также может содержать промотор, который функционально связан с кодирующей последовательностью. Промотор, функционально связанный с кодирующей последовательностью, может быть промотором вируса обезьяны 40 (SV40), промотором вируса опухоли молочной железы мыши (MMTV), промотором вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), так и промотором вируса иммунодефицита крупного рогатого скота (BIV), длинным терминальным повтором (LTR), промотором вируса Молони, промотором вируса птичьего лейкоза (ALV), промотором цитомегаловируса (ЦМВ), таким как промотор цитомегаловируса человека немедленно-раннего ответа (промотор hCMV), промотором вируса Эпштейна-Барра (EBV) или промотором вируса саркомы Рауса (RSV). Промотор также может быть промотором человеческого гена, такого как человеческий актин, человеческий миозин, человеческий гемоглобин, человеческий мышечный креатин или человеческий металлотионеин. Промотор также может быть тканеспецифичным промотором, таким как мышечный или кожный специфический промотор, природный или синтетический. Примеры таких промоторов описаны в публикации заявки на патент США №. US 20040175727, содержание которой полностью включено в настоящий документ.
[133] Плазмида также может содержать сигнал полиаденилирования, который может находиться ниже кодирующей последовательности. Сигнал полиаденилирования может быть сигналом полиаденилирования SV40, сигналом полиаденилирования LTR, сигналом полиаденилирования гормона роста крупного рогатого скота (bGH), сигналом полиаденилирования гормона роста человека (hGH), сигналом полиаденилирования человеческого β-глобина или сигналом полиаденилирования гормона роста крупного рогатого скота (bG поли-А). Сигнал полиаденилирования SV40 может быть сигналом полиаденилирования плазмиды pCEP4 (Invitrogen, Сан-Диего, Калифорния).
[134] Плазмида также может содержать энхансер перед кодирующей последовательностью. Энхансером может быть человеческий актин, человеческий миозин, человеческий гемоглобин, человеческий мышечный креатин или вирусный энхансер, например, CMV, FMDV, RSV или EBV. Усиления полинуклеотидной функции описаны в патентах США № 5593972, 5962248 и WO 94/016737, ссылки на содержание каждого из которых полностью включены в данный документ.
[135] Плазмида также может содержать точку начала репликации, происходящую от млекопитающих, для поддержания внехромосомной плазмиды и получения множества копий плазмиды в клетке. Плазмида может быть pVAXI, pCEP4 или pREP4 производства Invitrogen (Сан-Диего, Калифорния), которая может включать в себя источник репликации вируса Эпштейна-Барра и кодирующую область ядерного антигена EBNA-1, которая может производить высококопийную эписомальную репликацию без интеграции. Основой плазмиды может быть pAV0242. Плазмида может быть репликационно-дефектной плазмидой аденовируса типа 5 (Ad5).
[136] Плазмида также может содержать регуляторную последовательность, которая может хорошо подходить для экспрессии генов в той клетке, в которую вводится плазмида. Кодирующая последовательность может содержать кодон, который может обеспечить более эффективную транскрипцию кодирующей последовательности в клетке-хозяине.
[137] Кодирующая последовательность также может содержать лидерную последовательность иммуноглобулина (Ig). Лидерная последовательность может быть 5'-кодирующей последовательностью. Консенсусные антигены, кодируемые этой последовательностью, могут содержать N-концевую лидерную последовательность Ig, за которой следует консенсусный антигенный белок. Лидерной последовательностью N-концевого Ig может быть IgE или IgG.
[138] Плазмидой может быть pSE420 (Invitrogen, Сан-Диего, Калифорния), которая может быть использована для продуцирования белка в Escherichia coli (E.coli). Плазмида также может быть p-YES2 (Invitrogen, Сан-Диего, Калифорния), которая может быть использована для продуцирования белка в штаммах дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Плазмида также может иметь полную систему экспрессии бакуловируса MAXBAC™ (Invitrogen, Сан-Диего, Калифорния), которая может быть использована для продуцирования белка в клетках насекомых. Плазмида также может быть pcDNA I или pcDNA3 (Invitrogen, Сан-Диего, Калифорния), которые могут быть использованы для продуцирования белка в клетках млекопитающих, таких как клетки яичника китайского хомячка (CHO). Плазмидой также может быть pGXOOl (Inovio), модифицированная из pVAXl (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс).
[139] Вектор может быть кольцевой плазмидой, которой можно трансформировать клетку-мишень путем интеграции в клеточный геном или оставить внехромосомно (например, автономно реплицирующаяся плазмида с источником репликации).
[140] Вектором может быть pVAX, pcDNA3.0 или provax, или любой другой экспрессирующий вектор, способный экспрессировать ДНК, кодирующую антиген и позволяющий клетке транслировать последовательность в антиген, распознаваемый иммунной системой.
[141] Также, в данном документе представлена линейная вакцина на основе нуклеиновых кислот или кассета с линейной экспрессией («LEC»), которую можно эффективно доставлять субъекту посредством электропорации и экспрессии одного или более желаемых антигенов. LEC может быть любой линейной ДНК, лишенной какого-либо фосфатного основания. ДНК может кодировать один или более антигенов. LEC может содержать промотор, интрон, стоп-кодон и/или сигнал полиаденилирования. Экспрессия антигена может контролироваться промотором. LEC может не содержать генов устойчивости к антибиотикам и/или фосфатного основания. LEC может не содержать других последовательностей нуклеиновых кислот, не связанных с желаемой экспрессией гена антигена.
[142] LEC может быть получен из любой плазмиды, способной к линеаризации. Плазмида может быть способной экспрессировать антиген. Плазмидой может быть pNP (Пуэрто-Рико/34) или pM2 (Новая Каледония/99). Плазмидой может быть WLV009, pVAX, pcDNA3.0 или provax, или любой другой вектор экспрессии, способный экспрессировать ДНК, кодирующую антиген, и позволяющий клетке транслировать последовательность в антиген, распознаваемый иммунной системой.
[143] LEC может быть pcrM2. LEC может быть pcrNP. pcrNP и pcrMR, которые могут быть получены из pNP (Пуэрто-Рико/34) и pM2 (Новая Каледония/99), соответственно.
[144] Вектор может содержать промотор. Промотор может быть любым промотором, способным управлять экспрессией гена и регулировать экспрессию выделенной нуклеиновой кислоты. Такой промотор представляет собой цис-действующий элемент последовательности, необходимый для транскрипции ДНК-зависимой РНК-полимеразой, которая транскрибирует последовательность антигена, описанную в настоящем документе. Выбор промотора, используемого для прямой экспрессии гетерологичной нуклеиновой кислоты, зависит от конкретного применения. Промотор может быть расположен приблизительно на том же расстоянии от начального сайта транскрипции в векторе, что и от начального сайта транскрипции в нативном гене. Тем не менее, изменение этого расстояния может быть внесено без потери функции промотора.
[145] Промотор может быть функционально связан с последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей антиген, и сигналами, необходимыми для эффективного полиаденилирования транскрипта, сайтов связывания рибосом и терминации трансляции.
[146] Промотор может быть CMV-промотором, промотором раннего ответа SV40, промотором позднего ответа SV40, металлотионеиновым промотором, промотором вируса опухоли молочной железы мыши, промотором вируса саркомы Рауса, промотором полиэдрина или другим промотором с доказанной эффективностью экспрессии в эукариотических клетках.
[147] Вектор может включать энхансер и интрон с функциональными донорными и акцепторными сайтами сплайсинга. Для обеспечения эффективной терминации, вектор может содержать регион терминации транскрипции ниже структурного гена. Терминальная область может быть получена из того же гена, что и последовательность промотора, или может быть получена из разных генов.
Способы подготовки вектора
[148] В настоящем документе предложены способы получения вектора, содержащего молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующие обсуждаемый в данном документе мезотелиновый антиген. После заключительной стадии субклонирования в экспрессирующую плазмиду млекопитающего, вектор может быть использован для инокуляции клеточной культуры в крупномасштабном ферментере с использованием известных в данной области методов.
[149] Вектор, предназначенный для использования с устройствами электропорации, более подробно описанными ниже, может быть сконструирован или изготовлен с использованием комбинации известных устройств и технологий, однако более предпочтительным является изготовление с использованием оптимизированной технологии изготовления плазмид, описанной в публикации США № 2009/004716, поданной 23 мая 2008 года. В некоторых примерах, ДНК-плазмиды, использованные в данных исследованиях, могут быть сконструированы в концентрациях, превышающих или равных 10 мг/мл. Технологии изготовления также включают или объединяют различные устройства и протоколы, хорошо известные специалистам в данной области техники, в дополнение к технологиям, описанным в заявке США под серийным номером 60/939792, включая описанные в патенте США № 7,238,522, выданного 3 июля 2007 г. Упомянутые выше публикация и патент, а именно публикация США № 2009/004716 и патент США № 7,238,522, соответственно, включены полностью в данное изобретение.
Вспомогательные вещества и другие компоненты вакцины
[150] Вакцина может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый наполнитель. Фармацевтически приемлемый наполнитель может представлять собой функциональные молекулы, такие как переносчики, носители или разбавители. Фармацевтически приемлемый наполнитель может представлять собой агент, облегчающий трансфекцию, и может включать поверхностно-активные агенты, такие как иммуностимулирующие комплексы (ISCOMS), неполный адъювант Фрейнда, аналог ЛПС, включая монофосфориллипид A, мурамилпептиды, аналоги хинона, везикулы, такие как сквален и сквален, гиалуроновая кислота, липиды, липосомы, ионы кальция, вирусные белки, полианионы, поликатионы или наночастицы, или другие известные агенты, облегчающие трансфекцию.
[151] Средство, облегчающее трансфекцию, представляет собой полианион, поликатион, включая поли-L-глутамат (LGS) или липид. Средство, облегчающее трансфекцию, представляет собой поли-L-глутамат, который может присутствовать в вакцине в концентрации менее 6 мг/мл. Облегчающий трансфекцию агент может также включать поверхностно-активные агенты, такие как иммуностимулирующие комплексы (ISCOMS), неполный адъювант Фрейнда, аналог ЛПС, включая монофосфориллипид А, мурамилпептиды, аналоги хинона и везикулы, такие как сквален и сквален, и гиалуроновая кислота также может быть использованы в сочетании с генетическим конструктом. ДНК-плазмидные вакцины могут также включать агент, облегчающий трансфекцию, такой как липиды, липосомы, включая лецитиновые липосомы или другие липосомы, известные в данной области техники, в виде смеси ДНК-липосомы (см., например, W09324640), ионы кальция, вирусные белки, полианионы, поликатионы или наночастицы, или другие известные агенты, облегчающие трансфекцию. Агент, облегчающий трансфекцию, представляет собой полианион, поликатион, включая поли-L-глутамат (LGS), или липид. Концентрация трансфекционного агента в вакцине составляет менее 4 мг/мл, менее 2 мг/мл, менее 1 мг/мл, менее 0,750 мг/мл, менее 0,500 мг/мл, менее 0,250 мг/мл, менее 0,100 мг/мл, менее 0,050 мг/мл или менее 0,010 мг/мл.
[152] Фармацевтически приемлемый наполнитель может представлять собой один или более адъювантов. Адъювантами могут быть другие гены, которые экспрессируются в альтернативной плазмиде или доставляются в виде белков в комбинации с указанной выше плазмидой в составе вакцины. Один или более адъювантов могут быть выбраны из группы, состоящей из: CCL20, a-интерферона (ИФН-a), β-интерферона (ИФН-β), y-интерферона, тромбоцитарного фактора роста (PDGF), ФНОа, ФНОβ, GM-CSF, эпидермального фактора роста (EGF), хемоаттрактанта кожных Т-клеткок (CTACK), хемокина, экспрессируемого эпителиальным тимусом (TECK), эпителиального хемокина, связанного со слизистыми оболочками, ИЛ-12, ИЛ-15, ИЛ-28, ИЛ-31, ИЛ-33, МНС, CD80, CD86, ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-10, ИЛ-18, МСР-1, MIP-1a, MIP-1-, ИЛ-8, L-селектина, P-селектина, E-селектина, CD34, GlyCAM-1, MadCAM-1, LFA-1, VLA-1, Mac-1, pl50.95 , PECAM, ICAM-1, ICAM-2, ICAM-3, CD2, LFA-3, M-CSF, G-CSF, мутантных форм ИЛ-18, CD40, CD40L, фактора роста сосудов, фактора роста фибробластов, ИЛ-7, фактора роста нервов, фактора роста эндотелия сосудов, Fas, рецептора TNF, Fit, Apo-1, p55, WSL-1, DR3, TRAMP, Apo-3, AIR, LARD, NGRF, DR4, DRS, KILLER, TRA ИЛ-R2, TRICK2, DR6, каспазы ICE, Fos, c-jun, Sp-1, Ap-1, Ap-2, p38, p65R el, MyD88, IRAK, TRAF6, IkB, неактивного NIK, SAP K, SAP-I, JNK, генов ответа на интерферон, NF-kβ, Bax, TRAIL, TRAILrec, TRAILrecDRC5, TRAIL-R3, TRAIL-R4, RANK, RANK LIGAND, 0×40 , 0×40 LIGAND, NKG2D, MICA, MICB, NKG2A, NKG2B, NKG2C, NKG2E, NKG2F, TAPI, TAP2, ИЛ-15, имеющих сигнальную последовательность или последовательность, которая кодирует удаленную сигнальную последовательность, с необязательным включением другого сигнального пептида, такого как пептид IgE или последовательность, кодирующую другой сигнальный пептид, такой как пептид IgE, его функциональные фрагменты или их комбинацию. Адъювантом может быть ИЛ-12, ИЛ-15, ИЛ-28, CTACK, TECK, фактор роста, полученный из тромбоцитов (PDGF), ФНОa, TNFP, GM-CSF, эпидермальный фактор роста (EGF), ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-10, ИЛ-12, ИЛ-18 или их комбинация.
[153] В некоторых вариантах воплощения изобретения, адъювант может представлять собой один или более белков и/или молекул нуклеиновых кислот, которые кодируют белки, выбранные из группы, состоящей из: CCL-20, ИЛ-12, ИЛ-15, ИЛ-28, CTACK, TECK, MEC или RANTES. Примеры конструкций и последовательностей ИЛ-12 раскрыты в заявке PCT №. PCT/US1997/019502 и соответствующей заявке, серийный номер США № 08/956 865 и предварительной заявке США № 61/569600, поданной 12 декабря 2011 г., ссылки на каждую из которых включены в настоящий документ. Примеры конструкций и последовательностей ИЛ-15 раскрыты в заявке PCT №. PCT/US04/18962 и в соответствующей заявке, серийный номер США 10/560,650, и в заявке PCT №. PCT/US07/00886 и в соответствующей заявке, серийный номер США 12/160,766, и в заявке PCT №. PCT/USI0/048827, ссылки на каждую из которых включены в настоящий документ. Примеры конструкций и последовательностей ИЛ-28 раскрыты в заявке PCT №. PCT/US09/039648 и соответствующей заявке, серийный номер США 12/936,192, ссылки на каждую из которых включены в настоящий документ. Примеры RANTES и других конструкций и последовательностей раскрыты в заявке PCT №. PCT/US1999/004332 и соответствующей заявке, серийный номер США 09/622452, ссылки на каждую из которых включены в настоящий документ. Другие примеры конструкций и последовательностей RANTES раскрыты в заявке PCT №. PCT/US 11/024098, ссылки на которую включены в настоящий документ. Примеры RANTES и других конструкций и последовательностей раскрыты в заявке PCT №. PCT/US1999/004332 и соответствующей заявке, серийный номер США 09/622452 ссылки на каждую из которых включены в настоящий документ. Другие примеры конструкций и последовательностей RANTES раскрыты в заявке PCT №. PCT/US11/024098, ссылки на которую включены в настоящий документ. Примеры хемокинов, конструкций и последовательностей CTACK, TECK и MEC раскрыты в заявке PCT №. PCT/US2005/042231 и соответствующей заявке, серийный номер США 11/719,646, ссылки на каждую из которых включены в настоящий документ. Примеры 0X40 и других иммуномодуляторов раскрыты в заявке США № 10/560653, ссылки на которую включены в настоящий документ. Примеры DR5 и других иммуномодуляторов раскрыты в заявке США № 09/622452 ссылки на которую включены в настоящий документ.
