KR102601298B1 - 신호-조절 단백질 알파에 대한 항체 및 사용 방법 - Google Patents

신호-조절 단백질 알파에 대한 항체 및 사용 방법 Download PDF

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Abstract

인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, the D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인, 또는 둘 모두에 결합하는 단리된 항체가 특히 본 명세서에 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 항체는 또한 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인, 마우스 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인, 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인, 및/또는 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하거나 차단하지 않고, 한편, 일부 구현예에서, 상기 항체는 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위한 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 친화도를 감소시킨다. 방법, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 및 그와 관련된 숙주세포가 본 명세서에 또한 제공된다.

Description

신호-조절 단백질 알파에 대한 항체 및 사용 방법
관련 출원에 대한 교차 참조
본 출원은 2016년 9월 21일자로 출원된 미국 가출원번호 제62/397,752호 및 2017년 6월 5일자로 출원된 미국 가출원번호 제62/515,480호의 우선권 이익을 주장하며, 이들 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 통합된다.
ASCII 텍스트 파일에 대한 서열목록 제출
ASCII 텍스트 파일에 대한 하기 제출 내용은 그 전체가 참조로서 본 명세서에 통합된다: 서열 목록의 컴퓨터 판독가능한 형태(CRF)(파일명: 757972000140SEQLIST.txt, 기록된 날짜: 2017년 9월 20일, 크기: 411 KB).
기술분야
본 발명은 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인(예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인(예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체, 또는 둘 모두뿐만 아니라 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 숙주세포 및 이에 관련된 방법에 관한 것이다.
신호-조절 단백질 알파(SIRP-α)는 면역계의 조절에 중요한 역할을 하는 세포-표면 수용체의 계열의 일부이다(예를 들어, Barclay, A.N. 및 Brown, M.H. (2006) Nat. Rev. Immunol. 6:457-64 참고). SIRP-α는 백혈구, 예컨대 수지상 세포, 호산구, 중성구 및 대식세포를 포함하는, 다양한 세포의 표면 상에서 발현된다. SIRP-α는 외부 자극과 상호작용하는 세포외 도메인, 예컨대 리간드 및 다양한 세포내 신호를 매개하는 세포내 도메인을 포함한다.
SIRP-α의 주요 역할 중 하나는 CD47과의 상호작용을 통한 면역 반응의 조절이다. CD47은 다양한 세포 유형의 표면 상에서 발현된다. CD47의 IgSF 도메인이 면역 세포(예를 들어, 대식세포) 상에 발현된 SIRP-α의 세포외 도메인(예를 들어, D1 도메인)에 결합하면, 면역 세포에서 SIRP-α-매개된 신호를 도입하여, CD47-발현 세포의 식균작용을 방해한다. 따라서, CD47은 건강한 세포의 식균작용을 방해하는 면역계에 대한 일명 "나를 먹지 마시오(don't eat me)" 신호를 전달하는 역할을 한다(예를 들어, WO2015/138600 및 Weiskopf, K. 등 (2013) Science 341: 88-91 참고). 그러나, CD47은 다양한 암에 의해 고도로 발현되는 것으로 밝혀졌으며, 이 문맥에서 SIRP-α와의 그의 상호작용은 종양이 면역 감시, 및 대식세포에 의한 식균작용을 회피하기 위해 건강한 "나를 먹지 마시오" 신호를 모방할 수 있다고 생각한다(예를 들어, Majeti, R. 등 (2009) Cell 138:286-99; Zhao, X.W. 등 (2011) Proc. Natl. Acad. Sci. 108:18342-7 참고). 이와 같이, 이러한 상호작용을 차단하는 항체가 매우 바람직하다.
SIRP-α는 인간, 원숭이 및 마우스에서 고도의 다형성 단백질로 알려져 있다. 예를 들어, NOD 및 C57BL/6 마우스 균주에서 SIRP-α 단백질 사이에 20가지의 아미노산 차이가 확인되었으며, 이러한 다형성은 CD47 결합 및 이들 마우스 균주에서 인간 조혈 줄기 세포의 생착과 관련된 기능적 결과를 초래한다. 인간에서, SIRPA 유전자의 적어도 10개의 구별되는 대립유전자가 확인되었다(Takenaka, K. 등 (2007) Nat. Immunol. 8:1313-23, Zhao, X. 등 (2011), PNAS. 108:18342-47; van der Heijden, J. (2014). 인간 Fc 감마 수용체의 유전적 변형: 다형성 및 복제수 변형의 기능적 결과(박사 논문)).
SIRP-α의 다형성 및 다른 SIRP 계열 수용체의 존재뿐만 아니라 정상 면역 기능 및 종양 형성에서의 SIRP-α-CD47 상호작용의 중요성으로 인해, 종내 및/또는 종간 교차-반응성과 함께 상이한 결합 특이성을 갖는 항체의 확인은 인간 모집단 전체에 유효한 임상 후보물질의 개발 및 다양한 동물 모델에서 이들 후보물질의 특성규명에 큰 관심을 끈다. 따라서, SIRP-α 기능, 예를 들어, CD47과의 결합 상호작용을 조절하는 연구 도구 및 잠재적인 임상 후보물질 모두에 대한 필요성이 존재한다. 또한, 이 중요한 상호작용을 이해하고 효과적으로 표적화하기 위해 CD47-SIRP-α 결합에 대한 다양한 SIRP-α 결합 특이성 및 효과를 갖는 항체를 단리하는 방법에 대한 필요성이 존재한다.
특허 출원, 특허 공보, 비-특허 문헌 및 UniProtKB/Swiss-Prot 수탁 번호를 포함하여 본원에 인용된 모든 참고문헌은, 각각의 개별적인 참고문헌이 구체적으로 및 개별적으로 참고로 포함되도록 지시된 것처럼, 전체적으로 참고로 포함된다.
이들 및 다른 필요에 부합하기 위해, 특히, 단리된 항체 that bind 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 하기의 아미노산 서열을 포함하는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합한다: EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS (서열번호:5). 일부 구현예에서, 항체는 하기의 아미노산 서열을 포함하는 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합한다: EEELQVIQPDKSVSVAAGESAILHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPARELIYNQKEGHFP RVTTVSESTKRENMDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDTEFKSGAGTELSVRAKPS (서열번호:6). 일부 구현예에서, 항체는, EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS (서열번호:5)의 아미노산 서열을 포함하는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 및 EEELQVIQPDKSVSVAAGESAILHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPARELIYNQKEGHFPRVTTVSESTKRENMDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDTEFKSGAGTELSVRAKPS (서열번호:6)의 아미노산 서열을 포함하는 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 각각의 상기 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 5, 6, 및 76-83로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 세포외 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드는 사이노몰구스 SIRP-α 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 항체는 적어도 2개의 상이한 원숭이 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 사이노몰구스 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인, 서열번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 사이노몰구스 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인, 또는 둘 모두에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 2종 이상의 상이한 쥣과 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 하나 이상의 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하고, 그리고 상기 하나 이상의 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드 각각은 서열번호: 7-10으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 서열번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인, 서열번호:14의 아미노산 서열을 포함하는 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인, 또는 둘 모두에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열번호:15의 아미노산 서열을 포함하는 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는 세포에서 SIRP-α 신호전달을 조절한다. 일부 구현예에서, 세포는 대식세포, 수지상 세포, 중성구, 호산구, 및 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)로 구성된 군으로부터 선택된 백혈구이다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는 대식세포에서 SIRP-α 신호전달을 억제한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는 대식세포에 의해 식균작용을 향상시킨다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다. 일부 구현예에서, 항체는 제1 세포의 표면 상에서 발현된 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 제2 세포의 표면 상에서 발현된 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다. 일부 구현예에서, 항체는 CD47의 IgSF 도메인에 결합된 SIRP-α D1 변이체를 포함하는 복합체에 결합하지 않고, 상기 SIRP-α D1 변이체는 비-자연 발생 고친화도 SIRP-α D1 도메인이고, 그리고, 상기 SIRP-α D1 변이체는 인간 CD47에 결합하는 자연 발생 SIRP-α D1 도메인의 친화도보다 적어도 10-배 더 높은 친화도로 인간 CD47에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 제1 세포의 표면 상에서 발현된 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 제2 세포의 표면 상에서 발현된 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 CD47의 IgSF 도메인에 결합된 SIRP-α D1 변이체를 포함하는 복합체에 결합하고, 상기 SIRP-α D1 변이체는 비-자연 발생 고친화도 SIRP-α D1 도메인이고, 그리고, 상기 SIRP-α D1 변이체는 인간 CD47에 결합하는 자연 발생 SIRP-α D1 도메인의 친화도보다 적어도 10-배 더 높은 친화도로 인간 CD47에 결합한다. 일부 구현예에서, 상기 항체의 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 친화도를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 항체의, 제1 세포의 표면 상에서 발현된 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은 제2 세포의 표면 상에서 발현된 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 친화도를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 항체의, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 koff를 증가시킨다. 일부 구현예에서, 상기 항체의, 제1 세포의 표면 상에서 발현된 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은 제2 세포의 표면 상에서 발현된 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 koff를 증가시킨다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합하고; 상기 항체는 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 그리고 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합하고; 상기 항체는 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 그리고 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합하고; 상기 항체는 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 그리고 상기 항체의 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 친화도를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합하고; 상기 항체는 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 상기 항체는 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 그리고 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합하고; 상기 항체는 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 상기 항체는 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 그리고 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합하고; 상기 항체는 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 상기 항체는 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 그리고 상기 항체의 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 친화도를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합하고; 상기 항체는 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 그리고 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합하고; 상기 항체는 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 그리고 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합하고; 상기 항체는 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 그리고 상기 항체의 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 친화도를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 항체는 2종 이상의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드, 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드, 및 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 상기 항체는 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 중 적어도 하나에 결합하지 않고; 그리고 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다. 일부 구현예에서, 항체는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR 서열; 중쇄 가변 도메인 서열; 및/또는 항체 S130로부터의 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 binds 2종 이상의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인, 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드, 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드 (예를 들어, D1 도메인), 및 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 중 적어도 하나에 결합하고; 그리고 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다. 일부 구현예에서, 항체는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR 서열; 중쇄 가변 도메인 서열; 및/또는 S8, S13, S14, 및 S121로 구성된 군으로부터 선택된 항체로부터의 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 2종 이상의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드, 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드, 및 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 상기 항체는 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 중 적어도 하나에 결합하지 않거나, 감소된 친화도로 결합하고; 그리고 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 S137.1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR 서열; 중쇄 가변 도메인 서열; 및/또는 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 2종 이상의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 및 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드에 결합하고; 상기 항체는 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드에 결합하지 않고; 상기 항체는 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 중 적어도 하나에 결합하지 않고; 그리고 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다. 일부 구현예에서, 항체는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR 서열; 중쇄 가변 도메인 서열; 및/또는 S128로 구성된 군으로부터의 항체로부터의 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 2종 이상의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드, 및 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 중 적어도 하나에 결합하고; 상기 항체는 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드에 결합하지 않고; 그리고 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다. 일부 구현예에서, 항체는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR 서열; 중쇄 가변 도메인 서열; 및/또는 S9, S11, S119, S120, S122, 및 S135로 구성된 군으로부터 선택된 항체로부터의 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 2종 이상의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 및 2종 이상의 상이한 원숭이 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고, 그리고 상기 항체의 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 친화도를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 항체는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR 서열; 중쇄 가변 도메인 서열; 및/또는 S115, S116, S117 및 S118로 구성된 군으로부터 선택된 항체로부터의 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 서열번호:120의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:97의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 서열번호:127의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:104의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 서열번호:133의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:134의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:136의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:137의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:138의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:139의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:140의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:141의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:142의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 115의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 115의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 116의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 116의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 117의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 117의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 118의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 118의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 119의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 119의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 120의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 120의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 121의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨) 에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 121의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 122의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 122의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 123의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 123의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 126의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 126의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 128의 VH 도메인 에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 to the (예를 들어, 표 2에서 열거됨) 및/또는 항체 128의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 130의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 130의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 135의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 135의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 137의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 137의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 138의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 138의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 1의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 1의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 2의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨) 에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 2의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 8의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨) 에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 8의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 9의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 9의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 11의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 11의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 12의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 12의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 13의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 13의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 14의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 14의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 항체 21, 25, 27, 또는 66의 VH 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 항체 21, 25, 27, 또는 66의 VL 도메인 (예를 들어, 표 2에서 열거됨)에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:116에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:93에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:117에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:94에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:118에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:95에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:119에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:96에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:335에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:97에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:121 에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:98에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:122 에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:99에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:123 에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:100에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:124에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:101에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:125 에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:102에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:126에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:103에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:127에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:104에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:128 에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:105에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:129 에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:106에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:130 에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:107에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:108에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:85에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:109 에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:86에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:110 에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:87에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:111 에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:88에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:112 에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:89에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:113 에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:90에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:114 에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:91에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:115 에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:92에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:135, 137, 139, 또는 141 에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:136, 138, 140, 또는 142에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:227 또는 230의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:228 또는 231의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:229의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:232의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:233의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:234의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:219 또는 235의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:236 또는 238의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:237의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:239의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:240의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:241의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: (a) GFSFSX1X2AMX3 (여기서, X1는 N 또는 I이고; X2는 F 또는 Y이고; 그리고 X3는 T 또는 S임) (서열번호:185)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열; (b) TIGX4X5DTYYADSVKG (여기서, X4는 S 또는 A이고, 그리고 X5는 G 또는 D임) (서열번호:186)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열; (c) DSTVX6WSGDFFDY (여기서, X6는 S 또는 G임) (서열번호:187)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열; (d) RASQNVX7X8DX9A (여기서, X7는 K 또는 R이고; X8는 N 또는 S이고; 그리고 X9는 L 또는 I임) (서열번호:188)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열; (e) AAX10X11RX12T (여기서, X10는 R 또는 S이고; X11는 I 또는 S이고; 그리고 X12는 E 또는 D임) (서열번호:189)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열; 및 (f) QQYYDWPPFT (서열번호:148)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열. 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 항체 119로부터의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 표 2에서 열거됨). 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:335 및 97의 가변 도메인 서열로부터의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호:335의 중쇄 가변 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:97의 경쇄 가변 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 항체 135로부터의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 표 2에서 열거됨). 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:127 및 104의 가변 도메인 서열로부터의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호:127의 중쇄 가변 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:104의 경쇄 가변 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:97, 104, 120, 335, 및 127의 가변 도메인 서열로부터의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호:335 및 127의 중쇄 가변 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:97 및 104의 경쇄 가변 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:143-148로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호:143-145로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:146-148로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:148-153로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호:149-151로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:152, 153, 및 148로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 항체 136으로부터의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 표 2에서 열거됨). 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:155-160로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호:155-157로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:158-160로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 항체 21로부터의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 표 2에서 열거됨). 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:161-166로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호:161-163로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:164-166로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 항체 25로부터의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 표 2에서 열거됨). 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 161, 163, 168, 및 170-172로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호: 161, 168, 및 163로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:170-172로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 항체 27로부터의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 표 2에서 열거됨). 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 163, 173, 174, 및 176-178 로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호:163, 173, 및 174로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:176-178로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 항체 66 으로부터의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 표 2에서 열거됨). 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:162, 163, 179, 및 182-184 로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호: 162, 163, 및 179로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:182-184로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:143, 202, 204, 또는 205의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:144, 203, 또는 206의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:145 또는 207의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:146 또는 208의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:147 또는 209의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:148 또는 210의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:149, 211, 213, 또는 214의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:150, 212, 또는 215의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:151 또는 216의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:152 또는 217의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:153 또는 218의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:148의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:155, 219, 221, 또는 222의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:156, 220, 또는 223의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:157 또는 224의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:158 또는 225의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:159 또는 226의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:160의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:161, 191, 또는 194의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:162, 192, 또는 195의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:163 또는 193의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:164의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:165의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:166의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:161, 191, 또는 194의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:168, 196, 또는 197의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:163 또는 193의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:170의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:171의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:172의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:173, 198, 또는 200의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:174, 199, 또는 201의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:163 또는 193의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:176의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:177의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:178의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:179의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:182의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:183의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:184의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:164의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:165의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:166의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:137의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:170의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:171의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:172의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:139의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:176의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:177의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:178의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:141의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:182의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:183의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:184의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 항체 3으로부터의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 표 2에서 열거됨). 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:242로부터의 1, 2, 또는 3개의 HVR 서열을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:243으로부터의 1, 2, 또는 3개의 HVR 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 항체 45 로부터의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 표 2에서 열거됨). 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:244로부터의 1, 2, 또는 3개의 HVR 서열을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:245로부터의 1, 2, 또는 3개의 HVR 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:164, 170, 176, 또는 182의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; 서열번호:165, 171, 177, 또는 183의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 서열번호:166, 172, 178, 또는 184의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:137의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:164, 170, 176, 또는 182의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; 서열번호:165, 171, 177, 또는 183의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 서열번호:166, 172, 178, 또는 184의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:139의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:164, 170, 176, 또는 182의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; 서열번호:165, 171, 177, 또는 183의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 서열번호:166, 172, 178, 또는 184의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:141의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:164, 170, 176, 또는 182의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; 서열번호:165, 171, 177, 또는 183의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 서열번호:166, 172, 178, 또는 184의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, HVR 서열 중 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개는 카밧에 의해 정의된다. 일부 구현예에서, HVR 서열 중 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개는 초티아에 의해 정의된다. 일부 구현예에서, HVR 서열 중 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개는 IMGT에 의해 정의된다. 일부 구현예에서, 본 항체는 카밧, 초티아, 및 IMGT 중 2개 이상에 의해 정의된 HVR 서열을 포함환다 (예를 들어, 항체는 하나의 윤곽에 의해 정의된 하나 이상의 HVR 서열 및 상이한 윤곽에 의해 정의된 하나 이상의 HVR 서열을 포함한다).
다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되고, 상기 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인: (i) NFAMT (서열번호:175), NFAVT (서열번호:204), 또는 NFALT (서열번호:305)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) TIGSGDTYYADSVKG (서열번호:144)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) DSTVSWSGDFFDY (서열번호:145)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열; 및/또는 (b) 하기를 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인: (i) RASQNVKNDLA (서열번호:146)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (ii) AARIRET (서열번호:147)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (iii) QQYYDWPPFT (서열번호:148)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호:120, 335, 246, 258, 또는 327의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고/거나; 상기 VL 도메인은 서열번호:97 또는 312의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호:246의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:97의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:258의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:97의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:335의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:97의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:327의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:97의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:246의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:312의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:258의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:312의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:335의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:312의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 VH 도메인은 서열번호:327의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:312의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되고, 상기 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인: (i) IYAMS (서열번호:269), IYAVS (서열번호:213), 또는 IYALS (서열번호:306)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) TIGADDTYYADSVKG (서열번호:150)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) DSTVGWSGDFFDY (서열번호:151)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열; 및/또는 (b) 하기를 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인: (i) RASQNVRSDIA (서열번호:152)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (ii) AASSRDT (서열번호:153)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (iii) QQYYDWPPFT (서열번호:148)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호:341, 247, 259, 또는 328의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고/거나; 상기 VL 도메인은 서열번호:104 또는 248의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호:127의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:104의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:247의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:104의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:259의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:104의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:328의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:104의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:127의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:248의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:247의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:248의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:259의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:248의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 VH 도메인은 서열번호:328의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:248의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되고, 상기 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인: (i) X1X2DX3N (여기서, X1는 S 또는 T이고; X2는 Y 또는 S이고; 그리고 X3는 M, L, 또는 V임) (서열번호:307)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열; (ii) LISGSGEIX1YYADSVKG (여기서, X1는 I 또는 T임) (서열번호:308)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열; 및 (iii) EX1X2X3YRFFDX4 (여기서, X1는 N 또는 D이고; X2는 N 또는 D이고; X3는 R 또는 M이고; 그리고 X4는 D 또는 Y임) (서열번호:309)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열; 및/또는 (b) 하기를 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인: (i) RAX1QSVYX2YLA (여기서, X1는 S 또는 D이고; 그리고 X2는 T 또는 S임) (서열번호:310)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열; (ii) X1AX2X3RAX4 (여기서, X1는 G, A, 또는 D이고; X2는 S 또는 R이고; X3는 S, N, 또는 T이고; 그리고 X4는 T 또는 A임) (서열번호:311)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열; 및 (iii) QQYYDRPPLT (서열번호:160)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열. 일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인: (i) SYDMN (서열번호:270), SYDVN (서열번호:221), 또는 SYDLN (서열번호:313)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) LISGSGEIIYYADSVKG (서열번호:156)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ENNRYRFFDD (서열번호:157)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열; 및/또는 (b) 하기를 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인: (i) RASQSVYTYLA (서열번호:158)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (ii) GASSRAT (서열번호:159)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (iii) QQYYDRPPLT (서열번호:160)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호: 249, 133, 260, 또는 329의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하고/거나; 상기 VL 도메인은 서열번호:134, 250, 또는 251의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호:133의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:134의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:260의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:134의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:329의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:134의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:133의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:250의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:260의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:250의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:329의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:250의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:133의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:251의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:260의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:251의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:329의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:251의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:249의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:134의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:249의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:250의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 VH 도메인은 서열번호:249의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:251의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되고, 상기 항체는 하기를 포함한다: 하기를 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인: X1X2AX3S (여기서, X1는 S 또는 T이고; X2는 N, Y, H, 또는 D이고; 그리고 X3는 M, L, 또는 V임) (서열번호:297)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열; GISX1X2X3X4X5X6YYX7X8SX9KG (여기서, X1는 A 또는 S이고; X2는 G, S, 또는 부재하고; X3는 S, D 또는 G이고; X4는 G 또는 S이고; X5는 D, S, 또는 G이고; X6는 T 또는 A이고; X7는 P, G, V, I, A, 또는 S이고; X8는 A, D, 또는 G이고; 그리고 X9는 V 또는 M임) (서열번호:298)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열; 및 ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열; 및/또는 하기를 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인: SGGX1X2 X3SX4YYX5 (여기서, X1는 D, G, S, I, 또는 부재하고; X2는 S, W, G, Y, D이거나, 또는 부재하고; X3는 S, Y, T, 또는 D이고; X4는 H, T, S, 또는 Y이고; 그리고 X5는 G 또는 A임) (서열번호:299)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열; SDX1X2RPX3 (여기서, X1는 D 또는 N이고; X2는 E, K, 또는 Q이고; 그리고 X3는 S 또는 P임) (서열번호:300)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열; 및 X1X2YDX3X4X5YX6NX7 (여기서, X1는 G 또는 A이고; X2는 G 또는 A이고; X3는 G, Y, Q, S, 또는 A이고; X4는 S, R, 또는 T이고; X5는 T 또는 S이고; X6는 A, I, V, L, 또는 T이고; 그리고 X7는 T, A, D, 또는 P임) (서열번호:301)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열. 다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되고, 상기 항체는 하기를 포함한다: 하기를 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인: 하기를 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인: SX1AX2S (여기서, X1는 N 또는 Y이고; 그리고 X2는 M, L, 또는 V임) (서열번호:302)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열; GISX1GX2X3DTYYX4X5SVKG (여기서, X1는 A 또는 S이고; X2는 G 또는 부재하고; X3는 S 또는 G이고; X4는 P, G, 또는 V; 및 X5는 A 또는 D임) (서열번호:303)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열; 및 ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열; 및/또는 하기를 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인: SGGX1YSSYYYA (여기서, X1는 S 또는 A임) (서열번호:304)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열; SDDKRPS (서열번호:336)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열; 및 GGYDQSSYTNP (서열번호:172)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 포함한다: (i) SNAMS (서열번호:194), SNAVS (서열번호:271), 또는 SNALS (서열번호:318)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) GISAGGSDTYYPASVKG (서열번호:195)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호:135, 263, 264, 또는 330의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 포함한다: (i) SNAMS (서열번호:194), SNAVS (서열번호:271), 또는 SNALS (서열번호:318)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) GISSGSDTYYGDSVKG (서열번호:197)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호:137, 265, 266, 또는 331의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 포함한다: (i) SYAMS (서열번호:200), SYAVS (서열번호:272), 또는 SYALS (서열번호:319)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) GISSGGDTYYVDSVKG (서열번호:201)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호:139, 267, 268, 또는 332의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 FW1―HVR-L1―FW2―HVR-L2―FW3―HVR-L3―FW4 (N-말단에서 C-말단)을 포함하되, FW1은 아미노산 서열 SYELTQPPSVSVSPGQTARITC (서열번호:314)을 포함하고, FW2는 아미노산 서열 WYQQKPGQAPVTLIY (서열번호:315)을 포함하고, FW3은 아미노산 서열 NIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYC (서열번호:316)을 포함하고, 그리고 FW4은 아미노산 서열 FGGGTKLTVL (서열번호:317)을 포함한다. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 포함한다: (i) SGGSYSSYYYA (서열번호:170)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (ii) SDDKRPS (서열번호:336)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (iii) GGYDQSSYTNP (서열번호:172)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 포함한다: (i) SGGAYSSYYYA (서열번호:261)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (ii) SDDKRPS (서열번호:336)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (iii) GGYDQSSYTNP (서열번호:172)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호:263의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:264의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:330의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:137의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:139의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:265의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:266의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:331의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:267의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:268의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:332의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:263의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:264의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:330의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:265의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:266의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:331의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:267의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:268의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:332의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:137의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 VH 도메인은 서열번호:139의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되고, 상기 항체는 서열번호:296에 따라, I31, V33, Q52, K53, T67, R69, N70, 및 K96으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 위치에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열번호:296에 따라, I31, V33, Q52, K53, T67, R69, N70, 및 K96에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 추가로, 서열번호:296에 따라, L30, P32, E54, T62, N71, M72, F74, 및 R95로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 위치에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 추가로, 서열번호:296에 따라, L30, P32, E54, T62, N71, M72, F74, 및 R95에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다.
다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되고, 상기 항체는 서열번호:296에 따라, I7, P9, D10, K11, S12, A42, A108, 및 E111로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 위치에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열번호:296에 따라, K11, A42, A108, 및 E111에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열번호:296에 따라, I7, P9, D10, K11, S12, A108, 및 E111에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 추가로, 서열번호:296에 따라, L14, T26, T28, T88, Y90, S106, S113, 및 A116으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 위치에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 추가로, 서열번호:296에 따라, 인간 SIRP-α v1의 L14, T88, Y90, S106, S113, 및 A116에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 추가로, 서열번호:296에 따라, L14, T26, 및 T28에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다.
다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되고, 상기 항체는 서열번호:296에 따라, E47, L48, P58, R59, T82, 및 A84로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 위치에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열번호:296에 따라, E47, L48, P58, R59, T82, 및 A84에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 추가로, 서열번호:296에 따라, A17, P44, G45, I49, E54, G55, H56, F57, 및 P83로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 위치에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 추가로, 서열번호:296에 따라, 인간 SIRP-α v1의 A17, P44, G45, I49, E54, G55, H56, F57, 및 P83에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다.
다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되고, 상기 항체는 100nM 미만의 해리 상수 (KD)로 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 에 결합하고, 그리고 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다. 일부 구현예에서, 항체는 100nM 미만의 해리 상수 (KD) 로 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 D1 도메인 및 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 D1 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 사이노몰구스 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합한다.
다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되되, 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 D1 도메인에 결합하고, 그리고 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 100nM 미만의 해리 상수 (KD)로 인간 SIRP-α의 D1 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 100nM 미만의 해리 상수 (KD)로 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 D1 도메인에 결합하고/거나 100nM 미만의 해리 상수 (KD)로 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 D1 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 D1 도메인 및 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 D1 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 사이노몰구스 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합한다.
다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되되, 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하기 위해, 항체 119, 120, 121, 122, 21, 25, 27, 66, 및 135로 구성된 군으로부터 선택된 항체의 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함하는 참조 항-SIRP-α 항체와 경쟁한다. 다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되되, 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하기 위해, 하기를 포함하는 참조 항-SIRP-α 항체와 경쟁한다: (a) 서열번호:120의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:97의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; (b) 서열번호:121의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:98의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; (c) 서열번호:130의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:107의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; (d) 서열번호:122의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:99의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; (e) 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:136의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; (f) 서열번호:137의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:138의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; (g) 서열번호:139의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:140의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; (h) 서열번호:141의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:142의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (i) 서열번호:127의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:104의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인.
다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되되, 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하기 위해, 항체 136 및 137로 구성된 군으로부터 선택된 항체의 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함하는 참조 항-SIRP-α 항체와 경쟁한다. 다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되되, 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하기 위해, 하기를 포함하는 참조 항-SIRP-α 항체와 경쟁한다: (a) 서열번호:133의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:134의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (b) 서열번호:128의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:105의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인.
다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되되, 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하기 위해, 항체 3, 213, 173, 및 209로 구성된 군으로부터 선택된 항체의 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함하는 참조 항-SIRP-α 항체와 경쟁한다. 다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되되, 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하기 위해, 하기를 포함하는 참조 항-SIRP-α 항체와 경쟁한다: (a) 서열번호:242의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:243의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; (b) 서열번호:275의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:276의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; (c) 서열번호:278의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:279의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (d) 서열번호:280의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:281의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인.
다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되되, 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하기 위해, 항체 115, 116, 117, 118, 및 132로 구성된 군으로부터 선택된 항체의 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함하는 참조 항-SIRP-α 항체와 경쟁한다. 다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되되, 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하기 위해, 하기를 포함하는 참조 항-SIRP-α 항체와 경쟁한다: (a) 서열번호:116의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:93의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; (b) 서열번호:117의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:94의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; (c) 서열번호:118의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:95의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; (d) 서열번호:119의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:96의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (e) 서열번호:282의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:283의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인.
다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되되, 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하기 위해, 항체 218, 123, 149, 161, 162, 및 194로 구성된 군으로부터 선택된 항체의 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함하는 참조 항-SIRP-α 항체 와 경쟁한다. 다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되되, 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하기 위해, 하기를 포함하는 참조 항-SIRP-α 항체와 경쟁한다: (a) 서열번호:284의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:285의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; (b) 서열번호:123의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:100의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; (c) 서열번호:286의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:287의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; (d) 서열번호:288의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:289의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; (e) 서열번호:290의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:291의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인; 또는 (f) 서열번호:292의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:293의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인.
다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되되, 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하기 위해, 항체 45의 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함하는 참조 항-SIRP-α 항체와 경쟁한다. 다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공되되, 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하기 위해, 서열번호:244의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인 및 서열번호:245의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함하는 참조 항-SIRP-α 항체와 경쟁한다.
상기 구현예 중 임의의 것의 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는 대식세포에 의해 식균작용을 향상시킨다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는 수지상 세포의 활성화를 향상시킨다. 일부 구현예에서, 항체는 CD47을 발현시키는 종양의 생체내 성장을 억제한다. 일부 구현예에서, 항체는 CD47-발현 세포와 T 세포 사이의 상호작용을 예방한다.
상기 구현예 중 임의의 것의 일부 구현예에서, 항체는 단클론성 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 scFv-Fc, 단일 도메인 항체, 단일 중쇄 항체, 또는 단일 경쇄 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 서열번호:325, 326, 또는 426의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열번호:320-324로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 IgG1 Fc 영역, IgG2 Fc 영역, 및 IgG4 Fc 영역으로 구성된 군으로부터 선택된 인간 Fc 영역이다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 EU 넘버링 에 따라, L234A, L235A, L235E, G237A, 및 N297A 로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 EU 넘버링에 따라, A330S, P331S 및 N297A로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 인간 IgG2 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 EU 넘버링 에 따라, S228P, E233P, F234V, L235A, L235E, delG236, 및 N297A로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 인간 IgG4 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 Fab, F(ab')2, Fab'-SH, Fv, 및 scFv 단편으로 구성된 군으로부터 선택된 항체 단편이다. 일부 구현예에서, 항체는 세포독성 약물 또는 표지에 접합된다.
일부 구현예에서, 항체는 이중특이적 항체이다. 일부 구현예에서, 본 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 암 세포에 의해 발현된 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 암 세포에 의해 발현된 항원은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD52, CD56, CD70, CD74, CD79b, CD123, CD138, CS1/SLAMF7, Trop-2, 5T4, EphA4, BCMA, 뮤신 1, 뮤신 16, PD-L1, PTK7, STEAP1, 엔도텔린 B 수용체, 메소텔린, EGFRvIII, ENPP3, SLC44A4, GNMB, 넥틴 4, NaPi2b, LIV-1A, 구아닐릴 사이클라제 C, DLL3, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR, 인테그린 αVβ3, 인테그린 α5β1, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, 테나스신, Ley, EpCAM, CEA, gpA33, PSMA, TAG72, 뮤신, CAIX, EPHA3, 엽산 수용체 α, GD2, GD3, 및 NY-ESO-1/LAGE, SSX-2, MAGE 계열 단백질, MAGE-A3, gp100/pmel17, 멜란-A/MART-1, gp75/TRP1, 티로시나제, TRP2, CEA, PSA, TAG-72, 미성숙한 라미닌 수용체, MOK/RAGE-1, WT-1, SAP-1, BING-4, EpCAM, MUC1, PRAME, 서바이빈, BRCA1, BRCA2, CDK4, CML66, MART-2, p53, Ras, β-카테닌, TGF-βRII, HPV E6, 또는 HPV E7로부터의 펩타이드를 포함하는 MHC/펩타이드 복합체. 일부 구현예에서, 항체는 닭, 인간화된, 키메라성, 또는 인간 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 닭으로부터 생산되거나 유래된다.
상기 구현예 중 임의의 하나에 따른 항체를 포함하는 폴리뉴클레오타이드가 본 명세서에 추가로 제공된다. 상기 구현예 중 임의의 하나에 따른 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터가 본 명세서에 추가로 제공된다. 상기 구현예 중 임의의 하나에 따른 폴리뉴클레오타이드 또는 벡터를 포함하는 숙주세포가 본 명세서에 추가로 제공된다. 항체를 생산하는 방법이 본 명세서에 추가로 제공되고, 상기 방법은 상기 구현예 중 임의의 하나에 따른 숙주세포를 배양하여 항체를 생산하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법 추가로, 상기 항체를 상기 숙주세포로부터 회수하는 것을 포함한다.
개체에서 암을 치료하거나 그 진행을 지연시키는 방법이 본 명세서에 추가로 제공되고, 상기 방법은 상기 개체에게 상기 구현예 중 임의의 하나에 따른 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 방법은 추가로, 상기 개체에게 제2 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 항체는 암 세포에 의해 발현된 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, 암 세포에 의해 발현된 항원은 하기로 구성된 군으로부터 선택된다: CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD52, CD56, CD70, CD74, CD79b, CD123, CD138, CS1/SLAMF7, Trop-2, 5T4, EphA4, BCMA, 뮤신 1, 뮤신 16, PTK7, STEAP1, 엔도텔린 B 수용체, 메소텔린, EGFRvIII, ENPP3, SLC44A4, GNMB, 넥틴 4, NaPi2b, LIV-1A, 구아닐릴 사이클라제 C, DLL3, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR, 인테그린 αVβ3, 인테그린 α5β1, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, 테나스신, Ley, EpCAM, CEA, gpA33, PSMA, TAG72, 뮤신, CAIX, EPHA3, 엽산 수용체 α, GD2, GD3, 및 NY-ESO-1/LAGE, SSX-2, MAGE 계열 단백질, MAGE-A3, gp100/pmel17, 멜란-A/MART-1, gp75/TRP1, 티로시나제, TRP2, CEA, PSA, TAG-72, 미성숙한 라미닌 수용체, MOK/RAGE-1, WT-1, SAP-1, BING-4, EpCAM, MUC1, PRAME, 서바이빈, BRCA1, BRCA2, CDK4, CML66, MART-2, p53, Ras, β-카테닌, TGF-βRII, HPV E6, 또는 HPV E7로부터의 펩타이드를 포함하는 MHC/펩타이드 복합체. 일부 구현예에서, 본 방법은 추가로, 상기 개체에게 면역치료제의 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 면역치료제는 제2 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 항체는 PD-1, PD-L1, OX40, CTLA-4, CD137/4-1BB, TNFR2, B7-H3, FZD7, CD27, CCR4, CSF1R, CSF, TIM-3, LAG-3, VISTA, ICOS, CCR2, IDO, A2R, CD39, CD73, TIGIT, CD80, CD47, 아르기나제, TDO, 및 PVRIG로 구성된 군으로부터 선택된 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 항체는 100nM 미만의 해리 상수 (KD)로 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인, 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인, 또는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드와 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드 둘 모두의 세포외 도메인에 결합하되, 상기 제1 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하고, 그리고 상기 제2 항체는 PD-1에 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 D1 도메인에 결합하고, 상기 제1 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하지 않고, 그리고 상기 제2 항체는 PD-1에 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 항체는 100nM 미만의 해리 상수 (KD) 로 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하되, 상기 제1 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하고, 그리고 상기 제2 항체는 PD-L1에 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 D1 도메인에 결합하고, 상기 제1 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하지 않고, 그리고 상기 제2 항체는 PD-L1에 결합한다. 일부 구현예에서, 개체는 인간이다.
개체에서 자가면역 질환 또는 염증성 질환을 치료하거나 그 진행을 지연시키는 방법이 본 명세서에 추가로 제공된다, 방법은 상기 개체에게 상기 구현예 중 임의의 하나에 따른 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 자가면역 질환 또는 염증성 질환은 다발성 경화증, 류마티스성 관절염, 척추관절증, 전신 홍반성 낭창, 항체-매개된 염증성 또는 자가면역 질환, 이식편 대 숙주 질환, 패혈증, 당뇨병, 건선, 건선성 관절염, 죽상경화증, 쇼그렌 증후군, 진행성 전신 경화증, 경피증, 급성 관상동맥 증후군, 허혈성 재관류, 크론병, 궤양성 대장염, 자궁내막증, 사구체신염, IgA 신병증, 다낭성 신장 질환, 중증 근무력증, 특발성 폐 섬유증, 천식, 아토피 피부염, 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS), 혈관염, 및 염증성 자가면역 근염으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 개체는 인간이다.
인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고 인간 CD47과 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단하지 않는 항원 결합 도메인을 확인하는 방법이 본 명세서에 추가로 제공되고, 본 방법은 하기를 포함한다: (a) 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 항원 결합 도메인을 제공하는 단계; (b) CD47의 IgSF 도메인을 포함하는 폴리펩타이드에 결합된 SIRP-α D1 변이체를 포함하는 복합체를 조립하는 단계로서, 상기 SIRP-α D1 변이체는 비-자연 발생 고친화도 SIRP-α D1 도메인이고, 그리고, 상기 SIRP-α D1 변이체는 인간 CD47에 결합하는 자연 발생 SIRP-α D1 도메인의 친화도보다 적어도 10-배 더 높은 친화도로 인간 CD47에 결합하는 단계; (c) 상기 항원 결합 도메인을 상기 조립된 복합체와 접촉시키는 단계; 및 (d) 상기 복합체에 대한 상기 항원 결합 도메인의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 복합체에 대한 상기 항원 결합 도메인의 결합은, 상기 항원 결합 도메인이 인간 CD47과 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단하지 않음을 나타내는 단계. 항체 또는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고 인간 CD47과 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단하지 않는 항원 결합 도메인을 확인하는 방법이 본 명세서에 추가로 제공되고, 상기 방법은 항체 또는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 항원 결합 도메인을 CD47의 IgSF 도메인을 포함하는 폴리펩타이드에 결합된 SIRP-α D1 변이체를 포함하는 복합체과 접촉시키는 단계로서, 상기 SIRP-α D1 변이체는 비-자연 발생 고친화도 SIRP-α D1 도메인이고, 그리고, 상기 SIRP-α D1 변이체는 인간 CD47에 결합하는 자연 발생 SIRP-α D1 도메인의 친화도보다 적어도 10-배 더 높은 친화도로 인간 CD47에 결합하는 단계; 및 상기 복합체에 대한 상기 항원 결합 도메인의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 복합체에 대한 상기 항원 결합 도메인의 결합은, 상기 항원 결합 도메인이 인간 CD47과 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단하지 않음을 나타내는 단계를 포함한다. 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고 인간 CD47과 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단하는 항원 결합 도메인을 확인하는 방법이 본 명세서에 추가로 제공되고, 본 방법은 하기를 포함한다: (a) 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 항원 결합 도메인을 제공하는 단계; (b) CD47의 IgSF 도메인을 포함하는 폴리펩타이드에 결합된 SIRP-α D1 변이체를 포함하는 복합체를 조립하는 단계로서, 상기 SIRP-α D1 변이체는 비-자연 발생 고친화도 SIRP-α D1 도메인이고, 그리고, 상기 SIRP-α D1 변이체는 인간 CD47에 결합하는 자연 발생 SIRP-α D1 도메인의 친화도보다 적어도 10-배 더 높은 친화도로 인간 CD47에 결합하는 단계; (c) 상기 항원 결합 도메인을 상기 조립된 복합체와 접촉시키는 단계; 및 (d) 상기 복합체에 대한 상기 항원 결합 도메인의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 복합체에 대한 상기 항원 결합 도메인의 결합의 결핍은, 상기 항원 결합 도메인이 인간 CD47과 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단함을 나타내는 단계. 항체 또는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고 인간 CD47과 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단하는 항원 결합 도메인을 확인하는 방법이 본 명세서에 추가로 제공되고, 상기 방법은 항체 또는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 항원 결합 도메인을 CD47의 IgSF 도메인을 포함하는 폴리펩타이드에 결합된 SIRP-α D1 변이체를 포함하는 복합체과 접촉시키는 단계로서, 상기 SIRP-α D1 변이체는 비-자연 발생 고친화도 SIRP-α D1 도메인이고, 그리고, 상기 SIRP-α D1 변이체는 인간 CD47에 결합하는 자연 발생 SIRP-α D1 도메인의 친화도보다 적어도 10-배 더 높은 친화도로 인간 CD47에 결합하는 단계; 및 (d) 상기 복합체에 대한 상기 항원 결합 도메인의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 복합체에 대한 상기 항원 결합 도메인의 결합의 결핍은, 상기 항원 결합 도메인이 인간 CD47과 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단함을 나타내는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, SIRP-α D1 변이체는 서열번호:17-52로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CD47의 IgSF 도메인은 서열번호:16의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CD47의 IgSF 도메인을 포함하는 폴리펩타이드는 인간 CD47 세포외 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CD47의 IgSF 도메인을 포함하는 폴리펩타이드는 추가로, 항체 Fc 영역을 포함한다.
인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 항-SIRP-α 항체를 생산하는 방법이 본 명세서에 추가로 제공되고, 상기 방법은 하기의 단계들을 포함한다: (a) 닭을, 인간 SIRP-α 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)의 적어도 일부분을 포함하는 펩타이드로 면역화하는 단계; (b) 상기 면역화된 닭으로부터의 항체-생산 세포로부터 항체를 얻는 단계; 및 (c) 상기 세포로부터 수득된 항체와 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 사이의 결합을 검출하는 단계로서 상기 항체와 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 사이의 결합이, 상기 항체가 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 항-SIRP-α 항체임을 나타내는 단계. 일부 구현예에서, 항체는 닭, 인간화된, 키메라성, 또는 인간 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 하기의 아미노산 서열을 포함하는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다: EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS (서열번호:5). 일부 구현예에서, 항체는 하기의 아미노산 서열을 포함하는 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다: EEELQVIQPDKSVSVAAGESAILHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPARELIYNQKEGHFPRVTTVSESTKRENMDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDTEFKSGAGTELSVRAKPS (서열번호:6). 일부 구현예에서, 항체는 EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHF PRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS (서열번호:5) 하기의 아미노산 서열을 포함하는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인(예를 들어, D1 도메인)에 결합하고 EEELQVIQPDKSVSVAAGESAILHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPARELIYNQKEGHFPRVTTVSESTKRENMDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDTEFKSGAGTELSVRAKPS (서열번호:6)의 아미노산 서열을 포함하는 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 각각의 상기 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드는 서열번호: 5, 6, 및 76-83 로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 방법은 추가로, 상기 세포로부터 수득된 항체와 하기로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 사이의 결합을 검출하는 단계를 포함한다: 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드, 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드, 인간 SIRP-β 폴리펩타이드, 및 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드. 일부 구현예에서, 항체는 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드는 사이노몰구스 SIRP-α 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 항체는 적어도 2개의 상이한 원숭이 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 사이노몰구스 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 서열번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 사이노몰구스 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 2종 이상의 상이한 쥣과 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 하나 이상의 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고, 상기 하나 이상의 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드 각각은 서열번호: 7-10으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 서열번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 서열번호:14의 아미노산 서열을 포함하는 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열번호:15의 아미노산 서열을 포함하는 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다f. 일부 구현예에서, 본 방법은 추가로, 상기 세포로부터 수득된 항체와 CD47의 IgSF 도메인에 결합된 SIRP-α D1 변이체를 포함하는 복합체 사이의 결합 또는 결합의 결여를 검출하는 것을 포함하고, 상기 SIRP-α D1 변이체는 비-자연 발생 고친화도 SIRP-α D1 도메인이고, 그리고, 상기 SIRP-α D1 변이체는 인간 CD47에 결합하는 자연 발생 SIRP-α D1 도메인의 친화도보다 적어도 10-배 더 높은 친화도로 인간 CD47에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 CD47의 IgSF 도메인에 결합된 SIRP-α D1 변이체를 포함하는 복합체에 결합하고, 상기 SIRP-α D1 변이체는 비-자연 발생 고친화도 SIRP-α D1 도메인이고, 그리고, 상기 SIRP-α D1 변이체는 인간 CD47에 결합하는 자연 발생 SIRP-α D1 도메인의 친화도보다 적어도 10-배 더 높은 친화도로 인간 CD47에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 제1 세포의 표면 상에서 발현된 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 제2 세포의 표면 상에서 발현된 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 CD47의 IgSF 도메인에 결합된 SIRP-α D1 변이체를 포함하는 복합체에 결합하지 않고, 상기 SIRP-α D1 변이체는 비-자연 발생 고친화도 SIRP-α D1 도메인이고, 그리고, 상기 SIRP-α D1 변이체는 인간 CD47에 결합하는 자연 발생 SIRP-α D1 도메인의 친화도보다 적어도 10-배 더 높은 친화도로 인간 CD47에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다. 일부 구현예에서, 항체는 제1 세포의 표면 상에서 발현된 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 제2 세포의 표면 상에서 발현된 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다. 일부 구현예에서, 상기 항체의 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 친화도를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 항체의, 제1 세포의 표면 상에서 발현된 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은 제2 세포의 표면 상에서 발현된 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 친화도를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 항체의, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 koff를 증가시킨다. 일부 구현예에서, 상기 항체의, 제1 세포의 표면 상에서 발현된 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은 제2 세포의 표면 상에서 발현된 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 koff를 증가시킨다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는 세포에서 SIRP-α 신호전달을 조절한다. 일부 구현예에서, 세포는 대식세포, 수지상 세포, 중성구, 호산구, 및 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)로 구성된 군으로부터 선택된 백혈구이다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는 대식세포에서 SIRP-α 신호전달을 억제한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는 대식세포에 의해 식균작용을 향상시킨다.
본 명세서에 기술된 다양한 구현예의 특성 중 하나, 일부 또는 전부가 조합되어 본 발명의 다른 구현예를 형성할 수 있음을 이해해야 한다. 본 발명의 이들 및 다른 양태는 당해 분야의 숙련가에게 분명해질 것이다. 본 발명의 이들 및 다른 구현예들은 이하의 상세한 설명에 의해 추가로 설명된다.
도 1a는 10개의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 D1 도메인 간의 정렬을 도시한다. 도시된 서열은 서열번호: 5, 6, 및 76~83에 상응한다(최상부에서 바닥으로). 아미노산의 차이는 별표로 표시된다.
도 1b는 인간 v1, 인간 v2, 사이노몰구스 원숭이 및 129 마우스 SIRP-α D1 도메인 간의 정렬을 도시한다. 도시된 서열은 서열번호: 5, 6, 11 및 7에 상응한다(최상부에서 바닥으로). 아미노산의 차이는 별표로 표시된다.
