BR112020018927A2

BR112020018927A2 - Anticorpos contra proteína alfa reguladora de sinal e métodos de uso

Info

Publication number: BR112020018927A2
Application number: BR112020018927-8A
Authority: BR
Inventors: Jaume Pons; Bang Janet Sim; Hong Wan; Tracy Chia-Chien Kuo
Original assignee: ALX Oncology Inc.
Priority date: 2018-03-21
Filing date: 2019-03-20
Publication date: 2021-01-05
Also published as: CN112040979A; EP4144372A3; CL2020002414A1; MA52091A; PH12020551391A1; EP4144372A2; EP3768314A1; RU2020134294A; JOP20200206A1; US11292850B2; PE20201265A1; JP7393342B2; KR20200133376A; JP2021518142A; IL277337A; WO2019183266A1; MX2020009774A; RU2020134294A3; US20190352419A1; AU2019240111A1

Abstract

a presente invenção refere-se, entre outros, anticorpos humanizados isolados que se ligam a um domínio extracelular de um polipeptídeo sirp-a humano. também são fornecidos polinucleotídeos, vetores, células hospedeiras e métodos de produção e uso relacionados aos mesmos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “ANTICORPOS CONTRA PROTEÍNA ALFA REGULADORA DE SINAL E MÉTODOS DE USO”.

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

[001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade do Pedido Provisório nº de série U.S. 62/646.210 depositado em 21 de março de 2018, que está expressamente incorporado a título de referência em sua totalidade.

APRESENTAÇÃO DE LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS EM ARQUIVO DE TEXTO ASCII

[002] O conteúdo da seguinte apresentação em arquivo de texto ASCII é incorporado no presente documento a título de referência em sua totalidade: 757972000640SEQLIST.txt, data de gravação: 19 de março de 2019, tamanho: 230 KB).

CAMPO

[003] A presente descrição se refere aos anticorpos humanizados isolados que se ligam a um domínio extracelular (por exemplo, o domínio D1) de um polipeptídeo SIRP-α humano, assim como polinucleotídeos, vetores, células hospedeiras e métodos relacionados aos mesmos.

FUNDAMENTOS

[004] Proteína alfa reguladora de sinal (SIRP-α) é parte de uma família de receptores de superfície celular que têm papeis importantes na regulação do sistema imunológico (consultar, por exemplo, Barclay, A.N. e Brown, M.H. (2006) Nat. Rev. Immunol. 6:457-464). SIRP-α é expressa na superfície de várias células, que incluem leucócitos, tais como células dendríticas, eosinófilos, neutrófilos e macrófagos. SIRP-α inclui um domínio extracelular que interage com estímulos externos, tais como ligantes e um domínio intracelular que media uma variedade de sinais intracelulares.

[005] Um dos principais papéis de SIRP-α é sua regulação da resposta imunológica através das interações com CD47. CD47 é expressa na superfície de uma variedade de tipos celulares. Quando o domínio de IgSF de CD47 se liga ao domínio extracelular (por exemplo, o domínio D1) de SIRP-α expressa numa célula imune (por exemplo, um macrófago), isto transduz um sinal mediado por SIRP-α na célula imune que evita fagocitose da célula de expressão de CD47. Assim, CD47 serve para transportar o que se chama de um sinal de “não me coma” para o sistema imunológico que evita a fagocitose de células saudáveis (consultar, por exemplo, WO2015/138600 e Weiskopf, K. et al. (2013) Science 341:88-91). No entanto, CD47 também demonstrou ser altamente expresso por uma variedade de cânceres, e acredita-se que sua interação com SIRP-α neste contexto permita que tumores imitem o sinal saudável de “não me coma”, de modo a evadir vigilância imunológica e fagocitose por macrófagos (consultar, por exemplo, Majeti, R. et al. (2009) Cell 138:286-99; Zhao, X.W. et al. (2011) Proc. Natl. Acad. Sci. 108:18342-18347). Desta forma, anticorpos que bloqueiam esta interação são altamente desejáveis.

[006] Sabe-se que SIRP-α é uma proteína altamente polimórfica em seres humanos, macacos e camundongos. Por exemplo, diferenças polimórficas foram identificadas entre proteínas SIRP-α nas cepas de camundongo NOD e C57BL/6, e estes polimorfismos resultam em consequências funcionais relacionadas à ligação e enxerto de CD47 de células tronco hematopoiéticas humanas nestas cepas de camundongo. Em seres humanos, dois alelos predominantes do gene de SIRPA foram relatados (Treffers, LW. et al. (2018), Eur. J. Immunol. 48:344-354; Zhao, X. et al. (2011), PNAS. 108:18342-18347; van der Heijden, J. (2014). Genetic variation in human Fc gamma receptors: Functional consequences of polymorphisms and copy number variation (Dissertação de Doutorado)).

[007] Devido à importância da interação de SIRP-α-CD47 em função imunológica normal e tumorigênese, a identificação de anticorpos que se ligam à SIRP-α humana é de enorme interesse para o desenvolvimento de candidatos clínicos.

[008] Todas as referências citadas no presente documento, que incluem pedidos de Patente, publicações de Patente, literatura de não Patente e números de acesso UniProtKB/Swiss-Prot são incorporadas no presente documento a título de referência em sua totalidade, como se cada referência individual estivesse indicada de maneira especifica e individual como incorporada a título de referência.

SUMÁRIO

[009] Para cumprir estas e outras necessidades, são fornecidos no presente documento, entre outros, anticorpos isolados que se ligam a um domínio extracelular de um polipeptídeo SIRP-α humano. Vantajosamente, estes anticorpos têm uma ou mais dentre diversas propriedades in vitro e/ou in vivo úteis, tais como ligação a múltiplos polipeptídeos SIRP-α com alta afinidade, reatividade cruzada contra múltiplos polipeptídeos SIRP-α de mamíferos (por exemplo, v1 humano, v2 humano, cinomólogos e/ou múltiplas proteínas SIRP-α murinas), a habilidade em aprimorar fagocitose de macrófago, a habilidade em aprimorar ativação de célula dendrítica e/ou a habilidade em inibir crescimento in vivo de um tumor que expressa CD47. Além disto, a presente descrição fornece aos anticorpos cadeias leves variantes que foram modificadas geneticamente para remover potenciais deficiências, tais como resíduos que podem ser modificados por desaminação ou glicação, que resulta em anticorpos com características mais desejáveis para fabricação, armazenamento, e/ou desenvolvimento de fármaco.

[010] Em determinados aspectos, a presente descrição fornece anticorpos (por exemplo, anticorpos isolados) que se ligam a um domínio extracelular de um polipeptídeo SIRP-α humano, em que os anticorpos compreendem: uma cadeia pesada que compreende um domínio variável de cadeia pesada (VH) que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:26; e uma cadeia leve que compreende um domínio variável de cadeia leve (VL) que compreende uma sequência de aminoácidos de acordo com a Fórmula

SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPVTLI

YSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSS YTNPFGX1GTX2X3TVL (SEQ ID NO:71), em que X1 é G ou T; X2 é K, Q ou R; e X3 é L ou V, e em que o domínio de VL não compreende a sequência da SEQ ID NO:25.

[011] Em algumas modalidades, o domínio de VL compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:39 a 41. Em algumas modalidades, a cadeia leve compreende adicionalmente uma sequência de domínio constante de cadeia leve (CL) que compreende uma sequência de aminoácidos de acordo com a Fórmula

GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGS PVKAGVETTKPSKQSX4X5KYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS (SEQ ID NO:72), em que X4X5 é ND, DN, DS ou SD. Em algumas modalidades, a cadeia leve compreende ainda uma sequência de domínio constante de cadeia leve (CL) que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:43 a 46. Em algumas modalidades, a cadeia leve compreende adicionalmente um domínio constante de cadeia leve (CL) kappa. Em algumas modalidades, a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:36. Em algumas modalidades, a cadeia leve compreende adicionalmente um domínio constante de cadeia leve (CL) lambda. Em algumas modalidades, a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:37 ou SEQ ID NO:38. Em algumas modalidades, a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:48 a 57.

[012] Em algumas modalidades, o anticorpo é um scFv-Fc, anticorpo de domínio único, anticorpo de cadeia pesada única ou anticorpo de cadeia leve única. Em algumas modalidades, o anticorpo é um anticorpo monoclonal. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio constante de cadeia pesada que compreende uma região Fc. Em algumas modalidades, a região Fc é uma região Fc humana selecionada a partir do grupo que consiste numa região Fc de IgG1, uma região Fc de IgG2 e uma região Fc de IgG4. Em algumas modalidades, a região Fc é uma região Fc de IgG1 humana. Em algumas modalidades, a região Fc é uma região Fc de IgG1 humana que compreende substituições L234A, L235A e G237A, numeração de posição de aminoácido de acordo com EU. Em algumas modalidades, a região Fc é uma região Fc de IgG2 humana. Em algumas modalidades, a região Fc é uma região Fc de IgG2 humana que compreende substituições A330S e P331S, numeração de posição de aminoácido de acordo com EU. Em algumas modalidades, a região Fc compreende adicionalmente uma substituição N297A, numeração de posição de aminoácido de acordo com EU. Em algumas modalidades, a região Fc é uma região Fc de IgG2 humana que compreende uma substituição N297A, numeração de posição de aminoácido de acordo com EU. Em algumas modalidades, a região Fc é uma região Fc de IgG4 humana, e em que a cadeia pesada compreende uma substituição S228P, numeração de posição de aminoácido de acordo com EU. Em algumas modalidades, a cadeia pesada compreende um domínio constante de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:31 a 35. Em algumas modalidades, a cadeia pesada compreende um domínio constante de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:33, 34 e

137. Em algumas modalidades, a cadeia pesada compreende um domínio constante de cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:132 a 139.

[013] Em algumas modalidades, a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:58 a 62. Em algumas modalidades, a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:60, 61 e 129. Em algumas modalidades, a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:124 a 131.

[014] Em determinados aspectos, a presente descrição fornece anticorpos (por exemplo, anticorpos isolados) que se ligam a um domínio extracelular de um polipeptídeo SIRP-α humano, em que: a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:53; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:54; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:56; ou a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:57.

[015] Em determinados aspectos, a presente descrição fornece anticorpos (por exemplo, anticorpos isolados) que se ligam um domínio extracelular de um polipeptídeo SIRP-α humano, em que: a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:58, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:59, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:60, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:61, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:58, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:53; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:59, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:53; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:60, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:53; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:61, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:53; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:58, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:54; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:59, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:54; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:60, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:54; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:61, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:54; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:58, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:59, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:60, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:61, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:58, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:56; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:59, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:56; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:60, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:56; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:61, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:56; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:58, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:57; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:59, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:57; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:60, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:57; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:61, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:57; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:60, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:61, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:129, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55; a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:124, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52; ou a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:124, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55.

[016] Em algumas modalidades, o anticorpo aprimora fagocitose por um macrófago que expressa um polipeptídeo SIRP-α humano. Em algumas modalidades, o anticorpo aprimora ativação de uma célula dendrítica que expressa um polipeptídeo SIRP-α humano. Em algumas modalidades, o anticorpo inibe crescimento in vivo de um tumor que expressa CD47.

[017] Em algumas modalidades de qualquer uma das modalidades acima, o anticorpo é conjugado a um agente, por exemplo, um agente citotóxico, rótulo, ou porção química que modula o sistema imunológico.

[018] Em algumas modalidades de qualquer uma das modalidades acima, o anticorpo é um anticorpo biespecífico. Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um primeiro domínio de ligação ao antígeno que se liga a um domínio extracelular de um polipeptídeo SIRP-α humano e um segundo domínio de ligação ao antígeno que se liga a um antígeno expresso por uma célula cancerosa. Em algumas modalidades, o antígeno expresso pela célula cancerosa é selecionado a partir do grupo que consiste em CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD52, CD56, CD70, CD74, CD79b, CD123 , CD138,

CS1/SLAMF7, Trop-2, 5T4, EphA4, BCMA, Mucina 1, Mucina 16, PD- L1, PTK7, STEAP1, Receptor de Endotelina B, mesotelina, EGFRvIII, ENPP3, SLC44A4, GNMB, nectina 4, NaPi2b, LIV-1A, Guanilil ciclase C , DLL3, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR, integrina αVβ3, integrina α5β1, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, Tenascina, Ley, EpCAM, CEA, gpA33, PSMA, TAG72, uma mucina, CAIX, EPHA3 , receptor de folato α, GD2, GD3 e um complexo de MHC/peptídeo que compreende um peptídeo de NY-ESO-1/LAGE, SSX-2, uma proteína da família MAGE, MAGE-A3,gp100/pmel17,Melan-A/MART- 1,gp75/TRP1,tirosinase,TRP2, CEA, PSA, TAG-72, receptor de laminina imaturo, MOK/RAGE-1, WT-1, SAP-1, BING-4, EpCAM, MUC1, PRAME, survivina, BRCA1, BRCA2, CDK4, CML66, MART-2, p53, Ras, β-catenina, TGF-βRII, HPV E6 ou HPV E7 . Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um primeiro domínio de ligação ao antígeno que se liga a um domínio extracelular de um polipeptídeo SIRP-α humano e um segundo domínio de ligação ao antígeno que se liga a um antígeno expresso por uma célula imune.

Em algumas modalidades, o antígeno expresso pela célula imune é selecionado a partir do grupo que consiste em BDCA2, BDCA4, ILT7, LILRB1, LILRB2, LILRB3, LILRB4, LILRB5, Siglec-3, Siglec-7 , Siglec-9, Siglec-15, FGL- 1, CD200, CD200R, CSF-1R, CD40, CD40L, CD163, CD206, DEC205, CD47, CD123, arginase, IDO, TDO, AhR, EP2, COX-2, CCR2 , CCR-7, CXCR1, CX3CR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR7, TGF-β RI, TGF- β RII, c-Kit, CD244, L-selectina/CD62L, CD11b, CD11c, CD68, 41BB, CTLA4, PD1, PD-L1, PD-L2, TIM-3, BTLA, VISTA, LAG-3, CD28, OX40, GITR, CD137, CD27, HVEM, CCR4, CD25, CD103, KIrg1, Nrp1, CD278, Gpr83, TIGIT, CD154, CD160, TNFR2, PVRIG, DNAM e ICOS.

Em algumas modalidades, o anticorpo compreende um primeiro domínio de ligação ao antígeno que se liga a um domínio extracelular de um polipeptídeo SIRP-α humano e um segundo domínio de ligação ao antígeno que se liga a um antígeno expresso por uma célula exterminadora natural. Em algumas modalidades, o antígeno expresso pela célula NK é selecionado a partir do grupo que consiste em NKR- P1A, CD94, KLRG1, KIR2DL5A, KIR2DL5B, KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3, KIR2DS2, KIR2DS3, KIR2DS4, KIR2DS5, KIR3DS1, KIR2DS1, CD94, NKG2D, CD160, CD16, NKp46, NKp30, NKp44, DNAM1, CRTAM, CD27, NTB-A, PSGL1, CD96, CD100, NKp80, SLAMF7 e CD244.

[019] Em determinados aspectos, a presente descrição fornece um polinucleotídeo que codifica o anticorpo de acordo com qualquer uma das modalidades acima. Em determinados aspectos, a presente descrição fornece um vetor que compreende o polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades acima. Em determinados aspectos, a presente descrição fornece uma célula hospedeira que compreende o polinucleotídeo ou vetor de acordo com qualquer uma das modalidades acima. Em determinados aspectos, a presente descrição fornece um método para produzir um anticorpo, sendo que o método compreende cultivar a célula hospedeira de acordo com qualquer uma das modalidades acima, de modo que o anticorpo seja produzido. Em algumas modalidades, o método compreende adicionalmente recuperar o anticorpo da célula hospedeira.

[020] Em determinados aspectos, a presente descrição fornece um método para tratar ou atrasar progressão de câncer num indivíduo, sendo que o método compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do anticorpo de acordo com qualquer uma das modalidades acima. Em algumas modalidades, o método compreende adicionalmente administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um segundo anticorpo que se liga a um antígeno expresso pelo câncer. Em algumas modalidades, o antígeno expresso pelo câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em CD19, CD20, CD22, CD30, CD33,

CD38, CD52, CD56, CD70, CD74, CD79b, CD123 , CD138, CS1/SLAMF7, Trop-2, 5T4, EphA4, BCMA, Mucina 1, Mucina 16, PTK7, STEAP1, Receptor de Endotelina B, mesotelina, EGFRvIII, ENPP3, SLC44A4, GNMB, nectina 4, NaPi2b, LIV-1A, Guanilil ciclase C , DLL3, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR, integrina αVβ3, integrina α5β1, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, Tenascina, Ley, EpCAM, CEA, gpA33, PSMA, TAG72, uma mucina, CAIX, EPHA3 , receptor de folato α, GD2, GD3 e um complexo de MHC/peptídeo que compreende um peptídeo de NY-ESO-1/LAGE, SSX-2, uma proteína da família MAGE, MAGE-A3, gp100/pmel17, Melan-A/MART-1, gp75/TRP1, tirosinase, TRP2, CEA, PSA, TAG-72, receptor de laminina imaturo, MOK/RAGE-1, WT-1, SAP-1, BING-4, EpCAM, MUC1, PRAME, survivina, BRCA1, BRCA2, CDK4, CML66, MART-2, p53, Ras, β- catenina, TGF-βRII, HPV E6 ou HPV E7 . Em algumas modalidades, o método compreende adicionalmente administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um agente imunoterapêutico.

Em algumas modalidades, o agente imunoterapêutico compreende um segundo anticorpo.

Em algumas modalidades, o segundo anticorpo se liga a um antígeno selecionado a partir do grupo que consiste em BDCA2, BDCA4, ILT7, LILRB1, LILRB2, LILRB3, LILRB4, LILRB5, Siglec-3, Siglec-7, Siglec-9, Siglec-15, FGL-1, CD200, CD200R, CSF-1R, CD40, CD40L, CD163, CD206, DEC205, CD47, CD123, arginase, IDO, TDO, AhR, EP2, COX-2, CCR2, CCR-7, CXCR1, CX3CR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR7, TGF-β RI, TGF-β RII, c-Kit, CD244, L- selectina/CD62L, CD11b, CD11c, CD68, 41BB, CTLA4, PD1, PD-L1, PD-L2, TIM-3, BTLA, VISTA, LAG-3, CD28, OX40, GITR, CD137, CD27, HVEM, CCR4, CD25, CD103, KIrg1, Nrp1, CD278, Gpr83, TIGIT, CD154, CD160, TNFR2, PVRIG, DNAM, e ICOS.

Em algumas modalidades, o segundo anticorpo se liga à PD-1. Em algumas modalidades, o segundo anticorpo se liga à PD-L1. Em algumas modalidades, o agente imunoterapêutico compreende uma vacina, vírus oncolítico, terapia de célula adotiva, citocina ou molécula pequena. Em algumas modalidades, o método compreende adicionalmente administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um segundo anticorpo que se liga a um antígeno expresso por uma célula exterminadora natural (NK). Em algumas modalidades, o antígeno expresso pela célula NK é selecionado a partir do grupo que consiste em NKR-P1A, CD94, KLRG1, KIR2DL5A, KIR2DL5B, KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3, KIR2DS2, KIR2DS3, KIR2DS4, KIR2DS5, KIR3DS1, KIR2DS1, CD94, NKG2D, CD160, CD16, NKp46, NKp30, NKp44, DNAM1, CRTAM, CD27, NTB-A, PSGL1, CD96, CD100, NKp80, SLAMF7 e CD244. Em algumas modalidades, o método compreende adicionalmente administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um agente quimioterapêutico ou agente anticâncer de molécula pequena. Em algumas modalidades, o método compreende adicionalmente administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um inibidor de molécula pequena alvejado. Em algumas modalidades, o inibidor de molécula pequena alvejado é um inibidor de VEGFR e/ou PDGFR, inibidor de EGFR, inibidor de ALK, inibidor de CDK4/6, inibidor de PARP, inibidor de mTOR, inibidor de KRAS, inibidor de TRK, inibidor de BCL2, inibidor de IDH, inibidor de PI3K, inibidor de resposta a dano de DNA (DDR) ou agente de hipometilação.

[021] Em determinados aspectos, a presente descrição fornece um método para tratar ou atrasar progressão de uma doença autoimune ou uma doença inflamatória num indivíduo, sendo que o método compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do anticorpo de acordo com qualquer uma das modalidades acima. Em algumas modalidades, a doença autoimune ou doença inflamatória é selecionada a partir do grupo que consiste em esclerose múltipla, artrite reumatoide, espondiloartropatia, lúpus eritematoso sistêmico, uma doença inflamatória ou autoimune mediada por anticorpos, doença do enxerto contra hospedeiro, sepse, diabetes, psoríase, artrite psoriática, aterosclerose, síndrome de Sjögren, esclerose sistêmica progressiva, esclerodermia, síndrome coronariana aguda, reperfusão isquêmica, doença de Crohn, colite ulcerativa, endometriose, glomerulonefrite, nefropatia por IgA, doença renal policística, miastenia grave, fibrose pulmonar idiopática, doença fibrótica (por exemplo, fibrose pulmonar, cirrose hepática, fibrose atrial, fibrose endomiocárdica, mielofibrose ou fibrose retroperitoneal), asma, dermatite atópica, síndrome do desconforto respiratório agudo (SDRA), vasculite e miosite inflamatória autoimune.

[022] Se deve entender que uma, algumas ou todas as propriedades das várias modalidades descritas no presente documento podem ser combinadas para formar outras modalidades da presente invenção. Estes e outros aspectos da invenção se tornarão aparentes a uma pessoa versada na técnica. Estas e outras modalidades da invenção são adicionalmente descritas pela descrição detalhada a seguir.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[023] A Figura 1 mostra os resultados de um modelo de carcinoma de cólon de camundongo singênico in vivo para avaliar atividade de agente único. Células MC38 foram implantadas por via subcutânea em camundongos C57BL/6 e aleatorizadas em grupos (8 camundongos/grupo). Camundongos foram tratados com veículo (PBS), anticorpo anti-SIRP-α de bloqueio de CD47 AB27b, anticorpo anti-SIRP-α de bloqueio de CD47 AB25b ou anticorpo anti-SIRP-α de bloqueio de CD47 AB25c. Tratamento foi iniciado quando os tumores foram uma média de 60 mm3, dia 7 após implante. Camundongos foram dosados por via intraperitoneal (IP) a 10 mg/kg duas vezes por semana por três semanas com anticorpos anti-SIRP. Animais foram sacrificados quando os tumores alcançaram um volume de ~2000 mm3.

[024] A Figura 2 compara rendimento de expressão e afinidade de ligação de anticorpos que têm a cadeia pesada humana de AB21 e as cadeias leves humanizadas indicadas. Os anticorpos foram produzidos através de expressão em células 293-FS FreeStyle™ (Thermo Fisher).

[025] As Figuras 3A e 3B mostram os resultados de ensaios de fagocitose in vitro com o uso de células EGFR(+) DLD-1 como o alvo e macrófagos M2 como a célula de fagocitose. Anticorpos anti-SIRP-α foram testados nas concentrações indicadas em combinação com o anticorpo anti-EGFR cetuximabe. Fagocitose foi medida em porcentagem de células CFSE+.

[026] As Figuras 4A e 4B mostram os resultados de ensaios de ativação de célula dendrítica in vivo com os anticorpos anti-SIRP-α indicados. Camundongos foram injetados por via intravenosa com o anticorpo indicado a 10 mg/kg, e baços foram coletados cinco horas após injeção. Marcadores de ativação CD86, MHCII e CCR7 em células dendríticas CD4+ foram medidos através de citometria de fluxo.

[027] A Figura 5 mostra os resultados de um modelo de carcinoma de cólon de camundongo singênico in vivo para avaliar atividade de tratamento anti-SIRP-α combinante com inibição de trajetória de PD- L1/PD-1. Células CT26 foram implantadas por via subcutânea em camundongos BALBc e aleatorizadas em grupos (8 camundongos/grupo). Camundongos foram tratados com veículo (PBS), anticorpo anti-PD-L1, anticorpo anti-SIRP-α de bloqueio de CD47 AB25b ou AB25b e PD-L1. Tratamento foi iniciado quando os tumores foram uma média de 60 mm3, dia 7 após implante. Camundongos foram dosados por via intraperitoneal (IP) a 10 mg/kg duas vezes por semana por três semanas e sacrificados quando os tumores alcançaram um volume de ~2000 mm3.

[028] A Figura 6 mostra os resultados de um modelo de carcinoma de cólon de camundongo singênico in vivo para avaliar atividade de tratamento anti-SIRP-α combinante com inibição de trajetória de PD- L1/PD-1. Células MC38 foram implantadas por via subcutânea em camundongos C57BL/6 e aleatorizadas em grupos (8 camundongos/grupo). Camundongos foram tratados com veículo (PBS), anticorpo anti-PD-1, anticorpo anti-SIRP-α de bloqueio de CD47 AB25b ou AB25b e anti-PD-1. Tratamento foi iniciado quando os tumores foram uma média de 60 mm3, dia 7 após implante. Camundongos foram dosados por via intraperitoneal (IP) a 10 mg/kg duas vezes por semana por três semanas e sacrificados quando os tumores alcançaram um volume de ~2000 mm3.

[029] A Figura 7 mostra a cromatografia de íon extraído total, área sob a curva (XIC, AUC) da forma glicada (preto) contra não modificada (cinza) de peptídeos de anticorpo PC336, conforme analisado por espectrometria de massa. Sequências mostradas são as SEQ ID NOs:64 a 66 (esquerda para direita).

[030] A Figura 8 mostra a porcentagem de peptídeos modificados por desaminação nos resíduos indicados da cadeia leve e cadeia pesada de anticorpo anti-SIRP-α PC301, conforme analisado por espectrometria de massa. Numeração de aminoácido é com base na numeração sequencial de resíduos nas sequências de cadeia leve e pesada das SEQ ID NOs: 63 e 59, respectivamente (numeração de não Kabat).

[031] A Figura 9 mostra um fragmento da cadeia leve Hum1 com o resíduo K104 sujeito à glicação (SEQ ID NO:67; “Original”), juntamente com 3 variantes (SEQ ID NOs:68 a 70; versões 1 a 3, respectivamente) modificadas geneticamente para remover o sítio de glicação. Sítio de glicação está sublinhado.

[032] As Figuras 10 e 11 mostram um alinhamento da cadeia leve Hum1 original (com VL de Hum1 e domínio constante de IGCL1) com 6 variantes. Variantes incluem, cada uma, 1 das 3 variantes de sítio de glicação (v1, v2 e v3) e mutações DS ou SD para substituir o sítio de desaminação N171/N172. Mostradas de cima para baixo estão as SEQ ID NOs:47 e 52 a 57, respectivamente. Asteriscos indicam diferenças de sequência. CDRs são representadas em caixas (que representam SEQ ID NOs:22, 23 e 24, respectivamente). Delineações de CDR são de acordo com Kabat. Numeração de aminoácido é com base na numeração sequencial de resíduos.

[033] A Figura 12 mostra os resultados de ensaios de fagocitose in vitro com o uso de células EGFR(+) DLD-1 como o alvo e macrófagos M2 como a célula de fagocitose. Anticorpos anti-SIRP-α ou controle de isótopo com as regiões Fc indicadas foram testados em combinação com o anticorpo anti-EGFR cetuximabe. Fagocitose foi medida em porcentagem de células CFSE+.

[034] As Figuras 13A a 13E mostram os resultados de ensaios de redução que testam anticorpos anti-SIRP-α com as regiões Fc indicadas para a habilidade em reduzir vários tipos celulares das células mononucleares de sangue periférico (PBMCs). As Figuras 13A e 13B mostram a redução de células dendríticas lin-HLADR+ (DCs) e representam os resultados de experimentos realizados com o uso de PBMCs obtidas a partir de diferentes doadores. A Figura 13C mostra a falta de redução de células T CD3+ por anticorpos anti-SIRP-α e controles de isótopo. A Figura 13D mostra a falta de redução de monócitos de CD14+ por anticorpos anti-SIRP-α e controles de isótopo. A Figura 13E mostra a falta de redução de células B CD20+ por anticorpos anti-SIRP-α e controles de isótopo.

[035] As Figuras 14A e 14B mostram os resultados de ensaios de fagocitose in vitro com o uso de células EGFR(+) DLD-1 como o alvo e macrófagos M2 como a célula de fagocitose. Anticorpos anti-SIRP-α com as regiões Fc indicadas foram testados em combinação com o anticorpo anti-EGFR cetuximabe. Fagocitose foi medida em porcentagem de células CFSE+.

[036] As Figuras 15A e 15B mostram os resultados de ensaios de fagocitose in vitro com o uso de células EGFR(+) DLD-1 como o alvo e macrófagos M2 como a célula de fagocitose. Anticorpos anti-SIRP-α com os domínios constantes de cadeia leve indicados (lambda ou kappa) foram testados em combinação com o anticorpo anti-EGFR cetuximabe. Fagocitose foi medida em porcentagem de células CFSE+.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[037] A presente descrição descreve anticorpos que se ligam aos domínios extracelulares (por exemplo, os domínios D1) de um ou mais polipeptídeos SIRP-α humanos e têm uma variedade de perfis de ligação de SIRP-α de potencial interesse. Além disto, a presente descrição descreve anticorpos anti-SIRP-α com uma ou mais propriedades biológicas in vitro e/ou in vivo de interesse, tais como ligação aos múltiplos polipeptídeos SIRP-α com alta afinidade e a habilidade em aprimorar fagocitose de macrófago, aprimorar ativação de célula dendrítica e/ou inibir crescimento in vivo de um tumor que expressa CD47. Estes anticorpos têm uma cadeia leve derivada de galinha, que fornece oportunidades únicas para gerar anticorpos que reagem de maneira cruzada através de múltiplos polipeptídeos SIRP-α de mamíferos. De fato, estes anticorpos demonstraram reagir de maneira cruzada com v1 e v2 de SIRP-α humana, SIRP-α cinomóloga e SIRP-α murina de múltiplas cepas, o que as torna, então, altamente vantajosas tanto para teste pré-clínico quanto para aplicação clínica através de uma grande população humana. Importantemente, estes anticorpos também foram modificados geneticamente para remover potenciais deficiências, tais como resíduos que podem ser modificados por desaminação ou glicação, que resulta em anticorpos com características mais desejáveis para fabricação, armazenamento, e/ou desenvolvimento de fármaco.

[038] Em um aspecto, são fornecidos, no presente documento, anticorpos isolados que se ligam ao domínio extracelular (por exemplo, o domínio D1) de um polipeptídeo SIRP-α humano. São fornecidos, adicionalmente, no presente documento, polinucleotídeos e vetores que codificam os anticorpos da presente descrição, assim como métodos para produção de anticorpo relacionados aos mesmos.

[039] Em outro aspecto, são fornecidos, no presente documento, métodos para tratar ou atrasar progressão de câncer num indivíduo, que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um anticorpo da presente descrição.

[040] Em outro aspecto, são fornecidos, no presente documento, métodos para tratar ou atrasar progressão de uma doença autoimune ou inflamatória num indivíduo, que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um anticorpo da presente descrição.

DEFINIÇÕES

[041] Antes de descrever as modalidades divulgadas em detalhes, se deve entender que a presente descrição não se limita às composições ou sistemas biológicos particulares, que podem, obviamente, variar. Também deve ser entendido que a terminologia utilizada no presente documento é com o propósito de descrever apenas modalidades particulares, e não se destina a ser limitante.

[042] Conforme utilizado neste relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas singulares “um”, “uma”, “o” e “a” incluem referentes plurais a menos que o conteúdo dite claramente de outra forma. Assim, por exemplo, referência a “uma molécula” inclui, opcionalmente, uma combinação de duas ou mais das tais moléculas, e semelhantes.

[043] O termo “cerca de”, conforme usado no presente documento, se refere à faixa de erro normal para o respectivo valor prontamente conhecido pela pessoa versada no campo da técnica. A referência a "cerca de" num valor ou parâmetro no presente documento inclui (e descreve) modalidades que são dirigidas àquele valor ou parâmetro por si.

[044] Se entende que aspectos e modalidades da presente descrição incluem “que compreende”, “que consiste” e “que consiste essencialmente em” aspectos e modalidades.

[045] Um “polipeptídeo SIRP-α”, conforme usado no presente documento, pode se referir a qualquer polipeptídeo SIRP-α endógeno ou de ocorrência natural codificado por um genoma de quaisquer vertebrados, que incluem mamíferos, tais como seres humanos, macacos, roedores (por exemplo, camundongo ou rato), e pássaros, tais como galinhas. O termo também inclui variantes de ocorrência natural, por exemplo, alternativamente variantes com splice, variantes alélicos ou polimorfismos (por exemplo, aqueles descritos no presente documento). O termo pode se referir, adicionalmente, ao comprimento completo, polipeptídeos SIRP-α não processados, assim como polipeptídeos SIRP-α que resultam do processamento celular, por exemplo, remoção de uma sequência de sinal, etc. Sequências de polipeptídeos SIRP-α exemplificativas são descritas no presente documento. Em algumas modalidades, um polipeptídeo SIRP-α humano é um codificado por um gene SIRPA humano, por exemplo, conforme descrito por nº de ID de Gene NCBI 140885. Conforme descrito no presente documento, polipeptídeos SIRP-α são altamente polimórficos dentro e entre espécies, que incluem, por exemplo, múltiplas variantes humanas com polimorfismos de aminoácido no domínio extracelular.

[046] Polipeptídeos SIRP-α incluem um domínio extracelular que se liga aos ligantes/parceiros, por exemplo, CD47. Polipeptídeos SIRP- α compreendem 3 domínios extracelulares como imunoglobulina altamente homóloga (Ig)—D1, D2 e D3. O domínio D1 de SIRP-α

(“domínio D1”) se refere ao domínio extracelular de membrana distal de SIRP-α e media ligação de SIRP-α a CD47 (consultar, por exemplo, Hatherley, D. et al. (2008) Mol. Cell 31:266-277; Hatherley, D. et al. (2007) J. Biol. Chem. 282:14567-14575; Hatherley, D. et al. (2009) J. Biol. Chem. 284:26613-26619; e Lee, W. Y. et al. (2010) J. Biol. Chem. 285:37953-37963). O domínio extracelular geralmente se refere à porção extracelular inteira de SIRP-α, por exemplo, conforme expresso numa superfície celular, e pode incluir domínios de SIRP-α distintos, tal como o domínio D1. O domínio D1 contém resíduos mostrados como cruciais para mediar ligação de CD47 (consultar, por exemplo, Lee, W.Y. et al. (2007) J. Immunol. 179:7741-7750). Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga a um domínio extracelular de um polipeptídeo SIRP-α se liga a um ou mais resíduos do domínio D1.

[047] Conforme usado no presente documento, “CD47” (também conhecido como proteína de integrina associada (IAP), MER6, e OA3) se refere a um polipeptídeo que, dentre outros papeis, serve como um parceiro de ligação para polipeptídeos SIRP-α. Em algumas modalidades, CD47 se refere a um polipeptídeo CD47 humano, por exemplo, um polipeptídeo codificado por um gene CD47 humano, tal como aquele descrito pela SEQ ID NO de referência NCBI 961. Sequências de aminoácidos CD47 humanas exemplificativas são conhecidas (consultar, por exemplo, nº de acesso da sequência de referência NCBI NP_001768). Em particular, o domínio de IgSF de CD47 se refere ao domínio extracelular de terminal N de CD47 que é conhecido por ser crucial para ligação de SIRP-α (consultar, por exemplo, Barclay, A.N. e Brown, M.H. (2006) Nat. Rev. Immunol. 6:457- 464 e Hatherley, D. et al. (2009) J. Biol. Chem. 284:26613-26619). O termo “CD47” também pode incluir polipeptídeos CD47 modificados que tem capacidade para se ligar à SIRP-α, por exemplo, um polipeptídeo que compreende um domínio de IgSF de CD47 conjugado para outro polipeptídeo ou outra porção química, por exemplo, uma região Fc de Ig.

[048] Conforme usado no presente documento “modular sinalização de SIRP-α” pode se referir a antagonizar, agonizar ou, de outra forma, interferir com um ou mais aspectos de sinalização de SIRP- α numa célula que expressa um polipeptídeo SIRP-α. Sinalização de SIRP-α pode se referir a um ou mais eventos de sinalização intracelular mediados pela ativação de um polipeptídeo SIRP-α, que inclui, sem limitação, fosforilação de tirosina da região intracelular de SIRP-α, ligação de fosfatase (por exemplo, SHP1), ligação de proteína adaptadora (por exemplo, SCAP2, FYB, e/ou GRB2), produção de citocina (por exemplo, IL-10, IL-1β, IFN ou TNF), e produção de óxido nítrico; e/ou um ou mais fenótipos intercelulares, que incluem, sem limitação, fagocitose de macrófago e outros fenótipos de ativação ou supressivos de macrófagos, eosinófilos, neutrófilos, células dendríticas e células supressoras derivadas de mieloide (MDSCs).

