KR20240027677A - 항-sirp-알파 항체 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 치료 방법 및 진단 방법을 위한 항-SIRPa (신호 조절 단백질 알파) 항체 및 이의 항원 결합 단편 및 이의 사용 방법 및 이를 사용한 조성물에 관한 것이다.

Description

항-SIRP-알파 항체
서열 목록
본 출원은 ASCII 포맷으로 전자적으로 제출되고 그 전체가 참조로서 본원에 통합된 서열 목록을 포함한다. 2022년 5월 6일에 생성된 상기 ASCII 사본의 명칭은 105218-03-5011-WO_Sequence_Listing.txt이고 크기는 453,000 바이트이다.
관련 출원에 대한 개시
본 출원은 2021년 6월 4일에 출원된 미국 특허 가출원 제63/197,259호, 2022년 3월 31일에 출원된 미국 특허 가출원 제63/325,828호, 및 2022년 5월 6일에 출원된 미국 특허 가출원 제63/339,326호의 이익을 주장하며, 이들 각각은 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다.
기술분야
본 발명은 일반적으로 치료적 및/또는 진단적 사용을 위한 항-SIRPα(신호 조절 단백질 알파) 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 항-SIPRα 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 다양한 질환 또는 장애, 예를 들어 암, 염증성 질환, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 감염성 질환, 또는 섬유증의 치료를 위한 이의 사용 방법에 관한 것이다. 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약학적 조성물 및 키트가 또한 개시된다.
SIRPα는 대식세포, 호중구, 및 수지상 세포의 하위 집합과 같은 골수 세포에서 발현되는 억제 수용체이다. SIRPα는 3개의 Ig 유사 도메인, 1개의 막관통 도메인, 및 2개의 전형적인 면역수용체 티로신 기반 억제 모티프(ITIM)를 형성하는 4개의 티로신 잔기를 갖는 세포질 꼬리를 함유한다. SIRPα에 대한 천연 리간드는 적혈구 및 혈소판을 포함하여 많은 세포에서 발현되는 CD47이다. CD47에 대한 SIRPα의 결합은 SIRPα 세포내 ITIM 도메인에서 티로신 잔기의 인산화로 이어지고, 이어서 세포막에서 SHP-1 및 SHP-2 포스파타아제가 동원되어 활성화되는데, 이는 하류 표적의 탈인산화에 의해, 식균작용 또는 항원 제시를 포함하는 세포 기능을 조절할 수 있다.
효과적인 SIRPα 길항제를 개발하는 것은 CD47 결합 도메인 내의 다형성으로 인해 복잡해진다. 일반 모집단에서 최대 10개의 대립유전자 변이체가 있을 수 있다는 것이 보고된 적이 있고(Takenaka의 문헌[2007; Nat Immunol 2007 Dec;8(12):1313-23. doi: 10.1038/ni1527]), 최근 연구(Treffers의 문헌[2018, Eur J Immunol. 2018 Feb;48(2):344-354. doi: 10.1002/eji.201747215]; [MAbs Aug/Sep 2019;11(6):1036-1052. doi: 10.1080/19420862.2019.1624123])는 2개의 SIRPα 변이체 V1 및 V2가 가장 흔한 대립유전자 군인 동형접합체 V1/V1, 동형접합체 V2/V2, 및 이형접합체 V1/V2를 구성한다는 것을 강조한다. 이들 변이체는 CD47 결합을 담당하는 SIRPα의 N-말단 면역글로불린-유사 도메인 내의 118개 아미노산 잔기 중 13개가 상이하다. 이들 다형성 잔기는 CD47 결합 부위 외부에 위치하고, 따라서 SIRPα 변이체에 대한 CD47 결합의 친화도는 유사하다(Hatherley D의 문헌[2008 Immunity 2008 Nov 14;29(5):675-8. doi: 10.1016/j.immuni.2008.10.004]). 결과적으로, SIRPα 유전자형에 관계없이 다양한 환자 모집단에서 SIRPα를 치료적으로 표적화하기 위해서는 2개의 주요 SIRPα 대립유전자(V1 및 V2)와 교차 반응하는 범-대립유전자 항체가 필요하다.
SIRPα를 표적화할 때 다형성 변이체를 고려하는 것 이외에, 특히 N-말단 도메인에서 서열이 고도로 보존된다는 것을 감안했을 때 SIRPα의 가장 가까운 관계인 SIRPβ1 및 SIRPγ도 고려해야 한다. SIRPβ1 또한, SIRPα와 같이 골수 계통의 세포에서도 주로 발현되지만, SIRPα와는 달리 자체 신호전달 세포질 도메인이 결여되어 있지만, ITAM 함유 어댑터 분자 DAP12와의 안정적인 결합을 가능하게 하는 양으로 하전된 아미노산 잔기를 막관통 영역 내에 보유함으로써 활성화 수용체로서 작용하는 것으로 추정된다. SIRPβ1은 CD47에 결합하지 않으며, 이의 리간드는 식별되지 않았다. SIRPβ1의 적어도 2개의 이소형이 있는데(Liu 등의 문헌[2007 J Mol Biol. 2007 Jan 19;365(3):680-93. doi: 10.1016/j.jmb.2006.09.079]; Brooke 등의 문헌[. 2004 J Immunol. 2004 Aug 15;173(4):2562-70. doi: 10.4049/jimmunol.173.4.2562]), 이들은 SIRP 계열 유전자 클러스터 내에서 유전자의 탠덤 복제를 통해 발생한다. SIRPγ는 T 세포 및 활성화된 NK 세포에서 배타적으로 발현되고, SIRPα:CD47 상호작용보다 10배 낮은 친화도로 CD47에 결합한다. 이는 고유한 신호전달 능력을 갖지는 않지만, T 세포 내피관통 이동(TEM) 및 항원 제시에 있어서 역할을 한다는 보고된 증거가 있다.
상기를 감안하여, SIRPα와 CD47의 상호작용을 차단할 수 있고, 여러 유형의 암, 염증성 질환, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 감염성 질환, 또는 섬유증의 치료가 가능하도록 SIRPη에 대해 선택적인 범-대립유전자 항-SIRPα 항체가 필요하다.
본 발명은 SIRPa, , 특히 인간 SIRPa.에 (예를 들어 특이적으로) 결합하는 제제, 특히 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공함으로써 상기 필요성을 해결한다. 본 발명의 일 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SIRPa 와 CD47 사이의 상호작용을 차단한다. 본 발명의 또 다른 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CD47-매개 SIRPa 신호 전달을 차단한다.
본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 예를 들어 SIRPa 와 CD47 사이의 상호작용을 조절함으로써, 특히 CD47-매개 SIRPa 신호전달을 차단함으로써 완화될 수 있는 질환 또는 장애의 치료 및/또는 예방에 유용하다. 본 발명의 일 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 예를 들어 암, 염증성 질환, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 감염성 질환, 또는 섬유, 바람직하게는 암의 치료에 유용하다.
본 발명은 아래 본원에 기술된 특성 중 하나 이상을 갖는 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SIRPa에, 특히 인간 SIRPa 또는 시노몰구스 원숭이 SIRPa, 에, 더 구체적으로는 인간 SIRPa에 특이적으로 결합한다. 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 SIRPa의 V1 및/또는 V2 대립유전자에 결합한다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SIRPg에, 특히 시노몰구스 원숭이 SIRPg 또는 인간 SIRPg, 에, 더 구체적으로는 인간 SIRPg에 결합하지 않는다(예를 들어 검출 가능한 결합이 없거나, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 1 μM 이상의 KD로 결합함). 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 토끼, 마우스, 랫트, 또는 개 SIRPa에 결합하지 않는다(예를 들어 검출 가능한 결합이 없거나, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 1 μM 이상의 KD로 결합함).
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CD47이 SIRPa에, 특히 인간 SIRPa 또는 시노몰구스 원숭이 SIRPa, 에, 더 구체적으로는 인간 SIRPa에 결합하는 것을 차단한다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CD47이 인간 SIRPa -V1 및 SIRPa-V2에 결합하는 것을 차단한다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CD47-매개 SIRPa 신호전달을 차단한다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 대식세포 및/또는 수지상 세포에 의한 식균작용을 향상시킨다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 종양 표적화제, 특히 종양 표적화 항체와 함께 항체 의존적 세포 식균작용(ADCP)을 향상시킨다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 대식세포 및/또는 수지상 세포에 의한 종양 세포의 식균작용을 향상시킨다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 T 세포 증식의 억제를 차단한다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 유리한 약동학적 특성을 갖는다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 유리한 생물물리학적 특성, 예를 들어 수율, 품질, 안정성, 또는 용해도를 갖는다.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 33의 아미노산 서열(H-CDR1); 서열번호 34의 아미노산 서열(H-CDR2); 및 서열번호 35의 아미노산 서열(H-CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및
서열번호 36 또는 서열번호 37의 아미노산 서열(L-CDR1); 서열번호 38의 아미노산 서열(L-CDR2); 서열번호 39의 아미노산 서열(L-CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역,
또는
b) 서열번호 1 또는 서열번호 223의 아미노산 서열(H-CDR1); 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 또는 서열번호 224의 아미노산 서열(H-CDR2); 및 서열번호 6의 아미노산 서열(H-CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 또는 서열번호 225의 아미노산 서열(L-CDR1); 서열번호 10, 서열번호 11, 또는 서열번호 226의 아미노산 서열(L-CDR2); 서열번호 12 또는 서열번호 227의 아미노산 서열(L-CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역,
또는
c) 서열번호 52의 아미노산 서열(H-CDR1); 서열번호 53의 아미노산 서열(H-CDR2); 및 서열번호 54의 아미노산 서열(H-CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
서열번호 55의 아미노산 서열(L-CDR1); 서열번호 56의 아미노산 서열(L-CDR2); 서열번호 57의 아미노산 서열(L-CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역,
또는
d) 서열번호 33의 아미노산 서열(H-CDR1); 서열번호 70의 아미노산 서열(H-CDR2); 및 서열번호 71의 아미노산 서열(H-CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
서열번호 36의 아미노산 서열(L-CDR1); 서열번호 72의 아미노산 서열(L-CDR2); 서열번호 39의 아미노산 서열(L-CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역,
또는
e) 서열번호 262의 아미노산 서열(H-CDR1); 서열번호 87의 아미노산 서열(H-CDR2); 및 서열번호 88의 아미노산 서열(H-CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
서열번호 36의 아미노산 서열(L-CDR1); 서열번호 72의 아미노산 서열(L-CDR2); 서열번호 89의 아미노산 서열(L-CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 33의 아미노산 서열(H-CDR1); 서열번호 34의 아미노산 서열(H-CDR2); 서열번호 35의 아미노산 서열(H-CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 233의 아미노산 서열로서, 서열 중 아미노산 X1= D 또는 G이고 X2= L 또는 A인 아미노산 서열(L-CDR1); 서열번호 38의 아미노산 서열(L-CDR2); 서열번호 39의 아미노산 서열(L-CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역, 또는
b) 서열번호 228의 아미노산 서열로서, 서열 중 아미노산 X1 = N 또는 D인 아미노산 서열(H-CDR1); 서열번호 229의 아미노산 서열로서, 서열 중 X1=Y 또는 D이고, X2=N 또는 T이고, X3=N 또는 Q이고, X4=S 또는 P인 아미노산 서열(H-CDR2); 서열번호 6의 아미노산 서열(H-CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 230의 아미노산 서열로서, 서열 중 X1=K 또는 R이고, X2= N 또는 T이고, X3=G 또는 A이고, X4=N, A, 또는 T인 아미노산 서열(L-CDR1); 서열번호 231의 아미노산 서열로서, 서열 중 X1=L, Q, 또는 G이고, X2=N 또는 S인 아미노산 서열(L-CDR2); 서열번호 232의 아미노산 서열로서, 서열 중 X1=M 또는 G인 아미노산 서열(L-CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 100, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 또는 117 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 105, 125, 또는 126 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
추가의 양태에서, 본 발명의 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 104, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 221 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 109, 127, 128, 129, 130, 또는 222 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 100, 101, 102, 103, 또는 104 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 105, 106, 107, 108, 또는 109 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
b) 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
c) 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
d) 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
e) 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
f) 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
g) 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
h) 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
i) 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
j) 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
k) 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
l) 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
m) 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
n) 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
o) 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
p) 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역. 　
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
b) 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
c) 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
d) 서열번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
e) 서열번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
f) 서열번호 120의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
g) 서열번호 120의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
h) 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
i) 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
j) 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
k) 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
l) 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
m) 서열번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
n) 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
o) 서열번호 120의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
p) 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
q) 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
r) 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
s) 서열번호 124의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
t) 서열번호 124의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
u) 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
v) 서열번호 124의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
w) 서열번호 221의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 222의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역. 　
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함한다:
a) 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
b) 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
c) 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
d) 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
e) 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역. 　
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체는 서열번호 131, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 148, 149, 150, 151, 또는 152 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 174, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 또는 218 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
추가의 양태에서, 본 발명의 항-SIRPα 항체는 다음을 포함한다:
a) 서열번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
b) 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
c) 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 182의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
d) 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 183의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
e) 서열번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 184의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
f) 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 185의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
g) 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 186의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
h) 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 187의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
i) 서열번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
j) 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 189의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
k) 서열번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 190의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
l) 서열번호 148의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 191의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
m) 서열번호 149의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 192의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
n) 서열번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 193의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
o) 서열번호 151의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 194의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
p) 서열번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 195의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
q) 서열번호 217의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄. 　
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체는 서열번호 135, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 또는 219 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 178, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216 또는 220 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체는 다음을 포함한다:
a) 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
b) 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 196의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
c) 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 197의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
d) 서열번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 198의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
e) 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 199의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
f) 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 200의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
g) 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 201의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
h) 서열번호 159의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 202의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
i) 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
j) 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 204의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
k) 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
l) 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
m) 서열번호 164의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
n) 서열번호 165의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
o) 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 209의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
p) 서열번호 167의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 210의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
q) 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 211의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
r) 서열번호 169의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
s) 서열번호 170의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 213의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
t) 서열번호 171의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 214의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
u) 서열번호 172의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 215의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
v) 서열번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 216의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
w) 서열번호 219의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 220의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄. 　
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체는 서열번호 131, 133, 134, 137, 또는 135 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 174, 176, 177, 180, 또는 178 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체는 다음을 포함한다:
a) 서열번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
b) 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
c) 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 177의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
d) 서열번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
e) 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄. 　
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단클론 항체이다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체는 전장 항체이다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 단편은 인간 단클론 항체, 예를 들어 전장 인간 단클론 항체이다.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 100, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 또는 117의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 105, 125, 또는 126의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 본 발명의 추가 양태에서, 서열번호 100, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 또는 117의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 105, 125, 또는 126의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SIRPa. 에 특이적으로 결합한다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 104, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 221의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 109, 127, 128, 129, 130, 또는 222의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 본 발명의 추가 양태에서, 서열번호 104, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 221 의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 109, 127, 128, 129, 130, 또는 222의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SIRPa. 에 특이적으로 결합한다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 101, 102, 또는 103의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 106, 107, 108의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 　 본 발명의 추가 양태에서, 서열번호 101, 102, 또는 103의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 106, 107, 또는 108의 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SIRPa.에 특이적으로 결합한다.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA, 및 IgE, 예를 들어 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA, 또는 IgE, 보다 구체적으로는 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4로 이루어진 군으로부터 선택된 항체로부터의 중쇄 불변 영역을 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 S241P 치환을 갖는 IgG4인 중쇄 불변 영역을 포함한다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 C-말단 리신 잔기가 결여된 중쇄를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 L234A 및 L235A 치환을 갖는 IgG1인 중쇄 불변 영역을 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 카파 및 람다 경쇄로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 불변 영역을 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 임의로 추가 치료제와 병용 투여된다. 추가 치료제는 화학요법제, 항-PD-1 또는 PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, T 세포 관여자, CD137-작용제-항-FAP 이중특이적 항체, 종양 표적화 항체, VEGF-ANG2 이중특이적 항체, STING 작용제, MDM2 길항제, 또는 방사선 요법일 수 있다.
일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항-PD-1 항체, 예를 들어 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, 에자벤리맙, 또는 아테졸리주맙과 병용 투여된다. 추가의 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 예를 들어 아벨루맙 또는 더발루맙을 포함하는 항-PD-L1 항체와 병용 투여된다.
일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 종양 표적화 항체, 예를 들어 HER2를 표적화하는 항체(예: 트라스투주맙), EGFR을 표적화하는 항체(예: 세툭시맙, 파니투무맙), CD20을 표적화하는 항체(예: 리툭시맙, 오파투무맙), 또는 CD52를 표적화하는 항체(예: 알렘투주맙)와 병용 투여된다.
일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 2개의 치료제와 병용 투여된다. 추가의 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항-PD-1 항체(예: 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, 에자벤리맙, 또는 아테졸리주맙), 또는 항-PD-L1 항체(예: 아벨루맙 또는 더발루맙), 및 종양 표적화 항체, 예를 들어 HER2를 표적화하는 항체(예: 트라스투주맙), EGFR을 표적화하는 항체(예: 세툭시맙, 파니투무맙), CD20을 표적화하는 항체(예: 리툭시맙, 오파투무맙), 또는 CD52을 표적화하는 항체(예: 알렘투주맙)와 병용 투여된다.
본 발명의 일 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 240~252에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SIRPα 단백질 상에서 특이적 선형 또는 입체적 "SIRPα 에피토프"를 인식한다. 　 본 발명의 일 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 253~260 및 264 중 어느 하나, 특히 서열번호 256 및 257 중 어느 하나 또는 그 이상에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SIRPα 단백질 상에서 특이적 선형 또는 입체적 "SIRPα 에피토프"를 인식한다. 본 발명의 일 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음의 아미노산을 포함하는 SIRPα 에피토프에 결합한다: 서열번호 266에 제시된 것과 같은 LEU 60, ILE 61, VAL 63, GLY 64, PRO 65, GLN 82, LYS 83, GLU 84, THR 97, LYS 98, ARG 99, GLU 100, LYS 126, GLY 127, SER 128, PRO 129, 및 ASP 130. 　본 발명의 일 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 265에 제시된 것과 같은 아미노산 LEU 60, ILE 61, VAL 63, GLY 64, PRO 65, GLN 82, LYS 83, GLU 84, THR 97, LYS 98, ARG 99, ASN 100, LYS 126, GLY 127, SER 128, PRO 129, 및 ASP 130을 포함하는 SIRPα 에피토프에 결합한다. 　 본 발명의 또 다른 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 아미노산 ASP130을 포함하는 SIRPα 에피토프에 결합한다. 또 다른 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 253, 서열번호 254, 서열번호 255, 서열번호 264, 및 서열번호 256 중 어느 하나 또는 그 이상, 특히 서열번호 256을 포함하는 SIRPα 에피토프에 결합한다.
본 발명의 일 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 266에 제시된 것과 같은 아미노산 ARG 70, GLY 71, ALA 72, GLY 73, PRO 74, ALA 75, ARG 76, GLU 77, ALA 114, ALA 116, GLY 117, THR 118, TYR 120, THR 131, GLU 132, PHE 133, SER 135, 및 GLU 140을 포함하는 SIRPα 에피토프에 결합한다. 　본 발명의 일 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 265에 제시된 것과 같은 아미노산 ARG 70, GLY 71, ALA 72, GLY 73, PRO 74, GLY 75, ARG 76, GLU 77, ALA 114, ALA 116, GLY 117, THR 118, TYR 120, VAL 132, GLU 133, PHE 134, SER 136, 및 GLU 141을 포함하는 SIRPα 에피토프에 결합한다. 　 본 발명의 또 다른 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 아미노산 ALA72를 포함하는 SIRPα 에피토프에 결합한다. 또 다른 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 257, 서열번호 258, 서열번호 259, 및 서열번호 260 중 어느 하나 또는 그 이상, 특히 서열번호 257을 포함하는 SIRPα에 결합한다. 본 발명의 또 다른 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항체 A~E 중 어느 하나가 SIRPα에 결합하는 것을 차단한다.
또 다른 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 서열번호 268의 SIRPαV1 폴리펩티드에 대한 결합과 비교했을 때, 서열번호 269 또는 270의 변형된 SIRPαV1 폴리펩티드 서열에 대해 유사한 결합(예를 들어 친화도에 있어서 10배 미만 차이)을 나타내며, 이는 임의로 실온에서 측정된다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항체 A, A4, A10, 또는 이들의 항원 결합 단편이다.
또 다른 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 서열번호 268의 SIRPαV1 폴리펩티드에 대한 결합과 비교했을 때, 서열번호 271 또는 272의 변형된 SIRPαV1 폴리펩티드 서열에 대해 감소된 결합 친화도(예를 들어 친화도에 있어서 적어도 10배 감소)를 나타내며, 이는 임의로 실온에서 측정된다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항체 A, A4, A10, 또는 이들의 항원 결합 단편이다.
또 다른 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 서열번호 273의 SIRPαV2 폴리펩티드에 대한 결합과 비교했을 때, 서열번호 274 또는 275의 변형된 SIRPαV2 폴리펩티드 서열에 대해 유사한 결합(예를 들어 친화도에 있어서 10배 미만 차이)을 나타내며, 이는 임의로 실온에서 측정된다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항체 A, A4, A10, 또는 이들의 항원 결합 단편이다.
또 다른 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 서열번호 276의 SIRPβ1 폴리펩티드에 대한 결합과 비교했을 때, 서열번호 277의 변형된 SIRPβ1 폴리펩티드 서열에 대해 감소된 결합 친화도(예를 들어 친화도에 있어서 적어도 10배 감소)를 나타내며, 이는 임의로 실온에서 측정된다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항체 A, A4, A10, 또는 이들의 항원 결합 단편이다.
또 다른 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 279의 변형된 폴리펩티드 서열에 대한 결합을 나타내며, 이는 임의로 실온에서 측정된다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항체 A, A4, A10, 또는 이들의 항원 결합 단편이다.
또 다른 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 282 또는 283의 변형된 폴리펩티드 서열에 대한 결합을 나타내며, 이는 임의로 실온에서 측정된다. 바람직하게는, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항체 A, A4, A10, 또는 이들의 항원 결합 단편이다.
일 양태에서, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 SIRPa V1 및 SIRPaV2에 대한 결합 친화도(KD)에 있어서 SIRPaV1 및 SIRPaV2에 대해 유사한 결합 친화도, 예컨대 10배 미만의 차이(바람직하게는 5배 미만의 차이)를 나타내며, 이는 임의로 실온에서 측정된다.
일 양태에서, 본 발명은 V1-SIRPa 및/또는 V2-SIRPa에 결합하기 위해 본 발명의 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 경쟁하는 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 일 양태에서, 본 발명은 V1-SIRPa 및/또는 V2 SIRPa에 결합하기 위해 서열번호 100, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 또는 117 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 105, 125, 또는 126 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체; 또는 아미노산 서열 131,138,139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 또는 217 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 174, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 218 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체와 경쟁하는 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 　
일 양태에서, 본 발명은 V1-SIRPa 및/또는 V2-SIRPa에 결합하기 위해 본 발명의 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 경쟁하는 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 일 양태에서, 본 발명은 V1-SIRPa 및/또는 V2 SIRPa에 결합하기 위해 서열번호 104, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 221 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 109, 127, 128, 129, 130, 또는 222 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체; 또는 서열번호 135,153, 154, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 또는 219 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 178, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 또는 220 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항체와 경쟁하는 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 전술한 것과 같은 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 및 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하고, 임의로 하나 이상의 (예를 들어 1개 또는 2개의) 추가 치료제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 추가의 구현예에서, 추가 치료제는 화학요법제, 항-PD-1 또는 PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, T 세포 관여자, CD137-작용제-항-FAP 이중특이적 항체, 종양 표적화 항체, VEGF-ANG2 이중특이적 항체, STING 작용제, 또는 MDM2 길항제이다.
일 양태에서, 본 발명은 의약으로서 사용하거나 의약의 제조에 사용하기 위한 전술한 것과 같은 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 SIRPa 경로 장애를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 전술한 것과 같은 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 약학적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 양태에서, 본 발명은 SIRPa 경로 장애를 치료하는 데 사용하기 위한 전술한 것과 같은 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 일 양태에서, 본 발명은 SIRPa 경로 장애를 치료하기 위한 의약의 제조에 사용하기 위한 전술한 것과 같은 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다.
일 양태에서, 본 발명은 대상체(예: 인간)에서 SIRPa와 CD47 간의 상호작용을 조절하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 전술한 것과 같은 항-SIRPa 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 조성물을, 대상체에서 CD47-매개 SIRPa 신호 전달을 차단하기에 충분한 양으로 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 SIRPa와 CD47 간의 상호작용을 조절하는 데 사용하기 위한 전술한 것과 같은 항-SIRPa 항체 또는 항원 결합 단편을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 SIRPa와 CD47 간의 상호작용을 조절하기 위한 의약을 제조함에 있어서 전술한 것과 같은 항-SIRPa 항체 또는 항원 결합 단편의 용도를 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 식균작용을 향상시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 전술한 것과 같은 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 조성물을, CD47-매개 SIRPa 신호전달을 차단하기에 충반한 양으로 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 대식세포 및/또는 수지상 세포에 의한 식균작용을 향상시키는 데 사용하기 위한 전술한 것과 같은 항-SIRPa 항체 또는 항원 결합 단편을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 대식세포 및/또는 수지상 세포에 의한 종양 세포의 식균작용을 향상시키는 데 사용하기 위한 전술한 것과 같은 항-SIRPa 항체 또는 항원 결합 단편을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 대상체를 위한 의약을 제조함에 있어서 전술한 것과 같은 SIRPa 항체 또는 항원 결합 단편의 용도를 제공한다. 본 발명의 일 양태에서, 본 발명은 종양 표적화제, 바람직하게는 종양 표적화 항체와 함께 항체 의존적 세포 식균작용(ADCP)을 향상시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 전술한 것과 같은 항-SIRPa 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 조성물을, CD47-매개 SIRPa 신호전달을 차단하기에 충분한 양으로, 종양 표적화제, 바람직하게는 종양 표적화 항체, 더 바람직하게는 HER2를 표적화하는 종양 표적화 항체(예: 트라스투주맙), EGFR을 표적화하는 종양 표적화 항체(예: 세툭시맙, 파니투무맙), CD20을 표적화하는 종양 표적화 항체(예: 리툭시맙, 오파투무맙), CD52를 표적화하는 종양 표적화 항체(예: 알렘투주맙)와 병용으로 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일 구현예에서, 전술한 방법에 있어서, 전술한 용도를 위한 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서, 또는 전술한 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도에 있어서, 질환은 암, 염증성 질환, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 감염성 질환, 또는 섬유증으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 구현예에서, 전술한 방법에 있어서, 전술한 용도를 위한 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 있어서, 또는 전술한 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 비경구 투여 경로, 정맥내 투여 경로, 또는 피하 투여 경로에 의해 투여된다.
일 구현예에서, 본 발명은 전술한 것과 같은 중쇄 가변 영역 아미노 및/또는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 전술한 것과 같은 중쇄 및/또는 경쇄를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 서열번호 100, 101, 102, 103, 104, 105, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 104, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 221 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 서열번호 105, 106, 107, 108, 109, 125, 126, 109, 127, 128, 129, 130, 또는 222 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 걍쇄 가변 영역을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 서열번호 100, 101, 102, 103, 104, 105, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 104, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 221 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드; 및 서열번호 105, 106, 107, 108, 109, 125, 126, 109, 127, 128, 129, 130, 또는 222 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 서열번호 131,138,139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 217, 135,153, 154, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 219, 133, 134, 137, 132, 또는 136 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 영역을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 서열번호 174, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 218, 178, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 220, 176, 177, 180, 175, 또는 179 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 영역을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 서열번호 131,138,139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 217, 135,153, 154, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 219, 133, 134, 137, 132, 또는 136 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 영역을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드; 및 서열번호 174, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 218, 178, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 220, 176, 177, 180, 175, 또는 179 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 영역을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 전술한 것과 같은 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 서열번호 100, 101, 102, 103, 104, 105, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 104, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 221 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 서열번호 105, 106, 107, 108, 109, 125, 126, 109, 127, 128, 129, 130, 또는 222 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 걍쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 서열번호 100, 101, 102, 103, 104, 105, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 104, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 221 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드; 및 서열번호 105, 106, 107, 108, 109, 125, 126, 109, 127, 128, 129, 130, 또는 222 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 서열번호 131,138,139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 217, 135,153, 154, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 219, 133, 134, 137, 132, 또는 136 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 서열번호 174, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 218, 178, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 220, 176, 177, 180, 175, 또는 179 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 서열번호 131,138,139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 217, 135,153, 154, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 219, 133, 134, 137, 132, 또는 136 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드; 및 서열번호 174, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 218, 178, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 220, 176, 177, 180, 175, 또는 179 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 전술한 것과 같은 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 일 구현예에서, 숙주 세포는 포유류 세포이다.
일 구현예에서, 본 발명은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 다음의 단계를 포함한다:
- 전술한 것과 같은 중쇄 가변 영역을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터 및 전술한 것과 같은 경쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 둘 다를 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 형성될 수 있는 조건 하에서 배양하는 단계, 및
- 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 회수하는 단계.
일 구현예에서, 본 발명은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 다음의 단계를 포함한다:
- 전술한 것과 같은 중쇄를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터 및 전술한 것과 같은 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 둘 다를 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 형성될 수 있는 조건 하에서 배양하는 단계; 및
- 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 회수하는 단계.
일 구현예에서, 상기 방법은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 정제하는 단계를 추가로 포함한다. 일 구현예에서, 상기 방법은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 약학적 조성물로 제형화하는 단계를 추가로 포함한다. 또한, 본원에 개시된 것과 같은 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약학적 제형이 본원에 제공된다.
발명의 내용 뿐만 아니라 다음의 본 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용은 첨부된 도면과 함께 읽었을 때 더 잘 이해된다. 개시된 조성물, 방법, 및 키트를 예시하기 위해, 도면에는 방법 및 키트의 예시적인 구현예가 도시되어 있지만, 이들은 개시된 특정 구현예로 한정되어서는 않는다.
도 1a~1c는 CHO 세포에서 발현된 전장 인간 V1-SIRPα 또는 V2-SIRPα에 대한 항체의 결합을 도시한 일련의 그래프이다. 도 1a. CHO 부모 세포에 대한 항체 결합 도 1b. 전장 인간 SIRPαV1(NP_542970.1)을 발현하는 CHO 세포에 대한 항체 결합. 도 1c. 전장 인간 SIRPαV2-발현 CHO 세포(CAA71403.1)를 발현하는 CHO 세포에 대한 항체 결합.
도 2a~2b는 인간 단핵구 세포주에서 발현된 내인성 인간 V1-SIRPα 또는 V2-SIRPα에 대한 항체의 결합을 도시하는 일련의 그래프이다. 도 2a. U-937 인간 단핵구 세포주에 대한 항체 결합. 도 2b. THP-1 인간 단핵구 세포주에 대한 항체 결합.
도 3a~3d는 일차 인간 단핵구에서 발현된 내인성 인간 V1-SIRPα 및/또는 V2-SIRPα에 대한 항체의 결합을 도시하는 일련의 그래프이다. V1-SIRPα 대립유전자에 대해 동형접합성인 공여자 유래의 일차 인간 CD14+ 단핵구에 대한 항체 결합(도 3a~3d). 실선, 파선, 및 점선은 hIgG1(LALA), hIgG4P, 및 hIgG1(K322A) 백본 상에서 조작된 항체 분자를 각각 나타낸다.
도 4a~4d는 일차 인간 단핵구에서 발현된 내인성 인간 V1-SIRPα 및/또는 V2-SIRPα에 대한 항체의 결합을 도시하는 일련의 그래프이다. V1- 및 V2-SIRPα 대립유전자에 대해 이형접합성인 공여자 유래의 일차 인간 CD14+ 단핵구에 대한 항체 결합(도 4a~4d). 실선, 파선, 및 점선은 hIgG1(LALA), hIgG4P, 및 hIgG1(K322A) 백본 상에서 조작된 항체 분자를 각각 나타낸다.
도 5a~5d는 일차 인간 단핵구에서 발현된 내인성 인간 V1-SIRPα 및/또는 V2-SIRPα에 대한 항체의 결합을 도시하는 일련의 그래프이다. V2-SIRPα 대립유전자에 대해 동형접합성인 공여자 유래의 일차 인간 CD14+ 단핵구에 대한 항체 결합(도 5a~5d). 실선, 파선, 및 점선은 hIgG1(LALA), hIgG4P, 및 hIgG1(K322A) 백본 상에서 조작된 항체 분자를 각각 나타낸다.
도 6a~6d는 U973SIRPα KO 세포에서 발현된 전장 인간 SIRPβ1에 대한 항체의 결합을 도시한 일련의 그래프이다. 전장 인간 SIRPβ1(NP_006056.2)을 발현하는 U937SIRPα KO 세포에 대한 항체 결합(도 6a~6d). 실선, 파선, 및 점선은 hIgG1(LALA), hIgG4P, 및 hIgG1(K322A) 백본 상에서 조작된 항체 분자를 각각 나타낸다.
도 7a~7d는 U973SIRPα KO 세포에서 발현된 전장 인간 SIRPβ1에 대한 항체의 결합을 도시한 일련의 그래프이다. 전장 인간 SIRPβL(NP_001129316.1)을 발현하는 U937SIRPα KO 세포에 대한 항체 결합(도 7a~7d). 실선, 파선, 및 점선은 hIgG1(LALA), hIgG4P, 및 hIgG1(K322A) 백본 상에서 조작된 항체 분자를 각각 나타낸다.
도 8은 재조합 SIRPγ 단백질에 대한 항체의 결합을 도시한 그래프이다. 고정된 재조합 His-태그된 인간 SIRPγ 세포외 도메인(NP_061026.2)에 대한 항체 결합.
도 9는 CHO 세포에서 발현된 전장 인간 SIRPγ에 대한 항체의 결합을 도시한 그래프이다. 전장 인간 SIRPγ(NP_061026.2)를 발현하는 CHO 세포에 대한 항체 결합.
도 10a~10d는 일차 인간 CD3+ T 세포에 대한 항체의 결합을 도시한 일련의 그래프이다. 일차 인간 CD3+ T 세포에 대한 항체 결합(도 10a~10d). 실선, 파선, 및 점선은 hIgG1(LALA), hIgG4P, 및 hIgG1(K322A) 백본 상에서 조작된 항체 분자를 각각 나타낸다.
도 11a~11b는 인간 SIRPα에 대한 인간 CD47의 결합을 차단하는 것을 도시한 일련의 그래프이다. A. 항체는 전장 인간 SIRPαV1(NP_542970.1)을 발현하는 CHO 세포에 대한 인간 CD47의 결합을 차단한다. B. 항체는 전장 인간 SIRPαV2(CAA71403.1)를 발현하는 CHO 세포에 대한 인간 CD47의 결합을 차단한다.
도 12a~12b는 일차 세포에서 발현된 SIRPα에 대한 인간 CD47의 결합을 차단하는 것을 도시한 일련의 그래프이다. 항체는 V1에 대해 동형접합성인 공여자 유래의 일차 인간 CD14+ 단핵구에 대한 인간 CD47의 결합을 차단한다(도 12a~12d). 실선, 파선, 및 점선은 hIgG1(LALA), hIgG4P, 및 hIgG1(K322A) 백본 상에서 조작된 항체 분자를 각각 나타낸다.
도 13a~13b는 일차 세포에서 발현된 SIRPα에 대한 인간 CD47의 결합을 차단하는 것을 도시한 일련의 그래프이다. 항체는 V1- 및 V2-SIRPα 대립유전자에 대해 이형접합성인 공여자 유래의 일차 인간 CD14+ 단핵구에 대한 인간 CD47의 결합을 차단한다. 실선, 파선, 및 점선은 hIgG1(LALA), hIgG4P, 및 hIgG1(K322A) 백본 상에서 조작된 항체 분자를 각각 나타낸다.
도 14a~14b는 일차 세포에서 발현된 SIRPα에 대한 인간 CD47의 결합을 차단하는 것을 도시한 일련의 그래프이다. 항체는 V2에 대립유전자에 대해 동형접합성인 공여자 유래의 일차 인간 CD14+ 단핵구에 대한 인간 CD47의 결합을 차단한다. 실선, 파선, 및 점선은 hIgG1(LALA), hIgG4P, 및 hIgG1(K322A) 백본 상에서 조작된 항체 분자를 각각 나타낸다.
도 15a~15d는 세포 CD47-매개 SIRPα 활성화가 항-SIRPα 항체에 의해 차단됨을 보여주는 일련의 그래프이다. 항체는 세포 CD47-매개 V1-SIRPα 신호전달을 투여량 의존적으로 차단한다(도 15a~15d). 실선, 파선, 및 점선은 hIgG1(LALA), hIgG4P, 및 hIgG1(K322A) 백본 상에서 조작된 항체 분자를 각각 나타낸다.
도 16a~16d는 세포 CD47-매개 SIRPα 활성화가 항-SIRPα 항체에 의해 차단됨을 보여주는 일련의 그래프이다. 항체는 세포 CD47-매개 V2-SIRPα 신호전달을 투여량 의존적으로 차단한다(도 16a~16d). 실선, 파선, 및 점선은 hIgG1(LALA), hIgG4P, 및 hIgG1(K322A) 백본 상에서 조작된 항체 분자를 각각 나타낸다.
도 17a~17b는 인간 단핵구 세포주에 의한 CD47-매개 식균작용의 억제가 항-SIRPα 항체에 의해 복구될 수 있음을 보여주는 일련의 히스토그램이다. 항-SIRPα 항체는 CD47-코팅된 비드를 식균하는 V1-SIRPα 발현 U937SIRPα KO 세포(도 17a) 및 V1-SIRPα 발현 U937SIRPα KO 세포(도 17b)의 능력을 복구한다.
도 18a~18c는 항-SIRPα 항체가, V1-SIRPα 대립유전자에 대해 동형접합성인 공여자 유래의 일차 인간 대식세포에 의한 CD47-매개 식균작용 억제를 복구한다는 것을 입증하는 일련의 히스토그램 및 그래프이다. 도 18a. SIRPα 길항제는 옵소닌화된 CD47-코팅된 비드를 식균하는 단핵구 유래 대식세포의 능력을 복구한다. 도 18b. SIRPα 길항제는 옵소닌화되지 않은 CD47-코팅된 비드를 식균하는 단핵구 유래 대식세포의 능력을 향상시킨다. 도 18c. SIRPα 길항제는 옵소닌화된 CD47-코팅된 비드를 식균하는 단핵구 유래 대식세포의 능력을 투여량 의존적으로 복구한다.
도 19a~19c는 항-SIRPα 항체가, V1- 및 V2-SIRPα 대립유전자에 대해 이형접합성인 공여자 유래의 일차 인간 대식세포에 의한 CD47-매개 식균작용 억제를 복구한다는 것을 입증하는 일련의 히스토그램 및 그래프이다. 도 19a. SIRPα 길항제는 옵소닌화된 CD47-코팅된 비드를 식균하는 단핵구 유래 대식세포의 능력을 복구한다. 도 19b. SIRPα 길항제는 옵소닌화되지 않은 CD47-코팅된 비드를 식균하는 단핵구 유래 대식세포의 능력을 복구한다. 도 19c. SIRPα 길항제는 옵소닌화된 CD47-코팅된 비드를 식균하는 단핵구 유래 대식세포의 능력을 투여량 의존적으로 복구한다.
도 20a~20c는 항-SIRPα 항체가, V2-SIRPα 대립유전자에 대해 동형접합성인 공여자 유래의 일차 인간 대식세포에 의한 CD47-매개 식균작용 억제를 복구한다는 것을 입증하는 일련의 히스토그램 및 그래프이다. 도 20a. SIRPα 길항제는 옵소닌화된 CD47-코팅된 비드를 식균하는 단핵구 유래 대식세포의 능력을 복구한다. 도 20b. SIRPα 길항제는 옵소닌화되지 않은 CD47-코팅된 비드를 식균하는 단핵구 유래 대식세포의 능력을 복구한다. 도 20c. SIRPα 길항제는 옵소닌화된 CD47-코팅된 비드를 식균하는 단핵구 유래 대식세포의 능력을 투여량 의존적으로 복구한다.
도 21a~21b는 항-SIRPα 항체가, V1-SIRPα 대립유전자에 대해 동형접합성인 공여자 유래의 일차 인간 수지상 세포에 의한 CD47-매개 식균작용 억제를 복구한다는 것을 입증하는 일련의 히스토그램이다. 도 21a. SIRPα 길항제는 옵소닌화된 CD47-코팅된 비드를 식균하는 단핵구 유래 수지상 세포의 능력을 복구한다. 도 21b. SIRPα 길항제는 옵소닌화되지 않은 CD47-코팅된 비드를 식균하는 단핵구 유래 수지상 세포의 능력을 복구한다.
도 22a~22b는 항-SIRPα 항체가, V1- 및 V2-SIRPα 대립유전자에 대해 이형접합성인 공여자 유래의 일차 인간 수지상 세포에 의한 CD47-매개 식균작용 억제를 복구한다는 것을 입증하는 일련의 히스토그램이다. 도 22a. SIRPα 길항제는 옵소닌화된 CD47-코팅된 비드를 식균하는 단핵구 유래 수지상 세포의 능력을 복구한다. 도 22b. SIRPα 길항제는 옵소닌화되지 않은 CD47-코팅된 비드를 식균하는 단핵구 유래 수지상 세포의 능력을 복구한다.
도 23a~23b는 항-SIRPα 항체가, V2-SIRPα 대립유전자에 대해 동형접합성인 공여자 유래의 일차 인간 수지상 세포에 의한 CD47-매개 식균작용 억제를 복구한다는 것을 입증하는 일련의 히스토그램이다. 도 23a. SIRPα 길항제는 옵소닌화된 CD47-코팅된 비드를 식균하는 단핵구 유래 수지상 세포의 능력을 복구한다. 도 23b. SIRPα 길항제는 옵소닌화되지 않은 CD47-코팅된 비드를 식균하는 단핵구 유래 수지상 세포의 능력을 복구한다.
도 24a~24b는 항-SIRPα 항체가 CD47 매개 MLR의 억제를 복구함을 보여주는 일련의 히스토그램이다. 인간 CD47-Fc 매개 MLR의 면역억제는 항-SIRPα mAb 단독에 의해 또는 항-PD1 길항제인 펨브롤리주맙과의 병용에 의해 부분적으로 복구되었다(도 24a~24b).