[154] Другие гены, которые могут быть использованы в качестве адъювантов, включают в себя те, которые кодируют: MCP-1, MIP-1a, MIP-lp, ИЛ-8, RANTES, L-селектин, P-селектин, E-селектин, CD34, GlyCAM-1. , MadCAM-1, LFA-1, VLA-1, Mac-1, pl50.95, PECAM, ICAM-1, ICAM-2, ICAM-3, CD2, LFA-3, M-CSF, G-CSF, ИЛ-4, мутантные формы ИЛ-18, CD40, CD40L, фактор роста сосудов, фактор роста фибробластов, ИЛ-7, ИЛ-22, фактор роста нервов, фактор роста эндотелия сосудов, Fas, рецептор ФНО, Fit, Apo-1, p55, WSL-1, DR3, TRAMP, Apo-3, AIR, LARD, NGRF, DR4, DR5, KILLER, TRAIL-R2, TRICK2, DR6, каспазу ICE, Fos, c-jun, Sp-1, Ap-1 , Ap-2, p38, p65Rel, MyD88, IRAK, TRAF6, IkB, неактивный NIK, SAP K, SAP-1, JNK, гены ответа на интерферон, NF-kβ, Bax, TRAIL, TRAILrec, TRAILrecDRC5, TRAIL-R3, TRAIL-R4, RANK, лиганд RANK, 0×40, 0×40 LIGAND, NKG2D, MICA, MICB, NKG2A, NKG2B, NKG2C, NKG2E, NKG2F, TAPI, TAP2 и их функциональные фрагменты
[155] Вакцина может дополнительно включать способствующий генетической вакцине агент, описанный в заявке, серийный номер США 021 579, поданной 1 апреля 1994 г., ссылки на которую включены в настоящий документ.
[156] Вакцина может содержать антиген-кодирующий вектор в количестве от приблизительно 1 нанограмма до 100 миллиграммов; от приблизительно 1 микрограмма до приблизительно 10 миллиграммов; или предпочтительнее от приблизительно 0,1 микрограмма до приблизительно 10 миллиграммов; или более предпочтительнее от приблизительно 1 до приблизительно 2 мг. В некоторых предпочтительных вариантах воплощения изобретения, вакцина, согласно настоящему изобретению, содержит от приблизительно 5 нанограмм до приблизительно 1000 микрограммов нуклеиновой кислоты. В некоторых предпочтительных вариантах воплощения изобретения, вакцина может содержать от приблизительно 10 нанограмм до приблизительно 800 микрограммов нуклеиновой кислоты. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления, вакцина может содержать от приблизительно 0,1 до приблизительно 500 мкг нуклеиновой кислоты. В некоторых предпочтительных вариантах воплощения изобретения, вакцина может содержать от приблизительно 1 до приблизительно 350 мкг нуклеиновой кислоты. В некоторых предпочтительных вариантах воплощения изобретения, вакцина может содержать от приблизительно 25 до приблизительно 250 микрограммов, от приблизительно 100 до приблизительно 200 микрограммов, от приблизительно 1 нанограмма до 100 миллиграммов; от приблизительно 1 микрограмма до приблизительно 10 миллиграммов; от приблизительно 0,1 микрограмма до приблизительно 10 миллиграммов; от приблизительно 1 до приблизительно 2 мг, от приблизительно 5 до приблизительно 1000 микрограмм, от приблизительно 10 до приблизительно 800 микрограмм, от приблизительно 0,1 до приблизительно 500 микрограмм, от приблизительно 1 до приблизительно 350 микрограмм, от приблизительно 25 до приблизительно 250 микрограмм от приблизительно 100 до приблизительно 200 мкг антигена или его плазмиды.
[157] Вакцина может быть составлена в соответствии с применяемым способом введения. Фармацевтическая композиция для инъекционных вакцин может быть стерильной, апирогенной и не содержащей частиц. Можно использовать изотонический состав или раствор. Изотонические добавки могут включать хлорид натрия, декстрозу, маннит, сорбит и лактозу. Вакцина может содержать вазоконстриктор. Изотонические растворы могут включать забуференный фосфатом физиологический раствор. Вакцина может дополнительно содержать стабилизаторы, включая желатин и альбумин. Стабилизаторы могут обеспечивать стабильность состава при комнатной температуре или температуре окружающей среды в течение продолжительных периодов времени, включая LGS или поликатионы, или полианионы.
Фармацевтическая композиция вакцины
[158] Вакцина может быть в форме фармацевтической композиции. Фармацевтическая композиция может содержать вакцину. Фармацевтические композиции могут содержать от приблизительно 5 нанограмм (нг) до приблизительно 10 миллиграмм (мг) молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции, согласно настоящему изобретению, содержат от приблизительно 25 нг до приблизительно 5 мг молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции содержат от приблизительно 50 нг до приблизительно 1 мг молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции содержат от приблизительно 0,1 до приблизительно 500 микрограммов молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции содержат от приблизительно 1 до приблизительно 350 микрограммов молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции содержат от приблизительно 5 до приблизительно 250 микрограммов молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции содержат от приблизительно 10 до приблизительно 200 микрограммов молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции содержат от приблизительно 15 до приблизительно 150 микрограммов молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции содержат от приблизительно 20 до приблизительно 100 микрограммов молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции содержат от приблизительно 25 до приблизительно 75 микрограммов молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции содержат от приблизительно 30 до приблизительно 50 микрограммов молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции содержат от приблизительно 35 до приблизительно 40 микрограммов молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции содержат от приблизительно 100 до приблизительно 200 микрограммов молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции содержат от приблизительно 10 микрограммов до приблизительно 100 микрограммов молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения фармацевтические композиции содержат от приблизительно 20 микрограммов до приблизительно 80 микрограммов молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции содержат от приблизительно 25 микрограммов до приблизительно 60 микрограммов молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции содержат от приблизительно 30 нг до приблизительно 50 микрограммов молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции содержат от приблизительно 35 нг до приблизительно 45 микрограммов молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых предпочтительных вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции содержат от приблизительно 0,1 до приблизительно 500 микрограммов молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых предпочтительных вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции содержат от приблизительно 1 до приблизительно 350 микрограммов молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых предпочтительных вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции содержат от приблизительно 25 до приблизительно 250 микрограммов молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых предпочтительных вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции содержат от приблизительно 100 до приблизительно 200 микрограммов молекулы нуклеиновой кислоты вакцины.
[159] В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции, согласно настоящему изобретению, содержат по меньшей мере 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 100 нг молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции могут содержать по меньшей мере 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95,100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200, 205, 210, 215, 220, 225, 230, 235, 240, 245, 250, 255, 260, 265, 270, 275, 280, 285, 290, 295, 300, 305, 310, 315, 320, 325, 330, 335, 340, 345, 350, 355, 360, 365, 370, 375, 380, 385, 390, 395, 400, 405, 410, 415, 420, 425, 430, 435, 440, 445, 450, 455, 460, 465, 470, 475, 480, 485, 490, 495, 500, 605, 610, 615, 620, 625, 630, 635, 640, 645, 650, 655, 660, 665, 670, 675, 680, 685, 690, 695, 700, 705, 710, 715, 720, 725, 730, 735, 740, 745, 750, 755, 760, 765, 770, 775, 780, 785, 790, 795, 800, 805, 810, 815, 820, 825, 830, 835, 840, 845, 850, 855, 860, 865, 870, 875, 880, 885, 890, 895, 900, 905, 910, 915, 920, 925, 930, 935, 940, 945, 950, 955, 960, 965, 970, 975, 980, 985, 990, 995 или 1000 микрограмм молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтические композиции могут содержать по меньшей мере 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5 или 10 мг или более молекулы нуклеиновой кислоты вакцины.
[160] В других вариантах воплощения изобретения, фармацевтическая композиция может включать до 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 или 100 нг молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтическая композиция может содержать до и включая 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75,80, 85, 90, 95,100, 105, 110, 115, 120, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195,200, 205, 210, 215,220, 225,230, 235, 240, 245,250, 255, 260,265, 270, 275, 280, 285,290, 295, 300,305,310, 315,320,325, 330, 335,340,345, 350,355, 360, 365, 370, 375,380, 385, 390,395,400, 405,410,415, 420, 425,430, 435, 440,445, 450, 455, 460, 465,470, 475, 480,485,490, 495,500,605, 610, 615,620, 625, 630,635, 640, 645, 650, 655,660, 665, 670, 675,680, 685,690,695, 700, 705,710, 715, 720,725, 730, 735, 740, 745, 750, 755, 760, 765, 770,775, 780, 785, 790, 795, 800, 805, 810, 815, 820, 825, 830, 835, 840, 845, 850, 855, 860,865,870,875,880,885,890,895.900, 905, 910, 915, 920, 925, 930, 935, 940, 945, 950,955, 960,965,970,975,980,985,990,995, или 1000 микрограмм молекулы нуклеиновой кислоты вакцины. В некоторых вариантах воплощения изобретения, фармацевтическая композиция может содержать до и включая 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5 или 10 мг молекулы нуклеиновой кислоты вакцины.
[161] При составлении состава, фармацевтическая композиция может дополнительно содержать другие агенты в соответствии с используемым способом введения. В тех случаях, когда фармацевтические композиции представляют собой фармацевтические композиции для инъекций, они являются стерильными, апирогенными и не содержат твердых частиц. Предпочтительно использовать изотонический состав. Как правило, изотонические добавки могут включать хлорид натрия, декстрозу, маннит, сорбит и лактозу. В некоторых случаях, предпочтительными являются изотонические растворы, такие как забуференный фосфатом физиологический раствор. Стабилизаторы включают желатин и альбумин. В некоторых вариантах воплощения изобретения, к препарату добавляют вазоконстрикторный агент.
[162] Фармацевтическая композиция может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый наполнитель, как было указано выше. Например, фармацевтически приемлемый наполнитель может содержать функциональные молекулы, носители, адъюванты, транспортеры, разбавители или агенты, облегчающие трансфекцию, как было указано выше.
Способы вакцинации
[163] В настоящем документе предложены способы лечения и/или профилактики мезотелин-экспрессирующего рака, такого как рак яичника, но, не ограничиваясь им, с использованием фармацевтических составов, описанных выше. Здесь также описаны способы применения фармацевтических композиций, описанных выше, к субъекту для лечения и или профилактики мезотелин-экспрессирующего рака, такого как рак яичника, но, не ограничиваясь им. Здесь также описаны способы вакцинации субъекта. Также здесь описаны способы введения фармацевтических составов, описанных в изобретении, нуждающемуся в этом субъекту. Способы, описанные в изобретении, в совокупности называемые способами лечения с использованием фармацевтических составов, описанных в изобретении, могут включать введение одной или более вакцин, описанных в изобретении, нуждающемуся в этом субъекту, для индукции терапевтического и/или профилактического иммунного ответа. Вакцина может быть введена субъекту для модуляции активности иммунной системы субъекта и усиления иммунного ответа. Введение вакцины может происходить путем трансфекции раковых антигенов, как описано в изобретении, в виде молекулы нуклеиновой кислоты, экспрессируемой в клетке и доставляемой на поверхность клетки, после чего иммунная система распознает и индуцирует клеточный, гуморальный или клеточный и гуморальный ответ. Введение вакцины может быть использовано для индукции или активации иммунного ответа субъекта против мезотелина путем введения субъекту вакцины так, как это описано в настоящем документе.
[164] Вакцина может быть применена к субъекту для модулирования активности его иммунной системы, тем самым усиливая иммунный ответ. В некоторых вариантах изобретения, субъектом является млекопитающее. При введении вектора в клетки млекопитающего во время применения вакцины к млекопитающему, трансфицированные клетки будут экспрессировать и секретировать один или более раковых антигенов так, как описано в данном изобретении. Эти секретируемые белки или синтетические антигены будут распознаваться иммунной системой как чужеродные, что приведет к возникновению иммунного ответа, который может включать: антитела, полученные для одного или более раковых антигенов и Т-клеточный ответ, направленный конкретно против антигенов одного ракового заболевания или более. В некоторых примерах, у млекопитающего, вакцинированного вакцинами, обсуждаемыми в данном документе, будет развиваться примированная иммунная система, и при заражении одним или более антигенами рака, описанными в настоящем документе, примированная иммунная система позволит быстро избавиться от последующих раковых антигенов так, как описано в данном документе, одинаково, как через гуморальный, клеточный так и через клеточный и гуморальный иммунный ответ.
[165] Способы применения ДНК-вакцины, описанные в патентах США № 4945050 и 5036006, ссылки на оба патента включены в данный документ во всей своей полноте.
[166] Вакцина может быть введена млекопитающему для вызова у млекопитающего иммунного ответа. Млекопитающее может быть человеком, низшим приматом, коровой, свиньей, овцой, козой, антилопой, бизоном, водяным буйволом, быком, оленем, ежами, слонами, ламой, альпакой, мышами, крысами и, предпочтительно, человеком, коровой или свиньей, Для вызова иммунного ответа, вакцина также может быть введена субъекту, не являющемуся млекопитающим, например курице.
[167] Доза вакцины может составлять от 1 микрограмма до 10 мг активного компонента на килограмм (кг) массы тела во времени (компонент/кг массы тела/время) и может составлять от 20 микрограмм до 10 мг компонента/кг массы тела/времени. Вакцину можно применять каждые 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или 31 день. Количество доз вакцины для эффективного лечения может составлять 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более доз.
Способ генерации иммунного ответа с помощью вакцины
[168] Вакцина может быть использована для генерирования иммунного ответа у субъекта, такого как млекопитающее или не-млекопитающее, включая терапевтический или профилактический иммунный ответ. Иммунный ответ может генерировать антитела и/или Т-клетки-киллеры, нацеленные на один или более раковых антигенов так, как описано в данном документе. Такие антитела и Т-клетки могут быть выделены.
[169] Некоторые варианты воплощения изобретения являются способами генерирования иммунных ответов против одного или более раковых антигенов так, как описано в данном документе, причем эти варианты воплощения включают применение вакцины к субъекту. Некоторые варианты воплощения изобретения представляют способы профилактической вакцинации субъекта против рака или опухоли, экспрессирующей один или более мезотелиновых антигенов, как описано выше, причем эти варианты воплощения включают применение вакцины. Некоторые варианты воплощения изобретения представляют способы терапевтической вакцинации субъекта, страдающего от мезотелин-экспрессирующего рака яичника или опухоли, причем эти варианты воплощения включают применение вакцины. До введения вакцины, диагностика рака яичника или опухоли, экспрессирующей один или более мезотелиновых антигенов, как описано в данном документе, может проводиться в обычном режиме.
