JP2024056817A - 抗ｓｉｒｐ－アルファ抗体 - Google Patents

抗ｓｉｒｐ－アルファ抗体 Download PDF

Info

Publication number
JP2024056817A
JP2024056817A JP2024018149A JP2024018149A JP2024056817A JP 2024056817 A JP2024056817 A JP 2024056817A JP 2024018149 A JP2024018149 A JP 2024018149A JP 2024018149 A JP2024018149 A JP 2024018149A JP 2024056817 A JP2024056817 A JP 2024056817A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
seq
amino acid
acid sequence
antibody
variable region
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2024018149A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2024056817A5 (ja
Inventor
ベッチャー，ジャーク
Boettcher Jark
グプタ，パンカジ
Pankaj P Gupta
ハブテ，ハブトム
Habte Habtom
ファン，インイン
Yining Huang
クマール，サンディープ
Kumar Sandeep
フェニックス，キャスリン
Phoenix Kathryn
ラルフ，ケリー－リー
Ralph Kerry-Leigh
ツァン，ウィング・パン・ケニー
Wing Pan Tsang Kenny
トロンベッタ，エドゥアルド・セルジオ
Sergio Trombetta Eduardo
グプタ，プリヤンカー
Gupta Priyanka
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Boehringer Ingelheim International GmbH
OSE Immunotherapeutics SA
Original Assignee
Boehringer Ingelheim International GmbH
OSE Immunotherapeutics SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Boehringer Ingelheim International GmbH, OSE Immunotherapeutics SA filed Critical Boehringer Ingelheim International GmbH
Publication of JP2024056817A publication Critical patent/JP2024056817A/ja
Publication of JP2024056817A5 publication Critical patent/JP2024056817A5/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

【課題】ＳＩＲＰαとＣＤ４７との相互作用をブロックすることができ、いくつかの種類のがん、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、感染性疾患、又は線維症の治療を可能にするほどＳＩＲＰγに対して選択性である、汎対立遺伝子抗ＳＩＲＰα抗体を提供する。【解決手段】本発明は、ＳＩＲＰα、特にヒトＳＩＲＰαに（例えば、特異的に）結合する、薬剤、特に、抗体又はその抗原結合断片を提供する。本発明の一態様において、抗体又はその抗原結合断片は、ＳＩＲＰαとＣＤ４７との間の相互作用をブロックする。本発明の別の態様において、抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαシグナル伝達をブロックする。【選択図】なし

