TWI790219B - 用於治療癌症之結合分子 - Google Patents
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Abstract
本發明係關於特異性結合至TNF相關細胞凋亡誘導配體受體2 (TNF-related apoptosis-inducing ligand receptor 2；TRAILR2)及鈣黏蛋白-17 (cadherin-17；CDH17)之結合分子及其於藥劑中之用途、包含該等結合分子之醫藥組合物及使用該等結合分子作為藥劑來治療及/或預防癌症之方法。
Description
本發明係關於結合至TNF相關細胞凋亡誘導配體受體2 (TRAILR2)及鈣黏蛋白-17 (CDH17)之結合分子及其於藥劑中之用途、含有該等結合分子之醫藥組合物及使用該等結合分子作為藥劑來治療及/或預防癌症之方法。
癌症係一類通常基於異常細胞增殖及癌細胞在全身侵入或擴散之潛能之疾病，其係一種嚴重疾病且係全球死亡之主要原因。 業內已使用多種治療方法嘗試管控或在一些情形下治療癌症，包括手術、化學療法、放射療法及激素療法。儘管近年來某些癌症之治療已取得進展，但業內仍需要改良此疾病之治療。 基於抗體之生物分子提供作為強治療劑治療癌症之潛能。抗體經設計以識別並結合至細胞表面上之特定蛋白質(其靶抗原)，且該等蛋白質可僅存在於特定癌細胞之表面上或免疫細胞上。此結合可引起多種不同之生物反應，此端視其靶抗原蛋白之功能亦及抗體自身之結構而定。 舉例而言，一些抗體藉由將免疫細胞吸引至癌細胞或藉由直接影響免疫系統自身之活性來觸發免疫系統以攻擊並殺死癌細胞。另一類型之基於抗體之療法結合至癌細胞以終止或減少細胞分裂，由此減緩或防止異常細胞增殖。其他類型之抗體具有與其附接之藥物或放射性粒子且因此將該等治療劑遞送至癌細胞自身。 細胞凋亡係受控性的細胞機制，其中生物體會維持正常組織隔室中之細胞穩態且消除患病細胞。 在哺乳動物細胞中存在兩條引起細胞凋亡之主要信號傳導路徑：內在路徑及外在路徑。內在路徑係在粒線體層級上起始且在化學療法或輻射誘導之細胞死亡中起實質作用。相反，外在死亡路徑係經由細胞表面上之死亡受體介導之信號起始。 業內已廣泛研究在由腫瘤壞死因子(TNF)受體超家族之多個成員介導之信號後經由外在路徑誘導之細胞死亡。TNF超家族之特徵在於2至5個富含半胱胺酸之細胞外重複之序列。屬TNF超家族之死亡受體共享約80個胺基酸之同源細胞內死亡結構域，其為細胞凋亡信號轉導所必需。 TNF相關細胞凋亡誘導配體(TRAIL)係天然蛋白配體，其與兩種類型之受體相互作用：觸發TRAIL誘導之細胞凋亡之死亡受體及抑制TRAIL誘導之細胞凋亡之誘餌受體。迄今為止，已鑑別出四種針對TRAIL具有特異性之人類受體：死亡受體DR4 (DR4/TRAIL受體1/TRAILR1)及DR5 (TRAIL受體2/TRAIL-R2/KILLER)及誘餌受體DcR1/ TRAILR3/TRID及DcR2/TRAILR4。TRAIL亦可以低親和力結合至骨保護素(OPG)，其係一種可溶性誘餌受體。 靶向TRAIL受體已視為可用於研發癌症療法之方法，此乃因若基於抗體之分子可結合且活化TRAIL受體(即TRAIL受體激動劑分子)，則其可誘導癌細胞之細胞凋亡。如許多臨床前研究中所顯示，TRAIL信號傳導有效地誘導多個腫瘤細胞系之細胞凋亡，而不誘導大部分正常細胞之細胞凋亡。然而，亦報導正常組織、尤其肝中之肝細胞對此細胞凋亡誘導機制較為敏感。因此，若使用過於有效地活化該路徑之分子，則可因亦誘導非癌細胞之細胞凋亡而引起嚴重副作用。另一方面，若僅使用弱活化分子，則已顯示該等分子具有較差抗癌活性，儘管其耐受良好。 因此，業內需要研發出可起TRAIL受體激動劑分子作用之治療有效且安全之基於抗體之生物分子。因此，本發明之目標係生成具有經改良治療概況之TRAIL受體激動劑分子。
本發明係基於在單一結合分子內組合特異性結合至TNF相關細胞凋亡誘導配體受體2 (TRAILR2)之抗原結合位點與特異性結合至鈣黏蛋白-17 (CDH17)之抗原結合位點的概念。如下文更詳細論述，本發明分子之一個優點在於僅有助於表面上存在TRAILR2及CDH17之細胞之細胞凋亡。 因此，本發明之第一態樣提供結合分子，其具有至少一個特異性結合至TNF相關細胞凋亡誘導配體受體2 (TRAILR2)之抗原結合位點(第一抗原結合位點)及至少一個特異性結合至鈣黏蛋白-17 (CDH17)之抗原結合位點(第二抗原結合位點)。 在本發明結合分子之較佳實施例中，分子為雙特異性及四價。 在本發明結合分子之較佳實施例中，特異性結合至鈣黏蛋白-17 (CDH17)之抗原結合位點係免疫球蛋白(Ig)分子(具有兩條輕鏈及兩條重鏈之全長抗體之習用Y形結構)，且特異性結合至TNF相關細胞凋亡誘導配體受體2 (TRAILR2)之抗原結合位點包含一或多個scFv。 在本發明結合分子之較佳實施例中，一或多個scFv自N末端至C末端具有VL-VH定向。 在本發明結合分子之較佳實施例中，一或多個scFv融合至Ig分子之重鏈之C末端。 在本發明結合分子之較佳實施例中，Ig分子係IgG1KO。在本發明結合分子之另一較佳實施例中，Ig分子係IgG1FcRnmut。 在本發明結合分子之較佳實施例中，一或多個scFv藉由肽連接體、較佳長度為約4至20個胺基酸(例如6個、9個、12個、15個胺基酸中之任一者)之肽連接體融合至Ig分子。 在本發明結合分子之較佳實施例中，特異性結合至TRAILR2之抗原結合位點(第一抗原結合位點)選自由抗原結合位點(i)至(xiii)組成之群： i) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:1 (CDR1)、SEQ ID NO.:2 (CDR2)及SEQ ID NO.:3 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈互補決定區(CDR)及包括SEQ ID NO.:4 (CDR1)、SEQ ID NO.:5 (CDR2)及SEQ ID NO.:6 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR； ii) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:7 (CDR1)、SEQ ID NO.:8 (CDR2)及SEQ ID NO.:9 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:10 (CDR1)、SEQ ID NO.:11 (CDR2)及SEQ ID NO.:12 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR； iii) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:13 (CDR1)、SEQ ID NO.:14 (CDR2)及SEQ ID NO.:15 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:16 (CDR1)、SEQ ID NO.:17 (CDR2)及SEQ ID NO.:18 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR； iv) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:19 (CDR1)、SEQ ID NO.:20 (CDR2)及SEQ ID NO.:21 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:22 (CDR1)、SEQ ID NO.:23 (CDR2)及SEQ ID NO.:24 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR； v) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:25 (CDR1)、SEQ ID NO.:26 (CDR2)及SEQ ID NO.:27 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:28 (CDR1)、SEQ ID NO.:29 (CDR2)及SEQ ID NO.:30 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR； vi) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:31 (CDR1)、SEQ ID NO.:32 (CDR2)及SEQ ID NO.:33 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:34 (CDR1)、SEQ ID NO.:35 (CDR2)及SEQ ID NO.:36 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR； vii) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:37 (CDR1)、SEQ ID NO.:38 (CDR2)及SEQ ID NO.:39 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:40 (CDR1)、SEQ ID NO.:41 (CDR2)及SEQ ID NO.:42 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR； viii) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:44 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:50 (CDR2)及SEQ ID NO.:54 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR； ix) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:45 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:51 (CDR2)及SEQ ID NO.:55 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR； x) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:45 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:52 (CDR2)及SEQ ID NO.:56 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR； xi) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:45 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:50 (CDR2)及SEQ ID NO.:56 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR； xii) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:46 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:51 (CDR2)及SEQ ID NO.:57 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR；及 xiii) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:47 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:53 (CDR2)及SEQ ID NO.:57 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。 在本發明結合分子之較佳實施例中，特異性結合至TRAILR2之抗原結合位點(第一抗原結合位點)選自由抗原結合位點(i)至(xiv)組成之群： i) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:82之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:83之胺基酸序列的輕鏈可變結構域； ii) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:84之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:85之胺基酸序列的輕鏈可變結構域； iii) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:86之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:87之胺基酸序列的輕鏈可變結構域； iv) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:88之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:89之胺基酸序列的輕鏈可變結構域； v) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:90之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:91之胺基酸序列的輕鏈可變結構域； vi) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:92之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:93之胺基酸序列的輕鏈可變結構域； vii) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:94之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:95之胺基酸序列的輕鏈可變結構域； viii) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:96之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:97之胺基酸序列的輕鏈可變結構域； ix) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:98之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:99之胺基酸序列的輕鏈可變結構域； x) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:100之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:101之胺基酸序列的輕鏈可變結構域； xi) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:102之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:103之胺基酸序列的輕鏈可變結構域； xii) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:104之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:105之胺基酸序列的輕鏈可變結構域； xiii) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:106之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:107之胺基酸序列的輕鏈可變結構域；及 xiv) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:108之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:109之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。 在本發明結合分子之較佳實施例中，特異性結合至CDH17之抗原結合位點(第二抗原結合位點)選自由抗原結合位點(i)至(iv)組成之群： i) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:58 (CDR1)、SEQ ID NO.:59 (CDR2)及SEQ ID NO.:60 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:61 (CDR1)、SEQ ID NO.:62 (CDR2)及SEQ ID NO.:63 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR； ii) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:64 (CDR1)、SEQ ID NO.:65 (CDR2)及SEQ ID NO.:66 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:67 (CDR1)、SEQ ID NO.:68 (CDR2)及SEQ ID NO.:69 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR； iii) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:70 (CDR1)、SEQ ID NO.:71 (CDR2)及SEQ ID NO.:72 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:73 (CDR1)、SEQ ID NO.:74 (CDR2)及SEQ ID NO.:75 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR；及 iv) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:76 (CDR1)、SEQ ID NO.:77 (CDR2)及SEQ ID NO.:78 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:79 (CDR1)、SEQ ID NO.:80 (CDR2)及SEQ ID NO.:81 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。 在本發明結合分子之較佳實施例中，特異性結合至CDH17之抗原結合位點(第二抗原結合位點)選自由抗原結合位點(i)至(v)組成之群： i) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:110之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:111之胺基酸序列的輕鏈可變結構域； ii) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:112之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:113之胺基酸序列的輕鏈可變結構域； iii) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:114之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:115之胺基酸序列的輕鏈可變結構域； iv) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:116之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:117之胺基酸序列的輕鏈可變結構域；及 v) 抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.:118之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:119之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。 在一些實施例中，在本發明結合分子之背景下使用SEQ ID NO.:272之重鏈CDR3序列替代SEQ ID NO.:78之重鏈CDR3序列。 本發明之另一態樣提供具有以下序列之結合分子：(i) 包含SEQ ID NO.:159之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:160之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:161之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:162之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:163之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:164之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.: 165之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:166之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:167之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:168之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:169之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:170之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:171之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:172之胺基酸序列之重鏈，及(ii) 包含SEQ ID NO.:173之胺基酸序列之輕鏈。 本發明之另一態樣提供具有以下序列之結合分子：(i) 包含SEQ ID NO.:174之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:175之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:176之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:177之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:178之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:179之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.: 180之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:181之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:182之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:183之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:184之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:185之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:186之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:187之胺基酸序列之重鏈，及(ii) 包含SEQ ID NO.:188之胺基酸序列之輕鏈。 在另一態樣中，本文提供具有以下序列之結合分子：(i) 包含SEQ ID NO.:189之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:190之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:191之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:192之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:193之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:194之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.: 195之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:196之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:197之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:198之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:199之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:200之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:201之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:202之胺基酸序列之重鏈，及(ii) 包含SEQ ID NO.:203之胺基酸序列之輕鏈。 本發明之另一態樣提供具有以下序列之結合分子：(i) 包含SEQ ID NO.:204之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:205之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:206之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:207之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:208之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:209之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:210之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:211之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:212之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:213之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:214之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:215之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:216之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:217之胺基酸序列之重鏈；或包含SEQ ID NO.:271之胺基酸序列之重鏈，及(ii) 包含SEQ ID NO.:218之胺基酸序列之輕鏈。 在另一態樣中，本文提供具有以下序列之結合分子：(i) 包含SEQ ID NO.:145之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:147之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:149之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:151之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:153之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:155之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:157之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:219之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:220之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:221之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:222之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:223之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:224之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:225之胺基酸序列之重鏈；或包含SEQ ID NO.:226之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:227之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:228之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:229之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:230之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:231之胺基酸序列之重鏈、或包含SEQ ID NO.:232之胺基酸序列之重鏈，及(ii) 包含SEQ ID NO.:233之胺基酸序列之輕鏈。 本發明之另一態樣提供編碼本發明結合分子之核酸分子或含有此一核酸分子之表現載體。 本發明之另一態樣提供宿主細胞，其包含與表現控制序列功能相關之本發明核酸分子。本文進一步提供宿主細胞，其包含包括編碼如本文所述結合分子之核酸分子之表現載體。 本發明之另一態樣提供產生本發明結合分子之方法，其包含 (a) 在容許分子表現之條件下培養本發明之宿主細胞；及 (b) 回收該分子。 本發明之另一態樣提供本發明之結合分子，其用於藥劑中。 本發明之另一態樣提供本發明之結合分子，其用於癌症、較佳結腸直腸癌(CRC)、胃癌(GC)、胰臟癌(PAC)、食道癌或神經內分泌腫瘤之療法中。 本發明之另一態樣提供醫藥組合物，其包含本發明之結合分子以及醫藥上可接受之載劑及視情況一或多種其他活性成分。 本發明之另一態樣提供治療癌症之方法，其包含向有需要之患者投與有效量之本發明結合分子。 本文進一步提供特異性結合至CDH17之抗體，其包含(i) 包括SEQ ID NO.:58 (CDR1)、SEQ ID NO.:59 (CDR2)及SEQ ID NO.:60 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:61 (CDR1)、SEQ ID NO.:62 (CDR2)及SEQ ID NO.:63 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，(ii) 包括SEQ ID NO.:64 (CDR1)、SEQ ID NO.:65 (CDR2)及SEQ ID NO.:66 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:67 (CDR1)、SEQ ID NO.:68 (CDR2)及SEQ ID NO.:69 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，(iii) 包括SEQ ID NO.:70 (CDR1)、SEQ ID NO.:71 (CDR2)及SEQ ID NO.:72 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:73 (CDR1)、SEQ ID NO.:74 (CDR2)及SEQ ID NO.:75 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，或(iv) 包括SEQ ID NO.:76 (CDR1)、SEQ ID NO.:77 (CDR2)及SEQ ID NO.:78 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:79 (CDR1)、SEQ ID NO.:80 (CDR2)及SEQ ID NO.:81 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。
如上文所述，一種治療癌症之方法已藉由使用特異性結合且活化TNF相關細胞凋亡誘導配體(TRAIL)受體介導之細胞凋亡路徑之分子來誘導癌細胞之細胞凋亡。如許多臨床前研究中所顯示，TRAIL信號傳導有效地誘導多個腫瘤細胞系之細胞凋亡，而不誘導大部分正常細胞之細胞凋亡。然而，亦報導正常組織、尤其肝中之肝細胞對此細胞凋亡誘導機制較為敏感。 TRAIL以高親和力結合至四種不同的細胞表面受體。其中之兩者TRAILR1及TRAILR2能夠經由其細胞內死亡結構域與不同轉接蛋白及半胱天冬酶8酶原之相互作用觸發TRAIL誘導之細胞凋亡。TRAIL配體對TRAILR1或TRAILR2分子之分群有助於半胱天冬酶8酶原之自催化裂解及活化，此進而誘導細胞凋亡。TRAILR3及TRAILR4係誘餌受體，且儘管其細胞外結構域能夠結合TRAIL，但該等受體之細胞內部分不含能夠在TRAIL結合時誘導細胞凋亡之結構域。 誘餌TRAIL受體之過表現可使癌細胞對TRAIL配體之存在不敏感。特異性靶向非誘餌死亡誘導TRAIL受體避免了此問題且其代表腫瘤之一種更有效治療。本發明致力於研發出TRAILR2激動劑分子。TRAILR2廣泛性地表現於普遍性癌症中。 已研發出若干TRAILR2特異性激動抗體(包括來沙木單抗(Lexatumumab) (HGS-ETR2))來治療癌症。然而，該等激動抗體缺乏臨床效能。此可能歸因於缺乏TRAILR2受體之充分分群且因此無法有效地誘導癌細胞之細胞凋亡。 在促進TRAILR2介導之癌細胞之細胞凋亡之不同嘗試中，已研發出新穎四聚體TRAILR2結合奈米抗體TAS266。在臨床前實驗中，其展示優於習用TRAILR2靶向抗體之抗腫瘤效能。然而，已報導，肝中之肝細胞可能對TRAILR2介導之細胞凋亡敏感且因此如TAS266所促進之TRAILR2分群之非靶向增加具有潛在毒性之風險。實際上，TAS266之I期臨床試驗已終止。 因此，若使用過於有效地激動路徑之分子，則可因誘導非癌細胞之細胞凋亡而引起嚴重副作用。另一方面，若僅使用弱激動分子，則已顯示該等分子具有較差抗癌活性，儘管其耐受良好。 在過去，已嘗試設計由TRAIL受體結合位點及結合癌細胞特異性細胞表面分子(稱為「錨靶」)之位點組成之雙特異性分子。理論上，該等雙特異性分子唯一地結合至表現錨靶之癌細胞且誘導通過其TRAIL受體結合位點之細胞凋亡。 已提出多種不同錨靶作為TRAIL受體結合分子之適宜組合伴侶。 舉例而言，在WO2011039126A1中建議CEA (CEAM5_人類)及CRIPTO作為適宜錨靶。CEA及CRIPTO藉由GPI錨連接至細胞膜。然而，CEA及CRIPTO皆容易自細胞表面裂解且自腫瘤脫落至血流中。實際上，使用CEA血清含量作為癌症篩選之生物標記物。如可瞭解，血清CEA及CRIPTO可結合至具有TRAIL受體及該等錨靶之雙重結合之雙特異性分子。因此，血清CEA及CRIPTO不僅將與膜結合錨蛋白競爭，且亦可增加TRAIL受體在不表現CEA或CRIPTO之細胞中活化之可能性並因此可引起不期望副作用。 亦已提出FAP (纖維母細胞活化蛋白)作為錨靶。然而，FAP僅在位於腫瘤間質內之活化纖維母細胞上表現。FAP並不在上皮癌細胞中表現。因此，FAP雙特異性分子將僅起到促進彼等與活化纖維母細胞緊密物理接觸之癌細胞之細胞凋亡作用(Brünker等人，Molecular Cancer Therapeutics (2016), 15(5):946-957)。不與活化纖維母細胞直接接觸之腫瘤細胞將不受此治療之影響且將繼續增殖。因此，使用FAP作為錨靶來調介TRAIL受體誘導之癌細胞之細胞凋亡具有明顯缺點。另外，由於在組織重塑(包括肝纖維化、肺纖維化、全身性動脈粥樣硬化及關節炎)之位點中亦發現活化纖維母細胞，故靶向FAP及TRAIL受體之雙特異性分子可潛在地錨定至活化纖維母細胞之表面上且誘導肝或其他器官中之鄰近正常TRAIL敏感細胞之細胞凋亡。 類似地，已提出MCSP (黑色素瘤相關硫酸軟骨素蛋白多醣)及ROBO4 (迴旋同系物4)作為錨靶(He Yuan等人，The Journal of Investigative Dermatology (2016), 136(2):541-544；WO2011039126A1)。MCSP除在黑色素瘤之細胞表面上表現外，其主要在新血管系統上表現。ROBO4在內皮細胞中特異性表現。二者闡述於不同腫瘤類型之血管生成位點處。因此，與FAP一樣且僅除MSCP表現黑色素瘤以外有效，靶向MCSP或ROBO4及TRAIL受體之雙特異性分子將僅在癌細胞與內皮細胞緊密物理接觸時起到促進癌細胞之細胞凋亡作用。並非總是如此，此乃因隨著腫瘤生長，其快速增長超過其血液供應。因此，使用該等分子作為錨靶亦具有缺點。 此外，已報導在鼠類腫瘤異種移植物模型中，靶向TRAILR2及LTβR (淋巴毒素-β受體)之雙特異性抗體在抑制腫瘤生長方面有活性，其程度等於或大於各別親代抗體之組合(Michaelson等人，mAbs (2009), 1(2):128-141)。已顯示小鼠中之LTβR信號傳導對肝再生至關重要，其中LTβR在成熟肝細胞上表現(Anders R.A.等人，J Immunol (2005), 175(2):1295-1300)。與FAP相似，LTβR信號傳導在病毒性及非病毒性肝炎、膽管炎及HCC患者之慢性肝發炎期間廣泛活化。具體而言，已闡述其在肝細胞中之表現(Haybaeck J.等人，Cancer Cell (2009), 16(4): 295-308)。靶向LTβR及TRAIL受體可潛在地錨定至對TRAILR2活化敏感之LTβR表現肝細胞之表面上，且因此可潛在地引起肝毒性。 最後，亦已建議生腱蛋白C作為有用的錨靶。生腱蛋白C係分泌性蛋白且因此不會錨定至細胞膜。此代表誘導癌細胞之細胞凋亡之間接機制的另一實例。與MCSP或ROBO4錨定策略一樣，生腱蛋白C部分必須正確定向至癌細胞膜上之TRAILR2分子以實現細胞凋亡。另外，生腱蛋白C表現亦在慢性肝病中上調且預期使用包含TRAIL激動劑之雙特異性分子治療會加重病況。 因此，目前問題係在治療上特異性調節癌細胞中TRAIL受體介導之細胞凋亡路徑。 因此，本發明者決定鑑別出不大量存在於血清中且位於共表現TRAILR2之癌細胞中之錨蛋白。重要的是，本發明者決心選擇因上文所述之潛在肝毒性而不在肝中表現之錨蛋白。 本發明者將鈣黏蛋白-17鑑別為潛在適宜之錨靶，其可與TRAIL受體結合分子組合使用。 鈣黏蛋白-17 (CDH17)係鈣黏蛋白超家族之成員，即編碼鈣依賴性膜相關醣蛋白之基因。經編碼蛋白質係類鈣黏蛋白，由含有7個鈣黏蛋白結構域之細胞外區域及跨膜區組成，但缺少在鈣黏蛋白超家族之其他成員中保守之細胞質結構域。 本發明者分析CDH17在非腫瘤組織中之表現。IHC研究揭露小腸及結腸之黏膜上皮中之CDH17之均勻上皮染色。在膽囊、胃及胰內管上皮中亦檢測到均勻上皮染色。 迄今為止尚未公開代表性研究揭露腫瘤中TRAILR2及CDH17之共表現。在CRC中一致地顯示CDH17表現(88%-100%)以及TRAILR2表現(87%-100%)之高盛行率。在GC中，CDH17亦展示於56%-90%之所有病例中，且與擴散型相比在腸型中具有顯著較高之頻率，而TRAILR2已顯示在原發性及轉移性胃癌中大量組成性表現。在PAC中，CDH17表現可顯示於50%-82%之所有病例中且TRAILR2可顯示於81%之所有病例中(Gallmeier等人，PLoS One. 2013;8(2):e56760；Ito等人，Virchows Arch. 2005年10月;447(4):717-22；Koornstra等人，Eur J Cancer. 2005年5月;41(8):1195-202；Koyama等人，J Cancer Res Clin Oncol.
