JP2019048903A

JP2019048903A - Ｔｉｅ２活性化剤、血管の成熟化剤、及び血管の安定化剤、並びに経口用組成物

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Publication number: JP2019048903A
Application number: JP2019001247A
Authority: JP
Inventors: 信明大戸; Nobuaki Oto
Original assignee: Maruzen Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Maruzen Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2011-05-10
Filing date: 2019-01-08
Publication date: 2019-03-28
Anticipated expiration: 2031-10-28
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Abstract

【課題】優れたＴｉｅ２活性化作用、血管新生抑制作用、血管の成熟化作用、血管の正常化作用、及び血管の安定化作用を有する安全性の高いＴｉｅ２活性化剤、血管新生抑制剤、血管の成熟化剤、血管の正常化剤、及び血管の安定化剤、並びに医薬品組成物、及び飲食品の提供。【解決手段】ハスの胚芽部の水抽出物、親水性溶媒抽出物、又は水と親水性溶媒との混合溶媒抽出物、及びカリンの果実部の水抽出物、親水性溶媒抽出物、又は水と親水性溶媒との混合溶媒抽出物の少なくともいずれかの抽出物を有効成分として含有するＴｉｅ２活性化剤、血管の成熟化剤、及び血管の安定化剤、並びに経口用組成物である。【選択図】なし

Description

本発明は、Ｔｉｅ２活性化剤、血管新生抑制剤、血管の成熟化剤、血管の正常化剤、及び血管の安定化剤、並びに医薬品組成物、及び飲食品に関する。

血管は、血管内皮細胞と血管壁細胞（血管平滑筋細胞やペリサイト）とが、細胞外マトリックスを介して間接的に、又は直接的に接着する構造を有しており、酸素及び栄養素を生体組織に供給し、生体組織から老廃物を除去する機能を有している。

一般に、血管の形成は、新たに血管が形成される血管発生（ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｅｓｉｓ）と、形成された既存の血管が伸長し、分岐することにより、新たな血管のネットワークが形成される血管新生（ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）との２段階に分けられる。前者は、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）が作用し、脈管形成とよばれる血管の初期発生からその後の血管新生に至るまで非常に広い範囲の血管形成に関与するものであり、後者は、アンジオポエチン（Ａｎｇ）が作用し、血管内皮細胞と血管壁細胞との接着の制御、血管の構造的安定化に関与するものである。

血管は通常の酸素状況においては、血管内皮細胞とその周囲を裏打ちする血管壁細胞とが強固に接着しており、血管構造が安定に保たれているが、組織で低酸素が生じると血管壁細胞が血管内皮細胞から脱離し、無秩序な血管が増生することがある。このような現象（血管新生）は、腫瘍、慢性関節リウマチ、糖尿病網膜症、高脂血症、高血圧などの血管病変を主体とした疾患において、しばしば観察されている。

これらの血管新生は、血管内皮細胞に発現する受容体型チロシンキナーゼＴｉｅ２（ＴｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅｗｉｔｈＩｇａｎｄＥＧＦｈｏｍｏｌｏｇｙｄｏｍａｉｎ２）を活性化させることにより、抑制されることが知られている（例えば、特許文献１参照）。血管狭小化あるいは血管拡大化の抑制が原因となって生じる虚血性疾患においては、Ｔｉｅ２の活性化により、血管腔が拡大化されることが報告されている（例えば、非特許文献１参照）。また、Ｔｉｅ２の活性化により、血管内皮細胞の細胞死を抑制することも報告されている（例えば、非特許文献２参照）。

このように、Ｔｉｅ２の活性化により、血管新生が抑制されることが知られているだけでなく、血管を成熟化、正常化、及び安定化させることも知られている。
例えば、血管再生医療においては、Ｔｉｅ２の活性化により、血管における血管内皮細胞と血管壁細胞との接着を誘導して、血管を成熟化させることが知られている。
例えば、腫瘍や糖尿病性網膜症などで観察される血管壁細胞が血管内皮細胞に接着しないことによる無秩序な血管が増生するような疾患においては、Ｔｉｅ２の活性化により、血管壁細胞を内皮細胞に接着させ、血管を正常化させることが知られている。
例えば、種々の細胞内外の血管構造を破たんさせる環境因子に対しては、Ｔｉｅ２の活性化により、血管の不安定化を抑制し、血管を安定化させることが知られている。