Description

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、配列表を含む。上述のＡＳＣＩＩコピーは、２０２２年５月６日に作成され、１０５２１８－０３－５０１１－ＷＯ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔという名称であり、４５３，０００バイトのサイズである。
関連出願の開示
本出願は、２０２１年６月４日に出願された米国仮出願第６３／１９７，２５９号、２０２２年３月３１日に出願された米国仮出願第６３／３２５，８２８号、及び２０２２年５月６日に出願された米国仮出願第６３／３３９，３２６号の利益を主張し、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本発明は、一般に、治療的使用及び／又は診断的使用のための抗ＳＩＲＰα（シグナル調節タンパク質アルファ）抗体又はその抗原結合断片に関する。より具体的には、本発明は、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片、並びに様々な疾患又は障害、例えば、がん、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、感染性疾患、又は線維症の治療のためのそれらの使用方法に関する。抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を含む薬学的組成物及びキットも開示される。
ＳＩＲＰαは、マクロファージ、好中球、及び樹状細胞のサブセット等の骨髄系細胞上に発現する阻害性受容体である。ＳＩＲＰαは、３つのＩｇ様ドメインと、単一の膜貫通ドメインと、２つの典型的な免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を形成する４個のチロシン残基を有する細胞質尾部と、を含有する。ＳＩＲＰαの天然リガンドは、ＣＤ４７であり、赤血球及び血小板を含む多くの細胞上で発現される。ＣＤ４７に対するＳＩＲＰαの結合によって、ＳＩＲＰα細胞内ＩＴＩＭドメインにおけるチロシン残基のリン酸化、その後の細胞膜におけるＳＨＰ－１及びＳＨＰ－２ホスファターゼの動員及び活性化が起こり、次いで、下流の標的の脱リン酸化によって、食作用又は抗原提示を含む細胞機能を調節することができる。
効果的なＳＩＲＰαアゴニストの開発は、ＣＤ４７結合ドメイン内の多型によって複雑化する。一般的な集合体には、最大１０個の対立遺伝子バリアントが存在し得ることが報告されており（Ｔａｋｅｎａｋａ ２００７；Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００７ Ｄｅｃ；８（１２）：１３１３－２３．ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｉ１５２７．）、近年の研究（Ｔｒｅｆｆｅｒｓ，２０１８，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１８ Ｆｅｂ；４８（２）：３４４－３５４．ｄｏｉ：１０．１００２／ｅｊｉ．２０１７４７２１５．、ＭＡｂｓ Ａｕｇ／Ｓｅｐ ２０１９；１１（６）：１０３６－１０５２．ｄｏｉ：１０．１０８０／１９４２０８６２．２０１９．１６２４１２３．）は、２つのＳＩＲＰαバリアントＶ１及びＶ２が、最も多く見られる対立遺伝子群であるホモ接合型Ｖ１／Ｖ１、ホモ接合型Ｖ２／Ｖ２、及びヘテロ接合型Ｖ１／Ｖ２を構成することを強調している。これらのバリアントは、ＣＤ４７結合を担うＳＩＲＰαのＮ末端免疫グロブリン様ドメイン中の１１８個のアミノ酸残基のうちの１３個が異なっている。これらの多型性残基は、ＣＤ４７結合部位の外側に位置しており、したがって、ＳＩＲＰαバリアントに対するＣＤ４７結合の親和性は、同様である（Ｈａｔｈｅｒｌｅｙ Ｄ，２００８ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２００８ Ｎｏｖ １４；２９（５）：６７５－８．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｉｍｍｕｎｉ．２００８．１０．００４）。その結果、ＳＩＲＰα遺伝子型とは無関係な、多様な患者集団におけるＳＩＲＰαの治療標的化は、この２つの主要なＳＩＲＰα対立遺伝子（Ｖ１及びＶ２）と交差反応する汎対立遺伝子抗体を必要とする。
ＳＩＲＰαを標的化するときに多型性バリアントを考慮することに加えて、特にＮ末端ドメインにおける高い配列保存性を考慮して、ＳＩＲＰβ１及びＳＩＲＰγといったＳＩＲＰαの最も近い関連物も考慮すべきである。ＳＩＲＰβ１は、ＳＩＲＰαと同様に、骨髄系統の細胞でも主に発現されるが、ＳＩＲＰαとは異なり、その自身のシグナル伝達細胞質ドメインを欠いているが、膜貫通領域内に正に帯電したアミノ酸残基を有し、それによりＩＴＡＭ含有アダプター分子ＤＡＰ１２と安定に会合することができ、したがって、活性化受容体として作用すると推定される。ＳＩＲＰβ１は、ＣＤ４７に結合せず、そのリガンドは、特定されていない。ＳＩＲＰβ１の少なくとも２つのアイソフォームが存在する（Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ ２００７ Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００７ Ｊａｎ １９；３６５（３）：６８０－９３．ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ｊｍｂ．２００６．０９．０７９、Ｂｒｏｏｋｅ ｅｔ ａｌ．２００４ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４ Ａｕｇ １５；１７３（４）：２５６２－７０．ｄｏｉ：１０．４０４９／ｊｉｍｍｕｎｏｌ．１７３．４．２５６２．）、これらはＳＩＲＰファミリー遺伝子クラスター内の遺伝子のタンデム複製によって生じた。ＳＩＲＰγは、Ｔ細胞及び活性化ＮＫ細胞でのみ発現され、ＳＩＲＰα：ＣＤ４７相互作用よりも１０倍低い親和性でＣＤ４７に結合する。固有のシグナル伝達能力は有していないが、Ｔ細胞経内皮移行（ＴＥＭ）及び抗原提示において、何らかの役割を果たすという証拠が報告されている。
以上のことから、ＳＩＲＰαとＣＤ４７との相互作用をブロックすることができ、いくつかの種類のがん、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、感染性疾患、又は線維症の治療を可能にするほどＳＩＲＰγに対して選択性である、汎対立遺伝子抗ＳＩＲＰα抗体が必要とされている。
本発明は、ＳＩＲＰα、特にヒトＳＩＲＰαに（例えば、特異的に）結合する、薬剤、特に、抗体又はその抗原結合断片を提供することによって、上述の必要性に対処するものである。本発明の一態様において、抗体又はその抗原結合断片は、ＳＩＲＰαとＣＤ４７との間の相互作用をブロックする。本発明の別の態様において、抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαシグナル伝達をブロックする。
本発明の抗体又はその抗原結合断片は、例えば、ＳＩＲＰαとＣＤ４７との間の相互作用を調整することによって、特に、ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαシグナル伝達をブロックすることによって軽減することができる疾患又は障害の治療及び／又は予防に有用である。本発明の一態様において、抗体又はその抗原結合断片は、例えば、がん、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、感染性疾患、又は線維症、好ましくは、がんの治療に有用である。
本発明は、本明細書で以下に記載される特性のうちの１つ以上を有する、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を提供する。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、ＳＩＲＰα、特に、ヒトＳＩＲＰα又はカニクイザルＳＩＲＰα、より特定的にはヒトＳＩＲＰαに特異的に結合する。一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＳＩＲＰαのＶ１及び／又はＶ２対立遺伝子に結合する。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、ＳＩＲＰγ、特に、カニクイザルＳＩＲＰγ又はヒトＳＩＲＰγ、より特定的にはヒトＳＩＲＰγに結合しない（例えば、検出可能な結合が存在しないか、又は抗ＳＩＲＰα抗体若しくはその抗原結合断片が１μＭ以上のＫＤで結合する）。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、ウサギ、マウス、ラット、又はイヌＳＩＲＰαに結合しない（例えば、検出可能な結合が存在しないか、又は抗ＳＩＲＰα抗体若しくはその抗原結合断片が１μＭ以上のＫＤで結合する）。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、ＳＩＲＰα、特に、ヒトＳＩＲＰα又はカニクイザルＳＩＲＰα、より特定的にはヒトＳＩＲＰαに対するＣＤ４７の結合をブロックする。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＳＩＲＰα－Ｖ１及びＳＩＲＰα－Ｖ２に対するＣＤ４７の結合をブロックする。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαシグナル伝達をブロックする。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、マクロファージ及び／又は樹状細胞による食作用を増強する。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、腫瘍標的化剤、特に、腫瘍標的化抗体と組み合わせて、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を増強する。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、マクロファージ及び／又は樹状細胞による腫瘍細胞の食作用を増強する。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、Ｔ細胞増殖の阻害をブロックする。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、好ましい薬物動態特性を有する。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、好ましい生物物理学的特性、例えば、収率、品質、安定性、又は溶解性を有する。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）配列番号３３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）と、配列番号３４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）と、配列番号３５のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域、及び
配列番号３６又は配列番号３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）と、配列番号３８のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）と、配列番号３９のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域、
又は
ｂ）配列番号１若しくは配列番号２２３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）と、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２２４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）と、配列番号６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域、及び
配列番号７、配列番号８、配列番号９若しくは配列番号２２５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）と、配列番号１０、配列番号１１、若しくは配列番号２２６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）と、配列番号１２若しくは配列番号２２７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域、
又は
ｃ）配列番号５２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）と、配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）と、配列番号５４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域、及び
配列番号５５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）と、配列番号５６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）と、配列番号５７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域、
又は
ｄ）配列番号３３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）と、配列番号７０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）と、配列番号７１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域、及び
配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）と、配列番号７２のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）と、配列番号３９のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域、
又は
ｅ）配列番号２６２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）と、配列番号８７のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）と、配列番号８８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域、及び
配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）と、配列番号７２のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）と、配列番号８９のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域を含む。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）配列番号３３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）と、配列番号３４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）と、配列番号３５のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域、及び配列番号２３３のアミノ酸配列であって、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ若しくはＧ、及びＸ２＝Ｌ若しくはＡである、アミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）と、配列番号３８のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）と、配列番号３９のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域、又は
ｂ）配列番号２２８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）であって、アミノ酸Ｘ１＝Ｎ若しくはＤである、アミノ酸配列と、配列番号２２９のアミノ酸配列であって、Ｘ１＝Ｙ若しくはＤ、Ｘ２＝Ｎ若しくはＴ、Ｘ３＝Ｎ若しくはＱ、及びＸ４＝Ｓ若しくはＰである、アミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）と、配列番号６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域、及び配列番号２３０のアミノ酸配列であって、Ｘ１＝Ｋ若しくはＲ、Ｘ２＝Ｎ若しくはＴ、Ｘ３＝Ｇ若しくはＡ、及びＸ４＝Ｎ、Ａ若しくはＴである、アミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）と、配列番号２３１のアミノ酸配列であって、Ｘ１＝Ｌ、Ｑ若しくはＧ、及びＸ２＝Ｎ若しくはＳである、アミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）と、配列番号２３２のアミノ酸配列であって、Ｘ１＝Ｍ若しくはＧである、アミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域を含む。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１００、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、若しくは１１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０５、１２５、若しくは１２６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
更なる態様において、本発明の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１０４、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、若しくは２２１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０９、１２７、１２８、１２９、１３０、若しくは２２２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、配列番号１００、１０１、１０２、１０３、若しくは１０４のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０５、１０６、１０７、１０８、若しくは１０９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｂ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｄ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｆ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｇ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｈ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｊ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｋ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｌ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｍ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｎ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｏ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｐ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｄ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｆ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｇ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｈ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｉ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｊ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｋ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｌ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｍ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｎ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｏ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｐ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｑ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｒ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｓ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｔ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｕ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｖ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｗ）配列番号２２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、
ａ）配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｂ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｃ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｄ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
ｅ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号１３１、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４８、１４９、１５０、１５１、又は１５２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７４、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、又は２１８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
更なる態様において、本発明の抗ＳＩＲＰα抗体は、
ａ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７４のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｂ）配列番号１３８のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｃ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｄ）配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１８３のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｅ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１８４のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｆ）配列番号１４２のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１８５のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｇ）配列番号１４３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１８６のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｈ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１８７のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｊ）配列番号１４６のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１８９のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｋ）配列番号１４７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｌ）配列番号１４８のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９１のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｍ）配列番号１４９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９２のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｎ）配列番号１５０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９３のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｏ）配列番号１５１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９４のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｐ）配列番号１５２のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９５のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｑ）配列番号２１７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２１８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号１３５、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、又は２１９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７８、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、又は２２０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体は、
ａ）配列番号１３５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７８のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｂ）配列番号１５３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９６のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｃ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９７のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｄ）配列番号１５５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９８のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｅ）配列番号１５６のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９９のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｆ）配列番号１５７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２００のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｇ）配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２０１のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｈ）配列番号１５９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２０２のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｉ）配列番号１６０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２０３のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｊ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｋ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２０５のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｌ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２０６のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｍ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２０７のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｎ）配列番号１６５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｏ）配列番号１６６のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２０９のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｐ）配列番号１６７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２１０のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｑ）配列番号１６８のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２１１のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｒ）配列番号１６９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２１２のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｓ）配列番号１７０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２１３のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｔ）配列番号１７１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２１４のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｕ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２１５のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｖ）配列番号１７３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２１６のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｗ）配列番号２１９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体は、配列番号１３１、１３３、１３４、１３７、又は１３５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７４、１７６、１７７、１８０、又は１７８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体は、
ａ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７４のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｂ）配列番号１３３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７６のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｃ）配列番号１３４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７７のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｄ）配列番号１３７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１８０のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
ｅ）配列番号１３５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、ヒト抗体又はその抗原結合断片である。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、モノクローナル抗体である。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体は、全長抗体である。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその断片は、ヒトモノクローナル抗体、例えば、全長ヒトモノクローナル抗体である。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号１００、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、又は１１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１０５、１２５、又は１２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する軽鎖可変領域を含む。本発明の更なる態様において、配列番号１００、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、又は１１７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１０５、１２５、又は１２６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する軽鎖可変領域を含む、抗体、又はその抗原結合断片は、ＳＩＲＰαに特異的に結合する。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号１０４、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、又は２２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１０９、１２７、１２８、１２９、１３０、又は２２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する軽鎖可変領域を含む。本発明の更なる態様において、配列番号１０４、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、又は２２１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１０９、１２７、１２８、１２９、１３０、又は２２２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する軽鎖可変領域を含む、抗体、又はその抗原結合断片は、ＳＩＲＰαに特異的に結合する。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体、又はその抗原結合断片は、配列番号１０１、１０２、又は１０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１０６、１０７、１０８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する軽鎖可変領域を含む。本発明の更なる態様において、配列番号１０１、１０２、又は１０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する重鎖可変領域、及び配列番号１０６、１０７、１０８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する軽鎖可変領域を含む、抗体、又はその抗原結合断片は、ＳＩＲＰαに特異的に結合する。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体、又はその抗原結合断片は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ及びＩｇＥ、例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ又はＩｇＥ、より特定的には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４からなる群から選択される抗体からの重鎖定常領域を含む。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、重鎖定常領域を含み、重鎖定常領域は、Ｓ２４１Ｐ置換を有するＩｇＧ４の重鎖定常領域である。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、Ｃ末端リジン残基を欠く重鎖を含む。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、重鎖定常領域を含み、重鎖定常領域は、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ置換を有するＩｇＧ１の重鎖定常領域である。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、カッパ及びラムダ軽鎖からなる群から選択される軽鎖定常領域を含む。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、任意選択的に、追加の治療薬剤と組み合わせて投与される。追加の治療薬剤は、化学療法剤、抗ＰＤ－１若しくはＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、Ｔ細胞エンゲージャー、ＣＤ１３７アゴニスト抗ＦＡＰ二重特異性抗体、腫瘍標的化抗体、ＶＥＧＦ－ＡＮＧ２二重特異性抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＭＤＭ２アンタゴニスト、又は放射線療法であり得る。
一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、抗ＰＤ－１抗体、例えば、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、エザベンリマブ、又はアテゾリズマブと組み合わせて投与される。更なる態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、例えば、アベルマブ又はデュルバルマブを含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせて投与される。
一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、腫瘍標的化抗体、例えば、ＨＥＲ２を標的化する抗体（例えば、トラスツズマブ）、ＥＧＦＲを標的化する抗体（例えば、セツキシマブ、パニツムマブ）、ＣＤ２０を標的化する抗体（例えば、リツキシマブ、オファツムマブ）、又はＣＤ５２を標的化する抗体（例えば、アレムツズマブ）と組み合わせて投与される。
一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、２つの治療薬剤と組み合わせて投与される。更なる態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、抗ＰＤ－１抗体（例えば、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、エザベンリマブ、若しくはアテゾリズマブ）、又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、アベルマブ若しくはデュルバルマブ）、及び腫瘍標的化抗体、例えば、ＨＥＲ２を標的化する抗体（例えば、トラスツズマブ）、ＥＧＦＲを標的化する抗体（例えば、セツキシマブ、パニツムマブ）、ＣＤ２０を標的化する抗体（例えば、リツキシマブ、オファツムマブ）、又はＣＤ５２を標的化する抗体（例えば、アレムツズマブ）と組み合わせて投与される。
本発明の一態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２４０～２５２のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むＳＩＲＰαタンパク質上の特定の線形又は立体配座の「ＳＩＲＰαエピトープ」を認識する。本発明の一態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２５３～２６０及び２６４のうちのいずれか１つ、特に、配列番号２５６及び２５７の任意の１つ以上に示されるアミノ酸配列を含むＳＩＲＰαタンパク質上の特定の線形又は立体配座の「ＳＩＲＰαエピトープ」を認識する。本発明の一態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６６に示されるような、アミノ酸：ＬＥＵ６０、ＩＬＥ６１、ＶＡＬ６３、ＧＬＹ６４、ＰＲＯ６５、ＧＬＮ８２、ＬＹＳ８３、ＧＬＵ８４、ＴＨＲ９７、ＬＹＳ９８、ＡＲＧ９９、ＧＬＵ１００、ＬＹＳ１２６、ＧＬＹ１２７、ＳＥＲ１２８、ＰＲＯ１２９、及びＡＳＰ１３０を含むＳＩＲＰαエピトープに結合する。本発明の一態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６５に示されるような、アミノ酸ＬＥＵ６０、ＩＬＥ６１、ＶＡＬ６３、ＧＬＹ６４、ＰＲＯ６５、ＧＬＮ８２、ＬＹＳ８３、ＧＬＵ８４、ＴＨＲ９７、ＬＹＳ９８、ＡＲＧ９９、ＡＳＮ１００、ＬＹＳ１２６、ＧＬＹ１２７、ＳＥＲ１２８、ＰＲＯ１２９、及びＡＳＰ１３０を含むＳＩＲＰαエピトープに結合する。本発明の別の態様において、抗体又はその抗原結合断片は、アミノ酸ＡＳＰ１３０を含むＳＩＲＰαエピトープに結合する。別の態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２６４、及び配列番号２５６の任意の１つ以上、特に、配列番号２５６を含むＳＩＲＰαエピトープに結合する。
本発明の一態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６６に示されるような、アミノ酸ＡＲＧ７０、ＧＬＹ７１、ＡＬＡ７２、ＧＬＹ７３、ＰＲＯ７４、ＡＬＡ７５、ＡＲＧ７６、ＧＬＵ７７、ＡＬＡ１１４、ＡＬＡ１１６、ＧＬＹ１１７、ＴＨＲ１１８、ＴＹＲ１２０、ＴＨＲ１３１、ＧＬＵ１３２、ＰＨＥ１３３、ＳＥＲ１３５、及びＧＬＵ１４０を含むＳＩＲＰαエピトープに結合する。本発明の一態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６５に示されるような、アミノ酸ＡＲＧ７０、ＧＬＹ７１、ＡＬＡ７２、ＧＬＹ７３、ＰＲＯ７４、ＧＬＹ７５、ＡＲＧ７６、ＧＬＵ７７、ＡＬＡ１１４、ＡＬＡ１１６、ＧＬＹ１１７、ＴＨＲ１１８、ＴＹＲ１２０、ＶＡＬ１３２、ＧＬＵ１３３、ＰＨＥ１３４、ＳＥＲ１３６、及びＧＬＵ１４１を含むＳＩＲＰαエピトープに結合する。本発明の別の態様において、抗体又はその抗原結合断片は、アミノ酸ＡＬＡ７２を含むＳＩＲＰαエピトープに結合する。別の態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、及び配列番号２６０の任意の１つ以上、特に、配列番号２５７を含むＳＩＲＰαエピトープに結合する。本発明の別の態様において、抗体又はその抗原結合断片は、ＳＩＲＰαに対する抗体Ａ～Ｅのいずれかの結合をブロックする。
別の態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６９又は２７０の修飾ＳＩＲＰαＶ１ポリペプチド配列に対する、配列番号２６８のＳＩＲＰαＶ１ポリペプチドに対するその結合と比較して同等の結合（例えば、親和性の１０倍未満の差）を示し、これは、任意選択的に、室温で測定される。好ましくは、抗体又はその抗原結合断片は、抗体Ａ、Ａ４、Ａ１０、又はその抗原結合断片である。
別の態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７１又は２７２の修飾ＳＩＲＰαＶ１ポリペプチド配列に対する、配列番号２６８のＳＩＲＰαＶ１ポリペプチドに対するその結合と比較して、減少した結合親和性（例えば、親和性の少なくとも１０倍の減少）を示し、これは、任意選択的に、室温で測定される。好ましくは、抗体又はその抗原結合断片は、抗体Ａ、Ａ４、Ａ１０、又はその抗原結合断片である。
別の態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７４又は２７５の修飾ＳＩＲＰαＶ２ポリペプチド配列に対する、配列番号２７３のＳＩＲＰαＶ２ポリペプチドに対するその結合と比較して同等の結合（例えば、親和性の１０倍未満の差）を示し、これは、任意選択的に、室温で測定される。好ましくは、抗体又はその抗原結合断片は、抗体Ａ、Ａ４、Ａ１０、又はその抗原結合断片である。
別の態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７７の修飾ＳＩＲＰβ１ポリペプチド配列に対する、配列番号２７６のＳＩＲＰβ１ポリペプチドに対するその結合と比較して、減少した結合親和性（例えば、親和性の少なくとも１０倍の減少）を示し、これは、任意選択的に、室温で測定される。好ましくは、抗体又はその抗原結合断片は、抗体Ａ、Ａ４、Ａ１０、又はその抗原結合断片である。
別の態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２７９の修飾ポリペプチド配列に対する結合を示し、これは、任意選択的に、室温で測定される。好ましくは、抗体又はその抗原結合断片は、抗体Ａ、Ａ４、Ａ１０、又はその抗原結合断片である。
別の態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２８２又は２８３の修飾ポリペプチド配列に対する結合を示し、これは、任意選択的に、室温で測定される。好ましくは、抗体又はその抗原結合断片は、抗体Ａ、Ａ４、Ａ１０、又はその抗原結合断片である。
一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＳＩＲＰαＶ１及びＳＩＲＰαＶ２に対して同等の結合親和性を示し、例えば、ヒトＳＩＲＰαＶ１及びＳＩＲＰαＶ２に対して結合親和性（ＫＤ）における１０倍未満の差（好ましくは、５倍未満の差）を示し、これは、任意選択的に、室温で測定される。
一態様において、本発明は、Ｖ１－ＳＩＲＰα及び／又はＶ２－ＳＩＲＰαに対する結合について、本発明の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片と競合する、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を提供する。一態様において、本発明は、Ｖ１－ＳＩＲＰα及び／又はＶ２ ＳＩＲＰαに対する結合について、配列番号１００、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、若しくは１１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０５、１２５、若しくは１２６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体、又は配列番号１３１、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、若しくは２１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７４、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、２１８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体と競合する、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を提供する。
一態様において、本発明は、Ｖ１－ＳＩＲＰα及び／又はＶ２－ＳＩＲＰαに対する結合について、本発明の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片と競合する、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を提供する。一態様において、本発明は、Ｖ１－ＳＩＲＰα及び／又はＶ２ ＳＩＲＰαに対する結合について、配列番号１０４、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、若しくは２２１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０９、１２７、１２８、１２９、１３０、若しくは２２２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む抗体、又は配列番号１３５、１５３、１５４、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、若しくは２１９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７８、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、若しくは２２０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体と競合する、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を提供する。
一態様において、本発明は、上述の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片と、薬学的に許容される賦形剤とを、任意選択的に、１つ以上の（例えば、１つ又は２つの）追加の治療薬剤と組み合わせて含む、薬学的組成物を提供する。更なる実施形態において、追加の治療薬剤は、化学療法剤、抗ＰＤ－１若しくはＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、Ｔ細胞エンゲージャー、ＣＤ１３７アゴニスト抗ＦＡＰ二重特異性抗体、腫瘍標的化抗体、ＶＥＧＦ－ＡＮＧ２二重特異性抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、又はＭＤＭ２アンタゴニストである。
一態様において、本発明は、医薬として使用するための、又は医薬の調製における、上述の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を提供する。
一態様において、本発明は、ＳＩＲＰα経路障害を治療する方法であって、それを必要とする対象に薬学的有効量の上述の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む、方法を提供する。一態様において、本発明は、ＳＩＲＰα経路障害を治療する際に使用するための、上述の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を提供する。一態様において、本発明は、ＳＩＲＰα経路障害を治療するための医薬の製造における上述の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片の使用を提供する。
一態様において、本発明は、対象（例えば、ヒト）においてＳＩＲＰαとＣＤ４７との間の相互作用を調整する方法であって、対象に、上述の抗ＳＩＲＰα抗体又は抗原結合断片を、対象においてＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαシグナル伝達をブロックするのに十分な量で含む組成物を投与することを含む、方法を提供する。一実施形態において、本発明は、対象においてＳＩＲＰαとＣＤ４７との間の相互作用を調整する際に使用するための上述の抗ＳＩＲＰα抗体又は抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、対象においてＳＩＲＰαとＣＤ４７との間の相互作用を調整するための医薬の製造における上述の抗ＳＩＲＰα抗体又は抗原結合断片の使用を提供する。
一実施形態において、本発明は、食作用を増強する方法であって、対象に、上述の抗ＳＩＲＰα抗体又は抗原結合断片を、ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαシグナル伝達をブロックするのに十分な量で含む組成物を投与することを含む、方法を提供する。一実施形態において、本発明は、対象においてマクロファージ及び／又は樹状細胞による食作用を増強する際に使用するための上述の抗ＳＩＲＰα抗体又は抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、対象においてマクロファージ及び／又は樹状細胞による腫瘍細胞の食作用を増強する際に使用するための上述の抗ＳＩＲＰα抗体又は抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、対象のための医薬の製造における上述の抗ＳＩＲＰα抗体又は抗原結合断片の使用を提供する。本発明の一態様において、本発明は、腫瘍標的化剤、好ましくは腫瘍標的化抗体と組み合わせて、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を増強する方法であって、本方法が、腫瘍標的化剤、好ましくは、腫瘍標的化抗体、より好ましくは、ＨＥＲ２を標的化する抗体（例えば、トラスツズマブ）、ＥＧＦＲを標的化する抗体（例えば、セツキシマブ、パニツムマブ）、ＣＤ２０を標的化する抗体（例えば、リツキシマブ、オファツムマブ）、ＣＤ５２を標的化する抗体（例えば、アレムツズマブ）と組み合わせて、対象に、上述の抗ＳＩＲＰα抗体又は抗原結合断片を、ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαシグナル伝達をブロックするのに十分な量で含む組成物を投与することを含む、方法を提供する。
一実施形態において、上の方法において、上の使用のための抗ＳＩＲＰα抗体若しくはその抗原結合断片において、又は上の抗ＳＩＲＰα抗体若しくはその抗原結合断片の使用において、疾患は、がん、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、感染性疾患、又は線維症からなる群から選択される。
一実施形態において、上の方法において、上の使用のための抗ＳＩＲＰα抗体若しくはその抗原結合断片において、又は上の抗ＳＩＲＰα抗体若しくはその抗原結合断片の使用において、抗体又はその抗原結合断片は、非経口投与経路、静脈内投与経路、又は皮下投与経路によって投与される。
一実施形態において、本発明は、上述の重鎖可変領域アミノ及び／又は軽鎖可変領域をコードする、単離されたポリヌクレオチドを提供する。
一実施形態において、本発明は、上述の重鎖及び／又は軽鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチドを提供する。
一実施形態において、本発明は、配列番号１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１０４、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、又は２２１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域をコードする、単離されたポリヌクレオチドを提供する。
一実施形態において、本発明は、配列番号１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１２５、１２６、１０９、１２７、１２８、１２９、１３０、又は２２２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をコードする、単離されたポリヌクレオチドを提供する。
一実施形態において、本発明は、配列番号１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１０４、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、又は２２１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域をコードする、単離されたポリヌクレオチド、及び配列番号１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１２５、１２６、１０９、１２７、１２８、１２９、１３０、又は２２２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をコードする、単離されたポリヌクレオチドを提供する。
一実施形態において、本発明は、配列番号１３１、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、２１７、１３５、１５３、１５４、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、２１９、１３３、１３４、１３７、１３２、又は１３６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖領域をコードする、単離されたポリヌクレオチドを提供する。
一実施形態において、本発明は、配列番号１７４、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、２１８、１７８、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２２０、１７６、１７７、１８０、１７５、又は１７９のうちのいずれか１ついずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖領域をコードする、単離されたポリヌクレオチドを提供する。
一実施形態において、本発明は、配列番号１３１、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、２１７、１３５，１５３、１５４、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、２１９、１３３、１３４、１３７、１３２、又は１３６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖領域をコードする、単離されたポリヌクレオチド、及び配列番号１７４、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、２１８、１７８、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２２０、１７６、１７７、１８０、１７５、又は１７９のうちのいずれか１ついずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖領域をコードする、単離されたポリヌクレオチドを提供する。
一実施形態において、本発明は、上述のポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。
一実施形態において、本発明は、配列番号１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１０４、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、又は２２１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。
一実施形態において、本発明は、配列番号１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１２５、１２６、１０９、１２７、１２８、１２９、１３０、又は２２２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。
一実施形態において、本発明は、配列番号１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１０４、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、又は２２１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチド、及び配列番号１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１２５、１２６、１０９、１２７、１２８、１２９、１３０、又は２２２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。
一実施形態において、本発明は、配列番号１３１、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、２１７、１３５、１５３、１５４、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、２１９、１３３、１３４、１３７、１３２、又は１３６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖領域をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。
一実施形態において、本発明は、配列番号１７４、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、２１８、１７８、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２２０、１７６、１７７、１８０、１７５、又は１７９のうちのいずれか１ついずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖領域をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。
一実施形態において、本発明は、配列番号１３１、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、２１７、１３５，１５３、１５４、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、２１９、１３３、１３４、１３７、１３２、又は１３６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖領域をコードするポリヌクレオチド、及び配列番号１７４、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、２１８、１７８、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２２０、１７６、１７７、１８０、１７５、又は１７９のうちのいずれか１ついずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖領域をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。
一実施形態において、本発明は、上述の発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。一実施形態において、宿主細胞は、哺乳動物細胞である。
一実施形態において、本発明は、抗体又はその抗原結合断片を製造する方法であって、
－上述の重鎖可変領域をコードする単離されたポリヌクレオチドを含む単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクター、及び上述の軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む宿主細胞を、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を両方とも含む抗体又はその抗原結合断片の形成を可能にする条件下で培養するステップと、
－上述の抗体又はその抗原結合断片を回収するステップと、を含む、方法を提供する。
一実施形態において、本発明は、抗体又はその抗原結合断片を製造する方法であって、
－上述の重鎖をコードする単離されたポリヌクレオチドを含む単離されたポリヌクレオチドを含み、上述の軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む宿主細胞を、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を両方とも含む抗体又はその抗原結合断片の形成を可能にする条件下で培養するステップと、
－上述の抗体又はその抗原結合断片を回収するステップと、を含む、方法を提供する。
一実施形態において、上述の方法は、抗体又はその抗原結合断片を精製するステップを更に含む。一実施形態において、上述の方法は、抗体又はその抗原結合断片を薬学的組成物へと製剤化するステップを更に含む。本明細書に開示される抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を含む薬学的製剤も本明細書で提供される。
概要及び以下の詳細な説明は、添付の図面と併せて読むと、更に理解される。開示される組成物、方法、及びキットを例示する目的のために、方法及びキットの例示的な実施形態が図面に示されているが、これらは開示される特定の実施形態に限定されるべきではない。
ＣＨＯ細胞上で発現した全長ヒトＶ１－ＳＩＲＰα又はＶ２－ＳＩＲＰαに対する抗体の結合を示す一連のグラフである。図１Ａ．親ＣＨＯ細胞に対する抗体結合。図１Ｂ．全長ヒトＳＩＲＰαＶ１（ＮＰ＿５４２９７０．１）を発現するＣＨＯ細胞に対する抗体結合。図１Ｃ．全長ヒトＳＩＲＰαＶ２を発現するＣＨＯ細胞（ＣＡＡ７１４０３．１）を発現するＣＨＯ細胞に対する抗体結合。 ヒト単球細胞株上で発現した内因性ヒトＶ１－ＳＩＲＰα又はＶ２－ＳＩＲＰαに対する抗体の結合を示す一連のグラフである。図２Ａ．Ｕ－９３７ヒト単球細胞株に対する抗体結合。図２Ｂ．ＴＨＰ－１ヒト単球細胞株に対する抗体結合。 初代ヒト単球上で発現した内因性ヒトＶ１－ＳＩＲＰα及び／又はＶ２－ＳＩＲＰαに対する抗体の結合を示す一連のグラフである。Ｖ１－ＳＩＲＰα対立遺伝子についてホモ接合型のドナーからの初代ヒトＣＤ１４＋単球に対する抗体結合（図３Ａ～３Ｄ）。実線、破線、及び点線は、それぞれ、ｈＩｇＧ１（ＬＡＬＡ）、ｈＩｇＧ４Ｐ、ｈＩｇＧ１（Ｋ３２２Ａ）骨格上で操作された抗体分子を示す。 初代ヒト単球上で発現した内因性ヒトＶ１－ＳＩＲＰα及び／又はＶ２－ＳＩＲＰαに対する抗体の結合を示す一連のグラフである。Ｖ１－ＳＩＲＰα対立遺伝子及びＶ２－ＳＩＲＰα対立遺伝子についてヘテロ接合型のドナーからの初代ヒトＣＤ１４＋単球に対する抗体結合（図４Ａ～４Ｄ）。実線、破線、及び点線は、それぞれ、ｈＩｇＧ１（ＬＡＬＡ）、ｈＩｇＧ４Ｐ、ｈＩｇＧ１（Ｋ３２２Ａ）骨格上で操作された抗体分子を示す。 初代ヒト単球上で発現した内因性ヒトＶ１－ＳＩＲＰα及び／又はＶ２－ＳＩＲＰαに対する抗体の結合を示す一連のグラフである。Ｖ２－ＳＩＲＰα対立遺伝子についてホモ接合型のドナーからの初代ヒトＣＤ１４＋単球に対する抗体結合（図５Ａ～５Ｄ）。実線、破線、及び点線は、それぞれ、ｈＩｇＧ１（ＬＡＬＡ）、ｈＩｇＧ４Ｐ、ｈＩｇＧ１（Ｋ３２２Ａ）骨格上で操作された抗体分子を示す。 Ｕ９７３ＳＩＲＰα ＫＯ細胞上で発現した全長ヒトＳＩＲＰβ１に対する抗体の結合を示す一連のグラフである。全長ヒトＳＩＲＰβ１（ＮＰ＿００６０５６．２）を発現するＵ９７３ＳＩＲＰα ＫＯ細胞に対する抗体結合（図６Ａ～６Ｄ）。実線、破線、及び点線は、それぞれ、ｈＩｇＧ１（ＬＡＬＡ）、ｈＩｇＧ４Ｐ、ｈＩｇＧ１（Ｋ３２２Ａ）骨格上で操作された抗体分子を示す。 Ｕ９７３ＳＩＲＰα ＫＯ細胞上で発現した全長ヒトＳＩＲＰβ１に対する抗体の結合を示す一連のグラフである。全長ヒトＳＩＲＰβＬ（ＮＰ＿００１１２９３１６．１）を発現するＵ９７３ＳＩＲＰα ＫＯ細胞に対する抗体結合（図７Ａ～７Ｄ）。実線、破線、及び点線は、それぞれ、ｈＩｇＧ１（ＬＡＬＡ）、ｈＩｇＧ４Ｐ、ｈＩｇＧ１（Ｋ３２２Ａ）骨格上で操作された抗体分子を示す。 組換えＳＩＲＰγタンパク質に対する抗体の結合を示すグラフである。固定化された組換えＨｉｓタグ化ヒトＳＩＲＰγ細胞外ドメイン（ＮＰ＿０６１０２６．２）に対する抗体結合。 ＣＨＯ細胞上で発現した全長ヒトＳＩＲＰγに対する抗体の結合を示すグラフである。全長ヒトＳＩＲＰγ（ＮＰ＿０６１０２６．２）を発現するＣＨＯ細胞に対する抗体結合。 初代ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞に対する抗体の結合を示す一連のグラフである。初代ヒトＣＤ３＋Ｔ細胞に対する抗体の結合（図１０Ａ～１０Ｄ）。実線、破線、及び点線は、それぞれ、ｈＩｇＧ１（ＬＡＬＡ）、ｈＩｇＧ４Ｐ、ｈＩｇＧ１（Ｋ３２２Ａ）骨格上で操作された抗体分子を示す。 ヒトＳＩＲＰαに対するヒトＣＤ４７の結合のブロックを示す一連のグラフである。Ａ．抗体は、全長ヒトＳＩＲＰαＶ１（ＮＰ＿５４２９７０．１）を発現するＣＨＯ細胞に対するヒトＣＤ４７の結合をブロックする。Ｂ．抗体は、全長ヒトＳＩＲＰαＶ２（ＣＡＡ７１４０３．１）を発現するＣＨＯ細胞に対するヒトＣＤ４７の結合をブロックする。 初代細胞上で発現したＳＩＲＰαに対するヒトＣＤ４７の結合のブロックを示す一連のグラフである。抗体は、Ｖ１についてホモ接合型のドナーからの初代ヒトＣＤ１４＋単球に対するヒトＣＤ４７の結合をブロックする（図１２Ａ～１２Ｄ）。実線、破線、及び点線は、それぞれ、ｈＩｇＧ１（ＬＡＬＡ）、ｈＩｇＧ４Ｐ、ｈＩｇＧ１（Ｋ３２２Ａ）骨格上で操作された抗体分子を示す。 初代細胞上で発現したＳＩＲＰαに対するヒトＣＤ４７の結合のブロックを示す一連のグラフである。抗体は、Ｖ１－ＳＩＲＰα対立遺伝子及びＶ２－ＳＩＲＰα対立遺伝子についてヘテロ接合型のドナーからの初代ヒトＣＤ１４＋単球に対するヒトＣＤ４７の結合をブロックする。実線、破線、及び点線は、それぞれ、ｈＩｇＧ１（ＬＡＬＡ）、ｈＩｇＧ４Ｐ、ｈＩｇＧ１（Ｋ３２２Ａ）骨格上で操作された抗体分子を示す。 初代細胞上で発現したＳＩＲＰαに対するヒトＣＤ４７の結合のブロックを示す一連のグラフである。抗体は、Ｖ２対立遺伝子についてホモ接合型のドナーからの初代ヒトＣＤ１４＋単球に対するヒトＣＤ４７の結合をブロックする。実線、破線、及び点線は、それぞれ、ｈＩｇＧ１（ＬＡＬＡ）、ｈＩｇＧ４Ｐ、ｈＩｇＧ１（Ｋ３２２Ａ）骨格上で操作された抗体分子を示す。 細胞ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰα活性化が、抗ＳＩＲＰα抗体によってブロックされることを示す一連のグラフである。抗体は、細胞ＣＤ４７媒介性Ｖ１－ＳＩＲＰαシグナル伝達を用量依存的にブロックする（図１５Ａ～１５Ｄ）。実線、破線、及び点線は、それぞれ、ｈＩｇＧ１（ＬＡＬＡ）、ｈＩｇＧ４Ｐ、ｈＩｇＧ１（Ｋ３２２Ａ）骨格上で操作された抗体分子を示す。 細胞ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰα活性化が、抗ＳＩＲＰα抗体によってブロックされることを示す一連のグラフである。抗体は、細胞ＣＤ４７媒介性Ｖ２－ＳＩＲＰαシグナル伝達を用量依存的にブロックする（図１６Ａ～１６Ｄ）。実線、破線、及び点線は、それぞれ、ｈＩｇＧ１（ＬＡＬＡ）、ｈＩｇＧ４Ｐ、ｈＩｇＧ１（Ｋ３２２Ａ）骨格上で操作された抗体分子を示す。 ヒト単球細胞株による食作用のＣＤ４７媒介性阻害を、抗ＳＩＲＰα抗体によって回復することができることを示す一連のグラフである。抗ＳＩＲＰα抗体は、（図１７Ａ）Ｖ１－ＳＩＲＰα及び（図１７Ｂ）Ｖ２－ＳＩＲＰαを発現するＵ９３７ＳＩＲＰα ＫＯ細胞がＣＤ４７コーティングされたビーズを貪食する能力を回復させる。 抗ＳＩＲＰα抗体が、Ｖ１－ＳＩＲＰα対立遺伝子についてホモ接合型のドナーに由来する初代ヒトマクロファージによる食作用のＣＤ４７媒介性阻害を回復することを示す一連のヒストグラム及びグラフである。図１８Ａ．ＳＩＲＰαアンタゴニストは、オプソニン化ＣＤ４７コーティングされたビーズを貪食する単球由来のマクロファージの能力を回復する。図１８Ｂ．ＳＩＲＰαアンタゴニストは、非オプソニン化ＣＤ４７コーティングされたビーズを貪食する単球由来のマクロファージの能力を増強する。図１８Ｃ．ＳＩＲＰαアンタゴニストは、オプソニン化ＣＤ４７コーティングされたビーズを貪食する単球由来のマクロファージの能力を用量依存的に回復する。 抗ＳＩＲＰα抗体が、Ｖ１－ＳＩＲＰα対立遺伝子及びＶ２－ＳＩＲＰα対立遺伝子についてヘテロ接合型のドナーに由来する初代ヒトマクロファージによる食作用のＣＤ４７媒介性阻害を回復することを示す一連のヒストグラム及びグラフである。図１９Ａ．ＳＩＲＰαアンタゴニストは、オプソニン化ＣＤ４７コーティングされたビーズを貪食する単球由来のマクロファージの能力を回復する。図１９Ｂ．ＳＩＲＰαアンタゴニストは、非オプソニン化ＣＤ４７コーティングされたビーズを貪食する単球由来のマクロファージの能力を回復する。図１９Ｃ．ＳＩＲＰαアンタゴニストは、オプソニン化ＣＤ４７コーティングされたビーズを貪食する単球由来のマクロファージの能力を用量依存的に回復する。 抗ＳＩＲＰα抗体が、Ｖ２－ＳＩＲＰα対立遺伝子についてホモ接合型のドナーに由来する初代ヒトマクロファージによる食作用のＣＤ４７媒介性阻害を回復することを示す一連のヒストグラム及びグラフである。図２０Ａ．ＳＩＲＰαアンタゴニストは、オプソニン化ＣＤ４７コーティングされたビーズを貪食する単球由来のマクロファージの能力を回復する。図２０Ｂ．ＳＩＲＰαアンタゴニストは、非オプソニン化ＣＤ４７コーティングされたビーズを貪食する単球由来のマクロファージの能力を回復する。図２０Ｃ．ＳＩＲＰαアンタゴニストは、オプソニン化ＣＤ４７コーティングされたビーズを貪食する単球由来のマクロファージの能力を用量依存的に回復する。 抗ＳＩＲＰα抗体が、Ｖ１－ＳＩＲＰα対立遺伝子についてホモ接合型のドナーに由来する初代ヒト樹状細胞による食作用のＣＤ４７媒介性阻害を回復することを示す一連のヒストグラムである。図２１Ａ．ＳＩＲＰαアンタゴニストは、オプソニン化ＣＤ４７コーティングされたビーズを貪食する単球由来の樹状細胞の能力を回復する。図２１Ｂ．ＳＩＲＰαアンタゴニストは、非オプソニン化ＣＤ４７コーティングされたビーズを貪食する単球由来の樹状細胞の能力を回復する。 抗ＳＩＲＰα抗体が、Ｖ１－ＳＩＲＰα対立遺伝子及びＶ２－ＳＩＲＰα対立遺伝子についてヘテロ接合型のドナーに由来する初代ヒト樹状細胞による食作用のＣＤ４７媒介性阻害を回復することを示す一連のヒストグラムである。図２２Ａ．ＳＩＲＰαアンタゴニストは、オプソニン化ＣＤ４７コーティングされたビーズを貪食する単球由来の樹状細胞の能力を回復する。図２２Ｂ．ＳＩＲＰαアンタゴニストは、非オプソニン化ＣＤ４７コーティングされたビーズを貪食する単球由来の樹状細胞の能力を回復する。 抗ＳＩＲＰα抗体が、Ｖ２－ＳＩＲＰα対立遺伝子についてホモ接合型のドナーに由来する初代ヒト樹状細胞による食作用のＣＤ４７媒介性阻害を回復することを示す一連のヒストグラムである。図２３Ａ．ＳＩＲＰαアンタゴニストは、オプソニン化ＣＤ４７コーティングされたビーズを貪食する単球由来の樹状細胞の能力を回復する。図２３Ｂ．ＳＩＲＰαアンタゴニストは、非オプソニン化ＣＤ４７コーティングされたビーズを貪食する単球由来の樹状細胞の能力を回復する。 抗ＳＩＲＰα抗体が、ＭＬＲのヒトＣＤ４７媒介性阻害を回復することを示す一連のヒストグラムである。単独で、又は抗ＰＤ１アンタゴニストであるペムブロリズマブと組み合わせた抗ＳＩＲＰα ｍＡｂによって部分的に回復する、ＭＬＲのヒトＣＤ４７－Ｆｃ媒介性免疫抑制（図２４Ａ～２４Ｂ）。 抗ＳＩＲＰα抗体によって認識されるエピトープを示す一連の画像である。ヒトＳＩＲＰα－Ｖ２（残基１～１１５）の細胞外ドメインのドメイン１に結合した、抗体Ｅ（図２５Ａ）又は抗体Ａ（図２５Ｂ）のＦａｂ断片の構造。図２５Ｃ．ヒトＳＩＲＰα－Ｖ２（ＰＤＢ：２ＪＪＳ）の細胞外ドメインのドメイン１に結合したＣＤ４７（濃灰色）の構造。図２５Ｄ～図２５Ｆ：抗体ＥのＦａｂ断片（図２５Ｄ）によって、抗体ＡのＦａｂ断片（図２５Ｅ）、又はヒトＣＤ４７（図２５Ｆ）によって接触される残基を強調する、ヒトＳＩＲＰα－Ｖ２の細胞外ドメインのドメイン１の構造。 結晶構造に基づく、抗体Ａ：：ＳＩＲＰα＿Ｖ２複合体及び抗体Ｅ：：ＳＩＲＰα＿Ｖ２複合体のエピトープを示す一連の画像である。図２６Ａは、スティック表現として淡灰色で示されるＳＩＲＰαＶ２、及び原子型ごとに濃灰色で示される抗体Ａの残基を示す。抗体ＡのＦａｂ断片までの距離が４．５Å未満の原子を含むＳＩＲＰαＶ１残基は、マーキングされており、プログラムＭＯＥを用いた配列によってアラインメントされた、ＳＩＲＰαＶ１及びＳＩＲＰγの配列までカラムによって伸長される。ＳＩＲＰαＶ２ Ｄ１３０の相互作用は、この残基がグルタメートであるＳＩＲＰγに対する主要な差として強調される。図２６Ｂは、スティック表現として淡灰色で示されるＳＩＲＰαＶ２、並びに原子型ごとに濃灰色で示される抗体Ｅの残基及び表面を示す。抗体ＥのＦａｂ断片までの距離が４．５Å未満の原子を含むＳＩＲＰαＶ１残基は、マーキングされており、プログラムＭＯＥを用いた配列によってアラインメントされたＳＩＲＰαＶ１及びＳＩＲＰγの配列までカラムによって伸長される。ＳＩＲＰαＶ２ Ａ７２の相互作用は、この残基がより大きなアミノ酸バリンで構成されるＳＩＲＰγに対する主要な差として強調される。 抗ＳＩＲＰα抗体が、Ｖ１又はＶ２を発現するＵ－９３７細胞に対するＳＥ５Ａ５の結合をブロックすることを示す一連のヒストグラムである。抗ＳＩＲＰα抗体による、（図２７Ａ）Ｖ１－ＳＩＲＰαを発現するＵ－９３７細胞又は（図２７Ｂ）Ｖ２－ＳＩＲＰαを発現するＵ－９３７細胞に対する抗ＳＩＲＰα ｍＡｂであるＳＥ５Ａ５の結合の遮断。 ＣＨＯ細胞上で発現した全長ｃｙｎｏ ＳＩＲＰαに対する抗体の結合を示す一連のグラフである。図２８Ａ．全長ｃｙｎｏ ＳＩＲＰα（ＥＧＭ－０２２５２、クローンＨ３Ａ９）を発現するＣＨＯ細胞に対する抗体結合。図２８Ｂ．全長ｃｙｎｏ ＳＩＲＰα（ＸＰ＿０１５３１３１５５、クローンＰ３ＨＤ１０）を発現するＣＨＯ細胞に対する抗体結合。図２８Ｃ．全長ｃｙｎｏ ＳＩＲＰα（ＮＰ＿００１２７１６７９、クローンＨＣ６）を発現するＣＨＯ細胞に対する抗体結合。 ＣＨＯ細胞上で発現した全長ｃｙｎｏ ＳＩＲＰβ１に対する抗体の結合を示す一連のグラフである。図２９Ａ．全長ｃｙｎｏ ＳＩＲＰβ１（ＸＰ＿００５５６８５９８、クローンＰＡ２）を発現するＣＨＯ細胞に対する抗体結合。図２９Ｂ．全長ｃｙｎｏ ＳＩＲＰβ１ｖ３（ＸＰ＿００５５６８５９３、クローン１ＨＣ６）を発現するＣＨＯ細胞に対する抗体結合。 ５ｍｇ／ｋｇ（黒色の四角）又は１ｍｇ／ｋｇ（黒色の丸）でのカニクイザルにおけるＩＶ投与後の抗体Ａ１０の平均（ＳＤ）血清濃度－時間プロファイル。 Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ細胞上で発現した様々なアミノ酸点変異を有する全長ヒトＶ１－ＳＩＲＰαに対する抗体の結合を示す。全長野生型ヒトＳＩＲＰαＶ１を発現する細胞（図３１Ａ）、ＳＩＲＰαＶ１ Ｎ→Ｅを発現する細胞（図３１Ｂ）、ＳＩＲＰαＶ１ Ｄ→Ｅを発現する細胞（図３１Ｃ）、ＳＩＲＰαＶ１ Ｄ→Ｎを発現する細胞（図３１Ｄ）、ＳＩＲＰαＶ１ ＤＤ→ＥＮを発現する細胞（図３１Ｅ）、及び親ＣＨＯ細胞（図３１Ｆ）について、結果を示す。 Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ細胞上で発現した様々なアミノ酸点変異を有する全長ヒトＶ２－ＳＩＲＰαに対する抗体の結合を示す。全長野生型ヒトＳＩＲＰαＶ２を発現する細胞（図３２Ａ）、ＳＩＲＰαＶ２ Ｅ→Ｎを発現する細胞（図３２Ｂ）、及びＳＩＲＰαＶ２ Ｄ→Ｅを発現する細胞（図３２Ｃ）について、結果を示す。 Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ細胞上で発現したアミノ酸点変異を有する全長ヒトＳＩＲＰβ１に対する抗体の結合を示す。全長野生型ヒトＳＩＲＰβ１を発現する細胞（図３３Ａ）及びＳＩＲＰβ１ Ｄ→Ｈを発現する細胞（図３３Ｂ）について、結果を示す。 Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ細胞上で発現したアミノ酸点変異を有する全長ヒトＳＩＲＰβＬに対する抗体のを示す。野生型ＳＩＲＰβＬを発現する細胞（図３４Ａ）又はＳＩＲＰβＬ Ｈ→Ｄを発現する細胞（図３４Ｂ）について、結果を示す。 Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ細胞上で発現した様々なアミノ酸点変異を有する全長ヒトＳＩＲＰγに対する抗体の結合を示す。全長野生型ヒトＳＩＲＰγを発現する細胞（図３５Ａ）、ＳＩＲＰγ Ｅ→Ｄを発現する細胞（図３５Ｂ）、ＳＩＲＰγ Ｎ→Ｄを発現する細胞（図３５Ｃ）、及びＳＩＲＰγ ＥＮ→ＤＤを発現する細胞（図３５Ｄ）について、結果を示す。 両方とも概略図として示されるＳＩＲＰαＶ１のループ（淡灰色、ｐｄｂＩＤ：４ＣＭＭで観察されるような）、ＳＩＲＰαＶ２（灰色、抗体Ａとの複合体中の結晶構造において観察されるような）、及び抗体Ａ（濃灰色での表面、ＳＩＲＰαＶ１との複合体中の結晶構造において観察されるような）。 両方とも概略図として示されるＳＩＲＰαＶ１のループ（淡灰色、ｐｄｂＩＤ：４ＣＭＭで観察されるような）、ＳＩＲＰαＶ２（灰色、ＣＤ４７ ｐｄｂＩＤ：２ＪＪＳとの複合体中の結晶構造において観察されるような）、及びＣＤ４７（濃灰色での表面、ＳＩＲＰαＶ１との複合体中の結晶構造において観察されるような）。 ＳＩＲＰバリアントのループ（淡灰色、原子型ごとにコードされる色）：以下について観察される立体配座。（Ａ）ＳＩＲＰαＶ１（ｐｄｂＩＤ：４ＣＭＭ）、ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ７８３２４に従う番号付けを有する。（Ｂ）ＳＩＲＰαＶ２（抗体Ａとの複合体中の結晶構造において観察されるような）。（Ｃ）ＳＩＲＰβ１（ｐｄｂＩＤ：２ＪＪＵ）。（Ｄ）ＳＩＲＰβＬ（ｐｄｂＩＤ：２ＪＪＶ）。（Ｅ）ＳＩＲＰγ（ｐｄｂＩＤ：２ＪＪＷ）。（Ｆ）それぞれのループにおける配列モチーフと、ＳＩＲＰγの場合にはＤＤ→ＥＮ、ＳＩＲＰβＬの場合にはＤ→Ｈである結合の有意な消失と相関関係にある、ＳＩＲＰαＶ１からのアミノ酸の差との比較。
