KR102651761B1 - 암 치료용 결합 분자 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 TNF-관련 아폽토시스 유도 리간드 수용체 2 (TRAILR2) 및 카드헤린-17 (CDH17)에 특이적으로 결합하는 결합 분자 및 의약품에서의 그의 용도, 이를 함유하는 약학 조성물 및 이를 암 치료 및/또는 예방제로서 사용하는 방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 TNF-관련 아폽토시스 유도 리간드 수용체 2 (TRAILR2) 및 카드헤린-17 (CDH17)에 특이적으로 결합하는 결합 분자 및 의약품에서의 그의 용도, 이를 함유하는 약학 조성물 및 이를 암 치료 및/또는 예방제로서 사용하는 방법에 관한 것이다.
암은 일반적으로 비정상적인 세포 증식과 암세포가 신체 도처에 침범하거나 퍼질 잠재성에 근거한 질환 군이다. 이것은 심각한 질병이며 세계적으로 주요 사망 원인 중 하나이다.
암을 관리하거나, 사례에 따라 치료하기 위한 일환으로 수술, 화학요법, 방사선 치료 및 호르몬 요법을 비롯한 다양한 치료법들이 사용되어 왔다. 최근 몇 년간 특정 암의 치료에서 진전이 있었지만 이 질환의 치료에 대해서는 개선이 여전히 필요하다.
항체 기반의 생물학적 분자는 암 치료를 위한 강력한 치료제가 될 잠재력을 제공한다. 항체는 세포 표면 상의 특정 단백질 (표적 항원)을 인식하고 결합하도록 고안되었으며 이러한 단백질은 특정 암세포 표면이나 면역 세포에만 존재할 수 있다. 이같은 결합은 표적 항원 단백질의 기능 및 항체 자체의 구조에 따라 다수의 상이한 생물학적 반응을 일으킬 수 있다.
예를 들어, 일부 항체는 암세포에 면역 세포를 끌어들이거나 면역계 자체의 활성에 직접 영향을 줌으로써 암세포를 공격하고 죽이도록 면역계를 작동시킨다. 항체 기반 치료법의 또 다른 유형은 암세포에 결합하여 세포 분열을 중지 또는 감소시킴으로써 비정상적인 세포 증식을 늦추거나 예방하는 것이다. 다른 유형의 항체는 약물 또는 방사성 입자가 부착되어 암세포 자체에 이러한 치료제를 전달한다.
아폽토시스는 유기체가 정상적인 조직 구획에서 세포 항상성을 유지하고 무질서한 세포를 제거하는 조절된 세포 메커니즘이다.
포유류 세포에서 아폽토시스를 유도하는 다음의 두 가지 주요 신호전달 경로가 있다: 내인성 경로 및 외인성 경로. 내인성 경로는 미토콘드리아 수준에서 시작되며 화학요법 또는 방사선 유도 세포사에서 중요한 역할을 한다. 대조적으로, 외인성 사멸 경로는 세포 표면 상의 사멸 수용체 매개 신호를 통해 시작된다.
외인성 경로를 통해 유도된 아폽토시스는 종양 괴사 인자 (TNF) 수용체 슈퍼패밀리의 다양한 구성원에 의해 매개되는 신호에 좇아 광범위하게 연구되어 왔다. TNF 슈퍼패밀리는 2 내지 5개의 시스테인이 풍부한 세포 외 반복체의 서열을 특징으로 한다. TNF 슈퍼패밀리에 속한 사멸 수용체는 아폽토시스 신호의 전달에 필수적인 약 80개 아미노산의 상동성, 세포 내 사멸 도메인을 공유한다.
TNF-관련 아폽토시스 유도 리간드 (TRAIL)는 TRAIL-유도 아폽토시스를 유도하는 사멸 수용체 및 그를 억제하는 유인 수용체로 이루어진 두 종류의 수용체와 상호작용하는 천연 단백질 리간드이다. 현재까지 사멸 수용체인 DR4 (DR4/TRAIL 수용체 1/TRAILR1) 및 DR5 (TRAIL 수용체 2/TRAIL-R2/KILLER) 및 유인 수용체인 DcR1/TRAILR3/TRID 및 DcR2/TRAILR4의 TRAIL에 특이적인 4가지 인간 수용체가 동정되었다. TRAIL은 또한 낮은 친화력으로 가용성 유인 수용체인 오스테오프로테그린 (OPG)과 결합할 수 있다.
항체-기반 분자가 TRAIL-수용체에 결합하여 이를 활성화시킬 수 있다면, 즉 TRAIL-수용체 작용제 분자는 암세포에서 아폽토시스를 유도할 수 있기 때문에 TRAIL 수용체를 표적으로 하는 것은 암 치료법 개발에 유용한 접근법으로 간주되 왔다. 많은 전임상 연구에서 볼 수 있듯이, TRAIL-신호전달은 수많은 종양 세포주에서 아폽토시스를 효율적으로 유도하지만 대부분의 정상 세포에서는 그렇지 않다. 그러나, 정상 조직, 특히 간의 간세포는 또한 아폽토시스 유도의 이러한 메커니즘에 감수성이 있다고 보고되었다. 따라서, 경로를 너무 효율적으로 활성화시키는 분자가 사용된다면, 비암성 세포에서도 아폽토시스 유도로 인해 심각한 부작용이 유발될 수 있다. 반면 약하게 활성화되는 분자만 사용된다면 내약성은 좋지만 항암 활성은 낮은 것으로 밝혀졌다.
따라서 TRAIL-수용체 작용제 분자로서 기능할 수 있는 치료적으로 효과적이면서 안전한 항체 기반 생물학적 분자를 개발할 필요가 있다. 그러므로, 본 발명의 목적은 개선된 치료 프로파일을 갖는 TRAIL-수용체 작용제 분자를 생성시키는 것이다.
발명의 요약
본 발명은 TNF-관련 아폽토시스 유도 리간드 수용체 2 (TRAILR2)에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 단일 결합 분자 내에서 카드헤린-17 (CDH17)에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위와 결합시키는 개념에 기초한다. 하기에서 보다 상세히 논의되는 바와 같이, 본 발명의 분자의 한 가지 이점은 세포 표면에서 TRAILR2 및 CDH17을 제시하는 세포에서만 아폽토시스가 촉진된다는 것이다.
따라서, 본 발명의 제1 양태는 TNF-관련 아폽토시스 유도 리간드 수용체 2 (TRAILR2)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위 (제1 항원 결합 부위) 및 카드헤린-17 (CDH17)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위 (제2 항원 결합 부위)를 갖는 결합 분자를 제공한다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, 분자는 이중 특이성 및 4가이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, 카드헤린-17 (CDH17)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위는 면역글로불린 (Ig) 분자 (2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 가지는 전장 항체의 통상적인 Y 형 구조를 가짐)이고, TNF-관련 아폽토시스 유도 리간드 수용체 2 (TRAILR2)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위는 하나 이상의 scFv(들)를 포함한다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, 하나 이상의 scFv(들)는 N-에서 C-말단으로 VL-VH 배향을 갖는다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, 하나 이상의 scFv(들)는 Ig 분자의 중쇄의 C-말단에 융합된다. 예를 들어, 하나의 scFv는 Ig 분자의 중쇄 중 하나의 C-말단에 융합되고, 하나의 scFv는 C-말단에 융합되어 Ig 분자의 다른 중쇄의 C-말단에 융합된다. 이와 같이, TRAILR2에 특이적인 scFv는 Ig 분자의 각각의 중쇄에 융합되어, 대칭적인 4가의 이중 특이성 구조를 형성한다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, Ig 분자는 IgG1KO이다. 본 발명의 결합 분자의 또 다른 바람직한 실시양태에서, Ig 분자는 IgG1 FcRnmut이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, 하나 이상의 scFv(들)는 펩티드 링커, 바람직하게는 약 4 내지 20개의 아미노산 길이 (예를 들어, 6개, 9개, 12개, 15개의 아미노산 중 어느 하나)를 갖는 펩티드 링커에 의해 Ig 분자에 융합된다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위 (제1 항원 결합 부위)는 하기 항원 결합 부위 (i) 내지 (xiii)로 이루어진 군으로부터 선택된다:
i) 서열 번호 1 (CDR1), 서열 번호 2 (CDR2) 및 서열 번호 3 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 (CDR) 및 서열 번호 4 (CDR1), 서열 번호 5 (CDR2) 및 서열 번호 6 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위;
ii) 서열 번호 7 (CDR1), 서열 번호 8 (CDR2) 및 서열 번호 9 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 10 (CDR1), 서열 번호 11 (CDR2) 및 서열 번호 12 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위;
iii) 서열 번호 13 (CDR1), 서열 번호 14 (CDR2) 및 서열 번호 15 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 16 (CDR1), 서열 번호 17 (CDR2) 및 서열 번호 18 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위;
iv) 서열 번호 19 (CDR1), 서열 번호 20 (CDR2) 및 서열 번호 21 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 22 (CDR1), 서열 번호 23 (CDR2) 및 서열 번호 24 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위;
v) 서열 번호 25 (CDR1), 서열 번호 26 (CDR2) 및 서열 번호 27 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 28 (CDR1), 서열 번호 29 (CDR2) 및 서열 번호 30 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위;
vi) 서열 번호 31 (CDR1), 서열 번호 32 (CDR2) 및 서열 번호 33 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 34 (CDR1), 서열 번호 35 (CDR2) 및 서열 번호 36 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위;
vii) 서열 번호 37 (CDR1), 서열 번호 38 (CDR2) 및 서열 번호 39 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 40 (CDR1), 서열 번호 41 (CDR2) 및 서열 번호 42 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위;
viii) 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 44 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 50 (CDR2) 및 서열 번호 54 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위;
ix) 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 45 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 51 (CDR2) 및 서열 번호 55 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위;
x) 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 45 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 52 (CDR2) 및 서열 번호 56 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위;
xi) 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 45 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 50 (CDR2) 및 서열 번호 56 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위;
xii) 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 46 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 51 (CDR2) 및 서열 번호 57 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위; 및
xiii) 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 47 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 53 (CDR2) 및 서열 번호 57 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위 (제1 항원 결합 부위)는 하기 항원 결합 부위 (i) 내지 (xiv)로 이루어진 군에서 선택된다:
i) 서열 번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 83의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위;
ii) 서열 번호 84의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위;
iii) 서열 번호 86의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 87의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위;
iv) 서열 번호 88의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위;
v) 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 91의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위;
vi) 서열 번호 92의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위;
vii) 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위;
viii) 서열 번호 96의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위;
ix) 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위;
x) 서열 번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위;
xi) 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위;
xii) 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위;
xiii) 서열 번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위; 및
xiv) 서열 번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, CDH17에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위 (제2 항원 결합 부위)는 하기 항원 결합 부위 (i) 내지 (iv)로 이루어진 군에서 선택된다:
i) 서열 번호 58 (CDR1), 서열 번호 59 (CDR2) 및 서열 번호 60 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 61 (CDR1), 서열 번호 62 (CDR2) 및 서열 번호 63 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위;
ii) 서열 번호 64 (CDR1), 서열 번호 65 (CDR2) 및 서열 번호 66 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 67 (CDR1), 서열 번호 68 (CDR2) 및 서열 번호 69 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위;
iii) 서열 번호 70 (CDR1), 서열 번호 71 (CDR2) 및 서열 번호 72 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 73 (CDR1), 서열 번호 74 (CDR2) 및 서열 번호 75 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위; 및
iv) 서열 번호 76 (CDR1), 서열 번호 77 (CDR2) 및 서열 번호 78 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 79 (CDR1), 서열 번호 80 (CDR2) 및 서열 번호 81 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 항원 결합 부위.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, CDH17에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위 (제2 항원 결합 부위)는 하기 항원 결합 부위 (i) 내지 (v)로 이루어진 군에서 선택된다:
i) 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위;
ii) 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위;
iii) 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위;
iv) 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위; 및
v) 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위.
일부 실시양태에서, 서열 번호 272의 중쇄 CDR3 서열이 본 발명의 결합 분자와 관련하여 서열 번호 78의 중쇄 CDR3 서열 대신에 사용된다.
일부 실시양태에서, 중쇄 아미노산 서열 (예를 들어, Ig 중쇄의 C-말단에 융합된 scFv를 갖는 변형된 중쇄)뿐만 아니라 경쇄 아미노산 서열에 의해 정의되는 하기 다양한 측면에서 제공되는 결합 분자는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함함으로써 대칭적인 4가의 이중 특이적 구조를 형성한다.
본 발명의 또 다른 양태는 (i) 서열 번호 159의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 161의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 163의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 164의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 165의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 167의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 169의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 170의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 171의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 172의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 (ii) 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 가지는 결합 분자를 제공한다.
본 발명의 또 다른 양태는 (i) 서열 번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 175의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 177의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 180의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 181의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 182의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 183의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 184의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 185의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 186의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 187의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 (ii) 서열 번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 가지는 결합 분자를 제공한다.
본원에 제공된 또 다른 양태는 (i) 서열 번호 189의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 190의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 191의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 192의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 193의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 194의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 195의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 196의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 197의 의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 198의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 199의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 200의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 201의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 202의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 (ii) 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 가지는 결합 분자를 제공한다.
본 발명의 또 다른 양태는 (i) 서열 번호 204의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 206의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 207의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 208의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 209의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 210의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 211의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 213의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 214의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 215의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 216의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 217의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 271의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 (ii) 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 가지는 결합 분자를 제공한다.
본원에 제공된 또 다른 양태는 (i) 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 149의 아미노산 서열 또는 서열 번호 151의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 219의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 220의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 221의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 222의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 223의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 224의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 225의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 또는 서열 번호 226의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 227의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 228의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 229의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 230의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 231의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 232의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 (ii) 서열 번호 233의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 가지는 결합 분자를 제공한다.
본 발명의 추가의 양태는 본 발명의 결합 분자를 코딩하는 핵산 분자 또는 그러한 핵산 분자를 함유하는 발현 벡터를 제공한다.
본 발명의 추가의 양태는 발현 조절 서열과 기능적으로 연결되어 본 발명의 핵산 분자를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 본원에 기술된 바와 같은 결합 분자를 코딩하는 핵산 분자를 가지는 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포가 본원에 제공된다.
본 발명의 추가 양태는 본 발명의 결합 분자의 생산 방법을 제공하며, 이 방법은
(a) 본 발명의 숙주 세포를 분자의 발현을 허용하는 조건하에서 배양하는 단계; 및
(b) 분자를 회수하는 단계를 포함한다.
본 발명의 추가의 양태는 의약품에 사용하기 위한 본 발명의 결합 분자를 제공한다.
본 발명의 또 다른 양태는 암, 바람직하게는 결장직장암 (CRC), 위암 (GC), 췌장암 (PAC), 식도암 또는 신경내분비 종양의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 결합 분자를 제공한다.
본 발명의 추가의 양태는 약학적으로 허용되는 담체 및 임의로 하나 이상의 추가의 활성 성분과 함께 본 발명의 결합 분자를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 추가의 양태는 유효량의 본 발명의 결합 분자를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 암 치료 방법을 제공한다.
본원에서 (i) 서열 번호 58 (CDR1), 서열 번호 59 (CDR2) 및 서열 번호 60 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 61 (CDR1), 서열 번호 62 (CDR2) 및 서열 번호 63 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR, (ii) 서열 번호 64 (CDR1), 서열 번호 65 (CDR2) 및 서열 번호 66 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 67 (CDR1), 서열 번호 68 (CDR2) 및 서열 번호 69 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR, (iii) 서열 번호 70 (CDR1), 서열 번호 71 (CDR2) 및 서열 번호 72 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 73 (CDR1), 서열 번호 74 (CDR2) 및 서열 번호 75 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR, 또는 (iv) 서열 번호 76 (CDR1), 서열 번호 77 (CDR2) 및 서열 번호 78 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 79 (CDR1), 서열 번호 80 (CDR2) 및 서열 번호 81 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 CDH17에 특이적으로 결합하는 항체가 추가로 제공된다.
도 1A 및 B: 본 발명의 결합 분자의 개략도.
(i) 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는, CDH17에 특이적으로 결합하는 Ig 분자 및 (ii) TRAILR2에 특이적으로 결합하는 2개의 scFv 분자를 포함하는 본 발명의 결합 분자에 대한 일례가 도시된다. scFv의 N-말단은 Ig 분자의 각각의 중쇄의 C-말단에 융합되어, 대칭적인 4가의 이중 특이성 항체-유사 분자를 형성한다.
도 2: Colo-205 세포에서 TRAILR2 (TR2) 및 CDH17의 단백질 표면 발현 분석.
결과는 세포만을 함유하는 대조군 샘플에 대한 평균 PE 값으로 표시되었다. 데이터는 네 가지 독립적인 실험을 나타낸다.
도 3: 항체 배양이 세포 생존성에 미치는 영향.
Colo-205 세포를 상이한 농도의 (i) 항-TRAILR2 (항-TR2v1) 단독, (ii) 항-CDH17v1 단독, (iii) TRAILR2/CDH17 이중 특이성 분자 (CDH17v1/TR2v1) 또는 (iv) 별개의 TRAILR2 (항-TR2v1)와 CDH17v1 항체의 동등한 조합으로 24 시간 동안 처리하였다. 데이터는 비처리 대조군과 비교한 평균 상대값과 표준 편차로 표시되었다. 두 가지 독립적인 분석이 각 조건에 대해 중복으로 수행되었다.
도 4: 항체 배양 후 아폽토시스 유도 분석 ( 캐스파제 활성화 검정).
Colo-205 세포를 상이한 농도의 (i) 항-TRAILR2 (항-TR2v1) 단독, (ii) 항-CDH17v1 단독 및 (iii) CDH17v1/TR2v1 이중 특이성 분자로 (A) 2 시간 또는 (B) 6 시간 동안 처리하였다. (A) 캐스파제-8 또는 (B) 캐스파제-3 활성화가 측정되었다. 데이터는 비처리 대조군과 비교한 배수 변화의 평균 상대 값과 표준 편차로 표시되었다. 세 가지 독립적인 분석이 각 조건에 대해 중복으로 수행되었다.
도 5: CDH17v1 / TR2v1 이중 특이성 분자의 특이성 분석.
CDH17 대신에 인간 TR2와 트리니트로페놀 (TNP)을 인식하는 추가적인 이중 특이성 분자를 생성하였다. Colo-205 세포를 상이한 농도의 (i) TNP 단독 항체, (ii) 항-CDH17v1 단독, (iii) 항-TRAILR2 (항-TR2v1) 단독, (iv) TNP/TR2v1 또는 (v) CDH17v1/TR2v1 이중 특이성 분자로 24 시간 동안 처리하고, 세포 생존성을 측정하였다. 데이터는 비처리 대조군과 비교한 평균 상대 값과 표준 편차로 표시되었다. 두 가지 독립적인 분석이 각 조건에 대해 중복으로 수행되었다.
도 6: 항체 배양이 CDH17 음성 세포에 미치는 영향.
(A) HepG2 세포에서 TRAILR2 (TR2) 및 CDH17의 단백질 표면 발현 분석. 결과는 세포만을 함유하는 대조군 샘플에 대한 평균 PE 값으로 표시되었다. 데이터는 세 가지 독립적인 실험을 나타낸다. (B) HepG2 세포를 교차-링커인 염소 항-인간 IgG의 존재하에서 (항-TR2v1 (Fc 교차 링크)) 상이한 농도의 (i) 항-TRAILR2 (항-TR2v1) 단독, (ii) TRAILR2/CDH17 이중 특이성 분자 (CDH17v1/TR2v1), 또는 (iii) 항-TRAILR2로 72 시간 동안 처리하였다. 데이터는 비처리 대조군과 비교한 평균 상대 값과 표준 편차로 표시되었다. 다섯 가지 독립적인 분석이 각 조건에 대해 중복으로 수행되었다.
도 7: 상이한 IgG 스캐폴드를 함유하는 이중 특이성 분자가 세포 생존성에 미치는 영향.
Colo-205 세포를 상이한 농도의 항-TRAILR2 (항-TR2v1 또는 항-TR2v2) 단독 및 상이한 IgG1 (A 및 C) 및 IgG4Pro (B) 스캐폴드를 함유하는 인간 TRAILR2 및 인간 CDH17을 인식하는 상이한 이중 특이성 4가 분자로 24 시간 동안 처리하였다. 데이터는 비처리 대조군과 비교한 평균 상대 값과 표준 편차로 표시되었다. 두 가지 독립적인 분석이 각 조건에 대해 중복으로 수행되었다.
도 8: scFv 변형이 세포 생존성에 미치는 영향.
Colo-205 세포를 상이한 농도의 서로 다른 scFv 변이체를 함유하는 상이한 이중 특이성 분자로 24 시간 동안 처리하였다. 데이터는 비처리 대조군과 비교한 평균 상대 값과 표준 편차로 표시되었다. 두 가지 독립적인 분석이 각 조건에 대해 중복으로 수행되었다.
도 9: TRAILR2 (TR2) 및 인간 CDH17을 인식하는 이중 특이성 4가 분자가 세포 생존성에 미치는 영향.
(A-C) Colo-205 세포를 상이한 농도의 서로 다른 CDH17 결합제 및 scFv 변이체를 함유하는 상이한 이중 특이성 분자로 24 시간 동안 처리하였다. (D) HepG2 세포를 상이한 농도의 서로 다른 CDH17 결합제 및 scFv 변이체를 함유하는 상이한 이중 특이성 분자로 72 시간 동안 처리하였다. 항-TR2v2 (A-D) 및 항-CDH17H2 (C-D) 항체 단독을 대조군으로 사용하였다. 데이터는 비처리 대조군과 비교한 평균 상대 값과 표준 편차로 표시되었다. 적어도 두 가지 독립적인 분석이 각 조건에 대해 중복으로 수행되었다.
도 10: 인간 TRAILR2 (TR2) 및 인간 CD44v6을 인식하는 이중 특이성 분자가 세포 생존성에 미치는 영향.
(A) Colo-205 세포에서 TRAILR2 (TR2) 및 CD44v6의 단백질 표면 발현 분석. 결과는 세포만을 함유하는 대조군 샘플에 대한 평균 PE 값으로 표시되었다. 두 단백질 모두 각 IgG 대조군에 비해 유의한 발현을 보였다. 데이터는 세 가지 독립적인 실험을 나타낸다. (B) Colo-205 세포를 상이한 농도의 항-TRAILR2 (항-TR2v1) 단독, 항-CD44v6 항체 단독 및 CD44v6/TR2v1 이중 특이성 분자로 72 시간 동안 처리하였다. 데이터는 비처리 대조군과 비교한 평균 상대 값과 표준 편차로 표시되었다. 두 가지 독립적인 분석이 각 조건에 대해 중복으로 수행되었다.
도 11: 항체 배양이 CRC 세포 생존성에 미치는 영향.
(A 및 B) CL-34 (A) 및 SK-CO-1 (B) 세포에서의 TRAILR2 (TR2) 및 CDH17의 단백질 표면 발현 분석. 결과는 세포만을 함유하는 대조군 샘플에 대한 평균 PE 값과 표준 편차로 표시되었다. 데이터는 두 가지 독립적인 실험을 나타낸다. CL-34 (C) 및 SK-CO-1 (D) 세포를 상이한 농도의 (i) 항-TRAILR2 (항-TR2v1) 단독, (ii) 항-CDH17v1 단독 또는 (iii) CDH17v1/TR2v1로 각각 120 시간 및 96 시간 동안 처리하였다. 데이터는 비처리 대조군과 비교한 평균 상대 값과 표준 편차로 표시되었다. 두 가지 독립적인 분석이 각 조건에 대해 중복으로 수행되었다.
도 12: 인간 TRAILR2 (TR2) 및 인간 CDH17을 인식하는 4가 분자의 효과.
TRAILR2/CDH17 이중 특이성 분자 (검은색 원) [CDH17H2/TR2v2-(Ig G1 KO) (A 및 B) 또는 CDH17H2/TR2v2-(Ig G1 FcRnmut) (C 및 D)] 또는 비히클 대조군 (흰색 원)을 Colo205 (A 및 C) 또는 Gp2d (B 및 D) 종양 세포를 보유하는 마우스에 투여하였다. 종양 용적 (mm3)을 투여 후 지정된 날에 측정하고, 데이터를 종양 용적의 중앙값으로 나타내었다. 8-10 마리의 동물이 각 그룹에 포함되었다.
도 13: 새로운 CDH17 항체 분자를 사용하여 Colo-205 세포에서 CDH17의 단백질 표면 발현 분석.
결과는 세포만을 함유하는 대조군 샘플에 대한 평균 APC 값으로 나타내었다. 중복 실험의 대표 데이터.
도 14: 원발성 CRC 및 CRC 간 전이에서의 CDH17 및 TRAILR2 단백질 발현.
해당 일차 항체를 사용한 뒤 검출 시약 및 DAB 용액에서 배양을 이용한 TRAILR2 및 CDH17에 대한 대표 이미지
(i) 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는, CDH17에 특이적으로 결합하는 Ig 분자 및 (ii) TRAILR2에 특이적으로 결합하는 2개의 scFv 분자를 포함하는 본 발명의 결합 분자에 대한 일례가 도시된다. scFv의 N-말단은 Ig 분자의 각각의 중쇄의 C-말단에 융합되어, 대칭적인 4가의 이중 특이성 항체-유사 분자를 형성한다.
도 2: Colo-205 세포에서 TRAILR2 (TR2) 및 CDH17의 단백질 표면 발현 분석.
결과는 세포만을 함유하는 대조군 샘플에 대한 평균 PE 값으로 표시되었다. 데이터는 네 가지 독립적인 실험을 나타낸다.
도 3: 항체 배양이 세포 생존성에 미치는 영향.
Colo-205 세포를 상이한 농도의 (i) 항-TRAILR2 (항-TR2v1) 단독, (ii) 항-CDH17v1 단독, (iii) TRAILR2/CDH17 이중 특이성 분자 (CDH17v1/TR2v1) 또는 (iv) 별개의 TRAILR2 (항-TR2v1)와 CDH17v1 항체의 동등한 조합으로 24 시간 동안 처리하였다. 데이터는 비처리 대조군과 비교한 평균 상대값과 표준 편차로 표시되었다. 두 가지 독립적인 분석이 각 조건에 대해 중복으로 수행되었다.
도 4: 항체 배양 후 아폽토시스 유도 분석 ( 캐스파제 활성화 검정).
Colo-205 세포를 상이한 농도의 (i) 항-TRAILR2 (항-TR2v1) 단독, (ii) 항-CDH17v1 단독 및 (iii) CDH17v1/TR2v1 이중 특이성 분자로 (A) 2 시간 또는 (B) 6 시간 동안 처리하였다. (A) 캐스파제-8 또는 (B) 캐스파제-3 활성화가 측정되었다. 데이터는 비처리 대조군과 비교한 배수 변화의 평균 상대 값과 표준 편차로 표시되었다. 세 가지 독립적인 분석이 각 조건에 대해 중복으로 수행되었다.
도 5: CDH17v1 / TR2v1 이중 특이성 분자의 특이성 분석.