[049] Conforme usado no presente documento, o termo “anticorpo” pode se referir aos anticorpos intactos; fragmentos de anticorpo (que incluem, sem limitação, Fab, F(ab’)2, Fab’-SH, Fv, diacorpos, scFv, scFv-Fc, anticorpos de domínio único, anticorpos de cadeia pesada única e anticorpos de cadeia leve única), desde que exibam a atividade biológica desejada (por exemplo, ligação de epítopo); anticorpos monoclonais; anticorpos policlonais; anticorpos monoespecíficos; anticorpos multiespecíficos (por exemplo, anticorpos biespecíficos); e proteínas semelhantes ao anticorpo.

[050] Conforme usado no presente documento, o termo “biespecífico”, quando usado em referência a um anticorpo ou fragmento de anticorpo, inclui um anticorpo ou fragmento de anticorpo que têm duas especificidades de ligação diferentes. Por exemplo, cada especificidade de ligação pode reconhecer um diferente antígeno, ou cada especificidade de ligação pode reconhecer o mesmo antígeno com diferente afinidade e/ou epítopo preciso. Em algumas modalidades, cada especificidade de ligação diferente compreende um ou mais domínios de ligação ao antígeno de anticorpo diferente (por exemplo, domínios variáveis), de modo que o anticorpo biespecífico ou fragmento de anticorpo compreenda pelo menos um primeiro domínio de ligação ao antígeno com uma primeira especificidade de ligação e um segundo domínio de ligação ao antígeno com uma segunda especificidade de ligação. Uma variedade de formatos de anticorpo biespecífico exemplificativos são descritos no presente documento e conhecidos na técnica.

[051] Um anticorpo “isolado” pode se referir a um anticorpo que foi separado e/ou recuperado de um componente de seu ambiente natural, por exemplo, uma célula hospedeira ou organismo. Em algumas modalidades, um anticorpo é purificado até uma pureza desejada em peso (por exemplo, pelo menos 95%); e/ou homogeneidade por SDS- PAGE com o uso de, por exemplo, tingimento por prata, Coomassie, etc. Em algumas modalidades, um anticorpo isolado é obtido depois de uma ou mais etapas de purificação.

[052] Conforme conhecido na técnica, anticorpos “nativos” se referem aos complexos tipicamente heterotetraméricos que incluem duas cadeias leves (L) idênticas e duas cadeias pesadas (H) idênticas. Números variáveis de ligações de dissulfeto conectam as duas cadeias pesadas, e uma conecta cada cadeia leve a uma cadeia pesada, adicionalmente às pontes de dissulfeto dentro da cadeia. As cadeias pesadas incluem um domínio variável (VH) seguido (terminação N até terminação C) por três ou quatro domínios constantes. As cadeias leves incluem um domínio variável (VL) seguido por um domínio constante (CL). Tipicamente, cadeias leves de mamíferos estão dentro de uma das duas categorias com base na sequência de aminoácidos: kappa e lambda.

[053] Um “domínio constante” pode se referir à porção mais conservada do anticorpo ou fragmento, por exemplo, fora dos domínios variáveis. O termo pode incluir o domínio CL assim como domínios constantes de cadeia pesada CH1, CH2, e CH3, juntamente com a região de articulação de cadeia pesada. Opcionalmente, um domínio constante de cadeia pesada pode compreender adicionalmente um domínio constante de cadeia pesada CH4.

[054] Domínios constantes da cadeia pesada podem ser atribuídos a um dos 5 tipos principais: IgA, IgD, IgE, IgG e IgM. Diversos subtipos existem para diversos destes tipos principais. As estruturas de subunidade e configurações tridimensionais de diferentes classes de imunoglobulinas são bem conhecidas e descritas, de modo geral, em, por exemplo, Abbas et al. Cellular e Mol. Immunology, 4ª ed. (W.B. Saunders, Co., 2000).

[055] Conforme usado no presente documento, o termo “domínio variável de anticorpo” se refere às porções das cadeias leves e pesadas de um anticorpo que incluem as regiões de determinação complementares (CDRs, por exemplo, CDR L1, CDR L2, CDR L3, CDR H1, CDR H2, e CDR H3) e regiões de estrutura principal (FRs).

[056] O termo “variável” se refere ao fato de que as subsequências dos domínios variáveis se diferem substancialmente na sequência entre anticorpos e são cruciais para a especificidade de ligação de um anticorpo particular para seu antígeno. Variabilidade é concentrada em três regiões hipervariáveis (HVRs) em ambos os domínios de VH e VL. As porções mais conservadas de domínios variáveis são as chamadas regiões de estrutura principal (FR) nas quais as HVRs são intercaladas. Os domínios variáveis de cadeias pesadas e leves nativas compreendem, cada um, quatro regiões FR conectadas por três HVRs que formam laços (consultar Kabat et al., Sequencies of Proteins of

Immunological Interest, Quinta Edição, National Institute of Health, Bethesda, Md. (1991)).

[057] O termo “região hipervariável (HVR)” pode se referir às sub- regiões dos domínios de VH e VL caracterizados por variabilidade e/ou formação de sequência aprimoradas de laços definidos. Estes incluem três HVRs no domínio de VH (H1, H2 e H3) e três HVRs no domínio de VL (L1, L2 e L3). Acredita-se que H3 seja crucial na transmissão de especificidade de ligação fina, em que L3 e H3 mostram o maior nível de diversidade. Consultar Johnson e Wu, em Methods in Molecular Biology 248:1-25 (Lo, ed., Human Press, Totowa, N.J., 2003).

[058] Diversas delineações de HVR são conhecidas. As Regiões de Determinação de Complementaridade de Kabat (CDRs) são com base na variabilidade de sequência e são as usadas mais normalmente (Kabat et al., Sequencies of Proteins of Immunological Interest, 5ª Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). Chothia se refere, por sua vez, à localização dos laços estruturais (Chothia e Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). As HVRs de AbM representam um compromisso entre as HVRs de Kabat e laços estruturais de Chothia, e são usadas pelo software de modelagem de anticorpo AbM da Oxford Molecular. As HVRs de “contato” são baseadas numa análise das estruturas de cristal complexas disponíveis. Os resíduos de cada uma destas HVRs são notados abaixo. Resíduos de “Estrutura principal” ou “FR” são aqueles resíduos de domínio variável diferentes dos resíduos de HVR. Laço Kabat AbM Chothia Contato L1 L24 a L34 L24 a L34 L26 a L32 L30 a L36 L2 L50 a L56 L50 a L56 L50 a L52 L46 a L55 L3 L89 a L97 L89 a L97 L91 a L96 L89 a L96 H1 H31 a H35B H26 a H35B H26 a H32 H30 a H35B (Numeração de Kabat) H1 H31 a H35 H26 a H35 H26 a H32 H30 a H35 (Numeração de Chothia) H2 H50 a H65 H50 a H58 H53 a H55 H47 a H58 H3 H95 a H102 H95 a H102 H96 a H101 H93 a H101

[059] HVRs “estendidas” também são conhecidas: 24 a 36 ou 24 a 34 (L1), 46 a 56 ou 50 a 56 (L2) e 89 a 97 ou 89 a 96 (L3) no VL e 26 a 35 (H1), 50 a 65 ou 49 a 65 (H2) e 93 a 102, 94 a 102, ou 95 a 102 (H3) no VH (numeração de Kabat).

[060] “Numeração de acordo com Kabat” pode se referir ao sistema de numeração usado para domínios variáveis de cadeia pesada ou domínios variáveis de cadeia leve da compilação de anticorpos em Kabat et al., supra. A sequência de aminoácidos linear real pode conter menos ou mais aminoácidos que correspondem a um encurtamento de ou inserção numa FR ou HVR do domínio variável. A numeração de Kabat de resíduos pode ser determinada para um dado anticorpo por alinhamento em regiões de homologia da sequência do anticorpo com uma sequência numerada de Kabat “padrão”. Tipicamente, a numeração de Kabat é usada ao se referir a um resíduo nos domínios variáveis (aproximadamente resíduos 1 a 107 da cadeia leve e resíduos 1 a 113 da cadeia pesada), enquanto o sistema de numeração ou índice de EU (por exemplo, o índice de EU como em Kabat, numera de acordo com IgG1 de EU) é geralmente usado ao se referir a um resíduo na região constante de cadeia pesada.

[061] Anticorpos de “comprimento completo” ou “intactos” incluem, tipicamente, cadeias pesadas com uma região Fc, por exemplo, em oposição a um fragmento de anticorpo. Fragmentos de “Fab” de ligação ao antígeno com um sítio de ligação ao antígeno único podem ser liberados do fragmento Fc residual através de digestão de papaína. Fragmentos de F(ab’)2 incluem dois sítios de ligação ao antígeno produzidos por tratamento de pepsina de um anticorpo. No entanto, fragmentos de anticorpo incluirão uma ou mais regiões variáveis de anticorpo.

[062] Um fragmento “Fv” contém um sítio de ligação ao antígeno completo. Um Fv de cadeia única (scFv) pode incluir um domínio de VH e um domínio de VL ligados por um ligante peptídico, de modo que os domínios de VH e VL se associem, por exemplo, como num anticorpo ou fragmento Fab, de modo que as HVRs formem um sítio de ligação ao antígeno. Consultar Pluckthün, em The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, volume 113, edições de Rosenburg e Moore, (Springer- Verlag, Nova Iorque, 1994), páginas 269-315. Em algumas modalidades, o scFv é fundido a um domínio Fc de anticorpo (por exemplo, scFv-Fc). Embora seis HVRs compreendam, tipicamente, um sítio de ligação ao antígeno, um domínio variável único com três HVRs ainda tem capacidade para se ligar a um antígeno, embora numa afinidade inferior. Consultar Hamers-Casterman et al., Nature 363:446- 448 (1993); Sheriff et al., Nature Struct. Biol. 3:733-3.736 (1996). Anticorpos de domínio único (por exemplo, anticorpos de camelídeo) incluem, tipicamente, um domínio variável monomérico único para ligação ao antígeno. Anticorpos de cadeia pesada única (VHH) e cadeia leve única também são conhecidos. Um fragmento Fab’ inclui tipicamente mais alguns resíduos na extremidade de terminal C do que um fragmento Fab. Uma Fab’-SH inclui resíduos de cisteína com um tiol livre. Vários acoplamentos químicos de fragmentos de anticorpo são conhecidos na técnica.

[063] Um “diacorpo” inclui fragmentos de anticorpo com dois sítios de ligação ao antígeno. Estes incluem um domínio de VH e VL conectado por um ligante, que é tipicamente muito curto para facilitar o pareamento de domínios na mesma cadeia. Diacorpos podem ser bivalentes ou biespecíficos. Tricorpos e tetracorpos, ou outros números de domínios de VH/VL são conhecidos. Consultar Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003).

[064] Conforme usado no presente documento, um anticorpo “monoclonal” se refere a um anticorpo obtido a partir de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, por exemplo,

substancialmente idênticos, porém, que permitem menores níveis de mutações e/ou modificações de segundo plano. “Monoclonal” denota o caráter substancialmente homogêneo de anticorpos, e não exige produção do anticorpo em nenhum método particular. Em algumas modalidades, um anticorpo monoclonal é selecionado por suas sequências de HVR, VH e/ou VL e/ou propriedades de ligação, por exemplo, selecionado a partir de um grupo de clones (por exemplo, recombinante, hibridoma ou derivado de fago). Um anticorpo monoclonal pode ser modificado geneticamente para incluir uma ou mais mutações, por exemplo, para afetar afinidade de ligação ou outras propriedades do anticorpo, criar um anticorpo humanizado ou quimérico, melhorar produção de anticorpo e/ou homogeneidade, modificar geneticamente um anticorpo multiespecífico, anticorpos resultantes dos quais ainda são considerados monoclonais por natureza. Uma população de anticorpos monoclonais pode ser distinguida dos anticorpos policlonais conforme os anticorpos monoclonais individuais da população reconhecem o mesmo sítio antigênico. Uma variedade de técnicas para produção de anticorpos monoclonais são conhecidas; consultar, por exemplo, o método de hibridoma (por exemplo, Kohler e Milstein, Nature, 256:495-497 (1975); Hongo et al., Hybridoma, 14 (3): 253-260 (1995), Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2ª edição 1988); Hammerling et al., em: Monoclonal Antibodies and T- Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)), métodos de DNA recombinante (consultar, por exemplo, Documento de Patente nº U.S.

4.816.567), tecnologias de exibição de fago (consultar, por exemplo, Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 101(34): 12467-12472 (2004); e Lee et al., J. Immunol.

Methods 284(1-2): 119-132 (2004), e tecnologias para produzir anticorpos humanos ou semelhantes aos humanos em animais que têm partes dos ou todos os locais de imunoglobulina humana ou genes que codificam sequências de imunoglobulina humana (consultar, por exemplo, documentos nos WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 90: 2551 (1993); Jakobovits et al., Nature 362: 255-258 (1993); Bruggemann et al., Year in Immunol. 7:33 (1993); Documentos de Patente nº U.S. 5.545.807; 5.545.806; 5.569.825; 5.625.126; 5.633.425; e 5.661.016; Marks et al., Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg et al., Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368: 812-813 (1994); Fishwild et al., Nature Biotechnol. 14: 845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnol. 14: 826 (1996); e Lonberg e Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995).

[065] Anticorpos “quiméricos” podem se referir a um anticorpo com uma porção da cadeia pesada e/ou leve a partir de um isótopo, classe, ou organismo particular e outra porção a partir de outro isótopo, classe ou organismo. Em algumas modalidades, a região variável será a partir de uma origem ou organismo, e a região constante será a partir de outra.

[066] “Anticorpos humanizados” podem se referir aos anticorpos com sequência predominantemente humana e uma quantidade mínima de sequência não humana (por exemplo, camundongo ou galinha). Em algumas modalidades, um anticorpo humanizado tem uma ou mais sequências de HVR (que carregam uma especificidade de ligação de interesse) de um anticorpo derivado de um organismo não humano (por exemplo, camundongo ou galinha) enxertado num estrutura principal (FR) de anticorpo de recipiente humano. Em algumas modalidades, resíduos não humanos são adicionalmente enxertados no estrutura principal humano (não presente nos anticorpos nem de origem nem de recipiente), por exemplo, para melhorar as propriedades de anticorpo.

Em geral, um anticorpo humanizado irá compreender substancialmente todo de pelo menos um, e tipicamente dois, domínios variáveis, nos quais todos ou substancialmente todos os laços hipervariáveis correspondem àqueles de uma imunoglobulina não humana e todos ou substancialmente todos os FRs são aqueles de uma sequência de imunoglobulina humana. O anticorpo humanizado também compreenderá, opcionalmente, pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina (Fc), tipicamente aquela de uma imunoglobulina humana. Consultar Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); e Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992).

[067] Um anticorpo “humano” pode se referir a um anticorpo que tem uma sequência de aminoácidos que corresponde àquela de um anticorpo produzido por um ser humano e/ou foi feita com o uso de qualquer uma das técnicas para produzir anticorpos humanos, conforme divulgado no presente documento. Anticorpos humanos podem ser produzidos com o uso de várias técnicas conhecidas na arte, que incluem bibliotecas de exibição de fago. Hoogenboom e Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991); preparação de anticorpos monoclonais humanos conforme descrito em Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, página 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol., 147(1):86-95 (1991); e administrando-se o antígeno a um animal transgênico que foi modificado para produzir tais anticorpos em resposta ao desafio antigênico, porém, cujas localizações endógenas foram desabilitadas, por exemplo, camundongos enxertados imunizados (consultar, por exemplo, Documentos de Patente nº U.S. 6.075.181 e 6.150.584 com relação à tecnologia XENOMOUSETM) ou galinhas com sequência (ou sequências) de imunoglobulina humana (consultar, por exemplo, documentos nos WO2012162422, WO2011019844 e WO2013059159).

[068] Conforme usado no presente documento, o termo “ligante” se refere a uma ligação entre dois elementos, por exemplo, domínios de proteína. Em algumas modalidades, um ligante pode ser uma ligação covalente ou um espaçador. O termo “espaçador” se refere a uma porção química (por exemplo, um polímero de polietilenoglicol (PEG)) ou uma sequência de aminoácidos (por exemplo, uma sequência de 1 a 200 aminoácidos) que ocorre entre dois polipeptídeos ou domínios de polipeptídeo para fornecer espaço ou flexibilidade (ou tanto espaço quanto flexibilidade) entre os dois polipeptídeos ou domínios de polipeptídeo. Em algumas modalidades, um espaçador de aminoácido é parte da sequência primária de um polipeptídeo (por exemplo, unido aos polipeptídeos ou domínios de polipeptídeo espaçados por meio da cadeia principal de polipeptídeo).

[069] O termo "agente citotóxico", conforme usado no presente documento, pode se referir a qualquer agente que inibe proliferação celular ou induz morte celular. Agentes citotóxicos incluem, porém, sem limitação, agentes quimioterapêuticos; isótopos radioativos; agentes inibidores de crescimento; e toxinas, tais como toxinas de molécula pequena ou toxinas enzimaticamente ativas, que incluem fragmentos e/ou variantes das mesmas. Agentes citotóxicos exemplificativos incluem sem limitação inibidores metabólicos, agentes antimicrotúbulos, compostos que contêm platina, agentes alquilantes, inibidores de proteassoma, inibidores de topoisomerase II, antimetabólitos, inibidores de topoisomerase I, inibidores de trajetória de transdução de sinal, inibidores de angiogênese de tirosina quinase não receptora, hormônios e análogos hormonais, agentes proapoptóticos, inibidores de LDH-A, inibidores de ciclo celular, inibidores de HDAC e agentes antibióticos.

[070] Conforme usado no presente documento, um “rótulo” pode incluir qualquer porção química que sirva como um agente de detecção, por exemplo, de ligação entre um anticorpo rotulado da presente descrição e uma macromolécula ou célula. Rótulos exemplificativos incluem sem limitação porções químicas fluorescentes (por exemplo, compostos ou proteínas), radioativas ou enzimáticas, assim como etiquetas de purificação de afinidade.

[071] Conforme usado no presente documento, se pode dizer que um anticorpo se “liga” a um antígeno com uma afinidade suficiente para tornar o anticorpo útil para manipulação in vitro e/ou in vivo do antígeno. Em algumas modalidades, um anticorpo que se “liga” a um antígeno tem uma constante de dissociação (KD) para o antígeno que é menor ou igual a 1 µM a 25 ºC.

[072] Conforme usado no presente documento, o termo “afinidade” ou “afinidade de ligação” se refere à força da interação de ligação entre duas moléculas. De modo geral, a afinidade de ligação se refere à força da soma total de interações não covalentes entre uma molécula e seu parceiro de ligação, tal como uma variante de D1 de SIRP-α de alta afinidade e CD47. A menos que seja indicado de outra forma, a afinidade de ligação se refere à afinidade de ligação intrínseca, que reflete uma interação de 1:1 entre membros de um par de ligação. A afinidade de ligação entre duas moléculas é normalmente descrita pela constante de dissociação (KD) ou pela constante de associação (KA). Duas moléculas que têm baixa afinidade de ligação entre si geralmente se ligam lentamente, tendem a se dissociar facilmente e exibem uma grande KD. Duas moléculas que têm alta afinidade entre si geralmente se ligam prontamente, tendem a permanecer ligadas por mais tempo e exibem uma pequena KD. Em algumas modalidades, a KD de duas moléculas de interação é determinada com o uso de métodos e técnicas conhecidas, por exemplo, ressonância de plasmon em superfície (SPR). KD pode ser calculada como a razão de kdesativada/kativada.

[073] Conforme usado no presente documento, o termo “KD menor que”, se refere a um valor de KD numericamente menor e uma afinidade de ligação crescente com relação ao valor de KD citado. Conforme usado no presente documento, o termo “KD maior que”, se refere a um valor de KD numericamente maior e uma afinidade de ligação decrescente com relação ao valor de KD citado.

[074] Conforme usado no presente documento, “tratamento” pode se referir à administração terapêutica de uma molécula, composto, formulação, composição, etc., de modo a alterar um ou mais sintomas patológicos num indivíduo ou célula que é tratado. Efeitos de desejáveis de tratamento podem incluir, sem limitação, desacelerar a progressão de doença, amenizar ou paliar um sintoma patológico ou estado de doença, melhorar o prognóstico e/ou alcançar remissão de doença. Por exemplo, um câncer do indivíduo é “tratado” com sucesso se um ou mais sintomas associados ao câncer forem mitigados ou abolidos, tais como, sem limitação, reduzir a proliferação de células cancerosas, eliminar células cancerosas ou fardo tumoral, diminuir sintomas que resultam do câncer, aumentar a qualidade de vida do indivíduo, diminuir a dose de outro medicamento (ou medicamentos), e/ou prolongar sobrevivência do indivíduo. Como outro exemplo, uma doença autoimune ou inflamatória pode ser “tratada” com sucesso se um ou mais sintomas associados à doença autoimune ou inflamatória forem mitigados ou abolidos, tais como, sem limitação, reduzir células imunológicas autorreativas e/ou células imunológicas inflamatórias ou citocinas, diminuir ativação imunológica e/ou inflamação, retardar ou mitigar danos ao órgão que resultam da doença, diminuir sintomas que resultam da doença, aumentar a qualidade de vida do indivíduo, diminuir a dose de outro medicamento (ou medicamentos), e/ou prolongar sobrevivência do indivíduo.

[075] Conforme usado no presente documento, “atrasar a progressão” de uma doença pode se referir a desacelerar, retardar, diferir, adiar o desenvolvimento de estabilização ou, de outra forma,

prejudicar, o curso patológico da doença. Em algumas modalidades, o termo pode se referir a um atraso suficiente para englobar de maneira eficaz a prevenção, por exemplo, na prevenção do indivíduo desenvolver a doença. Em algumas modalidades, por exemplo, um câncer avançado, atrasar a progressão pode incluir atrasar a metástase. Uma pessoa com habilidade na técnica verificará que a extensão precisa de atraso pode depender, por exemplo, da doença específica, afecção do indivíduo e semelhantes.

[076] Os termos “câncer” e “canceroso” podem descrever crescimento/proliferação de célula desregulado ou não regulado por uma célula ou células num mamífero. Qualquer tipo de câncer conhecido na técnica pode ser incluído, tal como, porém, sem limitação, carcinoma, sarcoma, linfoma, leucemia, linfoma e blastoma. Mais exemplos particulares de tais cânceres incluem, porém, sem limitação, câncer de pulmão, câncer de célula escamosa, tumores cerebrais, glioblastoma, câncer de cabeça e pescoço, câncer hepatocelular, câncer colorretal (por exemplo, cânceres de cólon ou retal), câncer de fígado, câncer de bexiga, câncer gástrico ou de estômago, câncer pancreático, câncer cervical, câncer ovariano, câncer do trato urinário, câncer de mama, câncer peritoneal, câncer uterino, câncer de glândula salivar, câncer do rim ou renal, câncer de próstata, câncer vulvar, câncer de tireoide, carcinoma anal, carcinoma peniano, melanoma, mieloma múltiplo e linfoma de célula B (que inclui linfomas de não Hodgkin (NHL)); leucemia linfoblástica aguda (ALL); leucemia linfocítica crônica (CLL); leucemia mieloide aguda (AML); carcinoma de célula Merkel; tricoleucemia; leucemia mieloblástica crônica (CML); e metástases associadas.

[077] Conforme usado no presente documento, o termo “quantidade eficaz” pode se referir a uma quantidade de um anticorpo da presente descrição ou uma composição farmacêutica que contém um anticorpo da presente descrição que é suficiente e eficaz para obter um efeito terapêutico desejado no tratamento ou atraso de progressão de um paciente que tem uma doença, tal como um câncer, por exemplo, câncer hematológico ou tumor sólido. Em algumas modalidades, uma quantidade terapeuticamente eficaz evitará efeitos colaterais adversos, e/ou tais efeitos colaterais serão compensados por efeitos benéficos. Uma quantidade eficaz pode depender do indivíduo tratado, por exemplo, idade, peso, sexo, estado de doença, assim como a habilidade do agente em produzir uma resposta desejada. Uma quantidade eficaz pode ser administrada numa ou mais administrações. Como no contexto clínico, uma quantidade eficaz de um fármaco, composto ou composição farmacêutica pode ou não ser alcançada em conjunto com outro fármaco, composto ou composição farmacêutica, tal como outro agente terapêutico. Assim, uma “quantidade eficaz” também pode ser considerada no contexto de administrar um ou mais agentes terapêuticos adicionais, e um agente único pode ser considerado para ser dado numa quantidade eficaz caso, em combinação com um ou mais outros agentes, um resultado desejável possa ser ou seja alcançado.

[078] Conforme usado no presente documento, o termo “composição farmacêutica” pode se referir a uma formulação medicinal ou farmacêutica que inclui um ingrediente ativo, assim como excipientes ou diluentes (ou tanto excipientes quanto diluentes) e permite que o ingrediente ativo seja administrado através de métodos de administração adequados. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas divulgadas no presente documento incluem componentes farmaceuticamente aceitáveis que são compatíveis com um ou mais anticorpos da presente descrição. Em algumas modalidades, a composição farmacêutica está em forma de tablete ou cápsula para administração oral ou em forma aquosa para administração intravenosa ou subcutânea, por exemplo, através de injeção.

[079] Conforme usado no presente documento, os termos “sujeito”, “indivíduo” e “paciente” são usados intercambiavelmente para se referir a um vertebrado, por exemplo, um mamífero. Mamíferos incluem, porém, sem limitação, murinos, símios, seres humanos, animais de fazenda, animais para esporte e animais domésticos.

[080] Conforme usado no presente documento, “em conjunto com” ou “em combinação com” podem se referir à administração de um agente terapêutico adicionalmente a (por exemplo, antes, durante e/ou após) outro agente terapêutico.

ANTICORPOS

[081] Determinados aspectos da presente descrição se referem aos anticorpos que se ligam ao domínio extracelular (por exemplo, o domínio D1) de um polipeptídeo SIRP-α humano. Em algumas modalidades, o anticorpo é um anticorpo humanizado. Em algumas modalidades, o anticorpo é um anticorpo monoclonal.

[082] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH mostrado na Tabela 2 e/ou uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende uma sequência de aminoácidos de acordo com a Fórmula

SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPVTLI

YSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSS YTNPFGX1GTX2X3TVL (SEQ ID NO:71), em que X1 é G ou T; X2 é K, Q ou R; e X3 é L ou V. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH mostrado na Tabela 2 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende uma sequência de aminoácidos de acordo com a Fórmula

SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPVTLI

YSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSS YTNPFGX1GTX2X3TVL (SEQ ID NO:71), em que X1 é G ou T; X2 é K, Q ou R; e X3 é L ou V. Em algumas modalidades de qualquer uma das modalidades acima, o domínio de VL não compreende a sequência da SEQ ID NO:25. Em determinadas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:26 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende uma sequência de aminoácidos de acordo com a Fórmula

SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPVTLI

YSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSS YTNPFGX1GTX2X3TVL (SEQ ID NO:71), em que X1 é G ou T; X2 é K, Q ou R; e X3 é L ou V. Em algumas modalidades, o domínio de VL não compreende a sequência da SEQ ID NO:25. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH mostrado na Tabela 2 e/ou uma cadeia leve que compreende um domínio de VL mostrado na Tabela 1. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH mostrado na Tabela 2 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL mostrado na Tabela 1.

[083] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:26 e/ou uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:39 a 41. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:26 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:39 a 41.

[084] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH mostrado na Tabela 2 e/ou uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:48 a 57. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH mostrado na Tabela 2 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:48 a 57. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:26 e/ou uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:48 a 57. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:26 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:48 a 57. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:81 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:48 a 57. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:83 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:48 a 57. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:77 a 111 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:48 a 57. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:77 a 111 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:48 a 51. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH mostrado na Tabela 2 e um domínio constante que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:33, 34 e 137 e/ou uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:48 a

57. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:60, 61 e 129 e/ou uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:48 a

57.

[085] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:26, 81 ou 83 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:48 a 57. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:26, 81 ou 83 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:39 a 41. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:26 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:39 a

41.

[086] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:26, 81 ou 83 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de domínio de VL selecionada a partir das SEQ ID NOs:39 a 41 e um domínio CL que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:36 a 38. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:26 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de domínio de VL selecionada a partir das SEQ ID NOs:39 a 41 e um domínio CL que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:36 a 38.

[087] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:26, 81 ou 83 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende a sequência da SEQ ID NO:25 e uma sequência de domínio CL selecionada a partir das SEQ ID NOs:43 a 46. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:26 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende a sequência da SEQ ID NO:25 e uma sequência de domínio CL selecionada a partir das SEQ ID NOs:43 a 46.

[088] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:83 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de domínio de VL selecionada a partir das SEQ ID NOs:39 a 41. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:83 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:40. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:83 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55.

[089] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:119 a 123 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de domínio de VL selecionada a partir das SEQ ID NOs:39 a

41. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:119 a 123 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:40. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:119 a 123 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:119 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:120 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:121 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:122 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:123 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55.

[090] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:26 e uma sequência de domínio constante selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:132 a 139; e/ou uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:40. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:26 e uma sequência de domínio constante selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:33, 34 e 137; e/ou uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:40. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:26 e uma sequência de domínio constante selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:132 a 139; e/ou uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:26 e uma sequência de domínio constante selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:33, 34 e 137; e/ou uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55.

[091] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:124 a 131; e/ou uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:40. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:60, 61 e 129; e/ou uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:40. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:124 a 131; e/ou uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:60, 61 e 129; e/ou uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55. Em algumas modalidades, a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:60, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:55. Em algumas modalidades, a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:61, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:55. Em algumas modalidades, a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:137, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:55.

[092] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:58 a 62 e/ou uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende uma sequência de aminoácidos de acordo com a Fórmula

SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPVTLI

YSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSS YTNPFGX1GTX2X3TVL (SEQ ID NO:71), em que X1 é G ou T; X2 é K, Q ou R; e X3 é L ou V. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:58 a 62 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende uma sequência de aminoácidos de acordo com a Fórmula

SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPVTLI YSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSS

YTNPFGX1GTX2X3TVL (SEQ ID NO:71), em que X1 é G ou T; X2 é K, Q ou R; e X3 é L ou V. Em algumas modalidades de qualquer uma das modalidades acima, o domínio de VL não compreende a sequência da SEQ ID NO:25.

[093] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:58 a 62 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL mostrado na Tabela 1. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:58 a 62 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:39 a 41. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:58 a 62 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:48 a 57. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:58 a 62 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:39 a 41 e um domínio CL que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:36 a 38. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:58 a 62 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:25 e um domínio CL que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:43 a 46.

[094] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:53. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:54. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:56. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:62 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:57.

[095] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:58 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da

SEQ ID NO:59 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:60 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:61 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:52.

[096] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:58 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:53. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:59 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:53. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:60 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:53. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:61 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:53.

[097] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:58 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:54. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da

SEQ ID NO:59 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:54. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:60 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:54. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:61 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:54.

[098] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:58 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:59 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:60 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:61 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:55.

[099] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:58 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:56. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da

SEQ ID NO:59 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:56. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:60 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:56. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:61 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:56.

[0100] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:58 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:57. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:59 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:57. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:60 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:57. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:61 e uma cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:57.

[0101] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:77 a 111 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende a sequência da SEQ ID NO:25. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:77 a 111 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:39 a

41. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:77 a 111 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:39 a 41 e um domínio CL que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:36 a 38. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende um domínio de VH que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:77 a 111 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende a sequência da SEQ ID NO:25 e um domínio CL que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:43 a 46. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:114 a 123 e uma cadeia leve que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:47 a 63. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:124 a 131 e uma cadeia leve que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:47 a 63. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:114 a 131 e uma cadeia leve que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:47 a 63.

[0102] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:114 a 118 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:48 a 57. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:119 a 123 e uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:48 a 57. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:114 a 123 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:39 a 41. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:114 a 123 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:39 a 41 e um domínio CL que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:36 a 38. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:114 a 123 e uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende a sequência da SEQ ID NO:25 e um domínio CL que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:43 a 46.

[0103] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende três CDRs de um domínio de VH que compreende uma sequência apresentada na Tabela 2 e/ou três CDRs de um domínio de VL que compreende uma sequência apresentada na Tabela 1. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende um domínio de VH que compreende uma sequência que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99% ou 100% idêntica a uma sequência de domínio de VH apresentada na Tabela 2 e opcionalmente três CDRs de um domínio de VH que compreende uma sequência apresentada na Tabela 2, e/ou um domínio de VL que compreende uma sequência que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a uma sequência de domínio de VL apresentada na Tabela 1 e opcionalmente três CDRs de um domínio de VL que compreende uma sequência apresentada na Tabela 1. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a uma sequência de cadeia pesada apresentada na Tabela 2 e opcionalmente três CDRs de um domínio de VH que compreende uma sequência apresentada na Tabela 2, e/ou uma cadeia leve que compreende uma sequência que é pelo menos 90%, pelo menos 91%, pelo menos 92%, pelo menos 93%, pelo menos 94%, pelo menos 95%, pelo menos 96%, pelo menos 97%, pelo menos 98%, pelo menos 99%, ou 100% idêntica a uma sequência de cadeia leve apresentada na Tabela 1 e opcionalmente três CDRs de um domínio de VL que compreende uma sequência apresentada na Tabela 1. TABELA 1. SEQUÊNCIAS DE ANTICORPO DE CADEIA LEVE.

