KR20210025614A - 항-sirp-베타1 항체 및 그의 사용 방법 - Google Patents

항-sirp-베타1 항체 및 그의 사용 방법 Download PDF

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KR20210025614A
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앤드류 핀세틱
패트리샤 컬프
아넌 로젠탈
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알렉터 엘엘씨
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Abstract

본 개시내용은 일반적으로 SIRPβ1 폴리펩티드, 예를 들어, 인간 SIRPβ1에 특이적으로 결합하는 항체, 예를 들어, 모노클로날, 항체, 항체 단편 등을 포함하는 조성물, 및 이를 필요로 하는 개체를 예방하거나, 위험을 감소시키거나, 치료하는 데 있어서의 이러한 조성물의 용도에 관한 것이다.

Description

항-SIRP-베타1 항체 및 그의 사용 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2018년 6월 29일에 출원된 미국 가출원 번호 62/691,913의 우선권을 주장하며, 이는 임의의 목적을 위해 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
개시내용의 분야
본 개시내용은 항-SIRPβ1 항체 및 이러한 항체의 치료 용도에 관한 것이다.
신호 조절성 단백질 베타 (SIRPβ)는 골수 세포 계통 (단핵구, 대식세포, 과립구, 및 수지상 세포를 포함함) 내에서 및 뉴런 세포에서 발현되는 막횡단 수용체의 SIRP 패밀리에 속한다. SIRP 패밀리의 단백질은 2개의 막-근위 IgC 도메인 및 원위 IgV 도메인을 함유하는 세포외 영역을 특징으로 한다. SIRPα 수용체와는 달리, SIRPβ 단백질은 단백질 티로신 포스파타제 SHP-2 및 SHP-1을 동원할 수 있는 세포질 서열 모티프를 결여한 짧은 세포질 도메인을 함유한다. SIRPβ1 이소형 1은 단일 세포질 면역수용체 티로신-기재 활성화 (ITAM) 모티프를 함유하는 어댑터 단백질 DAP12와 회합한다. 예를 들어, 문헌 [Dietrich et al. 2000, J Immunol 164:9-12]; [Liu et al. 2005 J Biol Chem 280:36132-36140]을 참조한다. SIRPβ는 알츠하이머병에서 포식작용의 소교세포 조정제인 것으로 제시된 바 있다. 예를 들어, 문헌 [Gaikwad et al. 2009 Am J Pathol 175:2528-2539]을 참조한다.
따라서, SIRPβ1 활성과 연관된 질환, 장애, 및 상태를 치료하는 치료 항-SIRPβ1 항체에 대한 필요가 있다.
일부 실시양태에서, 인간 SIRPβ1에 결합하는 단리된 항체로서, 여기서 항체는 하기로부터 선택되는 적어도 1종, 적어도 2종, 적어도 3종, 적어도 4종, 또는 적어도 5종의 특성을 갖는 것인 단리된 항체가 제공된다:
a) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 인간 SIRPα에 결합하지 않음;
b) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 인간 SIRPγ에 결합하지 않음;
c) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 인간 SIRPβ1 이소형 3에 결합하지 않음;
d) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 마우스 SIRPβ1에 결합하지 않음;
e) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 시노몰구스 원숭이 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지 않음;
f) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 CD14-양성 단핵구 상의 SIRPβ1 활성을 효능작용함;
g) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 면역 세포, 예컨대 호중구 및/또는 단핵구에서 호흡 폭발을 유도하거나 증가시킴;
h) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 단핵구에서 IL-8 발현을 유도하거나 증가시킴;
i) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포 및/또는 수지상 세포에서 TNFα 발현을 유도하거나 증가시킴;
j) 시험관내에서 및/또는 생체내에서, 예를 들어, 종양 세포의 호중구-매개된 포식작용을 유도함;
k) 생체내에서 호중구-매개된 종양 세포 청소율을 증가시킴;
l) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포 상의 TREM2 발현을 증가시킴;
m) 단독으로 및/또는 효능제 항-TREM2 항체와 조합으로 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포의 생존율을 증가시킴; 및
n) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 수지상 세포의 생존율을 증가시킴.
일부 실시양태에서, 항체는 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 인간 SIRPα 또는 인간 SIRPβ1 이소형 3에 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 인간 SIRPα, SIRPγ, 또는 인간 SIRPβ1 이소형 3에 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 항체는 하기로부터 선택되는 적어도 1종, 적어도 2종, 또는 적어도 3종의 특성을 갖는다:
a) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 CD14-양성 단핵구 상의 SIRPβ1 활성을 효능작용함;
b) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 면역 세포, 예컨대 호중구 및/또는 단핵구에서의 호흡 폭발을 유도하거나 증가시킴;
c) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 단핵구에서 IL-8 발현을 유도하거나 증가시킴;
d) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포 및/또는 수지상 세포에서 TNFα 발현을 유도하거나 증가시킴;
e) 시험관내에서 및/또는 생체내에서, 예를 들어, 종양 세포의 호중구-매개된 포식작용을 유도함;
o) 생체내에서 호중구-매개된 종양 세포 청소율을 증가시킴;
p) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포 상의 TREM2 발현을 증가시킴;
q) 단독으로 및/또는 효능제 항-TREM2 항체와 조합으로 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포의 생존율을 증가시킴; 및
f) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 수지상 세포의 생존율을 증가시킴.
일부 실시양태에서, 인간 SIRPβ1에 결합하는 단리된 항체로서, 여기서 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 (a) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-L1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-L2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-L3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 것인 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 표 6에 제시된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4로부터 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 프레임워크 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 표 5에 제시된 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4로부터 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 프레임워크 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-10, SB-11, SB-12, SB-13, SB-14, SB-15, SB-16, SB-17, SB-18, SB-19, SB-20, SB-21, SB-22, SB-23, SB-24, SB-25, SB-26, SB-27, SB-28, SB-29, SB-30, SB-31, SB-32, SB-33, SB-34, SB-35, SB-36, SB-37, SB-38, SB-39, SB-40, SB-41, SB-42, SB-43, SB-44, SB-45, SB-46, SB-47, SB-48, SB-49, SB-50, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H2, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3 (표 3, 4, 8, 및 9에 제시됨)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호(SEQ ID NO): 268, 270, 272, 274, 276, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 366, 367, 368, 369, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 또는 382로부터 선택되는 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 268, 270, 272, 274, 276, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 366, 367, 368, 369, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 또는 382로부터 선택되는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 267, 269, 271, 273, 275, 277, 278, 280, 282, 284, 286, 288, 290, 292, 294, 296, 298, 300, 302, 304, 306, 308, 310, 312, 314, 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 또는 370으로부터 선택되는 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 267, 269, 271, 273, 275, 277, 278, 280, 282, 284, 286, 288, 290, 292, 294, 296, 298, 300, 302, 304, 306, 308, 310, 312, 314, 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 또는 370으로부터 선택되는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-10, SB-11, SB-12, SB-13, SB-14, SB-15, SB-16, SB-17, SB-18, SB-19, SB-20, SB-21, SB-22, SB-23, SB-24, SB-25, SB-26, SB-27, SB-28, SB-29, SB-30, SB-31, SB-32, SB-33, SB-34, SB-35, SB-36, SB-37, SB-38, SB-39, SB-40, SB-41, SB-42, SB-43, SB-44, SB-45, SB-46, SB-47, SB-48, SB-49, SB-50, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역, 및 경쇄 가변 영역과 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-10, SB-11, SB-12, SB-13, SB-14, SB-15, SB-16, SB-17, SB-18, SB-19, SB-20, SB-21, SB-22, SB-23, SB-24, SB-25, SB-26, SB-27, SB-28, SB-29, SB-30, SB-31, SB-32, SB-33, SB-34, SB-35, SB-36, SB-37, SB-38, SB-39, SB-40, SB-41, SB-42, SB-43, SB-44, SB-45, SB-46, SB-47, SB-48, SB-49, SB-50, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H2, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3 (표 3, 4, 8, 및 9에 제시됨)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 경쇄 가변 영역과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 항체의 중쇄 가변 영역과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역, 및 경쇄 가변 영역과 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H2, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3 (표 8 및 9에 제시됨)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 경쇄 가변 영역과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역, 및 경쇄 가변 영역과 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 80, 228, 또는 229의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 101, 239, 239, 240, 또는 241의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 125의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 366, 367, 368, 또는 369의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 267의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 366, 367, 368, 또는 369의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 267의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 81, 99, 230, 231, 또는 232의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 102, 242, 243, 244, 또는 245의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 126 또는 253의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 371, 372, 373, 374, 또는 375의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 269 또는 370의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 371, 372, 373, 374, 또는 375의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 269 또는 370의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 371, 372, 또는 373의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 370의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는 서열식별번호: 374 또는 375의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 269의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 85, 233, 또는 234의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 107, 246, 247, 또는 248의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 131 또는 254의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 376, 377, 또는 378의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 280의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 376, 377, 또는 378의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 280의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 97, 235, 236, 또는 237의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 121, 249, 250, 251, 또는 252의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 69의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 379, 380, 381, 또는 382의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 344의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 379, 380, 381, 또는 382의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 344의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 229의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 239의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 125의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 367의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 267의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 367의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 267의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 231의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 243의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 126의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 372의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 370의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 372의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 270의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 (a) 서열식별번호: 233의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 246의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 131의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 376의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 280의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 376의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 280의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 항체는 IgG 부류, IgM 부류, 또는 IgA 부류의 것이다. 일부 실시양태에서, 항체는 IgG 부류의 것이고, IgG1, IgG2, 또는 IgG4 이소타입을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체는 IgG1 이소타입을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체는 EU 넘버링에 따른 E430G 치환 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 항체 단편이다. 일부 실시양태에서, 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv 또는 scFv 단편이다.
일부 실시양태에서, 항체는 0.1 nM 내지 50 nM, 또는 0.5 nM 내지 10 nM, 또는 0.5 nM 내지 5 nM의 인간 SIRPβ1 이소형 1에 대한 친화도 (KD)를 갖는다. 일부 실시양태에서, 친화도는 포르테바이오 옥텟(ForteBio Octet)® 시스템을 사용하여 측정된다.
일부 실시양태에서, 항체는 제1 및 제2 항원을 인식하며, 여기서 제1 항원은 SIRPβ1이고, 제2 항원은 하기이다:
(a) 혈액-뇌-장벽을 가로지르는 수송을 용이하게 하는 항원;
(b) 트랜스페린 수용체 (TR), 인슐린 수용체 (HIR), 인슐린-유사 성장 인자 수용체 (IGFR), 저밀도 지질단백질 수용체 관련된 단백질 1 및 2 (LPR-1 및 2), 및 디프테리아 독소 수용체로 이루어진 군으로부터 선택되는 혈액-뇌-장벽을 가로지르는 수송을 용이하게 하는 항원;
(c) 질환-유발 핵산이 안티센스 GGCCCC (G2C4) 반복-확장 RNA이고, 질환-유발 단백질이 아밀로이드 베타, 올리고머성 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 그의 단편, 타우, IAPP, 알파-시누클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72 (염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅틴, 칼시토닌, 슈퍼옥시드 디스뮤타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이 소체, 심방 나트륨이뇨 인자, 섬 아밀로이드 폴리펩티드, 인슐린, 아포지질단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스티레틴, 리소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 이뮤노글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-연관된 비-ATG (RAN) 번역 산물, 디펩티드 반복 (DPR) 펩티드, 글리신-알라닌 (GA) 반복 펩티드, 글리신-프롤린 (GP) 반복 펩티드, 글리신-아르기닌 (GR) 반복 펩티드, 프롤린-알라닌 (PA) 반복 펩티드, 유비퀴틴, 및 프롤린-아르기닌 (PR) 반복 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 질환-유발 펩티드 또는 단백질 또는 질환-유발 핵산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 질환-유발 작용제;
(d) 리간드 및/또는 단백질이 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA-4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG-3, 및 포스파티딜세린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 면역 세포 상에 발현되는 리간드 및/또는 단백질; 및
(e) 1종 이상의 종양 세포 상에 발현되는 단백질, 지질, 폴리사카라이드, 또는 당지질.
일부 실시양태에서, 인간 SIRPβ1에 결합하는 단리된 항체로서, 여기서 항체는 인간 SIRPβ1 이소형 1에의 결합에 대해 본원에서 제공된 1종 이상의 항체와 경쟁하는 것인 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 인간 SIRPβ1에 결합하는 단리된 항체로서, 여기서 항체는 본원에서 제공된 1종 이상의 항체와 본질적으로 동일하거나 중첩하는 SIRPβ1 이소형 1 에피토프에 결합하는 것인 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 항-SIRPβ1 항체를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 핵산이 제공된다. 일부 실시양태에서, 핵산을 포함하는 벡터가 제공된다. 일부 실시양태에서, 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포가 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 항-SIRPβ1 항체를 발현하는 단리된 숙주 세포가 제공된다. 일부 실시양태에서, 인간 SIRPβ1에 결합하는 항체를 생산하는 방법으로서, 본원에서 제공된 항-SIRPβ1 항체를 발현하는 숙주 세포를 배양하여 항체가 생산되도록 하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 세포에 의해 생산된 항체를 회수하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 항-SIRPβ1 항체 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물이 제공된다.
일부 실시양태에서, 암을 치료하는 방법으로서, 본원에서 제공된 항-SIRPβ1 항체의 치료 유효량을 암의 치료를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 암은 육종, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신우암, 백혈병, 폐암, 소세포 폐암, 흑색종, 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 및 섬유육종, 다형성 교모세포종; 신장 투명 세포 암종; 부신피질 암종; 방광 요로상피 암종, 미만성 대 B-세포 림프종, 폐 선암종; 췌장 선암종, 신세포암, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 무통성 B 세포 림프종, 공격성 B 세포 림프종, T 세포 림프종, 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 골수이형성 증후군, 골수증식성 신생물, 유방 침습성 암종, 자궁경부 편평 세포 암종, 자궁경관내 선암종, 담관암종, 결장 선암종, 미만성 대 B-세포 림프종, 식도 암종, 두경부 편평 세포 암종, 신장 혐색소성, 신장 유두상 세포 암종, 저등급 신경교종, 간세포 암종, 폐 편평 세포 암종, 중피종, 난소 장액성 낭선암종, 췌장 선암종, 크롬친화세포종 및 부신경절종, 전립선 선암종, 직장 선암종, 피부 흑색종, 위 선암종, 고환 배세포 종양, 갑상선 암종, 흉선종, 자궁 체부 자궁내막 암종, 자궁 암육종, 및 포도막 흑색종으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 치료 방법은 PD1, PDL1, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, CTLA4, PD-L2, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD30, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR-5, CD2, CD5, CD39, 또는 CD73을 억제하거나 효능작용하는 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료 방법은 억제성 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체, 및/또는 1종 이상의 표준 또는 임상시험용 항암 요법을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 치료 방법은 억제성 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체를 항-SIRPA 항체와 조합으로 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 억제성 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 항-PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, 항-PD-L2 항체, 항-PD-1 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 및 항-HVEM 항체, 항- B- 및 T-림프구 감쇠자 (BTLA) 항체, 항-킬러 억제성 수용체 (KIR) 항체, 항-GAL9 항체, 항-TIM-1 항체, 항-TIM3 항체, 항-TIM-4 항체, 항-A2AR 항체, 항-CD39 항체, 항-CD73 항체, 항-LAG-3 항체, 항-포스파티딜세린 항체, 항-CD27 항체, 항-CD30 항체, 항-TNFα 항체, 항-CD33 항체, 항-Siglec-5 항체, 항-Siglec-7 항체, 항-Siglec-9 항체, 항-Siglec-11 항체, 길항작용성 항-TREM1 항체, 길항작용성 항-TREM2 항체, 항-TIGIT 항체, 항-VISTA 항체, 항-CD2 항체, 항-CD5 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 치료 방법은 방사선요법, 세포독성 화학요법, 표적화된 요법, 이마티닙 요법, 트라스투주맙 요법, 에타너셉트 요법, 입양 세포 전달 (ACT) 요법, 키메라 항원 수용체 T 세포 전달 (CAR-T) 요법, 백신 요법, 및 시토카인 요법으로부터 선택되는 1종 이상의 표준 또는 임상시험용 항암 요법을 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 치료 방법은 억제성 시토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체를 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 억제성 시토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 항-CCL2 항체, 항-CSF-1 항체, 항-IL-2 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 치료 방법은 자극성 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 효능작용성 항체를 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 자극성 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 효능작용성 항체는 효능제 항-CD40 항체, 효능제 항-OX40 항체, 효능제 항-ICOS 항체, 효능제 항-CD28 항체, 효능작용성 항-TREM1 항체, 효능작용성 항-TREM2 항체, 효능제 항-CD137/4-1BB 항체, 효능제 항-CD27 항체, 효능제 항-글루코코르티코이드-유도된 TNFR-관련된 단백질 GITR 항체, 효능제 항-CD30 항체, 효능제 항-BTLA 항체, 효능제 항-HVEM 항체, 효능제 항-CD2 항체, 효능제 항-CD5 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 치료 방법은 적어도 1종의 자극성 시토카인을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 자극성 시토카인은 IFN-α4, IFN-β, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 구성원, LIF, IFN-γ, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, MCP-1, MIP-1-베타, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 의약의 제조를 위한 본원에서 제공된 항-SIRPβ1 항체의 용도가 제공된다. 일부 실시양태에서, 의약은 암을 치료하기 위한 것이다. 일부 실시양태에서, 암을 치료하기 위한 본원에서 제공된 항-SIRPβ1 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, 신경변성 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서, 본원에서 제공된 항-SIRPβ1 항체의 치료 유효량을 신경변성 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 신경변성 질환 또는 장애는 치매, 전두측두엽 치매, 진행성 핵상 마비, 알츠하이머병, 혈관성 치매,　나수-하콜라병,　인지 결함, 기억 소실, 발작, 망막 이영양증, 근위축성 측삭 경화증, 외상성 뇌 손상, 척수 손상, 뇌졸중, 파킨슨병, 급성 파종성 뇌척수염, 망막 변성, 연령 관련된 황반 변성, 녹내장, 다발성 경화증으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 신경변성 질환 또는 장애를 치료하기 위한 의약의 제조를 위한 본원에서 제공된 항-SIRPβ1 항체의 용도가 제공된다. 일부 실시양태에서, 신경변성 질환 또는 장애는 치매, 전두측두엽 치매, 진행성 핵상 마비, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 나수-하콜라병,　인지 결함, 기억 소실, 발작, 망막 이영양증, 근위축성 측삭 경화증, 외상성 뇌 손상, 척수 손상, 뇌졸중, 파킨슨병, 급성 파종성 뇌척수염, 망막 변성, 연령 관련된 황반 변성, 녹내장, 다발성 경화증으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 신경변성 질환 또는 장애를 치료하는데 사용하기 위한 본원에서 제공된 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 신경변성 질환 또는 장애는 치매, 전두측두엽 치매, 진행성 핵상 마비, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 나수-하콜라병,　인지 결함, 기억 소실, 발작, 망막 이영양증, 근위축성 측삭 경화증, 외상성 뇌 손상, 척수 손상, 뇌졸중, 파킨슨병, 급성 파종성 뇌척수염, 망막 변성, 연령 관련된 황반 변성, 녹내장, 다발성 경화증으로부터 선택된다.
본원에 기재된 다양한 실시양태의 특성 중 하나, 일부, 또는 전부는 조합되어 본 발명의 다른 실시양태를 형성할 수 있음이 이해되어야 한다. 본 발명의 이들 및 다른 측면은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백하게 될 것이다. 본 발명의 이들 및 다른 실시양태는 이어지는 상세한 설명에 의해 추가로 기재된다.
도 1a는 SIRPβ1 이소형 1 (서열식별번호: 1; 유니프롯(Uniprot) 수탁 번호 O00241) 및 SIRPβ1 이소형 3 (서열식별번호: 384; 유니프롯 수탁 번호 Q5TFQ8)의 아미노산 서열의 정렬을 제시한다. 도 1b는 세포외 도메인 내의 높은 상동성을 나타내는 SIRPα (서열식별번호: 385; 유니프롯 수탁 번호 P78324)와의 SIRPβ1 이소형 1 (서열식별번호: 1)의 아미노산 서열의 정렬을 제시한다.
도 2는 인간 SIRPβ1 이소형 1 (서열식별번호: 1) 및 마우스 SIRPβ1 (서열식별번호: 386; 유니프롯 수탁 번호 Q8BFX8)의 아미노산 서열의 정렬을 제시한다.
도 3a-3b는 세포-기재 리포터 검정에서의 인간 SIRPβ1-의존성 루시페라제 발현의 유도를 제시한다. 세포를 플레이트-결합된 항-SIRPβ1 항체 (3a) 또는 항-SIRPα (SA-9C2) (3b) 또는 인간 IgG1 이소타입 대조군으로 자극시켰다. 결과는 배경 대비 배수로서 표현된다. 배경 수준은 y-축 상에 1로 설정된다.
도 4a는 인간 단핵구 상의 2가지 DAP12-연관된 수용체, SIRPβ1 및 TREM1의 발현 패턴을 제시한다. 음영화된 히스토그램은 이소타입 염색된 세포로부터의 배경 형광을 나타낸다. 흑색 윤곽화된 히스토그램은 표적-특이적 항체 염색된 세포로의 수용체 발현 수준을 나타낸다. 도 4b는 2명의 건강한 공여자로부터의 M1 및 M2 극성화된 대식세포 상의 SIRPβ1의 발현을 제시한다. 음영화된 히스토그램은 이소타입 염색된 세포로부터의 배경 형광을 나타낸다. 흑색 윤곽화된 히스토그램은 M2 대식세포 상의 SIRPβ1 발현 수준을 나타내는 반면, 파선 히스토그램은 M1 대식세포 상의 SIRPβ1 발현 수준을 나타낸다. 도 4c는 LPS 자극이 있는 또는 없는 인간 단핵구-유래된 수지상 세포 (DC) 상의 SIRPβ1 및 TREM1의 발현을 제시한다. 음영화된 히스토그램은 이소타입 염색된 세포로부터의 배경 형광을 나타낸다. 흑색 윤곽화된 히스토그램은 표적-특이적 항체 염색된 세포로의 수용체 발현 수준을 나타낸다.
도 5a는 인간 공여자로부터의 다양한 조직에서의 SIRPβ1 이소형 1의 RNA 발현 패턴을 프로파일링한다. 도 5b는 인간 공여자로부터의 다양한 조직에서의 SIRPβ1 이소형 3의 RNA 발현 패턴을 프로파일링한다. SIRPβ1 이소형 3에 대한 피크 발현은 말초 조직에서 제한된 발현을 갖는 뇌에서 일어난다.
도 6a는 2명의 상이한 공여자로부터 얻어진 1차 인간 호중구로부터의 SIRPβ1-매개된 호흡 폭발을 제시한다. 도 6b는 1차 인간 단핵구로부터의 SIRPβ1-매개된 호흡 폭발 (상부 패널) 또는 IL-8 방출 (하부 패널)을 제시한다. 도 6c는 1차 인간 대식세포 또는 수지상 세포 (DC)로부터의 SIRPβ1-매개된 TNFα 시토카인 방출을 제시한다.
도 7은 플레이트-결합된 항-SIRPβ1 항체로 자극된 1차 인간 호중구의 항-종양 활성을 제시한다. 발광 값은 y-축 상에 1로 설정된 옵소닌화 항체의 부재 하에서 호중구와 공동-배양된 Raji-Luc의 신호와의 상대 스케일로 제시된다.
도 8은 친화도 성숙된 항체에 의한 세포-기재 리포터 검정에서의 인간 SIRPβ1-의존성 루시페라제 발현의 유도를 제시한다. 제시된 결과는 원 발광 값이다. 배경 수준은 y-축 상에 10,000으로 설정된다.
도 9는 1차 인간 수지상 세포 (DC)로부터의 SIRPβ1-매개된 TNFα 시토카인 방출을 제시한다.
도 10a-10b는 다수의 SIRPβ1 항원에 대한 항-SIRPβ1 항체의 교차-반응성을 제시한다. 가용성, 인간 SIRPβ1-Fc 이소형 1 (O00241) 또는 이소형 3 (Q5TFQ8) 또는 시노몰구스 SIRPβ1-Fc (XM005568541)를 플레이트 상으로 코팅하고, 증가하는 농도의 항-SIRPβ1 항체 SB-1, SB-1-2, SB-2, SB-2-7, SB-8, SB-8-13, SB-40, 및 SB-40-21의 모 및 친화도 성숙된 형태와 함께 인큐베이션하였다. 모든 항-SIRPβ1 항체는 단지 인간 SIRPβ1-Fc 이소형 1 항원에 결합하였다.
도 11a는 플레이트-결합된, 전장 항-SIRPβ1 항체 SB-1-3, SB-2-8, SB-8-13, SB-8-15, 및 SB-40-20에 의한 3명의 상이한 건강한 공여자로부터의 단핵구-유래된 인간 대식세포 상의 TREM2 발현의 상향조절을 제시한다. 기준선 TREM2 발현을 인간 IgG1 이소타입 대조군 항체 상에서 인큐베이션된 세포로부터 결정하였다. TREM2를 다이라이트(DyLight) 650 형광단으로 접합된 항-TREM2 항체 (클론 ADI-22)로 검출하였다. 도 11b는 플레이트-결합된, 전장 항-SIRPβ1 항체 SB-1-3, SB-2-8, SB-8-13, SB-8-15, 및 SB-40-20 상에서 배양된 단핵구-유래된 인간 대식세포의 생존율을 제시한다. 생존성 세포를 셀 타이터 글로(Cell Titer Glo) 기질의 첨가 후 발광 값을 측정함으로써 정량화하였다. 인간 IgG1 이소타입 대조군 상에서 또는 플레이트-결합된 항체의 부재 하에서 (Ab 없음) 배양된 세포는 세포의 기준선 생존율을 확립하였다.
도 12는 증가하는 농도의 플레이트-결합된, 전장 항-SIRPβ1 항체 SB-1-3 및 SB-2-8 또는 인간 IgG1 이소타입 대조군 상에서 배양된 2명의 상이한 건강한 공여자로부터의 단핵구-유래된 대식세포의 생존율을 제시한다. 생존성 세포를 셀 타이터 글로 기질의 첨가 후 발광 값을 측정함으로써 정량화하였다.
도 13은 항-SIRPβ1 항체가 대식세포 생존율 검정에서 항-TREM2 항체의 효능작용성 활성을 향상시킴을 제시한다. 단핵구-유래된 대식세포를 가용성 항-TREM2 항체의 존재 또는 부재 하에서 플레이트-결합된, 전장 SB-1-3, SB-2-8, 또는 huIgG1 이소타입 대조군 상에서 배양하였다. 생존성 세포를 셀 타이터 글로 기질의 첨가 후 발광 값을 측정함으로써 정량화하였다.
도 14a는 플레이트-결합된, 전장 항-SIRPβ1 항체 SB-1-3, SB-2-8, 및 SB-8-13 또는 인간 IgG1 이소타입 대조군 상에서 배양된 인간 SIRPβ1 BAC 트랜스제닉 마우스로부터 얻어진 골수-유래된 대식세포의 생존율을 제시한다. 도 14b는 플레이트-결합된, 전장 항-SIRPβ1 항체 SB-1-3, SB-2-8, 및 SB-8-13 또는 인간 IgG1 이소타입 대조군 상에서 배양된 인간 SIRPβ1 BAC 트랜스제닉 마우스로부터 얻어진 골수-유래된 수지상 세포의 생존율을 제시한다. 생존성 세포를 셀 타이터 글로 기질의 첨가 후 발광 값을 측정함으로써 정량화하였다. 인간 IgG1 이소타입 대조군 상에서 또는 플레이트-결합된 항체의 부재 하에서 (Ab 없음) 배양된 세포는 세포의 기준선 생존율을 확립하였다.
도 15a-15c는 SIRP 패밀리의 상이한 수용체에 대한 항-SIRPβ1 항체의 교차-반응성을 제시한다. 도 15a 및 도 15b는 각각 재조합 인간 SIRPβ1 또는 재조합 인간 SIRPα를 과다발현하는 BW5147.G.1.4 세포에 결합하는 다양한 항-SIRP 수용체 항체의 적정 곡선을 제시한다. 도 15c는 SIRPγ를 내인적으로 발현하는 불멸화된 인간 T 세포주인 Jurkat 세포에 결합하는 항체의 적정 곡선을 제시한다. 양성 대조군 항체는 항-SIRPα/β 클론 18D5, 항-SIRPα/β/γ 클론 KWAR23, 및 항-SIRPγ 클론 LSB2.20이었다.
본 개시내용은 항-SIRPβ1 항체 (예를 들어, 모노클로날 항체); 이러한 항체를 제조하고 사용하는 방법; 이러한 항체를 포함하는 제약 조성물; 이러한 항체를 코딩하는 핵산; 및 이러한 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다.
본원에 기재되거나 언급된 기법 및 절차는 일반적으로 널리 이해되어 있으며, 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의한 통상적인 방법론, 예컨대, 예를 들어, 폭넓게 이용되는 방법론, 예컨대 문헌 [Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3d edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.]; [Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel, et al. eds., (2003)]; [Monoclonal Antibodies: A Practical Approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000)]에 기재된 것들을 사용하여 통상적으로 채용된다.
특허 출원 및 간행물을 비롯한 본원에 인용된 모든 참고문헌은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
I. 정의
본원에서 상호교환가능하게 사용된 용어 "신호-조절성 단백질 β1," "SIRPβ1," 및 "SIRPβ1 폴리펩티드"는 달리 지시되지 않는다면, 포유동물, 예컨대 영장류 (예를 들어, 인간 및 시노) 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트)를 비롯한 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 천연 SIRPβ1을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 상기 용어는 야생형 서열 및 천연 발생 변이체 서열, 예를 들어, 스플라이스 변이체 또는 대립유전자 변이체 둘 다를 포괄한다. 일부 실시양태에서, 상기 용어는 "전장," 비프로세싱된 SIRPβ1 뿐만 아니라 세포에서의 프로세싱으로부터 초래되는 임의의 형태의 SIRPβ1을 포괄한다. 일부 실시양태에서, SIRPβ1은 인간 SIRPβ1이다. 일부 실시양태에서, 예시적인 SIRPβ1 이소형 1의 아미노산 서열은 2018년 2월 28일의 것으로서 유니프롯 수탁 번호 O00241이다. 일부 실시양태에서, 예시적인 인간 SIRPβ1의 아미노산 서열은 서열식별번호: 1이다. 일부 실시양태에서, 예시적인 SIRPβ1 이소형 3의 아미노산 서열은 2018년 1월 31일의 것으로서 유니프롯 수탁 번호 Q5TFQ8이다. 일부 실시양태에서, 예시적인 인간 SIRPβ1 이소형 3의 아미노산 서열은 서열식별번호: 384이다. 달리 구체적으로 지시되지 않는다면, 본원에 사용된 바와 같은 "SIRPβ1"은 SIRPβ1 이소형 1을 지칭한다.
용어 "항-SIRPβ1 항체", "SIRPβ1에 결합하는 항체", 및 "SIRPβ1에 특이적으로 결합하는 항체"는 항체가 SIRPβ1을 표적화하는데 있어서 진단제 및/또는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도로 SIRPβ1에 결합할 수 있는 항체를 지칭한다. 한 실시양태에서, 비관련된, 비-SIRPβ1 폴리펩티드에의 항-SIRPβ1 항체의 결합의 정도는 예를 들어, 방사성면역검정 (RIA)에 의해 측정 시 SIRPβ1에의 항체의 결합의 약 10% 미만이다. 특정 실시양태에서, SIRPβ1에 결합하는 항체는 < 1 μM, < 100 nM, < 10 nM, < 1 nM, < 0.1 nM, < 0.01 nM, 또는 < 0.001 nM (예를 들어, 10-8 M 이하, 예를 들어 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들어, 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (KD)를 갖는다. 특정 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 상이한 종으로부터의 SIRPβ1 폴리펩티드 중에서 보존된 SIRPβ1의 에피토프에 결합한다.
표적 분자에의 항체의 결합에 관하여, 용어 특정한 폴리펩티드 또는 특정한 폴리펩티드 표적 상의 에피토프의 "특이적 결합" 또는 그에 "특이적으로 결합하다" 또는 "그에 대해 특이적인"은 비-특이적 상호작용과는 측정가능하게 상이한 결합을 의미한다. 특이적 결합은 예를 들어, 대조군 분자의 결합에 비해 분자의 결합을 결정함으로써 측정될 수 있다. 예를 들어, 특이적 결합은 표적, 예를 들어, 과량의 비-표지된 표적과 유사한 대조군 분자와의 경쟁에 의해 결정될 수 있다. 이 경우, 특이적 결합은 프로브에의 표지된 분자의 결합이 과량의 비표지된 표적에 의해 경쟁적으로 억제되는 경우 지시된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 특정한 폴리펩티드 또는 특정한 폴리펩티드 표적 상의 에피토프의 "특이적 결합" 또는 "그에 특이적으로 결합하다" 또는 "그에 대해 특이적인"은 예를 들어, 약 10-4 M 이하, 10-5 M 이하, 10-6 M 이하, 10-7 M 이하, 10-8 M 이하, 10-9 M 이하, 10-10 M 이하, 10-11 M 이하, 10-12 M 이하 중 임의의 것의 표적에 대한 KD 또는 10-4 M 내지 10-6 M 또는 10-6 M 내지 10-10 M 또는 10-7 M 내지 10-9 M의 범위의 KD를 갖는 분자에 의해 나타내어질 수 있다. 통상의 기술자에 의해 인정될 것인 바와 같이, 친화도 및 KD 값은 반비례 관계이다. 항원에 대한 높은 친화도는 낮은 KD 값에 의해 측정된다. 한 실시양태에서, 용어 "특이적 결합"은 분자가 임의의 다른 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 에피토프에 실질적으로 결합하지 않으면서 특정한 폴리펩티드 또는 특정한 폴리펩티드 상의 에피토프에 결합하는 결합을 지칭한다.
용어 "이뮤노글로불린" (Ig)은 본원에서 "항체"와 상호교환가능하게 사용된다. 본원에서 용어 "항체"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 특히 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 적어도 2개의 무손상 항체로부터 형성된 것들을 비롯한 다중특이적 항체 (예를 들어, 이중특이적 항체), 및 그들이 바람직한 생물학적 활성을 나타내는 한 항체 단편을 커버한다.
"천연 항체"는 통상적으로 2개의 동일한 경 ("L") 쇄 및 2개의 동일한 중 ("H") 쇄로 구성된, 약 150,000 달톤의 이종사량체성 당단백질이다. 각각의 경쇄는 1개의 공유 디술피드 결합에 의해 중쇄에 연결되는 반면, 디술피드 연결의 수는 상이한 이뮤노글로불린 이소타입의 중쇄 중에서 다양하다. 각각의 중쇄 및 경쇄는 또한 규칙적으로 이격된 쇄내 디술피드 브릿지를 갖는다. 각각의 중쇄는 한 말단에 다수의 불변 도메인에 의해 이어진 가변 도메인 (VH)을 갖는다. 각각의 경쇄는 한 말단에 가변 도메인 (VL) 및 그의 다른 말단에 불변 도메인을 가지며; 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인과 정렬되고, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬된다. 특정한 아미노산 잔기는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 사이의 계면을 형성하는 것으로 믿어진다.
상이한 부류의 항체의 구조 및 특성에 대해서는, 예를 들어, 문헌 [Basic and Clinical Immunology, 8th Ed., Daniel P. Stites, Abba I. Terr and Tristram G. Parslow (eds.), Appleton & Lange, Norwalk, CT, 1994, page 71 and Chapter 6]을 참조한다.
임의의 척추동물 종으로부터의 경쇄는 그들의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기반하여 카파 ("κ") 및 람다 ("λ")로 지칭되는 2가지 명백하게 별개의 유형 중 하나로 할당될 수 있다. 그들의 중쇄의 불변 도메인 (CH)의 아미노산 서열에 따라, 이뮤노글로불린은 상이한 부류 또는 이소타입으로 할당될 수 있다. 5가지 부류의 이뮤노글로불린이 있다: 각각 알파 ("α"), 델타 ("δ"), 엡실론 ("ε"), 감마 ("γ"), 및 뮤 ("μ")로 지정된 중쇄를 갖는 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM. γ 및 α 부류는 CH 서열 및 기능의 상대적으로 사소한 차이에 기반하여 하위부류 (이소타입)로 더 나누어지며, 예를 들어, 인간은 하기 하위부류를 발현한다: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2. 상이한 부류의 이뮤노글로불린의 서브유닛 구조 및 3차원 배위는 널리 공지되어 있으며, 일반적으로 예를 들어, 문헌 [Abbas et al., Cellular and Molecular Immunology, 4th ed. (W.B. Saunders Co., 2000)]에 기재되어 있다.
항체, 예컨대 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체의 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노-말단 도메인을 지칭한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 "VH" 및 "VL"로 지칭될 수 있다. 이들 도메인은 일반적으로 항체의 가장 가변적 부분 (동일한 부류의 다른 항체에 비해)이며, 항원 결합 부위를 함유한다.
용어 "가변"은 가변 도메인의 특정 절편이 항체, 예컨대 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체 중에서 서열에 있어서 광범위하게 상이하다는 사실을 지칭한다. 가변 도메인은 항원 결합을 매개하며, 그의 특정한 항원에 대한 특정한 항체의 특이성을 한정한다. 그러나, 가변성은 가변 도메인의 전체 범위에 걸쳐 고르게 분포되지 않는다. 대신, 이는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘 다에서 초가변 영역 (HVR)으로 지칭되는 3개의 절편에 집중된다. 가변 도메인의 보다 고도로 보존된 부분은 프레임워크 영역 (FR)으로 지칭된다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 베타-쉬트 구조를 연결하고, 일부의 경우 그의 일부를 형성하는 루프를 형성하는 3개의 HVR에 의해 연결된 베타-쉬트 배위를 대체로 채택하는 4개의 FR 영역을 포함한다. 각각의 쇄에서의 HVR은 FR 영역에 의해 가깝게 근접하여 함께 유지되며, 다른 쇄로부터의 HVR과 함께 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다 (문헌 [Kabat et al., Sequences of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, MD (1991)] 참조). 불변 도메인은 항원에의 항체의 결합에 직접적으로 관여하지 않지만, 다양한 이펙터 기능, 예컨대 항체-의존성 세포 독성에서의 항체의 참여를 나타낸다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균일한 항체, 즉, 집단을 포함하는 개별적 항체의 집단으로부터 얻어진 항체, 예컨대 본 개시내용의 모노클로날 항-SIRPβ1 항체가 가능한 천연 발생 돌연변이 및/또는 소량으로 존재할 수 있는 번역후 변형 (예를 들어, 이성질체화, 아미드화 등)을 제외하고는 동일한 것을 지칭한다. 모노클로날 항체는 고도로 특이적이며, 단일 항원 부위에 대해 지정된다. 전형적으로 상이한 결정자 (에피토프)에 대해 지정된 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와 대조적으로, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정자에 대해 지정된다. 그들의 특이성 외에도, 모노클로날 항체는 이들이 다른 이뮤노글로불린에 의해 비오염된 하이브리도마 배양에 의해 합성된다는 점에서 유리하다. 수식어 "모노클로날"은 항체의 실질적으로 균일한 집단으로부터 얻어지는 것으로서의 항체의 특징을 지시하며, 임의의 특정한 방법에 의한 항체의 생산을 요구하는 것으로서 해석되지 않아야 한다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 모노클로날 항체는 예를 들어, 하이브리도마 방법, 재조합 DNA 방법, 및 인간 이뮤노글로불린 서열을 코딩하는 인간 이뮤노글로불린 좌위 또는 유전자의 일부 또는 전부를 갖는 동물에서 인간 또는 인간-유사 항체를 생산하기 위한 기술을 비롯한 다양한 기법에 의해 제조될 수 있다.
용어 "전장 항체", "무손상 항체" 또는 "전체 항체"는 항체 단편과 반대로 그의 실질적으로 무손상 형태의 항체, 예컨대 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체를 지칭하기 위해 상호교환가능하게 사용된다. 구체적으로, 전체 항체는 Fc 영역을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 갖는 것들을 포함한다. 불변 도메인은 천연 서열 불변 도메인 (예를 들어, 인간 천연 서열 불변 도메인) 또는 그의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 일부의 경우, 무손상 항체는 1종 이상의 이펙터 기능을 가질 수 있다.
"항체 단편"은 무손상 항체가 결합하는 항원에 결합하는 무손상 항체의 부분을 포함하는 무손상 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편; 디아바디; 선형 항체 (미국 특허 5641870, 실시예 2; 문헌 [Zapata et al., Protein Eng. 8(10):1057-1062 (1995)] 참조); 단일-쇄 항체 분자 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 들 수 있다.
항체, 예컨대 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체의 파파인 소화는 "Fab" 단편, 및 용이하게 결정화하는 능력을 반영하는 명칭인 잔여의 "Fc" 단편으로 지칭되는 2개의 동일한 항원-결합 단편을 생산한다. Fab 단편은 중쇄의 가변 영역 도메인 (VH), 및 하나의 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)과 함께 전체 경쇄로 이루어진다. 각각의 Fab 단편은 항원 결합에 관하여 1가이며, 즉, 이는 단일 항원-결합 부위를 갖는다. 항체의 펩신 처리는 상이한 항원-결합 활성을 갖는 2개의 디술피드 연결된 Fab 단편에 대략 상응하며, 여전히 항원을 가교할 수 있는 단일 큰 F(ab')2 단편을 생성한다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 1개 이상의 시스테인을 비롯한 CH1 도메인의 카르복시 말단에 소수의 추가의 잔기를 가짐으로써 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 유리 티올 기를 함유하는 Fab'에 대한 본원에서의 명칭이다. F(ab')2 항체 단편은 원래 그들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편의 쌍으로서 생산되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링은 또한 공지되어 있다.
Fc 단편은 디술피드에 의해 함께 유지된 둘 다의 중쇄의 카르복시-말단 부분을 포함한다. 항체의 이펙터 기능은 또한 특정 유형의 세포 상에 발견되는 Fc 수용체 (FcR)에 의해 인식되는 영역인 Fc 영역에서의 서열에 의해 결정된다.
항체, 예컨대 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체의 "기능적 단편"은 일반적으로 무손상 항체의 항원 결합 또는 가변 영역 또는 변형된 FcR 결합 능력을 보유하거나 갖는 항체의 Fc 영역을 포함하는 무손상 항체의 부분을 포함한다. 항체 단편의 예로는 선형 항체, 단일-쇄 항체 분자 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 들 수 있다.
용어 "디아바디"는 가변 도메인의 쇄간 (그러나 쇄내는 아님) 쌍형성이 달성됨으로써, 2가 단편, 즉, 2개의 항원-결합 부위를 갖는 단편을 발생시키도록, VH 및 VL 도메인 사이에 짧은 링커 (약 5-10개 잔기)를 갖는 sFv 단편 (선행하는 단락 참조)을 구축함으로써 제조된 작은 항체 단편을 지칭한다. 이중특이적 디아바디는 2개의 항체의 VH 및 VL 도메인이 상이한 폴리펩티드 쇄 상에 존재하는 2개의 "교차" sFv 단편의 이종이량체이다.