도 25a~25f는 에피토프가 항-SIRPα 항체에 의해 인식되는 것을 도시한 일련의 이미지이다. 항체 E(도 25a) 또는 항체 A(도 25b)의 Fab 단편의 구조는 인간 SIRPα-V2의 세포외 도메인의 도메인 1(잔기 1 내지 115)에 결합하였다. 도 25c. CD47의 구조(진회색)는 인간 SIRPα-V2의 세포외 도메인의 도메인 1에 결합하였다(PDB: 2JJS). 도 25d~25f: 인간 SIRPα-V25E의 세포외 도메인의 도메인 1의 구조로서, 항체 E의 Fab 단편(도 25d), 항체 A의 Fab 단편(도 25e), 또는 인간 CD47(도 25f)에 의해 접촉된 잔기에 강조 표시를 한 것임.
도 26a~26b는 결정 구조를 기준으로 항체 A::SIRPα_V2 복합체 및 항체 E::SIRPα_V2 복합체의 에피토프를 도시한 일련의 이미지이다. 도 26a는 밝은 회색의 막대로 표시된 SIRPαV2 및 진회색의 원자 형태로 표시된 항체 A의 잔기를 도시한 것이다. 항체 A의 Fab 단편으로부터 < 4.5 Å 거리에 있는 원자를 포함하는 SIRPαV1 잔기를 표시하였고, 컬럼을 이용해 SIRPαV1 및 SIRPη의 서열을 확장하였고, 프로그램 MOE를 사용하여 서열별로 정렬하였다. SIRPαV2 D130의 상호작용은 SIRPη에 대한 주요 차이로서 강조되어 있는데, 여기서 이 잔기는 글루탐산염이다. 도 26b는 밝은 회색의 막대로 표시된 SIRPαV2 및 진회색의 원자 형태로 표시된 항체 E의 잔기와 표면을 도시한 것이다. 항체 E의 Fab 단편으로부터 < 4.5 Å 거리에 있는 원자를 포함하는 SIRPαV1 잔기를 표시하였고, 컬럼을 이용해 SIRPαV1 및 SIRPη의 서열을 확장하였고, 프로그램 MOE를 사용하여 서열별로 정렬하였다. SIRPαV2 A72의 상호작용은 SIRPη,에 대한 주요 차이로서 강조되어 있는데, 여기서 이 잔기는 더 큰 아미노산 발린으로 구성된다.
도 27a~27b는 항-SIRPα 항체가 V1- 또는 VV2-발현 U-937 세포에 대한 SE5A5의 결합을 차단함을 보여주는 일련의 히스토그램이다. V1-SIRPα 발현 U-937 세포(도 27a) 또는 V2-SIRPα 발현 U-937 세포(도 27b)에 대한 항-SIRPα mAb, SE5A5의 결합의 항-SIRPα 항체에 의한 차단.
도 28a~28c는 CHO 세포에서 발현된 전장 cyno SIRPα에 대한 항체의 결합을 도시한 일련의 그래프이다. 도 28a. 전장 cyno SIRPα(EGM-02252, 클론 H3A9)를 발현하는 CHO 세포에 대한 항체 결합. 도 28b. 전장 cyno SIRPα(XP_015313155, 클론 P3HD10)를 발현하는 CHO 세포에 대한 항체 결합. 도 28c. 전장 cyno SIRPα(NP_001271679, 클론 HC6)를 발현하는 CHO 세포에 대한 항체 결합.
도 29a~29b는 CHO 세포에서 발현된 전장 cyno SIRPβ1에 대한 항체의 결합을 도시한 일련의 그래프이다. 도 29a. 전장 cyno SIRPβ1(XP_005568598, 클론 PA2)을 발현하는 CHO 세포에 대한 항체 결합. 도 29b. 전장 cyno SIRPβ1(XP_005568593, 클론 1HC6)을 발현하는 CHO 세포에 대한 항체 결합.
도 30. 시노몰구스 원숭이에게 5 mg/kg(채워진 사각형) 또는 1 mg/kg(채워진 원)을 IV 투여한 후 항체 A10의 평균(SD) 혈청 농도-시간 프로파일.
도 31a~31f는 Expi-CHO 세포에서 발현된 다양한 아미노산 점 돌연변이를 갖는 전장 인간 V1-SIRPα에 대한 항체의 결합을 보여준다. 전장 야생형 인간 SIRPαV1(도 31a), SIRPαV1 N®E(도 31b), SIRPαV1 D®E(도 31c), SIRPαV1 D®N(도 31d), SIRPαV1 DD®EN(도 31e)을 발현하는 세포, 및 부모 CHO 세포(도 31f)에 대한 결과가 도시되어 있다.
도 32a~32c는 Expi-CHO 세포에서 발현된 다양한 아미노산 점 돌연변이를 갖는 전장 인간 V2-SIRPα에 대한 항체의 결합을 보여준다. 전장 야생형 인간 SIRPαV2(도 32a), SIRPαV2 E®N(도 32b), 및 SIRPαV2 D®E(도 32c)를 발현하는 세포에 대한 결과가 도시되어 있다.
도 33a~33f는 Expi-CHO 세포에서 발현된 아미노산 점 돌연변이를 갖는 전장 인간 SIRPβ1에 대한 항체의 결합을 보여준다. 전장 야생형 인간 SIRPβ1(도 33a) 및 SIRPβ1 D®H(도 33b)를 발현하는 세포에 대한 결과가 도시되어 있다.
도 34a~34b는 Expi-CHO 세포에서 발현된 아미노산 점 돌연변이를 갖는 전장 인간 SIRPβL에 대한 항체의 결합을 보여준다. 야생형 SIRPβL(도 34a) 또는 SIRPβL H®D(도 34b)를 발현하는 세포에 대한 결과가 도시되어 있다.
도 35a~35d는 Expi-CHO 세포에서 발현된 다양한 아미노산 점 돌연변이를 갖는 전장 인간 SIRPη에 대한 항체의 결합을 보여준다. 전장 야생형 인간 SIRPη(도 35a), SIRPηE®D(도 35b), SIRPη N®D(도 35c), 및 SIRPη EN®DD(도 35d)를 발현하는 세포에 대한 결과가 도시되어 있다.
도 36a. SIRPαV1(연회색, pdbID:4CMM에서 관찰된 것과 같음), SIRPαV2(회색, 항체 A와 복합체를 이룬 결정 구조에서 관찰된 것과 같음)(둘 다 개략적으로 도시됨), 및 항체 A(진회색으로 표시된 표면, SIRPαV1과 복합체를 이룬 결정 구조에서 관찰된 것과 같음)의 루프.
도 36b. SIRPαV1(연회색, pdbID:4CMM에서 관찰된 것과 같음), SIRPαV2(회색, CD47 pdbID:2JJS와 복합체를 이룬 결정 구조에서 관찰된 것과 같음)(둘 다 개략적으로 도시됨), 및 CD47(진회색으로 표시된 표면, SIRPαV1과 복합체를 이룬 결정 구조에서 관찰된 것과 같음)의 루프.
도 37a~37f. SIRP 변이체의 루프(연회색, 원자 유형별로 암호화된 색상): 다음에 대해 관찰된 형태: (a) SIRPαV1 (pdbID: 4CMM), uniprot ID: P78324에 따라 넘버링됨. (b) SIRPαV2 (항체 A와 복합체를 이룬 결정 구조에서 관찰된 것과 같음). (C) SIRPβ1 (pdbID: 2JJU). (d) SIRPβL (pdbID: 2JJV). (e) SIRPη (pdbID: 2JJW). (f) 각각의 루프에 있는 서열 모티프를 비교한 것으로서, SIRPαV1 대비 아미노산 차이는 SIRPη의 경우 DD->EN인 결합 및 SIRPβL의 경우 D-> H인 결합에 있어서의 유의한 손실과 상관된다.
본 발명은 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 관한 것이다. 본 발명은 CD47-매개 SIRPα 신호전달에 의해 조절되는 병태의 치료에 대한 필요성을 다룬다. 일 양태에서, 본 발명의 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 예를 들어 치료 및/또는 진단을 필요로 하는 대상체, 예컨대 인간에서 치료 및/또는 진단적 사용을 위한 것이다.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SIRPα에, 특히 인간 또는 시노몰구스 원숭이 SIRPα, 에, 더 구체적으로는 인간 SIRPα에 특이적으로 결합한다. 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 SIRPα의 V1 및/또는 V2 대립유전자에 결합한다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SIRPη에, 특히 시노몰구스 원숭이 또는 인간 SIRPη, 에, 더 구체적으로는 인간 SIRPη에 특이적으로 결합하지 않는다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 토끼, 마우스, 랫트, 또는 개 SIRPα에 결합하지 않는다.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 0.1 내지 100 nM, 0.1 내지 50 nM, 0.1 내지 25 nM, 0.1 내지 10 nM, 또는 0.1 내지 5 nM의 EC50을 갖는다. 본 발명의 추가 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 0.1 nM, 0.2 nM, 0.3 nM, 0.4 nM, 0.5 nM, 0.6 nM, 0.7 nM, 0.8 nM, 0.9 nM, 1 nM, 2 nM, 3 nM, 4 nM, 5 nM, 6 nM, 7 nM, 8 nM, 9 nM, 10 nM, 11 nM, 12 nM, 13 nM, 14 nM, 15 nM, 16 nM, 17 nM, 18 nM, 19 nM, 20 nM, 21 nM, 22 nM, 23 nM, 24 nM, 또는 25 nM의 EC50을 갖는다. EC50은, 예를 들어 실시예에 제시된 것들을 포함하여 당업계에 알려진 임의의 방법에 의해 결정될 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 0.01 내지 100 nM, 0.01 내지 50 nM, 0.01 내지 25 nM, 0.01 내지 10 nM, 또는 0.01 내지 5 nM의 IC50을 갖는다. 본 발명의 추가 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 0.01 nM, 0.02 nM, 0.03 nM, 0.04 nM, 0.05 nM, 0.06 nM, 0.07 nM, 0.08 nM, 0.09 nM, 0.1 nM, 0.2 nM, 0.3 nM, 0.4 nM, 0.5 nM, 0.6 nM, 0.7 nM, 0.8 nM, 0.9 nM, 1 nM, 2 nM, 3 nM, 4 nM, 5 nM, 6 nM, 7 nM, 8 nM, 9 nM, 10 nM, 11 nM, 12 nM, 13 nM, 14 nM, 15 nM, 16 nM, 17 nM, 18 nM, 19 nM, 20 nM, 21 nM, 22 nM, 23 nM, 24 nM, 또는 25 nM의 IC50을 갖는다. IC50은, 예를 들어 실시예에 제시된 것들을 포함하여 당업계에 알려진 임의의 방법에 의해 결정될 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 높은 친화도로 인간 SIRPα-V1 및 SIRPα-V2에 결합한다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 높은 친화도로, 예를 들어 20 nM 이하, 예를 들어 10 nM 이하, 예를 들어 5 nM 이하, 예를 들어 1 nM 이하의 친화도로 인간 SIRPα-V1(예를 들어 서열번호 240에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 인간 SIRPα-V1)에 결합한다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 높은 친화도로, 예를 들어 20 nM 이하, 예를 들어 10 nM 이하, 예를 들어 5 nM 이하, 예를 들어 1 nM 이하의 친화도로 인간 SIRPα-V2(예를 들어 서열번호 241에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 인간 SIRPα-V2)에 결합한다. 본 발명의 또 다른 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 시노몰구스 원숭이 SIRPα에 결합한다. 본 발명의 또 다른 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 400 nM 이하, 300 nM 이하, 250 nM 이하, 200 nM 이하, 100 nM 이하, 또는 50 nM 이하의 친화도로 시노몰구스 원숭이 SIRPα(예를 들어 서열번호 247에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 시노몰구스 원숭이 SIRPα)에 결합한다. 본 발명의 또 다른 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 400 nM 이하, 300 nM 이하, 200 nM 이하, 또는 50 nM 이하의 친화도로 시노몰구스 원숭이 SIRPα(예를 들어 서열번호 248에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 시노몰구스 원숭이 SIRPα)에 결합한다. 본 발명의 또 다른 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 400 nM 이하, 300 nM 이하, 200 nM 이하, 또는 50 nM 이하의 친화도로 시노몰구스 원숭이 SIRPα(예를 들어 서열번호 249에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 시노몰구스 원숭이 SIRPα)에 결합한다.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 예를 들어 1 μM 이상의 친화도로 SIRPα에 결합하지 않는다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 SIRPα에 결합하지 않고, 예를 들어 1 μM 이상의 친화도로 인간 SIRPα에 결합하지 않는다. 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 시노몰구스 원숭이 SIRPα에 결합하지 않고, 예를 들어 1 μM 이상의 친화도로 시노몰구스 원숭이 SIRPα에 결합하지 않는다.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SIRPα와 CD47 간의 상호작용을 차단한다. 추가 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 CD47-매개 SIRPα 신호전달을 차단한다. 일부 양태에서, 본 발명의 항체는 SIRPα에 대한 CD47의 결합을 차단함으로써, 비교자 항체 대조군과 비교했을 때 또는 본 발명의 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편이 없을 때와 비교했을 때 CD47-매개 SIRPα 신호 전달을 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%만큼 감소시킨다. 일 구현예에서, 비교자 항체 대조군은 서열번호 100, 101, 102, 103, 104, 105, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 104, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 221 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 105, 106, 107, 108, 109, 125, 126, 109, 127, 128, 129, 130, 또는 222 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는 서열번호 131,138,139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 217, 135,153, 154, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 219, 133, 134, 137, 132, 또는 136 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 영역; 및 서열번호 174, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 218, 178, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 220, 176, 177, 180, 175, 또는 179 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 영역을 포함한다.
결합 도메인이 표적에 특이적으로 결합하는지 여부는 당업계에 알려진 다양한 방법으로 시험할 수 있다. 이들 방법에는 정제된 단백질에 대한 항체의 결합을 검출하기 위한 표면 플라스몬 공명 또는 ELISA, 또는 세포에 대한 항체의 결합을 검출하기 위한 유세포 분석법이 포함된다. CD47의 결합을 차단하는 항체의 능력은 SIRPα 발현 세포와 정제된 가용성 CD47의 상호작용을 검출함으로써 측정할 수 있다. 대안적으로, 항체의 차단 활성은 SIRPα 인산화 및 SHP-1 포스파타아제의 동원을 평가함으로써 측정할 수 있다. 항-SIRPα 항체의 차단 활성은 CD47에 의해 야기된 식균작용의 억제를 복구하는 능력에 의해 평가할 수도 있다. 경쟁 억제에 의해 항체 특이성 및 친화도를 결정하는 방법은 당업계에 알려져 있다.
일 양태에서, 본 발명은 항-SIRPα 항체, 특히 단클론 항-SIRPα 항체, 예를 들어 인간 단클론 항-SIRPα 항체, 또는 전장 인간 단클론 항체를 제공한다.
일 양태에서, 본 발명의 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 유리한 약동학적 특성을 갖는다. 일 양태에서, 본 발명의 항-SIRPα 항체는 유리한 생물물리학적 특성, 예를 들어 수율, 품질, 안정성, 또는 용해도를 갖는다.
항체
항체 또는 면역글로불린의 일반화된 구조는 당업자에게 잘 알려져 있으며, 이들 분자는 2개의 동일한 경쇄(L)와 2개의 동일한 중쇄(H)로 이루어진, 일반적으로 약 150,000 달톤의 이종사량체 당단백질이다. 각각의 경쇄는 하나의 이황화 결합에 의해 중쇄에 공유 결합되어 이종이량체를 형성하고, 이종이량체의 2개의 동일한 중쇄 간의 공유 이황화 결합을 통해 이종삼량체 분자가 형성된다. 경쇄 및 중쇄가 하나의 이황화 결합에 의해 함께 연결되지만, 2개의 중쇄 간의 이황화 결합의 수는 면역글로불린 이소형에 따라 달라진다. 각각의 중쇄 및 경쇄는 규칙적으로 이격된 사슬내 이황화 브리지를 또한 갖는다. 각각의 중쇄는 아미노 말단에서, 가변 도메인(VH = 가변 중쇄)을 갖고, 이어서 3개 또는 4개의 불변 도메인(CH1, CH2, CH3, 및 CH4)뿐만 아니라 CH1과 CH2 사이의 힌지 영역도 갖는다. 각각의 경쇄는 2개의 도메인, 즉 아미노-말단 가변 도메인(VL = 가변 경쇄) 및 카르복시-말단 불변 도메인(CL)을 갖는다. VL 도메인은 VH 도메인과 비공유 결합하는 반면, CL 도메인은 보통은 이황화 결합을 통해 CH1 도메인에 공유 연결된다. 특정 아미노산 잔기는 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인 사이에 계면을 형성하는 것으로 여겨진다(Chothia 등의 문헌[1985, J. Mol. Biol. 186:651-663, Vargas-Madrazo E, Paz-Garcia E. J Mol Recognit. 2003;16(3):113-120]). 가변 도메인은 본원에서 가변 영역으로도 지칭되고, 불변 도메인은 불변 영역으로도 지칭된다.
가변 도메인 내의 특정 도메인은 상이한 항체 간에 광범위하게 상이하며, “초가변성”이다. 이들 초가변 도메인은 특정 항체의 특이적 항원 결정인자에 대한 특정 항체 각각의 결합 및 특이성에 직접 관여하는 잔기를 함유한다. 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 모두에서의 초가변성은 상보성 결정 영역(CDR) 또는 초가변 루프(HVL)로 알려진 3개의 분절에 집중된다. CDR은 Kabat 등의 문헌[1991, In: Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.]에서의 서열 비교에 의해 정의되는 반면, HVL은 Chothia 및 Lesk의 문헌[1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917]에 기술된 것과 같이, 가변 도메인의 3차원 구조에 따라 구조적으로 정의된다. 이들 2개의 방법이 CDR을 약간 다르게 식별하는 경우, 구조적 정의가 바람직하다. Kabat에 의해 정의된 바와 같이, CDR-L1은 경쇄 가변 도메인 내의 대략 잔기 24~34에 위치하고, CDR-L2는 대략 잔기 50~56에 위치하고, CDR-L3은 대략 잔기 89~97에 위치하며; CDR-H1은 중쇄 가변 도메인 내의 대략 잔기 31~35에 위치하고, CDR-H2는 대략 잔기 50~65에 위치하고, CDR-H3은 대략 잔기 95~102에 위치한다. IMGT 및 NORTH는 CDR의 대안적인 정의를 제공한다(Lefranc MP.의 문헌[Unique database numbering system for immunogenetic analysis. Immunol Today (1997) 18:509]; 및 North B, Lehmann A, Dunbrack RLJ.의 문헌[A new clustering of antibody CDR loop conformations. J Mol Biol. (2011) 406:228-56] 참조). 또한, CDR은 Chemical Computing Group(CCG) 넘버링에 따라 정의될 수 있다(Almagro 등의 문헌[Proteins 2011; 79:3050-3066] 및 Maier 등의 문헌[Proteins 2014; 82:1599-1610]). 따라서, 중쇄 및 경쇄의 CDR1, CDR2, CDR3은 주어진 항체에 특이적인 고유하고 기능적인 특성을 정의한다.
중쇄 및 경쇄 각각의 내에 있는 3개의 CDR은 덜 가변적인 경향이 있는 서열을 함유하는 프레임워크 영역(FR)에 의해 분리된다. FR 및 CDR은 중쇄 및 경쇄 가변 도메인의 아미노 말단에서 카르복시 말단 방향으로 다음의 순서에 따라 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4. FR의 대부분이 β-시트인 구성은 사슬 각각의 내에 있는 CDR을 서로 근접하게 위치시킬 뿐만 아니라 다른 사슬의 CDR에도 근접하게 위치시킨다. 생성된 형태는 항원 결합 부위에 기여하지만(Kabat 등의 문헌[1991, NIH Publ. No. 91-3242, Vol. I, pages 647-669]), 모든 CDR 잔기가 반드시 항원 결합에 직접 관여하지는 않는다. 당업자는 항체의 가변 영역 아미노산 서열을 고려함으로써 어떤 잔기가 특정 CDR을 포함하는지를 일상적으로 결정할 수 있다. 따라서, 중쇄 및 경쇄의 CDR1, CDR2, CDR3은 주어진 항체에 특이적인 고유하고 기능적인 특성을 정의한다.
FR 잔기 및 Ig 불변 도메인은 일반적으로 항원 결합에 직접 관여하지는 않지만, 항원 결합에 기여하고/하거나 항체 작동자 기능을 매개한다. 일부 FR 잔기는 적어도 세 가지 방식으로 항원 결합에 상당한 영향을 미치는 것으로 여겨진다: 에피토프에 비공유적으로 직접 결합함으로써; 하나 이상의 CDR 잔기와 상호작용함으로써; 및 중쇄와 경쇄 사이의 계면에 영향을 미침으로써. 불변 도메인은 항원 결합에 직접 관여하지는 않지만, 항체 의존적 세포 세포독성(ADCC), 보체 의존적 세포독성(CDC), 및 항체 의존적 세포 식균작용(ADCP)에 항체가 참여하는 것과 같이, 다양한 Ig 작동자 기능을 매개한다.
척추동물 면역글로불린의 경쇄는 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 2개의 명확하게 구별되는 부류인, 카파(λ) 및 람다(μ) 중 하나에 할당된다. 비교하자면, 포유류 면역글로불린의 중쇄는 불변 도메인의 서열에 따라 다음 5개의 주요 부류 중 하나에 할당된다: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM. IgG 및 IgA는 하위부류(이소형)로, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2로 각각 추가로 세분화된다. 면역글로불린의 상이한 부류에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ, 및 μ로 불린다. 고유 면역글로불린의 부류의 서브유닛 구조 및 3차원 구성은 잘 알려져 있다.
정의
용어 "항체" 및 "항-SIRPα 항체"는 본원에서 상호 교환적으로 사용되며, 단클론 항체(전장 단클론 항체 포함), 다중특이적 항체(예: 이중특이적 항체), N-말단 또는 C-말단 절단과 같은 사소한 변형을 갖는 항체, 및 원하는 생물학적 활성(예: SIRPα 결합)을 나타내는 항체의 가변 도메인 및 다른 부분과 같은 항체 단편을 포괄한다.
용어 “단클론 항체”는 항체 분자의 실질적으로 균질한 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하며, 상기 집단을 포함하는 개별 항체는 다음을 제외하고는 동일하다: 항체 중쇄로부터 C-말단 리신의 제거와 같은 가능한 잘 알려진 변경; 또는 존재할 수 있는 아미노산 이성질체화 또는 탈아미드화, 메티오닌 산화, 또는 아스파라긴 또는 글루타민 탈아미드화와 같은 번역 후 변형. 단클론 항체는 일반적으로 하나의 항원성 에피토프에 결합한다. 이중특이적 단클론 항체는 2개의 구별되는 항원성 에피토프에 결합한다. 단클론 항체는 단일특이적 또는 다중특이적(예: 이중특이적) 1가, 2가, 또는 다가 항체일 수 있다. 단클론 항체는 다음을 포함하여 당업계에 알려진 임의의 기술 또는 방법론에 의해 제조될 수 있음을 이해해야 한다: 예를 들어 하이브리도마 방법(Kohler 등의 문헌[1975, Nature 256:495]), 또는 당업계에 알려진 재조합 DNA 방법(예를 들어 미국 특허 제4,816,567호), 또는 Clarkson 등 및 Marks 등의 문헌에 기술된 기술을 사용해 파지 항체 라이브러리를 사용해 재조합적으로 생산된 단클론의 단리 방법(Clackson 등의 문헌[1991, Nature 352: 624-628], 및 Marks 등의 문헌[1991, J. Mol. Biol. 222: 581-597]).
키메라 항체는 하나의 종(예: 마우스와 같은 비인간 포유동물) 유래의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 및 또 다른 종(예: 인간) 항체의 중쇄 및 경쇄 불변 영역을 포함하며, 제1 종(예: 마우스) 유래의 항체의 가변 영역을 암호화하는 DNA 서열을 제2 종(예: 인간) 유래의 항체의 불변 영역에 대한 DNA 서열에 연결하고, 연결된 서열을 함유하는 발현 벡터가 포함된 숙주가 키메라 항체를 생산할 수 있도록 이를 형질전환함으로써 수득될 수 있다. 대안적으로, 키메라 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 하나 이상의 영역 또는 도메인이 다른 면역글로불린 부류 또는 이소형 유래의, 또는 컨센서스 서열 또는 생식선 서열 유래의 단클론 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나, 이에 대해 동형접합성이거나, 이의 변이체인 항체일 수도 있다. 이러한 항체의 단편이 이의 부모 항체의 바람직한 생물학적 활성(예: 동일한 에피토프에 결합하는 것)을 나타내는 경우, 키메라 항체는 이러한 항체의 단편을 포함할 수 있다(예를 들어 미국 특허 제4,816,567호; 및 Morrison 등의 문헌[1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855] 참조).
용어 "항체 단편", "항원 결합 단편", "항-SIRPα 항체 단편", "항-SIRPα 항체 단편", "조작된 항-SIRPα 항체 단편"은 가변 영역 또는 기능적 능력(예: SIRPα 결합)이 유지되는 전장 항-SIRPα 항체의 일부를 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, scFv, 및 scFv-Fc 단편, 디아바디, 선형 항체, 단쇄 항체, 미니바디, 항체 단편으로부터 형성된 디아바디, 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하지만 이에 한정되지는 않는다.
항체 단편은, 예를 들어 파파인 또는 펩신과 같은 효소로 치료된 전장 항체를 치료하여 유용한 항체 단편을 생성함으로써 수득될 수 있다. 파파인 분해는 2개의 동일한 항원 결합 항체 단편을 생산하는 데 사용되는데, 이들 단편은 “Fab” 단편(각각이 하나의 항원 결합 부위를 가짐) 및 잔류 “Fc” 단편으로 불린다. Fab 단편은 또한, 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 CH1 도메인을 함유한다. 펩신 치료는, 2개의 항원 결합 부위를 가지며 여전히 항원을 가교 결합시킬 수 있는 F(ab’)2 단편 생산으로 이어진다.
본 발명에 따른 항체 단편의 다른 예는 Fab’ 단편이다. Fab’ 단편은, 항체 힌지 영역 유래의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 추가 잔기가 CH1 도메인의 C-말단에 존재하는 만큼 Fab 단편과 상이하다. F(ab')2 항체 단편은 힌지 영역에서 시스테인 잔기에 의해 연결된 Fab’ 단편의 쌍이다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링도 알려져 있다.
“Fv” 단편은 긴밀하고 비공유적으로 결합된 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 이루어진 완전한 항원 인식 및 결합 부위를 함유한다. 이러한 구성에서, 각각의 가변 도메인의 3개의 CDR은 상호 작용하여 VH-VL 이량체의 표면 상에 항원 결합 부위를 정의한다. 종합적으로, 6개의 CDR은 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다.
항체 단편은 “단쇄 Fv” 또는 “scFv” 단편을 포함할 수도 있다. “단쇄 Fv” 또는 “scFv” 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하는 단쇄 Fv 변이체이며, 여기서 이들 도메인은 단일 폴리펩티드 사슬에 존재한다. 단쇄 Fv는 항원을 인식하고 이에 결합할 수 있다. scFv 폴리펩티드는, scFv의 항원 결합을 위한 바람직한 3차원 구조의 형성을 용이하게 하기 위해 VH와 VL 도메인 사이에 위치한 폴리펩티드 링커를 임의로 함유할 수도 있다(예를 들어 Pluckthun의 문헌[1994, In The Pharmacology of monoclonal Antibodies, Vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315] 참조).
항체 단편은 탠덤 Fd 분절을 형성할 수도 있는데, 이는 한 쌍의 항원 결합 영역을 형성하기 위한 한 쌍의 탠덤 Fd 분절(VH-CH1-VH-CH1)을 포함한다. 이들 “선형 항체”는, 예를 들어 Zapata 등의 문헌[1995, Protein Eng. 8(10):1057-1062]에 기술된 것과 같이 이중특이적 또는 단일특이적일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "인간 항체"는 인간 생식선 면역글로불린 서열로부터 유래된 항체 또는 이의 단편을 포함한다. 용어 “인간 항체”는 마우스, 랫트, 또는 토끼와 같은 다른 (포유류) 종의 생식선으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열 상에 이식된 항체를 포함하도록 의도되지 않는다. 따라서, 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 “인간 항체”는 단백질의 모든 부분(예를 들어, CDR, 프레임워크, CL, CH 도메인(예: CH1, CH2, CH3), 힌지, VL, VH)이 인간에서 실질적으로 면역원성이 아닌 항체 또는 이의 단편으로서, 본원에서 추가로 후술되는 것과 같은 사소한 서열 변화 또는 변형만을 갖는 항체 또는 이의 단편을 지칭한다.
이러한 "인간 항체"를 생성하기 위한 기술이 기술되어 왔으며, 여기에는 파지 디스플레이 또는 유전자이식 동물의 사용 등이 포함되지만 이들로 한정되지는 않는다(www. Ablexis.com/technology-alivamab.php; WO 90/05144; D. Marks, H.R. Hoogenboom, T.P. Bonnert, J. McCafferty, A.D. Griffiths 및 G. Winter의 문헌[(1991) "By-passing immunisation. Human antibodies from V-gene libraries displayed on phage." J.Mol.Biol., 222, 581-597]; Knappik 등의 문헌[J. Mol. Biol. 296: 57-86, 2000]; S. Carmen 및 L. Jermutus의 문헌["Concepts in antibody phage display". Briefings in Functional Genomics and Proteomics 2002 1(2):189-203]; Lonberg N, Huszar D.의 문헌["Human antibodies from transgenic mice". Int Rev Immunol. 1995;13(1):65-93]; Bruggemann M, Taussig MJ.의 문헌["Production of human antibody repertoires in transgenic mice”. Curr Opin Biotechnol. 1997 Aug;8(4):455-8]).
따라서, 인간 항체는 예를 들어 키메라 또는 인간화 항체와 구별된다. 인간 항체는 기능적으로 재배열된 인간 면역글로불린(예를 들어 중쇄 및/또는 경쇄) 유전자를 발현할 수 있는 비인간 동물 또는 원핵 세포 또는 진핵 세포에 의해 생산될 수 있음을 주목한다.
일 양태에서, 본 발명의 항-SIRPα 항체는 인간화 항체 또는 이의 항체 단편이다. 인간화 항체 또는 인간화 항체 단편은 면역글로불린 아미노산 서열 변이체 또는 이의 단편을 포함하는 특이적 유형의 키메라 항체로서, 소정의 항원에 결합할 수 있고, 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 실질적으로 갖는 하나 이상의 FR 및 비인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 실질적으로 갖는 하나 이상의 CDR을 포함한다. 종종 “수입(import)” 서열로서 지칭되는 이러한 비인간 아미노산 서열은 일반적으로 “수입” 항체 도메인, 특히 가변 도메인으로부터 취해진다. 일반적으로, 인간화 항체는 인간 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인의 FR 사이에 삽입된 적어도 비인간 항체의 CDR 또는 HVL을 포함한다. 항체의 인간화 방법은, 예를 들어 Almagro 등의 문헌[(2008) Frontiers in Bioscience 13, 1619-1633], 또는 WO12092374 A2에 기술되어 있다.
본 발명의 키메라, 인간화, 또는 인간 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 추가로 조작될 수 있다. 이러한 조작은, 예를 들어 인간에서의 면역원성을 감소시키기 위해서, 또는 탈아미드화, 원하지 않는 전하 또는 친유성 또는 비-특이적 결합을 피하기 위해서, 원하지 않는 아미노산의 제거 또는 교환을 포함하지만 이에 한정되지는 않는다. 원하지 않는 아미노산의 이러한 제거 또는 교환은, 예를 들어 시험관 내에서의 무작위 또는 부위 특이적 돌연변이 유발에 의해거나 생체 내에서의 체세포 돌연변이에 의해 도입될 수 있다. 또한, 키메라 또는 인간화 항체와 관련하여, 특정 마우스 FR 잔기가 항체 또는 이의 단편에 보유될 수 있음을 이해할 것이다.
일 양태에서, 항-SIRPα 항체는 (예를 들어 Fab, Fab', F(ab')2, Fabc, 및 Fv 단편에 함유된) 적어도 하나의, 일반적으로는 2개의 가변 도메인 모두를 실질적으로 포함한다. 또 다른 양태에서, 항-SIRPα 항체는 면역글로불린 Fc 영역의 적어도 일부, 일반적으로는 인간 면역글로불린의 적어도 일부를 또한 포함한다. 일반적으로, 항체는 경쇄뿐만 아니라 적어도 중쇄의 가변 도메인 둘 다를 함유한다. 항체는 경우에 따라 중쇄의 CH1, 힌지, CH2, CH3, 및/또는 CH4 영역 중 하나 이상을 포함할 수도 있다.
일 양태에서, 항-SIRPα 항체는 IgM, IgG, IgD, IgA 및 IgE를 포함하는 임의의 부류의 면역글로불린, 및 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2를 포함하는 임의의 이소형으로부터 선택될 수 있다. 대안적인 항-SIRPα 항체는 둘 이상의 면역글로불린 부류 또는 이소형으로부터의 서열을 포함할 수 있고, 원하는 작동자 기능을 최적화하기 위해 특정 변형된 또는 변형되지 않은 불변 도메인을 선택하는 것은 당업자의 기술 범위에 속한다.
예를 들어, 항체의 Fc 영역은 보체 의존적 세포독성(CDC), 항체 의존적 세포 세포독성(ADCC), 및 항체 의존적 세포 식균작용(ADCP)과 같은 작동자 기능 및 이의 혈청 반감기를 매개한다. Fc 조작은 항체에게 요구되는 약리학적 활성에 적합하도록 항체 특성을 최적화하는 데 사용될 수 있다. 이러한 세포독성 활성이 바람직하지 않은 경우, 예컨대 암을 치료함에 있어서 면역 세포를 표적화하는 경우, 불변 도메인은 IgG4와 같이 작동자 기능이 감소된 이소형일 수 있고/있거나 작동자 기능을 감소시키는 알려진 변형을 이용해 변형될 수 있다. 이러한 세포독성 활성이 바람직한 경우, 예컨대 표적화된 종양 세포의 파괴하고자 하는 경우, 불변 도메인은 작동자 기능이 증가된 이소형일 수 있고/있거나 작동자 기능을 증가시키는 알려진 변형을 이용해 변형될 수 있다. 몇몇 돌연변이는 작동자 기능을 감소시키거나 증가시키는 것으로 알려져 있다. 예를 들어 “The future of antibodies as cancer drugs” Janice M Reichert, Eugen Dhimolea, Drug Discov Today (2012) Sep;17(17-18):954-63 - PMID: 22561895, “Antibody Drug Discovery” (Volume 4 of Molecular medicine and medicinal chemistry) Clive R. Wood, World Scientific, 2012 ISBN 1848166281, 9781848166288;
“FcγR requirements leading to successful immunotherapy” Immunol Rev. (2015) Nov;268(1):104-22 - PMID: 26497516 참조.
일 양태에서, 본 발명의 항체의 불변 도메인은 Fab-아암 교환을 방지하는 하나의 치환 돌연변이(Ser228Pro)를 갖는 IgG4Pro이다. 또 다른 양태에서, 본 발명의 항체의 불변 도메인은 작동자 기능을 감소시키기 위해 불변 영역에서 2개의 돌연변이인 Leu234Ala 및 Leu235Ala를 갖는 IgG1이다.
조작된 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 FR 및 CDR, 또는 HVL이 부모 서열과 정확하게 상응할 필요는 없다. 예를 들어, 부모 서열은, 생성되는 아미노산 잔기가 부모 서열 중 어느 하나의 상응하는 위치에 있는 원래 잔기와 더 이상 동일하지는 않지만, 항체가 SIRPα에 결합하는 기능은 보유하도록 치환, 삽입, 또는 결실에 의해 변경(예를 들어, 돌연변이화)될 수 있다. 이러한 변경은 일반적으로 광범위하지 않을 것이고 보존적 변경일 것이다. 일반적으로, 조작된 항체 잔기의 적어도 75%, 더 빈번하게는 적어도 90%, 가장 빈번하게는 95% 초과, 또는 98% 초과, 또는 99% 초과가 부모 서열의 잔기에 상응할 것이다.
중쇄 및 경쇄 가변 영역 사이의 계면(“VL -VH 계면”)에 영향을 미치는 면역글로불린 잔기는 2개의 사슬의 근접성 또는 서로에 대한 배향에 영향을 미치는 것들이다. 사슬 간 상호작용에 관여할 수 있는 특정 잔기는 VL 잔기 34, 36, 38, 44, 46, 87, 89, 91, 96, 및 98 및 VH 잔기 35, 37, 39, 45, 47, 91, 93, 95, 100, 및 103을 포함한다(Kabbat 등의 문헌[Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1987]에 제시된 넘버링 시스템을 사용함). 미국 특허 제6,407,213호에서도 VL 잔기 43 및 85, 및 VH 잔기 43 및 60과 같은 잔기가 이러한 상호작용에 관여할 수도 있다는 것이 논의되었다. 이들 잔기는 인간 IgG에 대한 것으로만 표시되어 있지만, 다른 종에도 적용할 수 있다. 사슬 간 상호작용에 관여할 것으로 합리적으로 예상되는 중요한 항체 잔기는 컨센서스 서열로의 치환을 위해 선택된다.
용어 "컨센서스 서열" 및 "컨센서스 항체"는 임의의 특정 부류, 이소형, 또는 서브유닛 구조, 예를 들어 인간 면역글로불린 가변 도메인의 모든 면역글로불린의 각 위치에서 가장 빈번하게 발생하는 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 서열을 지칭한다. 컨센서스 서열은 특정 종 또는 많은 종의 면역글로불린에 기초할 수 있다. "컨센서스" 서열, 구조, 또는 항체는 특정 구현예에서 기술된 것과 같은 컨센서스 인간 서열을 포함하고, 임의의 특정 부류, 이소형, 또는 서브유닛 구조의 모든 인간 면역글로불린의 각 위치에서 가장 빈번하게 발생하는 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 서열을 지칭하는 것으로 이해된다. 따라서, 컨센서스 서열은, 각각의 위치에서 하나 이상의 알려진 면역글로불린에 존재하지만 임의의 단일 면역글로불린의 전체 아미노산 서열을 정확하게 복제하지는 않을 수 있는 아미노산을 갖는 아미노산 서열을 함유한다. 가변 영역 컨센서스 서열은 임의의 자연적으로 생산된 항체 또는 면역글로불린 (Kabat 등의 문헌[1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.]), 및 이들의 변이체로부터 수득되지 않는다. 중쇄 및 경쇄 컨센서스 서열의 FR 및 이의 변이체는 인간 또는 인간화 항-SIRPα 항체의 제조에 유용한 서열을 제공한다. 예를 들어, 미국 특허 제6,037,454호 및 제6,054,297호 참조.
"단리된" 항체는 항체의 자연 환경의 성분으로부터 항체가 발현된 세포 배양물로부터 식별되고 분리되고/되거나 회수된 것이다. 단리된 항체 또는 항체 단편은 항체 또는 항체 단편의 생산, 정제, 및/또는 보관 중에 발생하는 하나 이상의 공동-번역 변형 또는 번역 후 변형을 가질 수 있다. 항체의 자연 환경의 오염 성분은 항체의 진단적 또는 치료적 사용을 방해할 수 있는 물질이며, 효소, 호르몬, 또는 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질일 수 있다. 일 양태에서, 항체는 항체의 중량을 기준으로 적어도 95%가 넘게 단리되도록 정제될 것이고, 예를 들어 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%가 넘게 단리되도록 정제될 것이다.
단리된 항체는 항체가 생산되는 재조합 세포 내의 제자리(in situ) 항체를 포함하는데, 이는 항체의 자연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문이다. 그러나, 일반적으로, 단리된 항체는 재조합 세포 물질이 제거되는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
“다중특이적”은 동일한 항원 내에서 2개 이상의 구별되는 항원 또는 2개 이상의 구별되는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단백질, 예컨대 항체를 지칭한다.
“이중특이적”은 동일한 항원 내에서 2개의 구별되는 항원 또는 2개의 구별되는 에피토프에 특이적으로 결합하는 단백질, 예컨대 항체를 지칭한다.
일부 구현예에서, SIRPα에 특이적으로 결합하는 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이중특이적 항체이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다중특이적 항체이다. SIRPα에 특이적으로 결합하는 본원에 제공된 단일특이적 항체는 이중특이적 항체로 조작될 수 있는데, 이 또한 본 발명의 범주 내에 포함된다.
전장 이중특이적 항체는, 예를 들어 시험관 내에서 또는 무세포 환경에서 구별되는 특이성을 갖는 2개의 항체 절반 분자의 이종이량체 형성을 유리하게 하기 위해, 중쇄 CH3 계면에서 각각의 절반 분자 내에 치환을 도입함으로써 2개의 단일특이적 2가 항체 간의 Fab 아암 교환(예를 들어 절반 분자 교환, 하나의 중쇄-경쇄 쌍 교환)을 사용하거나, 공동 발현을 사용하여 생성될 수 있다. Fab 아암 교환 반응은 이황화 결합의 결과이다.
이중특이적 항체는 Triomab/Quadroma(Trion Pharma/Fresenius Biotech), 노브-인-홀(Genentech), CrossMAbs(Roche) 및 정전기 유도식 CH3 상호작용(Chugai, Amgen, NovoNordisk, Oncomed), LUZ-Y(Genentech), Strand Exchange Enginered Domain body(SEEDbody)(EMD Serono), Biclonic(Merus), 및 DuoBody® 제품(Genmab A/S)과 같은 설계를 사용하여 생성될 수도 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 2개 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열의 맥락에서의 용어 “동일한” 또는 “동일성 백분율”은, 최대 일치에 대해 비교하고 정렬했을 때 동일하거나 명시된 백분율의 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기가 동일한 2개 이상의 서열 또는 하위 서열을 지칭한다. 동일성 백분율을 결정하기 위해, 최적의 비교 목적을 위해 서열을 정렬한다(예를 들어, 제2 아미노산 또는 핵산 서열과의 최적의 정렬을 위해 제1 아미노산 또는 핵산 서열에 갭이 도입될 수 있음). 그런 다음, 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오티드 위치에 있는 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 비교한다. 제1 서열 내의 한 위치가 제2 서열 내의 상응하는 위치와 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드에 의해 점유되는 경우, 분자는 해당 위치에서 동일하다. 2개의 서열 사이의 동일성 백분율은 서열에 의해 공유된 동일한 위치의 수의 함수이다(즉, 동일성 (%) = 동일한 위치의 수/위치의 총 수(예: 중첩 위치) x 100). 일부 구현예에서, 비교되는 2개의 서열은 경우에 따라 갭이 서열 내에 도입된 후 동일한 길이이다(예를 들어, 비교되는 서열을 넘어 연장되는 추가 서열은 제외함). 예를 들어, 가변 영역 서열을 비교할 때, 리더 및/또는 불변 도메인 서열은 고려하지 않는다. 2개의 서열 간의 서열 비교를 위해, "상응하는" CDR은 두 서열 모두에서 동일한 위치에 있는 CDR(예를 들어, 각 서열의 CDR-H1)을 지칭한다.
두 서열 간의 동일성 백분율 또는 유사성 백분율의 결정은 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다. 2개의 서열의 비교에 사용되는 수학적 알고리즘의 바람직한 비제한적인 예는 Karlin 및 Altschul의 알고리즘이다(Karlin 및 Altschul의 문헌[1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268], 동 문헌은 Karlin 및 Altschul의 문헌[1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877]에서 수정됨). 이러한 알고리즘은 Altschul 등의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램에 통합되어 있다(Altschul 등의 문헌[1990, J. Mol. Biol. 215:403-410]). BLAST 뉴클레오티드 검색은 관심 단백질을 암호화하는 핵산과 상동인 뉴클레오티드 서열을 수득하기 위한 NBLAST 프로그램(score=100, wordlength=12)을 이용해 수행할 수 있다. BLAST 단백질 검색은 관심 단백질에 상동인 아미노산 서열을 수득하기 위한 XBLAST 프로그램(score=50, wordlength=3)을 이용해 수행할 수 있다. 비교 목적으로 갭이 도입된 정렬을 얻기 위해, Altschul 등의 문헌[1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402]에 기술된 것과 같은 Gapped BLAST를 사용할 수 있다. 대안적으로, PSI-Blast를 사용해 분자 간의 이격 관계를 검출하는 반복 검색을 수행할 수 있다(전술한 문헌). BLAST, Gapped BLAST, 및 PSI-Blast 프로그램을 이용할 때, 각 프로그램(예: XBLAST 및 NBLAST)의 기본 파라미터가 사용될 수 있다. 서열의 비교에 사용되는 수학적 알고리즘의 또 다른 바람직한 비제한적인 예는 Myers 및 Miller의 알고리즘이다(CABIOS(1989)). 이러한 알고리즘은 GCG 서열 정렬 소프트웨어 패키지의 일부인 ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 통합되어 있다. 아미노산 서열을 비교하기 위해 ALIGN 프로그램을 이용할 때, PAM120 중량 잔기 표(12의 갭 길이 페널티, 및 4의 갭 페널티)가 사용될 수 있다. 서열 분석을 위한 추가 알고리즘은 당업계에 알려져 있으며, Torellis 및 Robotti의 문헌[1994, Comput. Appl. Biosci. 10:3-5]에 기술된 것과 같은 ADVANCE 및 ADAM; 및 Pearson 및 Lipman의 문헌[1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444-8]에 기술된 FASTA를 포함한다. FASTA 내에서, ktup은 민감도와 검색 속도를 설정하는 제어 옵션이다. ktup=2인 경우, 비교되는 2개의 서열 내의 유사한 영역은 정렬된 잔기의 쌍을 관찰함으로써 발견되며; ktup=1인 경우, 하나의 정렬된 아미노산을 조사한다. ktup은 단백질 서열의 경우 2 또는 1로 설정될 수 있고, DNA 서열의 경우 1 내지 6으로 설정될 수 있다. ktup이 명시되지 않은 경우의 기본값은, 단백질의 경우 2이고, DNA의 경우 6이다. 대안적으로, 단백질 서열 정렬은 Higgins 등의 문헌[1996, Methods Enzymol. 266:383-402]에 기술된 것과 같은 CLUSTAL W 알고리즘을 사용해 수행될 수 있다.
“화학요법제”는 암 치료에 유용한 화학적 화합물이다. 이러한 화학요법제의 예는 티오테파 및 시클로스포스파미드와 같은 알킬화제; 부설판, 임프로설판, 및 피포설판과 같은 과 같은 알킬 설포네이트; 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파와 같은 아지리딘; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포라미드, 트리에틸렌티오포스포라미드, 및 트리메틸올로멜라민을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸아멜라민; 아세토게닌(특히 불라타신 및 불라타시논); 캄프토테신(합성 유사체 토포테칸 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065(이의 아도젤레신, 카르젤레신, 및 바이셀레신 합성 유사체 포함); 크립토피신(특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴, 아우리스타틴, (유사체 모노메틸-아우리스타틴 E 및 모노메틸-아우리스타틴 F 포함); 듀오카마이신(합성 유사체 KW-2189 및 CBI-TMI 포함); 엘류테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 클로람부실, 클로마파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 산화 메클로레타민 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비친, 페네스테린, 프레드니무스틴과 같은 질소 머스타드; 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴과 같은 니트로수레아; 에네디인 항생제(예: 칼리키마이신, 특히 칼리키미신 감마1I 및 칼리키마이신 phiI1, (예를 들어 Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33:183-186 참조); 디네마이신 A를 포함하는 디네마이신; 클로드로네이트와 같은 비스포스포네이트; 에스페라마이신; 및 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 발색단백질 에네디엔 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 액티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신(아드리아마이신™)(모르폴리노-독소독소라이신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 C와 같은 미토마이신, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 켈라미신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 유비니멕스, 지노스타틴, 조루비신과 같은 항생제; 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU)과 같은 항-대사물; 데노프테린과, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트와 같은 엽산 유사체; 플루다라빈, 6-메르캅토푸린, 티아미프린, 티오구아닌과 같은 퓨린 유사체; 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 엔오시타빈, 플록스우리딘과 같은 피리미딘 유사체; 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피토스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤과 같은 안드로겐; 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄과 같은 항-아드라날; 프롤린산과 같은 엽산 보충제; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데모콜신; 다아지쿠온; 엘포미틴; 아세트산엘립티늄; 에포틸론; 에토글루시드; 질산갈륨; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 메이탄신 및 안사미토신과 같은 메이탄시노이드; 미토구아존, 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 포도필린산; 2-에틸하이드라지드; 프로카르바진; PSK®; 라족산; 리족신; 시조푸란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2’,2”-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센(특히 T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A, 및 안기딘); 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미타브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드(“Ara-C”), 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들어 파클리탁셀(TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.) 및 독세탁셀(TAXOTERE®, Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); 클로람부실; 젬시타빈(Gemzar™); 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 시스플라틴 및 카보플라틴과 같은 백금 유사체; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드(VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈 나벨빈™); 노반트론; 테니포시드; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; CPT-11; 국소이성화효소 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴(DMFO); 레틴산과 같은 레티노이드; 카페시타빈; 및 전술한 건 중 어느 하나의 약학적으로 허용 가능한 염, 산, 또는 유도체를 포함한다. 또한, 이러한 정의에는 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하도록 작용하는, 예를 들어 타목시펜(Nolvadex™ 포함), 랄록시펜, 드롤록시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 및 토레미펜(Fareston™)을 포함하는 항에스트로겐 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제(SERM)와 같은 항 호르몬제; 부신에서 에스트로겐 생성을 조절하는 효소 아로마타아제를 억제하는, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메게스트롤 아세테이트(Megace™), 엑세메스탄, 포르메스탄, 파드로졸, 보로졸(Rivisor™), 레트로졸(Femara™), 및 아나스트로졸(Arimidex™)과 같은 아로마타아제 억제제; 및 플루타미드, 닐루타미드, 바이칼루타미드, 류프롤리드, 및 고세렐린과 같은 항-안드로겐; 및 전술한 것 중 어느 하나의 약학적으로 허용 가능한 염, 산, 또는 유도체가 포함된다. 이들 제제 중 어느 하나 또는 그 이상은 본 발명의 인간 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 접합되어 다양한 질환 및/또는 장애의 치료에 유용한 치료제를 제공할 수 있다.
진단 목적뿐만 아니라 치료적 모니터링 목적을 위해, 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표지에, 예컨대 표지에만 접합되거나 및 표지와 추가의 제2 제제(프로드러그, 화학요법제 등)에 접합될 수도 있다. 다른 제2 제제와 구별되는 표지는 검출 가능한 화합물 또는 조성물인 제제를 지칭하며, 이는 본 발명의 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 직접적으로 또는 간접적으로 접합될 수 있다. 표지는 그 자체로서 검출될 수 있거나(예: 방사성 동위원소 표지 또는 형광 표지), 효소 표지의 경우, 표지는 검출 가능한 기질 화합물 또는 조성물의 화학적 변경을 촉매할 수 있다. 표지된 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하여 시험관 내 및 생체 내 진단을 포함하여 다양한 응용예에서 사용할 수 있다.
본 발명의 다양한 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 하나 이상의 도메인이 재조합적으로 발현될 것이다. 이러한 재조합 발현에는 하나 이상의 조절 서열, 즉 특정 숙주 유기체에서 작동 가능하게 연결된 코딩 서열의 발현에 필요한 폴리뉴클레오티드 서열이 사용될 수 있다. 원핵 세포에 사용하기에 적합한 대조군 서열은, 예를 들어 프로모터, 작동자, 및 리보솜 결합 부위 서열을 포함한다. 진핵생물 대조군 서열은 프로모터, 폴리아데닐화 신호, 및 인핸서를 포함하지만, 이에 한정되지는 않는다. 이들 대조군 서열은 원핵 및 진핵 숙주 세포에서 항-SIPRα 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 발현 및 생산에 사용될 수 있다.
핵산 서열이 또 다른 핵산 서열과 기능적 관계에 놓일 때, 핵산 서열은 “작동 가능하게 연결”된다. 예를 들어, 핵산 전구서열 또는 분비 리더가 폴리펩티드의 분비에 참여하는 전구단백질로서 발현되는 경우, 핵산 전구서열 또는 분비 리더는 폴리펩티드를 암호화하는 핵산에 작동 가능하게 연결되거나; 프로모터 또는 인핸서가 서열의 전사에 영향을 미치는 경우, 프로모터 또는 인핸서는 코딩 서열에 작동 가능하게 연결되거나; 리보솜 결합 부위가 번역을 용이하게 하도록 위치되는 경우, 리보솜 결합 부위는 코딩 서열에 작동 가능하게 연결된다. 일반적으로, “작동 가능하게 연결된”은 연결되는 DNA 서열이 인접함을 의미하고, 분비 리더의 경우, 분비 리더가 인접하고 판독 프레임 내에 있음을 의미한다. 그러나, 인핸서는 인접하거나 인접하기 않을 수 있다. 연결은 편리한 제한 부위에서의 결찰에 의해 달성될 수 있다. 이러한 부위가 존재하지 않는 경우, 합성 올리고뉴클레오티드 어댑터 또는 링커가 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, “세포”, “세포주”, 및 “세포 배양물”이란 표현은 상호 교환적으로 사용되고, 이러한 모든 명칭은 이의 자손을 포함한다. 따라서, "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"는 전달의 회수에 관계없이 일차 대상체 세포 및 이로부터 유래된 배양물을 포함하며, 이는 예를 들어 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 하나 이상의 아미노산 서열을 암호화하는 하나 이상의 발현 벡터로 형질감염되었을 수 있다.
본 발명에 따라 치료를 목적으로 할 때의 용어 "포유동물"은 인간, 가축 및 농장 동물, 및 개, 말, 고양이, 소 등과 같은 동물원 동물, 스포츠 동물, 또는 애완 동물을 포함하여, 포유동물로서 분류되는 임의의 동물을 지칭한다. 바람직하게는, 포유동물은 인간이다.
본원에서 사용되는 “장애”는 본원에 기술된 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 이용한 치료가 이익이 되는 임의의 병태이다. 여기에는, 포유동물을 문제의 장애에 취약하게 하는 병리학적 병태를 포함하여, 만성 및 급성 장애 또는 질환이 포함된다. 본원에서 치료될 비제한적인 실시예 또는 장애는 염증성, 혈관신생, 자가면역, 및 면역학적 장애, 호흡기 장애, 암, 혈액암, 양성 및 악성 종양, 백혈병, 및 림프구 악성 종양을 포함한다.
용어 "암" 및 "암성"은 일반적으로 조절되지 않은 세포 성장을 특징으로 하는 포유류의 생리학적 병태를 지칭하거나 기술한다. 암의 예는 암종, 림프종, 모세포종, 육종, 및 백혈병을 포함하지만 이에 한정되지는 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 “SIRPα 경로 장애” 또는 “SIRPα 경로 질환”은 SIRPα와 CD47 간의 상호작용을 조절함으로써, 특히 SIRPα/CD47 신호전달을 억제함으로써 완화될 수 있는 병태를 지칭한다. "SIRPα 경로 장애" 또는 "SIRPα 경로 질환"은 SIRPα가 발현되는 골수 관련 질환을 포함한다. “SIRPα 경로 장애” 또는 “SIRPα 경로 질환”은 또한, SIRPα를 발현하는 대식세포 및/또는 수지상 세포에 의한 식균작용 감소를 특징으로 하고, 면역 반응의 증가가 바람직한 병태를 포함한다.
SIRPα 경로 장애의 예는 암, 염증성 질환, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 감염성 질환, 또는 섬유증이다. 암의 예는 혈액암(예를 들어 백혈병, 림프종, 골수종, 예를 들어, 다발성 골수종), 및 전이성 병변을 포함한다. 추가 예시는 고형 종양 암을 포함한다. 고형 종양의 예는 악성 종양, 예를 들어 육종 및 암종, 예를 들어 다양한 기관 계통의 선암종, 예컨대 폐, 유방, 난소, 림프, 위장(예: 결장), 항문, 생식기 및 비뇨생식기(예: 신장, 요로상피, 방광 세포, 전립선), 인두, CNS(예: 뇌, 신경, 또는 교세포), 두경부, 피부(예: 흑색종), 및 췌장에 영향을 미치는 것들 뿐만 아니라, 결장암, 직장암, 신세포 암종, 간암, 위암, 비소세포 폐암, 소장암, 및 식도암을 포함하는 악성 종양을 포함한다. 암은 초기, 중간, 말기이거나 전이성 암일 수 있다.
일부 구현예에서, 암은 폐암(예: NSCLC(예를 들어 편평 및/또는 비편평 세포 조직학을 갖는 NSCLC, 또는 NSCLC 선암종)), 흑색종(예: 진행성 흑색종), 신장암(예: 신세포 암종), 간암, 간세포 암종, 골수종(예: 다발성 골수종), 전립선암, 유방암(예를 들어 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 또는 HER2/neu 중 1개, 2개, 또는 모두를 발현하지 않는 유방암, 예를 들어 삼중 음성 유방암), 대장암, 췌장암, 두경부암(예: 두경부 편평 세포 암종(HNSCC)), 항문암, 위식도암, 갑상선암, 자궁경부암, 림프구증식성 질환(예를 들어 이식 후 림프구증식성 질환) 또는 혈액암, T-세포 림프종, B-세포 림프종, 비호지킨 림프종, 또는 백혈병(예: 골수성 백혈병 또는 림프성 백혈병)으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 암은 암종(예를 들어 진행성 또는 전이성 암종), 흑색종, 또는 폐 암종(예: NSCLC)으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 암은 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장암, 폐암, 교모세포종, 신장암, 바람직하게는 췌장암, 전립선암, 유방암, 결장암, 또는 폐암으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 암은 췌장암, 폐암, 유방암, 흑색종, 대장암, 난소암, 위암, 갑상선암, 간암, 또는 전립선암이다.
항체 또는 이의 항원 결합 단편과 같은 결합제의 맥락에서 용어 “특이적으로 결합하는” 또는 “특이적 결합”은 무관한 항원보다 항원 또는 항원 내의 에피토프에 더 자주, 더 신속하게, 더 오래, 더 큰 친화도로, 더 큰 결합능으로, 또는 상기의 일부 조합으로 결합하는 결합제를 지칭한다. 소정의 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 0.1 mM 이하, 바람직하게는 약 1 μΜ 미만의 KD로 항원 또는 항원 내의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 상이한 종에서의 상동성 단백질 간의 서열 동일성 또는 단일 종 내의 단백질의 변이체 간의 서열 동일성 때문에, 특이적 결합은 둘 이상의 종의 단백질(예를 들어, 인간 SIRPα 및 cyno SIRPα)을 인식하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 소정의 구현예에서, 제1 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 제2 단백질에 특이적으로 결합하거나 결합하지 않을 수 있음을 이해할 것이다. 이와 같이, “특이적 결합”은 배타적 결합, 즉 하나의 단백질에만 결합하는 것을 (포함할 수 있지만) 반드시 필요로 하지는 않는다. 따라서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 소정의 구현예에서, 둘 이상의 단백질에 특이적으로 결합할 수 있다.
2개의 분자가 하나의 단백질에 특이적으로 결합하는지 여부를 결정하기 위한 방법은 본원에 기술되거나 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어 평형 투석, 표면 플라스몬 공명 등을 포함한다. 일 구현예에서, 특이적 결합은 본원의 실시예 섹션에 기술된 친화도 결합 방법에 따른 약 1 x 10-7 M(100 nM) 이하의 KD를 특징으로 한다. 또 다른 구현예에서, 특이적 결합은 본원의 실시예 섹션에 기술된 친화도 결합 방법에 따른 약 5 x 10-8 M(50 nM) 이하의 KD를 특징으로 한다. 또 다른 구현예에서, 특이적 결합은 본원의 실시예 섹션에 기술된 친화도 결합 방법에 따른 약 1 x 10-8 M(10 nM) 이하의 KD를 특징으로 한다. 또 다른 구현예에서, 특이적 결합은 본원의 실시예 섹션에 기술된 친화도 결합 방법에 따른 약 5 x 10-9 M(5 nM) 이하의 KD를 특징으로 한다.
용어 "피하 투여"는 약물 저장부에 담긴 약물, 예를 들어 본 발명의 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 동물 또는 인간 환자와 같은 대상체의 피부 아래에, 바람직하게는 피부와 피하 조직 사이의 포켓 내에, 비교적 느린 지속 전달에 의해 도입하는 것을 지칭한다. 피부를 꼬집거나 피부를 피하 조직으로부터 멀리 당기면 포켓이 생성될 수 있다.
용어 "피하 주입"은 약물 저장부에 담긴 약물, 예를 들어 본 발명의 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 대상체의 피부 아래에, 바람직하게는 피부와 피하 조직 사이의 포켓 내에, 비교적 느린 지속 전달에 의해, 30분 이하, 또는 90분 이하를 포함하되 이에 한정되지 않는 기간 동안 도입하는 것을 지칭한다. 임의로, 주입은 대상체의 피부 아래에 이식되는 약물 전달 펌프의 피하 이식에 의해 이루어질 수 있으며, 여기서 펌프는 소정의 양의 약물을 소정의 기간 동안, 예컨대 30분, 90분, 또는 치료 요법의 길이에 걸친 기간 동안 전달한다.
용어 “피하 볼루스”는 대상체의 피부 아래의 약물을 투여하는 것을 지칭하며, 여기서 볼루스 약물은 약 15분 미만 동안 전달되고; 다른 양태에서는 5분 미만 동안 전달되고, 또 다른 양태에서는 60초 미만 동안 전달된다. 또 다른 양태에서, 투여는 피부와 피하 조직 사이의 포켓 내에 이루어지며, 여기서 포켓은 피부를 꼬집거나 피부를 피하 조직의 윗쪽으로 멀리 잡아당김으로써 생성될 수 있다. 예를 들어, "피하 볼루스"는 본 발명의 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 대상체에게 약 15분 미만 동안; 또 다른 양태에서는 5분 미만 동안; 및 또 다른 양태에서는 60초 미만 동안 투여하는 것을 지칭한다.
용어 “치료적 유효량”은 치료 중인 장애의 증상 중 하나 이상을 완화시키거나 경감시키는 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 양을 지칭하는 데 사용된다. 그렇게 함에 있어서, 환자에게 유익한 결과를 갖는 양이 치료적 유효량이다. 효능은 치료 대상 병태에 따라 종래의 방식으로 측정될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료(treatment 및 therapy)" 등은 임의의 임상적으로 바람직한 또는 유익한 효과를 유도하는, 질환 또는 장애에 대한 치료적 및 예방적 또는 억제적 조치를 포함하는 것을 의미하며, 여기에는 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상의 완화 또는 경감, 질환 또는 장애의 퇴행, 지연, 또는 진행의 중단이 포함되지만 이에 한정되지는 않는다. 따라서, 예를 들어, 치료란 용어는 질환 또는 장애의 증상의 발생 전 또는 후에 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 투여하여 질환 또는 장애의 하나 이상의 징후를 예방하거나 제거하는 것을 포함한다. 또 다른 예로서, 상기 용어는 질환의 증상을 물리치기 위해 질환의 임상적 발현 후에 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 투여하는 것을 포함한다. 또한, 투여가 질환 또는 장애의 임상적 파라미터, 예컨대 조직 손상의 정도 또는 전이의 양 또는 정도에 영향을 미치는 경우, 발병 후 및 임상적 증상이 발생한 후 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 투여하는 것은, 치료가 질환의 완화로 이어지는지 여부에 관계없이, 본원에서 사용되는 “치료(treatment 또는 therapy)”를 포함한다. 또한, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편 조성물 또는 이의 항원 결합 단편, 조성물, 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하지 않을 때의 증상과 비교했을 때, 본 발명의 조성물이 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여 치료 중인 장애의 적어도 하나의 증상을 경감시키거나 완화시키는 한, 장애의 모든 증상이 완화되는지 여부에 관계없이 기저 장애의 효과적인 치료로 간주되어야 한다.
용어 "패키지 삽입물"은 치료 제품의 상업적 패키지에 관례적으로 포함된 지침을 지칭하도록 사용되며, 여기에는 치료 제품의 사용의 적응증, 사용, 투여, 금기 사항, 및/또는 이러한 치료 제품의 사용에 관한 경고가 담긴다.
항체
항-SIRPα 항체, 특히 인간 항-SIRPα 항체뿐만 아니라 본 발명의 항-SIRPα 항체를 포함하는 조성물 및 제조 물품이 본원에 기술되고 개시된다. 또한, 항-SIRPα 항체의 항원 결합 단편이 기술된다. 항-SIRPα 항체 및 이의 항원 결합 단편은 다양한 질환 또는 장애, 특히 CD47-매개 SIRPα 신호전달의 조절을 특징으로 하는 질환 또는 장애의 치료에 사용될 수 있다. 항-SIRPα 항체 및 이의 항원 결합 단편은 각각 SIRPα 에피토프를 특이적으로 인식하는 하나의 부분을 포함한다.
에피토프는 가장 흔하게는 단백질, 짧은 올리고펩티드, 올리고펩티드 모방체(예를 들어, SIRPα 항원의 항체 결합 특성을 모방하는 유기 화합물), 또는 이들의 조합이다. 항체에 대한 펩티드 또는 폴리펩티드 에피토프의 최소 크기는 약 4 내지 5개의 아미노산인 것으로 여겨진다. 펩티드 또는 폴리펩티드 에피토프는 예를 들어 적어도 7개의 아미노산 또는 예를 들어 적어도 9개의 아미노산 또는 예를 들어 약 15 내지 약 20개의 아미노산을 함유한다. 항체가 항원성 펩티드 또는 폴리펩티드를 이들의 삼차 형태로 인식할 수 있기 때문에, 에피토프를 포함하는 아미노산은 인접하지 않아도 되고, 일부 경우에는 심지어 동일한 펩티드 사슬 상에 있지 않을 수도 있다. 에피토프는 당업계에 공지된 다양한 기술, 예컨대 X-선 결정학, 수소/중수소 교환 질량 분광분석(HXMS), 부위 지향 돌연변이 유발, 알라닌 스캐닝 돌연변이 유발, 및 펩티드 스크리닝 방법에 의해 결정될 수 있다.
항-SIRPα 항체의 생성 및 이들의 특성 분석은 실시예에 기술되어 있다. 본 발명의 대표적인 항-SIRPα 항체의 CDR은 아래 표 1~25에 개시되어 있다. 중쇄 CDR-1, CDR-2, CDR3(HCDR1~3) 및 경쇄 CDR-1, CDR-2, CDR3(L-CDR1~3)은 Kabat, CCG, Chothia, IMGT, 및 North에 따른 넘버링 시스템에 따라 제공된다.
항-SIRPa 항체 서열
본 발명의 대표적인 항-SIRPa 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 아래 표 26~27에 개시되어 있다.
본 발명의 대표적인 항-SIRPα 항체는 표 28 또는 29에 제시된 것과 같은 경쇄 및/또는 중쇄 가변 영역 서열을 갖는다.
중쇄 가변 영역(VH) 아미노산 서열
클론명 VH 서열
서열번호
항체 A1