CDH17 대신에 인간 TR2와 트리니트로페놀 (TNP)을 인식하는 추가적인 이중 특이성 분자를 생성하였다. Colo-205 세포를 상이한 농도의 (i) TNP 단독 항체, (ii) 항-CDH17v1 단독, (iii) 항-TRAILR2 (항-TR2v1) 단독, (iv) TNP/TR2v1 또는 (v) CDH17v1/TR2v1 이중 특이성 분자로 24 시간 동안 처리하고, 세포 생존성을 측정하였다. 데이터는 비처리 대조군과 비교한 평균 상대 값과 표준 편차로 표시되었다. 두 가지 독립적인 분석이 각 조건에 대해 중복으로 수행되었다.
도 6: 항체 배양이 CDH17 음성 세포에 미치는 영향.
(A) HepG2 세포에서 TRAILR2 (TR2) 및 CDH17의 단백질 표면 발현 분석. 결과는 세포만을 함유하는 대조군 샘플에 대한 평균 PE 값으로 표시되었다. 데이터는 세 가지 독립적인 실험을 나타낸다. (B) HepG2 세포를 교차-링커인 염소 항-인간 IgG의 존재하에서 (항-TR2v1 (Fc 교차 링크)) 상이한 농도의 (i) 항-TRAILR2 (항-TR2v1) 단독, (ii) TRAILR2/CDH17 이중 특이성 분자 (CDH17v1/TR2v1), 또는 (iii) 항-TRAILR2로 72 시간 동안 처리하였다. 데이터는 비처리 대조군과 비교한 평균 상대 값과 표준 편차로 표시되었다. 다섯 가지 독립적인 분석이 각 조건에 대해 중복으로 수행되었다.
도 7: 상이한 IgG 스캐폴드를 함유하는 이중 특이성 분자가 세포 생존성에 미치는 영향.
Colo-205 세포를 상이한 농도의 항-TRAILR2 (항-TR2v1 또는 항-TR2v2) 단독 및 상이한 IgG1 (A 및 C) 및 IgG4Pro (B) 스캐폴드를 함유하는 인간 TRAILR2 및 인간 CDH17을 인식하는 상이한 이중 특이성 4가 분자로 24 시간 동안 처리하였다. 데이터는 비처리 대조군과 비교한 평균 상대 값과 표준 편차로 표시되었다. 두 가지 독립적인 분석이 각 조건에 대해 중복으로 수행되었다.
도 8: scFv 변형이 세포 생존성에 미치는 영향.
Colo-205 세포를 상이한 농도의 서로 다른 scFv 변이체를 함유하는 상이한 이중 특이성 분자로 24 시간 동안 처리하였다. 데이터는 비처리 대조군과 비교한 평균 상대 값과 표준 편차로 표시되었다. 두 가지 독립적인 분석이 각 조건에 대해 중복으로 수행되었다.
도 9: TRAILR2 (TR2) 및 인간 CDH17을 인식하는 이중 특이성 4가 분자가 세포 생존성에 미치는 영향.
(A-C) Colo-205 세포를 상이한 농도의 서로 다른 CDH17 결합제 및 scFv 변이체를 함유하는 상이한 이중 특이성 분자로 24 시간 동안 처리하였다. (D) HepG2 세포를 상이한 농도의 서로 다른 CDH17 결합제 및 scFv 변이체를 함유하는 상이한 이중 특이성 분자로 72 시간 동안 처리하였다. 항-TR2v2 (A-D) 및 항-CDH17H2 (C-D) 항체 단독을 대조군으로 사용하였다. 데이터는 비처리 대조군과 비교한 평균 상대 값과 표준 편차로 표시되었다. 적어도 두 가지 독립적인 분석이 각 조건에 대해 중복으로 수행되었다.
도 10: 인간 TRAILR2 (TR2) 및 인간 CD44v6을 인식하는 이중 특이성 분자가 세포 생존성에 미치는 영향.
(A) Colo-205 세포에서 TRAILR2 (TR2) 및 CD44v6의 단백질 표면 발현 분석. 결과는 세포만을 함유하는 대조군 샘플에 대한 평균 PE 값으로 표시되었다. 두 단백질 모두 각 IgG 대조군에 비해 유의한 발현을 보였다. 데이터는 세 가지 독립적인 실험을 나타낸다. (B) Colo-205 세포를 상이한 농도의 항-TRAILR2 (항-TR2v1) 단독, 항-CD44v6 항체 단독 및 CD44v6/TR2v1 이중 특이성 분자로 72 시간 동안 처리하였다. 데이터는 비처리 대조군과 비교한 평균 상대 값과 표준 편차로 표시되었다. 두 가지 독립적인 분석이 각 조건에 대해 중복으로 수행되었다.
도 11: 항체 배양이 CRC 세포 생존성에 미치는 영향.
(A 및 B) CL-34 (A) 및 SK-CO-1 (B) 세포에서의 TRAILR2 (TR2) 및 CDH17의 단백질 표면 발현 분석. 결과는 세포만을 함유하는 대조군 샘플에 대한 평균 PE 값과 표준 편차로 표시되었다. 데이터는 두 가지 독립적인 실험을 나타낸다. CL-34 (C) 및 SK-CO-1 (D) 세포를 상이한 농도의 (i) 항-TRAILR2 (항-TR2v1) 단독, (ii) 항-CDH17v1 단독 또는 (iii) CDH17v1/TR2v1로 각각 120 시간 및 96 시간 동안 처리하였다. 데이터는 비처리 대조군과 비교한 평균 상대 값과 표준 편차로 표시되었다. 두 가지 독립적인 분석이 각 조건에 대해 중복으로 수행되었다.
도 12: 인간 TRAILR2 (TR2) 및 인간 CDH17을 인식하는 4가 분자의 효과.
TRAILR2/CDH17 이중 특이성 분자 (검은색 원) [CDH17H2/TR2v2-(Ig G1 KO) (A 및 B) 또는 CDH17H2/TR2v2-(Ig G1 FcRnmut) (C 및 D)] 또는 비히클 대조군 (흰색 원)을 Colo205 (A 및 C) 또는 Gp2d (B 및 D) 종양 세포를 보유하는 마우스에 투여하였다. 종양 용적 (mm3)을 투여 후 지정된 날에 측정하고, 데이터를 종양 용적의 중앙값으로 나타내었다. 8-10 마리의 동물이 각 그룹에 포함되었다.
도 13: 새로운 CDH17 항체 분자를 사용하여 Colo-205 세포에서 CDH17의 단백질 표면 발현 분석.
결과는 세포만을 함유하는 대조군 샘플에 대한 평균 APC 값으로 나타내었다. 중복 실험의 대표 데이터.
도 14: 원발성 CRC 및 CRC 간 전이에서의 CDH17 및 TRAILR2 단백질 발현.
해당 일차 항체를 사용한 뒤 검출 시약 및 DAB 용액에서 배양을 이용한 TRAILR2 및 CDH17에 대한 대표 이미지
발명의 상세한 설명
전술한 바와 같이, 암 치료를 위한 하나의 접근법은 TNF-관련 아폽토시스 유도 리간드 (TRAIL) 수용체-매개된 아폽토시스 경로에 특이적으로 결합하고 활성화시키는 분자를 사용함으로써 암세포에서 아폽토시스를 유도하는 것이다. 많은 전임상 연구에서 볼 수 있듯이, TRAIL 신호전달은 수많은 종양 세포주에서 아폽토시스를 효율적으로 유도하지만 대부분의 정상 세포에서는 그렇지 않다. 그러나, 정상 조직, 특히 간에서의 간세포는 또한 아폽토시스 유도의 이러한 기전에 감수성이 있다고 보고되었다.
TRAIL은 4개의 상이한 세포 표면 수용체에 고친화성으로 결합한다. 이 중 두 개, 즉 TRAILR1 및 TRAILR2 는 세포 내 사멸 도메인과 다른 적응성 단백질 및 프로-캐스파제 8의 상호작용을 통해 TRAIL 유도성 아폽토시스를 유도할 수 있다. TRAIL 리간드를 통한 TRAILR1 또는 TRAILR2 분자의 클러스터링은 자가 촉매 분해와 프로-캐스파제 8의 활성화를 촉진하고 이는 차례로 아폽토시스의 유도로 이어진다. TRAILR3 및 TRAILR4는 유인 수용체이고, 그들의 세포 외 도메인은 TRAIL에 결합할 수 있지만, 수용체의 세포 내 부분은 TRAIL 결합시에 아폽토시스를 유도할 수 있는 도메인을 함유하지 않는다.
유인 TRAIL 수용체의 과발현은 암세포를 TRAIL 리간드의 존재에 둔감하게 만들 수 있다. 비유인 사멸 유도 TRAIL 수용체의 특이적 표적은 이 문제를 피하고 종양의 보다 효과적인 치료법임을 제시한다. 본 발명은 TRAILR2 작용제 분자의 개발에 중점을 둔다. TRAILR2는 광범위 암에서 널리 발현된다.
렉사투무맙 (HGS-ETR2)을 포함한 여러 TRAILR2 특이적 작용 항체가 암 치료를 위해 개발되었다. 그러나 이들 작용 항체는 임상에서 효능이 부족하였다. 이것은 TRAILR2 수용체의 충분한 클러스터링이 부족하여 암세포에서 효과적으로 아폽토시스를 유도하지 못하기 때문일 수 있다.
암세포에서 TRAILR2 매개 아포토시스를 촉진하려는 다른 시도에서, 새로운 4량체 TRAILR2 결합 나노바디, TAS266이 개발되었다. 이것은 전임상 실험에서 기존의 TRAILR2 표적 항체보다 우수한 항종양 효과를 나타내는 것으로 입증되었다. 그러나, 간에서의 간세포가 TRAILR2 매개 아폽토시스에 민감할 수 있고 따라서 TAS266에 의해 촉진되는 TRAILR2 클러스터링의 비표적 증가는 잠재적인 독성의 위험이 있다고 보고되었다. 실제로, TAS266의 1상 임상 시험은 종료되었다.
따라서 경로를 너무 효율적으로 작동시키는 분자가 사용된다면 비암세포에서 아폽토시스가 유도되기 때문에 심한 부작용이 유발될 수 있다. 다른 한편으로, 너무 약하게 작용하는 분자가 사용된다면, 이들은 내약성은 좋지만 항암 활성은 좋지 않은 것으로 밝혀졌다.
과거에 "앵커 표적 (anchor target)"으로 불리는 TRAIL 수용체 결합 부위와 암세포 특이적 세포 표면 분자에 결합하는 부위로 이루어진 이중 특이성 분자를 실계하려는 시도가 있었다. 이론상, 그러한 이중 특이성 분자는 앵커 표적을 발현하는 암세포에 독점적으로 결합하고, TRAIL 수용체 결합 부위를 통해 아폽토시스를 유도한다.
다수의 상이한 앵커 표적이 TRAIL 수용체 결합 분자에 대한 적절한 조합 파트너로서 제안되어 왔다.
예를 들어, CEA (CEAM5_HUMAN) 및 CRIPTO가 WO2011039126A1에서 적합한 앵커 표적으로 제안되었다. CEA와 CRIPTO는 GPI 앵커에 의해 세포막에 연결되어 있다. 그러나, CEA와 CRIPTO는 모두 세포 표면에서 쉽게 절단되어 종양의 혈류로 빠져든다. 실제로, CEA 혈청 수준이 암 스크리닝을 위한 바이오마커로 사용된다. 이해할 수 있는 바와 같이, 혈청 CEA 및 CRIPTO는 TRAIL 수용체 및 이들 앵커 표적에 대해 이중 결합을 갖는 이중 특이성 분자에 결합할 수 있다. 따라서 혈청 CEA 및 CRIPTO는 막 결합 앵커 단백질과 경쟁할 뿐만 아니라 CEA 또는 CRIPTO를 발현하지 않는 세포에서 TRAIL 수용체 활성화의 가능성을 증가시킬 수 있으며, 따라서 원치않는 부작용을 유발할 수 있다.
FAP (Fibroblast activation protein, 섬유아세포 활성화 단백질)도 앵커 표적으로 제안되었다. 그러나, FAP는 종양 기질 내에 위치한 활성화된 섬유아세포에서만 발현된다. FAP는 상피 세포에서 발현되지 않는다. 따라서 FAP 이중 특이성 분자는 활성화된 섬유아세포와 물리적으로 밀접하게 접촉하는 암세포에서만 아폽토시스를 촉진시키는 작용을 할 것이다 (Bruenker et al., Molecular Cancer Therapeutics (2016), 15(5):946-957). 활성화된 섬유아세포와 직접 접촉하지 않는 종양 세포는 이 치료에 영향을 받지 않으며 계속 증식할 것이다. 따라서 암세포에서 TRAIL 수용체 유도된 아폽토시스를 매개하기 위한 앵커 표적으로 FAP를 사용하는 데에는 명백한 단점이 있다. 또한, 활성화된 섬유아세포는 간 섬유증, 폐 섬유증, 아테롬성경화증 및 관절염을 비롯한 조직 재형성 부위에서도 발견되기 때문에, FAP 및 TRAIL 수용체를 표적으로 하는 이중 특이성 분자는 잠재적으로 활성화된 섬유아세포의 표면에 고정되어 간 또는 다른 기관의 인접한 정상 TRAIL 민감성 세포에서 아폽토시스를 유도할 수 있다.
유사하게, MCSP (흑색종 관련 콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸) 및 ROBO4 (라운드어바웃 동족체 4 (roundabout homolog 4))가 앵커 표적으로서 제안되었다 (He Yuan et al., The Journal of Investigative Dermatology (2016), 136(2):541-544; WO2011039126A1). 흑색종의 세포 표면에서의 발현과는 별개로, MCSP는 주로 신생혈관에서 발현된다. ROBO4는 내피 세포에서 특이적으로 발현된다. 둘 다 상이한 종양 유형의 혈관신생 부위에 대해 기술된다. 따라서 MAPP 또는 ROBO4 및 TRAIL 수용체를 표적으로 하는 이중 특이성 분자가 효과적이기 위해서는 FAP와 마찬가지로 MSCP-발현 흑색종을 제외하고는 내피 세포와 밀접하게 물리적 접촉을 하면 암세포에서의 아폽토시스를 촉진하는 작용을 할 것이다. 종양이 급속히 너무 커지고 종양이 커짐에 따라 혈액으로 공급되기 때문에 이것이 항상 가능한 것은 아니다. 따라서, 또 다시 앵커 표적으로서 이들 분자를 사용하는데 단점이다.
또한, TRAILR2 및 LTβR (림포톡신-베타 수용체)를 표적으로 하는 이중 특이성 항체는 각각의 모 항체의 조합과 동등하거나 그보다 큰 수준으로 뮤린 종양 이종이식 모델에서 종양 성장을 억제하는데 활성이 있는 것으로 보고되었다 (Michaelson et al., mAbs (2009), 1(2):128-141). 마우스에서 LTβR 신호전달은 LTβR이 성숙한 간세포에서 발현되는 경우 간 재생에 결정적인 것으로 나타났다 (Anders R.A. et al. J Immunol (2005), 175(2):1295-1300). FAP와 마찬가지로 LTβR 신호전달은 바이러스 및 비바이러스성 간염, 담관염 및 HCC 환자에서 만성 간 염증 동안 광범위하게 활성화된다. 특히, 간세포에서의 그의 발현이 기술되어 있다 (Haybaeck J. et al. Cancer Cell (2009), 16(4): 295-308). LTβR 및 TRAIL 수용체의 표적화는 잠재적으로 TRAILR2 활성화에 민감한 LTβR-발현 간세포 표면에 고정될 수 있어 잠재적으로 간 독성을 유발할 수 있다.
마지막으로, 테나신 C가 또한 유용한 앵커 표적인 것으로 제안되었다. 테나신 C는 분비 단백질이므로 세포막에 고정되지 않는다. 이것은 암세포에서 아폽토시스를 유도하는 간접적인 메커니즘의 또 다른 예이다. MCSP 또는 ROBO4 앵커링 전략과 마찬가지로, 테나신 C 부분은 아폽토시스가 이루어지도록 암세포 막상의 TRAILR2 분자에 적절히 배향되어야 한다. 또한, 테나신 C 발현은 만성 간 질환에서 상향조절되며, TRAIL 작용제를 포함하는 이중 특이성 분자로 치료하면 상태를 악화시킬 것으로 예상된다.
따라서, 현재 암세포에서 특이적으로 TRAIL 수용체-매개된 아폽토시스 경로를 치료적으로 조절하는 문제가 있다.
이에 따라, 본 발명자들은 혈청 중에 실질적인 양으로 존재하지 않고 TRAILR2를 공동 발현하는 암세포에 국한된 앵커 단백질을 동정하기로 결정하였다. 중요하게, 본 발명자들은 상기에서 기술된 잠재적인 간 독성 때문에 간에서 발현되지 않는 앵커 단백질을 선택하기로 하였다.
본 발명자들은 TRAIL 수용체 결합 분자와 조합하여 사용될 수 있는 잠재적으로 적합한 앵커 표적으로서 카드헤린-17을 확인하였다.
카드헤린-17 (CDH17)은 카드헤린 슈퍼패밀리의 구성원으로 칼슘 의존성 막 결합된 당 단백질을 코딩하는 유전자이다. 코딩된 단백질은 카드헤린 유사이며 7개의 카드헤린 도메인과 막경유 영역을 포함하나 카드헤린 슈퍼패밀리의 다른 구성원들 중에서 보존된 세포질 도메인이 결여된 세포 외 영역으로 이루어진다.
본 발명자들은 비신생물성 조직에서 CDH17의 발현을 분석하였다. IHC 연구는 소장과 결장의 점막 상피에서 CDH17의 균질 상피 염색을 밝혀내었다. 담낭, 위 및 췌장관 내 상피에서도 이종 상피 염색이 검출되었다.
현재까지 종양에서 TRAILR2 및 CDH17의 공동 발현을 밝힌 대표적인 연구는 공개되지 않았다. 높은 유병률은 CRC에서 TRAILR2 (87-100%)뿐만 아니라 CDH17 (88-100%)의 발현에 대해 일관되게 나타났다. GC에서는, CDH17이 모든 경우의 56-90%에서 입증되어 확산형과 비교하여 장형에서 유의하게 높은 빈도를 보인 반면, TRAILR2는 원발성 및 전이성 위암종에서 높은 수준으로 구성적으로 발현된 것으로 나타났다. PAC에서, CDH17 발현은 모든 경우의 50-82%에서 나타났으며 TRAILR2는 81%에서 나타났다 (Gallmeier et al., PLoS One. 2013;8(2):e56760; Ito et al., Virchows Arch. 2005 Oct;447(4):717-22; Koornstra et al., Eur J Cancer. 2005 May;41(8):1195-202; Koyama et al., J Cancer Res Clin Oncol. 2002 Feb;128(2):73-9; Luque-Garcia et al., Proteomics. 2010 Mar;10(5):940-52; Panarelli et al., Am J Clin Pathol. 2012 Aug;138(2):211-22; Su et al., Mod Pathol. 2008 Nov;21(11):1379-86; Takamura et al., Cancer Sci. 2003 May;94(5):425-30; van Geelen et al., J Clin Oncol. 2006 Nov 1;24(31):4998-5004.).
따라서, 본 발명자들은 본 연구를 수행하여 TRAILR2 및 CDH17이 다양한 종양 (즉, 결장직장암 (CRC), 위암 (GC) 및 췌장암 (PAC))에서 공동 발현되나 비암성 세포에서는 공동 발현이 거의 없거나 전혀 없음을 알아냈다. 특히, CDH17은 TRAILR2 활성화에 대해 보고된 감수성으로 정상 간 조직 또는 간세포에서는 검출되지 않았다.
본 발명에 이르기까지 이들 두 항원을 표적으로 하는 결합 분자를 제조하는 것은 개시되지 않았거나 조금도 고려되지 않았다는 것을 지적하는 것이 중요하다.
따라서, 본 발명자들은 TRAILR2에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위 및 CDH17에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위를 포함하는 결합 분자를 제조하였다.
첨부된 실험 데이터에서, 이러한 분자는 CDH17 및 TRAILR2가 모두 발현되는 세포에서 본 발명의 분자의 치료적으로 허용가능한 양으로 시험관 내에서 아폽토시스를 유도할 수 있음을 알 수 있다. 중요하게도, 실시예에 나타낸 바와 같이, 동일한 분자는 TRAILR2를 발현하지만 CDH17을 발현하지 않는 세포에서 본질적으로 아폽토시스를 유도하지 않는다. 따라서, 본 발명의 결합 분자는 암세포가 CDH17 및 TRAILR2 모두를 발현하는 암에 대해 치료적으로 유효할 수 있다는 잠재성을 갖는다. 한 측면에서, 본 발명의 결합 분자는 CDH17 음성 간 세포에 영향을 미치지 않아, 간 독성의 위험을 감소시킨다. 또한, 본 발명의 결합 분자 (예: (i) CDH17에 특이적인 중쇄 가변 영역, 불변 IgG 도메인 및 TRAILR2에 특이적인 scFv를 각각 포함하는 2개의 중쇄 및 (ii) 각각 CDH17에 특이적인 경쇄 가변 영역을 포함하는 2개의 경쇄를 갖는 결합 분자)는 95% 이상의 단량체 함량으로 안정한 것으로 나타나 치료적 적용 가능성을 더욱 뒷받침한다.
따라서, 본 발명의 CDH17/TRAILR2 결합 분자는 당 업계에 공지된 분자에 비해 분명한 이점을 가지며 결장직장암 (CRC), 위암 (GC) 및 췌장암 (PAC)을 포함하여 암 치료에 대한 유용성을 제공한다.
또한, TRAILR2에 대한 TRAIL 수용체 결합 분자의 작용 효과를 증강시키는 CDH17의 능력은 모든 세포 표면 단백질에 공통적인 것은 아니다. 이것은 본 발명자들이 CD44v6이 또한 적합한 앵커 표적이 될 수 있는지 여부를 조사한 이후에 공지되었다. CD44v6은 편재되어 발현된 표면 당단백질 CD44의 스플라이스 변이형이며, 정상 조직보다 종양에서 우선적인 발현 패턴을 보이는 종양 관련 항원으로 알려져 있다. 그러나, 첨부된 실시예에 나타낸 바와 같이, CD44v6은 TRAIL 수용체 결합 분자의 작용 효과를 강화시키지 않기 때문에 앵커 단백질로서 기능하지 않는다. 따라서 앵커 표적으로서의 CDH17의 유용성은 단순히 단백질의 발현 프로파일에 기초하여 예측할 수 없다.
본 발명의 제1 양태는 TNF-관련 아폽토시스 유도 리간드 수용체 2 (TRAILR2)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위 (제1 항원 결합 부위) 및 카드헤린-17 (CDH17)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위 (제2 항원 결합 부위)를 가지는 결합 분자를 제공한다.
전술한 바와 같이, 본 발명에 이르기까지, TRAILR2 및 CDH17에 특이적으로 결합할 수 있는 결합 분자를 제조하는 것이 개시되거나 심지어 조금도 고려되지 않았다. 그럼에도 불구하고, 개별적으로 각각의 단백질 및 이들과 관련된 유전자는 당 업계에 공지되어 있고 생물학적 데이터베이스에 잘 나타나 있다.
의심의 여지를 없애기 위해, 여기서 "TNF-관련 아폽토시스 유도 리간드 수용체 2 (TRAILR2)"는 UniProt O14763 http://www.uniprot.org/uniprot/O14763에 제공된 인간 단백질 및 그 단백질을 코딩하는 핵산 서열을 의미한다.
의심의 여지를 없애기 위해, 여기서 "카드헤린-17 (CDH17)"은 UniProt Q12864 http://www.uniprot.org/uniprot/Q12864에 제공된 인간 단백질 및 그 단백질을 코딩하는 핵산 서열을 의미한다.
본 발명은 적어도 2개의 상이한 표적에 대해 결합 특이성을 갖는 결합 분자에 관한 것이다. 본 발명과 관련하여, 결합 분자는 항체로부터 유래된다. 결합 분자를 제조하는 기술에는 상이한 특이성을 갖는 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 공동 발현 (Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)), WO 93/08829, 및 Traunecker et al., EMBO J. 10: 3655 (1991) 참조), 및 "노브-인-홀 (knob-in-hole)" 공학 (예를 들어, 미국 특허 제5,731,168호 참조)이 있으나 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 결합 분자는 또한 항체 Fc-헤테로다이머 분자를 제조하기 위한 정전기적 조종 효과 (electrostatic steering effect)의 조작 (WO 2009/089004A1); 2개 이상의 항체 또는 단편을 교차 링크시키는 것 (예를 들어, 미국 특허 제4,676,980호 및 Brennan et al., Science, 229: 81 (1985) 참조); 이중 특이적 항체를 제조하기 위한 류신 지퍼 이용 (예를 들어, Kostelny et al., Immunol., 148(5): 1547-1553 (1992) 참조); 이중 특이적 단편을 제조하기 위한 "디아바디" 기술 이용 (예를 들어, Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444- 6448 (1993) 참조); 및 단쇄 Fv (sFv) 이량체 사용 (예를 들어, Gruber et al., /. Immunol., 152:5368 (1994) 참조); 및 예를 들어 문헌 [Tutt et al. /. Immunol. 147: 60 (1991)]에 기재되어 있는 삼중 특이성 항체 제조에 의해 제조될 수 있다
본원에서 특별히 정의되지 않은 용어는 개시 및 문맥에 비추어 당업자들에게 주어진 의미를 가져야 한다. 그러나, 명세서에서 사용된 바와 같이, 달리 지정되지 않는 한, 다음 용어는 제시된 의미를 가지며 다음 규칙이 준수된다.
본원에서 사용된 용어 "항원 결합 부위"는 항체로부터 유래된 중쇄 가변 도메인 (VH) 및 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함한다. 이 경우, 각 가변 도메인은 3개의 CDR을 포함한다. 한 측면에서, 본 발명에 따른 항원 결합 부위 또는 단백질의 특정 부분은 일반적으로 항체로부터 유래된다. 항체 또는 면역글로불린 분자의 일반화된 구조는 당업자에게 잘 알려져 있다.
"항체" 또는 "면역글로불린 분자" (면역글로불린이라고도 공지, Ig로 약칭됨)는 척추동물의 혈액이나 다른 체액에서 발견할 수 있는 감마 글로불린 단백질이며, 면역 체계가 이물질, 예컨대 박테리아 및 바이러스를 확인하고 중화하는 데 사용된다. 그들은 전형적으로 하나의 유닛을 갖는 단량체, 2개의 유닛을 갖는 이량체 또는 5개의 유닛을 갖는 오량체를 형성하기 위해 2개의 큰 중쇄 및 2개의 작은 경쇄를 각각 갖는 기본 구조 단위로 만들어진다. 항체는 비공유 상호작용에 의해 항원으로 알려진 다른 분자 또는 구조에 결합할 수 있다. 이 결합은 항체가 높은 친화력으로 특정 구조에만 결합한다는 의미에서 특이하다. 항체에 의해 인식되는 항원의 독특한 부분을 에피토프 또는 항원 결정기라고 한다. 에피토프에 결합하는 항체의 부분은 때로 파라토프 (paratope)라고 불리며, 항체의 소위 가변 도메인 또는 가변 영역 (Fv)에 존재한다. 가변 도메인은 프레임워크 영역 (FR)에 의해 이격된 3개의 소위 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함한다.