Способ лечения рака с помощью вакцины
[170] Вакцина может быть использована для генерирования или индукции иммунного ответа у млекопитающего, реагирующего или направленного на мезотелин-экспрессирующий рак, такой как рак яичника, конкретнее, эпителиальный рак яичника, а именно, серозный рак яичника, но, не ограничиваясь ими. Вызванный иммунный ответ может предотвратить образование рака яичника или рост опухоли.
[171] Вызванный иммунный ответ может предотвращать и/или уменьшать метастазирование раковых или опухолевых клеток у субъекта с раком яичника. Соответственно, вакцина может быть использована как способ, лечащий и/или предотвращающий рак или опухоль у млекопитающего или субъекта с раковой болезнью, к которому применяют вакцину.
[172] В некоторых вариантах воплощения изобретения, применяемая вакцина может опосредовать выведение или предотвращать рост опухолевых клеток путем индуцирования (1) гуморального иммунитета посредством В-клеточных ответов для генерирования антител, блокирующих выработку моноцитарного хемоаттрактантного белка-1 (МСР-1), тем самым замедляя миелоидные супрессорные клетки (МЛСК) и подавляя роста опухоли; (2) увеличения цитотоксических Т-лимфоцитов, таких как CD8 + (CTL), для атаки и уничтожения опухолевых клеток; (3) увеличения Т-хелперных ответов; (4) и усиления воспалительных реакций через ИФНγ и ФНО-a, или, предпочтительнее, индуцируя все из вышеперечисленного. Вакцина может увеличить безопухолевую выживаемость на 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44% и 45%. Вакцина может уменьшить опухолевую массу на 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 , 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59% и 60% после иммунизации. Вакцина может предотвращать и блокировать увеличение моноцитарного хемоаттрактантного белка-1 (МСР-1), цитокина, секретируемого миелоидными клетками-супрессорами. Вакцина может увеличить опухолеспецифическую выживаемость на 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 , 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59% и 60% ,
[173] В некоторых вариантах воплощения изобретения, иммунный ответ может генерировать гуморальный и/или антигенспецифический цитотоксический Т-лимфоцитарный (ЦТЛ) иммунный ответ, не вызывающий повреждения или воспаления различных тканей или систем (например, головного мозга или неврологической системы и др.) у субъекта, к которому применяется вакцина.
[174] В некоторых вариантах воплощения изобретения, вакцина может быть применена периферически (более подробно описано ниже) для установления антиген-специфического иммунного ответа, нацеленного на раковые или опухолевые клетки или ткани, для выведения или устранения рака или опухоли, экспрессирующей один или более раковых антигенов, не повреждая и не вызывая заболевание или смерть субъекта, к которому применяют вакцину.
[175] Применяемая вакцина может усиливать клеточный иммунный ответ субъекта приблизительно 50-6000-кратно, приблизительно 50-500-кратно, приблизительно 50-5000-кратно, приблизительно 50-кратно, приблизительно 4500-кратно, приблизительно 100-1000-кратно, приблизительно 150-6000-кратно, приблизительно 200-6000-кратно, приблизительно 250-6000-кратно или приблизительно 300-кратно до 6000-кратно. В некоторых вариантах воплощения изобретения, вводимая вакцина может усиливать клеточный иммунный ответ у субъекта приблизительно 50- кратно, 100-кратно, 150-кратно, 200-кратно, 250-кратно, 300-кратно, 350-кратно, 400-кратно, 450-кратно, 500-кратно, 550-кратно, 600-кратно, 650-кратно, 700-кратно, 750-кратно, 800-кратно, 850-кратно, 900-кратно, 950-кратно, 1000-кратно, 1100-кратно, 1200-кратно, 1300-кратно, 1400-кратно, 1500-кратно, 1600-кратно, 1700-кратно, 1800-кратно, 1900-кратно, 2000-кратно, 2100-кратно, 2200-кратно, 2300-кратно, 2400-кратно, 2500-кратно, 2600-кратно, 2700-кратно, 2800-кратно, 2900-кратно, 3000-кратно, 3100-кратно, 3200-кратно, 3300-кратно, 3400-кратно, 3500-кратно, 3600-кратно, 3700-кратно, 3800-кратно, 3900-кратно, 4000-кратно, 4100-кратно, 4200-кратно, 4300-кратно, 4400-кратно, 4500-кратно, 4600-кратно, 4700-кратно, 4800-кратно, 4900-кратно, 5000-кратно, 5100-кратно, 5200-кратно, 5300-кратно, 5400-кратно, 5500-кратно, 5600-кратно, 5700-кратно, 5800-кратно, 5900-кратно, или 6000-кратно, по сравнению с клеточным иммунным ответом субъекта, к которому не применяли вакцину.
[176] Вводимая вакцина может увеличить уровни гамма-интерферона (IFN-γ) у субъекта приблизительно 50-6000-кратно, приблизительно 50-5500-кратно, приблизительно 50- 5000-кратно, приблизительно 50-4500-кратно, приблизительно 100-6000-кратно, приблизительно 150- 6000-кратно, приблизительно 200- 6000-кратно, приблизительно 250- 6000-кратно, или приблизительно 300- 6000-кратно. В некоторых вариантах воплощения изобретения, применяемая вакцина может повышать уровни IFN-γ у субъекта приблизительно 50-кратно, 100-кратно, 150-кратно, 200-кратно, 250-кратно, 300-кратно, 350-кратно, 400-кратно, 450-кратно, 500-кратно, 550-кратно, 600- кратно, 650-кратно, 700-кратно, 750-кратно, 800-кратно, 850-кратно, 900-кратно, 950-кратно, 1000-кратно, 1100- кратно, 1200-кратно, 1300-кратно, 1400-кратно, 1500-кратно, 1600-кратно, 1700-кратно, 1800-кратно, 1900-кратно, 2000-кратно, 2100-кратно, 2200-кратно, 2300-кратно, 2400-кратно, 2500-кратно, 2600-кратно, 2700-кратно, 2800-кратно, 2900-кратно, 3000-кратно, 3100-кратно, 3200-кратно, 3300-кратно, 3400-кратно, 3500-кратно, 3600-кратно, 3700-кратно, 3800-кратно, 3900-кратно, 4000-кратно, 4100-кратно, 4200-кратно, 4300-кратно, 4400-кратно, 4500-кратно, 4600-кратно, 4700-кратно, 4800-кратно, 4900-кратно, 5000-кратно, 5100-кратно, 5200-кратно, 5300-кратно, 5400-кратно, 5500-кратно, 5600-кратно, 5700-кратно, 5800-кратно, 5900-кратно, или 6000-кратно, по сравнению с уровнями IFN-γ у субъекта, к которому не применяли вакцину.
[177] Доза вакцины может составлять от 1 мкг до 10 мг активного компонента на килограмм (кг) массы тела во времени (компонент/кг массы тела/время) и может составлять от 20 микрограммов до 10 мг компонента/кг массы тела/время. Вакцину можно вводить каждые 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 или 31 день. Эффективное для лечения количество доз вакцины может составлять 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более доз.
[178] Вакцину или фармацевтическую композицию можно применять различными путями, включая пероральный, парентеральный, сублингвальный, трансдермальный, ректальный, трансмукозальный, местный, ингаляционный, через щеку, внутриплевральный, внутривенный, внутриартериальный, внутрибрюшинный, подкожный, внутримышечный, интраназальный, интратекальный и/или внутрисуставный, или их комбинации. Для ветеринарного использования, композицию можно применять в виде подходящей приемлемой композиции в соответствии с обычной ветеринарной практикой. Ветеринар может легко определить режим дозирования и путь применения, который наиболее подходит для конкретного животного. Вакцину можно применять с помощью традиционных шприцев, безигольных инъекционных устройств, «генных пушек с бомбардировкой микрочастицами» или других физических методов, таких как электропорация («ЭП»), «гидродинамический метод» или ультразвук.
[179] Вектор вакцины может быть введен млекопитающему с помощью нескольких хорошо известных технологий, включая инъекцию ДНК (также называемую ДНК-вакцинацией) с электропорацией и без нее in vivo, липосомную трансфекцию, трансфекцию с участием наночастиц и использование рекомбинантных векторов, таких как рекомбинантный аденовирус, рекомбинантный вирус, ассоциированный с аденовирусом, и рекомбинантная коровья оспа. Один или более раковых антигенов вакцины можно вводить путем инъекции ДНК вместе с электропорацией in vivo.
Электропорация
[180] Вакцину или фармацевтическую композицию можно вводить посредством процесса электропорации. Введение вакцины посредством электропорации может быть выполнено с использованием устройств электропорации, сконфигурированных для доставки импульса энергии в желаемую ткань млекопитающего, эффективного для образования обратимых пор в клеточных мембранах, где, предпочтительно, импульс энергии является постоянным током, отвечающим текущим вводным параметрам, заданным пользователем. Устройство электропорации может содержать компонент электропорации и набор электродов или рукоятку в сборе. Компонент электропорации может включать в себя или состоять из одного или более различных элементов устройств электропорации, в том числе: контроллера, генератора сигналов тока, тестера импеданса, регистратора сигналов, элемента ввода, элемента сообщения о состоянии, порта связи, компонента памяти, источника питания и выключателя. Электропорацию можно проводить с использованием устройства электропорации in vivo, например, системы CELLECTRA® EP (Inovio Pharmaceuticals, Inc., Блу-Белл, Пенсильвания) или электропоратора Eigen (Inovio Pharmaceuticals, Inc.) для облегчения трансфекции клеток плазмидой.
[181] Примеры устройств электропорации и способов электропорации, которые могут облегчать введение ДНК-вакцин, согласно настоящему изобретению, включают описанные в патенте США № 7245963, Draghia-Akli и др., патентной публикации США 2005/0052630, поданной Smith и др., ссылки на содержание которых в полном объеме включены в настоящее описание. Другие устройства электропорации и способы электропорации, которые можно использовать для облегчения введения ДНК-вакцин, включают в себя устройства, представленные в одновременно находящейся на рассмотрении и заявке того же заявителя на патент США, серийный № 11/874072, поданной 17 октября 2007 г., которая заявляет о преимуществе в соответствии с 35 USC 119 (e) для предварительных заявок США Сер. 60/852,149, поданной 17 октября 2006 года, и 60/978,982, поданной 10 октября 2007 года, включенных в настоящий документ в полном объеме.
[182] Патент США № 7245963, авторства Draghia-Akli и соавт. описывает модульные электродные системы и их использование для облегчения введения биомолекулы в клетки выбранной ткани организма или растения. Модульные электродные системы могут содержать множество игольчатых электродов; игл для подкожных инъекций; электрических разъемов, которые обеспечивают проводящую связь от программируемого импульсного контроллера постоянного тока к множеству игольчатых электродов; и источник питания. Оператор может обхватить множество игольчатых электродов, установленных на опорной конструкции, и плотно вставить их в выбранную ткань тела или растения. Затем биомолекулы вводят через подкожную иглу в выбранную ткань. Активируется программируемый контроллер импульсов постоянного тока, и электрический импульс постоянного тока подается на множество игольчатых электродов. Применяемый электрический импульс постоянного тока облегчает введение биомолекулы в ячейку между множества электродов. Ссылки на все содержание патента США № 7245963 полностью включены в настоящее описание изобретения.
[183] Патентная публикация США 2005/0052630, представленная Smith и соавт. описывает устройство электропорации, которое можно использовать для эффективного облегчения введения биомолекулы в клетки выбранной ткани организма или растения. Устройство электропорации содержит электрокинетическое устройство («устройство EKD»), работа которого задается внешним программным обеспечением или встроенным программным обеспечением. Устройство EKD генерирует серию программируемых шаблонных импульсов постоянного тока между массива электродов на основании пользовательского управления и введенных параметров импульсов, и позволяет хранить и получать данные о форме колебаний сигнала тока. Устройство электропорации также содержит сменный электродный диск, имеющий ряд игольчатых электродов, центральный канал для инъекционной иглы и съемный направляющий диск. Ссылки на все содержание патента США. 2005/0052630 полностью включены в настоящее описание изобретения.
[184] Электродный массив и способы, описанные в патентах США №7,245,963 и 2005/0052630 можно адаптировать для глубокого проникновения не только в такие ткани, как мышцы, но и в другие ткани или органы. Из-за конфигурации электродного массива, инъекционная игла также полностью вставляется в целевой орган, и инъекция вводится перпендикулярно целевой ткани в места, которые предварительно заданы электродами. Электроды описаны в патенте США № 7244563 и в патенте США 2005/005263, предпочтительно, являются длиной 20 мм и шириной 21 мм.
[185] Кроме того, в некоторых вариантах воплощения изобретения, которые включают устройства электропорации и их использование, присутствуют устройства электропорации, которые описаны в следующих патентах: патент США 5 273 525, выданный 28 декабря 1993 г., патенты США 6 110 161, выданный 29 августа 2000 г., 6 261 281 выданный 17 июля 2001 г. и 6 958 060, выданный 25 октября 2005 г., и патент США 6 939 862, выданный 6 сентября 2005 г. Кроме того, в настоящем документе рассматриваются патенты, охватывающие предмет, предоставленный в патенте США 6 697 669, выданном 24 февраля 2004 г., который касается введения ДНК с использованием любого из множества устройств и патент США 7,328,064, выданный 5 февраля 2008 г., на способ инъекции ДНК. Ссылки на вышеуказанные патенты включены в данное описание во всей их полноте.
Способы приготовления вакцины
[186] В настоящем документе предложены способы получения плазмидных ДНК, обсуждаемых в данном документе. После заключительной стадии субклонирования в экспрессирующую плазмиду млекопитающего, плазмидные ДНК могут быть использованы для инокуляции культуры клеток в крупномасштабном ферментере с использованием известных в данной области способов.
[187] ДНК-плазмиды, предназначенные для использования с устройствами электропорации, согласно настоящему изобретению, могут быть составлены или изготовлены с использованием комбинации известных устройств и методик, но, предпочтительно, они изготавливаются с использованием оптимизированной технологии изготовления плазмиды, которая описана в опубликованной заявке США №. 20090004716, которая была подана 23 мая 2007 года. В некоторых примерах, ДНК-плазмиды, использованные в этих исследованиях, могут быть составлены в концентрациях, превышающих или равных 10 мг/мл. Технологии производства также включают или охватывают различные устройства и протоколы, хорошо известные специалистам в данной области техники, в дополнение к тем, которые описаны в заявке США под серийным номером 60/939792, включая те, которые описаны в лицензированном патенте США №. 7,238,522, выданном 3 июля 2007 г. Вышеупомянутая заявка и патент, серийный номер США 60/939,792 и патент США № 7,238,522, соответственно, полностью включены в настоящий документ.
[188] Настоящее изобретение имеет множество аспектов, иллюстрируемых следующими примерами, но, не ограничиваясь ими.
ПРИМЕРЫ
[189] Настоящее изобретение дополнительно проиллюстрировано в следующих примерах. Следует понимать, что, хотя эти примеры и указывают предпочтительные варианты воплощения изобретения, они приведены только в качестве иллюстрации. Специалист в данной области техники может определить основные характеристики этого изобретения используя приведенные выше обсуждения и данные примеры и, не отступая от сущности изобретения и объема, она может вносить различные изменения и модификации изобретения для его адаптации к различным применениям и условиям. Таким образом, различные модификации изобретения в дополнение показанным и описанным здесь, будут очевидны для специалистов в данной области техники из предшествующего описания. Такие модификации также попадают в объем прилагаемой формулы изобретения.