도 1c는 다양한 인간 및 마우스 SIRP-α D1 도메인 사이의 정렬을 도시하며, R1, R2 및 R3 루프가 표시되어 있다. 표시된 것은 인간 v1, 인간 v2, 129 마우스, NOD 마우스, C57BL/6 마우스 및 BALB/c 마우스 SIRP-α D1 도메인 간의 정렬이다. 도시된 서열은 서열번호: 5 내지 10에 상응한다(최상부에서 바닥으로). 아미노산의 차이는 별표로 표시된다.
도 2는 인간 v1, 인간 v2, 사이노몰구스 원숭이, 129 마우스 및 닭 SIRP-α D1 도메인 간의 정렬을 도시한다. 도시된 서열은 서열번호: 5, 6, 11, 7 및 84에 상응한다(최상부에서 바닥으로). 아미노산의 차이는 별표로 표시된다.
도 3a 및 3b는 다양한 SIRP 펩타이드에 대한 항체 클론 S130의 결합 특이성을 도시한다. 도 3a는 CD47의 IgSF 도메인(서열번호: 16)에 결합된 고친화성 SIRP-α 변이체의 인간 SIRPγ(서열번호: 15) 및 사전-형성된 복합체 뿐만 아니라 인간 v1, 인간 v2, 뮤린 및 사이노몰구스 SIRPαD1 도메인에 대한 항체에 대한 ELISA 결합 곡선을 도시한다. 사전-형성된 복합체는 2개의 고친화성 인간 SIRP-α v1 및 v2 폴리펩타이드(서열번호: 17 및 19)를 1:1 비율로 혼합하고 그 혼합물을 CD47과 배합시켜 SIRP-α:CD47 복합체를 생성시킴으로써 생성되었다. 도 4a 내지 9b에 대한 사전-형성된 복합체 SIRP-α:CD47 복합체도 또한, 유사하게 제조된다. 도 3b는 이들 표적 각각에 대한 클론의 결합 특이성을 요약한다("+"는 결합을 나타내고; "-"는 비-결합을 나타낸다).
도 4a 및 4b는 다양한 SIRP 펩타이드에 대한 항체 클론 S121의 결합 특이성을 도시한다. 도 4a는 CD47의 IgSF 도메인(서열번호: 16)에 결합된 고친화성 SIRP-α 변이체(서열번호: 17 및 19)의 인간 SIRPγ(서열번호: 15) 및 사전-형성된 복합체 뿐만 아니라 인간 v1, 인간 v2, 뮤린 및 사이노몰구스 SIRPαD1 도메인에 대한 항체에 대한 ELISA 결합 곡선을 도시한다. 도 4b는 이들 표적 각각에 대한 클론의 결합 특이성을 요약한다("+"는 결합을 나타내고; "-"는 비-결합을 나타낸다).
도 5a 및 5b는 다양한 SIRP 펩타이드에 대한 항체 클론 S137의 결합 특이성을 도시한다. 도 5a는 CD47의 IgSF 도메인(서열번호: 16)에 결합된 고친화성 SIRP-α 변이체(서열번호: 17 및 19)의 인간 SIRPγ(서열번호: 15) 및 사전-형성된 복합체 뿐만 아니라 인간 v1, 인간 v2, 뮤린 및 사이노몰구스 SIRPαD1 도메인에 대한 항체에 대한 ELISA 결합 곡선을 도시한다. 도 5b는 이들 표적 각각에 대한 클론의 결합 특이성을 요약한다("+"는 결합을 나타내고; "-"는 비-결합을 나타낸다).
도 6a 및 6b는 다양한 SIRP 펩타이드에 대한 항체 클론 S128의 결합 특이성을 도시한다. 도 6a는 CD47의 IgSF 도메인(서열번호: 16)에 결합된 고친화성 SIRP-α 변이체(서열번호: 17 및 19)의 인간 SIRPγ(서열번호: 15) 및 사전-형성된 복합체 뿐만 아니라 인간 v1, 인간 v2, 뮤린 및 사이노몰구스 SIRPαD1 도메인에 대한 항체에 대한 ELISA 결합 곡선을 도시한다. 도 6b는 이들 표적 각각에 대한 클론의 결합 특이성을 요약한다("+"는 결합을 나타내고; "-"는 비-결합을 나타낸다).
도 7a 및 7b는 다양한 SIRP 펩타이드에 대한 항체 클론 S135의 결합 특이성을 도시한다. 도 7a는 CD47의 IgSF 도메인(서열번호: 16)에 결합된 고친화성 SIRP-α 변이체(서열번호: 17 및 19)의 인간 SIRPγ(서열번호: 15) 및 사전-형성된 복합체 뿐만 아니라 인간 v1, 인간 v2, 뮤린 및 사이노몰구스 SIRPαD1 도메인에 대한 항체에 대한 ELISA 결합 곡선을 도시한다. 도 7b는 이들 표적 각각에 대한 클론의 결합 특이성을 요약한다("+"는 결합을 나타내고; "-"는 비-결합을 나타낸다).
도 8a 및 8b는 다양한 SIRP 펩타이드에 대한 항체 클론 S126의 결합 특이성을 도시한다. 도 8a는 CD47의 IgSF 도메인(서열번호: 16)에 결합된 고친화성 SIRP-α 변이체(서열번호: 17 및 19)의 인간 SIRPγ(서열번호: 15) 및 사전-형성된 복합체 뿐만 아니라 인간 v1, 인간 v2, 뮤린 및 사이노몰구스 SIRPαD1 도메인에 대한 항체에 대한 ELISA 결합 곡선을 도시한다. 도 8b는 이들 표적 각각에 대한 클론의 결합 특이성을 요약한다("+"는 결합을 나타내고; "-"는 비-결합을 나타낸다).
도 9a 및 9b는 다양한 SIRP 펩타이드에 대한 항체 클론 S138의 결합 특이성을 도시한다. 도 9a는 CD47의 IgSF 도메인(서열번호: 16)에 결합된 고친화성 SIRP-α 변이체(서열번호: 17 및 19)의 인간 SIRPγ(서열번호: 15) 및 사전-형성된 복합체 뿐만 아니라 인간 v1, 인간 v2, 뮤린 및 사이노몰구스 SIRPαD1 도메인에 대한 항체에 대한 ELISA 결합 곡선을 도시한다. 도 9b는 이들 표적 각각에 대한 클론의 결합 특이성을 요약한다("+"는 결합을 나타내고; "-"는 비-결합을 나타낸다).
도 10a는 야생형 닭으로부터 수득된 scFv-Fc 클론의 VH 및 VL 도메인의 정렬을 도시한다. 서열번호: 53 내지 60이 도시되어 있다(정렬에서 최상부에서 바닥으로의 순서대로). CDR 및 링커 서열은 라인으로 표시된다. 아미노산의 차이는 별표로 표시된다.
도 10b는 인간 항체를 생산하는 닭으로부터 수득된 scFv-Fc 클론의 VH 및 VL 도메인의 정렬을 도시한다. 서열번호: 61 내지 74가 도시되어 있다(정렬에서 최상부에서 바닥으로의 순서대로). CDR 및 링커 서열은 라인으로 표시된다. 아미노산의 차이는 별표로 표시된다.
도 11a는 계열 2 클론의 VH 및 VL 도메인의 정렬을 도시한다. VH 도메인의 아미노산 서열은 서열번호: 294, 139, 358, 362, 354, 380, 384, 350, 137, 374, 356, 352, 135, 348, 376, 346, 342, 344, 141, 360, 370, 382, 364, 366, 368, 372, 및 378(정렬에서 최상부에서 바닥으로의 순서대로)이다. VL 도메인의 아미노산 서열은 서열번호: 295, 363, 140, 359, 355, 351, 136, 349, 377, 138, 375, 357, 353, 381, 385, 345, 365, 367, 369, 347, 142, 343, 371, 379, 383, 361, 및 373(정렬에서 최상부에서 바닥으로의 순서대로)이다. HVR 서열은 라인으로 표시된다. HVR은 카밧에 따른다. 아미노산의 차이는 별표로 표시된다.
도 11b는 계열 3 클론의 VH 및 VL 도메인의 정렬을 도시한다. VH 도메인의 아미노산 서열은 서열번호: 133, 128, 396, 386, 398,402, 392, 388, 390, 394, 및 400(정렬에서 최상부에서 바닥으로의 순서대로)이다. VL 도메인의 아미노산 서열은 서열번호: 134, 105, 387, 389, 395, 397, 399, 403, 391, 393, 및 401(정렬에서 최상부에서 바닥으로의 순서대로)이다. HVR 서열은 라인으로 표시된다. HVR은 카밧에 따른다. 아미노산의 차이는 별표로 표시된다.
도 11c는 계열 4 클론의 VH 및 VL 도메인의 정렬을 도시한다. VH 도메인의 아미노산 서열은 서열번호: 116, 117, 118, 119, 282, 404, 및 406(정렬에서 최상부에서 바닥으로의 순서대로)이다. VL 도메인의 아미노산 서열은 서열번호: 93, 94, 95, 96, 283, 405, 및 407(정렬에서 최상부에서 바닥으로의 순서대로)이다. HVR 서열은 라인으로 표시된다. HVR은 카밧에 따른다. 아미노산의 차이는 별표로 표시된다.
도 11d는 계열 5, 빈(Bin) 4 클론의 VH 및 VL 도메인의 정렬을 도시한다. VH 도메인의 아미노산 서열은 서열번호: 278 및 412(정렬에서 최상부에서 바닥으로의 순서대로)이다. VL 도메인의 아미노산 서열은 서열번호: 279 및 413(정렬에서 최상부에서 바닥으로의 순서대로)이다. HVR 서열은 라인으로 표시된다. HVR은 카밧에 따른다. 아미노산의 차이는 별표로 표시된다.
도 11e는 추가의 계열 5, 빈 4 클론의 VH 및 VL 도메인의 정렬을 도시한다. VH 도메인의 아미노산 서열은 서열번호: 275 및 414(정렬에서 최상부에서 바닥으로의 순서대로)이다. VL 도메인의 아미노산 서열은 서열번호: 276 및 415(정렬에서 최상부에서 바닥으로의 순서대로)이다. HVR 및 링커 서열은 라인으로 표시된다. HVR은 카밧에 따른다. 아미노산의 차이는 별표로 표시된다.
도 11f는 계열 5, 빈 4 클론 S209의 각각의 VH 및 VL 도메인의 서열(서열번호: 280 및 281)을 도시한다. HVR 서열은 밑줄이 그어져 있다.
도 11g는 계열 5, 빈 5 클론의 VH 및 VL 도메인의 정렬을 도시한다. VH 도메인의 아미노산 서열은 서열번호: 123 및 292(정렬에서 최상부에서 바닥으로의 순서대로)이다. VL 도메인의 아미노산 서열은 서열번호: 100 및 293(정렬에서 최상부에서 바닥으로의 순서대로)이다. HVR 서열은 라인으로 표시된다. HVR은 카밧에 따른다. 아미노산의 차이는 별표로 표시된다.
도 11h는 추가의 계열 5, 빈 5 클론의 VH 및 VL 도메인의 정렬을 도시한다. VH 도메인의 아미노산 서열은 서열번호: 288, 290, 408 및 410(정렬에서 최상부에서 바닥으로의 순서대로)이다. VL 도메인의 아미노산 서열은 서열번호: 289, 291, 409 및 411(정렬에서 최상부에서 바닥으로의 순서대로)이다. HVR 서열은 라인으로 표시된다. HVR은 카밧에 따른다. 아미노산의 차이는 별표로 표시된다.
도 11i는 클론 149(각각 서열번호: 286 및 287) 및 클론 218(각각 서열번호: 284 및 285)의 VH 및 VL 도메인의 서열을 나타낸다. HVR 서열은 밑줄이 그어져 있다.
도 11j는 계열 1 클론의 VH 및 VL 도메인의 정렬을 나타낸다. VH 도메인의 아미노산 서열은 서열번호: 120, 121, 130 및 122(정렬에서 최상부에서 바닥으로의 순서대로)이다. VL 도메인의 아미노산 서열은 서열번호: 97, 98, 107 및 99(정렬에서 최상부에서 바닥으로의 순서대로)이다. HVR 서열은 라인으로 표시된다. HVR은 카밧에 따른다. 아미노산의 차이는 별표로 표시된다.
도 12a 내지 12c는 CD47의 증가하는 농도의 IgSF 도메인(서열번호: 16)과 혼합된 고친화성 SIRP-α 변이체(서열번호: 18)의 사전-형성된 복합체를 결합하는 대표적인 항체 클론의 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 도시한다. 도 12a는 SIRP-α에 대한 CD47의 결합을 차단하지 않는 항체(예를 들어, 비-차단 항체) 클론(S123)의 결합 곡선을 도시한다. 도 12b는 SIRP-α에 대한 CD47의 결합을 차단하는 항체(예를 들어, 차단 항체) 클론(S119)의 결합 곡선을 도시한다. 도 12c는 SIRP-α에 결합하고 CD47 결합에 대한 그의 친화도를 감소시키는 항체(예를 들어, "킥오프" 항체) 클론(S118)의 결합 곡선을 도시한다.
도 13a 내지 13g는 항-SIRP-α 항체(표시된 농도 시리즈), 세툭시맙(cetuximab) 또는 트라스투주맙(trastuzumab), 항-SIRP-α 항체 + 세툭시맙 또는 트라스투주맙, 또는 대조군 항체(IgG1, κ)로 처리된 대식세포를 사용한 시험관내 종양 세포 식균작용의 결과를 도시한다. 식균작용된 종양 세포를 가진 대식세포는 유동 세포계측법으로 CD33, CD206 및 CFSE에 양성인 세포로 확인되었다. 분석된 종양 세포는 DLD-1(도 13a-13d 및 13g) 또는 OE19 세포(도 13e 및 13f)이었다. 시험된 항-sIRP-α 항체는 AB3a(도 13a 및 도 13b), AB45a(도 13c 및 도 13d), AB119a(도 13e), AB135a(도 13f) 및 AB136c(도 13g)이었다.
도 14는 항-SIRP-α 항체 AB136b, 대조군 랫트 항-마우스 항-SIRP-α 길항-항체(클론 p84), 랫트 IgG 대조군, 또는 마우스 IgG 대조군으로 처리한 Balb/c 마우스의 비장으로부터 분리한 수지상 세포에 대한 생체내 수지상 세포 활성화 분석의 결과를 도시한다. 마우스에게 지시된 항체를 10 mg/kg으로 정맥내 주사하고, 주사 후 5시간 후에 비장을 수확하였다. 수지상 세포 상의 활성화 마커 CD86을 유동 세포계측법으로 측정하였다.
도 15는 단일 제제 활성을 평가하기 위한 생체내 동종 마우스 결장 암종 모델의 결과를 도시한다. MC38 세포를 C57BL/6 마우스에 피하 이식하고 그룹으로 무작위화하였다(8마리의 마우스/그룹). 마우스는 비히클(PBS), CD47 차단 항-SIRP-α 항체 AB25b, CD47 차단 항-SIRP-α 항체 AB25c, CD47 차단 항-SIRP-α 항체 AB27b, CD47 비-차단 항-SIRP-α 항체 AB3b, 또는 CD47 비-차단 항-SIRP-α 항체 136b로 처리하였다. 종양이 임플란트 후 7일째 평균 60mm3일 때 치료가 시작되었다. 마우스에게 항-SIRPα 항체를 3주 동안 주 2회 10 mg/kg 복강내(IP) 투여하였다. 종양이 약 2000mm3에 도달하면 동물을 희생시켰다.
도 16은 단일 제제 활성을 평가하기 위한 생체내 동종 마우스 결장 암종 모델의 결과를 도시한다. 표시한 바와 같이, AB136b 또는 비히클(PBS)으로 처리한 BALB/c 마우스(그룹당 8~9마리의 마우스)에 CT26 세포를 피하 이식하였다. 종양이 임플란트 후 7일째 평균 80mm3일 때 치료가 시작되었다. 마우스에게 항-SIRPα 항체를 3주 동안 주 2회 3mg/kg 또는 10mg/kg을 복강내(IP) 투여하였다. 종양이 약 2000mm3에 도달하면 동물을 희생시켰다.
도 17a는 X-선 결정학에 의해 결정된 바와 같이, SIRP-α에 결합하는 CD47 및 항-SIRP-α 항체 클론 119 Fab의 비교를 도시한다.
도 17b는 매립된 표면적 분석에 의해 결정된 바와 같이, 항-SIRP-α 항체 클론 119 Fab와 SIRP-α 사이의 상호작용 부위를 도시한다. 항체 119 Fab 결합 에피토프에 포함된 SIRP-α 잔기는 매립된 표면적 변화에 따라 음영처리된다. SIRP-α 파라토프의 핵심 항체 잔기는 다음과 같이 표시된다: (H) = 중쇄 잔기; (L) = 경쇄 잔기.
도 18a는 X-선 결정학에 의해 결정된 바와 같이, SIRP-α에 결합하는 CD47 및 항-SIRP-α 항체 클론 136 Fab의 비교를 도시한다.
도 18b는 매립된 표면적 분석에 의해 결정된 바와 같이, 항-SIRP-α 항체 클론 136 Fab와 SIRP-α 사이의 상호작용 부위를 도시한다. 항체 136 Fab 결합 에피토프에 포함된 SIRP-α 잔기는 매립된 표면적 변화에 따라 음영처리된다. SIRP-α 파라토프의 핵심 항체 잔기는 다음과 같이 표시된다: (H) = 중쇄 잔기; (L) = 경쇄 잔기.
도 19a는 X-선 결정학에 의해 결정된 바와 같이, SIRP-α에 결합하는 CD47 및 항-SIRP-α 항체 클론 3 Fab의 비교를 도시한다.
도 19b는 매립된 표면적 분석에 의해 결정된 바와 같이, 항-SIRP-α 항체 클론 3 Fab와 SIRP-α 사이의 상호작용 부위를 도시한다. 항체 3 Fab 결합 에피토프에 포함된 SIRP-α 잔기는 매립된 표면적 변화에 따라 음영처리된다. SIRP-α 파라토프의 핵심 항체 잔기는 다음과 같이 표시된다: (H) = 중쇄 잔기; (L) = 경쇄 잔기.
도 19c는 X-선 결정학에 의해 결정된 바와 같이, SIRP-α에 결합하는 CD47 및 항-SIRP-α 항체 클론 115 Fab의 비교를 도시한다.
도 19d는 매립된 표면적 분석에 의해 결정된 바와 같이, 항-SIRP-α 항체 클론 115 Fab와 SIRP-α 사이의 상호작용 부위를 도시한다. 항체 115 Fab 결합 에피토프에 포함된 SIRP-α 잔기는 매립된 표면적 변화에 따라 음영처리된다. SIRP-α 파라토프의 핵심 항체 잔기는 다음과 같이 표시된다: (H) = 중쇄 잔기; (L) = 경쇄 잔기.
도 20a는 X-선 결정학에 의해 결정된 바와 같이, SIRP-α에 결합하는 CD47, 항-SIRP-α 항체 클론 119 Fab, 항-SIRP-α 항체 클론 136 Fab, 항-SIRP-α 항체 클론 3 Fab, 항-SIRP-α 항체 클론 115 Fab의 비교를 도시한다.
도 20b는 X-선 결정학에 의해 결정된 바와 같이, SIRP-α에 결합하는 CD47, 항-SIRP-α 항체 클론 119 Fab, 항-SIRP-α 항체 클론 136 Fab, 항-SIRP-α 항체 클론 3 Fab 및 항-SIRP-α 항체 클론 115 Fab에 대한 에피토프를 도시한다. 값은 매립된 표면적(Å2)으로 나타낸 바와 같이, 단독으로 분석한 경우 대 SIRP-α와 복합체로 분석한 경우, Fab/CD47의 각 잔기 원자의 표면 접근가능한 영역 사이의 차이를 나타낸다. 서열번호: 296에 따른 잔기 넘버링.
도 21a는 항-SIRP-α 항체의 에피토프 비닝(binning)을 위한 순서도를 도시한다.
도 21b는 항-SIRP-α 항체 A, B, C, D, E 및 F의 에피토프 비닝에 대한 예시적인 검정 결과를 도시한다.
도 22a 및 도 22b는 나타낸 항-SIRP-α 항체의 에피토프 비닝의 결과를 도시한다. 칩에 결합된 리간드(항-SIRPα)의 클론 번호가 행으로 표시되고 칩 위에 주입된 피분석물(항-SIRPα)의 클론 번호가 열로 표시된다. 백색 박스는 샌드위치를 형성하는 항체를 나타낸다(및 상이한 에피토프에 결합하는 것으로 간주된다). 회색 박스는 샌드위치를 형성하지 않은 항체를 나타낸다(및 동일한 에피토프에 결합하는 것으로 간주된다). "X"는 한 배향의 데이터가 다른 배향과 일치하지 않는 시나리오를 나타낸다.
도 23은 에피토프 비닝에 기초한 SIRP-α D1 도메인에 결합하는 항-SIRP-α 항체 및 CD47 결합에 대한 모델을 제공한다. 각 빈(bin)에 대한 대표적인 항체 클론이 제공된다(및 번호로 표시된다).
도 24a는 친계 119 중쇄("119_VH_Wt"), 4개의 돌연변이(프레임워크에서 생식계열 서열에 3개의 역-돌연변이 및 잠재적인 산화 핫스팟을 제거하는 CDR-H1에서의 1개의 돌연변이; "VH_MutALL")를 갖는 119 변이체 중쇄, 3개의 돌연변이(프레임워크에서만 생식계열 서열에 3개의 역-돌연변이, "VH_MutAll_V34M")를 갖는 119 변이체 중쇄, 및 3개의 돌연변이 및 M34L 돌연변이(프레임워크에서 생식계열 서열에 3개의 역-돌연변이; "VH_MutAll_V34L")를 갖는 119 변이체 중쇄 사이의 정렬을 도시한다. 도시된 서열은 119_VH_Wt에 대한 서열번호: 335, VH_MutALL에 대한 서열번호: 246, VH_MutAll_V34M에 대한 서열번호: 258 및 VH_MutAll_V34L에 대한 서열번호: 327이다. CDR 서열은 라인으로 표시되며; 아미노산 차이는 별표로 표시된다.
도 24b는 친계 119 경쇄("119_VL_Wt"), 및 4개의 돌연변이(프레임워크에서 생식계열 서열에 대한 4개의 역-돌연변이; "VL_mutAll")를 갖는 119 변이체 경쇄 사이의 정렬을 도시한다. 도시된 서열은 119_VL_Wt에 대한 서열번호: 97 및 VL_mutAll에 대한 서열번호: 312이다. CDR 서열은 라인으로 표시되며; 아미노산 차이는 별표로 표시된다.
도 25a는 친계 135 경쇄("VL_wt") 및 2개의 돌연변이(프레임워크에서 생식계열 서열에 대한 2개의 역-돌연변이; "VL_mutALL")를 갖는 135 변이체 경쇄 사이의 정렬을 도시한다. 도시된 서열은 135 VL_wt에 대한 서열번호: 104 및 135 VL_MutALL에 대한 서열번호: 248이다. HVR 서열은 라인으로 표시되며; 아미노산 차이는 별표로 표시된다.
도 25b는 친계 135 중쇄("VH_wt"), 6개의 돌연변이(프레임워크에서 생식계열 서열에 5개의 역-돌연변이 및 잠재적인 산화 핫스팟을 제거하는 CDR-H1에서의 1개의 돌연변이; "VH_MutAll")를 갖는 135 변이체 중쇄, 프레임워크("VH_MutAll_V34M")에서 생식계열 서열에 5개의 역-돌연변이를 갖는 135 변이체 중쇄 및 프레임워크과 M34L 돌연변이("VH_MutAll_V34L")에서 생식계열 서열에 5개의 역-돌연변이가 있는 135 변이체 중쇄 사이의 정렬을 도시한다. 도시된 서열은 VH_wt에 대한 서열번호: 341, VH_MutAll에 대한 서열번호: 247 및 VH_MutAll_V34M에 대한 서열번호: 259 및 VH_MutAll_V34L에 대한 서열번호: 328이다. HVR 서열은 라인으로 표시되며; 아미노산 차이는 별표로 표시된다.
도 26a는 친계 136 경쇄("VL_wt"), 4개의 돌연변이(프레임워크에서 생식계열 서열에 대한 4개의 역-돌연변이; "VL_mutaLL")를 갖는 136 변이체 경쇄, 그렇지 않으면 "all mut" 배경의 야생형 서열로 되돌아가는 단일 I2T 역-돌연변이("VL_Mutall_I2T")를 갖는 136 변이체 경쇄 사이의 정렬을 도시한다. 도시된 서열은 VL_wt에 대한 서열번호: 134, VL_mutaLL에 대한 서열번호: 250 및 VL_Mutall_I2T에 대한 서열번호: 251이다. HVR 서열은 라인으로 표시되며; 아미노산 차이는 별표로 표시된다.
도 26b는 친계 136 중쇄("VH_wt"), 6개의 돌연변이(프레임워크에서 생식계열 서열에 대한 5개의 역-돌연변이 및 잠재적인 산화 핫스팟을 제거하는 CDR-H1에서의 1개의 돌연변이; "VH_mutall)를 갖는 136 변이체 중쇄, 프레임워크에서 생식계열 서열에 대한 5개의 역-돌연변이("VH_Mutall_V34M)를 갖는 136 변이체 중쇄, 및 프레임워크에서 생식계열 서열에 대한 5개의 역-돌연변이 및 M34L 돌연변이("VH_Mutall_V34L")를 갖는 136 변이체 중쇄 사이의 정렬을 도시한다. 도시된 서열은 VH_wt에 대한 서열번호: 133, VH_mutall에 대한 서열번호: 249, VH_Mutall_V34M에 대한 서열번호: 260 및 VH_Mutall_V34L에 대한 서열번호: 329이다. HVR 서열은 라인으로 표시되며; 아미노산 차이는 별표로 표시된다.
도 27a는 6개의 SIRP-α 단백질: 인간 SIRP-α v1(서열번호: 5), 인간 SIRP-α v2(서열번호: 6), 사이노몰구스 SIRP-α(서열번호: 11), NOD 마우스 SIRP-α(서열번호: 8), BL/6 마우스 SIRP-α(서열번호: 9) 및 BALB/c 마우스 SIRP-α(서열번호: 10)에 대한 항체 136 변이체의 결합 친화도를 나타낸다. 항체 변이체는 경쇄/중쇄 순서로 표시된 바와 같이, 돌연변이체("mut") 또는 친계("wt") 경쇄 및 돌연변이체 또는 친계 중쇄를 가졌다. 그래프에서 y-축은 KD mut/KD wt의 비율을 나타낸다. 1의 비율은 항체가 wt/wt 항체에 대해 등가의 KD를 가짐을 의미하며(점선으로 표시); 비율 > 1은 wt/wt보다 낮은 친화도를 나타내며; 비율 < 1은 wt/wt보다 높은 친화도를 나타낸다.
도 27b는 7개의 SIRP-α 단백질: BL/6 마우스 SIRP-α(서열번호: 9), NOD 마우스 SIRP-α(서열번호: 8), BALB/c 마우스 SIRP-α(서열번호: 10), 인간 SIRP-α v1(서열번호: 5), 인간 SIRP-α v2(서열번호: 6), 사이노몰구스 SIRP-α(서열번호: 11) 및 인간 SIRP-γ v1(서열번호: 15)에 대한 항체 136 변이체의 결합 친화도를 나타낸다. wt 136과 모든 돌연변이체 136을 테스트하는 것 외에, 모든 돌연변이체 경쇄 배경에서 각각의 개별 돌연변이를 제거하는 변이체를 작제했다. 그래프에서, y-축은 KD mut/KD wt의 비율을 나타낸다. 1의 비율은 항체가 wt/wt 항체에 대해 등가의 KD를 가짐을 의미하며(점선으로 표시); 비율 > 1은 wt/wt보다 낮은 친화도를 나타내며; 비율 < 1은 wt/wt보다 높은 친화도를 나타낸다.
도 28은 FreeStyle™ 293-FS 세포(Thermo Fisher)에서 지시된 인간 중쇄 및 인간화된 경쇄를 갖는 항체의 발현 수율 및 결합 친화도를 비교한다.
도 29는 Hum1, Hum8 및 Hum9 VL 도메인 사이의 정렬을 도시한다. Hum8은 Hum1에 기초하여 생성되었지만, HVR-L1 및 -L2에 또는 근처에 5가지 아미노산 치환을 가져 인간성을 증가시킨다. Hum9는 Hum1에 기초하여 생성되었지만, HVR-L1 및 HVR-L2에 또는 근처에 4가지 아미노산 치환을 가져 인간성을 증가시킨다. 서열번호: 252(Hum1), 416(Hum8) 및 262(Hum9)가 도시되어 있다. HVR 서열은 라인으로 표시되며; 아미노산 차이는 별표로 표시된다.
도 30은 생식계열 역-돌연변이("HC_MutAll")를 갖는 항체 21 변이체, 잠재적인 산화 핫스팟 M34V를 제거하는 CDR-H1의 돌연변이("HC_MutAll_M34V") 및 생식계열 역-돌연변이를 갖는 항체 21 변이체, 생식계열 역-돌연변이 및 M34L 돌연변이("HC_MutAll_M34L")를 갖는 항체 21 변이체, 생식계열 역-돌연변이("HC_MutAll")를 갖는 항체 25 변이체, 잠재적인 산화 핫스팟 M34V를 제거하는 CDR-H1 돌연변이("HC_MutAll_M34V") 및 생식계열 역-돌연변이를 갖는 항체 25 변이체, 생식계열 역-돌연변이 및 M34L 돌연변이("HC_MutAll_M34L")를 갖는 항체 25 변이체, 생식계열 역-돌연변이("HC_MutAll")를 갖는 항체 27 변이체, 잠재적인 산화 핫스팟 M34V를 제거하는 CDR-H1 돌연변이("HC_MutAll_M34V") 및 생식계열 역-돌연변이를 갖는 항체 27 변이체, 및 생식계열 역-돌연변이 및 M34L 돌연변이("HC_MutAll_M34L")를 갖는 항체 27 변이체 사이의 정렬을 도시한다. 도시된 서열은 서열번호: 263, 264, 330, 267, 268, 332, 265, 266 및 331(최상부에서 바닥으로)이다. HVR 서열은 라인으로 표시되며; 아미노산 차이는 별표로 표시된다.
도 31은 상기 표적으로 HER2(+) OE19 세포를 사용하고, 식균작용 세포로 M2 대식세포를 사용한 시험관내 식균작용 분석의 결과를 도시한다. "킥 오프(Kick off)" 항-SIRP-α 항체를 항-HER2 항체 트라스투주맙과 조합하여 지시된 농도로 시험하였다. 식균작용은 CFSE+ 세포의 백분율로 측정하였다.
도 32는 표적으로 EGFR(+) DLD-1 세포를 사용하고, 식균작용 세포로 M2 대식세포를 사용한 시험관내 식균작용 분석의 결과를 도시한다. 비-차단 항-SIRP-α 항체를 항-EGFR 항체 세툭시맙과 조합하여 지시된 농도로 시험하였다. 식균작용은 CFSE+ 세포의 백분율로 측정하였다.
도 33a 내지 33c는 표적으로 EGFR(+) DLD-1 세포를 사용하고, 식균작용 세포로 M2 대식세포를 사용한 시험관내 식균작용 분석의 결과를 도시한다. 항-SIRP-α 항체를 항-EGFR 항체 세툭시맙과 조합하여 지시된 농도로 시험하였다. 식균작용은 CFSE+ 세포의 백분율로 측정하였다.
도 34는 표적으로 EGFR(+) DLD-1 세포를 사용하고, 식균작용 세포로 M2 대식세포를 사용한 시험관내 식균작용 분석의 결과를 도시한다. 비-차단 항-SIRP-α 항체 27 및 136 각각을 항-EGFR 항체 세툭시맙과 조합하여 지시된 농도로 전장 항체(Fc 영역을 가짐) 또는 F(ab)2 단편으로 시험하였다. 식균작용은 CFSE+ 세포의 백분율로 측정하였다.
도 35는 표적으로 EGFR(+) DLD-1 세포를 사용하고, 식균작용 세포로 M2 대식세포를 사용한 시험관내 식균작용 분석의 결과를 도시한다. 차단 항-SIRP-α 항체 119 변이체를 항-EGFR 항체 세툭시맙과 조합하여 지시된 농도로 시험하였다. 식균작용은 CFSE+ 세포의 백분율로 측정하였다.
도 36은 표적으로 EGFR(+) DLD-1 세포를 사용하고, 식균작용 세포로 M2 대식세포를 사용한 시험관내 식균작용 분석의 결과를 도시한다. 차단 항-SIRP-α 항체 135 변이체를 항-EGFR 항체 세툭시맙과 조합하여 지시된 농도로 시험하였다. 식균작용은 CFSE+ 세포의 백분율로 측정하였다.
도 37은 표적으로 EGFR(+) DLD-1 세포를 사용하고, 식균작용 세포로 M2 대식세포를 사용한 시험관내 식균작용 분석의 결과를 도시한다. 비-차단 항-SIRP-α 항체를 항-EGFR 항체 세툭시맙과 조합하여 지시된 농도로 시험하였다. 식균작용은 CFSE+ 세포의 백분율로 측정하였다.
도 38a 내지 38b는 지시된 항-SIRP-α 항체에 의한 생체내 수지상 세포 활성화 검정의 결과를 도시한다. 마우스에게 지시된 항체를 10 mg/kg으로 정맥내 주사하고, 주사 후 5시간 후에 비장을 수확하였다. CD4+ 수지상 세포 상의 활성화 마커 CD86, MHCII 및 CCR7을 유동 세포계측법으로 측정하였다.
도 39a는 표적으로 EGFR(+) DLD-1 세포를 사용하고, 식균작용 세포로 M2 대식세포를 사용한 시험관내 식균작용 분석의 결과를 도시한다. 218a 및 218 변이체 항-SIRP-α 항체를 항-EGFR 항체 세툭시맙과 조합하여 지시된 농도로 시험하였다. 식균작용은 CFSE+ 세포의 백분율로 측정하였다.
도 39b는 표적으로 EGFR(+) DLD-1 세포를 사용하고, 식균작용 세포로 M2 대식세포를 사용한 시험관내 식균작용 분석의 결과를 도시한다. 예시적인 차단 항-SIRP-α 항체 119a, 120a 및 122a를 지시된 농도로 시험하였다. 식균작용은 CFSE+ 세포의 백분율로 측정하였다.
도 39c는 표적으로 EGFR(+) DLD-1 세포를 사용하고, 식균작용 세포로 M2 대식세포를 사용한 시험관내 식균작용 분석의 결과를 도시한다. 예시적인 비-차단 항-SIRP-α 항체 136a 및 137a를 지시된 농도로 시험하였다. 식균작용은 CFSE+ 세포의 백분율로 측정하였다.
도 39d는 표적으로 EGFR(+) DLD-1 세포를 사용하고, 식균작용 세포로 M2 대식세포를 사용한 시험관내 식균작용 분석의 결과를 도시한다. 예시적인 킥오프 항-SIRP-α 항체 115a, 116a, 117a, 118a 및 132a를 지시된 농도로 시험하였다. 식균작용은 CFSE+ 세포의 백분율로 측정하였다.
도 40은 항-SIRP-α 처리를 PD-L1/PD-1 경로 억제와 조합하는 것의 활성을 평가하기 위한 생체내 동종 마우스 결장 암종 모델의 결과를 도시한다. CT26 세포를 C57BL/6 마우스의 피하에 이식하고, 그룹으로 무작위화하였다(8마리의 마우스/그룹). 마우스를 비히클(PBS), 항-PD-L1 항체, CD47 차단 항-SIRP-α 항체 AB25b, 또는 AB25b 및 PD-L1로 처리하였다. 종양이 임플란트 후 7일째 평균 60mm3일 때 치료가 개시되었다. 마우스에게 3주간 매주 2회 10 mg/kg으로 복강내(IP)로 투여하고, 종양이 약 2000 mm3의 용적에 도달할 때 희생시켰다.
도 41은 항-SIRP-α 처리를 PD-L1/PD-1 경로 억제와 조합하는 것의 활성을 평가하기 위한 생체내 동종 마우스 결장 암종 모델의 결과를 도시한다. MC38 세포를 C57BL/6 마우스의 피하에 이식하고, 그룹으로 무작위화하였다(8마리의 마우스/그룹). 마우스를 비히클(PBS), 항-PD-L1 항체, CD47 차단 항-SIRP-α 항체 AB25b, AB25b 및 항-PD-1, CD47 비-차단 항-SIRP-α 항체 AB136b, 또는 AB136b 및 항-PD-1로 처리하였다. 종양이 임플란트 후 7일째 평균 60mm3일 때 치료가 개시되었다. 마우스에게 3주간 매주 2회 10 mg/kg으로 복강내(IP)로 투여하고, 종양이 약 2000 mm3의 용적에 도달할 때 희생시켰다.
본 발명은 하나 이상의 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인(예를 들어, D1 도메인)에 결합하고 잠재적인 관심의 다양한 SIRP-α 결합 프로파일을 갖는 항체를 기술한다. 이러한 특유의 SIRP-α 결합 프로파일은 하기 결합 능력 중 하나 이상을 포함하며, 이들은 다수의 특유의 특이성을 얻기 위해 다인 방식으로 조합된다. 예를 들어, 항체는 인간 SIRP-α v1, 인간 SIRP-α v2, 또는 이 둘 모두의 세포외 도메인(예를 들어, D1 도메인)에 결합할 수 있고; 항체는 하나 이상의 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인(예를 들어, D1 도메인)에 결합할 수 있거나 또는 이에 대한 결합이 결여될 수 있으며; 항체는 하나 이상의 뮤린 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인(예를 들어, D1 도메인)에 결합할 수 있거나, 또는 이에 대한 결합이 결여될 수 있으며; 항체는 인간 SIRPβ 폴리펩타이드의 세포외 도메인(예를 들어, D1 도메인)에 결합할 수 있거나, 또는 이에 대한 결합이 결여될 수 있으며; 및/또는 항체는 인간 SIRPγ 폴리펩타이드의 세포외 도메인(예를 들어, D1 도메인)에 결합할 수 있거나, 또는 이에 대한 결합이 결여될 수 있다. 또한, 본 발명은 SIRP-α에 대한 CD47의 결합을 차단하는 항체, SIRP-α에 대한 CD47의 결합을 차단하지 않는 항체, 및 SIRP-α에 대한 CD47의 결합을 차단하지 않지만 CD47에 대한 SIRP-α의 친화성을 감소시키지 않아, CD47/SIRP-α 복합체의 보다 신속한 해리를 유도하는 항체를 기술한다. 또한, 본 발명은 관심있는 하나 이상의 시험관내 및/또는 생체내 생물학적 특성, 예컨대 대식세포 식균작용을 강화시키고, 수지상 세포 활성화를 강화시키며, CD47을 발현하는 종양의 생체내 성장을 억제하는 능력 및/또는 CD47-발현 세포와 T 세포 사이의 상호작용을 방지하지 않으면서 이들 활성 중 하나 이상을 달성할 수 있는 능력을 갖는 항-SIRP-α 항체를 기술한다.
본 명세서에 기재된 방법은 상기 결합 특이성의 특유의 조합으로 항체를 확인하는데 사용될 수 있다. 이론에 의해 구속되기를 바라지 않으면서, 상기한 바와 같이 상이한 결합 프로파일을 갖는 특유의 항-SIRP-α 항체를 확인할 수 있는 능력은 전-임상 연구를 위한 바람직한 임상 특성 및 이점과 함께 항체(예를 들어, 본 명세서에 기재된 것)를 확인하는 것을 가능하게 한다고 생각된다.
일 양태에서, 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합하는 단리된 항체가 본 명세서에 제공된다. 본 개시내용의 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드 및 벡터, 뿐만 아니라 그와 관련된 항체의 생산 방법이 또한 본 명세서에 제공된다.
또 다른 양태에서, 개체에서 암을 치료하거나 지연시키는 방법이 본 명세서에 제공되고, 상기 방법은 상기 개체에게 본 개시내용의 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 양태에서, 개체에서 자가면역 또는 염증성 질환을 치료하거나 그 진행을 지연시키는 방법이 본 명세서에 제공되고, 상기 방법은 상기 개체에게 본 개시내용의 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함한다.
또 다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고 인간 CD47과 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단하지 않는 항원 결합 도메인을 확인하는 방법이 본 명세서에 제공된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 하기의 단계들을 포함한다: (a) 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 항원 결합 도메인을 제공하는 단계; (b) CD47의 IgSF 도메인을 포함하는 폴리펩타이드에 결합된 SIRP-α D1 변이체를 포함하는 복합체를 조립하는 단계로서, 상기 SIRP-α D1 변이체는 비-자연 발생 고친화도 SIRP-α D1 도메인이고, 그리고, 상기 SIRP-α D1 변이체는 인간 CD47에 결합하는 자연 발생 SIRP-α D1 도메인의 친화도보다 적어도 10-배 더 높은 친화도로 인간 CD47에 결합하는 단계; (c) 상기 항원 결합 도메인을 상기 조립된 복합체와 접촉시키는 단계; 및 (d) 상기 복합체에 대한 상기 항원 결합 도메인의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 복합체에 대한 상기 항원 결합 도메인의 결합은, 상기 항원 결합 도메인이 인간 CD47과 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단하지 않음을 나타내는 단계. 또 다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고 인간 CD47과 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단하지 않는 항원 결합 도메인을 확인하는 방법이 본 명세서에 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 항원 결합 도메인 또는 항체를 CD47의 IgSF 도메인을 포함하는 폴리펩타이드에 결합된 SIRP-α D1 변이체를 포함하는 복합체와 접촉시키는 단계로서, 상기 SIRP-α D1 변이체는 비-자연 발생 고친화도 SIRP-α D1 도메인이고, 그리고, 상기 SIRP-α D1 변이체는 인간 CD47에 결합하는 자연 발생 SIRP-α D1 도메인의 친화도보다 적어도 10-배 더 높은 친화도로 인간 CD47에 결합하는 단계; 및 상기 복합체에 대한 상기 항원 결합 도메인의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 복합체에 대한 상기 항원 결합 도메인의 결합은, 상기 항원 결합 도메인이 인간 CD47과 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단하지 않음을 나타내는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고 인간 CD47과 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단하는 항원 결합 도메인을 확인하는 방법이 본 명세서에 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 하기의 단계들을 포함한다: (a) 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 항원 결합 도메인을 제공하는 단계; (b) CD47의 IgSF 도메인을 포함하는 폴리펩타이드에 결합된 SIRP-α D1 변이체를 포함하는 복합체를 조립하는 단계로서, 상기 SIRP-α D1 변이체는 비-자연 발생 고친화도 SIRP-α D1 도메인이고, 그리고, 상기 SIRP-α D1 변이체는 인간 CD47에 결합하는 자연 발생 SIRP-α D1 도메인의 친화도보다 적어도 10-배 더 높은 친화도로 인간 CD47에 결합하는 단계; (c) 상기 항원 결합 도메인을 상기 조립된 복합체와 접촉시키는 단계; 및 (d) 상기 복합체에 대한 상기 항원 결합 도메인의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 복합체에 대한 상기 항원 결합 도메인의 결합의 결핍은, 상기 항원 결합 도메인이 인간 CD47과 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단함을 나타내는 단계. 또 다른 양태에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고 인간 CD47과 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단하는 항원 결합 도메인을 확인하는 방법이 본 명세서에 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 항원 결합 도메인 또는 항체를 CD47의 IgSF 도메인을 포함하는 폴리펩타이드에 결합된 SIRP-α D1 변이체를 포함하는 복합체와 접촉시키는 단계로서, 상기 SIRP-α D1 변이체는 비-자연 발생 고친화도 SIRP-α D1 도메인이고, 그리고, 상기 SIRP-α D1 변이체는 인간 CD47에 결합하는 자연 발생 SIRP-α D1 도메인의 친화도보다 적어도 10-배 더 높은 친화도로 인간 CD47에 결합하는 단계; 및 상기 복합체에 대한 상기 항원 결합 도메인의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 복합체에 대한 상기 항원 결합 도메인의 결합의 결핍은, 상기 항원 결합 도메인이 인간 CD47과 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단함을 나타내는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, 2종 이상의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 항-SIRP-α 항체를 생산하는 방법이 본 명세서에 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 하기의 단계들을 포함한다: (a) 닭을, 인간 SIRP-α 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)의 적어도 일부분을 포함하는 펩타이드로 면역화하는 단계; (b) 상기 면역화된 닭으로부터의 항체-생산 세포로부터 항체를 얻는 단계; 및 (c) 상기 세포로부터 수득된 항체와, 2종 이상의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 사이의 결합을 검출하는 단계로서, 상기 항체와 2종 이상의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 사이의 결합이, 상기 항체가 2종 이상의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 항-SIRP-α 항체임을 나타내는 단계.
정의
개시된 구현예를 상세히 설명하기 전에, 본 발명은 특정 조성물 또는 생물학적 시스템으로 제한되지 않으며, 물론 변경될 수 있음을 이해해야 한다. 본 명세서에서 사용된 용어는 특정 구현예를 설명하기 위한 것이며, 단지 본 발명을 한정하기 위한 것이 아님을 이해해야 한다.
본 명세서 및 첨부된 청구의 범위에 사용된 바와 같이, 단수 형태는 그 내용이 다르게 지시하지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "하나의 분자"에 대한 언급은 임의로 2개 이상의 상기 분자의 조합 등을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약"은 이 기술 분야의 당업자에게 용이하게 공지된 각각의 값에 대한 통상적인 오차 범위를 지칭한다. 본 명세서에서 "약" 값 또는 파라미터에 대한 언급은 그 값 또는 파라미터 자체로 지향되는 구현예를 포함한다(및 설명한다).
본 개시내용의 양태 및 구현예는 양태 및 구현예의 "포함하는", "구성되는" 및 "본질적으로 구성된"을 포함하는 것으로 이해된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "SIRP-α 폴리펩타이드"는 인간, 원숭이, 설치류(예를 들어, 마우스 또는 랫트)와 같은 포유동물 및 닭과 같은 새를 포함하는 임의의 척추동물로부터의 게놈에 의해 인코딩된 임의의 내인성 또는 자연 발생 SIRP-α 폴리펩타이드를 지칭할 수 있다. 이 용어는 또한 자연발생 변이체, 예를 들어 대안적으로 스플라이싱된 변이체, 대립유전자 변이체 또는 다형성(예를 들어, 본 명세서에 기재된 것들)을 포함한다. 이 용어는 세포내 처리, 예를 들어 신호 서열의 제거 등으로부터 기인한 SIRP-α 폴리펩타이드 뿐만 아니라 전장, 미처리 SIRP-α 폴리펩타이드를 추가로 지칭할 수 있다. 예시적인 SIRP-α 폴리펩타이드 서열이 본 명세서에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드는 예를 들어, NCBI 유전자 ID No. 140885에 기재된 바와 같이, 인간 SIRPA 유전자에 의해 인코딩된 것이다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, SIRP-α 폴리펩타이드는 종내 및 종간에서 매우 다형성이다. 예를 들어, 세포외 도메인에 아미노산 다형성을 갖는 적어도 10개의 인간 변이체가 확인되었다.