このようなＴｉｅ２の活性化により血管新生を抑制する天然由来の物質としては、桂皮の抽出物が知られているが（例えば、特許文献１参照）、活性が不十分であるという問題がある。また、血管新生を抑制する物質としては、スラミンが知られているが（例えば、特許文献２参照）、安全性に優れないという問題がある。

したがって、優れたＴｉｅ２活性化作用、血管新生抑制作用、血管の成熟化作用、血管の正常化作用、及び血管の安定化作用を有する安全性の高い物質について、速やかな開発が強く求められているのが現状である。

特開２００９−２６３３５８号公報特表平９−５０３４８８号公報

Ｓｃｉｅｎｃｅ．１９９９Ｄｅｃ２４；２８６（５４４９）：２５１１−４．Ｐ．Ｎ．Ａ．Ｓ．２００４Ａｐｒ１３；１０１（１５）：５５５３−８．

本発明は、前記従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れたＴｉｅ２活性化作用を有し、安全性の高いＴｉｅ２活性化剤を提供することを目的とする。また、本発明は、優れた血管新生抑制作用を有し、安全性の高い血管新生抑制剤を提供することを目的とする。また、本発明は、優れた血管の成熟化作用、血管の正常化作用、及び血管の安定化作用を有し、安全性の高い血管の成熟化剤、血管の正常化剤、及び血管の安定化剤を提供することを目的とする。また、本発明は、優れたＴｉｅ２活性化作用、血管新生抑制作用、血管の成熟化作用、血管の正常化作用、及び血管の安定化作用を有し、安全性の高い医薬品組成物を提供することを目的とする。

前記課題を解決するため本発明者らが鋭意検討を重ねた結果、下記抽出物が優れたＴｉｅ２活性化作用、血管新生抑制作用、血管の成熟化作用、血管の正常化作用、及び血管の安定化作用を有することを知見し、本発明を完成したものである。

本発明は、本発明者らによる前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞スターフルーツ抽出物、ゲットウ抽出物、ハス抽出物、ルイボス抽出物、インディアンデーツ抽出物、カリン抽出物、シジュウムグァバ抽出物、及びヒハツ抽出物の少なくともいずれかの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＴｉｅ２活性化剤である。
＜２＞スターフルーツ抽出物、ゲットウ抽出物、ハス抽出物、ルイボス抽出物、インディアンデーツ抽出物、カリン抽出物、シジュウムグァバ抽出物、及びヒハツ抽出物の少なくともいずれかの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする血管新生抑制剤である。
＜３＞スターフルーツ抽出物、ゲットウ抽出物、ハス抽出物、ルイボス抽出物、インディアンデーツ抽出物、カリン抽出物、シジュウムグァバ抽出物、及びヒハツ抽出物の少なくともいずれかの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする血管の成熟化剤、血管の正常化剤又は血管の安定化剤である。
＜４＞前記＜１＞に記載のＴｉｅ２活性化剤、前記＜２＞に記載の血管新生抑制剤、及び前記＜３＞に記載の血管の成熟化剤、血管の正常化剤又は血管の安定化剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする医薬品組成物である。

本発明のＴｉｅ２活性化剤によると、従来における前記諸問題を解決し、優れたＴｉｅ２活性化作用を有し、安全性の高いＴｉｅ２活性化剤を提供することができる。
本発明の血管新生抑制剤によると、従来における前記諸問題を解決し、優れた血管新生抑制作用を有し、安全性の高い血管新生抑制剤を提供することができる。
本発明の血管の成熟化剤、血管の正常化剤、及び血管の安定化剤によると、従来における前記諸問題を解決し、優れた血管の成熟化作用、血管の正常化作用、及び血管の安定化作用を有し、安全性の高い血管の成熟化剤、血管の正常化剤、及び血管の安定化剤を提供することができる。
本発明の医薬品組成物によると、従来における前記諸問題を解決し、優れたＴｉｅ２活性化作用、血管新生抑制作用、血管の成熟化作用、血管の正常化作用、及び血管の安定化作用を有し、安全性の高い医薬品組成物を提供することができる。

