JP2023523584A - 抗ｃｄ３抗体及びその使用 - Google Patents

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Abstract

本開示は、一般的には、ＣＤ３タンパク質に結合することができる免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体又はその抗原結合断片）に関する。本技術の抗体は、それを必要とする対象において、がん又はＣＤ３関連病態を検出する及び処置する方法に有用である。

Description

関連出願に対する相互参照
本出願は、２０２０年４月２４日に出願された米国仮特許出願第６３／０１５，１４９号の利益及び優先権を主張し、その内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
本技術は概して、ＣＤ３タンパク質を特異的に結合する免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体又はその抗原結合断片）の調製及びそれらの使用に関する。特に、本技術は、ＣＤ３結合抗体の調製及びがん又はＣＤ３関連病態の検出及び処置におけるそれらの使用に関する。
本技術の背景の下記の説明は、単に本技術を理解する際の助けとして提供されるに過ぎず、本技術に対して従来技術について記載して、それを構成するとは認められない。
自己免疫は、患者の免疫系がそれ自身の正常組織に対して反応すると発生する。ヒトでは、自己免疫疾患は一般にＢ細胞とＴ細胞の両方に関わる。Ｔ細胞は、主に自己免疫抗体又は免疫複合体により媒介される疾患を含む種々の自己免疫疾患において重要な役割を果たすが、交感性眼炎、多発性硬化症、及び１型糖尿病を含む主にＴ細胞媒介される疾患が存在する。自己免疫疾患の処置は主に副腎皮質ステロイド又はＴ細胞活性化経路アンタゴニストを用いた免疫抑制に基づいている。Arevalo et al., Middle East Afr J Ophthalmol 19(1): 13-21 (2012): Galea et al., BMJ 350: h1765 (2015)。
アレルゲン性造血細胞移植（ＡＨＣＴ）は、白血病、免疫不全、代謝性欠損、及び異常血色素症を含むいくつかのタイプの疾患に対する強力な処置である。Hatzimichael and Tuthill Stem Cells Cloning 3: 105-117 (2010)。ＡＨＣＴの１つの大きな合併症は、患者の３５～５０％で起こる移植片対宿主病である。Jacobsohn and Vogelsang Orphanet J Rare Dis 2: 35 (2007)。大半の治療選択肢は免疫抑制に基づいており、副腎皮質ステロイドは、グレードＩＩの及びそれより高い急性ＧＶＨＤの処置のための頼みの綱となる処置様式である。にもかかわらず、副腎皮質ステロイドは、自然及び適応免疫を含む全免疫系を弱める及び日和見感染のリスクを高めるなどのいくつかの逆代謝全身作用を有する（Jacobsohn and Vogelsang, supra (2007), Hatzimichael and Tuthill, supra (2010)）。さらに、一部の患者は副腎皮質ステロイド処置に抵抗性である。不運なことに、グレードＩＶのＧＶＨＤを有する患者の生存率はわずか５％であり、したがって、これらの患者のためのもっと効果的でもっと安全な処置選択肢の開発が必要とされている（Cahn et al., Blood 106(4): 1495-1500 (2005)）。
一態様では、本開示は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶH）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶL）を含み、（ａ）ＶHは、ＧＹＴＦＴＲＹＴ（配列番号２）のＶH－ＣＤＲ１配列、ＩＮＰＳＲＧＹＴ（配列番号３）のＶH－ＣＤＲ２配列、及びＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＤＹ（配列番号６）、ＡＲＹＹＤＤＨＹＳＣＤＹ（配列番号１３４）、ＡＲＹＹＤＤＨＣＳＬＤＹ（配列番号１３５）、若しくはＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＣＹ（配列番号１３６）のＶH－ＣＤＲ３配列を含み、並びに／又は（ｂ）ＶLは、ＳＳＶＳＹ（配列番号１２）のＶL－ＣＤＲ１配列、ＤＴ（配列番号１３）のＶL－ＣＤＲ２配列、及びＱＱＷＳＳＮＰＦＴ（配列番号１４）のＶL－ＣＤＲ３配列を含む、抗体又はその抗原結合断片を提供する。
一態様では、本開示は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶH）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶL）を含み、（ａ）ＶHは、配列番号５、７、８、９、１０、若しくは４３～６１のうちのいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、並びに／又は（ｂ）ＶLは、配列番号１５～２０若しくは６２～９１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、抗体又はその抗原結合断片を提供する。
上記実施形態のいずれかにおいて、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥからなる群から選択されるアイソタイプのＦｃドメインをさらに含み得る。一部の実施形態において、抗体は、Ｎ２９７Ａ及びＫ３２２Ａからなる群から選択される１種又は複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１定常領域を含む。さらに、又は或いは、一部の実施形態では、抗体は、Ｓ２２８Ｐ変異を含むＩｇＧ４定常領域を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ｓｃＦv、及びＦvからなる群から選択される。一部の実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二特異性抗体、又は多特異性抗体である。ある特定の実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、ＣＤ３ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する。ある特定の実施形態では、細胞外ドメインは、Ｆ～Ｇループ上の線形ストレッチの配列を含むＣＤ３εサブユニットを含む。一部の実施形態では、ＣＤ３εサブユニットは、３種の不連続領域：残基７９ε～８５ε（Ｆ～Ｇループ）、残基３４ε（βＣ鎖の第１の残基）、並びに残基４６ε及び４８ε（Ｃ’～Ｄループ）を含んでもよい。
別の態様では、本開示は、配列番号２３、配列番号９６、配列番号１００、配列番号１０４、配列番号１０８、配列番号１１２、配列番号１１６、配列番号１２６、配列番号１３２、配列番号１３７、配列番号１３９を含む重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列、又は１種若しくは複数の保存的アミノ酸置換を有するそれらのバリアント、及び／又は配列番号２１、配列番号９２、配列番号９４、配列番号９８、配列番号１０２、配列番号１０６、配列番号１１０、配列番号１１４、配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２８、配列番号１３０を含む軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列、又は１種若しくは複数の保存的アミノ酸置換を有するそれらのバリアントを含む抗体を提供する。一部の実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号２３及び配列番号２１、配列番号２３及び配列番号９２、配列番号９６及び配列番号９４、配列番号１００及び配列番号９８、配列番号１０４及び配列番号１０２、配列番号１０８及び配列番号１０６、配列番号１１２及び配列番号１１０、並びに配列番号１１６及び配列番号１１４からなる群から選択されるＨＣアミノ酸配列及びＬＣアミノ酸配列を含む。さらに、又は或いは、一部の実施形態では、抗体は、それぞれ配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２６、及び配列番号１３７、並びに配列番号１２８、配列番号１３０、配列番号１３２、及び配列番号１３９からなる群から選択される第１のＬＣアミノ酸配列、第２のＬＣアミノ酸配列、第１のＨＣアミノ酸配列、及び第２のＨＣアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、（ａ）配列番号１５～２０、若しくは６２～９１のいずれか１つの軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９９％同一である軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列、及び／又は（ｂ）配列番号５、７、８、９、１０、若しくは４３～６１のいずれか１つの重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９９％同一である重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む抗体を提供する。
別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号２１、配列番号９２、配列番号９４、配列番号９８、配列番号１０２、配列番号１０６、配列番号１１０、配列番号１１４、配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２８、若しくは配列番号１３０に存在するＬＣ配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９９％同一であるＬＣ配列、及び／又は（ｂ）配列番号２３、配列番号９６、配列番号１００、配列番号１０４、配列番号１０８、配列番号１１２、配列番号１１６、配列番号１２６、配列番号１３２、配列番号１３７、若しくは配列番号１３９に存在するＨＣ配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９９％同一であるＨＣ配列を含む抗体を提供する。
上記実施形態のいずれかにおいて、抗体は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二特異性抗体、又は多特異性抗体である。さらに、又は或いは、一部の実施形態では、抗体は、Ｎ２９７Ａ及びＫ３２２Ａからなる群から選択される１種又は複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１定常領域を含む。ある特定の実施形態では、本技術の抗体は、Ｓ２２８Ｐ変異を含むＩｇＧ４定常領域を含む。上記実施形態のいずれかにおいて、抗体は、ＣＤ３ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する。ある特定の実施形態では、細胞外ドメインは、Ｆ～Ｇループ上の線形ストレッチの配列を含むＣＤ３εサブユニットを含む。一部の実施形態では、ＣＤ３εサブユニットは、３種の不連続領域：残基７９ε～８５ε（Ｆ～Ｇループ）、残基３４ε（βＣ鎖の第１の残基）、並びに残基４６ε及び４８ε（Ｃ’～Ｄループ）を含んでもよい。
さらに又は代わりに、一部の実施形態では、本技術の抗体はα－１，６－フコース修飾を欠如している。
一態様では、本開示は、第１のペプチド鎖を含む多特異性抗原結合断片であって、該第１のペプチド鎖が、Ｎ末端方向からＣ末端方向へ：（ｉ）第１のエピトープに特異的に結合可能な第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと、（ｉｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含む可動性ペプチドリンカーと、（ｉｉｉ）該第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと、（ｉｖ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）4を含む可動性ペプチドリンカーと、（ｖ）第２のエピトープに特異的に結合可能な第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと、（ｖｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含む可動性ペプチドリンカーと、（ｖｉｉ）該第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと、（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＴＰＬＧＤＴＴＨＴを含む可動性ペプチドリンカー配列と、（ｉｘ）自己集合分解（ＳＡＤＡ）ポリペプチドとを含み、該第１の免疫グロブリンの該重鎖可変ドメイン若しくは該第２の免疫グロブリンの該重鎖可変ドメインが、配列番号５、７、８、９、１０、若しくは４３～６１のいずれか１つから選択され、及び／又は該第１の免疫グロブリンの該軽鎖可変ドメイン若しくは該第２の免疫グロブリンの該軽鎖可変ドメインが、配列番号１５～２０若しくは６２～９１のいずれか１つから選択される、多特異性抗原結合断片を提供する。
別の態様では、本開示は、第１のペプチド鎖を含む多特異性抗原結合断片であって、該第１のペプチド鎖が、Ｎ末端方向からＣ末端方向へ：（ｉ）第１のエピトープに特異的に結合可能な第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと、（ｉｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含む可動性ペプチドリンカーと、（ｉｉｉ）該第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと、（ｉｖ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）4を含む可動性ペプチドリンカーと、（ｖ）第２のエピトープに特異的に結合可能な第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと、（ｖｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含む可動性ペプチドリンカーと、（ｖｉｉ）該第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと、（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＴＰＬＧＤＴＴＨＴを含む可動性ペプチドリンカー配列と、（ｉｘ）自己集合分解（ＳＡＤＡ）ポリペプチドとを含み、該第１の免疫グロブリンの該重鎖可変ドメイン若しくは該第２の免疫グロブリンの該重鎖可変ドメインが、配列番号５、７、８、９、１０、若しくは４３～６１のいずれか１つから選択され、及び／又は該第１の免疫グロブリンの該軽鎖可変ドメイン若しくは該第２の免疫グロブリンの該軽鎖可変ドメインが、配列番号１５～２０若しくは６２～９１のいずれか１つから選択される、多特異性抗原結合断片を提供する。
本明細書中に開示される多特異性抗原結合断片のある特定の実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは、四量体化、五量体化、又は六量体化ドメインを含む。一部の実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは、ｐ５３、ｐ６３、ｐ７３、ｈｎＲＮＰＣ、ＳＮＡ－２３、Ｓｔｅｆｉｎ Ｂ、ＫＣＮＱ４、又はＣＢＦＡ２Ｔ１のいずれか１つの四量体ドメインを含む。
一態様では、本開示は、第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖を含む多特異性抗体であって、該第１のポリペプチド鎖及び該第２のポリペプチド鎖が、互いに共有結合されており、該第２のポリペプチド鎖及び該第３のポリペプチド鎖が、互いに共有結合されており、該第３のポリペプチド鎖及び該第４のポリペプチド鎖が、互いに共有結合されており、（ａ）該第１のポリペプチド鎖及び該第４のポリペプチド鎖がそれぞれ、Ｎ末端方向からＣ末端方向へ：（ｉ）第１のエピトープに特異的に結合可能な第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと、（ｉｉ）該第１の免疫グロブリンの軽鎖定常ドメインと、（ｉｉｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）3を含む可動性ペプチドリンカーと、（ｉｖ）第２の免疫グロブリンの相補的重鎖可変ドメインに連結されている該第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン、又は第２の免疫グロブリンの相補的軽鎖可変ドメインに連結されている該第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインであって、該第２の免疫グロブリンの該軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインが、第２のエピトープに特異的に結合可能であり、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含む可動性ペプチドリンカーを介して一緒に連結されて、単鎖可変断片を形成する第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン又は重鎖可変ドメインとを含み、（ｂ）該第２のポリペプチド鎖及び該第３のポリペプチド鎖がそれぞれ、Ｎ末端方向からＣ末端方向へ：（ｉ）該第１のエピトープに特異的に結合可能な該第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと、（ｉｉ）該第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインとを含み、該第１の免疫グロブリンの該重鎖可変ドメイン又は該第２の免疫グロブリンの該重鎖定常ドメインが配列番号５、７、８、９、１０、若しくは４３～６１のいずれか１つから選択され、及び／又は該第１の免疫グロブリンの該軽鎖可変ドメイン若しくは該第２の免疫グロブリンの該軽鎖可変ドメインが、配列番号１５～２０若しくは６２～９１のいずれか１つから選択される、多特異性抗体を提供する。
一態様では、本開示は、本明細書中に記載される抗体又は抗原結合断片のいずれかをコードする組換え核酸配列を提供する。一部の実施形態では、組換え核酸配列は、配列番号２２、２４、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３８、及び１４０からなる群から選択される。
別の態様では、本開示は、本明細書中に開示される組換え核酸配列のいずれかを含む宿主細胞又はベクターを提供する。
一態様では、本開示は、本技術の抗体又は抗原結合断片及び薬学的に許容される担体を含む組成物であって、抗体又は抗原結合断片が、同位体、色素、色素原（ｃｈｒｏｍａｇｅｎｓ）、造影剤、薬物、毒素、サイトカイン、酵素、酵素阻害剤、ホルモン、ホルモン拮抗薬、増殖因子、放射性核種、金属、リポソーム、ナノ粒子、ＲＮＡ、ＤＮＡ又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される作用物質にコンジュゲートされてもよい、組成物を提供する。
さらに、又は或いは、一部の実施形態では、本技術の多特異性抗体又はその抗原結合断片は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、骨髄性細胞、形質細胞、又はマスト細胞に結合する。さらに、又は或いは、一部の実施形態では、多特異性抗体又はその抗原結合断片は、ＣＤ３、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＤ２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、Ｎ－アセチルグルコサミントランスフェラーゼ、ｐ１５、ｇｐ７５、ベータ－カテニン、ＥｒｂＢ２、がん抗原１２５（ＣＡ－１２５）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、ＲＡＧＥ、ＭＡＲＴ（メラノーマ抗原）、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２、ＭＵＣ－３、ＭＵＣ－４、ＭＵＣ－５ａｃ、ＭＵＣ－１６、ＭＵＣ－１７、チロシナーゼ、Ｐｍｅｌ １７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ－ＶイントロンＶ配列（Ｎ－アセチルグルコサミントランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺がんｐｓｍ、ＰＲＡＭＥ（メラノーマ抗原）、β－カテニン、ＥＢＮＡ（エプスタインバーウイルス核内抗原）１－６、ＬＭＰ２、ｐ５３、肺抵抗タンパク質（ＬＲＰ）、Ｂｃｌ－２、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、Ｋｉ－６７、ＣＥＡＣＡＭ６、結腸特異抗原－ｐ（ＣＳＡｐ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦ、インスリン様成長因子（ＩＬＧＦ）、テネイシン、血小板由来成長因子、ＩＬ－６、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＭＥＴ、ＤＬＬ４、Ａｎｇ－２、ＨＥＲ３、ＩＧＦ－１Ｒ、ＣＤ３０、ＴＡＧ－７２、ＳＰＥＡＰ、ＣＤ４５、Ｌ１－ＣＡＭ、ルイスＹ（Ｌｅy）抗原、Ｅ－カドヘリン、Ｖ－カドヘリン、ＧＰＣ３、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ８０、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１２３、ＴＣＲガンマ／デルタ、ＮＫｐ４６、ＫＩＲ、ＣＤ５６、ＤＬＬ３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ９９、グロボＨ、ＣＤ２４、ＳＴＥＡＰ１、Ｂ７Ｈ３、ポリシアル酸、ＯＸ４０、ＯＸ４０－リガンド、ペプチドＭＨＣ複合体（ＴＰ５３、ＫＲＡＳ、ＭＹＣ、ＥＢＮＡ１－６、ＰＲＡＭＥ、ＭＡＲＴ、チロシナーゼ、ＭＡＧＥＡ１－Ａ６、ｐｍｅｌ１７、ＬＭＰ２、又はＷＴ１由来のペプチドを有する）、又は小分子ＤＯＴＡハプテンに結合する。小分子ＤＯＴＡハプテンは、ＤＯＴＡ、ＤＯＴＡ－Ｂｎ、ＤＯＴＡ－デスフェリオキサミン、ＤＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ2、Ｔｓｃｇ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｃｙｓ－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ2、Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、及びＡｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2からなる群から選択され得る。
別の態様では、本開示は、それを必要とする対象において、ＣＤ３関連自己免疫疾患を処置する方法であって、該対象に、有効量の、それぞれ配列番号２３及び配列番号２１、配列番号２３及び配列番号９２、配列番号９６及び配列番号９４、配列番号１００及び配列番号９８、配列番号１０４及び配列番号１０２、配列番号１０８及び配列番号１０６、配列番号１１２及び配列番号１１０、並びに配列番号１１６及び配列番号１１４からなる群から選択されるＨＣアミノ酸配列及びＬＣアミノ酸配列を含み、ＣＤ３に特異的に結合する抗体を投与することを含む、方法を提供する。ＣＤ３関連自己免疫疾患の例は、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス、セリアック病、交感性眼炎、１型糖尿病、及び移植片対宿主病を含むがこれらに限定されない。
さらに別の態様では、本開示は、それを必要とする対象において、がんを処置する方法であって、該対象に、有効量の、それぞれ配列番号２３及び配列番号２１、配列番号２３及び配列番号９２、配列番号９６及び配列番号９４、配列番号１００及び配列番号９８、配列番号１０４及び配列番号１０２、配列番号１０８及び配列番号１０６、配列番号１１２及び配列番号１１０、並びに配列番号１１６及び配列番号１１４からなる群から選択されるＨＣアミノ酸配列及びＬＣアミノ酸配列を含み、ＣＤ３に特異的に結合する抗体を投与することを含む、方法を提供する。がんの例は、前駆Ｔ急性リンパ性白血病／リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症タイプＡ、菌状息肉腫、パジェット様細網症、肉芽腫様弛緩皮膚、セザリー症候群、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、皮膚大Ｔ細胞リンパ腫、多形Ｔ細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症タイプＢ、二次皮膚ＣＤ３０＋大細胞リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、腸症関連Ｔ細胞リンパ腫、非特定型末梢性Ｔ細胞リンパ腫、皮下Ｔ細胞リンパ腫、大顆粒リンパ球性白血病、及び急性混合白血病を含むがこれらに限定されない。がんの他の例は、副腎がん、膀胱がん、血液がん、骨がん、脳がん、乳がん、細胞癌、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮体がん、耳鼻咽喉（ＥＮＴ）がん、子宮内膜がん、食道がん、胃腸がん、頭頚部がん、ホジキン病、腸がん、腎臓がん、咽頭がん、急性及び慢性白血病、肝臓がん、リンパ節がん、リンパ腫、肺がん、黒色腫、中皮腫、骨髄腫、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、肉腫、精上皮腫、皮膚がん、胃がん、奇形腫、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、血管腫瘍、及びそれらの転移を含むがこれらに限定されない。
さらに、又は或いは、上記方法の一部の実施形態では、抗体又は抗原結合断片は、対象に、さらなる治療剤と別々に、順次、又は同時に投与される。さらなる治療剤の例として、アルキル化剤、白金剤、タキサン、ビンカ剤、抗エストロゲン薬、アロマターゼ阻害剤、卵巣抑制剤、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＥＧＦ／ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、細胞分裂阻害アルカロイド、細胞傷害性抗生物質、代謝拮抗薬、内分泌／ホルモン剤、ビスホスホネート療法剤の１種又は複数が挙げられる。追加の治療剤の他の例は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、選択性ＣＯＸ－２抑制剤、グルココルチコイド、及び従来の疾患修飾性抗リウマチ薬（ｃＤＭＡＲＤ）を含む。
一態様では、本開示は、それを必要とする対象において腫瘍を検出する方法であって、（ａ）該対象に、有効量の放射標識ＤＯＴＡハプテン並びに放射標識ＤＯＴＡハプテン、腫瘍抗原、及びＣＤ３抗原に結合する本技術の多特異性抗体又は抗原結合断片を含み、複合体の多特異性抗体又は抗原結合断片により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在化するように設計されている複合体を投与することと、（ｂ）参照値よりも高い複合体によって放出される放射性レベルを検出することによって、該対象における腫瘍の存在を検出することとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、対象はヒトである。
別の態様では、本開示は、対象におけるがんをｉｎ ｖｉｖｏで検出する方法であって、（ａ）該対象に、有効量の本技術の抗体又は抗原結合断片を投与することであって、該抗体又は抗原結合断片がＣＤ３を発現するがん細胞に局在化するよう構成され、放射性同位元素で標識されている、投与することと、（ｂ）参照値よりも高い抗体又は抗原結合断片によって放出される放射性レベルを検出することによって、該対象における腫瘍の存在を検出することとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、対象は、がんと診断されているか、又はがんの疑いがある。抗体又は抗原結合断片によって放出される放射性レベルは、陽電子放射断層撮影法又は単一光子放射断層撮影法を使用して検出され得る。
さらに、又は或いは、一部の実施形態では、上記方法は、該対象に、有効量の、放射性核種にコンジュゲートされた本技術の抗体又は抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートを投与することをさらに含む。一部の実施形態では、放射性核種は、アルファ粒子放出同位体、ベータ粒子放出同位体、オージェエミッター、又はそれらの任意の組合せである。ベータ粒子放出同位体の例として、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、165Ｄｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕ、及び67Ｃｕが挙げられる。上記方法の一部の実施形態では、正常な組織における非特異的なＦｃＲ依存性結合は、排除又は低減される（例えば、アグリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）をもたらすＦｃ領域におけるＮ２９７Ａ変異を介して）。
また、本技術の少なくとも１種の免疫グロブリン関連組成物（例えば、本明細書中に記載される任意の抗体又は抗原結合断片）、又はその機能性バリアント（例えば、置換バリアント）及び使用説明書を含む、ＣＤ３関連病態の検出及び／又は処置のためのキットが、本明細書中に開示されている。ある特定の実施形態では、免疫グロブリン関連組成物は、１種又は複数の検出可能な標識にカップリングされている。一実施形態では、１種又は複数の検出可能な標識は、放射性標識、蛍光標識、又は発色性標識を含む。
さらに、又は或いは、一部の実施形態では、キットは、本明細書中に記載される抗ＣＤ３免疫グロブリン関連組成物に特異的に結合する二次抗体をさらに含む。一部の実施形態では、二次抗体は、放射性標識、蛍光標識、又は発色性標識からなる群から選択される少なくとも１種の検出可能な標識にカップリングされている。
一態様では、本開示は、予め標的とされる放射免疫療法に関して、対象を選択するの方法であって、（ａ）該対象に、有効量の、放射標識されたＤＯＴＡハプテン並びに該放射標識されたＤＯＴＡハプテン、腫瘍抗原、及びＣＤ３抗原に結合する本技術の多特異性抗体又は抗原結合断片を含む複合体を投与することであって、該複合体が、該複合体の多特異性抗体又は抗原結合断片により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在化するよう構成される、投与することと、（ｂ）該複合体によって放出される放射性レベルを検出することと、（ｃ）該複合体によって放出される放射性レベルが参照値よりも高い場合に、予め標的とされる放射免疫療法に関して、対象を選択することとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、対象はヒトである。
一態様では、本開示は、がんと診断された対象において放射線療法に対する腫瘍感受性を増加するための方法であって、放射標識ＤＯＴＡハプテン並びに放射標識ＤＯＴＡハプテン、ＣＤ３抗原及び腫瘍抗原を認識しこれに結合する本技術の多特異性抗体又は抗原結合断片を含む複合体の有効量を対象に投与することを含み、複合体は、複合体の多特異性抗体又は抗原結合断片により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在化するように構成される、方法を提供する。
一態様では、本開示は、それを必要とする対象において、がんを処置する方法であって、該対象に、有効量の、放射標識されたＤＯＴＡハプテン並びに該放射標識されたＤＯＴＡハプテン、ＣＤ３抗原及び腫瘍抗原を認識して、それらに結合する本技術の多特異性抗体又は抗原結合断片を含む複合体を投与することであって、該複合体が、該複合体の該多特異性抗体又は抗原結合断片によって認識される該腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在化するよう構成される、投与することを含む、方法を提供する。
本明細書中に開示される方法の上記実施形態のいずれかにおいて、複合体は、静脈内に、筋内に、動脈内に、髄腔内に、関節包内に、眼窩内に、皮内に、腹腔内に、経気管内に、皮下に、脳室内に、経口的に、腫瘍内に、又は鼻腔内に投与される。本明細書中に開示される方法の一部の実施形態では、対象はヒトである。さらに、又は或いは、本明細書中に開示される方法の上記実施形態のいずれかにおいて、放射標識されたＤＯＴＡハプテンは、213Ｂｉ、211Ａｔ、225Ａｃ、152Ｄｙ、212Ｂｉ、223Ｒａ、219Ｒｎ、215Ｐｏ、211Ｂｉ、221Ｆｒ、217Ａｔ、255Ｆｍ、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、165Ｄｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕ、67Ｃｕ、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌ、203Ｐｂ、68Ｇａ、227Ｔｈ、又は64Ｃｕを含み、アルファ粒子放出同位体、ベータ粒子放出同位体、又はオージェエミッターを含んでもよい。
予め標的とされる放射免疫療法に関して、対象を選択する方法であって、（ａ）該対象に、有効量の、放射標識されたＤＯＴＡハプテン、腫瘍抗原、及びＣＤ３抗原に結合する本技術の多特異性抗体又は抗原結合断片を投与することであって、該多特異性抗体が、該多特異性抗体又は抗原結合断片により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在化するよう構成される、投与することと、（ｂ）有効量の、放射標識ＤＯＴＡハプテンを該対象に投与することであって、該放射標識ＤＯＴＡハプテンが多特異性抗体又は抗原結合断片に結合するよう構成される、投与することと、（ｃ）該多特異性抗体によって放出される放射性レベルを検出することと、（ｄ）該多特異性抗体によって放出される放射性レベルが参照値よりも高い場合に、予め前標的とされる放射免疫療法に関して、対象を選択することとを含む、方法も本明細書で開示される。別の態様では、本開示は、がんと診断された対象において放射線療法に対する腫瘍感受性を増加させるための方法であって、（ａ）該対象に、有効量の、放射標識されたＤＯＴＡハプテン、腫瘍抗原、及びＣＤ３抗原に結合する本技術の多特異性抗体又は抗原結合断片を投与することであって、該多特異性抗体が、該多特異性抗体又は抗原結合断片により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在化するよう構成される、投与することと、（ｂ）有効量の、放射標識ＤＯＴＡハプテンを該対象に投与することであって、該放射標識ＤＯＴＡハプテンが多特異性抗体又は抗原結合断片に結合するよう構成される、投与することとを含む、方法を提供する。一態様では、本開示は、それを必要とする対象においてがんを処置する方法であって、（ａ）該対象に、有効量の、放射標識されたＤＯＴＡハプテン、腫瘍抗原、及びＣＤ３抗原に結合する本技術の多特異性抗体又は抗原結合断片の有効量を対象に投与することであって、該多特異性抗体が、該多特異性抗体又は抗原結合断片により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在化するよう構成される、投与することと、（ｂ）有効量の、放射標識ＤＯＴＡハプテンを該対象に投与することであって、該放射標識ＤＯＴＡハプテンが多特異性抗体又は抗原結合断片に結合するよう構成される、投与することとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、本技術の方法は、有効量の洗浄剤を、放射標識されたＤＯＴＡハプテンの投与前に、対象に投与することをさらに含む。
さらに、又は或いは、本明細書中に開示される方法の上記実施形態のいずれかにおいて、放射標識されたＤＯＴＡハプテンは、213Ｂｉ、211Ａｔ、225Ａｃ、152Ｄｙ、212Ｂｉ、223Ｒａ、219Ｒｎ、215Ｐｏ、211Ｂｉ、221Ｆｒ、217Ａｔ、255Ｆｍ、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、165Ｄｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕ、67Ｃｕ、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌ、203Ｐｂ、68Ｇａ、227Ｔｈ、又は64Ｃｕを含み、アルファ粒子放出同位体、ベータ粒子放出同位体、又はオージェエミッターを含んでもよい。本明細書中に開示される方法の上記実施形態のいずれかにおいて、対象はヒトである。
本明細書で開示される方法のありとあらゆる実施形態では、多特異性抗体又は抗原結合断片は、ＣＤ３、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＤ２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、Ｎ－アセチルグルコサミントランスフェラーゼ、ｐ１５、ｇｐ７５、ベータ－カテニン、ＥｒｂＢ２、がん抗原１２５（ＣＡ－１２５）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、ＲＡＧＥ、ＭＡＲＴ（メラノーマ抗原）、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２、ＭＵＣ－３、ＭＵＣ－４、ＭＵＣ－５ａｃ、ＭＵＣ－１６、ＭＵＣ－１７、チロシナーゼ、Ｐｍｅｌ １７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ－ＶイントロンＶ配列（Ｎ－アセチルグルコサミントランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺がんｐｓｍ、ＰＲＡＭＥ（メラノーマ抗原）、β－カテニン、ＥＢＮＡ（エプスタインバーウイルス核内抗原）１－６、ＬＭＰ２、ｐ５３、肺抵抗タンパク質（ＬＲＰ）、Ｂｃｌ－２、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、Ｋｉ－６７、ＣＥＡＣＡＭ６、結腸特異抗原－ｐ（ＣＳＡｐ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦ、インスリン様成長因子（ＩＬＧＦ）、テネイシン、血小板由来成長因子、ＩＬ－６、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＭＥＴ、ＤＬＬ４、Ａｎｇ－２、ＨＥＲ３、ＩＧＦ－１Ｒ、ＣＤ３０、ＴＡＧ－７２、ＳＰＥＡＰ、ＣＤ４５、Ｌ１－ＣＡＭ、ルイスＹ（Ｌｅy）抗原、Ｅ－カドヘリン、Ｖ－カドヘリン、ＧＰＣ３、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ８０、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１２３、ＴＣＲガンマ／デルタ、ＮＫｐ４６、ＫＩＲ、ＣＤ５６、ＤＬＬ３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ９９、グロボＨ、ＣＤ２４、ＳＴＥＡＰ１、Ｂ７Ｈ３、ポリシアル酸、ＯＸ４０、ＯＸ４０－リガンド、又はペプチドＭＨＣ複合体（ＴＰ５３、ＫＲＡＳ、ＭＹＣ、ＥＢＮＡ１－６、ＰＲＡＭＥ、ＭＡＲＴ、チロシナーゼ、ＭＡＧＥＡ１－Ａ６、ｐｍｅｌ１７、ＬＭＰ２、又はＷＴ１由来のペプチドを有する）に結合する。
２つの追加の結合ドメインを提供する２つのｓｃＦｖに共有結合している２つの結合部位を有するＩｇＧ分子を含むモジュラー四価ＩｇＧ－ｓｃＦｖフォーマットの模式図である。 本開示のＢＣ２７６（ｈＯＫＴ３ Ｌ２Ｈ２）ＢｓＡｂの生化学的純度の例となる分析を示す図である。上のパネルは、サイズ排除クロマトグラフィー高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）プロファイルを示す。溶出液中のタンパク質は、２８０ｎｍの波長を有する紫外線の吸光度に基づいて検出された。クロマトグラムからのＳＥＣ－ＨＰＬＣピークでのタンパク質の相対量は下のパネルに表示されている。 ヒト化ＯＫＴ３ ＩｇＧ抗体ＢＣ２７６（ｈＯＫＴ３ Ｌ２Ｈ２）の４０℃での安定性を示す図である。抗体は４０℃でインキュベートされ、それらのアリコートは指定時間に取り出されて、ＨＰＬＣを使用して純度を評価した。４０℃での時間の関数としての安定性値をプロットする線グラフが示されている。 ＢＣ２７６が強力なＴ細胞フラトリサイドをｉｎ ｖｉｔｒｏで誘導することを示す図である。Ｔ細胞は、Ｔ細胞増殖を支えるインターロイキン２の存在下、３５０ｐＭのＢＣ２７６と一緒にインキュベートされた。ＣＤ１９×ＣＤ３特異的ＩｇＧ－Ｌ－ｓｃＦｖ ＢｓＡｂ、及びヒト化ＯＫＴ３ ＩｇＧは対照として使用した。図３Ａは、いくつかの指示された時点でのＣＤ４ Ｔ細胞集団の数を示す。 ＢＣ２７６が強力なＴ細胞フラトリサイドをｉｎ ｖｉｔｒｏで誘導することを示す図である。Ｔ細胞は、Ｔ細胞増殖を支えるインターロイキン２の存在下、３５０ｐＭのＢＣ２７６と一緒にインキュベートされた。ＣＤ１９×ＣＤ３特異的ＩｇＧ－Ｌ－ｓｃＦｖ ＢｓＡｂ、及びヒト化ＯＫＴ３ ＩｇＧは対照として使用した。図３Ｂは、いくつかの指示された時点でのＣＤ８ Ｔ細胞集団の数を示す。 ＢＣ２７６ ＢｓＡｂがマウスで重大なＴ細胞枯渇を誘導することを示す。ＮＳＧマウスは図である、３０００万個のＰＢＭＣ（３人の異なるドナー由来のＰＢＭＣの混合物、それぞれのドナーから１０００万個の細胞）を腹腔内に注入された。１μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂの注射での処置は８日目に開始された。対照マウスは抗体を注射されない（Ａｂなし）又は抗ＣＤ３×ＧＤ２－ＢｓＡｂ（ＢＣ１１９）を注射され、これは負の対照として使用された。図４Ａは、指示された時点での抗ヒトＣＤ４５抗体で染色された末梢血のフローサイトメトリープロファイルを示す。 ＢＣ２７６ ＢｓＡｂがマウスで重大なＴ細胞枯渇を誘導することを示す。ＮＳＧマウスは図である、３０００万個のＰＢＭＣ（３人の異なるドナー由来のＰＢＭＣの混合物、それぞれのドナーから１０００万個の細胞）を腹腔内に注入された。１μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂの注射での処置は８日目に開始された。対照マウスは抗体を注射されない（Ａｂなし）又は抗ＣＤ３×ＧＤ２－ＢｓＡｂ（ＢＣ１１９）を注射され、これは負の対照として使用された。図４Ｂ（左パネル）は、指示された時点での末梢血１ｍｌ当たりのＣＤ４５＋細胞の定量化を示す線グラフを表示する。図４Ｂ（右パネル）は、１５日目（上パネル）及び２２日目（下パネル）のいずれかの末梢血１ｍｌ当たりのＣＤ４５＋細胞の定量化を示すグラフを表示する。 マウスでのＴ細胞枯渇に対するＢＣ２７６ ＢｓＡｂの用量効果を示す図である。ＮＳＧマウスは、３０００万個のＰＢＭＣ（３人の異なるドナー由来のＰＢＭＣの混合物、それぞれのドナーから１０００万個の細胞）を腹腔内に注入された。１μｇ又は０．１μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂ又は抗ＣＤ３×ＧＤ２－ＢｓＡｂ（ＢＣ１１９、負の対照）の注射での処置は８日目に開始された。図５Ａは、１５日目に抗ヒトＣＤ４５抗体で染色された末梢血のフローサイトメトリープロファイルを示す。。 マウスでのＴ細胞枯渇に対するＢＣ２７６ ＢｓＡｂの用量効果を示す図である。ＮＳＧマウスは、３０００万個のＰＢＭＣ（３人の異なるドナー由来のＰＢＭＣの混合物、それぞれのドナーから１０００万個の細胞）を腹腔内に注入された。１μｇ又は０．１μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂ又は抗ＣＤ３×ＧＤ２－ＢｓＡｂ（ＢＣ１１９、負の対照）の注射での処置は８日目に開始された。図５Ｂは、１５日目の末梢血１ｍｌ当たりのＣＤ４５＋細胞の定量化を示すグラフを示す。 ＣＤ４とＣＤ８ Ｔ細胞の両方が、ＢＣ２７６ ＢｓＡｂで処置するとｉｎ ｖｉｖｏで枯渇したことを示す図である。ＮＳＧマウスは、３０００万個のＰＢＭＣ（３人の異なるドナー由来のＰＢＭＣの混合物、それぞれのドナーから１０００万個の細胞）を腹腔内に注入された。１μｇ又は０．１μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂ又は抗ＣＤ３×ＧＤ２－ＢｓＡｂ（ＢＣ１１９、負の対照）の注射での処置は８日目に開始された。図６Ａは、指示された時点での末梢血１ｍｌ当たりのＣＤ４５＋細胞の定量化を示す。 ＣＤ４とＣＤ８ Ｔ細胞の両方が、ＢＣ２７６ ＢｓＡｂで処置するとｉｎ ｖｉｖｏで枯渇したことを示す図である。ＮＳＧマウスは、３０００万個のＰＢＭＣ（３人の異なるドナー由来のＰＢＭＣの混合物、それぞれのドナーから１０００万個の細胞）を腹腔内に注入された。１μｇ又は０．１μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂ又は抗ＣＤ３×ＧＤ２－ＢｓＡｂ（ＢＣ１１９、負の対照）の注射での処置は８日目に開始された。図６Ｂは、指示された時点での末梢血１ｍｌ当たりのＣＤ４＋細胞の定量化を示す。 ＣＤ４とＣＤ８ Ｔ細胞の両方が、ＢＣ２７６ ＢｓＡｂで処置するとｉｎ ｖｉｖｏで枯渇したことを示す図である。ＮＳＧマウスは、３０００万個のＰＢＭＣ（３人の異なるドナー由来のＰＢＭＣの混合物、それぞれのドナーから１０００万個の細胞）を腹腔内に注入された。１μｇ又は０．１μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂ又は抗ＣＤ３×ＧＤ２－ＢｓＡｂ（ＢＣ１１９、負の対照）の注射での処置は８日目に開始された。図６Ｃは、指示された時点での末梢血１ｍｌ当たりのＣＤ８＋細胞の定量化を示す。図６Ｃで、ＣＤ３ＢＣはＢＣ２７６ ＢｓＡｂのことである。 Ｔ細胞の枯渇が臨床副作用と関連していないことを示す図である。ＮＳＧマウスは、３０００万個のＰＢＭＣ（３人の異なるドナー由来のＰＢＭＣの混合物、それぞれのドナーから１０００万個）を腹腔内に注入された。１μｇ又は０．１μｇのＢＣ２７６又は抗ＣＤ３－、及びＧＤ２－ＢｓＡｂ（ＢＣ１１９、負の対照）の注射での処置は８日目に開始された。負の対照と比べた１μｇ又は０．１μｇのＢＣ２７６又は抗ＣＤ３－、及びＧＤ２－ＢｓＡｂ（ＢＣ１１９、負の対照）を受ける動物の体重を示す線グラフが示されている。 ＢＣ２７６処置マウスでの移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の発症を示す図である。図６Ａ－７に記載された実験由来のＮＳＧマウスを実験で使用した。抗体注射は停止され、エフェクター細胞の第２の用量（マウス当たり２２００万個の活性化Ｔ細胞）がマウスに注射された。次に、示される通りに抗体注射は再開された。図８Ａは、指示された時点での末梢血１ｍｌ当たりのＣＤ４＋細胞の定量化を示す線グラフを示す。 ＢＣ２７６処置マウスでの移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の発症を示す図である。図６Ａ－７に記載された実験由来のＮＳＧマウスを実験で使用した。抗体注射は停止され、エフェクター細胞の第２の用量（マウス当たり２２００万個の活性化Ｔ細胞）がマウスに注射された。次に、示される通りに抗体注射は再開された。図８Ｂは、指示された時点での末梢血１ｍｌ当たりのＣＤ８＋細胞の定量化を示す線グラフを示す。 抗体を受けていないマウスと比べて指示された用量のＢＣ２７６又は抗ＣＤ３－、及びＧＤ２－ＢｓＡｂ（ＢＣ１１９、負の対照）抗体で処置されたマウスでのＧＶＨＤスコアのグラフである。図８Ａ－８Ｂに記載される実験由来のマウスを５群にランダム化し、以下の処置：（１）３０μｇのＢＣ２７６、（２）１０μｇのＢＣ２７６、（３）３μｇのＢＣ２７６、（４）１０μｇのＢＣ１１９（ＣＤ３×ＧＤ２ ＢｓＡｂ）、及び（５）抗体なし（Ａｂなし）を実行した。ＧＶＨＤスコアは指示された時間に測定され、プロットされた。 抗体を受けていないマウスと比べて指示された用量のＢＣ２７６又は抗ＣＤ３－、及びＧＤ２－ＢｓＡｂ（ＢＣ１１９、負の対照）抗体で処置された動物の体重を示す線グラフである。図９に記載された実験由来のマウスは指示された時点で体重を量り、その体重はプロットされた。 抗体を受けていないマウスと比べて指示された用量のＢＣ２７６又は抗ＣＤ３－、及びＧＤ２－ＢｓＡｂ（ＢＣ１１９、負の対照）抗体で処置された動物の体重を示す線グラフである。図１０に記載された実験由来のマウスは指示された時点で体重を量り、その体重はプロットされた。 マウス及びヒト化ＯＫＴ３重鎖可変ドメインのアミノ酸配列を示す図である（それぞれ配列番号１、５、７～１０、及び４３～６１）。ＯＫＴ３＿ＶＨ（配列番号１）は、マウスＯＫＴ３重鎖可変ドメイン配列である。ＯＫＴ３＿ＶＨ－１、ＯＫＴ３＿ＶＨ－２、ＯＫＴ３＿ＶＨ－３、ＯＫＴ３＿ＶＨ－４、ＶＨ－１ Ｈ１０５、ＶＨ－２ Ｈ１０５、ＶＨ－３ Ｈ１０５、ＶＨ－４ Ｈ１０５、ＶＨ－１ Ｈ４４、ＶＨ－２ Ｈ４４、ＶＨ－３ Ｈ４４、ＶＨ－４ Ｈ４４、ＶＨ－１ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－２ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－３ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－４ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－１ Ｈ１００、ＶＨ－２ Ｈ１００、ＶＨ－３ Ｈ１００、ＶＨ－４ Ｈ１００、ＶＨ－１ Ｈ１０１、ＶＨ－２ Ｈ１０１、ＶＨ－３ Ｈ１０１、及びＶＨ－４ Ｈ１０１は、ヒト化ＯＫＴ３重鎖可変ドメインのバリアントである。ＶHＣＤＲ１配列はＧＹＴＦＴＲＹＴ（配列番号２）であり、ＶHＣＤＲ２配列はＩＮＰＳＲＧＹＴ（配列番号３）であり、ＶHＣＤＲ３配列はＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹ（配列番号４）、ＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＤＹ（配列番号６）、ＡＲＹＹＤＤＨＹＳＣＤＹ（配列番号１３４）、ＡＲＹＹＤＤＨＣＳＬＤＹ（配列番号１３５）、又はＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＣＹ（配列番号１３６）である。ＶHＣＤＲ１～３配列は下線が引かれている。ヒト化抗ＣＤ３抗体のＶHのＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴ定義を使用して決定される。 マウス及びヒト化ＯＫＴ３重鎖可変ドメインのアミノ酸配列を示す図である（それぞれ配列番号１、５、７～１０、及び４３～６１）。ＯＫＴ３＿ＶＨ（配列番号１）は、マウスＯＫＴ３重鎖可変ドメイン配列である。ＯＫＴ３＿ＶＨ－１、ＯＫＴ３＿ＶＨ－２、ＯＫＴ３＿ＶＨ－３、ＯＫＴ３＿ＶＨ－４、ＶＨ－１ Ｈ１０５、ＶＨ－２ Ｈ１０５、ＶＨ－３ Ｈ１０５、ＶＨ－４ Ｈ１０５、ＶＨ－１ Ｈ４４、ＶＨ－２ Ｈ４４、ＶＨ－３ Ｈ４４、ＶＨ－４ Ｈ４４、ＶＨ－１ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－２ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－３ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－４ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－１ Ｈ１００、ＶＨ－２ Ｈ１００、ＶＨ－３ Ｈ１００、ＶＨ－４ Ｈ１００、ＶＨ－１ Ｈ１０１、ＶＨ－２ Ｈ１０１、ＶＨ－３ Ｈ１０１、及びＶＨ－４ Ｈ１０１は、ヒト化ＯＫＴ３重鎖可変ドメインのバリアントである。ＶHＣＤＲ１配列はＧＹＴＦＴＲＹＴ（配列番号２）であり、ＶHＣＤＲ２配列はＩＮＰＳＲＧＹＴ（配列番号３）であり、ＶHＣＤＲ３配列はＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹ（配列番号４）、ＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＤＹ（配列番号６）、ＡＲＹＹＤＤＨＹＳＣＤＹ（配列番号１３４）、ＡＲＹＹＤＤＨＣＳＬＤＹ（配列番号１３５）、又はＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＣＹ（配列番号１３６）である。