JP2020503057A - シグナル調節タンパク質αに対する抗体及び使用方法 - Google Patents
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Abstract
本明細書においては、とりわけ、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン、またはその両方に結合する単離された抗体が提供される。いくつかの実施形態において、抗体は、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン、マウスＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン、ヒトＳｉＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン、及び／またはヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメインにも結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインとヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断するか、遮断せず、いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる。【選択図】図１６
Description
関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年９月２１日に出願された米国特許仮出願第６２／３９７，７５２号及び２０１７年６月５日に出願された米国特許仮出願第６２／５１５，４８０号の優先権を主張するものであり、各出願の全体は、参照により本明細書に援用される。
本出願は、２０１６年９月２１日に出願された米国特許仮出願第６２／３９７，７５２号及び２０１７年６月５日に出願された米国特許仮出願第６２／５１５，４８０号の優先権を主張するものであり、各出願の全体は、参照により本明細書に援用される。
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出の内容は、その全体が参照により本明細書に援用される：コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７５７９７２０００１４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ、記録日：２０１７年９月２０日、サイズ：４１１ＫＢ）。
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出の内容は、その全体が参照により本明細書に援用される：コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７５７９７２０００１４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ、記録日：２０１７年９月２０日、サイズ：４１１ＫＢ）。
本開示は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合する単離された抗体、ならびにそれに関連するポリヌクレオチド、ベクター、宿主細胞及び方法に関する。
シグナル調節タンパク質α（ＳＩＲＰ−α）は、免疫系の調節に重要な役割を果たす細胞表面受容体ファミリーの１つである（例えば、Ｂａｒｃｌａｙ，Ａ．Ｎ．ａｎｄ Ｂｒｏｗｎ，Ｍ．Ｈ．（２００６）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：４５７−６４参照）。ＳＩＲＰ−αは、樹状細胞、好酸球、好中球及びマクロファージなどの白血球を含む、種々の細胞の表面上に発現する。ＳＩＲＰ−αは、リガンドなどの外部刺激物と相互作用する細胞外ドメインと、様々な細胞内シグナルを媒介する細胞内ドメインとを含む。
ＳＩＲＰ−αの主な役割の１つは、ＣＤ４７との相互作用による免疫応答の調節であり、ＣＤ４７は、多種多様な細胞の表面上に発現する。ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインが、免疫細胞（例えば、マクロファージ）上に発現されたＳＩＲＰ−αの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合すると、ＳＩＲＰ−α媒介シグナルが免疫細胞内で伝達され、ＣＤ４７発現細胞の食作用が阻止される。このように、ＣＤ４７は、「ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ」と称されるシグナルを免疫系に伝達し、健康な細胞の食作用を防ぐ働きをする（例えば、ＷＯ２０１５／１３８６００及びＷｅｉｓｋｏｐｆ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４１：８８−９１参照）。一方で、ＣＤ４７は、様々ながんにおいても高度に発現することが示されており、この場合、ＳＩＲＰ−αとの相互作用は、腫瘍が、免疫監視及びマクロファージによる食作用を回避するために、健全な「ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ」シグナルを模倣することを可能にすると考えられる（例えば、Ｍａｊｅｔｉ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｃｅｌｌ １３８：２８６−９９、Ｚｈａｏ，Ｘ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１０８：１８３４２−７参照）。したがって、この相互作用を遮断する抗体が非常に望まれている。
ＳＩＲＰ−αは、ヒト、サル及びマウスにおいて高度に多型のタンパク質であることが知られている。例えば、ＮＯＤマウス系統とＣ５７ＢＬ／６マウス系統のＳＩＲＰ−αタンパク質の間には２０個のアミノ酸の相違が確認されており、これらの多型は、これらのマウス系統において、ＣＤ４７結合及びヒト造血幹細胞の生着に関連する機能上の影響をもたらす。ヒトでは、少なくとも１０個の明確に異なるＳＩＲＰΑ遺伝子の対立遺伝子が特定されている（Ｔａｋｅｎａｋａ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：１３１３−２３、Ｚｈａｏ，Ｘ．ｅｔ ａｌ．（２０１１），ＰＮＡＳ．１０８：１８３４２−４７、ｖａｎ ｄｅｒ Ｈｅｉｊｄｅｎ，Ｊ．（２０１４）．Ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ Ｆｃ ｇａｍｍａ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ａｎｄ ｃｏｐｙ ｎｕｍｂｅｒ ｖａｒｉａｔｉｏｎ（Ｄｏｃｔｏｒａｌ ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ））。
正常な免疫機能及び腫瘍形成におけるＳＩＲＰ−α−ＣＤ４７相互作用の重要性、ならびにＳＩＲＰ−αの多型性及び他のＳＩＲＰファミリー受容体の存在により、種内及び／または種間の交差反応性を有する、異なる結合特異性を有する抗体の特定は、ヒト集団に対して有効な臨床候補の開発及び様々な動物モデルにおける当該候補の特性評価にとって極めて興味深いものである。したがって、ＳＩＲＰ−αの機能、例えば、ＣＤ４７との結合相互作用を調節する、研究ツール及び潜在的臨床候補の両方が必要とされている。また、この重要な相互作用を理解し、効果的に標的とするために、様々なＳＩＲＰ−α結合特異性、及びＣＤ４７−ＳＩＲＰ−α結合に対する作用を有する抗体を単離する方法も必要とされている。
本明細書において引用される全ての参考文献は、特許出願、特許公報、非特許文献及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔアクセッション番号を含め、それぞれの個々の参考文献が参照により援用されることが具体的かつ個別に示される場合と同様に、その全体が参照により本明細書に援用される。
本明細書において引用される全ての参考文献は、特許出願、特許公報、非特許文献及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔアクセッション番号を含め、それぞれの個々の参考文献が参照により援用されることが具体的かつ個別に示される場合と同様に、その全体が参照により本明細書に援用される。
Ｂａｒｃｌａｙ，Ａ．Ｎ．ａｎｄ Ｂｒｏｗｎ，Ｍ．Ｈ．（２００６）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：４５７−６４
これらの必要性及び他の必要性を満たすために、とりわけ、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体が本明細書で提供される。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＡＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＡＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、３、４、５、６、７、８、９または１０個の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、３、４、５、６、７、８、９または１０個の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドのそれぞれは、配列番号５、６及び７６〜８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドは、カニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドである。いくつかの実施形態において、抗体は、少なくとも２つの異なるサルＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むカニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン、配列番号１２のアミノ酸配列を含むカニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン、またはその両方に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、２つ以上の異なるネズミＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、１つ以上のネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ここで、１つ以上のネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドのそれぞれは、配列番号７〜１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合しない。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合しない。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン、配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン、またはその両方に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞のＳＩＲＰ−αシグナル伝達を調節する。いくつかの実施形態において、細胞は、マクロファージ、樹状細胞、好中球、好酸球及び骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）からなる群から選択される白血球である。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するマクロファージのＳＩＲＰ−αシグナル伝達を阻害する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するマクロファージによる食作用を亢進する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。いくつかの実施形態において、抗体は、第１の細胞の表面上に発現されるヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、第２の細胞の表面上に発現されるヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。いくつかの実施形態において、抗体は、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体に結合せず、ここで、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない。いくつかの実施形態において、抗体は、第１の細胞の表面上に発現されるヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、第２の細胞の表面上に発現されるヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない。いくつかの実施形態において、抗体は、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体に結合し、ここで、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる。いくつかの実施形態において、第１の細胞の表面上に発現されるヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、第２の細胞の表面上に発現されるヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる。いくつかの実施形態において、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドのｋｏｆｆを増大させる。いくつかの実施形態において、第１の細胞の表面上に発現されるヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、第２の細胞の表面上に発現されるヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドのｋｏｆｆを増大させる。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、ここで、抗体は、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、ここで、抗体は、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、ここで、抗体は、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、ここで、抗体は、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、ここで、抗体は、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、ここで、抗体は、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプ
チドの親和性を低下させる。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる。いくつかの実施形態において、抗体は、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチド及びサルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）のうちの少なくとも１つに結合せず、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体Ｓ１３０に由来する、１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲ配列、重鎖可変ドメイン配列、及び／または軽鎖可変ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチド、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）のうちの少なくとも１つとに結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。いくつかの実施形態において、抗体は、Ｓ８、Ｓ１３、Ｓ１４及びＳ１２１からなる群から選択される抗体に由来する、１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲ配列、重鎖可変ドメイン配列、及び／または軽鎖可変ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチド及びサルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、ここで、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）のうちの少なくとも１つに結合しないか、減少された親和性で結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体Ｓ１３７に由来する、１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲ配列、重鎖可変ドメイン配列、及び／または軽鎖可変ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド及びサルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、ここで、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドに結合せず、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）のうちの少なくとも１つに結合せず、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。いくつかの実施形態において、抗体は、Ｓ１２８からなる群から選択される抗体に由来する、１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲ配列、重鎖可変ドメイン配列、及び／または軽鎖可変ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）のうちの少なくとも１つとに結合し、ここで、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドに結合せず、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。いくつかの実施形態において、抗体は、Ｓ９、Ｓ１１、Ｓ１１９、Ｓ１２０、Ｓ１２２及びＳ１３５からなる群から選択される抗体に由来する、１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲ配列、重鎖可変ドメイン配列、及び／または軽鎖可変ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、２つ以上の異なるサルＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）とに結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる。いくつかの実施形態において、抗体は、Ｓ１１５、Ｓ１１６、Ｓ１１７及びＳ１１８からなる群から選択される抗体に由来する、１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲ配列、重鎖可変ドメイン配列、及び／または軽鎖可変ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
チドの親和性を低下させる。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる。いくつかの実施形態において、抗体は、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチド及びサルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）のうちの少なくとも１つに結合せず、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体Ｓ１３０に由来する、１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲ配列、重鎖可変ドメイン配列、及び／または軽鎖可変ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチド、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）のうちの少なくとも１つとに結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。いくつかの実施形態において、抗体は、Ｓ８、Ｓ１３、Ｓ１４及びＳ１２１からなる群から選択される抗体に由来する、１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲ配列、重鎖可変ドメイン配列、及び／または軽鎖可変ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチド及びサルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、ここで、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）のうちの少なくとも１つに結合しないか、減少された親和性で結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体Ｓ１３７に由来する、１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲ配列、重鎖可変ドメイン配列、及び／または軽鎖可変ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド及びサルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、ここで、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドに結合せず、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）のうちの少なくとも１つに結合せず、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。いくつかの実施形態において、抗体は、Ｓ１２８からなる群から選択される抗体に由来する、１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲ配列、重鎖可変ドメイン配列、及び／または軽鎖可変ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）のうちの少なくとも１つとに結合し、ここで、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドに結合せず、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。いくつかの実施形態において、抗体は、Ｓ９、Ｓ１１、Ｓ１１９、Ｓ１２０、Ｓ１２２及びＳ１３５からなる群から選択される抗体に由来する、１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲ配列、重鎖可変ドメイン配列、及び／または軽鎖可変ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、２つ以上の異なるサルＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）とに結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる。いくつかの実施形態において、抗体は、Ｓ１１５、Ｓ１１６、Ｓ１１７及びＳ１１８からなる群から選択される抗体に由来する、１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲ配列、重鎖可変ドメイン配列、及び／または軽鎖可変ドメイン配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１１５のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１１５のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１１６のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１１６のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１１７のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１１７のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１１８のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１１８のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１１９のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１１９のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１２０のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１２０のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１２１のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１２１のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１２２のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１２２のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１２３のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１２３のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１２６のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１２６のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１２８のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１２８のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１３０のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１３０のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１３５のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１３５のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１３７のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１３７のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１３８のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１３８のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体２のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体２のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体８のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体８のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体９のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体９のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１１のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９
３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１１のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１２のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１２のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１３のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１３のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１４のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１４のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体２１、２５、２７もしくは６６のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体２１、２５、２７もしくは６６のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１６に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９３に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１７に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９４に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１８に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９５に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１９に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９６に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号３３５に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９７に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２１に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９８に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２２に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９９に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２３に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１００に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２４に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０１に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２５に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０２に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２６に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０３に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２７に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０４に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２８に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０５に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２９に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０６に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３０に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０７に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１０８に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号８５に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１０９に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号８６に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１０に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％
、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号８７に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１１に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号８８に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１２に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号８９に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１３に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９０に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１４に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９１に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１５に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９２に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３５、１３７、１３９もしくは１４１に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１３６、１３８、１４０もしくは１４２に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１１のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１２のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１２のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１３のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１３のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１４のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体１４のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体２１、２５、２７もしくは６６のＶＨドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または抗体２１、２５、２７もしくは６６のＶＬドメイン（例えば、表２に記載されるもの）に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１６に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９３に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１７に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９４に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１８に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９５に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１９に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９６に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号３３５に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９７に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２１に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９８に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２２に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９９に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２３に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１００に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２４に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０１に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２５に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０２に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２６に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０３に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２７に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０４に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２８に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０５に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２９に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０６に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３０に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０７に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１０８に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号８５に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１０９に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号８６に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１０に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％
、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号８７に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１１に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号８８に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１２に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号８９に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１３に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９０に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１４に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９１に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１５に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９２に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３５、１３７、１３９もしくは１４１に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１３６、１３８、１４０もしくは１４２に対して８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
いくつかの実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号２２７もしくは２３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２２８もしくは２３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号２１９もしくは２３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２３６もしくは２３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号２４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、（ａ）ＧＦＳＦＳＸ１Ｘ２ＡＭＸ３（配列中、Ｘ１は、ＮまたはＩであり、Ｘ２は、ＦまたはＹであり、Ｘ３は、ＴまたはＳである）（配列番号１８５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列、（ｂ）ＴＩＧＸ４Ｘ５ＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列中、Ｘ４は、ＳまたはＡであり、Ｘ５は、ＧまたはＤである）（配列番号１８６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列、（ｃ）ＤＳＴＶＸ６ＷＳＧＤＦＦＤＹ（配列中、Ｘ６は、ＳまたはＧである）（配列番号１８７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列、（ｄ）ＲＡＳＱＮＶＸ７Ｘ８ＤＸ９Ａ（配列中、Ｘ７は、ＫまたはＲであり、Ｘ８は、ＮまたはＳであり、Ｘ９は、ＬまたはＩである）（配列番号１８８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列、（ｅ）ＡＡＸ１０Ｘ１１ＲＸ１２Ｔ（配列中、Ｘ１０は、ＲまたはＳであり、Ｘ１１は、ＩまたはＳであり、Ｘ１２は、ＥまたはＤである）（配列番号１８９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列、及び（ｆ）ＱＱＹＹＤＷＰＰＦＴ（配列番号１４８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１１９（例えば、表２に記載されるもの）に由来する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号３３５及び９７の可変ドメイン配列に由来する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号３３５の重鎖可変ドメイン配列に由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号９７の軽鎖可変ドメイン配列に由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１３５（例えば、表２に記載されるもの）に由来する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１２７及び１０４の可変ドメイン配列に由来する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１２７の重鎖可変ドメイン配列に由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号１０４の軽鎖可変ドメイン配列に由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号９７、１０４、１２０、３３５及び１２７の可変ドメイン配列に由来する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号３３５及び１２７の重鎖可変ドメイン配列に由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号９７及び１０４の軽鎖可変ドメイン配列に由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１４３〜１４８から選択されるアミノ酸配列を有する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１４３〜１４５から選択される１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号１４６〜１４８から選択される１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１４８〜１５３から選択されるアミノ酸配列を有する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１４９〜１５１から選択される１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号１５２、１５３及び１４８から選択される１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体１３６（例えば、表２に記載されるもの）に由来する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１５５〜１６０から選択されるアミノ酸配列を有する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１５５〜１５７から選択される１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号１５８〜１６０から選択される１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体２１（例えば、表２に記載されるもの）に由来する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１６１〜１６６から選択されるアミノ酸配列を有する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１６１〜１６３から選択される１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号１６４〜１６６から選択される１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体２５（例えば、表２に記載されるもの）に由来する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１６１、１６３、１６８及び１７０〜１７２から選択されるアミノ酸配列を有する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１６１、１６８及び１６３から選択される１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号１７０〜１７２から選択される１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体２７（例えば、表２に記載されるもの）に由来する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１６３、１７３、１７４及び１７６〜１７８から選択されるアミノ酸配列を有する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１６３、１７３及び１７４から選択される１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号１７６〜１７８から選択される１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体６６（例えば、表２に記載されるもの）に由来する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１６２、１６３、１７９及び１８２〜１８４から選択されるアミノ酸配列を有する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１６２、１６３及び１７９から選択される１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号１８２〜１８４から選択される１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号１４３、２０２、２０４もしくは２０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１４４、２０３もしくは２０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１４５もしくは２０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１４６もしくは２０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１４７もしくは２０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１４８もしくは２１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号１４９、２１１、２１３もしくは２１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１５０、２１２もしくは２１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１５１もしくは２１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１５２もしくは２１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１５３もしくは２１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号１５５、２１９、２２１もしくは２２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１５６、２２０もしくは２２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１５７もしくは２２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１５８もしくは２２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１５９もしくは２２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号１６１、１９１もしくは１９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１６２、１９２もしくは１９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３もしくは１９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号１６１、１９１もしくは１９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１６８、１９６もしくは１９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３もしくは１９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号１７３、１９８もしくは２００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１７４、１９９もしくは２０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３もしくは１９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１７６のアミノ
酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体３（例えば、表２に記載されるもの）に由来する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号２４２に由来する１、２もしくは３つのＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号２４３に由来する１、２もしくは３つのＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体４５（例えば、表２に記載されるもの）に由来する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号２４４に由来する１、２もしくは３つのＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号２４５に由来する１、２もしくは３つのＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１６４、１７０、１７６もしくは１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５、１７１、１７７もしくは１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６、１７２、１７８もしくは１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１６４、１７０、１７６もしくは１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５、１７１、１７７もしくは１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６、１７２、１７８もしくは１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１６４、１７０、１７６もしくは１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５、１７１、１７７もしくは１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６、１７２、１７８もしくは１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１６４、１７０、１７６もしくは１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５、１７１、１７７もしくは１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６、１７２、１７８もしくは１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ配列の１、２、３、４、５または６つは、Ｋａｂａｔによって定義される。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ配列の１、２、３、４、５または６つは、Ｃｈｏｔｈｉａによって定義される。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ配列の１、２、３、４、５または６つは、ＩＭＧＴによって定義される。いくつかの実施形態において、抗体は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＩＭＧＴのうちの２つ以上によって定義されるＨＶＲ配列を含む（例えば、抗体は、１つの記述によって定義される１つ以上のＨＶＲ配列と、異なる記述によって定義される１つ以上のＨＶＲ配列とを含む）。
酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体３（例えば、表２に記載されるもの）に由来する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号２４２に由来する１、２もしくは３つのＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号２４３に由来する１、２もしくは３つのＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、抗体４５（例えば、表２に記載されるもの）に由来する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、（ａ）配列番号２４４に由来する１、２もしくは３つのＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号２４５に由来する１、２もしくは３つのＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１６４、１７０、１７６もしくは１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５、１７１、１７７もしくは１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６、１７２、１７８もしくは１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１６４、１７０、１７６もしくは１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５、１７１、１７７もしくは１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６、１７２、１７８もしくは１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１６４、１７０、１７６もしくは１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５、１７１、１７７もしくは１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６、１７２、１７８もしくは１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１６４、１７０、１７６もしくは１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５、１７１、１７７もしくは１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６、１７２、１７８もしくは１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ配列の１、２、３、４、５または６つは、Ｋａｂａｔによって定義される。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ配列の１、２、３、４、５または６つは、Ｃｈｏｔｈｉａによって定義される。いくつかの実施形態において、ＨＶＲ配列の１、２、３、４、５または６つは、ＩＭＧＴによって定義される。いくつかの実施形態において、抗体は、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＩＭＧＴのうちの２つ以上によって定義されるＨＶＲ配列を含む（例えば、抗体は、１つの記述によって定義される１つ以上のＨＶＲ配列と、異なる記述によって定義される１つ以上のＨＶＲ配列とを含む）。
他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、（ａ）（ｉ）ＮＦＡＭＴ（配列番号１７５）、ＮＦＡＶＴ（配列番号２０４）もしくはＮＦＡＬＴ（配列番号３０５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列と、（ｉｉ）ＴＩＧＳＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１４４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列と、（ｉｉｉ）ＤＳＴＶＳＷＳＧＤＦＦＤＹ（配列番号１４５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列とを含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／または（ｂ）（ｉ）ＲＡＳＱＮＶＫＮＤＬＡ（配列番号１４６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列と、（ｉｉ）ＡＡＲＩＲＥＴ（配列番号１４７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列と、（ｉｉｉ）ＱＱＹＹＤＷＰＰＦＴ（配列番号１４８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列とを含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１２０、３３５、２４６、２５８もしくは３２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＶＬドメインは、配列番号９７もしくは３１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２４６のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２５８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３２７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２４６のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号３１２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２５８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号３１２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号３１２のアミノ酸配列を含むか、あるいは、ＶＨドメインは、配列番号３２７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号３１２のアミノ酸配列を含む。
他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、（ａ）（ｉ）ＩＹＡＭＳ（配列番号２６９）、ＩＹＡＶＳ（配列番号２１３）もしくはＩＹＡＬＳ（配列番号３０６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列と、（ｉｉ）ＴＩＧＡＤＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１５０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列と、（ｉｉｉ）ＤＳＴＶＧＷＳＧＤＦＦＤＹ（配列番号１５１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列とを含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／または（ｂ）（ｉ）ＲＡＳＱＮＶＲＳＤＩＡ（配列番号１５２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列と、（ｉｉ）ＡＡＳＳＲＤＴ（配列番号１５３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列と、（ｉｉｉ）ＱＱＹＹＤＷＰＰＦＴ（配列番号１４８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列とを含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号３４１、２４７、２５９もしくは３２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＶＬドメインは、配列番号１０４もしくは２４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２４７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２５９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３２８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２４８のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２４７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２４８のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２５９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２４８のアミノ酸配列を含むか、あるいは、ＶＨドメインは、配列番号３２８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２４８のアミノ酸配列を含む。
他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、（ａ）（ｉ）Ｘ１Ｘ２ＤＸ３Ｎ（配列中、Ｘ１は、ＳまたはＴであり、Ｘ２は、ＹまたはＳであり、Ｘ３は、Ｍ、ＬまたはＶである）（配列番号３０７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列と、（ｉｉ）ＬＩＳＧＳＧＥＩＸ１ＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列中、Ｘ１は、ＩまたはＴである）（配列番号３０８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列と、（ｉｉｉ）ＥＸ１Ｘ２Ｘ３ＹＲＦＦＤＸ４（配列中、Ｘ１は、ＮまたはＤであり、Ｘ２は、ＮまたはＤであり、Ｘ３は、ＲまたはＭであり、Ｘ４は、ＤまたはＹである）（配列番号３０９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列とを含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／または（ｂ）（ｉ）ＲＡＸ１ＱＳＶＹＸ２ＹＬＡ（配列中、Ｘ１は、ＳまたはＤであり、Ｘ２は、ＴまたはＳである）（配列番号３１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列と、（ｉｉ）Ｘ１ＡＸ２Ｘ３ＲＡＸ４（配列中、Ｘ１はＧ、Ａ、またはＤであり、Ｘ２は、ＳまたはＲであり、Ｘ３は、Ｓ、ＮまたはＴであり、Ｘ４は、ＴまたはＡである）（配列番号３１１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列と、（ｉｉｉ）ＱＱＹＹＤＲＰＰＬＴ（配列番号１６０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列とを含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、（ａ）（ｉ）ＳＹＤＭＮ（配列番号２７０）、ＳＹＤＶＮ（配列番号２２１）もしくはＳＹＤＬＮ（配列番号３１３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列と、（ｉｉ）ＬＩＳＧＳＧＥＩＩＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１５６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列と、（ｉｉｉ）ＥＮＮＲＹＲＦＦＤＤ（配列番号１５７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列とを含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／または（ｂ）（ｉ）ＲＡＳＱＳＶＹＴＹＬＡ（配列番号１５８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列と、（ｉｉ）ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１５９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列と、（ｉｉｉ）ＱＱＹＹＤＲＰＰＬＴ（配列番号１６０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列とを含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２４９、１３３、２６０もしくは３２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＶＬドメインは、配列番号１３４、２５０もしくは２５１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３２９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５０のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５０のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３２９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５０のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５１のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５１のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３２９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５１のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５０のアミノ酸配列を含むか、あるいは、ＶＨドメインは、配列番号２４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５１のアミノ酸配列を含む。
他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、Ｘ１Ｘ２ＡＸ３Ｓ（配列中、Ｘ１は、ＳまたはＴであり、Ｘ２は、Ｎ、Ｙ、ＨまたはＤであり、Ｘ３は、Ｍ、ＬまたはＶである）（配列番号２９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列と、ＧＩＳＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＹＹＸ７Ｘ８ＳＸ９ＫＧ（配列中、Ｘ１は、ＡまたはＳであり、Ｘ２は、Ｇ、Ｓまたは不在であり、Ｘ３は、Ｓ、ＤまたはＧであり、Ｘ４は、ＧまたはＳであり、Ｘ５は、Ｄ、ＳまたはＧであり、Ｘ６は、ＴまたはＡであり、Ｘ７は、Ｐ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、ＡまたはＳであり、Ｘ８は、Ａ、ＤまたはＧであり、Ｘ９は、ＶまたはＭである）（配列番号２９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列と、ＥＴＷＮＨＬＦＤＹ（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列とを含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／またはＳＧＧＸ１Ｘ２Ｘ３ＳＸ４ＹＹＸ５（配列中、Ｘ１は、Ｄ、Ｇ、Ｓ、Ｉまたは不在であり、Ｘ２は、Ｓ、Ｗ、Ｇ、Ｙ、Ｄまたは不在であり、Ｘ３は、Ｓ、Ｙ、ＴまたはＤであり、Ｘ４は、Ｈ、Ｔ、ＳまたはＹであり、Ｘ５は、ＧまたはＡである）（配列番号２９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列と、ＳＤＸ１Ｘ２ＲＰＸ３（配列中、Ｘ１は、ＤまたはＮであり、Ｘ２は、Ｅ、ＫまたはＱであり、Ｘ３は、ＳまたはＰである）（配列番号３００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列と、Ｘ１Ｘ２ＹＤＸ３Ｘ４Ｘ５ＹＸ６ＮＸ７（配列中、Ｘ１は、ＧまたはＡであり、Ｘ２は、ＧまたはＡであり、Ｘ３は、Ｇ、Ｙ、Ｑ、ＳまたはＡであり、Ｘ４は、Ｓ、ＲまたはＴであり、Ｘ５は、ＴまたはＳであり、Ｘ６は、Ａ、Ｉ、Ｖ、ＬまたはＴであり、Ｘ７は、Ｔ、Ａ、ＤまたはＰである）（配列番号３０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列とを含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、ＳＸ１ＡＸ２Ｓ（配列中、Ｘ１は、ＮまたはＹであり、Ｘ２は、Ｍ、ＬまたはＶである）（配列番号３０２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列と、ＧＩＳＸ１ＧＸ２Ｘ３ＤＴＹＹＸ４Ｘ５ＳＶＫＧ（配列中、Ｘ１は、ＡまたはＳであり、Ｘ２は、Ｇまたは不在であり、Ｘ３は、ＳまたはＧであり、Ｘ４は、Ｐ、ＧまたはＶであり、Ｘ５は、ＡまたはＤである）（配列番号３０３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列と、ＥＴＷＮＨＬＦＤＹ（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列とを含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／またはＳＧＧＸ１ＹＳＳＹＹＹＡ（配列中、Ｘ１は、ＳまたはＡである）（配列番号３０４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列と、ＳＤＤＫＲＰＳ（配列番号３３６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列と、ＧＧＹＤＱＳＳＹＴＮＰ（配列番号１７２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列とを含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、（ｉ）ＳＮＡＭＳ（配列番号１９４）、ＳＮＡＶＳ（配列番号２７１）またはＳＮＡＬＳ（配列番号３１８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列、（ｉｉ）ＧＩＳＡＧＧＳＤＴＹＹＰＡＳＶＫＧ（配列番号１９５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列、及び（ｉｉｉ）ＥＴＷＮＨＬＦＤＹ（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１３５、２６３、２６４または３３０のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、（ｉ）ＳＮＡＭＳ（配列番号１９４）、ＳＮＡＶＳ（配列番号２７１）またはＳＮＡＬＳ（配列番号３１８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列、（ｉｉ）ＧＩＳＳＧＳＤＴＹＹＧＤＳＶＫＧ（配列番号１９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列、及び（ｉｉｉ）ＥＴＷＮＨＬＦＤＹ（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１３７、２６５、２６６または３３１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、（ｉ）ＳＹＡＭＳ（配列番号２００）、ＳＹＡＶＳ（配列番号２７２）またはＳＹＡＬＳ（配列番号３１９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列、（ｉｉ）ＧＩＳＳＧＧＤＴＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列、及び（ｉｉｉ）ＥＴＷＮＨＬＦＤＹ（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１３９、２６７、２６８または３３２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列ＦＷ１−ＨＶＲ−Ｌ１−ＦＷ２−ＨＶＲ−Ｌ２−ＦＷ３−ＨＶＲ−Ｌ３−ＦＷ４（Ｎ末端からＣ末端）を含み、配列中、ＦＷ１は、アミノ酸配列ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣ（配列番号３１４）を含み、ＦＷ２は、アミノ酸配列ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＴＬＩＹ（配列番号３１５）を含み、ＦＷ３は、アミノ酸配列ＮＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶＴＬＴＩＳＧＶＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣ（配列番号３１６）を含み、ＦＷ４は、アミノ酸配列ＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号３１７）を含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、（ｉ）ＳＧＧＳＹＳＳＹＹＹＡ（配列番号１７０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列、（ｉｉ）ＳＤＤＫＲＰＳ（配列番号３３６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列、及び（ｉｉｉ）ＧＧＹＤＱＳＳＹＴＮＰ（配列番号１７２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、（ｉ）ＳＧＧＡＹＳＳＹＹＹＡ（配列番号２６１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列、（ｉｉ）ＳＤＤＫＲＰＳ（配列番号３３６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列、及び（ｉｉｉ）ＧＧＹＤＱＳＳＹＴＮＰ（配列番号１７２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２６３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６４のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６６のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３１のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３２のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６４のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６６のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３１のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３２のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、あるいは、ＶＨドメインは、配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含む。