본원에 사용된 바와 같은 "키메라 항체"는 중쇄 및/또는 경쇄의 부분이 특정한 종으로부터 유래되거나 특정한 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체에서의 상응하는 서열과 동일하거나 그와 상동성인 반면, 쇄(들)의 나머지는 또 다른 종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체에서의 상응하는 서열과 동일하거나 그와 상동성인 항체 (이뮤노글로불린), 예컨대 본 개시내용의 키메라 항-SIRPβ1 항체, 뿐만 아니라 그들이 바람직한 생물학적 활성을 나타내는 한 이러한 항체의 단편을 지칭한다. 본원에서 관심의 키메라 항체는 항체의 항원-결합 영역이 예를 들어, 마카크 원숭이를 관심의 항원으로 면역화함으로써 생산된 항체로부터 유래된 프리마티즈드(PRIMATIZED)® 항체를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 "인간화 항체"는 "키메라 항체"의 하위세트로서 사용된다.
비-인간 (예를 들어, 뮤린) 항체의 "인간화" 형태, 예컨대 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체의 인간화 형태는 비-인간 HVR로부터의 아미노산 잔기 및 인간 FR로부터의 아미노산 잔기를 포함하는 키메라 항체이다. 특정 실시양태에서, 인간화 항체는 적어도 1개, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인의 실질적으로 전부를 포함할 것이며, 여기서 HVR (예를 들어, CDR)의 전부 또는 실질적으로 전부는 비-인간 항체의 그것들에 상응하고, FR의 전부 또는 실질적으로 전부는 인간 항체의 그것들에 상응한다. 인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 부분을 포함할 수 있다. 항체, 예를 들어, 비-인간 항체의 "인간화 형태"는 인간화를 겪은 항체를 지칭한다.
"인간 항체"는 인간에 의해 생산된 항체, 예컨대 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체의 그것에 상응하는 아미노산 서열을 갖고/거나, 본원에 개시된 바와 같은 인간 항체를 제조하기 위한 기법 중 임의의 것을 사용하여 제조된 것이다. 인간 항체의 이 정의는 구체적으로 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 배제한다. 인간 항체는 파지-제시 라이브러리 및 효모-기재 플랫폼 기술을 비롯한 관련 기술분야에 공지된 다양한 기법을 사용하여 생산될 수 있다. 인간 항체는 항원 챌린지에 반응하여 이러한 항체를 생산하도록 변형되었지만, 그의 내인성 좌위가 불능화된 트랜스제닉 동물, 예를 들어, 면역화된 제노마우스에 항원을 투여함으로써 제조될 수 있을 뿐만 아니라 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 제조될 수 있다.
본원에서 사용되는 경우 용어 "초가변 영역" 또는 "HVR"은 서열에서 초가변이고/거나 구조적으로 한정된 루프를 형성하는 항체-가변 도메인의 영역, 예컨대 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체의 그것을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 6개의 HVR; VH에서 3개 (H1, H2, H3), 및 VL에서 3개 (L1, L2, L3)를 포함한다. 천연 항체에서, H3 및 L3은 6개의 HVR의 가장 많은 다양성을 나타내며, H3은 특히 항체에 미세한 특이성을 부여하는데 있어서 고유한 역할을 하는 것으로 믿어진다. 단지 중쇄로 이루어진 천연 발생 낙타 항체는 기능적이며, 경쇄의 부재 하에서 안정하다.
다수의 HVR 서술이 사용되고 있으며, 본원에 포함된다. 일부 실시양태에서, HVR은 서열 가변성에 기반한 카바트(Kabat) 상보성-결정 영역 (CDR)일 수 있으며, 가장 통상적으로 사용된다 (Kabat et al., 상기 문헌). 일부 실시양태에서, HVR은 코티아(Chothia) CDR일 수 있다. 코티아는 대신 구조적 루프의 위치를 지칭한다 (Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). 일부 실시양태에서, HVR은 AbM HVR일 수 있다. AbM HVR은 카바트 CDR 및 코티아 구조적 루프 사이의 절충을 나타내며, 옥스포드 몰리큘라(Oxford Molecular)의 AbM 항체-모델링 소프트웨어에 의해 사용된다. 일부 실시양태에서, HVR은 "콘택트" HVR일 수 있다. "콘택트" HVR은 이용가능한 복잡한 결정 구조의 분석에 기반한다. 이들 HVR의 각각으로부터의 잔기를 하기에 언급한다.
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HVR은 하기와 같이 "연장된 HVR"을 포함할 수 있다: VL에서 24-36 또는 24-34 (L1), 46-56 또는 50-56 (L2), 및 89-97 또는 89-96 (L3), 및 VH에서 26-35 (H1), 50-65 또는 49-65 (바람직한 실시양태) (H2), 및 93-102, 94-102, 또는 95-102 (H3). 가변-도메인 잔기는 이들 연장된-HVR 정의의 각각에 대해 [Kabat et al., 상기 문헌]에 따라 넘버링된다.
"프레임워크" 또는 "FR" 잔기는 본원에 정의된 바와 같은 HVR 잔기 이외의 가변-도메인 잔기이다.
본원에 사용된 바와 같은 "수용자 인간 프레임워크"는 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크로부터 유래된 VL 또는 VH 프레임워크의 아미노산 서열을 포함하는 프레임워크이다. 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 또는 인간 컨센서스 프레임워크"로부터 유래된" 수용자 인간 프레임워크는 그의 동일한 아미노산 서열을 포함할 수 있거나, 이는 기존의 아미노산 서열 변화를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 기존의 아미노산 변화의 수는 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 또는 2개 이하이다. 기존의 아미노산 변화가 VH에 존재하는 경우, 바람직한 그러한 변화는 위치 71H, 73H 및 78H 중 단지 3개, 2개, 또는 1개에서 일어나며; 예를 들어, 그들 위치에서의 아미노산 잔기는 71A, 73T 및/또는 78A에 의할 수 있다. 한 실시양태에서, VL 수용자 인간 프레임워크는 VL 인간 이뮤노글로불린 프레임워크 서열 또는 인간 컨센서스 프레임워크 서열과 서열에 있어서 동일하다.
"인간 컨센서스 프레임워크"는 인간 이뮤노글로불린 VL 또는 VH 프레임워크 서열의 선택에서 가장 통상적으로 발생하는 아미노산 잔기를 나타내는 프레임워크이다. 일반적으로, 인간 이뮤노글로불린 VL 또는 VH 서열의 선택은 가변 도메인 서열의 서브그룹으로부터의 것이다. 일반적으로, 서열의 서브그룹은 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)]에서와 같은 서브그룹이다. 예는 VL에 대한 것을 포함하며, 서브그룹은 [Kabat et al., 상기 문헌]에서와 같이 서브그룹 카파 I, 카파 II, 카파 III 또는 카파 IV일 수 있다. 추가적으로, VH에 대해, 서브그룹은 [Kabat et al., 상기 문헌]에서와 같이 서브그룹 I, 서브그룹 II, 또는 서브그룹 III일 수 있다.
예를 들어, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체의 특정된 위치에서의 "아미노산 변형"은 특정된 잔기의 치환 또는 결실, 또는 특정된 잔기에 인접한 적어도 1개의 아미노산 잔기의 삽입을 지칭한다. 특정된 잔기에 "인접한" 삽입은 그의 1 내지 2개의 잔기 내의 삽입을 의미한다. 삽입은 특정된 잔기에 대해 N-말단 또는 C-말단일 수 있다. 본원에서 바람직한 아미노산 변형은 치환이다.
"친화도-성숙된" 항체, 예컨대 본 개시내용의 친화도 성숙된 항-SIRPβ1 항체는 그러한 변경(들)을 갖지 않는 모 항체에 비해, 항원에 대한 항체의 친화도의 개선을 초래하는 그의 1개 이상의 HVR에서의 1개 이상의 변경을 갖는 것이다. 한 실시양태에서, 친화도-성숙된 항체는 표적 항원에 대한 나노몰 또는 심지어 피코몰 친화도를 갖는다. 친화도-성숙된 항체는 관련 기술분야에 공지된 절차에 의해 생산된다. 예를 들어, 문헌 [Marks et al. Bio/Technology 10:779-783 (1992)]은 VH- 및 VL-도메인 셔플링에 의한 친화도 성숙을 기재한다. HVR 및/또는 프레임워크 잔기의 무작위 돌연변이유발은 예를 들어 문헌 [Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994)]; [Schier et al. Gene 169:147-155 (1995)]; [Yelton et al. J. Immunol. 155: 1994-2004 (1995)]; [Jackson et al. J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995)]; 및 [Hawkins et al., J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)]에 의해 기재되어 있다.
"Fv"는 완전한 항원-인식 및 -결합 부위를 포함하는 최소 항체 단편이다. 이 단편은 긴밀한, 비-공유 회합에서의 1개의 중쇄 및 1개의 경쇄 가변 영역 도메인의 이량체로 이루어진다. 이들 2개의 도메인의 폴딩으로부터 항원 결합을 위한 아미노산 잔기에 기여하고, 항체에의 항원 결합 특이성을 부여하는 6개의 초가변 루프 (H 및 L 쇄로부터 각각 3개의 루프)가 나온다. 그러나, 심지어 단일 가변 도메인 (또는 항원에 대해 특이적인 단지 3개의 HVR을 포함하는 Fv의 절반)도 전체 결합 부위보다 더 낮은 친화도로이지만 항원을 인식하고 그에 결합하는 능력을 갖는다.
또한 "sFv" 또는 "scFv"로 약칭되는 "단일-쇄 Fv"는 단일 폴리펩티드 쇄 내로 연결된 VH 및 VL 항체 도메인을 포함하는 항체 단편이다. 바람직하게는, sFv 폴리펩티드는 VH 및 VL 도메인 사이에 폴리펩티드 링커를 추가로 포함하며, 이는 sFv가 항원 결합을 위한 바람직한 구조를 형성하는 것을 가능하게 한다.
항체 "이펙터 기능"은 항체의 Fc 영역 (천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인하는 생물학적 활성을 지칭하며, 항체 이소타입에 따라 다양하다.
본원에서 용어 "Fc 영역"은 천연-서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함하는 이뮤노글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는데 사용된다. 이뮤노글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 다양할 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 통상적으로 위치 Cys226에서의 아미노산 잔기로부터, 또는 Pro230으로부터 그의 카르복실-말단까지의 스트레치에 대해 정의된다. Fc 영역의 C-말단 리신 (EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)은 예를 들어, 항체의 생산 또는 정제 동안, 또는 항체의 중쇄를 코딩하는 핵산을 재조합적으로 조작함으로써 제거될 수 있다. 따라서, 무손상 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447 잔기가 있는 및 없는 항체의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다. 본 개시내용의 항체에 사용하기 위한 적합한 천연-서열 Fc 영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함한다.
"천연 서열 Fc 영역"은 자연에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 천연 서열 인간 Fc 영역은 천연 서열 인간 IgG1 Fc 영역 (비-A 및 A 동종이형); 천연 서열 인간 IgG2 Fc 영역; 천연 서열 인간 IgG3 Fc 영역; 및 천연 서열 인간 IgG4 Fc 영역 뿐만 아니라 그의 천연 발생 변이체를 포함한다.
"변이체 Fc 영역"은 적어도 1개의 아미노산 변형, 바람직하게는 1개 이상의 아미노산 치환(들)에 의해 천연 서열 Fc 영역의 그것과는 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역에 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역에 비해 적어도 1개의 아미노산 치환, 예를 들어 천연 서열 Fc 영역에 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역에 약 1개 내지 약 10개의 아미노산 치환, 및 바람직하게는 약 1개 내지 약 5개의 아미노산 치환을 갖는다. 본원에서 변이체 Fc 영역은 바람직하게는 천연 서열 Fc 영역과 및/또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역과 적어도 약 80% 상동성, 및 가장 바람직하게는 그와 적어도 약 90% 상동성, 보다 바람직하게는 그와 적어도 약 95% 상동성을 갖는다.
"Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기재한다. 바람직한 FcR은 천연 서열 인간 FcR이다. 더욱이, 바람직한 FcR은 IgG 항체 (감마 수용체)에 결합하는 것이며, 이들 수용체의 대립유전자 변이체 및 대체적으로 스플라이싱된 형태를 비롯한 FcγRI, FcγRII, 및 FcγRIII 하위부류의 수용체를 포함하고, FcγRII 수용체는 FcγRIIA ("활성화 수용체") 및 FcγRIIB ("억제 수용체")를 포함하며, 이는 주로 그의 세포질 도메인에서 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 그의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-기재 활성화 모티프 ("ITAM")를 함유한다. 억제 수용체 FcγRIIB는 그의 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-기재 억제 모티프 ("ITIM")를 함유한다. 장래에 확인될 것들을 비롯한 다른 FcR은 본원에서 용어 "FcR"에 의해 포함된다. FcR은 또한 항체의 혈청 반감기를 증가시킬 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 펩티드, 폴리펩티드 또는 항체 서열에 관하여 "퍼센트 (%) 아미노산 서열 동일성" 및 "상동성"은 서열을 정렬하고, 필요에 따라 갭을 도입하여 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성한 후, 및 임의의 보존적 치환을 서열 동일성의 일부로서 간주하지 않고, 특이적 펩티드 또는 폴리펩티드 서열에서의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열에서의 아미노산 잔기의 백분율을 지칭한다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 결정하는 목적을 위한 정렬은 관련 기술분야의 기술 내인 다양한 방식으로, 예를 들어, 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 MEGALIGN™ (DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여 달성될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 비교되고 있는 서열의 전장에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는데 필요한 관련 기술분야에 공지된 임의의 알고리듬을 비롯한, 정렬을 측정하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다.
동일한 에피토프에 대해 경쟁하는 항체 (예를 들어, 중화 항체)의 맥락에서 사용되는 경우 용어 "경쟁하다"는 시험되고 있는 항체가 공통 항원 (예를 들어, SIRPβ1 또는 그의 단편)에의 참조 분자 (예를 들어, 리간드, 또는 참조 항체)의 특이적 결합을 방지하거나 억제하는 (예를 들어, 감소시키는) 검정에 의해 결정된 바와 같은 항체 사이의 경쟁을 의미한다. 다수의 유형의 경쟁적 결합 검정, 예를 들어 고상 직접 또는 간접 방사성면역검정 (RIA), 고상 직접 또는 간접 효소 면역검정 (EIA), 샌드위치 경쟁 검정 (예를 들어, 문헌 [Stahli et al., 1983, Methods in Enzymology 9:242-253] 참조); 고상 직접 비오틴-아비딘 EIA (예를 들어, 문헌 [Kirkland et al., 1986, J. Immunol. 137:3614-3619] 참조); 고상 직접 표지된 검정, 고상 직접 표지된 샌드위치 검정 (예를 들어, 문헌 [Harlow and Lane, 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press] 참조); 1-125 표지를 사용한 고상 직접 표지 RIA (예를 들어, 문헌 [Morel et al., 1988, Molec. Immunol. 25:7-15] 참조); 고상 직접 비오틴-아비딘 EIA (예를 들어, 문헌 [Cheung, et al., 1990, Virology 176:546-552] 참조); 및 직접 표지된 RIA (Moldenhauer et al., 1990, Scand. J. Immunol. 32:77-82)은 항체가 또 다른 것과 경쟁하는지를 결정하는데 사용될 수 있다. 전형적으로, 이러한 검정은 이들 중 어느 하나를 함유하는 고체 표면 또는 세포에 결합된 정제된 항원, 비표지된 시험 항체 및 표지된 참조 항체의 사용을 포함한다. 경쟁적 억제는 시험 항체의 존재 하에서 고체 표면 또는 세포에 결합된 표지의 양을 결정함으로써 측정된다. 통상적으로 시험 항체는 과량으로 존재한다. 경쟁 검정에 의해 확인된 항체 (경쟁 항체)는 참조 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체 및 입체 장해가 일어나는 참조 항체에 의해 결합된 에피토프에 충분히 근위인 인접한 에피토프에 결합하는 항체를 포함한다. 경쟁적 결합을 결정하는 방법에 관한 추가의 상세사항은 본원의 실시예에서 제공된다. 통상적으로, 경쟁 항체가 과량으로 존재하는 경우, 이는 공통 항원에의 참조 항체의 특이적 결합을 적어도 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97.5%, 및/또는 거의 100%만큼 억제할 (예를 들어, 감소시킬) 것이다.
본원에 사용된 바와 같은 SIRPβ1 폴리펩티드 및 제2 폴리펩티드 사이의 "상호작용"은 제한 없이, 단백질-단백질 상호작용, 물리적 상호작용, 화학적 상호작용, 결합, 공유 결합, 및 이온 결합을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 항체는 항체가 2개의 폴리펩티드 사이의 상호작용을 방해하거나, 감소시키거나, 완전히 제거하는 경우, 2개의 폴리펩티드 사이의 "상호작용을 억제한다". 그의 본 개시내용의 항체는 그의 항체가 2개의 폴리펩티드 중 하나에 결합하는 경우, 2개의 폴리펩티드 사이의 "상호작용을 억제한다". 일부 실시양태에서, 상호작용은 적어도 약 임의의 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97.5%, 및/또는 거의 100%만큼 억제될 수 있다.
용어 "에피토프"는 항체에 의해 결합될 수 있는 임의의 결정자를 포함한다. 에피토프는 그 항원을 표적화하는 항체에 의해 결합되는 항원의 영역이며, 항원이 폴리펩티드인 경우, 항체와 직접적으로 접촉하는 특이적 아미노산을 포함한다. 가장 자주, 에피토프는 폴리펩티드 상에 있지만, 일부의 경우, 다른 종류의 분자, 예컨대 핵산 상에 있을 수 있다. 에피토프 결정자는 분자의 화학적으로 활성인 표면 기, 예컨대 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 또는 술포닐 기를 포함할 수 있으며, 특이적 3차원 구조적 특징, 및/또는 특이적 전하 특징을 가질 수 있다. 일반적으로, 특정한 표적 항원에 대해 특이적인 항체는 폴리펩티드 및/또는 거대분자의 복합 혼합물에서 표적 항원 상의 에피토프를 우선적으로 인식할 것이다.
"효능제" 항체 또는 "활성화" 항체는 항체가 항원에 결합한 후에 항원의 1종 이상의 활성 또는 기능을 유도하는 (예를 들어, 증가시키는) 항체이다.
"길항제" 항체 또는 "차단" 항체 또는 "억제성" 항체는 항체가 항원에 결합한 후에 1종 이상의 리간드에의 항원 결합을 감소시키고/거나, 억제하고/거나, 제거하는 (예를 들어, 감소시키는), 및/또는 항체가 항원에 결합한 후에 항원의 1종 이상의 활성 또는 기능을 감소시키고/거나, 억제하고/거나, 제거하는 (예를 들어, 감소시키는) 항체이다. 일부 실시양태에서, 길항제 항체, 또는 차단 항체, 또는 억제성 항체는 1종 이상의 리간드에의 항원 결합 및/또는 항원의 1종 이상의 활성 또는 기능을 실질적으로 또는 완전히 억제한다.
"단리된" 항체, 예컨대 본 개시내용의 단리된 항-SIRPβ1 항체는 그의 생산 환경의 성분으로부터 (예를 들어, 천연적으로 또는 재조합적으로) 확인되고/거나, 분리되고/거나, 회수된 것이다. 바람직하게는, 단리된 항체는 그의 생산 환경으로부터의 모든 다른 오염물 성분과의 회합이 없다. 그의 생산 환경으로부터의 오염물 성분, 예컨대 재조합 형질감염된 세포로부터 초래된 것들은 전형적으로 항체에 대한 연구, 진단 또는 치료 용도를 방해할 물질이며, 효소, 호르몬, 및 다른 단백질성 또는 비-단백질성 용질을 포함할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 항체는 (1) 예를 들어, 로우리(Lowry) 방법에 의해 결정 시 항체의 95 중량% 초과까지, 및 일부 실시양태에서, 99 중량% 초과까지; (2) 스피닝 컵 서열분석기의 사용에 의해 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 얻는데 충분한 정도까지, 또는 (3) 쿠마시(Coomassie) 블루, 또는 바람직하게는, 은 염색을 사용하여 비-환원 또는 환원 조건 하에서 SDS-PAGE에 의해 균질성까지 정제될 것이다. 단리된 항체는 항체의 천연 환경의 적어도 1종의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문에 재조합 T-세포 내의 계내에서의 항체를 포함한다. 그러나, 통상적으로, 단리된 폴리펩티드 또는 항체는 적어도 1회의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
항체, 예컨대 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체를 코딩하는 "단리된" 핵산 분자는 그것이 생산된 환경에서 그것이 통상적으로 회합되는 적어도 1종의 오염물 핵산 분자로부터 확인되고 분리되는 핵산 분자이다. 바람직하게는, 단리된 핵산은 생산 환경과 연관된 모든 성분과의 회합이 없다. 본원에서의 폴리펩티드 및 항체를 코딩하는 단리된 핵산 분자는 그것이 자연에서 발견되는 형태 또는 환경 이외의 형태이다. 따라서, 단리된 핵산 분자는 세포에서 천연적으로 존재하는 본원에서의 폴리펩티드 및 항체를 코딩하는 핵산과는 구별된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "벡터"는 그것이 연결된 또 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 지칭하도록 의도된다. 한 가지 유형의 벡터는 추가의 DNA 절편이 라이게이션될 수 있는 원형 이중 가닥 DNA를 지칭하는 "플라스미드"이다. 또 다른 유형의 벡터는 파지 벡터이다. 또 다른 유형의 벡터는 바이러스 벡터이며, 여기서 추가의 DNA 절편은 바이러스 게놈 내로 라이게이션될 수 있다. 특정 벡터는 이들이 도입되는 숙주 세포에서 자율적 복제가 가능하다 (예를 들어, 박테리아 복제 원점을 갖는 박테리아 벡터 및 에피솜 포유동물 벡터). 다른 벡터 (예를 들어, 비-에피솜 포유동물 벡터)는 숙주 세포 내로의 도입 시 숙주 세포의 게놈 내로 통합될 수 있으며, 그에 의해 숙주 게놈과 함께 복제된다. 더욱이, 특정 벡터는 그들이 작동적으로 연결된 유전자의 발현을 지정할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "재조합 발현 벡터", 또는 간단히, "발현 벡터"로 지칭된다. 일반적으로, 재조합 DNA 기법에서 유용한 발현 벡터는 종종 플라스미드의 형태이다. 본 명세서에서, "플라스미드" 및 "벡터"는 플라스미드가 가장 통상적으로 사용되는 벡터의 형태이기 때문에 상호교환가능하게 사용될 수 있다.
본원에서 상호교환가능하게 사용된 바와 같은 "폴리뉴클레오티드", 또는 "핵산"은 임의의 길이의 뉴클레오티드의 중합체를 지칭하며, DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드, 변형된 뉴클레오티드 또는 염기, 및/또는 그들의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 폴리머라제에 의해 또는 합성 반응에 의해 중합체 내로 혼입될 수 있는 임의의 기질일 수 있다.
"숙주 세포"는 폴리뉴클레오티드 삽입물의 혼입을 위한 벡터(들)에 대한 수령자일 수 있거나 수령자였던 개별적 세포 또는 세포 배양물을 포함한다. 숙주 세포는 단일 숙주 세포의 자손을 포함하며, 자손은 천연, 우연적, 또는 고의적 돌연변이로 인해 원래 모 세포와 반드시 완전히 동일하지 않을 수 있다 (형태에 있어서 또는 게놈 DNA 상보체에 있어서). 숙주 세포는 본 발명의 폴리뉴클레오티드(들)로 생체내에서 형질감염된 세포를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 "담체"는 채용되는 투여량 및 농도에서 그에 노출되고 있는 세포 또는 포유동물에 대해 비독성인 제약상 허용되는 담체, 부형제, 또는 안정화제를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "예방하는"은 개체에서의 특정한 질환, 장애, 또는 상태의 발생 또는 재발에 관하여 예방을 제공하는 것을 포함한다. 개체는 특정한 질환, 장애, 또는 상태에 대해 취약하거나, 감수성이거나, 이러한 질환, 장애, 또는 상태를 발달시킬 위험이 있을 수 있지만, 질환, 장애, 또는 상태로 아직 진단되지 않았다.
본원에 사용된 바와 같은 특정한 질환, 장애, 또는 상태를 발달시킬 "위험이 있는" 개체는 검출가능한 질환 또는 질환의 증상을 가질 수 있거나 그렇지 않을 수 있으며, 본원에 기재된 치료 방법 전에 검출가능한 질환 또는 질환의 증상을 나타내었을 수 있거나, 그렇지 않을 수 있다. "위험이 있는"은 개체가 관련 기술분야에 공지된 바와 같은 특정한 질환, 장애, 또는 상태의 발달과 상관되는 측정가능한 파라미터인 1종 이상의 위험 인자를 가짐을 나타낸다. 이들 위험 인자 중 1종 이상을 갖는 개체는 이들 위험 인자 중 1종 이상이 없는 개체보다 특정한 질환, 장애, 또는 상태를 발달시킬 보다 높은 개연성을 갖는다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "치료"는 임상 병리학의 과정 동안 치료되고 있는 개체의 자연적 과정을 변경시키도록 디자인된 임상적 개입을 지칭한다. 치료의 바람직한 효과는 진행의 속도를 감소시키는 것, 병리학적 상태를 개선시키거나 완화시키는 것, 및 특정한 질환, 장애, 또는 상태의 완화 또는 개선된 예후를 포함한다. 개체는 예를 들어, 특정한 질환, 장애, 또는 상태와 연관된 1종 이상의 증상이 완화되거나 제거되는 경우, 성공적으로 "치료된다".
"유효량"은 적어도 필요한 투여량에서 및 기간 동안, 바람직한 치료 또는 예방 결과를 달성하는데 유효한 양을 지칭한다. 유효량은 1회 이상의 투여로 제공될 수 있다. 본원에서 유효량은 개체의 질환 상태, 연령, 성별, 및 중량, 및 개체에서 바람직한 반응을 유발하는 치료의 능력과 같은 인자에 따라 다양할 수 있다. 유효량은 또한 치료상 유익한 효과가 치료의 임의의 독성 또는 유해 효과를 능가하는 것이다. 예방 용도를 위해, 유익하거나 바람직한 결과는 질환의 생화학적, 조직학적 및/또는 행동적 증상, 그의 합병증 및 질환의 발달 동안 나타나는 중간 병리학적 표현형을 비롯한 질환의 위험을 제거하거나 감소시키는 것, 중증도를 줄이는 것, 또는 발병을 지연시키는 것과 같은 결과를 포함한다. 치료 용도를 위해, 유익하거나 바람직한 결과는 질환으로부터 초래되는 1종 이상의 증상을 감소시키는 것, 질환을 앓고 있는 것들의 삶의 질을 증가시키는 것, 질환을 치료하는데 요구되는 다른 의약의 용량을 감소시키는 것, 예컨대 표적화를 통해 또 다른 의약의 효과를 증진시키는 것, 질환의 진행을 지연시키는 것, 및/또는 생존을 연장시키는 것과 같은 임상적 결과를 포함한다. 약물, 화합물, 또는 제약 조성물의 유효량은 직접적으로 또는 간접적으로 예방적 또는 치료적 치료를 달성하는데 충분한 양이다. 임상적 맥락에서 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물, 또는 제약 조성물의 유효량은 또 다른 약물, 화합물, 또는 제약 조성물과 함께 달성될 수 있거나 그렇지 않을 수 있다. 따라서, "유효량"은 1종 이상의 치료제를 투여하는 맥락에서 간주될 수 있으며, 단일 작용제는 1종 이상의 다른 작용제와 함께, 바람직한 결과가 달성될 수 있거나 달성되는 경우, 유효량으로 주어지는 것으로 간주될 수 있다.
치료, 예방, 또는 위험의 감소의 목적을 위한 "개체"는 인간, 가축 및 농장 동물, 및 동물원, 경기, 또는 애완 동물, 예컨대 개, 말, 토끼, 소, 돼지, 햄스터, 거빌, 마우스, 페럿, 래트, 고양이 등을 비롯한 포유동물로 분류되는 임의의 동물을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 개체는 인간이다.
본원에 사용된 바와 같은 또 다른 화합물 또는 조성물"과 함께" 투여는 동시 투여 및/또는 상이한 시간에서의 투여를 포함한다. 함께 투여는 또한 공동-제형으로서의 투여, 또는 상이한 투여 빈도 또는 간격에서를 포함하고, 동일한 투여 경로 또는 상이한 투여 경로를 사용한 별개의 조성물로서의 투여를 포괄한다. 일부 실시양태에서, 함께 투여는 동일한 치료 처방의 일부로서의 투여이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "약"은 이 기술 분야의 통상의 기술자에게 용이하게 공지된 각각의 값에 대한 통상적인 오차 범위를 지칭한다. 본원에서 "약" 값 또는 파라미터에 대한 언급은 그 값 또는 파라미터 자체에 관한 실시양태를 포함한다 (및 기재한다).
본원에 및 첨부된 청구범위에 사용된 바와 같은 단수 형태는 맥락이 명백하게 달리 지시하지 않는다면 복수 언급대상을 포함한다. 예를 들어, "항체"에 대한 언급은 하나 내지 많은 항체, 예컨대 몰 양에 대한 언급이며, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 그의 등가물 등을 포함한다.
본원에 기재된 본 개시내용의 측면 및 실시양태는 측면 및 실시양태를 "포함하는", "로 이루어지는", 및 "로 본질적으로 이루어지는" 것을 포함한다.
I. 항-SIRPβ1 항체
항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다. 제공된 항체는 예를 들어, SIRPβ1 매개된 장애의 진단 또는 치료에 유용하다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 SIRPβ1 활성의 효능제이다. 일부 실시양태에서, 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만 인간 SIRPα에 결합하지 않는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만 인간 SIRPγ에 결합하지 않는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만 인간 SIRPβ1 이소형 3에 결합하지 않는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만 마우스 SIRPβ1 및/또는 시노몰구스 원숭이 SIRPβ1에 결합하지 않는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 CD14-양성 단핵구 상의 SIRPβ1 활성을 효능작용한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 면역 세포, 예컨대 호중구, 단핵구, 및/또는 대식세포에서 호흡 폭발을 유도한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 단핵구에서 IL-8 발현을 유도하거나 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 대식세포 및/또는 수지상 세포에서 TNFα 발현을 유도하거나 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는, 예를 들어, 종양 세포의 호중구-매개된 포식작용을 유도한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 호중구-매개된 종양 세포 청소율을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 호중구의 항-종양 특성 또는 활성을 증가시키거나 향상시킨다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 면역 세포를 동원한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 syk 인산화를 유도한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 Fc 감마 수용체를 발현하는 인접한 세포에 의해 클러스터링되는 경우 syk 인산화를 유도한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 SIRPβ1 항체는 세포의 표면 상의 SIRPβ1 발현을 하향조절한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 SIRPβ1 항체는 세포의 표면 상의 SIRPβ1 발현을 하향조절하지 않는다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 SIRPβ1 항체는 SIRPβ1에의 리간드의 결합을 차단한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 SIRPβ1 항체는 SIRPβ1에의 리간드의 결합을 차단하지 않는다.
일부 실시양태에서, 하기로부터 선택되는 1종 이상의 특성을 갖는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다:
a) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 인간 SIRPα에 결합하지 않음;
b) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 인간 SIRPγ에 결합하지 않음;
c) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 인간 SIRPβ1 이소형 3에 결합하지 않음;
d) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 마우스 SIRPβ1에 결합하지 않음;
e) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 시노몰구스 원숭이 SIRPβ1에 결합하지 않음;
f) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 CD14-양성 단핵구 상의 SIRPβ1 활성을 효능작용함;
g) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 면역 세포, 예컨대 호중구 및/또는 단핵구에서 호흡 폭발을 유도하거나 증가시킴;
h) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 단핵구에서 IL-8 발현을 유도하거나 증가시킴;
i) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포 및/또는 수지상 세포에서 TNFα 발현을 유도하거나 증가시킴;
j) 시험관내에서 및/또는 생체내에서, 예를 들어, 종양 세포의 호중구-매개된 포식작용을 유도함;
k) 생체내에서 호중구-매개된 종양 세포 청소율을 증가시킴;
l) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포 상의 TREM2 발현을 상향조절함;
m) 단독으로 및/또는 효능제 항-TREM2 항체와 조합으로 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포의 생존율을 증가시킴; 및
n) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 수지상 세포의 생존율을 증가시킴.
일부 실시양태에서, 하기 특성을 갖는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다:
a) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 인간 SIRPα에 결합하지 않음;
b) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 인간 SIRPγ에 결합하지 않음;
c) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 인간 SIRPβ1 이소형 3에 결합하지 않음;
d) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 마우스 SIRPβ1에 결합하지 않음;
e) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 시노몰구스 원숭이 SIRPβ1에 결합하지 않음;
f) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 CD14-양성 단핵구 상의 SIRPβ1 활성을 효능작용함;
g) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 면역 세포, 예컨대 호중구 및/또는 단핵구에서 호흡 폭발을 유도하거나 증가시킴;
h) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 단핵구에서 IL-8 발현을 유도하거나 증가시킴;
i) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포 및/또는 수지상 세포에서 TNFα 발현을 유도하거나 증가시킴;
j) 시험관내에서 및/또는 생체내에서, 예를 들어, 종양 세포의 호중구-매개된 포식작용을 유도하거나 증가시킴;
o) 생체내에서 호중구-매개된 종양 세포 청소율을 유도하거나 증가시킴;
p) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포 상의 TREM2 발현을 상향조절함;
q) 단독으로 및/또는 효능제 항-TREM2 항체와 조합으로 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포의 생존율을 증가시킴; 및
k) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 수지상 세포의 생존율을 증가시킴.
A. 예시적인 항체 및 특정 다른 항체 실시양태
일부 실시양태에서, (a) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택되는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-L1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-L2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-L3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3인 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-10, SB-11, SB-12, SB-13, SB-14, SB-15, SB-16, SB-17, SB-18, SB-19, SB-20, SB-21, SB-22, SB-23, SB-24, SB-25, SB-26, SB-27, SB-28, SB-29, SB-30, SB-31, SB-32, SB-33, SB-34, SB-35, SB-36, SB-37, SB-38, SB-39, SB-40, SB-41, SB-42, SB-43, SB-44, SB-45, SB-46, SB-47, SB-48, SB-49, SB-50, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 6개의 HVR (표 3, 4, 8, 및 9에 제시됨)을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 6개의 HVR (표 3, 4, 8, 및 9에 제시됨)을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 6개의 HVR (표 8 및 9에 제시됨)을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, SB-1-3, SB-2-8, 및 SB-8-13으로부터 선택되는 항체의 6개의 HVR (표 8 및 9에 제시됨)을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 228의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 238의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 125의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 229의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 239의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 125의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 229의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 240의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 125의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 229의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 241의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 125의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 230의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 242의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 126의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 231의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 243의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 126의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 232의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 244의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 126의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 99의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 245의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 126의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 230의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 242의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 253의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 233의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 246의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 131의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 234의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 247의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 131의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 233의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 248의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 131의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 233의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 246의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 254의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 235의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 249의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 69의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 236의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 250의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 69의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 237의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 251의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 69의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 서열식별번호: 236의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 252의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 69의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택되는 적어도 1개, 적어도 2개, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-10, SB-11, SB-12, SB-13, SB-14, SB-15, SB-16, SB-17, SB-18, SB-19, SB-20, SB-21, SB-22, SB-23, SB-24, SB-25, SB-26, SB-27, SB-28, SB-29, SB-30, SB-31, SB-32, SB-33, SB-34, SB-35, SB-36, SB-37, SB-38, SB-39, SB-40, SB-41, SB-42, SB-43, SB-44, SB-45, SB-46, SB-47, SB-48, SB-49, SB-50, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 HVR-H1, HVR, H2, 및 HVR-H3 (표 4 및 9에 제시됨)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 HVR-H1, HVR, H2, 및 HVR-H3 (표 4 및 9에 제시됨)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 HVR-H1, HVR, H2, 및 HVR-H3 (표 9에 제시됨)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 SB-1-3, SB-2-8, 및 SB-8-13으로부터 선택되는 항체의 HVR-H1, HVR, H2, 및 HVR-H3 (표 9에 제시됨)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 (a) 서열식별번호: 229의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 239의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 125의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 (a) 서열식별번호: 231의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 243의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 126의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 (a) 서열식별번호: 233의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 246의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (c) 서열식별번호: 131의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함한다.
일부 실시양태에서, (a) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-L1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-L2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; (c) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-L3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택되는 적어도 1개, 적어도 2개, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-10, SB-11, SB-12, SB-13, SB-14, SB-15, SB-16, SB-17, SB-18, SB-19, SB-20, SB-21, SB-22, SB-23, SB-24, SB-25, SB-26, SB-27, SB-28, SB-29, SB-30, SB-31, SB-32, SB-33, SB-34, SB-35, SB-36, SB-37, SB-38, SB-39, SB-40, SB-41, SB-42, SB-43, SB-44, SB-45, SB-46, SB-47, SB-48, SB-49, SB-50, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 HVR-L1, HVR, L2, 및 HVR-L3 (표 3 및 8에 제시됨)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 HVR-L1, HVR, L2, 및 HVR-L3 (표 3 및 8에 제시됨)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 HVR-L1, HVR, L2, 및 HVR-L3 (표 8에 제시됨)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 SB-1-3, SB-2-8, 및 SB-8-13으로부터 선택되는 항체의 HVR-L1, HVR, L2, 및 HVR-L3 (표 8에 제시됨)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 (a) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 (a) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 (a) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함한다.
일부 실시양태에서, (a) (i) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (ii) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 (iii) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택되는 적어도 1개, 적어도 2개, 또는 모든 3개의 VH HVR 서열을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) (i) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (ii) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (iii) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택되는 적어도 1개, 적어도 2개, 또는 모든 3개의 VL HVR 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) (i) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, (ii) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 (iii) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) (i) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, (ii) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 (iii) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H2를 포함하는 VH 도메인, 및 HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항-SIRPβ1 항체로서, 여기서 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H2, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3은 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-10, SB-11, SB-12, SB-13, SB-14, SB-15, SB-16, SB-17, SB-18, SB-19, SB-20, SB-21, SB-22, SB-23, SB-24, SB-25, SB-26, SB-27, SB-28, SB-29, SB-30, SB-31, SB-32, SB-33, SB-34, SB-35, SB-36, SB-37, SB-38, SB-39, SB-40, SB-41, SB-42, SB-43, SB-44, SB-45, SB-46, SB-47, SB-48, SB-49, SB-50, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 HVR (표 3, 4, 8, 및 9에 제시됨)인 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H2를 포함하는 VH 도메인, 및 HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항-SIRPβ1 항체로서, 여기서 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H2, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3은 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 HVR (표 3, 4, 8, 및 9에 제시됨)인 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H2를 포함하는 VH 도메인, 및 HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항-SIRPβ1 항체로서, 여기서 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H2, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3은 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 HVR (표 8 및 9에 제시됨)인 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, HVR-H1, HVR-H2, 및 HVR-H2를 포함하는 VH 도메인, 및 HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항-SIRPβ1 항체로서, 여기서 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H2, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3은 SB-1-3, SB-2-8, 및 SB-8-13으로부터 선택되는 항체의 HVR (표 8 및 9에 제시됨)인 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) (i) 서열식별번호: 229의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (ii) 서열식별번호: 239의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (iii) 서열식별번호: 125의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) (iv) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (v) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (vi) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) (i) 서열식별번호: 231의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (ii) 서열식별번호: 243의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (iii) 서열식별번호: 126의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) (iv) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (v) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (vi) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, (a) (i) 서열식별번호: 233의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (ii) 서열식별번호: 246의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (iii) 서열식별번호: 131의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및 (b) (iv) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (v) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (vi) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항-SIRPβ1 항체가 본원에서 제공된다.
또 다른 측면에서, 항-SIRPβ1 항체는 서열식별번호: 268, 270, 272, 274, 276, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 366, 367, 368, 369, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 또는 382의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인 (VH) 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 268, 270, 272, 274, 276, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 또는 365의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열에 비해 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 그 서열을 포함하는 항-SIRPβ1 항체는 SIRPβ1에 결합하는 능력을 보유한다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열식별번호: 268, 270, 272, 274, 276, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 366, 367, 368, 369, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 또는 382에서 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 5개의 아미노산은 서열식별번호: 268, 270, 272, 274, 276, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 366, 367, 368, 369, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 또는 382에서 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 외부의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다. 임의로, 항-SIRPβ1 항체는 서열식별번호: 268, 270, 272, 274, 276, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 366, 367, 368, 369, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 또는 382의 VH 서열 (그 서열의 번역후 변형을 포함함)을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH는 (a) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함한다.
또 다른 측면에서, 항-SIRPβ1 항체로서, 여기서 항체는 서열식별번호: 267, 269, 271, 273, 275, 277, 278, 280, 282, 284, 286, 288, 290, 292, 294, 296, 298, 300, 302, 304, 306, 308, 310, 312, 314, 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 또는 370의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하는 것인 항체가 본원에서 제공된다. 특정 실시양태에서, 서열식별번호: 267, 269, 271, 273, 275, 277, 278, 280, 282, 284, 286, 288, 290, 292, 294, 296, 298, 300, 302, 304, 306, 308, 310, 312, 314, 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 또는 370의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열에 비해 치환 (예를 들어, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 그 서열을 포함하는 항-SIRPβ1 항체는 SIRPβ1에 결합하는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 총 1 내지 10개의 아미노산은 서열식별번호: 267, 269, 271, 273, 275, 277, 278, 280, 282, 284, 286, 288, 290, 292, 294, 296, 298, 300, 302, 304, 306, 308, 310, 312, 314, 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 또는 370에서 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 실시양태에서, 총 1 내지 5개의 아미노산은 서열식별번호: 267, 269, 271, 273, 275, 277, 278, 280, 282, 284, 286, 288, 290, 292, 294, 296, 298, 300, 302, 304, 306, 308, 310, 312, 314, 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 또는 370에서 치환, 삽입 및/또는 결실되었다. 특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 HVR 외부의 영역에서 (즉, FR에서) 일어난다. 임의로, 항-SIRPβ1 항체는 서열식별번호: 267, 269, 271, 273, 275, 277, 278, 280, 282, 284, 286, 288, 290, 292, 294, 296, 298, 300, 302, 304, 306, 308, 310, 312, 314, 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 또는 370의 VL 서열 (그 서열의 번역후 변형을 포함함)을 포함한다. 특정 실시양태에서, VL은 (a) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (b) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (c) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3으로부터 선택되는 1, 2 또는 3개의 HVR을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체로서, 여기서 항체는 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VH, 및 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VL을 포함하는 것인 항체가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체로서, 여기서 항체는 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VH, 및 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VL을 포함하는 것인 항체가 본원에서 제공된다. 한 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 268, 270, 272, 274, 276, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 366, 367, 368, 369, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 및 382로부터 선택되는 VH 서열; 및 서열식별번호: 267, 269, 271, 273, 275, 277, 278, 280, 282, 284, 286, 288, 290, 292, 294, 296, 298, 300, 302, 304, 306, 308, 310, 312, 314, 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 및 370으로부터 선택되는 VL 서열 (그들 서열의 번역후 변형을 포함함)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-10, SB-11, SB-12, SB-13, SB-14, SB-15, SB-16, SB-17, SB-18, SB-19, SB-20, SB-21, SB-22, SB-23, SB-24, SB-25, SB-26, SB-27, SB-28, SB-29, SB-30, SB-31, SB-32, SB-33, SB-34, SB-35, SB-36, SB-37, SB-38, SB-39, SB-40, SB-41, SB-42, SB-43, SB-44, SB-45, SB-46, SB-47, SB-48, SB-49, SB-50, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 VH 서열 및 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 VH 서열 및 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 VH 서열 및 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1-3, SB-2-8, 및 SB-8-13으로부터 선택되는 항체의 VH 서열 및 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 367의 VH 서열 및 서열식별번호: 267의 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 372의 VH 서열 및 서열식별번호: 370의 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 376의 VH 서열 및 서열식별번호: 280의 VL 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 서열식별번호: 268, 270, 272, 274, 276, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 366, 367, 368, 369, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 및 382로부터 선택되는 VH 서열, 및 서열식별번호: 267, 269, 271, 273, 275, 277, 278, 280, 282, 284, 286, 288, 290, 292, 294, 296, 298, 300, 302, 304, 306, 308, 310, 312, 314, 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 및 370으로부터 선택되는 VL 서열을 포함하는 항체와 결합에 대해 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-10, SB-11, SB-12, SB-13, SB-14, SB-15, SB-16, SB-17, SB-18, SB-19, SB-20, SB-21, SB-22, SB-23, SB-24, SB-25, SB-26, SB-27, SB-28, SB-29, SB-30, SB-31, SB-32, SB-33, SB-34, SB-35, SB-36, SB-37, SB-38, SB-39, SB-40, SB-41, SB-42, SB-43, SB-44, SB-45, SB-46, SB-47, SB-48, SB-49, SB-50, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체와 결합에 대해 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체와 결합에 대해 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체와 결합에 대해 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 SB-1-3, SB-2-8, 및 SB-8-13으로부터 선택되는 항체와 결합에 대해 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 서열식별번호: 367의 VH 서열 및 서열식별번호: 267의 VL 서열을 포함하는 항체와 결합에 대해 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 서열식별번호: 372의 VH 서열 및 서열식별번호: 370의 VL 서열을 포함하는 항체와 결합에 대해 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 서열식별번호: 376의 VH 서열 및 서열식별번호: 280의 VL 서열을 포함하는 항체와 결합에 대해 경쟁한다.