Nome Descrição SEQ ID NO Sequência AB25 HVR-L1 22 SGGSYSSYYYA HVR-L2 23 SDDKRPS HVR-L3 24 GGYDQSSYTNP Hum1 VL 25 SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPV

TLIYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

DQSSYTNPFGGGTKLTVL Hum 1 VL VL 39 SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPV versão 1 (v1) TLIYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

DQSSYTNPFGTGTKVTVL Hum1 VL VL 40 SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPV versão 2 (v2) TLIYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

DQSSYTNPFGGGTQLTVL Hum1 VL VL 41 SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPV versão 3 (v3) TLIYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

DQSSYTNPFGGGTRLTVL CL Kappa CL 36 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDN Humano ALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVT

HQGLSSPVTKSFNRGEC IGLC1 CL 37 GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKAD Lambda GSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQV Humano THEGSTVEKTVAPTECS IGLC2 CL 38 GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKAD Lambda SSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQV Humano THEGSTVEKTVAPTECS IGLC1_wt CL 42 GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKAD Lambda GSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQV Humano THEGSTVEKTVAPTECS IGLC1_N172 CL 43 GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKAD D Lambda GSPVKAGVETTKPSKQSNDKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQV Humano THEGSTVEKTVAPTECS IGLC1_N171 CL 44 GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKAD D Lambda GSPVKAGVETTKPSKQSDNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQV Humano THEGSTVEKTVAPTECS Lambda_IGL CL 45 GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKAD C1_N171D GSPVKAGVETTKPSKQSDSKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQV Humano, THEGSTVEKTVAPTECS N172S (DS) Lambda_IGL CL 46 GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKAD C1_N171S GSPVKAGVETTKPSKQSSDKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQV Humano, THEGSTVEKTVAPTECS N172D (SD) LC Humano Cadeia leve 47 SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPV Original TLIYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

DQSSYTNPFGGGTKLTVL GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKAD GSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQV THEGSTVEKTVAPTECS

Nome Descrição SEQ ID NO Sequência LC Humano Cadeia leve 48 SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPV Original_N17 TLIYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY 2D DQSSYTNPFGGGTKLTVL

GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKAD GSPVKAGVETTKPSKQSNDKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQV

THEGSTVEKTVAPTECS LC Humano Cadeia leve 49 SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPV Original_N17 TLIYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY 1D DQSSYTNPFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLV

CLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSDNKYAASSY

LSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS LC Humano Cadeia leve 50 SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPV original TLIYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY N171D, DQSSYTNPFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLV N172S CLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSDSKYAASSY

LSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS LC Humano Cadeia leve 51 SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPV original TLIYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY N171S, DQSSYTNPFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLV N172D CLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSSDKYAASSY

LSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS LC Humano- Cadeia leve 52 SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPV Versão 1 + TLIYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

DS DQSSYTNPFGTGTKVTVL GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKAD GSPVKAGVETTKPSKQSDSKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQV

THEGSTVEKTVAPTECS LC Humano- Cadeia leve 53 SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPV Versão 1 + TLIYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

SD DQSSYTNPFGTGTKVTVL GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKAD GSPVKAGVETTKPSKQSSDKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQV

THEGSTVEKTVAPTECS LC Humano- Cadeia leve 54 SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPV Versão 2 + TLIYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

DS DQSSYTNPFGGGTQLTVL GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKAD GSPVKAGVETTKPSKQSDSKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQV

THEGSTVEKTVAPTECS LC Humano- Cadeia leve 55 SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPV Versão 2 + TLIYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

SD DQSSYTNPFGGGTQLTVL GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKAD GSPVKAGVETTKPSKQSSDKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQV

THEGSTVEKTVAPTECS LC Humano- Cadeia leve 56 SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPV Versão 3 + TLIYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

DS DQSSYTNPFGGGTRLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLV CLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSDSKYAASSY

LSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS LC Humano- Cadeia leve 57 SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPV Versão 3 + TLIYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

Nome Descrição SEQ ID NO Sequência

SD DQSSYTNPFGGGTRLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLV CLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSSDKYAASSY

LSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS Hum1 original Cadeia leve 63 SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPV em constante TLIYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY lambda DQSSYTNPFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLV IGLC2 CLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYL

SLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS TABELA 2. SEQUÊNCIAS DE ANTICORPO DE CADEIA PESADA. Nome Descrição SEQ ID NO Sequência AB21 HVR-H1 19 SNAMS HVR-H2 20 GISAGGSDTYYPASVKG HVR-H3 21 ETWNHLFDY AB21 VH MutAll VH 26 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP

GKGLEWVAGISAGGSDTYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMN

SLRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSS AB21_VH Cadeia 58 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP MutAll _IgG1wt pesada GKGLEWVAGISAGGSDTYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMN

SLRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSV FPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRT PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNS TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV

MHEALHNHYTQKSLSLSPG AB21_HC Cadeia 59 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP mutall_IgG1AA pesada GKGLEWVAGISAGGSDTYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMN

A SLRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSV morto FPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH

TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRT PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYAS TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG

Nome Descrição SEQ ID NO Sequência

QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV

MHEALHNHYTQKSLSLSPG AB21_VH Cadeia 60 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP MutAll _IgG2wt pesada GKGLEWVAGISAGGSDTYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMN

SLRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSV FPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKV DKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFR VVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE NNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE

ALHNHYTQKSLSLSPG AB21_VH Cadeia 61 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP MutAll _IgG2Da pesada GKGLEWVAGISAGGSDTYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMN

SLRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSV FPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKV DKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFR VVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE NNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE

ALHNHYTQKSLSLSPG AB21_VH Cadeia 62 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP MutAll _IgG4 pesada GKGLEWVAGISAGGSDTYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMN S228P SLRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSV

FPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVD KRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYR VVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPRE PQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE NNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHE

ALHNHYTQKSLSLSLG AB21_HC_wt VH 77 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAPG

Nome Descrição SEQ ID NO Sequência

KGLEWLAGISAGGSDTYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNTL

TAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS AB25_HC_wt VH 78 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCEASGFTFSSNAMSWVRQAPG

KGLEWVAGISSGSDTYYGDSVKGRLTISRDNSKNILYLQMNSLT

AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS AB27_HC_wt VH 79 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAVSGFRFSSYAMSWVRQAPG

KGLEWVSGISSGGDTYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQVNSLT

AEDTAIYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS AB66_HC_wt VH 80 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPG

KGLEWLAGISAGGSDTYYIDSVKGRFTISRDNPKNSLYLQMSSL

TAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS AB25_HC_Mut VH 81 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP all GKGLEWVAGISSGSDTYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS

LTAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSS AB25 VH MutAll VH 82 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAVSWVRQAPG M34V KGLEWVAGISSGSDTYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSL

TAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSS AB27_HC_Mut VH 83 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFRFSSYAMSWVRQAP all GKGLEWVSGISSGGDTYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS

LRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSS AB27 VH MutAll VH 84 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFRFSSYAVSWVRQAPG M34V KGLEWVSGISSGGDTYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSL

RAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSS AB21 VH MutAll VH 85 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAVSWVRQAPG M34V KGLEWVAGISAGGSDTYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS

LRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSS AB21_HC_Mut VH 86 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNALSWVRQAPG All_M34L KGLEWVAGISAGGSDTYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS

LRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSS AB25_HC_Mut VH 87 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNALSWVRQAPG All_M34L KGLEWVAGISSGSDTYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSL

TAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSS AB27_HC_Mut VH 88 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFRFSSYALSWVRQAPG All_M34L KGLEWVSGISSGGDTYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSL

Nome Descrição SEQ ID NO Sequência

RAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSS S16 VH 89 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAVSGFRFSSYAMSWVRQAPG

KGLEWVSGISSGGDTYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQVNSLT

AEDTAIYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S17 VH 90 DVQLVESGGAVVRPGESLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPG

KGLEWLAGISAGGSDTYYIDSVKGRFTISRDNSENSLYLQMNSL

TAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S22 VH 91 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPG

KGLEWLAGISAGGSDTYYIDSVKGRFTISRRQFQEQSLSPNEPA

LTAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S23 VH 92 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAASGFTFSSHAMSWVRQAPG

KGLEWLAGISAGGSDTYYIDSVKGRFTISRDNSKSSLYLRMNSL

TAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S24 VH 93 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAPG

KGLEWLAGISAGGSDTYYPASVKGRFTISRDNPKNTLYLQMNTL

TAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S26 VH 94 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAASGFTFSTYAMSWVRQAPG

KGLEWVSGISASGSGTYYGDSVKGRFTMSRDNSKNTLYLQMN

SLTAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S28 VH 95 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAASGFSFSSNAMSWVRQAPG

KGLEWVAGISASGDTYYSGSMKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSL

TAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S29 VH 96 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAVSGFRFSSYAMSWVRQAPG

KGLEWVSGISSDSDAYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQVNSLT

AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTMVTVSS S30 VH 97 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCEASGFTFSSDAMSWVRQAPG

KGLEWVSGISSGSSTYYGGSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSL

TAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S55 VH 98 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAVSGFRFSSYAMSWVRQAPG

KGLEWVSGISSGGDTYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQVNSLT

AEDTAIYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S56 VH 99 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPG

KGLEWLAGISAGGSDTYYIDSVKGRFTISRDNSKNSLYLQVNSL TAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS

Nome Descrição SEQ ID NO Sequência S59 VH 100 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAVSGFRFSSHAMSWVRQAP

GKGLEWVSGISSGGDTYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQVNS

LTAEDTAIYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S60 VH 101 DVQLVDSGGGVVRPGESLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPG

KGLEWLAGISAGGSDTYYIDSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSL

TAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S65 VH 102 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPG

KGLEWLAGISAGGSDTYYIDSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSL

TAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S69 VH 103 DLQLVESGGGVVRPGESLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPG

KGLEWLAGISAGGSDTYYIDSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSL

TAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S70 VH 104 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPG

KGLEWLAGISAGGSDAYYIDSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSL

TAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S71 VH 105 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPG

KGLEWLAGISAGGSDTYYIDSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSL

TAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S73 VH 106 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCEASGFTFSSNAMSWARQAPG

KGLEWVAGISSGSDTYYGDSVKGRLTISRDNSKNILYLQMNSLT

AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S74 VH 107 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAPG

KGLEWLAGISAGDSDTYYPASVKGRFTISRDNPKNTLYLQMNTL

TAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S76 VH 108 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPG

KGLEWLAGISAGGSDTYYIDSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSL

TAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S201 VH 109 DVQLVESGGAVVRPGETLRLSCTASGFTFSSYAMSWVRQAPG

KGLEWVSGISASGSDTYYADSVKGRSTISRDNSKNTLYLRMSS

LTAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S202 VH 110 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPG

KGLEWLAGISAGGSDTYYIDSVKGRFTISRDNSKNSLYLQMNSL

TAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVSS S206 VH 111 DVQLVESGGAVVRPGETLRLSCTASGFTFSSYAMSWVRQAPG

Nome Descrição SEQ ID NO Sequência

KGLEWVSGISASGSDTYYADSVKGRSTISRDNSKNTLYLRMSS

LTAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTLSS AB25 VH Cadeia 114 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP Mutall_IgG1wt pesada GKGLEWVAGISSGSDTYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS

LTAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFP LAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTF PAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKK VEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPE VTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMH

EALHNHYTQKSLSLSPG AB25 VH Cadeia 115 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP Mutall_IgG1de pesada GKGLEWVAGISSGSDTYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS ad LTAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFP

LAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTF PAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKK VEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPE VTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPR EPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQP ENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMH

EALHNHYTQKSLSLSPG AB25 VH Cadeia 116 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP Mutall_IgG2wt pesada GKGLEWVAGISSGSDTYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS

LTAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFP LAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTF PAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDK TVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVV SVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREP QVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPEN NYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA

LHNHYTQKSLSLSPG AB25 VH_ Cadeia 117 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP

Nome Descrição SEQ ID NO Sequência Mutall_IgG2Da pesada GKGLEWVAGISSGSDTYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS

LTAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFP LAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTF PAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDK TVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVV SVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREP QVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPEN NYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA

LHNHYTQKSLSLSPG AB25 VH_ Cadeia 118 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP Mutall_IgG4_S pesada GKGLEWVAGISSGSDTYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS 228P LTAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFP

LAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTF PAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDK RVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRV VSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPEN NYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEAL

HNHYTQKSLSLSLG AB27 VH_ Cadeia 119 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFRFSSYAMSWVRQAP Mutall_IgG1wt pesada GKGLEWVSGISSGGDTYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS

LRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVF PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT FPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK KVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNST YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQP REPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM

HEALHNHYTQKSLSLSPG AB27 VH_ Cadeia 120 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFRFSSYAMSWVRQAP Mutall_IgG1de pesada GKGLEWVSGISSGGDTYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS ad LRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVF

PLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT FPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDK

Nome Descrição SEQ ID NO Sequência

KVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYAST YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQP REPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQ PENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVM

HEALHNHYTQKSLSLSPG AB27 VH_ Cadeia 121 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFRFSSYAMSWVRQAP Mutall_IgG2wt pesada GKGLEWVSGISSGGDTYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS

LRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVF PLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT FPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVD KTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRV VSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREP QVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPEN NYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA

LHNHYTQKSLSLSPG AB27 VH_ Cadeia 122 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFRFSSYAMSWVRQAP Mutall_IgG2Da pesada GKGLEWVSGISSGGDTYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS

LRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVF PLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT FPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVD KTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRV VSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREP QVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPEN NYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEA

LHNHYTQKSLSLSPG AB27 VH_ Cadeia 123 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFRFSSYAMSWVRQAP Mutall_IgG4_S pesada GKGLEWVSGISSGGDTYYVDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNS 228P LRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVF

PLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHT FPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDK RVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVT CVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRV VSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREP QVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPEN

Nome Descrição SEQ ID NO Sequência

NYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEAL

HNHYTQKSLSLSLG AB21_MutAll_I Cadeia 124 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP gG1_AAA pesada GKGLEWVAGISAGGSDTYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMN

SLRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSV FPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVD KKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRT PEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNS TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQ PREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNG QPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV

MHEALHNHYTQKSLSLSPG AB21_MutAll_I Cadeia 125 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP gG2 pesada GKGLEWVAGISAGGSDTYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMN wildtype_C232 SLRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSV

S FPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKV DKTVERKSCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFR VVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE NNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE

ALHNHYTQKSLSLSPG AB21_MutAll_I Cadeia 126 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP gG2 pesada GKGLEWVAGISAGGSDTYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMN wildtype_C233 SLRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSV

S FPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKV DKTVERKCSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFR VVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE NNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE

ALHNHYTQKSLSLSPG AB21_MutAll_I Cadeia 127 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP

Nome Descrição SEQ ID NO Sequência gG2Da_C232S pesada GKGLEWVAGISAGGSDTYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMN

SLRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSV FPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKV DKTVERKSCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFR VVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE NNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE

ALHNHYTQKSLSLSPG AB21_MutAll_I Cadeia 128 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP gG2Da_C233S pesada GKGLEWVAGISAGGSDTYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMN

SLRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSV FPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKV DKTVERKCSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFR VVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE NNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE

ALHNHYTQKSLSLSPG AB21_MutAll_I Cadeia 129 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP gG2_N297A pesada GKGLEWVAGISAGGSDTYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMN

SLRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSV FPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKV DKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFASTFR VVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE NNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE

ALHNHYTQKSLSLSPG AB21_MutAll_I Cadeia 130 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP gG2_N297A_C pesada GKGLEWVAGISAGGSDTYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMN 232S SLRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSV

FPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKV

Nome Descrição SEQ ID NO Sequência

DKTVERKSCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFASTFR VVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE NNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE

ALHNHYTQKSLSLSPG AB21_MutAll_I Cadeia 131 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTFSSNAMSWVRQAP gG2_N297A_C pesada GKGLEWVAGISAGGSDTYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMN 233S SLRAEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSV

FPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVH TFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKV DKTVERKCSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEV TCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFASTFR VVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPRE PQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE NNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHE ALHNHYTQKSLSLSPG

[0104] Conforme descrito supra, várias técnicas para delinear regiões hipervariáveis (HVRs) ou regiões de determinação de complementaridade (CDRs) são conhecidas na técnica e podem ser aplicadas nas sequências de domínio variável descritas no presente documento. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende HVRs conforme definido por Chothia, Kabat, IMGT ou uma combinação dos mesmos (por exemplo, uma ou mais HVRs conforme definidas por uma delineação e uma ou mais HVRs conforme definidas por uma delineação diferente). Conforme usado no presente documento, a menos que seja especificado de outra forma, a numeração de resíduos de HVR ou CDR é definida pela numeração de Kabat.

[0105] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição se liga a um domínio extracelular (por exemplo, o domínio D1) de um polipeptídeo SIRP-α humano v1 que compreende a sequência de aminoácidos de

EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGREL

IYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRK GSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS (SEQ ID NO:5). Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição se liga a um domínio extracelular (por exemplo, o domínio D1) de um polipeptídeo SIRP-α humano v2 que compreende a sequência de aminoácidos de

EEELQVIQPDKSVSVAAGESAILHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPARELI

YNQKEGHFPRVTTVSESTKRENMDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKG SPDTEFKSGAGTELSVRAKPS (SEQ ID NO:6). Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição se liga a um domínio extracelular (por exemplo, o domínio D1) de um polipeptídeo SIRP-α humano v1 que compreende a sequência de aminoácidos de

EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGREL

IYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRK GSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS (SEQ ID NO:5) e um domínio extracelular (por exemplo, o domínio D1) de um polipeptídeo SIRP-α humano v2 que compreende a sequência de aminoácidos de

EEELQVIQPDKSVSVAAGESAILHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPARELI

YNQKEGHFPRVTTVSESTKRENMDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKG SPDTEFKSGAGTELSVRAKPS (SEQ ID NO:6).

[0106] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição se liga a um domínio extracelular (por exemplo, o domínio D1) de um polipeptídeo SIRP-α de macaco (por exemplo, o domínio D1 de um polipeptídeo SIRP-α de macaco). Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição se liga a um domínio extracelular (por exemplo, o domínio D1) de um polipeptídeo SIRP-α cinomólogo (por exemplo, encontrado no organismo Macaca fascicularis). Em algumas modalidades, o anticorpo se liga aos domínios extracelulares (por exemplo, os domínios D1) de pelo menos dois polipeptídeos variantes

SIRP-α de macaco diferentes. Em algumas modalidades, o anticorpo se liga aos domínios extracelulares (por exemplo, os domínios D1) de pelo menos dois polipeptídeos variantes SIRP-α cinomólogos diferentes. Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo se liga a um domínio extracelular (por exemplo, o domínio D1) de um polipeptídeo SIRP-α cinomólogo que compreende a sequência de aminoácidos de

EEELQVIQPEKSVSVAAGESATLNCTATSLIPVGPIQWFRGVGPGREL

IYHQKEGHFPRVTPVSDPTKRNNMDFSIRISNITPADAGTYYCVKFRK GSPDVELKSGAGTELSVRAKPS (SEQ ID NO:11), um domínio extracelular (por exemplo, o domínio D1) de um polipeptídeo SIRP-α cinomólogo que compreende a sequência de aminoácidos de

EEELQVIQPEKSVSVAAGDSATLNCTVSSLIPVGPIQWFRGAGPGRE

LIYNLKEGHFPRVTAVSDPTKRNNMDFSIRISNITPADAGTYYCVKFRK GSPDVELKSGAGTELSVRAKPS (SEQ ID NO:12), ou ambas.

[0107] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição se liga a um domínio extracelular de um polipeptídeo SIRP-α murino ou de camundongo (por exemplo, encontrado no organismo Mus musculus; por exemplo, o domínio D1 de um polipeptídeo SIRP-α murino ou de camundongo). Em algumas modalidades, o anticorpo se liga aos domínios extracelulares (por exemplo, os domínios D1) de dois ou mais polipeptídeos variantes SIRP-α murinos diferentes. Uma variedade de polipeptídeos variantes SIRP-α murinos de diferentes cepas de camundongo são conhecidos. Em algumas modalidades, o polipeptídeo variante SIRP-α murino compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de

KELKVTQPEKSVSVAAGDSTVLNCTLTSLLPVGPIKWYRGVGQSRLLI

YSFTGEHFPRVTNVSDATKRNNMDFSIRISNVTPEDAGTYYCVKFQK GPSEPDTEIQSGGGTEVYVLAKPS (SEQ ID NO: 7; da cepa do camundongo 129),

TEVKVIQPEKSVSVAAGDSTVLNCTLTSLLPVGPIRWYRGVGQSRQLI

YSFTTEHFPRVTNVSDATKRSNLDFSIRISNVTPEDAGTYYCVKFQRG SPDTEIQSGGGTEVYVLAK (SEQ ID NO:8; da cepa do camundongo NOD),

KELKVTQPEKSVSVAAGDSTVLNCTLTSLLPVGPIRWYRGVGPSRLLI

YSFAGEYVPRIRNVSDTTKRNNMDFSIRISNVTPADAGIYYCVKFQKG SSEPDTEIQSGGGTEVYVLAK (SEQ ID NO:9; da cepa do camundongo C57BL/6), e

TEVKVTQPEKSVSVAAGDSTILNCTVTSLLPVGPIRWYRGVGQSRLLI

YSFTGEHFPRIRNVSDTTKRNNMDFSIRISNVTPEDAGTYYCVKFQR GSSEPDTEIQSGGGTEVYVLAK (SEQ ID NO:10; da cepa do camundongo BALB/c).

[0108] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição se liga a um domínio extracelular (por exemplo, o domínio D1) de uma proteína da família SIRP humana. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição se liga a um domínio extracelular (por exemplo, o domínio D1) de um polipeptídeo SIRP-β humano. Em algumas modalidades, um polipeptídeo SIRP-β humano se refere a um polipeptídeo codificado por um gene SIRPB1 humano, por exemplo, conforme descrito pela SEQ ID NO de referência NCBI 10326. Em algumas modalidades, o domínio extracelular (por exemplo, o domínio D1) do polipeptídeo SIRP-β humano compreende a sequência de aminoácidos de

EDELQVIQPEKSVSVAAGESATLRCAMTSLIPVGPIMWFRGAGAGRE

LIYNQKEGHFPRVTTVSELTKRNNLDFSISISNITPADAGTYYCVKFRK GSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS (SEQ ID NO:13) ou

EEELQVIQPDKSISVAAGESATLHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPGRELI

YNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRISNITPADAGTYYCVKFRKG SPDHVEFKSGAGTELSVRAKPS (SEQ ID NO:14).

[0109] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição se liga a um domínio extracelular (por exemplo, o domínio D1)

de um polipeptídeo SIRP-γ humano. Em algumas modalidades, um polipeptídeo SIRP-γ humano se refere a um polipeptídeo codificado por um gene SIRPG humano, por exemplo, conforme descrito pela SEQ ID NO de referência NCBI 55423. Em algumas modalidades, o domínio extracelular (por exemplo, o domínio D1) do polipeptídeo SIRP-γ humano compreende a sequência de aminoácidos de

EEELQMIQPEKLLLVTVGKTATLHCTVTSLLPVGPVLWFRGVGPGRE

LIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRISSITPADVGTYYCVKFRK GSPENVEFKSGPGTEMALGAKPS (SEQ ID NO:15).

[0110] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição se liga a um domínio de IgSF de CD47 (por exemplo, CD47 humana). Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição se liga a um polipeptídeo que compreende a sequência de aminoácidos de

QLLFNKTKSVEFTFSNDTVVIPCFVTNMEAQNTTEVYVKWKFKGRDIY

TFDGALNKSTVPTDFSSAKIEVSQLLKGDASLKMDKSDAVSHTGNYT CEVTELTREGETIIELKYRVVS (SEQ ID NO:16).

[0111] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição modula a sinalização de SIRP-α numa célula que expressa um polipeptídeo SIRP-α humano. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição antagoniza a sinalização de SIRP-α numa célula que expressa um polipeptídeo SIRP-α humano. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição interfere na sinalização de SIRP-α numa célula que expressa um polipeptídeo SIRP- α humano. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição agoniza a sinalização de SIRP-α numa célula que expressa um polipeptídeo SIRP-α humano. Em algumas modalidades, a sinalização de SIRP-α inclui um ou mais eventos de sinalização intracelular mediados por ativação de um polipeptídeo SIRP-α, que incluem, sem limitação, fosforilação de tirosina da região intracelular de

SIRP-α, ligação de fosfatase (por exemplo, SHP1), ligação de proteína adaptadora (por exemplo, SCAP2, FYB e/ou GRB2), e produção de óxido nítrico. Vários ensaios para medir a sinalização de SIRP-α numa célula incluem, sem limitação, fosforilação de SIRP-α, coimunoprecipitação de SHP1 e SHP2, sinalização de PI3 quinase, produção de citocina (níveis de marcadores de superfície celular de ambas citocinas inflamatórias IL-12, IL-23, TNF, IFN e supressivas IL- 10, IL-4, IL-13 para marcadores de macrófago M1 e M2) ou ativação e função de célula dendrítica; Kharitonenkov, A. et al. (1997) Nature 386: 181-186; Ochi, F. et al. (1997) Biochem. Biophys. Res. Commun. 239:483-487; Kim, E.J. et al. (2013) Inflammation Research 62:377-386; Yi, T. et al. (2015) Immunity 43:764-775.

[0112] Em algumas modalidades, a célula que expressa um polipeptídeo SIRP-α humano é um leucócito. Em algumas modalidades, a célula é um macrófago, célula dendrítica, neutrófilo, eosinófilo ou célula supressora derivada de mieloide (MDSC). Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição diminui ou antagoniza a sinalização de SIRP-α numa célula que expressa um polipeptídeo SIRP-α humano em pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, ou pelo menos 90%, por exemplo, com o uso de um ou mais dos ensaios de sinalização de SIRP-α descritos no presente documento ou, de outra forma, conhecidos na técnica. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição aumenta ou agoniza a sinalização de SIRP-α numa célula que expressa um polipeptídeo SIRP-α humano em pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, ou pelo menos 90%, por exemplo, com o uso de um ou mais dos ensaios de sinalização de SIRP-α descritos no presente documento ou, de outra forma, conhecidos na técnica.

[0113] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição modula um fenótipo intercelular mediado por SIRP-α. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição aprimora a fagocitose através de um macrófago que expressa um polipeptídeo SIRP-α humano. Por exemplo, a atividade fagocítica de um macrófago tratado ou em contato com um anticorpo da presente descrição pode ser comparada com a atividade fagocítica de um macrófago não tratado ou em contato com o anticorpo, ou a atividade fagocítica de um macrófago que expressa um polipeptídeo SIRP-α humano e é tratado ou está em contato com um anticorpo da presente descrição pode ser comparada com a atividade fagocítica de um macrófago que não expressa um polipeptídeo SIRP-α humano e é tratado ou está em contato com o anticorpo. Ensaios de fagocitose exemplificativos podem ser encontrados, por exemplo, em Wieskopf, K. et al (2013) Science 341: 88 e Willingham, S.B. et al. (2012) Proc. Natl. Acad. Sci. 109:6662-

6667. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição aumenta a fagocitose por um macrófago que expressa um polipeptídeo SIRP-α humano em pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, ou pelo menos 90%, por exemplo, com o uso de um ou mais dos ensaios de fagocitose descritos no presente documento ou de outra forma conhecidos na técnica.

[0114] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição aprimora a ativação de célula (ou células) dendrítica que expressa um polipeptídeo SIRP-α humano (por exemplo, um nível aumentado de ativação de células dendríticas individuais, ou uma proporção aumentada de células dendríticas que são ativadas dentro de uma população de amostras). Por exemplo, a ativação de célula (ou células) dendrítica tratada ou em contato com um anticorpo da presente descrição pode ser comparada com a ativação de célula (ou células)

dendrítica não tratada ou em contato com o anticorpo, ou a ativação de célula (ou células) dendrítica que expressa um polipeptídeo SIRP-α humano e é tratada ou está em contato com um anticorpo da presente descrição pode ser comparada com a ativação de célula (ou células) dendrítica que não expressa um polipeptídeo SIRP-α humano e é tratada ou está em contato com o anticorpo. Ensaios de ativação de célula dendrítica exemplificativos são descritos no presente documento. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição aumenta a ativação de célula dendrítica (por exemplo, que expressa um polipeptídeo SIRP-α humano) em pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, ou pelo menos 90%, por exemplo, com o uso de um ou mais dos ensaios de ativação de célula dendrítica descritos no presente documento ou de outra forma conhecidos na técnica.

[0115] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição inibe crescimento in vivo de um tumor que expressa CD47. Por exemplo, crescimento in vivo de um tumor que expressa CD47 e é tratado com um anticorpo da presente descrição pode ser comparado contra crescimento in vivo de um tumor que expressa CD47 e não é tratado com um anticorpo da presente descrição. Ensaios de crescimento tumoral in vivo exemplificativos são descritos no presente documento. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição inibe crescimento in vivo de um tumor que expressa CD47 em pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos 80%, ou pelo menos 90%, por exemplo, com o uso de um ou mais dos ensaios de crescimento tumoral in vivo descritos no presente documento ou de outra forma conhecidos na técnica.

[0116] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição bloqueia a ligação entre um domínio extracelular (por exemplo, o domínio D1) de um polipeptídeo SIRP-α humano e um domínio de IgSF de um polipeptídeo CD47 humano (por exemplo, um anticorpo de “bloqueio”). Por exemplo, o anticorpo e o polipeptídeo CD47 podem “competir” pelo mesmo epítopo de SIRP-α, e/ou anticorpo que se liga à SIRP-α pode ser mutuamente exclusivo à CD47 que se liga à SIRP-α. A interface de ligação entre SIRP-α e CD47, assim como resíduos de ambas as proteínas que participam na ligação, são conhecidos; consultar Hatherley, D. et al. (2007) J. Biol. Chem. 282:14567-14575 e Nakaishi, A. et al. (2008) J. Mol. Biol. 375:650-660. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição bloqueia a ligação entre um domínio extracelular (por exemplo, o domínio D1) de um polipeptídeo SIRP-α humano e um domínio de IgSF de um polipeptídeo CD47 humano num ensaio in vitro, tal como um ensaio ELISA ou SPR, por exemplo, com o uso de polipeptídeos SIRP-α e/ou CD47 purificados.

PRODUÇÃO DE ANTICORPO E OUTRAS PROPRIEDADES DE ANTICORPO

[0117] Um anticorpo da presente descrição pode ser produzido por quaisquer meios conhecidos na técnica. Técnicas exemplificativas para produção de anticorpo são descritas abaixo; no entanto, estas técnicas exemplificativas são fornecidas para fins ilustrativos apenas e não devem ser limitantes. Além disto, propriedades de anticorpo exemplificativas contempladas para uso com os anticorpos descritos no presente documento são adicionalmente descritas.

[0118] Em algumas modalidades, um anticorpo que se “liga” a um antígeno tem uma constante de dissociação (KD) para o antígeno que é menor ou igual a 1 µM a 25 ºC. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição tem uma constante de dissociação (KD) para polipeptídeos SIRP-α v1 e/ou v2 humanos que é menor ou igual a 1 µM a 25 ºC, menor ou igual a 500 nM a 25 ºC, menor ou igual a 400 nM a

25 ºC, menor ou igual a 300 nM a 25 ºC, menor ou igual a 250 nM a 25 ºC, menor ou igual a 200 nM a 25 ºC, menor ou igual a 200 nM a 25 ºC, menor ou igual a 100 nM a 25 ºC, ou menor ou igual a 50 nM a 25 ºC. Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga a um polipeptídeo SIRP-α humano e um ou mais polipeptídeos SIRP-α não humanos se liga ao polipeptídeo SIRP-α humano numa afinidade superior (por exemplo, 10 vezes ou 100 vezes superior) ao polipeptídeo SIRP-α não humano, embora ainda seja considerado por “ligar” ambos polipeptídeos. Em algumas modalidades, um anticorpo que se liga a um polipeptídeo SIRP-α não humano e um ou mais polipeptídeos SIRP-α humanos se liga ao polipeptídeo SIRP-α humano numa afinidade superior (por exemplo, 10 vezes ou 100 vezes superior) ao polipeptídeo SIRP-α humano, embora ainda seja considerado por “ligar” ambos polipeptídeos. Ensaios para determinar a afinidade de ligação são conhecidos na técnica e incluem, sem limitação, ressonância de plasmon em superfície (SPR), por exemplo, conforme descrito no presente documento; ensaio de ligação ao antígeno radiomarcado (RIA), por exemplo, com o uso de uma versão de Fab de um anticorpo e seu antígeno; e semelhantes.

[0119] Para preparar um antígeno, o antígeno pode ser purificado ou obtido de outra forma a partir de uma origem natural, ou pode ser expresso com o uso de técnicas recombinantes. Em algumas modalidades, o antígeno pode ser usado como uma proteína solúvel. Em algumas modalidades, o antígeno pode ser conjugado em outro polipeptídeo ou outra porção química, por exemplo, para aumentar sua imunogenicidade. Por exemplo, um antígeno descrito no presente documento pode ser acoplado a uma região Fc. Em algumas modalidades, uma célula que expressa o antígeno em sua superfície celular pode ser usada como o antígeno.

[0120] Anticorpos policlonais podem ser elevados num animal através de múltiplas injeções subcutâneas (sc) ou intraperitoneais (ip) do antígeno e um adjuvante. Por exemplo, descrições de imunização de galinha são descritas no presente documento. Em algumas modalidades, o antígeno é conjugado com uma proteína imunogênica, por exemplo, hemocianina de lapa de buraco de fechadura, albumina sérica, tiroglobulina bovina, ou inibidor de tripsina de soja com o uso de um agente bifuncional ou de derivatização. Métodos exemplificativos para imunização de galinhas são fornecidos no presente documento. Métodos relevantes adequados para uma variedade de outros organismos, tais como mamíferos, são bem conhecidos na técnica.

[0121] Conforme descrito supra, anticorpos monoclonais podem ser produzidos através de uma variedade de métodos. Em algumas modalidades, um anticorpo monoclonal da presente descrição é produzido com o uso do método de hibridoma descrito primeiro por Kohler et al., Nature, 256:495 (1975), e descrito posteriormente em Hongo et al., Hybridoma, 14 (3): 253-260 (1995); Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2ª edição, 1988); e Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T- Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981). Tecnologia de hibridoma humano (tecnologia de trioma) é descrita em Vollmers e Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) e Vollmers e Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-191 (2005). Um meio de cultura no qual células de hibridoma são cultivadas pode ser examinado pela presença de um anticorpo de interesse, por exemplo, através de ensaio de ligação in vitro, imunoprecipitação, ELISA, RIA, etc.; e a afinidade de ligação pode ser determinada, por exemplo, através de análise Scatchard. Um hibridoma que produz um anticorpo com propriedades de ligação desejadas pode ser subclonado e cultivado com o uso de técnicas de cultura conhecidas, cultivado in vivo como tumores de ascites num animal, e semelhantes.

[0122] Em algumas modalidades, um anticorpo monoclonal é produzido com o uso de um método de biblioteca, tal como uma biblioteca de exibição de fago. Consultar, por exemplo, Hoogenboom et al., em Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001). Em algumas modalidades, repertórios de genes VH e VL são clonados por reação em cadeia de polimerase (PCR) e aleatoriamente recombinados em bibliotecas de fago, que são, então, examinados para fago de ligação ao antígeno, por exemplo, conforme descrito em Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994). Fago exibe, tipicamente, fragmentos de anticorpo, seja como fragmentos Fv de cadeia única (scFv) ou como fragmentos Fab. Alternativamente, o repertório virgem pode ser clonado (por exemplo, a partir de ser humano) para fornecer uma origem única de anticorpos a uma ampla faixa de não autoantígenos e também autoantígenos sem nenhuma imunização, conforme descrito por Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993). Finalmente, bibliotecas virgens também podem ser produzidas sinteticamente clonando-se segmentos de gene V não dispostos a partir de células tronco, e com o uso de iniciadores de PCR que contêm sequência aleatória para codificar as regiões CDR3 altamente variáveis e para realizar reorganização in vitro, conforme descrito por Hoogenboom e Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992).

[0123] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é um anticorpo de galinha. Anticorpos de galinha podem ser produzidos com o uso de várias técnicas conhecidas na arte; consultar, por exemplo, os documentos de Patente nº U.S. 6.143.559; 8.592.644; e 9.380.769.

[0124] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é um anticorpo quimérico. Consultar, por exemplo, o documento de Patente nº U.S. 4.816.567 e Morrison et al., Proc. Natl.

Acad. Sci. EUA, 81:6851-6855 (1984). Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico compreende uma região variável não humana (por exemplo, uma região variável derivada de uma galinha, camundongo, rato, hamster, coelho ou primata não humano, tal como um macaco) e uma região constante humana. Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico é um anticorpo de “classe comutada” no qual a classe ou subclasse foi alterada daquela do anticorpo parente. Anticorpos quiméricos incluem fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos.

[0125] Em algumas modalidades, um anticorpo quimérico é um anticorpo humanizado. Um anticorpo não humano pode ser humanizado para reduzir imunogenicidade aos seres humanos, embora retenha a especificidade e a afinidade do anticorpo não humano parental. De modo geral, um anticorpo humanizado compreende um ou mais domínios variáveis nos quais HVRs, por exemplo, CDRs, (ou porções das mesmas) são derivadas de um anticorpo não humano (por exemplo, um anticorpo de galinha), e FRs (ou porções das mesmas) são derivadas de sequências de anticorpo humano. Um anticorpo humanizado também compreenderá, opcionalmente, pelo menos uma porção de uma região constante humana. Em algumas modalidades, alguns resíduos de FR num anticorpo humanizado são substituídos por resíduos correspondentes de um anticorpo não humano (por exemplo, o anticorpo do qual os resíduos de HVR são derivados), por exemplo, para restaurar ou melhorar a especificidade ou afinidade de anticorpo. Anticorpos humanizados e métodos para produção são, então, revistos, por exemplo, em Almagro e Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008). Métodos para humanizar um anticorpo de galinha também foram descritos, por exemplo, no documento nº WO2005014653.

[0126] Regiões de estrutura principal humano úteis para humanização incluem, porém, sem limitação: regiões de estrutura principal selecionadas com o uso de método de “melhor encaixe”;

regiões de estrutura principal derivadas da sequência consensual de anticorpos humanos de um subgrupo particular de regiões variáveis de cadeia leve ou pesada; regiões de estrutura principal somaticamente mutadas humanas ou regiões de estrutura principal de linha genética humana; e regiões de estrutura principal derivadas das bibliotecas de FR de exame. Consultar, por exemplo, Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993); Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. EUA, 89:4285 (1992); Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993); Almagro e Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008); e Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997).

[0127] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é um anticorpo humano. Anticorpos humanos podem ser produzidos com o uso de várias técnicas conhecidas na técnica. Em algumas modalidades, o anticorpo humano é produzido através de um animal não humano, tal como as galinhas modificadas geneticamente (consultar, por exemplo, os documentos de Patente nº U.S. 8.592.644; e 9.380.769) e/ou camundongos descritos no presente documento. Anticorpos humanos são descritos, de modo geral, em Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008).

[0128] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é gerado por ou derivado de uma galinha, por exemplo, com o uso dos métodos descritos no presente documento.

[0129] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é um fragmento de anticorpo, que inclui, sem limitação, um fragmento de Fab, F(ab’)2, Fab’-SH, Fv, ou scFv, ou um anticorpo de domínio único, cadeia pesada única ou cadeia leve única. Fragmentos de anticorpo podem ser gerados, por exemplo, através de digestão enzimática ou através de técnicas recombinantes. Em algumas modalidades, digestão proteolítica de um anticorpo intacto é usada para gerar um fragmento de anticorpo, por exemplo, conforme descrito em

Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992) e Brennan et al., Science, 229:81 (1985). Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo é produzido através de uma célula hospedeira recombinante. Por exemplo, fragmentos de anticorpo Fab, Fv e ScFv são expressos por e secretados de E. coli. Fragmentos de anticorpos podem ser alternativamente isolados de uma biblioteca de fago de anticorpo.