本発明は、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片に関する。本発明は、ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαシグナル伝達によって調節される状態の治療の必要性に対処するものである。一態様において、本発明の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、例えば、ヒト等のそれを必要とする対象において、診断及び／又は治療の使用のためのものである。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、ＳＩＲＰα、特に、ヒト又はカニクイザルＳＩＲＰα、より特定的にはヒトＳＩＲＰαに特異的に結合する。一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＳＩＲＰαのＶ１及び／又はＶ２対立遺伝子に結合する。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、ＳＩＲＰγ、特に、カニクイザル又はヒトＳＩＲＰγ、より特定的にはヒトＳＩＲＰγに結合しない。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、ウサギ、マウス、ラット、又はイヌＳＩＲＰαに結合しない。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、０．１～１００ｎＭ、０．１～５０ｎＭ、０．１～２５ｎＭ、０．１～１０ｎＭ、又は０．１～５ｎＭのＥＣ５０を有する。本発明の更なる態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、０．１ｎＭ、０．２ｎＭ、０．３ｎＭ、０．４ｎＭ、０．５ｎＭ、０．６ｎＭ、０．７ｎＭ、０．８ｎＭ、０．９ｎＭ、１ｎＭ、２ｎＭ、３ｎＭ、４ｎＭ、５ｎＭ、６ｎＭ、７ｎＭ、８ｎＭ、９ｎＭ、１０ｎＭ、１１ｎＭ、１２ｎＭ、１３ｎＭ、１４ｎＭ、１５ｎＭ、１６ｎＭ、１７ｎＭ、１８ｎＭ、１９ｎＭ、２０ｎＭ、２１ｎＭ、２２ｎＭ、２３ｎＭ、２４ｎＭ、又は２５ｎＭのＥＣ５０を有する。ＥＣ５０は、例えば、実施例に示されるものを含め、当該技術分野で既知の任意の方法によって決定され得る。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、０．０１～１００ｎＭ、０．０１～５０ｎＭ、０．０１～２５ｎＭ、０．０１～１０ｎＭ、又は０．０１～５ｎＭのＩＣ５０を有する。本発明の更なる態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、０．０１ｎＭ、０．０２ｎＭ、０．０３ｎＭ、０．０４ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０６ｎＭ、０．０７ｎＭ、０．０８ｎＭ、０．０９ｎＭ、０．１ｎＭ、０．２ｎＭ、０．３ｎＭ、０．４ｎＭ、０．５ｎＭ、０．６ｎＭ、０．７ｎＭ、０．８ｎＭ、０．９ｎＭ、１ｎＭ、２ｎＭ、３ｎＭ、４ｎＭ、５ｎＭ、６ｎＭ、７ｎＭ、８ｎＭ、９ｎＭ、１０ｎＭ、１１ｎＭ、１２ｎＭ、１３ｎＭ、１４ｎＭ、１５ｎＭ、１６ｎＭ、１７ｎＭ、１８ｎＭ、１９ｎＭ、２０ｎＭ、２１ｎＭ、２２ｎＭ、２３ｎＭ、２４ｎＭ、又は２５ｎＭのＩＣ５０を有する。ＩＣ５０は、例えば、実施例に示されるものを含め、当該技術分野で既知の任意の方法によって決定され得る。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、高い親和性でヒトＳＩＲＰα－Ｖ１及びＳＩＲＰα－Ｖ２に結合する。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、高い親和性で、例えば、２０ｎＭ以下の親和性で、例えば、１０ｎＭ以下、例えば、５ｎＭ以下、例えば、１ｎＭ以下の親和性で、ヒトＳＩＲＰα－Ｖ１（例えば、配列番号２４０に示されるアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰα－Ｖ１）に結合する。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、高い親和性で、例えば、２０ｎＭ以下の親和性で、例えば、１０ｎＭ以下、例えば、５ｎＭ以下、例えば、１ｎＭ以下の親和性で、ヒトＳＩＲＰα－Ｖ２（例えば、配列番号２４１に示されるアミノ酸配列を含むヒトＳＩＲＰα－Ｖ２）に結合する。本発明の別の態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、カニクイザルＳＩＲＰαに結合する。本発明の別の態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、４００ｎＭ以下、３００ｎＭ以下、２５０ｎＭ以下、２００以下、１００ｎＭ以下、又は５０ｎＭ以下の親和性で、カニクイザルＳＩＲＰα（例えば、配列番号２４７に示されるアミノ酸配列を含むカニクイザルＳＩＲＰα）に結合する。本発明の別の態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、４００ｎＭ以下、３００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下、又は５０ｎＭ以下の親和性で、カニクイザルＳＩＲＰα（例えば、配列番号２４８に示されるアミノ酸配列を含むカニクイザルＳＩＲＰα）に結合する。本発明の別の態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、４００ｎＭ以下、３００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下、又は５０ｎＭ以下の親和性で、カニクイザルＳＩＲＰα（例えば、配列番号２４９に示されるアミノ酸配列を含むカニクイザルＳＩＲＰα）に結合する。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、例えば１μＭ以上の親和性で、ＳＩＲＰγに結合しない。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、ヒトＳＩＲＰγに結合せず、例えば、１μＭより大きな、又はそれより大きな親和性で、ヒトＳＩＲＰγに結合しない。本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、カニクイザルＳＩＲＰγに結合せず、例えば、１μＭ以上の親和性で、カニクイザルＳＩＲＰγに結合しない。
一態様において、本発明の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、ＳＩＲＰαとＣＤ４７との間の相互作用をブロックする。更なる態様において、本発明の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαシグナル伝達をブロックする。いくつかの態様において、本発明の抗体は、ＳＩＲＰαに対するＣＤ４７の結合をブロックし、それによって、比較抗体対照と比較した場合、又は本発明の抗ＳＩＲＰα抗体若しくは抗原結合断片が存在しない状態で、ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαシグナル伝達を少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％低下させる。一実施形態において、比較抗体対照は、配列番号１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１０４、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、若しくは２２１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１２５、１２６、１０９、１２７、１２８、１２９、１３０、若しくは２２２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は配列番号１３１、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、２１７、１３５、１５３、１５４、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、２１９、１３３、１３４、１３７、１３２、若しくは１３６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖領域、及び配列番号１７４、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、２１８、１７８、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２２０、１７６、１７７、１８０、１７５、若しくは１７９のうちのいずれか１ついずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖領域を含む。
結合ドメインが、標的に特異的に結合するかどうかは、当該技術分野で既知の様々な方法で試験することができる。これらの方法としては、精製されたタンパク質に対する抗体の結合を検出するための表面プラズモン共鳴若しくはＥＬＩＳＡ、又は細胞に対する抗体の結合を検出するためのフローサイトメトリーが挙げられる。抗体がＣＤ４７の結合をブロックする能力は、精製された可溶性ＣＤ４７とＳＩＲＰα発現細胞との相互作用を検出することによって測定することができる。代替的に、抗体のブロック活性は、ＳＩＲＰαリン酸化及びＳＨＰ－１ホスファターゼの動員を評価することによって測定することができる。抗ＳＩＲＰα抗体のブロック活性は、ＣＤ４７によって引き起こされる食作用の阻害を回復する能力によっても評価することができる。競合阻害によって抗体の特異性及び親和性を決定するための方法は、当該技術分野で既知である。
一態様において、本発明は、抗ＳＩＲＰα抗体、特に、モノクローナル抗ＳＩＲＰα抗体、例えば、ヒトモノクローナル抗ＳＩＲＰα抗体、又は全長ヒトモノクローナル抗体を提供する。
一態様において、本発明の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、好ましい薬物動態特性を有する。一態様において、本発明の抗ＳＩＲＰα抗体は、好ましい生物物理学的特性、例えば、収率、品質、安定性、又は溶解性を有する。
抗体
抗体又は免疫グロブリンの一般化された構造は、当業者に周知であり、これらの分子は、典型的には約１５０，０００ダルトンであり、２つの同一の軽（Ｌ）鎖及び２つの同一の重（Ｈ）鎖で構成されるヘテロ四量体糖タンパク質である。各軽鎖は、１つのジスルフィド結合によって重鎖に共有結合してヘテロ二量体を形成し、ヘテロ三量体分子は、ヘテロ二量体の２つの同一の重鎖間の共有ジスルフィド結合を介して形成される。軽鎖及び重鎖は、１つのジスルフィド結合によってともに連結されるが、２つの重鎖間のジスルフィド結合の数は、免疫グロブリンのアイソタイプによって異なる。各々の重鎖及び軽鎖はまた、規則的に空間があけられた鎖内ジスルフィド架橋を有する。各重鎖は、アミノ末端に可変ドメイン（ＶＨ＝可変重鎖）、その後に３つ又は４つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、及びＣＨ４）、並びにＣＨ１とＣＨ２との間のヒンジ領域を有する。各軽鎖は、アミノ末端可変ドメイン（ＶＬ＝可変軽鎖）及びカルボキシ末端定常ドメイン（ＣＬ）の２つのドメインを有する。ＶＬドメインは、ＶＨドメインと非共有結合的に会合するが、一方で、ＣＬドメインは、一般に、ジスルフィド結合を介してＣＨ１ドメインに共有結合される。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの間に界面を形成すると考えられている（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１８６：６５１－６６３，Ｖａｒｇａｓ－Ｍａｄｒａｚｏ Ｅ，Ｐａｚ－Ｇａｒｃｉａ Ｅ．Ｊ Ｍｏｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．２００３；１６（３）：１１３－１２０）。可変ドメインは、本明細書では可変領域とも呼ばれ、定常ドメインは、定常領域とも称される。
可変ドメイン内の特定のドメインは、異なる抗体間で大きく異なる、すなわち、「超可変」である。これらの超可変ドメインは、各々の特定の抗体のその特異的な抗原決定基に対する結合及び特異性に直接的に関与する残基を含有する。超可変性は、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインの両方において、相補性決定領域（ＣＤＲ）又は超可変ループ（ＨＶＬ）として知られる３つのセグメントに集中する。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｉｎ：Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．における配列比較によって定義され、一方で、ＨＶＬは、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７に記載されるように、可変ドメインの三次元構造に従って構造的に定義される。これらの２つの方法が、ＣＤＲのわずかな差を特定する場合、構造的な定義が好ましい。Ｋａｂａｔによって定義されるように、軽鎖可変ドメインにおいて、ＣＤＲ－Ｌ１は、約残基２４～３４、ＣＤＲ－Ｌ２は、約残基５０～５６、ＣＤＲ－Ｌ３は、約残基８９～９７に配置されており、重鎖可変ドメインにおいて、ＣＤＲ－Ｈ１は、約残基３１～３５、ＣＤＲ－Ｈ２は、約残基５０～６５、ＣＤＲ－Ｈ３は、約残基９５～１０２に配置されている。ＩＭＧＴ及びＮＯＲＴＨは、ＣＤＲの代替的な定義を提供する（Ｌｅｆｒａｎｃ ＭＰ．Ｕｎｉｑｕｅ ｄａｔａｂａｓｅ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ（１９９７）１８：５０９、及びＮｏｒｔｈ Ｂ，Ｌｅｈｍａｎｎ Ａ，Ｄｕｎｂｒａｃｋ ＲＬＪ．Ａ ｎｅｗ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ＣＤＲ ｌｏｏｐ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．（２０１１）４０６：２２８－５６を参照されたい）。更に、ＣＤＲは、Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ（ＣＣＧ）番号付けによって定義されてもよい（Ａｌｍａｇｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ２０１１；７９：３０５０－３０６６、及びＭａｉｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ２０１４；８２：１５９９－１６１０）。したがって、重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は、所与の抗体に特異的な固有の機能的特性を定義する。
重鎖及び軽鎖の各々内の３つのＣＤＲは、可変性が低い傾向がある配列を含有するフレームワーク領域（ＦＲ）によって分離される。重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインのアミノ末端からカルボキシ末端へと、ＦＲ及びＣＤＲは、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４の順序で配置される。ＦＲの大まかなシート構成は、各鎖内のＣＤＲを、互いに、及び他の鎖からのＣＤＲに近接させる。得られる構成は、抗原結合部位に寄与する（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，ＮＩＨ Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１－３２４２，Ｖｏｌ．Ｉ，ｐａｇｅｓ ６４７－６６９を参照されたい）が、ＣＤＲ残基の全てが、必ずしも抗原結合に直接的に関与しているわけではない。当業者は、抗体の可変領域アミノ酸配列を考慮して、残基が特定のＣＤＲを含むかどうかを日常的に決定することができる。したがって、重鎖及び軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は、所与の抗体に特異的な固有の機能的特性を定義する。
ＦＲ残基及びＩｇ定常ドメインは、一般に、抗原結合に直接的に関与しないが、抗原結合に寄与し、及び／又は抗体エフェクター機能を媒介する。いくつかのＦＲ残基は、エピトープに対する直接的な非共有結合による、１つ以上のＣＤＲ残基との相互作用による、及び重鎖と軽鎖との間の界面に影響を与えることによる、といった少なくとも３つの方法で抗原結合に対して顕著な効果を有すると考えられている。定常ドメインは、抗原結合に直接的に関与しないが、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、及び抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）における抗体の関与等の様々なＩｇエフェクター機能を媒介する。
脊椎動物免疫グロブリンの軽鎖は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、明確に異なる２つのクラスであるカッパ（κ）及びラムダ（λ）のうちの１つに割り当てられる。比較すると、哺乳動物免疫グロブリンの重鎖は、定常ドメインの配列に従って、５つの主要なクラスであるＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭのうちの１つに割り当てられる。ＩｇＧ及びＩｇＡは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、それぞれ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に更に分けられる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。天然免疫グロブリンのクラスのサブユニット構造及び三次元構成は周知である。
定義
「抗体」及び「抗ＳＩＲＰα抗体」という用語は、本明細書では互換的に使用され、モノクローナル抗体（全長モノクローナル抗体を含む）、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、Ｎ末端若しくはＣ末端切断等の小さな修飾を有する抗体、及び所望の生物学的特性、例えば、ＳＩＲＰα結合を示す可変ドメイン及び抗体の他の部分等の抗体断片を包含する。
「モノクローナル抗体」という用語は、抗体分子の実質的に均質な集合体から得られた抗体を指し、すなわち、その集合体を構成する個々の抗体は、抗体重鎖からのＣ末端リジンの除去、又は存在し得るアミノ酸異性化若しくは脱アミド化、メチオニン酸化若しくはアスパラギン若しくはグルタミン脱アミド化等の翻訳後修飾等の可能性のある周知の改変を除いて同一である。モノクローナル抗体は、典型的に、１つの抗原性エピトープに結合する。二重特異性モノクローナル抗体は、２つの異なる抗原性エピトープに結合する。モノクローナル抗体は、単一特異性、又は多重特異性（例えば、二重特異性）、一価、二価又は多価であり得る。モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法（ Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５）、又は当該技術分野で知られている組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）、又はＣｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８、及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７に記載される技術を使用して、ファージ抗体ライブラリーを使用して組換え産生されるモノクローナルの単離法を含む、当該技術分野で既知の任意の技術又は方法論によって作製することができることを理解すべきである。
キメラ抗体は、ある種（例えば、マウス等の非ヒト哺乳動物）からの抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域、並びに別の種（例えば、ヒト）抗体の重鎖定常領域及び軽鎖定常領域からなり、第１の種（例えば、マウス）からの抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列を、第２の種（例えば、ヒト）種からの抗体の定常領域のためのＤＮＡ配列に連結し、キメラ抗体を産生することが可能なように、宿主を、連結した配列を含有する発現ベクターで形質転換することによって得ることができる。代替的に、キメラ抗体はまた、重鎖及び／又は軽鎖の１つ以上の領域又はドメインが、別の免疫グロブリンクラス若しくはアイソタイプからの、又はコンセンサス若しくは生殖系列配列からのモノクローナル抗体における対応する配列と同一であるか、これに対して相同であるか、又はそのバリアントであり得る。キメラ抗体は、抗体断片が、その親抗体の所望な生物学的活性、例えば、同じエピトープに対する結合を示す場合に限り、かかる抗体の断片を含み得る（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１－６８５５を参照されたい）。
「抗体断片」、「抗原結合断片」、「抗ＳＩＲＰα抗体断片」、「抗ＳＩＲＰα抗体断片」、「操作された抗ＳＩＲＰα抗体断片」という用語は、全長抗ＳＩＲＰα抗体の一部分であって、可変領域又は機能的能力（例えば、ＳＩＲＰα結合）が保持されているものを指す。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及びｓｃＦｖ－Ｆｃ断片、ダイアボディ、線状抗体、一本鎖抗体、ミニボディ、抗体断片から形成されるダイアボディ、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。
抗体断片は、例えば、処理された全長抗体をパパイン又はペプシン等の酵素で処理して、有用な抗体断片を生成することによって得ることができる。パパイン消化を使用して、「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合抗体断片を生成し、各々が、単一の抗原結合部位と、残りの「Ｆｃ」断片と、を有する。Ｆａｂ断片はまた、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖のＣＨ１ドメインを含有する。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原を架橋することが可能であるＦ（ａｂ’）２断片を生成する。
本発明に係る抗体断片の別の例は、Ｆａｂ’断片である。Ｆａｂ’断片は、ＣＨ１ドメインのＣ末端の抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含む追加の残基の存在によって、Ｆａｂ断片とは異なる。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、ヒンジ領域中のシステイン残基によって連結されるＦａｂ’断片の対である。抗体断片の他の化学的カップリングも公知である。
「Ｆｖ」断片は、密な非共有結合性会合における、１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる、完全な抗原認識部位及び結合部位を含有する。この構成において、各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用し、ＶＨ－ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を画定する。まとめて、６つのＣＤＲは、抗体に対する特異的な抗原結合を与える。
抗体断片は、「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」断片も含み得る。「一本鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」抗体断片は、ドメインが単一ポリペプチド鎖中に存在する抗体のＶＨ及びＶＬを含む一本鎖Ｆｖバリアントである。一本鎖Ｆｖは、抗原を認識し、結合することができる。ｓｃＦｖポリペプチドは、任意選択的に、ｓｃＦｖによる抗原結合のための所望の三次元構造の形成を容易にするために、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に配置されるポリペプチドリンカーも含有し得る（例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，１９９４，Ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５を参照されたい）。
抗体断片はまた、一対の抗原結合領域を形成するために、一対のタンデムＦｄセグメント（ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１）を含むタンデムＦｄセグメントを形成し得る。これらの「線状抗体」は、例えば、Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．１９９５，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７－１０６２に記載されるように、二重特異性又は単一特異性であり得る。
本明細書で使用される「ヒト抗体」という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する抗体又はその断片を含む。「ヒト抗体」という用語は、マウス、ラット、又はウサギ等の別の（哺乳動物）種の生殖細胞系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトフレームワーク領域上に接合された抗体を含むことを意図していない。したがって、本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」という用語は、タンパク質のあらゆる部分（例えば、ＣＤＲ、フレームワーク、ＣＬ、ＣＨドメイン（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３）、ヒンジ、ＶＬ、ＶＨ）が、ヒトにおいて実質的に非免疫原性であり、本明細書で以下に更に記載されるようなほんのわずかな配列変化又は変動を有する、抗体又はその断片を指す。
かかる「ヒト抗体」を作製するための技術が記載されており、限定されないが、ファージディスプレイ、又はトランスジェニック動物の使用が挙げられる（ｗｗｗ．Ａｂｌｅｘｉｓ．ｃｏｍ／ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ－ａｌｉｖａｍａｂ．ｐｈｐ、ＷＯ９０／０５１４４、Ｄ．Ｍａｒｋｓ，Ｈ．Ｒ．Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，Ｔ．Ｐ．Ｂｏｎｎｅｒｔ，Ｊ．ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ，Ａ．Ｄ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ａｎｄ Ｇ．Ｗｉｎｔｅｒ（１９９１）“Ｂｙ－ｐａｓｓｉｎｇ ｉｍｍｕｎｉｓａｔｉｏｎ．Ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ Ｖ－ｇｅｎｅ ｌｉｂｒａｒｉｅｓ ｄｉｓｐｌａｙｅｄ ｏｎ ｐｈａｇｅ．”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２，５８１－５９７、Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６：５７－８６，２０００、Ｓ．Ｃａｒｍｅｎ ａｎｄ Ｌ．Ｊｅｒｍｕｔｕｓ，“Ｃｏｎｃｅｐｔｓ ｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｈａｇｅ ｄｉｓｐｌａｙ”．Ｂｒｉｅｆｉｎｇｓ ｉｎ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ２００２ １（２）：１８９－２０３、Ｌｏｎｂｅｒｇ Ｎ，Ｈｕｓｚａｒ Ｄ．“Ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｒｏｍ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ”．Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９５；１３（１）：６５－９３．、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ Ｍ，Ｔａｕｓｓｉｇ ＭＪ．“Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｍｉｃｅ”．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９７ Ａｕｇ；８（４）：４５５－８）。
したがって、ヒト抗体は、例えば、キメラ抗体又はヒト化抗体とは異なる。ヒト抗体は、機能的に再編成されたヒト免疫グロブリン（例えば、重鎖及び／又は軽鎖）遺伝子を発現することができる非ヒト動物又は原核細胞若しくは真核細胞によって産生され得ることが指摘される。
一態様において、本発明の抗ＳＩＲＰα抗体は、ヒト化抗体また又はその抗体断片である。ヒト化抗体又はヒト化抗体断片は、所定の抗原に結合することができ、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有する１つ以上のＦＲと、非ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を実質的に有する１つ以上のＣＤＲと、を含む、免疫グロブリンアミノ酸配列バリアント又はその断片を含む、特定の種類のキメラ抗体である。この非ヒトアミノ酸配列は、「インポート」配列と称されることが多いが、典型的には、「インポート」抗体ドメイン、特に可変ドメインから得られる。一般に、ヒト化抗体は、ヒト重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインのＦＲ間に挿入される非ヒト抗体のＣＤＲ又はＨＶＬを少なくとも含む。抗体のヒト化方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ １３，１６１９－１６３３によって、又はＷＯ１２０９２３７４Ａ２に記載されている。
本発明のキメラ抗体、ヒト化抗体若しくはヒト抗体、又はその抗原結合断片は、更に操作され得る。そのような操作としては、限定されないが、例えば、ヒトにおいて免疫原性を減少させるため、又は脱アミド化、望ましくない電荷又は親油性又は非特異性結合を回避するための、望ましくないアミノ酸の除去又は交換が挙げられる。そのような望ましくないアミノ酸の除去又は交換は、例えば、インビトロでの無作為若しくは部位特異的変異誘発によって、又はインビボでの体細胞変異によって、導入することができる。更に、キメラ抗体又はヒト化抗体に関連して、特定のマウスＦＲ残基が、抗体又はその断片中に保持され得ることが理解されるだろう。
一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメイン（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｂｃ、及びＦｖ断片に含有されるもの等）の実質的に全てを含む。別の態様において、抗ＳＩＲＰα抗体はまた、免疫グロブリンＦｃ領域の一部分、典型的には、ヒト免疫グロブリンの一部分を少なくとも含む。通常、抗体は、軽鎖及び少なくとも重鎖の可変ドメインの両方を含有する。抗体はまた、適切な場合、重鎖のＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２、ＣＨ３、及び／又はＣＨ４領域のうちの１つ以上を含み得る。
一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含む免疫グロブリンの任意の種類、並びにＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２を含む任意のアイソタイプから選択され得る。代替の抗ＳＩＲＰα抗体は、１つより多い免疫グロブリンのクラス又はアイソタイプからの配列を含んでいてもよく、所望のエデクター機能を最適化するための特定の修飾又は非修飾定常ドメインを選択することは、当業者の範囲内である。
例えば、抗体のＦｃ領域は、その血清半減期、並びに補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、及び抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）等のエフェクター機能を媒介する。Ｆｃ操作を用いて、それらに必要とされる薬理活性に適した抗体特性を最適化することができる。そのような細胞傷害活性が、がんの治療において免疫細胞を標的化する等の望ましくない場合に、定常ドメインは、ＩｇＧ４等のエフェクター機能が減少したアイソタイプの定常ドメインであってもよく、及び／又はエフェクター機そのような細胞傷害活性が、標的化された腫瘍細胞の破壊等の望ましい場合に、定常ドメインは、エフェクター機能が増加したアイソタイプの定常ドメインであってもよく、及び／又はエフェクター機能が増加する既知の修飾で修飾されてもよい。いくつかの変異は、エフェクター機能を減少させるか、又は増加させるかのいずれかであることが知られている。例えば、“Ｔｈｅ ｆｕｔｕｒｅ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｓ ｃａｎｃｅｒ ｄｒｕｇｓ”Ｊａｎｉｃｅ Ｍ Ｒｅｉｃｈｅｒｔ，Ｅｕｇｅｎ Ｄｈｉｍｏｌｅａ，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ（２０１２）Ｓｅｐ；１７（１７－１８）：９５４－６３－ＰＭＩＤ：２２５６１８９５，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ”（Ｖｏｌｕｍｅ ４ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）Ｃｌｉｖｅ Ｒ．Ｗｏｏｄ，Ｗｏｒｌｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，２０１２ ＩＳＢＮ １８４８１６６２８１，９７８１８４８１６６２８８；“ＦｃγＲ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｌｅａｄｉｎｇ ｔｏ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌ ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ”Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．（２０１５）Ｎｏｖ；２６８（１）：１０４－２２－ＰＭＩＤ：２６４９７５１６を参照されたい。
一態様において、本発明の抗体の定常ドメインは、Ｆａｂ－アーム交換を防止する１つの置き換え変異（Ｓｅｒ２２８Ｐｒｏ）を有するＩｇＧ４Ｐｒｏである。別の態様において、本発明の抗体の定常ドメインは、エフェクター機能を減少させるために定常領域中に２つの変異（Ｌｅｕ２３４Ａｌａ及びＬｅｕ２３５Ａｌａ）を有するＩｇＧ１である。
操作された抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片のＦＲ及びＣＤＲ、又はＨＶＬは、親配列に正確に対応する必要はない。例えば、親配列は、得られるアミノ酸残基が、もはやいずれかの親配列中の対応する位置の元々の残基と同一ではないが、それでも抗体がＳＩＲＰαに対する結合機能を保持しているような、置換、挿入、又は欠失によって改変され（例えば、変異誘発され）得る。このような改変は、典型的には、広範囲にわたるものではなく、保存的な改変である。通常、操作された抗体残基の少なくとも７５％は、親配列の残基、より頻繁には少なくとも９０％、最も頻繁には９５％より多く、又は９８％より多く、又は９９％より多くに対応する。
重鎖可変領域と軽鎖可変領域との間の界面（「ＶＬ－ＶＨ界面」）に影響を及ぼす免疫グロブリン残基は、互いに対して２つの鎖の近接性及び配向に影響を及ぼすものである。鎖間相互作用に関与し得る特定の残基としては、ＶＬ残基３４、３６、３８、４４、４６、８７、８９、９１、９６、及び９８、並びにＶＨ残基３５、３７、３９、４５、４７、９１、９３、９５、１００、及び１０３が挙げられる（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９８７）に示される番号付けシステムを利用する）。米国特許第６，４０７，２１３号はまた、ＶＬ残基４３及び８５、並びにＶＨ残基４３及び６０等の残基も、この相互作用に関与し得ることを考察している。これらの残基は、ヒトＩｇＧについてのみ示されているが、種にわたって適用可能である。コンセンサス配列内の置換のために、鎖間相互作用に関与することが合理的に予測される重要な抗体残基が選択される。
「コンセンサス配列」及び「コンセンサス抗体」という用語は、任意の特定のクラス、アイソタイプ、又はサブユニット構造の全ての免疫グロブリン中の各々の位置、例えば、ヒト免疫グロブリン可変ドメインで、最も頻繁に存在するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を指す。コンセンサス配列は、特定の種又は多くの種の免疫グロブリンに基づいていてもよい。「コンセンサス」配列、構造、又は抗体は、特定の実施形態に記載されるようなコンセンサスヒト配列を包含することが理解され、任意の特定のクラス、アイソタイプ、又はサブユニット構造の全てのヒト免疫グロブリン中の各位置で最も頻繁に存在するアミノ酸残基を含むアミノ酸配列を指す。したがって、コンセンサス配列は、１つ以上の既知の免疫グロブリンに存在するが、任意の単一の免疫グロブリンのアミノ酸配列全体を正確には複製し得ないアミノ酸を各位置に有するアミノ酸配列を含有する。可変領域コンセンサス配列は、任意の天然に産生される抗体又は免疫グロブリンから得られない。Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．、及びそのバリアント。重鎖コンセンサス配列及び軽鎖コンセンサス配列のＦＲ、並びにそれらのバリアントは、ヒト又はヒト化抗ＳＩＲＰα抗体の調製のための有用な配列を提供する。例えば、米国特許第６，０３７，４５４号及び同第６，０５４，２９７号を参照されたい。
「単離された」抗体は、その天然環境の構成要素から、又はそれが発現された細胞培養物から特定され、分離され、及び／又は回収された抗体である。単離された抗体又は抗体断片は、抗体又は抗体断片の産生、精製、及び／又は貯蔵中に生じる１つ以上の共翻訳修飾又は翻訳後修飾を有し得る。抗体の天然環境の汚染性抗生物質は、抗体の診断的使用又は治療的使用と干渉し得る材料であり、酵素、ホルモン、又は他のタンパク質性溶質若しくは非タンパク質性溶質であり得る。一態様において、抗体は、抗体の９５重量％を超える単離まで精製され、例えば、少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を超えるように精製される。
単離された抗体は、抗体の天然環境の少なくとも１つの構成要素が存在しないため、それが産生される組換え細胞内の抗体を系中に含む。しかしながら、通常、単離された抗体は、組換え細胞材料が除去される少なくとも１つの精製ステップによって調製される。
「多重特異性」とは、２つ以上の異なる抗原、又は同じ抗原内の２つ以上の異なるエピトープに特異的に結合する、タンパク質（例えば、抗体）を指す。
「二重特異性」とは、２つの異なる抗原、又は同じ抗原内の２つの異なるエピトープに特異的に結合する、タンパク質（例えば、抗体）を指す。
いくつかの実施形態において、本発明のＳＩＲＰαに特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態において、本発明の抗体又はその抗原結合断片は、多重特異性抗体である。本明細書に提供されるＳＩＲＰαに特異的に結合する単一特異性抗体は、二重特異性抗体へと操作されてもよく、これらも、本発明の範囲内に包含される。
全長二重特異性抗体は、例えば、インビトロで細胞を含まない環境で、又は共発現を使用して、異なる特異性を有する２つの抗体の半分の分子のヘテロ二量体形成を容易にするように各々の半分の分子中の重鎖ＣＨ３界面に置換を導入することによって、２つの単一特異性二価抗体間のＦａｂアーム交換（例えば、半分の分子交換、１つの重鎖－軽鎖対の交換）を使用して生成され得る。Ｆａｂアーム交換反応は、ジスルフィド結合の結果である。
二重特異性抗体はまた、Ｔｒｉｏｍａｂ／Ｑｕａｄｒｏｍａ（Ｔｒｉｏｎ Ｐｈａｒｍａ／Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、Ｋｎｏｂ－ｉｎ－Ｈｏｌｅ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＣｒｏｓｓＭＡｂｓ（Ｒｏｃｈｅ）、及び静電誘導ＣＨ３相互作用（Ｃｈｕｇａｉ，Ａｍｇｅｎ，ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋ、Ｏｎｃｏｍｅｄ）、ＬＵＺ－Ｙ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、Ｓｔｒａｎｄ Ｅｘｃｈａｎｇｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｄｏｍａｉｎ ｂｏｄｙ（ＳＥＥＤｂｏｄｙ）（ＥＭＤ Ｓｅｒｏｎｏ）、Ｂｉｃｌｏｎｉｃ（Ｍｅｒｕｓ）、及びＤｕｏＢｏｄｙ（登録商標）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｇｅｎｍａｂ Ａ／Ｓ）等の設計を使用して生成され得る。
本明細書で使用される場合、「同一の」又は「同一性パーセント」という用語は、２つ以上の核酸又はポリペプチド配列に関して、最大の対応のために比較し、アラインメントしたときに、同じであるか、又は同じであるヌクレオチド若しくはアミノ酸残基の特定の割合を有する、２つ以上の配列又はサブ配列を指す。パーセント同一性を決定するために、配列は、最適な比較目的のためにアラインメントされる（例えば、第２のアミノ又は核酸配列との最適なアラインメントのために、第１のアミノ酸又は核酸配列の配列中に、ギャップが導入され得る）。次いで、対応するアミノ酸位置又はヌクレオチド位置のアミノ酸残基又はヌクレオチドを比較する。第１の配列中の位置が、第２の配列中の対応する位置と同じアミノ酸残基又はヌクレオチドによって占められる場合、それらの分子は、その位置で同一である。２つの配列間の同一性パーセントは、それらの配列が共有する同一の位置の数の関数である（すなわち、同一性％＝同じ位置の数／位置の合計数（例えば、重複する位置）×１００）。いくつかの実施形態において、比較される２つの配列は、ギャップが適切なように配列内に導入された後に同じ長さである（例えば、比較される配列を超えて伸長する追加の配列を除く）。例えば、可変領域配列が比較されるとき、リーダー及び／又は定常ドメイン配列は考慮されない。２つの配列間の配列比較のために、「対応する」ＣＤＲは、両方の配列中の同じ位置のＣＤＲを指す（例えば、各配列のＣＤＲ－Ｈ１）。
２つの配列間の同一性パーセント又は類似性パーセントの決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。２つの配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの好ましい非限定的な例は、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５８７７のように修正された、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２６４－２２６８のアルゴリズムである。そのようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０のＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれる。ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いてＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を行い、目的のタンパク質をコードする核酸と相同なヌクレオチド配列を得ることができる。ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いてＢＬＡＳＴタンパク質検索を行い、目的のタンパク質と相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的でギャップ付きアラインメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２に記載されるように、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを利用することができる。代替的に、ＰＳＩ－Ｂｌａｓｔを使用して、分子間の遠隔関係を検出する反復検索を実行することができる（同上）。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ－Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムのデフォルトパラメータ（例えば、ＸＢＬＡＳＴ及びＮＢＬＡＳＴ）を使用することができる。配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの別の好ましい非限定的な例は、Ｍｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ，ＣＡＢＩＯＳ（１９８９）のアルゴリズムである。かかるアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アライメントソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１２０重み付け残基表、ギャップ長ペナルティ１２、及びギャップペナルティ４を使用することができる。配列分析のための追加のアルゴリズムは、当該技術分野で既知であり、Ｔｏｒｅｌｌｉｓ ａｎｄ Ｒｏｂｏｔｔｉ，１９９４，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．１０：３－５に記載されるＡＤＶＡＮＣＥ及びＡＤＡＭ、並びにＰｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４－８に記載されるＦＡＳＴＡが挙げられる。ＦＡＳＴＡ内で、ｋｔｕｐは、検索の感度及び速度を設定する制御オプションである。ｋｔｕｐ＝２の場合、比較される２つの配列中の類似の領域は、アラインメントされた残基の対を見ることによって見出され、ｋｔｕｐ＝１の場合、単一のアラインメントされたアミノ酸が調べられる。ｋｔｕｐは、タンパク質配列について２若しくは１に、又はＤＮＡ配列について１～６に設定され得る。ｋｔｕｐが指定されていない場合のデフォルトは、タンパク質について２、ＤＮＡについて６である。代替的に、タンパク質配列アラインメントは、Ｈｉｇｇｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：３８３－４０２に記載されるように、ＣＬＵＳＴＡＬ Ｗアルゴリズムを使用して行われ得る。
「化学療法剤」は、がんの治療に有用な化学化合物である。かかる化学療法剤の例としては、チオテパ及びシクロホスファミド等のアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファン等のアルキルスルホネート；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパ等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、及びトリメチロロメラミンを含む、エチレンイミン及びメチルアメラミン；アセトゲニン（特に、ブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（合成類似体トポテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、及びビゼレシン合成類似体を含む）；クリプトフィシン（特に、クリプトフィシン１及びクリプトフィシン８を含む）；ドラスタチン、アウリスタチン（類似体であるモノメチル－アウリスタチンＥ及びモノメチル－アウリスタチンＦを含む）；デュオカルマイシン（合成類似体であるＫＷ－２１８９及びＣＢＩ－ＴＭＩを含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン；スポンギスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えば、クロラムブシル、クロマファジン（ｃｈｌｏｍａｐｈａｚｉｎｅ）、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン；トロホスファミド、ウラシルマスタード；ニトロスレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａｓ）、例えば、カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン；抗生物質、例えば、エンジイン抗生物質（例えば、カリケアミシン、特に、カリケアミシンガンマ１Ｉ及びカリケアミシンファイＩ１、例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３－１８６を参照されたい；ダイネマイシン、ダイネマイシンＡを含む；ビスホスホネート、例えば、クロドロネート；エスペラミシン；及びネオカルジノスタチン発色団及び関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモモフォア（ｃｈｒｏｍｏｍｏｐｈｏｒｅ））、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オートラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（商標）（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン、例えば、マイトマイシンＣ、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗物質、例えば、メトトレキサート、及び５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）；葉酸類似体、例えば、デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリン類似体、例えば、フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えば、アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えば、カルステロン、ドロスタノロンプロピオン酸エステル、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤、例えば、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補給剤、例えば、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン；ジアジクオン；エルフォミチン（ｅｌｆｏｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダミン；マイタンシノイド、例えば、マイタンシン及びアンサマイトシン；ミトグアゾン、ミトキサントロン；モピダモル（ｍｏｐｉｄａｍｏｌ）；ニトラクリン；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン（ｓｉｚｏｆｕｒａｎ）；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２”－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ－２毒素、ベラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジンＡ及びアングイジン）；ウレタン（ｕｒｅｔｈａｎ）；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミタブロニトール（ｍｉｔａｂｒｏｎｉｔｏｌ）；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロラムブシル；ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ（商標））；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金類似体、例えば、シスプラチン及びカルボプラチン；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ビノレルビンＮａｖｅｌｂｉｎｅ（商標）；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ－１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド、例えば、レチノイン酸；カペシタビン、及び薬学的に許容される塩、酸、又は上述のいずれかの誘導体が挙げられる。また、この定義には、例えば、タモキシフェン（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（商標）を含む）、ラロキシフェン、ドロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、及びトレミフェン（Ｆａｒｅｓｔｏｎ（商標））；酵素アロマターゼを阻害し、副腎におけるエストロゲン産生を調節するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール（Ｍｅｇａｃｅ（商標））、エキセメスタン、フォルメスタン、ファドロゾール、ボロゾール（Ｒｉｖｉｓｏｒ（商標））、レトロゾール（Ｆｅｍａｒａ（商標））、及びアナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（商標）；及び抗アンドロゲン剤、例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリン、及び薬学的に許容される塩、酸、又は上述のいずれかの誘導体を含む、抗エストロゲン剤及び選択的エストロゲン受容体調節剤（ＳＥＲＭ）等の腫瘍に対するホルモン作用を調節又は阻害するように作用する抗ホルモン剤も含まれる。これらの薬剤のうちの任意の１つ以上は、様々な疾患及び／又は障害の治療のための有用な治療薬剤を提供するために、本発明のヒト抗体又はその抗原結合断片にコンジュゲート化され得る。
診断的及び治療的モニタリングの目的のために、本発明の抗体又はその抗原結合断片はまた、標識に（標識単独、又は標識と追加の第２の薬剤（プロドラッグ、化学療法剤等））にコンジュゲート化され得る。標識は、他の第２の薬剤とは区別される場合、検出可能な化合物又は組成物である薬剤を指し、本発明の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片に直接的又は間接的にコンジュゲート化され得る。標識自体は、検出可能であり得る（例えば、放射性同位体標識若しくは蛍光標識）か、又は、酵素標識の場合、検出可能な基質化合物若しくは組成物の化学的変化を触媒し得る。標識された抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、インビトロ診断及びインビボ診断を含む様々な用途で調製され、使用することができる。
本発明の様々な態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片の１つ以上のドメインは、組換え発現され得る。かかる組換え発現は、１つ以上の制御配列、すなわち、特定の宿主生物において作動可能に連結されたコード配列の発現に必要なポリヌクレオチド配列を用いてもよい。原核細胞での使用に好適な制御配列としては、例えば、プロモーター、オペレーター、及びリボソーム結合部位配列が挙げられる。真核生物の制御配列としては、限定されないが、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーが挙げられる。これらの制御配列は、原核宿主細胞及び真核宿主細胞における抗ＳＩＰＲα抗体又はその抗原結合断片の発現及び産生のために利用することができる。
核酸配列は、それが別の核酸配列と機能的関係に配置されるとき、「作動可能に連結される」。例えば、核酸プレ配列又は分泌リーダーは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現される場合、ポリペプチドをコードする核酸に作動可能に連結され、配列の転写に影響を及ぼす場合、プロモーター若しくはエンハンサーは、コード配列に作動可能に連結されるか、又は翻訳を容易にするように配置される場合、リボソーム結合部位は、コード配列に作動可能に連結される。一般に、「作動可能に連結される」は、連結されるＤＮＡ配列が、連続しており、分泌リーダーの場合には、連続しており、かつリーディングフレーム中にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは、任意選択的に連続している。連結は、簡便な制限部位でのライゲーションによって達成され得る。かかる部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプター又はリンカーを使用することができる。
本明細書で使用される場合、「細胞」、「細胞株」、及び「細胞培養」という表現は、互換的に使用され、そのような全ての呼称は、その子孫を含む。したがって、「形質転換体」及び「形質転換細胞」は、転写の数に関係なく、一次対象細胞及びそれに由来する培養物を含み、これらは、例えば、本発明の抗体又はその抗原結合断片の１つ以上のアミノ酸配列をコードする１つ以上の発現ベクターでトランスフェクトされていてもよい。
本発明に係る治療の目的のための「哺乳動物」という用語は、ヒト、飼育動物及び農場動物、並びにイヌ、ウマ、ネコ、ウシ等の動物園、スポーツ、又はペット動物を含む、哺乳動物に分類される任意の動物を指す。好ましくは、哺乳動物は、ヒトである。
「障害」は、本明細書で使用される場合、本明細書に記載される抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片による治療から利益を受け得る任意の状態である。障害は、哺乳動物が、問題となる障害にかかりやすくなる病理学的状態を含む、慢性及び急性の障害又は疾患を含む。本明細書で治療される非限定的な例又は障害としては、炎症性、血管新生、自己免疫及び免疫学的障害、呼吸器障害、がん、血液悪性腫瘍、良性及び悪性の腫瘍、白血病及びリンパ系悪性腫瘍が挙げられる。
「がん」及び「がん性」という用語は、典型的には調節されていない細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理学的状態を指すか、又はそれを説明する。がんの例としては、限定されないが、がん腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「ＳＩＲＰα経路障害」又は「ＳＩＲＰα経路疾患」という用語は、ＳＩＲＰαとＣＤ４７との間の相互作用を調整することによって、特に、ＳＩＲＰα／ＣＤ４７シグナル伝達を阻害することによって、軽減することができる状態を指す。「ＳＩＲＰα経路障害」又は「ＳＩＲＰα経路疾患」は、ＳＩＲＰαが発現される骨髄関連疾患を含む。「ＳＩＲＰα経路障害」又は「ＳＩＲＰα経路疾患」はまた、ＳＩＲＰαの増加した免疫応答が望ましいマクロファージ及び／又は樹状細胞による食作用の減少を特徴とする状態を含む。
ＳＩＲＰα経路障害の例は、がん、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、感染性疾患、又は線維症である。がんの例としては、血液がん（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫、例えば、多発性骨髄腫）、及び転移性病変が挙げられる。更なる例としては、固形腫瘍がんが挙げられる。固形腫瘍の例としては、悪性腫瘍、例えば、肉腫及びがん腫、例えば、様々な臓器系の腺がん、例えば、肺、乳房、卵巣、リンパ系、胃腸（例えば、結腸）、肛門、生殖器及び泌尿生殖管（例えば、腎臓、尿路上皮、膀胱細胞、前立腺）、咽頭、ＣＮＳ（例えば、脳、神経又はグリア細胞）、頭頚部、皮膚（例えば、黒色腫）、及び膵臓、並びに結腸がん、直腸がん、腎臓細胞がん、肝臓がん、胃がん、非小細胞肺がん、小腸のがん、及び食道のがん等の悪性腫瘍を含む腺がんが挙げられる。がんは、早期がん、中間がん、後期がん、又は転移性がんであり得る。
いくつかの実施形態において、がんは、肺がん（例えば、ＮＳＣＬＣ（例えば、扁平上皮組織学及び／又は非扁平上皮組織学を伴うＮＳＣＬＣ、又はＮＳＣＬＣ腺がん））、黒色腫（例えば、進行性黒色腫）、腎臓がん（例えば、腎細胞がん腫）、肝臓がん、肝細胞がん腫、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、前立腺がん、乳がん（例えば、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、若しくはＨＥＲ２／ｎｅｕのうちの１つ、２つ、若しくは全てを発現しない乳がん、例えば、トリプルネガティブ乳がん）、結腸直腸がん、膵臓がん、頭頚部がん（例えば、頭頸部扁平上皮がん腫（ＨＮＳＣＣ）、肛門がん、胃食道がん、甲状腺がん、子宮頸がん、リンパ増殖性疾患（例えば、移植後リンパ増殖性疾患）、又は血液がん、Ｔ細胞リンパ腫、Ｂ細胞リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、又は白血病（例えば、骨髄性白血病、又はリンパ性白血病）から選択される。
いくつかの実施形態において、がんは、がん腫（例えば、進行性若しくは転移性のがん腫）、黒色腫、又は肺がん腫、例えば、ＮＳＣＬＣから選択される。
いくつかの実施形態において、がんは、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、肺がん、膠芽腫、腎臓がん、好ましくは、膵臓がん、前立腺がん、乳がん、結腸直腸がん、又は肺がんから選択される。
いくつかの実施形態において、がんは、膵臓がん、肺がん、乳がん、黒色腫、結腸直腸がん、卵巣がん、胃がん、甲状腺がん、肝臓がん、又は前立腺がんである。
結合剤、例えば、抗体又はその抗原結合断片の文脈において「特異的に結合する」又は「特異的結合」という用語は、無関係の抗原よりも、抗原又は抗原内のエピトープに対して、より頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、より高い親和性で、より高いアビディティで、又は上述の何らかの組み合わせで会合する結合剤を指す。特定の実施形態において、抗体又はその抗原結合断片は、約０．１ｍＭ以下、好ましくは約１μＭ未満のＫＤで、抗原、又は抗原内のエピトープに特異的に結合する。異なる種における相同タンパク質間の配列同一性、又は単一種内のタンパク質のバリアントのため、特異的結合は、１つより多い種（例えば、ヒトＳＩＲＰα及びｃｙｎｏ ＳＩＲＰα）中のタンパク質を認識する抗体又はその抗原結合断片を含み得る。特定の実施形態において、第１のタンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、第２のタンパク質に特異的に結合してもよく、又は結合しなくてもよいことが理解される。したがって、「特異的結合」は、必ずしも排他的結合、すなわち単一のタンパク質に対する結合を必要としない（ただし、排他的結合を含み得る）。したがって、抗体又はその抗原結合断片は、特定の実施形態において、１つより多いタンパク質に特異的に結合し得る。
２つの分子がタンパク質に特異的に結合するかどうかを決定するための方法は、本明細書に記載されているか、又は当該技術分野で既知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴等を含む。一実施形態において、特異的結合は、本明細書の実施例のセクションに記載される親和性結合法に従って、約１×１０－７Ｍ（１００ｎＭ）以下のＫＤによって特徴付けられる。別の実施形態において、特異的結合は、本明細書の実施例のセクションに記載される親和性結合法に従って、約５×１０－８Ｍ（５０ｎＭ）以下のＫＤによって特徴付けられる。別の実施形態において、特異的結合は、本明細書の実施例のセクションに記載される親和性結合法に従って、約１×１０－８Ｍ（１０ｎＭ）以下のＫＤによって特徴付けられる。別の実施形態において、特異的結合は、本明細書の実施例のセクションに記載される親和性結合法に従って、約５×１０－９Ｍ（５ｎＭ）以下のＫＤによって特徴付けられる。
「皮下投与」という用語は、動物又はヒト患者等の対象の皮膚の下に、好ましくは、皮膚と下部組織との間のポケット内に、薬物貯蔵部からの比較的ゆっくりとした持続的送達によって、薬物、例えば、本発明の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を導入することを指す。皮膚を挟んだり、皮膚を下部組織から引き離したりすると、ポケットが生成することがある。
「皮下注入」という用語は、限定されないが３０分以下、又は９０分以下を含む期間、薬物貯蔵部からの比較的ゆっくりとした持続的送達によって、対象の皮膚の下に、好ましくは、皮膚と下部組織との間のポケット内に、薬物、例えば、本発明の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を導入することを指す。任意選択的に、注入は、対象の皮膚の下に埋め込まれる薬物送達ポンプの皮下埋め込みによって行われてもよく、ポンプは、所定の期間、例えば、３０分間、９０分間、又は治療レジメンの長さにわたる期間にわたって所定の量の薬物を送達する。
「皮下ボーラス」という用語は、ボーラス薬物送達がおよそ１５分未満である、対象の皮膚の下の薬物投与を指し、別の態様において、５分未満であり、更に別の態様において、６０秒未満である。更に別の態様において、投与は、皮膚と下部組織との間のポケット内にあり、ポケットは、皮膚を上に挟むか、若しくは引っ張るか、又は下部組織から引き離すことによって生成され得る。例えば、「皮下ボーラス」とは、本発明の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を対象におよそ１５分未満、別の態様において５分未満、更に別の態様において６０秒未満で投与することを指す。
「治療有効量」という用語は、治療される障害の症状の１つ以上を緩和又は軽減する抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片の量を指すために使用される。治療有効量は、そうすることで、患者にとって有益な転帰を有する量である。有効性は、治療される状態に応じて、従来の方法で測定され得る。
「治療」及び「療法」等の用語は、本明細書で使用される場合、限定されないが、疾患又は障害の１つ以上の症状の軽減又は除去、疾患又は障害の退縮、進行の遅延若しくは停止を含む、任意の臨床的に望ましい効果又は有益な効果をもたらす、疾患又は障害に対する治療的措置、並びに予防的措置又は抑制的措置を含むことを意味する。したがって、例えば、治療という用語は、疾患又は障害の症状の発症の前又は後に抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を投与することを含み、それによって疾患又は障害の１つ以上の徴候を予防するか、又は除去する。別の例として、この用語は、疾患の症状に対抗するために、疾患の臨床徴候が出た後に抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を投与することを含む。更に、発症後、又は臨床症状が発生した後の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片の投与は、投与が、組織損傷の程度又は転移の量若しくは程度等の疾患又は障害の臨床パラメータに影響を及ぼす場合、その治療が疾患の改善につながるかどうかにかかわらず、本明細書で使用される「治療」又は「療法」を含む。更に、本発明の組成物が、単独で、又は別の治療薬剤と組み合わせて、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片組成物、又はその抗原結合断片を使用しない状態での症状と比較して、治療される障害の少なくとも１つの症状を軽減するか、又は緩和する限り、その結果は、障害の全ての症状が軽減されるか否かにかかわらず、基礎となる障害の効果的な治療とみなされるべきである。
「添付文書」という用語は、かかる治療製品の使用に関する適応症、使用法、投与、禁忌及び／又は警告に関する情報を含む、治療製品の市販パッケージに通常含まれる説明書を指すために使用される。
抗体
抗ＳＩＲＰα抗体、特に、ヒト抗ＳＩＲＰα抗体、並びに本発明の抗ＳＩＲＰα抗体を含む組成物及び製造物品が本明細書に記載され、開示される。抗ＳＩＲＰα抗体の抗原結合断片も記載されている。抗ＳＩＲＰα抗体及びその抗原結合断片は、様々な疾患又は障害、特に、ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαシグナル伝達の調整によって特徴付けられる疾患又は障害の治療に使用することができる。抗ＳＩＲＰα抗体及びその抗原結合断片は、各々、ＳＩＲＰαエピトープを特異的に認識する部分を少なくとも含む。
エピトープは、最も一般的には、タンパク質、短いオリゴペプチド、オリゴペプチド模倣物（例えば、ＳＩＲＰα抗原の抗体結合特性を模倣する有機化合物）、又はこれらの組み合わせである。ある抗体のペプチド又はポリペプチドエピトープの最小サイズは、約４～５個のアミノ酸であると考えられる。ペプチド又はポリペプチドエピトープは、例えば少なくとも７個のアミノ酸、又は例えば少なくとも９個のアミノ酸、又は例えば約１５～約２０個のアミノ酸を含有する。抗体は、その三次形態での抗原性ペプチド又はポリペプチドを認識することができるため、エピトープを含むアミノ酸は、連続している必要はなく、いくつかの場合において、同じペプチド鎖上にさえ存在しなくてもよい。エピトープは、Ｘ線結晶学、水素／重水素交換質量分析（ＨＸＭＳ）、部位特異的変異誘発、アラニンスキャニング変異誘発、及びペプチドスクリーニング法等の当該技術分野で既知の様々な技術によって決定され得る。
抗ＳＩＲＰα抗体の生成、及びそれらの特性決定は、実施例に記載されている。本発明の代表的な抗ＳＩＲＰα抗体のＣＤＲは、以下の表１～２５に開示されている。重鎖ＣＤＲ－１、ＣＤＲ－２、ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ１～３）、及び軽鎖ＣＤＲ－１、ＣＤＲ－２、ＣＤＲ３（Ｌ－ＣＤＲ１～３）は、Ｋａｂａｔ、ＣＣＧ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、及びＮｏｒｔｈに従う番号付けシステムに従って提供される。
Figure 2024056817000001
Figure 2024056817000002
Figure 2024056817000003
Figure 2024056817000004
Figure 2024056817000005
Figure 2024056817000006
Figure 2024056817000007
Figure 2024056817000008
Figure 2024056817000009
Figure 2024056817000010
Figure 2024056817000011
Figure 2024056817000012
Figure 2024056817000013
Figure 2024056817000014
Figure 2024056817000015
Figure 2024056817000016
Figure 2024056817000017
Figure 2024056817000018
Figure 2024056817000019
Figure 2024056817000020
Figure 2024056817000021
Figure 2024056817000022
Figure 2024056817000023
Figure 2024056817000024
Figure 2024056817000025
抗ＳＩＲＰα抗体配列
本発明の代表的な抗ＳＩＲＰα抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、以下の表２６～２７に開示されている。
Figure 2024056817000026
Figure 2024056817000027
本発明の代表的な抗ＳＩＲＰα抗体は、表２８又は２９に示される軽鎖可変領域配列及び／又は重鎖可変領域配列を有する。
Figure 2024056817000028
Figure 2024056817000029

