JP2021529520A - 抗ｓｉｒｐ−ベータ１抗体及びその使用方法 - Google Patents

抗ｓｉｒｐ−ベータ１抗体及びその使用方法 Download PDF

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Abstract

本開示は、概して、ＳＩＲＰβ１ポリペプチド、例えばヒトＳＩＲＰβ１に特異的に結合する抗体、例えばモノクローナル抗体、抗体断片などを含む組成物、及びそのような組成物の、それを必要とする個体を予防する、リスクを低減する、又は処置することにおける使用に関する。【選択図】図１３

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年６月２９日に出願された米国仮出願第６２／６９１９１３号の利益を主張し、これは、あらゆる目的のために全内容が本明細書において出典明示により援用される。
本開示は、抗ＳＩＲＰβ１抗体及び同抗体の治療的使用に関する。
シグナル調節タンパク質ベータ（ＳＩＲＰβ）は、膜貫通受容体のＳＩＲＰファミリーに属しており、骨髄系細胞（単球、マクロファージ、顆粒球、樹状細胞を含む）及び神経細胞内で発現する。ＳＩＲＰファミリーのタンパク質は、２つの膜近位ＩｇＣドメインと１つの遠位ＩｇＶドメインとを含む細胞外領域によって特徴付けられる。ＳＩＲＰα受容体とは異なり、ＳＩＲＰβタンパク質には、タンパク質チロシンホスファターゼＳＨＰ−２及びＳＨＰ−１を動員できる細胞質配列モチーフを欠く短い細胞質ドメインが含まれる。ＳＩＲＰβ１アイソフォーム１は、単一の細胞質免疫受容体チロシンベースの活性化（ＩＴＡＭ）モチーフを含むアダプタータンパク質ＤＡＰ１２と結合している。例えば、Ｄｉｅｔｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ．２０００，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４：９−１２；Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．２００５ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８０：３６１３２−３６１４０参照。ＳＩＲＰβは、アルツハイマー病における食作用のミクログリアモジュレーターであることが示されている。例えば、Ｇａｉｋｗａｄ ｅｔ ａｔ．２００９ Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ １７５：２５２８−２５３９参照。
したがって、ＳＩＲＰβ１活性に関連する疾患、障害及び状態を治療するための治療用抗ＳＩＲＰβ１抗体が必要である。
いくつかの実施態様において、ヒトＳＩＲＰβ１に結合する単離された抗体が提供され、該抗体は、以下の特性から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、又は少なくとも５つの特性を有する。
ａ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰαには結合しない。
ｂ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰγには結合しない。
ｃ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム３には結合しない。
ｄ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、マウスＳＩＲＰβ１には結合しない。
ｅ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、カニクイザルＳＩＲＰβ１アイソフォーム１には結合しない。
ｆ） ＣＤ１４陽性単球に対するＳＩＲＰβ１活性をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏでアゴナイズする。
ｇ） 好中球及び／又は単球などの免疫細胞における呼吸性バーストをｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる。
ｈ） 単球におけるＩＬ−８発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる。
ｉ） マクロファージ及び／又は樹状細胞におけるＴＮＦα発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる。
ｊ） 例えば腫瘍細胞の、好中球を介した食作用をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導する。
ｋ） 好中球を介した腫瘍細胞のクリアランスをｉｎ ｖｉｖｏで増加させる。
ｌ） マクロファージ上のＴＲＥＭ２発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで増加させる。
ｍ） 単独で及び／又はアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体との組み合わせで、マクロファージの生存能力をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで増加させる。
ｎ） 樹状細胞の生存能力をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで増加させる。
いくつかの実施態様において、抗体は、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰα又はヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム３には結合しない。いくつかの実施態様において、抗体は、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰα、ＳＩＲＰγ又はヒトβ１アイソフォーム３には結合しない。いくつかの実施態様において、抗体は、以下の特性から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は少なくとも３つの特性を有する。
ａ） ＣＤ１４陽性単球に対するＳＩＲＰβ１活性をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏでアゴナイズする。
ｂ） 好中球及び／又は単球などの免疫細胞における呼吸性バーストをｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる。
ｃ） 単球におけるＩＬ−８発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる。
ｄ） マクロファージ及び／又は樹状細胞におけるＴＮＦα発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる。
ｅ） 例えば腫瘍細胞の、好中球を介した食作用をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導する。
ｏ） 好中球を介した腫瘍細胞のクリアランスをｉｎ ｖｉｖｏで増加させる。
ｐ） マクロファージ上のＴＲＥＭ２発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで増加させる。
ｑ） 単独で及び／又はアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体との組み合わせで、マクロファージの生存能力をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで増加させる。
ｆ） 樹状細胞の生存能力をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで増加させる。
いくつかの実施態様では、ヒトＳＩＲＰβ１に結合する単離抗体が提供され、ここで、該抗体は重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域は、（ａ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｌ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｌ２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；並びに（ｆ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｌ３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施態様では、重鎖可変領域は、表６に示すＦＲ１、ＶＨＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３及びＶＨ ＦＲ４から選択される１つ、２つ、３つ又は４つのフレームワーク領域を含む。いくつかの実施態様では、軽鎖可変領域は、表５に示すＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３及びＶＬ ＦＲ４から選択される１つ、２つ、３つ又は４つのフレームワーク領域を含む。
いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１０、ＳＢ−１１、ＳＢ−１２、ＳＢ−１３、ＳＢ−１４、ＳＢ−１５、ＳＢ−１６、ＳＢ−１７、ＳＢ−１８、ＳＢ−１９、ＳＢ−２０、ＳＢ−２１、ＳＢ−２２、ＳＢ−２３、ＳＢ−２４、ＳＢ−２５、ＳＢ−２６、ＳＢ−２７、ＳＢ−２８、ＳＢ−２９、ＳＢ−３０、ＳＢ−３１、ＳＢ−３２、ＳＢ−３３、ＳＢ−３４、ＳＢ−３５、ＳＢ−３６、ＳＢ−３７、ＳＢ−３８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４１、ＳＢ−４２、ＳＢ−４３、ＳＢ−４４、ＳＢ−４５、ＳＢ−４６、ＳＢ−４７、ＳＢ−４８、ＳＢ−４９、ＳＢ−５０、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３（表３、４、８及び９に示す）を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、又は３８２から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、又は３８２から選択される重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３３４、３３６、３３８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、又は３７０から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３３４、３３６、３３８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、又は３７０から選択される軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１０、ＳＢ−１１、ＳＢ−１２、ＳＢ−１３、ＳＢ−１４、ＳＢ−１５、ＳＢ−１６、ＳＢ−１７、ＳＢ−１８、ＳＢ−１９、ＳＢ−２０、ＳＢ−２１、ＳＢ−２２、ＳＢ−２３、ＳＢ−２４、ＳＢ−２５、ＳＢ−２６、ＳＢ−２７、ＳＢ−２８、ＳＢ−２９、ＳＢ−３０、ＳＢ−３１、ＳＢ−３２、ＳＢ−３３、ＳＢ−３４、ＳＢ−３５、ＳＢ−３６、ＳＢ−３７、ＳＢ−３８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４１、ＳＢ−４２、ＳＢ−４３、ＳＢ−４４、ＳＢ−４５、ＳＢ−４６、ＳＢ−４７、ＳＢ−４８、ＳＢ−４９、ＳＢ−５０、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域と、上記抗体の軽鎖可変領域と９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１０、ＳＢ−１１、ＳＢ−１２、ＳＢ−１３、ＳＢ−１４、ＳＢ−１５、ＳＢ−１６、ＳＢ−１７、ＳＢ−１８、ＳＢ−１９、ＳＢ−２０、ＳＢ−２１、ＳＢ−２２、ＳＢ−２３、ＳＢ−２４、ＳＢ−２５、ＳＢ−２６、ＳＢ−２７、ＳＢ−２８、ＳＢ−２９、ＳＢ−３０、ＳＢ−３１、ＳＢ−３２、ＳＢ−３３、ＳＢ−３４、ＳＢ−３５、ＳＢ−３６、ＳＢ−３７、ＳＢ−３８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４１、ＳＢ−４２、ＳＢ−４３、ＳＢ−４４、ＳＢ−４５、ＳＢ−４６、ＳＢ−４７、ＳＢ−４８、ＳＢ−４９、ＳＢ−５０、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３（表３、４、８及び９に示す）を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の軽鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域と、上記抗体の軽鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３（表８及び９に示す）を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の軽鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域と、上記抗体の軽鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域とを含む。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号８０、２２８又は２２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１０１、２３９、２３９、２４０又は２４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３６６、３６７、３６８又は３６９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号２６７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３６６、３６７、３６８又は３６９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号２６７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号８１、９９、２３０、２３１又は２３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１０２、２４２、２４３、２４４又は２４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１２６又は２５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３７１、３７２、３７３、３７４又は３７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号２６９又は３７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３７１、３７２、３７３、３７４又は３７５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号２６９又は３７０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３７１、３７２若しくは３７３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号３７０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含むか、又は配列番号３７４若しくは３７５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号８５、２３３、２３１又は２３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１０７、２４６、２４７又は２４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１３１又は２５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３７６、３７７又は３７８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号２８０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３７６、３７７又は３７８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号２８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号９７、２３５、２３６又は２３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１２１、２４９、２５０、２５１又は２５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３７９、３８０、３８１又は３８２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３４４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３７９、３８０、３８１又は３８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３６７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号２６７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３６７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号２６７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号２７０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３７６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号２８０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３７６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号２８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施態様では、抗体はモノクローナル抗体である。いくつかの実施態様では、抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス、又はＩｇＡクラスのものである。いくつかの実施態様では、抗体は、ＩｇＧクラスのものであり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４アイソタイプを有する。いくつかの実施態様では、抗体はＩｇＧ１アイソタイプを有している。いくつかの実施態様では、抗体は、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ置換及びＰ３３１Ｓ置換を含む。
いくつかの実施態様では、抗体は、抗体断片である。いくつかの実施態様では、抗体断片は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ又はｓｃＦｖ断片である。
いくつかの実施態様では、抗体は、０．１ｎＭから５０ｎＭ、又は０．５ｎＭから１０ｎＭ、又は０．５ｎＭから５ｎＭのヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に対する親和性（ＫＤ）を有する。いくつかの実施態様では、親和性は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ（登録商標）システムを用いて測定される。
いくつかの実施態様では、抗体は、第１及び第２の抗原を認識し、ここで、第１の抗原はＳＩＲＰβ１であり、第２の抗原は、
（ａ） 血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原；
（ｂ） トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１と２（ＬＰＲ−１と２）、及びジフテリア毒素受容体から成る群より選択される、血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原；
（ｃ） 疾患原因ペプチド若しくはタンパク質又は疾患原因核酸から成る群より選択される疾患原因剤であって、疾患原因核酸がアンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡであり、疾患原因タンパク質が、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質又はその断片、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質Ａ−Ｉ、血清アミロイドＡ、メディン（ｍｅｄｉｎ）、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン（ｋｅｒａｔｏｅｐｉｔｈｅｌｉｎ）、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから成る群より選択される、疾患原因剤；
（ｄ） ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、及びホスファチジルセリンから成る群より選択される、免疫細胞上に発現するリガンド及び／又はタンパク質；並びに
（ｅ） １若しくは複数の腫瘍細胞上に発現するタンパク質、脂質、多糖類又は糖脂質
である。
いくつかの実施態様では、ヒトＳＩＲＰβ１に結合する単離抗体が提供され、該抗体は、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１への結合について、本明細書で提供される１又は複数の抗体と競合する。いくつかの実施態様では、ヒトＳＩＲＰβ１に結合する単離抗体が提供され、該抗体は、本明細書で提供される１又は複数の抗体と本質的に同じか又は重複するＳＩＲＰβ１アイソフォーム１エピトープに結合する。
いくつかの実施態様では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰβ１抗体をコードする核酸配列を含む、単離された核酸が提供される。いくつかの実施態様では、該核酸を含むベクターが提供される。いくつかの実施態様では、該ベクターを含む単離された宿主細胞が提供される。いくつかの実施態様では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰβ１抗体を発現する、単離された宿主細胞が提供される。いくつかの実施態様では、ヒトＳＩＲＰβ１に結合する抗体を産生させる方法が提供され、該方法は、該抗体が産生されるように、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰβ１抗体を発現する宿主細胞を培養することを含む。いくつかの実施態様では、該方法は、上記細胞によって産生される抗体を回収することを更に含む。
いくつかの実施態様では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰβ１抗体と薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物が提供される。
いくつかの実施態様では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰβ１抗体を必要とする個体に治療有効量投与することを含む、がんの治療方法が提供される。いくつかの実施態様では、がんは、肉腫、膀胱がん、脳がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、腎盂がん、白血病、肺がん、小細胞肺がん、黒色腫、リンパ腫、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん及び線維肉腫、多形神経膠芽腫；腎明細胞がん；副腎皮質癌；膀胱尿路上皮癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、肺腺癌；膵臓腺癌、腎細胞がん、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、緩慢性Ｂ細胞リンパ腫、侵攻性Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性腫瘍、浸潤性乳癌、子宮頸部扁平上皮癌、子宮頸部腺癌、胆管細胞癌、結腸腺癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、食道癌、頭頸部扁平上皮癌、色素嫌性腎癌（ｋｉｄｎｅｙ ｃｈｒｏｍｏｐｈｏｂｅ）、乳頭状腎細胞癌（ｒｅｎａｌ ｐａｐｉｌｌａｒｙ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、低悪性度神経膠腫、肝細胞癌、肺扁平上皮癌、中皮腫、漿液性卵巣嚢腫（ｏｖａｒｉａｎ ｓｅｒｏｕｓ ｃｙｓｔａｄｅｎｏｍｃａｒｃｉｎｏｍａ）、膵臓腺癌、褐色細胞腫及び傍神経節腫、前立腺腺癌（ｐｒｏｓｔａｔｅ ａｄｅｎｏｃａｒｃｏｎｉｍｏ）、直腸腺癌、皮膚黒色腫、胃腺癌、精巣胚細胞腫瘍、甲状腺癌、胸腺腫(ｔｈｙｕｍｏｍａ）、
子宮体部子宮内膜癌（ｕｔｅｒｉｎｅ ｃｏｒｐｕｓ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）子宮癌肉腫、及びブドウ膜黒色腫から選択される。
いくつかの実施態様では、治療方法は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９又はＣＤ７３を阻害又はアゴナイズする治療剤を投与することを更に含む。いくつかの実施態様では、治療方法は、上記個体に対し、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１の抗体及び／又は１若しくは複数の標準的若しくは試験的抗がん療法を実施することを更に含む。
いくつかの実施態様では、治療方法は、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１の抗体を抗ＳＩＲＰＡ抗体と組み合わせて投与することを更に含む。いくつかの実施態様では、抑制性チェックポイント分子に特異的に結合する上記少なくとも１の抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー細胞抑制受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ−１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＭ−４抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ７３抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−５抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−７抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１１抗体、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ１抗体、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＣＤ２抗体、抗ＣＤ５抗体、並びにこれらの任意の組み合わせから選択される。
いくつかの実施態様では、治療方法は、放射線療法、細胞毒性化学療法、標的療法、イマチニブ療法、トラスツズマブ療法、エタネルセプト療法、養子細胞移植（ＡＣＴ）療法、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移植（ＣＡＲ−Ｔ）療法、ワクチン療法、及びサイトカイン療法から選択される、１又は複数の標準的又は試験的抗がん療法を実施することを更に含む。
いくつかの実施態様では、治療方法は、上記個体に対し、抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１の抗体を投与することを更に含む。いくつかの実施態様では、該抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１の抗体は、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体、及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
いくつかの実施態様では、治療方法は、上記個体に対し、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１のアゴニスト抗体を投与することを更に含む。いくつかの実施態様では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する上記少なくとも１のアゴニスト抗体は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト抗ＴＲＥＭ１抗体、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２７抗体、アゴニスト抗グルココルチコイド誘発性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）抗体、アゴニスト抗ＣＤ３０抗体、アゴニスト抗ＢＴＬＡ抗体、アゴニスト抗ＨＶＥＭ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２抗体、アゴニスト抗ＣＤ５抗体、及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
いくつかの実施態様では、治療方法は、上記個体に対し、少なくとも１の刺激性サイトカインを投与することを更に含む。いくつかの実施態様では、該少なくとも１の刺激性サイトカインは、ＩＦＮ−α４、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１ベータ、及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
いくつかの実施態様では、医薬の調製のための、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰβ１抗体の使用が提供される。いくつかの実施態様では、該医薬は、乳がんを治療するためのものである。いくつかの実施態様では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰβ１抗体は、がんを治療するために提供される。
いくつかの実施態様では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰβ１抗体を必要とする個体に治療有効量投与することを含む、神経変性疾患又は障害の治療方法が提供される。いくつかの実施態様では、神経変性疾患又は障害は、認知症、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、アルツハイマー病、血管性認知症、那須・ハコラ病、認知障害、記憶喪失、発作、網膜ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、脳外傷、脊髄損傷、卒中、パーキンソン病、急性散在性脳脊髄炎、網膜変性症、加齢黄斑変性、緑内障、多発性硬化症から選択される。
いくつかの実施態様では、神経変性疾患又は障害を治療するための医薬の調製のための、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰβ１抗体の使用が提供される。いくつかの実施態様では、神経変性疾患又は障害は、認知症、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、アルツハイマー病、血管性認知症、那須・ハコラ病、認知障害、記憶喪失、発作、網膜ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、脳外傷、脊髄損傷、卒中、パーキンソン病、急性散在性脳脊髄炎、網膜変性症、加齢黄斑変性、緑内障、多発性硬化症から選択される。いくつかの実施態様では、神経変性疾患又は障害の治療における使用のための、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様では、神経変性疾患又は障害は、認知症、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、アルツハイマー病、血管性認知症、那須・ハコラ病、認知障害、記憶喪失、発作、網膜ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、脳外傷、脊髄損傷、卒中、パーキンソン病、急性散在性脳脊髄炎、網膜変性症、加齢黄斑変性、緑内障、多発性硬化症から選択される。
本明細書に記載される様々な実施態様の特性の１つ、一部又は全てを、本発明の他の実施態様を形成するために組み合わせてもよいことを理解されたい。本発明の上記態様及び他の態様は、当業者には明らかであろう。本発明の上記実施態様及び他の実施態様について、以下の「発明を実施するための形態」で更に記載する。
ＳＩＲＰβ１アイソフォーム１（配列番号１；Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｏ００２４１）及びＳＩＲＰβ１アイソフォーム３（配列番号３８４；Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ５ＴＦＱ８）のアミノ酸配列のアライメントを示す。 ＳＩＲＰβ１アイソフォーム１（配列番号１）のアミノ酸配列の、細胞外ドメイン内で高い相同性を示すＳＩＲＰα（配列番号３８５；Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ７８３２４）のアミノ酸配列とのアライメントを示す。 ＳＩＲＰβ１アイソフォーム１（配列番号１）及びマウスＳＩＲＰβ１（配列番号３８６；Ｕｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ８ＢＦＸ８）のアミノ酸配列のアライメントを示す。 細胞ベースのレポーターアッセイにおけるヒトＳＩＲＰβ１依存性ルシフェラーゼ発現の誘導を示す。細胞をプレート結合抗ＳＩＲＰβ１抗体（３Ａ）又は抗ＳＩＲＰα（ＳＡ−９Ｃ２）（３Ｂ）又はヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロールで刺激した。結果は、バックグラウンドの倍率として表される。バックグラウンドレベルは、ｙ軸上で１に設定される。 ２種のＤＡＰ１２会合受容体、ＳＩＲＰβ１とＴＲＥＭ１のヒト単球での発現パターンを示す。影付きのヒストグラムは、アイソタイプで染色した細胞からのバックグラウンド蛍光を表す。黒枠のヒストグラムは、標的特異的抗体で染色した細胞での受容体発現レベルを表す。 ２名の健康なドナーからのＭ１及びＭ２極性化マクロファージでのＳＩＲＰβ１の発現を示す。影付きのヒストグラムは、アイソタイプで染色した細胞からのバックグラウンド蛍光を表す。黒枠のヒストグラムは、Ｍ２マクロファージでのＳＩＲＰβ１発現レベルを示し、一方、破線のヒストグラムは、Ｍ１マクロファージでのＳＩＲＰβ１の発現レベルを表す。 ＬＰＳ刺激の有無にかかわらず、ヒト単球由来樹状細胞（ＤＣ）でのＳＩＲＰβ１及びＴＲＥＭ１の発現を示す。影付きのヒストグラムは、アイソタイプで染色した細胞からのバックグラウンド蛍光を表す。黒枠のヒストグラムは、標的特異的抗体で染色した細胞での受容体発現レベルを表す。 ヒトドナーからの様々な組織におけるＳＩＲＰβ１アイソフォーム１のＲＮＡ発現パターンをプロファイルしている。 ヒトドナーからの様々な組織におけるＳＩＲＰβ１アイソフォーム３のＲＮＡ発現パターンをプロファイルしている。ＳＩＲＰβ１アイソフォーム３の発現のピークは脳で起っており、末梢組織での発現は限られている。 ２名の異なるドナーから得られた初代ヒト好中球からの、ＳＩＲＰβ１を介した呼吸バーストを示す。 初代ヒト単球からの、ＳＩＲＰβ１を介した呼吸バースト（上段）又はＩＬ−８放出（下段）を示す。 初代ヒトマクロファージ又は樹状細胞（ＤＣ）からの、ＳＩＲＰβ１を介したＴＮＦαサイトカイン放出を示す。 プレート結合抗ＳＩＲＰβ１抗体で刺激された初代ヒト好中球の抗腫瘍活性を示す。発光値は、ｙ軸上で１に設定されたオプソニン化抗体の非存在下で好中球と共培養されたＲａｊｉ−Ｌｕｃのシグナルとの相対的なスケールで表される。 親和性成熟抗体による細胞ベースのレポーターアッセイにおけるヒトＳＩＲＰβ１依存性ルシフェラーゼ発現の誘導を示す。提示されている結果は、生の発光値である。バックグラウンドレベルは、ｙ軸上で１０，０００に設定される。 初代ヒト樹状細胞（ＤＣ）からの、ＳＩＲＰβ１を介したＴＮＦαサイトカイン放出を示す。 複数のＳＩＲＰβ１抗原に対する抗ＳＩＲＰβ１抗体の交差反応性を示す。可溶性、ヒトＳＩＲＰβ１−Ｆｃアイソフォーム１（Ｏ００２４１）若しくはアイソフォーム３（Ｑ５ＴＦＱ８）又はカニクイザルＳＩＲＰβ１−Ｆｃ（ＸＭ００５５６８５４１）をプレート上にコーティングし、抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１、ＳＢ−１−２、ＳＢ−２、ＳＢ−２−７、ＳＢ−８、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−４０及びＳＢ−４０−２１の親及び親和性成熟型の濃度を上げながらインキュベートした。全ての抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ヒトＳＩＲＰβ１−Ｆｃアイソフォーム１抗原にのみ結合した。 プレート結合した完全長抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１−３、ＳＢ−２−８、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１５及びＳＢ−４０−２０による、３名の異なる健康なドナーからの単球由来のヒトマクロファージ上のＴＲＥＭ２発現のアップレギュレーションを示す。ベースラインＴＲＥＭ２発現は、ヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロール抗体上でインキュベートした細胞から決定した。ＴＲＥＭ２は、ＤｙＬｉｇｈｔ６５０フルオロフォアとコンジュゲートした抗ＴＲＥＭ２抗体（ｃｌｏｎｅ ＡＤＩ−２２）により検出された。 プレート結合した完全長抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１−３、ＳＢ−２−８、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１５及びＳＢ−４０−２０上で培養された、単球由来のヒトマクロファージの生存能力を示す。Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ基質を添加した後の発光値を測定することにより、生細胞を定量した。ヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロール上又はプレート結合抗体の非存在下（Ａｂなし）で培養した細胞は、細胞の生存能力のベースラインを確立した。 プレート結合した完全長抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１−３及びＳＢ−２−８又はヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロールの濃度を上げて培養した、２名の異なる健康なドナーからの単球由来マクロファージの生存能力を示す。Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ基質を添加した後の発光値を測定することにより、生細胞を定量した。 図１３は、マクロファージ生存アッセイにおいて抗ＳＩＲＰβ１抗体が抗ＴＲＥＭ２抗体のアゴニスト活性を増強することを示す。単球由来のマクロファージは、可溶性抗ＴＲＥＭ２抗体の存在下又は非存在下、プレート結合した完全長ＳＢ−１−３、ＳＢ−２−８又はｈｕＩｇＧ１アイソタイプコントロール上で培養された。Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ基質を添加した後の発光値を測定することにより、生細胞を定量した。 図１４Ａは、プレート結合した完全長抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１−３、ＳＢ−２−８及びＳＢ−８−１３又はヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロール上で培養したヒトＳＩＲＰβ１ ＢＡＣトランスジェニックマウスから得られた、骨髄由来マクロファージの生存能力を示す。図１４Ｂは、プレート結合した完全長抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１−３、ＳＢ−２−８及びＳＢ−８−１３又はヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロール上で培養したヒトＳＩＲＰβ１ ＢＡＣトランスジェニックマウスから得られた、骨髄由来樹状細胞の生存能力を示す。Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ基質を添加した後の発光値を測定することにより、生細胞を定量した。ヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロール上又はプレート結合抗体の非存在下（抗体なし）で培養した細胞は、細胞の生存能力のベースラインを確立した。 図１５Ａ−１５Ｃは、ＳＩＲＰファミリーの異なる受容体に対する抗ＳＩＲＰβ１抗体の交差反応性を示す。図１５Ａ及び１５Ｂは、それぞれ組換えヒトＳＩＲＰβ１又は組換えヒトＳＩＲＰαを過剰発現するＢＷ５１４７．Ｇ．１．４細胞に結合する様々な抗ＳＩＲＰ受容体抗体の滴定曲線を示す。図１５Ｃは、ＳＩＲＰγを内因的に発現する不死化ヒトＴ細胞株であるＪｕｒｋａｔ細胞に結合する抗体の滴定曲線を示す。陽性コントロール抗体は、抗ＳＩＲＰα／βクローン１８Ｄ５、抗ＳＩＲＰα／β／γクローンＫＷＡＲ２３、及び抗ＳＩＲＰγクローンＬＳＢ２．２０であった。
本開示は、抗ＳＩＲＰβ１抗体（例えばモノクローナル抗体）；当該抗体を作製及び使用する方法；当該抗体を含む薬学的組成物；当該抗体をコードする核酸；並びに当該抗体をコードする核酸を含む宿主細胞に関する。
本明細書に記載又は参照される技術及び手順は、一般によく理解されており、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ３ｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００１）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，（２００３）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）に記載されているような、広く利用されている方法論など、当業者による従来の方法論を使用して普通に用いられている。
特許出願書類及び刊行物を含む、本明細書に引用される全ての参考文献は、参照によりその全文が本明細書に援用される。
Ｉ．定義
特に断らない限り、「シグナル調節タンパク質β１」「ＳＩＲＰβ１」及び「ＳＩＲＰβ１ポリペプチド」という用語は、本明細書では互換的に使用され、霊長類（例えばヒト及びカニクイザル）及びげっ歯類（例えばマウス及びラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来の任意の天然型ＳＩＲＰβ１を指す。いくつかの実施態様において、この用語は、野生型配列と天然に存在する変異体配列（例えばスプライスバリアント又は対立遺子バリアントいくつかの実施態様では、この用語は、「完全長」の、プロセシングをうけていないＳＩＲＰβ１と、細胞内でのプロセシングから生じる任意の形態のＳＩＲＰβ１とを包含する。いくつかの実施態様では、ＳＩＲＰβ１は、ヒトＳＩＲＰβ１である。いくつかの実施態様において、例示的なＳＩＲＰβ１アイソフォーム１のアミノ酸配列は、２０１８年２月２８日の時点でＵｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｏ００２４１である。いくつかの実施態様において、例示的なヒトＳＩＲＰβ１のアミノ酸配列は、配列番号１である。いくつかの実施態様において、例示的なＳＩＲＰβ１アイソフォーム３のアミノ酸配列は、２０１８年１月３１日の時点でＵｎｉｐｒｏｔアクセッション番号Ｑ５ＴＦＱ８である。いくつかの実施態様において、例示的なヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム３のアミノ酸配列は、配列番号３８４である。別途指示がない限り、本明細書で使用される「ＳＩＲＰβ１」は、ＳＩＲＰβ１アイソフォーム１を指す。
用語「抗ＳＩＲＰβ１抗体」、「ＳＩＲＰβ１に結合する抗体」、及び「ＳＩＲＰβ１に特異的に結合する抗体」は、ＳＩＲＰβ１を標的とする際に抗体が診断剤及び／又は治療剤として有用であるように、十分な親和性でＳＩＲＰβ１に結合できる抗体を指す。一実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体の、無関係な、非ＳＩＲＰβ１ポリペプチドへの結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定して、該抗体のＳＩＲＰβ１への結合の約１０％未満である。特定の実施態様において、ＳＩＲＰβ１に結合する抗体は、＜１μΜ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭ、又は＜０．００１ｎＭ（例えば１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。特定の実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、異なる種からのＳＩＲＰβ１ポリペプチド間で保存されているＳＩＲＰβ１のエピトープに結合する。
抗体と標的分子との結合に関して、特定のポリペプチドに、又は特定のポリペプチド標的上のエピトープに対する「特異的結合」又はそれに「特異的に結合する」、又はそれに対して「特異的である」という用語は、非特異的相互作用とは測定可能な程度に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、コントロール分子の結合と比較して、分子の結合を決定することにより測定することができる。例えば、特異的結合は、標的と類似しているコントロール分子、例えば過剰の非標識標的との競合により決定することができる。この場合、標識された標的とプローブとの結合が、過剰の非標識標的によって競合的に阻害される場合には、特異的結合が示される。本明細書において使用される用語「特異的結合」、又は特定のポリペプチド若しくは特定のポリペプチド標的上のエピトープに対して「特異的に結合する」又は「特異的」であるとは、例えば、標的に対して約１０−４Ｍ以下、１０−５Ｍ以下、１０−６Ｍ以下、１０−７Ｍ以下、１０−８Ｍ以下、１０−９Ｍ以下、１０−１０Ｍ以下、１０−１１Ｍ以下、１０−１２Ｍ以下のＫＤ、又は１０−４Ｍから１０−６Ｍ、若しくは１０−６Ｍから１０−１０Ｍ、若しくは１０−７Ｍから１０−９Ｍの範囲のいずれかのＫＤを有する分子によって示されうる。当業者であれば理解するように、親和性とＫＤの値は反比例する。抗原に対する高い親和性は、低いＫＤ値によって測定される。一実施態様では、用語「特異的結合」は、分子が特定のポリペプチド若しくは特定のポリペプチド上のエピトープに、実質的に他のいずれのポリペプチド若しくはポリペプチドエピトープにも結合することなく結合することを指す。
用語「免疫グロブリン」（Ｉｇ）は、本明細書では「抗体」と互換可能に使用される。本明細書において用語「抗体」とは、最も広い意味で使用され、具体的には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２のインタクトな抗体から形成されるものを含む多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び、所望の生物学的活性を示す限り、抗体断片を包含する。
「天然抗体」は、通常、２つの同一の軽（「Ｌ」）鎖及び２つの同一の重「Ｈ」）鎖から構成される、約１５００００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は１つの共有ジスルフィド結合により重鎖に結合しており、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で変化する。また、各重鎖と軽鎖は、規則的に離間した鎖内ジスルフィド架橋を有している。各重鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）があり、それに続いて複数の定常ドメインがある。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）があり、他端に定常ドメインがあり、軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインと整列し、軽鎖の可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列している。特定のアミノ酸残基は、軽鎖と軽鎖の可変ドメイン間の堺界面を形成すると考えられる。
抗体の異なるクラスの構造及び特性については、例えばＢａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，８ｔｈ Ｅｄ．，Ｄａｎｉｅｌ Ｐ．Ｓｔｉｔｅｓ，Ａｂｂａ Ｉ．Ｔｅｒｒ ａｎｄ Ｔｒｉｓｔｒａｍ Ｇ．Ｐａｒｓｌｏｗ（ｅｄｓ．），Ａｐｐｌｅｔｏｎ ＆ Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，ＣＴ，１９９４，７１頁及び６章を参照されたい。
任意の脊動物種からの軽鎖は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（「κ」）及びラムダ（「λ」）と呼ばれる２つの明確に区別される型のいずれかに割り当てることができる。重鎖の定常ドメイン（ＣＨ）のアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは、異なるクラス又はアイソタイプに割り当てることができる。免疫グロブリンには、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭの５つのクラスがあり、これらはそれぞれ、アルファ（「α」）、デルタ（「δ」）イプシロン（「ε」）、ガンマ（「γ」）及びミュー（「μ」）と呼ばれる重鎖を有する。γ及びαのクラスは、ＣＨ配列及び機能の比較的小さな差異に基づいて、更にサブクラス（アイソタイプ）に分類され、例えば、ヒトは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２のサブクラスを発現する。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元構造はよく知られており、例えばＡｂｂａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈｅｄ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．，２０００）に概して記載されている。
抗体（例えば、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体）の「可変領域」又は「可変ドメイン」とは、抗体の重鎖又は軽鎖のアミノ末端ドメインを指す。重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれ「ＶＨ」、「ＶＬ」とも称される。これらドメインは通常、（同じクラスの他の抗体と比較して）抗体の最も可変的な部分であり、抗原結合部位を含んでいる。
用語「可変」は、抗体（例えば、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体）間で可変ドメインの特定のセグメントの配列が広範囲にわたって異なるという事実を表す。可変ドメインは、抗原結合を媒介し、その特定の抗原に対する特定の抗体の特異性を規定する。しかしながら、可変性は、可変ドメインの全範囲にわたって一様に分布してはいない。代わりにそれは、軽鎖及び重鎖可変ドメインの双方において、超可変領域（ＨＶＲ）と称される３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存されている部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、大部分がβシート構造をとる４つのＦＲ領域を含み、これら４つのＦＲ領域は３つのＨＶＲによって接続されており、３つのＨＶＲはループを形成し、βシート構造を接続しており、場合によってはβシート構造の一部を形成している。各鎖のＨＶＲは、ＦＲ領域によって近接して一緒に保持され、他の鎖のＨＶＲと共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)を参照のこと）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しているものではないが、例えば抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）への抗体の関与といった、種々のエフェクター機能を呈する。
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均一な抗体の集団から得られる、本開示のモノクローナル抗ＳＩＲＰβ１抗体などの抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、微量に存在する可能性のある天然変異及び／又は翻訳後修飾（例えば異性化、アミド化など）を除いて同じである。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対するものである。異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を通常含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対するものである。その特異性に加えて、モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ培養によって合成され、他の免疫グロブリンによって汚染されていないという点で有利である。修飾語「モノクローナル」とは、実質的に均一な抗体集団から得られているという抗体の特徴を指しており、抗体を何か特定の方法で作製しなければならないことを意味するものではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、及び、ヒト免疫グロブリン遺伝子座又はヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部又は全部を有する動物においてヒト又はヒト様抗体を作製するための技術を含む、様々な技術によって作製されうる。
「完全長抗体」、「インタクトな抗体」又は「全抗体」という用語は、抗体断片とは対照的に、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体のような、実質的にインタクトな形態の抗体を指すために互換的に使用される。具体的には、全抗体には、Ｆｃ領域を含む重鎖及び軽鎖を有するものが含まれる。定常ドメインは、天然配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）又はそのアミノ酸配列変異体でありうる。いくつかの事例では、インタクトな抗体は、１又は複数のエフェクター機能を有していてもよい。
「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合する、インタクトな抗体の一部分を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、抗体断片から形成される、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖ断片；ダイアボディ；直鎖状抗体（米国特許第５６４１８７０号、実施例２；Zapata et al., Protein Eng. 8(10):1057-1062 (1995)参照）；一本鎖抗体分子、並びに多重特異性抗体が含まれる。
抗体（本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体など）のパパイン消化は、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片と、容易に結晶化する能力を反映した呼称である、残りの「Ｆｃ」断片を生成する。Ｆａｂ断片は、軽鎖全体と重鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）及び１つの重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）から成る。各Ｆａｂ断片は、抗原結合に関して一価であり、すなわち単一の抗原結合部位を有する。抗体のペプシン処理は、異なる抗原結合活性を有し、且つ、抗原を架橋することが可能である２つのジスルフィド結合Ｆａｂ断片にほぼ対応する、単一の大きなＦ（ａｂ’）２断片を生成する。Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域由来の１又は複数のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に数個の追加残基を有している点でＦａｂ断片とは異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、本明細書において、Ｆａｂ’の一般名称であり、定常ドメインのシステイン残基が遊離チオール基を持つ。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、元々、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’断片の対として生産された。抗体断片の他の化学結合も知られている。
Ｆｃ断片は、ジスルフィドによって一緒に保持された両方の重鎖のカルボキシ末端部分を含む。抗体のエフェクター機能は、特定の種類の細胞に見られるＦｃ受容体（ＦｃＲ）によっても認識されるＦｃ領域の配列によって決定される。
本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体のような抗体の「機能的断片」は、インタクトな抗体の一部を含み、一般に、インタクトな抗体の抗原結合領域若しくは可変領域、又はＦｃＲ結合能を保持するか若しくは改良されたＦｃＲ結合能を有する抗体のＦｃ領域を含む。抗体断片の例は、抗体断片から形成された直鎖状抗体、一本鎖抗体分子及び多重特異性抗体を含む。
用語「ダイアボディ」は、鎖内ではなく鎖間での可変ドメインのペアリングが達成されるように、ＶＨドメインとＶＬドメインの間に短いリンカー（約５〜１０の残基）を有するｓＦｖ断片（前段落参照）を構築し、それによって二価の断片、すなわち２つの抗原結合部位を有する断片が得られることによって調製される、小さな抗体断片を指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨドメインとＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖上に存在する２つの「クロスオーバー」ｓＦｖ断片のヘテロ二量体である。
本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」とは、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が特定の種に由来する抗体又は特定の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一若しくは相同である一方、鎖（複数可）の残りの部分は、別の種に由来する抗体又は別の抗体クラス若しくはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一若しくは相同である、本開示のキメラ抗ＳＩＲＰβ１抗体などの抗体（免疫グロブリン）、並びに、所望の生物学的活性を呈する限り、そのような抗体の断片を指す。本明細書における目的のキメラ抗体には、抗体の抗原結合領域が、例えば、マカクザルを目的の抗原で免疫することによって生成された抗体に由来するＰＲＩＭＡＴＩＺＥＤ（登録商標）抗体が含まれる。本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」は、「キメラ抗体」のサブセットとして用いられる。
「ヒト化」型の非ヒト（例えばマウス）抗体、例えば、ヒト化型の本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、非ヒトＨＶＲからのアミノ酸残基及びヒトＦＲからのアミノ酸残基を含むキメラ抗体である。ある実施態様において、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの全てを実質的に含み、ＨＶＲ（例えばＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが非ヒト抗体のものに対応し、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、場合によって、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。抗体の「ヒト化型」、例えば非ヒト抗体は、ヒト化を遂げた抗体を指す。
「ヒト抗体」とは、ヒトによって産生された抗体及び／又は本明細書に開示のヒト抗体を作製するための任意の技術を使用して製造された抗体、例えば本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体など、のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。ヒト抗体は、ファージディスプレイライブラリー及び酵母ベースのプラットフォーム技術を含む、当技術分野で既知の様々な技術を用いて生成することができる。ヒト抗体は、抗原曝露に応答してヒト抗体を生成するように修飾されているが、その内因性遺伝子座が無効にされているトランスジェニック動物、例えば免疫化キセノマウスに抗原を投与することによって調製することができ、また、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成することもできる。
本明細書で使用される場合、「超可変領域」又は「ＨＶＲ」という用語は、配列が超可変であり、且つ／又は構造的に定められたループを形成する、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体などの抗体の可変ドメインの領域をいう。通常、抗体は、ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、ＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の計６つのＨＶＲを含む。天然抗体において、Ｈ３及びＬ３は６つのＨＶＲのうちで最も高い多様性を示し、特にＨ３は抗体に高度な特異性を付与するのに独特の役割を果たすと考えられている。重鎖のみから成る天然に存在するラクダ科の抗体は、軽鎖の非存在下で機能的で安定である。
