JP2022545300A - 新規の抗ｓｉｒｐａ抗体 - Google Patents

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シン，ロウメイ
ウー，チーハオ
ドゥ，チンリン
チウ，ヤンシェン
アーチ，ロバート・エイチ
ルー，ホンタオ
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エルピサイエンス（スーチョウ）・バイオファーマ，リミテッド
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Abstract

本開示は、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片、これらをコードする単離されたポリヌクレオチド、これらを含む医薬組成物、およびそれらの使用を提供する。

Description

[001]本開示は一般に、新規の抗ＳＩＲＰα抗体に関する。
[002]シグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）は、骨髄系細胞および樹状細胞に主として発現される阻害性受容体である。ＳＩＲＰαに加えて、ＳＩＲＰファミリーにはまた、ＳＩＲＰβおよびＳＩＲＰγを含め、いくつかの他の膜貫通糖タンパク質も含まれる。ＳＩＲＰファミリーのそれぞれのメンバーは、別個の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインとともに、３つの類似の細胞外Ｉｇ様ドメインを含む。ＣＤ４７は、細胞外のＮ末端側ＩｇＶドメイン、５つの膜貫通ドメイン、および短いＣ末端側の細胞内尾部を有する、広範に発現される膜貫通糖タンパク質である。ＣＤ４７は、ＳＩＲＰαの細胞リガンドとしての機能を果たす。ＣＤ４７がＳＩＲＰαに結合することにより、ファゴサイトーシスを抑制する「私を食べないで」のシグナルが送達され、食細胞上のＳＩＲＰαのＣＤ４７媒介性係合をブロックすることにより、「私を食べて」のシグナルを有する生細胞の除去を引き起こすことができる。腫瘍細胞は、マクロファージ媒介性破壊を回避するために、ＣＤ４７を過剰発現していることが多い。ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用は、マクロファージ媒介性ファゴサイトーシスの調節に関与していることが示されている（Ｔａｋｅｎａｋａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌ．， ８（１２）：１３１３－１３２３， ２００７）。広範な前臨床モデルでは、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックする治療法により、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるがん細胞のファゴサイトーシスおよびｉｎ ｖｉｖｏにおける抗腫瘍免疫応答を刺激する。現在、ＣＤ４７を標的とする複数の薬剤（抗ＣＤ４７抗体およびＳＩＲＰα融合タンパク質）が、臨床試験へと進んでいる。しかしながら、これらの薬剤は、溶血性貧血および血小板減少症と関連付けられている。安全性の問題に加えて、ＣＤ４７の普遍的な発現もまた、抗原シンクを引き起こし得、これにより有効性の低減がもたらされる。
[003]新規の抗ＳＩＲＰα抗体へのニーズが依然としてある。
[004]本開示を通して、冠詞「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、本明細書において、その冠詞の文法的目的物の１つまたはそれ超（即ち、少なくとも１つ）を意味するために用いられる。例として、「抗体」は１つの抗体または２つ以上の抗体を意味する。
[005]１つの観点では、本開示は、ヒトＳＩＲＰαに特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合性断片であって、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域、ならびに／またはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、ａ）ＨＣＤＲ１が、ＲＮＹＷＭＮ（配列番号１）、ＴＤＹＡＭＨ（配列番号２）、ＴＸ１ＹＡＭＮ（配列番号３）、ＴＨＹＳＭＨ（配列番号４）、ＳＤＹＦＭＴ（配列番号５）、ＴＮＹＤＩＳ（配列番号６）、ＳＳＹＷＩＨ（配列番号７）からなる群から選択される配列を含み、ｂ）ＨＣＤＲ２が、ＥＩＸ２ＬＫＳＮＴＹＡＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号８）、ＷＫＮＴＥＴＧＥＳＴＹＡＥＤＦＫＧ（配列番号９）、Ｘ３ＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＸ４Ｘ５ＦＫＧ（配列番号１０）、ＷＩＮＴＥＴＡＥＰＴＹＶＤＤＦＫＧ（配列番号１１）、ＮＶＮＹＤＧＲＳＴＹＹＬＤＳＬＫＳ（配列番号１２）、ＶＩＷＴＧＧＤＴＮＦＮＳＡＦＭＳ（配列番号１３）、またはＬＩＨＰＮＳＧＮＴＤＣＳＥＴＦＫＮ（配列番号１４）からなる群から選択される配列を含み、ｃ）ＨＣＤＲ３が、ＦＴＫＶＶＡＤＷＨＬＤＶ（配列番号１５）、ＧＧＹＧＳＮＹＶＭＤＹ（配列番号１６）、ＴＲＧＹＹＤＦＤＧＧＡＦＤＹ（配列番号１７）、ＧＧＬＲＱＧＤＹ（配列番号１８）、ＥＧＳＱＴＰＬＹＡＶＤＹ（配列番号１９）、ＶＱＹＦＧＧＳＹＧＰＭＤＹ（配列番号２０）、ＤＧＡＳＹＤＷＦＶＨ（配列番号２１）からなる群から選択される配列を含み、ｄ）ＬＣＤＲ１が、ＲＳＳＱＮＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号２２）、ＫＡＳＥＤＩＹＮＲＬＡ（配列番号２３）、Ｘ６ＡＳＱＮＶＧＴＨＬＡ（配列番号２４）、ＳＡＴＳＳＶＳＡＳＹＬＹ（配列番号２５）、ＫＡＳＱＮＶＧＴＡＶＡ（配列番号２６）、ＥＡＳＤＨＩＮＤＷＬＡ（配列番号２７）、ＫＳＳＱＳＬＬＹＴＮＧＫＴＹＬＮ（配列番号２８）からなる群から選択される配列を含み、ｅ）ＬＣＤＲ２が、ＫＸ７ＳＮＲＦＳ（配列番号２９）、ＧＡＴＳＬＥＴ（配列番号３０）、ＳＡＸ８ＹＲＹＩ（配列番号３１）、ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号３２）、ＬＡＳＮＲＹＴ（配列番号３３）、ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号３５）からなる群から選択される配列を含み、ｆ）ＬＣＤＲ３が、ＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（配列番号３６）、ＱＱＹＷＮＳＰＲＴ（配列番号３７）、ＱＱＹＮＴＹＰＬＴ（配列番号３８）、ＨＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号３９）、ＱＱＹＳＩＹＰＦＴ（配列番号４０）、ＱＱＹＷＮＴＰＬＴ（配列番号４１）、ＶＱＧＴＨＦＰＲＴ（配列番号４２）からなる群から選択される配列を含み、Ｘ１がＮまたはＤであり、Ｘ２がＳまたはＴであり、Ｘ３がＦまたはＷであり、Ｘ４がＱまたはＤであり、Ｘ５がＤまたはＧであり、Ｘ６がＫまたはＲであり、Ｘ７がＶまたはＩであり、Ｘ８がＳまたはＩである、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
[006]一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１は、配列番号１のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＨＣＤＲ２は、配列番号８のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＨＣＤＲ３は、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＬＣＤＲ１は、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＬＣＤＲ２は、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＬＣＤＲ３は、配列番号３６のアミノ酸配列を含み、Ｘ２およびＸ７は、上記に定義した通りである。
[007]一部の実施形態では、ＨＣＤＲ２は、ＥＩＳＬＫＳＮＴＹＡＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号４８）、ＥＩＴＬＫＳＮＴＹＡＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号４９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／またはＬＣＤＲ２は、ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号５５）およびＫＩＳＮＲＦＳ（配列番号５６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
[008]一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１は、配列番号３のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＨＣＤＲ２は、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＨＣＤＲ３は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＬＣＤＲ１は、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＬＣＤＲ２は、配列番号３１のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＬＣＤＲ３は、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、Ｘ１、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、およびＸ８は、上記の通り定義される。
[009]一部の実施形態では、ＨＣＤＲ１は、ＴＮＹＡＭＮ（配列番号４３）およびＴＤＹＡＭＮ（配列番号４５）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／またはＨＣＤＲ２は、ＦＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号５０）、ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＱＧＦＫＧ（配列番号５１）、およびＦＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＱＧＦＫＧ（配列番号５２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／またはＨＣＤＲ３は、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、かつ／またはＬＣＤＲ１は、ＫＡＳＱＮＶＧＴＨＬＡ（配列番号５３）およびＲＡＳＱＮＶＧＴＨＬＡ（配列番号５４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／またはＬＣＤＲ２は、ＳＡＳＹＲＹＩ（配列番号５７）およびＳＡＩＹＲＹＩ（配列番号５８）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／またはＬＣＤＲ３は、配列番号３８のアミノ酸配列を含む。
[0010]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片の重鎖可変領域は、ａ）配列番号１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４８の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１５の配列を含むＨＣＤＲ３、またはｂ）配列番号１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４９の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１５の配列を含むＨＣＤＲ３、またはｃ）配列番号２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１６の配列を含むＨＣＤＲ３、またはｄ）配列番号４３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号５０の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１７の配列を含むＨＣＤＲ３、またはｅ）配列番号４３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号５１の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１７の配列を含むＨＣＤＲ３、またはｆ）配列番号４５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号５２の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１７の配列を含むＨＣＤＲ３、またはｇ）配列番号４３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号５２の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１７の配列を含むＨＣＤＲ３、またはｈ）配列番号４の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１８の配列を含むＨＣＤＲ３、またはｉ）配列番号５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９の配列を含むＨＣＤＲ３、またはｊ）配列番号６の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２０の配列を含むＨＣＤＲ３、またはｋ）配列番号７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２１の配列を含むＨＣＤＲ３を含む。
[0011]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片の軽鎖可変領域は、ａ）配列番号２２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５５の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３６の配列を含むＬＣＤＲ３、またはｂ）配列番号２２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３６の配列を含むＬＣＤＲ３、またはｃ）配列番号２３の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３０の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３７の配列を含むＬＣＤＲ３、またはｄ）配列番号５３の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５７の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３８の配列を含むＬＣＤＲ３、またはｅ）配列番号５４の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５７の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３８の配列を含むＬＣＤＲ３、またはｆ）配列番号５４の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５８の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３８の配列を含むＬＣＤＲ３、またはｇ）配列番号２５の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３２の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３９の配列を含むＬＣＤＲ３、またはｈ）配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３３の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４０の配列を含むＬＣＤＲ３、またはｉ）配列番号２７の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３０の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４１の配列を含むＬＣＤＲ３、またはｊ）配列番号２８の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４２の配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
[0012]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片において、ＨＣＤＲ１が配列番号１の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号４８の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１５の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号２２の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５５の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号３６の配列を含むか、またはＨＣＤＲ１が配列番号１の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号４９の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１５の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号２２の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５６の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号３６の配列を含むか、またはＨＣＤＲ１が配列番号１の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号４９の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１５の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号２２の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５５の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号３６の配列を含むか、またはＨＣＤＲ１が配列番号２の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号９の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１６の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号２３の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号３０の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号３７の配列を含むか、またはＨＣＤＲ１が配列番号４３の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号５０の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１７の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号５３の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５７の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号３８の配列を含むか、またはＨＣＤＲ１が配列番号４３の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号５１の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１７の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号５４の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５７の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号３８の配列を含むか、またはＨＣＤＲ１が配列番号４５の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号５２の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１７の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号５４の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５７の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号３８の配列を含むか、またはＨＣＤＲ１が配列番号４５の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号５２の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１７の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号５４の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５８の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号３８の配列を含むか、またはＨＣＤＲ１が配列番号４３の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号５２の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１７の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号５４の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５８の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号３８の配列を含むか、またはＨＣＤＲ１が配列番号４の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１１の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１８の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号２５の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号３２の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号３９の配列を含むか、またはＨＣＤＲ１が配列番号５の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１２の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号１９の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号２６の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号３３の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号４０の配列を含むか、またはＨＣＤＲ１が配列番号６の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１３の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号２０の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号２７の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号３０の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号４１の配列を含むか、またはＨＣＤＲ１が配列番号７の配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号１４の配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号２１の配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号２８の配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号３５の配列を含み、ＬＣＤＲ３が配列番号４２の配列を含む。
[0013]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、およびＨＦＲ４のうちの１つもしくは複数、ならびに／または軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、およびＬＦＲ４のうちの１つもしくは複数をさらに含み、ここで、ａ）ＨＦＲ１は、ＱＸ９ＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＸ１０ＡＸ１１ＧＹＸ１２Ｘ１３（配列番号９２）またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、ｂ）ＨＦＲ２は、ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号９３）またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、ｃ）ＨＦＲ３配列は、ＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＸ１４ＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号９６）またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、ｄ）ＨＦＲ４は、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９７）またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、ｅ）ＬＦＲ１は、ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＸ１５ＬＸ１６ＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１００）またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、ｆ）ＬＦＲ２は、ＷＸ１７ＱＱＫＰＧＫＸ１８ＰＫＸ１９ＬＩＸ２０（配列番号１０４）またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、ｇ）ＬＦＲ３は、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＸ２１ＬＱＰＥＤＦＡＴＹＸ２２Ｃ（配列番号１０８）またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、ｈ）ＬＦＲ４は、ＦＸ２３ＱＧＴＫＬＥＩＫＸ２４（配列番号４７）またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、ここで、Ｘ９はＩまたはＶであり、Ｘ１０はＲまたはＫであり、Ｘ１１はＧまたはＲまたはＳであり、Ｘ１２はＴまたはＳであり、Ｘ１３はＬまたはＩまたはＦであり、Ｘ１４はＧまたはＳであり、Ｘ１５はＳまたはＲであり、Ｘ１６はＳまたはＧであり、Ｘ１７はＹまたはＦであり、Ｘ１８はＡまたはＳであり、Ｘ１９はＳまたはＡであり、Ｘ２０はＹまたはＦであり、Ｘ２１はＳまたはＮであり、Ｘ２２はＹまたはＦであり、Ｘ２３はＧまたはＤであり、Ｘ２４はＲまたは不在である。
[0014]一部の実施形態では、ＨＦＲ１は、配列番号４４、８９、９０、および９１からなる群から選択される配列を含み、ＨＦＲ２は、配列番号９３の配列を含み、ＨＦＲ３は、配列番号９４および９５からなる群から選択される配列を含み、ＨＦＲ４は、配列番号９７の配列を含み、ＬＦＲ１は、配列番号９８および９９からなる群から選択される配列を含み、ＬＦＲ２は、配列番号１０１、１０２、および１０３からなる群から選択される配列を含み、ＬＦＲ３は、配列番号１０５、１０６、および１０７からなる群から選択される配列を含み、ＬＦＲ４は、配列番号１０９および４６からなる群から選択される配列を含む。
[0015]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片の重鎖可変領域は、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２からなる群から選択される配列、および少なくとも８０％の配列同一性を有ししかもヒトＳＩＲＰαに対する特異的結合親和性を保持しているその相同配列を含む。
[0016]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片の軽鎖可変領域は、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８からなる群から選択される配列、および少なくとも８０％の配列同一性を有ししかもヒトＳＩＲＰαに対する特異的結合親和性を保持しているその相同配列を含む。
[0017]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片において、重鎖可変領域が配列番号５９の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号７３の配列を含むか、または重鎖可変領域が配列番号６０の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号７４の配列を含むか、または重鎖可変領域が配列番号６１の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号７５の配列を含むか、または重鎖可変領域が配列番号６２の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号７６の配列を含むか、または重鎖可変領域が配列番号６３の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号７７の配列を含むか、または重鎖可変領域が配列番号６４の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号７８の配列を含むか、または重鎖可変領域が配列番号６５の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号７９の配列を含むか、または重鎖可変領域が配列番号６５の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号８０の配列を含むか、または重鎖可変領域が配列番号６６の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号８１の配列を含むか、または重鎖可変領域が配列番号６５の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号８２の配列を含むか、または重鎖可変領域が配列番号６７の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号８３の配列を含むか、または重鎖可変領域が配列番号６８の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号８２の配列を含むか、または重鎖可変領域が配列番号６５の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号８４の配列を含むか、または重鎖可変領域が配列番号６９の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号８５の配列を含むか、または重鎖可変領域が配列番号７０の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号８６の配列を含むか、または重鎖可変領域が配列番号７１の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号８７の配列を含むか、または重鎖可変領域が配列番号７２の配列を含み、軽鎖可変領域が配列番号８８の配列を含む。
[0018]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、１つまたは複数のアミノ酸残基の置換または修飾をさらに含み、しかもヒトＳＩＲＰαに対する特異的結合親和性を保持している。一部の実施形態では、置換または修飾のうち少なくとも１つは、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のＣＤＲ配列の１つもしくは複数の中、および／または非ＣＤＲ配列の１つもしくは複数の中にある。一部の実施形態では、置換の少なくとも１つは保存的置換である。
[0019]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、Ｆｃ領域、任意選択でヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）のＦｃ領域、または任意選択でヒトＩｇＧのＦｃ領域をさらに含む。一部の実施形態では、Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、またはＩｇＭに由来する。一部の実施形態では、Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ４に由来する。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４に由来するＦｃ領域はＳ２２８Ｐの変異を含む。一部の実施形態では、ヒトＩｇＧ４に由来するＦｃ領域はＬ２３５Ｅの変異を含む。
[0020]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト化されている。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、モノクローナル抗体、二重特異的抗体、多重特異的抗体、組換え抗体、キメラ抗体、標識抗体、二価抗体、抗イディオタイプ抗体、または融合タンパク質である。
[0021]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異的ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖダイマー（二価ダイアボディ）、多重特異的抗体、ラクダ化単鎖ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、または二価ドメイン抗体である。
[0022]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、ａ）Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによって測定して、ヒトＳＩＲＰαに対して１０－７Ｍ以下の結合親和性を有すること、ｂ）ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、１ｎＭ以下のＥＣ５０でヒトＳＩＲＰα ｖ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に特異的に結合すること、およびｃ）ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、１ｎＭ以下のＥＣ５０でヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤに特異的に結合することからなる群から選択される、ヒトＳＩＲＰαに対する１つまたは複数の結合特性を有する。
[0023]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、ａ）ＳＩＲＰγ ＥＣＤに検出可能に結合しないこと、ｂ）ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、５０ｎＭ以下のＥＣ５０でＳＩＲＰγ ＥＣＤに結合すること、ｃ）ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、１ｎＭ以下のＥＣ５０でＳＩＲＰβ ＥＣＤに特異的に結合すること、ｄ）ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、ＳＩＲＰβ ＥＣＤに検出可能に結合しないこと、ｅ）ＦＡＣＳ結合アッセイによって測定して、ヒトＳＩＲＰα ＩｇＶドメインに特異的に結合すること、ｆ）ＦＡＣＳ結合アッセイによって測定して、ヒトＳＩＲＰα ＩｇＶドメインに検出可能に結合しないこと、ｇ）Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによって測定して、１０－５Ｍ以下の結合親和性でマウスＳＩＲＰαに特異的に結合すること、ｈ）ＦＡＣＳアッセイによって測定して、１０ｎＭの濃度で、カニクイザルＳＩＲＰαに特異的に結合すること、ｉ）ファゴサイトーシスアッセイによって測定して、１０ｎＭの濃度でマクロファージ細胞によるＣＤ４７発現標的細胞のファゴサイトーシスを誘導することができること、ならびにｊ）ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を低減させないことからなる群から選択される１つまたは複数の特性を有する。