항체 A9
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQAPGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRADDTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSS 110
항체 A2


항체 A10


항체 A11
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQATGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAADTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSS 111
항체 A3


항체 A12
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQATGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRASDTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSS 112
항체 A4


항체 A13
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQAPGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAADTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSS 113
항체 A5


항체 A14
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQAPGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRASDTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSS 114
항체 A6


항체 A15
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQAPGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSS 115
항체 A7
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQATGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAGDTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSS 116
항체 A8


항체 A16
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQAPGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAGDTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSS 117
항체 E1


항체 E2


항체 E9
QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYNPSLKSRVTISLDMSINQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSS 118
항체 E3


항체 E4


항체 E12
QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYNPSLKSRVTISLDMSKNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSS 119
항체 E5


항체 E6


항체 E14
QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYNPSLKSRVTISLDKSKNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSS 120
항체 E7


항체 E10


항체 E16
QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYNPSLKSRVTISLDTSKNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSS 121
항체 E8


항체 E11


항체 E17
QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWMGFIYDNGRTFYNPSLKSRVTISLDMSMNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSS 122
항체 E13


항체 E15


항체 E20
QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYTGRTFYNPSLKSRVTISLDMSINQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSS 123
항체 E18


항체 E19


항체 E21
QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYTGRTFYNPSLKSRVTISLDMSKNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSS 124
항체 E22
QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIRDYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYQSSLKSRVTISLDTSKNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSS
 221
경쇄 가변 영역(VL) 아미노산 서열
클론명 VL 서열
서열번호

항체 A1

항체 A2

항체 A3

항체 A4

항체 A5

항체 A6

항체 A7

항체 A8
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGINNYAAWFQQKPGKAPKSLIYTASSLHSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYVSYPYTFGQGTKLEIK 125

항체 A9

항체 A10

항체 A11

항체 A12

항체 A13

항체 A14

항체 A15

항체 A16
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDINNYLAWFQQKPGKAPKSLIYTASSLHSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYVSYPYTFGQGTKLEIK 126

항체 E1

항체 E3

항체 E5

항체 E7

항체 E8

항체 E13

항체 E19
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLYSNGYAYLDWYLQRPGQSPQLLIYQGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVFYCMQALQTPLTFGGGTKVEIK 127
항체 E2 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLYSNGYAYLDWYLQRPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIK 128

항체 E4

항체 E6

항체 E10

항체 E11

항체 E15

항체 E18
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLYSNGYAYLDWYLQRPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIK 129