SIRP-α 폴리펩타이드는 리간드/파트너, 예를 들어, CD47에 결합하는 세포외 도메인을 포함한다. SIRP-α 폴리펩타이드는 3개의 매우 상동성인 면역글로불린(Ig)-유사 세포외 도메인-D1, D2 및 D3을 포함한다. SIRP-α D1 도메인("D1 도메인")은 SIRP-α의 막원위, 세포외 도메인을 지칭하며, CD47에 대한 SIRP-α의 결합을 매개한다(예를 들어, Hatherley, D. 등 (2008) Mol. Cell 31:266-77; Hatherley, D. 등 (2007) J. Biol. Chem. 282:14567-75; Hatherley, D. 등 (2009) J. Biol. Chem. 284:26613-9; and Lee, W. Y. 등 (2010) J. Biol. Chem. 285:37953-63 참고). 세포외 도메인은 일반적으로 예를 들어, 세포 표면에서 발현되는, SIRP-α의 전체 세포외 부분을 지칭하며, 구별되는 SIRP-α 도메인, 예컨대 D1 도메인을 포함할 수 있다. D1 도메인은 CD47 결합을 매개하는데 중요한 것으로 나타난 잔기를 함유한다(예를 들어, Lee, W.Y. 등 (2007) J. Immunol. 179:7741-50 참고). 일부 구현예에서, SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인을 결합하는 항체는 D1 도메인의 하나 이상의 잔기를 결합시킨다. 예시적인 인간 SIRP-α D1 도메인 서열은 본 개시내용 전반에 걸쳐 기재되어 있으며, 비제한적으로 서열번호: 5, 6 및 76~83을 포함한다. 인간 SIRP α-D2 및 D3 도메인 서열은 공지되어 있으며, 비제한적으로, D2 도메인에 대하여 APVVSGPAARATPQHTVSFTCESHGFSPRDITLKWFKNGNELSDFQTNVDPVGESVSYSIHSTAKVVLTREDVHSQVICEVAHVTLQGDPLRGTANLSETIR(서열번호:131) 및 D3 도메인에 대하여 VPPTLEVTQQPVRAENQVNVTCQVRKFYPQRLQLTWLENGNVSRTETASTVTENKDGTYNWMSWLLVNVSAHRDDVKLTCQVEHDGQPAVSKSHDLKVS(서열번호:132)를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "CD47"(인테그린 관련된 단백질(IAP), MER6 및 OA3으로도 공지되어 있음)은 다른 역할 중에서도 SIRP-α 폴리펩타이드에 대한 결합 파트너로서 작용하는 폴리펩타이드를 지칭한다. 일부 구현예에서, CD47은 인간 CD47 폴리펩타이드, 예를 들어, NCBI 참조 서열번호:961에 기재된 것과 같은 인간 CD47 유전자에 의해 인코딩된 폴리펩타이드를 지칭한다. 예시적인 인간 CD47 아미노산 서열은 공지되어 있다(예를 들어, NCBI 기준 서열 수탁 번호 NP_001768). 특히, CD47의 IgSF 도메인은 SIRP-α 결합에 중요한 것으로 알려진 CD47의 N-말단 세포외 도메인을 지칭한다(예를 들어, Barclay, A.N. 및 Brown, M.H. (2006) Nat. Rev. Immunol. 6:457-64 및 Hatherley, D. 등 (2009) J. Biol. Chem. 284:26613-9 참고). 일부 구현예에서, CD47의 IgSF 도메인은 QLLFNKTKSVEFTFSNDTVVIPCFVTNMEAQNTTEVYVKWKFKGRDIYTFDGALNKSTVPTDFSSAKIEVSQLLKGDASLKMDKSDAVSHTGNYTCEVTELTREGETIIELKYRVVS (서열번호:16)의 아미노산 서열을 포함한다. 용어 "CD47"은 또한 SIRP-α에 결합할 수 있는 변형된 CD47 폴리펩타이드, 예를 들어, 또 다른 폴리펩타이드 또는 다른 잔기, 예를 들어 Ig Fc 영역에 접합된 CD47의 IgSF 도메인을 포함하는 폴리펩타이드를 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "SIRP-α 에피토프"는 비제한적으로 CD47을 포함하는, 본 발명의 항-SIRP-α 항체 및/또는 SIRP-α 결합 파트너에 대한 결합 부위를 형성하는 SIRP-α 폴리펩타이드의 아미노산을 지칭할 수 있다. 에피토프에 대한 항체 또는 다른 폴리펩타이드의 결합은 비제한적으로 교차-차단 검정(항체, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow 및 David Lane (1988) 참고), 에피토프 맵핑(Champe 등, J. Biol. Chem. 270:1388-1394 (1995) 참고), X-선 동시-결정학, 에피토프 비닝(binning), 부위-지향적 돌연변이유발(site-directed mutagenesis), 올리고-펩타이드 스캐닝, 고-처리량 돌연변이유발 맵핑, 수소/중수소 교환, 제한된 단백질 분해 등을 포함하는 당 업계에 공지된 다양한 검정법을 사용하여 특성규명 및/또는 맵핑될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "SIRP-α 신호전달 조절"은 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현하는 세포에서 SIRP-α 신호전달의 하나 이상의 양태를 길항하거나, 고통스럽게 하거나, 그렇지 않으면 방해하는 것을 지칭할 수 있다. SIRP-α 신호전달은 비제한적으로, SIRP-α의 세포내 영역의 티로신 인산화, 포스파타제(예를 들어, SHP1) 결합, 어댑터 단백질 결합(예를 들어, SCAP2, FYB 및/또는 GRB2), 사이토카인 생산(예를 들어, IL-10, IL-1β, IFN 또는 TNF) 및 산화 질소 생산을 포함하는 SIRP-α 폴리펩타이드의 활성화; 및/또는 비제한적으로 대식세포, 호산구, 중성구, 수지상 세포, 및 골수-유래된 억제 세포(MDSCs)의 다른 활성화 또는 억제성 표현형 및 대식세포 식균작용을 포함하는 하나 이상의 세포간 표현형에 의해 매개되는 하나 이상의 세포내 신호전달 사건을 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체"는 온전한 항체; 단, 원하는 생물학적 활성(예를 들어, 에피토프 결합)을 나타내는 경우 (비제한적으로 Fab, F(ab')2, Fab'-SH, Fv, 디아바디, scFv, scFv-Fc, 단일-도메인 항체, 단일 중쇄 항체, 및 단일 경쇄 항체를 포함하는) 항체 단편; 단클론성 항체; 다클론성 항체; 단일특이적 항체; 다중-특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체); 및 항체-유사 단백질을 지칭할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 항체 또는 항체 단편과 관련하여 사용될 때 용어 "이중특이적"은 2개의 상이한 결합 특이성을 갖는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 예를 들어, 각각의 결합 특이성은 상이한 항원을 인식할 수 있거나, 각각의 결합 특이성은 상이한 친화성 및/또는 정확한 에피토프로 동일한 항원을 인식할 수 있다. 일부 구현예에서, 각각의 상이한 결합 특이성은 이중특이적 항체 또는 항체 단편이 제1 결합 특이성을 갖는 적어도 제1 항원 결합 도메인 및 제2 결합 특이성을 갖는 제2 항원 도메인을 포함하도록, 하나 이상의 상이한 항체 항원 결합 도메인(예를 들어, 가변 도메인)을 포함한다. 다양한 예시적인 이중특이적 항체 포맷이 본 명세서에 기재되어 있고, 당 업계에 공지되어 있다.
"단리된" 항체는 천연 환경의 성분, 예를 들어 숙주세포 또는 유기체로부터 분리 및/또는 회수된 항체를 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 중량기준 원하는 순도(예를 들어, 적어도 95%)로 정제되고; 및/또는 예를 들어은, 쿠마시 등에 의한 염색을 사용한 SDS-PAGE에 의해 균질화될 수 있다. 일부 구현예에서, 단리된 항체는 하나 이상의 정제 단계 후에 수득된다.
당업계에 공지된 바와 같이, "천연" 항체는 전형적으로 2개의 동일한 경(L)쇄 및 2개의 동일한 중(H)쇄를 포함하는 헤테로사량체 복합체를 지칭한다. 다양한 수의 디설파이드 결합이 2개의 중쇄를 연결하고, 하나는 사슬내 디설파이드 브릿지에 더해, 중쇄에 각각의 경쇄를 연결한다. 중쇄는 3개 또는 4개의 불변 도메인에 의해 뒤따르는 가변 도메인(VH)(N-말단에서 C-말단으로)을 포함한다. 경쇄는 가변 도메인(VL), 이어서 불변 도메인(CL)을 포함한다. 전형적으로, 포유동물 경쇄는 아미노산 서열: 카파(κ) 및 람다(λ)에 기초한 두 가지 카테고리 중 하나에 속한다.
"불변 도메인"은 항체 또는 단편의 더 보존된 부분, 예를 들어 가변 도메인 외부를 지칭할 수 있다. 상기 용어는 중쇄 불변 도메인 CH1, CH2, CH3 및 선택적으로 CH4뿐만 아니라 CL 도메인을 포함할 수 있다.
중쇄의 불변 도메인은 5가지 주요 유형: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 중 하나에 배정될 수 있다. 이러한 많은 주요 유형의 여러 가지 하위 유형이 있다. 상이한 부류의 면역글로불린의 하위단위 구조 및 3차원 배치형태는 잘 알려져 있으며, 예를 들어 Abbas 등 Cellular and Mol. Immunology, 4th ed. (W.B. Saunders, Co., 2000)에 일반적으로 기재되어 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "항체 가변 도메인"은 상보적 결정 영역(CDRs, 예를 들어, CDR L1, CDR L2, CDR L3, CDR H1, CDR H2 및 CDR H3) 및 프레임워크 영역(FR)을 포함하는 항체의 경쇄 및 중쇄의 일부를 지칭한다.
용어 "가변성"은 가변 도메인의 하위 서열이 항체 사이에서 실질적으로 순차적으로 상이하고, 그의 항원에 대한 특정 항체의 결합 특이성에 중요하다는 사실을 지칭한다. 가변성은 VH 및 VL 도메인의 3개의 초가변성 영역(HVR)에 집중되어 있다. 가변 도메인의 보다 보존된 부분은 HVR이 산재되어 있는 프레임워크 영역(FR)이라고 불린다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 루프를 형성하는 3개의 HVR에 의해 연결된 4개의 FR 영역을 포함한다(카밧 등, 면역학적 관심의 단백질의 서열, 제5판, National Institute of Health, Bethesda, MD(1991) 참고).
용어 "초가변성 영역(HVR)"은 향상된 서열 가변성 및/또는 정의된 루프의 형성을 특징으로 하는 VH 및 VL 도메인의 하위영역을 지칭할 수 있다. 이들은 VH 도메인의 3개의 HVR(H1, H2 및 H3) 및 VL 도메인의 3개의 HVR(L1, L2 및 L3)을 포함한다. H3는 미세 결합 특이성을 부여하는데 중요한 것으로 믿어지며, L3 및 H3은 가장 높은 수준의 다양성을 나타낸다. Johnson 및 Wu, 분자 생물학 방법, 248:1-25(Lo, ed., Human Press, Totowa, N.J., 2003) 참조.
다수의 HVR 윤곽이 공지되어 있다. 카밧 상보성 결정 영역(CDRs)은 서열 가변성에 기초를 두고 있으며, 가장 통상적으로 사용된다(카밧 등, 면역학적 관심의 단백질의 서열, 제5판, National Institute of Health, Bethesda, MD(1991)). 초티아는 대신 구조적 루프의 위치를 나타낸다(초티아 및 Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917(1987)). AbM HVR은 카밧 HVRs 및 초티아 구조적 루프 사이의 절충안을 나타내며, Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다. "접점" HVR은 이용가능한 복잡한 결정 구조의 분석을 기반으로 한다. 이 HVR 각각으로부터의 잔기는 하기에 기록되어 있다. "프레임워크" 또는 "FR" 잔기는 HVR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다.
Figure 112019039814920-pct00001
"연장된" HVR은 또한 VL의 24-36 또는 24-34(L1), 46-56 또는 50-56(L2) 및 89-97 또는 89-96(L3), 및 VH의 26-35(H1), 50-65 또는 49-65(H2) 및 93-102, 94-102 또는 95-102(H3)(카밧 넘버링)으로 공지되어 있다.
"카밧에 따른 넘버링"은 카밧 등의 항체 편집에서(상동) 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 사용되는 넘버링 시스템을 지칭할 수 있다. 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 HVR의 단축 또는 삽입에 상응하는 더 적거나 또는 추가의 아미노산을 함유할 수 있다. 잔기의 카밧 넘버링은 항체 서열의 상동성 영역에서 "표준" 카밧 넘버링된 서열과의 정렬에 의해 주어진 항체에 대해 결정될 수 있다. 전형적으로 카밧 넘버링은 가변 도메인의 잔기(대략 경쇄의 잔기 1-107 및 중쇄의 잔기 1-113)를 언급할 때 사용되는 반면, EU 넘버링 시스템 또는 색인(예를 들어, 카밧에서와 같은 EU 색인, EU IgG1에 따른 넘버링)은 일반적으로 중쇄 불변 영역의 잔기를 언급할 때 사용된다.
"전장" 또는 "온전한" 항체는 전형적으로 예를 들어, 항체 단편과 반대되는 Fc 영역을 갖는 중쇄를 포함한다. 단일 항원 결합 부위를 갖는 항원-결합 "Fab" 단편은 파파인 소화에 의해 잔존 Fc 단편으로부터 방출될 수 있다. F(ab')2 단편은 항체의 펩신 처리에 의해 생성된 2개의 항원-결합 부위를 포함한다. 그러나, 항체 단편은 하나 이상의 항체 가변 영역을 포함할 것이다.
"Fv" 단편은 완전한 항원-결합 부위를 함유한다. 단일 사슬 Fv(scFv)는 HVR이 항원 결합 부위를 형성하도록, 예를 들어 항체 또는 Fab 단편과 같이 VH 및 VL 도메인이 결합하도록 펩타이드 링커에 의해 연결된 VH 및 VL 도메인을 포함할 수 있다. Pluckthun, 단클론성 항체의 약리학, vol. 113, Rosenburg 및 Moore eds., (Springer-Verlag, New York, 1994), pp. 269-315를 참조한다. 일부 구현예에서, scFv는 항체 Fc 도메인(예를 들어, scFv-Fc)에 융합된다. 6개의 HVR이 전형적으로 항원 결합 부위를 포함하는 반면, 3개의 HVR을 갖는 단일 가변 도메인은 여전히 낮은 친화성으로 항원에 결합할 수 있다. Hamers-Casterman 등, Nature 363:446-448 (1993); Sheriff 등, Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996)을 참조한다. 단일-도메인 항체(예를 들어, 낙타과 항체)는 전형적으로 항원 결합을 위한 단일의 단량체성 가변 도메인을 포함한다. 단일 중쇄(VHH) 및 단일 경쇄 항체 또한 공지되어 있다. Fab' 단편은 전형적으로 Fab 단편보다 C-말단에 몇개의 잔기를 더 포함한다. Fab'-SH는 유리 티올을 갖는 시스테인 잔기를 포함한다. 항체 단편의 다양한 화학적 커플링이 당해 기술에 공지되어 있다.
"디아바디(diabody)"는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 항체 단편을 포함한다. 이들은 링커에 의해 연결된 VH 및 VL 도메인을 포함하며, 전형적으로 너무 짧아서 동일한 사슬에서 도메인의 페어링을 촉진시킬 수 없다. 디아바디는 2가 또는 이중특이적일 수 있다. 트리바디 및 테트라바디, 또는 다른 수의 VH/VL 도메인이 공지되어 있다. Hudson 등, Nat. Med. 9:129-134 (2003)을 참조한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "단클론성" 항체는 실질적으로 균질한, 예를 들어, 실질적으로 동일하지만 경미한 수준의 백그라운드 돌연변이 및/또는 변형을 허용하는 항체의 모집단으로부터 수득된 항체를 지칭한다. "단클론성"은 항체의 실질적으로 균질한 특성을 나타내며, 임의의 특정 방법에 의해 항체를 생산할 필요가 없다. 일부 구현예에서, 단클론성 항체는 그의 HVR, VH 및/또는 VL 서열, 및/또는 클론 풀(예를 들어, 재조합, 하이브리도마 또는 파지-유래됨)로부터 선택된 결합 특성에 의해 선택된다. 단클론성 항체는 하나 이상의 돌연변이를 포함하도록, 예를 들어 항체의 결합 친화도 또는 다른 특성에 영향을 미치고, 인간화된 또는 키메라성 항체를 생성하고, 항체 생산 및/또는 균질성을 개선하며, 다중특이적 항체를 조작하고, 여전히 본질적으로 단클론성으로 간주되는 항체를 수득하도록 조작될 수 있다. 단클론성 항체의 모집단은 모집단의 개별 단클론성 항체가 동일한 항원 부위를 인식함에 따라 다클론성 항체와 구별될 수 있다. 단클론성 항체의 생산을 위한 다양한 기술이 공지되어 있으며; 예를 들어, 하이브리도마 방법(예를 들어, Kohler 및 Milstein, Nature, 256:495-97 (1975); Hongo 등, 하이브리도마, 14 (3): 253-260 (1995), Harlow 등, 항체: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling 등, in: 단클론성 항체 및 T-세포 하이브리도마 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)), 재조합 DNA 방법(예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호 참고), 파아지-디스플레이 기술(예를 들어, Clackson 등, Nature, 352: 624-628 (1991); Marks 등, J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Sidhu 등, J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee 등, J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee 등, J. Immunol. Method 284(1-2): 119-132 (2004) 참고), 및 인간 면역글로불린 유전자좌 또는 인간 면역글로불린 서열을 코딩하는 유전자의 일부 또는 전부를 갖는 동물에서 인간 또는 인간 유사 항체를 생산하는 기술(예를 들어, WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; Jakobovits 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551 (1993); Jakobovits 등, Nature 362: 255-258 (1993); Bruggemann 등, Year in Immunol. 7:33 (1993); 미국 특허 제5,545,807호; 제5,545,806호; 제5,569,825호; 제5,625,126호; 제5,633,425호; 및 제5,661,016호; Marks 등, Bio/Technology 10: 779-783 (1992); Lonberg 등, Nature 368: 856-859 (1994); Morrison, Nature 368: 812-813 (1994); Fishwild 등, Nature Biotechnol. 14: 845-851 (1996); Neuberger, Nature Biotechnol. 14: 826 (1996); 및 Lonberg 및 Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995) 참고).
"키메라성" 항체는 특정 아이소타입, 부류 또는 유기체로부터의 중쇄 및/또는 경쇄의 일 부분 및, 또 다른 아이소타입, 부류 또는 유기체로부터의 또 다른 부분을 갖는 항체를 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, 가변 영역은 하나의 공급원 또는 유기체로부터 유래하고, 불변 영역은 또 다른 공급원 또는 유기체로부터 유래할 것이다.
"인간화된 항체"는 우세한 인간 서열 및 최소량의 비-인간(예를 들어, 마우스 또는 닭) 서열을 갖는 항체를 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, 인간화된 항체는 인간 수용체 항체 프레임워크(FR)에 이식된 비-인간(예를 들어, 마우스 또는 닭) 유기체 유래 항체로부터의 하나 이상의 HVR 서열(관심의 결합 특이성을 지니고 있음)을 갖는다. 일부 구현예에서, 비-인간 잔기는 예를 들어, 항체 특성을 개선시키기 위해 인간 프레임워크(공급원 또는 수용체 항체에 존재하지 않음) 상에 추가로 이식된다. 일반적으로, 인간화된 항체는 실질적으로 모든 적어도 하나의, 전형적으로는 2개의 가변 도메인을 포함할 것이며, 모든 또는 실질적으로 모든 초가변성 루프가 비-인간 면역글로불린의 루프에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 면역글로불린 서열의 것들이다. 또한, 인간화된 항체는 선택적으로 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로는 인간 면역글로불린의 부분을 포함할 것이다. 예를 들어, Jones 등, Nature 321:522-525 (1986); Riechmann 등, Nature 332:323-329 (1988); 및 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)를 참고한다.
"인간" 항체는 인간에 의해 생성된 항체의 아미노산 서열에 상응하는, 및/또는 본 명세서에 개시된 바와 같은 인간 항체를 제조하기 위한 임의의 기술을 사용하여 제조된 아미노산 서열을 갖는 항체를 지칭할 수 있다. 인간 항체는 파지-디스플레이 라이브러리. Hoogenboom 및 Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks 등, J. Mol. Biol., 222:581 (1991); Cole 등, 단클론성 항체 및 암 요법, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner 등, J. Immunol., 147(1):86-95 (1991)에 기재된 바와 같은 인간 단클론성 항체의 제조; 및 항원 자극에 반응하여 상기 항체를 생산하도록 변형되었지만, 고장난 내인성 유전자좌를 갖는, 형질전환 동물, 예를 들어, 면역화된 제노마우스 (참고, 예를 들어, XENOMOUSETM 기술 관련 미국 특허 제6,075,181호 및 제6,150,584호) 또는 인간 면역글로불린 서열(들)을 갖는 닭(예를 들어, WO2012162422, WO2011019844, 및 WO2013059159 참고)에게 항원을 투여하는 기술을 포함하여 당 업계에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "링커"는 2개의 요소, 예를 들어, 단백질 도메인 사이의 연결을 지칭한다. 일부 구현예에서, 링커는 공유결합 또는 스페이서일 수 있다. 용어 "스페이서"는 두 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 도메인 사이의 공간 또는 가요성(또는 공간 및 가요성 모두)을 제공하기 위해 2개의 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 도메인 사이에서 발생하는 모이어티(예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 중합체) 또는 아미노산 서열(예를 들어, 1 내지 200 아미노산 서열)을 지칭한다. 일부 구현예에서, 아미노산 스페이서는 (예를 들어, 폴리펩타이드 백본을 통해, 이격된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 도메인에 연결된) 폴리펩타이드의 일차 서열의 일부이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "세포독성 약물"은 세포 증식을 억제하거나 세포사멸을 유도하는 임의의 제제를 지칭할 수 있다. 세포독성 약물은 비제한적으로 화학치료제; 방사성 동위원소; 성장 억제성 제제; 및 소분자 독소 또는 효소적으로 활성인 독소와 같은 독소(이들의 단편 및/또는 변이체를 포함함)를 포함한다. 예시적인 세포독성 약물은 비제한적으로, 대사 억제제, 항-미세소관 제제, 백금 함유 화합물, 알킬화제, 프로테아솜 억제제, 토포이소머라제 II 억제제, 항-대사물질, 토포이소머라제 I 억제제, 신호 형질도입 경로 억제제, 비-수용체 티로신 키나제 혈관신생 억제제, 호르몬 및 호르몬 유사체, 세포자멸유도 제제, LDH-A의 억제제, 세포주기 억제제, HDAC 억제제 및 항생제를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "표지"는 예를 들어 본 개시내용의 표지된 항체와 거대 분자 또는 세포 사이의 결합의, 검출제로서 작용하는 임의의 모이어티 포함할 수 있다. 예시적인 표지는 친화성 정제 태그 뿐만 아니라 형광(예를 들어, 화합물 또는 단백질), 방사성 또는 효소적 모이어티를 비제한적으로 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 항체는 항원의 시험관내 및/또는 생체내 조작에 유용한 항체를 제공하기에 충분한 친화도로 항원을 "결합"한다고 할 수 있다. 일부 구현예에서, 항원에 "결합하는" 항체는 25℃에서 1μM보다 작거나 같은, 항원에 대한 해리 상수(KD)를 갖는다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "친화성" 또는 "결합 친화도"는 두 분자 사이의 결합 상호작용의 강도를 지칭한다. 일반적으로, 결합 친화도는 분자와 그의 결합 파트너, 예컨대 고친화성 SIRP-α D1 변이체 및 CD47 사이의 비-공유 상호작용의 총계의 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 결합 친화도는 결합 쌍의 구성원간에 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화도를 지칭한다. 두 분자 사이의 결합 친화도는 통상적으로 해리 상수(KD) 또는 결합 상수(KA)로 기재된다. 서로에 대한 낮은 결합 친화도를 갖는 2개의 분자는 일반적으로 천천히 결합하고, 쉽게 해리되는 경향이 있으며, 큰 KD를 나타낸다. 서로에 대해 높은 친화도를 갖는 2개의 분자는 일반적으로 용이하게 결합하고, 더 오래 결합되는 경향이 있으며, 작은 KD를 나타낸다. 일부 구현예에서, 2개의 상호작용하는 분자의 KD는 공지된 방법 및 기술, 예를 들어, 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 사용하여 결정된다. KD는 koff/kon의 비율로 계산될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "KD 미만"은 인용된 KD 값에 비해 수치적으로 더 작은 KD 값 및 증가하는 결합 친화도를 지칭한다. 본 명세서에 사용된 용어 "KD 초과"는 인용된 KD 값에 비해 수치적으로 더 큰 KD 값 및 감소하는 결합 친화도를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "치료"는 치료되는 개체 또는 세포에서 하나 이상의 병리적 증상을 변경시키기 위해, 분자, 화합물, 제형, 조성물 등의 치료적 투여를 지칭할 수 있다. 치료의 바람직한 효과는 비제한적으로, 질환 진행을 감속시키는 것, 병리적 증상 또는 질환 상태를 완화 또는 경감시키는 것, 예후를 개선시키는 것 및/또는 질환 차도를 달성하는 것 등을 포함할 수 있다. 예를 들어, 개체의 암은 암과 관련된 하나 이상의 증상이 완화되거나 폐지되면, 예컨대, 비제한적으로 암세포의 증식이 감소되거나, 암 세포 또는 종양 부담이 제거되거나, 암으로 인한 증상이 감소되거나 개인의 삶의 질이 높아지고, 다른 약물(들)의 용량이 감소되고, 및/또는 개인의 생존이 연장된다면, 성공적으로 "치료된다". 또 다른 예로서, 자가면역 또는 염증성 질환은 자가면역 또는 염증성 질환과 관련된 하나 이상의 증상이 완화되거나 폐지되면, 예컨대, 비제한적으로 자가반응성 면역 세포 및/또는 염증성 면역 세포 또는 사이토카인이 감소되고, 면역 활성화 및/또는 염증이 감소되고, 질환으로 인한 장기 손상이 늦춰지거나 경감되고, 질환으로 인한 증상이 감소되고, 개인의 삶의 질이 향상되고, 다른 약물(들)의 용량이 감소되고, 및/또는 개인의 생존이 연장된다면, 성공적으로 "치료될 수 있다".
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 질환의 "진행을 지연시키는"은 질환의 병리적 경과를 늦추거나, 지연시키거나, 연기시키거나, 보류시키거나, 안정화시키거나 또는 방해하는 것을 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, 이 용어는 예방, 예를 들어 개체가 질환 발병을 효과적으로 예방하기에 충분한 지연을 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, 예를 들어, 진행성 암에서, 진행을 지연시키는 것은 전이를 지연시키는 것을 포함할 수 있다. 당해 분야의 숙련가는 지연의 정확한 길이가, 예를 들어, 특정 질환, 개체의 병태 등에 따라 달라질 수 있음을 인정할 것이다.
용어들 "암" 및 "암성"은 포유동물에서 세포 또는 세포들에 의한 이상조절된 또는 조절되지 않은 세포 성장/증식을 나타낼 수 있다. 당 업계에 공지된 임의의 암 유형, 예컨대 비제한적으로 암종, 육종, 림프종, 백혈병, 림프종 및 모세포종이 포함될 수 있다. 상기 암의 보다 구체적인 예는 비제한적으로 폐암, 편평상피 세포 암, 뇌종양, 교모세포종, 두경부암, 간세포 암, 결장직장암(예를 들어, 결장암 또는 직장암), 간암, 방광암, 위암 또는 위장암, 췌장암, 자궁경부암, 난소 암, 요로 암, 유방암, 복막 암, 자궁암, 타액선 암, 신장 또는 신장 암, 전립선 암, 외음부 암, 갑상선암, 항문 암종, 음경 암종, 흑색종, 다발성 골수종 및 B-세포 림프종(비-호지킨 림프종(NHL) 포함); 급성 림프아구성 백혈병(ALL); 만성 림프구성 백혈병(CLL); 급성 골수성 백혈병(AML); 메켈 세포 암종; 모발 세포 백혈병; 만성 골수아세포 백혈병(CML); 및 관련된 전이를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "유효량"은 질환, 예컨대, 암, 예를 들어 고형 종양 또는 혈액 암을 갖는 환자의 치료 또는 진행 지연에 원하는 치료 효과를 달성하는데 충분하고 효과적인, 본 발명의 항체 또는 본 발명의 항체를 함유하는 약제학적 조성물의 양을 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료적 유효량은 유해한 부작용을 피할 것이고, 및/또는 이러한 부작용은 유익한 효과보다 더 중요할 것이다. 유효량은 치료되는 개체, 예를 들어, 원하는 반응을 생성하는 제제의 능력 뿐만 아니라 연령, 체중, 성별, 질환 상태에 따라 달라질 수 있다. 유효량은 하나 이상의 투여시에 투여될 수 있다. 임상적 상황에서와 같이, 약물, 화합물 또는 약제학적 조성물의 유효량은 또 다른 약물, 화합물 또는 약제학적 조성물, 예컨대 또 다른 치료제와 공조하여 달성되거나, 달성되지 않을 수 있다. 따라서, "유효량"은 또한 하나 이상의 추가의 치료제를 투여하는 맥락에서 고려될 수 있으며, 단일 제제는 하나 이상의 다른 제제와 함께 공조하여, 바람직한 결과가 달성될 수 있거나 달성될 경우, 유효량으로 투여되는 것으로 간주될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "약제학적 조성물"은 부형제 또는 희석제(또는 부형제 및 희석제 모두)뿐만 아니라 활성 성분을 포함하고, 활성 성분이 적합한 투여방법에 의해 투여될 수 있도록 하는 약제 또는 약제학적 제형을 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 개시된 약제학적 조성물은 본 발명의 하나 이상의 항체와 양립가능한 약제학적으로 허용가능한 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 경구 투여를 위한 정제 또는 캡슐 형태, 또는 예를 들어 주사에 의한 정맥내 또는 피하 투여용 수성 형태로 존재한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어들 "대상체", "개체" 및 "환자"는 척추동물, 예를 들어 포유동물을 지칭하기 위해 상호교환적으로 사용된다. 포유동물은 뮤린, 유인원, 인간, 농장 동물, 스포츠 동물 및 애완 동물을 비제한적으로 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이, "와 공조하여" 또는 "와 조합하여"는 다른 치료제에 추가로(예를 들어, 전, 동안 및/또는 후에) 하나의 치료제의 투여를 지칭할 수 있다.
항체
본 발명의 특정 양태는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인, 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인, 또는 둘 다의 세포외 도메인(예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 항체에 관한 것이다. 본 명세서에 실증된 바와 같이, 항체는 두 단백질에 결합하는 항체뿐만 아니라 v1 또는 v2에 특이적으로 결합하는 것으로 특성규명되었다. 인간에서, SIRPA의 적어도 10개의 구별되는 대립유전자가 확인되었다(도 1a 참조; 또한 하기를 참조한다: Takenaka, K. 등 (2007) Nat. Immunol. 8:1313-23). 하나 이상의 인간 SIRP-α 폴리펩타이드와 결합하고 본 명세서에 기재된 하나 이상의 다른 결합 특이성을 갖는 항체는 본 발명의 유리한 발견이다. 또한, 본 발명은 신규한 SIRP-α 결합 특이성 프로파일의 놀라운 다양성을 나타내는 항체를 생산하고 동정하는 방법을 입증한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기의 아미노산 서열을 포함하는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다:
EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS (서열번호:5). 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기의 아미노산 서열을 포함하는 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다:
EEELQVIQPDKSVSVAAGESAILHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPARELIYNQKEGHFPRVTTVSESTKRENMDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDTEFKSGAGTELSVRAKPS
(서열번호:6). 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기에 결합한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인):
EEELQVIQPDKSVLVAAGETATLRCTATSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPRVTTVSDLTKRNNMDFSIRIGNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVRAKPS (서열번호:5) 및 하기의 아미노산 서열을 포함하는 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인):
EEELQVIQPDKSVSVAAGESAILHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPARELIYNQKEGHFPRVTTVSESTKRENMDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDTEFKSGAGTELSVRAKPS
(서열번호:6).
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드"은 예를 들어, 하나 이상의 조작된 돌연변이를 보유하고 있는 변이체와는 대조적으로 자연 발생 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드 또는 인간에서 발현된 다형성을 지칭할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 표 1에서 나타낸 서열을 포함하는 하나 이상의 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 및/또는 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인에 결합하고, v3, v4, v5, v6, v7, v8, v9, 및 v10로부터 선택된 하나 이상의 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 bind 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) (예를 들어, 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 (예를 들어, 유기체 마카카 파스시컬라리스에서 발견된) 사이노몰구스 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 적어도 2개의 상이한 원숭이 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 적어도 2개의 상이한 사이노몰구스 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항체는 하기에 결합한다: 하기의 아미노산 서열을 포함하는 사이노몰구스 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인): EEELQVIQPEKSVSVAAGESATLNCTATSLIPVGPIQWFRGVGPGRELIYHQKEGHFP RVTPVSDPTKRNNMDFSIRISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDVELKSGAGTELSVRAK PS (서열번호:11), 하기의 아미노산 서열을 포함하는 사이노몰구스 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인):
EEELQVIQPEKSVSVAAGDSATLNCTVSSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNLKEGHFP
RVTAVSDPTKRNNMDFSIRISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDVELKSGAGTELSVRAKPS (서열번호:12), 또는 둘 모두.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 쥣과 또는 마우스 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, 유기체 Mus 무스큘러스에서 발견됨; 예를 들어, 쥣과 또는 마우스 SIRP-α 폴리펩타이드의 D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 2종 이상의 상이한 쥣과 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 상이한 마우스 균주로부터의 다양한 쥣과 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드는 공지되어 있다. 일부 구현예에서, 쥣과 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드는 하기로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다:
KELKVTQPEKSVSVAAGDSTVLNCTLTSLLPVGPIKWYRGVGQSRLLIYSFTGEHFPR VTNVSDATKRNNMDFSIRISNVTPEDAGTYYCVKFQKGPSEPDTEIQSGGGTEVYVL AKPS (서열번호: 7; 129 마우스 균주로부터),
TEVKVIQPEKSVSVAAGDSTVLNCTLTSLLPVGPIRWYRGVGQSRQLIYSFTTEHFPR VTNVSDATKRSNLDFSIRISNVTPEDAGTYYCVKFQRGSPDTEIQSGGGTEVYVLAK
(서열번호:8; NOD 마우스 균주로부터),
KELKVTQPEKSVSVAAGDSTVLNCTLTSLLPVGPIRWYRGVGPSRLLIYSFAGEYVPR IRNVSDTTKRNNMDFSIRISNVTPADAGIYYCVKFQKGSSEPDTEIQSGGGTEVYVLA
K (서열번호:9; C57BL/6 마우스 균주로부터), 및
TEVKVTQPEKSVSVAAGDSTILNCTVTSLLPVGPIRWYRGVGQSRLLIYSFTGEHFPRI RNVSDTTKRNNMDFSIRISNVTPEDAGTYYCVKFQRGSSEPDTEIQSGGGTEVYVLA
K (서열번호:10; BALB/c 마우스 균주로부터).
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP 계열 단백질의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 인간 SIRP-β 폴리펩타이드는 예를 들어, NCBI Ref 서열번호 10326에 의해 기재된 바와 같이 인간 SIRPB1 유전자에 의해 인코딩된 폴리펩타이드를 지칭한다. 일부 구현예에서, 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)는 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
EDELQVIQPEKSVSVAAGESATLRCAMTSLIPVGPIMWFRGAGAGRELIYNQKEGHF PRVTTVSELTKRNNLDFSISISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDDVEFKSGAGTELSVR AKPS (서열번호:13) 또는
EEELQVIQPDKSISVAAGESATLHCTVTSLIPVGPIQWFRGAGPGRELIYNQKEGHFPR
VTTVSDLTKRNNMDFSIRISNITPADAGTYYCVKFRKGSPDHVEFKSGAGTELSVRAKPS (서열번호:14).
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드는 예를 들면 NCBI Ref 서열번호55423에 의해 기재된 바와 같이 인간 SIRPG 유전자에 의해 인코딩된 폴리펩타이드를 지칭한다. 일부 구현예에서, 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)는 하기의 아미노산 서열을 포함한다:
EEELQMIQPEKLLLVTVGKTATLHCTVTSLLPVGPVLWFRGVGPGRELIYNQKEGHF PRVTTVSDLTKRNNMDFSIRISSITPADVGTYYCVKFRKGSPENVEFKSGPGTEMALG AKPS (서열번호:15).
상기에 기재된 폴리펩타이드 중 하나 이상에 결합하는 항체 외에, 본 개시내용은 상기에 기재된 폴리펩타이드 중 하나 이상에 결합하지 않는 항체를 고려한다. 환언하면, 본 개시내용의 항체의 결합 프로파일은 본 명세서에 기재된 결합 특이성 및/또는 특성 중 임의의 것을 긍정적 또는 부정적으로 인용하는 것을 특징으로 할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는 세포에서의 SIRP-α 신호전달을 조절한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는 세포에서의 SIRP-α 신호전달을 길항시킨다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는 세포에서의 SIRP-α 신호전달을 방해한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는 세포에서의 SIRP-α 신호전달을 작용시킨다. 일부 구현예에서, SIRP-α 신호전달은 SIRP-α의 세포내 영역의 티로신 인산화, 포스파타제 (예를 들어, SHP1) 결합, 어댑터 단백질 결합 (예를 들어, SCAP2, FYB, 및/또는 GRB2), 및 산화질소 생산을 비제한적으로 포함하는 SIRP-α 폴리펩타이드의 활성화에 의해 매개된 하나 이상의 세포내 신호전달 사건을 포함한다. 세포에서 SIRP-α 신호전달을 측정하기 위한 다양한 검정은 하기를 비제한적으로 포함한다: SIRP-α 인산화, SHP1 및 SHP2 공-면역침강, PI3-키나제 신호전달, 사이토카인 생산 (염증성 IL-12, IL-23, TNFα, IFN 및 억제성 사이토카인 IL-10, IL-4, IL-13 둘 모두, M1 및 M2 대식세포 마커에 대한 세포 표면 마커 수준) 또는 수지상 세포 활성화 및 기능; Kharitonenkov, A. 등 (1997) Nature 386: 181-6; Ochi, F. 등 (1997) Biochem. Biophys. Res. Commun. 239:483-7; Kim, E.J. 등 (2013) Inflammation Research 62:377-86; Yi, T. 등 (2015) Immunity 43:764-75.
일부 구현예에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는 세포는 백혈구이다. 일부 구현예에서, 세포는 대식세포, 수지상 세포, 중성구, 호산구, 또는 골수-유래된 억제 세포 (MDSC)이다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는, 예를 들어, 본 명세서에 기재되어 있거나 달리 당업계에서 공지되어 있는 SIRP-α 신호전달 검정 중 하나 이상을 사용하여 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 까지 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는 세포에서의 SIRP-α 신호전달을 감소시키거나 길항시킨다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 예를 들어, 본 명세서에 기재되어 있거나 달리 당업계에서 공지되어 있는 SIRP-α 신호전달 검정 중 하나 이상을 사용하여 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 까지 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는 세포에서의 SIRP-α 신호전달을 증가시키거나 작용시킨다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 SIRP-α에 의해 매개된 세포간 표현형을 조절한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는 대식세포에 의한 식균작용을 향상시킨다. 예를 들어, 본 개시내용의 항체에 의해 처리되거나 그것과 접촉된 대식세포의 식세포 활성은 항체로 처리되거나 그것과 접촉되지 않은 대식세포의 식세포 활성과 비교될 수 있거나, 또는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키고 본 개시내용의 항체로 처리되거나 그것과 접촉된 대식세포의 식세포 활성은 인간 SIRP-α 폴리펩타이드을 발현시키지 않고 항체로 처리되거나 그것과 접촉되지 않는 대식세포의 식세포 활성과 비교될 수 있다. 예시적인 식균작용 검정은, 예를 들어, 하기에서 발견될 수 있다: Wieskopf, K. 등 (2013) Science 341: 88 및 Willingham, S.B. 등 (2012) Proc. Natl. Acad. Sci.109:6662-7. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는, 예를 들어, 본 명세서에 기재되어 있거나 달리 당업계에서 공지되어 있는 식균작용 검정 중 하나 이상을 사용하여 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 까지 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는 대식세포에 의한 식균작용을 증가시킨다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드을 발현시키는 수지상 세포(들)의 활성화 (예를 들어, 개별 수지상 세포의 증가된 수준의 활성화, 또는 샘플 모집단 내에서 활성화된 수지상 세포의 증가된 부분)을 향상시킨다. 예를 들어, 본 개시내용의 항체로 처리되거나 그것과 접촉된 수지상 세포(들)의 활성화는 항체로 처리되거나 그것과 접촉되지 않은 수지상 세포(들)의 활성화와 비교될 수 있거나, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키고 본 개시내용의 항체로 처리되거나 그것과 접촉된 수지상 세포(들)의 활성화은 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키지 않고 항체과 처리되거나 그것과 접촉되지 않은 수지상 세포(들)의 활성화와 비교될 수 있다. 예시적인 수지상 세포 활성화 검정는 본 명세서에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 , 예를 들어, 본 명세서에 기재되어 있거나 달리 당업계에서 공지되어 있는 수지상 세포 활성화 검정 중 하나 이상을 사용하여 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90%까지 (예를 들어, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는) 수지상 세포 활성화를 증가시킨다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 inhibit CD47를 발현시키는 종양의 생체내 성장을 억제한다. 예를 들어, CD47를 발현시키고 본 개시내용의 항체로 처리된 종양의 생체내 성장은 can be CD47를 발현시키는 종양의 생체내 성장에 대해 비교될 수 있고 본 개시내용의 항체로 처리되지 않을 수 있다. 예시적인 생체내 종양 성장 검정는 본 명세서에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 또는 달리 당업계에서 공지되어 있는 생체내 종양 성장 검정 중 하나 이상을 사용하여 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90% 까지CD47를 발현시키는 종양의 생체내 성장을 억제한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 및 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 (예를 들어, "차단" 항체) 사이의 결합을 차단한다. 예를 들어, 항체 및 CD47 폴리펩타이드는 동일한 SIRP-α 에피토프에 대해 "경쟁"할 수 있고/거나 SIRP-α에 결합하는 항체는 SIRP-α에 결합하는 CD47와 상호 배타적일 수 있다. SIRP-α 및 CD47 사이의 결합 계면, 뿐만 아니라 결합에 참여하는 단백질 둘 모두의 잔기는 공지되어 있다; 참고 Hatherley, D. et al. (2007) J. Biol. Chem. 282:14567-75 및 Nakaishi, A. et al. (2008) J. Mol. Biol. 375:650-60. 항체가 SIRP-α에 결합하는 CD47를 차단하는 지를 측정하기 위한 예시적인 검정은 본 명세서에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는, 예를 들어, 정제된 SIRP-α 및/또는 CD47 폴리펩타이드를 사용하여 시험관내 검정에서 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다. 예를 들어, 시험관내 ELISA 및 SPR 검정는 본 명세서에 기재되어 있지 않지만, 이것이, 다른 시험관내 결합 검정이 또한 사용될 수 있기 때문에 제한하는 것은 아니다. 일부 구현예에서, CD47의 IgSF 도메인에 결합된 SIRP-α D1 변이체 (예를 들어, 본 명세서에서 기재된 바와 같은 하나 이상의 자연 발생 대응물보다 더 높은 친화도로 CD47에 결합하는 비-자연 발생 고친화도 SIRP-α D1 도메인)을 포함하는 복합체에 결합된 항체는 차단, 비-차단, 및/또는 킥오프 항체를 스크리닝하는데 사용된다. 일부 구현예에서,"차단" 및/또는"비-차단" 항체는 표면 플라즈몬 공명 (SPR; 예를 들어, 실시예 1에 기재됨)을 통해 시험될 수 있다. 예를 들어, 복합체는 CD47의 IgSF 도메인과, SIRP-α D1 변이체 (예를 들어, 본 명세서에서 기재된 바와 같은 하나 이상의 자연 발생 대응물보다 더 높은 친화도로 CD47에 결합하는 비-자연 발생 고친화도 SIRP-α D1 도메인) 사이에 형성될 수 있다, 그 다음 시험 항체의 상기 복합체에의 결합이 측정될 수 있다. SIRP-α의 CD47에의 결합을 차단하는 항체에 대해, CD47의 증가된 농도에서, SIRP-α의 몇 개의 분자가 항체에 결합하도록 이용가능한 것은, 항체는 CD47와 동일한 결합 부위와 경쟁하고 대부분/모두 SIRP-α는 CD47과 복합체화되기 때문이다. 따라서, 혼합물 중 CD47의 농도가 증가함에 따라 공명 (RU)이 감소할 것으로 기재된다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 "차단" 항-SIRP-α 항체는 CD47과 SIRP-α의 결합 계면의 하나의 잔기에서 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고, 즉, 차단 항체 및 CD47은 부분적으로 또는 완전히 중첩 에피토프를 공유한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 "차단" 항-SIRP-α 항체는 CD47:SIRP-α 복합체에서 CD47에 의해 또한 결합된 하나 이상의 아미노산 위치에서 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. SIRP-α와 예시적인 항-SIRP-α 항체 또는 CD47 사이의 결합 계면은 실시예 4에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 제1 세포의 표면 상에서 발현된 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 제2 세포의 표면 상에서 발현된 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합, 예를 들어, 세포의 표면 상에서 발현된 폴리펩타이드 사이의 생체내 결합 검정을 차단한다. 일부 구현예에서, 생체내 검정은 SIRP-α 신호전달, 예를 들어, SIRP-α 폴리펩타이드의 활성화에 의해 매개된 하나 이상의 세포내 신호전달 사건의 하나 이상의 양태를 검정하여 제1 세포의 표면 상에서 발현된 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 제2 세포의 표면 상에서 발현된 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 평가할 수 있고, 상기 양태는 비제한적으로 하기를 포함한다: SIRP-α의 세포내 영역의 티로신 인산화, 포스파타제 (예를 들어, SHP1) 결합, 어댑터 단백질 결합 (예를 들어, SCAP2, FYB, 및/또는 GRB2), 사이토카인 생산 (예를 들어 IL-10, IL-1β, IFN 또는 TNF), 및 산화질소 생산; 및/또는 대식세포 식균작용 및 대식세포, 중성구, 수지상 세포, 호산구, 및 골수-유래된 억제 세포 (MDSCs)의 다른 활성 또는 억제성 표현형을 비제한적으로 포함하는 하나 이상의 세포간 표현형.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드 (예를 들어, "비-차단" 항체)의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하지 않는다. 예를 들어, 항체 및 CD47 폴리펩타이드는 SIRP-α의 구별되고/거나 비-중첩인 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는, 예를 들어, 정제된 SIRP-α 및/또는 CD47 폴리펩타이드를 사용하여 시험관내 검정에서 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하지 않는다. 예를 들어, 시험관내 ELISA 및 SPR 검정는 본 명세서에 기재되어 있지 않지만, 이것이, 다른 시험관내 결합 검정이 또한 사용될 수 있기 때문에 제한하는 것은 아니다. 일부 구현예에서, CD47의 IgSF 도메인에 결합된 SIRP-α D1 변이체 (예를 들어, 본 명세서에서 기재된 바와 같은 하나 이상의 자연 발생 대응물보다 더 높은 친화도로 CD47에 결합하는 비-자연 발생 고친화도 SIRP-α D1 도메인)을 포함하는 복합체에 결합된 항체는 차단, 비-차단, 및/또는 킥오프 항체를 스크리닝하는데 사용된다. 일부 구현예에서,"차단" 및/또는 "비-차단" 항체는 표면 플라즈몬 공명 (SPR; 예를 들어, 실시예 1에 기재됨)을 통해 시험될 수 있다. 예를 들어, 복합체는 CD47의 IgSF 도메인과, SIRP-α D1 변이체 (예를 들어, 본 명세서에서 기재된 바와 같은 하나 이상의 자연 발생 대응물보다 더 높은 친화도로 CD47에 결합하는 비-자연 발생 고친화도 SIRP-α D1 도메인) 사이에 형성될 수 있다, 그 다음 시험 항체의 상기 복합체에의 결합이 측정될 수 있다. SIRP-α의 CD47에의 결합을 차단하지 않는 항체에 대해, 항체는 SIRP-α/CD47 복합체에 결합하고 샌드위치를 형성하는 것으로 기재된다. 따라서, CD47의 증가된 농도에서, 공명은 따라서 증가된 샌드위치 형성으로 인해 증가된다. 일부 구현예에서, "본 개시내용의 항체의 비-차단" 항-SIRP-α는 CD47과 SIRP-α 사이의 계면 결합과 구별되는 하나 이상의 잔기에서 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고, 즉, 비-차단 항체 및 CD47은 완전히 비-중첩 에피토프를 공유한다. SIRP-α와 예시적인 항-SIRP-α 항체 또는 CD47 사이의 결합 계면은 실시예 4에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 제1 세포의 표면 상에서 발현된 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 제2 세포의 표면 상에서 발현된 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합, 예를 들어, 세포의 표면 상에서 발현된 폴리펩타이드 사이의 생체내 결합 검정을 차단하지 않는다. 일부 구현예에서, 생체내 검정은 SIRP-α 신호전달, 예를 들어, SIRP-α 폴리펩타이드의 활성화에 의해 매개된 하나 이상의 세포내 신호전달 사건의 하나 이상의 양태를 검정하여 제1 세포의 표면 상에서 발현된 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 제2 세포의 표면 상에서 발현된 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 평가할 수 있고, 상기 양태는 비제한적으로 하기를 포함한다: SIRP-α의 세포내 영역의 티로신 인산화, 포스파타제 (예를 들어, SHP1) 결합, 어댑터 단백질 결합 (예를 들어, SCAP2, FYB, 및/또는 GRB2), 사이토카인 생산 (예를 들어 IL-10, IL-1^, IFN 또는 TNF), 및 산화질소 생산; 및/또는 대식세포 식균작용 및 대식세포, 중성구, 수지상 세포, 호산구, 및 골수-유래된 억제 세포 (MDSCs)의 다른 활성 또는 억제성 표현형을 비제한적으로 포함하는 하나 이상의 세포간 표현형. CD47과의 SIRP-α 상호작용을 차단하지 않는 항체가 식균작용을 증가시킬 수 있고 생체내 종양 성장을 차단하는 것이 본 개시내용?? 놀라운 발견이다. 이론에 의해 구속되기를 바라지 않으면서, 비-차단 항-SIRP-α 항체는 CD47 결합에 독립적인 SIRP-α의 하나 이상의 기능을 조절할 수 있는 것으로 생각된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체의, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 친화도를 감소시킨다 (예를 들어, "킥오프" 항체). 일부 구현예에서, 상기 항체의, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 koff를 증가시킨다. 일부 구현예에서 상기 항체의, (예를 들어, 본 명세서에서 기재된 바와 같은) 인간 고친화도 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은 약 1x10-31/s 초과로 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 (예를 들어, 본 명세서에서 기재된 바와 같은) 인간 고친화도 SIRP-α 폴리펩타이드의 koff를 증가시킨다. 예를 들어, 항체 및 CD47 폴리펩타이드는 인접한 또는 부분적 중첩 SIRP-α 에피토프를 가질 수 있고, 이로써 항체는, CD47에 결합될 때 SIRP-α 에 결합할 수 있지만, 항체: SIRP-α는 SIRP-α: CD47 복합체의 해리를 촉진한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는, 예를 들어, 정제된 SIRP-α 및/또는 CD47 폴리펩타이드를 사용하여 시험관내 검정에서 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)의 친화도를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 상기 항체의, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은, 예를 들어, 정제된 SIRP-α 및/또는 CD47 폴리펩타이드를 사용하여 시험관내 검정에서 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 koff를 증가시킨다. 예를 들어, 시험관내 ELISA 및 SPR 검정는 본 명세서에 기재되어 있지 않지만, 이것이, 다른 시험관내 결합 검정이 또한 사용될 수 있기 때문에 제한하는 것은 아니다. 일부 구현예에서, CD47의 IgSF 도메인에 결합된 SIRP-α D1 변이체 (예를 들어, 본 명세서에서 기재된 바와 같은 하나 이상의 자연 발생 대응물보다 더 높은 친화도로 CD47에 결합하는 비-자연 발생 고친화도 SIRP-α D1 도메인)을 포함하는 복합체에 결합된 항체는 차단, 비-차단, 및/또는 킥오프 항체를 스크리닝하는데 사용된다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 예를 들어, 세포의 표면 상에서 발현된 폴리펩타이드 사이의 생체내 결합 검정을 사용하여 제2 세포의 표면 상에서 발현된 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해, 제1 세포의 표면 상에서 발현된 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)의 친화도를 감소시킨다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체의 "킥오프" 항-SIRP-α는 CD47과 SIRP-α 사이의 계면 결합의 하나 이상의 잔기에서 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고, 즉, 킥오프 항체 및 CD47은 부분적으로 중첩 에피토프를 공유한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체의 "킥오프" 항-SIRP-α는 CD47:SIRP-α 복합체 중 CD47에 의해 또한 결합된 1개 이상의 잔기에서 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 예를 들어, "킥오프" 항-SIRP-α 항체는 CD47:SIRP-α 복합체 중 CD47에 의해 또한 결합된 2개 이상의 잔기에서 그리고 SIRP-α의 CD47 결합 에피토프의 주변에서 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합할 수 있다. SIRP-α와 예시적인 항-SIRP-α 항체 또는 CD47 사이의 결합 계면은 실시예 4에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체의, 제1 세포의 표면 상에서 발현된 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은 예를 들어, 세포의 표면 상에서 발현된 폴리펩타이드 사이의 생체내 결합 검정을 사용하여 제2 세포의 표면 상에서 발현된 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 koff를 증가시킨다. 일부 구현예에서, 생체내 검정은 SIRP-α 신호전달, 예를 들어, SIRP-α 폴리펩타이드의 활성화에 의해 매개된 하나 이상의 세포내 신호전달 사건의 하나 이상의 양태를 검정하여 제1 세포의 표면 상에서 발현된 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 제2 세포의 표면 상에서 발현된 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 평가할 수 있고, 상기 양태는 비제한적으로 하기를 포함한다: SIRP-α의 세포내 영역의 티로신 인산화, 포스파타제 (예를 들어, SHP1) 결합, 어댑터 단백질 결합 (예를 들어, SCAP2, FYB, 및/또는 GRB2), 사이토카인 생산 (예를 들어 IL-10, IL-1β, IFN 또는 TNF), 및 산화질소 생산; 및/또는 대식세포 식균작용 및 대식세포, 중성구, 수지상 세포, 호산구, 및 골수-유래된 억제 세포 (MDSCs)의 다른 활성 또는 억제성 표현형을 비제한적으로 포함하는 하나 이상의 세포간 표현형.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 2개 이상 (또는 모두 3개의) SIRP-α, SIRPβ, 및 SIRPγ에 결합하여 하나 이상의 면역 세포 기능을 조절한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합하고; 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 그리고 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하지 않는다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합하고; 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 그리고 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합하고; 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 그리고 상기 항체의 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 친화도를 감소시킨다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합하고; 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 그리고 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하지 않는다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합하고; 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 그리고 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합하고; 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 그리고 상기 항체의 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 친화도를 감소시킨다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합하고; 원숭이 (예를 들어, 사이노몰구스) SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 및 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하지 않는다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합하고; 원숭이 (예를 들어, 사이노몰구스) SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인); 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 그리고 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 또는 둘 모두에 결합하고; 원숭이 (예를 들어, 사이노몰구스) SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인); 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 그리고 상기 항체의 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에의 결합은 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인에 결합하기 위해 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 친화도를 감소시킨다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 2종 이상의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드, 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드, 및 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 및 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 중 적어도 하나에 결합하지 않고; 그리고 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다 (참조, 예를 들어, 도 3A & 3B).