他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、配列番号２９６に従って、Ｉ３１、Ｖ３３、Ｑ５２、Ｋ５３、Ｔ６７、Ｒ６９、Ｎ７０及びＫ９６からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸位置で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２９６に従って、Ｉ３１、Ｖ３３、Ｑ５２、Ｋ５３、Ｔ６７、Ｒ６９、Ｎ７０及びＫ９６で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２９６に従って、Ｌ３０、Ｐ３２、Ｅ５４、Ｔ６２、Ｎ７１、Ｍ７２、Ｆ７４及びＲ９５からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸位置で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに更に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２９６に従って、Ｌ３０、Ｐ３２、Ｅ５４、Ｔ６２、Ｎ７１、Ｍ７２、Ｆ７４及びＲ９５で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに更に結合する。
他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、配列番号２９６に従って、Ｉ７、Ｐ９、Ｄ１０、Ｋ１１、Ｓ１２、Ａ４２、Ａ１０８及びＥ１１１からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸位置で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２９６に従って、Ｋ１１、Ａ４２、Ａ１０８及びＥ１１１で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２９６に従って、Ｉ７、Ｐ９、Ｄ１０、Ｋ１１、Ｓ１２、Ａ１０８及びＥ１１１で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２９６に従って、Ｌ１４、Ｔ２６、Ｔ２８、Ｔ８８、Ｙ９０、Ｓ１０６、Ｓ１１３及びＡ１１６からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸位置で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに更に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２９６に従って、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１のＬ１４、Ｔ８８、Ｙ９０、Ｓ１０６、Ｓ１１３及びＡ１１６で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに更に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２９６に従って、Ｌ１４、Ｔ２６及びＴ２８で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに更に結合する。
他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、配列番号２９６に従って、Ｅ４７、Ｌ４８、Ｐ５８、Ｒ５９、Ｔ８２及びＡ８４からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸位置で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２９６に従って、Ｅ４７、Ｌ４８、Ｐ５８、Ｒ５９、Ｔ８２及びＡ８４で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２９６に従って、Ａ１７、Ｐ４４、Ｇ４５、Ｉ４９、Ｅ５４、Ｇ５５、Ｈ５６、Ｆ５７及びＰ８３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸位置で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに更に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２９６に従って、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１のＡ１７、Ｐ４４、Ｇ４５、Ｉ４９、Ｅ５４、Ｇ５５、Ｈ５６、Ｆ５７及びＰ８３で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに更に結合する。
他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメインに１００ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメインに１００ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドのＤ１ドメイン及びヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドのＤ１ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、カニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチド細胞外ドメインに結合する。
他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドのＤ１ドメインに結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αのＤ１ドメインに１００ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドのＤ１ドメインに１００ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合し、及び／またはヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドのＤ１ドメインに１００ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドのＤ１ドメイン及びヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドのＤ１ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、カニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチド細胞外ドメインに結合する。
他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの結合について、抗体１１９、１２０、１２１、１２２、２１、２５、２７、６６及び１３５からなる群から選択される抗体の重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する。他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの結合について、（ａ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号９７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｂ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号９８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｃ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｄ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号９９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｅ）配列番号１３５のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号１３６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｆ）配列番号１３７のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号１３８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｇ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号１４０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｈ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号１４２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｉ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号１０４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する。
他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの結合について、抗体１３６及び１３７からなる群から選択される抗体の重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する。他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの結合について、（ａ）配列番号１３３のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号１３４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｂ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する。
他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの結合について、抗体３、２１３、１７３及び２０９からなる群から選択される抗体の重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する。他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの結合について、（ａ）配列番号２４２のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号２４３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｂ）配列番号２７５のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号２７６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｃ）配列番号２７８のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号２７９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｄ）配列番号２８０のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号２８１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する。
他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの結合について、抗体１１５、１１６、１１７、１１８及び１３２からなる群から選択される抗体の重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する。他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの結合について、（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号９３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｂ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号９４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｃ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号９５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｄ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号９６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｅ）配列番号２８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号２８３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する。
他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの結合について、抗体２１８、１２３、１４９、１６１、１６２及び１９４からなる群から選択される抗体の重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する。他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの結合について、（ａ）配列番号２８４のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号２８５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｂ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号１００のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｃ）配列番号２８６のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号２８７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｄ）配列番号２８８のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号２８９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、（ｅ）配列番号２９０のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号２９１のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｆ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び配列番号２９３のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する。
他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの結合について、抗体４５の重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する。他の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する単離された抗体であり、ここで、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの結合について、配列番号２４４のアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインと、配列番号２４５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインとを含む、参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する。
上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するマクロファージによる食作用を亢進する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する樹状細胞の活性化を亢進する。いくつかの実施形態において、抗体は、ＣＤ４７を発現する腫瘍のｉｎ ｖｉｖｏ成長を阻害する。いくつかの実施形態において、抗体は、ＣＤ４７発現細胞とＴ細胞との間の相互作用を妨げない。
上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、単一ドメイン抗体、一本鎖重鎖抗体または一本鎖軽鎖抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号３２５、３２６または４２６のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号３２０〜３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、Ｆｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＩｇＧ１のＦｃ領域、ＩｇＧ２のＦｃ領域及びＩｇＧ４のＦｃ領域からなる群から選択されるヒトＦｃ領域である。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＥＵナンバリングに従って、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ及びＮ２９７Ａからなる群から選択される１つ以上の変異を含む、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＥＵナンバリングに従って、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７Ａからなる群から選択される１つ以上の変異を含む、ヒトＩｇＧ２のＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、ｄｅｌＧ２３６及びＮ２９７Ａからなる群から選択される１つ以上の変異を含む、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ及びｓｃＦｖ断片からなる群から選択される抗体断片である。いくつかの実施形態において、抗体は、細胞傷害剤または標識にコンジュゲートされる。
いくつかの実施形態において、抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する第１の抗原結合ドメインと、がん細胞によって発現される抗原に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む。いくつかの実施形態において、がん細胞によって発現される抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＳ１／ＳＬＡＭＦ７、Ｔｒｏｐ−２、５Ｔ４、ＥｐｈＡ４、ＢＣＭＡ、ムチン１、ムチン１６、ＰＤ−Ｌ１、ＰＴＫ７、ＳＴＥＡＰ１、エンドセリンＢ型受容体、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＮＰＰ３、ＳＬＣ４４Ａ４、ＧＮＭＢ、ネクチン４、ＮａＰｉ２ｂ、ＬＩＶ−１Ａ、グアニル酸シクラーゼＣ、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリンαＶβ３、インテグリンα５β１、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰ、テネイシン、Ｌｅｙ、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ７２、ムチン、ＣＡＩＸ、ＥＰＨＡ３、葉酸受容体α、ＧＤ２、ＧＤ３、及びＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ、ＳＳＸ−２、ＭＡＧＥファミリータンパク質、ＭＡＧＥ−Ａ３、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、ｇｐ７５／ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２、未成熟ラミニン受容体、ＭＯＫ／ＲＡＧＥ−１、ＷＴ−１、ＳＡＰ−１、ＢＩＮＧ−４、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、ＭＡＲＴ−２、ｐ５３、Ｒａｓ、β−カテニン、ＴＧＦ−βＲＩＩ、ＨＰＶ Ｅ６またはＨＰＶ Ｅ７に由来するペプチドを含むＭＨＣ／ペプチド複合体からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、抗体は、ニワトリ抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはヒト抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、ニワトリによって産生されるか、ニワトリに由来する。
更に、本明細書で提供されるのは、上記の実施形態のいずれか１つによる抗体を含むポリヌクレオチドである。更に、本明細書で提供されるのは、上記の実施形態のいずれか１つによるポリヌクレオチドを含むベクターである。更に、本明細書で提供されるのは、上記の実施形態のいずれか１つによるポリヌクレオチドまたはベクターを含む宿主細胞である。更に、本明細書で提供されるのは、当該抗体が産生されるように、上記の実施形態のいずれか１つによる宿主細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法である。いくつかの実施形態において、方法は、宿主細胞から抗体を回収することを更に含む。
更に、本明細書で提供されるのは、個体のがんを治療するか、個体のがんの進行を遅らせる方法であって、上記の実施形態のいずれか１つによる抗体の有効量を個体に投与することを含む、方法である。いくつかの実施形態において、方法は、第２の抗体の有効量を個体に投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、第２の抗体は、がん細胞によって発現される抗原に結合する。いくつかの実施形態において、がん細胞によって発現される抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＳ１／ＳＬＡＭＦ７、Ｔｒｏｐ−２、５Ｔ４、ＥｐｈＡ４、ＢＣＭＡ、ムチン１、ムチン１６、ＰＴＫ７、ＳＴＥＡＰ１、エンドセリンＢ型受容体、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＮＰＰ３、ＳＬＣ４４Ａ４、ＧＮＭＢ、ネクチン４、ＮａＰｉ２ｂ、ＬＩＶ−１Ａ、グアニル酸シクラーゼＣ、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリンαＶβ３、インテグリンα５β１、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰ、テネイシン、Ｌｅｙ、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ７２、ムチン、ＣＡＩＸ、ＥＰＨＡ３、葉酸受容体α、ＧＤ２、ＧＤ３、及びＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ、ＳＳＸ−２、ＭＡＧＥファミリータンパク質、ＭＡＧＥ−Ａ３、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、ｇｐ７５／ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２、未成熟ラミニン受容体、ＭＯＫ／ＲＡＧＥ−１、ＷＴ−１、ＳＡＰ−１、ＢＩＮＧ−４、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、ＭＡＲＴ−２、ｐ５３、Ｒａｓ、β−カテニン、ＴＧＦ−βＲＩＩ、ＨＰＶ Ｅ６またはＨＰＶ Ｅ７に由来するペプチドを含むＭＨＣ／ペプチド複合体からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、方法は、免疫療法剤の有効量を個体に投与することを更に含む。いくつかの実施形態において、免疫療法剤は、第２の抗体を含む。いくつかの実施形態において、第２の抗体は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＯＸ４０、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＴＮＦＲ２、Ｂ７−Ｈ３、ＦＺＤ７、ＣＤ２７、ＣＣＲ４、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＩＣＯＳ、ＣＣＲ２、ＩＤＯ、Ａ２Ｒ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ８０、ＣＤ４７、アルギナーゼ、ＴＤＯ及びＰＶＲＩＧからなる群から選択される抗原に結合する。いくつかの実施形態において、第１の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン、またはヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドとヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの両方の細胞外ドメインに、１００ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合し、ここで、第１の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断し、第２の抗体は、ＰＤ−１に結合する。いくつかの実施形態において、第１の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドのＤ１ドメインに結合し、ここで、第１の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインとヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断せず、第２の抗体は、ＰＤ−１に結合する。いくつかの実施形態において、第１の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメインに１００ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合し、ここで、第１の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインとヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断し、第２の抗体は、ＰＤ−Ｌ１に結合する。いくつかの実施形態において、第１の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドのＤ１ドメインに結合し、ここで、第１の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインとヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断せず、第２の抗体は、ＰＤ−Ｌ１に結合する。いくつかの実施形態において、個体は、ヒトである。
更に、本明細書で提供されるのは、個体の自己免疫疾患または炎症性疾患を治療するか、個体の自己免疫疾患または炎症性疾患の進行を遅らせる方法であって、上記の実施形態のいずれか１つによる抗体の有効量を個体に投与することを含む、方法である。いくつかの実施形態において、自己免疫疾患または炎症性疾患は、多発性硬化症、関節リウマチ、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、抗体媒介性の炎症性疾患または自己免疫疾患、移植片対宿主病、敗血症、糖尿病、乾癬、乾癬性関節炎、アテローム性動脈硬化症、シェーグレン症候群、全身性進行性硬化症、強皮症、急性冠症候群、虚血再灌流、クローン病、潰瘍性大腸炎、子宮内膜症、糸球体腎炎、ＩｇＡ腎症、多発性嚢胞腎疾患、重症筋無力症、特発性肺線維症、喘息、アトピー性皮膚炎、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、血管炎及び自己免疫性炎症性筋炎からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、個体は、ヒトである。
更に、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、かつヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断しない抗原結合ドメインを特定する方法であって、（ａ）ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する抗原結合ドメインを準備することと、（ｂ）ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含むポリペプチドに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体を組み立てることであって、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する、組み立てることと、（ｃ）抗原結合ドメインを、組み立てた複合体に接触させることと、（ｄ）複合体に対する抗原結合ドメインの結合を検出することであって、複合体に対する抗原結合ドメインの結合は、当該抗原結合ドメインがヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断しないことを示す、検出することとを含む、方法である。更に、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、かつヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断しない抗体または抗原結合ドメインを特定する方法であって、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する抗体または抗原結合ドメインを、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含むポリペプチドに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体と接触させることであって、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する、接触させることと、複合体に対する抗原結合ドメインの結合を検出することであって、複合体に対する抗原結合ドメインの結合は、当該抗原結合ドメインがヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断しないことを示す、検出することとを含む、方法である。更に、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、かつヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断する抗原結合ドメインを特定する方法であって、（ａ）ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する抗原結合ドメインを準備することと、（ｂ）ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含むポリペプチドに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体を組み立てることであって、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する、組み立てることと、（ｃ）抗原結合ドメインを、組み立てた複合体に接触させることと、（ｄ）複合体に対する抗原結合ドメインの結合を検出することであって、複合体に対する抗原結合ドメインの結合の欠如は、当該抗原結合ドメインがヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断することを示す、検出することとを含む、方法である。更に、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、かつヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断する抗体または抗原結合ドメインを特定する方法であって、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する抗体または抗原結合ドメインを、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含むポリペプチドに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体と接触させることであって、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する、接触させることと、（ｄ）複合体に対する抗原結合ドメインの結合を検出することであって、複合体に対する抗原結合ドメインの結合の欠如は、当該抗原結合ドメインがヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断することを示す、検出することとを含む、方法である。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番号１７〜５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含むポリペプチドは、ヒトＣＤ４７の細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含むポリペプチドは、抗体Ｆｃ領域を更に含む。
更に、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する抗ＳＩＲＰ−α抗体を産生する方法であって、（ａ）ヒトＳＩＲＰ−α細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）の少なくとも一部を含むペプチドでニワトリを免疫化することと、（ｂ）免疫化したニワトリの抗体産生細胞から抗体を得ることと、（ｃ）細胞から得た抗体とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）との間の結合を検出することであって、抗体とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）との間の結合は、当該抗体が、ヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する抗ＳＩＲＰ−α抗体であることを示す、検出することとを含む、方法である。いくつかの実施形態において、抗体は、ニワトリ抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはヒト抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＡＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＡＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、３、４、５、６、７、８、９または１０個の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、３、４、５、６、７、８、９または１０個の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドのそれぞれは、配列番号５、６及び７６〜８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）を含む。いくつかの実施形態において、方法は、細胞から得た抗体と、サルＳＩＲＰ−αポリペプチド、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチド、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチド及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドからなる群から選択される１つ以上のＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）との間の結合を検出することを更に含む。いくつかの実施形態において、抗体は、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドは、カニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドである。いくつかの実施形態において、抗体は、少なくとも２つの異なるサルＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１１のアミノ酸配列を含むカニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、配列番号１２のアミノ酸配列を含むカニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、２つ以上の異なるネズミＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、１つ以上のネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、ここで、１つ以上のネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドのそれぞれは、配列番号７〜１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合しない。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合しない。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、配列番号１４のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、方法は、細胞から得た抗体と、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体との間の結合または結合の欠如を検出することを更に含み、ここで、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体に結合し、ここで、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない。いくつかの実施形態において、抗体は、第１の細胞の表面上に発現されるヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、第２の細胞の表面上に発現されるヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない。いくつかの実施形態において、抗体は、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体に結合せず、ここで、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。いくつかの実施形態において、抗体は、第１の細胞の表面上に発現されるヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、第２の細胞の表面上に発現されるヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。いくつかの実施形態において、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる。いくつかの実施形態において、第１の細胞の表面上に発現されるヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、第２の細胞の表面上に発現されるヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる。いくつかの実施形態において、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドのｋｏｆｆを増大させる。いくつかの実施形態において、第１の細胞の表面上に発現されるヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、第２の細胞の表面上に発現されるヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドのｋｏｆｆを増大させる。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞のＳＩＲＰ−αシグナル伝達を調節する。いくつかの実施形態において、細胞は、マクロファージ、樹状細胞、好中球、好酸球及び骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）からなる群から選択される白血球である。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するマクロファージのＳＩＲＰ−αシグナル伝達を阻害する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するマクロファージによる食作用を亢進する。
本明細書に記載される様々な実施形態の特性の１つ、複数または全てが組み合わされ、本発明の他の実施形態が形成され得ることを理解されたい。本発明のこれらの態様及び他の態様は、当業者に明らかとなるであろう。本発明のこれらの実施形態及び他の実施形態は、以下の詳細な説明によって更に詳述される。
本開示は、１つ以上のヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、潜在的に興味深い様々なＳＩＲＰ−α結合プロファイルを有する抗体について記載する。これらの独特なＳＩＲＰ−α結合プロファイルは、以下の結合能力のうちの１つ以上を含み、それらを多元的に組み合わせることで、多数の特有の特異性がもたらされる。例えば、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２、もしくはその両方の細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合することができ、抗体は、１つ以上のサルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合することができるか、結合することができず、抗体は、１つ以上のネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合することができるか、結合することができず、抗体は、ヒトＳＩＲＰβポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合することができるか、結合することができず、及び／または抗体は、ヒトＳＩＲＰγポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合することができるか、結合することができない。加えて、本開示は、ＣＤ４７のＳＩＲＰ−αへの結合を遮断する抗体、ＣＤ４７のＳＩＲＰ−αへの結合を遮断しない抗体、及びＣＤ４７のＳＩＲＰ−αへの結合を遮断しないが、ＣＤ４７に対するＳＩＲＰ−αの親和性を低下させ、ＣＤ４７／ＳＩＲＰ−α複合体のより迅速な解離をもたらす抗体について記載する。加えて、本開示は、マクロファージの食作用を亢進する能力、樹状細胞の活性化を亢進する能力、ＣＤ４７を発現する腫瘍のｉｎ ｖｉｖｏ成長を阻害する能力、及び／またはＣＤ４７発現細胞とＴ細胞との間の相互作用を妨げずにこれらの活性のうちの１つ以上を達成する能力などの目的とする１つ以上のｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ ｖｉｖｏ生物学的特性を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体について記載する。
本明細書に記載される方法は、上記の結合特異性の特有の組み合わせを有する抗体を特定するために使用され得る。理論に束縛されることを望むものではないが、上述のような異なる結合プロファイルを有する特有の抗ＳＩＲＰ−α抗体を特定できることは、望ましい臨床特性及び前臨床研究の利点を有する抗体（例えば、本明細書に記載されるもの）の特定を可能にすると考えられる。
一態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合する単離された抗体である。更に、本明細書で提供されるのは、本開示の抗体をコードするポリヌクレオチド及びベクターならびにそれに関連する抗体産生方法である。
別の態様において、本明細書で提供されるのは、個体のがんを治療するか、個体のがんの進行を遅らせる方法であって、本開示の抗体の有効量を個体に投与することを含む、方法である。
別の態様において、本明細書で提供されるのは、個体の自己免疫疾患または炎症性疾患を治療するか、個体の自己免疫疾患または炎症性疾患の進行を遅らせる方法であって、本開示の抗体の有効量を個体に投与することを含む、方法である。
別の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、かつヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断しない抗原結合ドメインを特定する方法である。いくつかの実施形態において、方法は、（ａ）ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する抗原結合ドメインを準備することと、（ｂ）ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含むポリペプチドに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体を組み立てることであって、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する、組み立てることと、（ｃ）抗原結合ドメインを、組み立てた複合体に接触させることと、（ｄ）複合体に対する抗原結合ドメインの結合を検出することであって、複合体に対する抗原結合ドメインの結合は、当該抗原結合ドメインがヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断しないことを示す、検出することとを含む。別の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、かつヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断しない抗原結合ドメインを特定する方法である。いくつかの実施形態において、方法は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する抗原結合ドメインまたは抗体を、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含むポリペプチドに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体と接触させることであって、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する、接触させることと、複合体に対する抗原結合ドメインの結合を検出することであって、複合体に対する抗原結合ドメインの結合は、当該抗原結合ドメインがヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断しないことを示す、検出することとを含む。
別の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、かつヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断する抗原結合ドメインを特定する方法である。いくつかの実施形態において、方法は、（ａ）ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する抗原結合ドメインを準備することと、（ｂ）ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含むポリペプチドに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体を組み立てることであって、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する、組み立てることと、（ｃ）抗原結合ドメインを、組み立てた複合体に接触させることと、（ｄ）複合体に対する抗原結合ドメインの結合を検出することであって、複合体に対する抗原結合ドメインの結合の欠如は、当該抗原結合ドメインがヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断することを示す、検出することとを含む。別の態様において、本明細書で提供されるのは、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、かつヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断する抗原結合ドメインを特定する方法である。いくつかの実施形態において、方法は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する抗原結合ドメインまたは抗体を、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含むポリペプチドに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体と接触させることであって、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する、接触させることと、複合体に対する抗原結合ドメインの結合を検出することであって、複合体に対する抗原結合ドメインの結合の欠如は、当該抗原結合ドメインがヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断することを示す、検出することとを含む。
別の態様において、本明細書で提供されるのは、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する抗ＳＩＲＰ−α抗体を産生する方法である。いくつかの実施形態において、方法は、（ａ）ヒトＳＩＲＰ−α細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）の少なくとも一部を含むペプチドでニワトリを免疫化することと、（ｂ）免疫化したニワトリの抗体産生細胞から抗体を得ることと、（ｃ）細胞から得た抗体と、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）との間の結合を検出することであって、抗体と、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）との間の結合は、当該抗体が、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する抗ＳＩＲＰ−α抗体であることを示す、検出することとを含む。
定義
本開示の実施形態を詳述する前に、本開示は、特定の組成物または生物系に限定されず、当然のことながら、変わり得ることを理解されたい。また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を記載する目的でのみ使用され、限定を意図するものではないことが理解される。
本開示の実施形態を詳述する前に、本開示は、特定の組成物または生物系に限定されず、当然のことながら、変わり得ることを理解されたい。また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を記載する目的でのみ使用され、限定を意図するものではないことが理解される。
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈により別途明示される場合を除き、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「分子」への言及は、任意選択により、２つ以上のかかる分子の組み合わせなどを含む。
本明細書で使用される「約」という用語は、当業者であれば容易に理解する、それぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」を付した値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーター自体を対象とする実施形態を含む（かつ記載する）ものである。
本開示の態様及び実施形態は、態様及び実施形態を「含む」、態様及び実施形態「からなる」、ならびに態様及び実施形態「から本質的になる」ことを含むことを理解されたい。
本明細書で使用される「ＳＩＲＰ−αポリペプチド」は、ヒト、サル、齧歯類（例えば、マウスまたはラット）などの哺乳類、及びニワトリなどの鳥類を含む、任意の脊椎動物に由来するゲノムによってコードされる任意の内因性または天然のＳＩＲＰ−αポリペプチドを指し得る。本用語はまた、天然バリアント、例えば、選択的スプライシングバリアント、アレルバリアントまたは多型（例えば、本明細書に記載されるもの）を含む。本用語は、更に、プロセシングを受けていない完全長のＳＩＲＰ−αポリペプチド、及び細胞内プロセシング（例えば、シグナル配列の除去など）から生じるＳＩＲＰ−αポリペプチドも指し得る。例示的なＳＩＲＰ−αポリペプチド配列については、本明細書に記載される。いくつかの実施形態において、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドは、ヒトＳＩＲＰＡ遺伝子によってコードされるもの（例えば、ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ Ｎｏ．１４０８８５によって記述されるもの）である。本明細書に記載されるように、ＳＩＲＰ−αポリペプチドは、種内及び種間で高度に多型である。例えば、細胞外ドメインにアミノ酸多型を有する、少なくとも１０個のヒトバリアントが同定されている。
ＳＩＲＰ−αポリペプチドは、リガンド／パートナー、例えば、ＣＤ４７に結合する、細胞外ドメインを含む。ＳＩＲＰ−αポリペプチドは、相同性の高い３つの免疫グロブリン（Ｉｇ）様細胞外ドメイン（Ｄ１、Ｄ２及びＤ３）を含む。ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン（「Ｄ１ドメイン」）は、ＳＩＲＰ−αの膜遠位の細胞外ドメインを指し、ＳＩＲＰ−αのＣＤ４７への結合を媒介する（例えば、Ｈａｔｈｅｒｌｅｙ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ ３１：２６６−７７、Ｈａｔｈｅｒｌｅｙ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２：１４５６７−７５、Ｈａｔｈｅｒｌｅｙ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８４：２６６１３−９、及びＬｅｅ，Ｗ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８５：３７９５３−６３参照）。細胞外ドメインは、一般に、例えば、細胞表面上に発現される、ＳＩＲＰ−αの細胞外部分全体を指し、Ｄ１ドメインなどの別個のＳＩＲＰ−αドメインを含み得る。Ｄ１ドメインは、ＣＤ４７結合の媒介に重要であることが示されている残基を含有する（例えば、Ｌｅｅ，Ｗ．Ｙ．ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７９：７７４１−５０参照）。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する抗体は、Ｄ１ドメインの１つ以上の残基に結合する。例示的なヒトＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン配列には、本開示を通して記載され、限定するものではないが、配列番号５、６及び７６〜８３が挙げられる。ヒトＳＩＲＰ−αＤ２及びＤ３ドメイン配列も知られており、限定するものではないが、Ｄ２ドメインについては、ＡＰＶＶＳＧＰＡＡＲＡＴＰＱＨＴＶＳＦＴＣＥＳＨＧＦＳＰＲＤＩＴＬＫＷＦＫＮＧＮＥＬＳＤＦＱＴＮＶＤＰＶＧＥＳＶＳＹＳＩＨＳＴＡＫＶＶＬＴＲＥＤＶＨＳＱＶＩＣＥＶＡＨＶＴＬＱＧＤＰＬＲＧＴＡＮＬＳＥＴＩＲ（配列番号１３１）、Ｄ３ドメインについては、ＶＰＰＴＬＥＶＴＱＱＰＶＲＡＥＮＱＶＮＶＴＣＱＶＲＫＦＹＰＱＲＬＱＬＴＷＬＥＮＧＮＶＳＲＴＥＴＡＳＴＶＴＥＮＫＤＧＴＹＮＷＭＳＷＬＬＶＮＶＳＡＨＲＤＤＶＫＬＴＣＱＶＥＨＤＧＱＰＡＶＳＫＳＨＤＬＫＶＳ（配列番号１３２）を含む。
本明細書で使用されるとき、「ＣＤ４７」（インテグリン関連タンパク質（ＩＡＰ）、ＭＥＲ６及びＯＡ３としても知られる）は、その役割のなかでも特に、ＳＩＲＰ−αポリペプチドの結合パートナーとして機能するポリペプチドを指す。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７は、ヒトＣＤ４７ポリペプチド、例えば、ヒトＣＤ４７遺伝子によってコードされるポリペプチド（ＮＣＢＩ Ｒｅｆ Ｓｅｑ ＩＤ Ｎｏ．９６１によって記述されるものなど）を指す。例示的なヒトＣＤ４７アミノ酸配列は、公知である（例えば、ＮＣＢＩ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．ＮＰ＿００１７６８参照）。特に、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインは、ＳＩＲＰ−α結合に重要であることが知られている、ＣＤ４７のＮ末端細胞外ドメインを指す（例えば、Ｂａｒｃｌａｙ，Ａ．Ｎ．ａｎｄ Ｂｒｏｗｎ，Ｍ．Ｈ．（２００６）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：４５７−６４及びＨａｔｈｅｒｌｅｙ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８４：２６６１３−９参照）。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインは、ＱＬＬＦＮＫＴＫＳＶＥＦＴＦＳＮＤＴＶＶＩＰＣＦＶＴＮＭＥＡＱＮＴＴＥＶＹＶＫＷＫＦＫＧＲＤＩＹＴＦＤＧＡＬＮＫＳＴＶＰＴＤＦＳＳＡＫＩＥＶＳＱＬＬＫＧＤＡＳＬＫＭＤＫＳＤＡＶＳＨＴＧＮＹＴＣＥＶＴＥＬＴＲＥＧＥＴＩＩＥＬＫＹＲＶＶＳ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含む。「ＣＤ４７」という用語はまた、ＳＩＲＰ−αに結合することができる修飾ＣＤ４７ポリペプチド、例えば、別のポリペプチドまたは他の部分（例えば、ＩｇのＦｃ領域）にコンジュゲートされたＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含むポリペプチドも含み得る。
本明細書で使用されるとき、「ＳＩＲＰ−αエピトープ」は、本開示の抗ＳＩＲＰ−α抗体及び／またはＳＩＲＰ−α結合パートナー（限定するものではないが、ＣＤ４７を含む）に対する結合部位を形成する、ＳＩＲＰ−αポリペプチドのアミノ酸を指し得る。エピトープに対する抗体または他のポリペプチドの結合は、当該技術分野において知られている様々なアッセイを使用して特徴付け及び／またはマッピングすることができ、これらには、限定するものではないが、クロスブロッキングアッセイ（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ（１９８８）参照）、エピトープマッピング（Ｃｈａｍｐｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１３８８−１３９４（１９９５）参照）、Ｘ線共結晶構造解析、エピトープビニング、部位特異的変異導入、オリゴペプチドスキャニング、ハイスループット変異導入マッピング、水素重水素交換、限定タンパク質分解などが含まれる。
本明細書で使用されるとき、「ＳＩＲＰ−αシグナル伝達を調節する」とは、ＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞において、ＳＩＲＰ−αシグナル伝達の１つ以上の側面をアンタゴナイズ、アゴナイズ、または妨害することを指し得る。ＳＩＲＰ−αシグナル伝達は、ＳＩＲＰ−αポリペプチドの活性化によって媒介される１つ以上の細胞内シグナル伝達事象（限定するものではないが、ＳＩＲＰ−αの細胞内領域のチロシンリン酸化、ホスファターゼ（例えば、ＳＨＰ１）結合、アダプタータンパク質結合（例えば、ＳＣＡＰ２、ＦＹＢ及び／またはＧＲＢ２）、サイトカイン産生（例えば、ＩＬ−１０、ＩＬ−１β、ＩＦＮまたはＴＮＦ）、及び一酸化窒素産生を含む）、及び／または１つ以上の細胞間の表現型（限定するものではないが、マクロファージの食作用ならびにマクロファージ、好酸球、好中球、樹状細胞及び骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の他の活性化または抑制表現型を含む）を指し得る。
本明細書で使用されるとき、「抗体」という用語は、インタクト抗体、抗体断片（限定するものではないが、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ダイアボディ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、単一ドメイン抗体、一本鎖重鎖抗体及び一本鎖軽鎖抗体を含む）（ただし、所望の生物活性（例えば、エピトープ結合）を示す場合に限る）、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、及び抗体様タンパク質を指し得る。
本明細書で使用されるとき、抗体または抗体断片に関して使用される「二重特異性」という用語は、２つの異なる結合特異性を有する、抗体または抗体断片を含む。例えば、各結合特異性は、異なる抗原を認識してもよいし、各結合特異性は、異なる親和性及び／または明確なエピトープで、同じ抗原を認識してもよい。いくつかの実施形態において、それぞれ異なる結合特異性は、１つ以上の異なる抗体抗原結合ドメイン（例えば、可変ドメイン）を含み、したがって、二重特異性抗体または抗体断片は、少なくとも第１の結合特異性を有する第１の抗原結合ドメインと、第２の結合特異性を有する第２の抗原結合ドメインとを含む。種々の例示的な二重特異性抗体フォーマットが本明細書に記載され、また、当該技術分野において知られている。
「単離された」抗体とは、その天然環境の成分（例えば、宿主細胞または生物）から分離及び／または回収された抗体を指し得る。いくつかの実施形態において、抗体は、例えば、銀、クマシーなどによる染色を使用したＳＤＳ−ＰＡＧＥによって、所望の純度重量％（例えば、少なくとも９５％）及び／または均一性まで精製される。いくつかの実施形態において、単離された抗体は、１つ以上の精製工程の後に得られる。
当該技術分野で知られているように、「天然」抗体は、２つの同一の軽鎖（Ｌ）及び２つの同一の重鎖（Ｈ）を含む、典型的にヘテロ四量体である複合体を指す。鎖内ジスルフィド架橋に加えて、様々な数のジスルフィド結合が２つの重鎖を連結し、１つは各軽鎖を重鎖に連結する。重鎖は、可変ドメイン（ＶＨ）と、それに続く（Ｎ末端からＣ末端へ）３つまたは４つの定常ドメインを含む。軽鎖は、可変ドメイン（ＶＬ）と、それに続く定常ドメイン（ＣＬ）を含む。典型的に、哺乳動物の軽鎖は、アミノ酸配列に基づいて、κ及びλの２つの分類のうちの１つに分類される。
「定常ドメイン」は、抗体または断片のうち、より保存されている部分、例えば、可変ドメイン外を指し得る。本用語は、ＣＬドメイン、ならびに重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３及び任意選択によりＣＨ４を含み得る。
重鎖の定常ドメインは、５つの主要なタイプ：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭのうちの１つに割り当てることができる。これらの主要なタイプの多くには、いくつかのサブタイプが存在する。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元立体構造は、よく知られており、例えば、Ａｂｂａｓ ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ ｅｄ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｃｏ．，２０００）に概説されている。
本明細書で使用されるとき、「抗体可変ドメイン」という用語は、相補性決定領域（ＣＤＲ、例えば、ＣＤＲ Ｌ１、ＣＤＲ Ｌ２、ＣＤＲ Ｌ３、ＣＤＲ Ｈ１、ＣＤＲ Ｈ２及びＣＤＲ Ｈ３）及びフレームワーク領域（ＦＲ）を含む、抗体の軽鎖及び重鎖の部分を指す。
「可変」という用語は、可変ドメインの部分配列が抗体間で配列の点で実質的に異なり、その抗原に対する特定の抗体の結合特異性にとって重要であるという事実を指す。可変性は、ＶＨ及びＶＬの両ドメイン内の３つの超可変領域（ＨＶＲ）に集中している。可変ドメインのうち、より保存されている部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれ、その間にＨＶＲが点在する。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、各々、ループを形成する３つのＨＶＲによって連結された４つのＦＲ領域を含む（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）参照）。
「超可変領域（ＨＶＲ）」という用語は、高度な配列可変性及び／または既定のループ形成を特徴とする、ＶＨドメイン及びＶＬドメインの小領域を指し得る。これらには、ＶＨドメイン中の３つのＨＶＲ（Ｈ１、Ｈ２及びＨ３）及びＶＬドメイン中の３つのＨＶＲ（Ｌ１、Ｌ２及びＬ３）が含まれる。Ｈ３は、優れた結合特異性を付与するのに重要であると考えられ、Ｌ３及びＨ３は、最大の多様性を示す。Ｊｏｈｎｓｏｎ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１−２５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，２００３）を参照されたい。
ＨＶＲの記述には多くのものが知られている。Ｋａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列可変性に基づくものであり、最も一般的に使用されている（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。Ｃｈｏｔｈｉａは、むしろ、構造的ループの位置に言及するものである（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。ＡｂＭ ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ ＨＶＲとＣｈｏｔｈｉａ構造的ループとの間の妥協案を示すものであり、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアで使用されている。「接触」ＨＶＲは、利用可能な複合体結晶構造の分析に基づくものである。これらのＨＶＲの各々の残基を、以下に示す。「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、ＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
「伸長」ＨＶＲも知られている：ＶＬ中、２４〜３６または２４〜３４（Ｌ１）、４６〜５６または５０〜５６（Ｌ２）及び８９〜９７または８９〜９６（Ｌ３）、ならびにＶＨ中、２６〜３５（Ｈ１）、５０〜６５または４９〜６５（Ｈ２）及び９３〜１０２、９４〜１０２または９５〜１０２（Ｈ３）（Ｋａｂａｔナンバリング）。
「Ｋａｂａｔに従うナンバリング」は、Ｋａｂａｔら（上掲）における抗体編成の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに使用されるナンバリングシステムを指し得る。実際の直鎖状アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＨＶＲの短縮化に応じてアミノ酸がより少ないこともあれば、ＦＲまたはＨＶＲへの挿入に応じて追加のアミノ酸を含有することもある。所与の抗体に対する残基のＫａｂａｔナンバリングは、その抗体の配列と「標準的な」Ｋａｂａｔナンバリング配列との相同領域でのアラインメントによって決定され得る。典型的に、Ｋａｂａｔナンバリングは、可変ドメイン中の残基（おおよそ、軽鎖の残基１〜１０７及び重鎖の残基１〜１１３）に言及する際に使用され、一方、ＥＵナンバリングシステムまたはＥＵインデックス（例えば、ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックス、ＥＵ ＩｇＧ１に従ったナンバリング）は、一般に、重鎖定常領域中の残基に言及する際に使用される。
「完全長」または「インタクト」抗体は、例えば、抗体断片とは対照的に、Ｆｃ領域を有する重鎖を典型的に含む。単一の抗原結合部位を有する抗原結合「Ｆａｂ」断片は、パパイン消化によって、残りのＦｃ断片から分離され得る。Ｆ（ａｂ’）２断片は、抗体のペプシン処理によって生成された、２つの抗原結合部位を含む。しかしながら、抗体断片は、１つ以上の抗体可変領域を含む。
「Ｆｖ」断片は、完全な抗原結合部位を含有する。一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）は、例えば、抗体またはＦａｂ断片のように、ＶＨドメイン及びＶＬドメインが会合し、これにより、ＨＶＲが抗原結合部位を形成するように、ペプチドリンカーによって連結されたＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み得る。Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９４），ｐｐ．２６９−３１５を参照されたい。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖは、抗体Ｆｃドメインに融合している（例えば、ｓｃＦｖ−Ｆｃ）。典型的には、６つのＨＶＲが抗原結合部位を構成するが、３つのＨＶＲを有する単一の可変ドメインであっても、親和性が低くなるものの、抗原に結合することができる。Ｈａｍｅｒｓ−Ｃａｓｔｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６３：４４６−４４８（１９９３）、Ｓｈｅｒｉｆｆ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．３：７３３−７３６（１９９６）を参照されたい。単一ドメイン抗体（例えば、ラクダ抗体）は、典型的に、抗原結合に関する単量体可変ドメインを１つ含む。一本鎖重鎖（ＶＨＨ）抗体及び一本鎖軽鎖抗体も知られている。Ｆａｂ’断片は、典型的に、Ｆａｂ断片よりも数個多い残基をＣ末端に含む。Ｆａｂ’−ＳＨは、遊離チオールを有するシステイン残基を含む。抗体断片の様々な化学的カップリングが当該技術分野において知られている。
「ダイアボディ」は、２つの抗原結合部位を有する抗体断片を含む。これらは、リンカーによって連結されたＶＨドメイン及びＶＬドメインを含み、当該リンカーは、典型的に、同じ鎖中でドメインの対形成が容易になされないような短さである。ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る。トリボディ及びテトラボディ、または他の数のＶＨ／ＶＬドメインが知られている。Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。
本明細書で使用されるとき、「モノクローナル」抗体は、実質的に均質な抗体集団から得られる抗体、例えば、少量のバックグラウンド変異及び／または修飾が認められるが、実質的に同一な抗体を指す。「モノクローナル」は、実質的に均質である抗体の性質を指し、いかなる特定の方法による抗体産生を要するものではない。いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、そのＨＶＲ配列、ＶＨ配列及び／またはＶＬ配列及び／または結合特性に基づいて選択され、例えば、クローン（例えば、組換え、ハイブリドーマまたはファージ由来）のプールから選択される。モノクローナル抗体は、例えば、抗体の結合親和性または他の特性に影響を与えるため、ヒト化抗体またはキメラ抗体を作製するため、抗体の産生及び／または均質性を改善するため、多重特異性抗体を設計するために、１つ以上の変異を含むように操作することができ、これにより得られた抗体は、依然として、本質的にモノクローナルとみなされる。モノクローナル抗体集団の個々のモノクローナル抗体は、同じ抗原部位を認識するので、モノクローナル抗体の集団は、ポリクローナル抗体とは区別され得る。モノクローナル抗体産生技術には様々なものが知られており、例えば、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−９７（１９７５）、Ｈｏｎｇｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１４（３）：２５３−２６０（１９９５）、Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）、Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１））、組み換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号参照）、ファージディスプレイ技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）、Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）、及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）参照、及びヒト免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子座または遺伝子の一部または全てを有する動物におけるヒト抗体またはヒト様抗体の産生技術（例えば、ＷＯ１９９８／２４８９３、ＷＯ１９９６／３４０９６、ＷＯ１９９６／３３７３５、ＷＯ１９９１／１０７４１、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：２５５１（１９９３）、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：２５５−２５８（１９９３）、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：３３（１９９３）、米国特許第５，５４５，８０７号、同第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６２５，１２６号、同第５，６３３，４２５号及び同第５，６６１，０１６号、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９−７８３（１９９２）、Ｌｏｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６−８５９（１９９４）、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８１２−８１３（１９９４）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５−８５１（１９９６）、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８２６（１９９６）、ならびにＬｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３（１９９５）参照）を参照されたい。