본 발명의 내용에서, CDR에 대한 언급은 IMGT로도 칭해지는 CCG의 정의에 기초한다 (Lefranc MP, Pommie C, Ruiz M, Giudicelli V, Foulquier E, Truong L, Thouvenin-Contet V, Lefranc G. "IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains." Dev Comp Immunol. 2003 Jan;27(1):55-77; Giudicelli V, Brochet X, Lefranc MP. "IMGT/V-QUEST: IMGT standardized analysis of the immunoglobulin (IG) and T cell receptor (TR) nucleotide sequences". Cold Spring Harb Protoc. 2011;2011(6):695-715). CDR의 다른 정의는 Kabat (E.A. Kabat, T.T. Wu, H. Bilofsky, M. Reid-Miller and H. Perry, Sequence of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda (1983)와 함께 Chothia에 기초한다 (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 1987, 196: 901-917).
본원에서 사용된 "가변 도메인" 또는 "가변 영역" 또는 Fv라는 표현은 항체와 항원의 결합에 직접적으로 관여하는 경쇄 및 중쇄의 각 쌍을 의미한다. 경쇄의 가변 도메인은 "VL"로 약칭되고 중쇄의 가변 도메인은 "VH"로 약칭된다. 가변 경쇄 및 중쇄 도메인은 동일한 일반 구조를 가지며, 각 도메인은 3개의 HVR (또는 CDR)에 의해 연결되는 서열이 광범위하게 보존되는 4개의 프레임워크 (FR) 영역을 포함한다. 프레임워크 영역은 베타-시트 형태를 취하고 CDR은 베타-시트 구조를 연결하는 루프를 형성할 수 있다. 각 쇄의 CDR은 프레임워크 영역에 의해 3 차원 구조로 유지되고 다른 쇄의 CDR과 함께 항원 결합 부위를 형성한다. 항체의 중쇄 및 경쇄 CDR3 영역은 본 발명에 따른 항체의 결합 특이성/친화성에서 특히 중요한 역할을 하며, 따라서 본 발명의 또 다른 대상을 제공한다. 본 출원에서 사용되는 용어 "불변 도메인" 또는 "불변 영역"은 가변 영역 이외의 항체 도메인을 의미한다. 이러한 불변 도메인 및 영역은 당 업계의 기술 수준에서 잘 알려져 있으며, Kabat 등에 의해 기술되었다 ("Sequence of proteins of immunological interest", US Public Health Services, NIH Bethesda, MD, Publication No. 91).
항체의 "Fc 부분"은 항체와 항원의 결합에 직접적으로 관여하지는 않지만 다양한 이펙터 기능을 나타낸다. "항체의 Fc 부분"은 당업자에게 잘 알려져 있고 항체의 파파인 절단에 기초하여 정의된 용어이다. 그의 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열에 따라, 항체 또는 면역글로불린은 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 클래스로 분류된다. 중쇄 불변 영역에 따라, 면역글로불린의 상이한 부류는 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 불린다. 이들 중 몇 개는 하위 클래스 (이소타입), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4, IgA1 및 IgA2로 더 분류될 수 있다. 항체의 Fc 부분은 보체 활성화, C1q 결합 및 Fc 수용체 결합에 기초하여 ADCC (항체 의존성 세포 매개 세포 독성) 및 CDC (보체 의존성 세포 독성)에 직접 관여한다. 보체 활성화 (CDC)는 대부분의 IgG 항체 하위 클래스의 Fc 부분에 보체 인자 C1q를 결합시킴으로써 개시된다. 보체 시스템에 대한 항체의 영향은 특정 조건에 의존적이지만, Clq에의 결합은 Fc 부분의 한정된 결합 부위에 의해 야기된다. 이러한 결합 부위는 당 기술 분야에 공지되어 있으며, 예를 들어 문헌 [Boakle et al., Nature 282 (1975) 742-743, Lukas et al., J. Immunol. 127 (1981) 2555-2560, Brunhouse and Cebra, Mol. Immunol. 16 (1979) 907-917, Burton et al., Nature 288 (1980) 338-344, Thommesen et al., Mol. Immunol. 37 (2000) 995-1004, Idusogie et al., J. Immunol.164 (2000) 4178-4184, Hezareh et al., J. Virology 75 (2001) 12161- 12168, Morgan et al., Immunology 86 (1995) 319-324, EP 0307434]에 기재되어 있다. 이러한 결합 부위는 예를 들어 L234, L235, D270, N297, E318, K320, K322, P331 및 P329 (Kabat의 EU 지수에 따른 번호 매김, 아래 참조)이다. IgG1에서 C1q 및 Fcγ 수용체 결합을 매개하는 이들 잔기 중에서 가장 중요한 것은 L234 및 L235이다 (Hezareh et al., J. Virology 75 (2001) 12161- 12168). 하위 클래스 IgG1 및 IgG3의 항체는 보체 활성화 및 C1q 및 C3 결합을 보인 반면, IgG2 및 IgG4는 보체 시스템을 활성화시키지 않으며 C1q 및 C3에 결합하지 않는다.
당 업계에서는 항체를 더 개발하여 의약 및 기술 분야에서 다재다능한 도구로 만들었다. 따라서, 본 발명과 관련하여, 용어 "항체 분자" 또는 "항체" (본원에서 동의어로 사용됨)는 자연계에서 발견될 수 있는 항체를 포함할 뿐만 아니라, 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄 또는 낙타과 종에서와 같이 2개의 중쇄만을 포함하지만, 그밖에 항원에 대한 결합 특이성 및 면역글로불린의 가변 도메인에 대한 구조적 유사성을 갖는 적어도 하나의 파라토프를 포함한 모든 분자를 포함한다.
따라서, 항체는 단일클론 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 항체의 단편, 특히 Fv, Fab, Fab' 또는 F(ab')2 단편, 단쇄 항체, 특히 단쇄 가변 단편 (scFv), 소형 모듈 면역약제 (SMIP), 도메인 항체, 나노바디, 디아바디 (diabody)를 포함할 수 있다. 항체는 항체의 Fc 부분 (항체 불변 영역)에 의해 통상 매개되는 ADCC 또는 CDC와 같은 이펙터 기능을 가질 수 있거나 또는 예를 들어 Fc 부분을 갖지 않거나 차단, 마스킹된 Fc 부분, 본질적으로 면역 세포 또는 보체 시스템과 같은 면역계 성분에 의해 인식되지 않거나 불충분하게 인식되는 Fc 부분을 가짐으로써 이펙터 기능을 갖지 않을 수 있다. 단일클론 항체 (mAb)는 아미노산 서열이 동일한 단일 특이성 항체이다. 그들은 특이적 항체 생성 B 세포와 골수종 (B 세포 암) 세포의 융합 클론을 나타내는 하이브리드 세포주 (하이브리도마 (hybridoma)라 칭함)로부터 하이브리도마 기술에 의해 생산될 수 있다 (Kohler G, Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature 1975;256:495-7). 대안적으로, 단일클론 항체는 숙주 세포에서 재조합 발현에 의해 생성될 수 있다 (Norderhaug L, Olafsen T, Michaelsen TE, Sandlie I. (May 1997). "Versatile vectors for transient and stable expression of recombinant antibody molecules in mammalian cells." J Immunol Methods 204 (1): 77-87; 또한 하기 참조). "재조합 항체" 또는 "재조합 결합 분자"는 재조합적으로 조작된 숙주 세포에 의해 생성된 항체 또는 결합 분자이다. 이는 임의로 단리되거나 정제된다.
인간에서의 적용을 위해, 기원적으로 마우스와 같은 다른 종에서 유래된 항체의 면역원성을 감소시키는 것이 종종 바람직하다. 이것은 키메라 항체의 작제 또는 "인간화"로 불리는 과정에 의해 이루어질 수 있다. 이 문맥에서, "키메라 항체"는 상이한 종 (예를 들어 인간)으로부터 유래된 서열 부분 (예를 들어, 불변 도메인)에 융합된 하나의 종 (예를 들어 마우스)으로부터 유래된 서열 부분 (예를 들어 가변 도메인)을 포함하는 항체로 이해된다. "인간화 항체"는 본래 비인간 종에서 유래된 가변 도메인을 포함하는 항체이며, 여기서 특정 아미노산은 그 가변 도메인의 전체 서열을 인간 가변 도메인의 서열에 보다 가깝게 만들기 위해 돌연변이되어 있다. 항체의 키메라화 및 인간화 방법은 당해 기술 분야에 잘 알려져 있다 (Billetta R, Lobuglio AF. "Chimeric antibodies". Int Rev Immunol. 1993;10(2-3):165-76; Riechmann L, Clark M, Waldmann H, Winter G (1988). "Reshaping human antibodies for therapy". Nature: 332:323).
"인간화" 항체는 비-인간 고가변 영역 (HVR)의 아미노산 잔기 및 인간 FR의 아미노산 잔기를 포함하는 항체를 말한다. 특정 실시양태에서, 인간화 항체는 실질적으로 모든 HVR (예를 들어, 상보성 결정 영역 (CDR))이 비-인간 항체의 것과 상응하고 모두 또는 실질적으로 전체 프레임워크 영역 (FR)이 인간 항체의 것과 상응하는 적어도 하나, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인을 모두 포함할 것이다. 인간화 항체는 임의로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 항체의 "인간형 형태", 예를 들어 비-인간 항체는 인간화된 항체를 말한다.
또한, 예를 들어 파아지 디스플레이 또는 유전자이식 동물의 사용에 의해 인간 게놈으로부터 유래된 서열을 기초로 항체를 생성하는 기술이 개발되었다 [WO 90/05144; D. Marks, H.R. Hoogenboom, T.P. Bonnert, J. McCafferty, A.D. Griffiths and G. Winter (1991) "By-passing immunisation. Human antibodies from V-gene libraries displayed on phage." J.Mol.Biol., 222, 581-597; Knappik et al., J. Mol. Biol. 296: 57-86, 2000; S. Carmen and L. Jermutus, "Concepts in antibody phage display". Briefings in Functional Genomics and Proteomics 2002 1(2):189-203; Lonberg N, Huszar D. "Human antibodies from transgenic mice". Int Rev Immunol. 1995;13(1):65-93.; Brueggemann M, Taussig MJ. "Production of human antibody repertoires in transgenic mice". Curr Opin Biotechnol. 1997 Aug;8(4):455-8]. 이러한 항체는 본 발명의 맥락에서 "인간 항체"이다.
항체는 또한 항원 결합 성질을 보유하는 면역글로불린의 단편, 예를 들면, Fab, Fab' 또는 F(ab')2 단편을 포함한다. 이러한 단편은 면역글로불린의 단편화에 의해, 예를 들면, 단백질분해성 소화에 의해, 또는 이러한 단편의 재조합 발현에 의해 수득할 수 있다. 예를 들면, 면역글로불린 소화는 통상적인 기술의 수단에 의해, 예를 들면, 파파인 또는 펩신을 사용하여 달성할 수 있다 (WO 94/29348 참조). 항체의 파파인 소화는 전형적으로 각각 단일 항원 결합 부위를 갖는 두 개의 동일한 항원 결합 단편, 소위 Fab 단편과 잔여 Fc 단편을 생성한다. 펩신 처리는 F(ab')2를 생성한다. Fab 분자에서, 가변 도메인은 각각 바람직하게는 인간 기원의 면역글로불린 불변 도메인에 융합된다. 따라서, 중쇄 가변 도메인은 CH1 도메인 (소위 Fd 단편)에 융합될 수 있고, 경쇄 가변 도메인은 CL 도메인에 융합될 수 있다. Fab 분자는 숙주 세포에서 각각의 핵산의 재조합 발현에 의해 생성될 수 있다 (하기 참조).
면역글로불린의 가변 도메인 또는 이러한 가변 도메인으로부터 유래된 분자를 상이한 분자 상황에 도입하는 다수의 기술이 개발되었다. 이러한 것들도 또한 본 발명에 따른 "항체"로서 고려되어야 한다. 일반적으로, 이들 항체 분자들은 면역글로불린에 비하여 크기가 작으며 단일 아미노산 쇄 또는 다수의 아미노산 쇄를 포함할 수 있다. 예를 들면, 단쇄 가변 단편(scFv)은 면역글로불린의 중쇄와 경쇄의 가변 영역들이 짧은 링커, 보통 세린 (S) 또는 글리신 (G)과 함께 연결된 융합체이다 [WO 88/01649; WO 91/17271; Huston et al; International Reviews of Immunology, Volume 10, 1993, 195-217]. "단일 도메인 항체" 또는 "나노바디"는 단일 Ig-유사 도메인에서 항원-결합 부위를 가진다 [WO 94/04678; WO 03/050531, Ward et al., Nature. 1989 Oct 12;341(6242):544-6; Revets et al., Expert Opin Bioi Ther. 5(1): 111-24, 2005]. 동일하거나 상이한 항원에 대해 결합 특이성을 갖는 하나 이상의 단일 도메인 항체는함께 연결될 수 있다. 디아바디는 2개의 가변 도메인을 포함한 2개의 아미노산 쇄로 구성된 2가 항체 분자이다 [WO 94/13804, Holliger et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 1993 Jul 15;90(14):6444-8]. 항체-유사 분자의 다른 예는 면역글로불린 슈퍼패밀리 (superfamily) 항체이다 [IgSF; Srinivasan and Roeske, Current Protein Pept. Sci. 2005, 6(2): 185-96]. 상이한 개념에 의해 소위 소형 모듈 면역약제 (SMIP)가 제공되었고, 이것은 단쇄 힌지 (hinge)에 연결된 Fv 도메인, 및 불변 도메인 CH1이 결여된 이펙터 도메인을 포함한다 (WO 02/056910).
본 발명과 관련하여, 본 발명의 제1 양태는 TNF-관련 아폽토시스 유도 리간드 수용체 2 (TRAILR2)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위 및 카드헤린-17 (CDH17)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위를 포함하는 결합 분자를 제공한다.
본원에 사용된 용어 "결합" 또는 "특이적 결합"은 시험관 내 분석에서 항원의 에피토프에 항체 또는 항원 결합 부위 (예를 들어, 본원에 기재된 결합 분자에서)의 결합을 의미한다. 친화력은 항체 분자상의 단일 항원-결합 부위와 단일 에피토프 사이의 상호작용이다. 그것은 평형 연관 상수 Ka = kon/koff 또는 평형 해리 상수 Kd = koff/kon에 의해 표현된다.
에피토프는 항체 또는 항원 결합 부분에 의해 결합되는 항원의 영역이다. 용어 "에피토프"는 항체 또는 항원 결합 부분에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 폴리펩티드 결정기를 포함한다. 특정 실시양태에서, 에피토프 결정기는 아미노산, 글리칸 측쇄, 포스포릴 또는 설포닐과 같은 분자의 화학적 활성 표면 군을 포함하고, 특정 실시양태에서는 특정 3차원 구조적 특성 및/또는 특정 전하 특성을 가질 수 있다. 구조적 및 비-구조적 에피토프는 변성 용매 존재 하에서 전자에 대한 결합은 상실되지만 후자에 대한 결합은 상실되지 않는다는 점에서 구별된다. 본원에 사용된 용어 "결합" 및 "특이적 결합"은 정제된 야생형 항원과 함께 시험관 내 분석, 바람직하게는 플라스몬 공명 분석 (BIAcore®, GE Healthcare Uppsala, Sweden)에서 항원의 에피토프에 대한 항체 또는 항원 결합 부분의 결합을 의미한다.
한 양태에서, 본 발명의 결합 분자는 예를 들어 표면 플라즈몬 공명 분석 (Malmqvist M., "Surface plasmon resonance for detection and measurement of antibody-antigen affinity and kinetics.", Curr Opin Immunol. 1993 Apr;5(2):282-6.)으로 결정된 바와 같은 친화력으로, KD 값 1 pM 내지 100 μM 범위, 바람직하게는 1 pM 내지 1 μM 범위로 TRAILR2 또는 CDH17 표적 항원에 결합한다. 항체 친화성은 또한 키네틱 배제 분석 (kinetic exclusion assay (KinExA)) 기술을 사용하여 측정할 수 있다 (Darling, R.J., and Brault P-A., "Kinetic exclusion assay technology: Characterization of Molecular Interactions." ASSAY and Drug Development Technologies. 2004, Dec 2(6): 647-657).
항체 분자의 결합 친화력은 친화성 성숙으로 알려진 공정에 의해 강화될 수 있다 (Marks et al., 1992, Biotechnology 10:779-783; Barbas, et al., 1994, Proc. Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813; Shier et al., 1995, Gene 169:147-155). 따라서, 친화성 성숙 항체가 또한 본 발명에 포함된다.
본원에서 사용된 용어 "결합" 또는 "특이적 결합"은 시험관 내 분석, 바람직하게는 표면 플라스몬 공명 분석 (SPR, BIAcore, GE-Healthcare Uppsala, Sweden)에서 항원의 에피토프에 대한 항체의 결합을 의미한다. 결합 친화성은 용어 kon (항체/항원 복합체로부터의 항체의 결합에 대한 속도 상수), koff (해리 상수) 및 KD (koff/kon)로 정의된다. 특이적 결합은 일반적으로 수용체 분자와 그의 리간드 사이에 복합체의 형성을 의미한다. 항체-항원 결합과 관련하여, 고친화성 항체는 전형적으로 10-9 M 이하의 친화성으로 그들의 표적 항원에 결합한다.
일 실시양태에서, 본 발명의 결합 분자는 1 nM 이하, 보다 더 바람직하게는 0.01 nM 미만의 농도에서 세포 생존성의 50% 초과 억제로 결장직장암 세포주 Colo205와 같은 하나 이상의 암세포 유형에서 TRAILR2 매개 아폽토시스를 유도할 수 있다.
추가의 실시양태에서, 본 발명의 결합 분자는 1 nM 이하, 더 바람직하게는 10 nM 이하, 보다 더 바람직하게는 100 nM 이하의 농도에서 세포 생존성의 50% 미만 억제로 세포주 HepG2와 같은 CDH17 음성 간 유래 세포에서 TRAILR2 매개된 아폽토시스를 유도할 수 없다.
추가의 바람직한 실시양태에서, 카드헤린-17 (CDH17)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위는 면역글로불린 (Ig) 분자 (2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 전장 항체의 통상적인 Y형 구조를 가짐)이며, TNF-관련 아폽토시스 유도 리간드 수용체 2 (TRAILR2)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위는 하나 이상의 scFv, scFab, Fab 또는 Fv 결합 요소를 포함한다. 바람직하게는 TNF-관련 아폽토시스 유도 리간드 수용체 2 (TRAILR2)에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위는 하나 이상의 scFv(들)를 포함한다.
"단쇄 Fv 단편"(scFv)은 항체 중쇄 가변 도메인 (VH), 링커 및 항체 경쇄 가변 도메인 (VL)을 포함하는 폴리펩티드이고, 여기서 상기 항체 도메인 및 상기 링커는 하기 N 말단에서 C 말단 방향으로의 순서 중 하나이고: a) VH-링커-VL, b) VL-링커-VH; 상기 링커는 15 내지 25개의 아미노산, 바람직하게는 20개의 아미노산 길이의 폴리펩티드이다.
또한, 이러한 단쇄 Fv 단편은 시스테인 잔기의 도입을 통해 VH 도메인 내, 또는 VL 도메인 내에서 VH와 VL 도메인 사이에 디설파이드 결합의 도입으로 추가로 안정화될 수 있다. N 말단이라는 용어는 폴리펩티드 사슬의 첫번째 아미노산을 나타내고 C 말단이라는 용어는 폴리펩티드 사슬의 C 말단의 마지막 아미노산을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 실시양태는 하나 이상의 scFv(들)가 추가의 시스테인 잔기를 포함하여 디설파이드 결합을 형성하는 것이다.
본 발명의 일 실시양태에서, scFv 부분의 안정성은 scFv 내에 디설파이드 결합 (본원에서 scFvss로 언급됨)을 형성하기 위해 근접한 3-차원 인접에 2개의 시스테인 잔기를 도입함으로써 증가될 수 있다. scFv가 TRv1의 V 영역 서열 (하기 논의됨)로부터 유래된 경우, 그러한 안정화된 디설파이드 결합이 조작될 수 있는 예시적인 잠재 부위는 (a) VL의 위치 99와 VH의 위치 45 사이, (b) VL의 위치 102와 VH의 위치 44 사이, (c) VL의 위치 4와 위치 100 사이, (d) VH의 위치 6과 위치 112 사이에 존재한다. 조작된 디설파이드 결합을 통해 안정화시키기 위해, 이들 위치에서 잔기는 바람직하게는 시스테인 잔기로 치환된다.
하기 실시예에서 입증된 바와 같이, 본 발명자들은 N-에서 C-말단으로 VL-VH 배향을 갖는 TRAILR2 scFv가 본 발명의 결합 분자에서 작용하여 표적 세포에서 아폽토시스를 유도할 수 있다는 것을 보여 주었다. N-에서 C-말단으로 VH-VL 배향을 갖는 TRAILR2 scFv가 또한 작용할 수 있지만, 이 배향에서 활성은 감소될 수 있다. 따라서, 본 발명의 바람직한 실시양태는 서열이 N-에서 C-말단으로 VL-VH인 경우이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시양태는 TRAILR2에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 scFv(들)가 펩티드 링커, 바람직하게는 약 4 내지 20개 (예를 들어, 6, 9, 12 또는 15개 중 어느 하나)의 아미노산 길이를 갖는 펩티드 링커에 의해 CDH17에 특이적으로 결합하는 Ig 분자 (예를 들어, 인간 IgG1, IgG1(KO), IgG1FcRnmut, IgG4Pro)에 융합되는 것이다. 바람직하게 scFv는 Ig 분자의 중쇄의 C-말단에 융합된다. 바람직하게는 Ig 분자는 IgG이다.
IgG 분자의 중쇄의 C-말단에 scFv 분자를 연결하거나 scFv 분자 내에 가변 도메인을 연결하는 방법은 당 업계에 잘 알려져 있다. 전형적으로, 글리신 및 세린 (GS 미니-링커라 칭함) 아미노산의 작은 링커 서열이 사용된다. 링커 내 아미노산의 수는 4 (GGGS) (서열 번호 144), 6 (GGSGGS) (서열 번호 141), 10 (GGGGSGGGGS) (서열 142) 또는 그 이상에서 변할 수 있다. 실제로, 일반적으로 링커는 관심 IgG를 코딩하는 핵산 분자(본 경우에는 CDH17 결합 부위에 대한 중쇄의 가변 도메인 및 IgG 유형의 불변 도메인을 코딩하는 핵산을 포함한다)를 링커 서열 (예를 들어, 5, 10, 15 또는 20개의 아미노산 중 하나의 GS 미니 링커, 바람직하게는 서열 번호 143의 링커)을 코딩하는 핵산 분자에 의해 이격된 원하는 scFv를 코딩하는 핵산 (이 경우, TRAILR2 결합 부위에 대해 VL-VH 또는 VH-VL 배향의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인을 코딩하는 핵산을 포함)과 결합하여 형성된다. 이어서, 이하에서 더 설명되는 바와 같이, 완전한 HC-scFv 코딩 핵산 분자를 발현 벡터 내에 두고 완전한 IgG 중쇄-scFv 단일 폴리펩티드가 형성되도록 적절한 숙주 세포에 도입한다.
바람직하게는 scFV 분자와 IgG 분자의 중쇄의 C-말단 사이의 GS 미니-링커는 GGSGGS (서열 번호 141)이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 (i) 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 가지는 CDH17에 특이적으로 결합하는 Ig 분자 및 (ii) 각각 TRAILR2에 특이적으로 결합하는 2개의 scFv 분자 (scFv(들))를 포함하는 다중 특이성 결합 단백질인 결합 분자를 제공한다. 바람직하게는, Ig 분자의 각 중쇄는 그의 C-말단에 융합된 하나의 scFv를 가지며, 이에 의해 이중 특이성 4가 결합 단백질을 형성한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 하기를 갖는 결합 분자 (본원에서 다중-특이성 결합 단백질 또는 변형된 Ig 분자로 지칭됨)를 제공한다:
(i) 각각 N에서 C 말단을 포함하는 2개의 중쇄;
- CDH17에 특이적인 중쇄 가변 도메인 (예를 들어, 뮤린, 인간화 또는 인간 VH 도메인)
- IgG의 불변 도메인 (예: 인간 IgG1 또는 IgG4)
- 펩티드 링커 (예를 들어, GS 미니 링커) 및
- TRAILR2에 특이적인 scFv (예를 들어, N에서 C 말단으로 VH 도메인 (예: 뮤린, 인간화 또는 인간 VH 도메인), 링커 및 VL 도메인 (예: 뮤린, 인간화 또는 인간 VL 도메인), 또는 그 반대의 경우 VL 도메인, 링커 및 VH 도메인)를 포함하는 scFv); 및
(ii) 각각 N에서 C 말단을 포함하는 2개의 경쇄:
- CDH17에 특이적인 경쇄 가변 도메인 (예를 들어, 뮤린, 인간화 또는 인간 VL 도메인),
- 경쇄 불변 도메인 (예: 인간 κ 사슬).
본원에 기재된 항체 분자 또는 결합 분자는 항체 분자의 성질에 원하는 영향을 미치는 다른 분자 실체에 (융합 단백질로서) 융합되거나 그렇지 않으면 (공유 또는 비-공유 결합에 의해) 결합될 수 있다. 예를 들어, 혈액과 같은 체액에서, 특히 단쇄 항체 또는 도메인 항체의 경우에 본원에 기술된 항체 또는 결합 분자의 약물 동력학적 특성, 안정성 등을 개선시키는 것이 바람직할 수 있다. 이와 관련하여, 다수의 기술, 특히 순환계에서 그러한 항체 분자의 반감기를 연장시키기 위한 페길화 (WO 98/25971; WO 98/48837; WO 2004081026); 알부민과 같은 혈청 단백질에 친화성을 갖는 다른 항체 분자에 항체 분자를 융합 또는 그렇지 않으면 공유 결합시키는 것 (WO 2004041865; WO 2004003019), 또는 알부민 또는 트랜스페린과 같은 혈청 단백질의 전부 또는 일부와 융합 단백질로서의 항체 분자의 발현 (WO 01/79258)이 개발되어 왔다.
항체의 Fc 영역은 다수의 Fc 수용체와 상호작용하여 다수의 중요한 기능성 (이는 "이펙터 기능"으로 지칭됨)으로 이어지기 때문에, 항체는 특정 실시양태에서 전장 항체 또는 Fc 영역의 일부를 포함하는 항체이고, 후자는 항체가 항원의 관련 부분 및 Fc 수용체 및 보체 모두에 특이적 결합을 나타내어야 한다. 불변 영역의 유형 및 길이의 선택은 보체 고정 또는 항체 의존성 세포 매개 세포 독성과 같은 이펙터 기능이 바람직한 특징인지, 항체 단백질의 원하는 약리학적 특성인지에 달려있다.
