TWI710574B - 抗訊號調節蛋白α(SIRPα)抗體 - Google Patents
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Abstract
本發明關於適合用於抗癌療法之針對訊號調節蛋白α(SIRPα) 的抗體。本發明進一步關於可選擇地與其他抗癌治療劑組合之抗SIRPα抗體於治療人實體腫瘤和血液惡性腫瘤之用途。
Description
本發明關於針對訊號調節蛋白α(SIRPα)之抗體及該等抗體可選擇地與其他抗癌治療劑之組合於治療癌症之用途。
從1990年代末期以來,治療性抗體已可用於治療癌症。這些治療性抗體可經由不同途徑作用在惡性細胞上。該藉由抗體與其在惡性細胞上之標靶結合所引發之信號傳導途徑導致細胞增殖受到抑制或細胞凋亡。治療性抗體之Fc區可引發補體依賴性細胞毒性(CDC)、抗體依賴性細胞毒性(ADCC)和抗體依賴性細胞吞噬作用(ADCP)。然而,治療性抗體之效力通常不足以作為單一療法。提高治療性抗體之效力的一種選擇係透過改善ADCC及/或ADCP。此已藉由改善Fc區對Fcγ受體之親和力來完成,例如藉由胺基酸取代(Richardset al. Mol. Cancer Ther.
2008, 7(8), 2517-2527)或藉由影響Fc區之糖基化(Hayeset al. J. Inflamm. Res.
2016, 9, 209-219)來完成。
改善治療性抗體之ADCC及/或ADCP的另一種方式為將治療性抗體與針對信號調節蛋白α之抗拮抗性抗體(抗-SIRPα)或抗-CD47抗體組合(WO2009/131453)。當CD47與表現在單核細胞、巨噬細胞、樹突細胞和嗜中性粒細胞上之抑制性免疫受體SIRPα結合時,SIRPα傳遞抑制信號而防止藉由吞噬作用或免疫效應細胞之其他Fc受體依賴性細胞破壞機制來破壞癌細胞。
腫瘤細胞使用CD47上調來作為逃避由治療性抗體引起之抗腫瘤免疫反應的機制。抗CD47或抗SIRPα抗體阻斷經由CD47-SIRPα軸產生之抑制性信號傳導,導致ADCC及/或ADCP增加。
大多數與CD47-SIRPα交互作用相關之臨床研究已聚焦在使用抗CD47抗體作為單一療法和與治療性抗體組合之療法(Weiskopf.Eur.J.Cancer 2017,
76,100-109)。儘管CD47亦表現在大多數正常組織之細胞表面上,與使用抗CD47抗體作為抗癌治療劑有關之研究仍持續增加。
使用抗SIRPα抗體之抗癌單一療法或組合療法的研究很少。關於抗SIRPα抗體之大部分研究係關於CD47-SIRPα交互作用之機制研究且已使用鼠抗SIRPα抗體進行;例如鼠12C4和1.23A增加由中性粒細胞介導之經曲妥珠單抗(trastuzumab)調理的SKBR3細胞之ADCC(Zhaoet al. PNAS
2011, 108(45), 18342-18347)。WO2015/138600揭示鼠抗人SIRPα抗體KWAR23及其嵌合型Fab片段,其增加西妥昔單抗(cetuximab)之體外吞噬作用。WO2018/026600中揭示具有包含N297A突變之人IgG1
Fc部分的人化KWAR23。WO2013/056352揭示IgG4
29AM4-5和其他IgG4
人抗SIRPα抗體。該IgG4
29AM4-5之劑量為8mg/kg,每週給藥三次,持續4週時可減少注入NOD scid γ(NSG)小鼠右股骨中之初代人AML細胞的白血病植入。
SIRPα為信號調節蛋白(SIRP)家族之成,存在於免疫效應細胞上之具有胞外Ig樣結構域的跨膜糖蛋白。SIRPα之NH2-端配體結合結構域為高度多態性(Takenakaet al. Nature Immun.
2007, 8(12), 1313-1323)。然而,此多態性不會顯著影響與CD47之結合。SIRPαBIT
(v1)和SIRPα1
(v2)為二種最常見且最分岐(13個殘基相異)之多型體(Hatherleyet al. J. Biol. Chem.
2014, 289(14), 10024-10028)。其他經生物化學表徵之人SIRP家族成員為SIRPβ1
和SIRPγ。
SIRPβ1
不與CD47結合(van Beeket al. J. Immunol.
2005, 175 (12), 7781-7787, 7788-7789)且至少有二種SIRPβ1
多態性變體為已知,SIRPβ1v1
(ENSP00000371018)和SIRPβ1v2
(ENSP00000279477)。儘管SIRPβ1
之天然配體尚未知,使用抗SIRPβ1
特異性抗體之體外研究顯示出SIRPβ1
接合可藉由誘導DAP12、Syk和SLP-76酪胺酸磷酸化及隨後活化MEK-MAPK-肌球蛋白輕鏈激酶級聯反應來促進巨噬細胞之吞噬作用(Matozakiet al. J. Biol. Chem.
2004, 279(28), 29450-29460)。
SIRPγ表現在T細胞和活化之NK細胞上,且與SIRPα相比較,SIRPγ以低10倍之親和力與CD47結合。CD47-SIRPγ交互作用涉及抗原呈遞細胞和T細胞之間的接觸,共同刺激T細胞活化並促進T細胞增殖(Piccioet al. Blood
2005, 105, 2421-2427)。此外,CD47-SIRPγ交互作用在T細胞跨內皮遷移中具有作用(Stefanisakiset al. Blood
2008, 112, 1280-1289)。
本技藝中已知之抗SIRPα抗體較不適合用於指向SIRPα之單一療法或組合療法,因為它們或是並非特異於人SIRPα,或是它們太具特異性。先前技藝之抗體KWAR23、SE5A5、29AM4-5和12C4並不具特異性,因為它們亦與人SIRPγ結合。與表現在T細胞上之SIRPγ結合可能對T細胞之增殖和募集有負面影響。其他抗SIRPα抗體之特異性過於有限,例如1.23A mAb僅識別人SIRPα多態性變體SIRPα1
而不識別變體SIRPαBIT
,該SIRPαBIT
至少在高加索人群中佔絕大多數(X.W. Zhaoet al. PNAS
2011, 108(45), 18342-18347) 。
除了使用抗SIRPα抗體來增加治療性抗體之ADCC外,這些抗體亦可用於直接靶向表現SIRPα之癌症類型。包含野生型人-Fc之抗SIRPα抗體可適合用於治療表現SIRPα之癌症,諸如腎細胞癌和惡性黑素瘤,因為具有功能性Fc區之鼠抗SIRPα抗體能減緩經注射Renca細胞和B16BL6黑素瘤細胞(二者均表現SIRPα)之小鼠中的腫瘤形成(Yanagitaet al. JCI Insight
2017, 2(1), e89140)。
總之,對於特異性結合SIRPα1
和SIRPαBIT
多態性變體,但與SIRPγ之結合力低,且適合單獨或與治療性抗體組合用於抗癌療法中之抗SIRPα抗體仍有需求。
本發明關於適合用於抗癌療法之抗SIRPα抗體。本發明進一步關於該抗體於治療人實體腫瘤和血液惡性腫瘤之用途。
本發明之詳細描述
目前無可用之已被核准之針對SIRPα的治療劑,雖然此標靶已顯示出在腫瘤免疫逃逸機制中起重要作用。此外,SIRPα表現在各種腫瘤細胞上,而使其成為可能之腫瘤相關抗原。
本發明關於拮抗性抗SIRPα抗體,其顯示出特異性結合二種主要之SIRPα多態性變體SIRPαBIT
和SIRPα1
,但不與SIRPγ結合並增加治療性抗體之ADCC及/或ADCP。
本專利說明書全文中使用之術語“抗體”係指包含二條重鏈和二條輕鏈之單株抗體(mAb)。抗體可為任何同種型,諸如IgA、IgE、IgG或IgM抗體。較佳地,該抗體為IgG抗體,更佳為IgG1
或IgG2
抗體。該抗體可為嵌合型、人化或人抗體。較佳地,本發明之抗體為人化的。甚至更佳地,該抗體為人化或人IgG抗體,最佳為人化或人IgG1
mAb。該抗體可具有κ(kappa)或λ(lambda)輕鏈,較佳為κ(kappa)輕鏈,即,人化或人IgG1-κ
抗體。該抗體可包含經工程處理之恆定區,即,可引入一或多種突變以,例如增加半衰期及/或增加或減少效應子功能。
如本文所使用之術語“單株抗體”和“mAb”係指從實質上同源之抗體群獲得之抗體,即,除了可能少量存在之可能的天然發生之突變外,該群體包含之個別抗體完全相同。抗體可藉由以代表所需抗原之肽的混合物將動物免疫化來產生。分離出B淋巴細胞並將與骨髓瘤細胞融合者或單一B淋巴細胞在條件培養基和飼養細胞之存在下培養數天。測試含有所產生之抗體的骨髓瘤或B-淋巴細胞上清液以選擇合適之B淋巴細胞或雜交瘤。單株抗體可藉由最先由Köhleret al. Nature
1975, 256, 495-497描述之雜交瘤方法從合適之雜交瘤製備。或者,可將合適之B細胞或淋巴瘤的RNA裂解,可分離出RNA,將其逆轉錄並測序。可藉由重組DNA方法在細菌、真核動物或植物細胞中製造抗體(參見,例如美國專利案第4,816,567號)。亦可使用本技藝描述之技術(例如描述於Clacksonet al. Nature
1919, 352, 624-628和Markset al. J. Mol. Biol.