「キメラ」抗体は、特定のアイソタイプ、クラスまたは生物由来の重鎖及び／または軽鎖の一部と、別のアイソタイプ、クラスまたは生物由来の別の部分とを含む抗体を指し得る。いくつかの実施形態において、可変領域は、１つの供給源または生物に由来し、定常領域は、別の供給源または生物に由来する。
「ヒト化抗体」は、大部分はヒト配列であるが、最小量の非ヒト（例えば、マウスまたはニワトリ）配列を含む抗体を指し得る。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体は、ヒトレシピエント抗体フレームワーク（ＦＲ）上にグラフト化された、非ヒト（例えば、マウスまたはニワトリ）生物に由来する抗体から得た１つ以上のＨＶＲ配列（目的の結合特異性を有する）を有する。いくつかの実施形態において、非ヒト残基は、例えば、抗体特性を改善するために、ヒトフレームワーク（供給源またはレシピエント抗体のいずれにも存在しないもの）上に更にグラフト化される。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ここで、超可変ループの全てまたは実質的に全ては、非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全ては、ヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。ヒト化抗体はまた、任意選択により、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンの少なくとも一部分を含む。Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−５２５（１９８６）、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９（１９８８）、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）を参照されたい。
「ヒト」抗体は、ヒトによって産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体、及び／または本明細書で開示されるような任意のヒト抗体作製技術を使用して作製された抗体を指し得る。ヒト抗体は、当該技術分野において知られている様々な技術を使用して産生され得、これらには、ファージディスプレイライブラリー（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１））、Ｃｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）、Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６−９５（１９９１）に記載されているようなヒトモノクローナル抗体作製、抗原刺激に応答して当該抗体を産生するように改変され、その内因性遺伝子座が無効化されているトランスジェニック動物、例えば、免疫化異種マウス（例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術に関する米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号参照）またはヒト免疫グロブリン配列（複数可）を有するニワトリ（例えば、ＷＯ２０１２１６２４２２、ＷＯ２０１１０１９８４４及びＷＯ２０１３０５９１５９参照）に抗原を投与することによるものが含まれる。
本明細書で使用されるとき、「リンカー」という用語は、２つの要素、例えば、タンパク質ドメインの間の連結を指す。いくつかの実施形態において、リンカーは、共有結合またはスペーサーであり得る。「スペーサー」という用語は、２つのポリペプチドまたはポリペプチドドメイン間にスペースまたは柔軟性（またはスペースと柔軟性の両方）を与えるために、２つのポリペプチドまたはポリペプチドドメイン間に存在する部分（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ポリマー）またはアミノ酸配列（例えば、１〜２００個のアミノ酸配列）を指す。いくつかの実施形態において、アミノ酸スペーサーは、ポリペプチドの一次配列の一部である（例えば、ポリペプチド主鎖を介して間隔をあけたポリペプチドまたはポリペプチドドメインに連結されている）。
本明細書で使用される「細胞傷害剤」という用語は、細胞増殖を阻害し、または細胞死を誘発する任意の剤を指し得る。細胞傷害剤には、化学療法剤、放射性同位体、成長阻害剤、及び小分子毒素または酵素活性毒素などの毒素（それらの断片及び／またはバリアントを含む）が含まれるが、これらに限定されない。例示的な細胞傷害剤には、限定するものではないが、代謝阻害剤、抗微小管剤、白金含有化合物、アルキル化剤、プロテアソーム阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、代謝拮抗剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、シグナル伝達経路阻害剤、非受容体型チロシンキナーゼ血管新生阻害剤、ホルモン及びホルモン類似体、アポトーシス誘導剤、ＬＤＨ−Ａ阻害剤、細胞周期阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ならびに抗生剤が挙げられる。
本明細書で使用されるとき、「標識」は、例えば、本開示の標識抗体と巨大分子または細胞との間の結合を検出する剤として機能する任意の部分を含み得る。例示的な標識には、限定するものではないが、蛍光（例えば、化合物またはタンパク質）、放射性または酵素部分、及びアフィニティー精製タグが挙げられる。
本明細書で使用されるとき、抗体は、当該抗体がｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／またはｉｎ ｖｉｖｏでの抗原操作に有用となるのに十分な親和性を有するとき、抗原に「結合する」と言うことができる。いくつかの実施形態において、抗原に「結合」する抗体は、抗原に対し、２５℃で１μＭ以下の解離定数（ＫＤ）を有する。
本明細書で使用されるとき、「親和性／アフィニティー」または「結合親和性」という用語は、２分子間の結合相互作用の強さを指す。一般に、結合親和性は、分子とその結合パートナー（高親和性のＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントとＣＤ４７など）との間の非共有結合性相互作用の合計の強さを指す。特に指示がない限り、結合親和性は、結合ペアのメンバー間の１：１の相互作用を反映する、固有の結合親和性を指す。２分子間の結合親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）または会合定数（ＫＡ）によって記述される。互いに低い結合親和性を有する２つの分子は、一般にゆっくりと結合し、容易に解離する傾向があり、大きいＫＤを示す。互いに高い結合親和性を有する２つの分子は、一般に容易に結合し、結合を長く維持する傾向があり、小さなＫＤを示す。いくつかの実施形態において、２つの相互作用分子のＫＤは、既知の方法及び技術、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を使用して決定される。ＫＤは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比として算出することができる。
本明細書で使用されるとき、「〜未満のＫＤ」という用語は、記載されるＫＤ値に対して、数値的に小さいＫＤ値及び結合親和性の増加を指す。本明細書で使用されるとき、「〜より大きいＫＤ」という用語は、記載されるＫＤ値に対して、数値的に大きいＫＤ値及び結合親和性の減少を指す。
本明細書で使用されるとき、「治療」は、治療される個体または細胞における１つ以上の異常な症状を変更するための分子、化合物、処方物、組成物などの治療的投与を指し得る。治療の望ましい効果は、限定するものではないが、疾患の進行を遅らせること、異常な症状もしくは病態を改善もしくは緩和すること、予後を改善すること、及び／または疾患の寛解を達成することを含み得る。例えば、個体のがんは、限定するものではないが、がん細胞の増殖の減少、がん細胞もしくは腫瘍組織量の排除、がんに起因する症状の軽減、個体の生活の質の向上、他の薬剤（複数可）の投与量の減少、及び／または個体の生存期間の延長など、がんに関連する１つ以上の症状が軽減または排除された場合、「治療」に成功する。別の例として、自己免疫疾患または炎症性疾患は、限定するものではないが、自己反応性免疫細胞及び／または炎症性免疫細胞もしくはサイトカインの減少、免疫活性化及び／または炎症の低下、疾患に起因する器官障害の遅延もしくは軽減、疾患に起因する症状の軽減、個体の生活の質の向上、他の薬剤（複数可）の投与量の減少、及び／または個体の生存期間の延長など、自己免疫疾患または炎症性疾患に関連する１つ以上の症状が軽減または排除された場合、「治療」に成功し得る。
本明細書で使用されるとき、疾患の「進行を遅らせる」とは、疾患の病的経過を減速させること、遅延させること、先延ばしすること、進行延期すること、安定化すること、または妨げることを指し得る。いくつかの実施形態において、本用語は、例えば、個体の疾患発症を予防することにおいて、予防を効果的に成し遂げるのに十分な遅延を指し得る。いくつかの実施形態において、例えば、進行がんにおいて、進行を遅らせることは、転移を遅らせることを含み得る。当業者であれば、当該遅延の正確な長さは、例えば、特定の疾患、個体の状態などに依存し得ることを理解するであろう。
「がん」及び「がん性」という用語は、哺乳動物の１つまたは複数の細胞による制御不全または無秩序な細胞成長／増殖を記述し得る。当該技術分野において知られている任意のがんの種類には、限定するものではないが、癌腫、肉腫、リンパ腫、白血病、リンパ腫及び芽細胞腫などが含まれ得る。このようながんのより具体的な例には、肺癌、扁平上皮細胞癌、脳腫瘍、膠芽腫、頭頸部癌、肝細胞癌、大腸癌（例えば、結腸癌または直腸癌）、肝臓癌、膀胱癌、胃癌、膵臓癌、子宮頸癌、卵巣癌、尿路癌、乳癌、腹膜癌、子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫（非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、メルケル細胞癌、毛様細胞性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ならびに関連転移が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用されるとき、「有効量」という用語は、本開示の抗体または本開示の抗体を含有する医薬組成物の量であって、がん、例えば、固形腫瘍または血液癌などの疾患を有する患者の治療または進行遅延において、所望の治療効果を達成するのに十分かつ有効である量を指し得る。いくつかの実施形態において、治療上有効な量は、有害な副作用を回避するものであり、及び／または有益な作用のほうが当該副作用よりも上回るものである。有効量は、治療される個体（例えば、年齢、体重、性別、病態）、及び所望の応答をもたらす作用物質の能力に依存し得る。有効量は、１回以上の投与で投与され得る。臨床的状況と同様に、薬物、化合物または医薬組成物の有効量は、別の薬物、化合物または医薬組成物（別の治療物質など）と併せて達成されてもよいし、そうでなくてもよい。したがって、「有効量」は、１つ以上の追加の治療物質を投与する状況でも考慮され得、単一の作用物質は、それが１つ以上の他の作用物質と併せて望ましい結果を達成し得、または達成するのであれば、有効量で投与されたとみなされ得る。
本明細書で使用されるとき、「医薬組成物」という用語は、有効成分及び賦形剤または希釈剤（または賦形剤と希釈剤の両方）を含み、当該有効成分を好適な投与方法によって投与することを可能にする、医薬処方物または製剤処方物を指し得る。いくつかの実施形態において、本明細書で開示される医薬組成物は、本開示の１つ以上の抗体に適合する、薬学的に許容される構成成分を含む。いくつかの実施形態において、医薬組成物は、経口投与用の錠剤またはカプセル剤の形態、あるいは、例えば、注射による静脈内または皮下投与用の水性形態である。
本明細書で使用されるとき、「対象」、「個体」及び「患者」という用語は、区別なく用いられ、脊椎動物、例えば、哺乳動物を指す。哺乳動物には、ネズミ、サル、ヒト、家畜、競技用動物及び愛玩動物が含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用されるとき、「〜とともに」または「〜と組み合わせて」とは、１つの治療薬を別の治療薬に加えて投与すること（例えば、その前、その間、及び／またはその後）を指し得る。
抗体
本開示のある特定の態様は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン、またはその両方に結合する抗体に関する。本明細書で示されるように、抗体は、ｖ１またはｖ２に特異的に結合する抗体、及び両方のタンパク質に結合する抗体として特徴付けられている。ヒトでは、少なくとも１０個の異なるＳＩＲＰＡ対立遺伝子が特定されている（図１Ａ参照、またＴａｋｅｎａｋａ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：１３１３−２３も参照されたい）。１つ以上のヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドに結合し、かつ本明細書に記載される他の結合特異性のうちの１つ以上を有する抗体は、本開示の有利な発見である。更に、本開示は、新規ＳＩＲＰ−α結合特異性プロファイルについて驚くべき多様性を示す抗体を産生及び特定する方法を示す。
本開示のある特定の態様は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン、またはその両方に結合する抗体に関する。本明細書で示されるように、抗体は、ｖ１またはｖ２に特異的に結合する抗体、及び両方のタンパク質に結合する抗体として特徴付けられている。ヒトでは、少なくとも１０個の異なるＳＩＲＰＡ対立遺伝子が特定されている（図１Ａ参照、またＴａｋｅｎａｋａ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：１３１３−２３も参照されたい）。１つ以上のヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドに結合し、かつ本明細書に記載される他の結合特異性のうちの１つ以上を有する抗体は、本開示の有利な発見である。更に、本開示は、新規ＳＩＲＰ−α結合特異性プロファイルについて驚くべき多様性を示す抗体を産生及び特定する方法を示す。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＡＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＡＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、及びＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。本明細書で使用されるとき、「ヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド」は、例えば、１つ以上の人工変異を有するバリアントとは対照的に、ヒトでの発現が認められている天然のヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドまたは多型を指し得る。例えば、いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、表１に示される配列を含む、１つ以上のヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）及び／またはヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、かつｖ３、ｖ４、ｖ５、ｖ６、ｖ７、ｖ８、ｖ９及びｖ１０から選択される１つ以上のヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）（例えば、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドのＤ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、カニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）（例えば、Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓの生物に認められるもの）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、少なくとも２つの異なるサルＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、少なくとも２つの異なるカニクイザルＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。例えば、いくつかの実施形態において、抗体は、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＥＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＴＬＮＣＴＡＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＶＧＰＧＲＥＬＩＹＨＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＰＶＳＤＰＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＶＥＬＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むカニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＥＫＳＶＳＶＡＡＧＤＳＡＴＬＮＣＴＶＳＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＬＫＥＧＨＦＰＲＶＴＡＶＳＤＰＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＶＥＬＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むカニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合する。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ネズミまたはマウスＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓの生物に認められるもの、例えば、ネズミまたはマウスＳＩＲＰ−αポリペプチドのＤ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、２つ以上の異なるネズミＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。異なるマウス系統に由来する様々なネズミＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドが知られている。いくつかの実施形態において、ネズミＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドは、ＫＥＬＫＶＴＱＰＥＫＳＶＳＶＡＡＧＤＳＴＶＬＮＣＴＬＴＳＬＬＰＶＧＰＩＫＷＹＲＧＶＧＱＳＲＬＬＩＹＳＦＴＧＥＨＦＰＲＶＴＮＶＳＤＡＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＳＮＶＴＰＥＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＱＫＧＰＳＥＰＤＴＥＩＱＳＧＧＧＴＥＶＹＶＬＡＫＰＳ（配列番号７、１２９マウス系統由来）、ＴＥＶＫＶＩＱＰＥＫＳＶＳＶＡＡＧＤＳＴＶＬＮＣＴＬＴＳＬＬＰＶＧＰＩＲＷＹＲＧＶＧＱＳＲＱＬＩＹＳＦＴＴＥＨＦＰＲＶＴＮＶＳＤＡＴＫＲＳＮＬＤＦＳＩＲＩＳＮＶＴＰＥＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＱＲＧＳＰＤＴＥＩＱＳＧＧＧＴＥＶＹＶＬＡＫ（配列番号８、ＮＯＤマウス系統由来）、ＫＥＬＫＶＴＱＰＥＫＳＶＳＶＡＡＧＤＳＴＶＬＮＣＴＬＴＳＬＬＰＶＧＰＩＲＷＹＲＧＶＧＰＳＲＬＬＩＹＳＦＡＧＥＹＶＰＲＩＲＮＶＳＤＴＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＳＮＶＴＰＡＤＡＧＩＹＹＣＶＫＦＱＫＧＳＳＥＰＤＴＥＩＱＳＧＧＧＴＥＶＹＶＬＡＫ（配列番号９、Ｃ５７ＢＬ／６マウス系統由来）、及びＴＥＶＫＶＴＱＰＥＫＳＶＳＶＡＡＧＤＳＴＩＬＮＣＴＶＴＳＬＬＰＶＧＰＩＲＷＹＲＧＶＧＱＳＲＬＬＩＹＳＦＴＧＥＨＦＰＲＩＲＮＶＳＤＴＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＳＮＶＴＰＥＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＱＲＧＳＳＥＰＤＴＥＩＱＳＧＧＧＴＥＶＹＶＬＡＫ（配列番号１０、ＢＡＬＢ／ｃマウス系統由来）から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰファミリータンパク質の細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドは、ヒトＳＩＲＰＢ１遺伝子によってコードされるポリペプチド（例えば、ＮＣＢＩ Ｒｅｆ Ｓｅｑ ＩＤ Ｎｏ．１０３２６によって記述されるもの）を指す。いくつかの実施形態において、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）は、ＥＤＥＬＱＶＩＱＰＥＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＴＬＲＣＡＭＴＳＬＩＰＶＧＰＩＭＷＦＲＧＡＧＡＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＬＴＫＲＮＮＬＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号１３）またはＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＩＳＶＡＡＧＥＳＡＴＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＨＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、ヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドは、ヒトＳＩＲＰＧ遺伝子によってコードされるポリペプチド（例えば、ＮＣＢＩ Ｒｅｆ Ｓｅｑ ＩＤ Ｎｏ．５５４２３によって記述されるもの）を指す。いくつかの実施形態において、ヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）は、ＥＥＥＬＱＭＩＱＰＥＫＬＬＬＶＴＶＧＫＴＡＴＬＨＣＴＶＴＳＬＬＰＶＧＰＶＬＷＦＲＧＶＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＳＳＩＴＰＡＤＶＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＥＮＶＥＦＫＳＧＰＧＴＥＭＡＬＧＡＫＰＳ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含む。
上記ポリペプチドのうちの１つ以上に結合する抗体に加えて、本開示は、上記ポリペプチドのうちの１つ以上に結合しない抗体を企図する。言い換えれば、本開示の抗体の結合プロファイルは、本明細書に記載される結合特異性及び／または特性のいずれかを肯定的または否定的に列挙することによって特徴付けることができる。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞のＳＩＲＰ−αシグナル伝達を調節する。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞のＳＩＲＰ−αシグナル伝達をアンタゴナイズする。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞のＳＩＲＰ−αシグナル伝達に干渉する。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞のＳＩＲＰ−αシグナル伝達をアンタゴナイズする。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰ−αシグナル伝達には、ＳＩＲＰ−αポリペプチドの活性化によって媒介される１つ以上の細胞内シグナル伝達事象が含まれ、限定するものではないが、ＳＩＲＰ−αの細胞内領域のチロシンリン酸化、ホスファターゼ（例えば、ＳＨＰ１）結合、アダプタータンパク質結合（例えば、ＳＣＡＰ２、ＦＹＢ及び／またはＧＲＢ２）、及び一酸化窒素産生が含まれる。細胞内のＳＩＲＰ−αシグナル伝達を測定するための様々なアッセイには、限定するものではないが、ＳＩＲＰ−αのリン酸化、ＳＨＰ１とＳＨＰ２の共免疫沈降、ＰＩ３−キナーゼシグナル伝達、サイトカイン産生（炎症性サイトカインＩＬ−１２、ＩＬ−２３、ＴＮＦα、ＩＦＮ及び抑制性サイトカインＩＬ−１０、ＩＬ−４、ＩＬ−１３の両方、Ｍ１及びＭ２マクロファージマーカーに対する細胞表面マーカーレベル）または樹状細胞の活性化及び機能が含まれる；Ｋｈａｒｉｔｏｎｅｎｋｏｖ，Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ ３８６：１８１−６、Ｏｃｈｉ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２３９：４８３−７、Ｋｉｍ，Ｅ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６２：３７７−８６、Ｙｉ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４３：７６４−７５。
いくつかの実施形態において、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞は、白血球である。いくつかの実施形態において、細胞は、マクロファージ、樹状細胞、好中球、好酸球または骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞のＳＩＲＰ−αシグナル伝達を、例えば、本明細書に記載されるまたは当該技術分野において知られているＳＩＲＰ−αシグナル伝達アッセイのうちの１つ以上を使用したとき、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％減少させるか、アンタゴナイズする。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞のＳＩＲＰ−αシグナル伝達を、例えば、本明細書に記載されるまたは当該技術分野において知られているＳＩＲＰ−αシグナル伝達アッセイのうちの１つ以上を使用したとき、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％増加させるか、アゴナイズする。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ＳＩＲＰ−αによって媒介される細胞間の表現型を調節する。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するマクロファージによる食作用を亢進する。例えば、本開示の抗体により処理されたまたは本開示の抗体と接触したマクロファージの貪食能と、当該抗体により処理されていないまたは当該抗体と接触していないマクロファージの貪食能とを比較することができ、あるいは、本開示の抗体により処理されたまたは本開示の抗体と接触した、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するマクロファージの貪食能と、当該抗体により処理されたまたは当該抗体と接触した、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現しないマクロファージの貪食能とを比較することができる。例示的な食作用アッセイは、例えば、Ｗｉｅｓｋｏｐｆ，Ｋ．ｅｔ ａｌ（２０１３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４１：８８及びＷｉｌｌｉｎｇｈａｍ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１０９：６６６２−７に見ることができる。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するマクロファージによる食作用を、例えば、本明細書に記載されるまたは当該技術分野において知られている食作用アッセイのうちの１つ以上を使用したとき、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％増加させる。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する樹状細胞（複数可）の活性化を亢進する（例えば、個々の樹状細胞の活性化レベルの増加、または試料集団のなかで活性化される樹状細胞の割合の増加）。例えば、本開示の抗体により処理されたまたは本開示の抗体と接触した樹状細胞（複数可）の活性化と、当該抗体により処理されていないまたは当該抗体と接触していない樹状細胞（複数可）の活性化とを比較することができ、あるいは、本開示の抗体により処理されたまたは本開示の抗体と接触した、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する樹状細胞（複数可）の活性化と、当該抗体により処理されたまたは当該抗体と接触した、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現しない樹状細胞（複数可）の活性化とを比較することができる。例示的な樹状細胞活性化アッセイは、本明細書に記載される。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、樹状細胞（例えば、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するもの）の活性化を、例えば、本明細書に記載されるまたは当該技術分野において知られている樹状細胞活性化アッセイのうちの１つ以上を使用したとき、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％増加させる。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ＣＤ４７を発現する腫瘍のｉｎ ｖｉｖｏ成長を阻害する。例えば、本開示の抗体により処理された、ＣＤ４７を発現する腫瘍のｉｎ ｖｉｖｏ成長と、本開示の抗体により処理されていない、ＣＤ４７を発現する腫瘍のｉｎ ｖｉｖｏ成長とを比較することができる。例示的なｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍成長アッセイは、本明細書に記載される。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ＣＤ４７を発現する腫瘍のｉｎ ｖｉｖｏ成長を、例えば、本明細書に記載されるまたは当該技術分野において知られているｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍成長アッセイのうちの１つ以上を使用したとき、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、または少なくとも９０％阻害する。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する（例えば、「遮断」抗体）。例えば、抗体及びＤ４７ポリペプチドは、同じＳＩＲＰ−αエピトープに対して「競合」し得、及び／またはＳＩＲＰ−αへの抗体結合は、ＳＩＲＰ−αへのＣＤ４７結合と互いに排他的であり得る。ＳＩＲＰ−αとＣＤ４７との間の結合界面、及び結合に関与する両タンパク質の残基は、知られている。Ｈａｔｈｅｒｌｅｙ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８２：１４５６７−７５及びＮａｋａｉｓｈｉ，Ａ．ｅｔ ａｌ．（２００８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３７５：６５０−６０を参照されたい。抗体がＣＤ４７のＳＩＲＰ−αへの結合を遮断するかどうかを決定するための例示的なアッセイは、本明細書に記載される。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、例えば、精製されたＳＩＲＰ−α及び／またはＣＤ４７ポリペプチドを使用するｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）とヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。例えば、本明細書では、ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＥＬＩＳＡ及びＳＰＲアッセイについての記載がなされるが、これは、限定を意味するものではなく、他のｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイも使用することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント（例えば、本明細書に記載される１つ以上の天然同等物よりも高い親和性でＣＤ４７に結合する非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン）を含む複合体への抗体結合を使用して、遮断抗体、非遮断抗体、及び／またはキック抗体をスクリーニングする。いくつかの実施形態において、「遮断」抗体及び／または「非遮断」抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ、例えば、実施例１に記載されるもの）により試験を行うことができる。例えば、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインとＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント（例えば、本明細書に記載される１つ以上の天然同等物よりも高い親和性でＣＤ４７に結合する非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン）との間に複合体を形成することができ、次いで、試験抗体の当該複合体への結合を測定することができる。ＳＩＲＰ−αのＣＤ４７への結合を遮断する抗体の場合、ＣＤ４７の濃度が高くなると、抗体がＣＤ４７と同じ結合部位に対して競合し、ほとんど／全てのＳＩＲＰ−αがＣＤ４７と複合体を形成するので、抗体の結合に利用できるＳＩＲＰ−αの分子はわずかであることが予想される。したがって、レゾナンス（ＲＵ）は、混合物中のＣＤ４７の濃度が高くなるにつれて低くなることが予想される。いくつかの実施形態において、本開示の「遮断」抗ＳＩＲＰ−α抗体は、ＣＤ４７とＳＩＲＰ−αとの間の結合界面の１つ以上の残基でＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、すなわち、遮断抗体とＣＤ４７は、部分的にまたは完全に重複するエピトープを共有する。いくつかの実施形態において、本開示の「遮断」抗ＳＩＲＰ−α抗体は、ＣＤ４７も同様に結合する、ＣＤ４７：ＳＩＲＰ−α複合体中の１つ以上のアミノ酸位置で、ＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。ＳＩＲＰ−αと、例示的な抗ＳＩＲＰ−α抗体またはＣＤ４７との結合界面は、実施例４に記載される。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、例えば、細胞表面上に発現されるポリペプチド間のｉｎ ｖｉｖｏ結合アッセイにおいて、第１の細胞の表面上に発現されるヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、第２の細胞の表面上に発現されるヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。いくつかの実施形態において、ｉｎ ｖｉｖｏアッセイは、ＳＩＲＰ−αシグナル伝達のうちの１つ以上の側面、例えば、ＳＩＲＰ−αポリペプチドの活性化によって媒介される１つ以上の細胞内シグナル伝達事象（限定するものではないが、ＳＩＲＰ−αの細胞内領域のチロシンリン酸化、ホスファターゼ（例えば、ＳＨＰ１）結合、アダプタータンパク質結合（例えば、ＳＣＡＰ２、ＦＹＢ及び／またはＧＲＢ２）、サイトカイン産生（例えば、ＩＬ−１０、ＩＬ−１β、ＩＦＮまたはＴＮＦ）、及び一酸化窒素産生を含む）、及び／または１つ以上の細胞間の表現型（限定するものではないが、マクロファージの食作用ならびにマクロファージ、好中球、樹状細胞、好酸球及び骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の他の活性化または抑制表現型を含む）をアッセイすることによって、第１の細胞の表面上に発現されるヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、第２の細胞の表面上に発現されるヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合をアッセイすることができる。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない（例えば、「非遮断」抗体）。例えば、抗体及びＣＤ４７ポリペプチドは、明確に異なる及び／または重複しないＳＩＲＰ−αのエピトープに結合することができる。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、例えば、精製されたＳＩＲＰ−α及び／またはＣＤ４７ポリペプチドを使用するｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）とヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない。例えば、本明細書では、ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＥＬＩＳＡ及びＳＰＲアッセイについての記載がなされるが、これは、限定を意味するものではなく、他のｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイも使用することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント（例えば、本明細書に記載される１つ以上の天然同等物よりも高い親和性でＣＤ４７に結合する非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン）を含む複合体への抗体結合を使用して、遮断抗体、非遮断抗体、及び／またはキック抗体をスクリーニングする。いくつかの実施形態において、「遮断」抗体及び／または「非遮断」抗体は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ、例えば、実施例１に記載されるもの）により試験を行うことができる。例えば、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインとＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント（例えば、本明細書に記載される１つ以上の天然同等物よりも高い親和性でＣＤ４７に結合する非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン）との間に複合体を形成することができ、次いで、試験抗体の当該複合体への結合を測定することができる。ＳＩＲＰ−αのＣＤ４７への結合を遮断しない抗体の場合、抗体は、ＳＩＲＰ−α／ＣＤ４７複合体に結合し、サンドイッチを形成することが予想される。したがって、ＣＤ４７の濃度が高くなると、サンドイッチ形成が増加することから、レゾナンスは、それに応じて増加する。いくつかの実施形態において、本開示の「非遮断」抗ＳＩＲＰ−α抗体は、ＣＤ４７とＳＩＲＰ−αとの間の結合界面とは異なる１つ以上の残基でＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、すなわち、非遮断抗体及びＣＤ４７は、完全に重複しないエピトープを共有する。ＳＩＲＰ−αと、例示的な抗ＳＩＲＰ−α抗体またはＣＤ４７との結合界面は、実施例４に記載される。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、例えば、細胞表面上に発現されるポリペプチド間のｉｎ ｖｉｖｏ結合アッセイにおいて、第１の細胞の表面上に発現されるヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、第２の細胞の表面上に発現されるヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない。いくつかの実施形態において、ｉｎ ｖｉｖｏアッセイは、ＳＩＲＰ−αシグナル伝達のうちの１つ以上の側面、例えば、ＳＩＲＰ−αポリペプチドの活性化によって媒介される１つ以上の細胞内シグナル伝達事象（限定するものではないが、ＳＩＲＰ−αの細胞内領域のチロシンリン酸化、ホスファターゼ（例えば、ＳＨＰ１）結合、アダプタータンパク質結合（例えば、ＳＣＡＰ２、ＦＹＢ及び／またはＧＲＢ２）、サイトカイン産生（例えば、ＩＬ−１０、ＩＬ−１β、ＩＦＮまたはＴＮＦ）、及び一酸化窒素産生を含む）、及び／または１つ以上の細胞間の表現型（限定するものではないが、マクロファージの食作用ならびにマクロファージ、好中球、樹状細胞、好酸球及び骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の他の活性化または抑制表現型を含む）をアッセイすることによって、第１の細胞の表面上に発現されるヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、第２の細胞の表面上に発現されるヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を評価することができる。ＳＩＲＰ−αとＣＤ４７の相互作用を遮断しない抗体が、食作用を増大させ、ｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍成長を阻止できるということは、本開示の驚くべき発見である。理論に束縛されることを望むものではないが、非遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体は、ＣＤ４７結合とは関係なく、ＳＩＲＰ−αの１つ以上の機能を調節することができると考えられる。
いくつかの実施形態において、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への本開示の抗体の結合は、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる（例えば、「キック」抗体）。いくつかの実施形態において、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドのｋｏｆｆを増大させる。いくつかの実施形態において、ヒト高親和性ＳＩＲＰ−αポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるもの）の細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒト高親和性ＳＩＲＰ−αポリペプチド（例えば、本明細書に記載されるもの）のｋｏｆｆを、約１×１０−３ １／ｓ超まで増大させる。例えば、抗体及びＣＤ４７ポリペプチドは、隣接するＳＩＲＰ−αエピトープまたは部分的に重複するＳＩＲＰ−αエピトープを有し得、そのため、ＳＩＲＰ−αがＣＤ４７に結合しているとき、抗体はＳＩＲＰ−αに結合することができ、抗体：ＳＩＲＰ−αは、ＳＩＲＰ−α：ＣＤ４７複合体の解離を促進する。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、例えば、精製されたＳＩＲＰ−α及び／またはＣＤ４７ポリペプチドを使用するｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）の親和性を低下させる。いくつかの実施形態において、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、例えば、精製されたＳＩＲＰ−α及び／またはＣＤ４７ポリペプチドを使用するｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドのｋｏｆｆを増大させる。例えば、本明細書では、ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＥＬＩＳＡ及びＳＰＲアッセイについての記載がなされるが、これは、限定を意味するものではなく、他のｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイも使用することができる。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアント（例えば、本明細書に記載される１つ以上の天然同等物よりも高い親和性でＣＤ４７に結合する非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメイン）を含む複合体への抗体結合を使用して、遮断抗体、非遮断抗体、及び／またはキック抗体をスクリーニングする。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、例えば、細胞表面上に発現されるポリペプチド間のｉｎ ｖｉｖｏ結合アッセイにおいて、第２の細胞の表面上に発現されるヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対する第１の細胞の表面上に発現されるヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）の親和性を低下させる。いくつかの実施形態において、本開示の「キック」抗ＳＩＲＰ−α抗体は、ＣＤ４７とＳＩＲＰ−αとの間の結合界面の１つ以上の残基でＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、すなわち、キック抗体とＣＤ４７は、部分的に重複するエピトープを共有する。いくつかの実施形態において、本開示の「キック」抗ＳＩＲＰ−α抗体は、ＣＤ４７も同様に結合する、ＣＤ４７：ＳＩＲＰ−α複合体中の１つ以上の残基で、ＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。例えば、「キック」抗ＳＩＲＰ−α抗体は、ＣＤ４７も同様に結合し、かつＳＩＲＰ−αのＣＤ４７結合エピトープ周辺にある、ＣＤ４７：ＳＩＲＰ−α複合体中の２つ以上の残基で、ＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合することができる。ＳＩＲＰ−αと、例示的な抗ＳＩＲＰ−α抗体またはＣＤ４７との結合界面は、実施例４に記載される。いくつかの実施形態において、第１の細胞の表面上に発現されるヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への本開示の抗体の結合は、例えば、細胞表面上に発現されるポリペプチド間のｉｎ ｖｉｖｏ結合アッセイにおいて、第２の細胞の表面上に発現されるヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドのｋｏｆｆを増大させる。いくつかの実施形態において、ｉｎ ｖｉｖｏアッセイは、ＳＩＲＰ−αシグナル伝達のうちの１つ以上の側面、例えば、ＳＩＲＰ−αポリペプチドの活性化によって媒介される１つ以上の細胞内シグナル伝達事象（限定するものではないが、ＳＩＲＰ−αの細胞内領域のチロシンリン酸化、ホスファターゼ（例えば、ＳＨＰ１）結合、アダプタータンパク質結合（例えば、ＳＣＡＰ２、ＦＹＢ及び／またはＧＲＢ２）、サイトカイン産生（例えば、ＩＬ−１０、ＩＬ−１β、ＩＦＮまたはＴＮＦ）、及び一酸化窒素産生を含む）、及び／または１つ以上の細胞間の表現型（限定するものではないが、マクロファージの食作用ならびにマクロファージ、好酸球、樹状細胞、好中球及び骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の他の活性化または抑制表現型を含む）をアッセイすることによって、第１の細胞の表面上に発現されるヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、第２の細胞の表面上に発現されるヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を評価することができる。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ＳＩＲＰ−α、ＳＩＲＰβ及びＳＩＲＰγのうちの２つ以上（または３つ全て）に結合することによって、１つまたは複数の免疫細胞機能を調節する。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、サル（例えば、カニクイザル）ＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、サル（例えば、カニクイザル）ＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）、またはその両方に結合し、サル（例えば、カニクイザル）ＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への抗体の結合は、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチド及びサルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）のうちの少なくとも１つに結合せず、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する（例えば、図３Ａ及び３Ｂ参照）。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチド、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）のうちの少なくとも１つとに結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する（例えば、図４Ａ及び４Ｂ参照）。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチド及びサルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）のうちの少なくとも１つに結合せず、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない（例えば、図５Ａ及び５Ｂ参照）。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド及びサルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合し、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドに結合せず、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）のうちの少なくとも１つに結合せず、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する（例えば、図６Ａ及び６Ｂ参照）。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）のうち少なくとも１つとに結合し、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドに結合せず、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する（例えば、図７Ａ及び７Ｂ参照）。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、表２に記載される配列を含むＶＨドメインに由来する３つのＣＤＲ及び／または表２に記載される配列を含むＶＬドメインに由来する３つのＣＤＲを含む（ＣＤＲを強調表示したＶＨ配列及びＶＬ配列は、図１０Ａ〜１０Ｂ及び図１１Ａ〜１１Ｊに記載される）。例えば、いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２９４、１３９、３５８、３６２、３５４、３８０、３８４、３５０、１３７、３７４、３５６、３５２、１３５、３４８、３７６、３４６、３４２、３４４、１４１、３６０、３７０、３８２、３６４、３６６、３６８、３７２、３７８、１３３、１２８、３９６、３８６、３９８，４０２、３９２、３８８、３９０、３９４、４００、１１６、１１７、１１８、１１９、２８２、４０４、４０６、２７８、４１２、２７５、４１４、２８０、１２３、２９２、２８８、２９０、４０８、４１０、２８６、２８４、１２０、１２１、１３０及び１２２から選択される配列を含むＶＨドメインに由来する３つのＣＤＲ、及び／または配列番号２９５、３６３、１４０、３５９、３５５、３５１、１３６、３４９、３７７、１３８、３７５、３５７、３５３、３８１、３８５、３４５、３６５、３６７、３６９、３４７、１４２、３４３、３７１、３７９、３８３、３６１、３７３、１３４、１０５、３８７、３８９、３９５、３９７、３９９、４０３、３９１、３９３、４０１、９３、９４、９５、９６、２８３、４０５、４０７、２７９、４１３、２７６、４１５、２８１、１００、２９３、２８９、２９１、４０９、４１１、２８７、２８５、９７、９８、１０７及び９９から選択される配列を含むＶＬドメインに由来する３つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、表２に記載される配列を含むＶＨドメイン及び／または表２に記載される配列を含むＶＬドメインを含む（図１０Ａ〜１０Ｂ及び図１１Ａ〜１１Ｊ参照）。例えば、いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２９４、１３９、３５８、３６２、３５４、３８０、３８４、３５０、１３７、３７４、３５６、３５２、１３５、３４８、３７６、３４６、３４２、３４４、１４１、３６０、３７０、３８２、３６４、３６６、３６８、３７２、３７８、１３３、１２８、３９６、３８６、３９８，４０２、３９２、３８８、３９０、３９４、４００、１１６、１１７、１１８、１１９、２８２、４０４、４０６、２７８、４１２、２７５、４１４、２８０、１２３、２９２、２８８、２９０、４０８、４１０、２８６、２８４、１２０、１２１、１３０及び１２２から選択されるアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号２９５、３６３、１４０、３５９、３５５、３５１、１３６、３４９、３７７、１３８、３７５、３５７、３５３、３８１、３８５、３４５、３６５、３６７、３６９、３４７、１４２、３４３、３７１、３７９、３８３、３６１、３７３、１３４、１０５、３８７、３８９、３９５、３９７、３９９、４０３、３９１、３９３、４０１、９３、９４、９５、９６、２８３、４０５、４０７、２７９、４１３、２７６、４１５、２８１、１００、２９３、２８９、２９１、４０９、４１１、２８７、２８５、９７、９８、１０７及び９９から選択されるアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、表２に記載される抗体に由来する６つのＣＤＲ配列を含む（図１０Ａ〜１０Ｂ及び図１１Ａ〜１１Ｊ参照）。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、本明細書に記載されるＶＬドメインＨｕｍ１〜Ｈｕｍ９のＶＬドメイン配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒト化抗体である。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒト抗体である。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、表２に記載される抗体に由来するＶＨドメイン及び／またはＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ＤまたはＥ残基を含むＶＨドメインと、それに続いて（例えば、Ｎ末端からＣ末端の方向に）配列番号１１６〜１３０から選択されるＶＨドメイン配列を含む。
表２．本明細書に記載される抗体クローンのアミノ酸配列
表２．本明細書に記載される抗体クローンのアミノ酸配列
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、１つ以上の残基で、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドに結合する。本開示の抗体が結合するＳＩＲＰ−αポリペプチドの残基は、参照ＳＩＲＰ−αポリペプチドを基準にして記載され得るが、この記述は、１つのＳＩＲＰ−αポリペプチド（すなわち、参照ＳＩＲＰ−αポリペプチド）に限定されないことを理解されたい。むしろ、参照ＳＩＲＰ−αポリペプチドの特定のアミノ酸残基は、対応するアミノ酸位置を特定するために記載され、当該アミノ酸位置は、様々なＳＩＲＰ−αポリペプチド上で特定することができる。例えば、配列番号２９６の１つ以上のアミノ酸位置に対応する特定の残基は、ｖ１及び／またはｖ２などの様々なヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドについて特定することができる。配列番号２９６及び配列番号５のアミノ酸配列は、Ｎ８０の位置のみが異なる（タンパク質の産生及び精製に有用である、配列番号２９６の少数のＣ末端残基を除く）ので、当業者であれば、本明細書における配列番号２９６のアミノ酸配列を基準にしたアミノ酸位置への言及は、配列番号５のアミノ酸配列中の同じ位置に対応することを認識するであろう。抗体が結合するＳＩＲＰ−αポリペプチドの残基を決定する技術は、当該技術分野において知られており、例示的かつ非限定的な説明が実施例４に記載される。
配列番号２９６
ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤ ＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴ ＡＴＬＲＣＴＡＴＳＬ ＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲ ＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹ ＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶ
ＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮ ＮＭＤＦＳＩＲＩＧＡ ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹ ＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤ ＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴ ＥＬＳＶＲＡＫＰＳＴ
ＲＨＨＨＨＨＨ
ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤ ＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴ ＡＴＬＲＣＴＡＴＳＬ ＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲ ＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹ ＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶ
ＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮ ＮＭＤＦＳＩＲＩＧＡ ＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹ ＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤ ＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴ ＥＬＳＶＲＡＫＰＳＴ
ＲＨＨＨＨＨＨ
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２９６に従って、Ｉ３１、Ｖ３３、Ｑ５２、Ｋ５３、Ｔ６７、Ｒ６９、Ｎ７０及びＫ９６から選択される１つ以上のアミノ酸位置で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２９６に従って、Ｌ３０、Ｐ３２、Ｅ５４、Ｔ６２、Ｎ７１、Ｍ７２、Ｆ７４及びＲ９５から選択される１つ以上のアミノ酸位置で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに更に結合する。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２９６に従って、Ｉ７、Ｐ９、Ｄ１０、Ｋ１１、Ｓ１２、Ａ４２、Ａ１０８及びＥ１１１から選択される１つ以上のアミノ酸位置で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２９６に従って、Ｋ１１、Ａ４２、Ａ１０８及びＥ１１１で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２９６に従って、Ｉ７、Ｐ９、Ｄ１０、Ｋ１１、Ｓ１２、Ａ１０８及びＥ１１１で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２９６に従って、Ｌ１４、Ｔ２６、Ｔ２８、Ｔ８８、Ｙ９０、Ｓ１０６、Ｓ１１３及びＡ１１６から選択される１つ以上のアミノ酸位置で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに更に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２９６に従って、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１のＬ１４、Ｔ８８、Ｙ９０、Ｓ１０６、Ｓ１１３及びＡ１１６で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに更に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２９６に従って、Ｌ１４、Ｔ２６及びＴ２８で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに更に結合する。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２９６に従って、Ｅ４７、Ｌ４８、Ｐ５８、Ｒ５９、Ｔ８２及びＡ８４から選択される１つ以上のアミノ酸位置で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、配列番号２９６に従って、Ａ１７、Ｐ４４、Ｇ４５、Ｉ４９、Ｅ５４、Ｇ５５、Ｈ５６、Ｆ５７及びＰ８３から選択される１つ以上のアミノ酸位置で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに更に結合する。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に、１００ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、または３０ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断し、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に、１００ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、または３０ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドのＤ１ドメイン及びヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドのＤ１ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、カニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドのＤ１ドメインに結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）と、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に、１００ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、または３０ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドのＤ１ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドのＤ１ドメイン及びヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドのＤ１ドメインに結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、カニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。いくつかの実施形態において、抗体は、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への結合について、参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する。抗体がヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への結合について参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合するかどうかを決定するための技術は、当該技術分野において知られており、例示的かつ非限定的な説明が実施例５に記載される。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への結合について、１１９、１２０、１２１、１２２、２１、２５、２７、６６及び１３５から選択される１つ以上の参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への結合について、次の参照抗ＳＩＲＰ−α抗体のうちの１つ以上と競合する：（ａ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、（ｂ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号９８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、（ｃ）配列番号１３０のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、（ｄ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、（ｅ）配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、（ｆ）配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、（ｇ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、（ｈ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、及び（ｉ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への結合について、１３６及び１３７から選択される１つ以上の参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への結合について、次の参照抗ＳＩＲＰ−α抗体のうちの１つ以上と競合する：（ａ）配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、及び（ｂ）配列番号１２８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への結合について、３、２１３、１７３及び２０９から選択される１つ以上の参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への結合について、次の参照抗ＳＩＲＰ−α抗体のうちの１つ以上と競合する：（ａ）配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、（ｂ）配列番号２７５のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号２７６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、（ｃ）配列番号２７８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号２７９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、及び（ｄ）配列番号２８０のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号２８１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への結合について、１１５、１１６、１１７、１１８及び１３２から選択される１つ以上の参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への結合について、次の参照抗ＳＩＲＰ−α抗体のうちの１つ以上と競合する：（ａ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、（ｂ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、（ｃ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、（ｄ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、及び（ｅ）配列番号２８２のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号２８３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への結合について、２１８、１２３、１４９、１６１、１６２及び１９４から選択される１つ以上の参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への結合について、次の参照抗ＳＩＲＰ−α抗体のうちの１つ以上と競合する：（ａ）配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号２８５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、（ｂ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号１００のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、（ｃ）配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号２８７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、（ｄ）配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、（ｅ）配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体、及び（ｆ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む抗体。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への結合について、参照抗ＳＩＲＰ−α抗体４５と競合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）への結合について、配列番号２４４のアミノ酸配列を含むＶＨドメインと、配列番号２４５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインとを含む、抗体と競合する。