본 발명의 일 실시양태에서, 본 발명의 결합 분자에 의한 보체 산물 C1q 또는 Fcγ 수용체에 대한 결합은 234 및 235 위치에서 지시된 L에서 A로의 돌연변이 유발을 갖는 IgG4 불변 영역 또는 IgG1 불변 영역의 이용에 의해 제거된다.
본 발명의 일 실시양태에서, 본 발명의 결합 분자는 가용성 Fc 감마 수용체 또는 보체 C1q에 의한 의도하지 않은 교차 링크를 피하도록 조작된 Fc 영역 또는 이의 관련 섹션을 가질 수 있다. 일 실시양태에서, 이러한 결합 분자 또는 항체 변이체는 모 항체보다 Fcγ 수용체 및 보체 C1q에 대해 훨씬 낮은 친화도를 갖는다. (이하, 달리 언급되지 않는다면, 항체 분자의 문맥에서, 또는 IgG 또는 Fc 영역의 문맥에서 용어 "모"는 각각 조작되지 않은 항체 분자, Fc 영역 또는 IgG를 지칭하며, 이로부터 돌연변이된 (조작된) 분자가 유도된다). 따라서, 본 발명의 실시양태는 Ig 분자가 야생형 Fc 영역과 비교하여 Fcγ 수용체 또는 보체 수용체 또는 둘 다에 대해 감소된 친화성을 갖는 Fc 변이체를 포함하는 것이다. 이러한 Ig 분자는 본원에서 IgG1(KO)로 지칭된다.
본 발명의 추가의 실시양태는, 예를 들어 위치 H310A에서 CH2 도메인의 점 돌연변이에 의해 신생아 Fc 수용체 (FcRn)와의 상호작용을 최적화함으로써 혈청 수준 (반감기)을 개질시키도록 조작된 Fc 영역 또는 이의 관련 섹션을 포함한다. 이러한 Ig 분자는 본원에서 IgG1FcRnmut로 지칭된다.
본 발명의 추가의 실시양태는 결합 분자가 다른 IgG4 분자와의 중쇄의 교환을 제거하는 IgG4의 힌지 영역 변이체를 포함하는 Ig 분자를 포함하는 것이다. 이러한 Ig 분자는 본원에서 IgG4Pro로 지칭된다.
본 발명은 TNF-관련 아폽토시스 유도 리간드 수용체 2 (TRAILR2)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위 및 카드헤린-17 (CDH17)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위를 포함하는 결합 분자를 제공한다.
특정 표적 항원에 결합하는 결합 부위를 제조하는 방법은 당 업계에 잘 알려져 있다. 숙련자는 TRAILR2 또는 CDH17 표적 항원에 대해 필요한 특이성을 갖는 항원 결합 부위를 설계하기 위해 이들 방법을 쉽게 이용할 수 있다.
항체 및 항체 단편을 생성하는 방법은 당 업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 항체는 항체 분자의 생체 내 생산의 유도, 면역글로불린 라이브러리의 스크리닝 (Orlandi et al, 1989. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86:3833-3837; Winter et al 1991, Nature 349:293-299) 또는 배양물에서 세포주에 의한 단클론 항체 분자의 생성을 이용하는 몇몇 방법 중 어느 한 방법으로 생성할 수 있다. 이들은 하이브리도마 기술, 인간 B-세포 하이브리도마 기술, 및 엡스타인-바 바이러스 (EBV)-하이브리도마 기술을 포함하나 이에 한정되지 않는다 (Kohler et al 1975. Nature 256:4950497; Kozbor et al 1985. J. Immunol. Methods 81: 31-42; Cote et al 1983. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:2026-2030; Cole et al 1984. Mol. Cell. Biol. 62:109-120).
당 업계에 공지되고 본원에 기술된 방법을 사용하여 본원에 기재된 결합 분자뿐만 아니라 TRAILR2 및/또는 CDH17 표적 항원 및 에 대해 필요한 특이성을 갖는 결합 부위를 갖는 항체를 제조하는 것이 당업자에게는 일상적일 것이다. 상기 항체로부터 결합 도메인의 단리는 통상적인 실시이며, 실제로 본원에 기술된 항체 및 결합 분자를 생성시키는데 사용될 수 있는 방법에 대한 추가 정보는 첨부된 실시예에 제공된다.
본 발명자들은 첨부된 실시예에서 논의되는 본 발명의 특이적 TRAILR2/CDH17 결합 분자를 제조하였다.
본 발명자들은 또한 TRAILR2에 특이적인 다수의 항원 결합 부위를 제조하고, 이들을 TR#1, TR#2, TR#3, TR#7, TR#8, TR#10, TR#12, TR2v1, TR2v2, TR2v3, TR2v4, TR2v5, TR2v6, 및 TR2v7이라 명명하였다. 본 발명자들은 또한 CDH17에 특이적인 다수의 항원 결합 부위를 제조하고, 이들을 CDH17A6, CDH17E2, CDH17H2, CDH17E9 및 CDH17v1이라 명명하였다. 하기 제공되는 임의의 실시양태에서, 결합 분자는 CDH17 (CDH17A6, CDH17E2, CDH17H2, CDH17E9 및 CDH17v1 중 어느 하나)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위, 및 TRAILR2에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위 (TR#1, TR#2, TR#3, TR#7, TR#8, TR#10, TR#12, TR2v1, TR2v2, TR2v3, TR2v4, TR2v5, TR2v6, 및 TR2v7 중 어느 하나)를 포함한다. 바람직하게는, CDH17에 특이적인 적어도 하나의 항원 결합 부위는 Ig 분자 (2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함함)이고, TRAILR2에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위는 2개의 scFv(들)를 포함하고, 여기서 하나의 scFv는 중쇄의 하나의 C-말단에 결합하고 하나의 scFv는 이중 특이성 및 4가 결합 단백질을 형성하는 Ig 분자의 다른 중쇄의 C-말단에 결합한다.
일부 실시양태에서, 항원 결합 부위 (TR#1, TR#2, TR#3, TR#7, TR#8, TR#10, TR#12, TR2v1, TR2v2, TR2v3, TR2v4, TR2v5, TR2v6, TR2v7, CDH17A6, CDH17E2, CDH17H2, CDH17E9 및 CDH17v1 중 어느 하나)는 비인간 고가변 영역 (HVR; 예를 들어, 상보성 결정 영역 CDR)) 유래 아미노산 잔기 및 인간 프레임워크 서열 유래 아미노산 잔기를 포함하는 인간화 항원 결합 부위 (예를 들어, 인간화 VH/VL 도메인을 포함함)이다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 부위 (TR#1, TR#2, TR#3, TR#7, TR#8, TR#10, TR#12, TR2v1, TR2v2, TR2v3, TR2v4, TR2v5, TR2v6, TR2v7, CDH17A6, CDH17E2, CDH17H2, CDH17E9 및 CDH17v1 중 어느 하나)는 둘 다 인간 게놈의 서열에서 유래한 CDR 및 FR 서열을 포함하는 인간 항원 결합 부위 (예를 들어, 인간 VH/VL 도메인을 포함함)이다.
특이 항원 결합 부위의 아미노산 서열은 명세서 (표 3) 및 서열 목록에 기재되어 있다.
이하 TRAILR2 및/또는 CDH17에 대한 특이적 항원 결합 부위를 포함하는 본 발명의 바람직한 실시양태에 대한 상세한 설명이 제공된다.
의심의 여지를 없애기 위해, 본 발명의 제1 양태에 대해 이하에 열거된 특정 실시양태 각각은 또한 각각 본 발명의 독립적인 측면으로 간주될 수 있다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 1 (CDR1), 서열 번호 2 (CDR2) 및 서열 번호 3 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 4 (CDR1), 서열 번호 5 (CDR2) 및 서열 번호 6 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#1이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 83의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#1이다. 예를 들어, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 134 (배향 VL-VH)의 아미노산 서열을 포함하는 scFv 분자를 포함한다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 7 (CDR1), 서열 번호 8 (CDR2) 및 서열 번호 9 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 10 (CDR1), 서열 번호 11 (CDR2) 및 서열 번호 12 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 및 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 84의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#2이다. 예를 들어, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 135 (배향 VL-VH)의 아미노산 서열을 포함하는 scFv 분자를 포함한다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 13 (CDR1), 서열 번호 14 (CDR2) 및 서열 번호 15 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 16 (CDR1), 서열 번호 17 (CDR2) 및 서열 번호 18 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#3이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 86의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 87의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#3이다. 예를 들어, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 136 (배향 VL-VH)의 아미노산 서열을 포함하는 scFv 분자를 포함한다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 19 (CDR1), 서열 번호 20 (CDR2) 및 서열 번호 21 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 22 (CDR1), 서열 번호 23 (CDR2) 및 서열 번호 24 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#7이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 88의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#7이다. 예를 들어, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 137 (배향 VL-VH)의 아미노산 서열을 포함하는 scFv 분자를 포함한다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 25 (CDR1), 서열 번호 26 (CDR2) 및 서열 번호 27 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 28 (CDR1), 서열 번호 29 (CDR2) 및 서열 번호 30 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#8이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 91의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#8이다. 예를 들어, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 138 (배향 VL-VH)의 아미노산 서열을 포함하는 scFv 분자를 포함한다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 31 (CDR1), 서열 번호 32 (CDR2) 및 서열 번호 33 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 34 (CDR1), 서열 번호 35 (CDR2) 및 서열 번호 36 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#10이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 92의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 및 서열 번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#10이다. 예를 들어, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 139 (배향 VL-VH)의 아미노산 서열을 포함하는 scFv 분자를 포함한다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 37 (CDR1), 서열 번호 38 (CDR2) 및 서열 번호 39 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 40 (CDR1), 서열 번호 41 (CDR2) 및 서열 번호 42 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#12이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#12이다. 예를 들어, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 140 (배향 VL-VH)의 아미노산 서열을 포함하는 scFv 분자를 포함한다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 44 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 50 (CDR2) 및 서열 번호 54 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR2v1 또는 TR2v2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 96의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR2v1이다. 예를 들어, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 124 (배향 VL-VH), 서열 번호 131 (배향 VH-VL), 서열 번호 132 (디설파이드 결합을 갖고 배향은 VH-VL, scFV) 또는 서열 번호 133 (디설파이드 결합을 갖고 배향은 VL-VH, scFV)의 아미노산 서열을 포함하는 scFv 분자를 포함한다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR2v2이다. 예를 들어, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 125 (배향 VL-VH)의 아미노산 서열을 포함하는 scFv 분자를 포함한다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 45 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 51 (CDR2) 및 서열 번호 55 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR2v3이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR2v3이다. 예를 들어, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 126 (배향 VL-VH)의 아미노산 서열을 포함하는 scFv 분자를 포함한다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 45 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 52 (CDR2) 및 서열 번호 56 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR2v4이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR2v4이다. 예를 들어, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 127 (배향 VL-VH)의 아미노산 서열을 포함하는 scFv 분자를 포함한다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 45 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 50 (CDR2) 및 서열 번호 56 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR2v5이다.
바람직하게는, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR2v5이다. 예를 들어, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 128 (배향 VL-VH)의 아미노산 서열을 포함하는 scFv 분자를 포함한다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 46 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 51 (CDR2) 및 서열 번호 57 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR2v6이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR2v6이다. 예를 들어, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 129 (배향 VL-VH)의 아미노산 서열을 포함하는 scFv 분자를 포함한다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 47 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 53 (CDR2) 및 서열 번호 57 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR2v7이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR2v7이다. 예를 들어, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 130 (배향 VL-VH)의 아미노산 서열을 포함하는 scFv 분자를 포함한다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 58 (CDR1), 서열 번호 59 (CDR2) 및 서열 번호 60 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 61 (CDR1), 서열 번호 62 (CDR2) 및 서열 번호 63 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
바람직하게는 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 64 (CDR1), 서열 번호 65 (CDR2) 및 서열 번호 67 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 67 (CDR1), 서열 번호 68 (CDR2) 및 서열 번호 69 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
바람직하게는 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 70 (CDR1), 서열 번호 71 (CDR2) 및 서열 번호 72 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 73 (CDR1), 서열 번호 74 (CDR2) 및 서열 번호 75 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2 또는 CDH17H2이다.
바람직하게는 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이다.
바람직하게는 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 76 (CDR1), 서열 번호 77 (CDR2) 및 서열 번호 78 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 79 (CDR1), 서열 번호 80 (CDR2) 및 서열 번호 81 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
바람직하게는 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 1 (CDR1), 서열 번호 2 (CDR2) 및 서열 번호 3 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 4 (CDR1), 서열 번호 5 (CDR2) 및 서열 번호 6 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 58 (CDR1), 서열 번호 59 (CDR2) 및 서열 번호 60 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 61 (CDR1), 서열 번호 62 (CDR2) 및 서열 번호 63 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#1이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 83의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#1 (예: 서열 번호 134의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 1 (CDR1), 서열 번호 2 (CDR2) 및 서열 번호 3 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 4 (CDR1), 서열 번호 5 (CDR2) 및 서열 번호 6 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 64 (CDR1), 서열 번호 65 (CDR2) 및 서열 번호 66 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 67 (CDR1), 서열 번호 68 (CDR2) 및 서열 번호 69 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#1이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 83의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#1 (예: 서열 번호 134의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 1 (CDR1), 서열 번호 2 (CDR2) 및 서열 번호 3 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 4 (CDR1), 서열 번호 5 (CDR2) 및 서열 번호 6 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 70 (CDR1), 서열 번호 71 (CDR2) 및 서열 번호 72 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 73 (CDR1), 서열 번호 74 (CDR2) 및 서열 번호 75 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#1이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2 또는 CDH17H2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 83의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#1 (예: 서열 번호 134의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 83의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#1 (예: 서열 번호 134의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 1 (CDR1), 서열 번호 2 (CDR2) 및 서열 번호 3 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 4 (CDR1), 서열 번호 5 (CDR2) 및 서열 번호 6 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 76 (CDR1), 서열 번호 77 (CDR2) 및 서열 번호 78 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 79 (CDR1), 서열 번호 80 (CDR2) 및 서열 번호 81 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#1이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 83의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#1 (예: 서열 번호 134의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 7 (CDR1), 서열 번호 8 (CDR2) 및 서열 번호 9 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 10 (CDR1), 서열 번호 11 (CDR2) 및 서열 번호 12 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 58 (CDR1), 서열 번호 59 (CDR2) 및 서열 번호 60 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 61 (CDR1), 서열 번호 62 (CDR2) 및 서열 번호 63 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#2이고 항원 결합 부위 CDH17에 특이적인 것은 CDH17E9이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 84의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#2 (예: 서열 번호 135의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 7 (CDR1), 서열 번호 8 (CDR2) 및 서열 번호 9 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 10 (CDR1), 서열 번호 11 (CDR2) 및 서열 번호 12 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 64 (CDR1), 서열 번호 65 (CDR2) 및 서열 번호 66 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 67 (CDR1), 서열 번호 68 (CDR2) 및 서열 번호 69 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#2이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 84의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#2 (예: 서열 번호 135의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 7 (CDR1), 서열 번호 8 (CDR2) 및 서열 번호 9 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 10 (CDR1), 서열 번호 11 (CDR2) 및 서열 번호 12 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 70 (CDR1), 서열 번호 71 (CDR2) 및 서열 번호 72 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 73 (CDR1), 서열 번호 74 (CDR2) 및 서열 번호 75 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 TR#2이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2 또는 CDH17H2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 84의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#2 (예: 서열 번호 135의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 84의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#2 (예: 서열 번호 135의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 7 (CDR1), 서열 번호 8 (CDR2) 및 서열 번호 9 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 10 (CDR1), 서열 번호 11 (CDR2) 및 서열 번호 12 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 CDR은 서열 번호 76 (CDR1), 서열 번호 77 (CDR2) 및 서열 번호 78 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 79 (CDR1), 서열 번호 80 (CDR2) 및 서열 번호 81 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 TR#2이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 84의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#2 (예: 서열 번호 135의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 13 (CDR1), 서열 번호 14 (CDR2) 및 서열 번호 15 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 16 (CDR1), 서열 번호 17 (CDR2) 및 서열 번호 18 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 58 (CDR1), 서열 번호 59 (CDR2) 및 서열 번호 60 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 61 (CDR1), 서열 번호 62 (CDR2) 및 서열 번호 63 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#3이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 86의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 87의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#3 (예: 서열 번호 136의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 13 (CDR1), 서열 번호 14 (CDR2) 및 서열 번호 15 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 16 (CDR1), 서열 번호 17 (CDR2) 및 서열 번호 18 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 64 (CDR1), 서열 번호 65 (CDR2) 및 서열 번호 66 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 67 (CDR1), 서열 번호 68 (CDR2) 및 서열 번호 69 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#3이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 86의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 87의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#3 (예: 서열 번호 136의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 13 (CDR1), 서열 번호 14 (CDR2) 및 서열 번호 15 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 16 (CDR1), 서열 번호 17 (CDR2) 및 서열 번호 18 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 70 (CDR1), 서열 번호 71 (CDR2) 및 서열 번호 72 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 73 (CDR1), 서열 번호 74 (CDR2) 및 서열 번호 75 (CDR3)의 아미노산 서열하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#3이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2 또는 CDH17H2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 86의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 87의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#3 (예: 서열 번호 136의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 86의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 87의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#3 (예: 서열 번호 136의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 13 (CDR1), 서열 번호 14 (CDR2) 및 서열 번호 15 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 16 (CDR1), 서열 번호 17 (CDR2) 및 서열 번호 18 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 76 (CDR1), 서열 번호 77 (CDR2) 및 서열 번호 78 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 79 (CDR1), 서열 번호 80 (CDR2) 및 서열 번호 81 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#3이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 86의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 87의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#3 (예: 서열 번호 136의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 19 (CDR1), 서열 번호 20 (CDR2) 및 서열 번호 21 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 22 (CDR1), 서열 번호 23 (CDR2) 및 서열 번호 24 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 58 (CDR1), 서열 번호 59 (CDR2) 및 서열 번호 60 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 61 (CDR1), 서열 번호 62 (CDR2) 및 서열 번호 63 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#7이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 88의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#7 (예: 서열 번호 137의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 19 (CDR1), 서열 번호 20 (CDR2) 및 서열 번호 21 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 22 (CDR1), 서열 번호 23 (CDR2) 및 서열 번호 24 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 64 (CDR1), 서열 번호 65 (CDR2) 및 서열 번호 66 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 67 (CDR1), 서열 번호 68 (CDR2) 및 서열 번호 69 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#7이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 88의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#7 (예: 서열 번호 137의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 19 (CDR1), 서열 번호 20 (CDR2) 및 서열 번호 21 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 22 (CDR1), 서열 번호 23 (CDR2) 및 서열 번호 24 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 70 (CDR1), 서열 번호 71 (CDR2) 및 서열 번호 72 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 73 (CDR1), 서열 번호 74 (CDR2) 및 서열 번호 75 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#7이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2 또는 CDH17H2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 88의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#7 (예: 서열 번호 137의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 88의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#7 (예: 서열 번호 137의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 19 (CDR1), 서열 번호 20 (CDR2) 및 서열 번호 21 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 22 (CDR1), 서열 번호 23 (CDR2) 및 서열 번호 24 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 76 (CDR1), 서열 번호 77 (CDR2) 및 서열 번호 78 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 79 (CDR1), 서열 번호 80 (CDR2) 및 서열 번호 81 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#7이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 88의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 89의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#7 (예: 서열 번호 137의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 25 (CDR1), 서열 번호 26 (CDR2) 및 서열 번호 27 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 28 (CDR1), 서열 번호 29 (CDR2) 및 서열 번호 30 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 58 (CDR1), 서열 번호 59 (CDR2) 및 서열 번호 60 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 61 (CDR1), 서열 번호 62 (CDR2) 및 서열 번호 63 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#8이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 91의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#8 (예: 서열 번호 138의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 25 (CDR1), 서열 번호 26 (CDR2) 및 서열 번호 27 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 28 (CDR1), 서열 번호 29 (CDR2) 및 서열 번호 30 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 64 (CDR1), 서열 번호 65 (CDR2) 및 서열 번호 66 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 67 (CDR1), 서열 번호 68 (CDR2) 및 서열 번호 69 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#8이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 91의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#8 (예: 서열 번호 138의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 25 (CDR1), 서열 번호 26 (CDR2) 및 서열 번호 27 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 28 (CDR1), 서열 번호 29 (CDR2) 및 서열 번호 30 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 70 (CDR1), 서열 번호 71 (CDR2) 및 서열 번호 72 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 73 (CDR1), 서열 번호 74 (CDR2) 및 서열 번호 75 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#8이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2 또는 CDH17H2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 91의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#8 (예: 서열 번호 138의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 91의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#8 (예: 서열 번호 138의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 25 (CDR1), 서열 번호 26 (CDR2) 및 서열 번호 27 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 28 (CDR1), 서열 번호 29 (CDR2) 및 서열 번호 30 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 76 (CDR1), 서열 번호 77 (CDR2) 및 서열 번호 78 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 79 (CDR1), 서열 번호 80 (CDR2) 및 서열 번호 81 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#8이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 90의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 91의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#8 (예: 서열 번호 138의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 31 (CDR1), 서열 번호 32 (CDR2) 및 서열 번호 33 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 34 (CDR1), 서열 번호 35 (CDR2) 및 서열 번호 36 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 58 (CDR1), 서열 번호 59 (CDR2) 및 서열 번호 60 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 61 (CDR1), 서열 번호 62 (CDR2) 및 서열 번호 63 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#10이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 92의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#10 (예: 서열 번호 139의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 31 (CDR1), 서열 번호 32 (CDR2) 및 서열 번호 33 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 34 (CDR1), 서열 번호 35 (CDR2) 및 서열 번호 36 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 64 (CDR1), 서열 번호 65 (CDR2) 및 서열 번호 66 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 67 (CDR1), 서열 번호 68 (CDR2) 및 서열 번호 69 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#10이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 92의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#10 (예: 서열 번호 139의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 31 (CDR1), 서열 번호 32 (CDR2) 및 서열 번호 33 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 34 (CDR1), 서열 번호 35 (CDR2) 및 서열 번호 36 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 아미노산 서열 번호 70 (CDR1), 서열 번호 71 (CDR2) 및 서열 번호 72 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 73 (CDR1), 서열 번호 74 (CDR2) 및 서열 번호 75 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#10이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2 또는 CDH17H2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 92의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#10 (예: 서열 번호 139의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 92의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#10 (예: 서열 번호 139의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 31 (CDR1), 서열 번호 32 (CDR2) 및 서열 번호 33 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 34 (CDR1), 서열 번호 35 (CDR2) 및 서열 번호 36 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 76 (CDR1), 서열 번호 77 (CDR2) 및 서열 번호 78 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 79 (CDR1), 서열 번호 80 (CDR2) 및 서열 번호 81 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#10이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 92의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 93의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#10 (예: 서열 번호 139의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 37 (CDR1), 서열 번호 38 (CDR2) 및 서열 번호 39 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 40 (CDR1), 서열 번호 41 (CDR2) 및 서열 번호 42 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 58 (CDR1), 서열 번호 59 (CDR2) 및 서열 번호 60 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 61 (CDR1), 서열 번호 62 (CDR2) 및 서열 번호 63 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#12이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#12 (예: 서열 번호 140의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 37 (CDR1), 서열 번호 38 (CDR2) 및 서열 번호 39 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 40 (CDR1), 서열 번호 41 (CDR2) 및 서열 번호 42 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 64 (CDR1), 서열 번호 65 (CDR2) 및 서열 번호 66 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 67 (CDR1), 서열 번호 68 (CDR2) 및 서열 번호 69 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#12이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#12 (예: 서열 번호 140의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 37 (CDR1), 서열 번호 38 (CDR2) 및 서열 번호 39 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 40 (CDR1), 서열 번호 41 (CDR2) 및 서열 번호 42 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 70 (CDR1), 서열 번호 71 (CDR2) 및 서열 번호 72 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 73 (CDR1), 서열 번호 74 (CDR2) 및 서열 번호 75 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#12이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH171E2 또는 CDH171H2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#12 (예: 서열 번호 140의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#12 (예: 서열 번호 140의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 37 (CDR1), 서열 번호 38 (CDR2) 및 서열 번호 39 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 40 (CDR1), 서열 번호 41 (CDR2) 및 서열 번호 42 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 76 (CDR1), 서열 번호 77 (CDR2) 및 서열 번호 78 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 79 (CDR1), 서열 번호 80 (CDR2) 및 서열 번호 81 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#12이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 94의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#12 (예: 서열 번호 140의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 44 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 50 (CDR2) 및 서열 번호 54 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 58 (CDR1), 서열 번호 59 (CDR2) 및 서열 번호 60 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 61 (CDR1), 서열 번호 62 (CDR2) 및 서열 번호 63 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv1 또는 TRv2이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 96의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv1 (예: 서열 번호 124, 서열 번호 131, 서열 번호 132, 서열 번호 133의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv2 (예: 서열 번호 125의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 44 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 50 (CDR2) 및 서열 번호 54 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 64 (CDR1), 서열 번호 65 (CDR2) 및 서열 번호 66 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 67 (CDR1), 서열 번호 68 (CDR2) 및 서열 번호 69 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv1 또는 TRv2이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 96의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv1 (예: 서열 번호 124, 서열 번호 131, 서열 번호 132, 서열 번호 133의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv2 (예: 서열 번호 125의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 44 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 50 (CDR2) 및 서열 번호 54 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 70 (CDR1), 서열 번호 71 (CDR2) 및 서열 번호 72 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 73 (CDR1), 서열 번호 74 (CDR2) 및 서열 번호 75 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv1 또는 TRv2이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2 또는 CDH17H2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 96의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv1 (예: 서열 번호 124, 서열 번호 131, 서열 번호 132, 서열 번호 133의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv2 (예: 서열 번호 125의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 96의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv1 (예: 서열 번호 124, 서열 번호 131, 서열 번호 132, 서열 번호 133의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv2 (예: 서열 번호 125의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 44 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 50 (CDR2) 및 서열 번호 54 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 76 (CDR1), 서열 번호 77 (CDR2) 및 서열 번호 78 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 79 (CDR1), 서열 번호 80 (CDR2) 및 서열 번호 81 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv1 또는 TRv2이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 96의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv1 (예: 서열 번호 124, 서열 번호 131, 서열 번호 132, 서열 번호 133의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv2 (예: 서열 번호 125의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 45 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 51 (CDR2) 및 서열 번호 55 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 58 (CDR1), 서열 번호 59 (CDR2) 및 서열 번호 60 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 61 (CDR1), 서열 번호 62 (CDR2) 및 서열 번호 63 (CDR3)의 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv3이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv3 (예: 서열 번호 126의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 45 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 51 (CDR2) 및 서열 번호 55 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 64 (CDR1), 서열 번호 65 (CDR2) 및 서열 번호 66 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 67 (CDR1), 서열 번호 68 (CDR2) 및 서열 번호 69 (CDR3)의 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv3이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv3 (예: 서열 번호 126의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 45 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 51 (CDR2) 및 서열 번호 55 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 70 (CDR1), 서열 번호 71 (CDR2) 및 서열 번호 72 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 73 (CDR1), 서열 번호 74 (CDR2) 및 서열 번호 75 (CDR3)의 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv3이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2 또는 CDH17H2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv3 (예: 서열 번호 126의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv3 (예: 서열 번호 126의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 45 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 51 (CDR2) 및 서열 번호 55 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 76 (CDR1), 서열 번호 77 (CDR2) 및 서열 번호 78 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 79 (CDR1), 서열 번호 80 (CDR2) 및 서열 번호 81 (CDR3)의 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv3이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 101의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv3 (예: 서열 번호 126의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 45 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 52 (CDR2) 및 서열 번호 56 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 58 (CDR1), 서열 번호 59 (CDR2) 및 서열 번호 60 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 61 (CDR1), 서열 번호 62 (CDR2) 및 서열 번호 63 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv4이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv4 (예: 서열 번호 127의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 45 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 52 (CDR2) 및 서열 번호 56 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 64 (CDR1), 서열 번호 65 (CDR2) 및 서열 번호 66 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 67 (CDR1), 서열 번호 68 (CDR2) 및 서열 번호 69 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv4이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv4 (예: 서열 번호 127의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 45 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 52 (CDR2) 및 서열 번호 56 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 70 (CDR1), 서열 번호 71 (CDR2) 및 서열 번호 72 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 73 (CDR1), 서열 번호 74 (CDR2) 및 서열 번호 75 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv4이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2 또는 CDH17H2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv4 (예: 서열 번호 127의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv4 (예: 서열 번호 127의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 45 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 52 (CDR2) 및 서열 번호 56 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 76 (CDR1), 서열 번호 77 (CDR2) 및 서열 번호 78 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 79 (CDR1), 서열 번호 80 (CDR2) 및 서열 번호 81 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv4이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 102의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 103의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv4 (예: 서열 번호 127의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 45 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 50 (CDR2) 및 서열 번호 56 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 58 (CDR1) 서열 번호 59 (CDR2) 및 서열 번호 60 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 61 (CDR1), 서열 번호 62 (CDR2) 및 서열 번호 63 (CDR3)의 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv5이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv5 (예: 서열 번호 128의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 45 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 50 (CDR2) 및 서열 번호 56 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 64 (CDR1) 서열 번호 65 (CDR2) 및 서열 번호 66 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 67 (CDR1), 서열 번호 68 (CDR2) 및 서열 번호 69 (CDR3)의 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv5이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv5 (예: 서열 번호 128의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 45 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 50 (CDR2) 및 서열 번호 56 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 70 (CDR1), 서열 번호 71 (CDR2) 및 서열 번호 72 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 73 (CDR1), 서열 번호 74 (CDR2) 및 서열 번호 75 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv5이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2 또는 CDH17H2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv5 (예: 서열 번호 128의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv5 (예: 서열 번호 128의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 45 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 50 (CDR2) 및 서열 번호 56 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 76 (CDR1), 서열 번호 77 (CDR2) 및 서열 번호 78 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 79 (CDR1), 서열 번호 80 (CDR2) 및 서열 번호 81 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv5이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 104의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 105의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv5 (예: 서열 번호 128의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 46 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 51 (CDR2) 및 서열 번호 57 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 58 (CDR1) 서열 번호 59 (CDR2) 및 서열 번호 60 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 61 (CDR1), 서열 번호 62 (CDR2) 및 서열 번호 63 (CDR3)의 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv6이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv6 (예: 서열 번호 129의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 46 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 51 (CDR2) 및 서열 번호 57 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 64 (CDR1) 서열 번호 65 (CDR2) 및 서열 번호 66 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 67 (CDR1), 서열 번호 68 (CDR2) 및 서열 번호 69 (CDR3)의 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv6이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv6 (예: 서열 번호 129의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 46 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 51 (CDR2) 및 서열 번호 57 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 70 (CDR1), 서열 번호 71 (CDR2) 및 서열 번호 72 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 73 (CDR1), 서열 번호 74 (CDR2) 및 서열 번호 75 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv6이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2 또는 CDH17H2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv6 (예: 서열 번호 129의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv6 (예: 서열 번호 129의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 46 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 51 (CDR2) 및 서열 번호 57 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 76 (CDR1), 서열 번호 77 (CDR2) 및 서열 번호 78 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 79 (CDR1), 서열 번호 80 (CDR2) 및 서열 번호 81 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv6이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 106의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 107의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv6 (예: 서열 번호 129의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 47 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 53 (CDR2) 및 서열 번호 57 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 58 (CDR1) 서열 번호 59 (CDR2) 및 서열 번호 60 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 61 (CDR1), 서열 번호 62 (CDR2) 및 서열 번호 63 (CDR3)의 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv7이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv7 (예: 서열 번호 130의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 47 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 53 (CDR2) 및 서열 번호 57 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 64 (CDR1) 서열 번호 65 (CDR2) 및 서열 번호 66 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 67 (CDR1), 서열 번호 68 (CDR2) 및 서열 번호 69 (CDR3)의 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv7이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv7 (예: 서열 번호 130의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 47 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 53 (CDR2) 및 서열 번호 57 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 70 (CDR1), 서열 번호 71 (CDR2) 및 서열 번호 72 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 73 (CDR1), 서열 번호 74 (CDR2) 및 서열 번호 75 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv7이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2 또는 CDH17H2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv7 (예: 서열 번호 130의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv7 (예: 서열 번호 130의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이다.