[0130] Fragmentos Fab'-SH podem ser diretamente recuperados de E. coli e quimicamente acoplados para formar fragmentos F(ab')2. Consultar Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992). Fragmentos F(ab') 2 também podem ser isolados diretamente de uma cultura de célula hospedeira recombinante. Fragmentos Fab e F(ab') 2 com meia vida in vivo aumentada que compreendem resíduos de epítopo de ligação ao receptor de resgate são descritos no Documento de Patente nº U.S. 5.869.046.

[0131] Em algumas modalidades, um anticorpo é um fragmento de Fv de cadeia única (scFv). Consultar documento nº WO 93/16185 e Documentos de Patente nº U.S. 5.571.894 e 5.587.458. Proteínas de fusão de scFv podem ser construídas para produzir uma fusão de uma proteína efetora na terminação amino ou carbóxi de um scFv. O fragmento de anticorpo também pode ser um “anticorpo linear”, por exemplo, conforme descrito no Documento de Patente nº U.S.

5.641.870, por exemplo. Tais anticorpos lineares podem ser monoespecíficos ou biespecíficos.

[0132] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é um anticorpo multiespecífico. Anticorpos multiespecíficos têm especificidades de ligação contra mais de um antígeno (por exemplo, que tem duas, três ou mais especificidades de ligação). Em algumas modalidades, o anticorpo é um anticorpo biespecífico. Em algumas modalidades, um anticorpo biespecífico compreende duas especificidades de ligação diferentes para o mesmo antígeno (por exemplo, que tem afinidade de ligação diferente e/ou epítopo específico do mesmo antígeno). Em algumas modalidades, um anticorpo biespecífico compreende especificidades de ligação para dois antígenos distintos. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico é um anticorpo de comprimento completo ou intacto. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico é um fragmento de anticorpo da presente descrição.

[0133] Anticorpos biespecífico ou multiespecífico com uma variedade de combinações de especificidades de ligação são contemplados no presente documento. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico tem uma primeira especificidade de ligação para um ou mais polipeptídeos SIRP-α conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico tem uma segunda especificidade de ligação para um antígeno expresso por uma célula cancerosa, por exemplo, na superfície celular. Tais antígenos exemplificativos incluem, sem limitação, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD52, CD56, CD70, CD74, CD79b, CD123 , CD138, CS1/SLAMF7, Trop-2, 5T4, EphA4, BCMA, Mucina 1, Mucina 16, PTK7, PD-L1, STEAP1, Receptor de Endotelina B, mesotelina, EGFRvIII, ENPP3, SLC44A4, GNMB, nectina 4, NaPi2b, LIV-1A, Guanilil ciclase C , DLL3, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR, integrina αVβ3, integrina α5β1, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, Tenascina, Ley, EpCAM, CEA, gpA33, PSMA, TAG72, uma mucina, CAIX, EPHA3 , receptor de folato α, GD2, GD3 e um complexo de MHC/peptídeo que compreende um peptídeo de NY-ESO-1/LAGE, SSX-2, uma proteína da família MAGE, MAGE-A3, gp100/pmel17, Melan-A/MART-1, gp75/TRP1, tirosinase, TRP2, CEA, PSA, TAG-72, receptor de laminina imaturo, MOK/RAGE-1, WT-1, SAP-1, BING-4, EpCAM, MUC1, PRAME, survivina, BRCA1, BRCA2, CDK4, CML66,

MART-2, p53, Ras, β-catenina, TGF-βRII, HPV E6 ou HPV E7. Sem desejar estar vinculado à teoria, acredita-se que combinar tal especificidade de ligação com uma especificidade de ligação contra uma SIRP-α é particularmente vantajoso, por exemplo, para direcionar leucócitos de expressão de FcR para alvejar uma célula tumoral com a segunda especificidade de ligação enquanto também se inibe a capacidade de resposta de SIRP-α expressa pelo leucócito para qualquer CD47 expressa pela célula tumoral com a primeira especificidade de ligação.

[0134] Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico tem uma segunda especificidade de ligação para um antígeno expresso por uma célula imune, por exemplo, na superfície celular. Tais antígenos exemplificativos incluem, sem limitação, BDCA2, BDCA4, ILT7, LILRB1, LILRB2, LILRB3, LILRB4, CSF-1R, CD40, CD40L, CD163, CD206, DEC205, CD47, CD123, IDO, TDO, 41BB, CTLA4, PD1, PD-L1, PD-L2, TIM-3, BTLA, VISTA, LAG-3, CD28, OX40, GITR, CD137, CD27, HVEM, CCR4, CD25, CD103, KIrg1, Nrp1, CD278, Gpr83, TIGIT, CD154, CD160, PVRIG, DNAM e ICOS. Em algumas modalidades, o antígeno é expresso numa célula mieloide. Tais antígenos podem incluir, sem limitação, BDCA2, BDCA4, ILT7, LILRB1, LILRB2, LILRB3, LILRB4, CSF-1R, CD40, CD40L, CD163, CD206, DEC205, CD47, CD123, IDO e TDO. Em algumas modalidades, o antígeno é expresso numa célula T. Tais antígenos podem incluir, sem limitação, 41BB, CTLA4, PD1, PD- L1, PD-L2, TIM-3, BTLA, VISTA, LAG-3, CD28, OX40, GITR, CD137, CD27, HVEM, CCR4, CD25, CD103, KIrg1, Nrp1, CD278, Gpr83, TIGIT, CD154, CD160, TNFR2, PVRIG, DNAM e ICOS.

[0135] Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico tem uma segunda especificidade de ligação para um antígeno expresso por uma célula NK, por exemplo, na superfície celular. Tais antígenos exemplificativos incluem, sem limitação, NKR-P1A (KLRB1), CD94

(NKG2A), KLRG1, KIR2DL5A, KIR2DL5B, KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3, KIR2DS2, KIR2DS3, KIR2DS4, KIR2DS5, KIR3DS1, KIR2DS1, CD94 (NKG2C/E), NKG2D, CD160 (BY55), CD16 (FcγRIIIA), NKp46 (NCR1), NKp30 (NCR3), NKp44 (NCR2), DNAM1 (CD226), CRTAM, CD27, NTB-A (SLAMF6), PSGL1, CD96 (tátil), CD100 (SEMA4D), NKp80 (KLRF1, CLEC5C), SLAMF7 (CRACC, CS1, CD319) e CD244 (2B4, SLAMF4).

[0136] Vários métodos são conhecidos na técnica para gerar e purificar um anticorpo biespecífico. Diversas abordagens foram descritas. Uma abordagem é a abordagem “botões nos orifícios” ou “protuberância na cavidade” (consultar, por exemplo, documento de Patente nº 5.731.168). Em algumas modalidades, heterodimerização de monômeros de domínio Fc é promovida introduzindo-se substituições diferentes, porém, compatíveis, nos dois monômeros de domínio Fc, tal como pares de resíduo de “botão no orifício” e pares de resíduo de carga. A interação entre botão e orifício favorece formação de heterodímero, enquanto a interação entre botão e botão e orifício e orifício prejudica a formação de homodímero devido ao embate estérico e deleção de interações favoráveis. Um orifício se refere a um vazio que é criado quando um aminoácido original numa proteína é substituído por um aminoácido diferente que tem um volume de cadeia lateral menor. Um botão se refere a uma colisão que é criada quando um aminoácido original numa proteína é substituído por um aminoácido diferente que tem um volume de cadeia lateral maior. Por exemplo, em algumas modalidades, um aminoácido que é substituído está no domínio constante de anticorpo CH3 de um monômero de domínio Fc e envolvido na dimerização de dois monômeros de domínio Fc. Em algumas modalidades, um orifício num domínio constante de anticorpo CH3 é criado para acomodar um botão em outro domínio constante de anticorpo CH3, de modo que os aminoácidos de botão e orifício atuem para promover ou favorecer a heterodimerização dos dois monômeros de domínio Fc. Em algumas modalidades, um orifício num domínio constante de anticorpo CH3 é criado para acomodar melhor um aminoácido original em outro domínio constante de anticorpo CH3. Em algumas modalidades, um botão num domínio constante de anticorpo CH3 é criado para formar interações adicionais com aminoácidos originais em outro domínio constante de anticorpo CH3.

[0137] Em algumas modalidades, um orifício é construído substituindo- se aminoácidos com cadeias laterais maiores, tais como tirosina ou triptofano por aminoácidos com cadeias laterais menores, tais como alanina, valina ou treonina, por exemplo, uma mutação Y407V no domínio constante de anticorpo CH3. De maneira similar, em algumas modalidades, um botão é construído substituindo-se aminoácidos com cadeias laterais menores por aminoácidos com cadeias laterais maiores, por exemplo, uma mutação T366W no domínio constante de anticorpo CH3. Em algumas modalidades, um monômero de domínio Fc inclui a mutação de botão T366W e o outro monômero de domínio Fc inclui mutações de orifício T366S, L358A e Y407V. Em algumas modalidades, um polipeptídeo da descrição que inclui uma variante de D1 de SIRP-α de alta afinidade é fundido num monômero de domínio Fc que inclui a mutação de botão T366W para limitar formação de homodímero botão-botão indesejado. Exemplos de pares de aminoácido de botão no orifício são incluídos, sem limitação, na Tabela 3. TABELA 3. PARES DE AMINOÁCIDO DE BOTÃO NO ORIFÍCIO. Monômero de T366S L358A T394W T394S T366W Y407T Y407A F405A T394S domínio Fc 1 Y407V Y407T Y407A T394S Monômero de T366Y T366W F405W T366Y T366W T394W F405W T366W domínio Fc 2 F405A F405W Y407A

[0138] Outra abordagem usa domínios variáveis de anticorpo com as especificidades de ligação desejadas (sítios de combinação de anticorpo e antígeno) fundidas em sequências de domínio constante de imunoglobulina, por exemplo, com um domínio constante de cadeia pesada de imunoglobulina, que compreende pelo menos parte das regiões de articulação, CH2 e CH3. Em algumas modalidades, o anticorpo biespecífico tem uma cadeia pesada de imunoglobulina híbrida com uma primeira especificidade de ligação num braço e um par de cadeia pesada e cadeia leve de imunoglobulina híbrida (que fornece uma segunda especificidade de ligação) no outro braço. Consultar o documento nº WO 94/04690. Outra abordagem usa reticulação (consultar, por exemplo, documento de Patente nº U.S. 4.676.980) para produzir um anticorpo heteroconjugado. Em algumas modalidades, anticorpos biespecíficos podem ser preparados com o uso de ligação química (consultar, por exemplo, Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)) para clivar proteoliticamente um anticorpo intacto em fragmentos F(ab')2 que são reduzidos na presença de um agente de complexação de ditiol e convertidos em derivados de tionitrobenzoato (TNB), em que um destes é reconvertido no Fab'-tiol através de redução e misturado com o outro derivado de Fab'-TNB para formar o anticorpo biespecífico. Em algumas modalidades, fragmentos Fab’-SH são quimicamente acoplados. Em algumas modalidades, fragmentos de anticorpo biespecífico são produzidos em cultura celular com o uso de zíperes de leucina, como em Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547- 1553 (1992). Para outros formatos de anticorpo biespecífico, consultar, por exemplo, Spiess, C. et al. (2015) Mol. Immunol. 67:95-106.

[0139] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é um diacorpo. Consultar, por exemplo, Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA, 90:6444-6448 (1993). Num diacorpo, os domínios de VH e VL de um par de fragmentos com domínios VL e VH complementares de outro fragmento, assim, se formam dois sítios de ligação ao antígeno. Outra estratégia para produzir fragmentos de anticorpo biespecífico através do uso de dímeros de cadeia única Fv (sFv) também foi relatada. Consultar Gruber et al, J. Immunol, 152:5368 (1994).

[0140] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é um anticorpo de domínio único. Um anticorpo de domínio único se refere a uma única cadeia de polipeptídeo que compreende todo ou uma porção do domínio variável de cadeia pesada ou todo ou uma porção do domínio variável de cadeia leve de um anticorpo. Em determinadas modalidades, um anticorpo de domínio único é um anticorpo de domínio único humano (consultar, por exemplo, Documento de Patente nº U.S. 6.248.516 B1). Numa modalidade, um anticorpo de domínio único inclui todo ou uma porção do domínio variável de cadeia pesada de um anticorpo. Anticorpos de camelídeo também são conhecidos.

[0141] Anticorpos podem ser produzidos com o uso de métodos recombinantes. Para produção recombinante de um anticorpo antiantígeno, ácido nucleico que codifica o anticorpo é isolado e inserido num vetor replicável para clonagem adicional (amplificação do DNA) ou para expressão. DNA que codifica o anticorpo pode ser prontamente isolado e sequenciado com o uso de procedimentos convencionais (por exemplo, com o uso de sondas de oligonucleotídeo que têm capacidade para se ligar especificamente aos genes que codificam as cadeias pesadas e leves do anticorpo). Diversos vetores estão disponíveis. Os componentes de vetor incluem, de modo geral, porém, sem limitação, um ou mais dos seguintes: uma sequência de sinal, uma origem de replicação, um ou mais genes marcadores, um elemento aprimorador, um promotor e uma sequência de terminação de transcrição.

[0142] Um anticorpo da presente descrição pode ser produzido de maneira recombinante como um polipeptídeo de fusão com um polipeptídeo heterólogo, por exemplo, uma sequência de sinal ou outro polipeptídeo que tem um sítio de clivagem específico na terminação N da proteína ou polipeptídeo maduro. A sequência de sinal heteróloga selecionada pode ser uma que é reconhecida e processada (por exemplo, clivada por uma peptidase sinal) pela célula hospedeira. Para células hospedeiras procarióticas que não reconhecem e processam uma sequência de sinal de anticorpo nativa, a sequência de sinal é substituída por uma sequência de sinal procariótica selecionada, por exemplo, a partir de fosfatase alcalina, penicilinase, lpp ou líderes de enterotoxina II termicamente estáveis. Para secreção de levedura, a sequência de sinal nativa pode ser substituída, por exemplo, pelo líder de levedura invertase, um líder de fator (que inclui líderes de α-fator Saccharomyces e Kluyveromyces), ou líder de ácido fosfatase, o líder de glicoamilase C. albicans, etc. Em expressão de célula de mamífero, sequências de sinal de mamífero, assim como líderes secretores virais, por exemplo, o sinal gD de herpes simplex, estão disponíveis.

[0143] Ambos os vetores de expressão e clonagem contêm uma sequência de ácido nucleico que permite que o vetor se replique numa ou mais células hospedeiras selecionadas, por exemplo, para permitir que o vetor se replique independentemente do DNA cromossômico hospedeiro. Esta sequência pode incluir origens de replicação ou sequências autonomamente replicantes. Tais sequências são bem conhecidas para uma variedade de bactérias, levedura e vírus. De modo geral, a origem de componente de replicação não é necessária para vetores de expressão de mamífero (a origem SV40 pode ser usada uma vez que contém o promotor precoce).

[0144] Vetores de expressão e clonagem podem conter um gene de seleção ou marcador selecionável. Genes de seleção típicos codificam proteínas que (a) conferem resistência aos antibióticos ou outras toxinas, por exemplo, ampicilina, neomicina, metotrexato ou tetraciclina, (b) complementam deficiências auxotróficas ou (c) fornecem nutrientes cruciais não disponíveis dos meios complexos. Exemplos de seleção dominante usam os fármacos neomicina, ácido micofenólico e higromicina. Outro exemplo de marcadores selecionáveis adequados para células de mamíferos é aquele que permite a identificação de células competentes para absorver ácido nucleico que codifica anticorpo, tal como DHFR, glutamina sintetase (GS), timidina quinase, metalotioneína-I e -II, genes de metalotioneína preferencialmente de primatas, adenosina deaminase, ornitina descarboxilase e semelhantes. Por exemplo, uma linha celular de ovário de hamster chinês (CHO) deficiente em atividade de DHFR endógena transformada com o gene de DHFR é identificada cultivando-se os transformantes num meio de cultura que contém metotrexato (Mtx), um antagonista competitivo de DHFR.

[0145] Alternativamente, células hospedeiras (particularmente hospedeiros de tipo selvagem que contêm DHFR endógena) transformadas ou cotransformada com sequências de DNA que codificam um anticorpo de interesse, gene de DHFR de tipo selvagem e outro marcador selecionável, tal como aminoglicosídeo 3'- fosfotransferase (APH) pode ser selecionado através de crescimento celular em meio que contém um agente de seleção para o marcador selecionável, tal como um antibiótico aminoglicosídico, por exemplo, canamicina, neomicina ou G418.

[0146] Vetores de expressão e clonagem contêm, de modo geral, um promotor que é reconhecido pelo organismo hospedeiro e é operacionalmente ligado ao ácido nucleico que codifica um anticorpo. Promotores adequados para uso com hospedeiros procarióticos incluem o promotor phoA, sistemas de promotor β-lactamase e lactose, promotor de fosfatase alcalina, um sistema de promotor de triptofano (trp) e promotores híbridos, tais como o promotor tac. No entanto, outros promotores bacterianos conhecidos são adequados. Sequências de promotor são conhecidas por eucariontes. Promotores de levedura são bem conhecidos na técnica e podem incluir promotores/aprimoradores induzíveis regulados pelas condições de crescimento. Virtualmente todos os genes eucarióticos têm uma região rica em AT localizada aproximadamente 25 a 30 bases a montante do sítio onde a transcrição é iniciada. Exemplos incluem, sem limitação, os promotores para 3- fosfoglicerato quinase ou outras enzimas glicolíticas, tais como enolase, gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase, hexoquinase, piruvato descarboxilase, fosfofrutoquinase, glicose-6-fosfato isomerase, 3- fosfoglicerato mutase, piruvato quinase, triosefosfato isomerase, fosfoglicose isomerase e glicoquinase. Transcrição de anticorpo de vetores em células hospedeiras de mamífero pode ser controlada, por exemplo, através de promotores obtidos dos genomas de vírus. Os promotores precoces e tardios do vírus SV40 são convenientemente obtidos como um fragmento de restrição de SV40 que também contém a origem viral SV40 de replicação. O promotor precoce imediato do citomegalovírus humano é convenientemente obtido como um fragmento de restrição HindIII E. Alternativamente, a repetição de terminal longo do Vírus Rous Sarcoma pode ser usada como o promotor.

[0147] Transcrição de um DNA que codifica um anticorpo da presente descrição através de eucariontes superiores é frequentemente aumentada inserindo-se uma sequência aprimoradora no vetor. Diversas sequências aprimoradoras são conhecidas agora a partir de genes de mamíferos (globina, elastase, albumina, α-fetoproteína e insulina). Tipicamente, no entanto, uma pessoa usará um aprimorador de um vírus de célula eucariótica.

[0148] Vetores de expressão usados em células hospedeiras eucarióticas (células de levedura, fungos, inseto, planta, animal, ser humano ou nucleadas de outros organismos multicelulares) também conterão sequências necessárias para a terminação de transcrição e para estabilizar o mRNA.

[0149] Células hospedeiras adequadas para clonagem ou expressão do DNA nos vetores no presente documento são as células procariontes, de levedura ou eucariontes superiores descritas acima. Procariontes adequados para este fim incluem eubactérias, tais como organismos Gram-negativos ou Gram-positivos, por exemplo, Enterobacteriaceae, tais como Escherichia, por exemplo, E. coli, Enterobacter, Erwinia, Klebsiella, Proteus, Salmonella, por exemplo, Salmonella typhimurium, Serratia, por exemplo, Serratia marcescans, e Shigella, etc. Além dos procariontes, micróbios eucariontes, tais como fungos filamentosos ou levedura são hospedeiros de clonagem ou expressão adequados para vetores de codificação de anticorpo. Saccharomyces cerevisiae, ou fermento de padeiro, é normalmente o mais usado dentre micro-organismos hospedeiros eucarióticos inferiores. Determinadas cepas de fungos e levedura podem ser selecionadas nas quais trajetórias de glicosilação foram “humanizadas”, o que resulta na produção de um anticorpo com um padrão de glicosilação parcial ou completamente humano. Consultar, por exemplo, Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006).

[0150] Culturas de célula vegetal de algodão, milho, batata, soja, petúnia, tomate, lentilha-de-água (Leninaceae), alfafa (M. truncatula) e tabaco também podem ser utilizadas como hospedeiros.

[0151] Células hospedeiras adequadas para a expressão de anticorpo glicosilado também são derivadas de organismos multicelulares (invertebrados e vertebrados). Exemplos de células de invertebrado incluem células vegetais e de inseto. Diversas cepas baculovirais e variantes e células hospedeiras de inseto permissivas correspondentes dos hospedeiros, tais como Spodoptera frugiperda (lagarto), Aedes aegypti (mosquito), Aedes albopictus (mosquito),

Drosophila melanogaster (mosquito de fruta) e Bombyx mori foram identificadas.

[0152] Células de vertebrado podem ser usadas como hospedeiros, e a propagação de células de vertebrado na cultura (cultura de tecido) se tornou um procedimento de rotina. Exemplos de linhas de célula hospedeira de mamífero úteis são linha CV1 de rim de macaco transformada por SV40 (COS-7, ATCC CRL 1651); linha de rim embriônico humano (293 ou 293 células subclonadas para crescimento em cultura de suspensão, Graham et al., J. Gen Virol. 36:59 (1977)); células de rim de hamster bebê (BHK, ATCC CCL 10); células de sertoli de camundongo (TM4, Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)); células de rim de macaco (CV1 ATCC CCL 70); células de rim do macaco verde africano (VERO-76, ATCC CRL-1587); células de carcinoma cervical humano (HELA, ATCC CCL 2); células de rim canino (MDCK, ATCC CCL 34); células de fígado de rato búfalo (BRL 3A, ATCC CRL 1442); células de pulmão humano (W138, ATCC CCL 75); células de fígado humano (Hep G2, HB 8065); tumor mamário de camundongo (MMT 060562, ATCC CCL51); células TRI (Mather et al., Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)); células MRC 5; células FS4; e uma linha de hepatoma humano (Hep G2). Outras linhas de célula hospedeira de mamífero úteis incluem células de ovário de hamster chinês (CHO), que incluem células DHFR- CHO (Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. EUA 77:4216 (1980)); e linhas de célula do mieloma, tais como NS0 e Sp2/0. Para uma revisão de determinadas linhas de célula hospedeira de mamífero adequadas para produção de anticorpo, consultar, por exemplo, Yazaki e Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J., 2003), páginas 255-268.

[0153] As células hospedeiras da presente descrição podem ser cultivadas numa variedade de meios. Meios comercialmente disponíveis, tais como Ham's F10 (Sigma), Meio Mínimo Essencial

((MEM), (Sigma), RPMI-1640 (Sigma), e Meio de Eagle Modificado da Dulbecco ((DMEM), Sigma) são adequados para cultivar as células hospedeiras. Além disto, qualquer um dos meios descritos em Ham et al., Meth. Enz. 58:44 (1979), Barnes et al., Anal. Biochem. 102:255 (1980), Documentos de Patente nº U.S. 4.767.704; 4.657.866;

4.927.762; 4.560.655; ou 5.122.469; WO 90/03430; WO 87/00195; ou documento de Patente nº U.S. 30.985 podem ser usados como meios de cultura para as células hospedeiras. Qualquer um destes meios pode ser complementado conforme necessário com hormônios e/ou outros fatores de crescimento (tais como insulina, transferrina ou fator de crescimento epidérmico), sais (tais como cloreto de sódio, cálcio, magnésio e fosfato), tampões (tais como HEPES), nucleotídeos (tais como adenosina e timidina), antibióticos (tal como fármaco GENTAMYCINTM), elementos vestigiais (definidos como compostos inorgânicos normalmente presentes em concentrações finais na faixa micromolar), e glicose ou uma fonte de energia equivalente. Quaisquer outros suplementos necessários também podem ser incluídos em concentrações apropriadas que seriam conhecidas por aqueles versados na técnica. As condições de cultura, tal como temperatura, pH e semelhantes, são aquelas anteriormente usadas com a célula hospedeira selecionada para expressão, e serão aparentes a uma pessoa de habilidade na técnica.

[0154] Ao usar técnicas recombinantes, o anticorpo pode ser produzido por via intracelular, no espaço periplásmico, ou diretamente secretado no meio. Se o anticorpo for produzido por via intracelular, como uma primeira etapa, os resíduos particulados, sejam células hospedeiras ou fragmentos lisados, são removidos, por exemplo, através de centrifugação ou ultrafiltração. Carter et al., Bio/Technology 10:163-167 (1992) descrevem um procedimento para isolar anticorpos que são secretados no espaço periplásmico de E. coli.

[0155] A composição de anticorpo preparada a partir das células pode ser purificada com o uso de, por exemplo, cromatografia de hidroxiapatita, cromatografia de interação hidrofóbica, eletroforese em gel, diálise e cromatografia de afinidade, sendo que a cromatografia de afinidade está entre uma das etapas de purificação tipicamente preferenciais.

[0156] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia leve que compreende uma sequência de domínio constante de cadeia leve (CL) que compreende uma sequência de aminoácidos de acordo com a Fórmula

GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGS PVKAGVETTKPSKQSX4X5KYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS (SEQ ID NO:72), em que X4X5 é ND, DN, DS ou SD. Em determinadas modalidades, o domínio CL compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:43 a

46.

[0157] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende um domínio variável de cadeia leve (VL) que compreende uma, duas, três ou quatro sequências de estrutura principal IGLV3, que incluem, sem limitação, SYELTQPPSVSVSPGQTARITC (SEQ ID NO:27), WYQQKPGQAPVTLIY (SEQ ID NO:28), NIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYC (SEQ ID NO:29), e FGGGTKLTVL (SEQ ID NO:30). Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende um domínio variável de cadeia leve (VL) que compreende a estrutura FW1—HVR-L1—FW2— HVR-L2—FW3—HVR-L3—FW4, em que FW1 compreende a sequência SYELTQPPSVSVSPGQTARITC (SEQ ID NO:27), FW2 compreende a sequência WYQQKPGQAPVTLIY (SEQ ID NO:28), FW3 compreende a sequência NIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYC (SEQ ID NO:29), e FW4 compreende a sequência FGGGTKLTVL (SEQ ID NO:30).

[0158] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia leve que compreende um domínio constante de cadeia leve (CL) kappa ou lambda. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia leve que compreende um domínio constante de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de uma das SEQ ID NOs:36 a 38. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia leve que compreende um domínio constante de cadeia leve que compreende a sequência de aminoácidos de uma das SEQ ID NOs:43 a 46. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia leve que compreende uma sequência de domínio constante de cadeia leve mostrada na Tabela 1. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende a sequência da SEQ ID NO:25 e uma sequência de domínio CL selecionada a partir das SEQ ID NOs:36 a 38 e 43 a 46. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia leve que compreende um domínio de VL que compreende a sequência da SEQ ID NO:25 e uma sequência de domínio CL selecionada a partir das SEQ ID NOs:43 a 46. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia leve que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir das SEQ ID NOs:48 a 51. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia leve que compreende uma sequência de domínio de VL selecionada a partir das SEQ ID NOs:39 a 41 e um domínio CL que compreende uma sequência selecionada a partir das SEQ ID NOs:36 a

38. Qualquer uma das cadeias leves acima pode ser combinada com uma cadeia pesada mostrada na Tabela 2 ou uma cadeia pesada de anticorpo que compreende um domínio de VH mostrado na Tabela 2.

[0159] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição inclui uma cadeia pesada que compreende um domínio constante de cadeia pesada que compreende uma região Fc. Por exemplo, em algumas modalidades, a região Fc é uma região Fc humana, por exemplo, IgG1, IgG2, ou IgG4 e subtipos dos mesmos. Regiões Fc exemplificativas e não limitantes são fornecidas dentro dos domínios constantes de cadeia pesada que compreendem as sequências de aminoácidos das SEQ ID NOs:31 a 35 e 132 a 139, conforme mostrado na Tabela 4. Em algumas modalidades, uma região Fc dentro de uma ou mais das sequências de aminoácidos de domínio constante de cadeia pesada das SEQ ID NOs:31 a 35 e 132 a 139 compreende uma ou mais das mutações descritas no presente documento, por exemplo, infra. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição compreende uma cadeia pesada que compreende uma sequência de domínio constante de cadeia pesada mostrada na Tabela 2. TABELA 4. SEQUÊNCIAS DE REGIÃO CONSTANTE

EXEMPLIFICATIVAS Nome SEQ ID NO Sequência IgG1 tipo selvagem 31 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQD WLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKN QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IgG1_AAA_N297A 32 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQD WLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKN

Nome SEQ ID NO Sequência

QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IgG2 33 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTV ERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH EDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLN GKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVD

KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IgG2Da 34 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTV ERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH EDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLN GKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVD

KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IgG4_S228P 35 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRV ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVS QEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWL NGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQV SLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTV

DKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG Kappa Humano 36 RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQS

GNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPV

TKSFNRGEC IGLC1 Lambda 37 GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPV Humano KAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVE

KTVAPTECS IGLC2 Lambda 38 GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPV Humano KAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVE

KTVAPTECS IgG1_AAA 132 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKV EPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVV

Nome SEQ ID NO Sequência

DVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQD WLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKN QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKL

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IgG2 C232S 133 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTV ERKSCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH EDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLN GKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVD

KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IgG2 C233S 134 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTV ERKCSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH EDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLN GKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVD

KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IgG2Da C232S 135 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTV ERKSCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH EDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLN GKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVD

KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IgG2Da C233S 136 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTV ERKCSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH EDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLN GKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVD

KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IgG2 N297A 137 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTV ERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH EDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFASTFRVVSVLTVVHQDWLN

Nome SEQ ID NO Sequência

GKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVD

KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IgG2 N297A C232S 138 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTV ERKSCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH EDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFASTFRVVSVLTVVHQDWLN GKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVD

KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG IgG2 N297A C233S 139 ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSG

VHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTV ERKCSVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSH EDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFASTFRVVSVLTVVHQDWLN GKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVD KSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG

[0160] Em algumas modalidades, a região Fc inclui uma ou mais mutações que influenciam uma ou mais propriedades de anticorpo, tal como estabilidade, padrão de glicosilação ou outras modificações, função de célula efetora, farmacocinética, e assim por diante. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição tem glicosilação reduzida ou mínima. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição tem função efetora ablacionada ou reduzida. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição melhorou a estabilidade (por exemplo, melhorou a estabilidade do domínio de articulação e/ou reduziu troca de monômero de anticorpos IgG4 através do uso da mutação S228P).

[0161] Mutações de Fc exemplificativas (por exemplo, que influenciam uma ou mais das propriedades descritas supra) incluem, sem limitação, (i) mutações de região Fc de IgG1 humana L234A,

L235A, G237A, e opcionalmente N297A; (ii) mutações de região Fc de IgG2 humana A330S, P331S e opcionalmente N297A; e (iii) mutações de região Fc de IgG4 humana S228P e opcionalmente E233P, F234V, L235A, delG236 e N297A (numeração de EU). Em algumas modalidades, a região Fc de IgG1 humana compreende mutações L234A, L235A e G237A. Em algumas modalidades, a região Fc de IgG1 humana compreende mutações L234A, L235A, G237A e N297A. Em algumas modalidades, a região Fc de IgG2 humana compreende mutações A330S e P331S. Em algumas modalidades, a região Fc de IgG2 humana compreende mutações A330S, P331S e N297A. Em algumas modalidades, a região Fc de IgG4 humana compreende uma mutação S288P. Em algumas modalidades, a região Fc de IgG4 humana compreende mutações S288P e L235E.

[0162] Anticorpos que alvejam antígenos de superfície celular podem disparar funções imunoestimuladoras e efetoras que são associadas ao engate de receptor Fc (FcR) em células imunológicas. Existem diversos receptores Fc que são específicos para classes particulares de anticorpos, que incluem IgG (receptores gama), IgE (receptores eta), IgA (receptores alfa) e IgM (receptores mu). A ligação da região Fc aos receptores Fc em superfícies celulares pode disparar diversas respostas biológicas que incluem fagocitose de partículas revestidas por anticorpo (fagocitose mediada por célula dependente de anticorpo, ou ADCP), depuração de complexos imunológicos, lise de células revestidas por anticorpo por células exterminadoras (citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo, ou ADCC) e, liberação de mediadores inflamatórios, transferência placentária e controle de produção de imunoglobulina. Adicionalmente, a ligação do componente C1 do complemento aos anticorpos pode ativar o sistema complementar. Ativação de complemento pode ser importante para a lise de patógenos celulares. No entanto, a ativação de complemento também pode estimular a resposta inflamatória e também pode estar envolvida na hipersensibilidade autoimune ou outros distúrbios imunológicos. Regiões Fc variantes com habilidade reduzida ou ablacionada para ligar determinados receptores Fc são úteis para desenvolver anticorpos terapêuticos e construtos de polipeptídeo fusão Fc que atuam alvejando, ativando ou neutralizando-se funções de ligante enquanto não se danifica ou destrói células ou tecidos locais.

[0163] Em algumas modalidades, um monômero de domínio Fc se refere a uma cadeia de polipeptídeo que inclui segundo e terceiro domínios constantes de anticorpo (por exemplo, CH2 e CH3). Em algumas modalidades, um monômero de domínio Fc também inclui um domínio de articulação. Em algumas modalidades, o monômero de domínio Fc é de qualquer isótopo de anticorpo de imunoglobulina, que inclui IgG, IgE, IgM, IgA e IgD. Adicionalmente, em algumas modalidades, um monômero de domínio Fc é de qualquer subtipo de IgG (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG2a, IgG2b, IgG2c, IgG3 e IgG4). Em algumas modalidades, os monômeros de domínio Fc incluem tanto quanto dez alterações de uma sequência de monômero de domínio Fc de tipo selvagem (por exemplo, 1 a 10, 1 a 8, 1 a 6, 1 a 4 substituições, adições ou inserções, deleções de aminoácido, ou combinações das mesmas) que alteram a interação entre um domínio Fc e um receptor Fc.

[0164] Em algumas modalidades, um monômero de domínio Fc de uma imunoglobulina ou um fragmento de um monômero de domínio Fc tem capacidade para formar um domínio Fc com outro monômero de domínio Fc. Em algumas modalidades, um monômero de domínio Fc de uma imunoglobulina ou um fragmento de um monômero de domínio Fc não tem capacidade para formar um domínio Fc com outro monômero de domínio Fc. Em algumas modalidades, um monômero de domínio Fc ou um fragmento de um domínio Fc é fundido num polipeptídeo da descrição para aumentar meia vida sérica do polipeptídeo. Em algumas modalidades, um monômero de domínio Fc ou um fragmento de um monômero de domínio Fc fundido num polipeptídeo da descrição dimeriza com um segundo monômero de domínio Fc para formar um domínio Fc que se liga a um receptor Fc, ou alternativamente, um monômero de domínio Fc se liga a um receptor Fc. Em algumas modalidades, um domínio Fc ou um fragmento do domínio Fc fundido a um polipeptídeo para aumentar a meia vida sérica do polipeptídeo não induz nenhuma resposta relacionada ao sistema imunológico. Um domínio Fc inclui dois monômeros de domínio Fc que são dimerizados pela interação entre os domínios constantes de anticorpo CH3.

[0165] Um domínio Fc de tipo selvagem forma a estrutura mínima que se liga a um receptor Fc, por exemplo, FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIIa, FcγRIIIb e FcγRIV. Em algumas modalidades, o domínio Fc num anticorpo da presente descrição compreende uma ou mais substituições, adições ou inserções, deleções de aminoácido, ou quaisquer combinações das mesmas que resultem na função efetora diminuída, tal como citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo (ADCC) diminuída, citólise dependente de complemento (CDC) diminuída, fagocitose mediada por célula dependente de anticorpo (ADCP) diminuída ou quaisquer combinações das mesmas. Por exemplo, um anticorpo da presente descrição pode exibir ligação diminuída (por exemplo, ligação mínima ou ausência de ligação) a um receptor Fc humano e ligação diminuída (por exemplo, ligação mínima ou ausência de ligação) à proteína C1q complementar; ligação diminuída (por exemplo, ligação mínima ou ausência de ligação) ao FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, FcγRIIIB, FcγRIIIB humano, ou quaisquer combinações das mesmas, e C1q; função efetora dependente de anticorpo alterada ou reduzida, tal como ADCC, CDC, ADCP ou quaisquer combinações das mesmas; e assim por diante. Mutações exemplificativas incluem, sem limitação, uma ou mais substituições de aminoácido em E233, L234, L235, G236, G237, D265, D270, N297, E318, K320, K322, A327, A330, P331, ou P329 (numeração de acordo com o índice de EU de Kabat (Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5ª Edição, Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)).