本開示は、抗ＳＩＲＰ−α抗体の複数のファミリーを提供し、各ファミリーは、複数の抗体から構成される。本明細書で示されるように、所定のファミリー内の抗体は、ある特定の構造的特性（例えば、類似または同一のＨＶＲまたはＣＤＲ配列）、及び１つ以上の機能的特性、例えば、限定するものではないが、ヒト、サル及び／またはマウスＳＩＲＰ−αポリペプチド（複数可）に対する結合親和性、ＳＩＲＰ−βポリペプチドに対する結合親和性、ＳＩＲＰ−γポリペプチドに対する結合親和性、ＳＩＲＰ−αへの結合様式（例えば、ＣＤ４７遮断、ＣＤ４７非遮断、または「キック」結合）、食作用の誘導（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにおいて）、樹状細胞の活性化、抗腫瘍有効性、ＳＩＲＰ−α結合エピトープ残基（複数可）または「ビン」（例えば、ビニングアッセイによって決定されるもの）などを共有し得る（例えば、表Ｐ〜Ｔ参照）。これらの共通特性のため、同じファミリーに属する抗体のＨＶＲ及び／またはＶＨもしくはＶＬ配列は、抗ＳＩＲＰ−α抗体が、本明細書に記載される２つ以上の特定の抗ＳＩＲＰ−α抗体に由来するＨＶＲ及び／またはＶＨもしくはＶＬを含むことができるように、交換または混合することができることが企図される。本明細書において詳述されるように、抗体可変ドメインのＨＶＲまたはＣＤＲ配列を決定するための各種方法論は、当該技術分野において知られており、限定するものではないが、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＩＭＧＴ定義、ならびにこれらの組み合わせがあり、本明細書中で区別なく使用することができる。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１２０、２４６、２５８、３２７、１２１、１３０、１２２、１２７、２４７、２５９、３３５及び３２８のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１；配列番号１２０、２４６、２５８、３２７、１２１、１３０、１２２、１２７、２４７、２５９、３３５及び３２８のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２；配列番号１２０、２４６、２５８、３２７、１２１、１３０、１２２、１２７、２４７、２５９、３３５及び３２８のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３；配列番号９７、９８、１０７、９９、１０４及び３１２のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１；配列番号９７、９８、１０７、９９、１０４及び３１２のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２；及び／または配列番号９７、９８、１０７、９９、１０４及び３１２のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１２０、２４６、２５８、３２７、１２１、１３０、１２２、１２７、２４７、２５９、３３５及び３２８のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１；配列番号１２０、２４６、２５８、３２７、１２１、１３０、１２２、１２７、２４７、２５９、３３５及び３２８のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１２０、２４６、２５８、３２７、１２１、１３０、１２２、１２７、２４７、２５９、３３５及び３２８のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号９７、９８、１０７、９９、１０４及び３１２のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１；配列番号９７、９８、１０７、９９、１０４及び３１２のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２；ならびに配列番号９７、９８、１０７、９９、１０４及び３１２のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１２０、２４６、２５８、３２７、１２１、１３０、１２２、１２７、２４７、２５９、３３５及び３２８のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１；配列番号１２０、２４６、２５８、３２７、１２１、１３０、１２２、１２７、２４７、２５９、３３５及び３２８のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２；配列番号１２０、２４６、２５８、３２７、１２１、１３０、１２２、１２７、２４７、２５９、３３５及び３２８のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３；配列番号９７、９８、１０７、９９、１０４及び３１２のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１；配列番号９７、９８、１０７、９９、１０４及び３１２のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２；ならびに配列番号９７、９８、１０７、９９、１０４及び３１２のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１３５、１３７、２６５、２６６、３３１、１３９、２６７、３３２、１４１、２６３、２６４、２６８、３３０、２９４、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２及び３８４のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１；配列番号１３５、１３７、２６５、２６６、３３１、１３９、２６７、３３２、１４１、２６３、２６４、２６８、３３０、２９４、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２及び３８４のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２；配列番号１３５、１３７、２６５、２６６、３３１、１３９、２６７、３３２、１４１、２６３、２６４、２６８、３３０、２９４、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２及び３８４のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３；配列番号１３６、１３８、１４０、１４２、２５２、２５４、２６２、４１６、２９５、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３及び３８５のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１；配列番号１３６、１３８、１４０、１４２、２５２、２５４、２６２、４１６、２９５、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３及び３８５のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２；及び／または配列番号１３６、１３８、１４０、１４２、２５２、２５４、２６２、４１６、２９５、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３及び３８５のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１３５、１３７、２６５、２６６、３３１、１３９、２６７、３３２、１４１、２６３、２６４、２６８、３３０、２９４、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２及び３８４のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１；配列番号１３５、１３７、２６５、２６６、３３１、１３９、２６７、３３２、１４１、２６３、２６４、２６８、３３０、２９４、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２及び３８４のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１３５、１３７、２６５、２６６、３３１、１３９、２６７、３３２、１４１、２６３、２６４、２６８、３３０、２９４、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２及び３８４のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１３６、１３８、１４０、１４２、２５２、２５４、２６２、４１６、２９５、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３及び３８５のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１；配列番号１３６、１３８、１４０、１４２、２５２、２５４、２６２、４１６、２９５、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３及び３８５のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２；ならびに配列番号１３６、１３８、１４０、１４２、２５２、２５４、２６２、４１６、２９５、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３及び３８５のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１３５、１３７、２６５、２６６、３３１、１３９、２６７、３３２、１４１、２６３、２６４、２６８、３３０、２９４、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２及び３８４のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１；配列番号１３５、１３７、２６５、２６６、３３１、１３９、２６７、３３２、１４１、２６３、２６４、２６８、３３０、２９４、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２及び３８４のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２；配列番号１３５、１３７、２６５、２６６、３３１、１３９、２６７、３３２、１４１、２６３、２６４、２６８、３３０、２９４、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、３６６、３６８、３７０、３７２、３７４、３７６、３７８、３８０、３８２及び３８４のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３；配列番号１３６、１３８、１４０、１４２、２５２、２５４、２６２、４１６、２９５、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３及び３８５のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１；配列番号１３６、１３８、１４０、１４２、２５２、２５４、２６２、４１６、２９５、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３及び３８５のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２；ならびに配列番号１３６、１３８、１４０、１４２、２５２、２５４、２６２、４１６、２９５、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６７、３６９、３７１、３７３、３７５、３７７、３７９、３８１、３８３及び３８５のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１３３、２４９、２６０、３２９、１２８、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００及び４０２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１；配列番号１３３、２４９、２６０、３２９、１２８、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００及び４０２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２；配列番号１３３、２４９、２６０、３２９、１２８、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００及び４０２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３；配列番号１３４、２５１、１０５、２５０、４１７、４１８、４１９、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１及び４０３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１；配列番号１３４、２５１、１０５、２５０、４１７、４１８、４１９、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１及び４０３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２；及び／または配列番号１３４、２５１、１０５、２５０、４１７、４１８、４１９、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１及び４０３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１３３、２４９、２６０、３２９、１２８、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００及び４０２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１；配列番号１３３、２４９、２６０、３２９、１２８、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００及び４０２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１３３、２４９、２６０、３２９、１２８、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００及び４０２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１３４、２５１、１０５、２５０、４１７、４１８、４１９、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１及び４０３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１；配列番号１３４、２５１、１０５、２５０、４１７、４１８、４１９、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１及び４０３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２；ならびに配列番号１３４、２５１、１０５、２５０、４１７、４１８、４１９、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１及び４０３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１３３、２４９、２６０、３２９、１２８、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００及び４０２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１；配列番号１３３、２４９、２６０、３２９、１２８、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００及び４０２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２；配列番号１３３、２４９、２６０、３２９、１２８、３８６、３８８、３９０、３９２、３９４、３９６、３９８、４００及び４０２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３；配列番号１３４、２５１、１０５、２５０、４１７、４１８、４１９、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１及び４０３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１；配列番号１３４、２５１、１０５、２５０、４１７、４１８、４１９、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１及び４０３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２；ならびに配列番号１３４、２５１、１０５、２５０、４１７、４１８、４１９、３８７、３８９、３９１、３９３、３９５、３９７、３９９、４０１及び４０３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、２８２、４０４及び４０６のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１；配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、２８２、４０４及び４０６のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２；配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、２８２、４０４及び４０６のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３；配列番号９３、９４、９５、９６、２８３、４０５及び４０７のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１；配列番号９３、９４、９５、９６、２８３、４０５及び４０７のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２；及び／または配列番号９３、９４、９５、９６、２８３、４０５及び４０７のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、２８２、４０４及び４０６のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１；配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、２８２、４０４及び４０６のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２；ならびに配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、２８２、４０４及び４０６のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号９３、９４、９５、９６、２８３、４０５及び４０７のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１；配列番号９３、９４、９５、９６、２８３、４０５及び４０７のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２；ならびに配列番号９３、９４、９５、９６、２８３、４０５及び４０７のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、２８２、４０４及び４０６のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１；配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、２８２、４０４及び４０６のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２；配列番号１１６、１１７、１１８、１１９、２８２、４０４及び４０６のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３；配列番号９３、９４、９５、９６、２８３、４０５及び４０７のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１；配列番号９３、９４、９５、９６、２８３、４０５及び４０７のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２；ならびに配列番号９３、９４、９５、９６、２８３、４０５及び４０７のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２４２に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２４２に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２４２に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２４３に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２４３に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、及び／または配列番号２４３に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２４２に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２４２に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号２４２に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２４３に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２４３に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２４３に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２４２に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２４２に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２４２に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２４３に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２４３に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２４３に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２７８及び４１２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２７８及び４１２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２７８及び４１２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２７９及び４１３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２７９及び４１３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、及び／または配列番号２７９及び４１３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２７８及び４１２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２７８及び４１２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７８及び４１２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２７９及び４１３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２７９及び４１３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、ならびに配列番号２７９及び４１３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２７８及び４１２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２７８及び４１２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２７８及び４１２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２７９及び４１３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２７９及び４１３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、ならびに配列番号２７９及び４１３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２７５及び４１４のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２７５及び４１４のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２７５及び４１４のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２７６及び４１５のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２７６及び４１５のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、及び／または配列番号２７６及び４１５のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２７５及び４１４のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２７５及び４１４のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、ならびに配列番号２７５及び４１４のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２７６及び４１５のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２７６及び４１５のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、ならびに配列番号２７６及び４１５のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２７５及び４１４のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２７５及び４１４のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２７５及び４１４のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２７６及び４１５のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２７６及び４１５のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、ならびに配列番号２７６及び４１５のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８０に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２８０に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２８０に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２８１に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２８１に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、及び／または配列番号２８１に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８０に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２８０に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号２８０に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８１に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２８１に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２８１に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８０に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２８０に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２８０に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２８１に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２８１に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２８１に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１２３及び２９２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１２３及び２９２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、配列番号１２３及び２９２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１００及び２９３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１００及び２９３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、及び／または配列番号１００及び２９３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１２３及び２９２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１２３及び２９２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、ならびに配列番号１２３及び２９２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１００及び２９３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１００及び２９３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、ならびに配列番号１００及び２９３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１２３及び２９２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号１２３及び２９２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、配列番号１２３及び２９２のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１００及び２９３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１００及び２９３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、ならびに配列番号１００及び２９３のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８８、２９０、４０８及び４１０のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１；配列番号２８８、２９０、４０８及び４１０のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２；配列番号２８８、２９０、４０８及び４１０のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３；配列番号２８９、２９１、４０９及び４１１のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１；配列番号２８９、２９１、４０９及び４１１のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２；及び／または配列番号２８９、２９１、４０９及び４１１のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８８、２９０、４０８及び４１０のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１；配列番号２８８、２９０、４０８及び４１０のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２；ならびに配列番号２８８、２９０、４０８及び４１０のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８９、２９１、４０９及び４１１のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１；配列番号２８９、２９１、４０９及び４１１のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２８９、２９１、４０９及び４１１のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８８、２９０、４０８及び４１０のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１；配列番号２８８、２９０、４０８及び４１０のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２；配列番号２８８、２９０、４０８及び４１０のアミノ酸配列から選択されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３；配列番号２８９、２９１、４０９及び４１１のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１；配列番号２８９、２９１、４０９及び４１１のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２；ならびに配列番号２８９、２９１、４０９及び４１１のアミノ酸配列から選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８６に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２８６に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２８６に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２８７に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２８７に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、及び／または配列番号２８７に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８６に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２８６に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号２８６に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８７に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２８７に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２８７に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８６に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２８６に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２８６に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２８７に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２８７に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２８７に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８４に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２８４に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２８４に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２８５に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２８５に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、及び／または配列番号２８５に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８４に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２８４に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号２８４に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８５に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２８５に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２８５に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８４に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２８４に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２８４に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２８５に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２８５に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２８５に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２４４に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２４４に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２４４に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２４５に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２４５に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、及び／または配列番号２４５に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２４４に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２４４に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号２４４に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２４５に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２４５に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２４５に記載選択されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２４４に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ１、配列番号２４４に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ２、配列番号２４４に記載されるＶＨドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２４５に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２４５に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２４５に記載されるＶＬドメイン配列に由来するＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２４４のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号２４５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２４４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号２４５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２７５のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号２７６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２７５のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号２７６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２７８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号２７９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２７８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号２７９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８０のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号２８１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号２８１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８２のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号２８３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号２８３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号２８５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号２８５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号２８７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号２８７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２７８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号２７９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２７８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号２７９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８０のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号２８１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号２８１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２７５のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号２７６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２７５のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号２７６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号４１４のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号４１５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号４１４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号４１５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号１００のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１００のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号２９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号２８９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２９０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号２９１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号２８７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号２８７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＶＨドメインに由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列、及び／または配列番号２８５、３３３もしくは３３４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインに由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号２８５、３３３もしくは３３４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）（ｉ）ＮＦＡＭＴ（配列番号１７５）、ＮＦＡＶＴ（配列番号２０４）もしくはＮＦＡＬＴ（配列番号３０５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列と、（ｉｉ）ＴＩＧＳＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１４４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列と、（ｉｉｉ）ＤＳＴＶＳＷＳＧＤＦＦＤＹ（配列番号１４５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列とを含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／または（ｂ）（ｉ）ＲＡＳＱＮＶＫＮＤＬＡ（配列番号１４６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列と、（ｉｉ）ＡＡＲＩＲＥＴ（配列番号１４７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列と、（ｉｉｉ）ＱＱＹＹＤＷＰＰＦＴ（配列番号１４８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列とを含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１２０、２４６、２５８もしくは３２７のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＶＬドメインは、配列番号９７もしくは３１２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２４６のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２５８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１２０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３２７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２４６のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号３１２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２５８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号３１２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１２０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号３１２のアミノ酸配列を含むか、あるいは、ＶＨドメインは、配列番号３２７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号３１２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）（ｉ）ＩＹＡＭＳ（配列番号２６９）、ＩＹＡＶＳ（配列番号２１３）もしくはＩＹＡＬＳ（配列番号３０６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列と、（ｉｉ）ＴＩＧＡＤＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１５０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列と、（ｉｉｉ）ＤＳＴＶＧＷＳＧＤＦＦＤＹ（配列番号１５１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列とを含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／または（ｂ）（ｉ）ＲＡＳＱＮＶＲＳＤＩＡ（配列番号１５２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列と、（ｉｉ）ＡＡＳＳＲＤＴ（配列番号１５３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列と、（ｉｉｉ）ＱＱＹＹＤＷＰＰＦＴ（配列番号１４８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列とを含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号３４１、１２７、２４７、２５９もしくは３２８のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＶＬドメインは、配列番号１０４もしくは２４８のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３４１のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２４７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２５９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３２８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２４８のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３４１のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２４８のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２４７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２４８のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２５９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２４８のアミノ酸配列を含むか、あるいは、ＶＨドメインは、配列番号３２８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２４８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）（ｉ）Ｘ１Ｘ２ＤＸ３Ｎ（配列中、Ｘ１は、ＳまたはＴであり、Ｘ２は、ＹまたはＳであり、Ｘ３は、Ｍ、ＬまたはＶである）（配列番号３０７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列と、（ｉｉ）ＬＩＳＧＳＧＥＩＸ１ＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列中、Ｘ１は、ＩまたはＴである）（配列番号３０８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列と、（ｉｉｉ）ＥＸ１Ｘ２Ｘ３ＹＲＦＦＤＸ４（配列中、Ｘ１は、ＮまたはＤであり、Ｘ２は、ＮまたはＤであり、Ｘ３は、ＲまたはＭであり、Ｘ４は、ＤまたはＹである）（配列番号３０９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列とを含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／または（ｂ）（ｉ）ＲＡＸ１ＱＳＶＹＸ２ＹＬＡ（配列中、Ｘ１は、ＳまたはＤであり、Ｘ２は、ＴまたはＳである）（配列番号３１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列と、（ｉｉ）Ｘ１ＡＸ２Ｘ３ＲＡＸ４（配列中、Ｘ１はＧ、Ａ、またはＤであり、Ｘ２は、ＳまたはＲであり、Ｘ３は、Ｓ、ＮまたはＴであり、Ｘ４は、ＴまたはＡである）（配列番号３１１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列と、（ｉｉｉ）ＱＱＹＹＤＲＰＰＬＴ（配列番号１６０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列とを含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）（ｉ）ＳＹＤＭＮ（配列番号２７０）、ＳＹＤＶＮ（配列番号２２１）もしくはＳＹＤＬＮ（配列番号３１３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列と、（ｉｉ）ＬＩＳＧＳＧＥＩＩＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１５６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列と、（ｉｉｉ）ＥＮＮＲＹＲＦＦＤＤ（配列番号１５７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列とを含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／または（ｂ）（ｉ）ＲＡＳＱＳＶＹＴＹＬＡ（配列番号１５８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列と、（ｉｉ）ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１５９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列と、（ｉｉｉ）ＱＱＹＹＤＲＰＰＬＴ（配列番号１６０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列とを含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１３３、２６０、３２９もしくは２４９のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＶＬドメインは、配列番号１３４、２５０、２５１、４１７、４１８もしくは４１９のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％もしくは１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３２９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１７のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１７のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３２９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１７のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１７のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１８のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１８のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３２９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１８のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１８のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１９のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１９のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３２９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１９のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１９のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５０のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５０のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３２９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５０のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５１のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５１のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３２９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５１のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５０のアミノ酸配列を含むか、あるいは、ＶＨドメインは、配列番号２４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）（ｉ）Ｘ１Ｘ２ＡＸ３Ｓ（配列中、Ｘ１は、ＳまたはＴであり、Ｘ２は、Ｎ、Ｙ、ＨまたはＤであり、Ｘ３は、Ｍ、ＬまたはＶである）（配列番号２９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列と、（ｉｉ）ＧＩＳＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＹＹＸ７Ｘ８ＳＸ９ＫＧ（配列中、Ｘ１は、ＡまたはＳであり、Ｘ２は、Ｇ、Ｓまたは不在であり、Ｘ３は、Ｓ、ＤまたはＧであり、Ｘ４は、ＧまたはＳであり、Ｘ５は、Ｄ、ＳまたはＧであり、Ｘ６は、ＴまたはＡであり、Ｘ７は、Ｐ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、ＡまたはＳであり、Ｘ８は、Ａ、ＤまたはＧであり、Ｘ９は、ＶまたはＭである）（配列番号２９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列と、（ｉｉｉ）ＥＴＷＮＨＬＦＤＹ（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列とを含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／または（ｂ）（ｉ）ＳＧＧＸ１Ｘ２Ｘ３ＳＸ４ＹＹＸ５（配列中、Ｘ１は、Ｄ、Ｇ、Ｓ、Ｉまたは不在であり、Ｘ２は、Ｓ、Ｗ、Ｇ、Ｙ、Ｄまたは不在であり、Ｘ３は、Ｓ、Ｙ、ＴまたはＤであり、Ｘ４は、Ｈ、Ｔ、ＳまたはＹであり、Ｘ５は、ＧまたはＡである）（配列番号２９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列と、（ｉｉ）ＳＤＸ１Ｘ２ＲＰＸ３（配列中、Ｘ１は、ＤまたはＮであり、Ｘ２は、Ｅ、ＫまたはＱであり、Ｘ３は、ＳまたはＰである）（配列番号３００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列と、（ｉｉｉ）Ｘ１Ｘ２ＹＤＸ３Ｘ４Ｘ５ＹＸ６ＮＸ７（配列中、Ｘ１は、ＧまたはＡであり、Ｘ２は、ＧまたはＡであり、Ｘ３は、Ｇ、Ｙ、Ｑ、ＳまたはＡであり、Ｘ４は、Ｓ、ＲまたはＴであり、Ｘ５は、ＴまたはＳであり、Ｘ６は、Ａ、Ｉ、Ｖ、ＬまたはＴであり、Ｘ７は、Ｔ、Ａ、ＤまたはＰである）（配列番号３０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列とを含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）（ｉ）ＳＸ１ＡＸ２Ｓ（配列中、Ｘ１は、ＮまたはＹであり、Ｘ２は、Ｍ、ＬまたはＶである）（配列番号３０２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列と、（ｉｉ）ＧＩＳＸ１ＧＸ２Ｘ３ＤＴＹＹＸ４Ｘ５ＳＶＫＧ（配列中、Ｘ１は、ＡまたはＳであり、Ｘ２は、Ｇまたは不在であり、Ｘ３は、ＳまたはＧであり、Ｘ４は、Ｐ、ＧまたはＶであり、Ｘ５は、ＡまたはＤである）（配列番号３０３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列と、（ｉｉｉ）ＥＴＷＮＨＬＦＤＹ（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列とを含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／または（ｂ）（ｉ）ＳＧＧＸ１ＹＳＳＹＹＹＡ（配列中、Ｘ１は、ＳまたはＡである）（配列番号３０４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列と、（ｉｉ）ＳＤＤＫＲＰＳ（配列番号３３６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列と、（ｉｉｉ）ＧＧＹＤＱＳＳＹＴＮＰ（配列番号１７２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列とを含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、（ｉ）ＳＮＡＭＳ（配列番号１９４）、ＳＮＡＶＳ（配列番号２７１）またはＳＮＡＬＳ（配列番号３１８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列、（ｉｉ）ＧＩＳＡＧＧＳＤＴＹＹＰＡＳＶＫＧ（配列番号１９５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列、及び（ｉｉｉ）ＥＴＷＮＨＬＦＤＹ（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１３５、２６３、２６４または３３０のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、（ｉ）ＳＮＡＭＳ（配列番号１９４）、ＳＮＡＶＳ（配列番号２７１）またはＳＮＡＬＳ（配列番号３１８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列、（ｉｉ）ＧＩＳＳＧＳＤＴＹＹＧＤＳＶＫＧ（配列番号１９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列、及び（ｉｉｉ）ＥＴＷＮＨＬＦＤＹ（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１３７、２６５、２６６または３３１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、（ｉ）ＳＹＡＭＳ（配列番号２００）、ＳＹＡＶＳ（配列番号２７２）またはＳＹＡＬＳ（配列番号３１９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列、（ｉｉ）ＧＩＳＳＧＧＤＴＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列、及び（ｉｉｉ）ＥＴＷＮＨＬＦＤＹ（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１３９、２６７、２６８または３３２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、１つ以上のヒトＩＧＬＶ３フレームワーク配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、４つのヒトＩＧＬＶ３フレームワーク配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列ＦＷ１−ＨＶＲ−Ｌ１−ＦＷ２−ＨＶＲ−Ｌ２−ＦＷ３−ＨＶＲ−Ｌ３−ＦＷ４（Ｎ末端からＣ末端）を含み、配列中、ＦＷ１は、アミノ酸配列ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣ（配列番号３１４）を含み、ＦＷ２は、アミノ酸配列ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＴＬＩＹ（配列番号３１５）を含み、ＦＷ３は、アミノ酸配列ＮＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶＴＬＴＩＳＧＶＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣ（配列番号３１６）を含み、ＦＷ４は、アミノ酸配列ＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号３１７）を含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、（ｉ）ＳＧＧＳＹＳＳＹＹＹＡ（配列番号１７０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列、（ｉｉ）ＳＤＤＫＲＰＳ（配列番号３３６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列、及び（ｉｉｉ）ＧＧＹＤＱＳＳＹＴＮＰ（配列番号１７２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、（ｉ）ＳＧＧＡＹＳＳＹＹＹＡ（配列番号２６１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列、（ｉｉ）ＳＤＤＫＲＰＳ（配列番号３３６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列、及び（ｉｉｉ）ＧＧＹＤＱＳＳＹＴＮＰ（配列番号１７２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２６３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６４のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６６のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３１のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３２のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６４のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６６のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３１のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３２のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４
のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６４のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６６のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３１のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３２のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６４のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６６のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３１のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３２のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、あるいは、ＶＨドメインは、配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含む。
のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６４のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６６のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３１のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３２のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６３のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６４のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３０のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６６のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３１のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号２６８のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号３３２のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４のアミノ酸配列を含むか、ＶＨドメインは、配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号４１６のアミノ酸配列を含むか、あるいは、ＶＨドメインは、配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２６２のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
いくつかの実施形態において、抗体は、（ａ）ＧＦＳＦＳＸ１Ｘ２ＡＭＸ３（配列中、Ｘ１は、ＮまたはＩであり、Ｘ２は、ＦまたはＹであり、Ｘ３は、ＴまたはＳである）（配列番号１８５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列、（ｂ）ＴＩＧＸ４Ｘ５ＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列中、Ｘ４は、ＳまたはＡであり、Ｘ５は、ＧまたはＤである）（配列番号１８６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列、（ｃ）ＤＳＴＶＸ６ＷＳＧＤＦＦＤＹ（配列中、Ｘ６は、ＳまたはＧである）（配列番号１８７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列、（ｄ）ＲＡＳＱＮＶＸ７Ｘ８ＤＸ９Ａ（配列中、Ｘ７は、ＫまたはＲであり、Ｘ８は、ＮまたはＳであり、Ｘ９は、ＬまたはＩである）（配列番号１８８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列、（ｅ）ＡＡＸ１０Ｘ１１ＲＸ１２Ｔ（配列中、Ｘ１０は、ＲまたはＳであり、Ｘ１１は、ＩまたはＳであり、Ｘ１２は、ＥまたはＤである）（配列番号１８９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列、及び（ｆ）ＱＱＹＹＤＷＰＰＦＴ（配列番号１４８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１４３〜１４８から選択されるアミノ酸配列を有する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１４３〜１４５から選択される１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号１４６〜１４８から選択される１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１４８〜１５３から選択されるアミノ酸配列を有する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１４９〜１５１から選択される１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号１５２、１５３及び１４８から選択される１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１５５〜１６０から選択されるアミノ酸配列を有する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１５５〜１５７から選択される１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号１５８〜１６０から選択される１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１６１〜１６６から選択されるアミノ酸配列を有する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１６１〜１６３から選択される１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号１６４〜１６６から選択される１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１６１〜１６６から選択されるアミノ酸配列を有する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１６１〜１６３から選択される１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または表２に示される可変ドメインの１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１６１、１６３、１６８及び１７０〜１７２から選択されるアミノ酸配列を有する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１６１、１６８及び１６３から選択される１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号１７０〜１７２から選択される１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１６１、１６３、１６８及び１７０〜１７２から選択されるアミノ酸配列を有する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１６１、１６８及び１６３から選択される１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または表２に示される可変ドメインの１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１６３、１７３、１７４及び１７６〜１７８から選択されるアミノ酸配列を有する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１６３、１７３及び１７４から選択される１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号１７６〜１７８から選択される１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１６２、１６３、１７９及び１８２〜１８４から選択されるアミノ酸配列を有する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１６２、１６３及び１７９から選択される１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号１８２〜１８４から選択される１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１６２、１６３、１７９及び１８２〜１８４から選択されるアミノ酸配列を有する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１６２、１６３及び１７９から選択される１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または表２に示される可変ドメインの１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１２０及び９７の可変ドメイン配列に由来する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１２０の重鎖可変ドメイン配列に由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号９７の軽鎖可変ドメイン配列に由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１２７及び１０４の可変ドメイン配列に由来する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１２７の重鎖可変ドメイン配列に由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号１０４の軽鎖可変ドメイン配列に由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号９７、１０４、１２０及び１２７の可変ドメイン配列に由来する１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ配列（例えば、配列番号１２０及び１２７の重鎖可変ドメイン配列に由来する１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲ配列及び／または配列番号９７及び１０４の軽鎖可変ドメイン配列に由来する１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲ配列）を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号１４３もしくは１４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１４４もしくは１５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１４５もしくは１５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１４６もしくは１５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１４７もしくは１５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１６４、１７０、１７６もしくは１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５、１７１、１７７もしくは１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６、１７２、１７８もしくは１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１６４、１７０、１７６もしくは１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５、１７１、１７７もしくは１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６、１７２、１７８もしくは１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１６４、１７０、１７６もしくは１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５、１７１、１７７もしくは１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６、１７２、１７８もしくは１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１６４、１７０、１７６もしくは１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５、１７１、１７７もしくは１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６、１７２、１７８もしくは１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１６４、１７０、１７６もしくは１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５、１７１、１７７もしくは１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６、１７２、１７８もしくは１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１６４、１７０、１７６もしくは１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５、１７１、１７７もしくは１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６、１７２、１７８もしくは１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１６４、１７０、１７６もしくは１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５、１７１、１７７もしくは１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６、１７２、１７８もしくは１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び／または配列番号１６４、１７０、１７６もしくは１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５、１７１、１７７もしくは１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６、１７２、１７８もしくは１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号２４２に由来する１、２もしくは３つのＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号２４３に由来する１、２もしくは３つのＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号２４４に由来する１、２もしくは３つのＨＶＲ配列を含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号２４５に由来する１、２もしくは３つのＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメインを含む。