1991, 222, 581-597中)從噬菌體抗體庫中分離出“單株抗體”。
本專利說明書全文中使用之術語“抗原結合片段”包括Fab、Fab'或F(ab')2
片段、單鏈(sc)抗體、scFv、單結構域(sd)抗體、雙抗體或微型抗體。
在人化抗體中,重鏈(HC)和輕鏈(LC)之可變區(VR)中的抗原結合互補決定區(CDR)係源自來自非人物種(通常為小鼠、大鼠或兔子)之抗體。這些非人CDR以能保留該抗體之功能性質(諸如結合親和力和特異性)之方式與HC和LC之可變區的人框架區(FR1、FR2、FR3和FR4)組合。人FR中之選定的胺基酸可與對應之原始非人物種胺基酸交換以改善結合親和力,但同時保持低免疫原性。或者,可將原始之非人物種FR之選定的胺基酸與其對應之人胺基酸交換以降低免疫原性,同時保留該抗體之結合親和力。由此人化之可變區與人恆定區組合。
CDR可使用Kabat(在Kabat, E.A.et al
.,Sequences of Proteins of Immunological Interest
, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD., NIH publication no. 91-3242, pp. 662, 680, 689 (1991)中)、Chothia (Chothiaet al., Nature
1989, 342, 877-883)或IMGT(Lefranc,The Immunologist
1999, 7, 132-136)之方法測定。在本發明之背景下,Eu編號係用於指示該抗體之重鏈和輕鏈恆定區中之位置。詞語“Eu編號”係指如Kabat, E.A.et al
.,Sequences of Proteins of Immunological Interest
, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD., NIH publication no. 91-3242, pp. 662, 680, 689 (1991)中之Eu索引。
拮抗性抗體對特定抗原具有親和力,且抗體與其抗原結合可抑制激動劑或反向激動劑在受體上之功能。在本發明之情況下,拮抗性抗SIRPα抗體與SIRPα結合將防止CD47與SIRPα結合或將破壞由CD47-SIRPα結合所引發之抑制信號。
拮抗性抗SIRPα抗體可結合至與CD47所結合者相同之位點,防止CD47與SIRPα連接,因而抑制會負調節免疫效應細胞之Fc受體依賴性作用的信號傳導。拮抗性抗SIRPα抗體亦可結合至與CD47之結合位點不同的SIRPα位點(即變構位點)而抑制SIRPα之抑制性信號傳導,不直接干擾物理性CD47-SIRPα交互作用,例如改變SIRPα之三維形狀。當與CD47結合時此種三維形狀之變化會防止(下游)信號傳導。當SIRPα結合至變構位點時,CD47可能仍與SIRPα結合,這可能使CD47較無法用於與血小板反應蛋白(thrombospondin)-1(TSP-1)結合。TSP-1與CD47連接在,例如負調節T細胞活化中具有作用(Soto-Pantojaet al. Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol.
2015, 50(3), 212-230)。
如本專利說明書全文中所使用之術語“結合親和力”係指特定之抗原-抗體交互作用之解離常數(KD
)。KD
為解離速率(koff
)對結合速率(kon
)之比例。因此,KD
等於koff
/kon
並以莫耳濃度(M)表示。其遵循KD
越小,結合親和力越強之原別。通常,KD
值係使用表面等離子共振(SPR)(通常係使用生物傳感器系統(例如Biacore®)),利用本技藝中已知之方法(例如E.S. Dayet al. Anal. Biochem
. 2013, 440, 96-107)測定。術語“結合親和力”亦可指使用例如ELISA分析測定或藉由流式細胞術測定時產生半最大結合之抗體濃度(EC50
)。
如本專利說明書全文中所使用之術語“特異性結合”係關於當在25℃下,藉由SPR測定時,該抗體與其抗原結合之KD
值通常低於10-7
M,例如10-8
M、10-9
M、 10-10
M、10-11
M,或甚至更低。
如本專利說明書全文中所使用之術語“低親和力”可與短語“不結合(does/do not bind或is/are not binding)”交換,且係指當使用ELISA分析測定抗體與其抗原之間的結合親和力時EC50
大於1500ng/ml,或當藉由SPR測定時,固定之抗原和抗體之間未觀察到特異性結合。
如本專利說明書全文中所使用之術語“高親和力”係指當在25℃下,藉由SPR測定時,該抗體與其抗原結合之KD
值通常低於10-10
M、10-11
M,或甚至更低。
特別是,本發明關於抗SIRPα抗體或其抗原結合片段,該抗SIRPα抗體或其抗原結合片段包含選自由下列所組成之群組的重鏈(HC)和輕鏈(LC)可變區(VR)互補決定區(CDR): a. SEQ ID NO:1之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:2之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; b. SEQ ID NO:3之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:4之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; c. SEQ ID NO:5之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:6之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; d. SEQ ID NO:7之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:8之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; e. SEQ ID NO:9之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:10之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; f. SEQ ID NO:11之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:12之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; g. SEQ ID NO:13之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:14之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; h. SEQ ID NO:15之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:16之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列;及 i. SEQ ID NO:17之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:18之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列, 其中該CDR係根據Kabat編號決定。
較佳地,本發明關於抗SIRPα抗體或其抗原結合片段,該抗SIRPα抗體或其抗原結合片段包含選自由下列所組成之群組的重鏈(HC)和輕鏈(LC)可變區(VR)互補決定區(CDR): a. SEQ ID NO:3之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:4之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; b. SEQ ID NO:5之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:6之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; c. SEQ ID NO:7之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:8之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; d. SEQ ID NO:9之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:10之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; e. SEQ ID NO:11之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:12之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; f. SEQ ID NO:13之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:14之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; g. SEQ ID NO:15之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:16之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列;及 h. SEQ ID NO:17之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:18之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列, 其中該等CDR係根據Kabat編號決定。
更佳地,本發明關於抗SIRPα抗體或其抗原結合片段,該抗SIRPα抗體或其抗原結合片段包含選自由下列所組成之群組的HCVR CDR和LCVR CDR: a. SEQ ID NO:3之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:4之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; b. SEQ ID NO:5之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:6之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; c. SEQ ID NO:7之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:8之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; d. SEQ ID NO:9之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:10之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列;及 e. SEQ ID NO:13之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:14之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列, 其中該等CDR係根據Kabat編號決定。