ＶHＣＤＲ１～３配列は下線が引かれている。ヒト化抗ＣＤ３抗体のＶHのＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴ定義を使用して決定される。 マウス及びヒト化ＯＫＴ３重鎖可変ドメインのアミノ酸配列を示す図である（それぞれ配列番号１、５、７～１０、及び４３～６１）。ＯＫＴ３＿ＶＨ（配列番号１）は、マウスＯＫＴ３重鎖可変ドメイン配列である。ＯＫＴ３＿ＶＨ－１、ＯＫＴ３＿ＶＨ－２、ＯＫＴ３＿ＶＨ－３、ＯＫＴ３＿ＶＨ－４、ＶＨ－１ Ｈ１０５、ＶＨ－２ Ｈ１０５、ＶＨ－３ Ｈ１０５、ＶＨ－４ Ｈ１０５、ＶＨ－１ Ｈ４４、ＶＨ－２ Ｈ４４、ＶＨ－３ Ｈ４４、ＶＨ－４ Ｈ４４、ＶＨ－１ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－２ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－３ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－４ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－１ Ｈ１００、ＶＨ－２ Ｈ１００、ＶＨ－３ Ｈ１００、ＶＨ－４ Ｈ１００、ＶＨ－１ Ｈ１０１、ＶＨ－２ Ｈ１０１、ＶＨ－３ Ｈ１０１、及びＶＨ－４ Ｈ１０１は、ヒト化ＯＫＴ３重鎖可変ドメインのバリアントである。ＶHＣＤＲ１配列はＧＹＴＦＴＲＹＴ（配列番号２）であり、ＶHＣＤＲ２配列はＩＮＰＳＲＧＹＴ（配列番号３）であり、ＶHＣＤＲ３配列はＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹ（配列番号４）、ＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＤＹ（配列番号６）、ＡＲＹＹＤＤＨＹＳＣＤＹ（配列番号１３４）、ＡＲＹＹＤＤＨＣＳＬＤＹ（配列番号１３５）、又はＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＣＹ（配列番号１３６）である。ＶHＣＤＲ１～３配列は下線が引かれている。ヒト化抗ＣＤ３抗体のＶHのＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴ定義を使用して決定される。 マウス及びヒト化ＯＫＴ３重鎖可変ドメインのアミノ酸配列を示す図である（それぞれ配列番号１、５、７～１０、及び４３～６１）。ＯＫＴ３＿ＶＨ（配列番号１）は、マウスＯＫＴ３重鎖可変ドメイン配列である。ＯＫＴ３＿ＶＨ－１、ＯＫＴ３＿ＶＨ－２、ＯＫＴ３＿ＶＨ－３、ＯＫＴ３＿ＶＨ－４、ＶＨ－１ Ｈ１０５、ＶＨ－２ Ｈ１０５、ＶＨ－３ Ｈ１０５、ＶＨ－４ Ｈ１０５、ＶＨ－１ Ｈ４４、ＶＨ－２ Ｈ４４、ＶＨ－３ Ｈ４４、ＶＨ－４ Ｈ４４、ＶＨ－１ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－２ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－３ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－４ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－１ Ｈ１００、ＶＨ－２ Ｈ１００、ＶＨ－３ Ｈ１００、ＶＨ－４ Ｈ１００、ＶＨ－１ Ｈ１０１、ＶＨ－２ Ｈ１０１、ＶＨ－３ Ｈ１０１、及びＶＨ－４ Ｈ１０１は、ヒト化ＯＫＴ３重鎖可変ドメインのバリアントである。ＶHＣＤＲ１配列はＧＹＴＦＴＲＹＴ（配列番号２）であり、ＶHＣＤＲ２配列はＩＮＰＳＲＧＹＴ（配列番号３）であり、ＶHＣＤＲ３配列はＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹ（配列番号４）、ＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＤＹ（配列番号６）、ＡＲＹＹＤＤＨＹＳＣＤＹ（配列番号１３４）、ＡＲＹＹＤＤＨＣＳＬＤＹ（配列番号１３５）、又はＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＣＹ（配列番号１３６）である。ＶHＣＤＲ１～３配列は下線が引かれている。ヒト化抗ＣＤ３抗体のＶHのＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴ定義を使用して決定される。 マウス及びヒト化ＯＫＴ３重鎖可変ドメインのアミノ酸配列を示す図である（それぞれ配列番号１、５、７～１０、及び４３～６１）。ＯＫＴ３＿ＶＨ（配列番号１）は、マウスＯＫＴ３重鎖可変ドメイン配列である。ＯＫＴ３＿ＶＨ－１、ＯＫＴ３＿ＶＨ－２、ＯＫＴ３＿ＶＨ－３、ＯＫＴ３＿ＶＨ－４、ＶＨ－１ Ｈ１０５、ＶＨ－２ Ｈ１０５、ＶＨ－３ Ｈ１０５、ＶＨ－４ Ｈ１０５、ＶＨ－１ Ｈ４４、ＶＨ－２ Ｈ４４、ＶＨ－３ Ｈ４４、ＶＨ－４ Ｈ４４、ＶＨ－１ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－２ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－３ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－４ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－１ Ｈ１００、ＶＨ－２ Ｈ１００、ＶＨ－３ Ｈ１００、ＶＨ－４ Ｈ１００、ＶＨ－１ Ｈ１０１、ＶＨ－２ Ｈ１０１、ＶＨ－３ Ｈ１０１、及びＶＨ－４ Ｈ１０１は、ヒト化ＯＫＴ３重鎖可変ドメインのバリアントである。ＶHＣＤＲ１配列はＧＹＴＦＴＲＹＴ（配列番号２）であり、ＶHＣＤＲ２配列はＩＮＰＳＲＧＹＴ（配列番号３）であり、ＶHＣＤＲ３配列はＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹ（配列番号４）、ＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＤＹ（配列番号６）、ＡＲＹＹＤＤＨＹＳＣＤＹ（配列番号１３４）、ＡＲＹＹＤＤＨＣＳＬＤＹ（配列番号１３５）、又はＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＣＹ（配列番号１３６）である。ＶHＣＤＲ１～３配列は下線が引かれている。ヒト化抗ＣＤ３抗体のＶHのＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴ定義を使用して決定される。 マウス及びヒト化ＯＫＴ３重鎖可変ドメインのアミノ酸配列を示す図である（それぞれ配列番号１、５、７～１０、及び４３～６１）。ＯＫＴ３＿ＶＨ（配列番号１）は、マウスＯＫＴ３重鎖可変ドメイン配列である。ＯＫＴ３＿ＶＨ－１、ＯＫＴ３＿ＶＨ－２、ＯＫＴ３＿ＶＨ－３、ＯＫＴ３＿ＶＨ－４、ＶＨ－１ Ｈ１０５、ＶＨ－２ Ｈ１０５、ＶＨ－３ Ｈ１０５、ＶＨ－４ Ｈ１０５、ＶＨ－１ Ｈ４４、ＶＨ－２ Ｈ４４、ＶＨ－３ Ｈ４４、ＶＨ－４ Ｈ４４、ＶＨ－１ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－２ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－３ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－４ Ｈ１００Ｂ、ＶＨ－１ Ｈ１００、ＶＨ－２ Ｈ１００、ＶＨ－３ Ｈ１００、ＶＨ－４ Ｈ１００、ＶＨ－１ Ｈ１０１、ＶＨ－２ Ｈ１０１、ＶＨ－３ Ｈ１０１、及びＶＨ－４ Ｈ１０１は、ヒト化ＯＫＴ３重鎖可変ドメインのバリアントである。ＶHＣＤＲ１配列はＧＹＴＦＴＲＹＴ（配列番号２）であり、ＶHＣＤＲ２配列はＩＮＰＳＲＧＹＴ（配列番号３）であり、ＶHＣＤＲ３配列はＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹ（配列番号４）、ＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＤＹ（配列番号６）、ＡＲＹＹＤＤＨＹＳＣＤＹ（配列番号１３４）、ＡＲＹＹＤＤＨＣＳＬＤＹ（配列番号１３５）、又はＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＣＹ（配列番号１３６）である。ＶHＣＤＲ１～３配列は下線が引かれている。ヒト化抗ＣＤ３抗体のＶHのＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴ定義を使用して決定される。 マウス及びヒト化ＯＫＴ３軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を示す図である（それぞれ配列番号１１、１５～２０、及び６２～９１）。ＯＫＴ３＿ＶＬ（配列番号１１）は、マウスＯＫＴ３軽鎖可変ドメイン配列である。ＯＫＴ３＿ＶＬ－１、ＯＫＴ３＿ＶＬ－２、ＯＫＴ３＿ＶＬ－３、ＯＫＴ３＿ＶＬ－４、ＯＫＴ３＿ＶＬ－５、ＯＫＴ３＿ＶＬ－６、ＶＬ－１ Ｌ１００、ＶＬ－２ Ｌ１００、ＶＬ－３ Ｌ１００、ＶＬ－４ Ｌ１００、ＶＬ－５ Ｌ１００、ＶＬ－６ Ｌ１００、ＶＬ－１ Ｌ４３、ＶＬ－２ Ｌ４３、ＶＬ－３ Ｌ４３、ＶＬ－４ Ｌ４３、ＶＬ－５ Ｌ４３、ＶＬ－６ Ｌ４３、ＶＬ－１ Ｌ４９、ＶＬ－２ Ｌ４９、ＶＬ－３ Ｌ４９、ＶＬ－４ Ｌ４９、ＶＬ－５ Ｌ４９、ＶＬ－６ Ｌ４９、ＶＬ－１ Ｌ５０、ＶＬ－２ Ｌ５０、ＶＬ－３ Ｌ５０、ＶＬ－４ Ｌ５０、ＶＬ－５ Ｌ５０、ＶＬ－６ Ｌ５０、ＶＬ－１ Ｌ４６、ＶＬ－２ Ｌ４６、ＶＬ－３ Ｌ４６、ＶＬ－４ Ｌ４６、ＶＬ－５ Ｌ４６、及びＶＬ－６ Ｌ４６はヒト化ＯＫＴ３軽鎖可変ドメインのバリアントである。ＶLＣＤＲ１配列はＳＳＶＳＹ（配列番号１２）であり、ＶLＣＤＲ２配列はＤＴ（配列番号１３）であり、ＶLＣＤＲ３配列はＱＱＷＳＳＮＰＦＴ（配列番号１４）である。ＶLＣＤＲ１～３配列は下線が引かれている。ヒト化抗ＣＤ３抗体のＶLのＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴ定義を使用して決定される。 マウス及びヒト化ＯＫＴ３軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を示す図である（それぞれ配列番号１１、１５～２０、及び６２～９１）。ＯＫＴ３＿ＶＬ（配列番号１１）は、マウスＯＫＴ３軽鎖可変ドメイン配列である。ＯＫＴ３＿ＶＬ－１、ＯＫＴ３＿ＶＬ－２、ＯＫＴ３＿ＶＬ－３、ＯＫＴ３＿ＶＬ－４、ＯＫＴ３＿ＶＬ－５、ＯＫＴ３＿ＶＬ－６、ＶＬ－１ Ｌ１００、ＶＬ－２ Ｌ１００、ＶＬ－３ Ｌ１００、ＶＬ－４ Ｌ１００、ＶＬ－５ Ｌ１００、ＶＬ－６ Ｌ１００、ＶＬ－１ Ｌ４３、ＶＬ－２ Ｌ４３、ＶＬ－３ Ｌ４３、ＶＬ－４ Ｌ４３、ＶＬ－５ Ｌ４３、ＶＬ－６ Ｌ４３、ＶＬ－１ Ｌ４９、ＶＬ－２ Ｌ４９、ＶＬ－３ Ｌ４９、ＶＬ－４ Ｌ４９、ＶＬ－５ Ｌ４９、ＶＬ－６ Ｌ４９、ＶＬ－１ Ｌ５０、ＶＬ－２ Ｌ５０、ＶＬ－３ Ｌ５０、ＶＬ－４ Ｌ５０、ＶＬ－５ Ｌ５０、ＶＬ－６ Ｌ５０、ＶＬ－１ Ｌ４６、ＶＬ－２ Ｌ４６、ＶＬ－３ Ｌ４６、ＶＬ－４ Ｌ４６、ＶＬ－５ Ｌ４６、及びＶＬ－６ Ｌ４６はヒト化ＯＫＴ３軽鎖可変ドメインのバリアントである。ＶLＣＤＲ１配列はＳＳＶＳＹ（配列番号１２）であり、ＶLＣＤＲ２配列はＤＴ（配列番号１３）であり、ＶLＣＤＲ３配列はＱＱＷＳＳＮＰＦＴ（配列番号１４）である。ＶLＣＤＲ１～３配列は下線が引かれている。ヒト化抗ＣＤ３抗体のＶLのＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴ定義を使用して決定される。 マウス及びヒト化ＯＫＴ３軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を示す図である（それぞれ配列番号１１、１５～２０、及び６２～９１）。ＯＫＴ３＿ＶＬ（配列番号１１）は、マウスＯＫＴ３軽鎖可変ドメイン配列である。ＯＫＴ３＿ＶＬ－１、ＯＫＴ３＿ＶＬ－２、ＯＫＴ３＿ＶＬ－３、ＯＫＴ３＿ＶＬ－４、ＯＫＴ３＿ＶＬ－５、ＯＫＴ３＿ＶＬ－６、ＶＬ－１ Ｌ１００、ＶＬ－２ Ｌ１００、ＶＬ－３ Ｌ１００、ＶＬ－４ Ｌ１００、ＶＬ－５ Ｌ１００、ＶＬ－６ Ｌ１００、ＶＬ－１ Ｌ４３、ＶＬ－２ Ｌ４３、ＶＬ－３ Ｌ４３、ＶＬ－４ Ｌ４３、ＶＬ－５ Ｌ４３、ＶＬ－６ Ｌ４３、ＶＬ－１ Ｌ４９、ＶＬ－２ Ｌ４９、ＶＬ－３ Ｌ４９、ＶＬ－４ Ｌ４９、ＶＬ－５ Ｌ４９、ＶＬ－６ Ｌ４９、ＶＬ－１ Ｌ５０、ＶＬ－２ Ｌ５０、ＶＬ－３ Ｌ５０、ＶＬ－４ Ｌ５０、ＶＬ－５ Ｌ５０、ＶＬ－６ Ｌ５０、ＶＬ－１ Ｌ４６、ＶＬ－２ Ｌ４６、ＶＬ－３ Ｌ４６、ＶＬ－４ Ｌ４６、ＶＬ－５ Ｌ４６、及びＶＬ－６ Ｌ４６はヒト化ＯＫＴ３軽鎖可変ドメインのバリアントである。ＶLＣＤＲ１配列はＳＳＶＳＹ（配列番号１２）であり、ＶLＣＤＲ２配列はＤＴ（配列番号１３）であり、ＶLＣＤＲ３配列はＱＱＷＳＳＮＰＦＴ（配列番号１４）である。ＶLＣＤＲ１～３配列は下線が引かれている。ヒト化抗ＣＤ３抗体のＶLのＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴ定義を使用して決定される。 マウス及びヒト化ＯＫＴ３軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を示す図である（それぞれ配列番号１１、１５～２０、及び６２～９１）。ＯＫＴ３＿ＶＬ（配列番号１１）は、マウスＯＫＴ３軽鎖可変ドメイン配列である。ＯＫＴ３＿ＶＬ－１、ＯＫＴ３＿ＶＬ－２、ＯＫＴ３＿ＶＬ－３、ＯＫＴ３＿ＶＬ－４、ＯＫＴ３＿ＶＬ－５、ＯＫＴ３＿ＶＬ－６、ＶＬ－１ Ｌ１００、ＶＬ－２ Ｌ１００、ＶＬ－３ Ｌ１００、ＶＬ－４ Ｌ１００、ＶＬ－５ Ｌ１００、ＶＬ－６ Ｌ１００、ＶＬ－１ Ｌ４３、ＶＬ－２ Ｌ４３、ＶＬ－３ Ｌ４３、ＶＬ－４ Ｌ４３、ＶＬ－５ Ｌ４３、ＶＬ－６ Ｌ４３、ＶＬ－１ Ｌ４９、ＶＬ－２ Ｌ４９、ＶＬ－３ Ｌ４９、ＶＬ－４ Ｌ４９、ＶＬ－５ Ｌ４９、ＶＬ－６ Ｌ４９、ＶＬ－１ Ｌ５０、ＶＬ－２ Ｌ５０、ＶＬ－３ Ｌ５０、ＶＬ－４ Ｌ５０、ＶＬ－５ Ｌ５０、ＶＬ－６ Ｌ５０、ＶＬ－１ Ｌ４６、ＶＬ－２ Ｌ４６、ＶＬ－３ Ｌ４６、ＶＬ－４ Ｌ４６、ＶＬ－５ Ｌ４６、及びＶＬ－６ Ｌ４６はヒト化ＯＫＴ３軽鎖可変ドメインのバリアントである。ＶLＣＤＲ１配列はＳＳＶＳＹ（配列番号１２）であり、ＶLＣＤＲ２配列はＤＴ（配列番号１３）であり、ＶLＣＤＲ３配列はＱＱＷＳＳＮＰＦＴ（配列番号１４）である。ＶLＣＤＲ１～３配列は下線が引かれている。ヒト化抗ＣＤ３抗体のＶLのＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴ定義を使用して決定される。 マウス及びヒト化ＯＫＴ３軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を示す図である（それぞれ配列番号１１、１５～２０、及び６２～９１）。ＯＫＴ３＿ＶＬ（配列番号１１）は、マウスＯＫＴ３軽鎖可変ドメイン配列である。ＯＫＴ３＿ＶＬ－１、ＯＫＴ３＿ＶＬ－２、ＯＫＴ３＿ＶＬ－３、ＯＫＴ３＿ＶＬ－４、ＯＫＴ３＿ＶＬ－５、ＯＫＴ３＿ＶＬ－６、ＶＬ－１ Ｌ１００、ＶＬ－２ Ｌ１００、ＶＬ－３ Ｌ１００、ＶＬ－４ Ｌ１００、ＶＬ－５ Ｌ１００、ＶＬ－６ Ｌ１００、ＶＬ－１ Ｌ４３、ＶＬ－２ Ｌ４３、ＶＬ－３ Ｌ４３、ＶＬ－４ Ｌ４３、ＶＬ－５ Ｌ４３、ＶＬ－６ Ｌ４３、ＶＬ－１ Ｌ４９、ＶＬ－２ Ｌ４９、ＶＬ－３ Ｌ４９、ＶＬ－４ Ｌ４９、ＶＬ－５ Ｌ４９、ＶＬ－６ Ｌ４９、ＶＬ－１ Ｌ５０、ＶＬ－２ Ｌ５０、ＶＬ－３ Ｌ５０、ＶＬ－４ Ｌ５０、ＶＬ－５ Ｌ５０、ＶＬ－６ Ｌ５０、ＶＬ－１ Ｌ４６、ＶＬ－２ Ｌ４６、ＶＬ－３ Ｌ４６、ＶＬ－４ Ｌ４６、ＶＬ－５ Ｌ４６、及びＶＬ－６ Ｌ４６はヒト化ＯＫＴ３軽鎖可変ドメインのバリアントである。ＶLＣＤＲ１配列はＳＳＶＳＹ（配列番号１２）であり、ＶLＣＤＲ２配列はＤＴ（配列番号１３）であり、ＶLＣＤＲ３配列はＱＱＷＳＳＮＰＦＴ（配列番号１４）である。ＶLＣＤＲ１～３配列は下線が引かれている。ヒト化抗ＣＤ３抗体のＶLのＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴ定義を使用して決定される。 マウス及びヒト化ＯＫＴ３軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列を示す図である（それぞれ配列番号１１、１５～２０、及び６２～９１）。ＯＫＴ３＿ＶＬ（配列番号１１）は、マウスＯＫＴ３軽鎖可変ドメイン配列である。ＯＫＴ３＿ＶＬ－１、ＯＫＴ３＿ＶＬ－２、ＯＫＴ３＿ＶＬ－３、ＯＫＴ３＿ＶＬ－４、ＯＫＴ３＿ＶＬ－５、ＯＫＴ３＿ＶＬ－６、ＶＬ－１ Ｌ１００、ＶＬ－２ Ｌ１００、ＶＬ－３ Ｌ１００、ＶＬ－４ Ｌ１００、ＶＬ－５ Ｌ１００、ＶＬ－６ Ｌ１００、ＶＬ－１ Ｌ４３、ＶＬ－２ Ｌ４３、ＶＬ－３ Ｌ４３、ＶＬ－４ Ｌ４３、ＶＬ－５ Ｌ４３、ＶＬ－６ Ｌ４３、ＶＬ－１ Ｌ４９、ＶＬ－２ Ｌ４９、ＶＬ－３ Ｌ４９、ＶＬ－４ Ｌ４９、ＶＬ－５ Ｌ４９、ＶＬ－６ Ｌ４９、ＶＬ－１ Ｌ５０、ＶＬ－２ Ｌ５０、ＶＬ－３ Ｌ５０、ＶＬ－４ Ｌ５０、ＶＬ－５ Ｌ５０、ＶＬ－６ Ｌ５０、ＶＬ－１ Ｌ４６、ＶＬ－２ Ｌ４６、ＶＬ－３ Ｌ４６、ＶＬ－４ Ｌ４６、ＶＬ－５ Ｌ４６、及びＶＬ－６ Ｌ４６はヒト化ＯＫＴ３軽鎖可変ドメインのバリアントである。ＶLＣＤＲ１配列はＳＳＶＳＹ（配列番号１２）であり、ＶLＣＤＲ２配列はＤＴ（配列番号１３）であり、ＶLＣＤＲ３配列はＱＱＷＳＳＮＰＦＴ（配列番号１４）である。ＶLＣＤＲ１～３配列は下線が引かれている。ヒト化抗ＣＤ３抗体のＶLのＣＤＲ配列は、ＩＭＧＴ定義を使用して決定される。 図１３Ａは、ヒト化ＯＫＴ３×ＣＤ３ ＢｓＡｂ、ＢＣ２７６（ｈＯＫＴ３ Ｈ２Ｌ２ＤＳ）の軽鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号２１～２２）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、ヒト化抗ＣＤ３ ＢｓＡｂの可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は、イタリック体、下線部ボールド体フォントで示されている。 図１３Ｂは、それぞれヒト化ＯＫＴ３×ＣＤ３ ＢｓＡｂ、ＢＣ２７６（ｈＯＫＴ３ Ｈ２Ｌ２ＤＳ）又はＢＣ２７６．１（ｈＯＫＴ３ Ｈ２Ｌ２）の重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号２３～２４）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、ヒト化抗ＣＤ３ ＢｓＡｂの可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は、イタリック体、下線部ボールド体フォントで示されている。 図１３Ｃは、ヒト化ＯＫＴ３×ＣＤ３ ＢｓＡｂ、ＢＣ２７６．１（ｈＯＫＴ３ Ｈ２Ｌ２）の軽鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号９２～９３）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、ヒト化抗ＣＤ３ ＢｓＡｂの可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は、イタリック体、下線部ボールド体フォントで示されている。 図１４Ａは、ヒト化抗ＧＤ２／抗ＣＤ３ ｈ３Ｆ８×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの軽鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号９４～９５）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、ｈ３Ｆ８×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図１４Ｂは、ヒト化ｈ３Ｆ８×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号９６～９７）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、ｈ３Ｆ８×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図１５Ａは、ヒト化抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３ ｈＭ１９５×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの軽鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号９８～９９）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、ｈＭ１９５×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図１５Ｂは、ヒト化ｈＭ１９５×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号１００～１０１）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、ｈＭ１９５×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図１６Ａは、ヒト化抗グリピカン－３／抗ＣＤ３ ｈＧＰＣ３×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの軽鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号９４～９５）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、ｈＧＰＣ３×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図１６Ｂは、ヒト化ｈＧＰＣ３×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号１０４～１０５）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、ｈＧＰＣ３×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図１７Ａは、ヒト化抗ＣＤ１９／抗ＣＤ３ ｈＦＭＣ６３×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの軽鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号１０６～１０７）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、ｈＦＭＣ６３×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図１７Ｂは、ヒト化ｈＦＭＣ６３×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号１０８～１０９）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、ｈＦＭＣ６３×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図１８Ａは、ヒト化ｈＳＴＥＡＰ１×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの軽鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号１１０～１１１）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、ｈＳＴＥＡＰ１×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図１８Ｂは、ヒト化ｈＳＴＥＡＰ１×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号１１２～１１３）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、ｈＳＴＥＡＰ１×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図１９Ａは、ヒト化抗ＣＤ３３／抗ＣＤ３ ｈＨＩＭ３４×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの軽鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号１１４～１１５）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、ｈＨＩＭ３４Ｓ×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図１９Ｂは、ヒト化ｈＨＩＭ３４×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの重鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号１１６～１１７）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、ｈＨＩＭ３４Ｓ×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂの可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図２０Ａは、単鎖二特異性直列断片可変（ｓｃＢｓＴａＦｖ）フォーマットでのヒト化３Ｆ８×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂ、ヒト化ＳＴＥＡＰ１×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂ、ヒト化ＨＥＲ２×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂ、及びヒト化ＦＭＣ６３×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂのアミノ酸配列（配列番号１１８）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、ｓｃＢｓＴａＦｖの可変ドメインはイタリック体で示され、リンカー配列はボールド体フォントで示され、ｐ５３四量体化ドメインはイタリック体で示されて下線が引かれ、ヒスチジン6タグはボールド及び下線フォントで示されている。 図２０Ｂは、単鎖二特異性直列断片可変（ｓｃＢｓＴａＦｖ）フォーマットでのヒト化３Ｆ８×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂ、ヒト化ＳＴＥＡＰ１×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂ、ヒト化ＨＥＲ２×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂ、及びヒト化ＦＭＣ６３×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂのアミノ酸配列（配列番号１１９）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、ｓｃＢｓＴａＦｖの可変ドメインはイタリック体で示され、リンカー配列はボールド体フォントで示され、ｐ５３四量体化ドメインはイタリック体で示されて下線が引かれ、ヒスチジン6タグはボールド及び下線フォントで示されている。 図２０Ｃは、単鎖二特異性直列断片可変（ｓｃＢｓＴａＦｖ）フォーマットでのヒト化３Ｆ８×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂ、ヒト化ＳＴＥＡＰ１×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂ、ヒト化ＨＥＲ２×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂ、及びヒト化ＦＭＣ６３×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂのアミノ酸配列（配列番号１２０）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、ｓｃＢｓＴａＦｖの可変ドメインはイタリック体で示され、リンカー配列はボールド体フォントで示され、ｐ５３四量体化ドメインはイタリック体で示されて下線が引かれ、ヒスチジン6タグはボールド及び下線フォントで示されている。 図２０Ｄは、単鎖二特異性直列断片可変（ｓｃＢｓＴａＦｖ）フォーマットでのヒト化３Ｆ８×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂ、ヒト化ＳＴＥＡＰ１×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂ、ヒト化ＨＥＲ２×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂ、及びヒト化ＦＭＣ６３×ｈＯＫＴ３ ＢｓＡｂのアミノ酸配列（配列番号１２１）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、ｓｃＢｓＴａＦｖの可変ドメインはイタリック体で示され、リンカー配列はボールド体フォントで示され、ｐ５３四量体化ドメインはイタリック体で示されて下線が引かれ、ヒスチジン6タグはボールド及び下線フォントで示されている。 図２１Ａは、ヒト化ｈ３Ｆ８×ｈＣ８２５ Ａｂの軽鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号１２２～１２３）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、重及び軽鎖の可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図２１Ｂは、ヒト化ｈ３Ｆ８×ｈＯＫＴ３ Ａｂの軽鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号１２４～１２５）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、重及び軽鎖の可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図２１Ｃは、ヒト化ｈ３Ｆ８ Ａｂの重鎖Ｋのアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号１２６～１２７）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、重及び軽鎖の可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図２１Ｄは、ヒト化ｈ３Ｆ８ Ａｂの重鎖Ｆのアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号１３７～１３８）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、重及び軽鎖の可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図２２Ａは、ヒト化ｈＳＴＥＡＰ１×ｈＣ８２５ Ａｂの軽鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号１２８～１２９）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、重及び軽鎖の可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図２２Ｂは、ヒト化ｈＳＴＥＡＰ１×ｈＯＫＴ３ Ａｂの軽鎖のアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号１３０～１３１）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、重及び軽鎖の可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図２２Ｃは、ヒト化ｈＳＴＥＡＰ１ Ａｂの重鎖Ｋのアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号１３２～１３３）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、重及び軽鎖の可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図２２Ｄは、ヒト化ｈＳＴＥＡＰ１ Ａｂの重鎖Ｆのアミノ酸及びヌクレオチド配列（配列番号１３９～１４０）を示す。シグナルペプチドは下線が引かれており、重及び軽鎖の可変ドメインはイタリック体フォントで示され、リンカー配列は下線ボールド体フォントで示されている。 図２３Ａは、ＧＤ２発現神経芽細胞腫細胞系（ＩＭＲ３２）に対する抗ＧＤ２抗ＣＤ３二特異性抗体（配列番号９４及び配列番号９６を含む）の効力を示す。 図２３Ｂは、ＧＰＣ３発現肝臓がん細胞系（ＨＥＰＧ２）に対する抗ＧＰＣ３抗ＣＤ３二特異性抗体（配列番号１０２及び配列番号１０４を含む）の効力を示す。 図２４Ａは、ＣＥＭ－ＮＫＲ Ｔ細胞系は、ＣＤ３発現を欠くが、ＢＣ２７６ ＢｓＡｂでの処置に応答性ではなかったことを示す。 図２４Ｂは、ＨＵＴ７８ Ｔ細胞は、高レベルのＣＤ３を発現するが、ＢＣ２７６ ＢｓＡｂで処置されると抗体依存性Ｔ細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＴＣ）アッセイで殺傷され、ＨＥＲ２に向けられた対称抗体ＨＥＲ２－ＢｓＡｂは細胞傷害性を示さなかったことを示す。 図２４Ｃは、ジャーカットＴ細胞は、高レベルのＣＤ３を発現するが、ＢＣ２７６ ＢｓＡｂで処置されると抗体依存性Ｔ細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＴＣ）アッセイで殺傷され、ＨＥＲ２に向けられた対称抗体ＨＥＲ２－ＢｓＡｂは細胞傷害性を示さなかったことを示す。 図２４Ｄは、８４０２Ｔ細胞は、高レベルのＣＤ３を発現するが、ＢＣ２７６ ＢｓＡｂで処置されると抗体依存性Ｔ細胞媒介細胞傷害性（ＡＤＴＣ）アッセイで殺傷され、ＨＥＲ２に向けられた対称抗体ＨＥＲ２－ＢｓＡｂは細胞傷害性を示さなかったことを示す。 図２４Ｅは、ＭＯＬＴ４ Ｔ細胞系は、ＣＤ３発現を欠くが、ＢＣ２７６ ＢｓＡｂでの処置に応答性ではなかったことを示す。 活性低下、猫背の姿勢、又は波立った毛などの不安の兆候は、ＢＣ２７６ ＢｓＡｂで処置された動物では観察されなかったことを示す図である。ＮＳＧマウスは、３０００万個のＰＢＭＣ（３人の異なるドナー由来のＰＢＭＣの混合物、それぞれのドナーから１０００万個の細胞）を０日目に腹腔内に注入された。マウスは、８日目に開始して、溶媒だけの対照（抗体なし）で、又は１μｇ若しくは０．１μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂ、又は１μｇ若しくは０．１μｇのＢＣ１１９ ＢｓＡｂで処置された。マウスは、不安の臨床兆候（すなわち、活性低下、猫背の姿勢、又は波立った毛）について評価された。 グリピカン－３抗原に結合する同じＦａｂを共有する５つのＧＰＣ３×ＣＤ３二特異性抗体（ＢｓＡｂ）を示す図である。それぞれの二特異性抗体は、定常軽鎖に結合している異なる抗ＣＤ３ ｓｃＦｖを表す。点線の円は抗ＣＤ３ ｓｃＦｖを示す。ＢｓＡｂ １～５は、それぞれ抗ＣＤ３ ｓｃＦｖクローンｈｕＯＫＴ３、ＣＤ３＿Ｈ２Ｌ２、ＣＤ３＿Ｈ２Ｌ５、ＣＤ３＿Ｈ４Ｌ２及びＣＤ３＿Ｈ４Ｌ５を表す。 図２６に示される５つのＧＰＣ３×ＣＤ３二特異性抗体（ＢｓＡｂ）（配列番号１４１～１４５）のそれぞれの抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ領域のアミノ酸配列を示す図である。 フローサイトメトリーを使用してｅｘ ｖｉｖｏ拡大されたヒトＴ細胞に対する図２６に記載される５つのＧＰＣ３×ＣＤ３ ＢｓＡｂの異なる結合親和性を示す図である。抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズにより２１日間活性化されたヒトＴ細胞は収穫され、ＢｓＡｂ（それぞれの試料について１×１０6Ｔ細胞）続いて二次ヤギ抗ヒトＩｇＧ ＰＥと一緒にインキュベートされた。ベースライン値（幾何ＭＦＩ、ｇＭＦＩ）は、ＢｓＡｂなしでヤギ抗ヒトＩｇＧ ＰＥのみと一緒にインキュベートされたＴ細胞から得られた。正規化ｇＭＦＩ値は、ベースライン値からそれぞれの試料のｇＭＦＩを演繹することにより計算された。ＢｓＡｂ＃３は、ヒトＴ細胞に対する最も高い結合親和性を示し、ＢｓＡｂ＃１、＃２、＃５及び＃４と続いた。ＢｓＡｂ＃６は、抗ＣＤ３ ｓｃＦｖを含有しないが、負の対照として含まれた。 ヒト組換えＣＤ３δ／εに対する例示されたＢｓＡｂの結合親和性は、ＳＰＲを使用して示される場合、極端に異なってはいないことを示す図である。ヒト組換えＣＤ３エプシロン＆ＣＤ３デルタヘテロ二量体タンパク質は、アミンカップリングキットを使用してＣＭ５センサーチップ上に固定され、ＢｓＡｂ（ＨＢＳ－ＥＰバッファーに希釈される、濃度は６．２５ｎＭ～１００ｎＭに及ぶ）は、２分間にわたり３０μｌ／分の流速でセンサー表面上に注入された。それぞれのサイクルの終了時、表面は１０ｍＭのＮａＯＨを使用して再生された。試料はＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００装置に流した。データはすべて、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して、２状態フィッティングモデル、ＫＤ＝ｋｄ／ｋａにフィットさせた。ＫＤ値により示される場合の、ヒトＣＤ３抗原に対するＢｓＡｂの結合親和性は、ＢｓＡｂ＃１、＃２、＃３及び＃５は類似する親和性で結合し、ＢｓＡｂ＃４は１ログ低い結合親和性を示したことを示す。 例示されたＢｓＡｂが、それぞれＴ細胞活性化マーカーＣＤ６９及びＣＤ２５の表面発現を差示的に誘導することを示す図である。抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズにより２１日間活性化されたヒトＴ細胞は収穫され、ＨｅｐＧ２細胞と１０：１比（１００，０００個のＴ細胞と１０，０００個のＨｅｐＧ２）で３７℃、３日間共培養された。３日後、細胞は収穫され、ｈＣＤ３、ｈＣＤ４、ｈＣＤ８、ｈＣＤ６９及びｈＣＤ２５について染色された。細胞は、細胞表面染色に先立って固定可能なライブ－デッド色素（ＮＩＲ）で前染色された。シングレット、ＮＩＲ－及びｈＣＤ３＋細胞は前ゲート開閉され、ｈＣＤ６９又はｈＣＤ２５に対するＣＤ８ Ｔ細胞発現について分析された。ＢｓＡｂ＃１、＃２、＃３及び＃５は類似する割合のＣＤ６９＋Ｔ細胞を誘導し、ＢｓＡｂ＃４はＣＤ６９のＣＤ８ Ｔ細胞発現を弱く活性化した。ＣＤ８ Ｔ細胞上でのＣＤ２５発現で類似する傾向が観察され、ＢｓＡｂ＃１、＃２、＃３及び＃５と比べて、ＢｓＡｂ＃４はＣＤ２５発現を弱く誘導した。 例示されたＢｓＡｂが、それぞれＴ細胞活性化マーカーＣＤ６９及びＣＤ２５の表面発現を差示的に誘導することを示す図である。抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズにより２１日間活性化されたヒトＴ細胞は収穫され、ＨｅｐＧ２細胞と１０：１比（１００，０００個のＴ細胞と１０，０００個のＨｅｐＧ２）で３７℃、３日間共培養された。３日後、細胞は収穫され、ｈＣＤ３、ｈＣＤ４、ｈＣＤ８、ｈＣＤ６９及びｈＣＤ２５について染色された。細胞は、細胞表面染色に先立って固定可能なライブ－デッド色素（ＮＩＲ）で前染色された。シングレット、ＮＩＲ－及びｈＣＤ３＋細胞は前ゲート開閉され、ｈＣＤ６９又はｈＣＤ２５に対するＣＤ８ Ｔ細胞発現について分析された。ＢｓＡｂ＃１、＃２、＃３及び＃５は類似する割合のＣＤ６９＋Ｔ細胞を誘導し、ＢｓＡｂ＃４はＣＤ６９のＣＤ８ Ｔ細胞発現を弱く活性化した。ＣＤ８ Ｔ細胞上でのＣＤ２５発現で類似する傾向が観察され、ＢｓＡｂ＃１、＃２、＃３及び＃５と比べて、ＢｓＡｂ＃４はＣＤ２５発現を弱く誘導した。 例示されたＢｓＡｂが頑強なＴ細胞増殖を誘導することを示す図である。抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズにより１４日間活性化されたヒトＴ細胞は収穫され、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ細胞増殖キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標））で標識された。Ｔ細胞は、ＨｅｐＧ２細胞と１０：１比（１００，０００個のＴ細胞と１０，０００個のＨｅｐＧ２）で共培養された。９６時間後、細胞は収穫され、ｈＣＤ３、ｈＣＤ４、ｈＣＤ８について染色された。細胞は、細胞表面染色に先立って固定可能なライブ－デッド色素（ＮＩＲ）で前染色された。図３２Ａ上。ＢｓＡｂ＃１、＃２、＃３及び＃５は頑強なＣＤ８ Ｔ細胞増殖を駆動し、７０％を超えるＣＤ８ Ｔ細胞はわずか６．４ｎｇ／ｍｌのＢｓＡｂ濃度で活発な分裂を受けた。ＢｓＡｂ＃４はＣＤ８ Ｔ細胞活性化を弱く誘導しただけでなく、６．４ｎｇ／ｍｌのＢｓＡｂ濃度ではほとんど分裂するＣＤ８ Ｔ細胞（１５％）はなかった。図３２Ａ下。Ｔ及びＨｅｐＧ２共培養アッセイにおける漸増濃度ではＣＤ８ Ｔ細胞生存率は低下しなかった。類似するＣＤ８ Ｔ細胞生存率（１０～２０％）がすべてのＢｓＡｂの間で観察された。図３２Ｂ。シングレット、ＮＩＲ－及びｈＣＤ３＋細胞は前ゲート開閉され、ＣＤ８ Ｔ細胞上で ｖｉｏｌｅｔ（励起／発光 ４０５／４５０）の強度について分析された。非分裂ＣＤ８ Ｔ細胞は最も高い強度のＣｅｌｌＴｒａｃｅ色素を宿し、細胞分裂ごとに色素の希釈及び強度の低下をもたらす。 例示されたＢｓＡｂが頑強なＴ細胞増殖を誘導することを示す図である。抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズにより１４日間活性化されたヒトＴ細胞は収穫され、ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ細胞増殖キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標））で標識された。Ｔ細胞は、ＨｅｐＧ２細胞と１０：１比（１００，０００個のＴ細胞と１０，０００個のＨｅｐＧ２）で共培養された。９６時間後、細胞は収穫され、ｈＣＤ３、ｈＣＤ４、ｈＣＤ８について染色された。細胞は、細胞表面染色に先立って固定可能なライブ－デッド色素（ＮＩＲ）で前染色された。図３２Ａ上。ＢｓＡｂ＃１、＃２、＃３及び＃５は頑強なＣＤ８ Ｔ細胞増殖を駆動し、７０％を超えるＣＤ８ Ｔ細胞はわずか６．４ｎｇ／ｍｌのＢｓＡｂ濃度で活発な分裂を受けた。ＢｓＡｂ＃４はＣＤ８ Ｔ細胞活性化を弱く誘導しただけでなく、６．４ｎｇ／ｍｌのＢｓＡｂ濃度ではほとんど分裂するＣＤ８ Ｔ細胞（１５％）はなかった。図３２Ａ下。Ｔ及びＨｅｐＧ２共培養アッセイにおける漸増濃度ではＣＤ８ Ｔ細胞生存率は低下しなかった。類似するＣＤ８ Ｔ細胞生存率（１０～２０％）がすべてのＢｓＡｂの間で観察された。図３２Ｂ。シングレット、ＮＩＲ－及びｈＣＤ３＋細胞は前ゲート開閉され、ＣＤ８ Ｔ細胞上で ｖｉｏｌｅｔ（励起／発光 ４０５／４５０）の強度について分析された。非分裂ＣＤ８ Ｔ細胞は最も高い強度のＣｅｌｌＴｒａｃｅ色素を宿し、細胞分裂ごとに色素の希釈及び強度の低下をもたらす。 ＨｅｐＧ２肝細胞癌細胞系のＢｓＡｂ結合Ｔ細胞媒介殺傷を示す図である。抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズにより１４日間活性化されたヒトＴ細胞は収穫され、ＨｅｐＧ２細胞と１０：１比（５０，０００個のＴ細胞と５，０００個のＨｅｐＧ２）で共培養された。Ｔ細胞とのインキュベーションに先立って、ＨｅｐＧ２細胞は３７℃、Ｃｒ51で１時間標識された。それぞれのＢｓＡｂの存在下でのヒトＴ細胞とＨｅｐＧ２細胞共培養物は、８００×ｇで１０分間遠心沈殿する前に４時間インキュベーター（３７℃、５％ＣＯ2）中に保管された。上澄みはマイクロチューブに移され、シンチレーションカウンターで読み取られた。ＢｓＡｂ＃３及び＃１は類似するＥＣ５０を示し、＃２及び＃５が続いた。ＢｓＡｂ４は最も低いＥＣ５０を示した。ＦａｂがＣＤ３３ターゲティングするＢｓＡｂ＃６は、負の対照として含まれた（ＨｅｐＧ２はＣＤ３３陰性がんである）。 ＨｅｐＧ２異種移植片マウスでのヒトＴ細胞生着を示す図である。ヒトＴ細胞は、ルシフェラーゼレンチウイルスにより形質導入されたが、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズの存在下で８日間拡大された。それぞれのＨｅｐＧ２異種移植片マウスは２×１０7個のＴ－ｌｕｃ細胞を投与された。処置されたマウスでのＴ－ｌｕｃ細胞の生物発光は、Ｔ－ｌｕｃ細胞投与後１、４、７、及び１０日目にＩＶＩＳ機器（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して獲得された。ルシフェリン（１００μｌ ＰＢＳ中０．３ｍｇ／マウス静注）はイメージングの５分前に注射された。ＨｅｐＧ２異種移植片マウスの一群は、生物発光についてのベースライン値を得るためにＴ－ｌｕｃ細胞もＢｓＡｂも投与されなかった。生物発光分析は、Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅ ２．６０ソフトウェアを使用して行われた。生物発光の強度は、腫瘍部位中へのＴ細胞の浸潤の数と相関している。ＢｓＡｂ＃３は、ＨｅｐＧ２腫瘍部位への最高数のＴ－ｌｕｃ細胞生着を駆動し、ＢｓＡｂ＃１及び＃２が続いた。ＢｓＡｂの投与量はＴ－ｌｕｃ細胞生着に影響を及ぼし、３０μｇのＢｓＡｂ＃１は３μｇのＢｓＡｂ＃１よりも高いＴ－ｌｕｃ浸潤を誘導した。 ＨｅｐＧ２異種移植片マウスでのヒトＴ細胞生着を示す図である。ヒトＴ細胞は、ルシフェラーゼレンチウイルスにより形質導入されたが、抗ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズの存在下で８日間拡大された。それぞれのＨｅｐＧ２異種移植片マウスは２×１０7個のＴ－ｌｕｃ細胞を投与された。処置されたマウスでのＴ－ｌｕｃ細胞の生物発光は、Ｔ－ｌｕｃ細胞投与後１、４、７、及び１０日目にＩＶＩＳ機器（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して獲得された。ルシフェリン（１００μｌ ＰＢＳ中０．３ｍｇ／マウス静注）はイメージングの５分前に注射された。ＨｅｐＧ２異種移植片マウスの一群は、生物発光についてのベースライン値を得るためにＴ－ｌｕｃ細胞もＢｓＡｂも投与されなかった。生物発光分析は、Ｌｉｖｉｎｇ Ｉｍａｇｅ ２．６０ソフトウェアを使用して行われた。生物発光の強度は、腫瘍部位中へのＴ細胞の浸潤の数と相関している。ＢｓＡｂ＃３は、ＨｅｐＧ２腫瘍部位への最高数のＴ－ｌｕｃ細胞生着を駆動し、ＢｓＡｂ＃１及び＃２が続いた。ＢｓＡｂの投与量はＴ－ｌｕｃ細胞生着に影響を及ぼし、３０μｇのＢｓＡｂ＃１は３μｇのＢｓＡｂ＃１よりも高いＴ－ｌｕｃ浸潤を誘導した。
本方法のある特定の態様、様式、実施形態、変動及び特長は、本技術を実質的に理解してもらうために、以下に種々のレベルで詳細に説明されている。
本開示は一般的には免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体又はその抗原結合断片）を提供し、この組成物はＣＤ３ポリペプチドに特異的に結合することができる。本技術の免疫グロブリン関連組成物は、それを必要とする対象においてＣＤ３関連病態を検出する又は処置するための方法に有用である。したがって、本方法の種々の態様は、抗ＣＤ３抗体の調製、特徴付け、及び操作に関する。本技術の免疫グロブリン関連組成物は、単独で又はがん若しくは自己免疫疾患を処置するための追加の治療剤との組合せに有用である。一部の実施形態では、免疫グロブリン関連組成物は、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、二特異性抗体、又は多特異性抗体である。
本方法を実行する場合、分子生物学、タンパク質生化学、細胞生物学、免疫学、微生物学及び組換えＤＮＡにおける多くの従来技法が使用される。例えば、Sambrook and Russell eds. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd edition；the series Ausubel et al. eds. (2007) Current Protocols in Molecular Biology；the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.)；MacPherson et al. (1991) PCR 1: A Practical Approach (IRL Press at Oxford University Press)；MacPherson et al. (1995) PCR 2: A Practical Approach；Harlow and Lane eds. (1999) Antibodies, A Laboratory Manual；Freshney (2005) Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique, 5th edition；Gait ed. (1984) Oligonucleotide Synthesis；米国特許第４，６８３，１９５号；Hames and Higgins eds. (1984) Nucleic Acid Hybridization；Anderson (1999) Nucleic Acid Hybridization；Hames and Higgins eds. (1984) Transcription and Translation；Immobilized Cells and Enzymes (IRL Press (1986))；Perbal (1984) A Practical Guide to Molecular Cloning；Miller and Calos eds. (1987) Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (Cold Spring Harbor Laboratory)；Makrides ed. (2003) Gene Transfer and Expression in Mammalian Cells；Mayer and Walker eds. (1987) Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology (Academic Press, London)；and Herzenberg et al. eds (1996) Weir’s Handbook of Experimental Immunologyを参照されたい。ポリペプチド遺伝子発現産物を検出しそのレベル（例えば、遺伝子翻訳レベル）を測定するための方法は当技術分野では周知であり、抗体検出及び定量化技法などのポリペプチド検出法の使用を含む（Strachan & Read, Human Molecular Genetics, Second Edition. (John Wiley and Sons, Inc., NY, 1999)も参照されたい）。
定義
別段定義されなければ、本明細書で使用されるすべての専門用語及び科学用語は一般的には、本技術が属する技術分野の当業者が通常理解しているのと同じ意味を有する。本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つ（ａ）」、「１つ（ａｎ）」及び「その（ｔｈｅ）」は、内容が別段はっきりと指示しなければ、複数の指示対象を含む。例えば、「細胞（ａ ｃｅｌｌ）」への言及は、２種以上の細胞の組合せ、及び同類のものを含む。一般に、本明細書で使用される命名法並びに以下に記載される細胞培養、分子遺伝学、有機化学、分析化学及び核酸化学並びにハイブリダイゼーションでの検査法は、当技術分野で周知であり通常用いられるものである。
本明細書で使用される場合、数に関連して用語「約（ａｂｏｕｔ）」は一般的には、別段明言されなければ或いは文脈から明らかでなければ、その数（より多い又は少ない）のどちらかの方向に１％、５％、又は１０％の範囲内に収まる数を含む（該数が可能な値の０％未満である又は１００％を超える場合を除いて）。
本明細書で使用される場合、対象への薬剤又は薬物の「投与」とは、化合物をその意図された機能を果たすため対象に導入する又は送達する任意の経路を含む。投与は、経口で、鼻腔内に、非経口で（静脈内に、筋肉内に、腹腔内に、又は皮下に）、直腸に、クモ膜下腔内に、腫瘍内に又は局所的に、を含むがこれらに限定されない任意の適切な経路により実行可能である。投与は自己投与及び別の人による投与を含む。