2002年2月;128(2):73-9；Luque-Garcia等人，Proteomics. 2010年3月;10(5):940-52；Panarelli等人，Am J Clin Pathol. 2012年8月;138(2):211-22；Su等人，Mod Pathol. 2008年11月;21(11):1379-86；Takamura等人，Cancer Sci. 2003年5月;94(5):425-30；van Geelen等人，J Clin Oncol. 2006年11月1日;24(31):4998-5004。)。 因此，本發明者實施此研究且顯示TRAILR2及CDH17在多種腫瘤(即結腸直腸癌(CRC)、胃癌(GC)及胰臟癌(PAC))中共表現，且在非癌細胞中極少或無共表現。應注意，在具有所報導對TRAILR2活化之敏感性之正常肝組織或肝細胞中無法檢測到CDH17。 重要的是指出在本發明之前尚未揭示或甚至從未設想製備靶向該兩種抗原之結合分子。 因此，本發明者製備結合分子，其包括至少一個特異性結合至TRAILR2之抗原結合位點及至少一個特異性結合至CDH17之抗原結合位點。 在隨附實驗數據中，可見該等分子能夠以本發明分子之治療上可接受之量誘導表現CDH17及TRAILR2二者之細胞之活體外細胞凋亡。重要的是，如實例中所顯示，相同分子基本上不誘導表現TRAILR2而不表現CDH17之細胞之細胞凋亡。因此，本發明結合分子可有效地治療其中癌細胞表現CDH17及TRAILR2二者之癌症。在一態樣中，本發明結合分子並不侵襲CDH17陰性肝細胞，藉此降低肝毒性之風險。此外，顯示本發明結合分子(例如具有以下各鏈之結合分子：(i) 包含針對CDH17具有特異性之重鏈可變區、恆定IgG結構域及異性針對TRAILR2具有特異性之scFv之兩條重鏈，及(ii) 包含針對CDH17具有特異性之輕鏈可變區之兩條輕鏈)穩定且單體含量高於95%，此進一步支持其治療適用性。 因此，本發明之CDH17/TRAILR2結合分子具有明顯優於彼等業內已知分子之優點且提供治療癌症(包括結腸直腸癌(CRC)、胃癌(GC)及胰臟癌(PAC))之效用。 此外，CDH17加強TRAIL受體結合分子對TRAILR2之激動效應之能力並非所有細胞表面蛋白所共有。此係自本發明者研究CD44v6是否亦可為適宜錨靶時獲知。CD44v6係普遍表現之表面醣蛋白CD44之剪接變體，且已知CD44v6係腫瘤相關抗原並具有在腫瘤中優先於正常組織之表現模式。然而，如隨附實例中所顯示，CD44v6並不起錨蛋白作用，此乃因其並不加強TRAIL受體結合分子之激動效應。因此，CDH17作為錨靶之效用無法簡單地基於該蛋白之表現概況來預測。 本發明之第一態樣提供結合分子，其具有至少一個特異性結合至TNF相關細胞凋亡誘導配體受體2 (TRAILR2)之抗原結合位點(第一抗原結合位點)及至少一個特異性結合至鈣黏蛋白-17 (CDH17)之抗原結合位點(第二抗原結合位點)。 如上文所述，在本發明之前尚未揭示或甚至從未設想製備可特異性結合至TRAILR2及CDH17之結合分子。無論如何，每一蛋白質及其相關基因個別地為業內已知且充分表示於生物數據庫中。 為免生疑問，「TNF相關細胞凋亡誘導配體受體2 (TRAILR2)」意指UniProt O14763http://www.uniprot.org/uniprot/O14763
中所提供之人類蛋白及編碼該蛋白之核酸序列。 為免生疑問，「鈣黏蛋白-17 (CDH17)」意指UniProt Q12864http://www.uniprot.org/uniprot/Q12864
中所提供之人類蛋白及編碼該蛋白之核酸序列。 本發明係關於對至少兩個不同靶具有結合特異性之結合分子。關於本發明，結合分子衍生自抗體。製備結合分子之技術包括(但不限於)重組共表現兩個具有不同特異性之免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(參見Milstein及Cuello, Nature 305: 537 (1983))、WO 93/08829及Traunecker等人，EMBO J. 10: 3655 (1991))及「隆凸於孔洞中(knob-in-hole)」改造(例如，參見美國專利第5,731,168號)。亦可藉由以下方式來製備結合分子：改造用於製備抗體Fc-異源二聚分子之靜電牽引效應(WO 2009/089004A1)；使兩個或更多個抗體或片段交聯(例如，參見美國專利第4,676,980號及Brennan等人，Science 229: 81 (1985))；使用白胺酸拉鍊產生雙特異性抗體(例如，參見Kostelny等人，Immunol., 148(5): 1547-1553 (1992))；使用用於製備雙特異性抗體片段之「雙價抗體」技術(例如，參見Hollinger等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993))；及使用單鏈Fv (sFv)二聚體(例如，參見Gruber等人，/. Immunol. 152:5368 (1994))；及製備三特異性抗體，如例如Tutt等人，Immunol. 147: 60 (1991)中所述。 應給予本文未明確定義之術語熟習此項技術者根據本發明及上下文將給予之含義。然而，如本說明書中所用，除非指定相反含義，否則以下術語具有所指示含義且以下慣例依附於此。 如本文所用之術語「抗原結合位點」包含衍生自抗體之重鏈可變結構域(VH
)及輕鏈可變結構域(VL
)。在該情形下，每一可變結構域包含3個CDR。在一態樣中，本發明之抗原結合位點或該蛋白之某些部分通常衍生自抗體。抗體或免疫球蛋白分子之廣義結構為熟習此項技術者所熟知。 「抗體」或「免疫球蛋白分子」(亦稱為免疫球蛋白，縮寫為Ig)係可在脊椎動物之血液或其他體液中發現、且免疫系統用於鑑別及中和外物(例如細菌及病毒)之γ球蛋白。其通常係由基礎結構單元構成，該等基礎結構單元各自具有兩條大重鏈及兩條小輕鏈，以形成例如具有一個單元之單體、具有兩個單元之二聚體或具有五個單元之五聚體。抗體可藉由非共價相互作用結合至稱為抗原之其他分子或結構。此結合具有特異性意指抗體將僅結合至特定結構且具有高親和力。由抗體識別之抗原之獨特部分稱為表位或抗原性決定子。抗體與表位結合之部分有時稱為互補位且駐留於抗體之所謂的可變結構域或可變區(Fv)中。可變結構域包含三個由框架區(FR)間隔開之所謂的互補決定區(CDR)。 在本發明上下文中，提及CDR係基於CCG (亦稱為IMGT)之定義(Lefranc MP、Pommié C、Ruiz M、Giudicelli V、Foulquier E、Truong L、Thouvenin-Contet V、Lefranc G. 「IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains.」 Dev Comp Immunol. 2003年1月;27(1):55-77；Giudicelli V、Brochet X、Lefranc MP. 「IMGT/V-QUEST: IMGT standardized analysis of the immunoglobulin (IG) and T cell receptor (TR) nucleotide sequences」. Cold Spring Harb Protoc. 2011;2011(6):695-715。CDR之另一定義係基於Chothia (Chothia及Lesk, J. Mol. Biol. 1987, 196: 901-917)以及Kabat (E.A. Kabat、T.T. Wu、H. Bilofsky、M. Reid-Miller及H. Perry, Sequence of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda (1983))。 如本文所用之表述「可變結構域」或「可變區」或Fv表示直接參與抗體與抗原結合之輕鏈及重鏈對中之每一者。輕鏈可變結構域縮寫為「VL」且重鏈可變結構域縮寫為「VH」。輕鏈及重鏈可變結構域具有相同的一般結構，且每一結構域包含藉由三個HVR (或CDR)連接之序列高度保守之四個框架區(FR)。框架區採用β-摺疊構形，且CDR可形成連接β-摺疊結構之環。每一鏈中之CDR藉由框架區保持其三維結構並與另一鏈之CDR一起形成抗原結合位點。抗體之重鏈及輕鏈CDR3區在本發明抗體之結合特異性/親和力方面起尤其重要之作用，且因此提供本發明之另一目標。如當前申請案內所用之術語「恆定結構域」或「恆定區」表示抗體中除可變區以外之結構域之和。該等恆定結構域及區域為業內所熟知且由例如Kabat等人予以闡述(「Sequence of proteins of immunological interest」, US Public Health Services, NIH Bethesda, MD，公開案第91號)。 抗體之「Fc部分」並不直接參與抗體與抗原之結合，但展現多種效應物功能。「抗體之Fc部分」係熟習此項技術者所熟知且基於抗體之木瓜蛋白酶裂解定義之術語。端視抗體或免疫球蛋白之重鏈恆定區之胺基酸序列，其分成以下類別：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM。根據重鏈恆定區，不同類別之免疫球蛋白分別稱為α、δ、ε、γ及μ。該等類別中之若干可進一步分成多個子類(同型)，例如IgG1、IgG2、IgG3及IgG4、IgA1及IgA2。抗體之Fc部分基於補體活化、C1q結合及Fc受體結合直接參與ADCC (抗體依賴性細胞介導之細胞毒性)及CDC (補體依賴性細胞毒性)。補體活化(CDC)係藉由補體因子C1q與大多數IgG抗體子類之Fc部分結合來起始。儘管抗體對補體系統之影響取決於某些條件，但與C1q之結合係由Fc部分中之經定義結合位點來引起。該等結合位點為業內已知且闡述於例如Boakle等人，Nature 282 (1975) 742-743；Lukas等人，J. Immunol. 127 (1981) 2555-2560；Brunhouse及Cebra, Mol. Immunol. 16 (1979) 907-917；Burton等人，Nature 288 (1980) 338-344；Thommesen等人，Mol. Immunol. 37 (2000) 995-1004；Idusogie等人，J. Immunol.164 (2000) 4178-4184；Hezareh等人，J. Virology 75 (2001) 12161-12168；Morgan等人，Immunology 86 (1995) 319-324；EP 0307434。該等結合位點係例如L234、L235、D270、N297、E318、K320、K322、P331及P329 (根據Kabat之EU索引編號，參見下文)。該等殘基中調介IgG1中之C1q及Fcγ受體結合之最關鍵殘基係L234及L235 (Hezareh等人，J. Virology 75 (2001) 12161-12168)。子類IgG1及IgG3之抗體通常顯示補體活化以及C1q及C3結合，而IgG2及IgG4並不活化補體系統且不結合C1q及C3。 業內已進一步研發出多種抗體且使其成為醫學及技術中之通用工具。因此，在本發明上下文中，術語「抗體分子」或「抗體」(在本文中以同義使用)不僅包括如可在自然界中發現之包含例如兩條輕鏈及兩條重鏈或僅兩條重鏈(如在駱駝科物種中)之抗體，且另外涵蓋包含至少一個對抗原具有結合特異性且結構類似於免疫球蛋白之可變結構域之互補位之所有分子。 因此，抗體可包含單株抗體、人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體、抗體片段(具體而言Fv、Fab、Fab’或F(ab’)2片段)、單鏈抗體(具體而言單鏈可變片段(scFv))、小模組免疫醫藥(SMIP)、結構域抗體、奈米抗體、雙價抗體。抗體可具有通常由抗體之Fc部分(抗體恆定區)調介之效應物功能，例如ADCC或CDC，或其可不具效應物功能，例如因缺少Fc部分或具有經阻斷經遮蔽之Fc部分，本質上由免疫細胞或免疫系統組分(如補體系統)無法識別或不充分識別之Fc部分。單株抗體(mAb)係胺基酸序列一致之單特異性抗體。其可藉由雜交瘤技術自雜合細胞系(稱為雜交瘤)產生，該雜合細胞系代表產生特異性抗體之B細胞與骨髓瘤(B細胞癌)細胞之融合純系(Kohler G、Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature 1975;256:495-7。)。或者，單株抗體可藉由宿主細胞中之重組表現來產生(Norderhaug L、Olafsen T、Michaelsen TE、Sandlie I. (1997年5月). 「Versatile vectors for transient and stable expression of recombinant antibody molecules in mammalian cells.」 J Immunol Methods 204 (1): 77-87；亦參見下文)。「重組抗體」或「重組結合分子」係由經重組改造之宿主細胞產生之抗體或結合分子。其視情況經分離或純化。 對於人類中之應用，通常期望減小最初衍生自其他物種(如小鼠)之抗體之免疫原性。此可藉由構築嵌合抗體或藉由稱為「人類化」之過程來進行。在此情況下，「嵌合抗體」應理解為包含衍生自一物種(例如小鼠)之序列部分(例如可變結構域)融合至衍生自不同物種(例如人類)之序列部分(例如恆定結構域)之抗體。「人類化抗體」係包含最初衍生自非人類物種之可變結構域之抗體，其中某些胺基酸已經突變以使該可變結構域之總體序列更密切類似於人類可變結構域之序列。抗體之嵌合及人類化方法為業內所熟知(Billetta R、Lobuglio AF. 「Chimeric antibodies.」 Int Rev Immunol. 1993;10(2-3):165-76；Riechmann L、Clark M、Waldmann H、Winter G (1988). 「Reshaping human antibodies for therapy」. Nature: 332:323)。 「人類化」抗體係指包含來自非人類超變區(HVR)之胺基酸殘基及來自人類FR之胺基酸殘基的抗體。在某些實施例中，人類化抗體將包含實質上所有之至少一個、且通常兩個可變結構域，其中所有或實質上所有之HVR (例如互補決定區(CDR))對應於非人類抗體之彼等HVR，且所有或實質上整個框架區(FR)對應於人類抗體之彼等FR。人類化抗體視情況可包含衍生自人類抗體之抗體恆定區之至少一部分。抗體(例如非人類抗體)之「人類化形式」係指已經受人類化之抗體。 此外，已研發出多種技術以基於衍生自人類基因體之序列產生抗體，例如藉由噬菌體展示或使用轉基因動物(WO 90/05144；D. Marks、H.R. Hoogenboom、T.P. Bonnert、J. McCafferty、A.D. Griffiths及G. Winter (1991) 「By-passing immunisation. Human antibodies from V-gene libraries displayed on phage.」 J. Mol. Biol., 222, 581-597；Knappik等人，J. Mol. Biol. 296: 57-86, 2000；S. Carmen及L. Jermutus, 「Concepts in antibody phage display.」 Briefings in Functional Genomics and Proteomics 2002 1(2):189-203；Lonberg N、Huszar D. 「Human antibodies from transgenic mice」. Int Rev Immunol. 1995;13(1):65-93.；Brüggemann M、Taussig MJ. 「Production of human antibody repertoires in transgenic mice」. Curr Opin Biotechnol. 1997年8月;8(4):455-8。)。該等抗體在本發明情況下係「人類抗體」。 抗體亦可包括免疫球蛋白之保留抗原結合性質之片段，如Fab、Fab’或F(ab’)2片段。該等片段可藉由免疫球蛋白之片段化、例如藉由蛋白水解消化或藉由該等片段之重組表現來獲得。舉例而言，免疫球蛋白消化可藉助常規技術、例如使用木瓜酶或胃蛋白酶(WO 94/29348)來實現。抗體之木瓜酶消化通常產生兩個一致的抗原結合片段，即所謂的Fab片段，其各自具有單一抗原結合位點及殘餘Fc片段。胃蛋白酶處理產生F(ab')2。在Fab分子中，可變結構域各自融合至免疫球蛋白恆定結構域、較佳人類來源之免疫球蛋白恆定結構域。因此，重鏈可變結構域可融合至CH1結構域(所謂的Fd片段)，且輕鏈可變結構域可融合至CL結構域。Fab分子可藉由在宿主細胞中重組表現各別核酸產生，參見下文。 已研發出多種技術用於在不同分子環境中放置免疫球蛋白之可變結構域或衍生自該等可變結構域之分子。彼等亦應視為本發明之「抗體」。一般而言，該等抗體分子之大小小於免疫球蛋白，且可包含單一胺基酸鏈或若干胺基酸鏈。舉例而言，單鏈可變片段(scFv)係免疫球蛋白之藉由短連接體(通常絲胺酸(S)或甘胺酸(G))連接在一起之重鏈及輕鏈可變區之融合物(WO 88/01649；WO 91/17271；Huston等人，International Reviews of Immunology，第10卷，1993, 195 - 217)。「單結構域抗體」或「奈米抗體」在單一Ig樣結構域中具有抗原結合位點(WO 94/04678；WO 03/050531；Ward等人，Nature. 1989年10月12日;341(6242):544-6；Revets等人，Expert Opin Biol Ther. 5(1):111-24, 2005)。一或多個對相同或不同抗原具有結合特異性之單結構域抗體可連接在一起。雙價抗體係由包含兩個可變結構域之兩條胺基酸鏈組成之二價抗體分子(WO 94/13804；Holliger等人，Proc Natl Acad Sci U S A. 1993年7月15日;90(14):6444-8)。抗體樣分子之其他實例係免疫球蛋白超家族抗體(IgSF；Srinivasan及Roeske, Current Protein Pept. Sci. 2005, 6(2): 185-96)。不同概念產生所謂的小模組免疫醫藥(SMIP)，其包含連接至單鏈鉸鏈及效應物結構域之Fv結構域且不含恆定結構域CH1 (WO 02/056910)。 關於本發明，本發明之第一態樣提供結合分子，其包含至少一個特異性結合至TNF相關細胞凋亡誘導配體受體2 (TRAILR2)之抗原結合位點及至少一個特異性結合至鈣黏蛋白-17 (CDH17)之抗原結合位點。 如本文所用之術語「結合」或「特異性結合」係指在活體外分析中抗體或抗原結合位點(例如在本文所述之結合分子中)與抗原表位之結合。親和力係抗體分子上之單一抗原結合位點與單一表位之間之相互作用。其係藉由平衡締合常數Ka = k締合
/k解離
或平衡解離常數Kd = k解離
/k締合
來表示。 表位係抗原中由抗體或抗原結合部分結合之區域。術語「表位」包括能夠特異性結合至抗體或抗原結合部分之任一多肽決定子。在某些實施例中，表位決定子包括分子之化學活性表面基團(例如胺基酸、多醣側鏈、磷醯基或磺醯基)，且在某些實施例中，可具有特定三維結構特徵及/或特定電荷特徵。構形及非構形表位之不同之處在於，在變性溶劑存在下不與前者但與後者結合。如本文所用之術語「結合」及「特異性結合」係指在使用經純化野生型抗原之活體外分析中、較佳在電漿共振分析(BIAcore®, GE-Healthcare Uppsala, Sweden)中抗體或抗原結合部分與抗原表位之結合。 在一態樣中，本發明結合分子以一親和力結合至TRAILR2或CDH17靶抗原，如例如藉由表面電漿共振分析所測定(Malmqvist M., 「Surface plasmon resonance for detection and measurement of antibody-antigen affinity and kinetics.」, Curr Opin Immunol. 1993年4月;5(2):282-6.)，且KD值介於1 pM至100 µM、較佳1 pM至1 µM範圍內。抗體親和力亦可使用動力學排除分析(KinExA)技術來量測(Darling, R.J.及Brault P-A., 「Kinetic exclusion assay technology: Characterization of Molecular Interactions.」 ASSAY and Drug Development Technologies. 2004年12月，2(6): 647-657)。 抗體分子之結合親和力可藉由稱為親和力成熟之過程增強(Marks等人，1992, Biotechnology 10:779-783；Barbas等人，1994, Proc. Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813；Shier等人，1995, Gene 169:147-155)。因此，親和力成熟抗體亦涵蓋於本發明中。 如本文所用之術語「結合」或「特異性結合」係指在活體外分析中、較佳在表面電漿共振分析(SPR, BIAcore, GE-Healthcare Uppsala, Sweden)中抗體與抗原表位之結合。結合親和力定義為術語k締合
(來自抗體/抗原複合物之抗體締合之速率常數)、k解離
(解離常數)及KD (k解離
/k締合
)。特異性結合通常係指在受體分子與其配體之間形成複合物。在抗體-抗原結合之情況下，高親和力抗體通常以10-9
M或更小之親和力結合其靶抗原。 在一個實施例中，本發明結合分子可誘導TRAILR2介導之一或多種癌細胞類型(例如結腸直腸癌細胞系Colo205)之細胞凋亡，且在1 nM或更小、且甚至更佳小於0.01 nM之濃度下抑制大於50%之細胞活力。 在另一實施例中，本發明之結合分子無法誘導TRAILR2介導之CDH17陰性肝源細胞(例如細胞系HepG2)之細胞凋亡，且在高達1 nM、或更佳高達10 nM、且甚至更佳高達100 nM之濃度下抑制小於50%之細胞活力。 在另一較佳實施例中，特異性結合至鈣黏蛋白-17 (CDH17)之抗原結合位點係免疫球蛋白(Ig)分子(具有兩條重鏈及兩條輕鏈之全長抗體之習用Y形結構)，且特異性結合至TNF相關細胞凋亡誘導配體受體2 (TRAILR2)之抗原結合位點包含一或多個scFv、scFab、Fab或Fv結合元件。較佳地，特異性結合至TNF相關細胞凋亡誘導配體受體2 (TRAILR2)之抗原結合位點包含一或多個scFv。「單鏈Fv片段」(scFv)係包含抗體重鏈可變結構域(VH)、連接體及抗體輕鏈可變結構域(VL)之多肽，其中該等抗體結構域及該連接體在N末端至C末端方向上具有以下順序中之一者：a) VH--連接體-VL，b) VL-連接體-VH；且其中該連接體係長度為15至25個胺基酸、較佳20個胺基酸之多肽。 另外，該等單鏈Fv片段可經由納入半胱胺酸殘基從而在VH與VL結構域之間、在VH結構域內或在VL結構域內納入二硫鍵來進一步穩定。術語N末端表示多肽鏈之第一個胺基酸，而術語C末端表示多肽鏈之C末端之最後一個胺基酸。因此，在本發明實施例中，一或多個scFv包含其他半胱胺酸殘基以形成二硫鍵。 在本發明實施例中，scFv部分之穩定性可藉由納入兩個緊密3維靠近之半胱胺酸殘基以在scFv內形成二硫鍵(在本文中稱為scFvss)來增加。若scFv衍生自TRv1之V區序列(如下文所論述)，則該等穩定二硫鍵可經改造之實例潛在位點包括：(a) VL之99位與VH之45位之間，(b) VL之102位與VH之44位之間，(c) VL之4位與100位之間，及(d) VH之6位與112位之間。為藉助經改造二硫鍵實現穩定，較佳用半胱胺酸殘基取代該等位置之殘基。 如隨附實例中所展示，本發明者已顯示，自N末端至C末端具有VL-VH定向之TRAILR2 scFv在本發明結合分子中可起誘導靶細胞之細胞凋亡作用。儘管自N末端至C末端具有VH-VL定向之TRAILR2 scFv亦可起作用，但活性在此定向中可能減小。因此，在本發明之較佳實施例中，自N末端至C末端之順序為VL-VH。 在本發明之另一較佳實施例中，一或多個特異性結合至TRAILR2之scFv藉由肽連接體、較佳長度為約4至20個胺基酸(例如6個、9個、12個或15個中之任一者)之肽連接體融合至特異性結合至CDH17之Ig分子(例如人類IgG1、IgG1(KO)、IgG1FcRnmut、IgG4Pro)。較佳地，scFv融合至Ig分子重鏈之C末端。較佳地，Ig分子係IgG。 將scFv分子連接至IgG分子重鏈之C末端或連接scFv分子內之可變結構域之方法為業內所熟知。通常使用甘胺酸及絲胺酸之小連接體序列(稱為GS微型連接體)。連接體中之胺基酸數可自4 (GGGS) (SEQ ID NO.:144)、6 (GGSGGS) (SEQ ID NO.:141)、10 (GGGGSGGGGS) (SEQ ID NO.:142)或更大變化。在實踐中，連接體通常係藉由以下方式形成：組合編碼所關注IgG之核酸分子(其在該情形下將包括編碼CDH17結合位點之重鏈可變結構域及IgG型恆定結構域之核酸)與編碼期望scFv之核酸(其在該情形下將包括編碼TRAILR2結合位點之呈VL-VH或VH-V1定向之重鏈及輕鏈可變結構域之核酸)，該兩種核酸分子由編碼連接體序列(例如5個、10個、15個或20個胺基酸中之任一者之GS微型連接體，較佳SEQ ID NO.:143之連接體)之核酸分子隔開。然後如下文進一步解釋，將此完整HC-scFv編碼核酸分子置於表現載體內且引入適宜宿主細胞中，使得形成完整IgG重鏈-scFv單一多肽。 較佳地，scFV分子與IgG分子重鏈C末端之間之GS微型連接體係GGSGGS (SEQ ID NO.:141)。 在一個實施例中，本發明提供結合分子，其具有： (i) 兩條重鏈，其自N至C末端各自包含： -針對CDH17具有特異性之重鏈可變結構域(例如鼠類、人類化或人類VH結構域) - IgG (例如人類IgG1或IgG4)之恆定結構域 - 肽連接體(例如GS微型連接體)，及 -針對TRAILR2具有特異性之scFv (例如自N至C末端包含VH結構域(例如鼠類、人類化或人類VH結構域)、連接體及VL結構域(例如鼠類、人類化或人類VL結構域)之scFv，或反之包含VL結構域、連接體及VH結構域之scFv)；及 (ii) 兩條輕鏈，其自N至C末端各自包含： 針對CDH17具有特異性之輕鏈可變結構域(例如鼠類、人類化或人類VL結構域)， 輕鏈恆定結構域(例如人類κ鏈)。 本文所述之抗體分子或結合分子可融合(為融合蛋白)或以其他方式連接(藉由共價鍵或非共價鍵)至對抗體分子之性質具有期望影響之其他分子實體。舉例而言，可期望改良本文所述之抗體或結合分子之藥物動力學性質，例如體液(例如血液)中之穩定性，尤其在單鏈抗體或結構域抗體之情形下。就此而言已研發出多種技術，具體而言延長該等抗體分子之循環半衰期，例如聚乙二醇化(WO 98/25971；WO 98/48837；WO 2004081026)、融合或以其他方式使抗體分子共價附接至對血清蛋白(如白蛋白)具有親和力之另一抗體分子(WO 2004041865；WO 2004003019)或使抗體分子表現為與血清蛋白(如白蛋白或運鐵蛋白)之全部或一部分之融合蛋白(WO 01/79258)。 由於抗體之Fc區與多種Fc受體相互作用產生多種重要的功能能力(其稱為「效應物功能」)，故在某些實施例中抗體係全長抗體或含有Fc區之一部分之抗體，只要後一抗體展現與抗原之相關部分以及與Fc受體及補體二者之特異性結合即可。恆定區之類型及長度之選擇端視效應物功能(如補體結合或抗體依賴性細胞介導之細胞毒性)是否係期望特徵及抗體蛋白之期望藥理學性質而定。 在本發明實施例中，藉由利用IgG4恆定區或在234位及235位具有L至A定向誘變之IgG1恆定區可除去本發明中結合分子與補體產物C1q或Fc γ受體之結合。 在本發明實施例中，本發明結合分子可具有Fc區或其相關部分，其已經改造以避免可溶性Fc γ受體或補體C1q之不期望交聯。在一個實施例中，該結合分子或抗體變體具有遠低於親代抗體之對Fcγ受體及補體C1q之親和力。(在下文中，若非另外說明，否則術語「親代」在抗體分子背景下或在IgG或Fc區背景下分別係指未經改造之抗體分子Fc區或IgG，突變(經改造)分子係自其衍生而來。)。因此，在本發明實施例中，Ig分子包含與野生型Fc區相比具有減小的對Fc γ受體或補體受體或二者之親和力之Fc變體。該Ig分子在本文中稱為IgG1(KO)。 在本發明之另一實施例中，本發明結合分子包含Fc區或其相關部分，其已經改造以藉由最佳化其與新生Fc受體(FcRn)之相互作用(例如藉由CH2結構域中H310A位之點突變)來改變血清含量(半衰期)。該Ig分子在本文中稱為IgG1FcRnmut。 在本發明之另一實施例中，結合分子包含Ig分子，該Ig分子包含除去重鏈與其他IgG4分子之調換之IgG4鉸鏈區變體。該Ig分子在本文中稱為IgG4Pro。 本發明提供結合分子，其具有至少一個特異性結合至TNF相關細胞凋亡誘導配體受體2 (TRAILR2)之抗原結合位點及至少一個特異性結合至鈣黏蛋白-17 (CDH17)之抗原結合位點。 製備結合至特定靶抗原之結合位點之方法為業內所熟知。熟習此項技術者可容易地使用該等方法來設計具有所需對TRAILR2或CDH17靶抗原之特異性之抗原結合位點。 生成抗體及抗體片段之方法為業內所熟知。舉例而言，抗體可經由若干方法中之任一者生成，該等方法採用誘導活體內抗體分子之產生、篩選免疫球蛋白文庫(Orlandi等人，1989. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86:3833-3837；Winter等人，1991, Nature 349:293-299)或藉由培養細胞系生成單株抗體分子。該等方法包括(但不限於)雜交瘤技術、人類B細胞雜交瘤技術及艾司坦-巴爾病毒(Epstein-Barr virus，EBV)雜交瘤技術(Kohler等人，1975. Nature 256:4950497；Kozbor等人，1985. J. Immunol. Methods 81:31-42；Cote等人，1983. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:2026-2030；Cole等人，1984. Mol. Cell. Biol. 62:109-120)。 使用業內已知及本文所述之方法，熟習此項技術者將容易地製備具有所需對TRAILR2及/或CDH17靶抗原之特異性之結合位點的抗體以及本文所述之結合分子。自該等抗體分離結合結構域係常規實踐且實際上關於可用於生成如本文所述抗體及結合分子之方法之其他資訊提供於隨附實例中。 本發明者製備本發明之特異性TRAILR2 / CDH17結合分子，其論述於隨附實例中。 本發明者製備多個針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點，且將該等位點稱為TR#1、TR#2、TR#3、TR#7、TR#8、TR#10、TR#12、TR2v1、TR2v2、TR2v3、TR2v4、TR2v5、TR2v6及TR2v7。本發明者亦製備多個針對CDH17具有特異性之抗原結合位點，且將該等位點稱為CDH17A6、CDH17E2、CDH17H2、CDH17E9及CDH17v1。 在一些實施例中，抗原結合位點(TR#1、TR#2、TR#3、TR#7、TR#8、TR#10、TR#12、TR2v1、TR2v2、TR2v3、TR2v4、TR2v5、TR2v6、TR2v7、CDH17A6、CDH17E2、CDH17H2、CDH17E9及CDH17v1中之任一者)係包含來自非人類超變區(HVR；例如互補決定區(CDR))之胺基酸殘基及來自人類框架序列之胺基酸殘基的「人類化」抗原結合位點(例如人類化VH/VL結構域)。在一些實施例中，抗原結合位點(TR#1、TR#2、TR#3、TR#7、TR#8、TR#10、TR#12、TR2v1、TR2v2、TR2v3、TR2v4、TR2v5、TR2v6、TR2v7、CDH17A6、CDH17E2、CDH17H2、CDH17E9及CDH17v1中之任一者)係包含皆衍生自人類基因體序列之CDR及FR序列之人類抗原結合位點(例如人類VH/VL結構域)。 特異性抗原結合位點之胺基酸序列提供於本說明(表3)及序列表中。 下文提供包含TRAILR2及/或CDH17之特異性抗原結合位點之本發明較佳實施例之細節。 為免生疑問，下文針對本發明第一態樣列示之每一具體實施例各自亦可視為本發明之獨立態樣。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:1 (CDR1)、SEQ ID NO.:2 (CDR2)及SEQ ID NO.:3 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:4 (CDR1)、SEQ ID NO.:5 (CDR2)及SEQ ID NO.:6 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#1。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:82之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:83之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#1。舉例而言，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:134 (定向VL-VH)之胺基酸序列之scFv分子。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:7 (CDR1)、SEQ ID NO.:8 (CDR2)及SEQ ID NO.:9 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:10 (CDR1)、SEQ ID NO.:11 (CDR2)及SEQ ID NO.:12 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:84之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:85之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#2。舉例而言，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:135 (定向VL-VH)之胺基酸序列之scFv分子。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:13 (CDR1)、SEQ ID NO.:14 (CDR2)及SEQ ID NO.:15 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:16 (CDR1)、SEQ ID NO.:17 (CDR2)及SEQ ID NO.:18 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#3。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:86之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:87之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#3。舉例而言，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:136 (定向VL-VH)之胺基酸序列之scFv分子。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:19 (CDR1)、SEQ ID NO.:20 (CDR2)及SEQ ID NO.:21 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:22 (CDR1)、SEQ ID NO.:23 (CDR2)及SEQ ID NO.:24 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#7。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:88之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:89之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#7。舉例而言，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:137 (定向VL-VH)之胺基酸序列之scFv分子。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:25 (CDR1)、SEQ ID NO.:26 (CDR2)及SEQ ID NO.:27 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:28 (CDR1)、SEQ ID NO.:29 (CDR2)及SEQ ID NO.:30 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#8。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:90之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:91之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#8。舉例而言，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:138 (定向VL-VH)之胺基酸序列之scFv分子。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:31 (CDR1)、SEQ ID NO.:32 (CDR2)及SEQ ID NO.:33 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:34 (CDR1)、SEQ ID NO.:35 (CDR2)及SEQ ID NO.:36 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#10。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:92之胺基酸序列的可變重鏈及包括SEQ ID NO.:93之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#10。舉例而言，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:139 (定向VL-VH)之胺基酸序列之scFv分子。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:37 (CDR1)、SEQ ID NO.:38 (CDR2)及SEQ ID NO.:39 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:40 (CDR1)、SEQ ID NO.:41 (CDR2)及SEQ ID NO.:42 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#12。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:94之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:95之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#12。舉例而言，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:140 (定向VL-VH)之胺基酸序列之scFv分子。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:44 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:50 (CDR2)及SEQ ID NO.:54 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR2v1或TR2v2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:96之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:97之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR2v1。舉例而言，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:124 (定向VL-VH)、SEQ ID NO.:131 (定向VH-VL)、SEQ ID NO.:132 (具有二硫鍵之定向VH-VL，scFvss)或SEQ ID NO.:133 (具有二硫鍵之定向VL-VH，scFV)之胺基酸序列之scFv分子。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:98之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:99之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR2v2。舉例而言，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:125 (定向VL-VH)之胺基酸序列之scFv分子。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:45 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:51 (CDR2)及SEQ ID NO.:55 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR2v3。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:100之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:101之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR2v3。舉例而言，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:126 (定向VL-VH)之胺基酸序列之scFv分子。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:45 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:52 (CDR2)及SEQ ID NO.:56 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR2v4。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:102之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:103之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR2v4。舉例而言，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:127 (定向VL-VH)之胺基酸序列之scFv分子。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:45 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:50 (CDR2)及SEQ ID NO.:56 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR2v5。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:104之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:105之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR2v5。舉例而言，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:128 (定向VL-VH)之胺基酸序列之scFv分子。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:46 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:51 (CDR2)及SEQ ID NO.:57 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR2v6。