본 발명의 결합 분자의 바람직한 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 43 (CDR1), 서열 번호 47 (CDR2) 및 서열 번호 48 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 49 (CDR1), 서열 번호 53 (CDR2) 및 서열 번호 57 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 76 (CDR1), 서열 번호 77 (CDR2) 및 서열 번호 78 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 79 (CDR1), 서열 번호 80 (CDR2) 및 서열 번호 81 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv7이고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
바람직하게는 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 108의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 109의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다. 이 실시양태에서, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv7 (예: 서열 번호 130의 scFv)이고 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이다.
위에 본 발명의 결합 분자 (이중 특이적 4가 결합 분자)에 사용될 수 있는 TRAILR2 및 CDH17에 특이적인 항원 결합 부위의 특정 조합 (예: CDH17E9, CDH17A6, CDH17E2, CDH17H2 및 CDH17v1 중 어느 하나의 CDH17 결합 부위와 조합된 TR#1, TR#2, TR#3, TR#7, TR#8, TR#10, TR#12, TR2v1, TR2v2, TR2v3, TR2v4, TR2v5, TR2v6, 및 TR2v7 중 어느 하나의 TRAILR2 결합 부위)이 기재되었다.
상기 조합의 일부 실시양태에서, CDH17에 대한 항원 결합 부위는 CDH17에 특이적인 중쇄 가변 도메인 (예: 항원 결합 부위 CDH17E9, CDH17A6, CDH17E2, CDH17H2 또는 CDH17v1의 VH)을 포함하고, 인간 중쇄 불변 영역 IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE 또는 IgM에 융합된다. 바람직하게는 인간 IgG1의 중쇄 불변 영역이 사용된다.
본 발명의 추가의 실시양태는 CDH17에 대한 항원 결합 부위가 CDH17에 특이적인 경쇄 가변 도메인 (예를 들어, 항원 결합 부위 CDH17E9, CDH17A6, CDH17E2, CDH17H2 또는 CDH17v1의 VL)을 더 포함하고, 인간 경쇄 불변 영역 카파 또는 람다에 융합된 것이다. 바람직하게는 인간 카파의 경쇄 불변 영역이 사용된다.
일부 실시양태에서, 결합 분자는 임의의 CDH17 특이적 항원 결합 부위 (CDH17E9, CDH17A6, CDH17E2, CDH17H2 또는 CDH17v1)를 포함하는 Ig 분자 (각각 중쇄 불변 영역, 예를 들어 불변 IgG1 영역에 융합된 2개의 VH 도메인 및 각각 경쇄 불변 영역에 융합된 2개의 VL 도메인을 포함함) 및 임의의 TRAILR2 특이적 항원 결합 부위 (TR#1, TR#2, TR#3, TR#7, TR#8, TR#10, TR#12, TR2v1, TR2v2, TR2v3, TR2v4, TR2v5, TR2v6, 또는 TR2v7)를 포함하는 2개의 scFv를 포함하고, 여기서 각 scFv(들)는 IgG 분자의 C-말단에 융합되어 (예를 들어 각각 펩티드 링커를 통해 하나의 scFv는 하나의 중쇄에, 다른 scFv는 다른 중쇄에) 이중 특이적 4가 결합 분자를 형성한다.
인간 IgG1 야생형의 중쇄 불변 영역에 대한 서열의 예는 서열 번호 120에서 제공되고, IgG1 KO는 서열 번호 121에서 제공되고, IgG4 Pro 야생형은 서열 번호 122에서 제공된다. IgG1 FcRnmut은 서열 번호 270에서 제공된다. 바람직하게는 중쇄 불변 영역은 서열 번호 121에 제공된 바와 같은 IgG1KO 또는 서열 번호 270에 제공된 바와 같은 IgG1FcRnmut이다.
인간 카파의 경쇄 불변 영역에 대한 서열의 예는 서열 번호 123에서 제공된다.
하기에 본 발명의 결합 분자 (본원에서 다중 특이성 결합 단백질로도 지칭됨)가 제공된다. 본 발명의 특이적 분자/단백질은 (i) 면역글로불린 중쇄가 CDH17에 특이적으로 결합하는 중쇄 가변 도메인 (예: CDH17E9, CDH17A6, CDH17E2, CDH17H2 및 CDH17v1 중 어느 하나의 VH), 면역글로불린 중쇄 불변 도메인 및 또한 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 (예: TR#1, TR#2, TR#3, TR#7, TR#8, TR#10, TR#12, TR2v1, TR2v2, TR2v3, TR2v4, TR2v5, TR2v6, 및 TR2v7 중 어느 하나의 VL 및 VH)의 아미노산을 포함하는 TRAILR2에 특이적으로 결합하고 Ig 불변 도메인의 C-말단부에 연결된 scFv의 아미노산 서열을 포함하고, (ii) 면역글로불린 경쇄는 CDH17에 특이적으로 결합하는 경쇄 가변 도메인 (예를 들어, CDH17E9, CDH17A6, CDH17E2, CDH17H2 및 CDH17v1 중 어느 하나의 VL) 및 경쇄 불변 도메인의 아미노산 서열을 포함하는 변형된 면역글로불린 분자를 포함한다. 바람직하게는, 변형된 면역글로불린 분자는 2개의 면역글로불린 중쇄 (예: 변형된 중쇄) 및 2개의 면역글로불린 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 그들의 중쇄 아미노산 서열 (예를 들어, Ig 중쇄의 C-말단에 융합된 scFv를 갖는 변형된 중쇄) 뿐만 아니라 그들의 경쇄 아미노산 서열에 의해 정의되는 하기 다양한 측면에서 제공되는 결합 분자는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함함으로써 대칭적인 4가의 이중 특이성 구조를 형성한다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 159의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이고 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#1이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 160의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이고 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#2이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 161의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#3이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 162의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#7이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 163의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#8이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 164의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#10이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 165의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#12이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 166의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv1이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 167의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv2이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 168의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv3이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 169의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv4이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 170의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv5이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 171의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv6이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 172의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 173의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E9이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv7이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 174의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#1이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 175의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#2이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 176의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#3이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 177의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#7이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 178의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#8이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 179의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#10이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 180의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#12이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 181의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv1이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 182의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv2이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 183의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv3이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 184의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv4이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 185의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이고 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv5이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 186의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv6이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 187의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 188의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17A6이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv7이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 189의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이고 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#1이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 190의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이고 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#2이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 191의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이고 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#3이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 192의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#7이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 193의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이고 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#8이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 194의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이고 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#10이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 195의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이고 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#12이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 196의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv1이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 197의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이고 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv2이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 198의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv3이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 199의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv4이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 200의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv5이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 201의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv6이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 202의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17E2이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv7이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 204의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이고 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#1이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 205의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이고 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#2이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 206의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#3이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 207의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#7이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 208의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이고 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#8이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 209의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#10이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 210의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#12이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 211의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv1이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv2이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 271의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv2이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 213의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv3이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 214의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이고 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv4이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 215의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv5이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 216의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv6이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 217의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17H2이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv7이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 219의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 233의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#1이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 220의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 233의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#2이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 221의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 233의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#3이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 222의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 233의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#7이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 223의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 233의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이고 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#8이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 224의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 233의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이고 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#10이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 225의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 233의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이고 TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TR#12이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 226의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 233의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv1이다.
본 발명의 또 다른 양태는 (i) 서열 번호 145의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 146의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; (ii) 서열 번호 147의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 148의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; (iii) 서열 번호 153의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 154의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; (iv) 서열 번호 155의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 156의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 또는 (v) 서열 번호 157의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 158의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv1이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 227의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 233의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv2이다.
본 발명의 또 다른 양태는 (i) 서열 번호 149의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 150의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 또는 (ii) 서열 번호 151의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호 152의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv2이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 228의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 233의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv3이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 229의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 233의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv4이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 230의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 233의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv5이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 231의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 233의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv6이다.
본 발명의 추가의 양태는 서열 번호 232의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 233의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 결합 분자를 제공한다. 이 양태에서, CDH17에 특이적인 항원 결합 부위는 CDH17v1이고, TRAILR2에 특이적인 항원 결합 부위는 TRv7이다.
본원에서 CDH17에 특이적으로 결합하는 항체 분자 (예를 들어, 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄와 함께 Y 형 구조를 가지는 전장 항체/면역글로불린 분자, 또는 그의 단편, 예컨대 Fv, Fab, Fab' 또는 F(ab')2 단편, 단쇄 항체, 단쇄 가변 단편 (scFv))가 추가로 제공된다. 일부 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항체 분자는 재조합 단클론 항체, 키메라, 인간화 또는 인간 항체 분자이다.
일부 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항체 분자는 서열 번호 58 (CDR1), 서열 번호 59 (CDR2) 및 서열 번호 60 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 61 (CDR1), 서열 번호 62 (CDR2) 및 서열 번호 63 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항체 분자는 서열 번호 110의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 111의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항체 분자는 서열 번호 64 (CDR1), 서열 번호 65 (CDR2) 및 서열 번호 66 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 67 (CDR1), 서열 번호 68 (CDR2) 및 서열 번호 69 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항체 분자는 서열 번호 112의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 113의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항체 분자는 서열 번호 70 (CDR1), 서열 번호 71 (CDR2) 및 서열 번호 72 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 73 (CDR1), 서열 번호 74 (CDR2) 및 서열 번호 75 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항체 분자는 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항체 분자는 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항체 분자는 서열 번호 76 (CDR1), 서열 번호 77 (CDR2) 및 서열 번호 78 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열 번호 79 (CDR1), 서열 번호 80 (CDR2) 및 서열 번호 81 (CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 실시양태에서, CDH17에 특이적인 항체 분자는 서열 번호 118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 119의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, 상기 정의된 바와 같은 CDH17 특이적 항체는 인간 중쇄 불변 도메인 (예: IgG 불변 도메인) 및 인간 경쇄 불변 도메인 (예: 카파 또는 람다 경쇄 불변 도메인)을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 불변 도메인은 인간 IgG1 야생형 (예: 서열 번호 120에 제공된 바와 같음), IgG1 KO (예: 서열 번호 121에 제공된 바와 같음), IgG4 Pro 야생형 (예: 서열 번호 122에 제공된 바와 같음) 또는 IgG1 FcRnmut (예: 서열 번호 270에 제공된 바와 같음)이다. 일부 실시양태에서, 인간 경쇄 불변 도메인은 (예: 서열 번호 123에 제공된 바와 같은) 인간 카파이다.
일부 실시양태에서, CDH17 특이적 항체는 서열 번호 120, 121, 122 또는 270 의 서열에 융합된 서열 번호 110, 112, 114, 116 또는 118 중 어느 하나의 서열을 포함하는 중쇄 및 서열 번호 123의 서열에 융합된 서열 번호 111, 113, 115, 117 또는 119 중 어느 하나의 서열을 포함하는 경쇄 (예: 서열 번호 173, 188, 203, 218 또는 233 중 어느 하나의 서열을 포함하는 경쇄)를 가진다.
본원에서 제공된 CDH17 특이적 항체는 염료, 약물 또는 상이한 항원에 대한 결합 특이성을 갖는 다른 분자를 부착시킴으로써 CDH17을 발현하는 세포를 (예컨대, ELISA 분석법, FACS 분석법, 면역조직학 등에서) 표지, 위치화, 동정 또는 표적화하는데 사용될 수 있다. 본원에 기재된 CDH17 특이적 항체는 CDH17을 발현하는 세포의 세포 생존성에 영향을 미치지 않는다. 일부 실시양태에서, CDH17 특이적 항체는 CDH17 발현 세포의 표면에 특이적으로 결합하고, 그러한 세포를 위치화 및/또는 동정하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 CDH17 항체는 CDH17을 발현하는 세포 (예를 들어, 종양 세포)를 동정하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에서 제공된 CDH17 항체는 약물 또는 세포 독성제를 상기 CDH17 항체에 부착시켜 상기 약물 또는 세포 독성제를 표적 세포 (예를 들어, CDH17을 발현하는 종양 세포)에 전달함으로써, 예를 들어 상기 표적 세포를 사멸시키는데 사용된다.
본 발명의 추가의 양태는 본 발명의 결합 분자 또는 본 발명의 항체 분자 또는 이러한 핵산 분자(들)를 포함하는 발현 벡터를 코딩하는 단리된 핵산 분자를 제공한다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 결합 분자 또는 본 발명의 항체 분자는 항체 중쇄 및/또는 경쇄 폴리펩티드를 포함한다. 당업자가 알 수 있는 바와 같이, 중쇄 폴리펩티드, 경쇄 폴리펩티드 또는 중쇄 폴리펩티드 및 경쇄 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 분자는 용이하게 제조할 수 있다.
경쇄 및 중쇄를 코딩하는 핵산 분자는 표준 방법을 사용하여 중합 효소 연쇄 반응 (PCR)에 의해 화학적으로 및 효소적으로 합성될 수 있다. 먼저, 적합한 올리고뉴클레오티드를 합성 유전자를 생성하는데 사용될 수 있는 당 업계에 공지된 방법 (예를 들어, Gait, 1984)으로 합성할 수 있다. 올리고뉴클레오티드로부터 합성 유전자를 생성하는 방법은 당 업계에 공지되어 있다 (예를 들어 Stemmer et al., 1995; Ye et al., 1992; Hayden et Mandecki, 1988; Frank et al., 1987).
본 발명의 핵산 분자는 서열 목록에 제시된 폴리펩티드 서열을 코딩하는 DNA 분자를 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명은 WO 2007/042309에 정의된 바와 같이 고 엄격성 결합 및 세척 조건하에 서열 목록에 제시된 폴리펩티드 서열을 코딩하는 DNA 분자에 하이브리드화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 바람직한 분자 (mRNA 관점에서)는 본원에 기재된 DNA 분자 중 하나와 적어도 75% 또는 80% (바람직하게는 적어도 85%, 보다 바람직하게는 적어도 90%, 가장 바람직하게는 적어도 95%)의 상동성 또는 서열 동일성을 갖는 것이다. 예를 들어, 진핵 세포에서 항체를 발현한다는 관점에서, 서열 목록에 제시된 DNA 서열은 진핵 세포에서의 코돈 사용과 일치하도록 설계되었다. 대장균에서 항체를 발현하는 것이 바람직하다면, 이 서열을 대장균 코돈 사용법에 맞추기 위해 변경할 수 있다. 본 발명의 DNA 분자의 변이체는 다수의 상이한 방법으로, 예를 들어 WO 2007/042309에 기재된 바와 같이 작제될 수 있다.
본원에서 사용된 것으로 2 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열의 문맥에서 "동일" 또는 "퍼센트 동일성"이란 용어는 비교하였을 때 동일하고 최대한 대응되도록 정렬된, 동일하거나 특정된 퍼센트의 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기를 가지는 2 이상의 서열 또는 부분 서열들을 지칭한다. 퍼센트 동일성을 결정하기 위해, 서열은 최적의 비교 목적을 위해 정렬된다 (예를 들어, 제2 아미노 또는 핵산 서열과의 최적의 정렬을 위해 제1 아미노산의 서열 또는 핵산 서열에 갭이 도입될 수 있다). 이어서, 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오티드 위치의 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 비교한다. 제1 서열의 위치가 제2 서열의 상응하는 위치와 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드에 의해 점유된 경우, 분자는 그 위치에서 동일하다. 두 서열 간의 퍼센트 동일성은 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이다 (즉, % 동일성 = 동일한 위치의 수/전체 위치의 수 (예를 들어, 중첩 위치)×100). 일부 실시양태에서, 비교되는 2개의 서열은 적합하다면 갭이 서열 내에 도입된 후 동일한 길이이다 (예를 들어, 비교되는 서열을 넘어서 연장되는 추가 서열을 배제한다). 예를 들어, 가변 영역 서열이 비교될 때, 선도 및/또는 불변 도메인 서열은 고려되지 않는다. 두 서열 간의 서열 비교를 위해, "상응하는" CDR은 양 서열에서 동일한 위치에 있는 CDR을 의미한다 (예를 들어, 각 서열의 CDR-H1).
두 서열 간의 % 동일성 또는 % 유사성의 결정은 수학적 알고리즘을 사용하여 수행할 수 있다. 두 서열의 비교에 이용되는 수학적 알고리즘의 바람직한 비제한적인 예는 [Karlin and Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268, modified as in Karlin and Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877]의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 [Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램에 통합되어 있다. 관심있는 단백질을 코딩하는 핵산에 상동인 뉴클레오티드 서열을 얻기 위해 NBLAST 프로그램, score = 100, wordlength = 12로 BLAST 뉴클레오티드 검색을 수행할 수 있다. 관심있는 단백질과 상동인 아미노산 서열을 얻기 위해 XBLAST 프로그램, score = 50, wordlength = 3으로 BLAST 단백질 검색을 수행할 수 있다. 비교 목적을 위한 갭 정렬을 얻기 위해, Gapped BLAST를 [Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402]에 기재된 바와 같이 이용할 수 있다. 대안적으로, PSI-Blast를 사용하여 분자 간의 거리 관계를 검출하는 반복 검색을 수행할 수 있다 (상동). BLAST, Gapped BLAST 및 PSI-Blast 프로그램을 사용하는 경우, 각 프로그램 (예: XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 파라미터가 이용될 수 있다. 서열의 비교에 이용되는 수학적 알고리즘의 또 다른 바람직한 비제한적 예는 Myers and Miller, CABIOS (1989)의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 GCG 서열 정렬 소프트웨어 패키지의 일부인 ALIGN 프로그램 (버전 2.0)에 통합된다. 아미노산 서열을 비교하기 위한 ALIGN 프로그램을 이용하는 경우, PAM120 중량 잔기 표, 갭 길이 패널티 12 및 갭 패널티 4가 사용될 수 있다. 서열 분석을 위한 추가적인 알고리즘은 당 업계에 공지되었으며 [Torellis and Robotti, 1994, Comput. Appl. Biosci. 10:3-5]에 기술된 바와 같은 ADVANCE 및 ADAM; 및 [Pearson and Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444-8]에 기술된 바와 같은 FASTA를 포함한다. FASTA 내에서, ktup은 검색의 민감도와 속도를 설정하는 제어 옵션이다. ktup = 2인 경우, 비교되는 두 서열의 유사한 영역은 정렬된 잔기의 쌍을 관찰함으로써 발견된다; ktup = 1이면 단일 정렬된 아미노산을 조사한다. ktup은 단백질 서열의 경우 2 또는 1로, DNA 서열의 경우 1에서 6까지 설정할 수 있다. ktup을 지정하지 않으면 디폴트값은 단백질의 경우 2이고 DNA의 경우 6이다. 대안적으로, 단백질 서열 정렬은 [Higgins et al., 1996, Methods Enzymol. 266:383-402]에 기술된 바와 같은 CLUSTAL W 알고리즘을 사용하여 수행할 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태는
(a) 분자의 발현을 허용하는 조건 하에서 본 발명의 숙주 세포를 배양하는 단계; 및,
(b) 분자를 회수하는 단계; 및 임의로
c) 분자를 추가로 정제 및/또는 변형 및/또는 제형화하는 단계;
를 포함하는, 본원에 기재된 결합 또는 항체 분자의 생산 방법을 제공한다.
본 발명의 상기 양태의 일 실시양태는 생산 방법이 본 발명의 결합 분자를 추가로 정제 및/또는 변형 및/또는 제형화 단계 (c)를 추가로 포함하는 것이다.
본 발명의 결합 분자 또는 항체를 생산하기 위해, 전장 및/또는 중쇄 또는 그의 단편을 코딩하는 DNA 분자를 발현 벡터에 삽입하여 서열이 전사 및 번역 제어 서열에 작동 가능하게 연결되도록 한다.
본 발명의 결합 분자 또는 항체를 제조하기 위해, 당업자는 당 업계에 널리 공지된 다양한 발현 시스템, 예를 들어, [Kipriyanov and Le Gall, Curr Opin Drug Discov Devel. 2004 Mar;7(2):233-42]에서 검토된 것들을 선택할 수 있다.
발현 벡터는 플라스미드, 레트로바이러스, 코스미드, EBV 유래 에피솜 등을 포함한다. 발현 벡터 및 발현 조절 서열은 숙주 세포와 양립할 수 있도록 선택된다. 본원에 기재된 결합 분자의 항체 경쇄 유전자 및 항체 중쇄 유전자 또는 중쇄 유전자 (예를 들어, 그의 C-말단이 scFv 서열에 부착된 면역글로불린 중쇄 서열을 포함하는 유전자)는 분리된 벡터로 삽입될 수 있다. 특정 실시양태에서, DNA 서열, 경쇄 및 중쇄 서열 모두가 동일한 발현 벡터에 삽입된다. 편리한 벡터는 기능적으로 완전한 인간 CH 또는 CL 면역글로불린 서열을 코딩하고 상술된 바와 같이 임의의 VH 및 VL 서열이 용이하게 삽입되고 발현될 수 있도록 조작된 적절한 제한 효소 부위를 갖는 것이다. 경쇄는 일반적으로 항체 경쇄, 항체 중쇄에 대한 카파 또는 람다이며, 대립 유전자 변이체를 비롯한 임의의 IgG 이소타입 (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) 또는 다른 면역글로불린일 수 있으나, 이에 한정되지는 않는다.
재조합 발현 벡터는 또한 숙주 세포로부터 항체 사슬 (예를 들어, 본원에 기재된 결합 분자 또는 항체의 중쇄 및 경쇄)의 분비를 촉진시키는 신호 펩티드를 코딩할 수 있다. 항체 사슬을 코딩하는 DNA는 신호 펩티드가 성숙한 항체 사슬 DNA의 아미노 말단에 인-프레임 (in-frame)으로 연결되도록 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 신호 펩티드는 면역글로불린 신호 펩티드 또는 비-면역글로불린 단백질로부터의 이종 펩티드일 수 있다. 대안적으로, 항체 사슬을 코딩하는 DNA 서열 (예를 들어, 본원에 기재된 결합 분자 또는 항체의 중쇄 및 경쇄)은 이미 신호 펩티드 서열을 함유할 수 있다.