[0024]別の態様では、本開示は、ヒトＳＩＲＰαとの結合について、上記に提供される抗体またはその抗原結合性断片と競合する、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片を提供する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＳＩＲＰαとの結合について、配列番号７０の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８６の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＳＩＲＰαとの結合について、配列番号７２の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８８の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＳＩＲＰαとの結合について、配列番号６２の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７６の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合するか、またはヒトＳＩＲＰαとの結合について、配列番号６９の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８５の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＳＩＲＰαとの結合について、配列番号７１の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８７の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する。
[0025]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、二重特異的である。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＩＲＰα以外の第２の抗原またはＳＩＲＰαの上の第２のエピトープと特異的に結合することができる。一部の実施形態では、第２の抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＧＰＣ－３、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＴＲＯＰ２、ＣＬＤＮ１８．２、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＰＴＨＲ２、およびＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ３）からなる群から選択される。
[0026]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、１つまたは複数のコンジュゲート部分に連結されている。一部の実施形態では、コンジュゲート部分はクリアランス修飾剤、化学療法剤、毒素、放射性同位体、ランタニド、発光標識、蛍光標識、酵素基質標識、ＤＮＡアルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チューブリンバインダー、またはその他の抗がん薬物を含む。
[0027]別の態様では、本開示は、本開示の抗体またはその抗原結合性断片および１つまたは複数の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を提供する。
[0028]別の態様では、本開示は、本開示の抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。
[0029]別の態様では、本開示は、本開示の単離されたポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。
[0030]別の態様では、本開示は、本開示のベクターを含む宿主細胞を提供する。
[0031]別の態様では、本開示は、本開示の抗体もしくはその抗原結合性断片および／または医薬組成物、ならびに第２の治療剤を含むキットを提供する。
[0032]別の態様では、本開示は、本開示のベクターが発現される条件下で本開示の宿主細胞を培養するステップを含む、本開示の抗体またはその抗原結合性断片を発現する方法を提供する。
[0033]別の態様では、本開示は、治療有効量の本開示の抗体もしくはその抗原結合性断片、および／または本開示の医薬組成物を対象に投与するステップを含む、対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を処置し、防止し、または軽減する方法を提供する。一部の実施形態では、疾患、障害、または状態は、がん、固形腫瘍、慢性感染症、炎症性疾患、多発性硬化症、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症性ショック、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、移植片機能不全、または関節炎である。一部の実施形態では、がんは肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、基底細胞癌、胆嚢がん、胃がん、肺がん、気管支がん、骨がん、肝胆管がん、膵がん、乳がん、肝がん、卵巣がん、精巣がん、腎がん、腎盂尿管がん、唾液腺がん、小腸がん、尿道がん、膀胱がん、頭頚部がん、脊椎がん、脳がん、頸がん、子宮がん、子宮内膜がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、肛門がん、食道がん、胃腸管がん、皮膚がん、前立腺がん、下垂体がん、膣がん、甲状腺がん、咽喉がん、膠芽細胞腫、黒色腫、骨髄異形成症候群、肉腫、奇形腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ＴまたはＢ細胞リンパ腫、ＧＩ器官間質腫、軟組織腫瘍、肝細胞癌、および腺癌である。一部の実施形態では、がんは、ＣＤ４７陽性がんである。一部の実施形態では、対象はヒトである。一部の実施形態では、投与は経口、経鼻、静脈内、皮下、舌下、または筋肉内の投与である。一部の実施形態では、方法は治療有効量の第２の治療剤を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、第２の治療剤は化学療法剤、抗がん薬、放射線療法剤、免疫療法剤、抗血管新生剤、標的療法剤、細胞療法剤、遺伝子療法剤、ホルモン療法剤、抗ウイルス剤、抗生剤、鎮痛剤、抗酸化剤、金属キレート剤、およびサイトカインからなる群から選択される。
[0034]別の態様では、本開示は、ＳＩＲＰα陽性細胞を本開示の抗体もしくはその抗原結合性断片および／または本開示の医薬組成物に曝露するステップを含む、ＳＩＲＰα陽性細胞におけるＳＩＲＰαの活性を調節する方法を提供する。一部の実施形態では、細胞はファゴサイトーシス細胞である。
[0035]別の態様では、本開示は、試料を本開示の抗体もしくはその抗原結合性断片および／または本開示の医薬組成物と接触させるステップ、ならびに試料中におけるＳＩＲＰαの存在または量を決定するステップを含む、試料中におけるＳＩＲＰαの存在または量を検出する方法を提供する。
[0036]別の態様では、本開示は、ａ）対象から得た試料を本開示の抗体もしくはその抗原結合性断片および／または本開示の医薬組成物と接触させるステップ、ｂ）試料中のＳＩＲＰαの存在または量を決定するステップ、ならびにｃ）ＳＩＲＰαの存在または量を、対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、またはステータスの存在または状態と相関させるステップを含む、対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を診断する方法を提供する。
[0037]ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３３の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４０の配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
[0038]別の態様では、本開示は、対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を処置し、防止し、または軽減するための医薬の製造における、本開示の抗体もしくはその抗原結合性断片および／または本開示の医薬組成物の使用を提供する。
[0039]別の態様では、本開示は、対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を診断するための診断試薬の製造における、本開示の抗体もしくはその抗原結合性断片および／または本開示の医薬組成物の使用を提供する。別の態様では、本開示は、ＳＩＲＰαの検出に有用な、本開示の抗体もしくはその抗原結合性断片および／または本開示の医薬組成物を含むキットを提供する。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３３の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４０の配列を含むＬＣＤＲ３を含む。
[0040]別の態様では、本開示は、本開示の抗体もしくはその抗原結合性断片および／または本開示の医薬組成物を、ファゴサイトーシスを誘導するのに有効な用量で対象に投与するステップを含む、対象においてファゴサイトーシスを誘導する方法を提供する。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。一部の実施形態では、対象は、がん、固形腫瘍、慢性感染症、炎症性疾患、多発性硬化症、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症性ショック、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、移植片機能不全、および関節炎からなる群から選択される疾患、障害、または状態を有する。
[0041]別の態様では、本開示は、本開示の抗体もしくはその抗原結合性断片および／または本開示の医薬組成物の存在下において、標的細胞を、ＳＩＲＰα陽性ファゴサイトーシス細胞試料と接触させて、それにより、ＳＩＲＰα陽性ファゴサイトーシス細胞による標的細胞のファゴサイトーシスを誘導するステップを含む、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてファゴサイトーシスを誘導する方法を提供する。一部の実施形態では、標的細胞は、ＣＤ４７発現細胞である。
[0042]図１Ａは、組換えタンパク質ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ（図１Ａ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ（図１Ｂ）、ヒトＳＩＲＰβ ＥＣＤ（図１Ｃ）、およびヒトＳＩＲＰγ ＥＣＤ（図１Ｄ）に対する抗ＳＩＲＰα抗体（Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体）のＥＬＩＳＡでの結合特異性を示す。 図１Ｂは、組換えタンパク質ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ（図１Ａ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ（図１Ｂ）、ヒトＳＩＲＰβ ＥＣＤ（図１Ｃ）、およびヒトＳＩＲＰγ ＥＣＤ（図１Ｄ）に対する抗ＳＩＲＰα抗体（Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体）のＥＬＩＳＡでの結合特異性を示す。 図１Ｃは、組換えタンパク質ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ（図１Ａ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ（図１Ｂ）、ヒトＳＩＲＰβ ＥＣＤ（図１Ｃ）、およびヒトＳＩＲＰγ ＥＣＤ（図１Ｄ）に対する抗ＳＩＲＰα抗体（Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体）のＥＬＩＳＡでの結合特異性を示す。 図１Ｄは、組換えタンパク質ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ（図１Ａ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ（図１Ｂ）、ヒトＳＩＲＰβ ＥＣＤ（図１Ｃ）、およびヒトＳＩＲＰγ ＥＣＤ（図１Ｄ）に対する抗ＳＩＲＰα抗体（Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体）のＥＬＩＳＡでの結合特異性を示す。 [0043]図２Ａは、ＣＨＯＫ１－ヒトＳＩＲＰα ｖ１－１Ｂ４細胞（図２Ａ）、ＣＨＯＫ１－カニクイザルＳＩＲＰα－２Ａ２細胞（図２Ｂ）、およびＣＨＯＫ１－Ｃ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα－２．２２細胞（図２Ｃ）に対する抗ＳＩＲＰα抗体（Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体）のＦＡＣＳ結合曲線を示す。 図２Ｂは、ＣＨＯＫ１－ヒトＳＩＲＰα ｖ１－１Ｂ４細胞（図２Ａ）、ＣＨＯＫ１－カニクイザルＳＩＲＰα－２Ａ２細胞（図２Ｂ）、およびＣＨＯＫ１－Ｃ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα－２．２２細胞（図２Ｃ）に対する抗ＳＩＲＰα抗体（Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体）のＦＡＣＳ結合曲線を示す。 図２Ｃは、ＣＨＯＫ１－ヒトＳＩＲＰα ｖ１－１Ｂ４細胞（図２Ａ）、ＣＨＯＫ１－カニクイザルＳＩＲＰα－２Ａ２細胞（図２Ｂ）、およびＣＨＯＫ１－Ｃ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα－２．２２細胞（図２Ｃ）に対する抗ＳＩＲＰα抗体（Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体）のＦＡＣＳ結合曲線を示す。 [0044]図３Ａは、示される抗ＳＩＲＰα抗体（Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体）の存在下における、ヒトマクロファージによるＪｕｒｋａｔ細胞（図３Ａ、３Ｄ）、Ｒａｊｉ細胞（図３Ｂ）、およびＤＬＤ－１細胞（図３Ｃ）のファゴサイトーシスを示す。 図３Ｂは、示される抗ＳＩＲＰα抗体（Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体）の存在下における、ヒトマクロファージによるＪｕｒｋａｔ細胞（図３Ａ、３Ｄ）、Ｒａｊｉ細胞（図３Ｂ）、およびＤＬＤ－１細胞（図３Ｃ）のファゴサイトーシスを示す。 図３Ｃは、示される抗ＳＩＲＰα抗体（Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体）の存在下における、ヒトマクロファージによるＪｕｒｋａｔ細胞（図３Ａ、３Ｄ）、Ｒａｊｉ細胞（図３Ｂ）、およびＤＬＤ－１細胞（図３Ｃ）のファゴサイトーシスを示す。 図３Ｄは、示される抗ＳＩＲＰα抗体（Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体）の存在下における、ヒトマクロファージによるＪｕｒｋａｔ細胞（図３Ａ、３Ｄ）、Ｒａｊｉ細胞（図３Ｂ）、およびＤＬＤ－１細胞（図３Ｃ）のファゴサイトーシスを示す。 [0045]図４Ａは、Ｂ－ｈＳＩＲＰαマウス（Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ）の標的化戦略を図示する。図４Ｂは、抗ＳＩＲＰα抗体（Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体）の、Ｂ－ｈＳＩＲＰＡマウス単球への結合を示す。 [0046]図５Ａは、ＣＨＯＫ１－ヒトＳＩＲＰα ｖ１－１Ｂ４細胞に対するヒト化抗体ｈｕ０３５．０１のＦＡＣＳ結合曲線を示す。図５Ｂは、組換えタンパク質ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤおよびマウスＳＩＲＰα（Ｃ５７ＢＬ／６）ＥＣＤに対するヒト化抗体ｈｕ０３５．０１のＥＬＩＳＡ結合を示す。図５Ｃは、表面プラズモン共鳴によって判定されたヒトＳＩＲＰα ｖ２に対するヒト化抗体ｈｕ０３５．０１の結合親和性の全動態を示す。 [0047]図６Ａは、組換えタンパク質ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ（図６Ａ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ（図６Ｂ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ８ ＥＣＤ（図６Ｃ）、ヒトＳＩＲＰβ ＥＣＤ（図６Ｄ）、ヒトＳＩＲＰγ ＥＣＤ（図６Ｅ）、およびマウスＳＩＲＰα（Ｃ５７ＢＬ／６）ＥＣＤ（図６Ｆ）に対する最適化されたｈｕ０３５候補のＥＬＩＳＡでの結合特異性を示す。 図６Ｂは、組換えタンパク質ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ（図６Ａ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ（図６Ｂ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ８ ＥＣＤ（図６Ｃ）、ヒトＳＩＲＰβ ＥＣＤ（図６Ｄ）、ヒトＳＩＲＰγ ＥＣＤ（図６Ｅ）、およびマウスＳＩＲＰα（Ｃ５７ＢＬ／６）ＥＣＤ（図６Ｆ）に対する最適化されたｈｕ０３５候補のＥＬＩＳＡでの結合特異性を示す。 図６Ｃは、組換えタンパク質ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ（図６Ａ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ（図６Ｂ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ８ ＥＣＤ（図６Ｃ）、ヒトＳＩＲＰβ ＥＣＤ（図６Ｄ）、ヒトＳＩＲＰγ ＥＣＤ（図６Ｅ）、およびマウスＳＩＲＰα（Ｃ５７ＢＬ／６）ＥＣＤ（図６Ｆ）に対する最適化されたｈｕ０３５候補のＥＬＩＳＡでの結合特異性を示す。 図６Ｄは、組換えタンパク質ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ（図６Ａ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ（図６Ｂ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ８ ＥＣＤ（図６Ｃ）、ヒトＳＩＲＰβ ＥＣＤ（図６Ｄ）、ヒトＳＩＲＰγ ＥＣＤ（図６Ｅ）、およびマウスＳＩＲＰα（Ｃ５７ＢＬ／６）ＥＣＤ（図６Ｆ）に対する最適化されたｈｕ０３５候補のＥＬＩＳＡでの結合特異性を示す。 図６Ｅは、組換えタンパク質ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ（図６Ａ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ（図６Ｂ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ８ ＥＣＤ（図６Ｃ）、ヒトＳＩＲＰβ ＥＣＤ（図６Ｄ）、ヒトＳＩＲＰγ ＥＣＤ（図６Ｅ）、およびマウスＳＩＲＰα（Ｃ５７ＢＬ／６）ＥＣＤ（図６Ｆ）に対する最適化されたｈｕ０３５候補のＥＬＩＳＡでの結合特異性を示す。 図６Ｆは、組換えタンパク質ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ（図６Ａ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ（図６Ｂ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ８ ＥＣＤ（図６Ｃ）、ヒトＳＩＲＰβ ＥＣＤ（図６Ｄ）、ヒトＳＩＲＰγ ＥＣＤ（図６Ｅ）、およびマウスＳＩＲＰα（Ｃ５７ＢＬ／６）ＥＣＤ（図６Ｆ）に対する最適化されたｈｕ０３５候補のＥＬＩＳＡでの結合特異性を示す。 [0048]図７は、ＣＨＯＫ１－ヒトＳＩＲＰα ｖ１－１Ｂ４細胞（図７Ａ）、ＣＨＯＫ１－カニクイザルＳＩＲＰα－２Ａ２細胞（図７Ｂ）、およびＣＨＯＫ１－Ｃ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα－２．２２細胞（図７Ｃ）に対する最適化されたｈｕ０３５候補のＦＡＣＳ結合曲線を示す。 [0049]図８は、競合的ＥＬＩＳＡアッセイによって測定した、最適化されたｈｕ０３５候補のＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用のブロッキング活性を示す。 [0050]図９は、キメラ抗体０３５ｃおよび最適化されたｈｕ０３５候補の存在下におけるヒトマクロファージによるＪｕｒｋａｔ細胞（図９Ａ）、ＤＬＤ１細胞（図９Ｂ）、およびＲａｊｉ細胞（図９Ｃ）のファゴサイトーシスを示す。 [0051]図１０Ａは、抗ＳＩＲＰα抗体（Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体）および最適化されたｈｕ０３５候補の存在下におけるＣＤ３／ＣＤ２８活性化因子により刺激されたＴ細胞のＩＦＮγ分泌（図１０Ａ）、ＣＤ４＋Ｔ細胞（図１０Ｂ）およびＣＤ８＋Ｔ細胞（図１０Ｃ）の増殖比を示す。 図１０Ｂは、抗ＳＩＲＰα抗体（Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体）および最適化されたｈｕ０３５候補の存在下におけるＣＤ３／ＣＤ２８活性化因子により刺激されたＴ細胞のＩＦＮγ分泌（図１０Ａ）、ＣＤ４＋Ｔ細胞（図１０Ｂ）およびＣＤ８＋Ｔ細胞（図１０Ｃ）の増殖比を示す。 図１０Ｃは、抗ＳＩＲＰα抗体（Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体）および最適化されたｈｕ０３５候補の存在下におけるＣＤ３／ＣＤ２８活性化因子により刺激されたＴ細胞のＩＦＮγ分泌（図１０Ａ）、ＣＤ４＋Ｔ細胞（図１０Ｂ）およびＣＤ８＋Ｔ細胞（図１０Ｃ）の増殖比を示す。 図１０Ｄは、抗ＳＩＲＰα抗体（Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体）および最適化されたｈｕ０３５候補の存在下におけるＣＤ３／ＣＤ２８活性化因子により刺激されたＴ細胞のＩＦＮγ分泌（図１０Ａ）、ＣＤ４＋Ｔ細胞（図１０Ｂ）およびＣＤ８＋Ｔ細胞（図１０Ｃ）の増殖比を示す。 [0052]図１１は、抗ＳＩＲＰα抗体（Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体）および最適化されたｈｕ０３５候補の存在下における同種樹状細胞により刺激されたＴ細胞のＩＦＮγ分泌（図１１Ａ）、ＣＤ４＋Ｔ細胞（図１１Ｂ）およびＣＤ８＋Ｔ細胞（図１１Ｃ）の増殖比を示す。
[0054]以下の本開示の記述は、本開示の種々の実施形態を説明することを意図しているのみである。したがって、議論する特定の改変は本開示の範囲を限定するものと解釈すべきではない。本開示の範囲から逸脱することなしに種々の等価物、変更、および改変ができることは、当業者には明らかであり、そのような等価の実施形態が本明細書に含まれるべきことが理解される。出版物、特許、および特許出願を含む本明細書で引用した全ての参照文献は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。
[0055]定義
[0056]本明細書で用いる用語「抗体」は、特定の抗原に結合する任意の免疫グロブリン、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多価抗体、二価抗体、一価抗体、多重特異的抗体、または二重特異的抗体を含む。天然のインタクトな抗体は２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む。哺乳動物の重鎖はアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミューに分類され、それぞれの重鎖は可変領域（ＶＨ）ならびに第１、第２、第３、および任意選択で第４の定常領域（それぞれＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４）からなる。哺乳動物の軽鎖はλまたはκと分類され、それぞれの軽鎖は可変領域（ＶＬ）および定常領域からなる。抗体は「Ｙ」の形状を有し、Ｙの軸はジスルフィド結合を介して互いに結合した２つの重鎖の第２および第３の定常領域からなる。Ｙのそれぞれのアームは、１本の軽鎖の可変および定常領域に結合した１本の重鎖の可変領域および第１の定常領域を含む。軽鎖および重鎖の可変領域は抗原の結合に関与している。両方の鎖の可変領域は一般に、相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖ＣＤＲ、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む重鎖ＣＤＲ）と呼ばれる３つの高度に可変性のループを含む。本明細書で開示する抗体および抗原結合性断片のＣＤＲの境界は、Ｋａｂａｔ、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、またはＡｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉの規則によって定義され、または同定されてよい（Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ，Ｂ．，Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２７３（４），９２７（１９９７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．Ｄｅｃ ５；１８６（３）：６５１－６３（１９８５）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６，９０１（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．Ｄｅｃ ２１－２８；３４２（６２５２）：８７７－８３（１９８９）；Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２７：５５－７７（２００３）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１（３），（２００５）；Ｍａｒｉｅ－Ｐａｕｌｅ Ｌｅｆｒａｎｃ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂ ｃｅｌｌｓ（ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ），ｃｈａｐｔｅｒ ２６，４８１－５１４，（２０１５））。３つのＣＤＲは、ＣＤＲよりも高度に保存され、高度に可変性のループを支持するスキャフォールドを形成するフレームワーク領域（ＦＲ）（ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、およびＬＦＲ４を含む軽鎖ＦＲ、ならびにＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、およびＨＦＲ４を含む重鎖ＦＲ）として知られる隣接する区間の間に挿入されている。重鎖および軽鎖の定常領域は抗原結合には関与しないが、種々のエフェクター機能を呈する。抗体は、その重鎖の定常領域のアミノ酸配列に基づいてクラスに割り付けられる。抗体の５つの主なクラスまたはアイソタイプはＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭであり、これらはそれぞれアルファ、デルタ、イプシロン、ガンマ、およびミュー重鎖の存在によって特徴付けられる。主な抗体クラスのいくつかは、ＩｇＧ１（ガンマ１重鎖）、ＩｇＧ２（ガンマ２重鎖）、ＩｇＧ３（ガンマ３重鎖）、ＩｇＧ４（ガンマ４重鎖）、ＩｇＡ１（アルファ１重鎖）、またはＩｇＡ２（アルファ２重鎖）等のサブクラスに分割される。
[0057]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体はその任意の抗原結合性断片を包含する。本明細書で用いる用語「抗原結合性断片」は、１つまたは複数のＣＤＲを含む抗体の一部から形成された抗体断片、または抗原に結合するが、インタクトな天然の抗体構造を含まない任意の他の抗体断片を意味する。抗原結合性断片の例には、限定なく、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異的ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖダイマー（二価ダイアボディ）、二重特異的抗体、多重特異的抗体、ラクダ化単鎖ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、または二価ドメイン抗体が含まれる。抗原結合性断片は、親抗体が結合する同じ抗原に結合することができる。
[0058]「Ｆａｂ」は、抗体に関して、ジスルフィド結合によって単一の重鎖の可変領域および第１の定常領域に結合した単一の軽鎖（可変領域と定常領域の両方）からなる抗体の部分を意味する。
[0059]「Ｆａｂ’」は、ヒンジ領域の一部を含むＦａｂ断片を意味する。
[0060]「Ｆ（ａｂ’）２」は、Ｆａｂ’のダイマーを意味する。
[0061]「Ｆｃ」は、抗体（たとえばＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＤアイソタイプ）に関して、ジスルフィド結合を介して第２の重鎖の第２および第３の定常ドメインに結合した第１の重鎖の第２および第３の定常ドメインからなる抗体の部分を意味する。ＩｇＭおよびＩｇＥアイソタイプの抗体に関するＦｃは、第４の定常ドメインをさらに含む。抗体のＦｃ部分は、抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）等の種々のエフェクター機能に関与しているが、抗原結合には機能しない。
[0062]「Ｆｖ」は、抗体に関して、完全な抗原結合部位を担う抗体の最小断片を意味する。Ｆｖ断片は、単一の重鎖の可変領域に結合した単一の軽鎖の可変領域からなる。
[0063]「単鎖Ｆｖ抗体」または「ｓｃＦｖ」は、直接またはペプチドリンカー配列を介して相互に連結された軽鎖可変領域および重鎖可変領域からなる操作された抗体を意味する（Ｈｕｓｔｏｎ ＪＳ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，８５：５８７９（１９８８））。
[0064]「単鎖Ｆｖ－Ｆｃ抗体」または「ｓｃＦｖ－Ｆｃ」は、抗体のＦｃ領域に連結されたｓｃＦｖからなる操作された抗体を意味する。
[0065]「ラクダ化単鎖ドメイン抗体」、「重鎖抗体」、または「ＨＣＡｂ」は、２つのＶＨドメインを含み、軽鎖を含まない抗体を意味する（Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ Ｌ．ａｎｄ Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｄｅｃ １０；２３１（１－２）：２５－３８（１９９９）；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ Ｓ．，Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｊｕｎ；７４（４）：２７７－３０２（２００１）；ＷＯ９４／０４６７８；ＷＯ９４／２５５９１；米国特許第６，００５，０７９号）。重鎖抗体はもともとラクダ科（ラクダ、ヒトコブラクダ、およびリャマ）に由来する。ラクダ化抗体は軽鎖を有しないが、真正の抗原結合能力を有する（Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ．Ｊｕｎ ３；３６３（６４２８）：４４６－８（１９９３）；Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫ．ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ．Ａｐｒ；５４（１）：３９－４７（２００２）；Ｎｇｕｙｅｎ ＶＫ．ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｍａｙ；１０９（１）：９３－１０１（２００３））。重鎖抗体の可変ドメイン（ＶＨＨドメイン）は、適応免疫応答によって生成される既知の最小の抗原結合単位を表す（Ｋｏｃｈ－Ｎｏｌｔｅ Ｆ．ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ．Ｎｏｖ；２１（１３）：３４９０－８．Ｅｐｕｂ ２００７ Ｊｕｎ １５（２００７））。
[0066]「ナノボディ」は、重鎖抗体のＶＨＨドメインおよび２つの定常ドメイン、ＣＨ２およびＣＨ３からなる抗体断片を意味する。
[0067]「ダイアボディ」または「ｄＡｂ」には、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体断片が含まれ、断片は同じポリペプチド鎖の中でＶＬドメインに連結されたＶＨドメインを含む（ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＨ）（たとえばＨｏｌｌｉｇｅｒ Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．Ｊｕｌ １５；９０（１４）：６４４４－８（１９９３）；ＥＰ４０４０９７；ＷＯ９３／１１１６１を参照）。同じ鎖の中の２つのドメインの間での対形成を可能にするには短すぎるリンカーを用いることによって、ドメインは別の鎖の相補的なドメインと対を形成することを強制され、それにより２つの抗原結合部位が創出される。抗原結合部位は同じまたは異なる抗原（またはエピトープ）を標的とし得る。ある特定の実施形態では、「二重特異的ｄｓダイアボディ」は、２つの異なる抗原（またはエピトープ）を標的とするダイアボディである。
[0068]「ドメイン抗体」は、重鎖の可変領域または軽鎖の可変領域のみを含む抗体断片を意味する。ある例では、２つ以上のＶＨドメインがペプチドリンカーと共有結合的に接合されて、二価または多価のドメイン抗体が創出される。二価ドメイン抗体の２つのＶＨドメインは、同じまたは異なる抗原を標的とし得る。
[0069]本明細書で用いる用語「価」は、所与の分子の中の特定した数の抗原結合部位の存在を意味する。用語「一価」は、ただ一つの単一の抗原結合部位を有する抗体または抗原結合性断片を意味し、用語「多価」は、複数の抗原結合部位を有する抗体または抗原結合性断片を意味する。したがって、用語「二価」、「四価」、および「六価」は、抗原結合性分子の中のそれぞれ２つの結合部位、４つの結合部位、および６つの結合部位の存在を示す。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は二価である。
[0070]本明細書で用いる場合、「二重特異的」抗体は、２つの異なるモノクローナル抗体に由来する断片を有し、２つの異なるエピトープに結合することができる人工の抗体を意味する。２つのエピトープは同じ抗原の上に存在してもよく、または２つの異なる抗原の上に存在してもよい。
[0071]ある特定の実施形態では、「ｓｃＦｖダイマー」は、別のＶＨ－ＶＬ部分と二量化した（ペプチドリンカーによって二量化された）ＶＨ－ＶＬを含む二価ダイアボディまたは二重特異的ｓｃＦｖ（ＢｓＦｖ）であり、それにより１つの部分のＶＨが他の部分のＶＬと協調して、同じ抗原（またはエピトープ）または異なる抗原（またはエピトープ）を標的とすることができる２つの結合部位を形成する。他の実施形態では、「ｓｃＦｖダイマー」は、（ペプチドリンカーによって連結された）ＶＬ１－ＶＨ２と会合した（これもペプチドリンカーによって連結した）ＶＨ１－ＶＬ２を含む二重特異的ダイアボディであり、それによりＶＨ１とＶＬ１が協調し、ＶＨ２とＶＬ２が協調して、それぞれの協調した対が異なる抗原特異性を有する。
[0072]「ｄｓＦｖ」は、単一の軽鎖の可変領域と単一の重鎖の可変領域との間の連結がジスルフィド結合であるジスルフィド安定化Ｆｖ断片を意味する。一部の実施形態では、「（ｄｓＦｖ）２」または「（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）」は、３つのペプチド鎖、即ちペプチドリンカー（たとえば長い可撓性リンカー）によって連結され、ジスルフィド架橋を介してそれぞれ２つのＶＬ部分に結合した２つのＶＨ部分を含む。一部の実施形態では、ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’は、ジスルフィドで対を形成したそれぞれの重鎖および軽鎖が異なる抗原特異性を有する二重特異的である。
[0073]本明細書で用いる用語「キメラ」は、１つの種に由来する重鎖および／または軽鎖の一部と、異なる種に由来する重鎖および／または軽鎖の残りとを有する抗体または抗原結合性断片を意味する。説明的な例では、キメラ抗体はヒトに由来する定常領域と、マウス等の非ヒト動物に由来する可変領域とを含んでよい。一部の実施形態では、非ヒト動物は哺乳動物、たとえばマウス、ラット、ウサギ、ヤギ、ヒツジ、モルモット、またはハムスターである。