Figure 2024056817000030

Figure 2024056817000031
Figure 2024056817000032

Figure 2024056817000033
本発明の代表的な抗ＳＩＲＰα抗体は、以下の表３０又は３１に示される重鎖及び／又は軽鎖を含み得る。
Figure 2024056817000034
Figure 2024056817000035

Figure 2024056817000036

Figure 2024056817000037

Figure 2024056817000038

Figure 2024056817000039

Figure 2024056817000040

Figure 2024056817000041

Figure 2024056817000042

Figure 2024056817000043

Figure 2024056817000044

Figure 2024056817000045

Figure 2024056817000046
Figure 2024056817000047

Figure 2024056817000048

Figure 2024056817000049

Figure 2024056817000050

Figure 2024056817000051
本発明の代表的な抗ＳＩＲＰα抗体は、以下の表３２又は３３に示される重鎖定常領域及び／又は軽鎖定常領域を含み得る。
Figure 2024056817000052
アミノ酸配列バリアント
バリアント抗ＳＩＲＰα抗体及びその抗体断片は、表１～２５に示されるＣＤＲのセットに基づいて操作され得る。バリアント抗ＳＩＲＰα抗体及び抗体断片において、ＣＤＲのアミノ酸配列は、変化しないままであるか、又は最小限の変化（例えば、１～５の変化）を有するが、その周囲の領域、例えば、ＦＲ領域を操作することができることを理解すべきである。抗ＳＩＲＰα抗体のアミノ酸配列バリアントは、適切なヌクレオチド変化を抗ＳＩＲＰα抗体ＤＮＡに導入することによって、又はペプチド合成によって、調製することができる。かかるバリアントとしては、例えば、本明細書の例の抗ＳＩＲＰα抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又はそれへの挿入、及び／又はその置換が挙げられる。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせは、最終構築物が所望の特徴を有することを条件に、最終構築物に到達するように作製される。アミノ酸変化はまた、ヒト又はバリアント抗ＳＩＲＰα抗体の翻訳後プロセスを改変してもよく、例えば、グリコシル化部位の数又は位置を変化させてもよい。
いくつかの実施形態において、本発明は、可変重鎖及び可変軽鎖を有する抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗体断片を含み、可変重鎖アミノ酸配列及び可変軽鎖アミノ酸配列は、表２６～２９に開示されるアミノ酸配列に対して少なくとも少なくとも９０％、少なくとも９２．５％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるが、但し、抗体又はその断片は、ＳＩＲＰα－Ｖ１及び／又はＳＩＲＰα－Ｖ２に対する結合を保持する。
いくつかの実施形態において、本発明は、可変重鎖及び可変軽鎖を有する抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗体断片を含み、可変重鎖アミノ酸配列及び可変軽鎖アミノ酸配列は、それぞれ配列番号１００、１０１、１０２、１０３、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１０４、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、又は２２１、及び配列番号１０５、１０６、１０７、１０８，１０９、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、又は２２２のアミノ酸配列に対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９２．５％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一である。
いくつかの実施形態において、本発明は、重鎖及び軽鎖を有する抗ＳＩＲＰα抗体を含み、重鎖アミノ酸配列及び軽鎖アミノ酸配列は、表３０及び３１に開示されるアミノ酸配列に対して少なくとも少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一であるが、但し、抗体又はその断片は、ＳＩＲＰα－Ｖ１及び／又はＳＩＲＰα－Ｖ２に対する結合を保持する。
いくつかの実施形態において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗体断片は、配列番号１００、１０１、１０２、１０３、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１０４、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、又は２２１に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖配列を含む。他の実施形態において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗体断片は、配列番号１００、１０１、１０２、１０３、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１０４、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、又は２２１の可変重鎖配列を含む抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗体断片の結合活性及び／又は機能活性を保持する。なお更なる実施形態において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗体断片は、配列番号１００、１０１、１０２、１０３、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１０４、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、又は２２１の可変重鎖配列を含み、重鎖可変配列中に１つ以上の保存的アミノ酸置換、例えば、１、２、３、４、５、１～２、１～３、１～４、又は１～５個の保存的アミノ酸置換を有する。なお更なる実施形態において、１つ以上の保存的アミノ酸置換は、（Ｋａｂａｔの番号付けシステムに基づいて）配列番号１００、１０１、１０２、１０３、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１０４、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、又は２２１中の１つ以上のフレームワーク領域内にある。
いくつかの実施形態において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗体断片は、１００、１０１、１０２、１０３、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１０４、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、又は２２１に示される抗ＳＩＲＰα重鎖可変領域配列に対して少なくとも９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％の配列同一性を有する可変重鎖配列を含み、（Ｋａｂａｔの番号付けシステムに基づいて）フレームワーク領域中に１つ以上の保存的アミノ酸置換を含み、配列番号１００、１０１、１０２、１０３、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１０４、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、又は２２１に示される可変重鎖配列、及び配列番号１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、又は２２２に示される可変軽鎖配列を含む抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗体断片の結合活性及び／又は機能活性を保持する。
いくつかの実施形態において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗体断片は、配列番号１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、又は２２２に示されるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖配列を含む。他の実施形態において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗体断片は、配列番号１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、又は２２２の可変軽鎖配列を含む抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗体断片の結合活性及び／又は機能活性を保持する。なお更なる実施形態において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗体断片は、配列番号１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、又は２２２の可変軽鎖配列を含み、軽鎖可変配列中に１つ以上の保存的アミノ酸置換、例えば、１、２、３、４、５、１～２、１～３、１～４、又は１～５個の保存的アミノ酸置換を有する。なお更なる実施形態において、１つ以上の保存的アミノ酸置換は、（Ｋａｂａｔの番号付けシステムに基づいて）配列番号１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１２７、１２８、１２９、１３０、又は２２２中の１つ以上のフレームワーク領域内にある。
いくつかの実施形態において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗体断片は、配列番号１０５、１０６、１０７、１０８，１０９、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、又は２２２に示される抗ＳＩＲＰα軽鎖可変領域配列に対して少なくとも９５％、約９６％、約９７％、約９８％、又は約９９％の配列同一性を有する可変軽鎖配列を含み、（Ｋａｂａｔの番号付けシステムに基づいて）フレームワーク領域中に１つ以上の保存的アミノ酸置換を含み、配列番号１００、１０１、１０２、１０３、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１０４、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、又は２２１に示される可変重鎖配列、及び配列番号１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１２６、１２７、１２８、１２９、１３０、又は２２２に示される可変軽鎖配列を含む抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗体断片の結合活性及び／又は機能活性を保持する。
いくつかの実施形態において、本発明は、アミノ酸置換を有する抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を含む。これらのバリアントは、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片中の少なくとも１個のアミノ酸残基が除去され、異なる残基がその位置に挿入されている。置換変異誘発のための最大の関心部位には、超可変領域が含まれるが、ＦＲ改変も企図される。保存的置換は、「好ましい置換」という見出しで表３３に示される。かかる置換が、生物学的活性の変化を引き起こす場合、「例示的な置換」と呼ばれる、又はアミノ酸の種類に関して以下に更に記載されるような、より実質的な変化を導入し、生成物をスクリーニングしてもよい。
Figure 2024056817000053
タンパク質化学において、抗体の生物学的特性は、（ａ）置換領域中のポリペプチド骨格の構造、例えば、シート若しくはらせん立体配座としての構造、（ｂ）標的部位での分子の電荷若しくは疎水性、又は（ｃ）側鎖の嵩高さを維持することに対する効果が著しく異なる置換を選択することによって達成され得ることが一般的に認められている。天然に存在する残基は、共通の側鎖特性に基づいて、群に分けられる。
（１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；
（２）中性親水性：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；
（３）酸性：ａｓｐ、ｇｌｕ；
（４）塩基性：ａｓｎ、ｇｉｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；
（５）鎖の配向に影響を及ぼす残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ；及び
（６）芳香族：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。
抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片の適切な立体配座の維持に関与しない任意のシステイン残基も、分子の酸化安定性を改善するために、異常な架橋を防止するために、又は細胞傷害性化合物若しくは細胞抑制性化合物への確立されたコンジュゲート化位置を提供するために、一般にセリンで置換されてもよい。逆に、システイン結合を抗体又はその抗原結合断片に添加して、その安定性を向上させてもよい（特に、抗体がＦｖ断片等の抗体断片である場合）。
抗体の別の種類のアミノ酸バリアントは、抗体の元々のグリコシル化パターンを改変することを伴う。本文脈における「改変する」という用語は、抗体中に見出される１つ以上の炭水化物部分を欠失させること、及び／又は抗体に以前に存在しなかった１つ以上のグリコシル化部位を付加することを意味する。例えば、抗体は、ヒトＩｇＧ１重鎖の２９７位にアミノ酸置換を含み、アスパラギン２９７を置き換える（例えば、Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｇ）ことによって、オリゴ糖トランスフェラーゼ酵素複合体媒介性グリコシル化を阻止し得る。
いくつかの態様において、本発明は、本明細書に記載の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子を含む。抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片のアミノ酸配列バリアントをコードする核酸分子は、当該技術分野で既知の様々な方法によって調製される。これらの方法としては、限定されないが、天然源からの単離（天然に存在するアミノ酸配列バリアントの場合）、又はオリゴヌクレオチド媒介性（若しくは部位特異的）変異誘発による調製、ＰＣＲ変異誘発、並びに抗ＳＩＲＰα抗体若しくはその抗原結合断片の先に調製されたバリアント又は非バリアント態様のカセット変異誘発が挙げられる。例えば、本発明に係る核酸分子はまた、本明細書に開示される核酸分子にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸分子を包含し、それにより、本発明の範囲内の「ストリンジェントな条件」という用語は、例えば、５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、及び１％ＳＤＳを含む緩衝液中での４２℃でのハイブリダイゼーション、又は５×ＳＳＣ、及び１％ＳＤＳを含む緩衝液中での６５℃でのハイブリダイゼーションを含むことができ、これらはともに、６５℃での０．２×ＳＳＣ、及び０．１％ＳＤＳの洗浄を伴う。例示的なストリンジェントなハイブリダイゼーション条件としては、４０％ホルムアミド、１ＭのＮａＣｌ、及び１％ＳＤＳの緩衝液中での３７℃でのハイブリダイゼーション、並びに１×ＳＳＣ中での４５℃での洗浄も挙げることができる。
特定の実施形態において、抗ＳＩＲＰα抗体は、抗体断片である。抗体断片の産生のために開発されてきた技術が存在する。断片は、インタクト抗体のタンパク質分解消化を介して誘導することができる（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４：１０７－１１７、及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１を参照されたい）。代替的に、断片は、組換え宿主細胞中で直接的に産生することができる。例えば、Ｆａｂ－ＳＨ断片は、Ｅ．ｃｏｌｉから直接的に回収され、化学的にカップリングしてＦ（ａｂ’）２断片を形成することができる（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３－１６７を参照されたい）。別のアプローチによって、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組換え宿主細胞培養物から直接的に単離することができる。抗体断片を産生するための他の技術は、当業者には明白であろう。
一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体及びその抗原結合断片は、グリコシル化、酸化、又は脱アミド化等の修飾を含み得る。
特定の実施形態において、インタクト抗体ではなく、抗ＳＩＲＰα抗体断片を使用することが望ましい場合がある。抗体断片の血清半減期を増加させるために、抗体断片を修飾することが望ましい場合がある。このことは、例えば、サルベージ受容体結合エピトープを抗体断片に組み込むことによって達成され得る。１つの方法において、抗体断片の適切な領域を、改変（例えば、変異）してもよく、又はエピトープを、ペプチドタグに組み込み、次いで、例えば、ＤＮＡ若しくはペプチド合成によって、いずれかの末端又は中央のいずれかで、これを抗体断片に融合してもよい（例えば、ＷＯ９６／３２４７８を参照されたい）。例えば、本発明の抗体断片は、全長ＩｇＧ骨格の使用が望ましくない場合、血清半減期を増加させるためにヒト血清アルブミンに融合されてもよい。抗体断片とヒト血清アルブミンとのかかる融合タンパク質は、２つの異なる抗体断片を融合してアビディティを増加させるか、又は血清半減期が延長された二重特異性結合タンパク質を生成する必要がある状況で有利であり得る（例えば、ＷＯ０５／０７７０４２Ａ２を参照されたい）。
抗体上に存在する任意の炭水化物部分の除去は、化学的又は酵素的に達成され得る。化学的脱グリコシル化は、Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２５９：５２によって、及びＥｄｇｅ ｅｔ ａｌ．，１９８１，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１１８：１３１によって記載される。抗体上の炭水化物部分の酵素的切断は、Ｔｈｏｔａｋｕｒａ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ １３８：３５０によって記載されるような様々なエンドグリコシダーゼ及びエキソグリコシダーゼの使用によって達成され得る。
別の種類の有用な修飾は、米国特許第４，６４０，８３５号、米国特許第４，４９６，６８９号、米国特許第４，３０１，１４４号、米国特許第４，６７０，４１７号、米国特許第４，７９１，１９２号、及び米国特許第４，１７９，３３７号のうちの１つ以上に示されるような方法で、抗体を、様々な非タンパク質性重合体のうちの１つ、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、又はポリオキシアルキレンに連結することを含む。
生物物理学的特性
一態様において、本発明は、１つ以上の好ましい生物物理学的特性を有する抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を提供する。一態様において、本発明のヒト抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、緩衝液中で、少なくとも９０％が単量体形態で、又は少なくとも９２％が単量体形態で、又は少なくとも９５％が単量体形態で、又は少なくとも９６％が単量体形態で、又は少なくとも９７％が単量体形態で、又は少なくとも９８％が単量体形態で、又は少なくとも９９％が単量体形態で存在する。更なる態様において、本発明のヒト抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、緩衝液中で、１週間、１ヶ月間、又は４ヶ月間にわたって、少なくとも９０％が単量体形態で、又は少なくとも９２％が単量体形態で、又は少なくとも９５％が単量体形態で、又は少なくとも９６％が単量体形態で、又は少なくとも９７％が単量体形態で、又は少なくとも９８％が単量体形態で、又は少なくとも９９％が単量体形態で保持される。上述の単量体の割合は、１つ以上の精製ステップ（例えば、タンパク質Ａ精製、任意選択的にその後のカチオン交換クロマトグラフィー）が行われた後に決定されてもよい。上述の単量体の割合は、低ｐＨ処理、例えば、ｐＨ３．５処理の後に決定されてもよい。上述の単量体の割合は、室温（例えば２５℃）、又は高温（例えば４０℃）で、緩衝液中で１週間、１ヶ月間、又は４ヶ月間の後に決定されてもよい。
別の態様において、本発明の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、高濃度で安定である。
別の態様において、本発明の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、低い粘度を有する。
エピトープ結合
別の態様において、本発明は、特定の線形又は立体配座の「ＳＩＲＰα抗原エピトープ」及び「ＳＩＲＰαエピトープ」を認識する抗体又はその抗原結合断片に関する。
本明細書で使用される場合、「ＳＩＲＰα抗原エピトープ」及び「ＳＩＲＰαエピトープ」という用語は、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片に結合することができる分子（例えば、ペプチド）又は分子の断片を指す。これらの用語には、例えば、本発明の抗体若しくは抗体断片のいずれかによって認識されるＳＩＲＰα抗原決定基、又は分子と抗体との間の主要な接触点が更に含まれる。
ＳＩＲＰα抗原エピトープは、タンパク質、タンパク質断片、ペプチド等に含まれてもよい。エピトープは、最も一般的には、タンパク質、短いオリゴペプチド、オリゴペプチド模倣物（例えば、ＳＩＲＰα抗原の抗体結合特性を模倣する有機化合物）、又はこれらの組み合わせである。
本発明の一態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２４０～２５２のうちのいずれか１つに示されるアミノ酸配列を含むＳＩＲＰαタンパク質上の特定の線形又は立体配座の「ＳＩＲＰαエピトープ」を認識する。本発明の一態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２５３～２６０及び２６４のうちのいずれか１つ、特に、配列番号２５６及び２５７の任意の１つ以上に示されるアミノ酸配列を含むＳＩＲＰαタンパク質上の特定の線形又は立体配座の「ＳＩＲＰαエピトープ」を認識する。本発明の一態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６６に示されるような、アミノ酸：ＬＥＵ６０、ＩＬＥ６１、ＶＡＬ６３、ＧＬＹ６４、ＰＲＯ６５、ＧＬＮ８２、ＬＹＳ８３、ＧＬＵ８４、ＴＨＲ９７、ＬＹＳ９８、ＡＲＧ９９、ＧＬＵ１００、ＬＹＳ１２６、ＧＬＹ１２７、ＳＥＲ１２８、ＰＲＯ１２９、及びＡＳＰ１３０を含むＳＩＲＰαエピトープに結合する。本発明の一態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６５に示されるような、アミノ酸ＬＥＵ６０、ＩＬＥ６１、ＶＡＬ６３、ＧＬＹ６４、ＰＲＯ６５、ＧＬＮ８２、ＬＹＳ８３、ＧＬＵ８４、ＴＨＲ９７、ＬＹＳ９８、ＡＲＧ９９、ＡＳＮ１００、ＬＹＳ１２６、ＧＬＹ１２７、ＳＥＲ１２８、ＰＲＯ１２９、及びＡＳＰ１３０を含むＳＩＲＰαエピトープに結合する。本発明の別の態様において、抗体又はその抗原結合断片は、アミノ酸ＡＳＰ１３０を含むＳＩＲＰαエピトープに結合する。別の態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２５３、配列番号２５４、配列番号２５５、配列番号２６４、及び配列番号２５６の任意の１つ以上、特に、配列番号２５６を含むＳＩＲＰαエピトープに結合する。
本発明の一態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６６に示されるような、アミノ酸ＡＲＧ７０、ＧＬＹ７１、ＡＬＡ７２、ＧＬＹ７３、ＰＲＯ７４、ＡＬＡ７５、ＡＲＧ７６、ＧＬＵ７７、ＡＬＡ１１４、ＡＬＡ１１６、ＧＬＹ１１７、ＴＨＲ１１８、ＴＹＲ１２０、ＴＨＲ１３１、ＧＬＵ１３２、ＰＨＥ１３３、ＳＥＲ１３５、及びＧＬＵ１４０を含むＳＩＲＰαエピトープに結合する。本発明の一態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２６５に示されるような、アミノ酸ＡＲＧ７０、ＧＬＹ７１、ＡＬＡ７２、ＧＬＹ７３、ＰＲＯ７４、ＧＬＹ７５、ＡＲＧ７６、ＧＬＵ７７、ＡＬＡ１１４、ＡＬＡ１１６、ＧＬＹ１１７、ＴＨＲ１１８、ＴＹＲ１２０、ＶＡＬ１３２、ＧＬＵ１３３、ＰＨＥ１３４、ＳＥＲ１３６、及びＧＬＵ１４１を含むＳＩＲＰαエピトープに結合する。本発明の別の態様において、抗体又はその抗原結合断片は、アミノ酸ＡＬＡ７２を含むＳＩＲＰαエピトープに結合する。別の態様において、抗体又はその抗原結合断片は、配列番号２５７、配列番号２５８、配列番号２５９、及び配列番号２６０の任意の１つ以上、特に、配列番号２５７を含むＳＩＲＰαエピトープに結合する。本発明の別の態様において、抗体又はその抗原結合断片は、ＳＩＲＰαに対する抗体Ａ～Ｅのいずれかの結合をブロックする。
更なる実施形態において、エピトープは、以下の表３４又は３５に示されるＳＩＲＰαタンパク質上に存在する。
Figure 2024056817000054
Figure 2024056817000055