「アジュバント」とは、免疫系の刺激を引き起こす１種又は複数の物質のことである。この文脈では、アジュバンドは、１種又は複数のワクチン抗原又は抗体に対する免疫応答を増強するのに使用される。アジュバントは、ワクチンの投与前に、ワクチンの投与と組み合わせて、又はワクチンの投与後に対象に投与し得る。アジュバントとして使用される化学化合物の例は、アルミニウム化合物、オイル、ブロックポリマー、免疫刺激複合体、ビタミン及びミネラル（例えば、ビタミンＥ、ビタミンＡ、セレニウム、及びビタミンＢ１２）、クイルＡ（サポニン）、細菌及び真菌細胞壁成分（例えば、リポ多糖、リポタンパク質、及び糖タンパク質）、ホルモン、サイトカイン、並びに共刺激因子を含む。
本明細書で使用される場合、用語「抗体」とは、例として及び限定せずに、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ、これらの組合せ、並びに任意の脊椎動物において、例えば、ヒト、ヤギ、ウサギ及びマウスなどの哺乳動物、並びにサメ免疫グロブリンなどの非哺乳動物種において、免疫応答中に産生される類似の分子を含む免疫グロブリン又は免疫グロブリン様分子を集合的に指す。本明細書で使用される場合、「抗体」（無傷の免疫グロブリンを含む）及び「抗原結合断片」は目的の分子（又は目的の高度に類似する分子の群）に特異的に結合し、他の分子（例えば、目的の分子に対して生体試料中の他の分子に対する結合定数の少なくとも１０3Ｍ-1倍、少なくとも１０4Ｍ-1倍、又は少なくとも１０5Ｍ-1倍である結合定数を有する抗体及び抗体断片）への結合は実質的に排除される。用語「抗体」は一般的に、キメラ抗体（例えば、ヒト化マウス抗体）、ヘテロコンジュゲート抗体（例えば、二特異性抗体）などの遺伝子操作された形態も含む。Pierce Catalog and Handbook, 1994-1995 (Pierce Chemical Co., Rockford, Ill.)；Kuby, J., Immunology, 3rd Ed., W.H. Freeman & Co., New York, 1997も参照されたい。
さらに具体的には、抗体とは、抗原のエピトープを特異的に認識し結合する少なくとも軽鎖免疫グロブリン可変領域又は重鎖免疫グロブリン可変領域を含むポリペプチドリガンドのことである。抗体は重鎖及び軽鎖で構成されており、そのそれぞれが可変重（ＶH）領域及び可変軽（ＶL）領域と名付けられた可変領域を有する。併せて、ＶH領域とＶL領域が抗体により認識される抗原への結合を担当している。典型的には、免疫グロブリンは、ジスルフィド結合により互いに連結された重（Ｈ）鎖と軽（Ｌ）鎖を有する。軽鎖には、２種のタイプ、ラムダ（λ）及びカッパ（κ）がある。抗体分子の機能的活性を決定する重鎖の主なクラス（又はアイソタイプ）が５種ある：ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥ。それぞれの重鎖及び軽鎖は、定常領域及び可変領域を含有する（この領域は「ドメイン」としても知られている）。組み合わせて、重鎖可変領域と軽鎖可変領域は抗原に特異的に結合する。軽鎖可変領域及び重鎖可変領域は、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」とも呼ばれる、３種の高頻度可変領域により中断される「フレームワーク」領域を含有する。フレームワーク領域及びＣＤＲの程度は定義されている（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, 1991参照、前記文献はこれにより参照により本明細書に組み込まれる）。Ｋａｂａｔデータベースは現在ではオンラインで維持されている。異なる軽鎖又は重鎖のフレームワーク領域の配列は、種内で比較的保存されている。抗体のフレームワーク領域、即ち、構成物軽鎖及び重鎖の複合フレームワーク領域は、主にβシート立体構造をとり、ＣＤＲは、βシート構造を接続する、場合により、その構造の一部を形成するループを形成する。したがって、フレームワーク領域は、鎖間非共有結合の相互作用によりＣＤＲを適切な配向に位置付けることを提供するスキャフォールドを形成する役目を果たす。
ＣＤＲは主に抗原のエピトープへの結合を担当している。それぞれの鎖のＣＤＲは典型的にはＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と呼ばれ、Ｎ末端から始まって順次番号が付けられており、典型的には特定のＣＤＲが位置している鎖によっても同定される。したがって、ＶH ＣＤＲ３は、それが見出される抗体の重鎖の可変ドメインに位置しており、ＶL ＣＤＲ１は、それが見出される抗体の軽鎖の可変ドメイン由来のＣＤＲ１である。ＣＤ３タンパク質に結合する抗体は、特異的なＶH領域及びＶL領域配列、したがって特異的なＣＤＲ配列を有する。特異性が異なる（即ち、抗原が異なれば異なる結合部位を有する）抗体は有するＣＤＲも異なる。抗体ごとに変化するのはＣＤＲであるが、ＣＤＲ内の限られた数のアミノ酸位だけが抗原結合に直接関与する。ＣＤＲ内のこれらの位置は特異性決定残基（ＳＤＲ）と呼ばれる。本明細書で使用される「免疫グロブリン関連組成物」とは、抗体（例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、組換え抗体、多特異性抗体、二特異性抗体、など）並びに抗体断片のことである。抗体又はその抗原結合断片は抗原に特異的に結合する。
本明細書で使用される場合、用語「抗体関連ポリペプチド」とは、可変領域を単独で、又は以下のポリペプチドエレメント：抗体分子のヒンジ領域、ＣＨ1、ＣＨ2、及びＣＨ3ドメインのすべて若しくは一部と組み合わせて含むことができる抗原結合抗体断片、例えば、単鎖抗体を意味する。可変領域並びにヒンジ領域、ＣＨ1、ＣＨ2、及びＣＨ3ドメインの任意の組合せも本技術に含まれる。本方法において有用である抗体関連分子は、例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）2、Ｆｄ、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、単鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）並びにＶL又はＶHドメインのいずれかを含む断片を含むが、これらに限定されない。例としては：（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶL、ＶH、ＣL及びＣＨ1ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）2断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された２種のＦａｂ断片を含む二価断片；（ｉｉｉ）ＶH及びＣＨ1ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶL及びＶHドメインからなるＦｖ断片；（ｖ）ｄＡｂ断片（Ward et al., Nature 341: 544-546, 1989）で、これはＶHドメインからなる；並びに（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。したがって、「抗体断片」又は「抗原結合断片」は、完全長抗体の部分、一般にはその抗原結合又は可変領域を含むことができる。抗体断片又は抗原結合断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、及びＦｖ断片；ダイアボディ；線形抗体；単鎖抗体分子；並びに抗体断片から形成される多特異性抗体を含む。
「二特異性抗体」又は「ＢｓＡｂ」とは、本明細書で使用される場合、はっきり異なる構造を有する２種の標的、例えば、２種の異なる標的抗原、同じ標的抗原上の２種の異なるエピトープ、又はハプテンと標的抗原若しくは標的抗原上のエピトープに同時に結合することができる抗体のことである。当技術分野では多種多様の異なる二特異性抗体構造が公知である。一部の実施形態では、二特異性抗体中のそれぞれの抗原結合部分は、ＶH及び／又はＶL領域を含み；一部の該実施形態では、ＶH及び／又はＶL領域は特定のモノクローナル抗体に見出される領域である。一部の実施形態では、二特異性抗体は２種の抗原結合部分を含有し、それぞれが異なるモノクローナル抗体由来のＶH及び／又はＶL領域を含む。一部の実施形態では、二特異性抗体は２種の抗原結合部分を含有し、２種の抗原結合部分のうちの１種は、第１のモノクローナル抗体由来のＣＤＲを含有するＶH及び／又はＶL領域を有する免疫グロブリン分子を含み、もう一方の抗原結合部分は、第２のモノクローナル抗体由来のＣＤＲを含有するＶH及び／又はＶL領域を有する抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆｄ、Ｆｖ、ｄＡＢ、ｓｃＦｖ、など）を含む。
本明細書で使用される場合、用語「コンジュゲートされた」とは、当技術分野の当業者に公知である任意の方法による２種の分子の結合のことである。適切なタイプの結合は、化学結合及び物理結合を含む。化学結合は、例えば、共有結合及び配位結合を含む。物理結合は、例えば、水素結合、双極子相互作用、ファンデルワールス力、静電相互作用、疎水性相互作用及び芳香族スタッキングを含む。
本明細書で使用される場合、用語「ダイアボディ」とは、２つの抗原結合部位を有する小抗体断片のことであり、その断片は、同じポリペプチド鎖（ＶH ＶL）において軽鎖可変ドメイン（ＶL）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶH）を含む。同じ鎖上の２種のドメイン間での対合を可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインは別の鎖の相補的ドメインと対合せざるを得なくなり２種の抗原結合部位を作り出す。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４，０９７号；国際公開第９３／１１１６１号；及びHollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6444-6448 (1993)にもっと十分に説明されている。
本明細書で使用される場合、用語「単鎖抗体」又は「単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）」とは、Ｆｖ断片の２種のドメイン、ＶL及びＶHの抗体融合分子のことである。単鎖抗体分子は、いくつかの個々の分子、例えば、二量体、三量体又は他のポリマーを有するポリマーを含み得る。さらに、Ｆｖ断片の２種のドメイン、ＶL及びＶHは別々の遺伝子によりコードされているが、ＶLとＶH領域が対合して一価分子（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる）を形成する単一タンパク質鎖として作られることを可能にする合成リンカーにより、組換え法を使用して、２種のドメインを結合させることができる。Bird et al. (1988) Science 242:423-426 and Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad Sci. USA 85:5879-5883。該単鎖抗体は、組換え技法又は無傷の抗体の酵素的若しくは化学的切断により調製することができる。
上記の抗体断片のいずれでも、当業者に公知である従来技法を使用して得られ、断片は、無傷の抗体と同じ方法で結合特異性及び中和活性についてスクリーニングされる。
本明細書で使用される場合、「抗原」とは、抗体（又はその抗原結合断片）が選択的に結合できる分子のことである。標的抗原は、タンパク質、炭水化物、核酸、脂質、ハプテン、又は他の天然に存在する若しくは合成化合物でもよい。一部の実施形態では、標的抗原は、ポリペプチド（例えば、ＣＤ３ポリペプチド）でもよい。抗原は、動物において免疫応答を生み出すために動物に投与してもよい。
用語「抗原結合断片」とは、抗原への結合を担当するポリペプチドの一部を有する全免疫グロブリン構造の断片のことである。本技術で有用な抗原結合断片の例は、ｓｃＦｖ、（ｓｃＦｖ）2、ｓｃＦｖＦｃ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）2を含むがこれらに限定されない。
「結合親和性」とは、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原又は抗原性ペプチド）の間の全非共有結合の相互作用の強度を意味する。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は一般的には解離定数（ＫD）により表すことができる。親和性は、本明細書に記載される方法を含む、当技術分野で公知の標準法により測定可能である。低親和性複合体は一般に抗原から容易に解離する傾向がある抗体を含有し、高親和性複合体は一般にもっと長い期間抗原に結合したままである傾向のある抗体を含有する。
本明細書で使用される場合、用語「生体試料」とは、生細胞由来の試料物質を意味する。生体試料は、対象から単離された組織、細胞、細胞のタンパク質又は膜抽出物、及び生体液（例えば、腹水液又は脳脊髄液（ＣＳＦ））、並びに対象内に存在する組織、細胞及び体液を含み得る。本技術の生体試料は、胸部組織、腎組織、子宮頸部、子宮内膜、頭部又は頚部、胆嚢、耳下腺組織、前立腺、脳、脳下垂体、肝臓組織、筋肉、食道、胃、小腸、結腸、肝臓、脾臓、膵臓、甲状腺組織、心臓組織、肺組織、膀胱、脂肪組織、リンパ節組織、子宮、卵巣組織、副腎組織、精巣組織、扁桃腺、胸腺、血液、毛髪、頬側、皮膚、血清、血漿、ＣＳＦ、精液、前立腺液、精漿、尿、糞便、汗、唾液、痰、粘液、骨髄、リンパ、及び涙から採取した試料を含むがこれらに限定されない。生体試料は内臓の生検から又はがんから得ることも可能である。生体試料は、診断若しくは研究のために対象から得ることができ、又は対照として非疾患個体から若しくは基礎研究のために得ることができる。試料は、例えば、静脈穿刺及び外科生検を含む標準法により得てもよい。ある特定の実施形態では、生体試料は針生検により得られる組織試料である。
本明細書で使用される場合、用語「ＣＤＲグラフト抗体」とは、「アクセプター」抗体の少なくとも１つのＣＤＲが、望ましい抗原特異性を有する「ドナー」抗体由来のＣＤＲ「グラフト」で置き換えられている抗体を意味する。
本明細書で使用される場合、用語「キメラ抗体」とは、１種の種由来のモノクローナル抗体のＦｃ定常領域（例えば、マウスＦｃ定常領域）が、組換えＤＮＡ技法を使用して、別の種の抗体由来のＦｃ定常領域（例えば、ヒトＦｃ定常領域）で置き換えられている抗体を意味する。一般的には、Robinson et al.、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；Akira et al.、欧州特許出願公開第１８４，１８７号；Taniguchi、欧州特許出願公開第１７１，４９６号；Morrison et al.、欧州特許出願公開第１７３，４９４号；Neuberger et al.、国際公開第８６／０１５３３号；Cabilly et al. 米国特許第４，８１６，５６７号；Cabilly et al.、欧州特許出願公開第０１２５，０２３号；Better et al., Science 240: 1041-1043, 1988；Liu et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 3439-3443, 1987；Liu et al., J. Immunol 139: 3521-3526, 1987；Sun et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 214-218, 1987；Nishimura et al., Cancer Res 47: 999-1005, 1987；Wood et al., Nature 314: 446-449, 1885；and Shaw et al., J. Natl. Cancer Inst. 80: 1553-1559, 1988を参照されたい。
本明細書で使用される場合、用語「コンセンサスＦＲ」とは、コンセンサス免疫グロブリン配列中のフレームワーク（ＦＲ）抗体領域を意味する。抗体のＦＲ領域は抗原に接触しない。
本明細書で使用される場合、用語「対照」は、比較目的で実験において使用される別の試料である。対照は、「陽性」又は「陰性」が可能である。例えば、実験の目的が、特定タイプの疾患に対する処置についての治療剤の有効性の相関を判定することである場合、陽性対照（所望の治療効果を示すことが知られている化合物又は組成物）及び陰性対照（治療を受けない又はプラセボを受ける対象又は試料）が典型的には用いられる。
本明細書で使用される場合、用語「有効量」とは、所望の治療及び／又は予防効果を達成するのに十分な量、例えば、本明細書に記載される疾患若しくは状態或いは本明細書に記載される疾患若しくは状態に関連する１種若しくは複数の徴候若しくは症状の予防又は減少をもたらす量のことである。治療又は予防応用という文脈では、対象に投与される組成物の量は、組成物、疾患の程度、タイプ、及び重症度に並びに健康全般、年齢、性別、体重及び薬物に対する耐性などの個体の特徴に応じて変動する。当業者であれば、これらの及び他の要因に応じて適切な投薬量を決定することができる。組成物は、１種又は複数の追加の治療化合物と組み合わせて投与することもできる。本明細書に記載される方法では、治療組成物は、本明細書に記載される疾患又は状態の１種又は複数の徴候又は症状を有する対象に投与してもよい。本明細書で使用される場合、組成物の「治療有効量」とは、疾患又は状態の生理的影響が寛解される又は除去される組成物レベルのことである。治療有効量は１回又は複数回の投与で与えることが可能である。
本明細書で使用される場合、用語「エフェクター細胞」とは、免疫応答の認識及び活性化相とは対照的に免疫応答のエフェクター相に関与している免疫細胞を意味する。例となる免疫細胞は、骨髄又はリンパ起源の細胞、例えば、リンパ細胞（例えば、Ｂ細胞及び細胞溶解Ｔ細胞（ＣＴＬ）を含むＴ細胞）、キラー細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、単球、好酸球、好中球、多形核細胞、顆粒球、マスト細胞、及び好塩基球を含む。エフェクター細胞は特異的なＦｃ受容体を発現し、特異的な免疫機能を実行する。エフェクター細胞は、抗体依存性細胞媒介性傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することができ、例えば、好中球はＡＤＣＣを誘導できる。例えば、ＦｃαＲを発現する単球、マクロファージ、好中球、好酸球、及びリンパ細胞は、標的細胞の特異的殺傷及び免疫系の他の成分への抗原提示、又は抗原を提示する細胞への結合に関与している。
本明細書で使用される場合、用語「エピトープ」とは、抗体に特異的に結合することができるタンパク質決定基を意味する。エピトープは通常、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面集団からなり、通常は特異的な三次元構造特性並びに特異的な荷電特性を有する。立体構造及び非立体構造エピトープは、前者には結合するが後者には結合しないことが変性溶媒の存在下では失われる点で区別される。一部の実施形態では、ＣＤ３タンパク質の「エピトープ」は、本技術の抗ＣＤ３抗体が特異的に結合するタンパク質の領域である。一部の実施形態では、エピトープは立体構造エピトープ又は非立体構造エピトープである。エピトープに結合する抗ＣＤ３抗体を求めてスクリーニングするため、Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)に記載されているアッセイなどのルーチンなクロスブロッキングアッセイを実施することができる。このアッセイを使用すれば、抗ＣＤ３抗体が本技術の抗ＣＤ３抗体と同じ部位又はエピトープに結合するかどうかを判定できる。代わりに、又はさらに、エピトープマッピングは当技術分野で公知の方法により実施することができる。例えば、抗体配列は、接触残基を特定するために、例えば、アラニンスキャニングにより変異誘発することができる。異なる方法では、ＣＤ３タンパク質の異なる領域に対応するペプチドは、試験抗体との又は試験抗体及び特徴付けられた若しくは既知のエピトープを有する抗体との競合アッセイにおいて使用することができる。
本明細書で使用される場合、「発現」は、以下のもの：前駆体ｍＲＮＡへの遺伝子の転写；成熟ｍＲＮＡを作製するための前駆体ｍＲＮＡのスプライシング及び他のプロセッシング；ｍＲＮＡ安定性；タンパク質への成熟ｍＲＮＡの翻訳（コドン使用頻度及びｔＲＮＡ利用能を含む）；並びにグリコシル化及び／又は適切な発現及び機能に必要な場合には翻訳産物の他の修飾のうちの１種又は複数を含む。
本明細書で使用される場合、用語「遺伝子」とは、プロモーター、エキソン、イントロン、及び発現を制御する他の非翻訳領域を含む、ＲＮＡ産物の調節された生合成のためのあらゆる情報を含有するＤＮＡのセグメントを意味する。
「相同性」又は「同一性」又は「類似性」とは、２種のペプチド間の又は２種の核酸分子間の配列類似性のことである。相同性は、比較目的で整列させ得るそれぞれの配列での位置を比べることにより判定することができる。比較された配列中の位置が同じ塩基又はアミノ酸で占められている場合、分子はその位置で相同である。配列間の相同性の程度は、配列により共有される適合する又は相同な位置の数の関数である。ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド領域（又はポリペプチド若しくはポリペプチド領域）が別の配列に対してある特定の百分率（例えば、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９８％又は９９％）の「配列同一性」を有することは、整列させた場合、塩基（又はアミノ酸）の百分率が２種の配列を比べて同じであることを意味する。この整列及びパーセント相同性又は配列同一性は、当技術分野で公知のソフトウェアプログラムを使用して判定することができる。一部の実施形態では、デフォルトパラメータは整列のために使用される。１つの整列プログラムはＢＬＡＳＴであり、デフォルトパラメータを使用している。特に、プログラムはＢＬＡＳＴＮ及びＢＬＡＳＴＰであり、以下のデフォルトパラメータ：遺伝コード＝標準；フィルター＝なし；ストランド＝両方；カットオフ＝６０；エクスペクト＝１０；マトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；デスクリプション＝５０配列；により分類する＝ハイスコア；データベース＝非重複、ジェンバンク＋ＥＭＢＬ＋ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ジェンバンクＣＤＳ翻訳＋ＳｗｉｓｓＰｒｏｔｅｉｎ＋ＳＰｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲを使用する。これらのプログラムの詳細は、米国国立生物工学情報センターで見出せる。生物学的に等価なポリヌクレオチドは、特定のパーセント相同性を有し同じ又は類似する生物活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチドである。２種の配列が、互いに４０％未満の同一性、又は２５％未満の同一性を共有する場合には、これらは「無関係」又は「非相同性」と見なされる。
本明細書で使用される場合、非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」型は、非ヒト免疫グロブリン由来の最小配列を含有するキメラ抗体である。大部分は、ヒト化抗体は、レシピエントの高頻度可変領域残基が所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）由来の高頻度可変領域残基で置き換えられているヒト免疫グロブリンである。一部の実施形態では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基は対応する非ヒト残基で置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見出されない残基を含んでもよい。これらの改変は、結合親和性などの抗体性能をさらに洗練させるために行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１種、典型的には２種の可変ドメイン（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、又はＦｖ）の実質的にすべてを含み、そこでは高頻度可変ループのすべて又は実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンの高頻度可変ループに対応しておりＦＲ領域のすべて又は実質的にすべてがヒト免疫グロブリンコンセンサスＦＲ配列のＦＲ領域であるが、ＦＲ領域は結合親和性を改善する１種又は複数のアミノ酸置換を含み得る。ＦＲにおけるこれらアミノ酸置換の数は典型的には、Ｈ鎖では６以下、Ｌ鎖では３以下である。ヒト化抗体は任意に、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部も含み得る。さらなる詳細については、Jones et al., Nature 321:522-525 (1986)；Reichmann et al., Nature 332:323-329 (1988)、及びPresta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)を参照されたい。例えば、Ahmed & Cheung, FEBS Letters 588(2):288-297 (2014)を参照されたい。
本明細書で使用される場合、用語「高頻度可変領域」とは、抗原結合を担当している抗体のアミノ酸残基のことである。高頻度可変領域は一般に、「相補性決定領域」若しくは「ＣＤＲ」由来のアミノ酸残基（例えば、ＶLではおよそ残基２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）及び８９～９７（Ｌ３）、ＶHではおよそ３１～３５Ｂ（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）及び９５～１０２（Ｈ３）(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)）及び／又は「高頻度可変ループ」由来のアミノ酸残基（例えば、ＶLでは残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）及び９１～９６（Ｌ３）、ＶHでは２６～３２（Ｈ１）、５２Ａ～５５（Ｈ２）及び９６～１０１（Ｈ３）（Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）を含む。
本明細書で使用される場合、２種以上の核酸又はポリペプチド配列という文脈で使用される場合、用語「同一の」又はパーセント「同一性」とは、以下に記載されるデフォルトパラメータを有するＢＬＡＳＴ若しくはＢＬＡＳＴ２．０配列比較アルゴリズムを使用して又は手動アライメント及び目視検査（例えば、ＮＣＢＩウェブサイト）により測定した比較窓又は指定された領域にわたって比較し最大一致に整列させた場合、同じである又は同じである特定の百分率（即ち、特定の領域（本明細書に記載される抗体をコードするヌクレオチド配列又は本明細書に記載される抗体のアミノ酸配列）にわたって約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれよりも高い同一性）のアミノ酸若しくはヌクレオチドを有する２つ以上の配列又は部分配列のことである。該配列は次に「実質的に同一」であると言われる。この用語は、試験配列の相補体のことでもあり、これに適用することができる。この用語は、欠失及び／又は付加を有する配列、並びに置換を有する配列も含む。一部の実施形態では、少なくとも約２５個のアミノ酸若しくはヌクレオチド長、又は５０～１００個のアミノ酸若しくはヌクレオチド長である領域にわたって同一性が存在する。
本明細書で使用される場合、用語「無傷の抗体」又は「無傷の免疫グロブリン」とは、ジスルフィド結合により相互に連結された少なくとも２種の重（Ｈ）鎖ポリペプチド及び２種の軽（Ｌ）鎖ポリペプチドを有する抗体を意味する。それぞれの重鎖は重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲ又はＶHと略記される）及び重鎖定常領域からなる。重鎖定常領域は３種のドメイン、ＣＨ1、ＣＨ2及びＣＨ3からなる。それぞれの軽鎖は軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲ又はＶLと略記される）及び軽鎖定常領域からなる。軽鎖定常領域は１つのドメイン、ＣLからなる。ＶH及びＶL領域は、もっと多く保存されフレームワーク領域（ＦＲ）と名付けられた領域で分散された、相補性決定領域（ＣＤＲ）と名付けられた高頻度可変性の領域にさらに細区分することができる。それぞれのＶH及びＶLは、３種のＣＤＲ及び４種のＦＲで構成されており、アミノ末端からカルボキシル末端まで以下の順：ＦＲ1、ＣＤＲ1、ＦＲ2、ＣＤＲ2、ＦＲ3、ＣＤＲ3、ＦＲ4で配置されている。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）及び古典的な相補系の第１の成分（Ｃｌｑ）を含む宿主組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介することができる。
本明細書で使用される場合、用語「個体」、「患者」、又は「対象」は個々の生物、脊椎動物、哺乳動物、又はヒトであり得る。一部の実施形態では、個体、患者又は対象はヒトである。
本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体のことであり、即ち、その集団を構成する個々の抗体は、少量存在する場合がある考えられる天然に存在する変異を除いて同一である。例えば、モノクローナル抗体は、任意の真核、原核、又はファージクローンを含む単一クローン由来である抗体であり得、モノクローナル抗体を産生する方法由来ではない。モノクローナル抗体組成物は特定のエピトープに対して単一結合特異性及び親和性を示す。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一抗原部位に向けられている。さらに、典型的には、異なる決定基（エピトープ）に向けられた異なる抗体を含む従来の（ポリクローナル）抗体調製物とは対照的に、それぞれのモノクローナル抗体は抗原上の単一の決定基に向けられる。修飾語の「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集団から得られる抗体の特徴を示しており、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきではない。モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ、組換え、及びファージディスプレイ技術を含むがこれらに限定されない当技術分野で公知の多種多様な技法を使用して調製することができる。例えば、本方法に従って使用されるモノクローナル抗体は、Kohler et al., Nature 256:495 (1975)により最初に記載されたハイブリドーマ法により作成してもよく、又は組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号参照）により作成してもよい。「モノクローナル抗体」は、例えば、Clackson et al., Nature 352:624-628 (1991)及びMarks et al., J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991)に記載された技法を使用してファージ抗体ライブラリーから単離してもよい。
本明細書で使用される場合、用語「薬学的に許容される担体」は、薬剤投与に適合するありとあらゆる溶剤、分散媒、コーティング、抗菌及び抗真菌化合物、等張及び吸収遅延化合物、並びに同類のものを含むことが意図されている。薬学的に許容される担体及びその製剤化は当業者には公知であり、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences (20th edition, ed. A. Gennaro, 2000, Lippincott, Williams & Wilkins, Philadelphia, Pa.)に記載されている。
本明細書で使用される場合、用語「ポリクローナル抗体」とは、少なくとも２種（２）の異なる抗体産生細胞系由来の抗体の調製物を意味する。この用語の使用は、抗原の異なるエピトープ又は領域に特異的に結合する抗体を含有する少なくとも２種（２）の抗体の調製物を含む。
本明細書で使用される場合、用語「ポリヌクレオチド」又は「核酸」とは、任意のＲＮＡ又はＤＮＡを意味し、これらは非改変若しくは改変ＲＮＡ又はＤＮＡでもよい。ポリヌクレオチドは、単鎖及び二本鎖ＤＮＡ、単鎖と二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、単鎖及び二本鎖ＲＮＡ、単鎖と二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、並びに単鎖又は、もっと典型的には二本鎖若しくは単鎖と二本鎖領域の混合物でもよいＤＮＡ及びＲＮＡを含むハイブリッド分子を含むが、これらに限定されない。さらに、ポリヌクレオチドとは、ＲＮＡ若しくはＤＮＡ又はＲＮＡとＤＮＡの両方を含む三本鎖領域のことである。用語ポリヌクレオチドは、１種又は複数の改変塩基を含有するＤＮＡ又はＲＮＡ及び安定性のため若しくは他の理由で改変された骨格を持つＤＮＡ又はＲＮＡも含む。
本明細書で使用される場合、用語「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は本明細書では互換的に使用されて、ペプチド結合又は改変されたペプチド結合、即ち、ペプチドアイソスターにより互いに結合された２種以上のアミノ酸を含むポリマーを意味する。ポリペプチドは、通常ペプチド、糖ペプチド又はオリゴマーと呼ばれる短い鎖と一般にタンパク質と呼ばれるもっと長い鎖の両方のことである。ポリペプチドは２０個の遺伝子コードアミノ酸以外のアミノ酸を含有し得る。ポリペプチドは、翻訳後プロセシングなどの天然の作用、又は当技術分野では周知である化学的改変技法のいずれかにより改変されたアミノ酸配列を含む。該改変は、基本テキストに及びもっと詳細な研究論文に、並びに夥しい研究文献に十分に説明されている。
本明細書で使用される場合、用語「組換え」とは、例えば、細胞、又は核酸、タンパク質、若しくはベクターに関連して使用される場合、細胞、核酸、タンパク質、又はベクターが異種核酸若しくはタンパク質の導入又は天然の核酸若しくはタンパク質の変更により改変されていること、又は材料がそのようにして改変された細胞由来であることを示している。したがって、例えば、組換え細胞は、細胞の天然（非組換え）型内では見出されない遺伝子を発現する又は他の方法で異常に発現されている、低発現されている若しくは全く発現されない天然の遺伝子を発現する。
本明細書で使用される場合、用語「別々の」治療用途とは、少なくとも２種の活性成分の異なる経路による同時の又は実質的に同時の投与のことである。
本明細書で使用される場合、用語「逐次」治療用途とは、少なくとも２種の活性成分の異なる時間での投与のことであり、投与経路は同一である又は異なっている。さらに具体的には、逐次用途とは、もう一方の又は他の活性成分の投与が始まる前の活性成分のうちの１つの全投与のことである。したがって、もう一方の活性成分（単数又は複数）を投与する前に数分、数時間、又は数日にわたって活性成分のうちの１つを投与することが可能である。この場合には同時処置はない。
本明細書で使用される場合、「特異的に結合する」とは、ある分子（例えば、抗体又はその抗原結合断片）がもう１つの分子（例えば、抗原）を認識し結合するが、他の分子は実質的に認識も結合もしない、分子のことである。特定の分子（例えば、ポリペプチド、又はポリペプチド上のエピトープ）への「特異的結合」、「に特異的に結合する」又は「に特異的である」という用語は、本明細書で使用される場合、例えば、それが結合する分子に対して約１０-4Ｍ、約１０-5Ｍ、約１０-6Ｍ、約１０-7Ｍ、約１０-8Ｍ、約１０-9Ｍ、約１０-10Ｍ、約１０-11Ｍ、又は約１０-12ＭのＫDを有する分子により示すことができる。用語「特異的に結合する」とは、分子（例えば、抗体又はその抗原結合断片）が、他のいかなるポリペプチド、又はポリペプチドエピトープにも実質的に結合せずに、特定のポリペプチド（例えば、ＣＤ３ポリペプチド）又は特定のポリペプチド上のエピトープに結合する場合の結合のことでもよい。
本明細書で使用される場合、用語「同時」治療用途とは、少なくとも２種の活性成分の同じ経路による同じ時間での又は実質的に同じ時間での投与のことである。
本明細書で使用される場合、用語「治療剤」とは、有効量で存在する場合、それを必要とする対象に対して所望の治療効果を生じる化合物を意味することが意図されている。
本明細書で使用される場合、「処置する（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」又は「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、ヒトなどの対象における本明細書に記載される疾患又は障害の処置を網羅し、（ｉ）疾患若しくは障害を阻害する、即ち、その発症を停止する；（ｉｉ）疾患若しくは障害を軽減する、即ち、障害の後退を引き起こす；（ｉｉｉ）障害の進行を遅くする；及び／又は（ｉｖ）疾患若しくは障害の１種若しくは複数の症状の進行を阻害する、軽減する、若しくは遅くすることを含む。一部の実施形態では、処置は、疾患に関連する症状を、例えば、軽減する、減少させる、治癒する、又は寛解の状態に置くことを意味する。
本明細書に記載される障害の種々の処置様式は、「実質的な」を意味することが意図されており、この用語は全処置であるが全処置未満も含み、一部の生物学的又は医学的関連結果が達成されることも認識するべきである。処置は、慢性疾患に対する連続長期処置又は急性状態の処置に対する単回若しくは数回投与でもよい。
本明細書に記載される抗ＣＤ３抗体のアミノ酸配列改変が企図されている。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善するのが望ましい場合がある。抗ＣＤ３抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体核酸中に適切なヌクレオチド変化を導入することにより、又はペプチド合成により調製される。該改変は、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又は抗体のアミノ酸配列内の残基中への挿入及び／又は抗体のアミノ酸配列内の残基の置換を含む。欠失、挿入、及び置換の任意の組合せは、得られた抗体が所望の特性を有する限り目的の抗体を得るために行われる。改変は、タンパク質のグリコシル化パターンの変化も含む。置換的変異誘発のための最も大きな目的の部位は、高頻度可変領域を含むが、ＦＲ変更も企図されている。「保存的置換は」下の表に示されている。
Figure 2023523584000002
置換バリアントの１タイプは、親抗体の１種又は複数の高頻度可変領域残基を置換することを含む。該置換バリアントを作製するための便利な方法は、ファージディスプレイを使用する親和性成熟を含む。具体的には、いくつかの高頻度可変領域部位（例えば、６～７部位）を変異させてそれぞれの部位で考えられるあらゆるアミノ酸置換を作り出す。このようにして作り出された抗体バリアントは、それぞれの粒子内にパッケージングされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物への融合物として糸状ファージ粒子から一価型で表示される。次に、ファージ表示されたバリアントは、本明細書に開示されるその生物活性（例えば、結合親和性）を求めてスクリーニングされる。改変のための候補高頻度可変領域部位を同定するため、アラニンスキャニング変異誘発を実施して、抗原結合に有意に寄与する高頻度可変領域残基を同定することができる。代わりに、又はさらに、抗原－抗体複合体の結晶構造を分析して抗体と抗原の間の接触点を同定するのは有益であり得る。該接触残基及び隣接する残基は、本明細書で詳しく述べられた技法に従った置換の候補である。該バリアントが作製されると、バリアントのパネルは本明細書に記載されるスクリーニングにかけられ、１種又は複数の関連アッセイにおける類似する又は優れた特性を有する抗体をさらなる開発のために選択し得る。
本技術の免疫グロブリン関連組成物
本技術は、抗ＣＤ３免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗ＣＤ３抗体又はその抗原結合断片）の産生及び使用のための方法並びに組成物を記載している。本開示の抗ＣＤ３免疫グロブリン関連組成物は、ＣＤ３関連病態の診断、又は処置に有用である可能性がある。本技術の範囲内の抗ＣＤ３免疫グロブリン関連組成物は、例えば、標的ポリペプチド、その相同体、誘導体又は断片に特異的に結合するモノクローナル、キメラ、ヒト化、二特異性抗体及びダイアボディを含むがこれらに限定されない。本開示は、本明細書で開示される抗ＣＤ３抗体のいずれかの抗原結合断片も提供し、抗原結合断片はＦａｂ、Ｆ（ａｂ）’２、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、及びＦｖからなる群から選択される。一態様では、本技術は、多特異性免疫グロブリン関連組成物（例えば、二特異性抗体剤）を含む、テプリズマブのキメラ及び再ヒト化バリアントを提供する。ＩＭＧＴアノテーションシステムに基づくヒト化ＣＤ３抗体のＶH及びＶLのＣＤＲは下にまとめられている。
Figure 2023523584000003
一態様では、本開示は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶH）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶL）を含み、（ａ）ＶHは、ＧＹＴＦＴＲＹＴのＶHＣＤＲ１配列（配列番号２）、ＩＮＰＳＲＧＹＴのＶHＣＤＲ２配列（配列番号３）、及びＡＲＹＹＤＤＨＹＣＬＤＹ（配列番号４）、ＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＤＹ（配列番号６）、ＡＲＹＹＤＤＨＹＳＣＤＹ（配列番号１３４）、ＡＲＹＹＤＤＨＣＳＬＤＹ（配列番号１３５）、若しくはＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＣＹ（配列番号１３６）のＶHＣＤＲ３配列を含み、並びに／又は、（ｂ）ＶLは、ＳＳＶＳＹのＶLＣＤＲ１配列（配列番号１２）、ＤＴのＶLＣＤＲ２配列（配列番号１３）、及びＱＱＷＳＳＮＰＦＴのＶLＣＤＲ３配列（配列番号１４）を含む、抗体又はその抗原結合断片を提供する。
一態様では、本開示は、重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶH）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶL）を含み、（ａ）ＶHは、配列番号５、７、８、９、１０、若しくは４３～６１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、並びに／又は（ｂ）ＶLは、配列番号１５～２０若しくは６２～９１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、抗体又はその抗原結合断片を提供する。
上記実施形態のいずれかにおいて、抗体は、例えば、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含む）、ＩｇＡ（ＩｇＡ1及びＩｇＡ2を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、又はＩｇＭ、及びＩｇＹであるが、これらに限定されない任意のアイソタイプのＦｃドメインをさらに含む。定常領域配列の非限定的な例として、下記が挙げられる。
ヒトＩｇＤ定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８８０（配列番号２５）
ＡＰＴＫＡＰＤＶＦＰＩＩＳＧＣＲＨＰＫＤＮＳＰＶＶＬＡＣＬＩＴＧＹＨＰＴＳＶＴＶＴＷＹＭＧＴＱＳＱＰＱＲＴＦＰＥＩＱＲＲＤＳＹＹＭＴＳＳＱＬＳＴＰＬＱＱＷＲＱＧＥＹＫＣＶＶＱＨＴＡＳＫＳＫＫＥＩＦＲＷＰＥＳＰＫＡＱＡＳＳＶＰＴＡＱＰＱＡＥＧＳＬＡＫＡＴＴＡＰＡＴＴＲＮＴＧＲＧＧＥＥＫＫＫＥＫＥＫＥＥＱＥＥＲＥＴＫＴＰＥＣＰＳＨＴＱＰＬＧＶＹＬＬＴＰＡＶＱＤＬＷＬＲＤＫＡＴＦＴＣＦＶＶＧＳＤＬＫＤＡＨＬＴＷＥＶＡＧＫＶＰＴＧＧＶＥＥＧＬＬＥＲＨＳＮＧＳＱＳＱＨＳＲＬＴＬＰＲＳＬＷＮＡＧＴＳＶＴＣＴＬＮＨＰＳＬＰＰＱＲＬＭＡＬＲＥＰＡＡＱＡＰＶＫＬＳＬＮＬＬＡＳＳＤＰＰＥＡＡＳＷＬＬＣＥＶＳＧＦＳＰＰＮＩＬＬＭＷＬＥＤＱＲＥＶＮＴＳＧＦＡＰＡＲＰＰＰＱＰＧＳＴＴＦＷＡＷＳＶＬＲＶＰＡＰＰＳＰＱＰＡＴＹＴＣＶＶＳＨＥＤＳＲＴＬＬＮＡＳＲＳＬＥＶＳＹＶＴＤＨＧＰＭＫ
ヒトＩｇＧ１定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８５７（配列番号２６）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ヒトＩｇＧ２定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８５９（配列番号２７）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＳＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ヒトＩｇＧ３定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８６０（配列番号２８）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＴＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＬＫＴＰＬＧＤＴＴＨＴＣＰＲＣＰＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＥＰＫＳＣＤＴＰＰＰＣＰＲＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＫＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＳＧＱＰＥＮＮＹＮＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＩＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＲＦＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
ヒトＩｇＭ定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８７１（配列番号２９）
ＧＳＡＳＡＰＴＬＦＰＬＶＳＣＥＮＳＰＳＤＴＳＳＶＡＶＧＣＬＡＱＤＦＬＰＤＳＩＴＬＳＷＫＹＫＮＮＳＤＩＳＳＴＲＧＦＰＳＶＬＲＧＧＫＹＡＡＴＳＱＶＬＬＰＳＫＤＶＭＱＧＴＤＥＨＶＶＣＫＶＱＨＰＮＧＮＫＥＫＮＶＰＬＰＶＩＡＥＬＰＰＫＶＳＶＦＶＰＰＲＤＧＦＦＧＮＰＲＫＳＫＬＩＣＱＡＴＧＦＳＰＲＱＩＱＶＳＷＬＲＥＧＫＱＶＧＳＧＶＴＴＤＱＶＱＡＥＡＫＥＳＧＰＴＴＹＫＶＴＳＴＬＴＩＫＥＳＤＷＬＧＱＳＭＦＴＣＲＶＤＨＲＧＬＴＦＱＱＮＡＳＳＭＣＶＰＤＱＤＴＡＩＲＶＦＡＩＰＰＳＦＡＳＩＦＬＴＫＳＴＫＬＴＣＬＶＴＤＬＴＴＹＤＳＶＴＩＳＷＴＲＱＮＧＥＡＶＫＴＨＴＮＩＳＥＳＨＰＮＡＴＦＳＡＶＧＥＡＳＩＣＥＤＤＷＮＳＧＥＲＦＴＣＴＶＴＨＴＤＬＰＳＰＬＫＱＴＩＳＲＰＫＧＶＡＬＨＲＰＤＶＹＬＬＰＰＡＲＥＱＬＮＬＲＥＳＡＴＩＴＣＬＶＴＧＦＳＰＡＤＶＦＶＱＷＭＱＲＧＱＰＬＳＰＥＫＹＶＴＳＡＰＭＰＥＰＱＡＰＧＲＹＦＡＨＳＩＬＴＶＳＥＥＥＷＮＴＧＥＴＹＴＣＶＡＨＥＡＬＰＮＲＶＴＥＲＴＶＤＫＳＴＧＫＰＴＬＹＮＶＳＬＶＭＳＤＴＡＧＴＣＹ
ヒトＩｇＧ４定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８６１（配列番号３０）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ
ヒトＩｇＡ１定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８７６（配列番号３１）
ＡＳＰＴＳＰＫＶＦＰＬＳＬＣＳＴＱＰＤＧＮＶＶＩＡＣＬＶＱＧＦＦＰＱＥＰＬＳＶＴＷＳＥＳＧＱＧＶＴＡＲＮＦＰＰＳＱＤＡＳＧＤＬＹＴＴＳＳＱＬＴＬＰＡＴＱＣＬＡＧＫＳＶＴＣＨＶＫＨＹＴＮＰＳＱＤＶＴＶＰＣＰＶＰＳＴＰＰＴＰＳＰＳＴＰＰＴＰＳＰＳＣＣＨＰＲＬＳＬＨＲＰＡＬＥＤＬＬＬＧＳＥＡＮＬＴＣＴＬＴＧＬＲＤＡＳＧＶＴＦＴＷＴＰＳＳＧＫＳＡＶＱＧＰＰＥＲＤＬＣＧＣＹＳＶＳＳＶＬＰＧＣＡＥＰＷＮＨＧＫＴＦＴＣＴＡＡＹＰＥＳＫＴＰＬＴＡＴＬＳＫＳＧＮＴＦＲＰＥＶＨＬＬＰＰＰＳＥＥＬＡＬＮＥＬＶＴＬＴＣＬＡＲＧＦＳＰＫＤＶＬＶＲＷＬＱＧＳＱＥＬＰＲＥＫＹＬＴＷＡＳＲＱＥＰＳＱＧＴＴＴＦＡＶＴＳＩＬＲＶＡＡＥＤＷＫＫＧＤＴＦＳＣＭＶＧＨＥＡＬＰＬＡＦＴＱＫＴＩＤＲＬＡＧＫＰＴＨＶＮＶＳＶＶＭＡＥＶＤＧＴＣＹ
ヒトＩｇＡ２定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８７７（配列番号３２）
ＡＳＰＴＳＰＫＶＦＰＬＳＬＤＳＴＰＱＤＧＮＶＶＶＡＣＬＶＱＧＦＦＰＱＥＰＬＳＶＴＷＳＥＳＧＱＮＶＴＡＲＮＦＰＰＳＱＤＡＳＧＤＬＹＴＴＳＳＱＬＴＬＰＡＴＱＣＰＤＧＫＳＶＴＣＨＶＫＨＹＴＮＰＳＱＤＶＴＶＰＣＰＶＰＰＰＰＰＣＣＨＰＲＬＳＬＨＲＰＡＬＥＤＬＬＬＧＳＥＡＮＬＴＣＴＬＴＧＬＲＤＡＳＧＡＴＦＴＷＴＰＳＳＧＫＳＡＶＱＧＰＰＥＲＤＬＣＧＣＹＳＶＳＳＶＬＰＧＣＡＱＰＷＮＨＧＥＴＦＴＣＴＡＡＨＰＥＬＫＴＰＬＴＡＮＩＴＫＳＧＮＴＦＲＰＥＶＨＬＬＰＰＰＳＥＥＬＡＬＮＥＬＶＴＬＴＣＬＡＲＧＦＳＰＫＤＶＬＶＲＷＬＱＧＳＱＥＬＰＲＥＫＹＬＴＷＡＳＲＱＥＰＳＱＧＴＴＴＦＡＶＴＳＩＬＲＶＡＡＥＤＷＫＫＧＤＴＦＳＣＭＶＧＨＥＡＬＰＬＡＦＴＱＫＴＩＤＲＭＡＧＫＰＴＨＶＮＶＳＶＶＭＡＥＶＤＧＴＣＹ
ヒトＩｇカッパ定常領域、Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１８３４（配列番号３３）
ＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
一部の実施形態では、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、配列番号２５～３２に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％同一であるか、又は１００％同一である重鎖定常領域を含む。さらに、又は或いは、一部の実施形態では、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、配列番号３３に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％同一であるか、又は１００％同一である軽鎖定常領域を含む。
一部の実施形態では、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、ＣＤ３ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する。ある特定の実施形態では、エピトープは立体構造エピトープ又は非立体構造エピトープである。一部の実施形態では、ＣＤ３ポリペプチドは配列番号４２のアミノ酸配列を有する。
ＮＣＢＩ Ｒｅｆ： ＮＰ＿０００７２４．１ ホモサピエンス（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３エプシロン鎖前駆体（配列番号４２）。
ＭＱＳＧＴＨＷＲＶＬＧＬＣＬＬＳＶＧＶＷＧＱＤＧＮＥＥＭＧＧＩＴＱＴＰＹＫＶＳＩＳＧＴＴＶＩＬＴＣＰＱＹＰＧＳＥＩＬＷＱＨＮＤＫＮＩＧＧＤＥＤＤＫＮＩＧＳＤＥＤＨＬＳＬＫＥＦＳＥＬＥＱＳＧＹＹＶＣＹＰＲＧＳＫＰＥＤＡＮＦＹＬＹＬＲＡＲＶＣＥＮＣＭＥＭＤＶＭＳＶＡＴＩＶＩＶＤＩＣＩＴＧＧＬＬＬＬＶＹＹＷＳＫＮＲＫＡＫＡＫＰＶＴＲＧＡＧＡＧＧＲＱＲＧＱＮＫＥＲＰＰＰＶＰＮＰＤＹＥＰＩＲＫＧＱＲＤＬＹＳＧＬＮＱＲＲＩ
さらに、又は或いは、一部の実施形態では、抗体又は抗原結合断片はＣＤ３ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する。ある特定の実施形態では、細胞外ドメインは、Ｆ～Ｇループ上の線形ストレッチの配列を含むＣＤ３εサブユニットを含む。一部の実施形態では、ＣＤ３εサブユニットは、３種の不連続領域：残基７９ε～８５ε（Ｆ～Ｇループ）、残基３４ε（βＣ鎖の第１の残基）、並びに残基４６ε及び４８ε（Ｃ’～Ｄループ）を含んでもよい。