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:106之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:107之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR2v6。舉例而言，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:129 (定向VL-VH)之胺基酸序列之scFv分子。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:47 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR且具有包含SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:53 (CDR2)及SEQ ID NO.:57 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR2v7。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:108之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:109之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR2v7。舉例而言，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:130 (定向VL-VH)之胺基酸序列之scFv分子。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:58 (CDR1)、SEQ ID NO.:59 (CDR2)及SEQ ID NO.:60 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR且具有包含SEQ ID NO.:61 (CDR1)、SEQ ID NO.:62 (CDR2)及SEQ ID NO.:63 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 較佳地，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:110之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:111之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:64 (CDR1)、SEQ ID NO.:65 (CDR2)及SEQ ID NO.:66 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR且具有包含SEQ ID NO.:67 (CDR1)、SEQ ID NO.:68 (CDR2)及SEQ ID NO.:69 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 較佳地，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:112之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:113之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:70 (CDR1)、SEQ ID NO.:71 (CDR2)及SEQ ID NO.:72 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR且具有包含SEQ ID NO.:73 (CDR1)、SEQ ID NO.:74 (CDR2)及SEQ ID NO.:75 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2或H2。 較佳地，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:114之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:115之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2。 較佳地，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:116之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:117之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:76 (CDR1)、SEQ ID NO.:77 (CDR2)及SEQ ID NO.:78 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR且具有包含SEQ ID NO.:79 (CDR1)、SEQ ID NO.:80 (CDR2)及SEQ ID NO.:81 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 較佳地，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:118之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:119之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:1 (CDR1)、SEQ ID NO.:2 (CDR2)及SEQ ID NO.:3 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:4 (CDR1)、SEQ ID NO.:5 (CDR2)及SEQ ID NO.:6 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:58 (CDR1)、SEQ ID NO.:59 (CDR2)及SEQ ID NO.:60 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:61 (CDR1)、SEQ ID NO.:62 (CDR2)及SEQ ID NO.:63 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#1且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:82之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:83之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:110之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:111之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#1 (例如SEQ ID NO.:134之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:1 (CDR1)、SEQ ID NO.:2 (CDR2)及SEQ ID NO.:3 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:4 (CDR1)、SEQ ID NO.:5 (CDR2)及SEQ ID NO.:6 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:64 (CDR1)、SEQ ID NO.:65 (CDR2)及SEQ ID NO.:66 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:67 (CDR1)、SEQ ID NO.:68 (CDR2)及SEQ ID NO.:69 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#1且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:82之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:83之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:112之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:113之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#1 (例如SEQ ID NO.:134之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:1 (CDR1)、SEQ ID NO.:2 (CDR2)及SEQ ID NO.:3 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:4 (CDR1)、SEQ ID NO.:5 (CDR2)及SEQ ID NO.:6 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:70 (CDR1)、SEQ ID NO.:71 (CDR2)及SEQ ID NO.:72 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:73 (CDR1)、SEQ ID NO.:74 (CDR2)及SEQ ID NO.:75 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#1且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2或CDH17H2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:82之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:83之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:114之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:115之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#1 (例如SEQ ID NO.:134之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:82之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:83之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:116之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:117之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#1 (例如SEQ ID NO.:134之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:1 (CDR1)、SEQ ID NO.:2 (CDR2)及SEQ ID NO.:3 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:4 (CDR1)、SEQ ID NO.:5 (CDR2)及SEQ ID NO.:6 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:76 (CDR1)、SEQ ID NO.:77 (CDR2)及SEQ ID NO.:78 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:79 (CDR1)、SEQ ID NO.:80 (CDR2)及SEQ ID NO.:81 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#1且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:82之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:83之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:118之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:119之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#1 (例如SEQ ID NO.:134之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:7 (CDR1)、SEQ ID NO.:8 (CDR2)及SEQ ID NO.:9 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:10 (CDR1)、SEQ ID NO.:11 (CDR2)及SEQ ID NO.:12 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:58 (CDR1)、SEQ ID NO.:59 (CDR2)及SEQ ID NO.:60 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR且具有包含SEQ ID NO.:61 (CDR1)、SEQ ID NO.:62 (CDR2)及SEQ ID NO.:63 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#2且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:84之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:85之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:110之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:111之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#2 (例如SEQ ID NO.:135之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:7 (CDR1)、SEQ ID NO.:8 (CDR2)及SEQ ID NO.:9 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:10 (CDR1)、SEQ ID NO.:11 (CDR2)及SEQ ID NO.:12 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:64 (CDR1)、SEQ ID NO.:65 (CDR2)及SEQ ID NO.:66 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:67 (CDR1)、SEQ ID NO.:68 (CDR2)及SEQ ID NO.:69 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#2且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:84之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:85之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:112之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:113之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#2 (例如SEQ ID NO.:135之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:7 (CDR1)、SEQ ID NO.:8 (CDR2)及SEQ ID NO.:9 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:10 (CDR1)、SEQ ID NO.:11 (CDR2)及SEQ ID NO.:12 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:70 (CDR1)、SEQ ID NO.:71 (CDR2)及SEQ ID NO.:72 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:73 (CDR1)、SEQ ID NO.:74 (CDR2)及SEQ ID NO.:75 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#2且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2或CDH17H2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:84之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:85之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:114之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:115之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#2 (例如SEQ ID NO.:135之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:84之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:85之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:116之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:117之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#2 (例如SEQ ID NO.:135之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:7 (CDR1)、SEQ ID NO.:8 (CDR2)及SEQ ID NO.:9 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:10 (CDR1)、SEQ ID NO.:11 (CDR2)及SEQ ID NO.:12 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:76 (CDR1)、SEQ ID NO.:77 (CDR2)及SEQ ID NO.:78 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:79 (CDR1)、SEQ ID NO.:80 (CDR2)及SEQ ID NO.:81 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#2且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:84之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:85之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:118之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:119之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#2 (例如SEQ ID NO.:135之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:13 (CDR1)、SEQ ID NO.:14 (CDR2)及SEQ ID NO.:15 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:16 (CDR1)、SEQ ID NO.:17 (CDR2)及SEQ ID NO.:18 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:58 (CDR1)、SEQ ID NO.:59 (CDR2)及SEQ ID NO.:60 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:61 (CDR1)、SEQ ID NO.:62 (CDR2)及SEQ ID NO.:63 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#3且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:86之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:87之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:110之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:111之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#3 (例如SEQ ID NO.:136之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:13 (CDR1)、SEQ ID NO.:14 (CDR2)及SEQ ID NO.:15 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:16 (CDR1)、SEQ ID NO.:17 (CDR2)及SEQ ID NO.:18 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:64 (CDR1)、SEQ ID NO.:65 (CDR2)及SEQ ID NO.:66 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:67 (CDR1)、SEQ ID NO.:68 (CDR2)及SEQ ID NO.:69 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#3且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:86之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:87之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:112之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:113之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#3 (例如SEQ ID NO.:136之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:13 (CDR1)、SEQ ID NO.:14 (CDR2)及SEQ ID NO.:15 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:16 (CDR1)、SEQ ID NO.:17 (CDR2)及SEQ ID NO.:18 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:70 (CDR1)、SEQ ID NO.:71 (CDR2)及SEQ ID NO.:72 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:73 (CDR1)、SEQ ID NO.:74 (CDR2)及SEQ ID NO.:75 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#3且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2或CDH17H2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:86之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:87之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:114之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:115之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#3 (例如SEQ ID NO.:136之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:86之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:87之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:116之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:117之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#3 (例如SEQ ID NO.:136之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:13 (CDR1)、SEQ ID NO.:14 (CDR2)及SEQ ID NO.:15 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:16 (CDR1)、SEQ ID NO.:17 (CDR2)及SEQ ID NO.:18 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:76 (CDR1)、SEQ ID NO.:77 (CDR2)及SEQ ID NO.:78 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:79 (CDR1)、SEQ ID NO.:80 (CDR2)及SEQ ID NO.:81 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#3且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:86之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:87之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:118之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:119之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#3 (例如SEQ ID NO.:136之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:19 (CDR1)、SEQ ID NO.:20 (CDR2)及SEQ ID NO.:21 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:22 (CDR1)、SEQ ID NO.:23 (CDR2)及SEQ ID NO.:24 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:58 (CDR1)、SEQ ID NO.:59 (CDR2)及SEQ ID NO.:60 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:61 (CDR1)、SEQ ID NO.:62 (CDR2)及SEQ ID NO.:63 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#7且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:88之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:89之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:110之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:111之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#7 (例如SEQ ID NO.:137之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:19 (CDR1)、SEQ ID NO.:20 (CDR2)及SEQ ID NO.:21 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:22 (CDR1)、SEQ ID NO.:23 (CDR2)及SEQ ID NO.:24 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:64 (CDR1)、SEQ ID NO.:65 (CDR2)及SEQ ID NO.:66 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:67 (CDR1)、SEQ ID NO.:68 (CDR2)及SEQ ID NO.:69 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#7且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:88之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:89之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:112之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:113之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#7 (例如SEQ ID NO.:137之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:19 (CDR1)、SEQ ID NO.:20 (CDR2)及SEQ ID NO.:21 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:22 (CDR1)、SEQ ID NO.:23 (CDR2)及SEQ ID NO.:24 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:70 (CDR1)、SEQ ID NO.:71 (CDR2)及SEQ ID NO.:72 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:73 (CDR1)、SEQ ID NO.:74 (CDR2)及SEQ ID NO.:75 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#7且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2或CDH17H2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:88之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:89之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:114之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:115之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#7 (例如SEQ ID NO.:137之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:88之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:89之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:116之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:117之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#7 (例如SEQ ID NO.:137之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:19 (CDR1)、SEQ ID NO.:20 (CDR2)及SEQ ID NO.:21 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:22 (CDR1)、SEQ ID NO.:23 (CDR2)及SEQ ID NO.:24 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:76 (CDR1)、SEQ ID NO.:77 (CDR2)及SEQ ID NO.:78 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:79 (CDR1)、SEQ ID NO.:80 (CDR2)及SEQ ID NO.:81 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#7且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:88之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:89之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:118之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:119之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#7 (例如SEQ ID NO.:137之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:25 (CDR1)、SEQ ID NO.:26 (CDR2)及SEQ ID NO.:27 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:28 (CDR1)、SEQ ID NO.:29 (CDR2)及SEQ ID NO.:30 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:58 (CDR1)、SEQ ID NO.:59 (CDR2)及SEQ ID NO.:60 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:61 (CDR1)、SEQ ID NO.:62 (CDR2)及SEQ ID NO.:63 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#8且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:90之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:91之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:110之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:111之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#8 (例如SEQ ID NO.:138之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:25 (CDR1)、SEQ ID NO.:26 (CDR2)及SEQ ID NO.:27 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:28 (CDR1)、SEQ ID NO.:29 (CDR2)及SEQ ID NO.:30 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:64 (CDR1)、SEQ ID NO.:65 (CDR2)及SEQ ID NO.:66 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:67 (CDR1)、SEQ ID NO.:68 (CDR2)及SEQ ID NO.:69 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#8且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:90之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:91之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:112之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:113之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#8 (例如SEQ ID NO.:138之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:25 (CDR1)、SEQ ID NO.:26 (CDR2)及SEQ ID NO.:27 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:28 (CDR1)、SEQ ID NO.:29 (CDR2)及SEQ ID NO.:30 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:70 (CDR1)、SEQ ID NO.:71 (CDR2)及SEQ ID NO.:72 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:73 (CDR1)、SEQ ID NO.:74 (CDR2)及SEQ ID NO.:75 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#8且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2或CDH17H2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:90之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:91之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:114之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:115之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#8 (例如SEQ ID NO.:138之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:90之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:91之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:116之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:117之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#8 (例如SEQ ID NO.:138之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:25 (CDR1)、SEQ ID NO.:26 (CDR2)及SEQ ID NO.:27 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:28 (CDR1)、SEQ ID NO.:29 (CDR2)及SEQ ID NO.:30 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:76 (CDR1)、SEQ ID NO.:77 (CDR2)及SEQ ID NO.:78 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:79 (CDR1)、SEQ ID NO.:80 (CDR2)及SEQ ID NO.:81 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#8且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:90之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:91之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:118之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:118之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#8 (例如SEQ ID NO.:138之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:31 (CDR1)、SEQ ID NO.:32 (CDR2)及SEQ ID NO.:33 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:34 (CDR1)、SEQ ID NO.:35 (CDR2)及SEQ ID NO.:36 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:58 (CDR1)、SEQ ID NO.:59 (CDR2)及SEQ ID NO.:60 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:61 (CDR1)、SEQ ID NO.:62 (CDR2)及SEQ ID NO.:63 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#10且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:92之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:93之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:110之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:111之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#10 (例如SEQ ID NO.:139之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:31 (CDR1)、SEQ ID NO.:32 (CDR2)及SEQ ID NO.:33 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:34 (CDR1)、SEQ ID NO.:35 (CDR2)及SEQ ID NO.:36 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:64 (CDR1)、SEQ ID NO.:65 (CDR2)及SEQ ID NO.:66 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:67 (CDR1)、SEQ ID NO.:68 (CDR2)及SEQ ID NO.:69 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#10且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:92之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:93之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:112之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:113之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#10 (例如SEQ ID NO.:139之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:31 (CDR1)、SEQ ID NO.:32 (CDR2)及SEQ ID NO.:33 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:34 (CDR1)、SEQ ID NO.:35 (CDR2)及SEQ ID NO.:36 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:70 (CDR1)、SEQ ID NO.:71 (CDR2)及SEQ ID NO.:72 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR且具有包含SEQ ID NO.:73 (CDR1)、SEQ ID NO.:74 (CDR2)及SEQ ID NO.:75 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#10且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2或CDH17H2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:92之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:93之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:114之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:115之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#10 (例如SEQ ID NO.:139之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:92之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:93之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:116之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:117之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#10 (例如SEQ ID NO.:139之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:31 (CDR1)、SEQ ID NO.:32 (CDR2)及SEQ ID NO.:33 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:34 (CDR1)、SEQ ID NO.:35 (CDR2)及SEQ ID NO.:36 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:76 (CDR1)、SEQ ID NO.:77 (CDR2)及SEQ ID NO.:78 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR且具有包含SEQ ID NO.:79 (CDR1)、SEQ ID NO.:80 (CDR2)及SEQ ID NO.:81 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#10且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:92之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:93之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:118之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:119之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#10 (例如SEQ ID NO.:139之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:37 (CDR1)、SEQ ID NO.:38 (CDR2)及SEQ ID NO.:39 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:40 (CDR1)、SEQ ID NO.:41 (CDR2)及SEQ ID NO.:42 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:58 (CDR1)、SEQ ID NO.:59 (CDR2)及SEQ ID NO.:60 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:61 (CDR1)、SEQ ID NO.:62 (CDR2)及SEQ ID NO.:63 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#12且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:94之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:95之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:110之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:111之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#12 (例如SEQ ID NO.:140之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:37 (CDR1)、SEQ ID NO.:38 (CDR2)及SEQ ID NO.:39 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:40 (CDR1)、SEQ ID NO.:41 (CDR2)及SEQ ID NO.:42 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:64 (CDR1)、SEQ ID NO.:65 (CDR2)及SEQ ID NO.:66 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:67 (CDR1)、SEQ ID NO.:68 (CDR2)及SEQ ID NO.:69 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#12且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:94之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:95之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:112之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:113之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#12 (例如SEQ ID NO.:140之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:37 (CDR1)、SEQ ID NO.:38 (CDR2)及SEQ ID NO.:39 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:40 (CDR1)、SEQ ID NO.:41 (CDR2)及SEQ ID NO.:42 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:70 (CDR1)、SEQ ID NO.:71 (CDR2)及SEQ ID NO.:72 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:73 (CDR1)、SEQ ID NO.:74 (CDR2)及SEQ ID NO.:75 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#12且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH171E2或CDH171H2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:94之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:95之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:114之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:115之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#12 (例如SEQ ID NO.:140之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:94之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:95之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:116之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:117之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#12 (例如SEQ ID NO.:140之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:37 (CDR1)、SEQ ID NO.:38 (CDR2)及SEQ ID NO.:39 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:40 (CDR1)、SEQ ID NO.:41 (CDR2)及SEQ ID NO.:42 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:76 (CDR1)、SEQ ID NO.:77 (CDR2)及SEQ ID NO.:78 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:79 (CDR1)、SEQ ID NO.:80 (CDR2)及SEQ ID NO.:81 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#12且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:94之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:95之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:118之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:119之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#12 (例如SEQ ID NO.:140之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:44 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:50 (CDR2)及SEQ ID NO.:54 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:58 (CDR1)、SEQ ID NO.:59 (CDR2)及SEQ ID NO.:60 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:61 (CDR1)、SEQ ID NO.:62 (CDR2)及SEQ ID NO.:63 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv1或TRv2且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:96之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:97之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:110之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:111之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv1 (例如SEQ ID NO.:124、SEQ ID NO.:131、SEQ ID NO.:132、SEQ ID NO.:133之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:98之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:99之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:110之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:111之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv2 (例如SEQ ID NO.:125之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:44 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:50 (CDR2)及SEQ ID NO.:54 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:64 (CDR1)、SEQ ID NO.:65 (CDR2)及SEQ ID NO.:66 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:67 (CDR1)、SEQ ID NO.:68 (CDR2)及SEQ ID NO.:69 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv1或TRv2且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:96之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:97之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:112之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:113之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv1 (例如SEQ ID NO.:124、SEQ ID NO.:131、SEQ ID NO.:132、SEQ ID NO.:133之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:98之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:99之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:112之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:113之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv2 (例如SEQ ID NO.:125之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:44 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:50 (CDR2)及SEQ ID NO.:54 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:70 (CDR1)、SEQ ID NO.:71 (CDR2)及SEQ ID NO.:72 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:73 (CDR1)、SEQ ID NO.:74 (CDR2)及SEQ ID NO.:75 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv1或TRv2且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2或CDH17H2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:96之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:97之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:114之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:115之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv1 (例如SEQ ID NO.:124、SEQ ID NO.:131、SEQ ID NO.:132、SEQ ID NO.:133之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:98之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:99之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:114之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:115之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv2 (例如SEQ ID NO.:125之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:96之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:97之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:116之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:117之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv1 (例如SEQ ID NO.:124、SEQ ID NO.:131、SEQ ID NO.:132、SEQ ID NO.:133之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:98之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:99之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:116之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:117之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv2 (例如SEQ ID NO.:125之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:44 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:50 (CDR2)及SEQ ID NO.:54 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:76 (CDR1)、SEQ ID NO.:77 (CDR2)及SEQ ID NO.:78 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:79 (CDR1)、SEQ ID NO.:80 (CDR2)及SEQ ID NO.:81 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv1或TRv2且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:96之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:97之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:118之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:119之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv1 (例如SEQ ID NO.:124、SEQ ID NO.:131、SEQ ID NO.:132、SEQ ID NO.:133之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:98之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:99之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:118之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:119之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv2 (例如SEQ ID NO.:125之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:45 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:51 (CDR2)及SEQ ID NO.:55 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:58 (CDR1)、SEQ ID NO.:59 (CDR2)及SEQ ID NO.:60 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:61 (CDR1)、SEQ ID NO.:62 (CDR2)及SEQ ID NO.:63 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv3且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:100之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:101之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:110之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:111之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv3 (例如SEQ ID NO.:126之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:45 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:51 (CDR2)及SEQ ID NO.:55 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:64 (CDR1)、SEQ ID NO.:65 (CDR2)及SEQ ID NO.:66 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:67 (CDR1)、SEQ ID NO.:68 (CDR2)及SEQ ID NO.:69 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv3且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:100之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:101之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:112之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:113之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv3 (例如SEQ ID NO.:126之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:45 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:51 (CDR2)及SEQ ID NO.:55 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR ，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:70 (CDR1)、SEQ ID NO.:71 (CDR2)及SEQ ID NO.:72 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:73 (CDR1)、SEQ ID NO.:74 (CDR2)及SEQ ID NO.:75 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv3且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2或CDH17H2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:100之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:101之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:114之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:115之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv3 (例如SEQ ID NO.:126之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:100之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:101之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:116之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:117之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv3 (例如SEQ ID NO.:126之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:45 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:51 (CDR2)及SEQ ID NO.:55 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR ，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:76 (CDR1)、SEQ ID NO.:77 (CDR2)及SEQ ID NO.:78 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:79 (CDR1)、SEQ ID NO.:80 (CDR2)及SEQ ID NO.:81 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv3且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:100之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:101之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:118之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:119之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv3 (例如SEQ ID NO.:126之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:45 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:52 (CDR2)及SEQ ID NO.:56 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:58 (CDR1)、SEQ ID NO.:59 (CDR2)及SEQ ID NO.:60 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:61 (CDR1)、SEQ ID NO.:62 (CDR2)及SEQ ID NO.:63 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv4且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:102之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:103之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:110之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:111之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv4 (例如SEQ ID NO.:127之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:45 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:52 (CDR2)及SEQ ID NO.:56 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:64 (CDR1)、SEQ ID NO.:65 (CDR2)及SEQ ID NO.:66 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:67 (CDR1)、SEQ ID NO.:68 (CDR2)及SEQ ID NO.:69 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv4且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:102之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:103之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:112之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:113之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv4 (例如SEQ ID NO.:127之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:45 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:52 (CDR2)及SEQ ID NO.:56 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:70 (CDR1)、SEQ ID NO.:71 (CDR2)及SEQ ID NO.:72 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:73 (CDR1)、SEQ ID NO.:74 (CDR2)及SEQ ID NO.:75 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv4且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2或CDH17H2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:102之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:103之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:114之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:115之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv4 (例如SEQ ID NO.:127之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:102之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:103之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:116之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:117之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv4 (例如SEQ ID NO.:127之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:45 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:52 (CDR2)及SEQ ID NO.:56 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:76 (CDR1)、SEQ ID NO.:77 (CDR2)及SEQ ID NO.:78 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:79 (CDR1)、SEQ ID NO.:80 (CDR2)及SEQ ID NO.:81 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv4且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:102之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:103之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:118之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:119之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv4 (例如SEQ ID NO.:127之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:45 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:50 (CDR2)及SEQ ID NO.:56 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:58 (CDR1)、SEQ ID NO.:59 (CDR2)及SEQ ID NO.:60 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:61 (CDR1)、SEQ ID NO.:62 (CDR2)及SEQ ID NO.:63 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv5且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:104之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:105之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:110之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:111之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv5 (例如SEQ ID NO.:128之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:45 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:50 (CDR2)及SEQ ID NO.:56 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:64 (CDR1)、SEQ ID NO.:65 (CDR2)及SEQ ID NO.:66 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:67 (CDR1)、SEQ ID NO.:68 (CDR2)及SEQ ID NO.:69 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv5且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:104之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:105之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:112之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:113之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv5 (例如SEQ ID NO.:128之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:45 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:50 (CDR2)及SEQ ID NO.:56 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:70 (CDR1)、SEQ ID NO.:71 (CDR2)及SEQ ID NO.:72 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:73 (CDR1)、SEQ ID NO.:74 (CDR2)及SEQ ID NO.:75 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv5且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2或CDH17H2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:104之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:105之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:114之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:115之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv5 (例如SEQ ID NO.:128之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:104之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:105之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:116之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:117之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv5 (例如SEQ ID NO.:128之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:45 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:50 (CDR2)及SEQ ID NO.:56 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:76 (CDR1)、SEQ ID NO.:77 (CDR2)及SEQ ID NO.:78 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:79 (CDR1)、SEQ ID NO.:80 (CDR2)及SEQ ID NO.:81 