일부 실시양태에서, 항체는 서열식별번호: 268, 270, 272, 274, 276, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 366, 367, 368, 369, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 및 382로부터 선택되는 VH 서열, 및 서열식별번호: 267, 269, 271, 273, 275, 277, 278, 280, 282, 284, 286, 288, 290, 292, 294, 296, 298, 300, 302, 304, 306, 308, 310, 312, 314, 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 및 370으로부터 선택되는 VL 서열을 포함하는 항-SIRPβ1 항체에 의해 결합되는 에피토프와 동일하거나 중첩하는 인간 SIRPβ1의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-10, SB-11, SB-12, SB-13, SB-14, SB-15, SB-16, SB-17, SB-18, SB-19, SB-20, SB-21, SB-22, SB-23, SB-24, SB-25, SB-26, SB-27, SB-28, SB-29, SB-30, SB-31, SB-32, SB-33, SB-34, SB-35, SB-36, SB-37, SB-38, SB-39, SB-40, SB-41, SB-42, SB-43, SB-44, SB-45, SB-46, SB-47, SB-48, SB-49, SB-50, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항-SIRPβ1 항체에 의해 결합되는 에피토프와 동일하거나 중첩하는 인간 SIRPβ1의 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 항체는 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항-SIRPβ1 항체에 의해 결합되는 에피토프와 동일하거나 중첩하는 인간 SIRPβ1의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항-SIRPβ1 항체에 의해 결합되는 에피토프와 동일하거나 중첩하는 인간 SIRPβ1의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SB-1-3, SB-2-8, 및 SB-8-13으로부터 선택되는 항-SIRPβ1 항체에 의해 결합되는 에피토프와 동일하거나 중첩하는 인간 SIRPβ1의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 서열식별번호: 367의 VH 서열 및 서열식별번호: 267의 VL 서열을 포함하는 항-SIRPβ1 항체에 의해 결합되는 에피토프와 동일하거나 중첩하는 인간 SIRPβ1의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 서열식별번호: 372의 VH 서열 및 서열식별번호: 370의 VL 서열을 포함하는 항-SIRPβ1 항체에 의해 결합되는 에피토프와 동일하거나 중첩하는 인간 SIRPβ1의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 서열식별번호: 376의 VH 서열 및 서열식별번호: 280의 VL 서열을 포함하는 항-SIRPβ1 항체에 의해 결합되는 에피토프와 동일하거나 중첩하는 인간 SIRPβ1의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 인간 SIRPβ1의 에피토프는 항-SIRPβ1 항체에 의해 결합되는 것과 동일한 에피토프이다.
일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 30 내지 148 내의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 30 내지 136 내의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 30 내지 80 내의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 40 내지 90 내의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 50 내지 100 내의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 60 내지 110 내의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 70 내지 120 내의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 80 내지 130 내의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 서열식별번호: 1의 아미노산 90 내지 140 내의 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 상기 실시양태 중 임의의 것에 따른 항-SIRPβ1 항체는 인간화 및/또는 인간 항체를 비롯한 모노클로날 항체이다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 항체 단편, 예를 들어, Fv, Fab, Fab', scFv, 디아바디, 또는 F(ab')2 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 실질적으로 전장 항체, 예를 들어, IgG1 항체, IgG2a 항체 또는 본원에 정의된 바와 같은 다른 항체 부류 또는 이소타입이다.
일부 실시양태에서, 상기 실시양태 중 임의의 것에 따른 항-SIRPβ1 항체는 단독으로 또는 조합으로 하기 섹션 1 내지 7에 기재된 바와 같은 특색 중 임의의 것을 포함할 수 있다:
(1) 항-SIRPβ1 항체 결합 친화도
본원에서 제공된 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 항체는 < 1 μM, < 100 nM, < 10 nM, < 1 nM, < 0.1 nM, < 0.01 nM, 또는 < 0.001 nM (예를 들어, 10-8 M 이하, 예를 들어, 10-8 M 내지 10-13 M, 예를 들어, 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수 (KD)를 갖는다. 해리 상수는 임의의 생화학적 또는 생물물리학적 기법, 예컨대 ELISA, 표면 플라스몬 공명 (SPR), 생물-층 간섭측정법 (예를 들어, 포르테바이오에 의한 옥텟 시스템 참조), 등온 적정 열량측정법 (ITC), 시차 주사 열량측정법 (DSC), 원편광 이색성 (CD), 정지-유동 분석, 및 비색 또는 형광 단백질 용융 분석을 비롯한 임의의 분석적 기법을 통해 결정될 수 있다. 한 실시양태에서, KD는 방사성표지된 항원 결합 검정 (RIA)에 의해 측정된다. 일부 실시양태에서, RIA는 예를 들어 문헌 [Chen et al. J. Mol. Biol. 293:865-881(1999))]에 기재된 바와 같이 관심의 항체의 Fab 버전 및 그의 항원으로 수행된다. 일부 실시양태에서, KD는 비아코어 표면 플라스몬 공명 검정을 사용하여 측정되며, 예를 들어, 비아코어 -2000 또는 비아코어 -3000 (비아코어, 인크. (BIAcore, Inc.), 미국 뉴저지주 피스캐터웨이)을 사용한 검정은 ~10 반응 단위 (RU)에서 고정화된 항원 CM5 칩으로 25℃에서 수행된다. 일부 실시양태에서, KD는 예를 들어, 본원의 실시예에서 논의된 바와 같이, 포르테바이오 옥텟® 레드384(Red384) 시스템 (포르테바이오, 미국 캘리포니아주 멘로 파크)을 사용하여 측정된다.
일부 실시양태에서, KD는 1가 항체 (예를 들어, Fab) 또는 전장 항체를 사용하여 결정된다. 일부 실시양태에서, KD는 1가 형태의 전장 항체를 사용하여 결정된다.
(2) 항체 단편
본원에서 제공된 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 항체는 항체 단편이다. 항체 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv, 및 scFv 단편, 및 하기 기재된 다른 단편을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 특정 항체 단편의 검토를 위해서는, 문헌 [Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)]을 참조한다. scFv 단편의 검토를 위해서는, 예를 들어, WO 93/16185; 및 미국 특허 번호 5571894 및 5587458을 참조한다. 샐비지 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하고, 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')2 단편의 논의에 대해서는, 미국 특허 번호 5869046을 참조한다.
디아바디는 2가 또는 이중특이적일 수 있는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 항체 단편이다. 예를 들어, EP404097; WO 1993/01161; 문헌 [Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)]을 참조한다. 트리아바디 및 테트라바디는 또한 문헌 [Hudson et al. Nat. Med. 9:129-134 (2003)]에 기재되어 있다. 단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 실시양태에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체이다 (예를 들어, 미국 특허 번호 6248516 참조).
항체 단편은 본원에 기재된 바와 같이 무손상 항체의 단백질분해적 소화 뿐만 아니라 재조합 숙주 세포 (예를 들어, 이. 콜라이(E. coli) 또는 파지)에 의한 생산을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 기법에 의해 제조될 수 있다.
(3) 키메라 및 인간화 항체
본원에서 제공된 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 항체는 키메라 항체이다. 특정 키메라 항체는 예를 들어, 미국 특허 번호 4816567에 기재되어 있다. 한 예에서, 키메라 항체는 비-인간 가변 영역 (예를 들어, 마우스, 래트, 햄스터, 토끼, 또는 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이로부터 유래된 가변 영역) 및 인간 불변 영역을 포함한다. 추가의 예에서, 키메라 항체는 부류 또는 하위부류가 모 항체의 그것으로부터 변화된 "부류 전환된" 항체이다. 키메라 항체는 그의 항원-결합 단편을 포함한다.
본원에서 제공된 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 항체는 인간화 항체이다. 전형적으로, 비-인간 항체는 모 비-인간 항체의 특이성 및 친화도를 보유하면서, 인간에 대한 면역원성을 감소시키도록 인간화된다. 특정 실시양태에서, 인간화 항체는 인간에서 실질적으로 비-면역원성이다. 특정 실시양태에서, 인간화 항체는 인간화 항체가 유래되는 또 다른 종으로부터의 항체와 표적에 대한 실질적으로 동일한 친화도를 갖는다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5530101, 5693761; 5693762; 및 5585089를 참조한다. 특정 실시양태에서, 그의 면역원성을 감소시키면서 항원 결합 도메인의 천연 친화도를 감소시키지 않으면서 변형될 수 있는 항체 가변 도메인의 아미노산이 확인된다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5766886 및 5869619를 참조한다. 일반적으로, 인간화 항체는 HVR (또는 그의 부분)이 비-인간 항체로부터 유래되고, FR (또는 그의 부분)이 인간 항체 서열로부터 유래된 것인 1개 이상의 가변 도메인을 포함한다. 인간화 항체는 임의로 또한 인간 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체에서의 일부 FR 잔기는 예를 들어, 항체 특이성 또는 친화도를 복원하거나 개선시키기 위해 비-인간 항체 (예를 들어, HVR 잔기가 유래되는 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환된다.
인간화 항체 및 이를 제조하는 방법은 예를 들어, 문헌 [Almagro et al. Front. Biosci. 13:161 9-1633 (2008)]에 검토되어 있으며, 예를 들어, 미국 특허 번호 5821337, 7527791, 6982321, 및 7087409에 추가로 기재되어 있다. 인간화에 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은 "최량-적합" 방법을 사용하여 선택된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)] 참조); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정한 서브그룹의 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285 (1992)]; 및 [Presta et al., J. Immunol. 151 :2623 (1993)] 참조); 인간 성숙한 (체세포적으로 돌연변이된) 프레임워크 영역 또는 인간 배선 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Almagro and Fransson Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)] 참조); 및 스크리닝 FR 라이브러리로부터 유래된 프레임워크 영역 (예를 들어, 문헌 [Baca et al. J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997)] 및 [Rosok et al. J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)] 참조)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
(4) 인간 항체
본원에서 제공된 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 관련 기술분야에 공지된 다양한 기법을 사용하여 생산될 수 있다. 인간 항체는 일반적으로 문헌 [van Dijk et al. Curr. Opin. Pharmacol. 5:368-74 (2001)] 및 [Lonberg Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)]에 기재되어 있다.
인간 항체는 항원 챌린지에 반응하여 무손상 인간 항체 또는 인간 가변 영역을 갖는 무손상 항체를 생산하도록 변형된 트랜스제닉 동물에게 면역원을 투여함으로써 제조될 수 있다. 인간 Ig 좌위의 큰 단편을 갖는 마우스 항체 생산에 있어서 결핍성인 마우스 균주를 이러한 마우스가 마우스 항체의 부재 하에서 인간 항체를 생산할 것이라는 예측으로 조작할 수 있다. 큰 인간 Ig 단편은 큰 가변 유전자 다양성 뿐만 아니라 항체 생산 및 발현의 적절한 조절을 보존할 수 있다. 항체 다양화 및 선택 및 인간 단백질에 대한 면역학적 내성의 결여를 위한 마우스 기구를 이용함으로써, 이들 마우스 균주에서의 재생산된 인간 항체 레퍼토리는 인간 항원을 비롯한 임의의 관심의 항원에 대한 높은 친화도 전체 인간 항체를 생성할 수 있다. 하이브리도마 기술을 사용하여, 바람직한 특이성을 갖는 항원-특이적 인간 MAb는 생산되고 선택될 수 있다. 특정 예시적인 방법은 미국 특허 번호 5545807, EP 546073, 및 EP 546073에 기재되어 있다. 또한, 예를 들어, 제노마우스™ 기술을 기재하는 미국 특허 번호 6075181 및 6150584; 휴맙(HUMAB)® 기술을 기재하는 미국 특허 번호 5770429; K-M 마우스(K-M MOUSE)® 기술을 기재하는 미국 특허 번호 7041870, 및 벨로시마우스(VELOCIMOUSE)® 기술을 기재하는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2007/0061900을 참조한다. 이러한 동물에 의해 생성된 무손상 항체로부터의 인간 가변 영역은 예를 들어, 상이한 인간 불변 영역과 조합함으로써 추가로 변형될 수 있다.
인간 항체는 또한 하이브리도마-기재 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 모노클로날 항체의 생산을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주는 기재되었다. (예를 들어, 문헌 [Kozbor J. Immunol. 133:3001 (1984)] 및 [Boerner et al. J. Immunol. 147:86 (1991)] 참조). 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체는 또한 문헌 [Li et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1 03:3557-3562 (2006)]에 기재되어 있다. 추가의 방법은 예를 들어, 미국 특허 번호 7189826 (하이브리도마 세포주로부터의 모노클로날 인간 IgM 항체의 생산을 기재함)에 기재된 것들을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술 (트리오마(Trioma) 기술)은 또한 문헌 [Vollmers et al. Histology and Histopathology 20(3) :927-937 (2005)] 및 [Vollmers et al. Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology 27(3):185-91 (2005)]에 기재되어 있다. 인간 항체는 또한 인간-유래된 파지 제시 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열을 단리함으로써 생성될 수 있다. 이러한 가변 도메인 서열은 그 후 바람직한 인간 불변 도메인과 조합될 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하기 위한 기법은 하기 기재된다.
본원에서 제공된 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 항체는 시험관내 방법 및/또는 바람직한 활성 또는 활성들을 갖는 항체에 대한 조합적 라이브러리를 스크리닝하는 것에 의해 단리된 인간 항체이다. 적합한 예로는 파지 제시 (CAT, 모르포시스(Morphosys), 디악스(Dyax), 바이오사이트(Biosite)/메다렉스(Medarex), 조마(Xoma), 심포겐(Symphogen), 알렉시온(Alexion) (이전에 프롤리페론(Proliferon)), 아피메드(Affimed)), 리보솜 제시 (CAT), 효모-기재 플랫폼 기술 (아디맙(Adimab)) 등을 들 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. 특정 파지 제시 방법에서, 문헌 [Winter et al. Ann. Rev. Immunol. 12: 433-455 (1994)]에 기재된 바와 같이 VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR)에 의해 개별적으로 클로닝되고, 파지 라이브러리에서 무작위로 재조합되며, 이는 그 후 항원-결합 파지에 대해 스크리닝될 수 있다. 예를 들어, 파지 제시 라이브러리를 생성하고, 이러한 라이브러리를 바람직한 결합 특징을 갖는 항체에 대해 스크리닝하는 다양한 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다. 또한, 문헌 [Sidhu et al. J. Mol. Biol. 338(2): 299-310, 2004]; [Lee et al. J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093, 2004]; [Fellouse Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34):12467-12472 (2004)]; 및 [Lee et al. J. Immunol. Methods 284( -2):1 19-132 (2004)]을 참조한다. 파지는 전형적으로 항체 단편을 단일-쇄 Fv (scFv) 단편으로서 또는 Fab 단편으로서 제시한다. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 구축하는 요구 없이 고-친화도 항체를 면역원에 제공한다. 대안적으로, 문헌 [Griffiths et al. EMBO J. 12: 725-734 (1993)]에 기재된 바와 같이, 나이브 레퍼토리는 (예를 들어, 인간으로부터) 클로닝되어 임의의 면역화 없이 항체의 단일 공급원을 폭넓은 범위의 비-자기 및 또한 자기-항원에 제공할 수 있다. 마지막으로, 문헌 [Hoogenboom et al. J. Mol. Biol., 227: 381-388, 1992]에 기재된 바와 같이, 나이브 라이브러리는 또한 줄기 세포로부터의 비재배열된 V-유전자 절편을 클로닝하고, 무작위 서열을 포함하는 PCR 프라이머를 사용하여 고도로 가변 HVR3 영역을 코딩하고, 시험관내에서 재배열을 달성함으로써 합성적으로 제조될 수 있다. 인간 항체 파지 라이브러리를 기재하는 특허 공보는 예를 들어 미국 특허 번호 5750373, 및 미국 특허 공개 번호 2007/0292936 및 2009/0002360을 포함한다. 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체는 본원에서 인간 항체 또는 인간 항체 단편으로 간주된다.
(5) Fc 영역을 포함하는 불변 영역
본원에서 제공된 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 항체는 Fc를 포함한다. 일부 실시양태에서, Fc는 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 및/또는 IgG4 이소타입이다. 일부 실시양태에서, 항체는 IgG 부류, IgM 부류, 또는 IgA 부류의 것이다.
본원에서 제공된 항체 중 임의의 것의 특정 실시양태에서, 항체는 IgG2 이소타입을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 IgG2 불변 영역을 함유한다. 일부 실시양태에서, 인간 IgG2 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 1종 이상의 SIRPβ1 활성 또는 독립적으로 Fc 수용체에의 결합을 유도한다. 일부 실시양태에서, 항체는 억제성 Fc 수용체에 결합한다. 특정 실시양태에서, 억제성 Fc 수용체는 억제성 Fc-감마 수용체 IIB (FcγIIB)이다.
본원에서 제공된 항체 중 임의의 것의 특정 실시양태에서, 항체는 IgG1 이소타입을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체는 마우스 IgG1 불변 영역을 함유한다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 IgG1 불변 영역을 함유한다. 일부 실시양태에서, 인간 IgG1 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 억제성 Fc 수용체에 결합한다. 특정 실시양태에서, 억제성 Fc 수용체는 억제성 Fc-감마 수용체 IIB (FcγIIB)이다.
본원에서 제공된 항체 중 임의의 것의 특정 실시양태에서, 항체는 IgG4 이소타입을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 IgG4 불변 영역을 함유한다. 일부 실시양태에서, 인간 IgG4 불변 영역은 Fc 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 억제성 Fc 수용체에 결합한다. 특정 실시양태에서, 억제성 Fc 수용체는 억제성 Fc-감마 수용체 IIB (FcγIIB)이다.
본원에서 제공된 항체 중 임의의 것의 특정 실시양태에서, 항체는 하이브리드 IgG2/4 이소타입을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체는 인간 IgG2의 EU 넘버링에 따른 아미노산 118 내지 260 및 인간 IgG4의 EU 넘버링에 따른 아미노산 261 내지 447을 포함하는 아미노산 서열을 포함한다 (WO 1997/11971; WO 2007/106585).
일부 실시양태에서, Fc 영역은 아미노산 치환을 포함하지 않는 Fc 영역을 포함하는 상응하는 항체에 비해 보체를 활성화시키지 않으면서 클러스터링을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 항체는 항체에 의해 특이적으로 결합된 표적의 1종 이상의 활성을 유도한다. 일부 실시양태에서, 항체는 SIRPβ1에 결합한다.
또한, 이펙터 기능을 변형시키고/거나, 항체의 혈청 반감기를 증가시키도록 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체를 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, 불변 영역 상의 Fc 수용체 결합 부위는 특정 Fc 수용체, 예컨대 FcγRI, FcγRII, 및/또는 FcγRIII에 대한 결합 친화도를 제거하거나 감소시켜 항체-의존성 세포-매개된 세포독성을 감소시키도록 변형되거나 돌연변이될 수 있다. 일부 실시양태에서, 이펙터 기능은 항체의 Fc 영역 (예를 들어, IgG의 CH2 도메인에서)의 N-글리코실화를 제거함으로써 손상된다. 일부 실시양태에서, 이펙터 기능은 WO 99/58572 및 문헌 [Armour et al. Molecular Immunology 40: 585-593 (2003)]; [Reddy et al. J. Immunology 164:1925-1933 (2000)]에 기재된 바와 같이 인간 IgG의 233-236, 297, 및/또는 327-331과 같은 영역을 변형시킴으로써 손상된다. 다른 실시양태에서, 또한, ITIM-함유 FcγRIIb (CD32b)에 대한 결합 선택성을 증가시켜 항체-의존성 세포-매개된 세포독성 및 항체-의존성 세포 포식작용을 비롯한 체액성 반응을 활성화시키지 않으면서 인접한 세포 상의 SIRPβ1 항체의 클러스터링을 증가시키도록 이펙터 기능을 변형시키도록 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체를 변형시키는 것이 바람직할 수 있다.
항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해, 예를 들어 미국 특허 5739277에 기재된 바와 같이 샐비지 수용체 결합 에피토프를 항체 (특히 항체 단편) 내로 혼입할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "샐비지 수용체 결합 에피토프"는 IgG 분자의 생체내 혈청 반감기를 증가시키는 것을 담당하는 IgG 분자 (예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4)의 Fc 영역의 에피토프를 지칭한다. 다른 아미노산 서열 변형.
(6) 다중특이적 항체
다중특이적은 동일한 또는 또 다른 폴리펩티드 (예를 들어, 본 개시내용의 1개 이상의 SIRPβ1 폴리펩티드) 상의 것들을 비롯한 적어도 2개의 상이한 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 항체이다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 이중특이적 항체이다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 삼중특이적 항체이다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 사중특이적 항체이다. 이러한 항체는 전장 항체 또는 항체 단편 (예를 들어, F(ab')2 이중특이적 항체)으로부터 유래될 수 있다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 SIRPβ1 상의 제1 부위에 결합하는 제1 항원 결합 영역을 포함하고, SIRPβ1 상의 제2 부위에 결합하는 제2 항원 결합 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 다중특이적 항체는 SIRPβ1에 결합하는 제1 항원 결합 영역 및 제2 폴리펩티드에 결합하는 제2 항원 결합 영역을 포함한다.
SIRPβ1에 결합하는 제1 항원 결합 영역 (여기서 제1 항원 결합 영역은 본원에 기재된 항체의 6개의 HVR을 포함함) 및 제2 폴리펩티드에 결합하는 제2 항원 결합 영역을 포함하는 다중특이적 항체가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, 제1 항원 결합 영역은 본원에 기재된 항체의 VH 또는 VL을 포함한다.
다중특이적 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 혈액-뇌-장벽을 가로지르는 수송을 용이하게 하는 항원이다. 일부 실시양태에서, 및 본원에서의 항체는 혈액-뇌 장벽을 가로지르는 수송을 용이하게 하는 펩티드에 접합된다. 혈액-뇌 장벽을 가로지르는 수송을 용이하게 하는 다수의 항원 및 펩티드는 관련 기술분야에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Gabathuler R. Neurobiol. Dis. 37:48-57 (2010)] 참조). 이러한 제2 항원 및 펩티드는 제한 없이, 트랜스페린 수용체 (TR), 인슐린 수용체 (HIR), 인슐린-유사 성장 인자 수용체 (IGFR), 저밀도 지질단백질 수용체 관련된 단백질 1 및 2 (LPR-1 및 2), CRM197 (디프테리아 독소의 비-독성 돌연변이체)을 비롯한 디프테리아 독소 수용체, TMEM 30(A) (플립파제(Flippase)), 단백질 전달 도메인, 예컨대 TAT, Syn-B, 또는 페네트라틴, 폴리-아르기닌 또는 일반적으로 양으로 하전된 펩티드, 안지오펩 펩티드, 예컨대 ANG1005 (예를 들어, 문헌 [Gabathuler, 2010] 참조), 및 혈액-뇌 장벽 내피 세포 상에 풍부화된 다른 세포 표면 단백질 (예를 들어, 문헌 [Daneman et al. PLoS One 5(10):e13741 (2010)] 참조)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 트랜스페린이다.
다중특이적 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 아밀로이드 베타, 올리고머성 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 그의 단편, 타우, IAPP, 알파-시누클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72 (염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅틴, 칼시토닌, 슈퍼옥시드 디스뮤타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이 소체, 심방 나트륨이뇨 인자, 섬 아밀로이드 폴리펩티드, 인슐린, 아포지질단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스티레틴, 리소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 이뮤노글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-연관된 비-ATG (RAN) 번역 산물, 디펩티드 반복 (DPR) 펩티드, 글리신-알라닌 (GA) 반복 펩티드, 글리신-프롤린 (GP) 반복 펩티드, 글리신-아르기닌 (GR) 반복 펩티드, 프롤린-알라닌 (PA) 반복 펩티드, 유비퀴틴, 및 프롤린-아르기닌 (PR) 반복 펩티드로부터 선택되는 질환-유발 단백질이다. 일부 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 타우이다. 일부 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 Aβ이다. 일부 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 TREM2이다. 일부 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 α-시누클레인이다.
다중특이적 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 면역 세포 상에 발현된 리간드 및/또는 단백질이며, 여기서 리간드 및/또는 단백질은 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA-4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG-3, 및 포스파티딜세린으로부터 선택된다.
다중특이적 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 1종 이상의 종양 세포 상에 발현된 단백질, 지질, 폴리사카라이드, 또는 당지질 및 이들의 임의의 조합이다.
다중특이적 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 이뮤노글로불린-유사 수용체, 예컨대 TREM2이다. 다중특이적 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 제2 폴리펩티드는 골수 계통 세포 상에 발현된 이뮤노글로불린-유사 수용체이다.
다가 항체는 적어도 1개의 폴리펩티드 쇄 (및 바람직하게는 2개의 폴리펩티드 쇄)를 함유하며, 여기서 폴리펩티드 쇄 또는 쇄들은 2개 이상의 가변 도메인을 포함한다. 예를 들어, 폴리펩티드 쇄 또는 쇄들은 VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc를 포함할 수 있으며, 여기서 VD1은 제1 가변 도메인이고, VD2는 제2 가변 도메인이고, Fc는 Fc 영역의 1개의 폴리펩티드 쇄이고, X1 및 X2는 아미노산 또는 폴리펩티드를 나타내고, n은 0 또는 1이다. 유사하게, 폴리펩티드 쇄 또는 쇄들은 VH-CH1-가요성 링커-VH-CH1-Fc 영역 쇄; 또는 VH-CH1-VH-CH1-Fc 영역 쇄를 포함할 수 있다. 본원에서 다가 항체는 바람직하게는 적어도 2개의 (및 바람직하게는 4개의) 경쇄 가변 도메인 폴리펩티드를 추가로 포함한다. 본원에서 다가 항체는 예를 들어, 약 2개 내지 약 8개의 경쇄 가변 도메인 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 여기서 고려되는 경쇄 가변 도메인 폴리펩티드는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 임의로, CL 도메인을 추가로 포함한다.
다중특이적 항체를 제조하는 기법은 상이한 특이성을 갖는 2개의 이뮤노글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 공동-발현 (문헌 [Milstein and Cuello Nature 305: 537 (1983)], WO 93/08829, 및 [Traunecker et al. EMBO J. 10:3655 (1991)] 참조), 및 "놉-인-홀" 조작 (예를 들어, 미국 특허 번호 5731168 참조)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 또한 WO 2013/026833 (크로스맙(CrossMab))을 참조한다. 다중-특이적 항체는 또한 항체 Fc- 이종이량체성 분자를 제조하기 위한 정전기적 스티어링 효과를 조작함 (WO 2009/089004A1); 2종 이상의 항체를 가교시킴 (예를 들어, 미국 특허 번호 4676980 참조); 류신을 사용함; 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위한 "디아바디" 기술을 사용함 (예를 들어, 문헌 [Hollinger et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993)] 참조); 및 단일-쇄 Fv (scFv) 이량체를 사용함 (예를 들어, 문헌 [Gruber et al. J. Immunol. 152:5368 (1994)] 참조); 및 예를 들어, 문헌 [Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)]에 기재된 바와 같이 삼중특이적 항체를 제조함으로써 제조될 수 있다.
옥토푸스(Octopus) 항체"를 비롯한 3개 이상의 기능적 항원 결합 부위를 갖는 조작된 항체는 또한 본원에 포함된다 (예를 들어, US 2006/0025576 참조). 본원의 항체는 또한 다수의 SIRPβ1에 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 "이중 작용 FAb" 또는 "DAF"를 포함한다 (예를 들어 US 2008/0069820 참조).
(7) 항체 변이체
본원에서 제공된 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 항체의 아미노산 서열 변이체가 고려된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화도 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선시키는 것이 바람직할 수 있다.
(i) 치환, 삽입, 및 결실 변이체
본원에서 제공된 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 1개 이상의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이체가 제공된다. 항체의 아미노산 서열 변이체는 항체를 코딩하는 뉴클레오티드 서열 내로 적절한 변형을 도입함으로써, 또는 펩티드 합성에 의해 제조될 수 있다. 이러한 변형은 예를 들어, 항체의 아미노산 서열 내의 잔기로부터의 결실, 및/또는 그 내로의 삽입 및/또는 그의 치환을 포함한다.
표 1: 아미노산 치환
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항체의 생물학적 특성의 실질적 변형은 (a) 예를 들어, 쉬트 또는 나선 입체형태로서의 치환의 영역에서의 폴리펩티드 백본의 구조, (b) 표적 부위에서의 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄의 벌크함을 유지하는데 대한 그들의 효과에 있어서 유의하게 상이한 치환을 선택함으로써 달성된다. 천연 발생 잔기는 공통적인 측쇄 특성에 기반하여 그룹으로 나누어진다:
(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; 및
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
예를 들어, 비-보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원의 또 다른 부류로부터의 구성원에 대한 교환을 포함할 수 있다. 이러한 치환된 잔기는 예를 들어, 비-인간 항체와 상동성인 인간 항체의 영역 내로, 또는 분자의 비-상동성 영역 내로 도입될 수 있다.
본원에 기재된 폴리펩티드 또는 항체에 대한 변화를 생성하는데 있어서, 특정 실시양태에 따르면, 아미노산의 소수친수성 인덱스가 고려될 수 있다. 각각의 아미노산은 그의 소수성 및 전하 특징에 기반하여 소수친수성 인덱스로 할당되었다. 이들은 이소류신 (+4.5); 발린 (+4.2); 류신 (+3.8); 페닐알라닌 (+2.8); 시스테인/시스틴 (+2.5); 메티오닌 (+1.9); 알라닌 (+1.8); 글리신 (-0.4); 트레오닌 (-0.7); 세린 (-0.8); 트립토판 (-0.9); 티로신 (-1.3); 프롤린 (-1.6); 히스티딘 (-3.2); 글루타메이트 (-3.5); 글루타민 (-3.5); 아스파르테이트 (-3.5); 아스파라긴 (-3.5); 리신 (-3.9); 및 아르기닌 (-4.5)이다.
단백질에 대한 상호작용성 생물학적 기능을 부여하는데 있어서 소수성 아미노산 인덱스의 중요성은 관련 기술분야에 이해되어 있다. 문헌 [Kyte et al. J. Mol. Biol., 157:105-131 (1982)]. 특정 아미노산은 유사한 소수친수성 인덱스 또는 점수를 갖는 다른 아미노산에 대해 치환될 수 있으며, 여전히 유사한 생물학적 활성을 보유한다. 소수친수성 인덱스에 기반하여 변화를 생성하는데 있어서, 특정 실시양태에서, 그의 소수친수성 인덱스가 ±2 내인 아미노산의 치환이 포함된다. 특정 실시양태에서, ±1 내인 것들이 포함되고, 특정 실시양태에서, ±0.5 내의 것들이 포함된다.
또한, 유사한 아미노산의 치환은 친수성에 기반하여 효과적으로 이루어질 수 있으며, 특히 여기서 그에 의해 생성되는 생물학적으로 기능적인 단백질 또는 펩티드는 본 경우에서와 같이 면역학적 실시양태에 사용하기 위해 의도된다. 특정 실시양태에서, 그의 인접한 아미노산의 친수도에 의해 지배되는 바와 같은 단백질의 가장 큰 국소 평균 친수도는 그의 면역원성 및 항원성과, 즉, 단백질의 생물학적 특성과 상관된다.
하기 친수도 값은 이들 아미노산 잔기에 할당되었다: 아르기닌 (+3.0); 리신 (+3.0±1); 아스파르테이트 (+3.0±1); 글루타메이트 (+3.0±1); 세린 (+0.3); 아스파라긴 (+0.2); 글루타민 (+0.2); 글리신 (0); 트레오닌 (-0.4); 프롤린 (-0.5±1); 알라닌 (-0.5); 히스티딘 (-0.5); 시스테인 (-1.0); 메티오닌 (-1.3); 발린 (-1.5); 류신 (-1.8); 이소류신 (-1.8); 티로신 (-2.3); 페닐알라닌 (-2.5) 및 트립토판 (-3.4). 유사한 친수도 값에 기반하여 변화를 생성하는데 있어서, 특정 실시양태에서, 그의 친수도 값이 ±2 내인 아미노산의 치환이 포함되고, 특정 실시양태에서, ±1 내인 것들이 포함되고, 특정 실시양태에서, ±0.5 내의 것들이 포함된다. 또한, 친수도에 기반하여 1차 아미노산 서열로부터 에피토프를 확인할 수 있다. 이들 영역은 또한 "에피토프 코어 영역"으로 지칭된다.
특정 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 이러한 변경이 항원에 결합하는 항체의 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한 1개 이상의 HVR 내에서 일어날 수 있다. 예를 들어, 결합 친화도를 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경 (예를 들어, 본원에서 제공된 바와 같은 보존적 치환)은 HVR에 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 예를 들어, HVR에서의 항원 접촉 잔기의 외부에 있을 수 있다. 상기 제공된 변이체 VH 및 VL 서열의 특정 실시양태에서, 각각의 HVR은 비변경되거나, 1, 2 또는 3개 이하의 아미노산 치환을 함유한다.
아미노산 서열 삽입은 길이로 1개의 잔기 내지 수백개 이상의 잔기를 포함하는 폴리펩티드의 범위인 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합물, 뿐만 아니라 단일 또는 다수의 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예로는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 들 수 있다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 효소 (예를 들어, ADEPT에 대한) 또는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드에 대한 항체의 N- 또는 C-말단에의 융합을 포함한다.
항체의 적절한 입체형태를 유지하는데 관여하지 않는 임의의 시스테인 잔기는 또한 분자의 산화적 안정성을 개선시키고, 비정상적 가교를 방지하기 위해 일반적으로 세린으로 치환될 수 있다. 반대로, 시스테인 결합(들)은 그의 안정성을 개선시키기 위해 항체에 첨가될 수 있다 (특히 항체가 항체 단편, 예컨대 Fv 단편인 경우).
(ii) 글리코실화 변이체
본원에서 제공된 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 항체는 항체가 글리코실화되는 정도를 증가시키거나 감소시키도록 변경된다. 항체에의 글리코실화 부위의 첨가 또는 결실은 편리하게는 1개 이상의 글리코실화 부위가 생성되거나 제거되도록 아미노산 서열을 변경시킴으로써 달성될 수 있다.
항체의 글리코실화는 전형적으로 N-연결되거나 O-연결된다. N-연결된은 아스파라긴 잔기의 측쇄에의 탄수화물 모이어티의 부착을 지칭한다. 트리펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 (여기서 X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산임)은 아스파라긴 측쇄에의 탄수화물 모이어티의 효소적 부착을 위한 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩티드에서의 이들 트리펩티드 서열 중 어느 하나의 존재는 잠재적 글리코실화 부위를 생성한다. O-연결된 글리코실화는 히드록시아미노산, 가장 통상적으로 세린 또는 트레오닌에의 당 N-아세틸갈락토스아민, 갈락토스, 또는 크실로스 중 하나의 부착을 지칭하지만, 5-히드록시프롤린 또는 5-히드록시리신은 또한 사용될 수 있다.
항체에의 글리코실화 부위의 첨가는 편리하게는 그것이 상기-기재된 트리펩티드 서열 중 하나 이상을 함유하도록 아미노산 서열을 변경시킴으로써 달성된다 (N-연결된 글리코실화 부위에 대해). 변경은 또한 원래 항체의 서열에의 1개 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기의 첨가, 또는 그에 의한 치환에 의해 이루어질 수 있다 (O-연결된 글리코실화 부위에 대해).
항체가 Fc 영역을 포함하는 경우, 그에 부착된 탄수화물은 변경될 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생산된 천연 항체는 전형적으로 일반적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 카바트 넘버링에 따른 Asn297에의 N-연결에 의해 부착되는 분지형, 비안테나리 올리고사카라이드를 포함한다. 올리고사카라이드는 다양한 탄수화물, 예를 들어, 만노스, N-아세틸 글루코스아민 (GlcNAc), 갈락토스, 및 시알산, 뿐만 아니라 비안테나리 올리고사카라이드 구조의 "줄기"에서의 GlcNAc에 부착된 푸코스를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 항체에서의 올리고사카라이드의 변형은 특정 개선된 특성을 갖는 항체 변이체를 생성하기 위해 이루어질 수 있다.
한 실시양태에서, Fc 영역에 (직접적으로 또는 간접적으로) 부착된 푸코스를 결여한 탄수화물 구조를 갖는 항체 변이체가 제공된다. 예를 들어, 미국 특허 공개 번호 2003/0157108 및 2004/0093621을 참조한다. "탈푸코실화된" 또는 "푸코스-결핍성" 항체 변이체와 관련된 간행물의 예로는 US 2003/0157108; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; 문헌 [Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004)]; [Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87:614 (2004)]을 들 수 있다. 탈푸코실화된 항체를 생산할 수 있는 세포주의 예로는 단백질 푸코실화에 있어서 결핍성인 Led 3 CHO 세포 (Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); US 2003/0157108), 및 넉아웃 세포주, 예컨대 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제 유전자, FUT8, 넉아웃 CHO 세포 (예를 들어, 문헌 [Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)] 및 [Kanda et al. Biotechnol. Bioeng. 94(4):680-688 (2006)] 참조)를 들 수 있다.
(iii) 변형된 불변 영역
본원에서 제공된 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 항체 Fc는 항체 Fc 이소타입 및/또는 변형이다. 일부 실시양태에서, 항체 Fc 이소타입 및/또는 변형은 Fc 감마 수용체에 결합할 수 있다.
본원에서 제공된 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 변형된 항체 Fc는 IgG1 변형된 Fc이다. 일부 실시양태에서, IgG1 변형된 Fc는 1개 이상의 변형을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, IgG1 변형된 Fc는 (예를 들어, 동일한 이소타입의 야생형 Fc 영역에 비해) 1개 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 1개 이상의 아미노산 치환은 N297A (Bolt S et al. (1993) Eur J Immunol 23:403-411), D265A (Shields et al. (2001) R. J. Biol. Chem. 276, 6591-6604), L234A, L235A (Hutchins et al. (1995) Proc Natl Acad Sci USA, 92:11980-11984; Alegre et al., (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu et al., (2000) Cell Immunol, 200:16-26), G237A (Alegre et al. (1994) Transplantation 57:1537-1543. 31; Xu et al. (2000) Cell Immunol, 200:16-26), C226S, C229S, E233P, L234V, L234F, L235E (McEarchern et al., (2007) Blood, 109:1185-1192), P331S (Sazinsky et al., (2008) Proc Natl Acad Sci USA 2008, 105:20167-20172), S267E, L328F, A330L, M252Y, S254T, 및/또는 T256E로부터 선택되며, 여기서 아미노산 위치는 EU 넘버링 관례에 따른다.
IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 N297A 돌연변이를 포함한다. IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 D265A 및 N297A 돌연변이를 포함한다. IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 D270A 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 변형된 Fc는 EU 넘버링에 따른 L234A 및 L235A 돌연변이를 포함한다. IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 L234A 및 G237A 돌연변이를 포함한다. IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 L234A, L235A 및 G237A 돌연변이를 포함한다. IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 P238D, L328E, E233, G237D, H268D, P271G 및 A330R 돌연변이 중 1개 이상 (전부를 포함함)을 포함한다. IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 S267E/L328F 돌연변이 중 1개 이상을 포함한다. IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 P238D, L328E, E233D, G237D, H268D, P271G 및 A330R 돌연변이를 포함한다. IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 P238D, L328E, G237D, H268D, P271G 및 A330R 돌연변이를 포함한다. IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 P238D, S267E, L328E, E233D, G237D, H268D, P271G 및 A330R 돌연변이를 포함한다. IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 P238D, S267E, L328E, G237D, H268D, P271G 및 A330R 돌연변이를 포함한다. IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 C226S, C229S, E233P, L234V, 및 L235A 돌연변이를 포함한다. IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 L234F, L235E, 및 P331S 돌연변이를 포함한다. IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 S267E 및 L328F 돌연변이를 포함한다. IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 S267E 돌연변이를 포함한다. IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 IgG1의 불변 중쇄 1 (CH1) 및 힌지 영역의 카파 경쇄를 갖는 IgG2의 CH1 및 힌지 영역 (EU 넘버링에 따른 IgG2의 아미노산 118-230)으로의 치환체를 포함한다.
IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 2개 이상의 아미노산 치환을 포함하지 않는 Fc 영역을 갖는 상응하는 항체에 비해 보체를 활성화시키지 않으면서 항체 클러스터링을 증가시키는 2개 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 따라서, IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, IgG1 변형된 Fc는 Fc 영역을 포함하는 항체이며, 여기서 항체는 위치 E430G에 아미노산 치환 및 EU 넘버링에 따른 L234F, L235A, L235E, S267E, K322A, L328F, A330S, P331S, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택되는 잔기 위치에 Fc 영역에서의 1개 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 변형된 Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E430G, L243A, L235A, 및 P331S에 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 변형된 Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E430G 및 P331S에 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 변형된 Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E430G 및 K322A에 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 변형된 Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E430G, A330S, 및 P331S에 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 변형된 Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E430G, K322A, A330S, 및 P331S에 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 변형된 Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E430G, K322A, 및 A330S에 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgG1 변형된 Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E430G, K322A, 및 P331S에 아미노산 치환을 포함한다.
IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, IgG1 변형된 Fc는 보체 활성화를 제거하기 위해, EU 넘버링 관례에 따른, A330L 돌연변이 (Lazar et al. Proc Natl Acad Sci USA, 103:4005-4010 (2006)), 또는 L234F, L235E, 및/또는 P331S 돌연변이 중 1개 이상 (Sazinsky et al. Proc Natl Acad Sci USA, 105:20167-20172 (2008))을 본원에서 추가로 포함할 수 있고, 그와 조합될 수 있다. IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, IgG1 변형된 Fc는 EU 넘버링에 따른 A330L, A330S, L234F, L235E, 및/또는 P331S 중 1개 이상을 추가로 포함할 수 있다. IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, IgG1 변형된 Fc는 인간 혈청에서 항체 반감기를 증진시키는 1개 이상의 돌연변이 (예를 들어, EU 넘버링 관례에 따른 M252Y, S254T, 및 T256E 돌연변이 중 1개 이상 (전부를 포함함))를 추가로 포함할 수 있다. IgG1 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, IgG1 변형된 Fc는 EU 넘버링에 따른 E430G, E430S, E430F, E430T, E345K, E345Q, E345R, E345Y, S440Y, 및/또는 S440W 중 1개 이상을 추가로 포함할 수 있다.
본 개시내용의 다른 측면은 변형된 불변 영역 (즉, Fc 영역)을 갖는 항체에 관한 것이다. 표적화된 수용체를 활성화시키는 FcγR 수용체에의 결합에 의존하는 항체는 FcγR 결합을 제거하도록 조작되는 경우 그의 효능제 활성을 소실할 수 있다 (예를 들어, 문헌 [Wilson et al. Cancer Cell 19:101-113 (2011)]; [Armour et al. Immunology 40:585-593 (2003)]; 및 [White et al. Cancer Cell 27:138-148 (2015)] 참조). 따라서, 정확한 에피토프 특이성을 갖는 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는, 항체가 인간 IgG2 이소타입 (CH1 및 힌지 영역)으로부터의 Fc 도메인 또는 억제성 FcγRIIB 수용체에 우선적으로 결합할 수 있는 또 다른 유형의 Fc 도메인, 또는 그의 변이를 갖는 경우, 최소 유해 효과로, 표적 항원을 활성화시킬 수 있는 것으로 생각된다.
본원에서 제공된 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 변형된 항체 Fc는 IgG2 변형된 Fc이다. 일부 실시양태에서, IgG2 변형된 Fc는 1개 이상의 변형을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, IgG2 변형된 Fc는 (예를 들어, 동일한 이소타입의 야생형 Fc 영역에 비해) 1개 이상의 아미노산 치환을 포함한다. IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 1개 이상의 아미노산 치환은 EU 넘버링 관례에 따른 V234A (Alegre et al. Transplantation 57:1537-1543 (1994); Xu et al. Cell Immunol, 200:16-26 (2000)); G237A (Cole et al. Transplantation, 68:563-571 (1999)); H268Q, V309L, A330S, P331S (US 2007/0148167; Armour et al. Eur J Immunol 29: 2613-2624 (1999); Armour et al. The Haematology Journal 1(Suppl.1):27 (2000); Armour et al. The Haematology Journal 1(Suppl.1):27 (2000)), C219S, 및/또는 C220S (White et al. Cancer Cell 27, 138-148 (2015)); S267E, L328F (Chu et al. Mol Immunol, 45:3926-3933 (2008)); 및 M252Y, S254T, 및/또는 T256E로부터 선택된다. IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 V234A 및 G237A에 아미노산 치환을 포함한다. IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 C219S 또는 C220S에 아미노산 치환을 포함한다. IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 A330S 및 P331S에 아미노산 치환을 포함한다. IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 S267E 및 L328F에 아미노산 치환을 포함한다.
IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링 관례에 따른 C127S 아미노산 치환을 포함한다 (White et al., (2015) Cancer Cell 27, 138-148; Lightle et al. Protein Sci. 19:753-762 (2010); 및 WO 2008/079246). IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 항체는 EU 넘버링 관례에 따른 C214S 아미노산 치환을 포함하는 카파 경쇄 불변 도메인을 갖는 IgG2 이소타입을 갖는다 (White et al. Cancer Cell 27:138-148 (2015); Lightle et al. Protein Sci. 19:753-762 (2010); 및 WO 2008/079246).
IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링 관례에 따른 C220S 아미노산 치환을 포함한다. IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 항체는 EU 넘버링 관례에 따른 C214S 아미노산 치환을 포함하는 카파 경쇄 불변 도메인을 갖는 IgG2 이소타입을 갖는다.
IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링 관례에 따른 C219S 아미노산 치환을 포함한다. IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 항체는 EU 넘버링 관례에 따른 C214S 아미노산 치환을 포함하는 카파 경쇄 불변 도메인을 갖는 IgG2 이소타입을 갖는다.
IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 IgG2 이소타입 중쇄 불변 도메인 1(CH1) 및 힌지 영역을 포함한다 (White et al. Cancer Cell 27:138-148 (2015)). IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 특정 실시양태에서, IgG2 이소타입 CH1 및 힌지 영역은 EU 넘버링에 따른 118-230의 아미노산 서열을 포함한다. IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 항체 Fc 영역은 EU 넘버링 관례에 따른 S267E 아미노산 치환, L328F 아미노산 치환, 또는 둘 다, 및/또는 N297A 또는 N297Q 아미노산 치환을 포함한다.
IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E430G, E430S, E430F, E430T, E345K, E345Q, E345R, E345Y, S440Y, 및 S440W에 1개 이상의 아미노산 치환을 추가로 포함한다. IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 인간 혈청에서 항체 반감기를 증진시키는 1개 이상의 돌연변이 (예를 들어, EU 넘버링 관례에 따른 M252Y, S254T, 및 T256E 돌연변이 중 1개 이상 (전부를 포함함))를 추가로 포함할 수 있다. IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 A330S 및 P331S를 추가로 포함할 수 있다.
IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 IgG2/4 하이브리드 Fc이다. 일부 실시양태에서, IgG2/4 하이브리드 Fc는 IgG2 aa 118 내지 260 및 IgG4 aa 261 내지 447을 포함한다. 임의의 IgG2 변형된 Fc의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 H268Q, V309L, A330S, 및 P331S에 1개 이상의 아미노산 치환을 포함한다.
IgG1 및/또는 IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 A330L, L234F; L235E, 또는 P331S; 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택되는 1개 이상의 추가의 아미노산 치환을 포함한다.
IgG1 및/또는 IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 특정 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 C127S, L234A, L234F, L235A, L235E, S267E, K322A, L328F, A330S, P331S, E345R, E430G, S440Y, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택되는 잔기 위치에 1개 이상의 아미노산 치환을 포함한다. IgG1 및/또는 IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E430G, L243A, L235A, 및 P331S에 아미노산 치환을 포함한다. IgG1 및/또는 IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E430G 및 P331S에 아미노산 치환을 포함한다. IgG1 및/또는 IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E430G 및 K322A에 아미노산 치환을 포함한다. IgG1 및/또는 IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E430G, A330S, 및 P331S에 아미노산 치환을 포함한다. IgG1 및/또는 IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E430G, K322A, A330S, 및 P331S에 아미노산 치환을 포함한다. IgG1 및/또는 IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E430G, K322A, 및 A330S에 아미노산 치환을 포함한다. IgG1 및/또는 IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E430G, K322A, 및 P331S에 아미노산 치환을 포함한다. IgG1 및/또는 IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 S267E 및 L328F에 아미노산 치환을 포함한다. IgG1 및/또는 IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 C127S에 아미노산 치환을 포함한다. IgG1 및/또는 IgG2 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E345R, E430G 및 S440Y에 아미노산 치환을 포함한다.
본원에서 제공된 항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 변형된 항체 Fc는 IgG4 변형된 Fc이다. 일부 실시양태에서, IgG4 변형된 Fc는 1개 이상의 변형을 포함한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, IgG4 변형된 Fc는 (예를 들어, 동일한 이소타입의 야생형 Fc 영역에 비해) 1개 이상의 아미노산 치환을 포함한다. IgG4 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 1개 이상의 아미노산 치환은 EU 넘버링 관례에 따른 L235A, G237A, S229P, L236E (Reddy et al. J Immunol 164:1925-1933(2000)), S267E, E318A, L328F, M252Y, S254T, 및/또는 T256E로부터 선택된다. IgG4 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링 관례에 따른 L235A, G237A, 및 E318A를 추가로 포함할 수 있다. IgG4 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링 관례에 따른 S228P 및 L235E를 추가로 포함할 수 있다. IgG4 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, IgG4 변형된 Fc는 EU 넘버링 관례에 따른 S267E 및 L328F를 추가로 포함할 수 있다.
IgG4 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, IgG4 변형된 Fc는 EU 넘버링 관례에 따른 S228P 돌연변이 (Angal et al. Mol Immunol. 30:105-108 (1993)) 및/또는 항체 안정화를 증진시키기 위한 (Peters et al. J Biol Chem. 287(29):24525-33 (2012))에 기재된 1개 이상의 돌연변이를 포함하고, 그와 조합될 수 있다.
IgG4 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, IgG4 변형된 Fc는 인간 혈청에서 항체 반감기를 증진시키는 1개 이상의 돌연변이 (예를 들어, EU 넘버링 관례에 따른 M252Y, S254T, 및 T256E 돌연변이 중 1개 이상 (전부를 포함함))를 추가로 포함할 수 있다.
IgG4 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 L235E를 포함한다. IgG4 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 C127S, F234A, L235A, L235E, S267E, K322A, L328F, E345R, E430G, S440Y, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택되는 잔기 위치에 1개 이상의 아미노산 치환을 포함한다. IgG4 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E430G, L243A, L235A, 및 P331S에 아미노산 치환을 포함한다. IgG4 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E430G 및 P331S에 아미노산 치환을 포함한다. IgG4 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E430G 및 K322A에 아미노산 치환을 포함한다. IgG4 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E430에 아미노산 치환을 포함한다. IgG4 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc 영역은 EU 넘버링에 따른 위치 E430G 및 K322A에 아미노산 치환을 포함한다. IgG4 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 S267E 및 L328F에 아미노산 치환을 포함한다. IgG4 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 C127S에 아미노산 치환을 포함한다. IgG4 변형된 Fc 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, Fc는 EU 넘버링에 따른 위치 E345R, E430G 및 S440Y에 아미노산 치환을 포함한다.
(8) 다른 항체 변형
항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 항체는 유도체이다. 용어 "유도체"는 아미노산 (또는 핵산)의 삽입, 결실, 또는 치환 이외의 화학적 변형을 포함하는 분자를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 유도체는 중합체, 지질, 또는 다른 유기 또는 무기 모이어티와의 화학적 결합을 포함하나 이에 제한되지는 않는 공유 변형을 포함한다. 특정 실시양태에서, 화학적으로 변형된 항원 결합 단백질은 화학적으로 변형되지 않은 항원 결합 단백질보다 더 큰 순환 반감기를 가질 수 있다. 특정 실시양태에서, 화학적으로 변형된 항원 결합 단백질은 바람직한 세포, 조직, 및/또는 기관에 대한 개선된 표적화 능력을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 유도체 항원 결합 단백질은 폴리에틸렌 글리콜, 폴리옥시에틸렌 글리콜, 또는 폴리프로필렌 글리콜을 포함하나 이에 제한되지는 않는 1개 이상의 수용성 중합체 부착을 포함하도록 공유 변형된다. 예를 들어, 미국 특허 번호 4640835, 4496689, 4301144, 4670417, 4791192 및 4179337을 참조한다. 특정 실시양태에서, 유도체 항원 결합 단백질은 모노메톡시-폴리에틸렌 글리콜, 덱스트란, 셀룰로스, 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카르복시메틸셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산 (단독중합체 또는 랜덤 공중합체), 폴리-(N-비닐 피롤리돈)-폴리에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 단독중합체, 폴리프로필렌 옥시드/에틸렌 옥시드 공-중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올 (예를 들어, 글리세롤) 및 폴리비닐 알콜, 뿐만 아니라 이러한 중합체의 혼합물을 포함하나 이에 제한되지는 않는 1종 이상의 중합체를 포함한다.
특정 실시양태에서, 유도체는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 서브유닛으로 공유 변형된다. 특정 실시양태에서, 1종 이상의 수용성 중합체는 유도체의 1개 이상의 특이적 위치에서, 예를 들어 아미노 말단에서 결합된다. 특정 실시양태에서, 1종 이상의 수용성 중합체는 유도체의 1개 이상의 측쇄에 무작위로 부착된다. 특정 실시양태에서, PEG는 항원 결합 단백질에 대한 치료 능력을 개선시키는데 사용된다. 특정 실시양태에서, PEG는 인간화 항체에 대한 치료 능력을 개선시키는데 사용된다. 특정 이러한 방법은 예를 들어, 임의의 목적을 위해 본원에 참조로 포함되는 미국 특허 번호 6133426에 논의되어 있다.
펩티드 유사체는 주형 펩티드의 그것들과 유사한 특성을 갖는 비-펩티드 약물로서 제약 산업에 통상적으로 사용된다. 이들 유형의 비-펩티드 화합물은 "펩티드 모방체" 또는 "펩티도모방체"로 용어화된다. 임의의 목적을 위해 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Fauchere, J. Adv. Drug Res., 15:29 (1986)]; 및 [Evans et al. J. Med. Chem., 30:1229 (1987)]. 이러한 화합물은 종종 컴퓨터화 분자 모델링의 도움으로 개발된다. 치료적으로 유용한 펩티드와 구조적으로 유사한 펩티드 모방체는 유사한 치료 또는 예방 효과를 생성하는데 사용될 수 있다. 일반적으로, 펩티도모방체는 패러다임 폴리펩티드 (즉, 생화학적 특헝 또는 약리학적 활성을 갖는 폴리펩티드), 예컨대 인간 항체와 구조적으로 유사하지만, 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해, -CH2NH-, -CH2S-, -CH2-CH2-, -CH=CH-(시스 및 트랜스), -COCH2-, -CH(OH)CH2-, 및 -CH2SO-로부터 선택되는 연결에 의해 임의로 대체된 1개 이상의 펩티드 연결을 갖는다. 컨센서스 서열의 1개 이상의 아미노산의 동일한 유형의 D-아미노산으로의 체계적 치환 (예를 들어 L-리신 대신 D-리신)은 특정 실시양태에서 보다 안정한 펩티드를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 또한, 컨센서스 서열 또는 실질적으로 동일한 컨센서스 서열 변이를 포함하는 구속된 펩티드는 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해 (임의의 목적을 위해 본원에 참조로 포함되는 문헌 [Rizo and Gierasch Ann. Rev. Biochem., 61:387 (1992)]; 예를 들어, 펩티드를 환화하는 분자내 디술피드 브릿지를 형성할 수 있는 내부 시스테인 잔기를 첨가함으로써 생성될 수 있다.
약물 접합은 특정 종양 마커 (예를 들어 이상적으로 단지 종양 세포에서 또는 상에서 발견되는 폴리펩티드)를 특이적으로 표적화하는 항체에의 생물학적 활성 세포독성 (항암) 탑재물 또는 약물의 커플링을 포함한다. 항체는 신체에서 이들 단백질을 추적하고, 그들 자신을 암 세포의 표면에 부착시킨다. 항체 및 표적 단백질 (항원) 사이의 생화학적 반응은 종양 세포에서 신호를 촉발시키며, 이는 그 후 세포독소와 함께 항체를 흡수하거나 내재화환다. ADC가 내재화된 후, 세포독성 약물은 방출되고, 암을 살해한다. 이 표적화로 인해, 이상적으로 약물은 보다 낮은 부작용을 가지며, 다른 화학치료제보다 더 폭넓은 치료 창을 제공한다. 항체를 접합시키는 기법은 개시되어 있고, 관련 기술분야에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Jane de Lartigue OncLive July 5, 2012]; [ADC Review on antibody-drug conjugates]; 및 [Ducry et al. Bioconjugate Chemistry 21 (1):5-13 (2010)] 참조).
II. 항체 활성
일부 실시양태에서, 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 인간 SIRPα에 결합하지 않는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 인간 SIRPγ에 결합하지 않는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 인간 SIRPβ1 이소형 3에 결합하지 않는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 마우스 SIRPβ1에 결합하지 않는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 시노몰구스 원숭이 SIRPβ1에 결합하지 않는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 시노몰구스 원숭이 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지 않는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다.
일부 실시양태에서, 항원에의 항-SIRPβ1 항체의 결합은 예를 들어, 실시예 1에 기재된 바와 같이, 포르테바이오 옥텟® 레드384 시스템 (포르테바이오, 미국 캘리포니아주 멘로 파크)을 사용하여 결정될 수 있다. 항체 결합은 예를 들어, 항체의 Fab 단편 (1가 결합에 대해) 또는 전장 항체, 예컨대 IgG (2가 결합, 또는 결합력에 대해)를 사용하여 결정될 수 있다. 포르테바이오 옥텟® 레드384 시스템을 사용한 전장 항체에 대한 예시적인 결합 검정은 하기와 같다. 항체를 AHQ 센서 상으로 로딩한다. 그 후, 로딩된 항체를 항원에 노출시키고, 오프-레이트를 다양한 시간 간격 (예컨대 3분)에서 검정 완충제에서 측정한다. 그 후, 동역학 데이터를 시스템과 함께 제공된 데이터 분석 소프트웨어에서 결합 모델을 사용하여 피팅할 수 있다. 항체 Fab 단편 친화도 측정을 위해, 일부 실시양태에서, 항원-Fc를 AHQ 센서 상으로 로딩한 후, 항체 Fab 단편에 노출시킬 수 있다. 오프-레이트를 상기와 같이 측정하고, 데이터를 시스템과 함께 제공된 소프트웨어를 사용하여 분석한다.
일부 실시양태에서, 시험관내에서 및/또는 생체내에서 CD14-양성 단핵구 상의 SIRPβ1 활성을 효능작용하는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 시험관내에서 CD14-양성 단핵구 상의 SIRPβ1 활성을 효능작용하는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 생체내에서 CD14-양성 단핵구 상의 SIRPβ1 활성을 효능작용하는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 항-SIRPβ1 항체가 고체 지지체, 예컨대 배양 플레이트 상에 고정화되거나 2차 항-IgG 항체에 의해 결합되거나, 보조 세포 상의 Fc 감마 수용체에 의해 결합되는 검정에서 시험관내에서 CD14-양성 단핵구 상의 SIRPβ1 활성을 효능작용한다. 일부 실시양태에서, 생체내에서 CD14-양성 단핵구 상의 SIRPβ1 활성을 효능작용하는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 항-SIRPβ1 항체가 시험관내에서 CD14-양성 단핵구 상의 SIRPβ1 활성을 효능작용하는지 여부를 결정하기 위한 비제한적 예시적인 검정은 실시예 3 및 4에 기재된다. 예를 들어, 단리된 단핵구를 시간의 기간, 예컨대 4시간 동안 기아시킨 후, 예를 들어, 항-IgG 항체의 존재 하에서 항-SIRPβ1 항체와 함께 인큐베이션한다. 인큐베이션 후, 세포를 용해시키고, Syk, ERK, AKT, SIRPβ1, 및/또는 DAP12 중 1종 이상의 인산화를 예를 들어, 항-포스포티로신 및/또는 항-포스포세린 항체를 사용하여 측정한다. Syk, ERK, AKT, SIRPβ1, 및/또는 DAP12 중 1종 이상의 인산화의 증가는 SIRPβ1 활성의 증가 (즉, SIRPβ1 활성의 효능제)의 지표이다. 또 다른 실시예로서, 단핵구를 Fc 감마 수용체를 발현하는 보조 세포, 예컨대 B 세포의 존재 하에서 항-SRPβ1 항체와 함께 인큐베이션할 수 있다. 인큐베이션 후, 세포를 용해시키고, Syk, ERK, AKT, SIRPβ1, 및/또는 DAP12 중 1종 이상의 인산화를 상기와 같이 결정한다. Syk, ERK, AKT, SIRPβ1, 및/또는 DAP12 중 1종 이상의 인산화의 증가는 SIRPβ1 활성의 증가 (즉, 항-SIRPβ1 항체가 SIRPβ1 활성의 효능제임)의 지표이다. 항-SIRPβ1 항체가 생체내에서 CD14-양성 단핵구 상의 SIRPβ1 활성을 효능작용하는지 여부를 결정하는 비제한적 예시적인 검정은 항-SIRPβ1 항체를 인간 SIRPβ1 BAC 트랜스제닉 C57BL/6 마우스에게 투여하고, CD14-양성 단핵구를 예를 들어, FACS에 의해 단리하는 것을 포함한다. 그 후, 단핵구를 용해시키고, Syk, ERK, AKT, SIRPβ1, 및/또는 DAP12 중 1종 이상의 인산화를 상기 기재된 바와 같이 측정한다. Syk, ERK, AKT, SIRPβ1, 및/또는 DAP12 중 1종 이상의 인산화의 증가는 SIRPβ1 활성의 증가 (즉, SIRPβ1 활성의 효능제)의 지표이다.
일부 실시양태에서, 시험관내에서 및/또는 생체내에서 면역 세포, 예컨대 호중구 및/또는 단핵구에서 호흡 폭발을 유도하거나 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 시험관내에서 면역 세포, 예컨대 호중구 및/또는 단핵구에서 호흡 폭발을 유도하거나 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 생체내에서 면역 세포, 예컨대 호중구 및/또는 단핵구에서 호흡 폭발을 유도하거나 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 항-SIRPβ1 항체가 면역 세포, 예컨대 호중구 및/또는 단핵구에서 호흡 폭발을 유도하거나 증가시키는지 여부를 결정하기 위한 비제한적 예시적인 시험관내 검정은 실시예 5 및 6에 기재된다. 예를 들어, 1차 호중구를 항-SIRPβ1 항체와 접촉시키고, 반응성 산소 종 (ROS)의 생산을 일반적인 산화적 스트레스 지시제, 예컨대 형광 염료 CM-H2DCFDA를 사용하여 검출한다. 대안적으로, 검정은 고체 지지체, 예컨대 배양 플레이트 상에 고정화되거나, 2차 항-IgG 항체에 의해 결합되거나, 보조 세포 상의 Fc 감마 수용체에 의해 결합된 항-SIRPβ1 항체를 사용하여 수행될 수 있다.
일부 실시양태에서, 시험관내에서 및/또는 생체내에서 단핵구에서 IL-8 발현을 유도하거나 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 시험관내에서 단핵구에서 IL-8 발현을 유도하거나 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 생체내에서 단핵구에서 IL-8 발현을 유도하거나 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 항-SIRPβ1 항체가 단핵구에서 IL-8 발현을 유도하거나 증가시키는지 여부를 결정하기 위한 비제한적 예시적인 시험관내 검정은 실시예 5에 기재된다. 예를 들어, 1차 단핵구를 고체 지지체, 예컨대 배양 플레이트 상에 고정화되거나, 2차 항-IgG 항체에 의해 결합되거나, 보조 세포 상의 Fc 감마 수용체에 의해 결합된 항-SIRPβ1 항체로 예를 들어, 밤새 자극시킬 수 있다. 상청액을 수집하여 IL-8 방출에 대해 검정할 수 있다. 항-SIRPβ1 항체가 생체내에서 단핵구에서 IL-8 발현을 유도하거나 증가시키는지 여부를 결정하는 비제한적 예시적인 검정은 항-SIRPβ1 항체를 인간 SIRPβ1 BAC 트랜스제닉 C57BL/6 마우스에게 투여하고, 1개 이상의 혈액 샘플을 얻는 것을 포함한다. IL-8의 혈청 농도를 상업적 검정, 예컨대 듀오세트(Duoset) ELISA 키트 (알앤디 시스템스(R&D Systems))를 사용하여 결정할 수 있다.
일부 실시양태에서, 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포 및/또는 수지상 세포에서 TNFα 발현을 유도하거나 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 시험관내에서 대식세포 및/또는 수지상 세포에서 TNFα 발현을 유도하거나 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 생체내에서 대식세포 및/또는 수지상 세포에서 TNFα 발현을 유도하거나 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 항-SIRPβ1 항체가 TNFα 발현을 유도하거나 증가시키는지 여부를 결정하기 위한 비제한적 예시적인 시험관내 검정은 실시예 6에 기재된다. 예를 들어, 단핵구-유래된 대식세포 또는 수지상 세포를 고체 지지체, 예컨대 배양 플레이트 상에 고정화되거나, 2차 항-IgG 항체에 의해 결합되거나, 보조 세포 상의 Fc 감마 수용체에 의해 결합된 항-SIRPβ1 항체의 존재 하에서 LPS로 예를 들어, 밤새 자극시킬 수 있다. 상청액을 수집하여 TNFα 방출에 대해 검정할 수 있다. 항-SIRPβ1 항체가 생체내에서 대식세포 및/또는 수지상 세포에서 TNFα 발현을 유도하거나 증가시키는지 여부를 결정하는 비제한적 예시적인 검정은 항-SIRPβ1 항체를 LPS (예컨대 5 μg의 LPS/마우스)와 함께 인간 SIRPβ1 BAC 트랜스제닉 C57BL/6 마우스에게 투여하는 것을 포함한다. 그 후, 마우스를 예를 들어, CO2 질식에 의해 희생시키고, 복막액을 회수하고, 원심분리에 의해 정화시킨다. TNF-α 농도를 상업적 검정, 예컨대 듀오세트 ELISA 키트 (알앤디 시스템스)를 사용하여 결정할 수 있다.
일부 실시양태에서, 시험관내에서 및/또는 생체내에서, 예를 들어, 종양 세포의 호중구-매개된 포식작용을 유도하거나 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 시험관내에서, 예를 들어, 종양 세포의 호중구-매개된 포식작용을 유도하거나 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 생체내에서, 예를 들어, 종양 세포의 호중구-매개된 포식작용을 유도하거나 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 생체내에서 호중구-매개된 종양 세포 청소율을 유도하거나 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 항-SIRPβ1 항체가 호중구-매개된 포식작용을 유도하거나 증가시키는지 여부를 결정하기 위한 비제한적 예시적인 시험관내 검정은 실시예 7에 기재된다. 예를 들어, 1차 호중구를 고체 지지체, 예컨대 배양 플레이트 상에 고정화되거나, 2차 항-IgG 항체에 의해 결합되거나, 보조 세포 상의 Fc 감마 수용체에 의해 결합된 항-SIRPβ1 항체와 접촉시킨다. 루시페라제를 발현하도록 조작된 암 세포, 예컨대 Raji B 세포 림프종 세포를 호중구와 공동-배양하고, 항-SIRPβ1 항체를 옵소닌화 항체, 예컨대 항-CD20 항체의 존재 하에서 고정화한다. 생존성 Raji 세포를 루시페라제 활성을 측정함으로써 정량화한다. IgG 대조군 항체에 비해 항-SIRPβ1 항체의 존재 하에서의 생존성 Raji 세포의 감소는 항-SIRPβ1 항체가 호중구-매개된 포식작용을 유도하거나 증가시킴을 지시한다. 항-SIRPβ1 항체가 생체내에서 호중구-매개된 종양 세포 청소율을 유도하거나 증가시키는지 여부를 결정하는 비제한적 예시적인 검정은 GFP-발현 B16F10 흑색종 세포를 인간 SIRPβ1 BAC 트랜스제닉 마우스 내로 정맥내로 주사하는 것을 포함한다. 그 후, 마우스를 옵소닌화 항-gp75 항체와 함께 항-SIRPβ1 항체로 처리한다. 말초 혈액을 수집하고, 적혈구를 용해시키고, 백혈구를 FACS 완충제에 재현탁시킨다. 호중구를 항-CD11b 및 항-Ly6G 항체로 염색하고, 섭취된 종양 세포로부터의 녹색 형광 신호의 획득에 대해 유동 세포계측법에 의해 분석한다. 이소타입-매칭된 대조군 항체로의 동일한 시험에 비해 호중구에서의 녹색 형광 신호의 증가는 항-SIRPβ1 항체가 호중구-매개된 포식작용을 유도하거나 증가시킴을 지시한다.
항-SIRPβ1 항체가 생체내에서 호중구-매개된 종양 세포 청소율을 유도하거나 증가시키는지 여부를 결정하는 추가의 비제한적 예시적인 검정은 예를 들어, 하기와 같이 폐 전이 모델을 사용한다. 활성화 FcγR의 발현을 결여한 Fc 수용체 γ-쇄 결손성 C57BL/6 마우스를 B16F10 흑색종 세포로 정맥내로 주사한다. 그 후, 인간 SIRPβ1 BAC 트랜스제닉 마우스로부터 단리된 골수 호중구를 옵소닌화 항-gp75 항체와 조합으로 항-SIRPβ1 항체로 정맥내로 주사한다. 시간의 기간 후, 마우스를 안락사시키고, 폐를 수확하고, 고정시킨다. 어두운 착색을 갖는 전이성 종양 결절의 수를 육안으로 카운팅한다. 이소타입-매칭된 대조군 항체로의 동일한 실험에 비해 전이성 종양의 수의 감소는 항-SIRPB1 항체가 생체내에서 호중구-매개된 종양 세포 청소율을 유도하거나 증가시킴을 지시한다.
일부 실시양태에서, 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포 상의 TREM2 발현을 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 시험관내에서 대식세포 상의 TREM2 발현을 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 생체내에서 대식세포 상의 TREM2 발현을 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 항-SIRPβ1 항체가 대식세포 상의 TREM2 발현을 증가시키는지 여부를 결정하기 위한 비제한적 예시적인 시험관내 검정은 실시예 16에 기재된다. 예를 들어, M-CSF와의 배양으로 분화된 단핵구-유래된 대식세포를 고체 지지체, 예컨대 배양 플레이트 상에 고정화되거나, 2차 항-IgG 항체에 의해 결합되거나, 보조 세포 상의 Fc 감마 수용체에 의해 결합된 항-SIRPβ1 항체와 함께 인큐베이션한다. 대식세포 상의 TREM2 발현을 예를 들어, FACS 분석에 의해 분석한다. 항-SIRPβ1 항체가 생체내에서 대식세포 상의 TREM2 발현을 증가시키는지 여부를 결정하는 비제한적 예시적인 검정은 하기와 같다. 인간 SIRPβ1 BAC 트랜스제닉 C57BL/6 마우스를 복막 내로 주사된 숙성된 멸균 티오글리콜레이트 브로쓰로 챌린지한다. 챌린지 후, 마우스를 항-SIRPβ1 항체로 처리한다. 그 후, 마우스를 희생시키고, 복막 대식세포를 예를 들어, 복강을 PBS로 세정함으로써 안락사 후 수확한다. 대식세포는 CD11b+ Ly6C- F4/80+ 세포로서 정의되며, FACS에 의해 분석하여 TREM2 발현 수준을 결정할 수 있다.
일부 실시양태에서, 단독으로 및/또는 효능제 항-TREM2 항체와 조합으로 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포의 생존율을 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 단독으로 및/또는 효능제 항-TREM2 항체와 조합으로 시험관내에서 대식세포의 생존율을 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 단독으로 및/또는 효능제 항-TREM2 항체와 조합으로 생체내에서 대식세포의 생존율을 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 시험관내에서 및/또는 생체내에서 수지상 세포의 생존율을 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 시험관내에서 수지상 세포의 생존율을 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 일부 실시양태에서, 생체내에서 수지상 세포의 생존율을 증가시키는 항-SIRPβ1 항체가 제공된다. 항-SIRPβ1 항체가 단독으로 또는 효능제 항-TREM2 항체와 조합으로 시험관내에서 대식세포의 생존율을 증가시키는지 여부를 결정하기 위한 비제한적 예시적인 시험관내 검정은 실시예 17, 18, 및 19에 기재된다. 예를 들어, M-CSF와의 배양으로 분화된 단핵구-유래된 대식세포를 고체 지지체, 예컨대 배양 플레이트 상에 고정화되거나, 2차 항-IgG 항체에 의해 결합되거나, 보조 세포 상의 Fc 감마 수용체에 의해 결합된 항-SIRPβ1 항체와 함께, 및 항-TREM2 항체와 함께 또는 없이 인큐베이션한다. 세포 생존율을 예를 들어, 샘플에서 ATP 농도에 대해 발광 신호를 생성하는 시약인 셀 타이터 글로 키트 (프로메가(Promega))를 사용하여 측정한다. 유사한 검정을 사용하여 항-SIRPβ1 항체가 시험관내에서 골수-유래된 대식세포 또는 수지상 세포의 생존율을 증가시키는지 여부를 결정할 수 있다. 이 검정을 위해, 골수 세포를 M-CSF와 함께 배양하여 대식세포를 분화시키거나, GM-CSF와 함께 배양하여 수지상 세포를 분화시킨다. 대식세포 또는 수지상 세포를 고체 지지체, 예컨대 배양 플레이트 상에 고정화되거나, 2차 항-IgG 항체에 의해 결합되거나, 보조 세포 상의 Fc 감마 수용체에 의해 결합된 항-SIRPβ1 항체와 함께, 및 항-TREM2 항체와 함께 또는 없이 인큐베이션한다. 상기와 같이, 세포 생존율을 예를 들어, 샘플에서 ATP 농도에 대해 발광 신호를 생성하는 시약인 셀 타이터 글로 키트 (프로메가)를 사용하여 측정한다. 항-SIRPβ1 항체가 생체내에서 대식세포의 생존율을 증가시키는지 여부를 결정하는 비제한적 예시적인 검정은 하기와 같다. CSF1R에 대한 차단 항체로의 연장된 처리는 M-CSF-매개된 생존 신호의 폐기로 인해 복막 및 조직 거주 F4/80+ 대식세포를 고갈시킨다. 이 검정을 위해, 인간 SIRPβ1 BAC 트랜스제닉 C57BL/6 마우스를 항-SIRPβ1 항체와 함께 항-CSF1R 항체로 투여한다. 처리 후, 마우스를 예를 들어, CO2 질식에 의해 희생시키고, 말초 혈액을 심장 천공에 의해 수집한다. 복막 대식세포를 PBS로의 세척에 의해 수집한다. 대식세포 집단을 FACS에 의해 혈액 및 복막에서 CD11b+ Ly6C- F4/80+ 세포 상에 게이팅함으로써 카운팅한다.
III. 핵산, 벡터, 및 숙주 세포
본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는, 예를 들어, 미국 특허 번호 4816567에 기재된 바와 같이 재조합 방법 및 조성물을 사용하여 생산될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체 중 임의의 것을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 갖는 단리된 핵산이 제공된다. 이러한 핵산은 항-SIRPβ1 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VH를 포함하는 아미노산 서열 (예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 코딩할 수 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 핵산을 포함하는 1종 이상의 벡터 (예를 들어, 발현 벡터)가 제공된다. 일부 실시양태에서, 이러한 핵산을 포함하는 숙주 세포가 또한 제공된다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 항체의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 포함하는 제2 벡터를 포함한다 (예를 들어, 이로 형질도입되었다). 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 진핵생물, 예를 들어, 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포 또는 림프 세포 (예를 들어, Y0, NS0, Sp20 세포)이다. 본 개시내용의 숙주 세포는 또한 제한 없이, 단리된 세포, 시험관내에서 배양된 세포, 및 생체외에서 배양된 세포를 포함한다.
본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체를 제조하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 항-SIRPβ1 항체를 코딩하는 핵산을 포함하는 본 개시내용의 숙주 세포를 항체의 발현에 적합한 조건 하에서 배양하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 이어서 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 회수된다.
본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체의 재조합 생산을 위해, 항-SIRPβ1 항체를 코딩하는 핵산은 단리되고, 숙주 세포에서의 추가의 클로닝 및/또는 발현을 위해 1종 이상의 벡터 내로 삽입된다. 이러한 핵산은 통상적인 절차를 사용하여 (예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용함으로써) 용이하게 단리되고 시퀀싱될 수 있다.
본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체 중 임의의 것, 또는 본원에 기재된 그의 세포-표면 발현된 단편 또는 폴리펩티드 (항체를 포함함)를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 적합한 벡터는 제한 없이, 클로닝 벡터 및 발현 벡터를 포함한다. 적합한 클로닝 벡터는 표준 기법에 따라 구축될 수 있거나, 관련 기술분야에서 이용가능한 다수의 클로닝 벡터로부터 선택될 수 있다. 선택되는 클로닝 벡터는 사용되도록 의도되는 숙주 세포에 따라 다양할 수 있지만, 유용한 클로닝 벡터는 일반적으로 자기-복제하는 능력을 갖고/거나, 특정한 제한 엔도뉴클레아제에 대한 단일 표적을 가질 수 있고/거나, 벡터를 포함하는 클론을 선택하는데 사용될 수 있는 마커에 대한 유전자를 운반할 수 있다. 적합한 예로는 플라스미드 및 박테리아 바이러스, 예를 들어, pUC18, pUC19, 블루스크립트(Bluescript) (예를 들어, pBS SK+) 및 그의 유도체, mpl8, mpl9, pBR322, pMB9, ColE1, pCR1, RP4, 파지 DNA, 및 셔틀 벡터, 예컨대 pSA3 및 pAT28을 들 수 있다. 이들 및 많은 다른 클로닝 벡터는 상업적 판매자, 예컨대 바이오래드(BioRad), 스트레이트진(Strategene), 및 인비트로젠(Invitrogen)으로부터 이용가능하다.
항체-코딩 벡터의 클로닝 또는 발현을 위한 적합한 숙주 세포는 원핵생물 또는 진핵생물 세포를 포함한다. 예를 들어, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 특히 글리코실화 및 Fc 이펙터 기능이 필요하지 않은 경우 박테리아에서 생산될 수 있다. 박테리아에서의 항체 단편 및 폴리펩티드의 발현에 대해, 예를 들어, 미국 특허 번호 5648237, 5789199, 및 5840523을 참조한다. 발현 후, 항체는 가용성 분획으로 박테리아 세포 페이스트로부터 단리될 수 있고, 추가로 정제될 수 있다.
원핵생물 외에도, 진핵생물 미생물, 예컨대 그의 글리코실화 경로가 "인간화"되어, 부분적으로 또는 전체적으로 인간 글리코실화 패턴을 갖는 항체의 생산을 초래하는 진균 및 효모 균주를 비롯한 필라멘트성 진균 또는 효모는 또한 항체-코딩 벡터에 대한 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다 (예를 들어, 문헌 [Gerngross Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004)]; 및 [Li et al. Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)]).
글리코실화된 항체의 발현을 위한 적합한 숙주 세포는 또한 다세포 유기체 (무척추동물 및 척추동물)로부터 유래될 수 있다. 무척추동물 세포의 예로는 식물 및 곤충 세포를 들 수 있다. 특히 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포의 형지감염을 위한, 곤충 세포와 함께 사용될 수 있는 다수의 바쿨로바이러스 균주가 확인되었다. 식물 세포 배양물은 또한 숙주로서 이용될 수 있다 (예를 들어, 트랜스제닉 식물에서 항체를 생산하기 위한 플란티바디스(PLANTIBODIES)™ 기술을 기재하는 미국 특허 번호 5959177, 6040498, 6420548, 7125978, 및 6417429).
척추동물 세포는 또한 숙주로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 현탁액에서 성장하도록 적응된 포유동물 세포주는 유용할 수 있다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 주 (COS-7); 인간 배아 신장 주 (예를 들어, 문헌 [Graham et al. J. Gen Virol. 36:59 (1977)]에 기재된 바와 같은 293 또는 293 세포); 아기 햄스터 신장 세포 (BHK); 마우스 세르톨리 세포 (예를 들어, 문헌 [Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)]에 기재된 바와 같은 TM4 세포); 원숭이 신장 세포 (CV1); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포 (VERO-76); 인간 자궁경부 암종 세포 (HELA); 개 신장 세포 (MDCK; 버팔로 래트 간 세포 (BRL 3A); 인간 폐 세포 (W138); 인간 간 세포 (Hep G2); 마우스 유방 종양 (MMT 060562); 예를 들어, 문헌 [Mather et al. Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)]에 기재된 바와 같은 TRI 세포; MRC 5 세포; 및 FS4 세포이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 DHFR- CHO 세포를 비롯한 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포 (Urlaub et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)); 및 골수종 세포주, 예컨대 Y0, NS0 및 Sp2/0을 포함한다. 항체 생산에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 검토에 대해서는, 예를 들어, 문헌 [Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)]을 참조한다.
IV. 제약 조성물/제형
본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물 및/또는 제약 제형이 본원에서 제공된다.
일부 실시양태에서, 제약상 허용되는 담체는 바람직하게는 채용되는 투여량 및 농도에서 수령자에게 비독성이다. 본원에 기재된 항체는 고체, 반-고체, 액체 또는 기체성 형태로 제제로 제형화될 수 있다. 이러한 제형의 예로는 제한 없이, 정제, 캡슐, 분말, 과립, 연고, 용액, 좌제, 주사, 흡입제, 겔, 미소구, 및 에어로졸을 들 수 있다. 제약상 허용되는 담체는 바람직한 제형에 따라, 동물 또는 인간 투여를 위한 제약 조성물을 제형화하는데 통상적으로 사용되는 비히클인 희석제의 제약상-허용되는, 비-독성 담체를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 예를 들어, 조성물의 pH, 삼투압, 점도, 투명도, 색상, 등장성, 냄새, 멸균성, 안정성, 용해 또는 방출의 속도, 흡착 또는 침투를 변형시키거나, 유지하거나, 보존하기 위한 제형 물질을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 제약상 허용되는 담체는 아미노산 (예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 리신); 항미생물제; 항산화제 (예컨대 아스코르브산, 아황산나트륨 또는 아황산수소나트륨); 완충제 (예컨대 보레이트, 비카르보네이트, 트리스-HCl, 시트레이트, 포스페이트 또는 다른 유기산); 벌크화제 (예컨대 만니톨 또는 글리신); 킬레이트화제 (예컨대 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA)); 착화제 (예컨대 카페인, 폴리비닐피롤리돈, 베타-시클로덱스트린 또는 히드록시프로필-베타-시클로덱스트린); 충전제; 모노사카라이드; 디사카라이드; 및 다른 탄수화물 (예컨대 글루코스, 만노스 또는 덱스트린); 단백질 (예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린); 착색제, 향미제 및 희석제; 유화제; 친수성 중합체 (예컨대 폴리비닐피롤리돈); 저분자량 폴리펩티드; 염-형성 반대이온 (예컨대 나트륨); 보존제 (예컨대 벤즈알코늄 클로라이드, 벤조산, 살리실산, 티메로살, 페네틸 알콜, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로르헥시딘, 소르브산 또는 과산화수소); 용매 (예컨대 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜); 당 알콜 (예컨대 만니톨 또는 소르비톨); 현탁화제; 계면활성제 또는 습윤화제 (예컨대 플루로닉스, PEG, 소르비탄 에스테르, 폴리소르베이트, 예컨대 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, 트리톤, 트로메타민, 레시틴, 콜레스테롤, 틸록사팔); 안정성 증진제 (예컨대 수크로스 또는 소르비톨); 긴장성 증진제 (예컨대 알칼리 금속 할라이드, 바람직하게는 염화나트륨 또는 염화칼륨, 만니톨, 소르비톨); 전달 비히클; 희석제; 부형제 및/또는 제약 아주반트를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 다양한 유형의 투여에 적합한 제형의 추가의 예는 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Pharmaceutical Press 22nd ed. (2013)]에서 발견될 수 있다. 약물 전달을 위한 방법의 간단한 검토에 대해서는, 문헌 [Langer, Science 249:1527-1533 (1990)]을 참조한다.
비경구 투여에 적합한 제형은 항산화제, 완충제, 정균제, 및 제형을 의도되는 수령자의 혈액과 등장성이 되게 하는 용질을 포함할 수 있는 수성 및 비-수성, 등장성 멸균 주사 용액, 및 현탁화제, 가용화제, 증점제, 안정화제, 및 보존제를 포함할 수 있는 수성 및 비-수성 멸균 현탁액을 포함한다.