Figure 2024056817000056

Figure 2024056817000057
本発明はまた、ＳＩＲＰαに対する結合について、本発明に係る抗ＳＩＲＰα抗体と競合する、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、ＳＩＲＰαに対する結合について、抗体Ａ～抗体Ｅのうちのいずれか１つと競合する、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を提供する。競合アッセイは、例えば、バイオセンサを使用してＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１４；９（３）：ｅ９２４５１に記載されるように、又はＰＬｏＳ Ｏｎｅ ２０２０ Ｍａｒ ５；１５（３）：ｅ０２２９２０６に記載されるように、又は本明細書に開示される方法によって行われてもよい。
治療的使用
一実施形態において、本発明の抗ＳＩＲＰα抗体、又はその抗原結合断片は、ＳＩＲＰα経路障害を治療及び／又は予防するのに有用である。
別の実施形態において、本発明の抗ＳＩＲＰα抗体、又はその抗原結合断片は、医薬として有用である。
したがって、一実施形態において、本発明は、対象においてＳＩＲＰαとＣＤ４７との間の相互作用を調整する方法であって、上述の対象に、本発明に係る抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を、上述の対象においてＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαシグナル伝達をブロックするのに十分な量で含む組成物を投与することを含む、方法を提供する。一実施形態において、本発明は、対象においてＳＩＲＰαとＣＤ４７との間の相互作用を調整する際に使用するための本発明に係る抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、対象においてＳＩＲＰαとＣＤ４７との間の相互作用を調整するための医薬の製造における本発明に係る抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片の使用を提供する。
一実施形態において、本発明は、対象において骨髄系細胞の食作用を増強する方法であって、上述の対象に、本発明に係る抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を、上述の対象において免疫応答を増強するのに十分な量で含む組成物を投与することを含む、方法を提供する。一実施形態において、本発明は、対象において骨髄系細胞の活性を増強する際に使用するための本発明に係る抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、対象において骨髄系細胞の食作用を増強するための医薬の製造における本発明に係る抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片の使用を提供する。
一実施形態において、本発明に係る抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を含む組成物を上述の対象に投与することを含む、対象におけるＳＩＲＰα経路疾患又は障害。一実施形態において、本発明は、対象においてがん、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、感染性疾患、又は線維症を治療又は予防する際に使用するための本発明に係る抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、対象においてがん、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、感染性疾患、又は線維症を治療又は予防するための医薬の製造における本発明に係る抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片の使用を提供する。
したがって、一実施形態において、本発明は、対象において上述の疾患又は状態のうちの１つを治療又は予防する方法であって、上述の対象に、本発明に係る抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を含む組成物を投与することを含む、方法を提供する。一実施形態において、本発明は、対象において上述の疾患又は状態のうちの１つを治療又は予防する際に使用するための本発明に係る抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を提供する。一実施形態において、本発明は、対象において上述の疾患又は状態のうちの１つを治療又は予防するための医薬の製造における本発明に係る抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片の使用を提供する。
治療的使用以外の使用
本明細書に記載の抗体は、親和性精製剤として有用である。このプロセスにおいて、抗体は、当該技術分野で周知の方法を使用して、タンパク質Ａ樹脂等の固相上に固定化される。固定化された抗体を、精製されるＳＩＲＰαタンパク質（又はその断片）を含有する試料と接触させ、その後、支持体を、固定化された抗体に結合するＳＩＲＰαタンパク質を除く試料中の全ての材料を実質的に除去するのに好適な溶媒で洗浄する。最後に、支持体を、抗体からＳＩＲＰαタンパク質を放出する別の好適な溶媒で洗浄する。
本明細書に開示される本発明のＳＩＲＰα抗体及びその断片はまた、ＳＩＲＰαタンパク質を検出及び／又は定量化するための診断アッセイに有用であり、例えば、特定の細胞、組織、又は血清中でＳＩＲＰα発現を検出するのに有用である。
いくつかの実施形態において、例えば、診断目的のために、抗体を検出可能な部分で標識することが有利であろう。放射性同位体、蛍光標識、酵素基質標識、量子ドット等を含む多数の検出可能な標識が利用可能である。標識は、様々な既知の技術を使用して、抗体と間接的にコンジュゲート化され得る。例えば、抗体は、ビオチンとコンジュゲート化させてもよく、上述の３つの広範なカテゴリーの標識のうちのいずれかを、アビジンとコンジュゲート化させてもよく、又はその逆も可能である。ビオチンは、アビジンに選択的に結合し、したがって、標識は、この間接的な様式で抗体とコンジュゲート化され得る。代替的に、標識と抗体との間接的なコンジュゲート化を達成するために、抗体は、小さなハプテン（例えばジゴキシン）とコンジュゲート化することができ、上述の異なる種類の標識のうちの１つを、抗ハプテン抗体（例えば、抗ジゴキシン抗体）とコンジュゲート化する。したがって、標識と抗体との間接的なコンジュゲート化を達成することができる。
診断用キット
抗ＳＩＲＰα抗体又はその断片を、診断用キット（すなわち、診断アッセイを行うための説明書とともに、所定量で包装された試薬の組み合わせ）に使用することができる。抗体が、酵素で標識される場合、キットは、検出可能な発色団又は蛍光団を提供する基質前駆体等の酵素によって必要とされる基質及び補因子を含み得る。加えて、安定化剤、緩衝液（例えば、ブロック緩衝液又は溶解緩衝液）等の他の添加剤が含まれ得る。種々の試薬の相対的な量は、アッセイの感度を実質的に最適化するような試薬の溶液中の濃度を提供するために、広く変動し得る。試薬は、溶解時に適切な濃度を有する試薬溶液を提供する賦形剤を含む、通常は凍結乾燥された乾燥粉末として提供され得る。
組成物、組み合わせ、及びそれらの投与
本発明に係る抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を含む組成物は、本明細書に記載のＳＩＲＰα経路疾患及び／又は障害を有するか、又はそのリスクがある対象に投与することができる。本発明は、ＳＩＲＰα経路疾患又は障害の予防又は治療のための医薬の製造における抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片の使用を更に提供する。本明細書で使用される「対象」という用語は、例えば、ヒト及び特定の非ヒト哺乳動物、例えば、霊長類、及びイヌを含め、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片が投与され得る任意の哺乳動物患者を意味する。本明細書に記載の方法を使用する治療を特に意図する対象には、ヒトが含まれる。
抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、それら自体で、又は１つ以上の追加の治療薬剤、例えば、最先端又は標準的なケア化合物、例えば、細胞抑制性物質若しくは細胞傷害性物質、細胞増殖阻害剤、抗血管新生物質、ステロイド、免疫調節剤／チェックポイント阻害剤等と組み合わせて投与され得る。
一態様において、本発明はまた、治療有効量の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片と、１つ以上の薬学的に適合する成分と、任意選択的に１つ以上の追加の治療薬剤とを含む薬学的組成物として投与される薬学的組成物を提供する。
本発明の更なる態様は、がん（例えば、がんに罹患しているか、又はがんを発症するリスクがある個体）の療法において使用するための本発明の結合分子を提供し、上述の療法は、１つ以上の薬理学的に活性な物質を含む。
本発明の更なる態様は、がん及び／又は腫瘍（例えば、がんに罹患しているか、又はがんを発症するリスクがある個体）の療法のための医薬の製造における１つ以上の活性成分の使用であって、上述の医薬が、本発明の結合分子を含む、使用を提供する。
本発明の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片と組み合わせて投与され得る細胞抑制活性物質及び／又は細胞傷害活性物質としては、それらに制限されるものではないが、ホルモン、ホルモン類似体及び抗ホルモン、アロマターゼ阻害剤、ＬＨＲＨアゴニスト及びアンタゴニスト、成長因子（血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、表皮成長因子（ＥＧＦ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）、ヒト表皮成長因子（ＨＥＲ、例えば、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＨＥＲ４）及び肝細胞成長因子（ＨＧＦ））の阻害剤、例えば、抗成長因子抗体又は抗成長因子受容体抗体を含む、及びチロシンキナーゼ阻害剤、例えば、セツキシマブ、ゲフィチニブ、アファチニブ、ニンテダニブ、イマチニブ、ラパチニブ、ボスチニブ、及びトラスツズマブ；代謝拮抗物質（例えば、抗葉酸剤、例えば、メトトレキサート、ラルチトレキセド、ピリミジン類似体、例えば、５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、ゲムシタビン、イリノテカン、ドキソルビシン、ＴＡＳ－１０２、カペシタビン及びゲムシタビン、プリン及びアデノシン類似体、例えば、メルカプトプリン、チオグアニン、クラドリビン及びペントスタチン、シタラビン（ａｒａＣ）、フルダラビン）；抗腫瘍抗生物質（例えば、アントラサイクリン）；白金誘導体（例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン）；アルキル化剤（例えば、エストラムスチン、メクロレタミン、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ダカルバジン、シクロホスファミド、イホスファミド、テモゾロミド、ニトロソウレア、例えば、カルムスチン及びロムスチン、チオテパ）；抗有糸分裂剤（例えば、ビンカアルカロイド、例えば、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン、及びビンクリスチン；及びタキサン、例えば、パクリタキセル、ドセタキセル）；血管新生阻害剤、ベバシズマブ、ラムシルマブ、及びアフリベルセプト、チューブリン阻害剤を含む；ＤＮＡ合成阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エピポドフィロトキシン、例えば、エトポシド及びエトポホス、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン、ミトキサントロン）、セリン／スレオニンキナーゼ阻害剤（例えば、ＰＤＫ１阻害剤、Ｒａｆ阻害剤、Ａ－Ｒａｆ阻害剤、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤、Ｃ－Ｒａｆ阻害剤、ｍＴＯＲ阻害剤、ｍＴＯＲＣ１／２阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＰＩ３Ｋα阻害剤、デュアルｍＴＯＲ／ＰＩ３Ｋ阻害剤、ＳＴＫ３３阻害剤、ＡＫＴ阻害剤、ＰＬＫ１阻害剤（例えば、ボラセルチブ）、ＣＤＫの阻害剤、ＣＤＫ９阻害剤を含む、Ａｕｒｏｒａキナーゼ阻害剤）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ＰＴＫ２／ＦＡＫ阻害剤）、タンパク質相互作用阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、ＥＲＫ阻害剤、ＦＬＴ３阻害剤、ＢＲＤ４阻害剤、ＩＧＦ－１Ｒ阻害剤、ＢＣｌ－ｘＬ阻害剤、Ｂｃｌ－２阻害剤、Ｂｃｌ－２／Ｂｃｌ－ｘＬ阻害剤、ＥｒｂＢ受容体阻害剤、ＢＣＲ－ＡＢＬ阻害剤、ＡＢＬ阻害剤、Ｓｒｃ阻害剤、ラパマイシン類似体（例えば、エベロリムス、テムシロリムス、リダホロリムス、シロリムス）、アンドロゲン合成阻害剤、アンドロゲン受容体阻害剤、ＤＮＭＴ阻害剤、ＨＤＡＣ阻害剤、ＡＮＧ１／２阻害剤、ＣＹＰ１７阻害剤、放射線医薬、免疫療法剤、例えば、免疫チェックポイント阻害剤（例えば、ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＰＤ－Ｌ１、ＬＡＧ３、及びＴＩＭ３結合分子／免疫グロブリン、例えば、イピリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ）、並びに種々の化学療法剤、例えば、アミホスチン、アナグレリド、クロドロナト（ｃｌｏｄｒｏｎａｔ）、フィルグラスチン（ｆｉｌｇｒａｓｔｉｎ）、インターフェロン、インターフェロンアルファ、ロイコボリン、リツキシマブ、プロカルバジン、レバミソール、メスナ、ミトタン、パミドロネート、及びポルフィマー；プロテアソーム阻害剤（例えばボルテゾミブ）；Ｓｍａｃ及びＢＨ３模倣物；ｍｄｍ２－ｐ５３アンタゴニストを含む、ｐ５３機能を回復させる薬剤；Ｗｎｔ／ベータ－カテニンシグナル伝達経路の阻害剤；及び／又はサイクリン依存性キナーゼ９阻害剤が挙げられる。
本発明の一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、任意選択的に、追加の治療薬剤と組み合わせて投与される。追加の治療薬剤は、化学療法剤、抗ＰＤ－１若しくはＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＣＴＬＡ４抗体、Ｔ細胞エンゲージャー、ＣＤ１３７アゴニスト抗ＦＡＰ二重特異性抗体、腫瘍標的化抗体、ＶＥＧＦ－ＡＮＧ２二重特異性抗体、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＭＤＭ２アンタゴニスト、又は放射線療法であり得る。
一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、抗ＰＤ－１抗体、例えば、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、エザベンリマブ、又はアテゾリズマブと組み合わせて投与される。更なる態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、例えば、アベルマブ又はデュルバルマブを含む抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせて投与される。
一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、ＨＥＲ２を標的化する腫瘍標的化抗体（例えば、トラスツズマブ）、ＥＧＦＲを標的化する腫瘍標的化抗体（例えば、セツキシマブ、パニツムマブ）、ＣＤ２０を標的化する腫瘍標的化抗体（例えば、リツキシマブ、オファツムマブ）、又はＣＤ５２を標的化する腫瘍標的化抗体（例えば、アレムツズマブ）と組み合わせて投与される。
一態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、２つの治療薬剤と組み合わせて投与される。更なる態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、抗ＰＤ－１抗体（例えば、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、エザベンリマブ、若しくはアテゾリズマブ）、又は抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、アベルマブ若しくはデュルバルマブ）、及びＨＥＲ２を標的化する腫瘍標的化抗体（例えば、トラスツズマブ）、ＥＧＦＲを標的化する腫瘍標的化抗体（例えば、セツキシマブ、パニツムマブ）、ＣＤ２０を標的化する腫瘍標的化抗体（例えば、リツキシマブ、オファツムマブ）、又はＣＤ５２を標的化する腫瘍標的化抗体（例えば、アレムツズマブ）と組み合わせて投与される。
種々の送達系が既知であり、これを使用して、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を投与することができる。導入方法としては、限定されないが、硝子体内、点眼薬、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、及び経口経路が挙げられる。抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、例えば、注入、ボーラス又は注射によって投与することができ、他の生物学的に活性な薬剤とともに投与することができる。投与は、全身的又は局所的であり得る。かかる注射のための製剤は、例えば、予め充填されたシリンジ中で調製され得る。したがって、本発明のある態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を含む予め充填されたシリンジが提供される。
療法に使用するために、本発明の抗ＳＩＲＰα抗体は、動物又はヒトへの投与を容易にするのに適切な薬学的組成物へと製剤化される。本明細書に記載される結合分子又は抗体分子の典型的な製剤は、結合分子又は抗体分子と、生理学的に許容される担体、賦形剤又は安定化剤とを、凍結乾燥又はその他の方法で乾燥された製剤、又は水溶液又は水性若しくは非水性の懸濁液の形態で混合することによって調製することができる。担体、賦形剤、改質剤、又は安定化剤は、用いる投薬量及び濃度で非毒性である。
典型的な実施形態において、薬学的組成物は、対象への静脈内投与又は皮下投与に適合させた薬学的組成物として、日常的な手順に従って製剤化される。典型的には、注射による投与のための組成物は、滅菌等張水性緩衝液の溶液である。必要に応じて、薬学的組成物は、注射部位の疼痛を緩和するために、可溶化剤及びリグノカイン等の局所麻酔剤も含み得る。一般に、成分は、例えば、活性剤の量を示すアンプル又は小袋等の気密状態で密封した容器中で凍結乾燥させた粉末又は水を含まない濃縮物として、単位剤形で別々に、又は一緒に混合されて供給される。注入によって医薬品を投与する場合、滅菌医薬品グレードの水又は生理食塩水を含む注入ボトルで注入することができる。医薬品が注射によって投与される場合、投与前に成分を混合することができるように、注射用滅菌水又は生理食塩水のアンプルを提供することができる。
更に、薬学的組成物は、（ａ）凍結乾燥形態での抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を含有する容器と、（ｂ）注射のための薬学的に許容される希釈剤（例えば、滅菌水）を含有する第２の容器と、を含む、薬学的キットとして適用することができる。薬学的に許容される希釈剤は、凍結乾燥した抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片の再構築又は希釈に使用することができる。任意選択的に、かかる容器と関連付けられるのは、で、医薬品又は生物学的製品の製造、使用又は販売を規制する政府機関によって規定される形態の通知であってもよく、この通知は、ヒト投与のための製造、使用又は販売の機関による承認を反映したものである。
いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、例えば、１ｍｇ／ｋｇ～２５ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ～５０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ～７５ｍｇ／ｋｇ、７５ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ～１２５ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇ～１５０ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ～１７５ｍｇ／ｋｇ、又は１７５ｍｇ／ｋｇ～２００ｍｇ／ｋｇを含む、例えば、１ｍｇ／ｋｇ～２００ｍｇ／ｋｇの用量を含む用量まで製剤化され得る。併用投与のための治療レジメンに関して、特定の実施形態において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片は、第２及び／第３の治療薬剤と同時に投与される。別の特定の実施形態において、第２及び／第３の治療薬剤は、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片の投与前又は投与後に投与される。
ポリヌクレオチド、ベクター、及び宿主細胞
本発明は、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチド、ベクター、及びポリヌクレオチドを含む宿主細胞、並びに抗体を産生するための組換え技術に関する。単離されたポリヌクレオチドは、例えば、全長モノクローナル抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、ダイアボディ、線状抗体、一本鎖抗体分子、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体を含む、任意の所望の形態の抗ＳＩＲＰα抗体をコードし得る。
抗ＳＩＲＰα抗体又はその断片若しくは鎖をコードする配列を含むポリヌクレオチドは、当該技術分野で知られているように、１つ以上の調節配列又は制御配列に融合させることができ、当該技術分野で知られているように、好適な発現ベクター又は宿主細胞に含まれていてもよい。重鎖可変ドメイン又は軽鎖可変ドメインをコードするポリヌクレオチド分子の各々は、ヒト定常ドメイン等の定常ドメインをコードするポリヌクレオチド配列に独立して融合させることができ、インタクトな抗体の産生を可能にする。代替的に、ポリヌクレオチド又はその一部分をともに融合し、一本鎖抗体の産生のための鋳型を提供することができる。
組換え産生のために、抗体をコードするポリヌクレオチドを、クローニング（ＤＮＡの増幅）のために、又は発現のために、複製可能なベクターに挿入する。組換え抗体を発現させるための多くの好適なベクターが利用可能である。ベクター構成要素としては、一般に、限定されないが、シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサー要素、プロモーター、及び転写終止配列のうちの１つ以上が挙げられる。
抗ＳＩＲＰα抗体はまた、融合ポリペプチドとして産生されてもよく、この場合、抗体は、成熟タンパク質又はポリペプチドのアミノ末端に特異的切断部位を有するシグナル配列又は他のポリペプチド等の異種ポリペプチドと融合される。選択される異種シグナル配列は、典型的には、宿主細胞によって認識され、処理される（例えば、シグナルペプチダーゼによって切断される）ものである。抗ＳＩＲＰα抗体シグナル配列を認識し、処理しない原核宿主細胞の場合、シグナル配列は、原核細胞シグナル配列によって置換され得る。シグナル配列は、例えば、アルカリホスファターゼ、ペニシリナーゼ、リポタンパク質、熱安定性エンテロトキシンＩＩリーダー等であり得る。酵母分泌のために、天然シグナル配列は、例えば、酵母インベルターゼアルファ因子（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ及びＫｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓのα－因子リーダーを含む）、酸ホスファターゼ、Ｃ．ａｌｂｉｃａｎｓグルコアミラーゼから得られるリーダー配列、又はＷＯ９０／１３６４６に記載されるシグナルで置換され得る。哺乳動物細胞において、哺乳類シグナル配列、及びウイルス分泌リーダー、例えば単純ヘルペスｇＤシグナルを使用することができる。かかる前駆体領域のためのＤＮＡは、リーディングフレーム中で、抗ＳＩＲＰα抗体をコードするＤＮＡにライゲーションされる。
哺乳動物宿主細胞におけるベクターからの抗ＳＩＲＰα抗体転写は、例えば、ポリオーマウイルス、鶏痘ウイルス、アデノウイルス（例えばアデノウイルス２）、ウシパピローマウイルス、トリ肉腫ウイルス、サイトメガロウイルス、レトロウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、及びシミアンウイルス４０（ＳＶ４０）等のウイルスのゲノムから、異種哺乳動物プロモーター、例えば、アクチンプロモーター若しくは免疫グロブリンプロモーターから、又は熱ショックプロモーターから得られるプロモーターによって制御され、但し、このようなプロモーターは、宿主細胞系に適合する。
本明細書のベクターにおけるＤＮＡのクローニング又は発現に好適な宿主細胞は、上述の原核生物、酵母、又は高等真核生物細胞である。この目的のための好適な原核生物としては、真正細菌、例えば、グラム陰性生物又はグラム陽性生物、例えば、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ、Ｅｒｗｉｎｉａ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、Ｐｒｏｔｅｕｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｓｅｒｒａｔｉａ、例えば、Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃａｎｓ、及びＳｈｉｇｅｌｌａ、並びにＢａｃｉｌｌｉ、例えば、Ｂ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ及びＢ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ（例えば、１９８９年４月１２日に公開されたＤＤ ２６６，７１０に開示されるＢ．ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ４１ Ｐ）、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、例えば、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、及びＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓが挙げられる。１つの好ましいＥ．ｃｏｌｉクローニング宿主は、Ｅ．ｃｏｌｉ ２９４（ＡＴＣＣ ３１，４４６）であるが、他の株、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｂ、Ｅ．ｃｏｌｉ Ｘ１７７６（ＡＴＣＣ ３１，５３７）、及びＥ．ｃｏｌｉ Ｗ３１１０（ＡＴＣＣ ２７，３２５）が好適である。これらの例は、限定ではなく例示である。
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母等の真核微生物は、抗ＳＩＲＰα抗体をコードするベクターに好適なクローニング又は発現宿主である。Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、又は一般的なパン用酵母は、低級真核宿主微生物の中で最も一般的に使用される。しかしながら、いくつかの他の属、種、及び株、例えば、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ；Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ宿主、例えば、Ｋ．ｌａｃｔｉｓ、Ｋ．ｆｒａｇｉｌｉｓ（ＡＴＣＣ １２，４２４）、Ｋ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ（ＡＴＣＣ １６，０４５）、Ｋ．ｗｉｃｋｅｒａｍｉｉ（ＡＴＣＣ ２４，１７８）、Ｋ．ｗａｌｔｉｉ（ＡＴＣＣ ５６，５００）、Ｋ．ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａｒｕｍ（ＡＴＣＣ ３６，９０６）、Ｋ．ｔｈｅｒｍｏｔｏｌｅｒａｎｓ、及びＫ．ｍａｒｘｉａｎｕｓ；ヤロウイア（ＥＰ ４０２，２２６）；Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｓ （ＥＰ １８３，０７０）；Ｃａｎｄｉｄａ；Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｒｅｅｓｉａ（ＥＰ ２４４，２３４）；Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ；Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ、例えば、Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ、及び糸状菌、例えば、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ｔｏｌｙｐｏｃｌａｄｉｕｍ、並びにＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ宿主、例えば、Ａ．ｎｉｄｕｌａｎｓ及びＡ．ｎｉｇｅｒは、本明細書において一般的に入手可能であり、かつ有用である。
グリコシル化抗ＳＩＲＰα抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物に由来する。無脊椎動物細胞の例としては、例えば、多数のバキュロウイルス株、及びバリアント、並びにＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（毛虫）、Ａｅｄｅｓ ａｅｇｙｐｔｉ（蚊）、Ａｅｄｅｓ ａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ（蚊）、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ（ミバエ）、及びＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ（カイコ）等の宿主からの対応する許容的な昆虫宿主細胞を含む、植物及び昆虫の細胞が挙げられる。トランスフェクションのための様々なウイルス株、例えば、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ＮＰＶのＬ－１バリアント、及びＢｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ ＮＰＶのＢｍ－５株が公的に入手可能であり、そのようなウイルスは、特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために使用され得る。
綿、トウモロコシ、ジャガイモ、大豆、ペチュニア、トマト、及びタバコの植物細胞培養物も宿主として利用することができる。
また、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片を、ウイルスベクターに組み込むこともでき、例えば、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドを、ウイルスベクターに導入し、次いでウイルスに感染させた後に対象の体内で発現させる。
別の態様において、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片の発現は、脊椎動物細胞において行われる。培養（組織培養）における脊椎動物細胞の伝播は、日常的な手順となり、技術は広く利用可能である。有用な哺乳動物宿主細胞株の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ－７、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １６５１）、ヒト胚性腎臓株（２９３若しくは懸濁培養における成長のためにサブクローニングされた２９３細胞（Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．，１９７７，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ １０）、チャイニーズハムスター卵巣細胞／－ＤＨＦＲ１（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６、例えば、ＤＧ４４）、マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，１９８０，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１）、サル腎臓細胞（ＣＶ１ ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７０）、サバンナモンキー（Ａｆｒｉｃａｎ ｇｒｅｅｎ ｍｏｎｋｅｙ）腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６、ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１５８７）、ヒト子宮頸がん腫細胞（ＨＥＬＡ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ２）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ３４）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ、ＡＴＣＣ ＣＲＬ １４４２）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ７５）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２、ＨＢ ８０６５）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ５１）、ＴＲ１細胞（Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８）、ＭＲＣ ５細胞、ＦＳ４細胞、及びヒト肝臓がん株（Ｈｅｐ Ｇ２）である。
低、中、及び高ストリンジェンシー条件下、特に本明細書で定義される高ストリンジェンシー条件下で、抗ＳＩＲＰα抗体又は抗体断片をコードする単離されたポリヌクレオチド配列によって表されるヌクレオチド配列の全て又は一部（例えば、可変領域をコードする部分）にハイブリダイズする核酸も含まれる。ハイブリダイズする核酸のハイブリダイズ部分は、典型的には、少なくとも１５（例えば、２０、２５、３０又は５０）ヌクレオチド長である。ハイブリダイズする核酸のハイブリダイズ部分は、抗ＳＩＲＰαポリペプチド（例えば、重鎖可変領域又は軽鎖可変領域）をコードする核酸、又はその補体の一部分又は全ての配列に対して少なくとも８０％、例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％同一である。本明細書に記載される種類のハイブリダイズする核酸は、例えば、クローニングプローブ、プライマー、例えば、ＰＣＲプライマー、又は診断プローブとして使用することができる。一態様において、「高ストリンジェンシー条件」とは、１２～２４時間の標準的なサザンブロッティング手順に従った、５×ＳＳＰＥ、０．３％ＳＤＳ、２００μｇ／ｍＬの剪断及び変性したサーモン精子ＤＮＡ、及び５０％ホルムアミド中、４２℃における、少なくとも１００ヌクレオチド長のプローブ、予備ハイブリダイゼーション及びハイブリダイゼーションを意味する。担体材料は、６５℃で０．２×ＳＳＣ、０．２％ＳＤＳを使用して、最終的に各々１５分間で３回洗浄される。
一実施形態において、本発明は、配列番号１００、１０１、１０２、１０３、１０４、１０５、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、又は２２１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチドに関する。
一実施形態において、本発明は、配列番号１０５、１０６、１０７、１０８、１０９、１２５、１２６、１０９、１２７、１２８、１２９、１３０、又は２２２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチドに関する。
一実施形態において、本発明は、配列番号１３１、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４７、１４８、１４９、１５０、１５１、１５２、２１７、１３５、１５３、１５４、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、２１９、１３３、１３４、１３７、１３２、又は１３６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖領域をコードするヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチドに関する。
一実施形態において、本発明は、配列番号１７４、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、２１８、１７８、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２２０、１７６、１７７、１８０、１７５、又は１７９のうちのいずれか１ついずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖領域をコードするヌクレオチド配列を含む、単離されたポリヌクレオチドに関する。
製造物品
別の態様において、上述の障害の治療に有用な材料を含有する製造物品が含まれる。製造物品は、容器及びラベルを含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、及び試験管が挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチック等の様々な材料から形成され得る。容器は、状態を治療するのに有効な組成物を保持し、無菌アクセスポートを有し得る。例えば、容器は、静脈内溶液バッグ、又は皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有するバイアルであってもよい。組成物中の活性薬剤は、抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片である。容器上にあるか、又は容器と関連付けられたラベルは、組成物が、選択した状態を治療するために使用されることを示す。製造物品は、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液、及びデキストロース溶液等の薬学的に許容される緩衝液を含む第２の容器を更に含み得る。製造物品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針、シリンジ、及び使用のための説明書を含む添付文書を含め、商業的観点及び使用者の観点から望ましい他の材料を更に含み得る。
ここで、本開示を以下の実施例を参照しつつ記載する。これらの実施例は、例示のみを目的として提供され、本開示は、これらの実施例に限定されるものと解釈されるべきではなく、むしろ、本明細書に提供される教示の結果として明らかになるありとあらゆる変形を包含するものと解釈されるべきである。
更なる説明を伴わないが、当業者は、前述の説明及び以下の例示的な実施例を使用して、本開示の化合物を作製し、利用して、特許請求の範囲に記載の方法を実施することができると考えられる。したがって、以下の作業例は、本発明の好ましい実施形態を具体的に指摘し、本開示の残りの部分をいかなる方法でも限定するものとして解釈されるべきではない。
実施例１：抗ＳＩＲＰα抗体の生成
ファージ及び酵母ディスプレイ
所望の選択性を有する、すなわち、ｈＳＩＲＰαＶ１及びｈＳＩＲＰαＶ２をブロックすることができ、ｈＳＩＲＰγに対する結合を欠く抗ＳＩＲＰα抗体を生成するための初期の試みは、ファージディスプレイを使用して行われる。ｈＳＩＲＰαＶ１、ｈＳＩＲＰαＶ２、及びカニクイザルＳＩＲＰαタンパク質のビオチン化細胞外ドメインを、３ラウンドの連続したスクリーニングにおいて、標的タンパク質として使用する。ｈＳＩＲＰγ細胞外ドメインに結合することができる抗体を除去するために、各スクリーニングラウンドにおいて、非標識ｈＳＩＲＰγ細胞外ドメインが選択解除剤として含まれる。
ファージディスプレイによって、更に特性決定された１３の候補抗体を得た。候補抗体のうちの４つは、ｈＳＩＲＰαＶ１及びｈＳＩＲＰαＶ２をブロックすることができたが、これらの抗体の各々は、ｈＳＩＲＰγにも結合すると決定された。候補抗体のうちの９つは、ｈＳＩＲＰγに結合しなかったが、ｈＳＩＲＰαＶ１又はｈＳＩＲＰαＶ２のみをブロックすることができたが、両方をブロックすることはできなかった。したがって、１３の候補抗体のいずれも、所望の選択性を有していないと決定された。
所望の選択性を有する抗ＳＩＲＰα抗体を生成するための同様の試みは、酵母ディスプレイを使用して行われる。酵母ディスプレイによって特定された候補抗体の大部分（６６のうちの５９）は、ｈＳＩＲＰαＶ１及びｈＳＩＲＰαＶ２をブロックすることができたが、ｈＳＩＲＰγにも結合した。残りの７つの抗体は、ｈＳＩＲＰγに結合しなかったが、ｈＳＩＲＰαＶ１のみをブロックすることができたが、ｈＳＩＲＰαＶ２をブロックすることができなかった。したがって、ファージディスプレイと同様に、候補抗体のいずれも、所望の選択性を有していないと決定された。
免疫化
ＡｌｉｖａＭａｂカッパマウスを、標準的な実験室の免疫化技術に従って、ヒト及びカニクイザルＳＩＲＰαタンパク質［ＮＰ５４２９７０、ＣＡＡ７１４０３及びＮＰ００１２７１６７９］の組換え産生された細胞外ドメインの組み合わせを用いて皮下で免疫化する。簡潔に述べると、マウスを、タンパク質及びアジュバント混合物を用いて、週に１回を４週間にわたって、皮下で免疫化する。水性アジュバントを使用して、天然タンパク質確認に対して内部にある部位の露出を低下させることによって、望ましい選択性を有する抗体の生成を改善することが期待される。４回の免疫化の後、抗体価をＥＬＩＳＡ法によって決定する。全ての抗原に対して強い抗体応答を示す動物を、抗体回復のために選択する。
Ｂ細胞回収及び組換え抗体産生
抗原特異的メモリーＢ細胞回収は、単一のＢ細胞フローサイトメトリー及び細胞選別を介して実行される。回収された抗体配列を合成し、限定されないが、ＳＩＲＰαに対する親和性、ｈｕＳＩＲＰα－Ｖ１及びｈｕＳＩＲＰα－Ｖ２ ＣＨＯ細胞株に対する結合、並びにＳＩＲＰα：ＣＤ４７相互作用のブロックを含む様々な特徴についてスクリーニングする。以下の所望の特性を示す代表的な抗体を表２６～２７に示す。抗体Ａ、抗体Ｂ、抗体Ｃ、抗体Ｄ、及び抗体Ｅ。
実施例２．抗体Ａ及び抗体Ｅの配列ライアビリティ（ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｌｉａｂｉｌｉｔｉｅｓ）の除去
親抗体の断片抗体（Ｆａｂ）クローンを調製する。潜在的な配列ライアビリティ（すなわち、免疫原性であり得るか、又は潜在的な製造上の問題を引き起こし得るアミノ酸残基）を除去するように、特定の位置変動を用いてライブラリーを調製する。これらの変異したライブラリーは、通常、Ｖ領域当たり５～１０個のバイナリ位置を有する。更に複雑なＶ領域中の特定の位置に対処するために、単一変異ライブラリー又は二重変異ライブラリーとは別に、別個の飽和ライブラリーも作製される。かかるライブラリーは、当該技術分野で知られる標準的な方法を使用して調製され、当業者によって容易に使用され得る。
操作されたＦａｂを、ｈｕＳＩＲＰα－Ｖ１及びｈｕＳＩＲＰα－Ｖ２に対する親和性を含む所望の特性について試験する。抗体Ａ及び抗体Ｅの操作された抗体の代表的な可変領域を表２８～２９に示す。
実施例３．精製された組換えヒトＳＩＲＰα、ＳＩＲＰβ１、ＳＩＲＰγタンパク質に対する抗体の結合親和性（ＳＰＲ ＫＤ）
種々のＳＩＲＰα分析物に対する抗ＳＩＲＰα抗体の結合親和性は、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される。この実験の試行緩衝液、及び全ての希釈液（記載されているものを除く）は、１×ＨＢＳ－ＥＰ＋で行われる。ＣＭ５センサチップを、１０μｌ／分の流束で、ＥＤＣ／ＮＨＳの等量混合物を用いて４２０秒間かけて活性化し、１０μｌ／分の流束で、タンパク質Ａ／Ｇビーズ（ｐＨ４．５の１０ｍＭ酢酸塩中５０μｇ／ｍｌ）を用いて４２０秒間かけて固定化し、表面上に約２６００～２９００ＲＵのタンパク質Ａ／Ｇを得る。センサチップを、１ＭのエタノールアミンＨＣｌを用い、１０μｌ／分の流速で４２０秒間、不活性化する。
各抗体を、タンパク質Ａ／Ｇ表面上で、１０μｌ／分の流速で６０秒間捕捉させ、約２８０ＲＵの捕捉レベルが得られる。分析物を、３０μｌ／分の流速で３００秒間にわたって、捕捉された抗体に注入する。解離を６００秒間行う。各ＳＩＲＰタンパク質の２倍段階希釈液（細胞外ドメイン＋Ｈｉｓ－Ｔａｇ）を、以下の表３６に示される最高濃度で分析物として注入する。
Figure 2024056817000058
各分析物の注入が完了すると、センサ表面は、３０μｌ／分の流速で３０秒間かけて０．８５％のリン酸を注入することによって再生される。
センサ表面（フローセル１）及びブランク（ＨＢＳ－ＥＰ＋）との分析物の相互作用を、生データから引き算する。次いで、センサグラムを１：１のＬａｎｇｍｕｉｒ結合に全体的に適合させ、オンレート（ｋａ）、オフレート（ｋＤ）、及び親和性（ＫＤ）値を提供し、定常状態結合モードに全体的に適合させ、平衡親和性（ＫＤ）を提供する。
上の手順を使用して、以下の分析物に対する結合親和性を測定する。ヒトＳＩＲＰαＶ１、ヒトＳＩＲＰαＶ２、ヒトＳＩＲＰβ１、ヒトＳＩＲＰβ１ｖ３、ヒトＳＩＲＰγ、カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＳＩＲＰα、ｃｙｎｏ ＳＩＲＰβ１、ｃｙｎｏ ＳＩＲＰβ１ｖ３、ｃｙｎｏ ＳＩＲＰγ、マウスＳＩＲＰα ＳＩＲＰα抗体の結合親和性についての結果を以下の表３７～４２に示す。
Figure 2024056817000059
Figure 2024056817000060
Figure 2024056817000061
Figure 2024056817000062
Figure 2024056817000063
Figure 2024056817000064
実施例４．ＣＨＯ細胞上で発現した全長ヒトＶ１－ＳＩＲＰα又はＶ２－ＳＩＲＰαに対する抗体の結合
ＳＩＲＰαを発現する細胞に対する抗体結合をフローサイトメトリーによって評価する。ＣＨＯ－Ｋ１親細胞（陰性対照）、全長ヒトＳＩＲＰαＶ１（ＮＰ＿５４２９７０．１）を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞、又は全長ヒトＳＩＲＰαＶ２（ＣＡＡ７１４０３．１）を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞を、ロバＩｇＧでブロックし、抗体の濃度を増加させつつ、氷上で６０分間インキュベートし、洗浄し、ＡＦ６４７コンジュゲート化ロバＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ二次試薬で染色する。細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。蛍光強度の中央値を決定し、抗体結合の尺度として使用する。
抗ＳＩＲＰα抗体ＫＷＡＲ２３（ＷＯ２０１５／１３８６００）及び抗体Ａ～Ｅは、０．４～１４ｎＭの範囲のＥＣ５０値で全長ヒトＳＩＲＰαＶ１（図１Ｂ）又はＳＩＲＰαＶ２（図１Ｃ）を発現するＣＨＯ細胞に対する用量依存的結合を示した（表４３）。試験した抗体のいずれも、親ＣＨＯ細胞に対する結合を示さなかった（図１Ａ）。
Figure 2024056817000065
実施例５．ヒト単球細胞株上で発現した内因性ヒトＶ１－ＳＩＲＰα又はＶ２－ＳＩＲＰαに対する抗体の結合
ＳＩＲＰαのＶ１対立遺伝子（Ｕ－９３７）又はＶ２対立遺伝子（ＴＨＰ－１）についてホモ接合型のヒト単球細胞株に対する抗体結合を評価する。Ｕ－９３７又はＴＨＰ－１細胞をロバＩｇＧでブロックし、抗体の濃度を増加させつつ、氷上で６０分間インキュベートし、洗浄し、ＡＦ６４７コンジュゲート化ロバＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ二次試薬で染色する。細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。蛍光強度の中央値を決定し、抗体結合の尺度として使用する。