甚至更佳地,本發明關於抗SIRPα抗體或其抗原結合片段,該抗SIRPα抗體或其抗原結合片段包含選自由下列所組成之群組的HCVR CDR和LCVR CDR: a. SEQ ID NO:5之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:6之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; b. SEQ ID NO:7之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:8之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列;及 c. SEQ ID NO:13之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:14之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列, 其中該等CDR係根據Kabat編號決定。
最佳地,本發明關於抗SIRPα抗體或其抗原結合片段,該抗SIRPα抗體或其抗原結合片段包含選自由下列所組成之群組的HCVR CDR和LCVR CDR: a. SEQ ID NO:7之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:8之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列;及 b. SEQ ID NO:13之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:14之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列, 其中該等CDR係根據Kabat編號決定。
於一較佳之實施態樣中,本發明關於如上文定義之抗SIRPα抗體或其抗原結合片段,其中該抗體顯示出與SIRPαBIT
和SIRPα1
二者特異性結合且不與SIRPγ結合。
於一更佳之實施態樣中,該抗SIRPα抗體或其抗原結合片段與SIRPαBIT
特異性結合之KD
值低於10-9
M且與SIRPα1
特異性結合之KD
值低於10-7
M,其中該KD
係在25℃下,藉由SPR測量。較佳地,該抗SIRPα抗體或其抗原結合片段與SIRPα1
結合之KD
值低於10-8
M。
於另一更佳之實施態樣中,該抗SIRPα抗體或其抗原結合片段與SIRPαBIT
和SIRPα1
特異性結合之KD
值低於10-9
M,其中該KD
係在25℃下,藉由SPR測量。
於甚至更佳之實施態樣中,該抗SIRPα抗體或其抗原結合片段與SIRPαBIT
和SIRPα1
特異性結合之KD
值低於10-10
M。較佳地,該抗SIRPα抗體或其抗原結合片段與SIRPαBIT
特異性結合之KD
值低於10-10
M且與SIRPα1
特異性結合之KD
值低於10-11
M。通常,如上文定義之抗SIRPα抗體為嵌合型、人化或人抗體。較佳地,該抗SIRPα抗體為人化或人抗體。更佳地,該抗SIRPα抗體為人化抗體。於一特定之實施態樣中,根據本發明之人化抗SIRPα抗體或其抗原結合片段包含選自由下列所組成之群組的HCVR和LCVR: a. SEQ ID NO:30之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:31之LCVR胺基酸序列; b. SEQ ID NO:32之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:33之LCVR胺基酸序列; c. SEQ ID NO:34之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:8之LCVR胺基酸序列; d. SEQ ID NO:35之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:36之LCVR胺基酸序列; e. SEQ ID NO:35之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:37之LCVR胺基酸序列; f. SEQ ID NO:13之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:38之LCVR胺基酸序列;及 g. SEQ ID NO:13之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:37之LCVR胺基酸序列。
於一較佳之實施態樣中,該人化之抗SIRPα抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:30之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:31之LCVR胺基酸序列。
於另一較佳之實施態樣中,該人化之抗SIRPα抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:32之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:33之LCVR胺基酸序列。
再於另一較佳之實施態樣中,該人化之抗SIRPα抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:34之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:8之LCVR胺基酸序列。
再於另一較佳之實施態樣中,該人化之抗SIRPα抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:35之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:36之LCVR胺基酸序列。
再於另一較佳之實施態樣中,該人化之抗SIRPα抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:35之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:37之LCVR胺基酸序列。
再於另一較佳之實施態樣中,該人化之抗SIRPα抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:13之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:38之LCVR胺基酸序列。
再於另一較佳之實施態樣中,該人化之抗SIRPα抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:13之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:37之LCVR胺基酸序列。
除了與人(hu)SIRPαBIT
和(hu)SIRPα1
二者結合外,根據本發明之抗體亦可與食蟹猴(cy)SIRPα結合,因而能在相關動物模型中進行體內研究。
根據本發明之抗體可結合至與CD47之結合位點不同的SIRPα位點(即,變構位點)並抑制SIRPα之抑制性信號傳導,而不直接干擾物理性CD47-SIRPα交互作用。或者,抗體可結合至與CD47之結合位點相同的位點,防止SIRPα與CD47連接並因此抑制可負調節免疫效應細胞之Fc受體依賴性作用的信號傳導。
如上述之抗SIRPα抗體或其抗原結合片段較已知之抗SIRPα抗體更具特異性,並對SIRPαBIT
和SIRPα1
二者顯示出優異之親和性。同樣地,根據本發明之抗SIRPα抗體不與SIRPγ結合。
於一特定之實施態樣中,根據本發明之抗SIRPα抗體包含Fc區,該Fc區與呈現在人免疫效應細胞上之活化的Fc受體結合。該等抗SIRPα抗體適合用於SIRPα陽性人實體腫瘤和血液惡性腫瘤之單一療法中,因為其可誘導ADCC及/或ADCP。人免疫效應細胞具有各種活化的Fc受體,該活化的Fc受體在連接時會引發吞噬作用、細胞因子釋出、ADCC及/或ADCP,等。該等受體之實例為Fcγ受體,例如FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32)、FcγRIIIA (CD16a)、FcγRIIIB(CD16b)、FcγRIIC和Fcα受體FcαRI (CD89)。各種天然抗體同種型與該等受體結合。例如IgG1
與FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIC、FcγRIIIA、FcγRIIIB結合;IgG2
與FcγRIIA、FcγRIIC、FcγRIIIA結合;IgG3
與FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIC、FcγRIIIA、FcγRIIIB結合;IgG4
與FcγRI、FcγRIIA、FcγRIIC、FcγRIIIA結合;及IgA與FcαRI結合。
於一較佳之實施態樣中,根據本發明之抗SIRPα抗體包含IgA或IgG同種型之Fc區。更佳者為包含IgG1
、IgG2
、IgG3
或IgG4
同種型之Fc區的抗SIRPα抗體;再更佳者為包含IgG1
、IgG2
或IgG4
同種型之Fc區的抗SIRPα抗體。最佳者為包含IgG1
同種型之Fc區的抗SIRPα抗體。
雖然該包含與呈現在人免疫效應細胞上之活化的Fc受體結合的Fc區之抗SIRPα抗體可適合用於治療表現SIRPα之癌症,嵌合型抗SIRPαIgG1
抗體當在體外與其他包含人Fc區(該人Fc區可與呈現在人免疫效應細胞上之活化的Fc受體結合)之抗體(即,能夠誘導ADCC及/或ADCP之抗體)組合進行測試時並未顯示出預期之結果。體外ADCC分析之結果顯示使用嵌合型IgG1
抗SIRPα抗體所增加之該等其他抗體之ADCC並不如所預期者,該預期之增加程度係基於稍早使用鼠抗體進行測試之結果。
因此,本發明關於顯示出對呈現在人免疫效應細胞上之活化的Fc受體之結合力降低或低親和力的抗SIRPα抗體。該等抗SIRPα抗體包含經改質之Fc區,相較於類似之未經改質的Fc區,該經改質之Fc區的其中一或多個胺基酸已被其他胺基酸取代。結合力降低意指該包含經改質之Fc區之抗SIRPα抗體對活化的Fc受體的親和力低於具有包含類似之未經改質的Fc區之相同可變區的抗SIRPα抗體的親和力。該抗體對活化的Fc受體的結合親和力通常係使用表面等離子體共振(SPR)或流式細胞術,利用本技藝已知之方法(例如J. Pharm. Biomed. Anal.
2012, 63, 23-28中之Harrison,等人之方法)測量。顯示出對人Fcα或Fcγ受體之結合力降低或低親和力的抗體與治療性抗體之組合藉由增加免疫效應細胞之ADCC及/或ADCP而對癌細胞之細胞破壞特別有效。通常,根據本發明之抗SIRPα抗體之Fc區係經改質以降低與呈現在人免疫效應細胞上之活化的Fc受體的結合力。
因此,根據本發明之抗SIRPα抗體包含經改質之Fc區,該Fc區顯示出對人Fcα或Fcγ受體之結合力降低或低親和力。例如IgG1
與Fcγ受體之結合力可藉由取代一或多個選自由下列所組成之群組的IgG1
胺基酸來降低:L234、L235、G237、D265、D270、N297、A327、P328和P329(Eu編號);IgG2
結合可藉由引入,例如一或多個下列胺基酸取代來降低:V234A、G237A、P238S、H268A、V309L、A330S和P331S;或H268Q、V309L、A330S和P331S(編號類似於IgG1
Eu編號)(Vafaet al. Methods
2014, 65, 114-126);該IgG3
結合可藉由引入,例如胺基酸取代L234A和L235A,或胺基酸取代L234A、L235A和P331S來降低(Leohet al. Mol. Immunol
. 2015, 67, 407-415);且IgG4
結合可藉由引入例如胺基酸取代S228P、F234A和L235A來降低(編號類似於IgG1
Eu編號)(Parekhet al. mAbs
2012, 4(3), 310-318)。IgA與Fcα受體之結合可藉由引入,例如下列一或多個胺基酸取代來降低:L257R、P440A、A442R、F443R和P440R(依序編號,Pleasset al
.J. Biol. Chem.