제형은 뇌 또는 중추 신경계에서의 체류 및 안정화를 위해 최적화될 수 있다. 작용제가 두개 구획 내로 투여되는 경우, 작용제는 구획에서 보유되고, 혈액 뇌 장벽을 확산하거나 다르게는 횡단하지 않는 것이 바람직하다. 안정화 기법은 분자량의 증가를 달성하기 위해 기, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜, 폴리아크릴아미드, 중성 단백질 담체 등에의 가교, 다량체화, 또는 연결을 포함한다.
체류를 증가시키기 위한 다른 전략은 생체분해성 또는 생체침식성 삽입물에서의 항체, 예컨대 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체의 포착을 포함한다. 치료 활성제의 방출의 속도는 중합체성 매트릭스를 통한 수송, 및 삽입물의 생체분해의 속도에 의해 제어된다. 삽입물은 입자, 쉬트, 패치, 플라크, 섬유, 마이크로캡슐 등일 수 있으며, 선택되는 삽입의 부위와 혼화성인 임의의 크기 또는 형상의 것일 수 있다. 채용될 수 있는 생체분해성 중합체성 조성물은 분해되는 경우 단량체를 비롯한 생리학상 허용되는 분해 산물을 초래하는 유기 에스테르 또는 에테르일 수 있다. 무수물, 아미드, 오르토에스테르 등은 그 자체로 또는 다른 단량체와 조합으로 용도를 발견할 수 있다. 중합체는 축합 중합체일 것이다. 중합체는 가교되거나 비-가교될 수 있다. 특정 관심의 것은 단독- 또는 공중합체인 히드록시지방족 카르복실산의 중합체, 및 폴리사카라이드이다. 관심의 폴리에스테르 중에서 포함되는 것은 D-락트산, L-락트산, 라세미 락트산, 글리콜산, 폴리카프로락톤, 및 이들의 조합의 중합체이다. 관심의 폴리사카라이드 중에는 알긴산나트륨, 및 관능화된 셀룰로스, 특히 수불용성, 약 5 kD 내지 500 kD의 분자량을 특징으로 하는 카르복시메틸셀룰로스 에스테르 등이 있다. 생체분해성 히드로겔은 또한 본 발명의 삽입물에 채용될 수 있다. 히드로겔은 전형적으로 액체를 흡수하는 능력을 특징으로 하는 공중합체 물질이다.
V. 치료 용도
본원에 개시된 바와 같이, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 질환 및 장애를 예방하거나, 위험을 감소시키거나, 또는 치료하는데 사용될 수 있다. 다양한 실시양태에서, 본원에서 제공된 항-SIRPβ1 항체는 하기로부터 선택되는 1종 이상의 활성을 갖는다: 시험관내에서 및/또는 생체내에서 CD14-양성 단핵구 상의 SIRPβ1 활성을 효능작용함; 시험관내에서 및/또는 생체내에서 면역 세포, 예컨대 호중구 및/또는 단핵구에서 호흡 폭발을 유도함; 시험관내에서 및/또는 생체내에서 단핵구에서 IL-8 발현을 유도함; 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포 및/또는 수지상 세포에서 TNFα 발현을 유도함; 시험관내에서 및/또는 생체내에서, 예를 들어, 종양 세포의 호중구-매개된 포식작용을 유도함; 생체내에서 호중구-매개된 종양 세포 청소율을 증가시킴; 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포 상의 TREM2 발현을 상향조절함; 단독으로 및/또는 효능제 항-TREM2 항체와 조합으로 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포의 생존율을 증가시킴; 및 시험관내에서 및/또는 생체내에서 수지상 세포의 생존율을 증가시킴.
다양한 실시양태에서, 본원에서 제공된 항-SIRPβ1 항체는 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합 치매, 크로이츠펠트-야콥병, 정상압 수두증, 근위축성 측삭 경화증, 헌팅톤병, 타우병증 질환, 나수-하콜라병, 뇌졸중, 급성 외상, 만성 외상, 루푸스, 급성 및 만성 결장염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 결장염, 비만, 말라리아, 본태성 진전, 중추 신경계 루푸스, 베체트병, 파킨슨병, 루이 소체를 갖는 치매, 다계통 위축, 샤이-드래거 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 변성, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종 장애, 사르코이드증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련된 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 변성, 호흡관 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 루푸스, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골생성증, 골화성 질환, 골의 파제트병, 및/또는 암을 예방하거나, 위험을 감소시키거나, 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 이러한 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 효능제 항체이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체의 치료 유효량을 개체에게 투여함으로써, 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합 치매, 크로이츠펠트-야콥병, 정상압 수두증, 근위축성 측삭 경화증, 헌팅톤병, 타우병증 질환, 나수-하콜라병, 뇌졸중, 급성 외상, 만성 외상, 루푸스, 급성 및 만성 결장염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 결장염, 비만, 말라리아, 본태성 진전, 중추 신경계 루푸스, 베체트병, 파킨슨병, 루이 소체를 갖는 치매, 다계통 위축, 샤이-드래거 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 변성, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종 장애, 사르코이드증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련된 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 변성, 호흡관 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 루푸스, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골생성증, 골화성 질환, 골의 파제트병, 및/또는 암을 갖는 개체를 예방하거나, 위험을 감소시키거나, 치료하는 방법이 본원에서 제공된다. 일부 이러한 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 SIRPβ1 활성의 효능제이다 (예를 들어, 이를 유도하거나 증가시킨다).
본원에 개시된 바와 같이, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 또한 선천 면역 세포 생존을 유도하고/거나 촉진시키는데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 효능제 항-SIRPβ1 항체의 치료 유효량을 개체에게 투여함으로써, 선천 면역 세포 생존의 유도 또는 촉진을 필요로 하는 개체에서 선천 면역 세포 생존을 유도하거나 증가시키는 방법을 제공한다.
본원에 개시된 바와 같이, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 또한 예컨대 손상 후 상처 치유를 유도하고/거나 촉진시키는데 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 상처 치유는 손상 후 결장 상처 복구일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 효능제 항-SIRPβ1 항체의 치료 유효량을 개체에게 투여함으로써, 상처 치유의 유도 또는 촉진을 필요로 하는 개체에서 상처 치유를 유도하거나 촉진시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 대상체 또는 개체는 포유동물이다. 포유동물은 제한 없이, 가축 동물 (예를 들어, 소, 양, 고양이, 개, 및 말), 영장류 (예를 들어, 인간 및 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이), 토끼, 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상체 또는 개체는 인간이다.
본원에서 제공된 항체 (및 임의의 추가의 치료제)는 비경구, 폐내, 비내, 병변내 투여, 뇌척수내, 두개내, 척수내, 윤활막내, 경막내, 경구, 국소, 또는 흡입 경로를 비롯한 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있다. 비경구 주입은 볼루스로서의 또는 시간의 기간에 걸친 연속적 주입에 의한 근육내, 정맥내 투여, 동맥내, 관절내, 복강내, 또는 피하 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 투여는 정맥내 투여이다. 일부 실시양태에서, 투여는 피하이다. 투여는 임의의 적합한 경로에 의해, 예를 들어 투여가 간단한지 만성인지 여부에 부분적으로 의존하는 주사, 예컨대 정맥내 또는 피하 주사에 의해서일 수 있다. 다양한 시점에 걸친 단일 또는 다중 투여, 볼루스 투여, 및 펄스 주입을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 투여 스케줄이 본원에서 고려된다.
본원에서 제공된 항체는 우수 의학 관행과 일치하는 방식으로 제형화되고, 용량화되고, 투여될 것이다. 이 맥락에서 고려를 위한 인자는 치료되는 특정한 장애, 치료되는 특정한 포유동물, 개별적 환자의 임상적 상태, 장애의 원인, 작용제의 전달의 부위, 투여의 방법, 투여의 스케줄링, 및 의학 실시자에게 공지된 다른 인자를 포함한다. 항체는 그럴 필요는 없으나, 해당 장애를 예방하거나 치료하는데 현재 사용되는 1종 이상의 작용제와 함께 임의로 제형화된다. 이러한 다른 작용제의 유효량은 제형에 존재하는 항체의 양, 장애 또는 치료의 유형, 및 상기 논의된 다른 인자에 의존한다. 이들은 일반적으로 본원에 기재된 것과 동일한 투여량으로 및 투여 경로로, 또는 본원에 기재된 투여량의 약 1 내지 99%, 또는 임의의 투여량으로, 및 적절한 것으로 경험적으로/임상적으로 결정되는 임의의 경로에 의해 사용된다.
질환의 예방 또는 치료를 위해, 본 발명의 항체의 적절한 투여량 (단독으로 또는 1종 이상의 다른 추가의 치료제와 조합으로 사용되는 경우)은 치료되는 질환의 유형, 항체의 유형, 질환의 중증도 및 과정, 항체가 예방적 또는 치료적 목적을 위해 투여되는지 여부, 이전의 요법, 환자의 임상적 내력 및 항체에 대한 반응, 및 담당 의사의 재량에 의존할 것이다. 항체는 적합하게는 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에게 투여된다.
질환의 유형 및 중증도에 따라, 약 1 μg/kg 내지 15 mg/kg (예를 들어, 0.1 mg/kg-10 mg/kg)의 항체는 예를 들어, 1회 이상의 별개의 투여에 의해서든, 연속적 주입에 의해서든, 환자에의 투여를 위한 초기 후보 투여량일 것이다. 한 전형적인 일일 투여량은 상기 언급된 인자에 따라 약 1 μg/kg 내지 100 mg/kg 이상의 범위일 수 있다. 수일 이상에 걸친 반복된 투여를 위해, 상태에 따라, 치료는 일반적으로 질환 증상의 바람직한 억제가 일어날 때까지 지속될 것이다. 항체의 한 예시적인 투여량은 약 0.05 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 범위일 것이다. 따라서, 약 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg 또는 10 mg/kg (또는 이들의 임의의 조합)의 1개 이상의 용량은 환자에게 투여될 수 있다. 이러한 용량은 간헐적으로, 예를 들어, 매주 또는 3주마다 (예를 들어, 환자가 약 2개 내지 약 20개, 또는 예를 들어, 약 6개의 용량의 항체를 받도록) 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 투여 빈도는 1일당 3회, 1일당 2회, 1일당 1회, 2일마다 1회, 매주 1회, 2주마다 1회, 4주마다 1회, 5주마다 1회, 6주마다 1회, 7주마다 1회, 8주마다 1회, 9주마다 1회, 10주마다 1회, 또는 매월 1회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회, 또는 그 초과이다. 초기 보다 높은 로딩 용량, 이어서 1개 이상의 보다 낮은 용량은 투여될 수 있다. 그러나, 다른 투여량 처방은 유용할 수 있다. 이 요법의 진행은 통상적인 기법 및 검정에 의해 용이하게 모니터링된다.
치매
치매는 정상적인 노화로부터 예상될 수 있는 것을 넘어, 이전에 비손상된 사람에서의 전반적 인지 능력의 심각한 소실로서 나타나는 비-특이적 증후군 (즉, 징후 및 증상의 세트)이다. 치매는 고유한 전반적 뇌 손상의 결과로서 정적일 수 있다. 대안적으로, 치매는 신체에서의 손상 또는 질환으로 인해 장기 감퇴를 초래하는 진행성일 수 있다. 치매는 노인 집단에서 훨씬 더 흔하지만, 이는 또한 65세 전에 발생할 수 있다. 치매에 의해 영향을 받는 인지 영역은 제한 없이, 기억, 주의 범위, 언어, 및 문제 해결을 포함한다. 일반적으로, 증상은 개체가 치매로 진단되기 전까지 적어도 6개월 동안 나타나야 한다.
치매의 예시적인 형태로는 제한 없이, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 의미적 치매, 및 루이 소체를 갖는 치매를 들 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체를 투여하는 것은 치매를 예방하고/거나, 위험을 감소시키고/거나, 치료할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체는 치매를 갖는 개체에서 1종 이상의 SIRPβ1 활성을 유도할 수 있다.
전두측두엽 치매
전두측두엽 치매 (FTD)는 뇌의 전두엽의 진행성 악화로부터 초래되는 상태이다. 시간 경과에 따라, 변성은 측두엽으로 진행될 수 있다. 유병률에 있어서 단지 알츠하이머병 (AD)에 두번째로, FTD는 예비-노인성 치매 사례의 20%를 차지한다. FTD의 임상적 특색은 기억 결손, 행동 이상, 인격 변화, 및 언어 손상을 포함한다 (Cruts, M. & Van Broeckhoven, C., Trends Genet. 24:186-194 (2008); Neary, D., et al., Neurology 51:1546-1554 (1998); Ratnavalli, E., Brayne, C., Dawson, K. & Hodges, J. R., Neurology 58:1615-1621 (2002)).
FTD 사례의 실질적인 부분은 상염색체 우성 방식으로 유전되지만, 심지어 한 가족에서도, 증상은 행동 장애를 갖는 FTD로부터 원발성 진행성 실어증까지의, 피질-기저부 신경절 변성까지의 스펙트럼에 걸칠 수 있다. FTD는 대부분의 신경변성 질환과 마찬가지로 질환에 걸린 뇌에서의 특이적 단백질 응집체의 병리학적 존재를 특징으로 할 수 있다. 역사적으로, FTD의 첫번째 기재는 신경원섬유 엉킴 또는 픽 소체에서의 과다인산화된 타우 단백질의 뉴런내 축적의 존재를 인식하였다. 미소관 연관된 단백질 타우에 대한 인과적 역할은 몇몇 패밀리에서 타우 단백질을 코딩하는 유전자에서의 돌연변이의 확인에 의해 뒷받침되었다 (Hutton, M., et al., Nature 393:702-705 (1998). 그러나, 대다수의 FTD 뇌는 과다인산화된 타우의 축적을 나타내지 않지만, 유비퀴틴 (Ub) 및 TAR DNA 결합 단백질 (TDP43)에 대한 면역반응성을 나타낸다 (Neumann, M., et al., Arch. Neurol. 64:1388-1394 (2007)). Ub 봉입체를 갖는 대다수의 그들 FTD 사례 (FTD-U)는 프로그래뉼린 유전자에서의 돌연변이를 운반하는 것으로 나타났다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체를 투여하는 것은 FTD를 예방하고/거나, 위험을 감소시키고/거나, 치료할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체를 투여하는 것은 FTD를 갖는 개체에서 1종 이상의 SIRPβ1 활성을 유도할 수 있다.
알츠하이머병
알츠하이머병 (AD)은 치매의 가장 흔한 형태이다. 질환에 대한 치료가 없으며, 이는 그것이 진행함에 따라 악화되고, 결국 사망을 초래한다. 가장 자주, AD는 65세 초과의 사람에서 진단된다. 그러나, 덜 일반적인 조기-발병 알츠하이머는 훨씬 더 일찍 발생할 수 있다.
알츠하이머병의 통상적인 증상은 행동적 증상, 에컨대 최근 사건을 기억하는데 있어서의 곤란함; 인지 증상, 혼동, 과민성 및 공격성, 기분 변화, 언어의 문제, 및 장기 기억 소실을 포함한다. 질환이 진행함에 따라 신체적 기능은 소실되고, 궁극적으로 사망을 초래한다. 알츠하이머병은 완전히 명백해지기 전에 알려지지 않고 가변적인 양의 시간 동안 발달하고, 이는 수년 동안 진단되지 않고 진행할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체를 투여하는 것은 알츠하이머병을 예방하고/거나, 위험을 감소시키고/거나, 치료할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체를 투여하는 것은 알츠하이머병을 갖는 개체에서 1종 이상의 SIRPβ1 활성을 유도할 수 있다.
나수-하콜라병
대안적으로 경화성 백질뇌병증을 갖는 다낭성 지질막성 골이영양증 (PLOSL)으로 지칭될 수 있는 나수-하콜라병 (NHD)은 하지 및 상지의 다낭성 골질 병변으로 인한 재발성 뼈 골절과 연관된 진행성 초로 치매를 특징을 하는 희귀한 유전되는 백질이영양증이다. NHD 질환 과정은 일반적으로 4가지 단계로 나누어진다: 잠재성, 골질, 초기 신경학적, 및 후기 신경학적. 아동기 동안의 정상 발달 후 (잠재성 단계), NHD는 청소년기 또는 젊은 성인기 (전형적인 발생 연령 20-30세) 동안 손, 손목, 발목, 및 발에서의 통증으로 나타나기 시작한다. 그 후, 환자는 사지 뼈에서의 다낭성 골질 및 골다공성 병변으로 인해 재발성 뼈 골절을 앓기 시작한다 (골질 단계). 생애의 30대 또는 40대 동안 (초기 신경학적 단계), 환자는 전두엽 증후군의 특징인 현저한 인성 변화 (예를 들어, 이상행복감, 집중의 결여, 판단의 소실, 및 사회적 억제)로 나타난다. 환자는 또한 전형적으로 진행성 기억 곤란을 앓는다. 간질성 발작은 또한 빈번히 관찰된다. 마지막으로 (후기 신경학적 단계), 환자는 현저한 치매로 진행하고, 말하고 움직일 수 없으며, 통상적으로 50세까지 사망한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체를 투여하는 것은 나수-하콜라병 (NHD)을 예방하고/거나, 위험을 감소시키고/거나 치료할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체를 투여하는 것은 NHD를 갖는 개체에서 1종 이상의 SIRPβ1 활성을 유도할 수 있다.
파킨슨병
특발성 또는 원발성 파킨슨증, 운동부족 경직 증후군 (HRS), 또는 진전 마비로 지칭될 수 있는 파킨슨병은 운동계 제어에 영향을 미치는 신경변성 뇌 장애이다. 뇌에서의 도파민-생성 세포의 진행성 사멸은 파킨슨의 주요 증상을 발생시킨다. 가장 자주, 파킨슨병은 50세 초과의 사람에서 진단된다. 파킨슨병은 대부분의 사람에서 특발성 (공지된 원인을 갖지 않음)이다. 그러나, 유전적 인자는 또한 질환에서 역할을 한다.
파킨슨병의 증상은 제한 없이, 손, 팔, 다리, 턱, 및 얼굴의 진전, 사지 및 몸통에서의 근육 강직, 운동의 완만 (운동완만증), 자세 불안정성, 보행 곤란, 신경정신병적 문제, 말 또는 행동의 변화, 우울, 불안, 통증, 정신병, 치매, 환각, 및 수면 문제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체를 투여하는 것은 파킨슨병을 예방하고/거나, 위험을 감소시키고/거나, 치료할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체를 투여하는 것은 파킨슨병을 갖는 개체에서 1종 이상의 SIRPβ1 활성을 유도할 수 있다.
근위축성 측삭 경화증
본원에 사용된 바와 같은 근위축성 측삭 경화증 (ALS) 또는 운동 뉴런 질환 또는 루 게릭병은 상호교환가능하게 사용되며, 급속하게 진행성인 쇠약, 근육 위축 및 근다발수축, 근육 경직, 발음 곤란 (조음장애), 삼킴 곤란 (연하곤란), 및 호흡 곤란 (호흡곤란)을 특징으로 하는 다양한 병인을 갖는 쇠약성 질환을 지칭한다.
프로그래뉼린은 ALS에서 역할을 하며 (Schymick, JC et al., (2007) J Neurol Neurosurg Psychiatry.;78:754-6), ALS 유발 단백질, 예컨대 TDP-43에 의해 유발되는 손상을 다시 보호하는 (Laird, AS et al., (2010). PLoS ONE 5: e13368) 것으로 제시된 바 있다. 또한, 프로-NGF는 척수 손상 후 희소돌기아교세포 및 피질척수 뉴런의 p75 매개된 사멸을 유도하는 것으로 입증되었다 (Beatty et al., Neuron (2002),36, pp. 375-386; Giehl et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA (2004), 101, pp 6226-30).
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체를 투여하는 것은 ALS를 예방하고/거나, 위험을 감소시키고/거나, 치료할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체를 투여하는 것은 ALS를 갖는 개체에서 1종 이상의 SIRPβ1 활성을 유도할 수 있다.
헌팅톤병
헌팅톤병 (HD)은 헌팅틴 유전자 (HTT)에서의 상염색체 우성 돌연변이에 의해 유발되는 유전되는 신경변성 질환이다. 헌팅틴 유전자 내의 시토카인-아데닌-구아닌 (CAG) 삼중 반복부의 확장은 유전자에 의해 코딩되는 헌팅틴 단백질 (Htt)의 돌연변이체 형태의 생산을 초래한다. 이 돌연변이체 헌팅틴 단백질 (mHtt)은 독성이며, 뉴런 사멸에 기여한다. 헌팅톤병의 증상은 가장 통상적으로 35세 내지 44세에 나타나지만, 이들은 임의의 연령에서 나타날 수 있다.
헌팅톤병의 증상은 제한 없이, 운동 제어 문제, 경련하는 무작위 운동 (무도병), 비정상적 눈 운동, 손상된 균형, 발작, 씹기 곤란, 삼킴 곤란, 인지 문제, 변화된 언어, 기억 결손, 사고 곤란, 불면증, 피로, 치매, 인격의 변화, 우울, 불안, 및 강박 행동을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체를 투여하는 것은 헌팅톤병 (HD)을 예방하고/거나, 위험을 감소시키고/거나, 치료할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체를 투여하는 것은 HD를 갖는 개체에서 1종 이상의 SIRPβ1 활성을 유도할 수 있다.
타우병증 질환
타우병증 질환, 또는 타우병증은 뇌 내의 미소관-연관된 단백질 타우의 응집에 의해 유발되는 신경변성 질환의 부류이다. 알츠하이머병 (AD)은 가장 널리 공지된 타우병증 질환이며, 불용성 신경원섬유 엉킴 (NFT)의 형태로 뉴런 내의 타우 단백질의 축적을 포함한다. 다른 타우병증 질환 및 장애는 진행성 핵상 마비, 권투선수 치매 (만성 외상성 뇌병증), 전두측두엽 치매 및 염색체 17과 관련된 파킨슨증, 리티코-보디그병 (괌의 파킨슨-치매 복합체), 매듭-우세 치매, 신경절교종 및 신경절세포종, 수막혈관종증, 아급성 경화 범뇌염, 납중독 뇌병증, 결절 경화증, 할러보르덴-슈파츠병, 지방갈색소증, 픽병, 피질기저부 변성, 은친화성 그레인 질환 (AGD), 헌팅톤병, 및 전두측두엽 변성을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체를 투여하는 것은 타우병증 질환을 예방하고/거나, 위험을 감소시키고/거나, 치료할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체를 투여하는 것은 타우병증 질환을 갖는 개체에서 1종 이상의 SIRPβ1 활성을 유도할 수 있다.
다발성 경화증
다발성 경화증 (MS)은 또한 파종성 경화증 또는 파종성 뇌척수염으로 지칭될 수 있다. MS는 뇌 및 척수의 축삭 주위의 지방 미엘린 수초가 손상되어, 탈수초화 및 흉터형성 뿐만 아니라 폭넓은 스펙트럼의 징후 및 증상을 초래하는 염증성 질환이다. MS는 서로와 효과적으로 통신하는 뇌 및 척수에서의 신경 세포의 능력에 영향을 미친다. 신경 세포는 미엘린으로 지칭되는 절연 물질 내에 함유된 축삭으로 지칭되는 긴 섬유 아래로 활동 전위로 지칭되는 전기 신호를 전송함으로써 통신한다. MS에서, 신체 자신의 면역계는 미엘린을 공격하고 손상시킨다. 미엘린이 소실되는 경우, 축삭은 더 이상 신호를 효과적으로 수행할 수 없다. MS 발병은 통상적으로 젊은 성인에서 발생하며, 여성에서 보다 통상적이다.
MS의 증상은 제한 없이, 감각의 변화, 예컨대 민감성의 소실 또는 저림; 자통 또는 저린감, 예컨대 감각저하 및 감각이상; 근육 쇠약; 간대; 근육 연축; 이동 곤란; 협동 및 균형 곤란, 예컨대 실조; 언어의 문제, 예컨대 조음장애, 또는 삼킴의 문제, 예컨대 연하곤란; 시각 문제, 예컨대 안진, 안내섬광, 및 복시를 비롯한 시각 신경염; 피로; 급성 또는 만성 통증; 및 방광 및 장 곤란; 다양한 정도의 인지 손상; 우울 또는 불안정한 기분의 감정적 증상; 통상적인 주위 온도보다 더 높은 것에의 노출로 인한 잔존 증상의 악화인 우토프 현상; 및 목을 구부릴 때 등 아래로 내려오는 전기적 감각인 레르미트 징후를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체를 투여하는 것은 다발성 경화증을 예방하고/거나, 위험을 감소시키고/거나, 치료할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-SIRPβ1 항체를 투여하는 것은 다발성 경화증을 갖는 개체에서 1종 이상의 SIRPβ1 활성을 유도할 수 있다.
암
본 개시내용의 추가의 측면은 본 개시내용의 단리된 항-SIRPβ1 항체의 치료 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 암을 갖는 개체를 예방하거나, 위험을 감소시키거나, 치료하는 방법을 제공한다. 본 개시내용의 단리된 항체 중 임의의 것은 이들 방법에 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 단리된 항체는 본 개시내용의 효능제 항체이다.
종양 미세환경은 T 림프구, 대식세포 및 골수/과립구 계통의 세포를 포함하는 이종 면역 침윤물을 함유하는 것으로 공지되어 있다. 특히, 종양에서의 M2-대식세포의 존재는 불량한 예후와 연관된다. 종양에서 이들 세포의 수를 감소시키는 요법, 예컨대 CSF1R 차단제는 전임상 모델 및 초기 단계 임상 연구에서 유익한 효과를 나타내고 있다. 중대한 전임상 연구는 또한 종양-연관된 대식세포를 표적화하는 약물 (예를 들어, CSF1/CSF1R 차단 항체) 및 T 세포를 표적화하는 체크포인트 차단 항체 사이의 상승작용을 보였으며, 이는 둘 다의 세포 유형을 조작하는 것이 개별적 요법이 불량하게 효과적인 종양 모델에서 효능을 나타냄을 제시한 바 있다 (Zhu Y; Cancer Res. 2014 Sep 15; 74(18):5057-69). 임의의 특정한 이론에 구애되기를 원하지는 않지만, 종양 연관된 대식세포 및/또는 호중구에서 SIRPβ1 신호전달을 유도하는 것은 종양 미세환경에서 면역 반응의 억제를 억제하여, 치료적 항-종양 면역 반응을 발생시키는 것으로 생각된다.
특정 실시양태에서, 본 개시내용의 방법에 의해 예방되거나 치료되는 암은 제한 없이, 편평 세포 암종 (예를 들어, 상피 편평 세포 암종), 폐암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 편평 비-소세포 폐암 (NSCLC), 폐의 선암종, 폐의 편평 암종, 비-편평 NSCLC, 신경교종, 복막의 암, 간세포암, 위장암, 위장암 및 위장 기질 암을 비롯한 위암, 신암 (예를 들어 투명 세포 암종), 난소암, 간암, 결장직장암, 자궁내막암, 신장암 (예를 들어, 신세포 암종 (RCC)), 전립선암 (예를 들어 호르몬 불응성 전립선 선암종), 갑상선암, 신경모세포종, 췌장암, 교모세포종 (다형성 교모세포종), 자궁경부암, 위암, 방광암, 간암, 유방암, 결장 암종, 및 두경부암 (또는 암종), 위암, 배세포 종양, 소아 육종, 동비 자연 킬러, 흑색종 (예를 들어, 전이성 악성 흑색종, 예컨대 피부 또는 안내 악성 흑색종), 골암, 피부암, 자궁암, 항문 영역의 암, 고환암, 난관의 암종, 자궁내막의 암종, 자궁경부의 암종, 질의 암종, 음문의 암종, 식도의 암, 소장의 암, 내분비계의 암, 부갑상선의 암, 부신의 암, 연조직의 육종, 요도의 암, 음경의 암, 아동의 고형 종양, 요관의 암, 신우의 암종, 중추 신경계 (CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 골수이형성 증후군, 결장직장 신생물, 고형 종양, 종양 혈관신생, 척추 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 유표피암, 편평 세포암, T-세포 림프종, 석면에 의해 유도된 것들을 비롯한 환경적으로-유도된 암, 바이러스-관련된 암 (예를 들어, 인간 유두종 바이러스 (HPV)-관련된 종양), 및 2가지 주요한 혈액 세포 계통, 즉, 골수 세포주 (과립구, 적혈구, 혈소판, 대식세포 및 비만 세포를 생성함) 또는 림프 세포주 (B, T, NK 및 형질 세포를 생성함) 중 어느 하나로부터 유래된 혈액학적 악성종양, 예컨대 모든 유형의 백혈병, 림프종, 및 골수종, 예를 들어, 급성, 만성, 림프구성 및/또는 골수성 백혈병, 예컨대 급성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 및 만성 골수성 백혈병 (CML), 비분화된 AML (M0), 골수모구성 백혈병 (M1), 골수모구성 백혈병 (M2; 세포 성숙을 가짐), 전골수구성 백혈병 (M3 또는 M3 변이체 [M3V]), 골수단핵구성 백혈병 (호산구증가증을 갖는 M4 또는 M4 변이체 [M4E]), 단핵구성 백혈병 (M5), 적백혈병 (M6), 거대모구성 백혈병 (M7), 고립성 과립구성 육종, 및 녹색종; 림프종, 예컨대 호지킨 림프종 (HL), 비-호지킨 림프종 (NHL), 무통성 림프종, 대 B 세포 미만성 림프종, B 세포 혈액 악성종양, 예를 들어, B-세포 림프종, T-세포 림프종, 림프형질세포양 림프종, 단핵구양 B-세포 림프종, 점막-연관된 림프 조직 (MALT) 림프종, 역형성 (예를 들어, Ki 1+) 큰-세포 림프종, 성인 T-세포 림프종/백혈병, 외투 세포 림프종, 혈관 면역모구성 T-세포 림프종, 혈관중심성 림프종, 장 T-세포 림프종, 원발성 종격 B-세포 림프종, 전구체 T-림프모구성 림프종, T-림프모구성; 및 림프종/백혈병 (T-Lbly/T-ALL), 말초 T-세포 림프종, 림프모구성 림프종, 이식후 림프증식성 장애, 진성 조직구성 림프종, 원발성 중추 신경계 림프종, 원발성 삼출 림프종, 림프모구성 림프종 (LBL), 림프 계통의 조혈 종양, 급성 림프모구성 백혈병, 미만성 대 B-세포 림프종, 버킷 림프종, 소포성 림프종, 미만성 조직구성 림프종 (DHL), 면역모구성 대세포 림프종, 전구체 B-림프모구성 림프종, 피부 T-세포 림프종 (CTLC) (또한 균상 식육종 또는 세자리 증후군으로 지칭됨), 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증을 갖는 림프형질세포성 림프종 (LPL); 골수종, 예컨대 IgG 골수종, 경쇄 골수종, 비분비성 골수종, 스몰더링 골수종 (또한 무통성 골수종으로 지칭됨), 단발 형질세포종, 및 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 털 세포 림프종; 골수 계통의 조혈 종양, 섬유육종 및 횡문근육종을 비롯한 중간엽 기원의 종양; 고환종, 기형암종, 성상세포종, 슈반세포종을 비롯한 중추 및 말초 신경의 종양; 섬유육종, 횡문근육종, 및 골육종을 비롯한 중간엽 기원의 종양; 및 흑색종, 색소성 건피증, 각질가시세포종, 고환종, 갑상선 소포암 및 기형암종을 비롯한 다른 종양, 림프 계통의 조혈 종양, 예를 들어 T-세포 장애, 예컨대 소세포 및 대뇌양 세포 유형의 것을 비롯한 T-전림프구성 백혈병 (T-PLL)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 T-세포 및 B-세포 종양; 바람직하게는 T-세포 유형의 큰 과립성 림프구 백혈병 (LGL); a/d T-NHL 헵타실라빅 림프종; 말초/흉선후 T 세포 림프종 (다형성 및 면역모구성 아형); 혈관중심성 (비내) T-세포 림프종; 두경부의 암, 신암, 직장암, 갑상선의 암; 급성 골수성 림프종, 뿐만 아니라 상기 암의 임의의 조합을 포함한다. 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 또한 전이성 암을 치료하는데 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 암은 육종, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신우암, 백혈병, 폐암, 소세포 폐암, 흑색종, 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 및 섬유육종으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 암은 삼중-음성 유방 암종이다. 일부 실시양태에서, 암은 초기 단계 암 또는 후기 단계 암일 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 원발성 종양일 수 있다. 일부 실시양태에서, 암은 상기 유형의 암 중 임의의 것으로부터 유래된 제2 부위에서의 전이성 종양일 수 있다.
일부 실시양태에서, 암은 다형성 교모세포종; 신장 투명 세포 암종; 부신피질 암종; 방광 요로상피 암종; 미만성 대 B-세포 림프종; 폐 선암종; 췌장 선암종, 신세포암, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 무통성 B 세포 림프종, 공격성 B 세포 림프종, T 세포 림프종, 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 골수이형성 증후군, 골수증식성 신생물, 유방 침습성 암종, 자궁경부 편평 세포 암종, 자궁경관내 선암종, 담관암종, 결장 선암종, 미만성 대 B-세포 림프종, 식도 암종, 두경부 편평 세포 암종, 신장 혐색소성, 신장 유두상 세포 암종, 저등급 신경교종, 간세포 암종, 폐 편평 세포 암종, 중피종, 난소 장액성 낭선암종, 췌장 선암종, 크롬친화세포종 및 부신경절종, 전립선 선암종, 직장 선암종, 피부 흑색종, 위 선암종, 고환 배세포 종양, 갑상선 암종, 흉선종, 자궁 체부 자궁내막 암종, 자궁 암육종, 및 포도막 흑색종으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체의 치료 유효량을 개체에게 투여함으로써, 암을 갖는 개체를 예방하거나, 위험을 감소시키거나, 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체의 치료 유효량을 개체에게 투여함으로써, 암을 갖는 개체를 예방하거나, 위험을 감소시키거나, 치료하는 방법으로서, 여기서 개체는 체크포인트 억제제 요법에 불응성인 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 체크포인트 억제제로서 작용하는 치료제와 함께 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 억제성 면역 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체, 및/또는 또 다른 표준 또는 임상시험용 항암 요법을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 억제성 체크포인트 분자는 PD1, PDL1, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, CTLA4, PD-L2, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD30, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR-5, CD2, CD5, CD39, 및 CD73으로부터 선택된다. 전형적인 실시양태에서, 치료제는 D1, PDL1, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, CTLA4, PD-L2, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD30, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR-5, CD2, CD5, CD39, 또는 CD73으로부터 선택되는 체크포인트 억제제에 대한 항체이다. 일부 실시양태에서, 억제성 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체와 조합으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 체크포인트 억제제에 대해 지정된 항체의 조합물은 본 발명의 항-SIRPβ1 항체와 함께 투여된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 자극성 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 효능작용성 항체, 예를 들어, 효능제 항-CD40 항체, 효능제 항-OX40 항체, 효능제 항-ICOS 항체, 효능제 항-CD28 항체, 효능작용성 항-TREM1 항체, 효능작용성 항-TREM2 항체, 효능제 항-CD137/4-1BB 항체, 효능제 항-CD27 항체, 효능제 항-글루코코르티코이드-유도된 TNFR-관련된 단백질 GITR 항체, 효능제 항-CD30 항체, 효능제 항-BTLA 항체, 효능제 항-HVEM 항체, 효능제 항-CD2 항체, 효능제 항-CD5 항체, 및 이들의 임의의 조합과 함께 투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 방법은 억제성 면역 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체, 및/또는 또 다른 표준 또는 임상시험용 항암 요법을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 억제성 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체와 조합으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 억제성 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 항-PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, 항-PD-L2 항체, 항-PD-1 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 및 항-HVEM 항체, 항- B- 및 T-림프구 감쇠자 (BTLA) 항체, 항- 킬러 억제성 수용체 (KIR) 항체, 항-GAL9 항체, 항-TIM3 항체, 항-A2AR 항체, 항-LAG-3 항체, 항-포스파티딜세린 항체, 항-CD27 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 표준 또는 임상시험용 항암 요법은 방사선요법, 세포독성 화학요법, 표적화된 요법, 이마티닙 (글리벡(Gleevec)®), 트라스투주맙 (헤르셉틴(Herceptin)®), 입양 세포 전달 (ACT), 키메라 항원 수용체 T 세포 전달 (CAR-T), 백신 요법, 및 시토카인 요법으로부터 선택되는 1종 이상의 요법이다. 일부 실시양태에서, 방법은 억제성 시토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체를 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 억제성 시토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체와 조합으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 억제성 시토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체는 항-CCL2 항체, 항-CSF-1 항체, 항-IL-2 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 방법은 자극성 면역 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 효능작용성 항체를 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 자극성 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 효능작용성 항체는 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체와 조합으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 자극성 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 효능작용성 항체는 효능제 항-CD40 항체, 효능제 항-OX40 항체, 효능제 항-ICOS 항체, 효능제 항-CD28 항체, 효능제 항-CD137/4-1BB 항체, 효능제 항-CD27 항체, 효능제 항-글루코코르티코이드-유도된 TNFR-관련된 단백질 GITR 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 항-SIRPβ1 항체는 방사선 요법 및/또는 화학치료제와 조합으로 투여된다. 화학치료제는 예를 들어, 하기 군을 포함한다: 항-대사물/항암제, 예컨대 피리미딘 유사체 (5-플루오로우라실, 플록수리딘, 카페시타빈, 겜시타빈 및 시타라빈) 및 퓨린 유사체, 폴레이트 길항제 및 관련된 억제제 (메토트렉세이트, 페메트렉시드, 머캅토퓨린, 티오구아닌, 펜토스타틴 및 2-클로로데옥시아데노신 (클라드리빈)); 천연 산물을 비롯한 항증식제/항유사분열제, 예컨대 빈카 알칼로이드 (빈블라스틴, 빈크리스틴, 및 비노렐빈), 미소관 파괴제, 예컨대 탁산 (파클리탁셀, 도세탁셀), 빈크리스틴, 빈블라스틴, 노코다졸, 에포틸론, 에리불린 및 나벨빈; 에피디포도필로톡신 (에토포시드, 테니포시드); DNA 손상제 (악티노마이신, 암사크린, 안트라시클린, 블레오마이신, 부술판, 캄프토테신, 카르보플라틴, 클로람부실, 시스플라틴, 시클로포스파미드, 시톡산, 닥티노마이신, 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 헥사메틸멜라민옥살리플라틴, 이포스파미드, 멜팔란, 머클로레타민, 미토마이신, 미톡산트론, 니트로소우레아, 플리카마이신, 프로카르바진, 탁솔, 탁소테레, 테모졸라미드, 테니포시드, 트리에틸렌티오포스포라미드 및 에토포시드 (VP 16)); DNA 메틸트랜스퍼라제 억제제 (아자시티딘); 항생제, 예컨대 닥티노마이신 (악티노마이신 D), 다우노루비신, 독소루비신 (아드리아마이신), 이다루비신, 안트라시클린, 미톡산트론, 블레오마이신, 플리카마이신 (미트라마이신) 및 미토마이신; 효소 (L-아스파라긴을 전신적으로 대사하고, 그들 자신의 아스파라긴을 합성하는 능력을 갖지 않는 세포를 고갈시키는 L-아스파라기나제); 항혈소판제; 항증식성/항유사분열 알킬화제, 예컨대 질소 머스타드 (메클로레타민, 시클로포스파미드 및 유사체, 멜팔란, 클로람부실), 에틸렌이민 및 메틸멜라민 (헥사메틸멜라민 및 티오테파), 알킬술포네이트 (부술판), 니트로소우레아 (카르무스틴 (BCNU) 및 유사체, 스트렙토조신), 트리아젠 (다카르바진 (DTIC)); 항증식성/항유사분열 항대사물, 예컨대 엽산 유사체 (메토트렉세이트); 백금 배위 착물 (시스플라틴, 카르보플라틴), 프로카르바진, 히드록시우레아, 미토탄, 아미노글루테티미드; 호르몬, 호르몬 유사체 (에스트로겐, 타목시펜, 고세렐린, 비칼루타미드, 닐루타미드) 및 아로마타제 억제제 (레트로졸, 아나스트로졸); 항응고제 (헤파린, 합성 헤파린 염 및 트롬빈의 다른 억제제); 섬유소용해제 (예컨대 조직 플라스미노겐 활성화제, 스트렙토키나제 및 우로키나제), 아스피린, 디피리다몰, 티클로피딘, 클로피도그렐, 압식시맙; 항이동제; 항분비제 (브레벨딘); 면역억제제 (시클로스포린, 타크롤리무스 (FK-506), 시롤리무스 (라파마이신), 아자티오프린, 미코페놀레이트 모페틸); 항-혈관신생 화합물 (TNP470, 게니스테인, 포말리도미드) 및 성장 인자 억제제 (혈관 내피 성장 인자 (VEGF) 억제제, 예컨대 집-아플리버셉트; 섬유모세포 성장 인자 (FGF) 억제제); 아폽토시스 단백질 (IAP) 길항제의 억제제 (비리나판트); 히스톤 데아세틸라제 (HDAC) 억제제 (보리노스타트, 로미뎁신, 키다미드, 파노비노스타트, 모세티노스타트, 아벡시노스타트, 벨리노스타트, 엔티노스타트, 레스미노스타트, 기비노스타트, 퀴시노스타트, SB939); 프로테아솜 억제제 (익사조밉); 안지오텐신 수용체 차단제; 산화질소 공여자; 안티-센스 올리고뉴클레오티드; 항체 (트라스투주맙, 파니투무맙, 페르투주맙, 세툭시맙, 아달리무맙, 골리무맙, 인플릭시맙, 리툭시맙, 오크렐리주맙, 오파투무맙, 오비누투주맙, 알렘투주맙, 압식시맙, 아틀리주맙, 다클리주맙, 데노수맙, 에팔리주맙, 엘로투주맙, 로벨리주맙, 루플리주맙, 우스테키누맙, 비실리주맙, 겜투주맙 오조가미신, 브렌툭시맙 베도틴); 키메라 항원 수용체; 세포 주기 억제제 (플라보피리돌, 로스코비틴, 브리오스타틴-1) 및 분화 유도제 (트레티노인); mTOR 억제제, 토포이소머라제 억제제 (독소루비신 (아드리아마이신), 암사크린, 캄프토테신, 다우노루비신, 닥티노마이신, 에니포시드, 에피루비신, 에토포시드, 이다루비신, 이리노테칸 (CPT-11) 및 미톡산트론, 토포테칸, 이리노테칸), 코르티코스테로이드 (코르티손, 덱사메타손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니손, 및 프레드니솔론); PARP 억제제 (니라파립, 올라파립); 초점 접착 키나제 (FAK) 억제제 (데파크티닙 (VS-6063), VS-4718, VS-6062, GSK2256098); 성장 인자 신호 전달 키나제 억제제 (세디라닙, 갈루니세르팁, 로실레티닙, 반데타닙, 아파티닙, EGF816, AZD4547); c-Met 억제제 (카프마티닙, INC280); ALK 억제제 (세리티닙, 크리조티닙); 미토콘드리아 기능이상 유도제, 독소, 예컨대 콜레라(Cholera) 독소, 리신, 슈도모나스 외독소, 보르데텔라 페르투시스(Bordetella pertussis) 아데닐레이트 시클라제 독소, 또는 디프테리아 독소, 및 카스파제 활성화제; 및 염색질 파괴제. 일부 실시양태에서, 화학치료제는 B-Raf 억제제, MEK 억제제, VEGF 억제제, VEGFR 억제제, 티로신 키나제 억제제, 항-유사분열제, 또는 이들의 임의의 조합이다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 입양 세포 전달 (ACT) 요법, 키메라 항원 수용체 T 세포 전달 (CAR-T) 요법, 백신 요법, 및/또는 시토카인 요법과 조합으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 억제성 시토카인, 예를 들어, 억제성 시토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체, 예컨대 항-CCL2 항체, 항-CSF-1 항체, 또는 항-IL-2 항체와 조합으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체는 적어도 1종의 자극성 시토카인과 조합으로 투여된다. 선행하는 실시양태 중 임의의 것과 조합될 수 있는 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 자극성 시토카인은 IFN-α4, IFN-β, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 구성원, LIF, IFN-γ, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, MCP-1, MIP-1-베타, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다.