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv5且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:104之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:105之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:118之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:119之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv5 (例如SEQ ID NO.:128之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:46 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:51 (CDR2)及SEQ ID NO.:57 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:58 (CDR1)、SEQ ID NO.:59 (CDR2)及SEQ ID NO.:60 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:61 (CDR1)、SEQ ID NO.:62 (CDR2)及SEQ ID NO.:63 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv6且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:106之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:107之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:110之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:111之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv6 (例如SEQ ID NO.:129之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:46 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:51 (CDR2)及SEQ ID NO.:57 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:64 (CDR1)、SEQ ID NO.:65 (CDR2)及SEQ ID NO.:66 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:67 (CDR1)、SEQ ID NO.:68 (CDR2)及SEQ ID NO.:69 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv6且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:106之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:107之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:112之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:113之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv6 (例如SEQ ID NO.:129之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:46 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:51 (CDR2)及SEQ ID NO.:57 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:70 (CDR1)、SEQ ID NO.:71 (CDR2)及SEQ ID NO.:72 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:73 (CDR1)、SEQ ID NO.:74 (CDR2)及SEQ ID NO.:75 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv6且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2或CDH17H2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:106之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:107之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:114之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:115之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv6 (例如SEQ ID NO.:129之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:106之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:107之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:116之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:117之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv6 (例如SEQ ID NO.:129之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:46 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:51 (CDR2)及SEQ ID NO.:57 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:76 (CDR1)、SEQ ID NO.:77 (CDR2)及SEQ ID NO.:78 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:79 (CDR1)、SEQ ID NO.:80 (CDR2)及SEQ ID NO.:81 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv6且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:106之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:107之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:118之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:119之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv6 (例如SEQ ID NO.:129之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:47 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:53 (CDR2)及SEQ ID NO.:57 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:58 (CDR1)、SEQ ID NO.:59 (CDR2)及SEQ ID NO.:60 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:61 (CDR1)、SEQ ID NO.:62 (CDR2)及SEQ ID NO.:63 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv7且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:108之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:109之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:110之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:111之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv7 (例如SEQ ID NO.:130之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:47 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:53 (CDR2)及SEQ ID NO.:57 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:64 (CDR1)、SEQ ID NO.:65 (CDR2)及SEQ ID NO.:66 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:67 (CDR1)、SEQ ID NO.:68 (CDR2)及SEQ ID NO.:69 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv7且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:108之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:109之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:112之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:113之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv7 (例如SEQ ID NO.:130之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:47 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:53 (CDR2)及SEQ ID NO.:57 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:70 (CDR1)、SEQ ID NO.:71 (CDR2)及SEQ ID NO.:72 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:73 (CDR1)、SEQ ID NO.:74 (CDR2)及SEQ ID NO.:75 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv7且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2或CDH17H2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:108之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:109之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:114之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:115之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv7 (例如SEQ ID NO.:130之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:108之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:109之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:116之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:117之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv7 (例如SEQ ID NO.:130之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2。 在本發明結合分子之較佳實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:43 (CDR1)、SEQ ID NO.:47 (CDR2)及SEQ ID NO.:48 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:49 (CDR1)、SEQ ID NO.:53 (CDR2)及SEQ ID NO.:57 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:76 (CDR1)、SEQ ID NO.:77 (CDR2)及SEQ ID NO.:78 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:79 (CDR1)、SEQ ID NO.:80 (CDR2)及SEQ ID NO.:81 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv7且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 較佳地，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:108之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:109之胺基酸序列的輕鏈可變結構域，且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點包含包括SEQ ID NO.:118之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:119之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。在此實施例中，針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv7 (例如SEQ ID NO.:130之scFv)且針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1。 上文闡釋可用於本發明結合分子(例如雙特異性及四價結合分子)中之針對TRAILR2具有特異性及CDH17之抗原結合位點之具體組合(例如TR#1、TR#2、TR#3、TR#7、TR#8、TR#10、TR#12、TR2v1、TR2v2、TR2v3、TR2v4、TR2v5、TR2v6及TR2v7中任一者之TRAILR2結合位點，與CDH17E9、CDH17A6、CDH17E2、CDH17H2及CDH17v1中任一者之CDH17結合位點的組合)。 在上文所述組合之一些實施例中，CDH17之抗原結合位點包含針對CDH17具有特異性之重鏈可變結構域(例如抗原結合位點CDH17E9、CDH17A6、CDH17E2、CDH17H2或CDH17v1之VH)且融合至人類重鏈恆定區，例如IgG、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE或IgM。較佳地，使用人類IgG1之重鏈恆定區。 在本發明之另一實施例中，CDH17之抗原結合位點包含針對CDH17具有特異性之輕鏈可變結構域(例如抗原結合位點CDH17E9、CDH17A6、CDH17E2、CDH17H2或CDH17v1之VL)且融合至人類輕鏈恆定區κ或λ。較佳地，使用人類κ輕鏈恆定區。 在一些實施例中，結合分子包含具有任一CDH17特異性抗原結合位點(CDH17E9、CDH17A6、CDH17E2、CDH17H2或CDH17v1)之Ig分子(例如IgG1)及具有任一TRAILR2特異性抗原結合位點(TR#1、TR#2、TR#3、TR#7、TR#8、TR#10、TR#12、TR2v1、TR2v2、TR2v3、TR2v4、TR2v5、TR2v6及TR2v7)之scFv，其中scFv融合至IgG分子之C末端(例如經由肽連接體)，藉此形成雙特異性四價結合分子。 人類IgG1野生型之重鏈恆定區之實例序列提供於SEQ ID NO.:120中，IgG1 KO提供於SEQ ID NO.:121中，IgG4 Pro野生型提供於SEQ ID NO.:122中。IgG1 FcRnmut提供於SEQ ID NO.:270中。較佳地，重鏈恆定區係如SEQ ID:121中所提供之IgG1KO或如SEQ ID NO.:270中所提供之IgG1FcRnmut。 人類κ輕鏈恆定區之實例序列提供於SEQ ID NO.:123中。 下文提供本發明之結合分子。本發明之每一特定分子包含經修飾免疫球蛋白分子，其中免疫球蛋白重鏈具有特異性結合至CDH17之重鏈可變結構域(例如CDH17E9、CDH17A6、CDH17E2、CDH17H2或CDH17v1中任一者之VH)之胺基酸序列、免疫球蛋白恆定結構域亦及scFv，該scFv特異性結合至具有輕鏈及重鏈可變結構域(例如TR#1、TR#2、TR#3、TR#7、TR#8、TR#10、TR#12、TR2v1、TR2v2、TR2v3、TR2v4、TR2v5、TR2v6及TR2v7中任一者VL及VH)之胺基酸序列之TRAILR2且連接至Ig恆定結構域之C末端；且抗體輕鏈具有特異性結合至CDH17之輕鏈可變結構域(例如CDH17E9、CDH17A6、CDH17E2、CDH17H2或CDH17v1中任一者之VL)之胺基酸序列。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:159之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:173之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#1。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:160之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:173之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#2。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:161之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:173之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#3。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:162之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:173之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#7。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:163之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:173之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#8。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:164之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:173之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#10。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:165之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:173之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#12。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:166之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:173之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv1。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:167之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:173之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv2。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:168之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:173之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv3。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:169之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:173之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv4。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:170之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:173之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv5。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:171之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:173之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv6。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:172之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:173之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E9且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv7。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:174之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:188之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#1。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:175之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:188之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#2。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:176之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:188之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#3。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:177之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:188之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#7。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:178之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:188之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#8。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:179之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:188之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#10。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:180之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:188之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#12。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:181之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:188之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv1。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:182之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:188之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv2。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:183之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:188之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv3。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:184之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:188之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv4。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:185之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:188之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv5。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:186之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:188之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv6。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:187之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:188之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17A6且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv7。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:189之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:203之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#1。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:190之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:203之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#2。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:191之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:203之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#3。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:192之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:203之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#7。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:193之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:203之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#8。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:194之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:203之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#10。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:195之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:203之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#12。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:196之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:203之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv1。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:197之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:203之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv2。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:198之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:203之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv3。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:199之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:203之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv4。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:200之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:203之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv5。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:201之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:203之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv6。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:202之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:203之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17E2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv7。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:204之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:218之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#1。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:205之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:218之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#2。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:206之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:218之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#3。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:207之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:218之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#7。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:208之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:218之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#8。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:209之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:218之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#10。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:210之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:218之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#12。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:211之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:218之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv1。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:212之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:218之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv2。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:213之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:218之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv3。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:214之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:218之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv4。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:215之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:218之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv5。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:216之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:218之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv6。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:217之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:218之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17H2且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv7。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:219之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:233之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#1。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:220之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:233之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#2。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:221之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:233之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#3。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:222之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:233之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#7。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:223之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:233之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#8。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:224之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:233之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#10。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:225之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:233之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TR#12。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:226之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:233之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv1。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含(i) 包括SEQ ID NO.:145之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:146之胺基酸序列的輕鏈；(ii) 包括SEQ ID NO.:147之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:148之胺基酸序列的輕鏈；(iii) 包括SEQ ID NO.:153之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:154之胺基酸序列的輕鏈；(iv) 包括SEQ ID NO.:155之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:156之胺基酸序列的輕鏈；或(v) 包括SEQ ID NO.:157之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:158之胺基酸序列的輕鏈。