[0074]本明細書で用いる用語「ヒト化」は、抗体または抗原結合性断片が非ヒト動物に由来するＣＤＲ、ヒトに由来するＦＲ領域、および適用される場合にはヒトに由来する定常領域を含むことを意味する。
[0075]本明細書で用いる用語「親和性」は、免疫グロブリン分子（即ち抗体）またはその断片と抗原との間の非共有結合相互作用の強さを意味する。
[0076]本明細書で用いる用語「特異的結合」または「特異的に結合する」は、たとえば抗体と抗原のような２つの分子の間の非ランダム結合反応を意味する。特異的結合は、たとえば抗原と抗原結合性分子との間の結合が平衡に達したときのＫＤ値、即ち解離速度と会合速度との比（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）によって表される結合親和性において特徴付けることができる。ＫＤは、それだけに限らないが、表面プラスモン共鳴法、ミクロスケールサーモフォレーシス法、ＨＰＬＣ－ＭＳ法、およびフローサイトメトリー（ＦＡＣＳなど）法を含む当技術分野で既知の任意の従来法を用いて決定してよい。１０－６Ｍ以下（たとえば５×１０－７Ｍ以下、２×１０－７Ｍ以下、１０－７Ｍ以下、５×１０－８Ｍ以下、２×１０－８Ｍ以下、１０－８Ｍ以下、５×１０－９Ｍ以下、４×１０－９Ｍ以下、３×１０－９Ｍ以下、２×１０－９Ｍ以下、または１０－９Ｍ以下）のＫＤ値は、抗体またはその抗原結合性断片とＳＩＲＰα（たとえばヒトＳＩＲＰα）との間の特異的結合を示し得る。
[0077]本明細書で用いる「ヒトＳＩＲＰαとの結合について競合する」能力は、第１の抗体または抗原結合性断片の、ヒトＳＩＲＰαと第２の抗ＳＩＲＰα抗体との間の結合相互作用を何らかの検出可能な程度で阻害する能力を意味する。ある特定の実施形態では、ヒトＳＩＲＰαとの結合について競合する抗体または抗原結合性断片は、ヒトＳＩＲＰαと第２の抗ヒトＳＩＲＰα抗体との間の結合相互作用を少なくとも８５％、または少なくとも９０％阻害する。ある特定の実施形態では、この阻害は９５％より大きく、または９９％より大きくてよい。
[0077]本明細書で用いる用語「エピトープ」は、それに抗体が結合する抗原の上の特定の原子またはアミノ酸の群を意味する。２つの抗体が抗原に対して競合的結合を示せば、それらは抗原の中の同じまたは密接に関連したエピトープに結合し得る。エピトープは線状またはコンフォメーション状（即ち、隔たれたアミノ酸残基を含む）であってよい。たとえば、抗体または抗原結合性断片が参照抗体の抗原への結合を少なくとも８５％、または少なくとも９０％、または少なくとも９５％ブロックすれば、その抗体または抗原結合性断片は、参照抗体と同じ／密接に関連したエピトープと結合するとみなしてよい。
[0078]本明細書で用いる用語「アミノ酸」は、それぞれのアミノ酸に特有の側鎖とともにアミン（－ＮＨ２）およびカルボキシル（－ＣＯＯＨ）官能基を含む有機化合物を意味する。本開示においてアミノ酸の名称は標準的な１文字または３文字のコードとして表すこともでき、それらを以下に要約する。
Figure 2022545300000002
[0079]アミノ酸配列に関する「保存的置換」は、アミノ酸残基を、同様の物理化学的特性を有する側鎖を有する異なるアミノ酸残基で置き換えることを意味する。たとえば、保存的置換は、疎水性側鎖を有するアミノ酸残基（たとえばＭｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、およびＩｌｅ）の間で、中性親水性側鎖を有するアミノ酸残基（たとえばＣｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、およびＧｌｎ）の間で、酸性側鎖を有するアミノ酸残基（たとえばＡｓｐ、Ｇｌｕ）の間で、塩基性側鎖を有するアミノ酸残基（たとえばＨｉｓ、Ｌｙｓ、およびＡｒｇ）の間で、または芳香族側鎖を有するアミノ酸残基（たとえばＴｒｐ、Ｔｙｒ、およびＰｈｅ）の間で行うことができる。当技術分野で既知のように、保存的置換は通常、タンパク質のコンフォメーション構造において顕著な変化を生じず、したがってタンパク質の生物学的活性を保持することができる。
[0080]本明細書で用いる用語「相同」は、最適に整列させたときに別の配列と少なくとも６０％（たとえば少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する核酸配列（またはその相補的ストランド）またはアミノ酸配列を意味する。
[0081]アミノ酸配列（または核酸配列）に関する「配列同一性パーセント（％）」は、配列を整列させ、必要な場合には同一のアミノ酸（または核酸）の数が最大になるようにギャップを導入した後の、参照配列におけるアミノ酸（または核酸）残基と同一である候補配列におけるアミノ酸（または核酸）残基のパーセンテージとして定義される。換言すれば、アミノ酸配列（または核酸配列）の配列同一性パーセント（％）は、比較する参照配列に関して同一であるアミノ酸残基（または塩基）の数を、候補配列または参照配列のどちらか短い方におけるアミノ酸残基（または塩基）の全数で除することによって計算することができる。アミノ酸残基の保存的置換は、同一の残基とみなしてもよく、みなさなくてもよい。アミノ酸（または核酸）の配列同一性パーセントを計算するための整列は、たとえばＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴｐ（Ｕ．Ｓ．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）のウェブサイトから入手可能、Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５：４０３－４１０（１９９０）；Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２５：３３８９－３４０２（１９９７）も参照されたい）、ＣｌｕｓｔａｌＷ２（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのウェブサイトから入手可能、Ｈｉｇｇｉｎｓ Ｄ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２６６：３８３－４０２（１９９６）；Ｌａｒｋｉｎ Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ（Ｏｘｆｏｒｄ，Ｅｎｇｌａｎｄ），２３（２１）：２９４７－８（２００７）も参照されたい）、およびＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の公衆利用可能なツールを用いて達成することができる。当業者であれば、ツールによって提供されるデフォルトパラメーターを用いてもよく、またはたとえば好適なアルゴリズムを選択することによって整列のために適切なパラメーターをカスタマイズしてもよい。
[0082]本明細書で用いる「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域の、Ｃ１複合体およびＦｃ受容体等のそのエフェクターへの結合に帰せられる生物学的活性を意味する。例示的なエフェクター機能には、抗体とＣ１複合体上のＣ１ｑとの相互作用によって媒介される補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）、抗体のＦｃ領域のエフェクター細胞上のＦｃ受容体への結合によって媒介される抗体依存性細胞媒介細胞毒性（ＡＤＣＣ）、およびファゴサイトーシスが含まれる。エフェクター機能は、Ｆｃ受容体結合アッセイ、Ｃ１ｑ結合アッセイ、および細胞溶解アッセイ等の種々のアッセイを用いて評価することができる。
[0083]「単離された」物質は、天然の状態から人の手によって改変されている。「単離された」組成物または物質が天然に生じるならば、それはその元の環境から変化しもしくは除去されているか、またはその両方である。たとえば、生きている動物の中に天然に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離されて」いないが、同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、その天然の状態において共存する物質から十分に分離されて実質的に純粋な状態で存在するならば、「単離されて」いる。「単離された核酸配列」は、単離された核酸分子の配列を意味する。ある特定の実施形態では、「単離された抗体またはその抗原結合性断片」は、電気泳動法（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動、キャピラリ電気泳動等）またはクロマトグラフィー法（イオン交換クロマトグラフィーまたは逆相ＨＰＬＣ）によって決定して少なくとも６０％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の純度を有する抗体またはその抗原結合性断片を意味する。
[0084]本明細書で用いる用語「ベクター」は、その中に遺伝要素が作動可能に挿入され、その遺伝要素の発現が生じて、それにより、その遺伝要素によってコードされるタンパク質、ＲＮＡ、またはＤＮＡが産生され、またはその遺伝要素が複製されるビヒクルを意味する。ベクターは、宿主細胞をトランスフォーム、トランスデュース、またはトランスフェクトして、それが宿主細胞の中に運搬する遺伝要素の発現を生じさせるために用い得る。ベクターの例には、プラスミド、ファージミド、コスミド、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、またはＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）等の人工染色体、ラムダファージまたはＭ１３ファージ等のバクテリオファージ、および動物ウイルスが含まれる。ベクターは、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択可能な要素、およびレポーター遺伝子等の発現を制御するための種々の要素を含んでよい。さらに、ベクターは複製の起点を含んでよい。ベクターは、ウイルス粒子、リポソーム、またはタンパク質コーティングを含むがこれらに限定されない、ベクターの細胞内への進入を補助する物質を含んでもよい。ベクターは発現ベクターまたはクローニングベクターであってよい。本開示は、抗体またはその抗原結合性断片をコードする本明細書で提供される核酸配列、核酸配列に作動可能に連結された少なくとも１つのプロモーター（たとえばＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ－１α）、および少なくとも１つの選択マーカーを含むベクター（たとえば発現ベクター）を提供する。
[0085]本明細書で用いる語句「宿主細胞」は、その中に外来のポリヌクレオチドおよび／またはベクターを導入することができ、またはこれらが導入された細胞を意味する。
[0086]用語「対象」は、ヒトおよび非ヒト動物を含む。非ヒト動物は、全ての脊椎動物、たとえば哺乳動物および非ヒト霊長類、マウス、ラット、ネコ、ウサギ、ヒツジ、イヌ、雌ウシ、ニワトリ、両生類、および爬虫類等の非哺乳動物を含む。注記した場合を除いて、用語「患者」または「対象」は、本明細書では相互交換可能に用いられる。
[0087]用語「抗腫瘍活性」は、腫瘍細胞の増殖、生存性、または転移活性の低減を意味する。たとえば、抗腫瘍活性は、治療のない対照と比較して、治療中に生じる異常な細胞の増殖速度の低下、または腫瘍のサイズの安定性もしくは低減、あるいは治療による長期生存によって示すことができる。そのような活性は、異種移植モデル、同種移植モデル、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）モデル、および抗腫瘍活性を検討するための当技術分野で既知のその他のモデルを含むがこれらに限らない許容されたｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏの腫瘍モデルを用いて評価することができる。
[0088]本明細書で用いる疾患、障害、もしくは状態を「処置すること」またはそれらの「処置」は、疾患、障害、もしくは状態を防止しまたは軽減すること、疾患、障害、もしくは状態の発症または発生速度を遅くすること、疾患、障害、もしくは状態を発生させるリスクを低減すること、疾患、障害、もしくは状態に関連する症状の発生を防止しまたは遅延させること、疾患、障害、もしくは状態に関連する症状を低減しまたは終止させること、疾患、障害、もしくは状態を完全にまたは部分的に寛解させること、疾患、障害、もしくは状態を治癒させること、またはそれらのいくつかの組合せを含む。
[0089]用語「診断」、「診断する」、または「診断すること」は、ＳＩＲＰα関連疾患の同定のような、病的な状態、疾患、または状態の同定を意味し、または特定の処置レジメンによって恩恵を受ける可能性のあるＳＩＲＰα関連疾患を有する対象の同定を意味する。一部の実施形態では、診断はＳＩＲＰαの異常な量または活性の同定を含む。一部の実施形態では、診断は対象におけるがんまたは自己免疫疾患の同定を意味する。
[0090]本明細書で用いる場合、用語「生物学的試料」または「試料」は、目的の対象から得られまたは由来し、たとえば物理的、生化学的、化学的、および／または生理学的特徴に基づいて特徴付けおよび／または同定される、細胞および／またはその他の分子実体を含む生物学的組成物を意味する。生物学的試料は、当業者には既知の任意の方法によって得られる対象の細胞、組織、臓器、および／または生物学的流体を含むが、これらに限定されない。一部の実施形態では、生物学的試料は流体試料である。一部の実施形態では、流体試料は全血、血漿、血清、粘液（鼻漏および痰を含む）、腹水、胸膜液、胸水、唾液、尿、滑液、脳脊髄液（ＣＳＦ）、胸腔穿刺液、腹部の液、腹水、または心嚢液である。一部の実施形態では、生物学的試料は対象の心臓、肝臓、脾臓、肺、腎臓、皮膚、または血管から得られる組織または細胞である。
[0091]「ＳＩＲＰα」は、本明細書で使用される場合、主として骨髄系細胞、樹状細胞によって発現され、幹細胞またはニューロンによっても発現される、シグナル調節タンパク質（ＳＩＲＰ）ファミリーの調節性膜糖タンパク質を指す。ＳＩＲＰαの構造には、細胞外ドメインおよび細胞質ドメインが含まれる。ＳＩＲＰαの細胞外ドメインは、１つの膜遠位側Ｉｇ可変様（ＩｇＶ）フォールドおよび２つの膜近位側Ｉｇ定常様（ＩｇＣ）フォールドからなる。ＳＩＲＰαのＩｇＶドメインは、ＣＤ４７の細胞外Ｉｇドメインの結合を担う。ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰαは、ヒトＳＩＲＰαである。ヒトＳＩＲＰαをコードする遺伝子は、多型遺伝子であり、複数のバリアントがヒト集団において説明されている。最も一般的なタンパク質バリアントは、ＳＩＲＰα ｖ１およびＳＩＲＰα ｖ２（受託番号ＮＰ＿５４２９７０（Ｐ７８３２４）およびＣＡＡ７１４０３）である。本明細書で使用されるＳＩＲＰαは、他の動物種、たとえば、とりわけマウスおよびカニクイザルに由来し得る。ハツカネズミ（マウス）ＳＩＲＰαタンパク質の例示的な配列は、ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿０３１５７３またはＢＡＡ２０３７６．１またはＢＡＡ１３５２１．１に開示されている。カニクイザル（サル）ＳＩＲＰαタンパク質の例示的な配列は、ＮＣＢＩ参照配列番号ＮＰ＿００１２７１６７９に開示されている。
[0092]ＳＩＲＰαに加えて、ＳＩＲＰファミリーにはまた、ＳＩＲＰβおよびＳＩＲＰγを含め、いくつかの他の膜貫通糖タンパク質も含まれる。ＳＩＲＰファミリーのそれぞれのメンバーは、別個の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインとともに、３つの類似の細胞外Ｉｇ様ドメインを含む。ＳＩＲＰベータ遺伝子によってコードされる「ＳＩＲＰβ」は、ＤＮＡＸ活性化タンパク質１２またはＤＡＰ１２と称される膜貫通タンパク質とのその会合を通じて、その細胞質尾部の細胞内シグナル伝達によって正のシグナルを生成する。ＤＡＰ１２の細胞質尾部は、ＳＩＲＰβ１を活性化機序に連結させる免疫受容体活性化チロシンモチーフ（ＩＴＡＭ）を有する。ＳＩＲＰｇとも名付けられる「ＳＩＲＰγ」は、ＳＩＲＰＧ遺伝子によってコードされ、細胞外ＩｇドメインはＳＩＲＰαおよびＳＩＲＰβに高度に相同であるが、ＳＩＲＰγの細胞質尾部は異なる。ＳＩＲＰγもまた、ＣＤ４７に結合することが示されているが、ＳＩＲＰαよりも親和性は低い。
[0093]用語「抗ＳＩＲＰα抗体」は、ＳＩＲＰα（たとえばヒトまたはサルのＳＩＲＰα）に特異的に結合することができる抗体を意味する。用語「抗ヒトＳＩＲＰα抗体」は、ヒトＳＩＲＰαに特異的に結合することができる抗体を意味する。
[0094]本明細書で用いる「ＳＩＲＰα関連」の疾患、障害、または状態は、ＳＩＲＰαの増加したまたは減少した発現または活性によって惹起され、悪化され、またはその他に関連する任意の疾患または状態を意味する。一部の実施形態では、ＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態は、たとえば自己免疫疾患等の免疫関連障害である。一部の実施形態では、ＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態は、たとえばがん等の過剰な細胞の増殖に関連する障害である。ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰα関連疾患または状態は、ＳＩＲＰα遺伝子の発現または過剰発現を特徴とする。ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰα関連疾患または状態は、ＣＤ４７の発現または過剰発現を特徴とする。
[0095]用語「薬学的に許容される」は、指定した担体、ビヒクル、希釈剤、賦形剤、および／または塩が一般に、その製剤を構成する他の成分と化学的におよび／または物理的に適合性があり、その受容者に生理学的に適合性があることを示す。
[0096]「ＳＩＲＰα陽性細胞」という用語は、本明細書で使用される場合、細胞の表面上にＳＩＲＰαを発現する細胞（たとえば、ファゴサイトーシス細胞）を指す。一部の実施形態では、「ＳＩＲＰα陽性細胞」は、細胞の表面上にＳＩＲＰβまたはＳＩＲＰγも発現し得る。
[0097]抗ＳＩＲＰα抗体
[0098]本開示は、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体および抗原結合性断片は、ＳＩＲＰαに特異的に結合することができる。
[0099]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによって１０－７Ｍ以下、８×１０－８Ｍ以下、５×１０－８Ｍ以下、２×１０－８Ｍ以下、８×１０－９Ｍ以下、５×１０－９Ｍ以下、２×１０－９Ｍ以下、１０－９Ｍ以下、８×１０－１０Ｍ以下、７×１０－１０Ｍ以下、または６×１０－１０Ｍ以下のＫＤ値で、ヒトＳＩＲＰαに特異的に結合する。Ｂｉａｃｏｒｅアッセイは表面プラスモン共鳴技術に基づいている。たとえばＭｕｒｐｈｙ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｃｈａｐｔｅｒ １９，ｕｎｉｔ １９．１４，２００６を参照されたい。ある特定の実施形態では、ＫＤ値は、本開示の実施例４．３に記載される方法によって測定される。
[00100]本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片のヒトＳＩＲＰαへの結合は、「５０％効果濃度」（ＥＣ５０）値によっても表すことができる。ＥＣ５０値は、その最大の結合の５０％が観察される抗体の濃度を意味する。ＥＣ５０値は当技術分野で既知の結合アッセイ、たとえば酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）等の直接または間接結合アッセイ、フローサイトメトリーアッセイ、およびその他の結合アッセイによって測定することができる。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、ＥＬＩＳＡによって、１ｎＭ以下、０．９ｎＭ以下、０．８ｎＭ以下、０．７ｎＭ以下、０．６ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０９ｎＭ以下、０．０８ｎＭ以下、０．０７ｎＭ以下、０．０６ｎＭ以下、または０．０５ｎＭ以下のＥＣ５０（即ち５０％結合濃度）で、ヒトＳＩＲＰαに特異的に結合する。
[00101]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、１ｎＭ以下（たとえば、５×１０－１０Ｍ以下、３×１０－１０Ｍ以下、１×１０－１０Ｍ以下）のＥＣ５０でヒトＳＩＲＰα ｖ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に特異的に結合する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、１ｎＭ以下（たとえば、５×１０－１０Ｍ以下、３×１０－１０Ｍ以下、１×１０－１０Ｍ以下）のＥＣ５０でヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤに特異的に結合する。
[00102]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、５０ｎＭ以下（たとえば、４０ｎＭ以下、３０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下）のＥＣ５０でＳＩＲＰγ ＥＣＤに結合する。
[00103]ＳＩＲＰγ ＥＣＤに「検出可能に結合しない」抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＩＲＰγに対して検出可能な結合を示さないもの、または同等のアッセイ条件下において対照抗体のものと同程度のレベルでＳＩＲＰγへの結合を示すものである。対照抗体は、ＳＩＲＰγに結合しないことが公知の任意の抗体であり得る。
[00104]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、１ｎＭ以下（たとえば、５×１０－１０Ｍ以下、３×１０－１０Ｍ以下、１×１０－１０Ｍ以下）のＥＣ５０でＳＩＲＰβ ＥＣＤに特異的に結合する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、ＳＩＲＰβ ＥＣＤに検出可能に結合しない。
[00105]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、ＦＡＣＳアッセイによって測定して、ヒトＳＩＲＰα ＩｇＶドメインに特異的に結合する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、ＦＡＣＳアッセイによって測定して、ヒトＳＩＲＰα ＩｇＶドメインに検出可能に結合しない。
[00106]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによって測定して、１０－５Ｍ以下（たとえば、５×１０－６Ｍ以下、３×１０－６Ｍ以下、１×１０－６Ｍ以下、５×１０－７Ｍ以下、３×１０－７Ｍ以下、１×１０－７Ｍ以下、５×１０－８Ｍ以下、３×１０－８Ｍ以下、１×１０－８Ｍ以下）の結合親和性でマウスＳＩＲＰαに特異的に結合する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、ＦＡＣＳアッセイによって測定して、１０ｎＭ以下の濃度でカニクイザルＳＩＲＰαに特異的に結合する。
[00107]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、ファゴサイトーシスアッセイによって測定して、１０ｎＭ以下の濃度で、マクロファージ細胞によるＣＤ４７発現標的細胞のファゴサイトーシスを誘導することができる。
[00108]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を低減させない。ＳＩＲＰγ－ＣＤ４７相互作用を通じた抗原提示細胞へのヒトＴ細胞の付着は、Ｔ細胞増殖を共刺激することが報告されている。本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、ＳＩＲＰγに特異的に結合しないか、またはＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を低減させるような程度でＳＩＲＰγ－ＣＤ４７相互作用をブロックしない。Ｔ細胞増殖は、当該技術分野において公知の方法を使用して、たとえば、本開示の実施例５．４に記載されるものなどのＴ細胞増殖アッセイによって、たとえば、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）標識化を使用して増殖集団を判定することによって、判定することができる。
[00109]例示的な抗ＳＩＲＰα抗体
[00110]ある特定の実施形態では、本開示は、ＲＮＹＷＭＮ（配列番号１）、ＴＤＹＡＭＨ（配列番号２）、ＴＸ１ＹＡＭＮ（配列番号３）、ＴＨＹＳＭＨ（配列番号４）、ＳＤＹＦＭＴ（配列番号５）、ＴＮＹＤＩＳ（配列番号６）、ＳＳＹＷＩＨ（配列番号７）、ＥＩＸ２ＬＫＳＮＴＹＡＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号８）、ＷＫＮＴＥＴＧＥＳＴＹＡＥＤＦＫＧ（配列番号９）、Ｘ３ＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＸ４Ｘ５ＦＫＧ（配列番号１０）、ＷＩＮＴＥＴＡＥＰＴＹＶＤＤＦＫＧ（配列番号１１）、ＮＶＮＹＤＧＲＳＴＹＹＬＤＳＬＫＳ（配列番号１２）、ＶＩＷＴＧＧＤＴＮＦＮＳＡＦＭＳ（配列番号１３）、またはＬＩＨＰＮＳＧＮＴＤＣＳＥＴＦＫＮ（配列番号１４）、ＦＴＫＶＶＡＤＷＨＬＤＶ（配列番号１５）、ＧＧＹＧＳＮＹＶＭＤＹ（配列番号１６）、ＴＲＧＹＹＤＦＤＧＧＡＦＤＹ（配列番号１７）、ＧＧＬＲＱＧＤＹ（配列番号１８）、ＥＧＳＱＴＰＬＹＡＶＤＹ（配列番号１９）、ＶＱＹＦＧＧＳＹＧＰＭＤＹ（配列番号２０）、ＤＧＡＳＹＤＷＦＶＨ（配列番号２１）、ＲＳＳＱＮＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号２２）、ＫＡＳＥＤＩＹＮＲＬＡ（配列番号２３）、Ｘ６ＡＳＱＮＶＧＴＨＬＡ（配列番号２４）、ＳＡＴＳＳＶＳＡＳＹＬＹ（配列番号２５）、ＫＡＳＱＮＶＧＴＡＶＡ（配列番号２６）、ＥＡＳＤＨＩＮＤＷＬＡ（配列番号２７）、ＫＳＳＱＳＬＬＹＴＮＧＫＴＹＬＮ（配列番号２８）、ＫＸ７ＳＮＲＦＳ（配列番号２９）、ＧＡＴＳＬＥＴ（配列番号３０）、ＳＡＸ８ＹＲＹＩ（配列番号３１）、ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号３２）、ＬＡＳＮＲＹＴ（配列番号３３）、ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号３５）、ＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（配列番号３６）、ＱＱＹＷＮＳＰＲＴ（配列番号３７）、ＱＱＹＮＴＹＰＬＴ（配列番号３８）、ＨＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号３９）、ＱＱＹＳＩＹＰＦＴ（配列番号４０）、ＱＱＹＷＮＴＰＬＴ（配列番号４１）、ＶＱＧＴＨＦＰＲＴ（配列番号４２）からなる群から選択される配列を含み、Ｘ１がＮまたはＤであり、Ｘ２がＳまたはＴであり、Ｘ３がＦまたはＷであり、Ｘ４がＱまたはＤであり、Ｘ５がＤまたはＧであり、Ｘ６がＫまたはＲであり、Ｘ７がＶまたはＩであり、Ｘ８がＳまたはＩである、１つまたは複数の（たとえば、１、２、３、４、５、または６つの）ＣＤＲを含む、抗ＳＩＲＰα抗体（たとえば、抗ヒトＳＩＲＰα抗体）およびその抗原結合性断片を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１～４２のうちのいずれかに対して１つ以下、２つ以下、または３つ以下のアミノ酸置換を有し、Ｘ１がＮまたはＤであり、Ｘ２がＳまたはＴであり、Ｘ３がＦまたはＷであり、Ｘ４がＱまたはＤであり、Ｘ５がＤまたはＧであり、Ｘ６がＫまたはＲであり、Ｘ７がＶまたはＩであり、Ｘ８がＳまたはＩである、抗体およびその抗原結合性断片をさらに包含する。
[00111]本明細書で用いる抗体「００１」は、配列番号５９の配列を有する重鎖可変領域および配列番号７３の配列を有する軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体を意味する。
[00112]本明細書で用いる抗体「００２」は、配列番号６０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号７４の配列を有する軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体を意味する。
[00113]本明細書で使用される抗体「０２２」は、配列番号６２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号７６の配列を有する軽鎖可変領域を含む、モノクローナル抗体を指す。
[00114]本明細書で用いる抗体「０３２」は、配列番号６１の配列を有する重鎖可変領域および配列番号７５の配列を有する軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体を意味する。
[00115]本明細書で用いる抗体「０３５」は、配列番号６３の配列を有する重鎖可変領域および配列番号７７の配列を有する軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体を意味する。
[00116]本明細書で用いる抗体「０５０」は、配列番号６９の配列を有する重鎖可変領域および配列番号８５の配列を有する軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体を意味する。
[00117]本明細書で用いる抗体「０５５」は、配列番号７０の配列を有する重鎖可変領域および配列番号８６の配列を有する軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体を意味する。
[00118]本明細書で用いる抗体「０６０」は、配列番号７１の配列を有する重鎖可変領域および配列番号８７の配列を有する軽鎖可変領域を含むモノクローナル抗体を意味する。
[00119]本明細書で使用される抗体「０７４」は、配列番号７２の配列を有する重鎖可変領域および配列番号８８の配列を有する軽鎖可変領域を含む、モノクローナル抗体を指す。
[00120]ある特定の実施形態では、本開示は、抗体００１、００２、０２２、０３２、０３５、０５０、０５５、０６０、または０７４の１つまたは複数の（たとえば１、２、３、４、５、または６つの）ＣＤＲ配列を含む抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
[00121]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１～７からなる群から選択される配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号８～１４からなる群から選択される配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１５～２１からなる群から選択される配列を含むＨＣＤＲ３、ならびに／または配列番号２２～２８からなる群から選択される配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号２９～３３および３５からなる群から選択される配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３６～４２からなる群から選択される配列を含むＬＣＤＲ３を含む抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
[00122]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４８の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５の配列を含むＨＣＤＲ３、ならびに／または配列番号２２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５５の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３６の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
[00123]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４９の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５の配列を含むＨＣＤＲ３、ならびに／または配列番号２２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３６の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
[00124]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４９の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１５の配列を含むＨＣＤＲ３、ならびに／または配列番号２２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５５の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３６の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
[00125]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１６の配列を含むＨＣＤＲ３、ならびに／または配列番号２３の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３０の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３７の配列を含むＬＣＤＲ３を含む抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
[00126]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号４３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号５０の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１７の配列を含むＨＣＤＲ３、ならびに／または配列番号５３の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５７の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３８の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
[00127]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号４の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１８の配列を含むＨＣＤＲ３、ならびに／または配列番号２５の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３２の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３９の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
[00128]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９の配列を含むＨＣＤＲ３、ならびに／または配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３３の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４０の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
[00129]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号６の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２０の配列を含むＨＣＤＲ３、ならびに／または配列番号２７の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３０の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４１の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
[00130]ある特定の実施形態では、本開示は、配列番号７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号２１の配列を含むＨＣＤＲ３、ならびに／または配列番号２８の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４２の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
[00131]下の表１は、抗体００１、００２、０２２、０３２、０３５、０５０、０５５、０６０、および０７４のＣＤＲアミノ酸配列を示す。ＣＤＲの境界はＫａｂａｔの規則によって定義し、または同定した。下の表２は、抗体００１、００２、０２２、０３２、０３５、０５０、０５５、０６０、および０７４の重鎖および軽鎖の可変領域のアミノ酸配列を示す。
[0132]
Figure 2022545300000003
[00133]
Figure 2022545300000004
Figure 2022545300000005