VI. 진단 용도
항체 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 항-SIRPβ1 항체 중 임의의 것은 샘플 또는 개체에서 SIRPβ1의 존재를 검출하는데 유용하다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "검출하는"은 정량적 또는 정성적 검출을 포괄한다. 진단 목적, 예컨대 개체에서의 또는 개체로부터 유래된 조직 샘플에서의 SIRPβ1의 검출을 위한 이 개시내용의 항체를 사용하는 방법이 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체는 인간이다.
검출 방법은 항원-결합된 항체의 정량화를 포함할 수 있다. 생물학적 샘플에서의 항체 검출은 면역형광 현미경검사, 면역세포화학, 면역조직화학, ELISA, FACS 분석, 면역침전, 또는 마이크로-양전자 방출 단층촬영법을 비롯한 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법으로 일어날 수 있다. 특정 실시양태에서, 항체는 예를 들어 18F로 방사성표지되고, 이어서 마이크로-양전자 방출 단층촬영법 분석을 이용하여 검출된다. 항체-결합은 또한 비-침습성 기법, 예컨대 양전자 방출 단층촬영법 (PET), X-선 컴퓨터 단층촬영법, 단일-광자 방출 컴퓨터 단층촬영법 (SPECT), 컴퓨터 단층촬영법 (CT), 및 컴퓨터 축 단층촬영법 (CAT)에 의해 환자에서 정량화될 수 있다.
VII. 제조품
본원에 기재된 항-SIRPβ1 항체를 포함하는 제조품 (예를 들어, 키트)이 본원에서 제공된다. 제조품은 본원에 기재된 항체를 포함하는 1개 이상의 용기를 포함할 수 있다. 용기는 바이알, 보틀, 자, 가요성 패키징 (예를 들어, 밀봉된 마일라 또는 플라스틱 백) 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 적합한 패키징일 수 있다. 용기는 단위 용량, 벌크한 패키지 (예를 들어, 다중-용량 패키지) 또는 하위-단위 용량일 수 있다.
일부 실시양태에서, 키트는 제2 작용제를 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제2 작용제는 에컨대 주사용 정균수 (BWFI), 포스페이트-완충 염수, 링거 용액 및 덱스트로스 용액을 포함하나 이에 제한되지는 않는 제약상-허용되는 완충제 또는 희석제이다. 일부 실시양태에서, 제2 작용제는 제약상 활성제이다. 일부 실시양태에서, 제2 작용제는 본원에 기재된 제약상 활성제이다.
제조품 중 임의의 것의 일부 실시양태에서, 제조품은 이 개시내용의 방법에 따라 사용하기 위한 지시서를 추가로 포함한다. 지시서는 일반적으로 의도된 치료를 위한 투여량, 투여 스케줄, 및 투여 경로에 대한 정보를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이들 지시서는 이 개시내용의 임의의 방법에 따른, 치매, 전두측두엽 치매, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 혼합 치매, 크로이츠펠트-야콥병, 정상압 수두증, 근위축성 측삭 경화증, 헌팅톤병, 타우병증 질환, 나수-하콜라병, 뇌졸중, 급성 외상, 만성 외상, 루푸스, 급성 및 만성 결장염, 류마티스성 관절염, 상처 치유, 크론병, 염증성 장 질환, 궤양성 결장염, 비만, 말라리아, 본태성 진전, 중추 신경계 루푸스, 베체트병, 파킨슨병, 루이 소체를 갖는 치매, 다계통 위축, 샤이-드래거 증후군, 진행성 핵상 마비, 피질 기저 신경절 변성, 급성 파종성 뇌척수염, 육아종 장애, 사르코이드증, 노화의 질환, 발작, 척수 손상, 외상성 뇌 손상, 연령 관련된 황반 변성, 녹내장, 색소성 망막염, 망막 변성, 호흡관 감염, 패혈증, 눈 감염, 전신 감염, 루푸스, 관절염, 다발성 경화증, 낮은 골 밀도, 골다공증, 골생성증, 골화성 질환, 골의 파제트병, 및 암으로부터 선택되는 질환, 장애, 또는 손상을 갖는 개체를 예방하거나, 위험을 감소시키거나, 치료하기 위한 본 개시내용의 단리된 항체 (예를 들어, 본원에 기재된 항-SIRPβ1 항체)의 투여의 설명을 포함한다. 일부 실시양태에서, 지시서는 항-SIRPβ1 항체 및 제2 작용제 (예를 들어, 제2 제약상 활성제)의 사용을 위한 지시서를 포함한다.
본 개시내용은 하기 실시예를 참조로 보다 충분히 이해될 것이다. 그러나, 이들은 본 개시내용의 범위를 제한하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 본 개시내용 전반에 걸쳐 모든 인용문헌은 명백하게 본원에 참조로 포함된다.
실시예
하기 실시예는 단지 예로서 제공되며, 제한으로서 제공되지 않는다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 변화되거나 변형되어 본질적으로 유사한 결과를 생성할 수 있는 다양한 비-중요한 파라미터를 용이하게 인식할 것이다.
실시예 1: 효능제 항-SIRPβ1 항체의 생산, 확인, 및 특징규명
인간 SIRPβ1 이소형 1 단백질 (SIRPβ1)의 아미노산 서열은 하기 서열식별번호: 1에 제시된다. 인간 SIRPβ1은 서열식별번호: 1의 아미노 잔기 1-29에 위치한 신호 펩티드; 서열식별번호: 1의 아미노 잔기 30-136에 위치한 세포외 이뮤노글로불린-유사 가변-유형 (IgV) 도메인; 서열식별번호: 1의 아미노산 147-246 및 253-347에 위치한 2개의 이뮤노글로불린-유사 불변 (IgC) 도메인; 서열식별번호: 1의 아미노 잔기 372-392에 위치한 막횡단 도메인; 및 서열식별번호: 1의 아미노 잔기 393-398에 위치한 세포내 도메인을 함유한다.
인간 SIRPβ1 아미노산 서열 (서열식별번호: 1):
Figure pct00003
인간 SIRPβ1 아미노산 서열은 DAP12에서의 아스파르트산과 상호작용하는 막횡단 도메인 내의 리신 잔기 (aa380), SIRPβ1로부터의 신호전달을 전달하는 핵심 어댑터 단백질, 뿐만 아니라 TREM1, TREM2, 및 다른 관련된 IgV 패밀리 구성원을 포함한다. 인간 SIRPβ1의 BLAST 분석은 가능하게는 대체적 스플라이싱으로부터 유래된 다수의 이소형을 확인하였다. 이들 전사체 변이체 중에서, SIRPβ1 이소형 3은 SIRPβ1 이소형 1과 가장 서열 동일성을 공유한다 (도 1a). 인간 SIRPβ1은 또한 인간 SIRPα에 관련된다. 인간 SIRPβ1 및 인간 SIRPα의 아미노산 서열의 정렬을 2-원 blast에 의해 생성하였다 (도 1b). 둘 다의 수용체의 세포외 영역은 85% 서열 동일성을 공유한다. 대조적으로, 인간 SIRPβ1은 마우스 SIRPβ1과 보다 불량한 상동성을 나타내며 (도 2), 이는 둘 다의 종에서의 SIRP 유전자 좌위가 분기성 선택 압력을 경험함을 시사한다.
인간 SIRPβ1의 세포외 도메인, 특히 세포외 IgV 도메인 (서열식별번호: 1의 아미노산 잔기 30-136)에 결합하는 항체는 마우스 하이브리도마 기술, 파지 제시 기술, 및 효모-기재 플랫폼 기술을 사용하여 생성될 수 있다. 항체는 SIRPβ1을 발현하는 세포에 결합하는 그들의 능력에 대해 및 세포에서 및 전체 동물에서 생체내에서 SIRPβ1 신호전달, 활성, 및 기능을 활성화시키는 그들의 능력에 대해 하기 실시예 2 내지 20에 기재된 바와 같이 스크리닝된다. 예를 들어, IgV 도메인 (아미노산 잔기 30-136)을 표적화하는 효능작용성 항-SIRPβ1 항체는 생산될 수 있다. SIRPα와 유사하게, SIRPβ1의 IgV 도메인은 미지의 리간드(들)에 결합하는 것으로 예측되며, 수용체의 다량체화를 통해, 활성화를 발생시킨다.
His-태그부착된 및 Fc-접합된 인간 SIRPα 및 인간 SIRPβ1 IgV 도메인의 생산
인간 SIRPα 및 인간 SIRPβ1 IgV 도메인 (또한 "도메인 1"로 지칭됨) 항원 (각각 서열식별번호: 387 및 388)의 포유동물 발현을 위해, cDNA에 기반한 합성 유전자를 포유동물 발현 벡터 내로 클로닝하고, 이어서 일시적으로 형질감염시키고, HEK293/T 세포에서 발현시켰다. 구축물은 이종 신호 펩티드 및 C-말단 인간 IgG1 Fc 및/또는 또는 His 태그를 포함하였다. 간략하게, 관심의 항원을 함유하는 발현 벡터를 형질감염 시약과 복합체화하고, 이어서 HEK293/T 세포에 1시간 동안 노출시키고, 이어서 배양 배지를 mL 당 400만개 세포의 최종 밀도로 희석함으로써 형질감염시켰다. 그 후, 세포를 48시간마다 새로운 공급 배지로 7일 동안 배양하였다. 7일 후, 상청액을 원심분리 후 수집하고, 정제를 Ni-세파로스, 및 일부의 경우, SEC 컬럼 정제를 사용하여 수행하여 >95% 비-응집된 단량체 함량에 도달하였다. SIRPα 및 SIRPβ1 단량체 항원을 FabRICATOR (IdeS) 프로테아제 (제노비스(Genovis), Cat # A2-FR2-1000)로 변형된 힌지 영역 (Lynaugh et al., MAbs. 2013 Oct;5(5):641-45)을 갖는 SIRPα/β1 Fc 융합 항원을 단편화하고, 이어서 단백질 A 친화도 정제하여 비소화된 Fc 융합 단백질 및 SEC를 제거하여 응집된 단량체를 제거함으로써 제조하였다.
항-SIRPβ1 항체에 대한 라이브러리 스크리닝
각각 ~109 다양성의 8개의 나이브 (사전-면역) 인간 합성 효모 라이브러리를 이전에 기재된 바와 같이 디자인하고, 생성하고, 번식시켰다 (예를 들어 문헌 [Xu et al., 2013]; WO2009036379; WO2010105256; WO2012009568; [Xu et al., Protein Eng Des Sel. 2013 Oct;26(10):663-70] 참조). 10개의 평행 선택을 인간 SIRPβ1-Fc 융합 항원 선택을 위해 8개의 나이브 라이브러리 및 인간 SIRPβ1 단량체 선택을 위해 8개의 라이브러리의 2개의 풀을 사용하여 수행하였다. 첫번째 2 라운드의 선택을 위해, 밀테니(Miltenyi) MACs 시스템을 이용한 자성 비드 분류 기법을 본질적으로 기재된 바와 같이 수행하였다 (Siegel et al., J Immunol Methods. 2004 Mar;286(l-2): 141-53). 간략하게, 효모 세포 (~109개의 세포/라이브러리, 총 밀도 ~1010)를 3 ml의 10 nM 비오티닐화된 SIRPβ1-Fc 융합 항원 또는 100 nM 비오티닐화된 SIRPβ1 단량체 항원과 함께 15분 동안 실온에서 0.1% BSA를 갖는 FACS 세척 완충제 PBS에서 인큐베이션하였다. 50 ml 빙냉 세척 완충제로 1회 세척한 후, 세포 펠릿을 40 mL 세척 완충제에 재현탁시키고, 500 μL 스트렙타비딘 마이크로비드 (밀테니 바이오텍(Miltenyi Biotec), 독일 베르기쉬 글라드바흐. Cat # 130-048-101)를 효모에 첨가하고, 4℃에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 다음으로, 효모 세포를 펠릿화하고, 5 mL 세척 완충제에 재현탁시키고, MACS LS 컬럼 (밀테니 바이오텍, 독일 베르기쉬 글라드바흐. Cat.#130-042-401) 상으로 로딩하였다. 5 mL를 로딩한 후, 컬럼을 3 ml FACS 세척 완충제로 3회 세척하였다. 그 후, 컬럼을 자기장으로부터 제거하고, 효모를 5 mL의 성장 배지로 용리한 후, 밤새 성장시켰다. 하기 4 라운드의 분류를 유동 세포계측법을 사용하여 수행하였다.
제1 FACS 선택 라운드를 위해, 대략 1x108개의 효모를 펠릿화하고, 세척 완충제로 3회 세척하고, 10 nM 비오티닐화된 SIRPβ1-Fc 융합 항원 또는 100 nM 비오티닐화된 SIRPβ1 단량체 항원과 함께 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 효모를 2회 세척하고, 1:100 희석된 염소 항-인간 F(ab')2 카파-FITC (서던 바이오테크(Southern Biotech), 미국 알라바마주 버밍햄, Cat# 2062-02) 및 1:500 희석된 스트렙타비딘-알렉사 플루오르(Alexa Fluor) 633 (라이프 테크놀로지스(Life Technologies), 미국 뉴욕주 그랜드 아일랜드, Cat # S21375), 또는 1:50 희석된 엑스트라비딘-피코에리트린 (시그마-알드리치(Sigma-Aldrich), 미국 세인트 루이스, Cat # E4011), 2차 시약 중 어느 하나로 4℃에서 15분 동안 염색하였다. 빙냉 세척 완충제로 2회 세척한 후, 세포 펠릿을 0.4 mL 세척 완충제에 재현탁시키고, 여과기-캡핑된 분류 튜브에 옮겼다. 분류를 FACS ARIA 분류기 (비디 바이오사이언시스(BD Biosciences))를 사용하여 수행하고, 분류 게이트를 결정하여 단지 SIRPβ1 결합 클론을 선택하였다. 하기 선택 라운드에서, 대략 2 x 107개의 효모를 상기와 같이 제조하였지만, 인큐베이션은 다중특이적 반응성 시약으로 하여 다중특이적 결합제 (Xu et al., PEDS. 2013 Oct;26(10):663-70), 및 대조군 단백질, HIS-태그부착된 인간 SIRPα 단량체에 대한 결합제를 감소시키기 위한 음성 분류를 수행하였다. 다음 라운드는 10 nM 인간 SIRPβ1-Fc 융합 항원 및 100 nM 인간 SIRPβ1 단량체 항원으로의 표지화를 이용하였다. 최종 라운드의 분류 후, 효모 세포를 플레이팅하고, 개별적 콜로니를 특징규명을 위해 선택하였다. 최종 라운드는 100 nM 및 10 nM 인간 SIRPβ1 단량체 항원으로의 표지화를 이용하였다.
제2 및 제4 FACS 분류 선택 라운드 산출물로부터의 중쇄를 사용하여 추가의 선택에 사용되는 경쇄 다양화 라이브러리를 제조하였다. 이들 선택을 위해, 제1 선택 라운드는 밀테니 MACs 비드 및 10 nM 인간 SIRPβ1-Fc 융합 항원으로의 표지화를 이용하였다. 4 라운드의 FACS 분류가 이어졌다. 제1 라운드는 100 nM 인간 SIRPβ1 단량체 항원을 사용하였다. 제2 FACS 라운드는 시약 결합제, 다중특이적 결합제, 및 대조군 단백질 인간 SIRPα HIS 태그부착된 단량체에 대한 결합제에의 결합을 감소시키기 위한 음성 분류였다. 마지막 2 라운드는 최고 친화도 결합제를 선택하는 인간 SIRPβ1 단량체 적정 (100 nM, 10 nM, 및 1 nM), 100 nM 인간 SIRPα 단량체, 및 SIRPβ1 IgV 도메인에 결합하는 대조군 AM4-5 항체와의 경쟁을 이용하여 풍부화된 집단에서 경쟁자 제시를 평가하였다. (미국 특허 출원 공개 번호 US2014/0242095 참조.) 최종 라운드의 분류 후, 효모 세포를 플레이팅하고, 개별적 콜로니를 특징규명을 위해 선택하였다.
항체 IgG 및 Fab 생산 및 정제
효모 클론을 포화까지 성장시킨 후, 30℃에서 48시간 동안 진탕하면서 유도하였다. 유도 후, 효모 세포를 펠릿화하고, 상청액을 정제를 위해 수확하였다. IgG를 단백질 A 컬럼을 사용하여 정제하고, 아세트산, pH 2.0으로 용리하였다. Fab 단편을 파파인 소화에 의해 생성하고, 캡쳐셀렉트(CaptureSelect) IgG-CH1 친화도 매트릭스 (라이프테크놀로지스, Cat # 1943200250) 상에서 정제하였다.
옥텟 ® 결합 실험
항-SIRPβ1 항체의 친화도를 일반적으로 이전에 기재된 바와 같이 (Estep et al., MAbs. 2013 Mar-Apr;5(2):270-8) 수행된 포르테바이오 옥텟® 레드384 시스템 (포르테바이오, 미국 캘리포니아주 멘로 파크)을 사용하여 그들의 해리 상수 (KD)를 측정함으로써 결정하였다. 간략하게, 옥텟 친화도 측정을 IgG를 온-라인에서 AHQ 센서 상으로 로딩함으로써 수행하였다. 센서를 오프-라인에서 검정 완충제에서 30분 동안 평형화시킨 후, 기준선 확립에 대해 60초 동안 온-라인에서 모니터링하였다. 아비드 결합 측정을 위해, 로딩된 IgG를 갖는 센서를 100 nM 항원 (인간 SIRPα 도메인 1 (D1) Fc 융합물 또는 SIRPβ1 도메인 1 (D1) Fc 융합물)에 3분 동안 노출시킨 후, 오프-레이트 측정을 위해 3분 동안 검정 완충제에 옮겼다. 추가의 아비드 결합을 비오티닐화된 SIRPβ1 단량체를 SA 센서 상에 로딩하고, 용액 중 100 nM IgG에 노출시킴으로써 결정하였다. 1가 결합 측정을 인간 SIRPα- 또는 SIRPβ1-Fc 융합 항원을 AHQ 센서 상으로 로딩하고, 이어서 100 nM 항-SIRPβ1 항체 Fab에 노출시킴으로써 얻었다. 추가의 1가 측정을 비오티닐화된 인간 SIRPα 또는 SIRPβ1 단량체를 SA 센서에 로딩하고, 이어서 용액 중 100 nM Fab에 노출시킴으로써 생성하였다. 동역학 데이터를 포르테바이오 (포르테바이오 데이터 분석 소프트웨어 7.0)에 의해 제공된 데이터 분석 소프트웨어에서 1:1 결합 모델을 사용하여 피팅하였다.
에피토프 비닝
항-SIRPβ1 항체의 에피토프 비닝을 포르테바이오 옥텟® 레드384 시스템 (포르테바이오, 미국 캘리포니아주 멘로 파크) 상에서 표준 샌드위치 형식 비닝 검정을 사용하여 수행하였다. 대조군 항-표적 IgG를 AHQ 센서 상으로 로딩하고, 센서 상의 비점유된 Fc-결합 부위를 비-관련된 인간 IgG1 항체로 차단하였다. 그 후, 센서를 100 nM 표적 항원, 이어서 제2 항-표적 항체에 노출시켰다. 데이터를 포르테바이오 데이터 분석 소프트웨어 7.0을 사용하여 프로세싱하였다. 항원 회합 후의 제2 항체에 의한 추가의 결합은 비점유된 에피토프 (비-경쟁자)를 지시하는 반면, 결합 없음은 에피토프 차단 (경쟁자)을 지시한다. 이 프로세스를 SIRPβ1의 IgV 도메인에 결합하는 2개의 참조 항체에 대해 반복하였다: (i) 빈 1을 한정하는 AM4-5; 및 (ii) 빈 2를 한정하는 SB-17.
항-SIRPβ1 항체의 최종 세트를 항원 결합 친화도에 기반하여 선택하였다. 인간 SIRPβ1에의 결합에 대해 양성인 항체를 인간 SIRPα와의 교차-반응성에 대해 시험하였다. 각각의 항체의 빈 범주는 하기 표 2에 열거된다. 표 2에서, "ND"는 빈 범주가 결정되지 않은 항체를 지칭하고; "NB"는 지시된 항원에 대한 결합이 없었던 항체를 지시하고; "PF"는 항원 결합 동역학이 1:1 결합 모델에 대해 불량한 핏을 나타낸 항체를 지칭한다. 마우스 SIRPβ1 D1-Fc, 인간 SIRPα D1-Fc, 또는 마우스 SIRPα D1-Fc에의 검출가능한 결합은 항-SIRPβ1 항체 중 임의의 것에 대해 관찰되지 않았다.
표 2: 항-SIRPβ1 항체의 생화학적 특징규명
Figure pct00004
Figure pct00005
항체 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열
표준 기법을 사용하여, 항체의 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인을 코딩하는 아미노산 서열을 결정하였다. 항체의 EU 또는 카바트 서열은 하기와 같이 표 3 내지 6에 제시된다. 항체의 EU 또는 카바트 경쇄 HVR 서열은 표 3에 제시된다. 항체의 EU 또는 카바트 중쇄 HVR 서열은 표 4에 제시된다. 항체의 EU 또는 카바트 경쇄 프레임워크 (FR) 서열은 표 5에 제시된다. 항체의 EU 또는 카바트 중쇄 프레임워크 (FR) 서열은 표 6에 제시된다.
표 3: 항-SIRPβ1 항체의 EU 또는 카바트 경쇄 HVR 서열
Figure pct00006
Figure pct00007
표 4: 항-SIRPβ1 항체의 EU 또는 카바트 중쇄 HVR 서열
Figure pct00008
표 5: 항-SIRPβ1 항체의 EU 또는 카바트 경쇄 프레임워크 서열
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
표 6: 항-SIRPβ1 항체의 EU 또는 카바트 중쇄 프레임워크 서열
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
SIRPβ1 항체 결합의 특징규명
항-SIRPβ1 항체의 초기 특징규명은 인간 또는 마우스 SIRPβ1을 발현하는 세포주에 결합하는 그들의 능력을 결정하는 것을 포함하였다. 세포를 수확하고, 96-웰 플레이트에서 106개/ml로 플레이팅하고, 세척하고, 1 μg/ml 항-SIRPβ1 항체를 함유하는 100 μl FACS 완충제에서 얼음 상에서 0.5시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 세포를 2회 세척하고, 0.5　μg/ml PE-접합된 2차 항체를 함유하는 100 μl FACS 완충제에서 얼음 상에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 차가운 FACS 완충제에서 2회 세척하고, BD FACS 칸토(Canto) 상에서 획득하였다. 데이터 분석 및 평균 형광 강도 (MFI) 값 또는 % 양성 세포의 계산을 플로우조(FlowJo) (트리스타(TreeStar)) 소프트웨어 버전 10.0.7로 수행하였다.
표 7은 낮은 수준의 재조합 인간 SIRPβ1을 발현하는 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포주에 결합하는 항-SIRPβ1 항체의 평균 형광 강도 (MFI) 값을 제시한다. 인간 IgG1 이소타입 대조군은 1로 설정된 배경 형광 신호를 확립하였다. 시험된 50개의 항-SIRPβ1 항체 클론 중에서, 32개의 클론은 배경에 비해 ≥2배의 MFI로 세포에 결합하였다. 음성 대조군으로서, 항-SIRPβ1 항체를 또한 재조합 마우스 SIRPβ1을 과다발현하는 CHO 세포에의 표면 결합에 대해 스크리닝하였다. 예상된 바와 같이, 시험 항체 중 어느 것도 마우스 SIRPβ1에 결합하지 않았다. SIRP 패밀리의 수용체 사이의 높은 서열 유사성을 고려하여, 항-SIRPβ1 항체를 또한 인간 및 마우스 SIRPα에 대한 교차-반응성에 대해 스크리닝하였다. 세포 결합 검정에서, 항-SIRPβ1 항체 중 어느 것도 인간 또는 마우스 SIRPα를 과다발현하는 세포에 결합하지 않았다.
표 7: 항-SIRPβ1 항체의 세포 결합 특징규명
Figure pct00015
Figure pct00016
추가적으로, 항-SIRPβ1 항체를 또한 NFAT (활성화된 T-세포의 핵 인자) 프로모터의 제어 하에서 루시페라제 유전자를 발현하는 리포터 세포주를 사용함으로써 항원 특이성에 대해 스크리닝하였다. 마우스 흉선 림프종 T 림프구로부터 유래된 세포주 BW5147.G.1.4 (ATCC® TIB48™)를 시그날 렌티(Cignal Lenti) NFAT-루시페라제 바이러스 (퀴아젠(Qiagen))로 감염시켜, BWZ/NFAT-루시페라제 리포터 세포를 발생시켰다. 이어서, 세포를 SIRPα의 세포내 ITIM 모티프가 DAP12의 세포내 ITAM 모티프로 치환된 인간 SIRPα-DAP12 키메라를 발현하는 렌티바이러스로, 또는 인간 SIRPβ1 및 인간 DAP12를 발현하는 2가지 렌티바이러스로 형질도입하였다. 시험 항체, 뿐만 아니라 인간 IgG1 이소타입 대조군을 96-웰 플레이트 상으로 10ug/mL로 흡착시켰다. 세척 후, huSIRPα/DAP12 키메라를 발현하는 (BWZ-huSIRPα) 또는 huSIRPβ1 및 DAP12를 공동-발현하는 (BWZ-huSIRPβ1) 105개의 NFAT-루시페라제 리포터 세포를 플레이트 상으로 시딩하고, 37C에서 밤새 인큐베이션하였다. 루시페라제 활성을 원글로(OneGlo) 시약 (프로메가)을 각각의 웰에 첨가하고, 샘플을 플레이트 진탕기 상에서 실온에서 3분 동안 인큐베이션함으로써 측정하였다. 발광 신호를 GEN5™ 2.04 소프트웨어를 사용하여 바이오텍 시너지(BioTek Synergy)™ 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 정량화하였다. 도 3a에 제시된 바와 같이, 50개의 항-SIRPβ1 클론 중에서 48개는 BWZ-huSIRPβ1 리포터 세포에서 배경에 비해 루시페라제 발현을 >5배 유도하였다. 대조적으로, 항-SIRPβ1 항체는 BWZ-huSIRPα 리포터 세포가 항체-코팅된 웰 상으로 첨가된 경우 루시페라제 발현을 유도하는데 실패하였다 (도 3b). 요약하면, 단지 인간 SIRPβ1을 발현하는 리포터 세포만이 발광 신호에 의해 측정 시, 고정화된 항-SIRPβ1 항체의 존재 하에서 루시페라제 발현을 유도하였다. 이들 결과는 막-결합된 항원에 결합할 수 있는 대부분의 항-SIRPβ1 항체가 다른 SIRP 수용체에 대해 교차-반응하지 않으면서 표적 항원에 대한 특이성을 입증함을 확립한다.
실시예 2: 골수 세포 상의 SIRPβ1 발현 프로파일
SIRP 패밀리는 주로 골수 세포 구획 내에서 발현되는 몇몇 막횡단 당단백질을 포함한다. SIRPβ1의 발현 패턴을 건강한 인간 공여자로부터 단리된 1차 인간 세포 상에서 확인하였다. 인간 1차 단핵구를 로세트셉(RosetteSep) 인간 단핵구 풍부화 칵테일 (스템셀 테크놀로지스(STEMCELL Technologies))을 제조업자의 프로토콜에 따라 사용하여 2명의 건강한 공여자로부터 얻은 헤파린화된 인간 말초 혈액 (블러드 센터스 오브 더 퍼시픽(Blood Centers of the Pacific))으로부터 단리하였다. SIRPβ1 및 TREM1 둘 다는 CD14-고 단핵구 상에서 우선적으로 발현된다. 단핵구를 10% 소 태아 혈청 (하이클론(Hyclone)) 및 50 ng/ml M-CSF 또는 GM-CSF (페프로테크(Peprotech))를 함유하는 RPMI (인비트로젠)에 시딩하여 각각 M2-유사 또는 M1-유사 대식세포의 분화를 유도하였다. 5 내지 6일 후, 대식세포를 플라스틱에 부착된 세포를 긁어냄으로써 수확하였다. 대안적으로, 단핵구를 10% 소 태아 혈청 (하이클론) 및 20 ng/ml IL-4 및 GM-CSF (페프로테크)를 함유하는 RPMI 배지에 시딩하여 미성숙한 수지상 세포의 분화를 유도하였다. 6 내지 7일 후, 수지상 세포를 플라스틱에 부착된 세포를 긁어냄으로써 수확하였다.
도 4a에 제시된 바와 같이, CD14 발현은 1차 인간 단핵구의 하위세트를 한정한다. 고전적 및 중간 단핵구는 높은 수준의 CD14를 발현하는 반면, 비-고전적 단핵구는 CD14 발현을 결여한다. TREM1과 같이, SIRPβ1은 CD14+ 단핵구에서 풍부하게 발현된다. 상기 기재된 바와 같이 말초 혈액으로부터 단리된 단핵구를 M-CSF 또는 GM-CSF와 함께 5일 동안 배양하여 각각 M2 또는 M1 대식세포를 생성하였다. SIRPβ1 발현은 1차 단핵구의 대식세포로의 분화 시 감소하며, M1-유사 대식세포는 M2-유사 대식세포에 비해 더 높은 수준의 수용체를 발현한다 (도 4b). 유사하게, SIRPβ1 발현은 1차 단핵구의 미성숙한 수지상 세포로의 분화 시 감소한다. 수지상 세포의 LPS-유도된 성숙은 TREM1에 대해 관찰된 증가된 발현과 대조적으로, SIRPβ1 발현을 추가로 하향조절한다 (도 4c). TREM1과는 달리, LPS 처리는 DC 상의 SIRPβ1 발현을 하향조절한다. SIRPβ1에 대한 피크 발현은 혈액, 비장, 및 폐에서 일어난다. 건강한 공여자로부터 수집된 다수의 조직 샘플로부터의 RNA-seq 데이터 세트로부터 SIRPβ1 발현 패턴을 조사하는 것은 SIRPβ1 전사체 수준이 순환 단핵구 및 호중구에서의 수용체의 높은 발현과 일치하게, 혈액에서 우세함을 확인시켜 준다 (도 5a). 그러나, RNA-seq 데이터는 SIRPβ1 이소형 3 전사체의 발현 패턴이 SIRPβ1 이소형 1의 그것과는 상이함을 밝혀내며; SIRPβ1 이소형 3은 대부분 말초 조직이 아니라 뇌에서 발현된다 (도 5b). (데이터는 유전자형-조직 발현 (GTEx) 컨소시엄 데이터베이스로부터 얻었다).
실시예 3: SIRPβ1 항체는 Syk 인산화를 유도한다
비장 티로신 키나제 (Syk)는 몇몇 기질을 인산화함으로써, 세포 활성화 및 염증 프로세스를 초래하는 신호전달 복합체의 형성을 용이하게 함으로써 SIRPβ1의 하류에서 기능하는 세포내 신호전달 분자이다. Syk 활성화를 유도하는 효능제 SIRPβ1 항체의 능력을 마우스 단핵구를 배양하고, 세포 추출물에서 Syk 단백질의 인산화 상태를 측정함으로써 결정한다. 이들 실험에서, 2차 항체를 사용하여 세포 상의 항-SIRPβ1 항체를 가교시켜 세포내 신호전달을 유도한다.
야생형 (WT) 마우스로부터의, 인간 SIRPβ1 BAC 트랜스제닉 마우스로부터의, 및 기능적 Fc 수용체 공통 감마 쇄 유전자의 발현을 결여한 마우스 (FcgR KO; REF: Takai T 1994. Cell 76(3):519-29)로부터의 골수-유래된 단핵구 (BMDM)를 1% 혈청 RPMI에서 4시간 동안 기아시킨 후, PBS-EDTA를 갖는 조직 배양 디쉬로부터 제거하고, PBS로 세척하고, 카운팅하였다. 세포를 전장 SIRPβ1 항체로 또는 huIgG1 이소타입 대조군으로 얼음 상에서 15분 동안 코팅하였다. 차가운 PBS로 세척한 후, 세포를 37℃에서 지시된 시간의 기간 동안 염소 항-인간 IgG의 존재 하에서 인큐베이션하였다. 자극 후, 세포를 용해 완충제 (1% v/v NP-40%, 50 Mm 트리스(Tris)-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1.5 mM MgCl2, 10% 글리세롤, 플러스 프로테아제 및 포스파타제 억제제)로 용해시키고, 이어서 4℃에서 10분 동안 16,000 g에서 원심분리하여 불용성 물질을 제거하였다. 그 후, 용해물을 항-Syk 항체 (BMDM에 대해 N-19 또는 인간 DC에 대해 4D10, 산타 크루즈 바이오테크놀로지(Santa Cruz Biotechnology))로 면역침전시켰다. 침전된 단백질을 SDS-PAGE에 의해 분획화하고, PVDF 막에 옮기고, 항-포스포티로신 항체 (4G10, 밀리포어(Millipore))로 프로빙하였다. 모든 기질이 적당하게 면역침전된 것을 확인하기 위해, 이뮤노블롯을 항-Syk 항체 (앱캠(Abcam), BMDM에 대해) 또는 항-Syk (노부스 바이올로지컬(Novus Biological), 인간 DC에 대해)로 재프로빙하였다. 가시화를 기재된 바와 같이 (예를 들어, 문헌 [Peng et al., (2010) Sci Signal., 3(122): ra38]), 향상된 화학발광 (ECL) 시스템 (지이 헬스케어(GE healthcare))으로 수행하였다. 이들 연구는 본 발명의 항-SIRPβ1 항체가 syk 인산화를 유도한다는 지지를 제공한다.
실시예 4: SIRPβ1 항체는 Fc 감마 수용체를 발현하는 인접한 세포에 의해 클러스터링되는 경우 Syk 인산화를 유도한다.
비장 티로신 키나제 (Syk)의 활성화는 2종 이상의 SIRPβ1 수용체를 항체와 가교시킴으로써, 세포 활성화 및 염증 프로세스를 초래하는 신호전달 복합체의 형성을 용이하게 함으로써 용이화된다. 생체내 가교는 Fc 수용체 (FcR)를 발현하는 인접한 세포, 예컨대 B 세포 및 다른 백혈구에 의해 매개된다 (White AL Cancer Immunol Immunother (2013) 62:941-948; Wilson NS 2011, Cancer Cell 19, 101-113; Bartholomaeus P J Immunol 2014; 192:2091-2098). 이들 실험에서, Fc 감마 수용체를 발현하는 보조 세포 (즉, B 세포)를 사용하여 항-SIRPβ1 항체를 가교시켜 세포내 신호전달을 유도한다.
항체 클러스터링을 통해 Syk의 활성화를 유도하는 Fc 수용체의 능력을 마우스 단핵구를 Fc 수용체를 발현하는 세포의 존재 하에서 배양하고, 세포 추출물에서 Syk 단백질의 인산화 상태를 측정함으로써 결정하였다. 야생형 (WT) 마우스 및 인간 SIRPβ1 BAC 트랜스제닉 마우스로부터의 골수-유래된 단핵구 (BMDM)를 1% 혈청 RPMI에서 4시간 동안 기아시킨 후, PBS-EDTA를 갖는 조직 배양 디쉬로부터 제거하고, PBS로 세척하고, 카운팅하였다. 세포를 전장 SIRPβ1 항체, 또는 huIgG1 이소타입 대조군으로 얼음 상에서 15분 동안 코팅하였다. 차가운 PBS로 세척한 후, 세포를 Fc 수용체를 발현하는 및 하기와 같이 이전에 제조된 글루타르알데히드-고정된 세포와 함께 37℃에서 5분 동안 인큐베이션하였다. 간략하게, Fc 수용체 발현 세포는 MACS 마이크로비드 (CD19+ B-세포 단리 키트 밀테니 바이오텍)를 제조업자의 프로토콜에 따라 사용하여 마우스 비장으로부터 단리된 B 세포, 또는 대안적으로, FcR2b 및 FcR3을 과다발현하는 P815 세포주이다. 2×106개 세포/ml 세포를 실온에서 1분 동안 0.05% 글루타르알데히드로 고정시키고, 반응을 1μM 글리신으로 정지시킨 후, 세포를 PBS로 광범위하게 세척하였다. 자극 후, 세포를 용해 완충제 (1% v/v NP-40%, 50 Mm 트리스-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1.5 mM MgCl2, 10% 글리세롤, 플러스 프로테아제 및 포스파타제 억제제)로 용해시키고, 이어서 4℃에서 10분 동안 16,000 g에서 원심분리하여 불용성 물질을 제거하였다. 그 후, 용해물을 항-Syk 항체 (BMDM에 대해 N-19 또는 인간 DC에 대해 4D10, 산타 크루즈 바이오테크놀로지)로 면역침전시켰다. 침전된 단백질을 SDS-PAGE에 의해 분획화하고, PVDF 막에 옮기고, 항-포스포티로신 항체 (4G10, 밀리포어)로 프로빙하였다. 모든 기질이 적당하게 면역침전된 것을 확인하기 위해, 이뮤노블롯을 항-Syk 항체 (앱캠, BMDM에 대해) 또는 항-Syk (노부스 바이올로지컬, 인간 DC에 대해)로 재프로빙하였다. 가시화를 기재된 바와 같이 (예를 들어, 문헌 [Peng et al., (2010) Sci Signal., 3(122): ra38]) 향상된 화학발광 (ECL) 시스템 (지이 헬스케어)으로 수행하였다. 이들 연구는 본 발명의 항-SIRPβ1 항체가 Fc 감마 수용체를 발현하는 인접한 세포에 의해 클러스터링되는 경우 syk 인산화를 유도한다는 지지를 제공한다.
실시예 5: SIRPβ1 항체는 면역 세포에서 호흡 폭발을 유도한다
본 개시내용의 SIRPβ1 항체의 효능작용성 기능을 1차 인간 선천 면역 세포 (예를 들어, 단핵구 및 호중구)에서 평가하였다.
항-SIRPβ1 및 이소타입 대조군 항체를 혈청-무함유 RPMI 배지에 희석하고, 100,000개의 호중구와 96-웰 플레이트 상에서 10 μg/ml의 농도로 혼합하였다. 1차 호중구를 동일한 날에 얻어진 말초 혈액으로부터 이지셉(EasySep)™ 직접 인간 호중구 단리 키트 (스템셀)로 제조업자의 지시서에 따라 단리하였다. 반응성 산소 종 (ROS)의 생산을 검출하기 위해, 세포를 2 μM의 형광 염료, CM-H2DCFDA로 표지하였다. 세포를 가용성, 전장 인간 IgG1 이소타입 대조군 또는 항-SIRPβ1 항체 SB-1, -2, -3, -4, -5, -6, -7, -8, -9, -11, -14, -15, -17, -27, -28, -31, -39, -40, -41, -45, -46, 및 -49로 자극시켰다. 37℃에서 CM-H2DCFDA의 존재 하에서 1시간의 항체-매개된 자극 후, 세포에서의 상대 형광 단위를 여기 파장 495 nm 및 방출 파장 530 nm에서 측정하였다. 자극된 세포의 비형광 인덱스를 단독으로 및/또는 이소타입 대조군 항체 (huIgG1)와 함께 배지에서 인큐베이션된 표지된 세포의 배경 형광의 차감에 의해 얻었다. 플레이트를 GEN5™ 2.04 소프트웨어를 사용하여 바이오텍 시너지™ 마이크로플레이트 판독기로 판독하였다.
도 6a에서, 2명의 건강한 공여자로부터의 1차 인간 호중구를 10　μg/mL의 가용성 전장 항-SIRPβ1 항체 또는 인간 IgG1 이소타입 대조군으로 자극시키고, 37℃에서 1시간 동안 2 μM CM-H2DCFDA로 표지하여 SIRPβ1-매개된 ROS 생산을 모니터링하였다. SIRPβ1 항체 SB-1, -2, -3, 및 -5는 용액에서 매우 효능작용성인 것으로 입증되었다. 대조적으로, SIRPβ1 항체 SB-15, -17, -27, -28, -31, -39, -40, -41, -45, -46, 및 -49는 용액에서 SIRPβ1-매개된 호흡 폭발을 약하게 활성화시켰다.
세포를 비처리된 채 방치하거나, 가용성, 전장 인간 IgG1 이소타입 대조군 또는 항-SIRPβ1 항체 SB-1, -2, -3, -4, -5, -6, -7, -8, -9, -11, -12, -13, -14, -15, -17, -23, -26, -27, -28, -31, -33, -34, -35, -36, -37, -39, -40, -41, -45, -46, 및 -49로 자극시켰다. 도 6b에서, 1차 인간 단핵구를 20 μg/mL의 가용성 전장 항-SIRPβ1 항체 또는 인간 IgG1 이소타입 대조군으로 자극시키고, 37℃에서 1시간 동안 2 μM CM-H2DCFDA로 표지하여 SIRPβ1-매개된 ROS 생산 및 IL-8 생산을 모니터링하였다. SIRPβ1 항체 SB-2, -3, -4, -5, -6, -7, -28, 및 -49는 용액에서 매우 효능작용성인 것으로 입증되었다. 대조적으로, SIRPβ1 항체 SB-14, -15, -17, -27, -41, -45, 및 -46은 용액에서 SIRPβ1-매개된 호흡 폭발을 약하게 활성화시켰다. 추가적으로, 1차 단핵구를 37℃에서 밤새 10 μg/mL로 96-웰 플레이트 상으로 흡착된 항-SIRPβ1 항체로 자극시켰다. 이어서 상청액 분획을 수집하고, IL-8 방출에 대해 검정하였다. SIRPβ1 항체 SB-1, -2, -3, -7, -8, -9, -14, 28, 및 -49는 플레이트-결합된 항체로서 매우 효능작용성인 것으로 입증되었다. 대조적으로, SIRPβ1 항체 SB-4, -12, -23, -26, -33, -34, -35, -36, 및 -37은 SIRPβ1-매개된 시토카인 방출을 약하게 활성화시켰다.
실시예 6: SIRPβ1은 대식세포로부터의 염증성 시토카인의 분비를 증가시킨다.