1999, 271(33), 23508-23514)。
較佳地,根據本發明之抗SIRPα抗體包含顯示出與人Fcγ受體之結合力降低或親和力低之經改質的Fc區。更佳地,該經改質之Fc區為IgG同種型之Fc區。甚至更佳地,該經改質之Fc區為IgG1
、IgG2
或IgG4
同種型之Fc區。
於一較佳之實施態樣中,根據本發明之抗SIRPα抗體包含經改質之人IgG1
Fc區,該IgG1
Fc區包含在一或多個選自由下列所組成之群組的位置處之一或多個胺基酸取代:L234、L235、G237、D265、D270、N297、A327、P328和P329(Eu編號)。
較佳地,該抗SIRPα抗體包含經改質之Fc IgG1
區,該經改質之Fc IgG1
區不包含胺基酸取代N297A或N297G。更佳地,該抗SIRPα抗體包含經改質之Fc IgG1
區,該經改質之Fc IgG1
區不包含在位置N297之胺基酸取代。
於一實施態樣中,該經改質之人IgG1
Fc區包含一或多個選自由下列所組成之群組的胺基酸取代:L234A、L234E、L235A、G237A、D265A、D265E、D265N、D270A、D270E、D270N、N297A、N297G、A327Q、 P328A、P329A和P329G。較佳地,該一或多個胺基酸取代係選自由下列所組成之群組:L234A、L234E、L235A、G237A、D265A、D265E、D265N、N297A、P328A、P329A和P329G。
於另一實施態樣中,該經改質之人IgG1
Fc區包含一或多個選自由下列所組成之群組的胺基酸取代:L234A、L234E、L235A、G237A、D265A、D265E、D265N、D270A、D270E、D270N、A327Q、P328A、P329A和P329G。較佳地,該一或多個胺基酸取代係選自由下列所組成之群組:L234A、L234E、L235A、G237A、D265A、D265E、D265N、P328A、P329A和P329G。更佳地,該經改質之Fc IgG1
區不包含胺基酸取代N297A或N297G。甚至更佳地,該經改質之Fc IgG1
區不包含在位置N297之胺基酸取代。
於一較佳之實施態樣中,該經改質之人IgG1
Fc區包含胺基酸取代L234A和L235A、L234E和L235A、L234A、L235A和P329A或L234A、L235A和P329G。較佳地,該經改質之Fc IgG1
區不包含胺基酸取代N297A或N297G。更佳地,該經改質之Fc IgG1
區不包含在位置N297之胺基酸取代。
於另一較佳之實施態樣中,根據本發明之抗SIRPα抗體包含經改質之人IgG1
Fc區,該經改質之人IgG1
Fc區包含胺基酸取代L234A和L235A或L234E和L235A,較佳為胺基酸取代L234A和L235A。更佳地,該經改質之Fc IgG1
區不包含胺基酸取代N297A或N297G。甚至更佳地,該經改質之Fc IgG1
區不包含在位置N297之胺基酸取代。
本發明進一步關於包含如上述之抗SIRPα抗體和一或多種醫藥上可接受之賦形劑的醫藥組成物。典型之治療性蛋白質(諸如抗體)的藥學配製劑係採用在靜脈內輸注之前需要(水性)溶解(即重構)之凍乾餅(凍乾粉末)形式,或在使用前需要解凍之冷凍(水性)溶液形式。
通常,醫藥組成物係以凍乾餅之形式提供。用於包含在根據本發明之醫藥組成物(在冷凍乾燥之前)中之合適的醫藥上可接受之賦形劑包括緩衝溶液(例如在水中之含有檸檬酸鹽、組胺酸或琥珀酸鹽之鹽類)、凍乾保護劑(例如蔗糖、海藻糖)、張力調節劑(例如氯化鈉)、表面活性劑(例如聚山梨醇酯)和增容劑(例如甘露醇、甘胺酸)。用於凍乾之蛋白質配製劑的賦形劑係根據其在凍乾過程中及在儲存期間防止蛋白質變性之能力選擇。
本發明進一步關於如上述之抗SIRPα抗體或醫藥組成物於作為藥物之用途。
於一實施態樣中,本發明關於如上述之抗SIRPα抗體或醫藥組成物於治療人實體腫瘤和血液惡性腫瘤之用途。本發明之抗SIRPα抗體可用於治療實體腫瘤,諸如乳腺癌、腎癌或黑色素瘤、或血液惡性腫瘤,諸如急性骨髓性白血病(AML)。
於第二實施態樣中,本發明關於用於治療SIRPα陽性之人實體腫瘤和血液惡性腫瘤之抗SIRPα抗體,該抗SIRPα抗體包含與存在於人免疫效應細胞上之活化的Fc受體結合之Fc區。較佳地,該與存在於人免疫效應細胞上之活化的Fc受體結合之Fc區為IgA或IgG同種型。更佳者為包含IgG1
、IgG2
、IgG3
或IgG4
同種型之Fc區的抗SIRPα抗體;該IgG1
、IgG2
或IgG4
同種型為甚至更佳者。最佳者為用於治療SIRPα陽性之人實體腫瘤和血液惡性腫瘤的包含IgG1
同種型之Fc區的抗SIRPα抗體。
於第三實施態樣中,本發明關於將如上述之抗SIRPα抗體或醫藥組成物與一或多種其他抗癌療法組合使用以用於治療人實體腫瘤和血液惡性腫瘤。合適之抗癌療法為手術、化學療法、放射療法、激素療法、標靶療法和免疫療法。如上述之抗SIRPα抗體或醫藥組成物可與一或多種其他抗癌療法同時組合使用或依序組合使用以治療人實體腫瘤和血液惡性腫瘤。特別是,如上述之抗SIRPα抗體或醫藥組成物可在使用一或多種其他抗癌療法後用於治療人實體腫瘤和血液惡性腫瘤。
較佳地,本發明關於將如上述之抗SIRPα抗體或醫藥組成物與一或多種其他抗癌治療劑組合使用以用於治療人實體腫瘤和血液惡性腫瘤。特別是,如上述之抗SIRPα抗體或醫藥組成物可在使用一或多種其他抗癌治療劑後用於治療人實體腫瘤和血液惡性腫瘤。
合適之抗癌治療劑包括化學治療劑、放射治療劑、激素治療劑、標靶治療劑和免疫治療劑。合適之化學治療劑包括烷基化試劑,諸如氮芥(nitrogen mustard)、亞硝基脲(nitrosourea)、四嗪(tetrazine)和氮丙啶(aziridine);抗代謝劑,諸如抗葉酸、氟嘧啶、脫氧核苷類似物和硫嘌呤;抗微管劑,諸如長春花生物鹼(vinca alkaloid)和紫杉烷(taxane)類;拓撲異構酶(topoisomerase)I和II抑制劑;及細胞毒性抗生素,諸如蒽環黴素(anthracycline)和博萊黴素(bleomycin)。
合適之放射治療劑包括放射性同位素,諸如131
I-間碘苄基胍(MIBG)、為磷酸鈉形式之32
P、223
Ra氯化物、89
Sr氯化物和153
Sm二胺四亞甲基膦酸鹽(EDTMP)。
適合作為激素治療劑之藥劑包括激素合成抑制劑,諸如芳香酶抑制劑和GnRH類似物;及激素受體拮抗劑,諸如選擇性雌激素受體調節劑和抗雄激素。
標靶治療劑為干擾涉及腫瘤發生和增殖之特定蛋白質的治療劑且可為小分子藥物;蛋白質,諸如治療性抗體;肽和肽衍生物;或蛋白質-小分子混合體,諸如抗體-藥物共軛物。標靶小分子藥物之實例包括mTor抑制劑,諸如依維莫司(everolimus)、替西羅莫司(temsirolimus)和雷帕黴素(rapamycin);激酶抑制劑,諸如伊馬替尼(imatinib)、達沙替尼(dasatinib)和尼羅替尼(nilotinib);VEGF抑制劑,諸如索拉非尼(sorafenib)和瑞格非尼(regorafenib);和EGFR/HER2抑制劑,諸如吉非替尼(gefitinib)、拉帕替尼(lapatinib)和厄洛替尼(erlotinib)。肽或肽衍生物標靶治療劑之實例包括蛋白酶體抑制劑,諸如硼替佐米(bortezomib)和卡非佐米 (carfilzomib)。
免疫治療劑包括誘導、增強或抑制免疫反應之藥劑,諸如細胞因子(IL-2和IFN-α);免疫調節性醯亞胺藥物,諸如沙利度邁(thalidomide)、來那度邁(lenalidomide)和泊馬度邁(pomalidomide);治療性癌症疫苗,諸如T-VEC(talimogene laherparepvec);基於細胞之免疫治療劑,諸如樹突細胞疫苗、過繼性T細胞和嵌合型抗原受體改質之T細胞;和可在與癌細胞上之與膜結合之配體結合時經由其Fc區引發ADCC/ADCP或CDC之治療性抗體。
較佳地,本發明關於如上述之抗SIRPα抗體或醫藥組成物與一或多種其他抗癌治療劑組合以治療人實體腫瘤和血液惡性腫瘤,其中該抗癌治療劑為標靶治療劑或免疫治療劑。根據本發明之較佳的標靶治療劑為治療性抗體或抗體-藥物共軛物(ADC)。最佳之標靶治療劑為治療性抗體。
本專利說明書全文中使用之術語“治療性抗體”係指如上述定義之適合用於人類療法之抗體或其抗原結合片段。適合用於人類療法之抗體具有足夠用於治療特定之人類疾病的品質、安全性及效力。品質可使用已建立之用於良好生產規範的指南進行評估;安全性和效力通常使用藥物監管機構(例如歐洲藥品管理局(EMA)或美國食品藥物管理局(FDA))已建立之指南進行評估。這些指南為本技藝所熟知。
較佳地,該治療性抗體為由藥物監管機構(諸如EMA或FDA)核准之抗體。大多數監管機構之線上數據庫可供查閱以確定抗體是否已被核准。
本專利說明書全文中使用之術語“ADC”係指經由連接子與如上述定義之抗體或其抗原結合片段共軛結合之細胞毒性藥物。通常,該細胞毒性藥物為高效力的,例如倍癌黴素(duocarmycin)、卡奇黴素(calicheamicin)、吡咯並苯並二氮呯(pyrrolobenzodiazepine)(PBD)二聚體、美登木素生物鹼(maytansinoid)或奥里斯他汀(auristatin)衍生物。該連接子可為可裂解的(例如包含可裂解之二肽纈胺酸-瓜胺酸(vc)或纈胺酸-丙胺酸(va) ),或不可裂解的(例如琥珀醯亞胺基-4-(N-馬來醯亞胺甲基)環己烷-1-羧酸酯(SMCC) )。
通常,用於與根據本發明之抗SIRPα抗體組合的治療性抗體為單特異性或雙特異性抗體或抗體片段,該單特異性或雙特異性抗體或抗體片段包含至少一個與選自由下列所組成之群組的標靶結合之HCVR和LCVR:膜聯蛋白(annexin)A1、B7H3、B7H4、CA6、CA9、CA15-3、CA19-9、CA27-29、CA125、CA242、CCR2、CCR5、CD2、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD37、CD38、CD40、CD44、CD47、CD56、CD70、CD74、CD79、CD115、CD123、CD138、CD203c、CD303、CD333、 CEA、CEACAM、CLCA-1、CLL-1、c-MET、Cripto、CTLA-4、DLL3、EGFL、EGFR、EPCAM、EPh(例如EphA2或EPhB3)、內皮素B受體(ETBR)、FAP、FcRL5(CD307)、FGF、FGFR(例如FGFR3)、FOLR1、GCC、GPNMB、HER2、HMW-MAA、整合素α(例如αvβ3和αvβ5)、IGF1R、TM4SF1(或L6抗原)、Lewis A樣碳水化合物、Lewis X、Lewis Y、LIV1、間皮素(mesothelin)、MUC1、MUC16、NaPi2b、黏連蛋-白4(Nectin-4)、PD-1、PD-L1、PSMA、PTK7、SLC44A4、STEAP-1、5T4抗原(或TPBG、滋養層糖蛋白)、TF(組織因子)、Thomsen -Friedenreich抗原(TF-Ag)、Tag72、TNF、TNFR、TROP2、VEGF、VEGFR和VLA。