[0166] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição tem ligação reduzida ou ablacionada aos receptores de Fcγ CD16a, CD32a, CD32b, CD32c e CD64. Em algumas modalidades, um anticorpo com uma região Fc não nativa descrita no presente documento exibe pelo menos uma redução de 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou maior na ligação de C1q em comparação com um anticorpo que compreende uma região Fc de tipo selvagem. Em algumas modalidades, um anticorpo com uma região Fc não nativa, conforme descrito no presente documento, exibe pelo menos uma redução de 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou maior em CDC em comparação com um anticorpo que compreende uma região Fc de tipo selvagem.

[0167] Em algumas modalidades, as variantes de Fc no presente documento são minimamente glicosiladas ou têm glicosilação reduzida com relação a uma sequência de tipo selvagem. Em algumas modalidades, desglicosilação é realizada com uma mutação de N297A, ou mutando-se N297 em qualquer aminoácido que não seja N.

[0168] Em algumas modalidades, variantes de regiões constantes de IgG de anticorpo (por exemplo, variantes de Fc) têm uma capacidade reduzida para se ligar especificamente aos receptores de Fcγ ou têm uma capacidade reduzida para induzir fagocitose. Em algumas modalidades, variantes de regiões constantes de IgG de anticorpo (por exemplo, variantes de Fc) têm uma capacidade reduzida para se ligar especificamente aos receptores de Fcγ e têm uma capacidade reduzida para induzir fagocitose. Por exemplo, em algumas modalidades, um domínio Fc é mutado por falta de funções efetoras, típico de um domínio Fc “morto”. Por exemplo, em algumas modalidades, um domínio Fc inclui substituições de aminoácido específicas que são conhecidas por minimizar a interação entre o domínio Fc e um receptor de Fcγ. Em algumas modalidades, um monômero de domínio Fc é de um anticorpo IgG1 e inclui uma ou mais das substituições de aminoácido L234A, L235A, G237A e N297A (numeração de posição de aminoácido conforme designado de acordo com o sistema de numeração EU por Kabat et al., 1991). Em algumas modalidades, uma ou mais mutações adicionais são incluídas em tal variante Fc de IgG1. Exemplos sem limitação de tais mutações adicionais para variantes Fc de IgG1 humana incluem E318A e K322A. Em alguns casos, uma variante Fc de IgG1 humana tem até 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5 ou 4 ou menos mutações no total em comparação com a sequência de IgG1 humana de tipo selvagem. Em algumas modalidades, uma ou mais deleções adicionais são incluídas em tal variante Fc de IgG1. Por exemplo, em algumas modalidades, a lisina de terminal C da região constante de cadeia pesada de IgG1 Fc é deletada, por exemplo, para aumentar a homogeneidade do polipeptídeo quando o polipeptídeo é produzido em células bacterianas ou de mamífero. Em alguns casos, uma variante Fc de IgG1 humana tem até 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5 ou 4 ou menos deleções no total em comparação com a sequência de IgG1 humana de tipo selvagem.

[0169] Em algumas modalidades, um monômero de domínio Fc é de um anticorpo de IgG2 e inclui substituições de aminoácido A330S, P331S, ou ambas A330S e P331S. As posições de aminoácido mencionadas acima são definidas de acordo com Kabat, et al. (1991). A numeração de Kabat de resíduos de aminoácido pode ser determinada para um dado anticorpo por alinhamento em regiões de homologia da sequência do anticorpo com uma sequência numerada de Kabat “padrão”. Em algumas modalidades, a variante Fc compreende uma sequência Fc de IgG2 humana que compreende uma ou mais das substituições de aminoácido A330S, P331S e N297A (numeração de posição de aminoácido conforme designado de acordo com o sistema de numeração EU por Kabat, et al. (1991). Em algumas modalidades, uma ou mais mutações adicionais são incluídas em tais variantes Fc de IgG2. Exemplos sem limitação de tais mutações adicionais para variante Fc de IgG2 humana incluem V234A, G237A, P238S, V309L e H268A (conforme designado de acordo com o sistema de numeração EU por Kabat et al. (1991)). Em alguns casos, uma variante Fc de IgG2 humana tem até 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 ou menos mutações no total em comparação com a sequência de IgG2 humana de tipo selvagem. Em algumas modalidades, uma ou mais deleções adicionais são incluídas em tal variante Fc de IgG2.

[0170] Quando a variante Fc é uma variante Fc de IgG4, em algumas modalidades, tal variante Fc compreende uma mutação S228P, E233P, F234V, L235A, L235E ou delG236 (numeração de posição de aminoácido conforme designado de acordo com Kabat, et al. (1991)). Em alguns casos, uma variante Fc de IgG4 humana tem até 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 ou 1 mutação (ou mutações) no total em comparação com a sequência de IgG4 humana de tipo selvagem.

[0171] Em algumas modalidades, a variante Fc exibe ligação reduzida a um receptor Fc do sujeito em comparação com a região Fc de IgG humana de tipo selvagem. Em algumas modalidades, a variante Fc exibe ligação ablacionada a um receptor Fc do sujeito em comparação com a região Fc de IgG humana de tipo selvagem. Em algumas modalidades, a variante Fc exibe uma redução de fagocitose em comparação com a região Fc de IgG humana de tipo selvagem. Em algumas modalidades, a variante Fc exibe fagocitose ablacionada em comparação com a região Fc de IgG humana de tipo selvagem.

[0172] Citotoxicidade mediada por célula dependente de anticorpo, que também é denominada no presente documento ADCC, se refere a uma forma de citotoxicidade na qual Ig secretada ligada aos receptores Fc (FcRs) presentes nas determinadas células citotóxicas (por exemplo, células Exterminadoras Naturais (NK) e neutrófilos) que permitem que estas células efetoras citotóxicas se liguem especificamente a uma célula-alvo que carrega antígeno e subsequentemente eliminem a célula-alvo. Fagocitose mediada por célula dependente de anticorpo, que também é denominada no presente documento ADCP, se refere a uma forma de citotoxicidade na qual Ig secretada ligada aos receptores Fc (FcRs) presentes nas determinadas células fagocíticas (por exemplo, macrófagos) que permitem que estas células efetoras fagocíticas se liguem especificamente a uma célula-alvo que carrega antígeno e subsequentemente engulam e digiram a célula-alvo. Anticorpos de IgG de alta afinidade específicos de ligante direcionados à superfície de células-alvo podem estimular as células citotóxicas ou fagocíticas e podem ser usados para tal eliminação. Em algumas modalidades, construtos de polipeptídeo que compreendem uma variante Fc, conforme descrito no presente documento, exibem ADCC ou ADCP reduzida em comparação com um construto de polipeptídeo que compreende uma região Fc de tipo selvagem. Em algumas modalidades, construtos de polipeptídeo que compreendem uma variante Fc, conforme descrito no presente documento, exibem pelo menos uma redução de 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou maior em ADCC ou ADCP em comparação com um construto de polipeptídeo que compreende uma região Fc de tipo selvagem. Em algumas modalidades, anticorpos que compreendem uma variante Fc, conforme descrito no presente documento, exibem ADCC ou ADCP ablacionada em comparação com um construto de polipeptídeo que compreende uma região Fc de tipo selvagem.

[0173] Citotoxicidade direcionada ao complemento, que também é denominada no presente documento CDC, se refere a uma forma de citotoxicidade na qual a cascata de complementos é ativada pelo componente complementar C1q que se liga ao anticorpo Fc. Em algumas modalidades, construtos de polipeptídeo que compreendem uma variante Fc, conforme descrito no presente documento, exibem pelo menos uma redução de 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou maior em ligação de C1q em comparação com um construto de polipeptídeo que compreende uma região Fc de tipo selvagem. Em alguns casos, construtos de polipeptídeo que compreendem uma variante Fc, conforme descrito no presente documento, exibem CDC reduzida em comparação com um construto de polipeptídeo que compreende uma região Fc de tipo selvagem. Em algumas modalidades, construtos de polipeptídeo que compreendem uma variante Fc, conforme descrito no presente documento, exibem pelo menos uma redução de 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ou maior em CDC em comparação com um construto de polipeptídeo que compreende uma região Fc de tipo selvagem. Em alguns casos, anticorpos que compreendem uma variante Fc, conforme descrito no presente documento, exibem CDC insignificante em comparação com um construto de polipeptídeo que compreende uma região Fc de tipo selvagem.

[0174] Variantes de Fc no presente documento incluem aquelas que exibem ligação reduzida a um receptor de Fcγ em comparação com a região Fc de IgG humana de tipo selvagem. Por exemplo, em algumas modalidades, uma variante Fc exibe ligação a um receptor de Fcγ que é menor que a ligação exibida por uma região Fc de IgG humana de tipo selvagem a um receptor de Fcγ. Em alguns casos, uma variante Fc tem ligação reduzida com um receptor de Fcγ por um fator de 10%, 20%

30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% (função efetora completamente ablacionada). Em algumas modalidades, a ligação reduzida é para qualquer um ou mais dos receptores de Fcγ, por exemplo, CD16a, CD32a, CD32b, CD32c ou CD64.

[0175] Em alguns casos, as variantes Fc divulgadas no presente documento exibem uma redução de fagocitose em comparação com sua região Fc de IgG humana de tipo selvagem. Tais variantes Fc exibem uma redução em fagocitose em comparação com sua região Fc de IgG humana de tipo selvagem, em que a redução de atividade de fagocitose é, por exemplo, por um fator de 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100%. Em alguns casos, uma variante Fc exibe fagocitose ablacionada em comparação com sua região Fc de IgG humana de tipo selvagem.

[0176] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é conjugado com um agente. Em algumas modalidades, o agente é um agente citotóxico que inclui, porém, sem limitação, os agentes citotóxicos exemplificativos descritos no presente documento. Em algumas modalidades, o agente é um rótulo que inclui, porém, sem limitação, os rótulos exemplificativos descritos no presente documento.

[0177] Em algumas modalidades, o agente é uma porção química que modula o sistema imunológico. Por exemplo, a porção química pode alvejar e/ou modular a função de uma célula que expressa SIRP-α em sua superfície, tal como uma molécula pequena que modula uma trajetória de sinalização celular da célula que expressa SIRP-α, por exemplo, um inibidor de IDO/TDO, inibidor de AhR, inibidor de arginase, inibidor de A2a R, agonistas de TLR, agonista de STING ou agonista de Rig-1. Em algumas modalidades, a porção química pode recrutar outra macromolécula ou célula nas proximidades com uma célula que expressa SIRP-α em sua superfície. Em algumas modalidades, a porção química compreende uma citocina, por exemplo, IL2, IL7, IL-10, IL15 ou IFN. Em algumas modalidades, a porção química (por exemplo, uma molécula pequena) modula a atividade de uma citocina, por exemplo, IL2, IL7, IL-10, IL15 ou IFN. Em algumas modalidades, a porção química compreende uma vacina contra câncer (que compreende, por exemplo, DNA, RNA, peptídeo ou outro componente (ou componentes) celular). Em algumas modalidades, a porção química compreende um adjuvante. Em algumas modalidades, a porção química compreende um oligonucleotídeo CpG. Em algumas modalidades, a porção química afeta purificação, exame e/ou exibição de anticorpo. Em algumas modalidades, a porção química também afeta o grau de ligação aos receptores Fc ou o grau de redução de fagocitose.

[0178] Em algumas modalidades, parceiros de fusão são ligados à sequência de variante Fc por meio de uma sequência de ligante. Em algumas modalidades, a sequência de ligante compreende, de modo geral, um pequeno número de aminoácidos, tal como menos que dez aminoácidos, embora ligantes mais longos também sejam utilizados. Em alguns casos, o ligante tem um comprimento menor que 10, 9, 8, 7, 6 ou 5 aminoácidos ou mais curto. Em alguns casos, o ligante tem um comprimento de pelo menos 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30 ou 35 aminoácidos ou mais longo. Opcionalmente, em algumas modalidades, um ligante clivável é empregado.

[0179] Em algumas modalidades, um parceiro de fusão é uma sequência de alvejamento ou de sinal que direciona uma proteína de variante Fc e quaisquer parceiros de fusão associados a uma localização celular desejada ou aos meios extracelulares. Em algumas modalidades, determinadas sequências de sinalização alvejam uma proteína a ser secretada nos meios de crescimento, ou no espaço periplásmico, localizado entre a membrana interna e externa da célula. Em algumas modalidades, um parceiro de fusão é uma sequência que codifica um peptídeo ou proteína que permite a purificação ou exame. Tais parceiros de fusão incluem, porém, sem limitação, etiquetas de poli-histidina (etiquetas His) (por exemplo His6 e His10) ou outras etiquetas para uso com sistemas de Cromatografia de Afinidade de Metal Imobilizado (IMAC) (por exemplo, colunas de afinidade Ni+2), fusões de GST, fusões de MBP, etiqueta Strep, a sequência-alvo de biotinilação BSP da enzima bacteriana BirA, e etiquetas de epítopo que são alvejadas por anticorpos (por exemplo, etiquetas c-myc, etiquetas flag e semelhantes).

[0180] Em algumas modalidades, tais etiquetas são úteis para purificação, para exame ou ambos. Por exemplo, em algumas modalidades, uma variante Fc é purificada com o uso de uma etiqueta His imobilizando-a numa coluna de afinidade Ni+2 e, então, após a purificação a mesma etiqueta His é usada para imobilizar o anticorpo numa placa revestida de Ni+2 para realizar um ELISA ou outro ensaio de ligação.

[0181] Vários parceiros de fusão que permitem uma variedade de métodos de seleção estão disponíveis. Por exemplo, fundindo-se os membros de uma biblioteca de variante Fc com a proteína de gene III, a exibição de fago pode ser empregada. Em algumas modalidades, parceiros de fusão permitem que variantes Fc sejam rotuladas. Alternativamente, em algumas modalidades, um parceiro de fusão se liga a uma sequência específica no vetor de expressão, que permite que o parceiro de fusão e variante Fc associada sejam ligados de maneira covalente ou não covalente com o ácido nucleico que os codifica.

[0182] Em algumas modalidades, quando um parceiro de fusão é uma porção química terapêutica, a porção química terapêutica é, por exemplo, um agente citotóxico, um peptídeo, uma proteína, um anticorpo, um siRNA ou uma molécula pequena.

[0183] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é ligado aos vários carreadores ou rótulos e usado para detectar a presença de células que expressam antígeno específicas. Exemplos de carreadores incluem vidro, poliestireno, polipropileno, polietileno, dextrana, náilon, amilases, celuloses naturais e modificadas, poliacrilamidas, agaroses e magnetite. A natureza do carreador pode ser solúvel ou insolúvel. Vários rótulos e métodos diferentes de rotulação são conhecidos. Exemplos de rótulos incluem enzimas, radioisótopos, compostos fluorescentes, metais coloidais, compostos quimioluminescentes e compostos bioluminescentes. Várias técnicas para ligar rótulos aos anticorpos divulgados no presente documento estão disponíveis. Em algumas modalidades, os anticorpos são acoplados aos haptenos de baixo peso molecular. Estes haptenos são, então, especificamente detectados por meio de uma segunda reação. Por exemplo, em algumas modalidades, a biotina de hapteno é usada com avidina ou os haptenos dinitrofenol, piridoxal ou fluoresceína são detectados com anticorpos anti-hapteno específicos (por exemplo, anticorpos antidinitrofenol, anticorpos antipiridoxal e anticorpos antifluoresceína, respectivamente). Em algumas modalidades, os anticorpos descritos no presente documento são utilizados in vitro para ensaios de ligação, tais como ensaios imunológicos. Por exemplo, em algumas modalidades, os anticorpos são utilizados em fase líquida ou ligados a um carreador de fase sólida. Em algumas modalidades, anticorpos utilizados para imunoensaios são rotulados de maneira detectável de várias maneiras.

MÉTODOS DE TRATAMENTO

[0184] Determinados aspectos da presente descrição se referem ao tratamento de uma doença ou distúrbio com o uso de um anticorpo descrito no presente documento. Em algumas modalidades, a doença é câncer. Em algumas modalidades, a doença é uma doença autoimune ou inflamatória.

[0185] Por exemplo, são fornecidos, no presente documento, métodos para tratar ou atrasar a progressão de câncer num indivíduo administrando-se uma quantidade eficaz de um anticorpo da presente descrição. Sem desejar estar vinculado à teoria, acredita-se que os anticorpos descritos no presente documento podem ser úteis no tratamento de câncer, por exemplo, abolindo-se a habilidade do câncer em inibir fagocitose e vigilância imunológica através da CD47: eixo geométrico de sinalização de SIRP-α, ou de outra forma aprimorando- se a ativação do sistema imunológico (tal como através da ativação de células dendríticas).

[0186] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é administrado em combinação com um segundo anticorpo, por exemplo, um anticorpo que se liga a um antígeno expresso pelo câncer (por exemplo, uma quantidade eficaz do segundo anticorpo, que, em algumas modalidades, conforme descrito acima, pode ser considerado no contexto de administrar um anticorpo anti-SIRP-α da presente descrição). Antígenos exemplificativos expressos por cânceres são conhecidos na técnica e incluem, sem limitação, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD52, CD56, CD70, CD74, CD79b, CD123 , CD138, CS1/SLAMF7, Trop-2, 5T4, EphA4, BCMA, Mucina 1, Mucina 16, PTK7, PD-L1, STEAP1, Receptor de Endotelina B, mesotelina, EGFRvIII, ENPP3, SLC44A4, GNMB, nectina 4, NaPi2b, LIV-1A, Guanilil ciclase C , DLL3, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR, integrina αVβ3, integrina α5β1, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, Tenascina, Ley, EpCAM, CEA, gpA33, PSMA, TAG72, uma mucina, CAIX, EPHA3 , receptor de folato α, GD2, GD3 e um complexo de MHC/peptídeo que compreende um peptídeo de NY-ESO- 1/LAGE, SSX-2, uma proteína da família MAGE, MAGE-A3, gp100/pmel17, Melan-A/MART-1, gp75/TRP1, tirosinase, TRP2, CEA, PSA, TAG-72, receptor de laminina imaturo, MOK/RAGE-1, WT-1, SAP-

1, BING-4, EpCAM, MUC1, PRAME, survivina, BRCA1, BRCA2, CDK4, CML66, MART-2, p53, Ras, β-catenina, TGF-βRII, HPV E6 ou HPV E7 . Por exemplo, em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é administrado em combinação com um anticorpo monoclonal que liga CD123 (também conhecido como receptor alfa de IL-3), tal como talacotuzumabe (também conhecido como CSL362 e JNJ- 56022473). Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é administrado em combinação com um anticorpo monoclonal que liga EGFR (tal como cetuximabe). Em algumas modalidades, o segundo anticorpo inclui uma ou mais funções efetoras, por exemplo, funções efetoras que estão associadas ao engate de receptor Fc (FcR) nas células imunológicas que incluem, sem limitação, ADCC ou ADCP, e/ou citotoxicidade dependente de complemento (CDC). Sem desejar estar vinculado à teoria, acredita-se que combinar tal anticorpo com um anticorpo da presente descrição é particularmente vantajoso, por exemplo, para direcionar leucócitos de expressão de FcR para alvejar uma célula tumoral na qual o segundo anticorpo está ligado enquanto inibe também a capacidade de resposta de SIRP-α expressa pelo leucócito para qualquer CD47 expressa pela célula tumoral com o anticorpo de SIRP-α.

[0187] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é administrado em combinação com um segundo anticorpo que se liga a um antígeno expresso por uma célula NK. Antígenos exemplificativos expressos por uma célula NK incluem, sem limitação, NKR-P1A (KLRB1), CD94 (NKG2A), KLRG1, KIR2DL5A, KIR2DL5B, KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3, KIR2DS2, KIR2DS3, KIR2DS4, KIR2DS5, KIR3DS1, KIR2DS1, CD94 (NKG2C/E), NKG2D, CD160 (BY55), CD16 (FcγRIIIA), NKp46 (NCR1), NKp30 (NCR3), NKp44 (NCR2), DNAM1 (CD226), CRTAM, CD27, NTB-A (SLAMF6), PSGL1, CD96 (tátil), CD100 (SEMA4D), NKp80 (KLRF1, CLEC5C), SLAMF7

(CRACC, CS1, CD319) e CD244 (2B4, SLAMF4).

[0188] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é administrado em combinação com um agente imunoterapêutico (por exemplo, uma quantidade eficaz do agente imunoterapêutico, que, em algumas modalidades, conforme descrito acima, pode ser considerado no contexto de administrar um anticorpo anti-SIRP-α da presente descrição). Um agente imunoterapêutico pode se referir a qualquer agente terapêutico que alveja o sistema imunológico e promove um redirecionamento terapêutico do sistema imunológico, tal como um modulador de uma trajetória coestimuladora, vacina contra câncer, célula imune recombinantemente modificada, etc., agentes imunoterapêuticos exemplificativos e não limitantes são descritos infra. Sem desejar estar vinculado à teoria, acredita-se que os anticorpos da presente descrição sejam adequados para uso com agentes imunoterapêuticos devido aos mecanismos de complementaridade de ação, por exemplo, na ativação tanto de macrófagos quanto de outras células imunológicas, tais como células Tefetoras para alvejar células tumorais.

[0189] Em algumas modalidades, o agente imunoterapêutico compreende um anticorpo. Antígenos exemplificativos de anticorpos imunoterapêuticos são conhecidos na técnica e incluem, sem limitação, BDCA2, BDCA4, ILT7, LILRB1, LILRB2, LILRB3, LILRB4, LILRB5, Siglec-3, Siglec-7 , Siglec-9, Siglec-15, FGL-1, CD200, CD200R, CSF- 1R, CD40, CD40L, CD163, CD206, DEC205, CD47, CD123, arginase, IDO, TDO, AhR, EP2, COX-2, CCR2 , CCR-7, CXCR1, CX3CR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR7, TGF-β RI, TGF-β RII, c-Kit, CD244, L-selectina/CD62L, CD11b, CD11c, CD68, 41BB, CTLA4, PD1, PD-L1, PD-L2, TIM-3, BTLA, VISTA, LAG-3, CD28, OX40, GITR, CD137, CD27, HVEM, CCR4, CD25, CD103, KIrg1, Nrp1, CD278, Gpr83, TIGIT, CD154, CD160, TNFR2, PVRIG, DNAM e ICOS. Agentes imunoterapêuticos que são aprovados ou estão em teste clínico de fase avançada incluem, sem limitação, ipilimumabe, pembrolizumabe, nivolumabe, atezolizumabe, avelumabe, durvalumabe e semelhantes. Em determinadas modalidades, um anticorpo da presente descrição é administrado em combinação com um inibidor da trajetória de PD- L1/PD-1, por exemplo, um anticorpo anti-PD-L1 ou anti-PD-1. Conforme demonstrado no presente documento, a administração combinada de um anticorpo anti-SIRP-α da presente descrição e um inibidor da trajetória de PD-L1/PD-1 pode resultar na atividade antitumoral sinérgica.

[0190] Em algumas modalidades, o agente imunoterapêutico compreende uma vacina, vírus oncolítico, terapia de célula adotiva, citocina ou agente imunoterapêutico de molécula pequena. Exemplos de tais agentes imunoterapêuticos são conhecidos na técnica. Por exemplo, terapias de célula adotiva e agentes terapêuticos podem incluir, sem limitação, terapia de célula T de receptor de antígeno quimérico (CAR-T), linfócitos de infiltração tumoral (TILs), célula NK modificada geneticamente TCR e produtos de célula de macrófago. Vacinas podem incluir, sem limitação, vacinas de polinucleotídeo, vacinas de polipeptídeo ou vacinas à base de célula (por exemplo, à base de célula tumoral ou dendrítica). Várias citocinas úteis para o tratamento de câncer são conhecidas e incluem, sem limitação, IL-2, IL- 15, IL-7, IL-10, IL-12, IL21, TNFa, IFNs, GM-CSF, e mutantes de citocina modificada geneticamente. Agentes imunoterapêuticos de molécula pequena podem incluir, sem limitação, inibidores de IDO/TDO, inibidores de AhR, inibidores de arginase, inibidores de A2a R, agonistas de TLR, agonistas de STING e agonistas de Rig-1.

[0191] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é administrado em combinação com um agente quimioterapêutico ou agente anticâncer de molécula pequena. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é administrado em combinação com um agente imunoterapêutico e um agente quimioterapêutico ou agente anticâncer de molécula pequena. Por exemplo, acredita-se que inibidores de quinase ou outros inibidores de trajetórias de sinalização (por exemplo, PAK4, PI3K, etc.) possam ser úteis em combinação com modulação do sistema imunológico para tratar câncer. Desta forma, os anticorpos da presente descrição podem ser usados em combinação com um ou mais agentes quimioterapêuticos e/ou moléculas pequenas (por exemplo, inibidores de quinase) para tratar câncer. Exemplos sem limitação de agentes quimioterapêuticos e/ou agentes anticâncer contemplados para uso em combinação com um anticorpo da presente descrição são fornecidos infra.

[0192] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é administrado em combinação com um agente terapêutico (por exemplo, um agente quimioterapêutico/citotóxico) que inclui e não se limita ao metotrexato (RHEUMATREX®, Ametopterina) ciclofosfamida (CYTOXAN®), talidomida (THALIDOMID®), acridina carboxamida, Actimid®, actinomicina, 17-N-alilamino-17- demetoxigeldanamicina, aminopterina, ansacrina, antraciclina, antineoplástico, antineoplaston, 5-azacitidina, azatioprina, BL22, bendamustina, biricodar, bleomicina, bortezomibe, b ostatina, busulfano, caliculina, camptotecina, capecitabina, carboplatin, cetuximabe, clorambucila, cisplatina, cladribina, clofarabina, citarabina, dacarbazina, dasatinibe, daunorrubicina, decitabina, ácido dicloroacético, discode olide, docetaxel, doxorrubicina, epirrubicina, epotilona, erribulina, estramustina, etopósido, exatecam, exisulinde, ferruginol, floxuridina, fludarabina, fluorouracila, fosfestrol, fotemustina, ganciclovir, gencitabina, hidroxiureia, IT-101, idarrubicina, ifosfamida, imiquimode, irinotecam, irofulveno, ixabepilona, laniquidar, lapatinibe,

lenalidomida, lomustina, lurtotecano, mafosfamida, masoprocol, mecloretamina, melfalano, mercaptopurina, mitomicina, mitotano, mitoxantrona, nelarabina, nilotinibe, oblimersem, oxaliplatina, PAC-1, paclitaxel, pemetrexede, pentostatina, pipobromano, pixantrona, plicamicina, procarbazina, inibidores de proteassoma (por exemplo, bortezomibe), raltitrexede, rebecamicina, Revlimid®, rubitecano, SN-38, salinosporamida A, satraplatina, estreptozotocina, swainsonina, tariquidar, taxano, tegafur-uracila, temozolomida, testolactona, tioTEPA, tioguanina, topotecano, trabectedina, tretinoina, tetranitrato de triplatina, tris(2-cloroetil)amina, troxacitabina, mostarda de uracila, valrubicina, vinblastina, vincristina, vinorrelbina, vorinostate, zosuquidar ou semelhantes.

[0193] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é administrado em combinação com um inibidor de molécula pequena alvejado. Por exemplo, em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é administrado em combinação com um inibidor de VEGFR/PDGFR (por exemplo, sorafenibe, sunitinibe, lenvatinibe, vandetanibe, cabozatinibe, apatinibe, pazopanibe, axitinibe ou regorafenibe), inibidor de EGFR (por exemplo, erlotinibe, gefitinibe ou osimertinibe), inibidor de MEK (por exemplo, trametinibe, cobimetinibe, binimetinibe ou selumetinibe), inibidor de ALK (por exemplo, crizotinibe, ceritinibe, alectinibe, brigatinibe, lorlatinibe, entrectinibe, TSR-011, CEP-37440, ou X-396), inibidor de CDK4/6 (por exemplo, palbociclibe, ribociclibe ou abemaciclibe), inibidor de PARP (por exemplo, olaparibe, rucaparibe, niraparibe, talazoparibe, pamiparibe, veliparibe, CEP 9722, ou E7016), inibidor de mTOR, inibidor de KRAS, inibidor de TRK (por exemplo, larotrectinibe), inibidor de BCL2 (por exemplo, venetoclax), inibidor de IDH (por exemplo, ivosidenibe ou enasidenibe), agente de hipometilação (por exemplo, decitabina ou azacitidina), inibidor de PI3K ou inibidor de DDR (por exemplo, CHK,

ATM ou ATR).

[0194] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é administrado em combinação com um agente terapêutico que Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é administrado em combinação com um agente terapêutico que inclui e não se limita 3F8, 8H9, Abagovomabe, Abciximabe, Abituzumabe, Abrilumabe, Actoxumabe, Adalimumabe, Adecatumumabe, Aducanumabe, Afelimomabe, Afutuzumabe, Alacizumabe pegol, ALD518, Alentuzumabe, Alirocumabe, pentetato de Altumomabe, Amatuximabe, mafenatox de Anatumomabe, ravtansina de Anetumabe, Anifrolumabe, kinzumabe (IMA-638), Apolizumabe, Arcitumomabe, Ascrinvacumabe, Aselizumabe, Atezolizumabe, Atinumabe, Atlizumabe (tocilizumabe), Atorolimumabe, Bapineuzumabe, Basiliximabe, Bavituximabe, Bectumomabe, Begelomabe, Belimumabe, Benralizumabe, Bertilimumabe, Besilesomabe, Bevacizumabe, Bezlotoxumabe, Biciromabe, Bimagrumabe, Bimequizumabe, mertansina de Bivatuzumabe, Blinatumomabe, Blosozumabe, Bococizumabe, vedotina de Brentuximabe, Briaquinumabe, Brodalumabe, Brolucizumabe, Brontictuzumabe, Canaquinumabe, mertansina de Cantuzumabe, ravtansina de Cantuzumabe, Caplacizumabe, pendetida de Capromabe, Carlumabe, Catumaxomabe, imunoconjugado de cBR96 e doxorrubicina, CC49, Cedelizumabe, Certolizumabe pegol, Cetuximabe, Ch.14.18, Citatuzumabe bogatox, Cixutumumabe, Clazaquizumabe, Clenoliximabe, tetraxetano de Clivatuzumabe, Codrituzumabe, ravtansina de Coltuximabe, Conatumumabe, Concizumabe, Crenezumabe, CR6261, Dacetuzumabe, Daclizumabe, Dalotuzumabe, Dapirrolizumabe pegol, Daratumumabe, Dectrecumabe, Demcizumabe, mafodotina de Denintuzumabe, Denosumabe, biotina de Derlotuximabe, Detumomabe, Dinutuximabe, Diridavumabe, Dorlimomabe aritox,

Drozitumabe, Duligotumabe, Dupilumabe, Durvalumabe, Dusigitumabe, Ecromeximabe, Eculizumabe, Edobacomabe, Edrecolomabe, Efalizumabe, Engumabe, Eldelumabe, Elgemtumabe, Elotuzumabe, Elsilimomabe, Emactuzumabe, Emibetuzumabe, Enavatuzumabe, vedotina de Enfortumabe, Enlimomabe pegol, Enoblituzumabe, Enoquizumabe, Enoticumabe, Ensituximabe, cituxetano de Epitumomabe, Epratuzumabe, Erlizumabe, Ertumaxomabe, Etaracizumabe, Etrolizumabe, Evinacumabe, Evolocumabe, Exbivirumabe, Fanolesomabe, Faralimomabe, Farletuzumabe, Fasinumabe, FBTA05, Felvizumabe, Fezaquinumabe, Ficlatuzumabe, Figitumumabe, Firivumabe, Flanvotumabe, Fletikumabe, Fontolizumabe, Foralumabe, Foravirumabe, Fresolimumabe, Fulranumabe, Futuximabe, Galiximabe, Ganitumabe, Gantenerumabe, Gavilimomabe, ozogamicina de Gemtuzumabe, Gevoquizumabe, Girentuximabe, vedotina de Glembatumumabe, Golimumabe, Gomiliximabe, Guselkumabe, Ibalizumabe, tiuxetano de Ibritumomabe, Icrucumabe, Idarucizumabe, Igovomabe, IMAB362, Imalumabe, Inciromabe, Ingatuzumabe, Inclacumabe, ravtansina de Indatuximabe, vedotina de Indusatumabe, Iniximabe, Intetumumabe, Inolimomabe, ozogamicina de Inotuzumabe, Ipilimumabe, Iratumumabe, Isatuximabe, Itolizumabe, Ixequizumabe, Queliximabe, Labetuzumabe, Lambrolizumabe, Lampalizumabe, Lebriquizumabe, Lemalesomabe, Lenzilumabe, Lerdelimumabe, Lexatumumabe, Libivirumabe, vedotina de Lifastuzumabe, Ligelizumabe, satetraxetano de Lilotomabe, Lintuzumabe, Lirilumabe, Lodelcizumabe, Loquivetmabe, mertansina de Lorvotuzumabe, Lucatumumabe, Lulizumabe pegol, Lumiliximabe, Lunretuzumabe, Mapatumumabe, Margetuximabe, Maslimomabe, Mavrilimumabe, Matuzumabe, Mepolizumabe, Metelimumabe, Milatuzumabe, Minretumomabe, Mitumomabe, Mogamulizumabe, Morolimumabe, Motavizumabe, Moxetumomabe pasudotox,

Muromonab-CD3, Nacolomabe tafenatox, Namilumabe, Naptumomabe estafenatox, Namatumabe, Natalizumabe, Nebacumabe, Necitumumabe, Nemolizumabe, Nerelimomabe, Nesvacumabe, Nimotuzumabe, Nivolumabe, mentano de Nofetumomabe, Obiltoxaximabe, Ocaratuzumabe, Ocrelizumabe, Odulimomabe, Ofatumumabe, Olaratumabe, Oloquizumabe, Omalizumabe, Onartuzumabe, Ontuxizumabe, Opicinumabe, Oportuzumabe monatox, Oregovomabe, Orticumabe, Otelixizumabe, Otlertuzumabe, Oxelumabe, Ozanezumabe, Ozoralizumabe, Pagibaximabe, Palivizumabe, Panitumumabe, Pancomabe, Panobacumabe, Parsatuzumabe, Pascolizumabe, Pasotuxizumabe, Pateclizumabe, Patritumabe, Pembrolizumabe, Pentumomabe, Peraquizumabe, Pertuzumabe, Pexelizumabe, Pidilizumabe, vedotina de Pinatuzumabe, Pintumomabe, Placulumabe, vedotina de Polatuzumabe, Ponezumabe, Priliximabe, Pritoxaximabe, Pritumumabe, PRO 140, Quilizumabe, Racotumomabe, Radretumabe, Ravirumabe, Ralpancizumabe, Ramucirumabe, Ranibizumabe, Raxibacumabe, Refanezumabe, Regavirumabe, Reslizumabe, Rilotumumabe, Rinucumabe, Rituximabe, Robatumumabe, Roledumabe, Romosozumabe, Rontalizumabe, Rovelizumabe, Ruplizumabe, Samalizumabe, Sarilumabe, pendetida de Satumomabe, Secuquinumabe, Seribantumabe, Setoxaximabe, Sevirumabe, Sibrotuzumabe, SGN-CD19A, SGN-CD33A, Sifalimumabe, Siltuximabe, Sintuzumabe, Siplizumabe, Sirucumabe, vedotina de Sotuzumabe, Solanezumabe, Solitomabe, Sonepcizumabe, Sontuzumabe, Stamulumabe, Sulesomabe, Suvizumabe, Tabalumabe, tetraxetana de Tacatuzumabe, Tadocizumabe, Talizumabe, Tanezumabe, Taplitumomabe paptox, Tarextumabe, Tebazumabe, Telimomabe aritox, Tenatumomabe, Teneliximabe, Teplizumabe, Teprotumumabe, Tesidolumabe, TGN1412, Ticilimumabe (tremelimumabe), Tildraquizumabe, Tigatuzumabe, TNX650,