항체 사슬을 코딩하는 DNA 서열 (예를 들어, 본원에 기재된 결합 분자 또는 항체의 중쇄 및 경쇄) 이외에, 재조합 발현 벡터는 프로모터, 인핸서, 종결 및 폴리아데닐화 신호 및 숙주 세포에서 항체 사슬의 발현을 조절하는 다른 발현 조절 요소를 포함하는 조절 서열을 가진다. (포유동물 세포에서의 발현을 위해 예시된) 프로모터 서열의 예로는 CMV 유래의 프로모터 및/또는 인핸서 (예컨대, CMV 유인원 바이러스 40 (SV40)) (예컨대 SV40 프로모터/인핸서), 아데노바이러스 (예를 들어, 아데노바이러스 주요 후기 프로모터 (AdMLP)), 폴리오마 및 천연 면역글로불린 및 액틴 프로모터와 같은 강력한 포유동물 프로모터가 있다. 폴리아데닐화 신호의 예로서 BGH polyA, SV40 후기 또는 초기 polyA; 또는, 면역글로불린 유전자의 3'UTR 등이 사용될 수 있다.
재조합 발현 벡터는 또한 숙주 세포에서 벡터의 복제 (예를 들어, 복제 기원) 및 선별 마커 유전자를 조절하는 서열을 보유할 수 있다. 본원에 기재된 결합 분자 또는 항체의 중쇄 또는 그의 항원-결합 부분 및/또는 경쇄 또는 그의 항원-결합 부분을 코딩하는 핵산 분자, 및 이들 DNA 분자를 포함하는 벡터는 리포좀-매개 형질감염, 폴리양이온-매개 형질감염, 원형질체 융합, 마이크로주입, 인산칼슘 침전법, 전기천공 또는 바이러스 벡터에 의한 전달을 비롯한 당 업계에 공지된 형질감염 방법에 따라 숙주 세포, 예를 들어 박테리아 세포 또는 고등 진핵 세포, 예를 들면, 포유동물 세포 내로 도입될 수 있다.
바람직하게는, 본원에 기재된 결합 분자 또는 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산 분자는 숙주 세포, 바람직하게는 포유류 세포 내로 공동 형질감염된 두 벡터 상에 존재한다.
따라서, 또 다른 양태는 본원에 기재된 결합 분자 또는 항체의 중쇄를 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터 및 경쇄를 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
발현을 위한 숙주로서 이용가능한 포유동물 세포주는 당 업계에 잘 알려져 있으며, 특히 중국 햄스터 난소 (CHO, CHO-DG44) 세포, NS0, SP2/0 세포, HeLa 세포, 베이비 햄스터 신장 (BHK) 세포, 원숭이 신장 세포 (COS), 인간 암종 세포 (예: Hep G2), A-549 세포, 3T3 세포 또는 임의의 그러한 세포주의 유도체/자손을 포함한다. 인간, 마우스, 래트, 원숭이 및 설치류 세포주를 예로 들 수 있으나 이에 한정되지 않는 다른 포유동물 세포, 또는 효모, 곤충 및 식물 세포를 예로 들 수 있으나 이에 한정되지 않는 다른 진핵 세포 또는 박테리아와 같은 원핵 세포가 사용될 수 있다. 본 발명의 결합 분자는 숙주 세포에서 결합 분자의 발현을 허용하기에 충분한 시간 동안 숙주 세포를 배양함으로써 생산된다
본원에 기재된 바와 같은 결합 분자 및 항체 분자는 바람직하게는 분비된 폴리펩티드로서 배양 배지로부터 회수되거나, 예를 들어 분비 신호없이 발현되는 경우 숙주 세포 용해물로부터 회수될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 결합 분자 또는 항체의 실질적으로 균질한 제제가 수득되는 방식으로 재조합 단백질 및 숙주 세포 단백질에 대해 사용되는 표준 단백질 정제 방법을 사용하여 본원에 기재된 결합 분자 또는 항체 분자를 정제하는 것이 필요하다. 예로서, 본 발명의 결합 분자 및 항체를 수득하는데 유용한 최첨단 정제 방법은 제1 단계로서 배양 배지 또는 용해물로부터 세포 및/또는 미립자 세포 파편을 제거하는 단계를 포함한다. 이어서 결합 분자 또는 항체는 예를 들어 면역 친화성 또는 이온 교환 컬럼, 에탄올 침전, 역상 HPLC, Sephadex 크로마토그래피, 실리카상의 크로마토그래피 또는 양이온 교환 수지상에서의 분획화에 의해 오염 가용성 단백질, 폴리펩티드 및 핵산으로부터 정제된다. 본원에 기재된 바와 같은 TRAILR2 및 CDH17 결합 분자 또는 CDH17 항체를 수득하기 위한 공정의 최종 단계로서, 정제ㄷhls 결합 분자 또는 항체는 치료적 적용을 위해 하기 기술된 바와 같이, 예를 들면, 건조, 예를 들면 동결 건조될 수 있다.
본 발명의 추가의 양태는 의약품에 사용하기 위한 본 발명의 결합 분자 또는 항체를 제공한다.
본 발명의 추가의 양태는 암 치료에 사용하기 위한 본 발명의 결합 분자 (TR#1, TR#2, TR#3, TR#7, TR#8, TR#10, TR#12, TR2v1, TR2v2, TR2v3, TR2v4, TR2v5, TR2v6, 및 TR2v7 중 어느 하나의 TRAILR2 결합 부위 및 CDH17E9, CDH17A6, CDH17E2, CDH17H2 및 CDH17v1 중 어느 하나의 CDH17 결합 부위를 가지는 결합 분자) 또는 CDH17에 특이적인 항체 (예: 세포 독성 약물에 융합됨)를 제공한다. 암은 결장직장암 (GC), 위암 (GC), 췌장암 (PAC), 간암 (담도암 포함) 또는 신경내분비 종양인 것이 바람직하다.
위에서 언급한 바와 같이, 본원 발명자들은 본원에 기재된 결합 분자가 암세포에서 아폽토시스를 유도하는 데 많은 유용성을 가지며, 따라서 TRAILR2 및 CDH17 모두를 발현하는 암의 치료에 사용될 수 있음을 확인하였다. 특정 종양이 TRAILR2 및 CDH17을 발현하는지 여부를 확인하는 방법은 당 업계에 공지되어 있다. 예를 들면, 면역조직화학이 종양 조직이 TRAILR2 및 CDH17을 발현하는지 (예를 들어, 본원에 기술된 바와 같은 CDH17 항체를 사용하여), 이에 따라 본 발명의 결합 분자로의 치료에 적합할 것인지의 여부를 결정하는데 사용할 수 있다.
특히, 본 발명의 결합 분자는 결장직장암 (CRC)의 치료에 유용하다.
CRC는 ICD-10에 명시된 명백한 악성 질환으로서 전 세계적으로 암 이환율과 사망률의 주요 원인 중 하나이다. CRC 환자의 약 25%가 전이성 전이가 있으며 전이성 질환은 새로 진단받은 환자의 40-50%에서 발생한다. 화학요법의 최근 개선으로 전이성 CRC의 생존 기간이 연장되었지만 대부분의 환자는 그 질환으로 쓰러지고 말 것이다. 따라서 이 질환을 치료하기 위한 추가 치료제가 절실히 필요하다.
결장직장암의 약 30-50%가 돌연변이 (비정상) KRAS 유전자를 가지고 있는 것으로 알려져 있다. 신생물에서 자주 발견되는 KRAS 돌연변이는 엑손 2 (코돈 12 및 13) 및 엑손 3 (코돈 61)에서의 돌연변이를 포함하며 종양 생검으로 분석할 수 있다. 이들은 연속적인 신호 변환을 일으켜 세포 성장, 증식, 침입 및 전이에 관여하는 하류 신호전달 경로를 자극하는 활성화 돌연변이를 포함한다. 발암성 K-Ras가 TRAIL에 의해 유도된 아폽토시스에 대한 저항성을 제공할 수 있다고 제안되어 왔다 (Hoogwater et al., Gastroenterology. 2010 Jun;138(7):2357-67). 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 결합 분자 (TR#1, TR#2, TR#3, TR#7, TR#8, TR#10, TR#12, TR2v1, TR2v2, TR2v3, TR2v4, TR2v5, TR2v6, 및 TR2v7 중 어느 하나의 TRAILR2 결합 부위 및 CCDH17E9, CDH17A6, CDH17E2, CDH17H2 및 CDH17v1 중 어느 하나의 CDH17 결합 부위를 가지는 결합 분자)는 KRAS 야생형 결장직장암 (즉, KRAS 야생형 종양을 가지는 환자)의 치료를 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 결합 분자 (TR#1, TR#2, TR#3, TR#7, TR#8, TR#10, TR#12, TR2v1, TR2v2, TR2v3, TR2v4, TR2v5, TR2v6, 및 TR2v7 중 어느 하나의 TRAILR2 결합 부위 및 CDH17E9, CDH17A6, CDH17E2, CDH17H2 및 CDH17v1 중 어느 하나의 CDH17 결합 부위를 가지는 결합 분자)는 KRAS 돌연변이성 결장직장암 (즉, KRAS 돌연변이 종양을 가지는 환자)의 치료를 위해 사용된다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 유효량의 본 발명의 결합 분자를 인간 (예를 들어, 암을 앓고 있거나 암 발생 위험이 있는 개체)에게 투여하는 것을 포함하는 암의 치료 또는 예방 방법에 관한 것이다.
바람직한 투여 방식은 주입 또는 주사 (정맥 내, 근육 내, 피하, 복강 내, 피내)에 의한 비경구 투여이지만, 흡입, 경피, 비강 내, 협측, 경구와 같은 다른 투여 방식이 또한 적용될 수 있다.
추가의 양태에서, 본 발명의 결합 분자는 주사기, 주입기 펜, 마이크로펌프 또는 다른 장치와 같은 결합 분자의 투여에 유용한 장치와 결합하여 사용된다. 추가의 양태에서, 본 발명의 결합 분자는 예를 들어 결합 분자의 사용에 대한 설명서가 있는 패키지 삽입물을 포함하는 부품 키트에 포함된다.
투여될 분자의 "치료적 유효량"은 암의 임상 증상을 예방, 개선 또는 치료하는데 필요한 최소량, 특히 이러한 장애에 효과적인 최소량이다.
1일 당 적용가능한 본 발명의 결합 분자의 용량 범위는 일반적으로 1 ㎍/kg 내지 100 mg/kg, 바람직하게는 0.1 mg/kg 내지 20 mg/kg이다.
일반적으로, 본원에서 언급된 질환, 장애 및 상태의 치료 및/또는 완화를 위하고 치료할 특정 질환, 장애 또는 상태, 본 발명의 특정 항체 분자의 효력, 특정 투여 경로 및 사용된 특정 약학적 제형 또는 조성물에 따라, 본 발명의 항체 분자는 일반적으로 체중 1 킬로그램 및 용량 당 0.005 내지 20.0 mg의 양, 바람직하게는 0.05 내지 10.0 mg/kg/용량, 보다 바람직하게는 0.5 내지 10 mg/kg/용량의 용량으로 연속적으로 (예를 들어, 주입에 의해) 또는 보다 바람직하게는 단일 용량으로서 투여될 것이다. 투여 간격은 주 2 회, 주간 또는 월간 용량일 수 있지만, 특히 앞에서 언급한 파라미터에 따라서 상당히 달라질 수 있다. 따라서, 일부 경우에는 위에 주어진 최소 용량보다 적게 사용하는 것이 충분할 수도 있지만, 다른 경우에는 상한을 초과해야 할 수도 있다. 많은 양을 투여할 때는 하루 동안 다수의 소 용량으로 나누는 것이 권장된다.
본 발명의 특정 결합 분자 및 이의 특이적 약동학 및 다른 특성에 따라, 매일, 격일, 3, 4, 5 또는 6 일, 주간, 월간 등으로 투여될 수 있다. 투여 요법은 장기간, 주간 치료를 포함할 수 있다. "장기간"이란 적어도 2 주, 바람직하게는 수개월 또는 수 년 동안 지속되는 것을 의미한다.
본 발명의 결합 분자 및 이를 포함하는 조성물의 효능은 관련된 특정 질환에 따라서 임의의 적합한 시험관 내 분석, 세포-기반 분석, 생체 내 분석 및/또는 그 자체로 공지된 동물 모델, 또는 이들의 임의의 조합을 사용하여 시험될 수 있다. 적합한 분석 및 동물 모델은 당업자에게 명백할 것이며, 예를 들어 하기 실시예에서 사용되는 분석 및 동물 모델을 포함한다.
실제 약학적 유효량 또는 치료적 투여량은 당연히 환자의 연령 및 체중, 투여 경로 및 질환의 중증도와 같은 당업자에게 공지된 인자에 의존할 것이다. 임의의 경우에 있어서, 본 발명의 결합 분자는 환자의 독특한 상태에 기초하여 약학적 유효량이 전달되도록 하는 투여량으로 투여될 것이다.
본 발명의 결합 분자는 단독으로 또는 다른 약리학적 활성 물질, 예를 들어, 최신 또는 표준 치료 화합물, 예를 들면, 세포 증식 억제 또는 세포 독성 물질, 세포 증식 억제제, 항-혈관형성 물질, 스테로이드, 면역 조절제/체크포인트 억제제 등과 조합하여 사용될 수 있다.
따라서, 본 발명의 추가의 양태는 약학적으로 허용되는 담체 및 임의로 하나 이상의 추가 활성 성분과 함께 본 발명의 결합 분자를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 추가의 양태는 하나 이상의 약리학적 활성 물질을 포함하는, 암 (예를 들어, 암을 앓고 있거나 암의 발생 위험이 있는 개체)의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 결합 분자를 제공한다.
본 발명의 추가의 양태는 암 및/또는 종양 (예를 들어, 암을 앓고 있거나 암의 발생 위험이 있는 개체)의 치료를 위한 약제의 제조에서의 하나 이상의 활성 성분의 용도를 제공하며, 상기 약제는 본 발명의 결합 분자를 포함한다.
본 발명의 결합 분자와 조합하여 투여될 수 있는 세포 증식 억제 및/또는 세포 독성 활성 물질은, 호르몬, 호르몬 유사체 및 항호르몬, 아로마타제 억제제, LHRH 작용제 및 길항제, 성장 인자 (예를 들어, 혈소판 유래 성장 인자 (PDGF), 섬유아세포 성장 인자 (FGF), 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), 상피 성장 인자 (EGF), 인슐린-유사 성장 인자 (IGF), 인간 상피 성장 인자 (HER, 예를 들어, HER2, HER3, HER4) 및 간세포 성장 인자 (HGF)와 같은 성장 인자)의 억제제를 포함하지만 이들에 한정되지 않으며, 억제제는, 예를 들어, (항-)성장 인자 항체, (항-)성장 인자 수용체 항체 및 티로신 키나제 억제제, 예를 들어, 세툭시맙, 게피티닙, 아파티닙, 닌테다닙, 이마티닙, 라파티닙, 보수티닙 및 트라스투주맙; 항대사물질 (예를 들어, 메토트렉세이트, 랄티트렉세드와 같은 항폴린산제, 5-플루오로우라실 (5-FU), 겜시타빈, 이리노테칸, 독소루비신, TAS-102, 카페시타빈 및 젬시타빈과 같은 피리미딘 유사체, 머캅토퓨린, 티오구아닌, 클라드리빈 및 펜토스타틴, 시타라빈 (ara C), 플루다라빈과 같은 퓨린 및 아데노신 유사체); 항종양 항생제 (예를 들어, 안트라사이클린); 백금 유도체 (예를 들어, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 카보플라틴); 알킬화제 (예를 들어, 에스트라무스틴, 메클로레타민, 멜팔란, 클로람부실, 부술판, 다카바진, 사이클로포스파미드, 이포스파미드, 테모졸로미드, 니트로소우레아, 예를 들어, 카르무스틴 및 로무스틴, 티오테파); 항유사분열제 (예를 들어, 빈블라스틴, 빈데신, 비노렐빈 및 빈크리스틴과 같은 빈카 알칼로이드; 및 파클리탁셀, 도세탁셀과 같은 탁산); 혈관형성 억제제 (베바시주맙, 라무시루맙 및 아플리베르셉 포함), 튜블린 억제제; DNA 합성 억제제, PARP 억제제, 토포아이소머라제 억제제 (예를 들어, 에피포도필로톡신, 예를 들어, 에토포시드 및 에토포포스, 테니포시드, 암사크린, 토포테칸, 이리노테칸, 미톡산트론), 세린/트레오닌 키나제 억제제 (예를 들어, PDK1 억제제, Raf 억제제, A-Raf 억제제, B-Raf 억제제, C-Raf 억제제, mTOR 억제제, mTORC1/2 억제제, PI3K 억제제, PI3Kα 억제제, 이중 mTOR/PI3K 억제제, STK33 억제제, AKT 억제제, PLK1 억제제 (예를 들어, 볼라세르팁), CDK 억제제 (CDK9 억제제 포함), 오로라 키나제 억제제), 티로신 키나제 억제제 (예를 들어, PTK2/FAK 억제제), 단백질 단백질 상호작용 억제제, MEK 억제제, ERK 억제제, FLT3 억제제, BRD4 억제제, IGF-1R 억제제, Bcl-xL 억제제, Bcl-2 억제제, Bcl-2/Bcl-xL 억제제, ErbB 수용체 억제제, BCR-ABL 억제제, ABL 억제제, Src 억제제, 라파마이신 유사체 (예를 들어, 에베롤리무스, 템시롤리무스, 리다포롤리무스, 시롤리무스), 안드로겐 합성 억제제, 안드로겐 수용체 억제제, DNMT 억제제, HDAC 억제제, ANG1/2 억제제, CYP17 억제제, 방사성 의약품, 면역 치료제, 예를 들어, 면역 체크포인트 억제제 (예를 들어, CTLA4, PD1, PD-L1, LAG3 및 TIM3 결합 분자/면역글로불린, 예를 들어, 이필리무맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙) 및 각종 화학요법제, 예를 들어, 아미포스틴, 아나그렐리드, 클로드로나트, 필그라스틴, 인터페론, 인터페론 알파, 류코보린, 리툭시맙, 프로카바진, 레바미솔, 메스나, 미토탄, 파미드로네이트 및 포르피머; 프로테아좀 억제제 (예: 보르테조밉); Smac 및 BH3 모방체; mdm2-p53 길항제를 비롯한 p53 기능을 회복시키는 약제; Wnt/베타 카테닌 신호전달 경로의 억제제; 및/또는 사이클린 의존성 키나제 9 억제제이다.
다음으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 약물과 조합하여 본 발명의 결합 분자를 사용하는 것을 포함하는 치료 방법이 특히 바람직하다:
(i) 유방암 환자에서 화학요법 조합 (네오아쥬반트 설정에서 독소루비신/사이클로포스파마이드 조합물 및/또는 카페시타빈/도세탁셀 조합물; 제1 및 이후 라인 치료를 위한 탁산/백금 계획 포함)과 함께 또는 없이 항-VEGF 항체 (베바시주맙 및 다른 항-혈관형성 물질);
(ii) CRC 치료에 사용되는 화학요법제 (5-플루오로우라실, 이리노테칸, 독소루비신 및 TAS-102 포함);
(iii) 예를 들어, CRC 환자의 치료를 위한 화학요법 조합 (이리노테칸 포함), 항-VEGF 항체 조합 (베바시주맙 및 다른 항-혈관형성 물질) 또는 레고라페닙 조합과 함께 또는 없이 항-EGFR 항체 (KRAS 야생형 종양에서의 세툭시맙 및 파니투무맙);
(iv) 예를 들어, CRC 환자의 치료를 위한 항-PD-1 및 항-PD-L1 제제 및 항-LAG3 제제, 예를 들어, 펨브롤리주맙 및 니볼루맙 및 WO2017/198741에 개시된 바와 같은 항체를 포함하는 면역치료제.
치료에 사용하기 위해, 본 발명의 결합 분자 또는 항체는 동물 또는 인간에게 투여를 용이하게 하기에 적합한 약학 조성물로 제형화된다. 본원에 기재된 결합 분자 또는 항체 분자의 통상적인 제형은 결합 분자 또는 항체 분자를 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제와 혼합하여 동결 건조 또는 달리 건조된 제형 또는 수용액 또는 수성 또는 비수성 현탁액의 형태로 제조될 수 있다. 담체, 부형제, 개질제 또는 안정제는 사용된 용량과 농도에서 비독성이다. 이들로는 포스페이트, 시트레이트, 아세테이트 및 기타 무기산 또는 유기산과 그 염과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드와 같은 방부제; 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레소시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG); 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 라이신과 같은 아미노산; 모노사카라이드, 디사카라이드, 올리고사카라이드 또는 폴리사카라이드 및 글루코오스, 만노오스, 수크로스, 트레할로스, 덱스트린 또는 덱스트란을 포함하는 다른 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 당 알콜, 예컨대 만니톨 또는 소르비톨; 나트륨과 같은 염-형성 반대 이온; 금속 착물 (예, Zn-단백질 착체); 및/또는 이온성 또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 TWEENTM (폴리소르베이트), PLURONICSTM 또는 지방산 에스테르, 지방산 에테르 또는 당 에스테르를 들 수 있다. 또한 에탄올 또는 이소프로판올과 같은 유기 용매를 항체 제형에 포함시킬 수 있다. 부형제는 또한 방출-변형 또는 흡수-변형 기능을 가질 수 있다.
보통, 수용액 또는 현탁액이 바람직할 것이다. 일반적으로, 본 발명의 결합 분자와 같은 치료 단백질에 적합한 제형은 완충된 단백질 용액, 예컨대 적절한 농도 (예를 들어, 0.001 내지 400 mg/ml, 바람직하게는 0.005 내지 200 mg/ml, 보다 많은 바람직하게는 0.01 내지 200 mg/ml, 보다 바람직하게는 1.0 내지 100 mg/ml, 예컨대 1.0 내지 10.0 mg/ml (iv 투여) 또는 100 mg/ml (sc 투여)의 단백질을 포함하는 용액 및 다음과 같은 수성 완충액:
- 포스페이트 완충 염수, pH 7.4,
- 다른 인산염 완충액, pH 6.2 내지 8.2,
- 아세트산염 완충액, pH 3.2 내지 7.5, 바람직하게는 pH 4.8 내지 5.5
- 히스티딘 완충액, pH 5.5 내지 7.0,
- 숙신산염 완충액, pH 3.2 내지 6.6, 및
- 시트르산염 완충액, pH 2.1 내지 6.2,
및 임의로 용액의 등장성을 제공하기 위한 염 (예, NaCl) 및/또는 안정화제 (예컨대, 수크로스, 트레할로스, 라이신) 및/또는 다른 폴리알콜 (예: 만니톨 및 글리세롤) 및 임의로 응집을 방지하기 위한 세제 (예를 들어, 0.02% Tween-20 또는 Tween-80)이다.
i.v. 투여에 바람직한 완충된 단백질 용액은 10 mM 시트레이트 완충액, pH 5.5, 207 mM 수크로오스, 25 mM 라이신 HCl 및 0.02% 폴리소르베이트 20에 용해된 약 10 mg/ml의 본 발명의 결합 분자를 포함하는 용액이다. 피하 적용을 위한 제형은 상당히 더 높은 농도, 예컨대 100 mg/ml 이하 또는 심지어 100 mg/ml 초과의 본 발명의 항체를 포함한다. 그러나, 상기 주어진 성분 및 그 양은 오직 하나의 바람직한 선택을 나타낸다는 것이 당업자에게는 자명할 것이다. 이들의 대안 및 변형을 당업자는 바로 인식할 수 있을 것이거나, 또는 상기 개시 내용으로부터 용이하게 구상할 수 있을 것이다.
이하에 본 발명이 다음 비제한적인 실시예로 기술된다.
실시예
1A: 원발성 및 전이성
결장직장암
(CRC) 및 원발성 위암 (GC) 및 췌장암 (PAC)에서 CDH17 및 TRAILR2 양자의 비율.
상이한 종양 유형에서 TRAILR2 및 CDH17의 단백질 발현을 평가하기 위한 연구를 수행하였다.
원발성 CRC에서의 TRAILR2 및 CDH17에 대한 IHC를 신선한 냉동 및 OCT 포매 샘플에서 수행하였다. 5 μm 두께의 절편을 크리오톰 (cryotome)에서 준비하고 유리 슬라이드 위에 놓은 후, 실온에서 4% PFA 및 차단 용액 (PBS/2% BSA)으로 고정시켰다. 절편을 일차 항체 (Adipogen # AG-20B-0028의 항-TRAILR2 클론 TR2.21, C=10 μg/ml; R&D Systems #MAB1032의 항-CDH17 (mulgG1) 클론 141713 from , C=1μg/ml)에 이어, 검출 시약 (TRAILR2 및 CDH17: EnVision+, HRP, Mouse, DAKO #4000) 및 DAB 용액에서 차례로 배양하였다. 헤마톡실린을 사용해 대비 염색을 수행하였다. 필요에 따라 PBS에서의 세척 단계를 수행하였다. CRC 전이에서의 TRAILR2 및 CDH17에 대한 IHC를 포르말린 고정 및 파라핀 포매 샘플에서 수행하였다. 2 μm 두께의 절편을 크리오톰에서 준비하고 유리 슬라이드 위에 놓은 후, 탈왁스처리하였다. 비마스킹 용액 (TRAILR2: pH9, Vector Laboratories #H3301; CDH17: pH6, Vector Laboratories #H3300)을 121 ℃/1 bar로 적용한 후 3% H2O2 및 이어서 PBS/2% BSA 중 정상 염소 혈청 (Vector Laboratories # S-1000)을 사용하여 차단 단계를 수행하였다. 절편을 1 시간 동안 실온에서 일차 항체 (Cell Signaling #8074의 항TRAILR2 (D4E9) XP® Rabbit mAb, 1:20으로 희석; R&D Systems #MAB1032의 항-CDH17 (mulgG1) 클론 141713, C = 1 μg/ml)에 이어, 검출 시약 (TRAILR2: EnVision+, HRP, Rabbit, DAKO #K4003; CDH17: EnVision+, HRP, Mouse, DAKO #4000) 및 DAB 용액에서 차례로 배양하였다. 헤마톡실린을 사용해 대비 염색을 수행하였다. 필요에 따라 PBS에서의 세척 단계를 수행하였다.