항체 E9

항체 E12

항체 E14

항체 E16

항체 E17

항체 E20

항체 E21
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLYSNAYNYLDWYLQRPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIK 130
항체 E22
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLYSTGYTYLDWYLQRPGQSPQLLIYGGSSRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVFYCGQALQTPLTFGQGTKVEIK 222
본 발명의 대표적인 항-SIRPα 항체는 표 30 또는 31에 제시된 것과 같은 중쇄 및/또는 경쇄를 포함할 수 있다.
항-SIRPα 항체의 전장 HC 서열
항체 서열 서열번호
항체 A EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQATGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAGDTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 131
항체 F EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQATGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAGDTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 132
항체 B QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGNYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVSGSGWYENYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 133
항체 C EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYDMHWVRQATGKGLEWVSVIGIAGDTYYPGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRVGDTAVYYCARGGSWDDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 134
항체 E QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYNSSLKSRVTISLDMSMNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 135
항체 G QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYNSSLKSRVTISLDMSMNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 136
항체 D EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFDMHWVRQPTGKGLEWVSTIGIAGDTYFPGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAGDTAVYYCARGGNWDDALDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 137
항체 A1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQAPGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRADDTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 138
항체 A2 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQATGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAADTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 139
항체 A3 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQATGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRASDTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 140
항체 A4 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQAPGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAADTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 141
항체 A5 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQAPGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRASDTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 142
항체 A6 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQAPGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 143
항체 A7 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQATGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAGDTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 144
항체 A8 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQAPGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAGDTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 145
항체 A9 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQAPGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRADDTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 146
항체 A10 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQATGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAADTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 147
항체 A11
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQATGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAADTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG 217
항체 A12 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQATGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRASDTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 148
항체 A13 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQAPGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAADTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 149
항체 A14 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQAPGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRASDTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 150
항체 A15 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQAPGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 151
항체 A16 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLSSYDMHWVRQAPGKGLEWVSAIGTAGDTYYTGSVKGRFTISRENAKNSLYLQMNSLRAGDTAVYYCVRGGVWDDAFDIWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 152
항체 E1 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYNPSLKSRVTISLDMSINQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 153
항체 E2 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYNPSLKSRVTISLDMSINQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 154
항체 E3 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYNPSLKSRVTISLDMSKNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 155
항체 E4 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYNPSLKSRVTISLDMSKNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 156
항체 E5 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYNPSLKSRVTISLDKSKNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 157
항체 E6 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYNPSLKSRVTISLDKSKNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 158
항체 E7 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYNPSLKSRVTISLDTSKNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 159
항체 E8 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWMGFIYDNGRTFYNPSLKSRVTISLDMSMNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 160
항체 E9 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYNPSLKSRVTISLDMSINQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 161
항체 E10 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYNPSLKSRVTISLDTSKNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 162
항체 E11 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWMGFIYDNGRTFYNPSLKSRVTISLDMSMNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 163
항체 E12 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYNPSLKSRVTISLDMSKNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 164
항체 E13 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYTGRTFYNPSLKSRVTISLDMSINQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 165
항체 E14 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYNPSLKSRVTISLDKSKNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 166
항체 E15 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYTGRTFYNPSLKSRVTISLDMSINQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 167
항체 E16 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYNPSLKSRVTISLDTSKNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 168
항체 E17 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWMGFIYDNGRTFYNPSLKSRVTISLDMSMNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 169
항체 E18 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYTGRTFYNPSLKSRVTISLDMSKNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 170
항체 E19 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYTGRTFYNPSLKSRVTISLDMSKNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 171
항체 E20 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYTGRTFYNPSLKSRVTISLDMSINQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 172
항체 E21 QVQLQESGPGLVRPSETLSLTCTVSGGSIRNYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYTGRTFYNPSLKSRVTISLDMSKNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 173
항체 E22 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIRDYYWSWIRQPPGKGLEWIGFIYYNGRTFYQSSLKSRVTISLDTSKNQFSLKMTSVTAADTAVYYCARVRAYSGIGLDGTDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG 219
항-SIRP-α 항체의 전장 LC 서열
항체 서열 서열번호
항체 A
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDINNYLAWFQQKPGKAPKSLIYTASSLHSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYVSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 174
항체 F
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDINNYLAWFQQKPGKAPKSLIYTASSLHSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYVSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 175
항체 B
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQQKPGKAPKLLIYAESSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 176
항체 C
DIQMTQSPSSLSASIGDKVTITCRASQDINNYLAWFQQKPGKAPKSLIYTASSLQSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYVSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 177
항체 E
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLYSNGYNYLDWYLQRPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVFYCMQALQTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 178
항체 G
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLYSNGYNYLDWYLQRPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVFYCMQALQTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 179
항체 D
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDINNYLAWFQQKPGKAPKSLIYTASSLQSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNTYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 180
항체 A1
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGINNYAAWFQQKPGKAPKSLIYTASSLHSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYVSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 181
항체 A2
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGINNYAAWFQQKPGKAPKSLIYTASSLHSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYVSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 182
항체 A3
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGINNYAAWFQQKPGKAPKSLIYTASSLHSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYVSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 183
항체 A4
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGINNYAAWFQQKPGKAPKSLIYTASSLHSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYVSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 184
항체 A5
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGINNYAAWFQQKPGKAPKSLIYTASSLHSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYVSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 185
항체 A6
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGINNYAAWFQQKPGKAPKSLIYTASSLHSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYVSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 186
항체 A7
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGINNYAAWFQQKPGKAPKSLIYTASSLHSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYVSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 187
항체 A8
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGINNYAAWFQQKPGKAPKSLIYTASSLHSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYVSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 188
항체 A9
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDINNYLAWFQQKPGKAPKSLIYTASSLHSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYVSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 189
항체 A10
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDINNYLAWFQQKPGKAPKSLIYTASSLHSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYVSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 190
항체 A11
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDINNYLAWFQQKPGKAPKSLIYTASSLHSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYVSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 218
항체 A12
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항체 A13
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDINNYLAWFQQKPGKAPKSLIYTASSLHSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYVSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 192
항체 A14
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항체 A15
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항체 A16
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항체 E1
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항체 E2
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항체 E3
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항체 E4
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항체 E5
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항체 E6
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항체 E7
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항체 E8
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항체 E9
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항체 E10 DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQSLLYSNGYAYLDWYLQRPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 205
항체 E11
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항체 E12
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항체 E13
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항체 E14
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항체 E15
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항체 E16
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항체 E17
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항체 E18
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항체 E19
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항체 E20
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항체 E21
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항체 E22
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본 발명의 대표적인 항-SIRPα 항체는 표 32 또는 33에 제시된 것과 같은 중쇄 및/또는 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있다.
항-SIRPα 항체의 불변 영역의 예시적인 HC 및 LC 서열
항체 서열 서열번호
IgG1 - HC ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 234
IgG1 - LC RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 235
IgG4 - HC ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 236
IgG4 -LC RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 237
IgG1-KO -HC ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK 238
IgG1-KO -LC RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC 239
아미노산 서열 변이체
변이체 항-SIRPα 항체 및 이의 항체 단편은 표 1~25에 표시된 CDR 세트에 기초하여 조작될 수 있다. 변이체 항-SIRPα 항체 및 항체 단편에서, CDR의 아미노산 서열은 변하지 않거나 최소한의 변화(예를 들어 1~5개의 변화)를 갖지만, 주변 영역, 예를 들어 FR 영역은 조작될 수 있다는 것을 이해해야 한다. 항-SIRPα 항체의 아미노산 서열 변이체는 항-SIRPα 항체 DNA에 적절한 뉴클레오티드 변화를 도입하거나 펩티드 합성에 의해 제조될 수 있다. 이러한 변이체는, 예를 들어 본원의 실시예의 항-SIRPα 항체의 아미노산 서열로부터 잔기의 결실 및/또는 상기 아미노산 서열 내에 잔기의 삽입 및/또는 상기 아미노산 서열 내의 잔기의 치환을 포함한다. 결실, 삽입, 및 치환의 임의의 조합은 최종 작제물이 원하는 특성을 갖는 경우, 최종 작제물에 이르도록 이루어진다. 아미노산 변화는 인간 또는 변이체 항-SIRPα 항체의 번역 후 과정을 변경할 수도 있는데, 예컨대 당질화 부위의 수 또는 위치를 변경할 수도 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 가변 중쇄 및 가변 경쇄를 갖는 항-SIRPα 항체 또는 이의 항체 단편을 포함하며, 여기서 가변 중쇄 아미노산 서열 및 가변 경쇄 아미노산 서열은 표 26~29에 개시된 아미노산 서열과 적어도 90%, 적어도 92.5%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하되, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SIRPα-V1 및/또는 SIRPα-V2에 대한 결합을 유지한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 가변 중쇄 및 가변 경쇄를 갖는 항-SIRPα 항체 또는 이의 항체 단편을 포함하며, 여기서 가변 중쇄 아미노산 서열 및 가변 경쇄 아미노산 서열은 서열번호 100, 101, 102, 103, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 104, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 221, 및 서열번호 105, 106, 107, 108,109, 126, 127, 128, 129, 130, 또는 222의 아미노산 서열과 각각 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 92.5%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하다.
일부 구현예에서, 본 발명은 중쇄 및 경쇄를 갖는 항-SIRPα 항체 또는 이의 항체 단편을 포함하며, 여기서 중쇄 아미노산 서열 및 경쇄 아미노산 서열은 표 30 및 31에 개시된 아미노산 서열과 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하되, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SIRPα-V1 및/또는 SIRPα-V2에 대한 결합을 유지한다.
일부 구현예에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항체 단편은 서열번호 100, 101, 102, 103, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 104, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 221에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항체 단편은 서열번호 100, 101, 102, 103, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 104, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 221의 가변 중쇄 서열을 포함하는 항-SIRPα 항체 또는 이의 항체 단편의 결합 활성 및/또는 기능적 활성을 보유한다. 또 다른 구현예에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항체 단편은 서열번호 100, 101, 102, 103, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 104, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 221의 가변 중쇄 서열을 포함하고, 중쇄 가변 서열에서 하나 이상의 보존적 아미노산 치환, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 1~2, 1~3, 1~4, 또는 1~5개의 보존적 아미노산 치환을 갖는다. 또 다른 구현예에서, (Kabat의 넘버링 시스템에 기초한) 하나 이상의 보존적 아미노산 치환은 서열번호 100, 101, 102, 103, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 104, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 221의 하나 이상의 프레임워크 영역 내에 포함된다.
일부 구현예에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항체 단편은 서열번호 100, 101, 102, 103, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 104, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 221에 제시된 항-SIRPα 중쇄 가변 영역 서열과 적어도 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99%의 서열 동일성을 갖는 가변 중쇄 서열을 포함하고, 프레임워크 영역에서 (Kabat의 넘버링 시스템에 기초한) 하나 이상의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 서열번호 100, 101, 102, 103, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 104, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 221에 제시된 가변 중쇄 서열 및 서열번호 105, 106, 107, 108,109, 126, 127, 128, 129, 130, 또는 222에 제시된 가변 경쇄 서열을 포함하는 항-SIRPα 항체 또는 이의 항체 단편의 결합 활성 및/또는 기능적 활성을 보유한다.
일부 구현예에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항체 단편은 서열번호 105, 106, 107, 108,109, 126,127, 128, 129, 130, 또는 222에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 포함한다. 다른 구현예에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항체 단편은 서열번호 105, 106, 107, 108,109, 126, 127, 128, 129, 130, 또는 222의 가변 경쇄 서열을 포함하는 항-SIRPα 항체 또는 이의 항체 단편의 결합 활성 및/또는 기능적 활성을 보유한다. 또 다른 구현예에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항체 단편은 서열번호 105, 106, 107, 108,109, 126, 127, 128, 129, 130, 또는 222의 가변 경쇄 서열을 포함하고, 경쇄 가변 서열에서 하나 이상의 보존적 아미노산 치환, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5, 1~2, 1~3, 1~4, 또는 1~5개의 보존적 아미노산 치환을 갖는다. 또 다른 구현예에서, (Kabat의 넘버링 시스템에 기초한) 하나 이상의 보존적 아미노산 치환은 서열번호 105, 106, 107, 108,109, 127, 128, 129, 130, 또는 222의 하나 이상의 프레임워크 영역 내에 포함된다.
일부 구현예에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항체 단편은 서열번호 105, 106, 107, 108,109, 126, 127, 128, 129, 130, 또는 222에 제시된 항-SIRPα 경쇄 가변 영역 서열과 적어도 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99%의 서열 동일성을 갖는 가변 경쇄 서열을 포함하고, 프레임워크 영역에서 (Kabat의 넘버링 시스템에 기초한) 하나 이상의 보존적 아미노산 치환을 포함하고, 서열번호 100, 101, 102, 103, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 104, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 221에 제시된 가변 중쇄 서열 및 서열번호 105, 106, 107, 108,109, 126, 127, 128, 129, 130, 또는 222에 제시된 가변 경쇄 서열을 포함하는 항-SIRPα 항체 또는 이의 항체 단편의 결합 활성 및/또는 기능적 활성을 보유한다.
일부 구현예에서, 본 발명은 아미노산 치환을 갖는 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 이들 변이체의 경우, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편에서 적어도 하나의 아미노산 잔기가 제거되고 그 자리에 상이한 잔기가 삽입된다. 치환 돌연변이 유발에 대한 가장 큰 관심 부위는 초가변 영역을 포함하지만, FR 변경도 고려된다. 보존적 치환은 표 33의 “바람직한 치환”이라는 제목 하에 나타나 있다. 이러한 치환이 생물학적 활성의 변화를 초래하는 경우, “예시적인 치환”으로 명명되거나 아미노산 부류와 관련하여 이하에서 후술되는 것과 같은 보다 실질적인 변화가 도입될 수 있고 생성물을 스크리닝할 수 있다.
단백질 화학에서, 항체의 생물학적 특성은 (a) 치환 영역에서 폴리펩티드 백본의 구조, 예를 들어 시트 또는 나선형 형태를 유지하거나, (b) 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성을 유지하거나, (c) 측쇄의 벌크를 유지하는 데 항체가 미치는 효과에 있어서 상당히 상이한 치환을 선택함으로써 달성될 수 있는 것으로 일반적으로 인정된다. 자연 발생 잔기는 공통 측쇄 특성에 기초하여 기로 나누어진다:
(1) 소수성: 노르류신, met, ala, val, leu, ile;
(2) 중성 친수성: cys, ser, thr;
(3) 산성: asp, glu;
(4) 염기성: asn, gin, his, lys, arg;
(5) 사슬 배향에 영향을 미치는 잔기: gly, pro; 및
(6) 방향족: trp, tyr, phe.
비보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원을 다른 부류로 교환하는 것을 수반하게 된다.
항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 적절한 형태를 유지하는 데 관여하지 않는 임의의 시스테인 잔기 또한 일반적으로 세린으로 치환되어, 분자의 산화 안정성을 개선하거나, 비정상적인 가교 결합을 방지하거나, 세포독성 또는 세포증식억제 화합물에 대한 확립된 접합 지점을 제공할 수 있다. 역으로, 시스테인 결합(들)이 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 첨가되어 안정성을 개선할 수 있다(특히 항체가 Fv 단편과 같은 항체 단편인 경우).
항체의 또 다른 유형의 아미노산 변이체는 항체의 원래의 당질화 패턴을 변경하는 것을 포함한다. 이러한 맥락에서 용어 "변경"은 항체에서 발견되는 하나 이상의 탄수화물 모이어티를 결실시키고/시키거나 이전에는 항체에 존재하지 않았던 하나 이상의 당질화 부위를 첨가하는 것을 의미한다. 예를 들어, 항체는 인간 IgG1 중쇄의 위치 297에서 아미노산 치환을 포함함으로써, 아스파라긴 297(예를 들어, N297A, N297G)을 치환함으로써 올리고당전달효소 효소 복합체 매개 당질화를 제거할 수 있다.
일부 양태에서, 본 발명은 본원에 기술된 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 아미노산 서열 변이체를 암호화하는 핵산 분자를 포함한다. 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 아미노산 서열 변이체를 암호화하는 핵산 분자는 당업계에 알려진 다양한 방법에 의해 제조된다. 이들 방법은 천연 공급원으로부터의 단리(자연 발생 아미노산 서열 변이체의 경우) 또는 올리고뉴클레오티드 매개 (또는 부위 지향) 돌연변이 유발, PCR 돌연변이 유발, 및 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 앞서 제조한 변이체 또는 비-변이체 버전의 카세트 돌연변이 유발에 의한 제조를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 예를 들어, 본 발명에 따른 핵산 분자는 또한 엄중도 조건 하에 본원에 개시된 핵산 분자에 혼성화되는 핵산 분자를 포함하며, 여기서 본 발명의 범주에 포함되는 용어 “엄중도 조건”은, 예를 들어 50% 포름아미드, 5×SSC, 및 1% SDS를 포함하는 42℃의 완충액에서의 혼성화, 또는 5×SSC 및 1% SDS를 포함하는 65℃의 완충액에서의 혼성화를 포함할 수 있고, 둘 다 65℃에서 0.2×SSC 및 0.1% SDS로 세척하는 것을 포함한다. 예시적인 엄중도 혼성화 조건은 40% 포름아미드, 1 M NaCl, 및 1% SDS를 포함하는 37℃의 완충액에서의 혼성화, 및 45℃에서 1×SSC에서 세척하는 것을 포함할 수도 있다.
소정의 구현예에서, 항-SIRPα 항체는 항체 단편이다. 항체 단편의 생산을 위해 개발된 기술이 있다. 단편은 온전한 항체의 단백질 분해를 통해 유래될 수 있다(예를 들어, Morimoto 등의 문헌[1992, Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117]; 및 Brennan 등의 문헌[1985, Science 229:81] 참조). 대안적으로, 단편은 재조합 숙주 세포에서 직접 생산될 수 있다. 예를 들어, Fab'-SH 단편은 대장균으로부터 직접 회수한 다음 화학적으로 커플링시켜 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다(예를 들어, Carter 등의 문헌[1992, Bio/Technology 10:163-167] 참조). 다른 접근법에 의하면, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접 단리될 수 있다. 항체 단편의 생산을 위한 다른 기술은 당업자에게 명백할 것이다.
일 양태에서, 항-SIRPα 항체 및 이의 항원 결합 단편은 당질화, 산화, 또는 탈아미드화와 같은 변형을 포함할 수 있다.
소정의 구현예에서, 온전한 항체보다는 항-SIRPα 항체 단편을 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 항체 단편의 혈청 반감기를 증가시키기 위해 항체 단편을 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 이는, 예를 들어, 구제 수용체 결합 에피토프를 항체 단편에 혼입함으로써 달성될 수 있다. 하나의 방법에서, 항체 단편의 적절한 영역을 변경하거나(예를 들어 돌연변이시키거나), 에피토프를 펩티드 태그 내로 혼입한 다음, 이를 예를 들어 DNA 또는 펩티드 합성에 의해 항체 단편의 일 단부 또는 중간에 융합시킬 수 있다(예를 들어, WO 96/32478 참조). 예를 들어, 전장 IgG 스캐폴드의 사용이 바람직하지 않은 경우, 본 발명의 항체 단편을 인간 혈청 알부민에 융합시켜 혈청 반감기를 증가시킬 수도 있다. 인간 혈청 알부민과 항체 단편의 이러한 융합 단백질은, 결합능을 증가시키거나 혈청 반감기가 연장된 이중특이적 결합 단백질을 생성하기 위해 2개의 상이한 항체 단편을 융합해야 하는 상황에서 유리할 수 있다(예를 들어, WO 05/077042 A2 참조).
항체 상에 존재하는 임의의 탄수화물 모이어티의 제거는 화학적으로 또는 효소적으로 달성될 수 있다. 화학적 탈당질화는 Hakimuddin 등의 문헌[1987, Arch. Biochem. Biophys. 259:52] 및 Edge 등의 문헌[1981, Anal. Biochem., 118:131]에 기술되어 있다. 항체 상의 탄수화물 모이어티의 효소적 절단은 Thotakura 등의 문헌[1987, Meth. Enzymol 138:350]에 기술된 것과 같은 다양한 엔도- 및 엑소-글리코시다아제를 사용함으로써 달성될 수 있다.
또 다른 유형의 유용한 변형은, 미국 특허 제4,640,835호, 미국 특허 제4,496,689호, 미국 특허 제4,301,144호, 미국 특허 제4,670,417호, 미국 특허 제4,791,192호, 및 미국 특허 제4,179,337호 중 하나 이상에 제시된 방식으로, 항체를 다양한 비단백질성 중합체, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 또는 폴리옥시알킬렌 중 하나에 연결하는 것을 포함한다.
생물물리학적 특성
일 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 유리한 생물물리학적 특성을 갖는 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 일 양태에서, 본 발명의 인간 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 적어도 90% 단량체 형태, 또는 적어도 92% 단량체 형태, 또는 적어도 95% 단량체 형태, 또는 적어도 96% 단량체 형태, 또는 적어도 97% 단량체 형태, 또는 적어도 98% 단량체 형태, 또는 적어도 99% 단량체 형태로 완충액 중에 존재한다. 추가의 양태에서, 본 발명의 인간 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 적어도 90% 단량체 형태, 또는 적어도 92% 단량체 형태, 또는 적어도 95% 단량체 형태, 또는 적어도 96% 단량체 형태, 또는 적어도 97% 단량체 형태, 또는 적어도 98% 단량체 형태, 또는 적어도 99% 단량체 형태로 완충액 중에 1주일, 1개월, 또는 4개월 동안 유지된다. 상기 단량체 백분율은 하나 이상의 정제 단계, 예를 들어 단백질 A 정제에 임의로 이어지는 양이온 교환 크로마토그래피가 수행된 후에 결정될 수 있다. 상기 단량체 백분율은 낮은 pH 처리, 예를 들어 pH 3.5 처리 후에 결정될 수 있다. 상기 단량체 백분율은 실온(예: 25℃)에서, 또는 승온 상태(예: 40℃)에서 완충액 중에 1주일, 1개월, 또는 4개월 방치한 후에 결정될 수 있다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 고농도에서 안정하다.
또 다른 양태에서, 본 발명의 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 낮은 점도를 갖는다.
에피토프 결합
또 다른 양태에서, 본 발명은 특이적 선형 및/또는 입체 "SIRPα 항원 에피토프" 및 "SIRPα 에피토프"를 인식하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 관한 것이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 “SIRPα 항원 에피토프” 및 “SIRPα 에피토프”는 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 결합할 수 있는 분자(예: 펩티드) 또는 분자의 단편을 지칭한다. 이들 용어는, 예를 들어, 본 발명의 항체 또는 항체 단편 중 어느 하나에 의해 인식되는 SIRPα 항원 결정인자 또는 분자와 항체 간의 주요 접촉 지점을 추가로 포함한다.
SIRPα 항원 에피토프는 단백질, 단백질 단편, 펩티드 등에 포함될 수 있다. 에피토프는 가장 흔하게는 단백질, 짧은 올리고펩티드, 올리고펩티드 모방체(예를 들어, SIRPα 항원의 항체 결합 특성을 모방하는 유기 화합물), 또는 이들의 조합이다.
본 발명의 일 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 240~252에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SIRPα 단백질 상에서 특이적 선형 또는 입체적 "SIRPα 에피토프"를 인식한다. 본 발명의 일 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 253~260 및 264 중 어느 하나, 특히 서열번호 256 및 257 중 어느 하나 또는 그 이상에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 SIRPα 단백질 상에서 특이적 선형 또는 입체적 "SIRPα 에피토프"를 인식한다. 본 발명의 일 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음의 아미노산을 포함하는 SIRPα 에피토프에 결합한다: 서열번호 266에 제시된 것과 같은 LEU 60, ILE 61, VAL 63, GLY 64, PRO 65, GLN 82, LYS 83, GLU 84, THR 97, LYS 98, ARG 99, GLU 100, LYS 126, GLY 127, SER 128, PRO 129, 및 ASP 130. 본 발명의 일 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 265에 제시된 것과 같은 아미노산 LEU 60, ILE 61, VAL 63, GLY 64, PRO 65, GLN 82, LYS 83, GLU 84, THR 97, LYS 98, ARG 99, ASN 100, LYS 126, GLY 127, SER 128, PRO 129, 및 ASP 130을 포함하는 SIRPα 에피토프에 결합한다. 본 발명의 또 다른 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 아미노산 ASP130을 포함하는 SIRPα 에피토프에 결합한다. 또 다른 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 253, 서열번호 254, 서열번호 255, 서열번호 264, 및 서열번호 256 중 어느 하나 또는 그 이상, 특히 서열번호 256을 포함하는 SIRPα 에피토프에 결합한다.
본 발명의 일 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 266에 제시된 것과 같은 아미노산 ARG 70, GLY 71, ALA 72, GLY 73, PRO 74, ALA 75, ARG 76, GLU 77, ALA 114, ALA 116, GLY 117, THR 118, TYR 120, THR 131, GLU 132, PHE 133, SER 135, 및 GLU 140을 포함하는 SIRPα 에피토프에 결합한다. 본 발명의 일 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호 265에 제시된 것과 같은 아미노산 ARG 70, GLY 71, ALA 72, GLY 73, PRO 74, GLY 75, ARG 76, GLU 77, ALA 114, ALA 116, GLY 117, THR 118, TYR 120, VAL 132, GLU 133, PHE 134, SER 136, 및 GLU 141을 포함하는 SIRPα 에피토프에 결합한다. 본 발명의 또 다른 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 아미노산 ALA72를 포함하는 SIRPα 에피토프에 결합한다. 또 다른 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 257, 서열번호 258, 서열번호 259, 및 서열번호 260 중 어느 하나 또는 그 이상을 포함하고, 특히 서열번호 257을 포함하는 SIRPα 에피토프에 결합한다. 본 발명의 또 다른 양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항체 A~E 중 어느 하나가 SIRPα에 결합하는 것을 차단한다.
추가의 구현예에서, 에피토프는 아래 표 34 또는 35에 제시된 SIRPα 단백질 상에 존재한다.
SIRP 단백질의 서열
단백질
서열
(세포외 도메인) 		서열번호
인간 SIRPαV1 (NP_542970.1) EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAENTGSNERNIYGGSG 240
인간 SIRPαV2 (CAA71403.1) EEELQVIQPDKSVSVAAGESAILHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPARELIYNQKEGHFPRVTTVSESTKRENMDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDTEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAENTGSNERNIYGGSG 241
인간 SIRPβ1 (NP_006056.2). EDELQVIQPEKSVSVAAGESATLRCAMTSLIPVGPIMWFRGAGAGRELIYNQKEGHFPRVTTVSELTKRNNLDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAVRATPEHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPAGDSVSYSIHSTARVVLTRGDVHSQVICEIAHITLQGDPLRGTANLSEAIRVPPTLEVTQQPMRAENQANVTCQVSNFYPRGLQLTWLENGNVSRTETASTLIENKDGTYNWMSWLLVNTCAHRDDVVLTCQVEHDGQQAVSKSYALEISAHQKEHGSDITHEAALAPTAPLGGSG 242
인간 SIRPβL/SIRPβ1v3 (NP_001129316.1) EEELQVIQPDKSISVAAGESATLHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDHVEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPAGDSVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTLTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAPGPALASAAPLGGSG 243
인간 SIRPγ (NP_061026.2) EEELQMIQPEKLLLVTVGKTATLHCTVTSLLPVGPVLWFRGVGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRISSITPADVGTYYCVKFRKGSPENVEFKSGPGTEMALGAKPSAPVVLGPAARTTPEHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPTGQSVAYSIRSTARVVLDPWDVRSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSEAIRVPPTLEVTQQPMRVGNQVNVTCQVRKFYPQSLQLTWSENGNVCQRETASTLTENKDGTYNWTSWFLVNISDQRDDVVLTCQVKHDGQLAVS KRLALEVTVHQKDQSSDATP