抗ＳＩＲＰα抗体ＫＷＡＲ２３及び抗体Ａ～Ｅは、０．２～２２ｎＭの範囲のＥＣ５０値でヒトＳＩＲＰαＶ１対立遺伝子についてホモ接合型のＵ－９３７細胞（図２Ａ）、及びヒトＳＩＲＰαＶ２対立遺伝子（についてホモ接合型のＴＨＰ－１細胞（図２Ｂ）に対する用量依存的結合を示した（表４４）。
Figure 2024056817000066
実施例６．初代ヒト単球上で発現した内因性ヒトＶ１－ＳＩＲＰα及び／又はＶ２－ＳＩＲＰαに対する抗体の結合
ＳＩＲＰαを発現する初代ヒト細胞に対する抗体結合をフローサイトメトリーによって評価する。ＳＩＲＰα Ｖ１対立遺伝子、Ｖ２対立遺伝子についてホモ接合型、又は両方の対立遺伝子についてヘテロ接合型であるとして遺伝子型決定されたドナーからのヒト末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）をロバＩｇＧでブロックし、抗体の濃度を増加させつつ、氷上で６０分間インキュベートし、洗浄し、ＡＦ６４７コンジュゲート化ロバＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ二次試薬で染色する。その後、洗浄した細胞をＨｕｍａｎ ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（商標）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）でブロックし、ＢＶ４２１コンジュゲート化抗ヒトＣＤ１４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、クローンＭ５Ｅ２）で染色する。細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。ＣＤ１４＋集合体の蛍光強度の中央値を決定し、抗体結合の尺度として使用する。
試験した全ての抗体（抗体Ａ～Ｇ、Ａ１０、Ａ４、Ａ１１、及びＥ２２）は、Ｖ１（図３Ａ～３Ｄ）又はＶ２（図５Ａ～５Ｄ）対立遺伝子についてホモ接合型、又は両方の対立遺伝子についてヘテロ接合型（図４Ａ～４Ｄ）のドナーからの初代ヒト単球に対する用量依存的結合を示した。表４５は、上述の抗体の各々について計算された初代細胞結合ＥＣ５０を強調している。抗体Ｂを除き、全ての抗体は、ナノモル濃度未満のＥＣ５０を示した。
初代ヒト単球に対する既知の抗ＳＩＲＰα抗体、ＫＷＡＲ２３、１Ｈ９（ＷＯ２０１９／０２３３４７）及びＳＩＲＰ ＡＢ１１（ＷＯ２０２０／０６８７５２）の結合も、上述のように評価され、ＥＣ５０結果を様４５に示す。１Ｈ９は、Ｖ１対立遺伝子についてホモ接合型、又は両方の対立遺伝子についてヘテロ接合型のドナーからの初代ヒト単球についての用量依存的結合及びナノモル濃度未満の結合ＥＣ５０値を示したが（図３Ｃ及び４Ｃ）、Ｖ２対立遺伝子についてホモ接合型のドナーからの初代ヒト単球で、非飽和性抗体結合が検出された。ＫＷＡＲ２３及びＳＩＲＰ ＡＢ１１抗体は、全ての遺伝子型のドナーからの初代ヒト単球で、ナノモル濃度未満の結合ＥＣ５０を示した（図３Ａ～３Ｄ、４Ａ～４Ｄ、及び５Ａ～５Ｄ、表４５）。
Figure 2024056817000067
実施例７．Ｕ９３７ＳＩＲＰα ＫＯ細胞上で発現した全長ヒトＳＩＲＰβ１又はＳＩＲＰβＬに対する抗体の結合
全長ヒトＳＩＲＰβ１（ＮＰ＿００６０５６．２）及びＳＩＲＰβＬ（ＮＰ＿００１１２９３１６．１）を発現する細胞に対する抗体結合をフローサイトメトリーによって評価する。ＳＩＲＰβ１－又はＳＩＲＰβＬを発現するＵ９３７ＳＩＲＰα ＫＯ細胞をロバＩｇＧでブロックし、抗体の濃度を増加させつつ、氷上で６０分間インキュベートし、洗浄し、ＡＦ６４７コンジュゲート化ロバＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ二次試薬で染色する。細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。蛍光強度の中央値を決定し、抗体結合の尺度として使用する。
抗体Ａ～Ｇ、Ａ１０、Ａ４、及びＡ１１は、アイソタイプ対照又は抗体Ｅ２２と異なり、Ｕ－９３７ＳＩＲＰα ＫＯ細胞上で発現した全長ヒトＳＩＲＰβ１に対する用量依存的結合を示した（図６Ａ～６Ｄ）。表４４は、上述の抗体の各々について計算された結合ＥＣ５０を強調している。抗体Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ａ１０、Ａ４、及びＡ１１は、これらの細胞に対してナノモル濃度未満のＥＣ５０値を示したが、抗体Ｂ、Ｅ、及びＧの結合は、２００ｎＭまでの濃度では非飽和性であり、ＥＣ５０値は決定されなかった。
抗体Ｅ、Ｇ、及びＥ２２は、１ｎＭ未満のＥＣ５０でＵ－９３７ＳＩＲＰα ＫＯ細胞（図７Ａ～７Ｄ）上で発現した全長ヒトＳＩＲＰβＬに対する用量依存的結合を示した（表４６）。ヒトＳＩＲＰβＬを発現するＵ－９３７ＳＩＲＰα ＫＯ細胞上で、抗体Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｆ、Ａ１０、Ａ４、及びＡ１１の結合を検出することができなかった（図７Ａ～７Ｄ）。抗体Ｂの結合（図７Ａ）は、ＳＩＲＰβＬを発現するＵ－９３７ＳＩＲＰα ＫＯ細胞で検出されたが、結合は、２００ｎＭまでの濃度では非飽和性であった。
ＳＩＲＰβ１又はＳＩＲＰβＬを発現するＵ９３７ＳＩＲＰα ＫＯ細胞に対する既知の抗ＳＩＲＰα抗体であるＫＷＡＲ２３、１Ｈ９、及びＳＩＲＰＡＢ１１の結合も、上述のように評価された。３つの分子は全て、ナノモル濃度未満の結合ＥＣ５０値（表４６）で、両方の細胞型に対する用量依存的結合を示した（図６Ａ～６Ｄ及び７Ａ～７Ｄ）。
Figure 2024056817000068
実施例８．ＥＬＩＳＡによる、精製された組換えヒトＳＩＲＰγタンパク質に対する抗体の結合
生化学的ＥＬＩＳＡベースのアッセイを利用して、ＳＩＲＰγに対する抗体の結合を評価する。黒色の９６ウェル平底イムノアッセイプレートを、ＤＰＢＳで希釈した組換えヒトＳＩＲＰγ細胞外ドメイン（ＥＣＤ）／Ｈｉｓタンパク質（ＮＰ＿０６１０２６．２）でコーティングし、４℃で一晩インキュベートする。プレートを３回洗浄し、続いて室温（ＲＴ）で約１～２時間ブロックする。プレートを洗浄し、ＲＴで約１～２時間のインキュベーションのために、段階滴定された抗体をそれぞれのウェルに添加する。インキュベートの後、プレートを洗浄し、各ウェルにＨＲＰＯコンジュゲート化マウス抗ヒトＩｇＧ二次試薬（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）を添加し、約１～２時間インキュベートする。最終的なプレート洗浄の後、Ａｍｐｌｅｘ（商標）赤色基質を添加し、暗所で、室温で１５～３０分間インキュベートする。ＥｎＶｉｓｉｏｎ Ｍｕｌｔｉｌａｂｅｌ Ｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して、蛍光を検出する（λＥｘ／λＥｍ＝５３０／５９０ｎｍ）。抗体結合を測定するために、平均蛍光をプロットする。
ＳＩＲＰ反応性γｍＡｂであるＫＷＡＲ２３を除き、試験した抗体（抗体Ａ～Ｅ）のいずれも、固定化された組換えヒトＳＩＲＰγ ＥＣＤ／Ｈｉｓタンパク質に対する結合を示さなかった（図８）。ＫＷＡＲ２３のＥＣ５０値は、０．１ｎＭであると決定された（表４７）。
実施例９．ＣＨＯ細胞上で発現したＳＩＲＰγに対する抗体の結合
ヒトＳＩＲＰγ（ＮＰ＿０６１０２６．２）を発現する細胞に対する抗体結合をフローサイトメトリーによって評価する。ＳＩＲＰγを発現するＣＨＯ細胞をロバＩｇＧでブロックし、抗体の濃度を増加させつつ、氷上で６０分間インキュベートし、洗浄し、ＡＦ６４７コンジュゲート化ロバＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ二次試薬で染色する。細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。蛍光強度の中央値を決定し、抗体結合の尺度として使用する。
ＳＩＲＰγを発現するＣＨＯ細胞上の各抗体の結合を、アイソタイプ対照と比較して検出した（図９）。２．７ｎＭのＥＣ５０を示したＳＩＲＰγ反応性ｍＡｂ（ＫＷＡＲ２３）と比較して（表４７）、抗体Ａ及びＣ～Ｅの結合は、２００ｎＭまでの濃度では非飽和性であり、検出された結合抗体の大きさは、小さかった。
実施例１０．初代ヒトＴ細胞上で発現したＳＩＲＰγに対する抗体の結合
内因性ＳＩＲＰγを発現する初代ヒトＴ細胞に対する抗体結合をフローサイトメトリーによって評価する。ヒト末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）をロバＩｇＧでブロックし、抗体の濃度を増加させつつ、氷上で６０分間インキュベートし、洗浄し、ＡＦ６４７コンジュゲート化ロバＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ二次試薬で染色する。その後、ヒトＰＢＭＣをＨｕｍａｎ ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（商標）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）でブロックし、ＢＵＶ３９５コンジュゲート化抗ヒトＣＤ３（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、クローンＳＫ７）で染色する。細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。ＣＤ３＋ゲーティング集合体の蛍光強度の中央値を決定し、抗体結合の尺度として使用する。
初代ヒトＴ細胞に対する既知の抗ＳＩＲＰα抗体であるＫＷＡＲ２３、１Ｈ９、及びＳＩＲＰＡＢ１１の結合も、上述のように評価される。ＫＷＡＲ２３、１Ｈ９、及びＳＩＲＰ ＡＢ１１は、１ｎＭ未満のＥＣ５０値で（表４７）、初代ヒトＣＤ３＋細胞に対する用量依存的結合を示したが（図１０Ａ～１０Ｄ）、一方で、抗体Ａ～Ｇ、Ａ１０、Ａ４、Ａ１１、及びＥ２２による結合は検出されなかった。
Figure 2024056817000069
実施例１１．ＣＨＯ細胞上で発現した全長ヒトＶ１－ＳＩＲＰα又はＶ２－ＳＩＲＰαに対するヒトＣＤ４７結合のブロック
ヒトＣＤ４７四量体は、ビオチン化ヒトＣＤ４７（ＮＰ＿９４２０８８、ＡｃｒｏＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及びＡＦ６４７コンジュゲート化ストレプトアビジン（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用して組み立てられる。抗体リガンドのブロック能を評価するために、全長ヒトＳＩＲＰαＶ１（ＮＰ＿５４２９７０．１）を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞、又は全長ヒトＳＩＲＰαＶ２（ＣＡＡ７１４０３．１）を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞を、抗体の濃度を増加させつつ、固定された濃度のヒトＣＤ４７四量体とともに、氷上で６０分間、共インキュベートする。細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。蛍光強度の中央値を決定し、ＣＤ４７結合の尺度として使用する。
既知のＫＷＡＲ２３抗体及び抗体Ａ～Ｅは、０．３～６．０ｎＭの範囲の半数阻害濃度（ＩＣ５０）値（表４８）でヒトＳＩＲＰαＶ１及びＳＩＲＰαＶ２を発現するＣＨＯ細胞に対するヒトＣＤ４７の結合を用量依存的にブロックした（図１１Ａ及び１１Ｂ）。約８０％でプラトー状態になった、抗体ＥによるヒトＳＩＲＰαＶ２を発現するＣＨＯ細胞に対するヒトＣＤ４７の結合の遮断。
Figure 2024056817000070
実施例１２．初代ヒト単球上で発現した内因性ヒトＶ１－ＳＩＲＰα及び／又はＶ２－ＳＩＲＰαに対するヒトＣＤ４７結合のブロック
ヒトＣＤ４７四量体は、ビオチン化ヒトＣＤ４７（ＮＰ＿９４２０８８、ＡｃｒｏＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）及びＡＦ６４７コンジュゲート化ストレプトアビジン（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用して組み立てられる。ＳＩＲＰα Ｖ１対立遺伝子、Ｖ２対立遺伝子についてホモ接合型、又は両方の対立遺伝子についてヘテロ接合型であるとして遺伝子型決定されたドナーからのヒト末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）をＨｕｍａｎ ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（商標）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）でブロックし、抗体の濃度を増加させつつ、固定された濃度のヒトＣＤ４７四量体及びＢＶ４２１コンジュゲート化抗ヒトＣＤ１４とともに、氷上で６０分間、共インキュベートする。細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。ＣＤ１４＋ゲーティング集合体の蛍光強度の中央値を決定し、ＣＤ４７結合の尺度として使用する。
抗体Ａ～Ｇ、Ａ１０、Ａ４、Ｅ２２、及びＡ１１は、アイソタイプ対照と異なり、Ｖ１対立遺伝子についてホモ接合型（図１２Ａ～１２Ｄ）若しくはＶ２対立遺伝子についてホモ接合型（図１４Ａ～１４Ｄ）、又は両方の対立遺伝子についてヘテロ接合型（図１３Ａ～１３Ｄ）のドナーからの初代ヒト単球に対するヒトＣＤ４７の結合を用量依存的にブロックした。抗体Ｂを除き、全ての抗体は、１ｎＭ未満のＩＣ５０値を示した（表４９）。
既知の抗ＳＩＲＰα抗体であるＫＷＡＲ２３、１Ｈ９、及びＳＩＲＰＡＢ１１が、初代ヒト単球に対するヒトＣＤ４７の結合をブロックする能力は、上述のように評価される。１Ｈ９は、ナノモル濃度未満のＩＣ５０値（表４９）で、Ｖ１対立遺伝子についてホモ接合型（図１２Ｃ）、又は両方の対立遺伝子についてヘテロ接合型（図１３Ｃ）のドナーからの初代ヒト単球に対する結合からヒトＣＤ４７をブロックし、Ｖ２対立遺伝子についてホモ接合型のドナーからの初代ヒト単球に対する不完全な遮断が観察された（図１４Ｃ）。ＫＷＡＲ２３及びＳＩＲＰＡＢ１１抗体は、全ての遺伝子型のドナーからの初代ヒト単球に対するヒトＣＤ４７の結合をブロックした（図１２Ａ～１２Ｄ、１３Ａ～１３Ｄ、及び１４Ａ～１４Ｄ、表４９）。
Figure 2024056817000071
実施例１３．細胞ＣＤ４７発現に依存するヒトＶ１－ＳＩＲＰα及びＶ２－ＳＩＲＰαシグナル伝達のブロック
ＳＩＲＰαシグナル伝達アッセイを使用して、細胞－細胞相互作用を介して提示されるＣＤ４７によって誘導されるＳＩＲＰαエンゲージメントを測定する。このアッセイにおけるＳＩＲＰαシグナル伝達の検出は、酵素断片相補性（ＥＦＣ）に依存する。ＥＦＣは、酵素ドナー（ＥＤ）断片及び酵素アクセプター（ＥＡ）断片からなる、β－ガラクトシダーゼにおける補体系を使用する。独立して、これらの断片は、β－ｇａｌ酵素活性を有していないが、近接させると、これらは活性なβ－ｇａｌ酵素を形成する。レポーターＪｕｒｋａｔ細胞は、ＣＤ４７を欠いており、ＳＨＰ－１ホスファターゼのＥＤタグ化ＳＩＲＰα受容体及びＥＡタグ化ＳＨ２ドメインを安定に共発現する。レポーター細胞が、ドナー細胞（内因性レベルのＣＤ４７を発現するＪｕｒｋａｔ細胞）に曝露されると、ＳＩＲＰαは、リン酸化され、ＳＨＰ－１ホスファターゼを動員する。この相互作用は、受容体活性化の尺度として、基質を加水分解して化学発光シグナルを生成することができる活性β－ｇａｌ酵素のＥＤ断片及びＥＡ断片の補体及び形成を行わせる。
総体積１００μｌのＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ ｃｅｌｌ ｐｌａｔｉｎｇ ０試薬中のＪｕｒｋａｔ親（３０，０００個）を添加する前に、Ｊｕｒｋａｔ ＳＩＲＰα－Ｖ１又は－αＶ２シグナル伝達細胞（２０，０００個）を、９６ウェルの白色底ＴＣ処理プレート中、３７℃、５％ＣＯ２で１時間、段階滴定された抗体とともにインキュベートする。プレートを、加湿インキュベーター中、３７℃、５％ＣＯ２で５時間かけてインキュベートする。ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ ＢｉｏＡｓｓａｙ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ試薬を添加し、暗所、室温でインキュベートした後、プレートを、ＥｎＶｉｓｉｏｎ（登録商標）ルミノメーターで読み取る。平均ＲＬＵ単位を、受容体活性化の尺度としてプロットする。
抗体Ａ～Ｇ、Ａ１０、Ａ４、Ｅ２２、及びＡ１１は、アイソタイプ対照と異なり、ナノモル濃度未満のＩＣ５０値（表４８）で細胞ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαＶ１活性化を完全にブロックした（図１５Ａ～１５Ｄ）。同様に、全ての抗体は、細胞ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαＶ２活性化を用量依存的にブロックしたが（図１６Ａ～１６Ｄ、表５０）、抗体Ｅ及びＥ２２による阻害は、それぞれ約８０％及び５５％でプラトー状態になり、抗体Ｂは、飽和性阻害を達成しなかった。
既知の抗ＳＩＲＰα抗体であるＫＷＡＲ２３、１Ｈ９、及びＳＩＲＰＡＢ１１が、細胞ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαシグナル伝達をブロックする能力は、上述のように評価される。１Ｈ９は、０．０４ｎＭのＩＣ５０で細胞ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαＶ１活性化を完全にブロックしたが（図１５Ｃ、表５０）、細胞ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαＶ２活性化の遮断は、飽和性阻害を達成しなかった（図１６Ｃ、表５０）。ＫＷＡＲ２３及びＳＩＲＰ ＡＢ１１抗体は、いずれかのＳＩＲＰα対立遺伝子を発現する細胞によって細胞ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαシグナル伝達をブロックすることができた。
Figure 2024056817000072
実施例１４．ＳＩＲＰαアンタゴニストは、ヒト単球細胞株においてＣＤ４７によって引き起こされる食作用の阻害を元に戻す
フローベースの食作用アッセイを開発し、ＣＤ４７によって誘導される食作用のＳＩＲＰα媒介性調節を定量化した。内因性ＳＩＲＰαを欠くＵ－９３７細胞を、全長Ｖ１－ＳＩＲＰα対立遺伝子又はＶ２－ＳＩＲＰα対立遺伝子を含有するレンチウイルスで形質導入する。これらの細胞を、ヒトＣＤ４７（ＮＰ＿９４２０８８、ＡｃｒｏＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でコーティングされているか、又はコーティングされていない蛍光コンジュゲート化されたマイクロビーズ（Ｓｐｈｅｒｏｔｅｃｈ）を添加する３０分前に、９６ウェルのＶ字底組織培養（ＴＣ）処理プレート中、指定の濃度で抗ＳＩＲＰα抗体とともにプレインキュベートし、ヒトＩｇＧ１抗体でオプソニン化し、Ｆｃ受容体媒介性食作用を誘導する。３７℃、５％ＣＯ２で２時間インキュベートした後、試料を洗浄し、Ｈｕｍａｎ ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（商標）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）でブロックし、ビーズの外側表面を認識する蛍光コンジュゲート化された抗体で染色して、細胞の外側に貼り付けられたビーズとその内側にあったビーズとの間の差別化をすることができる。細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。食作用は、内在化ビーズを有する細胞の割合として表される。
細胞をＣＤ４７コーティングされたビーズとともにインキュベートしたときに低下した、Ｖ１又はＶ２対立遺伝子のいずれかについてＳＩＲＰαを発現するＵ－９３７細胞による、オプソニン化したビーズの内在化（白色の棒グラフ）、細胞をＣＤ４７を欠くビーズとともにインキュベートしたときに観察されない効果（黒色の棒グラフ）。６７ｎＭの指定の抗体を用いた細胞の前処理は、Ｖ１（図１７Ａ）及びＶ２（図１７Ｂ）ＳＩＲＰαを発現するＵ－９３７細胞が、ＣＤ４７コーティングされたビーズを貪食する能力を回復し（白色の棒グラフ）、このことは、この抗体が、ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαシグナル伝達をブロックすることができることを示している。
実施例１５．ＳＩＲＰαアンタゴニストは、ＳＩＲＰα対立遺伝子の任意の組み合わせの初代ヒト単球由来マクロファージにおいてＣＤ４７によって引き起こされる食作用の阻害を元に戻す
フローベースの食作用アッセイを開発し、ＣＤ４７によって誘導される食作用のＳＩＲＰα媒介性調節を定量化した。ＳＩＲＰα Ｖ１対立遺伝子、Ｖ２対立遺伝子についてホモ接合型、又は両方の対立遺伝子についてヘテロ接合型であるとして遺伝子型決定されたドナーからのヒトＰＢＭＣ（ＥａｓｙＳｅｐ Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｋｉｔ、ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）から濃縮された単球を、５０ｎｇ／ｍｌのヒト組換えＭ－ＣＳＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）でスパイクされたＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ（商標）－ＳＦマクロファージ分化培地中で６～７日間培養した後に、マクロファージに分化させる。単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）を、ヒトＣＤ４７（ＮＰ＿９４２０８８、ＡｃｒｏＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でコーティングされているか、又はコーティングされておらず、ヒトＩｇＧ１でオプソニン化されているか、又はされていない、蛍光コンジュゲート化されたマイクロビーズ（Ｓｐｈｅｒｏｔｅｃｈ）を添加する３０分前に、９６ウェルの超低付着ＴＣプレート中、指定の濃度で抗ＳＩＲＰα抗体とともにプレインキュベートし、Ｆｃ受容体媒介性食作用を誘導する。３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした後、試料を洗浄し、Ｈｕｍａｎ ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（商標）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）でブロックし、ビーズの外側表面を認識する蛍光コンジュゲート化された抗体で染色して、細胞の外側に貼り付けられたビーズとその内側にあったビーズとの間の差別化をすることができる。細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。食作用は、内在化ビーズを有する細胞の割合として表される。
細胞をＣＤ４７コーティングされたビーズとともにインキュベートしたときに低下した、Ｖ１若しくはＶ２対立遺伝子についてホモ接合型（それぞれ図１８Ａ～１８Ｂ及び２０Ａ～２０Ｂ）、又は両方の対立遺伝子についてヘテロ接合型（図１９Ａ～１９Ｂ）のドナーからのＭＤＭによるビーズの内在化（オプソニン化を伴うもの、又は伴わないもの）（白色の棒グラフ）、細胞をＣＤ４７を欠くビーズとともにインキュベートしたときに観察されない効果（黒色の棒グラフ）。６７ｎＭの指定の抗体を用いた細胞の前処理は、細胞が、オプソニン化を伴う（図１８Ａ、１９Ａ、及び２０Ａ）並びに伴わない（図１８Ｂ、１９Ｂ、及び２０Ｂ）ＣＤ４７コーティングされたビーズを貪食する能力を回復し（白色の棒グラフ）、このことは、この抗体が、ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαシグナル伝達をブロックすることができることを示している。更なる実験は、抗ＳＩＲＰα抗体が、用量依存的な様式で全ての遺伝子型のドナーに由来する初代ＭＤＭによる食作用のＣＤ４７媒介性阻害を阻害することができることを示していた（図１８Ｃ、１９Ｃ、及び２０Ｃ）。
実施例１６．ＳＩＲＰαアンタゴニストは、ＳＩＲＰα対立遺伝子の任意の組み合わせの初代ヒト単球由来樹状細胞においてＣＤ４７によって引き起こされる食作用の阻害を元に戻す
フローベースの食作用アッセイを開発し、ＣＤ４７によって誘導される食作用のＳＩＲＰα媒介性調節を定量化した。ＳＩＲＰα Ｖ１対立遺伝子、Ｖ２対立遺伝子についてホモ接合型、又は両方の対立遺伝子についてヘテロ接合型であるとして遺伝子型決定されたドナーからのヒトＰＢＭＣ（ＥａｓｙＳｅｐ（商標）Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｋｉｔ、ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）から濃縮された単球を、ＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ（商標）－ＡＣＦ Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ＳｕｐｐｌｅｍｅｎｔでスパイクされたＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ（商標）－ＡＣＦ Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｍｅｄｉｕｍ中で５～６日間培養した後に、樹状細胞に分化させる。単球由来樹状細胞（ＭＤＤＣ）を、ヒトＣＤ４７（ＮＰ＿９４２０８８、ＡｃｒｏＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でコーティングされているか、又はコーティングされておらず、ヒトＩｇＧ１でオプソニン化されているか、又はされていない、蛍光コンジュゲート化されたマイクロビーズ（Ｓｐｈｅｒｏｔｅｃｈ）を添加する３０分前に、９６ウェルの超低付着ＴＣプレート中、指定の濃度で抗ＳＩＲＰα抗体とともにプレインキュベートし、Ｆｃ受容体媒介性食作用を誘導する。３７℃、５％ＣＯ２で１時間インキュベートした後、試料を洗浄し、Ｈｕｍａｎ ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（商標）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）でブロックし、ビーズを認識する蛍光コンジュゲート化された抗体で染色して、細胞の外側に貼り付けられたビーズとその内側にあったビーズとの間の差別化をすることができる。細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。食作用は、内在化ビーズを有する細胞の割合として表される。
細胞をＣＤ４７コーティングされたビーズとともにインキュベートしたときに低下した、Ｖ１若しくはＶ２対立遺伝子についてホモ接合型（それぞれ図２１Ａ～２１Ｂ及び２３Ａ～２３Ｂ）、又は両方の対立遺伝子についてヘテロ接合型（図２２Ａ～２２Ｂ）のドナーからのＭＤＤＣによるビーズの内在化（オプソニン化を伴うもの、又は伴わないもの）（白色の棒グラフ）、細胞をＣＤ４７を欠くビーズとともにインキュベートしたときに観察されない効果（黒色の棒グラフ）。６７ｎＭの指定の抗体を用いた細胞の前処理は、細胞が、オプソニン化を伴う（図２１Ａ、２２Ａ、及び２３Ａ）並びに伴わない（図２１Ｂ、２２Ｂ、及び２３Ｂ）ＣＤ４７コーティングされたビーズを貪食する能力を回復し（白色の棒グラフ）、このことは、この抗体が、ＣＤ４７媒介性ＳＩＲＰαシグナル伝達をブロックすることができることを示している。
実施例１７．抗ＳＩＲＰα抗体は、ヒト腫瘍細胞のＵ－９３７食作用を強化する
抗体依存性細胞食作用アッセイにおいて、選択された分子の機能活性を評価した。Ｒａｊｉ細胞（バーキットリンパ腫細胞株、ＡＴＣＣ）を、製造業者の指示に従ってＰＫＨ２６ Ｒｅｄ（Ｓｉｇｍａ）で標識し、その後、リツキシマブでオプソニン化する。Ｒａｊｉ細胞を洗浄して、結合していないリツキシマブを除去する。Ｖ１－ＳＩＲＰα及びＶ２－ＳＩＲＰαを発現するＵ－９３７細胞（５０，０００個）を、５０，０００個のＲａｊｉ標的細胞を添加する（±リツキシマブオプソニン化）前に、９６ウェルの超低付着ＴＣプレート中、段階滴定された抗ＳＩＲＰα ｍＡｂで３０分間かけて処理する。加湿インキュベーター中、３７℃、５％ＣＯ２で２時間インキュベートした後、試料を洗浄し、Ｈｕｍａｎ ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（商標）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）でブロックし、ＰＢコンジュゲート化抗ヒトＣＤ１３（Ｕ－９３７マーカー、クローンＷＭ１５、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）及びＡＦ６４７コンジュゲート化抗ヒトＣＤ１９（Ｒａｊｉマーカー、クローンＨＩＢ１９、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）カクテルで染色する。細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。食作用は、ＣＤ１９について陰性に染色し、ＰＫＨ２６について陽性に染色したＣＤ１３＋細胞の割合として表される。
その結果は、Ｖ１－ＳＩＲＰα及びＶ２－ＳＩＲＰαを発現するＵ－９３７細胞が、リツキシマブオプソニン化がされていないＲａｊｉ細胞を貪食することができないことを示した。Ｒａｊｉ細胞のオプソニン化は、細胞食作用の増加（約０．２％～約６％）を誘導し、用量依存的な様式で、抗ＳＩＲＰα抗体を用いた治療によって更に増強された。
実施例１８．抗ＳＩＲＰα抗体は、ヒト腫瘍細胞の単球由来のマクロファージの食作用を強化する
抗体依存性細胞食作用アッセイにおいて、選択された分子の機能活性を評価した。Ｒａｊｉ細胞（バーキットリンパ腫細胞株、ＡＴＣＣ）を、製造業者の指示に従ってＰＫＨ２６ Ｒｅｄ（Ｓｉｇｍａ）で標識し、その後、リツキシマブでオプソニン化する。Ｒａｊｉ細胞を洗浄して、結合していないリツキシマブを除去する。ＳＩＲＰα Ｖ１対立遺伝子についてヘテロ接合型であるとして遺伝子型決定されたドナーからのヒトＰＢＭＣ（ＥａｓｙＳｅｐ（商標）Ｍｏｎｏｃｙｔｅ Ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ Ｋｉｔ、ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）から濃縮された単球を、５０ｎｇ／ｍｌのヒト組換えＭ－ＣＳＦ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）でスパイクされたＩｍｍｕｎｏＣｕｌｔ（商標）－ＳＦマクロファージ分化培地中で６～７日間培養した後に、マクロファージに分化させる。単球由来マクロファージ（ＭＤＭ）を、５０，０００個のＲａｊｉ標的細胞を添加する（±リツキシマブオプソニン化）前に、９６ウェルの超低付着Ｕ字底プレート中、段階滴定された抗ＳＩＲＰα ｍＡｂで３０分間かけて処理する。３７℃、５％ＣＯ２で２時間インキュベートした後、試料を洗浄し、Ｈｕｍａｎ ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（商標）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）でブロックし、ＢＶ４２１コンジュゲート化抗ヒトＣＤ１４（ＭＤＭマーカー、クローンＭ５Ｅ２、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）及びＡＦ６４７コンジュゲート化抗ヒトＣＤ１９（Ｒａｊｉマーカー、クローンＨＩＢ１９、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）カクテルで染色する。細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。食作用は、ＣＤ１９について陰性に染色し、ＰＫＨ２６について陽性に染色したＣＤ１３＋細胞の割合として表される。
その結果は、ＭＤＭが、細胞治療にかかわらず、オプソニン化を欠くＲａｊｉ細胞を貪食することができないことを示していた。Ｒａｊｉ細胞のオプソニン化は、細胞食作用の増加（約１．３％～約１７％）を誘導し、抗ＳＩＲＰα抗体治療によって更に増強された。
実施例１９．混合リンパ球反応
選択された分子は、混合リンパ球反応において評価される。９６ウェルの丸底組織培養処理されたプレートを、ＤＰＢＳで希釈した組換えヒトＣＤ４７細胞外ドメイン（ＥＣＤ）／ｈＦｃタンパク質でコーティングし、４℃で一晩インキュベートする。プレートをＤＰＢＳ／ＣＦで３回洗浄した。凍結保存されたヒト単球由来樹状細胞（Ａｓｔａｒｔｅ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）を解凍し、洗浄し、Ｘ－ＶＩＶＯ １５培地に１０万個／ｍｌで再懸濁させる。次いで、ヒトＣＤ４７融合タンパク質で事前にコーティングされているか、又はされていない、９６ウェル丸底ＴＣプレートのそれぞれのウェルにＭＤＤＣ±ｍＡｂ処理を移す前に、ＭＤＤＣを、抗ＰＤ１アンタゴニストを１：１体積比で含むか、又は含まない、様々な抗ＳＩＲＰα ｍＡｂで６０分間プレインキュベートする。同種異系ヒトＰＢＭＣドナー（ＥａｓｙＳｅｐ（商標）Ｈｕｍａｎ ＣＤ４＋ Ｔ Ｃｅｌｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ）から濃縮したヒトＣＤ４＋Ｔ細胞（約１００，０００個）を、それぞれのウェルに添加し、３７℃、５％ＣＯ２で５日間、加湿インキュベーター中、プレートをインキュベートする。収穫の１６～１８時間前に、培養ウェルを、１μＣｉ（１００μＣｉ／ｍｌで１０μｌ）の３［Ｈ］チミジン（Ｍｏｒａｖｅｋ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｃ．）でパルス処理する。続いて、細胞を、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｍｉｃｒｏ９６ Ｈａｒｖｅｓｔｅｒを使用して、フィルタマット（Ｗａｌｌａｃ）上に収穫し、乾燥させ、次いで、１０ｍＬのＢｅｔａＰｌａｔｅ Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ（Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ、カタログ番号１２０５－４４０）を含む試料袋（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）中で密封する。ＭｉｃｒｏＢｅｔａ２ ２４５０ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して、３［Ｈ］チミジン組み込みを測定する。
図２４Ａ～２４Ｂは、プレートに結合したヒトＣＤ４７融合タンパク質が、混合リンパ球反応において樹状細胞によって媒介されるＣＤ４ Ｔ細胞増殖を阻害することを示し、ＣＤ４７媒介性シグナル伝達が、高度に免疫抑制性であり得ることを示している。これらのアッセイにおけるＣＤ４７－Ｆｃ媒介性免疫抑制は、抗ＳＩＲＰα抗体（ＫＷＡＲ２３、抗体Ａ及びＥ）単独によって、又は抗ＰＤ１アンタゴニストと組み合わせることによって、様々な程度まで元に戻すことができる。
実施例２０．抗ＳＩＲＰα Ｆａｂ：ＳＩＲＰα複合体の結晶化
ＳＩＲＰαに対する抗体結合の機構的な基礎を理解するために、ヒトＳＩＲＰα－Ｖ２のドメイン１との複合体において、抗体Ｅ及び抗体Ａについての抗体－ＳＩＲＰα複合体の構造に対して、分析を行った（図２５Ａ～２５Ｆ及び図２６Ａ～２６Ｂ）。
複雑な構造を得るために、Ｇａｔｅｗａｙクローニングシステムを使用して、ＳＩＲＰαＶ２（アミノ酸３１～１４８、Ｎ末端ＧＳＴタグを含む）の発現のための構築物を生成した。タンパク質を、Ｏｒｉｇａｍｉ Ｂ（ＤＥ３）細胞中で発現させ、ＧＳＴタグ化タンパク質のための標準プロトコルを使用して精製した。画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析し、所望のタンパク質を含有する断片をプールし、２５ｍＭのＨＥＰＥＳ、１００ｍＭのＮａＣｌ、５％のＧｌｙｃｅｒｉｎ、ｐＨ７．０中、２４ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。ＳＩＲＰαＶ２タンパク質を、抗体Ａ又はＥのＦａｂ断片と混合し、１０ｍＭのＴｒｉｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＴＣＥＰ、ｐＨ７、５中のサイズ排除クロマトグラフィーによって精製した。ＳＩＲＰαＶ２ Ｆａｂ複合体の結晶を、５ｍｇ／ｍｌ（貯蔵溶液：抗体Ａ：２０％のＰＥＧ３３５０及び１８０ｍＭのクエン酸トリアンモニウム及び抗体Ｅ：１５％のＰＥＧ４０００及び１００ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０）の複合体濃度での蒸気拡散シッティングドロップ法によって得た。データを、Ｓｗｉｓｓ Ｌｉｇｈｔ Ｓｏｕｒｃｅ（ＳＬＳ）で収集し、１．４Å（抗体Ａ）及び１．６Å（抗体Ｅ）の分解能で、構造を解析し、モデル化した。
結晶構造分析は、この２つの抗体が、異なる領域上で、異なる配向でＳＩＲＰαに接触することができることを示した。両方の抗体が、ＳＩＲＰα上のＣＤ４７結合部位を妨害し、一方で、抗体Ａは、ＣＤ４７によって係合されているＳＩＲＰα残基のほとんどに接触することができ、このことは、この抗体が、どのようにして完全なＣＤ４７拮抗作用を達成することができるかを示している。これらの抗体が接触するＳＩＲＰα残基は、ＳＩＲＰαの両方の対立遺伝子が、どのように対立遺伝子間のバリアント残基による有害な影響を伴わずに等しく結合することができるかを説明した。接触点はまた、ＳＩＲＰγに対する選択性を説明する（図２５Ａ～２５Ｆ及び図２６Ａ～２６Ｂ、並びに表５１～５２）。
Figure 2024056817000073
Figure 2024056817000074
ＳＩＲＰαＶ１及びＳＩＲＰαＶ２のアラインメント及び番号付けについては、図２６を参照されたい。
実施例２１．市販の抗ＳＩＲＰ ｍＡｂ、クローンＳＥ５Ａ５との競合アッセイ
抗体を、市販の抗ＳＩＲＰ ｍＡｂ、クローンＳＥ５Ａ５、Ｖ１－ＳＩＲＰα及びＶ２－ＳＩＲＰαを発現するＵ－９３７細胞に対する結合と競合する能力について評価した。蛍光コンジュゲート化ＳＥ５Ａ５（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）の添加前に、Ｈｕｍａｎ ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（商標）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）でブロックされた細胞を、抗ＳＩＲＰα抗体とともに氷上で３０分間インキュベートする。細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。蛍光強度の中央値をプロットする。
図２７Ａ～２７Ｂは、ＫＷＡＲ２３及び抗体Ａが、Ｖ１－ＳＩＲＰα及びＶ２－ＳＩＲＰαを発現するＵ－９３７細胞の両方に対する蛍光コンジュゲート化ＳＥ５Ａ５の結合をブロックしたことを示す。抗体Ｅは、Ｖ１－ＳＩＲＰαを発現するＵ－９３７細胞に対するＳＥ５Ａ５結合をブロックしたが、Ｖ２－ＳＩＲＰαを発現する細胞に対する結合はブロックしなかった。
実施例２２．ＣＨＯ細胞上で発現した全長カニクイザルＳＩＲＰαに対する抗体の結合
カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＳＩＲＰαを発現する細胞に対する抗体結合をフローサイトメトリーによって評価した。タンパク質配列アクセッション番号（Ａ）ＥＧＭ－０２２５２、（Ｂ）ＸＰ＿０１５３１３１５５、又は（Ｃ）ＮＰ＿００１２７１６７９に由来する全長ｃｙｎｏ ＳＩＲＰαを発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞を、ロバＩｇＧでブロックし、抗体の濃度を増加させつつ、氷上で６０分間インキュベートし、洗浄し、ＡＦ６４７コンジュゲート化ロバＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ二次試薬で染色する。細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。蛍光強度の中央値を決定し、抗体結合の尺度として使用する。
ＫＷＡＲ２３は、０．５～２．０ｎＭの範囲のＥＣ５０値（表５３）で、様々なカニクイザルＳＩＲＰα配列をコードする全てのｃｙｎｏ ＳＩＲＰαを発現するＣＨＯ細胞株（Ｈ３Ａ９、Ｐ３ＨＤ１０、及びＨＣ６）に対する用量依存的結合を示した（図２８Ａ～２８Ｃ）。抗体Ｅ及びＥ２２は、クローンＰ３ＨＤ１０及びＨＣ６について、飽和結合曲線及び１．１～２．５の間のＥＣ５０値を達成し、クローンＨ３Ａ９に対する結合をほとんど、又は全く達成しない多様な結合プロファイルを示した。抗体Ａ及びＡ１０は、３つ全てのクローンに対する結合を示したが、結合は、クローンＨ３Ａ９に対して最も強く、クローンＰ３ＨＤ１０及びＨＣ６については、最大５倍弱いＥＣ５０値であった。抗体Ａ４の滴定可能な結合は、３つの細胞株の各々で検出されたが、２００ｎＭまでの濃度では飽和を達成しなかった。
Figure 2024056817000075
実施例２３．ＣＨＯ細胞上で発現した全長カニクイザルＳＩＲＰβ１及びＳＩＲＰβ１ｖ３に対する抗体の結合
全長カニクイザルＳＩＲＰβ１（ＸＰ＿００５５６８５９８）及びＳＩＲＰβ１ｖ３（ＸＰ＿００５５６８５９３）を発現する細胞に対する抗体結合をフローサイトメトリーによって評価する。ＳＩＲＰβ１又はＳＩＲＰβ１Ｖ３を発現するＣＨＯ細胞をロバＩｇＧでブロックし、抗体の濃度を増加させつつ、氷上で６０分間インキュベートし、洗浄し、ＡＦ６４７コンジュゲート化ロバＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ二次試薬で染色する。細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。蛍光強度の中央値を決定し、抗体結合の尺度として使用する。
ＫＷＡＲ２３は、ナノモル濃度未満のＥＣ５０値（表５４）で、ｃｙｎｏ ＳＩＲＰβ１及びＳＩＲＰβ１ｖ３を発現するＣＨＯ細胞に対する用量依存的結合を示した（それぞれ図２９Ａ及び２９Ｂ）。抗体Ｅ及びＥ２２は、ＳＩＲＰβ１ｖ３を発現するＣＨＯ細胞について、飽和結合曲線及びナノモル濃度未満のＥＣ５０値を達成する（図２９Ｂ、表５４）が、ＳＩＲＰβ１を発現するＣＨＯ細胞に対する結合をほとんど、又は全く検出することができない（図２９Ａ）多様な結合プロファイルを示した。対照的に、抗体Ａ及びＡ１０は、ナノモル濃度未満のＥＣ５０値（表５４）でＳＩＲＰβ１を発現するＣＨＯ細胞に対する用量依存的結合を示し（図２９Ａ）、ＳＩＲＰβ１ｖ３を発現する細胞に対する非飽和性結合を示した（図２９Ｂ）。抗体Ａ４の用量依存的結合は、２つの細胞株の各々で検出されたが、６７ｎＭまでの濃度では飽和を達成しなかった。
Figure 2024056817000076
本明細書で引用される各々及び全ての特許、特許出願、及び刊行物の開示は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。本開示は、特定の実施形態を参照して開示されているが、本開示の他の実施形態及び変形例は、本発明の真の趣旨及び範囲から逸脱することなく当業者によって考案され得ることは明白である。添付の特許請求の範囲は、全てのそのような実施形態及び同等の変形形態を含むと解釈されることが意図される。
実施例２４．カニクイザルにおける薬物動態（ＰＫ）。
２．１～６．０ｋｇの体重範囲を有する２～５歳のナイーブな雄カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）において、薬物動態試験を実施する。カニクイザルを、抗体Ａ１０を投与される２つの治療群に分ける。群１（ｎ＝３）は、１ｍｇ／ｋｇの抗体を受け、群２（ｎ＝３）は、５ｍｇ／ｋｇの抗体を受ける。その抗体を、クエン酸緩衝液（５０ｍＭのクエン酸ナトリウム／１１５ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ５．０）中の２ｍｇ／ｍｌ溶液として静脈内（ｉ．ｖ．）投与する。末梢静脈から６週間にわたって血液試料を採取し、血清を分析のために回収する。
血清試料を、ＥＬＩＳＡフォーマットを使用して分析する。簡潔に述べると、ＨｕＳＩＲＰα－Ｖ１は、ＮＵＮＣ（商標）ＥＬＩＳＡプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に結合している。プレートを、血清試料とともにインキュベートする前に、リン酸緩衝生理食塩水中の０．０５％のＴＷＥＥＮ（商標）２０で洗浄し、ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ参照１００１０－０２３）中の５％ ＢＳＡ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｓｅｒａ Ｃａｒｅカタログ番号ＡＰ－４５１０－０１）でブロックする。抗体を、Ｎｏｖｕｓ、ｐＡｂ抗ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＨＲＰ、カタログ番号ＮＢ７４８９を１：８０００希釈液で利用して検出する。ＰＫパラメータを、Ｐｈｏｅｎｉｘ ＷＩＮＮＯＮＬＩＮ（商標）ソフトウェア（Ｖｅｒｓｉｏｎ ８．２、Ｃｅｒｔａｒａ ＵＳＡ，Ｉｎｃ．Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）を使用したノンコンパートメント分析によって決定する。
ＰＫ試験結果を図３０に示し、ＰＫパラメータを以下の表５５にまとめている。抗体は、１～５ｍｇ／ｋｇの用量依存性ＣＬを示し、標的媒介性薬物分布（ＴＭＤＤ）が全体的なクリアランスに寄与していることを示唆している。
Figure 2024056817000077
実施例２５．カニクイザルにおける毒性
抗体Ａ１０を有するカニクイザルにおいて、反復用量毒性試験を実施する。この試験で評価されるパラメータには、生体分析、毒物動態、臨床観察、体重、食物摂取、血液学、血液化学、凝固、尿検査、免疫表現型決定、神経行動検査、心電図検査、及び眼科検査が含まれる。
雄及び雌のカニクイザルの群（ｎ＝３／性別／群）は、１００及び２５０ｍｇ／ｋｇ／用量の用量レベルの抗体を、週に１回（ｑ１ｗ）を４週間にわたって受ける（５用量投与）。
体重、臨床観察、食事摂取、眼科検査、神経行動検査、心電図、免疫表現型決定、血液学、凝固、臨床化学又は尿検査において、抗体に関連する変化はなかった。
結論として、抗体に関連する有害所見がないサルにおいて、１００及び２５０ｍｇ／ｋｇ／用量の抗体を、週に１回４週間にわたって（合計で５用量）静脈内投与することは、忍容性であった。この試験の条件下で、定常状態（２２日目）での無有害作用レベル（ＮＯＡＥＬ）は、２５０ｍｇ／ｋｇ／用量を週１回であると考えられた。
実施例２６．Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ細胞上で発現した様々なアミノ酸点変異を有する全長ヒトＶ１－ＳＩＲＰαに対する抗体の結合
観察された抗体選択性の構造的基礎を試験するために、修飾Ｖ１－ＳＩＲＰαタンパク質配列を発現するように操作された細胞に対する抗体結合は、フローサイトメトリーによって試験される。Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ親細胞を、全長野生型ヒトＳＩＲＰαＶ１対立遺伝子（ＮＰ＿５４２９７０．１）、又はアミノ酸点変異を有する全長ヒトＳＩＲＰαＶ１（表５６）のいずれかを含有するレンチウイルスで形質導入し、マッチング発現レベルを達成するように選別する。これらの細胞をロバＩｇＧでブロックし、抗体の濃度を増加させつつ、氷上で６０分間インキュベートし、洗浄し、ＡＦ６４７コンジュゲート化ロバＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ二次試薬で染色する。染色した細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。蛍光強度の中央値を決定し、抗体結合の尺度として使用する。
抗体Ａ～Ｅ、Ａ４、Ａ１０、Ｅ２２、及びＫＷＡＲ２３は、アイソタイプ対照と異なり、０．３～３．８ｎＭの範囲のＥＣ５０値（表５７）で全長野生型ヒトＳＩＲＰαＶ１を発現するＥｘｐｉ－ＣＨＯ細胞に対する用量依存的結合を示した（図３１Ａ）。ＳＩＲＰαＶ１ Ｎ→Ｅ及びＤ→Ｅバリアントを発現する細胞に対する抗体結合は、ＳＩＲＰαＶ１ ＷＴを発現する細胞に対する結合と同等であった（図３１Ｂ～３１Ｃ、表５７）。対照的に、ＳＩＲＰαＶ１ Ｄ→Ｎ及びＤＤ→ＥＮバリアントを発現するＥｘｐｉ－ＣＨＯ細胞に対する抗体Ａ～Ｄ、Ａ４、及びＡ１０の結合は、影響を受け、このことは、廃止された、より弱い（＞ＥＣ５０）、又は非飽和性の結合を示している（図３１Ｄ～３１Ｅ、表５７）。試験した抗体のいずれも、親ＣＨＯ細胞に対する結合を示さなかった（図３１Ｆ）。
Figure 2024056817000078
Figure 2024056817000079