上記のように、超可変領域（ＨＶＲ）または相補性決定領域（ＣＤＲ）を記述するための様々な技術が当該技術分野において知られており、本明細書に記載される可変ドメイン配列に適用することができる。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、またはこれらの組み合わせによって定義されるＨＶＲ（例えば、１つの記述によって定義される１つ以上のＨＶＲ、及び異なる記述によって定義される１つ以上のＨＶＲ）を含む。３つの既知の記述（Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｋａｂａｔ及びＩＭＧＴ）を用いて記述された本開示の抗体のＨＶＲ配列を表５に示す。本明細書で使用されるとき、特に指定されない限り、ＨＶＲ残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔナンバリングによって定義される。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、表５に記載される１、２、３、４、５または６つのＨＶＲ（例えば、表５に記載される１、２もしくは３つの軽鎖ＨＶＲを含むＶＬドメイン及び／または表５に記載される１、２もしくは３つの重鎖ＨＶＲを含むＶＨドメイン）を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメイン、及び／または配列番号１９１もしくは１９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１９２、１９６もしくは１９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメイン、及び／または配列番号２３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号２４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメイン、及び／または配列番号２１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメインを含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメイン、及び／または配列番号１９４、１９８もしくは２００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１９５、１９７もしくは２０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメイン、及び／または配列番号２２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号２３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号２４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメイン、及び／または配列番号２３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメインを含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号１７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメインを含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号２１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号２１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号２０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号２１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号２０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号２０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号２０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号２０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号２１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号２１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号２１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号２１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、（ａ）配列番号２２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号２２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号２２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む。
上記の実施形態のいずれかのいくつかの実施形態において、抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するマクロファージによる食作用を亢進し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する樹状細胞の活性化を亢進し、ＣＤ４７を発現する腫瘍細胞（複数可）のｉｎ ｖｉｖｏ成長を阻害し、及び／またはＣＤ４７発現細胞とＴ細胞との間の相互作用を妨げない。食作用、樹状細胞活性化、腫瘍成長阻害、及びＣＤ４７発現細胞とＴ細胞との相互作用を測定するための例示的なアッセイ（例えば、接着アッセイ）は、本明細書に記載され、また当該技術分野において知られている。
抗体産生及び他の抗体特性
本開示の抗体は、当該技術分野において知られている任意の手段によって産生することができる。抗体産生のための例示的な技術が以下に記載されるが、これらの例示的な技術は、例示のみを目的に提供されるものであり、限定を意図するものではない。加えて、本明細書に記載される抗体との併用が企図される例示的な抗体の特性も更に記載される。
本開示の抗体は、当該技術分野において知られている任意の手段によって産生することができる。抗体産生のための例示的な技術が以下に記載されるが、これらの例示的な技術は、例示のみを目的に提供されるものであり、限定を意図するものではない。加えて、本明細書に記載される抗体との併用が企図される例示的な抗体の特性も更に記載される。
いくつかの実施形態において、抗原に「結合」する抗体は、抗原に対し、２５℃で１μＭ以下の解離定数（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒトｖ１及び／またはｖ２のＳＩＲＰ−αポリペプチドに対して、２５℃で１μＭ以下、２５℃で５００ｎＭ以下、２５℃で４００ｎＭ以下、２５℃で３００ｎＭ以下、２５℃で２５０ｎＭ以下、２５℃で２００ｎＭ以下、２５℃で２００ｎＭ以下、２５℃で１００ｎＭ以下、または２５℃で５０ｎＭ以下の解離定数（ＫＤ）を有する。いくつかの実施形態において、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチド及び１つ以上の非ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドに結合する抗体は、非ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドよりも高い親和性（例えば、１０倍または１００倍超）でヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドに結合するが、依然として、両方のポリペプチドに「結合する」とみなされる。いくつかの実施形態において、非ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチド及び１つ以上のヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドに結合する抗体は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドよりも高い親和性（例えば、１０倍または１００倍超）で非ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドに結合するが、依然として、両方のポリペプチドに「結合する」とみなされる。結合親和性を決定するためのアッセイは、当該技術分野において知られており、限定するものではないが、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）（例えば、本明細書に記載されるもの）、放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）（例えば、抗体のＦａｂ形態及びその抗原を使用するもの）などが含まれる。他の例示的な結合アッセイも本明細書に記載される。
抗原を作製するには、抗原を天然源から精製してもよいし、別の方法で取得してもよい。あるいは、組換え技術を使用して発現させてもよい。いくつかの実施形態において、抗原は、可溶性タンパク質として使用され得る。いくつかの実施形態において、抗原は、例えば、その免疫原性を高めるために、別のポリペプチドまたは他の部分にコンジュゲートされてもよい。例えば、本明細書に記載される抗原は、Ｆｃ領域に結合され得る。いくつかの実施形態において、細胞表面に抗原を発現する細胞を抗原として使用してもよい。
ポリクローナル抗体は、抗原及びアジュバントを複数回、皮下（ｓｃ）または腹腔内（ｉｐ）注射することによって動物において産生され得る。例えば、ニワトリの免疫付与に関する説明が本明細書に記載される。いくつかの実施形態において、抗原は、二官能性剤または誘導化剤を使用して、免疫原性タンパク質、例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリンまたはダイズトリプシン阻害剤にコンジュゲートされる。ニワトリを免疫するための例示的な方法が本明細書で提供される。哺乳動物などの他の様々な生物に適した関連方法もまた当該技術分野においてよく知られている。
上記のように、モノクローナル抗体は、種々の方法によって産生され得る。いくつかの実施形態において、本開示のモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）により最初に記載され、Ｈｏｎｇｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ，１４（３）：２５３−２６０（１９９５）、Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）、及びＨａｍｍｅｒｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）に更に記載されているハイブリドーマ法を使用して作製される。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）は、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載されている。ハイブリドーマ細胞が成長した培養培地を、目的の抗体の存在について、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイ、免疫沈降、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡなどによってスクリーニングすることができ、結合親和性については、例えば、スキャッチャード分析によって決定することができる。所望の結合特性を有する抗体を産生するハイブリドーマを、既知の培養技術を使用してサブクローン化し、成長させ、動物の腹水腫瘍としてｉｎ ｖｉｖｏで成長させることなどが可能である。
いくつかの実施形態において、モノクローナル抗体は、ファージディスプレイライブラリーなどのライブラリー法を使用して作製される。例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）を参照されたい。いくつかの実施形態において、例えば、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されるように、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によってクローニングし、ファージライブラリーでランダムに組み換え、次いで、これらを抗原結合ファージについてスクリーニングする。ファージは、典型的に、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片またはＦａｂ断片のいずれかとして、抗体断片を提示する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）に記載されるように、ナイーブレパートリー（例えば、ヒト由来）をクローニングすることで、いかなる免疫化も行うことなく、広範囲の非自己抗原及び自己抗原に対する単一の抗体源を得ることができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８（１９９２）に記載されるように、幹細胞に由来する再構成されていないＶ遺伝子断片をクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、高度に可変のＣＤＲ３領域をコード化し、ｉｎ ｖｉｔｒｏで再構成を達成することによって、ナイーブライブラリーを人工的に作製することもできる。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ニワトリ抗体である。ニワトリ抗体は、当該技術分野において知られている各種技術を使用して産生され得る。例えば、米国特許第６，１４３，５５９号、同第８，５９２，６４４号及び同第９，３８０，７６９号を参照されたい。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、キメラ抗体である。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４）を参照されたい。いくつかの実施形態において、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、ニワトリ、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）と、ヒト定常領域とを含む。いくつかの実施形態において、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスから変更されている、「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
いくつかの実施形態において、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。非ヒト抗体をヒト化することで、親の非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低下させることができる。一般に、ヒト化抗体は、１つ以上の可変ドメインを含み、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはその一部分）は、非ヒト抗体（例えば、ニワトリ抗体）に由来し、ＦＲ（またはその一部分）は、ヒト抗体配列に由来する。ヒト化抗体はまた、任意選択により、ヒト定常領域の少なくとも一部分を含む。いくつかの実施形態において、ヒト化抗体中のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体の特異性または親和性を回復または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基の由来となる抗体）由来の対応する残基に置換される。ヒト化抗体及びその作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）に概説されている。また、ニワトリ抗体をヒト化する方法は、例えば、ＷＯ２００５０１４６５３に記載されている。
ヒト化に有用なヒトフレームワーク領域には、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域、特定の軽鎖可変領域または重鎖可変領域サブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域、ヒト体細胞変異フレームワーク領域またはヒト生殖細胞系列フレームワーク領域、及びＦＲライブラリーのスクリーニングから得られるフレームワーク領域が含まれるが、これらに限定されない。例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）、及びＢａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）を参照されたい。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野において知られている各種技術を使用して産生され得る。いくつかの実施形態において、ヒト抗体は、本明細書に記載される遺伝子操作されたニワトリ（例えば、米国特許第８，５９２，６４４号及び同第９，３８０，７６９号参照）及び／またはマウスなどの非ヒト動物によって産生される。ヒト抗体は、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に概説されている。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、例えば、本明細書に記載の方法を使用して、ニワトリによって生成されるか、ニワトリに由来する。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、限定するものではないが、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’−ＳＨ、ＦｖもしくはｓｃＦｖ断片を含む、抗体断片、または単一ドメイン、一本鎖重鎖もしくは一本鎖軽鎖抗体である。抗体断片は、例えば、酵素消化または組換え技術によって生成され得る。いくつかの実施形態において、例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４：１０７−１１７（１９９２）及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）に記載されるように、インタクト抗体のタンパク質分解消化を使用して、抗体断片が生成される。いくつかの実施形態において、抗体断片は、組換え宿主細胞によって産生される。例えば、Ｆａｂ、Ｆｖ及びＳｃＦｖ抗体断片がＥ．ｃｏｌｉによって発現及び分泌される。あるいは、抗体断片は、抗体ファージライブラリーから単離することができる。
Ｆａｂ’−ＳＨ断片は、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収し、化学的に結合させてＦ（ａｂ’）２断片を形成することができる。Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３−１６７（１９９２）を参照されたい。Ｆ（ａｂ’）２断片はまた、組換え宿主細胞培養物から直接単離することもできる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含む、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期が延長されたＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片については、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。
いくつかの実施形態において、抗体は、一本鎖Ｆｖ断片（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６１８５ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号を参照されたい。ｓｃＦｖ融合タンパク質は、ｓｃＦｖのアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかでエフェクタータンパク質の融合を生じるように構築され得る。例えば、抗体断片はまた、例えば、米国特許第５，６４１，８７０号に記載されているものなどの「直鎖抗体」であり得る。このような直鎖抗体は、単一特異性または二重特異性であり得る。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、多重特異性抗体である。多重特異性抗体は、２つ以上の抗原に対して、結合特異性を有する（例えば、２、３またはそれを超える結合特異性を有する）。いくつかの実施形態において、抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、同じ抗原に対して、２つの異なる結合特異性を含む（例えば、異なる結合親和性及び／または同じ抗原の異なる特異的エピトープを有する）。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、２つの明確に異なる抗原に対する結合特異性を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、完全長またはインタクト抗体である。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、本開示の抗体断片である。
様々な結合特異性の組み合わせを有する二重特異性または多重特異性抗体が本明細書で企図される。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、本明細書に記載される１つ以上のＳＩＲＰ−αポリペプチドに対する第１の結合特異性を有する。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、がん細胞によって（例えば、細胞表面上に）発現される抗原に対する第２の結合特異性を有する。例示的な当該抗原には、限定するものではないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＳ１／ＳＬＡＭＦ７、Ｔｒｏｐ−２、５Ｔ４、ＥｐｈＡ４、ＢＣＭＡ、ムチン１、ムチン１６、ＰＴＫ７、ＰＤ−Ｌ１、ＳＴＥＡＰ１、エンドセリンＢ型受容体、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＮＰＰ３、ＳＬＣ４４Ａ４、ＧＮＭＢ、ネクチン４、ＮａＰｉ２ｂ、ＬＩＶ−１Ａ、グアニル酸シクラーゼＣ、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリンαＶβ３、インテグリンα５β１、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰ、テネイシン、Ｌｅｙ、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ７２、ムチン、ＣＡＩＸ、ＥＰＨＡ３、葉酸受容体α、ＧＤ２、ＧＤ３、及びＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ、ＳＳＸ−２、ＭＡＧＥファミリータンパク質、ＭＡＧＥ−Ａ３、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、ｇｐ７５／ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２、未成熟ラミニン受容体、ＭＯＫ／ＲＡＧＥ−１、ＷＴ−１、ＳＡＰ−１、ＢＩＮＧ−４、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、ＭＡＲＴ−２、ｐ５３、Ｒａｓ、β−カテニン、ＴＧＦ−βＲＩＩ、ＨＰＶ Ｅ６またはＨＰＶ Ｅ７に由来するペプチドを含むＭＨＣ／ペプチド複合体が挙げられる。理論に束縛されることを望むものではないが、このような結合特異性とＳＩＲＰ−αに対する結合特異性とを組み合わせることは、例えば、第１の結合特異性により、腫瘍細胞によって発現される任意のＣＤ４７に対する、白血球によって発現されるＳＩＲＰ−αの応答性を阻害しつつ、第２の結合特異性により、腫瘍細胞を標的にするようにＦｃＲ発現白血球を指向付けるのに特に有利であると考えられる。
二重特異性抗体を作製及び精製するための方法は、様々なものが当該技術分野において知られており、多数のアプローチが記載されている。アプローチの１つは、「ノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂｓ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅｓ）」または「空隙への突起（ｐｒｏｔｕｂｅｒａｎｃｅ−ｉｎｔｏ−ｃａｖｉｔｙ）」法である（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号参照）。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインモノマーのヘテロ二量体化は、「ノブ・イントゥ・ホール」残基ペア及び電荷残基ペアのように、２つのＦｃドメインモノマーに、異なるが適合する置換を導入することによって促進される。ノブとホールの相互作用は、ヘテロ二量体形成に有利であるが、ノブとノブ及びホールとホールの相互作用は、立体的衝突及び好ましい相互作用の欠如により、ホモ二量体形成を妨害する。ホールは、タンパク質中の元のアミノ酸を、より小さい側鎖体積を有する異なるアミノ酸で置き換えたときに生じる空隙を指す。ノブは、タンパク質中の元のアミノ酸を、より大きい側鎖体積を有する異なるアミノ酸で置き換えたときに生じる突起を指す。例えば、いくつかの実施形態において、置き換えられるアミノ酸は、ＦｃドメインモノマーのＣＨ３抗体定常ドメイン中にあり、２つのＦｃドメインモノマーの二量体化に関与する。いくつかの実施形態において、一方のＣＨ３抗体定常ドメイン中に、他方のＣＨ３抗体定常ドメイン中のノブを収容するようにホールを形成する。これにより、ノブとホールのアミノ酸が２つのＦｃドメインモノマーのヘテロ二量体化を促進または支持するように作用する。いくつかの実施形態において、一方のＣＨ３抗体定常ドメイン中のホールは、他方のＣＨ３抗体定常ドメイン中の元のアミノ酸をより良好に収容するように作成される。いくつかの実施形態において、一方のＣＨ３抗体定常ドメイン中のノブは、他方のＣＨ３抗体定常ドメイン中の元のアミノ酸と更なる相互作用を形成するように作成される。
いくつかの実施形態において、ホールは、ＣＨ３抗体定常ドメイン中のチロシンまたはトリプトファンなどのより大きな側鎖を有するアミノ酸を、アラニン、バリンまたはトレオニンなどのより小さな側鎖を有するアミノ酸で置き換えることによって構築される（例えば、Ｙ４０７Ｖ変異）。同様に、いくつかの実施形態において、ノブは、ＣＨ３抗体定常ドメイン中のより小さな側鎖を有するアミノ酸を、より大きな側鎖を有するアミノ酸で置き換えることによって構築される（例えば、Ｔ３６６Ｗ変異）。いくつかの実施形態において、一方のＦｃドメインモノマーは、ノブ変異Ｔ３６６Ｗを含み、他方のＦｃドメインモノマーは、ホール変異Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３５８Ａ及びＹ４０７Ｖを含む。いくつかの実施形態において、高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む本開示のポリペプチドを、ノブ変異Ｔ３６６Ｗを含むＦｃドメインモノマーに融合させ、望ましくないノブ−ノブホモ二量体形成を制限する。ノブ・イントゥ・ホールのアミノ酸ペアの例には、限定するものではないが、表３のものが挙げられる。
別のアプローチは、例えば、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインを有する免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合された、所望の結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインを使用する。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、一方のアームに第１の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖を有し、他方のアームにハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖ペア（第２の結合特異性を与える）を有する。ＷＯ９４／０４６９０を参照されたい。別のアプローチは、架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号参照）を使用してヘテロコンジュゲート抗体を作製する。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、化学的連結を使用して作製することができ（例えば、Ｂｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）参照）、インタクト抗体をタンパク質分解的にＦ（ａｂ’）２断片に切断し、これらの断片をジチオール複合化剤の存在下で還元し、チオニトロ安息香酸（ＴＮＢ）誘導体に変換し、その一方を還元によってＦａｂ’−チオールに再変換し、他方のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合し、二重特異性抗体を形成する。いくつかの実施形態において、Ｆａｂ’−ＳＨ断片を化学的に結合させる。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体断片は、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）に記載のように、ロイシンジッパーを使用して細胞培養で作製される。他の二重特異性抗体フォーマットについては、例えば、Ｓｐｉｅｓｓ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６７：９５−１０６を参照されたい。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ダイアボディである。例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい。ダイアボディの場合、一方の断片のＶＨドメイン及びＶＬドメインを、他方の断片の相補的なＶＬドメイン及びＶＨドメインと対合させ、これにより、２つの抗原結合部位を形成する。一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用によって二重特異性抗体断片を作製するための別の方策も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、単一ドメイン抗体である。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てもしくは一部分、または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部分を含む、単一ポリペプチド鎖を指す。ある特定の実施形態において、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号参照）。一実施形態において、単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全てまたは一部分を含む。ラクダ抗体も知られている。
抗体は、組換え法を使用して産生することができる。抗抗原抗体の組換え産生には、抗体をコードする核酸を単離し、更なるクローニング（ＤＮＡの増幅）または発現のために複製可能なベクターに挿入する。抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離され、配列決定することができる。多数のベクターが利用可能である。ベクター構成要素には、一般に、次の要素：シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサー要素、プロモーター及び転写終結配列のうちの１つ以上が含まれるが、これらに限定されない。
本開示の抗体は、例えば、シグナル配列または成熟タンパク質もしくは成熟ポリペプチドのＮ末端に特異的な切断部位を有する他のポリペプチドである、異種ポリペプチドとの融合ポリペプチドとして組換え的に産生することができる。選択される異種シグナル配列は、宿主細胞によって認識され、プロセシングされる（例えば、シグナルペプチダーゼによって切断される）ものであり得る。天然抗体のシグナル配列を認識せず、プロセシングしない原核生物の宿主細胞については、当該シグナル配列を、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、Ｉｐｐまたは熱安定性エンテロトキシンＩＩリーダーから選択される原核生物のシグナル配列に置き換える。酵母での分泌では、天然シグナル配列は、例えば、酵母インベルターゼリーダー、因子リーダー（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ及びＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ α因子リーダーを含む）、または酸性ホスファターゼリーダー、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓグルコアミラーゼリーダーなどに置き換えることができる。哺乳動物細胞の発現では、哺乳動物のシグナル配列及びウイルス分泌リーダー、例えば、単純ヘルペスｇＤシグナルが利用可能である。
発現ベクターとクローニングベクターはいずれも、１つ以上の選択した宿主細胞において、当該ベクターの複製を可能にする核酸配列、例えば、宿主染色体ＤＮＡとは関係なく当該ベクターの複製を可能にする核酸配列を含有する。この配列は、複製起点または自己複製配列を含み得る。かかる配列は、種々の細菌、酵母及びウイルスのものがよく知られている。一般に、哺乳動物発現ベクターには、複製起点成分は必要とされない（初期プロモーターを含有することから、ＳＶ４０起点が使用されることもある）。
発現ベクター及びクローニングベクターは、選択遺伝子または選択マーカーを含有し得る。典型的な選択遺伝子は、（ａ）抗生物質もしくは他の毒素、例えば、アンピシリン、ネオマイシン、メトトレキサートもしくはテトラサイクリンに対する耐性を付与するタンパク質、（ｂ）栄養要求性欠損を補うタンパク質、または（ｃ）複合培地から得られない重要な栄養素を供給するタンパク質をコードする。優性選択の例は、ネオマイシン、ミコフェノール酸及びハイグロマイシンの薬物を使用する。哺乳動物細胞に好適な選択マーカーの別の例は、抗体をコードする核酸を取り込む細胞成分の特定を可能にするものであり、例えば、ＤＨＦＲ、グルタミンシンテターゼ（ＧＳ）、チミジンキナーゼ、メタロチオネインＩ及び−ＩＩ、好ましくは、霊長類メタロチオネイン遺伝子、アデノシンデアミナーゼ、オルニチン脱炭酸酵素などである。例えば、ＤＨＦＲ遺伝子を用いて形質転換された、内因性ＤＨＦＲ活性を欠損するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株は、その形質転換体を、ＤＨＦＲの競合的アゴニストであるメトトレキサート（Ｍｔｘ）含有培地中で培養することによって特定される。
あるいは、目的の抗体をコードするＤＮＡ配列、野生型ＤＨＦＲ遺伝子、及びアミノグリコシド３’−ホスホトランスフェラーゼ（ＡＰＨ）などの別の選択マーカーを用いて形質転換または同時形質転換された宿主細胞（特に、内因性ＤＨＦＲを含有する野生型宿主）は、アミノグリコシド系抗生物質（例えば、カナマイシン、ネオマイシンまたはＧ４１８）などの選択マーカーに適した選択剤を含有する培地中で細胞を成長させることによって選択することができる。
発現ベクター及びクローニングベクターは、一般に、宿主生物によって認識され、抗体をコードする核酸に機能的に連結されたプロモーターを含有する。原核生物宿主での使用に好適なプロモーターには、ｐｈｏＡプロモーター、β−ラクタマーゼ及びラクトースプロモーター系、アルカリホスファターゼプロモーター、トリプトファン（ｔｒｐ）プロモーター系、ならびにｔａｃプロモーターなどのハイブリッドプロモーターが含まれる。しかしながら、他の既知の細菌プロモーターも好適である。真核生物のプロモーター配列が知られている。酵母プロモーターが当該技術分野においてよく知られており、成長条件によって制御される誘導性プロモーター／エンハンサーを含み得る。実質上、全ての真核細胞遺伝子は、転写が開始される部位から約２５〜３０塩基上流に位置するＡＴリッチ領域を有する。例としては、限定するものではないが、３−ホスホグリセリン酸キナーゼまたは他の解糖系酵素、例えば、エノラーゼ、グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ、ヘキソキナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼ、ホスホフルクトキナーゼ、グルコース−６−リン酸イソメラーゼ、３−ホスホグリセリン酸ムターゼ、ピルビン酸キナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼ、及びグルコキナーゼに対するプロモーターが挙げられる。哺乳動物の宿主細胞におけるベクターからの抗体転写は、例えば、ウイルスゲノムから得られるプロモーターによって制御することができる。ＳＶ４０ウイルスの初期及び後期プロモーターは、ＳＶ４０ウイルス複製起点を更に含有するＳＶ４０制限断片として簡便に得られる。ヒトサイトメガロウイルス最初期プロモーターは、ＨｉｎｄＩＩＩ Ｅ制限断片として簡便に得られる。あるいは、ラウス肉腫ウイルスの長末端反復をプロモーターとして使用することができる。
高等真核細胞による、本発明の抗体をコードするＤＮＡの転写は、多くの場合、ベクター中にエンハンサー配列を挿入することによって増大する。現在、哺乳動物遺伝子（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、α−フェトプロテイン及びインスリン）に由来する多くのエンハンサー配列が知られている。しかしながら、典型的に、真核細胞ウイルス由来のエンハンサーが使用される。
真核生物の宿主細胞（酵母、真菌、昆虫、植物、動物、ヒトまたは他の多細胞生物に由来する有核細胞）に使用される発現ベクターはまた、転写の終結及びｍＲＮＡの安定化に必要な配列を含有する。
本明細書におけるベクターのＤＮＡクローニングまたはＤＮＡ発現に好適な宿主細胞は、上記の原核生物、酵母または高等真核細胞である。この目的に好適な原核生物には、グラム陰性またはグラム陽性微生物などの真正細菌、例えば、ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａなどのＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｅｒｗｉｎｉａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、例えば、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ及びＳｈｉｇｅｌｌａなどが含まれる。原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物も、抗体をコードするベクターに好適なクローニング宿主または発現宿主である。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたは一般的にパン酵母菌は、下等真核生物の宿主微生物のなかでは最も一般的に使用されている。グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、ある特定の真菌株及び酵母株が選択され得る。例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
綿、トウモロコシ、ジャガイモ、ダイズ、ペチュニア、トマト、ウキクサ（Ｌｅｎｉｎａｃｅａｅ）、アルファルファ（Ｍ．ｔｒｕｎｃａｔｕｌａ）及びタバコの植物細胞培養物も宿主として利用することができる。
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）から得ることもできる。無脊椎動物細胞の例には、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。多数のバキュロウイルス系及びバリアントと、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（幼虫）、Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ（蚊）、Ａｅｄｅｓ ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ（蚊）、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ（ショウジョウバエ）及びＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉなどの宿主から得られる、対応する許容可能な昆虫宿主細胞が特定されている。
脊椎動物細胞を宿主として使用してもよく、培養（組織培養）における脊椎動物細胞の増殖が日常的な手段となっている。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０により形質転換したサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ１６５１）、ヒト胎児腎臓株（２９３細胞または浮遊培養での成長のためにサブクローニングされた２９３細胞（Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ１０）、マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０））、サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ７０）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１５８７）、ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ２）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ３４）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ１４４２）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ７５）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）、マウス乳腺癌（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）、ＴＲＩ細胞（Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２））、ＭＲＣ ５細胞、ＦＳ４細胞、及びヒトヘパトーマ株（Ｈｅｐ Ｇ２）である。他の有用な宿主哺乳動物細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が含まれる。抗体産生に好適な特定の宿主哺乳動物細胞株の総説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．２００３），ｐｐ．２５５−２６８を参照されたい。
本開示の宿主細胞は、種々の培地中で培養することができ、Ｈａｍ’ｓ Ｆ１０（Ｓｉｇｍａ）、最小必須培地（（ＭＥＭ）、（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ−１６４０（Ｓｉｇｍａ）、及びダルベッコ改変イーグル培地（（ＤＭＥＭ）、Ｓｉｇｍａ）などの市販の培地が、宿主細胞の培養に好適である。加えて、Ｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．５８：４４（１９７９）、Ｂａｒｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２：２５５（１９８０）、米国特許第４，７６７，７０４号、同第４，６５７，８６６号、同第４，９２７，７６２号、同第４，５６０，６５５号もしくは同第５，１２２，４６９号、ＷＯ９０／０３４３０、ＷＯ８７／００１９５または米国特許第３０，９８５号に記載されている培地のいずれかを宿主細胞の培養培地として使用してもよい。これらの培地のいずれも、必要に応じて、ホルモン及び／または他の成長因子（インスリン、トランスフェリンまたは上皮成長因子など）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム及びリン酸塩など）、緩衝剤（ＨＥＰＥＳなど）、ヌクレオチド（アデノシン及びチミジンなど）、抗生物質（ゲンタマイシン（商標）剤など）、微量元素（マイクロモル範囲の最終濃度で通常存在する無機化合物として定義される）ならびにグルコースまたは同等のエネルギー源が添加され得る。任意の他の必要な添加物も、当業者に知られているであろう適切な濃度で含めることができる。温度、ｐＨなどの培養条件は、発現のために選択された宿主細胞で以前から使用されているものであり、当業者には明らかであろう。
組換え技術を使用する場合、抗体は、ペリプラズム中に細胞内産生され得るか、培地中に直接分泌され得る。抗体が細胞内で産生される場合、第１工程として、宿主細胞または溶解断片のいずれかである粒子状デブリを、例えば、遠心分離または限外濾過によって除去する。Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３−１６７（１９９２）は、Ｅ．ｃｏｌｉのペリプラズムに分泌される抗体を単離するための手順について記載している。
細胞から調製された抗体組成物は、例えば、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析及び親和性クロマトグラフィーを使用して精製することができ、親和性クロマトグラフィーは、典型的に好ましい精製工程の１つである。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、κまたはλ軽鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、配列番号３２５、３２６または４２６のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む。例示的かつ非限定的な軽鎖定常領域配列を表６に記載する。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ＩＧＬＣ３λ軽鎖定常領域またはＩＧＬＣ７定常領域を含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、Ｆｃ領域を含む。例えば、いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、ヒトＦｃ領域、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４及びこれらのサブタイプである。例示的かつ非限定的なＦｃ領域は、表６に示される配列番号３２０〜３２４のアミノ酸配列内に記載される。いくつかの実施形態において、配列番号３２０〜３２４のアミノ酸配列内のうちの１つ以上のＦｃ領域は、例えば、本明細書中、以下に記載される変異のうちの１つ以上を含む。
いくつかの実施形態において、Ｆｃ領域は、安定性、グリコシル化パターンまたは他の修飾、エフェクター細胞機能、薬物動態などの１つ以上の抗体特性に影響を与える１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、グリコシル化が減少されているか、最小限である。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、エフェクター機能が除去されているか、低下している。例示的なＦｃ変異には、限定するものではないが、（ｉ）ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域の変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ及びＮ２９７Ａ、（ｉｉ）ヒトＩｇＧ２のＦｃ領域の変異Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７Ａ、ならびに（ｉｉｉ）ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域の変異Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、ｄｅｌＧ２３６及びＮ２９７Ａ（ＥＵナンバリング）が挙げられる。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ２のＦｃ領域は、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓ変異を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域は、Ｓ２８８Ｐ変異を含む。いくつかの実施形態において、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域は、Ｓ２８８Ｐ及びＬ２３５Ｅ変異を含む。
細胞表面抗原を標的にする抗体は、免疫細胞上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）結合に付随する免疫活性化及びエフェクター機能を誘発し得る。ＩｇＧ（γ受容体）、ＩｇＥ（η受容体）、ＩｇＡ（α受容体）及びＩｇＭ（μ受容体）を含む、特定の抗体クラスに特異的であるＦｃ受容体が多数存在する。細胞表面上のＦｃ受容体へのＦｃ領域の結合は、多数の生物反応を誘発し得、当該反応には、抗体被覆粒子の食作用（抗体依存性細胞媒介性食作用またはＡＤＣＰ）、免疫複合体のクリアランス、キラー細胞による抗体被覆細胞の溶解（抗体依存性細胞媒介性細胞傷害またはＡＤＣＣ）及び炎症性メディエーターの放出、胎盤通過、及び免疫グロブリン産生の制御が含まれる。更に、補体のＣ１成分の抗体への結合は、補体系を活性化し得る。補体の活性化は、細胞病原体の溶解にとって重要であり得る。しかしながら、補体の活性化はまた、炎症反応を刺激することもあり、自己免疫過敏症または他の免疫疾患に関与することもある。ある特定のＦｃ受容体に結合する能力を低下または除去したバリアントＦｃ領域は、局所細胞または局所組織を損傷も破壊もさせずに、リガンド機能を標的化、活性化または中和することによって作用する治療抗体及びＦｃ融合ポリペプチド構築物の開発に有用である。
いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインモノマーは、第２及び第３の抗体定常ドメイン（例えば、ＣＨ２及びＣＨ３）を含むポリペプチド鎖を指す。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインモノマーはまた、ヒンジドメインを含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインモノマーは、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＤを含む、任意の免疫グロブリン抗体アイソタイプのものである。更に、いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインモノマーは、任意のＩｇＧサブタイプ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ２ｃ、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４）のものである。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインモノマーは、野生型Ｆｃドメインモノマー配列から１０個もの変化（例えば、１〜１０、１〜８、１〜６、１〜４個のアミノ酸置換、付加もしくは挿入、欠失、またはこれらの組み合わせ）を含み、これらの変化がＦｃドメインとＦｃ受容体との間の相互作用を変化させる。
いくつかの実施形態において、免疫グロブリンのＦｃドメインモノマーまたはＦｃドメインモノマーの断片は、別のＦｃドメインモノマーとＦｃドメインを形成することができる。いくつかの実施形態において、免疫グロブリンのＦｃドメインモノマーまたはＦｃドメインモノマーの断片は、別のＦｃドメインモノマーとＦｃドメインを形成することができない。いくつかの実施形態において、ポリペプチドの血清半減期を延長するために、ＦｃドメインモノマーまたはＦｃドメインの断片が本開示のポリペプチドに融合される。いくつかの実施形態において、本開示のポリペプチドに融合されたＦｃドメインモノマーまたはＦｃドメインモノマーの断片は、第２のＦｃドメインモノマーと二量体化してＦｃ受容体に結合するＦｃドメインを形成するか、あるいは、Ｆｃドメインモノマーは、Ｆｃ受容体に結合する。いくつかの実施形態において、ポリペプチドの血清半減期を延長させるためにポリペプチドに融合されたＦｃドメインまたはＦｃドメイン断片は、いかなる免疫系関連反応も誘導しない。Ｆｃドメインは、ＣＨ３抗体定常ドメイン間の相互作用によって二量体化する２つのＦｃドメインモノマーを含む。
野生型Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体、例えば、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ及びＦｃγＲＩＶに結合する最小構造を形成する。いくつかの実施形態において、本開示の抗体中のＦｃドメインは、エフェクター機能の低下、例えば、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の低下、補体依存性細胞溶解（ＣＤＣ）の低下、抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）の低下、またはこれらの任意の組み合わせなどをもたらす、１つ以上のアミノ酸置換、付加もしくは挿入、欠失、またはこれらの組み合わせを含む。例えば、本開示の抗体は、ヒトＦｃ受容体に対する結合の減少（例えば、最小限の結合または結合がないこと）ならびに補体タンパク質Ｃ１ｑに対する結合の減少（例えば、最小限の結合または結合がないこと）、ヒトＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＢ、ＦｃγＲＩＩＩＢまたはこれらの任意の組み合わせ及びＣ１ｑに対する結合の減少（例えば、最小限の結合または結合がないこと）、抗体依存性エフェクター機能、例えば、ＡＤＣＣ、ＣＤＣ、ＡＤＣＰまたはこれらの任意の組み合わせなどの変更または低下を示すことができる。例示的な変異には、限定するものではないが、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３６、Ｇ２３７、Ｄ２６５、Ｄ２７０、Ｎ２９７、Ｅ３１８、Ｋ３２０、Ｋ３２２、Ａ３２７、Ａ３３０、Ｐ３３１またはＰ３２９に１つ以上のアミノ酸置換が挙げられる（ナンバリングはＫａｂａｔのＥＵインデックスに従う（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ｃ及びＣＤ６４のＦｃγ受容体に対する結合が減少しているか、除去されている。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される非天然Ｆｃ領域を含む抗体は、野生型Ｆｃ領域を含む抗体と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超える、Ｃ１ｑ結合の減少を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される非天然Ｆｃ領域を含む抗体は、野生型Ｆｃ領域を含む抗体と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超える、ＣＤＣの低下を示す。
いくつかの実施形態において、本明細書におけるＦｃバリアントは、野生型配列と比較して、グリコシル化が最小限であるか、グリコシル化が減少されている。いくつかの実施形態において、脱グリコシル化は、Ｎ２９７Ａを変異させるか、Ｎ２９７をＮではない任意のアミノ酸に変異させることによって達成される。
いくつかの実施形態において、抗体ＩｇＧ定常領域のバリアント（例えば、Ｆｃバリアント）は、Ｆｃγ受容体に特異的に結合する能力が低下しているか、あるいは、食作用を誘導する能力が低下している。いくつかの実施形態において、抗体ＩｇＧ定常領域のバリアント（例えば、Ｆｃバリアント）は、Ｆｃγ受容体に特異的に結合する能力が低下しており、かつ食作用を誘導する能力が低下している。例えば、いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、エフェクター機能を欠くように変異させる（これは「デッド」Ｆｃドメインに特有である）。例えば、いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインは、ＦｃドメインとＦｃγ受容体との間の相互作用を最小限に抑えることが知られている特定のアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインモノマーは、ＩｇＧ１抗体に由来し、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ及びＮ２９７Ａのうちの１つ以上を含む（Ｋａｂａｔ， ｅｔ ａｌ（１９９１）によるＥＵナンバリングシステムに従って指定）。いくつかの実施形態において、かかるＩｇＧ１のＦｃバリアントには、１つ以上の追加の変異が含まれる。ヒトＩｇＧ１のＦｃバリアントに対するこのような追加の変異の非限定的な例には、Ｅ３１８Ａ及びＫ３２２Ａが挙げられる。いくつかの場合において、ヒトＩｇＧ１のＦｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ１配列と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５または４個以下の変異を有する。いくつかの実施形態において、かかるＩｇＧ１のＦｃバリアントには、１つ以上の追加の欠失が含まれる。例えば、いくつかの実施形態において、例えば、ポリペプチドが細菌細胞中または哺乳動物細胞中で産生される場合、当該ポリペプチドの均質性を高めるために、ＦｃのＩｇＧ１重鎖定常領域のＣ末端リシンが欠失される。いくつかの場合において、ヒトＩｇＧ１のＦｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ１配列と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５または４個以下の欠失を有する。
いくつかの実施形態において、Ｆｃドメインモノマーは、ＩｇＧ２抗体に由来し、アミノ酸置換Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１ＳまたはＡ３３０ＳとＰ３３１Ｓの両方を含む。上述のアミノ酸位置は、Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ（１９９１）に従って定義される。所与の抗体に対するアミノ酸残基のＫａｂａｔナンバリングは、その抗体の配列と「標準的な」Ｋａｂａｔナンバリング配列との相同領域でのアラインメントによって決定され得る。いくつかの実施形態において、Ｆｃバリアントは、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７Ａアミノ酸置換のうちの１つ以上を含む、ヒトＩｇＧ２のＦｃ配列を含む（Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ（１９９１）によるＥＵナンバリングシステムに従って指定）。いくつかの実施形態において、かかるＩｇＧ２のＦｃバリアントには、１つ以上の追加の変異が含まれる。ヒトＩｇＧ２のＦｃバリアントに対するこのような追加の変異の非限定的な例には、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｖ３０９Ｌ及びＨ２６８Ａが挙げられる（Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ（１９９１）によるＥＵナンバリングシステムに従って指定）。いくつかの場合において、ヒトＩｇＧ２のＦｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ２配列と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４または３個以下の変異を有する。いくつかの実施形態において、かかるＩｇＧ２のＦｃバリアントには、１つ以上の追加の欠失が含まれる。
ＦｃバリアントがＩｇＧ４のＦｃバリアントである場合、いくつかの実施形態において、かかるＦｃバリアントは、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５ＥまたはｄｅｌＧ２３６変異を含む（Ｋａｂａｔ，ｅｔ ａｌ（１９９１）に従って指定）。いくつかの場合において、ヒトＩｇＧ４のＦｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧ４配列と比較して、合計で最大１２、１１、１０、９、８、７、６、５、４、３、２または１個の変異（複数可）を有する。
いくつかの実施形態において、Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧのＦｃ領域と比較して、対象のＦｃ受容体に対する結合が減少している。いくつかの実施形態において、Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧのＦｃ領域と比較して、対象のＦｃ受容体に対する結合の除去を示す。いくつかの実施形態において、Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧのＦｃ領域と比較して、食作用の低下を示す。いくつかの実施形態において、Ｆｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧのＦｃ領域と比較して、食作用の除去を示す。
抗体依存性細胞媒介性細胞傷害は、本明細書においてＡＤＣＣとも呼ばれ、ある特定の細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞及び好中球）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に分泌型Ｉｇが結合し、これにより、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原担持標的細胞に特異的に結合し、続いて、その標的細胞を死滅させることを可能にする、細胞傷害の一形態を指す。抗体依存性細胞媒介性食作用は、本明細書においてＡＤＣＰとも呼ばれ、ある特定の食細胞（例えば、マクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に分泌型Ｉｇが結合し、これにより、食作用エフェクター細胞が抗原担持標的細胞に特異的に結合し、続いて、その標的細胞を取り込み、消化することを可能にする、細胞傷害の一形態を指す。標的細胞の表面に対するリガンド特異的高親和性ＩｇＧ抗体は、細胞傷害性細胞または食細胞を刺激することができ、かかる死滅に使用することができる。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＦｃバリアントを含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、ＡＤＣＣまたはＡＤＣＰの低下を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＦｃバリアントを含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超える、ＡＤＣＣまたはＡＤＣＰの低下を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＦｃバリアントを含む抗体は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、ＡＤＣＣまたはＡＤＣＰの除去を示す。
補体依存性細胞傷害は、本明細書においてＣＤＣとも呼ばれ、抗体Ｆｃに補体成分Ｃ１ｑが結合することによって補体カスケードが活性化される、細胞傷害の一形態を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＦｃバリアントを含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超える、Ｃ１ｑ結合の減少を示す。いくつかの場合において、本明細書に記載されるＦｃバリアントを含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、ＣＤＣの低下を示す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載されるＦｃバリアントを含むポリペプチド構築物は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれを超える、ＣＤＣの低下を示す。いくつかの場合において、本明細書に記載されるＦｃバリアントを含む抗体は、野生型Ｆｃ領域を含むポリペプチド構築物と比較して、ごくわずかなＣＤＣしか示さない。
本明細書におけるＦｃバリアントは、野生型ヒトＩｇＧのＦｃ領域と比較して、Ｆｃγ受容体に対する結合が減少しているものを含む。例えば、いくつかの実施形態において、Ｆｃバリアントは、Ｆｃγ受容体に対する結合が、野生型ヒトＩｇＧのＦｃ領域によって示されるＦｃγ受容体に対する結合よりも少ない。いくつかの場合において、Ｆｃバリアントは、Ｆｃγ受容体に対する結合の減少が、１０％、２０％３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％（エフェクター機能の完全な除去）である。いくつかの実施形態において、結合の減少は、任意の１つ以上のＦｃγ受容体、例えば、ＣＤ１６ａ、ＣＤ３２ａ、ＣＤ３２ｂ、ＣＤ３２ｃまたはＣＤ６４に対するものである。
いくつかの場合において、本明細書で開示されるＦｃバリアントは、その野生型ヒトＩｇＧのＦｃ領域と比較して、食作用の低下を示す。かかるＦｃバリアントは、その野生型ヒトＩｇＧのＦｃ領域と比較して、食作用の低下を示し、その食作用活性の低下は、例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％である。いくつかの場合において、Ｆｃバリアントは、その野生型ヒトＩｇＧのＦｃ領域と比較して、食作用の除去を示す。
いくつかの実施形態において、本明細書で開示されるＦｃバリアントは、１つ以上の融合パートナーに結合される。いくつかの場合において、融合パートナーは、本開示の細胞傷害剤などの治療部分である。いくつかの場合において、融合パートナーは、発現されるタンパク質の標的化、精製、スクリーニング、提示などを可能にするように選択される。いくつかの実施形態において、融合パートナーはまた、Ｆｃ受容体への結合の程度または食作用の低下の程度に影響する。
いくつかの実施形態において、融合パートナーは、リンカー配列を介してＦｃバリアント配列に連結される。いくつかの実施形態において、リンカー配列は、一般に、少数のアミノ酸を含み、例えば、１０個未満のアミノ酸を含むが、それより長いリンカーも利用される。いくつかの場合において、リンカーは、１０、９、８、７、６もしくは５未満のアミノ酸長またはそれより短いアミノ酸長である。いくつかの場合において、リンカーは、少なくとも１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、２５、３０もしくは３５アミノ酸長またはそれより長いアミノ酸長である。任意選択により、いくつかの実施形態では、切断可能なリンカーが使用される。
いくつかの実施形態において、融合パートナーは、Ｆｃバリアントタンパク質と任意の関連する融合パートナーを、所望の細胞位置または細胞外培地に誘導する、ターゲット配列またはシグナル配列である。いくつかの実施形態において、ある特定のシグナル伝達配列は、タンパク質を成長培地中、または細胞膜の内膜と外膜との間に位置するペリプラズム中に分泌されるように標的にする。いくつかの実施形態において、融合パートナーは、精製またはスクリーニングを可能にするペプチドまたはタンパク質をコードする配列である。このような融合パートナーには、固定化金属アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）システム（例えば、Ｎｉ＋２アフィニティーカラム）で使用されるポリヒスチジンタグ（Ｈｉｓタグ）（例えば、Ｈｉｓ６及びＨｉｓ１０）または他のタグ、ＧＳＴ融合物、ＭＢＰ融合物、Ｓｔｒｅｐタグ、細菌酵素ＢｉｒＡのＢＳＰビオチン化標的配列、及び抗体の標的になるエピトープタグ（例えば、ｃ−ｍｙｃタグ、ｆｌａｇタグなど）が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、このようなタグは、精製、スクリーニング、またはその両方に有用である。例えば、いくつかの実施形態において、Ｆｃバリアントは、Ｈｉｓタグを使用してＮｉ＋２アフィニティーカラムに固定化されることにより精製され、次に、精製した後、同じＨｉｓタグを使用して、Ｎｉ＋２をコーティングしたプレートに抗体を固定化し、ＥＬＩＳＡまたは他の結合アッセイを実施する。
様々な選択方法を可能にする様々な融合パートナーが利用可能である。例えば、Ｆｃバリアントのライブラリーメンバーをｇｅｎｅ ＩＩＩタンパク質に融合させることによる、ファージディスプレイが使用される。いくつかの実施形態において、融合パートナーは、Ｆｃバリアントの標識化を可能にする。あるいは、いくつかの実施形態において、融合パートナーは、発現ベクター上の特定の配列に結合し、これにより、融合パートナー及び関連するＦｃバリアントが、それらをコードする核酸と共有結合または非共有結合的に連結可能となる。
いくつかの実施形態において、融合パートナーが治療部分である場合、治療部分は、例えば、細胞傷害剤、ペプチド、タンパク質、抗体、ｓｉＲＮＡまたは小分子である。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、様々な担体または標識に結合され、特定の抗原発現細胞の存在を検出するために使用される。担体の例には、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然及び変性セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、ならびにマグネタイトが挙げられる。担体の性質は、可溶性でも不溶性もよい。様々な異なる標識及び標識方法が知られている。標識の例には、酵素、放射性同位体、蛍光化合物、コロイド金属、化学発光化合物及び生物発光化合物が挙げられる。本明細書で開示される抗体に標識を結合するには、様々な技術が利用可能である。いくつかの実施形態において、抗体は、低分子量のハプテンに結合される。これらのハプテンは、次いで、第２の反応を用いて特異的に検出される。例えば、いくつかの実施形態において、ハプテンであるビオチンがアビジンとともに使用され、あるいは、ハプテンであるジニトロフェノール、ピリドキサールまたはフルオレセインが特定の抗ハプテン抗体（例えば、それぞれ抗ジニトロフェノール抗体、抗ピリドキサール抗体及び抗フルオレセイン抗体）により検出される。いくつかの実施形態において、本明細書に記載される抗体は、免疫アッセイなどの結合アッセイのために、ｉｎ ｖｉｔｒｏで使用される。例えば、いくつかの実施形態において、抗体は、液相で使用されるか、固相担体に結合される。いくつかの実施形態において、イムノアッセイに使用される抗体は、様々な方法で検出可能に標識される。
抗体を特定及び／または作製する方法
本開示のある特定の態様は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する抗原結合ドメインを特定する方法に関する。有利には、本明細書に記載の方法を使用して、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断する抗原結合ドメイン、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断しない抗原結合ドメイン、またはヒトＣＤ４７に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる抗原結合ドメインを特定することができる。
本開示のある特定の態様は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する抗原結合ドメインを特定する方法に関する。有利には、本明細書に記載の方法を使用して、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断する抗原結合ドメイン、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断しない抗原結合ドメイン、またはヒトＣＤ４７に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる抗原結合ドメインを特定することができる。
いくつかの実施形態において、方法は、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する抗原結合ドメインを準備することを含む。ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチド及び／または他のＳＩＲＰポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する例示的な抗原結合ドメイン及び抗体は、本明細書に記載され、かかる抗原結合ドメイン／抗体を特定するための例示的な方法も本明細書に記載される。例示的な方法については、以下の実施例に更に詳細に記載される。
いくつかの実施形態において、方法は、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含むポリペプチドに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体を組み立てることを含む。いくつかの実施形態において、複合体を「組み立てること」は、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントと、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含むポリペプチドの両方を含有する溶液を準備することを含む。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、例えば、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍、少なくとも１００倍、または少なくとも１００倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する、非天然バリアントである。有利には、天然ＳＩＲＰ−α：ＣＤ４７相互作用が結合アッセイ及びスクリーニングアッセイでの使用には弱すぎるため、これにより、抗体スクリーニングが容易となる。例示的なバリアントについては、以下に更に詳細に記載される。
いくつかの実施形態において、方法は、抗原結合ドメインを、組み立てた複合体に接触させることを含む。いくつかの実施形態において、複合体に対する抗原結合ドメインの結合、またはその欠如もしくは欠失が検出される。様々な検出技術が本明細書に記載される。いくつかの実施形態において、ＳＰＲまたはＥＬＩＳＡが使用される。複合体に対する抗原結合ドメインの検出可能な結合は、当該抗原結合ドメインがヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断しないことを示す。複合体に対する抗原結合ドメインの結合の欠如は、当該抗原結合ドメインがヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断することを示す。加えて、ＳＰＲを使用して、遮断抗体、非遮断抗体及びキック抗体を区別する。例えば、いくつかの実施形態において、非遮断抗体は、予め形成されたＳＩＲＰα：ＣＤ４７複合体の上に注入すると、ＲＵを増大させ、キック抗体は、予め形成されたＳＩＲＰα：ＣＤ４７複合体のＫｏｆｆを増大させ、遮断抗体は、予め形成されたＳＩＲＰα：ＣＤ４７複合体のＲＵまたはＫｏｆｆを変化させない。