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 2종 이상의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인, 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드, 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드 (예를 들어, D1 도메인), 및 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 중 적어도 하나에 결합하고; 그리고 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다 (참조, 예를 들어, 도4A & 4B).
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 2종 이상의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드, 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드, 및 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하고; 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 및 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 중 적어도 하나에 결합하지 않고; 그리고 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하지 않는다 (참조, 예를 들어, 도 5A & 5B).
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 2종 이상의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 및 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드에 결합하고; 항체는 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드에 결합하지 않고; 항체는 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 중 적어도 하나에 결합하지 않고; 그리고 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다 (참조, 예를 들어, 도 6A & 6B).
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 2종 이상의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인), 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드, 및 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인) 중 적어도 하나에 결합하고; 항체는 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드에 결합하지 않고; 그리고 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단한다 (참조, 예를 들어, 도 7A & 7B).
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 표 2에서 제시된 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 3개의 CDR 및/또는 표 2에서 제시된 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 3개의 CDR을 포함한다 (강조된 CDR을 갖는 VH 및 VL 서열은 도10A-10B & 11A-11J에서 제공된다). 예를 들어, 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 294, 139, 358, 362, 354, 380, 384, 350, 137, 374, 356, 352, 135, 348, 376, 346, 342, 344, 141, 360, 370, 382, 364, 366, 368, 372, 378, 133, 128, 396, 386, 398,402, 392, 388, 390, 394, 400, 116, 117, 118, 119, 282, 404, 406, 278, 412, 275, 414, 280, 123, 292, 288, 290, 408, 410, 286, 284, 120, 121, 130, 및 122로부터 선택된 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 3개의 CDR 및/또는 서열번호: 295, 363, 140, 359, 355, 351, 136, 349, 377, 138, 375, 357, 353, 381, 385, 345, 365, 367, 369, 347, 142, 343, 371, 379, 383, 361, 373, 134, 105, 387, 389, 395, 397, 399, 403, 391, 393, 401, 93, 94, 95, 96, 283, 405, 407, 279, 413, 276, 415, 281, 100, 293, 289, 291, 409, 411, 287, 285, 97, 98, 107, 및 99로부터 선택된 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 3개의 CDR. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 표 2에서 제시된 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 표 2에서 제시된 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다 (참조 도10A-10B & 11A-11J). 예를 들어, 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 294, 139, 358, 362, 354, 380, 384, 350, 137, 374, 356, 352, 135, 348, 376, 346, 342, 344, 141, 360, 370, 382, 364, 366, 368, 372, 378, 133, 128, 396, 386, 398,402, 392, 388, 390, 394, 400, 116, 117, 118, 119, 282, 404, 406, 278, 412, 275, 414, 280, 123, 292, 288, 290, 408, 410, 286, 284, 120, 121, 130, 및 122F로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호: 295, 363, 140, 359, 355, 351, 136, 349, 377, 138, 375, 357, 353, 381, 385, 345, 365, 367, 369, 347, 142, 343, 371, 379, 383, 361, 373, 134, 105, 387, 389, 395, 397, 399, 403, 391, 393, 401, 93, 94, 95, 96, 283, 405, 407, 279, 413, 276, 415, 281, 100, 293, 289, 291, 409, 411, 287, 285, 97, 98, 107, 및 99로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 표 2에 기재된 항체로부터의 6개의 CDR 서열을 포함한다 (참조 도10A-10B & 11A-11J). 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 본 명세서에서 기재된 바와 같은 VL 도메인 Hum1-Hum9의 VL 도메인 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간화된 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 항체이다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 표 2에 기재된 항체로부터의 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 D 또는 E 잔기를 포함하는VH 도메인 이어서 (예를 들어, N-말단에서 C-말단의 방향으로) 서열번호:116-130로부터 선택된 VH 도메인 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하나 이상의 잔기에서 인간 SIRP-α 폴리펩타이드에 결합한다. 본 개시내용의 항체에 의해 결합된 SIRP-α 폴리펩타이드의 잔기가 참조 SIRP-α 폴리펩타이드에 대해 기재될 수 있지만, 이러한 설명이 비제한적으로 단일 SIRP-α 폴리펩타이드 (즉, 참조 SIRP-α 폴리펩타이드)임을 이해해야 한다. 오히려, 참조 SIRP-α 폴리펩타이드의 특정 아미노산 잔기는 다양한 SIRP-α 폴리펩타이드에 대해 확인될 수 있는 상응하는 아미노산 위치를 확인하기 위해 기재된다. 예를 들어, 서열번호:296의 하나 이상의 아미노산 위치에 상응하는 특정 잔기는 다양한 인간 SIRP-α 폴리펩타이드, 예컨대 v1 및/또는 v2에 대해 확인될 수 있다. 서열번호:296 및 서열번호:5의 아미노산 서열이 N80 위치 (단백질 생산 및 정제에 유용한 서열번호:296의 작은 수의 C-말단 잔기 제외)에서만 상이하기 때문에, 당해 분야의 숙련가는, 서열번호:296의 아미노산 서열에 대한 아미노산 위치의 본 명세서의 언급이 서열번호:5의 아미노산 서열에서 동일한 위치에 상응할 것임을 인정할 것이다. 항체에 의해 결합된 SIRP-α 폴리펩타이드를 측정하는 기술은 당해 기술에 공지되어 있고; 예시적이고 비제한적인 설명은 실시예 4에서 제공된다.
서열번호:296
EEELQVIQPD KSVLVAAGET ATLRCTATSL IPVGPIQWFR GAGPGRELIY NQKEGHFPRV TTVSDLTKRN NMDFSIRIGA ITPADAGTYY CVKFRKGSPD DVEFKSGAGT ELSVRAKPST RHHHHHH
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 서열번호:296에 따른 I31, V33, Q52, K53, T67, R69, N70, 및 K96로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 위치에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 추가로, 서열번호:296에 따른 L30, P32, E54, T62, N71, M72, F74, 및 R95 로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 위치에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 서열번호:296에 따른 I7, P9, D10, K11, S12, A42, A108, 및 E111로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 위치에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열번호:296에 따라, K11, A42, A108, 및 E111에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열번호:296에 따른 I7, P9, D10, K11, S12, A108, 및 E111에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 추가로, 서열번호:296에 따라, L14, T26, T28, T88, Y90, S106, S113, 및 A116로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 위치에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 추가로, 서열번호:296에 따라, 인간 SIRP-α v1의 L14, T88, Y90, S106, S113, 및 A116에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 추가로, 서열번호:296에 따른, L14, T26, 및 T28에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 서열번호:296에 따은 E47, L48, P58, R59, T82, 및 A84로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 위치에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 추가로, 서열번호:296에 따른 A17, P44, G45, I49, E54, G55, H56, F57, 및 P83로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 위치에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 100nM 미만, 50nM 미만, 또는 30nM 미만의 해리 상수 (KD) 로 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하고, 그리고 항체는 100nM 미만, 50nM 미만, 또는 30nM 미만의 해리 상수 (KD) 로 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 D1 도메인 및 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 D1 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 사이노몰구스 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-γ 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 D1 도메인에 결합하고 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 100nM 미만, 50nM 미만, 또는 30nM 미만의 해리 상수 (KD) 로 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 D1 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 D1 도메인 및 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 D1 도메인에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 사이노몰구스 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-β 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 쥣과 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하기 위해 참조 항-SIRP-α 항체 와 경쟁한다. 항체가 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하기 위해 참조 항-SIRP-α 항체와 경쟁하는 지를 결정하는 기술은 당해 기술에 공지되어 있고; 예시적인 및 비제한적인 설명은 실시예 5에서 제공된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하기 위해 119, 120, 121, 122, 21, 25, 27, 66, 및 135로부터 선택된 하나 이상의 참조 항-SIRP-α 항체 와 경쟁한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하기 위해, 하기 참조 항-SIRP-α 항체 중 하나 이상과 경쟁한다: (a) 서열번호:120의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:97의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, (b) 서열번호:121의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:98의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, (c) 서열번호:130의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:107의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, (d) 서열번호:122의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:99의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, (e) 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:136의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, (f) 서열번호:137의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:138의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, (g) 서열번호:139의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:140의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, (h) 서열번호:141의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:142의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, 및 (i) 서열번호:127의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:104의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하기 위해 136 및 137 로부터 선택된 하나 이상의 참조 항-SIRP-α 항체와 경쟁한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하기 위해, 하기 참조 항-SIRP-α 항체 중 하나 이상과 경쟁한다: (a) 서열번호:133의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:134의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, 및 (b) 서열번호:128의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:105의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하기 위해 하나 이상의 참조 항-SIRP-α 항체 선택된 from 3, 213, 173, 및 209 와 경쟁한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하기 위해, 하기 참조 항-SIRP-α 항체 중 하나 이상과 경쟁한다: (a) 서열번호:242의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:243의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, (b) 서열번호:275의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:276의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, (c) 서열번호:278의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:279의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, 및 (d) 서열번호:280의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:281의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하기 위해 115, 116, 117, 118, 및 132로부터 선택된 하나 이상의 참조 항-SIRP-α 항체 와 경쟁한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하기 위해, 하기 참조 항-SIRP-α 항체 중 하나 이상과 경쟁한다: (a) 서열번호:116의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:93의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, (b) 서열번호:117의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:94의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, (c) 서열번호:118의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:95의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, (d) 서열번호:119의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:96의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, 및 (e) 서열번호:282의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:283의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하기 위해 218, 123, 149, 161, 162, 및 194로부터 선택된 하나 이상의 참조 항-SIRP-α 항체 와 경쟁한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하기 위해, 하기 참조 항-SIRP-α 항체 중 하나 이상과 경쟁한다: (a) 서열번호:284의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:285의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, (b) 서열번호:123의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:100의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, (c) 서열번호:286의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:287의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, (d) 서열번호:288의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:289의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, (e) 서열번호:290의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:291의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체, 및 (f) 서열번호:292의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:293의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하기 위해 참조 항-SIRP-α 항체 45 와 경쟁한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인 (예를 들어, D1 도메인)에 결합하기 위해 서열번호:244의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및 서열번호:245의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함하는 항체 와 경쟁한다.
본 개시내용은 다중 계열의 항-SIRP-α 항체를 제공하고, 상기 각각의 계열은 다중 항체를 포함한다. 본 명세서에서 실증된 바와 같이, 소정의 계열 내의 항체는 특정 구조적 특성 (예를 들어, 유사한 또는 동일한 HVR 또는 CDR 서열) 뿐만 아니라, 인간, 원숭이, 및/또는 마우스 SIRP-α 폴리펩타이드(들)에 대한 결합 친화도, SIRP-β 폴리펩타이드 에 대한 결합 친화도, SIRP-γ 폴리펩타이드 에 대한 결합 친화도, SIRP-α에의 결합 방식 (예를 들어, CD47 차단, CD47 비-차단, 또는 "킥오프" 결합), (예를 들어, 시험관내 검정에서) 식균작용의 유도, 수지상 세포의 활성화, 항종양 효능, SIRP-α 결합 에피토프 잔기(들) 또는 "빈(bin)" (예를 들어, 비닝 검정에 의해 결정), 및 기타 동종의 것 (참조, 예를 들어, 표 P-T)를 피제한적으로 포함하는 하나 이상의 기능적 특성을 공유할 수 있다. 이들 공유된 특성 때문에, 동일한 계열에 속하는 항체의 HVR 및/또는 VH 또는 VL 서열이 교환 또는 혼합될 수 있어서, 항-SIRP-α 항체가 본 명세서에 기재된 1 초과 개의 특정 항-SIRP-α 항체로부터 유래된 HVR 및/또는 VH 또는 VL을 포함할 수 있음이 고려된다. 본 명세서에서 더 상세히 논의된 바와 같이, 항체 가변 도메인의 HVR 또는 CDR 서열을 결절하는 다양한 방법은 당해 기술에 공지되어 있고 본 명세서에서 상호교환적으로 사용될 수 있고, 상기 방법은 비제한적으로 카밧, 초티아, 및 IMGT 정의, 뿐만 아니라 이들의 조합을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:120, 246, 258, 327, 121, 130, 122, 127, 247, 259, 335, 및 328의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호:120, 246, 258, 327, 121, 130, 122, 127, 247, 259, 335, 및 328의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호:120, 246, 258, 327, 121, 130, 122, 127, 247, 259, 335, 및 328의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호:97, 98, 107, 99, 104, 및 312의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 97, 98, 107, 99, 104, 및 312의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및/또는 서열번호: 97, 98, 107, 99, 104, 및 312의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:120, 246, 258, 327, 121, 130, 122, 127, 247, 259, 335, 및 328의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 120, 246, 258, 327, 121, 130, 122, 127, 247, 259, 335, 및 328의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 및 서열번호: 120, 246, 258, 327, 121, 130, 122, 127, 247, 259, 335, 및 328의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 97, 98, 107, 99,104, 및 312의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 97, 98, 107, 99, 104, 및 312의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 97, 98, 107, 99, 104, 및 312의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:120, 246, 258, 327, 121, 130, 122, 127, 247, 259, 335, 및 328의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 120, 246, 258, 327, 121, 130, 122, 127, 247, 259, 335, 및 328의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 120, 246, 258, 327, 121, 130, 122, 127, 247, 259, 335, 및 328의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 97, 98, 107, 99, 104, 및 312의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 97, 98, 107, 99, 104, 및 312의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 97, 98, 107, 99, 104, 및 312의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:135, 137, 265, 266, 331, 139, 267, 332, 141, 263, 264, 268, 330, 294, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382, 및 384의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 135, 137, 265, 266, 331, 139, 267, 332, 141, 263, 264, 268, 330, 294, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382, 및 384의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 135, 137, 265, 266, 331, 139, 267, 332, 141, 263, 264, 268, 330, 294, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382, 및 384의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호:136, 138, 140, 142, 252, 254, 262, 416, 295, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383, 및 385의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 136, 138, 140, 142, 252, 254, 262, 416, 295, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383, 및 385의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및/또는 서열번호: 136, 138, 140, 142, 252, 254, 262, 416, 295, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383, 및 385의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 135, 137, 265, 266, 331, 139, 267, 332, 141, 263, 264, 268, 330, 294, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382, 및 384의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 135, 137, 265, 266, 331, 139, 267, 332, 141, 263, 264, 268, 330, 294, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382, 및 384의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 및 서열번호: 135, 137, 265, 266, 331, 139, 267, 332, 141, 263, 264, 268, 330, 294, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382, 및 384의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 136, 138, 140, 142, 252, 254, 262, 416, 295, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383, 및 385의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 136, 138, 140, 142, 252, 254, 262, 416, 295, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383, 및 385의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 136, 138, 140, 142, 252, 254, 262, 416, 295, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383, 및 385의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 135, 137, 265, 266, 331, 139, 267, 332, 141, 263, 264, 268, 330, 294, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382, 및 384의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 135, 137, 265, 266, 331, 139, 267, 332, 141, 263, 264, 268, 330, 294, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382, 및 384의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 135, 137, 265, 266, 331, 139, 267, 332, 141, 263, 264, 268, 330, 294, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382, 및 384의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 136, 138, 140, 142, 252, 254, 262, 416, 295, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383, 및 385의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 136, 138, 140, 142, 252, 254, 262, 416, 295, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383, 및 385의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 136, 138, 140, 142, 252, 254, 262, 416, 295, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383, 및 385의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:133, 249, 260, 329, 128, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400, 및 402의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 133, 249, 260, 329, 128, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400, 및 402의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 133, 249, 260, 329, 128, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400, 및 402의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호:134, 251, 105, 250, 417, 418, 419, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401, 및 403의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 134, 251, 105, 250, 417, 418, 419, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401, 및 403의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및/또는 서열번호: 134, 251, 105, 250, 417, 418, 419, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401, 및 403의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 133, 249, 260, 329, 128, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400, 및 402의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 133, 249, 260, 329, 128, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400, 및 402의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 및 서열번호: 133, 249, 260, 329, 128, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400, 및 402의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 134, 251, 105, 250, 417, 418, 419, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401, 및 403의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 134, 251, 105, 250, 417, 418, 419, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401, 및 403의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 134, 251, 105, 250, 417, 418, 419, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401, 및 403의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 133, 249, 260, 329, 128, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400, 및 402의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 133, 249, 260, 329, 128, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400, 및 402의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 133, 249, 260, 329, 128, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400, 및 402의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 134, 251, 105, 250, 417, 418, 419, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401, 및 403의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 134, 251, 105, 250, 417, 418, 419, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401, 및 403의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 134, 251, 105, 250, 417, 418, 419, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401, 및 403의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다:의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1 of 서열번호:116, 117, 118, 119, 282, 404, 및 406; 서열번호: 116, 117, 118, 119, 282, 404, 및 406의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 116, 117, 118, 119, 282, 404, 및 406의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호:93, 94, 95, 96, 283, 405, 및 407의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 93, 94, 95, 96, 283, 405, 및 407의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및/또는 서열번호: 93, 94, 95, 96, 283, 405, 및 407의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 116, 117, 118, 119, 282, 404, 및 406의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 116, 117, 118, 119, 282, 404, 및 406의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 및 서열번호: 116, 117, 118, 119, 282, 404, 및 406의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 93, 94, 95, 96, 283, 405, 및 407의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 93, 94, 95, 96, 283, 405, 및 407의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 93, 94, 95, 96, 283, 405, 및 407의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 116, 117, 118, 119, 282, 404, 및 406의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 116, 117, 118, 119, 282, 404, 및 406의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 116, 117, 118, 119, 282, 404, 및 406의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 93, 94, 95, 96, 283, 405, 및 407의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 93, 94, 95, 96, 283, 405, 및 407의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 93, 94, 95, 96, 283, 405, 및 407의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 242에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 242에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 242에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 243에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 243에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및/또는 서열번호: 243에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 242에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 242에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 및 서열번호: 242에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 243에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 243에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 243에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 242에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 242에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 242에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 243에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 243에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 243에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 278 및 412의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 278 및 412의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 278 및 412의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 279 및 413의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 279 및 413의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및/또는 서열번호: 279 및 413의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 278 및 412의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 278 및 412의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 및 서열번호: 278 및 412의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 279 및 413의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 279 및 413의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 279 및 413의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 278 및 412의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 278 및 412의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 278 및 412의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 279 및 413의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 279 및 413의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 279 및 413의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 275 및 414의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 275 및 414의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 275 및 414의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 276 및 415의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 276 및 415의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및/또는 서열번호: 276 및 415의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 275 및 414의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 275 및 414의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 및 서열번호: 275 및 414의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 276 및 415의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 276 및 415의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 276 및 415의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 275 및 414의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 275 및 414의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 275 및 414의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 276 및 415의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 276 및 415의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 276 및 415의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 280에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 280에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 280에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 281에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 281에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및/또는 서열번호: 281에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 280에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 280에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 및 서열번호: 280에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 281에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 281에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 281에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 280에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 280에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 280에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 281에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 281에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 281에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 123 및 292의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 123 및 292의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 123 및 292의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 100 및 293의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 100 및 293의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및/또는 서열번호: 100 및 293의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 123 및 292의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 123 및 292의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 및 서열번호: 123 및 292의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 100 및 293의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 100 및 293의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 100 및 293의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 123 및 292의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 123 및 292의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 123 및 292의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 100 및 293의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 100 및 293의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 100 및 293의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 288, 290, 408, 및 410의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 288, 290, 408, 및 410의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 288, 290, 408, 및 410의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 289, 291, 409, 및 411의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 289, 291, 409, 및 411의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및/또는 서열번호: 289, 291, 409, 및 411의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 288, 290, 408, 및 410의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 288, 290, 408, 및 410의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 및 서열번호: 288, 290, 408, 및 410의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 289, 291, 409, 및 411의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 289, 291, 409, 및 411의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 289, 291, 409, 및 411의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 288, 290, 408, 및 410의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 288, 290, 408, 및 410의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 288, 290, 408, 및 410의 아미노산 서열로부터 선택된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 289, 291, 409, 및 411의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 289, 291, 409, 및 411의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 289, 291, 409, 및 411의 아미노산 서열로부터 선택된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 286에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 286에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 286에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 287에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 287에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및/또는 서열번호: 287에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 286에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 286에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 및 서열번호: 286에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 287에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 287에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 287에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 286에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 286에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 286에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 287에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 287에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 287에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 284에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 284에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 284에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 285에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 285에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및/또는 서열번호: 285에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 284에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 284에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 및 서열번호: 284에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 285에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 285에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 285에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 284에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 284에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 284에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 285에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 285에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 285에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:244에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 244에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호: 244에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호: 245에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 245에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및/또는 서열번호: 245에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 244에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호: 244에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 및 서열번호: 244에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:245에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호:245에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호:245에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:244에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H1; 서열번호:244에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H2; 서열번호:244에서 제시된 VH 도메인 서열로부터의 HVR-H3; 서열번호:245에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L1; 서열번호: 245에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L2; 및 서열번호: 245에서 제시된 VL 도메인 서열로부터의 HVR-L3.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:242의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:243의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:242의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:243의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:244의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:245의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:244의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:245의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:275의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:276의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:275의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:276의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:278의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:279의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:278의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:279의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:280의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:281의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:280의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:281의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:282의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:283의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:282의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:283의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:284의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:285의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:284의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:285의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:286의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:287의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:286의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:287의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:288의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:289의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:288의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:289의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:290의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:291의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:290의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:291의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:292의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:293의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:292의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:293의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:278의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:279의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:278의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:279의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:280의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:281의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:280의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:281의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:275의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:276의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:275의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:276의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:414의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:415의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:414의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:415의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:123의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:100의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:123의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:100의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:292의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:293의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:292의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:293의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:288의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:289의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:288의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:289의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:290의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:291의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:290의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:291의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:286의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:287의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:286의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:287의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:284의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:285, 333, 또는 334의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:284의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호: 285, 333, 또는 334의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인: (i) NFAMT (서열번호:175), NFAVT (서열번호:204), 또는 NFALT (서열번호:305)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) TIGSGDTYYADSVKG (서열번호:144)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) DSTVSWSGDFFDY (서열번호:145)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열; 및/또는 (b) 하기를 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인: (i) RASQNVKNDLA (서열번호:146)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (ii) AARIRET (서열번호:147)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (iii) QQYYDWPPFT (서열번호:148)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호:120, 246, 258, 또는 327의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고/거나 VL 도메인은 서열번호:97 또는 312의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호:246의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:97의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:258의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:97의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:120의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:97의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:327의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:97의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:246의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:312의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:258의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:312의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:120의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:312의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 VH 도메인은 서열번호:327의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:312의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인: (i) IYAMS (서열번호:269), IYAVS (서열번호:213), 또는 IYALS (서열번호:306)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) TIGADDTYYADSVKG (서열번호:150)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) DSTVGWSGDFFDY (서열번호:151)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열; 및/또는 (b) 하기를 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인: (i) RASQNVRSDIA (서열번호:152)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (ii) AASSRDT (서열번호:153)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (iii) QQYYDWPPFT (서열번호:148)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호:341, 127, 247, 259, 또는 328의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고/거나 VL 도메인은 서열번호:104 또는 248의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호:127의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:104의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:341의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:104의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:247의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:104의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:259의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:104의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:328의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:104의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:127의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:248의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:341의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:248의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:247의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:248의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:259의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:248의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 VH 도메인은 서열번호:328 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:248의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인: (i) X1X2DX3N (여기서, X1는 S 또는 T이고; X2는 Y 또는 S이고; 그리고 X3는 M, L, 또는 V임) (서열번호:307)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열; (ii) LISGSGEIX1YYADSVKG (여기서, X1는 I 또는 T임) (서열번호:308)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열; 및 (iii) EX1X2X3YRFFDX4 (여기서, X1는 N 또는 D이고; X2는 N 또는 D이고; X3는 R 또는 M이고; 그리고 X4는 D 또는 Y임) (서열번호:309)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열; 및/또는 (b) 하기를 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인: (i) RAX1QSVYX2YLA (여기서, X1는 S 또는 D이고; 그리고 X2는 T 또는 S임) (서열번호:310)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열; (ii) X1AX2X3RAX4 (여기서, X1는 G, A, 또는 D이고; X2는 S 또는 R이고; X3는 S, N, 또는 T이고; 그리고 X4는 T 또는 A임) (서열번호:311)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열; 및 (iii) QQYYDRPPLT (서열번호:160)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인: (i) SYDMN (서열번호:270), SYDVN (서열번호:221), 또는 SYDLN (서열번호:313)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) LISGSGEIIYYADSVKG (서열번호:156)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ENNRYRFFDD (서열번호:157)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열; 및/또는 (b) 하기를 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인: (i) RASQSVYTYLA (서열번호:158)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (ii) GASSRAT (서열번호:159)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (iii) QQYYDRPPLT (서열번호:160)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호:133, 260, 329, 또는 249의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고/거나; VL 도메인은 서열번호:134, 250, 251,417, 418, 또는 419의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호:133의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:134의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:260의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:134의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:329의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:134의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:249의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:134의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:133의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:417의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:260의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:417의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:329의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:417의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:249의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:417의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:133의 아미노산 서열을 포함한다, 그리고 VL 도메인은 서열번호:418의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:260의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:418의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:329의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:418의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:249의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:418의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:133, 및 VL 도메인은 서열번호:419의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:260, 및 VL 도메인은 서열번호:419의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:329의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:419의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:249의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:419의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:133의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:250의 아미노산 서열을 포함하고의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:260의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:250의 아미노산 서열을 포함하고의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:329의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:250의 아미노산 서열을 포함하고의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:133의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:251의 아미노산 서열을 포함하고의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:260의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:251의 아미노산 서열을 포함하고의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:329의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:251의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:249의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:134의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:249의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:250의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 VH 도메인은 서열번호:249의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:251의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인: (i) X1X2AX3S (여기서, X1는 S 또는 T이고; X2는 N, Y, H, 또는 D이고; 그리고 X3는 M, L, 또는 V임) (서열번호:297)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열; (ii) GISX1X2X3X4X5X6YYX7X8SX9KG (여기서, X1는 A 또는 S이고; X2는 G, S, 또는 부재하고; X3는 S, D 또는 G이고; X4는 G 또는 S이고; X5는 D, S, 또는 G이고; X6는 T 또는 A이고; X7는 P, G, V, I, A, 또는 S이고; X8는 A, D, 또는 G이고; 그리고 X9는 V 또는 M임) (서열번호:298)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열; 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열; 및/또는 (b) 하기를 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인: (i) SGGX1X2 X3SX4YYX5 (여기서, X1는 D, G, S, I, 또는 부재하고; X2는 S, W, G, Y, D이거나, 또는 부재하고; X3는 S, Y, T, 또는 D이고; X4는 H, T, S, 또는 Y이고; 그리고 X5는 G 또는 A임) (서열번호:299)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열; (ii) SDX1X2RPX3 (여기서, X1는 D 또는 N이고; X2는 E, K, 또는 Q이고; 그리고 X3는 S 또는 P임) (서열번호:300)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열; 및 (iii) X1X2YDX3X4X5YX6NX7 (여기서, X1는 G 또는 A이고; X2는 G 또는 A이고; X3는 G, Y, Q, S, 또는 A이고; X4는 S, R, 또는 T이고; X5는 T 또는 S이고; X6는 A, I, V, L, 또는 T이고; 그리고 X7는 T, A, D, 또는 P임) (서열번호:301)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 하기를 포함하는 중쇄 가변 (VH) 도메인: (i) SX1AX2S (여기서, X1는 N 또는 Y이고; 그리고 X2는 M, L, 또는 V임) (서열번호:302)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열; (ii) 서열 of GISX1GX2X3DTYYX4X5SVKG (여기서, X1는 A 또는 S이고; X2는 G 또는 부재하고; X3는 S 또는 G이고; X4는 P, G, 또는 V; 및 X5는 A 또는 D임) (서열번호:303)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2; 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열; 및/또는 (b) 하기를 포함하는 경쇄 가변 (VL) 도메인: (i) SGGX1YSSYYYA (여기서, X1는 S 또는 A임) (서열번호:304)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열; (ii) SDDKRPS (서열번호:336)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열; 및 (iii) GGYDQSSYTNP (서열번호:172)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 포함한다: (i) SNAMS (서열번호:194), SNAVS (서열번호:271), 또는 SNALS (서열번호:318)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) GISAGGSDTYYPASVKG (서열번호:195)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호: 135, 263, 264, 또는 330의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 포함한다: (i) SNAMS (서열번호:194), SNAVS (서열번호:271), 또는 SNALS (서열번호:318)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) GISSGSDTYYGDSVKG (서열번호:197)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호: 137, 265, 266, 또는 331의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 하기를 포함한다: (i) SYAMS (서열번호:200), SYAVS (서열번호:272), 또는 SYALS (서열번호:319)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) GISSGGDTYYVDSVKG (서열번호:201)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호: 139, 267, 268, 또는 332의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하나 이상의 인간 IGLV3 프레임워크 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VL 도메인은 4개의 인간 IGLV3 프레임워크 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열 FW1―HVR-L1―FW2―HVR-L2―FW3―HVR-L3―FW4 (N-말단에서 C-말단)을 포함하되, FW1은 아미노산 서열 SYELTQPPSVSVSPGQTARITC (서열번호:314)을 포함하고, FW2는 아미노산 서열 WYQQKPGQAPVTLIY (서열번호:315)을 포함하고, FW3은 아미노산 서열 NIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYC (서열번호:316)을 포함하고, 그리고 FW4은 아미노산 서열 FGGGTKLTVL (서열번호:317)을 포함한다. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 포함한다: (i) SGGSYSSYYYA (서열번호:170)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (ii) SDDKRPS (서열번호:336)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (iii) GGYDQSSYTNP (서열번호:172)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열번호:254의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열번호:416의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VL 도메인은 하기를 포함한다: (i) SGGAYSSYYYA (서열번호:261)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (ii) SDDKRPS (서열번호:336)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (iii) GGYDQSSYTNP (서열번호:172)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열. 일부 구현예에서, VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99%, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 도메인은 서열번호:263의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:264의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:330의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:137의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:139의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:265의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:266의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:331의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:267의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:268의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:332의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:263의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:264의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:330의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:265의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:266의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:331의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:267의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:268의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:332의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:263의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:254의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:264, 및 VL 도메인은 서열번호: 254의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:330, 및 VL 도메인은 서열번호: 254의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:265의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호: 254의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:266, 및 VL 도메인은 서열번호: 254의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:331의 아미노산 서열을 포함하고, 및 VL 도메인은 서열번호: 254의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:267의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호: 254의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:268의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호: 254의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:332, 및 VL 도메인은 서열번호: 254의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:263, 및 VL 도메인은 서열번호: 416의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:264의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호: 416의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:330의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호: 416의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:265의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호: 416의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:266의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호: 416의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:331의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호: 416의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:267의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호: 416의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:268의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호: 416의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:332의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호: 416의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:137의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:254의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:416의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:137의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:254의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:137의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:416의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:139의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:254의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 VH 도메인은 서열번호:139의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:416의 아미노산 서열을 포함하고; 또는 VH 도메인은 서열번호:139의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 서열번호:120의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:97의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 서열번호:127의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:104의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 서열번호:133의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:134의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:136의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 서열번호:137의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:138의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 서열번호:139의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:140의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 서열번호:141의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:142의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 하기를 포함한다: (a) GFSFSX1X2AMX3 (여기서, X1는 N 또는 I이고; X2는 F 또는 Y이고; 그리고 X3는 T 또는 S임) (서열번호:185)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열; (b) TIGX4X5DTYYADSVKG (여기서, X4는 S 또는 A이고, 그리고 X5는 G 또는 D임) (서열번호:186)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열; (c) DSTVX6WSGDFFDY (여기서, X6는 S 또는 G임) (서열번호:187)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열; (d) RASQNVX7X8DX9A (여기서, X7는 K 또는 R이고; X8는 N 또는 S이고; 그리고 X9는 L 또는 I임) (서열번호:188)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열; (e) AAX10X11RX12T (여기서 X10는 R 또는 S이고; X11는 I 또는 S이고; 그리고 X12는 E 또는 D임) (서열번호:189)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열; 및 (f) QQYYDWPPFT (서열번호:148)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:143-148로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호:143-145로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:146-148로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:148-153로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호:149-151로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:152, 153, 및 148로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:155-160로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호:155-157로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:158-160로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:161-166로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호:161-163로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:164-166로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:161-166로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호:161-163로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 표 2에서 나타낸 가변 도메인의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:161, 163, 168, 및 170-172로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호: 161, 168, 및 163로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:170-172로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 161, 163, 168, 및 170-172로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호: 161, 168, 및 163로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 표 2에서 나타낸 가변 도메인의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:163, 173, 174, 및 176-178 로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호:163, 173, 및 174로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:176-178로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 162, 163, 179, 및 182-184로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호: 162, 163, 및 179로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:182-184로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호: 162, 163, 179, 및 182-184 로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호: 162, 163, 및 179로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 표 2에서 나타낸 가변 도메인의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:120 및 97의 가변 도메인 서열로부터의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호:120의 중쇄 가변 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:97의 경쇄 가변 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:127 및 104의 가변 도메인 서열로부터의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호:127의 중쇄 가변 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:104의 경쇄 가변 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열). 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:97, 104, 120, 및 127의 가변 도메인 서열로부터의 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR 서열 (예를 들어, 서열번호:120 및 127의 중쇄 가변 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR 서열 및/또는 서열번호:97 및 104의 경쇄 가변 도메인으로부터의 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR 서열).
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:143의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:144의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:145의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:146의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:147의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:148의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:149의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:150의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:151의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:152의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:153의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:148의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:143 또는 149의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:144 또는 150의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:145 또는 151의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:146 또는 152의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:147 또는 153의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:148의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:155의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:156의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:157의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:159의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:160의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:161의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:164의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:165의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:166의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:161의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:168의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:170의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:171의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:172의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:173의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:174의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:176의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:177의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:178의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:179의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:182의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:183의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:184의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:164의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:165의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:166의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:137의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:170의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:171의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:172의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:139의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:176의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:177의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:178의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:141의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:182의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:183의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:184의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:161의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:164, 170, 176, 또는 182의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:165, 171, 177, 또는 183의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:166, 172, 178, 또는 184의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:161의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:168의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:164, 170, 176, 또는 182의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:165, 171, 177, 또는 183의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:166, 172, 178, 또는 184의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:173의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:174의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:164, 170, 176, 또는 182의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:165, 171, 177, 또는 183의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:166, 172, 178, 또는 184의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:179의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:164, 170, 176, 또는 182의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:165, 171, 177, 또는 183의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:166, 172, 178, 또는 184의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:164, 170, 176, 또는 182의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; 서열번호:165, 171, 177, 또는 183의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 서열번호:166, 172, 178, 또는 184의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:137의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:164, 170, 176, 또는 182의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; 서열번호:165, 171, 177, 또는 183의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 서열번호:166, 172, 178, 또는 184의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:139의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:164, 170, 176, 또는 182의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; 서열번호:165, 171, 177, 또는 183의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 서열번호:166, 172, 178, 또는 184의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:141의 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인 및/또는 서열번호:164, 170, 176, 또는 182의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1; 서열번호:165, 171, 177, 또는 183의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2; 및 서열번호:166, 172, 178, 또는 184의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:242로부터의 1, 2, 또는 3개의 HVR 서열을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:243으로부터의 1, 2, 또는 3개의 HVR 서열을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호:244로부터의 1, 2, 또는 3개의 HVR 서열을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:245로부터의 1, 2, 또는 3개의 HVR 서열을 포함하는 VL 도메인.
상기에 기재된 바와 같은, 초가변성 영역 (HVR) 또는 상보성 결정 영역 (CDR)을 윤곽하는 다양한 기술은 당해 기술에 공지되어 있고 본 명세서에 기재된 가변 도메인 서열에 적용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 초티아, 카밧, IMGT, 또는 이들의 조합에 의해 정의된 HVR (예를 들어, 하나의 윤곽에 의해 정의된 하나 이상의 HVR 및 상이한 윤곽에 의해 정의된 하나 이상의 HVR)을 포함한다. 3개의 공지된 윤곽 (초티아, 카밧, 및 IMGT)를 사용하여 기술된 본 개시내용의 항체의 HVR 서열은 표 5에서 제공된다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 달리 구체화되지 않는 한, HVR 잔기의 넘버링은 카밧 넘버링에 의해 정의된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 표 5에서 열거된 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 HVR (예를 들어, 표 5에서 열거된 1, 2, 또는 3개의 경쇄 HVR을 포함하는 VL 도메인 및/또는 표 5에서 열거된 1, 2, 또는 3개의 중쇄 HVR을 포함하는 VH 도메인)을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 서열번호:191의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호: 192의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호: 193의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 서열번호:191의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호: 196의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호: 193의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 서열번호: 198의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호: 199의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호: 193의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:164의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:165의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호: 166의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인 및/또는 서열번호:191 또는 198의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호: 192, 196, 또는 199의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호: 193의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:232의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:233의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:234의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인 및/또는 서열번호:230의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:231의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:232의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:239의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:240의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:241의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인 및/또는 서열번호:219의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:238의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:237의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 서열번호: 194의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호: 195의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호: 193의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 서열번호: 194의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호: 197의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호: 193의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 서열번호: 200의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호: 201의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호: 193의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:164의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:165의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호: 166의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인 및/또는 서열번호: 194, 198, 또는 200의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호: 195, 197, 또는 201의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호: 193의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:232의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:233의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:234의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인 및/또는 서열번호:227의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:228의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:230의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: 서열번호:239의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:240의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:241의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인 및/또는 서열번호:235의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:236의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:237의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 서열번호:161의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:162의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 서열번호:161의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:168의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 서열번호:173의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:174의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:163의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호: 202의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호: 203의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:145의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:146의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:147의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:148의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호: 211의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호: 212의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:151의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:152의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:153의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:148의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호: 219의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호: 220의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:157의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:159의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:160의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호: 204의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:144의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:145의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:146의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:147의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:148의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호: 213의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:150의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:151의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:152의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:153의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:148의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호: 221의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호:156의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호:157의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호:158의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호:159의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:160의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호: 205의의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호: 206의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호: 207의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호: 208의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호: 209의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호: 210의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호: 214의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호: 215의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호: 216의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호: 217의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호: 218의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:148의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 항체는 하기를 포함한다: (a) 서열번호: 222의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1, 서열번호: 223의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2, 및 서열번호: 224의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3을 포함하는 VH 도메인; 및/또는 (b) 서열번호: 225의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1, 서열번호: 226의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2, 및 서열번호:160의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하는 VL 도메인.
상기 구현예 중 임의의 것의 일부 구현예에서, 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는 대식세포에 의해 식균작용을 향상시키고, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드를 발현시키는 수지상 세포의 활성화를 향상시키고, CD47를 발현시키는 종양의 생체내 성장 또는 종양 세포(들)을 억제하고/거나 CD47-발현 세포와 T 세포 사이의 상호작용을 예방하지 않는다. 식균작용, 수지상 세포 활성화, 종양 성장 억제, 및 CD47-발현 세포와 T 세포 사이의 상호작용을 측정하기 위핸 예시적인 검정 (예를 들어, 접착 검정)는 본 명세서에 기재되어 있고 당업계에서 공지되어 있다.
항체 생산 및 다른 항체 특성
본 발명의 항체는 당 업계에 공지된 임의의 수단에 의해 생산될 수 있다. 항체 생산을 위한 예시적인 기술은 하기에 기재되어 있으며; 그러나, 이들 예시적인 기술은 단지 설명하기 위한 목적으로 제공되며, 제한하고자 하는 의도는 아니다. 또한, 본 명세서에 기재된 항체와 함께 사용하기 위해 고려되는 예시적인 항체 특성이 추가로 기술된다.
일부 구현예에서, 항원에 "결합"하는 항체는 25℃에서 1μM 이하의 항원에 대한 해리 상수(KD)를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 25℃에서 1μM 이하, 25℃에서 500nM 이하, 25℃에서 400nM 이하, 25℃에서 300nM 이하, 25℃에서 250nM 이하, 25℃에서 200nM 이하, 25℃에서 200nM 이하, 25℃에서 100nM 이하, 또는 25℃에서 50nM 이하인, 인간 v1 및/또는 v2 SIRP-α 폴리펩타이드에 대한 해리 상수(KD)를 갖는다. 일부 구현예에서, 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 및 하나 이상의 비-인간 SIRP-α 폴리펩타이드와 결합하는 항체는 비-인간 SIRP-α 폴리펩타이드보다 더 높은 친화도(예를 들어, 10-배 또는 100-배 이상)로 인간 SIRP-α 폴리펩타이드와 결합하며, 그럼에도 여전히 두 폴리펩타이드 모두에 "결합"하는 것으로 여겨진다. 일부 구현예에 있어서, 비-인간 SIRP-α 폴리펩타이드 및 하나 이상의 인간 SIRP-α 폴리펩타이드와 결합하는 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드보다 더 높은 친화도(예를 들어, 10-배 또는 100-배 이상)로 비-인간 SIRP-α 폴리펩타이드와 결합하며, 그럼에도 여전히 두 폴리펩타이드 모두에 "결합"하는 것으로 여겨진다. 결합 친화도를 측정하기 위한 검정은 당해 기술에 공지되어 있으며, 비제한적으로 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같은 표면 플라즈몬 공명(SPR); 예를 들어 항체 및 그의 항원의 Fab 버전을 사용하는 방사성 표지 항원 결합 검정(RIA); 등을 포함한다. 다른 예시적인 결합 검정이 본 명세서에 기재되어 있다.