도 14에, 원발성 CRC 및 CRC 간 전이에서의 TRAILR2 및 CDH17 둘 다에 대한 대표적인 IHC 이미지가 도시되었다. 원발성 CRC (n = 26)에서, 모든 경우의 100%에서 CDH17 발현이 관찰되었고 TRAILR2와의 공동 발현이 88%에서 관찰되었다. 전이성 CRC (n = 39, 간 및 폐)에서, 모든 경우의 100%에서 CDH17 발현이 관찰되었고 TRAILR2와의 공동 발현이 100%에서 관찰되었다. 원발성 GC (n = 49)에서, 모든 경우의 95%에서 CDH17 발현이 관찰되었고 TRAILR2와의 공동 발현이 60%에서 관찰되었다. 원발성 PaC (n = 32)에서, 모든 경우의 80%에서 CDH17 발현이 관찰되었고 TRAILR2와 공동 발현이 20%에서 관찰되었다.
본 연구는 CRC, GC 및 PAC의 상당한 부분 집단에서 CDH17과 TRAILR2의 공동 발현을 뒷받침한다.
실시예
1B: 인간 TRAIL 수용체 2 (
TRAILR2
) 및 인간
카드헤린17
(
CDH17
)을 인식하는 결합 분자의 설계
본 발명자들은 CDH17 및 TRAILR2에 결합하고 CDH17 및 TRAILR2 모두를 발현하는 암세포에서 아폽토시스를 유도하는 결합 분자를 개발하였다. 사용된 분자 설계는 중쇄의 C 말단에 결합된 상이한 특이성의 scFv와 함께 하나의 표적 항원에 대해 특이성을 갖는 IgG 항체 ("마스터 항체"라고함)를 가진다. 설계 개략도가 도 1에 도시되었다.
바람직하게는 결합 분자는 이중 특이성이고 4가이다.
이중 특이성 분자는 scFv의 가변 중 (VH) 및 가변 경 (VL) 도메인 사이에 가요성 펩티드 서열을 함유하고, scFv 도메인은 추가의 일련의 링커를 통해 마스터 IgG 항체에 연결되어 있다. 한 구성에서, scFv는 VL 도메인이 scFv의 "N-말단" 단부를 형성하도록 배향되어 마스터 항체의 중쇄의 C-말단에 융합되는데 반해 VH는scFv 및 실제로 전체 중쇄 폴리펩티드의 C-말단을 형성한다. 그러나, 이러한 "N-VL-VH-C" 구조는 역전될 수 있고, 즉 "N-VH-VL-C"임이 인정될 수 있다.
이 개념의 타당성을 테스트하기 위해, 도 1에 묘사된 형식을 기반으로 여러 가지 상이한 이중 특이성 분자를 제조하였다.
다음 실시예는 CDH17 및 TRAILR2에 결합하는 이중 특이성 분자를 생성하는 방법 및 이들 분자의 생물학적 활성과 형태 변화를 설명한다.
실시예
2:
하이브리도마
및 배양된 단일 B 세포로부터의 고속 대량 V 유전자 회수를 사용한
CDH17
및
TRAILR2를
인식하는 결합 도메인의 제조
인식할 수 있는 바와 같이, 인간 CDH17 및 TRAILR2에 결합하는 이중 특이성 분자를 제조하기 위해, 개별 표적 항원에 결합하는 가변 도메인을 얻는 것이 필요하다.
이를 달성하기 위해, CDH17 또는 TRAILR2 면역화 마우스로부터 유래된 클론 하이브리도마 또는 단일 B 세포를 시험관 내에서 배양하였다. 상등액을 인간 CDH17 또는 TRAILR2에 대한 반응성에 대해 스크리닝하였다. 면역글로불린 (Ig) VH 및 VL 유전자를 동정된 양성 클론으로부터 증폭시켰다.
하이브리도마로부터 RNA를 단리하기 위해, 단일 클론으로부터의 약 2×106 세포를 펠렛화하여 원료 물질로 사용하였다. 단일 B 세포의 경우, 단일 단리된 B 세포로부터 확장된 100 내지 500개의 세포를 원료 물질로서 사용하였다. RNeasy Plus (Qiagen, Hilden, Germany)를 사용하여 RNA를 단리하였다. Smarter cDNA 합성 키트 (Clontech, Mount View, CA)를 사용하여 제조업체의 지침에 따라 cDNA를 합성하였다.
Ig VH 및 VL 유전자를 표 1에 기재된 프라이머를 사용하여 증폭시켰다. 각각의 50 μl PCR 반응은 20 μM의 순방향 및 역방향 프라이머 혼합물, 25 μl의 Pfu 프리믹스 (Agilent Technologies), 2 μl의 정제되지 않은 cDNA 및 21 μl 의 이중 증류수로 이루어졌다. PCR 반응은 3 분간 94 ℃ 단계로 시작하여 15 PCR 사이클 (92 ℃에서 1 분, 55 ℃에서 1 분, 68 ℃에서 1 분), 이어서 25 PCR 사이클 (94 ℃에서 1 분, 50 ℃에서 1 분, 72 ℃에서 1 분)을 수행한 후, 7 분간 72 ℃ 단계로 종료하였다.
454 차세대 시퀀싱을 위해 바코딩된 프라이머 세트로 2차 PCR을 수행하였다. 반응은 94 ℃에서 3 분간을 시작으로, 92 ℃에서 1 분, 53 ℃에서 1 분, 및 68 ℃에서 1 분간 35회 순환하였다. VL 및 VH PCR 산물을 함께 모아 겔 정제한 후, 454 DNA 시퀀싱 (Roche GS-FLX, SeqWright, U.S.A.)에 제공하였다.
이 방법을 사용하여, CDH17 또는 TRAILR2에 대해 특이성을 갖는 결합 도메인을 코딩하는 다수의 Ig VH 및 VL 유전자 쌍을 제조하였다. VH 및 VL 서열의 일부를 당 업계에 공지된 방법을 사용하여 추가로 인간화하였다.
실시예
3:
CDH17
및
TRAILR2에
결합하는 이중 특이성 분자의 고속 대량
작제
TRAILR2 scFv를 코딩하는 유전자 분절을 작제하기 위해, 실시예 2에서 제조된 것이거나 당 업계에 공지된 TRAILR2 결합 가변 도메인을 코딩하는 VL 및 VH 유전자 쌍을 펩티드 서열 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (서열 번호 143)의 가요성 링커를 코딩하는 유전자 분절로 이었다. 생성된 scFv-코딩 유전자 분절을 차례로 인간 IgG 항체의 중쇄를 코딩하는 유전자의 3' 말단에 인프레임으로 클로닝하였다. 이들 코딩 절편을 중첩 PCR 방법에 의해 합성하고 발현 벡터 pTT5로 클로닝하였다.
실시예 2에서 제조된 CDH17-결합 가변 도메인을 코딩하는 VL 및 VH 유전자 쌍을 실시예 1에 개괄된 이중 특이성 포맷으로 포맷하였다. VH 유전자를 인간 Igγ를 코딩하는 유전자의 5' 말단에서 프레임 융합으로 pTT5 발현 벡터 내로 클로닝하였다. TRAILR2 결합 scFv를 코딩하는 유전자를 동일한 Igγ 인코딩 분절의 3' 말단에서 프레임으로 클로닝하였다. 유사하게, VL 유전자를 인간 IgG 카파 경쇄를 코딩하는 유전자와 인-프레임 융합으로서 pTT5 발현 벡터 내로 클로닝하였다.
실시예 2에서 제조된 것이거나 당 업계에 공지된 TRAILR2 결합 가변 도메인을 코딩하는 VL 및 VH 유전자 쌍을 추가로 사용하여 당 업계에 공지된 방법으로 (예를 들어 항원 결합 부위 TR2v1 또는 TRv2를 포함하는) TRAILR2에 특이적으로 결합하는 항체 분자 (2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 포함하는 전장 항체 분자)를 제조하고, 하기 기술된 실시예에서 대조 항체로서 또는 세포를 검출/표지하기 위해 사용하였다. 이 항체는 인간 IgG1 WT 또는 IgG1 (KO) 불변 도메인을 포함한다.
마찬가지로, 실시예 2에서 제조된 것이거나 당 업계에 공지된 CDH17 결합 가변 도메인을 코딩하는 VL 및 VH 유전자 쌍을 추가로 사용하여 당 업계에 공지된 방법으로 (예를 들어 항원 결합 부위 CDH17v1 또는 CDH17H2를 포함하는) CDH17에 특이적으로 결합하는 항체 분자 (2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 포함하는 전장 항체 분자)를 제조하고, 하기 기술된 실시예에서 대조 항체로서 또는 세포를 검출/표지하기 위해 사용하였다. 이 항체는 인간 IgG1 WT 또는 IgG1 (KO) 불변 도메인을 포함한다.
전술한 TRAILR2 또는 CDH17에 특이적이고 하기 실시예에서 대조 항체로서 사용되는 항체는 2개의 중쇄 및 경쇄를 갖는 통상적인 전장 항체이다. 상기 대조 항체의 결합 부위는 비교되는 이중 특이성 결합 단백질과 동일한 가변 도메인으로 정의된다. 예를 들어, 도 3에서, CDH17-특이적 결합 부위 CDH17v1 및 TRAILR2 특이적 결합 부위 TR2v1을 갖는 결합 분자 (결합 분자 CDH17v1/TR2v1으로 지칭됨)는 서열 번호 118의 CDH17에 특이적인 VH 서열 및 서열 번호 119의 CDH17에 특이적인 VL 서열 및 서열 번호 96의 TRAILR2에 특이적인 VH 서열 및 서열 번호 97의 TRAILR2에 특이적인 VL 서열 (표 2 참조)을 포함한다. 따라서, 본 실시예에서 사용된 대조 항체 항-CDH17v1은 서열 번호 118의 CDH17에 특이적인 VH 서열 및 서열 번호 119의 CDH17에 특이적인 VL 서열을 포함하고, 대조 항체 항-TRv1은 서열 번호 96의 TRAILR2에 특이적인 VH 서열 및 서열 번호 97의 TRAILR2에 특이적인 VL 서열 (도 3 참조)을 포함한다.
VH 및 VL 유전자의 지정 클로닝을 위해 위 절차에 In-Fusion® HD 클로닝 키트 (Clonetech, U.S.A.)를 사용하였다. 선형화된 벡터의 말단에 상보적인 15 bp 확장을 갖는 VL/VH에 대한 PCR 프라이머를 합성하였다. 제조업체의 표준 프로토콜을 사용하여 PCR을 수행하고, 앰플리콘을 정제하거나 클로닝 인핸서 (Cloning Enhancer)로 처리한 다음, 적절한 벡터에 클로닝하였다. 제조업체의 지침 (Clonetech, U.S.A.)에 따라 대장균을 형질전환시켰다. DNA mini-preps의 서열을 분석하였다.
각 발현 벡터는 신호 서열 및 중쇄 또는 경쇄를 코딩하는 사슬-코딩 유전자, 는 유전자, 암피실린과 같은 원핵 세포 선별 마커 유전자에 대한 발현 카세트 및 복제 기원을 위한 진핵 생물 프로모터 요소를 포함한다. 이들 DNA 플라스미드를 암피실린 내성 대장균 콜로니에서 증식시키고 정제하였다.
실시예
4: 인간
TRAILR2
및 인간
CDH17을
인식하는 이중 특이성, 4가 분자의 발현 및 정제
실시예 3에서 제조된 발현 벡터를 CHO-E 세포에 형질감염시켰다.
무 혈청 배지에서 현탁액에서 증식된 형질감염된 CHO-E 세포를 140 rpm, 37 ℃ 및 5% CO2에서 진탕 플라스크에서 진탕하에 배양하고, 지수 성장 조건에서 유지하였다. 형질감염 당일에, 세포를 경쇄 플라스미드 1 ㎎ 및 중쇄 플라스미드 0.5 ㎎으로 화학적으로 형질감염시켰다. 그런 다음, 1 L의 Gibco® FreeStyle™ CHO 발현 배지 (LifeTechnologies, NY, US)에 1-2×106 세포/ml로 파종하였다. 그 후, 세포를 단백질이 발현될 수 있도록 상업적 공급 용액 150 ml를 1회 공급하여 궤도 진탕하에 10 내지 12 일 동안 배양하였다. 세포 배양 상등액 중의 항체/결합 분자 역가를 제조업체의 지침에 따라 Octet® 기기 (Pall ForteBio, CA, US) 및 protA 바이오센서 팁을 사용하여 결정하였다.
재조합 결합 분자 또는 항체를 MabSelect™ (Amersham Biosciences)를 사용하여 단백질 A 친화도 크로마토그래피에 의해 배양 상등액으로부터 정제하고 60 mM NaOAc 완충액 (pH 5.0)에 저장하였다. 샘플의 순도와 이질도를 질량 분광 분석법 및 분석 초원심분리법으로 평가하였다. 모든 샘플은 기능성 시험 전에 단량체 함량이 90% 이상이고 불순물을 10% 미만으로 함유하는 것으로 확인되었다.
실시예
5: 인간
TRAILR2
및 인간
CDH17
분자를 인식하는 이중 특이성 분자의 세부 사항
하기 실시예에서, 본 발명의 다수의 상이한 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 항체 분자를 제조하였다. 혼동을 피하기 위해, 이들 분자의 특징 및 서열을 하기에 제공하였다.
실시예
6: 인간
TRAILR2
및 인간
CDH17을
인식하는 이중 특이성 분자의
증가된
아폽토시스
효과
도입부
상술된 실시예는 TRAILR2 및 인간 CDH17을 인식하는 이중 특이성 분자의 제조를 보여준다. 본 발명자들은 이들 분자가 아폽토시스 유도에 미치는 영향을 결정하기 위해 분자가 세포 생존성의 감소를 일으킬 수 있는지의 여부, 이러한 임의의 감소가 아폽토시스에 의한 것인지의 여부 및 임의의 아폽토시스 효과가 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 결합 분자에 의해 특이적으로 매개되었는지의 여부를 조사하기로 결정하였다.
세포 기반 분석법 개발
먼저, 세포 표면에 TRAILR2 및 CDH17을 가지고 있는 암세포를 동정할 필요가 있었다. Colo-205 세포주는 백인 결장 선암에서 유래한 것이다. 이것은 잘 알려진 실험실 세포 배양 도구이다. 본 발명자들은 이것을 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 결합 분자의 기능을 평가하기 위한 후보 세포주로 선택하였다.
Colo-205 세포상의 TRAILR2 및 CDH17 단백질 표면 발현을 하기와 같이 분석하였다. Accutase (Sigma A6964)를 사용하여 세포를 분리하고 FACS 완충액 (PBS, Gibco 14190; 3% FCS, Gibco 26140 및 0.09% NaN3, Sigma Aldrich S2002)으로 2회 세척하였다. ViCell (Beckman Coulter Life Sciences)을 사용하여 세포를 계수하고 세포수를 2-5×106 세포/ml로 조정하였다. 100 ㎕/웰 세포 현탁액을 96-웰 둥근 바닥 플레이트에 파종하였다.
세포를 파종한 후, 플레이트를 1200 rpm에서 5 분간 원심분리하고 상등액을 버렸다. 그런 다음 세포를 100 μL/웰의 일차 항체 적정 희석으로 4 ℃에서 60 분 동안 배양하였다. 세포를 FACS 완충액으로 2회 세척하고, 100 μL/웰의 적정 희석된 2차/접합 항체를 첨가하였다. 2차 항체가 있는 세포를 암실에서 4 ℃로 45 분 동안 배양하였다. FACS 완충액으로 2회 세척한 후, 세포를 웰당 100 μl FACS 완충액에 재현탁시킨 다음, FACS Canto (BD Biosciences)로 분석하였다.
TRAILR2 검출을 위해, 접합된 항-인간 CD262 (DR5) PE (eBioscience, 12-9908-42)를 사용하였다. CDH17에 대해서는, 항 CDH17 항체 (R & D Systems, MAB1032)와, 이어서 이차 항체 토끼 항-마우스 IgG PE (Dako, R0439)를 사용하였다. 대조군으로 마우스 IgG1 이소타입 대조군 PE (eBioscience, 12-4714-42) 및 마우스 IgG1 이소타입 대조군 (AbDserotec, MCA928EL)을 각각 사용하였다.
도 2에서, Colo-205 세포에서의 TRAILR2 및 CDH17의 단백질 표면 발현이 보여지고, 두 단백질은 모두 유의적인 발현을 제공한다.
Colo-205 세포에 대한 이중 특이성
TRAILR2
/
CDH17
분자의 효과
Colo-205 세포가 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 결합 분자의 기능을 평가하기에 적합한 암세포주로서 동정됨으로써, 본 발명자들은 하기 분석을 고안하였다.
Colo-205 세포를 배양 배지 (RPMI1640/Glutamax, Gibco 61870-010; + 10% FCS, Gibco 26140)에 플레이팅하였다. 37 ℃ 및 5% CO2에서 밤새 정치시킨 후, 세포를 목적하는 농도로 50 μl의 상이한 항체 또는 결합 분자 희석액과 24 시간 동안 배양하였다. 세포 생존성은 제조업체가 제공한 지침에 따라 CellTiter-Glo 발광성 세포 생존성 분석 (Promega G7571)을 사용하여 평가하였다. 마지막으로, Perkin Elmer의 VICTOR X4 2030 Multilabel Plate Reader를 사용하여 발광을 기록하였다.
세포 생존성에 대한 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 결합 분자의 영향을 도 3에 나타내었다. Colo-205 세포를 (i) 이중 특이성 분자, (ii) 항-TRAILR2 항체 단독, (iii) 항-CDH17 항체 단독 또는 (iv) TRAILR2 및 CDH17 항체의 동등한 자유-조합과 함께 24 시간 동안 배양하였다.
도 3에 나타낸 바와 같이, 항-CDH17 항체는 7×10-4 내지 70 nM 농도 범위로 사용된 경우 Colo-205 세포의 생존성에 영향을 미치지 않았다. TRAILR2 항체는 7 내지 70 nM로 사용된 경우 세포 생존성을 현저하게 감소시킬 수 있었고 자유-조합으로의 항-CDH17의 첨가는 항-TRAILR2 항체 단독으로 관찰된 효과를 변경시키지 않았다. 마지막으로, Colo-205 세포를 본원에 기술된 바와 같은 이중 특이성 TRAIL-R2/CDH17 결합 분자 (서열 번호 145의 중쇄 서열 및 서열 번호 146의 중쇄 서열을 포함하는 CDH17v1/TR2v1)와 함께 배양한 결과, 양 항-TRAIL-R2 항체 (각각 서열 번호 96 및 서열 번호 97의 VH 및 VL 서열을 갖는 항원 결합 부위 TRv1을 포함함) 단독 및 항-CDR17 항체에 비해 (각각 서열 번호 118 및 서열 번호 119의 VH 및 VL 서열을 갖는 항원 결합 부위 CDH17v1을 포함함)와 조합된 항-TRAIL-R2 항체 효능이 1000배 이상으로 향상되었다.
TRAILR2
/
CDH17
분자는 Colo-205 세포에서
아폽토시스를
유도한다
다음으로 도 3에 나타낸 바와 같은 세포 생존성의 감소가 아폽토시스의 유도에 의해 유발된 것인지를 조사하였다. TRAIL에 의해 유도된 아폽토시스는 캐스파제-8의 동원 및 활성화에 의해 매개되며, 차례로 아폽토시스를 유발하는 이펙터 캐스파제-3를 활성화시킨다. 따라서, 본원에서 제조된 항체 및 결합 분자가 아폽토시스 경로를 특이적으로 활성화시킬 수 있는지를 결정하기 위해, 본 발명자들은 표적 세포주에서 캐스파제-8 및 -3 활성을 모두 측정하였다.
캐스파제-3 및 -8 활성을 각각 Promega Apo-ONE 균질 캐스파제-3/7 분석 (Cat. # G7790) 및 Promega 캐스파제-Glo 8 분석 (Cat. # G8201)을 사용하여 측정하였다. 37 ℃ 및 5% CO2에서 밤새 정치시킨 후, 세포를 목적하는 농도를 달성하기 위해 50 μl의 상이한 항체 또는 결합 분자 희석액과 함께 상이한 시점을 따라 배양하였다. 캐스파제-3 및 -8 활성을 제조업체가 제공한 지침에 따라 평가하였다. Perkin Elmer의 VICTOR X4 2030 Multilabel Plate Reader를 사용하여 각 샘플의 발광을 측정하였다.
상기 분석 결과를 도 4에 나타내었다. 항-TRAILR2 항체 (각각 서열 번호 96 및 서열 번호 97의 VH 및 VL 서열을 갖는 항원 결합 부위 TRv1을 포함함) 단독 및 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 결합 분자 (서열 번호 145의 중쇄 서열 및 서열 번호 146의 경쇄 서열을 포함하는 CDH17v1/TR2v1)는 캐스파제 8 (A) 및 3 (B) 모두를 효율적으로 활성화시킬 수 있었다. 비처리 대조군과 비교할 때 항-CDH17 항체 (각각 서열 번호 118 및 서열 번호 119의 VH 및 VL 서열을 갖는 항원 결합 부위 CDH17v1을 포함) 배양 후 효과가 관찰되지 않았다. 이 데이터는 도 3에서 관찰된 세포 생존성의 감소가 어떤 비특이 메커니즘에 의한 것이 아니며 두 분자가 표적 세포에서 효율적으로 그리고 특이적으로 아폽토시스를 유도할 수 있음을 보여준다. 세포 생존성 데이터와 일치하여, 본 발명자들은 Colo-205 세포를 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 결합 분자와 함께 배양하면 항-TRAILR2 항체 단독에 비해 우수한 캐스파제-8 및 -3 활성화 (3 로그 이상의 효능 이동)로 이어진다는 것을 명백하게 관찰하였다.
Colo-205 세포의
아폽토시스는
TRAILR2
/
CDH17
분자에 의해 특이적으로
유도된다
본 발명자들은 또한 본 발명의 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 결합 분자에 의해 조절된 아폽토시스의 증가가 Colo-205 세포의 표면에 존재하는 CDH17에 의해 특이적으로 매개된다는 것을 확인하고 싶었다. 이를 입증하기 위해, 발명자들은 IgG 마스터 항-CDH17 항체가 TNP를 인식하는 것으로 대체된, 트리니트로 페놀 (TNP) 및 인간 TRAILR2를 인식하는 추가적인 이중 특이성, 4가 분자를 생성하였다. TNP 항원은 세포 표면에서 쉽게 발견할 수 없기 때문에, TNP에 대한 결합 영역은 분자에 대한 비특이적 대조군으로 작용한다.
Colo-205 세포를 상이한 농도의 (i) TNP에 대한 항체 단독, (ii) 항-CDH17 항체 단독, (iii) 항-TRAILR2 항체 단독, (iv) 이중 특이성 TRAILR2/TNP 결합 분자, (v) 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 분자로 24 시간 처리하고 세포 생존성을 측정하였다. 얻은 데이터를 도 5에 도시하였다.
도 5에 나타낸 바와 같이, 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 결합 분자 (서열 번호 145의 중쇄 서열 및 서열 번호 146의 경쇄 서열을 포함하는 CDH17v1/TR2v1)는 항-TRAILR2 항체 (각각 서열 번호 96 및 서열 번호 97의 VH 및 VL 서열을 갖는 항원 결합 부위 TRv1을 포함함)와 비교하여 세포 생존능의 감소에서 명백한 우수한 효과를 유도할 수 있었다. 이 효과는 이중 특이성 TRAILR2/TNP 결합 분자에서는 보이지 않는다. 따라서, CDH17을 TNP로 대체하면 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 결합 분자의 우수한 아폽토시스 효과가 없어지고, 이중 특이성 TRAILR2/TNP 결합 분자는 항-TRAILR2 항체 단독과 비슷한 효과를 갖게 된다.
HepG2 세포에 대한 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 분자의 효과
간 유래 CDH17 음성 및 TRAILR2 민감성 세포에서의 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 결합 분자의 효과를 연구하기 위해, 전술한 바와 유사한 실험을 HepG2 세포를 사용하여 수행하였다. 이 세포주는 최초 15세 백인 남성 간의 간세포 암종에서 유래하였다.
HepG2 세포를 DMEM (Lonza, BE12-604F) + 10% FCS (Gibco 26140)에서 37 ℃ 및 5% CO2에서 배양하였다.
Colo-205에 대해 기술된 바와 같이, 단백질 표면 발현 및 세포 생존성을 실시예 3에서 기술된 바와 같이 분석하였다. 도 6A에는, HepG2 세포에서의 TRAILR2 및 CDH17의 단백질 표면 발현이 나타나 있고, TRAILR2만이 유의한 발현을 제공하였다.
HepG2 세포를 (i) 항-TRAILR2 (각각 서열 번호 96 및 서열 번호 97의 VH 및 VL 서열을 갖는 항원 결합 부위 TRv1을 포함하는 항-TR2v1) 단독, (ii) TRAILR2/CDH17 이중 특이성 결합 분자 (서열 번호 145의 중쇄 서열 및 서열 번호 146의 경쇄 서열을 포함하는 CDH17v1/TR2v1)와 배양하였다. 또한, 다양한 작용성 인간 TRAILR1 및 TRAILR2 항체에 대해 문헌 (Ichikawa et al., 2001. Nat Med. Aug;7(8):954-60; Li et al., 2008 BMC Cancer. Nov 7;8:325; Natoni et al., 2007, British journal of haematology 2007 Nov;139(4):568-77; Pukac et al., 2005 Br J Cancer. 2005 Apr 25;92(8):1430-41; Yada et al., 2008 Ann Oncol. 2008 Jun;19(6):1060-70 ; Zhang et al., 2007a Cancer Lett. 2007 Jun 18;251(1):146-57)에 기재된 바와 같은 항-TRAILR2 항체의 최대 프로-아폽토시스 신호전달에 대한 대조군으로서, HepG2 세포를 교차-링커, 염소 항-인간 IgG (항-TR2v1 (Fc 교차 링크))의 존재 하에서 (iii) 항-TRAILR2 (각각 서열 번호 96 및 서열 번호 97의 VH 및 VL 서열을 포함하는 항원 결합 부위 TRv1 포함)와 함께 배양하였다. 도 6B에 나타낸 바와 같이, 항-TRAILR2 항체 단독 및 TRAILR2/CDH17 이중 특이성 분자 모두 생존성에 영향을 미치지 않는다. TRAILR2 항체의 인공 Fc 교차 링크 만이 세포 생존성을 현저하게 감소시킬 수 있었다.
추가의 CRC 세포에 대한 이중 특이성
TRAILR2
/
CDH17
분자의 효과
Colo-205에서 관찰된 효과가 다른 CRC 세포주에 적용될 수 있는지를 연구하기 위해, 두개의 추가적인 CRC 세포주로서 CL-34 (KRAS 야생형) 및 SK-CO-1 (KRAS p.G12V)를 사용하여 상기와 유사한 실험을 수행하였다.
CL-34 및 SK-CO-1을 각각 DMEM/F-12 (ATCC 30-2006) + 20% FCS (Gibco 26140) 및 EMEM (Lonza BE12-662F) + 10% FCS (Gibco 26140) 중에서 37 ℃ 및 5% CO2에서 배양하였다.
실시예 6에 기재된 바와 같이, 단백질 표면 발현 및 세포 생존성을 분석하였다. 도 11A 및 11B에 CL-34 (A) 및 SK-CO-1 (B) 세포에서의 TRAILR2 및 CDH17의 단백질 표면 발현이 나타나 있고, 두 단백질 모두 유의적인 발현을 제공한다.