Tocilizumabe (atlizumabe), Toralizumabe, Tosatoxumabe, Tositumomabe, Tovetumabe, Traloquinumabe, Trastuzumabe, TRBS07, Tregalizumabe, Tremelimumabe, celmoleucina de Tucotuzumabe, Tuvirumabe, Ublituximabe, Ulocuplumabe, Urelumabe, Urtoxazumabe, Ustequinumabe, vedotina de Vandortuzumabe, Vantictumabe, Vanucizumabe, Vapaliximabe, Varlilumabe, Vatelizumabe, Vedolizumabe, Veltuzumabe, Vepalimomabe, Vesencumabe, Visilizumabe, Volociximabe, mafodotina de Vorsetuzumabe, Votumumabe, Zalutumumabe, Zanolimumabe, Zatuximabe, Ziralimumabe ou Zolimomabe aritoxinclui e não se limita 3F8, 8H9, Abagovomabe, Abciximabe, Abituzumabe, Abrilumabe, Actoxumabe, Adalimumabe, Adecatumumabe, Aducanumabe, Afelimomabe, Afutuzumabe, Alacizumabe pegol, ALD518, Alentuzumabe, Alirocumabe, pentetato de Altumomabe, Amatuximabe, mafenatox de Anatumomabe, ravtansina de Anetumabe, Anifrolumabe, kinzumabe (IMA-638), Apolizumabe, Arcitumomabe, Ascrinvacumabe, Aselizumabe, Atezolizumabe, Atinumabe, Atlizumabe (tocilizumabe), Atorolimumabe, Bapineuzumabe, Basiliximabe, Bavituximabe, Bectumomabe, Begelomabe, Belimumabe, Benralizumabe, Bertilimumabe, Besilesomabe, Bevacizumabe, Bezlotoxumabe, Biciromabe, Bimagrumabe, Bimequizumabe, mertansina de Bivatuzumabe, Blinatumomabe, Blosozumabe, Bococizumabe, vedotina de Brentuximabe, Briaquinumabe, Brodalumabe, Brolucizumabe, Brontictuzumabe, Canaquinumabe, mertansina de Cantuzumabe, ravtansina de Cantuzumabe, Caplacizumabe, pendetida de Capromabe, Carlumabe, Catumaxomabe, imunoconjugado de cBR96 e doxorrubicina, CC49, Cedelizumabe, Certolizumabe pegol, Cetuximabe, Ch.14.18, Citatuzumabe bogatox, Cixutumumabe, Clazaquizumabe, Clenoliximabe, tetraxetano de Clivatuzumabe, Codrituzumabe, ravtansina de Coltuximabe, Conatumumabe,

Concizumabe, Crenezumabe, CR6261, Dacetuzumabe, Daclizumabe, Dalotuzumabe, Dapirrolizumabe pegol, Daratumumabe, Dectrecumabe, Demcizumabe, mafodotina de Denintuzumabe, Denosumabe, biotina de Derlotuximabe, Detumomabe, Dinutuximabe, Diridavumabe, Dorlimomabe aritox, Drozitumabe, Duligotumabe, Dupilumabe, Durvalumabe, Dusigitumabe, Ecromeximabe, Eculizumabe, Edobacomabe, Edrecolomabe, Efalizumabe, Engumabe, Eldelumabe, Elgemtumabe, Elotuzumabe, Elsilimomabe, Emactuzumabe, Emibetuzumabe, Enavatuzumabe, vedotina de Enfortumabe, Enlimomabe pegol, Enoblituzumabe, Enoquizumabe, Enoticumabe, Ensituximabe, cituxetano de Epitumomabe, Epratuzumabe, Erlizumabe, Ertumaxomabe, Etaracizumabe, Etrolizumabe, Evinacumabe, Evolocumabe, Exbivirumabe, Fanolesomabe, Faralimomabe, Farletuzumabe, Fasinumabe, FBTA05, Felvizumabe, Fezaquinumabe, Ficlatuzumabe, Figitumumabe, Firivumabe, Flanvotumabe, Fletikumabe, Fontolizumabe, Foralumabe, Foravirumabe, Fresolimumabe, Fulranumabe, Futuximabe, Galiximabe, Ganitumabe, Gantenerumabe, Gavilimomabe, ozogamicina de Gemtuzumabe, Gevoquizumabe, Girentuximabe, vedotina de Glembatumumabe, Golimumabe, Gomiliximabe, Guselkumabe, Ibalizumabe, tiuxetano de Ibritumomabe, Icrucumabe, Idarucizumabe, Igovomabe, IMAB362, Imalumabe, Inciromabe, Ingatuzumabe, Inclacumabe, ravtansina de Indatuximabe, vedotina de Indusatumabe, Iniximabe, Intetumumabe, Inolimomabe, ozogamicina de Inotuzumabe, Ipilimumabe, Iratumumabe, Isatuximabe, Itolizumabe, Ixequizumabe, Queliximabe, Labetuzumabe, Lambrolizumabe, Lampalizumabe, Lebriquizumabe, Lemalesomabe, Lenzilumabe, Lerdelimumabe, Lexatumumabe, Libivirumabe, vedotina de Lifastuzumabe, Ligelizumabe, satetraxetano de Lilotomabe, Lintuzumabe, Lirilumabe, Lodelcizumabe, Loquivetmabe, mertansina de Lorvotuzumabe, Lucatumumabe,

Lulizumabe pegol, Lumiliximabe, Lunretuzumabe, Mapatumumabe, Margetuximabe, Maslimomabe, Mavrilimumabe, Matuzumabe, Mepolizumabe, Metelimumabe, Milatuzumabe, Minretumomabe, Mitumomabe, Mogamulizumabe, Morolimumabe, Motavizumabe, Moxetumomabe pasudotox, Muromonab-CD3, Nacolomabe tafenatox, Namilumabe, Naptumomabe estafenatox, Namatumabe, Natalizumabe, Nebacumabe, Necitumumabe, Nemolizumabe, Nerelimomabe, Nesvacumabe, Nimotuzumabe, Nivolumabe, mentano de Nofetumomabe, Obiltoxaximabe, Ocaratuzumabe, Ocrelizumabe, Odulimomabe, Ofatumumabe, Olaratumabe, Oloquizumabe, Omalizumabe, Onartuzumabe, Ontuxizumabe, Opicinumabe, Oportuzumabe monatox, Oregovomabe, Orticumabe, Otelixizumabe, Otlertuzumabe, Oxelumabe, Ozanezumabe, Ozoralizumabe, Pagibaximabe, Palivizumabe, Panitumumabe, Pancomabe, Panobacumabe, Parsatuzumabe, Pascolizumabe, Pasotuxizumabe, Pateclizumabe, Patritumabe, Pembrolizumabe, Pentumomabe, Peraquizumabe, Pertuzumabe, Pexelizumabe, Pidilizumabe, vedotina de Pinatuzumabe, Pintumomabe, Placulumabe, vedotina de Polatuzumabe, Ponezumabe, Priliximabe, Pritoxaximabe, Pritumumabe, PRO 140, Quilizumabe, Racotumomabe, Radretumabe, Ravirumabe, Ralpancizumabe, Ramucirumabe, Ranibizumabe, Raxibacumabe, Refanezumabe, Regavirumabe, Reslizumabe, Rilotumumabe, Rinucumabe, Rituximabe, Robatumumabe, Roledumabe, Romosozumabe, Rontalizumabe, Rovelizumabe, Ruplizumabe, Samalizumabe, Sarilumabe, pendetida de Satumomabe, Secuquinumabe, Seribantumabe, Setoxaximabe, Sevirumabe, Sibrotuzumabe, SGN-CD19A, SGN-CD33A, Sifalimumabe, Siltuximabe, Sintuzumabe, Siplizumabe, Sirucumabe, vedotina de Sotuzumabe, Solanezumabe, Solitomabe, Sonepcizumabe, Sontuzumabe, Stamulumabe, Sulesomabe, Suvizumabe, Tabalumabe,

tetraxetana de Tacatuzumabe, Tadocizumabe, Talizumabe, Tanezumabe, Taplitumomabe paptox, Tarextumabe, Tebazumabe, Telimomabe aritox, Tenatumomabe, Teneliximabe, Teplizumabe, Teprotumumabe, Tesidolumabe, TGN1412, Ticilimumabe (tremelimumabe), Tildraquizumabe, Tigatuzumabe, TNX650, Tocilizumabe (atlizumabe), Toralizumabe, Tosatoxumabe, Tositumomabe, Tovetumabe, Traloquinumabe, Trastuzumabe, TRBS07, Tregalizumabe, Tremelimumabe, celmoleucina de Tucotuzumabe, Tuvirumabe, Ublituximabe, Ulocuplumabe, Urelumabe, Urtoxazumabe, Ustequinumabe, vedotina de Vandortuzumabe, Vantictumabe, Vanucizumabe, Vapaliximabe, Varlilumabe, Vatelizumabe, Vedolizumabe, Veltuzumabe, Vepalimomabe, Vesencumabe, Visilizumabe, Volociximabe, mafodotina de Vorsetuzumabe, Votumumabe, Zalutumumabe, Zanolimumabe, Zatuximabe, Ziralimumabe ou Zolimomabe aritox.

[0195] Tratamentos de combinação que compreendem um anticorpo da presente descrição e múltiplos agentes adicionais (por exemplo, conforme descrito supra) são contemplados. Por exemplo, em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é administrado em combinação com um agente quimioterapêutico/citotóxico e um anticorpo ou inibidor de molécula pequena alvejado. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é administrado em combinação com um agente quimioterapêutico/citotóxico e um agente imunoterapêutico. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é administrado em combinação com um anticorpo ou inibidor de molécula pequena alvejado e um agente imunoterapêutico.

[0196] Qualquer tipo de câncer conhecido na técnica pode ser incluído, tal como, porém, sem limitação, carcinoma, sarcoma, linfoma, leucemia, linfoma e blastoma. Mais exemplos particulares de tais cânceres incluem, porém, sem limitação, câncer de pulmão, câncer de célula escamosa, tumores cerebrais, glioblastoma, câncer de cabeça e pescoço, câncer hepatocelular, câncer colorretal (por exemplo, cânceres de cólon ou retal), câncer de fígado, câncer de bexiga, câncer gástrico ou de estômago, câncer pancreático, câncer cervical, câncer ovariano, câncer do trato urinário, câncer de mama, câncer peritoneal, câncer uterino, câncer de glândula salivar, câncer do rim ou renal, câncer de próstata, câncer vulvar, câncer de tireoide, carcinoma anal, carcinoma peniano, melanoma, mieloma múltiplo e linfoma de célula B (que inclui linfomas de não Hodgkin (NHL)); leucemia linfoblástica aguda (ALL); leucemia linfocítica crônica (CLL); leucemia mieloide aguda (AML); carcinoma de célula Merkel; tricoleucemia; leucemia mieloblástica crônica (CML); e metástases associadas.

[0197] Além das terapias de câncer, os anticorpos fornecidos no presente documento são úteis nas terapias nas quais anticorpos monoclonais são administrados com os fins de reduzir as células, por exemplo, no tratamento de doenças inflamatórias por células imunológicas de redução. Para tais fins um anticorpo fornecido no presente documento é administrado em combinação com um segundo anticorpo terapêutico, por exemplo, com rituximabe para redução de células B em doenças inflamatórias e afecções autoimunes; alemtuzumabe para esclerose múltipla; OKT3 para imunossupressão; outros para condicionamento de transplante de medula óssea; e semelhantes.

[0198] Adicionalmente são fornecidos, no presente documento, métodos para tratar ou atrasar progressão de uma doença autoimune ou uma doença inflamatória num indivíduo administrando-se uma quantidade eficaz de um anticorpo da presente descrição. Doenças autoimunes e doenças inflamatórias amenizáveis ao tratamento de acordo com a descrição incluem, porém, sem limitação, esclerose múltipla, artrite reumatoide, espondiloartropatia, lúpus eritematoso sistêmico, uma doença inflamatória ou autoimune mediada por anticorpos, doença do enxerto contra hospedeiro, sepse, diabetes, psoríase, aterosclerose, síndrome de Sjögren, esclerose sistêmica progressiva, esclerodermia, síndrome coronariana aguda, reperfusão isquêmica, doença de Crohn, endometriose, glomerulonefrite, miastenia grave, fibrose pulmonar idiopática, doenças fibróticas (por exemplo, fibrose pulmonar, cirrose hepática, fibrose atrial, fibrose endomiocárdica, mielofibrose ou fibrose retroperitoneal), asma, síndrome do desconforto respiratório agudo (SDRA), vasculite e miosite inflamatória autoimune. Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é administrado em combinação com um agente terapêutico, tal como um agente imunossupressor, anti-inflamatório ou imunomodulador. Em algumas modalidades, um anticorpo fornecido no presente documento é usado no tratamento de uma doença autoimune ou uma doença inflamatória, por exemplo, esclerose múltipla, artrite reumatoide, espondiloartropatia, lúpus eritematoso sistêmico, uma doença inflamatória ou autoimune mediada por anticorpos, doença do enxerto contra hospedeiro, sepse, diabetes, psoríase, artrite psoriática,aterosclerose, síndrome de Sjögren, esclerose sistêmica progressiva, esclerodermia, síndrome coronariana aguda, reperfusão isquêmica, doença de Crohn, colite ulcerativa, endometriose, glomerulonefrite, nefropatia por IgA, doença renal policística, miastenia grave, fibrose pulmonar idiopática, doença fibrótica (por exemplo, fibrose pulmonar, cirrose hepática, fibrose atrial, fibrose endomiocárdica, mielofibrose ou fibrose retroperitoneal), asma, dermatite atópica, síndrome do desconforto respiratório agudo (SDRA), vasculite ou miosite inflamatória autoimune.

[0199] Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é parte de uma formulação farmacêutica, por exemplo, que inclui o anticorpo e um ou mais carreadores farmaceuticamente aceitáveis. Composições e formulações farmacêuticas, conforme descrito no presente documento, podem ser preparadas misturando-se os ingredientes ativos (tais como um anticorpo ou um polipeptídeo) que têm o grau de pureza desejado com um ou mais carreadores farmaceuticamente aceitáveis opcionais (Remington’s Pharmaceutical Sciences 16ª edição, Osol, A. Ed. (1980)), na forma de formulações liofilizadas ou soluções aquosas. Carreadores farmaceuticamente aceitáveis são geralmente não tóxicos aos recipientes nas dosagens e concentrações empregadas e incluem, porém, sem limitação: tampões, tais como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes que incluem ácido ascórbico e metionina; conservantes; polipeptídeos de baixo peso molecular (menor que cerca de 10 resíduos); proteínas, tais como albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos, tais como polivinilpirrolidona; aminoácidos; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos que incluem glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes, tais como EDTA; açúcares, tais como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contraíons de formação de sal, tal como sódio; complexos de metal (por exemplo, complexos de proteína de Zn); e/ou tensoativos não iônicos, tais como polietilenoglicol (PEG). Em algumas modalidades, um anticorpo da presente descrição é liofilizado.

[0200] Em algumas modalidades, um indivíduo recebe uma dose normalizada no peso corporal do indivíduo. Em algumas modalidades, um indivíduo recebe uma dose de cerca de 10 μg/kg, cerca de 50 μg/kg, cerca de 100 μg/kg, cerca de 200 μg/kg, cerca de 300 μg/kg, cerca de 400 μg/kg, cerca de 500 μg/kg, cerca de 600 μg/kg, cerca de 700 μg/kg, cerca de 800 μg/kg, cerca de 900 μg/kg, cerca de 1000 μg/kg, cerca de 1100 μg/kg, 1200 μg/kg, 1300 μg/kg, 1400 μg/kg, 1500 μg/kg, 1600 μg/kg, 1700 μg/kg, 1800 μg/kg, 1900 μg/kg, cerca de 2000 μg/kg, cerca de 3000 μg/kg, cerca de 4000 μg/kg, cerca de 5000 μg/kg, cerca de 6000 μg/kg, cerca de 7000 μg/kg, cerca de 8000 μg/kg, cerca de 9000 μg/kg, cerca de 10 mg/kg, cerca de 20 mg/kg, cerca de 30 mg/kg, cerca de 40 mg/kg, cerca de 50 mg/kg, cerca de 60 mg/kg, cerca de 70 mg/kg, cerca de 80 mg/kg cerca de 90 mg/kg, cerca de 100 mg/kg, cerca de 200 mg/kg, cerca de 300 mg/kg, cerca de 400 mg/kg, cerca de 500 mg/kg, cerca de 600 mg/kg, cerca de 700 mg/kg, cerca de 800 mg/kg, cerca de 900 mg/kg, ou cerca de 1000 mg/kg de um anticorpo da presente descrição.

[0201] Em algumas modalidades, o período de tempo que um anticorpo da presente descrição é administrado ao indivíduo é qualquer período adequado, conforme determinado pelo estágio da doença, pelo histórico médico do paciente e pelo julgamento do médico responsável. Exemplos de tais períodos adequados incluem, porém, sem limitação, pelo menos cerca de 3 meses, pelo menos cerca de 4 meses, pelo menos cerca de 5 meses, pelo menos cerca de 6 meses, pelo menos cerca de 7 meses, pelo menos cerca de 8 meses, pelo menos cerca de 9 meses, pelo menos cerca de 10 meses, pelo menos cerca de 11 meses, pelo menos cerca de 12 meses, pelo menos cerca de 13 meses, pelo menos cerca de 14 meses, pelo menos cerca de 15 meses, pelo menos cerca de 16 meses, pelo menos cerca de 17 meses, pelo menos cerca de 18 meses, pelo menos cerca de 19 meses, pelo menos cerca de 20 meses, pelo menos cerca de 21 meses, pelo menos cerca de 22 meses, pelo menos cerca de 23 meses, ou pelo menos cerca de 24 meses ou mais longo. Em aspectos particulares, o período de tratamento continua por mais que 24 meses, se desejado, tal como por 30 meses, 31 meses, 32 meses, 33 meses, 34 meses, 35 meses, 36 meses, ou mais longo que 36 meses. Em algumas modalidades, o período é de 6 meses, 1 ano ou 2 anos. Em outra modalidade, o período de tempo de dosagem para qualquer um dos métodos descritos no presente documento é de pelo menos cerca de 2 semanas, pelo menos cerca de 4 semanas, pelo menos cerca de 8 semanas, pelo menos cerca de 16 semanas, pelo menos cerca de 17 semanas, pelo menos cerca de 18 semanas, pelo menos cerca de 19 semanas, pelo menos cerca de 20 semanas, pelo menos cerca de 24 semanas, pelo menos cerca de 28 semanas, pelo menos cerca de 32 semanas, pelo menos cerca de 36 semanas, pelo menos cerca de 40 semanas, pelo menos cerca de 44 semanas, pelo menos cerca de 48 semanas, pelo menos cerca de 52 semanas, pelo menos cerca de 60 semanas, pelo menos cerca de 68 semanas, pelo menos cerca de 72 semanas, pelo menos cerca de 80 semanas, pelo menos cerca de 88 semanas, pelo menos cerca de 96 semanas, ou pelo menos cerca de 104 semanas.

EXEMPLOS

[0202] A presente descrição será entendida mais completamente a título de referência nos seguintes Exemplos. No entanto, os exemplos não devem ser interpretados como limitação do escopo da presente descrição. Se entende que os exemplos e modalidades descritos no presente documento são apenas para fins ilustrativos e que várias modificações ou alterações sob a luz dos mesmos serão sugeridas às pessoas versadas na técnica e devem estar inseridas no espírito e âmbito deste pedido e escopo das reivindicações anexas. EXEMPLO 1: IDENTIFICAÇÃO DE ANTICORPOS COM

ESPECIFICIDADES DE LIGAÇÃO INOVADORAS PARA PROTEÍNAS SIRP-Α MÉTODOS PRODUÇÃO DE ANTICORPO

[0203] As seguintes proteínas foram usadas para imunização. Cada uma inclui um peptídeo SIRP-α de ser humano ou camundongo fundido com uma região Fc modificada (seja uma Fc de IgG4 humana com uma região de articulação que contém uma mutação S228P ou uma Fc de

IgG1 humana L234A/L235A/G237A/N297A designada como IgG1_AAA_N297A) para imunogenicidade aumentada. TABELA A. SEQUÊNCIAS DE IMUNOGÊNIO. Descrição SEQ ID NO Sequência v1 sirpa humano 1 EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQW (Fusão com Fc de IgG4_S228P) FRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDF

SIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTE LSVRAKPSESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVE VHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEY KCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQE EMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYK TTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVM

HEALHNHYTQKSLSLSLGK v2 sirpa humana 2 EEELQVIQPDKSVSVAAGESAILHCTVTSLIPVGPIQW (Fusão com Fc de IgG4_S228P) FRGAGPARELIYNQKEGHFPRVTTVSESTKRENMDF

SISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDTEFKSGAGTELS VRAKPSESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEV HNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT TPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMH

EALHNHYTQKSLSLSLGK sirpa 129 de camundongo 3 KELKVTQPEKSVSVAAGDSTVLNCTLTSLLPVGPIKW (Fusão com Fc de IgG1_AAA_N297A) YRGVGQSRLLIYSFTGEHFPRVTNVSDATKRNNMDF

SIRISNVTPEDAGTYYCVKFQKGPSEPDTEIQSGGGT EVYVLAKPSDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEV HNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYK CKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREE MTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMH

EALHNHYTQKSLSLSPGK Sirpa NOD de camundongo 4 TEVKVIQPEKSVSVAAGDSTVLNCTLTSLLPVGPIRW (Fusão com Fc de IgG1_AAA_N297A) YRGVGQSRQLIYSFTTEHFPRVTNVSDATKRSNLDFS

IRISNVTPEDAGTYYCVKFQRGSPDTEIQSGGGTEVY

Descrição SEQ ID NO Sequência

VLAKDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMI SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSN KALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQ VSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLD SDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHN HYTQKSLSLSPGK

[0204] As proteínas acima foram usadas para imunizar galinhas de tipo selvagem, galinhas SynVH que são galinhas transgênicas que contêm VH de ser humano e VL de galinha, ou galinhas com localizações de imunoglobulina “HuMAB” completamente humanas (Crystal Bioscience; consultar, por exemplo, os documentos nº WO2012162422, WO2011019844, e WO2013059159). Galinhas foram imunizadas com programações variadas que têm doses alternadas de antígeno. Uma programação de imunização exemplificativa é como a seguir: imunização inicial com dose de 100 µg de antígeno que tem a sequência da SEQ ID NO:1 na semana 1, intensificação de 100 µg de antígeno que tem a sequência da SEQ ID NO: 2 na semana 3, extração na semana 4, intensificação com dose de 50 µg de antígeno que tem a sequência da SEQ ID NO:1 na semana 5, extração na semana 6, intensificação com 50 µg de antígeno que tem a sequência da SEQ ID NO: 2 na semana 7, e extração na semana 8. Descrições adicionais de imunização de galinha podem ser encontradas, por exemplo, em Mettler Izquierdo, S. et al. (2016) Microscopy (Oxf) 1-16.

[0205] Em comparação com as sequências de SIRP-α de mamífero, a sequência de SIPRα de galinha se mostrou significativamente mais divergente. Sem desejar estar vinculado à teoria, acreditou-se que a divergência entre sequências de SIRP-α de mamífero e galinha forneceria oportunidades únicas para gerar anticorpos que reagem de forma cruzada através das múltiplas proteínas SIRP-α de mamífero. Por exemplo, pode ser difícil de gerar anticorpos anti-SIRP-α que reagem de forma cruzada com a sequência murina de um hospedeiro de camundongo devido à tolerância imunológica. Além disto, a maior divergência entre os sistemas imunológicos de galinha e mamífero pode resultar numa diversidade maior em produção de anticorpo.

[0206] Sem desejar estar vinculado à teoria, acredita-se que anticorpos com ligação reativa cruzada entre proteínas humana, cinomóloga e/ou murina podem permitir a caracterização de anticorpos tanto nos modelos animal quanto em teste clínico. Anticorpos com ligação específica para isoforma e/ou variante podem ser úteis para abordagens de medicina personalizada para populações humanas específicas e/ou estudos em variantes específicas de interesse.

DETERMINAÇÃO DE KDESATIVADA

[0207] A ligação dos clones de anticorpo às várias proteínas SIRP foi determinada com o uso de detecção por ressonância de plasmon em superfície (SPR) num instrumento ProteOn XPR36 (Bio-Rad, Hercules, CA) com o uso de solução salina tamponada de fosfato (PBS, pH 7,4) complementada com 0,01% de Tween-20 (PBST) como tampão de execução. Os meios pré-filtrados que contêm os anticorpos secretados foram usados diretamente para o ensaio. Primeiro, Fc de IgG anti- humana (BR-1008-39, GE Healthcare) foi acoplada à amina num chip de sensor GLC para gerar as superfícies de captura para os anticorpos. É alcançado cerca de 4000 RU por célula de fluxo de Fc de IgG anti- humana imobilizada. Cada clone é examinado com o uso do mesmo método como a seguir. Os analitos de SIRP usados para o exame foram SIRP- de várias espécies (v1 humana, v2 humana, cinomóloga, camundongo 129, BL6, BALBc, NOD), SIRP- humana e SIRP- humana; SEQ ID NOs:5, 6, 11, 7, 9, 10, 8, 13, e 15, respectivamente

[0208] ~5 a 10 ul de meios pré-filtrados em 10 mM de tampão de acetato de sódio (pH 4,5) foram injetados por 2 mins a 30 ul/min, seguido por fluxo de tampão por 1 min a 100 ul/min. Analito de SIRP (100 nM) foi injetado por 1 min a 100 ul/min, seguido por um ciclo de dissociação de 10 mins. Regeneração da superfície de chip foi realizada fluindo-se 3 M de Cloreto de Magnésio por 1 min a 25 ul/min em ambas orientações, seguido por fluxo de tampão por 1 min a 100 ul/min. Dados de biossensor foram mencionados duas vezes subtraindo-se os dados entre pontos (que não contêm Fc de IgG anti-humana imobilizada) dos dados de ponto de reação (Fc de IgG anti-humana imobilizada) e, então, subtraindo-se a resposta de uma injeção de analito “vazia” de tampão daquela de uma injeção de analito. A ligação foi ajustada com o uso de um Langmuir de 1:1 e valores de Kdesativada (1/S) calculados. Todos os ensaios de SPR foram realizados a 25 ºC.

DETERMINAÇÃO DE KD

[0209] As interações de anticorpos anti-SIRP com SIRP de várias espécies (v1 humana, v2 humana, cinomóloga, camundongo 129, BL6, BALBc, NOD), SIRP e SIRP foram analisadas com o uso de dois métodos, imobilização direta dos anticorpos (por meio de chip de GLC) ou captura por meio de Proteína A biotinilada (por meio de chip de NLC), de acordo com os seguintes protocolos. Todos os experimentos foram realizados a 25 ºC com o uso de um biossensor ProteOn XPR36 com base em SPR (BioRad, Inc, Hercules, CA) equipado com chips de sensor de GLC ou NLC. Anticorpos foram expressos com o uso de células FreeStyle™ 293-FS (Thermo Fisher). Purificação foi realizada através de cromatografia de coluna de afinidade de Proteína A padrão e anticorpos eluídos foram armazenados em tampão de PBS.

[0210] O tampão de execução foi PBS de pH 7,4 com 0,01% de Tween-20 (PBST+). Todos os analitos foram usados em suas concentrações nominais conforme determinado por absorvância A280 e com o uso de seu coeficiente de extinção molar calculado. Analitos foram injetados num modo cinético de “único disparo”, conforme descrito em outro lugar (consultar, por exemplo, Bravman, T. et al. (2006) Anal. Biochem. 358:281-288).

[0211] Para o método que usa chip de GLC, os analitos foram injetados e fluíram sobre anticorpos anti-SIRP imobilizados (~1000 RUs) em chips de GLC com o uso do Kit de Acoplamento de Amina Proteon. Para a etapa de imobilização, o chip de GLC foi ativado com EDAC/Sulpho-NHS 1:1 (Biorad) diluído 1/100 por 300 s a 25 μl/min. Anticorpos anti-SIRP foram diluídos até a concentração de 80 nM em 10 mM de tampão de acetato de sódio de pH 4,5 e imobilizados no chip a 30 μl/min por 50 s. Chip foi inativado com etanolamina por 300 s a 25 μl/min. Os analitos (por exemplo, SIRP- de diferentes espécies, SIRP- β SIRP-) foram injetados num modo cinético de “único disparo” em concentrações nominais de 100, 33, 11, 3,7, 1,2 e 0 nM. Tempos de associação foram monitorados por 90 s a 100 l/min, e os tempos de dissociação foram monitorados por 1200 s. As superfícies foram regeneradas com uma mescla de 2:1 em v/v de tampão de eluição de IgG Pierce/4 M de NaCl.

[0212] Alternativamente, a determinação de KD foi realizada com o uso de captura de anticorpo por meio de um chip de NLC. Neste caso, 15 ug/ml de proteína A biotinilada (Thermofisher) foram injetados em 30 ul/min por 120 s sobre o chip de NLC para obter uma resposta de imobilização de ~1000 a 1200 RUs. A seguir, anticorpos anti-SIRP (~160 nM) foram injetados por 80 s a 30 ul/min. Os analitos (SIRP de diferentes espécies, SIRP- e SIPR-) foram subsequentemente injetados num modo cinético de “único disparo” em concentrações nominais de 100, 33, 11, 3,7, 1,2 e 0 nM. Tempos de associação foram monitorados por 60 s a 25l/min, e os tempos de dissociação foram monitorados por 120 s. As superfícies foram regeneradas com uma mescla de 2:1 em v/v de tampão de eluição de IgG Pierce/4 M de NaCl.

[0213] Dados de biossensor foram citados duas vezes subtraindo- se os dados entre pontos (que não contêm proteína imobilizada) dos dados de ponto de reação (proteína imobilizada) e, então, subtraindo- se a resposta de uma injeção de analito “vazia” de tampão daquela de uma injeção de analito. Dados citados duas vezes foram ajustados globalmente para um modelo Langmuir simples e o valor de KD foi calculado a partir da razão das constantes de taxa cinética aparentes (KD = kd/ka).

RESULTADOS

[0214] As cinéticas de ligação de vários clones de anticorpo para proteínas SIRP-α de camundongo selecionadas foram determinadas. Proteínas de camundongo que foram testadas incluem proteínas SIRP- α de BALBc (SEQ ID NO:10), BL6 (SEQ ID NO:9), NOD (SEQ ID NO:8), e m129 (SEQ ID NO:7). Os resultados são resumidos nas Tabelas B a E abaixo. Sequências de domínio variável para AB21 e AB25 são mostradas na Tabela J1.

[0215] Conforme usado no presente documento, clones de anticorpo são citados por número de ID de clone. Além disto, a notação “S[número de clone]” se refere a um formato sc-Fv-Fc; a notação “AB[número de clone]” se refere a um formato de anticorpo de IgG completo; a notação “AB[número de clone]b” se refere a um formato de IgG1 de camundongo N297A; e “AB[número de clone]c” se refere a um formato de IgG2a de camundongo. TABELA B. RESUMO DAS CINÉTICAS PARA LIGAÇÃO DE ANTICORPOS SELECIONADOS À PROTEÍNA SIRP-Α DE CAMUNDONGO BALBC (SEQ ID NO:10) Anticorpo Kativada (1/Ms) Kdesativada (1/s) KD (M) AB21c 4,62x105 6,18x10-4 1,34x10-9 AB25c 3,03x105 2,92x10-3 9,64x10-9

TABELA C. RESUMO DAS CINÉTICAS PARA LIGAÇÃO DE ANTICORPOS SELECIONADOS À PROTEÍNA SIRP-Α DE CAMUNDONGO BL6 (SEQ ID NO:9) Anticorpo Kativada (1/Ms) Kdesativada (1/s) KD (M) AB21c 2,76x105 2,41x10-4 8,76x10-10 AB25c 1,42x105 3,99x10-4 2,81x10-9 TABELA D. RESUMO DAS CINÉTICAS PARA LIGAÇÃO DE ANTICORPOS SELECIONADOS À PROTEÍNA SIRP-Α DE CAMUNDONGO NOD (SEQ ID NO:8) Anticorpo Kativada (1/Ms) Kdesativada (1/s) KD (M) AB21c 7,49x105 4,79x10-4 6,40x10-10 AB25c 3,66x105 1,43x10-3 3,90x10-9 TABELA E. RESUMO DAS CINÉTICAS PARA LIGAÇÃO DE ANTICORPOS SELECIONADOS À PROTEÍNA SIRP-Α DE CAMUNDONGO M129 (SEQ ID NO:7) Anticorpo Kativada (1/Ms) Kdesativada (1/s) KD (M) AB21c 5,63x105 3,31x10-5 5,88x10-11 AB25c 3,52x105 2,07x10-5 5,87x10-11

[0216] Estes resultados demonstram que os clones de anticorpo AB21 e AB25 se ligam a todas as quatro proteínas SIRP-α de camundongo, o que torna estes anticorpos adequados para caracterização em modelos de camundongo in vivo. EXEMPLO 2: PROPRIEDADES FUNCIONAIS DE ANTICORPOS ANTI-SIRP-Α

[0217] O Exemplo anterior descreve a identificação e caracterização de anticorpos anti-SIRP-α. Estes anticorpos foram examinados a seguir em modelos animais para explorar efeitos biológicos da SIRP-α no crescimento tumoral.

[0218] Conforme observado acima, clones de anticorpo rotulados como “b” foram testados como anticorpos de IgG1 de camundongo de comprimento completo com uma mutação N297A. Clones de anticorpo rotulados como “c” foram testados como anticorpos de IgG2a de camundongo de comprimento completo.

MÉTODOS ATIVIDADE ANTITUMORAL IN VIVO

[0219] Para o modelo de carcinoma de cólon de camundongo singênico MC38, células MC38 foram implantadas por via subcutânea em camundongos C57BL/6 e aleatorizadas em grupos (8 a 10 camundongos/grupo). Grupos de tratamento incluíram veículo (PBS), AB25b, AB25c, e AB27b. Todos os anticorpos anti-SIRP tiveram uma região Fc de IgG1 de camundongo que carrega uma mutação N297A exceto por AB25c, que teve uma IgG2a de camundongo. Tratamento foi iniciado quando os tumores foram uma média de 60 a 65 mm3, dia 7 após implante. Camundongos foram dosados por via intraperitoneal (IP) a 10 mg/kg duas vezes por semana por três semanas para anti-SIRP. Animais foram sacrificados quando os tumores alcançaram um volume de ~2000 mm3.

RESULTADOS

[0220] Os efeitos antitumorais in vivo de vários anticorpos anti- SIRP-α foram ensaiados num modelo de carcinoma de cólon de camundongo singênico. As atividades antitumorais de bloqueio de anticorpos anti-SIRP-α AB25b, AB25c, e AB27b foram examinadas num modelo de carcinoma de cólon de camundongo singênico MC38 para avaliar suas atividades de agente único. Os anticorpos anti-SIRP-α de bloqueio AB25b, AB25c, e AB27b atrasaram a formação tumoral em 10 mg/kg em comparação com o veículo sozinho (Figura 1) no modelo de camundongo singênico MC38. No dia 25, grupos tratados com anticorpos anti-SIRP tiveram três camundongos abaixo de 600 mm 3 para AB25b, quatro camundongos abaixo de 600 mm3 para AB25c e 3 camundongos abaixo de 600 mm3 para AB27b, enquanto o grupo tratado com veículo teve apenas dois camundongos abaixo de 600 mm3.

[0221] Estes resultados demonstram a eficácia de tratamento de anticorpo anti-SIRP-α na inibição de crescimento tumoral in vivo. Anticorpos anti-SIRP-α de bloqueio demonstraram bloquear crescimento tumoral in vivo. EXEMPLO 3: HUMANIZAÇÃO DE ANTICORPOS ANTI-SIRP-Α

[0222] Os Exemplos acima descrevem a geração e caracterização de anticorpos anti-SIRP-α que têm uma cadeia pesada completamente humana e uma cadeia leve de galinha. De modo a humanizar as cadeias leves derivadas de galinha, HVRs de galinha destes anticorpos foram enxertadas em vários estrutura principals de cadeia leve lambda humana.

MÉTODOS HUMANIZAÇÃO

[0223] Anticorpos foram humanizados com o uso de técnicas padrão. Para medir o rendimento de produção, volume igual de culturas de Expi293 que expressam anticorpos anti-SIRP foram purificados através de cromatografia de afinidade de Proteína A. Após a troca de tampão em PBS, a concentração de proteína foi determinada por A280 e expressa em mg/ml.

RESULTADOS

[0224] De modo a projetar cadeias leves humanizadas, cada sequência de cadeia leve de galinha foi alinhada para o estrutura principal de linha genética humana através de IgBLAST (NCBI). Com o uso desta análise, a correspondência mais próxima do estrutura principal de cadeia leve lambda de galinha é IGLV3 humana (consultar SEQ ID NOs:27 a 30).