항원을 제조하기 위해, 항원은 천연 공급원으로부터 정제되거나 그렇지 않으면 수득될 수 있거나, 재조합 기술을 사용하여 발현될 수 있다. 일부 구현예에서, 항원은 가용성 단백질로서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 항원은 또 다른 폴리펩타이드 또는 다른 모이어티와 접합되어, 예를 들어 그의 면역원성을 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 항원은 Fc 영역과 접합될 수 있다. 일부 구현예에서, 그의 세포 표면 상에 항원을 발현하는 세포가 항원으로서 사용될 수 있다.
다클론성 항체는 항원 및 아쥬반트의 다중 피하(sc) 또는 복강내(ip) 주사에 의해 동물에서 상승될 수 있다. 예를 들어, 닭 면역화에 대한 설명이 본 명세서에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 항원은 이중작용성 또는 유도화제를 사용하여 면역원성 단백질, 예를 들어, 키홀 삿갓조개헤모시아닌, 혈청 알부민, 소과 티로글로불린, 또는 대두 트립신 억제제와 접합된다. 닭의 면역화를 위한 예시적인 방법이 본 명세서에서 제공된다. 포유동물와 같은 다양한 다른 유기체에 적합한, 관련된 방법은 당해 기술에 공지되어 있다.
상기에 기재된 바와 같이, 단클론성 항체는 다양한 방법에 의해 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 단클론성 항체는 Kohler 등, Nature, 256:495 (1975)에 최초로 기술되고, Hongo 등, Hybridoma, 14 (3): 253-260 (1995); Harlow 등, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); 및 Hammerling 등, in: 단클론성 항체 및 T-세포 하이브리도마 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)에 추가로 기재된 하이브리도마 방법을 사용하여 제조된다. 인간 하이브리도마 기술(Trioma 기술)은 Vollmers 및 Brandlein, 조직학 및 조직병리, 20(3):927-937 (2005) 및 Vollmers 및 Brandlein, 실험적 및 임상 약리학에 있어서의 방법 및 발견, 27(3):185-91 (2005)에 기재되어 있다. 하이브리도마 세포가 성장되는 배양 배지는 예를 들어, 시험관내 결합 검정, 면역침강, ELISA, RIA 등의 관심 항체의 존재에 대해 선별될 수 있으며; 및 결합 친화도는 예를 들어, Scatchard 분석에 의해 결정될 수 있다. 원하는 결합 특성을 갖는 항체를 생산하는 하이브리도마는 공지된 배양 기술을 사용하여 서브클로닝되고 성장될 수 있으며, 동물 등에서 복수 종양으로서 생체내에서 성장될 수 있다.
일부 구현예에서, 단클론성 항체는 파아지 디스플레이 라이브러리와 같은 라이브러리 방법을 사용하여 제조된다. 예를 들어, Hoogenboom 등 in 분자 생물학에 있어서의 방법 178:1-37 (O'Brien 등, ed., 인간 Press, Totowa, NJ, 2001)을 참조한다. 일부 구현예에서, VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는 중합효소 연쇄 반응(PCR)에 의해 클로닝되고 파아지 라이브러리에서 무작위로 재조합되며, 예를 들어, Winter 등, Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)에 기재된 바와 같이 항원-결합 파아지에 대해 선별된다. 파아지는 전형적으로 항체 단편을 단일-사슬 Fv(scFv) 단편 또는 Fab 단편으로 표시한다. 대안적으로, 순진 레퍼토리는 Griffiths 등, EMBO J, 12: 725-734(1993)에 기재된 바와 같이 임의의 면역화없이 광범위한 비-자체 항원 및 자기-항원에 대한 항체의 단일 공급원을 제공하기 위해 클로닝될 수 있다(예를 들어, 인간으로부터). 마지막으로, 순진 라이브러리는 Hoogenboom 및 Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)에 기재된 바와 같이, 줄기 세포에서 재배열되지 않은 V-유전자 세그먼트를 클로닝하고, 및 고도로 가변성인 CDR3 영역을 인코딩하고 시험관내에서 재배열을 수행하는 랜덤 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용하여 합성으로 제조될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 닭 항체이다. 닭 항체는 당 업계에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산될 수 있으며; 예를 들어, 미국 특허 제6,143,559호; 제8,592,644호; 및 제9,380,769호를 참고한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 키메라성 항체이다. 예를 들어, 미국 특허 제4,816,567호 및 Morrison 등 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)를 참고한다. 일부 구현예에서, 키메라성 항체는 비-인간 가변 영역(예를 들어, 닭, 마우스, 랫트, 햄스터, 토끼 또는 비-인간 영장류, 예컨대 원숭이로부터 유래된 가변 영역) 및 인간 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라성 항체는 부류 또는 서브클래스가 모 항체의 부류 또는 서브클래스에서 변경된 "부류 스위칭된" 항체이다. 키메라성 항체는 그의 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, 키메라성 항체는 인간화된 항체이다. 비-인간 항체는 친계 비-인간 항체의 특이성 및 친화성을 유지하면서 인간에 대한 면역원성을 감소시키기 위해 인간화될 수 있다. 일반적으로, 인간화된 항체는 HVR, 예를 들어, CDR(또는 그의 일부)이 비-인간 항체(예를 들어, 닭 항체)로부터 유래되고 FRs(또는 그의 일부)이 인간 항체 서열로부터 유래된 하나 이상의 가변 도메인을 포함한다. 인간화된 항체는 또한, 선택적으로 인간 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 일부 구현예에서, 인간화된 항체의 일부 FR 잔기는, 예를 들어, 항체 특이성 또는 친화성을 회복시키거나 개선시키기 위해, 비-인간 항체(예를 들어, HVR 잔기가 유래된 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환된다. 인간화된 항체 및 이들의 제조 방법은 예를 들어, Almagro 및 Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)에 기재되어 있다. 닭 항체를 인간화하는 방법은 또한 예를 들어 WO2005014653에 기재되어 있다.
인간화에 유용한 인간 프레임워크 영역은 비제한적으로 하기를 포함한다: "최적화" 방법을 사용하여 선택된 프레임워크 영역; 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정 하위그룹의 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래된 프레임워크 영역; 인간 체세포적으로 돌연변이된 프레임워크 영역 또는 인간 생식계열 프레임워크 영역; 및 스크리닝 FR 라이브러리로부터 유래된 프레임워크 영역. 예를 들어, Sims 등 J. Immunol. 151:2296 (1993)　; Carter 등 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992)　; Presta 등 J. Immunol., 151:2623 (1993); Almagro 및 Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008); 및 Baca 등, J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997)를 참고한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 인간 항체이다. 인간 항체는 당 업계에 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산될 수 있다. 일부 구현예에서, 인간 항체는 비-인간 동물, 예컨대 유전자적으로 조작된 닭(예를 들어, 미국 특허 제8,592,644호 및 제9,380,769호 참고) 및/또는 본 명세서에 기재된 마우스에 의해 생산된다. 인간 항체는 일반적으로 Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008)에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 예를 들어, 본 명세서에 기재된 방법을 사용하여 닭에 의해 생성되거나 닭으로부터 유래된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 비제한적으로 Fab, F(ab')2, Fab'-SH, Fv 또는 scFv 단편, 또는 단일-도메인, 단일 중쇄, 또는 단일 경쇄 항체를 포함하는 항체 단편이다. 항체 단편은 예를 들어, 효소적 분해 또는 재조합 기술에 의해 생성될 수 있다. 일부 구현예에서, Morimoto 등, 생화학적 및 생체물리학적 방법의 저널, 24:107-117 (1992) 및 Brennan 등, Science, 229:81 (1985)에 기재된 바와 같이, 항체 단편을 생성하기 위해, 온전한 항체의 단백질분해성 소화가 사용된다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 재조합 숙주세포에 의해 생산된다. 예를 들어, Fab, Fv 및 ScFv 항체 단편은 E. coli에 의해 발현되고 분비된다. 항체 단편은 대안적으로 항체 파아지 라이브러리로부터 단리될 수 있다.
Fab'-SH 단편은 E. coli로부터 직접 회수될 수 있고, 화학적으로 커플링되어 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다. Carter 등, Bio/기술 10:163-167 (1992)를 참고한다. F(ab')2 단편은 또한, 재조합 숙주세포 배양으로부터 직접 단리될 수 있다. 회수 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하는, 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab')2 단편은 하기에 기재되어 있다: 미국 특허 제5,869,046호.
일부 구현예에서, 항체는 단일 사슬 Fv 단편(scFv)이다. WO 93/16185 및 미국 특허 제5,571,894호 및 제5,587,458호를 참고한다. scFv 융합 단백질은 scFv의 아미노 말단 또는 카르복시 말단에서 효과기 단백질의 융합을 생성하도록 구성될 수 있다. 항체 단편은 예를 들어, 미국 특허 제5,641,870호에 기재된 바와 같이, 또한 "선형 항체"일 수 있다. 이러한 선형 항체는 단일특이적 또는 이중특이적일 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 다중특이적 항체이다. 다중특이적 항체는 1개 초과의 항원에 대한 결합 특이성을 갖는다(예를 들어, 2개, 3개 또는 그 이상의 결합 특이성을 갖는다). 일부 구현예에서, 항체는 이중특이적 항체이다. 일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 동일한 항원에 대해 2개의 상이한 결합 특이성을 포함한다(예를 들어, 동일한 항원의 상이한 결합 친화도 및/또는 특정 에피토프를 갖는다). 일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 2개의 구별되는 항원에 대한 결합 특이성을 포함한다. 일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 전장 또는 온전한 항체이다. 일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 본 발명의 항체 단편이다.
결합 특이성의 다양한 조합을 갖는 이중특이적 또는 다중특이적 항체가 본원에서 고려된다. 일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같은 하나 이상의 SIRP-α 폴리펩타이드에 대한 제1 결합 특이성을 갖는다. 일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 예를 들어 세포 표면 상에서 암세포에 의해 발현된 항원에 대한 제2 결합 특이성을 갖는다. 예시적인 상기 항원은 비제한적으로, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD52, CD56, CD70, CD74, CD79b, CD123, CD138, CS1/SLAMF7, Trop-2, 5T4, EphA4, BCMA, 뮤신 1, 뮤신 16, PTK7, PD-L1, STEAP1, 엔도텔린 B 수용체, 메소텔린, EGFRvIII, ENPP3, SLC44A4, GNMB, 넥틴 4, NaPi2b, LIV-1A, 구아닐릴 사이클라제 C, DLL3, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR, 인테그린 αVβ3, 인테그린 α5β1, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, 테나스신, Ley, EpCAM, CEA, gpA33, PSMA, TAG72, 뮤신, CAIX, EPHA3, 엽산 수용체 α, GD2, GD3, 및 NY-ESO-1/LAGE로부터의 펩타이드를 포함하는 MHC/펩타이드 복합체, SSX-2, MAGE 계열 단백질, MAGE-A3,　gp100/pmel17,　멜란-A/MART-1,　gp75/TRP1,　티로시나제,　TRP2, CEA, PSA,　TAG-72,　미성숙한 라미닌 수용체,　 MOK/RAGE-1, WT-1, SAP-1,　BING-4,　EpCAM,　MUC1, PRAME, 서바이빈,　BRCA1, BRCA2, CDK4,　CML66,　MART-2, p53, Ras, β-카테닌, TGF-βRII, HPV E6, 또는 HPV E7을 포함한다. 이론에 의해 구속되기를 바라지 않으면서, 제1 결합 특이성을 갖는 종양 세포에 의해 발현된 임의의 CD47에 대한 백혈구에 의해 발현되는 SIRP-α의 반응성을 억제하면서, 제2 결합 특이성을 갖는 종양 세포를 표적화하도록 예를 들어, FcR-발현 백혈구를 지시하는데, 상기 결합 특이성을 SIRP-α에 대한 결합 특이성과 조합시키는 것이 특히 유리하다.
이중특이적 항체를 생성 및 정제하기 위한 다양한 방법이 당해 기술에 공지되어 있다. 수많은 접근법이 기재되어 있다. 하나의 접근법은 "노브-인투-홀" 또는 "돌출부-인투-공동" 접근법이다(예를 들어, 미국 특허 제5,731,168호 참고). 일부 구현예에서, Fc 도메인 단량체의 헤테로이량체화는 2개의 Fc 도메인 단량체, 예컨대 "노브-인투-홀" 잔기 쌍 및 전하 잔기 쌍에 상이하지만, 양립가능한 치환을 도입함으로써 촉진된다. 노브 및 홀의 상호작용은 헤테로이량체 형성을 선호하는 반면, 노브-노브 및 홀-홀 상호작용은 입체적 충돌 및 양호한 상호작용의 결실로 인해 동종이량체 형성을 방해한다. 홀은 단백질의 원래 아미노산이 더 작은 측쇄 용적을 갖는 상이한 아미노산으로 대체될 때 생성되는 공동을 지칭한다. 노브는 단백질의 원래 아미노산이 더 큰 측쇄 용적을 갖는 상이한 아미노산으로 대체될 때 생성되는 범프를 지칭한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 대체되는 아미노산은 Fc 도메인 단량체의 CH3 항체 불변 도메인에 존재하고 2개의 Fc 도메인 단량체의 이량체화에 관여한다. 일부 구현예에서, 하나의 CH3 항체 불변 도메인의 홀이 또 다른 CH3 항체 불변 도메인의 노브를 수용하도록 생성되어, 노브 및 홀 아미노산이 2개의 Fc 도메인 단량체의 헤테로이량체화를 촉진 또는 쉽게 하도록 작용한다. 일부 구현예에서, 하나의 CH3 항체 불변 도메인의 홀은 또 다른 CH3 항체 불변 도메인의 원래 아미노산을 보다 잘 수용하도록 생성된다. 일부 구현예에서, 하나의 CH3 항체 불변 도메인의 노브가 생성되어 또 다른 CH3 항체 불변 도메인의 원래 아미노산과 부가적인 상호작용을 형성한다.
일부 구현예에서, 더 큰 측쇄를 갖는 아미노산, 예컨대 티로신 또는 트립토판을 보다 작은 측쇄, 예를 들어 CH3 항체 불변 도메인내 Y407V 돌연변이를 갖는 아미노산, 예컨대 알라닌, 발린 또는 트레오닌으로 대체함으로써 홀이 구축된다. 유사하게, 일부 구현예에서, 보다 작은 측쇄를 갖는 아미노산을 보다 큰 측쇄, 예를 들어 CH3 항체 불변 도메인에서의 T366W 돌연변이를 갖는 아미노산으로 대체함으로써 노브가 구축된다. 일부 구현예에서, 하나의 Fc 도메인 단량체는 노브 돌연변이 T366W를 포함하고, 다른 Fc 도메인 단량체는 홀 돌연변이 T366S, L358A 및 Y407V를 포함한다. 일부 구현예에서, 고친화성 SIRP-α D1 변이체를 포함하는 본 발명의 폴리펩타이드는 노브 돌연변이 T366W를 포함하는 Fc 도메인 단량체에 융합되어 원치 않는 노브-노브 동종이량체 형성을 제한한다. 노브-인투-홀 아미노산 쌍의 예는 비제한적으로 표 3에 포함된다.
또 다른 접근법은 면역글로불린 불변 도메인 서열, 예를 들어 힌지, CH2 및 CH3의 적어도 일부를 포함하는 면역글로불린 중쇄 불변 도메인에 융합된 원하는 결합 특이성(항체-항원 결합 부위)을 갖는 항체 가변 도메인을 사용한다. 일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 하나의 아암에 제1 결합 특이성을 갖는 하이브리드 면역글로불린 중쇄 및 다른 아암에 하이브리드 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍(제2 결합 특이성을 제공함)을 갖는다. WO 94/04690을 참조한다. 또 다른 접근법은 가교결합을 사용하여(예를 들어, 미국 특허 제4,676,980호 참고), 헤테로콘주게이트 항체를 생산한다. 일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 디티올 착화제의 존재하에 환원되고, 티오니트로벤조에이트(TNB) 유도체로 전환된 F(ab')2 단편으로 온전한 항체를 단백질분해적으로 쪼개는 화학적 결합을 사용하여 제조될 수 있으며(예를 들어, Brennan 등, Science, 229: 81 (1985) 참고), 이들 중 하나는 환원에 의해 Fab'-티올로 재전환되고 다른 Fab'-TNB 유도체와 혼합되어 이중특이적 항체를 형성한다. 일부 구현예에서, Fab'-SH 단편은 화학적으로 커플링된다. 일부 구현예에서, 이중특이적 항체 단편은 Kostelny 등, J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)에서와 같이, 류신 지퍼를 사용하여 세포 배양에서 생산된다. 다른 이중특이적 항체 포맷에 대해서는, 예를 들어, Spiess, C. 등 (2015) Mol. Immunol. 67:95-106을 참고한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 디아바디이다. 예를 들어, Hollinger 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)을 참고한다. 디아바디에서, 하나의 단편의 VH 및 VL 도메인은 또 다른 단편의 상보적 VL 및 VH 도메인과 페어링하여, 2개의 항원-결합 부위를 형성한다. 단일 사슬 Fv(sFv) 이량체를 사용하여 이중특이적 항체 단편을 제조하기 위한 또 다른 전략이 또한 보고되었다. Gruber 등, J. Immunol, 152:5368(1994)를 참고한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 단일-도메인 항체이다. 단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함하는 단일 폴리펩타이드 사슬을 지칭한다. 특정 구현예에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체이다(예를 들어, 미국 특허 제6,248,516 B1 호 참고). 일 구현예에서, 단일-도메인 항체는 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부를 포함한다. 낙타과(camelid) 항체도 공지되어 있다.
항체는 재조합 방법을 사용하여 생산될 수 있다. 항-항원 항체의 재조합 생산을 위해, 항체를 코딩하는 핵산이 단리되고 추가 클로닝(DNA 증폭) 또는 발현을 위해 복제가능한 벡터에 삽입된다. 항체를 코딩하는 DNA는 통상적인 절차를 사용하여(예를 들어 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 사용하여) 용이하게 단리 및 시퀀싱될 수 있다. 많은 벡터가 이용가능하다. 벡터 성분은 일반적으로 비제한적으로, 신호 서열, 복제 기원, 하나 이상의 마커 유전자, 인핸서 요소, 프로모터 및 전사 종결 서열 중 하나 이상을 포함한다.
본 발명의 항체는 이종성 폴리펩타이드, 예를 들어 성숙한 단백질 또는 폴리펩타이드의 N-말단에 특정 절단 부위를 갖는 신호 서열 또는 다른 폴리펩타이드와의 융합 폴리펩타이드로서 재조합적으로 생산될 수 있다. 선택된 이종성 신호 서열은 숙주세포에 의해 인식되고 처리(예를 들어, 신호 펩티다아제에 의해 절단됨)되는 것일 수 있다. 천연 항체 신호 서열을 인식 및 처리하지 않는 원핵 숙주세포의 경우, 신호 서열은 예를 들어, 알칼리성 포스파타제, 페니실리나제, lpp 또는 열안정성 장 독소 II 리더로부터 선택된 원핵 신호 서열로 치환된다. 효모 분비를 위해, 천연 신호 서열은 예를 들어 효모 인버타제 리더, 인자 리더(사카로마이세스(Saccharomyces) 및 클루이베로마이세스(Kluyveromyces) α-인자 리더 포함), 또는 산 포스파타제 리더, C. 알비칸스 글루코아밀라아제 리더 등으로 치환될 수 있다. 포유동물에서, 바이러스성 분비 리더, 예를 들어 단순 포진 gD 신호뿐만 아니라 세포 발현, 포유동물 신호 서열이 이용가능하다.
발현 및 클로닝 벡터는 모두 벡터가 하나 이상의 선택된 숙주세포에서 복제하여 예를 들어, 벡터가 숙주 염색체 DNA와 독립적으로 복제할 수 있게 하는 핵산 서열을 함유한다. 이 서열은 복제의 기원 또는 자율적인 복제 서열을 포함할 수 있다. 이러한 서열은 다양한 박테리아, 효모 및 바이러스에 대해 잘 알려져 있다. 일반적으로, 복제 성분의 기원은 포유동물 발현 벡터에 필요하지 않다(SV40 기원은 초기 프로모터를 함유하기 때문에 사용될 수 있다).
발현 벡터 및 클로닝 벡터는 선별 유전자 또는 선별 마커를 함유할 수 있다. 전형적인 선택 유전자는 (a) 항생제 또는 다른 독소, 예를 들어, 암피실린, 네오마이신, 메토트렉세이트, 또는 테트라사이클린에 대한 내성을 부여하거나, (b) 영양요구성 결핍을 보충하거나, 또는 (c) 복합 배지로부터 이용불가능한 중요한 영양소를 공급하는 단백질을 코딩한다. 우세한 선택의 예는 약물 네오마이신, 마이코페놀산 및 하이그로마이신을 사용한다. 포유동물 세포에 대한 적합한 선별 마커의 또 다른 예는 항체-코딩 핵산을 차지하는데 능숙한 세포의 확인을 가능하게 하는 것들, 예컨대 DHFR, 글루타민 합성효소 (GS), 티미딘 키나제, 메탈로티오네인-I 및 -II, 바람직하게는 영장류 메탈로티오네인 유전자, 아데노신 데아미나제, 오르니틴 탈탄산효소 등이다. 예를 들어, DHFR 유전자로 전환된 내인성 DHFR 활성이 결핍된 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포주는 DHFR의 경쟁적 길항제인 메토트렉세이트(Mtx)를 함유하는 배양 배지에서 형질전환체를 배양함으로써 확인된다.
대안적으로, 관심 항체, 야생형 DHFR 유전자, 및 또 다른 선별 마커, 에컨대 아미노글리코시드 3'-인산전달효소(APH)를 코딩하는 DNA 서열로 전환되거나 동시-전환된 숙주세포(특히, 내인성 DHFR을 함유하는 야생형 숙주)는 선별 마커 선택제, 예컨대 아미노 글리코시드 항생제, 예를 들어, 카나마이신, 네오마이신 또는 G418을 함유하는 배지에서 세포 성장에 의해 선별될 수 있다.
발현 및 클로닝 벡터는 일반적으로 숙주 유기체에 의해 인식되고 항체를 코딩하는 핵산에 작동가능하게 연결된 프로모터를 함유한다. 원핵 숙주와 함께 사용하기에 적합한 프로모터는 phoA 프로모터, β-락타마제 및 락토스 프로모터 시스템, 알칼리성 포스파타제 프로모터, 트립토판(trp) 프로모터 시스템, 및 하이브리드 프로모터, 예컨대 tac 프로모터를 포함한다. 그러나, 다른 공지된 박테리아 프로모터가 적합하다. 프로모터 서열은 진핵생물에 대하여 공지되어 있다. 효모 프로모터는 당해 분야에 잘 공지되어 있으며, 성장 조건에 의해 조절되는 유도성 프로모터/인핸서를 포함할 수 있다. 실제로 모든 진핵생물 유전자는 전사가 개시되는 부위에서 약 25 내지 30 염기 상류에 위치한 AT-풍부 영역을 갖는다. 그 예는 비제한적으로 포스포글리세레이트 키나제 또는 다른 당분해 효소, 예컨대 에놀라제, 글리세르알데하이드-3-포스페이트 탈수소효소, 헥소키나제, 피루베이트 탈탄산효소, 포스포푸룩토키나제, 글루코스-6-포스페이트 이소머라제, 3-포스포글리세레이트 뮤타제, 피루베이트 키나제, 트리오스포스페이트 이소머라제, 포스포글루코스 이소머라제, 및 글루코키나제를 위한 프로모터를 포함한다. 포유동물 숙주세포에서의 벡터로부터의 항체 전사는 예를 들어, 바이러스의 게놈으로부터 수득된 프로모터에 의해 조절될 수 있다. SV40 바이러스의 초기 및 후기 프로모터는 SV40 바이러스 복제 기원을 함유하는 SV40 제한 단편으로서 편리하게 수득된다. 인간 사이토메갈로 바이러스의 직접적인 초기 프로모터는 HindIII E 제한 단편으로서 편리하게 수득된다. 대안적으로, 악성 육종 바이러스 긴 말단 반복이 프로모터로서 사용될 수 있다.
고등 진핵생물에 의한 본 발명의 항체를 코딩하는 DNA의 전사는 종종 벡터에 인핸서 서열을 삽입함으로써 증가된다. 포유동물 유전자(글로빈, 엘라스타제, 알부민, α-태아단백 및 인슐린)로부터 많은 인핸서 서열이 공지되어 있다. 그러나 전형적으로, 하나는 진핵 세포 바이러스로부터의 인핸서를 사용할 것이다.
진핵생물 숙주세포(효모, 균류, 곤충, 식물, 동물, 인간 또는 다른 다중세포 유기체의 유핵 세포)에서 사용되는 발현 벡터는 또한 전사 종결 및 mRNA 안정화에 필요한 서열을 함유할 것이다.
본 발명의 벡터에서 DNA를 클로닝 또는 발현시키는데 적합한 숙주세포는 상기 기재된 원핵생물, 효모 또는 고등 진핵생물 세포이다. 이러한 목적을 위한 적합한 원핵생물은 진정박테리아, 예컨대 그램-음성 또는 그램-양성 유기체, 예를 들어, 엔테로박테리아세아에 예컨대 에스케리치아, 예를 들어, E. 콜리, 엔테로박터, 어위니아, 클렙시엘라, 프로테우스, 살모넬라, 예를 들어, 살모넬라 타이피뮤리움, 세라티아, 예를 들어, 세라티아 마르체칸스, 및 시겔라, 등을 포함한다. 원핵 생물 이외에, 진핵 미생물, 예컨대 사상균 또는 효모가 항체-인코딩 벡터에 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae) 또는 일반적인 베이커 효모는 저급 진핵생물 숙주 미생물 중에서 가장 일반적으로 사용된다. 글리코실화 경로가 "인간화된" 특정 진균 및 효모 균주가 선택되어, 부분적으로 또는 완전히 인간의 글리코실화 패턴을 갖는 항체를 생산시킬 수 있다. 예를 들어, Li 등, Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)을 참고한다.
목화, 옥수수, 감자, 대두, 페튜니아, 토마토, 좀개구리밥(렌니나세아에(Leninaceae)), 알팔파(엠. 트룬카툴라(M. truncatula)) 및 담배의 식물 세포 배양물이 또한 숙주로서 이용될 수 있다.
글리코실화 항체의 발현에 적합한 숙주세포는 또한 다중세포 유기체(무척추동물 및 척추동물)로부터 유래된다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 수많은 바큘로바이러스 균주 및 변이체 및 숙주, 예컨대 스포도프테라 프루지페르다 (Spodoptera frugiperda)(유충), 아에데스 아에집티(Aedes aegypti)(모기), 아에데스 알보픽투스(Aedes albopictus)(모기), 드로소필라 멜라노가스테르(Drosophila melanogaster)(초파리) 및 봄빅스 모리(Bombyx mori)로부터의 상응하는 허용된 곤충 숙주세포가 확인되었다.
척추동물 세포는 숙주로서 사용될 수 있고, 배양(조직 배양)에서의 척추동물 세포의 증식은 일상적인 절차가 되었다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 예는 SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주(COS-7, ATCC CRL 1651); 인간 배아 신장 세포주(현탁 배양의 성장을 위해 서브클로닝된 293 또는 293 세포, Graham 등, J. Gen Virol. 36:59 (1977)); 어린 햄스터 신장 세포(BHK, ATCC CCL 10); 마우스 세르톨리 세포(TM4, Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)); 원숭이 신장 세포(CV1 ATCC CCL 70); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(VERO-76, ATCC CRL-1587); 인간 자궁경부 암종 세포(HELA, ATCC CCL 2); 개 신장 세포(MDCK, ATCC CCL 34); 버팔로 랫트 간 세포(BRL 3A, ATCC CRL 1442); 인간 폐 세포(W138, ATCC CCL 75); 인간 간 세포(Hep G2, HB 8065); 마우스 유방 종양(MMT 060562, ATCC CCL51); TRI 세포(Mather 등, Annals N.Y. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)); MRC 5 세포; FS4 세포; 및 인간 간세포암 세포주(Hep G2)이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주는 DHFR-CHO 세포(Urlaub 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980))를 포함하는 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포; 및 골수종 세포주, 예컨대 NS0 및 Sp2/0을 포함한다. 항체 생산에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 검토를 위해, 예를 들어, Yazaki 및 Wu, 분자 생물학 방법, Vol. 248(B. K. C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J., 2003), pp. 255-268을 참고한다.
본 발명의 숙주세포는 다양한 배지에서 배양될 수 있다. 상업적으로 입수가능한 배지, 예컨대 Ham's F10(Sigma), 최소 필수 배지((MEM), (Sigma), RPMI-1640(Sigma), 및 둘베코 변형된 이글 배지((DMEM), Sigma)가 숙주세포를 배양하는데 적합하다. 또한, Ham 등, Meth. Enz. 58:44 (1979), Barnes 등, Anal. Biochem. 102:255 (1980), 미국 특허 제4,767,704호; 제4,657,866호; 제4,927,762호; 제4,560,655호; 또는 제5,122,469호; WO 90/03430; WO 87/00195; 또는 미국 특허 Re. 30,985에 기재된 임의의 배지가 숙주세포를 위한 배양 배지로서 사용될 수 있다. 이들 배지 중 임의의 것은 필요에 따라 호르몬 및/또는 다른 성장 인자(예컨대 인슐린, 트랜스페린, 또는 표피 성장 인자), 염(예컨대 염화나트륨, 칼슘, 마그네슘, 및 포스페이트), 완충액(예컨대 HEPES), 뉴클레오타이드(예컨대 아데노신 및 티미딘), 항생제(예컨대 겐타마이신TM 약물), 미량 원소(일반적으로 마이크로몰 범위의 최종 농도로 존재하는 무기 화합물로서 정의됨), 및 글루코스 또는 등가의 에너지 공급원으로 보충될 수 있다. 어느 다른 필요한 보충물은 당해 분야의 숙련가에 알려진 적절한 농도로 포함될 수도 있다. 온도, pH 등과 같은 배양 조건은 발현을 위해 선택된 숙주세포와 함께 이전에 사용된 것들이며, 당해 분야의 숙련가에게 분명할 것이다.
재조합 기술을 사용할 때, 항체는 세포내에서, 주변세포질 공간에서 생성되거나, 또는 배지에 직접 분비될 수 있다. 항체가 세포내에서 생산되면, 제1 단계로서, 예를 들어 원심분리 또는 한외여과에 의해 숙주세포 또는 용해된 단편의 미립자 잔해가 제거된다. Carter 등, Bio/Technology 10: 163-167(1992)은 E. coli의 주변세포질 공간으로 분비되는 항체를 단리하기 위한 절차를 기술한다.
세포로부터 제조된 항체 조성물은 예를 들어 하이드록실인회석 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 및 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제될 수 있으며, 친화성 크로마토그래피는 전형적으로 바람직한 정제 단계 중 하나이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 카파 또는 람다 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 서열번호: 325, 326 또는 426의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다. 예시적인 및 비-제한적인 경쇄 불변 영역 서열이 표 6에 제공되어 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 IGLC3 람다 경쇄 불변 영역 또는 IGLC7 불변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 Fc 영역을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, Fc 영역은 인간 Fc 영역, 예를 들어, IgG1, IgG2 또는 IgG4 및 그의 하위유형이다. 예시적인 및 비-제한적인 Fc 영역은 표 6에 개시된 서열번호: 320 내지 324의 아미노산 서열 내에 제공된다. 일부 구현예에서, 서열번호: 320 내지 324의 아미노산 서열 중 하나 이상 내의 Fc 영역은 본 명세서에 기재된 하나 이상의 돌연변이, 예를 들어 하기를 포함한다.
일부 구현예에서, Fc 영역은 하나 이상의 항체 특성, 예컨대 안정성, 글리코실화 또는 다른 변형 패턴, 효과기 세포 기능, 약동학 등에 영향을 미치는 하나 이상의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 감소된 또는 최소의 글리코실화를 갖는다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 제거되거나 감소된 효과기 기능을 갖는다. 예시적인 Fc 돌연변이는 비제한적으로 (i) 인간 IgG1 Fc 영역 돌연변이 L234A, L235A, G237A, 및 N297A; (ii) 인간 IgG2 Fc 영역 돌연변이 A330S, P331S 및 N297A; 및 (iii) 인간 IgG4 Fc 영역 돌연변이 S228P, E233P, F234V, L235A, delG236, 및 N297A(EU 넘버링)를 포함한다. 일부 구현예에서, 인간 IgG2 Fc 영역은 A330S 및 P331S 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 인간 IgG4 Fc 영역은 S288P 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 인간 IgG4 Fc 영역은 S288P 및 L235E 돌연변이를 포함한다.
세포 표면 항원을 표적으로 하는 항체는 면역 세포에서 Fc 수용체(FcR) 결합과 관련된 면역자극 및 효과기 기능을 유발할 수 있다. IgG(감마 수용체), IgE(에타 수용체), IgA(알파 수용체) 및 IgM(뮤 수용체)을 포함한 특정 부류의 항체에 특이적인 다수의 Fc 수용체가 있다. 세포 표면의 Fc 수용체에 대한 Fc 영역의 결합은 항체-코팅된 입자의 식균작용(항체-의존성 세포-매개된 식균작용, 또는 ADCP), 면역 복합체의 제거, 살해 세포에 의한 항체-코팅된 세포의 용해(항체-의존성 세포-매개된 세포독성, 또는 ADCC) 및 염증성 매체의 방출, 태반 전이 및 면역글로불린 생산 조절을 포함하는 수많은 생물학적 반응을 유발할 수 있다. 또한, 항체에 대한 보체의 C1 성분의 결합은 보체 시스템을 활성화시킬 수 있다. 보체의 활성화는 세포 병원체의 용해에 중요할 수 있다. 그러나, 보체의 활성화는 또한 염증 반응을 자극할 수 있으며, 또한 자가면역 과민증 또는 다른 면역학적 장애에 관여될 수 있다. 특정 Fc 수용체에 결합하는 능력이 감소되거나 제거된 변이체 Fc 영역은 국소 세포 또는 조직을 손상시키지 않거나 파괴시키지 않으면서 리간드 기능을 표적화, 활성화 또는 중화시킴으로써 작용하는 Fc-융합 폴리펩타이드 구조체 및 치료적 항체를 개발하는데 유용하다.
일부 구현예에서, Fc 도메인 단량체는 제2 및 제3 항체 불변 도메인(예를 들어, CH2 및 CH3)을 포함하는 폴리펩타이드 사슬을 지칭한다. 일부 구현예에서, Fc 도메인 단량체는 또한 힌지 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 도메인 단량체는 IgG, IgE, IgM, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 면역글로불린 항체 아이소타입이다. 추가로, 일부 구현예에서, Fc 도메인 단량체는 임의의 IgG 하위유형(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG2a, IgG2b, IgG2c, IgG3, 및 IgG4)이다. 일부 구현예에서, Fc 도메인 단량체는 Fc 도메인과 Fc 수용체 사이의 상호작용을 변경시키는 야생형 Fc 도메인 단량체 서열로부터의 10가지만큼 많은 변화(예를 들어, 1-10, 1-8, 1-6, 1-4 아미노산 치환, 첨가 또는 삽입, 결실, 또는 이들의 조합)를 포함한다.
일부 구현예에서, 면역글로불린의 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인 단량체의 단편은 또 다른 Fc 도메인 단량체와 함께 Fc 도메인을 형성할 수 있다. 일부 구현예에서, 면역글로불린의 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인 단량체의 단편은 또 다른 Fc 도메인 단량체와 함께 Fc 도메인을 형성할 수 없다. 일부 구현예에서, Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인의 단편은 폴리펩타이드의 혈청 반감기를 증가시키기 위해 본 발명의 폴리펩타이드에 융합된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 폴리펩타이드에 융합된 Fc 도메인 단량체 또는 Fc 도메인 단량체의 단편은 제2 Fc 도메인 단량체와 이량체화되어, Fc 수용체에 결합하는 Fc 도메인을 형성하거나, 또는 대안적으로 Fc 도메인 단량체가 Fc 수용체에 결합한다. 일부 구현예에서, 폴리펩타이드의 혈청 반감기를 증가시키기 위해 폴리펩타이드에 융합된 Fc 도메인 또는 Fc 도메인의 단편은 임의의 면역계-관련된 반응을 유도하지 않는다. Fc 도메인은 CH3 항체 불변 도메인들 사이의 상호작용에 의해 이량체화되는 2개의 Fc 도메인 단량체를 포함한다.
야생형 Fc 도메인은 Fc 수용체, 예를 들어, FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIIa, FcγRIIIb 및 FcγRIV와 결합하는 최소 구조를 형성한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체의 Fc 도메인은 감소된 효과기 기능, 예컨대 감소된 항체-의존성 세포-매개된 세포독성(ADCC), 감소된 보체-의존적 세포용해 (CDC), 감소된 항체-의존적 세포-매개된 식균작용 (ADCP), 또는 이들의 임의의 조합을 유도하는 하나 이상의 아미노산 치환, 첨가 또는 삽입, 결실 또는 이들의 조합을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 인간 Fc 수용체에 대한 감소된 결합(예를 들어, 최소 결합 또는 결합 부재) 및 보체 단백질 C1q에 대한 감소된 결합(예를 들어, 최소 결합 또는 결합 부재); 인간 FcγRI, FcγRIIA, FcγRIIB, FcγRIIIB, FcγRIIIB 또는 이들의 임의의 조합에 대한 감소된 결합(예를 들어, 최소 결합 또는 결합 부재) 및 C1q; 변경된 또는 감소된 항체-의존적 효과기 기능, 예컨대 ADCC, CDC, ADCP 또는 이들의 임의의 조합 등을 나타낼 수 있다. 예시적인 돌연변이는 비제한적으로, E233, L234, L235, G236, G237, D265, D270, N297, E318, K320, K322, A327, A330, P331, 또는 P329(카밧의 EU 인덱스에 따른 넘버링(면역학적 관심의 단백질의 서열, 5th Ed. 공중 보건 서비스, 국립 보건원, Bethesda, MD. (1991))에 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 CD16a, CD32a, CD32b, CD32c 및 CD64 Fcγ 수용체에 대한 감소된 또는 제거된 결합을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 비-천연 Fc 영역을 갖는 항체는 야생형 Fc 영역을 포함하는 항체와 비교하여 C1q 결합의 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 초과 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 비-천연 Fc 영역을 갖는 항체는 야생형 Fc 영역을 포함하는 항체와 비교하여 CDC의 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 초과 감소를 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 발명의 Fc 변이체는 야생형 서열에 비해 최소로 글리코실화되거나, 또는 감소된 글리코실화를 갖는다. 일부 구현예에서, 탈글리코실화는 N297A의 변이에 의해, 또는 N297을 N이 아닌 임의의 아미노산으로 변이시킴으로써 달성된다.
일부 구현예에서, 항체 IgG 불변 영역(예를 들어, Fc 변이체)의 변이체는 Fcγ 수용체에 특이적으로 결합하는 능력이 감소되거나, 식균작용을 유도하는 능력이 감소된다. 일부 구현예에서, 항체 IgG 불변 영역의 변이체(예를 들어, Fc 변이체)는 Fcγ 수용체에 특이적으로 결합하는 능력이 감소하고 식균작용을 유도하는 능력이 감소된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, Fc 도메인은 "사멸된" Fc 도메인의 전형적인 효과기 기능이 결핍되도록 돌연변이된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, Fc 도메인은 Fc 도메인과 Fcγ 수용체 사이의 상호작용을 최소화하는 것으로 알려진 특정 아미노산 치환을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 도메인 단량체는 IgG1 항체로부터 유래된 것이며, 아미노산 치환 L234A, L235A, G237A 및 N297A(카밧 등, 1991의 EU 넘버링 시스템에 따라 지정됨) 중 하나 이상을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가의 돌연변이가 상기 IgG1 Fc 변이체에 포함된다. 인간 IgG1 Fc 변이체에 대한 상기 추가 돌연변이의 비-제한적인 예는 E318A 및 K322A를 포함한다. 일부 사례에서, 인간 IgG1 Fc 변이체는 야생형 인간 IgG1 서열과 비교하여 최대 총 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5 또는 4, 이하의 돌연변이를 갖는다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 결실이 상기 IgG1 Fc 변이체에 포함된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 예를 들어, 폴리펩타이드가 박테리아 또는 포유동물 세포에서 생산될 때 폴리펩타이드의 균질성을 증가시키기 위해 Fc IgG1 중쇄 불변 영역의 C-말단 라이신이 결실된다. 일부 사례에서, 인간 IgG1 Fc 변이체는 야생형 인간 IgG1 서열과 비교하여 최대 총 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5 또는 4 이하의 결실을 갖는다.
일부 구현예에서, Fc 도메인 단량체는 IgG2 항체로부터 유래된 것이며, 아미노산 치환 A330S, P331S 또는 A330S 및 P331S 모두를 포함한다. 상기 언급된 아미노산 위치는 카밧, 등 (1991)에 따라 정의된다. 아미노산 잔기의 카밧 넘버링은 항체 서열의 상동성 영역에서 "표준" 카밧 넘버링된 서열과의 정렬에 의해 주어진 항체에 대해 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, Fc 변이체는 A330S, P331S 및 N297A 아미노산 치환(카밧 등, 1991의 EU 넘버링 시스템에 따라 지정됨) 중 하나 이상을 포함하는 인간 IgG2 Fc 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 돌연변이는 상기 IgG2 Fc 변이체에 포함된다. 인간 IgG2 Fc 변이체에 대한 상기 추가 돌연변이의 비-제한적인 예는 V234A, G237A, P238S, V309L 및 H268A(카밧 등, 1991의 EU 넘버링 시스템에 따라 지정됨)를 포함한다. 일부 사례에서, 인간 IgG2 Fc 변이체는 야생형 인간 IgG2 서열과 비교하여 최대 총 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4 또는 3 이하의 돌연변이를 갖는다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 결실이 상기 IgG2 Fc 변이체에 포함된다.
Fc 변이체가 IgG4 Fc 변이체인 경우, 일부 구현예에서, 상기 Fc 변이체는 (카밧, 등 (1991)에 따라 지정된 바와 같이) S228P, E233P, F234V, L235A, L235E 또는 delG236 돌연변이를 포함한다. 일부 사례에서, 인간 IgG4 Fc 변이체는 야생형 인간 IgG4 서열과 비교하여 최대 총 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개의 돌연변이를 갖는다.
일부 구현예에서, Fc 변이체는 야생형 인간 IgG Fc 영역과 비교하여 상기 대상체의 Fc 수용체에 대한 결합이 감소된 것을 나타낸다. 일부 구현예에서, Fc 변이체는 야생형 인간 IgG Fc 영역과 비교하여 상기 대상체의 Fc 수용체에 대한 결합이 제거된 것을 나타낸다. 일부 구현예에서, Fc 변이체는 야생형 인간 IgG Fc 영역과 비교하여 식균작용의 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, Fc 변이체는 야생형 인간 IgG Fc 영역과 비교하여 제거된 식균작용을 나타낸다.
본 명세서에서 ADCC로도 지칭되는 항체-의존적 세포-매개된 세포독성은 특정 세포독성 세포(예를 들어, 자연 살해(NK) 세포 및 중성구) 상에 존재하는 Fc 수용체(FcR)에 결합된 Ig를 분비하여, 상기 세포독성 효과기 세포가 항원-담지 표적 세포에 특이적으로 결합하고 이어서 표적 세포를 죽일 수 있게 하는 세포독성의 형태를 지칭한다. 본 명세서에서 ADCP로도 지칭되는 항체-의존성 세포-매개된 식균작용은 특정 식세포(예를 들어, 대식세포) 상에 존재하는 Fc 수용체(FcR)에 결합하는 Ig를 분비하여, 상기 식균작용 효과기 세포가 항원-담지 표적 세포에 특이적으로 결합하고 이어서 표적 세포를 삼키고 소화시킬 수 있게 하는 세포독성의 형태를 지칭한다. 표적 세포의 표면으로 지향된 리간드-특이적 고친화성 IgG 항체는 세포독성 또는 식균작용성 세포를 자극할 수 있으며, 그러한 살해에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 Fc 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 구조체는 야생형 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 구조체와 비교하여 감소된 ADCC 또는 ADCP를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 Fc 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 구조체는 야생형 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 구조체와 비교하여 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상의 ADCC 또는 ADCP 감소를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 Fc 변이체를 포함하는 항체는 야생형 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 구조체와 비교하여 제거된 ADCC 또는 ADCP를 나타낸다.
본 명세서에서 CDC로도 지칭되는 보체-지향된 세포독성은 보체 캐스케이드가 항체 Fc에 결합하는 보체 성분 C1q에 의해 활성화되는 세포독성의 형태를 지칭한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 Fc 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 구조체는 야생형 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 구조체와 비교하여 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상의 C1q 결합 감소를 나타낸다. 일부 경우에, 본 명세서에 기재된 바와 같은 Fc 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 구조체는 야생형 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 구조체와 비교하여 감소된 CDC를 나타낸다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 Fc 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 구조체는 야생형 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 구조체와 비교하여 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상의 CDC 감소를 나타낸다. 일부 경우에, 본 명세서에 기재된 바와 같은 Fc 변이체를 포함하는 항체는 야생형 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 구조체와 비교하여 무시할 수 있는 CDC를 나타낸다.
본 발명의 Fc 변이체는 야생형 인간 IgG Fc 영역과 비교하여 Fcγ 수용체에 대한 감소된 결합을 나타내는 것들을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, Fc 변이체는 Fcγ 수용체에 대한 야생형 인간 IgG Fc 영역에 의해 나타나는 결합보다 적은 Fcγ 수용체에 대한 결합을 나타낸다. 일부 경우에, Fc 변이체는 Fcγ 수용체에 대한 결합을 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%(완전히 제거된 효과기 기능)의 인자까지 감소시켰다. 일부 구현예에서, 감소된 결합은 임의의 하나 이상의 Fcγ 수용체, 예를 들어 CD16a, CD32a, CD32b, CD32c 또는 CD64에 대한 것이다.
일부 사례에서, 본 명세서에 개시된 Fc 변이체는 그의 야생형 인간 IgG Fc 영역과 비교하여 식균작용의 감소를 나타낸다. 이러한 Fc 변이체는 야생형 인간 IgG Fc 영역과 비교하여 식균작용의 감소를 나타내며, 여기서 식균작용 활성의 감소는 예를 들어 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 인자까지의 감소이다. 일부 사례에서, Fc 변이체는 야생형 인간 IgG Fc 영역과 비교하여 제거된 식균작용을 나타낸다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 개시된 Fc 변이체는 하나 이상의 융합 파트너에 커플링된다. 일부 경우에, 융합 파트너는 본 발명의 세포독성 약물과 같은 치료적 모이어티이다. 일부 경우에, 융합 파트너는 발현된 단백질의 표적화, 정제, 스크리닝, 디스플레이 등을 가능하게 하기 위해 선택된다. 일부 구현예에서, 융합 파트너는 또한 Fc 수용체에 대한 결합 정도 또는 식균작용 감소 정도에 영향을 미친다.
일부 구현예에서, 융합 파트너는 링커 서열을 통해 Fc 변이체 서열에 연결된다. 일부 구현예에서, 링커 서열은 일반적으로 적은 수의 아미노산, 예컨대 10개 미만의 아미노산을 포함하지만, 보다 긴 링커가 또한 이용된다. 일부 경우에, 링커의 길이는 10, 9, 8, 7, 6 또는 5 아미노산 이하이다. 일부 경우에, 링커의 길이는 적어도 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30 또는 35 아미노산 이상이다. 선택적으로, 일부 구현예에서, 절단가능한 링커가 사용된다.