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:227之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:233之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv2。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含(i) 包括SEQ ID NO.:149之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:150之胺基酸序列的輕鏈，或(ii) 包括SEQ ID NO.:151之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:152之胺基酸序列的輕鏈。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:228之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:233之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv3。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:229之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:233之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv4。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:230之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:233之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv5。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:231之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:233之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv6。 本發明之另一態樣提供結合分子，其包含包括SEQ ID NO.:232之胺基酸序列的重鏈及包括SEQ ID NO.:233之胺基酸序列的輕鏈。在此態樣中，針對CDH17具有特異性之抗原結合位點係CDH17v1且針對TRAILR2具有特異性之抗原結合位點係TRv7。 本文進一步提供特異性結合至CDH17之抗體分子(例如具有兩條重鏈及兩條輕鏈之Y形結構之全長抗體/免疫球蛋白分子或其片段，例如Fv、Fab、Fab’或F(ab’)2片段、單鏈抗體、單鏈可變片段(scFv))。在一些實施例中，針對CDH17具有特異性之抗體分子係重組單株抗體、嵌合、人類化或人類抗體分子。 在一些實施例中，針對CDH17具有特異性之抗體分子包含包括SEQ ID NO.:58 (CDR1)、SEQ ID NO.:59 (CDR2)及SEQ ID NO.:60 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:61 (CDR1)、SEQ ID NO.:62 (CDR2)及SEQ ID NO.:63 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。 在一些實施例中，針對CDH17具有特異性之抗體分子包含包括SEQ ID NO.:110之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:111之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。 在一些實施例中，針對CDH17具有特異性之抗體分子包含包括SEQ ID NO.:64 (CDR1)、SEQ ID NO.:65 (CDR2)及SEQ ID NO.:66 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:67 (CDR1)、SEQ ID NO.:68 (CDR2)及SEQ ID NO.:69 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。 在一些實施例中，針對CDH17具有特異性之抗體分子包含包括SEQ ID NO.:112之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:113之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。 在一些實施例中，針對CDH17具有特異性之抗體分子包含包括SEQ ID NO.:70 (CDR1)、SEQ ID NO.:71 (CDR2)及SEQ ID NO.:72 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:73 (CDR1)、SEQ ID NO.:74 (CDR2)及SEQ ID NO.:75 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。 在一些實施例中，針對CDH17具有特異性之抗體分子包含包括SEQ ID NO.:114之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:115之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。 在一些實施例中，針對CDH17具有特異性之抗體分子包含包括SEQ ID NO.:116之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:117之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。 在一些實施例中，針對CDH17具有特異性之抗體分子包含包括SEQ ID NO.:76 (CDR1)、SEQ ID NO.:77 (CDR2)及SEQ ID NO.:78 (CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.:79 (CDR1)、SEQ ID NO.:80 (CDR2)及SEQ ID NO.:81 (CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。 在一些實施例中，針對CDH17具有特異性之抗體分子包含包括SEQ ID NO.:118之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.:119之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。 在一些實施例中，如上文所定義之CDH17特異性抗體進一步包含人類重鏈恆定結構域(例如IgG恆定結構域)及人類輕鏈恆定結構域(例如κ或λ輕鏈恆定結構域)。在一些實施例中，重鏈恆定結構域係人類IgG1野生型(例如如提供於SEQ ID NO.:120中)、IgG1 KO (例如如提供於SEQ ID NO.:121中)、IgG4 Pro野生型(例如如提供於SEQ ID NO.:122中)或IgG1 FcRnmut (例如如提供於SEQ ID NO.:270中)。在一些實施例中，人類輕鏈恆定結構域係人類κ (例如如提供於SEQ ID NO.:123中)。 在一些實施例中，CDH17特異性抗體具有包含SEQ ID NO.:110、112、114、116或118中任一者之序列之重鏈，該序列融合至SEQ ID NO.:120、121、122或270中任一者之序列；及包含SEQ ID NO.:111、113、115、117或119中任一者之序列之輕鏈，該序列融合至SEQ ID NO.:123之序列(例如包含SEQ ID NO.:173、188、203、218或233中任一者之序列之輕鏈)。 本文所提供之CDH17特異性抗體可藉由附接對不同抗原具有結合特異性之染料、藥物或另一分子用於標記、定位、鑑別或靶向表現CDH17之細胞(例如在ELISA分析、FACS分析、免疫組織學或諸如此類中)。本文所述之單獨CDH17特異性抗體對表現CDH17之細胞之細胞活力無效應。在一些實施例中，CDH17特異性抗體特異性結合至CDH17表現細胞之表面且用於定位及/或鑑別該等細胞。在一些實施例中，本文所提供之CDH17抗體用於鑑別表現CDH17之細胞(例如腫瘤細胞)。在一些實施例中，本文所提供之CDH17抗體藉由將藥物或細胞毒性劑附接至該CDH17抗體用於將該藥物或細胞毒性劑遞送至靶細胞(例如表現CDH17之腫瘤細胞)，藉此例如殺死該靶細胞。 本發明之另一態樣提供編碼本發明結合分子或本發明抗體分子之經分離核酸分子或包含該(等)核酸分子之表現載體。 在一些實施例中，本發明結合分子或本發明抗體分子包含抗體重鏈及/或輕鏈多肽。如熟習此項技術者可瞭解，可容易地製備編碼重鏈多肽、輕鏈多肽或重鏈多肽及輕鏈多肽之核酸分子。 編碼輕鏈及重鏈之核酸分子可以化學方式及酶方式藉由聚合酶鏈式反應(PCR)使用標準方法合成。首先，可利用業內已知之方法(例如Gait, 1984)合成適宜寡核苷酸，其可用於產生合成基因。自寡核苷酸生成合成基因之方法為業內已知(例如Stemmer等人，1995；Ye等人，1992；Hayden et Mandecki, 1988；Frank等人，1987)。 本發明之核酸分子包括(但不限於)編碼序列表中所顯示之多肽序列之DNA分子。而且，本發明亦係關於在高嚴格度結合及洗滌條件下與編碼序列表中所顯示之多肽序列之DNA分子雜交的核酸分子，如WO 2007/042309中所定義。較佳分子(自mRNA角度來看)係與本文所述DNA分子中之一者具有至少75%或80% (較佳至少85%、更佳至少90%且最佳至少95%)同源性或序列一致性之彼等。舉例而言，就在真核細胞中表現抗體而言，序列表中所顯示之DNA序列已經設計以匹配真核細胞中之密碼子使用。若期望在大腸桿菌(E. coli
)中表現抗體，則可改變該等序列以匹配大腸桿菌密碼子使用。本發明DNA分子之變體可以若干不同方式構築，如例如WO 2007/042309中所述。 如本文所用之術語「一致」或「一致性%」在兩個或更多個核酸或多肽序列之情況下係指在比較並比對以獲得最大對應性時，兩個或更多個序列或子序列相同或具有指定百分比之相同核苷酸或胺基酸殘基。為測定一致性%，比對各序列用於最佳比較目的(例如可將空位引入第一胺基酸之序列或核酸序列中以與第二胺基酸或核酸序列最佳比對)。然後比較相應胺基酸位置或核苷酸位置處之胺基酸殘基或核苷酸。當第一序列中之位置被與第二序列中之相應位置相同之胺基酸殘基或核苷酸佔據時，則該等分子在該位置處一致。兩個序列之間之一致性%係該等序列所共享之一致位置數之函數(即一致性% = 一致位置數/總位置數(例如重疊位置)×100)。在一些實施例中，若適宜，所比較之兩個序列在序列內引入空位後具有相同長度(例如不包括延伸超出所比較序列之其他序列)。舉例而言，當比較可變區序列時，並不考慮前導序列及/或恆定結構域序列。對於兩個序列之間之序列比較，「相應」CDR係指兩個序列中之相同位置(例如每一序列之CDR-H1)之CDR。 可使用數學算法測定兩個序列之間之一致性%或相似性%。用於比較兩個序列之數學算法之較佳非限制性實例係Karlin及Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268之算法，其係根據Karlin及Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877修改而來。將此一算法納入Altschul等人，1990, J. Mol. Biol. 215:403-410之NBLAST及XBLAST程式中。可利用NBLAST程式、得分=100、字長=12來實施BLAST核苷酸檢索，以獲得與編碼所關注蛋白之核酸同源之核苷酸序列。可利用XBLAST程式、得分=50、字長=3來實施BLAST蛋白質檢索，以獲得與所關注蛋白同源之胺基酸序列。為獲得加空位比對用於比較目的，可如Altschul等人1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402中所述使用加空位BLAST。或者，可使用PSI-Blast來實施迭代檢索以檢測分子之間之疏遠關係(Id.)。在利用BLAST、加空位BLAST及PSI-Blast程式時，可使用各別程式(例如XBLAST及NBLAST)之預設參數。用於比較序列之數學算法之另一較佳非限制性實例係Myers及Miller, CABIOS (1989)之算法。將此一算法納入ALIGN程式(2.0版)中，該程式係GCG序列比對軟體包之一部分。在使用ALIGN程式比較胺基酸序列時，可使用PAM120權重殘基表、空位長度罰分12及空位罰分4。用於序列分析之其他算法為業內已知且包括如Torellis及Robotti, 1994, Comput. Appl. Biosci. 10:3-5中所述之ADVANCE及ADAM；及Pearson及Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444-8中所述之FASTA。在FASTA內，ktup係設定檢索之靈敏度及速度之控制選擇。若ktup=2，則藉由觀察比對刺激對尋找所比較兩個序列中之相似區域；若ktup=1，則檢查單一比對胺基酸。ktup對於蛋白質序列可設定為2或1或對於DNA序列可設定為1至6。若未指定ktup，則預設對於蛋白質為2且對於DNA為6。或者，可使用CLUSTAL W算法實施蛋白質序列比對，如Higgins等人，1996, Methods Enzymol. 266:383-402所述。 本發明之另一態樣提供產生本文所述之結合或抗體分子之方法，其包含： (a) 在容許分子表現之條件下培養本發明之宿主細胞；及 (b) 回收分子；及視情況 c) 進一步純化及/或修飾及/或調配分子。 在本發明此態樣之實施例中，產生方法進一步包含步驟(c) 進一步純化及/或修飾及/或調配本發明結合分子。 為產生本發明之結合分子或抗體，將編碼全長輕鏈及/或重鏈之DNA分子或其片段插入表現載體中，使得該等序列可操作連接至轉錄及轉譯控制序列。 為製造本發明之結合分子或抗體，熟習此項技術者可自業內所熟知之眾多種表現系統、例如Kipriyanov及Le Gall, Curr Opin Drug Discov Devel. 2004年3月;7(2):233-42所綜述之彼等進行選擇。 表現載體包括質體、反轉錄病毒、黏粒、EBV源游離基因體及諸如此類。表現載體及表現控制序列經選擇與宿主細胞相容。可將抗體輕鏈基因及抗體重鏈基因或本文所述結合分子之重鏈之基因(例如包含其C末端附接至scFv序列之免疫球蛋白重鏈序列之基因)插入各別載體中。在某些實施例中，將兩種DNA序列輕鏈及重鏈序列插入相同表現載體中。方便載體係編碼功能完整之人類CH或CL免疫球蛋白序列之彼等，其中適當限制位點經改造以使得可容易插入並表現任何VH或VL序列，如上文所述。關於抗體輕鏈恆定鏈通常係κ或λ，關於抗體重鏈，其可為(但不限於)任一IgG同型(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)或其他免疫球蛋白，包括等位基因變體。 重組表現載體亦可編碼促進抗體鏈(例如本文所述結合分子或抗體之重鏈及輕鏈)自宿主細胞分泌之信號肽。可將編碼抗體鏈之DNA選殖至載體中，使得信號肽框內連接至成熟抗體鏈DNA之胺基末端。信號肽可為免疫球蛋白信號肽或來自非免疫球蛋白之異源肽。或者，編碼抗體鏈(例如本文所述結合分子或抗體之重鏈及輕鏈)之DNA序列可已含信號肽序列。 除編碼抗體鏈(例如本文所述結合分子或抗體之重鏈及輕鏈)之DNA序列外，重組表現載體攜載調控序列，包括啟動子、增強子、終止及多聚腺苷酸化信號及控制抗體鏈在宿主細胞中表現之其他表現控制元件。啟動子序列(針對哺乳動物細胞中之表現例示)之實例係衍生自CMV (例如CMV猿猴病毒40 (SV40))之啟動子及/或增強子(例如SV40啟動子/增強子)、腺病毒啟動子(例如腺病毒主要晚期啟動子(AdMLP))、多瘤啟動子及強哺乳動物啟動子(例如天然免疫球蛋白及肌動蛋白啟動子)。多聚腺苷酸化信號之實例係BGH聚A、SV40晚期或早期聚A；或者，可使用免疫球蛋白基因之3´UTR等。 重組表現載體亦可攜載調控載體在宿主細胞中之複製之序列(例如複製起點)及可選標記物基因。可根據業內所熟知之轉染方法(包括脂質體介導之轉染、聚陽離子介導之轉染、原生質體融合、顯微注射、磷酸鈣沈澱、電穿孔或藉由病毒載體轉移)，將編碼本文所述結合分子或抗體之重鏈或其抗原結合部分及/或輕鏈或其抗原結合部分的核酸分子及包含該等DNA分子之載體引入宿主細胞(例如細菌細胞或較高級真核細胞，例如哺乳動物細胞)中。 較佳地，編碼本文所述結合分子或抗體之重鏈及輕鏈之核酸分子存在於共轉染至宿主細胞、較佳哺乳動物細胞中之兩種載體上。 因此，另一態樣提供宿主細胞，其包含包括編碼本文所述結合分子或抗體之重鏈之核酸分子的表現載體及包括編碼本文所述結合分子或抗體之輕鏈之核酸分子的表現載體。 可用作表現宿主之哺乳動物細胞系為業內所熟知且包括尤其中國倉鼠卵巢(CHO、CHO-DG44)細胞、NSO、SP2/0細胞、HeLa細胞、幼小倉鼠腎(BHK)細胞、猴腎細胞(COS)、人類癌細胞(例如Hep G2)、A549細胞、3T3細胞或任一該細胞系之衍生物/子代。可使用其他哺乳動物細胞(包括但不限於人類、小鼠、大鼠、猴及齧齒類動物細胞系)或其他真核細胞(包括但不限於酵母、昆蟲及植物細胞)或原核細胞(例如細菌)。本發明結合分子係藉由將宿主細胞培養足以容許結合分子在宿主細胞中表現之時間段來產生。 如本文所述之結合分子及抗體分子較佳係自培養基以分泌多肽形式回收或例如在無分泌信號下表現時其可自宿主細胞溶解物回收。需要使用用於重組蛋白及宿主細胞蛋白之標準蛋白質純化方法以獲得如本文所述結合分子或抗體之實質上均質之製劑的方式純化本文所述之結合分子或抗體分子。舉例而言，可用於獲得本發明結合分子及抗體之最新純化方法包括自培養基或溶解物去除細胞及/或顆粒細胞沈澱物作為第一步驟。然後例如藉由免疫親和或離子交換管柱上之分級分離、乙醇沈澱、反相HPLC、Sephadex層析、二氧化矽或陽離子交換樹脂上之層析自污染物可溶性蛋白、多肽及核酸純化結合分子或抗體。作為獲得如本文所述TRAILR2及CDH17結合分子或CDH17抗體之過程中之最後步驟，可將經純化結合分子或抗體乾燥(例如凍乾)，如下文所述用於治療應用。 本發明之另一態樣提供本發明之結合分子或抗體，其用於藥劑中。 本發明之另一態樣提供本發明結合分子(具有TR#1、TR#2、TR#3、TR#7、TR#8、TR#10、TR#12、TR2v1、TR2v2、TR2v3、TR2v4、TR2v5、TR2v6及TR2v7中任一者之TRAILR2結合位點及CDH17E9、CDH17A6、CDH17E2、CDH17H2及CDH17v1中任一者之CDH17結合位點的結合分子)或針對CDH17具有特異性之抗體(例如融合至細胞毒性藥物)，其用於癌症之療法中。較佳地，癌症係結腸直腸癌(CRC)、胃癌(GC)、胰臟癌(PAC)、肝癌(包括膽道系統癌症)或神經內分泌腫瘤。 如上文所述，本發明者已鑑別出，本文所述之結合分子在誘導癌細胞之細胞凋亡方面具有較大效用且因此可用於表現TRAILR2及CDH17二者之癌症之療法中。鑑別特定腫瘤是否表現TRAILR2及CDH17之方法為業內所熟知。舉例而言，可使用免疫組織化學來確定腫瘤組織是否表現TRAILR2及CDH17 (例如使用如本文所述之CDH17抗體)且因此將適於用本發明結合分子治療。 具體而言，本發明結合分子可用於治療結腸直腸癌(CRC)。 CRC係ICD-10中所列示之典型惡性疾病且係世界範圍內癌症發病率及死亡率之主要原因之一。約25%之CRC患者呈現明顯轉移且40%-50%之新近診斷患者罹患轉移性疾病。儘管化學療法之最新改良已延長轉移性CRC之存活持續時間，但大部分患者將死於其疾病。因此，業內極大地需要其他治療劑來治療此疾病。 已知約30%-50%之結腸直腸癌具有突變(異常) KRAS基因。頻繁發現於腫瘤中之KRAS
突變包括外顯子2 (密碼子12及13)及外顯子3 (密碼子61)處之彼等且可根據腫瘤生檢來分析。該等突變包括活化突變，其引起連續信號轉導，從而刺激參與細胞生長、增殖、侵入及轉移之下游信號傳導路徑。已表明，致癌K-Ras可抵抗由TRAIL誘導之細胞凋亡(Hoogwater等人，Gastroenterology. 2010年6月;138(7):2357-67)。在一些實施例中，本文所述之結合分子(具有TR#1、TR#2、TR#3、TR#7、TR#8、TR#10、TR#12、TR2v1、TR2v2、TR2v3、TR2v4、TR2v5、TR2v6及TR2v7中任一者之TRAILR2結合位點及CDH17E9、CDH17A6、CDH17E2、CDH17H2及CDH17v1中任一者之CDH17結合位點的結合分子)用於治療KRAS野生型結腸直腸癌(即KRAS野生型腫瘤患者)。在一些實施例中，本文所述之結合分子(具有TR#1、TR#2、TR#3、TR#7、TR#8、TR#10、TR#12、TR2v1、TR2v2、TR2v3、TR2v4、TR2v5、TR2v6及TR2v7中任一者之TRAILR2結合位點及CDH17E9、CDH17A6、CDH17E2、CDH17H2及CDH17v1中任一者之CDH17結合位點的結合分子)用於治療KRAS突變體結腸直腸癌(即KRAS突變體腫瘤患者)。 在另一態樣中，本發明係關於治療或預防癌症之方法，該方法包含向人類(例如患有癌症或具有罹患癌症風險之個體)投與有效量之本發明結合分子。 較佳施用模式係非經腸、藉由輸注或注射(靜脈內、肌內、皮下、腹膜內、真皮內)，但亦可使用其他施用模式，例如藉由吸入、經皮、鼻內、經頰、經口。 在另一態樣中，本發明之結合分子係與可用於投與結合分子之裝置組合使用，該裝置係例如注射器、注射筆、微型幫浦或其他裝置。在另一態樣中，本發明之結合分子包含在部件之套組中，例如亦包括包裝插頁及結合分子之使用說明書。 欲投與分子之「治療有效量」係預防、改善或治療癌症之臨床症狀所需之最小量，具體而言對該等病症有效之最小量。 本發明結合分子之每日施用之劑量範圍通常為1 μg/kg至100 mg/kg，較佳0.1 mg/kg至20 mg/kg。 通常，為治療及/或緩和本文所提及之疾病、病症及病況且端視欲治療之具體疾病、病症或病況、欲使用之本發明具體結合分子之功效、具體投與途徑及所用具體醫藥調配物或組合物，本發明抗體分子通常將以下列量投與：0.005與20.0 mg/公斤體重及劑量之間，較佳0.05與10.0 mg/kg/劑量之間，且更佳0.5與10 mg/kg/劑量之間，呈連續(例如藉由輸注)或更佳單一劑量形式。投與間隔可為例如每週兩次、每週一次或每月一次劑量，但可尤其端視之前所提及之參數顯著變化。因此，在一些情形下，使用小於上文所給出之最小劑量可能足夠，而在其他情形下可能必須超過該上限。在大量投與時，可適當地將其分成多個較小劑量並全天散佈。 端視本發明之具體結合分子及其具體藥物動力學及其他性質，可每天一次、每隔一天、每隔兩天、每隔三天、每隔四天或每隔五天、每週一次、每月一次及諸如此類投與。投與方案可包括長期每週一次治療。「長期」意指至少兩週且較佳持續數月或數年。 本發明結合分子及包含其之組合物之效能可使用任一適宜活體外分析、基於細胞之分析、活體內分析及/或本身已知之動物模型或其任一組合測試，此端視所涉及之具體疾病而定。適宜分析及動物模型將為熟習此項技術者顯而易見，且例如包括下文實例中所用之分析及動物模型。 當然，實際醫藥有效量或治療劑量將取決於熟習此項技術者已知之要素，例如患者之年齡及體重、投與途徑及疾病之嚴重程度。在任一情形下，本發明結合分子將以多個劑量及容許基於患者之獨特病況遞送醫藥有效量之方式投與。 本發明結合分子可單獨或與其他藥理學活性成分組合使用，該等活性成分係例如最新或標準護理化合物，例如細胞生長抑制或細胞毒性物質、細胞增殖抑制劑、抗血管生成物質、類固醇、免疫調節劑/檢查點抑制劑及諸如此類。 因此，本發明之另一態樣提供醫藥組合物，其包含本發明之結合分子以及醫藥上可接受之載劑及視情況一或多種其他活性成分。 本發明之另一態樣提供本發明之結合分子，其用於癌症之療法(例如患有癌症或具有罹患癌症風險之個體)中，其中該療法包含一或多種藥理學活性物質。 本發明之另一態樣提供一或多種活性成分之用途，其用於製造用於癌症及/或腫瘤療法(例如患有癌症或具有罹患癌症風險之個體)之藥劑，其中該藥劑包含本發明之結合分子。 可與本發明之結合分子組合投與之細胞生長抑制及/或細胞毒性活性物質包括(但不限於)激素、激素類似物及抗激素、芳香酶抑制劑、LHRH激動劑及拮抗劑、生長因子(生長因子，例如血小板源生長因子(PDGF)、纖維母細胞生長因子(FGF)、血管內皮生長因子(VEGF)、表皮生長因子(EGF)、胰島素樣生長因子(IGF)、人類表皮生長因子(HER，例如HER2、HER3、HER4)及肝細胞生長因子(HGF))抑制劑，抑制劑係例如(抗)生長因子抗體、(抗)生長因子受體抗體及酪胺酸激酶抑制劑，例如西妥昔單抗(cetuximab)、吉非替尼(gefitinib)、阿法替尼(afatinib)、尼達尼布(nintedanib)、伊馬替尼(imatinib)、拉帕替尼(lapatinib)、伯舒替尼(bosutinib)及曲妥珠單抗(trastuzumab)；抗代謝物(例如抗葉酸劑，例如胺甲喋呤(methotrexate)、雷替曲塞(raltitrexed)、嘧啶類似物(例如5-氟尿嘧啶(5-FU)、吉西他濱(gemcitabine)、伊立替康(irinotecan)、多柔比星(doxorubicin)、TAS-102、卡培他濱(capecitabine)及吉西他濱(gemcitabine))、嘌呤及腺苷類似物(例如巰嘌呤、硫鳥嘌呤、克拉屈濱(cladribine)及噴司他汀(pentostatin))、阿糖胞苷(cytarabine) (ara C)、氟達拉濱(fludarabine))；抗腫瘤抗生素(例如蒽環)；鉑衍生物(例如順鉑(cisplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)、卡鉑(carboplatin))；烷基化劑(例如雌莫司汀(estramustin)、氮芥(meclorethamine)、美法侖(melphalan)、氮芥苯丁酸(chlorambucil)、白消安(busulphan)、達卡巴嗪(dacarbazin)、環磷醯胺(cyclophosphamide)、異環磷醯胺(ifosfamide)、替莫唑胺(temozolomide)、亞硝基脲(例如卡莫司汀(carmustin)及洛莫司汀(lomustin))、噻替派(thiotepa))；抗有絲分裂劑(例如長春花生物鹼(Vinca alkaloid)，例如長春鹼(vinblastine)、長春地辛(vindesin)、長春瑞濱(vinorelbin)及長春新鹼(vincristine)；及紫杉烷(taxane)，例如太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多西他賽(docetaxel))；血管生成抑制劑，包括貝伐珠單抗(bevacizumab)、雷莫蘆單抗(ramucirumab)及阿柏西普(aflibercept)、微管蛋白抑制劑；DNA合成抑制劑、PARP抑制劑、拓樸異構酶抑制劑(例如表鬼臼毒素(epipodophyllotoxin) (例如依託泊苷(etoposide)及凡畢複(etopophos))、替尼泊苷(teniposide)、安吖啶(amsacrin)、托泊替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、米托蒽醌(mitoxantrone))、絲胺酸/蘇胺酸激酶抑制劑(例如PDK1抑制劑、Raf抑制劑、A-Raf抑制劑、B-Raf抑制劑、C-Raf抑制劑、mTOR抑制劑、mTORC1/2抑制劑、PI3K抑制劑、PI3Kα抑制劑、雙重mTOR/PI3K抑制劑、STK33抑制劑、AKT抑制劑、PLK1抑制劑(例如伏拉塞替(volasertib))、CDK抑制劑(包括CDK9抑制劑)、極光激酶抑制劑)、酪胺酸激酶抑制劑(例如PTK2/FAK抑制劑)、蛋白蛋白相互作用抑制劑、MEK抑制劑、ERK抑制劑、FLT3抑制劑、BRD4抑制劑、IGF-1R抑制劑、Bcl-xL抑制劑、Bcl-2抑制劑、Bcl-2/Bcl-xL抑制劑、ErbB受體抑制劑、BCR-ABL抑制劑、ABL抑制劑、Src抑制劑、雷帕黴素(rapamycin)類似物(例如依維莫司(everolimus)、替西羅莫司(temsirolimus)、瑞達福羅莫司(ridaforolimus)、西羅莫司(sirolimus))、雄激素合成抑制劑、雄激素受體抑制劑、DNMT抑制劑、HDAC抑制劑、ANG1/2抑制劑、CYP17抑制劑、放射性醫藥、免疫治療劑(例如免疫檢查點抑制劑，例如CTLA4、PD1、PD-L1、LAG3及TIM3結合分子/免疫球蛋白，例如伊匹單抗(ipilimumab)、尼沃魯單抗(nivolumab)、派姆單抗(pembrolizumab))及各種化學治療劑(例如阿米福汀(amifostin)、阿那格雷(anagrelid)、氯膦酸鹽(clodronat)、非爾司亭(filgrastin)、干擾素、干擾素α、甲醯四氫葉酸(leucovorin)、利妥昔單抗(rituximab)、丙卡巴肼(procarbazine)、左旋咪唑(levamisole)、美司鈉(mesna)、米托坦(mitotane)、帕米膦酸(pamidronate)及卟吩姆鈉(porfimer))；蛋白酶體抑制劑(例如硼替佐米(Bortezomib))；Smac及BH3模擬物；恢復p53功能性之藥劑，包括mdm2-p53拮抗劑；Wnt/β-連環蛋白信號傳導路徑抑制劑；及/或周期蛋白依賴性激酶9抑制劑。 尤佳地用本發明結合分子與選自以下之藥物組合治療： (i) 在乳癌患者中，抗VEGF抗體(貝伐珠單抗及其他抗血管生成物質)與或不與化學療法組合(包括在新輔助環境中多柔比星/環磷醯胺組合及/或卡培他濱/多西他賽組合；紫杉烷/鉑方案用於第一線及後續線治療)； (ii) 用於治療CRC之化學治療劑(包括5-氟尿嘧啶、伊立替康、多柔比星及TAS-102)； (iii) 抗EGFR抗體(在KRAS
野生型腫瘤中西妥昔單抗及帕尼單抗)與或不與化學療法組合(包括伊立替康)、抗VEGF抗體組合(貝伐珠單抗及其他抗血管生成物質)或瑞格菲尼組合，例如用於治療CRC患者； (iv) 免疫治療劑，包括抗PD-1及抗PD-L1藥劑，例如派姆單抗及尼沃魯單抗，例如用於治療CRC患者。 為用於療法中，將本發明之結合分子或抗體調配成適於幫助投與動物或人類之醫藥組合物。本文所述結合分子或抗體分子之典型調配物可藉由混合結合分子或抗體分子與生理上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑、以凍乾或其他乾燥調配物或水溶液或水性或非水性懸浮液形式製備。載劑、賦形劑、改質劑或穩定劑在所用劑量及濃度下無毒。其包括緩衝液系統，例如磷酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽及其他無機或有機酸及其鹽；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑，例如十八烷基二甲基苄基氯化銨；氯化六羥季銨；氯化苄烷銨、氯化本索寧(benzethonium chloride)；酚、丁醇或苄醇；對羥苯甲酸烷基酯，例如對羥苯甲酸甲酯或對羥苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚；蛋白質，例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水聚合物，例如聚乙烯基吡咯啶酮或聚乙二醇(PEG)；胺基酸，例如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、二醣、寡醣或多醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖、蔗糖、海藻糖、糊精或聚葡萄糖；螯合劑，例如EDTA；糖醇，例如甘露醇或山梨醇；成鹽相對離子，例如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及/或離子型或非離子型表面活性劑，例如TWEEN™ (聚山梨醇酯)/PLURONICS™或脂肪酸酯、脂肪酸醚或糖酯。在抗體調配物中亦可含有有機溶劑，例如乙醇或異丙醇。賦形劑亦可具有釋放改質或吸收改質功能。 通常，水溶液或懸浮液將較佳。通常，適用於治療蛋白(例如本發明結合分子)之調配物係緩衝蛋白質溶液，例如包括適宜濃度(例如0.001至400 mg/ml，較佳0.005至200 mg/ml，更佳0.01至200 mg/ml，更佳1.0 - 100 mg/ml，例如1.0至10.0 mg/ml (i.v.投與)或100 mg/ml (s.c.投與)之蛋白質及諸如以下等水性緩衝液之溶液： - 磷酸鹽緩衝鹽水，pH 7.4， - 其他磷酸鹽緩衝液，pH 6.2至8.2， - 乙酸鹽緩衝液，pH 3.2至7.5、較佳pH 4.8至5.5 - 組胺酸緩衝液，pH 5.5至7.0， - 琥珀酸鹽緩衝液，pH 3.2至6.6及 - 檸檬酸鹽緩衝液，pH 2.1至6.2， 及視情況鹽(例如NaCl)及/或穩定劑(例如蔗糖、海藻糖、離胺酸)及/或其他多元醇(例如甘露醇及甘油)，用於提供溶液及視情況清潔劑(例如0.02% Tween-20或Tween-80)之等滲性以例如防止聚集。 用於i.v.投與之較佳緩衝蛋白質溶液係包括約10 mg/ml之溶解於10 mM檸檬酸鹽緩衝液(pH 5.5)中之本發明結合分子、207 mM蔗糖、25 mM離胺酸HCl及0.02%聚山梨醇酯20之溶液。用於皮下施用之調配物可包括顯著較高濃度之本發明抗體，例如高達100 mg/ml或甚至高於100 mg/ml。然而，熟習此項技術者將明瞭，如上文所給出之成分及其量僅代表一種較佳選擇。熟習此項技術者即可明瞭其替代形式及變化形式或可容易地自上述揭示內容開始設想。 現將藉助以下非限制性實例來闡述本發明。實例 1A ： CDH17 及 TRAILR2 二者在原發性及轉移性結腸直腸癌 (CRC) 以及在原發性胃癌 (GC) 及胰臟癌 (PAC) 中之盛行率 .
實施評估TRAILR2及CDH17在不同腫瘤類型中之蛋白質表現之研究。 對新鮮冷凍及OCT包埋樣品實施原發性CRC上之TRAILR2及CDH17之IHC。在低溫切片機(cryotome)上製備5 µm厚切片且將其置於載玻片上，然後在室溫下在4% PFA及封阻溶液(PBS/2% BSA)中固定。將切片與一級抗體(抗TRAILR2純系TR2.21，來自Adipogen編號AG-20B-0028, C=10 µg/ml；抗CDH17 (muIgG1)純系141713，來自R&D Systems編號MAB1032, C=1µg/ml)一起培育，然後與檢測試劑(TRAILR2及CDH17：EnVision+, HRP, 小鼠, DAKO編號4000)一起培育並在DAB溶液中培育。使用蘇木素實施複染。若適宜，在PBS中實施洗滌步驟。 對福馬林固定及石蠟包埋之樣品實施CRC轉移上之TRAILR2及CDH17之IHC。在切片機上製備2 µm厚切片，將其置於載玻片上且脫蠟。以121℃/1巴施加未經遮蔽之溶液(TRAILR2: pH9, Vector Laboratories編號H3301；CDH17: pH6, Vector Laboratories編號H3300)，然後使用3% H2
O2
及隨後PBS/2% BSA中之正常山羊血清(Vector Laboratories編號S-1000)進行封阻步驟。在室溫下將切片與一級抗體(抗TRAILR2 (D4E9) XP®兔mAb，來自Cell Signaling編號8074，以1:20稀釋；抗CDH17 (muIgG1)純系141713，來自R&D Systems編號MAB1032, C=1 µg/ml)一起培育1h，然後與檢測試劑(TRAILR2: EnVision+, HRP, 兔, DAKO編號K4003；CDH17: EnVision+, HRP, 小鼠, DAKO編號4000)尤其培育並在DAB溶液中培育。使用蘇木素實施複染。若適宜，在PBS中實施洗滌步驟。 在圖14中，顯示在原發性CRC及CRC肝轉移中TRAILR2及CDH17二者之代表性IHC影像。在原發性CRC (n=26)中，在100%之所有病例中觀察到CDH17表現且在88%中觀察到與TRAILR2共表現；在轉移性CRC (n=39；肝及肺)中，在100%之所有病例中觀察到CDH17表現且在100%中觀察到與TRAILR2共表現；在原發性GC (n=49)中，在95%之所有病例中觀察到CDH17表現，且在60%中觀察到與TRAILR2共表現；在原發性PaC (n=32)中，在80%之所有病例中觀察到CDH17表現且在20%中觀察到與TRAILR2共表現。 此研究支持CDH17及TRAILR2在很大的CRC、GC及PAC之群體中共表現。實例 1B ：識別人類 TRAIL 受體 2 (TRAILR2) 及人類鈣黏蛋白 17 (CDH17) 之結合分子之設計
本發明者已研發出結合CDH17及TRAILR2且誘導表現CDH17及TRAILR2二者之癌細胞之細胞凋亡的結合分子。所用分子設計具有IgG抗體(稱為「主控抗體」)，其對一種靶抗原具有特異性，且不同特異性之scFv偶合至重鏈之C末端。設計之示意圖顯示於圖1中。 較佳地，結合分子為雙特異性及四價。 雙特異性分子在scFv之可變重鏈(VH)與可變輕鏈(VL)結構域之間含有撓性肽序列，且scFv結構域經由另一系列連接體連接至主控IgG抗體。在一構形中，scFv經定向使得VL結構域形成scFv之「N末端」且因此融合至主控抗體重鏈之C末端，同時VH形成scFv之C末端且實際上形成整個重鏈多肽。然而，可瞭解此「N-VL-VH-C」結構可顛倒，即「N-VH-VL-C」。 為測試此概念之可行性，基於圖1中所繪示之格式製備多個不同雙特異性分子。 以下實例解釋用於生成結合CDH17及TRAILR2之雙特異性分子之方法以及該等分子之格式及生物活性之變化。實例 2 ：使用自雜交瘤高通量 V 基因回收及培養單 B 細胞製備識別 CDH17 及 TRAILR2 之結合結構域
如可瞭解，為製備結合至人類CDH17及TRAILR2之雙特異性分子，需要獲得結合至個別靶抗原之可變結構域。 為達成此目的，在活體外培養衍生自CDH17或TRAILR2免疫小鼠之純系雜交瘤或單B細胞。針對人類CDH17或TRAILR2之反應性篩選上清液。然後自所鑑別之陽性純系擴增免疫球蛋白(Ig) VH及VL基因。 為自雜交瘤分離RNA，使單一純系之約2×106
個細胞沈澱且用作源材料。對於單B細胞，使用100至500個自異常分離之B細胞擴增之細胞作為源材料。使用RNeasy Plus (Qiagen, Hilden, Germany)分離RNA。然後使用Smarter cDNA合成套組(Clontech, Mount View, CA)根據製造商說明書合成cDNA。 使用表1中所列示之引子擴增Ig VH及VL基因。每一50 μl PCR反應物係由20 µM正向及反向引子混合物、25 μl Pfu預混合物(Agilent Technologies)、2 μl未純化cDNA及21 μl雙蒸H2
O組成。PCR反應以94℃步驟保持3 min開始，然後為15個PCR循環(92℃保持1 min，55℃保持1 min，68℃保持1 min)，然後25個PCR循環(94℃保持1 min，50℃保持1 min，72℃保持1 min)，且以72℃步驟保持7 min結束。 然後用經條碼化用於454下一代測序之引子組實施第二輪PCR。反應開始於在94℃下保持3 min，然後在92℃下保持1 min、53℃保持1 min及68℃保持1 min循環35輪。將VL及VH PCR產物彙集在一起，凝膠純化，然後提交用於454 DNA測序(Roche GS-FLX, SeqWright, U.S.A.)。 使用此方法，製備大量編碼針對CDH17具有特異性或TRAILR2之結合結構域之Ig VH及VL基因對。使用業內已知之方法進一步人類化一些VH及VL序列。表 1 ：引子 序列 
實例 3 ：結合 CDH17 及 TRAILR2 之雙特異性分子之高通量構築
為構築編碼TRAILR2 scFv之基因區段，藉由編碼撓性肽序列連接體GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO.:143)之基因區段連結編碼實例2中所製備或業內已知之TRAILR2結合可變結構域之VL及VH基因對。進而將所得scFv編碼基因區段框內選殖至編碼人類IgG抗體重鏈之基因之3’末端。藉由重疊PCR方法合成該等編碼區段且將其選殖至表現載體pTT5中。 然後將編碼實例2中所製備之CDH17結合可變結構域之VL及VH基因對格式化至實例1中所概述之雙特異性格式中。將VH基因選殖至pTT5表現載體中作為編碼人類Igγ之基因之5’末端之框內融合物。將編碼TRAILR2結合scFv之基因框內選殖至同一Igγ編碼區段之3’末端。類似地，將VL基因選殖至pTT5表現載體中作為與編碼人類IgG κ輕鏈之基因之框內融合物。 使用業內已知之方法將編碼實例2中所製備或業內已知之TRAILR2結合可變結構域之VL及VH基因對進一步用於製備特異性結合至TRAILR2 (例如包含抗原結合位點TR2v1或TRv2)之抗體分子(包含兩條輕鏈及兩條重鏈之全長抗體分子)且用於檢測/標記細胞或用作下文所述實例中之對照抗體。該等抗體包括人類IgG1 WT或IgG1 (KO)恆定結構域。 類似地，使用業內已知之方法將編碼實例2中所製備或業內已知之CDH17結合可變結構域之VL及VH基因對進一步用於製備特異性結合至CDH17 (例如包含抗原結合位點CDH17v1或CDH17H2)之抗體分子(包含兩條輕鏈及兩條重鏈之全長抗體分子)且用於檢測/標記細胞或用作下文所述實例中之對照抗體。該等抗體包括人類IgG1 WT或IgG1 (KO)恆定結構域。 上文所述且在下文實例中用作對照抗體之針對TRAILR2具有特異性或CDH17之抗體係具有兩條重鏈及輕鏈之習用全長抗體。該等對照抗體之結合位點係由與其比較之雙特異性結合蛋白相同之可變結構域定義。舉例而言，在圖3中，具有CDH17特異性結合位點CDH17v1及TRAILR2特異性結合位點TR2v1之結合分子(稱為結合分子CDH17v1/TR2v1)包含SEQ ID NO.:118之針對CDH17具有特異性之VH序列及SEQ ID NO.:119之針對CDH17具有特異性之VL序列以及SEQ ID NO.:96之針對TRAILR2具有特異性之VH序列及SEQ ID NO.:97之針對TRAILR2具有特異性之VL序列(參見表2)。因此，此實例中所用之對照抗體抗CDH17v1包含SEQ ID NO.:118之針對CDH17具有特異性之VH序列及SEQ ID NO.:119之針對CDH17具有特異性之VL序列，且對照抗體抗TRv1包含SEQ ID NO.:96之針對TRAILR2具有特異性之VH序列及SEQ ID NO.:97之針對TRAILR2具有特異性之VL序列(參見圖3)。 在上述程序中使用In-Fusion® HD選殖套組(Clonetech, U.S.A.)來定向選殖VH及VL基因。合成與線性化載體之末端互補之延長15 bp之VL/VH之PCR引子。使用製造商之標準方案實施PCR且純化擴增子或用選殖增強子處理，然後選殖至適當載體中。然後根據製造商說明書(Clonetech, U.S.A.)轉變大腸桿菌。對DNA微小製劑進行測序。 每一表現載體含有鏈編碼基因之真核啟動子元件、編碼信號序列及重鏈或輕鏈之基因、原核選擇標記物基因(例如胺苄青黴素(ampicillin))之表現盒及複製起點。使該等DNA質體在胺苄青黴素抗性大腸桿菌群落中繁殖並純化。實例 4 ：識別人類 TRAILR2 及人類 CDH17 之雙特異性四價分子之表現及純化
將實例3中所製備之表現載體轉染至CHO-E細胞中。 將以懸浮液形式生長於無血清培養基中之經轉染CHO-E細胞在搖瓶中在140 rpm、37℃及5% CO2
攪動下培養且保持在指數生長條件下。在轉染當天，用1 mg輕鏈質體及0.5 mg重鏈質體以化學方式轉染細胞。然後將該等細胞以1至2×106
個細胞/ml接種於1 L Gibco® FreeStyle™ CHO表現培養基(LifeTechnologies, NY, US)中。然後將細胞在迴轉式振盪下培育10至12天，且一次性進給150 ml市售進料溶液以容許蛋白質表現。使用Octet®儀器(Pall ForteBio, CA, US)及protA生物感測器尖端根據製造商說明書測定細胞培養上清液中之抗體/結合分子效價。 藉由蛋白質A親和層析使用MabSelect™ (Amersham Biosciences)自培養物上清液純化重組結合分子或抗體且儲存在60 mM NaOAc緩衝液(pH 5.0)中。藉由質譜及分析型超速離心評價樣品之純度及異質度。在功能測試之前，所有樣品經確認具有≥90%之單體含量且含有＜10%雜質。實例 5 ：所製備識別人類 TRAILR2 及人類 CDH17 分子之雙特異性分子之細節
在下文實例中，製備多個本發明之不同雙特異性TRAILR2/CDH17抗體分子。為避免混淆，該等分子之特徵及序列提供於下文中。表 2 ：本發明雙特異性 TRAILR2 / CDH17 分子之細節 
表3：本發明結合分子及抗體之CDR、VH、VL、scFv、輕鏈及重鏈之胺基酸序列及SEQ ID NO： 
實例 6 ：識別人類 TRAILR2 及人類 CDH17 之雙特異性分子之增加的細胞凋亡效應 導論
上文所述之實例顯示識別TRAILR2及人類CDH17之雙特異性分子之製備。為確定該等分子在細胞凋亡誘導中之作用，本發明者決定檢查該等分子是否可降低細胞活力，任何該降低是否係由細胞凋亡引起及任何細胞凋亡效應是否由雙特異性TRAILR2 / CDH17結合分子特異性調介。研發基於細胞之分析 .