複数のＨＶＲの描写が本明細書において使用され、包含される。いくつかの実施態様では、ＨＶＲは、配列可変性に基づいており、且つ、最も一般的に使用されているＫａｂａｔ相補性決定領域（ＣＤＲ）でありうる。いくつかの実施態様では、ＨＶＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲであってもよい。代わって、Ｃｈｏｔｈｉａは、構造的ループの位置に言及している（Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）。いくつかの実施態様では、ＨＶＲは、ＡｂＭ ＨＶＲであってもよい。ＡｂＭ ＨＶＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲとＣｈｏｔｈｉａ構造的ループの折衷であり、Ｏｘｆｏｒｄ ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアにより使用される。いくつかの実施態様では、ＨＶＲは、「接触」ＨＶＲであってもよい。「接触」ＨＶＲは、利用できる複合体結晶構造の解析に基づく。これらの各ＨＶＲからの残基を以下に記す。
Figure 2021529520
ＨＶＲは、次のような「伸長ＨＶＲ」を含みうる：ＶＬの２４〜３６又は２４〜３４（Ｌ１）、４６〜５６又は５０〜５６（Ｌ２）、及び８９〜９７又は８９〜９６（Ｌ３）と、ＶＨの２６〜３５（Ｈ１）、５０〜６５又は４９〜６５（好ましい実施態様）（Ｈ２）、及び９３〜１０２、９４〜１０２又は９５〜１０２（Ｈ３）。可変ドメイン残基は、これらの伸長ＨＶＲ定義のそれぞれについて、上掲のＫａｂａｔらに従って番号付けされている。
「フレームワーク」又は「ＦＲ」残基は、本明細書で定義しているＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
本明細書で使用される「アクセプターヒトフレームワーク」とは、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークに由来するＶＬ又はＶＨのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンのフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、そのアミノ酸配列が同じであってもよく、又は既存のアミノ酸配列の変化を含んでもよい。いくつかの実施態様において、既存のアミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。既存のアミノ酸変化がＶＨに存在する場合、好ましくは、それらの変化は、位置７１Ｈ、７３Ｈ及び７８Ｈのうちの３つのみ、２つのみ、又は１つのみで起こり、例えば、これらの位置のアミノ酸残基は７１Ａ、７３Ｔ及び／又は７８Ａによる可能性がある。一実施態様において、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と、配列が同一である。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に発生するアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬ配列又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループから行われる。一般に、上記配列のサブグループは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）にあるサブグループである。例にはＶＬの場合が含まれ、サブグループは、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．にあるように、サブグループカッパＩ、カッパＩＩ、カッパＩＩＩ又はカッパＩＶでありうる。更に、ＶＨの場合、サブグループは、上記のＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．にあるように、サブグループＩ、サブグループＩＩ又はサブグループＩＩＩでありうる。
例えば本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体の特定の位置での「アミノ酸修飾」は、特定の残基の置換若しくは欠失、又は特定の残基に隣接する少なくとも１のアミノ酸残基の挿入を指す。特定の残基に「隣接する」挿入とは、その１〜２残基内への挿入を意味する。挿入は、特定の残基のＮ末端又はＣ末端であってもよい。本明細書で好ましいアミノ酸修飾は、置換である。
本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体などの「親和性成熟」抗体は、その１又は複数のＨＶＲに１又は複数の変更を有することにより、そのような変更を有しない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性が向上している抗体である。一実施態様では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対して、ナノモル又はピコモルの親和性を有する。親和成熟抗体は、当技術分野において既知の方法により生産される。例えばＭａｒｋｓらは、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９−７８３（１９９２）で、ＶＨドメインとＶＬドメインのシャッフリングによる親和成熟を記述している。ＨＶＲ及び／又はフレームワーク残基のランダム突然変異誘発が、例えばＢａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：３８０９−３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ １６９：１４７−１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ． Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−９（１９９５）；及びＨａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６（１９９２）に記載されている。
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識及び抗原結合部位を含む最小抗体断片である。この断片は、緊密に非共有結合している、１つの重鎖可変領域と１つの軽鎖可変領域ドメインとの二量体で構成される。これら２つのドメインのフォールディングから、抗原結合のためのアミノ酸残基を与え、抗体に抗原結合特異性を付与する６つの超可変ループ（Ｈ鎖及びＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が発生する。但し、単一の可変ドメイン（又は抗原に対して特異的な３つのＨＶＲのみを含む、半分のＦｖ）であっても、結合部位全体よりも低い親和性であるものの、抗原を認識して結合する能力を有している。
「ｓＦｖ」又は「ｓｃＦｖ」とも略される「一本鎖Ｆｖ」は、単一ポリペプチド鎖中に接続されるＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドはＶＨ及びＶＬドメイン間にポリペプチドリンカーを更に含み、それはｓＦｖが抗原結合のための望ましい構造を形成することを可能にする。
抗体「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列Ｆｃ領域又はアミノ酸配列変異体Ｆｃ領域）に起因しうる生物学的活性を指し、抗体のアイソタイプにより変化する。
本明細書において用語「Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域及び変異体Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を指すために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変化しうるが、通常、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６の位置の又はＰｒｏ２３０のアミノ酸残基からそのカルボキシル末端まで伸長すると定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ番号付けシステムによる残基４４７）は、例えば、抗体の生成若しくは精製の間に、又は抗体の重鎖をコードする核酸を組換え操作することによって、除去することができる。したがって、インタクトな抗体の組成は、全てのＫ４４７残基が除かれた抗体集団、Ｋ４４７残基が除かれていない抗体集団、及びＫ４４７残基を有する抗体と有しない抗体との混合物を含む抗体集団を含みうる。本開示の抗体で使用するのに適した天然配列Ｆｃ領域には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４が含まれる。
「天然配列Ｆｃ領域」は、天然にみられるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一であるアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域は、天然配列ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）；天然配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域；天然配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域；及び天然配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域と、天然に存在するその変異体とを含む。
「変異体Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは１又は複数のアミノ酸置換による、天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、変異体Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域に、天然配列Ｆｃ領域又は親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して、少なくとも１のアミノ酸置換、例えば約１から約１０のアミノ酸置換、好ましくは約１から約５のアミノ酸置換を有する。本明細書の変異体Ｆｃ領域は、好ましくは、天然配列Ｆｃ領域及び／又は親ポリペプチドのＦｃ領域と、少なくとも約８０％の相同性、最も好ましくは少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは少なくとも約９５％の相同性を有する。
「Ｆｃ受容体」又は「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を意味する。好ましいＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。更に、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合し（ガンマ受容体）、且つ、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を、これらの受容体の対立遺伝子バリアント及び択一的にスプライシングされた形態を含めて、含み；ＦｃγＲＩＩ受容体には、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）が含まれ、これらは類似のアミノ酸配列を有するが主に細胞質ドメインが異なる。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに、免疫受容活性化チロシンモチーフ（「ＩＴＡＭ」）を含有する。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに、免疫受容体チロシン−ベース阻害モチーフ（「ＩＴＩＭ」）を含有する。将来的に同定されることになるものを含め、他のＦｃＲは、本明細書においては用語「ＦｃＲ」に包含される。ＦｃＲは、抗体の血清半減期を延長させることもできる。
本明細書で使用される場合、ペプチド、ポリペプチド又は抗体配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」及び「相同性」は、これらの配列を整列させ、最大の配列同一性パーセントを得るために必要に応じてギャップを導入し、配列同一性の一部としていかなる保存的置換も考慮しない場合の、特定のペプチド又はポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列中のアミノ酸残基の割合をいう。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアライメントは、当分野の技術の範囲内にある種々の方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、又はＭＥＧＡＬＩＧＮＴＭ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの一般に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアライメントを得るのに必要とされる当技術分野で既知の任意のアルゴリズムを含む、アライメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。
同じエピトープについて競合する抗体（例えば中和抗体）の文脈で使用される場合、「競合する」という用語は、試験される抗体が、共通の抗原（例えばＳＩＲＰβ１又はその断片）への参照分子（例えばリガンド又は参照抗体）の特異的結合を防止又は阻害する（例えば減少させる）ようなアッセイによって決定される抗体間の競合を意味する。抗体が他のものと競合するかどうかを決定するために、多くの種類の競合結合アッセイを使用することができ、それらは、例えば、固相直接又は間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接又は間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（例えばStahli et al., 1983, Methods in Enzymology 9:242-253参照）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例えばKirkland et al.,1986, J. Immunol. 137 : 3614-3619参照）、固相直接標識アッセイ、固相直接標識サンドイッチアッセイ（例えばHarlow and Lane, 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press参照);１−１２５標識を使用する固相直接標識ＲＩＡ(例えばMorel et al., 1988, Molec. Immunol. 25:7-1５参照）；固相直接ビオチン−アビジンＥＩＡ（例えばCheung, et al., 1990, Virology 176:546-552参照）；及び直接標識ＲＩＡ（Moldenhauer et al., 1990, Scand. J. Immunol. 32:77-82）である。典型的には、そのようなアッセイは、非標識化試験抗体及び標識化参照抗体のいずれかを有する細胞又は固体表面に結合した精製抗原の使用を伴う。競合的阻害は、試験抗体の存在下で、固体表面又は細胞に結合した標識の量を決定することによって測定される。通常、試験抗体は、過剰に存在する。競合アッセイによって同定された抗体（競合抗体）は、参照抗体と同じエピトープに結合する抗体と、立体障害が生じるほどに参照抗体が結合するエピトープに十分近い隣接エピトープに結合する抗原とを含む。競合的結合を決定するための方法に関する更なる詳細は、本明細書の実施例に提供される。それは、競合抗体が過剰に存在するときは、通常、共通の抗原への参照抗体の特異的結合を、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９７．５％及び／又はほぼ１００％阻害する（例えば低減させる）ものである。
本明細書で使用される場合、ＳＩＲＰβ１ポリペプチドと第２のポリペプチドとの間の「相互作用」は、限定されないが、タンパク質間相互作用、物理的相互作用、化学的相互作用、結合、共有結合、及びイオン結合を包含する。本明細書で使用される場合、抗体が２つのポリペプチド間の相互作用を破壊、低減又は完全に排除するとき、抗体はその２つのポリペプチド間の相互作用を「阻害する」。本開示の抗体は、それが２つのポリペプチドのいずれか１つに結合するとき、その２つのポリペプチド間の「相互作用を阻害する」。いくつかの実施態様では、この相互作用は、少なくとも約２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７．５％及び／又はほぼ１００％阻害される。
用語「エピトープ」は、抗体によって結合されることが可能な任意の決定基を含む。エピトープとは、抗原の、その抗原を標的とする抗体が結合する領域であり、抗原がポリペプチドの場合、抗体に直接接触する特定のアミノ酸を含む。ほとんどの場合、エピトープは、ポリペプチドに存在するが、場合によっては、核酸などの他の種類の分子に存在することもある。エピトープ決定基は、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基又はスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面基を含むことができ、独日の三次元構造的特性及び／又は独自の電荷特性を有しうる。一般に、特定の標的抗原に特異的な抗体は、ポリペプチド及び／又は高分子の複合体内で、標的抗原上のエピトープを優先的に認識する。
「アゴニスト」抗体又は「活性化」抗体は、抗体が抗原に結合した後、抗原の１つ以上の活性又は機能を誘導する（例えば増加させる）抗体である。
「アンタゴニスト」抗体又は「遮断」抗体又は「阻害」抗体とは、抗体が抗原に結合した後に、１つ以上のリガンドへの抗原結合を減少させ、阻害し、且つ／若しくは排除する（例えば低減させる）抗体、及び／又は抗体が抗原に結合した後に、抗原の１つ以上の活性又は機能を減少させ、阻害し、且つ／若しくは排除する（例えば低減させる）抗体である。いくつかの実施態様では、アンタゴニスト抗体又は遮断抗体又は阻害抗体は、１以上のリガンドへの抗原結合及び／又は抗原の１以上の活性若しくは機能を実質的に若しくは完全に阻害する。
本開示の単離された抗ＳＩＲＰβ１抗体などの「単離された」抗体とは、その産生環境（例えば天然又は組換え）の成分から同定、分離及び／又は回収されたものである。好ましくは、単離された抗体は、その産生環境からの他の全ての汚染成分との会合がない。その産生環境の汚染成分は、典型的には抗体の研究、診断又は治療への使用を妨害しうる物質であり、酵素、ホルモン、及びその他のタンパク質様又は非タンパク質様溶質を含みうる。好ましい実施態様において、抗体は、（１）例えばローリー法で決定して、抗体の９５重量％を超えるまで、及びの実施態様で９９重量％を超えるまで、（２）スピニングカップシークエネーターを使用することにより、Ｎ末端若しくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに充分な程度まで、又は（３）クーマシーブルー若しくは、好ましくは、銀染色を使用した非還元若しくは還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均一になるまで、精製される。単離された抗体には、抗体の自然環境の少なくとも１の成分が存在しないため、組換えＴ細胞内のｉｎ ｓｉｔｕ抗体が含まれる。しかしながら、通常、単離されたポリペプチド又は抗体は、少なくとも１の精製工程により調製される。
抗体（本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体など）をコードする「単離された」核酸分子は、その産生環境においてそれが通常会合している少なくとも１の汚染核酸分子から同定され且つ分離されている核酸分子である。好ましくは、単離された抗体は、産生環境と会合する全ての汚染成分との会合がない。本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする単離された核酸分子は、自然界に存在する形態又は設定以外の形態である。したがって、単離された核酸分子は、細胞内に天然に存在する、本明細書のポリペプチド及び抗体をコードする核酸とは区別される。
本明細書で使用される用語「ベクター」は、それに結合されている別の核酸を運搬することができる核酸分子を指すことが意図される。ベクターの１つのタイプは「プラスミド」であり、これは付加的なＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る円形の二本鎖ＤＮＡである。別のタイプのベクターはファージベクターである。また別のタイプのベクターはウイルスベクターであり、付加的なＤＮＡセグメントがウイルスゲノムにライゲーションされうる。特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞内で自律複製することができる（例えば、細菌の複製開始点を有する細菌ベクターとエピソームの哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞への導入時に宿主細胞のゲノム中に組み込まれることができ、それにより宿主ゲノムと共に複製される。更に、特定のベクターは、それらが作動可能に結合されている遺伝子の発現を指令することができる。このようなベクターは、本明細書では、「組換え発現ベクター」又は単に「発現ベクター」）と呼ばれる。一般に、組換えＤＮＡ技術で有用な発現ベクターはしばしばプラスミドの形態である。プラスミドが最も一般的に使用されているベクターの形態であるので、本明細書では「プラスミド」と「ベクター」は互換的に使用されうる。
本明細書で互換可能に使用される「ポリヌクレオチド」又は「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾されたヌクレオチド若しくは塩基、及び／又はそれらの類似体、或いはＤＮＡ若しくはＲＮＡポリメラーゼにより、又は合成反応によりポリマー中に取り込み可能な任意の基質でありうる。
「宿主細胞」には、ポリヌクレオチド挿入物を組み込むためのベクター（複数可）のレシピエントでありうる、又はレシピエントであった個々の細胞又は細胞培養物が含まれる。宿主細胞には単一の宿主細胞の子孫が含まれ、その子孫は、自然突然変異、偶発突然変異又は意図的突然変異により、必ずしも元の親細胞と（形態又はゲノムＤＮＡ補体が）完全に同一であるとは限らない。宿主細胞は、本発明のポリヌクレオチドでｉｎ ｖｉｖｏでトランスフェクトされた細胞を含む。
本明細書において使用される「担体」には、用いられる投与量及び濃度で、暴露される細胞又は哺乳動物に対して非毒性の薬学的に許容される担体、賦形剤又は安定剤が含まれる。
本明細書で使用される場合、用語「予防」は、個体における特定の疾患、障害又は状態の発生又は再発に関して予防を提供することを含む。個体は、特定の疾患、障害又は状態に素因があるか、特定の疾患、障害又は状態にかかりやすいか、或いはそのような疾患、障害又は状態を発症するリスクがあるが、まだその疾患、障害又は状態と診断されていない場合がある。
本明細書で使用される場合、特定の疾患、障害又は状態を発症する「リスクがある」個体は、検出可能な疾患又は疾患の症状を有する場合と有しない場合があり、本明細書に記載される治療方法の前に検出可能な疾患又は疾患の症状を示した場合と示さなかった場合がある。「リスクがある」とは、個体が１つ以上のリスク因子を有することを意味し、これは、当技術分野で知られているような、特定の疾患、障害又は状態の発症と相関する測定可能なパラメーターである。このようなリスク因子を１つ以上有する個人は、このようなリスク因子を１つ以上有しない個体よりも、特定の疾患、障害又は状態を発症する確率が高い。
本明細書において使用される場合、用語「治療」は、臨床病理学の過程で治療される個体の自然経過を変更するように設計された臨床的介入を指す。治療の望ましい効果には、特定の疾患、障害又は状態の、進行速度の低下、病的状態の軽減又は緩和、及び寛解又は予後の改善が含まれる。個体は、例えば、特定の疾患、障害又は状態に関連する１つ以上の症状が緩和又は除去された場合、正常に「治療」されている。
「有効量」とは、所望の治療的又は予防的結果を達成するために必要な用量及び期間での、少なくとも有効な量を指す。有効量は、１又は複数回の投与において提供することができる。本明細書における有効量は、個体の病状、年齢、性別、及び体重、並びに個体に所望の応答を導く治療の能力といった要因に応じて変化しうる。有効量は、治療の何らかの毒性の又は有害な影響を治療的に有益な効果が凌駕する量でもある。予防的使用の場合、有益な又は望ましい結果には、リスクを排除若しくは低減すること、重症度を軽減すること、又は、疾患の生化学的、組織学的及び／若しくは行動症候、その合併症、並びに疾患の発生中に表れる病理学的な中間表現型を含む疾患の発症を遅延させることが含まれる。治療的使用の場合、有益な又は望ましい結果には、疾患に起因する１又は複数の症候の低減、疾患罹者の生活の質の向上、疾患を治療するために必要とされる他の薬物の用量の低減、例えば標的化による別の薬物の効果の増強、疾患の進行の遅延、及び／又は生存期間の延長といった臨床結果が含まれる。有効量の薬物、化合物又は薬学的組成物は、直接的又は間接的に、予防的又は治療的処置を達成するために十分な量である。臨床的文脈で理解されるように、薬物、化合物又は薬学的組成物の有効量は、別の薬物、化合物又は薬学的組成物と併せて達成されても、されなくてもよい。したがって、「有効量」は、１又は複数の治療剤を投与する文脈で考えられ、単一の薬剤は、１又は複数の他の薬剤との組み合わせで所望の結果が達成されうるか又は達成される場合には、有効量で与えられると考えられうる。
処置、予防、又はリスク低減の対象である「個体」とは、哺乳類に分類される動物で、ヒト、家畜、及び動物園の動物、競技用動物又は愛玩動物（犬、馬、ウサギ、牛、豚、ハムスター、ネズミ、フェレット、ラット、猫等）を指す。いくつかの実施態様では、個体はヒトである。
本明細書で使用される場合、別の化合又は組成物との「併用」投与とは、同時投与及び／又は異なる時間での投与を含む。併用投与はまた、異なる投与頻度又は間隔で、同一の投与経路又は異なる投与経路を使用することを含む、配合剤としての投与又は別個の組成物としての投与を包含する。いくつかの実施態様において、併用投与は、同じ治療レジメンの一部としての投与である。
本明細書で用いられる「約」という用語は、この技術分野における当業者に容易に知られているそれぞれの値についての通常の誤差範囲を意味する。本明細書における「およそ」の値又はパラメーターへの言及は、その値又はパラメーター自体に関する実施態様を含む（記載する）。
本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに他を指さない限り、複数形を含む。例えば、「抗体」への言及は、モル量などの１から多数の抗体への言及であり、当業者に知られているその均等物などを含む。
本明細書に記載される本開示の態様及び実施態様は、態様及び実施態様「を含む」、「から成る」及び「から本質的に成る」を含む。
Ｉ．抗ＳＩＲＰβ１抗体
本明細書で提供されるのは、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。提供される抗体は、例えば媒介性障害の診断又は治療に有用である。
いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ＳＩＲＰβ１活性のアゴニストである。いくつかの実施態様において、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰαには結合しない抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様において、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰγには結合しない抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様において、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム３には結合しない抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様において、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、マウスＳＩＲＰβ１及び／又はカニクイザルＳＩＲＰβ１には結合しない抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ＣＤ１４陽性単球に対するＳＩＲＰβ１活性のアゴニストである。いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、好中球、単球及び／又はマクロファージなどの免疫細胞において呼吸バーストを誘発する。いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、単球におけるＩＬ−８発現を誘発又は増加させる。いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、マクロファージ及び／又はマ樹状細胞におけるＴＮＦα発現を誘発又は増加させる。いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、例えば腫瘍細胞の、好中球を介した食作用を誘発する。いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、好中球を介した腫瘍細胞クリアランスを増加させる。いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、好中球の抗腫瘍特性又は活性を増加又は増強させる。
いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、免疫細胞を動員する。いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ｓｙｋリン酸化を誘発する。いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、Ｆｃガンマ受容体を発現する隣接する細胞によってクラスター化されると、ｓｙｋリン酸化を誘導する。
いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、細胞の表面でのＳＩＲＰβ１発現をダウンレギュレートする。いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、細胞の表面でのＳＩＲＰβ１発現をダウンレギュレートしない。いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、リガンドのＳＩＲＰβ１への結合を遮断する。いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、リガンドのＳＩＲＰβ１への結合を遮しない。
いくつかの実施態様において、以下の特性から選択される１又は複数の特性を有する抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。
ａ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰαには結合しない。
ｂ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰγには結合しない。
ｃ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム３には結合しない。
ｄ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、マウスＳＩＲＰβ１には結合しない。
ｅ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、カニクイザルＳＩＲＰβ１には結合しない。
ｆ） ＣＤ１４陽性単球に対するＳＩＲＰβ１活性をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏでアゴナイズする。
ｇ） 好中球及び／又は単球などの免疫細胞における呼吸性バーストをｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる。
ｈ） 単球におけるＩＬ−８発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる。
ｉ） マクロファージ及び／又は樹状細胞におけるＴＮＦα発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる。
ｊ） 例えば腫瘍細胞の、好中球を介した食作用をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる。
ｋ） 好中球を介した腫瘍細胞のクリアランスをｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる。
ｌ） マクロファージ上のＴＲＥＭ２発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏでアップレギュレートする。
ｍ） 単独で及び／又はアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体との組み合わせで、マクロファージの生存能力をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで増加させる。
ｎ） 樹状細胞の生存能力をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで増加させる。
いくつかの実施態様において、以下の特性を有する抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。
ａ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰαには結合しない。
ｂ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰγには結合しない。
ｃ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム３には結合しない。
ｄ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、マウスＳＩＲＰβ１には結合しない。
ｅ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、カニクイザルＳＩＲＰβ１には結合しない。
ｆ） ＣＤ１４陽性単球に対するＳＩＲＰβ１活性をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏでアゴナイズする。
ｇ） 好中球及び／又は単球などの免疫細胞における呼吸性バーストをｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる。
ｈ） 単球におけるＩＬ−８発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる。
ｉ） マクロファージ及び／又は樹状細胞におけるＴＮＦα発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる。
ｊ） 例えば腫瘍細胞の、好中球を介した食作用をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる。
ｏ） 好中球を介した腫瘍細胞のクリアランスをｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる。
ｐ） マクロファージ上のＴＲＥＭ２発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏでアップレギュレートする。
ｑ） 単独で及び／又はアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体との組み合わせで、マクロファージの生存能力をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで増加させる。
ｋ） 樹状細胞の生存能力をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで増加させる。
Ａ．例示的な抗体及び特定の他の抗体の実施態様
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；並びに（ｆ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つのＨＶＲを含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ３、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含む抗ＳＩＲＰβ１抗体であり、ここで、（ａ）ＨＶＲ−Ｈ１は、表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含み；（ｂ）ＨＶＲ−Ｈ２は、表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ２のアミノ酸配列を含み；（ｃ）ＨＶＲ−Ｈ３は、表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ３のアミノ酸配列を含み；（ｄ）ＨＶＲ−Ｌ１は、表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｌ１のアミノ酸配列を含み；（ｅ）ＨＶＲ−Ｌ２は、表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｌ２のアミノ酸配列を含み；並びに（ｆ）ＨＶＲ−Ｌ３は、表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｌ３のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１０、ＳＢ−１１、ＳＢ−１２、ＳＢ−１３、ＳＢ−１４、ＳＢ−１５、ＳＢ−１６、ＳＢ−１７、ＳＢ−１８、ＳＢ−１９、ＳＢ−２０、ＳＢ−２１、ＳＢ−２２、ＳＢ−２３、ＳＢ−２４、ＳＢ−２５、ＳＢ−２６、ＳＢ−２７、ＳＢ−２８、ＳＢ−２９、ＳＢ−３０、ＳＢ−３１、ＳＢ−３２、ＳＢ−３３、ＳＢ−３４、ＳＢ−３５、ＳＢ−３６、ＳＢ−３７、ＳＢ−３８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４１、ＳＢ−４２、ＳＢ−４３、ＳＢ−４４、ＳＢ−４５、ＳＢ−４６、ＳＢ−４７、ＳＢ−４８、ＳＢ−４９、ＳＢ−５０、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の６つのＨＶＲ（表３、４、８及び９に示す）を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２から選択される抗体の６つのＨＶＲ（表３、４、８及び９に示す）を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の６つのＨＶＲ（表８及び９に示す）を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、ＳＢ−１−３、ＳＢ−２−８及びＳＢ−８−１３から選択される抗体の６つのＨＶＲ（表８及び９に示す）を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）配列番号２３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）配列番号２３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号２５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号２５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）配列番号２３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ−ＨＶＲ配列を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１０、ＳＢ−１１、ＳＢ−１２、ＳＢ−１３、ＳＢ−１４、ＳＢ−１５、ＳＢ−１６、ＳＢ−１７、ＳＢ−１８、ＳＢ−１９、ＳＢ−２０、ＳＢ−２１、ＳＢ−２２、ＳＢ−２３、ＳＢ−２４、ＳＢ−２５、ＳＢ−２６、ＳＢ−２７、ＳＢ−２８、ＳＢ−２９、ＳＢ−３０、ＳＢ−３１、ＳＢ−３２、ＳＢ−３３、ＳＢ−３４、ＳＢ−３５、ＳＢ−３６、ＳＢ−３７、ＳＢ−３８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４１、ＳＢ−４２、ＳＢ−４３、ＳＢ−４４、ＳＢ−４５、ＳＢ−４６、ＳＢ−４７、ＳＢ−４８、ＳＢ−４９、ＳＢ−５０、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ、Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３（表４及び９に示す）を含む。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３（表４及び９に示す）を含む。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ３（表９に示す）を含む。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ＳＢ−１−３、ＳＢ−２−８、及びＳＢ−８−１３から選択される抗体のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、及びＨＶＲ−Ｈ３（表９に示す）を含む。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、（ａ）配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、（ａ）配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、（ａ）配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｌ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｌ２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；（ｃ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｌ３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ−ＨＶＲ配列を含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１０、ＳＢ−１１、ＳＢ−１２、ＳＢ−１３、ＳＢ−１４、ＳＢ−１５、ＳＢ−１６、ＳＢ−１７、ＳＢ−１８、ＳＢ−１９、ＳＢ−２０、ＳＢ−２１、ＳＢ−２２、ＳＢ−２３、ＳＢ−２４、ＳＢ−２５、ＳＢ−２６、ＳＢ−２７、ＳＢ−２８、ＳＢ−２９、ＳＢ−３０、ＳＢ−３１、ＳＢ−３２、ＳＢ−３３、ＳＢ−３４、ＳＢ−３５、ＳＢ−３６、ＳＢ−３７、ＳＢ−３８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４１、ＳＢ−４２、ＳＢ−４３、ＳＢ−４４、ＳＢ−４５、ＳＢ−４６、ＳＢ−４７、ＳＢ−４８、ＳＢ−４９、ＳＢ−５０、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３（表３及び８に示す）を含む。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−ＨＬ及びＨＶＲ−Ｌ３（表３及び８に示す）を含む。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３（表８に示す）を含む。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ＳＢ−１−３、ＳＢ−２−８、及びＳＢ−８−１３から選択される抗体のＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３（表８に示す）を含む。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、（ａ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、（ａ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、（ａ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）（ｉ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｉｉ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｉｉｉ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｉｉ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｉｉｉ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は３つ全てのＶＬ ＨＶＲ配列を含む、ＶＬドメインを含む抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）（ｉ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｉｉ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；及び（ｉｉｉ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｉｉ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｉｉｉ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬドメインを含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ２を含むＶＨドメインと、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬドメインとを含む抗ＳＩＲＰβ１抗体であって、ここで、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１０、ＳＢ−１１、ＳＢ−１２、ＳＢ−１３、ＳＢ−１４、ＳＢ−１５、ＳＢ−１６、ＳＢ−１７、ＳＢ−１８、ＳＢ−１９、ＳＢ−２０、ＳＢ−２１、ＳＢ−２２、ＳＢ−２３、ＳＢ−２４、ＳＢ−２５、ＳＢ−２６、ＳＢ−２７、ＳＢ−２８、ＳＢ−２９、ＳＢ−３０、ＳＢ−３１、ＳＢ−３２、ＳＢ−３３、ＳＢ−３４、ＳＢ−３５、ＳＢ−３６、ＳＢ−３７、ＳＢ−３８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４１、ＳＢ−４２、ＳＢ−４３、ＳＢ−４４、ＳＢ−４５、ＳＢ−４６、ＳＢ−４７、ＳＢ−４８、ＳＢ−４９、ＳＢ−５０、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体のＨＶＲ（表３、４、８及び９に示す）である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ２を含むＶＨドメインと、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬドメインとを含む抗ＳＩＲＰβ１抗体であって、ここで、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体のＨＶＲ（表３、４、８及び９に示す）である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ２を含むＶＨドメインと、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬドメインとを含む抗ＳＩＲＰβ１抗体であって、ここで、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３は、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体のＨＶＲ（表８及び９に示す）である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２及びＨＶＲ−Ｈ２を含むＶＨドメインと、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬドメインとを含む抗ＳＩＲＰβ１抗体であって、ここで、ＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３は、ＳＢ−１−３、ＳＢ−２−８、及びＳＢ−８−１３から選択される抗体のＨＶＲ（表８及び９に示す）である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）（ｉ）配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｉｉ）配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉｖ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｖ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｖｉ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬドメインとを含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）（ｉ）配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｉｉ）配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉｖ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｖ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｖｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬドメインとを含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、（ａ）（ｉ）配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｉｉ）配列番号２４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｉｉｉ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含むＶＨドメインと、（ｂ）（ｉｖ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｖ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｖｉ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含むＶＬドメインとを含む、抗ＳＩＲＰβ１抗体である。
別の態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、又は３８２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。特定の実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、又は３６５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列に対する置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ＳＩＲＰβ１に結合する能力を保持している。特定の実施態様では、合計１から１０のアミノ酸が、配列番号２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、又は３８２において置換、挿入、及び／又は欠失されている。特定の実施態様では、合計１から５のアミノ酸が、配列番号２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、又は３８２において置換、挿入、及び／又は欠失されている。ある実施態様において、置換、挿入又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。場合によって、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、又は３８２のＶＨ配列（その配列の翻訳後修飾も含む）を含む。特定の実施態様において、ＶＨは、（ａ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、配列番号２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３３４、３３６、３３８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、又は３７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。特定の実施態様では、配列番号２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３３４、３３６、３３８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、又は３７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列に対する置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ＳＩＲＰβ１に結合する能力を保持している。いくつかの実施態様では、合計１から１０のアミノ酸が、配列番号２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３３４、３３６、３３８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、又は３７０において置換、挿入、及び／又は欠失されている。いくつかの実施態様では、合計１から５のアミノ酸が、配列番号２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３３４、３３６、３３８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、又は３７０において置換、挿入、及び／又は欠失されている。ある実施態様において、置換、挿入又は欠失は、ＨＶＲ外の（すなわちＦＲ内の）領域で生じる。場合によって、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３３４、３３６、３３８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、又は３７０のＶＬ配列（その配列の翻訳後修飾も含む）を含む。特定の実施態様において、ＶＬは、（ａ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｂ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；並びに（ｃ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される１つ、２つ又は３つのＨＶＲを含む。
いくつかの実施態様では、上記実施態様のいずれかにあるようなＶＨと、上記実施態様のいずれかにあるようなＶＬとを含む抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様において、提供されるのは、上記実施態様のいずれかにあるようなＶＨと、上記実施態様のいずれかにあるようなＶＬとを含む抗ＳＩＲＰβ１抗体である。一実施態様において、抗体は、配列番号２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、及び３８２から選択されるＶＨ配列と、配列番号２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３３４、３３６、３３８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、及び３７０から選択されるＶＬ配列とを、これらの配列の翻訳後修飾も含め、含む。いくつかの実施態様において、抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１０、ＳＢ−１１、ＳＢ−１２、ＳＢ−１３、ＳＢ−１４、ＳＢ−１５、ＳＢ−１６、ＳＢ−１７、ＳＢ−１８、ＳＢ−１９、ＳＢ−２０、ＳＢ−２１、ＳＢ−２２、ＳＢ−２３、ＳＢ−２４、ＳＢ−２５、ＳＢ−２６、ＳＢ−２７、ＳＢ−２８、ＳＢ−２９、ＳＢ−３０、ＳＢ−３１、ＳＢ−３２、ＳＢ−３３、ＳＢ−３４、ＳＢ−３５、ＳＢ−３６、ＳＢ−３７、ＳＢ−３８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４１、ＳＢ−４２、ＳＢ−４３、ＳＢ−４４、ＳＢ−４５、ＳＢ−４６、ＳＢ−４７、ＳＢ−４８、ＳＢ−４９、ＳＢ−５０、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１−３、ＳＢ−２−８、及びＳＢ−８−１３から選択される抗体のＶＨ配列及びＶＬ配列を含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３６７のＶＨ配列と配列番号２６７のＶＬ配列とを含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３７２のＶＨ配列と配列番号３７０のＶＬ配列とを含む。いくつかの実施態様では、抗体は、配列番号３７６のＶＨ配列と配列番号２８０のＶＬ配列とを含む。
いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、及び３８２から選択されるＶＨ配列と、配列番号２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３３４、３３６、３３８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、及び３７０から選択されるＶＬ配列とを含む抗体と結合について競合する。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１０、ＳＢ−１１、ＳＢ−１２、ＳＢ−１３、ＳＢ−１４、ＳＢ−１５、ＳＢ−１６、ＳＢ−１７、ＳＢ−１８、ＳＢ−１９、ＳＢ−２０、ＳＢ−２１、ＳＢ−２２、ＳＢ−２３、ＳＢ−２４、ＳＢ−２５、ＳＢ−２６、ＳＢ−２７、ＳＢ−２８、ＳＢ−２９、ＳＢ−３０、ＳＢ−３１、ＳＢ−３２、ＳＢ−３３、ＳＢ−３４、ＳＢ−３５、ＳＢ−３６、ＳＢ−３７、ＳＢ−３８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４１、ＳＢ−４２、ＳＢ−４３、ＳＢ−４４、ＳＢ−４５、ＳＢ−４６、ＳＢ−４７、ＳＢ−４８、ＳＢ−４９、ＳＢ−５０、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体と結合について競合する。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体と結合について競合する。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体と結合について競合する。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ＳＢ−１−３、ＳＢ−２−８、及びＳＢ−８−１３から選択される抗体と結合について競合する。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号３６７のＶＨ配列と配列番号２６７のＶＬ配列とを含む抗体と結合について競合する。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号３７２のＶＨ配列と配列番号３７０のＶＬ配列とを含む抗体と結合について競合する。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号３７６のＶＨ配列と配列番号２８０のＶＬ配列とを含む抗体と結合について競合する。
いくつかの実施態様において、抗体は、配列番号２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、及び３８２から選択されるＶＨ配列と、配列番号２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３３４、３３６、３３８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、及び３７０から選択されるＶＬ配列とを含む抗ＳＩＲＰβ１抗体によって結合されるエピトープと同じか又は重複するヒトＳＩＲＰβ１のエピトープに結合する。いくつかの実施態様において、抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１０、ＳＢ−１１、ＳＢ−１２、ＳＢ−１３、ＳＢ−１４、ＳＢ−１５、ＳＢ−１６、ＳＢ−１７、ＳＢ−１８、ＳＢ−１９、ＳＢ−２０、ＳＢ−２１、ＳＢ−２２、ＳＢ−２３、ＳＢ−２４、ＳＢ−２５、ＳＢ−２６、ＳＢ−２７、ＳＢ−２８、ＳＢ−２９、ＳＢ−３０、ＳＢ−３１、ＳＢ−３２、ＳＢ−３３、ＳＢ−３４、ＳＢ−３５、ＳＢ−３６、ＳＢ−３７、ＳＢ−３８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４１、ＳＢ−４２、ＳＢ−４３、ＳＢ−４４、ＳＢ−４５、ＳＢ−４６、ＳＢ−４７、ＳＢ−４８、ＳＢ−４９、ＳＢ−５０、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗ＳＩＲＰβ１抗体によって結合されるエピトープと同じか又は重複するヒトＳＩＲＰβ１のエピトープに結合する。
いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗ＳＩＲＰβ１抗体によって結合されるエピトープと同じか又は重複するヒトＳＩＲＰβ１のエピトープに結合する。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗ＳＩＲＰβ１抗体によって結合されるエピトープと同じか又は重複するヒトＳＩＲＰβ１のエピトープに結合する。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＢ−１−３、ＳＢ−２−８、及びＳＢ−８−１３から選択される抗ＳＩＲＰβ１抗体によって結合されるエピトープと同じか又は重複するヒトＳＩＲＰβ１のエピトープに結合する。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号３６７のＶＨ配列と配列番号２６７のＶＬ配列とを含む抗ＳＩＲＰβ１抗体によって結合されるエピトープと同じか又は重複するヒトＳＩＲＰβ１のエピトープに結合する。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号３７２のＶＨ配列と配列番号３７０のＶＬ配列とを含む抗ＳＩＲＰβ１抗体によって結合されるエピトープと同じか又は重複するヒトＳＩＲＰβ１のエピトープに結合する。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号３７６のＶＨ配列と配列番号２８０のＶＬ配列とを含む抗ＳＩＲＰβ１抗体によって結合されるエピトープと同じか又は重複するヒトＳＩＲＰβ１のエピトープに結合する。いくつかの実施態様では、ヒトＳＩＲＰβ１のエピトープは、抗ＳＩＲＰβ１抗体によって結合されるエピトープと同じである。
いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号１のアミノ酸３０〜１４８内のエピトープに結合する。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号１のアミノ酸３０〜１３６内のエピトープに結合する。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号１のアミノ酸３０〜８０内のエピトープに結合する。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号１のアミノ酸４０〜９０内のエピトープに結合する。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号１のアミノ酸５０〜１００内のエピトープに結合する。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号１のアミノ酸６０〜１１０内のエピトープに結合する。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号１のアミノ酸７０〜１２０内のエピトープに結合する。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号１のアミノ酸８０〜１３０内のエピトープに結合する。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、配列番号１のアミノ酸９０〜１４０内のエピトープに結合する。
いくつかの実施態様では、上記の実施態様のいずれかに記載の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ヒト化及び／又はヒト抗体を含めたモノクローナル抗体である。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、実質的に完全長抗体であり、例えば、本明細書に定義されているＩｇＧｌ抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、又は他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
いくつかの実施態様において、上記の実施態様のいずれかに記載の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、以下のセクション１〜７に記載されている任意の特徴を、単独で又は組み合わせて組み込むことができる。
（１）抗ＳＩＲＰβ１抗体結合親和性
本明細書において提供される抗体のいくつかの実施態様において、抗体は、＜１μΜ、＜１００ｎＭ、＜１０ｎＭ、＜１ｎＭ、＜０．１ｎＭ、＜０．０１ｎＭ、又は＜０．００１ｎＭ（例えば１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。解離定数は、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、バイオ層干渉法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ社のＯｃｔｅｔ Ｓｙｓｔｅｍ）、等温滴定熱量測定（ＩＴＣ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）、円二色性（ＣＤ）、ストップフロー解析、及び比色又は蛍光タンパク質溶解分析等の生化学的又は生物物理学的技術を含む任意の分析技術によって決定することができる。一実施態様において、ＫＤは、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）により測定される。いくつかの実施態様において、ＲＩＡは、例えばＣｈｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）に記載されているように、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原を用いて実施される。いくつかの実施態様では、ＫＤは、約１０反応単位（ＲＵ）の固定した抗原ＣＭ５チップを用いて２５℃のＢＩＡＣＯＲＥ−３０００（ニュージャージー州ピスカタウェイのＢＩＡｃｏｒｅ社）を用いるＢＩＡＣＯＲＥ表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。いくつかの実施態様では、ＫＤは、例えば、本明細書の実施例で論じられるように、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ３８４システム（カリフォルニア州メンロパークのＦｏｒｔｅＢｉｏ社）を用いて測定される。
いくつかの実施態様では、ＫＤは、一価抗体（例えばＦａｂ）又は完全長抗体を用いて決定される。いくつかの実施態様では、ＫＤは、一価形態の完全長抗体を用いて決定される。
（２）抗体断片
本明細書で提供される抗体のいくつかの実施態様において、抗体は、抗体断片である。抗体断片には、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、並びに後述の他の断片が含まれる。特定の抗体断片の総説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えば国際公開第９３／１６１８５号、並びに米国特許第５５７１８９４号及び５５８７４５８号を参照のこと。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、且つｉｎ ｖｉｖｏ半減期が増加したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の議論については、米国特許第５８６９０４６号を参照のこと。
ダイアボディは、２つの抗原結合部位を有する抗体断片であって、二価又は二重特異性であり得る。例えば、欧州特許第４０４０９７号；国際公開第１９９３／１１１６１号；Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディも、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載されている。単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て又は一部、或いは軽鎖可変ドメインの全て又は一部を含む抗体断片である。特定の実施態様では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（例えば、米国特許第６２４８５１６号参照）。
抗体断片は、本明細書に記載されているように、インタクトな抗体のタンパク質消化及び組換え宿主細胞（例えば大腸菌又はファージ）による生産を含むがこれらに限定されない、様々な技術で作製することができる。
（３）キメラ抗体及びヒト化抗体
本明細書で提供される抗体のいくつかの実施態様において、抗体は、キメラ抗体である。特定のキメラ抗体が、米国特許第４８１６５６７に記載されている。一例として、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ又は非ヒト霊長類（サルなど）由来の可変領域）とヒト定常領域とを含む。更なる例として、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のものから変更されている「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。
本明細書で提供される抗体のいくつかの実施態様において、抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減するために、親の非ヒト抗体の特異性と親和性を保持したままヒト化されている。特定の実施態様では、ヒト化抗体は、ヒトにおいて実質的に非免疫原性である。特定の実施態様において、ヒト化抗体は、ヒト化抗体が由来する別の種からの抗体と実質的に同じである、標的に対する親和性を有する。例えば、米国特許第５５３０１０１号、同第５６９３７６１号、同第５６９３７６２号、及び同第５５８５０８９号を参照されたい。特定の実施態様において、免疫原性を低下させながら抗原結合ドメインの本来の親和性を低下させることなく改変することができる、抗体可変ドメインのアミノ酸が同定される。例えば、米国特許第５７６６８８６号及び同第５８６９６１９号を参照のこと。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ（又はその一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（又はその一部）がヒト抗体配列に由来する、１又は複数の可変ドメインを含む。ヒト化抗体はまた、場合によってヒト定常領域の少なくとも一部を含むであろう。いくつかの実施態様では、ヒト化抗体のいくつかのＦＲ残基は、例えば抗体特異性又は親和性を回復又は改善するために、非ヒト抗体（例えばＨＶＲ残基が由来する抗体）の対応する残基で置換される。
ヒト化抗体及びその作成方法は、例えばＡｌｍａｇｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１ ９−１６３３（２００８）に総説されており、例えば米国特許第５８２１３３７号、同第７５２７７９１号、同第６９８２３２１号、及び同第７０８７４０９号に詳述されている。ヒト化に用いることができるヒトフレームワーク領域には、限定されないが、「ベストフィット」法を用いて選択されるフレームワーク領域（例えばSims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)を参照）；軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えばCarter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)；及びPresta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)を参照）；ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域又はヒトの生殖細胞系フレームワーク領域（例えばAlmagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)を参照）；及びＦＲライブラリーをスクリーニングすることから得られるフレームワーク領域（例えばBaca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997)及びRosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)を参照）が含まれる。
（４）ヒト抗体
本明細書で提供される抗体のいくつかの実施態様において、抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野において既知の様々な技術を用いて生産することができる。ヒト抗体は、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）及びＬｏｎｂｅｒｇ Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に概して記載されている。
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してインタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に、免疫原を投与することによって調製することができる。マウス抗体の非存在下でマウス抗体産生が欠損しているマウスがヒト抗体を産生することを狙って、ヒトＩｇ遺伝子座の大きな断片を用いて、マウス抗体産生が欠損しているマウス株を設計することができる。大きなヒトＩｇ断片は、抗体の産生と発現の適切な調節だけでなく、大きな可変遺伝子の多様性を維持することができる。抗体の多様化と選択、及びヒトタンパク質に対する免疫寛容の欠如のためにマウス機構を利用することにより、これらのマウス株で再現されたヒト抗体レパートリーは、ヒト抗原を含む目的の抗原に対する高親和性の完全ヒト抗体を得ることができる。ハイブリドーマ技術を使用して、所望の特異性を有する抗原特異的ヒトＭＡｂを生産し、選択することができる。特定の例示的方法が、米国特許第５５４５８０７号、欧州特許第５４６０７３号、及び同第５４６０７３号に記載されている。また、例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥＴＭ技術を記載している、米国特許第６０７５１８１号及び同第６１５０５８４号；ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術を記載している米国特許第５７７０４２９号；Ｋ−Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許第７０４１８７０号、及びＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照されたし。このような動物により生成されるインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることにより、更に改変されうる。
ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の製造のためのヒト骨髄腫細胞株及びマウス−ヒト異種骨髄腫（ｈｅｔｅｒｏｍｙｅｌｏｍａ）細胞株が記述されている。（例えば、Kozbor J. Immunol. 133:3001 (1984) and Boerner et al. J. Immunol. 147:86 (1991)参照）また、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により生成されるヒト抗体もＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１：３５５７−３５６２（２００６）に記載されている。更なる方法には、例えば米国特許第７１８９８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の製造を記載）に記載されているものが含まれる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）もまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ２０（３）：９２７−９３７（２００５）及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載されている。ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成することもできる。その後、このような可変ドメイン配列を、所望のヒト定常ドメインと組み合わせてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術を以下に記載する。
本明細書で提供される抗体のいくつかの実施態様では、抗体は、所望の活性（複数可）を有する抗体のためのｉｎ ｖｉｔｒｏ法及び／又はスクリーニングコンビナトリアルライブラリーによって単離されたヒト抗体である。好適な例には、ファージディスプレイ（ＣＡＴ、Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ、Ｄｙａｘ、Ｂｉｏｓｉｔｅ／Ｍｅｄａｒｅｘ、Ｘｏｍａ、Ｓｙｍｐｈｏｇｅｎ、Ａｌｅｘｉｏｎ（旧Ｐｒｏｌｉｆｅｒｏｎ）、Ａｆｆｉｍｅｄ）リボソームディスプレイ（ＣＡＴ）、酵母ベースのプラットフォーム技術（Ａｄｉｍａｂ）等が含まれるが、これらに限定されない。いくつかのファージディスプレイ法では、ＶＨ遺伝子のレパートリー及びＶＬ遺伝子のレパートリーをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により別々にクローニングし、ファージライブラリーにおいてランダムに組換え、次いでＷｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５（１９９４）に記載のようにして、抗原結合ファージをスクリーニングすることができる。例えば、ファージディスプレイライブラリーを作成して所望の結合特性を有する抗体の当該ライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が、当技術分野で知られている。また、Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０，２００４；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３，２００４；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（−２）：１ １９−１３２（２００４）も参照されたい。ファージは通常、抗体断片を、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片又はＦａｂ断片のいずれかとして表示する。免疫化された供給源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要性を伴うことなく免疫原に対する高親和性抗体を提供する。或いは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：７２５−７３４（１９９３）に記載されるように、ナイーブなレパートリーを（例えばヒトから）クローン化して、広範囲の非自己抗原及び自己抗原に対する抗体の単一の供給源を免疫化無しで提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８，１９９２によって記載されているように、幹細胞由来の再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、非常に可変的なＨＶＲ３領域をコードし、ｉｎ ｖｉｔｒｏで再配列を達成することによって、合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーについて記載している特許刊行物には、例えば、米国特許第５７５０３７３号；並びに米国特許出願公開第２００７／０２９２９３６号及び同第２００９／０００２３６０号が含まれる。ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体は、本明細書においてヒト抗体又はヒト抗体の断片とみなされる。
（５）Ｆｃ領域を含む定常領域
本明細書で提供される抗体のいくつかの実施態様において、抗体は、Ｆｃを含む。いくつかの実施態様において、Ｆｃは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及び／又はＩｇＧ４アイソタイプである。いくつかの実施態様において、抗体は、ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス又はＩｇＡクラスのものである。
本明細書で提供される抗体の特定の実施態様において、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプを有する。いくつかの実施態様において、抗体は、ヒトＩｇＧ２定常領域を含む。いくつかの実施態様において、ヒトＩｇＧ２定常領域には、Ｆｃ領域が含まれる。いくつかの実施態様において、抗体は、１若しくは複数のＳＩＲＰβ１活性を、又はＦｃ受容体への結合とは無関係に、誘発する。いくつかの実施態様では、抗体は、抑制性Ｆｃ受容体に結合する。特定の実施態様では、抑制性Ｆｃ受容体は、抑制性Ｆｃガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。
本明細書で提供される抗体の特定の実施態様において、抗体は、ＩｇＧ１アイソタイプを有する。いくつかの実施態様において、抗体は、マウスＩｇＧ１定常領域を含む。いくつかの実施態様において、抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む。いくつかの実施態様において、ヒトＩｇＧ１定常領域には、Ｆｃ領域が含まれる。いくつかの実施態様では、抗体は、抑制性Ｆｃ受容体に結合する。特定の実施態様では、抑制性Ｆｃ受容体は、抑制性Ｆｃガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。
本明細書で提供される抗体の特定の実施態様において、抗体は、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。いくつかの実施態様において、抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む。いくつかの実施態様において、ヒトＩｇＧ４定常領域には、Ｆｃ領域が含まれる。いくつかの実施態様では、抗体は、抑制性Ｆｃ受容体に結合する。特定の実施態様では、抑制性Ｆｃ受容体は、抑制性Ｆｃガンマ受容体ＩＩＢ（ＦｃγＩＩＢ）である。
本明細書で提供される抗体の特定の実施態様において、抗体は、ハイブリッドＩｇＧ２／４アイソタイプを有する。いくつかの実施態様では、抗体は、ヒトＩｇＧ２のＥＵ番号付けによるアミノ酸１１８〜２６０と、ヒトＩｇＧ４のＥＵ番号付けによるアミノ酸２６１４〜４７を含むアミノ酸配列を含む（国際公開第１９９７／１１９７１号；国際公開第２００７／１０６５８５号）。
いくつかの実施態様では、Ｆｃ領域は、アミノ酸置換を含まずＦｃ領域を含む、対応する抗体と比較して、補体を活性化することなくクラスター化を増加させる。いくつかの実施態様では、抗体は、抗体によって特異的に結合された標的の１又は複数の活性を誘発する。いくつかの実施態様では、抗体は、ＳＩＲＰβ１に結合する。
エフェクター機能を改変するため、及び／又は抗体の血清半減期を増加させるために、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体を改変することも望ましい場合がある。例えば、定常領域上のＦｃ受容体結合部位は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害を低減するために、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩ及び／又はＦｃγＲＩＩＩなどの特定のＦｃ受容体への結合親和性を除去又は低減するように改変又は変異されてもよい。いくつかの実施態様では、エフェクター機能は、抗体のＦｃ領域（例えば、ＩｇＧのＣＨ２ドメイン内）のＮ−グリコシル化を除去することによって損なわれる。いくつかの実施態様では、エフェクター機能は、国際公開第９９／５８５７２号及びＡｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４０：５８５−５９３（２００３）；Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １６４：１９２５−１９３３（２０００）に記載されているようなヒトＩｇＧの２３３〜２３６、２９７、及び／又は３２７〜３３１等の領域を改変することによって損なわれる。また、他の実施態様では、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害及び抗体依存性細胞食作用を含む体液性応答を活性化することなく、隣接する細胞上でのＳＩＲＰβ１抗体のクラスタリングを増加させるために、エフェクター機能を改変するように本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体を改変して、ＩＴＩＭ含有ＦｃＲＩＩｂ（ＣＤ３２ｂ）に対する選択性の発見を増加させることが好ましい場合もある。
例えば、米国特許第５７３９２７７号に記載のように、抗体の血清半減期を延長させるために、抗体（特に抗体断片）の中へサルベージ受容体結合エピトープを組み入れることができる。本明細書で使用されるように、用語「サルベージ受容体結合エピトープ」は、ＩｇＧ分子（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープであって、ＩｇＧ分子のｉｎ ｖｉｖｏ血清半減期を増加させることに関与するものを指す。その他のアミノ酸配列修飾。
（６）多重特異性抗体
多重特異性は、同じ又は別のポリペプチド（例えば、本開示の１つ又は複数のＳＩＲＰβ１ポリペプチド）上のものを含む、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。いくつかの実施態様において、多重特異性抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施態様において、多重特異性抗体は、三重特異性抗体である。いくつかの実施態様において、多重特異性抗体は、四重特異性抗体である。このような抗体は、完全長抗体又は抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特性抗体）から誘導されうる。いくつかの実施態様において、多重特異性抗体は、ＳＩＲＰβ１上の第１の部位に結合する第１の抗原結合領域を含み、ＳＩＲＰβ１上の第２の部位に結合する第２の抗原結合領域を含む。いくつかの実施態様において、多重特異性抗体は、ＳＩＲＰβ１に結合する第１の抗原結合領域と、第２のポリペプチドに結合する第２の抗原結合領域とを含む。
本明細書で提供されるのは、第１の抗原結合領域を含む多重特異性抗体であり、第１の抗原結合領域は、ＳＩＲＰβ１に結合する本明細書に記載の抗体の６つのＨＶＲと第２のポリペプチドに結合する第２の抗原結合領域とを含む。いくつかの実施態様では、第１の抗原結合領域は、本明細書に記載の抗体のＶＨ又はＶＬを含む。
多重特異性抗体のいくつかの実施態様において、第２のポリペプチドは、血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原である。いくつかの実施態様では、本明細書の抗体は、血液脳関門を通過する輸送を促進するペプチドにコンジュゲートされている。血液脳関門を通過する輸送を促進する多数の抗原及びペプチドが当技術分野で知られている（例えば、Ｇａｂａｔｈｕｌｅｒ Ｒ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ｄｉｓ．３７：４８−５７（２０１０）を参照されたい）。このような第２の抗原及びペプチドには、限定されないが、トランスフェリン受容体（ＴＲ）；インスリン受容体（ＨＩＲ）；インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）；低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１及び２（ＬＰＲ−１及び２）；ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の非毒性変異体）などのジフテリア毒素受容体；ＴＭＥＭ３０（Ａ）（フリッパーゼ）；ＴＡＴ、Ｓｙｎ−Ｂ又はペネトラチン等のタンパク質伝達ドメイン；ポリアルギニン又は通常正に帯電したペプチド；ＡＮＧ１００５などのＡｎｇｉｏｐｅｐペプチド（例えばＧａｂａｔｈｕｌｅｒ，２０１０参照）、並びに血液脳関門内皮細胞上に濃縮されている他の細胞表面タンパク質（例えばDaneman et al. PLoS One 5(10):e13741 (2010)参照）が含まれる。いくつかの実施態様では、第２のポリペプチドは、トランスフェリンである。
多重特異性抗体のいくつかの実施態様では、第２のポリペプチドは、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質又はその断片、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン（ｍｅｄｉｎ）、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン（ｋｅｒａｔｏｅｐｉｔｈｅｌｉｎ）、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから選択される疾患原因タンパク質である。いくつかの実施態様では、第２のポリペプチドは、Ｔａｕである。いくつかの実施態様では、第２のポリペプチドは、Ａβｕである。いくつかの実施態様では、第２のポリペプチドは、ＴＲＥＭ２である。いくつかの実施態様では、第２のポリペプチドは、α−シヌクレインである。
多重特異性抗体のいくつかの実施態様では、第２のポリペプチドは、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、及びホスファチジルセリンから選択される、免疫細胞上に発現するリガンド及び／又はタンパク質である。
多重特異性抗体のいくつかの実施態様では、第２のポリペプチドは、１又は複数の腫瘍細胞上に発現するタンパク質、脂質、多糖又はは糖脂質及びこれらの任意の組み合わせである。
多重特異性抗体のいくつかの実施態様において、第２のポリペプチドは、ＴＲＥＭ２などの免疫グロブリン様受容体である。多重特異性抗体のいくつかの実施態様において、第２のポリペプチドはは、骨髄系細胞上に発現する免疫グロブリン様受容体である。
多価抗体は、少なくとも１のポリペプチド鎖（好ましくは２のポリペプチド鎖）を含み、そのポリペプチド鎖（複数可）は、２以上の可変ドメインを含む。例えば、ポリペプチド鎖（複数可）は、ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−（Ｘ２）ｎ−Ｆｃ（ここで、ＶＤ１は、第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の可変ドメインであり、Ｆｃは、Ｆｃ領域の一方のポリペプチド鎖であり、Ｘ１及びＸ２は、アミノ酸又はポリペプチドを表し、ｎは、０又は１である）を含んでもよい。同様に、ポリペプチド鎖（複数可）は、ＶＨ−ＣＨ１−フレキシブルリンカー−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖；又はＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１−Ｆｃ領域鎖を含んでもよい。本明細書における多価抗体は、好ましくは、少なくとも２（好ましくは４）の軽鎖可変ドメインポリペプチドを更に含む。本明細書における多価抗体は、例えば、約２から約８の軽鎖可変ドメインポリペプチドを含んでもよい。本明細書で企図される軽鎖可変ドメインポリペプチドは、軽鎖可変ドメインを含み、場合によって、ＣＬドメインを更に含んでもよい。
多重特異性抗体を作製するための技術は、限定されるものではないが、異なる特異性を有する２組の免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え共発現（Milstein and Cuello Nature 305: 537 (1983)、国際公開第９３／０８８２９号、及びTraunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991)を参照）及び「ノブ・イン・ホール」技術（例えば米国特許第５７３１１６８号を参照）を含む。国際公開第２０１３／０２６８３３号（ＣｒｏｓｓＭａｂ）も参照されたい。多重特異抗体はまた、抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製するための静電ステアリング効果を操作すること（国際公開第２００９／０８９００４号）、２以上の抗体を架橋すること（例えば米国特許第４６７６９８０号）；ロイシンを使用すること；二重特異性抗体断片を作製するために「ダイアボディ」技術を使用すること（例えばHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)を参照）；及び一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーを使用すること（例えばGruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)を参照）；及び、例えばTutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)に記載されているように、三重特異性抗体を調製することによって作製することができる。
「オクトパス抗体」を含む、３つ以上の機能性抗原結合部位を持つ操作された抗体もまた本明細書に含まれる（例えば米国特許出願公開第２００６／００２５５７６号を参照）。また、本明細書における抗体は、複数のＳＩＲＰβ１に結合する抗原結合部位を含む、「二重作用性ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」を含む（例えば米国特許出願公開第２００８／００６９８２０号参照）。
（７）抗体変異体
本明細書で提供される抗体のいくつかの実施態様では、アミノ酸配列変異体が企図されている。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。
（ｉ）置換変異体、挿入変異体、及び欠失変異体
本明細書で提供される抗体のいくつかの実施態様では、１以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することにより、又はペプチド合成により調製することができる。このような改変には、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又は該残基への挿入、及び／又は該残基の置換が含まれる。
Figure 2021529520
抗体の生物学的特性の実質的な改変は、（ａ）例えばシート又は螺旋状のコンフォメーションとしての、置換領域におけるポリペプチド骨格の構造の維持、（ｂ）標的部位での分子の電荷又は疎水性の維持、又は（ｃ）側鎖の嵩の維持に及ぼす効果が著しく異なる置換を選択することにより達成される。天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいて以下の群に分けることができる。
（１） 疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２） 中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３） 酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４） 塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５） 鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び
（６） 芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
例えば、非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つの要素を別のクラスの要素と交換することを必然的に伴うものである。このような置換された残基は、例えば、非ヒト抗体と相同であるヒト抗体の領域に、又は分子の非相同領域に導入することができる。
本明細書に記載のポリペプチド又は抗体に変更を加える際に、特定の実施態様によれば、アミノ酸の疎水性親水性指標（ｈｙｄｒｏｐａｔｈｉｃ ｉｎｄｅｘ）を考慮してもよい。各アミノ酸には、その疎水性と電荷特性に基づいて、以下のように親水性指標が割り当てられている。イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（−０．４）；スレオニン（−０．７）；セリン（−０．８）；トリプトファン（−０．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−１．６）；ヒスチジン（−３．２）；グルタミン酸（−３．５）；グルタミン（−３．５）；アスパラギン酸（−３．５）；アスパラギン（−３．５）；リジン（−３．９）；及びアルギニン（−４．５）
タンパク質に相互作用的な生物学的機能を付与する際の疎水性親水性アミノ酸指標の重要性は、当技術分野で理解されている。Ｋｙｔｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５７：１０５−１３１（１９８２）。特定のアミノ酸が、類似の疎水性親水性指標又はスコアを有する他のアミノ酸で置換されていても、依然として類似の生物学的活性を保持しうることが知られている。疎水性親水性指標に基づいて変更を加える際、特定の実施態様では、疎水性親水性指標が±２以内であるアミノ酸の置換が含まれる。特定の実施態様では、±１以内のものが含まれ、特定の実施態様では、±０．５以内のものが含まれる。
同様のアミノ酸の置換は、特にそれによって生成された生物学的に機能的なタンパク質又はペプチドを、本件の場合のように、免疫学的実施態様で使用することが意図されている場合、親水性に基づいて効果的に行うことができることも当技術分野で理解されている。特定の実施態様では、隣接するアミノ酸の親水性によって決定されるタンパク質の最大の局所平均親水性は、その免疫原性及び抗原性、すなわちタンパク質の生物学的特性と相関する。
以下の親水性値がこれらのアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．０±１）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グルタミン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオニン（−０．４）；プロリン（−０．５±１）；アラニン（−０．５）；ヒスチジン（−０．５）；システイン（−１．０）；メチオニン（−１．３）；バリン（−１．５）；ロイシン（−１．８）；イソロイシン（−１．８）；チロシン（−２．３）；フェニルアラニン（−２．５）及びトリプトファン（−３．４）。同様の親水性値に基づいて変更を加える際に、特定の実施態様では、親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換が含まれ、特定の実施態様では、±１以内であるものが含まれ、特定の実施態様では、±０．５以内であるものが含まれる。親水性に基づいて一次アミノ酸配列からエピトープを同定することもできる。これらの領域は、「エピトープコア（ｅｐｉｔｏｐｉｃ ｃｏｒｅ）領域」とも呼ばれる。
特定の実施態様では、これらの変更が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り、１つ以上のＨＶＲ内で置換、挿入又は欠失が起こりうる。例えば、実質的に結合親和性を低下させない保存的変更（例えば本明細書において提供される保存的置換）をＨＶＲ内で行うことができる。このような変更は、例えば、ＨＶＲ内の残基に接する抗原の外側にあってもよい。上記の変異体ＶＨ配列及びＶＬ配列の特定の実施態様において、各ＨＶＲは変化しないか、又はわずか１つ、２つ若しくは３つのアミノ酸置換を含む。
アミノ酸配列挿入には、長さが１残基から１００又はそれ以上の残基を含むポリペプチドまでの範囲のアミノ末端及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入物の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入変異体は、抗体の血清半減期を延ばす酵素（例えばＡＤＥＰＴのための）又はポリペプチドに対する抗体のＮ末端又はＣ末端への融合物を含む。
また、抗体の正確な立体配座の維持に関わっていない一切のシステイン残基は、一般にはセリンで置き換えられ、分子の酸化的安定性を改善し異常な架橋を防止してもよい。逆に、システイン結合（複数可）を抗体に付加して、その安定性を改善してもよい（特に、抗体が、Ｆｖ断片などの抗体断片である場合）。
（ｉｉ）グリコシル化変異体
本明細書で提供される抗体のいくつかの実施態様において、抗体は、それがグリコシル化される程度を増大又は低下させるように変更される。グリコシル化部位の抗体への付加又は削除は、１又は複数のグリコシル化部位が作り出させる又は除去されるようにアミノ酸配列を変更することにより、簡便に達成することができる。
抗体のグリコシル化は、典型的には、Ｎ結合又はＯ結合のいずれかである。Ｎ結合とは、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列のアスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−スレオニン（ここで、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的結合に対する認識配列である。よって、ポリペプチドにおけるこれらトリペプチド配列のいずれかの存在が、潜在的なグリコシル化部位を作り出す。Ｏ結合グリコシル化とは、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はスレオニンに、糖であるＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース又はキシロースのうちの１つが結合することを指すが、５−ヒドロキシプロリン又は５−ヒドロキシリジンもまた用いられうる。
抗体へのグリコシル化部位の付加は、アミノ酸配列を変更して前述のトリペプチド配列のうちの１又は複数を含むようにすることにより、簡便に達成される（Ｎ結合グリコシル化部位のもの場合）。この変更は、１若しくは複数のセリン又はトレオニン残基を元の抗体の配列に付加する、又は該残基により置換することによってもなされうる（Ｏ結合グリコシル化部位の場合）。
抗体がＦｃ領域を含む場合には、それに結合する糖を変えることができる。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインの、Ｋａｂａｔ番号付けによるＡｓｎ２９７へのＮ結合によって結合された分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。オリゴ糖には、様々な炭水化物、例えばマンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース及びシアル酸の他、二分岐オリゴ糖構造の「幹」においてＧｌｃＮＡｃに結合されたフコースが含まれうる。いくつかの実施態様において、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾は、特定の改善された特性を有する抗体変異体を作製するためになされうる。
一実施態様において、抗体変異体は、Ｆｃ領域に（直接又は間接的に）結合されたフコースを欠く糖鎖構造を有して提供される。例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号及び同第２００４／００９３６２１号を参照のこと。「脱フコシル化」又は「フコース欠損」抗体変異体に関連する刊行物の例は、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号、米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号、米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号、米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号、米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号、米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号、米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号、米国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）を含む。脱フコシル化抗体を産生する能力を有する細胞株の例には、タンパク質フコシル化を欠損しているＬｅｄ ３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）、及びノックアウト細胞株、例えばアルファ−１、６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)及びKanda et al. Biotechnol. Bioeng. 94(4):680-688 (2006)参照）が含まれる。
（ｉｉｉ）改変された定常領域
本明細書で提供される抗体のいくつかの実施態様において、抗体Ｆｃは、抗体Ｆｃアイソタイプ及び／又は改変である。いくつかの実施態様において、抗体Ｆｃアイソタイプ及び／又は改変型は、Ｆｃガンマ受容体に結合することができる。
本明細書で提供される抗体のいくつかの実施態様において、改変抗体Ｆｃは、ＩｇＧ１改変Ｆｃである。いくつかの実施態様において、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、１又は複数の改変を含む。例えば、いくつかの実施態様において、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、１又は複数のアミノ酸置換を含む（例えば、同じアイソタイプの野生型Ｆｃ領域と比較して）。いくつかの実施態様において、１又は複数のアミノ酸置換は、Ｎ２９７Ａ（Bolt S et al. (1993) Eur J Immunol 23:403-411)、Ｄ２６５Ａ（Shields et al. (2001) R. J. Biol. Chem. 276, 6591−6604）、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ（Hutchins et al. (1995) Proc Natl Acad Sci USA, 92:11980-11984; Alegre et al., (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu et al., (2000) Cell Immunol, 200:16-26）、Ｇ２３７Ａ（Alegre et al. (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu et al. (2000) Cell Immunol, 200:16-26）、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ（McEarchern et al., (2007) Blood, 109:1185-1192）、Ｐ３３１Ｓ（Sazinsky et al., (2008) Proc Natl Acad Sci USA 2008, 105:20167-20172）、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｌ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／又はＴ２５６Ｅから選択される（ここで、アミノ酸位置は、ＥＵ番号付け規則（ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ）による）。
ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＮ２９７Ａ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＤ２６５Ａ及びＮ２９７Ａ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＤ２７０Ａ変異を含む。いくつかの実施態様において、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＬ２３４Ａ及びＧ２３７Ａ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＧ２３７Ａ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ及びＡ３３０Ｒ変異の１又は複数（全てを含む）を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＳ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ変異の１又は複数を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ及びＡ３３０Ｒ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＰ２３８Ｄ、Ｌ３２８Ｅ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ及びＡ３３０Ｒ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＰ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｅ２３３Ｄ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ及びＡ３３０Ｒ変異を含む。
ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＰ２３８Ｄ、Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｅ、Ｇ２３７Ｄ、Ｈ２６８Ｄ、Ｐ２７１Ｇ及びＡ３３０Ｒ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＣ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ及びＬ２３５Ａ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ及びＰ３３１Ｓ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＳ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＳ２６７Ｅ変異を含む。ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、Ｆｃは、ＩｇＧ１の重鎖定常（ｃｏｎｓｔａｎｔ ｈｅａｖｙ）１（ＣＨ１）及びヒンジ領域の、カッパ軽鎖を有するＩｇＧ２のＣＨ１及びヒンジ領域（ＥＵ番号付けによるＩｇＧ２のアミノ酸１１８−２３０）による置換を含む。
ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、Ｆｃは、２つ以上のアミノ酸置換を含まないＦｃ領域を有する対応する抗体と比較して、補体を活性化することなく抗体のクラスタリングを増加させる２つ以上のアミノ酸置換を含む。したがって、ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、Ｆｃ領域を含む抗体であり、ここで該抗体は、ＥＵ番号付けによるＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、及びこれらの任意の組み合わせから選択される残基位置にＦｃ領域の１又は複数のアミノ酸置換と、位置Ｅ４３０Ｇに１つのアミノ酸置換とを含む。いくつかの実施態様において、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＰ３３１Ｓの位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ及びＰ３３１Ｓの位置にアミノ酸置を含む。いくつかの実施態様では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ及びＫ３２２Ａの位置にアミノ酸置を含む。いくつかの実施態様では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓの位置にアミノ酸置を含む。いくつかの実施態様において、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓの位置にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施態様では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ及びＡ３３０Ｓの位置にアミノ酸置を含む。いくつかの実施態様では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ及びＰ３３１Ｓの位置にアミノ酸置を含む。
ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、本明細書において、補体活性化を除去するための、ＥＵ番号付け規則によるＡ３３０Ｌ変異（Lazar et al. Proc Natl Acad Sci USA, 103:4005-4010 (2006)）、又はＬ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ及び／若しくはＰ３３１Ｓ変異（Sazinsky et al. Proc Natl Acad Sci USA, 105:20167-20172 (2008)）のうちの１若しくは複数を更に含んでもよく、これらと組み合わせてもよい。ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＡ３３０Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、及び／又はＰ３３１Ｓのうちの１又は複数を更に含んでもよい。ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ヒト血清中の抗体半減期を延長するための１又は複数の変異（例えば、ＥＵ番号付け規則によるＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６変異のうちの１又は複数（全てを含む））を更に含んでもよい。ＩｇＧ１改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、ＩｇＧ１改変Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ、Ｅ４３０Ｔ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｓ４４０Ｙ、及び／又はＳ４４０Ｗのうちの１又は複数を更に含んでもよい。
本開示の他の態様は、改変された定常領域（例えばＦｃ領域）を有する抗体に関する。ＦｃγＲ受容体への結合に依存して標的受容体を活性化する抗体は、ＦｃγＲ結合を排除するように操作された場合、そのアゴニスト活性を失う可能性がある（例えば、Wilson et al. Cancer Cell 19:101-113 (2011); Armour et al. Immunology 40:585-593 (2003);及びWhite et al. Cancer Cell 27:138-148 (2015)参照）。）したがって、正しいエピトープ特異性を有する本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、それがヒトＩｇＧ２アイソタイプ（ＣＨ１及びヒンジ領域）からのＦｃドメイン、又は抑制性ＦｃγＲＩＩＢ受容体若しくはその変異体に優先的に結合できる別のタイプのＦｃドメインを有する場合、最小限の有害作用で標的抗原を活性化することができると考えられる。
本明細書で提供される抗体のいずれかについてのいくつかの実施態様において、改変抗体Ｆｃは、ＩｇＧ２改変Ｆｃである。いくつかの実施態様において、ＩｇＧ２改変Ｆｃは、１又は複数の改変を含む。例えば、いくつかの実施態様において、ＩｇＧ２改変Ｆｃは、１又は複数のアミノ酸置換（例えば、同じアイソタイプの野生型と比較して）を含む。ＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、１又は複数のアミノ酸置換は、ＥＵ番号付け規則によるＶ２３４Ａ（Alegre et al. Transplantation 57:1537-1543 (1994); Xu et al. Cell Immunol, 200:16-26 (2000)）；Ｇ２３７Ａ（Cole et al. Transplantation, 68:563-571 (1999)）；Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ（米国特許出願公開第２００７／０１４８１６７号；Armour et al. Eur J Immunol 29: 2613-2624 (1999); Armour et al. The Haematology Journal 1(Suppl.1):27 (2000); Armour et al. The Haematology Journal 1(Suppl.1):27 (2000)）、Ｃ２１９Ｓ及び／又はＣ２２０Ｓ（White et al. Cancer Cell 27, 138-148 (2015)）；Ｓ２６７Ｅ、Ｌ３２８Ｆ（Chu et al. Mol Immunol, 45:3926-3933 (2008)）；及びＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／又はＴ２５６Ｅより選択される。ＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＶ２３４Ａ及びＧ２３７Ａの位置にアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＣ２１９Ｓ又はＣ２２０Ｓの位置にアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＡ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓの位置にアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＳ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆの位置にアミノ酸置換を含む。
ＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付け規則によるＣ１２７Ｓアミノ酸置換を含む（White et al., (2015) Cancer Cell 27, 138-148; Lightle et al. Protein Sci. 19:753-762 (2010)；及び国際公開第２００８／０７９２４６号）。ＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、抗体は、ＥＵ番号付け規則によるＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを有するＩｇＧ２アイソタイプを有する（White et al. Cancer Cell 27:138-148 (2015); Lightle et al. Protein Sci. 19:753-762 (2010)；及び国際公開第２００８／０７９２４６号）。
ＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付け規則によるＣ２２０Ｓアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、抗体は、ＥＵ番号付け規則によるＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを有するＩｇＧ２アイソタイプを有する。
ＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付け規則によるＣ２１９Ｓアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、抗体は、ＥＵ番号付け規則によるＣ２１４Ｓアミノ酸置換を含むカッパ軽鎖定常ドメインを有するＩｇＧ２アイソタイプを有する。
ＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＩｇＧ２アイソタイプ重鎖定常ドメイン１（ＣＨ１）及びヒンジ領域を含む（White et al. Cancer Cell 27:138-148 (2015)）。ＩｇＧ２改変Ｆｃについての特定の実施態様では、ＩｇＧ２アイソタイプＣＨ１及びヒンジ領域は、ＥＵ番号付けによる１１８〜２３０のアミノ酸配列を含む。ＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、抗体Ｆｃ領域は、ＥＵ番号付け規則によるＳ２６７Ｅアミノ酸置換、Ｌ３２８Ｆアミノ酸置換又はその両方、及び／又はＮ２９７Ａ若しくはＮ２９７Ｑアミノ酸置換を含む。
ＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ、Ｅ４３０Ｓ、Ｅ４３０Ｆ、Ｅ４３０Ｔ、Ｅ３４５Ｋ、Ｅ３４５Ｑ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ３４５Ｙ、Ｓ４４０Ｙ、及びＳ４４０Ｗの位置に１又は複数のアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ヒト血清中の抗体半減期を延長するための１又は複数の変異（例えば、ＥＵ番号付け規則によるＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅ変異のうちの１又は複数（全てを含む））を更に含んでもよい。ＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓを更に含んでもよい。
ＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＩｇＧ２／４ハイブリッドＦｃである。いくつかの実施態様では、ＩｇＧ２／４ハイブリッドＦｃは、ＩｇＧ２ ａａ１１８〜２６０とＩｇＧ４ ａａ ２６１〜４４７とを含む。ＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＨ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓの位置に１又は複数のアミノ酸置換を含む。
ＩｇＧ１及び／又はＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＡ３３０Ｌ、Ｌ２３４Ｆ；Ｌ２３５Ｅ、又はＰ３３１Ｓ及びこれらの任意の組み合わせから選択される１又は複数の追加のアミノ酸置換を含む。
ＩｇＧ１及び／又はＩｇＧ２改変Ｆｃについての特定の実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＩＣ１２７Ｓ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ、及びこれらの任意の組み合わせから選択される残基位置に１又は複数のアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／又はＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｓの位置にアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／又はＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ及びＰ３３１Ｓの位置にアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／又はＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ及びＫ３２２Ａの位置にアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／又はＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓの位置にアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／又はＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、Ａ３３０Ｓ、及びＰ３３１Ｓの位置にアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／又はＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及びＡ３３０Ｓの位置にアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／又はＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ、Ｋ３２２Ａ、及びＰ３３１Ｓの位置にアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／又はＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＳ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆの位置にアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／又はＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＣ１２７Ｓの位置にアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ１及び／又はＩｇＧ２改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、及びＳ４４０Ｙの位置にアミノ酸置換を含む。