別の態様では、本開示は、配列番号２３、配列番号９６、配列番号１００、配列番号１０４、配列番号１０８、配列番号１１２、配列番号１１６、配列番号１２６、配列番号１３２、配列番号１３７、配列番号１３９を含む重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列、又は１種若しくは複数の保存的アミノ酸置換を有するそのバリアントを含む単離された免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体又はその抗原結合断片）を提供する。さらに又は代わりに、一部の実施形態では、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、配列番号２１、配列番号９２、配列番号９４、配列番号９８、配列番号１０２、配列番号１０６、配列番号１１０、配列番号１１４、配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２８、配列番号１３０を含む軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列、又は１種若しくは複数の保存的アミノ酸置換を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、それぞれ配列番号２３及び配列番号２１、配列番号２３及び配列番号９２、配列番号９６及び配列番号９４、配列番号１００及び配列番号９８、配列番号１０４及び配列番号１０２、配列番号１０８及び配列番号１０６、配列番号１１２及び配列番号１１０、並びに配列番号１１６及び配列番号１１４からなる群から選択されるＨＣアミノ酸配列及びＬＣアミノ酸配列を含む。さらに、又は或いは、一部の実施形態では、免疫グロブリン関連組成物は、それぞれ配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２６、及び配列番号１３７、並びに配列番号１２８、配列番号１３０、配列番号１３２、及び配列番号１３９からなる群から選択される第１のＬＣアミノ酸配列、第２のＬＣアミノ酸配列、第１のＨＣアミノ酸配列、及び第２のＨＣアミノ酸配列を含む。
免疫グロブリン関連組成物の上記実施形態のいずれかにおいて、ＨＣ及びＬＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列は、ＣＤ３ポリペプチドの細胞外ドメインに結合する抗原結合部位を形成する。ある特定の実施形態では、細胞外ドメインは、Ｆ～Ｇループ上の線形ストレッチの配列を含むＣＤ３εサブユニットを含む。一部の実施形態では、ＣＤ３εサブユニットは、３種の不連続領域：残基７９ε～８５ε（Ｆ～Ｇループ）、残基３４ε（βＣ鎖の第１の残基）、並びに残基４６ε及び４８ε（Ｃ’～Ｄループ）を含んでもよい。一部の実施形態では、エピトープは、コンホメーションエピトープ又は非コンホメーションエピトープである。
一部の実施形態では、ＨＣ及びＬＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列は、同じポリペプチド鎖の構成成分である。他の実施形態では、ＨＣ及びＬＣ免疫グロブリン可変ドメイン配列は、異なるポリペプチド鎖の構成成分である。ある特定の実施形態では、抗体は、完全長抗体である。
一部の実施形態では、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、少なくとも１種のＣＤ３ポリペプチドに特異的に結合する。一部の実施形態では、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、約１０-3Ｍ、１０-4Ｍ、１０-5Ｍ、１０-6Ｍ、１０-7Ｍ、１０-8Ｍ、１０-9Ｍ、１０-10Ｍ、１０-11Ｍ、又は１０-12Ｍの解離定数（ＫD）で、少なくとも１種のＣＤ３ポリペプチドを結合する。ある特定の実施形態では、免疫グロブリン関連組成物は、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二特異性抗体、又は多特異性抗体である。一部の実施形態では、抗体は、ヒト抗体フレームワーク領域を含む。
ある特定の実施形態では、免疫グロブリン関連組成物は、下記の特徴：（ａ）配列番号１５～２０、若しくは６２～９１のいずれか１つの軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９９％同一である軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列、及び／又は（ｂ）配列番号５、７、８、９、１０、若しくは４３～６１のいずれか１つの重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９９％同一である重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列の１つ又は複数を含む。別の態様では、本明細書中で提供される免疫グロブリン関連組成物中の１つ又は複数のアミノ酸残基は、別のアミノ酸で置換される。置換は、本明細書中で定義されるような「保存的置換」であり得る。
一態様では、本開示は、配列番号１１８～１２１から選択されるアミノ酸配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含む免疫グロブリン関連組成物を提供する。
別の態様では、本開示は、（ａ）配列番号２１、配列番号９２、配列番号９４、配列番号９８、配列番号１０２、配列番号１０６、配列番号１１０、配列番号１１４、配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２８、配列番号１３０に存在するＬＣ配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９９％同一であるＬＣ配列、及び／又は（ｂ）配列番号２３、配列番号９６、配列番号１００、配列番号１０４、配列番号１０８、配列番号１１２、配列番号１１６、配列番号１２６、配列番号１３２、配列番号１３７、若しくは配列番号１３９に存在するＨＣ配列に少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、若しくは少なくとも９９％同一であるＨＣ配列を含む抗体を提供する。
さらに、又は或いは、一部の実施形態では、本開示の多特異性抗体は、ＣＤ３、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＤ２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、Ｎ－アセチルグルコサミントランスフェラーゼ、ｐ１５、ｇｐ７５、ベータ－カテニン、ＥｒｂＢ２、がん抗原１２５（ＣＡ－１２５）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、ＲＡＧＥ、ＭＡＲＴ（メラノーマ抗原）、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２、ＭＵＣ－３、ＭＵＣ－４、ＭＵＣ－５ａｃ、ＭＵＣ－１６、ＭＵＣ－１７、チロシナーゼ、Ｐｍｅｌ １７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ－ＶイントロンＶ配列（Ｎ－アセチルグルコサミントランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺がんｐｓｍ、ＰＲＡＭＥ（メラノーマ抗原）、β－カテニン、ＥＢＮＡ（エプスタインバーウイルス核内抗原）１－６、ＬＭＰ２、ｐ５３、肺抵抗タンパク質（ＬＲＰ）、Ｂｃｌ－２、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、Ｋｉ－６７、ＣＥＡＣＡＭ６、結腸特異抗原－ｐ（ＣＳＡｐ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦ、インスリン様成長因子（ＩＬＧＦ）、テネイシン、血小板由来成長因子、ＩＬ－６、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＭＥＴ、ＤＬＬ４、Ａｎｇ－２、ＨＥＲ３、ＩＧＦ－１Ｒ、ＣＤ３０、ＴＡＧ－７２、ＳＰＥＡＰ、ＣＤ４５、Ｌ１－ＣＡＭ、ルイスＹ（Ｌｅy）抗原、Ｅ－カドヘリン、Ｖ－カドヘリン、ＧＰＣ３、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ８０、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１２３、ＴＣＲガンマ／デルタ、ＮＫｐ４６、ＫＩＲ、ＣＤ５６、ＤＬＬ３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ９９、グロボＨ、ＣＤ２４、ＳＴＥＡＰ１、Ｂ７Ｈ３、ポリシアル酸、ＯＸ４０、ＯＸ４０－リガンド、ペプチドＭＨＣ複合体（ＴＰ５３、ＫＲＡＳ、ＭＹＣ、ＥＢＮＡ１－６、ＰＲＡＭＥ、ＭＡＲＴ、チロシナーゼ、ＭＡＧＥＡ１－Ａ６、ｐｍｅｌ１７、ＬＭＰ２、又はＷＴ１由来のペプチドを有する）、又は小分子ＤＯＴＡハプテンに結合する。
一態様では、本開示は、第１のペプチド鎖を含む多特異性抗原結合断片であって、該第１のペプチド鎖が、Ｎ末端方向からＣ末端方向へ：（ｉ）第１のエピトープに特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと、（ｉｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含む可動性ペプチドリンカーと、（ｉｉｉ）該第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと、（ｉｖ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）4を含む可動性ペプチドリンカーと、（ｖ）第２のエピトープに特異的に結合することができる第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと、（ｖｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6とを含む可動性ペプチドリンカーと、（ｖｉｉ）該第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと、（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＴＰＬＧＤＴＴＨＴを含む可動性ペプチドリンカー配列と、（ｉｘ）自己集合分解（ＳＡＤＡ）ポリペプチドとを含み、該第１の免疫グロブリンの該重鎖可変ドメイン若しくは該第２の免疫グロブリンの該重鎖可変ドメインが、配列番号５、７、８、９、１０、若しくは４３～６１のいずれか１つから選択され、及び／又は該第１の免疫グロブリンの該軽鎖可変ドメイン若しくは該第２の免疫グロブリンの該軽鎖可変ドメインが、配列番号１５～２０若しくは６２～９１のいずれか１つから選択される、多特異性抗原結合断片を提供する。
別の態様では、本開示は、第１のペプチド鎖を含む多特異性抗原結合断片であって、該第１のペプチド鎖が、Ｎ末端方向からＣ末端方向へ：（ｉ）第１のエピトープに特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと、（ｉｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含む可動性ペプチドリンカーと、（ｉｉｉ）該第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと、（ｉｖ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）4を含む可動性ペプチドリンカーと、（ｖ）第２のエピトープに特異的に結合することができる第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと、（ｖｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含む可動性ペプチドリンカーと、（ｖｉｉ）該第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと、（ｖｉｉｉ）アミノ酸配列ＴＰＬＧＤＴＴＨＴを含む可動性ペプチドリンカー配列と、（ｉｘ）自己集合分解（ＳＡＤＡ）ポリペプチドとを含み、該第１の免疫グロブリンの該重鎖可変ドメイン若しくは該第２の免疫グロブリンの該重鎖可変ドメインが、配列番号５、７、８、９、１０、若しくは４３～６１のいずれか１つから選択され、及び／又は該第１の免疫グロブリンの該軽鎖可変ドメイン若しくは該第２の免疫グロブリンの該軽鎖可変ドメインが、配列番号１５～２０若しくは６２～９１のいずれか１つから選択される、多特異性抗原結合断片を提供する。
本明細書中に開示される二特異性抗原結合断片のある特定の実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは、四量体化、五量体化、又は六量体化ドメインを含む。一部の実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは、ｐ５３、ｐ６３、ｐ７３、ｈｎＲＮＰＣ、ＳＮＡ－２３、Ｓｔｅｆｉｎ Ｂ、ＫＣＮＱ４、又はＣＢＦＡ２Ｔ１のいずれか１つの四量体ドメインを含む。さらに、又は或いは、一部の実施形態では、二特異性抗原結合断片は、配列番号１１８～１２１から選択されるアミノ酸配列を含む。
一態様では、本開示は、第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖を含み、該第１のポリペプチド鎖及び該第２のポリペプチド鎖が、互いに共有結合されており、該第２のポリペプチド鎖及び該第３のポリペプチド鎖が、互いに共有結合されており、該第３のポリペプチド鎖及び該第４のポリペプチド鎖が、互いに共有結合されており、（ａ）該第１のポリペプチド鎖及び該第４のポリペプチド鎖がそれぞれ、Ｎ末端方向からＣ末端方向へ：（ｉ）第１のエピトープに特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと、（ｉｉ）該第１の免疫グロブリンの軽鎖定常ドメインと、（ｉｉｉ）アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）3を含む可動性ペプチドリンカーと、（ｉｖ）第２の免疫グロブリンの相補的重鎖可変ドメインに連結されている第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン、又は第２の免疫グロブリンの相補的軽鎖可変ドメインに連結されている第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインであって、該第２の免疫グロブリンの該軽鎖及び該重鎖可変ドメインが、第２のエピトープに特異的に結合可能であり、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含む可動性ペプチドリンカーにより互いに連結されて、単鎖可変断片を形成する、第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン又は重鎖可変ドメインとを含み、（ｂ）該第２のポリペプチド鎖及び該第３のポリペプチド鎖がそれぞれ、Ｎ末端方向からＣ末端方向へ：（ｉ）第１のエピトープに特異的に結合することができる第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと、（ｉｉ）該第１の免疫グロブリンの重鎖定常ドメインとを含み該第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン又は該第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインが配列番号５、７、８、９、１０、若しくは４３～６１のいずれか１つから選択され、及び／又は第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン若しくは第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインが、配列番号１５～２０若しくは６２～９１のいずれか１つから選択される、多特異性抗体を提供する。
ある特定の実施形態では、免疫グロブリン関連組成物は、Ｎ２９７Ａ及びＫ３２２Ａからなる群から選択される１種又は複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１定常領域を含有する。さらに、又は或いは、一部の実施形態では、免疫グロブリン関連組成物は、Ｓ２２８Ｐ変異を含むＩｇＧ４定常領域を含有する。
一部の態様では、本明細書中に記載される抗ＣＤ３免疫グロブリン関連組成物は、迅速な結合及び細胞取込みを促進し、及び／又は放出を減速させるように構造的修飾を含有する。一部の態様では、本技術の抗ＣＤ３免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体）は、迅速な結合及び細胞取込みを促進し、及び／又は放出を減速させるように、ＣＨ２定常重鎖領域において欠失を含有し得る。一部の態様では、Ｆａｂ断片は、迅速な結合及び細胞取込みを促進し、及び／又は放出を減速させるのに使用される。一部の態様では、Ｆ（ａｂ）’2断片は、迅速な結合及び細胞取込みを促進し、及び／又は放出を減速させるのに使用される。
一態様では、本技術は、本明細書中に記載される免疫グロブリン関連組成物のいずれかをコードする核酸配列を提供する。また、本明細書中に記載される抗体のいずれかをコードする組換え核酸配列が、本明細書中に開示されている。一部の実施形態では、核酸配列は、配列番号２２、２４、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３８、及び１４０からなる群から選択される。
別の態様では、本技術は、本明細書中に記載される免疫グロブリン関連組成物のいずれかをコードする任意の核酸配列を発現する宿主細胞を提供する。
本技術の免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗ＣＤ３抗体）は、単一特異性、二特異性、三特異性であり得るか、又はより大きな多特異性であり得る。多特異性抗体は、１つ若しくは複数のＣＤ３ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であり得るか、又はＣＤ３ポリペプチド並びに異種ポリペプチドなどの異種組成物又は固体支持体物質の両方に特異的であり得る。例えば、国際公開第９３／１７７１５号、同第９２／０８８０２号、同第９１／００３６０号、同第９２／０５７９３号、Tutt et al., J. Immunol. 147: 60-69(1991)、米国特許第５，５７３，９２０号、同第４，４７４，８９３号、同第５，６０１，８１９号、同第４，７１４，６８１号、同第４，９２５，６４８号、同第６，１０６，８３５号、Kostelny et al., J. Immunol. 148: 1547-1553 (1992)を参照のこと。一部の実施形態では、免疫グロブリン関連組成物は、キメラである。ある特定の実施形態では、免疫グロブリン関連組成物は、ヒト化されている。
本技術の免疫グロブリン関連組成物はさらに、Ｎ末端若しくはＣ末端で異種ポリペプチドに組換え的に融合され得るか、又はポリペプチド若しくは他の組成物に化学的にコンジュゲートされ得る（共有結合的及び非共有結合的コンジュゲーションを含む）。例えば、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、検出アッセイにおいて標識として有用な分子及び異種ポリペプチド、薬物、又は毒素等のエフェクター分子に、組換え的に融合され得るか、又はコンジュゲートされ得る。例えば、国際公開第９２／０８４９５号、同第９１／１４４３８号、同第８９／１２６２４号、米国特許第５，３１４，９９５号及び欧州特許第０ ３９６ ３８７号を参照のこと。
本技術の免疫グロブリン関連組成物の上記実施形態のいずれかにおいて、抗体又は抗原結合断片は、同位体、色素、色素原（ｃｈｒｏｍａｇｅｎｓ）、造影剤、薬物、毒素、サイトカイン、酵素、酵素阻害剤、ホルモン、ホルモン拮抗薬、増殖因子、放射性核種、金属、リポソーム、ナノ粒子、ＲＮＡ、ＤＮＡ又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される作用物質にコンジュゲートされてもよい。化学的結合又は物理的結合に関して、免疫グロブリン関連組成物上の官能基は通常、作用物質上の官能基と結合する。或いは、作用物質上の官能基は、免疫グロブリン関連組成物上の官能基と結合する。
作用物質及び免疫グロブリン関連組成物上の官能基は、直接結合し得る。例えば、作用物質上の官能基（例えば、スルフヒドリル基）は、免疫グロブリン関連組成物上の官能基（例えば、スルフヒドリル基）と結合して、ジスルフィドを形成し得る。或いは、官能基は、架橋剤（即ち、リンカー）を通じて結合し得る。架橋剤のいくつかの例を以下に記載する。クロスリンカーは、作用物質又は免疫グロブリン関連組成物のいずれかに結合され得る。コンジュゲートにおける作用物質又は免疫グロブリン関連組成物の数はまた、他方上に存在する官能基の数によって限定される。例えば、コンジュゲートと結合される作用物質の最大数は、免疫グロブリン関連組成物上に存在する官能基の数に依存する。或いは、作用物質と結合される免疫グロブリン関連組成物の最大数は、作用物質上に存在する官能基の数に依存する。
さらに別の実施形態では、コンジュゲートは、１種の作用物質に結合された１種の免疫グロブリン関連組成物を含む。一実施形態では、コンジュゲートは、少なくとも１種の免疫グロブリン関連組成物に化学的に結合された（例えば、コンジュゲートされた）少なくとも１種の作用物質を含む。作用物質は、当業者に公知の任意の方法によって、免疫グロブリン関連組成物に化学的に結合され得る。例えば、作用物質上の官能基は、免疫グロブリン関連組成物上の官能基に直接結合され得る。適切な官能基のいくつかの例として、アミノ、カルボキシル、スルフヒドリル、マレイミド、イソシアネート、イソチオシアネート及びヒドロキシルが挙げられる。
作用物質はまた、ジアルデヒド、カルボジイミド、ジマレイミド等の架橋剤を用いて、免疫グロブリン関連組成物に化学的に結合され得る。架橋剤は、例えば、Pierce Biotechnology社、ロックフォード、イリノイ州から入手され得る。Pierce Biotechnology社のウェブサイトは、助力を提供し得る。さらなる架橋剤として、Kreatech Biotechnology, B.V.社、アムステルダム、オランダの米国特許第５，５８０，９９０号、同第５，９８５，５６６号、及び同第６，１３３，０３８号に記載される白金架橋剤が挙げられる。
或いは、作用物質及び免疫グロブリン関連組成物上の官能基は、同じであり得る。ホモ二官能性クロスリンカーは通常、同一の官能基を架橋するのに使用される。ホモ二官能性クロスリンカーの例として、ＥＧＳ（即ち、エチレングリコールビス［スクシンイミジルスクシネート］）、ＤＳＳ（即ち、ジスクシンイミジルスベレート）、ＤＭＡ（即ち、ジメチルアジピミデート．２ＨＣｌ）、ＤＴＳＳＰ（即ち、３，３’－ジチオビス［スルホスクシンイミジルプロピオネート］）、ＤＰＤＰＢ（即ち、１，４－ジ－［３’－（２’－ピリジルジチオ）－プロピオンアミド］ブタン）、及びＢＭＨ（即ち、ビス－マレイミドヘキサン）が挙げられる。かかるホモ二官能性クロスリンカーはまた、Pierce Biotechnology社から入手可能である。
他の例では、作用物質を、免疫グロブリン関連組成物から切断することは有益であり得る。上述したPierce Biotechnology社のウェブサイトはまた、例えば、細胞中の酵素によって切断され得る適切なクロスリンカーを選択する際に、当業者に助力を提供し得る。したがって、作用物質は、免疫グロブリン関連組成物から分離され得る。切断可能なリンカーの例として、ＳＭＰＴ（即ち、４－スクシンイミジルオキシカルボニル－メチル－ａ－［２－ピリジルジチオ］トルエン）、スルホーＬＣ－ＳＰＤＰ（即ち、６－（３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミド）ヘキサン酸スルホスクシンイミジル）、ＬＣ－ＳＰＤＰ（即ち、６－（３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミド）ヘキサン酸スクシンイミジル）、スルホーＬＣ－ＳＰＤＰ（即ち、６－（３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミド）ヘキサン酸スルホスクシンイミジル）、ＳＰＤＰ（即ち、３－［２－ピリジルジチオ］－プロピオンアミドヘキサン酸Ｎ－スクシンイミジル）、及びＡＥＤＰ（即ち、３－［２－アミノエチル）ジチオ］プロピオン酸ＨＣｌ）が挙げられる。
別の実施形態では、コンジュゲートは、少なくとも１種の免疫グロブリン関連組成物と物理的に結合された少なくとも１種の作用物質を含む。当業者に公知の任意の方法を用いて、作用物質を免疫グロブリン関連組成物と物理的に結合し得る。例えば、免疫グロブリン関連組成物及び作用物質は、当業者に公知の任意の方法によって一緒に結合され得る。混合の順序は、重要でない。例えば、作用物質は、当業者に公知の任意の方法によって、免疫グロブリン関連組成物と物理的に混合され得る。例えば、免疫グロブリン関連組成物及び作用物質は、容器中に入れられて、例えば、容器を振盪することによって攪拌されて、免疫グロブリン関連組成物及び作用物質を混合することができる。
免疫グロブリン関連組成物は、当業者に公知の任意の方法によって修飾され得る。例えば、免疫グロブリン関連組成物は、上述されるように、架橋剤又は官能基を用いて修飾され得る。
Ａ．本技術の抗ＣＤ３抗体を調製する方法
総括。初めに、本技術の抗体を産生することができる標的ポリペプチドを選択する。例えば、抗体は、完全長ＣＤ３タンパク質に対して、又はＣＤ３タンパク質の細胞外ドメインの一部に対して産生されてもよい。該標的ポリペプチドに向けられる抗体を産生するための技法は当業者には周知である。該技法の例は、例えば、ディスプレイライブラリー、ゼノ又はヒトマウス、ハイブリドーマに関連する技法、及び同類のものを含むがこれらに限定されない。本技術の範囲内の標的ポリペプチドは、免疫応答を誘発可能な細胞外ドメインを含有するＣＤ３タンパク質由来の任意のポリペプチドを含む。ある特定の実施形態では、細胞外ドメインは、Ｆ～Ｇループ上の線形ストレッチの配列を含むＣＤ３εサブユニットを含む。一部の実施形態では、ＣＤ３εサブユニットは、３種の不連続領域：残基７９ε～８５ε（Ｆ～Ｇループ）、残基３４ε（βＣ鎖の第１の残基）、並びに残基４６ε及び４８ε（Ｃ’～Ｄループ）を含んでもよい。
ＣＤ３タンパク質及びその断片に向けられる組換え的に操作された抗体及び抗体断片、例えば、抗体関連ポリペプチドは、本開示に従って使用するのに適していることは理解するべきである。
本明細書に示される技法を受けることができる抗ＣＤ３抗体は、モノクローナル及びポリクローナル抗体、並びにＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆｄ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、抗体軽鎖、抗体重鎖及び／又は抗体断片などの抗体断片を含む。抗体Ｆｖ含有ポリペプチド、例えば、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）2抗体断片の高収率産生に有用な方法は記載されており、米国特許第５，６４８，２３７号を参照されたい。
一般的に、抗体は始発種（ｏｒｉｇｉｎａｔｉｎｇ ｓｐｅｃｉｅｓ）から得られる。さらに詳細には、標的ポリペプチド抗原に対する特異性を有する始発種抗体の軽鎖、重鎖又は両方の可変部分の核酸又はアミノ酸配列が得られる。始発種は、本技術の抗体又は抗体のライブラリーを産生するのに有用であった任意の種、例えば、ラット、マウス、ウサギ、ニワトリ、サル、ヒト、及び同類のものである。
ファージ又はファージミドディスプレイ技術は、本技術の抗体を導き出すのに有用な技法である。モノクローナル抗体を産生しクローニングするための技法は当業者には周知である。本技術の抗体をコードする配列の発現は大腸菌において実行することができる。
核酸コード配列の縮重のせいで、天然に存在するタンパク質のアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列をコードする他の配列を本技術の実行で使用し得る。これらの配列には、上記ポリペプチドをコードする核酸配列のすべて又は部分を含む核酸配列を含むがこれらに限定されず、この核酸配列は配列内の機能的に等価なアミノ酸残基をコードする異なるコドンの置換により変更され、したがって、サイレント変化を生じる。本技術に従った免疫グロブリンのヌクレオチド配列は、標準法（“Current Methods in Sequence Comparison and Analysis,” Macromolecule Sequencing and Synthesis, Selected Methods and Applications, pp. 127-149, 1998, Alan R. Liss, Inc.）により計算した場合２５％までの配列相同性変動を、該バリアントがＣＤ３タンパク質を認識する有効な抗体を形成する限り許容することは認識されている。例えば、ポリペプチド配列内の１種又は複数のアミノ酸残基は、機能的等価物としての役目を果たす類似する極性の別のアミノ酸により置換し、サイレント変更をもたらすことができる。配列内のアミノ酸の代替物は、そのアミノ酸が属するクラスの他のメンバーから選択し得る。例えば、非極性（疎水性）アミノ酸は、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン及びメチオニンを含む。極性中性アミノ酸は、グリシン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、及びグルタミンを含む。正電荷（塩基性）アミノ酸はアルギニン、リジン及びヒスチジンを含む。負電荷（酸性）アミノ酸はアスパラギン酸及びグルタミン酸を含む。例えば、グリコシル化、タンパク質切断、抗体分子又は他の細胞リガンドへの連鎖、などにより、翻訳の間又はその後差示的に改変されるタンパク質又はその断片若しくは誘導体も本技術の範囲内に含まれる。さらに、免疫グロブリンコード核酸配列をｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏで変異させれば、翻訳配列、開始配列、及び／若しくは終結配列を作り出す及び／若しくは破壊する又はコード領域に変動を作り出す及び／若しくは新たな制限エンドヌクレアーゼ部位を形成する若しくは前から存在する制限エンドヌクレアーゼ部位を破壊して、さらなるｉｎ ｖｉｔｒｏ改変を促進することができる。ｉｎ ｖｉｔｒｏ部位特異的変異誘発、J. Biol. Chem. 253:6551、Ｔａｂリンカー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の使用、及び同類のものを含むがこれらに限定されない当技術分野で公知の変異誘発のための任意の技法を使用することができる。
ポリクローナル抗血清及び免疫原の調製。本技術の抗体又は抗体断片を作製する方法は典型的には、精製したＣＤ３タンパク質若しくはその断片で又はＣＤ３タンパク質若しくはその断片を発現する細胞で対象（一般的には、マウス又はウサギなどの非ヒト対象）を免疫化することを含む。適切な免疫原性調製物は、例えば、組換え的に発現されたＣＤ３タンパク質又は化学的に合成されたＣＤ３ペプチドを含有することができる。ＣＤ３タンパク質の細胞外ドメイン、又はその一部若しくは断片を免疫原として使用すれば、ポリクローナル及びモノクローナル抗体調製のための標準技法を使用してＣＤ３タンパク質、又はその一部若しくは断片に結合する抗ＣＤ３抗体を産生することができる。ある特定の実施形態では、細胞外ドメインは、Ｆ～Ｇループ上の線形ストレッチの配列を含むＣＤ３εサブユニットを含む。一部の実施形態では、ＣＤ３εサブユニットは、３種の不連続領域：残基７９ε～８５ε（Ｆ～Ｇループ）、残基３４ε（βＣ鎖の第１の残基）、並びに残基４６ε及び４８ε（Ｃ’～Ｄループ）を含んでもよい。完全長ＣＤ３タンパク質又はその断片は、免疫原としての断片として有用である。一部の実施形態では、ＣＤ３断片は、ペプチドに対して産生された抗体がＣＤ３タンパク質と特異的な免疫複合体を形成するように、ＣＤ３タンパク質の細胞外ドメイン、又はその一部若しくは断片（例えば、３種の不連続領域：残基７９ε～８５ε（Ｆ～Ｇループ）、残基３４ε（βＣ鎖の第１の残基）、並びに残基４６ε及び４８ε（Ｃ’～Ｄループ）を含むＣＤ３εサブユニットを含むＣＤ３ポリペプチド）を含む。一部の実施形態では、抗原性ＣＤ３ペプチドは、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、又は少なくとも１００個のアミノ酸残基を含む。使用次第で及び当業者には周知である方法に従って、長いほうの抗原性ペプチドのほうが短いほうの抗原性ペプチドよりも望ましい場合がある。所与のエピトープの多量体のほうが単量体よりも効果的である場合がある。
必要な場合には、ＣＤ３タンパク質（又はその断片）の免疫原性は、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）又は卵白アルブミン（ＯＶＡ）などの担体タンパク質への融合又はコンジュゲーションにより増やすことができる。多くの該担体タンパク質が当技術分野で公知である。ＣＤ３タンパク質をフロイント完全又は不完全アジュバントなどの従来のアジュバントと結合させると、ポリペプチドに対する対象の免疫反応を増やすこともできる。免疫応答を増やすために使用される種々のアジュバントは、フロイント（完全及び不完全）、ミネラルゲル（例えば、水酸化アルミニウム）、界面活性物質（例えば、リゾレシチン、プルロニック（登録商標）ポリオール、ポリアニオン、ペプチド、油乳剤、ジニトロフェノール、など）、カルメットゲラン桿菌及びコリネバクテリウム・パルバム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ）などのヒトアジュバント又は類似の免疫賦活性化合物を含むがこれらに限定されない。これらの技法は当技術分野では標準である。
本技術を説明する際、免疫応答は「一次」又は「二次」免疫応答と見なし得る。一次免疫応答は、「防御」免疫応答とも見なされ、特定の抗原、例えば、ＣＤ３タンパク質への一部の最初の暴露（例えば、最初の「免疫化」）の結果として個体において引き起こされる免疫応答のことである。一部の実施形態では、免疫化は、抗原を含有するワクチンを個体に接種する結果として起こることができる。例えば、ワクチンは、１種又は複数のＣＤ３タンパク質由来抗原を含むＣＤ３ワクチンが可能である。一次免疫応答は、経時的に弱くなる又は弱毒化することがあり、消失さえする又は少なくとも弱毒化して検出できなくなることがある。したがって、本技術は、「二次」免疫応答にも関しており、この応答はここでは「記憶免疫応答」とも見なされる。用語二次免疫応答とは、一次免疫応答がすでに引き起こされた後で個体において誘発される免疫応答のことである。
したがって、二次免疫応答を誘発すれば、例えば、弱くなった又は弱毒化した既存の免疫応答を増強する、又は消失してしまった又はもはや検出できない以前の免疫応答を再生することができる。二次又は記憶免疫応答は体液性（抗体）応答又は細胞応答が可能である。二次又は記憶体液性応答は、抗原の最初の提示時に発生された記憶Ｂ細胞が賦活化されると起こる。遅延型過敏（ＤＴＨ）反応は、ＣＤ４+Ｔ細胞により媒介される一種の細胞二次又は記憶免疫応答である。抗原への最初の暴露により免疫系が刺激され、追加の暴露によりＤＴＨが生じる。
適切な免疫化に続いて、抗ＣＤ３抗体を対象の血清から調製することができる。必要ならば、ＣＤ３タンパク質に向けられた抗体分子は、哺乳動物から（例えば、血液から）単離し、ポリペプチドＡクロマトグラフィーなどの周知の技法によりさらに精製してＩｇＧ画分を得ることができる。
モノクローナル抗体。本技術の一実施形態では、抗体は抗ＣＤ３モノクローナル抗体である。例えば、一部の実施形態では、抗ＣＤ３モノクローナル抗体は、ヒト又はマウス抗ＣＤ３モノクローナル抗体であり得る。ＣＤ３タンパク質に向けられたモノクローナル抗体、又はその誘導体、断片、類似体若しくは相同体の調製では、連続細胞系培養による抗体分子の産生を提供するいかなる技法でも利用することができる。該技法は、ハイブリドーマ技法（例えば、Kohler & Milstein, 1975. Nature 256: 495-497参照）；トリオーマ技法；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技法（例えば、Kozbor, et al., 1983. Immunol. Today 4: 72参照）及びヒトモノクローナル抗体を産生するためのＥＢＶハイブリドーマ技法（例えば、Cole, et al., 1985. In: MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96参照）を含むがこれらに限定されない。ヒトモノクローナル抗体は本技術の実行に利用することができ、ヒトハイブリドーマを使用することにより（例えば、Cote, et al., 1983. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80: 2026-2030参照）又はヒトＢ細胞をエプスタインバーウイルスを用いてｉｎ ｖｉｔｒｏで形質転換することにより（例えば、Cole, et al., 1985. In: MONOCLONAL ANTIBODIES AND CANCER THERAPY, Alan R. Liss, Inc., pp. 77-96参照）産生することが可能である。例えば、抗体の領域をコードする核酸の集団は単離することができる。抗体の保存された領域をコードする配列由来のプライマーを利用するＰＣＲを使用して、集団から抗体の部分をコードする配列を増幅させ、次に可変ドメインなどの抗体又はその断片をコードするＤＮＡを増幅された配列から再構築させる。該増幅された配列は、ファージ又は細菌上での融合ポリぺプチドの発現及びディスプレイのために、他のタンパク質、例えば、バクテリオファージコート、又は細菌細胞表面タンパク質をコードするＤＮＡに融合させることができる。次に、増幅された配列は、発現させ、例えば、ＣＤ３タンパク質上に存在する抗原又はエピトープに対する発現された抗体又はその断片の親和性に基づいてさらに選択する又は単離することができる。代わりに、抗ＣＤ３モノクローナル抗体を発現するハイブリドーマは、対象を免疫化し次にルーチンな方法を使用して対象の脾臓からハイブリドーマを単離することにより調製可能である。例えば、Milstein et al., (Galfre and Milstein, Methods Enzymol (1981) 73: 3-46)を参照されたい。標準法を使用してハイブリドーマをスクリーニングすれば、変動する特異性（即ち、異なるエピトープに対して）及び親和性のモノクローナル抗体が産生される。所望の特性、例えば、ＣＤ３結合を有する選択されたモノクローナル抗体は、ハイブリドーマにより発現されると使用することができ、この抗体はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの分子に結合させるとその特性を変更することができる、又はこの抗体をコードするｃＤＮＡは単離し、配列決定し、種々のやり方で操作することができる。合成デンドリマー樹を反応性アミノ酸側鎖、例えば、リジンに付加すれば、ＣＤ３タンパク質の免疫原特性を増強することができる。その上、ＣＰＧ－ジヌクレオチド技法を使用すれば、ＣＤ３タンパク質の免疫原特性を増強することができる。他の操作は、貯蔵中又は対象への投与後の抗体の不安定性の一因となる特定のアミノアシル残基を置換する又は欠失させること、及びＣＤ３タンパク質の抗体の親和性を改良する親和性成熟技法を含む。
ハイブリドーマ技法。一部の実施形態では、本技術の抗体は、ハイブリドーマにより産生される抗ＣＤ３モノクローナル抗体であり、このハイブリドーマは、不死化細胞に融合されたヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウスから得られるＢ細胞を含む。ハイブリドーマ技法は、当技術分野では公知であり、Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY, 349 (1988)；Hammerling et al., Monoclonal Antibodies And T-Cell Hybridomas, 563-681 (1981)において教唆される技法を含む。ハイブリドーマ及びモノクローナル抗体を作製するための方法は当業者には周知である。
ファージディスプレイ技法。上記の通り、本技術の抗体は、組換えＤＮＡ及びファージディスプレイ技術の適用を通じて産生することができる。例えば、抗ＣＤ３抗体は、当技術分野で公知の種々のファージディスプレイ法を使用して調製することができる。ファージディスプレイ法では、機能的抗体ドメインは、そのドメインをコードするポリヌクレオチド配列を保有するファージ粒子の表面に表示される。所望の結合特性を有するファージは、抗原、典型的には固体表面又はビーズに結合している又はこれに捕捉された抗原を用いて直接選択することによりレパートリー又はコンビナトリアル抗体ライブラリー（例えば、ヒト又はマウス）から選択される。これらの方法で使用されるファージは典型的には、Ｆａｂ、Ｆｖ又はファージ遺伝子ＩＩＩ若しくは遺伝子ＶＩＩＩタンパク質に組換え的に融合されているジスルフィド安定化されたＦｖ抗体ドメインを有するｆｄ及びＭ１３を含む糸状ファージである。さらに、方法を、Ｆａｂ発現ライブラリーの構築用に適合させれば（例えば、Huse, et al., Science 246: 1275-1281, 1989参照）、ＣＤ３ポリペプチド、例えば、ポリペプチド又はその誘導体、断片、類似体若しくは相同体、に対して所望の特異性を有するモノクローナルＦａｂ断片の迅速で効果的な同定が可能になる。本技術の抗体を作製するために使用することができるファージディスプレイ法の他の例は、Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A., 85: 5879-5883, 1988；Chaudhary et al., Proc. Natl. Acad. Sci U.S.A., 87: 1066-1070, 1990；Brinkman et al., J. Immunol. Methods 182: 41-50, 1995；Ames et al., J. Immunol. Methods 184: 177-186, 1995；Kettleborough et al., Eur. J. Immunol. 24: 952-958, 1994；Persic et al., Gene 187: 9-18, 1997；Burton et al., Advances in Immunology 57: 191-280, 1994；国際出願ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４；国際公開第９０／０２８０９号；国際公開第９１／１０７３７号；国際公開第９２／０１０４７号；国際公開第９２／１８６１９号；国際公開第９３／１１２３６号；国際公開第９５／１５９８２号；国際公開第９５／２０４０１号；国際公開第９６／０６２１３号；国際公開第９２／０１０４７号 (Medical Research Council et al.)；国際公開第９７／０８３２０号（Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ）；国際公開第９２／０１０４７号（ＣＡＴ／ＭＲＣ）；国際公開第９１／１７２７１号（Ａｆｆｙｍａｘ）；並びに米国特許第５，６９８，４２６号、米国特許第５，２２３，４０９号、米国特許第５，４０３，４８４号、米国特許第５，５８０，７１７号、米国特許第５，４２７，９０８号、米国特許第５，７５０，７５３号、米国特許第５，８２１，０４７号、米国特許第５，５７１，６９８号、米国特許第５，４２７，９０８号、米国特許第５，５１６，６３７号、米国特許第５，７８０，２２５号、米国特許第５，６５８，７２７号及び米国特許第５，７３３，７４３号に開示される方法を含む。ジスルフィド結合を経て結合させることによりバクテリオファージ粒子の表面にポリペプチドを表示するのに有用な方法は、Ｌｏｈｎｉｎｇにより米国特許第６，７５３，１３６号に記載されている。上の参考文献に記載されているように、ファージ選択後、ファージ由来の抗体コード領域を単離して、ヒト抗体を含む全抗体又は任意の他の所望の抗原結合断片を作製するのに使用し、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、及び細菌を含む任意の所望の宿主において発現させることができる。例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’及びＦ（ａｂ’）2断片を組換え的に産生するための技法は、国際公開第９２／２２３２４号；Mullinax et al., BioTechniques 12: 864-869, 1992；及びSawai et al., AJRI 34: 26-34, 1995；及びBetter et al., Science 240: 1041-1043, 1988に開示される方法などの当技術分野で公知の方法を使用して用いることもできる。
一般的に、ディスプレイベクター中にクローニングされるハイブリッド抗体又はハイブリッド抗体断片は、抗体又は抗体断片がファージ又はファージミド粒子の表面に存在するので、良好な結合活性を維持するバリアントを特定するために適切な抗原に対して選択することができる。例えば、Barbas III et al., Phage Display, A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 2001)を参照されたい。しかし、選択及び／又はスクリーニングのために抗体断片ライブラリーを溶菌ファージベクター（改変されたＴ７又はラムダＺａｐシステム）中にクローニングするなどの他のベクターフォーマットをこのプロセス用に使用することもできると考えられる。
組換え抗ＣＤ３抗体の発現。上記の通り、本技術の抗体は、組換えＤＮＡ技術の適用を通じて産生することができる。本技術の抗ＣＤ３抗体をコードする組換えポリヌクレオチド構築物は典型的には、天然に会合している又は異種プロモーター領域を含む、抗ＣＤ３抗体鎖のコード配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む。したがって、本技術の別の態様は、本技術の抗ＣＤ３抗体をコードする１種又は複数の核酸配列を含有するベクターを含む。本技術のポリペプチドのうちの１種又は複数の組換え発現では、抗ＣＤ３抗体をコードするヌクレオチド配列のすべて又は一部を含有する核酸は、当技術分野では周知であり下で詳述される組換えＤＮＡ技法により、適切なクローニングベクター、又は発現ベクター（即ち、挿入されたポリペプチドコード配列の転写及び翻訳に必要なエレメントを含有するベクター）中に挿入される。ベクターの多様な集団を作製するための方法は、Lerner et al.米国特許第６，２９１，１６０号及び米国特許第６，６８０，１９２号により記載されている。
一般に、組換えＤＮＡ技法に有用である発現ベクターは多くの場合プラスミドの形をしている。本開示では、「プラスミド」及び「ベクター」は、ベクターが最も一般的に使用される形のベクターなので互換的に使用することができる。しかし、本技術は、ウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）などの専門的にはプラスミドではない該他の発現ベクター型を含むことが意図されており、これらの発現ベクターは等価な機能を果たす。該ウイルスベクターは、対象への感染及びその対象における構築物の発現を可能にする。一部の実施形態では、発現制御配列は、真核宿主細胞を形質転換する又はトランスフェクトすることができるベクターにおける真核プロモーター系である。ベクターが適切な宿主に組み込まれた後、宿主は、抗ＣＤ３抗体をコードするヌクレオチド配列の高レベル発現、並びに抗ＣＤ３抗体、例えば、交差反応性抗ＣＤ３抗体の収集及び精製に適した条件下で維持される。一般的には、米国特許出願公開第２００２／０１９９２１３号を参照されたい。これらの発現ベクターは典型的には、宿主染色体ＤＮＡのエピソームとして又は不可欠な部分として宿主生物において複製可能である。通常、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換された細胞の検出を可能にする選択マーカー、例えば、アンピシリン耐性又はハイドロマイシン耐性を含有する。ベクターは、細胞外抗体断片の分泌を指示するのに有用であるシグナルペプチド、例えば、ペクチン酸リアーゼもコードすることができる。米国特許第５，５７６，１９５号を参照されたい。
本技術の組換え発現ベクターは、宿主細胞での核酸の発現に適した形でＣＤ３結合特性を有するタンパク質をコードする核酸を含み、これは組換え発現ベクターが、発現用に使用される宿主細胞に基づいて選択され発現される核酸配列に作動可能に連結されている１種又は複数の調節配列を含むことを意味する。組換え発現ベクター内では、「作動可能に連結された」とは、目的のヌクレオチド配列が、ヌクレオチド配列の発現を可能にする様式で（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ転写／翻訳系において又はベクターが宿主細胞内に導入されている場合の宿主細胞において）調節配列に連結されることを意味するよう意図されている。用語「調節配列」とは、プロモーター、エンハンサー及び他の発現制御エレメント（例えば、ポリアデニル化シグナル）を含むことが意図されている。該調節配列は、例えば、Goeddel, GENE EXPRESSION TECHNOLOGY: METHODS IN ENZYMOLOGY 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990)に記載されている。調節配列は、多くのタイプの宿主細胞でのヌクレオチド配列の構成的発現を指示する配列及びある特定の宿主細胞でのみヌクレオチド配列の発現を指示する配列（例えば、組織特異的調節配列）を含む。発現ベクターの設計は、形質転換される宿主細胞の選択、所望のポリペプチドの発現レベル、などの要因に依拠できることは当業者に認識されている。組換えポリペプチド発現（例えば、抗ＣＤ３抗体）のプロモーターとして有用である典型的な調節配列は、例えば、３－ホスホグリセリン酸キナーゼ及び他の解糖酵素のプロモーターを含むがこれらに限定されない。誘導性酵母プロモーターは、とりわけ、アルコールデヒドロゲナーゼ、アイソシトクロームＣ（ｉｓｏｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ Ｃ）、並びにマルトース及びガラクトース利用を担当する酵素由来のプロモーターを含む。一実施形態では、本技術の抗ＣＤ３抗体をコードするポリヌクレオチドは、ａｒａ Ｂプロモーターに作動可能に連結されており宿主細胞において発現可能である。米国特許第５，０２８，５３０号を参照されたい。本技術の発現ベクターは、宿主細胞中に導入され、それによって、本明細書に記載される核酸によりコードされる、融合ポリペプチドを含む、ポリペプチド又はペプチド（例えば、抗ＣＤ３抗体、など）を産生することができる。
本技術の別の態様は、抗ＣＤ３抗体発現宿主細胞に関しており、この宿主細胞は１種又は複数の抗ＣＤ３抗体をコードする核酸を含有する。本技術の組換え発現ベクターは、原核又は真核細胞における抗ＣＤ３抗体の発現用に設計することが可能である。例えば、抗ＣＤ３抗体は、大腸菌などの細菌細胞、昆虫細胞（バキュロウイルス発現ベクターを使用する）、真菌細胞、例えば、酵母、酵母細胞又は哺乳動物細胞で発現させることができる。適切な宿主細胞は、Goeddel, GENE EXPRESSION TECHNOLOGY: METHODS IN ENZYMOLOGY 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990)でさらに考察されている。代わりに、組換え発現ベクターは、例えば、Ｔ７プロモーター調節配列及びＴ７ポリメラーゼを使用すれば、ｉｎ ｖｉｔｒｏで転写させ翻訳させることができる。確率的に作製されたポリヌクレオチド配列の発現を経て予め決められた特性を有するポリペプチド、例えば、抗ＣＤ３抗体の調製及びスクリーニングに有用な方法は以前に記載されている。米国特許第５，７６３，１９２号、米国特許第５，７２３，３２３号、米国特許第５，８１４，４７６号、米国特許第５，８１７，４８３号、米国特許第５，８２４，５１４号、米国特許第５，９７６，８６２号、米国特許第６，４９２，１０７号、米国特許第６，５６９，６４１号を参照されたい。
原核生物でのポリペプチドの発現は、ほとんどの場合、融合又は非融合ポリペプチドの発現を指示する構成的又は誘導性プロモーターを含有するベクターを用いて大腸菌で実行される。融合ベクターは、そこにコードされるポリペプチドに、通常は組換えポリペプチドのアミノ末端にいくつかのアミノ酸を付加させる。該融合ベクターは典型的には３種の目的：（ｉ）組換えポリペプチドの発現を増やすため；（ｉｉ）組換えポリペプチドの溶解性を増やすため；及び（ｉｉｉ）親和性精製においてリガンドとして作用することにより組換えポリペプチドの精製を支援するため、を果たす。多くの場合、融合発現ベクターでは、タンパク質切断部位は融合部分と組換えポリペプチドの接合点に導入されて、融合ポリペプチドの精製に続く融合部分からの組換えポリペプチドの分離を可能にする。該酵素、及びその同族認識配列は、活性化第Ｘ因子、トロンビン及びエンテロキナーゼを含む。典型的な融合発現ベクターは、標的組換えポリペプチドにそれぞれグルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースＥ結合ポリペプチド、又はポリペプチドＡを融合させるｐＧＥＸ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ；Smith and Johnson, 1988. Gene 67: 31-40）、ｐＭＡＬ（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ、Ｂｅｖｅｒｌｙ、Ｍａｓｓ．）及びｐＲＩＴ５（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を含む。