[0225] Em outra abordagem, uma busca na literatura foi realizada para determinar as sequências de estrutura principal de cadeia leve lambda humano ideal para fazer par com sequências de VH3 humana (a cadeia pesada humana usada para estes anticorpos). Com base nestas análises, acreditou-se que VH3 humana faria um bom par com IGLV1 e IGLV2 humanas. Consultar Glanville, J. et al. (2009) Proc. Natl. Acad. Sci. 106:20216-20221; Lloyd, C. et al. (2009) Proteína Eng. Des. Sel. 22:159-168; e Jayaram, N. et al. (2012) Proteína Eng. Des. Sel. 25:523-529.

[0226] Portanto, seis cadeias leves humanizadas foram criadas: Hum1 (HVRs de AB25 + estrutura principal de IGLV3 humana; SEQ ID NO:25), Hum2 (HVRs de AB25 + estrutura principal de IGLV1 humana), Hum3 (HVRs de AB66 + estrutura principal de IGLV3 humana), Hum4 (HVRs de AB66 + estrutura principal de IGLV1 humana), Hum5 (HVRs de AB25 + estrutura principal de IGLV2 humana) e Hum6 (HVRs de AB21 + estrutura principal de IGLV1 humana).

[0227] Cada uma das 6 cadeias leves humanizadas foi pareada com a cadeia pesada AB21. Anticorpos foram expressos conforme descrito acima. Surpreendentemente, sequências de estrutura principal de IGLV1 humana resultaram na expressão de anticorpo diminuída independentemente da cadeia pesada. Isto se refere aos pareamentos de cadeia pesada com Hum2, Hum4 e Hum6. Os resultados são resumidos na Figura 2 como “rendimento de proteína” (fileira 1). Por outro lado, anticorpos com estrutura principal de IGLV2 e IGLV3 humanas (Hum 1, Hum3, Hum5) na cadeia leve demonstraram níveis superiores de expressão.

[0228] Anticorpos selecionados também foram caracterizados por se ligar a uma variedade de proteínas SIRP, por exemplo, à SIRP-α humana v1 (SEQ ID NO:5), SIRP-α humana v2 (SEQ ID NO:6), SIRP-α cinomóloga (SEQ ID NO:11), SIRP-α de camundongo BALB/c (SEQ ID NO:10), e SIRP-γ humana (SEQ ID NO:15). Estes dados também são resumidos na Figura 2. Cadeias leves humanizadas selecionadas provocaram uma diminuição na ligação a um ou mais antígenos. Por exemplo, o estrutura principal de IGLV3 humana (representado por Hum1 e Hum3) demonstrou permitir níveis superiores de produção de anticorpo sem perturbar a afinidade de ligação. Por exemplo, domínios variáveis de cadeia leve com os estruturas principal de IGLV3 e as sequências de HVR de anticorpo 25 ou anticorpo 66 (representadas por Hum1 e Hum 3, respectivamente) combinaram bem com a cadeia pesada AB21 e demonstraram ligação similar às proteínas SIRP-α e SIRP-γ diferentes. Por outro lado, estrutura principal de IGLV1 e IGLV2 (representados por Hum2, Hum4, Hum5 e Hum6) demonstraram diminuir a expressão e/ou ligação à SIRP quando pareados com a cadeia pesada AB21. Dados de ligação adicionais destes experimentos são fornecidos na Tabela L infra. O estrutura principal de IGLV3 humana foi selecionado para teste adicional.

[0229] Domínios de VL adicionais Hum9 e Hum8 foram gerados com base no domínio de VL Hum1. Em comparação com Hum1, Hum9 contém 4 substituições de aminoácido próximas ou em HVR-L1 e –L2 que aumentam a humanidade da cadeia leve para mais ou igual a 85% de identidade com a sequência de cadeia leve humana. Em comparação com Hum1, Hum8 contém 5 substituições de aminoácido, respectivamente próximas ou em HVR-L1 e –L2 que aumentam a humanidade da cadeia leve para mais ou igual a 85% de identidade com a sequência de cadeia leve humana. VLs Hum1, Hum8 e Hum9 quando pareadas com domínio de VH de cadeia pesada all_mut_AB21 (que carrega mutações de linha genética; SEQ ID NO:26) produziram anticorpos anti-SIRP- que se ligam à SIRP- v1 humana com afinidade igual ou melhor 10 pM (Tabela M). EXEMPLO 4: INDUÇÃO DE FAGOCITOSE E ATIVAÇÃO DE CÉLULA DENDRÍTICA POR ANTICORPOS ANTI-SIRP-Α

[0230] Vários anticorpos anti-SIRP-α foram examinados a seguir em ensaios de fagocitose e ativação de célula dendrítica.

MÉTODOS CULTIVO DE LINHA CELULAR TUMORAL

[0231] Células de DLD-1 (adenocarcinoma colorretal humano) foram mantidas em meio de crescimento compreendido por RPMI (Gibco) complementado por 10 por cento de Soro Bovino Fetal termicamente inativado (Gibco), um por cento de penicilina/estreptomicina (Gibco), e um por cento de Glutamax (Gibco).

DERIVAÇÃO E CULTURA DE MACRÓFAGOS DERIVADOS DE MONÓCITO HUMANO

[0232] Resíduos de trima foram recebidos dos Centros Sanguíneos do Pacífico e diluídos em 1:4 com Solução Salina Tamponada de Fosfato (PBS, Gibco). Sangue diluído foi dividido em quatro tubos e forrado com 20 ml de Ficoll-Paque Plus (GE Healthcare). Tubos foram centrifugados por 30 minutos em 400 x g. PBMCs foram coletados da interface e ressuspensos em tampão FACS (PBS com 0,5 por cento de Albumina de Soro Bovino (Gibco)). Monócitos CD14+ foram purificados através da seleção negativa com o uso do Kit de Isolamento de Monócito II (Miltenyi Biotec) e colunas LS (Miltenyi Biotec) de acordo com o protocolo do fabricante.

[0233] Para macrófagos não polarizados, monócitos CD14+ foram semeados em placas de 15 cm de cultura de tecido (Corning) em 10 milhões de células por prato em 25 ml de IMDM (Gibco) complementado com 10 por cento de soro AB humano (Corning), um por cento de penicilina/estreptomicina, e um por cento de Glutamax. Células foram cultivadas de sete a dez dias.

[0234] Para macrófagos polarizados M2, monócitos CD14+ foram semeados em placas de 15 cm de cultura de tecido (Corning) em 6 milhões células por prato em 25 ml de RPMI(Gibco) complementado com 10 por cento de soro bovino fetal (Thermo Fisher), um por cento de penicilina/estreptomicina e um por cento de Glutamax, e 50 ng/ml de M- CSF (Miltenyi). Células foram cultivadas de sete a dez dias.

ENSAIOS DE FAGOCITOSE IN VITRO

[0235] Células DLD-1 foram separadas das placas de cultura lavando-se duas vezes com 20 ml de PBS e incubação em 10 ml de TrypLE Select (Gibco) por 10 minutos a 37ºC. Células foram centrifugadas, lavadas em PBS e ressuspensas em meio. Células foram rotuladas com o kit de proliferação celular Celltrace CFSE (Thermo Fisher) de acordo com as instruções do fabricante e ressuspensas em IMDM. Macrófagos foram separados das placas de cultura lavando-se duas vezes com 20 ml de PBS e incubação em 10 ml de TrypLE Select por 20 minutos a 37ºC. Células foram removidas com um raspador de célula (Corning), lavadas em PBS e ressuspensas em IMDM.

[0236] Ensaios de fagocitose foram montados em placas de 96 poços com fundo em U de fixação ultra baixa (Corning) que contêm 100000 células DLD-1, 50000 macrófagos, diluições em série de cinco vezes de anticorpo anti-SIRP-α de 100 nM a 6,4 pM, e cetuximabe (Absolute Antibody) em 1 ou 0,01 ug/ml ou anticorpo de controle do mesmo isótopo (Southern Biotech). Placas foram incubadas por duas horas a 37ºC numa incubadora umidificada com 5 por cento de dióxido de carbono. Células foram granuladas através de centrifugação por cinco minutos a 400 x g e lavadas em tampão de FACS de 250 μl. Macrófagos foram tingidos em gelo por 15 minutos em tampão de FACS de 50 μl que contém 10 μl de reagende de bloqueio de FcR humano (Miltenyi Biotec), 0,5 μl de BV421 anti-CD33 (Biolegend), e 0,5 μl de APC-Cy7 anti-CD206 (Biolegend). Células foram lavadas em 200 μl de tampão de FACS, lavadas em 250 μl de PBS e tingidas em gelo por 30 minutos em 50 μl de Corante de Viabilidade Fixável eFluor 506 (ebioscience) diluído em 1:1000 em PBS. Células foram lavadas duas vezes em 250 μl de tampão de FACS e fixadas por 30 minutos em gelo em 75 μl de Cytofix (BD Biosciences). Células foram lavadas em 175 μl de tampão de FACS e ressuspensas em 75 μl de tampão de FACS. Células foram analisadas num FACS Canto II (BD Biosciences), com análise de dados subsequente por Flowjo 10,7 (Treestar). Células mortas foram excluídas fechando-se na população negativa e506. Macrófagos que fagocitaram células tumorais foram identificadas como células positivas para CD33, CD206 e CFSE.

ENSAIOS DE ATIVAÇÃO DE CÉLULA DENDRÍTICA

[0237] Camundongos Balb/c (n=3/grupo) foram injetados por via intravenosa com um controle de IgG1 humana, vários anticorpos anti- SIRP-α, controle de IgG de camundongo ou veículo (PBS) a 10 mg/kg. Cinco horas após a injeção, os baços foram coletados e processados em suspensão de célula única por dissociação mecânica. Nível de marcador de ativação CD86, MHCII e CCR7 em células dendríticas esplênicas CD4+ foi medido através de citometria de fluxo.

RESULTADOS

[0238] Anticorpos humanizados descritos acima foram testados para seus efeitos em fagocitose de células EGFR(+) DLD-1 por macrófagos M2 em combinação com o anticorpo anti-EGFR cetuximabe (Figura 3A). Todos os anticorpos humanizados demonstraram aprimorar fagocitose induzida por cetuximabe. Os anticorpos humanizados descritos acima (variante de cadeia pesada de anticorpo 25 combinada com variante de cadeia pesada de anticorpo 27 e cadeia leve Hum1 ou Hum9 combinada com cadeia leve Hum1) foram testados por seus efeitos em fagocitose de células EGFR(+) DLD-1 por macrófagos M2 em combinação com o anticorpo anti-EGFR cetuximabe

(Figura 3B). Todos os anticorpos humanizados demonstraram aprimorar fagocitose induzida por cetuximabe. Todos os anticorpos testados foram gerados como anticorpos de IgG1 humana de comprimento completo com mutações L234A, L235A, G237A e N297A.

[0239] A seguir, vários anticorpos anti-SIRP-α foram examinados para seus efeitos em ativação de célula dendrítica in vivo (Figuras 4A e 4B). Falha em engatar receptor de SIRP-α de camundongo em células dendríticas esplênicas por meio de ligação de CD47 resulta em ativação de célula dendrítica esplênica. Anticorpos anti-SIRP-α Hum1/AB21mutall, Hum8/AB21mutall, e Hum9/AB21mutall foram testados in vivo para determinar se os mesmos resultam em ativação de célula dendrítica. Conforme determinado por expressão de CD86 e MHCII, estes anticorpos de bloqueio anti-SIRP-α tiveram capacidade para induzir ativação de células dendríticas. EXEMPLO 5: EFEITOS ANTITUMORAIS SINÉRGICOS DE COMBINAR ANTICORPOS ANTI-SIRP-Α COM INIBIÇÃO DA TRAJETÓRIA DE PD-L1/PD-1

MÉTODOS ATIVIDADE ANTITUMORAL IN VIVO

[0240] Para o modelo de carcinoma de cólon de camundongo singênico CT26, células CT26 foram implantadas por via subcutânea em camundongos BALB/c e aleatorizadas em grupos (8 a 9 camundongos/grupo). Grupos de tratamento incluíram veículo (PBS), AB25b, anti-PD-L1 e AB25b/anti-PD-L1. Anti-PD-L1 é gerado fundindo- se o domínio de VH e VL de Atezolizumabe com região Fc de IgG1 de camundongo que carrega uma mutação N297A. Todos os anticorpos anti-SIRP- também têm uma região Fc de IgG1 de camundongo que carrega uma mutação N297A. Tratamento foi iniciado quando os tumores tiveram uma média de 75 a 80 mm3, dia 7 ou 8 após implante. Camundongos foram dosados por via intraperitoneal (IP) a 3 mg/kg ou

10 mg/kg duas vezes por semana por três semanas para anticorpos anti-SIRP e três doses a 3 mg/kg, cinco dias de diferença para anti- PD-L1. Animais foram sacrificados quando os tumores alcançaram um volume de ~2000 mm3.

[0241] Para o modelo de carcinoma de cólon de camundongo singênico MC38, células MC38 foram implantadas por via subcutânea em camundongos C57BL/6 e aleatorizadas em grupos (8 a 10 camundongos/grupo). Grupos de tratamento incluíram veículo (PBS), AB25b, anti-PD1 (clone RMP1-14, BioXCell), e AB25b/anti-PD1. Todos os anticorpos anti-SIRP tiveram uma região Fc de IgG1 murina que carrega uma mutação N297A exceto para AB25c. Tratamento foi iniciado quando os tumores foram uma média de 60 a 65 mm3, dia 7 após implante. Camundongos foram dosados por via intraperitoneal (IP) a 10 mg/kg duas vezes por semana por três semanas para anti-SIRP e três doses a 2 mg/kg para anti-PD1. Animais foram sacrificados quando os tumores alcançaram um volume de ~2000 mm3.

RESULTADOS

[0242] Atividade antitumoral do anticorpo anti-SIRP-α de bloqueio AB25b foi testada sozinha e em combinação com um anticorpo anti-PD- L1 no modelo de carcinoma de cólon de camundongo singênico CT26. Conforme mostrado na Figura 5, a administração de AB25b a 10 mg/kg em combinação com anti-PD-L1 a 3 mg/kg atrasou a formação tumoral quando em comparação com o tratamento com cada agente único ou controle de veículo. No dia 27 do estudo, o grupo de tratamento de combinação teve seis camundongos com tumores abaixo de 600 mm3 em tamanho, em comparação com dois, dois e dois camundongos com tumores abaixo 600 mm3 em tamanho nos grupos de tratamento de veículo, agente anti-PD-L1 único e agente anti-SIRP-α único, respectivamente.

[0243] A seguir, as atividades antitumorais do anticorpo anti-SIRP-

α AB25b foram testadas sozinhas e em combinação com um anticorpo anti-PD-1 no modelo de carcinoma de cólon de camundongo singênico MC38. Conforme mostrado na Figura 6, a combinação de AB25b (a 10 mg/kg) com anti-PD-1 a 5 mg/kg atrasou a formação tumoral quando em comparação com o tratamento com cada agente único ou controle de veículo. No dia 27 do estudo, o grupo de tratamento de combinação de AB25b/PD-1 teve sete camundongos com tumores abaixo de 600 mm 3 em tamanho, em comparação com um, cinco e dois camundongos com tumores abaixo 600 mm3 em tamanho nos grupos de tratamento de veículo, agente anti-PD-1 único e agente AB25b único, respectivamente.

[0244] Um resumo dos anticorpos descritos no presente documento e suas propriedades é fornecido na Tabela K. Dados de ligação adicionais são fornecidos nas Tabelas L e N. EXEMPLO 6: CADEIAS LEVES DE ANTICORPO ANTI-SIRP-Α

INOVADORAS MODIFICADAS GENETICAMENTE PARA REMOVER POTENCIAIS PONTOS QUENTES DE DESVANTAGEM

[0245] Devido às propriedades de bloqueio de anticorpos anti-SIRP- α AB21 e AB25 descritas acima, um anticorpo que compreende o domínio de VH de AB21 variante (SEQ ID NO:26) e o domínio de VL Hum1 humanizado (SEQ ID NO:25) foi selecionado para análise. A sequência de cadeias leves de anticorpo que compreende o domínio de cadeia leve variável humanizada Hum1 descrito acima foi analisada para potenciais pontos quentes de desvantagem, por exemplo, sítios de desaminação ou glicação.

[0246] Desaminação de proteína é uma modificação pós- translacional na qual a amida de cadeia lateral de um resíduo de glutamina ou asparagina é convertida num grupo carboxilato ácido. Desaminação não enzimática de asparagina é mais rápida do que aquela de glutamina e, portanto, apresenta uma significância fisiológica superior e maior risco de potencial desvantagem na fabricação e armazenamento de agentes terapêuticos à base de polipeptídeo.

[0247] Glicação se refere à glicosilação não enzimática ou reação de Mallard de proteínas, que ocorre principalmente no grupo ε-amino de lisina, ou um grupo amino livre. As cadeias laterais de resíduos de arginina, histidina, triptofano e cisteína representam potenciais sítios de glicação adicionais. Proteínas amadori modificadas são um produto de glicação precoce e passam por reações adicionais que originam produtos de extremidade de glicação antecipados (AGEs).

[0248] As análises das cadeias leves que contêm Hum1 identificaram sítios onde a modificação genética pode ser desejada para limitar o risco devido, por exemplo, às modificações que podem ocorrer durante a fabricação, armazenamento e/ou desenvolvimento de fármaco de anticorpos anti-SIRP-α. Este Exemplo descreve o teste e construção de variantes de Hum1 que removem estas potenciais desvantagens.

MÉTODOS ANÁLISE DE MAPEAMENTO DE PEPTÍDEO

[0249] Para digestões de tripsina, amostras foram diluídas em 6 M de HCl de Guanidina e 1 mM de EDTA. 10 mM de DTT e 10 mM de iodoacetamida foram usados para reduzir e alquilar as amostras, respectivamente. O tampão foi, então, trocado para 0,1 M de Tris-HCl e amostras foram incubadas por 4 horas para digestão. Para digestões de quimiotripsina, amostras foram diluídas em 100 mM de bicarbonato de amônia. 1% de tensoativo lábel ao ácido aniônico de progenta foi adicionado. Novamente, 10 mM de DTT e 10 mM de iodoacetamida foram usados para reduzir e alquilar as amostras, respectivamente. Amostras foram incubadas de um dia para o outro

[0250] Os dados espectrais de massa foram adquiridos pela Waters Acuity UHPLC alinhado com um Orbitrap Quadrupolo Híbrido Q

Exactive (Thermo Scientific, San Jose CA). Coluna usada é Agilent AdvanceBio Peptide Mapping (C18, ID 1x150 mm). Solventes de fase inversa foram usados e o gradiente usado foi tampão de 2% a 40% durante 41 minutos. Faixa de varredura de MS completa foi de 250 a 2000 m/z. Buscas de peptídeo e abundância relativa foram analisadas com o uso de Byonic and Byologic da Protein Metrics. Precisão de Massa de Precursor de 10 ppm e precisão de massa de fragmento de 20 ppm foi adotada.

DETERMINAÇÃO DE KD

[0251] As interações de anticorpos anti-SIRPa com SIPRa de várias espécies (v1 humana, v2 humana, cinomóloga, camundongo 129, BL6, BALBc, NOD), SIRPb e SIRPg foram analisadas com o uso de imobilização direta dos anticorpos. Todos os experimentos foram realizados a 25 ºC com o uso de um biossensor ProteOn XPR36 com base em SPR (BioRad, Inc, Hercules, CA) equipado com chips de sensor de GLC. Anticorpos foram expressos com o uso de células FreeStyle™ 293-FS (Thermo Fisher). Purificação foi realizada através de cromatografia de coluna de afinidade de Proteína A padrão e anticorpos eluídos foram armazenados em tampão de PBS.

[0252] O tampão de execução foi PBS de pH 7,4 com 0,01% de Tween-20 (PBST+). Todos os analitos foram usados em suas concentrações nominais conforme determinado por absorvância A280 e com o uso de seu coeficiente de extinção molar calculado. Analitos foram injetados num modo cinético de “único disparo”, conforme descrito em outro lugar (consultar, por exemplo, Bravman, T. et al. (2006) Anal. Biochem. 358:281-288).

[0253] Para imobilização com o uso de chip de GLC, os analitos foram injetados e fluíram sobre anticorpos anti-SIRP-α imobilizados (~1000 RUs) em chips de GLC com o uso do Kit de Acoplamento de Amina Proteon. Para a etapa de imobilização, o chip de GLC foi ativado com EDAC/Sulpho-NHS 1:1 (Biorad) diluído 1/100 por 300 s a 25 μl/min. Anticorpos anti-SIRP-α foram diluídos até a concentração de 80 nM em 10 mM de tampão de acetato de sódio de pH 4,5 e imobilizados no chip a 30 μl/min por 50 s. Chip foi inativado com etanolamina por 300 s a 25 μl/min. Os analitos (por exemplo, SIRP-α de diferentes espécies, SIRP- β, SIRP-) foram injetados num modo cinético de “único disparo” em concentrações nominais de 100, 33, 11, 3,7, 1,2 e 0 nM. Tempos de associação foram monitorados por 90 s a 100 ul/min, e os tempos de dissociação foram monitorados por 1200 s. As superfícies foram regeneradas com uma mescla de 2:1 em v/v de tampão de eluição de IgG Pierce/4 M de NaCl.

[0254] Dados de biossensor foram citados duas vezes subtraindo- se os dados entre pontos (que não contêm proteína imobilizada) dos dados de ponto de reação (proteína imobilizada) e, então, subtraindo- se a resposta de uma injeção de analito “vazia” de tampão daquela de uma injeção de analito. Dados citados duas vezes foram ajustados globalmente para um modelo Langmuir simples e o valor de KD foi calculado a partir da razão das constantes de taxa cinética aparentes (KD = kd/ka).

RESULTADOS

[0255] Um anticorpo anti-SIRP-α (anticorpo PC336) que compreende uma cadeia leve (SEQ ID NO:47) com o domínio de VL Hum1 (SEQ ID NO:25) e um domínio constante lambda de IGLC1 humana (SEQ ID NO:37), e uma cadeia pesada (SEQ ID NO:61) com o domínio de VH MutAll AB21 (SEQ ID NO:26) e uma região constante (SEQ ID NO:34) que compreende uma região Fc de IgG2Da humana (que compreende mutações A330S e P331S, numeração de posição de aminoácido de acordo com EU) foi realizada através de digestão de tripsina e quimiotripsina conforme descrito acima. Cobertura de sequência geral de cadeia pesada foi de 100% (444 dos 444 aminoácidos), e cadeia leve foi de 98,6% (211 dos 214 aminoácidos). Sequências de domínio variável e cadeia completa para todos os anticorpos são fornecidas nas Tabelas J1 e J2.

[0256] Estas análises revelaram três resíduos de cadeia leve que foram modificados por glicação. Tabela F mostra a glicação observada na cadeia leve. Um total de 3 peptídeos glicados foram isolados. Dentre estes, se observou que ~48% do peptídeo com a sequência da SEQ ID NO:65 foi glicado. A modificação de glicação foi atribuída a K104 (numeração com base na numeração sequencial de aminoácidos para cadeia leve, não de Kabat). A Figura 7 mostra a cromatografia de íon extraído total, área sob a curva (XIC, AUC) da forma glicada contra a forma não modificada de peptídeos de anticorpo PC336. TABELA F. PEPTÍDEOS GLICADOS DE CADEIA LEVE QUE CONTÉM HUM1 DE ANTICORPO PC336. Sequência de peptídeo Modificação/ AAs Posição Peptídeo de % Nomes modifica de AA tripsina dos digerida ADGSPVKAGVETTKPSK Não modificado 99,5 (SEQ ID NO:64) Hex/162,0528 K 158 Glicado 0,521 FSGSSSGTTVTLTISGVQ Não modificado 52,1

AEDEADYYCGGYDQSSY Hex/162,0528 K 104 Glicado 47,9 TNPFGGGTK (SEQ ID NO:65) ITCSGGSYSSYYYAWYQ Não modificado 99

QKPGQAPVTLIYSDDKRP Hex/162,0528 K 38 Glicado 1,03 SNIPER (SEQ ID NO:66)

[0257] Mapeamento de peptídeo de um segundo anticorpo anti-SIRP- α (anticorpo PC333) que compreende a mesma cadeia leve (SEQ ID NO:47) e uma cadeia pesada (SEQ ID NO:58) com o domínio de VH MutAll AB21 (SEQ ID NO:26) e uma região constante (SEQ ID NO:31) que compreende uma região Fc de IgG1 humana de tipo selvagem também foi realizado. Similar ao que foi observado para o anticorpo 336, o resíduo de lisina na posição 104 da cadeia leve também foi observado como glicado neste anticorpo (~34% dos peptídeos; consultar a Tabela G). TABELA G. PEPTÍDEO GLICADO DE CADEIA LEVE QUE CONTÉM HUM1 DE ANTICORPO PC333. Posição Modificação/ AAs Peptídeos XIC % Nomes modificados 104 Nativo 2.770E+8 66,02 Hex/162,0528 K Modificado 1.430E+8 33,98

[0258] Mapeamento de peptídeo também revelou a presença de resíduos desamidados na cadeia leve que contém Hum1 de anticorpo PC301, que compreende uma cadeia leve (SEQ ID NO:63) com o domínio de VL Hum1 (SEQ ID NO:25) e um domínio constante lambda de IGLC2 humana (SEQ ID NO:38) e uma cadeia pesada (SEQ ID NO:59) com o domínio de VH MutAll AB21 (SEQ ID NO:26) e uma região constante (SEQ ID NO:32) que compreende uma região Fc AAA N297A de IgG1 humana (que compreende mutações L234A, L235A, G237A, e N297A, numeração de posição de aminoácido de acordo com EU). Conforme mostrado na Figura 8, vários sítios na cadeia leve e cadeia pesada do anticorpo PC301 foram observados como desamidados. Em particular, aproximadamente 50% dos peptídeos que contêm os resíduos N171 e N172 do domínio constante de cadeia leve se mostraram modificados por desaminação. A partir do mapeamento de peptídeo, não foi possível determinar se N171, N172, ou ambos os resíduos foram desamidados, visto que estes dois resíduos são adjacentes uns aos outros e isolados no mesmo peptídeo.

[0259] Modificações pós-translacionais, tais como desaminação e glicação são indesejáveis para desenvolvimento de fármaco. Isto ocorre devido aos potenciais problemas com a heterogeneidade de produto durante a fabricação de fármaco. Portanto, é desejável limitar as modificações mesmo que estas modificações não pareçam afetar as afinidades de ligação dos anticorpos anti-SIRP-α.

[0260] Para remover os resíduos potencialmente desamidados (N171/N172), 4 variantes de sítio de desaminação foram testadas primeiro. Anticorpo PC334 conteve a cadeia leve de VL+IGLC1 Hum1 original (SEQ ID NO:47). Anticorpo PC338 conteve uma cadeia leve com o domínio de VL Hum1 original e o domínio constante de variante N172D (SEQ ID NO:48). Anticorpo PC339 conteve uma cadeia leve com o domínio de VL Hum1 original e o domínio constante de variante N171D (SEQ ID NO:49). Anticorpo PC340 conteve uma cadeia leve com o domínio de VL Hum1 original e o domínio constante de variante de sítio de desaminação N171D,N172S (SEQ ID NO:50). Anticorpo PC341 conteve uma cadeia leve com o domínio de VL Hum1 original e o domínio constante de variante de sítio de desaminação N171S,N172D (SEQ ID NO:51). Todos os anticorpos tiveram uma cadeia pesada que compreende o domínio de VH mutall AB21HC (SEQ ID NO:26) e uma região constante (SEQ ID NO:32) que compreende a região Fc AAA N297A de IgG1 humana (sequência de cadeia pesada completa, conforme mostrado na SEQ ID NO:59). Os resultados do ensaio de ligação são mostrados na Tabela H. Todos os quatro mutantes ligados com afinidade equivalente à SIRP-α humana v1, em comparação com o anticorpo de tipo selvagem. TABELA H. LIGAÇÃO DE ANTICORPOS ANTI-SIRP-Α COM CADEIAS LEVES HUM1 DE VARIANTE DE SÍTIO DE DESAMINAÇÃO À SIRP-Α HUMANA V1. Anticorpo Cadeia Leve Fc KD (M) para SIRP humana v1 PC334 Hum1_IGLC1 IgG1_AAA_dead* <1E-12 PC338 Hum1_IGLC1_ N172D IgG1_AAA_dead <1E-12

Anticorpo Cadeia Leve Fc KD (M) para SIRP humana v1 PC339 Hum1_IGLC1_ N171D IgG1_AAA_dead <1E-12 PC340 Hum1_IGLC1_N171D, N172S IgG1_AAA_dead <1E-12 PC341 Hum1_IGLC1_N171S, N172D IgG1_AAA_dead <1E-12 * IgG1_AAA_dead se refere à IgG1 humana com substituições L234A, L235A, G237A e N297A.

[0261] A seguir, as variantes de sítio de glicação foram testadas. A região do domínio de VL Hum1 com o sítio de glicação é mostrada na Figura 9. Para remover este sítio de glicação, três variantes deste domínio de VL foram criadas, versões rotuladas 1, 2 e 3 (v1, v2, e v3 também são usadas intercambiavelmente no presente documento). Estas variantes realizam mutação em resíduos no sítio de glicação K104 e ao redor do mesmo. Versões 1 e 2 usam sequências idênticas à sequência IGLJ1 e IGLJ7 humana nativa, respectivamente. Versão 3 substitui a lisina por arginina para manter a carga positiva e tamanho de resíduo. As variantes de sítio de glicação foram testadas no contexto das variantes de desaminação N171S, N172D.

[0262] Anticorpo PC334 conteve a cadeia leve de VL+IGLC1 Hum1 original (SEQ ID NO:47). Anticorpo PC341 conteve uma cadeia leve com o domínio de VL Hum1 original e o domínio constante de variante de sítio de desaminação N171S,N172D (abreviado “SD”) (SEQ ID NO:51). Anticorpos PC345, PC346, e PC347 também contiveram o domínio constante de variante de sítio de desaminação SD, porém, incluíram os domínios de VL de variante 1, 2, e 3 Hum1, respectivamente (SEQ ID NOs:53, 55 e 57, respectivamente). Todos os anticorpos tiveram uma cadeia pesada que compreende o domínio de VH mutall AB21HC (SEQ ID NO:26) e uma região constante (SEQ ID NO:32) que compreende a região Fc AAA N297A de IgG1 humana (sequência de cadeia pesada completa, conforme mostrado na SEQ ID NO:59). Os resultados do ensaio de ligação são mostrados na Tabela I1.

TABELA I1. LIGAÇÃO DE ANTICORPOS ANTI-SIRP-Α COM CADEIAS LEVES HUM1 DE VARIANTE DE SÍTIO DE GLICAÇÃO À SIRP-Α HUMANA V1. Anticorpo Cadeia Leve Fc KD (M) para SIRP humana v1 PC334 Hum1_IGLC1 IgG1_AAA_dead* <1.0E-12 PC341 Hum1_IGLC1_N171S, N172D IgG1_AAA_dead <1.0E-12 PC345 Hum1_IGLC1_version 1 + SD IgG1_AAA_dead <1.0E-12 PC346 Hum1_IGLC1_version 2 + SD IgG1_AAA_dead <1.0E-12 PC347 Hum1_IGLC1_version 3 + SD IgG1_AAA_dead <1.0E-12 * IgG1_AAA_dead se refere à IgG1 humana com substituições L234A, L235A, G237A e N297A.

[0263] Conforme mostrado nas Tabelas H e I1, todos os anticorpos ligados com afinidade equivalente à SIRP-α humana v1, em comparação com o anticorpo de tipo selvagem. Estes resultados demonstram que as variantes modificadas geneticamente para remover pontos quentes de desvantagem de desaminação e glicação não tiveram efeito sobre a ligação à SIRP-α.

[0264] Com base nos resultados acima, 6 variantes de cadeia leve preferenciais foram geradas, e o alinhamento das respectivas sequências (SEQ ID NOs:52 a 57) é mostrado nas Figuras 10 e 11. As mesmas compreenderam a combinação de duas variantes de sítio de desaminação preferenciais (N171D/N172S e N171S/N172D, abreviadas como “DS” e “SD,” respectivamente) e as 3 variantes de glicação (v1, v2, v3). O domínio de VL hum1 original e região constante lambda de IGLC1 humana (SEQ ID NO:47) também são mostrados no alinhamento. EXEMPLO 7: EFEITO DE SEQUÊNCIA DE DOMÍNIO CONSTANTE SOBRE ATIVIDADES BIOLÓGICAS DE ANTICORPOS ANTI-SIRP-Α

[0265] Anticorpos anti-SIRP-α com diferentes regiões Fc e domínios constantes de cadeia leve foram testados para seu efeito sobre fagocitose, de modo a entender como estas sequências impactam as propriedades biológicas de anticorpos anti-SIRP-α.

MÉTODOS

[0266] Para redução funcional de células dendríticas, células mononucleares de sangue periférico (PBMC) foram isoladas dos resíduos de trima de indivíduos saudáveis com Ficoll-Paque Plus. 500000 PBMCs foram incubadas em placas de 96 poços com fundo em u (Corning) com anti-SIRP a uma concentração de 10 ug/ml por 48 horas a 37 ºC. Para citometria de fluxo, células foram incubadas em reagente de bloqueio de FcR humano e tingidas com um coquetel de anticorpos rotulados com fluorocromo contra lin- (CD3, CD14, CD16, CD19, CD56) e HLADR. Corante de viabilidade fixável foi usado para identificar células vivas. Após tingimento, células foram lavadas e fixadas com 0,5% de paraformaldeído em PBS. Antes da aquisição, microesferas de contagem absoluta foram adicionadas e amostras foram adquiridas com citômetro de fluxo Canto II e analisadas com o uso de software FlowJo.

[0267] Fagocitose foi medida com o uso do ensaio in vitro descrito no Exemplo 4.

RESULTADOS

[0268] Anticorpos anti-SIRP-α humanizados com diferentes regiões Fc foram testados para seus efeitos sobre fagocitose de células EGFR(+) DLD-1 através de macrófagos M2 em combinação com o anticorpo anti-EGFR cetuximabe (Figura 12). Todos os anticorpos tiveram a sequência de cadeia leve da SEQ ID NO:55 e a sequência de domínio de VH da SEQ ID NO:26. Regiões Fc testadas incluíram o tipo selvagem de IgG2 (conforme representado na sequência de domínio constante da SEQ ID NO:33), região Fc de IgG2Da (que compreende mutações A330S e P331S, numeração de posição de aminoácido de acordo com EU; conforme representado na sequência de domínio constante da SEQ ID NO:34), região Fc de IgG2 que compreende uma mutação N297A (numeração de posição de aminoácido de acordo com EU; conforme representado na sequência de domínio constante da SEQ ID NO:137), e região Fc de IgG1 que compreende as mutações N297A, L234A, L235A, e G237A (numeração de posição de aminoácido de acordo com EU; conforme representado na sequência de domínio constante da SEQ ID NO:32). Todos os anticorpos demonstraram ter atividade aproximadamente equivalente no aprimoramento de fagocitose induzida por cetuximabe.

[0269] A seguir, anticorpos anti-SIRP-α com diferentes regiões Fc (ou controles de isótopo correspondentes) foram testados para sua habilidade em reduzir diferentes tipos celulares de PBMCs doadoras. Todos os anticorpos tiveram a sequência de cadeia leve da SEQ ID NO:55 e a sequência de domínio de VH da SEQ ID NO:26. Conforme mostrado nas Figuras 13A e 13B, anticorpos anti-SIRP-α com IgG1 de tipo selvagem, IgG4 de tipo selvagem, IgG2 de tipo selvagem, ou regiões Fc de IgG2Da tiveram capacidade para reduzir DCs de PBMCs obtidas de dois diferentes doadores. Isto indica que estas regiões Fc têm a habilidade de potencializar alguma redução de DC no contexto do ensaio de PBMC (DCs são conhecidas por expressar SIRP-α). Por outro lado, apenas as regiões Fc N297A de IgG1 e IgG2 L234A/L235A/G237A/N297A não mostraram redução de DC. Nenhum dos anticorpos testados resultou em redução significativa de células T, monócitos ou células B (Figuras 13C a 13E). Vantajosamente, a região Fc N297A de IgG2 fornece a mesma falta de redução que a região Fc de IgG1 L234A/L235A/G237A/N297A, porém, com menos mutações (e, portanto, potencialmente menos imunogenicidade).