較佳者為單特異性治療性抗體。更佳者為針對腫瘤細胞表面上之與膜結合之標靶的抗體。
用於與根據本發明之抗SIRPα抗體組合使用之合適之治療性抗體包括阿崙單抗(alemtuzumab)、貝伐單抗(bevacizumab)、西妥昔單抗(cetuximab)、帕尼單抗(panitumumab)、利妥昔單抗(rituximab)和曲妥珠單抗(trastuzumab)。
用於與根據本發明之抗-SIRPα抗體組合使用之合適的ADC包括曲妥珠單抗美坦辛(trastuzumab emtansine)和本妥昔單抗維朵汀(brentuximab vedotin)。
於一較佳之實施態樣中,本發明關於如上述之抗SIRPα抗體與針對腫瘤細胞表面上之與膜結合的標靶之治療性抗體的組合於上述之用途,該治療性抗體包含與呈現在人免疫效應細胞上之活化的Fc受體結合之人Fc區。
經由與上述該等活化的Fc受體結合,包含與呈現在人免疫效應細胞上之活化的Fc受體結合之人Fc區的治療性抗體可誘導ADCC及/或ADCP。人IgG、IgE或IgA同種型之治療性抗體包含與呈現在人免疫效應細胞上之活化的Fc受體結合之人Fc區。
根據本發明使用之較佳的治療性抗體為IgG或IgA同種型之治療性抗體。更佳者為IgG同種型(例如IgG1
、IgG2
、IgG3
和IgG4
抗體)之治療性抗體。甚至更佳者為IgG1
或IgG2
同種型之治療性抗體。最佳者為IgG1
同種型之治療性抗體。
較佳地,本發明關於與針對腫瘤細胞表面上之與膜結合之標靶的治療性抗體組合使用以用於治療人實體腫瘤和血液惡性腫瘤之人化的抗SIRPα抗體,該人化之抗SIRPα抗體包含選自由下列所組成之群組的HCVR CDR和LCVR CDR: a. SEQ ID NO:1之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:2之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; b. SEQ ID NO:3之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:4之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; c. SEQ ID NO:5之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:6之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; d. SEQ ID NO:7之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:8之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; e. SEQ ID NO:9之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:10之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; f. SEQ ID NO:11之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:12之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; g. SEQ ID NO:13之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:14之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; h. SEQ ID NO:15之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:16之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列;及 i. SEQ ID NO:17之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:18之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; 該治療性抗體包含與呈現在人免疫效應細胞上之活化的Fc受體結合之人Fc區,其中該抗SIRPα抗體包含經改質之Fc區,與包含野生型Fc區之相同抗SIRPα抗體相比較時,其顯示出與人Fcα或Fcγ受體之結合力降低。
於一較佳之實施態樣中,該與治療性抗體組合以用於治療人實體腫瘤和血液惡性腫瘤之人化的抗SIRPα抗體包含經改質之人IgG1
Fc區,該經改質之人IgG1
Fc區在一或多個選自由下列所組成之群組的位置處包含一或多個胺基酸取代:L234、L235、G237、D265、D270、N297、A327、P328和P329(Eu編號)。
較佳地,該與治療性抗體組合以用於治療人實體腫瘤和血液惡性腫瘤之人化的抗SIRPα抗體包含經改質之IgG1
Fc區,該經改質之IgG1
Fc區不包含胺基酸取代N297A或N297G。更佳地,該抗SIRPα抗體包含經改質之Fc IgG1
區,該經改質之Fc IgG1
區不包含在位置N297之胺基酸取代。
於一實施態樣中,該經改質之人IgG1
Fc區包含一或多個選自由下列所組成之群組的胺基酸取代:L234A、L234E、L235A、G237A、D265A、D265E、D265N、D270A、D270E、D270N、N297A、N297G、A327Q、 P328A、P329A和P329G。
於另一實施態樣中,該與治療性抗體組合以用於治療人實體腫瘤和血液惡性腫瘤之人化的抗SIRPα抗體包含經改質之IgG1
Fc區,該經改質之IgG1
Fc區包含一或多個選自由下列所組成之群組的胺基酸取代:L234A、L234E、L235A、G237A、D265A、D265E、D265N、D270A、D270E、D270N、A327Q、P328A、P329A和P329G。較佳地,該一或多個胺基酸取代係選自由下列所組成之群組:L234A、L234E、L235A、G237A、D265A、D265E、D265N、P328、P329A和P329G。更佳地,該經改質之Fc IgG1
區不包含胺基酸取代N297A或N297G。甚至更佳地,該經改質之Fc IgG1
區不包含在位置N297之胺基酸取代。
於一較佳之實施態樣中,該經改質之人IgG1
Fc區包含胺基酸取代L234A和L235A、L234E和L235A、L234A、L235A和P329A或L234A、L235A和P329G。較佳地,該經改質之Fc IgG1
區不包含胺基酸取代N297A或N297G。更佳地,該經改質之Fc IgG1
區不包含在位置N297之胺基酸取代。
於另一較佳之實施態樣中,該與治療性抗體組合以用於治療人實體腫瘤和血液惡性腫瘤之人化的抗SIRPα抗體包含經改質之人IgG1
Fc區,該經改質之人IgG1
Fc區包含胺基酸取代L234A和L235A或L234E和L235A,較佳為胺基酸取代L234A和L235A。更佳地,該經改質之Fc IgG1
區不包含胺基酸取代N297A或N297G。甚至更佳地,該經改質之Fc IgG1
區不包位置N297之胺基酸取代。
於一較佳之實施態樣中,該與針對腫瘤細胞表面上之與膜結合之標靶的治療性抗體組合使用以用於治療人實體腫瘤和血液惡性腫瘤之人化的抗SIRPα抗體包含含有胺基酸取代L234A和L235A之Fc區及HCVR CDR和LCVR CDR,該治療性抗體包含與呈現在人免疫效應細胞上之活化的Fc受體結合之人Fc區,該人化之抗SIRPα抗體的HCVR CDR和LCVR CDR係選自由下列所組成之群組: a. SEQ ID NO:3之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:4之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; b. SEQ ID NO:5之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:6之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; c. SEQ ID NO:7之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:8之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; d. SEQ ID NO:9之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:10之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列;及 e. SEQ ID NO:13之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:14之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列。
於第二較佳之實施態樣中,該用於如上述定義之用途的人化之抗SIRPα抗體包含含有胺基酸取代L234A和L235A之Fc區及選自由下列所組成之群組的HCVR CDR和LCVR CDR: a. SEQ ID NO:5之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:6之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列; b. SEQ ID NO:7之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:8之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列;及 c. SEQ ID NO:13之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:14之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列。
於第三較佳之實施態樣中,該用於如上述定義之用途的人化之抗SIRPα抗體包含含有胺基酸取代L234A和L235A之Fc區及選自由下列所組成之群組的HCVR CDR和LCVR CDR: a. SEQ ID NO:7之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:8之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列;及 b. SEQ ID NO:13之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列及SEQ ID NO:14之CDR1、CDR2和CDR3胺基酸序列。