適切な誘導性非融合大腸菌発現ベクターの例は、ｐＴｒｃ（Amrann et al., (1988) Gene 69: 301-315）及びｐＥＴ １１ｄ（Studier et al., GENE EXPRESSION TECHNOLOGY: METHODS IN ENZYMOLOGY 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990) 60-89）を含む。ポリペプチド融合を経て多機能ポリペプチドを産生するための別個の活性ペプチド又はタンパク質ドメインの標的化した組立てのための方法は、Pack et al.、米国特許第６，２９４，３５３号；米国特許第６，６９２，９３５号に記載されている。大腸菌での組換えポリペプチド発現、例えば、抗ＣＤ３抗体、を最大にする１つの戦略は、組換えポリペプチドをタンパク質分解性に切断する能力が損なわれた宿主細菌でポリペプチドを発現することである。例えば、Gottesman, GENE EXPRESSION TECHNOLOGY: METHODS IN ENZYMOLOGY 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990) 119-128を参照されたい。もう１種の戦略は、それぞれのアミノ酸を表す個々のコドンが発現宿主、例えば、大腸菌で優先的に利用されるように、発現ベクター中に挿入される核酸の核酸配列を変更することである（例えば、Wada, et al., 1992. Nucl. Acids Res. 20: 2111-2118参照）。本技術の核酸配列の該変更は、標準ＤＮＡ合成技法により実行することが可能である。
別の実施形態では、抗ＣＤ３抗体発現ベクターは酵母発現ベクターである。酵母サッカロマイセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）における発現用のベクターの例は、ｐＹｅｐＳｅｃ１（Baldari, et al., 1987. EMBO J. 6: 229-234）、ｐＭＦａ（Kurjan and Herskowitz, Cell 30: 933-943, 1982）、ｐＪＲＹ８８（Schultz et al., Gene 54: 113-123, 1987）、ｐＹＥＳ２（Invitrogen Corporation, San Diego, Calif.）及びｐｉｃＺ（Invitrogen Corp, San Diego, Calif.）を含む。代わりに、抗ＣＤ３抗体は、バキュロウイルス発現ベクターを使用して昆虫細胞において発現することができる。培養昆虫細胞（例えば、ＳＦ９細胞）でのポリペプチド、例えば、抗ＣＤ３抗体の発現に利用可能なバキュロウイルスは、ｐＡｃシリーズ（Smith, et al., Mol. Cell. Biol. 3: 2156-2165, 1983）及びｐＶＬシリーズ（Lucklow and Summers, 1989. Virology 170: 31-39）を含む。
さらに別の実施形態では、本技術の抗ＣＤ３抗体をコードする核酸は、哺乳動物発現ベクターを使用して哺乳動物細胞において発現される。哺乳動物発現ベクターの例は、例えば、ｐＣＤＭ８（Seed, Nature 329: 840, 1987）及びｐＭＴ２ＰＣ（Kaufman, et al., EMBO J. 6: 187-195, 1987）を含むがこれらに限定されない。哺乳動物細胞において使用される場合、発現ベクターの制御機能は多くの場合、ウイルス調節エレメントにより提供される。例えば、一般に使用されるプロモーターは、ポリオーマ、アデノウイルス２、サイトメガロウイルス、及びサルウイルス４０由来である。本技術の抗ＣＤ３抗体の発現に有用である原核と真核細胞の両方に適した他の発現系では、例えば、Chapters 16 and 17 of Sambrook, et al., MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL. 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989を参照されたい。
別の実施形態では、組換え哺乳動物発現ベクターは特定の細胞型での核酸（例えば、組織特異的調節エレメント）の発現を指示することができる。組織特異的調節エレメントは当技術分野で公知である。適切な組織特異的プロモーターの非限定的例は、アルブミンプロモーター（肝臓特異的；Pinkert, et al., Genes Dev. 1: 268-277, 1987）、リンパ特異的プロモーター（Calame and Eaton, Adv. Immunol. 43: 235-275, 1988）、Ｔ細胞受容体（Winoto and Baltimore, EMBO J. 8: 729-733, 1989）及び免疫グロブリン（Banerji, et al., 1983. Cell 33: 729-740；Queen and Baltimore, Cell 33: 741-748, 1983.）のプロモーター、神経特異的プロモーター（例えば、神経フィラメントプロモーター；Byrne and Ruddle, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 5473-5477, 1989）、膵臓特異的プロモーター（Edlund, et al., 1985. Science 230: 912-916）、並びに乳腺特異的プロモーター（例えば、ミルクホエープロモーター；米国特許第４，８７３，３１６号及び欧州特許出願公開第２６４，１６６号）を含む。発生的に調節されたプロモーター、例えば、マウスｈｏｘプロモーター（Kessel and Gruss, Science 249: 374-379, 1990）及びα－胎児タンパク質プロモーター（Campes and Tilghman, Genes Dev. 3: 537-546, 1989）も包含される。
本方法の別の態様は、本技術の組換え発現ベクターが導入されている宿主細胞に関係する。用語「宿主細胞」及び「組換え宿主細胞」は本明細書では互換的に使用される。該用語は、特定の対象細胞だけではなく該細胞の子孫又は潜在的子孫も指すと理解されている。変異又は環境上の影響のせいで続く世代にある特定の改変が起こる場合があるので、該子孫は、実際に、親細胞と同一ではない場合があるが、それでも本明細書で使用されるこの用語の範囲内に含まれる。
宿主細胞は任意の原核又は真核細胞が可能である。例えば、抗ＣＤ３抗体は、大腸菌などの細菌細胞、昆虫細胞、酵母又は哺乳動物細胞において発現させることができる。哺乳動物細胞は免疫グロブリン又はその断片をコードするヌクレオチドセグメントを発現するのに適した宿主である。Winnacker, From Genes To Clones, (VCH Publishers, NY, 1987)を参照されたい。無傷の異種タンパク質を分泌することができるいくつかの適切な宿主細胞系が当技術分野では開発されており、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系、種々のＣＯＳ細胞系、ＨｅＬａ細胞、Ｌ細胞及び骨髄腫細胞系を含む。一部の実施形態では、細胞は非ヒトである。これらの細胞のための発現ベクターは、複製起点、プロモーター、エンハンサーなどの発現制御配列、並びにリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、及び転写終結配列などの必要なプロセッシング情報部位を含む。Queen et al., Immunol. Rev. 89: 49, 1986。実例となる発現制御配列は、内在性遺伝子、サイトメガロウイルス、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルス、及び同類のもの由来のプロモーターである。Co et al., J Immunol. 148: 1149, 1992。他の適切な宿主細胞は当業者には公知である。
ベクターＤＮＡは、従来の形質転換又はトランスフェクション技法を経て原核又は真核細胞中に導入することができる。本明細書で使用される場合、用語「形質転換」及び「トランスフェクション」とは、リン酸カルシウム若しくは塩化カルシウム共沈殿、ＤＥＡＥ－デキストラン媒介トランスフェクション、リポフェクション、電気穿孔、遺伝子銃又はウイルスベースのトランスフェクションを含む、外来核酸（例えば、ＤＮＡ）を宿主細胞中に導入するための種々の当技術分野で認められた技法を指すことが意図されている。哺乳動物細胞を形質転換するのに使用される他の方法は、ポリブレンの使用、原形質融合、リポソーム、電気穿孔、及びマイクロインジェクションを含む（一般的には、Sambrook et al., Molecular Cloning参照）。宿主細胞を形質転換する又はトランスフェクトするのに適した方法は、Sambrook, et al. (MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL. 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989)及び他の実習マニュアルに見出すことができる。目的のＤＮＡセグメントを含有するベクターは、細胞宿主のタイプに応じて周知の方法により宿主細胞中に移行させることができる。
哺乳動物細胞の安定したトランスフェクションでは、使用される発現ベクター及びトランスフェクション技法によっては、外来ＤＮＡをそのゲノム中に組み込み得るのは細胞のわずかな部分だけであることが知られている。これらの組込み体を同定し選択するため、選択可能マーカー（例えば、抗生物質に対する耐性）をコードする遺伝子が一般に、目的の遺伝子と一緒に宿主細胞中に導入される。種々の選択可能マーカーは、Ｇ４１８、ハイグロマイシン及びメトトレキサートなどの、薬物に対する耐性を与えるマーカーを含む。選択可能マーカーをコードする核酸は、宿主細胞中の抗ＣＤ３抗体をコードするベクターと同じベクター上に導入することができる、又は別個のベクターに導入することができる。導入された核酸を安定的にトランスフェクトされた細胞は、薬物選択により同定することができる（例えば、選択可能マーカー遺伝子を組み込んでいる細胞は生存し、その他の細胞は死滅する）。
培養中の原核又は真核宿主細胞などの、本技術の抗ＣＤ３抗体を含む宿主細胞を使用すれば、組換え抗ＣＤ３抗体を産生（即ち、発現）することができる。一実施形態では、方法は、抗ＣＤ３抗体が産生されるように、適切な培地において宿主細胞（その中には抗ＣＤ３抗体をコードする組換え発現ベクターが導入されている）を培養することを含む。別の実施形態では、方法は、培地又は宿主細胞から抗ＣＤ３抗体を単離するステップをさらに含む。発現された後、抗ＣＤ３抗体の収集物、例えば、抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体関連ポリペプチドは、培養培地及び宿主細胞から精製される。抗ＣＤ３抗体は、ＨＰＬＣ精製、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動及び同類のものを含む、当技術分野の標準手順に従って精製することができる。一実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、Boss et al.、米国特許第４，８１６，３９７号の方法により宿主生物において産生される。通常、抗ＣＤ３抗体鎖はシグナル配列と一緒に発現され、したがって、培養培地に放出される。しかし、抗ＣＤ３抗体鎖が宿主細胞により自然に分泌されない場合には、抗ＣＤ３抗体鎖は中性洗剤を用いた処理により放出させることができる。組換えポリペプチドの精製は当技術分野では周知であり、硫酸アンモニウム沈殿、親和性クロマトグラフィー精製技法、カラムクロマトグラフィー、イオン交換精製技法、ゲル電気泳動及び同類のものを含む（一般的には、Scopes, Protein Purification (Springer-Verlag, N.Y., 1982)を参照）。
抗ＣＤ３抗体をコードするポリヌクレオチド、例えば、抗ＣＤ３抗体コード配列は、トランスジェニック動物のゲノム中への導入及びトランスジェニック動物の乳での引き続く発現のために導入遺伝子に組み込むことができる。例えば、米国特許第５，７４１，９５７号、米国特許第５，３０４，４８９号、及び米国特許第５，８４９，９９２号を参照されたい。適切な導入遺伝子は、カゼイン及びβ－ラクトグロブリンなどの、乳腺特異的遺伝子由来のプロモーター及びエンハンサーと作動可能に連結された軽及び／又は重鎖をコードする配列を含む。トランスジェニック動物の作製では、導入遺伝子を、受精卵母細胞中にマイクロインジェクトすることができる、又は胚性幹細胞のゲノム中に組み込み、該細胞の核を徐核卵母細胞中に移すことができる。
単鎖抗体。一実施形態では、本技術の抗ＣＤ３抗体は単鎖抗ＣＤ３抗体である。本技術によれば、ＣＤ３タンパク質に特異的である単鎖抗体の産生に技法を適合させることが可能である（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号参照）。本技術の単鎖Ｆｖ及び抗体を産生するのに使用することができる技法の例は、米国特許第４，９４６，７７８号、及び米国特許第５，２５８，４９８号；Huston et al., Methods in Enzymology, 203: 46-88, 1991；Shu, L. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 7995-7999, 1993；and Skerra et al., Science 240: 1038-1040, 1988に記載されている技法を含む。
キメラ及びヒト化抗体。一実施形態では、本技術の抗ＣＤ３抗体はキメラ抗ＣＤ３抗体である。一実施形態では、本技術の抗ＣＤ３抗体はヒト化抗ＣＤ３抗体である。本技術の一実施形態では、ドナー及びアクセプター抗体は異なる種由来のモノクローナル抗体である。例えば、アクセプター抗体はヒト抗体であり（ヒトにおいてその抗原性を最小化するため）、その場合、得られたＣＤＲグラフト抗体は「ヒト化」抗体と名付けられる。
ヒトと非ヒト部分の両方を含む、キメラ及びヒト化モノクローナル抗体などの組換え抗ＣＤ３抗体は、標準組換えＤＮＡ技法を使用して作製することができ、本技術の範囲内である。ヒトでの本技術の抗ＣＤ３抗体のｉｎ ｖｉｖｏ使用並びにｉｎ ｖｉｔｒｏ検出アッセイでのこれらの作用物質の使用を含む、一部の使用では、キメラ又はヒト化抗ＣＤ３抗体を使用することが可能である。該キメラ及びヒト化モノクローナル抗体は、当技術分野で公知の組換えＤＮＡ技法により作製することができる。該有用な方法は、例えば、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；米国特許第５，２２５，５３９号；欧州特許第１８４１８７号；欧州特許第１７１４９６号；欧州特許第１７３４９４号；国際公開第８６／０１５３３号；米国特許第４，８１６，５６７号；米国特許第５，２２５，５３９号；欧州特許第１２５０２３号；Better, et al., 1988. Science 240: 1041-1043；Liu, et al., 1987. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 3439-3443；Liu, et al., 1987. J. Immunol. 139: 3521-3526；Sun, et al., 1987. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 214-218；Nishimura, et al., 1987. Cancer Res. 47: 999-1005；Wood, et al., 1985. Nature 314: 446-449；Shaw, et al., 1988. J. Natl. Cancer Inst. 80: 1553-1559；Morrison (1985) Science 229: 1202-1207；Oi, et al. (1986) BioTechniques 4: 214；Jones, et al., 1986. Nature 321: 552-525；Verhoeyan, et al., 1988. Science 239: 1534；Morrison, Science 229: 1202, 1985；Oi et al., BioTechniques 4: 214, 1986；Gillies et al., J. Immunol. Methods, 125: 191-202, 1989；米国特許第５，８０７，７１５号；及びBeidler, et al., 1988. J. Immunol. 141: 4053-4060に記載される方法を含むが、これらに限定されない。例えば、抗体は、ＣＤＲ移植（欧州特許第０ ２３９ ４００号；国際公開第９１／０９９６７号；米国特許第５，５３０，１０１号；米国特許第５，５８５，０８９号；米国特許第５，８５９，２０５号；米国特許第６，２４８，５１６号；欧州特許第４６０１６７号）、ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）又はリサーフェイシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（欧州特許第０ ５９２ １０６号；欧州特許第０ ５１９ ５９６号；Padlan E. A., Molecular Immunology, 28: 489-498, 1991；Studnicka et al., Protein Engineering 7: 805-814, 1994；Roguska et al., PNAS 91: 969-973, 1994）、及びチェーンシャッフリング（ｃｈａｉｎ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（米国特許第５，５６５，３３２号）を含む種々の技法を使用してヒト化することができる。一実施形態では、マウス抗ＣＤ３モノクローナル抗体をコードするｃＤＮＡは、特にＦｃ定常領域をコードする配列を取り除くために選択された制限酵素で消化され、ヒトＦｃ定常領域をコードするｃＤＮＡの等価な部分が置換される（Robinson et al．、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ８６／０２２６９；Akira et al．、欧州特許出願公開第１８４，１８７号；Taniguchi，欧州特許出願公開第１７１，４９６号；Morrison et al．、欧州特許出願公開第１７３，４９４号；Neuberger et al．、国際公開第８６／０１５３３号；Cabilly et al．米国特許第４，８１６，５６７号；Cabilly et al．、欧州特許出願公開第１２５，０２３号；Better et al. (1988) Science 240: 1041-1043；Liu et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 3439-3443；Liu et al. (1987) J Immunol 139: 3521-3526；Sun et al. (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84: 214-218；Nishimura et al. (1987) Cancer Res 47: 999-1005；Wood et al. (1985) Nature 314: 446-449；and Shaw et al. (1988) J. Natl. Cancer Inst. 80: 1553-1559；米国特許第６，１８０，３７０号；米国特許第６，３００，０６４号；米国特許第６，６９６，２４８号；米国特許第６，７０６，４８４号；米国特許第６，８２８，４２２号参照）。
一実施形態では、本技術は、ヒト抗マウス抗体（以下「ＨＡＭＡ」と呼ばれる）応答を誘導する可能性がなく、それでも効果的な抗体エフェクター機能を有するヒト化抗ＣＤ３抗体の構築を提供する。本明細書で使用される場合、抗体との関係で、用語「ヒト」及び「ヒト化」は、ヒト対象において治療的に許容できる弱い免疫原性応答を誘発すると予想される任意の抗体に関係する。一実施形態では、本技術は、ヒト化抗ＣＤ３抗体、重鎖及び軽鎖免疫グロブリンを提供する。
ＣＤＲ抗体。一部の実施形態では、本技術の抗ＣＤ３抗体は抗ＣＤ３ ＣＤＲ抗体である。一般的には、抗ＣＤ３ ＣＤＲ抗体を作製するのに使用されるドナー及びアクセプター抗体は、異なる種由来のモノクローナル抗体であり、典型的にはアクセプター抗体はヒト抗体であり（ヒトにおいてその抗原性を最小化するため）、その場合、得られたＣＤＲグラフト抗体は「ヒト化」抗体と名付けられる。移植片は、アクセプター抗体の単一ＶH若しくはＶL内の単一ＣＤＲで（又は単一ＣＤＲの部分でも）よく、又はＶH及びＶLのうちの１つ若しくは両方内の複数のＣＤＲ（又はその部分）が可能である。頻繁に、アクセプター抗体のすべての可変ドメインの３種のＣＤＲすべては対応するドナーＣＤＲで置き換えられるが、ＣＤ３タンパク質への得られたＣＤＲグラフト抗体の適切な結合を可能にするのに必要なのと同じ数のみを置き換える必要がある。ＣＤＲグラフト及びヒト化抗体を作製するための方法は、Queen et al．米国特許第５，５８５，０８９号；米国特許第５，６９３，７６１号；米国特許第５，６９３，７６２号；及びWinter米国特許第５，２２５，５３９号；並びに欧州特許第０６８２０４０号により教唆される。ＶH及びＶLポリペプチドを調製するのに有用な方法は、Winter et al．、米国特許第４，８１６，３９７号；米国特許第６，２９１，１５８号；米国特許第６，２９１，１５９号；米国特許第６，２９１，１６１号；米国特許第６，５４５，１４２号；欧州特許第０３６８６８４号；欧州特許第０４５１２１６号；及び欧州特許第０１２０６９４号により教唆される。
同じファミリー及び／又は同じファミリーメンバーから適切なフレームワーク領域候補を選択した後、重鎖及び軽鎖可変領域のいずれか又は両方は、始発種由来のＣＤＲをハイブリッドフレームワーク領域中に移植することにより作製される。上記態様のいずれかに関してハイブリッド可変鎖領域を有するハイブリッド抗体又はハイブリッド抗体断片の組立は、当業者には公知である従来法を使用して達成することができる。例えば、本明細書に記載されるハイブリッド可変ドメイン（即ち、標的種に基づくフレームワーク及び始発種由来のＣＤＲ）をコードするＤＮＡ配列は、オリゴヌクレオチド合成及び／又はＰＣＲにより作製することができる。ＣＤＲ領域をコードする核酸は、適切な制限酵素を使用して始発種抗体から単離し、適切なライゲーション酵素を用いてライゲートすることにより標的種のフレームワークにライゲートすることもできる。代わりに、始発種抗体の可変領域のフレームワークは、部位特異的変異誘発により変化させることができる。
ハイブリッドは、それぞれのフレームワーク領域に対応する複数の候補間の選択から構築されるので、本明細書に記載される原則に従って構築を受け入れられる配列の多くの組合せが存在する。したがって、個々のフレームワーク領域の異なる組合せのあるメンバーを有するハイブリッドのライブラリーを集めることができる。該ライブラリーは、配列の電子データベース集合物又はハイブリッドの物理的集合物が可能である。
この過程は典型的には、グラフトＣＤＲに隣接するアクセプター抗体のＦＲを変更しない。しかし、当業者であれば、所与のＦＲのある特定の残基を、ＦＲがドナー抗体の対応するＦＲにもっと類似するように置き換えることにより、得られた抗ＣＤ３ ＣＤＲグラフト抗体の抗原結合親和性を改善できることもある。置換の適切な位置は、ＣＤＲに隣接するアミノ酸残基、又はＣＤＲと相互作用することができるアミノ酸残基を含む（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号、特に１２～１６段参照）。又は、当業者であれば、ドナーＦＲから始めて、それをアクセプターＦＲ若しくはヒトコンセンサスＦＲにもっと類似するように改変することができる。これらの改変を行うための技法は当技術分野では公知である。特に、得られたＦＲがその位置についてヒトコンセンサスＦＲに適合する、又は該コンセンサスＦＲに少なくとも９０％又はそれよりも多く同一である場合、そうしても、完全ヒトＦＲを有する同じ抗体と比べて、得られた改変抗ＣＤ３ ＣＤＲグラフト抗体の抗原性を有意に増やす可能性はない。
二特異性抗体（ＢｓＡｂ）。二特異性抗体は、異なる構造を有する２種の標的、例えば、２種の異なる標的抗原、同じ標的抗原上の２種の異なるエピトープ、又はハプテン及び標的抗原若しくは標的抗原上のエピトープに同時に結合できる抗体である。ＢｓＡｂは、例えば、同じ又は異なる抗原の異なるエピトープを認識する重鎖及び／又は軽鎖を組み合わせることにより作製できる。一部の実施形態では、分子機能により、二特異性結合剤はその２種の結合アームのうちの１つ（１種のＶＨ／ＶＬ対）上で１種の抗原（又はエピトープ）に結合し、その第２のアーム（異なるＶＨ／ＶＬ対）上で異なる抗原（又はエピトープ）に結合する。この定義により、二特異性結合剤は２種の異なる抗原結合アームを有し（特異性とＣＤＲ配列の両方で）、それが結合するそれぞれの抗原に対して一価である。
二特異性抗体（ＢｓＡｂ）及び二特異性抗体断片（ＢｓＦａｂ）などの多特異性抗体は、例えば、ＣＤ３に特異的に結合する少なくとも１種のアームと第２の標的抗原特異的に結合する少なくとも１種の他のアームとを有する。一部の実施形態では、第２の標的抗原は、Ｂ細胞、Ｔ細胞、骨髄細胞、形質細胞、又はマスト細胞の抗原又はエピトープである。さらに又は代わりに、ある特定の実施形態では、第２の標的抗原は、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ８０、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１２３、ＴＣＲガンマ／デルタ、ＮＫｐ４６及びＫＩＲからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、ＢｓＡｂは、細胞表面上にＣＤ３抗原を発現する腫瘍細胞に結合することができる。一部の実施形態では、ＢｓＡｂは、腫瘍部位に細胞傷害性Ｔ細胞を向ける（又は動員する）ことにより腫瘍細胞の殺傷を促進するように操作されている。他の例となるＢｓＡｂは、ＣＤ３に対して特異的な第１の抗原結合部位及び小分子ハプテン（例えば、ＤＴＰ Ａ、ＩＭＰ２８８、ＤＯＴＡ、ＤＯＴＡ－Ｂｎ、ＤＯＴＡ－デスフェリオキサミン、本明細書に記載される他のＤＯＴＡキレート、ビオチン、フルオレセイン、又はGoodwin, D A. et al, 1994, Cancer Res. 54(22):5937-5946に開示されるハプテン）に対して特異的な第２の抗原結合部位を有するＢｓＡｂを含む。
分子工学を使用して様々な二特異性融合タンパク質を作製することができる。例えば、完全免疫グロブリンフレームワーク（例えば、ＩｇＧ）、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又はその組合せを利用するＢｓＡｂが構築されている。一部の実施形態では、二特異性融合タンパク質は二価であり、例えば、１種の抗原に対して単一の結合部位のあるｓｃＦｖ及び第２の抗原に対して単一の結合部位のあるＦａｂ断片を含む。一部の実施形態では、二特異性融合タンパク質は二価であり、例えば、１種の抗原に対して単一の結合部位のあるｓｃＦｖ及び第２の抗原に対して単一の結合部位のある別のｓｃＦｖ断片を含む。他の実施形態では、二特異性融合タンパク質は四価であり、例えば、１種の抗原に対して２つの結合部位及び第２の抗原に対して２つの同じｓｃＦｖを有する免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ）を含む。直列の２つのｓｃＦＶユニットで構成されたＢｓＡｂは臨床的に成功した二特異性抗体フォーマットであることが明らかにされている。一部の実施形態では、腫瘍抗原（例えば、ＣＤ３）に結合するｓｃＦｖがＴ細胞に結合する（例えば、ＣＤ３に結合することにより）ｓｃＦｖと連結されるように、２つの単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を直列に含むＢｓＡｂが設計されている。このようにして、Ｔ細胞は、腫瘍細胞の細胞傷害性殺傷を媒介できるように、腫瘍部位に動員される。例えば、Dreier et al., J. Immunol. 170:4397-4402 (2003)；Bargou et al., Science 321 :974- 977 (2008)を参照されたい。一部の実施形態では、腫瘍抗原（例えば、ＣＤ３）に結合するｓｃＦｖが小分子ＤＯＴＡハプテンに結合するｓｃＦｖと連結されるように、２つの単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を直列に含む本技術のＢｓＡｂが設計されている。
ＢｓＡｂを産生するための最近の方法は、システイン残基がもっとありふれた免疫グロブリンアイソタイプよりも強く架橋結合するように追加のシステイン残基を有する操作された組換えモノクローナル抗体を含む。例えば、FitzGerald et al., Protein Eng. 10(10):1221-1225 (1997)を参照されたい。別のアプローチは、必要とされる二重の特異性を持つ２種以上の異なる単鎖抗体又は抗体断片セグメントを連結して組換え融合タンパク質を操作することである。例えば、Coloma et al., Nature Biotech. 15:159-163 (1997)を参照されたい。分子工学を使用して、様々な二特異性融合タンパク質を産生することができる。
２種以上の異なる単鎖抗体又は抗体断片を連結する二特異性融合タンパク質は類似する方法で産生される。組換え法を使用すれば、様々な融合タンパク質を産生することができる。ある特定の実施形態では、本技術に従ったＢｓＡｂは免疫グロブリンを含み、この免疫グロブリンは重鎖及び軽鎖、並びにｓｃＦｖを含む。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、本明細書に開示される任意のＣＤ３免疫グロブリンの重鎖のＣ末端に連結されている。ある特定の実施形態では、ｓｃＦｖは、本明細書に開示される任意のＣＤ３免疫グロブリンの軽鎖のＣ末端に連結されている。種々の実施形態では、ｓｃＦｖはリンカー配列を経て重鎖又は軽鎖に連結されている。ｓｃＦｖへの重鎖Ｆｄのインフレーム接続に必要な適切なリンカー配列は、ＰＣＲ反応を通じてＶL及びＶkappaドメイン中に導入される。次に、ｓｃＦｖをコードするＤＮＡ断片は、ＣＨ１ドメインをコードするＤＮＡ配列を含有するステージングベクター（ｓｔａｇｉｎｇ ｖｅｃｔｏｒ）中にライゲートされる。得られたｓｃＦｖ－ＣＨ１構築物は切り取られて、ＣＤ３抗体のＶH領域をコードするＤＮＡ配列を含有するベクター中にライゲートされる。得られたベクターを使用すれば、二特異性融合タンパク質の発現用の哺乳動物細胞などの適切な宿主細胞をトランスフェクトすることができる。
一部の実施形態では、リンカーは、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、1５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００個又はそれよりも多いアミノ酸長である。一部の実施形態では、リンカーは、それが硬直した三次元構造を取らない傾向があるが、むしろポリペプチドに可動性（例えば、第１の及び／又は第２の抗原結合部位）を提供することを特徴とする。一部の実施形態では、リンカーは、例えば、安定性の増加などのＢｓＡｂに分け与えられた特定の特性に基づいて本明細書に記載されるＢｓＡｂにおいて用いられる。一部の実施形態では、本技術のＢｓＡｂはＧ4Ｓリンカーを含む。一部の実施形態では、本技術のＢｓＡｂは（Ｇ4Ｓ）nリンカーを含み、ｎは１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、1５又はそれよりも多いである。
自己集合分解（ＳＡＤＡ）コンジュゲート。一部の実施形態では、本技術の抗ＣＤ３抗体は、１種又は複数のＳＡＤＡドメインを含む。ＳＡＤＡドメインは、有益な運動学的、熱力学的、及び／又は薬理学的特性のある環境依存性多量体化を達成するように構成する及び／又は適合させることができる。例えば、ＳＡＤＡドメインは、オフターゲット相互作用のリスクを最小限にしつつ目的の標的部位へのペイロードの効果的な送達を可能にするコンジュゲートの一部であり得ることは認識されている。本技術の抗ＣＤ３抗体は、１種又は複数の結合ドメインに連結されたＳＡＤＡドメインを含み得る。一部の実施形態では、該コンジュゲートは、適切な条件下（例えば、コンジュゲートが閾値濃度若しくはｐＨよりも上で存在する溶液中で及び／又はペイロードに対する受容体の適切なレベル若しくは密度を特徴とする標的部位に存在する場合）ではそれが多量体化して所望のサイズの複合体を形成し、他の条件下（例えば、適切な環境多量体化トリガーを欠く）ではもっと小さな形まで分解することを特徴とする。
ＳＡＤＡコンジュゲートは、ＳＡＤＡドメインのないコンジュゲートと比べて改善された特徴を有し得る。一部の実施形態では、多量体コンジュゲートの改善された特徴は：標的への増加した結合活性／結合、標的細胞若しくは組織に対する増加した特異性、及び／又は伸びた初期血清半減期を含む。一部の実施形態では、改善された特徴は、もっと小さな状態（例えば、二量体の又は単量体の）への解離を通じて、ＳＡＤＡコンジュゲートは、減少した非特異的結合、減少した毒性、及び／又は改良された腎クリアランスを示すことを含む。一部の実施形態では、ＳＡＤＡコンジュゲートは、ヒトホモ多量体化ポリペプチドのアミノ酸配列に少なくとも７５％同一性を示し１種又は複数の多量体化解離定数（ＫD）を特徴とするアミノ酸配列を有するＳＡＤＡポリペプチドを含む。
一部の実施形態では、ＳＡＤＡコンジュゲートは、それが第1の多量体化状態及び１種又は複数の高次多量体化状態を取り入れるように構築され配置される。一部の実施形態では、第1の多量体化状態はサイズが約７０ｋＤａ未満である。一部の実施形態では、第1の多量体化状態は非多量体化状態（例えば、単量体又は二量体）である。一部の実施形態では、第１の多量体化状態は単量体である。一部の実施形態では、第１の多量体化状態は二量体である。一部の実施形態では、第１の多量体化状態は、多量体化された状態（例えば、三量体又は四量体）である。一部の実施形態では、高次多量体化状態は、ホモ四量体又はサイズが１５０ｋＤａよりも大きな高次ホモ多量体である。一部の実施形態では、高次ホモ多量体化されたコンジュゲートは、コンジュゲートがＳＡＤＡポリペプチドＫDを超える濃度で存在している場合水溶液中で安定している。一部の実施形態では、ＳＡＤＡコンジュゲートは、コンジュゲートの濃度がＳＡＤＡポリペプチドＫDを下回る場合の生理的条件下で、高次多量体化状態から第1の多量体化状態へ移行する。
一部の実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドはリンカーを経て結合ドメインに共有結合している。当技術分野で公知であるいかなる適切なリンカーも使用することができる。一部の実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは、ポリペプチドリンカーを経て結合ドメインに連結している。一部の実施形態では、ポリペプチドリンカーはＧｌｙ－Ｓｅｒリンカーである。一部の実施形態では、ポリペプチドリンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｎの配列である又はこれを含み、ｎは反復ＧＧＧＧＳ単位の数を表し、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、1５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０又はそれよりも多い。一部の実施形態では、結合ドメインは、ＳＡＤＡポリペプチドに直接融合している。
一部の実施形態では、ＳＡＤＡドメインはヒトポリペプチド又はその断片及び／若しくは誘導体である。一部の実施形態では、ＳＡＤＡドメインはヒトにおいては実質的に非免疫原性である。一部の実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは多量体として安定している。一部の実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは不対システイン残基を欠く。一部の実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは、大きな露出した疎水性表面を持たない。一部の実施形態では、ＳＡＤＡドメインは、平行又は逆平行配向で会合することができるヘリックス束を含む構造を有する又は有すると予想される。一部の実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは可逆的多量体化が可能である。一部の実施形態では、ＳＡＤＡドメインは、四量体化ドメイン、七量体化ドメイン、六量体化ドメイン又は八量体化ドメインである。ある特定の実施形態では、ＳＡＤＡドメインは四量体化ドメインである。一部の実施形態では、ＳＡＤＡドメインは、それぞれが平行又は逆並行配向で会合するヘリックス束で構成されている多量体化ドメインで構成されている。一部の実施形態では、ＳＡＤＡドメインは、以下のヒトタンパク質：ｐ５３、ｐ６３、ｐ７３、ヘテロ核リボヌクレオタンパク質Ｃ（ｈｎＲＮＰＣ）、シナプトソーム関連タンパク質２３（ＳＮＡＰ－２３）のＮ－末端ドメイン、ＳｔｅｆｉｎＢ（シスタチンＢ）、カリウム電位型チャネルサブファミリーＫＱＴメンバー４（ＫＣＮＱ４）、又はサイクリン－Ｄ－関連タンパク質（ＣＢＦＡ２Ｔ１）のうちの１種の群から選択される。適切なＳＡＤＡドメインの例は、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０３１２３５号に記載されており、前記特許文献はこれにより参照によりその全体を組み込まれる。例となるＳＡＤＡドメインについてのポリペプチド配列は下に提供されている。
ヒトｐ５３四量体化ドメインアミノ酸配列（３２１～３５９）
ＫＰＬＤＧＥＹＦＴＬＱＩＲＧＲＥＲＦＥＭＦＲＥＬＮＥＡＬＥＬＫＤＡＱＡＧＫＥＰ（配列番号３４）
ヒトｐ６３四量体化ドメインアミノ酸配列（３９６～４５０）
ＲＳＰＤＤＥＬＬＹＬＰＶＲＧＲＥＴＹＥＭＬＬＫＩＫＥＳＬＥＬＭＱＹＬＰＱＨＴＩＥＴＹＲＱＱＱＱＱＱＨＱＨＬＬＱＫＱ（配列番号３５）
ヒトｐ７３四量体化ドメインアミノ酸配列（３４８～３９９）
ＲＨＧＤＥＤＴＹＹＬＱＶＲＧＲＥＮＦＥＩＬＭＫＬＫＥＳＬＥＬＭＥＬＶＰＱＰＬＶＤＳＹＲＱＱＱＱＬＬＱＲＰ（配列番号３６）。
ヒトＨＮＲＮＰＣ四量体化ドメインアミノ酸配列（１９４～２２０）
ＱＡＩＫＫＥＬＴＱＩＫＱＫＶＤＳＬＬＥＮＬＥＫＩＥＫＥ（配列番号３７）
ヒトＳＮＡＰ－２３四量体化ドメインアミノ酸配列（２３～７６）
ＳＴＲＲＩＬＧＬＡＩＥＳＱＤＡＧＩＫＴＩＴＭＬＤＥＱＫＥＱＬＮＲＩＥＥＧＬＤＱＩＮＫＤＭＲＥＴＥＫＴＬＴＥＬ（配列番号３８）
ヒトＳｔｅｆｉｎＢ四量体化ドメインアミノ酸配列（２～９８）
ＭＣＧＡＰＳＡＴＱＰＡＴＡＥＴＱＨＩＡＤＱＶＲＳＱＬＥＥＫＥＮＫＫＦＰＶＦＫＡＶＳＦＫＳＱＶＶＡＧＴＮＹＦＩＫＶＨＶＧＤＥＤＦＶＨＬＲＶＦＱＳＬＰＨＥＮＫＰＬＴＬＳＮＹＱＴＮＫＡＫＨＤＥＬＴＹＦ（配列番号３９）
ＫＣＮＱ４四量体化ドメインアミノ酸配列（６１１～６４０）
ＤＥＩＳＭＭＧＲＶＶＫＶＥＫＱＶＱＳＩＥＨＫＬＤＬＬＬＧＦＹ（配列番号４０）
ＣＢＦＡ２Ｔ１四量体化ドメインアミノ酸配列（４６２～５２１）
ＴＶＡＥＡＫＲＱＡＡＥＤＡＬＡＶＩＮＱＱＥＤＳＳＥＳＣＷＮＣＧＲＫＡＳＥＴＣＳＧＣＮＴＡＲＹＣＧＳＦＣＱＨＫＤＷＥＫＨＨ（配列番号４１）
一部の実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは、ｐ５３、ｐ６３、ｐ７３、ヘテロ核リボヌクレオタンパク質Ｃ（ｈｎＲＮＰＣ）、シナプトソーム関連タンパク質２３（ＳＮＡＰ－２３）のＮ－末端ドメイン、ＳｔｅｆｉｎＢ（シスタチンＢ）、カリウム電位型チャネルサブファミリーＫＱＴメンバー４（ＫＣＮＱ４）、又はサイクリン－Ｄ－関連タンパク質（ＣＢＦＡ２Ｔ１）の四量体化ドメインである又はこれを含む。一部の実施形態では、ＳＡＤＡポリペプチドは、配列番号３４～４１のいずれか１つに示される配列に少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一の配列である、又はこれを含む。
Ｆｃ改変。一部の実施形態では、本技術の抗ＣＤ３抗体は、バリアントＦｃ領域を含み、前記バリアントＦｃ領域は、前記分子がＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲ）に対して変更された親和性を有するように、野生型Ｆｃ領域（又は親Ｆｃ領域）と比べて少なくとも１つのアミノ酸改変を含むが、ただしSondermann et al., Nature, 406:267-273 (2000)により開示された相互作用などのＦｃ－Ｆｃ受容体相互作用の結晶及び構造分析に基づいて前記バリアントＦｃ領域がＦｃ受容体に直接接触する位置に置換を持たない。ＦｃγＲなどのＦｃ受容体と直接接触するＦｃ領域内の位置の例は、アミノ酸２３４～２３９（ヒンジ領域）、アミノ酸２６５～２６９（Ｂ／Ｃループ）、アミノ酸２９７～２９９（Ｃ７Ｅループ）、及びアミノ酸３２７～３３２（Ｆ／Ｇ）ループを含む。
一部の実施形態では、本技術の抗ＣＤ３抗体は、活性化及び／又は抑制性受容体に対して変更された親和性を有し、１種又は複数のアミノ酸改変のあるバリアントＦｃ領域を有し、前記１種又は複数のアミノ酸改変はアラニンでのＮ２９７置換、又はアラニンでのＫ３２２置換である。
グリコシル化修飾。一部の実施形態では、本技術の抗ＣＤ３抗体は、親Ｆｃ領域と比べてバリアントグリコシル化のあるＦｃ領域を有する。一部の実施形態では、バリアントグリコシル化はフコースの非存在を含み；一部の実施形態では、バリアントグリコシル化は、ＧｎＴ１－欠損ＣＨＯ細胞での発現から生じる。
一部の実施形態では、本技術の抗体は、抗体の機能性、例えば、抗原への結合活性を変更せずに、目的の抗原（例えば、ＣＤ３）に結合する適切な参照抗体と比べて、修飾されたグリコシル化部位を有し得る。本明細書で使用される場合、「グリコシル化部位」は、オリゴ糖（即ち、互いに連結された２種以上の単糖を含有する炭水化物）が特異的に共有結合する抗体中の任意の特定のアミノ酸配列を含む。
オリゴ糖側鎖は典型的には、Ｎ－又はＯ－結合を経て抗体の骨格に連結されている。Ｎ－結合型グリコシル化とは、アスパラギン残基の側鎖へのオリゴ糖部分の結合のことである。Ｏ－結合型グリコシル化とは、ヒドロキシアミノ酸、例えば、セリン、スレオニンへのオリゴ糖部分の結合のことである。例えば、フコース及び末端Ｎ－アセチルグルコサミンを含むある特定のオリゴ糖を欠如するＦｃ－グリコフォーム（ｈＣＤ３－ＩｇＧｌｎ）は、特殊なＣＨＯ細胞で作製され、増強されたＡＤＣＣエフェクター機能を示し得る。
一部の実施形態では、本明細書で開示される免疫グロブリン関連組成物の炭水化物含量は、グリコシル化部位を付加する又は欠失することにより改変される。抗体の炭水化物含量を改変するための方法は当技術分野では周知であり、本技術内に含まれ、例えば、米国特許第６，２１８，１４９号；欧州特許第０３５９０９６号；米国特許出願公開第２００２／００２８４８６号；国際公開第０３／０３５８３５号；米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号；米国特許第６，２１８，１４９号；米国特許第６，４７２，５１１号を参照されたい。前記特許文献はすべて参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、抗体（又はその関連する部分若しくは成分）の炭水化物含量は、抗体の１種又は複数の内在性炭水化物部分を欠失することにより改変される。ある特定の実施形態では、本技術は、２９７位をアスパラギンからアラニンに改変することにより、抗体のＦｃ領域のグリコシル化部位を欠失することを含む。
操作されたグリコフォームは、エフェクター機能を増強する又は低下させることを含むがこれらに限定されない様々な目的に有用であり得る。操作されたグリコフォームは、例えば、操作された若しくはバリアント発現系を使用することにより、１種若しくは複数の酵素、例えば、Ｎ－アセチルグルコサミントランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）との共発現により、種々の生物若しくは種々の生物由来の細胞系においてＦｃ領域を含む分子を発現することにより、又はＦｃ領域を含む分子が発現された後炭水化物を改変することにより、当業者には公知のいかなる方法によっても作製し得る。操作されたグリコフォームを作製するための方法は当技術分野では公知であり、Umana et al., 1999, Nat. Biotechnol. 17: 176-180；Davies et al., 2001, Biotechnol. Bioeng. 74:288-294；Shields et al., 2002, J. Biol. Chem. 277:26733-26740；Shinkawa et al., 2003, J. Biol. Chem. 278:3466-3473；米国特許第６，６０２，６８４号；米国特許出願第１０／２７７，３７０号；米国特許出願第１０／１１３，９２９号；国際公開第００／６１７３９号；国際公開第０１／２９２２４６号；国際公開第０２／３１１１４０号；国際公開第０２／３０９５４号；ＰＯＴＩＬＬＥＧＥＮＴ（商標） ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ (Biowa, Inc. Princeton, N.J.)；ＧＬＹＣＯＭＡＢ（商標） ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ (GLYCART biotechnology AG, Zurich, Switzerland)に記載される方法を含むがこれらに限定されない。前記文献のそれぞれは参照によりその全体を本明細書に組み込まれる。例えば、国際公開第００／０６１７３９号；米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号；Okazaki et al., 2004, JMB, 336: 1239-49を参照されたい。
融合タンパク質。一実施形態では、本技術の抗ＣＤ３抗体は融合タンパク質である。本技術の抗ＣＤ３抗体は、第２のタンパク質に融合されると、抗原性タグとして使用することができる。ポリペプチドに融合させることができるドメインの例は、異種シグナル配列だけではなく、他の異種機能的領域も含む。融合は必ずしも直接的である必要はなく、リンカー配列を通じて起こることがある。さらに、本技術の融合タンパク質を操作すれば、抗ＣＤ３抗体の特徴を改善することもできる。例えば、追加のアミノ酸、特に、荷電アミノ酸の領域を抗ＣＤ３抗体のＮ－末端に付加すれば、宿主細胞からの精製の間又はそれに続く取扱い及び貯蔵の間の安定性及び持続性を改善することができる。その上、ペプチド部分を抗ＣＤ３抗体に付加すれば、精製を促進することができる。該領域は、抗ＣＤ３抗体の最終調製に先立って取り除くことができる。ポリペプチドの取扱いを促進するためのペプチド部分の付加は、当技術分野ではよく知られているルーチンな技法である。本技術の抗ＣＤ３抗体は、融合ポリペプチドの精製を促進するペプチドなどのマーカー配列に融合させることができる。選択された実施形態では、マーカーアミノ酸配列は、とりわけ、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ、Ｉｎｃ．、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、Ｃａｌｉｆ）に提供されているタグなどの６ヒスチジンペプチドであり、その多くが市販されている。例えば、Gentz et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 821-824, 1989に記載されているように、６ヒスチジンは融合タンパク質の便利な精製を提供する。精製に有用である別のペプチドタグ、「ＨＡ」タグは、インフルエンザ赤血球凝集素タンパク質由来のエピトープに一致している。Wilson et al., Cell 37: 767, 1984。
したがって、これら上記融合タンパク質のいずれでも、本技術のポリヌクレオチド又はポリペプチドを使用して操作することができる。その上、一部の実施形態では、本明細書に記載される融合タンパク質はｉｎ ｖｉｖｏでの増加した半減期を示す。
ジスルフィド連結二量体構造を有する融合タンパク質（ＩｇＧが原因で）は、単量体分泌タンパク質又はタンパク質断片単独と比べて他の分子に結合して中和するのにより効率的になることができる。Fountoulakis et al., J. Biochem. 270: 3958-3964, 1995。
同様に、欧州特許第４６４ ５３３号（カナダ特許第２０４５８６９号）は、免疫グロブリン分子の定常領域の種々の部分を別のヒトタンパク質又はその断片と一緒に含む融合タンパク質を開示している。多くの場合、融合タンパク質中のＦｃ部分は治療及び診断に有益であり、したがって、例えば、改善された薬物動態特性をもたらすことができる。欧州特許第０２３２ ２６２号を参照されたい。代わりに、融合タンパク質を発現させ、検出し、精製した後にＦｃ部分を欠失させる又は改変するのが望ましい場合がある。例えば、Ｆｃ部分は、融合タンパク質が免疫化のための抗原として使用される場合は、治療及び診断の妨げとなることがある。創薬では、例えば、ｈＩＬ－５などのヒトタンパク質は、ｈＩＬ－５のアンタゴニストを同定するためのハイスループットスクリーニングアッセイの目的でＦｃ部分に融合されている。Bennett et al., J. Molecular Recognition 8: 52-58, 1995；Johanson et al., J. Biol. Chem., 270: 9459-9471, 1995。
標識された抗ＣＤ３抗体。一実施形態では、本技術の抗ＣＤ３抗体は、標識部分、即ち、検出可能基と結合される。抗ＣＤ３抗体にコンジュゲートされる特定の標識又は検出可能基は、それがＣＤ３タンパク質への本技術の抗ＣＤ３抗体の特異的結合を著しく妨げない限り、本技術の重要な態様ではない。検出可能基は、検出可能な物理的又は化学的特性を有する任意の材料が可能である。該検出可能標識は免疫アッセイ及びイメージングの分野で十分に開発されてきた。一般的には、該方法に有用であるほぼいかなる標識でも本技術に適用することができる。したがって、標識は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、電気的、光学的又は化学的手段により検出可能である任意の組成物である。本技術の実行に有用である標識は、磁気ビーズ（例えば、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（商標））、蛍光色素（例えば、フルオレセインイソチオシアネート、テキサスレッド、ローダミン、及び同類のもの）、放射標識（例えば、3Ｈ、14Ｃ、35Ｓ、125Ｉ、121Ｉ、131Ｉ、112Ｉｎ、99ｍＴｃ）、マイクロバブルなどの他の造影剤（超音波画像診断用）、18Ｆ、11Ｃ、15Ｏ、89Ｚｒ（ポジトロン放出断層撮影用）、99mＴｃ、111Ｉｎ（単一光子エミッション断層用）、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ及びＥＬＩＳＡにおいて一般的に使用される他の酵素）、及びコロイド金などの熱量測定標識又は色ガラス若しくはプラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックス、及び同類のもの）ビーズを含む。該標識の使用を記載する特許は、米国特許第３，８１７，８３７号；米国特許第３，８５０，７５２号；米国特許第３，９３９，３５０号；米国特許第３，９９６，３４５号；米国特許第４，２７７，４３７号；米国特許第４，２７５，１４９号；及び米国特許第４，３６６，２４１号を含み；それぞれの特許が参照によりその全体を及びあらゆる目的のために本明細書に組み込まれる。Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals (6th Ed., Molecular Probes, Inc., Eugene OR.)も参照されたい。
標識は、当技術分野で周知の方法に従って、アッセイの所望の構成要素に直接的に又は間接的に結合させることができる。上記のように、多種多様な標識を使用することができ、標識の選択は、要求される感度、化合物とのコンジュゲーションの容易さ、安定性要件、利用可能な計測手段、及び処分規定などの要因に依拠している。