図１は、各試料におけるＴｉｅ２リン酸化をウエスタンブロットにより検出した結果を示す図である。図２は、各試料におけるＴｉｅ２リン酸化をウエスタンブロットにより検出した結果を示す図である。図３は、各試料におけるＴｉｅ２リン酸化をウエスタンブロットにより検出した結果を示す図である。図４は、各試料におけるＴｉｅ２リン酸化をウエスタンブロットにより検出した結果を示す図である。図５は、各試料におけるＴｉｅ２リン酸化をウエスタンブロットにより検出した結果を示す図である。

（Ｔｉｅ２活性化剤、血管新生抑制剤、血管の成熟化剤、血管の正常化剤、及び血管の安定化剤、並びに医薬品組成物）
本発明のＴｉｅ２活性化剤、血管新生抑制剤、血管の成熟化剤、血管の正常化剤、及び血管の安定化剤、並びに医薬品組成物は、スターフルーツ抽出物、ゲットウ抽出物、ハス抽出物、ルイボス抽出物、インディアンデーツ抽出物、カリン抽出物、シジュウムグァバ抽出物、及びヒハツ抽出物を有効成分として含有し、更に必要に応じてその他の成分を含有してなる。

前記Ｔｉｅ２活性化剤は、Ｔｉｅ２をリン酸化することで、その活性体（リン酸化Ｔｉｅ２）に変換するＴｉｅ２活性化作用を有する。前記Ｔｉｅ２が活性化されると、細胞内チロシンキナーゼドメインの自己リン酸化を惹起し、血管内皮細胞と血管壁細胞との接着が誘導される。血管狭小化あるいは血管拡大化の抑制が原因となって生じる虚血性疾患においては、Ｔｉｅ２の活性化により、血管腔が拡大化される。また、Ｔｉｅ２の活性化により、血管内皮細胞の細胞死が抑制される。

前記血管新生抑制剤は、既存の血管から形成される新たな血管のネットワークを抑制する血管新生抑制作用を有する。低酸素状態では、Ｔｉｅ２の活性化が一時的に抑制され、血管内皮細胞と血管壁細胞との接着が乖離し、接着が乖離された血管内皮細胞から新しい血管のネットワークが形成される。血管新生抑制剤は、このような血管壁細胞が内皮細胞に接着しないことによる無秩序な血管の増生を抑制することができる。

前記血管の成熟化剤は、血管内皮細胞と血管壁細胞との接着を誘導して、血管内環境因子（細胞及び液性因子）が容易には血管外に漏出しないような血管内皮細胞間の接着斑を形成する成熟化作用を有する。また、血管再生医療においては、Ｔｉｅ２の活性化により、血管における血管内皮細胞と血管壁細胞との接着を誘導して、血管を成熟化させることが可能である。

前記血管の正常化剤は、血管内皮細胞同士の接着を高め、血管壁細胞の血管内皮細胞への裏打ちを促進することにより、血管透過性の破綻した血管や血管の無秩序な増生を招くような異常な血管を、正常な状態にする正常化作用を有する。また、腫瘍や糖尿病性網膜症などで観察される血管壁細胞が血管内皮細胞に接着しないことによる無秩序な血管が増生するような疾患においては、Ｔｉｅ２の活性化により、血管壁細胞を内皮細胞に接着させ、血管を正常化させることが可能である。

前記血管の安定化剤は、既存の血管に対する障害、血管内皮細胞同士の解離、及び血管内皮細胞と血管壁細胞の解離を抑制する作用、及び血管内皮細胞の細胞死を抑制する安定化作用を有する。また、種々の細胞内外の血管構造を破たんさせる環境因子に対しては、Ｔｉｅ２の活性化により、血管の不安定化を抑制し、血管を安定化させることが可能である。

前記医薬品組成物は、前記Ｔｉｅ２活性化剤、前記血管新生抑制剤、前記血管の成熟化剤、前記血管の正常化剤、及び前記血管の安定化剤のいずれかを含む組成物であり、Ｔｉｅ２活性化作用、血管新生抑制作用、血管の成熟化作用、血管の正常化作用、及び血管の安定化作用を有する。