首先，需要鑑別出在細胞表面上具有TRAILR2及CDH17之癌細胞系。Colo-205細胞系衍生自人類高加索人結腸腺癌(Caucasian colon adenocarcinoma)。其係熟知之實驗室細胞培養工具。本發明者選擇此作為候選細胞系來評價雙特異性TRAILR2 / CDH17結合分子之功能。 如下分析Colo-205細胞上之TRAILR2及CDH17蛋白質表面表現。使用Accutase (Sigma A6964)將細胞剝離且用FACS緩衝液(PBS, Gibco 14190；3% FCS, Gibco 26140；及0.09% NaN3
, Sigma Aldrich S2002)洗滌兩次。使用ViCell (Beckman Coulter Life Sciences)對細胞進行計數且將細胞數調節至2-5×106
個細胞/ml。將100 μl/孔細胞懸浮液接種於96孔圓底板中。 接種細胞後，將板在1200 rpm下離心5分鐘且丟棄上清液。然後在4℃下將細胞與100 μl/孔一級抗體適當稀釋物一起培育60 min。用FACS緩衝液將細胞洗滌兩次且添加100 μl/孔之二級/偶聯抗體之適當稀釋物。在4℃下在黑暗中將細胞與二級抗體一起培育45 min。用FACS緩衝液洗滌兩次後，將細胞重懸浮於100 μl FACS緩衝液/孔中且在FACS Canto (BD Biosciences)中分析。 對於TRAILR2檢測，使用偶聯抗人類CD262 (DR5) PE (eBioscience, 12-9908-42)。對於CDH17，使用抗CDH17抗體(R&D Systems, MAB1032)，然後使用二級抗體兔抗小鼠IgG PE (Dako, R0439)。作為對照，分別使用小鼠IgG1同型對照PE (eBioscience, 12-4714-42)及小鼠IgG1同型對照(AbDserotec, MCA928EL)。 在圖2中，顯示TRAILR2及CDH17在Colo-205細胞中之蛋白質表面表現，其中兩種蛋白質證實大量表現。雙特異性 TRAILR2 / CDH17 分子對 Colo-205 細胞之效應
已鑑別出Colo-205細胞作為適宜癌細胞系來評價雙特異性TRAILR2 / CDH17結合分子之功能，本發明者設計以下分析。 將Colo-205細胞平鋪於培養基(RPMI1640/Glutamax, Gibco 61870-010；加10% FCS, Gibco 26140)中。在37℃及5% CO2
下靜置過夜後，將細胞與50 μl期望濃度之不同抗體或結合分子稀釋物一起培育24h。然後藉由使用CellTiter-Glo發光細胞活力分析(Promega G7571)根據製造商所提供之說明書評價細胞活力。最後，使用來自Perkin Elmer之VICTOR X4 2030多標記讀板儀記錄發光。 雙特異性TRAILR2 / CDH17結合分子對細胞活力之效應顯示於圖3中。將Colo-205細胞與以下抗體一起培育24小時：(i) 雙特異性分子，(ii) 單獨抗TRAILR2抗體，(iii) 單獨抗CDH17抗體，或(iv) TRAILR2及CDH17抗體之等效自由組合。 如圖3中所顯示，抗CDH17抗體在7×10-4
nM至70 nM之濃度範圍下使用時對Colo-205細胞之活力無效應。TRAILR2抗體在7 nM與70 nM之間使用時能夠顯著降低細胞活力，且添加自由組合之抗CDH17不會改變使用單獨抗TRAILR2抗體所觀察到之效應。最後，與單獨抗TRAIL-R2抗體(包含VH及VL序列分別為SEQ ID NO.:96及SEQ ID NO.:97之抗原結合位點TRv1)及抗TRAIL-R2抗體與抗CDH17抗體(包含VH及VL序列分別為SEQ ID NO.:118及SEQ ID NO.:119之抗原結合位點CDH17v1)之組合相比，一起培育Colo-205細胞與如本文所述之雙特異性TRAIL-R2 / CDH17結合分子(包含SEQ ID NO.:145之重鏈序列及SEQ ID NO.:146之輕鏈序列之CDH17v1/TR2v1)產生1000倍以上改良之功效。TRAILR2 / CDH17 分子誘導 Colo-205 細胞之細胞凋亡
隨後研究如圖3中所顯示細胞活力之降低是否係由誘導細胞凋亡引起。TRAIL誘導之細胞凋亡係藉由招募及活化半胱天冬酶-8進而活化效應物半胱天冬酶-3、從而引起細胞凋亡來調介。因此，為確定本文所製備之抗體及結合分子是否能夠特異性活化細胞凋亡路徑，本發明者量測半胱天冬酶-8及半胱天冬酶-3在靶細胞系中之活性二者。 半胱天冬酶-3及半胱天冬酶-8活性係分別使用Promega Apo-ONE均質半胱天冬酶-3/7分析(目錄號G7790)及Promega半胱天冬酶-Glo 8分析(目錄號G8201)來量測。在37℃及5% CO2
下靜置過夜後，將細胞沿不同時間點與50 μl不同抗體或結合分子稀釋物一起培育以達成期望濃度。然後根據製造商所提供之說明書評價半胱天冬酶-3及半胱天冬酶-8活性。然後使用來自Perkin Elmer之VICTOR X4 2030多標記讀板儀量測每一樣品之發光。 此分析之結果顯示於圖4中。在此處可見，單獨抗TRAILR2抗體(包含VH及VL序列分別為SEQ ID NO.:96及SEQ ID NO.:97之抗原結合位點TRv1)及雙特異性TRAILR2 / CDH17結合分子(包含SEQ ID NO.:145之重鏈序列及SEQ ID NO.:146之輕鏈序列之CDH17v1/TR2v1)皆能夠有效地活化半胱天冬酶8 (A)及半胱天冬酶3 (B)二者。與未經處理之對照相比，在抗CDH17抗體(包含VH及VL序列分別為SEQ ID NO.:118及SEQ ID NO.:119之抗原結合位點CDH17v1)培育後未觀察到效應。此數據展示，在圖3中觀察到之細胞活力之降低並不歸因於任何非特異性機制，且兩種分子能夠有效且特異性誘導靶細胞之細胞凋亡。與細胞活力數據一致，本發明者觀察到，與單獨抗TRAILR2抗體相比，一起培育Colo-205細胞與雙特異性TRAILR2 / CDH17結合分子明確產生優異的半胱天冬酶-8及半胱天冬酶-3活化(功效偏移3 log以上)。Colo-205 細胞之細胞凋亡係由雙特異性 TRAILR2 / CDH17 分子特異性誘導
本發明者亦欲確認，由本發明之雙特異性TRAILR2/CDH17結合分子調節之細胞凋亡之增加係由存在於Colo-205細胞表面上之CDH17特異性調介。為證實此推測，本發明者生成識別人類TRAILR2及三硝基苯酚(TNP)之另一雙特異性四價分子，其中用IgG主控抗CDH17抗體取代識別TNP者。與TNP之結合區域充當該分子之非特異性對照，此乃因TNP抗原無法容易地在細胞表面上發現。 用不同濃度之以下抗體將Colo-205細胞處理24h：(i) 單獨針對TNP之抗體，(ii) 單獨抗CDH17抗體，(iii) 單獨抗TRAILR2抗體，(iv) 雙特異性TRAILR2 / TNP結合分子，(v) 雙特異性TRAILR2 / CDH17分子，且量測細胞活力。所獲得數據顯示於圖5中。 如圖5中所顯示，與抗TRAILR2抗體(包含VH及VL序列分別為SEQ ID NO.:96及SEQ ID NO.:97之抗原結合位點TRv1)相比，雙特異性TRAILR2 / CDH17結合分子(包含SEQ ID NO.:145之重鏈序列及SEQ ID NO.:146之輕鏈序列之CDH17v1/TR2v1)能夠誘導明顯優異之降低細胞活力之效應。使用雙特異性TRAILR2 / TNP結合分子無法觀察到此效應。因此，用CDH17取代TNP消除雙特異性TRAILR2 / CDH17結合分子之優異細胞凋亡效應，且雙特異性TRAILR2 / TNP結合分子具有與單獨抗TRAILR2抗體相當之效應。雙特異性 TRAILR2 / CDH17 分子對 HepG2 細胞之效應
為研究雙特異性TRAILR2 / CDH17結合分子在肝源CDH17陰性及TRAILR2敏感性細胞中之效應，使用HepG2細胞實施與上文所述類似之實驗。此細胞系最初衍生自15歲高加索人男性之肝細胞癌。 將HepG2細胞培養於在37℃及5% CO2
下DMEM (Lonza, BE12-604F)加10% FCS (Gibco 26140)中。 如針對Colo-205所述，如實例3中所述分析蛋白質表面表現及細胞活力。在圖6A中，顯示TRAILR2及CDH17在HepG2細胞中之蛋白質表面表現，且僅TRAILR2證實大量表現。 將HepG2細胞與以下抗體一起培育：(i) 單獨抗TRAILR2 (包含VH及VL序列分別為SEQ ID NO.:96及SEQ ID NO.:97之抗原結合位點TRv1之抗TR2v1)，(ii) TRAILR2/CDH17雙特異性結合分子(包含SEQ ID NO.:145之重鏈序列及SEQ ID NO.:146之輕鏈序列之CDH17v1/TR2v1))。另外，作為如多種激動性人類TRAILR1及TRAILR2抗體之文獻(Ichikawa等人，2001. Nat Med. 8月;7(8):954-60；Li等人，2008 BMC Cancer. 11月7日;8:325；Natoni等人，2007 Br J Haematol. 2007年11月;139(4):568-77；Pukac等人，2005 Br J Cancer. 2005年4月25日;92(8):1430-41；Yada等人，2008 Ann Oncol. 2008年6月;19(6):1060-70；Zhang等人，2007a Cancer Lett. 2007年6月18日;251(1):146-57)中所述之抗TRAILR2抗體之最大促細胞凋亡信號傳導的對照，亦將HepG2細胞與(iii) 抗TRAILR2 (包含VH及VL序列分別為SEQ ID NO.:96及SEQ ID NO.:97之抗原結合位點TRv1)在交聯劑山羊抗人類IgG (抗TR2v1 (Fc交聯))存在下一起培育。如圖6B中所顯示，單獨抗TRAILR2抗體及TRAILR2/CDH17雙特異性分子對活力皆無效應。僅TRAILR2抗體之人工Fc交聯能夠顯著降低細胞活力。雙特異性 TRAILR2 / CDH17 分子 對其他 CRC 細 胞之效應 .
為研究Colo-205之所觀察到之效應是否可應用於其他CRC細胞系，使用兩種其他CRC細胞系CL-34 (KRAS野生型)及SK-CO-1 (KRAS p.G12V)細胞實施與上文所述類似之實驗。 將CL-34及SK-CO-1細胞分別培養於37℃及5% CO2
下DMEM/F-12 (ATCC 30-2006)加20% FCS (Gibco 26140)及EMEM (Lonza BE12-662F)加10%FCS(Gibco 26140)中。 如實例6中所述，分析蛋白質表面表現及細胞活力。在圖11A及11B中，顯示TRAILR2及CDH17在CL-34 (A)及SK-CO-1 (B)細胞中之蛋白質表面表現，且兩種蛋白質證實大量表現。 將CL-34及SK-CO-1細胞與以下抗體一起培育：(i) 雙特異性TRAILR2 / CDH17結合分子(包含SEQ ID NO.:145之重鏈及SEQ ID NO.:146之輕鏈之CDH17v1/TR2v1))，(ii) 單獨抗TRAILR2抗體(包含VH及VL序列分別為SEQ ID NO.:96及SEQ ID NO.:97之抗原結合位點TRv1)，或(iii) 單獨抗CDH17抗體(包含VH及VL序列分別為SEQ ID NO.:118及SEQ ID NO.:119之抗原結合位點CDH17v1)。如圖11中所顯示，抗CDH17抗體對活力無效應，而TRAILR2抗體在7 nM與70 nM之間使用時能夠顯著降低細胞活力。如針對Colo-205細胞所述，與單獨抗TRAILR2抗體相比，一起培育CL-34及SK-CO-1細胞二者與雙特異性TRAILR2 / CDH17結合分子產生細胞活力之3 log以上之明顯功效偏移。 與在CL-34及SK-CO-1細胞中所觀察到之類似反應一致，在19個CRC細胞系之擴大面板中未檢測到KRASmut與KRASwt細胞系之間之顯著敏感性差異(威爾卡森等級和測試(Wilcoxon-Rank-Sum-Test)，數據未顯示)。討論
本發明者在上文已展示，雙特異性TRAILR2 / CDH17結合分子誘導CRC細胞系之細胞凋亡。此細胞凋亡效應係使用比單獨TRAILR2抗體小3個以上數量級且為治療上有用之劑量值之濃度來達成。亦展示此效應係由雙特異性分子之CDH17部分特異性觸發，且在最大效應之濃度下，無法檢測到對肝源CDH17陰性及TRAILR2敏感性HepG2細胞之細胞活力之效應。實例 7 ： 不同 IgG 支架 在 雙特異性 TRAILR2 / CDH17 分子中之用途
本發明者亦研究改變雙特異性TRAILR2 / CDH17分子之主控抗體元件中所用之IgG支架是否會改變細胞凋亡之誘導。 用不同濃度之單獨抗TRAILR2抗體及包含IgG1(A及C)或IgG4Pro(B)恆定區之雙特異性TRAILR2 / CDH17結合分子將Colo-205細胞處理24h。在抗體培育後，量測細胞活力(圖7)。 如圖7中所顯示，用先前所用之IgG1支架取代具有2個額外突變(L234A及L235A)之第二形式(IgG1 KO; SEQ ID NO.:121)或具有1個額外突變(H310A)之第三形式(FcRnmut, SEQ ID NO.:270)不會改變對降低Colo-205細胞活力之效應。 與野生型形式相似，新生成之雙特異性結合分子(包含SEQ ID NO.:147之重鏈及SEQ ID NO.:148之輕鏈之TRv1/CDH17v1 IgG1 (KO))在以低至10-2
nM之濃度使用時能夠顯著降低細胞活力，而親代TRAILR2抗體(包含VH及VL序列分別為SEQ ID NO.:96及SEQ ID NO.:97之抗原結合位點TRv1)未顯示效應。此對於第二雙特異性結合分子亦如此，其中用TRAILR2結合結構域取代稍經修飾之序列(與VH及VL序列分別為SEQ ID NO.:98及SEQ ID NO.:99之抗TR2v2相比，包含SEQ ID NO.:149之重鏈及SEQ ID NO.:150之輕鏈之TRAILR2v2))。此外，製備其中用雙特異性支架之主控抗體元件中所用之IgG支架完全取代IgG4 Pro同種型(包含SEQ ID NO.:151之重鏈序列及SEQ ID NO.:152之輕鏈序列)或IgG1 FcRnmut (CDH17H2/TR2v2) (包含SEQ ID NO.:271之重鏈序列及SEQ ID NO.:218之輕鏈序列)的不同雙特異性分子。如圖7中所顯示，此分子變化不會改變其在降低Colo-205細胞活力方面之功效。實例 8 ： scFv 變體 在降低細 胞活力方面之效應 .
然後研究改變scFv第二抗體組分是否影響本發明分子對細胞凋亡之誘導。 在實例6中所用之分子中，scFv經定向使得VL形成結合部分之N末端，且因此經由連接體融合至主控抗體重鏈之C末端，同時scFv之VH形成整個重鏈分子之C末端。 因此，生成多種包含由可變結構域之一致序列定義但該等結構域之定向及/或其他修飾不同之結合位點的不同雙特異性TRAILR2 / CDH17結合分子(scFv形式1至4)。 1. 雙特異性TRAILR2 / CDH17 scFv1分子具有VH-VL定向，即scFv之VH經由連接體融合至抗體之C末端，且scFv之VL形成整個重鏈分子之C末端(scFv序列為SEQ ID NO.:131之CDH17v1/TRv1)。 2. 雙特異性TRAILR2 / CDH17 scFv2分子亦具有VH-VL定向，即scFv之VH經由連接體融合至抗體之C末端，且scFv之VL形成整個重鏈分子之C末端，並具有額外二硫鍵以穩定scFv結合結構域(scFv序列為SEQ ID NO.:132之CDH17v1/TRv1)。 3. 雙特異性TRAILR2 / CDH17 scFv3分子係圖7中所用且因此其具有VL-VH定向，即scFv之VL經由連接體融合至抗體之C末端，且scFv之VH形成整個重鏈分子之C末端(scFv序列為SEQ ID NO.:124之CDH17v1/TRv1)。 4. 雙特異性TRAILR2 / CDH17 scFv4分子亦具有VL-VH定向，即scFv之VL經由連接體融合至抗體之C末端，且scFv之VH形成整個重鏈分子之C末端，並具有額外二硫鍵以穩定scFv結合結構域(scFv序列為SEQ ID NO.:133之CDH17v1/TRv1)。 然後研究雙特異性TRAILR2 / CDH17結合分子之該等變體在實例6中所述之Colo-205細胞凋亡分析中之功能。在與結合分子一起培育後，量測細胞活力。 圖8中所呈現之數據顯示，雙特異性TRAILR2 / CDH17結合分子可誘導Colo-205細胞凋亡，而與VH及VL結構域在scFv抗體結構域內之定向無關，然而，VL-VH具有大於VH-VL定向之細胞凋亡效應。攜載額外二硫鍵之分子與不具該等額外鍵之相應親代分子相比無顯著效應。 因此，改變實例1中所概述之雙特異性抗體格式之結構可耐受，但VL-VH確實具有顯著較大之細胞凋亡效應。實例 9 ： 使用 替代性結 合序列之雙特異性分子 TRAILR2 及 CDH17 bi-scFv 在降低 Colo-205 細 胞活力方面之效應 .
製備具有不同結合結構域之雙特異性TRAILR2 / CDH17結合分子之變化形式。所用特異性結合分子之細節顯示於實例5中之表中。然後研究改變如實例6中所述之Colo-205細胞凋亡分析中所用之結合結構域之效應。 用不同濃度之含有不同新鑑別出之CDH17 (A)及TRAILR2 (B及C)結合序列之不同雙特異性分子將Colo-205細胞處理24h。在抗體培育後，量測細胞活力。 圖9 (A-C)中所呈現之數據展示，具有不同TRAILR2及CDH17結合序列之雙特異性結合分子(包含SEQ ID NO.:182之HC及SEQ ID NO.:188之LC之CDH17A6/TR2v2；包含SEQ OD NO.:197之HC及SEQ ID NO.:203之LC之CDH17E2/TR2v2；包含SEQ ID NO.:167之HC及SEQ ID NO.:173之LC之CDH17E9/TR2v2；包含SEQ ID NO.:219之HC及SEQ ID NO.:233之LC之CDH17v1/TR2#1；包含SEQ ID NO.:220之HC及SEQ ID NO.:233之LC之CDH17v1/TR2#2；包含SEQ ID NO.:221之HC及SEQ ID NO.:233之LC之CDH17v1/TR2#3；包含SEQ ID NO.:223之HC及SEQ ID NO.:233之LC之CDH17v1/TR2#8；包含SEQ ID NO.:224之HC及SEQ ID NO.:233之LC之CDH17v1/TR2#10；包含SEQ ID NO.:212之HC及SEQ ID NO.:218之LC之CDH17H2/TR2v2；包含SEQ ID NO.:213之HC及SEQ ID NO.:218之LC之CDH17H2/TR2v3；包含SEQ ID NO.:214之HC及SEQ ID NO.:218之LC之CDH17H2/TR2v4；包含SEQ ID NO.:215之HC及SEQ ID NO.:218之LC之CDH17H2/TR2v5；包含SEQ ID NO.:216之HC及SEQ ID NO.:218之LC之CDH17H2/TR2v6；包含SEQ ID NO.:217之HC及SEQ ID NO.:218之LC之CDH17H2/TR2v7)在以低至10-2
nM之濃度使用時能夠顯著降低細胞活力，而親代TRAILR2抗體(包含SEQ ID NO.:98之VH及SEQ ID NO.:99之VL之TR2v2)在相同濃度下未顯示效應。在圖9D中，在上文所提及肝源CDH17陰性及TRAILR2敏感性HepG2細胞中測試該等分子中之一些(包含SEQ ID NO.:212之HC及SEQ ID NO.:218之LC之CDH17H2/TR2v2；包含SEQ ID NO.:213之HC及SEQ ID NO.:218之LC之CDH17H2/TR2v3；包含SEQ ID NO.:214之HC及SEQ ID NO.:218之LC之CDH17H2/TR2v4；包含SEQ ID NO.:215之HC及SEQ ID NO.:218之LC之CDH17H2/TR2v5；包含SEQ ID NO.:216之HC及SEQ ID NO.:218之LC之CDH17H2/TR2v6；包含SEQ ID NO.:217之HC及SEQ ID NO.:218之LC之CDH17H2/TR2v7)。如圖中所顯示，對於任一所測試分子，高達1 nM之濃度無可檢測到之HepG2細胞活力之效應。在圖9C-D中亦顯示，親代CDH17抗體(包含SEQ ID NO.:116之VH及SEQ ID NO.:117之VL之CDH17H2)未顯示在所測試濃度範圍內降低Colo-205及HepG2之細胞活力之效應。 因此，不同TRAILR2及CDH17結合序列可用於本發明之雙特異性TRAILR2 / CDH17結合分子中。實例 10 ：識別 TRAILR2 及 CD44v6 之雙特異性分子無降低 Colo-205 細胞活力之額外效應 .
亦研究另一錨靶是否可用於替代CDH17。因此，製備識別TRAILR2及CD44v6之雙特異性分子。 如在實例6中，首先藉由FACS量測TRAILR2及CD44v6蛋白質表面表現。對於CD44v6檢測，使用BIWA1抗體，然後使用二級抗體山羊抗小鼠IgG PE (Dako, R0480)。作為對照，使用小鼠IgG1同型對照(AbDserotec, MCA928EL)。 在圖10A中，顯示TRAILR2及CD44v6在Colo-205細胞中之蛋白質表面表現，且兩種蛋白質證實大量表現。 然後使用CellTiter-Glo發光細胞活力分析量測細胞活力。將Colo-205細胞與TRAILR2 / CD44v6雙特異性結合分子、單獨抗TRAILR2抗體或單獨抗CD44v6抗體一起培育。數據呈現於圖10B中。 培育10-2
ng/ml至10 mg/ml之濃度範圍內之抗CD44v6抗體無Colo-205細胞之活力之效應。在0.1 μg/ml與10 μg/ml之間使用時，與抗TRAILR2抗體(包含SEQ ID NO.:96之VH及SEQ ID NO.:97之VL之TR2v1)一起培育能夠顯著降低細胞活力，且將Colo-205細胞與等效量之識別人類TRAILR2及人類CD44v6之雙特異性四價分子一起培育不同於使用單獨抗TRAILR2抗體所觀察到之效應。 因此，CD44v6無法用作調節TRAILR2誘導之Colo-205細胞之細胞凋亡之錨靶。實例 11 ：在 CRC 異種移植物模型中雙特異性分子之活體內效能 .