いくつかの実施形態において、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインは、ヒトＩｇＳＦドメインである。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含むポリペプチドは、ヒトＣＤ４７の細胞外ドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインは、ＱＬＬＦＮＫＴＫＳＶＥＦＴＦＳＮＤＴＶＶＩＰＣＦＶＴＮＭＥＡＱＮＴＴＥＶＹＶＫＷＫＦＫＧＲＤＩＹＴＦＤＧＡＬＮＫＳＴＶＰＴＤＦＳＳＡＫＩＥＶＳＱＬＬＫＧＤＡＳＬＫＭＤＫＳＤＡＶＳＨＴＧＮＹＴＣＥＶＴＥＬＴＲＥＧＥＴＩＩＥＬＫＹＲＶＶＳ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含むポリペプチドは、別のポリペプチドまたは他の部分、例えば、ＩｇのＦｃ領域にコンジュゲートされる。
高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインバリアント
種々の高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが本発明での使用に企図される。例えば、ある特定の実施形態において、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番号１７〜５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む（表４参照）。ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントの更なる説明を以下に示す。
種々の高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが本発明での使用に企図される。例えば、ある特定の実施形態において、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、配列番号１７〜５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む（表４参照）。ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントの更なる説明を以下に示す。
いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその断片は、１×１０−８Ｍ未満、５×１０−９Ｍ未満、１×１０−９Ｍ未満、５×１０−１０Ｍ未満、１×１０−１０Ｍ未満、または１×１０−１１Ｍ未満のＫＤでＣＤ４７に結合する。いくつかの実施形態において、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドまたはその断片は、約５００ｎＭ〜１００ｎＭ、約１００ｎＭ〜５０ｎＭ、約５０ｎＭ〜１０ｎＭ、約１０ｎＭ〜５ｎＭ、約５ｎＭ〜１ｎＭ、約１ｎＭ〜５００ｐＭ、約５００ｐＭ〜１００ｐＭ、約１００ｐＭ〜５０ｐＭ、または約５０ｐＭ〜１０ｐＭのＫＤでＣＤ４７に結合する。
いくつかの実施形態において、断片は、１０未満のアミノ酸長、約１０アミノ酸長、約２０アミノ酸長、約３０アミノ酸長、約４０アミノ酸長、約５０アミノ酸長、約６０アミノ酸長、約７０アミノ酸長、約８０アミノ酸長、約９０アミノ酸長、約１００アミノ酸長、または約１００を超えるアミノ酸長のポリペプチドを含む。断片は、ＣＤ４７に結合する能力を保持する。好ましくは、ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチド及びその断片は、ＳＩＲＰ−αポリペプチドがＣＤ４７に結合するよりも高い親和性でＣＤ４７に結合する。
いくつかの実施形態において、上述したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントポリペプチドは、第２のポリペプチドに結合または融合される。いくつかの実施形態において、第２のポリペプチドには、限定するものではないが、Ｆｃポリペプチド、Ｆｃバリアント、ＨＳＡポリペプチド、アルブミンペプチド、ＰＥＧポリマー、または前述のものの断片が含まれる。
いくつかの実施形態において、ポリペプチドは、表４に記載される任意のバリアントに対して、少なくとも８５％の配列同一性（例えば、少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性）を有する高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインを含む。
ニワトリにおける抗体産生
本開示のある特定の態様は、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する抗ＳＩＲＰ−α抗体を産生する方法に関する。理論に束縛されることを望むものではないが、ニワトリＳＩＲＰ−αと哺乳動物（例えば、ヒト、サル、マウス、など）ＳＩＲＰ−αとの間には大きな多様性があることから、ニワトリの使用が特に有利であると考えられる。更に、ニワトリと哺乳動物との間には系統発生に距離があるので、例えば、ヒト及びマウスＳＩＲＰ−αポリペプチドに対して交差反応を示す抗体の特定を可能にし、これは、マウスにおける抗体産生では自己寛容により達成するのが困難であり得る。
本開示のある特定の態様は、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）に結合する抗ＳＩＲＰ−α抗体を産生する方法に関する。理論に束縛されることを望むものではないが、ニワトリＳＩＲＰ−αと哺乳動物（例えば、ヒト、サル、マウス、など）ＳＩＲＰ−αとの間には大きな多様性があることから、ニワトリの使用が特に有利であると考えられる。更に、ニワトリと哺乳動物との間には系統発生に距離があるので、例えば、ヒト及びマウスＳＩＲＰ−αポリペプチドに対して交差反応を示す抗体の特定を可能にし、これは、マウスにおける抗体産生では自己寛容により達成するのが困難であり得る。
いくつかの実施形態において、方法は、ヒトＳＩＲＰ−α細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）の少なくとも一部を含むペプチドでニワトリを免疫化することを含む。例示的な免疫化スケジュールは、以下に記載される。ニワトリの免疫法は、例えば、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｉｚｑｕｉｅｒｄｏ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ（Ｏｘｆ）１−１６に記載されている。いくつかの実施形態において、方法は、免疫化したニワトリの抗体産生細胞から抗体を得ることを含む。
いくつかの実施形態において、方法は、細胞から得た抗体と、２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメイン（例えば、Ｄ１ドメイン）との間の結合を検出することを含む。例えば、いくつかの実施形態において、例えば、本明細書に記載されるヒトＳＩＲＰ−α ｖ１及びｖ２が使用される。例示的な検出技術は、本明細書に記載され、これらには、限定するものではないが、ＧＥＭアッセイ（例えば、ＷＯ２００９１１１０１４及びＭｅｔｔｌｅｒ Ｉｚｑｕｉｅｒｄｏ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ（Ｏｘｆ）１−１６参照）、ＳＰＲ及びＥＬＩＳＡが挙げられる。
治療方法
本開示のある特定の態様は、本明細書に記載される抗体を使用して、疾患または障害を治療することに関する。いくつかの実施形態において、疾患は、がんである。いくつかの実施形態において、疾患は、自己免疫疾患または炎症性疾患である。
本開示のある特定の態様は、本明細書に記載される抗体を使用して、疾患または障害を治療することに関する。いくつかの実施形態において、疾患は、がんである。いくつかの実施形態において、疾患は、自己免疫疾患または炎症性疾患である。
例えば、本明細書で提供されるのは、本開示の抗体の有効量を投与することによって、個体のがんを治療するか、個体のがんの進行を遅らせる方法である。理論に束縛されることを望むものではないが、本明細書に記載される抗体は、例えば、ＣＤ４７：ＳＩＲＰ−αシグナル伝達軸を介して食作用及び免疫監視を阻害するがんの能力を無効化すること、または免疫系の活性化（樹状細胞の活性化によるものなど）を亢進することにより、がんの治療に有用であり得ると考えられる。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、化学療法剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、第２の抗体、例えば、がんによって発現される抗原に結合する抗体と組み合わせて投与される。がんによって発現される例示的な抗原は、当該技術分野において知られており、限定するものではないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＳ１／ＳＬＡＭＦ７、Ｔｒｏｐ−２、５Ｔ４、ＥｐｈＡ４、ＢＣＭＡ、ムチン１、ムチン１６、ＰＴＫ７、ＰＤ−Ｌ１、ＳＴＥＡＰ１、エンドセリンＢ型受容体、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＮＰＰ３、ＳＬＣ４４Ａ４、ＧＮＭＢ、ネクチン４、ＮａＰｉ２ｂ、ＬＩＶ−１Ａ、グアニル酸シクラーゼＣ、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリンαＶβ３、インテグリンα５β１、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰ、テネイシン、Ｌｅｙ、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ７２、ムチン、ＣＡＩＸ、ＥＰＨＡ３、葉酸受容体α、ＧＤ２、ＧＤ３、及びＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ、ＳＳＸ−２、ＭＡＧＥファミリータンパク質、ＭＡＧＥ−Ａ３、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、ｇｐ７５／ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２、未成熟ラミニン受容体、ＭＯＫ／ＲＡＧＥ−１、ＷＴ−１、ＳＡＰ−１、ＢＩＮＧ−４、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、ＭＡＲＴ−２、ｐ５３、Ｒａｓ、β−カテニン、ＴＧＦ−βＲＩＩ、ＨＰＶ Ｅ６またはＨＰＶ Ｅ７に由来するペプチドを含むＭＨＣ／ペプチド複合体が挙げられる。例えば、いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、タラコツズマブ（ＣＳＬ３６２及びＪＮＪ−５６０２２４７３としても知られる）などのＣＤ１２３（ＩＬ−３受容体αとしても知られる）に結合するモノクローナル抗体と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、ＥＧＦＲに結合するモノクローナル抗体（セツキシマブなど）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、第２の抗体は、１つ以上のエフェクター機能を含み、例えば、限定するものではないが、ＡＤＣＣもしくはＡＤＣＰ、及び／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を含む、免疫細胞上のＦｃ受容体（ＦｃＲ）結合に付随するエフェクター機能である。理論に束縛されることを望むものではないが、かかる抗体と本開示の抗体とを組み合わせることは、例えば、ＳＩＲＰ−α抗体により、腫瘍細胞によって発現される任意のＣＤ４７に対する、白血球によって発現されるＳＩＲＰ−αの応答性を阻害しつつ、第２の抗体が結合する腫瘍細胞を標的にするようにＦｃＲ発現白血球を指向付けるのに特に有利であると考えられる。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、免疫療法剤と組み合わせて投与される。免疫療法剤は、免疫系を標的にし、免疫系の治療的方向転換を促進する任意の治療剤、例えば、共刺激経路の調節因子、がんワクチン、組換え的に改変された免疫細胞などを指し得る。いくつかの実施形態において、免疫療法剤は、抗体を含む。免疫療法用抗体の例示的な抗原は、当該技術分野において知られており、限定するものではないが、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＯＸ４０、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、Ｂ７−Ｈ３、ＦＺＤ７、ＣＤ２７、ＴＮＦＲ２、ＣＣＲ４、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＩＣＯＳ、ＣＣＲ２、ＩＤＯ、Ａ２Ｒ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ８０、ＣＤ４７、アルギナーゼ、ＴＤＯ及びＰＶＲＩＧが挙げられる。承認されている免疫療法剤または後期臨床試験中の免疫療法剤には、限定するものではないが、イピリムマブ、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブなどが含まれる。理論に束縛されることを望むものではないが、本開示の抗体は、例えば、マクロファージ及びエフェクターＴ細胞の両方を活性化して腫瘍細胞を標的にする相補的作用機序があることから、免疫療法剤との併用に好適であると考えられる。特定の実施形態において、本開示の抗体は、ＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１経路阻害剤、例えば、抗ＰＤ−Ｌ１または抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて投与される。本明細書で示されるように、本開示の抗ＳＩＲＰ−α抗体とＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１経路阻害剤の組み合わせ投与は、相乗的な抗腫瘍活性をもたらし得る。例えば、いくつかの実施形態において、本開示の遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体は、抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、本開示の非遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体は、抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、本開示の遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、本開示の非遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせて投与される。
当該技術分野において知られている任意のがんの種類には、限定するものではないが、癌腫、肉腫、リンパ腫、白血病、リンパ腫及び芽細胞腫などが含まれ得る。このようながんのより具体的な例には、肺癌、扁平上皮細胞癌、脳腫瘍、膠芽腫、頭頸部癌、肝細胞癌、大腸癌（例えば、結腸癌または直腸癌）、肝臓癌、膀胱癌、胃癌、膵臓癌、子宮頸癌、卵巣癌、尿路癌、乳癌、腹膜癌、子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肛門癌、陰茎癌、黒色腫、多発性骨髄腫及びＢ細胞リンパ腫（非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、メルケル細胞癌、毛様細胞性白血病、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、ならびに関連転移が挙げられるが、これらに限定されない。
がん治療に加えて、本明細書で提供される抗体は、細胞を枯渇させる目的でモノクローナル抗体が投与される治療、例えば、免疫細胞枯渇による炎症性疾患の治療に有用である。当該目的のために、本明細書で提供される抗体は、第２の治療抗体（例えば、炎症性疾患及び自己免疫状態におけるＢ細胞の枯渇にはリツキシマブ、多発性硬化症にはアレムツズマブ、免疫抑制にはＯＫＴ３、骨髄移植前処置には他の剤など）と組み合わせて投与される。
更に、本明細書で提供されるのは、本開示の抗体の有効量を投与することによって、個体の自己免疫疾患または炎症性疾患を治療するか、個体の自己免疫疾患または炎症性疾患の進行を遅らせる方法である。本開示による治療を適用できる自己免疫疾患及び炎症性疾患には、多発性硬化症、関節リウマチ、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、抗体媒介性の炎症性疾患または自己免疫疾患、移植片対宿主病、敗血症、糖尿病、乾癬、アテローム性動脈硬化症、シェーグレン症候群、全身性進行性硬化症、強皮症、急性冠症候群、虚血再灌流、クローン病、子宮内膜症、糸球体腎炎、重症筋無力症、特発性肺線維症、喘息、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、血管炎及び自己免疫性炎症性筋炎が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、免疫抑制剤、抗炎症剤または免疫調節剤などの治療薬と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される抗体は、自己免疫疾患または炎症性疾患、例えば、多発性硬化症、関節リウマチ、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、抗体媒介性の炎症性疾患もしくは自己免疫疾患、移植片対宿主病、敗血症、糖尿病、乾癬、乾癬性関節炎、アテローム性動脈硬化症、シェーグレン症候群、全身性進行性硬化症、強皮症、急性冠症候群、虚血再灌流、クローン病、潰瘍性大腸炎、子宮内膜症、糸球体腎炎、ＩｇＡ腎症、多発性嚢胞腎疾患、重症筋無力症、特発性肺線維症、喘息、アトピー性皮膚炎、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、血管炎または自己免疫性炎症性筋炎の治療に使用される。
いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、例えば、抗体及び１つ以上の薬学的に許容される担体を含む製剤処方物の一部である。本明細書に記載される医薬組成物及び製剤処方物は、所望の純度を有する有効成分（抗体またはポリペプチドなど）を、１つ以上の任意選択の薬学的に許容される担体と混合することによって、凍結乾燥製剤または水性液剤の形態で調製することができる（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））。薬学的に許容される担体は、一般に、使用される用量及び濃度で、レシピエントに対して無毒であり、これらには、リン酸、クエン酸及び他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；アミノ酸；グルコース、マンノースもしくはデキストリンを含む、単糖、二糖及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；及び／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本開示の抗体は、凍結乾燥される。
本開示は、以下の実施例を参照することによって、より十分に理解されるであろう。しかしながら、実施例は、本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に記載される実施例及び実施形態は、例示のみを目的にするものであり、それらを考慮した様々な変形または変更が当業者に想起され、本出願の趣旨及び範囲ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれることを理解されたい。
実施例１：ＳＩＲＰ−αタンパク質に対して新しい結合特異性を有する抗体の特定
方法
抗体産生
以下のタンパク質を免疫化に使用した。各々は、免疫原性を高めるために、改変したＦｃ領域（Ｓ２２８Ｐ ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ、またはＩｇＧ１＿ＡＡＡ＿Ｎ２９７Ａと記載されるＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｎ２９７Ａ ヒトＩｇＧ１ Ｆｃのいずれか）を融合させたヒトまたはマウスＳＩＲＰ−αペプチドを含む。
方法
抗体産生
以下のタンパク質を免疫化に使用した。各々は、免疫原性を高めるために、改変したＦｃ領域（Ｓ２２８Ｐ ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ、またはＩｇＧ１＿ＡＡＡ＿Ｎ２９７Ａと記載されるＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｎ２９７Ａ ヒトＩｇＧ１ Ｆｃのいずれか）を融合させたヒトまたはマウスＳＩＲＰ−αペプチドを含む。
上記タンパク質を使用して、野生型ニワトリ、ＳｙｎＶＨニワトリ（ヒト由来のＶＨ及びニワトリ由来のＶＬを含有するトランスジェニックニワトリ）、または完全なヒト「ＨｕＭＡＢ」免疫グロブリン遺伝子座を有するニワトリ（Ｃｒｙｓｔａｌ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、例えば、ＷＯ２０１２１６２４２２、ＷＯ２０１１０１９８４４及びＷＯ２０１３０５９１５９参照）を免疫化した。抗原を交互に投与する可変スケジュールでニワトリを免疫化した。例示的な免疫化スケジュールは、次のとおりである。１週目に配列番号１の配列を有する抗原を１００μｇの用量で初回免疫し、３週目に配列番号２の配列を有する抗原１００μｇを追加免疫し、４週目に採血し、５週目に配列番号１の配列を有する抗原を５０μｇの用量で追加免疫し、６週目に採血し、７週目に配列番号２の配列を有する抗原５０μｇを追加免疫し、８週目に採血する。ニワトリの免疫化に関する更なる説明は、例えば、Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｉｚｑｕｉｅｒｄｏ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ（Ｏｘｆ）１−１６に見ることができる。
抗体クローンのスクリーニング及び発現
クローンを作製し、ＧＥＭアッセイに従ってスクリーニングした（Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｉｚｑｕｉｅｒｄｏ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ（Ｏｘｆ）１−１６参照）。クローンは、軽鎖がリンカーを介して重鎖と融合している、ｓｃＦｖ−Ｆｃフォーマットで試験した。ｓｃＦｖは、ヒトＦｃ−ＩｇＧ１のＮ末端に融合させた。クローンをＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３−ＦＳ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）で発現させ、分泌培地をＥＬＩＳＡ及びＳＰＲでの結合特性評価に使用した。
クローンを作製し、ＧＥＭアッセイに従ってスクリーニングした（Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｉｚｑｕｉｅｒｄｏ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ（Ｏｘｆ）１−１６参照）。クローンは、軽鎖がリンカーを介して重鎖と融合している、ｓｃＦｖ−Ｆｃフォーマットで試験した。ｓｃＦｖは、ヒトＦｃ−ＩｇＧ１のＮ末端に融合させた。クローンをＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３−ＦＳ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）で発現させ、分泌培地をＥＬＩＳＡ及びＳＰＲでの結合特性評価に使用した。
ＳＰＲ
様々なＳＩＲＰタンパク質に対する抗体クローンの結合は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）検出を使用し、０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０（ＰＢＳＴ）を添加したリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）をランニング緩衝液に用い、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６機器（Ｂｉｏ−Ｒａｄ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ））で測定した。分泌された抗体を含有する培地を予め濾過し、これをアッセイに直接使用した。まず、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（ＢＲ−１００８−３９（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ））をＧＬＣセンサーチップ上にアミン結合させ、抗体に対する捕捉表面を作った。１フローセル当たり約４０００ＲＵの固定化抗ヒトＩｇＧ Ｆｃが得られる。以下と同じ方法を使用して、各クローンをスクリーニングする。スクリーニングに使用したＳＩＲＰアナライトを表Ｃに記載する。
様々なＳＩＲＰタンパク質に対する抗体クローンの結合は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）検出を使用し、０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０（ＰＢＳＴ）を添加したリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）をランニング緩衝液に用い、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６機器（Ｂｉｏ−Ｒａｄ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ））で測定した。分泌された抗体を含有する培地を予め濾過し、これをアッセイに直接使用した。まず、抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ（ＢＲ−１００８−３９（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ））をＧＬＣセンサーチップ上にアミン結合させ、抗体に対する捕捉表面を作った。１フローセル当たり約４０００ＲＵの固定化抗ヒトＩｇＧ Ｆｃが得られる。以下と同じ方法を使用して、各クローンをスクリーニングする。スクリーニングに使用したＳＩＲＰアナライトを表Ｃに記載する。
（１）１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）中の約５〜１０ｕＬの予め濾過した培地を３０ｕｌ／分で２分間注入した。
（２）緩衝液を１００ｕＬ／分で１分間流す。
（３）ＳＩＲＰアナライト（１００ｎＭ）を１００ｕＬ／分で１分間注入し、続いて、１０分の解離サイクル。
（４）３Ｍ塩化マグネシウムを２５ｕＬ／分で両方向に１分間流すことによってチップ表面を再生。
（５）緩衝液を１００ｕＬ／分で１分間流す。
バイオセンサーのデータは、反応スポットのデータ（固定化抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ）からインタースポットのデータ（固定化抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ不含）を差し引き、次に、アナライト注入の反応から緩衝液「ブランク」アナライト注入の反応を差し引くことによって、ダブルリファレンスを行った。１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒを使用して結合をフィッティングし、Ｋｏｆｆ（１／Ｓ）値を算出した。ＳＰＲアッセイは全て２５℃で実施した。
ＥＬＩＳＡ
ＳＩＲＰアナライト及びＳＩＲＰ−α：ＣＤ４７複合体に対する抗体クローンの結合をスクリーニングするために、ＥＬＩＳＡアッセイを実施した。簡潔に述べれば、個々のＥＬＩＳＡ実験において、次のタンパク質を用いて９６ウェル平底高結合プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ−Ｏｎｅ ＃６５５０６１）をコーティングした：アビジン（Ｓｉｇｍａ Ａ９２７５）（２ｕｇ／ｍｌ）と、それに続くビオチン化ヒトＳＩＲＰα Ｖ１（０．５ｕｇ／ｍｌ）、アビジン（２ｕｇ／ｍｌ）と、それに続くヒトＳＩＲＰα Ｖ２ビオチン（０．５ｕｇ／ｍｌ）、マウスＮＯＤ ＳＩＲＰα（２ｕｇ／ｍｌ）、ヒトＳＩＲＰγ（２ｕｇ／ｍｌ）、ＣＤ４７（２ｕｇ／ｍｌ）と、それに続く高親和性ヒトＳＩＲＰα Ｖ１及びＶ２（各２ｕｇ／ｍｌ）または抗ｈＦｃ（２ｕｇ／ｍｌ Ｒｏｃｋｌａｎｄ ６０９−４１０３）。プレートをＰＢＳＴＭ（リン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、３％ミルク）によりブロッキングし、分泌されたｓｃＦｖ−Ｆｃを含有する上清５０ｕｌを室温で１時間添加する。プレートをＰＢＳＴで洗浄した。５０ｕｌの抗ｈＦｃ−ＨＲＰ（１：５０００ Ｒｏｃｋｌａｎｄ ６０９−４３０３）を室温で１時間添加した。プレートをＰＢＳＴで洗浄した。ＴＭＢを５分間発色させ、１Ｎ ＨＣｌで停止した。ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ１ Ｈｙｂｒｉｄ Ｒｅａｄｅｒを使用してＥＬＩＳＡの結果を読み取った。アッセイに使用され、本明細書に記載される、対応するタンパク質は、ヒトＳＩＲＰα Ｖ１（配列番号５）、ヒトＳＩＲＰα Ｖ２（配列番号６）、カニクイザルＳＩＲＰα（配列番号１１）、マウスＮＯＤ ＳＩＲＰα（配列番号８）、ヒトＳＩＲＰγ（配列番号１５）、ＣＤ４７（配列番号１６）、高親和性ＳＩＲＰα Ｖ１（配列番号４２）、高親和性ＳＩＲＰα Ｖ２（配列番号１７）である。
ＳＩＲＰアナライト及びＳＩＲＰ−α：ＣＤ４７複合体に対する抗体クローンの結合をスクリーニングするために、ＥＬＩＳＡアッセイを実施した。簡潔に述べれば、個々のＥＬＩＳＡ実験において、次のタンパク質を用いて９６ウェル平底高結合プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ−Ｏｎｅ ＃６５５０６１）をコーティングした：アビジン（Ｓｉｇｍａ Ａ９２７５）（２ｕｇ／ｍｌ）と、それに続くビオチン化ヒトＳＩＲＰα Ｖ１（０．５ｕｇ／ｍｌ）、アビジン（２ｕｇ／ｍｌ）と、それに続くヒトＳＩＲＰα Ｖ２ビオチン（０．５ｕｇ／ｍｌ）、マウスＮＯＤ ＳＩＲＰα（２ｕｇ／ｍｌ）、ヒトＳＩＲＰγ（２ｕｇ／ｍｌ）、ＣＤ４７（２ｕｇ／ｍｌ）と、それに続く高親和性ヒトＳＩＲＰα Ｖ１及びＶ２（各２ｕｇ／ｍｌ）または抗ｈＦｃ（２ｕｇ／ｍｌ Ｒｏｃｋｌａｎｄ ６０９−４１０３）。プレートをＰＢＳＴＭ（リン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、３％ミルク）によりブロッキングし、分泌されたｓｃＦｖ−Ｆｃを含有する上清５０ｕｌを室温で１時間添加する。プレートをＰＢＳＴで洗浄した。５０ｕｌの抗ｈＦｃ−ＨＲＰ（１：５０００ Ｒｏｃｋｌａｎｄ ６０９−４３０３）を室温で１時間添加した。プレートをＰＢＳＴで洗浄した。ＴＭＢを５分間発色させ、１Ｎ ＨＣｌで停止した。ＢｉｏＴｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈ１ Ｈｙｂｒｉｄ Ｒｅａｄｅｒを使用してＥＬＩＳＡの結果を読み取った。アッセイに使用され、本明細書に記載される、対応するタンパク質は、ヒトＳＩＲＰα Ｖ１（配列番号５）、ヒトＳＩＲＰα Ｖ２（配列番号６）、カニクイザルＳＩＲＰα（配列番号１１）、マウスＮＯＤ ＳＩＲＰα（配列番号８）、ヒトＳＩＲＰγ（配列番号１５）、ＣＤ４７（配列番号１６）、高親和性ＳＩＲＰα Ｖ１（配列番号４２）、高親和性ＳＩＲＰα Ｖ２（配列番号１７）である。
結果
ＳＩＲＰ−αは、ヒト、サル及びマウスにおいて高度に多型のタンパク質である。例えば、ＮＯＤマウス系統とＣ５７ＢＬ／６マウス系統のＳＩＲＰ−αタンパク質の間には２０個のアミノ酸の相違が確認されており、これらの多型は、これらのマウス系統において、ＣＤ４７結合及びヒト造血幹細胞の生着に関連する機能上の影響をもたらす。ヒトにおいては、少なくとも１０個の異なるＳＩＲＰＡ対立遺伝子が特定されており、これらの対立遺伝子を区別するアミノ酸変異は、ＣＤ４７推定結合残基に認められる（Ｔａｋｅｎａｋａ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：１３１３−２３）。１０個のヒトバリアントＳＩＲＰ−αタンパク質配列のアラインメントを図１Ａに示す。種内及び／または種間の交差反応性を有する、異なる結合特異性を有する抗体の特定は、ヒト集団に対して有効な臨床候補の開発及び様々な動物モデルにおける当該候補の特性評価にとって極めて興味深いものである。
ＳＩＲＰ−αは、ヒト、サル及びマウスにおいて高度に多型のタンパク質である。例えば、ＮＯＤマウス系統とＣ５７ＢＬ／６マウス系統のＳＩＲＰ−αタンパク質の間には２０個のアミノ酸の相違が確認されており、これらの多型は、これらのマウス系統において、ＣＤ４７結合及びヒト造血幹細胞の生着に関連する機能上の影響をもたらす。ヒトにおいては、少なくとも１０個の異なるＳＩＲＰＡ対立遺伝子が特定されており、これらの対立遺伝子を区別するアミノ酸変異は、ＣＤ４７推定結合残基に認められる（Ｔａｋｅｎａｋａ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．（２００７）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：１３１３−２３）。１０個のヒトバリアントＳＩＲＰ−αタンパク質配列のアラインメントを図１Ａに示す。種内及び／または種間の交差反応性を有する、異なる結合特異性を有する抗体の特定は、ヒト集団に対して有効な臨床候補の開発及び様々な動物モデルにおける当該候補の特性評価にとって極めて興味深いものである。
ヒト（ｖ１及びｖ２バリアント）、カニクイサル及びマウス１２９由来のＳＩＲＰ−αタンパク質のＤ１ドメインをアラインメントし、保存アミノ酸を特定した（図１Ｂ）。カニクイザルとマウス１２９の配列は、図１Ａに示されるように、ヒトバリアントｖ３〜ｖ１０よりもヒトｖ１及びｖ２から大きく異なるが、これらのアラインメントは、４つの全てのタンパク質の間に、ある程度の保存性があることを示しており、交差反応性抗体がおそらく特定され得ることを示唆している。しかしながら、各タンパク質はまた、特有の多型を示しており、特異的抗体もまた可能であることを示唆している。
図１Ｃに示されるように、複数のヒトバリアント及びマウス系統（例えば、１２９、ＮＯＤ、Ｃ５７ＢＬ／６及びＢＡＬＢ／ｃ）を代表するＳＩＲＰ−αタンパク質配列のアラインメントも行った。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３は、ＳＩＲＰαのＣＤ４７結合部位付近に位置する残基を示す。これらのアラインメントは、ヒト配列とマウス配列の間では、Ｒ１よりもＲ２及びＲ３のほうが大幅に異なることを示した。理論に束縛されることを望むものではないが、特定のネズミＳＩＲＰ−αタンパク質に結合する抗ＳＩＲＰ−α抗体は、例えば、薬物動態研究（ＣＤ−１マウスを使用するものなど）、トランスジェニックマウスの開発（Ｃ５７ＢＬ／６バックグラウンドにおけるものなど）、及び／またはＳＣＩＤ（例えば、ＮＯＤバックグラウンド）もしくは同系（例えば、ＢＡＬＢ／ｃまたはＣ５７ＢＬ／６バックグラウンド）マウスモデルにおける特性評価に対し、有用であり得ると考えられる。
上記の哺乳動物ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインと、ＤＦＫＬＱＱＰＱＳＳＶＶＶＩＫＧＤＴＬＴＬＮＣＴＡＳＧＳＧＰＩＧＡＶＫＷＶＫＧＷＧＳＤＮＱＴＶＹＥＨＫＧＳＦＰＲＶＭＲＡＶＰＤＰＴＮＤＦＴＩＲＩＳＮＶＳＬＥＤＡＧＴＹＹＣＶＫＬＲＫＧＩＶＤＤＶＶＦＴＲＧＧＧＴＥＶＳＶＨＡ（配列番号８４）の配列を含むニワトリＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインとのアラインメントも行った（図２）。ニワトリのＳＩＰＲα配列は、哺乳動物のＳＩＲＰ−α配列と比較すると、著しく異なることがわかった。様々なＳＩＲＰ−αタンパク質間のペアワイズ配列同一性パーセントの比較を表Ｂに示す。
理論に束縛されることを望むものではないが、この相違により、複数の哺乳動物ＳＩＲＰ−αタンパク質に対して交差反応を示す抗体を作製するという特有の機会が得られると考えられた。例えば、マウス宿主由来のネズミ配列と交差反応を示す抗ＳＩＲＰ−α抗体を作製することは、免疫寛容があるために、困難であり得る。更に、ニワトリと哺乳動物における免疫系の相違が大きければ、抗体産生における多様性も大きくなり得る。
ＳＩＲＰ−αタンパク質に対して新しい結合特異性を有する抗体を特定するために、上記のｓｃＦｖ−Ｆｃフォーマットで抗体クローンを特徴付けた。各抗体クローンは、ＥＬＩＳＡを使用して、次の標的：ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１のＤ１ドメイン（配列番号５に従う配列）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２のＤ１ドメイン（配列番号６に従う配列）、カニクイザルＳＩＲＰ−αバリアントのＤ１ドメイン（配列番号１１に従う配列）、マウス１２９ＳＩＲＰ−αのＤ１ドメイン（配列番号７に従う配列）、及びヒトＳＩＲＰγアイソフォーム（配列番号１５に従う配列）に対する結合について、０．００８〜１．０μｇ／ｍＬの濃度で試験した。本明細書で使用されるとき、抗体クローンは、クローンＩＤ番号によって示される。加えて、「Ｓ［クローン番号］」という表記は、ｓｃ−Ｆｖ−Ｆｃフォーマットを指し、「ＡＢ［クローン番号］」という表記は、完全ＩｇＧ抗体フォーマットを指し、「ＡＢ［クローン番号］ａ」という表記は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１を指し、「ＡＢ［クローン番号］ｂ」という表記は、マウスＩｇＧ１のＮ２９７Ａフォーマットを指し、「ＡＢ［クローン番号］ｃ」という表記は、マウスＩｇＧ２ａフォーマットを指し、「［クローン番号］Ｆａｂ」という表記は、Ｆａｂ断片フォーマットを指す。
加えて、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメイン（配列番号１６に従う配列）に結合した２つの高親和性ＳＩＲＰ−αバリアント（配列番号４２及び配列番号１８）の１：１の混合物を使用して調製したプレ複合体に対する各抗体クローンの結合を特徴付けた。有利には、野生型ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインとＣＤ４７のＩｇＳＦドメインとの間の親和性は比較的低いので、高親和性ＳＩＲＰ−αバリアントを含む複合体を使用することにより、ＳＩＲＰ−αがＣＤ４７と複合体化していてもＳＩＲＰ−αに結合する抗体の特定が可能となる（例えば、非遮断抗体）。また、ＳＩＲＰ−αがＣＤ４７と複合体化している場合には、ＳＩＲＰ−αに結合することができない抗体の特定も可能となる。これは、当該抗体とＣＤ４７がＳＩＲＰ−α上の同じ結合界面に対して競合することを示唆している（例えば、遮断抗体）。使用した２つのＳＩＲＰαバリアント（配列番号１７及び配列番号１９）は、それぞれヒトＳＩＲＰαポリペプチドバリアント１及びバリアント２を使用して操作された高親和性ＳＩＲＰα Ｄ１ドメインに対応する。
図３Ａは、クローンＳ１３０（配列番号７１）のＥＬＩＳＡ結合曲線を示す。このクローンは、哺乳動物ＳＩＲＰ−αタンパク質に対して交差反応性を示し、複数のヒトバリアントならびにカニクイザル及びネズミタンパク質に結合した（図３Ｂ）。しかしながら、その結合は、ヒトＳＩＲＰγでは結合が観察されなかったことから、アイソフォーム特異的でもあった。このクローンはまた、高親和性ＳＩＲＰ−αバリアントに結合したＣＤ４７を含有するプレ形成複合体への結合が検出されなかったことから、ＳＩＲＰ−αとＣＤ４７との間の相互作用の遮断剤であることが特定された。
図４Ａは、クローンＳ１２１（配列番号７５）のＥＬＩＳＡ結合曲線を示す。このクローンも哺乳動物ＳＩＲＰ−αタンパク質に対して交差反応性を示したが、ヒトＳＩＲＰγにも結合したことから、全アイソフォーム結合を示す（図４Ｂ）。このクローンもまた、ＳＩＲＰ−αとＣＤ４７との間の相互作用の遮断剤であることが特定された。
図５Ａは、クローンＳ１３７（配列番号７３）のＥＬＩＳＡ結合曲線を示す。図３Ａ及び３Ｂに示されるクローンと同様に、このクローンも哺乳動物ＳＩＲＰ−αタンパク質に対して交差反応性を示し、ヒトＳＩＲＰγには結合しなかったことから、アイソフォーム特異的結合であった（図５Ｂ）。しかしながら、このクローンは、プレ形成複合体に結合したことから、ＳＩＲＰ−αとＣＤ４７との間の相互作用の非遮断剤であることが特定された。
図６Ａは、クローンＳ１２８（配列番号７０）のＥＬＩＳＡ結合曲線を示す。このクローンは、霊長類ＳＩＲＰ−αタンパク質に対してアイソフォーム特異的交差反応性を示し、ネズミタンパク質には結合しなかった（図６Ｂ）。このクローンもまた、ＳＩＲＰ−αとＣＤ４７との間の相互作用の遮断剤であることが特定された。
図７Ａは、クローンＳ１３５（配列番号７２）のＥＬＩＳＡ結合曲線を示す。図６Ａ及び６Ｂに示されるクローンと同様に、この遮断クローンは、霊長類ＳＩＲＰ−αタンパク質に対して交差反応性を示し、ネズミタンパク質には結合しなかった（図７Ｂ）。クローンＳ１２８とは異なり、このクローンは、ヒトＳＩＲＰγと交差反応することがわかった。
図８Ａは、クローンＳ１２６（配列番号６９）のＥＬＩＳＡ結合曲線を示す。このクローンは、ヒトＳＩＲＰ−αバリアントの両方に結合するが、他のペプチドには結合しないことから、ヒト特異的であることがわかった（図８Ｂ）。このクローンは、ＳＩＲＰ−αとＣＤ４７との間の相互作用の遮断剤であることが特定された。
図９Ａは、クローンＳ１３８（配列番号７４）のＥＬＩＳＡ結合曲線を示す。このクローンは、ヒトＳＩＲＰ−αバリアント１にのみ結合した。これは、高度の種内及び種間結合特異性を示す（図９Ｂ）。このクローンは、ＳＩＲＰ−αとＣＤ４７との間の相互作用の遮断剤であることが特定された。
結論として、ＳＩＲＰ−αタンパク質に対して多数の特有の結合特異性を有する新規抗体が特徴付けられた。図１０Ａは、ニワトリ抗体を産生するニワトリから得たｓｃＦｖ−Ｆｃ可変ドメイン配列を示すアラインメントを提供する（ＣＤＲを明示する）。図１０Ｂは、ヒト抗体を産生するニワトリから得たｓｃＦｖ−Ｆｃ可変ドメイン配列を示すアラインメントを提供する（ＣＤＲを明示する）。これらの検討は、抗ＳＩＲＰ−α抗体を特定するための抗体多様性の源として、ニワトリが有用であることを際立たせるものである。
抗体がＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合を遮断できるかどうかを評価するために、ＥＬＩＳＡによるスクリーニングに加えて、ＳＰＲによるスクリーニングも実施した。抗体の捕捉は、上記のように調製された抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃ固定化ＧＬＣ表面を使用して行った。スクリーニングには、野生型ＳＩＲＰ−αではなく、高い親和性（ｎＭ）でＣＤ４７（配列番号１６）に結合するように操作されたＳＩＲＰαバリアント（配列番号１７）を使用した。これは、野生型ＳＩＲＰ−αバリアントではＣＤ４７に対する結合親和性（ｕＭ）が低いので、安定した複合体相互作用が生じず、サンドイッチ形成を評価できないからである。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）に０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０（ＰＢＳＴ）を添加し、ランニング緩衝液とした。
まず、１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）中の約５〜１０ｕＬの予め濾過した抗体含有培地を３０ｕｌ／分で２分間注入し、抗ヒトＩｇＧ−Ｆｃ固定化ＧＬＣ表面に捕捉させ、続いて、単純な緩衝液を１００ｕＬ／分で１分間流した。次に、０、２０、５５、５００または１５００ｎＭの異なる濃度でＣＤ４７（配列番号１６）と予め混合した１００ｎＭの高親和性ＳＩＲＰ−αバリアント（配列番号１７）を１００ｕＬ／分で別々に１分間注入し、解離時間を１０分間とした。以下の記載において、ＳＩＲＰ−αは、配列番号１７を指す。
ＳＩＲＰ−αのＣＤ４７への結合を遮断しない抗体の場合、抗体は、ＳＩＲＰ−α／ＣＤ４７複合体に結合し、サンドイッチを形成することが予想される。したがって、ＣＤ４７の濃度が高くなると、サンドイッチ形成が増加することから、レゾナンスは、それに応じて増加する。抗体クローンＳ１２３は、このプロファイルに一致することがわかった。Ｓ１２３のプロファイルの例を図１２Ａに示す。
ＳＩＲＰ−αのＣＤ４７への結合を遮断する抗体の場合、そのプロファイルは、非遮断抗体とは異なるものである。ＣＤ４７の濃度が高くなると、抗体がＣＤ４７と同じ結合部位に対して競合し、ほとんど／全てのＳＩＲＰ−αがＣＤ４７と複合体を形成するので、抗体の結合に利用できるＳＩＲＰ−αの分子はわずかであることが予想される。したがって、レゾナンス（ＲＵ）は、混合物中のＣＤ４７の濃度が高くなるにつれて低くなることが予想される。抗体クローンＳ１１９は、このプロファイルに一致することがわかった。Ｓ１１９のプロファイルの例を図１２Ｂに示す。
遮断剤及び非遮断剤に加えて、「キック」プロファイルを有する第３のカテゴリーの抗体が単離された。抗体クローンＳ１１８は、このプロファイルに一致することがわかった。Ｓ１１８のプロファイルの例を図１２Ｃに示す。ＣＤ４７の濃度が高くなると（例えば、５００ｎＭ及び１５００ｎＭのＣＤ４７）、より高い３００ＲＵのレゾナンスが時間とともに減衰することから示されるように、抗体とＳＩＲＰ−αとＣＤ４７の間で一過性のサンドイッチが形成された。このレゾナンス単位の減衰は、抗体が複合体中のＳＩＲＰ−αに結合し、ＣＤ４７に対するＳＩＲＰ−αの結合を「跳ね返す」ことができることを示す。
ＳＰＲを使用して、各ＳＩＲＰアナライトに対する各クローンの結合のｋｏｆｆ速度を決定した（表Ｃ）。ＳＰＲスクリーニング条件は、本明細書に記載されているものであり、Ｋｏｆｆ値は、Ｌａｎｇｍｕｉｒ反応速度フィッティングを使用して決定した。ＣＤ４７遮断特性（遮断、非遮断、キック）を表Ｃの最後の列に記載する。各抗体は、その対応する配列番号に従って特定される。ＳＩＲＰアナライト配列は次のとおりである：ＣＶ１−３：配列番号１８、ｖ１：配列番号５、ｖ２：配列番号６、カニクイザル１：配列番号１１、カニクイザル２：配列番号１２、ｍ１２９、配列番号７、ＮＯＤ：配列番号８、ＢＬ６：配列番号９、ｓｉｒｐｂ１：配列番号１３、ｓｉｒｐｇ：配列番号１５。
ＮＢ＝結合なし
ＬＢ＝極めて低い結合（ＬａｎｇｍｕｉｒフィッティングではＫｏｆｆを算出できない）
−＝スクリーニングせず
ＬＢ＝極めて低い結合（ＬａｎｇｍｕｉｒフィッティングではＫｏｆｆを算出できない）
−＝スクリーニングせず
これらのデータは、異なる種及び種内のバリアントにわたるＳＩＲＰ−αタンパク質に対して様々な結合特異性を有する抗体クローンが特定されたことを示している。上記のＥＬＩＳＡを使用して、ヒトｖ１（配列番号５）、ヒトｖ２（配列番号６）、ＮＯＤマウス（配列番号８）及びカニクイザルＳＩＲＰ−αのＤ１ドメイン（配列番号１１）、ならびにヒトＳＩＲＰγ（配列番号１５）、及びＣＤ４７のＩｇＳＦドメイン（配列番号１６）に結合した２つの高親和性ＳＩＲＰ−αバリアント（配列番号１７及び１９）の１：１の混合物のプレ形成複合体に対する結合曲線を作成することによって、選択した抗体の結合特異性を更に特徴付けた。
試験したｓｃＦｖ−Ｆｃクローンの配列を表Ｄに示す。
理論に束縛されることを望むものではないが、ヒト、カニクイザル及び／またはネズミタンパク質の間で交差反応性結合を有する抗体は、動物モデルと臨床試験の両方における抗体の特性評価を可能にし得ると考えられる。アイソフォーム及び／またはバリアント特異的結合を有する抗体は、特定のヒト集団に対する個別化医療アプローチ及び／または目的の特定バリアントに関する研究に有用であり得る。種内及び種間の結合特異性のプロファイリングに加えて、本明細書に記載される方法はまた、ＳＩＲＰ−αとＣＤ４７との間の結合を遮断する抗体または遮断しない抗体の特定、及びＣＤ４７に対するＳＩＲＰ−αの結合を「跳ね返す」抗体の特定も可能にする。
実施例２：ＳＩＲＰ−αタンパク質に対して新しい結合特異性を有する更なる抗体の特定
方法
ＫＤの決定
抗ＳＩＲＰα抗体と、様々な種（ヒトｖ１、ヒトｖ２、カニクイザル、マウス１２９、ＢＬ６、ＢＡＬＢｃ、ＮＯＤ）に由来するＳＩＰＲα、ＳＩＲＰβ及びＳＩＲＰγとの相互作用について、抗体の直接固定化（ＧＬＣチップによる）またはビオチン化プロテインＡを介した捕捉（ＮＬＣチップによる）による２つの方法を次のプロトコルに従って使用して分析した。実験は全て、ＧＬＣまたはＮＬＣセンサーチップを備えるＳＰＲ系ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６バイオセンサー（ＢｉｏＲａｄ，Ｉｎｃ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ））を使用して２５℃で実施した。実施例１に記載されるように、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３−ＦＳ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して抗体を発現させた。標準的なプロテインＡアフィニティーカラムクロマトグラフィーにより精製を行い、溶出した抗体をＰＢＳ緩衝液中に保存した。
方法
ＫＤの決定
抗ＳＩＲＰα抗体と、様々な種（ヒトｖ１、ヒトｖ２、カニクイザル、マウス１２９、ＢＬ６、ＢＡＬＢｃ、ＮＯＤ）に由来するＳＩＰＲα、ＳＩＲＰβ及びＳＩＲＰγとの相互作用について、抗体の直接固定化（ＧＬＣチップによる）またはビオチン化プロテインＡを介した捕捉（ＮＬＣチップによる）による２つの方法を次のプロトコルに従って使用して分析した。実験は全て、ＧＬＣまたはＮＬＣセンサーチップを備えるＳＰＲ系ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６バイオセンサー（ＢｉｏＲａｄ，Ｉｎｃ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ））を使用して２５℃で実施した。実施例１に記載されるように、ＦｒｅｅＳｔｙｌｅ（商標）２９３−ＦＳ細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して抗体を発現させた。標準的なプロテインＡアフィニティーカラムクロマトグラフィーにより精製を行い、溶出した抗体をＰＢＳ緩衝液中に保存した。
ランニング緩衝液は、０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ＋）（ｐＨ７．４）であった。アナライトは全て、Ａ２８０の吸光度と、算出されたモル吸光係数を使用して決定される名目上の濃度で使用した。アナライトは、別途記載されるように（例えば、Ｂｒａｖｍａｎ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．（２００６）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５８：２８１−２８８参照）、「ワンショット」カイネティクスモードで注入した。
ＧＬＣチップを使用する方法の場合、Ｐｒｏｔｅｏｎ Ａｍｉｎｅ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ Ｋｉｔを使用してＧＬＣチップ上に固定化した抗ＳＩＲＰα抗体（約１０００ＲＵ）上に、アナライトを注入して流した。固定化工程のために、１／１００に希釈したＥＤＡＣ／Ｓｕｌｐｈｏ−ＮＨＳ １：１（Ｂｉｏｒａｄ）を２５μＬ／分で用いて、ＧＬＣチップを３００秒間活性化した。抗ＳＩＲＰα抗体は、１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）中で８０ｎＭの濃度に希釈し、３０μＬ／分で５０秒間、チップに固定化した。エタノールアミンを２５μＬ／分で用いて、チップを３００秒間不活性化した。アナライト（例えば、異なる種に由来するＳＩＲＰ−α、ＳＩＲＰ−β、ＳＩＲＰ−γ）を１００、３３、１１、３．７、１．２及び０ｎＭの名目上の濃度で、「ワンショット」カイネティクスモードで注入した。結合時間は、１００μＬ／分で９０秒間モニターし、解離時間は、１２００秒間モニターした。ＰｉｅｒｃｅのＩｇＧ溶出緩衝液／４Ｍ ＮａＣｌの２：１（ｖ／ｖ）ブレンドを用いて表面を再生した。
あるいは、ＮＬＣチップによる抗体捕捉を使用してＫＤ決定を行った。この場合、ＮＬＣチップ上にビオチン化プロテインＡ（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｈｅｒ）１５ｕｇ／ｍＬを３０ｕＬ／分で１２０秒間注入し、約１０００〜１２００ＲＵの固定化反応を得た。次に、抗ＳＩＲＰα抗体（約１６０ｎＭ）を３０ｕＬ／分で８０秒間注入した。その後、アナライト（異なる種に由来するＳＩＲＰ−α、ＳＩＲＰ−β及びＳＩＲＰ−γ）を１００、３３、１１、３．７、１．２及び０ｎＭの名目上の濃度で、「ワンショット」カイネティクスモードで注入した。結合時間は、２５μＬ／分で６０秒間モニターし、解離時間は、１２００秒間モニターした。ＰｉｅｒｃｅのＩｇＧ溶出緩衝液／４Ｍ ＮａＣｌの２：１（ｖ／ｖ）ブレンドを用いて表面を再生した。
バイオセンサーのデータは、反応スポットのデータ（固定化タンパク質）からインタースポットのデータ（固定化タンパク質不含）を差し引き、次に、アナライト注入の反応から緩衝液「ブランク」アナライト注入の反応を差し引くことによって、ダブルリファレンスを行った。ダブルリファレンスを行ったデータを単純なＬａｎｇｍｕｉｒモデルにグローバルフィッティングし、見かけの反応速度定数の比からＫＤ値を算出した（ＫＤ＝ｋｄ／ｋａ）。
結果
３つの代表的な抗体（遮断抗体、非遮断抗体及び「キック」抗体）を、上記の様々なＳＩＲＰ−α、β、γタンパク質に対する結合について更に特徴付けた。３つの抗体は、ヒト配列を含有し、ＨｕＭａｂニワトリ免疫化実験から得た。これらの抗体は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ及びＮ２９７Ａの変異を含む完全長ヒトＩｇＧ１抗体として試験した。これらの実験で試験したＳＩＲＰ−αタンパク質は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１（配列番号５）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２（配列番号６）、カニクイザルＳＩＲＰ−α（配列番号１１）、ヒトＳＩＲＰβアイソフォーム１（配列番号１３）、ヒトＳＩＲＰβアイソフォーム２（配列番号１４）、及びヒトＳＩＲＰγアイソフォーム１（配列番号１５）に対応する。ヒトＳＩＲＰβアイソフォーム１（配列番号１３）は、当該技術分野において、ＳＩＲＰβ１アイソフォーム１としても知られている。
３つの代表的な抗体（遮断抗体、非遮断抗体及び「キック」抗体）を、上記の様々なＳＩＲＰ−α、β、γタンパク質に対する結合について更に特徴付けた。３つの抗体は、ヒト配列を含有し、ＨｕＭａｂニワトリ免疫化実験から得た。これらの抗体は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ及びＮ２９７Ａの変異を含む完全長ヒトＩｇＧ１抗体として試験した。これらの実験で試験したＳＩＲＰ−αタンパク質は、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１（配列番号５）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２（配列番号６）、カニクイザルＳＩＲＰ−α（配列番号１１）、ヒトＳＩＲＰβアイソフォーム１（配列番号１３）、ヒトＳＩＲＰβアイソフォーム２（配列番号１４）、及びヒトＳＩＲＰγアイソフォーム１（配列番号１５）に対応する。ヒトＳＩＲＰβアイソフォーム１（配列番号１３）は、当該技術分野において、ＳＩＲＰβ１アイソフォーム１としても知られている。
３つの抗体について得たＫＤ値を以下の表Ｅに示す。
次に、選択されたマウスＳＩＲＰ−αタンパク質に対する様々な抗体クローンの結合反応速度を上記のように決定した。試験したマウスタンパク質には、ＢＡＬＢｃ（配列番号１０）、ＢＬ６（配列番号９）、ＮＯＤ（配列番号８）及びｍ１２９（配列番号７）のＳＩＲＰ−αタンパク質が含まれる。結果を以下の表Ｆ〜Ｉにまとめる。「ｃ」と表示される抗体クローンは、完全長マウスＩｇＧ２ａ抗体として試験し、「ａ」と表示される抗体クローンは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ及びＮ２９７Ａの変異を含む完全長ヒトＩｇＧ１抗体として試験した。
上記抗体について、ＶＨ及びＶＬドメイン配列（それぞれ）は次のとおりであった：ＡＢ１３６ａ：配列番号１３３及び１３４、ＡＢ３ｃ：配列番号２４２及び２４３、ＡＢ２１ｃ：配列番号１３５及び１３６、ＡＢ２５ｃ：配列番号１３７及び１３８、ＡＢ２７ｃ：配列番号１３９及び１４０、ＡＢ６６ｃ：配列番号１４１及び１４２。
これらの結果は、複数の抗体クローンが４つの全てのマウスＳＩＲＰ−αタンパク質に結合することから、これらの抗体がｉｎ ｖｉｖｏマウスモデルにおける特性評価に好適となることを示している。
実施例３：抗ＳＩＲＰ−α抗体の機能特性
先の実施例は、様々なヒト、カニクイザル及び／またはネズミのＳＩＲＰ−α、ＳＩＲＰ−β及びＳＩＲＰ−γタンパク質に対する結合特異性などの多様な特性を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体の特定及び特性評価について記載し、また、抗体がＳＩＲＰ−αとＣＤ４７との間の結合を遮断するかどうかについて記載している。次に、目的とする特定のカテゴリーを示す抗体を、ＳＩＲＰ−αの生物学的機能に対する影響を特徴付けることを目的にした、種々のｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ機能アッセイで試験した。特に、「遮断」（すなわち、ＳＩＲＰ−αとＣＤ４７との間の結合を遮断する抗体）及び「非遮断」（すなわち、ＳＩＲＰ−αとＣＤ４７との間の結合を遮断しない抗体）の活性について、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの各種アッセイで特徴付けた。
先の実施例は、様々なヒト、カニクイザル及び／またはネズミのＳＩＲＰ−α、ＳＩＲＰ−β及びＳＩＲＰ−γタンパク質に対する結合特異性などの多様な特性を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体の特定及び特性評価について記載し、また、抗体がＳＩＲＰ−αとＣＤ４７との間の結合を遮断するかどうかについて記載している。次に、目的とする特定のカテゴリーを示す抗体を、ＳＩＲＰ−αの生物学的機能に対する影響を特徴付けることを目的にした、種々のｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏ機能アッセイで試験した。特に、「遮断」（すなわち、ＳＩＲＰ−αとＣＤ４７との間の結合を遮断する抗体）及び「非遮断」（すなわち、ＳＩＲＰ−αとＣＤ４７との間の結合を遮断しない抗体）の活性について、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの各種アッセイで特徴付けた。
上記のとおり、「ａ」と表示される抗体クローンは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ及びＮ２９７Ａの変異を含む完全長ヒトＩｇＧ１抗体として試験した。「ｂ」と表示される抗体クローンは、Ｎ２９７Ａの変異を含む完全長マウスＩｇＧ１抗体として試験した。「ｃ」と表示される抗体クローンは、完全長マウスＩｇＧ２ａ抗体として試験した。
方法
腫瘍細胞株の培養
ＤＬＤ−１（ヒト大腸腺癌）細胞及びＯＥ１９（ヒト食道癌）細胞を、１０％非働化ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）及び１％Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）を添加したＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）からなる成長培地中に維持した。
腫瘍細胞株の培養
ＤＬＤ−１（ヒト大腸腺癌）細胞及びＯＥ１９（ヒト食道癌）細胞を、１０％非働化ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）及び１％Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｇｉｂｃｏ）を添加したＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）からなる成長培地中に維持した。
ヒト単球由来マクロファージの誘導及び培養
Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｃｉｆｉｃからトリマ残留物を入手し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ））で１：４に希釈した。希釈した血液を４つのチューブに分け、２０ｍｌのＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の上に重ねた。試験管を４００×ｇで３０分間遠心分離にかけた。境界面からＰＢＭＣを回収し、ＦＡＣＳ緩衝液（０．５％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ））中に再懸濁した。Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ ＩＩ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）及びＬＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を製造元のプロトコルに従って使用して、ネガティブ選択によりＣＤ１４＋単球を精製した。
Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｃｉｆｉｃからトリマ残留物を入手し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ））で１：４に希釈した。希釈した血液を４つのチューブに分け、２０ｍｌのＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の上に重ねた。試験管を４００×ｇで３０分間遠心分離にかけた。境界面からＰＢＭＣを回収し、ＦＡＣＳ緩衝液（０．５％ウシ血清アルブミン含有ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ））中に再懸濁した。Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ ＩＩ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）及びＬＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を製造元のプロトコルに従って使用して、ネガティブ選択によりＣＤ１４＋単球を精製した。
非極性化マクロファージの場合、１０％ヒトＡＢ血清（Ｃｏｒｎｉｎｇ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン及び１％Ｇｌｕｔａｍａｘを添加した２５ｍｌのＩＭＤＭ（Ｇｉｂｃｏ）を入れた１５ｃｍ組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中に、ＣＤ１４＋単球を１ディッシュ当たり１０００万細胞で播種した。細胞を７〜１０日間培養した。
Ｍ２極性化マクロファージの場合、１０ウシ胎児血清（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン及び１％Ｇｌｕｔａｍａｘを添加した２５ｍｌのＲＰＭＩ（Ｇｉｂｃｏ）及び５０ｎｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を入れた１５ｃｍ組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中に、ＣＤ１４＋単球を１ディッシュ当たり６００万細胞で播種した。細胞を７〜１０日間培養した。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ食作用アッセイ
ＤＬＤ−１細胞及びＯＥ１９細胞を、２０ｍｌのＰＢＳで２回洗浄し、１０ｍｌのＴｒｙｐＬＥ Ｓｅｌｅｃｔ（Ｇｉｂｃｏ）中で３７℃、１０分間、インキュベーションすることによって、培養プレートから剥離した。細胞を遠心分離にかけ、ＰＢＳで洗浄し、培地中に再懸濁した。Ｃｅｌｌｔｒａｃｅ ＣＦＳＥ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を製造元の説明書に従って用いて細胞に標識し、ＩＭＤＭ中に再懸濁した。マクロファージを、２０ｍｌのＰＢＳで２回洗浄し、１０ｍｌのＴｒｙｐＬＥ Ｓｅｌｅｃｔ中で３７℃、２０分間、インキュベーションすることによって、培養プレートから剥離した。セルスクレーパー（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を用いて細胞を取り出し、ＰＢＳで洗浄し、ＩＭＤＭ中に再懸濁した。
ＤＬＤ−１細胞及びＯＥ１９細胞を、２０ｍｌのＰＢＳで２回洗浄し、１０ｍｌのＴｒｙｐＬＥ Ｓｅｌｅｃｔ（Ｇｉｂｃｏ）中で３７℃、１０分間、インキュベーションすることによって、培養プレートから剥離した。細胞を遠心分離にかけ、ＰＢＳで洗浄し、培地中に再懸濁した。Ｃｅｌｌｔｒａｃｅ ＣＦＳＥ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を製造元の説明書に従って用いて細胞に標識し、ＩＭＤＭ中に再懸濁した。マクロファージを、２０ｍｌのＰＢＳで２回洗浄し、１０ｍｌのＴｒｙｐＬＥ Ｓｅｌｅｃｔ中で３７℃、２０分間、インキュベーションすることによって、培養プレートから剥離した。セルスクレーパー（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を用いて細胞を取り出し、ＰＢＳで洗浄し、ＩＭＤＭ中に再懸濁した。
１００，０００個のＤＬＤ−１細胞またはＯＥ１９細胞、５０，０００個のマクロファージ、抗ＳＩＲＰ−α抗体の５倍段階希釈液（１００ｎＭ〜６．４ｐＭ）、及び１もしくは０．０１ｕｇ／ｍｌのセツキシマブ（絶対抗体）、０．０１ｕｇ／ｍｌのトラスツズマブ、または同じアイソタイプのコントロール抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を含有する超低接着Ｕ底９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中で、食作用アッセイを組み立てた。試験した全ての抗ＳＩＲＰ−α抗体は、マウスＩｇＧ２ａを有するＡＢ１３６ｃを除き、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ及びＮ２９７Ａの変異を含むヒトＩｇＧ１を有した。５％二酸化炭素の加湿インキュベータ内でプレートを３７℃で２時間インキュベートした。細胞を４００×ｇで５分間遠心分離にかけてペレット化し、２５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液で洗浄した。１０μｌのヒトＦｃＲ Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）、０．５μｌの抗ＣＤ３３ ＢＶ４２１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）及び０．５μｌの抗ＣＤ２０６ ＡＰＣ−Ｃｙ７（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を含有する５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液中でマクロファージを氷上で１５分間染色した。細胞を２００μｌのＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、２５０μｌのＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳで１：１０００に希釈した５０μｌのＦｉｘａｂｌｅ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｄｙｅ ｅＦｌｕｏｒ ５０６（ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）中、氷上で３０分間染色した。細胞を２５０μｌのＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、７５μｌのＣｙｔｏｆｉｘ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中、氷上で３０分間固定した。細胞を１７５μｌのＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、７５μｌのＦＡＣＳ緩衝液中に再懸濁した。ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で細胞を解析し、続いて、Ｆｌｏｗｊｏ １０．７（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）でデータを解析した。ｅ５０６ネガティブ集団でゲーティングし、死細胞を除外した。腫瘍細胞を貪食したマクロファージは、ＣＤ３３、ＣＤ２０６及びＣＦＳＥがポジティブである細胞として特定した。
ｉｎ ｖｉｖｏにおける樹状細胞の活性化
Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝３／群）に対し、対照ラット抗マウス抗ＳＩＲＰ−αアンタゴニスト抗体（クローンｐ８４）、ラットＩｇＧコントロール、ＡＢ１３６ｂ（Ｎ２９７Ａ変異を有するマウスＩｇＧ１のＦｃ領域を含むＡＢ１３６）、マウスＩｇＧコントロールまたはビヒクル（ＰＢＳ）を１０ｍｇ／ｋｇで静脈内注射した。注射から５時間後、脾臓を摘出し、７０μＭセルストレーナーに通すことによって物理的に解離させ、単一細胞懸濁液に処理した。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、赤血球の溶解を行った。その後、細胞をＰＢＳ／１０％ＦＢＳで更に２回洗浄し、細胞染色用に調製した。ＭＨＣ−ＩＩ、ＣＤ８、３３Ｄ１、ＣＤ４、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ８６、ＣＣＲ７結合蛍光色素及び生死判別色素を用いて、細胞を４℃で１時間染色した。細胞を２回洗浄し、ＢＤ Ｃａｎｔｏ ＩＩフローサイトメーターを使用して解析し、Ｆｌｏｗｊｏを使用してデータを処理した。
Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝３／群）に対し、対照ラット抗マウス抗ＳＩＲＰ−αアンタゴニスト抗体（クローンｐ８４）、ラットＩｇＧコントロール、ＡＢ１３６ｂ（Ｎ２９７Ａ変異を有するマウスＩｇＧ１のＦｃ領域を含むＡＢ１３６）、マウスＩｇＧコントロールまたはビヒクル（ＰＢＳ）を１０ｍｇ／ｋｇで静脈内注射した。注射から５時間後、脾臓を摘出し、７０μＭセルストレーナーに通すことによって物理的に解離させ、単一細胞懸濁液に処理した。細胞をＰＢＳで２回洗浄し、赤血球の溶解を行った。その後、細胞をＰＢＳ／１０％ＦＢＳで更に２回洗浄し、細胞染色用に調製した。ＭＨＣ−ＩＩ、ＣＤ８、３３Ｄ１、ＣＤ４、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ８６、ＣＣＲ７結合蛍光色素及び生死判別色素を用いて、細胞を４℃で１時間染色した。細胞を２回洗浄し、ＢＤ Ｃａｎｔｏ ＩＩフローサイトメーターを使用して解析し、Ｆｌｏｗｊｏを使用してデータを処理した。
ｉｎ ｖｉｖｏにおける抗腫瘍活性
ＣＴ２６同系マウス結腸癌モデルの場合、ＣＴ２６細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下移植し、複数群（８〜９匹／群）に無作為化した。処置群には、ビヒクル（ＰＢＳ）及びＡＢ１３６ｂを含めた。ＡＢ１３６抗ＳＩＲＰ−αは、Ｎ２９７Ａ変異を有するマウスＩｇＧ１のＦｃ領域を有した。処置は、移植後７または８日目に、腫瘍が平均７５〜８０ｍｍ３になったときに開始した。マウスにＡＢ１３６ｂを３ｍｇ／ｋｇで週２回、３週間にわたって腹腔内（ＩＰ）投与した。腫瘍が約２０００ｍｍ３の体積に達したら、動物を屠殺した。
ＣＴ２６同系マウス結腸癌モデルの場合、ＣＴ２６細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下移植し、複数群（８〜９匹／群）に無作為化した。処置群には、ビヒクル（ＰＢＳ）及びＡＢ１３６ｂを含めた。ＡＢ１３６抗ＳＩＲＰ−αは、Ｎ２９７Ａ変異を有するマウスＩｇＧ１のＦｃ領域を有した。処置は、移植後７または８日目に、腫瘍が平均７５〜８０ｍｍ３になったときに開始した。マウスにＡＢ１３６ｂを３ｍｇ／ｋｇで週２回、３週間にわたって腹腔内（ＩＰ）投与した。腫瘍が約２０００ｍｍ３の体積に達したら、動物を屠殺した。
ＭＣ３８同系マウス結腸癌モデルの場合、ＭＣ３８細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下移植し、複数群（８〜１０匹／群）に無作為化した。処置群には、ビヒクル（ＰＢＳ）、ＡＢ２５ｂ、ＡＢ２５ｃ、ＡＢ２７ｂ、ＡＢ３ｂ及びＡＢ１３６ｂを含めた。全ての抗ＳＩＲＰα抗体は、マウスＩｇＧ２ａを有するＡＢ２５ｃを除き、Ｎ２９７Ａの変異を有するマウスＩｇＧ１のＦｃ領域を有した。処置は、移植後７日目に、腫瘍が平均６０〜６５ｍｍ３になったときに開始した。マウスに抗ＳＩＲＰαを１０ｍｇ／ｋｇで週２回、３週間にわたって腹腔内（ＩＰ）投与した。腫瘍が約２０００ｍｍ３の体積に達したら、動物を屠殺した。
結果
極性化及び非極性化マクロファージを使用したｉｎ ｖｉｔｒｏ食作用アッセイにおける食作用の誘導について、様々な抗ＳＩＲＰ−α抗体を試験した。
極性化及び非極性化マクロファージを使用したｉｎ ｖｉｔｒｏ食作用アッセイにおける食作用の誘導について、様々な抗ＳＩＲＰ−α抗体を試験した。
追加の抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ３及びＡＢ４５を以下に記載する実験で試験した。両抗体とも非遮断抗体である。ＳＰＲを使用して、各ＳＩＲＰアナライトに対する各クローン（ｓｃＦｖ−Ｆｃフォーマット）の結合のｋｏｆｆ速度を決定した（表Ｊ１）。ＳＰＲスクリーニング条件は、本明細書に記載されているものであり、Ｋｏｆｆ値は、Ｌａｎｇｍｕｉｒ反応速度フィッティングを使用して決定した。ＳＩＲＰアナライト配列は次のとおりである：ＣＶ１−３：配列番号１８、ｖ１：配列番号５、ｖ２：配列番号６、カニクイザル１：配列番号１１、カニクイザル２：配列番号１２、ｍ１２９、配列番号７、ＮＯＤ：配列番号８、ＢＬ６：配列番号９、ｓｉｒｐｂ１：配列番号１３、ｓｉｒｐｇ：配列番号１５。
図１３Ａ及び１３Ｂに示されるように、非遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ３ａは、Ｍ２極性化マクロファージにおいて、ＤＬＤ−１腫瘍細胞の食作用を誘導することがわかった。特に、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ抗体）及びＡＢ３ａによるマクロファージの処置は、腫瘍細胞食作用の強い誘導をもたらした。同様に、非遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ４５ａは、Ｍ２極性化マクロファージにおいて、ＤＬＤ−１腫瘍細胞の食作用を誘導することがわかり、セツキシマブ（抗ＥＧＦＲ抗体）及びＡＢ４５ａによるマクロファージの処置は、腫瘍細胞食作用の強い誘導をもたらした（図１３Ｃ及び１３Ｄ）。遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ１１９ａ（図１３Ｅ）及びＡＢ１３５ａ（図１３Ｆ）もまた、トラスツズマブ（抗ＨＥＲ２抗体）と同時投与した場合、ＯＥ１９腫瘍細胞の食作用を誘導することがわかった。非遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ１３６ｃもまた、ＤＬＤ−１腫瘍細胞の食作用を誘導することがわかった（図１３Ｇ）。
非遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ１３６ｂ（ＶＨ及びＶＬドメイン配列については、それぞれ配列番号１３３及び１３４）のｉｎ ｖｉｖｏ作用を特徴付けるために、樹状細胞活性化アッセイを使用した。脾臓樹状細胞上のマウスＳＩＲＰ−α受容体にＣＤ４７結合を介した結合がない場合、脾臓樹状細胞の活性化が生じる。対照抗ＳＩＲＰ−αアンタゴニスト抗体ｐ８４は、マウスに静脈内注射すると、脾臓樹状細胞を活性化した（図１４）。非遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ１３６ｂをｉｎ ｖｉｖｏで試験して、樹状細胞の活性化をもたらすかどうかを決定した。興味深いことに、ＡＢ１３６ｂ処理は、ｐ８４と同程度の脾臓樹状細胞の活性化をもたらした（図１４）。
次に、様々な抗ＳＩＲＰ−α抗体のｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍作用を２つの同系マウス結腸癌モデルでアッセイした。ＭＣ３８同系マウス結腸癌モデルにおいて、遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ２５ｂ、ＡＢ２５ｃ及びＡＢ２７ｂならびに非遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体ＡＢ３ｂ及びＡＢ１３６ｂの抗腫瘍活性を試験して、それぞれの単剤活性を評価した。遮断（ＡＢ２５ｂ、ＡＢ２５ｃ及びＡＢ２７ｂ）及び非遮断（ＡＢ３ｂ及びＡＢ１３６ｂ）抗ＳＩＲＰ−α抗体はいずれも、ＭＣ３８同系マウスモデルにおいて、ビヒクル単独と比較して１０ｍｇ／ｋｇで腫瘍形成を遅らせた（図１５）。２５日目に、抗ＳＩＲＰα抗体で処置した群では、６００ｍｍ３未満のマウスがＡＢ２５ｂ及びＡＢ２７ｂで３匹、６００ｍｍ３未満のマウスがＡＢ２５ｃ及びＡＢ３ｂで４匹、６００ｍｍ３未満のマウスがＡＢ１３６ｂで５匹であったのに対し、ビヒクル処置群では、６００ｍｍ３未満のマウスは２匹のみであった。
次に、ＣＴ２６同系マウス結腸癌モデルにおいて、非遮断ＡＢ１３６ｂの抗腫瘍活性を試験して、その単剤活性を評価した。これらの結果は、ＡＢ１３６ｂ処置が、ＣＴ２６同系マウスモデルにおいて、ビヒクル単独と比較して３ｍｇ／ｋｇで腫瘍形成を遅らせることを確認するものであった（図１６）。