本明細書で提供される抗体のいずれかについてのいくつかの実施態様において、改変抗体Ｆｃは、ＩｇＧ４改変Ｆｃである。いくつかの実施態様において、ＩｇＧ４改変Ｆｃは、１又は複数の改変を含む。例えば、いくつかの実施態様において、ＩｇＧ４改変Ｆｃは、１又は複数のアミノ酸置換（例えば、同じアイソタイプの野生型と比較して）を含む。ＩｇＧ４改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、１又は複数のアミノ酸置換は、ＥＵ番号付け規則によるＬ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｓ２２９Ｐ、Ｌ２３６Ｅ（Reddy et al. J Immunol 164:1925-1933(2000))、Ｓ２６７Ｅ、Ｅ３１８Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及び／又はＴ２５６Ｅから選択される。ＩｇＧ４改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、Ｆｃは、ＥＵ番号付け規則によるＬ２３５Ａ、Ｇ２３７、及びＥ３１８Ａを更に含んでもよい。ＩｇＧ４改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、Ｆｃは、ＥＵ番号付け規則によるＳ２２８Ｐ及びＬ２３５Ｅを更に含んでもよい。ＩｇＧ４改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、ＩｇＧ４改変Ｆｃは、ＥＵ番号付け規則によるＳ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆを更に含んでもよい。
ＩｇＧ４改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様において、ＩｇＧ４改変Ｆｃは、抗体安定化を促進するための、ＥＵ番号付け規則によるＳ２２８Ｐ変異（Angal et al. Mol Immunol. 30:105-108 (1993)）及び／又は（Peters et al. J Biol Chem. 287(29):24525-33 (2012)）に記載の１又は複数の変異を含み、これらと組み合わせてもよい。
ＩｇＧ４改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、ＩｇＧ４改変Ｆｃは、ヒト血清中の抗体半減期を延長するための１又は複数の変異（例えば、ＥＵ番号付け規則によるＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６変異のうちの１又は複数（全てを含む））を更に含んでもよい。
ＩｇＧ４改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＬ２３５Ｅを含む。ＩｇＧ４改変Ｆｃについての特定の実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＣ１２７Ｓ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｓ２６７Ｅ、Ｋ３２２Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ、及びこれらの任意の組み合わせから選択される残基位置に１又は複数のアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ、Ｌ２４３Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３３１Ｓの位置にアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ及びＰ３３１Ｓの位置にアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ及びＫ３２２Ａの位置にアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ４３０の位置にアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃ領域は、ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ及びＫ３２２Ａの位置にアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＳ２６７Ｅ及びＬ３２８Ｆの位置にアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４改変Ｆｃについてのいくつかの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＣ１２７Ｓの位置にアミノ酸置換を含む。ＩｇＧ４改変Ｆｃについてのいくつかのの実施態様では、Ｆｃは、ＥＵ番号付けによるＥ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ及びＳ４４０Ｙの位置にアミノ酸置換を含む。
（８）他の抗体改変
これらの抗体のいずれかについてのいくつかの実施態様において、抗体は、誘導体である。「誘導体」という用語は、アミノ酸（又は核酸）の挿入、欠失又は置換以外の化学修飾を含む分子を指す。特定の実施態様では、誘導体は、ポリマー、脂質、又は他の有機若しくは無機部分との化学結合を含むがこれらに限定されない、共有結合修飾を含む。特定の実施態様では、化学的に修飾された抗原結合タンパク質は、化学的に修飾されていない抗原結合タンパク質よりも長い循環半減期を有しうる。特定の実施態様では、化学的に修飾された抗原結合タンパク質は、所望の細胞、組織及び／又は器官に対して改善された標的化能力を有することができる。いくつかの実施態様では、誘導体抗原結合タンパク質は、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレングリコール又はポリプロピレングリコールを含むがこれらに限定されない、１種以上の水溶性ポリマーの付着物を含むように共有結合的に修飾される。例えば、米国特許第４６４０８３５号、同第４４９６６８９号、同第４３０１１４４号、同第４６７０４１７号、同第４７９１１９２号、及び同第４１７９３３７号を参照されたい。特定の実施態様では、誘導体抗原結合タンパク質は、モノメトキシ−ポリエチレングリコール、デキストラン、セルロース、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダムコポリマー）、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）−ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）及びポリビニルアルコール、並びにこれらのポリマーの混合物を含むがこれらに限定されない、１種以上のポリマーを含む。
特定の実施態様では、誘導体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットで共有結合的に修飾されている。特定の実施態様では、１種以上の水溶性ポリマーは、１又は複数の特定の位置、例えば誘導体のアミノ末端で結合されている。特定の実施態様では、１種以上の水溶性ポリマーは、誘導体の１又は複数の側鎖にランダムに付着している。特定の実施態様では、ＰＥＧは、抗原結合タンパク質の治療能力を向上させるために使用される。特定の実施態様では、ＰＥＧは、ヒト化抗体の治療能力を向上させるために使用される。特定のそのような方法は、例えば、任意の目的のために参照により本明細書に援用される米国特許第６１３３４２６号において論じられている。
ペプチドアナログは、テンプレートペプチドに類似した性質を有する非ペプチド薬として製薬業界で一般的に使用されている。任意の目的のために参照により本明細書に援用されるＦａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｒｅｓ．，１５：２９（１９８６）；及びＥｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３０：１２２９（１９８７）。そのような化合物は、コンピュータ化された分子モデリングの助けを借りて開発されることが多い。治療上有用なペプチドと構造的に類似しているペプチド模倣物を使用して、同様の治療効果又は予防効果を生み出すことができる。一般に、ペプチド模倣物は、ヒト抗体のようなパラダイムポリペプチド（すなわち、生化学的特性又は薬理学的活性を有するポリペプチド）に構造的に類似しているが、当技術分野でよく知られた方法により、−ＣＨ−ＣＨ２ＮＨ−、−ＣＨ２Ｓ−、−ＣＨ２−ＣＨ２−、−ＣＨ＝ＣＨ−（シス及びトランス）、−ＣＯＣＨ２−、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−、及び−ＣＨ２ＳＯ−から選択される連結によって置換されていてもよい１又は複数のペプチド連結を有する。特定の実施態様において、コンセンサス配列の１又は複数のアミノ酸を同じ型のＤ−アミノ酸（例えば、Ｌ−リジンの代わりにＤ−リジン）で系統的に置換することにより、より安定なペプチドを生成することができる。更に、コンセンサス配列又は実質的に同一のコンセンサス配列の変異型を含む拘束ペプチドは、当技術分野で知られている方法（任意の目的のために参照により本明細書に援用されるＲｉｚｏ ａｎｄ Ｇｉｅｒａｓｃｈ Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６１：３８７（１９９２））、例えば、ペプチドを環化する分子内ジスルフィド橋を形成することが可能な内部システイン残基を付加することによって、生成することができる。
薬物コンジュゲーションは、生物学的に活性な細胞傷害性（抗がんの）ペイロード又は薬物を、特定の腫瘍マーカー（例えば、理想的には腫瘍細胞内又は腫瘍細胞上にのみ存在するポリペプチド）を特異的に標的とする抗体と結合させることを含む。抗体は、これらのタンパク質を体内で追跡し、がん細胞の表面に付着する。抗体と標的タンパク質（抗原）の間の生化学的反応は、腫瘍細胞内のシグナルをトリガーし、その後腫瘍細胞は細胞毒素と共に抗体を吸収又は内在化する。ＡＤＣが内在化された後、細胞傷害性薬物が放出され、がんを死滅させる。この標的化により、理想的には、この薬物は、他の化学療法剤よりもより低い副作用を有し、広い治療ウィンドウを与える。抗体をコンジュゲートするための技術は、当技術分野で知られている（例えば、Jane de Lartigue OncLive July 5, 2012; ADC Review on antibody-Drug conjugates；及びDucry et al. Bioconjugate Chemistry 21 (1):5-13 (2010)を参照のこと）。
ＩＩ．抗体活性
いくつかの実施態様において、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰαには結合しない抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様において、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰγには結合しない抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様において、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム３には結合しない抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様において、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、マウスＳＩＲＰβ１には結合しない抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様において、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、カニクイザルＳＩＲＰβ１には結合しない抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様において、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、カニクイザルＳＩＲＰβ１アイソフォーム１には結合しない抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。
いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体の抗原への結合は、例えば、実施例１に記載のように、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ３８４システム（カリフォルニア州メンロパーク、ＦｏｒｔｅＢｉｏ社）を使用して決定することができる。抗体結合は、例えば、抗体のＦａｂ断片（一価結合の場合）又はＩｇＧなどの完全長抗体（二価結合又はアビディティーの場合）を用いて決定することができる。ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ３８４システムを用いる、完全長抗体の例示的な結合アッセイは、次の通りである。ＡＨＱセンサーに抗体をロードする。その後、ロードした抗体を抗原に曝露し、様々な時間間隔（例えば３分）でアッセイ緩衝液中でオフレートを測定する。その後、システム付属のデータ解析ソフトウェアのバインディングモデルを使用して、カイネティクスデータを適合させることができる。抗体Ｆａｂ断片親和性測定の場合、いくつかの実施態様において、抗原−ＦｃをＡＨＱセンサーにロードし、その後、抗体Ｆａｂ断片に曝露する。オフレートを上記のように測定し、データをシステム付属のソフトウェアを使用して解析する。
そして、いくつかの実施態様において、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏでのＣＤ１４陽性単球に対するＳＩＲＰβ１活性をアゴナイズする抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。そして、いくつかの実施態様において、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＣＤ１４陽性単球に対するＳＩＲＰβ１活性をアゴナイズする抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。そして、いくつかの実施態様において、ｉｎ ｖｉｖｏでのＣＤ１４陽性単球に対するＳＩＲＰβ１活性をアゴナイズする抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、抗ＳＩＲＰβ１抗体が培養プレートのような固体支持体上に固定化されているか、二次抗ＩｇＧ抗体によって結合されているか、又はアクセサリー細胞上のＦｃガンマ受容体によって結合されているアッセイにおいて、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＣＤ１４陽性単球に対するＳＩＲＰβ１活性をアゴナイズする。そして、いくつかの実施態様において、ｉｎ ｖｉｖｏでのＣＤ１４陽性単球に対するＳＩＲＰβ１活性をアゴナイズする抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。抗ＳＩＲＰβ１抗体がｉｎ ｖｉｔｒｏでＣＤ１４陽性単球に対するＳＩＲＰβ１活性をアゴナイズするどうかを決定するための、非限定的な例示のアッセイが、実施例３及び４に記載されている。例えば、単離された単球を、例えば４時間などの期間、飢餓状態にし、次いで、例えば、抗ＩｇＧ抗体の存在下で、抗ＳＩＲＰβ１抗体と共にインキュベートする。
インキュベーション後、細胞を溶解し、Ｓｙｋ、ＥＲＫ、ＡＫＴ、ＳＩＲＰβ１及び／又はＤＡＰ１２のうちの１又は複数のリン酸化を、例えば、抗ホスホチロシン及び／又は抗ホスホセリン抗体を使用して測定する。Ｓｙｋ、ＥＲＫ、ＡＫＴ、ＳＩＲＰβ１及び／又はＤＡＰ１２のうちの１又は複数のリン酸化の増加は、ＳＩＲＰβ１活性の増加（すなわち、ＳＩＲＰβ１活性のアゴニスト）を示している。別の例として、単球は、Ｂ細胞などのＦｃガンマ受容体を発現するアクセサリー細胞の存在下で抗ＳＲＰβ１抗体と共にインキュベートされてもよい。インキュベーション後、細胞を溶解し、Ｓｙｋ、ＥＲＫ、ＡＫＴ、ＳＩＲＰβ１及び／又はＤＡＰ１２のうちの１又は複数のリン酸化を上記のように決定する。Ｓｙｋ、ＥＲＫ、ＡＫＴ、ＳＩＲＰβ１及び／又はＤＡＰ１２のうちの１又は複数のリン酸化の増加は、ＳＩＲＰβ１活性の増加（すなわち、抗ＳＩＲＰβ１抗体がＳＩＲＰβ１活性のアゴニストであること）を示している。抗ＳＩＲＰβ１抗体がｉｎ ｖｉｖｏでＣＤ１４陽性単球に対するＳＩＲＰβ１活性をアゴナイズするかどうかを決定するための非限定的な例示的アッセイは、抗ＳＩＲＰβ１抗体をヒトＳＩＲＰβ１ ＢＡＣトランスジェニックＣ５７ＢＬ／６マウスに投与することと、ＣＤ１４陽性単球を、例えばＦＡＣＳにより単離することとを含む。その後、単球を溶解し、Ｓｙｋ、ＥＲＫ、ＡＫＴ、ＳＩＲＰβ１及び／又はＤＡＰ１２のうちの１又は複数のリン酸化を、上述のように測定する。Ｓｙｋ、ＥＲＫ、ＡＫＴ、ＳＩＲＰβ１及び／又はＤＡＰ１２のうちの１又は複数のリン酸化の増加は、ＳＩＲＰβ１活性の増加（すなわち、ＳＩＲＰβ１活性のアゴニスト）を示している。
いくつかの実施態様では、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで好中球及び／又は単球などの免疫細胞における呼吸バーストを誘導するか又は増加させる抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様では、ｉｎ ｖｉｔｒｏで好中球及び／又は単球などの免疫細胞における呼吸バーストを誘導するか又は増加させる抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様では、ｉｎ ｖｉｖｏで好中球及び／又は単球などの免疫細胞における呼吸バーストを誘導するか又は増加させる抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。抗ＳＩＲＰβ１抗体が、好中球及び／又は単球などの免疫細胞において呼吸バーストを誘導するか又は増加させるかどうかを決定するための、非限定的な例示のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイが、実施例５と６に記載されている。例えば、一次好中球を抗ＳＩＲＰβ１抗体と接触させ、活性酸素種（ＲＯＳ）の産生を、蛍光色素ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡなどの一般的な酸化ストレスインジケーターを用いて検出する。或いは、このアッセイは、培養プレートなどの固体支持体に固定化された、又は二次抗ＩｇＧ抗体によって結合された、又はアクセサリー細胞上のＦｃガンマ受容体によって結合された抗ＳＩＲＰβ１抗体を使用して実施することができる。
いくつかの実施態様では、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで単球においてＩＬ−８発現を誘導するか又は増加させる抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様では、ｉｎ ｖｉｔｒｏで単球においてＩＬ−８発現を誘導するか又は増加させる抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様では、ｉｎ ｖｉｖｏで単球においてＩＬ−８発現を誘導するか又は増加させる抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。抗ＳＩＲＰβ１抗体が単球においてＩＬ−８発現を誘導するか又は増加させるかどうかを決定するための、非限定的な例示のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイが、実施例５に記載されている。例えば、一次単球は、培養プレートなどの固体支持体に固定化された、又は二次抗ＩｇＧ抗体によって結合された、又はアクセサリー細胞上のＦｃガンマ受容体によって結合された抗ＳＩＲＰβ１抗体で、例えば一晩、刺激してもよい。上清を、ＩＬ−８放出のアッセイのために採取してもよい。抗ＳＩＲＰβ１抗体がｉｎ ｖｉｖｏで単球におけるＩＬ−８発現を誘導するか又は増加させるかどうかを決定するための非限定的な例示的アッセイは、ヒトＳＩＲＰβ１ ＢＡＣトランスジェニックＣ５７ＢＬ／６マウスに抗ＳＩＲＰβ１抗体を投与することと、１又は複数の血液試料を得ることを含む。ＩＬ−８の血清濃度は、Ｄｕｏｓｅｔ ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）のような市販のアッセイを用いて決定することができる。
いくつかの実施態様では、マクロファージ及び／又は樹状細胞におけるＴＮＦα発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様では、マクロファージ及び／又は樹状細胞におけるＴＮＦα発現をｉｎ ｖｉｔｒｏで誘導するか又は増加させる抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様では、マクロファージ及び／又は樹状細胞におけるＴＮＦα発現をｉｎ ｖｉｔｒｏで誘導するか又は増加させる抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。抗ＳＩＲＰβ１抗体がＴＮＦα発現を誘導するか又は増加させるかどうかを決定するための、非限定的な例示のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイが、実施例６に記載されている。例えば、単球由来のマクロファージ又は樹状細胞は、培養プレートなどの固体支持体上に固定化された、又は二次抗ＩｇＧ抗体によって結合された、又はアクセサリー細胞上のＦｃガンマ受容体によって結合された抗ＳＩＲＰβ１抗体の存在下で、例えば一晩、ＬＰＳで刺激してもよい。上清を、ＴＮＦα放出のアッセイのために採取してもよい。抗ＳＩＲＰβ１抗体がマクロファージ及び／又は樹状細胞におけるＴＮＦα発現をｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させるかどうかを決定するための非限定的な例示のアッセイは、ヒトＳＩＲＰβ１ ＢＡＣトランスジェニックＣ５７ＢＬ／６マウスに抗ＳＩＲＰβ１抗体をＬＰＳ（例えば、５μｇのＬＰＳ／マウス）と共に投与することを含む。その後、例えばＣＯ２窒息によってマウスを犠牲死させ、腹水を回収して、遠心分離により清澄化する。ＴＮＦ−α濃度は、Ｄｕｏｓｅｔ ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）のような市販のアッセイを用いて決定することができる。
いくつかの実施態様では、例えば腫瘍細胞の、好中球を介した食作用をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様では、例えば腫瘍細胞の、好中球を介した食作用をｉｎ ｖｉｔｒｏで誘導するか又は増加させる抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様では、例えば腫瘍細胞の、好中球を介した食作用をｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様では、好中球を介した腫瘍細胞クリアランスをｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。抗ＳＩＲＰβ１抗体が好中球を介した食作用を誘導するか又は増加させるかどうかを決定するための、非限定的な例示のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイが、実施例７に記載されている。例えば、一次好中球を、培養プレートなどの固体支持体上に固定化された、又は二次抗ＩｇＧ抗体によって結合された、又はアクセサリー細胞上のＦｃガンマ受容体によって結合された抗ＳＩＲＰβ１抗体と接触させる。ルシフェラーゼを発現するように操作されたラージＢ細胞リンパ腫細胞などのがん細胞は、抗ＣＤ２０抗体などのオプソニン化抗体の存在下で好中球及び固定化された抗ＳＩＲＰβ１抗体と共培養される。生存ラージ細胞は、ルシフェラーゼ活性を測定することによって定量化される。抗ＳＩＲＰβ１抗体の存在下でのＩｇＧコントロール抗体と比較した生存ラージ細胞の減少は、抗ＳＩＲＰβ１抗体が好中球を介した食作用を誘導するか又は増加させることを示している。抗ＳＩＲＰβ１抗体が好中球を介した腫瘍細胞クリアランスをｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させるかどうかを決定するための非限定的な例示のアッセイは、ＧＦＰを発現するＢ１６Ｆ１０黒色腫細胞をヒトＳＩＲＰβ１ ＢＡＣトランスジェニックマウスに静脈内注射することを含む。その後マウスを、オプソニン化抗ｇｐ７５抗体と共に抗ＳＩＲＰβ１抗体で処理する。末梢血を採取し、赤血球を溶解し、白血球をＦＡＣＳ緩衝液に再懸濁させる。好中球を抗ＣＤ１１ｂ抗体及び抗Ｌｙ６Ｇ抗体で染色し、摂取した腫瘍細胞からの緑色蛍光シグナルの獲得についてフローサイトメトリーで解析する。アイソタイプをマッチさせたコントロール抗体を用いた同じ実験と比較した、好中球における緑色蛍光シグナルの増加は、抗ＳＩＲＰβ１抗体が好中球を介した食作用を誘導するか又は増加させることを示す。
抗ＳＩＲＰβ１抗体がｉｎ ｖｉｖｏで好中球を介した腫瘍細胞クリアランスを誘導するか又は増加させるかどうかを決定するためのさらなる非限定的な例示のアッセイは、肺転移モデル、例えば以下のようなものを使用する。活性化ＦｃγＲの発現を欠くＦｃ受容体γ鎖欠損Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、Ｂ１６Ｆ１０黒色腫細胞を静脈内注射する。ヒトＳＩＲＰβ１ ＢＡＣトランスジェニックマウスから単離した骨髄好中球に、オプソニン化抗ｇｐ７５抗体と組み合わせた抗ＳＩＲＰβ１抗体を静脈内注入する。一定時間経ったら、マウスを安楽死させ、肺を回収して固定する。色素沈着が濃い転移性腫瘍結節の数を目視でカウントする。アイソタイプをマッチさせたコントロール抗体を用いた同じ実験と比較した、転移性腫瘍結節の数が減少は、抗ＳＩＲＰＢ１抗体が好中球を介する腫瘍細胞クリアランスをｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させることを示している。
いくつかの実施態様では、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏでマクロファージ上のＴＲＥＭ２発現を増加させる抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様において、ｉｎ ｖｉｔｒｏでマクロファージ上のＴＲＥＭ２発現を増加させる抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様において、ｉｎ ｖｉｖｏでマクロファージ上のＴＲＥＭ２発現、ＦＡＣＳ解析を増加させる抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。抗ＳＩＲＰβ１抗体がマクロファージ上のＴＲＥＭ２発現を増加させるかどうかを決定するための非限定的な例示のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイが、実施例１６に記載されている。例えば、Ｍ−ＣＳＦとの培養で分化した単球由来のマクロファージが、培養プレートなどの固体支持体上に固定化された、又は二次抗ＩｇＧ抗体によって結合された、又はアクセサリー細胞上にＦｃガンマ受容体によって結合された抗ＳＩＲＰβ１抗体と共にインキュベートされる。マクロファージ上のＴＲＥＭ２発現は、例えばＦＡＣＳ解析によって解析される。抗ＳＩＲＰβ１抗体がイｉｎ ｖｉｖｏでマクロファージ上のＴＲＥＭ２発現を増加させるかどうかを決定するための非限定的な例示のアッセイは、以下の通りである。ヒトＳＩＲＰβ１ＢＡＣトランスジェニックＣ５７ＢＬ／６マウスに、腹膜に注入された熟成滅菌チオグリコレートブロスでチャレンジを行う。チャレンジに続いて、マウスを抗ＳＩＲＰβ１抗体で処理する。その後、マウスを犠牲死させ、安楽死後、例えばＰＢＳで腹膜腔をすすぐことによって腹膜マクロファージを回収する。ロファージを、ＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｃ−Ｆ４／８０＋細胞と定義し、ＦＡＣＳによって解析して、ＴＲＥＭ２発現レベルを決定することができる。
いくつかの実施態様では、単独で及び／又はアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体との組み合わせで、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏでマクロファージの生存能力を高める抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様では、単独で及び／又はアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体との組み合わせで、ｉｎ ｖｉｔｒｏでマクロファージの生存能力を高める抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様では、単独で及び／又はアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体との組み合わせで、ｉｎ ｖｉｖｏでマクロファージの生存能力を高める抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様では、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで樹状細胞の生存能力を高める抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様では、ｉｎ ｖｉｔｒｏで樹状細胞の生存能力を高める抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。いくつかの実施態様では、ｉｎ ｖｉｖｏで樹状細胞の生存能力を高める抗ＳＩＲＰβ１抗体が提供される。抗ＳＩＲＰβ１抗体が単独で及び／又はアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体との組み合わせで、ｉｎ ｖｉｔｒｏでマクロファージの生存能力を高めるかどうかを決定するための、非限定的な例示のｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイが実施例１７及び１９に記載されている。例えば、Ｍ−ＣＳＦとの培養で分化した単球由来のマクロファージが、培養プレートなどの固体支持体上に固定化させた、又は二次抗ＩｇＧ抗体によって結合させた、又はアクセサリー細胞上のＦｃガンマ受容体によって結合させた抗ＳＩＲＰβ１抗体と、抗ＴＲＥＭ２抗体の有無にかかわらず、インキュベートされる。細胞生存性は、例えば、試料中のＡＴＰ濃度に比例する発光シグナルを生成する試薬であるＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定される。同様のアッセイを使用して、抗ＳＩＲＰβ１抗体がｉｎ ｖｉｔｒｏで骨髄由来マクロファージ又は樹状細胞の生存能力を高めるかどうかを決定することができる。このアッセイでは、骨髄細胞を、マクロファージを分化させるためにＭ−ＣＳＦと培養するか、又は樹状細胞を分化させるためにＧＭ−ＣＳＦと培養する。該マクロファージ又は樹状細胞は、培養プレートなどの固体支持体上に固定化させた、又は二次抗ＩｇＧ抗体によって結合させた、又はアクセサリー細胞上のＦｃガンマ受容体によって結合させた抗ＳＩＲＰβ１抗体と、抗ＴＲＥＭ２抗体の有無にかかわらず、インキュベートされる。上述の通り、細胞生存性は、例えば、試料中のＡＴＰ濃度に比例する発光シグナルを生成する試薬であるＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して測定される。抗ＳＩＲＰβ１抗体がｉｎ ｖｉｖｏでマクロファージの生存能力を高めるかどうかを決定するための非限定的な例示のアッセイは、以下の通りである。ＣＳＦ１Ｒに対する遮断抗体による長期治療は、Ｍ−ＣＳＦを介した生存シグナルの抑止により、腹膜及び組織に常在するＦ４／８０＋マクロファージを枯渇させる。このアッセイでは、ヒトＳＩＲＰβ１ＢＡＣトランスジェニックＣ５７ＢＬ／６マウスに抗ＳＩＲＰβ１抗体と一緒に抗ＣＳＦ１Ｒ抗体を投与する。治療後、例えばＣＯ２窒息によってマウスを犠牲死させ、心臓穿刺によって末梢血を採取する。腹膜マクロファージは、ＰＢＳでの洗浄によって採取される。マクロファージ集団は、血液及び腹膜中のＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｃ−Ｆ４／８０＋細胞にゲーティングすることにより、ＦＡＣＳでカウントされる。
ＩＩＩ．核酸、ベクター、及び宿主細胞
本開示の方法の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、例えば米国特許第４８１６５６７号に記載されているような組換え方法及び組成物を用いて製造することができる。いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体のいずれかをコードするヌクレオチド配列を有する単離された核酸が提供される。このような核酸は、抗ＳＩＲＰβ１抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又はＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、該抗体の軽鎖及び／又は重鎖）を含むコードすることができる。このような核酸を含む１又は複数のベクター（例えば発現ベクター）が提供される。いくつかの実施態様では、このような核酸を含む宿主細胞も提供される。いくつかの実施態様において、該宿主細胞は、（１）該抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及びＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）該抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター及び該抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、これらを形質導入された）。いくつかの実施態様において、該宿主細胞は、真核生物細胞、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又はリンパ系細胞（例えばＹ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。本開示の宿主細胞はまた、限定されないが、単離細胞、ｉｎ ｖｉｔｒｏ培養細胞、及びｅｘ ｖｉｖｏ培養細胞を含む。
本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体の作製方法が提供される。いくつかの実施態様において、本方法は、抗ＳＩＲＰβ１抗体をコードする核酸を含む本開示の宿主細胞を、抗体の発現に適した条件下で培養することを含む。いくつかの実施態様において、その後抗体が、宿主細胞（又は宿主細胞培養培地）から回収される。
本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体の組み換え生産のために、抗ＳＩＲＰβ１抗体をコードする核酸を単離し、宿主細胞内での更なるクローニング及び／又は発現のために１又は複数のベクターに挿入する。このような核酸は、容易に単離可能であり、従来の手順を用いて（例えば抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定することができる。
本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体のいずれかをコードする核酸配列を含むか、又は本明細書に記載の細胞表面発現断片若しくそのポリペプチド（抗体を含む）を含む適切なベクターには、クローニングベクター及び発現ベクターが含まれるが、これらに限定されない。適切なクローニングベクターは、標準的な技術に従って構築することができ、又は当技術分野で利用可能な多数のクローニングベクターから選択することができる。選択されるクローニングベクターは使用するつもりの宿主細胞によって異なり得るが、有用なクローニングベクターは、一般に、自己複製する能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼに対する単一の標的を有し、且つ／又はベクターを含むクローンを選択する際に使用できるマーカー用遺伝子を有しうる。好適な例には、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えばｐＢＳ ＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐｌ８、ｍｐｌ９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、並びにｐＳＡ３及びｐＡＴ２８のようなシャトルベクターが含まれる。これら及び他の多くのクローニングベクターは、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの民間のメーカーから入手可能である。
抗体をコードするベクターのクローニング又は発現に適した宿主細胞は、原核生物細胞又は真核細胞を含む。例えば、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要ない場合、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、細菌内で生産されうる。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば米国特許第５６４８２３７号、同第５７８９１９９号、及び同第５８４０５２３号。発現後、抗体を、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離し、更に精製することができる。
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母などの真核微生物もまた、抗体をコードするベクターのクローニング又は発現宿主として適しており。これには、グリコシル化経路が「ヒト化」され、その結果、部分的又は完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体が産生された真菌株及び酵母株も含まれる。
グリコシル化抗体の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）からも得られる。無脊椎動物細胞の例には、植物及び昆虫細胞が含まれる。多数のバキュロウイルス株が同定されており、これらは特にヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と併せて使用することができる。植物細胞培養物もまた、宿主として利用することができる（例えば、トランスジェニック植物において抗体を生産するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳTM技術を記載した米国特許第５９５９１７７号、同第６０４０４９８号、同第６４２０５４８号、同第７１２５９７８号、及び同第６４１７４２９号）。
脊椎動物細胞も宿主として用いることができる。例えば、懸濁液中で増殖するように適合されている哺乳動物細胞株は、有用でありうる。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）；ヒト胎児腎臓株（例えば、Graham et al., J. Gen Virol. 36: 59 (1977)に記載の２９３又は２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Mather, Biol. Reprod. 23: 243-251 (1980)に記載のＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；ＴＲＩ細胞（例えば、Mather et al., Annals N. Y Acad. Sci. 383: 44-68 (1982)に記載）；ＭＲＣ ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株は、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Urlaub et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)）を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、並びにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株を含む。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ及びＷｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２４８巻（B.K.C. Lo, 編., Humana Press, Totowa, NJ），２５５−２６８頁（２００３）を参照。
ＩＶ．薬学的組成物／製剤
本明細書に提供されるのは、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体及び薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物及び／又は薬学的製剤である。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容される担体は、好ましくは、採用される用量及び濃度において、レシピエントに対して無毒である。本明細書に記載の抗体は、固体、半固体、液体又は気体の形態の調製物に配合することができる。このような製剤の例には、限定されないが、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、軟膏、溶液、坐剤、注射剤、吸入剤、ゲル、ミクロスフィア、及びエアロゾルが含まれる。薬学的に許容される担体には、所望の製剤に応じて、動物又はヒト投与用の薬学的組成物を製剤化するために一般的に使用されるビヒクルである、薬学的に許容される非毒性の希釈剤担体が含まれうる。特定の実施態様において、薬学的組成物は、例えば、組成物のｐＨ、浸透性、粘度、透明度、色、等張性、臭気、無菌性、安定性、組成物の溶解又は放出の速度、吸着又は浸透性などを改変、維持又は保持するための製剤材料を含むことができる。
特定の実施態様において、薬学的に許容される担体には、限定されないが、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリジン等）；抗菌剤；酸化防止剤（アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム又は亜硫酸水素ナトリウム等）；緩衝剤（ホウ酸塩、重炭酸塩、トリス−ＨＣｌ、クエン酸塩、リン酸塩又は他の有機酸等）；充填剤（マンニトール又はグリシンなど）；キレート剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）など）；錯化剤（カフェイン、ポリビニルピロリドン、ベータ−シクロデキストリン又はヒドロキシプロピル−ベータ−シクロデキストリン等）；フィラー；単糖類；二糖類及び他の炭水化物（グルコース、マンノース又はデキストリン等）；タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン等）；着色、香料及び希釈剤；乳化剤；親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）；低分子量ポリペプチド；塩を形成する対イオン（ナトリウムなど）；防腐剤（塩化ベンザルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸又は過酸化水素等）；溶剤（グリセリン、プロピレングリコール又はポリエチレングリコール等）；糖アルコール（マンニトール又はソルビトールなど）；懸濁剤；界面活性剤又は湿潤剤（例えば、プルロニクス、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０などのポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサパル）；安定性向上剤（スクロース又はソルビトールなど）；浸透圧調整剤（例えば、ハロゲン化アルカリ金属（好ましくは塩化ナトリウム又は塩化カリウム）、マンニトール、ソルビトール）；送達ビヒクル；希釈剤；賦形剤及び／又は佐薬が含まれる。様々なタイプの投与に適した製剤の更なる例は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ ２２ｎｄ ｅｄ．（２０１３）にある。薬物送達の方法の短い総説については、Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３（１９９０）を参照されたい。
非経口投与に適した製剤には、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、及び目的のレシピエントの血液と製剤を等張にする溶質を含むことができる水性及び非水性の等張滅菌注射液；並びに懸濁化剤可溶化剤増粘剤、安定化剤、及び保存剤を含むことができる水性及び非水性の滅菌懸濁液が含まれる。
製剤は、脳又は中枢神経系における保持及び安定化のために最適化されていてもよい。本発明の薬剤を頭蓋コンパートメントに投与する際には、薬剤が拡散するなどして血液脳関門を越えないよう、コンパートメント内に保持されることが望ましい。安定化技術には、分子量を増加させるための、ポリエチレングリコール、ポリアクリルアミド、中性ｔタンパク質担体等の基への架橋、多量体化、又は結合が含まれる。
保持を増加させるための他の戦略には、生分解性又は生体分解可能なインプラントにおける、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体などの抗体の取り込みが含まれる。治療的に活性な薬剤の放出速度は、ポリマーマトリックスを介した輸送の速度、及びインプラントの生分解によって制御される。インプラントは、粒子、シート、パッチ、プラーク、繊維、マイクロカプセル等であってよく、選択された挿入部位に適合する任意のサイズ又は形状であってよい。使用することができる生分解性ポリマー組成物は、有機エステル又はエーテルであってもよく、これらは、分解されると、モノマーを含む生理学的に許容される分解生成物をもたらす。無水物、アミド、オルトエステル等は、それ自体で、又は他のモノマーと組み合わせて使用されてもよい。このようなポリマーは、縮合ポリマーとなる。ポリマーは、架橋されていても、架橋されていなくてもよい。特に関心の対象であるのは、ホモ又はコポリマーのいずれかのヒドロキシ脂肪族カルボン酸のポリマー、及び多糖類である。対象のポリエステルに含まれるのは、Ｄ−乳酸、Ｌ−乳酸、ラセミ乳酸、グリコール酸、ポリカプロラクトン、及びこれらの組み合わせである。対象の多糖類は、中でも、アルギン酸カルシウム、及び機能性セルロース、特に水不溶性、約５ｋＤから５００ｋＤの分子量などを特徴とするカルボキシメチルセルロースエステルである。生分解性ヒドロゲルもまた、本発明のインプラントに使用されうる。ヒドロゲルは通常、液体を吸収する能力を特徴とするコポリマー材料である。
Ｖ．治療用途
様々な実施態様において、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰβ１抗体は、以下の作用：ＣＤ１４陽性単球に対するＳＩＲＰβ１活性をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏでアゴナイズする；好中球及び／又は単球などの免疫細胞における呼吸バーストをｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導する；単球におけるＩＬ−８発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導する；マクロファージ及び／又は樹状細胞におけるＴＮＦα発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導する；例えば腫瘍細胞の、好中球を介する食作用をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導する；好中球を介する腫瘍細胞クリアランスをｉｎ ｖｉｖｏで増加させる；マクロファージ上のＴＲＥＭ２発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏでアップレギュレートする；単独で及び／又はアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体との組み合わせでの、マクロファージの生存能力をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで高める；並びに樹状細胞の生存能力をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで高める、から選択される１又は複数の作用を有する。
様々な実施態様において、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰβ１抗体は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパシー（Ｔａｕｐａｔｈｙ）病、那須ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦症、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢性疾患、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性症、呼吸器感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、骨軟化症、骨のパジェット病、及び／又はがんを予防、リスクを低減、又は治療するために使用することができる。いくつかのこのような実施様態では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、アゴニスト抗体である。
いくつかの実施態様において、本明細書で提供されるのは、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパシー病、那須ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦症、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症（ｃｏｒｔｉｃａｌ ｂａｓａｌ ｇａｎｇｌｉｏｎｉｃ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢性疾患、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性症、呼吸器感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、骨軟化症、骨のパジェット病、及び／又はがんを有する個体に、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体の治療有効量を投与することによって、該個体を予防、リスクを低減、又は処置する方法である。いくつかのこのような実施様態では、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ＳＩＲＰβ１活性のアゴニスト（例えば、ＳＩＲＰβ１活性を誘導する又は増加させる）である。
本明細書に開示されるように、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体はまた、自然免疫細胞の生存を誘導及び／又は促進するために使用されうる。いくつかの実施態様において、本開示は、治療有効量の本開示のアゴニスト抗ＳＩＲＰβ１抗体を、必要とする個体に投与することによって、該個体において自然免疫細胞の生存を誘導又は促進する方法を提供する。
本明細書に開示されるように、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体はまた、損傷後などの創傷治癒を誘導及び／又は促進するために使用されてもよい。いくつかの実施態様において、創傷治癒は、損傷後の結腸創傷修復であってもよい。いくつかの実施態様において、本開示は、治療有効量の本開示のアゴニスト抗ＳＩＲＰβ１抗体を、必要とする個体に投与することによって、該個体において創傷治癒を誘導又は促進する方法を提供する。
いくつかの実施態様では、対象又は個体は、哺乳動物である。哺乳動物は、限定されるものではないが、家畜動物（例えばウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えばヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、及びげっ歯類（例えばマウス及びラット）含む。いくつかの実施態様では、対象又は個体は、ヒトである。
本明細書で提供される抗体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口投与、肺内投与、鼻腔内投与、鼻腔内投与、脊髄内投与、頭蓋内投与、脊髄内投与、髄腔内投与、髄腔内投与、経口投与、局所投与、又は吸入経路を含む任意の適切な手段で投与することができる。非経口輸液には、筋肉内投与、ボーラスとして若しくは一定期間の持続注入よる静脈内投与、動脈内投与、関節内投与、腹腔内投与、又は皮下投与が含まれる。いくつかの実施態様では、投与は、静脈投与である。いくつかの実施態様では、投与は、皮下である。投薬は、その投与が短期間か又は長期であるかどうかに部分的に依存し、任意の適切な経路、例えば、静脈内又は皮下注射などの注射により行うことができる。本明細書では、単回投与又は様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、パルス注入を含むがこれらに限定されない様々な投与スケジュールが想定される。
本発明で提供される抗体は、医療実施基準に一致した様式で製剤化、調薬及び投与される。この観点において考慮すべき要素には、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤送達部位、投与方法、投与日程、及び医療従事者が知るその他の要素が含まれる。本発明の抗体は、必要ではないが任意選択的に、問題の障害の予防又は治療のために現在使用されている１種以上の薬剤と共に製剤化される。このような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体の量、障害又は治療の種類、及び上述のその他の要素に応じて決まる。そのような他の薬剤は、一般的には本明細書に記載されているのと同じ用量及び投与経路で、又は本明細書に記載の用量の約１から９９％で、又は経験的に／臨床的に妥当であると決定された任意の用量及び任意の経路で使用される。
疾患の予防又は治療に関し、本発明の抗体の（単独での使用又は１種以上の他の追加的治療剤との併用の際の）適切な投与量は、治療される疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体が予防又は治療のどちらの目的で投与されるか、従前の治療、患者の病歴及び抗体に対する応答、並びに主治医の裁量によって決定されるであろう。本発明の抗体は、単回又は一連の治療にわたって患者へ適切に投与される。
疾患の種類及び重症度に応じて、例えば単回又は複数回の別個の投与によるか、持続注入によるかに関わらず、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体が患者への投与のための初期候補用量となりうる。典型的な１日用量は、上記要因に応じて約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であってもよい。数日以上にわたる反復投与に関しては、病状に応じて、治療は一般に疾患症状の望まれる抑制が起こるまで継続されるものとする。抗体の１つの例示的な投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇ（又はこれらの任意の組み合わせ）の１又は複数の用量を患者に投与することができる。このような用量は断続的に、例えば毎週又は３週毎に（例えば、患者が約２から約２０用量、又は例えば、約６用量の抗体を受けるように）投与してよい。特定の実施態様では、投与頻度は、１日に３回、１日に２回、１日に１回、隔日に１回、１週間に１回、２週間に１回、４週間に１回、５週間に１回、６週間に１回、７週間に１回、８週間に１回、９週間に１回、１０週間に１回、又は１ヶ月に１回、２ヶ月に１回、３ヶ月に１回、又はそれ以上である。初回の高負荷用量の後、それより低い用量を１以上投与してもよい。しかしながら、他の用量レジメンも有用である。この療法の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易にモニターされる。
認知症
認知症は、非特異的な症候群（すなわち、一連の徴候と症状）であり、通常の加齢から予想されるものを超えて、以前は障害のなかった人の全体的な認知能力の深刻な喪失として現れるものである。認知症は、独特の全体的な脳損傷の結果として静的である場合もある。或いは、認知症は、進行性の場合もあり、体の損傷又は疾患病気が原因で長期的な衰えをもたらすこともある。認知症は、高齢者に多く見られるが、６５歳より前に発症することもある。認知症の影響を受ける認知領域には、記憶、注意力、言語、及び問題解決が含まれるが、これらに限定されない。一般に、認知症と診断される前に、少なくとも６か月間症状が出ていなければならない。
認知症の例示的な形態には、限定されないが、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、意味性認知症、及びレビー小体型認知症が含まれる。
いくつかの実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体を投与することにより、認知症を予防、リスクを低減、及び／又は治療することが可能である。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体を投与することにより、認知症を有する個体において、１又は複数のＳＩＲＰβ１活性を誘導しすることができる。
前頭側頭型認知症
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、脳の前頭葉が徐々に衰えていくことに起因する状態である。時間の経過とともに、この変性は、側頭葉に進む可能性がある。ＦＴＤは、有病率がアルツハイマー病（ＡＤ）に次いて高く、初老期認知症の症例の２０％を占める。ＦＴＤの臨床的特徴は、記憶障害、行動異常、人格変化、及び言語障害を含む（Cruts, M. & Van Broeckhoven, C., Trends Genet. 24:186-194 (2008); Neary, D., et al., Neurology 51:1546-1554 (1998); Ratnavalli, E., Brayne, C., Dawson, K. & Hodges, J. R., Neurology 58:1615-1621 (2002)）。
ＦＴＤ症例の大部分は常染色体優性遺伝であるが、同一家族であっても、行動障害を伴うＦＴＤから原発性進行性失語症、大脳皮質基底核変性症に至るまで、症状は多岐にわたる。ＦＴＤは、大半の神経変性疾患と同様に、罹患した脳内における特定のタンパク質凝集体の病理学的存在によって特徴付けることができる。歴史的には、ＦＴＤの最初の記述は、神経原線維変化又はピック体における過剰リン酸化タウタンパク質の神経細胞内への蓄積の存在を認識していた。微小管関連タンパク質タウの原因となる役割は、いくつかの家族におけるタウタンパク質をコードする遺伝子の変異の同定によって裏付けられた(Hutton, M., et al., Nature 393:702-705 (1998)。但し、ＦＴＤ脳の大部分は、過剰リン酸化タウの蓄積を示していないものの、ユビキチン（Ｕｂ）及びＴＡＲ ＤＮＡ結合タンパク質（ＴＤＰ４３）に対する免疫反応性を示す（Neumann, M., et al., Arch. Neurol. 64:1388-1394 (2007)）。Ｕｂ封入体（ＦＴＤ−Ｕ）を伴うＦＴＤ症例の大部分は、プログラニュリン遺伝子に変異を持っていることが示された。
いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体を投与することにより、ＦＴＤを予防、リスクを低減、及び／又は治療することが可能である。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体を投与することにより、ＦＴＤを有する個体において１又は複数のＳＩＲＰβ１活性を誘導することができる。
アルツハイマー病
アルツハイマー病（ＡＤ）は、認知症の最も一般的な形態である。進行するにつれて悪化し、最終的には死に至るこの疾患の治療法はない。ＡＤは、６５歳以上の人に診断されることがほとんどである。但し、あまり一般的ではない早期発症型アルツハイマー病は、はるかに早く発生することがある。
アルツハイマー病の一般的な症状には、最近の出来事を思い出しにくいなどの行動症；認知症状、混乱、イライラ及び攻撃性、気分変動、言語障害、並びに長期記憶喪失等が含まれる。この疾患が進行すると身体機能が失われ、最終的に死に至る。アルツハイマー病は、完全に顕在化するまでの時間が不明で変動するため、何年も診断されずに進行することがある。アルツハイマー病は、完全に顕在化するまでの時間が不明で変動するため、何年も診断されずに進行することがある。
いくつかの実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体を投与することにより、アルツハイマー病を予防、リスクを低減、及び／又は治療することが可能である。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体を投与することにより、アルツハイマー病を有する個体において１又は複数のＳＩＲＰβ１活性を誘導することができる。
那須ハコラ病
那須ハコラ病（ＮＨＤ）は、硬化性白質脳症を伴う多嚢胞性脂膜性骨異形成症（ＰＬＯＳＬ）とも呼ばれ、下肢及び上肢の多嚢胞性骨病変による骨折の再発を伴う進行性の初老期認知症を特徴とする稀な遺伝性白質ジストロフィーである。ＮＨＤの疾患経過は一般に、潜伏期、骨症状期、早期精神神経症状期、晩期精神神経症状期の４つのステージに分けられる。ＮＨＤは、小児期（潜伏期）の正常な発達の後、青年期又は若年成人期（通常発症年齢２０〜３０歳）に手、手首、足首、足の痛みを伴って顕在化し始める。患者はその後、四肢の骨に多嚢胞性骨及び骨粗鬆症の病変による再発骨折に悩まされるようになる（骨症状期）。３０代又は４０代（早期精神神経症状期）の間に、患者は前頭葉症候群に特徴的な顕著な人格変化（例えば、多幸感、集中力の欠如、判断力の喪失、社会的抑制）を示す。また、患者は通常、進行性の記憶障害に悩まされる。てんかん発作も頻繁に観察される。最後に（晩期精神神経症状期）、患者は重度の認知症に進行し、話すことも動くこともできず、通常は５０歳までに死亡する。
いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体を投与することにより、那須ハコラ病（ＮＨＤ）を予防、リスクを低減、及び／又は治療することが可能である。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体を投与することにより、ＮＨＤを有する個体において１又は複数のＳＩＲＰβ１活性を誘導することができる。
パーキンソン病
パーキンソン病は、特発性若しくは原発性パーキンソニズム、低運動性硬直症候群（ＨＲＳ）又は振戦麻痺と呼ばれることがあるが、運動系の制御に影響を及ぼす神経変性脳障害である。脳内のドーパミン産生細胞の死が進行することによって、パーキンソン病の主な症状がもたらされる。多くの場合、パーキンソン病は５０歳以上の人で診断される。パーキンソン病は、ほとんどの人において特発性（原因不明）である。しかし、遺伝的要因もパーキンソン病に関与している。
パーキンソン病の症状には、手、腕、足、顎、顔の震え、手足や体幹の筋硬直、動作の鈍化（運動緩慢）、姿勢の不安定化、歩行困難、神経精神医学的問題、言動の変化、抑うつ、不安、痛み、精神病、認知症、幻覚、睡眠障害等が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体を投与することにより、パーキンソン病を予防、リスクを低減、及び／又は治療することが可能である。いくつかの実施態様では、抗ＳＩＲＰβ１抗体の投与により、パーキンソン病を有する個体において、１又は複数のＳＩＲＰβ１活性を誘導することができる。
筋萎縮性側索硬化症
本明細書で使用される場合、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）又は運動ニューロン疾患又はルー・ゲーリック病は、互換的に使用され、急速に進行する脱力、筋萎縮及び線維束性収縮、筋痙縮、発話困難（構音障害）、嚥下困難（嚥下障害）、及び息切れ（呼吸困難）を特徴とする様々な病因を有する衰弱性疾患を指す。
プログラヌリンがＡＬＳにおいて役割を果たし（Schymick, JC et al., (2007) J Neurol Neurosurg Psychiatry.;78:754-6）、ＴＤＰ−４３などのＡＬＳを引き起こすタンパク質によって引き起こされる損傷を防ぐことが示された。また、ｐｒｏ−ＮＧＦが脊髄損傷後のオリゴデンドロサイト及び皮質脊髄の神経細胞（ｃｏｒｔｉｃｏｓｐｉｎａｌ ｎｅｕｒｏｎ）のｐ７５によって媒介される死を誘導することも実証された（Beatty et al., Neuron (2002),36, pp. 375-386; Giehl et al, Proc. Natl. Acad. Sci USA (2004), 101, pp 6226-30）。
いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体を投与することにより、ＡＬＳを予防、リスクを低減、及び／又は治療することが可能である。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体を投与することにより、ＡＬＳを有する個体において１又は複数のＳＩＲＰβ１活性を誘導することができる。
ハンチントン病
ハンチントン病（ＨＤ）は、ハンチントン遺伝子（ＨＴＴ）の常染色体優性突然変異によって引き起こされる遺伝性の神経変性疾患である。ハンチンチン遺伝子内のサイトカイン−アデニン−グアニン（ＣＡＧ）三塩基反復の伸長により、同遺伝子がコードするハンチンチンタンパク質（Ｈｔｔ）の変異体が産生される。この変異型ハンチンチンタンパク質（ｍＨｔｔ）は毒性があり、神経細胞死に関与する。ハンチントン病の症状は、３５歳から４４歳の間に現れることがほとんどだが、どの年齢でも現れる可能性がある。
ハンチントン病の症状には、限定されないが、運動制御障害、痙攣、不規則な動き（舞踏病）、眼球運動異常、バランス障害、発作、咀嚼困難、嚥下困難、認知障害、発話の変化、記憶障害、思考障害、不眠症、疲労、認知症、人格の変化、抑うつ、不安、強迫的行動等が含まれる。
いくつかの実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体を投与することにより、ハンチントン病（ＨＤ）を予防、リスクを低減、及び／又は治療することが可能である。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体を投与することにより、ＨＤを有する個体において１又は複数のＳＩＲＰβ１活性を誘導することができる。
タウオパシー病
タウオパシー病（又はタウオパチー）は、脳内の微小管関連タンパク質であるタウの凝集によって引き起こされる神経変性疾患の一種である。アルツハイマー病（ＡＤ）は、最もよく知られているタウオパシー病であり、不溶性の神経原線維変化（ＮＦＴ）の形で神経細胞内にタウタンパク質の蓄積を伴う。その他のタウオパシー病及び障害には、進行性核上麻痺、認知症プギリスティカ（染色体外傷性脳症）、１７番染色体に関連した前頭側頭型認知症ｆ・パーキンソニズム、Ｌｙｔｉｃｏ−Ｂｏｄｉｇ病（グアムのパーキンソン認知症複合体）、タングル優位性認知症、ガングリオグリオーマ、ガングリオサイトーマなどがあります。髄膜血管腫症、亜急性硬化性全脳炎、鉛脳症、結節性硬化症、ホールボーデン・スパッツ病、リポフスチン症、ピック病、コルチコバサル変性症、アルギロフィリック・グレイン病（ＡＧＤ）、ハンチントン病、前頭側頭型認知症、前頭側頭葉変性症。
いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体を投与することにより、タウオパシー病を予防、リスクを低減、及び／又は治療することが可能である。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体を投与することにより、タウオパシー病を有する個体において１又は複数のＳＩＲＰβ１活性を誘導することができる。
多発性硬化症
多発性硬化症（ＭＳ）は、播種性硬化症又は播種性脳脊髄炎と呼ばれることもある。ＭＳは、脳と脊髄の軸索を取り巻く、脂質に富んだミエリン鞘が損傷して、脱髄と瘢痕化だけでなく広範な兆候や症状につながる炎症性疾患である。ＭＳは、脳及び脊髄の神経細胞が互いに効果的に通信する能力に影響を与える。神経細胞は、活動電位と呼ばれる電気信号を、軸索と呼ばれる長い繊維に送ることによって通信し、軸索は、ミエリンと呼ばれる絶縁物質で包まれている。ＭＳでは、身体の自己免疫システムがミエリンを攻撃し、損傷させる。ミエリンが失われると、軸索はもはや効果的に信号を伝達することができなくなる。ＭＳの発症は通常、若年成人で起こり、女性ではより一般的である。ｈｔｔｐ：／／ｅｎ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／Ｍｕｌｔｉｐｌｅ＿ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ−ｃｉｔｅ＿ｎｏｔｅ−ｐｍｉｄ１８９７０９７７−１
ＭＳの症状には、限定されないが、感覚の変化、例えば感覚消失又はヒリヒリ感；チクチク感又はしびれ、例えば感覚鈍麻及び感覚異常；気力低下；クローヌス；筋痙攣；運動困難；協調運動障害及び平衡障害などの運動失調症；構音障害などの発話の問題又は嚥下障害などの嚥下の問題；視覚の問題、例えば眼振、
光視を含む視神経炎、及び複視；倦怠感；急性又は慢性疼痛；並びに膀胱及び腸の障害；様々な程度の認知障害；抑うつ又は不安定な気分の情緒的症状；通常よりも高い周囲温度に曝されたことによる既存の症状の悪化であるウトーホフ現象；及び首を曲げたときに背中に走る電気感覚であるレルミット徴候が含まれる。
いくつかの実施態様において、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体を投与することにより、多発性硬化症を予防、リスクを低減、及び／又は治療することが可能である。いくつかの実施態様において、抗ＳＩＲＰβ１抗体を投与することにより、多発性硬化症を有する個体において１又は複数のＳＩＲＰβ１活性を誘導することができる。
がん
本開示の更に別の態様は、治療有効量の本開示の単離された抗ＳＩＲＰβ１抗体をがんを有する個体に投与することを含む、該個体を予防、リスクを低減、又は処置する方法を提供する。本開示の単離された抗体のいずれかが、これらの方法において使用されうる。いくつかの実施態様では、単離された抗体は、本開示のアゴニスト抗体である。
腫瘍の微小環境は、Ｔリンパ球、マクロファージ及び骨髄系／顆粒球系の細胞を含む不均一な免疫浸潤を含むことが知られている。特に、腫瘍内のＭ２−マクロファージの存在は予後不良と関連している。ＣＳＦ１Ｒ遮断剤など、腫瘍内のこれらの細胞数を減少させる治療法は、前臨床モデル及び早期臨床研究で有益な効果を示している。また、将来性のある前臨床研究は、腫瘍関連マクロファージを標的とする薬物（例えばＣＳＦ１／ＣＳＦ１Ｒ遮断抗体）とＴ細胞を標的とするチェックポイント遮断抗体との間の相乗効果を示しており、両方の細胞型を操作すると、個々の治療法の有効性が低い腫瘍モデルで有効性を示すことが示されている（Zhu Y; Cancer Res. 2014 Sep 15; 74(18):5057-69）。いかなる特定の理論にも拘束されることは望まないが、腫瘍関連マクロファージ及び／又は好中球におけるＳＩＲＰβ１シグナル伝達を誘導することは、腫瘍微小環境における免疫応答の抑制を阻害し、その結果、治療的な抗腫瘍免疫応答をもたらすと考えられる。
特定の実施態様において、本開示の方法によって予防又は治療されるがんには、限定されないが、扁平上皮癌（例えば上皮性扁平上皮癌）、肺がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、扁平上皮非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、肺の腺癌、肺の扁平上皮癌、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、腹膜のがん、肝細胞がん、消化器がん、消化器がん及び消化管間質がんを含む胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｏｒ ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、腎がん（例：明細胞癌）、卵巣がん、肝臓がん；結腸直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん（例：腎細胞癌（ＲＣＣ））、前立腺がん（例：ホルモン不応性前立腺腺癌）、甲状腺がん、神経芽細胞腫、膵臓がん、膠芽細胞腫（多形神経膠芽腫）、子宮頸がん、胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）、膀胱がん、肝がん、乳がん、大腸癌、並びに頭頚部がん（又は癌）、胃がん（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、生殖細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラー（ｓｉｎｏｎａｓａｌ ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ）、黒色腫（例：皮膚悪性黒色腫又は眼内悪性黒色腫などの転移性悪性黒色腫）、骨がん、皮膚がん、子宮がん、肛門部がん、精巣がん、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰部癌、食道がん、小腸のがん（ｃａｎｃｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｃａｎｃｅｒ ｓｍａｌｌ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ）、内分泌系のがん、副甲状腺のがん、副腎のがん、軟部組織肉腫、尿道がん、陰茎がん、小児固形腫瘍。尿管がん、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、骨髄異形成症候群、結腸直腸新生物、固形腫瘍、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮がん、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストによって誘発されるものを含む環境誘発性がん、ウイルス関連がん（例：ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）関連腫瘍）、並びに２つの主要な血液細胞系統のいずれか、すなわち骨髄性細胞株（顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージ、マスト細胞を産生する）又はリンパ性細胞株（Ｂ、Ｔ、ＮＫ、血漿細胞を産生する）に由来する血液学的悪性腫瘍、例えば、全てのタイプの白血病、リンパ腫及び骨髄腫、例えば急性、慢性、リンパ球性及び／又は骨髄性白血病（急性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、未分化ＡＭＬ（Ｍ０）、骨髄芽球性白血病（Ｍ１）、骨髄芽球性白血病（Ｍ２；細胞成熟を伴う）、前骨髄球性白血病（Ｍ３又はＭ３変種［Ｍ３Ｖ］）、骨髄単球性白血病（好酸球増加を伴うＭ４又はＭ４変種［Ｍ４Ｅ］）、単球性白血病（Ｍ５）、赤血球性白血病（Ｍ６）、巨核芽球性白血病（Ｍ７）、孤立性顆粒球肉腫及び緑色腫；リンパ腫、例えばホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、低悪性度リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ｌａｒｇｅ Ｂ ｃｅｌｌ ｄｉｆｆｕｓｅ ｌｙｍｐｈｏｍａ）、Ｂ細胞血液悪性腫瘍、例えば細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、リンパ形質細胞様リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、粘膜内リンパ組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、未分化（例：Ｋｉ １＋）大細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞性リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫、Ｔリンパ芽球性；及びリンパ腫／白血病（Ｔ−Ｌｂｌｙ／Ｔ−ＡＬＬ）、末梢Ｔ細胞リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、移植後リンパ増殖性疾患、真の組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、造血器リンパ系の腫瘍、急性リンパ芽球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ｄｉｆｆｕｓｅ ｌａｒｇｅ Ｂ−ｃｅｌｌ ｌｙｍｐｈｏｍａ）、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＬＣ）（菌状息肉症（ｍｙｃｏｓｉｓ ｆｕｎｇｏｉｄｅｓ）又はセザリー症候群ともいう）、並びにワルデンストレームマクログロブリン血症を伴うリンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）；ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫（低悪性度骨髄腫ともいう）、孤立性形質細胞腫、及び多発性骨髄腫などの骨髄腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、毛様細胞リンパ腫；骨髄系の造血器腫瘍、線維肉腫及び横紋筋肉腫を含む間葉起源の腫瘍；セミノーマ、悪性奇形腫、星細胞腫を含む中枢神経系及び末梢神経系の腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫、及び骨肉腫を含む間葉起源の腫瘍；並びに他の腫瘍、例えば黒色腫、色素性乾皮症、角化棘細胞腫、セミノーマ、甲状腺濾胞がん、及び悪性奇形腫、リンパ系の造血器腫瘍、例えばＴ細胞腫瘍及びＢ細胞腫瘍（小細胞型及び大脳型を含むＴリンパ球性白血病（Ｔ−ＰＬＬ）などのＴ細胞障害を含むがこれらに限定されない）；好ましくはＴ細胞型の大粒状リンパ球白血病（ＬＧＬ）；ａ／ｄ Ｔ−ＮＨＬ肝脾（ｈｅｐｔａｓｙｌｌａｂｉｃ）リンパ腫；末梢／後甲状腺Ｔ細胞リンパ腫（多形及び免疫芽球性サブタイプ）；血管中心性（鼻）Ｔ細胞リンパ腫；頸部がん、腎がん、直腸がん、甲状腺がん；急性骨髄性リンパ腫、並びに前記がんの任意の組み合わせが含まれる。本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、転移性がんの治療にも使用されうる。
いくつかの実施態様では、がんは、肉腫、膀胱がん、脳がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、腎盂がん、白血病、肺がん、小細胞肺がん、黒色腫、リンパ腫、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、及び線維肉腫から選択される。いくつかの実施態様では、がんは、トリプルネガティブ乳癌である。いくつかの実施態様では、がんは、早期がんであっても後期癌がんであってもよい。いくつかの実施態様では、がんは、早期がんであっても後期癌がんであってもよい。いくつかの実施態様では、がんは、原発腫瘍であってもよい。
いくつかの実施態様では、がんは、多形神経膠芽腫；腎明細胞がん；副腎皮質癌；膀胱尿路上皮癌；びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫；肺腺癌；膵臓腺癌、腎細胞がん、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、緩慢性Ｂ細胞リンパ腫、侵攻性Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性腫瘍、浸潤性乳癌、子宮頸部扁平上皮癌、子宮頸部腺癌、胆管細胞癌、結腸腺癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、食道癌、頭頸部扁平上皮癌、色素嫌性腎癌、乳頭状腎細胞癌、低悪性度神経膠腫、肝細胞癌、肺扁平上皮癌、中皮腫、漿液性卵巣嚢腫、膵臓腺癌、褐色細胞腫及び傍神経節腫、前立腺腺癌、直腸腺癌、皮膚黒色腫、胃腺癌、精巣胚細胞腫瘍、甲状腺癌、胸腺腫、子宮体部子宮内膜癌、子宮癌肉腫、及びブドウ膜黒色腫から選択される。
いくつかの実施態様では、本開示は、治療有効量の本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体をがんを有する個体に投与することによって、該個体を予防、リスクを低減、又は処置する方法を提供する。
いくつかの実施態様では、本開示は、がんを有し、チェックポイント阻害剤治療に抵抗性である個体に対し、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体の治療有効量を投与することによって、該個体を予防、リスクを低減、又は治療する方法を提供する。
いくつかの実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、チェックポイント阻害剤として作用する治療剤と一緒に投与されてもよい。いくつかの実施態様では、上記方法は、上記個体に対し、阻害性免疫チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１の抗体及び／又はもう１つの標準的若しくは試験的抗がん療法を投与することを更に含む。
いくつかの実施態様では、阻害性チェックポイント分子は、ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９、及びＣＤ７３から選択される。典型的な実施態様では、治療剤は、Ｄ１、ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９又はＣＤ７３から選択されるチェックポイント阻害剤に対する抗体である。いくつかの実施態様では、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する上記少なくとも１の抗体は、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体と組み合わせて投与される。いくつかの実施態様では、チェックポイント阻害剤に対して向けられた抗体の組み合わせが、本発明の抗ＳＩＲＰβ１抗体と一緒に投与される。
いくつかの実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１のアゴニスト抗体、例えば、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト抗ＴＲＥＭ１抗体、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２７抗体、アゴニスト抗グルココルチコイド誘発性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）抗体、アゴニスト抗ＣＤ３０抗体、アゴニスト抗ＢＴＬＡ抗体、アゴニスト抗ＨＶＥＭ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２抗体、アゴニスト抗ＣＤ５抗体、及びこれらの任意の組み合わせと一緒に投与されてもよい。
いくつかの実施態様では、上記方法は、上記個体に対し、阻害性免疫チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１の抗体及び／又はもう１つの標準的若しくは試験的抗がん療法を投与することを更に含むいくつかの実施態様では、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する上記少なくとも１つの抗体は、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体と組み合わせて投与される。いくつかの実施態様では、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する上記少なくとも１の抗体は、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー抑制性受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、及びこれらの任意の組み合わせから選択される。いくつかの実施態様では、標準的又は試験的抗がん療法は、放射線療法、細胞毒性化学療法、標的療法、イマチニブ（グリベック（登録商標）），、トラスツズマブ（ハーセプチン（登録商標））、養子細胞移植（ＡＣＴ）、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移植（ＣＡＲ−Ｔ）、ワクチン療法、及びサイトカイン療法から選択される１又は複数の療法である。いくつかの実施態様では、上記方法は、上記個体に対し、抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１の抗体を投与することを更に含む。いくつかの実施態様では、抑制性サイトカインに特異的に結合する上記少なくとも１の抗体は、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体と組み合わせて投与される。いくつかの実施態様では、抑制性サイトカインに特異的に結合する上記少なくとも１の抗体は、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体、及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
いくつかの実施態様では、上記方法は、上記個体に対し、刺激性免疫チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１のアゴニスト抗体を投与することを更に含む。いくつかの実施態様では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する上記少なくとも１のアゴニスト抗体は、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体と組み合わせて投与される。いくつかの実施態様では、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する上記少なくとも１のアゴニスト抗体は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２７抗体、アゴニスト抗グルココルチコイド誘発性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）抗体、及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
いくつかの実施態様では、本発明の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、放射線療法及び／又は化学療法剤と組み合わせて投与される。化学療法剤には、例えば、以下の群が含まれる：ピリミジンアナログ（５−フルオロウラシル、フロクスウリジン、カペシタビン、ゲムシタビン及びシタラビン）及びプリンアナログ、葉酸アンタゴニスト及び関連する阻害剤（メトトレキサート、ペメトレキセド、メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン及び２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン））等の代謝拮抗剤／抗がん剤；ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン及びビノレルビン）、微小管破壊剤、例えばタキサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロン、エリブリン及びナベルビンなど、天然物を含む抗増殖剤／有糸分裂阻害剤；エピジポドフィロトキシン類（エトポシド、テニポシド）；ＤＮＡ損傷剤（アクチノマイシン、アムサクリン、アントラサイクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カルボプラチン、クロランブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、サイトキサン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ヘキサメチルメラミンオキサリプラチン、イホスファミド、メルファラン、メクロレタミン（ｍｅｒｃｈｌｏｒｅｈｔａｍｉｎｅ）、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソウレア、プリカマイシン、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テモゾラミド、テニポシド、トリエチレンチオホスホルアミド及びエトポシド（ＶＰ １６））；ＤＮＡメチルトランスフェラーゼ阻害剤（アザシチジン）；ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、イダルビシン、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）及びマイトマイシン等の抗生物質；酵素（Ｌ−アスパラギンを全身的に代謝し、それ自身のアスパラギンを合成する能力を持たない細胞を奪うＬ−アスパラギナーゼ）；抗血小板剤；ナイトロジェンマスタード類（メクロレタミン、シクロホスファミド及びアナログ、メルファラン、クロラムブシル）、エチレンイミン及びメチルメラミン（ヘキサメチルメラミン及びチオテパ）、アルキルスルフォネート（ブスルファン）、ニトロソウレア類（カルムスチン（ＢＣＮＵ）及びアナログ、ストレプトゾシン）、トリアゼン類（ダカルバシン（ＤＴＩＣ））等の抗増殖／抗有糸分裂アルキル化剤；葉酸アナログ（メトトレキサート）などの抗増殖／抗有糸分裂代謝拮抗剤；白金錯体（シスプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシウレア、ミトタン、アミノグルテチミド；ホルモン、ホルモンアナログ（エストロゲン、タモキシフェン、ゴセレリン、ビカルタミド、ニルタミド）及びアロマターゼ阻害剤（レトロゾール、アナストロゾール）；抗凝固剤（ヘパリン、合成ヘパリン塩及びトロンビンの他の阻害剤）；血栓溶解剤（組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼ及びウロキナーゼ等）、アスピリン、ジピリダモール、チクロピジン、クロピドグレル、アブシキシマブ；非移行性薬；分泌抑制剤（ブレフェルジン（ｂｒｅｖｅｌｄｉｎ））；免疫抑制薬（シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）、シロリムス（ラパマイシン）、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル）；抗血管形成化合物（ＴＮＰ４７０、ゲニステイン、ポマリドミド）及びｚｉｖ−ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔなどの増殖因子阻害剤（血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）阻害剤；線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）阻害剤）；アポトーシスの阻害因子（ＩＡＰ）のアンタゴニスト（ビリナパント）；ヒストン脱アセチル化（ＨＤＡＣ）阻害剤（ボリノスタット、ロミデプシン、キダミド、パノビノスタット、モセチノスタット、アベキシノスタット、ベリノスタット、エンチノスタット、レスミノスタット、ギビノスタット、キジノスタット、ＳＢ９３９）；プロテアソーム阻害剤（イキサゾミブ）；アンジオテンシン受容体遮断薬；一酸化窒素供与剤；アンチセンスオリゴヌクレオチド；抗体（トラスツズマブ、パニツムマブ、ペルツズマブ、セツキシマブ、アダリムマブ、ゴリムマブ、インフリキシマブ、リツキシマブ、オクレリズマブ、オファツムマブ、オビヌツズマブ、アレムツズマブ、アブシキシマブ、アトリズマブ、ダクリズマブ、デノスマブ、エファリズマブ、エロツズマブ、ロベリズマブ、ルプリズマブ、ウステキヌマブ、ビジリズマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、ブレンツキシマブベドチン）；キメラ抗原受容体；細胞周期阻害剤（フラボピリドール、ロスコビチン、ブリオスタチン１）及び分化誘導剤（トレチノイン）；ｍＴＯＲ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤（ドキソルビシン（アドリアマイシン）、アムサクリン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、エ二ポシド（ｅｎｉｐｏｓｉｄｅ）、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イリノテカン（ＣＰＴ−１１）及びミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン）、副腎皮質ステロイド薬（コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン（ｍｅｔｈｙｌｐｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、プレドニゾン及びプレドニゾロン）；ＰＡＲＰ阻害剤（ニラパリブ、オラパリブ）；接着斑キナーゼ（ＦＡＫ）阻害剤（デファクチニブ（ＶＳ−６０６３）、ＶＳ−４７１８、ＶＳ−６０６２、ＧＳＫ２２５６０９８）；増殖因子シグナル伝達キナーゼ阻害剤（セジラニブ、ガルニセルチブ、ロシレチニブ、バンデタニブ、アファチニブ、ＥＧＦ８１６、ＡＺＤ４５４７）；ｃ−Ｍｅｔ阻害剤（カプマチニブ、ＩＮＣ２８０）；ＡＬＫ阻害剤（セリチニブ、クリゾチニブ）；ミトコンドリアの機能不全誘導剤、コレラ毒素、リシン、緑膿菌外毒素、百日咳菌のアデニル酸シクラーゼ毒素又はジフテリア毒素等の毒素、及びカスパーゼ活性化因子；及びクロマチン攪乱物質が含まれる。いくつかの実施態様では、化学療法剤は、Ｂ−Ｒａｆ阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＶＥＧＦ阻害剤、ＶＥＧＦＲ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、有糸分裂阻害剤、又はこれらの任意の組み合わせである。
いくつかの実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、養子細胞移植（ＡＣＴ）療法、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移植（ＣＡＲ−Ｔ）療法、ワクチン療法、及び／又はサイトカイン療法と組み合わせて投与される。
いくつかの実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、阻害性サイトカイン、例えば、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体又は抗ＩＬ−２抗体のような阻害性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１の抗体と組み合わせて投与される。
いくつかの実施態様では、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体は、少なくとも１の刺激性サイトカインと組み合わせて投与される。前述の実施態様のいずれかと組み合わせることができるいくつかの実施態様では、上記少なくとも１の刺激性サイトカインは、ＩＦＮ−α４、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１ベータ、及びこれらの任意の組み合わせから選択される。
ＶＩ．診断用途
抗体についてのいくつかの実施態様では、本明細書において提供される抗ＳＩＲＰβ１抗体のいずれも、試料又は個体中のＳＩＲＰβ１の存在を検出するために有用である。本明細書で使用する「検出（する）」という用語は、定量的又は定性的検出を包含する。本明細書で提供されるのは、個体又は個体に由来する組織試料におけるＳＩＲＰβ１の検出などの診断目的のために本開示の抗体を使用する方法である。いくつかの実施態様では、個体はヒトである。
検出方法は、抗原結合抗体の定量化を含みうる。生体試料中の抗体検出は、免疫蛍光顕微鏡、免疫細胞化学、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ解析、免疫沈降法又はマイクロ陽電子放出断層撮影を含む、当技術分野で知られている任意の方法で行うことができる。いくつかの実施態様では、抗体は、例えば、１８Ｆで放射性標識され、その後、マイクロ陽電子放出断層画像解析を利用して検出される。抗体結合は、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、Ｘ線コンピュータ断層撮影、単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、及びココンピュータＸ線体軸断層撮影（ＣＡＴ）等の非侵襲的技術を用いて、患者において定量化することもできる。
ＶＩＩ．製造品
本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の抗ＳＩＲＰβ１抗体を含む製造品（例えばキット）である。製造品は、本明細書に記載の抗体を含む１又は複数の容器を含んでもよい。容器は、バイアル、ボトル、ジャー、軟包装（例えば、密封マイラー又はビニール袋）等を含むがこれらに限定されない、適切な包装である。容器は、単位用量、バルク包装（例えば、複数用量包装）又はサブユニット用量でもよい。
いくつかの実施態様では、キットは、第２の薬剤を更に含んでもよい。いくつかの実施態様では、第２の薬剤は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル溶液、及びデキストロース溶液等を含むがこれらに限定されない、薬学的に許容される緩衝剤又は希釈剤である。いくつかの実施態様において、第２の薬剤は、薬学的活性剤である。いくつかの実施態様において、第２の薬剤は、本明細書に記載の薬学的活性剤である。
製造品のいずれかについてのいくつかの実施態様では、製造品は、本開示の方法に従って使用するための説明書を更に含む。説明書は一般に、目的の治療のための投与量、投薬スケジュール、及び投与経路に関する情報を含む。いくつかの実施態様において、このような説明書は、本開示の任意の方法に従って、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、混合型認知症、クロイツフェルト・ヤコブ病、常圧水頭症、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、タウオパシー（ｔａｕｐａｔｈｙ）病、那須ハコラ病、脳卒中、急性外傷、慢性外傷、狼瘡、急性及び慢性大腸炎、関節リウマチ、創傷治癒、クローン病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、肥満、マラリア、本態性振戦症、中枢神経系狼瘡、ベーチェット病、パーキンソン病、レビー小体型認知症、多系統萎縮症、シャイ・ドレーガー症候群、進行性核上性麻痺、大脳皮質基底核変性症、急性播種性脳脊髄炎、肉芽腫性障害、サルコイドーシス、加齢性疾患、発作、脊髄損傷、外傷性脳損傷、加齢黄斑変性、緑内障、網膜色素変性症、網膜変性症、呼吸器感染症、敗血症、眼感染症、全身感染症、狼瘡、関節炎、多発性硬化症、低骨密度、骨粗鬆症、骨形成、骨軟化症、骨のパジェット病、及びがんから選択される疾患、障害又は傷害を有する個体を予防、リスクを低減、又は処置するための、本開示の単離された抗体の投与についての説明を含む。いくつかの実施態様では、説明書は、抗ＳＩＲＰβ１抗体及び第２の薬剤（例えば、第２の薬学的活性剤）の使用のための説明書を含む。
本開示は、以下の実施例を参照することによって、より完全に理解されるであろう。但し、これらの実施例は、本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本開示における全ての引用は、参照により明示的に本明細書に援用される。
以下の実施例は、例示のためだけに提示されるものであり、限定のためではない。当業者は、本質的に同様の結果をもたらすように変更又は修正することができる様々な重要ではないパラメーターを容易に認識するであろう。
実施例１：アゴニスト抗ＳＩＲＰβ１抗体の製造、同定及び特性評価
ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１タンパク質（ＳＩＲＰβ１）のアミノ酸配列は、以下の配列番号１に記載されている。ヒトＳＩＲＰβ１は、配列番号１のアミノ残基１〜２９に位置するシグナルペプチド；配列番号１のアミノ残基３０〜１３６に位置する細胞外免疫グロブリン様可変型（ＩｇＶ）ドメイン；配列番号１のアミノ酸１４７〜２４６及び２５３〜３４７に位置する２つの免疫グロブリン様定常（ＩｇＣ）ドメイン；配列番号１のアミノ残基３７２〜３９２に位置する膜貫通ドメイン；及び配列番号１のアミノ残基３９３〜３９８に位置する細胞内ドメインを含んでいる。
ヒトＳＩＲＰβ１アミノ酸配列（配列番号１）：
10 20 30 40 50
MPVPASWPHL PSPFLLMTLL LGRLTGVAGE DELQVIQPEK SVSVAAGESA
60 70 80 90 100
TLRCAMTSLI PVGPIMWFRG AGAGRELIYN QKEGHFPRVT TVSELTKRNN
110 120 130 140 150
LDFSISISNI TPADAGTYYC VKFRKGSPDD VEFKSGAGTE LSVRAKPSAP
160 170 180 190 200
VVSGPAVRAT PEHTVSFTCE SHGFSPRDIT LKWFKNGNEL SDFQTNVDPA
210 220 230 240 250
GDSVSYSIHS TARVVLTRGD VHSQVICEIA HITLQGDPLR GTANLSEAIR
260 270 280 290 300
VPPTLEVTQQ PMRAENQANV TCQVSNFYPR GLQLTWLENG NVSRTETAST
310 320 330 340 350
LIENKDGTYN WMSWLLVNTC AHRDDVVLTC QVEHDGQQAV SKSYALEISA
360 370 380 390
HQKEHGSDIT HEAALAPTAP LLVALLLGPK LLLVVGVSAI YICWKQKA
ヒトＳＩＲＰβ１のアミノ酸配列は、ＳＩＲＰβ１、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、及びその他の関連するＩｇＶファミリーメンバーからのシグナル伝達を伝達する重要なアダプタータンパク質であるＤＡＰ１２のアスパラギン酸と相互作用する、膜貫通ドメイン内のリジン残基（ａａ３８０）を含む。ヒトＳＩＲＰβ１のＢＬＡＳＴ解析により、選択的スプライシングに由来しうる複数のアイソフォームが同定された。これらの転写変異体の中でも、ＳＩＲＰβ１アイソフォーム３は、ＳＩＲＰβ１アイソフォーム１と最も配列同一性を共有している（図１Ａ）。ヒトＳＩＲＰβ１は、ヒトＳＩＲＰαにも関連している。ヒトＳＩＲＰβ１とヒトＳＩＲＰαのアミノ酸配列のアライメントを双方向ブラストにより生成した（図１Ｂ）。両方の受容体の細胞外領域は、８５％の配列同一性を共有している。対照的に、ヒトＳＩＲＰβ１は、マウスＳＩＲＰβ１との相同性が低い（図２）ことを示しており、これは、両種のＳＩＲＰ遺伝子座が異なる選択圧を受けていることを示唆している。
ヒトＳＩＲＰβ１の細胞外ドメイン、特に細胞外ＩｇＶドメイン（配列番号１のアミノ酸残基３０〜１３６）に結合する抗体は、マウスハイブリドーマ技術、ファージディスプレイ技術、及び酵母ベースのプラットフォーム技術を使用して生成することができる。抗体は、以下の実施例２〜２０に記載されているように、ＳＩＲＰβ１を発現する細胞に結合する能力、並びに細胞内及び動物全体のｉｎ ｖｉｖｏにおけるＳＩＲＰβ１のシグナル伝達、活性及び機能を活性化する能力についてスクリーニングされる。例えば、ＩｇＶドメイン（アミノ酸残基３０〜１３６）を標的とするアゴニスト抗ＳＩＲＰβ１抗体を製造することができる。ＳＩＲＰαとの類推により、ＳＩＲＰβ１のＩｇＶドメインは、未知のリガンド（複数可）に結合し、受容体の多量化を通じて活性化につながることが予測される。
Ｈｉｓタグ付き及びＦｃコンジュゲートヒトＳＩＲＰα並びにヒトＳＩＲＰβ１ＩｇＶドメインの作製
ヒトＳＩＲＰα及びヒトＳＩＲＰβ１ ＩｇＶドメイン（「ドメイン１」ともいう）抗原（それぞれ配列番号３８７、３８８）の哺乳動物発現のために、ｃＤＮＡに基づく合成遺伝子を哺乳動物発現ベクターにクローニングし、続いて一過性のトランスフェクションを行い、ＨＥＫ２９３／Ｔ細胞内で発現させた。コンストラクトには、異種シグナルペプチドとＣ末端ヒトＩｇＧ１Ｆｃ及び／又はＨｉｓタグが含まれていた。簡単に説明すると、目的の抗原を含む発現ベクターを、トランスフェクション試薬との複合体化、続いてＨＥＫ２９３／Ｔ細胞への１時間の曝露後、培地１ｍＬ当たり４００万細胞の最終密度に希釈することによって、トランスフェクトした。その後、細胞を、４８時間ごとに新鮮なフィード培地で７日間培養した。７日後、遠心分離に続いて上清を採取し、Ｎｉ−セファロースを使用して精製を行い、場合によっては、ＳＥＣカラム精製を行って、非凝集モノマー含有量が＞９５％になるようにした。ＳＩＲＰα及びＳＩＲＰβ１モノマー抗原を、改変されたヒンジ領域を有するＳＩＲＰα／β１ Ｆｃ融合抗原（Lynaugh et al., MAbs. 2013 Oct;5(5):641-45）をＦａｂＲＩＣＡＴＯＲ（ＩｄｅＳ）プロテアーゼ（Ｇｅｎｏｖｉｓ、カタログ＃Ａ２−ＦＲ２−１０００）で断片化し、その後、プロテインＡアフィニティー精製により未消化のＦｃ融合タンパク質を除去し、ＳＥＣにより凝集モノマーを除去した。
抗ＳＩＲＰβ１抗体のライブラリースクリーニング
８つのナイーブ（免疫前）ヒト合成酵母ライブラリーを、それぞれ約１０９の多様性を有するように設計し、生成し、前述のように増殖させた（例えば、Xu et al, 2013；国際公開第２００９０３６３７９号；同第２０１０１０５２５６号；同第２０１２００９５６８号；Xu et al., Protein Eng Des Sel. 2013 Oct;26(10):663-70参照）。ヒトＳＩＲＰβ１−Ｆｃ融合抗原選択のための８つのナイーブライブラリーと、ヒトＳＩＲＰβ１モノマー選択のための８つのライブラリーから成る２つのプールを用いて、１０の並列セレクションを行った。最初の２ラウンドの選択については、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＭＡＣｓシステムを利用した磁気ビーズソーティング技術を、基本的には記載されているように実施した（Siegel et al., J Immunol Methods. 2004 Mar;286(l-2): 141-53）。簡単に説明すると、酵母細胞（１ライブラリー当たり約１０９細胞、総密度約１０１０）を、０．１％ＢＳＡを含むＦＡＣＳ洗浄緩衝液ＰＢＳ中、室温で１５分間、１０ｎＭビオチン化ＳＩＲＰβ１−Ｆｃ融合抗原又は１００ｎＭビオチン化ＳＩＲＰβ１モノマー抗原３ｍｌとインキュベートした。５０ｍｌの氷冷洗浄緩衝液で１回洗浄した後、細胞ペレットを４０ｍＬの洗浄バッファーに再懸濁させ、５００μＬのストレプトアビジンマイクロビーズ（ドイツ、ベルギッシュ・グラートバッハのＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ＃１３０−０４８−１０１）を酵母に添加し、４℃で１５分間インキュベートした。次に、酵母細胞をペレット化し、５ｍＬの洗浄緩衝液に再懸濁させ、ＭＡＣＳ ＬＳカラム（ドイツ、ベルギッシュ・グラートバッハのＭｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、カタログ＃１３０−０４２−４０１）にロードした。この５ｍＬをロードした後、カラムを３ｍＬのＦＡＣＳ洗浄緩衝液で３回洗浄した。その後、カラムを磁場から外し、酵母を５ｍＬの増殖培地で溶出させ、一晩増殖させた。フローサイトメトリーを用いて、以下の４ラウンドのソーティングを行った。
最初のＦＡＣＳ選択ラウンドについては、約１×１０８酵母を、ペレット化し、洗浄緩衝液で３回洗浄し、１０ｎＭビオチン化ＳＩＲＰβ１−Ｆｃ融合抗原又は１００ｎＭビオチン化ＳＩＲＰβ１モノマー抗原と室温で１０分間インキュベートした。その後、酵母を２回洗浄し、二次試薬として、ヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）２カッパ−ＦＩＴＣを１：１００で希釈したもの（アラバマ州バーミンガムのＳｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ＃２０６２−０２）と、ストレプトアビジン−アレキサフルオロ６３３（ニューヨーク州グランドアイランドのＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ＃Ｓ２１３７５）を１：５００で希釈したもの又はエクストラアビジン−フィコエリスリン（セントルイスのＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ＃Ｅ４０１１）を１：５０で希釈したもののいずれかを用い、４℃で１５分間染色した。氷冷洗浄緩衝液で２回洗浄した後、細胞ペレットを０．４ｍＬ洗浄緩衝液に再懸濁させ、ストレーナーで蓋をしたソートチューブに移した。選別は、ＦＡＣＳ ＡＲＩＡソーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して実施し、ソートゲートは、ＳＩＲＰβ１結合クローンのみを選択するように決定した。次の選択ラウンドでは、約２ｘ１０７の酵母を上記のように調製したが、インキュベーションは、多重特異性バインダーとタンパク質、ＨＩＳタグ付きヒトＳＩＲＰαモノマーを制御するためのバインダーとを減少させるネガティブソートを行うための多重特異性反応性試薬（Xu et al., PEDS. 2013 Oct;26(10):663-70)Oct;26(10):663-70)と共に行われた。次のラウンドでは、１０ｎＭヒトＳＩＲＰβ１−Ｆｃ融合抗原と１００ｎＭヒトＳＩＲＰβ１モノマー抗原による標識を利用した。ソートの最終ラウンドの後、酵母細胞をプレーティングし、特性評価のために個々のコロニーを摘出した。最終ラウンドでは、１００ｎＭ及び１０ｎＭのヒトＳＩＲＰβ１モノマー抗原による標識を利用した。
２番目と４番目のＦＡＣＳソーティング選択ラウンド出力からの重鎖を使用して、追加の選択に使用される軽鎖多様化ライブラリーを準備した。これらの選択では、最初の選択ラウンドでＭｉｌｔｅｎｙｉ ＭＡＣｓビーズと、１０ｎＭのヒトＳＩＲＰβ１−Ｆｃ融合抗原での標識が利用された。その後、４ラウンドのＦＡＣＳソーティングが行われた。最初のラウンドでは、１００ｎＭのヒトＳＩＲＰβ１モノマー抗原を使用した。２回目のＦＡＣＳラウンドは、試薬バインダー、多重特異性バインダー、及びタンパク質ヒトＳＩＲＰαＨＩＳタグ付きモノマーを制御するバインダーへの結合を減少させるネガティブソートであった。最後の２つのラウンドでは、最高親和性のバインダーを選択するためのヒトＳＩＲＰβ１モノマー滴定（１００ｎＭ、１０ｎＭ、及び１ｎＭ）、１００ｎＭのヒトＳＩＲＰαモノマー、及びＳＩＲＰβ１ ＩｇＶドメインに結合するコントロールＡＭ４−５抗体との競合を利用して、濃縮された集団における競合体の代表性（ｃｏｍｐｅｔｉｔｏｒ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）を評価した。（米国特許出願公開第２０１４／０２４２０９５号参照。）ソートの最終ラウンドの後、酵母細胞をプレーティングし、特性評価のために個々のコロニーを摘出した。
抗体ＩｇＧ及びＦａｂの生成と精製
酵母クローンを飽和状態まで増殖させた後、振とうしながら３０℃で４８時間誘導した。誘導後、酵母細胞をペレット化し、精製のために上清を回収した。ＩｇＧを、プロテインＡカラムを使用して精製し、酢酸、ｐＨ２．０で溶出した。パパイン消化によってＦａｂ断片が生成され、それをＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ ＩｇＧ−ＣＨ１アフィニティーマトリックスで精製した。（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ＃ １９４３２００２５０）。
Ｏｃｔｅｔ（登録商標）結合実験
抗ＳＩＲＰβ１抗体の親和性は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ３８４システム（カリフォルニア州メンロパークのＦｏｒｔｅＢｉｏ）を用いるそれらの解離定数（ＫＤ）を、ほとんど以前に記載された（Estep et al., MAbs. 2013 Mar-Apr;5(2):270-8）ように測定することによって決定された。簡単に説明すると、Ｏｃｔｅｔの親和性測定は、ＡＨＱセンサーにＩｇＧをオンラインでロードすることによって行われた。センサーを、アッセイ緩衝液中で３０分間オフラインで平衡化し、その後、ベースライン確立のために６０秒間オンラインでモニターした。センサーを、アッセイ緩衝液中で３０分間オフラインで平衡化し、その後、ベースライン確立のために６０秒間オンラインでモニターした。追加のＡｖｉｄ結合は、ビオチン化ＳＩＲＰβ１モノマーをＳＡセンサー上にロードし、溶液中の１００ｎＭ ＩｇＧに曝露することによって決定された。一価結合の測定は、ヒトＳＩＲＰα−又はＳＩＲＰβ１−Ｆｃ融合抗原をＡＨＱセンサーにロードした後、１００ｎＭの抗ＳＩＲＰβ１抗体Ｆａｂに曝露することによって得られた。追加の一価測定は、ビオチン化ヒトＳＩＲＰα又はＳＩＲＰβ１モノマーをＳＡセンサーにロードした後、溶液中の１００ｎＭ Ｆａｂに曝露することによって行われた。カイネティクスデータを、ＦｏｒｔｅＢｉｏが提供するデータ解析ソフトウェア（ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ７．０）で１：１結合モデルを使用して適合させた。
エピトープビニング
抗ＳＩＲＰβ１抗体のエピトープビニングを、ＦｏｒｔｅＢｉｏＯｃｔｅｔ（登録商標）Ｒｅｄ３８４システム（カリフォルニア州メンロパークのＦｏｒｔｅＢｉｏ）で、標準的なサンドイッチ様式のビニングアッセイを使用して実行した。コントロールの抗標的ＩｇＧをＡＨＱセンサーにロードし、センサー上の占有されていないＦｃ結合部位を無関係のヒトＩｇＧ１抗体で遮断した。その後、センサーを１００ｎｍの標的抗原に曝露し、続いて２番目の抗標的抗体に曝露した。データはＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ７．０を用いて処理した。抗原結合後の二次抗体による追加結合は、占有されていないエピトープ（非競合）を示し、一方、結合がない場合はエピトープ遮断（競合）を示す。このプロセスを、ＳＩＲＰβ１のＩｇＶドメインに結合する２つの参照抗体：（ｉ）ビン１とされるＡＭ４−５；及び（ｉｉ）ビン２とされるＳＢ−１７について繰り返した。
抗ＳＩＲＰβ１抗体の最終セットを、抗原結合親和性に基づいて選択した。ヒトＳＩＲＰβ１への結合に陽性であった抗体を、ヒトＳＩＲＰαとの交差反応性について試験した。各抗体のビンカテゴリーを以下の表２に示す。表２において、「ＮＤ」は、ビンカテゴリーが決定されなかった抗体、「ＮＢ」は、示した抗原との結合がなかった抗体、「ＰＦ」は、抗原結合カイネティクスが１：１結合モデルへの適合性に乏しかった抗体を示す。マウスＳＩＲＰβ１ Ｄ１−Ｆｃ、ヒトＳＩＲＰα Ｄ１−Ｆｃ又はマウスＳＩＲＰα Ｄ１−Ｆｃに対する検出可能な結合は、いずれの抗ＳＩＲＰβ１抗体についても観察されなかった。
Figure 2021529520
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抗体重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列
標準的な技術を使用して、抗体の軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインをコードするアミノ酸配列を決定した。抗体のＥＵ又はＫａｂａｔ配列を、以下の通り、表３〜６に示す。抗体のＥＵ又はＫａｂａｔ軽鎖ＨＶＲ配列を、表３に示している。抗体のＥＵ又はＫａｂａｔ重鎖ＨＶＲ配列を、表４に示している。抗体のＥＵ又はＫａｂａｔ軽鎖フレームワーク（ＦＲ）配列を、表５に示している。抗体のＥＵ又はＫａｂａｔ重鎖フレームワークＦＲ）配列を、表６に示している。
Figure 2021529520
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ＳＩＲＰβ１抗体結合の特性評価
抗ＳＩＲＰβ１抗体の最初の特性評価には、ヒト又はマウスＳＩＲＰβ１を発現する細胞株と結する能力の決定が含まれていた。細胞を回収し、９６ウェルプレート中で１０６／ｍｌでプレーティングし、洗浄し、抗ＳＩＲＰβ１抗体１μｇ／ｍｌを含む１００μｌのＦＡＣＳ緩衝液中、氷上で０．５時間インキュベートした。その後、細胞を２回洗浄し、ＰＥコンジュゲート二次抗体０．５μｇ／ｍｌを含む１００μｌのＦＡＣＳ緩衝液中、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を冷たいＦＡＣＳ緩衝液中で２回洗浄し、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏで取得した。データ解析及び平均蛍光強度（ＭＦＩ）値又は陽性細胞率（％）の計算は、ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．で行った。
表７は、低レベルの組換えヒトＳＩＲＰβ１を発現するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株に結合した抗ＳＩＲＰβ１抗体の平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を示す。ヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロールを、バックグラウンド蛍光シグナルを１に設定して確立した。試験した５０個の抗ＳＩＲＰβ１抗体クローンのうち、３２個のクローンがバックグラウンドの２倍以上のＭＦＩで細胞に結合した。ネガティブコントロールとして、抗ＳＩＲＰβ１抗体はまた、組換えマウスＳＩＲＰβ１を過剰発現するＣＨＯ細胞への表面結合についてもスクリーニングされた。予想通り、試験抗体は、いずれもマウスＳＩＲＰβ１に結合しなかった。ＳＩＲＰファミリーの受容体間の高い配列類似性を考慮して、抗ＳＩＲＰβ１抗体を、ヒト及びマウスＳＩＲＰαに対する交差反応性についてもスクリーニングした。細胞結合アッセイにおいて、抗ＳＩＲＰβ１抗体はいずれもヒト又はマウスＳＩＲＰαを過剰発現する細胞に結合しなかった。
Figure 2021529520
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更に、抗ＳＩＲＰβ１抗体を、ＮＦＡＴ（活性化Ｔ細胞の核内因子）プロモーターの制御下でルシフェラーゼ遺伝子を発現するレポーター細胞株を用いて抗原特異性についてスクリーニングした。マウス胸腺リンパ腫Ｔリンパ球由来の細胞株ＢＷ５１４７．Ｇ．１．４（ＡＴＣＣ（登録商標）ＴＩＢ４ＴＭ）をＣｉｇｎａｌ Ｌｅｎｔｉ ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼウイルス（Ｑｉａｇｅｎ）に感染させ、ＢＷＺ／ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼレポーター細胞を得た。その後、ＳＩＲＰαの細胞内ＩＴＩＭモチーフをＤＡＰ１２の細胞内ＩＴＡＭモチーフで置換したヒトＳＩＲＰα−ＤＡＰ１２キメラを発現するレンチウイルス、又はヒトＳＩＲＰβ１及びヒトＤＡＰ１２を発現する２つのレンチウイルスのいずれかで細胞で形質導入した。ヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロールと同様に、試験抗体を１０ｕｇ／ｍＬで９６ウェルプレートに吸着させた。洗浄後、ｈｕＳＩＲＰα／ＤＡＰ１２キメラ（ＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰα）を発現するか、又はｈｕＳＩＲＰβ１とＤＡＰ１２（ＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰβ１）を共発現する１０５個のＮＦＡＴ−ルシフェラーゼレポーター細胞をプレート上に播種し、３７℃で一晩インキュベートした。ルシフェラーゼ活性は、ＯｎｅＧｌｏ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに添加し、プレートシェーカー上で試料を室温で３分間インキュベートすることによって測定した。発光シグナルを、ＧＥＮ５Ｍ２．０４ソフトウェアを使用したＢｉｏＴｅｋＳｙｎｅｒｇｙＴＭＭｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒを使用して定量化した。図３Ａに示すように、５０個の抗ＳＩＲＰβ１クローンのうち４８個が、ＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰβ１レポーター細胞でバックグラウンドの５倍を超えるルシフェラーゼ発現を誘導した。対照的に、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、抗体でコーティングしたウェルにＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰαレポーター細胞を添加した場合、ルシフェラーゼ発現を誘導しなかった（図３Ｂ）。要約すると、発光シグナルによって測定した場合、ヒトＳＩＲＰβ１を発現するレポーター細胞のみが、固定化された抗ＳＩＲＰβ１抗体の存在下でルシフェラーゼ発現を誘導した。これらの結果は、膜結合抗原を結合することができるほとんどの抗ＳＩＲＰβ１抗体が、他のＳＩＲＰ受容体と交差反応することなく、標的抗原に対する特異性を示すことを立証している。
実施例２：骨髄細胞でのＳＩＲＰβ１発現プロファイル
ＳＩＲＰファミリーは、主に骨髄細胞のコンパートメント内で発現するいくつかの膜貫通型糖タンパク質を含む。ＳＩＲＰβ１の発現パターンを、健康なヒトドナーから単離した初代ヒト細胞で検証した。製造元のプロトコールに従ってＨｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用し、２名の健康なドナーから得られたヘパリン化ヒト末梢血（Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｃｉｆｉｃ）からヒト初代単球を分離した。ＳＩＲＰβ１とＴＲＥＭ１のいずれも、ＣＤ１４−ｈｉｇｈ単球で優先的に発現する。単球を、１０％ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）及び５０ｎｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦ又はＧＭ−ＣＳＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を含有するＲＰＭＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に播種し、それぞれＭ２様マクロファージ又はＭ１様マクロファージの分化を誘導した。５〜６日後、プラスチックに付着した細胞を掻き取ってマクロファージを回収した。或いは、単球を、１０％ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、並びに２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４及びＧＭ−ＣＳＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を含有するＲＰＭＩ培地中に播種し、未熟樹状細胞の分化を誘導した。６〜７日後、プラスチックに付着した細胞を掻き取って樹状細胞を回収した。
図４Ａに示すように、ＣＤ１４発現は、初代ヒト単球のサブセットを定義する。古典的な単球及び中間的な単球は高レベルのＣＤ１４を発現するが、非古典的な単球はＣＤ１４発現を欠く。ＴＲＥＭ１と同様に、ＳＩＲＰβ１は、ＣＤ１４＋単球で豊富に発現している。上記のように末梢血から単離された単球を、Ｍ−ＣＳＦ又はＧＭ−ＣＳＦと共に５日間培養し、それぞれＭ２又はＭ１マクロファージを生成した。ＳＩＲＰβ１の発現は、初代単球のマクロファージへの分化の際に減少し、Ｍ１様マクロファージは、Ｍ２様マクロファージと比較してより高いレベルの受容体を発現している（図４Ｂ）。同様に、ＳＩＲＰβ１の発現は、初代単球が未熟樹状細胞に分化すると減少する。樹状細胞のＬＰＳ誘導性成熟は、ＴＲＥＭ１で観察された発現の増加とは対照的に、ＳＩＲＰβ１の発現を更にダウンレギュレートする（図４Ｃ）。ＴＲＥＭ１とは異なり、ＬＰＳ処理はＤＣ上のＳＩＲＰβ１発現をダウンレギュレートする。ＳＩＲＰβ１のピーク発現は、血液、脾臓及び肺で発生する。健康なドナーから採取した複数の組織試料のＲＮＡ−ｓｅｑデータセットからＳＩＲＰβ１の発現パターンを調査すると、ＳＩＲＰβ１転写レベルが血液中で優勢であることが確認され、循環単球及び好中球での受容体の高発現と一致している（図５Ａ）。しかし、ＲＮＡ−ｓｅｑデータから、ＳＩＲＰβ１アイソフォーム３の発現パターンはＳＩＲＰβ１アイソフォーム１の発現パターンとは異なり、ＳＩＲＰβ１アイソフォーム３はほとんどが脳で発現しており、末梢組織では発現していないことが明らかになった（図５Ｂ）。（データはＧｅｎｅｏｔｙｐｅ−Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ（ＧＴＥｘ）Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍのデータベースから取得）