亦研究識別TRAILR2及CDH17之結合分子之活體內效能。出於此目的，將表現TRAILR2及CDH17二者之人類CRC癌細胞系Colo205 (KRAS野生型)及Gp2d (KRAS p.G12D)植入免疫缺陷小鼠中且量測投與本發明分子對腫瘤體積之效應。 向雌性BomTac:NMRI-Foxn1nu同型接合小鼠皮下植入5.0 ×106
個Colo205細胞(0.1 mL PBS + 5% FCS)或5.0 ×106
個Gp2d細胞(0.1 mL且細胞:基質膠比率為1:1 (v/v))且監測腫瘤生長直至其達到180-200 mm3
。將小鼠隨機化於兩組中且投與媒劑對照或本發明結合分子之單一注射，對於Colo205為5 mg/Kg且對於Gp2d為1.67 mg/Kg [包含SEQ ID NO.:212之重鏈序列及SEQ ID NO.:218之輕鏈序列之CDH17H2/TR2v2-(Ig G1 KO)]；對於Colo205及Gp2d為5 mg/Kg [包含SEQ ID NO.:271之重鏈序列及SEQ ID NO.:218之輕鏈序列之CDH17H2/TR2v2-(Ig G1 FcRnmut)]。 圖12中所呈現之數據展示與對照組相比，本發明之結合分子能夠誘導顯著且延長之腫瘤體積減小。實例 12 ：使用新生成之 CDH17 抗體檢測 CDH17 表面表現。
在圖13中顯示新生成之抗CDH17H2抗體(包含SEQ ID NO.:116之VH及SEQ ID NO.:117之VL及SEQ ID NO.:121之IgG1序列)能夠檢測CDH17蛋白質表面表現。如實例6中所述實施FACS分析。使用新生成之抗CDH17H2抗體作為一級抗體用於檢測，然後使用二級抗體兔抗小鼠IgG PE (Dako, R0439)。作為對照，使用人類IgG1同型對照APC (Biolegend, 409306)。實例 13 ：用於 i.v. 投與之醫藥調配物
可選擇本發明之任一上述結合分子來製造用於i.v.施用之醫藥調配物。適用於本發明抗體之醫藥調配物之實例如下。 10 mL小瓶含有10 mg/mL之於由10 mM檸檬酸鹽(pH 5.5)、207 mM蔗糖、25 mM離胺酸HCl及0.02%聚山梨醇酯20及注射用水(WFI)組成之緩衝液中的本發明結合分子。實例 14 ： ProtA 親和層析及藉由分析型粒徑篩析層析 (aSEC) 測定單體含量：
藉由重組蛋白A親和層析使用MabSelect SuRe樹脂(GE Healthcare)自所收穫細胞培養液捕獲本文所述各種結合分子之樣品。使用30 mM乙酸鈉(pH 3.5)以等梯度模式溶析樣品且使用3M乙酸鈉之1%溶液(pH 9.0)將所溶析樣品中和至pH 5.0。 使用Waters UHPLC系統上之Waters BEH200管柱實施aSEC。移動相緩衝液係50 mM磷酸鈉(pH 6.8)、200 mM精胺酸、0.05%疊氮化鈉。對於每一運行，以0.5 ml/min之運行流速注射5-10 µg樣品。 測定單體含量之百分比且各種結合分子之結果顯示於表4中。 
圖 1a 及 b ： 本發明結合分子 之示意圖
。圖 2 ： TRAILR2 (TR2) 及 CDH17 在 Colo-205 細胞中之蛋白質表面表現之分析。
結果顯示為相對於僅含細胞之對照樣品之平均PE值。數據代表四個獨立實驗。圖 3 ： 抗體培育對細胞活力之效應。
用不同濃度之以下抗體將Colo-205細胞處理24h：(i) 單獨抗TRAILR2 (抗TR2v1)，(ii) 單獨抗CDH17v1，(iii) TRAILR2/CDH17雙特異性分子(CDH17v1/TR2v1)，或(iv) 各別TRAILR2 (抗TR2v1)及CDH17v1抗體之等效組合。數據表示為與未經處理之對照相比之平均相對值加標準偏差。在每一條件下以一式兩份實施兩個獨立分析。圖 4 ： 抗體培育後細胞凋亡誘導 ( 半胱天冬酶活化分析 ) 之分析。
用不同濃度之以下抗體將Colo-205細胞處理(A) 2h或(B) 6h：(i) 單獨抗TRAILR2 (抗TR2v1)，(ii) 單獨抗CDH17v1，及(iii) CDH17v1/TR2v1雙特異性分子。(A) 量測半胱天冬酶-8或(B) 半胱天冬酶-3活化。數據表示為與未經處理之對照相比之倍數變化之平均相對值加標準偏差。在每一條件下以一式兩份實施三個獨立分析。圖 5 ： CDH17v1/TR2v1 雙特異性分子之特異性之分析。
生成識別人類TR2及三硝基苯酚(TNP)替代CDH17之另一雙特異性分子。用不同濃度之以下抗體將Colo-205細胞處理24h：(i) 單獨針對TNP之抗體，(ii) 單獨抗CDH17v1，(iii) 單獨抗TRAILR2 (抗TR2v1)，(iv) TNP/TR2v1，或(v) CDH17v1/TR2v1雙特異性分子，且量測細胞活力。數據表示為與未經處理之對照相比之平均相對值加標準偏差。在每一條件下以一式兩份實施兩個獨立分析。圖 6 ： 抗體培育對 CDH17 陰性細胞之效應。
(A) TRAILR2 (TR2)及CDH17在HepG2細胞中之蛋白質表面表現之分析。結果顯示為相對於僅含細胞之對照樣品之平均PE值。數據代表三個獨立實驗。(B) 用不同濃度之以下抗體將HepG2細胞處理72h：(i) 單獨抗TRAILR2 (抗TR2v1)，(ii) TRAILR2/CDH17雙特異性分子(CDH17v1/TR2v1)，或(iii) 抗TRAILR2 (在交聯劑存在下)、山羊抗人類IgG (抗TR2v1 (Fc交聯))。數據表示為與未經處理之對照相比之平均相對值加標準偏差。在每一條件下以一式兩份實施五個獨立分析。圖 7 ： 含有不同 IgG 支架之雙特異性分子對細胞活力之效應。
用不同濃度之以下抗體將Colo-205細胞處理24h：單獨抗TRAILR2 (抗TR2v1或抗TR2v2)及含有不同IgG1 (A及C)及IgG4Pro (B)支架之識別人類TRAILR2及人類CDH17之不同雙特異性四價分子。數據表示為與未經處理之對照相比之平均相對值加標準偏差。在每一條件下以一式兩份實施兩個獨立分析。圖 8 ： scFv 變體對細胞活力 之效應
。用不同濃度之含有不同scFv變體之不同雙特異性分子將Colo-205細胞處理24h。數據表示為與未經處理之對照相比之平均相對值加標準偏差。在每一條件下以一式兩份實施兩個獨立分析。圖 9 ： 識別人類 TRAILR2 (TR2) 及人類 CDH17 之雙特異性四價分子對細胞活力之效應。
(A-C) 用不同濃度之含有不同CDH17結合劑及scFv變體之不同雙特異性分子將Colo-205細胞處理24h。(D) 用不同濃度之含有不同CDH17結合劑及scFv變體之不同雙特異性分子將HepG2細胞處理72h。使用單獨抗TR2v2 (A-D)及抗CDH17H2 (C-D)抗體作為對照。數據表示為與未經處理之對照相比之平均相對值加標準偏差。在每一條件下以一式兩份實施至少兩個獨立分析。圖 10 ： 識別人類 TRAILR2 (TR2) 及人類 CD44v6 之雙特異性分子對細胞活力之效應。
(A) TRAILR2(
TR2)及CD44v6在Colo-205細胞中之蛋白質表面表現之分析。結果顯示為相對於僅含細胞之對照樣品之平均PE值。兩種蛋白質皆顯示與各別IgG對照相比顯著之表現。數據代表3個獨立實驗。(B) 用不同濃度之以下抗體將Colo-205細胞處理72h：單獨抗TRAILR2 (抗TR2v1)、單獨抗CD44v6抗體及CD44v6/TR2v1雙特異性分子。數據表示為與未經處理之對照相比之平均相對值加標準偏差。在每一條件下以一式兩份實施兩個獨立分析。圖 11 ：抗體培育對 CRC 細胞活力之效應。
(A及B) TRAILR2 (TR2)及CDH17在CL-34 (A)及SK-CO-1 (B)細胞中之蛋白質表面表現之分析。結果顯示為相對於僅含細胞之對照樣品之平均PE值加標準偏差。數據代表2個獨立實驗。用不同濃度之以下抗體將CL-34 (C)及SK-CO-1 (D)細胞分別處理120h及96h：(i) 單獨抗TRAILR2 (抗TR2v1)，(ii) 單獨抗CDH17v1，或(iii) CDH17v1/TR2v1。數據表示為與未經處理之對照相比之平均相對值加標準偏差。在每一條件下以一式兩份實施兩個獨立分析。圖 12 ：識別人類 TRAILR2 (TR2) 及人類 CDH17 之四價分子之效能：
將TRAILR2/CDH17雙特異性分子(黑色圓) [CDH17H2/TR2v2-(Ig G1 KO) (A及B)或CDH17H2/TR2v2-(Ig G1 FcRnmut) (C及D)]或媒劑對照(白色圓)投與帶有Colo205 (A及C)或Gp2d (B及D)腫瘤細胞之小鼠。在所指示日投與後量測腫瘤體積(mm3)且數據表示為腫瘤體積之中值。每組包括8-10隻動物。圖 13 ： 使用新的 CDH17 抗體分子分析 CDH17 在 Colo-205 細胞中之蛋白質表面表現。
結果顯示為相對於僅含細胞之對照樣品之平均APC值。一式兩份實驗之代表性數據。圖 14 ： 原發性 CRC 及 CRC 肝轉移中之 CDH17 及 TRAILR2 蛋白表現。
使用相應一級抗體、然後藉由檢測試劑並在DAB溶液中培育之TRAILR2及CDH17之代表性影像。
<110> 德商百靈佳殷格翰國際股份有限公司(BOEHRINGER INGELHEIM INTERNATIONAL GMBH)
<120> 用於治療癌症之結合分子
<130> 12-0415-FF
<150> US 62/437,770
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<223> 重鏈
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<212> PRT
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<212> PRT
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<212> PRT
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<223> 重鏈
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<223> 重鏈
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<223> 重鏈
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<213> 人工序列
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<223> 重鏈
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> 重鏈
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈
<400> 232
<210> 233
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈
<400> 233
<210> 234
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 234
<210> 235
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 235
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 236
<210> 237
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 237
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<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
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<211> 57
<212> DNA
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<220>
<223> 引子
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<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 240
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<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 241
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<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 242
<210> 243
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 243
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<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 244
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<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 245
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<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 246
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<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
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<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 248
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<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 249
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<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 250
<210> 251
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 251
<210> 252
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 252
<210> 253
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 253
<210> 254
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 254
<210> 255
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 255
<210> 256
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 256
<210> 257
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 257
<210> 258
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 258
<210> 259
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 259
<210> 260
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 260
<210> 261
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 261
<210> 262
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 262
<210> 263
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 263
<210> 264
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 264
<210> 265
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 265
<210> 266
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 266
<210> 267
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 267
<210> 268
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 268
<210> 269
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 269
<210> 270
<211> 329
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 270
<210> 271
<211> 707
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 引子
<400> 271
<210> 272
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR
<400> 272
Claims (27)
- 一種結合分子，其包含至少一個特異性結合至TNF相關細胞凋亡誘導配體受體2(TNF-related apoptosis-inducing ligand receptor 2；TRAILR2)之抗原結合位點及至少一個特異性結合至鈣黏蛋白-17(cadherin-17；CDH17)之抗原結合位點。
- 如請求項1之結合分子，其中該分子為雙特異性及四價。
- 如請求項1或2之結合分子，其中該特異性結合至鈣黏蛋白-17(CDH17)之抗原結合位點係免疫球蛋白(Ig)分子且該特異性結合至TNF相關細胞凋亡誘導配體受體2(TRAILR2)之抗原結合位點包含一或多個scFv。
- 如請求項3之結合分子，其中該一或多個scFv具有自N末端至C末端之VL-VH定向。
- 如請求項3之結合分子，其中該一或多個scFv融合至該Ig分子之重鏈之C末端。
- 如請求項3之結合分子，其中該Ig分子係IgG。
- 如請求項5之結合分子，其中該一或多個scFv藉由肽連接體融合至該 Ig分子，較佳地肽連接體具有約4至20個胺基酸之長度。
- 如請求項1或2之結合分子，其中該特異性結合至TRAILR2之抗原結合位點選自由抗原結合位點i)至xiii)組成之群：i)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：1(CDR1)、SEQ ID NO.：2(CDR2)及SEQ ID NO.：3(CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.：4(CDR1)、SEQ ID NO.：5(CDR2)及SEQ ID NO.：6(CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR；ii)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：7(CDR1)、SEQ ID NO.：8(CDR2)及SEQ ID NO.：9(CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.：10(CDR1)、SEQ ID NO.：11(CDR2)及SEQ ID NO.：12(CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR；iii)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：13(CDR1)、SEQ ID NO.：14(CDR2)及SEQ ID NO.：15(CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.：16(CDR1)、SEQ ID NO.：17(CDR2)及SEQ ID NO.：18(CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR；iv)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：19(CDR1)、SEQ ID NO.：20(CDR2)及SEQ ID NO.：21(CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.：22(CDR1)、SEQ ID NO.：23(CDR2)及SEQ ID NO.：24(CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR；v)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：25(CDR1)、SEQ ID NO.：26(CDR2)及SEQ ID NO.：27(CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.：28(CDR1)、SEQ ID NO.：29(CDR2)及SEQ ID NO.：30(CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR；vi)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：31(CDR1)、SEQ ID NO.：32(CDR2)及SEQ ID NO.：33(CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.：34(CDR1)、SEQ ID NO.：35(CDR2)及SEQ ID NO.：36(CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR；vii)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：37(CDR1)、SEQ ID NO.：38(CDR2)及SEQ ID NO.：39(CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.：40(CDR1)、SEQ ID NO.：41(CDR2)及SEQ ID NO.：42(CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR；viii)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：43(CDR1)、SEQ ID NO.：44(CDR2)及SEQ ID NO.：48(CDR3)之重鏈CDR及包括SEQ ID NO.：49(CDR1)、SEQ ID NO.：50(CDR2)及SEQ ID NO.：54(CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR；ix)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：43(CDR1)、SEQ ID NO.：45(CDR2)及SEQ ID NO.：48(CDR3)之重鏈CDR及包括SEQ ID NO.：49(CDR1)、SEQ ID NO.：51(CDR2)及SEQ ID NO.：55(CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR；x)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：43(CDR1)、SEQ ID NO.：45(CDR2)及SEQ ID NO.：48(CDR3)之重鏈CDR及包括SEQ ID NO.：49(CDR1)、SEQ ID NO.：52(CDR2)及SEQ ID NO.：56(CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR；xi)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：43(CDR1)、SEQ ID NO.：45(CDR2)及SEQ ID NO.：48(CDR3)之重鏈CDR及包括SEQ ID NO.：49(CDR1)、SEQ ID NO.：50(CDR2)及SEQ ID NO.：56(CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR；xii)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：43(CDR1)、SEQ ID NO.：46(CDR2)及SEQ ID NO.：48(CDR3)之重鏈CDR及包括SEQ ID NO.：49(CDR1)、SEQ ID NO.：51(CDR2)及SEQ ID NO.：57(CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR；及xiii)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：43(CDR1)、SEQ ID NO.：47(CDR2)及SEQ ID NO.：48(CDR3)之重鏈CDR及包括SEQ ID NO.：49(CDR1)、SEQ ID NO.：53(CDR2)及SEQ ID NO.：57(CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。
- 如請求項1或2之結合分子，其中該特異性結合至TRAILR2之抗原結合位點選自由抗原結合位點i)至xiv)組成之群：i)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：82之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.：83之胺基酸序列的輕鏈可變結構域；ii)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：84之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.：85之胺基酸序列的輕鏈可變結構域；iii)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：86之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.：87之胺基酸序列的輕鏈可變結構域；iv)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：88之胺基酸序列的重 鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.：89之胺基酸序列的輕鏈可變結構域；v)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：90之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.：91之胺基酸序列的輕鏈可變結構域；vi)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：92之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.：93之胺基酸序列的輕鏈可變結構域；vii)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：94之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.：95之胺基酸序列的輕鏈可變結構域；viii)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：96之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.：97之胺基酸序列的輕鏈可變結構域；ix)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：98之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.：99之胺基酸序列的輕鏈可變結構域；x)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：100之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.：101之胺基酸序列的輕鏈可變結構域；xi)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：102之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.：103之胺基酸序列的輕鏈可變結構域； xii)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：104之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.：105之胺基酸序列的輕鏈可變結構域；xiii)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：106之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.：107之胺基酸序列的輕鏈可變結構域；及xiv)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：108之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.：109之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。
- 如請求項1或2之結合分子，其中該特異性結合至CDH17之抗原結合位點選自由抗原結合位點i)至iv)組成之群：i)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：58(CDR1)、SEQ ID NO.：59(CDR2)及SEQ ID NO.：60(CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.：61(CDR1)、SEQ ID NO.：62(CDR2)及SEQ ID NO.：63(CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR；ii)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：64(CDR1)、SEQ ID NO.：65(CDR2)及SEQ ID NO.：66(CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.：67(CDR1)、SEQ ID NO.：68(CDR2)及SEQ ID NO.：69(CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR；iii)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：70(CDR1)、SEQ ID NO.：71(CDR2)及SEQ ID NO.：72(CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.：73(CDR1)、SEQ ID NO.：74(CDR2)及SEQ ID NO.：75(CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR；及iv)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：76(CDR1)、SEQ ID NO.：77(CDR2)及SEQ ID NO.：78(CDR3)之胺基酸序列的重鏈CDR及包括SEQ ID NO.：79(CDR1)、SEQ ID NO.：80(CDR2)及SEQ ID NO.：81(CDR3)之胺基酸序列的輕鏈CDR。
- 如請求項1或2之結合分子，其中該特異性結合至CDH17之抗原結合位點選自由抗原結合位點i)至v)組成之群：i)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：110之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.：111之胺基酸序列的輕鏈可變結構域；ii)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：112之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.：113之胺基酸序列的輕鏈可變結構域；iii)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：114之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.：115之胺基酸序列的輕鏈可變結構域；iv)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：116之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.：117之胺基酸序列的輕鏈可變結構域；及v)抗原結合位點，其包含包括SEQ ID NO.：118之胺基酸序列的重鏈可變結構域及包括SEQ ID NO.：119之胺基酸序列的輕鏈可變結構域。
- 一種結合分子，其包含(i)包括SEQ ID NO.：159之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：160之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：161之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：162之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：163之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：164之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：165之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：166之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：167之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：168之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：169之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：170之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：171之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：172之胺基酸序列的重鏈，及(ii)包括SEQ ID NO.：173之胺基酸序列的輕鏈。
- 一種結合分子，其包含(i)包括SEQ ID NO.：174之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：175之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：176之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：177之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：178之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：179之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：180之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：181之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：182之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：183之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：184之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：185之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：186之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：187之胺基酸序列的重鏈，及(ii)包括SEQ ID NO.：188之胺基酸序列的輕鏈。
- 一種結合分子，其包含(i)包括SEQ ID NO.：189之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：190之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：191之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：192之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：193之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：194之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：195之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：196之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：197之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：198之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：199之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：200之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：201之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：202之胺基酸序列的重鏈，及(ii)包括SEQ ID NO.：203之胺基酸序列的輕鏈。
- 一種結合分子，其包含(i)包括SEQ ID NO.：204之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：205之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：206之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：207之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：208之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：209之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：210之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：211之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：212之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：213之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：214之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：215之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：216之胺基酸序列的重 鏈、或包括SEQ ID NO.：217之胺基酸序列的重鏈；及(ii)包括SEQ ID NO.：218之胺基酸序列的輕鏈。
- 一種結合分子，其包含(i)包括SEQ ID NO.：145之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：147之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：149之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：151之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：153之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：155之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：157之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：219之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：220之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：221之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：222之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：223之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：224之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：225之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：226之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：227之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：228之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：229之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：230之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：231之胺基酸序列的重鏈、或包括SEQ ID NO.：232之胺基酸序列的重鏈；及(ii)包括SEQ ID NO.：233之胺基酸序列的輕鏈。
- 如請求項1、2及12至16中任一項之結合分子，其用於藥劑中。
- 如請求項1、2及12至16中任一項之結合分子，其用於治療癌症之方 法中。
- 如請求項18之結合分子，其中該癌症係結腸直腸癌(colorectal cancer；CRC)、胃癌(gastric cancer；GC)、胰臟癌(pancreatic cancer；PAC)、食道癌或神經內分泌腫瘤。
- 一種經分離核酸分子，其編碼如請求項8至11中任一項之結合分子之重鏈可變結構域及/或輕鏈可變結構域。
- 一種經分離核酸分子，其編碼如請求項12至16中任一項之結合分子之重鏈及/或輕鏈。
- 一種表現載體，其包含如請求項20或21之核酸分子。
- 一種宿主細胞，其經如請求項22之表現載體轉染。
- 一種製造如請求項8至16中任一項之結合分子之方法，其包含(a)在容許該分子表現之條件下培養如請求項23之宿主細胞；及(b)回收該分子；及視情況(c)進一步純化及/或修飾及/或調配該分子。
- 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至16中任一項之結合分子及醫藥 上可接受之載劑。
- 一種如請求項1至16中任一項之結合分子之用途，其用於製備用來治療癌症之醫藥組合物。
- 如請求項26之用途，其中該癌症係結腸直腸癌(CRC)、胃癌(GC)、胰臟癌(PAC)、食道癌或神經內分泌腫瘤。
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