Пример 1: Генерация консенсусной последовательности мезотелина
[190] В GenBank были опубликованы три варианта мезотелина. Варианты 1 и 2 на 98% идентичны на нуклеотидном уровне, а вариант 3 представляет собой частичную последовательность с альтернативно-сплайсированным С-концом, нарушающим область заякоривания ГФИ. Указано, что все три варианта транскрипта экспрессируются раковыми клетками человека. На основании анализа последовательности, вакцина, нацеленная на вариант 1, также будет нацеливаться на большую часть последовательностей вариантов 2 и 3. Кроме того, вариант 1 является основным транскриптом, экспрессируемым в опухолях яичников. Поэтому вариант 1 был выбран в качестве мишени для вакцины.
[191] Для создания человеческого консенсусного мезотелина, из GenBank было скачано 14 последовательностей мезотелина (www.ncbi.nlm.nih.gov/genbank/). Коды доступа GenBank для выбранных последовательностей мезотелина: NP_005814.2, BAA08419.1, AAH09272.1, AAV87530.1, AAH03512.1, XP_008959182.1, AAC50348.1, XP_009428309.1, XP_007978969.1, XP_011822299.1, XP_011817841.1, XP_011822298.1, XP_009193880.1 и XP_011817843.1.
[192] Консенсусная последовательность была создана с использованием программного пакета DNASTAR® Lasergene (версия 13.0.0.357). Последовательности мезотелина из GenBank были импортированы в MegAlign и выровнены с использованием программы выравнивания множественных последовательностей ClustalW. Полученная консенсусная последовательность мезотелина (SEQ ID NO: 1) имеет 95,8% гомологию с нативным мезотелином человека.
Пример 2: Введение мутаций для упразднения функции мезотелина
[193] Для упразднения потенциальной биологической функции вырабатываемого консенсусного белка мезотелина, была введена одна мутация, приводящая к устранению связывания MUC16/CA125. Кроме того, были введены две мутации, нарушающие привязку ГФИ. Обоснование введения этих мутаций описано ниже.
MUC16/CA125-связанная мутация
[194] Усеченный мутагенез использовали для идентификации сайта связывания мезотелина для MUC16/CA125 (ФИГ. 1). Как показано на ФИГ. 1, предшественник мезотелина (71 кДа) расщепляется на два продукта: потенцирующий фактор мегакариоцитов 30 кДа (MPF; остатки Ser34-Arg286) и, ГФИ-заякоренный, связанный с мембраной протеин зрелого мезотелина 41 кДа (светло-серый), начиная с Glu296. Область протеолитического расщепления (заштрихованная серым) содержит сайт расщепления фурином в Arg295 и другие сайты расщепления протеазой, включая сайт расщепления трипсином в Arg286. Указаны четыре предсказанных N-связанных гликана (черные «леденцы на палочке»; Asn57, Asn388, Asn488 и Asn515) на мезотелине. Усеченные мутанты (районы I, II, III, IAB, IBC, IA, IB и IC) генерировались в виде слитых белков Fc кролика для последовательного сужения CA125-связывающего домена мезотелина.
[195] Как показано на ФИГ. 5 (Kaneko et al., JBiol Chem, 2009 Feb 6; 284 (6): 3739-49), замена тирозина в положении 318 аланином (Y318A) полностью нарушает взаимодействие с CA125. Мутация аланина в Glu324 (E324A; KD 42,4 нМ) и Trp321 (W321A; KD 19,5 нМ) снижает связывание мезотелина с CA125. Мутация аланина в His354 (H354A) не изменяет мезотелин-CA125 взаимодействия (KD 2,71 нМ).
[196] И, как показано на ФИГ. 4 (Kaneko et al., J Biol Chem, 2009 Feb 6; 284 (6): 3739-49), вестерн-блот-анализ аланиновых мутантов в области IAB (296-359) демонстрирует дифференциальное связывание. Мутации аланина в Tyr318 (Y318A) и Glu324 (E324A) устраняют связывание мезотелина с CA125. Мутация аланина в Trp321 (W321A) частично снижает связывание мезотелина с CA125. Мутация аланина в His354 не изменяет мезотелин-CA125 взаимодействие.
[197] Наконец, как показано на ФИГ. 6 (Kaneko et al., J Biol Chem, 2009 Feb 6; 284 (6): 3739-49), для количественного измерения связывания CA125 использовали интенсивность флуоресценции (среднее геометрическое). Связывание полноразмерной зрелой формы мезотелина (FULL) с CA125 определяли, как 100%. Область I (296-390), область IAB (296-359) и мутант HAB4A IAB связывались с CA125 значительно сильнее, чем любые другие перечисленные фрагменты или мутанты (*, p <0,05). Мутация Y318A значительно снижает связывание по всей длине, по сравнению со зрелой формой мезотелина. Основываясь на этих результатах, мутация Y318A была введена в конечную синтетическую консенсусную последовательность мезотелина.
ГФИ-заякоренный сайт
[198] ГФИ-заякоренная сигнальная последовательность состоит из гидрофобной области, отделенной от сайта присоединения ГФИ (ко-сайта) гидрофильным регионом спейсера (ФИГ. 2). Сайт прикрепления является первым из трех смежных аминокислот, имеющих короткие боковые цепи. За ним должна следовать короткая спейсерная последовательность, которая обычно неструктурирована, а затем карбоксиконцевая гидрофобная сигнальная последовательность. (Mayor, S. & Riezman, H. Nature reviews. Molecular cell biology 5 (2004)). Ко-сайт мезотелина был мутирован с серина на треонина. Ко+2 мезотелина был мутирован с треонина на валин.
Как показано в таблице 1, синтетическая консенсусная белковая последовательность мезотелина имеет 95,2% идентичность с нативным мезотелином человека.
Таблица 1
Пример 3: Характеристика синтетического консенсуса мезотелинового конструкта
[199] Как только была получена синтетическая консенсусная последовательность мезотелиновой ДНК, для получения более высокого уровня экспрессии к N-концу были добавлены вышестоящая последовательность Козак и лидерная последовательность IgE. (Yang, J. S. et al. The Journal of infectious diseases 184, 809-816 (2001).). Кроме того, использование кодона гена было адаптировано к смещению кодонов генов Homo sapiens (Andre, S. et al. Journal of virology 72, 1497-1503 (1998); Demi, L. et al. Journal of virology 75, 10991-11001 (2001)). Также, оптимизацию РНК проводили таким образом, чтобы избегать областей с очень высоким (> 80%) или очень низким (<30%) содержанием GC-пар и мотивов цис-последовательностей, таких как внутренние боксы TATA, chi -сайты и сайты связывания рибосом (Muthumani, K. et al. Virology 314, 134-146 (2003); Muthumani, K. et al. Virology 314, 134-146 (2003)).
[200] Схематическое представление синтетической консенсусной конструкции мезотелина показано на ФИГ. 3. Звездочка (*) обозначает мутации отмены связывания MUC16 и прикрепления ГФИ. Нуклеотидная последовательность (SEQ ID NO: 1) и аминокислота (SEQ ID NO: 2) синтетического консенсусного мезотелина представлены в таблице 16 и таблице 17 соответственно. Аннотация элементов SEQ ID NO: 2 и соответствующих аминокислотных положений представлена в Таблице 2.
Таблица 2
Описание | Аминокислотная позиция |
Лидерная последовательность IgE | 1-18 |
Мезотелин-кодирующий сайт | 19-607 |
Мутация устранения связывания MUC16/CA125 | Y303A |
Мутация разрыва ГФИ-связывания | S583T |
T585V |
[201] Для лучшего понимания возможных структурных эффектов белка в процессе синтеза синтетического консенсуса, была создана сравнительная модель молекулярного предшественника MPF и мезотелина. Несколько элементов вторичной структуры были использованы для выравнивания и генерации модели. Предсказанный сайт гликозилирования имеет правильную ориентацию на поверхности модели. Часть мезотелина в данной модели была экстраполирована из работы, проделанной Sathyanarayana и соавт. и была смоделирована, как серия повторений ARM. (Sathyanarayana, B. K., Hahn, Y. et al. BMC structural biology 9, 1 (2009)). Ссылка на Sathyanarayana не описывает места дисульфидной связи. Эта функция рассматривается в улучшенной модели и правильно ориентирована локально. Кроме того, на поверхности модели доступны потенциальные N-связанные гликозиды.
[202] Характеристики синтетического консенсусного мезотелина приведены в таблице 3.
Таблица 3
Характеристики | Синтетический консенсусный мезотелин |
Идентичность с нативным мезотелином человека | 95.2% |
Идентичность с нативным мезотелином макаки-резус | 90.3% |
Идентичность с нативным мезотелином мыши | 58.1% |
Количество аимнокислотных мутаций (в соотношении с нативным человеческим) | 28 |
Количество вставок мутаций (не-консенсусного происхождения) | 3 |
Молекулярный вес | 609 ак (67 KDa) |
Длина кодирующей последовательности (п.н.) | 1827 |
Пример 4: Конструкция и структура плазмиды
[203] Основой вектора является pGX0001, модифицированный экспрессирующий вектор pVAX1 размером 2998 п.н. под контролем промотора цитомегаловируса человека немедленно-раннего ответа (промотор hCMV). Исходный pVAXl был получен в компании Thermo Fisher Scientific. Основа вектора pGX0001 включает ген устойчивости к канамицину (KanR) и плазмидный источник репликации (pUC ori) для наработки. Эти элементы не функционируют в эукариотических клетках. Карта и описание модифицированного вектора экспрессии pVAXl (pGX0001) показана на ФИГ. 4.
[204] Для создания pGX0001 были внесены изменения в pVAXl. Эти модификации перечислены в Таблице 4, в связи с которыми не было обнаружено никаких проблем, касающихся амплификации плазмиды, транскрипции и трансляции антигена. При использовании pGX0001 в качестве основы, до настоящего времени не наблюдалось никаких дальнейших изменений в последовательности pGX0001. Пары оснований 2, 3 и 4 заменены с ACT на CTG в основе, предшествующей промотору ЦМВ.
Таблица 4
Модификация | Пары оснований | Описание |
OG | 241 | В промоторе ЦМВ |
OT | 1158 | Основа, ниже сигнальной последовательности полиаденилирования гормона роста крупного рогатого скота (bGH поли-A) |
A> - | 2092 | Основа, ниже гена устойчивости к канамицину |
C>T | 2493 | в плазмидном источнике репликации pUC (pUC ori) |
G>C | 2969 | В самом конце pUC Ori выше сайта RNASeH |
[205] Синтезированный синтетический консенсусный мезотелин разрезали рестриктазами BamHI и Xhol и клонировали в pGX0001 с экспрессионной кассетой, контролируемой промотором транскрипции цитомегаловируса немедленного-раннего ответа. Полученная плазмида была названа pGX1430. Для подтверждения правильности сборки плазмиды было выполнено ее секвенирование по всей длине, результат проанализирован и подтвержден двумя аналитиками. Принципиальная схема pGX1430 представлена на ФИГ. 5.
Пример 5: In Vitro экспрессия антигена
[206] Подтверждение экспрессии белка антигена вектором pGX1430 проводили вестерн-блоттингом. Клетки человеческой рабдомиосаркомы (RD) (ATCC, CCL-136), культивируемые в среде DMEM с 10% ФБС (ThermoFisher), трансфицировали векторами pGX1430 или pGX0001 (6 мкг/10 см2) с использованием турбофектина 8 (Origene). Через сорок восемь часов после трансфекции, клетки лизировали с использованием лизирующего буфера для клеток RIPA (ThermoFisher), лизат клеток собирали. После определения концентрации общего белка методом BCA (ThermoFisher), 15 пг клеточного лизата подвергали электрофорезу в 4-12% геле СДС-PAGE (ThermoFisher), определение проводили с использованием коммерческих анти-мезотелиновых антител (клон Cell Signaling Technology D4X7M) и визуализировали с помощью анти-кролиных антител IgG (Santa Cruz Biotech # sc-2004), конъюгированных с пероксидазой хрена (HRP), с использованием системы для анализа вестерн-блота ECL (GE Healthcare). В качестве контроля загрузки, блоты повторно исследовали относительно экспрессии актина с использованием анти-3-актин моноклональных антител (Santa Cruz Biotech, клон C4).
[207] Размер предшественника мезотелина человека составляет 70 кДа с расщепленными гликозилированными формами 46-48 кДа, тогда как синтетический консенсусный предшественник мезотелина составляет 64,28 кДа с расщепленными гликозилированными формами 35-37 кДа. Как показано на ФИГ. 6, белковая полоса ожидаемой молекулярной массы была обнаружена для pGX1430 (64,28 кДа). Белковых полос в лунке с pGX0001 не было обнаружено. Были обнаружены анти-β-актиновые полосы одинаковой интенсивности, что указывало на загрузку одинакового количества белка в каждую лунку.
Пример 6: Иммуногенность синтетических консенсусных вакцинных конструкций мезотелина
Животные и иммунизации
[208] Самок мышей CB6F1 в возрасте 8 недель закупали в Jackson Laboratories. Все животные содержались в помещении с регулируемой температурой и сменой режима освещенности в BTS Research (Сан-Диего, Калифорния). Уход за животными осуществлялся в соответствии с руководящими принципами Национального института здравоохранения и Предложениями по уходу и использованию животных (ACUP) (BTS ACUP # 15-091). Мыши были разделены на пять групп, как показано в Таблице 5.
Таблица 5
Группа | n | Конструкт | Дозировка конструкта (мкг) | Объем введения (мкл) |
1 | 4 | pGX0001 | 30 | 30 |
2 | 8 | pGX1430 | 10 | 30 |
3 | 8 | pGX1430 | 20 | 30 |
4 | 8 | pGX1430 | 30 | 30 |
5 | 8 | pGX1430 | 50 | 30 |
[209] Мышей в иммунизированных группах вакцинировали указанными дозами pGX0001 или pGX1430 в соответствии с СОП R20-003147 CELLECTRA® 3P Mouse Treatment. Вкратце, плазмиды разводили в стерильной воде для инъекций (VetOne) так, чтобы указанная доза могла быть доставлена путем внутримышечной инъекции в переднюю мышцу большеберцовой кости при объеме инъекции 30 мкл. За каждой внутримышечной инъекцией немедленно следовала электропорация (ЕР) с использованием адаптивного устройства постоянного тока для электропорации CELLECTRA® 2000 с решеткой 3P (Inovio Pharmaceuticals). Устройство было настроено на подачу двух импульсов 0,1 А с шириной импульса 52 мс, с интервалом 1 секунда. Мыши получали 3 иммунизации в интервале 3 недель. Мышей умерщвляли через три недели после последней иммунизации, селезенки изымали для проведения исследования клеточного иммунного ответа. Никакую другую ткань не изымали.
Выделение лимфоцитов селезенки
[210] Спленоциты выделяли асептически и помещали в 5 мл среды R10 (среда 1640 Института памяти Роузвелла Парка, дополненная 10% эмбриональной бычьей сывороткой и 1% антибиотиком-антимикотиком). Спленоциты выделяли путем механического разрушения селезенки с использованием аппарата Stomacher (Seward Laboratory Systems Inc.), полученный продукт фильтровали с использованием сита для клеток диаметром 40 мкм (BD Falcon). Полученный продукт центрифугировали, осадок обрабатывали в течение 5 минут лизирующим буфером ACK (Lonza) для лизиса эритроцитов. Затем, спленоциты центрифугировали, промывали в ФСБ и ресуспендировали в среде R10, после чего их немедленно использовали для дальнейшего анализа.