[00134]抗体００１、００２、０２２、０３２、０３５、０５０、０５５、０６０、および０７４のそれぞれがＳＩＲＰαに結合することができ、抗原結合特異性が一次的にＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域によって提供されることを考えれば、抗体００１、００２、０２２、０３２、０３５、０５０、０５５、０６０、および０７４のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３の配列、ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３の配列は「混合および整合されて」（即ち異なる抗体のＣＤＲは混合および整合されるが、それぞれの抗体はＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３、ならびにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含まなくてはならない）、本開示の抗ＳＩＲＰα結合分子を創出することができる。そのような「混合および整合された」抗体のＳＩＲＰα結合は、上記および実施例に記載した結合アッセイを用いて試験することができる。好ましくは、ＶＨ ＣＤＲ配列が混合および整合される場合には、特定のＶＨ配列からのＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、および／またはＨＣＤＲ３配列は、構造的に同様のＣＤＲ配列で置き換えられる。同様に、ＶＬ ＣＤＲ配列が混合および整合される場合には、特定のＶＬ配列からのＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、および／またはＬＣＤＲ３配列は、好ましくは構造的に同様のＣＤＲ配列で置き換えられる。たとえば、抗体００１および０３５のＨＣＤＲ１はいくつかの構造的同様性を共有しており、したがって混合および整合させやすい。モノクローナル抗体００１、００２、０２２、０３２、０３５、０５０、０５５、０６０、および０７４について１つまたは複数のＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ領域配列を本明細書で開示したＣＤＲ配列からの構造的に同様の配列で置換することによって新規のＶＨおよびＶＬ配列が創出され得ることは、当業者には容易に明白になる。
[00135]ＣＤＲは抗原結合に関与していることが知られている。しかし、６つのＣＤＲの全てが不可欠または不変ではないことが見出されている。換言すれば、ＳＩＲＰαへの特異的な結合親和性を実質的に保持しながら抗ＳＩＲＰα抗体００１、００２、０２２、０３２、０３５、０５０、０５５、０６０、および０７４における１つまたは複数のＣＤＲを置き換え、変更、または修飾することが可能である。
[00136]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、その抗体およびその抗原結合性断片がＳＩＲＰαに特異的に結合することができる限り、好適なフレームワーク領域（ＦＲ）配列を含む。上の表１で提供したＣＤＲ配列はマウス抗体から得られるが、これらは組換え手法等の当技術分野で既知の好適な方法を用いてとりわけマウス、ヒト、ラット、ウサギ等の任意の好適な種の任意の好適なＦＲ配列にグラフトすることができる。
[00137]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体および抗原結合性断片は、ヒト化される。ヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトにおけるその低減した免疫原性において望ましい。ヒト化抗体は、非ヒトＣＤＲ配列がヒトまたは実質的にヒトのＦＲ配列にグラフトされているので、その可変領域においてキメラである。抗体または抗原結合性断片のヒト化は本質的に、非ヒト（マウス等）ＣＤＲ遺伝子をヒト免疫グロブリン遺伝子中の対応するヒトＣＤＲ遺伝子で置換することによって実施することができる（たとえばＪｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６を参照されたい）。
[00138]この目的を達成するために、当技術分野で既知の方法を用いて好適なヒト重鎖および軽鎖の可変ドメインを選択することができる。説明的な例では、「ベストフィット」アプローチを用いることができ、ここでは非ヒト（たとえばげっ歯類）抗体の可変ドメイン配列が既知のヒト可変ドメイン配列に対してスクリーニングまたはＢＬＡＳＴ処理され、非ヒトクエリー配列に最も近いヒト配列が同定され、非ヒトＣＤＲ配列をグラフトするためのヒトスキャフォールドとして用いられる（たとえばＳｉｍｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｔ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１を参照されたい）。あるいは、非ヒトＣＤＲのグラフト化のために、全てのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワークを用いてもよい（たとえばＣａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５；Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３を参照されたい）。
[00139]以下の表３は、ｈｕ０３５．０１、ｈｕ０３５．０２、ｈｕ０３５．０３、ｈｕ０３５．０９、ｈｕ０３５．１０、ｈｕ０３５．１３、ｈｕ０３５．１４、およびｈｕ０３５．１７と表記される、抗体０３５の８つのヒト化抗体のＣＤＲアミノ酸配列を示す。ＣＤＲの境界部は、Ｋａｂａｔの慣例によって定義または特定した。以下の表４は、８つのヒト化抗体ｈｕ０３５．０１、ｈｕ０３５．０２、ｈｕ０３５．０３、ｈｕ０３５．０９、ｈｕ０３５．１０、ｈｕ０３５．１３、ｈｕ０３５．１４、およびｈｕ０３５．１７の重鎖および軽鎖可変領域アミノ酸配列を示す。以下の表５は、８つのヒト化抗体ｈｕ０３５．０１、ｈｕ０３５．０２、ｈｕ０３５．０３、ｈｕ０３５．０９、ｈｕ０３５．１０、ｈｕ０３５．１３、ｈｕ０３５．１４、およびｈｕ０３５．１７のＦＲアミノ酸配列を示す。
[00140]
Figure 2022545300000006
[00141]
Figure 2022545300000007
Figure 2022545300000008
[00142]
Figure 2022545300000009
Figure 2022545300000010
[00143]ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、非ヒトであるＣＤＲ配列を除いて、実質的に全てのヒト配列からなっている。一部の実施形態では、可変領域ＦＲおよび存在する場合には定常領域は、完全にまたは実質的にヒト免疫グロブリン配列からのものである。ヒトＦＲ配列およびヒト定常領域配列は異なるヒト免疫グロブリン遺伝子由来でよく、たとえばＦＲ配列は１つのヒト抗体由来であり、定常領域は別のヒト抗体に由来する。一部の実施形態では、ヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、ヒト重鎖ＨＦＲ１～４、および／または軽鎖ＬＦＲ１～４を含む。
[00144]一部の実施形態では、ヒトに由来するＦＲ領域は、それが由来する元のヒト免疫グロブリンと同じアミノ酸配列を含んでよい。一部の実施形態では、ヒトＦＲの１つまたは複数のアミノ酸残基は、親の非ヒト抗体からの対応する残基で置換される。これは、ある特定の実施形態ではヒト化抗体またはその断片を非ヒト親抗体の構造に密接に近似させ、それによって結合特性を最適化（たとえば結合親和性を増大）させるために望ましい。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＦＲ配列のそれぞれにおいて１０、９、８、７、６、５、４、３、２、もしくは１個以下のアミノ酸残基の置換、または重鎖もしくは軽鎖の可変ドメインの全てのＦＲ配列において１０、９、８、７、６、５、４、３、２、もしくは１個以下のアミノ酸残基の置換を含む。一部の実施形態では、アミノ酸残基におけるそのような変化は、重鎖ＦＲ領域にのみ、軽鎖ＦＲ領域にのみ、または両方の鎖に存在し得る。ある特定の実施形態では、ヒトＦＲ配列の１つまたは複数のアミノ酸はランダムに変異して結合親和性を増大させる。ある特定の実施形態では、ヒトＦＲ配列の１つまたは複数のアミノ酸は親の非ヒト抗体の対応するアミノ酸に復帰変異して結合親和性を増大させる。
[00145]ある特定の実施形態では、本開示はまた、ＱＸ９ＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＸ１０ＡＸ１１ＧＹＸ１２Ｘ１３（配列番号９２）の配列またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含む重鎖ＨＦＲ１、ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号９３）の配列またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含む重鎖ＨＦＲ２、ＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＸ１４ＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号９６）の配列またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含む重鎖ＨＦＲ３、およびＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９７）の配列またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含む重鎖ＨＦＲ４を含み、Ｘ９がＩまたはＶであり、Ｘ１０がＲまたはＫであり、Ｘ１１がＧまたはＲまたはＳであり、Ｘ１２がＴまたはＳであり、Ｘ１３がＬまたはＩまたはＦであり、Ｘ１４がＧまたはＳである、ヒト化抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片も提供する。
[00146]ある特定の実施形態では、本開示はまた、ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＸ１５ＬＸ１６ＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１００）の配列またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含む軽鎖ＬＦＲ１、ＷＸ１７ＱＱＫＰＧＫＸ１８ＰＫＸ１９ＬＩＸ２０（配列番号１０４）の配列またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含む軽鎖ＬＦＲ２、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＸ２１ＬＱＰＥＤＦＡＴＹＸ２２Ｃ（配列番号１０８）の配列またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含む軽鎖ＬＦＲ３、およびＦＸ２３ＱＧＴＫＬＥＩＫＸ２４（配列番号４７）の配列またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含む軽鎖ＬＦＲ４を含み、Ｘ１５がＳまたはＲであり、Ｘ１６がＳまたはＧであり、Ｘ１７がＹまたはＦであり、Ｘ１８がＡまたはＳであり、Ｘ１９がＳまたはＡであり、Ｘ２０がＹまたはＦであり、Ｘ２１がＳまたはＮであり、Ｘ２２がＹまたはＦであり、Ｘ２３がＧまたはＤであり、Ｘ２４がＲまたは不在である、ヒト化抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片も提供する。
[00147]ある特定の実施形態では、本開示はまた、配列番号４４、８９、９０、および９１からなる群から選択される配列を含む重鎖ＨＦＲ１、配列番号９３の配列を含む重鎖ＨＦＲ２、配列番号９４および９５からなる群から選択される配列を含む重鎖ＨＦＲ３、ならびに配列番号９７の配列を含む重鎖ＨＦＲ４、ならびに／または配列番号９８および９９からなる群から選択される配列を含む軽鎖ＬＦＲ１、配列番号１０１、１０２、および１０３からなる群から選択される配列を含む軽鎖ＬＦＲ２、配列番号１０５、１０６、および１０７からなる群から選択される配列を含む軽鎖ＬＦＲ３、ならびに配列番号１０９および４６からなる群から選択される配列を含む軽鎖ＬＦＲ４を含む、ヒト化抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片も提供する。
[00148]ある特定の実施形態では、本開示はまた、ｈｕ０３５．０１－ＶＨ（配列番号６４）、ｈｕ０３５．０２－ＶＨ／ｈｕ０３５．０３－ＶＨ／ｈｕ０３５．１０－ＶＨ／ｈｕ０３５．１７－ＶＨ（配列番号６５）、ｈｕ０３５．０９－ＶＨ（配列番号６６）、ｈｕ０３５．１３－ＶＨ（配列番号６７）、およびｈｕ０３５．１４－ＶＨ（配列番号６８）からなる群から選択される重鎖可変領域に含まれるＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、および／またはＨＦＲ４配列を含む、ヒト化抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片も提供する。
[00149]ある特定の実施形態では、本開示は、ｈｕ０３５．０１－ＶＬ（配列番号７８）、ｈｕ０３５．０２－ＶＬ（配列番号７９）、ｈｕ０３５．０３－ＶＬ（配列番号８０）、ｈｕ０３５．０９－ＶＬ（配列番号８１）、ｈｕ０３５．１０－ＶＬ／ｈｕ０３５．１４－ＶＬ（配列番号８２）、ｈｕ０３５．１３－ＶＬ（配列番号８３）、およびｈｕ０３５．１７－ＶＬ（配列番号８４）からなる群から選択される軽鎖可変領域に含まれるＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、および／またはＬＦＲ４配列を含む、ヒト化抗ＳＩＲＰαおよびその抗原結合性断片をも提供する。
[00150]ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるヒト化抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片は、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、および配列番号６８からなる群から選択される重鎖可変ドメイン配列、ならびに／または配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、および配列番号８４からなる群から選択される軽鎖可変ドメイン配列を含む。
[00151]本開示は、
１）ｈｕ０３５．０１－ＶＨ（配列番号６４）の重鎖可変領域およびｈｕ０３５．０１－ＶＬ（配列番号７８）の軽鎖可変領域を含む「ｈｕ０３５．０１」、
２）ｈｕ０３５．０２－ＶＨ（配列番号６５）の重鎖可変領域およびｈｕ０３５．０２－ＶＬ（配列番号７９）の軽鎖可変領域を含む「ｈｕ０３５．０２」、
３）ｈｕ０３５．０３－ＶＨ（配列番号６５）の重鎖可変領域およびｈｕ０３５．０３－ＶＬ（配列番号８０）の軽鎖可変領域を含む「ｈｕ０３５．０３」、
４）ｈｕ０３５．０９－ＶＨ（配列番号６６）の重鎖可変領域およびｈｕ０３５．０９－ＶＬ（配列番号８１）の軽鎖可変領域を含む「ｈｕ０３５．０９」、
５）ｈｕ０３５．１０－ＶＨ（配列番号６５）の重鎖可変領域およびｈｕ０３５．１０－ＶＬ（配列番号８２）の軽鎖可変領域を含む「ｈｕ０３５．１０」、
６）ｈｕ０３５．１３－ＶＨ（配列番号６７）の重鎖可変領域およびｈｕ０３５．１３－ＶＬ（配列番号８３）の軽鎖可変領域を含む「ｈｕ０３５．１３」、
７）ｈｕ０３５．１４－ＶＨ（配列番号６８）の重鎖可変領域およびｈｕ０３５．１４－ＶＬ（配列番号８２）の軽鎖可変領域を含む「ｈｕ０３５．１４」、
８）ｈｕ０３５．１７－ＶＨ（配列番号６５）の重鎖可変領域およびｈｕ０３５．１７－ＶＬ（配列番号８４）の軽鎖可変領域を含む「ｈｕ０３５．１７」、
を含む０３５の例示的なヒト化抗体をも提供する。
[00152]これらの例示的なヒト化抗ＳＩＲＰα抗体はＳＩＲＰαに対する特異的な結合能力または親和性を保持しており、その観点において親のマウス抗体０３５と少なくとも同程度またはそれより優れていた。たとえば、データは、実施例５に提供される。
[00153]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体および抗原結合性断片は、重鎖可変ドメインの全てもしくは一部、および／または軽鎖可変ドメインの全てもしくは一部を含む。一実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、本明細書で提供される重鎖可変ドメインの全てまたは一部からなる単鎖ドメイン抗体である。そのような単鎖ドメイン抗体のさらなる情報は当技術分野で利用可能である（たとえば米国特許第６，２４８，５１６号を参照されたい）。
[00154]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、免疫グロブリン（Ｉｇ）の定常領域をさらに含み、これは任意選択で重鎖および／または軽鎖の定常領域をさらに含む。ある特定の実施形態では、重鎖定常領域はＣＨ１、ヒンジ、および／またはＣＨ２－ＣＨ３領域（または任意選択でＣＨ２－ＣＨ３－ＣＨ４領域）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４の重鎖定常領域を含む。ある特定の実施形態では、軽鎖定常領域はＣκまたはＣλを含む。本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片の定常領域は、野生型の定常領域の配列と同一であってもよく、１つまたは複数の変異において異なってもよい。
[00155]ある特定の実施形態では、重鎖定常領域はＦｃ領域を含む。Ｆｃ領域は、抗体依存性細胞性細胞毒性（ＡＤＣＣ）および抗体の補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）等のエフェクター機能を媒介することが知られている。異なるＩｇアイソタイプのＦｃ領域はエフェクター機能を誘導する異なる能力を有する。たとえば、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３のＦｃ領域は、ＩｇＧ２およびＩｇＧ４のＦｃ領域より効果的にＡＤＣＣとＣＤＣの両方を誘導することが認識されている。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体およびその抗原結合性断片は、ＡＤＣＣまたはＣＤＣを誘導することができるＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプのＦｃ領域を含み、あるいはエフェクター機能が低減しまたは枯渇したＩｇＧ４もしくはＩｇＧ２アイソタイプの定常領域を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、野生型ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域または他の野生型ヒトＩｇＧ４対立遺伝子を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、Ｓ２２８Ｐの変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、Ｌ２３５Ｅの変異を含むヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む。
[00156]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、診断用および／または治療用に提供するために十分なＳＩＲＰαに対する特異的結合親和性を有する。
[00157]本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、組換え抗体、二重特異的抗体、多重特異的抗体、標識抗体、二価抗体、抗イディオタイプ抗体、または融合タンパク質であってよい。組換え抗体は、動物体内でなくｉｎ ｖｉｔｒｏで組換え法を用いて調製された抗体である。
[00158]ある特定の実施形態では、本開示は、ＳＩＲＰαとの結合について本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片と競合する、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰαとの結合について配列番号７０の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８６の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰαとの結合について配列番号７２の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８８の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰαとの結合について、配列番号６２の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７６の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合するか、またはヒトＳＩＲＰαとの結合について、配列番号６９の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８５の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片を提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰαとの結合について、配列番号７１の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８７の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
[00159]ある特定の実施形態では、本開示は、ヒトＳＩＲＰαとの結合について、ａ）配列番号５９の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７３の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体、ｂ）配列番号６１の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７５の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体、ｃ）配列番号６０の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７４の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体、ｄ）配列番号６３の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７７の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体からなる群から選択される抗体と競合する、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片であって、ＫＷＡＲ２３、ＨＥＦＬＢ、２９－ＡＭ４－５、ＡＬＸ Ｈ２１、および３Ｆ９－２２のうちのいずれでもない、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片を提供する。
[00160]本明細書で用いる「ＫＷＡＲ２３」は、配列番号１１１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１１４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む抗体またはその抗原結合性断片を意味する。
[00161]本明細書で用いる「ＨＥＦＬＢ」は、配列番号１１２のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む抗体またはその抗原結合性断片を意味する。
[00162]本明細書で用いる「２９－ＡＭ４－５」は、配列番号１１０のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１１３のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む抗体またはその抗原結合性断片を意味する。
[00163]本明細書で使用される「ＡＬＸ Ｈ２１」は、配列番号１１５のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１１７のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合性断片を指す。
[00164]本明細書で使用される「３Ｆ９－２２」は、配列番号１１６のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１１８のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合性断片を指す。
[00165]抗体バリアント
[00166]本明細書で提供される抗体およびその抗原結合性断片は、本明細書で提供される抗体配列の種々のバリアントをも包含する。
[00167]ある特定の実施形態では、抗体バリアントは、上の表１および表３で提供したＣＤＲ配列の１つもしくは複数、上の表２および表４で提供した重鎖可変領域もしくは軽鎖可変領域の非ＣＤＲ配列の１つもしくは複数、ならびに／または定常領域（たとえばＦｃ領域）における１つまたは複数の修飾または置換を含む。そのようなバリアントはＳＩＲＰαに対するそれらの親抗体の結合特異性を保持しているが、修飾または置換によって与えられる１つまたは複数の望ましい特性を有する。たとえば、抗体バリアントは、改善された抗原結合親和性、改善されたグリコシル化パターン、低減されたグリコシル化のリスク、低減された脱アミノ化、低減されまたは枯渇したエフェクター機能、改善されたＦｃＲｎ受容体結合、増大した薬物動態学的半減期、ｐＨ感受性、および／またはコンジュゲート化に対する適合性（たとえば導入された１つまたは複数のシステイン残基）を有し得る。
[00168]当技術分野で既知の方法、たとえば「アラニンスキャニング変異生成」を用いて親抗体配列をスクリーニングして、修飾しまたは置換するために好適なまたは好ましい残基を同定してよい（たとえばCunningham and Wells (1989) Science，244:1081-1085を参照されたい）。簡単には、標的の残基（たとえばＡｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、およびＧｌｕ等の荷電残基）を同定し、中性または陰荷電のアミノ酸（たとえばアラニンまたはポリアラニン）で置き換えることができ、修飾された抗体を産生して目的の特性についてスクリーニングする。特定のアミノ酸の位置における置換によって目的の機能の変化が実証されれば、その位置を修飾または置換のための可能性のある残基として同定することができる。可能性のある残基は、異なる種類の残基（たとえばシステイン残基、陽荷電残基等）で置換することによってさらに評価してよい。
[00169]親和性バリアント
[00170]抗体の親和性バリアントは、上の表１および表３で提供した１つもしくは複数のＣＤＲ配列、上の表５で提供した１つもしくは複数のＦＲ配列、または上の表２および表４で提供した重鎖または軽鎖の可変領域配列における修飾または置換を含んでよい。ＣＤＲ領域は可変領域において２つのＦＲ領域に隣接していることが当技術分野で公知であるので、ＦＲ配列は、上の表１および表３におけるＣＤＲ配列および上の表２および表４における可変領域配列に基づいて当業者によって容易に同定することができる。親和性バリアントはＳＩＲＰαに対する親抗体の特異的結合親和性を保持し、または親抗体よりも改善されたＳＩＲＰα特異的結合親和性さえも有する。ある特定の実施形態では、ＣＤＲ配列、ＦＲ配列、または可変領域配列における置換の少なくとも１つ（または全て）は、保存的置換を含む。
[00171]当業者であれば、上の表１および表３で提供したＣＤＲ配列、ならびに上の表２および表４で提供した可変領域配列において、１つまたは複数のアミノ酸残基が置換され、しかも得られる抗体もしくは抗原結合性断片がまだＳＩＲＰαに対する結合親和性もしくは結合容量を保持し、または改善された結合親和性もしくは容量さえも有することが理解される。この目的を達成するために、当技術分野で既知の種々の方法を用いることができる。たとえば、ファージディスプレイ技術を用いて抗体バリアント（ＦａｂまたはｓｃＦｖバリアント等）のライブラリーを生成して発現させ、次いでヒトＳＩＲＰαへの結合親和性についてスクリーニングすることができる。別の例として、コンピューターソフトウェアを用いて抗体のヒトＳＩＲＰαへの結合を仮想的に模擬し、結合界面を形成する抗体上のアミノ酸残基を同定することができる。そのような残基は、結合親和性の低減を防止するために置換において避けるか、またはより強い結合を提供するために置換の標的としてもよい。
[00172]ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるヒト化抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＤＲ配列の１つもしくは複数において、および／またはＦＲ配列の１つもしくは複数において、１つまたは複数のアミノ酸残基の置換を含む。ある特定の実施形態では、親和性バリアントは、ＣＤＲ配列中および／またはＦＲ配列中、合計で２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１以下の置換を含む。
[00173]ある特定の実施形態では、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、上の表１および表３に列挙したＣＤＲと少なくとも８０％（たとえば少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１つ、２つ、または３つのＣＤＲ配列を含み、しかもその親抗体と同様またはそれより高いレベルでさえＳＩＲＰαに対する特異的結合親和性を保持している。
[00174]ある特定の実施形態では、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、上の表２および表４に列挙した可変領域配列と少なくとも８０％（たとえば少なくとも８５％、８８％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％）の配列同一性を有する１つまたは複数の可変領域配列を含み、しかもその親抗体と同様またはそれより高いレベルでさえＳＩＲＰαに対する特異的結合親和性を保持している。一部の実施形態では、上の表２および表４に列挙した可変領域配列において全部で１～１０個のアミノ酸が置換され、挿入され、または欠失している。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外（たとえばＦＲの中）の領域で起こる。
[00175]グリコシル化バリアント
[00176]本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、抗体またはその抗原結合性断片のグリコシル化の程度を増加しまたは減少することによって得られるグリコシル化バリアントをも包含する。
[00177]抗体またはその抗原結合性断片は、グリコシル化部位を導入しまたは除去する１つまたは複数の修飾を含んでよい。グリコシル化部位は、炭水化物部分（たとえばオリゴ糖構造）を結合することができる側鎖を有するアミノ酸残基である。抗体のグリコシル化は、典型的にはＮ連結またはＯ連結である。Ｎ連結は、アスパラギン残基、たとえばアスパラギン－Ｘ－セリンおよびアスパラギン－Ｘ－スレオニン等のトリペプチド配列においてＸがプロリンを除く任意のアミノ酸である、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を意味する。Ｏ連結グリコシル化は、糖、Ｎ－アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの１つの、ヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリンまたはスレオニンへの結合を意味する。天然のグリコシル化部位の除去は、たとえば配列中に存在する上記のトリペプチド配列（Ｎ連結グリコシル化部位について）またはセリンもしくはスレオニン残基（Ｏ連結グリコシル化部位について）の１つが置換されるようにアミノ酸配列を改変することによって、便利に達成することができる。そのようなトリペプチド配列またはセリンもしくはスレオニン残基を導入することによって、新たなグリコシル化部位を同様に創出することができる。
[00178]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体および抗原結合性断片は、グリコシル化部位を除去するためにＮ２９７における変異（たとえば、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、またはＮ２９７Ｇ）を含む。
[00179]システイン操作されたバリアント
[00180]本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、導入された１つまたは複数の遊離のシステインアミノ酸残基を含む、システイン操作されたバリアントをも包含する。
[00181]遊離のシステイン残基は、ジスルフィド架橋の部分ではない残基である。システイン操作されたバリアントは、操作されたシステインの部位で、たとえばマレイミドまたはハロアセチルによって、たとえば細胞毒性および／またはイメージング化合物、標識、またはとりわけ放射性同位体とコンジュゲートするために有用である。抗体またはその抗原結合性断片を操作して遊離のシステイン残基を導入する方法は当技術分野で既知であり、たとえばＷＯ２００６／０３４４８８を参照されたい。
[00182]Ｆｃバリアント
[00183]本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、たとえばＡＤＣＣおよびＣＤＣ等の改変されたエフェクター機能を提供するために、Ｆｃ領域および／またはヒンジ領域に１つまたは複数のアミノ酸残基の修飾または置換を含むＦｃバリアントをも包含する。抗体操作によってＡＤＣＣ活性を改変する方法は当技術分野において記載されており、たとえばＳｈｉｅｌｄｓ ＲＬ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００１．２７６（９）：６５９１－６０４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ＥＥ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０００．１６４（８）：４１７８－８４；Ｓｔｅｕｒｅｒ Ｗ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５，１５５（３）：１１６５－ ７４；Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ＥＥ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００１，１６６（４）：２５７１－５；Ｌａｚａｒ ＧＡ．ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ，２００６，１０３（１１）：４００５－４０１０；Ｒｙａｎ ＭＣ．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．，２００７，６：３００９－３０１８；Ｒｉｃｈａｒｄｓ ＪＯ，．ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ．２００８，７（８）：２５１７－２７；Ｓｈｉｅｌｄｓ Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２００２，２７７：２６７３３－２６７４０；Ｓｈｉｎｋａｗａ Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ，２００３，２７８：３４６６－３４７３を参照されたい。
[00184]本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片のＣＤＣ活性は、たとえばＣ１ｑ結合および／またはＣＤＣを改善しまたは減退させることによって改変することもできる（たとえばＷＯ９９／５１６４２；Ｄｕｎｃａｎ ＆ Ｗｉｎｔｅｒ Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号;米国特許第５，６２４，８２１号;ならびにＦｃ領域バリアントの他の例に関してはＷＯ９４／２９３５１を参照されたい）。Ｆｃ領域のアミノ酸残基３２９、３３１、および３２２から選択される１つまたは複数のアミノ酸を異なるアミノ酸残基で置き換えて、Ｃ１ｑの結合および／または低減されもしくは消失された補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）を改変することができる（たとえばＩｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号を参照されたい）。１つまたは複数のアミノ酸置換を導入して、抗体の補体を固定する能力を改変することもできる（ＢｏｄｍｅｒらによるＰＣＴ公開ＷＯ ９４／２９３５１を参照されたい）。