於第四較佳之實施態樣中,該用於如上述定義之用途的人化之抗SIRPα抗體包含含有胺基酸取代L234A和L235A之Fc區,及 a. SEQ ID NO:30之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:31之LCVR胺基酸序列; b. SEQ ID NO:32之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:33之LCVR胺基酸序列; c. SEQ ID NO:34之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:8之LCVR胺基酸序列; d. SEQ ID NO:35之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:36之LCVR胺基酸序列; e. SEQ ID NO:35之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:37之LCVR胺基酸序列; f. SEQ ID NO:13之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:38之LCVR胺基酸序列;或 g. SEQ ID NO:13之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:37之LCVR胺基酸序列。
於一較佳之實施態樣中,該用於如上述定義之用途的人化之抗SIRPα抗體包含含有胺基酸取代L234A和L235A之Fc區及SEQ ID NO:30之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:31之LCVR胺基酸序列。更佳地,該經改質之Fc IgG1
區不包含胺基酸取代N297A或N297G。甚至更佳地,該經改質之Fc IgG1
區不包含在位置N297之胺基酸取代。
於另一較佳之實施態樣中,該用於如上述定義之用途的人化之抗SIRPα抗體包含含有胺基酸取代L234A和L235A之Fc區及SEQ ID NO:32之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:33之LCVR胺基酸序列。
再於另一較佳之實施態樣中,該用於如上述定義之用途的人化之抗SIRPα抗體包含含有胺基酸取代L234A和L235A之Fc區及SEQ ID NO:34之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:8之LCVR胺基酸序列。
再於另一較佳之實施態樣中,該用於如上述定義之用途的人化之抗SIRPα抗體包含含有胺基酸取代L234A和L235A之Fc區及SEQ ID NO:35之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:36之LCVR胺基酸序列。
再於另一較佳之實施態樣中,該用於如上述定義之用途的人化之抗SIRPα抗體包含含有胺基酸取代L234A和L235A之Fc區及SEQ ID NO:35之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:37之LCVR胺基酸序列。
再於另一較佳之實施態樣中,該用於如上述定義之用途的人化抗SIRPα抗體包含Fc區,該Fc區包含胺基酸取代L234A和L235A,及SEQ ID NO:13之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:38之LCVR胺基酸序列。
再於另一較佳之實施態樣中,該用於如上述定義之用途的人化之抗SIRPα抗體包含含有胺基酸取代L234A和L235A之Fc區及SEQ ID NO:13之HCVR胺基酸序列和SEQ ID NO:37之LCVR胺基酸序列。
更佳地,該用於如上述定義之用途的人化之抗SIRPα抗體包含Fc區,該Fc區包含胺基酸取代L234A和L235A,該經改質之Fc IgG1
區不包含胺基酸取代N297A或N297G。甚至更佳地,該經改質之Fc IgG1
區不包含位置N297之胺基酸取代。
當與包含野生型Fc區之相同抗SIRPα抗體相比較時,該包含顯示出與人Fcα或Fcγ受體之結合降低之經改質之Fc區的抗SIRPα抗體增強治療性抗體對SIRPαBIT
或SIRPα1
之體外ADCC,其使用來自不同供體純合子之嗜中性粒細胞作為效應細胞。所有這些抗體均可利用大部分供體之嗜中性粒細胞來增加體外ADCC,較佳之抗體甚至可利用所有供體之嗜中性粒細胞來增加體外ADCC。 [實施例]免疫方案和選擇
以代表人(hu)SIRPαBIT
、人(hu)SIRPα1
和食蟹猴(cy)SIRPα之胞外結構域區域的肽混合物將兔子反復免疫化。在不同的時間點收集血液並使其富含淋巴細胞。將單一B細胞置入微量滴定盤之單一孔中。將這些B細胞在條件培養基和飼養細胞之存在下培養數天。在此期間,它們產生單株抗體並將其釋放入培養基中(B細胞上清液)。分析這些單一B細胞之上清液中之IgG產生情況;隨後測定huSIRPαBIT
和huSIRPα1
、cySIRPα與抗Fc抗體之特異性結合。合適之上清液為與huSIRPαBIT
和huSIRPα1
二者及與cySIRPα結合者。成功挑選後,測量與鼠(mu)SIRPα和huSIRPß1V1
、huSIRPß1V2
和huSIRPγ(作為抗標靶)之結合。此外,測定與過度表現SIRPαBIT
和SIRPα1
之CHO細胞的結合。應用與親本CHO細胞之結合作為對照分析。
選擇用於RNA分離、逆轉錄和測序之合適之B細胞裂解物。基因合成抗體輕鏈和重鏈之獨特的可變區並分別選殖在抗體恆定區序列(κLC SEQ ID NO:26和人IgG1
HC-LALA形式SEQ ID NO:27)前面。
在Tecan Freedom Evo平台上使用自動化程序以含有抗體序列之質粒瞬時轉染HEK 293細胞。在具有盤自動進樣器之Dionex Ultimate 3000 HPLC系統上使用親和力純化法(蛋白A)從細胞上清液中純化免疫球蛋白。在ELISA型分析中測試所產生之抗體(ELISA:huSIRPα1
、huSIRPαBIT
、cySIRPα、muSIRPα、huSIRPβ1V1
/β1V2
/γ;細胞結合分析:huSIRPα1
、huSIRPαBIT
)。瞬時表現抗體
a) cDNA構建體和表現載體之製備方法 將抗體之HCVR胺基酸序列各自在N-端連接前導序列(抗體1至9、15、16為SEQ ID NO:28;抗體10至14為SEQ ID NO:39)及在C端連接根據SEQ ID NO:27之人IgG1
HC LALA的恆定結構域。將抗體12C4huIgG1
LALA、12C4 huIgG1
或29AM4-5huIgG1
LALA之HCVR胺基酸序列各自在N端連接HAVT20前導序列(SEQ ID NO:29)及在C端連接根據SEQ ID NO:27之人IgG1
HC LALA或野生型人IgG1
HC (SEQ ID NO:25)之恆定結構域。將所產生之嵌合型胺基酸序列逆轉譯成經優化以在人細胞(智人(Homo sapiens
))中表現之cDNA序列密碼子。類似地,藉由將前導序列(抗體1至9、12為SEQ ID NO:28;抗體10、11、13至16為SEQ ID NO:40;12C4huIgG1
LALA、12C4huIgG1
和29AM4-5huIgG1
LALA為SEQ ID NO:29)之序列在N端連接抗體1至16、12C4huIgG1
LALA和12C4huIgG1
及29AM4-5huIgG1
LALA之LCVR及在C端連接人IgG1
κ輕鏈恆定區(SEQ ID NO:26)來取得該構建體之LC的嵌合型cDNA序列。使用根據表1之HCVR和LCVR序列。
b) 載體建構和選殖策略 為了表現抗體鏈,使用哺乳動物表現載體,該哺乳動物表現載體含有CMV:BGHpA表現盒。將含有HC或LC表現盒之最終載體(分別為CMV:HC:BGHpA和CMV:LC-BGHpA)轉移入大腸桿菌NEB 5-α細胞中並在其中擴增。使用Maxiprep或Megaprep套組(Qiagen)進行大規模生產用於轉染之最終表現載體。
c) 在哺乳動物細胞中瞬時表現 根據如下述之製造商的說明,使用ExpiFectamine轉染劑,以表現載體轉染市售之Expi293F細胞(Thermo Fisher):將75x107
個細胞接種在300mL FortiCHO培養基中,將300μg之表現載體與800μl之ExpiFectamine轉染劑合併並加入細胞中。轉染後一天,在培養物中加入1.5 ml之增強劑1(Enhancer1)和15 ml之增強劑2。轉染後6天,藉由在4,000g離心15分鐘來收穫細胞培養物之上清液並將該澄清之收穫物在PES瓶過濾器/MF 75過濾器(Nalgene)上過濾。抗體結合和特異性 實驗性
ELISA分析:將在磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中之huSIRPα1
、huSIRPαBIT
、huSIRPß1V1
、huSIRPß1V2
、huSIRPγ和cySIRPα的溶液分別加入用於ELISA之多孔黑色聚苯乙烯盤中並令其在室溫下黏附1小時。使用標準洗滌緩衝液藉由三個洗滌步驟除去未結合之蛋白質。隨後,在孔中加入阻斷緩衝液。在室溫下培育1小時後,以標準洗滌緩衝液洗滌孔三次。將在緩衝液中之各種濃度的抗體加入孔中並在室溫下培育1小時。使用標準洗滌緩衝液藉由三個洗滌步驟除去未結合之抗體。將在緩衝液中之山羊抗人IgG(Fab')2
:辣根過氧化物酶(HRP)加入孔中並在室溫下培育1小時。加入3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB)並在充分顯色後加入HCl。在450nm/620nm處讀取吸光度。
表面等離子體共振(SPR)分析:在表面等離子體共振裝置(Biacore T200系統,GE Life Sciences)上,在25℃下藉由單循環動力學分析進行親和力分析。先以10μL/min之流速注入鏈親和素共軛物(20倍稀釋之生物素CAPture試劑,GE Life Sciences)60秒,再以10μL/min之流速注入在運行緩衝液(pH 7.4之10 mM HEPES緩衝液,其具有150 mM NaCl、3 mM EDTA和0.005% v/v聚氧乙烯(20)山梨醇酐單月桂酸酯(表面活性劑P20))中之5μg/ml SIRP抗原60秒以將生物素化之SIRP抗原捕捉在適合生物素化之分子的芯片表面上(Sensor Chip CAP,GE Life Sciences)。基線穩定設定在1分鐘,然後注入在運行緩衝液(pH 7.4之10 mM HEPES緩衝液,其具有150 mM NaCl、3 mM EDTA和0.005% v/v聚氧乙烯(20)山梨醇酐單月桂酸酯)中之5種漸增濃度之抗SIRP抗體。每個步驟使用150秒之結合時間,然後僅在最高濃度下解離1200秒,所有步驟之流速均為30μL/min。以6M胍-HCl、0.25M NaOH溶液(60秒,流速為30μL/ min)進行再生。使用非抗SIRP(空白)固定之參考流體道和運行之緩衝液注射,在觀察到之傳感圖上進行雙重空白減法。以所有測試之抗SIRP抗體之1:1 Langmuir模型與傳感圖擬合。使用Biacore T200評估軟體(v3.1)計算動力學參數(ka