Figure 2024056817000080
実施例２７．Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ細胞上で発現した様々なアミノ酸点変異を有する全長ヒトＶ２－ＳＩＲＰαに対する抗体の結合
観察された抗体選択性の構造的基礎を試験するために、修飾Ｖ２－ＳＩＲＰαタンパク質配列を発現するように操作された細胞に対する抗体結合は、フローサイトメトリーによって試験される。Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ親細胞を、全長野生型ヒトＳＩＲＰαＶ２対立遺伝子（ＣＡＡ７１４０３．１）、又はアミノ酸点変異を有する全長ヒトＳＩＲＰαＶ２（表５８）のいずれかを含有するレンチウイルスで形質導入し、マッチング発現レベルを達成するように選別する。これらの細胞をロバＩｇＧでブロックし、抗体の濃度を増加させつつ、氷上で６０分間インキュベートし、洗浄し、ＡＦ６４７コンジュゲート化ロバＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ二次試薬で染色する。染色した細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。蛍光強度の中央値を決定し、抗体結合の尺度として使用する。
抗体Ａ～Ｅ、Ａ４、Ａ１０、Ｅ２２、及びＫＷＡＲ２３は、アイソタイプ対照と異なり、０．２～３．６ｎＭの範囲のＥＣ５０値（表５９）で全長野生型ヒトＳＩＲＰαＶ２を発現するＥｘｐｉ－ＣＨＯ細胞に対する用量依存的結合を示した（図３２Ａ）。ＳＩＲＰαＶ２ Ｅ→Ｎを発現する細胞に対する抗体結合は、ＳＩＲＰαＶ２ ＷＴを発現する細胞に対する結合と同等であった（図３２Ｂ、表５９）。対照的に、ＳＩＲＰαＶ２ Ｄ→Ｅを発現するＥｘｐｉ－ＣＨＯ細胞に対する抗体Ａ、Ｄ、Ａ４、及びＡ１０の結合は、Ｂ、Ｃ、Ｅ、Ｅ２２、及びＫＷＡＲ２３と異なり、影響を受け、ＳＩＲＰαＶ２ ＷＴを発現する細胞について観察されるＥＣ５０値よりも３．１～７．７倍大きなＥＣ５０値を示している（図３２Ｃ、表５９）。
Figure 2024056817000081
Figure 2024056817000082
実施例２８．Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ細胞上で発現した様々なアミノ酸点変異を有する全長ヒトＳＩＲＰβ１に対する抗体の結合
観察された抗体選択性の構造的基礎を試験するために、修飾ＳＩＲＰβ１タンパク質配列を発現するように操作された細胞に対する抗体結合は、フローサイトメトリーによって試験される。Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ親細胞を、全長野生型ヒトＳＩＲＰβ１対立遺伝子（Ｏ００２４１）、又は単一のアミノ酸点変異を有する全長ヒトＳＩＲＰβ１（表６０）のいずれかを含有するレンチウイルスで形質導入し、マッチング発現レベルを達成するように選別する。これらの細胞をロバＩｇＧでブロックし、抗体の濃度を増加させつつ、氷上で６０分間インキュベートし、洗浄し、ＡＦ６４７コンジュゲート化ロバＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ二次試薬で染色する。染色した細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。蛍光強度の中央値を決定し、抗体結合の尺度として使用する。
抗体Ａ～Ｅ、Ａ４、Ａ１０、及びＫＷＡＲ２３は、アイソタイプ対照又は抗体Ｅ２２と異なり、Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ細胞上で発現した全長野生型ヒトＳＩＲＰβ１に対する用量依存的結合を示した（図３３Ａ）。表６１は、抗体の各々について計算された結合ＥＣ５０を強調している。抗体Ａ、Ｃ、Ｄ、Ａ４、及びＡ１０は、野生型ヒトＳＩＲＰβ１を発現する細胞で０．２～１．６ｎＭの範囲のＥＣ５０値を示したが、一方で、抗体Ｂ及びＥの結合は、非飽和性であり、ＥＣ５０は決定されなかった。ＫＷＡＲ２３を除き、単一のアミノ酸置換（Ｄ→Ｈ）がループ領域内に導入されたとき、抗体結合が完全に失われた（図３３Ｂ）。
Figure 2024056817000083
Figure 2024056817000084
実施例２９．Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ細胞上で発現した様々なアミノ酸点変異を有する全長ヒトＳＩＲＰβＬに対する抗体の結合
観察された抗体選択性の構造的基礎を試験するために、修飾ＳＩＲＰβＬタンパク質配列を発現するように操作された細胞に対する抗体結合は、フローサイトメトリーによって試験される。Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ親細胞を、全長野生型ヒトＳＩＲＰβＬ対立遺伝子（Ｑ５ＴＦＱ８）、又は単一のアミノ酸点変異を有する全長人ＳＩＲＰβＬ（表６２）のいずれかを含有するレンチウイルスで形質導入し、マッチング発現レベルを達成するように選別する。これらの細胞をロバＩｇＧでブロックし、抗体の濃度を増加させつつ、氷上で６０分間インキュベートし、洗浄し、ＡＦ６４７コンジュゲート化ロバＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ二次試薬で染色する。染色した細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。蛍光強度の中央値を決定し、抗体結合の尺度として使用する。
抗体Ｅ、Ｅ２２、及びＫＷＡＲ２３は、１．２ｎＭ未満のＥＣ５０値で（表６３）、Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ細胞上で発現した全長ヒトＳＩＲＰβＬに対する用量依存的な結合を示した（図３４Ａ）。抗体Ａ、Ａ４、及びＡ１０の結合は、ＳＩＲＰβＬを発現する細胞では検出することができなかったが、一方で、抗体Ｂ、Ｃ、及びＤは、非飽和性結合を示した（図３４Ａ、表６３）。ループ領域内に導入された単一のアミノ酸置換（Ｈ→Ｄ）は、これらの細胞に対する抗体結合を維持し、強化し、又は容易にした（図３４Ｂ、表６３）。
Figure 2024056817000085
Figure 2024056817000086
実施例３０．Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ細胞上で発現した様々なアミノ酸点変異を有する全長ヒトＳＩＲＰγに対する抗体の結合
観察された抗体選択性の構造的基礎を試験するために、修飾ＳＩＲＰγタンパク質配列を発現するように操作された細胞に対する抗体結合は、フローサイトメトリーによって試験される。Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ親細胞を、全長野生型ヒトＳＩＲＰγ（ＮＰ＿５４２９７０．１）、又はアミノ酸点変異を有する全長ヒトＳＩＲＰγ（表６４）のいずれかを含有するレンチウイルスで形質導入し、マッチング発現レベルを達成するように選別する。これらの細胞をロバＩｇＧでブロックし、抗体の濃度を増加させつつ、氷上で６０分間インキュベートし、洗浄し、ＡＦ６４７コンジュゲート化ロバＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ二次試薬で染色する。染色した細胞を洗浄し、固定し、フローサイトメトリーによって分析する。蛍光強度の中央値を決定し、抗体結合の尺度として使用する。
ＫＷＡＲ２３を除き、試験した抗体（抗体Ａ～Ｅ、Ａ４、Ａ１０、Ｅ２２）は、全長野生型ヒトＳＩＲＰγを発現するＥｘｐｉ－ＣＨＯ細胞、又はＳＩＲＰγ Ｅ→Ｄを発現する細胞に対する飽和性結合を示さなかった（それぞれ図３５Ａ及び３５Ｂ）。対照的に、抗体Ａ～Ｄ、Ａ４、及びＡ１０は、ナノモル濃度未満のＥＣ５０値で、全てではないが抗体Ｂとの、ＳＩＲＰγ Ｎ→Ｄ及びＥＮ→ＤＤバリアントを発現するＥｘｐｉ－ＣＨＯ細胞に対する飽和性抗体結合を示した（それぞれ図３５Ｃ及び３５Ｄ、並びに表６５）。
Figure 2024056817000087
Figure 2024056817000088
実施例３１．ＳＩＲＰαＶ１のアミノ酸１２５～１３２及びＳＩＲＰαＶ２のアミノ酸１２５～１３１は、抗体選択性の決定因子である
抗体Ａによって結合したＳＩＲＰαエピトープの特定の領域は、ＳＩＲＰαＶ１のアミノ酸１２５～１３２（配列ＲＫＧＳＰＤＤＶ）に対応する、ＳＩＲＰαＶ２のアミノ酸１２５～１３１（配列ＲＫＧＳＰＤＴ）に位置するループ領域内で特定された。このループを、ヒトＳＩＲＰγ及びヒトＳＩＲＰβＬに対する検出可能な結合を伴わない、ＳＩＲＰαＶ１及びＳＩＲＰαＶ２に対する選択的結合を含む、抗体Ａの観察された結合特性の決定基として特定した（表３７）。結合選択性を付与する際のこのループの潜在的な役割は、複合体ＳＩＲＰαＶ２中の抗体Ａの結晶構造の決定によって特定され（実施例２０）、関連するＳＩＲＰアイソフォーム中のエピトープアミノ酸の配列比較から特定され、上述の結合試験によって確認された（実施例２６～３０）。注目すべきことに、このループは、ＳＩＲＰαＶ１とＳＩＲＰαＶ２との間で長さが異なる（すなわち、ＳＩＲＰαＶ１において８個のアミノ酸、ＳＩＲＰαＶ２において７個のアミノ酸）。このループ長さの違いにもかかわらず、抗体Ａは、ＳＩＲＰαＶ１及びＳＩＲＰαＶ２の両方について同様の結合親和性を示す（例えば、表３７を参照されたい）。図３６Ａは、抗体Ａがどのようにして側面からこのループに結合するかを示しており、このことが、ＳＩＲＰαＶ１及びＳＩＲＰαＶ２において長さが異なるループの特異的認識を可能にすると考えられる。抗体ＡとのＳＩＲＰα相互作用の一般的な構成は、天然の結合パートナーＣＤ４７とのＳＩＲＰαの相互作用と同様であり、ＳＩＲＰαＶ１及びＳＩＲＰαＶ２のループは、同様の配向で接近することを観察した（図３６Ｂ）。しかしながら、抗体Ａと異なり、ＣＤ４７はＳＩＲＰγにも結合し、このことは、抗体Ａが、この一般的な類似性にもかかわらず、結合特異性を付与することができることを示している。
異なる長さのループを、抗体Ａによって認識することができるが、それにもかかわらず、エピトープのこの部分は、ＳＩＲＰタンパク質について観察される選択性を付与することができる。ＳＩＲＰαＶ１中の配列モチーフＰＤＤＶを、対応する配列がそれぞれＰＥＮＶ及びＰＤＨＶであるＳＩＲＰγ及びＳＩＲＰβＬとの重要な違いであると特定した（図３７Ａ～３７Ｆ）。
抗体Ａの観察された選択性の構造的基礎を更に試験するために、発現された修飾ＳＩＲＰタンパク質配列に対して操作された細胞に結合する能力を試験した（実施例２６～３０を参照されたい）。これらの実験の結果は、結合選択性を付与するためのこのループにおけるバリアント残基の重要性を確認するものであった。ＳＩＲＰαＶ１中のそれぞれの配列モチーフ（ＰＤＤＶ）を、ＳＩＲＰγのＰＤＮＶ又はＰＥＮＶ配列のいずれかに交換することで、抗体Ａに対する結合が強く損なわれることを観察した（図３１Ｄ～３１Ｅ）。同様に、そのＰＤＤＶモチーフを有するＳＩＲＰβ１に対する抗体Ａの結合は、ＳＩＲＰβＬのＰＤＨＶモチーフに交換することによって、完全に阻止された（図３３Ｂ）。逆に、ＳＩＲＰγのＰＥＮＶモチーフをＳＩＲＰαＶ１のＰＥＤＶ若しくはＰＤＤＶのいずれかに交換するか（図３５Ｃ～３５Ｄ）、又はＳＩＲＰβＬのＰＤＨＶモチーフをＳＩＲＰβ１のＰＤＤＶに交換すると（図３４Ｂ）、結合を回復させることができる。これらの結果は、一方でＳＩＲＰαタンパク質中の２つの異なるループ長さの許容を可能にするが、他方で結合界面におけるアミノ酸変化に対する高い感受性を提供する、エピトープの特性を強調するものである。まとめると、これらの特性によって、抗体Ａ及びそのバリアント（例えば、Ａ４及びＡ１０）について記載される選択性パターン、すなわち、ＳＩＲＰγ及びＳＩＲＰβＬに対する結合が顕著に存在しないことによって補完される、ＳＩＲＰαＶ１、ＳＩＲＰαＶ２、及びＳＩＲＰβ１に対する強い結合が得られる。
実施例３２．抗体価及び純度
方法
トランスフェクション。トランスフェクションのために、重鎖ＤＮＡ、軽鎖ＤＮＡ、フィラーＤＮＡ及びＸＢＰ－１ ＤＮＡと、Ｏｐｔｉ－Ｐｒｏ ＳＦＭ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）とを合わせ、０．２μｍフィルタを通して濾過することによって滅菌する。トランスフェクションに必要なスケールのために、２×１０６個の細胞／ｍＬ又は４×１０６個の細胞／ｍＬで（ＢａｌａｎＣＤ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｏｒｙ ＣＨＯ（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）＋４ｍＭのＬ－グルタミン中で）細胞を調製する。算出された体積のＴｒａｎｓＩＴ Ｐｒｏ（Ｍｉｒｕｓ）トランスフェクション試薬を、調製されたＯｐｔｉ－Ｐｒｏ ＳＦＭ＋ＤＮＡミックスに添加し、調製した細胞にすぐに移す。振とうフラスコを３７℃、５％ＣＯ２、１４０ｒｐｍ又は２００ｒｐｍの振とう速度で、インキュベーター中に配置する。２４時間トランスフェクトした後、温度を３０℃に変え、トランスフェクトされた細胞に、Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｏｒｙ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ及びＡｎｔｉ－Ｃｌｕｍｐｉｎｇ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（両方ともＩｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を添加する。グルコースレベルが２ｇ／Ｌ～１ｇ／Ｌに低下する時期に応じて、５日目又は７日目の間にＣＨＯ ＣＤ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ Ｆｅｅｄ Ｂ（Ｇｉｂｃｏ）を添加する。トランスフェクトされた培養物を７～１０日間維持する。
遠心分離及び滅菌濾過によって収穫する。清澄化した細胞培養物上清を、タンパク質Ａバイオセンサを備えたＦｏｒｔｅＢｉｏ／Ｐａｌｌ Ｏｃｔｅｔ Ｒｅｄ ９６装置によって、力価のためにサンプリングする。測定された抗体濃度は、発現価（ｍｇ／Ｌ）として報告される。
タンパク質Ａ（ＰｒｏＡ）精製：精製は、ＧＥ ＡＫＴＡ Ｐｕｒｅシステムを使用して、室温（ＲＴ）で実施する。各試料を、ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用した組換えタンパク質Ａ親和性クロマトグラフィーによって、収穫した細胞培養液（ＨＣＣＦ）から捕捉する。クロマトグラフィーのステップ及び緩衝液の詳細は、それぞれ表６６及び６７に見出すことができる。タンパク質を、中性ｐＨ、室温でタンパク質Ａに結合させ、高塩（１ＭのＮａＣｌ）で洗浄する。各試料を、３０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ３．５を使用して、アイソクラティックモードで溶出させる。溶出した試料を、３Ｍの酢酸ナトリウム（ｐＨ９．０）の１％溶液を使用して、ｐＨ５．０になるまで中和する。中和したタンパク質を、０．２２μｍ濾過システムで滅菌濾過する。濃度を、ＮａｎｏＤｒｏｐ ８０００ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用した、２８０ｎｍでの吸光度測定に基づいて計算する。
Figure 2024056817000089
Figure 2024056817000090
カチオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＸ）。カチオン交換クロマトグラフィーを、室温で実施する。緩衝液及び処理条件を表６８及び６９にまとめている。タンパク質Ａ親和性クロマトグラフィーで精製した試料を、ＡＫＴＡ Ａｖａｎｔクロマトグラフィーシステム（Ｃｙｔｉｖａ）を使用するＰｏｒｏｓ ５０ ＸＳカラム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して研磨する。抗体を、５ＣＶ（体積部）の５０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）で予め平衡化したカラムに結合させ、５ＣＶの同じ緩衝液で洗浄する。次いで、抗体を、２０ＣＶ中０～０．５ＭのＮａＣｌの勾配を使用して溶出させる。溶出した試料を、最終イオン強度が約１００ｍＭ ＮａＣｌになるまで調整する。タンパク質を、高減圧濾過システムを使用して、０．２２μｍ Ｓｔｅｒｉｆｌｉｐ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって、５０ｍＬのファルコンチューブ内で滅菌濾過する。抗体濃度を、ＮａｎｏＤｒｏｐ ８０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して２８０ｎｍで測定した吸光度に基づいて計算する。精製された抗体を４℃で貯蔵する。
Figure 2024056817000091
Figure 2024056817000092
分析サイズ排除クロマトグラフィー。分析サイズ排除クロマトグラフィー（ａＳＥＣ）は、Ｐｒｏｔｅｉｎ ＢＥＨ ＳＥＣカラム２００Å、１．７μｍ、４．６×１５０ｍｍ（Ｗａｔｅｒｓ部品番号１８６００５２２５）を使用するＡｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ、Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）システムを使用して実施される。試行条件は、以下のとおりである。移動相：５０ｍＭのリン酸ナトリウム、２００ｍＭのアルギニン、及び０．０５％のアジ化ナトリウム、流速：０．５ｍｌ／分、試行時間：５分間、試料ロード量：１０μｇ、ピーク検出：Ａ２８０ｎｍ。結果を分析して、単量体、低分子量（ＬＭＷ）、及び高分子量（ＨＭＷ）として存在する抗体の割合を決定する。
低ｐＨの保持は、１Ｍの酢酸（ｐＨ２．４５）を用いてｐＨを３．５に調整することによって行う。室温で９０分間インキュベートした後、１ＭのＴｒｉｓ ＨＣｌ（ｐＨ９．０）によってｐＨ５．０になるまで中和する。最終濃度は、ＮａｎｏＤｒｏｐ ８０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）を使用して、２８０ｎｍでの吸光度を測定することによって決定される。試料のサイズ純度は、分析サイズ排除クロマトグラフィーによって特性決定される。
結果
上の手順を使用して、本開示の抗体を発現させ、精製する。表７０及び７１は、示される抗体についての２つの異なる試行からの力価及びサイズ純度の結果を示す。表７０は、タンパク質Ａ精製及びカチオン交換クロマトグラフィーの発現価及び結果を示す。所与の抗体について繰り返されている行は、複数の複製物を示す。表７１は、タンパク質Ａ精製の発現価及び結果を示す。表７２は、ｐＨ５．０で保持された同じ抗体と比較した、ｐＨ３．５処理後の指定の抗体（２個の複製物）についてのサイズ純度の結果を示す。
Figure 2024056817000093
Figure 2024056817000094
Figure 2024056817000095
実施例３３．抗体結合動態
方法
種々のＳＩＲＰα分析物に対する抗ＳＩＲＰα抗体の結合動態は、Ｂｉａｃｏｒｅ ８Ｋ＋（Ｃｙｔｉｖａ）を使用して、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって決定される。１×ＨＢＳ－ＥＰ＋（Ｃｙｔｉｖａ）を試行緩衝液として使用し、特に明記しない限り、全ての希釈に使用する。Ｓｅｒｉｅｓ Ｓ ＣＭ５センサチップを、０．１Ｍ ＮＨＳ（Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド）及び０．４Ｍ ＥＤＣ（１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）の１：１混合物を用い、１０μｌ／分の流束で４２０秒間かけて活性化し、タンパク質Ａ／Ｇ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１０ｍＭ酢酸塩中１０μｇ／分、ｐＨ４．５）を用い、１０μｌ／分の流束で４２０秒間かけて固定化し、表面上におよそ３０００ＲＵのタンパク質Ａ／Ｇを得る。次いで、センサチップを、１ＭのエタノールアミンＨＣｌ（ｐＨ８．５）を用い、１０μｌ／分の流速で４２０秒間、不活性化する。
抗体（およそ１ｕｇ／ｍｌ）を、タンパク質Ａ／Ｇ表面上で、１０μｌ／分の流速で６０秒間捕捉させ、およそ２４０ＲＵの捕捉レベルが得られる。各ＳＩＲＰタンパク質（細胞外ドメイン＋Ｈｉｓ－Ｔａｇ、濃度は示されているとおり）の希釈液を、３０μｌ／分の流速で、捕捉された抗体上に分析物として注入して３００秒間かけて会合させ、続いて６００秒間かけて解離させる。表面を、３０μｌ／分で０．８５％リン酸を３０秒間注入することによって再生する。Ｂｉａｃｏｒｅ Ｉｎｓｉｇｈｔ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアにおいて、ＳＰＲセンサグラムを１：１のＬａｎｇｍｕｉｒ結合に全体的に適合させ、オンレート（ｋａ）、オフレート（ｋｄ）、及び解離定数（ＫＤ）値を提供するか、又は定常状態親和性に全体的に適合させ、ＫＤを提供する。
結果
上の手順を使用して、本開示の抗体の結合特性を測定する。使用した各分析物について、最高濃度は、実施例３に示されるようなものであった（表３６を参照）。測定した各分析対象物に対する各々の指定の抗体のオンレート、オフレート、及び解離定数を表７３～７４に示す。
Figure 2024056817000096
Figure 2024056817000097
表７３～７４の略称。ＮＢ：結合なし。＊は、定常状態の親和性を示す（ｋａ及びｋｄの値は、利用可能ではない）。
実施例３４．抗体濃度が安定性に及ぼす影響
抗体Ａ１０は、１０ｍＭのヒスチジン（ｐＨ６．０）中、様々な濃度で調製される。各々の調製した試料を、濁度、粘度について、並びにサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって高分子量（ＨＭＷ）、抗体単量体、及び低分子量（ＬＭＷ）レベルについて評価する。ＳＥＣを、初期に、及び２５℃で１週間後に実施する。結果を以下の表７５に示す。
固有蛍光測定を使用して、ドメインのアンフォールディング及び凝集形成を温度の関数として評価する。結果を以下の表７６に示す。
Figure 2024056817000098
Figure 2024056817000099
方法
濁度。濁度は、濁度光度計を使用して測定される。各測定について、１３０μＬの試料を、単回使用のホウケイ酸ガラス丸底キュベット中に配置する。照射波長は、６３３ｎｍであり、直角光散乱により濁度を測定する。各測定の少なくとも２回の複製物を、許容偏差≦２％で採取する。
粘度。粘度は、Ｈａａｋｅ ＭＡＲＳ ＩＩＩ Ｒｈｅｏｍｅｔｅｒ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃを使用して測定される。測定パラメータは、以下のとおりである。円錐：Ｃ３５／１（φ３５ｍｍ及び１°角度）、チタン。体積＝２１０μＬ、希釈されていない。データ分析：剪断速度１０００ｓ－１で１００データ点。温度：２０℃。
サイズ排除クロマトグラフィー。サイズ排除クロマトグラフィーは、プレカラムＫｒｕｄＫａｔｃｈｅｒ Ｕｌｔｒａ ＨＰＬＣ Ｉｎ－Ｌｉｎｅ Ｆｉｌｔｅｒ ０．５μｍ×０．００４μｍ ＩＤ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）及びカラムＡｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ＢＥＨ２００ＳＥＣ ３００×４．６ｍｍ（Ｗａｔｅｒｓ Ｃｏｒｐ．、Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）を使用する、ＵＰＬＣ－Ｓｙｓｔｅｍ、例えば、Ａｇｉｌｅｎｔ １２９０ Ｉｎｆｉｎｉｔｙ ＩＩで実施される。移動相は、４０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４×Ｈ２Ｏ、０．４ＭのＮａＣｌＯ４、ｐＨ６．８であり、流束は、０．３ｍＬ／分である。オートサンプラーは、５℃に維持され、カラムは、室温である。検出は、２８０ｎｍの波長でＵＶ検出器によって行われる。ピーク幅は、＞０．０５分（１ｓ）（ＥｍＰｏｗｅｒについて）、又はおよそ１０Ｈｚ（他のソフトウェア）である。スリットは、４ｎｍである。試料を移動相で５ｍｇ／ｍＬまで希釈する。ロード量は、注入１回当たり３０μｇである。試行時間は１５分間である。アルゴリズムＡｐｅｘ Ｔｒａｃｋをデフォルトとして、アルゴリズムを用いて積分を自動的に行い、ピーク面積は、「デフォルトショルダー」設定を有効にした状態で、４．５～１１．５分の保持時間内にほぼ収まる。ピーク幅は、２０秒であり、検出閾値は、１４である。
固有蛍光。固有蛍光は、標準化された方法を使用して、Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ ＮＴ．４８ ｎａｎｏ ＤＳＦ（ＮａｎｏＴｅｍｐｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＧｍｂＨ、Ｍｕｎｉｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して測定される。試料体積は、キャピラリー当たり１０μＬであり、試料濃度及び製剤は示されているとおりである。Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ ＮＴ．４８ Ｓｅｒｉｅｓ ｎａｎｏＤＳＦ Ｇｒａｄｅ Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｃａｐｉｌｌａｒｉｅｓを、タンパク質濃度＞０．２ｍｇ／ｍＬに使用し、Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ ＮＴ．４８ Ｓｅｒｉｅｓ ｎａｎｏＤＳＦ Ｇｒａｄｅ Ｈｉｇｈ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ Ｃａｐｉｌｌａｒｉｅｓを、濃度≦０．２ｍｇ／ｍＬに使用する。温度傾斜は、１℃／分で２０～９５℃である。固有蛍光の励起波長は、２８５ｎｍに設定され、強度は、１０％～３０％である（最適な測定範囲に応じて適合される）。３５０／３３０ｎｍにおける検出比の値を、温度に対する関数としてプロットする。この関数の最初の導出は、Ｔｏｎｓｅｔ及び融解温度の決定に使用され、Ｔｏｎｓｅｔは、光の後方散乱によって決定される。
実施例３５．抗体安定性試験
抗体Ａ１０は、２５ｍＭのヒスチジン及びｐＨ６．０中の５０ｍｇの抗体／ｍＬの濃度で、様々なＮａＣｌ濃度を用いて製剤化される。各製剤の特性を、ＳＰＲ（表７７）並びにＳＥＣ（表７８及び７９）によって、初期に、及び４０℃で４週間後及び８週間後に評価した。
Figure 2024056817000100
Figure 2024056817000101
Figure 2024056817000102
方法
表面プラズモン共鳴。表面プラズモン共鳴分光法は、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（Ｃｙｔｉｖａ、Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ）を使用して行う。試行緩衝液及び希釈緩衝液は、ＨＢＳ－ＥＰ＋（Ｃｙｔｉｖａ、Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ，ＭＡ）である。分析温度は、２５℃であった。データ収集速度は、１フローセルを使用して１Ｈｚである。センサチップＣＭ５を、高密度タンパク質Ａ／Ｇ固定化とともに使用する。ソフトウェアの事前に定義された標準アミンカップリング法が適用される。固定化緩衝液は、ｐＨ４．５の酢酸塩、３０μｇ／ｍｌ、４２０秒間、１０μｌ／分である。分析は、２０００～６２．５ｎｇ／ｍｌの較正曲線を因子１：２及び追加のブランク注入とともに調製することによって実施する。抗体試料を１μｇ／ｍｌになるまで希釈する。ヒトＳＩＲＰα Ｖ１及びＶ２抗原を１０μｇ／ｍｌになるまで希釈する。構築方法については、１つのサイクルは、１８０秒間、１０μｌ／分での抗体の捕捉、１８０秒間、１０μｌ／分での抗原の注入、及び１２秒間、５０μ／分での５０ｍＭのＨＣｌによる再生を含む。タンパク質Ａ／Ｇ及び抗原の試料のＢｉａｃｏｒｅ濃度を計算し、抗原結合部位の結合活性を計算するために、較正曲線を用いて、受信したセンサグラムの評価を行った。
サイズ排除クロマトグラフィー。サイズ排除クロマトグラフィーを、上の実施例３４に記載されるように実施する。
実施例３６．固有の生物物理プロファイル分析
方法
選択された抗体の可変領域についての物理化学的記述子は、Ａｈｍｅｄ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２０２１．Ｓｅｐ １４；１１８（３７）：ｅ２０２０５７７１１８に記載される方法に従って、ｐＨ値７．４及び１３７ｍＭ塩を使用して算出する。５つの記述子は、ＶＬドメインとＶＨドメインとの間に埋められた表面積（ＢＳＡ＿ＶＬ：ＶＨ）、疎水性表面パッチに対する電荷の比率（ＲＰ）、双極子及び疎水性モーメントの比（ＲＭ）、疎水性異方性（Ａｖｇ＿ＨＩ）、及び構造に基づく等電点（ｐＩＦｖ＿３Ｄ）である。これらの５つの記述子値の各々を使用して、それらを、７７の承認された抗体ベースの生体療法に含まれる７９のＦｖ領域（承認された生体療法の２つは、各々２つのＦｖ領域を含有する）についての対応する記述子の平均及び標準偏差（ＳＤ）値を比較することによって、Ｚスコアを算出した。Ｚスコア＞１．９６又は＜－１．９６を有する各記述子は、Ｆｖ領域についてのｆｌａｇに寄与する。Ｆｖ領域が最大５つのｆｌａｇを収集することができるように、選択された抗体ごとにｆｌａｇの数を合計した。また、各Ｆｖ領域についての個々のＺスコアを組み合わせて、記載されるようにそのＺ距離を得る（同上）。
結果
上の手順を使用して、選択された抗体の固有の生物物理学的特性を評価する。抗体Ａ～Ｅ、Ａ１～Ａ１６、及びＥ１～Ｅ２２の可変領域配列は、上に開示されるとおりであり、抗体Ｌ１４、Ｐ１１、Ｓ４、ＳＢ６、Ｓ７、Ｓ１０、及びＳ１４の配列は、表８０～８１に示されるとおりである。表８２は、５つの記述子の各々の値を示す。表８３は、各記述子の値に対応するＺスコア、並びに５つの記述子から算出されるＺ距離を示す。表８４は、各記述子についてのＦｌａｇ値（０は、ｆｌａｇなしを示し、１は、１個のｆｌａｇを示し、すなわち、Ｚスコア＞１．９６又は＜－１．９６）、及び各抗体についてのｆｌａｇの総数を示す。所与の抗体について、絶対値のＺスコア値が大きいほど、ｆｌａｇの数が多いほど、Ｚ距離値が大きいほど、それぞれ、分析に使用される７７の承認された生体療法に含まれる７９のＦｖ領域の平均特性からの偏差が大きいことを示す。
Figure 2024056817000103
Figure 2024056817000104
Figure 2024056817000105
Figure 2024056817000106