일부 구현예에서, 융합 파트너는 Fc 변이체 단백질 및 임의의 관련 융합 파트너를 원하는 세포 위치 또는 세포외 매체로 향하게 하는 표적화 또는 신호 서열이다. 일부 구현예에서, 특정 신호전달 서열은 단백질을 성장 배지 또는 세포의 내막과 외막 사이에 위치한 주변세포질 공간으로 분비하도록 표적화한다. 일부 구현예에서, 융합 파트너는 정제 또는 스크리닝을 가능하게 하는 펩타이드 또는 단백질을 코딩하는 서열이다. 그와 같은 융합 파트너는 비제한적으로, 고정된 금속 친화도 크로마토그래피(IMAC) 시스템(예를 들어, Ni+2 친화성 칼럼)과 함께 사용하기 위한, 폴리히스티딘 태그(His-태그)(예를 들어 His6 및 His10) 또는 다른 태그, GST 융합, MBP 융합, Strep-태그, 박테리아 효소 BirA의 BSP 바이오티닐화 표적 서열, 및 항체에 의해 표적화되는 에피토프 태그(예를 들어, c-myc 태그, 플래그-태그 등)를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 태그는 정제, 스크리닝, 또는 이 둘 모두에 유용하다. 예를 들어, 일부 구현예에서, Fc 변이체는 His-태그를 사용하여, 이를 Ni+2 친화성 칼럼에 고정시킴으로써 정제된 다음 정제 후 동일한 His-태그가 사용되어, 항체를 Ni+2 코팅된 플레이트에 고정시켜, ELISA 또는 다른 결합 검정을 수행한다.
다양한 선택 방법을 가능하게 하는 다양한 융합 파트너가 이용가능하다. 예를 들어, Fc 변이체 라이브러리의 구성원을 유전자 III 단백질에 융합시킴으로써, 파아지 디스플레이가 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 융합 파트너는 Fc 변이체를 표지할 수 있게 한다. 대안적으로, 일부 구현예에서, 융합 파트너는 발현 벡터상의 특정 서열에 결합하여, 융합 파트너 및 관련 Fc 변이체를 이들을 코딩하는 핵산과 공유 또는 비공유 결합할 수 있게 한다.
일부 구현예에서, 융합 파트너가 치료적 모이어티인 경우, 치료적 모이어티는 예를 들어, 세포독성 약물, 펩타이드, 단백질, 항체, siRNA 또는 소분자이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 다양한 담체 또는 표지와 결합되어 특정 항원 발현 세포의 존재를 검출하는데 사용된다. 담체의 예는 유리, 폴리스티렌, 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 덱스트란, 나일론, 아밀라아제, 천연 및 변형된 셀룰로스, 폴리아크릴아미드, 아가로스, 및 마그네타이트를 포함한다. 담체의 성질은 가용성이거나 불용성일 수 있다. 다양한 상이한 라벨 및 라벨링 방법이 공지되어 있다. 라벨의 예는 효소, 방사선동위원소, 형광 화합물, 콜로이드성 금속, 화학발광 화합물, 및 생체-발광성 화합물을 포함한다. 본 명세서에 개시된 항체에 라벨을 결합시키기 위한 다양한 기술이 이용가능하다. 일부 구현예에서, 항체는 저분자량의 합텐에 커플링된다. 이들 합텐은 제2 반응에 의해 특이적으로 검출된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 합텐 바이오틴은 아비딘 또는 합텐과 함께 사용되고, 디니트로페놀, 피리독살, 또는 플루오레세인은 특이적 항-헵텐 항체(예를 들어, 항-디니트로페놀 항체, 항-피리독살 항체, 및 항-플루오레세인 항체 각각)에 의해 검출된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 항체는 면역 검정과 같은 결합 검정을 위해 시험관내에서 이용된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항체는 액상으로 이용되거나, 또는 고상 담체에 결합된다. 일부 구현예에서, 면역 검정을 위해 이용되는 항체는 다양한 방식으로 검출가능하게 표지된다.
항체의 확인 및/또는 생성 방법
본 발명의 특정 양태는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인(예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 항원 결합 도메인을 동정하는 방법에 관한 것이다. 유리하게는, 본 명세서에 기재된 방법은 인간 CD47 및 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단하고, 인간 CD47 및 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단시키지 않거나, 또는 인간 CD47에 대한 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 친화도를 감소시키는 항원 결합 도메인을 동정하는데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 방법은 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인(예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 항원 결합 도메인을 제공하는 단계를 포함한다. 예시적인 항원 결합 도메인 및 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 및/또는 다른 SIRP 폴리펩타이드의 세포외 도메인(예를 들어, D1 도메인)을 결합시키는 항체는 상기 항원 결합 도메인/항체를 동정하기 위한 예시적인 방법으로서 본 명세서에 기재되어 있다. 예시적인 방법은 하기 실시예에서 보다 상세히 기재된다.
일부 구현예에서, 본 방법은 CD47의 IgSF 도메인을 포함하는 폴리펩타이드에 결합된 SIRP-α D1 변이체를 포함하는 복합체를 어셈블링하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 복합체를 "어셈블링"하는 것은 SIRP-α D1 변이체 및 CD47의 IgSF 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 모두를 함유하는 용액을 제공하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, SIRP-α D1 변이체는 예를 들어, 인간 CD47에 결합하는 자연 발생 SIRP-α D1 도메인의 친화성보다 적어도 10배, 적어도 100배 또는 적어도 100배 이상인 친화성을 갖는 인간 CD47에 결합하는 비-자연 발생 변이체이다. 유리하게는, 천연 SIRP-α:CD47 상호작용이 결합 및 스크리닝 검정에 사용하기에는 너무 약할 수 있으므로, 이는 항체 스크리닝을 촉진시킨다. 예시적인 변이체는 하기에 보다 상세히 기재된다.
일부 구현예에서, 본 방법은 항원 결합 도메인을 조립된 복합체와 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 복합체에 대한 항원 결합 도메인의 결합, 또는 누락 또는 결핍이 검출된다. 다양한 검출 기술이 본 명세서에서 기재되어 있다. 일부 구현예에서, SPR 또는 ELISA가 사용된다. 복합체에 대한 항원 결합 도메인의 검출가능한 결합은 항원 결합 도메인이 인간 CD47 및 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단하지 않는다는 것을 나타낸다. 복합체에 대한 항원 결합 도메인의 결합 누락은 항원 결합 도메인이 인간 CD47 및 인간 SIRP-α 폴리펩타이드 사이의 결합을 차단한다는 것을 나타낸다. 또한, SPR은 차단, 비-차단 및 킥-오프 항체를 구별하는데 사용된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 비-차단 항체는 사전-형성된 SIRPα:CD47 복합체의 최상부에 주사될 때 RU를 증가시키고, 킥-오프 항체는 사전-형성된 SIRPα:CD47 복합체의 Koff를 증가시키고, 및 차단 항체는 사전-형성된 SIRPα:CD47 복합체의 RU 또는 Koff를 변화시키지 않는다.
일부 구현예에서, CD47의 IgSF 도메인은 인간 IgSF 도메인이다. 일부 구현예에서, CD47의 IgSF 도메인을 포함하는 폴리펩타이드는 인간 CD47 세포외 도메인을 포함한다. 일부 구현예에 있어서, CD47의 IgSF 도메인은 QLLFNKTKSVEFTFSNDTVVIPCFVTNMEAQNTTEVYVKWKFKGRDIYTFDGALNKSTVPTDFSSAKIEVSQLLKGDASLKMDKSDAVSHTGNYTCEVTELTREGETIIELKYRVVS(서열번호: 16)의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CD47의 IgSF 도메인을 포함하는 폴리펩타이드는 또 다른 폴리펩타이드 또는 다른 모이어티, 예를 들어 Ig Fc 영역에 접합된다.
고친화성 SIRP-α D1 도메인 변이체
다양한 고친화성 SIRP-α D1 변이체가 본 명세서에서의 사용에 고려된다. 예를 들어, 특정 구현예에서, SIRP-α D1 변이체는 서열번호: 17 내지 52(표 4 참고)로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. SIRP-α D1 변이체에 대한 자세한 설명은 하기와 같다.
일부 구현예에서, SIRP-α D1 변이체 폴리펩타이드 또는 이의 단편은 1 x 10-8 M 미만, 5 x 10-9 M 미만, 1 x 10-9 M 미만, 5 x 10-10 M 미만, 1 x 10-10 M 미만 또는 1 x 10-11 M 미만의 KD를 갖는 CD47에 결합한다. 일부 구현예에서, SIRP-α D1 변이체 폴리펩타이드 또는 이의 단편은 CD47에 약 500 nM 내지 100 nM, 약 100 nM 내지 50 nM, 약 50 nM 내지 10 nM, 약 10 nM 내지 5 nM, 약 5 nM 내지 1 nM, 약 1 nM 내지 500 pM, 약 500 pM 내지 100 pM, 약 100 pM 내지 50 pM, 또는 약 50 pM 내지 10 pM의 KD를 갖는 CD47에 결합한다.
일부 구현예에서, 단편은 10개 미만의 아미노산 길이의, 약 10개 아미노산 길이의, 약 20개 아미노산 길이의, 약 30개 아미노산 길이의, 약 40개 아미노산 길이의, 약 50개 아미노산 길이의, 약 60개 아미노산 길이의, 약 70개 아미노산 길이의, 약 80개 아미노산 길이의, 약 90개 아미노산 길이의, 약 100개 아미노산 길이의, 또는 약 100개 초과 아미노산 길이의 폴리펩타이드를 포함한다. 단편은 CD47에 결합하는 능력을 보유한다. 바람직하게는, SIRP-α D1 변이체 폴리펩타이드 및 이의 단편은 SIRP-α 폴리펩타이드가 CD47에 결합하는 것보다 높은 친화성으로 CD47에 결합한다.
일부 구현예에서, 상기 언급된 SIRP-α D1 변이체 폴리펩타이드는 제2 폴리펩타이드에 부착되거나 융합된다. 일부 구현예에서, 제2 폴리펩타이드는 비제한적으로 Fc 폴리펩타이드, Fc 변이체, HSA 폴리펩타이드, 알부민 펩타이드, PEG 폴리머 또는 상기한 단편을 포함한다.
일부 구현예에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 표 4에 제공된 임의의 변이체에 대하여 적어도 85%의 서열 동일성(예를 들어, 적어도 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 서열 동일성)을 갖는 고친화도 SIRP-α D1 도메인을 포함한다.
닭에서의 항체 생성
본 발명의 특정 양태는 2개 이상의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인(예를 들어, D1 도메인)에 결합하는 항-SIRP-α 항체를 생산하는 방법에 관한 것이다. 이론에 의해 구속되기를 바라지 않으면서, 닭 SIRP-α와 포유동물(예를 들어, 인간, 원숭이, 마우스 등) SIRP-α 사이의 큰 다양성 때문에 닭의 사용이 특히 유리하다고 생각된다. 또한, 닭과 포유동물 사이의 계통발생적 거리(phylogenetic distance)는 예를 들어, 인간 및 마우스 SIRP-α 폴리펩타이드에 대해 교차-반응하는 항체의 확인을 허용하며, 이는 자기-내성으로 인해 마우스에서 항체를 생성함으로써 달성하기 어려울 수 있다.
일부 구현예에서, 본 방법은 인간 SIRP-α 세포외 도메인(예를 들어, D1 도메인)의 적어도 일부를 포함하는 펩타이드로 닭을 면역화시키는 단계를 포함한다. 예시적인 면역화 계획은 하기에 기재되어 있다. 닭 면역화를 위한 방법은 예를 들어, Mettler Izquierdo, S. 등 (2016) 현미경검사 (Oxf) 1-16에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 본 방법은 면역화된 닭으로부터의 항체-생산 세포로부터 항체를 얻는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 본 방법은 2개 이상의 상이한 인간 SIRP-α 변이체 폴리펩타이드의 세포외 도메인(예를 들어, D1 도메인) 및 세포로부터 수득된 항체 사이의 결합을 검출하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같은 인간 SIRP-α v1 및 v2가 사용된다. 예시적인 검출 기술은 본 명세서에 기술되어 있으며 비제한적으로, GEM 검정(예를 들어, WO2009111014 및 Mettler Izquierdo, S. 등 (2016) 현미경검사 (Oxf) 1-16 참고), SPR 및 ELISA를 포함한다.
치료 방법
본 발명의 특정 양태는 본 명세서에 기재된 항체를 사용하여 질환 또는 장애를 치료하는 것에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 질환은 암이다. 일부 구현예에서, 질환은 자가면역 또는 염증성 질환이다.
예를 들어, 본 명세서에 제공된 것은 유효량의 본 발명의 항체를 투여함으로써 개체에서 암을 치료하거나 진행을 지연시키는 방법이다. 이론에 의해 구속되기를 바라지 않으면서, 본 명세서에 기재된 항체는 예를 들어, CD47:SIRP-α 신호전달 축을 통한 식균작용 및 면역 감시를 저해하는 암의 능력을 억제함으로써, 또는 그렇지 않으면 면역계의 활성화(예컨대 수지상 세포의 활성화)를 강화시킴으로써 암의 치료에 유용할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 화학치료제와 조합하여 투여된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 제2 항체, 예를 들어 암에 의해 발현되는 항원에 결합하는 항체와 조합하여 투여된다. 암에 의해 발현되는 예시적인 항원은 당해 기술에 공지되어 있고, 및 비제한적으로 CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD52, CD56, CD70, CD74, CD79b, CD123, CD138, CS1/SLAMF7, Trop-2, 5T4, EphA4, BCMA, 뮤신 1, 뮤신 16, PTK7, PD-L1, STEAP1, 엔도텔린 B 수용체, 메소텔린, EGFRvIII, ENPP3, SLC44A4, GNMB, 넥틴 4, NaPi2b, LIV-1A, 구아닐릴 사이클라제 C, DLL3, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR, 인테그린 αVβ3, 인테그린 α5β1, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, 테나스신, Ley, EpCAM, CEA, gpA33, PSMA, TAG72, 뮤신, CAIX, EPHA3, 엽산 수용체 α, GD2, GD3, 및 NY-ESO-1/LAGE로부터의 펩타이드를 포함하는 MHC/펩타이드 복합체, SSX-2, MAGE 계열 단백질, MAGE-A3,　gp100/pmel17,　멜란-A/MART-1,　gp75/TRP1,　티로시나제,　TRP2, CEA, PSA,　TAG-72,　미성숙한 라미닌 수용체,　 MOK/RAGE-1, WT-1, 　SAP-1,　BING-4,　EpCAM,　MUC1, PRAME, 서바이빈,　BRCA1, BRCA2, CDK4,　CML66,　MART-2, p53, Ras, β카테닌, 　TGF-βRII, HPV E6, 또는 HPV E7을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 탈라코투주맙(talacotuzumab)(CSL362 및 JNJ-56022473으로도 공지됨)과 같은 CD123(IL-3 수용체 알파로도 공지됨)에 결합하는 단클론성 항체와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 EGFR에 결합하는 단클론성 항체(예를 들어, 세툭시맙)와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, 제2 항체는 하나 이상의 효과기 기능, 예를 들어 ADCC 또는 ADCP, 및/또는 보체-의존성 세포독성(CDC)을 포함하는 면역 세포상의 Fc 수용체(FcR) 결합과 관련된 효과기 기능을 포함한다. 이론에 의해 구속되기를 바라지 않으면서, 예를 들어, SIRP-α 항체로 종양 세포에 의해 발현된 임의의 CD47에 대한 백혈구에 의해 발현되는 SIRP-α의 반응성을 억제하면서 FcR-발현 백혈구가 제2 항체가 결합된 종양 세포를 표적으로 하도록 유도하기 위해서는, 그와 같은 항체를 본 발명의 항체와 배합시키는 것이 특히 유리하다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 면역 치료제와 조합하여 투여된다. 면역 치료제는 면역 시스템을 표적으로 하고 공동자극 경로의 조절제, 암 백신, 재조합으로 변형된 면역 세포 등과 같은 면역계의 치료적 방향 전환을 촉진시키는 임의의 치료제를 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서, 면역 치료제는 항체를 포함한다. 면역치료적 항체의 예시적인 항원은 당해 기술에 공지되어 있으며, 비제한적으로 PD-1, PD-L1, OX40, CTLA-4, CD137/4-1BB, B7-H3, FZD7, CD27, TNFR2, CCR4, CSF1R, CSF, TIM-3, LAG-3, VISTA, ICOS, CCR2, IDO, A2R, CD39, CD73, TIGIT, CD80, CD47, 아르기나제, TDO, 및 PVRIG를 포함한다. 승인된 또는 말기 단계의 임상 시험에서의 면역 치료제는 비제한적으로 이필리무맙, 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 아테졸리주맙, 아벨루맙, 더발루맙 등을 포함한다. 이론에 의해 구속되기를 바라지 않으면서, 본 발명의 항체는 상보적 작용 기전으로 인해, 예를 들어, 종양 세포를 표적화하기 위해 대식세포 및 T효과기 세포 모두를 활성화시키는데 면역 치료제와 함께 사용하기에 적합하다고 생각된다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항체는 PD-L1/PD-1 경로의 억제제, 예를 들어, 항-PD-L1 또는 항-PD-1 항체와 조합하여 투여된다. 본 명세서에 설명된 바와 같이, 본 발명의 항-SIRP-α 항체와 PD-L1/PD-1 경로의 억제제의 병용 투여는 상승적 항-종양 활성을 초래할 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 본 발명의 차단 항-SIRP-α 항체는 항-PD-1 항체와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에 있어서, 본 발명의 비-차단 항-SIRP-α 항체는 항-PD-1 항체와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 차단 항-SIRP-α 항체는 항-PD-L1 항체와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 비-차단 항-SIRP-α 항체는 항-PD-L1 항체와 조합하여 투여된다.
당 업계에 공지된 임의의 암 유형, 예컨대 비제한적으로 암종, 육종, 림프종, 백혈병, 림프종, 및 모세포종이 포함될 수 있다. 그러한 암의 보다 구체적인 예는 비제한적으로 폐암, 편평상피 세포 암, 뇌종양, 교모세포종, 두경부 암, 간세포 암, 결장직장암(예를 들어, 결장암 또는 직장암), 간암, 방광암, 위암 또는 위장암, 췌장암, 자궁경부암, 난소암, 요로암, 유방암, 복막 암, 자궁암, 타액선 암, 신장 또는 신장암, 전립선암, 외음부 암, 갑상선암, 항문 암종, 음경 암종, 흑색종, 다발성 골수종 및 B-세포 림프종(비-호지킨 림프종(NHL) 포함); 급성 림프아구성 백혈병(ALL); 만성 림프구성 백혈병(CLL); 급성 골수 백혈병(AML); 머켈 세포 암종; 모발 세포 백혈병; 만성 골수아세포 백혈병(CML); 및 관련된 전이를 포함한다.
암 요법에 추가하여, 본원에서 제공된 항체는, 예를 들어 고갈 면역 세포에 의한 염증성 질환의 치료에서 세포를 고갈시키는 목적으로 단클론성 항체를 투여하는 요법에 유용하다. 이러한 목적을 위해, 본원에서 제공된 항체는 제2 치료적 항체, 예를 들어 염증성 질환 및 자가면역 상태에서 B 세포의 고갈에 대한 리툭시맙; 다발성 경화증에 대한 알렘투주맙(alemtuzumab); 면역억제에 대한 OKT3; 골수 이식 컨디셔닝에 대한 다른 것들; 등과 조합하여 투여된다.
본 발명의 항체의 유효량을 투여함으로써 개체에서 자가면역 질환 또는 염증성 질환의 진행을 치료 또는 지연시키는 방법이 추가로 제공된다. 본 발명에 따른 치료가 가능한 자가면역 질환 및 염증성 질환은 비제한적으로 다발성 경화증, 류마티스성 관절염, 척추관절증, 전신 홍반성 낭창, 항체-매개된 염증성 또는 자가면역 질환, 이식편 대 숙주 질환, 패혈증, 당뇨병, 건선, 죽상경화증, 쇼그렌 증후군, 진행성 전신 경화증, 경피증, 급성 관상동맥 증후군, 허혈성 재관류, 크론병, 자궁내막증, 사구체신염, 중증 근무력증, 특발성 폐 섬유증, 천식, 급성 호흡 곤란 증후군(ARDS), 혈관염, 및 염증성 자가면역 근염을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 치료제, 예컨대 면역억제성, 항-염증성 또는 면역조절 제제와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에서 제공된 항체는 자가면역 질환 또는 염증성 질환, 예를 들어 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 척추관절증, 전신 홍반성 낭창, 항체-매개된 염증성 또는 자가면역 질환, 이식편 대 숙주 질환, 패혈증, 당뇨병, 건선,　건선성 관절염, 죽상경화증, 쇼그렌 증후군, 진행성 전신 경화증, 경피증, 급성 관상동맥 증후군, 허혈성 재관류, 크론병,　궤양성 대장염,　자궁내막증, 사구체신염,　IgA 신병증, 다낭성 신장 질환, 중증 근무력증, 특발성 폐 섬유증, 천식,　아토피 피부염, 급성 호흡 곤란 증후군(ARDS), 혈관염, 또는 염증성 자가면역 근염의 치료에 사용된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 약제학적 제형, 예를 들어 항체 및 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 제형의 일부이다. 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물 및 제형은 원하는 순도를 갖는 활성 성분(예컨대 항체 또는 폴리펩타이드)을 동결건조된 제형 또는 수용액의 형태의 하나 이상의 임의의 약제학적으로 허용가능한 담체와 혼합함으로써 제조될 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed(1980)). 약제학적으로 허용가능한 담체는 일반적으로 사용된 투약량 및 농도에서 수혜자에게 비독성이며, 비제한적으로: 완충액, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기 산; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 산화방지제; 보존제; 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩타이드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 폴리머, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산; 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린을 포함하는, 단당류, 이당류, 및 다른 탄수화물; 킬레이트제, 예컨대 EDTA; 당류, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염 형성 반대 이온, 예컨대 나트륨; 금속 착물(예를 들어 Zn-단백질 복합체); 및/또는 비-이온성 계면활성제 예컨대 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체는 동결건조된다.
실시예
본 발명은 하기 실시예를 참조하여 더욱 완전하게 이해될 것이다. 그러나, 실시예는 본 개시내용의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 본 명세서에 기재된 실시예 및 구현예는 단지 설명을 위한 것이며, 그에 대한 다양한 변형 또는 변경이 당해 분야의 숙련가에게 제안될 것이며, 및 본원의 사상 및 영역 및 첨부된 청구항들의 범위 내에 포함되어야 한다는 것이 제안될 것이다.
실시예 1: SIRP-α 단백질에 대한 신규한 결합 특이성을 가진 항체의 동정
방법
항체 생산
면역화를 위해 하기의 단백질을 사용하였다. 각각은 증가된 면역원성을 위해 변형된 Fc 영역(IgG1_AAA_N297A로 명명된 S228P 인간 IgG4 Fc 또는 L234A/L235A/G237A/N297A 인간 IgG1 Fc)에 융합된 인간 또는 마우스 SIRP-α 펩타이드를 포함한다.
상기 단백질은 야생형 닭, 인간으로부터의 VH 및 닭으로부터의 VL을 함유하는 유전자도입 닭인 SynVH 닭, 또는 완전 인간 "HuMAB" 면역글로불린 유전자좌를 갖는 닭을 면역화하는데 사용되었다(Crystal Bioscience; 예를 들어, WO2012162422, WO2011019844 및 WO2013059159 참고). 닭은 항원을 교대 용량의 항원을 갖는 다양한 스케줄로 면역화시켰다. 예시적인 면역화 스케쥴은 하기와 같다: 1주째에 서열번호: 1의 서열을 갖는 100μg 용량의 항원으로 초기 면역화, 3주째에 서열번호: 2의 서열을 갖는 100μg 항원의 부스트, 4주째에 드로잉, 5주째에 서열번호: 1의 서열을 갖는 50μg 용량의 항원으로 부스트, 6주째에 드로잉, 7주째에 서열번호: 2의 서열을 갖는 50μg의 항원으로 부스트, 및 8주째에 드로잉. 추가의 닭 면역화에 대한 설명은 예를 들어, Mettler Izquierdo, S. 등 (2016) 현미경검사 (Oxf) 1-16에서 찾아볼 수 있다.
항체 클론의 스크리닝 및 발현
GEM 검정(Mettler Izquierdo, S. 등 (2016) 현미경검사 (Oxf) 1-16 참고)에 따라 클론을 생성하고 스크리닝하였다. 경쇄가 링커를 통해 중쇄와 융합된 scFv-Fc 포맷으로 클론을 시험하였다. scFv를 인간 Fc-IgG1의 N-말단에 융합시켰다. 클론을 FreeStyle™ 293-FS 세포(Thermo Fisher)에서 발현시키고, 분비된 배지를 ELISA 및 SPR 결합 특성규명에 사용하였다.
SPR
다양한 SIRP 단백질에 대한 항체 클론의 결합은 작동 완충제로서 0.01% Tween-20(PBST)을 보충한 포스페이트 완충 식염수(PBS, pH 7.4)를 사용하여 ProteOn XPR36 기기(Bio-Rad, Hercules, CA)에서 표면 플라즈몬 공명(SPR) 검출을 사용하여 결정하였다. 분비된 항체를 함유하는 사전-여과된 배지를 검정에 직접 사용하였다. 먼저, 항-인간 IgG Fc(BR-1008-39, GE Healthcare)를 GLC 센서 칩에 아민-커플링시켜 항체의 포획 표면을 생성시켰다. 고정화된 항-인간 IgG Fc의 유동 세포 당 약 4000 RU가 달성된다. 하기와 같은 방법을 사용하여 각각의 클론을 스크리닝한다. 스크린에 사용된 SIRP 피분석물은 표 C에 열거되어 있다.
(1) 10mM 아세트산 나트륨 완충액(pH4.5) 내 사전-여과된 배지 약 5 내지 10㎕를 30ul/분으로 2분 동안 주입;
(2) 100uL/분으로 1분 동안 완충액 유동;
(3) 100uL/분으로 1분 동안 주입된 SIRP 피분석물(100nM), 이어서 10분의 해리 사이클;
(4) 3M 염화 마그네슘을 25uL/분으로 1분 동안 양방향으로 유동시켜 칩 표면 재생; 및
(5) 100uL/분으로 1분 동안 완충액 유동.
반응 스폿 데이터(고정된 항-인간 IgG Fc)로부터 간극 데이터(고정화된 항-인간 IgG Fc를 함유하지 않음)를 감한 후 피분석물 주입의 반응으로부터 완충액 "블랭크" 피분석물 주입의 반응을 감하여, 바이오센서 데이터를 이중-언급하였다. 계산된 1:1 랑뮤어(Langmuir) 및 Koff(1/S) 값을 사용하여 결합을 적합화하였다. 모든 SPR 검정은 25℃에서 수행하였다.
ELISA
SIRP 피분석물 및 SIRP-α:CD47 복합체에 대한 항체 클론의 스크린 결합을 위해 ELISA 검정을 수행하였다. 간단히, 별도의 ELISA 실험에서 96-웰 편평한 바닥, 고결합 플레이트(Greiner Bio-One #655061)를 하기 단백질로 코팅하였다: 아비딘(Sigma A9275)(2ug/ml), 이어서 바이오티닐화된 인간 SIRPαV1(0.5ug/ml), 아비딘(2ug/ml), 이어서 인간 SIRPαV2 바이오틴(0.5ug/ml), 마우스 NOD SIRPα(2ug/ml), 인간 SIRPγ(2ug/ml), CD47(2ug/ml), 이어서 고친화도 인간 SIRPαV1 및 V2(각각 2ug/ml) 또는 항-hFc(2ug/ml Rockland 609-4103). 플레이트를 PBSTM(포스페이트 완충 식염수 pH 7.4, 0.05% Tween20, 3% 우유)로 차단하고, 분비된 scFv-Fc를 함유하는 상청액 50 ul를 실온에서 1시간 동안 첨가하였다. 플레이트를 PBST로 세정하였다. 50ul의 항-hFc-HRP(1:5000 Rockland 609-4303)를 실온에서 1시간 동안 첨가하였다. 플레이트를 PBST로 세정하였다. TMB를 5분 동안 전개시키고, 1N HCl로 중단시켰다. ELISA 결과는 BioTek 시너지 H1 하이브리드 리더를 사용하여 판독하였다. 검정에 사용되며 본 명세서에 기재된 상응하는 단백질은 하기와 같다: 인간 SIRPα V1(서열번호: 5); 인간 SIRPα V2(서열번호: 6); 사이노몰구스 SIRPa(서열번호: 11); 마우스 NOD SIRPα(서열번호: 8); 인간 SIRPγ(서열번호: 15); CD47(서열번호: 16); 고친화도 SIRPα V1(서열번호: 42); 고친화도 SIRPα V2(서열번호: 17).
결과
SIRP-α는 인간, 원숭이 및 마우스에서 고도의 다형성 단백질이다. 예를 들어, NOD와 C57BL/6 마우스 균주에서 SIRP-α 단백질 사이에 20가지의 아미노산 차이가 확인되었으며, 이들 다형성은 이들 마우스 균주에서 인간 조혈 줄기 세포의 생착 및 CD47 결합과 관련된 기능적 결과를 초래한다. 인간에서는 SIRPA의 적어도 10개의 구별되는 대립유전자가 확인되었고, 대립유전자를 구별하는 아미노산 변이가 예측된 CD47-결합 잔기에서 발견된다(Takenaka, K. 등 (2007) Nat. Immunol. 8:1313-23). 10개의 인간 변이체 SIRP-α 단백질 서열의 정렬이 도 1a에 제공되어 있다. 종내 및/또는 종간 교차-반응성과 상이한 결합 특이성을 갖는 항체의 동정은 인간 모집단 전체에 효과적인 임상 후보물질의 개발 및 다양한 동물 모델에서 이들 후보물질의 특성규명에 큰 관심이 있다.
인간(v1 및 v2 변이체), 사이노몰구스 원숭이 및 마우스 129로부터의 SIRP-α 단백질의 D1 도메인을 정렬하여 보존된 아미노산을 동정하였다(도 1b). 도 1a에 도시된 바와 같이, 사이노몰구스 원숭이 및 마우스 129 서열은 인간 변이체 v3-v10보다 인간 v1 및 v2에서 훨씬 더 엇갈리는 반면, 이들 정렬은 4개의 단백질 모두에서 어느 정도의 보전을 나타내며, 교차-반응성 항체가 확인될 수 있음을 시사한다. 그러나 각각의 단백질은 또한 특유의 다형성을 보여주며, 이는 특정 항체가 또한 가능하다는 것을 시사한다.
도 1c에 도시된 바와 같이, 다수의 인간 변이체 및 마우스 균주(예를 들어, 129, NOD, C57BL/6 및 BALB/c)를 나타내는 SIRP-α 단백질 서열도 정렬되었다. R1, R2, R3은 SIRPα와 CD47의 결합 부위 주변에 있는 잔기를 나타낸다. 이러한 정렬은 R2와 R3이 R1보다는 인간과 마우스 서열 중 및 사이에서 더 엇갈린다는 것을 입증했다. 이론에 의해 구속되기를 바라지 않으면서, 특정 뮤린 SIRP-α 단백질에 결합하는 항-SIRP-α 항체가 약동학적 연구(예컨대 CD-1 마우스를 사용하는 연구), 유전자도입 마우스(예컨대 C57BL/6 배경의 마우스)의 개발, 및/또는 SCID(예를 들어, NOD 배경) 또는 동계의(예를 들어, BALB/c 또는 C57BL/6 배경) 마우스 모델의 특성규명에 유용할 수 있다.
상기 기재된 포유동물 SIRP-α D1 도메인은 또한 서열 DFKLQQPQSSVVVIKGDTLTLNCTASGSGPIGAVKWVKGWGSDNQTVYEHKGSFPRVMRAVPDPTNDFTIRISNVSLEDAGTYYCVKLRKGIVDDVVFTR GGGTEVSVHA(서열번호: 84)(도 2)를 포함하는 닭 SIRP-α의 D1 도메인과 정렬되었다. 포유동물 SIRP-α 서열과 비교하여, 닭 SIPRα의 서열은 상당히 더 엇갈리는 것으로 밝혀졌다. 다양한 SIRP-α 단백질 사이의 서열 동일성 백분율의 쌍별 비교가 표 B에 제시되어 있다.
이론에 의해 구속되기를 바라지 않으면서, 이러한 발산은 다수의 포유동물 SIRP-α 단백질을 가로질러 교차-반응하는 항체를 생성시키는 특유의 기회를 제공할 것으로 생각되었다. 예를 들어, 면역 저항성 때문에 마우스 숙주로부터 뮤린 서열과 교차-반응하는 항-SIRP-α 항체를 생성하는 것이 어려울 수 있다. 또한, 닭과 포유동물의 면역계 간의 더 큰 차이는 항체 생산에 있어 더 큰 다양성을 초래할 수 있다.
SIRP-α 단백질에 대한 신규한 결합 특이성을 갖는 항체를 확인하기 위해, 항체 클론을 상기 기재된 바와 같이 scFv-Fc 포맷으로 특성규명하였다. 각각의 항체 클론을 하기 표적에 대해 ELISA를 사용하여 결합에 대해 0.008 내지 1.0μg/mL의 농도로 시험하였다: 인간 SIRP-α v1의 D1 도메인(서열번호: 5에 따른 서열), 인간 SIRP-α v2의 D1 도메인(서열번호: 6에 따른 서열), 사이노몰구스 SIRP-α 변이체의 D1 도메인(서열번호: 11에 따른 서열), 마우스 129 SIRP-α의 D1 도메인(서열번호: 7에 따른 서열), 및 인간 SIRPγ 동형체(서열번호: 15에 따른 서열). 이후에 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 항체 클론은 클론 ID 번호로 언급된다. 또한 표기법 "S[클론 번호]"는 sc-Fv-Fc 형식을 지칭하며; 표기법 "AB[클론 번호]"는 완전한 IgG 항체 형식을 지칭하며; 표기법 "AB[클론 번호]a"는 L234A, L235A, G237A 및 N297A 돌연변이를 갖는 인간 IgG1을 지칭하며; "AB[클론 번호]b"는 마우스 IgG1 N297A 형식을 지칭하며; "AB[클론 번호]c"는 마우스 IgG2a 형식을 지칭하며; 및 "[클론 번호]Fab"는 Fab 단편 형식을 지칭한다.
또한, CD47(서열번호: 16에 따른 서열)의 IgSF 도메인과 결합된 2개의 고친화성 SIRP-α 변이체(서열번호: 42 및 서열번호: 18)의 1:1 혼합을 사용하여 제조된 사전-복합체에 대한 각각의 항체 클론의 결합을 특성규명하였다. 유익하게는, 야생형 SIRP-α D1 도메인과 CD47의 IgSF 도메인 사이의 친화성이 비교적 낮기 때문에, 고친화성 SIRP-α 변이체를 포함하는 복합체의 사용은 SIRP-α에 결합하는 항체의 동정을 허용하면서 그것은 CD47(예를 들어, 비-차단 항체)에 의해 복합체화된다. 또한, SIRP-α가 CD47과 복합체를 형성하는 동안 SIRP-α에 결합할 수 없는 항체의 동정을 가능하게 하여, 항체 및 CD47이 SIRP-α(예를 들어, 차단 항체)에서 동일한 결합 계면에 대해 경쟁할 수 있음을 시사한다. 사용된 2개의 SIRPα 변이체(서열번호: 17 및 서열번호: 19)는 각각 인간 SIRPα 폴리펩타이드 변이체 1 및 변이체 2를 사용하여 조작된 고친화성 SIRPαD1 도메인에 상응한다.
도 3a는 클론 S130(서열번호: 71)에 대한 ELISA 결합 곡선을 도시한다. 이 클론은 포유동물 SIRP-α 단백질에 걸쳐 교차-반응성을 나타내었으며, 사이노몰구스 및 뮤린 단백질뿐만 아니라 다중 인간 변이체에도 결합하였다(도 3b). 그러나, 인간 SIRPγ와의 결합이 관찰되지 않았기 때문에 그것의 결합은 또한 동형체-특이 적이었다. 이 클론은 고친화성 SIRP-α 변이체에 결합된 CD47을 함유하는 사전-형성된 복합체에 대한 어떠한 결합도 검출되지 않았기 때문에 SIRP-α와 CD47 사이의 상호작용의 차단제로서 확인되었다.
도 4a는 클론 S121(서열번호: 75)에 대한 ELISA 결합 곡선을 나타낸다. 이 클론은 또한 포유동물 SIRP-α 단백질을 가로 지르는 교차-반응을 나타냈지만, 이는 또한 인간 SIRPγ에 결합하여 범-ISO 형성을 나타냈다(도 4b). 이 클론은 또한 SIRP-α와 CD47 사이의 상호작용의 차단제로 확인되었다.
도 5a는 클론 S137(서열번호: 73)에 대한 ELISA 결합 곡선을 도시한다. 도 3a 및 3b에 도시된 바와 같이, 이 클론은 인간 SIRPγ에 결합하지 않으므로(도 5b), 동형체-특이적 결합을 갖는 포유동물 SIRP-α 단백질에 대한 교차-반응성을 입증하였다. 그러나, 이 클론은 SIRP-α와 CD47 사이의 상호작용의 비-차단제로서 확인되었는데, 이는 사전-형성된 복합체에 결합하기 때문이다.
도 6a는 클론 S128(서열번호: 70)에 대한 ELISA 결합 곡선을 도시한다. 이 클론은 영장류 SIRP-α 단백질을 통한 동형체-특이적 교차-반응성을 입증하였지만, 뮤린 단백질에는 결합하지 않았다(도 6b). 이 클론은 또한 SIRP-α와 CD47 사이의 상호작용제의 차단제로 확인되었다.
도 7a는 클론 S135(서열번호: 72)에 대한 ELISA 결합 곡선을 나타낸다. 도 6a 및 6b에 도시된 클론과 유사하게, 이 차단 클론은 영장류 SIRP-α 단백질을 가로질러 교차-반응성을 나타내지만, 이는 뮤린 단백질에 결합하지 않았다(도 7b). 클론 S128과 달리, 이 클론은 인간 SIRPγ와 교차-반응하는 것으로 밝혀졌다.
도 8a는 클론 S126(서열번호: 69)에 대한 ELISA 결합 곡선을 나타낸다. 이 클론은 인간-특이적이기 때문에 인간 SIRP-α 변이체에 결합하지만 다른 펩타이드에는 결합하지 않았다(도 8b). 이 클론은 SIRP-α와 CD47 사이의 상호작용의 차단제로서 확인되었다.
도 9a는 클론 S138(서열번호: 74)에 대한 ELISA 결합 곡선을 나타낸다. 이 클론은 인간 SIRP-α 변이체 1에만 결합하여 높은 수준의 종내 및 종간 결합 특이성을 나타내었다(도 9b). 이 클론은 SIRP-α와 CD47 사이의 상호작용의 차단제로서 확인되었다.
결론적으로, SIRP-α 단백질에 대한 다수의 특유의 결합 특이성을 갖는 신규한 항체가 특성규명되었다. 도 10a는 닭 항체를 생성하는 닭으로부터 수득된 scFv-Fc 가변 도메인 서열을 나타내는 정렬을 제공한다(CDR은 표시됨). 도 10b는 인간 항체를 생성하는 닭으로부터 수득된 scFv-Fc 가변 도메인 서열을 나타내는 정렬을 제공한다(CDR은 표시됨). 이들 연구는 항-SIRP-α 항체의 동정을 위한 항체 다양성의 공급원으로서 닭의 유용성을 강조한다.
항체가 CD47에 대한 SIRPα의 결합을 차단할 수 있는지를 평가하기 위해, ELISA에 의한 스크리닝 이외에 SPR 스크리닝도 수행하였다. 상기 기재된 바와 같이 제조된 항-인간 IgG-Fc 고정화된 GLC 표면을 사용하여 항체 포획을 수행하였다. 야생형 SIRP-α보다는 높은 nM 친화성을 갖는 CD47(서열번호: 16)을 결합하도록 조작된 SIRPα 변이체(서열번호: 17)가 스크린에 사용되었다. 이것은 야생형 SIRP-α 변이체가 CD47에 대한 낮은 uM 결합 친화도를 갖기 때문에 안정한 복합체 상호작용으로 샌드위치 형성을 평가할 수 없기 때문이다. 인산염 버퍼 식염수(PBS, pH 7.4)에 작동 완충제로 0.01% Tween-20(PBST)를 보충하였다.
먼저, 10mM 아세트산나트륨 완충액(pH4.5) 중의 항체를 함유하는 약 5~10㎕의 사전-여과된 배지를 2분 동안 30ul/분으로 주입하고, 항-인간 IgG-Fc 고정화된 GLC 표면 위에 포획하고, 이어서 100uL/분으로 1분의 짧은 완충액 유동이 이어졌다. 다음으로, 0, 20, 55, 500 또는 1500nM의 상이한 농도로 CD47(서열번호: 16)과 사전-혼합된 100nM의 고친화성 SIRP-α 변이체(서열번호: 17)를 100uL/분으로 10분간 해리시간과 함께 별도로 주사하였다. 하기 설명에서, SIRP-α는 서열번호: 17을 지칭한다.
CD47에 대한 SIRP-α의 결합을 차단하지 않는 항체의 경우, SIRP-α/CD47 복합체에 결합하여 샌드위치를 형성할 것으로 기대된다. 따라서, CD47의 농도가 증가함에 따라, 증가된 샌드위치 형성으로 인해 공명이 증가하였다. 항체 클론 S123이이 프로파일과 일치하는 것으로 나타났다. S123에 대한 프로파일의 예는 도 12a에 도시된다.
SIRP-α와 CD47의 결합을 차단하는 항체의 경우, 프로파일은 비-차단 항체와 상이할 것이다. 항체가 CD47과 동일한 결합 부위에 대해 경쟁하고 대부분/모든 SIRP-α가 CD47과 복합체화되기 때문에 CD47의 농도가 증가함에 따라 항체에 결합하는데 이용가능한 SIRP-α 분자의 수는 더 적을 것으로 예상된다. 따라서, 혼합물내 CD47의 농도가 증가함에 따라 공명(RU)이 감소할 것으로 기대된다. 항체 클론 S119가 이 프로파일과 일치하는 것으로 밝혀졌다. S119에 대한 프로파일의 일례가도 12b에 도시되어 있다.
차단제 및 비-차단제 이외에, "킥오프(kick off)" 프로파일을 갖는 제3 카테고리의 항체가 단리되었다. 항체 클론 S118이 이 프로파일과 일치하는 것으로 밝혀졌다. S118에 대한 프로파일의 예는 도 12c에 도시되어 있다. CD47의 보다 높은 농도(예를 들어, 500nM 및 1500nM CD47)에서 300RU의 높은 공명이 나타내는 바와 같이 항체, SIRP-α 및 CD47 사이에 일시적인 샌드위치가 형성되어, 시간 경과에 따라 부식되었다. 이러한 공명 단위의 감소는 항체가 복합체에서 SIRP-α에 결합할 수 있었고 "SIRP-α를 킥 오프하여" CD47에 결합하지 못했음을 나타낸다.
각각의 SIRP 피분석물에 대한 각 클론의 결합의 Koff 비율은 SPR을 사용하여 결정하였다(표 C). SPR 스크리닝 조건이 본 명세서에 기술되었으며, Koff 값은 랑뮤어 동력학 적합화를 사용하여 결정되었다. CD47 차단 특성(차단, 비-차단, 킥-오프)은 표 C의 마지막 칼럼에 기재되어 있다. 각각의 항체는 그의 대응하는 SEQ ID NO.에 따라 확인된다. SIRP 피분석물 서열은 하기와 같다: CV1-3, 서열번호:18; v1, 서열번호:5; v2, 서열번호:6; 사이노1, 서열번호:11; 사이노2, 서열번호:12; m129, 서열번호:7; NOD, 서열번호:8; BL6, 서열번호:9; sirpb1, 서열번호:13; sirpg, 서열번호:15.
이들 데이터는 상이한 종내 및 종간 변이체에 걸쳐 SIRP-α 단백질에 대한 다양한 결합 특이성을 갖는 항체 클론이 확인되었음을 나타낸다. 인간 SIRPγ(서열번호: 15), 및 CD47의 IgSF 도메인(서열번호: 16)에 결합된 2개의 고친화성 SIRP-α 변이체(서열번호: 17 및 19)의 1:1 혼합물의 사전-형성된 복합체뿐만 아니라 인간 v1(서열번호: 5), 인간 v2(서열번호: 6), NOD 마우스(서열번호: 8), 및 사이노몰구스 SIRP-αD1 도메인(서열번호: 11)에 대한 결합곡선을 생성하여 상기 기재된 바와 같이 ELISA를 사용하여, 선택된 항체에 대한 결합 특이성을 추가로 특성규명하였다.
시험된 scFv-Fc 클론의 서열을 표 D에 제공한다.
이론에 의해 구속되기를 바라지 않으면서, 인간, 사이노몰구스 및/또는 뮤린 단백질 간의 교차-반응성 결합을 갖는 항체가 동물 모델 및 임상 시험 모두에서 항체의 특성규명을 허용할 수 있다고 생각된다. 이성체- 및/또는 변이체-특이적 결합을 갖는 항체는 특정 인간 모집단에 대한 개인화된 의약 접근 및/또는 관심의 특정 변이체에 대한 연구에 유용할 수 있다. 종내 및 종간 결합 특이성을 프로파일링하는 것 이외에, 본 명세서에 기술된 방법은 또한 CD47에 대한 결합으로부터 "SIRPα를 킥-오프"하는 항체뿐만 아니라 SIRP-α와 CD47 사이의 결합을 차단하거나 차단하지 않는 항체의 확인을 허용한다.
실시예 2: SIRP-α 단백질에 신규한 결합 특이성을 갖는 추가 항체의 동정
방법
K D 의 결정
다양한 종(인간 v1, 인간 v2, 사이노몰구스, 마우스 129, BL6, BALBc, NOD), SIRPβ 및 SIRPγ로부터의 SIPRα와의 항-SIRPα 항체의 상호작용을 하기 프로토콜에 따라 항체의 (GLC 칩을 통한) 직접적인 고정화 또는 (NLC 칩을 통한) 바이오티닐화된 단백질 A를 통한 포획, 2가지 방법을 사용하여 분석하였다. 모든 실험은 GLC 또는 NLC 센서 칩이 구비된 SPR-기반 ProteOn XPR36 바이오센서(BioRad, Inc, Hercules, CA)를 사용하여 25℃에서 수행하였다. 항체는 실시예 1에 기재된 바와 같이 FreeStyleTM 293-FS 세포(Thermo Fisher)를 사용하여 발현되었다. 정제는 표준 단백질 A 친화도 컬럼 크로마토그래피에 의해 수행하고, 용출된 항체는 PBS 완충액에 저장하였다.
러닝 완충액은 0.01% Tween-20(PBST+)을 갖는 PBS pH 7.4이었다. 모든 피분석물은 A280 흡광도에 의해 결정된 그들의 명목 농도로 사용하였으며, 그의 몰 계산된 소광 계수를 사용하였다. 피분석물은 다른 곳에서 기재된 바와 같이 "원-샷(one-shot)" 동력학 방식으로 주사하였다(예를 들어, Bravman, T. 등 (2006) Anal. Biochem. 358:281-288 참고).
GLC 칩을 사용하는 방법의 경우, 피분석물을 주사하고 Proteon 아민 커플링 키트를 사용하여 GLC 칩 상에 고정된 항-SIRPα 항체(약 1000 RU) 상에 유동시켰다. 고정화 단계를 위해, 1/100 희석된 EDAC/Sulpho-NHS 1:1(Biorad)을 사용하여 25μL/분으로 300초 동안 GLC 칩을 활성화시켰다. 항-SIRPα 항체를 10 mM 아세트산 나트륨 완충액(pH 4.5)에서 80 nM 농도로 희석하고, 30 μL/분으로 50초 동안 칩에 고정시켰다. 칩을 에탄올아민으로 25 μL/분으로 300초 동안 불활성화시켰다. 피분석물(예를 들어, 상이한 종으로부터의 SIRP-α, SIRP-β, SIRP-γ)을 100, 33, 11, 3.7, 1.2 및 0 nM의 명목 농도에서 "원-샷" 동력학 방식으로 주사하였다. 회합시간은 100μL/분에서 90초 동안 모니터링하고, 해리시간은 1200초 동안 모니터링하였다. Pierce IgG 용출 완충액/4M NaCl의 2:1 v/v 블렌드로 표면을 재생시켰다.