まとめると、これらの結果は、マクロファージによる腫瘍細胞の食作用の誘導、樹状細胞の活性化、及びｉｎ ｖｉｖｏにおける腫瘍成長の阻害を含む、抗ＳＩＲＰ−α抗体処置の有効性を示している。複数の遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体が腫瘍細胞食作用を促進し、樹状細胞を活性化し、ｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍成長を阻止することがわかった。しかしながら、驚くべきことに、非遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体による処置もまた、２つの異なる同系マウス腫瘍モデルにおいて、脾臓樹状細胞を活性化し、ｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍成長を阻害することがわかった。非遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体が食作用を増大させ、ｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍成長を阻止することができたという発見は、いずれも予期しない驚くべきことであった。これまでの研究では、遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体のみがｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍成長を阻害することができると考えられていた（Ｙａｎａｇｉｔａ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．（２０１７）ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ ２：ｅ８９１４０参照）。
実施例４：ＳＩＲＰ−α上の抗ＳＩＲＰ−α抗体エピトープの構造解析
上記の実施例１〜３に記載されるように、ＳＩＲＰ−αに対する様々な特異性及び結合様式を持った抗ＳＩＲＰ−α抗体、例えば、ＣＤ４７のＳＩＲＰ−αへの結合を遮断する抗体、ＣＤ４７のＳＩＲＰ−αへの結合を遮断しない抗体、及びＳＩＲＰ−αに結合し、ＣＤ４７との結合親和性を低下させる抗体（「キック」抗体）が作製された。これらのタイプの抗体がＣＤ４７と比較してＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインにどのように結合するのかを理解し、また選択した抗ＳＩＲＰ−α抗体のエピトープを特徴付けるために、構造解析を実施した。
上記の実施例１〜３に記載されるように、ＳＩＲＰ−αに対する様々な特異性及び結合様式を持った抗ＳＩＲＰ−α抗体、例えば、ＣＤ４７のＳＩＲＰ−αへの結合を遮断する抗体、ＣＤ４７のＳＩＲＰ−αへの結合を遮断しない抗体、及びＳＩＲＰ−αに結合し、ＣＤ４７との結合親和性を低下させる抗体（「キック」抗体）が作製された。これらのタイプの抗体がＣＤ４７と比較してＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインにどのように結合するのかを理解し、また選択した抗ＳＩＲＰ−α抗体のエピトープを特徴付けるために、構造解析を実施した。
方法
結晶学構造解析
Ｆａｂ及びＳＩＲＰαの発現は、これまでに確立されているプロトコルと同様に行い、タンパク質精製のためのアフィニティークロマトグラフィー及びサイズ排除の従来法を伴った。Ｅｘｐｉ２９３におけるタンパク質の産生を容易にするために、配列番号５と比較してＮ８０Ａ変異を有するヒトＳＩＲＰ−α ｖ１変異体（配列番号２９６）を使用した。Ｎ８０Ａ ＳＩＲＰαを使用する目的は、結晶化に最も適していると思われる、均一な非グリコシル化形態のＳＩＲＰαを産生することであった。最終精製緩衝液は、最小量であり、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）及び５０ｍＭ ＮａＣｌのみである。精製した複合体試料は、４℃で安定であり、結晶化実験及び最終的な構造決定のための準備として、１０〜１２ｍｇ／ｍＬに濃縮した。
結晶学構造解析
Ｆａｂ及びＳＩＲＰαの発現は、これまでに確立されているプロトコルと同様に行い、タンパク質精製のためのアフィニティークロマトグラフィー及びサイズ排除の従来法を伴った。Ｅｘｐｉ２９３におけるタンパク質の産生を容易にするために、配列番号５と比較してＮ８０Ａ変異を有するヒトＳＩＲＰ−α ｖ１変異体（配列番号２９６）を使用した。Ｎ８０Ａ ＳＩＲＰαを使用する目的は、結晶化に最も適していると思われる、均一な非グリコシル化形態のＳＩＲＰαを産生することであった。最終精製緩衝液は、最小量であり、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）及び５０ｍＭ ＮａＣｌのみである。精製した複合体試料は、４℃で安定であり、結晶化実験及び最終的な構造決定のための準備として、１０〜１２ｍｇ／ｍＬに濃縮した。
Ｆａｂ：ＳＩＲＰα複合体を投影する方法は、十分に確立された原則または結晶学に従うものであり、スパースマトリックス法から始め、そこからカスタム最適化条件を出し、定常プロトコルを確立した。結晶化は、シッティングドロップ蒸気拡散法を利用して行った。初期スパースマトリックススクリーニングのために、Ｑｉａｇｅｎ（登録商標）から市販されている条件キットを使用した（表Ｊ２）。これらの結晶化実験は、タンパク質と結晶化条件液の比率を変えたドロップでセットした。設定したタンパク質と条件液の比率は、１：１、２：１及び３：１の範囲であり、総体積は、９６ウェル（８×１２）トレイのサブウェル中１μＬであった。１００ｕＬの結晶化条件液をウェルリザーバーに入れた。これらのドロップをＭｏｓｑｕｉｔｏドロップセッティングロボットを使用してセットし、完成したプレートを密封し、１２℃のインキュベータ内に保存した。顕微鏡下でプレート／ドロップを観察し、ドロップ沈殿、アグリゲーション、相分離、アモルファス形成及び初期タンパク質結晶を含む成長を確認することによって、実験をモニターした。
結晶化の概要及び結晶の採取
表Ｊ３に示されるように、２つの主要条件の派生条件により、４つの複合体の結晶化が達成された。Ｘ線回折スクリーニング及び可能なデータ収集の前に、結晶の完全性が液体窒素での操作及びクライオ凍結により損なわれないように、最適な結晶形で結晶を採取した。氷結を防ぐために、凍結時にクライオプロテクタントを使用した。典型的なクライオプロテクタントは、結晶を形成した結晶化条件液に２０％グリセロールを添加したものであった。３０％ＰＥＧ４０００以上の条件液で結晶が形成された場合には、グリセロールの添加は必要なく、パーセンテージの高いＰＥＧ４０００は、有効なクライオプロテクタントとして作用した。ナイロンまたはＭｉｔｉｇｅｎ（登録商標）スタイルのいずれかのクライオループを用いて、複合体の結晶を操作した。単結晶が形成されたドロップから単結晶を単離して取り出し、クライオプロテクタント中に短時間移した後、液体窒素中に入れて急速凍結した。
表Ｊ３に示されるように、２つの主要条件の派生条件により、４つの複合体の結晶化が達成された。Ｘ線回折スクリーニング及び可能なデータ収集の前に、結晶の完全性が液体窒素での操作及びクライオ凍結により損なわれないように、最適な結晶形で結晶を採取した。氷結を防ぐために、凍結時にクライオプロテクタントを使用した。典型的なクライオプロテクタントは、結晶を形成した結晶化条件液に２０％グリセロールを添加したものであった。３０％ＰＥＧ４０００以上の条件液で結晶が形成された場合には、グリセロールの添加は必要なく、パーセンテージの高いＰＥＧ４０００は、有効なクライオプロテクタントとして作用した。ナイロンまたはＭｉｔｉｇｅｎ（登録商標）スタイルのいずれかのクライオループを用いて、複合体の結晶を操作した。単結晶が形成されたドロップから単結晶を単離して取り出し、クライオプロテクタント中に短時間移した後、液体窒素中に入れて急速凍結した。
データの収集及び処理
上記のように液体窒素中で急速凍結した結晶について、データを収集した。これらの試料は、タンパク質の回折格子についてスクリーニングしたとき、クライオストリーム中に残り、続いて、振動法による後続のデータセット収集を行った。収集は、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｈｏｔｏｎ ＳｏｕｒｃｅまたはＤｉａｍｏｎｄ Ｌｉｇｈｔ Ｓｏｕｒｃｅのいずれかで行った。データセットをｘｉａ２スイートを使用して減少させた。ｘｉａ２は、巨大分子結晶学的データの自動処理を可能にするラッパースクリプトである。このプログラムは、ＸＤＳ、ＤＩＡＬＳ、Ｍｏｓｆｌｍ及びＡｉｍｌｅｓｓなどの複数のデータ処理プログラムを使用することができる。これらのプログラムは、回折データの適切な空間群及び単位格子への指数付け、強度の積分、及びスケーリングを行い、それぞれ固有の反射強度の推定値を生成することができる。初期の複合体１のデータセットについて、ＳＩＲＰαのホモログモデル及びＦａｂ（それぞれＰＤＢ ＣＯＤＥ：２ＵＶ３及びＰＤＢ ＣＯＤＥ：４ＮＭ４参照）を用い、ＣＣＰ４ ＳｕｉｔｅのＰｈａｓｅｒ ＭＲを使用して、分子置換法（ＭＲ）により位相を算出した。複合体２、３及び４の後続データセットについては、複合体１の完成した構造モデル座標を、位相算出及び初期モデル構築の検索モデルとして使用した。
上記のように液体窒素中で急速凍結した結晶について、データを収集した。これらの試料は、タンパク質の回折格子についてスクリーニングしたとき、クライオストリーム中に残り、続いて、振動法による後続のデータセット収集を行った。収集は、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｈｏｔｏｎ ＳｏｕｒｃｅまたはＤｉａｍｏｎｄ Ｌｉｇｈｔ Ｓｏｕｒｃｅのいずれかで行った。データセットをｘｉａ２スイートを使用して減少させた。ｘｉａ２は、巨大分子結晶学的データの自動処理を可能にするラッパースクリプトである。このプログラムは、ＸＤＳ、ＤＩＡＬＳ、Ｍｏｓｆｌｍ及びＡｉｍｌｅｓｓなどの複数のデータ処理プログラムを使用することができる。これらのプログラムは、回折データの適切な空間群及び単位格子への指数付け、強度の積分、及びスケーリングを行い、それぞれ固有の反射強度の推定値を生成することができる。初期の複合体１のデータセットについて、ＳＩＲＰαのホモログモデル及びＦａｂ（それぞれＰＤＢ ＣＯＤＥ：２ＵＶ３及びＰＤＢ ＣＯＤＥ：４ＮＭ４参照）を用い、ＣＣＰ４ ＳｕｉｔｅのＰｈａｓｅｒ ＭＲを使用して、分子置換法（ＭＲ）により位相を算出した。複合体２、３及び４の後続データセットについては、複合体１の完成した構造モデル座標を、位相算出及び初期モデル構築の検索モデルとして使用した。
構造の構築及び精密化
モデル構築にはＣｏｏｔプログラムを使用した。一例として、複合体１は、ＡＳＵ中に４つの分子を有すると算出されたので、ＳＩＲＰαと複合体化したＡＢ１１９ｆの４対を構築して構造モデルを完成させることになる。構造の構築手法は、標的タンパク質の既知の配列に従って、アミノ酸残基を電子密度中に組み立てていくものであった。データの質が、観察された結晶データセットへの構造モデルのフィッティングに直接相関するため、複合体の三次構造の構築は、確立されたプロトコルに従った。最初に、残基のペプチド主鎖を構築した。次いで、電子密度図が許せば、正しい残基側鎖を配置した。タンパク質配列中の元のアミノ酸がモデル化されていない場合、それは、対応する側鎖の密度が不足しているためであり、したがって、アミノ酸のペプチド主鎖のみがモデル化され得、アラニン残基側鎖が適所に構築される。配列ストレッチは、不規則な領域であり得、アミノ酸主鎖の配置であっても密度が不足しているため構築することができない。構築後、ＣＣＰ４ Ｓｕｉｔｅの一部であるＲｅｆｍａｃプログラムにより、後続の一連の精密化を行った。精密化プログラムは、残差最尤法により、座標パラメーターを最小にするために使用される。精密化の完成は、Ｒ値、結合距離及び結合角度、ならびにＲａｍａｃｈａｎｄｒａｎフィッティングを含むパラメーターについて、モデルのパラメーターが好ましい統計的許容区間に収まるようになったときとした。加えて、モデルの物理的許容度を確認するために、Ｍｏｌｐｒｏｂｉｔｙも使用して、完全かつ適切な構造決定を確実にした。
モデル構築にはＣｏｏｔプログラムを使用した。一例として、複合体１は、ＡＳＵ中に４つの分子を有すると算出されたので、ＳＩＲＰαと複合体化したＡＢ１１９ｆの４対を構築して構造モデルを完成させることになる。構造の構築手法は、標的タンパク質の既知の配列に従って、アミノ酸残基を電子密度中に組み立てていくものであった。データの質が、観察された結晶データセットへの構造モデルのフィッティングに直接相関するため、複合体の三次構造の構築は、確立されたプロトコルに従った。最初に、残基のペプチド主鎖を構築した。次いで、電子密度図が許せば、正しい残基側鎖を配置した。タンパク質配列中の元のアミノ酸がモデル化されていない場合、それは、対応する側鎖の密度が不足しているためであり、したがって、アミノ酸のペプチド主鎖のみがモデル化され得、アラニン残基側鎖が適所に構築される。配列ストレッチは、不規則な領域であり得、アミノ酸主鎖の配置であっても密度が不足しているため構築することができない。構築後、ＣＣＰ４ Ｓｕｉｔｅの一部であるＲｅｆｍａｃプログラムにより、後続の一連の精密化を行った。精密化プログラムは、残差最尤法により、座標パラメーターを最小にするために使用される。精密化の完成は、Ｒ値、結合距離及び結合角度、ならびにＲａｍａｃｈａｎｄｒａｎフィッティングを含むパラメーターについて、モデルのパラメーターが好ましい統計的許容区間に収まるようになったときとした。加えて、モデルの物理的許容度を確認するために、Ｍｏｌｐｒｏｂｉｔｙも使用して、完全かつ適切な構造決定を確実にした。
エピトープマッピング及び重ね合わせ解析
抗原単独の溶媒露出表面積と、抗体のＦａｂ断片と複合体化した抗原の溶媒露出表面積との間の差として、エピトープに関する抗原の埋没表面積を算出した。逆に、ｆａｂ断片単独の溶媒露出表面積と、その抗原と複合体化したｆａｂの溶媒露出表面積との間の差として、パラトープに関する抗体重鎖及び軽鎖の埋没表面積を算出した。露出表面積は、プローブ半径１．４Åのローリングボール法によって算出した。埋没表面積をÅ２で報告する。各構造からＳＩＲＰαを選択し、その炭素原子を重ね合わせることによって、全ての抗体：ＳＩＲＰα複合体を重ね合わせた。解析に使用したＣＤ４７：ＳＩＲＰα複合体（Ｖ１バリアント）構造は、ＰＤＢ：４ＣＭＭである。重ね合わせ及びＲＭＳＤ算出は、ＰＹＭＯＬを使用して行った。
抗原単独の溶媒露出表面積と、抗体のＦａｂ断片と複合体化した抗原の溶媒露出表面積との間の差として、エピトープに関する抗原の埋没表面積を算出した。逆に、ｆａｂ断片単独の溶媒露出表面積と、その抗原と複合体化したｆａｂの溶媒露出表面積との間の差として、パラトープに関する抗体重鎖及び軽鎖の埋没表面積を算出した。露出表面積は、プローブ半径１．４Åのローリングボール法によって算出した。埋没表面積をÅ２で報告する。各構造からＳＩＲＰαを選択し、その炭素原子を重ね合わせることによって、全ての抗体：ＳＩＲＰα複合体を重ね合わせた。解析に使用したＣＤ４７：ＳＩＲＰα複合体（Ｖ１バリアント）構造は、ＰＤＢ：４ＣＭＭである。重ね合わせ及びＲＭＳＤ算出は、ＰＹＭＯＬを使用して行った。
結果
まず、ＳＩＲＰ−αに結合した遮断抗体１１９Ｆａｂの構造を決定し、ＳＩＲＰ−αに対するＣＤ４７の結合と比較した。図１７Ａに示されるように、抗体１１９及びＣＤ４７は、ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対し、類似したエピトープに結合した。抗体１１９のエピトープ中、５６％のＳＩＲＰ−α残基がＣＤ４７のエピトープでも確認され、ＣＤ４７のエピトープ中、７５％のＳＩＲＰ−α残基が抗体１１９のエピトープでも確認された。図１７Ｂに、抗体１１９との相互作用に関与するＳＩＲＰ−α残基（上記の埋没表面積の変化として決定）に濃淡を付け、空間充填モデルとして示す。また、抗体１１９Ｆａｂのパラトープの主要残基も示す（黒色の棒）。当該残基は、重鎖残基Ｎ３１、Ｓ５３、Ｄ５５、Ｙ５７、Ｔ９９、Ｓ１０１及びＷ１０２（Ｎ３１は図１７Ｂに示す構造配向では見えない）と、軽鎖残基Ｙ９２及びＷ９４とを含む（それぞれ配列番号３３５及び９７に従う重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列に基づく）。
まず、ＳＩＲＰ−αに結合した遮断抗体１１９Ｆａｂの構造を決定し、ＳＩＲＰ−αに対するＣＤ４７の結合と比較した。図１７Ａに示されるように、抗体１１９及びＣＤ４７は、ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対し、類似したエピトープに結合した。抗体１１９のエピトープ中、５６％のＳＩＲＰ−α残基がＣＤ４７のエピトープでも確認され、ＣＤ４７のエピトープ中、７５％のＳＩＲＰ−α残基が抗体１１９のエピトープでも確認された。図１７Ｂに、抗体１１９との相互作用に関与するＳＩＲＰ−α残基（上記の埋没表面積の変化として決定）に濃淡を付け、空間充填モデルとして示す。また、抗体１１９Ｆａｂのパラトープの主要残基も示す（黒色の棒）。当該残基は、重鎖残基Ｎ３１、Ｓ５３、Ｄ５５、Ｙ５７、Ｔ９９、Ｓ１０１及びＷ１０２（Ｎ３１は図１７Ｂに示す構造配向では見えない）と、軽鎖残基Ｙ９２及びＷ９４とを含む（それぞれ配列番号３３５及び９７に従う重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列に基づく）。
図１８Ａは、ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに結合するＣＤ４７と、ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに結合する非遮断抗体１３６Ｆａｂとの間の比較を示す。抗体１３６とＣＤ４７のＳＩＲＰ−α結合エピトープは、完全に重複しないことがわかった。図１８Ｂに、抗体１３６との相互作用に関与するＳＩＲＰ−α残基に濃淡を付け、空間充填モデルとして示す。また、抗体１３６Ｆａｂのパラトープの主要残基も示す（黒色の棒）。当該残基は、重鎖残基Ｅ５６、Ｙ５９及びＲ１０２と、軽鎖残基Ｙ９２及びＲ９４とを含む（それぞれ配列番号１３３及び１３４に従う重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列に基づく）。
図１９Ａは、ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに結合するＣＤ４７と、ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに結合する非遮断抗体３Ｆａｂとの間の比較を示す。抗体３とＣＤ４７のＳＩＲＰ−α結合エピトープは、完全に重複しないことがわかった。図１９Ｂに、抗体３との相互作用に関与するＳＩＲＰ−α残基に濃淡を付け、空間充填モデルとして示す。また、抗体３Ｆａｂのパラトープの主要残基も示す（黒色の棒）。当該残基は、重鎖残基Ｒ５６及びＧ１００と、軽鎖残基Ｒ２４、Ｒ２６、Ｙ８６及びＧ８８とを含む（それぞれ配列番号２４２及び２４３に従う重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列に基づく）。
図１９Ｃは、ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに結合するＣＤ４７と、ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに結合する「キック」抗体１１５Ｆａｂとの間の比較を示す。抗体１１５のＳＩＲＰ−α結合エピトープは、ＣＤ４７のエピトープに隣接することがわかった。ｍＡｂ１１５は、ＣＤ４７のＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインのエピトープに隣接するエピトープに結合することが確認されたが、１１５のエピトープ部分は、ＣＤ４７自体と重複する可能性が高い。両方のエピトープを比較すると、同一の残基が２つあり、これは、それぞれのエピトープの重複しない部分に起因する相互作用により、１１５ＦａｂとＣＤ４７が同時にＳＩＲＰ−αに結合することが可能であることを示唆している。本明細書に記載される反応速度分析では、抗体１１５がＳＩＲＰ−α及びＣＤ４７と一過性の複合体を形成し、ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対するＣＤ４７の親和性を低下させることが示された。図１９Ｄでは、抗体１１５との相互作用に関与するＳＩＲＰ−α残基に濃淡を付けている。また、抗体１１５Ｆａｂのパラトープの主要残基も示す。当該残基は、重鎖残基Ｓ３１、Ｙ３２、Ｎ５２、Ｙ１００及びＷ１０２と、軽鎖残基Ｋ３２及びＹ９２とを含む（それぞれ配列番号２７３及び２７４に従う重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列に基づく）。
図２０Ａは、ＳＩＲＰ−αに対するＣＤ４７結合と比較した、ＳＩＲＰ−αに対する抗体１１９、１３６、３及び１１５の結合を示す。遮断抗体１１９は、非遮断抗体１３６と３の両方のＳＩＲＰ−αエピトープと比較して、完全に重複しないＳＩＲＰ−αエピトープに結合することがわかった。これらの相互作用に関与するＳＩＲＰ−α及び抗体の残基を表Ｋ１にまとめる。ＣＤ４７と相互作用することが決定したＳＩＲＰ−α残基は、次のように決定された：２９、３０、３１、３３、３４、３５、３６、３７、５０、５１、５２、５３、５４、６６、６７、６８、６９、７４、９３、９６、９７、９８、９９及び１０１（配列番号５に従う）。図２０Ｂは、ＳＩＲＰ−αに結合するＣＤ４７ならびに抗ＳＩＲＰ−α Ｆａｂ１１９、１３６、３及び１１５のエピトープ（配列番号２９６に従う残基）の概要であり、埋没表面積の変化を示す。本明細書に記載されるように、パラトープを示すために使用された抗体のアミノ酸残基ナンバリングは、重鎖または軽鎖のアミノ酸配列に従ったナンバリングに基づいており、例えば、抗体残基のＫａｂａｔまたはＣｈｏｔｈｉａナンバリングによるものではない。
これらの結果は、ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインと各種抗ＳＩＲＰ−α抗体との間の結合界面、及びＣＤ４７とＳＩＲＰ−αとの間の結合界面を明らかにしている。また、抗体１１９は、ＣＤ４７とＳＩＲＰ−αとの間の結合を遮断し（重複するＳＩＲＰ−αエピトープを共有するため）、抗体１３６及び３は、結合を遮断せず（これらのエピトープはＣＤ４７のエピトープと重複しないため）、抗体１１５は、ＳＩＲＰ−α結合から「ＣＤ４７を跳ね返す」（わずかに重複するＳＩＲＰ−αエピトープしか共有しないため）という観察に対して、構造的基礎を提供する。更に、これらの研究は、各相互作用に関与する特異的抗体及びＳＩＲＰ−αの残基を明確に示している。
結晶学によって定義された非遮断剤（３、１３６）、遮断剤（１１９）及びキック（１１５）抗体のＳＩＲＰα結合エピトープを用いて、実施例５に記載されるエピトープビニングを実施することによって、更なる抗ＳＩＲＰα抗体の結合位置を特徴付けることができる。例えば、ＳＩＲＰαへの結合について非遮断剤１３６と競合する任意の抗ＳＩＲＰα抗体の場合、これらの抗体は、結晶学によって定義された１３６と同様の結合エピトープを共有すると予測することができる。
実施例５：抗ＳＩＲＰ−α抗体のエピトープビニング
次に、共有するエピトープを有する抗体及び異なるエピトープを有する抗体を分類するために、上記の抗ＳＩＲＰ−α抗体を、ＳＩＲＰ−αとのエピトープビニング実験でアッセイした。
次に、共有するエピトープを有する抗体及び異なるエピトープを有する抗体を分類するために、上記の抗ＳＩＲＰ−α抗体を、ＳＩＲＰ−αとのエピトープビニング実験でアッセイした。
方法
エピトープビニング
簡潔に述べれば、図２１Ａに示すようにエピトープビニングを行った。第１の抗ＳＩＲＰ−α抗体をチップ上に固定化し、次いで、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１（配列番号５）を注入した。次いで、第２の抗ＳＩＲＰ−α抗体を注入した。第１の抗ＳＩＲＰ−α抗体とＳＩＲＰ−αとの間で形成された複合体に第２の抗体が結合することができた場合、第１の抗体と第２の抗体は、異なるエピトープに結合すると決定した。第２の抗体が結合できなかった場合、第１の抗体と第２の抗体は、エピトープを共有すると決定した。
エピトープビニング
簡潔に述べれば、図２１Ａに示すようにエピトープビニングを行った。第１の抗ＳＩＲＰ−α抗体をチップ上に固定化し、次いで、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１（配列番号５）を注入した。次いで、第２の抗ＳＩＲＰ−α抗体を注入した。第１の抗ＳＩＲＰ−α抗体とＳＩＲＰ−αとの間で形成された複合体に第２の抗体が結合することができた場合、第１の抗体と第２の抗体は、異なるエピトープに結合すると決定した。第２の抗体が結合できなかった場合、第１の抗体と第２の抗体は、エピトープを共有すると決定した。
チップ上に固定化した抗ＳＩＲＰ−α抗体（Ａ）を使用し、抗ＳＩＲＰ−α抗体（Ｂ〜Ｆ）を注入したビニングアッセイの例示的な結果を図２１Ｂに示す。抗ＳＩＲＰα抗体（Ｂ）、（Ｅ）及び（Ｆ）は、複合体とサンドイッチを形成し、これは、６０秒時点（それぞれの抗ＳＩＲＰα抗体の注入時）でのＲＵの増大によって示されている。したがって、これらの抗体は、抗ＳＩＲＰα（Ａ）とは異なるエピトープに結合すると決定され、ビニングプロット中、白いボックスによって示される（図２２Ａ及び２２Ｂ）。抗ＳＩＲＰα抗体（Ｃ）及び（Ｄ）の場合、サンドイッチを形成せず、これは、それぞれの抗ＳＩＲＰα抗体の注入後、ＲＵが安定していることによって示される。したがって、これらの抗体は、抗ＳＩＲＰα（Ａ）と同じエピトープに結合すると決定され、ビニングプロット中、グレーで示される（図２２Ａ及び２２Ｂ）。図２２Ａ及び２２Ｂ中、チップに結合したリガンド（抗ＳＩＲＰα）のクローン番号を行に示し、チップに注入したアナライト（抗ＳＩＲＰα）のクローン番号を列に示す。「Ｘ」は、一方向のデータが他方のデータと一致しないシナリオを示す。
まず、先に記載するＰｒｏｔｅｏｎ Ａｍｉｎｅ Ｃｏｕｐｌｉｎｇ Ｋｉｔを使用して、抗ＳＩＲＰα抗体をＧＬＣチップ上に固定する。簡潔に述べれば、固定化工程のために、１／８０に希釈したＥＤＡＣ／Ｓｕｌｐｈｏ−ＮＨＳ １：１（Ｂｉｏｒａｄ）を２５μＬ／分で用いて、ＧＬＣチップを３００秒間活性化した。抗ＳＩＲＰα抗体は、１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）中で８０ｎＭの濃度に希釈し、３０μＬ／分で５０秒間、チップに固定化した。エタノールアミンを２５μＬ／分で用いて、チップを３００秒間不活性化した。その後、ＳＩＲＰ−α ｖ１（配列番号５）（１００ｎＭ）を最初に１００ｕＬ／分で６０秒間注入し、続いて、試験用抗ＳＩＲＰα抗体（１００〜１５０ｎＭ）を１００ｕＬ／分で６０秒間注入した。ＰｉｅｒｃｅのＩｇＧ溶出緩衝液／４Ｍ ＮａＣｌの２：１（ｖ／ｖ）ブレンドを用いて表面を再生した。得られたセンサーグラムを使用して、抗体を、その結合プロファイルに従って評価し、種々のビンに分類した。
結果
次の抗ＳＩＲＰ−α抗体クローン：３、２１、２５、２７、４５、６６，１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１３２、１３５、１３６、１３７、１４９、１６１、１６２、１７３、１９４、２０９、２１３及び２１８をビンに分類した。図２２Ａ及び２２Ｂに示されるように、当該結果により、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１に対する抗ＳＩＲＰ−α抗体結合の各様式（Ｂ：遮断、ＮＢ：非遮断、及びＫＯ：「キック」）は、別々のビンに分類されることが示された。非遮断剤の場合、抗ＳＩＲＰα抗体は、その結合プロファイルに基づいて、４つのビンに更に分けることができた。例えば、抗ＳＩＲＰα抗体１２３、１４９、１６１、１６２、１９４及び２１８は、ビン５に分類された。抗ＳＩＲＰα抗体３、１７３、２０９及び２１３は、ビン４に分類された。抗ＳＩＲＰα抗体１３６及び１３７は、ビン２に分類された。抗ＳＩＲＰα抗体４５は、特有の結合プロファイルを有し、ビン６に分類される。
次の抗ＳＩＲＰ−α抗体クローン：３、２１、２５、２７、４５、６６，１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１３２、１３５、１３６、１３７、１４９、１６１、１６２、１７３、１９４、２０９、２１３及び２１８をビンに分類した。図２２Ａ及び２２Ｂに示されるように、当該結果により、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１に対する抗ＳＩＲＰ−α抗体結合の各様式（Ｂ：遮断、ＮＢ：非遮断、及びＫＯ：「キック」）は、別々のビンに分類されることが示された。非遮断剤の場合、抗ＳＩＲＰα抗体は、その結合プロファイルに基づいて、４つのビンに更に分けることができた。例えば、抗ＳＩＲＰα抗体１２３、１４９、１６１、１６２、１９４及び２１８は、ビン５に分類された。抗ＳＩＲＰα抗体３、１７３、２０９及び２１３は、ビン４に分類された。抗ＳＩＲＰα抗体１３６及び１３７は、ビン２に分類された。抗ＳＩＲＰα抗体４５は、特有の結合プロファイルを有し、ビン６に分類される。
実施例４に記載される構造解析と合わせると、これらの結果から、図２３に示される、ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインに対する抗体及びＣＤ４７の結合モデルが得られた。例えば、ビン１、２、３及び４の各種抗ＳＩＲＰα抗体は、それぞれのビンに分類された抗ＳＩＲＰα１１９、１３６、１１５及び３と同様の結合エピトープを共有すると仮定される。抗ＳＩＲＰα１１９、１３６、１１５及び３の結合エピトープは、実施例４に記載されるように、結晶溶液から得られた。
加えて、ビン５の抗ＳＩＲＰα抗体は、抗ＳＩＲＰα１３６（ビン２）及び１１５（ビン３）それぞれに隣接して結合し、重複するエピトープを共有すると仮定される。これは、ビン５の抗ＳＩＲＰα抗体が、ＳＩＲＰα Ｖ１への結合について、ビン２及び３の抗体と競合するが、ビン１、４及び６の抗体とは競合しないというビニングデータに基づく（図２２Ｂ）。
抗ＳＩＲＰα抗体４５（ビン６）は、抗ＳＩＲＰα３（ビン４）及び１３６（ビン２）それぞれに隣接して結合し、重複するエピトープを共有すると仮定される。これは、抗ＳＩＲＰα４５が、ＳＩＲＰα Ｖ１への結合について、ビン２及び４の抗体と競合するが、ビン１、３及び５の抗体とは競合しないというビニングデータに基づく（図２２Ｂ）。
図２３のモデルは、構造解析及びビニング解析に基づいた各抗体ビンのエピトープを例示し、例示的な抗体クローンを使用した様々な抗体ビン間の重複を表す。本明細書で単離された更なる抗ＳＩＲＰ−α抗体を、エピトープマッピングプロファイル、ＶＨ／ＶＬドメイン配列の相同性、ＳＩＲＰタンパク質に対する結合特異性、及び抗体源に基づいて、ファミリー及びビンに分類する。例えば、ファミリー１／ビン１の抗ＳＩＲＰ−α抗体は、ＶＨ及びＶＬドメインにおいて高い配列相同性を共有するＣＤ４７遮断剤である（表Ｐ及び図１１Ｊ）。ＶＨ及びＶＬは、完全ヒト配列である。ファミリー２／ビン１の抗ＳＩＲＰ−α抗体もまたＣＤ４７遮断剤である。これらのＶＨ及びＶＬは、高い相同性を共有し、それぞれヒト及びニワトリに由来する（表Ｐ、図１１Ａ）。ファミリー３／ビン２の抗ＳＩＲＰ−α抗体は、ＣＤ４７非遮断剤を含み、相同性の高いＶＨ／ＶＬは、完全ヒト配列である（表Ｐ、図１１Ｂ）。ファミリー４／ビン３の抗ＳＩＲＰ−α抗体は、キック抗体を含み、相同性の高いＶＨ／ＶＬは、完全ヒト配列である（表Ｐ、図１１Ｃ）。ファミリー５は、ビン４、５及び６にそれぞれマッピングされるＣＤ４７非遮断剤を含む。これらの抗体の配列アラインメント及び結合プロファイルを、それぞれ図１１Ｄ〜１１I及び表Ｐに示す。様々なＳＩＲＰ−α、ＳＩＲＰ−β及びＳＩＲＰ−γポリペプチドに対するファミリー１〜５中の対応する抗ＳＩＲＰα抗体のＫｏｆｆ結合値を表Ｔに示す。
実施例６：抗ＳＩＲＰ−α抗体の生殖細胞系列及び高感受性変異バリアント
上記の抗ＳＩＲＰ−α抗体のいくつかは、ニワトリで産生された完全ヒト抗体である（例えば、抗体１１９、１３５及び１３６）。そのため、これらの抗体のいくつかは、これらの抗体がニワトリＢ細胞中で産生されることから、野生型ヒト生殖細胞系列配列と比較して、可変ドメインフレームワーク配列中に変異を含有し得る。したがって、これらの抗ＳＩＲＰα抗体が候補治療薬としてヒトで試験される場合、免疫原性を制限する目的で、それらの各残基を、ヒト生殖細胞系列配列の残基に一致するように「復帰変異」させることが望ましい。生殖細胞系列の復帰変異に加えて、高感受性ホットスポットについて、抗体１１９、１３５及び１３６のＣＤＲ及びフレームワーク領域を解析した。これらの解析により、抗ＳＩＲＰα抗体の製造、保存及び／または薬物開発中に生じ得る修飾に起因するリスクを制限するために、工学的操作が望まれ得る部位を特定した。
上記の抗ＳＩＲＰ−α抗体のいくつかは、ニワトリで産生された完全ヒト抗体である（例えば、抗体１１９、１３５及び１３６）。そのため、これらの抗体のいくつかは、これらの抗体がニワトリＢ細胞中で産生されることから、野生型ヒト生殖細胞系列配列と比較して、可変ドメインフレームワーク配列中に変異を含有し得る。したがって、これらの抗ＳＩＲＰα抗体が候補治療薬としてヒトで試験される場合、免疫原性を制限する目的で、それらの各残基を、ヒト生殖細胞系列配列の残基に一致するように「復帰変異」させることが望ましい。生殖細胞系列の復帰変異に加えて、高感受性ホットスポットについて、抗体１１９、１３５及び１３６のＣＤＲ及びフレームワーク領域を解析した。これらの解析により、抗ＳＩＲＰα抗体の製造、保存及び／または薬物開発中に生じ得る修飾に起因するリスクを制限するために、工学的操作が望まれ得る部位を特定した。
方法
生殖細胞系列／高感受性変異
上に記載されるように、ＧＬＣチップを使用した直接固定化を用いて、ＳＩＲＰに結合するそれぞれの生殖細胞系列及び高感受性変異体のＫＤを決定した。
生殖細胞系列／高感受性変異
上に記載されるように、ＧＬＣチップを使用した直接固定化を用いて、ＳＩＲＰに結合するそれぞれの生殖細胞系列及び高感受性変異体のＫＤを決定した。
野生型及び変異型抗体をＥｘｐｉ２９３中で発現させ、先に記載されるように、プロテインＡアフィニティーカラムクロマトグラフィーによって精製した。全ての抗体が、ヒトＬ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｎ２９７Ａ ＩｇＧ１ Ｆｃ抗体として発現された。ＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ Ｌｉｇｈｔｎｉｎｇ Ｓｉｔｅ Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓキット（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｃａｔａｌｏｇ ＃２１０５１８）を製造元の説明書に従って使用して、変異導入を実施した。
結果
抗体１１９、１３５及び１３６を試験した。ＩｇＢｌａｓｔ（ＮＣＢＩ）を使用して、選択した抗体の配列と、入手可能なヒト生殖細胞系列配列とのアラインメントを行った。例えば、１１９の重鎖及び軽鎖上に、合計で７つの部位が特定された。図２４Ａに示されるように、ＣＤＲ配列が変わらないように維持しつつ、１１９ＶＨのヒト生殖細胞系列配列には通常生じない残基（例えば、Ｄ１、Ｅ４３及びＬ１１２）を復帰変異させてヒト生殖細胞系列配列に一致させた（例えば、Ｄ１Ｅ、Ｅ４３Ｋ及びＬ１１２Ｑ）。１１９ＶＬについては（図２４Ｂ）、ＣＤＲ配列が変わらないように維持しつつ、１１９ＶＬのヒト生殖細胞系列配列には通常生じない残基（例えば、Ｆ２１、Ｒ３９、Ｅ６０及びＴ７６）を復帰変異させてヒト生殖細胞系列配列に一致させた（例えば、Ｆ２１Ｌ、Ｒ３９Ｋ、Ｅ６０Ａ及びＴ７６Ｓ）。本明細書で使用されるとき、「ａｌｌ ｍｕｔ」及び「ｍｕｔ」という用語は、特定の抗体可変ドメインについて本明細書に記載される生殖細胞系列変異の全てを含有する可変ドメインを指す。生殖細胞系列変異及び高感受性変異を記載するために使用されるアミノ酸ナンバリングは、それぞれの配列番号に従った連続ナンバリングに基づく。
抗体１１９、１３５及び１３６を試験した。ＩｇＢｌａｓｔ（ＮＣＢＩ）を使用して、選択した抗体の配列と、入手可能なヒト生殖細胞系列配列とのアラインメントを行った。例えば、１１９の重鎖及び軽鎖上に、合計で７つの部位が特定された。図２４Ａに示されるように、ＣＤＲ配列が変わらないように維持しつつ、１１９ＶＨのヒト生殖細胞系列配列には通常生じない残基（例えば、Ｄ１、Ｅ４３及びＬ１１２）を復帰変異させてヒト生殖細胞系列配列に一致させた（例えば、Ｄ１Ｅ、Ｅ４３Ｋ及びＬ１１２Ｑ）。１１９ＶＬについては（図２４Ｂ）、ＣＤＲ配列が変わらないように維持しつつ、１１９ＶＬのヒト生殖細胞系列配列には通常生じない残基（例えば、Ｆ２１、Ｒ３９、Ｅ６０及びＴ７６）を復帰変異させてヒト生殖細胞系列配列に一致させた（例えば、Ｆ２１Ｌ、Ｒ３９Ｋ、Ｅ６０Ａ及びＴ７６Ｓ）。本明細書で使用されるとき、「ａｌｌ ｍｕｔ」及び「ｍｕｔ」という用語は、特定の抗体可変ドメインについて本明細書に記載される生殖細胞系列変異の全てを含有する可変ドメインを指す。生殖細胞系列変異及び高感受性変異を記載するために使用されるアミノ酸ナンバリングは、それぞれの配列番号に従った連続ナンバリングに基づく。
加えて、酸化、脱アミド化、異性化、加水分解、Ｎ−結合グリコシル化の影響を受ける可能性のある残基を含む「高感受性」ホットスポットについても、抗体配列を解析した。潜在的ホットスポットを表Ｌに示す。特に、ＨＶＲ−Ｈ１のＭ３４Ｖ及びＭ３４Ｌバリアントは、複数の抗体のＶＨドメインで発生した。
生殖細胞系列及び高感受性の復帰変異を有する重鎖及び／または軽鎖可変ドメインを使用して、抗体１１９のバリアントを作製した。生殖細胞系列の復帰変異Ｄ１Ｅ、Ｅ４３Ｋ及びＬ１１２Ｑと、ＣＤＲ−Ｈ１中のＭ３４Ｖ変異（酸化される可能性のあるメチオニン残基を除去する変異）とを含む、１１９変異型（「ｍｕｔ」）ＶＨドメインを作製した（ＶＨ配列については、配列番号２４６参照）。生殖細胞系列の復帰変異Ｄ１Ｅ、Ｅ４３Ｋ及びＬ１１２Ｑを含む、別のバリアントを作製した（ＶＨ配列については、配列番号２５８参照）。親配列とバリアント配列との間のアラインメントを図２４Ａに示す。生殖細胞系列の復帰変異Ｆ２１Ｌ、Ｒ３９Ｋ、Ｅ６０Ａ及びＴ７６Ｓを含む１１９変異型（「ｍｕｔ」）軽鎖も作製した。親配列とバリアント配列との間のアラインメントを図２４Ｂに示す。
ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１（配列番号５）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２（配列番号６）及びカニクイザルＳＩＲＰ−α（配列番号１１）に対する結合親和性について、変異型重鎖及び／または軽鎖を含む抗体１１９バリアントと、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ及びＮ２９７Ａ変異（ＥＵナンバリング）を有するＩｇＧ１のＦｃ領域を含む親の１１９抗体と、Ｓ２２８Ｐ変異（ＥＵナンバリング）を有するＩｇＧ４のＦｃ領域を含む親の１１９抗体とを比較した。１１９の変異型重鎖及び軽鎖は、いずれも、３つ全てのＳＩＲＰ−αタンパク質に対する結合親和性をわずかに低下させることがわかった。しかしながら、変異型重鎖及び軽鎖を含む１１９抗体バリアントは、ヒトＳＩＲＰ−αタンパク質の両方に対して、依然として強い結合を示し、ＫＤは約３０ｎＭであった（表Ｍ）。親抗体と比較して、変異型重鎖及び軽鎖を含む１１９抗体バリアントの収率も約４．５倍減少した（表Ｍ）。
１１９のＳＩＲＰα結合に対するＨＶＲ−Ｈ１中のメチオニンの影響を調べるために、Ｍ３４Ｖ及びＭ３４Ｌの単一変異を１１９ＶＨ野生型バックグラウンドで作製し、１１９野生型軽鎖と組み合わせた。１１９ｗｔ／ｗｔ＿Ｍ３４Ｖ及び１１９ｗｔ／ｗｔ＿Ｍ３４Ｌは、いずれも、１１９ｗｔ／ｗｔと比較して、ヒトＳＩＲＰα ｖ１及びｖ２に対して同等の親和性（ＫＤ、Ｍ）を有した。これは、残基Ｍ３４がＳＩＲＰ−α結合に重要でなく、Ｍ３４ＬまたはＭ３４Ｖ変異に置換されてもよいことを示している。１１９ＶＨ野生型バックグラウンドで作製したＭ３４Ｖ及びＭ３４Ｌの単一変異に対応するＶＨ配列は、それぞれ配列番号４２１及び４２０である。
次に、抗体１３５の類似バリアントを作製した。生殖細胞系列の復帰変異Ｄ１Ｅ、Ｒ１３Ｑ、Ｅ１６Ｇ、Ｅ４３Ｋ及びＬ１１２Ｑと、ＣＤＲ−Ｈ１中のＭ３４Ｖ変異（酸化される可能性のあるメチオニン残基を除去する変異）とを含む、１３５変異型（ｍｕｔ）重鎖を作製した（ＶＨ配列については、配列番号２４７参照）。ＣＤＲ−Ｈ１中にＭ３４Ｖ変異を含まない類似のバリアントを構築した（ＶＨ配列については配列番号２５９参照）。生殖細胞系列の復帰変異Ｆ２１Ｌ及びＤ６０Ａを含む、１３５変異型（ｍｕｔ）軽鎖を作製した（ＶＬ配列については、配列番号２４８参照）。親配列とバリアント配列との間のアラインメントを図２５Ａ及び２５Ｂに示す。
ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１（配列番号５）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２（配列番号６）、カニクイザルＳＩＲＰ−α（配列番号１１）及びヒトＳＩＲＰ−γ ｖ１（配列番号１５）に対する結合親和性について、変異型重鎖及び／または軽鎖を含む抗体１３５バリアントと親の１３５抗体とを比較した。１３５変異型重鎖及び軽鎖は、４つ全てのＳＩＲＰ−αタンパク質に対して同等の結合親和性を有し、収率も同等であった（表Ｎ１）。
ＳＩＲＰα結合に対する１３５のＨＶＲ−Ｈ１中のメチオニンの影響を調べるために、Ｍ３４Ｖ及びＭ３４Ｌの単一変異を１３５ＶＨ野生型バックグラウンドで作製し、１３５野生型軽鎖と組み合わせた。１３５ｗｔ／ｗｔ＿Ｍ３４Ｖ及び１３５ｗｔ／ｗｔ＿Ｍ３４Ｌは、いずれも、１３５ｗｔ／ｗｔと比較して、ヒトＳＩＲＰα ｖ１及びｖ２に対して同等の親和性（ＫＤ、Ｍ）を有した。これは、残基Ｍ３４がＳＩＲＰ−α結合に重要でなく、Ｍ３４ＬまたはＭ３４Ｖ変異に置換されてもよいことを示している。１３５ＶＨ野生型バックグラウンドで作製したＭ３４Ｖ及びＭ３４Ｌの単一変異に対応するＶＨ配列は、それぞれ配列番号４２３及び４２２である。
表Ｎ１．ヒト及びカニクイザルＳＩＲＰ−αタンパク質ならびにヒトＳＩＲＰ−γタンパク質に対する１３５バリアント抗体の結合親和性（ＫＤ、Ｍ）
表Ｎ１．ヒト及びカニクイザルＳＩＲＰ−αタンパク質ならびにヒトＳＩＲＰ−γタンパク質に対する１３５バリアント抗体の結合親和性（ＫＤ、Ｍ）
抗体１３６の類似バリアントを作製した。生殖細胞系列の復帰変異Ｄ１Ｅ、Ｒ１３Ｑ、Ｅ１６Ｒ、Ｅ４３Ｋ及びＬ１１１Ｑと、ＣＤＲ−Ｈ１中のＭ３４Ｖ変異（酸化される可能性のあるメチオニン残基を除去する変異）とを含む、Ａ１３６変異型（ｍｕｔ）重鎖を作製した（ＶＨ配列については、配列番号２４９参照）。ＣＤＲ−Ｈ１中にＭ３４Ｖ変異を含まない類似のバリアントを構築した（ＶＨ配列については配列番号２６０参照）。生殖細胞系列の復帰変異Ｔ２Ｉ、Ｔ１２Ｓ、Ｔ２２Ｓ及びＥ３８Ｑを含む、１３６変異型（ｍｕｔ）軽鎖を作製した（ＶＬについては、配列番号２５０参照）。親配列とバリアント配列との間のアラインメントを図２６Ａ及び２６Ｂに示す。
図２７Ａに示されるように、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１（配列番号５）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２（配列番号６）、カニクイザルＳＩＲＰ−α（配列番号１１）、ＮＯＤマウスＳＩＲＰ−α（配列番号８）、ＢＬ／６マウスＳＩＲＰ−α（配列番号９）及びＢＡＬＢ／ｃマウスＳＩＲＰ−α（配列番号１０）に対する結合親和性について、変異型重鎖及び／または軽鎖を含む抗体１３６バリアントと、ＩｇＧ１＿ＡＡＡ＿Ｎ２９７Ａである親（「ｗｔ」）１３６抗体とを比較した。図２７Ａ中、Ｙ軸は、各種ＳＩＲＰに対する結合の比（ＫＤ ｍｕｔ／ＫＤ ｗｔ）を示す。比が１である場合は、親抗体の結合と比較して、ＫＤに変化がないことを示す。比が１より大きい場合は、親抗体と比較して、ＳＩＲＰα（複数可）への結合親和性が低下することを示し、１より小さい場合は、増大することを示す。１３６ｗｔ（ＶＬ）／ｍｕｔ（ＶＨ）抗体は、ｗｔ（ＶＬ）／ｗｔ（ＶＨ）と同様の挙動を示したが、変異型軽鎖を含むバリアントは、いずれも結合親和性が低く、いくつかのＶＬ変異は許容されないことが示された。
結合親和性に対する各軽鎖の復帰変異の影響を分析するために、更なる抗体１３６バリアントを構築し、ＢＬ／６マウスＳＩＲＰ−α（配列番号９）、ＮＯＤマウスＳＩＲＰ−α（配列番号８）、ＢＡＬＢ／ｃマウスＳＩＲＰ−α（配列番号１０）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１（配列番号５）、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２（配列番号６）、カニクイザルＳＩＲＰ−α（配列番号１１）及びヒトＳＩＲＰ−γ ｖ１（配列番号１５）に対する結合親和性について特徴付けた。「ａｌｌ ｍｕｔａｎｔ」バックグラウンドから始め、個々の変異をそれぞれ逆転させた。図２７Ｂに示されるように、Ｉ２Ｔ、Ｓ１２Ｔ、Ｓ２２Ｔ及びＱ３８Ｅ変異を、それ以外は「ａｌｌ ｍｕｔａｎｔ」である軽鎖として個々に試験した。それ以外はａｌｌ ｍｕｔバックグラウンドであるＩ２Ｔ変異は、親ｗｔ／ｗｔ抗体と比較して、一様に同様の結合親和性を示した（ａｌｌ ｍｕｔバックグラウンドのＩ２Ｔについては、配列番号２５１、親抗体と変異型１３６抗体とのアラインメントについては、図２７Ａを参照）。しかしながら、他の３つの逆転変異（Ｓ１２Ｔ、Ｓ２２Ｔ及びＱ３８Ｅ）は、一様に１３６ｍｕｔ／ｍｕｔに類似した結合親和性を示した。これは、Ｔ２Ｉ変異が各種ＳＩＲＰタンパク質に対する結合親和性低下の原因であることを示している。これらの実験からの更なるデータを以下の表Ｑに記載する。
実施例７：抗ＳＩＲＰ−α抗体のヒト化
上記の実施例は、完全ヒト重鎖及びニワトリ軽鎖を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体の作製について記載している。ニワトリ由来の軽鎖をヒト化するために、これらの抗体のニワトリＨＶＲを様々なヒトλ軽鎖フレームワーク上にグラフト化した。
上記の実施例は、完全ヒト重鎖及びニワトリ軽鎖を有する抗ＳＩＲＰ−α抗体の作製について記載している。ニワトリ由来の軽鎖をヒト化するために、これらの抗体のニワトリＨＶＲを様々なヒトλ軽鎖フレームワーク上にグラフト化した。
方法
ヒト化
標準的な技術を使用して抗体をヒト化した。生産収率を測定するために、抗ＳＩＲＰα抗体を発現する、同量のＥｘｐｉ２９３培養液をプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによって精製した。緩衝液をＰＢＳに交換した後、Ａ２８０によりタンパク質濃度を決定し、ｍｇ／ｍＬで示した。
ヒト化
標準的な技術を使用して抗体をヒト化した。生産収率を測定するために、抗ＳＩＲＰα抗体を発現する、同量のＥｘｐｉ２９３培養液をプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによって精製した。緩衝液をＰＢＳに交換した後、Ａ２８０によりタンパク質濃度を決定し、ｍｇ／ｍＬで示した。
結果
ヒト化軽鎖を設計するために、ＩｇＢＬＡＳＴ（ＮＣＢＩ）により、各ニワトリ軽鎖配列と、最も近いヒト生殖細胞系列フレームワークとのアライメントを行った。この解析を使用すると、ニワトリλ軽鎖フレームワークに最も近いものは、ヒトＩＧＬＶ３である（配列番号３１４〜３１７参照）。
ヒト化軽鎖を設計するために、ＩｇＢＬＡＳＴ（ＮＣＢＩ）により、各ニワトリ軽鎖配列と、最も近いヒト生殖細胞系列フレームワークとのアライメントを行った。この解析を使用すると、ニワトリλ軽鎖フレームワークに最も近いものは、ヒトＩＧＬＶ３である（配列番号３１４〜３１７参照）。
別のアプローチでは、文献検索を行って、ヒトＶＨ３配列（当該抗体に使用されるヒト重鎖）と対合するのに最適なヒトλ軽鎖フレームワーク配列を決定した。これらの解析に基づくと、ヒトＶＨ３は、ヒトＩＧＬＶ１及びＩＧＬＶ２と良好に対合するであろうと考えられた。Ｇｌａｎｖｉｌｌｅ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１０６：２０２１６−２０２２１、Ｌｌｏｙｄ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２２：１５９−１６８、及びＪａｙａｒａｍ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．Ｄｅｓ．Ｓｅｌ．２５：５２３−５２９を参照されたい。
したがって、６つのヒト化軽鎖：Ｈｕｍ１（ＡＢ２５ＨＶＲ＋ヒトＩＧＬＶ３フレームワーク）、Ｈｕｍ２（ＡＢ２５ＨＶＲ＋ヒトＩＧＬＶ１フレームワーク）、Ｈｕｍ３（ＡＢ６６ＨＶＲ＋ヒトＩＧＬＶ３フレームワーク）、Ｈｕｍ４（ＡＢ６６ＨＶＲ＋ヒトＩＧＬＶ１フレームワーク）、Ｈｕｍ５（ＡＢ２５ＨＶＲ＋ヒトＩＧＬＶ２フレームワーク）、及びＨｕｍ６（ＡＢ２１ＨＶＲ＋ヒトＩＧＬＶ１フレームワーク）を作製した。得られた軽鎖可変ドメインの配列を表Ｏ１に記載する。
６つのヒト化軽鎖のそれぞれを４つの重鎖（ＡＢ２１、ＡＢ２５、ＡＢ２７及びＡＢ６６由来）のそれぞれと対合させ、２４個の特有の抗体を作製した。抗体は、上記のとおりに発現させた。驚くべきことに、ヒトＩＧＬＶ１フレームワーク配列は、重鎖にかかわらず、抗体発現が減少した。これは、Ｈｕｍ２、Ｈｕｍ４及びＨｕｍ６との全ての重鎖対合を指す（ＡＢ６６由来の重鎖と対合を行った場合を除く）。結果を「タンパク質収率」として図２８にまとめる（行１）。対照的に、ヒトＩＧＬＶ２及びＩＧＬＶ３フレームワーク（Ｈｕｍ１、Ｈｕｍ３、Ｈｕｍ５）を含む軽鎖を含む抗体は、重鎖にかかわらず、発現レベルが高くなった。
次に、選択した抗体を、様々なＳＩＲＰタンパク質（例えば、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２、カニクイザルＳＩＲＰ−α、マウスＢＡＬＢ／ｃ ＳＩＲＰ−α及びヒトＳＩＲＰ−γ）に対する結合について特徴付けた。これらのデータについても図２８にまとめる。選択したヒト化軽鎖は、１つ以上の抗原に対して、結合の減少をもたらした。例えば、ヒトＩＧＬＶ３フレームワーク（Ｈｕｍ１及びＨｕｍ３で表される）は、結合親和性を変更することなく、優れた抗体産生レベルを可能にすることがわかった。例えば、ＩＧＬＶ３フレームワークと、抗体２５または抗体６６のＨＶＲ配列のいずれかとを含む軽鎖可変ドメイン（それぞれＨｕｍ１及びＨｕｍ３で表される）は、様々な重鎖（例えば、抗体２１、２５、２７及び６６由来の重鎖可変ドメイン）と良好に結合し、異なるＳＩＲＰ−α及びＳＩＲＰ−γタンパク質に対して同様の結合を示した。対照的に、ＩＧＬＶ１及びＩＧＬＶ２フレームワーク（Ｈｕｍ２、Ｈｕｍ４、Ｈｕｍ５及びＨｕｍ６で表される）は、抗体２１、２５及び２７及び６６由来の重鎖と対合したとき、発現低下及び／またはＳＩＲＰへの結合減少のいずれかが認められた。これらの実験からの更なる結合データを以下の表Ｒに記載する。更なる試験のために、ヒトＩＧＬＶ３フレームワークを選択した。
これらの抗体をヒト化する別の目的は、ヒト生殖細胞系列軽鎖／重鎖配列に対して８５％以上の同一性を有する抗体配列であった。Ｈｕｍ１のＶＬドメインに基づいて、更なるＶＬドメインＨｕｍ９及びＨｕｍ８を作製した。Ｈｕｍ１と比較して、Ｈｕｍ９は、ＨＶＲ−Ｌ１及びＨＶＲ−Ｌ２中またはその付近に、軽鎖のヒト性を８５％以上のヒト軽鎖配列同一性まで上昇させる４つのアミノ酸置換を含有する（図２９）。Ｈｕｍ１と比較して、Ｈｕｍ８は、ＨＶＲ−Ｌ１及びＨＶＲ−Ｌ２中またはその付近にそれぞれ、軽鎖のヒト性を８５％以上のヒト軽鎖配列同一性まで上昇させる５つのアミノ酸置換を含有する（図２９）。Ｈｕｍ１、Ｈｕｍ８及びＨｕｍ９ ＶＬは、重鎖ａｌｌ＿ｍｕｔ＿ＡＢ２１（生殖細胞系列変異を有する）と対合したとき、１０ｐＭ以上の親和性でヒトｖ１に結合する、抗ＳＩＲＰα抗体をもたらした（表Ｓ）。同様に、Ｈｕｍ１、Ｈｕｍ８及びＨｕｍ９ ＶＬが重鎖ａｌｌ＿ｍｕｔ＿ＡＢ２５（生殖細胞系列変異を有する）と対合したとき、抗ＳＩＲＰα抗体は、１０ｐＭ以上の親和性でヒトｖ１に結合する。これらの実験からの更なる結合データを以下の表Ｓに記載する。これらの軽鎖は、抗体ＶＨドメイン２１、２５及び２７（ならびに抗体１１９、１３５及び１３６について上に記載されるように変更されたこれらのバリアント）と区別なく組み合わせることができる（図３０）。理論に束縛されることを望むものではないが、上記のヒト化プロセスは、ファミリー２（ビン１）のいずれの抗体軽鎖にも適用できると考えられる。
実施例８：抗ＳＩＲＰ−α抗体による食作用の誘導及び樹状細胞の活性化
次に、ＳＩＲＰ−αに対して異なる結合様式を示す様々な抗ＳＩＲＰ−α抗体（例えば、遮断抗体、非遮断抗体及び「キック」抗体）を食作用アッセイで調べた。
次に、ＳＩＲＰ−αに対して異なる結合様式を示す様々な抗ＳＩＲＰ−α抗体（例えば、遮断抗体、非遮断抗体及び「キック」抗体）を食作用アッセイで調べた。
ＣＤ４７−Ｆｃ結合アッセイ
Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７ Ｍｉｃｒｏｓｃａｌｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、ＣＤ４７−ＦｃをＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７（ＡＦ６４７）にコンジュゲートした。９６ウェルポリプロピレンプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）で、ＦＡＣＳ緩衝液中、１００μｌの０．２５μＭ ＡＦ６４７標識ＣＤ４７−Ｆｃ及び１μｌの抗ＣＤ１４ＰＥ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に、１００，０００個のＰＢＭＣを懸濁した。細胞を氷上で３０分間インキュベートし、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、抗ＳＩＲＰ−α抗体の１０倍段階希釈液（１．２５μＭ〜２５ｐＭ）中でインキュベートした。細胞を氷上で３０分間インキュベートし、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、７５μｌの０．５％ホルムアルデヒドで固定した。ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で細胞を解析し、続いて、Ｆｌｏｗｊｏ １０．７（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）でデータを解析した。ＣＤ１４陽性単球集団におけるＣＤ４７−Ｆｃシグナルの幾何平均蛍光強度を決定した。
Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７ Ｍｉｃｒｏｓｃａｌｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｌａｂｅｌｉｎｇ Ｋｉｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、ＣＤ４７−ＦｃをＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７（ＡＦ６４７）にコンジュゲートした。９６ウェルポリプロピレンプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）で、ＦＡＣＳ緩衝液中、１００μｌの０．２５μＭ ＡＦ６４７標識ＣＤ４７−Ｆｃ及び１μｌの抗ＣＤ１４ＰＥ抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に、１００，０００個のＰＢＭＣを懸濁した。細胞を氷上で３０分間インキュベートし、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、抗ＳＩＲＰ−α抗体の１０倍段階希釈液（１．２５μＭ〜２５ｐＭ）中でインキュベートした。細胞を氷上で３０分間インキュベートし、ＦＡＣＳ緩衝液で洗浄し、７５μｌの０．５％ホルムアルデヒドで固定した。ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で細胞を解析し、続いて、Ｆｌｏｗｊｏ １０．７（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）でデータを解析した。ＣＤ１４陽性単球集団におけるＣＤ４７−Ｆｃシグナルの幾何平均蛍光強度を決定した。
樹状細胞活性化アッセイ
本明細書に別途記載されるように、樹状細胞活性化アッセイを実施した。簡潔に述べれば、Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝３／群）に対し、対照ラット抗マウス抗ＳＩＲＰ−αアンタゴニスト抗体（クローンｐ８４）、ヒトＩｇＧ１コントロール、様々な抗ＳＩＲＰ−α抗体、マウスＩｇＧコントロール、またはビヒクル（ＰＢＳ）を１０ｍｇ／ｋｇで静脈内注射した。注射から５時間後、脾臓を摘出し、物理的に解離させることによって単一細胞懸濁液に処理した。ＣＤ４＋脾臓樹状細胞の活性化マーカーＣＤ８６、ＭＨＣＩＩ及びＣＣＲ７のレベルをフローサイトメトリーにより測定した。
本明細書に別途記載されるように、樹状細胞活性化アッセイを実施した。簡潔に述べれば、Ｂａｌｂ／ｃマウス（ｎ＝３／群）に対し、対照ラット抗マウス抗ＳＩＲＰ−αアンタゴニスト抗体（クローンｐ８４）、ヒトＩｇＧ１コントロール、様々な抗ＳＩＲＰ−α抗体、マウスＩｇＧコントロール、またはビヒクル（ＰＢＳ）を１０ｍｇ／ｋｇで静脈内注射した。注射から５時間後、脾臓を摘出し、物理的に解離させることによって単一細胞懸濁液に処理した。ＣＤ４＋脾臓樹状細胞の活性化マーカーＣＤ８６、ＭＨＣＩＩ及びＣＣＲ７のレベルをフローサイトメトリーにより測定した。
細胞接着アッセイ
接着アッセイを、ヒトＣＤ４７を欠く同質遺伝子細胞またはヒトＣＤ４７を発現する同質遺伝子細胞を使用して実施した。ＣＲＩＳＰＲ技術を使用して、ハムスターＣＤ４７ノックアウトＣＨＯ細胞（ＣＨＯＣＬ４７ ＫＯ）を作製した。ヒトＣＤ４７をＣＨＯＣＤ４７ ＫＯに一過性にトランスフェクションすることによって、ヒトＣＤ４７を発現する同質遺伝子細胞を作製した。トランスフェクションから２４時間後、ヒトＣＤ４７をトランスフェクションしたＣＨＯＣＤ４７ ＫＯ細胞（４×１０５）を２４ウェル組織培養処理プレート上に再播種し、３７℃で一晩、再付着させ、コンフルエントに達成させた。
接着アッセイを、ヒトＣＤ４７を欠く同質遺伝子細胞またはヒトＣＤ４７を発現する同質遺伝子細胞を使用して実施した。ＣＲＩＳＰＲ技術を使用して、ハムスターＣＤ４７ノックアウトＣＨＯ細胞（ＣＨＯＣＬ４７ ＫＯ）を作製した。ヒトＣＤ４７をＣＨＯＣＤ４７ ＫＯに一過性にトランスフェクションすることによって、ヒトＣＤ４７を発現する同質遺伝子細胞を作製した。トランスフェクションから２４時間後、ヒトＣＤ４７をトランスフェクションしたＣＨＯＣＤ４７ ＫＯ細胞（４×１０５）を２４ウェル組織培養処理プレート上に再播種し、３７℃で一晩、再付着させ、コンフルエントに達成させた。
健康なドナーの末梢血からヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＦｉｃｏｌｌ勾配遠心分離により分離した。磁気ビーズを使用したネガティブセレクションにより、ＣＤ３＋及びＣＤ１４＋細胞をＰＢＭＣから単離した。単離したＣＤ３＋及びＣＤ１４＋細胞（５×１０６）を、変異型ヒトＩｇＧ１（Ｌ２３４Ａ Ｌ２３５Ａ Ｇ２３７Ａ及びＮ２９７Ａ）を含有するＨｕｍ１／ＡＢ２１ｍｕｔａｌｌ、Ｈｕｍ９／ＡＢ２１ｍｕｔａｌｌまたは１３６ｗｔ／ｍｕｔ抗体（２０ｕｇ／ｍＬ）とともに３７℃で２０分間プレインキュベートし、その後、ＣＨＯＣＤ４７ ＫＯ及びＣＨＯｈＣＤ４７＋細胞に播種し、３７℃で１時間接着させた。非接着細胞をＰＢＳで穏やかに５回洗浄することによって除去した。接着細胞をトリプシンで剥離し、１０％ＦＢＳで中和した。細胞を９６ウェルプレートに移し、ＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡで２回洗浄した後、蛍光色素結合ヒトＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８及びＣＤ１４抗体を用いて細胞表面を標識した。カウントビーズを加え、細胞接着をＢＤ Ｃａｎｔｏ ＩＩフローサイトメーターを使用して定量した。フローサイトメトリーのデータ解析は、Ｆｌｏｗｊｏを使用して行った。
結果
Ｍ２マクロファージによるＨＥＲ２（＋）ＯＥ１９細胞の食作用に対する、ＳＩＲＰ−α結合からＣＤ４７を「跳ね返す」５つの抗体の作用について、抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブと組み合わせて、調べた（図３１）。５つの全ての「キック」抗体がトラスツズマブ誘導食作用を亢進することがわかった。
Ｍ２マクロファージによるＨＥＲ２（＋）ＯＥ１９細胞の食作用に対する、ＳＩＲＰ−α結合からＣＤ４７を「跳ね返す」５つの抗体の作用について、抗ＨＥＲ２抗体トラスツズマブと組み合わせて、調べた（図３１）。５つの全ての「キック」抗体がトラスツズマブ誘導食作用を亢進することがわかった。
次に、Ｍ２マクロファージによるＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞の食作用に対する、ＣＤ４７のＳＩＲＰ−α結合を遮断しない５つの抗体の作用について、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブと組み合わせて、調べた（図３２）。全ての非遮断抗体がセツキシマブ誘導食作用を亢進することがわかった。
次に、Ｍ２マクロファージによるＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞の食作用に対する、上記のヒト化抗体の作用について、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブと組み合わせて、試験した（図３３Ａ）。全てのヒト化抗体がセツキシマブ誘導食作用を亢進することがわかった。Ｍ２マクロファージによるＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞の食作用に対する、抗体１３６の追加のバリアント（上記）の作用について、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブと組み合わせて、試験した（図３３Ｂ）。抗体１３６の全てのバリアントがセツキシマブ誘導食作用を亢進したが、程度は様々であった。Ｍ２マクロファージによるＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞の食作用に対する、上記の追加のヒト化抗体（Ｈｕｍ１またはＨｕｍ９軽鎖と組み合わせた抗体２５及び２７重鎖バリアント）の作用について、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブと組み合わせて、試験した（図３３Ｃ）。全てのヒト化抗体がセツキシマブ誘導食作用を亢進することがわかった。
食作用に対する抗ＳＩＲＰ−α抗体のＦｃ領域の影響を調べるために、Ｍ２マクロファージによるＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞の食作用に対する、２つの非遮断抗体の作用について、完全長抗体またはＦ（ａｂ）２断片のいずれかで、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブと組み合わせて、試験した（図３４）。これらの結果は、非遮断抗体がＦ（ａｂ）２断片では食作用を誘導する能力を失うことを示しており、このクラスの抗体のＦｃ領域が食作用の誘導に必要であることを示唆している。
Ｍ２マクロファージによるＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞の食作用に対する、遮断抗体１１９の３つのバリアント（上記）の作用について、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブと組み合わせて、試験した（図３５）。結果は、３つの全てのバリアントがセツキシマブ誘導食作用を亢進することを示した。
Ｍ２マクロファージによるＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞の食作用に対する、遮断抗体１３５の２つのバリアント（上記）の作用について、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブと組み合わせて、試験した（図３６）。結果は、両方のバリアントがセツキシマブ誘導食作用を亢進することを示した。
Ｍ２マクロファージによるＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞の食作用に対する、更なる非遮断抗体（上記）の作用について、抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブと組み合わせて、試験した（図３７）。全ての非遮断抗体がセツキシマブ誘導食作用を亢進することがわかった。
次に、既知の抗ＳＩＲＰ−α抗体ｐ８４を含む、様々な抗ＳＩＲＰ−α抗体を、ｉｎ ｖｉｖｏ樹状細胞活性化に対する作用について調べた（図３８Ａ〜３８Ｂ）（例えば、Ｔａｎｇｓｈｅｎｇ，Ｙ．ｅｔ ａｌ（２０１５）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ４３３：１−１２参照）。脾臓樹状細胞上のマウスＳＩＲＰ−α受容体にＣＤ４７結合を介した結合がない場合、脾臓樹状細胞の活性化が生じる。対照抗ＳＩＲＰ−αアンタゴニスト抗体ｐ８４は、マウスに静脈内注射すると、脾臓の樹状細胞を活性化した。非遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体（ＡＢ１３６ｂ、ＡＢ３ｂ及びＡＢ１３６ｗｔ／ｍｕｔ）及び遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体（Ｈｕｍ１／ＡＢ２１ｍｕｔａｌｌ、Ｈｕｍ８／ＡＢ２１ｍｕｔａｌｌ及びＨｕｍ９／ＡＢ２１ｍｕｔａｌｌ）をｉｎ ｖｉｖｏで試験して、樹状細胞の活性化をもたらすかどうかを決定した。ＣＤ８６及びＭＨＣＩＩ発現によって決定されるように、ＳＩＲＰ−α遮断剤と非遮断剤はいずれも樹状細胞の活性化を誘導する。これらの結果は、遮断及び非遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体が樹状細胞の活性化を誘導することを示唆している。
抗体２１８の野生型重鎖を含むヒト化軽鎖（それぞれＨｕｍ１３及びＨｕｍ１４）を発現させることによって、抗体２１８の２つのバリアント２１８−Ｈｕｍ１３／ＶＨ＿ｗｔ及び２１８−Ｈｕｍ１４／ＶＨ＿ｗｔを作製した。Ｈｕｍ１３は、ヒトＩＧＬＶ２フレームワークを使用するが、Ｈｕｍ１４は、ヒトＩＧＬＶ３フレームワークを使用した（Ｈｕｍ１３及びＨｕｍ１４のＶＬ配列については、それぞれ配列番号３３３及び３３４参照）。表Ｏ２に示されるように、両クローンともｖ１及びｖ２に対して低い結合親和性を示した（ＫＤは約２９．３〜５３．１ｎＭ）。
両抗体を、セツキシマブと組み合わせて、ＤＬＤ−１細胞での食作用アッセイで試験した。興味深いことに、ヒト化バリアントは、親ＡＢ２１８ａ抗体を超えて食作用を亢進することができなかった（図３９Ａ）。理論に束縛されることを望むものではないが、これらの結果は、約３０〜５０ｎＭの範囲以下のＫＤを有する抗体が、より弱い親和性で結合する抗体よりも食作用を誘導することにおいてより効果的であり得ることを示唆している。
次に、単剤での食作用の誘導について、例示的な遮断、非遮断及びキック抗ＳＩＲＰ−α抗体を試験した。まず、Ｍ２マクロファージによるＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞の食作用に対する、ＣＤ４７のＳＩＲＰ−α結合を遮断する３つの抗体（ＡＢ１１９ａ、ＡＢ１２０ａ及びＡＢ１２２ａ）の単剤としての作用について調べた（上に記載するとおり）。全ての遮断抗体が単剤で食作用を誘導することがわかった（図３９Ｂ）。次に、Ｍ２マクロファージによるＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞の食作用に対する、ＣＤ４７のＳＩＲＰ−α結合を遮断しない２つの抗体（ＡＢ１３６ａ及びＡＢ１３７ａ）の単剤としての作用について調べた。全ての非遮断抗体が単剤で食作用を誘導することがわかった（図３９Ｃ）。最後に、Ｍ２マクロファージによるＥＧＦＲ（＋）ＤＬＤ−１細胞の食作用に対する、５つの「キック」抗ＳＩＲＰ−α抗体（ＡＢ１１５ａ、ＡＢ１１６ａ、ＡＢ１１７ａ、ＡＢ１１８ａ及びＡＢ１３２ａ）の単剤としての作用について調べた。全ての「キック」抗体が単剤で食作用を誘導することがわかった（図３９Ｄ）。
実施例９：遮断または非遮断抗ＳＩＲＰ−α抗体とＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−１経路阻害剤の併用による相乗的な抗腫瘍作用
方法
ｉｎ ｖｉｖｏにおける抗腫瘍活性
ＣＴ２６同系マウス結腸癌モデルの場合、ＣＴ２６細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下移植し、複数群（８〜９匹／群）に無作為化した。処置群には、ビヒクル（ＰＢＳ）、ＡＢ２５ｂ、抗ＰＤ−Ｌ１、及びＡＢ２５ｂ／抗ＰＤ−Ｌ１を含めた。抗ＰＤ−Ｌ１は、アテゾリズマブのＶＨ及びＶＬドメインと、Ｎ２９７Ａ変異を有するマウスＩｇＧ１のＦｃ領域とを融合することによって作製される。抗ＳＩＲＰ−α抗体も全て、Ｎ２９７Ａ変異を有するマウスＩｇＧ１のＦｃ領域を有する。処置は、移植後７または８日目に、腫瘍が平均７５〜８０ｍｍ３になったときに開始した。マウスに抗ＳＩＲＰα抗体を３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇで週２回３週間、及び抗ＰＤ−Ｌ１を３ｍｇ／ｋｇで３回５日間隔で腹腔内（ＩＰ）投与した。腫瘍が約２０００ｍｍ３の体積に達したら、動物を屠殺した。
方法
ｉｎ ｖｉｖｏにおける抗腫瘍活性
ＣＴ２６同系マウス結腸癌モデルの場合、ＣＴ２６細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに皮下移植し、複数群（８〜９匹／群）に無作為化した。処置群には、ビヒクル（ＰＢＳ）、ＡＢ２５ｂ、抗ＰＤ−Ｌ１、及びＡＢ２５ｂ／抗ＰＤ−Ｌ１を含めた。抗ＰＤ−Ｌ１は、アテゾリズマブのＶＨ及びＶＬドメインと、Ｎ２９７Ａ変異を有するマウスＩｇＧ１のＦｃ領域とを融合することによって作製される。抗ＳＩＲＰ−α抗体も全て、Ｎ２９７Ａ変異を有するマウスＩｇＧ１のＦｃ領域を有する。処置は、移植後７または８日目に、腫瘍が平均７５〜８０ｍｍ３になったときに開始した。マウスに抗ＳＩＲＰα抗体を３ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇで週２回３週間、及び抗ＰＤ−Ｌ１を３ｍｇ／ｋｇで３回５日間隔で腹腔内（ＩＰ）投与した。腫瘍が約２０００ｍｍ３の体積に達したら、動物を屠殺した。
ＭＣ３８同系マウス結腸癌モデルの場合、ＭＣ３８細胞をＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下移植し、複数群（８〜１０匹／群）に無作為化した。処置群には、ビヒクル（ＰＢＳ）、ＡＢ２５ｂ、ＡＢ１３６ｂ、抗ＰＤ１（クローンＲＭＰ１−１４、ＢｉｏＸＣｅｌｌ）、ＡＢ１３６ｂ／抗ＰＤ１、及びＡＢ２５ｂ／抗ＰＤ１を含めた。全ての抗ＳＩＲＰα抗体は、ＡＢ２５ｃを除き、Ｎ２９７Ａの変異を有するネズミＩｇＧ１のＦｃ領域を有した。処置は、移植後７日目に、腫瘍が平均６０〜６５ｍｍ３になったときに開始した。マウスに抗ＳＩＲＰαを１０ｍｇ／ｋｇで週２回３週間、及び抗ＰＤ−１を２ｍｇ／ｋｇで３回、腹腔内（ＩＰ）投与した。腫瘍が約２０００ｍｍ３の体積に達したら、動物を屠殺した。
結果
ＣＴ２６同系マウス結腸癌モデルにおいて、遮断ＡＢ２５ｂ抗ＳＩＲＰ−α抗体の抗腫瘍活性を、単独で、また抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせて試験した。図４０に示されるように、ＡＢ２５ｂ １０ｍｇ／ｋｇを抗ＰＤ−Ｌ１ ３ｍｇ／ｋｇと組み合わせて投与すると、単剤またはビヒクル対照のそれぞれによる処置と比較して、腫瘍形成が遅延した。試験２７日目に、ビヒクル、抗ＰＤ−Ｌ１単剤及び抗ＳＩＲＰ−α単剤の処置群における腫瘍の大きさが６００ｍｍ３未満のマウスは、それぞれ２匹、２匹及び２匹であったのに比べて、併用処置群における腫瘍の大きさが６００ｍｍ３未満のマウスは、６匹であった。
ＣＴ２６同系マウス結腸癌モデルにおいて、遮断ＡＢ２５ｂ抗ＳＩＲＰ−α抗体の抗腫瘍活性を、単独で、また抗ＰＤ−Ｌ１抗体と組み合わせて試験した。図４０に示されるように、ＡＢ２５ｂ １０ｍｇ／ｋｇを抗ＰＤ−Ｌ１ ３ｍｇ／ｋｇと組み合わせて投与すると、単剤またはビヒクル対照のそれぞれによる処置と比較して、腫瘍形成が遅延した。試験２７日目に、ビヒクル、抗ＰＤ−Ｌ１単剤及び抗ＳＩＲＰ−α単剤の処置群における腫瘍の大きさが６００ｍｍ３未満のマウスは、それぞれ２匹、２匹及び２匹であったのに比べて、併用処置群における腫瘍の大きさが６００ｍｍ３未満のマウスは、６匹であった。
次に、ＭＣ３８同系マウス結腸癌モデルにおいて、遮断ＡＢ２５ｂ抗ＳＩＲＰ−α抗体及び非遮断ＡＢ１３６ｂ抗ＳＩＲＰ−α抗体の抗腫瘍活性を、単独で、また抗ＰＤ−１抗体と組み合わせて試験した。図４１に示されるように、ＡＢ２５ｂまたはＡＢ１３６ｂのいずれか（１０ｍｇ／ｋｇ）を抗ＰＤ−１ ５ｍｇ／ｋｇと組み合わせると、単剤またはビヒクル対照のそれぞれによる処置と比較して、腫瘍形成が遅延した。試験２７日目に、ビヒクル、抗ＰＤ−１単剤、ＡＢ２５ｂ単剤及びＡＢ１３６ｂ単剤の処置群における腫瘍の大きさが６００ｍｍ３未満のマウスは、それぞれ１匹、５匹、２匹及び１匹であったのに比べて、ＡＢ２５ｂ／ＰＤ−１併用処置群における腫瘍の大きさが６００ｍｍ３未満のマウスは、７匹であり、ＡＢ１３６ｂ／ＰＤ−１併用処置群における腫瘍の大きさが６００ｍｍ３未満のマウスは、６匹であった。
本明細書に記載される抗体及びその特性の概要を表Ｐに記載する。更なる結合データを表Ｔに記載する。
理解を明確にするために、上記の開示について、例示及び実施例によって、ある程度詳細に説明してきたが、その説明及び実施例は、本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書に引用される全ての特許及び科学参考文献の開示は、その全体が参照により明示的に援用される。
Claims (199)
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、ヒトＳＩＲＰ−αｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン、ヒトＳＩＲＰ−αｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン、またはその両方に結合する、前記抗体。
- ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＡＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１に記載の抗体。
- ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１に記載の抗体。
- ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＡＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の抗体。
- サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の抗体。
- 前記サルＳＩＲＰ−αポリペプチドが、カニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドである、請求項５に記載の抗体。
- 少なくとも２つの異なるサルＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項５または６に記載の抗体。
- 配列番号１１のアミノ酸配列を含むカニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン、配列番号１２のアミノ酸配列を含むカニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン、またはその両方に結合する、請求項６または７に記載の抗体。
- ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の抗体。
- ２つ以上の異なるネズミＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項９に記載の抗体。
- 前記抗体が、１つ以上のネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ここで、前記１つ以上のネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドのそれぞれは、配列番号７〜１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項９または１０に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメインに結合しない、請求項１〜１１及び１３のいずれか一項に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメインに結合しない、請求項１〜１２及び１４のいずれか一項に記載の抗体。
- 配列番号１３のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１２〜１５のいずれか一項に記載の抗体。
- 配列番号１５のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１２〜１６のいずれか一項に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞のＳＩＲＰ−αシグナル伝達を調節する、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の抗体。
- 前記細胞が、マクロファージ、樹状細胞、好中球、好酸球及び骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）からなる群から選択される白血球である、請求項１８に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するマクロファージのＳＩＲＰ−αシグナル伝達を阻害する、請求項１９に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するマクロファージによる食作用を亢進する、請求項１８〜２０のいずれか一項に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体。
- 前記抗体が、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体に結合せず、ここで、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する、請求項２２に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体。