[00185]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は低減したエフェクター機能を有し、ＩｇＧ１において２３４、２３５、２３７、および２３８、２６８、２９７、３０９、３３０、および３３１からなる群から選択される位置に１つまたは複数のアミノ酸置換を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片はＩｇＧ１アイソタイプのものであり、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ｅ、Ｐ３３１Ｓからなる群から選択される１つもしくは複数のアミノ酸の置換、またはそれらの任意の組合せを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片はＩｇＧ２アイソタイプのものであり、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ３０９Ｌ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ、Ｖ２３４Ａ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸の置換、またはそれらの任意の組合せ（たとえばＨ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｐ２３８Ｓ／Ｈ２６８Ａ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ｐ３３１Ｓ）を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片はＩｇＧ４アイソタイプのものであり、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ｇ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａからなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸の置換、またはそれらの任意の組合せを含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片はＩｇＧ２／ＩｇＧ４交差アイソタイプのものである。ＩｇＧ２／ＩｇＧ４交差アイソタイプの例はＲｏｔｈｅｒ ＲＰ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２５：１２５６－１２６４（２００７）に記載されている。
[00186]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体および抗原結合性断片はＩｇＧ４アイソタイプのものであり、２２８および２３５の１つまたは複数の点に１つまたは複数のアミノ酸の置換を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体および抗原結合性断片は、ＩｇＧ４アイソタイプのものであり、Ｆｃ領域にＳ２２８Ｐの変異を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体および抗原結合性断片は、ＩｇＧ４アイソタイプのものであり、Ｆｃ領域にＬ２３５Ｅの変異を含む。
[00187]ある特定の実施形態では、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）へのｐＨ依存性結合を改善する１つまたは複数のアミノ酸の置換を含む。そのようなバリアントは酸性ｐＨでＦｃＲｎに結合してこれをリソソーム内での分解から逃れさせ、次いで転座して細胞外に放出されることを可能にするので、延長された薬物動態学的半減期を有することができる。抗体またはその抗原結合性断片を操作してＦｃＲｎとの結合親和性を改善する方法は当技術分野で公知であり、たとえばＶａｕｇｈｎ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，６（１）：６３－７３，１９９８；Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅ １，Ｃｈａｐｔｅｒ ２７：Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｃ ｒｅｇｉｏｎ ｆｏｒ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ＰＫ，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，２０１０；Ｙｅｕｎｇ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７０：３２６９－３２７７（２０１０）；ａｎｄ Ｈｉｎｔｏｎ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１７６：３４６－３５６（２００６）を参照されたい。
[00188]ある特定の実施形態では、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、Ｆｃ領域の界面においてヘテロ二量化を容易にしおよび／または促進する１つまたは複数のアミノ酸の置換を含む。これらの修飾は、第１のＦｃポリペプチドへの突出部の導入および第２のＦｃポリペプチドへの空洞の導入を含み、突出部が空洞の中に位置して第１および第２のＦｃポリペプチドの相互作用が促進され、ヘテロ二量体または複合体が形成される。これらの修飾を有する抗体を生成する方法は、たとえば米国特許第５，７３１，１６８号に記載されているように当技術分野で既知である。
[00189]抗原結合性断片
[00190]抗ＳＩＲＰα抗原結合性断片も、本明細書で提供される。種々の型の抗原結合性断片が当技術分野で既知であり、たとえばそのＣＤＲが上の表１および表３に示され、可変配列が上の表２および表４に示される、例示的な抗体ならびにその種々のバリアント（親和性バリアント、グリコシル化バリアント、Ｆｃバリアント、システイン操作されたバリアント、その他）を含む本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体に基づいて開発することができる。
[00191]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗原結合性断片は、ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異的ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖダイマー（二価ダイアボディ）、多重特異的抗体、ラクダ化単鎖ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、および二価ドメイン抗体である。
[00192]そのような抗原結合性断片の産生のために種々の手法を用いることができる。実例的な方法には、インタクトな抗体の酵素消化（たとえばＭｏｒｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４：１０７－１１７（１９９２）；およびＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）を参照されたい）、E.coli等の宿主細胞による組換え発現（たとえばＦａｂ、Ｆｖ、およびＳｃＦｖ抗体断片のため）、上で論じたファージディスプレイライブラリーからのスクリーニング（たとえばＳｃＦｖのため）、およびＦ（ａｂ’）２断片を形成するための２つのＦａｂ’－ＳＨ断片の化学的カップリング（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３－１６７（１９９２））が含まれる。抗体断片の産生のためのその他の手法は、当業者には明らかになる。
[00193]ある特定の実施形態では、抗原結合性断片はｓｃＦｖである。ｓｃＦｖの生成は、たとえばＷＯ ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号および第５，５８７，４５８号に記載されている。ＳｃＦｖはアミノまたはカルボキシル末端でエフェクタータンパク質と融合して、融合タンパク質を提供することができる（たとえばＡｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編を参照されたい）。
[00194]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、二価、四価、六価、または多価である。二価を超えるいずれの分子も多価と考えられ、たとえば三価、四価、六価等を包含する。
[00195]二価分子は、２つの結合部位がいずれも同じ抗原または同じエピトープへの結合について特異的であれば、単一特異的である。これは、ある特定の実施形態では、抗原またはエピトープに対して一価の対応物よりも強い結合を提供する。同様に、多価分子も単一特異的であり得る。ある特定の実施形態では、二価または多価の抗原結合性部分において、結合部位の第１の価および結合部位の第２の価は構造的に同一である（即ち、同じ配列を有する）か、または構造的に異なる（即ち、同じ特異性であるが異なる配列を有する）。
[00196]二価も、２つの結合部位が異なる抗原またはエピトープに特異的であれば、二重特異的であり得る。これは多価分子にもあてはまる。たとえば、三価分子は、２つの結合部位が第１の抗原（またはエピトープ）に対して単一特異的で、第３の結合部位が第２の抗原（またはエピトープ）に対して特異的であれば、二重特異的であり得る。
[00197]二重特異的抗体
[00198]ある特定の実施形態では、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、二重特異的である。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、前記ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片とは異なる結合特異性を有する第２の機能性部分にさらに連結されている。
[00199]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される二重特異的抗体またはその抗原結合性断片は、ＳＩＲＰα以外の第２の抗原、またはＳＩＲＰαの上の第２のエピトープに特異的に結合することができる。ある特定の実施形態では、第２の抗原は、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＧＰＣ－３、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＴＲＯＰ２、ＣＬＤＮ１８．２、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＰＴＨＲ２、およびＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ３）からなる群から選択される。
[00200]コンジュゲート
[00201]一部の実施形態では、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、１つまたは複数のコンジュゲート部分をさらに含む。コンジュゲート部分は、抗体またはその抗原結合性断片に連結することができる。コンジュゲート部分は、抗体またはその抗原結合性断片に結合することができる部分である。種々のコンジュゲート部分が本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片に連結され得ることが意図されている（たとえば「Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ」，Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ ｔｏ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｍ．Ｃｒｕｓｅ ａｎｄ Ｒ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ．（ｅｄｓ．），Ｃａｒｇｅｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９８９）を参照されたい）。これらのコンジュゲート部分は、とりわけ共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合、複合体化、会合、ブレンド、または付加によって、抗体またはその抗原結合性断片に連結され得る。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、リンカーを介して１つまたは複数のコンジュゲートに連結することができる。
[00202]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、エピトープ結合部分の外に、１つまたは複数のコンジュゲート部分への結合に利用できる特定の部位を含むように操作してよい。たとえば、そのような部位は、コンジュゲート部分への共有結合リンケージを容易にする１つまたは複数の反応性アミノ酸残基、たとえばシステインまたはヒスチジン残基を含んでよい。
[00203]ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、コンジュゲート部分に間接的に、または別のコンジュゲート部分を通して連結されてもよい。たとえば、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片をビオチンにコンジュゲートさせ、次いでアビジンにコンジュゲートした第２のコンジュゲートに間接的にコンジュゲートしてよい。一部の実施形態では、コンジュゲート部分は、クリアランス修飾剤（たとえば半減期を延長させるＰＥＧ等のポリマー）、化学療法剤、毒素、放射性同位体、ランタニド、検出可能な標識（たとえば発光標識、蛍光標識、酵素基質標識）、ＤＮＡアルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チューブリンバインダー、精製部分、またはその他の抗がん薬物を含む。
[00204]「毒素」は、細胞に有害なまたは細胞に損傷を与えもしくはこれを殺す任意の薬剤であり得る。毒素の例には、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロミド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ＭＭＡＥ、ＭＭＡＦ、ＤＭ１、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアンスラシンジオン、ミトキサントロン、ミスラマイシン、アクチノマイシンＤ、１－デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、プロマイシンおよびそのアナログ、抗代謝物（たとえばメトトレキサート、６－メルカプトプリン、６－チオグアニン、シタラビン、５－フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（たとえばメクロレタミン、チオエパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびｃｉｓ－ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン、アンスラサイクリン類（たとえばダウノルビシン（以前はダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生剤（たとえばダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミスラマイシンおよびアンスラマイシン（ＡＭＣ））、抗有糸分裂剤（たとえばビンクリスチンおよびビンブラスチン）、トポイソメラーゼ阻害剤、ならびにチューブリンバインダーが限定なく含まれる。
[00205]検出可能な標識の例には、蛍光標識（たとえばフルオレセイン、ローダミン、ダンシル、フィコエリスリン、またはテキサスレッド）、酵素基質標識（たとえばセイヨウワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ルセリフェラーゼ類、グルコアミラーゼ、リゾチーム、サッカライドオキシダーゼ類、またはβ－Ｄ－ガラクトシダーゼ）、放射性同位体（たとえば１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓ、３Ｈ、１１１Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１４Ｃ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、８６Ｙ、８８Ｙ、９０Ｙ、１７７Ｌｕ、２１１Ａｔ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、および３２Ｐ、その他のランタニド）、発光標識、色素体部分、ジゴキシゲニン、ビオチン／アビジン、ＤＮＡ分子、または検出用の金が含まれてよい。
[00206]ある特定の実施形態では、コンジュゲート部分は、抗体の半減期を延長することを補助するクリアランス修飾剤であり得る。説明的な例には、水溶性ポリマー、たとえばＰＥＧ、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、その他が含まれる。ポリマーは任意の分子量のものであってよく、分枝しても分枝しなくてもよい。抗体に結合されるポリマーの数は変動し、２つ以上のポリマーが結合される場合にはこれらは同じ分子または異なる分子であり得る。
[00207]ある特定の実施形態では、コンジュゲート部分は磁気ビーズ等の精製部分であり得る。
[00208]ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、コンジュゲートのための基礎として用いられる。
[00209]ポリヌクレオチドおよび組換え方法
[00210]本開示は、本明細書で提供される抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。本明細書で用いる用語「核酸」または「ポリヌクレオチド」は、一本鎖または二本鎖の形態のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）およびそのポリマーを意味する。他に指示しなければ、特定のポリヌクレオチド配列は、その保存的に修飾されたバリアント（たとえば縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、ＳＮＰ、および相補的配列をも黙示的に包含し、ならびに明白に示された配列を包含する。具体的には、縮重コドン置換は、その中の１つまたは複数の選択された（または全ての）コドンの第３の位置が混合された塩基および／またはデオキシイノシン残基で置換された配列を生成することによって達成され得る（Ｂａｔｚｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｒｅｓ．１９：５０８１（１９９１）；Ｏｈｔｓｕｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：２６０５－２６０８（１９８５）；およびＲｏｓｓｏｌｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｒｏｂｅｓ ８：９１－９８（１９９４）を参照されたい）。
[00211]モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて（たとえば抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いることによって）容易に単離され、シーケンシングされる。コードするＤＮＡは、合成法によって得てもよい。
[00212]抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離されたポリヌクレオチドは、当技術分野で既知の組換え手法を用いて、さらなるクローニング（ＤＮＡの増幅）または発現のためにベクターに挿入することができる。多くのベクターが利用可能である。ベクター成分には一般に、それだけに限らないが、以下の１つまたは複数が含まれる。シグナル配列、複製の起源、１つまたは複数のマーカー遺伝子、エンハンサー要素、プロモーター（たとえばＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ－１α）、および転写終止配列。
[00213]本開示は、本明細書で提供される単離されたポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるポリヌクレオチドは、抗体またはその抗原結合性断片、核酸配列に作動可能に連結された少なくとも１つのプロモーター（たとえばＳＶ４０、ＣＭＶ、ＥＦ－１α）、および少なくとも１つの選択マーカーをコードする。ベクターの例には、それだけに限らないが、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（たとえばヘルペスシンプレックスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、パポバウイルス（たとえばＳＶ４０）、ラムダファージ、およびＭ１３ファージ、プラスミドｐｃＤＮＡ３．３、ｐＭＤ１８－Ｔ、ｐＯｐｔｉｖｅｃ、ｐＣＭＶ、ｐＥＧＦＰ、ｐＩＲＥＳ、ｐＱＤ－Ｈｙｇ－ＧＳｅｕ、ｐＡＬＴＥＲ、ｐＢＡＤ、ｐｃＤＮＡ、ｐＣａｌ、ｐＬ、ｐＥＴ、ｐＧＥＭＥＸ、ｐＧＥＸ、ｐＣＩ、ｐＥＧＦＴ、ｐＳＶ２、ｐＦＵＳＥ、ｐＶＩＴＲＯ、ｐＶＩＶＯ、ｐＭＡＬ、ｐＭＯＮＯ、ｐＳＥＬＥＣＴ、ｐＵＮＯ、ｐＤＵＯ、Ｐｓｇ５Ｌ、ｐＢＡＢＥ、ｐＷＰＸＬ、ｐＢＩ、ｐ１５ＴＶ－Ｌ、ｐＰｒｏ１８、ｐＴＤ、ｐＲＳ１０、ｐＬｅｘＡ、ｐＡＣＴ２．２、ｐＣＭＶ－ＳＣＲＩＰＴ．ＲＴＭ．、ｐＣＤＭ８、ｐＣＤＮＡ１．１／ａｍｐ、ｐｃＤＮＡ３．１、ｐＲｃ／ＲＳＶ、ＰＣＲ２．１、ｐＥＦ－１、ｐＦＢ、ｐＳＧ５、ｐＸＴ１、ｐＣＤＥＦ３、ｐＳＶＳＰＯＲＴ、ｐＥＦ－Ｂｏｓ等が含まれる。
[00214]抗体またはその抗原結合性断片をコードするポリヌクレオチド配列を含むベクターを、クローニングまたは遺伝子発現のために宿主細胞に導入することができる。本明細書におけるベクター中でのクローニングまたはＤＮＡ発現に適した宿主細胞は、原核細胞、酵母、または上述の高等な真核細胞である。この目的に適した原核細胞には、グラム陰性またはグラム陽性の生命体等の真正細菌、たとえばエシェリキア属、たとえば大腸菌等の腸内細菌科、エンテロバクター属、エルウィニア属、クレブシエラ属、プロテウス属、サルモネラ属、たとえばＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、セラチア属、たとえばＳｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ、およびシゲラ属、ならびにＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓおよびＢ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ等のバチルス属、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ等のシュードモナス属、ならびにストレプトミセス属が含まれる。
[00215]原核細胞に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物は、抗ＳＩＲＰα抗体コーディングベクターのための好適なクローニングまたは発現用の宿主である。低級真核宿主微生物の中で、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅまたは一般的な製パン用酵母が最も一般に使用されている。しかし、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、たとえばＫ．ｌａｃｔｉｓ、Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ（ＡＴＣＣ １２，４２４）、Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（ＡＴＣＣ １６，０４５）、Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ（ＡＴＣＣ ２４，１７８）、Ｋ．ｗａｌｔｉｉ（ＡＴＣＣ ５６，５００）、Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ（ＡＴＣＣ ３６，９０６）、Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ、およびＫ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ等のクルイベロミセス宿主、ヤロウィア（ＥＰ ４０２，２２６）、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ（ＥＰ １８３，０７０）、カンジダ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｉａ（ＥＰ ２４４，２３４）、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ、Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ等のシュワニオミセス、およびたとえばＮｅｕｒｏｓｐｏｒａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ等の糸状菌、ならびにＡ．ｎｉｄｕｌａｎｓおよびＡ．ｎｉｇｅｒ等のアスペルギルス属の宿主等の他の多数の属、種、および株が一般に利用可能であり、本明細書で有用である。
[00216]本明細書で提供されるグリコシル化抗体またはその抗原結合性断片の発現のために好適な宿主細胞は、多細胞生命体に由来する。無脊椎動物の細胞の例には、植物および昆虫の細胞が含まれる。多数のバキュロウイルス株およびバリアント、ならびにＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（毛虫）、Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ（蚊）、Ａｅｄｅｓ ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ（蚊）、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ（ミバエ）、およびＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ等の宿主からの対応する許容される昆虫宿主細胞が同定されている。トランスフェクションのための種々のウイルス株、たとえばＡｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ＮＰＶのＬ－１バリアントおよびＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ ＮＰＶのＢｍ－５株は公に利用可能であり、そのようなウイルスは本発明に従って本明細書のウイルスとして、特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために用いてよい。木綿、トウモロコシ、ジャガイモ、大豆、ペチュニア、トマト、およびタバコの植物細胞培養も宿主として利用することができる。
[00217]しかし、関心は脊椎動物細胞において最大であり、培養における脊椎動物細胞の増殖（組織培養）が通常の手順になっている。有用な哺乳動物宿主細胞株の例には、ＳＶ４０でトランスフォームされたサル腎ＣＶ１株（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）、ヒト胚腎株（懸濁培養における増殖のためにサブクローニングした２９３または２９３細胞、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７））、ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）、チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））、マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０））、サル腎細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）、アフリカミドリザル腎細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）、ヒト子宮頚癌細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、イヌ腎細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）、バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）、マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）、ＴＲＩ細胞(Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）)、ＭＲＣ５細胞、ＦＳ４細胞、ならびにヒト肝細胞がん株（Ｈｅｐ Ｇ２）がある。一部の実施形態では、宿主細胞は、ＣＨＯ、ＢＨＫ、ＮＳ０、２９３等の哺乳動物培養細胞株、およびそれらの誘導体である。
[00218]宿主細胞は、抗ＳＩＲＰα抗体の産生のための上記の発現またはクローニング用のベクターによってトランスフォームされ、プロモーターの誘導、トランスフォーマントの選択、または所望の配列をコードする遺伝子の増幅のために適するように修飾された従来の栄養培地中で培養される。別の実施形態では、抗体は当技術分野で既知の相同組換えによって産生してよい。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片を産生することができる。
[00219]本開示はまた、本開示のベクターが発現される条件下で、本開示で提供される宿主細胞を培養するステップを含む、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片を発現する方法を提供する。本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片を産生するために用いる宿主細胞は、種々の培地中で培養してよい。ＨａｍのＦ１０（Ｓｉｇｍａ）、Ｍｉｎｉｍａｌ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ（ＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）、ＲＰＭＩ－１６４０（Ｓｉｇｍａ）、およびＤｕｌｂｅｃｃｏのＭｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）（Ｓｉｇｍａ）等の市販の培地は、宿主細胞を培養するために好適である。さらに、Ｈａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚ．５８：４４（１９７９）、Ｂａｒｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０２：２５５（１９８０）、米国特許第４，７６７，７０４号、第４，６５７，８６６号、第４，９２７，７６２号、第４，５６０，６５５号、もしくは第５，１２２，４６９号、ＷＯ ９０／０３４３０、ＷＯ ８７／００１９５、または米国特許Ｒｅ．３０，９８５に記載された培地のいずれも、宿主細胞の培養培地として用いてよい。これらの培地のいずれにも、ホルモンおよび／またはその他の成長因子（インスリン、トランスフェリン、または上皮細胞成長殖因子等）、塩（塩化ナトリウム、カルシウム、マグネシウム、およびリン酸塩）、緩衝剤（ＨＥＰＥＳ等）、ヌクレオチド（アデノシンおよびチミジン等）、抗生剤（ＧＥＮＴＡＭＹＣＩＮ（商標）薬物等）、微量元素（通常マイクロモル範囲の最終濃度で存在する無機化合物として定義される）、およびグルコースもしくは当量のエネルギー源を必要に応じて補ってよい。当業者に既知の他の任意の必要な補助物も、適切な濃度で含んでよい。温度、ｐＨ、その他の培養条件は、発現のために選択した宿主細胞とともに既に用いられたものであり、当業者には明白になる。
[00220]組換え手法を用いる場合には、抗体は細胞内で、細胞膜周辺腔で、産生され、または培地中に直接分泌することができる。抗体が細胞内で産生される場合には、第１のステップとして、宿主細胞または溶解した断片の粒子状のデブリは、たとえば遠心分離または限外濾過によって除去される。Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３－１６７（１９９２）は、大腸菌の細胞膜周辺腔に分泌される抗体を単離する手順を記載している。簡単には、酢酸ナトリウム（ｐＨ３．５）、ＥＤＴＡ、およびフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）の存在下に約３０分かけて細胞ペーストを解凍する。細胞デブリは遠心分離によって除去することができる。抗体が培地中に分泌される場合には、そのような発現システムからの上清を、一般に市販のタンパク質濃縮フィルター、たとえばＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅのＰｅｌｌｉｃｏｎ限外濾過ユニットを用いてまず濃縮する。タンパク質分解を阻害するためにＰＭＳＦ等のプロテアーゼ阻害剤を前記ステップのいずれにも含ませ、外来の夾雑物の増殖を防止するために抗生剤を含ませてよい。
[00221]細胞から調製した抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片は、たとえばヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、ＤＥＡＥセルロースイオン交換クロマトグラフィー、硫酸アンモニウム沈降、塩析、およびアフィニティクロマトグラフィーを用いて精製することができ、アフィニティクロマトグラフィーが好ましい精製手法である。
[00222]ある特定の実施形態では、固相に固定化されたプロテインＡが、抗体およびその抗原結合性断片の免疫アフィニティ精製のために用いられる。アフィニティリガンドとしてのプロテインＡの好適性は、抗体中に存在する任意の免疫グロブリンのＦｃドメインの種およびアイソタイプによる。プロテインＡは、ヒトガンマ１、ガンマ２、またはガンマ４の重鎖に基づく抗体を精製するために用いることができる（Ｌｉｎｄｍａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．６２：１－１３（１９８３））。全てのマウスアイソタイプおよびヒトガンマ３についてはプロテインＧが推奨される（Ｇｕｓｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．５：１５６７ １５７５（１９８６））。アフィニティリガンドが結合するマトリックスはアガロースであることが最も多いが、他のマトリックスも利用可能である。制御された細孔ガラスまたはポリ（スチレンジビニル）ベンゼン等の機械的に安定なマトリックスは、アガロースによって達成されるよりも速い流量および短い処理時間を可能にする。抗体がＣＨ３ドメインを含む場合には、Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ ＡＢＸ（商標）樹脂（Ｊ．Ｔ．Ｂａｋｅｒ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ，Ｎ．Ｊ．）が精製に有用である。イオン交換カラム上の分別、エタノール沈降、逆相ＨＰＬＣ、シリカ上のクロマトグラフィー、ヘパリンＳＥＰＨＡＲＯＳＥ（商標）上のクロマトグラフィー、アニオンまたはカチオン交換樹脂（ポリアスパラギン酸カラム等）上のクロマトグラフィー、クロマトフォーカシング、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、および硫酸アンモニウム沈降等のタンパク質精製のための他の手法も、回収すべき抗体に応じて利用可能である。
[00223]任意の予備的な精製ステップに続いて、目的の抗体および夾雑物を含む混合物を、約２．５～４．５のｐＨで溶出緩衝液を用い、好ましくは低い塩濃度（たとえば約０～０．２５Ｍの塩）で実施する低ｐＨ疎水性相互作用クロマトグラフィーに供してよい。
[00224]医薬組成物
[00225]本開示は、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片および１つもしくは複数の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物をさらに提供する。
[00226]本明細書で開示する医薬組成物における使用のための薬学的に許容される担体には、たとえば薬学的に許容される液体、ゲル、もしくは固体の担体、水性ビヒクル、非水性ビヒクル、抗微生物剤、等張剤、緩衝剤、抗酸化剤、麻酔剤、懸濁／分散剤、隔離剤もしくはキレート化剤、希釈剤、アジュバント、賦形剤、または非毒性補助物質、当技術分野で既知の他の成分、またはそれらの種々の組合せが含まれ得る。
[00227]好適な成分には、たとえば抗酸化剤、充填材、結合剤、崩壊剤、緩衝剤、保存剤、滑剤、香味剤、増粘剤、着色剤、乳化剤、または糖およびシクロデキストリン等の安定剤が含まれ得る。好適な抗酸化剤には、たとえばメチオニン、アスコルビン酸、ＥＤＴＡ、チオ硫酸ナトリウム、白金、カタラーゼ、クエン酸、システイン、チオグリセロール、チオグリコール酸、チオソルビトール、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、および／またはプロピルガレートが含まれ得る。本明細書で開示したように、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片およびコンジュゲートを含む組成物におけるメチオニン等の１つもしくは複数の抗酸化剤の含有により、抗体またはその抗原結合性断片の酸化が低減される。この酸化の低減によって結合親和性の喪失が防止されまたは低減され、それにより抗体の安定性が改善され、保存期間が最大化される。したがって、ある特定の実施形態では、本明細書で開示した１つもしくは複数の抗体またはその抗原結合性断片およびメチオニン等の１つもしくは複数の抗酸化剤を含む医薬組成物が提供される。抗体または抗原結合性断片をメチオニン等の１つもしくは複数の抗酸化剤と混合することによって、本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片の酸化を防止し、保存期間を延長し、および／または効率を改善する方法がさらに提供される。