非放射性標識は多くの場合間接的な手段により結合される。一般的には、リガンド分子（例えば、ビオチン）は分子に共有結合される。次に、リガンドは、本質的に検出可能である又は検出可能な酵素、蛍光化合物、若しくは化学発光化合物などのシグナル系に共有結合している抗リガンド（例えば、ストレプトアビジン）分子に結合する。いくつかのリガンド及び抗リガンドを使用可能である。リガンドが天然の抗リガンド、例えば、ビオチン、チロキシン、及びコルチゾールを有する場合、リガンドは標識された天然に存在する抗リガンドと組み合わせて使用可能である。代わりに、いかなるハプテン又は抗原性化合物でも抗体、例えば、抗ＣＤ３抗体と組み合わせて使用可能である。
分子は、例えば、酵素又はフルオロフォアとのコンジュゲーションにより、シグナル発生化合物に直接コンジュゲートすることもできる。標識としての目的の酵素は主に、ヒドロラーゼ、特に、ホスファターゼ、エステラーゼ及びグリコシダーゼ、又は酸化還元酵素、特に、ペルオキシダーゼである。標識化部分として有用である蛍光化合物は、フルオレセイン及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、並びに同類のものを含むがこれらに限定されない。標識化部分として有用である化学発光化合物は、例えば、ルシフェリン、及び２，３－ジヒドロフタラジンジオン、例えば、ルミノールを含むがこれらに限定されない。使用可能な種々の標識化又はシグナル発生システムの概説では、米国特許第４，３９１，９０４号を参照のこと。
標識を検出する手段は当業者には周知である。したがって、例えば、標識が放射性標識である場合、検出のための手段は、オートラジオグラフィーにおけるようなシンチレーションカウンター又は写真フィルムを含む。標識が蛍光標識である場合、蛍光色素を適切な波長の光で励起し、こうして得られた蛍光を検出することにより標識を検出できる。蛍光は、写真フィルムによって、電荷結合装置（ＣＣＤ）又は光電子増倍管などの電子探知器の使用によりなど視覚的に検出することができる。同様に、酵素標識は、酵素に適切な基質を提供し得られた反応産物を検出することにより検出することができる。最後に、単純な比色分析標識は、ただ標識と会合した色を観察することにより検出することができる。したがって、種々のディップスティックアッセイでは、コンジュゲートした金は多くの場合ピンク色に見え、種々のコンジュゲートしたビーズはビーズの色に見える。
いくつかのアッセイフォーマットは標識された構成要素の使用を必要としない。例えば、凝集アッセイを使用すれば、標的抗体、例えば、抗ＣＤ３抗体の存在を検出できる。この場合、抗原被覆粒子は、標的抗体を含む試料により凝集される。このフォーマットでは、構成要素のどれも標識する必要はなく、標的抗体の存在は簡単な目視検査により検出される。
Ｂ．本技術の抗ＣＤ３抗体を同定し特徴付ける
本技術の抗ＣＤ３抗体を同定する及び／又はスクリーニングするための方法。ＣＤ３タンパク質に対して所望の特異性を有する抗体（例えば、ＣＤ３タンパク質の細胞外ドメイン、特に、３種の不連続領域：残基７９ε～８５ε（Ｆ～Ｇループ）、残基３４ε（βＣ鎖の第１の残基）、並びに残基４６ε及び４８ε（Ｃ’～Ｄループ）を含むＣＤ３εサブユニットに結合する抗体）を求めてＣＤ３ポリペプチドに対する抗体を同定しスクリーニングするのに有用な方法は、当技術分野内で公知のあらゆる免疫学的に媒介される技法を含む。免疫応答の構成要素は、当技術分野の当業者に周知である種々の方法によりｉｎ ｖｉｔｒｏで検出することができる。例えば、（１）細胞傷害性Ｔリンパ球を放射標識標的細胞と一緒にインキュベートし、これらの標的細胞の溶解を放射能放出により検出できる；（２）ヘルパーＴリンパ球を抗原及び抗原提示細胞と一緒にインキュベートし、サイトカインの合成及び分泌は標準法により測定可能である(Windhagen A et al., Immunity, 2: 373-80, 1995)；（３）抗原提示細胞を全タンパク質抗原と一緒にインキュベートし、ＭＨＣ上でのその抗原の提示はＴリンパ球活性化アッセイ又は生物物理的方法により検出できる（Harding et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 86: 4230-4, 1989）；（４）マスト細胞をそのＦｃイプシロン受容体と架橋結合する試薬と一緒にインキュベートし、ヒスタミン遊離は酵素免疫アッセイにより測定可能である（Siraganian et al., TIPS, 4: 432-437, 1983）；並びに（５）酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）。
同様に、モデル生物（例えば、マウス）又はヒト対象での免疫応答の生成物も、当技術分野の当業者に周知である種々の方法により検出することができる。例えば、（１）ワクチン接種に応答しての抗体の産生は臨床検査室で現在使用されている標準法、例えば、ＥＬＩＳＡにより容易に検出することができる；（２）炎症部位への免疫細胞の遊走は、皮膚表面にかき傷をつけ、無菌容器を置いてかき傷上で遊走細胞を捕捉することにより検出することができる（Peters et al., Blood, 72: 1310-5, 1988）；（３）マイトジェン又は混合リンパ球反応に応答しての末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の増殖は3Ｈ－チミジンを使用して測定することができる；（４）顆粒球、マクロファージ、及びＰＢＭＣ中の他の貪食細胞の貪食能は、ＰＢＭＣを標識された粒子と一緒にウェルに置くことにより測定することができる（Peters et al., Blood, 72: 1310-5, 1988）；並びに（５）免疫系細胞の分化は、ＣＤ４及びＣＤ８などのＣＤ分子に対する抗体でＰＢＭＣを標識し、これらのマーカーを発現しているＰＢＭＣの画分を測定することにより、測定することができる。
一実施形態では、本技術の抗ＣＤ３抗体は、複製可能遺伝子パッケージの表面のＣＤ３ペプチドのディスプレイを使用して選択される。例えば、米国特許第５，５１４，５４８号、米国特許第５，８３７，５００号、米国特許第５，８７１，９０７号、米国特許第５，８８５，７９３号、米国特許第５，９６９，１０８号、米国特許第６，２２５，４４７号、米国特許第６，２９１，６５０号、米国特許第６，４９２，１６０号、欧州特許第５８５ ２８７号、欧州特許第６０５５２２号、欧州特許第６１６６４０号、欧州特許第１０２４１９１号、欧州特許第５８９ ８７７号、欧州特許第７７４ ５１１号、欧州特許第８４４ ３０６号を参照されたい。所望の特異性を有する結合分子をコードするファージミドゲノムを含有する糸状バクテリオファージ粒子を作製する／選択するのに有用な方法は記載されている。例えば、欧州特許第７７４ ５１１号、米国特許第５８７１９０７号、米国特許第５９６９１０８号、米国特許第６２２５４４７号、米国特許第６２９１６５０号、米国特許第６４９２１６０号を参照されたい。
一部の実施形態では、本技術の抗ＣＤ３抗体は、酵母宿主細胞の表面のＣＤ３ペプチドのディスプレイを使用して選択される。酵母表面ディスプレイによるｓｃＦｖポリペプチドの単離に有用な方法は、Kieke et al., Protein Eng. 1997 Nov；10(11): 1303-10により記載されている。
一部の実施形態では、本技術の抗ＣＤ３抗体は、リボソームディスプレイを使用して選択される。リボソームディスプレイを使用してペプチドライブラリー中でリガンドを同定するのに有用な方法は、Mattheakis et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91: 9022-26, 1994；及びHanes et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 4937-42, 1997により記載されている。
ある特定の実施形態では、本技術の抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３ペプチドのｔＲＮＡディスプレイを使用して選択される。ｔＲＮＡディスプレイを使用するリガンドのｉｎ ｖｉｔｒｏ選択に有用な方法はMerryman et al., Chem. Biol., 9: 741-46, 2002に記載されている。
一実施形態では、本技術の抗ＣＤ３抗体はＲＮＡディスプレイを使用して選択される。ＲＮＡディスプレイライブラリーを使用してペプチド及びタンパク質を選択するのに有用な方法は、Roberts et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94: 12297-302, 1997；及びNemoto et al., FEBS Lett., 414: 405-8, 1997に記載されている。非天然ＲＮＡディスプレイライブラリーを使用してペプチド及びタンパク質を選択するのに有用な方法は、Frankel et al., Curr. Opin. Struct. Biol., 13: 506-12, 2003に記載されている。
一部の実施形態では、本技術の抗ＣＤ３抗体は、グラム陰性菌の周辺質で発現され標識されたＣＤ３タンパク質と混合される。国際公開第０２／３４８８６号を参照されたい。Harvey et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 22: 9193-98 2004及び米国特許出願公開第２００４／００５８４０３号に記載されている通り、ＣＤ３タンパク質に対する親和性を有する組換えポリペプチドを発現するクローンでは、抗ＣＤ３抗体に結合された標識されたＣＤ３タンパク質の濃度は増加し、ライブラリーのその他の残りからの細胞の単離が可能になる。
所望の抗ＣＤ３抗体の選択後、前記抗体は、当業者に公知の任意の技法、例えば、原核又は真核細胞発現及び同類のものにより大量に産生することができる。例えば、抗ＣＤ３ハイブリッド抗体又は断片であるがこれらに限定されない抗ＣＤ３抗体は、原種抗体結合特異性を保持するのに必要なＣＤＲ及び、必要ならば、可変領域フレームワークの最小部分（本明細書に記載される技法に従って操作される）が始発種抗体に由来し、抗体の残りが、本明細書に記載される通りに操作することができる標的種免疫グロブリン由来である抗体重鎖をコードする発現ベクターを構築し、それによってハイブリッド抗体重鎖の発現用のベクターを作製する従来の技法を使用することにより産生することができる。
ＣＤ３結合の測定。一部の実施形態では、ＣＤ３結合アッセイとは、ＣＤ３タンパク質と抗ＣＤ３抗体の間の結合に適した条件下でＣＤ３タンパク質と抗ＣＤ３抗体が混合され、ＣＤ３タンパク質と抗ＣＤ３抗体の間の結合量を評価するアッセイフォーマットのことである。結合量は適切な対照と比較され、対照は、ＣＤ３タンパク質の非存在下での結合量、非特異的免疫グロブリン組成物の存在下での結合量、又はその両方が可能である。結合量は任意の適切な方法によって評価することが可能である。結合アッセイ法は、例えば、ＥＬＩＳＡ、放射免疫アッセイ、シンチレーション近接アッセイ、蛍光エネルギー移動アッセイ、液体クロマトグラフィー、膜濾過アッセイ、及び同類のものを含む。抗ＣＤ３抗体に結合しているＣＤ３タンパク質の直接測定のための生物物理的アッセイは、例えば、核磁気共鳴、蛍光、蛍光偏光、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡＣＯＲＥチップ）及び同類のものである。特異的結合は、当技術分野で公知の標準アッセイ、例えば、放射性リガンド結合アッセイ、ＥＬＩＳＡ、ＦＲＥＴ、免疫沈降、ＳＰＲ、ＮＭＲ（２Ｄ－ＮＭＲ）、質量分析及び同類のものにより判定される。候補抗ＣＤ３抗体の特異的結合が候補抗ＣＤ３抗体の非存在下で観察される結合よりも少なくとも１パーセント大きい場合、候補抗ＣＤ３抗体は本技術の抗ＣＤ３抗体として有用である。
本技術の抗ＣＤ３抗体の使用
概要。本技術の抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３タンパク質の局在化及び／又は定量化に関連する当該技術分野で公知の方法において（例えば、適切な生理学的試料内のＣＤ３タンパク質のレベルを測定する際の使用のために、診断方法における使用のために、ポリペプチドをイメージングする際の使用のために、など）有用である。本技術の抗体は、親和性クロマトグラフィー又は免疫沈降等の標準的な技法によって、ＣＤ３タンパク質を単離するのに有用である。本技術の抗ＣＤ３抗体は、生体試料、例えば、哺乳動物血清又は細胞からの天然免疫反応性ＣＤ３タンパク質の精製、並びに宿主系において発現される組換え的に産生される免疫反応性ＣＤ３タンパク質の精製を促進し得る。さらに、免疫反応性ポリペプチドの発現の量及びパターンを評価するために、抗ＣＤ３抗体は、免疫反応性ＣＤ３タンパク質を（例えば、血漿、細胞溶解物又は細胞上清中で）検出するのに使用され得る。本技術の抗ＣＤ３抗体は、例えば、所与の処置レジメンの有効性を決定するために、臨床実験手順の一部として、組織中の免疫反応性ＣＤ３タンパク質レベルをモニタリングするのに診断的に使用され得る。上述するように、検出は、本技術の抗ＣＤ３抗体を、検出可能な物質にカップリングすること（即ち、物理的に連結すること）によって促進され得る。
ＣＤ３タンパク質の検出。生体試料中の免疫反応性ＣＤ３タンパク質の存在又は非存在を検出する例示的な方法は、試験対象から生体試料を得ることと、生体試料を、免疫反応性ＣＤ３タンパク質の存在が生体試料中で検出されるように、免疫反応性ＣＤ３タンパク質を検出することが可能な本技術の抗ＣＤ３抗体と接触させることを包含する。検出は、抗体に結合された検出可能な標識を用いて遂行され得る。
抗ＣＤ３抗体に関して「標識された」という用語は、検出可能な物質を抗体にカップリングすること（即ち、物理的に連結すること）による抗体の直接的な標識、並びに二次抗体等の、直接標識されている別の化合物との反応性による抗体の間接的な標識を包含する。間接的な標識の例として、蛍光標識された二次抗体を使用した一次抗体の検出、及び蛍光標識されたストレプトアビジンを用いて検出され得るような、ビオチンを有するＤＮＡプローブの末端標識が挙げられる。
一部の実施形態では、本明細書中に開示される抗ＣＤ３抗体は、１種又は複数の検出可能な標識にコンジュゲートされる。かかる使用に関して、抗ＣＤ３抗体は、発色性標識、酵素標識、放射性同位体標識、同位体標識、蛍光標識、毒性標識、化学発光標識、核磁気共鳴造影剤又は他の標識の共有結合又は非共有結合によって検出可能に標識され得る。
適切な発色性標識の例として、ジアミノベンジジン及び４－ヒドロキシアゾ－ベンゼン－２－カルボン酸が挙げられる。適切な酵素標識の例として、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ブドウ球菌ヌクレアーゼ、Δ－５－ステロイドイソメラーゼ、酵母－アルコールデヒドロゲナーゼ、α－グリセロールリン酸デヒドロゲナーゼ、トリオースリン酸イソメラーゼ、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、アスパラギナーゼ、グルコースオキシダーゼ、β－ガラクトシダーゼ、リボヌクレアーゼ、ウレアーゼ、カタラーゼ、グルコース－６－リン酸デヒドロゲナーゼ、グルコアミラーゼ、及びアセチルコリンエステラーゼが挙げられる。
適切な放射性同位体標識の例として、3Ｈ、111Ｉｎ、125Ｉ、131Ｉ、32Ｐ、35Ｓ、14Ｃ、51Ｃｒ、57Ｔｏ、58Ｃｏ、59Ｆｅ、75Ｓｅ、152Ｅｕ、90Ｙ、67Ｃｕ、217Ｃｉ、211Ａｔ、212Ｐｂ、47Ｓｃ、109Ｐｄ等が挙げられる。111Ｉｎは、それが、肝臓による125Ｉ又は131Ｉ標識ＣＤ３結合抗体の脱ハロゲン化の問題を回避するため、ｉｎ ｖｉｖｏイメージングが使用される場合の例示的な同位体である。さらに、この同位体は、イメージングに関して、より好適なガンマ放出エネルギーを有する（Perkins et al, Eur. J. Nucl. Med. 70:296-301 (1985)、Carasquillo et al., J. Nucl. Med. 25:281-287 (1987)）。例えば、１－（Ｐ－イソチオシアナトベンジル）－ＤＰＴＡを有するモノクローナル抗体にカップリングされた111Ｉｎは、非腫瘍組織、特に肝臓において、ほとんど取込みを示さず、腫瘍局在化の特異性を高める（Esteban et al., J. Nucl. Med. 28:861-870 (1987)）。適切な非放射性同位体標識の例として、157Ｇｄ、55Ｍｎ、162Ｄｙ、52Ｔｒ、及び56Ｆｅが挙げられる。
適切な蛍光標識の例として、152Ｅｕ標識、フルオレセイン標識、イソチオシアネート標識、ローダミン標識、フィコエリトリン標識、フィコシアニン標識、アロフィコシアニン標識、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）標識、ｏ－フタルアルデヒド（ｏ－ｐｈｔｈａｌｄｅｈｙｄｅ）標識、及びフルオレスカミン標識が挙げられる。適切な毒素標識の例として、ジフテリア毒素、リシン、及びコレラ毒素が挙げられる。
化学発光標識の例として、ルミノール標識、イソルミノール標識、芳香族アクリジニウムエステル標識、イミダゾール標識、アクリジニウム塩標識、シュウ酸エステル標識、ルシフェリン標識、ルシフェラーゼ標識、及びエクオリン標識が挙げられる。核磁気共鳴造影剤の例として、Ｇｄ、Ｍｎ、及び鉄等の重金属核が挙げられる。
本技術の検出方法を使用して、生体試料中の免疫反応性ＣＤ３タンパク質を、ｉｎ ｖｉｔｒｏ並びにｉｎ ｖｉｖｏで検出することができる。免疫反応性ＣＤ３タンパク質の検出のためのｉｎ ｖｉｔｒｏ技法として、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット、免疫沈降、ラジオイムノアッセイ、及び免疫蛍光が挙げられる。さらに、免疫反応性ＣＤ３タンパク質の検出のためのｉｎ ｖｉｖｏ技法として、対象に、標識された抗ＣＤ３抗体を導入することが挙げられる。例えば、抗ＣＤ３抗体は、放射性マーカーで標識することができ、対象におけるその存在及び位置は、標準的なイメージング技法によって検出することができる。一実施形態では、生体試料は、試験対象由来のＣＤ３タンパク質分子を含有する。
イムノアッセイ及びイメージング。本技術の抗ＣＤ３抗体を使用して、抗体ベースの技法を使用して生体試料（例えば、ヒト血漿）中の免疫反応性ＣＤ３タンパク質レベルをアッセイすることができる。例えば、組織におけるタンパク質発現は、古典的な免疫組織学的方法を用いて研究され得る。Jalkanen, M. et al., J. Cell. Biol. 101: 976-985, 1985、Jalkanen, M. et al., J. Cell. Biol. 105: 3087-3096, 1987。タンパク質遺伝子発現を検出するのに有用な他の抗体ベースの方法として、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）及びラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）等のイムノアッセイが挙げられる。適切な抗体アッセイ標識は、当該技術分野で公知であり、グルコースオキシダーゼ等の酵素標識、及びヨウ素（125Ｉ、121Ｉ、131Ｉ）、炭素（14Ｃ）、硫黄（35Ｓ）、トリチウム（3Ｈ）、インジウム（112Ｉｎ）、及びテクネチウム（99ｍＴｃ）等の放射性同位体又は他の放射性作用物質、及びフルオレセイン、ローダミン、及び緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）等の蛍光標識、並びにビオチンが挙げられる。
生体試料中の免疫反応性ＣＤ３タンパク質レベルをアッセイすることに加えて、本技術の抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３のｉｎ ｖｉｖｏイメージングに使用され得る。この方法に有用な抗体として、Ｘ線撮影、ＮＭＲ又はＥＳＲによって検出可能なものが挙げられる。Ｘ線撮影に関して、適切な標識として、バリウム又はセシウム等の放射性同位体が挙げられ、それらは、検出可能な放射線を放出するが、明らかに対象にとって有害でない。ＮＭＲ及びＥＳＲに適したマーカーとして、重水素等の検出可能な特徴的なスピンを有するものが挙げられ、それらは、関連するｓｃＦｖクローンに関する栄養分の標識によって、抗ＣＤ３抗体へ取り込まれ得る。
放射性同位体（例えば、131Ｉ、112Ｉｎ、99ｍＴｃ）、放射線不透過性物質、又は核磁気共鳴によって検出可能な材料等の、適切な検出可能なイメージング部分で標識された抗ＣＤ３抗体が、対象に導入される（例えば、非経口的に、皮下的に、又は腹腔内で）。対象の大きさ及び使用されるイメージングシステムにより、診断画像を作成するのに必要とされるイメージング部分の量が決定されることが理解されよう。放射性同位体部分の場合、ヒト対象に関しては、注射される放射能の量は通常、約５ミリキューリー～２０ミリキューリーの範囲の99ｍＴｃである。続いて、標識された抗ＣＤ３抗体は、特異的な標的ポリペプチドを含有する細胞の位置で蓄積する。例えば、本技術の標識された抗ＣＤ３抗体は、ＣＤ３タンパク質が局在化されている細胞及び組織において、対象内で蓄積する。
したがって、本技術は、病状の診断方法を提供し、該方法は、（ａ）個体の細胞又は体液中の本技術の抗ＣＤ３抗体の結合を測定することによって、免疫反応性ＣＤ３タンパク質の発現をアッセイすること、（ｂ）試料中に存在する免疫反応性ＣＤ３タンパク質の量を、標準物質参照と比較することを包含し、ここで、標準物質と比較した免疫反応性ＣＤ３タンパク質レベルの増加又は減少は、病状を示す。
親和性精製。本技術の抗ＣＤ３抗体を使用して、免疫反応性ＣＤ３タンパク質を対象から精製し得る。一部の実施形態では、抗体は、固体支持体上に固定化される。かかる固体支持体の例として、ポリカーボネート等のプラスチック、アガロース及びセファロース等の複雑な炭水化物、ポリアクリルアミド等のアクリル樹脂及びラテックスビーズが挙げられる。抗体を、かかる固体支持体にカップリングするための技法は、当該技術分野で周知されている（Weir et al., "Handbook of Experimental Immunology" 4th Ed., Blackwell Scientific Publications, Oxford, England, Chapter 10 (1986)、Jacoby et al., Meth. Enzym. 34 Academic Press, N.Y. (1974)）。
抗原を、抗体支持体マトリックスに結合する最も簡素な方法は、カラム中にビーズを収集して、抗原溶液をカラムの下方へと通すことである。この方法の効率は、固定化された抗体と、抗原との間の接触時間に依存し、これは、低い流速を使用することによって延ばすことができる。固定化された抗体は、抗原が流れ過ぎると抗原を捕捉する。或いは、抗原は、抗原溶液を支持体（例えば、ビーズ）と混合することと、スラリーを回転させるか、又は揺り動かして、抗原と、固定化された抗体との間の最大接触を可能にすることとによって、抗体－支持体マトリックスと接触され得る。結合反応が完了した後、スラリーを、ビーズの収集用のカラムに通す。ビーズは、適切な洗浄緩衝剤を使用して洗浄され、続いて、純粋な、又は実質的に純粋な抗原が溶出される。
目的の抗体又はポリペプチドは、ビーズ等の固体支持体にコンジュゲートされ得る。さらに、ビーズ等の第１の固体支持体はまた、望ましい場合、ポリペプチドの、支持体へのコンジュゲーションに関して本明細書中で開示されるものを含む任意の適切な手段によって、第２のビーズ又は他の支持体であり得る第２の固体支持体にコンジュゲートされ得る。したがって、ポリペプチドの、固体支持体へのコンジュゲーションに関して本明細書中に開示されるコンジュゲーション方法及び手段のいずれかはまた、第１の支持体の、第２の支持体へのコンジュゲーションにも適用することができ、そこでは、第１の固体支持体及び第２の固体支持体は、同じであり得るか、又は異なり得る。
ポリペプチドを、固体支持体にコンジュゲートするための使用に関する、架橋剤であり得る適切なリンカーとして、支持体の表面上に存在する官能基と、若しくはポリペプチドと、又はその両方と反応し得る様々な作用物質が挙げられる。架橋剤として有用な試薬として、ホモ二官能性試薬、及び特にヘテロ二官能性試薬が挙げられる。有用な二官能性架橋剤として、Ｎ－ＳＩＡＢ、ジマレイミド、ＤＴＮＢ、Ｎ－ＳＡＴＡ、Ｎ－ＳＰＤＰ、ＳＭＣＣ及び６－ＨＹＮＩＣが挙げられるが、これらに限定されない。架橋剤は、ポリペプチドと、固体支持体との間に選択的に切断可能な結合を提供するように選択され得る。例えば、３－アミノ－（２－ニトロフェニル）プロピオン酸等の光に不安定な（ｐｈｏｔｏｌａｂｉｌｅ）クロスリンカーは、ポリペプチドを固体支持体から切断するための手段として用いられ得る。（Brown et al., Mol. Divers, pp, 4-12 (1995)、Rothschild et al., Nucl. Acids Res., 24:351-66 (1996)、及び米国特許第５，６４３，７２２号）。他の架橋剤が、当該技術分野で周知されている。（例えば、上述のWong(1991)、及び上述のHermanson(1996)を参照のこと）。
抗体又はポリペプチドは、カルボキシル基官能基化ビーズと、ポリペプチドのアミノ末端との間で形成される共有結合的アミド結合により、又は逆に、アミノ基官能基化ビーズと、ポリペプチドのカルボキシル末端との間で形成される共有結合的アミド結合により、ビーズ等の固体支持上に固定化され得る。さらに、二官能性トリチルリンカーは、支持体に、例えば、Ｗａｎｇ樹脂等の樹脂上の４－ニトロフェニル活性エステルに、アミノ樹脂を介して樹脂上のアミノ基又はカルボキシル基により結合され得る。二官能性トリチルアプローチを使用して、確実にポリペプチドが切断されて、除去され得るように、固体支持体は、ギ酸又はトリフルオロ酢酸等の揮発性酸による処置を要し得る。かかる場合では、ポリペプチドは、固体支持体のウェルの底部で、又は固体支持体の平坦な表面上で、ビーズレスパッチとして堆積され得る。マトリックス溶液の添加後、ポリペプチドは、ＭＳに脱着され得る。
疎水性トリチルリンカーもまた、揮発性酸又は適切なマトリックス溶液、例えば、３－ＨＰＡを含有するマトリックス溶液を使用することによって、酸に不安定なリンカーとして活用されて、アミノ連結トリチル基を、ポリペプチドから切断することができる。酸不安定性は変化し得る。例えば、トリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチル又はトリメトキシトリチルは、ポリペプチドの、適切なｐ－置換トリチルアミン誘導体、又はより酸に不安定なトリチルアミン誘導体に変化させることができ、即ち、トリチルエーテル及びトリチルアミン結合は、ポリペプチドに対して成され得る。したがって、ポリペプチドは、例えば、疎水性引力を崩壊することによって、又は望ましい場合には、３－ＨＰＡ等のマトリックスが酸として作用する典型定なＭＳ条件下を含む酸性条件下でトリチルエーテル又はトリチルアミン結合を切断することによって、疎水性リンカーから除去され得る。
直交的に切断可能なリンカーはまた、第１の固体支持体、例えばビーズを、第２の固体支持体に結合するのに、又は目的のポリペプチドを、固体支持体に結合するのに有用であり得る。かかるリンカーを使用して、第１の固体支持体、例えばビーズは、ポリペプチドを支持体から切断せずに、第２の固体支持体から選択的に切断させることができ、続いて、ポリペプチドは、その後になってビーズから切断させることができる。例えば、ＤＴＴ等の還元剤を使用して切断され得るジスルフィドリンカーは、ビーズを第２の固体支持体に結合するのに用いることができ、酸で切断可能な二官能性トリチル基を使用して、ポリペプチドを支持体に固定化することができる。望ましい場合、ポリペプチドの、固体支持体への連結をまず切断することができ、例えば、第１の支持体と、第２の支持体との間の連結を無傷のままの状態にさせる。トリチルリンカーは、共有結合的コンジュゲーション又は疎水性コンジュゲーションを提供することができ、コンジュゲーションの性質にかかわらず、トリチル基は、酸性条件で容易に切断される。
例えば、ビーズの、固体支持体への高密度結合、又はポリペプチドの、ビーズへの高密度結合が促進されるような長さ及び化学的性質を有するように選択され得る連結基を通じて、ビーズは、第２の支持体に結合され得る。かかる連結基は、例えば、「樹枝状の」構造を有することができ、それにより、固体支持体上で結合部位１つにつき多数の官能基を提供する。かかる連結基の例として、ポリリジン、ポリグルタミン酸、ペンタ－エリスリトール及びトリス－ヒドロキシ－アミノメタンが挙げられる。
非共有結合的結合。抗体又はポリペプチドは、非共有結合的相互作用を通じて、固体支持体にコンジュゲートされ得るか、又は第１の固体支持体はまた、第２の固体支持体にコンジュゲートされ得る。例えば、磁化されることが可能である強磁性材料で作られた磁気ビーズは、磁気固体支持体に結合させることができ、磁場の除去により、支持体から放出され得る。或いは、固体支持体に、イオン性部分又は疎水性部分を提供することができ、それは、それぞれ、イオン性部分又は疎水性部分の、ポリペプチドとの、例えば結合されたトリチル基を含有するポリペプチドとの、又は疎水性を有する第２の固体支持体との相互作用を可能にし得る。
また、固体支持体に、特異的な結合対の成員を提供することができ、したがって、相補的な結合部分を含有するポリペプチド又は第２の固体支持体にコンジュゲートさせることができる。例えば、アビジンで、又はストレプトアビジンでコーティングされたビーズは、ビオチン部分が取り込まれているポリペプチドに、又はビオチン若しくはイミノビオチン等のビオチンの誘導体でコーティングされた第２の固体支持体に結合され得る。
本明細書中で開示されるか、又はそうでなければ当該技術分野で公知の結合成員のいずれも反転し得ることが認識されるべきである。したがって、例えば、ビオチンは、ポリペプチド又は固体支持体のいずれかに取り込ませることができ、逆に、アビジン又は他のビオチン結合部分は、それぞれ、支持体又はポリペプチドに取り込ませられる。本明細書中での使用に関して意図される他の特異的な結合対として、ホルモン及びそれらの受容体、酵素、及びその基質、ヌクレオチド配列及びその相補配列、抗体及び抗体が特異的に相互作用する抗原、並びに当業者に公知の他のかかる対が挙げられるが、これらに限定されない。
Ａ．本技術の抗ＣＤ３抗体の診断的使用
概要。本技術の抗ＣＤ３抗体は、診断方法において有用である。したがって、本技術は、対象におけるＣＤ３活性の診断において抗体を使用する方法を提供する。本技術の抗ＣＤ３抗体は、それらが、ＣＤ３タンパク質に対するエピトープ結合特異性及び非常に高い結合親和性の任意のレベルを有するように選択され得る。概して、抗体の結合親和性が高いほど、標的ポリペプチドを除去せずに、非特異的に結合される材料を除去するのに、イムノアッセイにおいて、よりストリンジェントな洗浄条件が実施され得る。したがって、診断アッセイにおいて有用な本技術の抗ＣＤ３抗体は通常、約１０8Ｍ-1、１０9Ｍ-1、１０10Ｍ-1、１０11Ｍ-1又は１０12Ｍ-1の結合親和性を有する。さらに、診断試薬として使用される抗ＣＤ３抗体は、少なくとも１２時間、少なくとも五（５）時間、又は少なくとも一（１）時間で、標準的な条件下で平衡に達するのに十分な動力学的オンレートを有することが望ましい。
抗ＣＤ３抗体を使用して、様々な標準的なアッセイフォーマットで、免疫反応性ＣＤ３タンパク質を検出することができる。かかるフォーマットとして、免疫沈降、ウエスタンブロッティング、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ、及びイムノメトリック（ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｒｉｃ）アッセイが挙げられる。例えば、Harlow & Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Publications, New York, 1988)、米国特許第３，７９１，９３２号、同第３，８３９，１５３号、同第３，８５０，７５２号、同第３，８７９，２６２号、同第４，０３４，０７４号、同第３，７９１，９３２号、同第３，８１７，８３７号、同第３，８３９，１５３号、同第３，８５０，７５２号、同第３，８５０，５７８号、同第３，８５３，９８７号、同第３，８６７，５１７号、同第３，８７９，２６２号、同第３，９０１，６５４号、同第３，９３５，０７４号、同第３，９８４，５３３号、同第３，９９６，３４５号、同第４，０３４，０７４号、及び同第４，０９８，８７６を参照のこと。生体試料は、対象の任意の組織又は体液から得られ得る。ある特定の実施形態では、対象は、がんの初期ステージである。一実施形態では、がんの初期ステージは、対象から得られた試料中のＣＤ３タンパク質のレベル又は発現パターンによって決定される。ある特定の実施形態では、試料は、尿、血液、血清、血漿、唾液、羊水、脳脊髄液（ＣＳＦ）、及び生検体組織からなる群から選択される。
イムノメトリック又はサンドイッチアッセイは、本技術の診断方法に関するフォーマットの１種である。米国特許第４，３７６，１１０号、同第４，４８６，５３０号、同第５，９１４，２４１号、及び同第５，９６５，３７５を参照のこと。かかるアッセイは、１種の抗体、例えば、固相に固定化された抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体の集団、及び溶液中の別の抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体の集団を使用する。通常、溶液の抗ＣＤ３抗体又は抗ＣＤ３抗体の集団は標識される。抗体集団が使用される場合、集団は、標的ポリペプチド内の異なるエピトープ特異性に結合する抗体を含有し得る。したがって、同じ集団が、固相及び溶液抗体の両方に使用され得る。抗ＣＤ３モノクローナル抗体が使用される場合、異なる結合特異性を有する第１及び第２のＣＤ３モノクローナル抗体が、固相及び溶液相に使用される。固相（「捕捉」とも称される）及び溶液（「検出」とも称される）抗体は、一方ずつ順に、又は同時に、標的抗原と接触され得る。固相抗体がまず接触される場合、アッセイは、フォワードアッセイであると称される。逆に、溶液抗体がまず接触される場合、アッセイは、リバースアッセイであると称される。標的が、両方の抗体と同時に接触される場合、アッセイは、同時アッセイと称される。ＣＤ３タンパク質を抗ＣＤ３抗体と接触させた後、試料は、通常、約１０分から約２４時間まで様々であり、通常は約１時間の期間でインキュベートされる。続いて、洗浄ステップが実施されて、診断試薬として使用される抗ＣＤ３抗体に特異的に結合されなかった試料の構成成分を除去する。固相及び溶液抗体が、別々のステップで結合される場合、洗浄は、一方又は両方の結合ステップ後に実施され得る。洗浄後、結合は、通常、標識溶液抗体の結合を通じて、固相に連結された標識を検出することによって定量化される。通常、抗体の所与の対又は抗体の集団及び所与の反応条件に関して、公知の濃度の標的抗原を含有する試料から、検量線が作成される。続いて、試験される試料中の免疫反応性ＣＤ３タンパク質の濃度は、検量線（即ち、標準曲線）からの内挿によって読み取られる。分析物は、平衡状態で結合された標識溶液抗体の量から、又は平衡に達する前の一連の時点での結合された標識溶液抗体の動力学的測定によって測定され得る。かかる曲線の勾配は、試料中のＣＤ３タンパク質の濃度の尺度である。
上記方法における使用に適した支持体として、例えば、ニトロセルロース膜、ナイロン膜、及び誘導体化されたナイロン膜、並びにまた、アガロース、デキストランベースゲル、ディップスティック、粒子状物質、ミクロスフェア、磁性粒子、試験管、マイクロタイターウェル、ＳＥＰＨＡＤＥＸ（商標）（Amersham Pharmacia Biotech社、ニュージャージー州ピスカタウェイ）等の粒子などが挙げられる。固定化は、吸収によるか、又は共有結合によるものであり得る。任意に、抗ＣＤ３抗体は、アビジン等の表面結合リンカーへの結合のために、ビオチン等のリンカー分子に結合され得る。
一部の実施形態では、本開示は、診断剤にコンジュゲートされた本技術の抗ＣＤ３抗体を提供する。診断剤は、放射性又は非放射性標識、造影剤（例えば、磁気共鳴画像法、コンピュータ断層撮影法又は超音波用の）を含んでもよく、放射性標識は、ガンマ放出同位体、ベータ放出同位体、アルファ放出同位体、オージェ電子放出同位体、又は陽電子放出同位体であり得る。投与される診断剤は、抗体部分、即ち、抗体又は抗体断片、又は細断片にコンジュゲートされた分子であり、抗原を含有する細胞を位置付けることによって、疾患を診断又は検出するのに有用である。
有用な診断剤として、放射性同位体、色素（例えば、ビオチン－ストレプトアビジン複合体を用いて）、造影剤、蛍光化合物又は分子及び磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）用の増強剤（例えば、常磁性イオン）が挙げられるが、これらに限定されない。米国特許第６，３３１，１７５号は、ＭＲＩ増強剤にコンジュゲートされた抗体のＭＲＩ技法及び調製について記載しており、その全体が参照により組み込まれる。一部の実施形態では、診断剤は、放射性同位体、磁気共鳴画像法における使用のための増強剤、及び蛍光化合物からなる群から選択される。抗体構成成分に放射性金属又は常磁性イオンを負荷するために、イオンを結合するための多数のキレート基が結合されている長い尾部を有する試薬と、抗体構成成分を反応させる必要があり得る。かかる尾部は、ポリリジン、多糖、又は例えば、この目的で有用であることが公知のエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ポルフィリン、ポリアミン、クラウンエーテル、ビス－チオセミカルバゾン、ポリオキシム等の基のようなキレート基が結合され得るペンダント基を有する他の誘導体化されたか、若しくは誘導体化可能な鎖であり得る。キレートは、標準的な化学を使用して、本技術の抗体にカップリングされ得る。キレートは通常、免疫反応性の最小の損失並びに最小の凝集及び／又は内部架橋で、分子への結合の形成を可能にする基によって抗体に連結される。キレートを抗体にコンジュゲートするための他の方法及び試薬は、米国特許第４，８２４，６５９号に開示されている。特に有用な金属－キレートの組合せとして、ラジオイメージング用の診断同位体とともに使用される、２－ベンジル－ＤＴＰＡ並びにそのモノメチル及びシクロヘキシルアナログが挙げられる。同じキレートは、マンガン、鉄及びガドリニウム等の非放射性金属と複合体形成されると、本技術のＣＤ３抗体とともに使用される場合にＭＲＩに有用である。
ＮＯＴＡ（１，４，７－トリアザ－シクロノナン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ”－三酢酸）、ＤＯＴＡ、及びＴＥＴＡ（ｐ－ブロモアセトアミド－ベンジル－テトラエチルアミン四酢酸）等の大環状キレートは、様々な金属並びにそれぞれガリウム、イットリウム及び銅の放射性核種等の放射性金属とともに使用される。かかる金属－キレート錯体は、環の大きさを、目的の金属に合わせることによって安定化され得る。他のＤＯＴＡキレートの例として、（ｉ）ＤＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、（ｉｉ）Ａｃ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2；（ｉｉｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｉｖ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｖ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｖｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｖｉｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｖｉｉｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ2；（ｉｘ）Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ2；（ｘ）Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－ＮＨ2；（ｘｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2；（ｘｉｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2；（ｘｉｉｉ）（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ2；（ｘｉｖ）Ｔｓｃｇ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｘｖ）（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｘｖｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｃｙｓ－ＮＨ2；（ｘｖｉｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ2、（ｘｖｉｉｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、及び（ｘｉｘ）Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2が挙げられる。
ＲＡＩＴに関する223Ｒａ等の核種を安定に結合するための目的の大環状ポリエーテル等の他の環型キレートもまた意図される。
Ｂ．本技術の抗ＣＤ３抗体の治療的使用
一態様では、本技術の免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体又はその抗原結合断片）は、固形腫瘍又は液性腫瘍の処置に有用である。適切な固形腫瘍又は液性腫瘍の非限定的例は、副腎がん、膀胱がん、血液がん、骨がん、脳がん、乳がん、細胞癌、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮体がん、耳鼻咽喉（ＥＮＴ）がん、子宮内膜がん、食道がん、胃腸がん、頭頚部がん、ホジキン病、腸がん、腎臓がん、咽頭がん、急性及び慢性白血病、肝臓がん、リンパ節がん、リンパ腫、肺がん、黒色腫、中皮腫、骨髄腫、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、肉腫、精上皮腫、皮膚がん、胃がん、奇形腫、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、血管腫瘍、及びそれらの転移を含む。
一態様では、本技術の免疫グロブリン関連組成物（例えば、抗体又はその抗原結合断片）は、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス、セリアック病、交感性眼炎、１型糖尿病、移植片対宿主病、前駆Ｔ急性リンパ性白血病／リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症タイプＡ、菌状息肉腫、パジェット様細網症、肉芽腫様弛緩皮膚、セザリー症候群、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、皮膚大Ｔ細胞リンパ腫、多形Ｔ細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症タイプＢ、二次皮膚ＣＤ３０＋大細胞リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、腸症関連Ｔ細胞リンパ腫、非特定型末梢性Ｔ細胞リンパ腫、皮下Ｔ細胞リンパ腫、大顆粒リンパ球性白血病、及び急性混合白血病などのＣＤ３関連病態の処置に有用である。該処置は、病理学的に高いレベルのＣＤ３と同定された患者（例えば、本明細書に記載される方法により診断された患者）で又は該病理学的レベルと関連していることが分かっている疾患と診断された患者で使用することができる。一態様では、本開示は、それを必要とする対象において、ＣＤ３関連病態を処置する方法であって、該対象に、有効量の、本技術の抗体（又はその抗原結合断片）を投与することを含む、方法を提供する。本技術の抗体により処置することができるＣＤ３関連病態の例は、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス、セリアック病、交感性眼炎、１型糖尿病、移植片対宿主病、前駆Ｔ急性リンパ性白血病／リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症タイプＡ、菌状息肉腫、パジェット様細網症、肉芽腫様弛緩皮膚、セザリー症候群、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、皮膚大Ｔ細胞リンパ腫、多形Ｔ細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症タイプＢ、二次皮膚ＣＤ３０＋大細胞リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、腸症関連Ｔ細胞リンパ腫、非特定型末梢性Ｔ細胞リンパ腫、皮下Ｔ細胞リンパ腫、大顆粒リンパ球性白血病、及び急性混合白血病を含むがこれらに限定されない。
本技術の組成物は、自己免疫疾患又はＴ細胞悪性腫瘍の処置に有用である他の治療剤と併せて用いてもよい。例えば、本技術の抗体は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、選択性ＣＯＸ－２抑制剤、グルココルチコイド、及び従来の疾患修飾性抗リウマチ薬（ｃＤＭＡＲＤ）からなる群から選択される少なくとも１種の追加の治療剤と別々に、順次又は同時に投与してもよい。ＮＳＡＩＤの例は、（１）サリチル酸誘導体：アセチルサリチル酸（アスピリン）、ジフルニサル及びスルファサラジン；（２）パラ－アミノフェノール誘導体：アセトアミノフェン；（３）フェナム酸：メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸；（４）プロピオン酸誘導体：イブプロフェン、ナプロキセン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン；及び（５）エノール酸（オキシカム）誘導体：ピロキシカム、テノキシカムを含むがこれらに限定されない。
選択性ＣＯＸ－２抑制剤の例は、メロキシカム、サリチル酸塩、ニメスリド、セレコキシブ、オフェコキシブ、バルデコキシブ、ルミラコキシブ、パレコキシブ、及びエトリコキシブを含むがこれらに限定されない。グルココルチコイドの例は、プレドニゾン／プレドニゾロン、メチルプレドニゾロン、並びにデキサメタゾン及びベタメタゾンなどのフッ化グルココルチコイドを含むがこれらに限定されない。ＤＭＡＲＤの例は、メトトレキサート、レフルノミド、金化合物、スルファサラジン、アザチオプリン、シクロホスファミド、抗マラリア薬、ｄ－ペニシラミン、シクロスポリン、ヒドロキシクロロキン、エタネルセプト、インフリキシマブ、アダリムマブ、ゴリムマブ、及びセルトリズマブペゴルを含むがこれらに限定されない。
本技術の組成物は、ＣＤ３関連がんの処置において有用な他の治療剤と併用され得る。例えば、本技術の抗体は、アルキル化剤、白金剤、タキサン、ビンカ剤、抗エストロゲン薬、アロマターゼ阻害剤、卵巣抑制剤、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＥＧＦ／ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、細胞分裂阻害アルカロイド、細胞傷害性抗生物質、代謝拮抗薬、内分泌／ホルモン剤、ビスホスホネート療法剤及び標的とされる生物学的治療剤（例えば、米国特許第６３０６８３２号、国際公開第２０１２００７１３７号、国際公開第２００５０００８８９号、国際公開第２０１００９６６０３号等に記載される治療用ペプチド）からなる群から選択される、少なくとも１種のさらなる治療剤と別々に、順次、又は同時に投与され得る。一部の実施形態では、少なくとも１種のさらなる治療剤は、化学療法剤である。特定の化学療法剤として、シクロホスファミド、フルオロウラシル（又は５－フルオロウラシル又は５－ＦＵ）、メトトレキサート、エダトレキサート（１０－エチル－１０－デアザ－アミノプテリン）、チオテパ、カルボプラチン、シスプラチン、タキサン、パクリタキセル、タンパク質結合性パクリタキセル、ドセタキセル、ビノレルビン、タモキシフェン、ラロキシフェン、トレミフェン、フルベストラント、ゲムシタビン、イリノテカン、イクサベピロン、テモゾロミド、トポテカン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、エリブリン、マイトマイシン、カペシタビン、アナストロゾール、エキセメスタン、レトロゾール、ロイプロリド）、アバレリックス、ブセレリン、ゴセレリン、酢酸メゲストロール、リセドロン酸塩、パミドロン酸塩、イバンドロン酸塩、アレンドロン酸塩、デノスマブ、ゾレドロン酸塩、トラスツズマブ、タイケルブ、アントラサイクリン系（例えば、ダウノルビシン及びドキソルビシン）、ベバシズマブ、オキサリプラチン、メルファラン、エトポシド、メクロレタミン、ブレオマイシン、微小管毒（ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ ｐｏｉｓｏｎｓ）、バンレイシ科アセトゲニン（ａｎｎｏｎａｃｅｏｕｓ ａｃｅｔｏｇｅｎｉｎｓ）、又はそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されない。
本技術の組成物は、単独ボーラスとして、それを必要とする対象に投与されてもよい。或いは、投薬レジメンは、腫瘍の出現後の様々な時間で実施される複数回投与を含み得る。
投与は、経口、鼻腔内、非経口（静脈内、筋内、腹腔内、又は皮下）、直腸、頭蓋内、腫瘍内、髄腔内、又は局所を含む、任意の適切な経路によって実行され得る。投与は、自己投与及び別の人による投与を包含する。同様に、記載されるような医療状態の処置の各種モードが、完全を包含するが、完全には至らない処置も包含する「実質的」を意味すると意図されることが理解され、ここで、一部の生物学的又は医療的に関連する結果が達成される。
一部の実施形態では、本技術の抗体は、それを必要とする対象において、１回又は複数回用量で投与され得る医薬製剤を含む。投薬量レジメンは、所望の応答（例えば、治療応答）を提供するように調整され得る。
通常、治療効果を達成するのに十分な、有効量の本技術の抗体組成物は、１日当たり体重１キログラムにつき約０．０００００１ｍｇ～１日当たり体重１キログラムにつき約１０，０００ｍｇの範囲である。通常、投薬量範囲は、１日当たり体重１キログラムにつき約０．０００１ｍｇ～１日当たり体重１キログラムにつき約１００ｍｇである。抗ＣＤ３抗体の投与に関して、投薬量は、対象の体重について、毎週、２週間毎に、又は３週間毎に、約０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇ、より通常では０．０１～５ｍｇ／ｋｇの範囲である。例えば、投薬量は、毎週、２週間毎に、若しくは３週間毎に、１ｍｇ／ｋｇ（体重）若しくは１０ｍｇ／ｋｇ（体重）であり得るか、又は毎週、２週間毎に、又は３週間毎に、１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。一実施形態では、抗体の単回投薬量は、体重１ｋｇにつき０．１～１０，０００マイクログラムの範囲である。一実施形態では、担体中の抗体濃度は、送達される１ミリリットルにつき０．２～２０００マイクログラムの範囲である。例示的な処置レジメンは、２週間に１回又は１ヵ月に１回又は３ヵ月～６ヵ月に１回の投与を伴う。抗ＣＤ３抗体は、複数回投与され得る。単回投薬間の間隔は、毎時、毎日、毎週、毎月又は毎年であり得る。間隔はまた、対象における抗体の血中レベルを測定することによって示される場合には不規則であってもよい。一部の方法では、投薬量は、約７５μｇ／ｍＬ～約１２５μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ～約１５０μｇ／ｍＬ、約１２５μｇ／ｍＬ～約１７５μｇ／ｍＬ、又は約１５０μｇ／ｍＬ～約２００μｇ／ｍＬの対象における血清抗体濃度を達成するように調整される。或いは、抗ＣＤ３抗体は、持続放出性製剤として投与されてもよく、そこでは、より低頻度の投与が要される。投薬量及び頻度は、対象における抗体の半減期に応じて様々である。投薬量及び投与の頻度は、処置が予防的又は治療的であるかどうかに応じて多様であり得る。予防的用途では、比較的低い投薬量が、長期間にわたって比較的低頻度の間隔で投与される。治療的用途では、疾患の進行が低減若しくは終結されるまで、又は対象が疾患の症状の部分的若しくは完全な回復を示すまで、場合によっては比較的短い間隔で比較的高い投薬量が要される。その後、患者は、予防的レジメンで投与され得る。
別の態様では、本開示は、対象におけるがんをｉｎ ｖｉｖｏで検出する方法であって、（ａ）該対象に、有効量の本技術の抗体（又はその抗原結合断片）を投与することであって、該抗体が、ＣＤ３を発現するがん細胞に局在化するよう構成され、放射性同位元素で標識されている、投与することと、（ｂ）参照値よりも高い抗体によって放出される放射性レベルを検出することによって、該対象における腫瘍の存在を検出することとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、参照値は、１グラム当たりの注射用量（％ＩＤ／ｇ）として表される。参照値は、非腫瘍（正常）組織中に存在する放射性レベルを測定することと、非腫瘍（正常）組織中に存在する平均放射性レベル±標準偏差を計算することとによって算出され得る。一部の実施形態では、腫瘍組織と、正常組織との間の放射性レベルの比は、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１、又は１００：１である。