공개된 문헌은 골수-유래된 대식세포 (BMDM) 또는 1차 복막 대식세포 프로세싱이 DAP12에서 결손되는 경우 TLR 반응을 변경시켰음을 기재한다. 본 개시내용의 SIRPβ1 항체가 염증성 시토카인 생산의 변화를 유도하는지 여부를 결정하기 위해, 1차 인간 단핵구-유래된 대식세포 및 수지상 세포를 비-포화 수준의 TLR 자극제와 조합으로 플레이트-결합된 시험 항체와 함께 배양하고, 시토카인의 수준을 24시간 후에 측정한다. 단핵구-유래된 대식세포 및 수지상 세포를 생성하기 위해, 인간 1차 단핵구를 로세트셉 인간 단핵구 풍부화 칵테일 (스템셀 테크놀로지스)을 제조업자의 프로토콜에 따라 사용하여 헤파린화된 인간 혈액 (블러드 센터스 오브 더 퍼시픽)으로부터 단리하였다. 단핵구를 10% 소 태아 혈청 (하이클론) 및 50 ng/ml M-CSF를 함유하는 RPMI (인비트로젠)에 시딩하여 대식세포 분화를 유도하였다. 5 내지 6일 후, 대식세포를 플라스틱에 부착된 세포를 긁어냄으로써 수확하였다. 대안적으로, 단핵구를 10% 소 태아 혈청 (하이클론) 및 20 ng/ml IL-4 및 GM-CSF (페프로테크)를 함유하는 RPMI 배지에 시딩하여 미성숙한 수지상 세포의 분화를 유도하였다. 6 내지 7일 후, 수지상 세포를 플라스틱에 부착된 세포를 긁어냄으로써 수확하였다. 대식세포 또는 수지상 세포를 105개 세포/웰로 지시된 항체로 코팅된 96-웰 플레이트 상에 플레이팅하고, 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 TLR4 효능제, LPS (살모넬라 아보르투스 에쿠이(Salmonella abortus equi))로 공동-자극시켰다.
도 6c에 제시된 바와 같이, 단핵구-유래된 대식세포 및 수지상 세포를 10 μg/mL로 96-웰 플레이트 상으로 흡착된 항-SIRPβ1 항체 (SB-1, -2, -3, -4, -5, -6, -7, -8, -9, -11, -12, -14, -15, -16, -17, -18, -19, -20, -21, -28, -32, -40, 및 -49)의 존재 하에서 0.5 ng/mL LPS로 37℃에서 밤새 자극시켰다. 이어서, 상청액 분획을 수집하고, TNFα 방출에 대해 검정하였다. 음성 대조군으로서, DC를 TNFα 방출을 억제하는 플레이트-결합된 항-SIRPα 항체, SA-56-90의 존재 하에서 LPS로 자극시켰다. 호흡 폭발을 측정하는 모든 실험에서, 반응성 산소 종 (ROS)의 생산을 세포를 2 μM의 형광 지시제, CM-H2DCFDA로 표지함으로써 모니터링하였다. SIRPβ1 항체 SB-1, -2, -6, -8, 및 -49는 플레이트-결합된 항체로서 매우 효능작용성인 것으로 입증되었다. 대조적으로, 대부분의 나머지 SIRPβ1 항체는 SIRPβ1-매개된 시토카인 방출을 약하게 활성화시켰다. 유사하게, 플레이트-결합된 SB-1 및 SB-40 (그러나 SB-32는 그렇지 않음)은 단핵구-유래된 수지상 세포로부터의 LPS-유도된 TNFα 방출을 향상시켰다. 대조적으로, LPS-유도된 TNFα 방출은 플레이트-결합된 항-SIRPα 항체, SA-90으로 자극된 수지상 세포에서 감소되었으며, 이는 효능작용성 항-SIRPβ1 항체는 세포를 활성화시키는 반면, 효능작용성 SIRPα 항체는 세포 활성을 억제함을 확인시켜 준다.
실시예 7: SIRPβ1-자극된 호중구의 항-종양 활성
호중구는 항체- 또는 보체-옵소닌화된 표적 세포에 대한 효율적인 포식세포이지만, 종양 미세환경의 맥락에서, 호중구는 일반적으로 종양 진행, 침습, 및 혈관신생에 기여한다. 그러나, 최근의 간행물은 종양-연관된 호중구가 다른 골수 세포와 같이 항-종양 표현형에 대해 극성화하는 잠재성을 보유함을 시사한다. 호중구는 높은 수준의 SIRPβ1을 발현하기 때문에, 항-SIRPβ1 항체를 시험관내에서 호중구-매개된 종양 세포 청소율을 유도하는 그들의 능력에 대해 평가하였다. 1차 호중구를 동일한 날에 얻어진 건강한 공여자의 말초 혈액으로부터 이지셉™ 직접 인간 호중구 단리 키트 (스템셀)로 제조업자의 지시서에 따라 단리하였다. 그 후, 단리된 인간 호중구를 10 μg/mL 항-SIRPβ1 항체 또는 이소타입 대조군으로 이전에 코팅된 96-웰 플레이트 상으로 첨가하였다. 이어서, 루시페라제를 안정하게 발현하도록 조작된 Raji B 세포 림프종 세포를 옵소닌화 항체 (항-CD20 인간 IgG1)와 함께 또는 없이 호중구와 1:1 비로 혼합하였다. 공동-배양된 세포를 37℃에서 밤새 인큐베이션하고, 생존성 Raji 세포를 원글로 시약 (프로메가)의 첨가 후 루시페라제 활성을 측정하고, 샘플을 실온에서 3분 동안 플레이트 진탕기 상에서 인큐베이션함으로써 정량화하였다. 발광 신호를 GEN5™ 2.04 소프트웨어를 사용하여 바이오텍 시너지™ 마이크로플레이트 판독기로 검출하였다.
도 7에 제시된 바와 같이, 인간 호중구는 고정화된 이소타입 대조군 항체의 존재 하에서 공동-배양되는 경우 Raji 세포를 제거하는데 실패하였다. 항-CD20 huIgG1의 첨가는 비자극된 호중구로의 종양 세포 청소율을 복원하지 않았다. 유사하게, 고정화된 항-SIRPβ1 항체로 자극된 호중구는 Raji 세포를 유의하게 제거하는데 실패하였다. 그러나, SIRPβ1-자극된 호중구는 항-CD20 옵소닌화된 Raji 세포를 청소하였다. 효능작용성 항-SIRPβ1 항체 SB-1, SB-2, SB-3, 및 SB-4는 이소타입 대조군-처리된 호중구에 비해 생존성 Raji 세포로부터의 발광 신호를 ~50% 감소시켰다. 항-SIRPβ1 항체 SB-28 및 SB-49는 옵소닌화된 Raji 세포에 대한 약한 활성을 입증하였다. 이들 결과는 효능작용성 항-SIRPβ1 항체가 호중구의 항-종양 특성을 향상시킴을 시사한다.
실시예 8: 항-SIRPβ1 항체의 친화도 성숙
다양한 물리적 및 기능적 속성을 갖는 5가지 항-SIRPβ1 항체, SB-1, SB-2, SB-8, 및 SB-40 ("모" 항체로 용어화됨)을 친화도-성숙시켰다. 간략하게, 다양화된 항체 라이브러리를 출발 모 항체의 각각에 대해 효모에서 생성하였다. 다양성을 표준 분자 클로닝 기법을 이용하여 모 중쇄 CDR-H3 및 경쇄 (LC)를 중쇄 (HC)의 CDR-H1 및 CDR-H2 영역에서의 기존의 유전적 다양성과 조합함으로써 생성하였다 ("H1/H2" 최적화로 용어화됨). 이는 대략 105개 클론의 크기의 6개의 라이브러리를 발생시켰다: 개선된 친화도를 갖는 항체의 선택을 위한 1:755-768. 라이브러를 스크리닝하는데 사용된 선택 압력은 인간 SIRPα 및 SIRPβ1 항원 평형 적정, 모 항체 Fab 경쟁 동역학, 및 다중특이성 시약 선택해제의 사용을 포함하였다 (예를 들어, WO 2014/179363; 문헌 [Xu et al., Protein Eng Des Sel, 26(10): 663-670]에 기재된 바와 같음). 그 후, FACS 유동 세포계측법을 채용하여, 표준 기법을 사용하여 항체를 가시화하고 선택하였다 (예를 들어, 문헌 [Chao et al. Nature Protocols, 2006;1:755-768] 참조). 그 후, 바람직한 집단을 추가의 선택 라운드 내로 넘겼다. 6 라운드의 풍부화 후, 효모 세포를 단일 항체 단리물을 얻기 위해 플레이팅하고, 이를 그 후 실시예 1에 기재된 바와 같이 생산하고 특징규명하였다. 5가지 출발 모 항체 중 4가지로부터의 17개의 친화도-개선된 항체를 이렇게 얻었다.
항체 IgG 및 Fab 생산 및 정제
효모 클론을 포화까지 성장시킨 후, 30℃에서 48시간 동안 진탕하면서 유도하였다. 유도 후, 효모 세포를 펠릿화하고, 상청액을 정제를 위해 수확하였다.
이뮤노글로불린을 단백질 A 컬럼을 사용하여 정제하고, 아세트산, pH 2.0으로 용리하였다. Fab 단편을 파파인 소화에 의해 생성하고, 캡쳐셀렉트 IgG-CHl 친화도 매트릭스 (라이프테크놀로지스) 상에서 정제하였다.
친화도 결정
항-SIRPβ1 항체의 친화도를 포르테바이오 옥텟® 및 메소 스케일 디스커버리(Meso Scale Discovery) (MSD) 기기에 의해 KD 값을 측정함으로써 결정하였다. 옥텟® 친화도 측정을 일반적으로 이전에 기재된 바와 같이 (Estep et al., MAbs. 2013 Mar-Apr;5(2):270-8), 실온에서 수행하였다. 간략하게, 옥텟® 친화도 측정을 IgG를 온-라인에서 AHQ 센서 상으로 로딩함으로써 수행하였다. 센서를 오프-라인에서 검정 완충제에서 30분 동안 평형화한 후, 온-라인에서 60초 동안 기준선 확립에 대해 모니터링하였다. 아비드 결합 측정을 위해, 로딩된 IgG를 갖는 센서를 100 nM 항원 (인간 SIRPα 또는 SIRPβ1 Fc 융합물)에 3분 동안 노출시킨 후, 오프-레이트 측정을 위해 3분 동안 검정 완충제에 옮겼다. 추가의 아비드 결합을 비오티닐화된 SIRPβ1 단량체를 SA 센서 상에 로딩하고, 용액 중 100 nM IgG에 노출시킴으로써 결정하였다. 1가 결합 측정을 인간 SIRPβ1 Fc 융합 항원을 AHQ 센서에 로딩하고, 이어서 100 nM 항-SIRPβ1 항체 Fab에 노출시킴으로써 얻었다. 추가의 1가 측정을 비오티닐화된 인간 SIRPβ1 단량체를 SA 센서에 로딩하고, 이어서 용액 중 100 nM Fab에 노출시킴으로써 생성하였다. 동역학 데이터를 포르테바이오에 의해 제공된 데이터 분석 소프트웨어에서 1:1 결합 모델을 사용하여 피팅하였다.
MSD-SET KD 측정을 위해, 용액 평형 적정 (SET)을 재조합 인간 SIRPβ1을 갖는 PBS + 0.1% IgG-무함유 BSA (PBSF)에서 수행하고, 100 pM에서 일정하게 유지하고, 대략 50 nM에서 시작하여 항체의 3 내지 5배 계열 희석액과 함께 인큐베이션하였다. 항체 (PBS 중 20 nM)를 표준 결합 MSD-ECL 플레이트 상으로 4℃에서 밤새 또는 실온에서 30분 동안 코팅하였다. 그 후, 플레이트를 1% BSA로 30분 동안 700 rpm에서 진탕하면서 차단하고, 이어서 세척 완충제 (PBSF + 0.05% 트윈(Tween) 20)로 3회 세척하였다. SET 샘플을 적용하고, 플레이트 상에서 150초 동안 700 rpm에서 진탕하면서 인큐베이션하고, 이어서 1회 세척하였다. 플레이트 상에 포획된 항원을 3분 동안 플레이트 상에서의 인큐베이션에 의해 PBSF 중 250 ng/ml 술포태그-표지된 스트렙타비딘으로 검출하였다. 플레이트를 세척 완충제로 3회 세척한 후, 계면활성제를 갖는 lx 판독 완충제 T를 사용하여 MSD 섹터 이미저(Sector Imager) 2400 상에서 판독하였다. 퍼센트 유리 항원을 프리즘(Prism)에서 적정된 항체의 함수로서 플롯팅하고, 2차 방정식에 피팅하여 KD를 추출하였다. 처리량을 개선시키기 위해, 액체 취급 로봇을 SET 샘플 제조를 비롯한 MSD-SET 실험 전반에 걸쳐 사용하였다.
세포 결합 친화도 측정을 4℃에서 인간 SIRPα 또는 SIRPβ1 중 어느 하나를 발현하는 BWZ 리포터 세포를 사용하여 수행하였다. 간략하게, 세포를 수확하고, PBS에서 세척하고, 증가하는 농도의 항-SIRPβ1 항체 또는 이소타입 대조군과 함께 인큐베이션하였다. 항체를 FACS 완충제 (PBS + 2% FBS)에 희석하였다. 얼음 상에서 30분 동안 인큐베이션 후, 세포를 FACS 완충제에서 2회 세척하고, 항-인간 PE 접합된 2차 항체 (비디 바이오사이언시스)와 함께 얼음 상에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 세포를 200ul FACS 완충제에서 2회 세척하고, 이어서 FACS 칸토 스크리닝 기기 (BD) 상에서 분석하였다. 겉보기 KD 값을 비-선형 곡선 피팅 (변형된 원사이트토탈(OneSiteTotal), 그래프 패드 프리즘(Graph Pad Prism))에 의해 결정하였다.
항-SIRPβ1 항체 선택
각각의 모 항체에 비해 개선된 친화도를 나타낸 친화도-성숙된 항-SIRPβ1 항체 클론을 추가로 특징규명하였다. 모든 친화도-성숙된 항체 클론의 초기 스크리닝 후, 각각의 모 항체에 대한 클론을 추가의 분석을 위해 선택하였다.
항체 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열
표준 기법을 사용하여, 친화도 성숙된 항체의 경쇄 가변 및 중쇄 가변 도메인을 코딩하는 아미노산 서열을 결정하였다. 친화도 성숙된 항체의 카바트 경쇄 HVR 서열은 표 8에 제시된다. 항체의 카바트 중쇄 HVR 서열은 표 9에 제시된다. 항체의 카바트 중쇄 프레임워크 (FR) 서열은 표 10에 제시된다. 항체의 카바트 경쇄 프레임워크 (FR) 서열은 표 11에 제시된다.
표 8: 친화도 성숙된 항-SIRPβ1 항체의 카바트 경쇄 HVR 서열
Figure pct00017
(p)는 모 항체 서열을 나타낸다
표 9: 친화도 성숙된 항-SIRPβ1 항체의 카바트 중쇄 HVR 서열
Figure pct00018
(p)는 모 항체 서열을 나타낸다
표 10: 친화도 성숙된 항-SIRPβ1 항체의 카바트 경쇄 FR 서열
Figure pct00019
Figure pct00020
(p)는 모 항체 서열을 나타낸다
표 11: 친화도 성숙된 항-SIRPβ1 항체의 카바트 중쇄 FR 서열
Figure pct00021
Figure pct00022
(p)는 모 항체 서열을 나타낸다
친화도-성숙된 항-SIRPβ1 항체 결합의 특징규명
친화도 성숙된 항-SIRPβ1 항체의 최종 세트를 항원 결합 친화도에 기반하여 선택하였다. 인간 SIRPβ1에의 결합에 대해 양성인 항체를 인간 SIRPα에 대한 교차-반응성에 대해 시험하였다. 각각의 항체의 생화학적 특징은 하기 표 12에 열거된다. 표 12에서, "N.B."는 지시된 항원에의 결합이 없는 항체를 지칭하고; "P.F."는 항원 결합 동역학이 1:1 결합 모델에 대해 불량한 피트를 나타내는 항체를 지칭하고; "N.M."은 측정가능하지 않음을 지칭한다.
표 12: 친화도 성숙된 항-SIRPβ1 항체의 생화학적 특징규명
Figure pct00023
친화도 성숙된 항-SIRPβ1 항체의 후속 특징규명은 인간 또는 마우스 SIRPβ1을 발현하는 세포주에 결합하는 그들의 능력을 결정하는 것을 포함하였다. 세포를 수확하고, 96-웰 플레이트에 106개/ml로 플레이팅하고, 세척하고, 1 μg/ml 항-SIRPβ1 항체를 함유하는 100μl FACS 완충제에서 얼음 상에서 0.5시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 세포를 2회 세척하고, 0.5μg/ml PE-접합된 2차 항체를 함유하는 100ul FACS 완충제에서 얼음 상에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 차가운 FACS 완충제에서 2회 세척하고, BD FACS 칸토 상에서 획득하였다. 데이터 분석 및 평균 형광 강도 (MFI) 값 또는 % 양성 세포의 계산을 플로우조 (트리스타) 소프트웨어 버전 10.0.7로 수행하였다.
표 13은 낮은 수준의 인간 SIRPβ1을 발현하는 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포주에 결합하는 친화도 성숙된 항-SIRPβ1 항체의 평균 형광 강도 (MFI) 값을 제시한다. 인간 IgG1 이소타입 대조군은 1로 설정된 배경 형광 신호를 확립하였다. 시험된 22개의 항-SIRPβ1 항체 클론 중에서, 17개의 클론은 배경에 비해 ≥3배의 MFI로 세포에 결합하였다. 음성 대조군으로서, 항-SIRPβ1 항체를 또한 마우스 SIRPβ1을 과다발현하는 CHO 세포에의 표면 결합에 대해 스크리닝하였다. 예상된 바와 같이, 시험 항체 중 어느 것도 마우스 SIRPβ1에의 유의한 결합을 나타내지 않았으며, 이는 클론이 원래 인간 항원에 결합하기 위해 선택되었기 때문이다. SIRP 패밀리의 수용체 사이의 높은 서열 유사성을 고려하여, 항-SIRPβ1 항체를 또한 인간 SIRPα에 대한 교차-반응성에 대해 스크리닝하였다. 세포 결합 검정에서, 항-SIRPβ1 항체 중 어느 것도 인간 SIRPα를 과다발현하는 세포에 결합하지 않았다.
표 13: 친화도 성숙된 항-SIRPβ1 항체의 세포 결합 특징규명
Figure pct00024
원래 4가지 모 항-SIRPβ1 항체는 SIRPα 교차-반응성을 입증하지 않았지만, 옥텟® 분석은 자손 항체 중 하나 (SB-8-14)가 라이브러리 스크리닝 동안 음성 선택 압력의 적용에도 불구하고 SIRPα에의 아비드 결합을 획득하였음을 밝혀내었다. 상기 표 12를 참조한다. 아비드 결합이 SIRPα-의존성 신호전달을 촉발시키는지를 결정하기 위해, 항-SIRPβ1 항체를 인간 SIRPα 및 SIRPβ1 리포터 세포에서 유전자 발현을 유도하는 능력에 대해 평가하였다. 이전에 기재된 바와 같이, 시험 항체 또는 2가지 항-SIRPα 항체 (클론 SA-90, SA-94)를 10 μg/mL로 96-웰 플레이트 상으로 흡착시켰다. 세척 후, 105개의 BWZ-huSIRPα 또는 BWZ-huSIRPβ1 NFAT-루시페라제 리포터 세포를 웰 상으로 시딩하고, 37℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 루시페라제 활성을 원글로 시약 (프로메가)을 각각의 웰에 첨가하고, 샘플을 실온에서 3분 동안 플레이트 진탕기 상에서 인큐베이션함으로써 정량화하였다. 발광 신호를 GEN5™ 2.04 소프트웨어를 사용하여 바이오텍 시너지™ 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 정량화하였다. 도 8에 제시된 바와 같이, 모 항-SIRPβ1 항체 및 그들의 친화도 개선된 자손 둘 다는 BWZ-huSIRPβ1 리포터 세포에서 루시페라제 발현을 유도하는 능력을 보유하였다. SB-8-14를 비롯한 모든 친화도 성숙된 클론은 BWZ-huSIRPα 리포터 세포를 항체-코팅된 웰 상으로 첨가한 경우 루시페라제 발현을 유의하게 유도하는데 실패하였다 (도 8). 대조적으로, 둘 다의 항-SIRPα 항체 클론은 BWZ-huSIRPα에서 루시페라제 발현을 유도하였지만, BWZ-huSIRPβ1 리포터 세포에서는 그렇지 않았다 (도 8). 이들 결과는 본원에 개시된 친화도 성숙된 자손 항체 중 하나의 가용성 SIRPα에의 아비드 결합에도 불구하고, 시험된 모든 항-SIRPβ1 항체가 막-결합된 SIRPα에 기능적으로 결속하는데 실패하였음을 확립한다. 대신, 항-SIRPβ1 항체는 막-결합된 인간 SIRPβ1에 대한 기능적 특이성을 입증하였다.
실시예 9: 친화도 성숙된 항-SIRPβ1 항체는 수지상 세포로부터의 염증성 시토카인의 분비를 증가시킨다.
친화도 성숙된 항-SIRPβ1 항체가 염증성 시토카인 생산의 변화를 유도하는 능력을 보유하는지 여부를 결정하기 위해, 1차 인간 단핵구-유래된 수지상 세포를 비-포화 수준의 TLR 자극제와 조합으로 플레이트-결합된 시험 항체와 함께 배양하고, 시토카인의 수준을 24시간 후에 측정하였다. 단핵구-유래된 수지상 세포를 생성하기 위해, 인간 1차 단핵구를 로세트셉 인간 단핵구 풍부화 칵테일 (스템셀 테크놀로지스)을 제조업자의 프로토콜에 따라 사용하여 헤파린화된 인간 혈액 (블러드 센터스 오브 더 퍼시픽)으로부터 단리하였다. 단핵구를 10% 소 태아 혈청 (하이클론) 및 20 ng/ml IL-4 및 GM-CSF (페프로테크)를 함유하는 RPMI (인비트로젠)에 시딩하여 미성숙한 수지상 세포의 분화를 유도하였다. 6 내지 7일 후, 수지상 세포를 플라스틱에 부착된 세포를 긁어냄으로써 수확하였다. 수지상 세포를 105개 세포/웰로 지시된 항체로 코팅된 96-웰 플레이트 상에 플레이팅하고, 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 TLR4 효능제, LPS (살모넬라 아보르투스 에쿠이)로 공동-자극시켰다.
도 9에서, 3명의 건강한 공여자로부터의 단핵구-유래된 수지상 세포를 2 μg/mL로 96-웰 플레이트 상으로 흡착된 지시된 친화도 성숙된 항-SIRPβ1 항체의 존재 하에서 0.5 ng/mL LPS로 37℃에서 밤새 자극시켰다. 이어서, 상청액 분획을 수집하고, TNFα 방출에 대해 검정하였다. SIRPβ1 항체 SB-1-3, SB-2-8, 및 SB-8-13은 플레이트-결합된 항체로서 매우 효능작용성인 것으로 입증되었다. 대조적으로, 나머지 SIRPβ1 항체, SB-2-8, SB-8-15, 및 SB-40-20은 SIRPβ1-매개된 시토카인 방출을 약하게 활성화시켰다.
실시예 10: 항-SIRPβ1 항체는 인간 SIRPβ1 이소형 1에 특이적이다
목록화된 다수의 SIRPβ1 이소형 중에서, 이소형 1은 말초에서 주로 발현되는 수용체의 전장 버전이다. SIRPβ1 이소형 1의 서열에 기반한 재조합 항원을 효모 라이브러리 풀로부터 항-SIRPβ1 항체를 선택하는데 사용하였다. 선택된 항-SIRPβ1 항체가 인간 SIRPβ1의 다른 이소형과 또는 시노몰구스 SIRPβ1과 교차-반응하였는지를 확인하기 위해, 인간 SIRPβ1 이소형 3 서열 및 시노몰구스 SIRPβ1 이소형 1 서열에 기반한 재조합 항원을 HEK293 세포에서의 일시적 형질감염에 의해 생산하였다. 정제된, Fc-태그부착된 재조합 단백질을 96-웰 플레이트 상으로 1 μg/mL로 4℃에서 밤새 흡착시켰다. 이어서, 플레이트를 PBS + 0.05% 트윈-20으로 세척하고, 1% BSA + PBS로 실온에서 2시간 동안 차단하였다. 1 μg/mL로 차단 완충제에 희석된 항체를 웰에 첨가하고, 계열 희석하고, 4℃에서 밤새 항원에 결합하게 하였다. 다음 날, 1차 항체를 제거하고, 차단 완충제에 1:10,000 희석된 서양고추냉이 퍼옥시다제에 접합된 항-인간 카파 경쇄 항체를 웰에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 PBS + 0.05% 트윈-20으로 세척하고, 100 μL의 TMB 기질 용액을 웰에 첨가하여 항원에 결합된 항-SIRPβ1 항체의 양에 비례하는 비색 신호를 생성하였다. 반응이 적절한 색상 강도에 도달하였으면, 100 μL의 정지 용액을 첨가하여 효소를 켄칭하였다. 플레이트를 GEN5™ 2.04 소프트웨어를 사용하여 바이오텍 시너지™ 마이크로플레이트 판독기로 판독하였다.
도 10a-10b는 ELISA 데이터에 기반한 지시된 SIRPβ1 항원에 결합된 항-SIRPβ1 항체의 결합 곡선을 제시한다. 8가지 항-SIRPβ1 항체 (4가지 모 항체 및 4가지 상응하는 친화도 성숙된 항체)를 분석을 위해 선택하였다. 이들 결합 곡선으로부터 계산된 EC50 값은 모든 8가지 항-SIRPβ1 항체가 높은 친화도로 인간 SIRPβ1 이소형 1을 인식하였음을 입증하였다. 예를 들어, SB-1 및 SB-1-2에 대한 EC50 값은 각각 0.034 nM 및 0.045 nM이다. SB-2 및 SB-2-7에 대한 EC50 값은 각각 0.032 nM 및 0.029 nM이다. SB-8 및 SB-8-13에 대한 EC50 값은 각각 0.022 nM 및 0.019 nM이다. SB-40 및 SB-40-21에 대한 EC50 값은 각각 0.040 nM 및 0.025 nM이다. 그러나, 시험된 항-SIRPβ1 항체는 인간 SIRPβ1 이소형 3에 대해 또는 시노몰구스 SIRPβ1에 대해 교차-반응하지 않았다. 이들 결과는 스크리닝 및 선택 플랫폼이 인간 SIRPα, 인간 SIRPβ1 이소형 3, 뮤린 SIRPβ1, 또는 시노몰구스 SIRPβ1에 대한 교차-반응성의 증거 없이 인간 SIRPβ1 이소형 1에 대한 매우 특이적인 항체를 생성하였음을 입증한다.
실시예 11: 생체내에서 면역 세포의 동원을 증가시키는데 있어서의 항-SIRPβ1 항체의 효과의 분석
단독으로 또는 LPS와 조합으로 어느 하나의 항체의 복강내 (IP) 투여 후 인간 SIRPβ1 BAC-트랜스제닉 마우스의 복막강 (PEC)에서 염증성 세포 (호중구 과립구, 단핵구, 및 대식세포)의 동원을 조정하는 항-SIRPβ1 항체의 능력을 하기와 같이 평가하였다. 간략하게, 마우스는 먼저 40　mg/kg 항-SIRPβ1 항체 또는 이소타입 대조군 항체 mIgG1 (클론 MOPC-21, 바이옥스셀(Bioxcell))의 IP 주사를 받았다. 14시간 후, 마우스는 4 mg/kg LPS, 또는 대조군으로서 PBS의 IP 주사를 받았다. LPS 또는 PBS 주사 후 6시간에, 세포를 기재된 바와 같이 (예를 들어, 문헌 [Gawish R et al., 2014 FASEB J] 참조) PEC로부터 수확하고, FACS에 의해 분석하였다. FACS 분석을 위해, PEC 세포를 항-CD11b-퍼시픽 블루(Pacific Blue), 항-CD11c PeCy7, 항-MCH-II- APCCy7, 항-Gr1-FITC, 항-Ly6G-PE 및 생존율 다이 (라이프 테크놀로지스, Cat# L34957)와 함께 얼음 상에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, 차가운 FACS 완충제로 2회 세척하였다. 그 후, 4% PFA-고정된 샘플을 획득하였다. 데이터를 BD FACS 칸토 II 세포계측기 (벡톤 디킨슨(Becton Dickinson)) 상에서 획득하고, 플로우조 소프트웨어로 분석하였다. 이들 연구는 본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체가 생체내에서 면역 세포의 동원을 증가시킨다는 지지를 제공한다.
실시예 12: 종양 미세환경에서의 SIRPβ1 발현
3마리의 인간 SIRPβ1 BAC-트랜스제닉 마우스 (암컷, 8주령)의 그룹을 100μl PBS에 현탁된 1x106개의 MC38 또는 CT26 결장 암종 세포, 또는 EMT-6 뮤린 유방 암종 세포로 피하로 챌린지하였다. 동물을 삽입 전에 이소플루란으로 마취시켰다. 종양이 700 내지 1000 mm3의 크기에 도달한 경우, 종양을 외식하여 FACS에 의해 종양 미세환경에서의 SIRPβ1 발현을 분석하였다. 비교로서, 종양 함유 마우스의 비장 또는 나이브 마우스의 대조군 비장을 또한 분석하였다. FACS에 의한 발현 분석을 위해, 종양 및 비장을 1mg/ml 콜라게나제를 함유하는 PBS에서 인큐베이션한 후, 여과된 세포를 통해 프로세싱하여 단일 세포 현탁액을 얻었다. 그 후, 세포를 항-CD45-PerCp-Cy7, 항-CD11b-PerCP-Cy5.5, 항-CD3-PC, 항-Gr1-FITC, 항-NK1.1-PE, 항-SIRPβ1-APC 항체 및 생존율 다이 (라이프 테크놀로지스, Cat# L34957)와 함께 얼음 상에서 30분 동안 인큐베이션한 후, 차가운 FACS 완충제로 2회 세척하였다. 그 후, 4% PFA-고정된 샘플을 획득하였다. 데이터를 BD FACS 칸토 II 세포계측기 (벡톤 디킨슨) 상에서 획득하고, 플로우조 소프트웨어로 분석하였다. 이들 연구는 골수 세포 또는 골수 계통의 세포가 종양 미세환경에서 SIRPβ1을 발현한다는 지지를 제공한다.
실시예 13: 인간 SIRPβ1 BAC 트랜스제닉 마우스에서의 종양 성장의 분석
야생형 (WT, n=11) 및 인간 SIRPβ1 BAC 트랜스제닉 마우스 (SIRPβ1tg, n=14) 마우스 (성별 및 연령-매칭된 한배새끼, 10주령 (+/- 2주))의 그룹을 100 μl PBS에 현탁된 1x106개의 MC38 결장 암종 종양 세포로 피하로 챌린지하였다. 그 후, 마우스를 종양 삽입 전에 이소플루란으로 마취시켰다. 종양 삽입 후, 마우스를 다양한 농도의 본 발명의 항-SIRPβ1 항체로 투여하였다. 종양 성장을 제5일에 시작하여 격주로 캘리퍼스로 모니터링하였다. 실험의 종점은 2000 mm3의 종양 부피 또는 60일이다. 대조군 동물에서 관찰된 것에 비해 종양 성장 또는 종양 크기 (부피, mm3로서 표현됨)를 감소시키는데 대한 항-SIRPβ1 항체 투여의 효과를 결정하였다. 이들 연구는 본 발명의 항-SIRPβ1 항체가 생체내에서 종양 성장을 감소시킨다는 지지를 제공한다.
실시예 14: 항-SIRPβ1 항체는 인간 수지상 세포 (DC) 상의 CD83 및 CD86의 발현을 유도한다
CD83 및 CD86의 발현을 변형시키는 항-SIRPβ1 항체의 능력을 평가하기 위해, 플레이트-결합된 및 가용성 항체 둘 다를 수지상 세포 (DC)와 함께 인큐베이션하고, CD83, CD86, CCR7, 및 인산화된 ERK의 발현을 측정하였다. 항체를 PBS 중 2 또는 10 μg/ml로 12 웰 플레이트에서 4℃에서 밤새 플레이팅하였다. 웰을 다음 날 PBS로 3X 세척하였다. 건강한 공여자의 말초 혈액으로부터 단리된 1차 인간 단핵구를 10% FBS 및 20 ng/mL IL-4 및 GM-CSF로 보충된 RPMI 배지에서 항체 코팅된 웰에 첨가하고, 37℃, 5% CO2에서 5일 동안 인큐베이션하였다. 제5일에, 미성숙한 인간 DC를 수확하고, FACS에 의해 CD86, CD83, CD1a, 및 HLA-DR에 대해, BD FACS 칸토 상에서 분석하였다. 데이터 분석을 플로우조 (트리스타) 소프트웨어 버전 10.0.7로 수행하였다. CD83 및 CD86의 수준을 CD1a+/HLA-/DR+ 세포 집단에 대해 평가하였다. 세포내 ERK 인산화를 위해, 세포를 1% 포름알데히드로 고정시키고, 시토픽스/시토펌 키트 (BD)로 투과화하고, 세포내 Erk 인산화를 PE-ERK 항체 (BD)로의 염색 후에 유동 세포계측법으로 결정하였다. 이들 연구는 본 발명의 항-SIRPβ1 항체가 인간 수지상 세포에서 CD83, CD86 및 CCR7의 발현을 증가시킨다는 지지를 제공한다. 추가적으로, 이들 연구는 본 발명의 항-SIRPβ1 항체가 인간 수지상 세포에서 ERK 인산화를 증가시키거나 유도한다는 지지를 제공한다.
실시예 15: PI3K 경로의 활성화를 지시하는, SIRPβ1, DAP12, SYK, ERK, 및 AKT의 인산화를 유도하는 항-SIRPβ1 및/또는 항-SIRPβ1 이중특이적 항체에 대한 스크리닝
인간 SIRPβ1을 발현하도록 조작된 1차 인간 골수 세포 또는 뮤린 골수 세포주 (J774, RAW 264.7, BMM 세포, 또는 파골세포)를 PBS-EDTA를 갖는 조직 배양 디쉬로부터 제거하고, PBS로 세척하고, 카운팅하였다. J774 (40 × 106개) 또는 RAW 264.7 세포 (10 × 106개 BMM 또는 파골세포)를 항-SIRPβ1 및/또는 항-SIRPβ1 이중특이적 항체 (예컨대 항-SIRPβ1/TREM2 이중특이적 항체)와 함께 또는 이소타입-매칭된 대조군 항체와 함께 1 μg/106개 세포로 얼음 상에서 20분 동안 또는 다른 조건 하에서 인큐베이션하였다. 세포를 빙냉 방사성면역침전 검정 (RIPA) 완충제에 20분 동안 용해시키고, 이어서 4℃에서 10분 동안 16,000 g에서 원심분리하여 불용성 물질을 제거하였다. 생성된 상청액을 지시된 항체 (DAP12, ERK, 또는 AKT) 및 단백질 A- 또는 단백질 G-아가로스 (시그마(Sigma))로 면역침전 반응시켰다. 비드를 RIPA 완충제로 광범위하게 세척하고, 단백질을 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동 (SDS-PAGE)에 의해 분리하였다. 그 후, 단백질을 웨스턴 블롯팅에 의해 니트로셀룰로스 막에 옮기고, 적절한 항체 (DAP12, ERK, 또는 AKT의 인산화된 형태를 특이적으로 인식하는 항체)와 함께 인큐베이션하고, 기재된 바와 같이 (예를 들어, 문헌 [Peng et al., (2010) Sci Signal., 3(122): ra38]), 향상된 화학발광 (ECL) 시스템 (피어스(Pierce))으로 가시화하였다. 이들 연구는 본 발명의 항-SIRPβ1 항체가 SIRPβ1, DAP12, SYK, ERK, 및 AKT의 인산화를 유도한다는 지지를 제공한다. 추가적으로, 이들 연구는 본 발명의 항-SIRPβ1 항체가 PI3K 경로를 활성화시키는데 효과적이라는 지지를 제공한다.
실시예 16: 항-SIRPβ1 항체는 인간 대식세포 상의 TREM2 발현을 상향조절한다
SIRPβ1 및 TREM2는 골수 세포 상에 발현되는 DAP12-연관된 수용체이다. SIRPβ1이 TREM2의 발현을 변형시키는지를 평가하기 위해, 대식세포를 플레이트-결합된 항체 상에서 배양하고, 유동 세포계측법에 의해 TREM2의 세포 표면 수준에 대해 분석하였다.
항체 (SB-1-3, SB-2-8, SB-8-13, SB-8-15, SB-40-20, 및 huIgG1 대조군)를 PBS 중 2 μg/mL로 37℃에서 4시간 동안 96-웰 플레이트 상으로 흡착시켰다. 웰을 PBS로 2회 세척하였다. 5 내지 6일 동안 M-CSF와의 배양으로 분화하는 단핵구-유래된 인간 대식세포를 수확하고, 웰 당 100,000개의 세포로 플레이팅하였다. 대식세포를 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션하였다. TREM2 발현의 FACS 분석을 BD FACS 칸토 II 상에서 수행하고, 데이터 분석을 플로우조 (트리스타) 소프트웨어로 수행하였다.
도 11a에 제시된 바와 같이, 플레이트-결합된 항-SIRPβ1 항체 SB-2-8, SB-8-15, 및 SB-40-20은 3명의 건강한 공여자로부터 얻어진 huIgG1 이소타입 대조군 처리된 대식세포에 비해 TREM2 발현을 대략 2배 증가시켰다. 그러나, 3명의 건강한 공여자 중 2명 (624 및 626)에서, 플레이트-결합된 항-SIRPβ1 항체 SB-1-3 및 SB-8-13은 huIgG1 이소타입 대조군 처리된 대식세포에 비해 TREM2 발현을 단지 부분적으로 증가시켰다. 제3 건강한 공여자 (625)로부터의 대식세포에서, 플레이트-결합된 SB-1-3 및 SB-8-13은 huIgG1 이소타입 대조군에 비해 TREM2 발현을 대략 2배 증가시켰다. 이들 결과를 기반으로, 항-SIRPβ1 항체 SB-2-8, SB-8-15, 및 SB-40-20은 세포 표면 TREM2 발현을 유도하는 효능제로서 기능한다.
실시예 17: 항-SIRPβ1 항체는 인간 대식세포의 생존율을 증가시킨다
문헌에서의 증거는 TREM2가 대식세포/소교세포 생존율을 촉진시킴을 시사한다. SIRPβ1은 DAP12 어댑터 분자와 회합하고, TREM2 발현에 영향을 미칠 수 있기 때문에, 항-SIRPβ1 항체를 인간 대식세포 생존율을 증가시키는 능력에 대해 평가하였다.
항체 (SB-1-3, SB-2-8, SB-8-13, SB-8-15, SB-40-20, 및 huIgG1 대조군)를 PBS 중 2 μg/mL로 37℃에서 4시간 동안 96-웰 플레이트 상으로 흡착시켰다. 웰을 PBS로 2회 세척하였다. 5 내지 6일 동안 M-CSF와의 배양으로 분화하는 단핵구-유래된 인간 대식세포를 수확하고, 세척하여 잔류의 M-CSF를 제거하였다. 대식세포를 10% FBS 및 1% 페니실린/스트렙토마이신으로 보충된 RPMI 성장 배지에 mL 당 500,000개의 세포로 재현탁시켰다. 세포를 등부피의 PBS로 희석하고, 25,000개의 세포를 함유하는 100 μL를 각각의 웰에 첨가하였다. 대식세포를 37℃에서 2일 동안 인큐베이션하였다. 생존율의 분석을 샘플에서 ATP 농도에 대한 발광 신호를 생성하는 시약인 셀 타이터 글로 키트 (프로메가)를 사용하여 수행하였다. 플레이트를 GEN5 2.04 소프트웨어를 사용하여 바이오텍 시너지 마이크로플레이트 판독기로 판독하였다.
도 11b에 제시된 바와 같이, 기준선 발광을 플레이트-결합된, 전장 huIgG1 이소타입 대조군 상에서 배양된 대식세포로 확립하였다. 항체의 부재 하에서 (Ab 없음) 시딩된 대식세포에 비해, 이소타입 대조군으로 대식세포 생존율의 유의한 변화는 없다. 그러나, 플레이트-결합된, 전장 항-SIRPβ1 항체 SB-1-3, SB-8-13, 및 SB-8-15 상에서 배양된 대식세포는 이소타입 대조군 처리된 세포에 비해 생존율의 유의한 증가를 입증하였다. 플레이트-결합된, 전장 항-SIRPβ1 항체 SB-2-8 및 SB-40-20은 이소타입 대조군 처리된 세포에 비해 대식세포 생존율을 증가시키는데 실패하였다.
항-SIRPβ1 항체 사이에 초기에 관찰된 활성의 차이를 고려하여, 후속 검정은 항체 활성이 흡착된 단백질의 농도에 의존하였는지를 결정하였다. 항-SIRPβ1 항체 SB-1-3 및 SB-2-8 또는 인간 IgG1 이소타입 대조군을 PBS 중 10 μg/mL에서 시작하여 37℃에서 4시간 동안 96-웰 플레이트 상으로 코팅하고, 3배 계열 희석하였다. 이전에 기재된 바와 같이, 대식세포를 등부피의 PBS로 희석하고, 25,000개의 세포를 함유하는 100 μL를 각각의 웰에 첨가하였다. 대식세포를 37℃에서 2일 동안 인큐베이션하였다. 생존율의 분석을 셀 타이터 글로 키트 (프로메가)를 사용하여 수행하고, 플레이트를 GEN5 2.04 소프트웨어를 사용하여 바이오텍 시너지 마이크로플레이트 판독기로 판독하였다.
도 12에 제시된 바와 같이, 플레이트-결합된, 전장 항-SIRPβ1 항체 SB-1-3은 이소타입 대조군 처리된 세포에 비해 대식세포 생존율을 용량-의존적 방식으로 증가시켰다. 대조적으로, 플레이트-결합된, 전장 항-SIRPβ1 항체 SB-2-8은 심지어 코팅된 단백질의 높은 농도에서도 대식세포 생존율을 증가시키는데 실패하였다. 따라서, 항-SIRPβ1 항체 SB-1-3, SB-8-13, 및 SB-8-15는 이 검정에서 효능작용성 활성을 입증하였다.
실시예 18: 항-SIRPβ1 및 항-TREM2 항체로의 대식세포의 조합 처리의 상가적 및 상승적 효과
효능작용성 항-TREM2 항체는 가용성 형식으로 세포에 첨가되는 경우 대식세포 생존율을 증가시키는 것으로 나타났다. 생존율 검정을 수행하여 항-SIRPβ1 항체로 대식세포를 공동-자극시키는 것이 항-TREM2 항체의 효능제 활성을 추가로 향상시키는지를 결정하였다.
항-SIRPβ1 항체 SB-1-3 및 SB-2-8 또는 인간 IgG1 이소타입 대조군을 PBS 중 10 μg/mL로 37℃에서 4시간 동안 96-웰 플레이트 상으로 코팅하였다. 이전에 기재된 바와 같이, 대식세포를 등부피의 PBS로 희석하고, 25,000개의 세포를 함유하는 100 μL를 각각의 웰에 첨가하였다. 지시되는 경우, 대식세포를 또한 50 μg/mL의 항-TREM2 항체로 처리하였다. 대식세포를 37℃에서 2일 동안 인큐베이션하였다. 생존율을 분석을 셀 타이터 글로 키트 (프로메가)를 사용하여 수행하고, 플레이트를 GEN5 2.04 소프트웨어를 사용하여 바이오텍 시너지 마이크로플레이트 판독기로 판독하였다.