[00228]さらに説明すると、薬学的に許容される担体には、たとえば注射用塩化ナトリウム、リンゲル注射液、等張デキストロース注射液、注射用滅菌水、もしくはデキストロースおよびラクテート化リンゲル注射液等の水性ビヒクル、植物由来の固定化油、綿実油、コーン油、ゴマ油、またはピーナツ油等の非水性ビヒクル、静細菌性または静真菌性の濃度の抗微生物剤、塩化ナトリウムもしくはデキストロース等の等張剤、リン酸塩もしくはクエン酸塩等の緩衝剤、重硫酸ナトリウム等の抗酸化剤、プロカイン塩酸塩等の局所麻酔剤、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、もしくはポリビニルピロリドン等の懸濁分散剤、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０（ＴＷＥＥＮ－８０）等の乳化剤、ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）もしくはＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）等の隔離剤もしくはキレート化剤、エチルアルコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、水酸化ナトリウム、塩酸、クエン酸、または乳酸が含まれ得る。多数回投与用容器中の医薬組成物には、フェノール類もしくはクレゾール類、水銀化合物、ベンジルアルコール、クロロブタノール、メチルおよびプロピルｐ－ヒドロキシ安息香酸エステル、チメロサール、塩化ベンザルコニウム、および塩化ベンゼトニウムを含む、担体として利用される抗微生物剤を添加してよい。好適な賦形剤には、たとえば水、食塩液、デキストロース、グリセロール、またはエタノールが含まれ得る。好適な非毒性補助物質には、たとえば湿潤もしくは乳化剤、ｐＨ緩衝剤、安定剤、溶解促進剤、または酢酸ナトリウム、ソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミンオレエート、もしくはシクロデキストリン等の薬剤が含まれ得る。
[00229]医薬組成物は、液体溶液、懸濁液、エマルジョン、ピル、カプセル、錠剤、持続放出製剤、または粉末であり得る。経口製剤には、医薬グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム等の標準的な担体が含まれ得る。
[00230]ある特定の実施形態では、医薬組成物は注射可能な組成物に製剤化される。注射可能な医薬組成物は、たとえば液体溶液、懸濁液、エマルジョン、を生成するために好適な液体溶液、懸濁液、エマルジョン、または固体形態等の任意の従来の形態で調製してよい。注射用の調製物には、即時注射可能な無菌かつ／または非発熱性の溶液、皮下注射用錠剤を含む使用直前に溶媒と即時混合できる凍結乾燥粉末等の無菌の乾燥した可溶性製品、即時注射可能な無菌の懸濁液、使用直前にビヒクルと即時混合できる無菌の乾燥した不溶性製品、ならびに無菌かつ／または非発熱性のエマルジョンが含まれ得る。溶液は水性または非水性であってよい。
[00231]ある特定の実施形態では、単位用量の調製物がアンプル、バイアル、または針付きシリンジの中に包装される。非経口投与のための全ての調製物は、当技術分野で知られており実践されているように、無菌かつ非発熱性であるべきである。
[00232]ある特定の実施形態では、無菌の凍結乾燥された粉末は、本明細書で開示した抗体または抗原結合性断片を好適な溶媒に溶解することによって調製される。溶媒は、粉末または粉末から調製される再構成された溶液の安定性またはその他の薬理学的要素を改善する賦形剤を含んでよい。用い得る賦形剤には、それだけに限らないが、水、デキストロース、ソルビタール、フルクトース、コーンシラップ、キシリトール、グリセリン、グルコース、スクロース、またはその他の好適な薬剤が含まれる。溶媒は、一実施形態ではほぼ中性のｐＨで、クエン酸塩、リン酸ナトリウムもしくはカリウム、またはその他の当業者には既知のそのような緩衝剤等の緩衝剤を含んでよい。引き続く溶液の無菌濾過およびそれに続く当業者には既知の標準的条件下における凍結乾燥によって、望ましい製剤が提供される。一実施形態では、得られる溶液は凍結乾燥のためのバイアルに分注される。各バイアルは、抗ＳＩＲＰα抗体もしくはその抗原結合性断片、またはその組成物の単一用量または多回用量を含み得る。用量または用量の組に必要な量より少量（たとえば約１０％）多くバイアルを過剰充填することは、正確な試料取り出しおよび正確な投与を容易にするために許容される。凍結乾燥された粉末は、約４℃～室温等の適切な条件下で保存することができる。
[00233]凍結乾燥された粉末を注射用水で再構成することによって、非経口投与における使用のための製剤が提供される。一実施形態では、再構成のために、無菌かつ／もしくは非発熱性の水またはその他の好適な液体担体を、凍結乾燥された粉末に添加する。正確な量は与えられる選択した療法に依存し、実験的に決定することができる。
[00234]キット
[00235]ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片を含むキットを提供する。ある特定の実施形態では、本開示は、本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片、ならびに第２の治療剤を含むキットを提供する。ある特定の実施形態では、第２の治療剤は、化学療法剤、抗がん薬物、放射線療法、免疫療法剤、抗血管形成剤、標的療法、細胞療法、遺伝子療法、ホルモン療法、抗ウイルス剤、抗生剤、鎮痛剤、抗酸化剤、金属キレート化剤、およびサイトカインからなる群から選択される。
[00236]そのようなキットは、当業者には容易に明白になるように、所望であればたとえば１つもしくは複数の薬学的に許容される担体を含む容器、追加の容器、その他の種々の従来の医薬キット成分の１つまた複数をさらに含み得る。投与すべき成分の量を示す、挿入物またはラベルとしての説明書、投与のためのガイドライン、および／または成分を混合するためのガイドラインも、キットに含ませることができる。
[00237]使用の方法
[00238]本開示は、治療有効量の本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片、および／または本明細書で提供される医薬組成物を対象に投与するステップを含む、対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を処置する方法をも提供する。ある特定の実施形態では、対象はヒトである。
[00239]一部の実施形態では、ＳＩＲＰα関連疾患、障害、または状態は、ＳＩＲＰαおよび／またはＳＩＲＰαシグネチャー遺伝子の発現または過剰発現を特徴とする。
[00240]ある特定の実施形態では、ＳＩＲＰα関連疾患、障害、または状態としては、がん、固形腫瘍、慢性感染症、炎症性疾患、多発性硬化症、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症性ショック、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、移植片機能不全、または関節炎が挙げられるが、これらに限定されない。
[00241]ある特定の実施形態では、がんは、ＳＩＲＰαを発現するがんである。ある特定の実施形態では、がんは、ＣＤ４７陽性がんである。ある特定の実施形態では、がんは肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、基底細胞癌、胆嚢がん、胃がん、肺がん、気管支がん、骨がん、肝胆管がん、膵がん、乳がん、肝がん、卵巣がん、精巣がん、腎がん、腎盂尿管がん、唾液腺がん、小腸がん、尿道がん、膀胱がん、頭頚部がん、脊椎がん、脳がん、頸がん、子宮がん、子宮内膜がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、食道がん、胃腸管がん、皮膚がん、前立腺がん、下垂体がん、膣がん、甲状腺がん、咽喉がん、膠芽細胞腫、黒色腫、骨髄異形成症候群、肉腫、奇形腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ＴまたはＢ細胞リンパ腫、ＧＩ器官間質腫、軟組織腫瘍、肝細胞癌、および腺癌からなる群から選択される。
[00242]一部の実施形態では、がんは、ＣＤ４７陽性がんである。一部の実施形態では、処置しようとする対象は、ＣＤ４７陽性がんを有すると同定されている。本明細書で使用される「ＣＤ４７陽性」がんは、がん細胞においてＣＤ４７タンパク質を発現すること、またはがん細胞において、正常細胞において予想されるよりも有意に高いレベルでＣＤ４７を発現することを特徴とするがんを指す。目的とされる生物学的試料におけるＣＤ４７の存在および／または量は、生物学的試料が由来する対象が、抗ＳＩＲＰα抗体に応答し得る可能性が高いかどうかを示し得る。様々な方法を使用して、対象から得られた試験生物学的試料におけるＣＤ４７の存在および／または量を決定することができる。たとえば、試験生物学的試料を、発現されるＣＤ４７タンパク質に結合しそれを検出する抗ＣＤ４７抗体またはその抗原結合性断片に曝露してもよい。あるいは、ＣＤ４７はまた、ｑＰＣＲ、逆転写酵素ＰＣＲ、マイクロアレイ、ＳＡＧＥ、ＦＩＳＨなどの方法を使用して、核酸発現レベルで検出することもできる。一部の実施形態では、試験試料は、がん細胞もしくは組織、または腫瘍浸潤性免疫細胞に由来する。ある特定の実施形態では、試験生物学的試料におけるＣＤ４７の存在または上方制御されたレベルは、応答性の尤度を示す。「上方制御された」という用語は、本明細書で使用される場合、同じ方法を使用して検出した参照試料におけるＣＤ４７の発現レベルと比較して、１０％以上、１５％以上、２０％以上、２５％以上、３０％以上、３５％以上、４０％以上、４５％以上、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上、７５％以上、８０％以上、またはそれ以上の、試験試料中のＣＤ４７の発現レベルにおける全体的な増加を指す。参照試料は、健常個体もしくは非罹患個体から得られた対照試料、または試験試料が得られた同じ個体から得られた健常試料もしくは非罹患試料であり得る。たとえば、参照試料は、試験試料（たとえば、腫瘍）に隣接したまたはその付近の非疾患試料であり得る。
[00243]別の態様では、治療有効量の本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片、および／または本明細書で提供される医薬組成物を、疾患、障害、または状態の処置を必要とする対象に投与するステップを含む、ＳＩＲＰαの活性を調節することによる恩恵を受ける対象における疾患、障害、または状態を処置する方法が提供される。ある特定の実施形態では、疾患または状態は、ＳＩＲＰαに関連する疾患、障害、または状態である。
[00244]本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片の治療有効量は、たとえば体重、年齢、過去の病歴、現在の投薬、対象の健康状態および交差反応の可能性、アレルギー、感受性、および有害な副反応、ならびに投与経路および疾患発生の程度等の当技術分野で既知の種々の因子に依存する。用量は、これらのおよびその他の状況または要求によって指示されるように、当事者（たとえば医師または獣医師）によって比例的に低減されまたは増加されてよい。
[00245]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体または抗原結合性断片は、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇの治療有効用量で投与してよい。ある特定の実施形態では、投与用量は処置の経過にわたって変化してよい。たとえばある特定の実施形態では、初期の投与用量は引き続く投与用量より高くてよい。ある特定の実施形態では、投与用量は対象の反応に応じて処置の経過にわたって変動してよい。
[00246]投薬レジメンは、最適の所望の応答（たとえば治療応答）が提供されるように調整してよい。たとえば、単一用量を投与してもよく、いくつかに分割した用量を経時的に投与してもよい。
[00247]本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、当技術分野で既知の任意の経路、たとえば非経口（たとえば皮下、腹腔内、静脈内注入を含む静脈内、筋肉内、または皮内注射）または非－非経口（たとえば経口、鼻内、眼内、舌下腺、直腸、または局所）経路によって投与してよい。
[00248]一部の実施形態では、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、単独で、または治療有効量の第２の治療剤と組み合わせて、投与してよい。たとえば、本明細書で開示する抗体またはその抗原結合性断片は、第２の治療剤、たとえば化学療法剤、抗がん薬、放射線療法剤、免疫療法剤、抗血管新生剤、標的療法剤、細胞療法剤、遺伝子療法剤、ホルモン療法剤、抗ウイルス剤、抗生剤、鎮痛剤、抗酸化剤、金属キレート剤、およびサイトカインと組み合わせて投与してよい。
[00249]本明細書で用いる用語「免疫療法」は、免疫系を刺激してがん等の疾患と闘わせるか、一般的な方法で免疫系を強化する療法の型を意味する。免疫療法の例には、チェックポイント調節剤、養子細胞移植、サイトカイン、腫瘍溶解性ウイルス、および治療用ワクチンが限定なく含まれる。
[00250]「標的療法」は、がんに関連する特定の分子、たとえばがん細胞には存在するが正常な細胞には存在しない、もしくはがん細胞でより豊富に存在する特定のタンパク質、またはがんの成長および生存に寄与するがん微小環境における標的分子に作用する療法の型である。標的療法は治療剤を腫瘍に標的させ、それにより正常組織を治療剤の影響から救う。
[00251]これらの実施形態のあるものでは、１つもしくは複数の追加の治療剤と組み合わせて投与される本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片は、その１つもしくは複数の追加の治療剤と同時に投与してよく、またこれらの実施形態のあるものでは、抗体もしくはその抗原結合性断片および追加の治療剤は、同じ医薬組成物の部分として投与してよい。しかし、別の治療剤と「組み合わせて」投与される抗体もしくはその抗原結合性断片は、その薬剤と同時にもしくは同じ組成物中で投与されなくてもよい。別の薬剤の前にもしくはその後に投与される抗体もしくはその抗原結合性断片は、その抗体もしくは抗原結合性断片および第２の薬剤が異なる経路を介して投与されたとしても、その語句が本明細書で使用されれば、その薬剤と「組み合わせて」投与されたと考えられる。可能な場合には、本明細書で開示した抗体もしくはその抗原結合性断片と組み合わせて投与された追加の治療剤は、その追加の治療剤の製品情報シートに列挙されたスケジュールに従って、またはＰｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ２００３（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，５７版；Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ Ｃｏｍｐａｎｙ；ＩＳＢＮ：１５６３６３４４５７；５７版（２００２年１１月）もしくは当技術分野で公知のプロトコルに従って、投与される。
[00252]別の態様では、本開示は、ＳＩＲＰα陽性細胞を本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片に曝露するステップを含む、ＳＩＲＰα陽性細胞におけるＳＩＲＰαの活性を調節する方法をさらに提供する。一部の実施形態では、ＳＩＲＰα陽性細胞はファゴサイトーシス細胞（たとえば、マクロファージ）である。
[00253]別の態様では、本開示は、試料を本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片と接触させるステップ、および試料中のＳＩＲＰαの存在または量を決定するステップを含む、試料中のＳＩＲＰαの存在または量を検出する方法を提供する。
[00254]別の態様では、本開示は、ａ）対象から得た試料を本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片と接触させるステップ、ｂ）試料中のＳＩＲＰαの存在または量を決定するステップ、およびｃ）ＳＩＲＰαの存在または量を対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、またはステータスの存在または状態と相関させるステップを含む、対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を診断する方法を提供する。
[00255]別の態様では、本開示は、ＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態の検出に有用な、任意選択で検出可能な部分とコンジュゲートした、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片を含むキットを提供する。キットは、使用説明書をさらに含んでよい。
[00256]別の態様では、本開示は、対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を処置し、防止し、または軽減するための医薬の製造における、およびＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を診断するための診断試薬の製造における、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片の使用をも提供する。
[00257]別の態様では、本開示は、本明細書で提供される抗体もしくはその抗原結合性断片および／または本明細書で提供される医薬組成物を、ファゴサイトーシスを誘導するのに有効な用量で対象に投与するステップを含む、対象においてファゴサイトーシスを誘導する方法を提供する。たとえば、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片は、ＣＤ４７を発現するがん細胞、炎症細胞、および／または慢性感染細胞のファゴサイトーシスを誘導するために投与され得る。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。一部の実施形態では、対象は、がん、固形腫瘍、慢性感染症、炎症性疾患、多発性硬化症、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症性ショック、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、移植片機能不全、および関節炎からなる群から選択される疾患、障害、または状態を有する。
[00258]別の態様では、本開示は、本明細書で提供される抗体またはその抗原結合性断片の存在下において、標的細胞を、ＳＩＲＰα陽性ファゴサイトーシス細胞試料と接触させて、それにより、ＳＩＲＰα陽性ファゴサイトーシス細胞による標的細胞のファゴサイトーシスを誘導するステップを含む、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてファゴサイトーシスを誘導する方法を提供する。一部の実施形態では、標的細胞は、ＣＤ４７発現細胞である。
[00259]以下の実施例は、特許請求する発明をより良く説明するために提供され、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。以下に記載する全ての特定の組成物、材料、および方法は全体としてまたは部分的に、本発明の範囲に含まれる。これらの特定の組成物、材料、および方法は本発明を限定することを意図しておらず、本発明の範囲に含まれる特定の実施形態を説明するのみである。当業者であれば、発明の能力を行使することなく、また本発明の範囲から逸脱せずに、等価の組成物、材料、および方法を開発することができる。本発明の境界内に留まりつつ、本明細書に記載した手順の中で多くの変形を行うことができることが理解されよう。そのような変形が本発明の範囲に含まれることは、本発明者らの意図である。
実施例１．試薬の生成
[00260]１．１．参照抗体の生成
[00261]抗ＳＩＲＰα参照抗体２９－ＡＭ４－５（ＵＳ２０１４０２４２０９５を参照されたい）、ＫＷＡＲ２３（ＵＳ２０１７００７３４１４Ａ１を参照されたい）、ＨＥＦＬＢ（ＷＯ２０１７１７８６５３Ａ２を参照されたい）、ＡＬＸ Ｈ２１（ＵＳ２０１８０１０５６００Ａ１を参照されたい）、または３Ｆ９－２２（ＵＳ２０１９０３５９７０７Ａ１を参照されたい）の可変領域をコードするＤＮＡ配列を、ヒトＩｇＧ定常領域を発現するベクターにクローニングした。参照抗体２９－ＡＭ４－５、ＫＷＡＲ２３、ＨＥＦＬＢ、ＡＬＸ Ｈ２１、および３Ｆ９－２２の可変領域アミノ酸配列を、以下の表６に示す。発現プラスミドをトランスフェクトしたＥｘｐｉ２９３細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、３７℃で１週間、培養した。次いで、培養培地を収集し、遠心分離して細胞ペレットを除去した。回収した上清をプロテインＡアフィニティクロマトグラフィー（ＭａｂｓｅｌｅｃｔＳｕｒｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で精製した。
[00262]
Figure 2022545300000011
[00263]１．２．ヒト、カニクイザル、マウスＳＩＲＰα安定発現細胞株の生成
[00264]全長ヒトＳＩＲＰα ｖ１（ＮＰ＿５４２９７０）、カニクイザルＳＩＲＰα（ＮＰ＿００１２７１６７９）、またはＣ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα（ＮＰ＿０３１５７３）をコードするＤＮＡ配列を、それぞれ、ｐＩＲＥＳベクター（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）にクローニングした。ヒトＳＩＲＰα ｖ１発現プラスミドをトランスフェクトした２９３Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、０．５μｇ／ｍｌのピューロマイシンを含有する培地において、２週間選択的に培養した。次いで、ヒトＳＩＲＰα ｖ１を安定に発現する単一細胞クローンを、限界希釈によって単離し、抗ヒトＳＩＲＰα抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、３２３８０２）を使用して、ＦＡＣＳによってスクリーニングした。
[00265]類似の方式で、ヒトＳＩＲＰα ｖ１、カニクイザルＳＩＲＰα、またはＣ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα発現プラスミドをトランスフェクトしたＣＨＯＫ１細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、６μｇ／ｍｌのピューロマイシンを含有する培地において、２週間選択的に培養した。次いで、ヒトＳＩＲＰα ｖ１、カニクイザルＳＩＲＰα、またはＣ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰαを安定に発現する単一細胞クローンを、限界希釈によって単離し、抗ヒトＳＩＲＰα（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、３２３８０２）または抗マウスＳＩＲＰα（Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ、５０９５６－Ｒ００１）抗体を使用して、ＦＡＣＳによってスクリーニングした。
[00266]１．３．組換えタンパク質の生成
[00267]ヒトＣＤ４７（ＮＰ＿００１７６８．１、Ｍ１－Ｅ１４１）、ヒトＳＩＲＰα ｖ１（ＮＰ＿５４２９７０、Ｍ１－Ｒ３７０）、ヒトＳＩＲＰα ｖ２（ＣＡＡ７１４０３．１、Ｍ１－Ｒ３６９）、ヒトＳＩＲＰβ（Ｏ００２４１、Ｍ１－Ｌ３７１）、またはヒトＳＩＲＰγ（Ｑ９Ｐ１Ｗ８、Ｍ１－Ｐ３６０）の細胞外ドメインをコードするＤＮＡ配列を、ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域（ｈＦｃ）を発現するｐＣＰＣベクター（Ｃｈｅｍｐａｒｔｎｅｒ）にクローニングした。組換えＥＣＤタンパク質を発現するプラスミドをトランスフェクトしたＥｘｐｉ２９３細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、３７℃で１週間、培養した。次いで、培養培地を収集し、遠心分離して細胞ペレットを除去した。回収した上清を、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーカラム（Ｍａｂｓｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して精製した。
[00268]組換えタンパク質６ｘＨｉｓタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤおよびヒトＳＩＲＰα ｖ８ ＥＣＤを、Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎから購入した。組換えタンパク質６ｘＨｉｓタグ化ヒトＣＤ４７ ＥＣＤ、ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ、およびＣ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα ＥＣＤを、Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎから購入した。
実施例２．抗体の生成
[00269]２．１．タンパク質免疫化のための免疫原の調製
[00270]Ｆｃタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を、タンパク質免疫化のための免疫原として使用した（実施例１．３を参照されたい）。
[00271]２．２．細胞免疫化のための免疫原の調製
[00272]ヒトＳＩＲＰα ｖ１を安定に発現する２９３Ｆ細胞を、細胞免疫化のための免疫原として使用した（実施例１．２を参照されたい）。
[00273]２．３．遺伝子免疫化のための免疫原の調製
[00274]全長ヒトＳＩＲＰα ｖ１タンパク質（ＮＰ＿５４２９７０）をコードするＤＮＡ配列を、ｐＣＰベクター（Ｃｈｅｍｐａｒｔｎｅｒ）にクローニングした。次いで、調製したプラスミドを、遺伝子免疫化のための免疫原としてコロイド金ブレット（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）上にコーティングした。
[00275]２．４．免疫化
[00276]Ｂａｌｂ／ｃおよびＳＪＬ／Ｊマウス（ＳＬＡＣ）に、ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を使用したタンパク質免疫化、ヒトＳＩＲＰα ｖ１を安定に発現する２９３Ｆ細胞を使用した細胞免疫化、およびヒトＳＩＲＰα ｖ１発現プラスミドをコーティングした金ブレットを使用した遺伝子免疫化という３つの異なる戦略によって、免疫化を行った。ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を用いたＥＬＩＳＡアッセイおよびヒトＳＩＲＰα ｖ１を安定に発現する２９３Ｆ細胞を用いたＦＡＣＳアッセイを使用して、免疫化したマウスの血清力価を検出した。血清力価が高かったマウスを、ハイブリドーマ融合のために選択した。
[00277]２．５．ハイブリドーマの生成
[00278]最後の追加免疫の５日後に、マウスを屠殺し、脾細胞を収集した。１％（ｖ／ｖ）のＮＨ４ＯＨを添加して、赤血球を溶解させた。次いで、洗浄した脾細胞を、高効率電気融合またはＰＥＧ方法によって、ＳＰ２／０マウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ）と融合させた。細胞融合の後、融合した細胞を、２０％ ＦＢＳおよび１％ ＨＡＴを含有する２００μｌのＤＭＥＭ培地とともに、２×１０４個の細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートに播種した。
[00279]２．６．ハイブリドーマのスクリーニング
[00280]融合の１０～１２日後に、融合プレートを、主として、ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を用いたＥＬＩＳＡアッセイまたはヒトＳＩＲＰα ｖ１を安定に発現する２９３Ｆ細胞を用いたＡｃｕｍｅｎアッセイ（ＴＴＰ Ｌａｂｔｅｃｈ）によって、スクリーニングした。二次スクリーニングのために、陽性ウェルから得られたハイブリドーマ細胞を増幅させて２４ウェルプレートに入れた。二次スクリーニングにおいて、結合活性を、ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を用いたＥＬＩＳＡアッセイおよびヒトＳＩＲＰα ｖ１を安定に発現する２９３Ｆ細胞を用いたＦＡＣＳアッセイによって、評価した。上位の結合活性を有するクローンを、サブクローンに選択した。加えて、ヒトＳＩＲＰα ｖ２／β／γに対する特異性、種間交差反応性、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用のブロッキング活性、ＣＤ４７とＳＩＲＰβとの相互作用のブロッキング活性もまた、ハイブリドーマの特徴付けのために、二次スクリーニングにおいて検出した（特徴付けアッセイ方法については実施例３を参照されたい）。
[00281]２．７．ハイブリドーマのサブクローン
[00282]それぞれの選択したクローンのハイブリドーマ細胞を、限界希釈によって、１つの細胞／ウェルの密度で、９６ウェルプレートに播種した。プレートを、ハイブリドーマの一次スクリーニングと同じ方式でスクリーニングした（実施例２．６を参照されたい）。陽性単一クローンを選択し、ハイブリドーマの二次スクリーニングと同じ方式で特徴付けを行った（実施例２．６を参照されたい）。次いで、上位の結合活性を有するモノクローナルハイブリドーマ細胞株を、さらなるハイブリドーマ抗体産生、特徴付け、およびシーケンシングのために得た。
[00283]合計９つの抗体クローンを、機能性ヒットとして同定し、これらのクローンから精製したハイブリドーマ抗体に、それぞれ、００１、００２、０２２、０３２、０３５、０５０、０５５、０６０、および０７４として割り当てた。
実施例３．抗体の特徴付け
[00284]３．１．ハイブリドーマ抗体の産生および精製
[00285]約１４日間の培養の後に、ハイブリドーマ細胞培養培地を収集し、遠心分離して、細胞を除去した。０．２２μｍのＰＥＳ膜を通して濾過し、ｐＨを７．２に調整した後、回収した上清を、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーカラム（ＧＥ）にロードした。抗体を、０．１Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３．０）によって溶出させた後、即座にＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を使用して中和した。ＰＢＳ緩衝液で透析した後、抗体濃度を、Ｎａｎｏ Ｄｒｏｐ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）によって判定した。タンパク質の純度を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびＨＰＬＣ－ＳＥＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ）によって評価した。内毒素レベルを、Ｅｎｄｏｃｈｒｏｍｅ－Ｋキット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）を用いて検出した。
[00286]３．２．単球由来マクロファージのファゴサイトーシスアッセイ
[00287]精製したハイブリドーマ抗体の機能有効性を、フローサイトメトリーに基づくファゴサイトーシスアッセイによって評価した。簡単に述べると、ヒト単球由来マクロファージを、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で標識したＣＤ４７発現ＪｕｒｋａｔおよびＲａｊｉがん細胞とともに、５０ｎＭ／２ｎＭ抗ＳＩＲＰα抗体の存在下において共培養した。ファゴサイトーシスは、細胞追跡のスミレ色色素が陽性であるマクロファージのパーセンテージを判定することによってアッセイした。
[00288]表７に要約されるように、抗ＳＩＲＰαハイブリドーマ抗体００１、００２、０３２、０３５、０５５、０７４、０２２、０５０、および０６０は、２ｎＭの濃度で、マクロファージによるＪｕｒｋａｔ細胞およびＲａｊｉ細胞の強力なファゴサイトーシスを刺激したが、他の公知の抗ＳＩＲＰα抗体２９－ＡＭ４－５、ＫＷＡＲ２３、およびＨＥＦＬＢは、全く効果を示さなかったかまたは弱い効果を示した。これらの９つの抗体は、機能性抗体であると考えられた。
Figure 2022545300000012
[00289]３．３．結合特異性の検出
[00290]精製したハイブリドーマ抗体のＳＩＲＰファミリーメンバーに対する結合特異性を、組換えタンパク質Ｆｃタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ、ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ、ヒトＳＩＲＰβ ＥＣＤ、およびヒトＳＩＲＰγ ＥＣＤを使用して、ＥＬＩＳＡアッセイによって検出した。簡単に述べると、抗体を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングした抗原とともに、３７℃で１時間インキュベートした。洗浄した後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）で標識した抗マウスまたは抗ヒトＩｇＧ二次Ａｂ（Ｓｉｇｍａ）を添加し、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、１００μｌ／ウェルのＴＭＢ溶液（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を添加した。１５分間室温でインキュベートした後、反応を、５０μｌの１Ｎ ＨＣｌを添加することによって停止させた。ＯＤ ４５０ｎｍを読み取り、ＥＣ５０を計算した。９つの機能性抗体の結合特異性特性を、表７に要約する。０６０およびＨＥＦＬＢを除き、試験した抗体の全てが、ヒトＳＩＲＰα ｖ１およびＳＩＲＰα ｖ２の両方に結合することができる。０６０およびＨＥＦＬＢは、ヒトＳＩＲＰα ｖ１には結合することができるが、ｖ２には結合することができない。０５５を除き、試験した抗体の全てが、ヒトＳＩＲＰβに結合することができる。他の公知の抗ＳＩＲＰα抗体と比較して、０２２、０３５、および０５０のみが、ヒトＳＩＲＰγに弱く結合することができる。
[00291]３．４．種間交差反応性試験
[00292]精製したハイブリドーマ抗体のヒト、カニクイザル、およびマウスＳＩＲＰαに対する種間交差反応性を、ＳＩＲＰαタンパク質を安定に発現するＣＨＯＫ１－ヒトＳＩＲＰα ｖ１－１Ｂ４細胞、ＣＨＯＫ１－カニクイザルＳＩＲＰα－２Ａ２細胞、およびＣＨＯＫ１－Ｃ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα－２．２２細胞を使用して、ＦＡＣＳアッセイによって判定した。簡単に述べると、抗体を、２×１０５個の標的細胞とともに、４℃で１時間インキュベートした。洗浄した後、蛍光標識した抗マウスまたは抗ヒトＩｇＧ二次抗体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を添加し、４℃で１時間インキュベートした。幾何学的中央値蛍光強度を検出し、ＥＣ５０を計算した。９つの機能性抗体の種間交差反応性特性を、表７に要約する。特に、同じ実験において試験した他の抗体とは対照的に、０６０は、カニクイザルＳＩＲＰαに結合することができず、０３５は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰαに対する交差反応性を有することに注目する。
[00293]３．５．ＣＤ４７／ＳＩＲＰα、ＣＤ４７／ＳＩＲＰγの相互作用のブロッキング活性の検出
[00294]競合的ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、精製したハイブリドーマ抗体が、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用またはＣＤ４７とＳＩＲＰγとの相互作用をブロックすることができるかどうかを判定した。簡単に述べると、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用のブロッキング活性の検出については、抗体およびビオチン標識した可溶性ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングしたヒトＣＤ４７ ＥＣＤ組換えタンパク質とともに共インキュベートした。
[00295]ＣＤ４７とＳＩＲＰγとの相互作用のブロッキング活性の検出については、抗体およびビオチン標識した可溶性ヒトＣＤ４７ ＥＣＤ組換えタンパク質を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングしたヒトＳＩＲＰγ ＥＣＤ組換えタンパク質とともに共インキュベートした。洗浄した後、西洋ワサビペルオキシダーゼで標識したストレプトアビジン（ＨＲＰ－ＳＡ、Ｓｉｇｍａ）を添加し、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、１００μｌ／ウェルのＴＭＢ溶液（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を添加した。１５分間室温でインキュベートした後、反応を、５０μｌの１Ｎ ＨＣｌを添加することによって停止させた。ＯＤ ４５０ｎｍを読み取った。ブロッキング比およびＩＣ５０を計算した。９つの機能性抗体のＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用、ＣＤ４７とＳＩＲＰγとの相互作用のブロッキング活性を、表７に要約する。他の公知の抗ＳＩＲＰα抗体と比較して、０２２、０５０、０５５、および０７４は、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックすることができなかった。特に、本発明の抗体の全ては、ＣＤ４７とＳＩＲＰγとの相互作用をブロックすることができない。