244
인간 CD47 (NP_942088) WQPPLLFNKTKSVEFTFGNDTVVIPCFVTNMEAQNTTEVYVKWKFKGRDIYTFDGQANKSTVPTDFSSAKIEVSQLLKGDASLKMDKSDAVSHTGNYTCEVTELTREGETIIELKYRVVS 245
마우스 SIRPα
(NP 031573)		 KELKVTQPEKSVSVAAGDSTVLNCTLTSLLPVGPIKWYRGVGQSRLLIYSFTGEHFPRVTNVSDATKRNNMDFSIRISNVTPEDAGTYYCVKFQKGPSEPDTEIQSGGGTEVYVLAKPSPPEVSGPADRGIPDQKVNFTCKSHGFSPRNITLKWFKDGQELHHLETTVNPSGKNVSYNISSTVRVVLNSMDVHSKVICEVAHITLDRSPLRGIANLSNFIRVSPTVKVTQQSPTSMNQVNLTCRAERFYPEDLQLIWLENGNVSRNDTPKNLTKNTDGTYNYTSLFLVNSSAHREDVVFTCQVKHDQQPAITRNHTVLGLAHSSDQGSMQTFPGNNATHNWN 246
CySIRPα
NP_001271679		 EEELQVIQPEKSVSVAAGDSATLNCTVSSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNLKEGHFPRVTAVSDPTKRNNMDFSIRISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDVELKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAVRATAEHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDVQTNVDPAGKSVSYSIRSTARVLLTRRDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSEAIRVPPFLEVTQQSMRADNQVNVTCQVTKFYPQRLQLTWLENGNVSRTEMASALPENKDGTYNWTSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVNKSFSVKVSAHPKEQGSNTAAENTGTNERNIYGGSG 247
CySIRPα
EGM_02252		 EEELQVIQPEKSVSVAAGESATLNCTATSLIPVGPIQWFRGVGPGRELIYHQKEGHFPRVTPVSDPTKRNNMDFSIRISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDVELKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAVRATAEHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPAGKSVSYSIRSTARVVLTRRDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSEAIRVPPFLEFTQQSMRADNQVNVTCQVMKFYPQRLQLTWLENGNVSRTEMASALPENKDGTYNWTSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVNKSFSVKVSAHPKEQGSNTAAENTGTNERNIYGGSG 248
CySIRPα
XP_015313155		 EEELQVIQPEKSVSVAAGDSATLNCTVSSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNLKEGHFPRVTPVSDPTKRNNMDFSIRISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDVELKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAVRATAEHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPAGKSVSYSIRSTARVVLTRRDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSEAIRVPPFLEVTQQSMRADNQVNVTCQVTKFYPQRLQLTWLENGNVSRTEMASALPENKDGTYNWTSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVNKSFSVKVSAHPKEQGSNTAAENTGTNERNIYGGSG 249
Cyno
SIRPβ1v3
XP_005568593		 EEELQVIQPEKSVSVTAGESATLNCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNLKEGHFPRVTTVLDPTKRNNMDFSIHISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDVELKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPTARATPEHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPAGKSVSYSIRSTARVVLTRRDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSEAIRVPPTLEVFQRPMRAENQVNVTCQVRKFYPQRLLLTWLENGNVSQTETASTLTENKDGTYNWRSWLLVNTCAHRDGVVLTCQVEHDGQPAVSKSHALEVSAHQKEQCSDTTSGPVLAPTAPLGGSG 250
Cyno
SIRPβ1
XP_005568598		 EEELQVIQPEKSISVAAGESATLNCTVTSLIPVGPIQWFRGVGPGRELIFNLQEGHFPRVTPVSDPTKRNNMDFSILISSITPADAGTYYCVKFRKGSPDVELKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAVRATAEHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTSVDPAGKSVSYSIRSTARVVLTRRDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSEAIRVPPFLEVTQQSMRAENQANITCQVSNFYPQRLLLTWLENGNVSQTETASTLTENKDGTYNWTSWLLVNICAHRDDVVLTCQVKHDGQPAVSKSHTLEISAHQKEQDSDVTHGLALAPTAPLGGSG 251
Cyno
SIRPη
XP_005568591		 EEELQMIQPEKLLLVAVGESATLNCTVTSLLPVGPVLWFRGVGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRISSITPADAGTYYCVKFRKGSPENVEFKSGPGTEMALRAKPSAPVVSGPAARATPEHTVSFTCKSHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPAGQSVSYSIRSTARVVLAPWDVRSQVTCEVAHVTLQGDPLRGTANLSEAIRVPPTLEVTQQPMRAGNQVNITYQVRNFYPQNLQLTWLENGNVCRTETASTLTENKDGTYNWTSWLLVNTSDQRDDVVLTCQVKHDGQLAVNKSLVLEVSAHQKDQSSDATHGGSG 252
SIRPα 에피토프의 서열
단백질 서열 서열번호
인간 SIRPαV1 또는 V2
LIPVGP 253
인간 SIRPαV1 또는 V2 QKE 254
인간 SIRPαV1 TKRN 255
인간 SIRPαV2 TKRE 264
인간 SIRPαV1 또는 V2 KGSPD 256
인간 SIRPαV1 또는 V2 RGAGPGRE 257
인간 SIRPαV1 또는 V2 AGTYY 258
인간 SIRPαV1 VEFKSGAGTE 259
인간 SIRPαV2 TEFKSGAGTE 260
본 발명은 또한, SIRPα에 결합하기 위해 본 발명에 따른 항-SIRPα 항체와 경쟁하는 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 SIRPα에 결합하기 위해 항체 A~항체 E 중 어느 하나와 경쟁하는 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 경쟁 검정은, 예를 들어 바이오센서를 사용해 [PLoS One. 2014; 9(3): e92451]에 기술된 것과 같이 수행되거나, [PLoS One 2020 Mar 5;15(3):e0229206]에 기술된 것과 같이 수행되거나, 본원에 개시된 방법에 의해 수행될 수 있다.
치료적 용도
일 구현예에서, 본 발명의 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SIRPα 경로 장애를 치료 및/또는 예방하는 데 유용하다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 의약으로서 유용하다.
따라서, 일 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 SIRPα와 CD47 간의 상호작용을 조절하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명에 따른 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 조성물을, 상기 대상체에서 CD47-매개 SIRPα 신호 전달을 차단하기에 충분한 양으로 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 SIRPα와 CD47 간의 상호작용을 조절하는 데 사용하기 위한 본 발명에 따른 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 SIRPα와 CD47 간의 상호작용을 조절하기 위한 의약을 제조함에 있어서 본 발명에 따른 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편의 용도를 제공한다.
일 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 골수 세포 식균작용을 향상시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명에 따른 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 조성물을, 상기 대상체에서 면역 반응을 향상시키기에 충분한 양으로 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 골수 세포 활성을 향상시키는 데 사용하기 위한 본 발명에 따른 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 골수 세포 활성을 향상시키기 위한 의약을 제조함에 있어서 본 발명에 따른 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도를 제공한다.
일 구현예에서, 대상체에서 SIRPα 경로 질환 또는 장애는 본 발명에 따른 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 암, 염증성 질환, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 감염성 질환, 또는 섬유증을 치료하거나 예방하는 데 사용하기 위한 본 발명에 따른 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 암, 염증성 질환, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 감염성 질환, 또는 섬유증을 치료하거나 예방하는 데 사용하기 위한 의약을 제조함에 있어서 본 발명에 따른 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도를 제공한다.
따라서, 일 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 상기 질환 또는 장애 중 하나를 치료하거나 예방하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명에 따른 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 상기 질환 또는 장애 중 하나를 치료하거나 예방하는 데 사용하기 위한 본 발명에 따른 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명은 대상체에서 상기 질환 또는 장애 중 하나를 치료하거나 예방하기 위한 의약을 제조함에 있어서 본 발명에 따른 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도를 제공한다.
비치료적 용도
본원에 기술된 항체는 친화도 정제제로서 유용하다. 이러한 프로세스에서, 항체는 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 단백질 A 수지와 같은 고상 상에 고정된다. 고정된 항체는 정제 대상 SIRPα 단백질(또는 이의 단편)을 함유하는 샘플과 접촉되고, 그 후 지지체는 적절한 용매로 세척되는데, 이는 고정된 항체에 결합된 SIRPα 단백질을 제외하고, 샘플 내의 실질적으로 모든 물질을 제거하게 된다. 마지막으로, 지지체는 또 다른 적절한 용매로 세척되는데, 이는 항체로부터 SIRPα 단백질을 방출하게 된다.
본원에 개시된 것과 같은 본 발명의 SIRPα 항체 및 이의 단편은 SIRPα 단백질을 검출 및/또는 정량화하기 위한, 예를 들어 특정 세포, 조직, 또는 혈청에서 SIRPα 발현을 검출하는 진단 검정에도 유용하다.
이는, 일부 구현예에서, 예를 들어 검출 가능한 모이어티로 항체를 표지하는 진단 목적에 유리할 것이다. 방사성 동위원소, 형광 표지, 효소 기질 표지, 양자 점 등을 포함하는 다수의 검출 가능한 표지가 이용 가능하다. 표지는 다양한 알려진 기술을 사용하여 항체와 간접적으로 접합될 수 있다. 예를 들어, 항체는 비오틴과 접합될 수 있고, 전술한 표지의 3개의 넓은 카테고리 중 어느 하나가 아비딘과 접합될 수 있거나, 그 반대일 수도 있다. 비오틴은 아비딘에 선택적으로 결합하므로, 표지는 이러한 간접적인 방식으로 항체와 접합될 수 있다. 대안적으로, 항체와 표지의 간접 접합을 달성하기 위해, 항체를 작은 합텐(예: 디곡신)과 접합시킬 수 있고, 전술한 상이한 유형의 표지 중 하나를 항-합텐 항체(예: 항-디곡신 항체)와 접합시킨다. 따라서, 표지와 항체의 간접 접합이 달성될 수 있다.
진단 키트
항-SIRPα 항체 또는 이의 단편은 진단 키트, 즉 진단 검정을 수행하기 위한 지침과 소정량의 시약의 포장된 조합에 사용될 수 있다. 항체가 효소로 표지되는 경우, 키트는 검출 가능한 발색단 또는 형광단을 제공하는 기질 전구체와 같은 효소에 의해 요구되는 기질 및 보조인자를 포함할 수 있다. 또한, 안정화제, 완충액(예를 들어 블록 완충액 또는 용해 완충액) 등과 같은 다른 첨가제가 포함될 수 있다. 다양한 시약의 상대량은 검정의 민감도를 실질적으로 최적화하는 시약 용액의 농도를 제공하도록 광범위하게 변화될 수 있다. 시약은, 용해 후 적절한 농도를 갖는 시약 용액을 제공하게 될 부형제를 포함하여, 일반적으로 동결건조된 건조 분말로서 제공될 수 있다.
조성물, 조합, 및 이의 투여
본 발명에 따른 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 조성물은 본원에 기술된 SIRPα 경로 질환 및/또는 장애를 앓고 있거나 이에 걸릴 위험이 있는 대상체에게 투여될 수 있다. 본 발명은 SIRPα 경로 질환 또는 장애의 예방 또는 치료를 위한 의약을 제조함에 있어서 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도를 추가로 제공한다. 본원에서 사용되는 용어 "대상체"는, 예를 들어 인간 및 특정 비인간 동물, 예컨대 영장류 및 개를 포함하여, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 투여될 수 있는 임의의 포유류 환자를 의미한다. 본원에 기술된 방법을 사용하는 치료를 위해 특이적으로 의도되는 대상체는 인간을 포함한다.
항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단독으로 투여되거나 하나 이상의 추가 치료제, 예컨대 최첨단 화합물 또는 표준 치료 화합물, 예를 들어 세포증식억제 물질 또는 세포독성 물질, 세포 증식 억제제, 항-혈관신생 물질, 스테로이드, 면역 조절제/면역 관문 억제제 등과 병용으로 투여될 수 있다.
일 양태에서, 본 발명은 또한 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 치료적 유효량 및 하나 이상의 약학적으로 호환 가능한 성분, 및 임의로 하나 이상의 추가 치료제를 포함하는 약학적 조성물로서 투여되는 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 추가 양태는 암(예를 들어 암을 앓고 있거나 암 발생 위험이 있는 개체)의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 결합 분자를 제공하며, 여기서 상기 요법은 하나 이상의 약리학적 활성 물질을 포함한다.
본 발명의 추가 양태는 암 및/또는 종양(예를 들어 암을 앓고 있거나 암 발생 위험이 있는 개체)의 치료를 위한 의약을 제조함에 있어서 하나 이상의 활성 성분의 용도를 제공하며, 여기서 상기 의약은 본 발명의 결합 분자를 포함한다.
본 발명의 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 병용으로 투여될 수 있는 세포증식억제 물질 및/또는 세포독성 활성 물질은 다음을 포함하지만 이에 한정되지는 않는다: 호르몬제, 호르몬 유사체 및 항-호르몬제, 아로마타제 억제제, LHRH 작용제 및 길항제, 성장 인자(예: 혈소판 유래 성장 인자(PDGF), 섬유아세포 성장 인자(FGF), 혈관 내피 성장 인자(VEGF), 표피 성장 인자(EGF), 인슐린-유사 성장 인자(IGF), 인간 표피 성장 인자(HER, 예를 들어, HER2, HER3, HER4), 및 간세포 성장 인자(HGF))의 억제제(예를 들어 항-성장 인자 항체 또는 항-성장 인자 수용체 항체 및 티로신 키나아제 억제제, 예를 들어 세툭시맙, 게피티닙, 아파티닙, 닌테다닙, 이마티닙, 라파티닙, 보수티닙, 및 트라스투주맙을 포함함); 항대사산물(예: 메토트렉세이트와 같은 항엽산제, 랄티트렉시드, 피리미딘 유사체, 예컨대 5-플루오로우라실(5-FU), 젬시타빈, 이리노테칸, 독소루비신, TAS-102, 카페시타빈 및 젬시타빈, 메르캅토푸린과 같은 퓨린 및 아데노신 유사체, 티오구아닌, 클라드리빈 및 펜토스타틴, 시타라빈(ara C), 플루다라빈); 항종양 항생제(예: 안트라사클린); 백금 유도체(예: 시스플라틴, 옥살리플라틴, 카보플라틴); 알킬화제(예: 에스트라무스틴, 메클로레타민, 멜팔란, 클로람부실, 부설판, 다카바진, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 테모졸로미드, 예를 들어 카르무스틴 및 로무스틴과 같은 니트로소우레아, 티오테파); 항유사분열제(예: 빈블라스틴, 빈데신, 비노렐빈, 및 빈크리스틴과 같은 빈카 알칼로이드; 및 파클리탁셀 및 도세탁셀과 같은 탁산); 베바시주맙, 라무시루맙 및 애플리버셉트를 포함하는 혈관신생 억제제, 투불린 억제제; DNA 합성 억제제, PARP 억제제, 국소이성화효소 억제제(예: 에토포시드 및 에토포포스, 테니포시드, 암사크린, 토포테칸, 이리노테칸, 미톡산트론과 같은 에피포도필로톡신), 세린/트레오닌 키나아제 억제제(예: PDK1 억제제, Raf 억제제, A-Raf 억제제, B-Raf 억제제, C-Raf 억제제, mTOR 억제제, mTORC1/2 억제제, PI3K 억제제, PI3Kα 억제제, 이중 mTOR/PI3K 억제제, STK33 억제제, AKT 억제제, PLK1 억제제(예: 볼라세르팁), CDK9 억제제를 포함하는 CDK 억제제, 오로라 키나아제 억제제), 티로신 키나아제 억제제(예: PTK2/FAK 억제제), 단백질 상호작용 억제제, MEK 억제제, ERK 억제제, FLT3 억제제, BRD4 억제제, IGF-1R 억제제, Bcl-xL 억제제, Bcl-2 억제제, Bcl-2/Bcl-xL 억제제, ErbB 수용체 억제제, BCR-ABL 억제제, ABL 억제제, Src 억제제, 라파마이신 유사체(예: 에베롤리무스, 템시롤리무스, 리다포롤리무스, 시롤리무스), 안드로겐 합성 억제제, 안드로겐 수용체 억제제, DNMT 억제제, HDAC 억제제, ANG1/2 억제제, CYP17 억제제, 방사성 의약품, 면역 관문 억제제와 같은 면역치료제(예: CTLA4, PD1, PD-L1, LAG3, 및 TIM3 결합 분자/면역글로불린, 예컨대 이필리무맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙), 및 다양한 화학요법제, 예컨대 아미포스틴, 아나그렐리드, 클로드로나트, 필그라스틴, 인터페론, 인터페론 알파, 류코보린, 리툭시맙, 프로카바진, 레바미솔, 메스나, 미토탄, 파미드로네이트 및 포르피머; (보르테조밉과 같은) 프로테아좀 억제제; Smac 및 BH3 모방체; mdm2-p53 길항제를 포함하여 p53 기능을 복구하는 제제; Wnt/베타-카테닌 신호전달 경로의 억제제; 및/또는 시클린-의존적 키나아제 9 억제제.
본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 임의로 추가 치료제와 병용 투여된다. 추가 치료제는 화학요법제, 항-PD-1 또는 PD-L1 항체, 항-CTLA4 항체, T 세포 관여자, CD137-작용제-항-FAP 이중특이적 항체, 종양 표적화 항체, VEGF-ANG2 이중특이적 항체, STING 작용제, MDM2 길항제, 또는 방사선 요법일 수 있다.
일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항-PD-1 항체, 예를 들어 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, 에자벤리맙, 또는 아테졸리주맙과 병용 투여된다. 추가의 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 예를 들어 아벨루맙 또는 더발루맙을 포함하는 항-PD-L1 항체와 병용 투여된다.
일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 종양 표적화 항체, 즉 HER2를 표적화하는 항체(예: 트라스투주맙), EGFR을 표적화하는 항체(예: 세툭시맙, 파니투무맙), CD20을 표적화하는 항체(예: 리툭시맙, 오파투무맙), 또는 CD52를 표적화하는 항체(예: 알렘투주맙)와 병용 투여된다.
일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 2개의 치료제와 병용 투여된다. 추가의 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 항-PD-1 항체(예: 니볼루맙, 펨브롤리주맙, 피딜리주맙, 에자벤리맙, 또는 아테졸리주맙), 또는 항-PD-L1 항체(예: 아벨루맙 또는 더발루맙), 및 종양 표적화 항체, 즉 HER2를 표적화하는 항체(예: 트라스투주맙), EGFR을 표적화하는 항체(예: 세툭시맙, 파니투무맙), CD20을 표적화하는 항체(예: 리툭시맙, 오파투무맙), 또는 CD52을 표적화하는 항체(예: 알렘투주맙)와 병용 투여된다.
다양한 전달 시스템이 알려져 있고, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 투여하는 데 사용될 수 있다. 도입 방법은 유리체내, 점안액, 피내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 비강내, 경막외, 및 경구 경로를 포함하지만 이에 한정되지 않는다. 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 예를 들어 주입, 볼루스, 또는 주사에 의해 투여될 수 있고, 다른 생물학적 활성제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신 또는 국소 투여일 수 있다. 이러한 주사를 위한 제형은, 예를 들어 사전 충진식 주사기로 제조될 수 있다. 이와 같이, 본 발명의 일 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 사전 충진식 주사기가 제공된다.
치료에 사용하기 위해, 본 발명의 항-SIRPα 항체는 동물 또는 인간에 대한 투여를 용이하게 하는 데 적절한 약학적 조성물로 제형화된다. 본원에 기술된 결합 분자 또는 항체 분자의 전형적인 제형은 결합 분자 또는 항체 분자를 생리학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 또는 안정화제와 함께 동결건조되거나 달리 건조된 제형 또는 수용액 또는 수성 또는 비수성 현탁액의 형태로 혼합함으로써 제조될 수 있다. 담체, 부형제, 개질제, 또는 안정화제는 사용된 투여량 및 농도에서 비독성이다.
전형적인 구현예에서, 약학적 조성물은 대상체에게 정맥내 또는 피하 투여하기에 적합한 약학적 조성물로서 통상적인 절차에 따라 제형화된다. 통상적으로, 주사에 의해 투여하기 위한 조성물은 멸균 등장성 수성 완충액 중의 용액이다. 필요한 경우, 약학적 조성물은 가용화제 및 국소 마취제, 예컨대 주사 부위에서 통증을 완화시키기 위한 리그노카인(lignocaine)을 포함할 수도 있다. 일반적으로, 성분은 개별적으로 공급되거나 단위 투여 형태로 함께 혼합되어, 예를 들어 활성제의 양이 표시된 앰플 또는 봉지(sachet)와 같은 기밀 밀봉된 용기에 담긴 건조 동결건조된 분말 또는 무수 농축물로서 공급된다. 약학적 성분이 주입에 의해 투여되는 경우, 이는 멸균 약학적 등급의 물 또는 식염수가 담긴 주입 병에 나눠 담길 수 있다. 약학적 성분이 주사에 의해 투여되는 경우, 투여 전에 성분을 혼합할 수 있도록 주사용 멸균수 또는 식염수의 앰플이 제공될 수 있다.
또한, 약학적 조성물은 다음을 포함하는 약학적 키트로서 제공될 수 있다: (a) 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 동결건조된 형태로 담긴 용기 및 (b) 주사용 약학적으로 허용 가능한 희석제(예: 멸균수)가 담긴 제2 용기. 약학적으로 허용 가능한 희석제는 동결건조된 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 재구성 또는 희석에 사용될 수 있다. 이러한 용기(들)와 임의로 결합되는 것은 의약품 또는 생물학적 제품의 제조, 사용, 또는 판매를 규제하는 정부 기관이 처방한 형태의 통지일 수 있으며, 이러한 통지는 인간 투여용으로 제조, 사용, 또는 판매하는 것이 기관에 의해 승인되었음을 반영한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 투여량으로 제형화될 수 있고, 여기에는 예를 들어 1 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량, 예를 들어 1 mg/kg 내지 25 mg/kg, 25 mg/kg 내지 50 mg/kg, 50 mg/kg 내지 75 mg/kg, 75 mg/kg 내지 100 mg/kg, 100 mg/kg 내지 125 mg/kg, 125 mg/kg 내지 150 mg/kg, 150 mg/kg 내지 175 mg/kg, 또는 175 mg/kg 내지 200 mg/kg의 투여량이 포함된다. 병용 투여를 위한 치료 요법과 관련하여, 특정 구현예에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 제2 및/또는 제3 치료제와 동시에 투여된다. 또 다른 특정 구현예에서, 제2 및/또는 제3 치료제는 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 투여 전 또는 후에 투여된다.
폴리뉴클레오티드, 벡터, 및 숙주 세포
본 발명은 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하는 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드, 벡터, 및 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포, 및 항체의 생산을 위한 재조합 기술에 관한 것이다. 단리된 폴리뉴클레오티드는, 예를 들어 전장 단클론 항체, Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편, 디아바디, 선형 항체, 단쇄 항체 분자, 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하는 임의의 원하는 형태의 항-SIRPα 항체를 암호화할 수 있다.
항-SIRPα 항체 또는 이의 단편 또는 사슬을 암호화하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드(들)는 당업계에 공지된 바와 같이 하나 이상의 조절 서열 또는 대조군 서열에 융합될 수 있고, 당업계에 공지된 바와 같이 적절한 발현 벡터 또는 숙주 세포에 함유될 수 있다. 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 분자 각각은 인간 불변 도메인과 같은 불변 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 서열에 독립적으로 융합되어, 온전한 항체의 생산을 가능하게 할 수 있다. 대안적으로, 폴리뉴클레오티드 또는 이의 일부는 함께 융합되어, 단쇄 항체의 생산을 위한 템플릿을 제공할 수 있다.
재조합 생산을 위해, 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는 클로닝(DNA의 증폭) 또는 발현을 위해 복제 가능한 벡터 내에 삽입된다. 재조합 항체를 발현하기 위한 많은 적절한 벡터가 이용 가능하다. 벡터 성분은 일반적으로 다음 중 하나 이상을 포함하지만 이에 한정되지는 않는다: 신호 서열, 복제 기점, 하나 이상의 마커 유전자, 인핸서 요소, 프로모터, 및 전사 종결 서열.
항-SIRPα 항체는, 항체가 신호 서열과 같은 이종 폴리펩티드와 융합되거나 성숙한 단백질 또는 폴리펩티드의 아미노 말단에서 특이적 절단 부위를 갖는 다른 폴리펩티드와 융합된 융합 폴리펩티드로서 생산될 수도 있다. 선택된 이종 신호 서열은 일반적으로 숙주 세포에 의해 인식되고 가공되는(예를 들어 신호 펩티다아제에 의해 절단되는) 것이다. 항-SIRPα 항체 신호 서열을 인식하고 처리하지 않는 원핵 숙주 세포의 경우, 신호 서열은 원핵 신호 서열로 치환될 수 있다. 신호 서열은, 예를 들어 알칼리 인산분해효소, 페니실리나아제, 지단백질, 열안정 장독소 II 리더 등일 수 있다. 효모 분비의 경우, 고유 신호 서열은, 예를 들어 효모 전화효소 알파-인자(사카로미세스 및 클루이베로미세스 α-인자 리더를 포함함), 산성 인산분해효소, C. 알비칸스 글루코아밀라아제, 또는 WO 90/13646에 기술된 신호로부터 수득된 리더 서열로 치환될 수 있다. 포유류 세포에서는, 포유류 신호 서열뿐만 아니라 바이러스 분비 리더, 예를 들어 단순 포진 gD 신호도 사용될 수 있다. 이러한 전구체 영역에 대한 DNA는 해독 프레임에서, 항-SIRPα 항체를 암호화하는 DNA에 결찰된다.
포유류 숙주 세포에서 벡터로부터의 항-SIRPα 항체 전사는, 예를 들어 폴리오마 바이러스, 계두 바이러스, 아데노바이러스(예: 아데노바이러스 2), 소 유두종 바이러스, 조류 육종 바이러스, 거대세포바이러스, 레트로바이러스, B형 간염 바이러스, 및 원숭이 바이러스 40(SV40)로부터 수득된 프로모터, 이종 포유류 프로모터, 예를 들어 액틴 프로모터 또는 면역글로불린 프로모터로부터 수득된 프로모터, 또는 열충격 프로모터로부터 수득된 프로모터에 의해 조절되지만, 이러한 프로모터가 숙주 세포 시스템과 양립 가능한 경우에 한한다.
본원의 벡터에서 DNA를 클로닝하거나 발현시키기에 적합한 숙주 세포는 전술한 원핵생물, 효모, 또는 고등 진핵생물 세포이다. 이러한 목적에 적절한 원핵생물은 유박테리아, 예컨대 그람 음성 또는 그람 양성 유기체, 예를 들어 대장균과 같은 장내세균, 예를 들어, 대장균, 엔테로박터, 에르위니아, 클레브시엘라, 프로테우스, 살모넬라, 예를 들어, 살모넬라 티피무륨, 세라티아, 예를 들어 세라티아 마르세스칸스, 및 시겔라뿐만 아니라 고초균 및 B. 리체니포르미스(예를 들어 1989년 4월 12일에 공개된 DD 266,710에 개시된 B. 리체니포르미스 41 P), 녹농균(P. aeruginosa)과 같은 슈도모나스, 및 스트렙토미세스를 포함한다. 대장균 B, 대장균 X1776(ATCC 31,537), 및 대장균 W3110(ATCC 27,325)과 같은 다른 균주가 적합하지만, 하나의 바람직한 대장균 클로닝 숙주는 대장균 294(ATCC 31,446)이다. 이들 실시예는 한정하는 것이 아니라 예시적인 것이다.
원핵생물 이외에도, 사상균 또는 효모와 같은 진핵 미생물이 항-SIRPα 항체-암호화 벡터를 위한 클로닝 또는 발현 숙주로서 적합하다. 사카로미세스 세레비시아, 또는 일반적인 제빵 효모가 저등 진핵생물 숙주 미생물 가운데 가장 흔히 사용된다. 그러나 다음과 같은 다수의 다른 속, 종, 계통을 흔히 이용할 수 있고, 본원에서 유용하다: 스키조사카로미세스 폼베; 예를 들어 K. 락티스, K. 프라질리스(ATCC 12,424), K. 불가리쿠스(ATCC 16,045), K. 위커라미이(ATCC 24,178), K. 왈티이(ATCC 56,500), K. 드로소필라럼(ATCC 36,906), K. 써모톨레란스, 및 K. 막시아누스와 같은 클루이베로미세스 숙주; 야로위아(EP 402,226); 피치아 파스토리스(EP 183,070); 칸디다; 트리코데르마 리시아(EP 244,234); 뉴로스포라 크라사; 슈반니오미세스 옥시덴탈리스와 같은 슈반니오미세스; 예를 들어 뉴로스프라, 페니실륨, 톨리포클라듐과 같은 사상 진균; 및 A. 니둘란스 및 A. 니게르와 같은 아스페르길루스 숙주.
당질화된 항-SIRPα 항체의 발현에 적합한 숙주 세포는 다세포 유기체로부터 유래된다. 무척추 세포의 예는 식물 세포와 곤충 세포를 포함하며, 여기에는 예를 들어 다수의 바큘로바이러스 균주 및 변이체; 및 스포도프테라 프루기페르다(애벌래), 이집트 숲모기(모기), 흰줄 숲모기(모기), 노랑초파리(초파리), 및 누에 나방(누에)와 같은 숙주로부터의 상응하는 허용된 곤충 숙주 세포가 포함된다. 아오토그라파 캘리포르니카 NPV의 L-1 변이체 및 누에 나방 NPV의 Bm-5 균주와 같은 형질감염을 위한 다양한 바이러스 균주가 공개적으로 이용 가능하며, 이러한 바이러스는 특히 스포도프테라 프루기페르다 세포의 형질감염에 사용될 수 있다.
목화, 옥수수, 감자, 대두, 페투니아, 토마토, 및 담배의 식물 세포 배양물이 숙주로서 사용될 수도 있다.
항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편도 바이러스 벡터에 혼입될 수 있는데, 예를 들어 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 바이러스 벡터 내로 도입된 다음 바이러스 감염 후 대상체의 신체에서 발현된다.
또 다른 양태에서, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 발현은 척추동물 세포에서 수행된다. 배양물(조직 배양물)에서 척추동물 세포를 전파하는 것은 일상적인 절차가 되었으며 기술은 널리 이용 가능하다. 유용한 포유류 숙주 세포주의 예는 SV40(COS-7, ATCC CRL 1651)에 의해 형질전환된 CV1 세포주, 인간 배아 신장 세포주(293 세포 또는 현탁 배양물에서 성장시키기 위해 서브클로닝된 293 세포)(Graham 등의 문헌[1977, J. Gen Virol. 36: 59]), 베이비 햄스터 신장 세포(BHK, ATCC CCL 10), 차이니즈 햄스터 난소 세포/-DHFR1(CHO, Urlaub 등의 문헌[1980, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77: 4216]; 예를 들어 DG44), 마우스 세르톨리 세포(TM4, Mather의 문헌[1980, Biol. Reprod. 23:243-251]), 원숭이 신장 세포(CV1 ATCC CCL 70), 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(VERO-76, ATCC CRL-1587), 인간 자궁경부암 세포(HELA, ATCC CCL 2), 개 신장 세포(MDCK, ATCC CCL 34), 버팔로 랫트 간 세포(BRL 3A, ATCC CRL 1442), 인간 폐 세포(W138, ATCC CCL 75), 인간 간 세포(Hep G2, HB 8065), 마우스 유방 종양(MMT 060562, ATCC CCL51), TR1 세포(Mather 등의 문헌[1982, Annals N.Y. Acad. Sci. 383: 44-68]), MRC 5 세포, FS4 세포, 및 인간 간종양 세포주(Hep G2)이다.
또한 낮은 엄중도 조건, 중간 엄중도 조건, 및 높은 엄중도 조건 하에서, 특히 본원에서 정의된 것과 같은 높은 엄중도 조건 하에서, 항-SIRPα 항체 또는 항체 단편을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드 서열(들)에 의해 대표되는 뉴클레오티드 서열의 전부 또는 일부(예를 들어 가변 영역을 암호화하는 부분)에 혼성화되는 핵산이 포함된다. 혼성화 핵산의 혼성화 부분은 일반적으로 적어도 15개(예를 들어, 20, 25, 30 또는 50개) 뉴클레오티드의 길이이다. 혼성화 핵산의 혼성화 부분은 항-SIRPα 폴리펩티드(예를 들어 중쇄 또는 경쇄 가변 영역) 또는 이의 보체를 암호화하는 핵산의 일부 또는 전부의 서열과 적어도 80%, 예를 들어, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하다. 본원에 기술된 유형의 혼성화 핵산은, 예를 들어 클로닝 프로브, 프라이머, 예를 들어 PCR 프라이머, 또는 진단 프로브로서 사용될 수 있다. 일 양태에서, “높은 엄중도 조건”은 0.3% SDS, 200 μg/mL의 전단되고 변성된 연어 정자 DNA, 및 50% 포름아미드가 보충된 5×SSPE에서 적어도 100개 뉴클레오티드 길이를 프로브를 사용해 표준 서던 블롯팅 절차에 따라 42℃에서 12 내지 24시간 동안 사전-혼성화하고 혼성화하는 것을 의미한다. 마지막으로, 담체 물질을 65℃에서 0.2×SSC, 0.2% SDS를 사용하여 15분씩 3회 세척한다.
일 구현예에서, 본 발명은 서열번호 100, 101, 102, 103, 104, 105, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 221 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다.
일 구현예에서, 본 발명은 서열번호 105, 106, 107, 108, 109, 125, 126, 109, 127, 128, 129, 130, 또는 222 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다.
일 구현예에서, 본 발명은 서열번호 131,138,139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 217, 135,153, 154, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 219, 133, 134, 137, 132, 또는 136 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 영역을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다.
일 구현예에서, 본 발명은 서열번호 174, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 218, 178, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 220, 176, 177, 180, 175, 또는 179 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 영역을 암호화하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다.
제조 물품
또 다른 양태에서, 전술한 장애의 치료에 유용한 물질을 함유하는 제조 물품이 포함된다. 제조 물품은 용기 및 표지를 포함한다. 적절한 용기는, 예를 들어 병, 바이알, 주사기, 및 시험관을 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 물질로 형성될 수 있다. 용기에는 병태를 치료하는 데 효과적인 조성물이 담기며, 멸균 액세스 포트가 있을 수 있다. 예를 들어, 용기는 정맥내 용액 백이거나 피하 주사 바늘에 의해 천공될 수 있는 마개가 구비된 바이알일 수 있다. 조성물 중의 활성제는 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 용기 상의 표지 또는 용기와 연관된 표지는 조성물이 선택된 병태를 치료하는 데 사용된다는 것을 나타낸다. 제조 물품은 인산염 완충 식염수, 링거 용액, 및 덱스트로스 용액과 같은 약학적으로 허용 가능한 완충액을 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 상업적 관점에서 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있으며, 여기에는 다른 완충액, 희석제, 필터, 바늘, 주사기, 및 사용 지침이 담긴 패키지 삽입물이 포함될 수 있다.
실시예
이제 본 개시는 하이 실시예를 참조하여 기술된다. 이들 실시예는 단지 예시의 목적으로 제공되며, 본 개시는 어떤 방식으로도 이들 실시예로 한정되는 것으로 해석되어서는 안되며, 오히려 본원에서 제공된 교시의 결과로서 명백해지는 임의의 그리고 모든 변형을 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
추가의 설명이 없어도, 당업자는 전술한 설명 및 다음의 예시적인 실시예를 사용하여, 본 개시의 화합물을 제조하고 활용할 수 있으며, 청구된 방법을 실시할 수 있는 것으로 여겨진다. 따라서, 다음의 실제 실시예는 구체적으로 본 발명의 바람직한 구현예를 나타내며, 어떤 방식으로든 본 개시의 나머지를 한정하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
실시예 1: 항-SIRPα 항체의 생성
파지 및 효모 디스플레이.
원하는 선택도를 갖는 항-SIRPα 항체, 즉 hSIRPαV1 및 hSIRPαV2를 차단할 수 있고 hSIRPγ에 대한 결합이 결여된 항체를 생성하기 위한 초기 노력는 파지 디스플레이를 사용하여 수행된다. hSIRPαV1, hSIRPαV2, 및 시노몰구스 SIRPα 단백질의 비오티닐화된 세포외 도메인을 3회의 순차적 스크리닝 라운드에서 표적 단백질로서 사용한다. hSIRPγ 세포외 도메인에 결합할 수 있는 항체를 제거하기 위해, 표지되지 않은 hSIRPγ 세포외 도메인을 탈선택제로서 각 스크리닝 라운드에 포함시킨다.
파지 디스플레이를 통해 13개의 후보 항체를 생성하였고, 이들을 추가로 특성화하였다. 후보 항체 중 4개는 hSIRPαV1 및 hSIRPαV2를 차단할 수 있었지만, 이들 항체 각각이 hSIRPγ에도 결합하는 것으로 결정되었다. 후보 항체 중 9개는 hSIRPγ에 결합하지는 않았지만, hSIRPαV1 또는 hSIRPαV2만을 차단할 수 있었고, 둘 다를 차단하지는 못했다. 따라서, 13개의 후보 항체 중 원하는 선택도를 가진 항체는 없는 것으로 결정하였다.
원하는 선택도를 가진 항-SIRPα 항체를 생성하기 위한 유사한 노력이 효모 디스플레이를 사용하여 수행된다. 효모 디스플레이에 의해 식별된 후보 항체의 대부분(66개 중 59개)은 hSIRPαV1 및 hSIRPαV2를 차단할 수 있었지만, hSIRPγ에도 결합하였다. 나머지 7개의 항체는 hSIRPγ에 결합하지 않았지만, hSIRPαV1만 차단하고 hSIRPαV2는 차단할 수 없었다. 따라서, 파지 디스플레이와 유사하게, 후보 항체 중 원하는 선택도를 가진 항체는 없는 것으로 결정하였다.
면역화.
재조합적으로 생산한 인간 및 시노몰구스 SIRPα 단백질[NP 542970, CAA71403 및 NP 001271679]의 세포외 도메인의 조합을 표준 실험실 면역화 기술에 따라 AlivaMab 카파 마우스에게 피하 주입하여 이들 마우스를 면역화시켰다. 간략하게, 마우스에게 단백질과 보조제 혼합물을 4주 동안 주 1회 피하 주입하여 마우스를 면역화시킨다. 수성 보조제가 사용되는데, 이는 확인된 고유 단백질에 대해 내부에 있는 부위의 노출을 감소시킴으로써 원하는 선택도를 갖는 항체의 생성을 개선할 것으로 기대된다. 4회의 면역화 후, 항체 역가를 ELISA 방법에 의해 결정한다. 모든 항원에 대해 강한 항체 반응을 나타내는 동물을 항체 회수를 위해 선택한다.
B-세포 회수 및 재조합 항체 생산.
항원 특이적 기억 B 세포 회수는 1회의 B 세포 유세포 분석법 및 세포 분류를 통해 수행된다. 회수된 항체 서열을 합성하고, 다음을 포함하되 이에 한정되지 않는 다양한 특성에 대해 스크리닝한다: SIRPα에 대한 친화도, huSIRPα-V1 및 huSIRPα-V2 CHO 세포주에 대한 결합, 및 SIRPα:CD47 상호작용의 차단. 원하는 특성을 나타내는 대표적인 항체는 표 26~27에 나타나 있다: 항체 A, 항체 B, 항체 C, 항체 D, 및 항체 E.
실시예 2. 항체 A 및 항체 E에 대한 서열 라이브러리의 제거.
부모 항체의 단편 항체(Fab) 클론을 제조한다. 라이브러리는 잠재적 서열 부담(즉, 면역원성일 수 있거나 잠재적 제조 문제를 야기할 수 있는 아미노산 잔기)이 제거되도록 특정 위치를 변형시켜 제조한다. 이들 돌연변이된 라이브러리는 일반적으로 V 영역 당 5 내지 10개의 이진 위치를 갖는다. 보다 복잡한 V-영역에서의 특정 위치를 다루기 위해, 단일 또는 이중 돌연변이 라이브러리와 별도로 별개의 포화 라이브러리도 만든다. 이러한 라이브러리는 당업계에 공지된 표준 방법을 사용하여 제조되며, 당업자가 쉽게 사용할 수 있다.
조작된 Fab를, huSIRPα-V1 및 huSIRPα-V2에 대한 친화도를 포함하여, 원하는 특성에 대해 시험한다. 항체 A 및 항체 E에 대한 조작된 항체에 대한 대표적인 가변 영역은 표 28~29에 나타나 있다.
실시예 3. 정제된 재조합 인간 SIRPα, SIRPβ1, SIRPγ 단백질에 대한 항체의 결합 친화도(SPR K D )
다양한 SIRPα 분석물에 대한 항-SIRPα 항체의 결합 친화도는 ProteOn XPR36(Bio-Rad)을 사용하여 표면 플라스몬 공명(SPR)에 의해 결정한다. 이 실험을 위한 실행 완충액 및 모든 희석물(명시된 경우 제외)은 1 × HBS-EP+에서 수행된다. CM5 센서칩을 EDC/NHS의 동일한 혼합물을 10 μl/분의 유속으로 420초 동안 주입하여 활성화시키고, 단백질 A/G 비드(10 mM 아세테이트 pH 4.5 중 50 μg/ml)를 10 μl/분의 유속으로 420초 동안 주입하여 고정시켜, 표면 상에 약 2600~2900 RU의 단백질 A/G를 생성한다. 1M 에탄올아민 HCl을 10 μl/분의 유속으로 420초 동안 주입하여 센서칩을 비활성화시킨다.
각각의 항체를 단백질 A/G 표면 상에 10 μl/분의 유속으로 60초 동안 포획하여 약 280 RU의 포획 수준을 생성한다. 분석물을 포획된 항체 위에 30 μl/분의 유속으로 300초 동안 주입한다. 해리를 600초 동안 수행한다. 각각의 SIRP 단백질(세포외 도메인 + His-태그)의 2배 연속 희석물을 분석물로서 주입한다. 가장 높은 농도는 아래 표 36에 표시되어 있다.
결합 친화도 분석에 사용된 다양한 SIRP 단백질 및 이들의 최고 농도에 대한 목록
분석물
(세포외 도메인 + His-태그) 		수탁 번호 실험에서의 최고 농도(nM)
hSIRPαV1 NP_542970.1 100
hSIRPαV2 CAA71403.1 100
hSIRPβ1 NP_006056.2 1000
hSIRPβ1v3 NP_001129316.1 100
hSIRPγ NP_061026.2 1000
CynoSIRPα NP 001271679 1000
CynoSIRPα EGM_02252 1000
CynoSIRPα XP_015313155 1000
CynoSIRPβ1 XP_005568598 1000
CynoSIRPβ1v3 XP_005568593 1000
CynoSIRPγ XP_005568591 1000
각 분석물의 주입이 완료된 후, 0.85% 인산을 30 μl/분의 유속으로 30초 동안 주입함으로써 센서 표면을 재생시킨다.
센서 표면(유세포 1) 및 블랭크(HBS-EP+)와 분석물의 상호 작용은 원시 데이터로부터 차감한다. 그런 다음, 센서그램을 1:1 랭뮤어 결합에 전체적으로 피팅하여 결합-속도(ka), 해리-속도(kD), 및 친화도(KD) 값뿐만 아니라 정태 결합 모드를 산출하여, 평형 친화도(KD)를 산출한다.
상기 절차는 다음의 분석물에 대한 결합 친화도를 측정하는 데 사용된다: 인간 SIRPαV1, 인간 SIRPαV2, 인간 SIRPβ1, 인간 SIRPβ1v3, 인간 SIRPη, 시노몰구스 (cyno) SIRPα, cyno SIRPβ1, cyno SIRPβ1v3, cyno SIRPη, 마우스 SIRPα. SIRPα 항체에 대한 결합 치환도에 대한 결과는 아래 표 37~42에 나타나 있다.
실시예 4. CHO 세포에서 발현된 전장 인간 V1-SIRPα 또는 V2-SIRPα에 대한 항체의 결합
SIRPα를 발현하는 세포에 대한 항체 결합을 유세포 분석법으로 평가한다. CHO-K1 부모 세포(음성 대조군), 전장 인간 SIRPαV1을 발현하는 CHO-K1 세포(NP_542970.1) 또는 전장 인간 SIRPαV2를 발현하는 CHO-K1 세포(CAA71403.1)를 당나귀 IgG로 차단하고, 증가하는 농도의 항체와 함께 얼음 상에서 60분 동안 인큐베이션하고, 세척하고, AF647-접합된 당나귀 F(ab’)2 항-인간 IgG 이차 시약으로 염색한다. 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. 형광 강도 중앙값을 결정하고 항체 결합의 척도로서 사용한다.
항-SIRPα 항체 KWAR23(WO2015138600) 및 항체 A~E는 전장 인간 SIRPαV1를 발현하는 CHO 세포(도 1b) 또는 SIRPαV2를 발현하는 CHO 세포(도 1c)에 대한 투여량 의존적 결합을 나타냈으며, EC50 값은 0.4~14 nM 범위였다(표 43). 시험된 항체 중 부모 CHO 세포에 대한 결합을 나타낸 항체는 없었다(도 1a).
실시예 5. 인간 단핵구 세포주에서 발현된 내인성 인간 V1-SIRPα 또는 V2-SIRPα에 대한 항체의 결합
SIRPα의 V1-대립유전자(U-937) 또는 V2-대립유전자(THP-1)에 대해 동형접합성인 인간 단핵구 세포주에 대한 항체 결합을 평가한다. U-937 또는 THP-1 세포를 당나귀 IgG로 차단하고, 증가하는 농도의 항체와 함께 얼음 상에서 60분 동안 인큐베이션하고, 세척하고, AF647-접합된 당나귀 F(ab’)2 항-인간 IgG 이차 시약으로 염색한다. 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. 형광 강도 중앙값을 결정하고 항체 결합의 척도로서 사용한다.
항-SIRPα 항체 KWAR23 및 항체 A~E는 인간 SIRPαV1 대립유전자에 대해 동형접합성인 U-937 세포(도 2a) 및 인간 SIRPαV2 대립유전자에 대해 동형접합성인 THP-1 세포(도 2b)에 대한 투여량 의존적 결합을 나타냈으며, EC50 값은 0.2~22 nM 범위였다(표 44).
실시예 6. 일차 인간 단핵구에서 발현된 내인성 인간 V1-SIRPα 및/또는 V2-SIRPα에 대한 항체의 결합
SIRPα를 발현하는 일차 인간 세포에 대한 항체 결합을 유세포 분석법으로 평가한다. SIRPα V1 대립유전자, V2 대립유전자에 대해 동형접합성으로서 유전자형 분석된 공여자, 또는 두 대립유전자에 모두에 대해 이형접합성으로서 유전자형 분석된 공여자 유래의 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 당나귀 IgG로 차단하고, 증가하는 농도의 항체와 함께 얼음 상에서 60분 동안 인큐베이션하고, 세척하고, AF647-접합된 당나귀 F(ab’)2 항-인간 IgG 이차 시약으로 염색한다. 이어서, 세척된 세포를 인간 TruStain FcX™(Biolegend)로 차단하고 BV421-접합된 항-인간 CD14(Biolegend, 클론 M5E2)로 염색한다. 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. CD14+ 집단의 형광 강도 중앙값을 결정하고 항체 결합의 척도로서 사용하였다.
시험된 모든 항체(항체 A~G, A10, A4, A11, 및 E22)는 V1에 대해 동형접합성인 공여자(도 3a~3d) 또는 V2에 대해 동형접합성인 공여자(도 5a~5d), 또는 두 대립유전자 모두에 대해 이형접합성인 공여자 유래의 일차 인간 단핵구에 대한 투여량 의존적 결합을 나타냈다(도 4a~4d). 표 45는 전술한 항체 각각에 대해 계산된 일차 세포 결합 EC50을 강조한 것이다. 항체 B 이외에, 모든 항체는 나노몰 미만의 EC50을 나타냈다.
알려진 항-SIRPα 항체인 KWAR23, 1H9(WO 2019/023347), 및 SIRP AB11(WO 2020/068752)의 일차 인간 단핵구에 대한 결합도 전술한 바와 같이 평가하였으며, EC50 결과는 표 45에 나타나 있다. 1H9는 V1 대립유전자에 대해 동형접합성이거나 두 대립유전자 모두에 대해 이형접합성인 공여자 유래의 일차 인간 단핵구에 대해 투여량 의존적 결합 및 나노몰 이하의 결합 EC50 값을 나타냈지만(도 3c 및 도 4c), V2 대립유전자에 대해 동형접합성인 공여자 유래의 일차 인간 단핵구 상에서 불포화 항체 결합이 검출되었다. KWAR23 및 SIRP AB11 항체는 모든 유전자형의 공여자 유래의 일차 인간 단핵구에 대해 나노몰 이하의 결합 EC50을 나타냈다(도 3a~3d, 4a~4d, 및 5a~5d; 표 45).
실시예 7. U937 SIRPα KO 세포에서 발현된 전장 인간 SIRPβ1 또는 SIRPβL에 대한 항체의 결합
전장 인간 SIRPβ1(NP_006056.2) 및 SIRPβL(NP_001129316.1)을 발현하는 세포에 대한 항체 결합을 유세포 분석법으로 평가한다. SIRPβ1- 또는 SIRPβL-발현 U937SIRPα KO 세포를 당나귀 IgG로 차단하고, 증가하는 농도의 항체와 함께 얼음 상에서 60분 동안 인큐베이션하고, 세척하고, AF647-접합된 당나귀 F(ab’)2 항-인간 IgG 이차 시약으로 염색한다. 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. 형광 강도 중앙값을 결정하고 항체 결합의 척도로서 사용한다.
이소형 대조군 또는 항체 E22을 제외한 항체 A~G, A10, A4, 및 A11은 U-937SIRPα KO 세포에서 발현된 전장 인간 SIRPβ1에 대해 투여량 의존적 결합을 나타냈다(도 6a~6d). 표 44는 전술한 항체 각각에 대해 계산된 결합 EC50을 강조한 것이다. 항체 A, C, D, F, A10, A4, 및 A11은 이들 세포에 대해 나노몰 이하의 EC50 값을 나타냈지만, 항체 B, E, 및 G의 결합은 높게는 200 nM의 농도에서 불포화성이었고 EC50 값은 결정되지 않았다.
항체 E, G, 및 E22는 U-937SIRPα KO 세포에서 발현된 전장 인간 SIRPβ L에 대해 투여량 의존적 결합을 나타냈으며(도 7a~7d), EC50은 1 nM 미만이었다(표 46). SIRPβL-발현 U-937SIRPα KO 세포에서 항체 A, C, D, F, A10, A4 및 A11의 결합은 검출할 수 없었다(도 7a~7d). 항체 B의 결합(도 7a)은 SIRPβ L-발현 U-937SIRPα KO 세포에서 검출되었지만; 결합은 높게는 200 nM의 농도에서 포화되지 않았다.
SIRPβ1- 또는 SIRPβL-발현 U937SIRPα KO 세포에 대한 알려진 항-SIRPα 항체 KWAR23, 1H9, 및 SIRPAB11의 결합도 전술한 바와 같이 평가하였다. 3개의 분자 모두는 나노몰 미만의 결합 EC50 값으로 두 세포 유형 모두에 대한 투여량 의존적 결합을 나타냈다(도 6a~6d 및 7a~7d)(표 46).
실시예 8. ELISA에 의한 정제된 재조합 인간 SIRPη 단백질에 대한 항체의 결합
생화학적 ELISA 기반 검정을 사용하여 SIRPη에 대한 항체의 결합을 평가한다. 검은색의 96-웰 평평한 바닥 면역검정 플레이트를 재조합 인간 SIRPη 세포외 도메인(ECD)/His 단백질(NP_061026.2)로 코팅하고, DPBS에서 희석하고 4℃에서 밤새 인큐베이션한다. 플레이트를 3회 세척하고, 이어서 실온(RT)에서 약 1~2시간 동안 차단한다. 플레이트를 세척하고, RT에서 약 1~2시간의 인큐베이션 하는 동안 연속적으로 적정된 항체를 각각의 웰에 첨가한다. 인큐베이션 후, 플레이트를 세척하고, HRPO-접합된 마우스 항-인간 IgG 이차 시약(Jackson Immuno Research)을 각 웰에 첨가하고 약 1~2시간 동안 인큐베이션한다. 최종 플레이트 세척 후, Amplex™ 적색 기질을 첨가하고 RT의 암소에서 15~30분 동안 인큐베이션한다. EnVision 다중표지 플레이트 판독기(Perkin Elmer)를 사용하여 형광을 검출한다(μEx/μEm = 530/590 nm). 항체 결합을 측정하기 위해 평균 형광을 도표화한다.
SIRPη-반응성 mAb인 KWAR23을 제외하고, 시험된 항체(항체 A~E) 중 고정된 재조합 인간 SIRPη ECD/His 단백질에 대한 결합을 나타낸 항체는 없었다(도 8). KWAR23에 대한 EC50 값은 0.1 nM인 것으로 결정되었다(표 47).
실시예 9. CHO 세포에서 발현된 전장 인간 V1-SIRPη에 대한 항체의 결합