대안적으로, KD 결정은 NLC 칩을 통한 항체 포획을 사용하여 수행하였다. 이 경우, 15ug/mL 바이오티닐화된 단백질 A(Thermofisher)를 NLC 칩 위에 120초 동안 30uL/분으로 주사하여, 약 1000 내지 1200RUs의 고정화 반응을 얻었다. 다음으로, 항-SIRPα 항체(약 160nM)를 30uL/분으로 80초 동안 주사하였다. 피분석물(다른 종으로부터의 SIRPα, SIRP-β 및 SIRP-γ)을 명목 농도 100, 33, 11, 3.7, 1.2 및 0 nM에서 "원-샷" 동역학 방식으로 주사하였다. 25 ㎕/분으로 60초 동안 회합시간을 모니터링하고, 120초 동안 해리시간을 모니터링하였다. Pierce IgG 용출 완충액/4M NaCl의 2:1 v/v 블렌드로 표면을 재생시켰다.
반응 스폿 데이터(고정화된 단백질)로부터 스폿간(interspot) 데이터(고정화화되지 않은 단백질을 포함함)를 빼고, 이어서 피분석물 주사로부터 완충액 "블랭크" 피분석물 주사의 반응을 차감함으로써 바이오센서 데이터를 이중-참조하였다. 이중-참조된 데이터는 단순한 랑뮤어(Langmuir) 모델에 전반적으로 적합하였고, KD 값은 겉보기 동력학 속도 상수의 비율(KD = kd/ka)로부터 계산되었다.
결과
3개의 대표적인 항체(차단, 비-차단 및 "킥 오프" 항체)를 상기한 바와 같이 다양한 SIRP-α, -β, -γ 단백질과의 결합에 대해 추가로 특성규명하였다. 3개의 항체는 인간 서열을 함유하고 있으며, HuMab 닭 면역화 실험으로부터 유래되었다. 이들 항체는 L234A, L235A, G237A 및 N297A 돌연변이를 가진 전장 인간 IgG1 항체로서 시험하였다. 이 실험에서 검사된 SIRP-α 단백질은 인간 SIRP-α v1(서열번호: 5), 인간 SIRP-α v2(서열번호: 6), 사이노몰구스 SIRP-α(서열번호: 11), 인간 SIRPβ 동형체 1(서열번호: 13), 인간 SIRPβ 동형체 2(서열번호: 14) 및 인간 SIRPγ 동형체 1(서열번호: 15)에 상응된다. 인간 SIRPβ 동형체 1(서열번호: 13)은 SIRPβ1 동형체 1로서 또한 당 업계에 공지되어 있다.
3가지 항체에 대해 수득된 KD 값을 하기 표 E에 나타내었다.
다음으로, 선택된 마우스 SIRP-α 단백질에 대한 다양한 항체 클론의 결합 동력학을 상기 기재된 바와 같이 결정하였다. 시험된 마우스 단백질은 BALBc(서열번호: 10), BL6(서열번호: 9), NOD(서열번호: 8) 및 m129(서열번호: 7) SIRP-α 단백질을 포함한다. 결과는 하기 표 F-I에 요약되어 있다. "c"로 표지된 항체 클론을 전장 마우스 IgG2a 항체로 시험하고; "a"로 표지된 항체 클론을 L234A, L235A, G237A 및 N297A 돌연변이를 가진 전장 인간 IgG1 항체로 시험하였다.
상기 항체에 있어서, VH 및 VL 도메인 서열(각각)은 하기와 같다: AB136a: 서열번호: 133 및 134; AB3c: 서열번호: 242 및 243; AB21c: 서열번호: 135 및 136; AB25c: 서열번호: 137 및 138; AB27c: 서열번호: 139 및 140; AB66c: 서열번호: 141 및 142.
이들 결과는 다수의 항체 클론이 4개의 모든 마우스 SIRP-α 단백질에 결합하여 이들 항체를 생체내 마우스 모델에서의 특성규명에 적합하게 만든다는 것을 입증한다.
실시예 3: 항-SIRP-α 항체의 기능적 특성
이전의 실시예는 다양한 인간, 사이노몰구스 및/또는 뮤린 SIRP-α, SIRP-β 및 SIRP-γ에 대한 결합 특이성과 같은 다양한 특성의 어레이를 갖는 항-SIRP-α 항체의 동정 및 특성규명 및 항체가 SIRP-α와 CD47 사이의 결합을 차단하는지 여부를 기술한다. 특정 관심 카테고리를 나타내는 항체는 SIRP-α의 생물학적 기능에 미치는 영향을 특성화하기 위한 다양한 시험관내 및 생체내 기능적 검정에서 검사하였다. 특히, "차단(blocking)"(즉, SIRP-α와 CD47 사이의 결합을 차단하는 항체)과 "비-차단(non-blocking)"(즉, SIRP-α와 CD47 사이의 결합을 차단하지 않는 항체)을 다양한 시험관내 및 생체내 기능적 검정에서 활성에 대하여 특성규명하였다.
상기한 바와 같이, "a"로 표지된 항체 클론을 L234A, L235A, G237A 및 N297A 돌연변이를 갖는 전장 인간 IgG1 항체로서 시험하였다. "b"로 표지된 항체 클론을 N297A 돌연변이를 갖는 전장 마우스 IgG1 항체로서 시험하였다. "c"로 표지된 항체 클론을 전장 마우스 IgG2a 항체로서 시험하였다.
방법
종양 세포주 배양
10% 열-불활성화된 우태 혈청(Gibco), 1% 페니실린/스트렙토마이신(Gibco) 및 1% Glutamax(Gibco)로 보충한 RPMI(Gibco)로 구성된 성장 배지에서 DLD-1(인간 결장직장 선암종) 및 OE19(인간 식도 암종) 세포를 유지하였다.
인간 단핵구-유래된 대식세포의 유도 및 배양
태평양 혈액 센터(Blood Center of the Pacific)로부터 Trima 잔류물을 수용하고, 포스페이트 완충 식염수(PBS, Gibco)로 1:4로 희석하였다. 희석된 혈액을 4개의 튜브로 분할하고, 20 ml Ficoll-Paque Plus(GE Healthcare)로 밑에 깔았다. 튜브를 400 x g에서 30분 동안 원심분리하였다. PBMC를 계면으로부터 수집하고, FACS 완충액(0.5% 소 혈청 알부민(Gibco)을 갖는 PBS)에 재현탁시켰다. 제조사의 프로토콜에 따라 단핵구 단리 키트 II(Miltenyi Biotec) 및 LS 컬럼(Miltenyi Biotec)을 사용하여 음성 선택에 의해 CD14+ 단핵구를 정제하였다.
비분극 대식세포의 경우, 10% 인간 AB 혈청(Corning), 1% 페니실린/스트렙토마이신, 및 1% Glutamax로 보충한 25 ml IMDM(Gibco)에서 디쉬 당 1천만개의 세포로 15 cm 조직 배양판(Corning)에 CD14+ 단핵구를 시딩하였다. 세포를 7 내지 10일 동안 배양하였다.
M2 분극된 대식세포의 경우, 10 우태 혈청(Thermo Fisher), 1% 페니실린/스트렙토마이신, 및 1% Glutamax로 보충한 25 ml RPMI(Gibco), 및 M-CSF 50ng/ml(Miltenyi)에서 디쉬 당 6백만개의 세포로 15 cm 조직 배양판(Corning)에 CD14+ 단핵구를 시딩하였다. 세포를 7 내지 10일 동안 배양하였다.
시험관내 식균작용 검정
DLD-1 및 OE19 세포를 20 ml PBS로 2회 세정하고, 10 ml TrypLE Select(Gibco)에서 37℃에서 10분 동안 인큐베이션함으로써 배양판으로부터 탈착하였다. 세포를 원심분리하고, PBS로 세정하고, 배지에 재현탁시켰다. 세포를 제조사의 지침에 따라 Celltrace CFSE 세포 증식 키트(Thermo Fisher)로 표지하고, IMDM에 재현탁시켰다. 대식세포를 20 ml PBS로 2회 세정하고 10 ml TrypLE Select에서 37℃에서 20분 동안 인큐베이션하여 배양판으로부터 탈착하였다. 세포를 세포 스크레이퍼(Corning)로 제거하고, PBS로 세척한 다음, IMDM에 재현탁시켰다.
100,000개의 DLD-1 또는 OE19 세포, 50,000개의 대식세포, 100 nM 내지 6.4 pM의 항-SIRP-α 항체의 5배 연속 희석액, 및 1 또는 0.01 ug/ml의 세툭시맙(절대 항체), 0.01 ug/ml의 트라스투주맙 또는 동일한 아이소타입(Southern Biotech)의 대조군 항체를 함유하는 초-저 부착 U-바닥 96 웰 플레이트(Corning)에서 식균작용 검정을 조립하였다. 시험된 모든 항-SIRP-α 항체는 마우스 IgG2a를 가진 AB136c를 제외하고 L234A, L235A, G237A 및 N297A 돌연변이를 갖는 인간 IgG1을 가졌다. 플레이트를 37℃에서 5% 이산화탄소가 포함된 가습된 배양기에서 2시간 동안 배양하였다. 세포를 400 x g에서 5분 동안 원심분리하여 펠렛화하고, 250 ㎕ FACS 완충액에서 세정하였다. 10 μl 인간 FcR 차단 시약(Miltenyi Biotec), 0.5 μl 항-CD33 BV421(Biolegend) 및 0.5 μl 항-CD206 APC-Cy7(Biolegend)을 함유하는 50 μl FACS 완충액에서 얼음 상에서 대식세포를 15분 동안 염색하였다. 세포를 200 μl FACS 완충액으로 세정하고, 250 μl PBS로 세정한 다음, PBS로 1:1000 희석한 50 μl 고정가능 생존력 염료(Fixable Viability Dye) eFluor 506(ebioscience)에서 30분 동안 얼음 상에서 염색하였다. 세포를 250 μl FACS 완충액에서 2회 세척하고 75 μl Cytofix(BD Biosciences)에서 얼음 상에서 30 분간 고정시켰다. 세포를 175㎕ FACS 완충액에서 세정하고, 75㎕ FACS 완충액에 재현탁시켰다. 세포를 FACS Canto II(BD Biosciences)에서 분석하고, Flowjo 10.7(Treestar)에 의한 후속 데이터 분석을 수행했다. 죽은 세포는 e506-음성 모집단에서 게이팅을 통해 배제시켰다. 식균작용된 종양 세포를 가진 대식세포는 CD33, CD206 및 CFSE에 대해 양성인 세포로 확인되었다.
생체내 수지상 세포 활성화
대조군 랫트 항-마우스 항-sIRP-α 길항적 항체(클론 p84), 랫트 IgG 대조군, AB136b(N297A 돌연변이 포함 마우스 IgG1 Fc 영역을 가진 AB136), 마우스 IgG 대조군 또는 10 mg/kg의 비히클(PBS)을 Balb/c 마우스(n = 3/그룹)에 정맥내 주사하였다. 주사 후 5시간 후, 비장을 수확하고 70μM 세포 여과기를 통한 기계적 해리에 의해 단일 세포 현탁액으로 처리하였다. 세포를 PBS로 2회 세정하고, 적혈구 용해를 수행하였다. 이어서, 세포를 PBS/10% FBS로 추가로 2회 세정하고, 세포 염색을 위해 준비하였다. 세포를 형광색소 접합된 MHC-II, CD8, 33D1, CD4, CD11c, CD86, CCR7 및 생존력 염료로 4도에서 1시간 동안 염색하였다. 세포를 2회 세정하고, BD Canto II 유동 세포측정기를 사용하여 분석하고, 데이터를 Flowjo를 사용하여 처리하였다.
생체내 항-종양 활성
CT26 동종 마우스 결장 암종 모델에 대해, CT26 세포를 BALB/c 마우스의 피하에 이식하고, 그룹으로 무작위화하였다(8~9마리의 마우스/그룹). 처리 그룹은 비히클(PBS) 및 AB136b를 포함하였다. AB136 항-SIRP-α는 N297A 돌연변이를 포함하는 마우스 IgG1 Fc 영역을 가졌다. 종양이 이식 후 7 또는 8일째에 평균 75~80mm3일 때 치료를 개시하였다. 마우스에게 AB136b를 3주 동안 매주 2회 복강내(IP)로 3mg/kg을 투여하였다. 종양이 약 2000mm3에 도달했을때 동물을 희생시켰다.
MC38 동종 마우스 결장 암종 모델에 대해, MC38 세포를 C57BL/6 마우스의 피하에 이식하고 그룹으로 무작위화하였다(8~10마리의 마우스/그룹). 처리 그룹은 비히클(PBS), AB25b, AB25c, AB27b, AB3b 및 AB136b를 포함하였다. 모든 항-SIRPα 항체는 마우스 IgG2a를 갖는 AB25c를 제외하고 N297A 돌연변이를 포함하는 마우스 IgG1 Fc 영역을 가졌다. 종양이 이식 후 7일째에 평균 60~65mm3일 때 치료를 개시하였다. 마우스에게 항-SIRPα를 3주 동안 매주 2회 복강내(IP)로 10 mg/kg을 투여하였다. 종양이 약 2000mm3에 도달했을때 동물을 희생시켰다.
결과
다양한 항-SIRP-α 항체를 분극된 및 비분극 대식세포를 사용하여 시험관내 식균작용 검정에서 식균작용의 유도에 대해 검사하였다.
추가의 항-SIRP-α 항체 AB3 및 AB45를 하기 기재된 실험에서 시험하였다. 둘 모두 비-차단 항체이다. 각각의 SIRP 피분석물에 대한 각각의 클론(scFv-Fc 포맷)의 결합의 koff 비율은 SPR을 사용하여 결정하였다(표 J1). SPR 스크리닝 조건이 본 명세서에 기재되었으며, Koff 값은 랑뮤어 동력학 적합화를 사용하여 결정하였다. SIRP 피분석물 서열은 하기와 같다: CV1-3, 서열번호: 18; v1, 서열번호: 5; v2, 서열번호: 6; 사이노1, 서열번호: 11; 사이노2, 서열번호: 12; m129, 서열번호: 7; NOD, 서열번호: 8; BL6, 서열번호: 9; sirpb1, 서열번호: 13; sirpg, 서열번호: 15.
도 13a 및 도 13b에 도시된 바와 같이, 비-차단 항-SIRP-α 항체 AB3a는 M2 분극된 대식세포에서 DLD-1 종양 세포의 식균작용을 유도하는 것으로 밝혀졌다. 특히, 세툭시맙(항-EGFR 항체) 및 AB3a로 대식세포를 처리하면 종양 세포 식균작용이 강력하게 유도되었다. 마찬가지로, 비-차단 항-SIRP-α 항체 AB45a는 DLD-1 종양 세포 M2 분극된 대식세포의 식균작용을 유도하고, 세툭시맙(항-EGFR 항체) 및 AB45a로 대식세포를 처리하면 종양 세포 식균작용이 강력하게 유도되었다(도 13c 및 도 13d). 트라스투주맙(항-HER2 항체)와 함께 투여한 경우, 차단 항-SIRP-α 항체 AB119a(도 13e) 및 AB135a(도 13f)는 또한 OE19 종양 세포의 식균작용을 유도하는 것으로 밝혀졌다. 비-차단 항-SIRP-α 항체 AB136c는 또한 DLD-1 종양 세포의 식균작용을 유도하는 것으로 밝혀졌다(도 13g).
수지상 세포 활성화 검정을 사용하여 비-차단 항-SIRP-α 항체 AB136b(각각 VH 및 VL 도메인 서열에 대한 서열번호: 133 및 134)의 생체내 효과를 특성화하였다. CD47 결합을 통해 비장 수지상 세포 상에 마우스 SIRP-α 수용체를 관여시키지 않으면 비장 수지상 세포 활성화를 유발시킨다. 대조군 항-SIRP-α 길항제 항체 p84는 마우스에 정맥내 주사했을 때 비장 수지상 세포를 활성화시켰다(도 14). 비-차단 항-SIRP-α 항체 AB136b를 생체내에서 시험하여 수지상 세포 활성화를 유도하는지를 결정하였다. 흥미롭게도, AB136b 처리는 p84와 유사한 수준에서 비장 수지상 세포의 활성화를 유도하였다(도 14).
다음으로, 다양한 항-SIRP-α 항체의 생체내 항-종양 효과를 2개의 동종 마우스 결장 암종 모델에서 분석하였다. 차단 항-SIRP-α 항체 AB25b, AB25c 및 AB27b 및 비-차단 항-SIRP-α 항체 AB3b 및 AB136b의 항-종양 활성을 MC38 동종 마우스 결장 암종 모델에서 검사하여 그것의 단일 작용제 활성을 평가하였다. MC38 동종 마우스 모델에서 비히클 단독(도 15)과 비교하여 차단(AB25b, AB25c 및 AB27b) 및 비-차단(AB3b 및 AB136b) 항-SIRP-α 항체 모두 10 mg/kg에서 종양 형성을 지연시켰다. 25일째, 항-SIRPα 항체로 처리된 그룹은 AB25b 및 AB27b에 대해 600mm3 미만의 3마리 마우스를 갖고, AB25c 및 AB3b에 대해서는 600mm3 미만의 4마리 마우스를 갖고, 및 AB136b에 대해서는 600mm3 미만의 5마리 마우스를 가진 반면, 비히클-처리된 그룹은 600mm3 이하의 2마리 마우스만 가졌다.
비-차단 AB136b의 항-종양 활성을 단일 작용제 활성을 평가하기 위해 CT26 동종 마우스 결장 암종 모델에서 다음에 평가하였다. 이러한 결과는 AB136b 처리가 CT26 동종 마우스 모델(도 16)에서 비히클 단독과 비교하여, 3mg/kg에서 종양 형성을 지연시킨다는 것을 확인했다.
종합하여, 이들 결과는 대식세포에 의한 종양 세포 식균작용 유도, 수지상 세포 활성화 및 생체내 종양 성장 억제에서 항-SIRP-α 항체 처리의 효능을 입증한다. 다중 차단 항-SIRP-α 항체는 종양 세포 식균작용을 촉진하고 수지상 세포를 활성화하며 생체내 종양 성장을 차단하는 것으로 밝혀졌다. 그러나 놀랍게도 비-차단 항-SIRP-α 항체로 치료한 결과 2개의 상이한 동종 마우스 종양 모델에서 비장 수지상 세포를 활성화시키고 생체내 종양 성장을 억제하는 것으로 밝혀졌다. 비-차단 항-SIRP-α 항체가 식균작용을 증가시키고 생체내 종양 성장을 차단할 수 있다는 발견은 놀랍고 예상치 못했던 것이다. 이전의 연구는 차단 항-SIRP-α 항체만으로 생체내 종양 성장을 억제할 수 있다고 제안했다(Yanagita, T. 등 (2017) JCI Insight 2:e89140 참고).
실시예 4: SIRP-α상의 항-SIRP-α 항체 에피토프의 구조적 분석
상기 실시예 1 내지 3에서 기재된 바와 같이, 항-SIRP-α 항체는 SIRP-α에 대한 결합의 다양한 특이성 및 방식으로 생성되었으며, 예를 들어 SIRP-α에 대한 CD47 결합을 차단하는 항체, SIRP-α에 대한 CD47의 결합을 차단하지 않는 항체, 및 SIRP-α에 결합하여 CD47 결합에 대한 친화성을 감소시키는 항체("킥 오프" 항체)이다. 이들 유형의 항체가 CD47과 비교하여 SIRP-α의 D1 도메인에 어떻게 결합 하는지를 이해하고, 선택된 항-SIRP-α 항체의 에피토프를 특성화하기 위해 구조적 분석을 착수했다.
방법
결정학 및 구조적 분석
Fab 및 SIRPα의 발현은 이전에 확립된 프로토콜과 유사하였고, 단백질 정제를 위한 친화도 크로마토그래피 및 크기 배제의 전통적인 방법을 포함하였다. Expi293(서열번호: 296)에서 단백질 생산의 용이성을 위해 서열번호: 5와 비교하여 N80A 돌연변이를 갖는 인간 SIRP-α v1 돌연변이체를 사용하였다. N80A SIRPα를 사용하는 목적은 결정화에 가장 적합한, 균질한, 비-당화된 형태의 SIRPα를 생산하는 것이었다. 최종 정제 완충액은 10 mM Tris pH 7.5 및 50 mM NaCl 만으로 최소이다. 정제된 복합 샘플은 4℃에서 안정하고, 결정화 실험 및 최종적인 구조 결정을 위해 제조시 10~12 mg/mL로 농축하였다.
Fab:SIRPα 복합체 프로젝트를 위한 방법은 희소 매트릭스 기술로 시작하여 잘 정립된 원리 또는 결정학을 따르고, 주문형 최적화된 조건을 유도하여 일상적인 프로토콜을 수립했다. 결정화는 시팅 드롭 증기 확산 기술을 이용하여 수행하였다. 초기 희소 매트릭스 스크리닝을 위해, Qiagen®을 통해 상업적으로 입수가능한 조건 키트를 사용했다(표 J2). 이들 결정화 실험은 결정화 조건에 대한 단백질의 비율의 변화에 의해 드롭되었다. 비율은 1:1, 2:1 및 3:1 단백질의 범위에서 96 웰(8 x 12) 트레이의 서브 웰에서 1 μL의 총 용적으로 조건으로 설정했다. 100㎕의 결정화 조건을 웰 저장소에 놓았다. 이들 적하(drop)를 모기 드롭 세팅 로봇을 사용하여 설정하였으며, 완료된 플레이트를 밀봉하고, 및 12℃ 인큐베이터에 저장하였다. 초기 단백질 결정뿐만 아니라 드롭 침전, 응집, 상 분리, 비정질 형성을 포함하는 전개상황을 보기 위해 현미경으로 플레이트/드롭을 관찰하여 실험을 모니터링하였다.
결정화 요약 및 결정 수확
4개의 복합체의 결정화는 표 J3에 나타낸 바와 같이 두 가지 주요 조건의 유도체로 달성하였다. 결정 수확을 최적의 결정 형태로 수행하여 액체 질소에서 조작 및 저온-동결이 X-선 회절 스크리닝 및 가능한 데이터 수집 이전에 결정의 완전성을 위태롭게 하지는 않을 것이다. 아이싱(icing)을 방지하기 위해 동결시에 동결-보호제를 수행하였다. 전형적인 동결-보호제는 결정을 형성하는 결정화 조건에 20% 글리세롤을 첨가하는 것을 포함한다. 30% PEG 4000 이상의 조건에서 결정이 형성되면, 글리세롤을 첨가할 필요가 없다. PEG 4000의 높은 백분율은 실행가능한 동결-보호제로 거동했다. 복합체의 결정은 나일론 또는 Mitigen® 스타일의 저온 루프로 조작하였다. 단결정을 단리하고, 액체 질소로 급격한 동결이 일어나기 전에 단시간 동안 동결-보호제로 형성 및 이동된 드롭 밖으로 잘라냈다.
데이터 수집 및 처리
상기한 바와 같이 액체 질소 중에서 급속 냉동된 결정 상에서 데이터를 수집하였다. 이 샘플들은 진동 방법을 통한 후속 데이터세트 수집에 앞서 단백질 격자 회절을 스크리닝할 때 동결 스트림에 남아있었다. 수집은 어드밴스드 광자 공급원(Advanced Photon Source) 또는 다이아몬드 광원(Diamond Light Source)에서 일어났다. 데이터세트는 xia2 suite를 사용하여 감소되었다. xia2는 거대분자 결정학 데이터의 자동화 축소를 허용하는 래퍼 스크립트이다. 이 프로그램은 XDS, DIALS, Mosflm 및 Aimless와 같은 다중 데이터 축소 프로그램을 사용할 수 있다. 이들 프로그램을 사용하면 회절 데이터를 적절한 공간 그룹 및 단위 셀로 인덱싱하고, 강도를 통합하고, 각각의 특유의 반사의 강도를 추정할 수 있다. 초기 Complex 1 데이터세트의 경우, Fab 뿐만 아니라 SIRPα의 동족체 모델을 사용하는 CCP4 Suite의 Phaser MR(PDB CODE: 2UV3 및 PDB CODE: 4NM4 참고)를 사용하여 분자 대체(MR)를 통해 상들을 계산했다. 복합체 2, 3 및 4의 후속 데이터세트의 경우 복합체 1의 완료된 구조 모델 좌표가 위상 계산 및 초기 모델 빌드의 검색 모델로 사용되었다.
구조체 생성 및 정제
모델 구축은 Coot 프로그램을 이용했다. 예를 들어, 복합체 1은 ASU에서 4 분자로 계산되었으므로, SIRPα와 복합체를 이루는 4쌍의 AB119f를 구축하여, 구조체 모델을 완성한다. 구조체 구축 전략은 표적 단백질의 공지된 서열을 따라 아미노산 잔기를 전자 밀도로 구축하는 것이었다. 데이터의 품질은 관측된 결정 데이터세트로의 구조 모델의 적합성과 직접적으로 관련이 있다. 따라서, 복합체의 3차 구조체를 구축하는 것은 확립된 프로토콜을 따랐다. 처음에는 잔기의 펩타이드 본(bone)이 구축되었다. 전자 밀도 맵이 허용하는 경우, 올바른 잔기 측쇄의 배치가 뒤따른다. 단백질 서열의 최초 아미노산이 모델링되지 않은 경우, 그것은 각각의 측쇄에 대한 밀도 부족으로 인한 것이며, 따라서 아미노산의 펩타이드 백본만이 모델링될 수 있고 알라닌 잔기 측쇄가 제자리에 형성된다. 서열의 스트레치는 무질서한 영역일 수 있으며, 아미노산 백본의 배치에 대해서조차도 밀도의 부족으로 인해 구축될 수 없다. 그 다음에 CCP4 Suite의 일부인 Refmac 프로그램을 통해 계속해서 개량 작업이 진행되었다. 개량 프로그램은 최대 가능성 오차(Maximum Likelihood residual)를 통해 좌표 파라미터를 최소화하는데 사용한다. 모델 파라미터가 Rvalue, 결합 길이 및 각도, 및 Ramachandran fit를 포함한 파라미터에 유리한 통계적 허용오차로 떨어지면 개량이 완료되었다. 또한 모델의 물리적인 허용오차를 체크하기 위해 Molprobity를 사용하여 완전하고 적절한 구조체 결정을 보장했다.
에피토프 맵핑 및 중첩(superimposition) 분석
에피토프에 대한 항원의 매립된 표면적은 항원 단독의 용매-접근가능한 표면적과 항체의 Fab 단편과의 복합체내 항원 사이의 차이로서 계산하였다. 반대로, 파라토프에 대한 항체 중쇄 및 경쇄의 매립된 표면적은 fab 단편 단독의 용매-접근가능한 표면적과 그 항원과의 복합체의 차이로서 계산하였다. 표면 접근가능한 영역은 1.4Å의 탐침 반경을 갖는 롤링 볼 방법에 의해 계산하였다. 매립된 표면적은 Å로 보고된다. 모든 항체:SIRPα 복합체는 각각의 구조체로부터 SIRPα를 선택하고 그것의 탄소 원자를 중첩시킴으로써 중첩시켰다. 분석에 사용된 CD47:SIRPα 복합체(V1 변이체) 구조체는 PDB:4CMM이다. 중첩과 RMSD 계산은 PYMOL을 사용하여 수행하였다.
결과
먼저, SIRP-α에 결합된 항체 119 Fab를 차단하는 구조체를 결정하고, SIRP-α에 결합하는 CD47과 비교하였다. 도 17a에 도시된 바와 같이, 항체 119 및 CD47은 SIRP-α D1 도메인의 유사한 에피토프에 결합하였다. 항체 119 에피토프의 SIRP-α 잔기의 56%는 CD47 에피토프에서도 발견되었지만, CD47 에피토프의 SIRP-α 잔기의 75%는 항체 119 에피토프에서도 발견되었다. (상기 기재된 매립된 표면적 변화에 의해 결정된 바와 같이) 항체 119와의 상호작용에 참여하는 SIRP-α 잔기는 음영을 나타내고, 도 17b에서는 공간-채워진 모델로 도시되었다. 중쇄 잔기 N31, S53, D55, Y57, T99, S101 및 W102(N31은 도 17b에 도시된 구조 배향에서 보이지 않음) 및 경쇄 잔기 Y92 및 W94(각각 서열번호: 335 및 97에 따른 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 기초함)를 포함하는, 항체 119 Fab 파라토프로부터의 핵심 잔기가 또한 도시된다(흑색 스틱).
도 18a는 SIRP-α D1 도메인에 결합하는 CD47과 SIRP-α D1 도메인에 결합하는 비-차단 항체 136 Fab 사이의 비교를 도시한다. 항체 136 및 CD47의 SIRP-α 결합 에피토프는 완전히 중첩되지 않는 것으로 밝혀졌다. 항체 136과의 상호작용에 참여하는 SIRP-α 잔기는 음영 처리되고, 도 18b에서는 공간-채워진 모델로 도시된다. 중쇄 잔기 E56, Y59 및 R102 및 경쇄 잔기 Y92 및 R94(서열번호: 133 및 134에 따른 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 기초함)를 포함하는, 항체 136 Fab 파라토프로부터의 핵심 잔기가 또한 도시된다(흑색 스틱).
도 19a는 SIRP-α D1 도메인에 결합하는 CD47과 SIRP-α D1 도메인에 결합하는 비-차단 항체 3 Fab 사이의 비교를 도시한다. 항체 3 및 CD47의 SIRP-α 결합 에피토프는 또한 완전히 중첩되지 않는 것으로 밝혀졌다. 항체 3과의 상호작용에 관여하는 SIRP-α 잔기는 음영처리되고, 도 19b에서는 공간-채워진 모델로서 도시된다. 중쇄 잔기 R56 및 G100 및 경쇄 잔기 R24, R26, Y86 및 G88(SEQ ID NOs: 242 및 243에 따른 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 기초함)을 포함하는, 항체 3 Fab 파라토프로부터의 핵심 잔기가 또한 도시된다(흑색 스틱).
도 19c는 SIRP-α D1 도메인에 대한 CD47 결합과 SIRP-α D1 도메인에 결합하는 "킥 오프" 항체 115 Fab 사이의 비교를 도시한다. 항체 115의 SIRP-α 결합 에피토프는 CD47의 에피토프에 인접한 것으로 밝혀졌다. mAb 115가 CD47의 에피토프에 인접한 SIRP-α D1 도메인의 에피토프에 결합하는 것으로 밝혀졌지만, 115 에피토프의 일부는 CD47 자체와 중첩되는 것으로 보인다. 두 에피토프를 비교하면, 2개의 동일한 잔기가 존재하여, 각각의 에피토프의 중첩되지 않는 부분으로부터의 상호작용이 115 Fab 및 CD47이 SIRP-α에 동시에 결합할 수 있게 함을 시사한다. 본 명세서에 기재된 동력학 분석은 항체 115가 SIRP-α 및 CD47과 일시적 복합체를 형성하지만, SIRP-α D1 도메인에 대한 CD47의 친화도를 감소시킨다는 것을 입증한다. 항체 115와의 상호작용에 참여하는 SIRP-α 잔기는 도 19d에 음영표시된다. 중쇄 잔기 S31, Y32, N52, Y100 및 W102 및 경쇄 잔기 K32 및 Y92(서열번호: 273 및 274에 따른 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열에 기초함)를 포함하는, 항체 115 Fab 파라토프로부터의 핵심 잔기가 또한 도시된다.
도 20a는 SIRP-α에 결합하는 CD47과 비교하여, SIRP-α에 대한 항체 119, 136, 3 및 115의 결합을 도시한다. 차단 항체 119는 비-차단 항체 136 및 3의 SIRP-α 에피토프와 비교하여, 완전히 비-중첩 SIRP-α 에피토프에 결합하는 것으로 밝혀졌다. 이들 상호작용에 참여하는 SIRP-α 및 항체 잔기는 표 K1에 요약되어 있다. CD47과 상호작용하는 것으로 결정된 SIRP-α 잔기는 하기와 같이 결정되었다: 29, 30, 31, 33, 34, 35, 36, 37, 50, 51, 52, 53, 54, 66, 67, 68, 69, 74, 93, 96, 97, 98, 99, 및 101(서열번호: 5에 따름). 도 20b는 SIRP-α(서열번호: 296에 따른 잔기)에 결합하는 CD47 및 항-SIRP-α Fab 119, 136, 3 및 115에 대한 에피토프를 요약하고, 매립된 표면적 변화를 열거한다. 본 명세서에 기재된 바와 같이, 파라토프를 나타내기 위해 사용된 항체의 아미노산 잔기의 넘버링은 예를 들어, 항체 잔기의 카밧 또는 초티아 넘버링이 아닌, 중쇄 또는 경쇄의 아미노산 서열에 따른 넘버링에 기초한다.
이 결과는 CD47과 SIRP-α 사이의 결합 계면뿐만 아니라 SIRP-α D1 도메인과 다양한 항-SIRP-α 항체 사이의 결합 계면을 설명한다. 그들은 또한, 항체 119가 CD47과 SIRP-α 사이의 결합을 차단한다는 것(그것들은 중첩된 SIRP-α 에피토프를 공유하기 때문에), 항체 136과 3은 결합을 차단하지 않는다는 것(그들의 에피토프는 CD47의 에피토프와 중첩되지 않기 때문에), 항체 115가 SIRP-α를 결합하는 것으로부터 "CD47을 킥 오프한다"는 것(약간만 중첩하는 SIRP-α 에피토프를 공유하기 때문에)을 관찰하기 위한 구조적 근거를 제공한다. 이들 연구는 각각의 상호작용에 참여하는 특정 항체와 SIRP-α 잔기를 추가로 강조한다.
이들 항체가 결정학에 의해 정의된 비-차단제(3, 136), 차단제(119) 및 킥오프(115) 항체의 SIRPα 결합 에피토프에 의해, 추가의 항-SIRPα 항체에 대한 결합 위치는 실시예 5에 기재된 에피토프 비닝을 수행하는 것을 특징으로 할 수 있다. 예를 들어, SIRPα에 대한 결합에 대해 비-차단제 136과 경쟁하는 임의의 항-SIRPα 항체에 대해, 이들 항체가 결정학에 의해 정의된 바와 같은 136과 유사한 결합 에피토프를 공유할 것으로 예측할 수 있다.
실시예 5: 항-SIRP-α 항체의 에피토프 비닝
공유된 및 구별되는 에피토프를 갖는 항체를 카테고리화하기 위해 SIRP-α에 의한 에피토프 비닝 실험에서 상기 기재된 항-SIRP-α 항체를 다음으로 분석하였다.
방법
에피토프 비닝
간단히, 에피토프 비닝은 도 21a에 도시된 바와 같이 수행하였다. 제1 항-SIRP-α 항체를 칩 상에 고정화시킨 후, 인간 SIRP-α v1(서열번호: 5)을 주사하였다. 제2 항-SIRP-α 항체를 주사했다. 제2 항체가 제1 항-SIRP-α 항체와 SIRP-α 사이에 형성된 복합체를 결합시킬 수 있다면, 제1 항체 및 제2 항체는 상이한 에피토프에 결합하는 것으로 결정되었다. 제2 항체가 결합할 수 없는 경우, 제1 및 제2 항체는 에피토프를 공유하는 것으로 결정되었다.
칩에 고정화된 항-SIRP-α 항체(A)를 사용하고 항-SIRP-α 항체(B-F)를 주사한 비닝 검정의 예시적인 결과를 도 21b에 나타내었다. 항-SIRPα 항체 (B), (E) 및 (F)는 복합체와 함께 샌드위치를 형성하며, 이것은 (각각의 항-SIRPα 항체의 주사시) 60초에 증가하는 RU로 표시된다. 이와 같이, 이들은 항-SIRPα(A)와 상이한 에피토프에 결합하는 것으로 결정되며, 비닝 플롯(도 22a 및 22b)에서 백색 박스로 표시된다. 항-SIRPα 항체 (C) 및 (D)의 경우, 이들은 샌드위치를 형성하지 않았으며, 이는 각각의 항-SIRPα 항체를 주사한 후 안정적인 RU로 표시된다. 이와 같이, 이들은 항-SIRPα(A)와 동일한 에피토프에 결합하는 것으로 결정되고 비닝 플롯에서 회색으로 음영표시된다(도 22a 및 22b). 칩에 결합된 리간드(항-SIRPα)의 클론 번호는 행으로서 표시되고, 칩 상에 주사된 피분석물(항-SIRPα)에 대한 클론 번호는 도 22a 및 22b에서 칼럼으로 표시된다. "X"는 한 방향으로부터의 데이터가 다른 방향과 일치하지 않는 시나리오를 나타낸다.
먼저, 항-SIRPα 항체를 상기 기재된 바와 같이 Proteon 아민 커플링 키트(Amine Coupling Kit)를 사용하여 GLC 칩 상에 고정시켰다. 간단히 말하면, 고정화 단계에서, GLC 칩은 EDAC/Sulpho-NHS 1:1(Biorad)을 25μL/분으로 300초 동안 1/80로 희석하여 활성화시켰다. 항-SIRPα 항체를 10 mM 아세트산나트륨 완충액(pH 4.5)에서 80 nM 농도로 희석하고, 30 μL/분으로 50초 동안 칩에 고정시켰다. 칩을 25 μL/분으로 300초 동안 에탄올아민에 의해 불활성화시켰다. 그 후, SIRP-α v1(서열번호: 5)(100nM)을 100μL/분으로 60초 동안 먼저 주사한 다음, 60초 동안 100uL/분의 시험(100~150nM)에서 항-SIRPa 항체를 주사하였다. Pierce IgG 용출 완충액/4M NaCl의 2:1 v/v 블렌드로 표면을 재생시켰다. 수득한 센소그램을 사용하여 결합 프로파일에 따라 항체를 스코어링하고 상이한 빈으로 분류하였다.
결과
하기 항-SIRP-α 항체 클론을 비닝하였다: 3, 21, 25, 27, 45, 66, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 132, 135, 136, 137, 149, 161, 162, 173, 194, 209, 213, 및 218. 도 22a 및 도 22b에 도시된 바와 같이, 결과는 인간 SIRP-α v1에 결합하는 항-SIRP-α 항체의 각각의 방식(B: 차단, NB: 비-차단 및 KO: "킥 오프")이 별도로 비닝되었음을 실증하였다. 비-차단제의 경우, 항-SIRPα 항체는 그의 결합 프로파일에 기반하여 4개의 빈으로 추가로 분리될 수 있었다. 예를 들어, 항-SIRPα 항체 123, 149, 161, 162, 194 및 218을 빈5로 분류하였다. 항-SIRPα 항체 3, 173, 209 및 213을 빈 4로 그룹화하였다. 항-SIRPα 항체 136 및 137을 빈 2로 그룹화하였다. 항-SIRPα 항체 45는 특유의 결합 프로파일을 가지며, 빈 6으로 그룹화한다.
실시예 4에 기재된 구조적 분석과 조합하여, 이들 결과는 도 23에 도시된 SIRP-α D1 도메인에 결합하는 항체 및 CD47의 모델을 유도하였다. 예를 들어, 빈 1, 2, 3 및 4의 다양한 항-SIRPα 항체는 각각의 빈에 분류된 항-SIRPα 119, 136, 115 및 3과 유사한 결합 에피토프를 공유하는 것으로 가정된다. 항-SIRPα119, 136, 115 및 3에 대한 결합 에피토프는 실시예 4에 기재된 바와 같은 결정 용액으로부터 수득되었다.
또한, 빈 5 내의 항-SIRPα 항체는 항-SIRPα136(빈 2) 및 115(빈 3)에 각각 인접하여 결합하고, 중첩하는 에피토프를 공유하는 것으로 가정된다. 이는 빈 5에서 항-SIRPα 항체가 SIRPαV1에 결합하기 위해 빈 2 및 3에서 항체와 경쟁함을 나타내는 비닝 데이터에 기초하고, 빈 1, 4 및 6에서 항체와 경쟁하지 않았다(도 22b).
항-SIRPα 항체 45(빈 6)는 항-SIRPα3(빈 4) 및 136(빈 2)에 각각 인접하여 결합하고, 중첩된 에피토프를 공유하는 것으로 가정된다. 이것은 SIRPαV1에 결합하기 위해 Bin2 및 4에서 항체와 경쟁하는 항-SIRPα45를 나타내는 비닝 데이터에 기초하고, 항-SIRPα45는 빈 1, 3 및 5의 항체와 경쟁하지 않았다(도 22b).
도 23의 모델은, 구조적 및 비닝 분석에 기초한 각각의 항체 빈의 에피토프를 설명하고, 예시적인 항체 클론을 사용하여 다양한 항체 빈 사이의 중첩을 입증한다. 본원에서 단리된 추가의 항-SIRP-α 항체는 그들의 에피토프 맵핑 프로파일, 그들의 VH/VL 도메인 서열에서의 상동성, SIRP 단백질에 대한 결합 특이성 및 항체의 공급원에 기초하여 계열 및 빈으로 그룹화된다. 예를 들어, 계열 1/빈 1의 항-SIRP-α 항체는 그의 VH 및 VL 도메인에서 높은 서열 상동성을 공유하는 CD47 차단제이다(표 P 및 도 11j). VH 및 VL은 완전 인간 서열이다. 계열 2/빈 1의 항-SIRP-α 항체도 CD47 차단제이다. 그의 VH 및 VL은 높은 상동성을 공유하고, 각각 인간 및 닭 공급원으로부터 유래한다(표 P, 도 11a). 계열 3/빈 2의 항-SIRP-α 항체는 CD47 비-차단제를 포함하고, 이들의 고도의 상동성 VH/VL은 완전 인간 서열이다(표 P, 도 11b). 계열 4/빈 3의 항-SIRP-α 항체는 킥-오프 항체를 포함하고, 이들의 상동성 VH/VL은 완전 인간 서열이다(표 P, 도 11c). 계열 5는 빈 4, 5 및 6으로 별도로 맵핑된 CD47 비-차단제를 포함한다. 이들 항체의 서열 정렬 및 이들의 결합 프로파일이 도 11d-11i 및 표 P에 각각 도시되어 있다. 계열 1~5에서 상응하는 항-SIRPα 항체의 다양한 SIRP-α, SIRP-β 및 SIRP-γ 폴리펩타이드에 대한 Koff 결합 값이 표 T에 제시되어 있다.
실시예 6: 항-SIRP-α 항체의 생식계열 및 책임 돌연변이 변이체
상기 기재된 일부 항-SIRP-α 항체는 닭에서 생성된 완전 인간 항체(예를 들어, 항체 119, 135 및 136)이다. 이와 같이, 이들 항체 중 일부는 닭 B 세포에서 이들 항체를 생성함으로써 야생형 인간 생식계열 서열과 비교하여, 가변 도메인 프레임워크 서열에 돌연변이를 함유할 수 있다. 따라서, 이들 항-SIRPα 항체가 잠재적인 치료제로서 인간에서 시험될 때 면역원성을 제한하는 목적으로 인간 생식계열 서열의 것과 일치하도록 이들 각각의 잔기를 "역-돌연변이시키는" 것이 바람직하다. 생식계열 역-돌연변이 외에도, 항체 119, 135 및 136의 CDR 및 프레임워크 영역을 책임 핫스팟에 대해 분석하였다. 이 분석은 항-SIRPα 항체의 제조, 저장 및/또는 약물 개발 중에 발생할 수 있는 변형으로 인해 위험을 제한하기 위해 공학기술이 요구되는 부위를 확인했다.
방법
생식계열/책임 돌연변이
상기 기재된 바와 같이 GLC 칩을 사용하여 직접적인 고정화를 사용하여 SIRP에 결합하는 각각의 생식계열 및 책임 돌연변이체에 대한 KD를 결정하였다.
야생형 및 돌연변이체 항체를 Expi293에서 발현시키고, 상기 기재된 바와 같이 단백질 A 친화도 컬럼 크로마토그래피로 정제하였다. 모든 항체는 인간 L234A/L235A/G237A/N297A IgG1 Fc 항체로 발현되었다. 돌연변이유발은 QuikChange Lightning 부위 지향된 돌연변이유발(Site Directed Mutagenesis) 키트를 사용하여 제조사의 지침(Agilent Catalog #210518)에 따라 수행했다.
결과
항체 119, 135 및 136을 시험하였다. 선택된 항체 서열은 IgBlast(NCBI)를 사용하여 이용가능한 인간 생식계열 서열과 정렬하였다. 예를 들어, 119개의 중쇄 및 경쇄에 총 7개의 부위가 확인되었다. 도 24a에 도시된 바와 같이, 119 VH(예를 들어, D1, E43 및 L112)의 인간 생식계열 서열에서 통상적으로 발생하지 않는 잔기를 CDR T서열을 그대로 유지하면서 인간 생식계열 서열(예를 들어, D1E, E43K 및 L112Q)와 일치시키도록 역-돌연변이시켰다. 119 VL(도 24b)에 관해서는, CDR 서열을 온전하게 유지하면서 119 VL(예를 들어, F21, R39, E60, 및 T76)의 인간 생식계열 서열에서 통상적으로 발생하지 않는 잔기를 인간 생식계열 서열(예를 들어, F21L, R39K, E60A, 및 T76S)와 일치시키도록 역-돌연변이시켰다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "모든 변이(all mut)" 및 "mut"는 특정 항체 가변 도메인에 대해 본 명세서에 기재된 모든 생식계열 돌연변이를 함유하는 가변 도메인을 지칭한다. 생식계열 돌연변이 및 책임 돌연변이를 기술하기 위해 사용된 아미노산 넘버링은 각각의 SEQ ID에 따라 순차적인 넘버링에 기초한다.
또한, 항체 서열은 산화, 탈아미드화, 이성질체화, 가수분해 및 N-연결된 글리코실화에 민감할 수 있는 잔기를 포함하는 "책임" 핫스팟에 대해서도 분석하였다. 잠재적인 핫스폿은 표 L에 나타나있다. 특히, HVR-H1의 M34V 및 M34L 변이체는 다중 항체의 VH 도메인에 대해 생성되었다.
항체 119의 변이체는 생식계열 및 책임 역-돌연변이를 갖는 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 사용하여 생성하였다. 잠재적으로 산화될 수 있는 메티오닌 잔기를 제거하는 CDR-H1의 M34V 돌연변이뿐만 아니라, 생식계열 역-돌연변이 D1E, E43K 및 L112Q를 갖는 119 돌연변이체("mut") VH 도메인이 생성되었다(VH 서열에 대해서는 서열번호: 246 참고). 생식계열 복귀 돌연변이 D1E, E43K 및 L112Q를 갖는 또 다른 변이체가 생성되었다(VH 서열에 대해서는 서열번호: 258 참고). 친계 서열과 변이체 서열 사이의 정렬을 도 24a에 도시한다. 119 돌연변이("mut") 경쇄는 또한 생식계열 돌연변이 F21L, R39K, E60A, 및 T76S에 의해 생성되었으며; 친계 및 변이체 서열 간의 정렬이 도 24b에 도시되어 있다.
인간 SIRP-α v1(서열번호: 5), 인간 SIRP-α v2(서열번호: 6) 및 사이노몰구스 SIRP-α(서열번호: 11)에 대한 결합 친화도에 대하여, 돌연변이체 중쇄 및/또는 경쇄를 갖는 항체 119 변이체를 L234A, L235A, G237A 및 N297A 돌연변이(EU 넘버링)를 포함하는 IgG1 Fc 영역을 갖는 친계 119 항체 및 S228P 돌연변이(EU 넘버링)를 포함하는 IgG4 Fc 영역을 갖는 친계 119 항체와 비교하였다. 119 돌연변이체 중쇄 및 경쇄는 모두 3종의 SIRP-α 단백질 모두에 대한 결합 친화도가 약간 감소하는 것으로 밝혀졌다. 그러나, 돌연변이된 중쇄 및 경쇄를 갖는 119 항체 변이체는 약 30nM의 KD로 여전히 인간 SIRP-α 단백질 모두에 대한 강한 결합을 나타냈다(표 M). 친계 항체와 비교하여, 돌연변이된 중쇄 및 경쇄를 갖는 119 항체 변이체의 수율 또한 약 4.5배 감소하였다(표 M).