CL-34 및 SK-CO-1 세포를 (i) 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 결합 분자 (서열 번호 145의 중쇄 및 서열 번호 146의 경쇄를 포함하는 CDH17v1/TR2v1) (ii) 항-TRAILR2 항체 (각각 서열 번호 96 및 서열 번호 97의 VH 및 VL 서열을 갖는 항원 결합 부위 TRv1을 포함함) 단독, 또는 (iii) 항-CDH17 항체 (각각 서열 번호 118 및 서열 번호 119의 VH 및 VL 서열을 갖는 항원 결합 부위 CDH17v1을 포함함) 단독과 배양하였다. 도 11에 나타낸 바와 같이, 항-CDH17 항체는 생존성에 영향을 미치지 않는 반면, TRAILR2 항체는 7 내지 70 nM에서 세포 생존능을 현저히 감소시킬 수 있었다. Colo-205 세포에 대해 기술된 바와 같이, CL-34 및 SK-CO-1 세포 둘 모두를 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 결합 분자와 함께 배양한 결과, 항-TRAILR2 항체 단독과 비교하여 세포 생존율에 3 로그 이상의 명확한 역전사를 나타내었다.
CL-34 및 SK-CO-1 세포에서 관찰된 유사 반응과 일치하여, 19개의 CRC 세포주의 확대 패널에서 KRASmut 및 KRASwt 세포주 간 민감도에 유의한 차이는 검출되지 않았다 (Wilcoxon-Rank-Sum-Test, 데이터는 표시되지 않음).
검토
본 발명자들은 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 결합 분자가 CRC 세포주에서 아폽토시스를 유도한다는 것을 상기에서 입증하였다. 이 아폽토시스 효과는 치료적으로 유용한 투여량 수준이고 TRAILR2 항체 단독보다 3 자리 이상 적은 농도를 사용하여 달성된다. 또한 이 효과는 이중 특이성 분자의 CDH17 부분에 의해 특이적으로 유도되고, 최대 효과의 농도에서 간 유래 CDH17 음성 및 TRAILR2 민감성 HepG2 세포의 세포 생존성에 검출가능한 영향을 미치지 않는 것으로 입증되었다.
실시예
7: 이중 특이성
TRAILR2
/
CDH17
분자에서 상이한 IgG
스캐폴드의
사용
본 발명자들은 또한 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 분자의 마스터 항체 요소에 사용된 IgG 스캐폴드의 변화가 아폽토시스의 유도를 변화시키는지에 대해 조사하였다.
Colo-205 세포를 상이한 농도의 항-TRAILR2 항체 단독 및 IgG1 (A 및 C) 또는 IgG4Pro (B) 불변 영역을 포함하는 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 결합 분자로 24 시간 동안 처리하였다. 항체 배양 후 세포 생존성을 측정하였다 (도 7).
도 7에 나타낸 바와 같이, 2개의 추가 돌연변이 (L234A 및 L235A)를 갖는 제2 버전 (IgG1 KO; 서열 번호 121) 또는 1개의 추가 돌연변이 (H310A, 서열 번호 270)를 갖는 제3 버전 (FcRnmut)에 대한 이전에 사용된 IgG1 스캐 폴드의 치환은 Colo-205 세포 생존성의 감소에 대한 효과를 변화시키지 않았다.
야생형과 유사하게, 새로 생성된 이중 특이성 결합 분자 (서열 번호 147의 중쇄 및 서열 번호 148의 경쇄를 포함하는 TRv1/CDH17v1 IgG1 (KO))는 10-2 nM과 같이 낮은 농도로 사용되었을 때 세포 생존성을 현저하게 감소시킬 수 있었지만, 모 TRAILR2 항체 (각각 서열 번호 96 및 서열 번호 97의 VH 및 VL 서열을 갖는 항원 결합 부위 TRv1을 포함함)는 효과를 나타내지 않았다. 이것은 TRAILR2 결합 도메인이 항-TR2v2 (각각 서열 번호 98 및 서열 번호 99의 VH 및 VL 서열을 가짐)와 비교하여 약간 변형된 서열 (서열 번호 149의 중쇄 및 서열 번호 150의 경쇄를 포함하는 TRAILR2v2)로 치환된 제2 이중 특이성 결합 분자에 대해서도 마찬가지였다. 또한, 이중 특이성 스캐폴드의 마스터 항체 요소에 사용된 IgG 스캐폴드가 IgG4 Pro 이소타입 (서열 번호 151의 중쇄 서열 및 서열 번호 152의 경쇄 서열을 포함함)으로 완전히 대체된 상이한 이중 특이성 분자 또는 서열 번호 271의 중쇄 서열 및 서열 번호 218의 경쇄 서열을 포함하는 IgG1 FcRnmut (CDH17H2/TR2v2)를 제조하였다. 도 7에 도시된 바와 같이, 분자에서의 이러한 변화는 Colo-205 세포 생존성을 감소시키는 효력을 변경시키지 않았다.
실시예
8: 세포
생존성
감소에서의 scFv
변이체의
효과
이어서, scFv 제2 항체 성분에 대한 변화가 본 발명의 분자에 의한 아폽토시스의 유도에 영향을 주는지에 대해 조사하였다.
실시예 6에서 사용된 분자에서, scFv는 VL이 결합 부분의 N-말단을 형성하고 따라서 마스터 항체의 중쇄의 C-말단에 링커를 통해 융합되는 반면, scFv의 VH는 전체 중쇄 분자의 C-말단을 형성하도록 배향된다.
따라서, 동일 서열의 가변 도메인이나 상기 도메인의 상이한 배향 및/또는 추가 변형 (scFv 버전 1 내지 4)으로 정의되는 결합 부위를 포함하는 다수의 상이한 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 결합 분자가 생성되었다.
1. 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 scFv1 분자는 VH-VL 배향을 갖는다. 즉, scFv의 VH는 링커를 통해 항체의 C-말단에 융합되고, scFv의 VL은 중쇄 전체 분자의 C-말단을 형성한다 (서열 번호 131의 scFv 서열을 갖는 CDH17v1/TRv1).
2. 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 scFv2 분자가 또한 VH-VL 배향을 갖는다. 즉, scFv의 VH는 링커를 통해 항체의 C-말단에 융합되고, scFv의 VL은 중쇄 전체 분자의 C-말단을 형성하며, scFv 결합 도메인을 안정화시키기 위한 추가의 디설파이드 결합을 갖는다 (서열 번호 132의 scFv 서열을 갖는 CDH17v1/TRv1).
3. 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 scFv3 분자는 도 7에서 사용된 것이며, 따라서 VL-VH 배향을 갖는다. 즉, scFv의 VL은 링커를 통해 항체의 C-말단에 융합되고, scFv의 VH는 중쇄 전체 분자의 C-말단을 형성한다 (서열 번호 124의 scFv 서열을 갖는 CDH17v1/TRv1).
4. 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 scFv4 분자는 또한 VL-VH 배향을 가지며, 즉, scFv의 VL은 링커를 통해 항체의 C-말단에 융합되고, scFv의 VH는 중쇄 전체 분자의 C-말단을 형성하며, scFv 결합 도메인을 안정화시키기 위한 추가의 디설파이드 결합을 갖는다 (서열 번호 133의 scFv 서열을 갖는 CDH17v1/TRv1).
이어서, 실시예 6에 기재된 Colo-205 세포 아폽토시스 분석으로 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 결합 분자의 이들 변이체의 기능을 조사하였다. 결합 분자와 배양한 후, 세포 생존성을 측정하였다.
도 8에 제시된 데이터는 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 결합 분자가 scFv 항체 도메인 내의 VH 및 VL 도메인의 배향에 관계없이 Colo-205 세포의 아폽토시스를 유도할 수 있음을 보여 주지만, VL-VH가 VH-VL 배향보다 아폽토시스 효과가 더 크다. 추가적인 디설파이드 결합을 갖는 분자는 이들 추가 결합이 없는 상응하는 모 분자와 비교할 때 유의한 효과가 없다.
따라서, VL-VH가 놀랍게도 더 큰 아폽토시스 효과를 갖기는 하지만, 실시예 1에 개략된 이중 특이성 항체 포맷의 구조에 대한 변화는 허용될 수 있다.
실시예
9: 대안적인 결합 서열을 사용한 이중 특이성 분자
TRAILR2
및 CDH17 bi-scFv의 Colo-205 세포
생존성
감소에서의 효과
상이한 결합 도메인을 갖는 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 결합 분자의 변이체를 제조하였다. 사용된 특이적 결합 분자의 세부 사항을 실시예 5의 표에 나타내었다. 실시예 6에 기술된 바와 같은 Colo-205 세포 아폽토시스 분석에 사용된 결합 도메인을 변화시키는 것에 대한 효과를 조사하였다.
Colo-205 세포를 상이한 농도의 새로이 동정된 상이한 CDH17 (A) 및 TRAILR2 (B 및 C) 결합 서열을 함유하는 서로 다른 이중 특이성 분자로 24 시간 동안 처리하였다. 항체 배양 후, 세포 생존성을 측정하였다.
도 9 (A-C)에 제시된 데이터는 상이한 TRAILR2 및 CDH17 결합 서열 (서열 번호 182의 HC 및 서열 번호 188의 LC를 포함하는 CDH17A6/TR2v2; 서열 번호 197의 HC 및 서열 번호 203의 LC를 포함하는 CDH17E2/TR2v2; 서열 번호 167의 HC 및 서열 번호 173의 LC를 포함하는 CDH17E9/TR2v2; 서열 번호 219의 HC 및 서열 번호 233의 LC를 포함하는 CDH17v1/TR2#1; 서열 번호 220의 HC 및 서열 번호 233의 LC를 포함하는 CDH17v1/TR2#2; 서열 번호 221의 HC 및 서열 번호 233의 LC를 포함하는 CDH17v1/TR2#3; 서열 번호 223의 HC 및 서열 번호 233의 LC를 포함하는 CDH17v1/TR2#8; 서열 번호 224의 HC 및 서열 번호 233의 LC를 포함하는 CDH17v1/TR2#10; 서열 번호 212의 HC 및 서열 번호 218의 LC를 포함하는 CDH17H2/TR2v2; 서열 번호 213의 HC 및 서열 번호 218의 LC를 포함하는 CDH17H2/TR2v3; 서열 번호 214의 HC 및 서열 번호 218의 LC를 포함하는 CDH17H2/TR2v4; 서열 215의 HC 및 서열 218의 LC를 포함하는 CDH17H2/TR2v5; 서열 번호 216의 HC 및 서열 번호 218의 LC를 포함하는 CDH17H2/TR2v6; 서열 번호 217의 HC 및 서열 번호 218의 LC를 포함하는 CDH17H2/TR2v7)을 가지는 이중 특이성 결합 분자가 10-2 nM 정도의 낮은 농도로 사용된 경우 세포 생존성을 현저하게 감소시킬 수 있는 반면, 모 TRAILR2 항체 (서열 번호 98의 VH 및 서열 번호 99의 VL을 포함하는 TR2v2)는 동일한 농도에서 효과를 나타내지 않았음을 입증한다. 도 9D에서, 이들 일부 분자 (서열 번호 212의 HC 및 서열 번호 218의 LC를 포함하는 CDH17H2/TR2v2, 서열 번호 213의 HC 및 서열 번호 218의 LC를 포함하는 CDH17H2/TR2v3; 서열 번호 214의 HC 및 서열 번호 218의 LC를 포함하는 CDH17H2/TR2v4; 서열 번호 215의 HC 및 서열 번호 218의 LC를 포함하는 CDH17H2/TR2v5; 서열 번호 216의 HC 및 서열 번호 218의 LC를 포함하는 CDH17H2/TR2v6; 서열 번호 217의 HC 및 서열 번호 218의 LC를 포함하는 CDH17H2/TR2v7)를 상기 간 유래 CDH17 음성 및 TRAILR2 민감성 HepG2 세포에서 시험하였다. 도에서 나타내는 바와 같이, 1 nM까지의 농도는 시험된 모든 분자에 대해 HepG2 세포 생존성에서 검출 가능한 효과가 없었다. 도 9C 내지 도 9D에서, 모 CDH17 항체 (서열 번호 116의 VH 및 서열 번호 117의 VH를 포함하는 CDH17H2)는 시험된 농도 범위 내에서 Colo-205뿐만 아니라 HepG2의 어느 것도 세포 생존성을 감소시키는 효과를 나타내지 않았다.
따라서, 상이한 TRAILR2 및 CDH17 결합 서열이 본 발명의 이중 특이성 TRAILR2/CDH17 결합 분자에 사용될 수 있다.
실시예
10:
TRAILR2
및
CD44v6를
인식하는 이중 특이성 분자는 Colo-205 세포 생존성을 감소시키는데 상가적인 효과가 없다.
대체 앵커 표적이 CDH17 대신 사용될 수 있는지를 또한 조사하였다. 이에 따라, TRAILR2 및 CD44v6를 인식하는 이중 특이성 분자를 제조하였다.
실시예 6에서와 같이, 본 발명자들은 먼저 FACS에 의해 TRAILR2 및 CD44v6 단백질 표면 발현을 측정하였다. CD44v6 검출을 위해 BIWA1 항체 다음에 2차 항체인 염소 항-마우스 IgG PE (Dako, R0480)를 사용하였다. 대조군으로 마우스 IgG1 이소타입 대조군을 (AbDserotec, MCA928EL)을 사용하였다.
도 10A에 Colo-205 세포에서의 TRAILR2 및 CD44v6의 단백질 표면 발현이 나타나 있고, 두 단백질 모두 유의한 발현을 보인다.
이어 세포 생존성을 CellTiter-Glo 발광 세포 생존성 분석을 사용하여 측정하였다. Colo-205 세포를 TRAILR2/CD44v6 이중 특이성 결합 분자, 항-TRAILR2 항체 단독 또는 항-CD44v6 항체 단독과 배양하였다. 데이터가 도 10B에 제시되었다.
10-2 ng/ml 내지 10 mg/ml nM 농도 범위에 걸친 항-CD44v6 항체의 배양은 Colo-205 세포의 생존성에 영향을 미치지 않았다. 항 TRAILR2 항체 (서열 번호 96의 VH 및 서열 번호 97의 VL을 포함하는 TR2v1)와의 배양은 0.1 ㎍/ml 내지 10 ㎍/ml로 사용된 경우 세포 생존성을 유의하게 감소시킬 수 있었고, Colo-205 세포를 인간 TRAILR2 및 인간 CD44v6을 인식하는 동등한 양의 이중 특이성, 4가 분자와 배양하는 것은 항-TRAILR2 항체 단독으로 관찰된 효과와 차이가 없었다.
따라서, CD44v6는 Colo-205 세포에서 TRAILR2로 유도된 아폽토시스를 조절하기 위한 앵커 표적으로 사용될 수 없다.
실시예
11: CRC 이종이식 모델에서의 이중 특이성 분자의 생체 내 효능
TRAILR2 및 CDH17을 인식하는 결합 분자의 시험관 내 효능을 또한 조사하였다. 이를 위해, TRAILR2 및 CDH17 모두를 발현하는 Colo205 (KRAS 야생형) 및 Gp2d (KRAS p.G12D)의 인간 CRC 암세포주를 면역결핍 마우스에 주입하고, 종양 용적에 대한 본 발명의 분자의 투여 효과를 측정하였다.
암컷 BomTac:NMRI-Foxn1nu-동형접합 마우스에 5.0×106 Colo205 세포 (0.1 mL PBS + 5% FCS) 또는 5.0×106 Gp2d 세포 (세포:Matrigel 비 1:1 (v/v)로 0.1 mL)를 피하로 주입하고, 종양의 성장을 180-200 mm3에 이를 때까지 관찰하였다. 마우스를 두 군으로 무작위로 나누고, 비히클 대조군 또는 본 발명의 결합 분자 - Colo205에 대해 5 mg/Kg 및 Gp2d에 대해 1.67 mg/Kg [서열 번호 212의 중쇄 서열 및 서열 번호 218의 경쇄 서열을 포함하는 CDH17H2/TR2v2-(Ig G1 KO)]; Colo205 및 Gp2d에 대해 5 mg/Kg [서열 번호 271의 중쇄 서열 및 서열 번호 218의 경쇄 서열을 포함하는 CDH17H2/TR2v2-(Ig G1 FcRnmut)]를 단일 주사로 투여하였다.
도 12에 제시된 데이터는 본 발명의 결합 분자가 대조군과 비교하여 종양 용적의 유의적이고 연장된 감소를 유도할 수 있음을 입증한다.
실시예
12: 새로 생성된
CDH17
항체를 이용한
CDH17
표면 발현의 검출
도 13에 새로 생성된 항-CDH17H2 항체 (서열 번호 116의 VH 및 서열 번호 117의 VL 및 서열 번호 121의 IgG1 서열 포함)에서 CDH17 단백질 표면 발현이 검출 가능한 것으로 나타나 있다. FACS 분석을 실시예 6에 기재된 바와 같이 수행하였다. 새로 생성된 항-CDH17H2 항체를 검출용 일차 항체로 사용하고, 2차 항체 토끼 항-마우스 IgG PE (Dako, R0439)를 사용하였다. 대조군으로서 인간 IgG1 이소타입 대조 APC (Biolegend, 409306)를 사용하였다.
실시예
13: i.v. 투여용 약학 조성물
상기 임의의 본 발명의 결합 분자를 i.v. 적용을 위한 약학 제형의 제조용으로 선택할 수 있다. 본 발명의 항체를 위한 적합한 약학 제형의 예는 다음과 같다.
10 mL 바이알에 10 mM 시트레이트, pH 5.5, 207 mM 수크로오스, 25 mM 라이신 HCl 및 0.02% 폴리소르베이트 20으로 이루어진 완충액 및 주사용수 (WFI) 중 10 mg/mL의 본 발명의 결합 분자가 함유된다.
실시예
14: ProtA 친화성 크로마토그래피 및 분석 크기 배제 크로마토그래피 (aSEC)에 의한 단량체 함량의 측정
본원에 기술된 다양한 결합 분자의 샘플을 MabSelect SuRe 수지 (GE Healthcare)를 사용하여 재조합 단백질-A 친화성 크로마토그래피에 의해 수확한 세포 배양액으로부터 포획하였다. 샘플을 30 mM 아세트산나트륨, pH 3.5를 사용하여 등용매 모드로 용출시키고, 용출된 샘플을 3M 아세트산나트륨, pH 9.0의 1% 용액을 사용하여 pH 5.0으로 중화시켰다.
aSEC를 Waters UHPLC 시스템에서 Waters BEH200 컬럼으로 수행하였다. 이동상 완충액은 50 mM 인산나트륨 pH 6.8, 200 mM 아르기닌, 0.05% 나트륨 아지드로 이루어졌다. 각 실행에 대해, 5-10 μg의 샘플을 0.5 ml/min의 유속으로 주입하였다. 단량체 함량의 백분율을 측정하고 다양한 결합 분자에 대한 결과를 표 4에 나타내었다.
| 결합 분자 | protA 후 단량체% |
| CDH17H2/TRv2(서열 번호 212/218) | 98% |
| CDH17H2/TRv3(서열 번호 213/218) | 99% |
| CDH17H2/TRv4(서열 번호 214/218) | 96% |
| CDH17H2/TRv5(서열 번호 215/218) | 96% |
| CDH17H2/TRv6(서열 번호 216/218) | 97.7% |
| CDH17H2/TRv7(서열 번호 217/218) | 98.3% |
SEQUENCE LISTING
<110> BOEHRINGER INGELHEIM INTERNATIONAL GMBH
<120> Binding molecules for the treatment of cancer
<130> 12-0415-WO-1
<160> 272
<170> BiSSAP 1.3.6
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g 61
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 253
ctatgcgcct tgccagcccg ctcagctcgc gtgtcctgct cactggatgg tgggaagatg 60
g 61
<210> 254
<211> 57
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 254
cgtatcgcct ccctcgcgcc atcagacgag tgcgtctaat acgactcact atagggc 57
<210> 255
<211> 57
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 255
cgtatcgcct ccctcgcgcc atcagacgct cgacactaat acgactcact atagggc 57
<210> 256
<211> 57
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 256
cgtatcgcct ccctcgcgcc atcagagacg cactcctaat acgactcact atagggc 57
<210> 257
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 257
cgtatcgcct ccctcgcgcc atcagagcac tgtagctaat acgactcact atagggc 57
<210> 258
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<220>
<223> Primer
<400> 258
cgtatcgcct ccctcgcgcc atcagatcag acacgctaat acgactcact atagggc 57
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<220>
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cgtatcgcct ccctcgcgcc atcagatatc gcgagctaat acgactcact atagggc 57
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<220>
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cgtatcgcct ccctcgcgcc atcagctcgc gtgtcctaat acgactcact atagggc 57
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ctatgcgcct tgccagcccg ctcagacgag tgcgtggggc cagtggatag acagatgggg 60
g 61
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ctatgcgcct tgccagcccg ctcagacgct cgacaggggc cagtggatag acagatgggg 60
g 61
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g 61
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g 61
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g 61
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g 61
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ctatgcgcct tgccagcccg ctcagcgtgt ctctaggggc cagtggatag acagatgggg 60
g 61
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ctatgcgcct tgccagcccg ctcagctcgc gtgtcggggc cagtggatag acagatgggg 60
g 61
<210> 270
<211> 329
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 270
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
Ala Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
325
<210> 271
<211> 707
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Primer
<400> 271
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp His
20 25 30
Thr Ile His Trp Met Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Arg Asp Val Ile Thr Gln Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Leu Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gly Tyr Phe Tyr Gly Ser Arg Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala
225 230 235 240
Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu Ala Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Ser Ser Glu Leu Thr Gln
450 455 460
Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg Ile Thr Cys
465 470 475 480
Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys
485 490 495
Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly Lys Asn Asn Arg Pro
500 505 510
Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ala
515 520 525
Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
530 535 540
Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Val Val Phe Gly Gly Gly
545 550 555 560
Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
565 570 575
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Gln
580 585 590
Ser Gly Gly Gly Val Glu Arg Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
595 600 605
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg
610 615 620
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Asn Trp Asn
625 630 635 640
Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Val Thr Ile
645 650 655
Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
660 665 670
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Ile Leu Gly Ala
675 680 685
Gly Arg Gly Trp Tyr Phe Asp Leu Trp Gly Lys Gly Thr Thr Val Thr
690 695 700
Val Ser Ser
705
<210> 272
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDR
<400> 272
Gly Tyr Ser Tyr Arg Asn Tyr Ala Tyr Tyr Tyr Asp Tyr
1 5 10
Claims (29)
- TNF-관련 아폽토시스 유도 리간드 수용체 2(TRAILR2)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위 및 카드헤린-17(CDH17)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위를 포함하는 결합 분자로서,
이중 특이성이고 4가이며,
상기 카드헤린-17(CDH17)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위는 면역글로불린(Ig) 분자이고, 상기 TNF-관련 아폽토시스 유도 리간드 수용체 2(TRAILR2)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위는 하나 이상의 scFv(들)을 포함하며,
상기 TRAILR2에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위가, 서열 번호 43(CDR1), 서열 번호 44(CDR2) 및 서열 번호 48(CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR; 및 서열 번호 49(CDR1), 서열 번호 50(CDR2) 및 서열 번호 54(CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR;을 포함하는 항원 결합 부위를 포함하고,
상기 CDH17에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위가, 서열 번호 70(CDR1), 서열 번호 71(CDR2) 및 서열 번호 72(CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR; 및 서열 번호 73(CDR1), 서열 번호 74(CDR2) 및 서열 번호 75(CDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR;을 포함하는 항원 결합 부위를 포함하는,
결합 분자. - 제1항에 있어서, 하나 이상의 scFv(들)이 N-에서 C-말단으로 VL-VH 배향을 가지는, 결합 분자.
- 제1항에 있어서, 하나 이상의 scFv(들)이 Ig 분자의 중쇄의 C-말단에 융합되는, 결합 분자.
- 제1항에 있어서, Ig 분자가 IgG인, 결합 분자.
- 제1항에 있어서, 하나 이상의 scFv(들)이 펩티드 링커에 의해 Ig 분자에 융합되는, 결합 분자.
- 제5항에 있어서, 펩티드 링커가 4 내지 20개의 아미노산 길이를 갖는, 결합 분자.
- 제1항에 있어서, TRAILR2에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위가 하기 viii) 또는 ix)인, 결합 분자:
viii) 서열 번호 96의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위; 또는
ix) 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위. - 제1항에 있어서, CDH17에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위가 하기 iii) 또는 iv)인, 결합 분자:
iii) 서열 번호 114의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 115의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위; 또는
iv) 서열 번호 116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열 번호 117의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 항원 결합 부위. - TNF-관련 아폽토시스 유도 리간드 수용체 2(TRAILR2)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위 및 카드헤린-17(CDH17)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위를 포함하는 결합 분자로서,
(i) 서열 번호 196의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 197의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (ii) 서열 번호 203의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;를 포함하는, 결합 분자. - TTNF-관련 아폽토시스 유도 리간드 수용체 2(TRAILR2)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위 및 카드헤린-17(CDH17)에 특이적으로 결합하는 적어도 하나의 항원 결합 부위를 포함하는 결합 분자로서,
(i) 서열 번호 211의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 또는 서열 번호 212의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 (ii) 서열 번호 218의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄;를 포함하는, 결합 분자. - 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 결합 분자를 코딩하는, 단리된 핵산 분자.
- 제11항의 단리된 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터.
- 제12항의 발현 벡터로 형질감염된 숙주 세포.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 결합 분자를 제조하는 방법으로서,
(a) 상기 결합 분자를 코딩하는 단리된 핵산 분자를 포함하는 발현 벡터로 형질감염된 숙주 세포를, 상기 결합 분자의 발현을 허용하는 조건 하에서 배양하는 단계;
(b) 상기 결합 분자를 회수하는 단계; 및 임의로
(c) 상기 결합 분자를 추가로 정제 및/또는 변형 및/또는 제형화하는 단계;를 포함하는, 방법. - 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 의약품에 사용하기 위한 것인 결합 분자.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 결합 분자 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는, 암 치료용 약학 조성물.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 결합 분자의 치료적 유효량을 포함하는, 암 치료용 약제.
- 암 치료용 약학 조성물을 제조하기 위하여 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 결합 분자를 사용하는 방법.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 암의 치료 방법에 사용하기 위한 것인 결합 분자.
- 제16항에 있어서, 암이 결장직장암(CRC), 위암(GC), 췌장암(PAC), 식도암 또는 신경내분비 종양인 약학 조성물.
- 제17항에 있어서, 암이 결장직장암(CRC), 위암(GC), 췌장암(PAC), 식도암 또는 신경내분비 종양인 약제.
- 제18항에 있어서, 암이 결장직장암(CRC), 위암(GC), 췌장암(PAC), 식도암 또는 신경내분비 종양인 방법.
- 제19항에 있어서, 암이 결장직장암(CRC), 위암(GC), 췌장암(PAC), 식도암 또는 신경내분비 종양인 결합 분자.
- 삭제
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- 삭제
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