인간 SIRPη를 발현하는 세포(NP_061026.2)에 대한 항체 결합을 유세포 분석법으로 평가한다. SIRPη-발현 CHO 세포를 당나귀 IgG로 차단하고, 증가하는 농도의 항체와 함께 얼음 상에서 60분 동안 인큐베이션하고, 세척하고, AF647-접합된 당나귀 F(ab’)2 항-인간 IgG 이차 시약으로 염색한다. 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. 형광 강도 중앙값을 결정하고 항체 결합의 척도로서 사용한다.
SIRPη-발현 CHO 세포에서 각각의 항체에 대한 결합을 이소형 대조군에 비해 상대적으로 검출하였다(도 9). 2.7 nM의 EC50을 나타낸 SIRPη-반응성 mAb(KWAR23)와 비교했을 때(표 47), 항체 A 및 C~E의 결합은 높게는 200 nM의 농도에서 불포화성이었고, 검출된 항체의 결합 정도는 낮았다.
실시예 10. 일차 인간 T 세포에서 발현된 SIRPη에 대한 항체의 결합
내인성 SIRPη를 발현하는 일차 인간 T 세포에 대한 항체 결합을 유세포 분석법으로 평가한다. 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 당나귀 IgG로 차단하고, 증가하는 농도의 항체와 함께 얼음 상에서 60분 동안 인큐베이션하고, 세척하고, AF647-접합된 당나귀 F(ab’)2 항-인간 IgG 이차 시약으로 염색한다. 이어서, 인간 PBMC를 인간 TruStain FcX™(Biolegend)로 차단하고 BV395-접합된 항-인간 CD3(BD Biosciences, 클론 SK7)으로 염색한다. 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. CD3+ 게이팅된 집단의 형광 강도 중앙값을 결정하고 항체 결합의 척도로서 사용하였다.
일차 인간 T 세포에 대한 알려진 항-SIRPα 항체인 KWAR23, 1H9, 및 SIRPAB11의 결합도 전술한 바와 같이 평가한다. KWAR23, 1H9, 및 SIRP AB11은 1 nM 미만의 EC50 값으로 일차 인간 CD3+ 세포에 대한 투여량 의존적 결합을 나타낸 반면(도 10a~10d), 항체 A~G, A10, A4, A11, 및 E22에 의한 결합은 검출되지 않았다(표 47).
실시예 11. CHO 세포에서 발현된 전장 인간 V1-SIRPα 또는 V2-SIRPα에 대한 인간 CD47 결합의 차단
비오티닐화된 인간 CD47(NP_942088; AcroBiosystems) 및 AF647-접합된 스트렙트아비딘(Biolegend)을 사용하여 인간 CD47 사량체를 조립한다. 항체 리간드 차단 가능성을 평가하기 위해, 전장 인간 SIRPαV1을 발현하는 CHO-K1 세포(NP_542970.1) 또는 전장 인간 SIRPαV2를 발현하는 CHO-K1 세포(CAA71403.1)를 증가하는 농도의 항체 및 고정된 농도의 인간 CD47 사량체와 함께 얼음 상에서 60분 동안 공동 배양한다. 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. 형광 강도 중앙값을 결정하고 CD47 결합의 척도로서 사용한다.
알려진 KWAR23 항체 및 항체 A~E는 인간 SIRPαV1 및 SIRPαV2-발현 CHO 세포에 대한 인간 CD47 결합을 투여량 의존적으로 차단하였으며(도 11a 및 도 11b), 반수 최대 억제 농도(IC50) 값은 0.3~6.0 nM 범위였다(표 48). 항체 E에 의한, 인간 SIRPαV2-발현 CHO 세포에 대한 인간 CD47 결합의 차단은 약 80%에서 평탄화되었다.
실시예 12. 일차 인간 단핵구에서 발현된 내인성 인간 V1-SIRPα 및/또는 V2-SIRPα에 대한 인간 CD47 결합의 차단
비오티닐화된 인간 CD47(NP_942088; AcroBiosystems) 및 AF647-접합된 스트렙트아비딘(Biolegend)을 사용하여 인간 CD47 사량체를 조립한다. SIRPα V1 대립유전자, V2 대립유전자에 대해 동형접합성인 것으로 유전자형 분석된 공여자 또는 두 대립유전자 모두에 대해 이형접합성으로 유전자형 분석된 공여자 유래의 인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 인간 TruStain FcX™(Biolegend)로 차단하고, 증가하는 농도의 항체, 고정된 농도의 인간 CD47 사량체, 및 BV421-접합된 항-인간 CD14와 함께 얼음 상에서 60분 동안 공동 배양한다. 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. CD14+ 게이팅된 집단의 형광 강도 중앙값을 결정하고 CD47 결합의 척도로서 사용하였다.
이소형 대조군을 제외하고, 항체 A~G, A10, A4, E22, 및 A11은 V1 대립유전자에 대해 동형접합성인 공여자(도 12a~12d) 또는 V2 대립유전자에 대해 이형접합성인 공여자(도 14a~14d) 유래의 일차 인간 단핵구에 대한 CD47 결합을 투여량 의존적으로 차단하였다(도 13a~13d). 항체 B를 제외하고, 모든 항체는 1 nM 미만의 IC50 값을 나타냈다(표 49).
일차 인간 단핵구에 대한 인간 CD47 결합을 차단하는 알려진 항-SIRPα 항체 KWAR23, 1H9, 및 SIRPAB11의 능력도 전술한 바와 같이 평가한다. 1H9는 V1 대립유전자에 대해 동형접합성인 공여자(도 12c) 또는 두 대립유전자 모두에 대해 이형접합성인 공여자(도 13c) 유래의 일차 인간 단핵구에 대한 인간 CD47 결합을 나노몰 미만의 IC50 값으로 차단한 반면(표 49), V2 대립유전자에 대해 동형접합성인 공여자 유래의 일차 인간 단핵구에 대해서는 불완전한 차단이 관찰되었다(도 14c). KWAR23 및 SIRPAB11 항체는 모든 유전자형의 공여자 유래의 일차 인간 단핵구에 대한 인간 CD47 결합을 차단하였다(도 12a~12d, 13a~13d, 및 14a~14d; 표 49).
실시예 13. 세포 CD47 발현에 의존적인 인간 V1-SIRPα 및 V2-SIRPα 신호 전달의 차단
SIRPα 신호전달 검정은 세포-세포 상호작용을 통해 제시된 CD47에 의해 유도된 SIRPα 결합을 측정하는 데 사용된다. 이 검정에서 SIRPα 신호전달의 검출은 효소 단편 보완(EFC)에 의존한다. EFC는 효소 공여자(ED) 단편과 효소 수용자(EA) 단편으로 이루어진 β-갈락토시다아제 내의 보완 시스템을 사용한다. 독립적으로, 이들 단편은 β-gal 효소 활성을 갖지는 않지만; 근접할 때, 이들은 활성 β-gal 효소를 형성한다. 리포터 Jurkat 세포는 CD47을 갖지 않으며, SHP-1 인산분해효소의 ED-태그된 SIRPα 수용체와 EA-태그된 SH2 도메인을 안정하게 공동 발현한다. 리포터 세포가 공여자 세포(내인성 수준의 CD47을 발현하는 Jurkat 세포)에 노출될 때, SIRPα는 인산화되고 SHP-1 인산분해효소를 동원한다. 이러한 상호작용에 의해 ED 단편과 EA 단편이 보완되고, 기질을 가수분해할 수 있는 활성 β-gal 효소가 형성되어, 수용체 활성화의 척도로서의 화학발광 신호가 생성된다.
96-웰 백색 바닥의 TC 처리된 플레이트에서, Jurkat SIRPα-V1 또는 -αV2 신호전달 세포(20,000개)를 연속 적정한 항체와 함께 37℃, 5% CO2에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, PathHunter 세포 플레이팅 0 시약 중 JurkatParental 세포(30,000)를 100 μl의 총 부피로 첨가하였다. 플레이트를 가습된 인큐베이터에서 37℃, 5% CO2에서 5시간 동안 인큐베이션한다. PathHunter 생물검정 검출 시약을 첨가하고 실온의 암소에서 인큐베이션한 후, EnVision® 발광측정기를 이용해 플레이트를 판독한다. 평균 RLU 단위를 수용체 활성화의 척도로서 도표화한다.
이소형 대조군으로 제외하고, 항체 A~G, A10, A4, E22, 및 A11은 나노몰 미만의 IC50 값으로 세포 CD47-매개 SIRPαV1 활성화를 완전히 차단하였다(도 15a~15d)(표 48). 유사하게, 비록 항체 E 및 E22에 의한 억제가 각각 약 80% 및 55%에서 평탄화되었고, 항체 B가 포화 가능한 억제를 달성하지는 못했지만, 모든 항체는 세포 CD47-매개 SIRPαV2 활성화를 투여량 의존적으로 차단하였다(도 16a~16d; 표 50).
알려진 SIRPα 항체 KWAR23, 1H9, 및 SIRPAB11이 세포 CD47-매개 SIRPα 신호전달을 차단하는 능력을 전술한 바와 같이 평가한다. 1H9는 0.04 nM의 IC50으로 CD47-매개 SIRPαV1 활성화를 완전히 차단하였지만(도 15c; 표 50), 세포 CD47-매개 SIRPαV2 활성화의 차단은 포화 가능한 억제를 달성하지 못했다(도 16c; 표 50). KWAR23 및 SIRP AB11 항체는 SIRPα 대립유전자 중 어느 하나를 발현하는 세포에 의한 세포 CD47-매개 SIRPα 신호전달을 차단할 수 있었다.
실시예 14. SIRPα 길항제는 인간 단핵구 세포주에서 CD47에 의해 야기된 식균작용의 억제를 역전시킨다
CD47에 의해 유도된 식균작용의 SIRPα 매개 조절을 정량화하기 위해 유세포 기반 식균작용 검정을 개발하였다. 내인성 SIRPα가 결여된 U-937 세포에 전장 V1- 또는 V2-SIRPα 대립유전자를 함유하는 렌티바이러스를 형질도입한다. 96-웰 V-바닥 내의 조직 배양물(TC) 처리한 플레이트에서, 이들 세포를 표시된 농도의 항-SIRPα 항체와 함께 30분 동안 사전 인큐베이션한 후, 인간 CD47(NP_942088; AcroBiosystems)로 코팅하거나 코팅하지 않은 형광 접합된 마이크로비드(Spherotech)를 첨가하고, 인간 IgG1 항체로 옵소닌화하여 Fc 수용체 매개 식균작용을 유도한다. 37℃, 5% CO2에서 2시간 인큐베이션한 후, 샘플을 세척하고, 인간 TruStain FcX™(Biolegend)으로 차단하고, 비드의 외부 표면을 인식하는 형광 접합된 항체로 염색하여 세포의 외부에 접착된 비드와 내부에 접착된 비드를 구분할 수 있게 한다. 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. 식균작용은 내재화된 비드를 가진 세포의 백분율로서 표시된다.
V1 또는 V2 대립유전자 중 어느 하나에 대한 SIRPα를 발현하는 U-937 세포에 의한 옵소닌화된 비드의 내재화는, 세포를 CD47-코팅된 비드(흰색 막대)와 함께 인큐베이션했을 때 떨어졌고; 세포를 CD47이 결여된 비드(검은색 막대)와 함께 인큐베이션했을 때 아무런 효과가 관찰되지 않았다. 67 nM의 표시된 항체로 세포를 전처리한 결과, V1-SIRPα 및 V2-SIRPα 둘 다를 발현하는 U-937 세포(각각 도 17a 및 도 17b)가 CD47-코팅된 비드를 식균하는 능력이 회복되었는데, 이는 항체가 CD47-매개 SIRPα 신호전달을 차단할 수 있음을 나타낸다.
실시예 15. SIRPα 길항제는 SIRPα 대립유전자의 임의의 조합으로 이루어진, 일차 인간 단핵구 유래 대식세포에서 CD47에 의해 야기되는 식균작용의 억제를 역전시킨다
CD47에 의해 유도된 식균작용의 SIRPα 매개 조절을 정량화하기 위해 유세포 기반 식균작용 검정을 개발하였다. SIRPα V1 대립유전자, V2 대립유전자에 대해 동형접합성으로 유전자형 분석된 공여자 또는 두 대립유전자 모두에 대해 이형접합성으로 유전자형 분석된 공여자 유래의 인간 PBMC(EasySep 단핵구 농축 키트, StemCell Technologies)에서 농축시킨 단핵구는, 50 ng/ml 인간 재조합 M-CSF(Peprotech)가 첨가된 ImmunoCult™-SF 대식세포 분화 배지에서 6~7일 동안 배양한 후 대식세포로 분화된다. 96-웰 울트라-로우 부착(ultra-low attachment) TC 플레이트에서, 단핵구 유래 대식세포(MDM)를 표시된 농도의 항-SIRPα 항체와 함께 30분 동안 사전 인큐베이션한 후, 인간 CD47(NP_942088; AcroBiosystems)로 코팅하거나 코팅하지 않은 형광 접합된 마이크로비드(Spherotech)를 첨가하고, 인간 IgG1 항체로 옵소닌화하거나 하지 않고 Fc 수용체 매개 식균작용을 유도한다. 37℃, 5% CO2에서 1시간 인큐베이션한 후, 샘플을 세척하고, 인간 TruStain FcX™(Biolegend)으로 차단하고, 비드의 외부 표면을 인식하는 형광 접합된 항체로 염색하여 세포의 외부에 접착된 비드와 내부에 접착된 비드를 구분할 수 있게 한다. 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. 식균작용은 내재화된 비드를 가진 세포의 백분율로서 표시된다.
V1 또는 V2 대립유전자에 대해 동형접합성인 공여자(각각 도 18a~18b 및 도 20a~20b) 또는 두 대립유전자 모두에 대해 이형접합성인 공여자(도 19a~19b) 유래의 MDM에 의한 비드 내재화(옵소닌화 유무와 무관함)는, 세포를 CD47-코팅된 비드(백색 막대)와 함께 인큐베이션했을 때 떨어졌고; 세포를 CD47이 결여된 비드(검은색 막대)와 함께 인큐베이션했을 때는 효과가 관찰되지 않았다. 67 nM의 표시된 항체로 세포를 전처리한 결과, 세포가 옵소닌화된 CD47 코팅된 비드(백색 막대(도 18a, 19a, 및 20a) 및 옵소닌화되지 않은 CD47 코팅된 비드(도 18b, 19b, 및 20b)를 식균하는 능력이 회복되었는데, 이는 항체가 CD47-매개 SIRPα 신호전달을 차단할 수 있음을 나타낸다. 추가 실험은, 항-SIRPα 항체가 모든 유전자형의 공여자에서 유래된 일차 MDM에 의한 식균작용의 CD47-매개 억제를 투여량 의존적 방식으로 복구할 수 있음을 보여주었다(도 18c, 19c, 및 20c).
실시예 16. SIRPα 길항제는 SIRPα 대립유전자의 임의의 조합으로 이루어진, 일차 인간 단핵구 유래 수지상 세포에서 CD47에 의해 야기되는 식균작용의 억제를 역전시킨다
CD47에 의해 유도된 식균작용의 SIRPα 매개 조절을 정량화하기 위해 유세포 기반 식균작용 검정을 개발하였다. SIRPα V1 대립유전자, V2 대립유전자에 대해 동형접합성으로 유전자형 분석된 공여자 또는 두 대립유전자 모두에 대해 이형접합성으로 유전자형 분석된 공여자 유래의 인간 PBMC(EasySep™ 단핵구 농축 키트, StemCell Technologies)에서 농축시킨 단핵구는, ImmunoCult™-ACF 수지상 세포 분화 보충체가 첨가된 ImmunoCult™-ACF 수지상 세포 배지에서 5~6일 동안 배양한 후 수지상 분화된다. 96-웰 울트라-로우 부착(ultra-low attachment) TC 플레이트에서, 단핵구 유래 수지상 세포(MDDC)를 표시된 농도의 항-SIRPα 항체와 함께 30분 동안 사전 인큐베이션한 후, 인간 CD47(NP_942088; AcroBiosystems)로 코팅하거나 코팅하지 않은 형광 접합된 마이크로비드(Spherotech)를 첨가하고, 인간 IgG1 항체로 옵소닌화하거나 하지 않고 Fc 수용체 매개 식균작용을 유도한다. 37℃, 5% CO2에서 1시간 인큐베이션한 후, 샘플을 세척하고, 인간 TruStain FcX™(Biolegend)으로 차단하고, 비드를 인식하는 형광 접합된 항체로 염색하여 세포의 외부에 접착된 비드와 내부에 접착된 비드를 구분할 수 있게 한다. 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. 식균작용은 내재화된 비드를 가진 세포의 백분율로서 표시된다.
V1 또는 V2 대립유전자에 대해 동형접합성인 공여자(각각 도 21a~21b 및 도 23a~23b) 또는 두 대립유전자 모두에 대해 이형접합성인 공여자(도 22a~22b) 유래의 MDDC에 의한 비드 내재화(옵소닌화 유무와 무관함)는, 세포를 CD47-코팅된 비드(백색 막대)와 함께 인큐베이션했을 때 떨어졌고; 세포를 CD47이 결여된 비드(검은색 막대)와 함께 인큐베이션했을 때는 효과가 관찰되지 않았다. 67 nM의 표시된 항체로 세포를 전처리한 결과, 세포가 옵소닌화된 CD47 코팅된 비드(백색 막대(도 21a, 22a, 및 23a) 및 옵소닌화되지 않은 CD47 코팅된 비드(도 21b, 22b, 및 23b)를 식균하는 능력이 회복되었는데, 이는 항체가 CD47-매개 SIRPα 신호전달을 차단할 수 있음을 나타낸다.
실시예 17. 항-SIRPα 항체는 인간 종양 세포의 U-937 식균작용을 강화한다
선택된 분자의 기능적 활성을 항체 의존적 세포 식균작용 검정에서 평가하였다. Raji 세포(버킷 림프종 세포주; ATCC)를 제조사의 지침에 따라 PKH26 레드(Sigma)로 표지하고, 이어서 리툭시맙으로 옵소닌화한다. Raji 세포를 세척하여 미결합 리툭시맙을 제거한다. 96-웰 울트라-로우 부착 TC 플레이트에서, V1- 또는 V2-SIRPα-발현 U-937 세포(50,000개)를 연속 적정한 항-SIRPα mAb로 30분 동안 처리한 후, 50,000개의 Raji 표적 세포(± 리툭시맙 옵소닌화)를 첨가한다. 37℃, 5% CO2에서 가습된 인큐베이터에서 2시간 인큐베이션한 후, 샘플을 세척하고, 인간 TruStain FcX™(Biolegend)로 차단하고, PB-접합된 항-인간 CD13(U-937 마커; 클론 WM15; BD Biosciences) 및 AF647-접합된 항-인간 CD19(Raji 마커; 클론 HIB19; Biolegend) 칵테일로 염색한다. 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. 식균작용은 CD19에 대해 음성으로 염색되고 PKH26에 대해 양성으로 염색된 CD13+ 세포의 백분율로서 표시된다.
결과는 V1- 및 V2-SIRPα-발현 U-937 세포가 리툭시맙 옵소닌화가 결여된 Raji 세포를 식균시킬 수 없음을 보여주었다. Raji 세포의 옵소닌화는 세포 식균작용의 증가를 유도하였는데(약 0.2% 내지 약 6%), 이는 항-SIRPα 항체로 치료함으로써 투여량 의존적 방식으로 추가로 강화되었다.
실시예 18. 항-SIRPα 항체는 인간 종양 세포의 단핵구 유래 대식세포의 식균작용을 강화한다
선택된 분자의 기능적 활성을 항체 의존적 세포 식균작용 검정에서 평가하였다. Raji 세포(버킷 림프종 세포주; ATCC)를 제조사의 지침에 따라 PKH26 레드(Sigma)로 표지하고, 이어서 리툭시맙으로 옵소닌화한다. Raji 세포를 세척하여 미결합 리툭시맙을 제거한다. SIRPα V1 대립유전자에 대해 동형접합성으로 유전자형 분석된 공여자 유래의 인간 PBMC(EasySep™ 단핵구 농축 키트, StemCell Technologies)에서 농축시킨 단핵구는, 50 ng/ml 인간 재조합 M-CSF(Peprotech)가 첨가된 ImmunoCult™-SF 대식세포 분화 배지에서 6~7일 동안 배양한 후 대식세포로 분화된다. 96-웰 울트라-로우 부착 둥근 바닥 플레이트에서, 단핵구 유래 대식세포(MDM)을 연속 적정한 항-SIRPα mAb로 30분 동안 처리한 후, 50,000개의 Raji 표적 세포(± 리툭시맙 옵소닌화)를 첨가한다. 37℃, 5% CO2에서 2시간 인큐베이션한 후, 샘플을 세척하고, 인간 TruStain FcX™(Biolegend)로 차단하고, BV421-접합된 항-인간 CD14(MDM 마커; 클론 M5E2; Biolegend) 및 AF647-접합된 항-인간 CD19(Raji 마커; 클론 HIB19; Biolegend) 칵테일로 염색한다. 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. 식균작용은 CD19에 대해 음성으로 염색되고 PKH26에 대해 양성으로 염색된 CD13+ 세포의 백분율로서 표시된다.
결과는, MDM이 세포 치료에 관계없이 옵소닌화가 결여된 Raji 세포를 식균할 수 없음을 보여주었다. Raji 세포의 옵소닌화는 세포 식균작용의 증가를 유도하였는데(약 1.3% 내지 약 17%), 이는 항-SIRPα 항체로 치료함으로써 추가로 강화되었다.
실시예 19. 혼합 림프구 반응
선택된 분자를 혼합 림프구 반응에서 평가하였다. 96-웰 둥근 바닥 조직 배양물 처리된 플레이트를 DPBS에서 희석된 재조합 인간 CD47 세포외 도메인(ECD)/hFc 단백질로 코팅하고 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 플레이트를 DPBS/CF에서 3X 세척한다. 동결 보존된 인간 단핵구 유래 수지상 세포(Astarte Biologics)를 해동하고, 세척하고, X-VIVO 15 배지에 0.1백만/ml로 재현탁한다. 그런 다음, MDDC를 항-PD1 길항제와 함께 또는 항-PD1 길항제 없이 다양한 항-SIRPα mAb와 함께 1:1의 부피비로 60분 동안 사전 인큐베이션한 후, 이전에 인간 CD47로 코팅했거나 코팅하지 않은 96-웰 둥근 바닥 TC 플레이트의 각각의 웰에 MDDC ± mAb 치료제를 전달하였다. 동종이계 인간 PBMC 공여자(EasySep™ 인간 CD4+ T 세포 단리 키트)로부터 농축시킨 인간 CD4+ T 세포(약 100,000개)를 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 가습된 인큐베이터에서 37℃, 5% CO2에서 5일 동안 인큐베이션한다. 수확하기 16 내지 18시간 전에, 배양 웰을 1 μCi(100 μCi/ml의 10 μl)의 3[H]티미딘(Moravek Biochemicals Inc.)으로 펄싱한다. 이어서, Molecular Devices Micro96 Harvester를 사용해 세포를 필터 매트(Wallac) 상에 수확하고, 건조시킨 다음, 10 ml의 베타플레이트 섬광물질(BetaPlate Scintillation, Perkin-Elmer, cat#1205-440)이 포함된 샘플 백(Perkin Elmer)에 넣고 밀봉한다. 3[H]티미딘의 혼입은 MicroBeta2 2450 마이크로플레이트 계수기(Perkin Elmer)를 사용하여 측정한다.
도 24a~24b는 혼합 림프구 반응에서 수지상 세포에 의해 매개된 CD4 T 세포 증식을 플레이트 결합된 인간 CD47 융합 단백질이 억제하였음을 보여주는데, 이는 CD47-매개 신호전달이 고도로 면역 억제성일 수 있음을 입증한다. 이들 검정에서 CD47-Fc 매개 면역억제는 항-SIRPα 항체(KWAR23, 항체 A 및 E) 단독에 의해 또는 항-PD1 길항제와의 조합에 의해 다양한 정도로 역전될 수 있다.
실시예 20. 항-SIRPα Fab:SIRPα 복합체의 결정화
SIRPα 결합하는 항체에 대한 기계론적 기초를 이해하기 위해, 인간 SIRPα-V2의 도메인 1과 복합체를 형성한 항체 E 및 항체 A를 대상으로 항체-SIRPα 복합체의 구조에 대한 분석을 수행하였다(도 25a~25f 및 도 26a~26b).
복합체 구조를 얻기 위해, Gateway 클로닝 시스템을 사용하여 SIRPα V2(아미노산 31~148, N-말단 GST 태그를 포함함)의 발현을 위한 작제물을 생성하였다. 단백질을 오리가미 B(Origami B, DE3) 세포에서 발현시키고, GST-태그된 단백질에 대한 표준 프로토콜을 사용하여 정제하였다. 분획을 SDS-PAGE로 분석하고, 원하는 단백질을 함유하는 분획을 모으고, 25 mM HEPES; 100 mM NaCl; 5% 글리세린; pH 7.0에서 24 mg/ml로 농축시켰다. SIRPα V2 단백질을 항체 A 또는 E의 Fab 단편과 혼합하고, 10 mM 트리스; 150 mM NaCl; 1 mM TCEP; pH 7.5에서 크기 배제 크로마토그래피로 정제하였다. 증기 확산 좌적 방법에 의해 SIRPα V2 Fab 복합체의 결정을 5 mg/ml의 복합체 농도로 수득하였다(저장 용액: 항체 A: 20% PEG3350 및 180mM 트리-암모늄 시트레이트, 및 항체 E: 15% PEG 4000 및 100 mM HEPES, pH 7.0). Swiss Light Source(SLS)에서 데이터를 수집하고, 구조를 해석하고, 1.4 Å(항체 A) 및 1.6 Å(항체 E)의 해상도로 모델링하였다.
결정 구조 분석은, 2개의 항체가 상이한 영역에서 상이한 배향으로 SIRPα와 접촉할 수 있음을 입증하였다. 두 항체 모두가 SIRPα 상의 CD47-결합 부위를 가렸지만, 항체 A는 CD47에 의해 결합되는 SIRPα 잔기의 대부분과 접촉할 수 있으며, 이는 이 항체가 어떻게 완전한 CD47 길항작용을 달성할 수 있는지를 나타낸다. 이들 항체에 의해 접촉된 SIRPα 잔기는 SIRPα의 두 대립유전자 모두가 이들 대립유전자 사이에 있는 변이체 잔기에 의해 유해한 효과 없이 어떻게 동일하게 결합될 수 있는지를 설명한다. 접촉점 또한, SIRPγ에 대한 선택도를 설명한다(도 25a~25f 및 도 26a~26b, 및 표 51~52).
실시예 21. 상업적 항-SIRP mAb, 클론 SE5A5와의 경쟁 검정
항체가 V1- 및 V2-SIRPα 발현 U-937 세포에 결합하기 위해 상업적 항-SIRP mAb, 클론 SE5A5와 경쟁하는 능력에 대해 항체를 평가하였다. 인간 TruStain FcX™(Biolegend)로 차단된 세포를 항-SIRPα 항체와 함께 얼음 상에서 30분 동안 인큐베이션한 후, 형광 접합된 SE5A5(Biolegend)를 첨가한다. 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. 형광 강도 중앙값을 도표화한다.
도 27a~27b는 KWAR23 및 항체 A가 V1- 및 V2-SIRPα 발현 U-937 세포 둘 다에 형광 접합된 SE5A5가 결합하는 것을 차단하였음을 보여준다. 항체 E는 V1-SIRPα-발현 U-937 세포에 대한 SE5A5 결합을 차단하였지만, V2-SIRPα-발현 세포에 대한 결합을 차단하지는 않았다.
실시예 22. CHO 세포에서 발현된 전장 시노몰구스 SIRPα에 대한 항체의 결합
시노몰구스 (cyno) SIRPα를 발현하는 세포에 대한 항체 결합을 유세포 분석법으로 평가한다. 단백질 서열 수탁 번호 (A) EGM-02252; (B) XP_015313155; 또는 (C) NP_001271679에서 유래된 전장 cyno SIRPα를 발현하는 CHO-K1 세포를 당나귀 IgG로 차단하고, 증가하는 농도의 항체와 함께 얼음 상에서 60분 동안 인큐베이션하고, 세척하고, AF647-접합된 당나귀 F(ab’)2 항-인간 IgG 이차 시약으로 염색하였다. 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. 형광 강도 중앙값을 결정하고 항체 결합의 척도로서 사용한다.
KWAR23은 다양한 시노몰구스 SIRPα 서열을 암호화하는 모든 cyno SIRPα-발현 CHO 세포주(H3A9, P3HD10, 및 HC6)에 대한 투여량 의존적 결합을 나타냈으며(도 28a~28c), EC50 값은 0.5~2.0 nM 범위였다(표 53). 항체 E 및 E22는 클론 P3HD10 및 HC6에 대해 포화 가능한 결합 곡선 및 1.1 내지 2.5의 EC50 값을 달성하는 다양한 결합 프로파일을 나타냈으며, 클론 H3A9에 대해서는 거의 하지 않거나 전혀 결합하지 않았다. 항체 A 및 A10은 3개의 클론 모두에 대한 결합을 나타냈는데, 결합은 클론 H3A9에 대해 가장 강하였고 클론 P3HD10 및 HC6에 대해서는 최대 5배 더 약한 EC50 값을 나타냈다. 항체 A4의 적정 가능한 결합이 3개의 세포주 각각에서 검출되었지만, 높게는 200 nM의 농도에서 포화를 달성하지 못했다.
실시예 23. CHO 세포에서 발현된 전장 시노몰구스 SIRPβ1- 및 SIRPβ1v3에 대한 항체의 결합
전장 시노몰구스 SIRPβ1(XP_005568598) 및 SIRPβ1v3(XP_005568593)을 발현하는 세포에 대한 항체 결합을 유세포 분석법으로 평가한다. SIRPβ1- 또는 SIRPβ1V3-발현 U937SIRPα KO 세포를 당나귀 IgG로 차단하고, 증가하는 농도의 항체와 함께 얼음 상에서 60분 동안 인큐베이션하고, 세척하고, AF647-접합된 당나귀 F(ab’)2 항-인간 IgG 이차 시약으로 염색한다. 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. 형광 강도 중앙값을 결정하고 항체 결합의 척도로서 사용한다.
KWAR23은 cyno SIRPβ1- 및 SIRPβ1v3-발현 CHO 세포(각각 도 29a 및 29b)에 대한 투여량 의존적 결합을 나타냈으며, EC50 값은 나노몰 미만이었다(표 54). 항체 E 및 E22는 SIRPβ1v3-발현 CHO 세포에 대해 포화 가능한 결합 곡선 및 나노몰 미만의 EC50 값을 달성하는 다양한 결합 프로파일을 나타냈지만(도 29b, 표 54), SIRPβ1-발현 CHO 세포에 대해서는 검출 가능한 결합이 거의 없거나 전혀 없었다(도 29a). 대조적으로, 항체 A 및 A10은 SIRPβ1-발현 CHO 세포에 대한 용량 의존적 결합을 나타냈고(도 29a), EC50 값은 나노몰 미만이었으며(표 54), SIRPβ1v3-발현 세포에 대해서는 불포화성 결합을 나타냈다(도 29b). 항체 A4의 투여량 의존적 결합이 2개의 세포주 각각에서 검출되었지만, 높게는 67 nM의 농도에서 포화를 달성하지 못했다.
본원에 인용된 모든 특허, 특허 출원, 및 공개의 개시 내용은 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다. 본 개시는 특정 구현예를 참조하여 개시되었지만, 본 발명의 진정한 사상 및 범주를 벗어나지 않고도 본 개시의 다른 구현예 및 변형이 당업자에 의해 고안될 수 있음이 명백하다. 첨부된 청구범위는 이러한 모든 구현예 및 동등한 변형을 포함하는 것으로 해석되도록 의도된다.
실시예 24. 시노몰구스 원숭이에서의 약동학(PK).
약동학 연구는 2.1~6.0 kg의 체중 범위를 갖는 2~5세의 미노출 수컷 시노몰구스 원숭이(Macaca fascicularis)를 대상으로 수행된다. 원숭이를 2개의 치료군으로 나누고, 항체 A10을 투여한다. 1군(n=3)에게는 1 mg/kg의 항체를 투여하고 2군(n=3)에게는 5 mg/kg의 항체를 투여한다. 항체는 구연산염 완충액(50 mM 구연산나트륨/115 mM 염화나트륨, pH 5.0) 중 2 mg/ml 용액으로서 정맥내(i.v.) 투여된다. 6주에 걸쳐 말초 정맥으로부터 혈액 샘플을 채취하고, 분석을 위해 혈청을 회수한다.
ELISA 포맷을 사용하여 혈청 샘플을 분석한다. 간략하게, HuSIRPα-V1은 NUNC(TM) ELISA 플레이트(Thermo Fisher Scientific)에 결합된다. 플레이트를 인산염 완충 식염수 중 0.05% TWEEN(TM) 20으로 세척하고, PBS(Gibco ref 10010-023) 중 5% BSA 완충액(Sera Care cat#AP-4510-01)으로 차단한 후, 혈청 샘플과 함께 인큐베이션한다. 항체는 Novus, pAb 항-염소 항-인간 IgG HRP, Cat# NB7489를 1:8000 희석으로 사용하여 검출한다. PK 파라미터는 Phoenix WINNONLIN(TM) 소프트웨어(버전 8.2, Certara USA, Inc. Princeton, NJ)를 사용하여 비구획 분석에 의해 결정한다.
PK 연구 결과는 도 30에 도시되어 있고, PK 파라미터는 아래 표 55에 요약되어 있다. 항체는 1 내지 5 mg/kg의 투여량에서 투여량 의존적 CL을 나타냈는데, 이는 표적 매개 약물 분포(TMDD)가 전체 제거에 기여함을 시사한다.
실시예 25. 시노몰구스 원숭이에서의 독성학.
항체 A10을 사용해 시노몰구스 원숭이를 대상으로 반복 투여 독성 연구를 수행한다. 본 연구에서 평가된 파라미터에는 생체분석, 독성 동역학, 임상 관찰, 체중, 음식 섭취, 혈액학, 혈액 화학, 응고, 뇨분석, 면역표현형 분석, 신경행동 검사, 심전도 검사, 및 안과 검사가 포함된다.
수컷 및 암컷 시노몰구스 원숭이의 군(n=3/성별/군)에게 4주 동안 100 및 250 mg/kg/투여의 투여량 수준의 항체를 q1w로 투여한다(5회 투여량 투여).
체중, 임상 관찰, 음식 섭취, 안과 검사, 신경행동 검사, 심전도, 면역표현형 분석, 혈액학, 응고, 임상 화학, 또는 뇨분석에서 항체 관련 변화는 없었다.
결론적으로, 4주 동안 100 및 250 mg/kg/투여의 항체를 q1w로 정맥내 투여하는 것(총 5회 투여)은 원숭이에게 내약성이 있었고, 항체 관련 이상 소견은 없었다. 본 연구의 조건 하에서, 정태(22일차) 시의 무독성량(no-observed-adverse-effect-level)은 250 mg/kg/투여 q1w인 것으로 간주되었다.
실시예 26. Expi-CHO 세포에서 발현된 다양한 아미노산 점 돌연변이를 갖는 전장 인간 V1-SIRPα에 대한 항체의 결합
관찰된 항체 선택도의 구조적 기초를 연구하기 위해, 변형된 V1-SIRPα 단백질 서열을 발현하도록 조작된 세포에 대한 항체 결합을 유세포 분석법으로 시험한다. Expi-CHO 부모 세포에게 전장 야생형 인간 SIRPαV1 대립유전자(NP_542970.1) 또는 아미노산 점 돌연변이를 갖는 전장 인간 SIRPαV1을 함유하는 렌티바이러스를 형질도입하고(표 56), 일치하는 발현 수준을 달성하도록 분류한다. 이들 세포를 당나귀 IgG로 차단하고, 증가하는 농도의 항체와 함께 얼음 상에서 60분 동안 인큐베이션하고, 세척하고, AF647-접합된 당나귀 F(ab’)2 항-인간 IgG 항체로 염색한다. 염색된 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. 형광 강도 중앙값을 결정하고 항체 결합의 척도로서 사용한다.
이소형 대조군을 제외한 항체 A~E, A4, A10, E22, 및 KWAR23은 전장 야생형 인간 SIRPαV1을 발현하는 Expi-CHO 세포에 대해 투여량 의존적 결합을 나타냈고(도 31a), EC50 값은 0.3 내지 3.8 nM 범위였다(표 57). SIRPαV1 N®E 및 D®E 변이체를 발현하는 세포에 대한 항체 결합은 SIRPαV1 WT-발현 세포에 대한 결합과 비슷하였다(도 31b~31c; 표 57). 대조적으로, SIRPαV1 D®N 및 DD®EN 변이체를 발현하는 Expi-CHO 세포에 대한 항체 A~D, A4, 및 A10의 결합은 영향을 받아, 제거된 결합, 더 약한 결합(> EC50), 또는 불포화성 결합을 나타냈다(도 31d~31e; 표 57). 시험된 항체 중 부모 CHO 세포에 대한 결합을 나타낸 항체는 없었다(도 31f).
표적 서열 서열번호
αV1 WT EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAENTGSNERNIYIVVGVVCTLLVALLMAALYLVRIRQKKAQGSTSSTRLHEPEKNAREITQDTNDITYADLNLPKGKKPAPQAAEPNNHTEYASIQTSPQPASEDTLTYADLDMVHLNRTPKQPAPKPEPSFSEYASVQVPRK 268
αV1 N®E EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKR E NMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAENTGSNERNIYIVVGVVCTLLVALLMAALYLVRIRQKKAQGSTSSTRLHEPEKNAREITQDTNDITYADLNLPKGKKPAPQAAEPNNHTEYASIQTSPQPASEDTLTYADLDMVHLNRTPKQPAPKPEPSFSEYASVQVPRK 269
αV1 D®E EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSP E DVEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAENTGSNERNIYIVVGVVCTLLVALLMAALYLVRIRQKKAQGSTSSTRLHEPEKNAREITQDTNDITYADLNLPKGKKPAPQAAEPNNHTEYASIQTSPQPASEDTLTYADLDMVHLNRTPKQPAPKPEPSFSEYASVQVPRK 270
αV1 D®N EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPD N VEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAENTGSNERNIYIVVGVVCTLLVALLMAALYLVRIRQKKAQGSTSSTRLHEPEKNAREITQDTNDITYADLNLPKGKKPAPQAAEPNNHTEYASIQTSPQPASEDTLTYADLDMVHLNRTPKQPAPKPEPSFSEYASVQVPRK 271
αV1 DD®EN EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSP EN VEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAENTGSNERNIYIVVGVVCTLLVALLMAALYLVRIRQKKAQGSTSSTRLHEPEKNAREITQDTNDITYADLNLPKGKKPAPQAAEPNNHTEYASIQTSPQPASEDTLTYADLDMVHLNRTPKQPAPKPEPSFSEYASVQVPRK 272
실시예 27. Expi-CHO 세포에서 발현된 다양한 아미노산 점 돌연변이를 갖는 전장 인간 V2-SIRPα에 대한 항체의 결합
관찰된 항체 선택도의 구조적 기초를 연구하기 위해, 변형된 V2-SIRPα 단백질 서열을 발현하도록 조작된 세포에 대한 항체 결합을 유세포 분석법으로 시험한다. Expi-CHO 부모 세포에게 전장 야생형 인간 SIRPαV2 대립유전자(CAA71403.1) 또는 아미노산 점 돌연변이를 갖는 전장 인간 SIRPαV2를 함유하는 렌티바이러스를 형질도입하고(표 58), 일치하는 발현 수준을 달성하도록 분류한다. 이들 세포를 당나귀 IgG로 차단하고, 증가하는 농도의 항체와 함께 얼음 상에서 60분 동안 인큐베이션하고, 세척하고, AF647-접합된 당나귀 F(ab’)2 항-인간 IgG 항체로 염색한다. 염색된 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. 형광 강도 중앙값을 결정하고 항체 결합의 척도로서 사용한다.
이소형 대조군을 제외한 항체 A~E, A4, A10, E22, 및 KWAR23은 전장 야생형 인간 SIRPαV2를 발현하는 Expi-CHO 세포에 대해 투여량 의존적 결합을 나타냈고(도 32a), EC50 값은 0.2 내지 3.6 nM 범위였다(표 59). SIRPαV2 E®N을 발현하는 세포에 대한 항체 결합은 SIRPαV2 WT-발현 세포에 대한 결합과 비슷하였다(도 32b; 표 59). 대조적으로, B, C, E, E22, 및 KWAR23을 제외하고, SIRPαV2 D®E를 발현하는 Expi-CHO 세포에 대한 항체 A, D, A4 및 A10의 결합이 영향을 받았고, EC50은 SIRPαV2 WT 발현 세포에 대해 관찰된 EC50 값보다 3.1 내지 7.7배 더 큰 것으로 나타났다(도 32c; 표 59).
표적 서열 서열번호
αV2 WT EEELQVIQPDKSVSVAAGESAILHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPARELIYNQKEGHFPRVTTVSESTKRENMDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDTEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAENTGSNERNIYIVVGVVCTLLVALLMAALYLVRIRQKKAQGSTSSTRLHEPEKNAREITQDTNDITYADLNLPKGKKPAPQAAEPNNHTEYASIQTSPQPASEDTLTYADLDMVHLNRTPKQPAPKPEPSFSEYASVQVPRK 273
αV2 E→N EEELQVIQPDKSVSVAAGESAILHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPARELIYNQKEGHFPRVTTVSESTKR N NMDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDTEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAENTGSNERNIYIVVGVVCTLLVALLMAALYLVRIRQKKAQGSTSSTRLHEPEKNAREITQDTNDITYADLNLPKGKKPAPQAAEPNNHTEYASIQTSPQPASEDTLTYADLDMVHLNRTPKQPAPKPEPSFSEYASVQVPRK 274
αV2 D→E EEELQVIQPDKSVSVAAGESAILHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPARELIYNQKEGHFPRVTTVSESTKRENMDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSP E TEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAAENTGSNERNIYIVVGVVCTLLVALLMAALYLVRIRQKKAQGSTSSTRLHEPEKNAREITQDTNDITYADLNLPKGKKPAPQAAEPNNHTEYASIQTSPQPASEDTLTYADLDMVHLNRTPKQPAPKPEPSFSEYASVQVPRK 275
실시예 28. Expi-CHO 세포에서 발현된 다양한 아미노산 점 돌연변이를 갖는 전장 인간 SIRPβ1에 대한 항체의 결합
관찰된 항체 선택도의 구조적 기초를 연구하기 위해, 변형된 SIRPβ1 단백질 서열을 발현하도록 조작된 세포에 대한 항체 결합을 유세포 분석법으로 시험한다. Expi-CHO 부모 세포에게 전장 야생형 인간 SIRPβ1(O00241) 또는 하나의 아미노산 점 돌연변이를 갖는 전장 인간 SIRPβ1 중 어느 하나를 함유하는 렌티바이러스를 형질도입하고(표 60), 일치하는 발현 수준을 달성하도록 분류한다. 이들 세포를 당나귀 IgG로 차단하고, 증가하는 농도의 항체와 함께 얼음 상에서 60분 동안 인큐베이션하고, 세척하고, AF647-접합된 당나귀 F(ab’)2 항-인간 IgG 항체로 염색한다. 염색된 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. 형광 강도 중앙값을 결정하고 항체 결합의 척도로서 사용한다.
이소형 대조군 또는 항체 E22을 제외한 항체 A~E, A4, A10, 및 KWAR23은 Expi-CHO 세포에서 발현된 전장 야생형 인간 SIRPβ1에 대해 투여량 의존적 결합을 나타냈다(도 33a). 표 61은 항체 각각에 대해 계산된 결합 EC50을 강조한 것이다. 항체 A, C, D, A4, 및 A10은 야생형 인간 SIRPβ1-발현 세포에서 0.2 내지 1.6 nM 범위의 EC50 값을 나타냈지만, 항체 B 및 E의 결합은 불포화성이었고 EC50 값은 결정되지 않았다. KWAR23을 제외하고, 항체 결합은 하나의 아미노산 치환(D®H)이 루프 영역 내에 도입될 때 완전히 상실되었다(도 33b).
표적 서열 서열번호
β1 WT EDELQVIQPEKSVSVAAGESATLRCAMTSLIPVGPIMWFRGAGAGRELIYNQKEGHFPRVTTVSELTKRNNLDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAVRATPEHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPAGDSVSYSIHSTARVVLTRGDVHSQVICEIAHITLQGDPLRGTANLSEAIRVPPTLEVTQQPMRAENQANVTCQVSNFYPRGLQLTWLENGNVSRTETASTLIENKDGTYNWMSWLLVNTCAHRDDVVLTCQVEHDGQQAVSKSYALEISAHQKEHGSDITHEAALAPTAPLLVALLLGPKLLLVVGVSAIYICWKQKA 276
β1 D→H EDELQVIQPEKSVSVAAGESATLRCAMTSLIPVGPIMWFRGAGAGRELIYNQKEGHFPRVTTVSELTKRNNLDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPD H VEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAVRATPEHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPAGDSVSYSIHSTARVVLTRGDVHSQVICEIAHITLQGDPLRGTANLSEAIRVPPTLEVTQQPMRAENQANVTCQVSNFYPRGLQLTWLENGNVSRTETASTLIENKDGTYNWMSWLLVNTCAHRDDVVLTCQVEHDGQQAVSKSYALEISAHQKEHGSDITHEAALAPTAPLLVALLLGPKLLLVVGVSAIYICWKQKA 277
실시예 29. Expi-CHO 세포에서 발현된 다양한 아미노산 점 돌연변이를 갖는 전장 인간 SIRPβL에 대한 항체의 결합
관찰된 항체 선택도의 구조적 기초를 연구하기 위해, 변형된 SIRPβL 단백질 서열을 발현하도록 조작된 세포에 대한 항체 결합을 유세포 분석법으로 시험한다. Expi-CHO 부모 세포에게 전장 야생형 인간 SIRPβL(Q5TFQ8) 또는 하나의 아미노산 점 돌연변이를 갖는 전장 인간 SIRPβL 중 어느 하나를 함유하는 렌티바이러스를 형질도입하고(표 62), 일치하는 발현 수준을 달성하도록 분류한다. 이들 세포를 당나귀 IgG로 차단하고, 증가하는 농도의 항체와 함께 얼음 상에서 60분 동안 인큐베이션하고, 세척하고, AF647-접합된 당나귀 F(ab’)2 항-인간 IgG 항체로 염색한다. 염색된 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. 형광 강도 중앙값을 결정하고 항체 결합의 척도로서 사용한다.
항체 E, E22, 및 KWAR23은 Expi-CHO 세포에서 발현된 전장 인간 SIRPβL에 대한 투여량 의존적 결합을 나타냈으며(도 34a), EC50 값은 1.2 nM 미만이었다(표 63). 항체 A, A4, 및 A10의 결합은 SIRPβL-발현 세포에서 검출될 수 없었던 반면, 항체 B, C, 및 D는 불포화성 결합을 나타냈다(도 34a, 표 63). 루프 영역 내에 도입된 단일 아미노산 치환(H®D)은 이들 세포에 대한 항체 결합을 유지하거나, 강화시키거나, 용이하게 하였다(도 34b, 표 63).
표적 서열 서열번호
βL WT EEELQVIQPDKSISVAAGESATLHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDHVEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPAGDSVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTLTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAPGPALASAAPLLIAFLLGPKVLLVVGVSVIYVYWKQKA 278
βL H→D EEELQVIQPDKSISVAAGESATLHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRISNITPADAGTYYCVKFRKGSPD D VEFKSGAGTELSVRAKPSAPVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPAGDSVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIRVPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTLTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVSAHPKEQGSNTAPGPALASAAPLLIAFLLGPKVLLVVGVSVIYVYWKQKA 279
실시예 30. Expi-CHO 세포에서 발현된 다양한 아미노산 점 돌연변이를 갖는 전장 인간 SIRPη에 대한 항체의 결합
관찰된 항체 선택도의 구조적 기초를 연구하기 위해, 변형된 SIRPη 단백질 서열을 발현하도록 조작된 세포에 대한 항체 결합을 유세포 분석법으로 시험한다. Expi-CHO 부모 세포에게 전장 야생형 인간 SIRPη(NP_542970.1) 또는 아미노산 점 돌연변이를 갖는 전장 인간 SIRPη를 함유하는 렌티바이러스를 형질도입하고(표 64), 일치하는 발현 수준을 달성하도록 분류한다. 이들 세포를 당나귀 IgG로 차단하고, 증가하는 농도의 항체와 함께 얼음 상에서 60분 동안 인큐베이션하고, 세척하고, AF647-접합된 당나귀 F(ab’)2 항-인간 IgG 항체로 염색한다. 염색된 세포를 세척하고, 고정하고, 유세포 분석법으로 분석한다. 형광 강도 중앙값을 결정하고 항체 결합의 척도로서 사용한다.
KWAR23을 제외하고, 시험된 항체(항체 A~E, A4, A10, E22) 가운데 전장 야생형 인간 SIRPη 또는 SIRPη E®D 발현 세포를 발현하는 Expi-CHO 세포에 포화 결합을 나타내는 항체는 없었다(각각 도 35a 및 35b). 대조적으로, 항체 A~D, A4, 및 A10은 SIRPη N®D 및 EN®DD 변이체를 발현하는 Expi-CHO 세포에 대한 포화성 항체 결합을 나타냈으며, 항체 B를 제외한 모든 항체의 EC50 값은 나노몰 미만이었다(각각 도 35c 및 35d, 및 표 65).
표적 서열 서열번호
γWT EEELQMIQPEKLLLVTVGKTATLHCTVTSLLPVGPVLWFRGVGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRISSITPADVGTYYCVKFRKGSPENVEFKSGPGTEMALGAKPSAPVVLGPAARTTPEHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPTGQSVAYSIRSTARVVLDPWDVRSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSEAIRVPPTLEVTQQPMRVGNQVNVTCQVRKFYPQSLQLTWSENGNVCQRETASTLTENKDGTYNWTSWFLVNISDQRDDVVLTCQVKHDGQLAVSKRLALEVTVHQKDQSSDATPGPASSLTALLLIAVLLGPIYVPWKQKT 280
γE→D EEELQMIQPEKLLLVTVGKTATLHCTVTSLLPVGPVLWFRGVGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRISSITPADVGTYYCVKFRKGSP D NVEFKSGPGTEMALGAKPSAPVVLGPAARTTPEHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPTGQSVAYSIRSTARVVLDPWDVRSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSEAIRVPPTLEVTQQPMRVGNQVNVTCQVRKFYPQSLQLTWSENGNVCQRETASTLTENKDGTYNWTSWFLVNISDQRDDVVLTCQVKHDGQLAVSKRLALEVTVHQKDQSSDATPGPASSLTALLLIAVLLGPIYVPWKQKT 281
γN→D EEELQMIQPEKLLLVTVGKTATLHCTVTSLLPVGPVLWFRGVGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRISSITPADVGTYYCVKFRKGSPE D VEFKSGPGTEMALGAKPSAPVVLGPAARTTPEHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPTGQSVAYSIRSTARVVLDPWDVRSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSEAIRVPPTLEVTQQPMRVGNQVNVTCQVRKFYPQSLQLTWSENGNVCQRETASTLTENKDGTYNWTSWFLVNISDQRDDVVLTCQVKHDGQLAVSKRLALEVTVHQKDQSSDATPGPASSLTALLLIAVLLGPIYVPWKQKT 282
γEN→DD EEELQMIQPEKLLLVTVGKTATLHCTVTSLLPVGPVLWFRGVGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRISSITPADVGTYYCVKFRKGSP DD VEFKSGPGTEMALGAKPSAPVVLGPAARTTPEHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPTGQSVAYSIRSTARVVLDPWDVRSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSEAIRVPPTLEVTQQPMRVGNQVNVTCQVRKFYPQSLQLTWSENGNVCQRETASTLTENKDGTYNWTSWFLVNISDQRDDVVLTCQVKHDGQLAVSKRLALEVTVHQKDQSSDATPGPASSLTALLLIAVLLGPIYVPWKQKT 283
실시예 31. SIRPα V1의 아미노산 125~132 및 SIRPα V2의 아미노산 125~131은 항체 선택도에 대한 결정인자이다
SIRPαV1의 아미노산 125~132(서열 RKGSPDDV)에 상응하는 SIRPαV2의 아미노산 125~131(서열 RKGSPDT)에 위치한 루프 영역 내에서 항체 A에 의해 결합된 SIRPα 에피토프의 특정 영역을 식별하였다. 인간 SIRPαV1 및 SIRPαV2에 대한 선택적 결합을 포함하여, 항체 A의 관찰된 결합 특성에 대한 결정인자로서 이 루프를 식별하였는데, 인간 SIRPη 및 인간 SIRPβL에 대한 검출 가능한 결합은 없었다(표 37). 결합 선택도를 부여하는 데 있어서 이 루프의 잠재적 역할을, 복합체 SIRPαV2(실시예 20)에서 항체 A의 결정 구조를 결정하고, 관련 SIRP 이소형에서 에피토프 아미노산의 서열을 비교함으로써 식별하였고, 전술한 결합 연구(실시예 26~30)에 의해 확인하였다. 특히, 이러한 루프는 SIRPαV1과 SIRPαV2 간에 길이가 상이한데, SIRPαV1의 경우 8개의 아미노산이고 SIRPαV2의 경우 7개의 아미노산이다. 루프 길이에 있어서 이러한 차이에도 불구하고, 항체 A는 SIRPαV1 및 SIRPαV2 둘 다에 대해 유사한 결합 친화도를 나타낸다(예를 들어 표 37 참조). 도 36a는 항체 A가 어떻게 측면으로부터 이러한 루프에 결합하는지를 도시하는데, 이는 SIRPαV1 및 SIRPαV2에서의 상이한 길이를 이용해 루프를 특이적으로 인식할 수 있는 것으로 여겨진다. SIRPα와 항체 A와의 상호작용의 일반적인 구성은, SIRPαV1과 SIRPαV2의 루프가 유사한 배향으로 접근되는, SIRPα와 자연 결합 파트너인 CD47과의 상호작용과 유사하다는 것이 관찰되었다(도 36b). 그러나, 항체 A와 달리, CD47은 SIRPη에도 결합하는데, 이는 항체 A가 이러한 일반적인 유사성에도 불구하고 결합 선택도를 부여할 수 있음을 나타낸다.
길이가 상이한 루프가 항체 A에 의해 인식될 수 있다 하더라도, 에피토프의 이러한 부분은 그럼에도 불구하고 SIRP 단백질에 대해 관찰된 선택도를 부여할 수 있다. SIRPαV1 내의 서열 모티프 PDDV가 SIRPη와 SIRPβL 간의 중요한 차이인 것으로 식별하였는데, 여기서 상응하는 서열은 각각 PENV 및 PDHV이다(도 37a~37f).
항체 A의 관찰된 선택도의 구조적 기초를 추가로 연구하기 위해, 변형된 SIRP 단백질 서열을 발현하도록 조작된 세포에 결합하는 능력을 시험하였다(실시예 26~30 참조). 이들 실험의 결과를 통해, 결합 선택도를 부여함에 있어서 이러한 루프 내의 변이체 잔기의 중요성을 확인하였다. SIRPαV1 내의 각 서열 모티프(PDDV)를 SIRPη의 PDNV 또는 PENV 서열 중 어느 하나로 교환하는 것이 항체 A에 대한 결합을 강력하게 손상시켰음이 관찰되었다(도 31d~31e). 유사하게, PDDV 모티프를 갖는 SIRPβ1에 대한 항체 A의 결합은 상기 모티프를 SIRPβL의 PDHV 모티프로 교환함으로써 완전히 제거되었다(도 33b). 반대로, SIRPη의 PENV 모티프를 SIRPαV1의 PEDV 또는 PDDV로 교환하거나(도 35c~35d), SIRPβL의 PDHV 모티프를 SIRPβ1의 PDDV로 교환하면(도 34b) 결합이 복구될 수 있다. 이들 결과는, 한편으로는 SIRPα 단백질 내의 2개의 상이한 루프 길이 차이를 허용하지만, 다른 한편으로는 결합 계면에서 아미노산 변화에 대한 높은 민감도를 제공하는 에피토프의 특성을 강조한다. 종합하면, 이들 특성은 항체 A 및 이의 변이체(예: A4 및 A10)에 대해 기술된 선택도 패턴, 즉 SIRPη 및 SIRPβL에 대한 현저한 결합 부재에 의해 보완되는 SIRPαV1, SIRPαV2, 및 SIRPβ1에 대한 강한 결합을 초래한다.
실시예 32. 항체 역가 및 순도.
방법
형질감염. 형질감염을 위해, 중쇄 DNA, 경쇄 DNA, 필러 DNA, 및 XBP-1 DNA를 Opti-Pro SFM(Thermo Fisher)과 조합하고, 0.2 μm 필터를 통해 여과하여 멸균한다. 필요한 형질감염 규모에 맞게 (BalanCD Transfectory CHO(Irvine Scientific) + 4mM L-글루타민 중에서) 2x106개의 세포/mL 또는 4x106개의 세포/mL의 세포를 제조한다. 계산된 부피의 TransIT Pro(Mirus) 형질감염 시약을 제조된 Opti-Pro SFM + DNA 혼합물에 첨가한 즉시, 제조된 세포로 옮긴다. 140 rpm 또는 200 rpm 진탕 속도로 설정된 진탕 플라스크를 37℃, 5% CO2에서 인큐베이터에 넣는다. 형질감염 후 24시간차에, 온도를 30℃로 낮추고, 형질감염 보충제와 응집방지 보충제(둘 다 Irvine Scientific)를 형질감염된 세포에 첨가한다. 포도당 수준이 2 g/L 내지 1 g/L로 떨어지는 시기에 따라, 5일차 또는 7일차 사이에 CHO CD 이피션트 피드(Efficient Feed) B(Gibco)를 첨가한다. 형질감염된 배양물은 7 내지 10일 동안 유지시킨다.
원심분리 및 멸균 여과에 의해 수확한다. 단백질 A 바이오센서가 구비된 ForteBio/Pall Octet Red 96 기기에 의한 역가 산정을 위해 정화된 세포 배양 상청액을 샘플링한다. 측정된 항체 농도는 발현 역가(mg/L)로서 보고된다.