[0270] Anticorpos anti-SIRP-α também foram testados para afinidade de ligação à SIRP-α humana v1; SIRP-α de camundongo NOD, C57BL/6, e BALBc; SIRP-β humana; e SIRP-γ humana. Anticorpos testados incluíram as seguintes cadeias pesadas e leves:

PC301: cadeia leve da SEQ ID NO:63 e cadeia pesada da SEQ ID NO:59; PC334: cadeia leve da SEQ ID NO:47 e cadeia pesada da SEQ ID NO:59; e PC367: cadeia leve da SEQ ID NO:55 e cadeia pesada da SEQ ID NO:129. TABELA I2. AFINIDADES DE LIGAÇÃO DE ANTICORPOS ANTI- SIRP-Α ÀS PROTEÍNAS SIRP (KD, M). Proteína hSIRPa v1 hSIRPa v2 Cyno NOD C57BL/6 BALBc hSIRPb hSIRPg SEQ ID NO 5 6 11 8 9 10 13 15 PC301 2.06E-12 4.60E-12 3.89E-11 2.93E-09 9.25E-09 9.53E-09 1.22E-11 <1.00E-12 PC334 1.51E-11 4.38E-11 7.74E-11 8.19E-09 3.29E-09 6.75E-09 3.71E-11 4.52E-11 PC367 2.11E-12 8.23E-11 5.01E-11 6.37E-09 1.97E-08 7.87E-09 3.27E-11 3.52E-11

[0271] Acredita-se que anticorpos de IgG2 humana existam em isoformas à base de dissulfeto (A, B, e AB), e a introdução de mutações C232S ou C233S em regiões constantes de IgG2 humana foi relatada por reduzir heterogeneidade causada pelo embaralhamento de dissulfeto (Lightle, S. et al. (2010) Proteína Sci. 19:753-762). Acredita- se que cada uma destas mutações force anticorpos de IgG2 na isoforma A. Além disto, também se acredita que a cadeia leve lambda promova abundância de isoforma A. Anticorpos anti-SIRP-α com regiões Fc de IgG2 de tipo selvagem (Figura 14A) ou N297A de IgG2 (Figura 14B) que compreendem mutações C232S ou C233S foram testados para efeitos sobre fagocitose de células EGFR(+) DLD-1 através de macrófagos M2 em combinação com o anticorpo anti-EGFR cetuximabe. Todos os anticorpos tiveram a sequência de cadeia leve da SEQ ID NO:55 e a sequência de domínio de VH da SEQ ID NO:26. Regiões Fc de tipo selvagem e N297A foram testadas com o uso de anticorpos com a cadeia leve lambda para acionar a predominância de isoforma A. Anticorpos anti-SIRP-α de IgG2 que compreendem regiões Fc com mutações C232S ou C233S mostraram aprimoramento similar de fagocitose, em comparação com anticorpos com regiões Fc N297A de IgG2 ou IgG2 de tipo selvagem.

[0272] O efeito do domínio constante de cadeia leve sobre a habilidade de anticorpos anti-SIRP-α para aprimorar a fagocitose também foi examinado. Todos os anticorpos tiveram a sequência de domínio de VH da SEQ ID NO:26 e a sequência de domínio de VL da SEQ ID NO:18. Anticorpos anti-SIRP-α com cadeias leves lambda e kappa mostraram aprimoramento similar de fagocitose, em ambos os contextos de uma cadeia pesada que contém Fc de IgG2 de tipo selvagem (Figura 15A) ou um Fc de IgG2da (Figura 15B).

[0273] Embora a descrição supracitada tenha sido descrita em alguns detalhes a título de ilustração e exemplo para fins de clareza de entendimento, as descrições e exemplos não devem ser interpretados como limitantes do escopo da presente descrição. As divulgações de toda a literatura de patente e científica citada no presente documento são expressamente incorporadas em sua totalidade a título de referência. TABELA J1. SEQUÊNCIAS DE DOMÍNIO VARIÁVEL PARA ANTICORPOS SELECIONADOS. Anticorpo Domínio de VH Domínio de VL AB21 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCAASGFTF ALTQPASVSANPGETVKIACSGGDYYSYYYGW

SSNAMSWVRQAPGKGLEWLAGISAGGSD YQQKAPGSALVTVIYSDDKRPSDIPSRFSGSAS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNTLT GSTATLTITGVRAEDEAVYYCGGYDYSTYANA AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTV FGAGTTLTVL (SEQ ID NO:74) SS (SEQ ID NO:73) AB25 DVQLVESGGGVVRPGESLRLSCEASGFTF ALTQPASVSANPGETVEITCSGGSYSSYYYAW

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISSGSDT YQQKSPGSAPVTLIYSDDKRPSNIPSRFSGSAS

YYGDSVKGRLTISRDNSKNILYLQMNSLTA GSTATLTITGVRAEDEAVYFCGGYDQSSYTNP EDTAVYYCARETWNHLFDYWGLGTLVTVS FGAGTTLTVL (SEQ ID NO:76) S (SEQ ID NO:75) PC301 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

Anticorpo Domínio de VH Domínio de VL

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTKLTVL (SEQ ID NO:25) SS (SEQ ID NO:26) PC333 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTKLTVL (SEQ ID NO:25) SS (SEQ ID NO:26) PC334 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTKLTVL (SEQ ID NO:25) SS (SEQ ID NO:26) PC336 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTKLTVL (SEQ ID NO:25) SS (SEQ ID NO:26) PC338 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTKLTVL (SEQ ID NO:25) SS (SEQ ID NO:26) PC339 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTKLTVL (SEQ ID NO:25) SS (SEQ ID NO:26) PC340 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

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TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTKLTVL (SEQ ID NO:25) SS (SEQ ID NO:26) PC341 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

Anticorpo Domínio de VH Domínio de VL

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTKLTVL (SEQ ID NO:25) SS (SEQ ID NO:26) PC342 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGTGTKVTVL (SEQ ID NO:39) SS (SEQ ID NO:26) PC343 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTQLTVL (SEQ ID NO:40) SS (SEQ ID NO:26) PC344 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTRLTVL (SEQ ID NO:41) SS (SEQ ID NO:26) PC345 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGTGTKVTVL (SEQ ID NO:39) SS (SEQ ID NO:26) PC346 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTQLTVL (SEQ ID NO:40) SS (SEQ ID NO:26) PC347 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTRLTVL (SEQ ID NO:41) SS (SEQ ID NO:26) AB21_HC_m EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY utAll + V1 SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

Anticorpo Domínio de VH Domínio de VL

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGTGTKVTVL (SEQ ID NO:39) SS (SEQ ID NO:26) AB21_HC_m EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY utAll + V2 SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTQLTVL (SEQ ID NO:40) SS (SEQ ID NO:26) AB21_HC_m EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY utAll + V3 SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTRLTVL (SEQ ID NO:41) SS (SEQ ID NO:26) PC348 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTQLTVL (SEQ ID NO:40) SS (SEQ ID NO:26) PC349 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTQLTVL (SEQ ID NO:40) SS (SEQ ID NO:26) PC350A EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF ALTQPASVSANPGETVEITCSGGSYSSYYYAW

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YQQKSPGSAPVTLIYSDDKRPSNIPSRFSGSAS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR GSTATLTITGVRAEDEAVYFCGGYDQSSYTNP AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV FGAGTTLTVL (SEQ ID NO:18) SS (SEQ ID NO:26) PC350B EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF ALTQPASVSANPGETVEITCSGGSYSSYYYAW

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YQQKSPGSAPVTLIYSDDKRPSNIPSRFSGSAS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR GSTATLTITGVRAEDEAVYFCGGYDQSSYTNP AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV FGAGTTLTVL (SEQ ID NO:18) SS (SEQ ID NO:26) PC363 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

Anticorpo Domínio de VH Domínio de VL

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTQLTVL (SEQ ID NO:40) SS (SEQ ID NO:26) PC364 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTQLTVL (SEQ ID NO:40) SS (SEQ ID NO:26) PC367 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTQLTVL (SEQ ID NO:40) SS (SEQ ID NO:26) PC369 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGS

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYT AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVTV NPFGGGTQLTVL (SEQ ID NO:40) SS (SEQ ID NO:26) TABELA J2. SEQUÊNCIAS DE CADEIA COMPLETA PARA ANTICORPOS SELECIONADOS. Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve PC301 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTL VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA WKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASS

VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNV YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPA VAPTECS (SEQ ID NO:63)

PEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve

VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:59) PC333 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTKLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA WKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASS

VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNV YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPA VAPTECS (SEQ ID NO:47)

PELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:58) PC334 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

PEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:59) PC336 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve

TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTKLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGC FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV WKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASS

LQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNV YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT DHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPV VAPTECS (SEQ ID NO:47)

AGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVD VSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCK VSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLP PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKL

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:61) PC338 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTKLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA WKADGSPVKAGVETTKPSKQSNDKYAASS

VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNV YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPA VAPTECS (SEQ ID NO:48)

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:59) PC339 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTKLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA WKADGSPVKAGVETTKPSKQSDNKYAASS VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNV YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPA VAPTECS (SEQ ID NO:49)

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:59) PC340 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTKLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA WKADGSPVKAGVETTKPSKQSDSKYAASS

VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNV YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPA VAPTECS (SEQ ID NO:50)

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:59) PC341 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTKLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA WKADGSPVKAGVETTKPSKQSSDKYAASS

VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNV YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPA VAPTECS (SEQ ID NO:51)

PEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve

YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:59) PC342 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLF VSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGC PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV KADGSPVKAGVETTKPSKQSSDKYAASSY

LQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNV LSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTV DHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPV APTECS (SEQ ID NO:53)

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:61) PC343 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTQLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGC FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV WKADGSPVKAGVETTKPSKQSSDKYAASS

LQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNV YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT DHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPV VAPTECS (SEQ ID NO:55)

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:61) PC344 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTRLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGC FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV WKADGSPVKAGVETTKPSKQSSDKYAASS

LQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNV YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT DHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPV VAPTECS (SEQ ID NO:57)

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:61) PC345 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLF VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA KADGSPVKAGVETTKPSKQSSDKYAASSY

VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNV LSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPA APTECS (SEQ ID NO:53)

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:59) PC346 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTQLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA WKADGSPVKAGVETTKPSKQSSDKYAASS

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve

VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNV YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPA VAPTECS (SEQ ID NO:55)

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:59) PC347 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTRLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA WKADGSPVKAGVETTKPSKQSSDKYAASS

VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNV YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPA VAPTECS (SEQ ID NO:57)

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:59) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG1 wt)+ SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V1+DS TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLF VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA KADGSPVKAGVETTKPSKQSDSKYAASSY

VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNV LSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTV NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPA APTECS (SEQ ID NO:52)

PELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve

YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:58) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG1 wt) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V1+SD TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLF VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA KADGSPVKAGVETTKPSKQSSDKYAASSY

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:58) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG1 wt) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V2+DS TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTQLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA WKADGSPVKAGVETTKPSKQSDSKYAASS

VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNV YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPA VAPTECS (SEQ ID NO:54)

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:58)

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG1 wt) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V2+SD TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTQLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA WKADGSPVKAGVETTKPSKQSSDKYAASS

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:58) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG1 wt) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V3+DS TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTRLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA WKADGSPVKAGVETTKPSKQSDSKYAASS

VLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNV YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT NHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPA VAPTECS (SEQ ID NO:56)

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:58) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG1 wt) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V3+SD TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTRLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve

CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA WKADGSPVKAGVETTKPSKQSSDKYAASS

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:58) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG1 AAA SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER morto)+ V1+DS TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:59) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG1 AAA morto) SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER + V1+SD TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

PEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve

KPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:59) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG1 AAA morto) SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER + V2+DS TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:59) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG1 AAA morto) SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER + V2+SD TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

PEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKT KPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKE YKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQV YTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:59) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG1 AAA morto) SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER + V3+DS TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:59) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG1 AAA morto) SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER + V3+SD TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTRLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALG FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA CLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPA WKADGSPVKAGVETTKPSKQSSDKYAASS

SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNH YTQKSLSLSPG (SEQ ID NO:59) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG2 wt)+ SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V1+DS TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLF

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve

VSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGC PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV KADGSPVKAGVETTKPSKQSDSKYAASSY

LQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNV LSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTV DHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPV APTECS (SEQ ID NO:52)

AGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVD VSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCK VSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLP PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKL

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:60) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG2 wt) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V1+SD TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLF VSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGC PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV KADGSPVKAGVETTKPSKQSSDKYAASSY

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:60) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG2 wt) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V2+DS TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTQLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGC FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV WKADGSPVKAGVETTKPSKQSDSKYAASS

LQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNV YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT DHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPV VAPTECS (SEQ ID NO:54)

AGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVD

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve

VSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCK VSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLP PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKL

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:60) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG2 wt) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V2+SD TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTQLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGC FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV WKADGSPVKAGVETTKPSKQSSDKYAASS

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:60) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG2 wt) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V3+DS TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTRLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGC FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV WKADGSPVKAGVETTKPSKQSDSKYAASS

LQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNV YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT DHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPV VAPTECS (SEQ ID NO:56)

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:60) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG2 wt) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V3+SD TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTRLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGC FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV WKADGSPVKAGVETTKPSKQSSDKYAASS

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:60) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG2 Da)+ SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V1+DS TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGTGTKVTVLGQPKANPTVTLF VSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGC PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAW LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV KADGSPVKAGVETTKPSKQSDSKYAASSY

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:61) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG2 Da) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V1+SD TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:61) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG2 Da) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V2+DS TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:61) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG2 Da) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V2+SD TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:61) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG2 Da) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V3+DS TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:61) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG2 Da) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V3+SD TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

AGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVD VSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCK VSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLP PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve

ESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKL

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:61) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG4 S228P)+ SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V1+DS TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVD LSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTV HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFL APTECS (SEQ ID NO:52)

GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVD VSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLP PSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRL

TVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSLG (SEQ ID NO:62) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG4 S228P) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V1+SD TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVD LSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTV HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFL APTECS (SEQ ID NO:53)

TVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSLG (SEQ ID NO:62) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG4 S228P) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve V2+DS TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVD YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFL VAPTECS (SEQ ID NO:54)

TVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSLG (SEQ ID NO:62) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG4 S228P) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V2+SD TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVD YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFL VAPTECS (SEQ ID NO:55)

TVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSLG (SEQ ID NO:62) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG4 S228P) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V3+DS TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT DQSSYTNPFGGGTRLTVLGQPKANPTVTL VSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGC FPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVA LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV WKADGSPVKAGVETTKPSKQSDSKYAASS LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVD YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFL VAPTECS (SEQ ID NO:56)

TVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSLG (SEQ ID NO:62) AB21_HC_mutAll EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY (IgG4 S228P) + SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD YYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPER V3+SD TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR FSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGY

LQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVD YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFL VAPTECS (SEQ ID NO:57)

TVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSLG (SEQ ID NO:62) PC348 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVD VSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCK VSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLP

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve

PSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRL

TVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSLG (SEQ ID NO:62) PC349 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:60) PC350A EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF ALTQPASVSANPGETVEITCSGGSYSSYYY

SSNAMSWVRQAPGKGLEWVAGISAGGSD AWYQQKSPGSAPVTLIYSDDKRPSNIPSRF TYYPASVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLR SGSASGSTATLTITGVRAEDEAVYFCGGYD AEDTAVYYCARETWNHLFDYWGQGTLVT QSSYTNPFGAGTTLTVLRTVAAPSVFIFPPS VSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGC DEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKV LVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAV DNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTL

LQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNV TLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSF DHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPV NRGEC (SEQ ID NO:140)

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:61) PC350B EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF ALTQPASVSANPGETVEITCSGGSYSSYYY

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:60) PC363 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

LQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNV YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT DHKPSNTKVDKTVERKSCVECPPCPAPPV VAPTECS (SEQ ID NO:55)

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:125) PC364 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve

LQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNV YLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKT DHKPSNTKVDKTVERKCSVECPPCPAPPV VAPTECS (SEQ ID NO:55)

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:126) PC367 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

AGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVD VSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQFASTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCK VSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLP PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKL

TVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ KSLSLSPG (SEQ ID NO:129) PC369 EVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCAASGFTF SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSY

AGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVD VSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPRE EQFASTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCK

Anticorpo Cadeia pesada Cadeia leve

VSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLP

PSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW ESNGQPENNYKTTPPMLD (SEQ ID NO:130) TABELA K. RESUMO DE ANTICORPO ANTI-SIRP-Α. Anticor Tipo de Fago Camu Ligação de Espécies Isoformas KD KD Cadeia Cadeia po Liga- in ndon- (+/-) (Kdesativada) Humanas (+/-) Huma Human Pesada Leve ção vitro go in (Kdesativada) na V1 a V2 vivo (SEQ (SEQ

ID ID (+/-) (+/-) Huma Cyno Camu Beta Gama (Human (Human NO:5) NO:6) na v1 (SEQ ndong (SEQ (SEQ o/ o/ (SEQ ID o 129 ID ID Galinha) Galinha) ID NO:11 (SEQ NO:13) NO:15) NO:5) ) ID NO:7) 21 Bloquea + + + + + + + <1.0E- <1.0E- Humano Galinha dor 12 12 25 Bloquea + + + + + + + <1.0E- <1.0E- Humano Galinha dor 12 12 TABELA L. RESUMO DE HUMANIZAÇÃO DE ANTICORPO ANTI- SIRP-Α (RODADA 1). Designação VL VH Kdesativada (1/s) Fago Camun de Anticorpo in vitro dongo in vivo SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ (+/-) (+/-) NO:5 NO:6 NO:11 NO:10 ID NO:15 V1 V2 Humana Cyno BALBc SIRPg Humana Anticorpos Parentais AB21 Galinha Humano 7.07E-04 1.92E-03 2.29E- 2.41E- 9.02E- NT + (AB21_LC_wt) (AB21_HC_wt 03 03 04 ) AB25 Galinha Humano 1.65E-04 3.53E-04 3.94E- 1.78E- 2.03E- + + (AB25_LC_wt) (AB25_HC_wt 04 03 04 ) Humanização de cadeia leve de galinha de AB25, AB66 - substituída por estrutura principal de IGLV3 humana Hum1 / Hum1___Huma Humano 1.93E-04 3.03E-04 3.95E- 2.91E- 1.88E- + AB21_HC_wt nized (AB21_HC_wt 04 03 04

Designação VL VH Kdesativada (1/s) Fago Camun de Anticorpo in vitro dongo in vivo SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ (+/-) (+/-) NO:5 NO:6 NO:11 NO:10 ID NO:15 V1 V2 Humana Cyno BALBc SIRPg Humana (AB25_IGLV3) ) Hum1 / Hum1___Huma Humano 1.33E-04 2.67E-04 3.30E- 3.74E- 2.03E- + AB25_HC_wt nized (AB25_HC_wt 04 03 04 (AB25_IGLV3) ) Hum3 / Hum3___Huma Humano 1.37E-04 4.38E-04 4.32E- 2.31E- 2.10E- NT AB21_HC_wt nized (AB21_HC_wt 04 03 04 (AB66_IGLV3) ) Hum3 / Hum3___Huma Humano 5.94E-05 3.53E-04 3.75E- 2.27E- 1.69E- NT AB25_HC_wt nized (AB25_HC_wt 04 04 04 (AB66_IGLV3) ) NT ou vazio = não testado. TABELA M. RESUMO DE HUMANIZAÇÃO DE ANTICORPO ANTI- SIRP-Α (RODADA 2). Designação VL VH KD (M) Fago de Anticorpo in vitro SEQ ID SEQ SEQ SEQ SEQ SEQ SEQ SEQ (+/-) NO:5 ID ID ID ID ID ID ID NO:6 NO:1 NO:8 NO:9 NO:1 NO: NO: 1 0 13 15 Humana Huma Cyno NOD BL6 BALB SIRP SIRP V1 na V2 c b g Pareamento de cadeia leve humanizada com cadeia pesada (linha germinal mut) Hum1 / Hum1___ Humano 5.32E-12 4.60E- 2.91E 3.70E 9.50 7.91E 6.7E- >1.0E + AB21_HC_Mu _Humani (AB21_H 12 -11 -09 E-09 -09 12 -12 tall zed C_Mutall SEQ ID ) NO:25 SEQ ID NO:26 Mutação de cadeia leve humanizada para aumentar % de humanidade Hum8 / Hum8___ Humano 2.01E-11 2.78E 4.15 7.12E 126 + AB21_HC_Mu _Humani (AB21_H -08 E-04 -08 tall zed C_Mutall (AB25_IG ) LV3) + SEQ ID 5aa em NO:26

CDR

Designação VL VH KD (M) Fago de Anticorpo in vitro SEQ ID SEQ SEQ SEQ SEQ SEQ SEQ SEQ (+/-) NO:5 ID ID ID ID ID ID ID NO:6 NO:1 NO:8 NO:9 NO:1 NO: NO: 1 0 13 15 Humana Huma Cyno NOD BL6 BALB SIRP SIRP V1 na V2 c b g Hum9 / Hum9___ Humano 1.19E-11 1.19E- 2.22E 2.41E 5.33 1.36E 5.69E 3.45E + AB21_HC_Mu _Humani (AB21_H 10 -10 -08 E-04 -07 -11 -11 tall zed C_Mutall (AB25_IG ) LV3) + 4aa em

CDR NT ou vazio = não testado. TABELA N. RESUMO DE DADOS DE LIGAÇÃO DE ANTICORPO ANTI-SIRP-Α. VALORES INDICADOS SÃO TESTADOS POR SPR (KDESATIVADA, 1/S). Anticor CV1-3 v1 v2 cyno1 cyno2 m129 NOD BL6 SIRPb SIRPg po SEQ ID SEQ SEQ SEQ SEQ SEQ SEQ SEQ SEQ SEQ bloqueio NO:18 ID ID ID ID ID ID ID ID ID de CD47 NO:5 NO:6 NO:11 NO:12 NO:7 NO:8 NO:9 NO:13 NO:15 S21 1.95E- 1.80E- 2.07E- 2.33E- 2.52E- 2.81E- 2.64E- 8.06E- 1.90E- 1.84E- bloqueio 04 04 04 04 04 04 03 04 04 04 S25 1.40E- 1.12E- 2.09E- 2.19E- 2.12E- 1.33E- 7.79E- 2.90E- 1.71E- 1.41E- bloqueio 04 04 04 04 04 04 04 04 04 04

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Anticorpo isolado que se liga a um domínio extracelular de um polipeptídeo SIRP-α humano, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende: (a) uma cadeia pesada que compreende um domínio variável de cadeia pesada (VH) que compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:26; e (b) uma cadeia leve que compreende um domínio variável de cadeia leve (VL) que compreende uma sequência de aminoácidos de acordo com a fórmula

SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPVTLI

YSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSS YTNPFGX1GTX2X3TVL (SEQ ID NO:71), em que X1 é G ou T; X2 é K, Q ou R; e X3 é L ou V, e em que o domínio de VL não compreende a sequência de SEQ ID NO:25.

2. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o domínio de VL compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:39 a 41.

3. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 1 ou 0, caracterizado pelo fato de que a cadeia leve compreende ainda uma sequência de domínio constante de cadeia leve (CL) que compreende uma sequência de aminoácidos de acordo com a fórmula

GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGS PVKAGVETTKPSKQSX4X5KYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHE GSTVEKTVAPTECS (SEQ ID NO:72), em que X4X5 é ND, DN, DS ou SD.

4. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 1 ou 0, caracterizado pelo fato de que a cadeia leve compreende ainda uma sequência de domínio constante de cadeia leve (CL) que compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:43 a 46.

5. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 1 ou 0, caracterizado pelo fato de que a cadeia leve compreende ainda um domínio constante de cadeia leve kappa (CL).

6. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:36.

7. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 1 ou 0, caracterizado pelo fato de que a cadeia leve compreende ainda um domínio constante de cadeia leve lambda (CL).

8. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 0 , caracterizado pelo fato de que a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:37 ou SEQ ID NO:38.

9. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a cadeia leve compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:48 a 57.

10. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 0, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um scFv-Fc, anticorpo de domínio único, anticorpo de cadeia pesada única ou anticorpo de cadeia leve única.

11. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 0, caracterizado pelo fato que de que o anticorpo é um anticorpo monoclonal.

12. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 0, caracterizado pelo fato de que a cadeia pesada compreende um domínio constante de cadeia pesada que compreende uma região Fc.

13. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 0,

caracterizado pelo fato de que a região Fc é uma região Fc humana selecionada a partir do grupo que consiste em uma região Fc de IgG1, uma região Fc de IgG2 e uma região Fc de IgG4.

14. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que a região Fc é uma região Fc de IgG1 humana.

15. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que a região Fc é uma região Fc de IgG1 humana que compreende substituições L234A, L235A e G237A, numeração de posição de aminoácido de acordo com EU.

16. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que a região Fc compreende ainda uma substituição N297A, numeração de posição de aminoácido de acordo com EU.

17. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que a região Fc é uma região Fc de IgG2 humana.

18. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que a região Fc é uma região Fc de IgG2 humana que compreende substituições A330S e P331S, numeração de posição de aminoácido de acordo com EU.

19. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 0 ou 0, caracterizado pelo fato de que a região Fc compreende ainda uma substituição N297A, numeração de posição de aminoácido de acordo com EU.

20. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que a região Fc é uma região Fc de IgG4 humana, e em que a cadeia pesada compreende uma substituição S228P, numeração de posição de aminoácido de acordo com EU.

21. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 0,

caracterizado pelo fato de que o domínio constante de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 31 a 35.

22. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que o domínio constante de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs: 33, 34 e 137.

23. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que o domínio constante de cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:132 a 139.

24. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:58 a 62.

25. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a cadeia pesada compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste nas SEQ ID NOs:60, 61 e 129.

26. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: (a) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:62, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:52; (b) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:62, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:53; (c) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:62, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:54;

(d) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 62, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:55; (e) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO: 62, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:56; ou (f) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:62, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:57.

27. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: (a) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:58, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:52; (b) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:59, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:52; (c) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:60, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:52; (d) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:61, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:52; (e) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:58, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:53; (f) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:59, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:53; (g) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:60, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:53; (h) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:61, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:53; (i) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:58, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:54; (j) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:59, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:54; (k) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:60, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:54; (l) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:61, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:54; (m) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:58, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:55; (n) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:59, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:55; (o) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:60, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:55; (p) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:61, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:55; (q) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:58, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:56; (r) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:59, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:56; (s) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:60, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:56; (t) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:61, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:56; (u) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:58, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:57; (v) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:59, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:57; (w) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:60, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:57; ou (x) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:61, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:57.

28. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: (a) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:60, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:55; (b) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:61, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:55; (c) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:129, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:55; (d) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:124, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:52; ou (e) a cadeia pesada compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:124, e a cadeia leve compreende a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:55.

29. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 0, caracterizado pelo fato de que o anticorpo intensifica a fagocitose por um macrófago que expressa um polipeptídeo SIRP-α humano.

30. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 0, caracterizado pelo fato de que o anticorpo intensifica a ativação de uma célula dendrítica que expressa um polipeptídeo SIRP-α humano.

31. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 0, caracterizado pelo fato de que o anticorpo inibe o crescimento in vivo de um tumor que expressa CD47.

32. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 0, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é conjugado a um agente.

33. Anticorpo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 0, caracterizado pelo fato que de que o anticorpo é um anticorpo biespecífico.

34. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende um primeiro domínio de ligação ao antígeno que se liga a um domínio extracelular de um polipeptídeo SIRP-α humano e um segundo domínio de ligação ao antígeno que se liga a um antígeno expresso por uma célula cancerosa.

35. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que o antígeno expresso pela célula cancerosa é selecionado a partir do grupo que consiste em CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD52, CD56, CD70, CD74, CD79b, CD123 , CD138, CS1/SLAMF7, Trop-2, 5T4, EphA4, BCMA, Mucina 1, Mucina 16, PD-L1, PTK7, STEAP1, Receptor de Endotelina B, mesotelina, EGFRvIII, ENPP3, SLC44A4, GNMB, nectina 4, NaPi2b, LIV-1A, Guanilil ciclase C , DLL3, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR, integrina αVβ3, integrina α5β1, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, Tenascina, Ley, EpCAM, CEA, gpA33, PSMA, TAG72, uma mucina, CAIX, EPHA3, receptor de folato α, GD2, GD3 e um complexo de MHC/peptídeo que compreende um peptídeo de NY-ESO- 1/LAGE, SSX-2, uma proteína da família MAGE, MAGE- A3, gp100/pmel17, Melan-A/MART-1, gp75/TRP1, tirosinase, TRP2, CEA, PSA, TAG-72, receptor de laminina imaturo, MOK/RAGE-1, WT- 1, SAP-1, BING-4, EpCAM, MUC1, PRAME, survivina, BRCA1, BRCA2, CDK4, CML66, MART-2, p53, Ras, β-catenina, TGF-βRII, HPV E6 ou HPV E7 .

36. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende um primeiro domínio de ligação ao antígeno que se liga a um domínio extracelular de um polipeptídeo SIRP-α humano e um segundo domínio de ligação ao antígeno que se liga a um antígeno expresso por uma célula imune.

37. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que o antígeno expresso pela célula imune é selecionado a partir do grupo que consiste em BDCA2, BDCA4, ILT7, LILRB1, LILRB2, LILRB3, LILRB4, LILRB5, Siglec-3, Siglec-7 , Siglec-

9, Siglec-15, FGL-1, CD200, CD200R, CSF-1R, CD40, CD40L, CD163, CD206, DEC205, CD47, CD123, arginase, IDO, TDO, AhR, EP2, COX- 2, CCR2 , CCR-7, CXCR1, CX3CR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR7, TGF-β RI, TGF-β RII, c-Kit, CD244, L-selectina/CD62L, CD11b, CD11c, CD68, 41BB, CTLA4, PD1, PD-L1, PD-L2, TIM-3, BTLA, VISTA, LAG- 3, CD28, OX40, GITR, CD137, CD27, HVEM, CCR4, CD25, CD103, KIrg1, Nrp1, CD278, Gpr83, TIGIT, CD154, CD160, TNFR2, PVRIG, DNAM e ICOS.

38. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que o anticorpo compreende um primeiro domínio de ligação ao antígeno que se liga a um domínio extracelular de um polipeptídeo SIRP-α humano e um segundo domínio de ligação ao antígeno que se liga a um antígeno expresso por uma célula exterminadora natural (NK).

39. Anticorpo, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que o antígeno expresso pela célula NK é selecionado a partir do grupo que consiste em NKR-P1A, CD94, KLRG1, KIR2DL5A, KIR2DL5B, KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3, KIR2DS2, KIR2DS3, KIR2DS4, KIR2DS5, KIR3DS1, KIR2DS1, CD94, NKG2D, CD160, CD16, NKp46, NKp30, NKp44, DNAM1, CRTAM, CD27, NTB-A, PSGL1, CD96, CD100, NKp80, SLAMF7 e CD244.

40. Polinucleotídeo, caracterizado pelo fato de que codifica o anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 0.

41. Vetor, caracterizado pelo fato de que compreende o polinucleotídeo, como definido na reivindicação 0.

42. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que compreende o polinucleotídeo, como definido na reivindicação 0, ou o vetor, como definido na reivindicação 0.

43. Método para produzir um anticorpo, caracterizado pelo fato de que o método compreende cultivar a célula hospedeira, como definida na reivindicação 0, de modo que o anticorpo seja produzido.

44. Método, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que compreende ainda recuperar o anticorpo da célula hospedeira.

45. Método para tratar ou atrasar a progressão do câncer num indivíduo, caracterizado pelo fato de que o método compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 0.

46. Método, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que compreende ainda administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um segundo anticorpo que se liga a um antígeno expresso pelo câncer.

47. Método, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que o antígeno expresso pelo câncer é selecionado a partir do grupo que consiste em CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD52, CD56, CD70, CD74, CD79b, CD123 , CD138, CS1/SLAMF7, Trop-2, 5T4, EphA4, BCMA, Mucina 1, Mucina 16, PTK7, STEAP1, Receptor de Endotelina B, mesotelina, EGFRvIII, ENPP3, SLC44A4, GNMB, nectina 4, NaPi2b, LIV-1A, Guanilil ciclase C, DLL3, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR, integrina αVβ3, integrina α5β1, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, Tenascina, Ley, EpCAM, CEA, gpA33, PSMA, TAG72, uma mucina, CAIX, EPHA3, receptor de folato α, GD2, GD3 e um complexo de MHC/peptídeo que compreende um peptídeo de NY-ESO-1/LAGE, SSX-2, uma proteína da família MAGE, MAGE-A3, gp100/pmel17, Melan-A/MART- 1, gp75/TRP1, tirosinase, TRP2, CEA, PSA, TAG-72, receptor de laminina imaturo, MOK/RAGE-1, WT-1, SAP-1, BING-4, EpCAM, MUC1, PRAME, survivina, BRCA1, BRCA2, CDK4, CML66, MART-2, p53, Ras, β-catenina, TGF-βRII, HPV E6 ou HPV E7.

48. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações

0 a 0, caracterizado pelo fato de que compreende ainda administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um agente imunoterapêutico.

49. Método, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que o agente imunoterapêutico compreende um segundo anticorpo.

50. Método, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que o segundo anticorpo se liga a um antígeno selecionado do grupo que consiste em BDCA2, BDCA4, ILT7, LILRB1, LILRB2, LILRB3, LILRB4, LILRB5, Siglec-3, Siglec-7, Siglec-9, Siglec-15, FGL- 1, CD200, CD200R, CSF-1R, CD40, CD40L, CD163, CD206, DEC205, CD47, CD123, arginase, IDO, TDO, AhR, EP2, COX-2, CCR2, CCR-7, CXCR1, CX3CR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR7, TGF-β RI, TGF- β RII, c-Kit, CD244, L-selectina/CD62L, CD11b, CD11c, CD68, 41BB, CTLA4, PD1, PD-L1, PD-L2, TIM-3, BTLA, VISTA, LAG-3, CD28, OX40, GITR, CD137, CD27, HVEM, CCR4, CD25, CD103, KIrg1, Nrp1, CD278, Gpr83, TIGIT, CD154, CD160, TNFR2, PVRIG, DNAM e ICOS.

51. Método, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que o segundo anticorpo se liga à PD-1.

52. Método, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que o segundo anticorpo se liga à PD-L1.

53. Método, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que o agente imunoterapêutico compreende uma vacina, vírus oncolítico, terapia de célula adotiva, citocina ou agente de molécula pequena.

54. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 0 a 0, caracterizado pelo fato de que compreende ainda administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um segundo anticorpo que se liga a um antígeno expresso por uma célula exterminadora natural (NK).

55. Método, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que o antígeno expresso pela célula NK é selecionado a partir do grupo que consiste em NKR-P1A, CD94, KLRG1, KIR2DL5A, KIR2DL5B, KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3, KIR2DS2, KIR2DS3, KIR2DS4, KIR2DS5, KIR3DS1, KIR2DS1, CD94, NKG2D, CD160, CD16, NKp46, NKp30, NKp44, DNAM1, CRTAM, CD27, NTB-A, PSGL1, CD96, CD100, NKp80, SLAMF7 e CD244.

56. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 0 a 0, caracterizado pelo fato de que compreende ainda administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um agente quimioterápico ou agente anticâncer de molécula pequena.

57. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 0 a 0, caracterizado pelo fato de que compreende ainda administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz de um inibidor de molécula pequena alvejado.

58. Método, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que o inibidor de molécula pequena alvejado é um inibidor de VEGFR e/ou PDGFR, inibidor de EGFR, inibidor de ALK, inibidor de CDK4/6, inibidor de PARP, inibidor de mTOR, inibidor de KRAS, inibidor de TRK, inibidor de BCL2, inibidor de IDH, inibidor de PI3K, inibidor de resposta a dano de DNA (DDR) ou agente de hipometilação.

59. Método para tratar ou atrasar a progressão de uma doença autoimune ou uma doença inflamatória em um indivíduo, caracterizado pelo fato de que compreende administrar ao indivíduo uma quantidade eficaz do anticorpo, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 0.

60. Método, de acordo com a reivindicação 0, caracterizado pelo fato de que a doença autoimune ou doença inflamatória é selecionada a partir do grupo que consiste em esclerose múltipla, artrite reumatoide, espondiloartropatia, lúpus eritematoso sistêmico, uma doença inflamatória ou autoimune mediada por anticorpos, doença do enxerto contra hospedeiro, sepse, diabetes, psoríase, artrite psoriática,

aterosclerose, síndrome de Sjögren, esclerose sistêmica progressiva, esclerodermia, síndrome coronariana aguda, reperfusão isquêmica, doença de Crohn, colite ulcerativa, endometriose, glomerulonefrite, nefropatia por IgA, doença renal policística, miastenia grave, fibrose pulmonar idiopática, fibrose pulmonar, cirrose hepática, fibrose atrial, fibrose endomiocárdica, mielofibrose, fibrose retroperitoneal, asma, dermatite atópica, síndrome do desconforto respiratório agudo (SDRA), vasculite e miosite inflamatória autoimune.