一部の実施形態では、対象は、がんと診断されているか、又はがんを有する疑いがある。抗体によって放出される放射性レベルは、陽電子放射断層撮影法又は単一光子放射断層撮影法を使用して検出され得る。
さらに、又は或いは、一部の実施形態では、上記方法は、該対象に、有効量の、放射性核種にコンジュゲートされた本技術の抗体を含むイムノコンジュゲートを投与することをさらに含む。一部の実施形態では、放射性核種は、アルファ粒子放出同位体、ベータ粒子放出同位体、オージェエミッター、又はそれらの任意の組合せである。ベータ粒子放出同位体の例として、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、165Ｄｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕ、及び67Ｃｕが挙げられる。アルファ粒子放出同位体の例として、213Ｂｉ、211Ａｔ、225Ａｃ、152Ｄｙ、212Ｂｉ、223Ｒａ、219Ｒｎ、215Ｐｏ、211Ｂｉ、221Ｆｒ、217Ａｔ、及び255Ｆｍが挙げられる。オージェエミッターの例として、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌ、及び203Ｐｂが挙げられる。上記方法の一部の実施形態では、正常な組織における非特異的なＦｃＲ依存性結合は、排除又は低減される（例えば、アグリコシル化（ａｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）をもたらすＦｃ領域におけるＮ２９７Ａ変異を介して）。かかるイムノコンジュゲートの治療有効性は、曲線下面積（ＡＵＣ）腫瘍：ＡＵＣ正常組織の比を計算することによって決定され得る。一部の実施形態では、イムノコンジュゲートは、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１又は１００：１のＡＵＣ腫瘍：ＡＵＣ正常組織の比を有する。
ＰＲＩＴ。一態様では、本開示は、それを必要とする対象において腫瘍を検出する方法であって、（ａ）該対象に、有効量の、放射標識されたＤＯＴＡハプテン並びに放射標識されたＤＯＴＡハプテン、腫瘍抗原、及びＣＤ３抗原に結合する本技術の多特異性抗体又は抗原結合断片を含む複合体を投与することであって、該複合体が、該複合体の多特異性抗体又は抗原結合断片により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在化するよう構成される、投与することと、（ｂ）参照値よりも高い複合体によって放出される放射性レベルを検出することによって、該対象における腫瘍の存在を検出することとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。
一態様では、本開示は、予め標的とされる放射免疫療法に関して、対象を選択するための方法であって、（ａ）該対象に、有効量の、放射標識されたＤＯＴＡハプテン並びに放射標識されたＤＯＴＡハプテン、腫瘍抗原、及びＣＤ３抗原に結合する本技術の多特異性抗体又は抗原結合断片を含む複合体を投与することであって、該複合体が、該複合体の多特異性抗体又は抗原結合断片により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在化するよう構成される、投与することと、（ｂ）該複合体によって放出される放射性レベルを検出することと、（ｃ）該複合体によって放出される放射性レベルが、参照値よりも高い場合に、予め標的とされる放射免疫療法に関して、該対象を選択することとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。
予め標的とされる放射免疫療法に関して、対象を選択するための方法であって、（ａ）該対象に、有効量の放射標識されたＤＯＴＡハプテン、腫瘍抗原、及びＣＤ３抗原に結合する本技術の多特異性抗体又は抗原結合断片を投与することであって、該多特異性抗体が、該多特異性抗体又は抗原結合断片により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在化する構成される、投与することと、（ｂ）有効量の放射標識ＤＯＴＡハプテンの該対象に投与することであって、放射標識ＤＯＴＡハプテンが多特異性抗体又は抗原結合断片に結合するよう構成される、投与することと、（ｃ）多特異性抗体によって放出される放射性レベルを検出することと、（ｄ）多特異性抗体によって放出される放射性レベルが参照値よりも高い場合に、予め標的とされる放射免疫療法に関して、該対象を選択することとを含む、方法も本明細書で開示される。
ＤＯＴＡハプテンの例として、（ｉ）ＤＯＴＡ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2、（ｉｉ）Ａｃ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）Ｄ－Ｔｙｒ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2；（ｉｉｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｉｖ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｖ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｖｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｖｉｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｖｉｉｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ2；（ｉｘ）Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ2；（ｘ）Ａｃ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｂｚ－ＤＴＰＡ）－ＮＨ2；（ｘｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2；（ｘｉｉ）ＤＯＴＡ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2；（ｘｉｉｉ）（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－ＮＨ2；（ｘｉｖ）Ｔｓｃｇ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｘｖ）（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－Ｄ－Ｇｌｕ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＨＳＧ）－ＮＨ2；（ｘｖｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ａｌａ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｃｙｓ－ＮＨ2；（ｘｖｉｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｃｙｓ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－ＮＨ2；（ｘｖｉｉｉ）Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＴＰＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2、（ｘｉｘ）Ａｃ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｔｙｒ－Ｄ－Ｌｙｓ（ＤＯＴＡ）－Ｄ－Ｌｙｓ（Ｔｓｃｇ－Ｃｙｓ）－ＮＨ2及び（ｘｘ）ＤＯＴＡが挙げられる。放射標識は、アルファ粒子放出同位体、ベータ粒子放出同位体、又はオージェエミッターであり得る。放射標識の例として、213Ｂｉ、211Ａｔ、225Ａｃ、152Ｄｙ、212Ｂｉ、223Ｒａ、219Ｒｎ、215Ｐｏ、211Ｂｉ、221Ｆｒ、217Ａｔ、255Ｆｍ、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、165Ｄｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕ、67Ｃｕ、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌ、203Ｐｂ、68Ｇａ、227Ｔｈ、又は64Ｃｕが挙げられる。
本明細書中に開示される方法の一部の実施形態では、複合体によって放出される放射性レベルは、陽電子放射断層撮影法又は単一光子放射断層撮影法を使用して検出される。
さらに、又は或いは、本明細書で開示される方法の一部の実施形態では、対象は、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス、セリアック病、交感性眼炎、１型糖尿病、移植片対宿主病、前駆Ｔ急性リンパ性白血病／リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症タイプＡ、菌状息肉腫、パジェット様細網症、肉芽腫様弛緩皮膚、セザリー症候群、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、皮膚大Ｔ細胞リンパ腫、多形Ｔ細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症タイプＢ、二次皮膚ＣＤ３０＋大細胞リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、腸症関連Ｔ細胞リンパ腫、非特定型末梢性Ｔ細胞リンパ腫、皮下Ｔ細胞リンパ腫、大顆粒リンパ球性白血病、及び急性混合白血病を有すると診断される、又はこれらを有すると疑われている。本明細書で開示される方法の他の実施形態では、対象は、副腎がん、膀胱がん、血液がん、骨がん、脳がん、乳がん、細胞癌、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮体がん、耳鼻咽喉（ＥＮＴ）がん、子宮内膜がん、食道がん、胃腸がん、頭頚部がん、ホジキン病、腸がん、腎臓がん、咽頭がん、急性及び慢性白血病、肝臓がん、リンパ節がん、リンパ腫、肺がん、黒色腫、中皮腫、骨髄腫、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、肉腫、精上皮腫、皮膚がん、胃がん、奇形腫、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、血管腫瘍、及びそれらの転移を有すると診断される、又はこれらを有すると疑われている。
さらに、又は或いは、本明細書中に開示される方法の一部の実施形態では、複合体は、静脈内に、筋内に、動脈内に、髄腔内に、関節包内に、眼窩内に、皮内に、腹腔内に、経気管内に、皮下に、脳室内に、経口的に、腫瘍内に、又は鼻腔内に投与される。ある特定の実施形態では、複合体は、対象の脳脊髄液又は血液に投与される。
本明細書中に開示される方法の一部の実施形態では、複合体によって放出される放射性レベルは、複合体が投与された２時間後～１２０時間後に検出される。本明細書中に開示される方法のある特定の実施形態では、複合体によって放出される放射性レベルは、組織１グラム当たりの注射用量のパーセンテージ（％ＩＤ／ｇ）として表される。参照値は、非腫瘍（正常）組織中に存在する放射性レベルを測定することと、非腫瘍（正常）組織中に存在する平均放射性レベル±標準偏差を計算することとによって算出され得る。一部の実施形態では、参照値は、標準取込み値（ＳＵＶ）である。Thie JA, J Nucl Med. 45(9):1431-4 (2004)を参照のこと。一部の実施形態では、腫瘍組織と、正常組織との間の放射性レベルの比は、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１、又は１００：１である。
別の態様では、本開示は、がんと診断された対象において放射線療法に対する腫瘍感受性を増加させる方法であって、（ａ）該対象に、有効量の、放射標識されたＤＯＴＡハプテン、腫瘍抗原、及びＣＤ３抗原に結合する本技術の多特異性抗体又は抗原結合断片を投与することであって、該多特異性抗体が、該多特異性抗体又は抗原結合断片により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在化するよう構成される、投与することと、（ｂ）有効量の放射標識ＤＯＴＡハプテンを該対象に投与することであって、放射標識ＤＯＴＡハプテンが多特異性抗体又は抗原結合断片に結合するよう構成される、投与することとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。
抗ＤＯＴＡ多特異性抗体は、それが腫瘍細胞を飽和させるのに十分な条件下で、またそれが腫瘍細胞を飽和させるのに十分な期間、投与される（例えば、投薬レジメンに従って）。一部の実施形態では、未結合の抗ＤＯＴＡ多特異性抗体は、抗ＤＯＴＡ多特異性抗体の投与後に血流から除去される。一部の実施形態では、放射標識されたＤＯＴＡハプテンは、未結合の抗ＤＯＴＡ多特異性抗体の排除を可能にするのに十分であり得る期間後に投与される。
放射標識されたＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ多特異性抗体の投与の１分後～４日又はそれを超える日数後の任意の時間で投与され得る。例えば、一部の実施形態では、放射標識されたＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ多特異性抗体の投与の１分後、２分後、３分後、４分後、５分後、１０分後、１５分後、２０分後、２５分後、３０分後、３５分後、４０分後、５０分後、５５分後、１時間後、１．２５時間後、１．５時間後、１．７５時間後、２時間後、２．５時間後、３時間後、３．５時間後、４時間後、４．５時間後、５時間後、５．５時間後、６時間後、６．５時間後、７時間後、７．５時間後、８時間後、８．５時間後、９時間後、９．５時間後、１０時間後、１１時間後、１２時間後、１３時間後、１４時間後、１５時間後、１６時間後、１７時間後、１８時間後、１９時間後、２０時間後、２１時間後、２２時間後、２３時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後、又はその中の任意の範囲に投与される。或いは、放射標識されたＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ多特異性抗体の投与の４日又はそれを超える日数後の任意の時間で投与される。
さらに、又は或いは、一部の実施形態では、上記方法は、有効量の洗浄剤を、該放射標識されたＤＯＴＡハプテンの投与前に、該対象に投与することをさらに含む。洗浄剤は、Ｃ８２５－ハプテンとコンジュゲートされ得る任意の分子（デキストラン又はデンドリマー又はポリマー）であり得る。一部の実施形態では、洗浄剤は、２０００ｋＤ、１５００ｋＤ、１０００ｋＤ、９００ｋＤ、８００ｋＤ、７００ｋＤ、６００ｋＤ、５００ｋＤ、４００ｋＤ、３００ｋＤ、２００ｋＤ、１００ｋＤ、９０ｋＤ、８０ｋＤ、７０ｋＤ、６０ｋＤ、５０ｋＤ、４０ｋＤ、３０ｋＤ、２０ｋＤ、１０ｋＤ、又は５ｋＤ以下である。一部の実施形態では、洗浄剤は、５００ｋＤアミノデキストラン－ＤＯＴＡコンジュゲート（例えば、５００ｋＤ－デキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｙ）、５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｌｕ）、又は５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｉｎ）等）である。
一部の実施形態では、清澄剤及び放射標識されたＤＯＴＡハプテンは、本技術の抗ＤＯＴＡ多特異性抗体又は抗原結合断片のさらなる投与を伴わずに投与される。例えば、一部の実施形態では、本技術の抗ＤＯＴＡ多特異性抗体又は抗原結合断片は、（ｉ）本技術の抗ＤＯＴＡ多特異性抗体又は抗原結合断片の投与（任意に、関連する腫瘍細胞が飽和されるように）；（ｉｉ）放射標識されたＤＯＴＡハプテン及び任意に清澄剤の投与；（ｉｉｉ）抗ＤＯＴＡ多特異性抗体の追加の投与を伴わない、放射標識されたＤＯＴＡハプテン及び／又は清澄剤の任意の追加の投与の少なくとも１サイクルを含むレジメンに従って投与される。一部の実施形態では、上記方法は、複数回のかかるサイクル（例えば、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回又はそれを超えるサイクル）を含み得る。
さらに、又は或いは、上記方法の一部の実施形態では、抗ＤＯＴＡ多特異性抗体及び／又は放射標識されたＤＯＴＡハプテンは、静脈内に、筋内に、動脈内に、髄腔内に、関節包内に、眼窩内に、皮内に、腹腔内に、経気管内に、皮下に、脳室内に、腫瘍内に、経口的に、又は鼻腔内に投与される。
一態様では、本開示は、がんと診断された対象において放射線療法に対する腫瘍感受性を増加させる方法であって、該対象に、有効量の、放射標識ＤＯＴＡハプテン並びに放射標識ＤＯＴＡハプテン、ＣＤ３抗原及び腫瘍抗原を認識して結合する本技術の多特異性抗体又は抗原結合断片を含む複合体を投与することであって、該複合体が、該複合体の多特異性抗体又は抗原結合断片により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在化するよう構成される、投与することを含む、方法を提供する。複合体は、静脈内に、筋内に、動脈内に、髄腔内に、関節包内に、眼窩内に、皮内に、腹腔内に、経気管内に、皮下に、脳室内に、経口的に、腫瘍内に、又は鼻腔内に投与され得る。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。
別の態様では、本開示は、それを必要とする対象においてがんを処置する方法であって、（ａ）有効量の本技術の抗ＤＯＴＡ多特異性抗体又は抗原結合断片を該対象に投与することであって、該抗ＤＯＴＡ多特異性抗体が（ｉ）ＣＤ３抗原に結合する、及び（ｉｉ）腫瘍抗原に結合して局在化するよう構成される、投与することと、（ｂ）有効量の放射標識ＤＯＴＡハプテンを該対象に投与することであって、該放射標識ＤＯＴＡハプテンが抗ＤＯＴＡ多特異性抗体又は抗原結合断片に結合するよう構成される、投与することとを含む、方法を提供する。抗ＤＯＴＡ多特異性抗体は、それが腫瘍細胞を飽和させるのに十分な条件下で、またそれが腫瘍細胞を飽和させるのに十分な期間、投与される（例えば、投薬レジメンに従って）。一部の実施形態では、未結合の抗ＤＯＴＡ多特異性抗体は、抗ＤＯＴＡ多特異性抗体の投与後に血流から除去される。一部の実施形態では、放射標識されたＤＯＴＡハプテンは、未結合の抗ＤＯＴＡ多特異性抗体の排除を可能にするのに十分であり得る期間後に投与される。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。
したがって、一部の実施形態では、上記方法は、有効量の洗浄剤を、該放射標識されたＤＯＴＡハプテンの投与前に、該対象に投与することをさらに含む。放射標識されたＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ多特異性抗体の投与の１分後～４日又はそれを超える日数後の任意の時間で投与され得る。例えば、一部の実施形態では、放射標識されたＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ多特異性抗体の投与の１分後、２分後、３分後、４分後、５分後、１０分後、１５分後、２０分後、２５分後、３０分後、３５分後、４０分後、４５分後、５０分後、５５分後、１時間後、１．２５時間後、１．５時間後、１．７５時間後、２時間後、２．５時間後、３時間後、３．５時間後、４時間後、４．５時間後、５時間後、５．５時間後、６時間後、６．５時間後、７時間後、７．５時間後、８時間後、８．５時間後、９時間後、９．５時間後、１０時間後、１１時間後、１２時間後、１３時間後、１４時間後、１５時間後、１６時間後、１７時間後、１８時間後、１９時間後、２０時間後、２１時間後、２２時間後、２３時間後、２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後、又はその中の任意の範囲に投与される。或いは、放射標識されたＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ多特異性抗体の投与の４日又はそれを超える日数後の任意の時間で投与され得る。
洗浄剤は、５００ｋＤアミノデキストラン－ＤＯＴＡコンジュゲート（例えば、５００ｋＤ－デキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｙ）、５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｌｕ）、又は５００ｋＤデキストラン－ＤＯＴＡ－Ｂｎ（Ｉｎ）等）であり得る。一部の実施形態では、洗浄剤及び放射標識されたＤＯＴＡハプテンは、抗ＤＯＴＡ多特異性抗体のさらなる投与を伴わずに投与される。例えば、一部の実施形態では、抗ＤＯＴＡ多特異性抗体は、（ｉ）本技術の抗ＤＯＴＡ多特異性抗体又は抗原結合断片の投与（任意に、関連する腫瘍細胞が飽和されるように）；（ｉｉ）放射標識ＤＯＴＡハプテン及び任意に清澄剤の投与；（ｉｉｉ）抗ＤＯＴＡ多特異性抗体の追加の投与を伴わない、放射標識ＤＯＴＡハプテン及び／又は清澄剤の任意の追加の投与の少なくとも１サイクルを含むレジメンに従って投与される。一部の実施形態では、方法は、複数の該サイクル（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれよりも多いサイクル）を含んでもよい。
それを必要とする対象においてがんを処置する方法であって、該対象に、有効量の、放射標識ＤＯＴＡハプテン並びに放射標識ＤＯＴＡハプテン、ＣＤ３抗原、及び腫瘍抗原を認識して結合する本技術の多特異性抗体又は抗原結合断片を含む複合体を投与することであって、該複合体が、該複合体の多特異性抗体により認識される腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在化するよう構成される、投与することを含む、方法も本明細書で提供される。かかる複合体の治療有効性は、曲線下面積（ＡＵＣ）腫瘍：ＡＵＣ正常組織の比を計算することによって決定され得る。一部の実施形態では、複合体は、約２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、３０：１、３５：１、４０：１、４５：１、５０：１、５５：１、６０：１、６５：１、７０：１、７５：１、８０：１、８５：１、９０：１、９５：１又は１００：１のＡＵＣ腫瘍：ＡＵＣ正常組織の比を有する。
本明細書で開示される方法のありとあらゆる実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ３、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＤ２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、Ｎ－アセチルグルコサミントランスフェラーゼ、ｐ１５、ｇｐ７５、ベータ－カテニン、ＥｒｂＢ２、がん抗原１２５（ＣＡ－１２５）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、ＲＡＧＥ、ＭＡＲＴ（メラノーマ抗原）、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２、ＭＵＣ－３、ＭＵＣ－４、ＭＵＣ－５ａｃ、ＭＵＣ－１６、ＭＵＣ－１７、チロシナーゼ、Ｐｍｅｌ １７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ－ＶイントロンＶ配列（Ｎ－アセチルグルコサミントランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺がんｐｓｍ、ＰＲＡＭＥ（メラノーマ抗原）、β－カテニン、ＥＢＮＡ（エプスタインバーウイルス核内抗原）１－６、ＬＭＰ２、ｐ５３、肺抵抗タンパク質（ＬＲＰ）、Ｂｃｌ－２、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、Ｋｉ－６７、ＣＥＡＣＡＭ６、結腸特異抗原－ｐ（ＣＳＡｐ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦ、インスリン様成長因子（ＩＬＧＦ）、テネイシン、血小板由来成長因子、ＩＬ－６、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＭＥＴ、ＤＬＬ４、Ａｎｇ－２、ＨＥＲ３、ＩＧＦ－１Ｒ、ＣＤ３０、ＴＡＧ－７２、ＳＰＥＡＰ、ＣＤ４５、Ｌ１－ＣＡＭ、ルイスＹ（Ｌｅy）抗原、Ｅ－カドヘリン、Ｖ－カドヘリン、ＧＰＣ３、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ８０、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１２３、ＴＣＲガンマ／デルタ、ＮＫｐ４６、ＫＩＲ、ＣＤ５６、ＤＬＬ３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ９９、グロボＨ、ＣＤ２４、ＳＴＥＡＰ１、Ｂ７Ｈ３、ポリシアル酸、ＯＸ４０、ＯＸ４０－リガンド、ペプチドＭＨＣ複合体（ＴＰ５３、ＫＲＡＳ、ＭＹＣ、ＥＢＮＡ１－６、ＰＲＡＭＥ、ＭＡＲＴ、チロシナーゼ、ＭＡＧＥＡ１－Ａ６、ｐｍｅｌ１７、ＬＭＰ２、又はＷＴ１由来のペプチドを有する）、又は小分子ＤＯＴＡハプテンからなる群から選択される。
毒性。最適には、本明細書に記載される抗ＣＤ３抗体の有効量（例えば、用量）は患者に実質的な毒性を与えることなく治療効果を提供する。本明細書中に記載される抗ＣＤ３抗体の毒性は、細胞培養液又は実験動物における標準的な製薬手順によって、例えば、ＬＤ50（集団の５０％に対して致死的な用量）又はＬＤ100（集団の１００％に対して致死的な用量）を決定することによって決定され得る。毒性効果と、治療効果との間の用量比が、治療指数である。これらの細胞培養液アッセイ及び動物研究から得られたデータは、ヒトにおける使用にとって毒性でない投薬量範囲を配合するのに使用され得る。本明細書中に記載される抗ＣＤ３抗体の投薬量は、ほとんど又は全く毒性を有さない有効用量を含む循環濃度の範囲内に存在する。投薬量は、用いられる剤形及び利用される投薬経路に応じて、この範囲内で多様であり得る。正確な配合、投与経路及び投薬量は、対象の状態を考慮して、個々の医師によって選択され得る。例えば、Fingl et al., In: The Pharmacological Basis of Therapeutics, Ch. 1 (1975)を参照のこと。
医薬組成物の製剤。本技術の方法によれば、抗ＣＤ３抗体は、投与に適した医薬組成物に取り込まれ得る。医薬組成物は概して、対象への投与に適した形態で、組換え抗体又は実質的に精製された抗体及び薬学的に許容される担体を含む。薬学的に許容される担体は、幾分、投与される特定の組成物によって、並びに組成物を投与するのに使用される特定の方法によって決定される。したがって、抗体組成物を投与するための、医薬組成物の多種多様な適切な製剤が存在する（例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA 18th ed., 1990を参照のこと）。医薬組成物は概して、滅菌の実質的に等張性として、アメリカ食品医薬品局のすべての適正製造基準（ＧＭＰ）規則に完全準して配合される。
「薬学的に許容される」、「生理学的に許容される」、及びそれらの文法的変動の用語は、それらが、組成物、担体、希釈剤及び試薬を指す場合、交換可能に使用され、材料が、組成物の投与を禁止する程度の望ましくない生理学的影響の産生を伴わずに、対象への、又は対象上への投与が可能であることを表している。例えば、「薬学的に許容される賦形剤」は、一般的に安全で、無毒性で、かつ望ましい医薬組成物を調製するのに有用である賦形剤を意味し、獣医用途に、及びヒト医薬品使用に許容される賦形剤を包含する。かかる賦形剤は、固体、液体、半固体、又はエーロゾル組成物の場合では、気体であり得る。「薬学的に許容される塩及びエステル」は、薬学的に許容され、所望の薬理学的特性を有する塩及びエステルを意味する。かかる塩は、組成物中に存在する酸性プロトンが、無機又は有機塩基と反応することが可能である、形成され得る塩を包含する。適切な無機塩として、アルカリ金属、例えば、ナトリウム及びカリウム、マグネシウム、カルシウム、及びアルミニウムとともに形成されるものが挙げられる。適切な有機塩として、アミン塩基、例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎ－メチルグルカミン等のような有機塩基とともに形成されるものが挙げられる。かかる塩はまた、無機酸（例えば、塩酸及び臭化水素酸）及び有機酸（例えば、酢酸、クエン酸、マレイン酸並びにアルカンスルホン酸及びアレーンスルホン酸、例えば、メタンスルホン酸及びベンゼンスルホン酸）とともに形成される酸付加塩を包含する。薬学的に許容されるエステルとして、抗ＣＤ３抗体中に存在するカルボキシ基、スルホニルオキシ基及びホスホノキシ基から形成されるエステル、例えば、Ｃ1-6アルキルエステルが挙げられる。２つの酸性基が存在する場合、薬学的に許容される塩又はエステルは、一酸－一塩若しくはエステル、又は二塩若しくはエステルであってもよく、類似して、２つよりも多い酸性基が存在する場合、かかる基のいくつか又はすべてが、塩化又はエステル化され得る。この技術で指名される抗ＣＤ３抗体は、非塩化又は非エステル化形態で、或いは塩化及び／又はエステル化形態で存在することができ、かかる抗ＣＤ３抗体の命名は、元の（非塩化及び非エステル化）化合物並びにその薬学的に許容される塩及びエステルの両方を包含すると意図される。また、本技術のある特定の実施形態は、１つよりも多い立体異性形態中に存在することができ、かかる抗ＣＤ３抗体の命名は、すべての単一立体異性体及びかかる立体異性体のすべての混合物（ラセミであろうと、又は他の場合であろうと）を包含するよう意図される。当業者は、本技術の特定の薬物及び組成物に適した、投与のタイミング、配列及び投薬量を決定するのに差し支えない。
かかる担体又は希釈剤の例として、水、生理食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液、及び５％ヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されない。リポソーム及び固定油等の非水性ビヒクルもまた使用され得る。薬学的に活性な物質のためのかかる媒質及び化合物の使用は、当該技術分野で周知されている。ただし、任意の利便性の高い媒質又は化合物が、抗ＣＤ３抗体と不適合である限りにおいて、組成物中でのそれらの使用が意図される。補足的な活性化合物もまた、組成物に取り込まれ得る。
本技術の医薬組成物は、意図される投与経路に適合性であるように配合される。本技術の抗ＣＤ３抗体組成物は、非経口経路、局所経路、静脈内経路、経口経路、皮下経路、動脈内経路、皮内経路、経皮経路、直腸経路、頭蓋内経路、髄腔内経路、腹腔内経路、鼻腔内経路、又は筋内経路によって、又は吸入剤として投与され得る。抗ＣＤ３抗体は、各種ＣＤ３関連病態を処置するのに少なくとも部分的に有効である他の作用物質と組み合わせて投与されてもよい。
非経口、皮内、若しくは皮下用途に使用される溶液又は懸濁液は、下記の構成成分：滅菌希釈剤、例えば、注射用の水、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒；抗菌化合物、例えば、ベンジルアルコール又はメチルパラベン；酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウム；キレート化合物、例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）；緩衝剤、例えば、酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩、及び浸透圧の調整用の化合物、例えば、塩化ナトリウム又はデキストロースを含み得る。ｐＨは、酸又は塩基、例えば、塩酸又は水酸化ナトリウムを用いて調整され得る。非経口調製物は、ガラス若しくはプラスチックで作られた、アンプル、ディスポーザブルシリンジ又は複数回投与バイアル中に封入され得る。
注射可能な使用に適した医薬組成物として、滅菌水溶液（水溶性である場合）又は分散液及び滅菌注射可能な溶液又は分散液の即時調製用の滅菌粉末が挙げられる。静脈内投与に関して、適切な担体として、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（BASF社、パーシッパニー、ニュージャージー州）又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。すべての場合において、組成物は、滅菌でなくてはならず、容易な注射通過能（ｓｙｒｉｎｇｅａｂｉｌｉｔｙ）が存在する程度に流動性であるべきである。組成物は、製造及び保管の条件下で安定でなくてはならず、細菌及び真菌等の微生物の混入作用に対して保存されなくてならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール等）、及びそれらの適切な混合物を含有する溶媒又は分散液媒質であり得る。適正な流動性は、例えば、レシチン等のコーティングを用いることで、分散液の場合には、所要の粒径の維持によって、及び界面活性剤を用いることで、維持され得る。微生物の作用の防止は、各種抗菌化合物及び抗真菌化合物、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール等によって達成され得る。多くの場合、組成物中に、等張性化合物、例えば、糖、マンニトール、ソルビトール等のポリアルコール、塩化ナトリウムを含むことが望ましい。注射可能な組成物の長期吸収は、組成物中に、吸収を遅延させる化合物、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを含むことによってもたらされ得る。
滅菌注射可能な溶液は、適切な溶媒中の所要量の本技術の抗ＣＤ３抗体を、上記で列挙される成分の１種又は組合せとともに取り込むこと、必要に応じて、続く濾過滅菌によって調製され得る。概して、分散液は、抗ＣＤ３抗体を、基本的な分散液媒質及び上記で列挙されるものからの所要の他の成分を含有する滅菌ビヒクルへ取り込むことによって調製される。滅菌注射可能な溶液の調製用の滅菌粉末の場合、調製方法は、有効成分に加えて、任意のさらなる所望の成分の粉末を、それらの予め滅菌濾過された溶液から生じる真空乾燥及び凍結乾燥である。本技術の抗体は、有効成分の持続性又はパルス放出を可能にするような様式で配合され得るデポ注射又はインプラント調製物の形態で投与され得る。
経口組成物は概して、不活性希釈剤又は食用担体を含む。経口組成物は、ゼラチンカプセル中に封入され得るか、又は錠剤に圧縮され得る。経口治療用投与の目的で、抗ＣＤ３抗体は、賦形剤とともに取り込ませることができ、錠剤、トローチ、又はカプセルの形態で使用され得る。経口組成物はまた、洗口剤としての使用のための流動性担体を使用して調製することもでき、ここでは、流動性担体中の化合物は、経口的に投与されて、くちゅくちゅされて、吐き出されるか、又は飲み込まれる。薬学的に適合性の結合化合物、及び／又は補助剤材料は、組成物の一部として含まれ得る。錠剤、丸剤、カプセル、トローチ等は、下記の成分、又は類似した性質の化合物：結合剤、例えば、結晶セルロース、トラガカントゴム若しくはゼラチン；賦形剤、例えば、デンプン若しくはラクトース；崩壊化合物、例えば、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、若しくはコーンスターチ；潤滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム若しくはＳｔｅｒｏｔｅｓ；流動促進剤、例えば、コロイド二酸化ケイ素；甘味化合物、例えば、スクロース若しくはサッカリン；又は風味化合物、例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル、若しくは柑橘香味料のいずれかを含有し得る。
吸入による投与に関して、抗ＣＤ３抗体は、適切な推進剤、例えば、二酸化炭素等の気体を含有する加圧容器若しくはディスペンサー、又は噴霧器からのエーロゾルスプレーの形態で送達される。
全身投与はまた、経粘膜又は経皮手段によるものであり得る。経粘膜又は経皮投与に関して、透過されるべきバリアに適した浸透剤が、製剤中に使用される。かかる浸透剤は、当該技術分野において一般的に公知であり、例えば、経粘膜投与に関しては、清浄剤、胆汁酸塩、及びフシジン酸誘導体を包含する。経粘膜投与は、点鼻薬又は坐剤を使って遂行され得る。経皮投与に関して、抗ＣＤ３抗体は、当該技術分野で一般的に公知であるように、軟膏、軟膏剤、ジェル、又はクリームへと配合される。
抗ＣＤ３抗体はまた、直腸送達用の坐剤（例えば、ココアバター及び他のグリセリド等の従来の坐剤基剤を用いた場合）又は停留浣腸の形態で、医薬組成物として調製され得る。
一実施形態では、抗ＣＤ３抗体は、インプラント及びマイクロカプセル化された送達系を含む制御放出製剤等の、身体からの迅速な排除に対して抗ＣＤ３抗体を防御する担体を用いて調製される。エチレン酢酸ビニル、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸等の生分解性の生体適合性ポリマーが使用され得る。かかる製剤の調製方法は、当業者に明らかである。材料は、Alza社及びNova Pharmaceuticals社から商業的に入手可能であり得る。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を用いて感染細胞を標的とするリポソームを含む）もまた、薬学的に許容される担体として使用され得る。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されるように、当業者に公知の方法に従って調製され得る。
Ｃ．キット
本技術は、本技術の少なくとも１種の免疫グロブリン関連組成物（例えば、本明細書中に記載される任意の抗体又は抗原結合断片）、又はその機能性バリアント（例えば、置換バリアント）を含む、ＣＤ３関連病態の検出及び／又は処置のためのキットを提供する。任意に、本技術のキットの上述される構成成分は、適切な溶液中に充填されて、ＣＤ３関連病態の診断及び／又は処置のために標識される。上述の構成成分は、単位用量又は複数用量容器、例えば密封アンプル、バイアル、瓶、シリンジ、及び試験管中に、水溶液、好ましくは滅菌水溶液として、又は再構成用の凍結乾燥製剤、好ましくは滅菌製剤として、保管され得る。キットは、より高い体積へと医薬組成物を希釈するのに適した希釈剤を保持する第２の容器をさらに含み得る。適切な希釈剤として、医薬組成物の薬学的に許容される賦形剤及び生理食塩水が挙げられるが、これらに限定されない。さらに、キットは、希釈されようとされまいと、医薬組成物を希釈するための説明書及び／又は医薬組成物を投与するための説明書を含み得る。容器は、ガラス又はプラスチック等の様々な材料から形成されてもよく、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈内溶液袋又は皮下注射針によって穿孔され得るストッパーを有するバイアルであり得る）。キットは、リン酸緩衝食塩水、リンゲル溶液及びデキストロース溶液等の薬学的に許容される緩衝剤を含む、より多くの容器をさらに含み得る。キットは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、適切な宿主の１種又は複数のための培養培地を含む、商業的観点及びユーザーの観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。キットは、かかる治療用又は診断用製品の使用に関する、例えば、適応症、使用法、投薬量、製造、投与、禁忌及び／又は警告に関する情報を含有する、治療用又は診断用製品の商用パッケージ中に通例含まれる説明書を包含してもよい。
キットは、生体試料、例えば血清、血漿、リンパ液、嚢胞液、尿、糞便、脳脊髄液、腹水また血液を含むがこれらに限定されない、例えば任意の体液、及び体組織の生検試料を含む生体試料中の免疫反応性ＣＤ３タンパク質の存在を検出するのに有用である。例えば、キットは、生体試料中のＣＤ３タンパク質を結合することが可能な１種又は複数の本技術のヒト化、キメラ、又は二特異性抗ＣＤ３抗体（又はそれらの抗原結合断片）；試料中のＣＤ３タンパク質の量を決定するための手段；及び試料中の免疫反応性ＣＤ３タンパク質の量を、標準物質と比較するための手段を含み得る。抗ＣＤ３抗体の１種又は複数は、標識され得る。キット構成成分（例えば、試薬）は、適切な容器中に包装され得る。キットは、免疫反応性ＣＤ３タンパク質を検出するのにキットを使用するための説明書をさらに含み得る。
抗体ベースキットに関して、キットは、例えば、１）ＣＤ３タンパク質に結合する、固体支持体に結合された第１の抗体、例えば、本技術のヒト化、キメラ又は二特異性ＣＤ３抗体（又はその抗原結合断片）、及び任意に、２）ＣＤ３タンパク質又は第１の抗体のいずれかに結合し、かつ検出可能な標識にコンジュゲートされている第２の異なる抗体を含み得る。
キットはまた、例えば、緩衝剤、防腐剤又はタンパク質安定化剤を含み得る。キットは、検出可能な標識、例えば、酵素又は基質を検出するのに必要な構成成分をさらに含み得る。キットはまた、アッセイされて、試験試料と比較され得る対照試料又は一連の対照試料を含有し得る。キットの構成成分はそれぞれ、個々の容器内に封入させることができ、各種容器はすべて、キットを使用して実施されるアッセイの結果を解釈するための説明書とともに、単一パッケージ内に存在し得る。本技術のキットは、キット容器上又はキット容器中に書面による製品（ｗｒｉｔｔｅｎ ｐｒｏｄｕｃｔ）を含有し得る。書面による製品は、例えば、ＣＤ３タンパク質のｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏでの検出のための、又はそれを必要とする対象における、ＣＤ３関連病態の処置のための、キット中に含有される試薬の使用法について記載する。ある特定の実施形態では、試薬の使用は、本技術の方法に従い得る。
本技術は、以下の実施例によりさらに説明されるが、この実施例は決して限定的であると解釈されるべきではない。以下の実施例は、本技術の説明的な抗ＣＤ３抗体の調製、特徴付け、及び使用を示している。以下の実施例は、本技術のキメラ、ヒト化、及び二特異性抗体の産生、並びにその結合特異性及びｉｎ ｖｉｔｒｏとｉｎ ｖｉｖｏ生物活性の特徴付けを示している。
（実施例１）マウスＯＫＴ３のヒト化
ＣＤ３－ＢｓＡｂを構築するため二価モジュラープラットフォームを選択した（図１Ａ）。抗ＣＤ３抗体ＯＫＴ３は＞８５％のヒトらしさまで再ヒト化した。ＯＫＴ３の重及び軽鎖のＣＤＲ（Arakawa, Kuroki et al., J Biochem 120(3): 657-662 (1996)）は、それぞれヒトフレームワークＶＨではＩＧＨＶ１－４６*０１－ＩＧＨＪ４*０１、ＶＬではＩＧＫＶ３－１１*０１－ＩＧＫＪ２*０２とのその相同性に基づいてヒトＩｇＧ１フレームワーク上に移植された。
図１２Ａは、マウス及びヒト化ＯＫＴ３重鎖可変ドメイン（ＶH）のアミノ酸配列を示す。マウスＯＫＴ３のＶHドメインは配列番号１に示されており、これはＶHＣＤＲ１（配列番号２）、ＶHＣＤＲ２（配列番号３）、及びＶHＣＤＲ３（配列番号４）を含む（図１２Ａ）。配列番号７～１０は、マウスＯＫＴ３のＶHドメインのヒト化バージョンである。配列ＯＫＴ３＿ＶＨ－１（配列番号７）、ＯＫＴ３＿ＶＨ－２（配列番号８）、ＯＫＴ３＿ＶＨ－３（配列番号９）、及びＯＫＴ３＿ＶＨ－４（配列番号１０）は本明細書に開示されるヒト化ＯＫＴ３重鎖可変ドメインの４種のバリアントであり、＞８５％のヒトらしさを特徴とする（図１２Ａ）。図１２Ｂは、マウス及びヒト化ＯＫＴ３軽鎖可変ドメイン（ＶL）のアミノ酸配列を示す。マウスＯＫＴ３のＶLドメインは配列番号１１に示されており、これはＶLＣＤＲ１（配列番号１２）、ＶLＣＤＲ２（配列番号１３）、及びＶLＣＤＲ３（配列番号１４）を含む（図１２Ｂ）。配列番号１５～２０は、ＯＫＴ３のＶLドメインのヒト化バージョンである。ＯＫＴ３＿ＶＬ－１（配列番号１５）、ＯＫＴ３＿ＶＬ－２（配列番号１６）、ＯＫＴ３＿ＶＬ－３（配列番号１７）、ＯＫＴ３＿ＶＬ－４（配列番号１８）、配列ＯＫＴ３＿ＶＬ－５（配列番号１９）、及びＯＫＴ３＿ＶＬ－６（配列番号２０）は本明細書に開示されるヒト化ＯＫＴ３軽鎖可変ドメインの６種のバリアントであり、＞８５％のヒトらしさを特徴とする（図１２Ｂ）。４種の重鎖及び６種の軽鎖デザインから、ｈｕＯＫＴ３の２４のバージョンを遺伝子合成しＣＨＯ細胞で発現させた。
グリコシル化を取り除くため、標準ｈＩｇＧ１ Ｆｃ領域中のＮ２９７Ａ突然変異を導入した。軽鎖は、ヒト化ＯＫＴ３ ＩｇＧ１軽鎖をＣ末端（Ｇ4Ｓ）3リンカー続いてｈｕＯＫＴ３ ｓｃＦｖで伸長することにより構築した。重鎖と軽鎖の両方をコードしているＤＮＡを哺乳動物発現ベクター中に挿入し、ＣＨＯ－Ｓ細胞中にトランスフェクトし、最も高い発現の安定なクローンを選択した。上澄みは振盪フラスコから収集しプロテインＡ親和性クロマトグラフィー上で精製した。
図１３Ａ及び１３Ｂは、本明細書に開示されるＯＫＴ３＿ＶＬ－２とＯＫＴ３＿ＶＨ－２ヒト化可変ドメインを組み合わせるヒト化抗ＣＤ３ ＢＣ２７６ ＢｓＡｂアミノ酸配列の軽鎖（配列番号２１）及び重鎖（配列番号２３）のアミノ酸配列を示している。
本開示のヒト化抗ＣＤ３抗体についての安定性データが下に提供されている。
Figure 2023523584000004
本開示のヒト化抗ＣＤ３抗体についての結合親和性データが下に提供されている。
Figure 2023523584000005
（実施例２）本開示の抗ＣＤ３免疫グロブリン関連組成物の精製及び生化学的特徴付け
ヒト化抗体を特徴付けるため、培養上澄みを振盪フラスコから収集しプロテインＡ親和性クロマトグラフィーを使用して精製した。精製された抗体は生化学的純度分析にかけた。本開示のＢｓＡｂの生化学的純度を決定するため、精製したＢｓＡｂを、サイズ排除クロマトグラフィー高速液体クロマトグラフィー（ＳＥＣ－ＨＰＬＣ）を使用して分解させた。溶出液中のタンパク質は、２８０ｎｍでのＵＶ光の吸光度に基づいて検出した。例となるＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラムは図１Ｂに示されている。ＢｓＡｂピークは、ＳＥＣ－ＨＰＬＣの保持時間に基づいて同定した。生化学的純度は、ＢｓＡｂピークの面積に基づいて評価した。
ヒト化抗体は４０℃でインキュベートし、明記された時間にそれらのアリコートを取り出して、ＨＰＬＣを使用して純度を評価した。図２に示されるように、ヒト化ＯＫＴ３ ＩｇＧ抗体は４０℃で３週間後＞７５％無傷であった。これらの結果は、本技術の免疫グロブリン関連組成物が薬理学的に許容される純度及び安定性特性を有することを実証している。
（実施例３）本開示の抗ＣＤ３免疫グロブリン関連組成物はｉｎ ｖｉｔｒｏで強力なＴ細胞フラトリサイドを誘導する
Ｔ細胞は、Ｔ細胞増殖を支援するインターロイキン－２の存在下で３５０ｐＭのＢＣ２７６ ＢｓＡｂと一緒にインキュベートした。２種の異なる抗体を対照として使用した。第１の対照抗体は、ＣＤ１９（ＩｇＧの２つのＦａｂアーム）及びＣＤ３（ＩｇＧ ＣＬのＣ末端に接続された２つのｓｃＦｖ）に特異的なＩｇＧ－Ｌ－ｓｃＦｖ ＢｓＡｂであった。第２の対照抗体はヒト化ＯＫＴ３ ＩｇＧであった。両方の対照抗体はＣＤ３に対して単一特異性である。図３Ａ～３Ｂに示されるように、ＢＣ２７６ ＢｓＡｂは、ＣＤ４（図３Ａ）とＣＤ８（図３Ｂ）両方の間でわずか３５０ｐＭの用量で強力なＴ細胞フラトリサイドを誘導した。ＣＤ４ Ｔ細胞の間ではＴ細胞死のほうが目立っていたけれどもＴ細胞集団。重要なことに、対照抗体のどちらも有意な又は永続性のあるＴ細胞枯渇を誘導せず、Ｔ細胞は対照抗体の存在下で最終的に増殖した（図３Ａ～３Ｂ）。
これらの結果は、本技術の免疫グロブリン関連組成物が強力な抗Ｔ細胞活性を見せることを実証している。したがって、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、自己免疫疾患（Ｔ細胞により直接的に誘導される又はＴ細胞が自己抗体を生み出すＢ細胞の活性化において役割を演じる場合）、及びＴ細胞悪性腫瘍を含む、Ｔ細胞の活性化により引き起こされる疾患を処置するのに有用である。
（実施例４）本開示の抗ＣＤ３免疫グロブリン関連組成物はｉｎ ｖｉｖｏで重大なＴ細胞枯渇を誘導する
ＮＳＧマウスに３０００万個のＰＢＭＣ（異なる３つのドナー由来のＰＢＭＣの混合物、それぞれのドナーから１０００万個の細胞）を腹腔内に注射した。末梢血は７日目にＴ細胞の存在について染色され、処置は８日目に開始された。処置は、ＢＣ２７６ ＢｓＡｂ若しくはＢＣ１１９、ＣＤ３×ＧＤ２－特異的ＢｓＡｂ、又は溶媒のみ（抗体なし）の１μｇの注射を含んだ。１５日目及び２２日目に、末梢血は抗ヒトＣＤ４５抗体で染色され、フローサイトメトリー分析にかけられた。図４Ａに示されるように、ＢＣ２７６ ＢｓＡｂを用いた処置により、フローサイトメトリードットプロットの右辺に見られたＣＤ４５＋集団がほぼ完全に消失した。ＢＣ１１９ ＢｓＡｂの効果は抗体なし群に匹敵していた。３つの処置群由来のＣＤ４５＋細胞の数は定量化された。図４Ｂに示されるように、ＢＣ２７６ ＢｓＡｂを用いた処置により、マウスでの重大なＴ細胞枯渇が誘導された。これとは対照的に、ＢＣ１１９ ＢｓＡｂは抗体なし群と比べて中程度の効果を引き起こした。ＢＣ２７６は、ＢＣ１１９と比べてより強力なＴ細胞枯渇を誘導した。
Ｔ細胞枯渇をｉｎ ｖｉｖｏで誘導する際のＢＣ２７６ ＢｓＡｂの効力をさらに評価するために、１μｇ及び０．１μｇ用量でのＢＣ２７６ ＢｓＡｂの効果を評価した。ＮＳＧマウスに３０００万個のＰＢＭＣ（異なる３つのドナー由来のＰＢＭＣの混合物、それぞれのドナーから１０００万個の細胞）を腹腔内に注射した。末梢血は７日目にＴ細胞の存在について染色され、処置は８日目に開始された。処置は、１μｇ若しくは０．１μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂ、又は１μｇ若しくは０．１μｇのＢＣ１１９の注射を含んだ。１５日目に、末梢血は抗ヒトＣＤ４５抗体で染色され、フローサイトメトリー分析にかけられた。
図５Ａに示されるように、ＣＤ４５＋集団は、フローサイトメトリードットプロットの右辺に見られるように、１μｇ又は０．１μｇのＢＣ１１９ ＢｓＡｂで処置された動物で観察された。これとは対照的に、１μｇと０．１μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂの両方を用いた処置により、ＣＤ４５＋集団は減少した。図５Ｂに示されるように、１μｇ又は０．１μｇのＢＣ１１９ ＢｓＡｂを用いた処置に続いて、平均ＣＤ４５＋細胞数は約３００～４００の個／μｌの間に及んだ。これとは対照的に、平均ＣＤ４５＋細胞数は、それぞれ１μｇ又は０．１μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂを用いた処置に続いて約１０個／μｌ及び約３５個／μｌであり（図５Ｂ）、１μｇの用量は、０．１μｇの用量と比べてマウスでより重大なＴ細胞枯渇を誘発した。
ＮＳＧマウスに３０００万個のＰＢＭＣ（異なる３つのドナー由来のＰＢＭＣの混合物、それぞれのドナーから１０００万個の細胞）を０日目に腹腔内に注射し、マウスは、１μｇ若しくは０．１μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂ、又は１μｇ若しくは０．１μｇのＢＣ１１９ ＢｓＡｂで処置された。抗体なし対照は負の対照として使用された。８、１５、及び２２日目に、末梢血は抗ヒトＣＤ４５、抗ヒトＣＤ４、又は抗ヒトＣＤ８抗体で染色され、フローサイトメトリー分析にかけられた。図６Ａに示されるように、抗体なし対照、又はＢＣ１１９ ＢｓＡｂと比べて、１μｇ又は０．１μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂを用いた処置に続いて１５及び２２日目にＣＤ４５＋細胞の激しい枯渇が観察された。１μｇと０．１μｇ両方のＢＣ１１９ ＢｓＡｂでの処置は、抗体なし対照と比べて２２日目にＣＤ４５＋細胞に対して中程度の効果があった（図６Ａ）。Ｔ細胞亜集団のさらなる分析により、ＢＣ１１９ ＢｓＡｂ又は抗体なし対照と比べて、１μｇ又は０．１μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂを用いた処置に続いてＣＤ４とＣＤ８ Ｔ細胞の両方がｉｎ ｖｉｖｏで激しく枯渇していること（図６Ｂ～６Ｃ）が明らかにされた。