119 SIRPα 결합에 대한 HVR-H1에서의 메티오닌의 효과를 조사하기 위해, M34V 및 M34L 단일 돌연변이가 119 VH 야생형 배경에서 생성되고, 119 야생형 경쇄와 조합되었다. 119 wt/wt_M34V 및 119 wt/wt_M34L 모두 119 wt/wt와 비교하여 인간 SIRPα v1 및 v2에 대해 유사한 친화성(KD, M)을 가졌다. 이것은 잔기 M34가 SIRP-α 결합에 중요하지 않으며 M34L 또는 M34V 돌연변이로 치환될 수 있음을 나타낸다. 119 VH 야생형 배경에서 생성된 M34V 및 M34L 단일 돌연변이에 대한 상응하는 VH 서열은 각각 서열번호: 421 및 420이다.
다음으로, 항체 135의 유사한 변이체가 생성되었다. 잠재적으로 산화될 수 있는 메티오닌 잔기를 제거하는 CDR-H1의 M34V 돌연변이뿐만 아니라, 생식계열 역돌연변이 D1E, R13Q, E16G, E43K 및 L112Q로 135 돌연변이체(mut) 중쇄가 생성되었다(VH 서열에 대해서는 서열번호: 247 참고). CDR-H1에서 M34V 돌연변이없이 유사한 변이체가 작제되었다(VH 서열에 대해서는 서열번호: 259 참고). 135 돌연변이체(mut) 경쇄가 생식계열 역돌연변이 F21L 및 D60A와 함께 생성되었다(VL 서열에 대해서는 서열번호: 248 참고). 친계 서열과 변이체 서열 사이의 정렬은 도 25a 및 도 25b에 도시되어 있다.
돌연변이체 중쇄 및/또는 경쇄를 갖는 항체 135 변이체를 인간 SIRP-α v1(서열번호: 5), 인간 SIRP-α v2(서열번호: 6), 사이노몰구스 SIRP-α(서열번호: 11) 및 인간 SIRP-γ v1(서열번호: 15)에 대한 결합 친화도에 대하여 친계 135 항체와 비교하였다. 135 돌연변이체 중쇄 및 경쇄는 4개의 SIRP-α 단백질 모두에 유사한 수득율뿐만 아니라 상응하는 결합 친화도를 가졌다(표 N1).
SIRP-α 결합에 대한 135의 HVR-H1에서 메티오닌의 효과를 조사하기 위해, M34V 및 M34L 단일 돌연변이가 135 VH 야생형 배경에서 생성되고, 135 야생형 경쇄와 조합하였다. 135 wt/wt_M34V 및 135 wt/wt_M34L 모두 135 wt/wt와 비교하여 인간 SIRPα v1 및 v2에 대해 유사한 친화성(KD, M)을 가졌다. 이것은 잔기 M34가 SIRP-α 결합에 중요하지 않으며, M34L 또는 M34V 돌연변이로 치환될 수 있음을 나타낸다. 135 VH 야생형 배경에서 생성된 M34V 및 M34L 단일 돌연변이에 대한 상응하는 VH 서열은 각각 서열번호: 423 및 422이다.
항체 136의 유사한 변이체가 생성되었다. 잠재적으로 산화될 수 있는 메티오닌 잔기를 제거하는 CDR-H1의 M34V 돌연변이뿐만 아니라, 생식계열 역돌연변이 D1E, R13Q, E16R, E43K, 및 L111Q로 136 돌연변이체(mut) 중쇄가 생성되었다(VH 서열에 대해서는 서열번호: 249 참고). CDR-H1에서 M34V 돌연변이없이 유사한 변이체가 작제되었다(VH 서열에 대해서는 서열번호: 260 참고). 136 돌연변이체(mut) 경쇄가 생식계열 역돌연변이 T2I, T12S, T22S, 및 E38Q와 함께 생성되었다(VL 서열에 대해서는 서열번호: 250 참고). 친계 서열과 변이체 서열 사이의 정렬은 도 26a 및 도 26b에 도시되어 있다.
도 27a에 도시된 바와 같이, 돌연변이체 중쇄 및/또는 경쇄를 갖는 항체 136 변이체를 인간 SIRP-α v1(서열번호: 5), 인간 SIRP-α v2(서열번호: 6), 사이노몰구스 SIRP-α(서열번호: 11), NOD 마우스 SIRP-α(서열번호: 8), BL/6 마우스 SIRP-α(서열번호: 9), 및 BALB/c 마우스 SIRP-α(서열번호: 10)에 대한 결합 친화도에 대해 IgG1_AAA_N297A로서 친계("wt") 136 항체와 비교하였다. 도 27a에서, Y-축은 다양한 SIRP에 대한 KD mut/KD wt 결합의 비율을 나타낸다. 비율=1일 경우, 친계 항체 결합과 비교하여 KD의 변화는 나타나지 않았다. 비율 => 1 및 <1은 SIRPα(s)에 대한 친화성 결합이 친계 항체와 비교하여 감소 및 증가함을 나타낸다. 136 wt(VL)/mut(VH) 항체가 wt(VL)/wt(VH)와 유사하게 거동하는 반면, 돌연변이된 경쇄를 갖는 두 변이체는 결합 친화도가 더 안 좋았으며, 일부 VL 돌연변이가 용인되지 않음을 나타낸다.
결합 친화도에 대한 각각의 경쇄 역-돌연변이의 효과를 분석하기 위해, 추가의 항체 136 변이체를 작제하고, BL/6 마우스 SIRP-α(서열번호: 9), NOD 마우스 SIRP-α(서열번호: 8), BALB/c 마우스 SIRP-α(서열번호: 10), 인간 SIRP-α v1(서열번호: 5), 인간 SIRP-α v2(서열번호: 6), 사이노몰구스 SIRP-α(서열번호: 11) 및 인간 SIRP-γ v1(서열번호: 15)에 대한 결합 친화도에 대하여 특성규명하였다. "모든 돌연변이체" 배경부터 시작하여 각각의 개별 돌연변이가 역전되었다. I2T, S12T, S22T 및 Q38E 돌연변이는 도 27b에 나타낸 바와 같이 달리 "모든 돌연변이체" 경쇄에서 개별적으로 시험하였다. 다르게 모든 mut 배경에서 I2T 돌연변이는 친계 wt/wt 항체와 비교하여 일관되게 유사한 결합 친화도를 나타내었다(모든 mut 배경에서 I2T에 대하여 서열번호: 251, 및 친계 및 돌연변이체 136 항체와의 정렬에 대하여 도 27a 참고). 그러나 다른 세 가지 역 돌연변이(S12T, S22T 및 Q38E)는 일관되게 136 mut/mut와 더 유사한 결합 친화도를 나타내어, T2I 돌연변이가 다양한 SIRP 단백질에 대한 결합 친화도 감소에 기여한다는 것을 나타낸다. 이들 실험으로부터의 추가 데이터는 하기 표 Q에 제공된다.
실시예 7: 항-SIRP-α 항체의 인간화
상기 기재된 실시예는 완전 인간 중쇄 및 닭 경쇄를 갖는 항-SIRP-α 항체의 생성을 기술한다. 닭-유래된 경쇄를 인간화하기 위해, 이들 항체의 닭 HVR을 다양한 인간 λ 경쇄 프레임워크 상에에 그라프팅하였다.
방법
인간화
항체를 표준 기술을 사용하여 인간화시켰다. 생산 수득율을 측정하기 위해, 항-SIRPα 항체를 발현하는 Expi293 배양액의 동등 용적을 단백질 A 친화도 크로마토그래피로 정제하였다. PBS로의 완충액 교환 후, 단백질 농도를 A280에 의해 측정하고, mg/mL로 표시하였다.
결과
인간화 경쇄를 디자인하기 위하여, 각각의 닭 경쇄 서열을 IgBLAST(NCBI)에 의해 가장 가까운 인간 생식계열 프레임워크에 정렬시켰다. 이 분석을 사용하여, 닭 λ 경쇄 프레임워크에 가장 가까운 일치는 인간 IGLV3이다(서열번호: 314~317 참고).
또 다른 접근법에서, 인간 VH3 서열(이들 항체에 사용된 인간 중쇄)과 페어링하기 위한 최적의 인간 λ 경쇄 프레임워크 서열을 결정하기 위한 문헌 조사가 수행되었다. 이러한 분석에 기초하여, 인간 VH3은 인간 IGLV1 및 IGLV2와 잘 페어링할 것이라고 생각되었다. Glanville, J. 등 (2009) Proc. Natl. Acad. Sci. 106:20216-20221; Lloyd, C. 등 (2009) Protein Eng. Des. Sel. 22:159-168; 및 Jayaram, N. 등 (2012) Protein Eng. Des. Sel. 25:523-529를 참고한다.
따라서, 6개의 인간화된 경쇄가 생성되었다: Hum1(AB25 HVRs + 인간 IGLV3 프레임워크), Hum2(AB25 HVRs + 인간 IGLV1 프레임워크), Hum3(AB66 HVRs + 인간 IGLV3 프레임워크), Hum4(AB66 HVRs + 인간 IGLV1 프레임워크), Hum5(AB25 HVRs + 인간 IGLV2 프레임워크), 및 Hum6(AB21 HVRs + 인간 IGLV1 프레임워크). 수득된 경쇄 가변 도메인의 서열을 표 O1에 제공한다.
각각의 6개의 인간화된 경쇄는 각각의 4개의 중쇄(AB21, AB25, AB27, 및 AB66으로부터 유래됨)와 페어링되어, 24개의 특유의 항체를 생성하였다. 항체는 상기 기재된 바와 같이 발현되었다. 놀랍게도, 인간 IGLV1 프레임워크 서열은 중쇄에 관계없이 항체 발현을 감소시켰다. 이것은 Hum2, Hum4 및 Hum6과의 모든 중쇄 페어링을 지칭한다(AB66에서 중쇄와 페어링을 수행한 경우 제외). 그 결과를 도 28에 "단백질 수득율"(1행)로 요약하였다. 대조적으로, 인간 IGLV2 및 IGLV3 프레임워크(Hum1, Hum3, Hum5)를 포함하는 경쇄를 갖는 항체는 중쇄에 관계없이 더 높은 수준의 발현을 나타냈다.
그 다음, 선택된 항체를 다양한 SIRP 단백질(예를 들어, 인간 SIRP-α v1, 인간 SIRP-α v2, 사이노몰구스 SIRP-α, 마우스 BALB/c SIRP-α, 및 인간 SIRP-γ)에 대한 결합에 대하여 특성규명하였다. 이들 데이터는 또한 도 28에 요약되어 있다. 선택된 인간화된 경쇄는 하나 이상의 항원에 대한 결합을 감소시켰다. 예를 들어, 인간 IGLV3 프레임워크(Hum1 및 Hum3으로 표시됨)는 결합 친화도를 혼란시키지 않으면서 우수한 수준의 항체 생산을 허용하는 것으로 밝혀졌다. 예를 들어, IGLV3 프레임워크 및 항체 25 또는 항체 66 HVR 서열(각각 Hum1 및 Hum3으로 표시됨)을 갖는 경쇄 가변 도메인은 다양한 중쇄(예를 들어, 항체 21, 25, 27 및 66으로부터의 중쇄 가변 도메인)와 잘 조합하고, 상이한 SIRP-α 및 SIRP-γ 단백질에 대한 유사한 결합을 나타냈다. 대조적으로, IGLV1 및 IGLV2 프레임워크(Hum2, Hum4, Hum5 및 Hum6으로 표시됨)는 항체 21, 25 및 27 및 66으로부터의 중쇄와 페어링하면 SIRP의 발현을 감소시키고 및/또는 SIRP에 대한 결합을 감소시키는 것으로 밝혀졌다. 이들 실험으로부터 추가의 결합 데이터가 하기 표 R에 제공된다. 인간 IGLV3 프레임워크가 추가 테스트를 위해 선택되었다.
이들 항체의 인간화를 위한 또 다른 목적은 인간 생식계열 경쇄/중쇄 서열과 85% 이상의 동일성을 갖는 항체 서열이었다. 추가의 VL 도메인 Hum9 및 Hum8은 Hum1 VL 도메인을 기초로 생성되었다. Hum1과 비교하여, Hum9는 인간 경쇄 서열과 85% 이상의 동일성까지 경쇄의 인간화도(humanness)를 증가시키는 HVR-L1 및 -L2에서 또는 부근에서 4개의 아미노산 치환을 함유한다(도 29). Hum1과 비교하여, Hum8은 인간 경쇄 서열과 85% 이상의 동일성까지 경쇄의 인간화도를 증가시키는 HVR-L1 및 -L2에서 또는 부근에서 각각 5개의 아미노산 치환을 함유한다(도 29). Hum1, Hum8 및 Hum9 VL이 중쇄 all_mut_AB21(생식계열 돌연변이를 지니고 있음)과 페어링될 때 10pM 이상의 친화도로 인간 v1에 결합하는 항-SIRPα 항체를 생성했다(표 S). 유사하게, Hum1, Hum8 및 Hum9 VL이 중쇄 all_mut_AB25(생식계열 돌연변이를 지니고 있음)와 페어링될 때, 항-SIRPα 항체는 10pM 이상의 친화도로 인간 v1에 결합한다. 이들 실험으로부터의 추가의 결합 데이터는 하기 표 S에 제공된다. 이들 경쇄는 항체 VH 도메인 21, 25 및 27(뿐만 아니라 항체 119, 135 및 136에 대하여 상기 기재된 바와 같이 변형된, 그의 변이체; 도 30)과 상호교환적으로 조합될 수 있다. 이론에 의해 구속되기를 바라지 않으면서, 상기 기재된 인간화 과정은 계열 2(빈 1)의 임의의 항체의 경쇄에 적용될 수 있다고 생각된다.
실시예 8: 항-SIRP-α 항체에 의한 식균작용 및 수지상 세포 활성화의 유도
SIRP-α에 대한 상이한 결합 방식(예를 들어, 차단, 비-차단 및 "킥 오프" 항체)을 나타내는 다양한 항-SIRP-α 항체를 다음에 식균작용 검정에서 검사하였다.
CD47-Fc 결합 검정
CD47-Fc를 Alexa Fluor 647 마이크로규모 단백질 라벨링 키트(Microscale Protein Labeling Kit)(Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 Alexa Fluor 647(AF647)과 접합시켰다. 96 웰 폴리프로필렌 플레이트(Corning)에서, 100,000 PBMC를 FACS 완충액 중의 0.25 μM AF647-표지된 CD47-Fc 및 1 μl 항-CD14 PE 항체(Biolegend) 100 μl 중에 현탁시켰다. 세포를 얼음 위에서 30분 동안 배양하고, FACS 완충액으로 세정하고, 1.25 μM 내지 25 pM의 항-SIRP-α 항체의 10배 연속 희석으로 배양하였다. 세포를 얼음 위에서 30분 동안 배양하고, FACS 완충액으로 세정하고, 75㎕의 0.5% 포름알데하이드로 고정시켰다. 세포를 FACS Canto II(BD Biosciences)에서 분석하고 Flowjo 10.7(Treestar)에 의한 후속 데이터 분석을 수행했다. CD47-Fc 신호의 기하 평균 형광 세기를 CD14-양성 단핵구 모집단에서 결정하였다.
수지상 세포 활성화 검정
수지상 세포 활성화 검정은 본 명세서의 다른 곳에서 기재된 바와 같이 수행되었다. 간단히, Balb/c 마우스(n = 3/그룹)에 대조군 랫트 항-마우스 항-SIRP-α 길항적 항체(클론 p84), 인간 IgG1 대조군, 다양한 항-SIRP-α 항체, 마우스 IgG 대조군, 또는 비히클(PBS)을 10 mg/kg로 정맥내 주사하였다. 주사 5시간 후, 비장을 수확하고, 기계적 해리에 의해 단일 세포 현탁액으로 가공하였다. CD4+ 비장 수지상 세포의 활성화 마커 CD86, MHCII 및 CCR7 수준을 유세포측정법으로 측정하였다.
세포 유착 검정
인간 CD47이 결핍되거나 발현되는 등질 세포를 사용하여 접착 검정을 수행하였다. 햄스터 CD47 녹아웃 CHO 세포(CHOCD47 KO)는 CRISPR 기술을 사용하여 생성되었다. 일시적으로 인간 CD47을 CHOCD47 KO로 형질감염시킴으로써 인간 CD47을 발현하는 등질 세포를 생성하였다. 형질감염 24시간 후, 인간 CD47 형질감염된 CHOCD47 KO 세포(4×105)를 24 웰 조직 배양 처리된 플레이트에 재분주하고, 재부착시킨 후, 37℃에서 밤새 컨플루언시(confluency)에 이르게 하였다.
피콜 구배 원심분리법에 의해 건강한 공여체의 말초 혈액으로부터 인간 말초 혈액 단핵구(PBMC)를 분리하였다. 자성 비드를 사용하여 음성 선택에 의해 PBMC로부터 CD3+ 및 CD14+ 세포를 단리하였다. 단리된 CD3+ 및 CD14+ 세포(5×106)를 돌연변이된 인간 IgG1(L234A L235A G237A, 및 N297A)(20ug/mL)을 함유하는 Hum1/AB21mutall, Hum9/AB21mutall 또는 136w/mut 항체와 함께 37℃에서 20분동안 사전-배양시킨 후, CHOCD47 KO 및 CHOhCD47+ 세포 상에 플레이팅하고, 37℃에서 1시간 동안 접착시켰다. 비-부착 세포를 PBS로 5회 부드럽게 세정하여 제거하였다. 부착 세포를 트립신으로 탈착시키고, 10% FBS로 중화시켰다. 세포를 96 웰 플레이트로 옮기고, PBS + 0.5% BSA로 2회 세정한 다음, 형광색소 접합된 인간 CD3, CD4, CD8 및 CD14 항체로 세포 표면을 라벨링하였다. 카운팅 비즈를 첨가하고, BD Canto II 유세포측정기를 사용하여 세포 접착력을 정량화하였다. 유세포측정 데이터의 분석은 Flowjo를 사용하여 수행되었다.
결과
CD47이 SIRP-α에 결합하는 것을 "킥 오프"하는 5개의 항체를 항-HER2 항체 트라스투주맙과 함께 M2 대식세포에 의한 HER2(+) OE19 세포의 식균작용에 대한 이들의 효과에 대해 검사하였다(도 31). 5가지 모든 "킥 오프" 항체가 모두 트라스투주맙-유도된 식균작용을 증강시키는 것으로 밝혀졌다.
CD47을 SIRP-α에 결합시키지 못하게 차단하는 5가지 항체를 다음으로 항-EGFR 항체 세툭시맙과 함께 M2 대식 세포에 의한 EGFR(+) DLD-1 세포의 식균작용에 대한 그의 영향에 대해 검사하였다(도 32). 모든 비-차단 항체는 세툭시맙-유도된 식균작용을 증강시키는 것으로 나타났다.
다음으로, 상기 기재된 인간화된 항체를 항-EGFR 항체 세툭시맙과 조합된 M2 대식세포에 의한 EGFR(+) DLD-1 세포의 식균작용에 대한 그의 영향에 대해 시험하였다(도 33a). 모든 인간화된 항체는 세툭시맙-유도된 식균작용을 증가시키는 것으로 밝혀졌다. 항-EGFR 항체 세툭시맙과 조합된 M2 대식 세포에 의한 EGFR(+) DLD-1 세포의 식균작용에 대한 이들의 효과에 대해 상기 항체 136의 추가 변이체를 시험하였다(도 33b). 항체 136의 모든 변이체는 세툭시맙-유도된 식균작용을 증가시켰지만, 정도는 다양했다. 상기 추가의 인간화된 항체(Hum1 또는 Hum9 경쇄와 조합된 항체 25 및 27 중쇄 변이체)를 항-EGFR 항체 세툭시맙과 조합된 M2 대식세포에 의한 EGFR(+) DLD-1 세포의 식균작용에 대한 그의 효과에 대해 시험하였다(도 33c). 모든 인간화된 항체는 세툭시맙-유도된 식균작용을 증가시키는 것으로 밝혀졌다.
식균작용에 대한 항-SIRP-α 항체 Fc 영역의 효과를 조사하기 위해, 2개의 비-차단 항체를 항-EGFR 항체 세툭시맙과 조합된 M2 대식세포에 의한 EGFR(+) DLD-1 세포의 식균작용에 대한 그의 효과에 대한 전장 항체 또는 F(ab)2 단편으로 시험하였다(도 34). 이들 결과는 비-차단 항체가 F(ab)2 단편으로 식균작용을 유도하는 능력을 상실함을 나타내며, 이러한 부류의 항체의 Fc 영역이 식균작용의 유도에 필요하다는 것을 시사한다.
항-EGFR 항체 세툭시맙과 조합된 M2 대식세포에 의한 EGFR(+) DLD-1 세포의 식균작용에 대한 이들의 효과에 대해 차단 항체 119(상기 기재됨)의 3개의 변이체를 시험하였다(도 35). 결과는 3개의 변이체가 모두 세툭시맙-유도된 식균작용을 증가시킨다는 것을 보여주었다.
항-EGFR 항체 세툭시맙과 조합된 M2 대식세포에 의한 EGFR(+) DLD-1 세포의 식균작용에 대한 이들의 효과에 대해 차단 항체 135(상기 기재됨)의 2개의 변이체를 시험하였다(도 36). 결과는 두 변이체가 모두 세툭시맙-유도된 식균작용을 증가시킨다는 것을 보여주었다.
항-EGFR 항체 세툭시맙과 조합된 M2 대식세포에 의한 EGFR(+) DLD-1 세포의 식균작용에 대한 이들의 효과에 대해 추가의 비-차단 항체(상기 기재됨)를 시험하였다(도 37). 모든 비-차단 항체는 세툭시맙-유도된 식균작용을 증가시키는 것으로 밝혀졌다.
다음으로, 다양한 항-SIRP-α 항체를 공지된 항-SIRP-α 항체 p84를 포함하는 생체내 수지상 세포 활성화에 대한 그의 효과(도 38a-38b)에 대해 시험하였다(예를 들어, Tangsheng, Y. 등 (2015) Immunity 433:1-12 참고). CD47 결합을 통해 비장 수지상 세포 상에 마우스 SIRP-α 수용체를 관여시키지 않으면, 비장 수지상 세포가 활성화된다. 대조군 항-SIRP-α 길항제 항체 p84는 마우스에 정맥내 주사했을 때 비장 수지상 세포를 활성화시켰다. 비-차단 SIRP-α 항체(AB136b, AB3b 및 AB136 wt/mut) 및 차단 항-SIRP-α 항체(Hum1/AB21mutall, Hum8/AB21mutall 및 Hum9/AB21mutall)를 생체내에서 시험하여 수지상 세포 활성화를 유발시켰는지 여부를 결정하였다. CD86 및 MHCII 발현에 의해 결정된 바와 같이, SIRP-α 차단제 및 비-차단제 모두 수지상 세포의 활성화를 유도한다. 이들 결과는 차단 및 비-차단 항-SIRP-α 항체가 수지상 세포의 활성화를 유도함을 시사한다.
항체 218의 야생형 중쇄와 함께 인간화된 경쇄(각각 Hum13 및 Hum14)를 발현시킴으로써 항체 218, 218-Hum13/VH_wt 및 218-Hum14/VH_wt의 2개의 변이체를 생성시켰다. Hum13은 인간 IGLV2 프레임워크를 사용한 반면, Hum14는 인간 IGLV3 프레임워크를 사용하였다(각각 Hum13 및 Hum14의 VL 서열에 대해서는 서열번호: 333 및 334 참고). 표 O2에 나타낸 바와 같이, 두 클론 모두 v1 및 v2에 대한 낮은 친화성 결합(KD는 약 29.3 내지 53.1 nM임)을 나타냈다.
두 항체 모두 DLD-1 세포에서 세툭시맙과 조합하여 식균작용 검정에서 시험하였다. 흥미롭게도, 인간화된 변이체는 친계 AB218a 항체에 대한 식균작용을 강화시킬 수 없었다(도 39a). 이론에 의해 구속되기를 바라지 않으면서, 이러한 결과는 30~50nM의 근사 범위 또는 그 이하의 KD를 갖는 항체가 보다 약한 친화성으로 결합하는 항체보다 식균작용을 유도하는데 더 효과적일 수 있음을 시사한다.
예시적인 차단, 비-차단 및 킥 오프 항-SIRP-α 항체를 다음으로 단일 제제로서 식균작용의 유도에 대해 시험하였다. 먼저 CD47이 SIRP-α, AB119a, AB120a 및 AB122a와 결합하는 것을 차단하는 3가지 항체를 M2 대식세포에 의한 EGFR(+) DLD-1 세포의 식균작용에 대한 단일 작용제로서의 그의 효과에 대해 조사하였다. 모든 차단 항체는 단일 제제로서 식균작용을 유도하는 것으로 밝혀졌다(도 39b). 다음으로, CD47이 SIRP-α, AB136a 및 AB137a와 결합하는 것을 차단하지 않는 2가지 항체를 M2 대식세포에 의한 EGFR(+) DLD-1 세포의 식균작용에 대한 단일 제제로서의 그의 효과에 대해 검사하였다. 모든 비-차단 항체는 단일 제제로서 식균작용을 유도하는 것으로 밝혀졌다(도 39c). 마지막으로, 5개의 "킥-오프" 항-SIRP-α 항체, AB115a, AB116a, AB117a, AB118a 및 AB132a를 M2 대식세포에 의한 EGFR(+) DLD-1 세포의 식균작용에 대한 단일 작용제로서의 그의 효과에 대해 검사하였다. 모든 "킥-오프" 항체는 단일 제제로서 식균작용을 유도하는 것으로 밝혀졌다(도 39d).
실시예 9: 차단 또는 비-차단 항-SIRP-α 항체를 PD-L1/PD-1 경로의 억제와 조합하여 상승 작용하는 항-종양 효과
방법
생체내 항-종양 활성
CT26 동종 마우스 결장 암종 모델에 대하여, CT26 세포를 BALB/c 마우스의 피하에 이식하고, 그룹으로 무작위화하였다(8~9마리의 마우스/그룹). 처리 그룹은 비히클(PBS), AB25b, 항-PD-L1 및 AB25b/항-PD-L1을 포함하였다. 항-PD-L1은 아테졸리주맙의 VH 및 VL 도메인을 N297A 돌연변이를 갖는 마우스 IgG1 Fc 영역과 융합시킴으로써 생성된다. 모든 항-SIRP-α 항체는 또한 N297A 돌연변이를 갖는 마우스 IgG1 Fc 영역을 갖는다. 종양이 이식 후 7 또는 8일후, 평균 75~80mm3일 때 치료가 시작되었다. 마우스에게 항-SIRPα 항체에 대해 3주간 매주 2회 3 mg/kg 또는 10 mg/kg으로 복강내(IP) 투여하고, 항-PD-L1에 대해 5일 간격으로 3 mg/kg 용량으로 3회 투여하였다. 종양이 약 2000mm3의 용적에 도달하면 동물을 희생시켰다.
MC38 동종 마우스 결장 암종 모델에 있어서, MC38 세포를 C57BL/6 마우스의 피하에 이식하고, 그룹(8~10 마우스/그룹)으로 무작위화하였다. 치료 그룹은 비히클(PBS), AB25b, AB136b, 항-PD1(클론 RMP1-14, BioXCell), AB136b/항-PD1 및 AB25b/항-PD1을 포함한다. 모든 항-SIRPα 항체는 AB25c를 제외하고는 N297A 돌연변이를 갖는 뮤린 IgG1 Fc 영역을 가졌다. 종양이 이식 후 7일째 평균 60~65mm3일 때 치료가 시작되었다. 마우스에게 항-SIRPα에 대해 3주 동안 매주 2회 10 ㎎/㎏으로, 항-PD1에 대해 2 mg/kg의 용량으로 3회 복강내(IP)로 투여하였다. 종양이 약 2000mm3에 도달하면 동물을 희생시켰다.
결과
차단 AB25b 항-SIRP-α 항체의 항-종양 활성을 단독으로, 및 CT26 동종 마우스 결장 암종 모델에서 항-PD-L1 항체와 조합하여 시험하였다. 도 40에 도시된 바와 같이, 3mg/kg의 항-PD-L1과 조합하여 10mg/kg에서의 AB25b의 투여는 각 단일 제제 또는 비히클 대조군에 의한 처리와 비교할 때 종양 형성을 지연시켰다. 이 연구의 27일째에, 각각 비히클, 항-PD-L1 단일 제제 및 항-SIRP-α 단일 제제 처리 그룹에서 크기 600mm3 이하의 종양을 가진 2마리, 2마리 및 2마리의 마우스와 비교하여, 복합 치료 그룹은 크기 600mm3 이하의 종양을 가진 6마리의 마우스를 가지고 있었다.
다음으로, 차단 AB25b 항-SIRP-α 항체 및 비-차단 AB136b 항-SIRP-α 항체의 항-종양 활성을 단독으로 및 MC38 동종 마우스 결장 암종 모델의 항-PD-1 항체와 조합하여 시험하였다. 도 41에 도시된 바와 같이, AB25b 또는 AB136b(10mg/kg)와 5mg/kg의 항-PD-1을 조합하면, 각각의 단일 제제 또는 비히클 대조군에 의한 치료와 비교하여 종양 형성이 지연되었다. 이 연구의 27일째에 각각 비히클, 항-PD-1 단일 제제, AB25b 단일 제제 및 AB136b 단일 제제 처리 그룹에서 크기 600mm3 이하의 종양을 가진 1마리, 5마리, 2마리, 및 1마리의 마우스와 비교하여, AB25b/PD-1 병용 치료 그룹에는 크기 600mm3 이하의 종양을 가진 7마리의 마우스가 있었고, AB136b/PD-1 병용 치료 그룹에는 600mm3 이하의 종양을 가진 6마리의 마우스가 있었다.
본 명세서에 기재된 항체 및 그 특성의 요약은 표 P에 제공된다. 추가의 결합 데이터는 표 T에 제공된다.
상기 기재된 개시내용이 이해의 명확성을 위해 예시 및 예로서 일부 상세하게 기재되었지만, 설명 및 예는 본 개시내용의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 본 명세서에 인용된 모든 특허 및 과학 문헌의 개시내용은 그 전체가 참고로 명시적으로 편입된다.
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411 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Val Gly Ser Lys 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Asn Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Thr Asp Trp Pro Pro 85 90 95 Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 412 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 412 Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp His 20 25 30 Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Gly Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Gly Ile Ser Leu Arg Gly Gly Val Thr Trp Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Arg Leu Phe Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Ser Trp Asn Thr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 413 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 413 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Thr Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asn Val Arg Ser Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Gly Pro Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 414 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 414 Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Glu Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asn Ser 20 25 30 Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Ile Ser Asp Thr Gly Asp Thr Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ser Trp Ile Trp Trp Thr Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 415 <211> 103 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 415 Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Asn Leu Gly Gly Thr Val 1 5 10 15 Glu Ile Thr Cys Ser Gly Gly Asn Ser Asn His Tyr Gly Trp Tyr Gln 20 25 30 Gln Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile Tyr Ala Asp Thr 35 40 45 Asn Arg Pro Ser Asn Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Thr Ser Gly 50 55 60 Ser Thr Ser Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Glu Asp Glu Ala 65 70 75 80 Val Tyr Tyr Cys Gly Gly Ser Ser Thr Gly Asp Gly Ile Phe Gly Ala 85 90 95 Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu 100 <210> 416 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 416 Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ala Tyr Ser Ser Tyr Tyr Tyr 20 25 30 Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr 35 40 45 Ser Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Thr Thr Val Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Gly Tyr Asp Gln Ser Ser Tyr Thr 85 90 95 Asn Pro Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 417 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 417 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Thr Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Thr Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 418 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 418 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Thr Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 419 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 419 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Tyr Thr Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Glu Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Arg Pro Pro 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 420 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 420 Asp Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe 20 25 30 Ala Leu Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Ile Gly Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys 85 90 95 Asp Ser Thr Val Ser Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 421 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 421 Asp Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asn Phe 20 25 30 Ala Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Ile Gly Ser Gly Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys 85 90 95 Asp Ser Thr Val Ser Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 422 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 422 Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ile Tyr 20 25 30 Ala Leu Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Ile Gly Ala Asp Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys 85 90 95 Asp Ser Thr Val Gly Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 423 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 423 Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ile Tyr 20 25 30 Ala Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Thr Ile Gly Ala Asp Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly 50 55 60 Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln 65 70 75 80 Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys 85 90 95 Asp Ser Thr Val Gly Trp Ser Gly Asp Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Leu 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 424 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 424 Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Leu Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Asn Asn Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Asp Trp Gly Leu Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 425 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 425 Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asp Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Leu Ile Ser Gly Ser Gly Glu Ile Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Asn Asn Arg Tyr Arg Phe Phe Asp Asp Trp Gly Leu Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 426 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 426 Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser 1 5 10 15 Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp 20 25 30 Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro 35 40 45 Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn 50 55 60 Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys 65 70 75 80 Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val 85 90 95 Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser 100 105

Claims (199)

  1. 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하는 단리된 항체로서, 상기 항체는 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드의 세포외 도메인, 인간 SIRP-α v2 폴리펩타이드의 세포외 도메인, 원숭이 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인, 및 뮤린 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하고; 상기 항체는 중쇄 가변 (VH) 도메인을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 (VL) 도메인을 포함하는 경쇄를 포함하며; 여기서,
    (a) 상기 VH 도메인은 (i) SNAMS (서열번호:194), SNAVS (서열번호:271), 또는 SNALS (서열번호:318)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) GISAGGSDTYYPASVKG (서열번호:195)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열을 포함하고, 상기 VL 도메인은 (iv) SGGSYSSYYYA (서열번호:170)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (v) SDDKRPS (서열번호:336)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (vi) GGYDQSSYTNP (서열번호:172)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하거나;
    (b) 상기 VH 도메인은 (i) SNAMS (서열번호:194), SNAVS (서열번호:271), 또는 SNALS (서열번호:318)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) GISSGSDTYYGDSVKG (서열번호:197)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열을 포함하고, 상기 VL 도메인은 (iv) SGGSYSSYYYA (서열번호:170)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (v) SDDKRPS (서열번호:336)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (vi) GGYDQSSYTNP (서열번호:172)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하거나;
    (c) 상기 VH 도메인은 (i) SYAMS (서열번호:200), SYAVS (서열번호:272), 또는 SYALS (서열번호:319)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) GISSGGDTYYVDSVKG (서열번호:201)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열을 포함하고, 상기 VL 도메인은 (iv) SGGSYSSYYYA (서열번호:170)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (v) SDDKRPS (서열번호:336)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (vi) GGYDQSSYTNP (서열번호:172)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하거나;
    (d) 상기 VH 도메인은 (i) SNAMS (서열번호:194), SNAVS (서열번호:271), 또는 SNALS (서열번호:318)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) GISAGGSDTYYPASVKG (서열번호:195)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열을 포함하고, 상기 VL 도메인은 (iv) SGGAYSSYYYA (서열번호:261)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (v) SDDKRPS (서열번호:336)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (vi) GGYDQSSYTNP (서열번호:172)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열을 포함하거나;
    (e) 상기 VH 도메인은 (i) SNAMS (서열번호:194), SNAVS (서열번호:271), 또는 SNALS (서열번호:318)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) GISSGSDTYYGDSVKG (서열번호:197)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열을 포함하고, 상기 VL 도메인은 (iv) SGGAYSSYYYA (서열번호:261)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (v) SDDKRPS (서열번호:336)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (vi) GGYDQSSYTNP (서열번호:172)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열을 포함하거나;
    (f) 상기 VH 도메인은 (i) SYAMS (서열번호:200), SYAVS (서열번호:272), 또는 SYALS (서열번호:319)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) GISSGGDTYYVDSVKG (서열번호:201)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열을 포함하고, 상기 VL 도메인은 (iv) SGGAYSSYYYA (서열번호:261)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (v) SDDKRPS (서열번호:336)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (vi) GGYDQSSYTNP (서열번호:172)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열을 포함하거나; 또는
    (g) 상기 VH 도메인은 (i) SNAMS (서열번호:194)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) GISAGGSDTYYPASVKG (서열번호:195)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열을 포함하고, 상기 VL 도메인은 (iv) SGGDYYSYYYG (서열번호:164)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열; (v) SDDKRPS (서열번호:336)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열; 및 (vi) GGYDYSTYANA (서열번호:166)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열을 포함하는,
    단리된 항체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인과 인간 CD47 폴리펩타이드의 IgSF 도메인 사이의 결합을 차단하는, 항체.
  3. 제1항에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열번호:135, 263, 264, 또는 330의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  4. 제1항에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열번호:137, 265, 266, 또는 331의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  5. 제1항에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열번호:139, 267, 268, 또는 332의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  6. 제1항에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열 FW1―HVR-L1―FW2―HVR-L2―FW3―HVR-L3―FW4 (N-말단에서 C-말단)을 포함하며, 이때 FW1은 아미노산 서열 SYELTQPPSVSVSPGQTARITC (서열번호:314)을 포함하고, FW2는 아미노산 서열 WYQQKPGQAPVTLIY (서열번호:315)을 포함하고, FW3은 아미노산 서열 NIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYC (서열번호:316)을 포함하고, FW4은 아미노산 서열 FGGGTKLTVL (서열번호:317)을 포함하는, 항체.
  7. 제1항에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  8. 제1항에 있어서, 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  9. 제1항에 있어서, 상기 항체는 닭으로부터 생산되거나 유래되는 인간화된 항체인, 항체.
  10. 제1항에 있어서,
    (a) 상기 VH 도메인은 (i) SNAMS (서열번호:194)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) GISAGGSDTYYPASVKG (서열번호:195)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열을 포함하고, 상기 VL 도메인은 (iv) SGGSYSSYYYA (서열번호:170)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (v) SDDKRPS (서열번호:336)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (vi) GGYDQSSYTNP (서열번호:172)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하거나;
    (b) 상기 VH 도메인은 (i) SNAMS (서열번호:194)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) GISSGSDTYYGDSVKG (서열번호:197)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열을 포함하고, 상기 VL 도메인은 (iv) SGGSYSSYYYA (서열번호:170)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (v) SDDKRPS (서열번호:336)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (vi) GGYDQSSYTNP (서열번호:172)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하거나;
    (c) 상기 VH 도메인은 (i) SYAMS (서열번호:200)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) GISSGGDTYYVDSVKG (서열번호:201)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열을 포함하고, 상기 VL 도메인은 (iv) SGGSYSSYYYA (서열번호:170)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (v) SDDKRPS (서열번호:336)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (vi) GGYDQSSYTNP (서열번호:172)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3을 포함하거나;
    (d) 상기 VH 도메인은 (i) SNALS (서열번호:318)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) GISAGGSDTYYPASVKG (서열번호:195)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열을 포함하고, 상기 VL 도메인은 (iv) SGGAYSSYYYA (서열번호:261)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (v) SDDKRPS (서열번호:336)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (vi) GGYDQSSYTNP (서열번호:172)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열을 포함하거나;
    (e) 상기 VH 도메인은 (i) SNAVS (서열번호:271)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) GISSGSDTYYGDSVKG (서열번호:197)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열을 포함하고, 상기 VL 도메인은 (iv) SGGAYSSYYYA (서열번호:261)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (v) SDDKRPS (서열번호:336)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (vi) GGYDQSSYTNP (서열번호:172)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열을 포함하거나; 또는
    (f) 상기 VH 도메인은 (i) SYALS (서열번호:319)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H1 서열, (ii) GISSGGDTYYVDSVKG (서열번호:201)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H2 서열, 및 (iii) ETWNHLFDY (서열번호:193)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-H3 서열을 포함하고, 상기 VL 도메인은 (iv) SGGAYSSYYYA (서열번호:261)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L1 서열, (v) SDDKRPS (서열번호:336)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L2 서열, 및 (vi) GGYDQSSYTNP (서열번호:172)의 아미노산 서열을 포함하는 HVR-L3 서열을 포함하는,
    항체.
  11. 제1항에 있어서,
    (a) 상기 VH 도메인은 서열번호:263의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하거나;
    (b) 상기 VH 도메인은 서열번호:264의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하거나;
    (c) 상기 VH 도메인은 서열번호:330의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하거나;
    (d) 상기 VH 도메인은 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하거나;
    (e) 상기 VH 도메인은 서열번호:137의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하거나;
    (f) 상기 VH 도메인은 서열번호:139의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하거나;
    (g) 상기 VH 도메인은 서열번호:265의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하하거나;
    (h) 상기 VH 도메인은 서열번호:266의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하하거나;
    (i) 상기 VH 도메인은 서열번호:331의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하하거나;
    (j) 상기 VH 도메인은 서열번호:267의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하하거나;
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    (l) 상기 VH 도메인은 서열번호:332의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하하거나;
    (m) 상기 VH 도메인은 서열번호:263의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하하거나;
    (n) 상기 VH 도메인은 서열번호:264의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하하거나;
    (o) 상기 VH 도메인은 서열번호:330의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하하거나;
    (p) 상기 VH 도메인은 서열번호:265의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하하거나;
    (q) 상기 VH 도메인은 서열번호:266의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하하거나;
    (r) 상기 VH 도메인은 서열번호:331의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하하거나;
    (s) 상기 VH 도메인은 서열번호:267의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하하거나;
    (t) 상기 VH 도메인은 서열번호:268의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하하거나;
    (u) 상기 VH 도메인은 서열번호:332의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하하거나;
    (v) 상기 VH 도메인은 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하하거나;
    (w) 상기 VH 도메인은 서열번호:137의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하거나;
    (x) 상기 VH 도메인은 서열번호:139의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:262의 아미노산 서열을 포함하거나: 또는
    (y) 상기 VH 도메인은 서열번호:135의 아미노산 서열을 포함하고 상기 VL 도메인은 서열번호:136의 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  12. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 서열번호:296에 따라, I31, V33, Q52, K53, T67, R69, N70, 및 K96으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 위치에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 결합하는, 항체.
  13. 제12항에 있어서, 상기 항체는 서열번호:296에 따라, L30, P32, E54, T62, N71, M72, F74, 및 R95로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 아미노산 위치에서 인간 SIRP-α v1 폴리펩타이드에 추가로 결합하는, 항체.
  14. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 단클론성 항체 또는 scFv-Fc 항체인, 항체.
  15. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 서열번호:325, 326, 또는 426의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함하는, 항체.
  16. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 Fc 영역을 포함하는, 항체.
  17. 제16항에 있어서, 상기 항체는 서열번호:320-324로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 항체.
  18. 제16항에 있어서, 상기 Fc 영역은 IgG1 Fc 영역, IgG2 Fc 영역, 및 IgG4 Fc 영역으로 구성된 군으로부터 선택된 인간 Fc 영역인, 항체.
  19. 제18항에 있어서, 상기 Fc 영역은
    (a) EU 넘버링에 따라, L234A, L235A, G237A, 및 N297A로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 인간 IgG1 Fc 영역을 포함하거나;
    (b) EU 넘버링에 따라, A330S, P331S 및 N297A로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 인간 IgG2 Fc 영역을 포함하거나; 또는
    (c) EU 넘버링에 따라, S228P, E233P, F234V, L235A, L235E, delG236, 및 N297A로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 돌연변이를 포함하는 인간 IgG4 Fc 영역을 포함하는, 항체.
  20. 제1항에 있어서, 상기 VH 도메인은 서열번호:263의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 도메인은 서열번호:252의 아미노산 서열을 포함하고; 상기 항체는 서열번호:325, 326, 또는 426의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하고; 상기 항체는 서열번호:320-324로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 추가로 포함하는, 항체.
  21. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 세포독성 약물 또는 표지에 접합되는, 항체.
  22. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체는 이중특이적 항체인, 항체.
  23. 제22항에 있어서, 상기 항체는 인간 SIRP-α 폴리펩타이드의 세포외 도메인에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 및 암 세포에 의해 발현된 항원에 결합하는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는, 항체.
  24. 제23항에 있어서, 상기 암 세포에 의해 발현된 항원은 CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD52, CD56, CD70, CD74, CD79b, CD123, CD138, CS1/SLAMF7, Trop-2, 5T4, EphA4, BCMA, 뮤신 1, 뮤신 16, PD-L1, PTK7, STEAP1, 엔도텔린 B 수용체, 메소텔린, EGFRvIII, ENPP3, SLC44A4, GNMB, 넥틴 4, NaPi2b, LIV-1A, 구아닐릴 사이클라제 C, DLL3, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR, 인테그린 αVβ3, 인테그린 α5β1, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, 테나스신, Ley, EpCAM, CEA, gpA33, PSMA, TAG72, 뮤신, CAIX, EPHA3, 엽산 수용체 α, GD2, GD3; 및 NY-ESO-1/LAGE, SSX-2, MAGE 계열 단백질, MAGE-A3, gp100/pmel17, 멜란-A/MART-1, gp75/TRP1, 티로시나제, TRP2, CEA, PSA, TAG-72, 미성숙한 라미닌 수용체, MOK/RAGE-1, WT-1, SAP-1, BING-4, EpCAM, MUC1, PRAME, 서바이빈, BRCA1, BRCA2, CDK4, CML66, MART-2, p53, Ras, β-카테닌, TGF-βRII, HPV E6, 또는 HPV E7로부터의 펩타이드를 포함하는 MHC/펩타이드 복합체로 구성된 군으로부터 선택되는, 항체.
  25. 제1항, 제10항, 제11항 및 제20항 중 어느 한 항의 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드.
  26. 제25항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터.
  27. 제25항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 숙주세포.
  28. 항체를 생산하는 방법으로서, 상기 항체가 생산되도록 제27항의 숙주세포를 배양하는 것을 포함하는, 방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 방법은 상기 숙주세포로부터 상기 항체를 회수하는 것을 추가로 포함하는, 방법.
  30. 제1항, 제10항, 제11항 및 제20항 중 어느 한 항의 항체를 포함하는, 개체에서 암을 치료하거나 그 진행을 지연시키는 방법에 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 상기 방법은 상기 개체에게 상기 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 약제학적 조성물.
  31. 제30항에 있어서, 상기 방법이 상기 개체에게 암에 의해 발현된 항원에 결합하는 제2 항체의 유효량을 투여하는 것을 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
  32. 제31항에 있어서, 상기 암에 의해 발현된 항원은 CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD38, CD52, CD56, CD70, CD74, CD79b, CD123, CD138, CS1/SLAMF7, Trop-2, 5T4, EphA4, BCMA, 뮤신 1, 뮤신 16, PTK7, STEAP1, 엔도텔린 B 수용체, 메소텔린, EGFRvIII, ENPP3, SLC44A4, GNMB, 넥틴 4, NaPi2b, LIV-1A, 구아닐릴 사이클라제 C, DLL3, EGFR, HER2, VEGF, VEGFR, 인테그린 αVβ3, 인테그린 α5β1, MET, IGF1R, TRAILR1, TRAILR2, RANKL, FAP, 테나스신, Ley, EpCAM, CEA, gpA33, PSMA, TAG72, 뮤신, CAIX, EPHA3, 엽산 수용체 α, GD2, GD3; 및 NY-ESO-1/LAGE, SSX-2, MAGE 계열 단백질, MAGE-A3, gp100/pmel17, 멜란-A/MART-1, gp75/TRP1, 티로시나제, TRP2, CEA, PSA, TAG-72, 미성숙한 라미닌 수용체, MOK/RAGE-1, WT-1, SAP-1, BING-4, EpCAM, MUC1, PRAME, 서바이빈, BRCA1, BRCA2, CDK4, CML66, MART-2, p53, Ras, β-카테닌, TGF-βRII, HPV E6, 또는 HPV E7로부터의 펩타이드를 포함하는 MHC/펩타이드 복합체로 구성된 군으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
  33. 제30항에 있어서, 상기 방법이 상기 개체에게 면역치료제의 유효량을 투여하는 것을 추가로 포함하는, 약제학적 조성물.
  34. 제33항에 있어서, 상기 면역치료제는, PD-1, PD-L1, OX40, CTLA-4, CD137/4-1BB, TNFR2, B7-H3, FZD7, CD27, CCR4, CSF1R, CSF, TIM-3, LAG-3, VISTA, ICOS, CCR2, IDO, A2R, CD39, CD73, TIGIT, CD80, CD47, 아르기나제, TDO, 및 PVRIG로 구성된 군으로부터 선택된 항원에 결합하는 제2 항체를 포함하는, 약제학적 조성물.
  35. 제1항, 제10항, 제11항 및 제20항 중 어느 한 항의 항체를 포함하는, 개체에서 자가면역 질환 또는 염증성 질환을 치료하거나 그 진행을 지연시키는 방법에 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 상기 방법은 상기 개체에게 상기 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, 약제학적 조성물.
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