実施例３：ＳＩＲＰβ１抗体はＳｙｋリン酸化を誘導する
脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）は、複数の基質をリン酸化することでＳＩＲＰβ１の下流で機能する細胞内シグナル伝達分子であり、それによって細胞の活性化と炎症過程につながるシグナル伝達複合体の形成を促進する。アゴニストＳＩＲＰβ１抗体がＳｙｋ活性化を誘導する能力は、マウス単球を培養することと、細胞抽出物中のＳｙｋタンパク質のリン酸化状態を測定することとによって決定される。これらの実験では、細胞内シグナル伝達を誘導するために、二次抗体を用いて細胞上の抗ＳＩＲＰβ１抗体を架橋する。
野生型（ＷＴ）マウスから、ヒトＳＩＲＰβ１ ＢＡＣトランスジェニックマウスから、及び機能的Ｆｃ受容体共通ガンマ鎖遺伝子の発現を欠くマウス（ＦｃｇＲ ＫＯ；ＲＥＦ：Ｔａｋａｉ Ｔ １９９４．Ｃｅｌｌ ７６（３）：５１９−２９）からの骨髄由来単球（ＢＭＤＭ）を１％血清ＲＰＭＩ中で４時間飢餓状態にし、その後ＰＢＳ−ＥＤＴＡで組織培養皿から取り出し、ＰＢＳで洗浄し、計数する。細胞を、完全長ＳＩＲＰβ１抗体又はｈｕＩｇＧ１アイソタイプコントロールで氷上で１５分間コーティングする。冷ＰＢＳで洗浄した後、細胞をヤギ抗ヒトＩｇＧの存在下、３７℃で示された時間インキュベートする。刺激後、細胞を溶解緩衝液（１％ ｖ／ｖ ＮＰ−４０％、５０Ｍｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１０％グリセロール、プラス、プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤）で溶解し、その後、１６０００ｇ、４℃で１０分間遠心分離して不溶性物質を除去する。その後、溶解物を、抗Ｓｙｋ抗体（ＢＭＤＭにはＮ−１９、ヒトＤＣには４Ｄ１０、Ｓａｎｔａ ＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）と共に免疫沈降させる。沈降したたんぱく質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分画し、ＰＶＤＦ膜に移し、抗ホスホチロシン抗体（４Ｇ１０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）でプローブする。全ての基質が十分に免疫沈降していることを確認するために、抗Ｓｙｋ抗体（Ａｂｃａｍ、ＢＭＤＭ用）又は抗Ｓｙｋ抗体（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、ヒトＤＣ用）を用いて免疫ブロットをリプローブする。可視化は、記載されているように（例えばPeng et al., (2010) Sci Signal., 3(122): ra38）、増強化学発光（ＥＣＬ）システム（ＧＥヘルスケア）を用いて行われる。これらの研究は、本発明の抗ＳＩＲＰβ１抗体がｓｙｋリン酸化を誘導することの裏付けを提供する。
実施例４：ＳＩＲＰβ１抗体は、Ｆｃガンマ受容体を発現する隣接細胞によってクラスター化されるとＳｙｋリン酸化を誘導する。
脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）の活性化は、２つ以上のＳＩＲＰβ１受容体抗体で架橋することによって促進され、それにより細胞の活性化と炎症過程につながるシグナル伝達複合体の形成を促進する。ｉｎ ｖｉｖｏでの架橋は、Ｂ細胞及び他の白血球など、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する隣接細胞によって媒介される（White AL Cancer Immunol Immunother (2013) 62:941-948; Wilson NS 2011, Cancer Cell 19, 101-113; Bartholomaeus P J Immunol 2014; 192:2091-2098）。これらの実験では、Ｆｃガンマ受容体を発現するアクセサリー細胞（すなわちＢ細胞）を用いて、抗ＳＩＲＰβ１抗体を架橋させて細胞内シグナル伝達を誘導する。
抗体クラスタリングを介してＳｙｋの活性化を誘導するＦｃ受容体の能力は、Ｆｃ受容体を発現する細胞の存在下でマウス単球を培養し、細胞抽出物中のＳｙｋタンパク質のリン酸化状態を測定することによって決定される。野生型（ＷＴ）マウス及びヒトＳＩＲＰβ１ ＢＡＣトランスジェニックマウスの骨髄由来単球（ＢＭＤＭ）を１％血清ＲＰＭＩ中で４時間飢餓状態にした後、ＰＢＳ−ＥＤＴＡで組織培養皿から取り出し、ＰＢＳで洗浄し、計数する。細胞を、完全長ＳＩＲＰβ１抗体又はｈｕＩｇＧ１アイソタイプコントロールで氷上で１５分間コーティングする。細胞を、完全長ＳＩＲＰβ１抗体又はｈｕＩｇＧ１アイソタイプコントロールで氷上で１５分間コーティングする。冷ＰＢＳで洗浄した後、細胞を３７℃で５分間、Ｆｃ受容体を発現し、以下のように前もって調製したグルタルアルデヒド固定細胞と共にインキュベートする。簡単に説明すると、Ｆｃ受容体発現細胞は、ＭＡＣＳマイクロビーズ（ＣＤ１９＋Ｂ細胞分離キットＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）を製造元のプロトコールに従って使用してマウス脾臓から分離したＢ細胞、又はＦｃＲ２ｂとＦｃＲ３を過剰発現するＰ８１５細胞株のいずれかである。１ｍｌ当たり２×１０６個の細胞を０．０５％グルタルアルデヒドで室温で１分間固定し、反応を１μＭ Ｇｌｙｃｉｎｅで停止させ、その後細胞をＰＢＳで広範囲に洗浄する。刺激後、細胞を溶解緩衝液（１％ ｖ／ｖ ＮＰ−４０％、５０Ｍｍ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ２、１０％グリセロール、プラス、プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤）で溶解し、その後、１６０００ｇ、４℃で１０分間遠心分離して不溶性物質を除去する。その後、溶解物を、抗Ｓｙｋ抗体（ＢＭＤＭにはＮ−１９、ヒトＤＣには４Ｄ１０、Ｓａｎｔａ ＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）と共に免疫沈降させる。沈降したたんぱく質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分画し、ＰＶＤＦ膜に移し、抗ホスホチロシン抗体（４Ｇ１０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）でプローブする。全ての基質が十分に免疫沈降していることを確認するために、抗Ｓｙｋ抗体（Ａｂｃａｍ、ＢＭＤＭ用）又は抗Ｓｙｋ抗体（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、ヒトＤＣ用）を用いて免疫ブロットをリプローブする。可視化は、記載されているように（例えばPeng et al., (2010) Sci Signal., 3(122): ra38）、増強化学発光（ＥＣＬ）システム（ＧＥヘルスケア）を用いて行われる。これらの研究は、本発明の抗ＳＩＲＰβ１抗体がＦｃガンマ受容体を発現する隣接細胞によってクラスター化されると、ｓｙｋリン酸化を誘導することの裏付けを提供する。
実施例５：ＳＩＲＰβ１抗体は免疫細胞において呼吸バーストを誘導する
本開示のＳＩＲＰβ１抗体のアゴニスト機能を、初代ヒト自然免疫細胞（例えば単球及び好中球）において評価した。
抗ＳＩＲＰβ１抗体及びアイソタイプコントロール抗体を無血清ＲＰＭＩ培地で希釈し、９６ウェルプレート上で１０μｇ／ｍｌの濃度で１０万個の好中球と混合した。初代好中球は、ＥａｓｙＳｅｐＴＭＤｉｒｅｃｔ Ｈｕｍａｎ Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ）を使用して、同じ日に採取した末梢血から製造元の指示書に従って単離した。活性酸素種（ＲＯＳ）の生成を検出するために、細胞を２μＭの蛍光色素ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡで標識した。細胞を、可溶性の完全長ヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロール又は抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１、−２、−３、−４、−５、−６、−７、−８、−９、−１１、−１４、−１５、−１７、−２７、−２８、−３１、−３９、−４０、−４１、−４５、−４６、及び−４９で刺激した。ＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡの存在下、３７℃で１時間の抗体媒介刺激に続いて、細胞内の相対蛍光単位を励起波長４９５ｎｍ及び発光波長５３０ｎｍで測定した。刺激された細胞の特異的な蛍光指数は、培地のみで、及び／又はアイソタイプコントロール抗体（ｈｕＩｇＧ１）と共にインキュベートした標識細胞のバックグラウンド蛍光を差し引くことで得られた。プレートは、ＧＥＮ５ＴＭ２．０４ソフトウェアを使用してＢｉｏＴｅｋ ＳｙｎｅｒｇｙＴＭＭｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒで読み取った。
図６Ａでは、２名の健康なドナーからの初代ヒト好中球を、１０μｇ／ｍＬの可溶性完全長抗ＳＩＲＰβ１抗体又はヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロールで刺激し、２μＭのＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡで３７℃で１時間標識し、ＳＩＲＰβ１媒介のＲＯＳ生成をモニターした。ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１、−２、−３、及び−５は、溶液中で非常にアゴニスト性であることが証明された。対照的に、ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１５、−１７、−２７、−２８、−３１、−３９、−４０、−４１、−４５、−４６、及び−４９は、溶液中でＳＩＲＰβ１を介した呼吸バーストを弱く活性化した。
細胞を、可溶性の完全長ヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロール又は抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１、−２、−３、−４、−５、−６、−７、−８、−９、−１１、−１２、−１３、−１４、−１５、−１７、−２３、−２６、−２７、−２８、−３１、−３３、−３４、−３５、−３６、−３７、−３９、−４０、−４１、−４５、−４６、及び−４９で刺激した。図６Ｂでは、初代ヒト単球を、２０μｇ／ｍＬの可溶性完全長抗ＳＩＲＰβ１抗体又はヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロールで刺激し、２μＭのＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡで３７℃で１時間標識し、ＳＩＲＰβ１媒介のＲＯＳ生成及びＩＬ−８生成をモニターした。ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−２、−３、−４、−５、−６、−７、−２８、及び−４９は、溶液中で非常にアゴニスト性であることが証明された。対照的に、ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１４、−１５、−１７、−２７、−４１、−４５、及び−４６は、溶液中でＳＩＲＰβ１を介した呼吸バーストを弱く活性化した。更に、初代単球を、９６ウェルプレートに１０μｇ／ｍＬで吸着させた抗ＳＩＲＰβ１抗体で３７℃で一晩刺激した。続いて、上清画分を収集し、ＩＬ−８放出についてアッセイした。ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１、−３、−７、−８、−９、−１４、２８、及び−４９は、プレート結合抗体として非常にアゴニスト性であることが証明された。対照的に、ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−４、−１２、−２３、−２６、−３３、−３４、−３５、−３６、及び−３７は、溶液中でＳＩＲＰβ１を介したサイトカイン放出を弱く活性化した。
実施例６：ＳＩＲＰβ１はマクロファージからの炎症性サイトカインの分泌を増加させる。
公開されている文献には、ＤＡＰ１２が欠損している場合にＴＬＲ応答が変化した骨髄由来マクロファージ（ＢＭＤＭ）又は初代腹膜マクロファージが記載されている。本開示のＳＩＲＰβ１抗体が炎症性サイトカイン産生の変化を誘導するかどうかを決定するために、初代ヒト単球由来マクロファージ及び樹状細胞を、非飽和レベルのＴＬＲ刺激剤と組み合わせてプレート結合試験抗体と共に培養し、２４時間後にサイトカインのレベルを測定する。単球由来マクロファージ及び樹状細胞を生成するために、製造元のプロトコールに従ってＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｃｏｃｋｔａｉｌ （ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用し、ヘパリン添加ヒト血液（Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｃｉｆｉｃ）からヒト初代単球を単離した。単球を、１０％ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）及び５０ｎｇ／ｍｌのＭ−ＣＳＦを含有するＲＰＭＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に播種し、マクロファージ分化を誘導した。５〜６日後、プラスチックに付着した細胞を掻き取ってマクロファージを回収した。或いは、単球を、１０％ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、並びに２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４及びＧＭ−ＣＳＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を含有するＲＰＭＩ培地中に播種し、未熟樹状細胞の分化を誘導した。６〜７日後、プラスチックに付着した細胞を掻き取って樹状細胞を回収した。マクロファージ又は樹状細胞を、示された抗体でコーティングされた９６ウェルプレートに１０５細胞／ウェルでプレーティングし、３７℃で２４時間インキュベートする。細胞を、ＴＬＲ４アゴニストであるＬＰＳ（ウマ流産菌）で共刺激する。
図６Ｃに示すように、単球由来のマクロファージと樹状細胞を、９６ウェルプレートに１０μｇ／ｍＬで吸着させた抗ＳＩＲＰβ１１抗体（ＳＢ−１、−２、−３、−４、−５、−６、−７、−８、−９、−１１、−１２、−１４、−１５、−１６、−１７、−１８、−１９、−２０、−２１、−２８、−３２、−４０、及び−４９）の存在下、０．５ｎｇ／ｍＬのＬＰＳで３７℃で一晩刺激した。続いて、上清画分を収集し、ＴＮＦα放出についてアッセイした。ネガティブコントロールとして、ＴＮＦαの放出を抑制するプレート結合抗ＳＩＲＰα抗体ＳＡ−５６−９０の存在下でＤＣをＬＰＳで刺激した。呼吸バーストを測定する全ての実験で、活性酸素種（ＲＯＳ）の生成は、細胞を２μＭの蛍光色インジケーターＣＭ−Ｈ２ＤＣＦＤＡで細胞を標識することによってモニターした。ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１、−２、−６、−８、及び−４９は、プレート結合抗体として非常にアゴニスト性であることが証明された。対照的に、残りのほとんどのＳＩＲＰβ１抗体は、ＳＩＲＰβ１を介したサイトカイン放出を弱く活性化した。同様に、プレート結合ＳＢ−１とＳＢ−４０（ＳＢ−３２ではなく）は、単球由来樹状細胞からのＬＰＳ誘発性ＴＮＦα放出を増強した。対照的に、ＬＰＳ誘発性ＴＮＦα放出は、プレート結合抗ＳＩＲＰα抗体ＳＡ−９０で刺激された樹状細胞で減少したが、これにより、アゴニストＳＩＲＰα抗体が細胞活性を阻害する一方、アゴニスト抗ＳＩＲＰβ１抗体は細胞を活性化することが確認された。
実施例７：ＳＩＲＰβ１刺激好中球の抗腫瘍活性
好中球は抗体化によって又は補体によってオプソニン化された標的細胞にとって効率的な食細胞であるが、腫瘍の微小環境の文脈では、好中球は通常、腫瘍の進行、浸潤及び血管新生に寄与する。しかし、最近の刊行物は、他の骨髄細胞と同様に、腫瘍関連好中球が抗腫瘍表現型に向かって分極する可能性を保持していることを示唆している。好中球は高レベルのＳＩＲＰβ１を発現するため、抗ＳＩＲＰβ１抗体の、ｉｎ ｖｉｔｒｏで好中球を介した腫瘍細胞クリアランスを誘導する能力を評価した。初代好中球は、ＥａｓｙＳｅｐＴＭＤｉｒｅｃｔ Ｈｕｍａｎ Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ）を使用して、同じ日に採取した健康なドナーの末梢血から製造元の指示書に従って単離した。その後、単離されたヒト好中球を、１０μｇ／ｍＬの抗ＳＩＲＰβ１抗体又はアイソタイプコントロールで前もってコーティングされた９６ウェルプレートに加えた。その後、ルシフェラーゼを安定的に発現するように操作したラージＢ細胞リンパ腫細胞を、好中球と１：１の比率で、オプソニン化抗体（抗ＣＤ２０ヒトＩｇＧ１）の有無にかかわらず混合した。共培養細胞を３７℃で一晩インキュベートし、ＯｎｅＧｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を添加した後のルシフェラーゼ活性を測定することと、プレートシェーカー上で試料を室温で３分間インキュベートすることとにより、生存Ｒａｊｉ細胞を定量した。発光シグナルを、ＧＥＮ５ＴＭ２．０４ソフトウェアを使用したＢｉｏＴｅｋＳｙｎｅｒｇｙＴＭＭｉｃｒｏｐｌａｔｅＲｅａｄｅｒで検出した。
図７に示すように、固定化アイソタイプコントロール抗体の存在下で共培養した場合、ヒト好中球は、ラージ細胞を排除しなかった。抗ＣＤ２０ ｈｕＩｇＧ１を添加しても、刺激されていない好中球では腫瘍細胞クリアランスは回復しなかった。同様に、固定化された抗ＳＩＲＰβ１抗体で刺激された好中球は、ラージ細胞を著しくは排除しなかった。但し、ＳＩＲＰβ１で刺激された好中球は、抗ＣＤ２０オプソニン化ラージ細胞を除去した。アゴニスト抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、及びＳＢ−４は、アイソタイプコントロールで処理された好中球と比較して、生存ラージ細胞からの発光シグナルを約５０％減少させた。抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−２８及びＳＢ−４９は、オプソニン化されたラージ細胞に対して弱い活性を示した。これらの結果は、アゴニスト抗ＳＩＲＰβ１抗体が好中球の抗腫瘍特性を増強することを示唆している。
実施例８：抗ＳＩＲＰβ１抗体の親和性成熟
様々な物理的及び機能的属性を有する５つの抗ＳＩＲＰβ１抗体、ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−８、及びＳＢ−４０（「親」抗体と呼ばれる）が親和性成熟されていた。簡単に説明すると、出発親抗体のそれぞれについて、酵母で多様な抗体ライブラリーを作成した。この多様性は、標準的な分子クローニング技術を利用して、親の重鎖ＣＤＲ−Ｈ３及び軽鎖（ＬＣ）を、重鎖（ＨＣ）のＣＤＲ−Ｈ１及びＣＤＲ−Ｈ２領域における既存の遺伝的多様性と結合させることによって作成された（「Ｈ１／Ｈ２」最適化という）。これにより、親和性が改善された抗体の選択についてサイズが約１０５クローン；１：７５５〜７６８の６つのライブラリーが作成された。ライブラリーのスクリーニングに使用される選択圧には、ヒトＳＩＲＰα及びＳＩＲＰβ１抗原平衡滴定、親抗体Ｆａｂ競合カイネティクス、及び多重特異性試薬選択解除の使用が含まれる（例えば、国際公開第２０１４／１７９３６３号；Xu et al., Protein Eng Des Sel, 26(10): 663-670に記載）。その後、ＦＡＣＳフローサイトメトリーを使用して、標準的な手法を使用して抗体を視覚化及び選択した（例えば、Chao et al. Nature Protocols, 2006;1:755-768参照）。その後、所望の母集団を追加の選択ラウンドに繰り越した。６ラウンドの濃縮後、単一の抗体分離物を得るために酵母細胞をプレーティングし、その後、これを実施例１に記載したように製造し、特徴付けた。このようにして、５つの出発親抗体のうち４つの出発親抗体から１７個の親和性改善抗体が得られた。
抗体ＩｇＧ及びＦａｂの生成と精製
酵母クローンを飽和状態まで増殖させた後、振とうしながら３０℃で４８時間誘導した。誘導後、酵母細胞をペレット化し、精製のために上清を回収した。
免疫グロブリンを、プロテインＡカラムを使用して精製し、酢酸、ｐＨ２．０で溶出した。パパイン消化によってＦａｂ断片が生成され、それをＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ ＩｇＧ−ＣＨｌアフィニティーマトリックス（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で精製した。
親和性決定
抗ＳＩＲＰβ１抗体の親和性は、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ（登録商標）及びＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（ＭＳＤ）装置を用いてＫＤ値を測定することにより決定した。Ｏｃｔｅｔ（登録商標）親和性測定は、以前に概して記載されている通りに、室温で行った（Estep et al, MAbs. 2013 Mar-Apr;5(2):270-8）。簡単に説明すると、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）親和性測定は、ＡＨＱセンサーにＩｇＧをオンラインでロードすることによって行われた。センサーを、アッセイ緩衝液中で３０分間オフラインで平衡化し、その後、ベースライン確立のために６０秒間オンラインでモニターした。Ａｖｉｄ結合測定のために、ＩｇＧをロードしたセンサーを１００ｎＭ抗原（ヒトＳＩＲＰα又はＳＩＲＰβ１Ｆｃ融合体）に３分間曝露した後、オフレート測定のためにアッセイ緩衝液に３分間移した。追加のＡｖｉｄ結合は、ビオチン化ＳＩＲＰβ１モノマーをＳＡセンサー上にロードすることと、溶液中の１００ｎＭ ＩｇＧに曝露することとによって決定された。一価結合の測定は、ヒトＳＩＲＰβ１Ｆｃ融合抗原をＡＨＱセンサーにロードした後、１００ｎＭの抗ＳＩＲＰβ１抗体Ｆａｂに曝露することによって得られた。追加の一価測定は、ビオチン化ヒトＳＩＲＰβ１モノマーをＳＡセンサーにロードした後、溶液中の１００ｎＭ Ｆａｂに曝露することによって行われた。カイネティクスデータを、ＦｏｒｔｅＢｉｏが提供するデータ解析ソフトウェアで１：１結合モデルを使用して適合させた。
ＭＳＤ−ＳＥＴ ＫＤ測定については、溶液平衡滴定（ＳＥＴ）を、組換えヒトＳＩＲＰβ１を１００ｐＭで一定に保持したＰＢＳ ＋ ０．１％ ＩｇＧフリー ＢＳＡ（ＰＢＳＦ）中で行い、約５０ｎＭから始まる抗体の３倍から５倍の段階希釈液でインキュベートした。抗体（ＰＢＳ中２０ｎＭ）を、標準結合ＭＳＤ−ＥＣＬプレート上に４℃で一晩、又は室温で３０分間コーティングした。その後、プレートを、７００ｒｐｍで振とうしながら３０分間１％ＢＳＡで遮断し、続いて、洗浄緩衝液（ＰＢＳＦ ＋ ０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄した。ＳＥＴ試料をプレートに塗布し、７００ｒｐｍで振とうしながら１５０秒間インキュベートした後、１回の洗浄を行った。プレート上で３分間インキュベートすることにより、プレート上に捕捉された抗原を、ＰＢＳＦ中２５０ｎｇ／ｍｌのスルホタグ標識ストレプトアビジンで検出した。プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄し、その後、界面活性剤を用いた１ｘ Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔを用いてＭＳＤ Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ ２４００装置上で読み取った。遊離抗原の割合を、Ｐｒｉｓｍで滴定した抗体の関数としてプロットし、二次方程式に当てはめてＫＤを抽出した。スループットを向上させるために、ＳＥＴ試料調製を含むＭＳＤ−ＳＥＴ実験全体を通して液体ハンドリングロボットを使用した。
細胞結合親和性測を、ヒトＳＩＲＰα又はＳＩＲＰβ１のいずれかを発現するＢＷＺレポーター細胞を使用して４℃で実施した。簡単に説明すると、細胞を回収し、ＰＢＳで洗浄し、漸増濃度の抗ＳＩＲＰβ１抗体又はアイソタイプコントロールと共にインキュベートした。抗体をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ＋２％ＦＢＳ）で希釈した。氷上で３０分間インキュベートした後、細胞をＦＡＣＳ緩衝液中で２回洗浄し、抗ヒトＰＥコンジュゲート二次抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）と共に氷上で３０分間インキュベートした。その後、細胞を２００ｕｌのＦＡＣＳ緩衝液中で２回洗浄し、続いてＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏスクリーニング装置（ＢＤ）で分析した。見かけのＫＤ値を、非線形カーブフィッティング（改良版ＯｎｅＳｉｔｅＴｏｔａｌ、Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ）によって決定した。
抗Ａｎｔｉ−ＳＩＲＰβ１抗体選択
それぞれの親抗体と比較して改善された親和性を示した親和性成熟抗ＳＩＲＰβ１抗体クローンを更に特徴付けた。全ての親和性成熟抗体クローンの最初のスクリーニングの後、各親抗体のクローンを更なる分析のために選択した。
抗体重鎖及び軽鎖可変ドメイン配列
標準的な技術を使用して、親和性成熟抗体の軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインをコードするアミノ酸配列を決定した。親和性成熟抗体のＫａｂａｔ軽鎖ＨＶＲ配列を、表８に示している。該抗体のＫａｂａｔ重鎖ＨＶＲ配列を、表９に示している。該抗体のＫａｂａｔ重鎖フレームワーク（ＦＲ）配列を、表１０に示している。抗体のＫａｂａｔ軽鎖フレームワーク（ＦＲ）配列を、表１１に示している。
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親和性成熟抗ＳＩＲＰβ１抗体結合の特性評価
親和性成熟抗ＳＩＲＰβ１抗体の最終セットを、抗原結合親和性に基づいて選択した。ヒトＳＩＲＰβ１への結合に陽性であった抗体を、ヒトＳＩＲＰαへの交差反応性について試験した。各抗体の生化学的特性評価を以下の表１２に示す。表１２において、「Ｎ．Ｂ．」は示された抗原との結合がない抗体を指し、「Ｐ．Ｆ．」は抗原結合カイネティクスが１：１結合モデルへの適合性に乏しい抗体を、「Ｎ．Ｍ．」は測定不可能な抗体を示す。
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親和性成熟抗ＳＩＲＰβ１抗体のその後の特性評価には、ヒト又はマウスＳＩＲＰβ１を発現する細胞株に結合する能力を決定することが含まれていた。細胞を回収し、９６ウェルプレート中で１０６／ｍｌでプレーティングし、洗浄し、抗ＳＩＲＰβ１抗体１μｇ／ｍｌを含む１００μｌのＦＡＣＳ緩衝液中、氷上で０．５時間インキュベートした。その後、細胞を２回洗浄し、ＰＥコンジュゲート二次抗体０．５μｇ／ｍｌを含む１００μｌのＦＡＣＳ緩衝液中、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を冷たいＦＡＣＳ緩衝液中で２回洗浄し、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏで取得した。データ解析及び平均蛍光強度（ＭＦＩ）値又は陽性細胞率（％）の計算は、ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．で行った。
表１３は、低レベルのヒトＳＩＲＰβ１を発現するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株に結合した親和性成熟抗ＳＩＲＰβ１抗体の平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を示す。ヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロールを、バックグラウンド蛍光シグナルを１に設定して確立した。試験した２２個の抗ＳＩＲＰβ１抗体クローンのうち、１７個のクローンがバックグラウンドの３倍以上のＭＦＩで細胞に結合した。ネガティブコントロールとして、抗ＳＩＲＰβ１抗体はまた、マウスＳＩＲＰβ１を過剰発現するＣＨＯ細胞への表面結合についてもスクリーニングされた。予想通り、ヒト抗原に結合するためにクローンが元々選択されたため、どの試験抗体もマウスＳＩＲＰβ１への著しい結合は示さなかった。ＳＩＲＰファミリーの受容体間の高い配列類似性を考慮して、抗ＳＩＲＰβ１抗体を、ヒトＳＩＲＰαに対する交差反応性についてもスクリーニングした。細胞結合アッセイにおいて、抗ＳＩＲＰβ１抗体はいずれもヒトＳＩＲＰαを過剰発現する細胞に結合しなかった。
Figure 2021529520
元の４つの親抗ＳＩＲＰβ１抗体はＳＩＲＰα交差反応性を示さなかったが、Ｏｃｔｅｔ（登録商標）分析により、ライブラリースクリーニング中に負の選択圧をかけたにもかかわらず子孫抗体の１つ（ＳＢ−８−１４）がＳＩＲＰαへのａｖｉｄ結合を獲得したことが明らかになった。上記の表１２参照。ａｖｉｄ結合がＳＩＲＰα依存性シグナル伝達を誘発するかどうかを決定するために、抗ＳＩＲＰβ１抗体を、ヒトＳＩＲＰα及びＳＩＲＰβ１レポーター細胞における遺伝子発現を誘導する能力について評価した。前述のように、試験抗体又は２つの抗ＳＩＲＰα抗体（クローンＳＡ−９０、ＳＡ−９４）を１０μｇ／ｍＬで９６ウェルプレートに吸着させた。洗浄後、１０５ＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰα又はＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰβ１ ＮＦＡＴ−ルシフェラーゼレポーター細胞をウェルに播種し、３７℃で一晩インキュベートした。ルシフェラーゼ活性は、ＯｎｅＧｌｏ試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに添加し、プレートシェーカー上で試料を室温で３分間インキュベートすることによって定量した。発光シグナルを、ＧＥＮ５ＴＭ２．０４ソフトウェアを使用したＢｉｏＴｅｋＳｙｎｅｒｇｙＴＭＭｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒを使用して定量化した。図８に示すように、親抗ＳＩＲＰβ１抗体と親和性改良された子孫の両方が、ＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰβ１レポーター細胞においてルシフェラーゼ発現を誘導する能力を保持した。ＳＢ−８−１４を含め親和性成熟クローンは全て、抗体でコーティングしたウェルにＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰαレポーター細胞を添加した場合、ルシフェラーゼ発現を著しくは誘導しなかった（図８）。対照的に、両方の抗ＳＩＲＰα抗体クローンは、ＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰαではルシフェラーゼ発現を誘導し、ＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰβ１レポーター細胞では誘導しなかった（図８）。これらの結果は、本明細書に開示された親和性成熟子孫抗体の１つの可溶性ＳＩＲＰαへのａｖｉｄ結合にもかかわらず、試験した全ての抗ＳＩＲＰβ１抗体が膜結合ＳＩＲＰαに機能的に関与しなかったことを立証する。代わりに、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、膜結合ヒトＳＩＲＰβ１に対する機能的特異性を示した。
実施例９：親和性成熟抗ＳＩＲＰβ１抗体は樹状細胞からの炎症性サイトカインの分泌を増加させる。
親和性成熟抗ＳＰＳＩＲＰβ１抗体が炎症性サイトカイン産生の変化を誘導する能力を保持するかどうかを決定するために、初代ヒト単球由来樹状細胞を、非飽和レベルのＴＬＲ刺激剤と組み合わせてプレート結合試験抗体と共に培養し、２４時間後にサイトカインのレベルを測定する。単球由来樹状細胞を生成するために、製造元のプロトコールに従ってＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｃｏｃｋｔａｉｌ（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用し、ヘパリン添加ヒト血液（Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｎｔｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｐａｃｉｆｉｃ）からヒト初代単球を単離した。単球を、１０％ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、並びに２０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−４及びＧＭ−ＣＳＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を含有するＲＰＭＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に播種し、未熟樹状細胞の分化を誘導した。６〜７日後、プラスチックに付着した細胞を掻き取って樹状細胞を回収した。樹状細胞を、示された抗体でコーティングされた９６ウェルプレートに１０５細胞／ウェルでプレーティングし、３７℃で２４時間インキュベートする。細胞を、ＴＬＲ４アゴニストであるＬＰＳ（ウマ流産菌）で共刺激する。
図９において、３名の健康なドナーからの単球由来樹状細胞を、２μｇ／ｍＬで９６ウェルプレートに吸着した示された親和性成熟抗ＳＩＲＰβ１抗体の存在下、０．５ｎｇ／ｍＬのＬＰＳで３７℃で一晩刺激した。続いて、上清画分を収集し、ＴＮＦα放出についてアッセイした。ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１−３、ＳＢ−２−８、及びＳＢ−８−１３は、プレート結合抗体として非常にアゴニスト性であることが証明された。対照的に、残りのＳＩＲＰβ１抗体、ＳＢ−２−８、ＳＢ−８−１５、及びＳＢ−４０−２０は、ＳＩＲＰβ１を介したサイトカイン放出を弱く活性化した。
実施例１０：抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に特異的である
分類されている複数のＳＩＲＰβ１アイソフォームの中で、アイソフォーム１は主に末梢で発現する受容体の完全長バージョンである。酵母ライブラリープールから抗ＳＩＲＰβ１抗体を選択するために、ＳＩＲＰβ１アイソフォーム１の配列に基づく組換え抗原を使用した。選択された抗ＳＩＲＰβ１抗体がヒトＳＩＲＰβ１の他のアイソフォーム又はカニクイザルＳＩＲＰβ１と交差反応するかどうかを確認するために、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム３配列及びカニクイザルＳＩＲＰβ１アイソフォーム１配列に基づく組換え抗原を、ＨＥＫ２９３細胞内での一過性トランスフェクションにより作製した。精製したＦｃタグ付き組換えタンパク質を、９６ウェルプレートに１μｇ／ｍＬ、４℃で一晩吸着させた。続いて、プレートをＰＢＳ ＋ ０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄し、１％ ＢＳＡ ＋ ＰＢＳで室温で２時間遮断した。１μｇ／ｍＬでブロッキング緩衝液に希釈した抗体をウェルに添加し、連続的に希釈し、４℃で一晩抗原を結合させた。翌日、初代抗体を除去し、ブロッキング緩衝液に１：１００００で希釈したホースラディッシュペルオキシダーゼにコンジュゲートした抗ヒトカッパ軽鎖抗体をウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳ ＋ ０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄し、１００μＬのＴＭＢ基質溶液をウエルに添加し、抗原に結合した抗ＳＩＲＰβ１抗体の量に比例する比色シグナルを生成した。反応が適切な色強度に達したら、１００μＬの停止溶液（Ｓｔｏｐ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を加えて酵素をクエンチした。ＧＥＮ５ＴＭ２．０４ソフトウェアを使用して、ＢｉｏＴｅｋＳｙｎｅｒｇｙＴＭマイクロプレートリーダーでプレートを読み取った。
図１０Ａ〜１０Ｂは、ＥＬＩＳＡデータに基づく、示されたＳＩＲＰβ１抗原に結合した抗ＳＩＲＰβ１抗体の結合曲線を示す。８の抗ＳＩＲＰβ１抗体（４の親抗体と４の対応する親和性成熟抗体）を解析のために選択した。これらの結合曲線から計算されたＥＣ５０値は、８の抗ＳＩＲＰβ１抗全てが高い親和性でヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１を認識することを証明した。例えば、ＳＢ−１及びＳＢ−１−２のＥＣ５０値は、それぞれ０．０３４ｎＭ、０．０４５ｎＭであった。ＳＢ−２及びＳＢ−２−７のＥＣ５０値は、それぞれ０．０３２ｎＭ、０．０２９ｎＭであった。ＳＢ−８及びＳＢ−８−１３のＥＣ５０値は、それぞれ０．０２２ｎＭ、０．０１９ｎＭであった。ＳＢ−４０及びＳＢ−４０−２１のＥＣ５０値は、それぞれ０．０４０ｎＭ、０．０２５ｎＭであった。但し、試験した抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム３又はカニクイザルＳＩＲＰβ１のいずれにも交差反応しなかった。これらの結果は、スクリーニング及び選択プラットフォームが、ヒトＳＩＲＰα、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム３、マウスＳＩＲＰβ１又はカニクイザルＳＩＲＰβ１に対する交差反応性のエビデンスなしに、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に対して非常に特異的な抗体をもたらしことを示している。
実施例１１：抗ＳＩＲＰβ１抗体のｉｎ ｖｉｖｏ免疫細胞の動員増加効果の解析
ヒトＳＩＲＰβ１ ＢＡＣトランスジェニックマウスの腹腔内（ＩＰ）投与後の腹腔内（ＰＥＣ）における炎症性細胞（好中球顆粒球、単球、及びマクロファージ）の動員を調節する抗ＳＩＲＰβ１抗体の能力を、抗体単独又はＬＰＳとの組み合わせのいずれかで以下のように評価する。簡単に説明すると、マウスは、最初に４０ｍｇ／ｋｇの抗ＳＩＲＰβ１抗体又はアイソタイプコントロール抗体ｍＩｇＧ１（クローンＭＯＰＣ−２１、Ｂｉｏｘｃｅｌｌ）のＩＰ注射を受ける。１４時間後、マウスは４ｍｇ／ｋｇのＬＰＳ、又はコントロールであるＰＢＳのＩＰ注射を受ける。ＬＰＳ又はＰＢＳ注射の６時間後に、細胞を、記載されている（例えばGawish R et al, 2014 FASEB J参照）ようにＰＥＣから回収し、ＦＡＣＳで解析する。ＦＡＣＳ解析のために、ＰＥＣ細胞を、抗ＣＤ１１ｂ−Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ、抗ＣＤ１１ｃ ＰｅＣｙ７、抗ＭＣＨ−ＩＩ−ＡＰＣＣｙ７、抗Ｇｒ１−ＦＩＴＣ、抗Ｌｙ６Ｇ−ＰＥ及び生存率色素（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ＃Ｌ３４９５７）と共に、氷上で１時間インキュベートし、その後、冷ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄する。その後、４％ＰＦＡ固定試料を取得する。データは、ＢＤ ＦＡＣＳ ＣＡＮＴＯ ＩＩサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアで解析した。これらの研究は、本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体がｉｎ ｖｉｖｏで免疫細胞の動員を増加させるという裏付けを提供する。
実施例１２：腫瘍微小環境におけるＳＩＲＰβ１の発現
３頭のヒトＳＩＲＰβ１ ＢＡＣトランスジェニックマウス（メス、８週齢）のグループに、１００μｌのＰＢＳに懸濁させた１ｘ１０６ ＭＣ３８若しくはＣＴ２６結腸癌細胞又はＥＭＴ−６マウス乳腺癌細胞で皮下チャレンジを行う。動物は、移植前にイソフルランで麻酔される。腫瘍のサイズが７００〜１０００ｍｍ３に達したら、腫瘍を外植して、ＦＡＣＳによって腫瘍微小環境におけるＳＩＲＰβ１の発現を解析する。比較として、腫瘍ベアリングマウスの脾臓又はナイーブマウスのコントロール脾臓も解析する。ＦＡＣＳによる発現解析では、腫瘍及び脾臓をコラゲン分解酵素１ｍｇ／ｍｌを含むＰＢＳ中でインキュベートし、その後細胞を漉して処理して単細胞懸濁液を得る。その後、細胞を、抗ＣＤ４５−ＰｅｒＣｐ−Ｃｙ７、抗ＣＤ１１ｂ−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、抗ＣＤ３−ＰＣ、抗Ｇｒ１−ＦＩＴＣ、抗ＮＫ１．１−ＰＥ、抗ＳＩＲＰβ１−ＡＰＣ抗体、及び生存率色素（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、カタログ＃Ｌ３４９５７）と共に氷上で３０分間インキュベートし、その後、冷ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄する。その後、４％ＰＦＡ固定試料を取得する。データは、ＢＤ ＦＡＣＳ ＣＡＮＴＯ ＩＩサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）で取得し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアで解析した。これらの研究は、骨髄細胞又は骨髄系の細胞が腫瘍環境下でＳＩＲＰβ１を発現していることの裏付けを提供するものである。
実施例１３：ヒトＳＩＲＰβ１ＢＡＣトランスジェニックマウスにおける腫瘍増殖の解析
野生型（ＷＴ、ｎ＝１１）及びヒトＳＩＲＰβ１ ＢＡＣトランスジェニックマウス（ＳＩＲＰβ１ｔｇ、ｎ＝１４）マウス（性別及び年齢が一致する同腹仔、１０週齢（±２週間））のグループに、１００μｌのＰＢＳ中に懸濁させた１ｘ１０６ ＭＣ３８結腸癌腫瘍細胞で皮下チャレンジを行う。その後、マウスを、腫瘍移植前にイソフルランで麻酔する。腫瘍移植に続いて、マウスに本発明の様々な濃度の抗ＳＩＲＰβ１抗体を投与する。腫瘍増殖を、５日目から隔週でノギスを用いてモニターする。実験のエンドポイントは、腫瘍体積２０００ｍｍ３又は６０日である。コントロール動物で観察されたものと比較して、腫瘍増殖又は腫瘍サイズ（体積、ｍｍ３として表される）の減少に対する抗ＳＩＲＰβ１抗体投与の効果が決定される。これらの研究は、本発明の抗ＳＩＲＰβ１抗体がｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍増殖を減少させるという裏付けを提供するものである。
実施例１４：抗ＳＩＲＰβ１抗体はヒト樹状細胞（ＤＣ）でのＣＤ８３及びＣＤ８６の発現を誘導する
ＣＤ８３及びＣＤ８６の発現を変更する抗ＳＩＲＰβ１抗体の能力を評価するために、プレート結合抗体及び可溶性抗体の両方を樹状細胞（ＤＣ）とインキュベートし、ＣＤ８３、ＣＤ８６、ＣＣＲ７及びリン酸化されたＥＲＫの発現を測定する。抗体を、ＰＢＳ中２又は１０μｇ／ｍｌで４℃で一晩、１２ウェルプレートにプレーティングする。ウェルを翌日にＰＢＳで３回洗浄する。健康なドナーの末梢血から単離された初代ヒト単球を、１０％ＦＢＳ及び２０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−４及びＧＭ−ＣＳＦを補充したＲＰＭＩ培地中の抗体コーティングウェルに添加し、３７℃、５％ＣＯ２で５日間インキュベートする。５日目に、未成熟ヒトＤＣを回収し、ＢＤ ＦＡＣＳ ＣａｎｔｏでＦＡＣＳによってＣＤ８６、ＣＤ８３、ＣＤ１ａ、及びＨＬＡ−ＤＲについて解析する。データ解析は、ＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｅｅＳｔａｒ）ソフトウェアバージョン１０．０．７で行う。ＣＤ８３及びＣＤ８６のレベルのＣＤ１ａ＋／ＨＬＡ−／ＤＲ＋細胞生息個体数を評価する。細胞内ＥＲＫリン酸化については、細胞を１％ホルムアルデヒドで固定し、ｃｙｔｏｆｉｘ／ｃｙｔｏｐｅｒｍキット（ＢＤ）で透過処理し、ＰＥ−ＥＲＫ抗体（ＢＤ）で染色した後、フローサイトメトリーで細胞内ＥＲＫのリン酸化を測定する。これらの研究は、本発明の抗ＳＩＲＰβ１抗体がヒト樹状細胞におけるＣＤ８３、ＣＤ８６及びＣＣＲ７の発現を増加させるという裏付けを提供する。加えて、これらの研究は、本発明の抗ＳＩＲＰβ１抗体がヒト樹状細胞におけるＥＲＫリン酸化を増加させるか、又は誘導するという裏付けを提供する。
実施例１５：ＰＩ３Ｋ経路の活性化を示すＳＩＲＰβ１、ＤＡＰ１２、ＳＹＫ、ＥＲＫ、及びＡＫＴのリン酸化を誘導する抗ＳＩＲＰβ１及び／又は抗ＳＩＲＰβ１二重特異性抗体のスクリーニング
ヒトＳＩＲＰβ１（Ｊ７７４、ＲＡＷ ２６４．７、ＢＭＭ細胞、又は破骨細胞）を発現するように操作されたヒト初代ヒト骨髄細胞又はマウス骨髄細胞株を、ＰＢＳ−ＥＤＴＡを用いて組織培養皿から取り出し、ＰＢＳで洗浄し、計数する。Ｊ７７４（４０×１０６）又はＲＡＷ ２６４．７細胞（１０×１０６ ＢＭＭ又は破骨細胞）を、抗ＳＩＲＰβ１及び／又は抗ＳＩＲＰβ１二重特異的抗体（抗ＳＩＲＰβ１／ＴＲＥＭ２二重特異的抗体など）で、又はアイソタイプをマッチさせたコントロール抗体で、１μｇ／１０６細胞と共に、氷上又はその他の条件で２０分間インキュベートする。細胞を氷冷放射免疫沈降アッセイ（ＲＩＰＡ）緩衝液で２０分間溶解した後、１６０００ｇで１０分間、４℃で遠心分離して不溶性物質を除去する。得られた上清を、示された抗体（ＤＡＰ１２、ＥＲＫ又はＡＫＴ）及びプロテインＡアガロース又はプロテインＧアガロース（Ｓｉｇｍａ）を用いて免疫沈降反応に供する。ビーズをＲＩＰＡ緩衝液で広範囲に洗浄し、ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によりタンパク質を分離する。その後、ウエスタンブロッティングによりニトロセルロース膜に転写し、適切な抗体（ＤＡＰ１２、ＥＲＫ又はＡＫＴのリン酸化形態を特異的に認識する抗体）と共にインキュベートし、記載されているように（例えば、Peng et al., (2010) Sci Signal., 3(122): ra38）、増強化学発光（ＥＣＬ）システム（Ｐｉｅｒｃｅ）で可視化する。これらの研究は、本発明の抗ＳＩＲＰβ１抗体がＳＩＲＰβ１、ＤＡＰ１２、ＳＹＫ、ＥＲＫ及びＡＫＴのリン酸化を誘導するという裏付けを提供する。加えて、これらの研究は、本発明の抗ＳＩＲＰβ１抗体がＰＩ３Ｋ経路を活性化するのに有効であるという裏付けを提供する。
実施例１６：抗ＳＩＲＰβ１抗体はヒトマクロファージでのＴＲＥＭ２発現をアップレギュレートする
ＳＩＲＰβ１とＴＲＥＭ２は、骨髄細胞で発現するＤＡＰ１２関連受容体である。ＳＩＲＰβ１がＴＲＥＭ２の発現を変更するかどうかを評価するために、マクロファージをプレート結合抗体上で培養し、フローサイトメトリーによりＴＲＥＭ２の細胞表面レベルを解析した。
抗体（ＳＢ−１−３、ＳＢ−２−８、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−４０−２０、及びｈｕＩｇＧ１コントロール）を、ＰＢＳ中で２μｇ／ｍＬで４時間、３７℃で９６ウェルプレートに吸着させた。ウェルをＰＢＳで２回洗浄した。Ｍ−ＣＳＦと共に５〜６日間培養して分化した単球由来のヒトマクロファージを回収し、１ウェル当たり１０００００個の細胞でプレーティングした。マクロファージを３７℃、５％ＣＯ２で一晩インキュベートした。ＴＲＥＭ２発現のＦＡＣＳ解析をＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩで行い、データ解析をＦｌｏｗＪｏ（ＴｒｏｙＳｔａｒ）ソフトウェアを用いて行った。
図１１Ａに示すように、プレート結合抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−２−８、ＳＢ−８−１５、及びＳＢ−４０−２０は、３名の健康なドナーから得たｈｕＩｇＧ１アイソタイプコントロール処理マクロファージ（ｈｕＩｇＧ１ ｉｓｏｔｙｐｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｔｒｅａｔｅｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ）と比較して、ＴＲＥＭ２発現を約２倍増加させた。但し、３名の健康なドナーのうち２名（６２４と６２６では、プレート結合抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１−３及びＳＢ−８−１３は、ｈｕＩｇＧ１アイソタイプコントロール処理マクロファージと比較して、ＴＲＥＭ２発現を部分的にしか増加させなかった。第３の健康なドナー（６２５）からのマクロファージでは、プレート結合ＳＢ−１−３及びＳＢ−８−１３は、ｈｕＩｇＧ１アイソタイプのコントロールと比較してＴＲＥＭ２の発現を約２倍に増加させた。これらの結果に基づいて、抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−２−８、ＳＢ−８−１５及びＳＢ−４０−２０は、細胞表面ＴＲＥＭ２発現を誘導するアゴニストとして機能する。
実施例１７：抗ＳＩＲＰβ１抗体はヒトマクロファージの生存能力を高める
ＴＲＥＭ２がマクロファージ／ミクログリアの生存能力を促進することを示唆するエビデンスが文献にある。ＳＩＲＰβ１はＤＡＰ１２アダプター分子と結合し、ＴＲＥＭ２の発現に影響を与える可能性があるため、抗ＳＩＲＰβ１抗体を、そのヒトマクロファージの生存能力を高める能力について評価した。
抗体（ＳＢ−１−３、ＳＢ−２−８、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−４０−２０、及びｈｕＩｇＧ１コントロール）を、ＰＢＳ中で２μｇ／ｍＬで４時間、３７℃で９６ウェルプレートに吸着させた。ウェルをＰＢＳで２回洗浄した。Ｍ−ＣＳＦと共に５〜６日間培養して分化した単球由来のヒトマクロファージを回収し、洗浄して残留Ｍ−ＣＳＦを除去した。マクロファージを、１０％ＦＢＳと１％Ｐｅｎｎ／Ｓｔｒｅｐを補充したＲＰＭＩ増殖培地に１ｍＬ当たり５０００００個の細胞で再懸濁させた。細胞を等量のＰＢＳで希釈し、２５０００個の細胞を含む１００μＬを各ウェルに添加した。マクロファージを、２日間３７℃でインキュベートした。生存能力の分析は、試料中のＡＴＰ濃度に比例する発光シグナルを生成する試薬であるＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して実施した。ＧＥＮ５ ２．０４ソフトウェアを使用して、Ｂｉｏｔｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒでプレートを読み取った。
図１１Ｂに示すように、ベースライン発光は、プレート結合完全長ｈｕＩｇＧ１アイソタイプコントロール上で培養されたマクロファージで設定した。抗体の非存在下（抗体なし）で播種されたマクロファージと比較して、アイソタイプコントロールに関してはマクロファージの生存能力に大きな変化はない。しかし、プレート結合完全長抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１−３、ＳＢ−８−１３及びＳＢ−８−１５上で培養したマクロファージは、アイソタイプコントロール処理細胞と比較して、生存能力の著しい増加を示した。プレート結合完全長抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−２−８及びＳＢ−４０−２０は、アイソタイプコントロール処理細胞と比較して、マクロファージ生存能力を増加させなかった。
抗ＳＩＲＰβ１抗体間で最初に観察された活性の違いを考慮して、その後のアッセイでは、抗体の活性が吸着したタンパク質の濃度に依存するかどうかを決定した。抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１−３及びＳＢ−２−８又はヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロールを、９６ウェルプレートに３７℃で４時間コーティングし、ＰＢＳで１０μｇ／ｍＬから開始し、３倍に段階希釈した。前述のように、マクロファージを等量のＰＢＳで希釈し、２５０００個の細胞を含む１００μＬを各ウェルに添加した。マクロファージを、２日間３７℃でインキュベートした。生存能力の分析は、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて実施し、プレートは、ＧＥＮ５ ２．０４ソフトウェアを使用してＢｉｏｔｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒで読み取った。
図１２に示すように、プレート結合完全長抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１−３は、アイソタイプコントロール処理細胞と比較して、マクロファージの生存能力を用量依存的に増加させた。対照的に、プレート結合完全長の抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−２−８は、高濃度のコートタンパク質であってもマクロファージの生存能力を増加させなかった。したがって、このアッセイにおいて、抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１−３、ＳＢ−８−１３及びＳＢ−８−１５はアゴニスト活性を示した。
実施例１８：抗ＳＩＲＰβ１及び抗ＴＲＥＭ２抗体によるマクロファージの併用治療の相加的及び相乗的効果
アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体は、可溶性の形式で細胞に添加するとマクロファージの生存能力を増加させることが過去に示されている。抗ＳＩＲＰβ１抗体とマクロファージを共刺激すると、アゴニスト活性抗ＴＲＥＭ２抗体が更に増強されるかどうかを決定するために、生存能力アッセイを実施した。
抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１−３及びＳＢ−２−８又はヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロールを、ＰＢＳ中１０μｇ／ｍＬで３７℃で４時間９６ウェルプレートにコーティングした。前述のように、マクロファージを等量のＰＢＳで希釈し、２５０００個の細胞を含む１００μＬを各ウェルに添加した。示している場合、マクロファージはまた、５０μｇ／ｍＬの抗ＴＲＥＭ２抗体でも処理された。マクロファージを、２日間３７℃でインキュベートした。生存能力の分析は、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて実施し、プレートは、ＧＥＮ５２．０４ソフトウェアを使用してＢｉｏｔｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒで読み取った。
図１３に示すように、ヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロールで培養した細胞にアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体を添加すると、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体の非存在下で培養した細胞に比べてマクロファージ生存能力が大幅に増加し、このアッセイの再現性が確認された。更に、プレート結合完全長抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１−３上でマクロファージを培養すると、アイソタイプ処理細胞と比較して生存能力が大幅に増加したが、抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−２−８はその活性を示さなかった（図１２）。プレート結合抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１−３及び可溶性アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体でマクロファージを共刺激すると、マクロファージの生存能力が更に向上することにより、相加性が示される。興味深いことに、プレート結合抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−２−８及び可溶性抗ＴＲＥＭ２抗体でマクロファージを共刺激すると、マクロファージの生存能力が高まることにより、相乗活性が示される。したがって、抗ＳＩＲＰβ１抗体がアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体の活性を増強する。
実施例１９：抗ＳＩＲＰβ１抗体は骨髄由来のマクロファージの生存能力を高める
マウス骨髄細胞におけるヒト抗原の発現を再現するヒトＳＩＲＰβ１ＢＡＣトランスジェニックマウスを作製した。ヒトＳＩＲＰβ１トランスジェニックマウスの骨髄細胞は、脛骨と大腿骨をＰＢＳでフラッシングすることにより得た。骨髄細胞は、マクロファージを分化させるために５０ｎｇ／ｍＬのＭ−ＣＳＦを、樹状細胞を分化させるために１０ｎｇ／ｍＬのＧＭ−ＣＳＦを補充したＲＰＭＩ培地で培養した。抗ＳＩＲＰβ１抗体を、そのマウス骨髄細胞の生存能力を高める能力について評価した。
抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１−３、ＳＢ−２−８及びＳＢ−８−１３又はヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロールを、ＰＢＳ中１０μｇ／ｍＬで３７℃で４時間９６ウェルプレートにコーティングした。マクロファージ及び樹状細胞を等量のＰＢＳで希釈し、２５０００個の細胞を含む１００μＬを各ウェルに添加した。細胞を、２日間３７℃でインキュベートした。生存能力の分析は、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて実施し、プレートは、ＧＥＮ５ ２．０４ソフトウェアを使用してＢｉｏｔｅｋ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒで読み取った。図１４Ａに示すように、ヒトマクロファージと一致して、プレート結合完全長抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−１−３及びＳＢ−８−１３上で骨髄由来マクロファージを培養すると、アイソタイプコントロール処理細胞と比較してマクロファージの生存能力が向上した。対照的に、抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−２−８は、マクロファージの生存能力を高めなかった。図１４Ｂに示すように、樹状細胞（ＤＣ）をプレート結合抗体で培養すると、全ての抗ＳＩＲＰβ１抗体がアイソタイプコントロール処理細胞と比較してＤＣ生存能力を増加させた。但し、抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ−８−１３で処理したＤＣのみが、無処理の樹状細胞（抗体なし）と比較して生存能力の向上を示した。したがって、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ヒトＳＩＲＰβ１を発現するマウス骨髄細胞に対してアゴニスト活性を示す。
実施例２０：関連するＳＩＲＰ受容体に対する親和性成熟抗ＳＩＲＰβ１抗体の交差反応性
ＳＩＲＰファミリーのタンパク質の特徴は、細胞外ドメインでの広範なアミノ酸配列の保存である。例えば、ＳＩＲＰβ１の細胞外領域は、ＳＩＲＰαと約９０％の配列同一性を共有し、ＳＩＲＰγと約７７％の配列同一性を共有する。１つのＳＩＲＰタンパク質ファミリーメンバーに対して開発された抗体は、多くの場合、複数のＳＩＲＰ受容体ファミリーメンバーと交差反応する。
配列／構造の相同性にもかかわらず、ＳＩＲＰ受容体は異なる機能特性と発現パターンを示す。例えば、ＳＩＲＰαは、ＣＤ４７と結合して免疫抑制を媒介する細胞質のＩＴＩＭモチーフを含んでいる。対照的に、細胞内シグナル伝達モチーフを欠き、ＣＤ４７と結合しないＳＩＲＰβ１は、ＩＴＡＭを含むＤＡＰ１２アダプタータンパク質と結合し、活性化シグナルを伝播する。ＳＩＲＰγは、主に骨髄系細胞に発現する他のＳＩＲＰ受容体とは異なり、リンパ球とＮＫ細胞に発現し、Ｔ細胞への抗原提示時に細胞間接着を安定化させる働きをする。
本開示の抗ＳＩＲＰβ１抗体の抗原特異性を決定するために、細胞ベースのアフィニティー測定を行い、細胞表面に発現した抗原に対する親和性成熟抗ＳＩＲＰβ１抗体の見かけの親和性を確認した。不死化マウスＴ細胞株であるＢＷ５１４７．Ｇ．１．４細胞を、ヒトＳＩＲＰβ１（ＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰβ１）又はヒトＳＩＲＰα（ＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰα）を過剰発現するように操作した。不死化ヒトＴ細胞株であるＪｕｒｋａｔ細胞は、ＳＩＲＰγを内因的に発現する。
これらの実験において、前述の２つの抗：抗体１８Ｄ５（ＳＩＲＰα及びＳＩＲＰβと交差反応する抗ＳＩＲＰ抗体）及び抗体ＫＷＡＲ２３（ＳＩＲＰα、ＳＩＲＰβ及びＳＩＲＰγと交差反応する抗ＳＩＲＰ抗体）をポジティブコントロールとして使用した。これらの抗体は、ヒトＩｇＧ４骨格上で組換え生産された。市販の抗ＳＩＲＰγ抗体（クローンＬＳＢ２．２０；サンディエゴのＢｉｏｌｅｇｅｎｄ）をフィコエリスリン（ＰＥ）フルオロフォアとコンジュゲートさせて、Ｊｕｒｋａｔ細胞上でのＳＩＲＰγ発現を確認するために使用した。抗ＳＩＲＰβ１モノクローナル抗体及びコントロール抗体のそれぞれの連続希釈液を１０５個の細胞に添加し、４℃で結合平衡に達するようにした。蛍光標識された二次抗体の添加と簡単な洗浄工程の後、滴定された抗体濃度の関数としてのＭＦＩ値がＦＡＣＳ解析によって記録された。
以下の表１４において、ＥＣ５０値は、ＳＩＲＰβ１を過剰発現している細胞に漸増濃度の抗体変異体を加えることによって相対的な親和性を割り当てる。受容体結合抗体は、抗ヒトＩｇＧ ＰＥ二次抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）で細胞を染色することによって検出された。曲線を、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ６ソフトウェアを用いた非線形回帰解析を用いて適合させた。図１５Ａに示すように、抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ＢＷＺ−ｈｕＳＩＲＰβ１細胞に異なるＥＣ５０プロファイルで結合した。抗ＳＩＲＰβ１抗体ＳＢ１−３は、他の抗ＳＩＲＰβ１抗体と比較して、また、ポジティブコントロール抗体である１８Ｄ５と比較して、最も優れた見かけの親和性を示した。抗ＳＩＲＰβ１抗体は、ＳＩＲＰα（図１５Ｂ）又はＳＩＲＰγ（図１５Ｃ）を発現する細胞とは結合せず、これらの抗体が抗原特異的であることが実証された。
Figure 2021529520
特定の配列
ＳＢ−１：軽鎖可変領域
EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQLLGSSPRTFGGGTKVEIK（配列番号２６７）
ＳＢ−１：重鎖可変領域
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDFTEVVGWLGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号２６８）