- 前記抗体が、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体に結合し、ここで、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する、請求項２４に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドのｋｏｆｆを増大させる、請求項２６に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン、またはその両方に結合し、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない、請求項１に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン、またはその両方に結合し、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する、請求項１に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン、またはその両方に結合し、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる、請求項１に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン、またはその両方に結合し、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない、請求項１に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン、またはその両方に結合し、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する、請求項１に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン、またはその両方に結合し、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる、請求項１に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン、またはその両方に結合し、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない、請求項１に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン、またはその両方に結合し、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する、請求項１に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン、またはその両方に結合し、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる、請求項１に記載の抗体。
- ２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチド及びサルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメインのうちの少なくとも１つに結合せず、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する、請求項１に記載の抗体。
- 抗体Ｓ１３０に由来する、１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲ配列、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン配列、及び／または軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン配列を含む、請求項３７に記載の抗体。
- ２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチド、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメインのうちの少なくとも１つとに結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する、請求項１に記載の抗体。
- Ｓ８、Ｓ１３、Ｓ１４及びＳ１２１からなる群から選択される抗体に由来する、１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲ配列、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン配列、及び／または軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン配列を含む、請求項３９に記載の抗体。
- ２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチド及びサルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメインのうちの少なくとも１つに結合しないか、減少された親和性で結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない、請求項１に記載の抗体。
- 抗体Ｓ１３７に由来する、１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲ配列、重鎖可変ドメイン配列、及び／または軽鎖可変ドメイン配列を含む、請求項４１に記載の抗体。
- ２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド及びサルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドに結合せず、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメインのうちの少なくとも１つに結合しないか、減少された親和性で結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する、請求項１に記載の抗体。
- Ｓ１２８からなる群から選択される抗体に由来する、１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲ配列、重鎖可変ドメイン配列、及び／または軽鎖可変ドメイン配列を含む、請求項４３に記載の抗体。
- ２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチド、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメイン及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメインのうちの少なくとも１つとに結合し、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドに結合せず、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する、請求項１に記載の抗体。
- Ｓ９、Ｓ１１、Ｓ１１９、Ｓ１２０、Ｓ１２２及びＳ１３５からなる群から選択される抗体に由来する、１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲ配列、重鎖可変ドメイン配列、及び／または軽鎖可変ドメイン配列を含む、請求項４５に記載の抗体。
- ２つ以上の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメインと、２つ以上の異なるサルＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメインとに結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる、請求項１に記載の抗体。
- Ｓ１１５、Ｓ１１６、Ｓ１１７及びＳ１１８からなる群から選択される抗体に由来する、１、２、３、４、５もしくは６つのＣＤＲ配列、重鎖可変ドメイン配列、及び／または軽鎖可変ドメイン配列を含む、請求項４７に記載の抗体。
- （ａ）ＧＦＳＦＳＸ１Ｘ２ＡＭＸ３（式中、Ｘ１は、ＮまたはＩであり、Ｘ２は、ＦまたはＹであり、Ｘ３は、ＴまたはＳである）（配列番号１８５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列、
（ｂ）ＴＩＧＸ４Ｘ５ＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列中、Ｘ４は、ＳまたはＡであり、Ｘ５は、ＧまたはＤである）（配列番号１８６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列、
（ｃ）ＤＳＴＶＸ６ＷＳＧＤＦＦＤＹ（式中、Ｘ６は、ＳまたはＧである）（配列番号１８７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列、
（ｄ）ＲＡＳＱＮＶＸ７Ｘ８ＤＸ９Ａ（式中、Ｘ７は、ＫまたはＲであり、Ｘ８は、ＮまたはＳであり、Ｘ９は、ＬまたはＩである）（配列番号１８８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列、
（ｅ）ＡＡＸ１０Ｘ１１ＲＸ１２Ｔ（配列中、Ｘ１０は、ＲまたはＳであり、Ｘ１１は、ＩまたはＳであり、Ｘ１２は、ＥまたはＤである）（配列番号１８９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列、及び
（ｆ）ＱＱＹＹＤＷＰＰＦＴ（配列番号１４８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、
請求項１に記載の抗体。 - （ａ）配列番号１４３、２０２、２０４もしくは２０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１４４、２０３もしくは２０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１４５もしくは２０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１４６もしくは２０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１４７もしくは２０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１４８もしくは２１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
- 配列番号１２０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号９７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
- （ａ）配列番号１４９、２１１、２１３もしくは２１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１５０、２１２もしくは２１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１５１もしくは２１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１５２もしくは２１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１５３もしくは２１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
- 配列番号１２７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
- （ａ）配列番号１５５、２１９、２２１もしくは２２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１５６、２２０もしくは２２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１５７もしくは２２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１５８もしくは２２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１５９もしくは２２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
- 配列番号１３３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
- （ａ）配列番号１６１、１９１もしくは１９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１６２、１９２もしくは１９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３もしくは１９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
- 配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
- （ａ）配列番号１６１、１９１もしくは１９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１６８、１９６もしくは１９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３もしくは１９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
- 配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
- （ａ）配列番号１７３、１９８もしくは２００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１７４、１９９もしくは２０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３もしくは１９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
- 配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
- （ａ）配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号１６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
- 配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び／または配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
- （ａ）配列番号２２７もしくは２３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２２８もしくは２３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
- （ａ）配列番号２１９もしくは２３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１と、配列番号２３６もしくは２３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２と、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３とを含む、ＶＨドメイン；及び／または（ｂ）配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１と、配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２と、配列番号２４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３とを含む、ＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、
（ａ）（ｉ）ＮＦＡＭＴ（配列番号１７５）、ＮＦＡＶＴ（配列番号２０４）もしくはＮＦＡＬＴ（配列番号３０５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列と、（ｉｉ）ＴＩＧＳＧＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１４４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列と、（ｉｉｉ）ＤＳＴＶＳＷＳＧＤＦＦＤＹ（配列番号１４５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列とを含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／または
（ｂ）（ｉ）ＲＡＳＱＮＶＫＮＤＬＡ（配列番号１４６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列と、（ｉｉ）ＡＡＲＩＲＥＴ（配列番号１４７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列と、（ｉｉｉ）ＱＱＹＹＤＷＰＰＦＴ（配列番号１４８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列とを含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、
前記抗体。 - 前記ＶＨドメインが、配列番号１２０、３３５、２４６、２５８もしくは３２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／または前記ＶＬドメインが、配列番号９７もしくは３１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項６６に記載の抗体。
- （ａ）前記ＶＨドメインが、配列番号２４６のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、
（ｂ）前記ＶＨドメインが、配列番号２５８のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、
（ｃ）前記ＶＨドメインが、配列番号３３５のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、
（ｄ）前記ＶＨドメインが、配列番号３２７のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号９７のアミノ酸配列を含むか、
（ｅ）前記ＶＨドメインが、配列番号２４６のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号３１２のアミノ酸配列を含むか、
（ｆ）前記ＶＨドメインが、配列番号２５８のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号３１２のアミノ酸配列を含むか、
（ｇ）前記ＶＨドメインが、配列番号３３５のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号３１２のアミノ酸配列を含むか、あるいは、
（ｈ）前記ＶＨドメインが、配列番号３２７のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号３１２のアミノ酸配列を含む、
請求項６７に記載の抗体。 - ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、
（ａ）（ｉ）ＩＹＡＭＳ（配列番号２６９）、ＩＹＡＶＳ（配列番号２１３）もしくはＩＹＡＬＳ（配列番号３０６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列と、（ｉｉ）ＴＩＧＡＤＤＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１５０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列と、（ｉｉｉ）ＤＳＴＶＧＷＳＧＤＦＦＤＹ（配列番号１５１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列とを含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／または
（ｂ）（ｉ）ＲＡＳＱＮＶＲＳＤＩＡ（配列番号１５２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列と、（ｉｉ）ＡＡＳＳＲＤＴ（配列番号１５３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列と、（ｉｉｉ）ＱＱＹＹＤＷＰＰＦＴ（配列番号１４８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列とを含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、
前記抗体。 - 前記ＶＨドメインが、配列番号３４１、２４７、２５９もしくは３２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／または前記ＶＬドメインが、配列番号１０４もしくは２４８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項６９に記載の抗体。
- （ａ）前記ＶＨドメインが、配列番号３４１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか、
（ｂ）前記ＶＨドメインが、配列番号２４７のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか、
（ｃ）前記ＶＨドメインが、配列番号２５９のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか、
（ｄ）前記ＶＨドメインが、配列番号３２８のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号１０４のアミノ酸配列を含むか、
（ｅ）前記ＶＨドメインが、配列番号３４１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２４８のアミノ酸配列を含むか、
（ｆ）前記ＶＨドメインが、配列番号２４７のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２４８のアミノ酸配列を含むか、
（ｇ）前記ＶＨドメインが、配列番号２５９のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２４８のアミノ酸配列を含むか、あるいは、
（ｇ）前記ＶＨドメインが、配列番号３２８のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２４８のアミノ酸配列を含む、
請求項７０に記載の抗体。 - ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、
（ａ）（ｉ）Ｘ１Ｘ２ＤＸ３Ｎ（配列中、Ｘ１は、ＳまたはＴであり、Ｘ２は、ＹまたはＳであり、Ｘ３は、Ｍ、ＬまたはＶである）（配列番号３０７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列と、
（ｉｉ）ＬＩＳＧＳＧＥＩＸ１ＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列中、Ｘ１は、ＩまたはＴである）（配列番号３０８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列と、
（ｉｉｉ）ＥＸ１Ｘ２Ｘ３ＹＲＦＦＤＸ４（配列中、Ｘ１は、ＮまたはＤであり、Ｘ２は、ＮまたはＤであり、Ｘ３は、ＲまたはＭであり、Ｘ４は、ＤまたはＹである）（配列番号３０９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列とを含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／または
（ｂ）（ｉ）ＲＡＸ１ＱＳＶＹＸ２ＹＬＡ（配列中、Ｘ１は、ＳまたはＤであり、Ｘ２は、ＴまたはＳである）（配列番号３１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列と、
（ｉｉ）Ｘ１ＡＸ２Ｘ３ＲＡＸ４（配列中、Ｘ１はＧ、Ａ、またはＤであり、Ｘ２は、ＳまたはＲであり、Ｘ３は、Ｓ、ＮまたはＴであり、Ｘ４は、ＴまたはＡである）（配列番号３１１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列と、
（ｉｉｉ）ＱＱＹＹＤＲＰＰＬＴ（配列番号１６０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列とを含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、
前記抗体。 - （ａ）（ｉ）ＳＹＤＭＮ（配列番号２７０）、ＳＹＤＶＮ（配列番号２２１）もしくはＳＹＤＬＮ（配列番号３１３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列と、（ｉｉ）ＬＩＳＧＳＧＥＩＩＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１５６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列と、（ｉｉｉ）ＥＮＮＲＹＲＦＦＤＤ（配列番号１５７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列とを含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／または
（ｂ）（ｉ）ＲＡＳＱＳＶＹＴＹＬＡ（配列番号１５８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列と、（ｉｉ）ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号１５９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列と、（ｉｉｉ）ＱＱＹＹＤＲＰＰＬＴ（配列番号１６０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列とを含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、
請求項７２に記載の抗体。 - 前記ＶＨドメインが、配列番号２４９、１３３、２６０もしくは３２９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／または前記ＶＬドメインが、配列番号１３４、２５０もしくは２５１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項７２または７３に記載の抗体。
- （ａ）前記ＶＨドメインが、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むか、
（ｂ）前記ＶＨドメインが、配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むか、
（ｃ）前記ＶＨドメインが、配列番号３２９のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むか、
（ｄ）前記ＶＨドメインが、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５０のアミノ酸配列を含むか、
（ｅ）前記ＶＨドメインが、配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５０のアミノ酸配列を含むか、
（ｆ）前記ＶＨドメインが、配列番号３２９のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５０のアミノ酸配列を含むか、
（ｇ）前記ＶＨドメインが、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５１のアミノ酸配列を含むか、
（ｈ）前記ＶＨドメインが、配列番号２６０のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５１のアミノ酸配列を含むか、
（ｉ）前記ＶＨドメインが、配列番号３２９のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５１のアミノ酸配列を含むか、
（ｊ）前記ＶＨドメインが、配列番号２４９のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むか、
（ｋ）前記ＶＨドメインが、配列番号２４９のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５０のアミノ酸配列を含むか、あるいは、
（ｌ）前記ＶＨドメインが、配列番号２４９のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５１のアミノ酸配列を含む、
請求項７２に記載の抗体。 - ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、
（ａ）（ｉ）Ｘ１Ｘ２ＡＸ３Ｓ（配列中、Ｘ１は、ＳまたはＴであり、Ｘ２は、Ｎ、Ｙ、ＨまたはＤであり、Ｘ３は、Ｍ、ＬまたはＶである）（配列番号２９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列と、
（ｉｉ）ＧＩＳＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５Ｘ６ＹＹＸ７Ｘ８ＳＸ９ＫＧ（配列中、Ｘ１は、ＡまたはＳであり、Ｘ２は、Ｇ、Ｓまたは不在であり、Ｘ３は、Ｓ、ＤまたはＧであり、Ｘ４は、ＧまたはＳであり、Ｘ５は、Ｄ、ＳまたはＧであり、Ｘ６は、ＴまたはＡであり、Ｘ７は、Ｐ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、ＡまたはＳであり、Ｘ８は、Ａ、ＤまたはＧであり、Ｘ９は、ＶまたはＭである）（配列番号２９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列と、
（ｉｉｉ）ＥＴＷＮＨＬＦＤＹ（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列とを含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／または
（ｂ）（ｉ）ＳＧＧＸ１Ｘ２Ｘ３ＳＸ４ＹＹＸ５（配列中、Ｘ１は、Ｄ、Ｇ、Ｓ、Ｉまたは不在であり、Ｘ２は、Ｓ、Ｗ、Ｇ、Ｙ、Ｄまたは不在であり、Ｘ３は、Ｓ、Ｙ、ＴまたはＤであり、Ｘ４は、Ｈ、Ｔ、ＳまたはＹであり、Ｘ５は、ＧまたはＡである）（配列番号２９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列と、
（ｉｉ）ＳＤＸ１Ｘ２ＲＰＸ３（配列中、Ｘ１は、ＤまたはＮであり、Ｘ２は、Ｅ、ＫまたはＱであり、Ｘ３は、ＳまたはＰである）（配列番号３００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列と、
（ｉｉｉ）Ｘ１Ｘ２ＹＤＸ３Ｘ４Ｘ５ＹＸ６ＮＸ７（配列中、Ｘ１は、ＧまたはＡであり、Ｘ２は、ＧまたはＡであり、Ｘ３は、Ｇ、Ｙ、Ｑ、ＳまたはＡであり、Ｘ４は、Ｓ、ＲまたはＴであり、Ｘ５は、ＴまたはＳであり、Ｘ６は、Ａ、Ｉ、Ｖ、ＬまたはＴであり、Ｘ７は、Ｔ、Ａ、ＤまたはＰである）（配列番号３０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列とを含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、
前記抗体。 - ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、
（ａ）（ｉ）ＳＸ１ＡＸ２Ｓ（配列中、Ｘ１は、ＮまたはＹであり、Ｘ２は、Ｍ、ＬまたはＶである）（配列番号３０２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列と、
（ｉｉ）ＧＩＳＸ１ＧＸ２Ｘ３ＤＴＹＹＸ４Ｘ５ＳＶＫＧ（配列中、Ｘ１は、ＡまたはＳであり、Ｘ２は、Ｇまたは不在であり、Ｘ３は、ＳまたはＧであり、Ｘ４は、Ｐ、ＧまたはＶであり、Ｘ５は、ＡまたはＤである）（配列番号３０３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列と、
（ｉｉｉ）ＥＴＷＮＨＬＦＤＹ（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列とを含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン；及び／または
（ｂ）（ｉ）ＳＧＧＸ１ＹＳＳＹＹＹＡ（配列中、Ｘ１は、ＳまたはＡである）（配列番号３０４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列と、
（ｉｉ）ＳＤＤＫＲＰＳ（配列番号３３６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列と、
（ｉｉｉ）ＧＧＹＤＱＳＳＹＴＮＰ（配列番号１７２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列とを含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む、
前記抗体。 - 前記ＶＨドメインが、（ｉ）ＳＮＡＭＳ（配列番号１９４）、ＳＮＡＶＳ（配列番号２７１）またはＳＮＡＬＳ（配列番号３１８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列、（ｉｉ）ＧＩＳＡＧＧＳＤＴＹＹＰＡＳＶＫＧ（配列番号１９５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列、及び（ｉｉｉ）ＥＴＷＮＨＬＦＤＹ（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列を含む、請求項７６または７７に記載の抗体。
- 前記ＶＨドメインが、配列番号１３５、２６３、２６４または３３０のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項７８に記載の抗体。
- 前記ＶＨドメインが、（ｉ）ＳＮＡＭＳ（配列番号１９４）、ＳＮＡＶＳ（配列番号２７１）またはＳＮＡＬＳ（配列番号３１８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列、（ｉｉ）ＧＩＳＳＧＳＤＴＹＹＧＤＳＶＫＧ（配列番号１９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列、及び（ｉｉｉ）ＥＴＷＮＨＬＦＤＹ（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列を含む、請求項７６に記載の抗体。
- 前記ＶＨドメインが、配列番号１３７、２６５、２６６または３３１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項８０に記載の抗体。
- 前記ＶＨドメインが、（ｉ）ＳＹＡＭＳ（配列番号２００）、ＳＹＡＶＳ（配列番号２７２）またはＳＹＡＬＳ（配列番号３１９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１配列、（ｉｉ）ＧＩＳＳＧＧＤＴＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２配列、及び（ｉｉｉ）ＥＴＷＮＨＬＦＤＹ（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３配列を含む、請求項７６に記載の抗体。
- 前記ＶＨドメインが、配列番号１３９、２６７、２６８または３３２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項８２に記載の抗体。
- 前記ＶＬドメインが、配列ＦＷ１−ＨＶＲ−Ｌ１−ＦＷ２−ＨＶＲ−Ｌ２−ＦＷ３−ＨＶＲ−Ｌ３−ＦＷ４（Ｎ末端からＣ末端）を含み、前記配列中、ＦＷ１は、アミノ酸配列ＳＹＥＬＴＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＲＩＴＣ（配列番号３１４）を含み、ＦＷ２は、アミノ酸配列ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＴＬＩＹ（配列番号３１５）を含み、ＦＷ３は、アミノ酸配列ＮＩＰＥＲＦＳＧＳＳＳＧＴＴＶＴＬＴＩＳＧＶＱＡＥＤＥＡＤＹＹＣ（配列番号３１６）を含み、ＦＷ４は、アミノ酸配列ＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号３１７）を含む、請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の抗体。
- 前記ＶＬドメインが、（ｉ）ＳＧＧＳＹＳＳＹＹＹＡ（配列番号１７０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列、（ｉｉ）ＳＤＤＫＲＰＳ（配列番号３３６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列、及び（ｉｉｉ）ＧＧＹＤＱＳＳＹＴＮＰ（配列番号１７２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、請求項７６〜８４のいずれか一項に記載の抗体。
- 前記ＶＬドメインが、配列番号２５２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項８５に記載の抗体。
- 前記ＶＬドメインが、（ｉ）ＳＧＧＡＹＳＳＹＹＹＡ（配列番号２６１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１配列、（ｉｉ）ＳＤＤＫＲＰＳ（配列番号３３６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２配列、及び（ｉｉｉ）ＧＧＹＤＱＳＳＹＴＮＰ（配列番号１７２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３配列を含む、請求項７６〜８４のいずれか一項に記載の抗体。
- 前記ＶＬドメインが、配列番号２６２のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項８７に記載の抗体。
- （ａ）前記ＶＨドメインが、配列番号２６３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、
（ｂ）前記ＶＨドメインが、配列番号２６４のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、
（ｃ）前記ＶＨドメインが、配列番号３３０のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、
（ｄ）前記ＶＨドメインが、配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、
（ｅ）前記ＶＨドメインが、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、
（ｆ）前記ＶＨドメインが、配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、
（ｇ）前記ＶＨドメインが、配列番号２６５のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、
（ｈ）前記ＶＨドメインが、配列番号２６６のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、
（ｉ）前記ＶＨドメインが、配列番号３３１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、
（ｊ）前記ＶＨドメインが、配列番号２６７のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、
（ｋ）前記ＶＨドメインが、配列番号２６８のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、
（ｌ）前記ＶＨドメインが、配列番号３３２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２５２のアミノ酸配列を含むか、
（ｊ）前記ＶＨドメインが、配列番号２６３のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、
（ｍ）前記ＶＨドメインが、配列番号２６４のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、
（ｎ）前記ＶＨドメインが、配列番号３３０のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、
（ｏ）前記ＶＨドメインが、配列番号２６５のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、
（ｐ）前記ＶＨドメインが、配列番号２６６のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、
（ｑ）前記ＶＨドメインが、配列番号３３１のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、
（ｒ）前記ＶＨドメインが、配列番号２６７のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、
（ｓ）前記ＶＨドメインが、配列番号２６８のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、
（ｔ）前記ＶＨドメインが、配列番号３３２のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、
（ｕ）前記ＶＨドメインが、配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、
（ｖ）前記ＶＨドメインが、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２６２のアミノ酸配列を含むか、あるいは、
（ｗ）前記ＶＨドメインが、配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２６２のアミノ酸配列を含む、
請求項７６に記載の抗体。 - ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、配列番号２９６に従って、Ｉ３１、Ｖ３３、Ｑ５２、Ｋ５３、Ｔ６７、Ｒ６９、Ｎ７０及びＫ９６からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸位置で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに結合する、前記抗体。
- 配列番号２９６に従って、Ｉ３１、Ｖ３３、Ｑ５２、Ｋ５３、Ｔ６７、Ｒ６９、Ｎ７０及びＫ９６で、前記ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに結合する、請求項９０に記載の抗体。
- 配列番号２９６に従って、Ｌ３０、Ｐ３２、Ｅ５４、Ｔ６２、Ｎ７１、Ｍ７２、Ｆ７４及びＲ９５からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸位置で、前記ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに更に結合する、請求項９０または９１に記載の抗体。
- 配列番号２９６に従って、Ｌ３０、Ｐ３２、Ｅ５４、Ｔ６２、Ｎ７１、Ｍ７２、Ｆ７４及びＲ９５で、前記ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに更に結合する、請求項９２に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、配列番号２９６に従って、Ｉ７、Ｐ９、Ｄ１０、Ｋ１１、Ｓ１２、Ａ４２、Ａ１０８及びＥ１１１からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸位置で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに結合する、前記抗体。
- 配列番号２９６に従って、Ｋ１１、Ａ４２、Ａ１０８及びＥ１１１で、前記ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに結合する、請求項９４に記載の抗体。
- 配列番号２９６に従って、Ｉ７、Ｐ９、Ｄ１０、Ｋ１１、Ｓ１２、Ａ１０８及びＥ１１１で、前記ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに結合する、請求項９４に記載の抗体。
- 配列番号２９６に従って、Ｌ１４、Ｔ２６、Ｔ２８、Ｔ８８、Ｙ９０、Ｓ１０６、Ｓ１１３及びＡ１１６からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸位置で、前記ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに更に結合する、請求項９４〜９６のいずれか一項に記載の抗体。
- 配列番号２９６に従って、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１のＬ１４、Ｔ８８、Ｙ９０、Ｓ１０６、Ｓ１１３及びＡ１１６で、前記ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに更に結合する、請求項９７に記載の抗体。
- 配列番号２９６に従って、Ｌ１４、Ｔ２６及びＴ２８で、前記ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに更に結合する、請求項９７に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、配列番号２９６に従って、Ｅ４７、Ｌ４８、Ｐ５８、Ｒ５９、Ｔ８２及びＡ８４からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸位置で、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに結合する、前記抗体。
- 配列番号２９６に従って、Ｅ４７、Ｌ４８、Ｐ５８、Ｒ５９、Ｔ８２及びＡ８４で、前記ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに結合する、請求項１００に記載の抗体。
- 配列番号２９６に従って、Ａ１７、Ｐ４４、Ｇ４５、Ｉ４９、Ｅ５４、Ｇ５５、Ｈ５６、Ｆ５７及びＰ８３からなる群から選択される１つ以上のアミノ酸位置で、前記ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに更に結合する、請求項１００または１０１に記載の抗体。
- 配列番号２９６に従って、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１のＡ１７、Ｐ４４、Ｇ４５、Ｉ４９、Ｅ５４、Ｇ５５、Ｈ５６、Ｆ５７及びＰ８３で、前記ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドに更に結合する、請求項１０２に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメインに１００ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する、前記抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメインに１００ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合する、請求項１０４に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドのＤ１ドメイン及びヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドのＤ１ドメインに結合する、請求項１０４に記載の抗体。
- カニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１０４〜１０６のいずれか一項に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１０４〜１０７のいずれか一項に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１０４〜１０８のいずれか一項に記載の抗体。
- ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１０４〜１０９のいずれか一項に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドのＤ１ドメインに結合し、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない、前記抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αのＤ１ドメインに１００ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合する、請求項１１１に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドのＤ１ドメインに１００ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合し、及び／またはヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドのＤ１ドメインに１００ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合する、請求項１１１または１１２に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドのＤ１ドメイン及びヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドのＤ１ドメインに結合する、請求項１１１に記載の抗体。
- カニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１１１〜１１４のいずれか一項に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１１１〜１１５のいずれか一項に記載の抗体。
- ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１１１〜１１６のいずれか一項に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの結合について、抗体１１９、１２０、１２１、１２２、２１、２５、２７、６６及び１３５からなる群から選択される抗体の重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する、前記抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの結合について、抗体１３６及び１３７からなる群から選択される抗体の重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する、前記抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの結合について、抗体３、２１３、１７３及び２０９からなる群から選択される抗体の重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する、前記抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの結合について、抗体１１５、１１６、１１７、１１８及び１３２からなる群から選択される抗体の重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する、前記抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの結合について、抗体２１８、１２３、１４９、１６１、１６２及び１９４からなる群から選択される抗体の重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する、前記抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する単離された抗体であって、前記ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの結合について、抗体４５の重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む参照抗ＳＩＲＰ−α抗体と競合する、前記抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するマクロファージによる食作用を亢進する、請求項１０４〜１２３のいずれか一項に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する樹状細胞の活性化を亢進する、請求項１０４〜１２４のいずれか一項に記載の抗体。
- ＣＤ４７を発現する腫瘍のｉｎ ｖｉｖｏ成長を阻害する、請求項１０４〜１２５のいずれか一項に記載の抗体。
- ＣＤ４７発現細胞とＴ細胞との間の相互作用を妨げない、請求項１０４〜１２６のいずれか一項に記載の抗体。
- モノクローナル抗体である、請求項１〜１２７のいずれか一項に記載の抗体。
- ｓｃＦｖ−Ｆｃ、単一ドメイン抗体、一本鎖重鎖抗体または一本鎖軽鎖抗体である、請求項１〜１２７のいずれか一項に記載の抗体。
- 配列番号３２５、３２６または４２６のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域を含む、請求項１〜１２７のいずれか一項に記載の抗体。
- Ｆｃ領域を含む、請求項１〜１２７及び１２９のいずれか一項に記載の抗体。
- 配列番号３２０〜３２４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１３１に記載の抗体。
- 前記Ｆｃ領域が、ＩｇＧ１のＦｃ領域、ＩｇＧ２のＦｃ領域及びＩｇＧ４のＦｃ領域からなる群から選択されるヒトＦｃ領域である、請求項１３１に記載の抗体。
- 前記Ｆｃ領域が、ＥＵナンバリングに従って、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ及びＮ２９７Ａからなる群から選択される１つ以上の変異を含む、ヒトＩｇＧ１のＦｃ領域を含む、請求項１３１に記載の抗体。
- 前記Ｆｃ領域が、ＥＵナンバリングに従って、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ及びＮ２９７Ａからなる群から選択される１つ以上の変異を含む、ヒトＩｇＧ２のＦｃ領域を含む、請求項１３１に記載の抗体。
- 前記Ｆｃ領域が、ＥＵナンバリングに従って、Ｓ２２８Ｐ、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、ｄｅｌＧ２３６及びＮ２９７Ａからなる群から選択される１つ以上の変異を含む、ヒトＩｇＧ４のＦｃ領域を含む、請求項１３１に記載の抗体。
- Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ及びｓｃＦｖ断片からなる群から選択される抗体断片である、請求項１〜２３、２５〜２７、２９、３０、３２、３３、３５〜７１、７６〜９３、１００〜１１０及び１１８のいずれか一項に記載の抗体。
- 細胞傷害剤または標識にコンジュゲートされる、請求項１〜１３７のいずれか一項に記載の抗体。
- 二重特異性抗体である、請求項１〜１３７のいずれか一項に記載の抗体。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する第１の抗原結合ドメインと、がん細胞によって発現される抗原に結合する第２の抗原結合ドメインとを含む、請求項１３８に記載の抗体。
- 前記がん細胞によって発現される前記抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＳ１／ＳＬＡＭＦ７、Ｔｒｏｐ−２、５Ｔ４、ＥｐｈＡ４、ＢＣＭＡ、ムチン１、ムチン１６、ＰＤ−Ｌ１、ＰＴＫ７、ＳＴＥＡＰ１、エンドセリンＢ型受容体、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＮＰＰ３、ＳＬＣ４４Ａ４、ＧＮＭＢ、ネクチン４、ＮａＰｉ２ｂ、ＬＩＶ−１Ａ、グアニル酸シクラーゼＣ、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリンαＶβ３、インテグリンα５β１、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰ、テネイシン、Ｌｅｙ、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ７２、ムチン、ＣＡＩＸ、ＥＰＨＡ３、葉酸受容体α、ＧＤ２、ＧＤ３、及びＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ、ＳＳＸ−２、ＭＡＧＥファミリータンパク質、ＭＡＧＥ−Ａ３、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、ｇｐ７５／ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２、未成熟ラミニン受容体、ＭＯＫ／ＲＡＧＥ−１、ＷＴ−１、ＳＡＰ−１、ＢＩＮＧ−４、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、ＭＡＲＴ−２、ｐ５３、Ｒａｓ、β−カテニン、ＴＧＦ−βＲＩＩ、ＨＰＶ Ｅ６またはＨＰＶ Ｅ７に由来するペプチドを含むＭＨＣ／ペプチド複合体からなる群から選択される、請求項１３９に記載の抗体。
- ニワトリ抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはヒト抗体である、請求項１〜１４１のいずれか一項に記載の抗体。
- ニワトリによって産生されるか、ニワトリに由来する、請求項１〜１４２のいずれか一項に記載の抗体。
- 請求項１〜１４３のいずれか一項に記載の抗体をコードする、ポリヌクレオチド。
- 請求項１４４に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
- 請求項１４４に記載のポリヌクレオチドまたは請求項１４５に記載のベクターを含む、宿主細胞。
- 前記抗体が産生されるように、請求項１４６に記載の宿主細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法。
- 前記宿主細胞から前記抗体を回収することを更に含む、請求項１４７に記載の方法。
- 個体のがんを治療するか、個体のがんの進行を遅らせる方法であって、請求項１〜１４３のいずれか一項に記載の抗体の有効量を前記個体に投与することを含む、前記方法。
- 前記がんによって発現される抗原に結合する第２の抗体の有効量を前記個体に投与することを更に含む、請求項１４９に記載の方法。
- 前記がん細胞によって発現される前記抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ７４、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＳ１／ＳＬＡＭＦ７、Ｔｒｏｐ−２、５Ｔ４、ＥｐｈＡ４、ＢＣＭＡ、ムチン１、ムチン１６、ＰＴＫ７、ＳＴＥＡＰ１、エンドセリンＢ型受容体、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＥＮＰＰ３、ＳＬＣ４４Ａ４、ＧＮＭＢ、ネクチン４、ＮａＰｉ２ｂ、ＬＩＶ−１Ａ、グアニル酸シクラーゼＣ、ＤＬＬ３、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、インテグリンαＶβ３、インテグリンα５β１、ＭＥＴ、ＩＧＦ１Ｒ、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＲＡＮＫＬ、ＦＡＰ、テネイシン、Ｌｅｙ、ＥｐＣＡＭ、ＣＥＡ、ｇｐＡ３３、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ７２、ムチン、ＣＡＩＸ、ＥＰＨＡ３、葉酸受容体α、ＧＤ２、ＧＤ３、及びＮＹ−ＥＳＯ−１／ＬＡＧＥ、ＳＳＸ−２、ＭＡＧＥファミリータンパク質、ＭＡＧＥ−Ａ３、ｇｐ１００／ｐｍｅｌ１７、Ｍｅｌａｎ−Ａ／ＭＡＲＴ−１、ｇｐ７５／ＴＲＰ１、チロシナーゼ、ＴＲＰ２、ＣＥＡ、ＰＳＡ、ＴＡＧ−７２、未成熟ラミニン受容体、ＭＯＫ／ＲＡＧＥ−１、ＷＴ−１、ＳＡＰ−１、ＢＩＮＧ−４、ＥｐＣＡＭ、ＭＵＣ１、ＰＲＡＭＥ、サバイビン、ＢＲＣＡ１、ＢＲＣＡ２、ＣＤＫ４、ＣＭＬ６６、ＭＡＲＴ−２、ｐ５３、Ｒａｓ、β−カテニン、ＴＧＦ−βＲＩＩ、ＨＰＶ Ｅ６またはＨＰＶ Ｅ７に由来するペプチドを含むＭＨＣ／ペプチド複合体からなる群から選択される、請求項１５０に記載の方法。
- 免疫療法剤の有効量を前記個体に投与することを更に含む、請求項１４９に記載の方法。
- 前記免疫療法剤が、第２の抗体を含む、請求項１５２に記載の方法。
- 前記第２の抗体が、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＯＸ４０、ＣＴＬＡ−４、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＴＮＦＲ２、Ｂ７−Ｈ３、ＦＺＤ７、ＣＤ２７、ＣＣＲ４、ＣＳＦ１Ｒ、ＣＳＦ、ＴＩＭ−３、ＬＡＧ−３、ＶＩＳＴＡ、ＩＣＯＳ、ＣＣＲ２、ＩＤＯ、Ａ２Ｒ、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ８０、ＣＤ４７、アルギナーゼ、ＴＤＯ及びＰＶＲＩＧからなる群から選択される抗原に結合する、請求項１５３に記載の方法。
- 前記第１の抗体が、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン、またはヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドとヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの両方の細胞外ドメインに、１００ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合し、前記第１の抗体が、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断し、前記第２の抗体が、ＰＤ−１に結合する、請求項１５３に記載の方法。
- 前記第１の抗体が、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドのＤ１ドメインに結合し、前記第１の抗体が、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインとヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断せず、前記第２の抗体が、ＰＤ−１に結合する、請求項１５３に記載の方法。
- 前記第１の抗体が、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメインに１００ｎＭ未満の解離定数（ＫＤ）で結合し、前記第１の抗体が、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインとヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断し、前記第２の抗体が、ＰＤ−Ｌ１に結合する、請求項１５３に記載の方法。
- 前記第１の抗体が、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドのＤ１ドメインに結合し、前記第１の抗体が、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインとヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断せず、前記第２の抗体が、ＰＤ−Ｌ１に結合する、請求項１５３に記載の方法。
- 個体の自己免疫疾患または炎症性疾患を治療するか、個体の自己免疫疾患または炎症性疾患の進行を遅らせる方法であって、請求項１〜１４３のいずれか一項に記載の前記抗体の有効量を前記個体に投与することを含む、前記方法。
- 前記自己免疫疾患または炎症性疾患が、多発性硬化症、関節リウマチ、脊椎関節症、全身性エリテマトーデス、抗体媒介性の炎症性疾患または自己免疫疾患、移植片対宿主病、敗血症、糖尿病、乾癬、乾癬性関節炎、アテローム性動脈硬化症、シェーグレン症候群、全身性進行性硬化症、強皮症、急性冠症候群、虚血再灌流、クローン病、潰瘍性大腸炎、子宮内膜症、糸球体腎炎、ＩｇＡ腎症、多発性嚢胞腎疾患、重症筋無力症、特発性肺線維症、喘息、アトピー性皮膚炎、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、血管炎及び自己免疫性炎症性筋炎からなる群から選択される、請求項１５９に記載の方法。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、かつヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断しない抗原結合ドメインを特定する方法であって、
（ａ）ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する抗原結合ドメインを準備することと、
（ｂ）ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含むポリペプチドに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体を組み立てることであって、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する、組み立てることと、
（ｃ）前記抗原結合ドメインを、前記組み立てた複合体に接触させることと、
（ｄ）前記複合体に対する前記抗原結合ドメインの結合を検出することであって、前記複合体に対する前記抗原結合ドメインの結合は、前記抗原結合ドメインがヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断しないことを示す、検出することと
を含む、前記方法。 - ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、かつヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断する抗原結合ドメインを特定する方法であって、
（ａ）ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する抗原結合ドメインを準備することと、
（ｂ）ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含むポリペプチドに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体を組み立てることであって、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する、組み立てることと、
（ｃ）前記抗原結合ドメインを、前記組み立てた複合体に接触させることと、
（ｄ）前記複合体に対する前記抗原結合ドメインの結合を検出することであって、前記複合体に対する前記抗原結合ドメインの結合の欠如は、前記抗原結合ドメインがヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドとの間の結合を遮断することを示す、検出することと
を含む、前記方法。 - 前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントが、配列番号１７〜５２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１６１または１６２に記載の方法。
- 前記ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインが、配列番号１６のアミノ酸配列を含む、請求項１６１〜１６３のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含む前記ポリペプチドが、ヒトＣＤ４７の細胞外ドメインを含む、請求項１６１〜１６４のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインを含む前記ポリペプチドが、抗体Ｆｃ領域を更に含む、請求項１６１〜１６５のいずれか一項に記載の方法。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する抗ＳＩＲＰ−α抗体を産生する方法であって、
（ａ）ヒトＳＩＲＰ−α細胞外ドメインの少なくとも一部を含むペプチドでニワトリを免疫化することと、
（ｂ）前記免疫化したニワトリの抗体産生細胞から抗体を得ることと、
（ｃ）前記細胞から得た前記抗体とヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインとの間の結合を検出することであって、前記抗体と前記ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインとの間の結合は、前記抗体が、ヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメインに結合する抗ＳＩＲＰ−α抗体であることを示す、検出することと
を含む、前記方法。 - 前記抗体が、ニワトリ抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、またはヒト抗体である、請求項１６７に記載の方法。
- 前記抗体が、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメイン、ヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメイン、またはその両方に結合する、請求項１６７または１６８に記載の方法。
- 前記抗体が、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＡＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１６９に記載の方法。
- 前記抗体が、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１６８に記載の方法。
- 前記抗体が、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＬＶＡＡＧＥＴＡＴＬＲＣＴＡＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＧＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＤＬＴＫＲＮＮＭＤＦＳＩＲＩＧＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＤＶＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ１ポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ＥＥＥＬＱＶＩＱＰＤＫＳＶＳＶＡＡＧＥＳＡＩＬＨＣＴＶＴＳＬＩＰＶＧＰＩＱＷＦＲＧＡＧＰＡＲＥＬＩＹＮＱＫＥＧＨＦＰＲＶＴＴＶＳＥＳＴＫＲＥＮＭＤＦＳＩＳＩＳＮＩＴＰＡＤＡＧＴＹＹＣＶＫＦＲＫＧＳＰＤＴＥＦＫＳＧＡＧＴＥＬＳＶＲＡＫＰＳ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−α ｖ２ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１６８〜１７１のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が、３、４、５、６、７、８、９または１０個の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１６８〜１７１のいずれか一項に記載の方法。
- 前記３、４、５、６、７、８、９または１０個の異なるヒトＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドのそれぞれが、配列番号５、６及び７６〜８３からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む細胞外ドメインを含む、請求項１７２に記載の方法。
- 前記細胞から得た前記抗体と、サルＳＩＲＰ−αポリペプチド、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチド、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチド及びヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドからなる群から選択される１つ以上のＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインとの間の結合を検出することを更に含む、請求項１６６〜１７４のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が、サルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１７５に記載の方法。
- 前記サルＳＩＲＰ−αポリペプチドが、カニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドである、請求項１７６に記載の方法。
- 前記抗体が、少なくとも２つの異なるサルＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１７６または１７７に記載の方法。
- 前記抗体が、配列番号１１のアミノ酸配列を含むカニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン、配列番号１２のアミノ酸配列を含むカニクイザルＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメイン、またはその両方に結合する、請求項１７７または１７８に記載の方法。
- 前記抗体が、ネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１７５〜１７９のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が、２つ以上の異なるネズミＳＩＲＰ−αバリアントポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１８０に記載の方法。
- 前記抗体が、１つ以上のネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインに結合し、ここで、前記１つ以上のネズミＳＩＲＰ−αポリペプチドのそれぞれは、配列番号７〜１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１８０または１８１に記載の方法。
- 前記抗体が、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１７５〜１８２のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が、ヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１７５〜１８３のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が、ヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメインに結合しない、請求項１７５〜１８１及び１８４のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が、ヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメインに結合しない、請求項１７５〜１８３及び１８５のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が、配列番号１３のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−βポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１８３〜１８６のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が、配列番号１５のアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰ−γポリペプチドの細胞外ドメインに結合する、請求項１８３〜１８７のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞から得た前記抗体と、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体との間の結合または結合の欠如を検出することを更に含み、ここで、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する、請求項１６６〜１８８のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗体が、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体に結合し、ここで、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する、請求項１８９に記載の方法。
- 前記抗体が、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断しない、請求項１９０に記載の方法。
- 前記抗体が、ＣＤ４７のＩｇＳＦドメインに結合したＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントを含む複合体に結合せず、ここで、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、非天然高親和性ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインであり、前記ＳＩＲＰ−α Ｄ１バリアントは、天然ＳＩＲＰ−α Ｄ１ドメインがヒトＣＤ４７に結合する親和性よりも少なくとも１０倍大きい親和性でヒトＣＤ４７に結合する、請求項１８９に記載の方法。
- 前記抗体が、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインと、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインとの間の結合を遮断する、請求項１９２に記載の方法。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの親和性を低下させる、請求項１８８に記載の方法。
- ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドの細胞外ドメインへの前記抗体の結合が、ヒトＣＤ４７ポリペプチドのＩｇＳＦドメインへの結合に対するヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドのｋｏｆｆを増大させる、請求項１９４に記載の方法。
- 前記抗体が、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現する細胞のＳＩＲＰ−αシグナル伝達を調節する、請求項１６７〜１９５のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞が、マクロファージ、樹状細胞、好中球、好酸球及び骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）からなる群から選択される白血球である、請求項１９６に記載の方法。
- 前記抗体が、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するマクロファージのＳＩＲＰ−αシグナル伝達を阻害する、請求項１９７に記載の方法。
- 前記抗体が、ヒトＳＩＲＰ−αポリペプチドを発現するマクロファージによる食作用を亢進する、請求項１９６または１９７に記載の方法。
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