Метод иммуноферментных пятен (ELISpot) ИФНy
[211] Для оценки антигенспецифических клеточных ответов мышей проводили анализ ELISpot (MabTech) ИФНy. Девяносто шесть луночных планшетов, предварительно покрытых антителами против мышиного ИФНy, промывали в ФСБ и блокировали в течение 2 часов при комнатной температуре с помощью полной культуральной среды (RPMI 1640 с добавлением 10% ФБС и антибиотиков). Лимфоциты селезенки ресуспендировали в среде R10 (а затем добавляли в трех повторах при исходном количестве 2×105 клеток на лунку). Синтезировали набор пептидов (GenScript), каждый из которых содержал 15 аминокислотных остатков, перекрывающих 11 аминокислот, представляющих полную последовательность синтетического консенсусного белка мезотелина. Указанные наборы пептидов ресуспендировали в ДМСО (Sigma) и объединяли в два пептидных пула с пептидной концентрацией ~ 2 пг/мл. Пептидный пул содержал пептиды, соответствующие синтетическому консенсусному белку антигена мезотелина. Конкавалин А (Sigma) в концентрации 5 пг/мл использовали в качестве положительного контроля, а полную культуральную среду использовали в качестве отрицательного контроля. Планшеты инкубировали в течение 18 часов при 37°С в инкубаторе с 5% содержанием атмосферного СО2. Затем добавляли биотинилированные анти-мышиные антитела к ИФНy (MabTech), планшеты инкубировали в течение 2 часов при комнатной температуре. Планшеты промывали и добавляли стрептавидин-ALP антитела (MabTech), после чего планшеты инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре.
[212] Детекцию пятна выполняли в соответствии с инструкциями к набору от производителя (MabTech). Пятна на планшетах подсчитывали с использованием автоматического считывателя ELISPOT (Cellular Technology). Для отображения данных, среднее количество пятнообразующих единиц (СОЕ) было установлено как 1×106 спленоцитов. Антигенспецифические ответы ИФНy ELISpot представлены числом пятнообразующих единиц ИФНy (СОЕ), которое на 1×106 спленоцитов, больше, чем СОЕ в отрицательном контроле (только в среде).
[213] Иммуногенность синтетического консенсусного конструкта мезотелина оценивали для четырех дозировок (10 мкг, 20 мкг, 30 мкг и 50 мкг) с помощью ИФНy ELISpot и проточной цитометрии (n=8/группа). В качестве отрицательного контроля, мышей (n=4/группа) иммунизировали пустой плазмидной основой (pGX0001). По сравнению с мышами, вакцинированными отрицательным контролем, вакцинация синтетическим консенсусным мезотелином (pGX1430) вызывала клеточные иммунные ответы. Величина синтетической консенсусной специфической продукции мезотелина ИФНy, определенная ELISpot, была дозозависимой при дозах 10 и 20 пг (ФИГ.7A и ФИГ.7B) с аналогичным максимальным иммунным ответом, достигаемым при дозах 30 и 50 пг. В частности, синтетический консенсусный мезотелиновый ИФНy СОЕ составил 1345 ± 1290, 2241 ± 1721, 2242 ± 1932 и 2004 ± 674 при 10, 20, 30 и 50 пг соответственно. Ответ на консенсусный синтетический мезотелиновый ИФНy были значительно выше, чем ответ на наивный, при дозах 10 мкг (р=0,004), 20 мкг (р=0,004), 30 мкг (р=0,004) и 50 мкг (р=0,004) pGX1430. Ответы ИФНy суммированы в Таблице 6.
Таблица 6
Конструкт | Доза | Среднее СОЕ ± Станд. откл. | p-значение |
pGX0001 | 30 пг | 6 ± 7 | n/a |
pGX1430 | 10 пг | 1345 ± 1290 | 0.004 |
20 пг | 2241± 1721 | 0.004 | |
30 пг | 2242 ± 1932 | 0.004 | |
50 пг | 2004 ± 674 | 0.004 | |
Статистическая значимость, принятая на уровне p <0,013. Указанные значения p относятся к наивным (иммунизированным pGX0001 мышам). |
Проточная цитометрия
[214] Клеточные иммунные ответы, индуцированные синтетическим консенсусным мезотелином, были дополнительно охарактеризованы с использованием метода проточной цитометрии. 2×106 спленоцитов, полученных от вакцинированных и наивных мышей, стимулировали сразу же после выделения синтетическими консенсусными пептидами мезотелина в течение 6 часов в присутствии анти-мышиных антител CD107a (BD Biosciences) к брефельдину A (BD Biosciences), монензину (BD Biosciences) и флуоресцин изотиоцианату (FITC). После стимуляции пептидами, спленоциты центрифугировали и ресуспендировали в растворе мышиных Fc-блокаторов BD (BD Biosciences) в количестве 20 мкл на лунку. Раствор Fc-блокатора используют при начальном разведении 1:40 в ФСБ и инкубируют при 4°С в течение 5 минут.
[215] После инкубации, оставшиеся внеклеточные антитела (в ФСБ) добавляют по 30 мкл на лунку и инкубируют при 4°С в течение 30 минут. После добавления внеклеточного красителя, конечный объем раствора в каждой лунке составляет 50 мкл, состоящий из Fc-блокатора в конечном разведении 1: 100 и внеклеточных антител в их соответствующих рабочих разведениях. Затем клетки окрашивают витальным красителем (Vivid, Thermo-Fisher) и следующими внеклеточными антителами: анти-мышиные CD3e АРС-Cy7, анти-мышиные CD4-PerCP-Cy5.5 и анти-мышиные CD8a АРС (BD Biosciences) антитела. Затем, внутриклеточные цитокины окрашивают следующими антителами: BV605 анти-мышиного ИФНy, APC-R700 анти-мышиного ИЛ-2 и PE анти-мышиного ФНО-a (BD Biosciences).
[216] Данные ICS были получены с помощью 10-цветного FACS CANTO (BD Biosciences), завершение анализа проводили с использованием FlowJo. Стратегия стробирующей проточной цитометрии показана на ФИГ. 8. Для присвоения клетке статуса антигенспецифичной с помощью проточной цитометрии, частота сообщаемого параметра должна превышать частоту параметра отрицательного контроля (только среды). Для идентифицирования клетки, как продуцирующей антигенспецифичный CD 107a, клетка также должна быть идентифицирована в качестве позитивной относительно антигенспецифической продукции ИФНy и/или ИЛ-2 и/или ФНОa булевым стробированием.
[217] Синтетический консенсусный мезотелин вызывал более устойчивые ответы в компартменте Т-клеток CD8 +, по сравнению с ответами в компартменте Т-клеток CD4 + (ФИГ. 9A-9D). Синтетический консенсусный мезотелин индуцировал частоту антиген-специфических ответов CD4+Т-клеток, которые были значительно более устойчивыми, чем наивные (0,09% ± 0,07%), группах дозировок пг (0,29% ± 0,20%) (р <0,004), 20 пг (0,50% ± 0,30). %) (p <0,004), 30 пг (0,42% ± 0,24%) (p <0,004) и 50 пг (0,38% ± 0,17%) (p <0,004) (ФИГ. 9A). Синтетический консенсусный ответ мезотелин-специфических CD4+Т-клеток был дозозависимым при дозах 10 и 20 пг, но не при дозах 30 и 50 пг, и состоял в основном из ИФНy-ИЛ-2-ФНОa +, ИФНy+ИЛ-2-ФНОa-, ИФНy-ИЛ-2+ФНОa+или ИФНy+ИЛ-2+ФНОa +, продуцирующих CD4+T-клетки (ФИГ. 9C). Частота антигенспецифических CD4+Т-клеток более подробно представлена в Таблице 7.
Таблица 7
Синтетический консенсусный мезотелин CD4+Т-клеток | |||
Конструкт | Доза | %CD4+ ± Станд. откл. | p-значение |
pGX0001 | 30 пг | 0.09 ±0.07 | n/a |
pGX1430 | 10 пг | 0.29 ±0.20 | 0.004 |
20 пг | 0.50 ±0.30 | 0.004 | |
30 пг | 0.42 ± 0.24 | 0.004 | |
50 пг | 0.38 ±0.17 | 0.004 | |
Статистическая значимость, принятая на уровне p <0,013. Указанные значения p относятся к наивным (иммунизированным pGX0001 мышам). |
[218] Частота антиген-специфических CD8+T-клеток, индуцированных синтетическим консенсусным мезотелином, увеличилась, по сравнению с контролем, во всех дозовых группах (ФИГ. 9B). В частности, частота антиген-специфических CD8+Т-ответов в группах, иммунизированных 10 мкг (0,64% ± 0,42%) (р=0,016), 20 мкг (0,70% ± 0,48%) (р=0,028), 30 мкг (0,97% ± 0,96%) (р=0,008) и 50 пг (1,00% ± 0,22%) (р=0,004) pGX1430 была значительно более устойчивой при более высоких дозах, по сравнению с наивными (0,15% ± 0,04%). Синтетический консенсусный ответ мезотелин-специфических CD8+T-клеток увеличивался с увеличением дозы и состоял в основном из ИФНy+ИЛ-2-ФНОa-продуцирующих CD8+T-клеток (ФИГ. 9D). Частота антигенспецифических CD8+T-клеток более подробно описана в Таблице 8.
Таблица 8
Синтетический консенсусный мезотелин CD8+Т-клеток | |||
Конструкт | Доза | %CD8+ ± Станд. Откл. | p-значение |
pGX0001 | 30 пг | 0.15 ±0.04 | n/a |
pGX1430 | 10 пг | 0.64 ± 0.42 | 0.016 |
20 пг | 0.70 ± 0.48 | 0.028 | |
30 пг | 0.97 ± 0.96 | 0.008 | |
50 пг | 1.00 ±0.22 | 0.004 | |
Статистическая значимость, принятая на уровне p <0,013. Указанные значения p относятся к наивным (иммунизированным pGX0001мышам). |
[219] Все дозы синтетического консенсусного мезотелина индуцировали частоту CD4+CD107a+T-клеток, которая была выше, чем у наивного (0,01% ± 0,01%). В частности, частота антиген-специфических CD4+CD107a+T-клеток составила 0,10% ± 0,11%, 0,20% ± 0,13%, 0,16% ± 0,13% и 0,15% ± 0,11% в дозовых группах 10 пг (р=0,004), 20 пг (р=0,004), 30 пг (р=0,016) и 50 пг (р=0,004) соответственно (ФИГ. 10А). Цитокиновый профиль синтетических консенсусных мезотелин-специфических CD4+CD107a+T-клеток был сходным в разных дозовых группах и состоял в основном из ИФНy+ИЛ-2+ФНОa +, ИФНy+ИЛ-2+ФНОa +, ИФНy+ИЛ-2+ ФНОa + (ФИГ 10C). Частота антиген-специфических CD4+T-клеток с цитолитическим потенциалом дополнительно детализирована в Таблице 9.
Таблица 9
Синтетический консенсусный мезотелин CD4+Т-клеток | |||
Конструкт | Доза | %CD4+CD107a+ ± Станд. откл. | p-значение |
pGX0001 | 30 пг | 0.01 ± 0.01 | n/a |
pGX1430 | 10 пг | 0.10 ±0.11 | 0.004 |
20 пг | 0.20 ±0.13 | 0.004 | |
30 пг | 0.16 ±0.13 | 0.016 | |
50 пг | 0.15 ± 0.11 | 0.004 | |
Статистическая значимость, принятая на уровне p <0,013. Указанные значения p относятся к наивным (иммунизированным pGX0001 мышам). |
[220] Подобно количеству антиген-специфических CD8+T-клеток, синтетический консенсусный мезотелин индуцировал значительное изменение частоты CD8+CD107a+T-клеток среди всех групп, по сравнению с наивными (0,05% ± 0,02%) (ФИГ. 10C). В частности, частота антиген-специфических CD8+CD107a+T-клеток составляла 0,27% ± 0,22%, 0,57% ± 0,43%, 0,83% ± 0,85% и 0,90% ± 0,24% в дозовых группах 10 пг (р=0,008), 20 пг (р=0,028), 30 пг (р=0,004) и 50 пг (р=0,004) соответственно (ФИГ. 10А). Профиль цитокинов синтетических консенсусных мезотелин-специфических CD8+CD107a+T-клеток был сходным во всех дозовых группах, и большинство являлось ИФНy+ИЛ-2-ФНОa- (ФИГ.10D), за исключением группы, получавшей 10 пг, в которой профиль большинства состоял из ИФНy+ИЛ-2+ФНОa+и ИФНy+ИЛ- 2+ФНОa +. Частота антигенспецифических CD8+Т-клеток с цитолитическим потенциалом более подробно описана в Таблице 10.
Таблица 10
Synthetic Consensus Mesothelin CD8*CD107a*T cells
Синтетический консенсусный мезотелин CD8+Т-клеток | |||
Конструкт | Доза | %CD8+CD107a+ ± Станд. откл. | p-значение |
pGX0001 | 30 пг | 0.05 ± 0.02 | n/a |
pGX1430 | 10 пг | 0.27 ±0.22 | 0.008 |
20 пг | 0.57 ± 0.43 | 0.028 | |
30 пг | 0.83 ± 0.85 | 0.004 | |
50 пг | 0.90 ± 0.24 | 0.004 | |
Статистическая значимость, принятая на уровне p <0,013. Указанные значения p относятся к наивным (иммунизированным pGX0001 мышам). |
[221] В целом, никаких существенных различий каких-либо представленных данных иммунных ответов между иммунизированными группами не было (то есть, результаты для 10 пг не были значительно ниже, чем для 50 пг и т.д.)
Статистический анализ
[222] Статистический анализ был выполнен с использованием IBM SPSS Statistics 22 (IBM Corporation). Во многих сравнениях, для данных не было продемонстрировано нормального распределения. По этой причине, для всех анализов использовался U-критерий Манна-Уитни, а для многократных сравнений - специальная поправка Бонферрони. Статистическая значимость установлена при p <0,013 (0,05/4 сравнения=0,0125).
Заключение
[223] Синтетический консенсусный мезотелин увеличивал частоту антиген-специфических CD4 +, CD4+CD107a+и CD8 +, CD8+CD107a+T-клеток, по сравнению с наивными, хотя величина ответа была намного более устойчивой в компартменте CD8+T-клеток.
Пример 7: Моновалентное исследование синтетического консенсусного мезотелина на низших приматах
[224] Для исследования потенциала синтетического консенсусного мезотелина отдельно и в сочетании с низкой и высокой дозами ИЛ-12, восемнадцать взрослых макак-резус, каждой из которых был присвоен уникальный идентифицирующий номер NHP, были разделены на 3 группы по 6 и иммунизированы pGX1430 следующим образом. Шесть животных были иммунизированы 3,0 мг pGX1430 (группа 1), шесть - 3,0 мг pGX1430 плюс 0,04 мг pGX6006 (выбранный резус ИЛ-12) в качестве адъюванта (группа 2) и шесть - 3,0 мг pGX1430 плюс 0,20 мг pGX6006 (выбранный резус ИЛ-12) в качестве адъюванта (группа 3), растворы готовили в стандартном солевом растворе для инъекционного объема 1,0 мл. Иммунизационные инъекции вводили на 0, 4, 8 и 12 неделе с необязательной пятой иммунизацией. Все иммунизации проводили внутримышечно с помощью устройства CELLECTRA® 2000 5P-IM EP с объемом инъекции 1 мл, со стерильной водой для инъекций, с чередованием контралатеральных конечностей. Условия ЭП были следующими: OpBlock 0070 - IM, 0,5 А, 3 импульса, 52 мс, 0,2 с между импульсами. Иммуногенность мезотелина оценивалась на 2, 6, 10 и 14 неделях.