、kd
和KD
)。
流式細胞術:以冰冷之FACS緩衝液(含有0.2% v/w BSA(Sigma-Aldrich,密蘇里州聖路易市)和0.02% v/w NaN3
(Sigma-Aldrich)之1x PBS(LONZA))洗滌內源性表現人SIRPαBIT
抗原之U937細胞和源自非經工程處理之分殖株的細胞(100,000個細胞/孔(96孔板)),該源自非經工程處理之分殖株的細胞已經過篩選且係從表現人SIRPα1
、SIRPαBIT
或cySIRPα抗原之CHO-S中國倉鼠卵巢細胞(ExpiCHO-S)中分離出,接著,加入在冰冷之FACS緩衝液中稀釋之一系列濃度之各初級mAb(50μL/孔)。在4℃溫育30分鐘後,以冰冷之FACS緩衝液洗滌細胞三次並加入50μL/孔之二級mAb(AffiniPure F(ab')2
片段山羊抗人IgG-APC,1:6,000稀釋,Jackson Immuno Research)。在4℃下30分鐘後,將細胞洗滌二次並重新懸浮於150μL FACS緩衝液中。藉由流式細胞術(BD FACSVerse,紐澤西州Franklin Lakes)測定螢光強度並以U937細胞和ExpiCHO-S細胞之中位數螢光強度(MFI-中位數)指示。曲線係使用GraphPad Prism(用於Windows之版本7.02,GraphPad,加州聖地牙哥)中具可變斜率之S形劑量-反應程式(四個參數)藉由非線性回歸擬合。計算EC50
值,該EC50
值為當使用4-參數對數擬合時產生介於曲線底部與頂部中間之反應的濃度(以μg/mL計)。結果
ELISA分析:藉由ELISA取得之抗體1至9和參考抗體與huSIRPα1
、huSIRPαBIT
、huSIRPß1
、huSIRPß1V2
、huSIRPγ、cySIRPα結合的EC50
值總結於表2中。所有抗體均與huSIRPα1
和huSIRPαBIT
結合。抗體29AM4-5huIgG1
LALA和12C4huIgG1
LALA與huSIRPß1V1
、huSIRPß1V2
和huSIRPγ結合。抗體2至6、8和9顯示出對huSIRPß1V1
和huSIRPγ之親和力低。抗體7與huSIRPß1V1
結合,但對於huSIRPß1V2
和huSIRPγ之親和力低。抗體1與huSIRPß1V2
和huSIRPγ結合。
SPR分析:與參考抗體KWAR23、huIgG1
12C4LALA和SE5A5(從商品供應商購得)相比較,抗體4、7、10至14與huSIRPα1
、huSIRPαBIT
和huSIRPγ結合之KD
值總結於表3中。抗體4、7、10至14與huSIRPα1
和huSIRPαBIT
二者結合,但不與huSIRPγ結合。所有參考抗體均與huSIRPγ結合。
流式細胞術分析:藉由流式細胞術測定各種抗體與表現在細胞上之huSIRPα1
、huSIRPαBIT
及/或cySIRPα之結合。該結合係以EC50
值指示,該EC50
值顯示於表4中。抗體2、4、5、7、8、10至14與huSIRPα1
、huSIRPαBIT
及cySIRPα結合。抗體2、4、5、7、8、10至14以低μg/mL範圍與cySIRPα結合。 抗體阻斷CD47-SIRPα結合試驗性
將經SIRPα1
或SIRPαBIT
轉染之CHO細胞或作為對照組之親本CHO細胞接種於在具有透明底部之有孔盤中的20μl細胞培養基中並培育過夜。將抗體1至9、29AM4-5huIgG1
LALA或12C4huIgG1
LALA參考抗體與His標籤® CD47和抗His標籤®螢光偵測抗體之混合物一起加入孔中並培育2小時。培育後,以細胞洗滌緩衝液洗滌細胞。使用篩選系統(CellInsight®,Thermo Scientific®)測定螢光並測定每一細胞之總螢光。結果
抗體29AM4-5huIgG1
LALA、12C4huIgG1
LALA、3和7完全阻斷CD47與表現huSIRPα1
之CHO細胞和表現huSIRPαBIT
之CHO細胞二者結合,抗體1、2、4至6、8和9既不會阻斷CD47與表現huSIRPα1
之CHO細胞結合,亦不會阻斷CD47與表現huSIRPαBIT
之CHO細胞結合。 ADCC分析
根據Chaoet al. PNAS
2011, 108(45), 18342-18347中之方法將用於SIRPα1
或SIRPαBIT
之供體純合子的中性粒細胞分離出並進行培養。使用51
Cr釋出分析或非放射性銪TDA(EuTDA)細胞毒性分析(DELFIA,PerkinElmer)測定ADCC。使用SKBR3細胞作為靶細胞並在37℃下以100μCi51
Cr(Perkin-Elmer)標記90分鐘,或在37℃下以雙(乙醯氧基甲基)2,2':6',2"-三聯吡啶-6,6"-二羧酸酯(BATDA試劑Delfia)標記5分鐘。以PBS洗滌2次後,將每孔5×103
個靶細胞在適當之抗體的存在下,在37℃和5% CO2
下與嗜中性粒細胞(效應細胞:靶細胞 50:1)一起在96孔U型底盤中,在補充有10%(v/v)胎牛血清(FCS)之IMDM培養基中培育4小時。培育後,收集上清液並在γ計數器(Wallac)中分析放射性,或將上清液加入銪溶液(DELFIA,PerkinElmer)中並使用分光螢光計(Envision,PerkinElmer)測定銪2,2':6',2"-三聯吡啶-6,6"-二羧酸(EuTDA)螢光。細胞毒性百分比之計算方法為[(實驗釋出-自發性釋出)/(總釋出-自發性釋出)]×100%。所有條件均以一式二份及/或一式三份測量。12C4huIgG1
LALA 相對於 12C4IgG1 之 ADCC 數據
第1圖顯示ADCC分析之結果,該結果係以%細胞毒性表示。使用嗜中性粒細胞作為效應細胞和單獨之曲妥珠單抗在SKBR3細胞上所測得之%細胞毒性小於曲妥珠單抗與鼠12C4抗體(m12C4)之組合的細胞毒性%。曲妥珠單抗與其中12C4可變區被移植到人IgG1
恆定區上之抗體(12C4huIgG1
)的組合顯示出在低濃度之12C4huIgG1
下,與單獨之曲妥珠單抗相比較時具有類似之%細胞毒性。在較高濃度之12C4huIgG1
下可觀察到細胞毒性%降低。曲妥珠單抗與其中12C4可變區被移植到包含胺基酸取代L234A和L235A之人IgG1
恆定區上之抗體(12C4huIgG1
LALA)的組合顯示出與單獨之曲妥珠單抗之%細胞毒性相比較,%細胞毒性增加且與12C4huIgG1
和曲妥珠單抗之組合相比較,%細胞毒性增加。ADCC 數據
第2圖比較相對於曲妥珠單抗(其% ADCC設為100%),由人中性粒細胞引起之%ADCC,該比較係將具有包含胺基酸取代L234A和L235A(LALA)之人IgG1
恆定區的抗體1至9與曲妥珠單抗之組合存在時之%ADCC與當12C4huIgG1
LALA和曲妥珠單抗之組合存在時之%ADCC相比較來進行。分別使用B6H12IgG1
LALA(其具有小鼠抗CD47抗體之VR和包含胺基酸取代L234A和L235A之人IgG1
恆定區)和載劑(無曲妥珠單抗)作為陽性和陰性對照組。實心方塊(■)為以具有SIRPαBIT
變體之供體(用於SIRPαBIT
之純合子)的嗜中性粒細胞測量之數值,空心圓(○)為以具有SIRPα1
變體之供體(用於SIRPα1
之純合子)的嗜中性粒細胞測量之數值。與單獨之曲妥珠單抗相比較,所有抗體之平均ADCC增加。在抗體1、2、4、5、7和8方面,平均ADCC增加之加強度甚至超越由12C4huIgG1
LALA所造成之ADCC增加。當比較每一供體每一抗體之ADCC增加程度時,相較於12C4huIgG1
LALA,抗體1、3至6、8和9顯示出% ADCC增加之變化較小。
第3圖比較由人中性粒細胞引起之%ADCC,該比較係將各種濃度之嵌合型抗體4和7及具有包含胺基酸取代L234A和L235A(LALA)之人IgG1
恆定區的人化抗體10和14與曲妥珠單抗之組合存在時之%ADCC與單獨之曲妥珠單抗及曲妥珠單抗與各種濃度之12C4huIgG1
LALA之組合存在時之%ADCC相比較來進行。使用用於SIRPαBIT
之二個供體純合子的中性粒細胞。即使在低濃度下,抗體4、7、10和14仍增加ADCC。該ADCC增加為濃度倚賴性。
第4圖比較由人中性粒細胞引起之%ADCC,該比較係將在抗體4、7、10、13、14、15和16與曲妥珠單抗(Tmab)之組合的存在下由人中性粒細胞引起之%ADCC與在單獨之曲妥珠單抗及12C4huIgG1
LALA與曲妥珠單抗(Tmab)之組合的存在下由人中性粒細胞引起之ADCC%進行比較。與單獨之曲妥珠單抗相比較,所有抗體均增加ADCC。在抗體4、7、10、13、14、15和16與曲妥珠單抗之組合的存在下,大多數供體之嗜中性粒細胞所增加之ADCC類似或高於12C4huIgG1
LALA與曲妥珠單抗之組合所引起之ADCC增加。序列表,重鏈 (HC) 和輕鏈 (LC) 可變區 (VR) 胺基酸序列中之 CDR1 、 CDR2 和 CDR3 胺基酸序列下方劃線 ( 使用 Kabat 法決定 )
第1圖. 比較以%細胞毒性測量之單獨之曲妥珠單抗(Tmab)、曲妥珠單抗與鼠12C4抗SIRPα抗體(mu12C4)之組合、曲妥珠單抗與其中鼠12C4可變區被移植到人IgG1
恆定區上之抗體(12C4huIgG1
)的組合及曲妥珠單抗與其中鼠12C4可變區被移植到包含胺基酸取代L234A和L235A之人IgG1
恆定區上的抗體(12C4huIgG1
LALA)之組合的ADCC,該測量係在SKBR3 HER2陽性乳癌細胞上使用人嗜中性粒細胞作為效應細胞進行測量。
第2圖. 相對於曲妥珠單抗(設為100%),比較曲妥珠單抗與具有包含胺基酸取代L234A和L235A之人IgG1
恆定區的抗SIRPα抗體1-9之組合、與抗SIRPα抗體12C4huIgG1
LALA(12C4LALA)之組合和與抗CD47抗體B6H12huIgG1
LALA(B6H12LALA)之組合在SKBR3細胞之%ADCC。實心方塊(■)為使用具有SIRPαBIT
變體之供體的嗜中性粒細胞測量之數值,空心圓(○)為使用具有SIRPα1
變體之供體的嗜中性粒細胞測量之數值。縱列(column)為所有供體之平均值;誤差條代表標準偏差。
第3圖. 相對於單獨之曲妥珠單抗,比較曲妥珠單抗與各種濃度之抗SIRPα抗體4、7、10、14(其具有包含胺基酸取代L234A和L235A之人IgG1
恆定區)(劑量反應曲線)之組合及與抗SIRPα抗體12C4huIgG1
LALA (12C4LALA)之組合在SKBR3細胞之% ADCC。具有SIRPαBIT變體之二個供體的嗜中性粒細胞(△,○)。縱列為該二個供體之平均值。
<110> 荷蘭商辛頌生物製藥公司(Synthon Biopharmaceuticals B.V.)