ＳＢ−２：軽鎖可変領域
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSSSHPFTFGGGTKVEIK（配列番号２６９）
ＳＢ−２：重鎖可変領域
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMNWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQTAAAAIWGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号２７０）

ＳＢ−３：軽鎖可変領域
EIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRLFHPPTFGGGTKVEIK（配列番号２７１）
ＳＢ−３：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPSSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREGIAATDAYFDLWGRGTLVTVSS（配列番号２７２）

ＳＢ−４：軽鎖可変領域
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYADAPITFGGGTKVEIK（配列番号２７３）
ＳＢ−４：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARSGTHFGTYSYSNWFDPWGQGTLVTVSS（配列番号２７４）

ＳＢ−５：軽鎖可変領域
EIVLTQSPATLSLSPGERATITCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRLFHPPTFGGGTKVEIK（配列番号２７５）
ＳＢ−５：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAREGDEDWFDPWGQGTLVTVSS（配列番号２７６）

ＳＢ−６：軽鎖可変領域
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSGHLPITFGGGTKVEIK（配列番号２７７）
ＳＢ−６：重鎖可変領域
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSTISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDFTEVVGWLGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号２６８）

ＳＢ−７：軽鎖可変領域
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQHYIAPFTFGGGTKVEIK（配列番号２７８）
ＳＢ−７：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTASYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARETRQDSAHYYGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号２７９）

ＳＢ−８：軽鎖可変領域
EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASNRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQVYSSPYTFGGGTKVEIK（配列番号２８０）
ＳＢ−８：重鎖可変領域
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYHSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGAMTPAGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号２８１）

ＳＢ−９：軽鎖可変領域
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYHSVPPITFGGGTKVEIK（配列番号２８２）
ＳＢ−９：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGIHWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDGLHYGDYIVYYGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号２８３）

ＳＢ−１０：軽鎖可変領域
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQAIESPLTFGGGTKVEIK（配列番号２８４）
ＳＢ−１０：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGVPRGDLGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号２８５）

ＳＢ−１１：軽鎖可変領域
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCVQALQTPLTFGGGTKVEIK（配列番号２８６）
ＳＢ−１１：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSNYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARPVDSSSYSLGYYYGMDVWGKGTTVTVSS（配列番号２８７）

ＳＢ−１２：軽鎖可変領域
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYSASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQLDNLPYTFGGGTKVEIK（配列番号２８８）
ＳＢ−１２：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTSYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDTYAYSYGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号２８９）

ＳＢ−１３：軽鎖可変領域
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSNGYNYLDWYLQKPGQSPQVLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALRSPITFGGGTKVEIK（配列番号２９０）
ＳＢ−１３：重鎖可変領域
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGDTSGGAYFDLWGRGTLVTVSS（配列番号２９１）

ＳＢ−１４：軽鎖可変領域
EIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDSSNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQFSYYPITFGGGTKVEIK（配列番号２９２）
ＳＢ−１４：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTASYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDRGGVGFDYWGQGTLVTVSS（配列番号２９３）

ＳＢ−１５：軽鎖可変領域
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYSHPFTFGGGTKVEIＫ（配列番号２９４）
ＳＢ−１５：重鎖可変領域
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSNSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREVGAPPSYPFDIWGQGTMVTVSS（配列番号２９５）

ＳＢ−１６：軽鎖可変領域
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQLFSTPFTFGGGTKVEIK（配列番号２９６）
ＳＢ−１６：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGSIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARANYYDSSGYSGLDLWGRGTLVTVSS（配列番号２９７）