[225] Идентификация животных, происхождение, пол и вес для групп 1-3 представлены в Таблице 11.
Таблица 11
Группа/доза | ID | Происхождение (если известно) | Пол | Вес (кг) |
6864 | Китайский резус | Ж | 4.5 | |
6870 | Китайский резус | Ж | 4.0 | |
1 | 6876 | Китайский резус | Ж | 4.1 |
6882 | Китайский резус | M | 4.0 | |
6889 | Китайский резус | M | 4.4 | |
6896 | Китайский резус | M | 3.9 | |
6865 | Китайский резус | Ж | 4.7 | |
6871 | Китайский резус | Ж | 4.4 | |
6877 | Китайский резус | Ж | 4.4 | |
2 | 6884 | Китайский резус | M | 4.3 |
6890 | Китайский резус | M | 3.9 | |
6897 | Китайский резус | M | 3.8 | |
6866 | Китайский резус | Ж | 4.1 | |
6872 | Китайский резус | Ж | 4.4 | |
3 | 6878 | Китайский резус | Ж | 4.2 |
6885 | Китайский резус | M | 4.6 | |
6891 | Китайский резус | M | 4.6 | |
6898 | Китайский резус | M | 4.2 |
Изоляция МКПК
[226] Цельную кровь низших приматов собирали в пробирки для приготовления клеток с цитратом натрия (CPT BD Biosciences), содержащие антикоагулянт и гелевый барьер. Перед доставкой в течение ночи, цельную кровь после забора центрифугируют как можно быстрее (в течение 2 часов), для отделения и сконцентрирования МКПК. Эритроциты и нейтрофилы оседают на дно пробирок и удерживаются на месте гелевым барьером. Плазма и лимфоциты остаются выше гелевого барьера. Каждая пробирка для приготовления клеток (CPT) может вмещать ~ 8 мл крови и доставляться при комнатной температуре. По прибытии в доклиническую лабораторию в Сан-Диего, отцентрифугированные пробирки СРТ используют для изоляции МКПК. После лизиса эритроцитов аммонийно-хлоридно-калиевым (AХK) буфером, жизнеспособные клетки подсчитывали с использованием автоматического счетчика клеток Invitrogen CountessTM и ресуспендировали в полной питательной среде (RPMI 1640 с добавлением 10% ФБС, антибиотиков и β-меркаптоэтанола). После завершения анализов, описанных в этом отчете, оставшиеся МКПК были заморожены в средах для заморозки (10% ДМСО (Sigma) и 90% ФБС (Seradigm)) в криопробирках и долгое время хранились в жидком азоте.
Метод иммуноферментных пятен (ELISpot) ИФНy
[227] Для оценки антиген-специфических клеточных ответов, индуцированных вакциной, в каждый момент времени проводили анализ ELISpot ИФНy обезьян с изолированными МКПК и с использованием набора (MabTech IFNy ELISpotPro, # 3421M-2APW-10). Вкратце, 96-луночные планшеты, предварительно покрытые анти-обезъяньими ИФНy антителами (mAb MT126L), промывали в ФСБ и блокировали в течение 2 часов при комнатной температуре с использованием полной культуральной среды (RPMI 1640 с добавлением 10% ФБС, антибиотиков и β-меркаптоэтанола). МКПК низших обезьян были ресуспендированы в среде RIO, а затем добавлены в трех повторах с исходным количеством 2×105 клеток на лунку. Был синтезирован набор пептидов (GenScript), каждый из которых содержал 15 аминокислотных остатков, с 11 перекрывающимися аминокислотами, представляющими целые последовательности синтетического консенсусного белка. Эти наборы пептидов ресуспендировали в ДМСО (Sigma) и объединяли с концентрацией приблизительно 2 пг/мл каждого соответствующего пептида в пулы. Все антигенспецифичные объединенные пептиды использовали в соотношении 1: 100, то есть в финальном разведении 1: 200 в каждой лунке в сочетании с МКПК. Было получено четыре пула для мезотелина.
[228] В качестве положительного контроля использовали анти-CD3 (mAh CD-2 Mabtech) и/или PMA (Sigma) с иономицином (Sigma). Полная культуральная среда R10 была использована в качестве отрицательного контроля. Планшеты инкубировали в течение приблизительно 18 часов при 37°С в инкубаторе с 5% атмосферного СО 2. После удаления клеток и добавления анти-обезъяньих- ALP-конъюгированных антител к ИФНy (MabTech Ab 7-B6-1-ALP), планшеты инкубируют в течение 2 часов при комнатной температуре. Затем проводят сэндвич-иммуноферментный анализ с использованием субстратного раствора БХИВ/НСТ в соответствии с инструкциями производителя набора (MabTech). Сине-черный окрашенный осадок образует пятна, выявляющие каждую отдельную ИФНy-продуцирующую клетку. Затем пятна сканируются и подсчитываются анализатором и программным обеспечением CTL ImmunoSpot® (Cellular Technology), а качество контролируется обученным оператором. Ответы ИФНy выглядят, как пятнообразующие единицы (СОЕ) МКПК которые до 1×105 больше, чем СОЕ в отрицательном контроле (только среда).
Иммунологические результаты
[229] Мезотелин-специфические ответы ИФНy показаны на ФИГ. 11 A -11 C для групп 1-3, в которых иммунизации проводили только мезотелином (ФИГ. 12A), мезотелином с низкой дозой ИЛ-12 (0,04 мг) (ФИГ. 11B) или мезотелином с высокой дозой ИЛ-12. (0,2 мг) (ФИГ. 11C). Результаты показывают ответ в каждый момент времени через 2 недели после введения дозы. В целом, все группы и отдельные животные показывали увеличение ответа к концу исследования через 2 недели после введения 4 дозы, по сравнению с исходными данными до иммунизации. ФИГ. 11 A-11C показывает тенденцию ИЛ-12, обеспечивающего адъювантный эффект для ответов ИФНy на синтетический консенсусный мезотелин через PD3.
[230] На ФИГ. 12A-12C изображены усредненные мезотелин-специфические ответы ИФНy с иммунизацией одним мезотелином (ФИГ. 12A), мезотелином с низкой дозой ИЛ-12 (0,04 мг) (ФИГ. 12B) или мезотелином с высокой дозой ИЛ-12 (0,2 мг) (ФИГ. 12C). ФИГ. 12A-12C показывают, что ИЛ-12 увеличивает величину, но не широту ответов ИФНy против синтетического консенсусного мезотелина.
Физиологические параметры
[231] Как показано в таблицах 12, 13 и 14, различия ни по одному из физиологических параметров, измеренных вследствие иммунизации для групп 1, 2 и 3, соответственно, не наблюдались. Не было отмечено существенных различий для эритроцитов, гематокритного числа, нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов, эозинофилов (данные не предоставлены). Эти значения находятся в ожидаемых пределах для животных указанного вида, пола и возраста, подвергающихся аналогичным экспериментальным процедурам. Любые отклонения от заявленных нормальных диапазонов носят спорадический характер, присутствуют только для одного пола и не связаны с уровнями дозы или сроками.
Таблица 12
Группа 1 | До вакцинации | После вакцинации | Норма | |
Неделя 2 | Неделя 6 | Неделя 14 | ||
Лейкоциты (#/103/мл) |
3.4*-11.9 (#6896, 6882) |
3.3*-9.5 (#6896, 6882) | 3.4*-12.6 (#6896, 6882) | 4.0-15.0 |
Креатинин (мг/дл) |
0.5-0.9 | 0.4-0.9 | 0.5-0.9 | 0.3-1.4 |
Азот мочевины в крови (мг/дл) | 9-23 | 14-27 | 11-28 | 9-29 |
Щелочная фосфатаза (ед/л) | 197-576 | 238-551 | 218-673 | 65-641 |
Аспартатаминотрансфераза (ед/л) | 9*-23 (#6889, 6870, 6882) |
7*-26 (#6889, 6870, 6882, 6864) |
20*-44 (#6870) |
23-175 |
Аланинаминотрансфераза (ед/л) | 19-40 | 12*-28 (#6870) |
8*-30 (#6889) |
18-204 |
Общий биллирубин (мг /дл) | 0.1-0.2 | 0.2-0.3 | 0.1-0.3 | 0.1-0.6 |
Примечание: вне нормы *
Таблица 13
Группа 2 | До вакцинации | После вакцинации | Норма | |
Неделя 2 | Неделя 6 | Неделя 14 | ||
Лейкоциты (#/103/мл) |
5.9-16.2 | 5.1-9.2 | 7.1-11.9 | 4.0-15.0 |
Креатинин (мг/дл) |
0.5-0.8 | 0.4-0.8 | 0.4-0.9 | 0.3-1.4 |
Азот мочевины в крови (мг/дл) | 11-18 | 13-19 | 14-19 | 9-29 |
Щелочная фосфатаза (ед/л) | 256-419 | 331-435 | 324-490 | 65-641 |
Аспартатаминотрансфераза (ед/л) | 14*-29 (#6871, 6865, 6897, 6877) |
15*-34 (#6871, 6865, 6897, 6877) |
21*-34 (#6865) |
23-175 |
Аланинаминотрансфераза (ед/л) | 17*-43 (#6865) | 17*-34 (#6865) |
18-40 | 18-204 |
Общий биллирубин (мг /дл) | 0.2 | 0.2-0.3 | 0.2-0.4 | 0.1-0.6 |
Примечание: вне нормы *
Таблица 14
Группа 3 | До вакцинации | После вакцинации | Норма | |
Неделя 2 | Неделя 6 | Неделя 14 | ||
Лейкоциты (#/103/мл) |
5.3-13.7 | 3.8*-11.0 (#6885) |
3.9*-16.5 (#6885) |
4.0-15.0 |
Креатинин (мг/дл) |
0.5-0.7 | 0.5-0.7 | 0.6-0.8 | 0.3-1.4 |
Азот мочевины в крови (мг/дл) | 11-21 | 13-22 | 12-25 | 9-29 |
Щелочная фосфатаза (ед/л) | 302-405 | 363-441 | 332-439 | 65-641 |
Аспартатаминотрансфераза (ед/л) | 8*-31 (#6891, 6878, 6898) |
6*-32 (#6891, 6898, 6872, 6885) |
21*-43 (#6885, 6891) |
23-175 |
Аланинаминотрансфераза (ед/л) | 15*-34 (#6878) |
15*-36 (#6885) |
8*-33 (#6891) |
18-204 |
Общий биллирубин (мг /дл) | 0.1-0.2 | 0.1-0.2 | 0.1-0.2 | 0.1-0.6 |
Примечание: вне нормы *
[232] В течение исследования, не наблюдалось значительного изменения веса среди всех групп, при нормальном диапазоне 4-12, как показано ниже в Таблице 15.
Таблица 15
Группы | Вес (кг) | ||||
Месяц 1 | Месяц 2 | Месяц 3 | Месяц 4 | Месяц 5 | |
4 | 4.12-5.38 | 3.94*-5.48 (#6882) |
3.88*-5.56 (#6882) |
4.0-5.9 | 3.94*-5.84 (#6882) |
5 | 4.14-5.26 | 3.92*-5.34 (#6897) |
3.88*-5.46 (#6897) |
3.94*-5.24 (#6897) |
3.88*-5.38 (#6897) |
6 | 4.68-5.28 | 4.54-5.36 | 4.56-5.32 | 4.82-5.8 | 4.72-5.74 |
[233] В целом результаты показывают, что синтетический консенсусный мезотелин, применяемый отдельно, способен вызывать иммунный ответ у 100% низших приматов. Добавление адъюванта ИЛ-12 не демонстрировало значительного улучшения.
[234] Ясно, что вышеприведенное подробное описание и сопровождающие примеры являются просто иллюстративными и не должны рассматриваться, как ограничения объема изобретения, который определяется исключительно прилагаемой формулой изобретения и ее эквивалентах.
[235] Различные изменения и модификации приведенных вариантов воплощения изобретения очевидны для специалистов в данной области техники. Такие изменения и модификации приведенных вариантов воплощения изобретения, включая изменения, относящиеся к химическим структурам, заместителям, производным, промежуточным соединениям, синтезам, композициям, составам или способам применения изобретения, но, не ограничиваясь ими, могут быть сделаны без отклонения от сущности и объема изобретения.