도 13에 제시된 바와 같이, 효능제 항-TREM2 항체를 인간 IgG1 이소타입 대조군 상에서 배양된 세포에 첨가하는 것은 효능제 항-TREM2 항체의 부재 하에서 배양된 세포에 비해 대식세포 생존율을 유의하게 증가시켰으며, 이는 이 검정의 재현성을 확립한다. 더욱이, 대식세포를 플레이트-결합된, 전장 항-SIRPβ1 항체 SB-1-3 상에서 배양하는 것은 이소타입 처리된 세포에 비해 생존율을 유의하게 증가시킨 반면, 항-SIRPβ1 항체 SB-2-8은 그 활성을 나타내지 않았다 (도 12). 대식세포를 플레이트-결합된 항-SIRPβ1 항체 SB-1-3 및 가용성 효능제 항-TREM2 항체로 공동-자극시키는 것은 대식세포 생존율을 추가로 향상시킴으로써 상가성을 나타낸다. 흥미롭게도, 대식세포를 플레이트-결합된 항-SIRPβ1 항체 SB-2-8 및 가용성 항-TREM2 항체로 공동-자극시키는 것은 대식세포 생존율을 증가시킴으로써 상승적 활성을 나타낸다. 따라서, 항-SIRPβ1 항체는 효능작용성 항-TREM2 항체의 활성을 향상시킨다.
실시예 19: 항-SIRPβ1 항체는 골수-유래된 대식세포의 생존율을 증가시킨다
마우스 골수 세포에서의 인간 항원의 발현을 개괄하는 인간 SIRPβ1 BAC 트랜스제닉 마우스를 생성하였다. 인간 SIRPβ1 트랜스제닉 마우스로부터의 뮤린 골수 세포를 경골 및 대퇴골을 PBS로 플러싱함으로써 얻었다. 골수 세포를 50 ng/mL M-CSF로 보충된 RPMI 배지에서 배양하여 대식세포로 분화시키거나 10 ng/mL GM-CSF로 수지상 세포로 분화시켰다. 항-SIRPβ1 항체를 뮤린 골수 세포 생존율을 증가시키는 그들의 능력에 대해 평가하였다.
항-SIRPβ1 항체 SB-1-3, SB-2-8, 및 SB-8-13 또는 인간 IgG1 이소타입 대조군을 PBS 중 10 μg/mL로 37℃에서 4시간 동안 96-웰 플레이트 상으로 코팅하였다. 대식세포 및 수지상 세포를 등부피의 PBS로 희석하고, 25,000개의 세포를 함유하는 100 μL를 각각의 웰에 첨가하였다. 세포를 37℃에서 2일 동안 인큐베이션하였다. 생존율을 분석을 셀 타이터 글로 키트 (프로메가)를 사용하여 수행하고, 플레이트를 GEN5 2.04 소프트웨어를 사용하여 바이오텍 시너지 마이크로플레이트 판독기로 판독하였다. 도 14a에 제시된 바와 같이, 인간 대식세포와 일치하게, 골수-유래된 대식세포를 플레이트-결합된, 전장 항-SIRPβ1 항체 SB-1-3 및 SB-8-13 상에서 배양하는 것은 이소타입 대조군 처리된 세포에 비해 대식세포 생존율을 향상시켰다. 대조적으로, 항-SIRPβ1 항체 SB-2-8은 대식세포 생존율을 증가시키는데 실패하였다. 도 14b에 제시된 바와 같이, 수지상 세포 (DC)를 플레이트-결합된 항체 상에서 배양한 경우, 모든 항-SIRPβ1 항체는 이소타입 대조군 처리된 세포에 비해 DC 생존율을 증가시켰다. 그러나, 단지 항-SIRPβ1 항체 SB-8-13 처리된 DC만이 비처리된 수지상 세포 (Ab 없음)에 비해 증가된 생존율을 나타내었다. 따라서, 항-SIRPβ1 항체는 인간 SIRPβ1을 발현하는 뮤린 골수 세포로 효능작용성 활성을 나타낸다.
실시예 20: 관련된 SIRP 수용체에 대한 친화도 성숙된 항-SIRPβ1 항체의 교차-반응성
SIRP 패밀리의 단백질의 특징적인 특색은 세포외 도메인에서의 그들의 광범위한 아미노산 서열 보존이다. 예를 들어, SIRPβ1의 세포외 영역은 SIRPα과 ~90% 서열 동일성 및 SIRPγ와 ~77% 서열 동일성을 공유한다. 1종의 SIRP 단백질 패밀리 구성원에 대해 개발된 항체는 종종 다수의 SIRP 수용체 패밀리 구성원과 교차-반응한다.
서열/구조에 있어서의 상동성에도 불구하고, SIRP 수용체는 상이한 기능적 특성 및 발현 패턴을 나타낸다. 예를 들어, SIRPα는 CD47에의 결합 시 면역 억제를 매개하는 세포질 ITIM 모티프를 함유한다. 대조적으로, 세포내 신호전달 모티프를 결여하고, CD47에 결합하지 않는 SIRPβ1은 ITAM-함유 DAP12 어댑터 단백질과 회합하여 활성화 신호를 전파시킨다. SIRPγ는, 골수 세포 상에 주로 발현되는 다른 SIRP 수용체와는 달리, 림프구 및 NK 세포 상에 발현되고, T 세포에의 항원 제시 동안 세포-세포 부착을 안정화시키는 기능을 한다.
본 개시내용의 항-SIRPβ1 항체의 항원 특이성을 결정하기 위해, 세포-기재 친화도 측정을 수행하여 세포 표면-발현된 항원에 대한 친화도-성숙된 항-SIRPβ1 항체의 겉보기 친화도를 확인하였다. 불멸화된 마우스 T-세포주인 BW5147.G.1.4 세포를 인간 SIRPβ1 (BWZ-huSIRPβ1) 또는 인간 SIRPα (BWZ-huSIRPα)를 과다발현하도록 조작하였다. 불멸화된 인간 T 세포주인 Jurkat 세포는 SIRPγ를 내인적으로 발현한다.
이들 실험에서, 이전에 기재된 2가지 항체를 양성 대조군으로서 사용하였다: 항체 18D5 (SIRPα 및 SIRPβ와 교차-반응하는 항-SIRP 항체) 및 항체 KWAR23 (SIRPα, SIRPβ, 및 SIRPγ와 교차-반응하는 항-SIRP 항체). 이들 항체를 인간 IgG4 백본 상에서 재조합적으로 생산하였다. 피코에리트린 (PE) 형광단과 접합된 시판되는 항-SIRPγ 항체 (클론 LSB2.20; 바이오레전드(Biolegend), 샌 디에고)를 사용하여 Jurkat 세포 상의 SIRPγ 발현을 확인하였다. 항-SIRPβ1 모노클로날 항체 및 대조군 항체의 각각의 계열 희석액을 105개의 세포에 첨가하고, 4℃에서 결합 평형을 달성하게 하였다. 형광-표지된 2차 항체의 첨가 및 간단한 세척 단계 후, 적정된 항체 농도의 함수로서의 MFI 값을 FACS 분석을 통해 기록하였다.
하기 표 14에서, EC50 값은 증가하는 농도의 항체 변이체를 SIRPβ1을 과다발현하는 세포에 첨가함으로써 상대 친화도를 할당한다. 수용체 결합된 항체를 세포를 항-인간 IgG PE 2차 항체 (서던 바이오테크)로 염색함으로써 검출하였다. 곡선을 그래프패드 프리즘 6 소프트웨어로 비선형 회귀 분석을 사용하여 피팅하였다. 도 15a에 제시된 바와 같이, 항-SIRPβ1 항체는 별개의 EC50 프로파일로 BWZ-huSIRPβ1 세포에 결합하였다. 항-SIRPβ1 항체 SB1-3은 다른 항-SIRPβ1 항체에 비해, 뿐만 아니라 양성 대조군 항체, 18D5의 그것에 비해 가장 양호한 겉보기 친화도를 나타내었다. 항-SIRPβ1 항체는 SIRPα (도 15b) 또는 SIRPγ (도 15c)를 발현하는 세포에 결합하는데 실패하였으며, 이는 이들 항체가 항원-특이적임을 입증한다.
표 14: BWZ-인간 SIRPβ1 세포에 결합하는 항체의 EC50 값
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SEQUENCE LISTING <110> Alector LLC <120> ANTI-SIRP-BETA1 ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF <130> 01209-0006-00PCT <150> US 62/691,913 <151> 2018-06-29 <160> 388 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 398 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Pro Val Pro Ala Ser Trp Pro His Leu Pro Ser Pro Phe Leu Leu 1 5 10 15 Met Thr Leu Leu Leu Gly Arg Leu Thr Gly Val Ala Gly Glu Asp Glu 20 25 30 Leu Gln Val Ile Gln Pro Glu Lys Ser Val Ser Val Ala Ala Gly Glu 35 40 45 Ser Ala Thr Leu Arg Cys Ala Met Thr Ser Leu Ile Pro Val Gly Pro 50 55 60 Ile Met Trp Phe Arg Gly Ala Gly Ala Gly Arg Glu Leu Ile Tyr Asn 65 70 75 80 Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser Glu Leu Thr 85 90 95 Lys Arg Asn Asn Leu Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn Ile Thr Pro 100 105 110 Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser Pro 115 120 125 Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val Arg 130 135 140 Ala Lys Pro Ser Ala Pro Val Val Ser Gly Pro Ala Val Arg Ala Thr 145 150 155 160 Pro 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sequence <220> <223> Heavy chain HVR sequence <400> 102 Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 103 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy chain HVR sequence <400> 103 Trp Ile Asn Pro Ser Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 104 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy chain HVR sequence <400> 104 Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln 1 5 10 15 Gly <210> 105 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy chain HVR sequence <400> 105 Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 106 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy chain HVR sequence <400> 106 Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 107 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy chain HVR sequence <400> 107 Ser Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn 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219 Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 220 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy chain framework sequence <400> 220 Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys 1 5 10 15 Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 221 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy chain framework sequence <400> 221 Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu 1 5 10 15 Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg 20 25 30 <210> 222 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy chain framework sequence <400> 222 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 223 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy chain framework sequence <400> 223 Trp Gly Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 224 <211> 11 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Gly Met Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 369 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy Chain Variable Region <400> 369 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Ser Ala Ser Gly Arg Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Asp Phe Thr Glu Val Val Gly Trp Leu Gly Met Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 370 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Light Chain Variable Region <400> 370 Glu Val Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser 20 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Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 378 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy Chain Variable Region <400> 378 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Tyr Ser Ile Ser Ala His 20 25 30 Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Ser Ile Phe His Ser Gly His Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Gly Ala Met Thr Pro Ala Gly Met Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 379 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy Chain Variable Region <400> 379 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu 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Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 381 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy Chain Variable Region <400> 381 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Phe 20 25 30 Tyr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Ser Gly His Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Thr Gly Glu Tyr Ser Tyr Ser Pro His Gly Met Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 382 <211> 123 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Heavy Chain Variable Region <400> 382 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Ser Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Thr Gly Glu Tyr Ser Tyr Ser Pro His Gly Met Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 383 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> Light chain HVR sequence <400> 383 Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 384 <211> 398 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 384 Met Pro Val Pro Ala Ser Trp Pro His Leu Pro Ser Pro Phe Leu Leu 1 5 10 15 Met Thr Leu Leu Leu Gly Arg Leu Thr Gly Val Ala Gly Glu Glu Glu 20 25 30 Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Ile Ser Val Ala Ala Gly Glu 35 40 45 Ser Ala Thr Leu His Cys Thr Val Thr Ser Leu Ile Pro Val Gly Pro 50 55 60 Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu Ile Tyr Asn 65 70 75 80 Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser Asp Leu Thr 85 90 95 Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Ser Asn Ile Thr Pro 100 105 110 Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser Pro 115 120 125 Asp His Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val Arg 130 135 140 Ala Lys Pro Ser Ala Pro Val Val Ser Gly Pro Ala Ala Arg Ala Thr 145 150 155 160 Pro Gln His Thr Val Ser Phe Thr Cys Glu Ser His Gly Phe Ser Pro 165 170 175 Arg Asp Ile Thr Leu Lys Trp Phe Lys Asn Gly Asn Glu Leu Ser Asp 180 185 190 Phe Gln Thr Asn Val Asp Pro Ala Gly Asp Ser Val Ser Tyr Ser Ile 195 200 205 His Ser Thr Ala Lys Val Val Leu Thr Arg Glu Asp Val His Ser Gln 210 215 220 Val Ile Cys Glu Val Ala His Val Thr Leu Gln Gly Asp Pro Leu Arg 225 230 235 240 Gly Thr Ala Asn Leu Ser Glu Thr Ile Arg Val Pro Pro Thr Leu Glu 245 250 255 Val Thr Gln Gln Pro Val Arg Ala Glu Asn Gln Val Asn Val Thr Cys 260 265 270 Gln Val Arg Lys Phe Tyr Pro Gln Arg Leu Gln Leu Thr Trp Leu Glu 275 280 285 Asn Gly Asn Val Ser Arg Thr Glu Thr Ala Ser Thr Leu Thr Glu Asn 290 295 300 Lys Asp Gly Thr Tyr Asn Trp Met Ser Trp Leu Leu Val Asn Val Ser 305 310 315 320 Ala His Arg Asp Asp Val Lys Leu Thr Cys Gln Val Glu His Asp Gly 325 330 335 Gln Pro Ala Val Ser Lys Ser His Asp Leu Lys Val Ser Ala His Pro 340 345 350 Lys Glu Gln Gly Ser Asn Thr Ala Pro Gly Pro Ala Leu Ala Ser Ala 355 360 365 Ala Pro Leu Leu Ile Ala Phe Leu Leu Gly Pro Lys Val Leu Leu Val 370 375 380 Val Gly Val Ser Val Ile Tyr Val Tyr Trp Lys Gln Lys Ala 385 390 395 <210> 385 <211> 504 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 385 Met Glu Pro Ala Gly Pro Ala Pro Gly Arg Leu Gly Pro Leu Leu Cys 1 5 10 15 Leu Leu Leu Ala Ala Ser Cys Ala Trp Ser Gly Val Ala Gly Glu Glu 20 25 30 Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala Gly 35 40 45 Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Ile Pro Val Gly 50 55 60 Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu Ile Tyr 65 70 75 80 Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser Asp Leu 85 90 95 Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn Ile Thr 100 105 110 Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly Ser 115 120 125 Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser Val 130 135 140 Arg Ala Lys Pro Ser Ala Pro Val Val Ser Gly Pro Ala Ala Arg Ala 145 150 155 160 Thr Pro Gln His Thr Val Ser Phe Thr Cys Glu Ser His Gly Phe Ser 165 170 175 Pro Arg Asp Ile Thr Leu Lys Trp Phe Lys Asn Gly Asn Glu Leu Ser 180 185 190 Asp Phe Gln Thr Asn Val Asp Pro Val Gly Glu Ser Val Ser Tyr Ser 195 200 205 Ile His Ser Thr Ala Lys Val Val Leu Thr Arg Glu Asp Val His Ser 210 215 220 Gln Val Ile Cys Glu Val Ala His Val Thr Leu Gln Gly Asp Pro Leu 225 230 235 240 Arg Gly Thr Ala Asn Leu Ser Glu Thr Ile Arg Val Pro Pro Thr Leu 245 250 255 Glu Val Thr Gln Gln Pro Val Arg Ala Glu Asn Gln Val Asn Val Thr 260 265 270 Cys Gln Val Arg Lys Phe Tyr Pro Gln Arg Leu Gln Leu Thr Trp Leu 275 280 285 Glu Asn Gly Asn Val Ser Arg Thr Glu Thr Ala Ser Thr Val Thr Glu 290 295 300 Asn Lys Asp Gly Thr Tyr Asn Trp Met Ser Trp Leu Leu Val Asn Val 305 310 315 320 Ser Ala His Arg Asp Asp Val Lys Leu Thr Cys Gln Val Glu His Asp 325 330 335 Gly Gln Pro Ala Val Ser Lys Ser His Asp Leu Lys Val Ser Ala His 340 345 350 Pro Lys Glu Gln Gly Ser Asn Thr Ala Ala Glu Asn Thr Gly Ser Asn 355 360 365 Glu Arg Asn Ile Tyr Ile Val Val Gly Val Val Cys Thr Leu Leu Val 370 375 380 Ala Leu Leu Met Ala Ala Leu Tyr Leu Val Arg Ile Arg Gln Lys Lys 385 390 395 400 Ala Gln Gly Ser Thr Ser Ser Thr Arg Leu His Glu Pro Glu Lys Asn 405 410 415 Ala Arg Glu Ile Thr Gln Asp Thr Asn Asp Ile Thr Tyr Ala Asp Leu 420 425 430 Asn Leu Pro Lys Gly Lys Lys Pro Ala Pro Gln Ala Ala Glu Pro Asn 435 440 445 Asn His Thr Glu Tyr Ala Ser Ile Gln Thr Ser Pro Gln Pro Ala Ser 450 455 460 Glu Asp Thr Leu Thr Tyr Ala Asp Leu Asp Met Val His Leu Asn Arg 465 470 475 480 Thr Pro Lys Gln Pro Ala Pro Lys Pro Glu Pro Ser Phe Ser Glu Tyr 485 490 495 Ala Ser Val Gln Val Pro Arg Lys 500 <210> 386 <211> 397 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 386 Met Leu Leu Leu Asp Ala Trp Thr His Ile Pro His Cys Val Leu Leu 1 5 10 15 Leu Ile Leu Leu Leu Gly Leu Lys Gly Ala Ala Val Arg Glu Leu Lys 20 25 30 Val Ile Gln Pro Val Lys Ser Phe Phe Val Gly Ala Gly Gly Ser Ala 35 40 45 Thr Leu Asn Cys Thr Val Thr Tyr Leu Leu Pro Val Gly Pro Ile Lys 50 55 60 Trp Tyr Arg Gly Val Gly Gln Ser Arg Leu Leu Ile Tyr Pro Phe Thr 65 70 75 80 Gly Glu Tyr Phe Pro Arg Ile Thr Ser Val Ser Asp Val Lys Lys Arg 85 90 95 Ser Asn Leu Asp Phe Ser Ile Arg Ile Ser Asn Val Thr Pro Ala Asp 100 105 110 Ser Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Gln Arg Gly Ser Ser Glu Pro 115 120 125 Asp Ile Glu Ile Gln Ser Gly Gly Gly Thr Glu Leu Ser Val Phe Ala 130 135 140 Lys Pro Ser Ser Pro Met Val Ser Gly Pro Ala Ala Arg Ala Val Pro 145 150 155 160 Gln Gln Thr Val Thr Phe Thr Cys Arg Ser His Gly Phe Phe Pro Gln 165 170 175 Asn Leu Thr Leu Lys Trp Phe Lys Asn Gly Asn Glu Ile Ser His Leu 180 185 190 Glu Thr Ser Val Glu Pro Glu Glu Thr Ser Val Ser Tyr Arg Val Ser 195 200 205 Ser Thr Val Gln Val Val Leu Glu Pro Arg Asp Val Arg Ser Gln Ile 210 215 220 Ile Cys Glu Val Asp His Val Thr Leu Asp Arg Ala Pro Leu Arg Gly 225 230 235 240 Ile Ala His Ile Ser Glu Ile Ile Gln Val Pro Pro Thr Leu Glu Ile 245 250 255 Ser Gln Gln Pro Thr Met Val Trp Asn Val Ile Asn Val Thr Cys Gln 260 265 270 Ile Gln Lys Phe Tyr Pro Arg Arg Phe Gln Val Thr Trp Leu Glu Asn 275 280 285 Gly Asn Ile Ser Arg Arg Glu Val Pro Phe Thr His Ile Val Asn Lys 290 295 300 Asp Gly Thr Tyr Asn Trp Ile Ser Trp Leu Leu Val Asn Ile Ser Ala 305 310 315 320 Leu Glu Glu Asn Met Val Val Thr Cys Gln Val Glu His Asp Gly Gln 325 330 335 Ala Glu Val Ile Glu Thr His Thr Val Val Val Thr Glu His Gln Arg 340 345 350 Val Lys Gly Thr Ser Thr Met Ser Glu Leu Lys Thr Ala Gly Ile Ala 355 360 365 Lys Ile Pro Val Ala Val Leu Leu Gly Ser Lys Ile Leu Leu Leu Ile 370 375 380 Ala Ala Thr Val Ile Tyr Met Arg Lys Lys Gln Asn Ala 385 390 395 <210> 387 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> SIRPalpha domain 1 (IgV domain) <400> 387 Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Val Leu Val Ala Ala 1 5 10 15 Gly Glu Thr Ala Thr Leu Arg Cys Thr Ala Thr Ser Leu Ile Pro Val 20 25 30 Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser Asp 50 55 60 Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Gly Asn Ile 65 70 75 80 Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys Gly 85 90 95 Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu Ser 100 105 110 Val Arg Ala Lys Pro Ser 115 <210> 388 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> SIRPbeta1 domain 1 (IgV domain) <400> 388 Glu Asp Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Glu Lys Ser Val Ser Val Ala 1 5 10 15 Ala Gly Glu Ser Ala Thr Leu Arg Cys Ala Met Thr Ser Leu Ile Pro 20 25 30 Val Gly Pro Ile Met Trp Phe Arg Gly Ala Gly Ala Gly Arg Glu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser 50 55 60 Glu Leu Thr Lys Arg Asn Asn Leu Asp Phe Ser Ile Ser Ile Ser Asn 65 70 75 80 Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys 85 90 95 Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu 100 105 110 Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser 115

Claims (104)

  1. 인간 SIRPβ1에 결합하는 단리된 항체로서, 여기서 항체는 하기로부터 선택되는 적어도 1종, 적어도 2종, 적어도 3종, 적어도 4종, 또는 적어도 5종의 특성을 갖는 것인 단리된 항체:
    a) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 인간 SIRPα에 결합하지 않음;
    b) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 인간 SIRPγ에 결합하지 않음;
    c) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 인간 SIRPβ1 이소형 3에 결합하지 않음;
    d) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 마우스 SIRPβ1에 결합하지 않음;
    e) 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 시노몰구스 원숭이 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지 않음;
    f) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 CD14-양성 단핵구 상의 SIRPβ1 활성을 효능작용함;
    g) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 면역 세포, 예컨대 호중구 및/또는 단핵구에서 호흡 폭발을 유도하거나 증가시킴;
    h) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 단핵구에서 IL-8 발현을 유도하거나 증가시킴;
    i) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포 및/또는 수지상 세포에서 TNFα 발현을 유도하거나 증가시킴;
    j) 시험관내에서 및/또는 생체내에서, 예를 들어, 종양 세포의 호중구-매개된 포식작용을 유도함;
    k) 생체내에서 호중구-매개된 종양 세포 청소율을 증가시킴;
    l) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포 상의 TREM2 발현을 증가시킴;
    m) 단독으로 및/또는 효능제 항-TREM2 항체와 조합으로 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포의 생존율을 증가시킴; 및
    n) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 수지상 세포의 생존율을 증가시킴.
  2. 제1항에 있어서, 항체가 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 인간 SIRPα 또는 인간 SIRPβ1 이소형 3에 결합하지 않거나; 또는 항체가 인간 SIRPβ1 이소형 1에 결합하지만, 인간 SIRPα, SIRPγ, 또는 인간 SIRPβ1 이소형 3에 결합하지 않는 것인 단리된 항체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 항체가 하기로부터 선택되는 적어도 1종, 적어도 2종, 또는 적어도 3종의 특성을 갖는 것인 단리된 항체:
    a) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 CD14-양성 단핵구 상의 SIRPβ1 활성을 효능작용함;
    b) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 면역 세포, 예컨대 호중구 및/또는 단핵구에서의 호흡 폭발을 유도하거나 증가시킴;
    c) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 단핵구에서 IL-8 발현을 유도하거나 증가시킴;
    d) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포 및/또는 수지상 세포에서 TNFα 발현을 유도하거나 증가시킴;
    e) 시험관내에서 및/또는 생체내에서, 예를 들어, 종양 세포의 호중구-매개된 포식작용을 유도함;
    o) 생체내에서 호중구-매개된 종양 세포 청소율을 증가시킴;
    p) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포 상의 TREM2 발현을 증가시킴;
    q) 단독으로 및/또는 효능제 항-TREM2 항체와 조합으로 시험관내에서 및/또는 생체내에서 대식세포의 생존율을 증가시킴; 및
    f) 시험관내에서 및/또는 생체내에서 수지상 세포의 생존율을 증가시킴.
  4. 인간 SIRPβ1에 결합하는 단리된 항체로서, 여기서 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 (a) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 표 4 및/또는 표 9에 제시된 HVR-H3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-L1의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-L2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 표 3 및/또는 표 8에 제시된 HVR-L3의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 것인 항체.
  5. 제4항에 있어서, 중쇄 가변 영역이 표 6에 제시된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4로부터 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 프레임워크 영역을 포함하는 것인 항체.
  6. 제4항 또는 제5항에 있어서, 경쇄 가변 영역이 표 5에 제시된 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4로부터 선택되는 1, 2, 3 또는 4개의 프레임워크 영역을 포함하는 것인 항체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-10, SB-11, SB-12, SB-13, SB-14, SB-15, SB-16, SB-17, SB-18, SB-19, SB-20, SB-21, SB-22, SB-23, SB-24, SB-25, SB-26, SB-27, SB-28, SB-29, SB-30, SB-31, SB-32, SB-33, SB-34, SB-35, SB-36, SB-37, SB-38, SB-39, SB-40, SB-41, SB-42, SB-43, SB-44, SB-45, SB-46, SB-47, SB-48, SB-49, SB-50, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H2, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3 (표 3, 4, 8, 및 9에 제시됨)을 포함하는 것인 항체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 268, 270, 272, 274, 276, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 366, 367, 368, 369, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 또는 382로부터 선택되는 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 268, 270, 272, 274, 276, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 366, 367, 368, 369, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 또는 382로부터 선택되는 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 267, 269, 271, 273, 275, 277, 278, 280, 282, 284, 286, 288, 290, 292, 294, 296, 298, 300, 302, 304, 306, 308, 310, 312, 314, 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 또는 370으로부터 선택되는 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 267, 269, 271, 273, 275, 277, 278, 280, 282, 284, 286, 288, 290, 292, 294, 296, 298, 300, 302, 304, 306, 308, 310, 312, 314, 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 또는 370으로부터 선택되는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-10, SB-11, SB-12, SB-13, SB-14, SB-15, SB-16, SB-17, SB-18, SB-19, SB-20, SB-21, SB-22, SB-23, SB-24, SB-25, SB-26, SB-27, SB-28, SB-29, SB-30, SB-31, SB-32, SB-33, SB-34, SB-35, SB-36, SB-37, SB-38, SB-39, SB-40, SB-41, SB-42, SB-43, SB-44, SB-45, SB-46, SB-47, SB-48, SB-49, SB-50, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역, 및 경쇄 가변 영역과 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-10, SB-11, SB-12, SB-13, SB-14, SB-15, SB-16, SB-17, SB-18, SB-19, SB-20, SB-21, SB-22, SB-23, SB-24, SB-25, SB-26, SB-27, SB-28, SB-29, SB-30, SB-31, SB-32, SB-33, SB-34, SB-35, SB-36, SB-37, SB-38, SB-39, SB-40, SB-41, SB-42, SB-43, SB-44, SB-45, SB-46, SB-47, SB-48, SB-49, SB-50, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  14. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H2, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3 (표 3, 4, 8, 및 9에 제시됨)을 포함하는 것인 항체.
  15. 제14항에 있어서, 항체가 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 항체가 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  17. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 경쇄 가변 영역과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  18. 제14항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  19. 제14항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역, 및 경쇄 가변 영역과 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  20. 제14항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 SB-1, SB-2, SB-3, SB-4, SB-5, SB-6, SB-7, SB-8, SB-9, SB-14, SB-28, SB-39, SB-40, SB-49, SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  21. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 HVR-H1, HVR-H2, HVR-H2, HVR-L1, HVR-L2, 및 HVR-L3 (표 8 및 9에 제시됨)을 포함하는 것인 항체.
  22. 제21항에 있어서, 항체가 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  23. 제21항 또는 제22항에 있어서, 항체가 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 경쇄 가변 영역과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  25. 제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  26. 제21항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역, 및 경쇄 가변 영역과 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  27. 제21항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 SB-1-2, SB-1-3, SB-1-4, SB-1-5, SB-2-7, SB-2-8, SB-2-9, SB-2-10, SB-2-11, SB-8-13, SB-8-14, SB-8-15, SB-8-16, SB-40-18, SB-40-19, SB-40-20, 및 SB-40-21로부터 선택되는 항체의 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  28. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 (a) 서열식별번호: 80, 228, 또는 229의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 101, 239, 239, 240, 또는 241의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 125의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 것인 항체.
  29. 제28항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 366, 367, 368, 또는 369의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  30. 제28항 또는 제29항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 267의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  31. 제28항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 366, 367, 368, 또는 369의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  32. 제28항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 267의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  33. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 (a) 서열식별번호: 81, 99, 230, 231, 또는 232의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 102, 242, 243, 244, 또는 245의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 126 또는 253의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 것인 항체.
  34. 제33항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 371, 372, 373, 374, 또는 375의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 269 또는 370의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  36. 제33항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 371, 372, 373, 374, 또는 375의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  37. 제33항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 269 또는 370의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  38. 제33항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 371, 372, 또는 373의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 370의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는 서열식별번호: 374 또는 375의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 269의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  39. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 (a) 서열식별번호: 85, 233, 또는 234의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 107, 246, 247, 또는 248의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 131 또는 254의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 것인 항체.
  40. 제39항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 376, 377, 또는 378의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  41. 제39항 또는 제40항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 280의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  42. 제39항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 376, 377, 또는 378의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  43. 제39항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 280의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  44. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 (a) 서열식별번호: 97, 235, 236, 또는 237의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 121, 249, 250, 251, 또는 252의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 69의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 것인 항체.
  45. 제44항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 379, 380, 381, 또는 382의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  46. 제44항 또는 제45항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 344의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  47. 제44항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 379, 380, 381, 또는 382의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  48. 제44항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 344의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  49. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 (a) 서열식별번호: 229의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 239의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 125의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 것인 항체.
  50. 제49항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 367의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  51. 제49항 또는 제50항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 267의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  52. 제49항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 367의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  53. 제49항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 267의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  54. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 (a) 서열식별번호: 231의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 243의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 126의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 것인 항체.
  55. 제54항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 372의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  56. 제54항 또는 제55항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 370의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  57. 제54항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 372의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  58. 제54항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 270의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  59. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 (a) 서열식별번호: 233의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1; (b) 서열식별번호: 246의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; (c) 서열식별번호: 131의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3; (d) 서열식별번호: 383의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; (e) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 (f) 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 것인 항체.
  60. 제59항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 376의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  61. 제59항 또는 제60항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 280의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 97%, 또는 적어도 99% 동일한 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  62. 제59항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 376의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  63. 제59항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 서열식별번호: 280의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 항체.
  64. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 모노클로날 항체인 항체.
  65. 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 IgG 부류, IgM 부류, 또는 IgA 부류의 것인 항체.
  66. 제65항에 있어서, 항체가 IgG 부류의 것이고, IgG1, IgG2, 또는 IgG4 이소타입을 갖는 것인 항체.
  67. 제66항에 있어서, 항체가 IgG1 이소타입을 갖는 것인 항체.
  68. 제67항에 있어서, 항체가 EU 넘버링에 따른 E430G 치환 및 P331S 치환을 포함하는 것인 항체.
  69. 제1항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 항체 단편인 항체.
  70. 제69항에 있어서, 단편이 Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2, Fv 또는 scFv 단편인 항체.
  71. 제1항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 0.1 nM 내지 50 nM, 또는 0.5 nM 내지 10 nM, 또는 0.5 nM 내지 5 nM의 인간 SIRPβ1 이소형 1에 대한 친화도 (KD)를 갖는 것인 항체.
  72. 제71항에 있어서, 친화도가 포르테바이오 옥텟(ForteBio Octet)® 시스템을 사용하여 측정되는 것인 항체.
  73. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 제1 및 제2 항원을 인식하고, 제1 항원이 SIRPβ1이고, 제2 항원이 하기인 항체:
    (a) 혈액-뇌-장벽을 가로지르는 수송을 용이하게 하는 항원;
    (b) 트랜스페린 수용체 (TR), 인슐린 수용체 (HIR), 인슐린-유사 성장 인자 수용체 (IGFR), 저밀도 지질단백질 수용체 관련된 단백질 1 및 2 (LPR-1 및 2), 및 디프테리아 독소 수용체로 이루어진 군으로부터 선택되는 혈액-뇌-장벽을 가로지르는 수송을 용이하게 하는 항원;
    (c) 질환-유발 핵산이 안티센스 GGCCCC (G2C4) 반복-확장 RNA이고, 질환-유발 단백질이 아밀로이드 베타, 올리고머성 아밀로이드 베타, 아밀로이드 베타 플라크, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 그의 단편, 타우, IAPP, 알파-시누클레인, TDP-43, FUS 단백질, C9orf72 (염색체 9 오픈 리딩 프레임 72), c9RAN 단백질, 프리온 단백질, PrPSc, 헌팅틴, 칼시토닌, 슈퍼옥시드 디스뮤타제, 아탁신, 아탁신 1, 아탁신 2, 아탁신 3, 아탁신 7, 아탁신 8, 아탁신 10, 루이 소체, 심방 나트륨이뇨 인자, 섬 아밀로이드 폴리펩티드, 인슐린, 아포지질단백질 AI, 혈청 아밀로이드 A, 메딘, 프로락틴, 트랜스티레틴, 리소자임, 베타 2 마이크로글로불린, 겔솔린, 케라토에피텔린, 시스타틴, 이뮤노글로불린 경쇄 AL, S-IBM 단백질, 반복부-연관된 비-ATG (RAN) 번역 산물, 디펩티드 반복 (DPR) 펩티드, 글리신-알라닌 (GA) 반복 펩티드, 글리신-프롤린 (GP) 반복 펩티드, 글리신-아르기닌 (GR) 반복 펩티드, 프롤린-알라닌 (PA) 반복 펩티드, 유비퀴틴, 및 프롤린-아르기닌 (PR) 반복 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 질환-유발 펩티드 또는 단백질 또는 질환-유발 핵산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 질환-유발 작용제;
    (d) 리간드 및/또는 단백질이 CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, PD-L1, CTLA-4, PD-L2, PD-1, B7-H3, B7-H4, HVEM, BTLA, KIR, GAL9, TIM3, A2AR, LAG-3, 및 포스파티딜세린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 면역 세포 상에 발현되는 리간드 및/또는 단백질; 및
    (e) 1종 이상의 종양 세포 상에 발현되는 단백질, 지질, 폴리사카라이드, 또는 당지질.
  74. 인간 SIRPβ1에 결합하는 단리된 항체로서, 여기서 항체는 인간 SIRPβ1 이소형 1에의 결합에 대해 제1항 내지 제73항 중 어느 한 항의 1종 이상의 항체와 경쟁하는 것인 항체.
  75. 인간 SIRPβ1에 결합하는 단리된 항체로서, 여기서 항체는 제1항 내지 제74항 중 어느 한 항의 1종 이상의 항체와 본질적으로 동일하거나 중첩하는 SIRPβ1 이소형 1 에피토프에 결합하는 것인 항체.
  76. 제1항 내지 제75항 중 어느 한 항의 항체를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 단리된 핵산.
  77. 제76항의 핵산을 포함하는 벡터.
  78. 제77항의 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포.
  79. 제1항 내지 제75항 중 어느 한 항의 항체를 발현하는 단리된 숙주 세포.
  80. 인간 SIRPβ1에 결합하는 항체를 생산하는 방법으로서, 제78항 또는 제79항의 세포를 배양하여 항체가 생산되도록 하는 것을 포함하는 방법.
  81. 제80항에 있어서, 세포에 의해 생산된 항체를 회수하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  82. 제1항 내지 제75항 중 어느 한 항의 항체 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
  83. 암을 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제75항 중 어느 한 항의 항체의 치료 유효량을 암의 치료를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  84. 제83항에 있어서, 암이 육종, 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 자궁내막암, 신장암, 신우암, 백혈병, 폐암, 소세포 폐암, 흑색종, 림프종, 췌장암, 전립선암, 난소암, 및 섬유육종, 다형성 교모세포종; 신장 투명 세포 암종; 부신피질 암종; 방광 요로상피 암종, 미만성 대 B-세포 림프종, 폐 선암종; 췌장 선암종, 신세포암, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 무통성 B 세포 림프종, 공격성 B 세포 림프종, T 세포 림프종, 급성 림프모구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 다발성 골수종, 골수이형성 증후군, 골수증식성 신생물, 유방 침습성 암종, 자궁경부 편평 세포 암종, 자궁경관내 선암종, 담관암종, 결장 선암종, 미만성 대 B-세포 림프종, 식도 암종, 두경부 편평 세포 암종, 신장 혐색소성, 신장 유두상 세포 암종, 저등급 신경교종, 간세포 암종, 폐 편평 세포 암종, 중피종, 난소 장액성 낭선암종, 췌장 선암종, 크롬친화세포종 및 부신경절종, 전립선 선암종, 직장 선암종, 피부 흑색종, 위 선암종, 고환 배세포 종양, 갑상선 암종, 흉선종, 자궁 체부 자궁내막 암종, 자궁 암육종, 및 포도막 흑색종으로부터 선택되는 것인 방법.
  85. 제83항 또는 제84항에 있어서, 방법이 PD1, PDL1, CD40, OX40, ICOS, CD28, CD137/4-1BB, CD27, GITR, CTLA4, PD-L2, B7-H3, B7-H4, HVEM, LIGHT, BTLA, CD30, TIGIT, VISTA, KIR, GAL9, TIM1, TIM3, TIM4, A2AR, LAG3, DR-5, CD2, CD5, CD39, 또는 CD73을 억제하거나 효능작용하는 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 것인 방법.
  86. 제83항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 억제성 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체, 및/또는 1종 이상의 표준 또는 임상시험용 항암 요법을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  87. 제86항에 있어서, 방법이 억제성 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체를 항-SIRPA 항체와 조합으로 투여하는 것을 추가로 포함하는 것인 방법.
  88. 제86항 또는 제87항에 있어서, 억제성 체크포인트 분자에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체가 항-PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, 항-PD-L2 항체, 항-PD-1 항체, 항-B7-H3 항체, 항-B7-H4 항체, 및 항-HVEM 항체, 항- B- 및 T-림프구 감쇠자 (BTLA) 항체, 항-킬러 억제성 수용체 (KIR) 항체, 항-GAL9 항체, 항-TIM-1 항체, 항-TIM3 항체, 항-TIM-4 항체, 항-A2AR 항체, 항-CD39 항체, 항-CD73 항체, 항-LAG-3 항체, 항-포스파티딜세린 항체, 항-CD27 항체, 항-CD30 항체, 항-TNFα 항체, 항-CD33 항체, 항-Siglec-5 항체, 항-Siglec-7 항체, 항-Siglec-9 항체, 항-Siglec-11 항체, 길항작용성 항-TREM1 항체, 길항작용성 항-TREM2 항체, 항-TIGIT 항체, 항-VISTA 항체, 항-CD2 항체, 항-CD5 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택되는 것인 방법.
  89. 제86항에 있어서, 1종 이상의 표준 또는 임상시험용 항암 요법이 방사선요법, 세포독성 화학요법, 표적화된 요법, 이마티닙 요법, 트라스투주맙 요법, 에타너셉트 요법, 입양 세포 전달 (ACT) 요법, 키메라 항원 수용체 T 세포 전달 (CAR-T) 요법, 백신 요법, 및 시토카인 요법으로부터 선택되는 것인 방법.
  90. 제83항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, 억제성 시토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체를 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  91. 제90항에 있어서, 억제성 시토카인에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 항체가 항-CCL2 항체, 항-CSF-1 항체, 항-IL-2 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택되는 것인 방법.
  92. 제83항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 자극성 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 효능작용성 항체를 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  93. 제92항에 있어서, 자극성 체크포인트 단백질에 특이적으로 결합하는 적어도 1종의 효능작용성 항체가 효능제 항-CD40 항체, 효능제 항-OX40 항체, 효능제 항-ICOS 항체, 효능제 항-CD28 항체, 효능작용성 항-TREM1 항체, 효능작용성 항-TREM2 항체, 효능제 항-CD137/4-1BB 항체, 효능제 항-CD27 항체, 효능제 항-글루코코르티코이드-유도된 TNFR-관련된 단백질 GITR 항체, 효능제 항-CD30 항체, 효능제 항-BTLA 항체, 효능제 항-HVEM 항체, 효능제 항-CD2 항체, 효능제 항-CD5 항체, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택되는 것인 방법.
  94. 제83항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1종의 자극성 시토카인을 개체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  95. 제94항에 있어서, 적어도 1종의 자극성 시토카인이 IFN-α4, IFN-β, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-8, CRP, IL-20 패밀리 구성원, LIF, IFN-γ, OSM, CNTF, GM-CSF, IL-11, IL-12, IL-15, IL-17, IL-18, IL-23, CXCL10, IL-33, MCP-1, MIP-1-베타, 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택되는 것인 방법.
  96. 의약의 제조를 위한 제1항 내지 제75항 중 어느 한 항의 항체의 용도.
  97. 암을 치료하기 위한 의약의 제조를 위한 제1항 내지 제75항 중 어느 한 항의 항체의 용도.
  98. 제1항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 암을 치료하는데 사용하기 위한 항체.
  99. 신경변성 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제75항 중 어느 한 항의 항체의 치료 유효량을 신경변성 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  100. 제99항에 있어서, 신경변성 질환 또는 장애가 치매, 전두측두엽 치매, 진행성 핵상 마비, 알츠하이머병, 혈관성 치매,　나수-하콜라병,　인지 결함, 기억 소실, 발작, 망막 이영양증, 근위축성 측삭 경화증, 외상성 뇌 손상, 척수 손상, 뇌졸중, 파킨슨병, 급성 파종성 뇌척수염, 망막 변성, 연령 관련된 황반 변성, 녹내장, 다발성 경화증으로부터 선택되는 것인 방법.
  101. 신경변성 질환 또는 장애를 치료하기 위한 의약의 제조를 위한 제1항 내지 제75항 중 어느 한 항의 항체의 용도.
  102. 제101항에 있어서, 신경변성 질환 또는 장애가 치매, 전두측두엽 치매, 진행성 핵상 마비, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 나수-하콜라병,　인지 결함, 기억 소실, 발작, 망막 이영양증, 근위축성 측삭 경화증, 외상성 뇌 손상, 척수 손상, 뇌졸중, 파킨슨병, 급성 파종성 뇌척수염, 망막 변성, 연령 관련된 황반 변성, 녹내장, 다발성 경화증으로부터 선택되는 것인 용도.
  103. 제1항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 신경변성 질환 또는 장애를 치료하는데 사용하기 위한 항체.
  104. 제103항에 있어서, 신경변성 질환 또는 장애가 치매, 전두측두엽 치매, 진행성 핵상 마비, 알츠하이머병, 혈관성 치매, 나수-하콜라병,　인지 결함, 기억 소실, 발작, 망막 이영양증, 근위축성 측삭 경화증, 외상성 뇌 손상, 척수 손상, 뇌졸중, 파킨슨병, 급성 파종성 뇌척수염, 망막 변성, 연령 관련된 황반 변성, 녹내장, 다발성 경화증으로부터 선택되는 것인 항체.
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