단백질 A(ProA) 정제: 정제는 GE AKTA Pure 시스템을 사용하여 실온(RT)에서 수행된다. MabSelect SuRe 수지(GE Healthcare)를 사용하는 재조합 단백질-A 친화도 크로마토그래피에 의해 수확된 세포 배양 유체(HCCF)로부터 각 샘플을 포획한다. 크로마토그래피 단계 및 완충액 세부 사항은 표 66 및 67에서 각각 확인할 수 있다. 단백질을 중성 pH에서 중성의 단백질 A에 결합시키고, 고염도(1M NaCl)로 세척한다. 각 샘플을 30 mM 아세트산나트륨, pH 3.5를 사용하여 등용매 모드에서 용리시킨다. 용리된 샘플을 3M 아세트산나트륨의 1% 용액, pH 9.0을 사용하여 pH 5.0으로 중화시킨다. 중화된 단백질을 0.22 μm 여과 시스템으로 멸균 여과한다. 농도는 NanoDrop 8000 분광 광도계(Thermo Fisher)를 사용하여 280 nm에서의 흡광도 측정에 기초하여 계산된다.
완충액 조성
평형화/세척 1 DPBS: 8.05 mM 인산나트륨, 137mM NaCl, 1.47 mM 인산칼륨, 2.6 mM 염화칼륨, pH 7.4
세척 2 DPBS 중 1M NaCl
세척 3 DPBS: 8.05 mM 인산나트륨, 137mM NaCl, 1.47 mM 인산칼륨, 2.6 mM 염화칼륨, pH 7.2
용리 30 mM 아세트산 나트륨, pH 3.5
중화 3M 아세트산 나트륨, pH 약 9
재생 0.25N NaOH
보관 20% 에탄올
단계 완충액/용액 부피
평형화 DPBS, pH 7.4 ≥ 5CV
로딩 배지 다양함
세척 1 DPBS, pH 7.4 ≥ 5CV
세척 2 DPBS+ 1M NaCl ≥ 5CV
세척 3 DPBS, pH 7.4 ≥ 5CV
용리 30 mM 아세트산나트륨, pH 3.5 ≥ 5CV
비고:
· OD 파장 280 nm
· OD≥100 mAU일 때 풀 수집 시작
· OD≥100 mAU일 때 풀 수집 종료
중화 3M 아세트산 나트륨, pH 9 용리 후 풀의 1% 부피
재생-전 세척 DPBS, pH 7.4 ≥ 5CV
비고:
· 컬럼 세척액의 pH를 확인함으로써 컬럼이 DPBS, pH 7.2에서 평형화되도록 함
재생 0.25N NaOH ≥ 5CV
비고:
· 컬럼을 0.25N NaOH에서 충분히 세척하여 끈적이는 오염물이 없도록 함
· 컬럼을 ≥30분 동안 재생 완충액에 두지 말 것
재생-후 세척 DPBS, pH 7.4 ≥ 5CV
비고:
· 컬럼 세척액의 pH를 확인함으로써 컬럼이 DPBS, pH 7.2에서 평형화되도록 함
보관 20% 에탄올 ≥ 5CV
양이온 교환 크로마토그래피(CEX). 양이온 교환 크로마토그래피는 실온에서 수행된다. 완충액 및 가공 조건은 표 68 및 표 69에 요약되어 있다. 단백질 A 친화도 크로마토그래피로 정제한 샘플을 AKTA Avant 크로마토그래피 시스템(Cytiva)을 사용하여 Poros 50 XS 컬럼(Thermo Fisher)을 사용하여 연마한다. 5CV(컬럼 부피)의 50 mM 아세트산나트륨, pH5.0로 사전 평형화된 컬럼에 항체를 결합시키고, 5CV의 동일한 완충액으로 세척한다. 그런 다음, 20 CV 중 0 내지 0.5 M NaCl의 구배를 사용하여 항체를 용리한다. 용리된 샘플을 약 100 mM NaCl의 최종 이온 강도로 조정한다. 진공 여과 시스템을 사용하여 0.22 μm Steriflip (Millipore)에 의해 단백질을 50mL 팔콘 튜브 내로 멸균 여과한다. 항체 농도는 NanoDrop 8000(Thermo Fisher)을 사용하여 280 nm에서 측정한 흡광도에 기초하여 계산된다. 정제된 항체는 4℃에서 보관된다.
완충액 조성
평형화/세척 50 mM 아세트산 나트륨, pH 5.0
용리 50 mM 아세트산 나트륨, 1M NaCl, pH 5.0
50% B의 20CV에서의 구배 용리
재생 0.25N NaOH
보관 20% 에탄올
단계 완충액 부피
평형화 50 mM 아세트산 나트륨, pH 5.0 5 CV
로딩 50 mM 아세트산 나트륨, pH 5.0 다양함
세척 50 mM 아세트산 나트륨, pH 5.0 5 CV
용리 50 mM 아세트산 나트륨 및 1M NaCl, pH 5.0 20 CV
비고:
· OD 파장 280 nm
· OD≥100 mAU일 때 풀 수집 시작
OD ≤ 100 mAU일 때 풀 수집 종료
재생 0.25N NaOH ≥ 5 CV
재생-후 세척 DPBS, pH 7.4 ≥ 5 CV
보관 20% 에탄올 ≥ 5 CV
분석적 크기 배제 크로마토그래피. 분석적 크기 배제 크로마토그래피(aSEC)는 단백질 BEH SEC 컬럼 200Å, 1.7 μm, 4.6x150 mm(Waters part#186005225)를 사용하여 Acquity UPLC(Waters, Milford, MA) 시스템을 사용하여 수행된다. 실행 조건은 다음과 같다: 이동상: 50 mM 인산나트륨, 200 mM 아르기닌, 및 0.05% 아지드화 나트륨; 유속: 0.5 ml/분; 실행 시간: 5분; 샘플 로딩량: 10 μg; 피크 검출: A280nm. 결과를 분석하여 단량체, 저분자량(LMW), 및 고분자량(HMW)으로서 존재하는 항체의 백분율을 결정한다.
낮은 pH를 유지하는 것은 1M 아세트산, pH 2.45로 pH를 3.5로 조정하여 수행한다. 실온에서 90분 동안 인큐베이션한 후, 샘플을 1M 트리스 HCl, pH 9.0에 의해 pH 5.0으로 중화시킨다. 최종 농도는 NanoDrop 8000(Thermo Fisher)을 사용하여 280 nm에서 흡광도를 측정하여 결정한다. 샘플의 크기 순도는 분석적 크기 배제 크로마토그래피에 의해 특성화한다.
결과
상기 절차는 본 개시의 항체를 발현시키고 정제하는 데 사용된다. 표 70 및 71은 표시된 것과 같은 항체에 대한 2회의 상이한 임상시험으로부터의 역가 및 크기 순도 결과를 보여준다. 표 70은 단백질 A 정제 및 양이온 교환 크로마토그래피의 발현 역가 및 결과를 보여준다. 주어진 항체에 대한 반복된 행은 다수의 복제물을 나타낸다. 표 71은 단백질 A 정제의 발현 역가 및 결과를 보여준다. 표 72는 pH 3.5 처리(2회 반복) 후 표시된 항체에 대한 크기 순도 결과를 pH 5.0로 유지시킨 동일한 항체와 비교하여 보여준다.
명칭 역가 (mg/L) ProA 로딩량 (mg) ProA로부터의 회수 (%) ProA 후
단량체 (%) 		CEX
로딩량 		CEX로부터의
회수 (%) 		CEX 후
단량체 (%)
A 334 334 82.20% 97.03 264.54 78.40% 100
B 206 206 70.78% 95.66 145.81 60.69% 99.2
C 277 277 82.46% 97.76 228.41 76.18% 99.89
D 227 227 80.61% 98.26 182.98 81.26% 99.95
E 136 136 68.71% 98.05 93.45 74.31% 99.98
A10 231 462 101% 97.32 453 84.41% 99.88
A10 287 287 102% 97.15 292 80.61% 99.91
A10 246.5 247 101.00% 96.02 235 79.40% 99.64
A4 137 274 105.60% 99.44 274 85.19% 99.9
E22 77 385 189.10% 95.99 694 79.24% 99.49
항체 발현 역가 (mg/L) 단백질 A 정제 후
정제 농도(mg/mL) 		단백질 A 정제 후 단량체
(메인 피크) (%)
A 286 3.68 98.57
A1 215.1 3.61 98.62
A2 199.4 3.57 99.11
A3 222.6 3.64 98.78
A4 230.5 3.67 98.69
A5 254.7 3.72 98.13
A6 226.5 3.62 98.59
A7 256.2 3.58 98.37
A8 249.8 3.59 98.58
A9 251.1 3.68 98.03
A10 256.3 3.67 97.54
A12 271.6 3.68 98.57
A13 259.2 3.67 98.39
A14 261.4 3.72 98.48
A15 249.2 3.63 97.56
A16 281.3 3.7 98.64
E 146 3.19 99.09
E1 216.1 3.24 87.86
E2 157.6 3.37 97.12
E3 237.7 3.27 88.32
E4 169.8 3.31 97.58
E5 240.6 3.26 88.92
E6 193.4 3.37 98.51
E7 209.2 3.44 86.42
E8 92.8 3.12 98.9
E9 209.7 3.39 88.79
E10 162.9 3.28 100
E11 58.6 1.95 100
E12 235 3.43 88.83
E13 204.6 3.3 89.09
E14 227.5 3.41 92.98
E15 118 3.21 99.14
E16 245.2 3.35 88.1
E17 84.9 2.93 92.69
E18 183.8 3.35 97.63
E19 230.3 3.39 87.89
E20 208 3.49 89.2
E21 237.5 3.46 91.24
E22 78.5 2.89 97.27
실시예 33. 항체 결합 동역학
방법
다양한 SIRPα 분석물에 대한 항-SIRPα 항체의 결합 동역학은 Biacore 8K+(Cytiva)를 사용하여 표면 플라스몬 공명(SPR)에 의해 결정한다. 달리 언급되지 않는 한, 1x HBS-EP+(Cytiva)를 실행 완충액으로서 및 모든 희석물에 대해 사용한다. 0.1 M NHS(N-하이드록시숙신이미드) 및 0.4 M EDC(1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카르보디이미드 하이드로클로라이드)의 1:1 혼합물을 10 μl/분의 유속으로 420초 동안 주입하여 Series S CM5 센서칩을 활성화하고, 단백질 A/G(Thermo Scientific, 10 mM 아세테이트 pH 4.5 중 10 μg/ml)를 10 μl/분의 유속으로 420초 동안 주입하여 고정시켜, 표면 상에 약 3000 RU의 단백질 A/G를 생성하였다. 그런 다음, 1 M 에탄올아민 HCl pH 8.5를 10 μl/분의 유속으로 420초 동안 주입하여 센서칩을 비활성화시킨다.
항체(약 1 ug/ml)를 10 μl/분의 유속으로 주입하여 단백질 A/G 표면 상에 60초 동안 포획하여 약 240 RU의 포획 수준에 도달시킨다. 분석물로서 각 SIRP 단백질(표시된 농도의 세포외 도메인 + His-태그)의 희석물을 포획된 항체 위에 300초의 결합 시간 동안 30 μl/분의 유속으로 주입한 다음, 600초 동안 해리시킨다. 0.85% 인산을 30 μl/분의 유속으로 30초 동안 주입하여 표면을 재생시킨다. SPR 센서그램을 랭뮤어 결합에 전체적으로 1:1로 피팅하여 결합 속도(ka), 해리 속도(kd), 및 해리 상수(KD) 값을 구하거나, Biacore Insight Evaluation 소프트웨어에서 정태 친화도에 전체적으로 피팅하여 KD를 구한다.
결과
상기 절차는 본 개시의 항체의 결합 특성을 측정하는 데 사용된다. 사용된 각 분석물에 대해, 최고 농도는 실시예 3에 표시된 바와 같았다(표 36 참조). 측정된 각 분석물에 대한 각각의 표시된 항체의 결합 속도, 해리 속도, 및 해리 상수는 표 73~표 74에 나타나 있다.
huSIRPαV1 huSIRPαV2
항체 ka (1/Ms) kd (1/s) KD (nM) ka (1/Ms) kd (1/s) KD (nM)
A 4.97E+05 3.84E-03 7.72 8.07E+05 7.28E-03 9.03
E 4.79E+05 2.03E-04 0.43 5.47E+05 1.81E-04 0.33
A1 7.27E+05 6.25E-03 8.60 8.69E+05 1.62E-02 18.6
A2 7.29E+05 6.85E-03 9.39 8.83E+05 1.84E-02 20.9
A3 7.30E+05 6.61E-03 9.06 9.07E+05 1.78E-02 19.6
A4 7.29E+05 6.17E-03 8.46 8.92E+05 1.63E-02 18.3
A5 6.84E+05 5.98E-03 8.75 9.09E+05 1.62E-02 17.8
A6 7.66E+05 6.34E-03 8.28 9.47E+05 1.71E-02 18.1
A7 7.16E+05 6.72E-03 9.38 9.33E+05 1.90E-02 20.4
A8 7.08E+05 6.04E-03 8.53 8.59E+05 1.62E-02 18.8
A9 4.95E+05 3.63E-03 7.34 7.91E+05 6.52E-03 8.25
A10 5.98E+05 4.02E-03 6.75 6.93E+05 6.98E-03 10.6
A11 5.86E+05 4.00E-03 6.87 6.80E+05 7.09E-03 10.9
A12 4.82E+05 3.78E-03 7.83 7.69E+05 6.89E-03 8.96
A13 4.84E+05 3.52E-03 7.28 7.60E+05 6.35E-03 8.36
A14 4.88E+05 3.97E-03 8.13 8.16E+05 6.48E-03 7.95
A15 5.26E+05 3.71E-03 7.06 8.48E+05 6.71E-03 7.91
A16 4.72E+05 3.77E-03 7.98 7.66E+05 6.30E-03 8.22
E1 4.14E+05 2.99E-04 0.72 5.23E+05 3.30E-04 0.63
E2 4.59E+05 4.19E-04 0.91 5.35E+05 3.67E-04 0.69
E3 3.85E+05 3.71E-04 0.96 4.72E+05 3.66E-04 0.78
E4 4.38E+05 4.33E-04 0.99 5.11E+05 4.21E-04 0.82
E5 3.31E+05 3.36E-04 1.02 4.06E+05 3.55E-04 0.87
E6 3.74E+05 3.86E-04 1.03 4.29E+05 3.75E-04 0.88
E7 3.78E+05 4.53E-04 1.20 4.68E+05 5.52E-04 1.18
E8 3.22E+05 3.90E-04 1.21 4.35E+05 2.36E-04 0.54
E9 5.18E+05 6.31E-04 1.22 5.83E+05 5.48E-04 0.94
E10 4.22E+05 5.18E-04 1.23 4.98E+05 5.96E-04 1.20
E11 3.52E+05 4.98E-04 1.41 4.53E+05 2.58E-04 0.57
E12 4.90E+05 8.19E-04 1.67 5.62E+05 7.09E-04 1.26
E13 3.94E+05 6.71E-04 1.70 4.90E+05 3.38E-04 0.69
E14 4.03E+05 7.43E-04 1.84 4.53E+05 6.15E-04 1.36
E15 4.21E+05 8.02E-04 1.91 5.01E+05 3.69E-04 0.74
E16 4.90E+05 1.06E-03 2.15 5.47E+05 1.05E-03 1.93
E17 4.05E+05 9.55E-04 2.36 5.08E+05 4.05E-04 0.80
E18 4.10E+05 1.01E-03 2.46 4.93E+05 4.43E-04 0.90
E19 3.34E+05 8.43E-04 2.52 4.11E+05 3.99E-04 0.97
E20 4.80E+05 1.64E-03 3.42 5.63E+05 6.27E-04 1.11
E21 4.76E+05 2.12E-03 4.46 5.49E+05 7.61E-04 1.39
cynoSIRPα
(NP_001271679)		 cynoSIRPα
(EGM_02252)		 cynoSIRPα
(XP_015313155)
항체 ka (1/Ms) kd (1/s) KD (nM) ka (1/Ms) kd (1/s) KD (nM) ka (1/Ms) kd (1/s) KD (nM)
A 8.73E+05 1.38E-01 158 해당
없음		 해당 없음 258* 해당 없음 해당 없음 165*
E 2.35E+05 1.91E-03 8.14 NB 2.41E+05 1.70E-03 7.07
A1 해당 없음 해당 없음 780* 해당
없음		 해당 없음 523* 해당 없음 해당 없음 427*
A2 해당 없음 해당 없음 887* 해당
없음		 해당 없음 556* 해당 없음 해당 없음 469*
A3 해당 없음 해당 없음 857* 해당
없음		 해당 없음 560* 해당 없음 해당 없음 480*
A4 해당 없음 해당 없음 669* 해당
없음		 해당 없음 488* 해당 없음 해당 없음 420*
A5 해당 없음 해당 없음 665* 해당
없음		 해당 없음 517* 해당 없음 해당 없음 415*
A6 해당 없음 해당 없음 684* 해당
없음		 해당 없음 521* 해당 없음 해당 없음 420*
A7 해당 없음 해당 없음 741* 해당
없음		 해당 없음 588* 해당 없음 해당 없음 466*
A8 해당 없음 해당 없음 639* 해당
없음		 해당 없음 520* 해당 없음 해당 없음 415*
A9 해당 없음 해당 없음 346* 해당
없음		 해당 없음 230* 해당 없음 해당 없음 174*
A10 해당 없음 해당 없음 388* 해당
없음		 해당 없음 282* 해당 없음 해당 없음 203*
A11 해당 없음 해당 없음 410* 해당
없음		 해당 없음 298* 해당 없음 해당 없음 204*
A12 해당 없음 해당 없음 384* 해당
없음		 해당 없음 247* 해당 없음 해당 없음 195*
A13 해당 없음 해당 없음 330* 해당
없음		 해당 없음 223* 해당 없음 해당 없음 177*
A14 해당 없음 해당 없음 316* 해당
없음		 해당 없음 222* 해당 없음 해당 없음 176*
A15 해당 없음 해당 없음 317* 해당
없음		 해당 없음 224* 해당 없음 해당 없음 174*
A16 해당 없음 해당 없음 306* 해당
없음		 해당 없음 224* 해당 없음 해당 없음 174*
E1 1.83E+05 3.27E-03 17.9 NB 1.90E+05 3.17E-03 16.7
E2 2.54E+05 5.26E-03 20.7 NB 2.60E+05 5.12E-03 19.7
E3 1.68E+05 2.91E-03 17.3 NB 1.70E+05 2.88E-03 16.9
E4 2.22E+05 4.68E-03 21.1 NB 2.28E+05 4.51E-03 19.8
E5 1.23E+05 4.71E-03 38.2 NB 1.21E+05 4.59E-03 37.8
E6 1.89E+05 7.74E-03 41.0 NB 1.75E+05 7.29E-03 41.6
E7 1.58E+05 3.46E-03 21.9 NB 1.59E+05 3.37E-03 21.2
E8 2.04E+05 3.60E-03 17.7 NB 2.07E+05 3.44E-03 16.6
E9 3.21E+05 1.40E-02 43.7 NB 3.24E+05 1.32E-02 40.8
E10 2.16E+05 5.45E-03 25.2 NB 2.22E+05 5.26E-03 23.7
E11 2.67E+05 5.42E-03 20.3 NB 2.75E+05 5.49E-03 20.0
E12 2.79E+05 1.29E-02 46.1 NB 2.97E+05 1.25E-02 42.2
E13 1.97E+05 7.55E-03 38.3 NB 1.90E+05 7.11E-03 37.4
E14 1.90E+05 1.73E-02 90.7 NB 2.00E+05 1.73E-02 86.3
E15 2.43E+05 1.20E-02 49.4 NB 2.45E+05 1.13E-02 46.2
E16 3.13E+05 1.58E-02 50.0 NB 3.00E+05 1.47E-02 48.8
E17 2.82E+05 1.26E-02 44.8 NB 2.92E+05 1.26E-02 43.2
E18 2.24E+05 1.18E-02 52.5 NB 2.26E+05 1.13E-02 50.0
E19 1.56E+05 7.25E-03 46.6 NB 1.54E+05 6.87E-03 44.7
E20 2.51E+05 2.78E-02 111.0 NB 2.51E+05 2.61E-02 104.0
E21 2.25E+05 2.42E-02 107.0 NB 2.28E+05 2.45E-02 108.0
표 73~74에 대한 약어. NB: 결합 없음. *는 정태 친화도를 나타낸다(ka 및 kd 값은 제공되지 않음).
실시예 34. 항체 농도가 안정성에 미치는 효과
항체 A10을 10 mM 히스티딘(pH 6.0)에서 다양한 농도로 제조한다. 제조된 각 샘플을 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 탁도, 점도, 및 고분자량(HMW), 항체 단량체, 및 저분자량(LMW) 수준에 대해 평가한다. SEC는 초기에 수행되고 1주일 후에 25℃에서 수행된다. 결과는 아래 표 75에 나타나 있다.
고유 형광 측정치는 도메인 펼침 및 응집 형성을 온도의 함수로서 평가하는 데 사용된다. 결과는 표 76에 나타나 있다.
방법
탁도. 탁도는 탁도 광도계를 사용하여 측정한다. 각각의 측정을 위해, 130 μL의 샘플을 일회용 붕규산 유리 둥근 바닥 큐벳에 넣는다. 조사 파장은 633 nm이고, 탁도는 직각 광 산란에 의해 측정한다. 각각의 측정은 적어도 2회 반복하고, 허용 오차는 ≤ 2%이다.
점도. 점도는 Haake MARS III Rheometer, Thermo Scientific을 사용하여 측정한다. 측정 파라미터는 다음과 같다: 콘: C35/1 (Ø 35 mm 및 1° 각도), 티타늄. 부피 = 210 μL, 미희석. 데이터 분석: 1000s-1의 전단 속도에서 100개의 데이터 포인트. 온도: 20℃.
크기 배제 크로마토그래피. 크기 배제 크로마토그래피는 전-컬럼(KrudKatcher 초-HPLC 인라인 필터 0.5μm x 0.004 μm ID (Phenomenex, Torrance, CA)) 및 컬럼(Acquity UPLC BEH200SEC 300 x 4.6 mm (Waters Corp., Milford, MA))을 사용해 UPLC-시스템, 예를 들어 Agilent 1290 Infinity II 상에서 수행한다. 이동상은 40 mM NaH2PO4 x H2O, 0.4 M NaClO4, pH 6.8이고, 유속은 0.3 mL/분이다. 자동샘플러를 5℃로 유지하고, 컬럼은 실온으로 유지한다. 검출은 280 nm의 파장에서 UV 검출기로 수행한다. 피크폭은 > 0.05분(1 s)(EmPower의 경우)이거나 약 10 Hz(다른 소프트웨어)이다. 슬릿은 4 nm이다. 샘플을 이동상에서 5 mg/mL로 희석한다. 로딩량은 주입 당 30 μg이다. 실행 시간은 15분이다. 통합은 알고리즘 Apex Track을 기본값으로 하여 자동으로 수행하며, “검출 숄더” 설정을 활성화했을 때 피크 면적은 대략 4.5~11.5분의 머무름 시간 내에 있다. 피크 폭은 20초이고 검출 임계값은 14이다.
고유 형광. 고유 형광은 표준화된 방법을 사용하여 Prometheus NT. 48 nano DSF(NanoTemper Technologies GmbH, Munich, Germany)를 사용하여 측정한다. 샘플 부피는 모세관 당 10 μL이고, 샘플 농도 및 제형은 표시된 바와 같다. 단백질 농도 > 0.2 mg/mL인 경우에 Prometheus NT.48 시리즈 nanoDSF 등급 표준 모세관을 사용하고, 농도 ≤ 0.2 mg/mL인 경우에 Prometheus NT.48 시리즈 nanoDSF 등급 고감도 모세관을 사용한다. 온도 램프 구간은 20℃~95℃이며, 증분은 1℃/분이다. 고유 형광에 대한 여기 파장은 285 nm로 설정하고, 강도는 10%~30%이다(최적의 측정 범위에 따라 조정됨). 350/330 nm에서의 검출 비율의 값은 온도에 대한 함수로서 도표화되어 있다. 이 함수의 제1 미분값은 Tonset 및 용융 온도를 결정하는 데 사용되고, Tonset은 광 후방 산란에 의해 결정한다.
실시예 35. 항체 안정성 시험
항체 A10은 25 mM 히스티딘 및 pH 6.0 중에서 NaCl 농도를 가변하면서 50 mg(항체)/mL의 농도로 제형화된다. 각 제형의 특성을 초기에 및 4주 및 8주 동안 40℃로 유지한 후에 SPR(표 77) 및 SEC(표 78 및 79)에 의해 평가하였다.
방법
표면 플라스몬 공명 . 표면 플라스몬 공명 분광분석은 Biacore T200(Cytiva, Marlborough, MA)을 사용하여 수행된다. 실행 완충액 및 희석 완충액은 HBS-EP+(Cytiva, Marlborough, MA)이다. 분석 온도는 25℃였고 데이터 수집 속도는 1 Hz이고, 하나의 유세포를 사용한다. 센서 칩 CM5는 고밀도 단백질 A/G 고정과 함께 사용된다. 소프트웨어의 미리 정의된 표준 아민 커플링 방법이 적용된다. 고정 완충액은 아세테이트(pH 4.5, 30 μg/ml, 420초, 10 μl/분)이다. 인자 1:2를 사용하고 추가로 블랭크를 주입하여 2000~62.5 ng/ml의 교정 곡선을 준비함으로써 분석을 수행한다. 항체 샘플을 1 μg/ml로 희석한다. 인간 SIRPα V1 및 V2 항원을 10 μg/ml로 희석한다. 빌드 방법의 경우, 1 사이클은 다음과 같이 구성된다: 180초 동안 10 μl/분의 속도로 항체 포획; 180초 동안 10 μl/분의 속도로 항원 주입; 및 12초 동안 50 μ/분의 속도로 50 mM HCl로 재생. 교정 곡선을 사용해 수신된 센서그램에 대한 평가를 수행하여 단백질 A/G 및 항원에 대한 샘플의 Biacore 농도를 계산하고, 항원 결합 부위에 대한 결합 활성을 계산하였다.
크기 배제 크로마토그래피 . 크기 배제 크로마토그래피는 상기 실시예 34에 기술된 바와 같이 수행된다.
실시예 36. 고유 생물물리학적 프로파일 분석
방법
선택된 항체의 가변 영역에 대한 물리화학적 기술어는 Ahmed 등의 문헌[Proc Natl Acad Sci U S A. 2021. Sep 14;118(37):e2020577118]에 기술된 방법에 따라, 7.4의 pH 값 및 137 mM 염에서 연산한다. 5개의 기술어는 다음과 같다: VL 도메인과 VH 도메인 사이에 매립된 표면적(BSA_VL:VH), 소수성 표면 패치(RP)에 대한 하전 비율, 쌍극 모멘트와 소수성 모멘트의 비율(RM), 소수성 이방성(Avg_HI), 및 구조 기반 등전점(pIFv_3D). 이들 5개의 기술어 값 각각은, 이들 기술어 값을 77개의 승인된 항체 기반 생물치료제에 함유된 79개의 Fv 영역(승인된 생물치료제 중 2개는 2개의 Fv 영역을 각각 함유함)에 대한 상응하는 기술어의 평균 및 표준 편차(SD) 값과 비교함으로써, Z-스코어를 계산하는 데 사용하였다. Z-스코어가 > 1.96 또는 < -1.96인 각각의 기술어는 Fv 영역에 대한 플래그(flag)를 제공한다. Fv 영역이 최대 5개의 플래그를 수집할 수 있도록, 선택된 각 항체에 대한 플래그의 수를 합산하였다. 또한, 각 Fv 영역에 대한 개별 Z-스코어를 합쳐 기술된 것과 같은 Z-거리를 얻는다(전술한 문헌 참조).
결과
상기 절차는 선택된 항체의 고유 생물물리학적 특성을 평가하는 데 사용된다. 항체 A~E, A1~A16, 및 E1~E22의 가변 영역 서열은 위에 개시한 것과 같고, 항체 L14, P11, S4, SB6, S7, S10, 및 S14의 서열은 표 80~81에 도시된 것과 같다. 표 82는 5개의 기술어 각각의 값을 나타낸다. 표 83은 각 기술어 값에 대응하는 Z-스코어뿐만 아니라 5개의 기술어로부터 연산된 Z-거리를 보여준다. 표 84는 각 기술어에 대한 플래그 값(0은 플래그가 없음을 나타내고 1은 플래그를 나타냄, 즉 Z-스코어 > 1.96 또는 < -1.96임) 및 각 항체에 대한 플래그의 총 수를 보여준다. 주어진 항체에 대해, 절대 Z-스코어 값이 높을수록 플래그의 수가 더 많고, Z-거리 값이 높을수록 분석에 사용된 77개의 승인된 생물치료제에 함유된 79개의 Fv 영역의 평균 특성으로부터 편차가 각각 더 커짐을 나타낸다.
항체 중쇄 가변 영역의 서열
항체 중쇄 가변 영역 서열 서열번호
L14 QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYNFNIYWINWVRQAPGQGLEWIGNIYPSSISTNYNEKFKTRATLTVDKSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARSEGTYYGGRYEGDWFGYWGQGTLVTVSS 284
P11 EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYVMSWVRQTPGKGLEWVATISSGGTYTYYPDSVKGRFTLSRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASQLTGSEFDYWGQGTTVTVSS 286
S4 QSVEESGGRLGTPGTPLTLTCTVSGFSLSSYVMGWFRQAPGKGLEYIGIISSSGSPYYASWVNGRFTISKTSTTMDLKMNSPTTEDTATYFCARVGPLGVDYFNIWGPGTLVTVSL 288
SB6 RQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSHGISWVRQAPGKGLEYIGTIGTGVITYFASWAKGRFTGSKTSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARGSAWNDPFDPWGQGTLVTVSS 290
S7 RSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSHGISWVRQAPGKGLEYIGTIGTGVITYFASWAKGRFTGSKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARGSAWNDPFDPWGPGTLVTVSS 292
S10 KVEESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYVMGWVRQAPGKGLEWVSIISSSGSPYYASWVNGRFTISKDNSEGMVYLQMNSLRAEDTAVYYCARVGPLGVDYFNIWGQGTTVTVSS 294
S14 RQLVESGGGLVQPGGSLRLSCTASGFSLSSHGISWVRQAPGKGLEYIGTIGTGVITYFASWAKGRFTGSKTSSTAYMELSSLRSEDTAVYFCARGSAWNDPFDPWGQGTLVTVSS 296
항체 경쇄 가변 영역의 서열
항체 경쇄 가변 영역 서열 서열번호
L14 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDIRNYLNWYQQKPGKAPKLLIYFTSTLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQGNTLPWTFGGGTKVEIK 285
P11 DIVITQSPASLAVSLGERATISCRASESVDSYGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYRASNLESGVPDRFSGSGSRTDFTLTINPLQAEDVATYYCHQSGDLPWTFGGGTKVEIK 287
S4 DIVMTQTPSSVEAAVGGTVTIKCQAGQSINSYLAWYQQKPGQRPKLLIYYASTLESGVPSRFKGSGSGTDYTLTISDLESADAATYYCQSWHYISRSYAFGGGTEVVVK 289
SB6 DIVMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSVYGNNDLAWYQQKPGQAPKLLIYLASTLATGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGGDDEADNTFGQGTKVEIK 291
S7 ALVMTQTPASVSAAVGGTVTTKCQASQSVYGNNDLAWYQHKPGQPPKLLIYLASTLATGVPSRFSGSGSGTQFTLTITGVQSDDAATYYCLGGGDDEADNVFGGGTEVVV 293
S10 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCQAGQSINSYLAWYQQKPGQPPKLLIYYASTLESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQSWHYISRSYAFGGGTKLEIK 295
S14 DIEMTQSPSSVSASVGDRVTLTCQASQSVYGNNDLAWYQQKPGQAPKLLIYLASTLATGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCLGGGDDEADNVFGGGTKVEIK 297
항체의 고유 생물물리학적 특성
항체 생물물리학적 특성
BSA_LC:HC RP RM Avg_HI pIFv_3D
A 757.565 2.182 1.052 1.147 7.401
B 880.962 1.78 1.174 1.897 8.426
C 746.141 3.2 1.097 0.822 7.342
D 724.277 2.028 0.794 0.884 7.357
E 814.084 1.605 1.135 0.576 8.001
A1 772.203 1.236 0.567 0.645 7.313
A2 754.856 2.407 0.941 1.007 7.84
A3 749.195 1.6 0.981 0.956 7.65
A4 774.46 1.54 1.03 0.614 7.445
A5 779.811 1.913 1.157 0.578 7.474
A6 811.151 1.946 0.961 0.641 6.771
A7 754.862 2.094 0.949 0.956 7.826
A8 758.408 1.415 1.145 0.571 7.474
A9 722.586 1.472 1.131 0.781 5.415
A10 740.85 1.5 1.048 1.182 7.401
A11 771.402 2.031 1.088 1.083 7.372
A12 763.62 1.882 1.071 1.117 7.386
A13 716.196 1.592 1.303 0.659 6.581
A14 752.533 1.771 1.283 0.629 6.405
A15 731.64 1.228 1.096 0.758 5.783
A16 730.942 1.604 1.298 0.741 6.443
E1 897.824 2 0.972 0.818 7.84
E2 862.05 1.5 1.327 0.624 8.031
E3 880.578 1.786 1.121 0.915 8.397
E4 865.757 1.969 1.241 0.953 8.119
E5 806.757 3 1.123 1.295 8.646
E6 871.934 3.333 1.292 1.147 8.529
E7 858.2 2.152 0.991 0.996 8.368
E8 892.703 2.086 0.745 0.553 7.518
E9 848.808 1.426 1.155 0.659 8.001
E10 849.995 2.194 1.133 1.144 8.397
E11 842.435 1.789 0.796 0.685 7.401
E12 910.73 1.478 1.219 0.883 8.353
E13 827.903 1.744 0.928 0.567 8.148
E14 835.996 2.3 1.314 1.12 8.646
E15 817.36 1.639 1.007 1.031 8.031
E16 874.806 1.795 1.236 0.971 8.397
E17 847.622 1.65 0.94 0.514 7.606
E18 840.334 1.933 1.234 1.14 8.236
E19 871.606 1.634 1.124 0.756 8.294
E20 821.97 1.465 0.903 0.447 7.928
E21 842.136 1.477 1.447 0.956 8.382
E22 886.351 2.793 1.236 0.985 7.987
L14 992.129 1.929 0.654 1.426 8.617
P11 759.501 1.795 1.69 0.685 6.481
S4 893.191 1.829 1.359 1.002 6.756
SB6 895.402 1.784 1.251 1.265 5.846
S7 819.933 2.129 0.765 0.353 5.757
S10 841.792 1.523 0.882 1.133 5.415
S14 871.617 1.822 1.511 1.403 5.313
항체의 고유 생물물리학적 특성으로부터 연산한 Z-점수 및 Z-거리
항체 Z 점수 Z-거리
BSA_LC:HC RP RM Avg_HI pIFv_3D
A -0.813 -0.003 -0.098 0.551 -0.306 1.034
B 0.678 -0.315 0.068 2.503 0.515 2.664
C -0.952 0.787 -0.038 -0.293 -0.353 1.318
D -1.216 -0.123 -0.454 -0.131 -0.342 1.354
E -0.13 -0.451 0.015 -0.933 0.175 1.059
A1 -0.636 -0.737 -0.766 -0.753 -0.377 1.498
A2 -0.846 0.172 -0.252 0.188 0.046 0.92
A3 -0.915 -0.455 -0.197 0.055 -0.107 1.047
A4 -0.609 -0.501 -0.129 -0.833 -0.271 1.186
A5 -0.544 -0.212 0.045 -0.927 -0.248 1.124
A6 -0.166 -0.186 -0.223 -0.764 -0.811 1.164
A7 -0.846 -0.071 -0.241 0.056 0.034 0.885
A8 -0.803 -0.598 0.029 -0.947 -0.248 1.401
A9 -1.236 -0.554 0.01 -0.401 -1.898 2.366
A10 -1.015 -0.532 -0.105 0.643 -0.306 1.354
A11 -0.646 -0.12 -0.05 0.385 -0.33 0.831
A12 -0.74 -0.236 -0.072 0.473 -0.318 0.966
A13 -1.314 -0.461 0.247 -0.718 -0.964 1.855
A14 -0.874 -0.322 0.219 -0.797 -1.104 1.664
A15 -1.127 -0.743 -0.038 -0.46 -1.603 2.146
A16 -1.135 -0.452 0.239 -0.505 -1.074 1.72
E1 0.882 -0.144 -0.209 -0.305 0.046 0.968
E2 0.45 -0.532 0.28 -0.808 0.198 1.121
E3 0.674 -0.311 -0.004 -0.051 0.492 0.891
E4 0.495 -0.168 0.161 0.048 0.269 0.611
E5 -0.219 0.632 -0.001 0.938 0.691 1.343
E6 0.569 0.891 0.232 0.553 0.597 1.354
E7 0.403 -0.027 -0.183 0.159 0.468 0.664
E8 0.82 -0.078 -0.521 -0.994 -0.213 1.409
E9 0.29 -0.59 0.043 -0.716 0.175 0.989
E10 0.304 0.006 0.013 0.544 0.492 0.794
E11 0.213 -0.308 -0.451 -0.649 -0.306 0.927
E12 1.038 -0.549 0.13 -0.134 0.456 1.274
E13 0.037 -0.343 -0.27 -0.958 0.292 1.093
E14 0.135 0.089 0.262 0.483 0.691 0.897
E15 -0.091 -0.425 -0.161 0.25 0.198 0.562
E16 0.604 -0.303 0.155 0.093 0.492 0.855
E17 0.275 -0.416 -0.252 -1.094 -0.142 1.237
E18 0.187 -0.196 0.152 0.534 0.362 0.716
E19 0.565 -0.428 0.001 -0.464 0.409 0.941
E20 -0.035 -0.559 -0.303 -1.268 0.116 1.424
E21 0.209 -0.55 0.444 0.054 0.48 0.881
E22 0.744 0.471 0.154 0.13 0.163 0.918
L14 2.022 -0.2 -0.646 1.278 0.668 2.574
P11 -0.79 -0.303 0.779 -0.649 -1.043 1.683
S4 0.826 -0.277 0.323 0.174 -0.823 1.254
SB6 0.853 -0.312 0.176 0.858 -1.552 2
S7 -0.059 -0.044 -0.494 -1.513 -1.623 2.275
S10 0.205 -0.515 -0.333 0.515 -1.898 2.07
S14 0.565 -0.282 0.533 1.218 -1.979 2.467
항체의 고유 생물물리학적 특성으로부터 연산한 플래그 값
항체 플래그
BSA_LC:HC RP RM Avg_HI pIFv_3D 합계
A 0 0 0 0 0 0
B 0 0 0 1 0 1
C 0 0 0 0 0 0
D 0 0 0 0 0 0
E 0 0 0 0 0 0
A1 0 0 0 0 0 0
A2 0 0 0 0 0 0
A3 0 0 0 0 0 0
A4 0 0 0 0 0 0
A5 0 0 0 0 0 0
A6 0 0 0 0 0 0
A7 0 0 0 0 0 0
A8 0 0 0 0 0 0
A9 0 0 0 0 0 0
A10 0 0 0 0 0 0
A11 0 0 0 0 0 0
A12 0 0 0 0 0 0
A13 0 0 0 0 0 0
A14 0 0 0 0 0 0
A15 0 0 0 0 0 0
A16 0 0 0 0 0 0
E1 0 0 0 0 0 0
E2 0 0 0 0 0 0
E3 0 0 0 0 0 0
E4 0 0 0 0 0 0
E5 0 0 0 0 0 0
E6 0 0 0 0 0 0
E7 0 0 0 0 0 0
E8 0 0 0 0 0 0
E9 0 0 0 0 0 0
E10 0 0 0 0 0 0
E11 0 0 0 0 0 0
E12 0 0 0 0 0 0
E13 0 0 0 0 0 0
E14 0 0 0 0 0 0
E15 0 0 0 0 0 0
E16 0 0 0 0 0 0
E17 0 0 0 0 0 0
E18 0 0 0 0 0 0
E19 0 0 0 0 0 0
E20 0 0 0 0 0 0
E21 0 0 0 0 0 0
E22 0 0 0 0 0 0
L14 1 0 0 0 0 1
P11 0 0 0 0 0 0
S4 0 0 0 0 0 0
SB6 0 0 0 0 0 0
S7 0 0 0 0 0 0
S10 0 0 0 0 0 0
S14 0 0 0 0 1 1
실시예 37. 항체 서열의 인간성 분석
방법
인간 동일성 백분율(“인간성”) 값은 Jones 등의 문헌[MAbs. 2016;8(1):1-9. doi: 10.1080/19420862.2015.1114320]에 기술된 방법을 사용하여, 선택된 항체의 가변 경쇄 및 가변 중쇄 서열에 대해 연산된다. 간략하게, 인간화 서열을 가장 가까운 인간 생식선 상대방과 비교하고, 각각에 대한 동일성 백분율을 결정한다.
결과
상기 절차는 선택된 항체의 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 인간성 백분율을 측정하는 데 사용된다. 결과는 표 85에 나타나 있다. 인간성 값(%)이 더 높을수록 인간 생식선 항체 서열과 유사성이 더 크다는 것을 나타낸다.
항체의 인간성 값 백분율
항체 VH VL
생식선 인간성 (%) 생식선 인간성 (%)
A IGHV3-13*01 96.907 IGKV1-16*02 94.737
B IGHV1-2*02 98.958 IGKV1-12*01 98.947
C IGHV3-13*01 96.907 IGKV1-16*02 93.684
D IGHV3-13*01 94.845 IGKV1-16*02 95.789
E IGHV4-59*01 86.598 IGKV2-28*01 96
A1 IGHV3-13*01 94.845 IGKV1-16*02 94.737
A2 IGHV3-13*01 95.876 IGKV1-16*02 94.737
A3 IGHV3-13*01 95.876 IGKV1-16*02 94.737
A4 IGHV3-13*01 94.845 IGKV1-16*02 94.737
A5 IGHV3-13*01 94.845 IGKV1-16*02 94.737
A6 IGHV3-13*01 94.845 IGKV1-16*02 94.737
A7 IGHV3-13*01 96.907 IGKV1-16*02 94.737
A8 IGHV3-13*01 95.876 IGKV1-16*02 94.737
A9 IGHV3-13*01 94.845 IGKV1-16*02 94.737
A10 IGHV3-13*01 95.876 IGKV1-16*02 94.737
A11 IGHV3-13*01 95.876 IGKV1-16*02 94.737
A12 IGHV3-13*01 95.876 IGKV1-16*02 94.737
A13 IGHV3-13*01 94.845 IGKV1-16*02 94.737
A14 IGHV3-13*01 94.845 IGKV1-16*02 94.737
A15 IGHV3-13*01 94.845 IGKV1-16*02 94.737
A16 IGHV3-13*01 95.876 IGKV1-16*02 94.737
E1 IGHV4-59*01 87.629 IGKV2-28*01 94
E2 IGHV4-59*01 87.629 IGKV2-28*01 96
E3 IGHV4-59*01 88.66 IGKV2-28*01 94
E4 IGHV4-59*01 88.66 IGKV2-28*01 96
E5 IGHV4-59*01 88.66 IGKV2-28*01 94
E6 IGHV4-59*01 88.66 IGKV2-28*01 96
E7 IGHV4-59*01 89.691 IGKV2-28*01 94
E8 IGHV4-4*08 85.567 IGKV2-28*01 94
E9 IGHV4-59*01 87.629 IGKV2-28*01 96
E10 IGHV4-59*01 89.691 IGKV2-28*01 96
E11 IGHV4-4*08 85.567 IGKV2-28*01 96
E12 IGHV4-59*01 88.66 IGKV2-28*01 96
E13 IGHV4-59*01 87.629 IGKV2-28*01 94
E14 IGHV4-59*01 88.66 IGKV2-28*01 96
E15 IGHV4-59*01 87.629 IGKV2-28*01 96
E16 IGHV4-59*01 89.691 IGKV2-28*01 96
E17 IGHV4-4*08 85.567 IGKV2-28*01 96
E18 IGHV4-59*01 88.66 IGKV2-28*01 96
E19 IGHV4-59*01 88.66 IGKV2-28*01 94
E20 IGHV4-59*01 87.629 IGKV2-28*01 96
E21 IGHV4-59*01 88.66 IGKV2-28*01 96
E22 IGHV4-59*01 88.66 IGKV2-28*01 92
L14 IGHV1-46*02 80.612 IGKV1-39*01 88.421
P11 IGHV3-21*01 88.66 IGKV7-3*01 73.737
S4 IGHV3-64*04 60.215 IGKV1-27*01 70.652
SB6 IGHV3-66*01 67.368 IGKV1-6*01 85.556
S7 IGHV3-53*04 54.348 IGKV1-6*01 65.934
S10 IGHV3-66*01 81.522 IGKV4-1*01 82.653
S14 IGHV3-66*01 67.368 IGKV1-6*01 83.333
SEQUENCE LISTING <110> BOEHRINGER INGELHEIM USA CORPORATION OSE IMMUNOTHERAPEUTICS SA <120> ANTI-SIRP-ALPHA ANTIBODIES <130> 105218-03-5011-WO/09-0722 <150> 63/197,259 <151> 2021-06-04 <150> 63/325,828 <151> 2022-03-31 <150> 63/339,326 <151> 2022-05-06 <160> 297 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 1 Asn Tyr Tyr Trp Ser 1 5 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 2 Phe Ile Tyr Tyr Asn Gly Arg Thr Phe Tyr Asn Ser Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 3 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 3 Phe Ile Tyr Tyr Asn Gly Arg Thr Phe Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 4 Phe Ile Tyr Asp Asn Gly Arg Thr Phe 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Synthetic polypeptide <400> 102 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Val Ile Gly Ile Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Pro Gly Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Gly Gly Ser Trp Asp Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Met Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 103 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 103 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Asp Met His Trp Val Arg Gln Pro Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Ile Gly Ile Ala Gly Asp Thr Tyr Phe Pro Gly Ser Val Lys 50 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Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 132 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ala Ile Gly Thr Ala Gly Asp Thr Tyr Tyr Thr Gly Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Val 85 90 95 Arg Gly Gly Val Trp Asp Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln 165 170 175 Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val 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Synthetic polypeptide <400> 172 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Arg Asn Tyr 20 25 30 Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Phe Ile Tyr Tyr Thr Gly Arg Thr Phe Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 Ser Arg Val Thr Ile Ser Leu Asp Met Ser Ile Asn Gln Phe Ser Leu 65 70 75 80 Lys Met Thr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Arg Val Arg Ala Tyr Ser Gly Ile Gly Leu Asp Gly Thr Asp Val Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 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<220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 226 Gly Gly Ser Ser Arg Ala Ser 1 5 <210> 227 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 227 Gly Gln Ala Leu Gln Thr Pro Leu Thr 1 5 <210> 228 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> N or D <400> 228 Xaa Tyr Tyr Trp Ser 1 5 <210> 229 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Y or D <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> N or T <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> N or Q <220> <221> MOD_RES <222> (12)..(12) <223> S or P <400> 229 Phe Ile Tyr Xaa Xaa Gly Arg Thr Phe Tyr Xaa Xaa Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 230 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 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mutant <220> <221> Site <222> (101)..(101) <223> Mutated residue <400> 279 Glu Glu Glu Leu Gln Val Ile Gln Pro Asp Lys Ser Ile Ser Val Ala 1 5 10 15 Ala Gly Glu Ser Ala Thr Leu His Cys Thr Val Thr Ser Leu Ile Pro 20 25 30 Val Gly Pro Ile Gln Trp Phe Arg Gly Ala Gly Pro Gly Arg Glu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asn Gln Lys Glu Gly His Phe Pro Arg Val Thr Thr Val Ser 50 55 60 Asp Leu Thr Lys Arg Asn Asn Met Asp Phe Ser Ile Arg Ile Ser Asn 65 70 75 80 Ile Thr Pro Ala Asp Ala Gly Thr Tyr Tyr Cys Val Lys Phe Arg Lys 85 90 95 Gly Ser Pro Asp Asp Val Glu Phe Lys Ser Gly Ala Gly Thr Glu Leu 100 105 110 Ser Val Arg Ala Lys Pro Ser Ala Pro Val Val Ser Gly Pro Ala Ala 115 120 125 Arg Ala Thr Pro Gln His Thr Val Ser Phe Thr Cys Glu Ser His Gly 130 135 140 Phe Ser Pro Arg Asp Ile Thr Leu Lys Trp Phe Lys Asn Gly Asn Glu 145 150 155 160 Leu Ser Asp Phe Gln Thr Asn Val Asp Pro Ala Gly Asp Ser Val Ser 165 170 175 Tyr Ser Ile His Ser Thr Ala Lys Val Val Leu Thr Arg Glu Asp Val 180 185 190 His Ser Gln Val Ile Cys 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Asp Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 292 <211> 115 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 292 Arg Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser His Gly 20 25 30 Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly 35 40 45 Thr Ile Gly Thr Gly Val Ile Thr Tyr Phe Ala Ser Trp Ala Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Gly Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr 65 70 75 80 Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Ser 85 90 95 Ala Trp Asn Asp Pro Phe Asp Pro Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 293 <211> 110 <212> PRT <213> Oryctolagus cuniculus <400> 293 Ala Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Ala Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Thr Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Gly Asn 20 25 30 Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Thr Leu Ala Thr Gly 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Ala Arg Gly Ser 85 90 95 Ala Trp Asn Asp Pro Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 297 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Artificial antibody sequence <400> 297 Asp Ile Glu Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Leu Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Gly Asn 20 25 30 Asn Asp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Thr Leu Ala Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu 65 70 75 80 Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Gly Asp Asp 85 90 95 Glu Ala Asp Asn Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110