Таблица 16: Синтетическая консенсусная мезотелиновая ДНК-кодирующая последовательность
SEQ ID №. |
Последовательность |
1 | ATGGACTGGACATGGATTCTGTTTCTGGTCGCCGCCGCTACACGAGTGCATTCAAGCAGGGCTCTGGCAGGGGAGACTGGGCAGGAAGCAGCCCCACTGGACGGCGTGCTGGCAAACCCTCCCGATATCAGCTCCCTGAGCCCTAGACAGCTGCTGGGCTTCCCATGCGTGGAGGTGAGCGGCCTGTCCACCGAGAGGGTGCGCGAGCTGGCAGTGGCCCTGGCACAGAAGAATGTGAAGCTGTCCGCCGAGCAGCTGAGGTGCCTGGCACACAGGCTGTCTGAGCCACCCGAGGACCTGGATGCACTGCCACTGGACCTGCTGCTGTTCCTGAACCCCGATGCCTTTAGCGGCCCTCAGGCCTGTACAAGGTTCTTTTCCCGCGTGGCCAAGGCCAATGTGGACCTGCTGCCTAGGGGCGCCCCAGAGCGGCAGAGACTGCTGCCAGCCGCCCTGGCATGCTGGGGCGTGAGGGGCTCTCTGCTGAGCGAGGCAGACGTGCGCGCCCTGGGCGGCCTGGCCTGTGATCTGCCTGGCCGCTTTGTGGCCGAGTCTGCCGAGGTGCTGCTGCCAAGGCTGGTGAGCTGCCTGGGACCTCTGGACCAGGATCAGCAGGAGGCCGTGCGCGCCGCCCTGCAGGGCGGCGGCCCTCCCTACGGCCCTCCCTCTACCTGGTCTATCAGCACACTGGACGCACTGAGAGGCAGCCTGCCAGTGCTGGGACAGCCCGTGATCAGGTCCATCCCTCAGGGCATCCTGGCAGCATGGAGGCAGCGGAGCAGCCGGGACCCCTCCTGGAGGCAGCCAGAGAGAACCGTGCTGAGGCCTAGATTCCGGAGAGACGTGGAGAAGACAGCCTGTCCATCCGGCAAGAAGGTGCACGAGATCGATGAGTCTCTGATCTTTGCCAAGAAGTGGGAGCTGGAGGCATGCGTGGACGCCGCCCTGCTGGCAGCACAGATGGATAGAGTGAACGCCATCCCCTTCACCTACGAGCAGCTGGACGTGCTGAAGCACAAGCTGGATGAGCTGTACCCCCAGGGCTATCCTGAGAGCGTGACACAGCACCTGGGCTATCTGTTTCTGAAGATGTCTCCTGAGGACATCAGGAAGTGGAACGTGACCAGCCTGGAGACACTGAAGGCCCTGCTGGAGGTCAATAAGGGCCACGAGATGTCCCCACAGGTGGCCACCCTGATCGACAGGGTGGTGAAGGGCAGAGGCCAGCTGGACAAGGATACAGTGGATACCCTGACAGCCTTCTACCCAGGCTACCTGTGCTCCCTGTCTCCCGAGGAGCTGTCCTCTGTGCCACCCAGCTCCATCGGAGCCGTGCGGCCTCAGGACCTGGATACCTGCGACCCAAGACAGCTGGATGTGCTGTACCCCAAGGCCAGGCTGGCCTTCCAGAACATGAATGGCAGCGAGTATTTCGTGAAGATCCAGCCATTTCTGGGCGGCGCCCCAACCGAGGACCTGAAGGCCCTGTCCCAGCAGAACGTGTCTATGGACCTGGCCACCTTTATGAAGCTGCGCACAGATGCCGTGCTGCCACTGACAGTGGCAGAGGTGCAGAAGCTGCTGGGACCTCACGTGGAGGGCCTGAAGGCAGAGGAGAGGCACAGGCCCGTGCGGGACTGGATTCTGCGGCAGAGACAGGACGATCTGGATACCCTGGGACTGGGACTGCAGGGCGGCATCCCAAATGGCTATCTGGTGCTGGATCTGTCCGTGCGGGAGGCCCTGACAGGCGTGCCCTGCCTGCTGGGACCTGGACCTGTGCTGACTGTGCTGGCTCTGCTGCTGGCTTCAACACTGGCTTGATAA |
Таблица 17: S Синтетическая консенсусная мезотелиновая последовательность белка
SEQ ID №. |
Последовательность |
2 | MDWTWILFLVAAATRVHSSRALAGETGQEAAPLDGVLANPPDISSLSPRQLLGFPCVEVSGLSTERVRELAVALAQKNVKLSAEQLRCLAHRLSEPPEDLDALPLDLLLFLNPDAFSGPQACTRFFSRVAKANVDLLPRGAPERQRLLPAALACWGVRGSLLSEADVRALGGLACDLPGRFVAESAEVLLPRLVSCLGPLDQDQQEAVRAALQGGGPPYGPPSTWSISTLDALRGSLPVLGQPVIRSIPQGILAAWRQRSSRDPSWRQPERTVLRPRFRRDVEKTACPSGKKVHEIDESLIFAKKWELEACVDAALLAAQMDRVNAIPFTYEQLDVLKHKLDELYPQGYPESVTQHLGYLFLKMSPEDIRKWNVTSLETLKALLEVNKGHEMSPQVATLIDRVVKGRGQLDKDTVDTLTAFYPGYLCSLSPEELSSVPPSSIGAVRPQDLDTCDPRQLDVLYPKARLAFQNMNGSEYFVKIQPFLGGAPTEDLKALSQQNVSMDLATFMKLRTDAVLPLTVAEVQKLLGPHVEGLKAEERHRPVRDWILRQRQDDLDTLGLGLQGGIPNGYLVLDLSVREALTGVPCLLGPGPVLTVLALLLASTLA |
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> INOVIO PHARMACEUTICALS, INC
YAN, Jian
SLAGER, Anna
GARMAN, Bradley
COOCH, Neil
<120> МЕЗОТЕЛИН-НАЦЕЛЕННЫЕ ВАКЦИНЫ ОТ РАКА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
<130> INO-1002WO / 104409.000444
<150> US 62/598,289
<151> 2017-12-13
<160> 2
<170> Патентная версия 3.5
<210> 1
<211> 1827
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая консенсусная мезотелиновая ДНК-кодирующая
последовательность
<400> 1
atggactgga catggattct gtttctggtc gccgccgcta cacgagtgca ttcaagcagg 60
gctctggcag gggagactgg gcaggaagca gccccactgg acggcgtgct ggcaaaccct 120
cccgatatca gctccctgag ccctagacag ctgctgggct tcccatgcgt ggaggtgagc 180
ggcctgtcca ccgagagggt gcgcgagctg gcagtggccc tggcacagaa gaatgtgaag 240
ctgtccgccg agcagctgag gtgcctggca cacaggctgt ctgagccacc cgaggacctg 300
gatgcactgc cactggacct gctgctgttc ctgaaccccg atgcctttag cggccctcag 360
gcctgtacaa ggttcttttc ccgcgtggcc aaggccaatg tggacctgct gcctaggggc 420
gccccagagc ggcagagact gctgccagcc gccctggcat gctggggcgt gaggggctct 480
ctgctgagcg aggcagacgt gcgcgccctg ggcggcctgg cctgtgatct gcctggccgc 540
tttgtggccg agtctgccga ggtgctgctg ccaaggctgg tgagctgcct gggacctctg 600
gaccaggatc agcaggaggc cgtgcgcgcc gccctgcagg gcggcggccc tccctacggc 660
cctccctcta cctggtctat cagcacactg gacgcactga gaggcagcct gccagtgctg 720
ggacagcccg tgatcaggtc catccctcag ggcatcctgg cagcatggag gcagcggagc 780
agccgggacc cctcctggag gcagccagag agaaccgtgc tgaggcctag attccggaga 840
gacgtggaga agacagcctg tccatccggc aagaaggtgc acgagatcga tgagtctctg 900
atctttgcca agaagtggga gctggaggca tgcgtggacg ccgccctgct ggcagcacag 960
atggatagag tgaacgccat ccccttcacc tacgagcagc tggacgtgct gaagcacaag 1020
ctggatgagc tgtaccccca gggctatcct gagagcgtga cacagcacct gggctatctg 1080
tttctgaaga tgtctcctga ggacatcagg aagtggaacg tgaccagcct ggagacactg 1140
aaggccctgc tggaggtcaa taagggccac gagatgtccc cacaggtggc caccctgatc 1200
gacagggtgg tgaagggcag aggccagctg gacaaggata cagtggatac cctgacagcc 1260
ttctacccag gctacctgtg ctccctgtct cccgaggagc tgtcctctgt gccacccagc 1320
tccatcggag ccgtgcggcc tcaggacctg gatacctgcg acccaagaca gctggatgtg 1380
ctgtacccca aggccaggct ggccttccag aacatgaatg gcagcgagta tttcgtgaag 1440
atccagccat ttctgggcgg cgccccaacc gaggacctga aggccctgtc ccagcagaac 1500
gtgtctatgg acctggccac ctttatgaag ctgcgcacag atgccgtgct gccactgaca 1560
gtggcagagg tgcagaagct gctgggacct cacgtggagg gcctgaaggc agaggagagg 1620
cacaggcccg tgcgggactg gattctgcgg cagagacagg acgatctgga taccctggga 1680
ctgggactgc agggcggcat cccaaatggc tatctggtgc tggatctgtc cgtgcgggag 1740
gccctgacag gcgtgccctg cctgctggga cctggacctg tgctgactgt gctggctctg 1800
ctgctggctt caacactggc ttgataa 1827
<210> 2
<211> 607
<212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетическая консенсусная мезотелиновая протеин-кодирующая
последовательность
<400> 2
Met Asp Trp Thr Trp Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Arg Val
1 5 10 15
His Ser Ser Arg Ala Leu Ala Gly Glu Thr Gly Gln Glu Ala Ala Pro
20 25 30
Leu Asp Gly Val Leu Ala Asn Pro Pro Asp Ile Ser Ser Leu Ser Pro
35 40 45
Arg Gln Leu Leu Gly Phe Pro Cys Val Glu Val Ser Gly Leu Ser Thr
50 55 60
Glu Arg Val Arg Glu Leu Ala Val Ala Leu Ala Gln Lys Asn Val Lys
65 70 75 80
Leu Ser Ala Glu Gln Leu Arg Cys Leu Ala His Arg Leu Ser Glu Pro
85 90 95
Pro Glu Asp Leu Asp Ala Leu Pro Leu Asp Leu Leu Leu Phe Leu Asn
100 105 110
Pro Asp Ala Phe Ser Gly Pro Gln Ala Cys Thr Arg Phe Phe Ser Arg
115 120 125
Val Ala Lys Ala Asn Val Asp Leu Leu Pro Arg Gly Ala Pro Glu Arg
130 135 140
Gln Arg Leu Leu Pro Ala Ala Leu Ala Cys Trp Gly Val Arg Gly Ser
145 150 155 160
Leu Leu Ser Glu Ala Asp Val Arg Ala Leu Gly Gly Leu Ala Cys Asp
165 170 175
Leu Pro Gly Arg Phe Val Ala Glu Ser Ala Glu Val Leu Leu Pro Arg
180 185 190
Leu Val Ser Cys Leu Gly Pro Leu Asp Gln Asp Gln Gln Glu Ala Val
195 200 205
Arg Ala Ala Leu Gln Gly Gly Gly Pro Pro Tyr Gly Pro Pro Ser Thr
210 215 220
Trp Ser Ile Ser Thr Leu Asp Ala Leu Arg Gly Ser Leu Pro Val Leu
225 230 235 240
Gly Gln Pro Val Ile Arg Ser Ile Pro Gln Gly Ile Leu Ala Ala Trp
245 250 255
Arg Gln Arg Ser Ser Arg Asp Pro Ser Trp Arg Gln Pro Glu Arg Thr
260 265 270
Val Leu Arg Pro Arg Phe Arg Arg Asp Val Glu Lys Thr Ala Cys Pro
275 280 285
Ser Gly Lys Lys Val His Glu Ile Asp Glu Ser Leu Ile Phe Ala Lys
290 295 300
Lys Trp Glu Leu Glu Ala Cys Val Asp Ala Ala Leu Leu Ala Ala Gln
305 310 315 320
Met Asp Arg Val Asn Ala Ile Pro Phe Thr Tyr Glu Gln Leu Asp Val
325 330 335
Leu Lys His Lys Leu Asp Glu Leu Tyr Pro Gln Gly Tyr Pro Glu Ser
340 345 350
Val Thr Gln His Leu Gly Tyr Leu Phe Leu Lys Met Ser Pro Glu Asp
355 360 365
Ile Arg Lys Trp Asn Val Thr Ser Leu Glu Thr Leu Lys Ala Leu Leu
370 375 380
Glu Val Asn Lys Gly His Glu Met Ser Pro Gln Val Ala Thr Leu Ile
385 390 395 400
Asp Arg Val Val Lys Gly Arg Gly Gln Leu Asp Lys Asp Thr Val Asp
405 410 415
Thr Leu Thr Ala Phe Tyr Pro Gly Tyr Leu Cys Ser Leu Ser Pro Glu
420 425 430
Glu Leu Ser Ser Val Pro Pro Ser Ser Ile Gly Ala Val Arg Pro Gln
435 440 445
Asp Leu Asp Thr Cys Asp Pro Arg Gln Leu Asp Val Leu Tyr Pro Lys
450 455 460
Ala Arg Leu Ala Phe Gln Asn Met Asn Gly Ser Glu Tyr Phe Val Lys
465 470 475 480
Ile Gln Pro Phe Leu Gly Gly Ala Pro Thr Glu Asp Leu Lys Ala Leu
485 490 495
Ser Gln Gln Asn Val Ser Met Asp Leu Ala Thr Phe Met Lys Leu Arg
500 505 510
Thr Asp Ala Val Leu Pro Leu Thr Val Ala Glu Val Gln Lys Leu Leu
515 520 525
Gly Pro His Val Glu Gly Leu Lys Ala Glu Glu Arg His Arg Pro Val
530 535 540
Arg Asp Trp Ile Leu Arg Gln Arg Gln Asp Asp Leu Asp Thr Leu Gly
545 550 555 560
Leu Gly Leu Gln Gly Gly Ile Pro Asn Gly Tyr Leu Val Leu Asp Leu
565 570 575
Ser Val Arg Glu Ala Leu Thr Gly Val Pro Cys Leu Leu Gly Pro Gly
580 585 590
Pro Val Leu Thr Val Leu Ala Leu Leu Leu Ala Ser Thr Leu Ala
595 600 605
<---
Claims (34)
1. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антиген мезотелина, содержащая:
(a) последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует аминокислоты 19-607 SEQ ID NO: 2; или
(b) последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует аминокислотную последовательность, идентичную аминокислотам 19-607 SEQ ID NO: 2 по меньшей мере на 96%, где указанная аминокислотная последовательность содержит аланин в аминокислотном положении 303, треонин в аминокислотном положении 583 и валин в аминокислотном положении 585 относительно SEQ ID NO: 2.
2. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антиген мезотелина, содержащая:
(a) нуклеотиды 55-1821 SEQ ID NO: 1; или
(b) фрагмент, который по меньшей мере на 96% идентичен нуклеотидам 55-1821 SEQ ID NO: 1, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует аланин в аминокислотном положении 303, треонин в аминокислотном положении 583 и валин в аминокислотном положении 585 относительно SEQ ID NO: 2.
3. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антиген мезотелина, содержащая:
(a) последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует SEQ ID NO: 2; или
(b) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую аминокислотную последовательность, идентичную SEQ ID NO: 2 по меньшей мере на 96%, где указанная аминокислотная последовательность содержит аланин в аминокислотном положении 303, треонин в аминокислотном положении 583 и валин в аминокислотном положении 585 относительно SEQ ID NO: 2.
4. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антиген мезотелина, содержащая:
(a) последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую SEQ ID NO: 1; или
(b) последовательность нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 96% идентична SEQ ID NO: 1, где указанная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует аланин в аминокислотном положении 303, треонин в аминокислотном положении 583 и валин в аминокислотном положении 585 относительно SEQ ID NO: 2.
5. Экспрессионный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-4.
6. Экспрессионный вектор по п. 4, где молекула нуклеиновой кислоты функционально связана с регуляторным элементом, выбранным из промотора или сигнала полиаденилирования.
7. Экспрессионный вектор по п. 6, где промотор представляет собой промотор цитомегаловируса человека немедленно-раннего ответа (промотор hCMV).
8. Экспрессионный вектор по п. 6, где сигнал полиаденилирования является сигнальной последовательностью полиаденилирования гормона роста крупного рогатого скота (bGH поли-A).
9. Экспрессионный вектор по любому из пп. 5-8, где вектор является плазмидой.
10. Иммуногенная композиция, содержащая эффективное количество одной или более молекул нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-4 и фармацевтически приемлемый носитель.
11. Иммуногенная композиция, содержащая эффективное количество одного или более векторов по любому из пп. 5-9 и фармацевтически приемлемый носитель.
12. Антиген мезотелина, содержащий:
(a) аминокислоты 19-607 из SEQ ID NO: 2; или
(b) аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 95% идентична аминокислотам 19-607 SEQ ID NO: 2, где указанная аминокислотная последовательность содержит аланин в аминокислотном положении 303, треонин в аминокислотном положении 583 и валин в аминокислотном положении 585 относительно SEQ ID NO: 2.
13. Антиген мезотелина, содержащий:
(a) аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2; или
(b) аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 96% идентична SEQ ID NO: 2, где указанная аминокислотная последовательность содержит аланин в аминокислотном положении 303, треонин в аминокислотном положении 583 и валин в аминокислотном положении 585 относительно SEQ ID NO: 2.
14. Вакцина для лечения или предотвращения мезотелин-экспрессирующего рака, содержащая эффективное количество экспрессионного вектора по любому из пп. 5-9 и фармацевтически приемлемый эксципиент.
15. Вакцина по п. 14, которая дополнительно включает адъювант.
16. Вакцина по п. 15, где адъювант представляет собой ИЛ-12, ИЛ-15, ИЛ-28 или RANTES.
17. Способ лечения субъекта с мезотелин-экспрессирующей раковой клеткой, включающий введение терапевтически эффективного количества вакцины по любому из пп. 14-16.
18. Способ по п. 17, где применение включает стадию электропорации.
19. Способ по п. 17, где применение происходит к одному или более сайтам субъекта.