ＳＢ−１７：軽鎖可変領域
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYDDPYTFGGGTKVEIK（配列番号２９８）
ＳＢ−１７：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARGPLLYGDYHVRYGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号２９９）

ＳＢ−１８：軽鎖可変領域
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCLQALQTPITFGGGTKVEIK（配列番号３００）
ＳＢ−１８：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAKPRGDYGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３０１）

ＳＢ−１９：軽鎖可変領域
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQAIGVPPTFGGGTKVEIK（配列番号３０２）
ＳＢ−１９：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGGGGYAYEYFQHWGQGTLVTVSS（配列番号３０３）

ＳＢ−２０：軽鎖可変領域
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYLSPFTFGGGTKVEIK（配列番号３０４）
ＳＢ−２０：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGSIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGREYGGHYYGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３０５）

ＳＢ−２１：軽鎖可変領域
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQTLRIPPTFGGGTKVEIK（配列番号３０６）
ＳＢ−２１：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSNGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARVGNMDQEYFDLWGRGTLVTVSS（配列番号３０７）

ＳＢ−２２：軽鎖可変領域
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGNSYPITFGGGTKVEIK（配列番号３０８）
ＳＢ−２２：重鎖可変領域
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSDGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPTRYGYDRLGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３０９）

ＳＢ−２３：軽鎖可変領域
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAYPYPLTFGGGTKVEIK（配列番号３１０）
ＳＢ−２３：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIAPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARTTYRDYYMDVWGKGTTVTVSS（配列番号３１１）

ＳＢ−２４：軽鎖可変領域
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQLNIHPWTFGGGTKVEIK（配列番号３１２）
ＳＢ−２４：重鎖可変領域
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWAWIRQPPGKGLEWIGSIYHSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDRSRGYPVYGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３１３）

ＳＢ−２５：軽鎖可変領域
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQVNSFPWTFGGGTKVEIK（配列番号３１４）
ＳＢ−２５：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSLAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGGDYSGYDYASGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３１５）

ＳＢ−２６：軽鎖可変領域
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQARGLPTFGGGTKVEIK（配列番号３１６）
ＳＢ−２６：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDGSAGRQEHGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３１７）

ＳＢ−２７：軽鎖可変領域
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQAVSDPPTFGGGTKVEIK（配列番号３１８）
ＳＢ−２７：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARQDLGSSHWHFDLWGRGTLVTVSS（配列番号３１９）

ＳＢ−２８：軽鎖可変領域
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQDGNFPLTFGGGTKVEIK（配列番号３２０）
ＳＢ−２８：重鎖可変領域
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSISYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDPRDYSSGSSGGGWGYFDLWGRGTLVTVSS（配列番号３２１）

ＳＢ−２９：軽鎖可変領域
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIFLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQARGSPITFGGGTKVEIK（配列番号３２２）
ＳＢ−２９：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGSIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAPYGSSSGYGYFDLWGRGTLVTVSS（配列番号３２３）

ＳＢ−３０：軽鎖可変領域
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQFLSSPWTFGGGTKVENQ（配列番号３２４）
ＳＢ−３０：重鎖可変領域
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGGYYWSWIRQHPGKGLEWIGYIYYSGSTVYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAREGPGYPSYFDPWGQGTLVTVSS（配列番号３２５）

ＳＢ−３１：軽鎖可変領域
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAVSHPFTFGGGTKVEIK（配列番号３２６）
ＳＢ−３１：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPGGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREGLYSSGWYIDVWGQGTLVTVSS（配列番号３２７）

ＳＢ−３２：軽鎖可変領域
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQDFLTPITFGGGTKVEIK（配列番号３２８）
ＳＢ−３２：重鎖可変領域
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYSSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGDSSSGGLDLWGRGTLVTVSS（配列番号３２９）

ＳＢ−３３：軽鎖可変領域
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQFAFLPLTFGGGTKVENQ（配列番号３３０）
ＳＢ−３３：重鎖可変領域
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGQYTGSLDVWGQGTMVTVSS（配列番号３３１）

ＳＢ−３４：軽鎖可変領域
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSVSSNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQDNTFPYTFGGGTKVEIK（配列番号３３２）
ＳＢ−３４：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTKYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDTYYTPYGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３３３）

ＳＢ−３５：軽鎖可変領域
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQTLQVPLTFGGGTKVEIK（配列番号３３４）
ＳＢ−３５：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRPQSESYLLDYWGQGTLVTVSS（配列番号３３５）

ＳＢ−３６：軽鎖可変領域
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAFSHRTFGGGTKVEIK（配列番号３３６）
ＳＢ−３６：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAREGPEQLWYLDYWGQGTLVTVSS（配列番号３３７）

ＳＢ−３７：軽鎖可変領域
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRHTYPLTFGGGTKVEIK（配列番号３３８）
ＳＢ−３７：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSNYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSRWGASGYYYYMDVWGQGTMVTVSS（配列番号３３９）

ＳＢ−３８：軽鎖可変領域
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQAVSYPITFGGGTKVEIK（配列番号３４０）
ＳＢ−３８：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARESGTDFGTISYWGQGTLVTVSS（配列番号３４１）

ＳＢ−３９：軽鎖可変領域
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYDFPLTFGGGTKVEIK（配列番号３４２）
ＳＢ−３９：重鎖可変領域
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWAWIRQPPGKGLEWIGSIYHSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGSNYGDYGRFDYWGQGTLVTVSS（配列番号３４３）

ＳＢ−４０：軽鎖可変領域
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDSSNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRDEHPPWTFGGGTKVEIK（配列番号３４４）
ＳＢ−４０：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMSWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDTGEYSYSPHGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３４５）

ＳＢ−４１：軽鎖可変領域
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDITNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQADNFPYTFGGGTKVEIK（配列番号３４６）
ＳＢ−４１：重鎖可変領域
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARVGQYPIYGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３４７）

ＳＢ−４２：軽鎖可変領域
EIVMTQSPATLSVSPGERATITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYSASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGDSFPITFGGGTKVEIK（配列番号３４８）
ＳＢ−４２：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARGPGHYYVAGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３４９）

ＳＢ−４３：軽鎖可変領域
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASKRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRFDFPITFGGGTKVEIK（配列番号３５０）
ＳＢ−４３：重鎖可変領域
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWAWIRQPPGKGLEWIGSIYHSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDAPGYPMLGMDVWGQGTTVSVSS（配列番号３５１）

ＳＢ−４４：軽鎖可変領域
DIQMTQSPSTLSASVGDRVTITCRASQSIGSWLAWYQQKPGKAPKLLIYKASSLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFATYYCQEYGSYRTFGGGTKVEIK（配列番号３５２）
ＳＢ−４４：重鎖可変領域
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSNYMSWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGDTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGSSFWSGSAVSYYGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３５３）

ＳＢ−４５：軽鎖可変領域
VLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSFLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQVVSVPTFGGGTKVEIK（配列番号３５４）
ＳＢ−４５：重鎖可変領域
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISSGYYWAWIRQPPGKGLEWIGSIYHSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDLSRGYAVSGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３５５）

ＳＢ−４６：軽鎖可変領域
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVRSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQLYSSPYTFGGGTKVEIK（配列番号３５６）
ＳＢ−４６：重鎖可変領域
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARASPWELDVWGQGTMVTVSS（配列番号３５７）

ＳＢ−４７：軽鎖可変領域
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQADYFPITFGGGTKVEIK（配列番号３５８）
ＳＢ−４７：重鎖可変領域
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSSYAWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDLGHYDYWSGSRDYYYGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３５９）

ＳＢ−４８：軽鎖可変領域
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGIDSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQASNFPITFGGGTKVEIK（配列番号３６０）
ＳＢ−４８：重鎖可変領域
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSNKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGTIAAAGWPPEYFQHWGQGTLVTVSS（配列番号３６１）

ＳＢ−４９：軽鎖可変領域
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDITNYLNWYQQKPGKAPKLLIYDASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYFHPPLTFGGGTKVEIK（配列番号３６２）
ＳＢ−４９：重鎖可変領域
QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSSDYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGPTGYKDKWRYYYGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３６３）

ＳＢ−５０：軽鎖可変領域
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQFLHTPRTFGGGTKVEIK（配列番号３６４）
ＳＢ−５０：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAREGGGHASYHYYGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３６５）

ＳＢ−１−２：軽鎖可変領域
EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQLLGSSPRTFGGGTKVEIK（配列番号２６７）
ＳＢ−１−２：重鎖可変領域
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFGSFGMNWVRQAPGKGLEWVSAITASGGSTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDFTEVVGWLGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３６６）

ＳＢ−１−３：軽鎖可変領域
EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQLLGSSPRTFGGGTKVEIK（配列番号２６７）
ＳＢ−１−３：重鎖可変領域
EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSAYGMNWVRQAPGKGLEWVSAITSSGRSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDFTEVVGWLGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３６７）

ＳＢ−１−４：軽鎖可変領域
EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQLLGSSPRTFGGGTKVEIK(配列番号２６７）
ＳＢ−１−４：重鎖可変領域
QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSAYGMNWVRQAPGKGLEWVSAIRASGGATYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDFTEVVGWLGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３６８）

ＳＢ−１−５：軽鎖可変領域
EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQLLGSSPRTFGGGTKVEIK（配列番号２６７）
ＳＢ−１−５：重鎖可変領域
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSAYGMNWVRQAPGKGLEWVSAISASGRSTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDFTEVVGWLGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３６９）

ＳＢ−２−７：軽鎖可変領域
EVVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSSSHPFTFGGGTKVEIK（配列番号３７０）
ＳＢ−２−７：重鎖可変領域
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFARYGMHWVRQAPGKGLEWVSAISGLAGPTYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQTAAAAIWGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３７１）

ＳＢ−２−８：軽鎖可変領域
EVVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSSSHPFTFGGGTKVEIK（配列番号３７０）
ＳＢ−２−８：重鎖可変領域
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFLDYGMHWVRQAPGKGLEWVSAISAFAGSTYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQTAAAAIWGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３７２）

ＳＢ−２−９：軽鎖可変領域
EVVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSSSHPFTFGGGTKVEIK（配列番号３７０）
ＳＢ−２−９：重鎖可変領域
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFKTYGMHWVRQAPGKGLEWVAHIWYEGSNKVYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQTAAAAIWGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３７３）

ＳＢ−２−１０：軽鎖可変領域
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSSSHPFTFGGGTKVEIK（配列番号２６９）
ＳＢ−２−１０：重鎖可変領域
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFGSYGMHWVRQAPGKGLEWVSAISGLAGQTYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQTAAAAIWGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３７４）

ＳＢ−２−１１：軽鎖可変領域
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQSSSHPFTFGGGTKVEIK（配列番号２６９）
ＳＢ−２−１１：重鎖可変領域
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFARYGMHWVRQAPGKGLEWVSAISGLAGPTYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDQTAAWGIWGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３７５）

ＳＢ−８−１３：軽鎖可変領域
EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASNRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQVYSSPYTFGGGTKVEIK（配列番号２８０）
ＳＢ−８−１３：重鎖可変領域
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISAHYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIFHSGHTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGAMTPAGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３７６）

ＳＢ−８−１４：軽鎖可変領域
EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASNRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQVYSSPYTFGGGTKVEIK（配列番号２８０）
ＳＢ−８−１４：重鎖可変領域
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISPHYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYHSGHTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGAMTPAGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３７７）

ＳＢ−８−１５：軽鎖可変領域
EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASNRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQVYSSPYTFGGGTKVEIK（配列番号２８０）
ＳＢ−８−１５：重鎖可変領域
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISPHYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIYHSGHTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGAMTPAGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３７７）

ＳＢ−８−１６：軽鎖可変領域
EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASNRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQVYSSPYTFGGGTKVEIK（配列番号２８０）
ＳＢ−８−１６：重鎖可変領域
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCAVSGYSISAHYYWGWIRQPPGKGLEWIGSIFHSGHTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARAGAMTPAGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３７８）

ＳＢ−４０−１８：軽鎖可変領域
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDSSNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRDEHPPWTFGGGTKVEIK（配列番号３４４）
ＳＢ−４０−１８：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMAWVRQAPGQRLEWMGWINPAVGATIYSQKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDTGEYSYSPHGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３７９）

ＳＢ−４０−１９：軽鎖可変領域
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDSSNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRDEHPPWTFGGGTKVEIK（配列番号３４４）
ＳＢ−４０−１９：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMVWVRQAPGQGLEWMGIINPSSGATNYAQKFQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDTGEYSYSPHGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３８０）

ＳＢ−４０−２０：軽鎖可変領域
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDSSNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRDEHPPWTFGGGTKVEIK（配列番号３４４）
ＳＢ−４０−２０：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSFYISWVRQAPGQGLEWMGIINPSSGHTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARDTGEYSYSPHGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３８１）

ＳＢ−４０−２１：軽鎖可変領域
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDSSNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRDEHPPWTFGGGTKVEIK（配列番号３４４）
ＳＢ−４０−２１：重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMVWVRQAPGQGLEWMGIINPSSGDTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCARDTGEYSYSPHGMDVWGQGTTVTVSS（配列番号３８２）

ＳＩＲＰαドメイン１（ＩｇＶドメイン）
EELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS（配列番号３８７）

ＳＩＲＰβ１ドメイン１（ＩｇＶドメイン）
EDELQVIQPEKSVSVAAGESATLRCAMTSLIPVGPIMWFRGAGAGRELIYNQKEGHFPRVTTVSELTKRNNLDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS（配列番号３８８）

Claims (104)

  1. ヒトＳＩＲＰβ１に結合する単離された抗体であって、以下から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、又は少なくとも５つの特性を有する、単離された抗体：
    ａ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰαには結合しない；
    ｂ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰγには結合しない；
    ｃ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム３には結合しない；
    ｄ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、マウスＳＩＲＰβ１には結合しない；
    ｅ） ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、カニクイザルＳＩＲＰβ１アイソフォーム１には結合しない；
    ｆ） ＣＤ１４陽性単球に対するＳＩＲＰβ１活性をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏでアゴナイズする；
    ｇ） 好中球及び／又は単球などの免疫細胞における呼吸性バーストをｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる；
    ｈ） 単球におけるＩＬ−８発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる；
    ｉ） マクロファージ及び／又は樹状細胞におけるＴＮＦα発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる；
    ｊ） 例えば腫瘍細胞の、好中球を介した食作用をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導する；
    ｋ） 好中球を介した腫瘍細胞のクリアランスをｉｎ ｖｉｖｏで増加させる；
    ｌ） マクロファージ上のＴＲＥＭ２発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで増加させる；
    ｍ） 単独で及び／又はアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体との組み合わせで、マクロファージの生存能力をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで高める；
    ｎ） 樹状細胞の生存能力をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで高める。
  2. ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰα若しくはヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム３に結合しない；又はヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に結合するが、ヒトＳＩＲＰα、ＳＩＲＰγ若しくはヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム３に結合しない、請求項１に記載の単離された抗体。
  3. 以下から選択される少なくとも１つ、少なくとも２つ、又は少なくとも３つの特性を有する、請求項１又は請求項２に記載の単離された抗体：
    ａ） ＣＤ１４陽性単球に対するＳＩＲＰβ１活性をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏでアゴナイズする；
    ｂ） 好中球及び／又は単球などの免疫細胞における呼吸性バーストをｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる；
    ｃ） 単球におけるＩＬ−８発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる；
    ｄ） マクロファージ及び／又は樹状細胞におけるＴＮＦα発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導するか又は増加させる；
    ｅ） 例えば腫瘍細胞の、好中球を介した食作用をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで誘導する；
    ｏ） 好中球を介した腫瘍細胞のクリアランスをｉｎ ｖｉｖｏで増加させる；
    ｐ） マクロファージ上のＴＲＥＭ２発現をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで増加させる；
    ｑ） 単独で及び／又はアゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体との組み合わせで、マクロファージの生存能力をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで高める；
    ｆ 樹状細胞の生存能力をｉｎ ｖｉｔｒｏ及び／又はｉｎ ｖｉｖｏで高める。
  4. ヒトＳＩＲＰβ１に結合する単離された抗体であって、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖可変領域が、（ａ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）表４及び／又は表９に示すＨＶＲ−Ｈ３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｌ１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｌ２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；並びに（ｆ）表３及び／又は表８に示すＨＶＲ−Ｌ３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、単離された抗体。
  5. 重鎖可変領域が、表６に示すＶＨ ＦＲ１、ＶＨ ＦＲ２、ＶＨ ＦＲ３及びＶＨ ＦＲ４から選択される１つ、２つ、３つ又は４つのフレームワーク領域を含む、請求項４に記載の抗体。
  6. 軽鎖可変領域が、表５に示すＶＬ ＦＲ１、ＶＬ ＦＲ２、ＶＬ ＦＲ３及びＶＬ ＦＲ４から選択される１つ、２つ、３つ又は４つのフレームワーク領域を含む、請求項４又は請求項５に記載の抗体。
  7. ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１０、ＳＢ−１１、ＳＢ−１２、ＳＢ−１３、ＳＢ−１４、ＳＢ−１５、ＳＢ−１６、ＳＢ−１７、ＳＢ−１８、ＳＢ−１９、ＳＢ−２０、ＳＢ−２１、ＳＢ−２２、ＳＢ−２３、ＳＢ−２４、ＳＢ−２５、ＳＢ−２６、ＳＢ−２７、ＳＢ−２８、ＳＢ−２９、ＳＢ−３０、ＳＢ−３１、ＳＢ−３２、ＳＢ−３３、ＳＢ−３４、ＳＢ−３５、ＳＢ−３６、ＳＢ−３７、ＳＢ−３８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４１、ＳＢ−４２、ＳＢ−４３、ＳＢ−４４、ＳＢ−４５、ＳＢ−４６、ＳＢ−４７、ＳＢ−４８、ＳＢ−４９、ＳＢ−５０、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３（表３、４、８及び９に示す）を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体。
  8. 配列番号２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、又は３８２から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗体。
  9. 配列番号２６８、２７０、２７２、２７４、２７６、２７９、２８１、２８３、２８５、２８７、２８９、２９１、２９３、２９５、２９７、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１１、３１３、３１５、３１７、３１９、３２１、３２３、３２５、３２７、３２９、３３１、３３３、３３５、３３７、３３９、３４１、３４３、３４５、３４７、３４９、３５１、３５３、３５５、３５７、３５９、３６１、３６３、３６５、３６６、３６７、３６８、３６９、３７１、３７２、３７３、３７４、３７５、３７６、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、又は３８２から選択される重鎖可変領域を含む、請求項１から８のいずれか一項に記載の抗体。
  10. 配列番号２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３３４、３３６、３３８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、又は３７０から選択される配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の抗体。
  11. 配列番号２６７、２６９、２７１、２７３、２７５、２７７、２７８、２８０、２８２、２８４、２８６、２８８、２９０、２９２、２９４、２９６、２９８、３００、３０２、３０４、３０６、３０８、３１０、３１２、３１４、３１６、３１８、３２０、３２２、３２４、３２６、３２８、３３０、３３２、３３４、３３６、３３８、３４０、３４２、３４４、３４６、３４８、３５０、３５２、３５４、３５６、３５８、３６０、３６２、３６４、又は３７０から選択される軽鎖可変領域を含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の抗体。
  12. ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１０、ＳＢ−１１、ＳＢ−１２、ＳＢ−１３、ＳＢ−１４、ＳＢ−１５、ＳＢ−１６、ＳＢ−１７、ＳＢ−１８、ＳＢ−１９、ＳＢ−２０、ＳＢ−２１、ＳＢ−２２、ＳＢ−２３、ＳＢ−２４、ＳＢ−２５、ＳＢ−２６、ＳＢ−２７、ＳＢ−２８、ＳＢ−２９、ＳＢ−３０、ＳＢ−３１、ＳＢ−３２、ＳＢ−３３、ＳＢ−３４、ＳＢ−３５、ＳＢ−３６、ＳＢ−３７、ＳＢ−３８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４１、ＳＢ−４２、ＳＢ−４３、ＳＢ−４４、ＳＢ−４５、ＳＢ−４６、ＳＢ−４７、ＳＢ−４８、ＳＢ−４９、ＳＢ−５０、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域と、前記抗体の軽鎖可変領域と９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域とを含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体。
  13. ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１０、ＳＢ−１１、ＳＢ−１２、ＳＢ−１３、ＳＢ−１４、ＳＢ−１５、ＳＢ−１６、ＳＢ−１７、ＳＢ−１８、ＳＢ−１９、ＳＢ−２０、ＳＢ−２１、ＳＢ−２２、ＳＢ−２３、ＳＢ−２４、ＳＢ−２５、ＳＢ−２６、ＳＢ−２７、ＳＢ−２８、ＳＢ−２９、ＳＢ−３０、ＳＢ−３１、ＳＢ−３２、ＳＢ−３３、ＳＢ−３４、ＳＢ−３５、ＳＢ−３６、ＳＢ−３７、ＳＢ−３８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４１、ＳＢ−４２、ＳＢ−４３、ＳＢ−４４、ＳＢ−４５、ＳＢ−４６、ＳＢ−４７、ＳＢ−４８、ＳＢ−４９、ＳＢ−５０、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体。
  14. ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２及びＨＶＲ−Ｌ３（表３、４、８及び９に示す）を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体。
  15. ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域を含む、請求項１４に記載の抗体。
  16. ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域を含む、請求項１４又は請求項１５に記載の抗体。
  17. ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の軽鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域を含む、請求項１４から１６のいずれか一項に記載の抗体。
  18. ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の軽鎖可変領域を含む、請求項１４から１７のいずれか一項に記載の抗体。
  19. ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域と、前記抗体の軽鎖可変領域と９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域とを含む、請求項１４から１８のいずれか一項に記載の抗体。
  20. ＳＢ−１、ＳＢ−２、ＳＢ−３、ＳＢ−４、ＳＢ−５、ＳＢ−６、ＳＢ−７、ＳＢ−８、ＳＢ−９、ＳＢ−１４、ＳＢ−２８、ＳＢ−３９、ＳＢ−４０、ＳＢ−４９、ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む、請求項１４から１９のいずれか一項に記載の抗体。
  21. ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体のＨＶＲ−Ｈ１、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｈ２、ＨＶＲ−Ｌ１、ＨＶＲ−Ｌ２、及びＨＶＲ−Ｌ３（表８及び９に示す）を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体。
  22. ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域を含む、請求項２１に記載の抗体。
  23. ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域を含む、請求項２１又は請求項２２に記載の抗体。
  24. ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の軽鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域を含む、請求項２１から２３のいずれか一項に記載の抗体。
  25. ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の軽鎖可変領域を含む、請求項２１から２４のいずれか一項に記載の抗体。
  26. ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域と、前記抗体の軽鎖可変領域と９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域とを含む、請求項２１から２５のいずれか一項に記載の抗体。
  27. ＳＢ−１−２、ＳＢ−１−３、ＳＢ−１−４、ＳＢ−１−５、ＳＢ−２−７、ＳＢ−２−８、ＳＢ−２−９、ＳＢ−２−１０、ＳＢ−２−１１、ＳＢ−８−１３、ＳＢ−８−１４、ＳＢ−８−１５、ＳＢ−８−１６、ＳＢ−４０−１８、ＳＢ−４０−１９、ＳＢ−４０−２０、及びＳＢ−４０−２１から選択される抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含む、請求項２１から２６のいずれか一項に記載の抗体。
  28. （ａ）配列番号８０、２２８又は２２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１０１、２３９、２３９、２４０又は２４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体。
  29. 配列番号３６６、３６７、３６８又は３６９のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域を含む、請求項２８に記載の抗体。
  30. 配列番号２６７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域を含む、請求項２８又は請求項２９に記載の抗体。
  31. 配列番号３６６、３６７、３６８又は３６９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項２８から３０のいずれか一項に記載の抗体。
  32. 配列番号２６７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項２８から３１のいずれか一項に記載の抗体。
  33. （ａ）配列番号８１、９９、２３０、２３１又は２３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１０２、２４２、２４３、２４４又は２４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１２６又は２５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体。
  34. 配列番号３７１、３７２、３７３、３７４又は３７５のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域を含む、請求項３３に記載の抗体。
  35. 配列番号２６９又は３７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域を含む、請求項３３又は請求項３４に記載の抗体。
  36. 配列番号３７１、３７２、３７３、３７４又は３７５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項３３から３５のいずれか一項に記載の抗体。
  37. 配列番号２６９又は３７０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項３３から３６のいずれか一項に記載の抗体。
  38. 配列番号３７１、３７２若しくは３７３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号３７０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含むか、又は配列番号３７４若しくは３７５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２６９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む、請求項３３から３７のいずれか一項に記載の抗体。
  39. （ａ）配列番号８５、２３３又は２３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１０７、２４６、２４７又は２４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１３１又は２５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体。
  40. 配列番号３７６、３７７又は３７８のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域を含む、請求項３９に記載の抗体。
  41. 配列番号２８０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域を含む、請求項３９又は請求項４０に記載の抗体。
  42. 配列番号３７６、３７７又は３７８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項３９から４１のいずれか一項に記載の抗体。
  43. 配列番号２８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項３９から４２のいずれか一項に記載の抗体。
  44. （ａ）配列番号９７、２３５、２３６又は２３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号１２１、２４９、２５０、２５１又は２５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体。
  45. 配列番号３７９、３８０、３８１又は３８２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域を含む、請求項４４に記載の抗体。
  46. 配列番号３４４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域を含む、請求項４４又は請求項４５に記載の抗体。
  47. 配列番号３７９、３８０、３８１又は３８２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項４４から４６のいずれか一項に記載の抗体。
  48. 配列番号３４４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項４４から４７のいずれか一項に記載の抗体。
  49. （ａ）配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体。
  50. 配列番号３６７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域を含む、請求項４９に記載の抗体。
  51. 配列番号２６７のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域を含む、請求項４９又は請求項５０に記載の抗体。
  52. 配列番号３６７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項４９から５１のいずれか一項に記載の抗体。
  53. 配列番号２６７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項４９から５２のいずれか一項に記載の抗体。
  54. （ａ）配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体。
  55. 配列番号３７２のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域を含む、請求項５４に記載の抗体。
  56. 配列番号３７０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域を含む、請求項５４又は請求項５５に記載の抗体。
  57. 配列番号３７２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項５４から５６のいずれか一項に記載の抗体。
  58. 配列番号２７０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項５４から５７のいずれか一項に記載の抗体。
  59. （ａ）配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１；（ｂ）配列番号２４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２；（ｃ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３；（ｄ）配列番号３８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１；（ｅ）配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２；及び（ｆ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体。
  60. 配列番号３７６のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である重鎖可変領域を含む、請求項５９に記載の抗体。
  61. 配列番号２８０のアミノ酸配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、又は少なくとも９９％同一である軽鎖可変領域を含む、請求項５９又は請求項６０に記載の抗体。
  62. 配列番号３７６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を含む、請求項５９から６１のいずれか一項に記載の抗体。
  63. 配列番号２８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項５９から６２のいずれか一項に記載の抗体。
  64. モノクローナル抗体である、請求項１から６３のいずれか一項に記載の抗体。
  65. ＩｇＧクラス、ＩｇＭクラス又はＩｇＡクラスのものである、請求項１から６４のいずれか一項に記載の抗体。
  66. ＩｇＧクラスのものであり、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４アイソタイプを有する、請求項６５に記載の抗体。
  67. ＩｇＧ１アイソタイプを有する、請求項６６記載の抗体。
  68. ＥＵ番号付けによるＥ４３０Ｇ置換及びＰ３３１Ｓ置換を含む、請求項６７に記載の抗体。
  69. 抗体断片である、請求項１から６８のいずれか一項に記載の抗体。
  70. 断片がＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ又はｓｃＦｖ断片である、請求項６９に記載の抗体。
  71. ０．１ｎＭから５０ｎＭ、又は０．５ｎＭから１０ｎＭ、又は０．５ｎＭから５ｎＭのヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１に対する親和性（ＫＤ）を有する、請求項１から７０のいずれか一項に記載の抗体。
  72. 親和性がＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ（登録商標）システムを用いて測定される、請求項７１に記載の抗体。
  73. 抗体が第１及び第２の抗原を認識し、第１の抗原はＳＩＲＰβ１であり、第２の抗原は、
    （ａ） 血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原；
    （ｂ） トランスフェリン受容体（ＴＲ）、インスリン受容体（ＨＩＲ）、インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）、低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質１と２（ＬＰＲ−１と２）、及びジフテリア毒素受容体から成る群より選択される、血液脳関門を通過する輸送を促進する抗原；
    （ｃ） 疾患原因ペプチド若しくはタンパク質又は疾患原因核酸から成る群より選択される疾患原因剤であって、疾患原因核酸がアンチセンスＧＧＣＣＣＣ（Ｇ２Ｃ４）リピート伸長ＲＮＡであり、疾患原因タンパク質が、アミロイドベータ、オリゴマーアミロイドベータ、アミロイドベータプラーク、アミロイド前駆体タンパク質又はその断片、Ｔａｕ、ＩＡＰＰ、アルファ−シヌクレイン、ＴＤＰ−４３、ＦＵＳタンパク質、Ｃ９ｏｒｆ７２（染色体９オープンリーディングフレーム７２）、ｃ９ＲＡＮタンパク質、プリオンタンパク質、ＰｒＰＳｃ、ハンチンチン、カルシトニン、スーパーオキシドジスムターゼ、アタキシン、アタキシン１、アタキシン２、アタキシン３、アタキシン７、アタキシン８、アタキシン１０、レビー小体、心房性ナトリウム利尿因子、膵島アミロイドポリペプチド、インスリン、アポリポタンパク質ＡＩ、血清アミロイドＡ、メディン（ｍｅｄｉｎ）、プロラクチン、トランスサイレチン、リゾチーム、ベータ２ミクログロブリン、ゲルゾリン、ケラトエピセリン（ｋｅｒａｔｏｅｐｉｔｈｅｌｉｎ）、シスタチン、免疫グロブリン軽鎖ＡＬ、Ｓ−ＩＢＭタンパク質、リピート関連非ＡＴＧ（ＲＡＮ）翻訳産物、ジペプチドリピート（ＤＰＲ）ペプチド、グリシン−アラニン（ＧＡ）リピートペプチド、グリシン−プロリン（ＧＰ）リピートペプチド、グリシン−アルギニン（ＧＲ）リピートペプチド、プロリン−アラニン（ＰＡ）リピートペプチド、ユビキチン、及びプロリン−アルギニン（ＰＲ）リピートペプチドから成る群より選択される、疾患原因剤；
    （ｄ） ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＰＤ−Ｌ１、ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−１、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＢＴＬＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ３、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ−３、及びホスファチジルセリンから成る群より選択される、免疫細胞上に発現するリガンド及び／又はタンパク質；並びに
    （ｅ） １又は複数の腫瘍細胞上に発現するタンパク質、脂質、多糖類又は糖脂質
    である、請求項１から７２のいずれか一項に記載の抗体。
  74. ヒトＳＩＲＰβ１に結合する単離された抗体であって、ヒトＳＩＲＰβ１アイソフォーム１への結合について、請求項１から７３のいずれか一項に記載の１又は複数の抗体と競合する、単離された抗体。
  75. ヒトＳＩＲＰβ１に結合する単離された抗体であって、請求項１から７４のいずれか一項に記載の１又は複数の抗体と本質的に同じか又は重複するＳＩＲＰβ１アイソフォーム１エピトープに結合する、単離された抗体。
  76. 請求項１から７５のいずれか一項に記載の抗体をコードする核酸配列を含む、単離された核酸。
  77. 請求項７６に記載の核酸を含むベクター。
  78. 請求項７７に記載のベクターを含む、単離された宿主細胞。
  79. 請求項１から７５のいずれか一項に記載の抗体を発現する、単離された宿主細胞。
  80. ヒトＳＩＲＰβ１に結合する抗体を産生させる方法であって、抗体が産生されるように請求項７８又は請求項７９に記載の細胞を培養することを含む、方法。
  81. 前記細胞によって産生された抗体を回収することを更に含む、請求項８０に記載の方法。
  82. 請求項１から７５のいずれか一項に記載の抗体と薬学的に許容される担体とを含む、薬学的組成物。
  83. がんを治療する方法であって、必要とする個体に、請求項１から７５のいずれか一項に記載の抗体の治療有効量を投与することを含む、方法。
  84. がんが、肉腫、膀胱がん、脳がん、乳がん、結腸がん、直腸がん、子宮内膜がん、腎臓がん、腎盂がん、白血病、肺がん、小細胞肺がん、黒色腫、リンパ腫、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん及び線維肉腫、多形神経膠芽腫；腎明細胞癌；副腎皮質癌；膀胱尿路上皮癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、肺腺癌；膵臓腺癌、腎細胞がん、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、緩慢性Ｂ細胞リンパ腫、侵攻性Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、骨髄増殖性腫瘍、浸潤性乳癌、子宮頸部扁平上皮癌、子宮頸部腺癌、胆管細胞癌、結腸腺癌、びまん性大細胞型Ｂ細胞性リンパ腫、食道癌、頭頸部扁平上皮癌、色素嫌性腎癌、乳頭状腎細胞癌、低悪性度神経膠腫、肝細胞癌、肺扁平上皮癌、中皮腫、漿液性卵巣嚢腫、膵臓腺癌、褐色細胞腫及び傍神経節腫、前立腺腺癌、直腸腺癌、皮膚黒色腫、胃腺癌、精巣胚細胞腫瘍、甲状腺癌、胸腺腫、子宮体部子宮内膜癌、子宮癌肉腫、及びブドウ膜黒色腫から選択される、請求項８３に記載の方法。
  85. ＰＤ１、ＰＤＬ１、ＣＤ４０、ＯＸ４０、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＣＤ２７、ＧＩＴＲ、ＣＴＬＡ４、ＰＤ−Ｌ２、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＨＶＥＭ、ＬＩＧＨＴ、ＢＴＬＡ、ＣＤ３０、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＫＩＲ、ＧＡＬ９、ＴＩＭ１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ４、Ａ２ＡＲ、ＬＡＧ３、ＤＲ−５、ＣＤ２、ＣＤ５、ＣＤ３９又はＣＤ７３を阻害又はアゴナイズする治療剤を投与することを更に含む、請求項８３又は請求項８４に記載の方法。
  86. 前記個体に対し、阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１の抗体を投与すること及び／又は１若しくは複数の標準的若しくは試験的抗がん療法を行うことを更に含む、請求項８３から８５のいずれか一項に記載の方法。
  87. 阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する少なくとも１の抗体を抗ＳＩＲＰＡ抗体と組み合わせて投与することを更に含む、請求項８６に記載の方法。
  88. 阻害性チェックポイント分子に特異的に結合する前記少なくとも１の抗体が、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、抗ＰＤ−１抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ４抗体、並びに抗ＨＶＥＭ抗体、抗Ｂ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）抗体、抗キラー細胞抑制受容体（ＫＩＲ）抗体、抗ＧＡＬ９抗体、抗ＴＩＭ−１抗体、抗ＴＩＭ３抗体、抗ＴＩＭ−４抗体、抗Ａ２ＡＲ抗体、抗ＣＤ３９抗体、抗ＣＤ７３抗体、抗ＬＡＧ−３抗体、抗ホスファチジルセリン抗体、抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ３０抗体、抗ＴＮＦα抗体、抗ＣＤ３３抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−５抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−７抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−９抗体、抗Ｓｉｇｌｅｃ−１１抗体、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ１抗体、アンタゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、抗ＣＤ２抗体、抗ＣＤ５抗体、並びにこれらの任意の組み合わせから選択される、請求項８６又は請求項８７に記載の方法。
  89. 前記１又は複数の標準的又は試験的抗がん療法が、放射線療法、細胞毒性化学療法、標的療法、イマチニブ療法、トラスツズマブ療法、エタネルセプト療法、養子細胞移植（ＡＣＴ）療法、キメラ抗原受容体Ｔ細胞移植（ＣＡＲ−Ｔ）療法、ワクチン療法、及びサイトカイン療法から選択される、請求項８６に記載の方法。
  90. 前記個体に対し、抑制性サイトカインに特異的に結合する少なくとも１の抗体を投与することを更に含む、請求項８３から８９のいずれか一項に記載の方法。
  91. 抑制性サイトカインに特異的に結合する前記少なくとも１の抗体が、抗ＣＣＬ２抗体、抗ＣＳＦ−１抗体、抗ＩＬ−２抗体、及びこれらの任意の組み合わせから選択される、請求項９０に記載の方法。
  92. 前記個体に対し、刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する少なくとも１のアゴニスト抗体を投与することを更に含む、請求項８３から９１のいずれか一項に記載の方法。
  93. 刺激性チェックポイントタンパク質に特異的に結合する前記少なくとも１のアゴニスト抗体が、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、アゴニスト抗ＯＸ４０抗体、アゴニスト抗ＩＣＯＳ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２８抗体、アゴニスト抗ＴＲＥＭ１抗体、アゴニスト抗ＴＲＥＭ２抗体、アゴニスト抗ＣＤ１３７／４−１ＢＢ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２７抗体、アゴニスト抗グルココルチコイド誘発性ＴＮＦＲ関連タンパク質（ＧＩＴＲ）抗体、アゴニスト抗ＣＤ３０抗体、アゴニスト抗ＢＴＬＡ抗体、アゴニスト抗ＨＶＥＭ抗体、アゴニスト抗ＣＤ２抗体、アゴニスト抗ＣＤ５抗体、及びこれらの任意の組み合わせから選択される、請求項９２に記載の方法。
  94. 前記個体に対し、少なくとも１の刺激性サイトカインを投与することを更に含む、請求項８３から９３のいずれか一項に記載の方法。
  95. 前記少なくとも１の刺激性サイトカインが、ＩＦＮ−α４、ＩＦＮ−β、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＣＲＰ、ＩＬ−２０ファミリーメンバー、ＬＩＦ、ＩＦＮ−γ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＣＸＣＬ１０、ＩＬ−３３、ＭＣＰ−１、ＭＩＰ−１ベータ、及びこれらの任意の組み合わせから選択される、請求項９４に記載の方法。
  96. 医薬の調製のための、請求項１から７５のいずれか一項に記載の抗体の使用。
  97. がんを治療するための医薬の調製のための、請求項１から７５のいずれか一項に記載の抗体の使用。
  98. がんの治療における使用のための、請求項１から７５のいずれか一項に記載の抗体。
  99. 神経変性疾患又は障害を治療する方法であって、必要とする個体に、請求項１から７５のいずれか一項に記載の抗体の治療有効量を投与することを含む、方法。
  100. 前記神経変性疾患又は障害が、認知症、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、アルツハイマー病、血管性認知症、那須・ハコラ病、認知障害、記憶喪失、発作、網膜ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、脳外傷、脊髄損傷、卒中、パーキンソン病、急性散在性脳脊髄炎、網膜変性症、加齢黄斑変性、緑内障、多発性硬化症から選択される、請求項９９に記載の方法。
  101. 神経変性疾患又は障害を治療するための医薬の調製のための、請求項１から７５のいずれか一項に記載の抗体の使用。
  102. 前記神経変性疾患又は障害が、認知症、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、アルツハイマー病、血管性認知症、那須・ハコラ病、認知障害、記憶喪失、発作、網膜ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、脳外傷、脊髄損傷、卒中、パーキンソン病、急性散在性脳脊髄炎、網膜変性症、加齢黄斑変性、緑内障、多発性硬化症から選択される、請求項１０１に記載の使用。
  103. 神経変性疾患又は障害の治療における使用のための、請求項１から７５のいずれか一項に記載の抗体。
  104. 前記神経変性疾患又は障害が、認知症、前頭側頭型認知症、進行性核上性麻痺、アルツハイマー病、血管性認知症、那須・ハコラ病、認知障害、記憶喪失、発作、網膜ジストロフィー、筋萎縮性側索硬化症、脳外傷、脊髄損傷、卒中、パーキンソン病、急性散在性脳脊髄炎、網膜変性症、加齢黄斑変性、緑内障、多発性硬化症から選択される、請求項１０３に記載の抗体。
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