Figure 2024056817000107
Figure 2024056817000108

Figure 2024056817000109
Figure 2024056817000110
実施例３７．抗体配列のヒトらしさの分析
方法
選択された抗体の可変軽鎖配列及び可変重鎖配列について、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．ＭＡｂｓ．２０１６；８（１）：１－９．ｄｏｉ：１０．１０８０／１９４２０８６２．２０１５．１１１４３２０に記載の方法を使用して、ヒト同一性（「ヒトらしさ（ｈｕｍａｎｎｅｓｓ）」）値の割合を算出する。簡潔に述べると、ヒト化配列を、それらの最も近いヒト生殖細胞系列の対応物と比較し、各々について同一性の割合を決定する。
結果
上の手順を使用して、選択された抗体の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域のヒトらしさの割合を測定する。結果を表８５に示す。ヒトらしさ値％が大きいほど、ヒト生殖系列抗体配列に対する類似性が大きいことを示す。
Figure 2024056817000111
Figure 2024056817000112

Claims (46)

  1. 抗ヒトＳＩＲＰα抗体又は抗原結合断片であって、
    ａ）配列番号３３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）と、配列番号３４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）と、配列番号３５のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域、及び
    配列番号３６又は配列番号３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）と、配列番号３８のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）と、配列番号３９のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域、
    又は
    ｂ）配列番号１若しくは配列番号２２３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）と、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２２４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）と、配列番号６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域、及び
    配列番号７、配列番号８、配列番号９若しくは配列番号２２５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）と、配列番号１０、配列番号１１、若しくは配列番号２２６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）と、配列番号１２若しくは配列番号２２７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域、
    又は
    ｃ）配列番号５２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）と、配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）と、配列番号５４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域、及び
    配列番号５５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）と、配列番号５６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）と、配列番号５７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域、
    又は
    ｄ）配列番号３３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）と、配列番号７０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）と、配列番号７１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域、及び
    配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）と、配列番号７２のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）と、配列番号３９のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域、
    又は
    ｅ）配列番号２６２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）と、配列番号８７のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）と、配列番号８８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域、及び
    配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）と、配列番号７２のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）と、配列番号８９のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域を含む、抗ヒトＳＩＲＰα抗体又は抗原結合断片。
  2. 前記抗体又はその抗原結合断片が、
    ａ）配列番号３３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）と、配列番号３４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）と、配列番号３５のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域、及び配列番号２３３のアミノ酸配列であって、アミノ酸Ｘ１＝Ｄ若しくはＧ、及びＸ２＝Ｌ若しくはＡである、アミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）と、配列番号３８のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）と、配列番号３９のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域、又は
    ｂ）配列番号２２８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）であって、アミノ酸Ｘ１＝Ｎ若しくはＤである、アミノ酸配列と、配列番号２２９のアミノ酸配列であって、Ｘ１＝Ｙ若しくはＤ、Ｘ２＝Ｎ若しくはＴ、Ｘ３＝Ｎ若しくはＱ、及びＸ４＝Ｓ若しくはＰである、アミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）と、配列番号６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域、及び
    配列番号２３０のアミノ酸配列であって、Ｘ１＝Ｋ若しくはＲ、Ｘ２＝Ｎ若しくはＴ、Ｘ３＝Ｇ若しくはＡ、及びＸ４＝Ｎ、Ａ若しくはＴである、アミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）と、配列番号２３１のアミノ酸配列であって、Ｘ１＝Ｌ、Ｑ若しくはＧ、及びＸ２＝Ｎ若しくはＳである、アミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）と、配列番号２３２のアミノ酸配列であって、Ｘ１＝Ｍ若しくはＧである、アミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗ヒトＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片。
  3. 前記抗体又はその抗原結合断片が、
    配列番号３３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）と、配列番号３４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）と、配列番号３５のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域、及び
    配列番号３６又は配列番号３７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）と、配列番号３８のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）と、配列番号３９のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗ヒトＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片。
  4. 前記抗体又はその抗原結合断片が、
    配列番号１若しくは配列番号２２３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）と、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、若しくは配列番号２２４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）と、配列番号６のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域、及び
    配列番号７、配列番号８、配列番号９若しくは配列番号２２５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）と、配列番号１０、配列番号１１、若しくは配列番号２２６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）と、配列番号１２若しくは配列番号２２７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗ヒトＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片。
  5. 前記抗体又はその抗原結合断片が、
    配列番号５２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）と、配列番号５３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）と、配列番号５４のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域、及び
    配列番号５５のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）と、配列番号５６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）と、配列番号５７のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片。
  6. 前記抗体又はその抗原結合断片が、
    配列番号３３のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）と、配列番号７０のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）と、配列番号７１のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域、及び
    配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）と、配列番号７２のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）と、配列番号３９のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片。
  7. 前記抗体又はその抗原結合断片が、
    配列番号２６２のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ１）と、配列番号８７のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ２）と、配列番号８８のアミノ酸配列（Ｈ－ＣＤＲ３）と、を含む、重鎖可変領域、及び
    配列番号３６のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ１）と、配列番号７２のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ２）と、配列番号８９のアミノ酸配列（Ｌ－ＣＤＲ３）と、を含む、軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片。
  8. 前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号１００、１１０、１１１、１１２、１１３、１１４、１１５、１１６、若しくは１１７のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０５、１２５、若しくは１２６のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片。
  9. 前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号１０４、１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、若しくは２２１のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０９、１２７、１２８、１２９、１３０、若しくは２２２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片。
  10. 前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号１００、１０１、１０２、１０３、若しくは１０４のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０５、１０６、１０７、１０８、若しくは１０９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１に記載の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片。
  11. 前記抗体又はその抗原結合断片が、
    ａ）配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｂ）配列番号１１０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｃ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｄ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｅ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｆ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｇ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｈ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｉ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｊ）配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｋ）配列番号１１２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｌ）配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｍ）配列番号１１４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｎ）配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｏ）配列番号１１６のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｐ）配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項８に記載の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片。
  12. 前記抗体又はその抗原結合断片が、配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ａ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｂ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｃ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｄ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｅ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｆ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｇ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｈ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｉ）配列番号１１８のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｊ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｋ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｌ）配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｍ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｎ）配列番号１２０のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｏ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｐ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｑ）配列番号１２２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｒ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｓ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１２７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｔ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｕ）配列番号１２４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｖ）配列番号２２１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号２２２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項９に記載の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片。
  13. 前記抗体又はその抗原結合断片が、
    ａ）配列番号１００のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０５のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｂ）配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｃ）配列番号１０２のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｄ）配列番号１０３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、又は
    ｅ）配列番号１０４のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、及び配列番号１０９のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１０に記載の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片。
  14. 前記抗体が、配列番号１３１、１３８、１３９、１４０、１４１、１４２、１４３、１４４、１４５、１４６、１４８、１４９、１５０、１５１、又は１５２のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７４、１８１、１８２、１８３、１８４、１８５、１８６、１８７、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、１９４、１９５、又は２１８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項８に記載の抗ＳＩＲＰα抗体。
  15. 前記抗体が、
    ａ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７４のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｂ）配列番号１３８のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１２１のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｃ）配列番号１３９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｄ）配列番号１４０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１８３のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｅ）配列番号１４１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１８４のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｆ）配列番号１４２のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１８５のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｇ）配列番号１４３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１８６のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｈ）配列番号１４４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１８７のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｉ）配列番号１４５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１８８のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｊ）配列番号１４６のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１８９のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｋ）配列番号１４７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９０のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｌ）配列番号１４８のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９１のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｍ）配列番号１４９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９２のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｎ）配列番号１５０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９３のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｏ）配列番号１５１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９４のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｐ）配列番号１５２のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９５のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｑ）配列番号２１７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２１８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１４に記載の抗ＳＩＲＰα抗体。
  16. 前記抗体が、配列番号１３５、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１５８、１５９、１６０、１６１、１６２、１６３、１６４、１６５、１６６、１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、又は２１９のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７８、１９６、１９７、１９８、１９９、２００、２０１、２０２、２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、又は２２０のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項９に記載の抗ＳＩＲＰα抗体。
  17. 前記抗体が、
    ａ）配列番号１３５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７８のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｂ）配列番号１５３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９６のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｃ）配列番号１５４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９７のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｄ）配列番号１５５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９８のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｅ）配列番号１５６のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１９９のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｆ）配列番号１５７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２００のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｇ）配列番号１５８のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２０１のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｈ）配列番号１５９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２０２のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｉ）配列番号１６０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２０３のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｊ）配列番号１６１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２０４のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｋ）配列番号１６２のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２０５のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｌ）配列番号１６３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２０６のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｍ）配列番号１６４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２０７のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｎ）配列番号１６５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２０８のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｏ）配列番号１６６のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２０９のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｐ）配列番号１６７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２１０のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｑ）配列番号１６８のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２１１のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｒ）配列番号１６９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２１２のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｓ）配列番号１７０のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２１３のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｔ）配列番号１７１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２１４のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｕ）配列番号１７２のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２１５のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｖ）配列番号１７３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２１６のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｗ）配列番号２１９のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号２２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１６に記載の抗ＳＩＲＰα抗体。
  18. 前記抗体が、配列番号１３１、１３３、１３４、１３７、又は１３５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７４、１７６、１７７、１８０、又は１７８のうちのいずれか１つのアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１０に記載の抗ＳＩＲＰα抗体。
  19. 前記抗体が、
    ａ）配列番号１３１のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７４のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｂ）配列番号１３３のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７６のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｃ）配列番号１３４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７７のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｄ）配列番号１３７のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１８０のアミノ酸配列を含む軽鎖、又は
    ｅ）配列番号１３５のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１７８のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１８に記載の抗ＳＩＲＰα抗体。
  20. 前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１に記載の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片。
  21. 前記抗体が、ヒト抗体である、請求項１に記載の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片。
  22. その抗原結合断片の前記抗体が、ＫＤ≦１０ｎＭでヒトＳＩＲＰαに結合する、請求項１に記載の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片。
  23. その抗原結合断片の前記抗体が、ＫＤ≦４００ｎＭでヒト又はカニクイザルＳＩＲＰαに結合する、請求項２２に記載の抗ＳＩＲＰα抗体又はその抗原結合断片。
  24. 医薬として使用するための、請求項１～２３のいずれか一項に記載の抗ＳＩＲＰα抗体。
  25. 請求項１～２３のいずれか一項に記載の抗体又は抗原結合断片と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。
  26. １つ以上の追加の治療薬剤を更に含む、請求項２５に記載の薬学的組成物。
  27. 前記１つ以上の追加の治療薬剤が、抗ＰＤ－１抗体、抗ＰＤ－Ｌ１抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、及び抗ＨＥＲ２抗体からなる群から選択される、請求項２６に記載の薬学的組成物。
  28. 疾患を治療する方法であって、前記方法が、請求項１～２３のいずれか一項に記載の抗体若しくは抗原結合断片、又は請求項２５～２７のいずれか一項に記載の薬学的組成物を、それを必要とする対象に投与することを含み、前記疾患が、がん、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、感染性疾患、又は線維症から選択される、方法。
  29. 疾患を治療する際に使用するためのものであり、前記疾患が、がん、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、感染性疾患、又は線維症から選択される、請求項１～２３のいずれか一項に記載の抗ＳＩＲＰα抗体若しくは抗原結合断片、又は請求項２５～２７のいずれか一項に記載の薬学的組成物。
  30. 疾患を治療するための医薬の製造におけるものであり、前記疾患が、がん、炎症性疾患、自己免疫疾患、呼吸器疾患、感染性疾患、又は線維症から選択される、請求項１～２３のいずれか一項に記載の抗ＳＩＲＰα抗体若しくは抗原結合断片、又は請求項２５～２７のいずれか一項に記載の薬学的組成物の使用。
  31. 前記疾患が、がんである、請求項２８に記載の方法、請求項２９に記載の抗ＳＩＲＰα抗体若しくは抗原結合断片、又は請求項３０に記載の抗ＳＩＲＰα抗体若しくは抗原結合断片の使用。
  32. 前記抗体又はその抗原結合断片が、非経口投与経路、静脈内投与経路、又は皮下投与経路によって投与される、請求項２８に記載の方法、請求項２９に記載の抗ＳＩＲＰα抗体若しくは抗原結合断片、又は請求項３０に記載の抗ＳＩＲＰα抗体若しくは抗原結合断片の使用。
  33. 請求項８、９、又は１０のいずれか一項に記載の重鎖可変領域アミノ及び／又は軽鎖可変領域をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
  34. 請求項１４、１６、又は１８のいずれか一項に記載の重鎖及び／又は軽鎖をコードする、単離されたポリヌクレオチド。
  35. 請求項３３又は３４に記載のポリヌクレオチドを含むベクター、好ましくは発現ベクター、より好ましくは、発現制御配列と機能的に関連する本発明のポリヌクレオチドを含むベクター。
  36. 請求項３３又は３４に記載のポリヌクレオチドを含む、宿主細胞。
  37. 前記細胞が、哺乳動物細胞である、請求項３６に記載の宿主細胞。
  38. 請求項１～２３のいずれか一項に記載の抗ＳＩＲＰα抗体若しくは抗原結合断片の産生のための方法であって、
    （ａ）前記抗ＳＩＲＰα抗体又は抗原結合断片の発現を可能にする条件下で宿主細胞を育てるステップと、
    （ｂ）前記抗ＳＩＲＰα抗体又は抗原結合断片を回収するステップと、を含む、方法。
  39. 請求項１～２３のいずれか一項に記載の抗ＳＩＲＰα抗体若しくは抗原結合断片を含む診断キット、若しくは診断方法、又はその使用。
  40. ヒト抗ＳＩＲＰα抗体又は抗原結合断片であって、ＳＩＲＰαに結合すると、前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号２６６に示されるような、アミノ酸残基ＬＥＵ６０、ＩＬＥ６１、ＶＡＬ６３、ＧＬＹ６４、ＰＲＯ６５、ＧＬＮ８２、ＬＹＳ８３、ＧＬＵ８４、ＴＨＲ９７、ＬＹＳ９８、ＡＲＧ９９、ＧＬＵ１００、ＬＹＳ１２６、ＧＬＹ１２７、ＳＥＲ１２８、ＰＲＯ１２９、及びＡＳＰ１３０、又は配列番号２６５に示されるような、ＬＥＵ６０、ＩＬＥ６１、ＶＡＬ６３、ＧＬＹ６４、ＰＲＯ６５、ＧＬＮ８２、ＬＹＳ８３、ＧＬＵ８４、ＴＨＲ９７、ＬＹＳ９８、ＡＲＧ９９、ＡＳＮ１００、ＬＹＳ１２６、ＧＬＹ１２７、ＳＥＲ１２８、ＰＲＯ１２９、及びＡＳＰ１３０に結合し、前記抗体が、ＳＩＲＰαに対する請求項１～２３のいずれか一項に記載の抗体のいずれかの結合をブロックする、ヒト抗ＳＩＲＰα抗体又は抗原結合断片。
  41. ヒト抗ＳＩＲＰα抗体又は抗原結合断片であって、ＳＩＲＰαに結合すると、前記抗体又は抗原結合断片が、配列番号２６６中のアミノ酸残基ＡＲＧ７０、ＧＬＹ７１、ＡＬＡ７２、ＧＬＹ７３、ＰＲＯ７４、ＡＬＡ７５、ＡＲＧ７６、ＧＬＵ７７、ＡＬＡ１１４、ＡＬＡ１１６、ＧＬＹ１１７、ＴＨＲ１１８、ＴＹＲ１２０、ＴＨＲ１３１、ＧＬＵ１３２、ＰＨＥ１３３、ＳＥＲ１３５、及びＧＬＵ１４０、又は配列番号２６５に示されるような、ＡＲＧ７０、ＧＬＹ７１、ＡＬＡ７２、ＧＬＹ７３、ＰＲＯ７４、ＧＬＹ７５、ＡＲＧ７６、ＧＬＵ７７、ＡＬＡ１１４、ＡＬＡ１１６、ＧＬＹ１１７、ＴＨＲ１１８、ＴＹＲ１２０、ＶＡＬ１３２、ＧＬＵ１３３、ＰＨＥ１３４、ＳＥＲ１３６、及びＧＬＵ１４１に結合し、前記抗体が、ＳＩＲＰαに対する請求項１～２３のいずれか一項に記載の抗体のいずれかの結合をブロックする、ヒト抗ＳＩＲＰα抗体又は抗原結合断片。
  42. 前記抗体が、ＣＤ４７に対する抗ＳＩＲＰα抗体の結合を少なくとも約８０％ブロックする、請求項４０又は４１に記載のヒト抗ＳＩＲＰα抗体又は抗原結合断片。
  43. 抗体を製造する方法であって、
    ａ）抗体の形成を可能にする条件下で、請求項８～１０のいずれか一項に記載の重鎖可変領域をコードする単離されたポリヌクレオチドを含み、請求項８～１０のいずれか一項に記載の軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む宿主細胞を培養するステップと、
    ｂ）前記抗体を回収するステップと、を含む、方法。
  44. 抗体を製造する方法であって、
    ａ）抗体の形成を可能にする条件下で、請求項１４、１６、又は１８に記載の重鎖をコードする単離されたポリヌクレオチド、及び請求項１４、１６、又は１８に記載の軽鎖をコードするポリヌクレオチドを含む発現ベクターを含む宿主細胞を培養するステップと、
    ｂ）前記抗体を回収するステップと、を含む、方法。
  45. 前記抗体を精製するステップを更に含む、請求項４３又は４４に記載の方法。
  46. 前記抗体を薬学的組成物へと製剤化するステップを更に含む、請求項４３又は４４に記載の方法。
JP2024018149A 2021-06-04 2024-02-08 抗ｓｉｒｐ－アルファ抗体 Pending JP2024056817A (ja)

Applications Claiming Priority (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163197259P 2021-06-04 2021-06-04
US63/197,259 2021-06-04
US202263325828P 2022-03-31 2022-03-31
US63/325,828 2022-03-31
US202263339326P 2022-05-06 2022-05-06
US63/339,326 2022-05-06
JP2022576817A JP7436711B2 (ja) 2021-06-04 2022-06-02 抗ｓｉｒｐ－アルファ抗体
PCT/IB2022/055170 WO2022254379A1 (en) 2021-06-04 2022-06-02 Anti-sirp-alpha antibodies

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022576817A Division JP7436711B2 (ja) 2021-06-04 2022-06-02 抗ｓｉｒｐ－アルファ抗体

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2024056817A true JP2024056817A (ja) 2024-04-23
JP2024056817A5 JP2024056817A5 (ja) 2024-05-21

Family

ID=82156310

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022576817A Active JP7436711B2 (ja) 2021-06-04 2022-06-02 抗ｓｉｒｐ－アルファ抗体
JP2024018149A Pending JP2024056817A (ja) 2021-06-04 2024-02-08 抗ｓｉｒｐ－アルファ抗体

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022576817A Active JP7436711B2 (ja) 2021-06-04 2022-06-02 抗ｓｉｒｐ－アルファ抗体

Country Status (15)

Country Link
US (2) US11572412B2 (ja)
EP (1) EP4347653A1 (ja)
JP (2) JP7436711B2 (ja)
KR (1) KR20240027677A (ja)
AU (1) AU2022284373A1 (ja)
BR (1) BR112023025194A2 (ja)
CA (1) CA3218692A1 (ja)
CL (1) CL2023003554A1 (ja)
CO (1) CO2023017156A2 (ja)
DO (1) DOP2023000259A (ja)
EC (1) ECSP23088844A (ja)
IL (1) IL308741A (ja)
MX (1) MX2023014389A (ja)
TW (1) TW202317620A (ja)
WO (1) WO2022254379A1 (ja)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110650976B (zh) * 2017-04-13 2024-04-19 赛罗帕私人有限公司 抗SIRPα抗体
PE20240327A1 (es) 2021-04-13 2024-02-22 Nuvalent Inc Heterociclos con sustitucion amino para tratar canceres con mutaciones de egfr
WO2024105180A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Boehringer Ingelheim International Gmbh Predictive efficacy biomarkers for anti-sirpa antibodies
WO2024200826A1 (en) 2023-03-30 2024-10-03 Ose Immunotherapeutics Lipid-based nanoparticle targeted at activated immune cells for the expression of immune cell inhibiting molecule and use thereof
WO2024200823A1 (en) 2023-03-30 2024-10-03 Ose Immunotherapeutics Lipid-based nanoparticle targeted at activated immune cells for the expression of immune cell enhancing molecule and use thereof

Family Cites Families (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
JPS6023084B2 (ja) 1979-07-11 1985-06-05 味の素株式会社 代用血液
US4640835A (en) 1981-10-30 1987-02-03 Nippon Chemiphar Company, Ltd. Plasminogen activator derivatives
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
DD266710A3 (de) 1983-06-06 1989-04-12 Ve Forschungszentrum Biotechnologie Verfahren zur biotechnischen Herstellung van alkalischer Phosphatase
US4496689A (en) 1983-12-27 1985-01-29 Miles Laboratories, Inc. Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer
EP0206448B1 (en) 1985-06-19 1990-11-14 Ajinomoto Co., Inc. Hemoglobin combined with a poly(alkylene oxide)
US4791192A (en) 1986-06-26 1988-12-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified protein with polyethyleneglycol
DE68913658T3 (de) 1988-11-11 2005-07-21 Stratagene, La Jolla Klonierung von Immunglobulin Sequenzen aus den variablen Domänen
FR2646437B1 (fr) 1989-04-28 1991-08-30 Transgene Sa Nouvelles sequences d'adn, leur application en tant que sequence codant pour un peptide signal pour la secretion de proteines matures par des levures recombinantes, cassettes d'expression, levures transformees et procede de preparation de proteines correspondant
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
WO1992022653A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
US6037454A (en) 1996-11-27 2000-03-14 Genentech, Inc. Humanized anti-CD11a antibodies
US20100215640A1 (en) 2003-04-24 2010-08-26 The University Of North Carolina At Chapel Hill Method for inhibiting cellular activation by insulin-like growth factor-1
US8613922B2 (en) 2003-04-24 2013-12-24 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods for inhibiting diabetic retinopathy with an antibody against integrin associated protein (IAP)
SI1729795T1 (sl) 2004-02-09 2016-04-29 Human Genome Sciences, Inc. Albuminski fuzijski proteini
DK1907424T3 (en) 2005-07-01 2015-11-09 Squibb & Sons Llc HUMAN MONOCLONAL ANTIBODIES TO PROGRAMMED death ligand 1 (PD-L1)
MX350501B (es) 2007-10-12 2017-09-07 Massachusetts Inst Technology Nanotecnologia de vacuna.
EP2111869A1 (en) 2008-04-23 2009-10-28 Stichting Sanquin Bloedvoorziening Compositions and methods to enhance the immune system
CN108997498A (zh) 2008-12-09 2018-12-14 霍夫曼-拉罗奇有限公司 抗-pd-l1抗体及它们用于增强t细胞功能的用途
PL2429574T3 (pl) 2009-05-15 2015-12-31 Univ Health Network Kompozycje i sposoby leczenia nowotworów hematologicznych celujące w oddziaływanie SIRP-CD47
GB201015765D0 (en) 2010-09-21 2010-10-27 Immatics Biotechnologies Gmbh Use of myeloid cell biomarkers for the diagnosis of cancer
EP2658970B1 (en) 2010-12-31 2016-09-28 Bioatla LLC Express humanization of antibodies
EP2701722A4 (en) 2011-04-28 2014-12-31 Univ Southern California CANCEROUS MARKERS OF HUMAN SUPPRESSIVE MYELOID CELLS
US20140242095A1 (en) 2011-10-19 2014-08-28 University Health Network Antibodies and antibody fragments targeting sirp-alpha and their use in treating hematologic cancers
SI2785375T1 (sl) 2011-11-28 2020-11-30 Merck Patent Gmbh Protitelesa proti PD-L1 in uporabe le-teh
EP3757130A1 (en) 2013-09-26 2020-12-30 Costim Pharmaceuticals Inc. Methods for treating hematologic cancers
SG11201607143UA (en) 2014-03-11 2016-09-29 Univ Leland Stanford Junior Anti sirp-alpha antibodies and bi-specific macrophage enhancing antibodies
SG11201808465UA (en) 2016-04-14 2018-10-30 Ose Immunotherapeutics NEW ANTI-SIRPa ANTIBODIES AND THEIR THERAPEUTIC APPLICATIONS
JOP20190009A1 (ar) 2016-09-21 2019-01-27 Alx Oncology Inc أجسام مضادة ضد بروتين ألفا منظم للإشارات وطرق استخدامها
SG10201912879YA (en) 2016-12-09 2020-02-27 Alector Llc Anti-sirp-alpha antibodies and methods of use thereof
CN110650976B (zh) 2017-04-13 2024-04-19 赛罗帕私人有限公司 抗SIRPα抗体
CN118271443A (zh) * 2017-05-16 2024-07-02 拜奥迪斯私人有限公司 抗SIRPα抗体
BR112020001653A2 (pt) 2017-07-26 2020-07-21 Forty Seven, Inc. anticorpos anti-sirp-alfa e métodos relacionados
US11713356B2 (en) 2017-10-13 2023-08-01 Ose Immunotherapeutics Modified bifunctional anti-human signal regulatory protein alpha (SIRPa) antibody and method of use thereof for treating cancer
KR20200133376A (ko) 2018-03-21 2020-11-27 알렉소 온콜로지 인크. 신호-조절 단백질 알파에 대한 항체 및 사용 방법
CR20200566A (es) * 2018-05-25 2021-02-19 Alector Llc Anticuerpos anti-sirpa y metodos de utilización de los mismos
SG11202012338QA (en) 2018-07-10 2021-01-28 Univ Kobe Nat Univ Corp ANTI-SIRPa ANTIBODY
WO2020033646A1 (en) 2018-08-08 2020-02-13 Orionis Biosciences, Inc. SIRP1α TARGETED CHIMERIC PROTEINS AND USES THEREOF
TW202028237A (zh) 2018-09-27 2020-08-01 美商西建公司 SIRPα結合蛋白及其使用方法
JP2022507295A (ja) * 2018-11-14 2022-01-18 アーチ オンコロジー，インコーポレイテッド 治療用ＳＩＲＰα抗体
EP3880707A1 (en) * 2018-11-15 2021-09-22 Byondis B.V. HUMANIZED ANTI-SIRPa ANTIBODIES
US20220235144A1 (en) 2019-03-04 2022-07-28 Qilu Puget Sound Biotherapeutics Corporation Anti-sirp-alpha antibodies
WO2021032078A1 (en) * 2019-08-20 2021-02-25 Elpiscience (Suzhou) Biopharma, Ltd. Novel anti-sirpa antibodies
CN111635458A (zh) 2020-03-20 2020-09-08 上海健信生物医药科技有限公司 靶向Sirpα的抗体或其抗原结合片段及其制备和应用
CN111995682B (zh) 2020-08-21 2022-05-10 博奥信生物技术（南京）有限公司 抗人SIRPα单克隆抗体及其用途
CN112010979B (zh) 2020-08-21 2022-05-10 博奥信生物技术（南京）有限公司 一种抗人SIRPα单克隆抗体及其用途
CN112574310B (zh) 2020-12-11 2023-05-05 浙江博锐生物制药有限公司 抗SIRPα抗体及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
WO2022254379A1 (en) 2022-12-08
TW202317620A (zh) 2023-05-01
MX2023014389A (es) 2024-03-04
US20230012273A1 (en) 2023-01-12
CO2023017156A2 (es) 2024-02-26
CA3218692A1 (en) 2022-12-08
IL308741A (en) 2024-01-01
AU2022284373A2 (en) 2024-02-08
EP4347653A1 (en) 2024-04-10
JP2023530116A (ja) 2023-07-13
CL2023003554A1 (es) 2024-06-28
KR20240027677A (ko) 2024-03-04
ECSP23088844A (es) 2023-12-29
BR112023025194A2 (pt) 2024-02-27
AU2022284373A1 (en) 2024-01-04
DOP2023000259A (es) 2024-04-30
JP7436711B2 (ja) 2024-02-22
US20230203188A1 (en) 2023-06-29
US11572412B2 (en) 2023-02-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6585801B2 (ja) がんの処置のための抗ｐｄ１抗体及び抗ｌａｇ３抗体
US11332541B2 (en) Multi-specific binding proteins for cancer treatment
JP7436711B2 (ja) 抗ｓｉｒｐ－アルファ抗体
US11312785B2 (en) Antagonizing CD73 antibody
TWI790219B (zh) 用於治療癌症之結合分子
JP2021048858A (ja) 抗−ｃｄ４７抗体及びその使用
US20220017612A1 (en) Anti-lap antibody variants and uses thereof
JP2019534008A (ja) Ｐｄ−１に対する抗体及びその使用
AU2017209099A1 (en) Anti-ROR1 antibodies, ROR1 x CD3 bispecific antibodies, and methods of using the same
KR20200139725A (ko) Her3 항원 결합 분자
AU2020269268A1 (en) CD123-binding polypeptides and uses thereof
JP2021503280A (ja) 免疫グロブリン様転写産物３（ｉｌｔ３）に特異的な抗体およびその使用
JP2022505925A (ja) 抗ｔｉｍ－３抗体
CN116648463A (zh) Cd47-cd38双特异性抗体
TW202340243A (zh) 抗ｃｄ３９抗體及其用途
TW202317625A (zh) 新穎三特異性結合分子
CN115368458A (zh) 抗cd73抗体及其应用
CN114641500A (zh) 使用抗ox40抗体与抗tim3抗体的组合治疗癌症的方法
CN117881699A (zh) 抗SIRPα抗体
WO2024102980A1 (en) Anti-alpha5 integrin antibodies and uses thereof
JP2022174194A (ja) がんの処置のための抗ｔｎｆ関連アポトーシス誘発リガンド受容体２及び抗カドヘリン１７結合性二重特異的分子

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20240314

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20240513