[00296]３．６．赤血球凝集活性
[00297]抗ＣＤ４７抗体は、赤血球（ＲＢＣ）凝集を促進し得、これは、安全性に関するリスクにつながる可能性がある。精製したハイブリドーマ抗体の赤血球凝集活性について試験した。簡単に述べると、ヒトＲＢＣを、ＰＢＳ中に１０％に希釈し、１００ｎＭの抗体の存在下において、３７℃で１時間インキュベートした。赤血球凝集の根拠は、赤血球凝集していないＲＢＣのはっきりとした赤い点（ｐｕｎｃｔｕａｔｅ ｒｅｄ ｄｏｔ）と比較してぼんやりと現れる、定まっていないＲＢＣの存在によって示される。赤血球凝集インデックスは、抗体の存在下におけるＲＢＣペレットの面積を定量し、抗体の不在下におけるものに対して正規化することによって判定した。表７に要約されるように、９つ全ての機能性抗体は、赤血球凝集活性を示さなかった。
[00298]３．７．エピトープビニング
[00299]競合的ＥＬＩＳＡアッセイを、９つの機能性抗体のエピトープビニングに使用した。簡単に述べると、過剰な競合抗体およびビオチン標識した可溶性ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ組換えタンパク質を、ＥＬＩＳＡマイクロプレートにコーティングした抗体とともに共インキュベートした。洗浄した後、ＨＲＰ－ＳＡを添加し、３７℃で１時間インキュベートした。次いで、１００μｌ／ウェルのＴＭＢ溶液（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を添加した。１５分間室温でインキュベートした後、反応を、５０μｌの１Ｎ ＨＣｌを添加することによって停止させた。ＯＤ ４５０ｎｍを読み取った。競合比を計算した。ＳＩＲＰαとの結合について互いに競合し得る抗体は、類似の結合エピトープを有する。
[00300]表８に示される合計９つの抗ＳＩＲＰα抗体は、５つの異なるエピトープ群に属する。００１、００２、０３２、および０３５は、全てＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用のブロッカーである参照抗体２９－ＡＭ４－５、ＫＷＡＲ２３、およびＨＥＦＬＢと同じ大きな群に属する。他のブロッカー０６０、ならびに非ブロッカーである０５５、０７４、０２２、および０５０は、他の４つの異なる固有のエピトープ群に属する。
[00301]具体的には、抗ＳＩＲＰα抗体００１、００２、０３２、および参照抗体２９－ＡＭ４－５、ＫＷＡＲ２３は、ヒトＳＩＲＰαとの結合について互いに競合し、これらが、表７に示されるように、Ｉ－ａにグループ分けされる同一または緊密に関連するエピトープに結合し得ることが示される。抗ＳＩＲＰα抗体０３５もまた、ヒトＳＩＲＰαとの結合について、００１、００２、および０３２と競合する。しかしながら、０３５は、参照抗体２９－ＡＭ４－５およびＫＷＡＲ２３とは完全に競合することはできず、０３５が、表７に示されるようにＩ－ｂにグループ分けされるわずかに異なるエピトープを有し得ることが示される。参照抗体ＨＥＦＬＢと抗ＳＩＲＰα抗体００１、００２、０３２、０３５との間の競合は、双方向ではない。したがって、ＨＥＦＬＢのエピトープは、表７に示されるように、Ｉ－ｃにグループ分けされる。Ｉ－ａ、Ｉ－ｂ、およびＩ－ｃは、緊密に関連するＩという大きな群に属すると考えられる。同様に、抗体０２２および０５０は、ヒトＳＩＲＰαとの結合について、互いに競合し、これらが、表７に示されるように、ＩＶにグループ分けされる同一または緊密に関連するエピトープに結合し得ることが示される。抗体０５５、０７４、および０６０は、ヒトＳＩＲＰαに対して試験におけるいずれの他の抗体とも競合的結合を示さなかったため、これらは、それぞれが、表７に示されるように、それぞれ、ＩＩ、ＩＩＩ、およびＶにグループ分けされる異なるエピトープに結合し得ることが示される。
[00302]３．８．ハイブリドーマのシーケンシング
[00303]モノクローナルハイブリドーマ細胞から単離したＲＮＡを、ＳＭＡＲＴｅｒ ＲＡＣＥ ５’／３’キット（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を使用してｃＤＮＡに逆転写した。次いで、ｃＤＮＡを鋳型として使用して、マウスＩｇプライマーセット（Ｎｏｖａｇｅｎ）のプライマーを用いて重鎖および軽鎖可変領域を増幅させた。ＰＣＲ産物を、アガロースゲルでの電気泳動によって解析した。正しいサイズのＤＮＡ断片を収集し、ＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ ＧｅｌおよびＰＣＲ Ｃｌｅａｒ－ｕｐキット（ＭＡＣＨＥＲＥＹ ＮＡＧＥＬ）で精製した後、ｐＭＤ１８－Ｔベクター（Ｔａｋａｒａ）でライゲートした。ライゲーション産物を、ＤＨ５αコンピテント細胞にトランスフォームした。クローンを選択し、挿入断片をＤＮＡシーケンシングによって解析した。
実施例４．キメラ抗体の生成および特徴付け
[00304]４．１．キメラ抗体の生成および産生
[00305]ハイブリドーマのシーケンシングの結果を検証するために、マウス抗体を、Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体に変換させた。簡単に述べると、重鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列を、Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４重鎖定常領域を有するｐｃＤＮＡ３．４－ｈＩｇＧ４Ｐベクター（Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ）にクローニングした。軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ配列を、ヒトカッパ軽鎖定常領域を有するｐｃＤＮＡ３．４－ｈＩｇＧｋベクター（Ｂｉｏｉｎｔｒｏｎ）にクローニングした。結果として得られるキメラ抗体は、本明細書において、００１ｃ、００２ｃ、０２２ｃ、０３２ｃ、０３５ｃ、０５０ｃ、０５５ｃ、０６０ｃ、および０７４ｃと称され、ここで、接尾辞「ｃ」は、キメラを示す。
Figure 2022545300000013
[00306]抗体重鎖および軽鎖発現プラスミドを共トランスフェクトしたＥｘｐｉ２９３細胞（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を、３７℃で１週間増殖させた。次いで、培養培地を収集し、遠心分離して細胞を除去した。回収した上清を、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーカラム（Ｎａｎｏｍｉｃｒｏｔｅｃｈ）にロードした。抗体を、０．１Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３．４）によって溶出させた後、即座にＴｒｉｓ緩衝液（ｐＨ８．０）を使用して中和した。ＰＢＳ緩衝液で透析した後、抗体濃度を、Ｎａｎｏ Ｄｒｏｐ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）によって判定した。タンパク質の純度を、ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびＨＰＬＣ－ＳＥＣ（Ａｇｉｌｅｎｔ）によって評価した。内毒素レベルを、Ｅｎｄｏｃｈｒｏｍｅ－Ｋキット（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）を用いて検出した。
[00307]４．２．キメラ抗体の特徴付け
[00308]精製したキメラ抗体を、結合特異性解析および種間交差反応性解析に適用した（実施例３．３および３．４に記載される方法を参照されたい）。図１Ａ～図１Ｄは、ＥＬＩＳＡ解析によって測定した、組換えタンパク質ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ（Ａ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ（Ｂ）、ヒトＳＩＲＰβ ＥＣＤ（Ｃ）、およびヒトＳＩＲＰγ ＥＣＤ（Ｄ）に対する抗ＳＩＲＰαキメラ抗体の結合特異性を示す。
[00309]試験した９つ全てのキメラ抗体が、ＥＬＩＳＡによって測定して、ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ（図１Ａ、表９）への結合について、ナノモル以下のＥＣ５０を示した。参照抗体２９－ＡＭ４－５、ＫＷＡＲ２３、およびＨＥＦＬＢもまた、同様の結合親和性を示した。
[00310]０６０ｃおよびＨＥＦＬＢを除き、全ての他のキメラ抗体および参照抗体が、ＥＬＩＳＡによって測定して、ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ（図１Ｂ、表１０）への結合について、ナノモル以下のＥＣ５０を示した。
[00311]０５５ｃを除き、全ての他のキメラ抗体および参照抗体が、ＥＬＩＳＡによって測定して、ヒトＳＩＲＰβ ＥＣＤ（図１Ｃ、表１１）への結合について、ナノモル以下のＥＣ５０を示した。
Figure 2022545300000014
Figure 2022545300000015
Figure 2022545300000016
[00312]キメラ抗体００１ｃ、００２ｃ、０３２ｃ、０５５ｃ、０６０ｃ、０７４ｃは、ＥＬＩＳＡによって測定して、ＳＩＲＰγ ＥＣＤ（図１Ｄ、表１２）への特異的な結合を示さなかった。キメラ抗体０２２ｃ、０３５ｃ、および０５０ｃは、参照抗体２９－ＡＭ４－５、ＫＷＡＲ２３、およびＨＥＦＬＢと同様に、全てが、ＥＬＩＳＡによって測定して、ヒトＳＩＲＰγ ＥＣＤ（図１Ｄ、表１２）への特異的な結合を示した。
Figure 2022545300000017
[00313]図２Ａ～図２Ｃは、抗ＳＩＲＰαキメラ抗体の種間交差反応性を示す。図２Ａは、ＣＨＯＫ１－ヒトＳＩＲＰα ｖ１－１Ｂ４細胞に対する抗体のＦＡＣＳ結合曲線を示す。図２Ｂおよび図２Ｃは、ＣＨＯＫ１－カニクイザルＳＩＲＰα－２Ａ２細胞およびＣＨＯＫ１－Ｃ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα－２．２２細胞に対する１０ｎＭの抗体のＦＡＣＳ結合を示す。
[00314]試験した９つ全てのキメラ抗体が、ＦＡＣＳによって測定して、ＣＨＯＫ１－ヒトＳＩＲＰα ｖ１－１Ｂ４細胞（図２Ａ、表１３）への結合について、ナノモル以下のＥＣ５０を示した。参照抗体２９－ＡＭ４－５、ＫＷＡＲ２３、およびＨＥＦＬＢもまた、同様の結合親和性を示した。
Figure 2022545300000018
[00315]図２Ｂに示されるように、結果は、０６０ｃを除く全ての抗体（即ち、００１ｃ、００２ｃ、０２２ｃ、０３２ｃ、０３５ｃ、０５０ｃ、０５５ｃ、および０７４ｃ）が、カニクイザルＳＩＲＰαに対して良好な交差反応性を有することを示す。図２Ｃに示されるように、０３５ｃのみが、Ｃ５７ＢＬ／６株のマウスＳＩＲＰαに対して交差反応性を有する。
[00316]精製したキメラ抗体を、ファゴサイトーシスアッセイにおいても試験した（実施例３．２に記載される方法を参照されたい）。図３Ａ～図３Ｄは、示される抗ＳＩＲＰα抗体（Ｓ２２８Ｐの変異を有するヒトＩｇＧ４キメラ抗体）の存在下における、ヒトマクロファージによるＪｕｒｋａｔ細胞、Ｒａｊｉ細胞、およびＤＬＤ－１細胞のファゴサイトーシスを示す。
[00317]図３Ａ～図３Ｄに示されるように、単独で使用した場合、９つのキメラ抗体は、Ｊｕｒｋａｔ細胞（図３Ａ、図３Ｄ）、Ｒａｊｉ細胞（図３Ｂ）、およびＤＬＤ－１細胞（図３Ｃ）の用量依存的な強力なマクロファージによるファゴサイトーシスを刺激したが、一方で参照抗体２９－ＡＭ４－５、ＫＷＡＲ２３、およびＨＥＦＬＢは、全く効果を示さなかったかまたは弱い効果を示した。
[00318]本発明者らは、抗ＳＩＲＰαキメラ抗体は、ＣＤ４７相互作用の重要な領域であるＳＩＲＰα ＩｇＶドメインに結合することによって、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックすることができると推測した。本発明者らの仮説を証明するために、本発明者らは、Ｂ－ｈＳＩＲＰＡマウス（Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ）に由来する初代単球に対する抗ＳＩＲＰαキメラ抗体のＦＡＣＳ結合を試験した（図４Ｂ）。
[00319]図４Ａに示されるように、ＣＤ４７と相互作用するＳＩＲＰα ＩｇＶドメインをコードするＢ－ｈＳＩＲＰＡマウスのＳｉｒｐａ遺伝子エクソン２を、ヒト化した。ヒト化マウスは、ヒトＳＩＲＰαのＩｇＶドメイン、ならびにマウスＳＩＲＰαのＩｇＣ１／Ｃ２ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内ドメインから構成される、キメラＳＩＲＰαを発現する。簡単に述べると、Ｂ－ｈＳＩＲＰＡマウスの脾細胞を採取し、抗ＳＩＲＰαキメラ抗体とともに、４℃で１時間インキュベートした。洗浄した後、蛍光標識した抗ヒトＩｇＧ二次抗体（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を添加し、４℃で１時間インキュベートした。マウスＣＤ１１ｂおよびマウスＦ４／８０も、単球を示すように染色した。ｍＣＤ１１ｂおよびｍＦ４／８０二重陽性サブセットにおける抗ＳＩＲＰα陽性染色集団を、計算した。
[00320]図４Ｂに示されるように、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用のブロッカーである００１ｃ、００２ｃ、０３２ｃ、０３５ｃ、および０６０ｃは、Ｂ－ｈＳＩＲＰＡマウスに由来する初代単球に結合することができ、それらが、ヒトＳＩＲＰα ＩｇＶドメインに結合することが示された。しかしながら、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用の非ブロッカー０２２ｃ、０５０ｃ、０５５ｃ、および０７４ｃではこの通りではない。
[00321]これら全ての特徴付けデータは、本発明者らがハイブリドーマ抗体から得られたものと一貫性があり、得られた可変領域の配列が正しいことを示唆する。特徴付けのデータを、表１４に要約する。
Figure 2022545300000019
[00322]４．３．表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって判定される結合親和性
[00323]抗ＳＩＲＰαキメラ抗体を、Ｂｉａｃｏｒｅ（ＧＥ）を使用して、ヒトＳＩＲＰα ｖ１、ヒトＳＩＲＰα ｖ２、およびＣ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰαに対する結合親和性に関して特徴付けた。簡単に述べると、試験しようとする抗体を、ヒト抗体捕捉キット（ＧＥ）を使用して、ＣＭ５チップ（ＧＥ）に捕捉した。６ｘＨｉｓタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ１、ヒトＳＩＲＰα ｖ２、およびＣ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα ＥＣＤ組換えタンパク質の抗原を、複数の用量に連続希釈し、３０μｌ／分で１８０秒間注入した。解離のため緩衝液流量を４００秒、保った。チップの再生のため３ＭのＭｇＣｌ２を用いた。会合および解離の曲線は１：１結合モデルに合致し、それぞれの抗体についてＫａ／Ｋｄ／ＫＤ値を計算した。抗ＳＩＲＰαキメラ抗体の親和性データを、表１５および表１４に要約する。
実施例５．抗体ヒト化および親和性成熟
[00324]５．１ヒト化
[00325]０３５の重鎖および軽鎖可変領域の配列を、ヒト抗体配列データベースにおいて検索した。ＶＨ７－４－１およびＶＫ１－１６を、もともとのマウス抗体配列に対する相同性に基づいて、ヒト化のための鋳型として選択した。マウス抗体配列から得られたＣＤＲを、次いで、抗体の上部および中央部のコア構造を維持するための残基とともに、鋳型にグラフトした。得られた０３５のヒト化抗体は、ｈｕ０３５．０１と表記し、ここで、接頭辞「ｈｕ」は、「ヒト化」を示し、接尾辞の数字は、ヒト化抗体のシリアル番号を表す。
Figure 2022545300000020
[00326]５．２．ヒト化抗体の特徴付け
[00327]ヒト化０３５の最初のバージョンであるｈｕ０３５．０１を、ＣＨＯＫ１－ヒトＳＩＲＰα ｖ１－１Ｂ４細胞を使用してＦＡＣＳアッセイによって、Ｆｃタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ組換えタンパク質を使用してＥＬＩＳＡアッセイによって、および６ｘＨｉｓタグ化ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ組換えタンパク質の抗原を使用してＳＰＲ解析によって、特徴付けした（実施例３．４、実施例３．３、および実施例４．３に記載される方法を参照されたい）。親抗体０３５ｃと比較して、ヒト化ｈｕ０３５．０１は、ＦＡＣＳアッセイにおいてＣＨＯＫ１－ヒトＳＩＲＰα ｖ１－１Ｂ４細胞に対して（図５Ａ）、およびＥＬＩＳＡアッセイにおいてヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ組換えタンパク質に対して（図５Ｂ）、相対的に弱い結合を示した。ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ組換えタンパク質の抗原を用いたＳＰＲ解析において、ｈｕ０３５．０１の結合親和性（５３．４ｎＭ）が、０３５ｃ（０．６１ｎＭ）よりも低いことが確認された（図５Ｃ）。具体的には、ｈｕ０３５．０１は、可能性として結合活性の低減に起因して、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、Ｃ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα ＥＣＤと結合することを検出することができない（図５Ｂ）。
[00328]５．３．親和性成熟
[00329]結合親和性の低減という理由から、ｈｕ０３５．０１を、親和性成熟によって最適化させた。簡単に述べると、重鎖および軽鎖をｓｃＦｖ形式にランダムに変異させ、ヒトＳＩＲＰαおよび／またはマウスＳＩＲＰαへのより良好な結合物質に関してスクリーニングすることによって、第１のＣＤＲグラフトした配列の親和性成熟を行った。上位の結合物質をシーケンシングし、哺乳動物発現ベクターにクローニングし、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞において発現させ、さらなる特徴付けのために精製した。得られた親和性成熟後のヒト化抗体は、ｈｕ０３５．０２、ｈｕ０３５．０３からｈｕ０３５．１７と表記し、ここで、接頭辞「ｈｕ」は、「ヒト化」を示し、接尾辞の数字は、ヒト化抗体のシリアル番号を表す。
[00330]５．４．親和性成熟後のヒト化抗体の特徴付け
[00331]ｈｕ０３５．０２、ｈｕ０３５．０３、ｈｕ０３５．０９、ｈｕ０３５．１０、ｈｕ０３５．１３、ｈｕ０３５．１４、およびｈｕ０３５．１７に割り当てられた、最終的な７つのヒト化して成熟させた候補を、結合特異性解析および種間交差反応性解析に適用した（実施例３．３および３．４に記載される方法を参照されたい）。
[00332]親抗体０３５ｃと比較して、最適化されたｈｕ０３５候補は、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、組換えタンパク質ヒトＳＩＲＰα ｖ１ ＥＣＤ（図６Ａ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤ（図６Ｂ）、ヒトＳＩＲＰα ｖ８ ＥＣＤ（図６Ｃ）、およびヒトＳＩＲＰβ ＥＣＤ（図６Ｄ）に対する同程度の結合能力を維持することが確認された。特に、それらは、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、異なるレベルで、組換えタンパク質ヒトＳＩＲＰγ ＥＣＤ（図６Ｅ）およびＣ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα ＥＣＤ（図６Ｆ）に対する結合の強化を示した。ＥＣ５０値を計算し、表１７に要約した。
[00333]最適化されたｈｕ０３５候補はまた、ＦＡＣＳアッセイにおいて、ヒトＳＩＲＰα（図７Ａ）、カニクイザルＳＩＲＰα（図７Ｂ）、およびＣ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα（図７Ｃ）に対する同程度の種間交差反応性を維持することも確認された。ＥＬＩＳＡアッセイにより得られたデータと一貫して、それらは、異なるレベルで、ＣＨＯＫ１－Ｃ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰα－２．２２細胞に対する結合の強化を示した（図７Ｃ）。ＥＣ５０値を計算し、表１７に要約した。
[00334]最適化されたｈｕ０３５候補を、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用をブロックする能力に関して試験した（図８、実施例３．５に記載される方法を参照されたい）。親抗体０３５ｃと比較して、最適化されたｈｕ０３５候補であるｈｕ０３５．０２、ｈｕ０３５．０３、ｈｕ０３５．０９、ｈｕ０３５．１０、ｈｕ０３５．１３、ｈｕ０３５．１４、およびｈｕ０３５．１７は、同程度のＣＤ４７とＳＩＲＰαとの相互作用のブロッキング活性を維持することが確認された。ＩＣ５０値を計算し、表１７に要約した。
[00335]さらに、ＳＰＲ解析により、親抗体０３５ｃと比較して、最適化されたｈｕ０３５候補であるｈｕ０３５．０２、ｈｕ０３５．０３、ｈｕ０３５．０９、ｈｕ０３５．１０、ｈｕ０３５．１３、ｈｕ０３５．１４、およびｈｕ０３５．１７が、ヒトＳＩＲＰα対立遺伝子に対して同程度の結合親和性を示し、Ｃ５７ＢＬ／６マウスＳＩＲＰαに対して改善された結合親和性を示したことが確認された（実施例４．３に記載される方法を参照されたい）。動態データを、表１６および表１７に要約する。
Figure 2022545300000021
[00336]最適化されたｈｕ０３５候補を、機能評価のためにファゴサイトーシスアッセイにおいても試験した（実施例３．２に記載される方法を参照されたい）。図９に示されるように、親抗体０３５ｃと比較して、最適化されたｈｕ０３５候補であるｈｕ０３５．０２、ｈｕ０３５．０３、ｈｕ０３５．０９、ｈｕ０３５．１０、ｈｕ０３５．１３、ｈｕ０３５．１４、およびｈｕ０３５．１７は、マクロファージによるＪｕｒｋａｔ細胞（図９Ａ）、ＤＬＤ１細胞（図９Ｂ）、およびＲａｊｉ細胞（図９Ｃ）の強力または同程度のファゴサイトーシスを刺激することが確認されたが、一方で２つの公知の抗ＳＩＲＰα抗体ＡＬＸ Ｈ２１および３Ｆ９－２２は、全く効果を示さなかったかまたは弱い効果を示した。
[00337]ＳＩＲＰγ－ＣＤ４７相互作用を通じた抗原提示細胞へのヒトＴ細胞の結合は、Ｔ細胞増殖を共刺激することが報告された。７つの最適化されたｈｕ０３５候補は、親抗体０３５ｃと比較して強化されたヒトＳＩＲＰγに対する結合活性を示したため（図６Ｅ）、Ｔ細胞増殖を妨害する可能性を排除するために、これらの最適化されたｈｕ０３５候補ならびにキメラ抗体のうちのいくつかを、Ｔ細胞活性化アッセイにおいて試験した。簡単に述べると、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で標識したヒト初代Ｔ細胞を、ＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ（商標）ヒトＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔ細胞活性化因子（ＳＴＥＭＣＥＬＬ）で４日間、またはｉｎ ｖｉｔｒｏで生成した同種成熟樹状細胞で５日間のいずれかで、刺激した。示される抗体を、試験の開始時から、飽和濃度（１０ｕｇ／ｍｌ）で添加した。ＣｅｌｌＴｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔの低い染色を使用して、増殖集団を判定した。ＩＦＮγ分泌は、ヒトＩＦＮガンマキット（Ｃｉｓｂｉｏ）で判定した。
[00338]図１０に示されるように、最適化されたｈｕ０３５候補であるｈｕ０３５．０２、ｈｕ０３５．０３、ｈｕ０３５．０９、ｈｕ０３５．１０、ｈｕ０３５．１３、ｈｕ０３５．１４、およびｈｕ０３５．１７、ならびにキメラ抗体０３５ｃ、０２２ｃ、０３２ｃ、０５０ｃ、０５５ｃ、０６０ｃ、および０７４ｃは、Ｔ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔ細胞活性化因子で刺激した場合に、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖（図１０Ｂ、図１０Ｄ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖（図１０Ｃ、図１０Ｄ）に対して負の影響を示さず、最適化されたｈｕ０３５候補であるｈｕ０３５．０２およびｈｕ０３５．１７、ならびにキメラ抗体０２２ｃ、０３２ｃ、０３５ｃ、０５０ｃ、０５５ｃ、０６０ｃ、および０７４ｃは、Ｔ細胞をＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔ細胞活性化因子で刺激した場合に、ＩＦＮγ分泌に対して負の影響を示さなかった（図１０Ａ）。同様に、最適化されたｈｕ０３５候補であるｈｕ０３５．０２、ｈｕ０３５．１７、ならびにキメラ抗体０３５ｃ、０２２ｃ、０３２ｃ、０５０ｃ、０５５ｃ、０６０ｃ、および０７４ｃは、Ｔ細胞を同種樹状細胞で刺激した場合に、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖（図１１Ｂ）、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖（図１１Ｃ）、およびＩＦＮγ分泌（図１１Ａ）に対して負の影響を示さなかった。予測されるように、抗ＳＩＲＰγ抗体ＬＳＲ２．２０（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）は、Ｔ細胞活性化の阻害剤である。
[00339]これらの特徴付けデータの全てを、表１７に要約し、ヒト化および親和性成熟の成功が示唆される。
Figure 2022545300000022

Claims (63)

  1. ヒトＳＩＲＰαに特異的に結合することができる抗体またはその抗原結合性断片であって、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域ならびに／またはＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域を含み、
    ａ）前記ＨＣＤＲ１が、ＲＮＹＷＭＮ（配列番号１）、ＴＤＹＡＭＨ（配列番号２）、ＴＸ１ＹＡＭＮ（配列番号３）、ＴＨＹＳＭＨ（配列番号４）、ＳＤＹＦＭＴ（配列番号５）、ＴＮＹＤＩＳ（配列番号６）、ＳＳＹＷＩＨ（配列番号７）からなる群から選択される配列を含み、
    ｂ）前記ＨＣＤＲ２が、ＥＩＸ２ＬＫＳＮＴＹＡＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号８）、ＷＫＮＴＥＴＧＥＳＴＹＡＥＤＦＫＧ（配列番号９）、Ｘ３ＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＸ４Ｘ５ＦＫＧ（配列番号１０）、ＷＩＮＴＥＴＡＥＰＴＹＶＤＤＦＫＧ（配列番号１１）、ＮＶＮＹＤＧＲＳＴＹＹＬＤＳＬＫＳ（配列番号１２）、ＶＩＷＴＧＧＤＴＮＦＮＳＡＦＭＳ（配列番号１３）、またはＬＩＨＰＮＳＧＮＴＤＣＳＥＴＦＫＮ（配列番号１４）からなる群から選択される配列を含み、
    ｃ）前記ＨＣＤＲ３が、ＦＴＫＶＶＡＤＷＨＬＤＶ（配列番号１５）、ＧＧＹＧＳＮＹＶＭＤＹ（配列番号１６）、ＴＲＧＹＹＤＦＤＧＧＡＦＤＹ（配列番号１７）、ＧＧＬＲＱＧＤＹ（配列番号１８）、ＥＧＳＱＴＰＬＹＡＶＤＹ（配列番号１９）、ＶＱＹＦＧＧＳＹＧＰＭＤＹ（配列番号２０）、ＤＧＡＳＹＤＷＦＶＨ（配列番号２１）からなる群から選択される配列を含み、
    ｄ）前記ＬＣＤＲ１が、ＲＳＳＱＮＩＶＨＳＮＧＮＴＹＬＥ（配列番号２２）、ＫＡＳＥＤＩＹＮＲＬＡ（配列番号２３）、Ｘ６ＡＳＱＮＶＧＴＨＬＡ（配列番号２４）、ＳＡＴＳＳＶＳＡＳＹＬＹ（配列番号２５）、ＫＡＳＱＮＶＧＴＡＶＡ（配列番号２６）、ＥＡＳＤＨＩＮＤＷＬＡ（配列番号２７）、ＫＳＳＱＳＬＬＹＴＮＧＫＴＹＬＮ（配列番号２８）からなる群から選択される配列を含み、
    ｅ）前記ＬＣＤＲ２が、ＫＸ７ＳＮＲＦＳ（配列番号２９）、ＧＡＴＳＬＥＴ（配列番号３０）、ＳＡＸ８ＹＲＹＩ（配列番号３１）、ＳＴＳＮＬＡＳ（配列番号３２）、ＬＡＳＮＲＹＴ（配列番号３３）、ＬＶＳＫＬＤＳ（配列番号３５）からなる群から選択される配列を含み、
    ｆ）前記ＬＣＤＲ３が、ＦＱＧＳＨＶＰＦＴ（配列番号３６）、ＱＱＹＷＮＳＰＲＴ（配列番号３７）、ＱＱＹＮＴＹＰＬＴ（配列番号３８）、ＨＱＷＳＳＹＰＹＴ（配列番号３９）、ＱＱＹＳＩＹＰＦＴ（配列番号４０）、ＱＱＹＷＮＴＰＬＴ（配列番号４１）、ＶＱＧＴＨＦＰＲＴ（配列番号４２）からなる群から選択される配列を含み、
    Ｘ１がＮまたはＤであり、Ｘ２がＳまたはＴであり、Ｘ３がＦまたはＷであり、Ｘ４がＱまたはＤであり、Ｘ５がＤまたはＧであり、Ｘ６がＫまたはＲであり、Ｘ７がＶまたはＩであり、Ｘ８がＳまたはＩである、抗体またはその抗原結合性断片。
  2. 前記ＨＣＤＲ１が、配列番号１のアミノ酸配列を含み、かつ／または
    前記ＨＣＤＲ２が、配列番号８のアミノ酸配列を含み、かつ／または
    前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１５のアミノ酸配列を含み、かつ／または
    前記ＬＣＤＲ１が、配列番号２２のアミノ酸配列を含み、かつ／または
    前記ＬＣＤＲ２が、配列番号２９のアミノ酸配列を含み、かつ／または
    前記ＬＣＤＲ３が、配列番号３６のアミノ酸配列を含み、
    Ｘ２およびＸ７が、請求項１に定義した通りである、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  3. 前記ＨＣＤＲ２が、ＥＩＳＬＫＳＮＴＹＡＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号４８）、ＥＩＴＬＫＳＮＴＹＡＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号４９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または
    前記ＬＣＤＲ２が、ＫＶＳＮＲＦＳ（配列番号５５）およびＫＩＳＮＲＦＳ（配列番号５６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項２に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  4. 前記ＨＣＤＲ１が、配列番号３のアミノ酸配列を含み、かつ／または
    前記ＨＣＤＲ２が、配列番号１０のアミノ酸配列を含み、かつ／または
    前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、かつ／または
    前記ＬＣＤＲ１が、配列番号２４のアミノ酸配列を含み、かつ／または
    前記ＬＣＤＲ２が、配列番号３１のアミノ酸配列を含み、かつ／または
    前記ＬＣＤＲ３が、配列番号３８のアミノ酸配列を含み、
    Ｘ１、Ｘ３、Ｘ４、Ｘ５、Ｘ６、およびＸ８が、請求項１に定義した通りである、請求項１に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  5. ａ）前記ＨＣＤＲ１が、ＴＮＹＡＭＮ（配列番号４３）およびＴＤＹＡＭＮ（配列番号４５）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または
    ｂ）前記ＨＣＤＲ２が、ＦＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＤＤＦＫＧ（配列番号５０）、ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＱＧＦＫＧ（配列番号５１）、およびＦＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＱＧＦＫＧ（配列番号５２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または
    ｃ）前記ＨＣＤＲ３が、配列番号１７のアミノ酸配列を含み、かつ／または
    ｄ）前記ＬＣＤＲ１が、ＫＡＳＱＮＶＧＴＨＬＡ（配列番号５３）およびＲＡＳＱＮＶＧＴＨＬＡ（配列番号５４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または
    ｅ）前記ＬＣＤＲ２が、ＳＡＳＹＲＹＩ（配列番号５７）およびＳＡＩＹＲＹＩ（配列番号５８）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、かつ／または
    ｆ）前記ＬＣＤＲ３が、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、請求項４に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  6. 前記重鎖可変領域が、
    ａ）配列番号１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４８の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１５の配列を含むＨＣＤＲ３、または
    ｂ）配列番号１の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号４９の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１５の配列を含むＨＣＤＲ３、または
    ｃ）配列番号２の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号９の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１６の配列を含むＨＣＤＲ３、または
    ｄ）配列番号４３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号５０の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１７の配列を含むＨＣＤＲ３、または
    ｅ）配列番号４３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号５１の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１７の配列を含むＨＣＤＲ３、または
    ｆ）配列番号４５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号５２の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１７の配列を含むＨＣＤＲ３、または
    ｇ）配列番号４３の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号５２の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１７の配列を含むＨＣＤＲ３、または
    ｈ）配列番号４の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１１の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１８の配列を含むＨＣＤＲ３、または
    ｉ）配列番号５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号１９の配列を含むＨＣＤＲ３、または
    ｊ）配列番号６の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１３の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２０の配列を含むＨＣＤＲ３、または
    ｋ）配列番号７の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１４の配列を含むＨＣＤＲ２、および配列番号２１の配列を含むＨＣＤＲ３
    を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  7. 前記軽鎖可変領域が、
    ａ）配列番号２２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５５の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３６の配列を含むＬＣＤＲ３、または
    ｂ）配列番号２２の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５６の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３６の配列を含むＬＣＤＲ３、または
    ｃ）配列番号２３の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３０の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３７の配列を含むＬＣＤＲ３、または
    ｄ）配列番号５３の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５７の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３８の配列を含むＬＣＤＲ３、または
    ｅ）配列番号５４の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５７の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３８の配列を含むＬＣＤＲ３、または
    ｆ）配列番号５４の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号５８の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３８の配列を含むＬＣＤＲ３、または