Claims (46)

  1. 다음을 포함하는 항-인간 SIRPa 항체 또는 항원 결합 단편:
    a) 서열번호 33의 아미노산 서열(H-CDR1); 서열번호 34의 아미노산 서열(H-CDR2); 및 서열번호 35의 아미노산 서열(H-CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및
    서열번호 36 또는 서열번호 37의 아미노산 서열(L-CDR1); 서열번호 38의 아미노산 서열(L-CDR2); 서열번호 39의 아미노산 서열(L-CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역,
    또는
    b) 서열번호 1 또는 서열번호 223의 아미노산 서열(H-CDR1); 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 또는 서열번호 224의 아미노산 서열(H-CDR2); 및 서열번호 6의 아미노산 서열(H-CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
    서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 또는 서열번호 225의 아미노산 서열(L-CDR1); 서열번호 10, 서열번호 11, 또는 서열번호 226의 아미노산 서열(L-CDR2); 서열번호 12 또는 서열번호 227의 아미노산 서열(L-CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역,
    또는
    c) 서열번호 52의 아미노산 서열(H-CDR1); 서열번호 53의 아미노산 서열(H-CDR2); 및 서열번호 54의 아미노산 서열(H-CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
    서열번호 55의 아미노산 서열(L-CDR1); 서열번호 56의 아미노산 서열(L-CDR2); 서열번호 57의 아미노산 서열(L-CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역,
    또는
    d) 서열번호 33의 아미노산 서열(H-CDR1); 서열번호 70의 아미노산 서열(H-CDR2); 및 서열번호 71의 아미노산 서열(H-CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
    서열번호 36의 아미노산 서열(L-CDR1); 서열번호 72의 아미노산 서열(L-CDR2); 서열번호 39의 아미노산 서열(L-CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역,
    또는
    e) 서열번호 262의 아미노산 서열(H-CDR1); 서열번호 87의 아미노산 서열(H-CDR2); 및 서열번호 88의 아미노산 서열(H-CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
    서열번호 36의 아미노산 서열(L-CDR1); 서열번호 72의 아미노산 서열(L-CDR2); 서열번호 89의 아미노산 서열(L-CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역.
  2. 제1항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함하는, 항-인간 SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    a) 서열번호 33의 아미노산 서열(H-CDR1); 서열번호 34의 아미노산 서열(H-CDR2); 서열번호 35의 아미노산 서열(H-CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 233의 아미노산 서열로서, 서열 중 아미노산 X1= D 또는 G이고 X2= L 또는 A인 아미노산 서열(L-CDR1); 서열번호 38의 아미노산 서열(L-CDR2); 서열번호 39의 아미노산 서열(L-CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역, 또는
    b) 서열번호 228의 아미노산 서열로서, 서열 중 아미노산 X1 = N 또는 D인 아미노산 서열(H-CDR1); 서열번호 229의 아미노산 서열로서, 서열 중 X1=Y 또는 D이고, X2=N 또는 T이고, X3=N 또는 Q이고, X4=S 또는 P인 아미노산 서열(H-CDR2); 서열번호 6의 아미노산 서열(H-CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
    서열번호 230의 아미노산 서열로서, 서열 중 X1=K 또는 R이고, X2= N 또는 T이고, X3=G 또는 A이고, X4=N, A, 또는 T인 아미노산 서열(L-CDR1); 서열번호 231의 아미노산 서열로서, 서열 중 X1=L, Q, 또는 G이고, X2=N 또는 S인 아미노산 서열(L-CDR2); 서열번호 232의 아미노산 서열로서, 서열 중 X1=M 또는 G인 아미노산 서열(L-CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역.
  3. 제1항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함하는, 항-인간 SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    서열번호 33의 아미노산 서열(H-CDR1); 서열번호 34의 아미노산 서열(H-CDR2); 및 서열번호 35의 아미노산 서열(H-CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및
    서열번호 36 또는 서열번호 37의 아미노산 서열(L-CDR1); 서열번호 38의 아미노산 서열(L-CDR2); 서열번호 39의 아미노산 서열(L-CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역.
  4. 제1항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함하는, 항-인간 SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    서열번호 1 또는 서열번호 223의 아미노산 서열(H-CDR1); 서열번호 2, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 또는 서열번호 224의 아미노산 서열(H-CDR2); 및 서열번호 6의 아미노산 서열(H-CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
    서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 또는 서열번호 225의 아미노산 서열(L-CDR1); 서열번호 10, 서열번호 11, 또는 서열번호 226의 아미노산 서열(L-CDR2); 서열번호 12 또는 서열번호 227의 아미노산 서열(L-CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역.
  5. 제1항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함하는, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    서열번호 52의 아미노산 서열(H-CDR1); 서열번호 53의 아미노산 서열(H-CDR2); 및 서열번호 54의 아미노산 서열(H-CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
    서열번호 55의 아미노산 서열(L-CDR1); 서열번호 56의 아미노산 서열(L-CDR2); 서열번호 57의 아미노산 서열(L-CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역.
  6. 제1항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함하는, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    서열번호 33의 아미노산 서열(H-CDR1); 서열번호 70의 아미노산 서열(H-CDR2); 및 서열번호 71의 아미노산 서열(H-CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
    서열번호 36의 아미노산 서열(L-CDR1); 서열번호 72의 아미노산 서열(L-CDR2); 서열번호 39의 아미노산 서열(L-CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역.
  7. 제1항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함하는, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    서열번호 262의 아미노산 서열(H-CDR1); 서열번호 87의 아미노산 서열(H-CDR2); 및 서열번호 88의 아미노산 서열(H-CDR3)을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
    서열번호 36의 아미노산 서열(L-CDR1); 서열번호 72의 아미노산 서열(L-CDR2); 서열번호 89의 아미노산 서열(L-CDR3)을 포함하는 경쇄 가변 영역.
  8. 제1항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 100, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 또는 117 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 105, 125, 또는 126 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  9. 제1항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 104, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 221 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 109, 127, 128, 129, 130, 또는 222 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  10. 제1항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 100, 101, 102, 103, 또는 104 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 105, 106, 107, 108, 또는 109 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  11. 제8항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함하는, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    a) 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    b) 서열번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    c) 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    d) 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    e) 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    f) 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    g) 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    h) 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    i) 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 125의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    j) 서열번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    k) 서열번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    l) 서열번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    m) 서열번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    n) 서열번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    o) 서열번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    p) 서열번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 126의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역. 　
  12. 제9항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함하는 항-SIRPa 항체 또는 이의 항원 결합 단편: 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    a) 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    b) 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 128의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    c) 서열번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    d) 서열번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    e) 서열번호 120의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    f) 서열번호 120의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    g) 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    h) 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    i) 서열번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    j) 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    k) 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    l) 서열번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    m) 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    n) 서열번호 120의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    o) 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    p) 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    q) 서열번호 122의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    r) 서열번호 124의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 129의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    s) 서열번호 124의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 127의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    t) 서열번호 123의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    u) 서열번호 124의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 130의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    v) 서열번호 221의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 222의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역. 　
  13. 제10항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다음을 포함하는, 항-인간 SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편:
    a) 서열번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    b) 서열번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    a) 서열번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    b) 서열번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역; 또는
    c) 서열번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역. 　
  14. 제8항에 있어서, 항체는 서열번호 131, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 148, 149, 150, 151, 또는 152 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 174, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 또는 218 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 항-SIRPα 항체.
  15. 제14항에 있어서, 항체는 다음을 포함하는, 항-SIRPa 항체:
    a) 서열번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    b) 서열번호 138의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 121의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    c) 서열번호 139의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 182의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    d) 서열번호 140의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 183의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    e) 서열번호 141의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 184의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    f) 서열번호 142의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 185의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    g) 서열번호 143의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 186의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    h) 서열번호 144의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 187의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    i) 서열번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    j) 서열번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 189의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    k) 서열번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 190의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    l) 서열번호 148의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 191의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    m) 서열번호 149의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 192의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    n) 서열번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 193의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    o) 서열번호 151의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 194의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    p) 서열번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 195의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    q) 서열번호 217의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄. 　
  16. 제9항에 있어서, 항체는 서열번호 135, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 또는 219 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 178, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216 또는 220 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 항-SIRPα 항체.
  17. 제16항에 있어서, 항체는 다음을 포함하는, 항-SIRPa 항체:
    a) 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    b) 서열번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 196의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    c) 서열번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 197의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    d) 서열번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 198의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    e) 서열번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 199의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    f) 서열번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 200의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    g) 서열번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 201의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    h) 서열번호 159의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 202의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    i) 서열번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    j) 서열번호 161의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 204의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    k) 서열번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    l) 서열번호 163의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 206의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    m) 서열번호 164의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 207의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    n) 서열번호 165의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 208의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    o) 서열번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 209의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    p) 서열번호 167의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 210의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    q) 서열번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 211의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    r) 서열번호 169의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    s) 서열번호 170의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 213의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    t) 서열번호 171의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 214의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    u) 서열번호 172의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 215의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    v) 서열번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 216의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    w) 서열번호 219의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 220의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄. 　
  18. 제10항에 있어서양태에서, 항체는 서열번호 131, 133, 134, 137, 또는 135 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 174, 176, 177, 180, 또는 178 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 항-SIRPα 항체.
  19. 제18항에 있어서, 항체는 다음을 포함하는, 항-SIRPa 항체:
    a) 서열번호 131의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    b) 서열번호 133의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    c) 서열번호 134의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 177의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    d) 서열번호 137의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 180의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는
    e) 서열번호 135의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄. 　
  20. 제1항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단클론 항체인, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  21. 제1항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 항체인, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  22. 제1항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 KD ≤ 10 nM에서 인간 SIRPa에 결합하는, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  23. 제22항에 있어서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 KD ≤ 400 nM에서 인간 또는 시노몰구스 SIRPa에 결합하는, 항-SIRPα 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한, 항-SIRPα 항체.
  25. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물.
  26. 제25항에 있어서, 하나 이상의 추가 치료제를 추가로 포함하는, 약학적 조성물.
  27. 제26항에 있어서, 하나 이상의 추가 치료제는 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-EGFR 항체, 및 항-HER2 항체로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약학적 조성물.
  28. 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편 또는 제25항 내지 제27항의 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하되, 질환은 암, 염증성 질환, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 감염성 질환, 또는 섬유증으로부터 선택되는, 방법.
  29. 질환을 치료하는 데 사용하기 위한 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제25항 내지 제27항의 약학적 조성물로서, 상기 질환은 암, 염증성 질환, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 감염성 질환, 또는 섬유증으로부터 선택되는, 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 약학적 조성물.
  30. 질환을 치료하기 위한 의약의 제조에 있어서 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제25항 내지 제27항의 약학적 조성의 용도로서, 상기 질환은 암, 염증성 질환, 자가면역 질환, 호흡기 질환, 감염성 질환, 또는 섬유증으로부터 선택되는, 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 약학적 조성물.
  31. 제28항에 따른 방법, 제29항에 따른 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제30항의 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편의 용도에 있어서, 상기 질환은 암인, 방법, 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편의 용도.
  32. 제28항에 따른 방법, 제29항에 따른 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 제30항의 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편의 용도에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 비경구 투여 경로, 정맥내 투여 경로, 또는 피하 투여 경로에 의해 투여되는, 방법, 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편의 용도.
  33. 제8항, 제9항, 또는 제10항 중 어느 한 항에 따른 중쇄 가변 영역 아미노 및/또는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
  34. 제14항, 제16항, 또는 제18항 중 어느 한 항에 따른 중쇄 및/또는 경쇄를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드.
  35. 제33항 내지 제34항 중 어느 한 항에 따른 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 바람직하게는 발현 벡터, 보다 바람직하게는 발현 조절 서열과 기능적으로 연결된 본 발명에 따른 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
  36. 제33항 내지 제34항 중 어느 한 항에 따른 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포.
  37. 제36항에 있어서, 상기 세포는 포유류 세포인, 숙주 세포.
  38. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편의 생산 방법으로서, 상기 방법은 다음 단계를 포함하는 방법:
    (a) 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편의 발현을 허용하는 조건 하에 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
    (b) 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편을 회수하는 단계.
  39. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 진단 키트 또는 진단 방법, 또는 이들의 용도.
  40. 인간 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편으로서,, SIRPα에 결합할 때, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 265에 제시된 것과 같은 아미노산 잔기 LEU 60, ILE 61, VAL 63, GLY 64, PRO 65, GLN 82, LYS 83, GLU 84, THR 97, LYS 98, ARG 99, GLU 100, LYS 126, GLY 127, SER 128, PRO 129 and ASP 130. as set forth in 서열번호 266; or LEU 60, ILE 61, VAL 63, GLY 64, PRO 65, GLN 82, LYS 83, GLU 84, THR 97, LYS 98, ARG 99, ASN 100, LYS 126, GLY 127, SER 128, PRO 129, 및 ASP 130에 결합하고, 상기 항체는 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항의 항체가 SIRPα에 결합하는 것을 차단하는, 항체 또는 항원 결합 단편.
  41. 인간 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편으로서, SIRPα에 결합할 때, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 서열번호 265에 제시된 것과 같은 아미노산 잔기 ARG 70, GLY 71, ALA 72, GLY 73, PRO 74, ALA 75, ARG 76, GLU 77, ALA 114, ALA 116, GLY 117, THR 118, TYR 120, THR 131, GLU 132, PHE 133, SER 135 and GLU 140 in 서열번호 266 or ARG 70, GLY 71, ALA 72, GLY 73, PRO 74, GLY 75, ARG 76, GLU 77, ALA 114, ALA 116, GLY 117, THR 118, TYR 120, VAL 132, GLU 133, PHE 134, SER 136, 및 GLU 141에 결합하고, 상기 항체는 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항의 항체가 SIRPα에 결합하는 것을 차단하는, 항체 또는 항원 결합 단편.
  42. 제40항 또는 제41항에 있어서, 상기 항체는 항-SIRPα 항체가 CD47에 결합하는 것을 적어도 약 80%만큼 차단하는, 인간 항-SIRPα 항체 또는 항원 결합 단편.
  43. 항체를 제조하는 방법으로서, 다음 단계를 포함하는 방법:
    a) 항체의 형성을 허용하는 조건 하에서 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 중쇄 가변 영역을 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하고 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 경쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
    b) 상기 항체를 회수하는 단계.
  44. 항체를 제조하는 방법으로서, 다음 단계를 포함하는 방법:
    a) 항체의 형성을 허용하는 조건 하에서 제14항, 제16항, 또는 제18항에 따른 중쇄를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오티드 및 제14항, 제16항, 또는 제18항에 따른 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
    b) 상기 항체를 회수하는 단계.
  45. 제43항 또는 제44항에 있어서, 상기 항체를 정제하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  46. 제43항 또는 제44항에 있어서, 상기 항체를 약학적 조성물로 제형화하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
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