<120> 抗訊號調節蛋白α(SIRP α)抗體
<140> TW 107116450
<141> 2018-05-15
<140> EP 17171285.4
<141> 2017-05-16
<160> 40
<170> BiSSAP 1.3.6
<210> 1
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:1(HC VR 1)
<210> 2
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:2(LC VR 1)
<210> 3
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:3(HC VR 2)
<210> 4
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:4(LC VR 2)
<210> 5
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:5(HC VR 3)
<210> 6
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<210> 7
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:7(HC VR 4)
<210> 8
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:8(LC VR 4)
<210> 9
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:9(HC VR 5)
<210> 10
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:10(LC VR 5)
<210> 11
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:11(HC VR 6)
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<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:12(LC VR 6)
<210> 13
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<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:13(HC VR 7)
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<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
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<220>
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<220>
<223> SEQ ID NO:16(LC VR 8)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:18(LC VR 9)
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<220>
<223> SEQ ID NO:19(HC VR 29AM4-5)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:20(LC VR 29AM4-5)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:21(HC VR 12C4)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:22(LC VR 12C4)
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<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:23(HC KWAR23)
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<212> PRT
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<220>
<223> SEQ ID NO:24(LC VR KWAR23)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:25(人IgG1抗體HC恆定區)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:26(人IgG抗體LC恆定區)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:27(人IgG1抗體HC恆定區LALA突變體)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:28(前導序列抗體1-9)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:29(HAVT20前導序列)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:30(HC VR 10)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:31(LC VR 10)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:32(HC VR 11)
<210> 33
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:33(LC VR 11)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:34(HC VR 12)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:35(HC VR 13+14)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:36(LC VR 13)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:37(LC VR 14+16)
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:38(LC VR 15)
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<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:39(前導序列重鏈10-14)
<210> 40
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO:40(前導序列輕鏈10、11及13-16)
Claims (15)
- 一種抗訊號調節蛋白α(SIRPα)抗體或其抗原結合片段,該抗SIRPα抗體或其抗原結合片段包含重鏈(HC)可變區(VR)互補決定區(CDR)1、2及3和輕鏈(LC)可變區(VR)互補決定區(CDR)1、2及3,其中:a.HCVR CDR1係由胺基酸序列HGIS組成;b.HCVR CDR2係由胺基酸序列TIGTGVITYFASWAKG組成;c.HCVR CDR3係由胺基酸序列GSAWNDPFDP組成;d.LCVR CDR1係由胺基酸序列QASQSVYGNNDLA組成;e.LCVR CDR2係由胺基酸序列LASTLAT組成;且f.LCVR CDR3係由胺基酸序列LGGGDDEADNV組成,其中該等CDR係根據Kabat編號決定。
- 如申請專利範圍第1項之抗SIRPα抗體或其抗原結合片段,其為嵌合型、人化或人抗體。
- 如申請專利範圍第2項之抗SIRPα抗體或其抗原結合片段,其為人化抗體。
- 如申請專利範圍第3項之抗SIRPα抗體或其抗原結合片段,其包含a.SEQ ID NO:35之HCVR胺基酸序列及SEQ ID NO:36之LCVR胺基酸序列;b.SEQ ID NO:35之HCVR胺基酸序列及SEQ ID NO:37之LCVR胺基酸序列;c.SEQ ID NO:13之HCVR胺基酸序列及SEQ ID NO:38之LCVR胺基酸序列;或d.SEQ ID NO:13之HCVR胺基酸序列及SEQ ID NO:37之LCVR胺基酸序列。
- 如申請專利範圍第1至4項中任一項之抗SIRPα抗體或其抗原結合片段,其包含經改質之Fc區,該包含經改質之Fc區之抗SIRPα抗體與包含野生型Fc區之相同抗SIRPα抗體相比較顯示與人Fcα或Fcγ受體之結合減低。
- 如申請專利範圍第5項之抗SIRPα抗體或其抗原結合片段,其包含經改質之人IgG1 Fc區,該經改質之人IgG1 Fc區在一或多個選自由下列所組成之群組的位置包含胺基酸取代:根據Eu編號之L234、L235、G237、D265、D270、N297、A327、P328和P329。
- 如申請專利範圍第6項之抗SIRPα抗體或其抗原結合片段,其包含胺基酸取代L234A和L235A;L234E和L235A; L234A、L235A和P329A;或,L234A、L235A和P329G。
- 如申請專利範圍第7項之抗SIRPα抗體或其抗原結合片段,其包含胺基酸取代L234A和L235A、或L234E和L235A。
- 一種醫藥組成物,其包含如申請專利範圍第1至8項中任一項之抗SIRPα抗體或其抗原結合片段及一或多種醫藥上可接受之賦形劑。
- 如申請專利範圍第9項之醫藥組成物,其係用於作為藥物。
- 如申請專利範圍第9項之醫藥組成物,其係用於治療人實體腫瘤或血液惡性腫瘤。
- 一種如申請專利範圍第1至8項中任一項之抗SIRPα抗體或其抗原結合片段或如申請專利範圍第9項之醫藥組成物與一或多種其他抗癌治療劑之組合物,該組合物係用於治療人實體腫瘤或血液惡性腫瘤。
- 如申請專利範圍第12項之組合物,其中該一或多種其他抗癌治療劑為標靶治療劑或免疫治療劑。
- 如申請專利範圍第13項之組合物,其中該標靶治療劑為治療性抗體或抗體-藥物軛合物。
- 如申請專利範圍第14項之組合物,其中該治療性抗體為針對腫瘤細胞表面上之與膜結合的標靶之治療性抗體,其包含與呈現在人免疫效應細胞上之活化的Fc受體結合之人Fc區。
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