これらの結果は、本技術の免疫グロブリン関連組成物が強力な抗Ｔ細胞活性を見せることを実証している。したがって、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、自己免疫疾患（Ｔ細胞により直接的に誘導される又はＴ細胞が自己抗体を生み出すＢ細胞の活性化において役割を演じる場合）、及びＴ細胞悪性腫瘍を含む、Ｔ細胞の活性化により引き起こされる疾患を処置するのに有用である。
（実施例５）Ｔ細胞のＢＣ２７６誘導枯渇はマウスでの臨床副作用とは関連していない
ＮＳＧマウスに３０００万個のＰＢＭＣ（異なる３つのドナー由来のＰＢＭＣの混合物、それぞれのドナーから１０００万個の細胞）を０日目に腹腔内に注射した。マウスは、８日目に開始して、溶媒のみ対照（抗体なし）で、又は１μｇ若しくは０．１μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂ、又は１μｇ若しくは０．１μｇのＢＣ１１９ ＢｓＡｂで処置された。マウスは、体重減少、活性低下、猫背の姿勢、又は波立った毛などの不安の臨床兆候について評価された。抗体処置のいずれかを受けた動物の体重は抗体なし対照で処置された動物に匹敵していた。図７を参照されたい。活性低下、猫背の姿勢、又は波立った毛などの他の不安の兆候は、ＢＣ２７６ ＢｓＡｂで処置された動物でも観察されなかった。図２５を参照されたい。
これらの結果は、本技術の免疫グロブリン関連組成物が強力な抗Ｔ細胞活性を見せることを実証している。したがって、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、自己免疫疾患（Ｔ細胞により直接的に誘導される又はＴ細胞が自己抗体を生み出すＢ細胞の活性化において役割を演じる場合）、及びＴ細胞悪性腫瘍を含む、Ｔ細胞の活性化により引き起こされる疾患を処置するのに有用である。
（実施例６）本開示の抗ＣＤ３免疫グロブリン関連組成物はＧＶＨＤ兆候を減少し生存を延ばすことができる
実施例６及び７に記載されるマウスで移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の発症を促進するため、抗体注射を停止し、エフェクター細胞の第２の用量（マウス当たり２２００万個の活性化Ｔ細胞）をマウスに注射した。抗体注射（１μｇ又は０．１μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂ、１μｇ又は０．１μｇのＢＣ１１９ ＢｓＡｂ）は３５日目に再開した。溶媒のみ（抗体なし）は負の対照として使用された。８、１５、２２、２８及び４４日目に、末梢血は抗ヒトＣＤ４、又は抗ヒトＣＤ８抗体で染色され、フローサイトメトリー分析にかけられた。
図８Ａ～８Ｂに示されるように、０．１μｇと１μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂの両方が、抗体なし対照と比べて２２日目までにＣＤ４＋（図８Ａ）とＣＤ８＋（図８Ｂ）Ｔ細胞の両方を枯渇させた。同様に、ＢＣ１１９は、抗体なし対照と比べて２２日目までにＣＤ４＋細胞に対して中程度の効果を見せた（図８Ａ）。しかし、２２日目の後は、ＢＣ２７６ ＢｓＡｂ（又はＢＣ１１９ ＢｓＡｂ）は、もはやマウスでＣＤ４＋（図８Ａ）又はＣＤ８＋（図８Ｂ）Ｔ細胞を枯渇させるのに十分ではなかった。このように、該マウスは、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）のモデルとして役に立った。
マウスは再び５群にランダム化され、３０μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂ、１０μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂ、３μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂ、１０μｇのＢＣ１１９ ＢｓＡｂ、又は抗体なしで処置された。死んだマウスはＧＶＨＤスコア５を割り当てられた。図９に示されるように、３０μｇ及び１０μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂを用いたマウスの処置により、ＧＶＨＤのスコアはそれぞれ２から０．１２に（ｐ＜０．０００１）及び１．８から０．１２に（ｐ＜０．０００３）減少した。これとは対照的に、３μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂのみを用いて処置されたマウス、１０μｇの対照ＢｓＡｂで処置されたマウス、及び未処置のマウスでのＧＶＨＤスコアは増加した。図１０に示されるように、ＢＣ２７６ ＢｓＡｂ群（３０μｇ及び１０μｇ）のマウスは体重が増え、その他の群のマウスは体重が減り、ＧＶＨＤに対するＢＣ２７６ ＢｓＡｂのより高い用量の治療効果のさらなる証拠を提供した（図１０）。図１１に示されるように、３０μｇ及び１０μｇのＢＣ２７６ ＢｓＡｂを受けたマウスはすべて生存し、その他の群のマウスはＧＶＨＤに屈した。
これらの結果は、本技術の免疫グロブリン関連組成物が強力な抗Ｔ細胞活性を見せることを実証している。したがって、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、自己免疫疾患（Ｔ細胞により直接的に誘導される又はＴ細胞が自己抗体を生み出すＢ細胞の活性化において役割を演じる場合）、及びＴ細胞悪性腫瘍を含む、Ｔ細胞の活性化により引き起こされる疾患を処置するのに有用である。
（実施例７）がんを処置するための本開示の免疫グロブリン関連組成物の使用
図２３Ａ～２３Ｂは、種々のがん標的細胞を使用しての複数のＴ細胞細胞傷害性アッセイからの結果を示す。ヒト活性化Ｔ細胞及び標的ヒト腫瘍細胞は、腫瘍抗原及びＣＤ３を標的にする二特異性抗体と一緒に４時間インキュベートし、本開示から配列番号９４及び配列番号９６配列を含む抗ＧＤ２×ＣＤ ３ＢｓＡｂ、又は配列番号１０２及び配列番号１０４配列を含む抗ＧＰＣ３×ＣＤ ３ＢｓＡｂを使用して抗腫瘍細胞傷害性を測定した。図２３Ａは、ＧＤ２発現神経芽細胞腫細胞系（ＩＭＲ３２）に対する抗ＧＤ２抗ＣＤ３二特異性抗体の効力を明確に示している。図２３Ｂは、ＧＰＣ３発現肝がん細胞系（ＨＥＰＧ２）に対する抗ＧＰＣ３抗ＣＤ３二特異性抗体の効力を示す。
ナイーブＴ細胞は、Ｐａｎ Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ社、Ｂｅｒｇｉｓｃｈ Ｇｌａｄｂａｃｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用してヒト正常ボランティアＰＢＭＣから精製した。これらのＴ細胞を、３０ ＩＵ／ｍＬのＩＬ－２の存在下でＣＤ３／ＣＤ２８ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、Ｃａｒｌｓｂａｄ ＣＡ）により製造業者のプロトコルに従って７～１４日間活性化し拡大した。Xu H et al., Cancer Immunol Res 3:266-77 (2015)に記載される51Ｃｒ放出アッセイを実施し、ＳｉｇｍａＰｌｏｔソフトウェアを使用してＥＣ50を計算した。腫瘍細胞系は、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社、Ｃａｒｌｓｂａｄ ＣＡ）を補充したＲＰＭＩ－１６４０（Ｃｅｌｌｇｒｏ社、Ｓｗｅｄｅｓｂｏｒｏ、ＮＪ）で培養し、ＥＤＴＡ／トリプシンを用いて収穫した。標的腫瘍細胞は、１００ ｕＣｉ／１０6細胞で３７℃、１時間、51Ｃｒクロム酸ナトリウム（Ａｍｅｒｓｈａｍ社、Ａｒｌｉｎｇｔｏｎ Ｈｅｉｇｈｔ、ＩＬ）で標識した。細胞を２回洗浄した後、標的腫瘍細胞を９６ウェルプレートにおいてウェル当たり５０００個の細胞で蒔き；Ｅ：Ｔ比１０：１で、ＢＣ２７６ ＢｓＡｂを０．１μｇ／ｍｌの開始濃度から１０倍まで滴定した。３７℃で４時間のインキュベーション後、放出された51Ｃｒはガンマ計数器（Ｐａｃｋｅｄ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ、Ｄｏｗｎｅｒｓ Ｇｒｏｖｅ社、ＩＬ）で測定した。特異的溶解のパーセンテージは、式１００％（実験ｃｐｍ－バックグラウンドｃｐｍ）／（全ｃｐｍ－バックグラウンドｃｐｍ）を使用して計算し、ｃｐｍは放出された51Ｃｒの１分間当たりのカウントを表した。51Ｃｒの全放出は１０％のＳＤＳ（Ｓｉｇｍａ社、Ｓｔ Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ）を用いた溶解により評価し、バックグラウンド放出はエフェクター細胞及び抗体の非存在下で測定した。図２４Ａ～２４Ｅ及び表２で示されるように、ＣＤ３発現を有するＴ細胞系はＡＤＴＣアッセイで殺傷され、ＨＥＲ２に向けられた対照抗体ＨＥＲ２－ＢｓＡｂは細胞傷害性を全く示さなかった。
Figure 2023523584000006
 これらの結果は、本技術の抗ＣＤ３免疫グロブリン関連組成物を使用すれば様々な腫瘍抗原及び腫瘍型に対するポリクローナルＴ細胞の標的を変えることができることを実証している。
（実施例８）自己免疫疾患及び１型糖尿病を処置するための本開示の免疫グロブリン関連組成物の使用
動物モデルを使用して、本技術の抗ＣＤ３抗体又は抗原結合断片の治療効果をｉｎ ｖｉｖｏで評価する。自己免疫疾患及び１型糖尿病の齧歯類モデルの例が開発されている。Vudattu et al., J Immunol. 193(2):587-96 (2014); Turley et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 102(49): 17729-17733 (2005)。
１型糖尿病は、インスリンの分泌を担当する膵臓β細胞のＴ細胞媒介自己免疫破壊である。Roep, Diabetologia, 46: 305-321 (2003)。Ｔ細胞を取り除くことによるＩ型糖尿病に対するＢＣ２７６ ＢｓＡｂ処置の効果を調べるため、３種のトランスジェニックマウスモデル：ｉ）ＯＴ－Ｉマウス（Ｃ５７ＢＬ／６－Ｔｇ（ＴｃｒａＴｃｒｂ）１１００Ｍｊｂ／Ｊ）、このマウスはオボアルブミンペプチド残基２５７～２６４（ＯＶＡ257~264）を認識するトランスジェニックＴ細胞受容体を発現する；ｉｉ）ＲＩＰ－ｍＯＶＡマウス（Ｃ５７ＢＬ／６－Ｔｇ（Ｉｎｓ２－ＴＦＲＣ／ＯＶＡ）２９６Ｗｅｈｉ／ＷｅｈｉＪ）、このマウスは膵臓β細胞（インスリンを分泌する）及び腎臓近位管状細胞においてオボアルブミンの強力な発現を見せる；及びｉｉｉ）ヒトＣＤ３トランスジェニック（Ｂ６．Ｃｇ－Ｔｇ（ＣＤ３Ｅ）６００Ｃｐｔ／Ｊ）マウス、そこではマウスＴ細胞がヒトＣＤ３ｅドメインを発現し、したがって、Ｔ細胞二特異性抗体に結合することができる、を使用する。
ＯＴ－ＩマウスはＣＤ３トランスジェニックマウスと交配させる。ＯＴ－Ｉ Ｔ細胞受容体を発現するＴ細胞及びヒトＣＤ３Ｅ遺伝子も有する子孫をＴ細胞ドナーとして使用する。Ｔ細胞は、これらのマウスの脾臓及びリンパ節から収穫しうる。第２ステップでは、収穫されたＴ細胞はＲＩＰ－ｍＯＶＡマウスに注射され、そこでは事前リンパ球除去がドナー細胞の生着の一助となることがある。糖尿病の発生及び進行は、血中ブドウ糖をチェックすることによりモニターされる。血糖が２００ｍｇ／ｄｌを上回るとすぐに、ＢＣ２７６ ＢｓＡｂの異なる用量及び対照抗体を用いた処置が開始される。糖尿病の重症度は、血中ブドウ糖レベルを通じてモニターすることができる。アッセイの完了時、膵臓免疫組織化学によりβ細胞中へのＴ細胞の浸潤の程度が明らかにされる。
本技術の免疫グロブリン関連組成物は、動物モデルにおいて自己免疫疾患及び／又は１型糖尿病の症状を減少させると予測される。
したがって、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、自己免疫疾患（Ｔ細胞により直接的に誘導される又はＴ細胞が自己抗体を生み出すＢ細胞の活性化において役割を演じる場合）、及びＴ細胞悪性腫瘍を含む、Ｔ細胞の活性化により引き起こされる疾患を処置するのに有用である。
（実施例９）Ｔ細胞悪性腫瘍を処置するための本開示の免疫グロブリン関連組成物の使用
動物モデルを使用して、本技術の抗ＣＤ３抗体又は抗原結合断片の治療効果をｉｎ ｖｉｖｏで評価する。Ｔ細胞リンパ腫（ＴＣＬ）及びＴ細胞白血病などのＴ細胞悪性腫瘍の齧歯類モデルの例が開発されている。Kohnken et al., Front Oncol. 7: 22 (2017)。Ｔ細胞がんに対するＢＣ２７６ ＢｓＡｂの効果を試験するため、免疫不全マウスに、ルシフェラーゼを形質導入してもよいＴ細胞がん（例えば、ＣＣＲＦ－ＣＥＭ、ＴＡＬＬ－１０４、Ｊ４５．０１、及びジャーカットＣｌｏｎｅ Ｅ６－１）を接種する。腫瘍進行は生物発光イメージング（ＢＬＩ）によりモニターされる。マウスでの腫瘍成長の動力学に基づいて、ヒトＴ細胞を、異なる用量のＢＣ２７６ ＢｓＡｂ又は対照抗体と一緒に又はこれなしで異なる時点に注射する。ＢＬＩシグナル及びマウス体重及び生存は処置有効性の代替物として使用される。
本技術の免疫グロブリン関連組成物は、動物モデルにおいてＴ細胞悪性腫瘍の症状を減少させると予測される。
したがって、本技術の免疫グロブリン関連組成物は、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、自己免疫疾患（Ｔ細胞により直接的に誘導される又はＴ細胞が自己抗体を生み出すＢ細胞の活性化において役割を演じる場合）、及びＴ細胞悪性腫瘍を含む、Ｔ細胞の活性化により引き起こされる疾患を処置するのに有用である。
（実施例１０）がんを処置するための本開示の免疫グロブリン関連組成物の使用
ＳＡＤＡドメイン（例えば、配列番号１１８～１２１）を含む本技術の免疫グロブリン関連組成物は、Ｔ細胞を効果的に動員して固形又は液体腫瘍を殺傷させると予測される。図２０Ａ～２０Ｄを参照されたい。
抗ＤＯＴＡ抗体ドメイン（例えば、配列番号１２２、１２４、１２６、及び１３７又は配列番号１２８、１３０、１３２、及び１３９）を含む本技術の異種二量体抗腫瘍免疫グロブリン関連組成物は、がんを有する患者でのＴ細胞イメージング、並びに腫瘍への治療ペイロードの送達（治療同位元素を使用して）の両方を可能にすると予測される。図２１Ａ～２１Ｄ及び図２２Ａ～２２Ｄを参照されたい。
（実施例１１）異なる抗ＣＤ３配列を有する二特異性抗体の機能活性の比較
図２７は、図２６に示される５種のＧＰＣ３×ＣＤ３二特異性抗体（ＢｓＡｂ）（配列番号１４１～１４５）のそれぞれについての抗ＣＤ３ ｓｃＦｖ領域のアミノ酸配列を示す。抗ＧＰＣ３免疫グロブリンの軽鎖及び重鎖配列は、それぞれ以下のとおりである。
Figure 2023523584000007
 （配列番号１４６）
及び
Figure 2023523584000008
 （配列番号１４７）
図２８に示されるように、ＢｓＡｂ＃３は、ｅｘ ｖｉｖｏ拡大ヒトＴ細胞に対する最も高い結合親和性を示し、ＢｓＡｂ＃１、＃２、＃５及び＃４が後に続く。図２９は、ヒト組換えＣＤ３δ／εに対する例示されるＢｓＡｂの結合親和性がＳＰＲを使用して実証された場合、劇的に異ならないことを示す。ＢｓＡｂ＃１、＃２、＃３及び＃５は類似する親和性で結合し、ＢｓＡｂ＃４は１ログ低い結合親和性を示す。
図３０～３１は、例示されるＢｓＡｂが、それぞれＴ細胞活性化マーカーＣＤ６９及びＣＤ２５の表面発現を差示的に誘導することを示す。ＢｓＡｂ＃１、＃２、＃３及び＃５は類似する割合のＣＤ６９＋Ｔ細胞を誘導し、ＢｓＡｂ＃４は、ＣＤ６９のＣＤ８ Ｔ細胞発現を弱く活性化した。類似する傾向はＣＤ８ Ｔ細胞上でのＣＤ２５発現について観察され、それによりＢｓＡｂ＃４は、ＢｓＡｂ＃１、＃２、＃３及び＃５と比べてＣＤ２５発現を弱く誘導した。
ＢｓＡｂ＃１、＃２、＃３及び＃５は頑強なＣＤ８ Ｔ細胞増殖を駆動し、７０％を超えるＣＤ８ Ｔ細胞が、わずか６．４ｎｇ／ｍｌのＢｓＡｂ濃度で活発な分裂を受けた。ＢｓＡｂ＃４は、ＣＤ８ Ｔ細胞活性化を弱く誘導しただけではなく、６．４ｎｇ／ｍｌのＢｓＡｂ濃度で分裂するＣＤ８ Ｔ細胞はほとんどない（１５％）。図３２Ａを参照されたい。Ｔ及びＨｅｐＧ２共培養アッセイでの漸増する濃度のＢｓＡｂは、ＣＤ８ Ｔ細胞生存率の低下をもたらさなかった。すべてのＢｓＡｂ間で類似するＣＤ８ Ｔ細胞生存率（１０～２０％）が観察された。
図３３は、ＨｅｐＧ２肝細胞癌細胞系のＢｓＡｂ結合Ｔ細胞媒介殺傷を示す。ＢｓＡｂ＃３及び＃１は類似するＥＣ５０を示し、＃２及び＃５が後に続き、ＢｓＡｂ４は最も低いＥＣ５０を示した。
図３４Ａ～３４Ｂは、ＨｅｐＧ２異種移植片マウスでのヒトＴ細胞生着を示す。ＢｓＡｂ＃３は、ＨｅｐＧ２腫瘍部位への最も多い数のＴ－ｌｕｃ細胞生着を駆動し、ＢｓＡｂ＃１及び＃２が後に続いた。ＢｓＡｂの投与量はＴ－ｌｕｃ細胞生着に影響を及ぼした。例えば、３０μｇのＢｓＡｂ＃１は、３μｇのＢｓＡｂ＃１よりも高いＴ－ｌｕｃ浸潤を誘導した。
均等物
本技術は本出願に記載される特定の実施形態に関して限定されるべきではなく、実施形態は、本技術の個々の態様の単一の説明として意図されている。当業者には明らかになるように、この本技術には、その精神と範囲から逸脱することなく多くの改変及び変動を行うことができる。本明細書に列挙される方法及び装置に加えて、本技術の範囲内の機能的に等価な方法及び装置は、前述の説明から当業者には明らかになる。該改変及び変動は本技術の範囲内に収まることが意図されている。この本技術が特定の方法、試薬、化合物、組成物又は生物システムに限定されず、当然のことながら、変動できることは理解されるべきである。本明細書で使用される用語は特定の実施形態を説明することを目的とするだけであり、限定的であることを意図されていないことも理解されるべきである。
さらに、本開示の特長又は態様がマーカッシュ群に関して記載されている場合、当業者であれば、本開示がそれによりマーカッシュ群の任意の個々のメンバー又はメンバーのサブグループに関しても記載されていることを認識する。
当業者であれば理解するように、ありとあらゆる目的のため、特に書面による明細を提供することに関して、本明細書に開示されるすべての範囲は、ありとあらゆる考えられるサブレンジ及びそのサブレンジの組合せも包含する。列挙されているいかなる範囲も、同じ範囲が少なくとも等しい半分、３分の１、４分の１、５分の１、１０分の１、などに分解されることを十分に説明し可能にしていると容易に認識することができる。非限定的例として、本明細書で考察されるそれぞれの範囲は、下部３分の１、中間３分の１及び上部３分の１、などに容易に分解することができる。当業者も理解するように、「まで」、「少なくとも」、「より大きい」、「未満」及び同類のものなどのすべての言語は、列挙されている数を含み、引き続いて上で考察されたサブレンジに分解することができる範囲のことである。最後に、当業者であれば理解するように、範囲はそれぞれ個々の数を含む。したがって、例えば、１～３個の細胞を有する群は、１、２、又は３個の細胞を有する群のことである。同様に、１～５個の細胞を有する群は、１、２、３、４、又は５個の細胞を有する群のことである、など。
本明細書で言及される又は引用されるすべての特許、特許出願、仮出願、及び出版物は、参照によりすべての図及び表を含めてその全体を、本明細書の明確な教唆と矛盾しない程度まで組み込まれる。

Claims (63)

  1. 重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶH）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶL）を含む抗体又はその抗原結合断片であって、
    （ａ）該ＶHが、ＧＹＴＦＴＲＹＴのＶH－ＣＤＲ１配列（配列番号２）、ＩＮＰＳＲＧＹＴのＶH－ＣＤＲ２配列（配列番号３）、及びＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＤＹ（配列番号６）、ＡＲＹＹＤＤＨＹＳＣＤＹ（配列番号１３４）、ＡＲＹＹＤＤＨＣＳＬＤＹ（配列番号１３５）、若しくはＡＲＹＹＤＤＨＹＳＬＣＹ（配列番号１３６）のＶH－ＣＤＲ３配列を含み、並びに／又は
    （ｂ）該ＶLが、ＳＳＶＳＹのＶL－ＣＤＲ１配列（配列番号１２）、ＤＴのＶL－ＣＤＲ２配列（配列番号１３）、及びＱＱＷＳＳＮＰＦＴのＶL－ＣＤＲ３配列（配列番号１４）を含む、抗体又はその抗原結合断片。
  2. 重鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶH）及び軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン（ＶL）を含む抗体又はその抗原結合断片であって、
    （ａ）該ＶHが、配列番号５、７、８、９、１０、若しくは４３～６１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、並びに／又は
    （ｂ）該ＶLが、配列番号１５～２０若しくは６２～９１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、抗体又はその抗原結合断片。
  3. ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥからなる群から選択されるアイソタイプのＦｃドメインをさらに含む、請求項１又は２に記載の抗体又は抗原結合断片。
  4. Ｎ２９７Ａ及びＫ３２２Ａからなる群から選択される１種又は複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１定常領域を含む、請求項３に記載の抗体。
  5. Ｓ２２８Ｐ変異を含むＩｇＧ４定常領域を含む、請求項３に記載の抗体。
  6. Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）2、Ｆａｂ’、ｓｃＦv、及びＦvからなる群から選択される、請求項１又は２に記載の抗原結合断片。
  7. 残基７９ε～８５ε（Ｆ～Ｇループ）、残基３４ε（βＣ鎖の第１の残基）、並びに残基４６ε及び４８ε（Ｃ’～Ｄループ）を含むＣＤ３εサブユニットに結合する、請求項１～６のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合断片。
  8. 前記抗体が、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二特異性抗体、又は多特異性抗体である、請求項１～７のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合断片。
  9. 配列番号２３、配列番号９６、配列番号１００、配列番号１０４、配列番号１０８、配列番号１１２、配列番号１１６、配列番号１２６、配列番号１３２、配列番号１３７、配列番号１３９を含む重鎖（ＨＣ）アミノ酸配列、又は１種若しくは複数の保存的アミノ酸置換を有するそれらのバリアント、及び／又は配列番号２１、配列番号９２、配列番号９４、配列番号９８、配列番号１０２、配列番号１０６、配列番号１１０、配列番号１１４、配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２８、配列番号１３０を含む軽鎖（ＬＣ）アミノ酸配列、又は１種若しくは複数の保存的アミノ酸置換を有するそれらのバリアントを含む抗体。
  10. それぞれ配列番号２３及び配列番号２１、
    配列番号２３及び配列番号９２、
    配列番号９６及び配列番号９４、
    配列番号１００及び配列番号９８、
    配列番号１０４及び配列番号１０２、
    配列番号１０８及び配列番号１０６、
    配列番号１１２及び配列番号１１０、並びに
    配列番号１１６及び配列番号１１４
    からなる群から選択されるＨＣアミノ酸配列及びＬＣアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の抗体。
  11. それぞれ配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２６、及び配列番号１３７、並びに配列番号１２８、配列番号１３０、配列番号１３２、及び配列番号１３９からなる群から選択される第１のＬＣアミノ酸配列、第２のＬＣアミノ酸配列、第１のＨＣアミノ酸配列、及び第２のＨＣアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の抗体。
  12. （ａ）配列番号１５～２０若しくは６２～９１のいずれか１つの軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列に少なくとも９５％同一である軽鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列、及び／又は
    （ｂ）配列番号５、７、８、９、１０若しくは４３～６１のいずれか１つの重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列に少なくとも９５％同一である重鎖免疫グロブリン可変ドメイン配列を含む抗体。
  13. （ａ）配列番号２１、配列番号９２、配列番号９４、配列番号９８、配列番号１０２、配列番号１０６、配列番号１１０、配列番号１１４、配列番号１２２、配列番号１２４、配列番号１２８、若しくは配列番号１３０に存在するＬＣ配列に少なくとも９５％同一であるＬＣ配列、及び／又は
    （ｂ）配列番号２３、配列番号９６、配列番号１００、配列番号１０４、配列番号１０８、配列番号１１２、配列番号１１６、配列番号１２６、配列番号１３２、配列番号１３７、若しくは配列番号１３９に存在するＨＣ配列に少なくとも９５％同一であるＨＣ配列
    を含む抗体。
  14. モノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、二特異性抗体、又は多特異性抗体である、請求項９～１３のいずれか１項に記載の抗体。
  15. 残基７９ε～８５ε（Ｆ～Ｇループ）、残基３４ε（βＣ鎖の第１の残基）、並びに残基４６ε及び４８ε（Ｃ’～Ｄループ）を含むＣＤ３εサブユニットを含むＣＤ３ポリペプチドに結合する、請求項９～１４のいずれか１項に記載の抗体。
  16. Ｎ２９７Ａ及びＫ３２２Ａからなる群から選択される１種又は複数のアミノ酸置換を含むＩｇＧ１定常領域を含む、請求項９～１５のいずれか１項に記載の抗体。
  17. Ｓ２２８Ｐ変異を含むＩｇＧ４定常領域を含む、請求項９～１５のいずれか１項に記載の抗体。
  18. 配列番号１１８～１２１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列に少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含む、多特異性抗体又は抗原結合断片。
  19. 配列番号１１８～１２１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１８に記載の抗体又は抗原結合断片。
  20. 請求項１～１９のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合断片をコードする組換え核酸配列。
  21. 配列番号２２、２４、９３、９５、９７、９９、１０１、１０３、１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７、１２３、１２５、１２７、１２９、１３１、１３３、１３８、及び１４０からなる群から選択される組換え核酸配列。
  22. 請求項２０又は２１に記載の組換え核酸配列を含む宿主細胞又はベクター。
  23. 請求項１～８のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合断片及び薬学的に許容可能な担体を含む組成物であって、前記抗体又は抗原結合断片が、同位体、色素、色素原、造影剤、薬物、毒素、サイトカイン、酵素、酵素阻害剤、ホルモン、ホルモン拮抗薬、増殖因子、放射性核種、金属、リポソーム、ナノ粒子、ＲＮＡ、ＤＮＡ又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される作用物質にコンジュゲートされてもよい、組成物。
  24. 請求項９～１９のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合断片及び薬学的に許容可能な担体を含む組成物であって、前記抗体が、同位体、色素、色素原、造影剤、薬物、毒素、サイトカイン、酵素、酵素阻害剤、ホルモン、ホルモン拮抗薬、増殖因子、放射性核種、金属、リポソーム、ナノ粒子、ＲＮＡ、ＤＮＡ又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される作用物質にコンジュゲートされてもよい、組成物。
  25. α－１，６－フコース修飾を欠如している、請求項１～５、７又は８のいずれか１項に記載の抗体。
  26. α－１，６－フコース修飾を欠如している、請求項９～１９のいずれか１項に記載の抗体。
  27. 前記多特異性抗体又は抗原結合断片が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、骨髄性細胞、形質細胞、又はマスト細胞に結合する、請求項８又は１４に記載の多特異性抗体。
  28. ＣＤ３、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＤ２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、Ｎ－アセチルグルコサミントランスフェラーゼ、ｐ１５、ｇｐ７５、ベータ－カテニン、ＥｒｂＢ２、がん抗原１２５（ＣＡ－１２５）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、ＲＡＧＥ、ＭＡＲＴ（メラノーマ抗原）、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２、ＭＵＣ－３、ＭＵＣ－４、ＭＵＣ－５ａｃ、ＭＵＣ－１６、ＭＵＣ－１７、チロシナーゼ、Ｐｍｅｌ １７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ－ＶイントロンＶ配列（Ｎ－アセチルグルコサミントランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺がんｐｓｍ、ＰＲＡＭＥ（メラノーマ抗原）、β－カテニン、ＥＢＮＡ（エプスタインバーウイルス核内抗原）１－６、ＬＭＰ２、ｐ５３、肺抵抗タンパク質（ＬＲＰ）、Ｂｃｌ－２、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、Ｋｉ－６７、ＣＥＡＣＡＭ６、結腸特異抗原－ｐ（ＣＳＡｐ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦ、インスリン様成長因子（ＩＬＧＦ）、テネイシン、血小板由来成長因子、ＩＬ－６、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＭＥＴ、ＤＬＬ４、Ａｎｇ－２、ＨＥＲ３、ＩＧＦ－１Ｒ、ＣＤ３０、ＴＡＧ－７２、ＳＰＥＡＰ、ＣＤ４５、Ｌ１－ＣＡＭ、ルイスＹ（Ｌｅy）抗原、Ｅ－カドヘリン、Ｖ－カドヘリン、ＧＰＣ３、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ８０、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１２３、ＴＣＲガンマ／デルタ、ＮＫｐ４６、ＫＩＲ、ＣＤ５６、ＤＬＬ３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ９９、グロボＨ、ＣＤ２４、ＳＴＥＡＰ１、Ｂ７Ｈ３、ポリシアル酸、ＯＸ４０、ＯＸ４０－リガンド、ペプチドＭＨＣ複合体（ＴＰ５３、ＫＲＡＳ、ＭＹＣ、ＥＢＮＡ１－６、ＰＲＡＭＥ、ＭＡＲＴ、チロシナーゼ、ＭＡＧＥＡ１－Ａ６、ｐｍｅｌ１７、ＬＭＰ２、又はＷＴ１由来のペプチドを有する）、又は小分子ＤＯＴＡハプテンに結合する、請求項８、１４、１８、又は１９に記載の多特異性抗体又は抗原結合断片。
  29. それを必要とする対象において、ＣＤ３関連自己免疫疾患を処置する方法であって、該対象に、有効量の、
    それぞれ、配列番号２３及び配列番号２１、
    配列番号２３及び配列番号９２、
    配列番号９６及び配列番号９４、
    配列番号１００及び配列番号９８、
    配列番号１０４及び配列番号１０２、
    配列番号１０８及び配列番号１０６、
    配列番号１１２及び配列番号１１０、並びに
    配列番号１１６及び配列番号１１４
    からなる群から選択されるＨＣアミノ酸配列及びＬＣアミノ酸配列を含む抗体を投与することを含み、該抗体がＣＤ３に特異的に結合する、方法。
  30. 前記ＣＤ３関連自己免疫疾患が、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス、セリアック病、交感性眼炎、１型糖尿病、及び移植片対宿主病からなる群から選択される、請求項２９に記載の方法。
  31. それを必要とする対象において、がんを処置する方法であって、該対象に、有効量の、
    それぞれ、配列番号２３及び配列番号２１、
    配列番号２３及び配列番号９２、
    配列番号９６及び配列番号９４、
    配列番号１００及び配列番号９８、
    配列番号１０４及び配列番号１０２、
    配列番号１０８及び配列番号１０６、
    配列番号１１２及び配列番号１１０、並びに
    配列番号１１６及び配列番号１１４
    からなる群から選択されるＨＣアミノ酸配列及びＬＣアミノ酸配列を含む抗体を投与することを含み、該抗体がＣＤ３に特異的に結合する、方法。
  32. それを必要とする対象において、がんを処置する方法であって、該対象に、有効量の、配列番号１１８～１２１のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む二特異性抗体又は抗原結合断片を投与することを含む、方法。
  33. 前記がんが、前駆Ｔ急性リンパ性白血病／リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症タイプＡ、菌状息肉腫、パジェット様細網症、肉芽腫様弛緩皮膚、セザリー症候群、成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、皮膚大Ｔ細胞リンパ腫、多形Ｔ細胞リンパ腫、リンパ腫様丘疹症タイプＢ、二次皮膚ＣＤ３０＋大細胞リンパ腫、肝脾Ｔ細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、腸症関連Ｔ細胞リンパ腫、非特定型末梢性Ｔ細胞リンパ腫、皮下Ｔ細胞リンパ腫、大顆粒リンパ球性白血病、急性混合白血病、副腎がん、膀胱がん、血液がん、骨がん、脳がん、乳がん、細胞癌、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮体がん、耳鼻咽喉（ＥＮＴ）がん、子宮内膜がん、食道がん、胃腸がん、頭頚部がん、ホジキン病、腸がん、腎臓がん、咽頭がん、急性及び慢性白血病、肝臓がん、リンパ節がん、リンパ腫、肺がん、黒色腫、中皮腫、骨髄腫、鼻咽頭がん、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、口腔がん、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、咽頭がん、前立腺がん、直腸がん、肉腫、精上皮腫、皮膚がん、胃がん、奇形腫、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、膣がん、血管腫瘍、及びそれらの転移からなる群から選択される、請求項３１又は３２に記載の方法。
  34. 前記抗体又は抗原結合断片が、前記対象に、さらなる治療剤と別々に、順次、又は同時に投与される、請求項２９～３３のいずれか１項に記載の方法。
  35. 前記さらなる治療剤が、アルキル化剤、白金剤、タキサン、ビンカ剤、抗エストロゲン薬、アロマターゼ阻害剤、卵巣抑制剤、ＶＥＧＦ／ＶＥＧＦＲ阻害剤、ＥＧＦ／ＥＧＦＲ阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、細胞分裂阻害アルカロイド、細胞傷害性抗生物質、代謝拮抗薬、内分泌／ホルモン剤、及びビスホスホネート療法剤の１種又は複数である、請求項３４に記載の方法。
  36. 前記さらなる治療剤が、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、選択性ＣＯＸ－２抑制剤、グルココルチコイド、及び従来の疾患修飾性抗リウマチ薬（ｃＤＭＡＲＤ）のうちの１種又は複数である、請求項３４に記載の方法。
  37. 対象におけるがんをｉｎ ｖｉｖｏで検出する方法であって、
    （ａ）該対象に、有効量の請求項１～１９のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合断片を投与することであって、該抗体又は抗原結合断片が、ＣＤ３を発現するがん細胞に局在化するよう構成され、放射性同位体で標識されている、投与することと、
    （ｂ）参照値よりも高い、前記抗体又は抗原結合断片によって放出される放射性レベルを検出することによって、該対象における腫瘍の存在を検出すること
    を含む、方法。
  38. 前記対象が、がんと診断されているか、又はがんの疑いがある、請求項３７に記載の方法。
  39. 前記抗体又は抗原結合断片によって放出される前記放射性レベルが、陽電子放射断層撮影法又は単一光子放射断層撮影法を使用して検出される、請求項３７又は３８に記載の方法。
  40. 前記対象に、有効量の、放射性核種にコンジュゲートされた請求項１～１９のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合断片を含むイムノコンジュゲートを投与することをさらに含む、請求項３７～３９のいずれか１項に記載の方法。
  41. 前記放射性核種が、アルファ粒子放出同位体、ベータ粒子放出同位体、オージェエミッター、又はそれらの任意の組合せである、請求項４０に記載の方法。
  42. 前記ベータ粒子放出同位体が、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、165Ｄｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕ、及び67Ｃｕからなる群から選択される、請求項４１に記載の方法。
  43. 請求項１～１９のいずれか１項に記載の抗体又は抗原結合断片及び使用説明書を含むキット。
  44. 前記抗体又は抗原結合断片が、放射性標識、蛍光標識、及び発色性標識からなる群から選択される少なくとも１種の検出可能な標識にカップリングされている、請求項４３に記載のキット。
  45. 請求項１～１９のいずれか１項に記載の抗体に特異的に結合する二次抗体をさらに含む、請求項４３又は４４に記載のキット。
  46. 第１のペプチド鎖を含む多特異性抗原結合断片であって、該第１のペプチド鎖がＮ末端方向からＣ末端方向へ：、
    ｉ．第１のエピトープに特異的に結合可能な第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと、
    ｉｉ．アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含む可動性ペプチドリンカーと、
    ｉｉｉ．該第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと、
    ｉｖ．アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）4を含む可動性ペプチドリンカーと、
    ｖ．第２のエピトープに特異的に結合可能な第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと、
    ｖｉ．アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含む可動性ペプチドリンカーと、
    ｖｉｉ．該第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと、
    ｖｉｉｉ．アミノ酸配列ＴＰＬＧＤＴＴＨＴを含む可動性ペプチドリンカー配列と、
    ｉｘ．自己組立て分解（ＳＡＤＡ）ポリペプチド
    とを含み、該第１の免疫グロブリンの該重鎖可変ドメイン若しくは該第２の免疫グロブリンの該重鎖可変ドメインが、配列番号５、７、８、９、１０、若しくは４３～６１のいずれか１つから選択され、及び／又は該第１の免疫グロブリンの該軽鎖可変ドメイン若しくは該第２の免疫グロブリンの該軽鎖可変ドメインが、配列番号１５～２０若しくは６２～９１のいずれか１つから選択される、多特異性抗原結合断片。
  47. 第１のペプチド鎖を含む多特異性抗原結合断片であって、該第１のペプチド鎖がＮ末端方向からＣ末端方向へ：
    ｉ．第１のエピトープに特異的に結合可能な第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと、
    ｉｉ．アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含む可動性ペプチドリンカーと、
    ｉｉｉ．該第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと、
    ｉｖ．アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）4を含む可動性ペプチドリンカーと、
    ｖ．第２のエピトープに特異的に結合可能な第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと、
    ｖｉ．アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含む可動性ペプチドリンカーと、
    ｖｉｉ．該第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと、
    ｖｉｉｉ．アミノ酸配列ＴＰＬＧＤＴＴＨＴを含む可動性ペプチドリンカー配列と、
    ｉｘ．自己組立て分解（ＳＡＤＡ）ポリペプチド
    とを含み、該第１の免疫グロブリンの該重鎖可変ドメイン若しくは該第２の免疫グロブリンの該重鎖可変ドメインが、配列番号５、７、８、９、１０、若しくは４３～６１のいずれか１つから選択され、及び／又は該第１の免疫グロブリンの該軽鎖可変ドメイン若しくは該第２の免疫グロブリンの該軽鎖可変ドメインが、配列番号１５～２０若しくは６２～９１のいずれか１つから選択される、多特異性抗原結合断片。
  48. 前記ＳＡＤＡポリペプチドが、四量体化、五量体化、又は六量体化ドメインを含む、請求項４６又は４７に記載の抗原結合断片。
  49. 前記ＳＡＤＡポリペプチドが、ｐ５３、ｐ６３、ｐ７３、ｈｎＲＮＰＣ、ＳＮＡ－２３、Ｓｔｅｆｉｎ Ｂ、ＫＣＮＱ４、又はＣＢＦＡ２Ｔ１のいずれか１つの四量体ドメインを含む、請求項４８に記載の抗原結合断片。
  50. 第１のポリペプチド鎖、第２のポリペプチド鎖、第３のポリペプチド鎖及び第４のポリペプチド鎖を含む多特異性抗体であって、該第１のポリペプチド鎖及び該第２のポリペプチド鎖が、互いに共有結合されており、該第２のポリペプチド鎖及び該第３のポリペプチド鎖が、互いに共有結合されており、該第３のポリペプチド鎖及び該第４のポリペプチド鎖が、互いに共有結合されており、
    ａ．該第１のポリペプチド鎖及び該第４のポリペプチド鎖がそれぞれ、Ｎ末端方向からＣ末端方向へ：
    ｉ．第１のエピトープに特異的に結合可能な第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメインと、
    ｉｉ．該第１の免疫グロブリンの軽鎖定常ドメインと、
    ｉｉｉ．アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）3を含む可動性ペプチドリンカーと、
    ｉｖ．第２の免疫グロブリンの相補的重鎖可変ドメインに連結されている該第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン、又は第２の免疫グロブリンの相補的軽鎖可変ドメインに連結されている該第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインであって、該第２の免疫グロブリンの該軽鎖可変ドメイン及び該重鎖可変ドメインが、第２のエピトープに特異的に結合可能であり、アミノ酸配列（ＧＧＧＧＳ）6を含む可動性ペプチドリンカーを介して一緒に連結されて、単鎖可変断片を形成する、第２の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン又は重鎖可変ドメイン
    とを含み、
    ｂ．該第２のポリペプチド鎖及び該第３のポリペプチド鎖がそれぞれ、Ｎ末端方向からＣ末端方向へ：
    ｉ．該第１のエピトープに特異的に結合可能な該第１の免疫グロブリンの重鎖可変ドメインと、
    ｉｉ．該第１の免疫グロブリンの重鎖定常ドメイン
    とを含み、該第１の免疫グロブリンの該重鎖可変ドメイン又は該第２の免疫グロブリンの該重鎖可変ドメインが配列番号５、７、８、９、１０、若しくは４３～６１のいずれか１つから選択され、及び／又は該第１の免疫グロブリンの該軽鎖可変ドメイン若しくは該第２の免疫グロブリンの該軽鎖可変ドメインが、配列番号１５～２０若しくは６２～９１のいずれか１つから選択される、多特異性抗体。
  51. 前記多特異性抗体が、放射標識ＤＯＴＡハプテン、腫瘍抗原及びＣＤ３抗原に結合する、請求項８、１４又は４６～５０のいずれか１項に記載の多特異性抗体又は抗原結合断片。
  52. 前記腫瘍抗原が、ＣＤ３、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ＧＤ２、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＭＵＭ－１、ＣＤＫ４、Ｎ－アセチルグルコサミントランスフェラーゼ、ｐ１５、ｇｐ７５、ベータ－カテニン、ＥｒｂＢ２、がん抗原１２５（ＣＡ－１２５）、癌胎児抗原（ＣＥＡ）、ＲＡＧＥ、ＭＡＲＴ（メラノーマ抗原）、ＭＵＣ－１、ＭＵＣ－２、ＭＵＣ－３、ＭＵＣ－４、ＭＵＣ－５ａｃ、ＭＵＣ－１６、ＭＵＣ－１７、チロシナーゼ、Ｐｍｅｌ １７（ｇｐ１００）、ＧｎＴ－ＶイントロンＶ配列（Ｎ－アセチルグルコサミントランスフェラーゼＶイントロンＶ配列）、前立腺がんｐｓｍ、ＰＲＡＭＥ（メラノーマ抗原）、β－カテニン、ＥＢＮＡ（エプスタインバーウイルス核内抗原）１－６、ＬＭＰ２、ｐ５３、肺抵抗タンパク質（ＬＲＰ）、Ｂｃｌ－２、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、Ｋｉ－６７、ＣＥＡＣＡＭ６、結腸特異抗原－ｐ（ＣＳＡｐ）、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ７４、ＣＤ１３８、ＥＧＦＲ、ＥＧＰ－１、ＥＧＰ－２、ＶＥＧＦ、ＰｌＧＦ、インスリン様成長因子（ＩＬＧＦ）、テネイシン、血小板由来成長因子、ＩＬ－６、ＣＤ２０、ＣＤ１９、ＰＳＭＡ、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＭＥＴ、ＤＬＬ４、Ａｎｇ－２、ＨＥＲ３、ＩＧＦ－１Ｒ、ＣＤ３０、ＴＡＧ－７２、ＳＰＥＡＰ、ＣＤ４５、Ｌ１－ＣＡＭ、ルイスＹ（Ｌｅy）抗原、Ｅ－カドヘリン、Ｖ－カドヘリン、ＧＰＣ３、ＥｐＣＡＭ、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２１、ＣＤ２３、ＣＤ４６、ＣＤ８０、ＨＬＡ－ＤＲ、ＣＤ７４、ＣＤ２２、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１２３、ＴＣＲガンマ／デルタ、ＮＫｐ４６、ＫＩＲ、ＣＤ５６、ＤＬＬ３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ９９、グロボＨ、ＣＤ２４、ＳＴＥＡＰ１、Ｂ７Ｈ３、ポリシアル酸、ＯＸ４０、ＯＸ４０－リガンド、又はペプチドＭＨＣ複合体（ＴＰ５３、ＫＲＡＳ、ＭＹＣ、ＥＢＮＡ１－６、ＰＲＡＭＥ、ＭＡＲＴ、チロシナーゼ、ＭＡＧＥＡ１－Ａ６、ｐｍｅｌ１７、ＬＭＰ２、又はＷＴ１由来のペプチドを有する）である、請求項５１に記載の多特異性抗体又は抗原結合断片。
  53. 予め標的とされる放射免疫療法に関して、対象を選択する方法であって、
    （ａ）該対象に、有効量の、放射標識されたＤＯＴＡハプテン及び請求項５１又は５２に記載の多特異性抗体又は抗原結合断片を含む複合体を投与することであって、該複合体が、該多特異性抗体又は抗原結合断片により認識される前記腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在化するよう構成される、投与することと、
    （ｂ）該複合体によって放出される放射性レベルを検出することと、
    （ｃ）該複合体によって放出される該放射性レベルが、参照値よりも高い場合に、予め標的とされる放射免疫療法に関して、該対象を選択することと
    を含む、方法。
  54. がんと診断された対象において、放射線療法に対する腫瘍感度を増加させる方法であって、該対象に、有効量の、放射標識されたＤＯＴＡハプテン及び請求項５１又は５２に記載の多特異性抗体又は抗原結合断片を含む複合体を投与することを含み、該複合体が該多特異性抗体又は抗原結合断片により認識される前記腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在化するよう構成される、方法。
  55. それを必要とする対象において、がんを処置する方法であって、該対象に、有効量の、放射標識されたＤＯＴＡハプテン及び請求項５１又は５２に記載の多特異性抗体又は抗原結合断片を含む複合体を投与することを含み、該複合体が、該多特異性抗体又は抗原結合断片により認識される前記腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在化するよう構成される、方法。
  56. 予め標的とされる放射免疫療法に関して、対象を選択する方法であって、
    （ａ）該対象に、有効量の、請求項５１又は５２に記載の多特異性抗体又は抗原結合断片を投与することであって、該多特異性抗体が、該多特異性抗体又は抗原結合断片により認識される前記腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在化するよう構成される、投与することと、
    （ｂ）有効量の放射標識されたＤＯＴＡハプテンを、該対象に投与することであって、該放射標識されたＤＯＴＡハプテンが、該多特異性抗体又は抗原結合断片に結合するよう構成される、投与することと、
    （ｃ）該多特異性抗体によって放出される放射性レベルを検出することと、
    （ｄ）該多特異性抗体によって放出される該放射性レベルが参照値よりも高い場合に、予め標的とされる放射免疫療法に関して、該対象を選択することと
    を含む、方法。
  57. がんと診断された対象において、放射線療法に対する腫瘍感受性を増加させる方法であって、
    （ａ）該対象に、有効量の、請求項５１又は５２に記載の多特異性抗体又は抗原結合断片を投与することであって、該多特異性抗体が、該多特異性抗体又は抗原結合断片により認識される前記腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在化するよう構成される、投与することと、
    （ｂ）有効量の放射標識されたＤＯＴＡハプテンを、該対象に投与することであって、該放射標識されたＤＯＴＡハプテンが、該多特異性抗体又は抗原結合断片に結合するよう構成される、投与することと
    を含む、方法。
  58. それを必要とする対象において、がんを処置する方法であって、
    （ａ）該対象に、有効量の、請求項５１又は５２に記載の多特異性抗体又は抗原結合断片を投与することであって、該多特異性抗体が、該多特異性抗体又は抗原結合断片により認識される前記腫瘍抗原を発現する腫瘍に局在化するよう構成される、投与することと、
    （ｂ）有効量の放射標識されたＤＯＴＡハプテンを、該対象に投与することであって、該放射標識されたＤＯＴＡハプテンが、該多特異性抗体又は抗原結合断片に結合するよう構成される、投与することと
    を含む、方法。
  59. 有効量の洗浄剤を、前記放射標識されたＤＯＴＡハプテンの投与前に、前記対象に投与することをさらに含む、請求項５６～５８のいずれか１項に記載の方法。
  60. 前記対象がヒトである、請求項５３～５９のいずれか１項に記載の方法。
  61. 前記複合体が、静脈内に、筋内に、動脈内に、髄腔内に、関節包内に、眼窩内に、皮内に、腹腔内に、経気管内に、皮下に、脳室内に、経口的に、腫瘍内に、又は鼻腔内に投与される、請求項５３～５５のいずれか１項に記載の方法。
  62. 前記放射標識されたＤＯＴＡハプテンが、アルファ粒子放出同位体、ベータ粒子放出同位体、又はオージェエミッターを含む、請求項５３～６１のいずれか１項に記載の方法。
  63. 前記放射標識されたＤＯＴＡハプテンが、213Ｂｉ、211Ａｔ、225Ａｃ、152Ｄｙ、212Ｂｉ、223Ｒａ、219Ｒｎ、215Ｐｏ、211Ｂｉ、221Ｆｒ、217Ａｔ、255Ｆｍ、86Ｙ、90Ｙ、89Ｓｒ、165Ｄｙ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、177Ｌｕ、67Ｃｕ、111Ｉｎ、67Ｇａ、51Ｃｒ、58Ｃｏ、99mＴｃ、103mＲｈ、195mＰｔ、119Ｓｂ、161Ｈｏ、189mＯｓ、192Ｉｒ、201Ｔｌ、203Ｐｂ、68Ｇａ、227Ｔｈ、又は64Ｃｕを含む、請求項５３～６２のいずれか１項に記載の方法。
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