    ｇ）配列番号２５の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３２の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号３９の配列を含むＬＣＤＲ３、または
    ｈ）配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３３の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４０の配列を含むＬＣＤＲ３、または
    ｉ）配列番号２７の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３０の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４１の配列を含むＬＣＤＲ３、または
    ｊ）配列番号２８の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３５の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４２の配列を含むＬＣＤＲ３
    を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  8. ａ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号１の配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号４８の配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号１５の配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号２２の配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号５５の配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号３６の配列を含むか、または
    ｂ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号１の配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号４９の配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号１５の配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号２２の配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号５６の配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号３６の配列を含むか、または
    ｃ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号１の配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号４９の配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号１５の配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号２２の配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号５５の配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号３６の配列を含むか、または
    ｄ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号２の配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号９の配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号１６の配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号２３の配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号３０の配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号３７の配列を含むか、または
    ｅ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号４３の配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号５０の配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号１７の配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号５３の配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号５７の配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号３８の配列を含むか、または
    ｆ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号４３の配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号５１の配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号１７の配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号５４の配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号５７の配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号３８の配列を含むか、または
    ｇ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号４５の配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号５２の配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号１７の配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号５４の配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号５７の配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号３８の配列を含むか、または
    ｈ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号４５の配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号５２の配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号１７の配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号５４の配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号５８の配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号３８の配列を含むか、または
    ｉ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号４３の配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号５２の配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号１７の配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号５４の配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号５８の配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号３８の配列を含むか、または
    ｊ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号４の配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１１の配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号１８の配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号２５の配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号３２の配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号３９の配列を含むか、または
    ｋ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号５の配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１２の配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号１９の配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号２６の配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号３３の配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号４０の配列を含むか、または
    ｌ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号６の配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１３の配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号２０の配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号２７の配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号３０の配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号４１の配列を含むか、または
    ｍ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号７の配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号１４の配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号２１の配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号２８の配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号３５の配列を含み、前記ＬＣＤＲ３が配列番号４２の配列を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  9. 重鎖ＨＦＲ１、ＨＦＲ２、ＨＦＲ３、およびＨＦＲ４のうちの１つもしくは複数、ならびに／または軽鎖ＬＦＲ１、ＬＦＲ２、ＬＦＲ３、およびＬＦＲ４のうちの１つもしくは複数をさらに含み、
    ａ）前記ＨＦＲ１が、ＱＸ９ＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＸ１０ＡＸ１１ＧＹＸ１２Ｘ１３（配列番号９２）またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、
    ｂ）前記ＨＦＲ２が、ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号９３）またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、
    ｃ）前記ＨＦＲ３配列が、ＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＸ１４ＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号９６）またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、
    ｄ）前記ＨＦＲ４が、ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９７）またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、
    ｅ）前記ＬＦＲ１が、ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＸ１５ＬＸ１６ＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１００）またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、
    ｆ）前記ＬＦＲ２が、ＷＸ１７ＱＱＫＰＧＫＸ１８ＰＫＸ１９ＬＩＸ２０（配列番号１０４）またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、
    ｇ）前記ＬＦＲ３が、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＸ２１ＬＱＰＥＤＦＡＴＹＸ２２Ｃ（配列番号１０８）またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、
    ｈ）前記ＬＦＲ４が、ＦＸ２３ＱＧＴＫＬＥＩＫＸ２４（配列番号４７）またはその少なくとも８０％の配列同一性のある相同配列を含み、
    Ｘ９がＩまたはＶであり、Ｘ１０がＲまたはＫであり、Ｘ１１がＧまたはＲまたはＳであり、Ｘ１２がＴまたはＳであり、Ｘ１３がＬまたはＩまたはＦであり、Ｘ１４がＧまたはＳであり、Ｘ１５がＳまたはＲであり、Ｘ１６がＳまたはＧであり、Ｘ１７がＹまたはＦであり、Ｘ１８がＡまたはＳであり、Ｘ１９がＳまたはＡであり、Ｘ２０がＹまたはＦであり、Ｘ２１がＳまたはＮであり、Ｘ２２がＹまたはＦであり、Ｘ２３がＧまたはＤであり、Ｘ２４がＲまたは不在である、請求項１から８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  10. 前記ＨＦＲ１が、配列番号４４、８９、９０、および９１からなる群から選択される配列を含み、
    前記ＨＦＲ２が、配列番号９３の配列を含み、
    前記ＨＦＲ３が、配列番号９４および９５からなる群から選択される配列を含み、
    前記ＨＦＲ４が、配列番号９７の配列を含み、
    前記ＬＦＲ１が、配列番号９８および９９ならなる群から選択される配列を含み、
    前記ＬＦＲ２が、配列番号１０１、１０２、および１０３からなる群から選択される配列を含み、
    前記ＬＦＲ３が、配列番号１０５、１０６、および１０７からなる群から選択される配列を含み、
    前記ＬＦＲ４が、配列番号１０９および４６からなる群から選択される配列を含む、請求項９に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  11. 前記重鎖可変領域が、配列番号５９、配列番号６０、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２からなる群から選択される配列、および少なくとも８０％の配列同一性を有ししかもヒトＳＩＲＰαに対する特異的結合親和性を保持しているその相同配列を含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  12. 前記軽鎖可変領域が、配列番号７３、配列番号７４、配列番号７５、配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７、配列番号８８からなる群から選択される配列、および少なくとも８０％の配列同一性を有ししかもヒトＳＩＲＰαに対する特異的結合親和性を保持しているその相同配列を含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  13. ａ）前記重鎖可変領域が配列番号５９の配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号７３の配列を含むか、または
    ｂ）前記重鎖可変領域が配列番号６０の配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号７４の配列を含むか、または
    ｃ）前記重鎖可変領域が配列番号６１の配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号７５の配列を含むか、または
    ｄ）前記重鎖可変領域が配列番号６２の配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号７６の配列を含むか、または
    ｅ）前記重鎖可変領域が配列番号６３の配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号７７の配列を含むか、または
    ｆ）前記重鎖可変領域が配列番号６４の配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号７８の配列を含むか、または
    ｇ）前記重鎖可変領域が配列番号６５の配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号７９の配列を含むか、または
    ｈ）前記重鎖可変領域が配列番号６５の配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８０の配列を含むか、または
    ｉ）前記重鎖可変領域が配列番号６６の配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８１の配列を含むか、または
    ｊ）前記重鎖可変領域が配列番号６５の配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８２の配列を含むか、または
    ｋ）前記重鎖可変領域が配列番号６７の配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８３の配列を含むか、または
    ｌ）前記重鎖可変領域が配列番号６８の配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８２の配列を含むか、または
    ｍ）前記重鎖可変領域が配列番号６５の配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８４の配列を含むか、または
    ｎ）前記重鎖可変領域が配列番号６９の配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８５の配列を含むか、または
    ｏ）前記重鎖可変領域が配列番号７０の配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８６の配列を含むか、または
    ｐ）前記重鎖可変領域が配列番号７１の配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８７の配列を含むか、または
    ｑ）前記重鎖可変領域が配列番号７２の配列を含み、前記軽鎖可変領域が配列番号８８の配列を含む、請求項１から１２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  14. １つまたは複数のアミノ酸残基の置換または修飾をさらに含み、しかもヒトＳＩＲＰαに対する特異的結合親和性を保持している、請求項１から１３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  15. 前記置換または修飾のうちの少なくとも１つが、前記重鎖可変領域もしくは軽鎖可変領域の前記ＣＤＲ配列のうちの１つもしくは複数の中、および／または前記非ＣＤＲ配列のうちの１つもしくは複数の中にある、請求項１４に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  16. Ｆｃ領域、任意選択でヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）のＦｃ領域、または任意選択でヒトＩｇＧのＦｃ領域をさらに含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  17. 前記Ｆｃ領域が、ヒトＩｇＧ４に由来する、請求項１６に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  18. ヒトＩｇＧ４に由来する前記Ｆｃ領域が、Ｓ２２８Ｐの変異および／またはＬ２３５Ｅの変異を含む、請求項１７に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  19. ヒト化されている、請求項１から１８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  20. モノクローナル抗体、二重特異的抗体、多重特異的抗体、組換え抗体、キメラ抗体、標識抗体、二価抗体、抗イディオタイプ抗体、または融合タンパク質である、請求項１から１９のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  21. ダイアボディ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ断片、ジスルフィド安定化Ｆｖ断片（ｄｓＦｖ）、（ｄｓＦｖ）２、二重特異的ｄｓＦｖ（ｄｓＦｖ－ｄｓＦｖ’）、ジスルフィド安定化ダイアボディ（ｄｓダイアボディ）、単鎖抗体分子（ｓｃＦｖ）、ｓｃＦｖダイマー（二価ダイアボディ）、多重特異的抗体、ラクダ化単一ドメイン抗体、ナノボディ、ドメイン抗体、または二価ドメイン抗体である、請求項１から２０のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  22. ａ）Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによって測定して、ヒトＳＩＲＰαに対して１０－７Ｍ以下の結合親和性を有すること、
    ｂ）ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、１ｎＭ以下のＥＣ５０でヒトＳＩＲＰα ｖ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に特異的に結合すること、および
    ｃ）ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、１ｎＭ以下のＥＣ５０でヒトＳＩＲＰα ｖ２ ＥＣＤに特異的に結合すること
    からなる群から選択される、ヒトＳＩＲＰαに対する１つまたは複数の結合特性を有する、請求項１から２１のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  23. ａ）ＳＩＲＰγ ＥＣＤに検出可能に結合しないこと、
    ｂ）ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、５０ｎＭ以下のＥＣ５０でＳＩＲＰγ ＥＣＤに結合すること、
    ｃ）ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、１ｎＭ以下のＥＣ５０でＳＩＲＰβ ＥＣＤに特異的に結合すること、
    ｄ）ＥＬＩＳＡアッセイによって測定して、ＳＩＲＰβ ＥＣＤに検出可能に結合しないこと、
    ｅ）ＦＡＣＳアッセイによって測定して、ヒトＳＩＲＰα ＩｇＶドメインに特異的に結合すること、
    ｆ）ＦＡＣＳアッセイによって測定して、ヒトＳＩＲＰα ＩｇＶドメインに検出可能に結合しないこと、
    ｇ）Ｂｉａｃｏｒｅアッセイによって測定して、１０－５Ｍ以下の結合親和性でマウスＳＩＲＰαに特異的に結合すること、
    ｈ）ＦＡＣＳアッセイによって測定して、１０ｎＭの濃度でカニクイザルＳＩＲＰαに特異的に結合すること、
    ｉ）ファゴサイトーシスアッセイによって測定して、１０ｎＭの濃度でマクロファージ細胞によるＣＤ４７発現標的細胞のファゴサイトーシスを誘導することができること、ならびに
    ｊ）ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を低減させないこと
    からなる群から選択される、１つまたは複数の特性を有する、請求項１から２２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  24. ヒトＳＩＲＰαとの結合について請求項１から２３のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片と競合する、抗ＳＩＲＰα抗体またはその抗原結合性断片。
  25. ヒトＳＩＲＰαとの結合について配列番号７０の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８６の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、請求項２４に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  26. ヒトＳＩＲＰαとの結合について、配列番号７２の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８８の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、請求項２４に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  27. ヒトＳＩＲＰαとの結合について、配列番号６２の配列を含む重鎖可変領域および配列番号７６の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合するか、またはヒトＳＩＲＰαとの結合について、配列番号６９の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８５の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、請求項２４に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  28. ヒトＳＩＲＰαとの結合について、配列番号７１の配列を含む重鎖可変領域および配列番号８７の配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体と競合する、請求項２４に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  29. 二重特異的である、請求項１から２８のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  30. ＳＩＲＰα以外の第２の抗原と特異的に結合することができる、請求項２９に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  31. ＳＩＲＰα上の第２のエピトープに特異的に結合することができる、請求項２９に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  32. 前記第２の抗原が、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２４、ＣＤ２５、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４４、ＣＤ５２、ＣＤ５６、ＣＤ７０、ＣＤ９６、ＣＤ９７、ＣＤ９９、ＣＤ１２３、ＣＤ２７９（ＰＤ－１）、ＣＤ２７４（ＰＤ－Ｌ１）、ＧＰＣ－３、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＴＲＯＰ２、ＣＬＤＮ１８．２、ＥＧＦＲ、ＨＥＲ２、ＣＤ１１７、Ｃ－Ｍｅｔ、ＰＴＨＲ２、およびＨＡＶＣＲ２（ＴＩＭ３）からなる群から選択される、請求項３０に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  33. １つまたは複数のコンジュゲート部分に連結された、請求項１から３２のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  34. 前記コンジュゲート部分がクリアランス修飾剤、化学療法剤、毒素、放射性同位体、ランタニド、発光標識、蛍光標識、酵素基質標識、ＤＮＡアルキル化剤、トポイソメラーゼ阻害剤、チューブリンバインダー、精製部分、またはその他の抗がん薬物を含む、請求項３３に記載の抗体またはその抗原結合性断片。
  35. 請求項１から３４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片および１つまたは複数の薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
  36. 請求項１から３４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片をコードする単離されたポリヌクレオチド。
  37. 請求項３６に記載の単離されたポリヌクレオチドを含むベクター。
  38. 請求項３７に記載のベクターを含む宿主細胞。
  39. 請求項１から３４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片、および／または請求項３５に記載の医薬組成物、ならびに第２の治療剤を含むキット。
  40. 請求項３７に記載のベクターが発現される条件下で請求項３８に記載の宿主細胞を培養するステップを含む、請求項１から３４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合性断片を発現する方法。
  41. 治療有効量の請求項１から３４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片、および／または請求項３５に記載の医薬組成物を対象に投与するステップを含む、前記対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を処置し、防止し、または軽減する方法。
  42. 前記疾患、障害、または状態が、がん、固形腫瘍、慢性感染症、炎症性疾患、多発性硬化症、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症性ショック、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、移植片機能不全、または関節炎である、請求項４１に記載の方法。
  43. 前記がんが肛門がん、虫垂がん、星状細胞腫、基底細胞癌、胆嚢がん、胃がん、肺がん、気管支がん、骨がん、肝胆管がん、膵がん、乳がん、肝がん、卵巣がん、精巣がん、腎がん、腎盂尿管がん、唾液腺がん、小腸がん、尿道がん、膀胱がん、頭頚部がん、脊椎がん、脳がん、頸がん、子宮がん、子宮内膜がん、結腸がん、結腸直腸がん、直腸がん、食道がん、胃腸管がん、皮膚がん、前立腺がん、下垂体がん、膣がん、甲状腺がん、咽喉がん、膠芽細胞腫、黒色腫、骨髄異形成症候群、肉腫、奇形腫、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ＴもしくはＢ細胞リンパ腫、ＧＩ器官間質腫、軟組織腫瘍、肝細胞癌、腺癌である、請求項４２に記載の方法。
  44. 前記がんがＣＤ４７陽性がんである、請求項４２または４３に記載の方法。
  45. 前記対象が、ヒトである、請求項４１から４４のいずれか一項に記載の方法。
  46. 前記投与が経口、経鼻、静脈内、皮下、舌下、または筋肉内投与を介する、請求項４１から４５のいずれか一項に記載の方法。
  47. 治療有効量の第２の治療剤を投与するステップをさらに含む、請求項４１から４６のいずれか一項に記載の方法。
  48. 前記第２の治療剤が化学療法剤、抗がん薬、放射線療法剤、免疫療法剤、抗血管新生剤、標的療法剤、細胞療法剤、遺伝子療法剤、ホルモン療法剤、抗ウイルス剤、抗生剤、鎮痛剤、抗酸化剤、金属キレート剤、およびサイトカインからなる群から選択される、請求項４７に記載の方法。
  49. ＳＩＲＰα陽性細胞を請求項１から３４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片および／または請求項３５に記載の医薬組成物に曝露するステップを含む、前記ＳＩＲＰα陽性細胞におけるＳＩＲＰαの活性を調節する方法。
  50. 前記細胞がファゴサイトーシス細胞である、請求項４９に記載の方法。
  51. 試料を請求項１から３４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片および／または請求項３５に記載の医薬組成物と接触させるステップ、ならびに前記試料中におけるＳＩＲＰαの存在または量を決定するステップを含む、前記試料中におけるＳＩＲＰαの存在または量を検出する方法。
  52. ａ）対象から得た試料を請求項１から３４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片および／または請求項３５に記載の医薬組成物と接触させるステップ、ｂ）前記試料中のＳＩＲＰαの存在または量を決定するステップ、ならびにｃ）ＳＩＲＰαの存在または量を前記対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態の存在またはステータスと相関させるステップを含む、前記対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を診断する方法。
  53. 前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３３の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４０の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、請求項５１または５２に記載の方法。
  54. 対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を処置し、防止し、または軽減するための医薬の製造における、請求項１から３４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片および／または請求項３５に記載の医薬組成物の使用。
  55. 対象におけるＳＩＲＰα関連の疾患、障害、または状態を診断するための診断試薬の製造における、請求項１から３４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片および／または請求項３５に記載の医薬組成物の使用。
  56. 前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３３の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４０の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、請求項５５に記載の使用。
  57. ＳＩＲＰαの検出に有用な、請求項１から３４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片および／または請求項３５に記載の医薬組成物を含むキット。
  58. 前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号５の配列を含むＨＣＤＲ１、配列番号１２の配列を含むＨＣＤＲ２、配列番号１９の配列を含むＨＣＤＲ３、配列番号２６の配列を含むＬＣＤＲ１、配列番号３３の配列を含むＬＣＤＲ２、および配列番号４０の配列を含むＬＣＤＲ３を含む、請求項５７に記載のキット。
  59. 請求項１から３４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片および／または請求項３５に記載の医薬組成物を、ファゴサイトーシスを誘導するのに有効な用量で対象に投与するステップを含む、前記対象においてファゴサイトーシスを誘導する方法。
  60. 前記対象が、ヒトである、請求項５９に記載の方法。
  61. 前記対象が、がん、固形腫瘍、慢性感染症、炎症性疾患、多発性硬化症、自己免疫疾患、神経疾患、脳損傷、神経損傷、赤血球増加症、ヘモクロマトーシス、外傷、敗血症性ショック、線維症、アテローム性動脈硬化症、肥満、ＩＩ型糖尿病、移植片機能不全、および関節炎からなる群から選択される疾患、障害、または状態を有する、請求項５９または６０に記載の方法。
  62. 請求項１から３４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合性断片および／または請求項３５に記載の医薬組成物の存在下において、標的細胞を、ＳＩＲＰα陽性ファゴサイトーシス細胞試料と接触させて、それにより、前記ＳＩＲＰα陽性ファゴサイトーシス細胞による前記標的細胞のファゴサイトーシスを誘導するステップを含む、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてファゴサイトーシスを誘導する方法。
  63. 前記標的細胞が、ＣＤ４７発現細胞である、請求項６２に記載の方法。
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