20. Способ вакцинации субъекта против мезотелин-экспрессирующей раковой клетки, включающий применение количества вакцины по любому из пп. 14-16, эффективного для индукции гуморального иммунного ответа.
21. Способ по п. 20, где введение включает стадию электропорации.
22. Способ по п. 20, где введение происходит в одном или более сайтах субъекта.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762598289P | 2017-12-13 | 2017-12-13 | |
US62/598,289 | 2017-12-13 | ||
PCT/US2018/065519 WO2019118760A1 (en) | 2017-12-13 | 2018-12-13 | Cancer vaccines targeting mesothelin and uses thereof |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2021117813A Division RU2021117813A (ru) | 2017-12-13 | 2018-12-13 | Мезотелин-нацеленные вакцины от рака и их применение |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2751252C1 true RU2751252C1 (ru) | 2021-07-12 |
Family
ID=66734859
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2020122868A RU2751252C1 (ru) | 2017-12-13 | 2018-12-13 | Мезотелин-нацеленные вакцины от рака и их применение |
RU2021117813A RU2021117813A (ru) | 2017-12-13 | 2018-12-13 | Мезотелин-нацеленные вакцины от рака и их применение |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2021117813A RU2021117813A (ru) | 2017-12-13 | 2018-12-13 | Мезотелин-нацеленные вакцины от рака и их применение |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US11154602B2 (ru) |
EP (1) | EP3723810A4 (ru) |
JP (2) | JP7352547B2 (ru) |
KR (2) | KR102637862B1 (ru) |
CN (1) | CN111479590A (ru) |
AU (2) | AU2018383658B2 (ru) |
BR (1) | BR112020010499A2 (ru) |
CA (1) | CA3083528C (ru) |
MX (1) | MX2020006226A (ru) |
RU (2) | RU2751252C1 (ru) |
WO (1) | WO2019118760A1 (ru) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2003000113A2 (en) * | 2001-06-20 | 2003-01-03 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor |
US20140010861A1 (en) * | 2012-04-02 | 2014-01-09 | modeRNA Therapeutics | Modified polynucleotides for the production of proteins associated with human disease |
Family Cites Families (64)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5077044A (en) | 1980-05-19 | 1991-12-31 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Jr. University | Novel non-reverting shigella live vaccines |
US4554101A (en) | 1981-01-09 | 1985-11-19 | New York Blood Center, Inc. | Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity |
US5174993A (en) | 1981-12-24 | 1992-12-29 | Health Research Inc. | Recombinant avipox virus and immunological use thereof |
US5338683A (en) | 1981-12-24 | 1994-08-16 | Health Research Incorporated | Vaccinia virus containing DNA sequences encoding herpesvirus glycoproteins |
US5110587A (en) | 1981-12-24 | 1992-05-05 | Health Research, Incorporated | Immunogenic composition comprising synthetically modified vaccinia virus |
US4722848A (en) | 1982-12-08 | 1988-02-02 | Health Research, Incorporated | Method for immunizing animals with synthetically modified vaccinia virus |
US4510245A (en) | 1982-11-18 | 1985-04-09 | Chiron Corporation | Adenovirus promoter system |
US5643579A (en) | 1984-11-01 | 1997-07-01 | American Home Products Corporation | Oral vaccines |
ZA858044B (en) | 1984-11-01 | 1987-05-27 | American Home Prod | Oral vaccines |
US4797368A (en) | 1985-03-15 | 1989-01-10 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Adeno-associated virus as eukaryotic expression vector |
GB8508845D0 (en) | 1985-04-04 | 1985-05-09 | Hoffmann La Roche | Vaccinia dna |
US5223424A (en) | 1985-09-06 | 1993-06-29 | Prutech Research And Development | Attenuated herpesviruses and herpesviruses which include foreign DNA encoding an amino acid sequence |
US4790987A (en) | 1985-11-15 | 1988-12-13 | Research Corporation | Viral glycoprotein subunit vaccine |
US5310668A (en) | 1986-06-20 | 1994-05-10 | Merck & Co., Inc. | Varicella-zoster virus as a live recombinant vaccine |
US5242829A (en) | 1986-09-23 | 1993-09-07 | Therion Biologics Corporation | Recombinant pseudorabies virus |
US5387744A (en) | 1987-06-04 | 1995-02-07 | Washington University | Avirulent microbes and uses therefor: Salmonella typhi |
IL86583A0 (en) | 1987-06-04 | 1988-11-15 | Molecular Eng Ass | Vaccine containing a derivative of a microbe and method for the production thereof |
US5294441A (en) | 1987-06-04 | 1994-03-15 | Washington University | Avirulent microbes and uses therefor: salmonella typhi |
US5112749A (en) | 1987-10-02 | 1992-05-12 | Praxis Biologics, Inc. | Vaccines for the malaria circumsporozoite protein |
US5225336A (en) | 1989-03-08 | 1993-07-06 | Health Research Incorporated | Recombinant poxvirus host range selection system |
CH682669A5 (fr) | 1989-03-08 | 1993-10-29 | Health Research Inc | Virus recombinant modifié pour exprimer un produit de gènes chez un hôte, procédés et vaccin correspondants. |
US5703055A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
US5591439A (en) | 1989-03-24 | 1997-01-07 | The Wistar Institute Of Anatomy And Biology | Recombinant cytomegalovirus vaccine |
JP3004049B2 (ja) | 1989-03-31 | 2000-01-31 | ワシントン ユニバーシティー | 病原性のないphoP型微生物を含有するワクチン |
ES2070997T3 (es) | 1989-12-04 | 1995-06-16 | Akzo Nobel Nv | Virus de herpes recombinante de pavos y vacunas vector vivas derivadas de los mismos. |
US5294548A (en) | 1990-04-02 | 1994-03-15 | American Biogenetic Sciences, Inc | Recombianant Hepatitis a virus |
WO1991018088A1 (en) | 1990-05-23 | 1991-11-28 | The United States Of America, Represented By The Secretary, United States Department Of Commerce | Adeno-associated virus (aav)-based eucaryotic vectors |
US5462734A (en) | 1990-11-02 | 1995-10-31 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Bovine herpesvirus vaccine and method of using same |
US5240703A (en) | 1991-03-01 | 1993-08-31 | Syntro Corporation | Attenuated, genetically-engineered pseudorabies virus s-prv-155 and uses thereof |
US6034298A (en) | 1991-08-26 | 2000-03-07 | Prodigene, Inc. | Vaccines expressed in plants |
US5955088A (en) | 1992-02-03 | 1999-09-21 | Cedars-Sinai Medical Center | Pharmaceutical compsition of herpes simplex virus type-1 (HSV-1), glycoproteins |
AU4528493A (en) | 1992-06-04 | 1994-01-04 | Regents Of The University Of California, The | In vivo gene therapy with intron-free sequence of interest |
US5273525A (en) | 1992-08-13 | 1993-12-28 | Btx Inc. | Injection and electroporation apparatus for drug and gene delivery |
ATE302854T1 (de) | 1993-01-26 | 2005-09-15 | Univ Pennsylvania | Zusammensetzungen und verfahren zur verabreichung von genetischem material |
US5593972A (en) | 1993-01-26 | 1997-01-14 | The Wistar Institute | Genetic immunization |
US5981505A (en) | 1993-01-26 | 1999-11-09 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for delivery of genetic material |
WO1994028929A1 (en) | 1993-06-07 | 1994-12-22 | Genentech, Inc. | Hiv envelope polypeptides |
US5739118A (en) | 1994-04-01 | 1998-04-14 | Apollon, Inc. | Compositions and methods for delivery of genetic material |
US6156319A (en) | 1994-07-25 | 2000-12-05 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Soluble herpesvirus glycoprotein complex vaccine |
NL9401820A (nl) | 1994-11-02 | 1996-06-03 | Meyn Maschf | Inrichting voor het bewerken van aan zijn poten opgehangen gevogelte. |
US5962428A (en) | 1995-03-30 | 1999-10-05 | Apollon, Inc. | Compositions and methods for delivery of genetic material |
US5650309A (en) | 1995-05-16 | 1997-07-22 | The Regents Of The University Of California | Viral vectors |
US5698202A (en) | 1995-06-05 | 1997-12-16 | The Wistar Institute Of Anatomy & Biology | Replication-defective adenovirus human type 5 recombinant as a rabies vaccine carrier |
US6261281B1 (en) | 1997-04-03 | 2001-07-17 | Electrofect As | Method for genetic immunization and introduction of molecules into skeletal muscle and immune cells |
EA002087B1 (ru) | 1997-04-03 | 2001-12-24 | Электрофект Ас | Способ введения фармацевтических препаратов и нуклеиновых кислот в скелетную мышцу |
CZ299473B6 (cs) | 1997-06-30 | 2008-08-06 | Rhone-Poulenc Rorer S. A. | Nukleová kyselina a elektrické pole jako sdruženýprodukt pro prenos nukleové kyseliny do bunek prícne pruhovaného svalstva |
US6697669B2 (en) | 1998-07-13 | 2004-02-24 | Genetronics, Inc. | Skin and muscle-targeted gene therapy by pulsed electrical field |
US6589529B1 (en) | 1998-10-30 | 2003-07-08 | Children's Hospital Medical Center | Rotavirus subunit vaccine |
JP3543326B2 (ja) | 2001-08-30 | 2004-07-14 | ソニー株式会社 | 情報処理装置および方法、情報処理システム、情報配信装置、記録媒体、並びにプログラム |
US8209006B2 (en) | 2002-03-07 | 2012-06-26 | Vgx Pharmaceuticals, Inc. | Constant current electroporation device and methods of use |
US7245963B2 (en) | 2002-03-07 | 2007-07-17 | Advisys, Inc. | Electrode assembly for constant-current electroporation and use |
US7328064B2 (en) | 2002-07-04 | 2008-02-05 | Inovio As | Electroporation device and injection apparatus |
US9200036B2 (en) * | 2002-07-12 | 2015-12-01 | The Johns Hopkins University | Mesothelin vaccines and model systems |
AU2003295366B2 (en) | 2002-11-04 | 2011-11-24 | Advisys, Inc. | Synthetic muscle promoters with activities exceeding naturally occurring regulatory sequences in cardiac cells |
CA2567324C (en) | 2003-05-30 | 2012-01-03 | Advisys, Inc. | Devices and methods for biomaterial production |
WO2007117371A2 (en) * | 2006-03-01 | 2007-10-18 | Anza Therapeutics, Inc. | Engineered listeria and methods of use thereof |
WO2007103225A2 (en) | 2006-03-01 | 2007-09-13 | Anza Therapeutics, Inc. | Engineered listeria and methods of use thereof |
US7935804B2 (en) * | 2006-03-01 | 2011-05-03 | Aduro Biotech | Engineered Listeria and methods of use thereof |
AU2008256681B2 (en) | 2007-05-23 | 2014-07-31 | Vgxi, Inc | Compositions comprising high concentration of biologically active molecules and processes for preparing the same |
ES2613630T3 (es) | 2010-05-23 | 2017-05-25 | Aduro Biotech, Inc. | Métodos y composiciones que utilizan Listeria para un tratamiento auxiliar del cáncer |
NZ702108A (en) * | 2012-05-03 | 2016-09-30 | Hutchinson Fred Cancer Res | Enhanced affinity t cell receptors and methods for making the same |
AU2013324049B2 (en) * | 2012-09-27 | 2017-09-21 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Mesothelin antibodies and methods for eliciting potent antitumor activity |
EP3607974A1 (en) | 2013-03-15 | 2020-02-12 | The Trustees of The University of Pennsylvania | Cancer vaccines and methods of treatment using the same |
HUE045567T2 (hu) | 2013-12-18 | 2020-01-28 | Vaximm Gmbh | MSLN-t célzó DNS vakcina rák immunterápiához |
-
2018
- 2018-12-13 WO PCT/US2018/065519 patent/WO2019118760A1/en unknown
- 2018-12-13 BR BR112020010499-0A patent/BR112020010499A2/pt active Search and Examination
- 2018-12-13 KR KR1020207019754A patent/KR102637862B1/ko active IP Right Grant
- 2018-12-13 RU RU2020122868A patent/RU2751252C1/ru active
- 2018-12-13 KR KR1020247005047A patent/KR20240024366A/ko active Application Filing
- 2018-12-13 US US16/219,287 patent/US11154602B2/en active Active
- 2018-12-13 CN CN201880080512.XA patent/CN111479590A/zh active Pending
- 2018-12-13 JP JP2020532723A patent/JP7352547B2/ja active Active
- 2018-12-13 RU RU2021117813A patent/RU2021117813A/ru unknown
- 2018-12-13 EP EP18887384.8A patent/EP3723810A4/en active Pending
- 2018-12-13 AU AU2018383658A patent/AU2018383658B2/en active Active
- 2018-12-13 MX MX2020006226A patent/MX2020006226A/es unknown
- 2018-12-13 CA CA3083528A patent/CA3083528C/en active Active
-
2021
- 2021-09-07 US US17/467,728 patent/US20210401959A1/en active Pending
-
2022
- 2022-05-10 AU AU2022203126A patent/AU2022203126A1/en active Pending
-
2023
- 2023-07-10 JP JP2023112878A patent/JP2023145499A/ja active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2003000113A2 (en) * | 2001-06-20 | 2003-01-03 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor |
US20140010861A1 (en) * | 2012-04-02 | 2014-01-09 | modeRNA Therapeutics | Modified polynucleotides for the production of proteins associated with human disease |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
СЕЛЕДЦОВ В.И, Ксеновакцино-терапия в лечении злокачественных заболеваний, Сибирский онкологический журнал, 2010, N 3 (39), с 48-57. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR102637862B1 (ko) | 2024-02-19 |
AU2018383658A1 (en) | 2020-07-16 |
US11154602B2 (en) | 2021-10-26 |
RU2021117813A (ru) | 2021-06-25 |
JP2023145499A (ja) | 2023-10-11 |
KR20240024366A (ko) | 2024-02-23 |
EP3723810A4 (en) | 2022-02-23 |
AU2018383658B2 (en) | 2022-02-10 |
EP3723810A1 (en) | 2020-10-21 |
CA3083528C (en) | 2023-09-12 |
JP7352547B2 (ja) | 2023-09-28 |
JP2021506266A (ja) | 2021-02-22 |
US20210401959A1 (en) | 2021-12-30 |
MX2020006226A (es) | 2020-11-18 |
US20190175711A1 (en) | 2019-06-13 |
WO2019118760A1 (en) | 2019-06-20 |
AU2022203126A1 (en) | 2022-06-02 |
BR112020010499A2 (pt) | 2020-11-24 |
CN111479590A (zh) | 2020-07-31 |
KR20200096955A (ko) | 2020-08-14 |
CA3083528A1 (en) | 2019-06-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2022203986A1 (en) | Cancer vaccines targeting PRAME and uses thereof | |
RU2751252C1 (ru) | Мезотелин-нацеленные вакцины от рака и их применение | |
RU2751253C1 (ru) | Противораковые вакцины, нацеленные на сурвивин, и их применения | |
RU2776949C2 (ru) | Противораковые вакцины, нацеленные на сурвивин, и их применения | |
RU2759681C1 (ru) | Противораковые вакцины, нацеленные на boris, и способы их применения | |
JP7314139B2 (ja) | Lemd1を標的とするがんワクチンおよびその使用 | |
RU2750689C1 (ru) | Противораковые вакцины, направленные на muc16, и их применение | |
RU2799786C2 (ru) | Противораковые вакцины, нацеленные на boris, и способы их применения |