＜スターフルーツ抽出物＞
前記スターフルーツは、カタバミ科ゴレンシ属の常緑の木本であり、学名は、Ａｖｅｒｒｈｏａｃａｒａｍｂｏｌａ（和名：ゴレンシ）である。前記スターフルーツの原産地は、東南アジア全域の他、中国南部、台湾、ブラジル、ガイアナ、トリニダード・トバゴ、フロリダ、ハワイ等の熱帯から亜熱帯地域であり、これらの地域から容易に入手可能である。前記スターフルーツは、甘い実のなる甘味種と、酸味のある実のなる酸味種とがあり、生食の他、ジャムやゼリー、漬物などに利用されている。前記スターフルーツの葉は、風熱感冒、急性胃腸炎、小便不利、産後浮腫等の予防乃至治療剤として利用されている。

前記スターフルーツの抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、葉部、茎部、花部、果実部、根部などが挙げられるが、これらの中でも、葉部が好ましい。

前記スターフルーツの抽出部位の調製方法としては、各部位を乾燥させた後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することにより得ることができる。前記乾燥は、天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。

前記スターフルーツ抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法により容易に得ることができる。前記スターフルーツの抽出物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出液の希釈液、濃縮液、抽出液の乾燥物などが挙げられる。

前記スターフルーツの抽出方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料である前記スターフルーツの前記抽出部位を投入し、必要に応じて適宜攪拌しながら可溶性成分を溶出した後、濾過して抽出残渣を除くことにより抽出液を得る方法などが挙げられる。

前記スターフルーツの抽出条件（抽出時間及び抽出温度）、及び前記スターフルーツの抽出溶媒の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

前記スターフルーツの抽出溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性溶媒、又はこれらの混合溶媒が挙げられる。前記水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水などが挙げられる。前記親水性溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられる。前記混合溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、低級アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部、多価アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、添加することが好ましい。また、前記スターフルーツの抽出溶媒は、室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。これらの中でも、熱水を用いて抽出することが、好ましい。

前記スターフルーツ抽出物の精製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、液−液分配抽出、各種クロマトグラフィー、膜分離などの精製方法が挙げられる。

前記スターフルーツ抽出物の濃度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、１００μｇ／ｍＬ〜４００μｇ／ｍＬが好ましく、２００μｇ／ｍＬ〜４００μｇ／ｍＬがより好ましい。

＜ゲットウ抽出物＞
前記ゲットウは、ショウガ科ハナミョウガ属の常緑多年草であり、学名は、Ａｌｐｉｎｉａｓｐｅｃｉｏｓａ（別名：月桃）である。前記ゲットウの原産地は、九州南端から沖縄、小笠原沿岸部、台湾から中国南部、東南アジア、インド等であり、これらの地域から容易に入手可能である。前記ゲットウの草丈は、２ｍ〜３ｍであり、茎は、束生し直立しており、葉は、紙質で２列に互生して楕円状皮針形であり、花は、大形の総状花序を下垂している。

前記ゲットウの抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、葉部、茎部、花部、果実部、根部などが挙げられるが、これらの中でも、葉部が好ましい。

前記ゲットウの抽出部位の調製方法としては、各部位を乾燥させた後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することにより得ることができる。前記乾燥は、天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。

前記ゲットウ抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法により容易に得ることができる。前記ゲットウの抽出物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出液の希釈液、濃縮液、抽出液の乾燥物などが挙げられる。

前記ゲットウの抽出方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料である前記ゲットウの前記抽出部位を投入し、必要に応じて適宜攪拌しながら可溶性成分を溶出した後、濾過して抽出残渣を除くことにより抽出液を得る方法などが挙げられる。

前記ゲットウの抽出条件（抽出時間及び抽出温度）、及び前記ゲットウの抽出溶媒の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

前記ゲットウの抽出溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性溶媒、又はこれらの混合溶媒が挙げられる。前記水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水などが挙げられる。前記親水性溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられる。前記混合溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、低級アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部、多価アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、添加することが好ましい。また、前記ゲットウの抽出溶媒は、室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。これらの中でも、熱水を用いて抽出することが、好ましい。

前記ゲットウ抽出物の精製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、液−液分配抽出、各種クロマトグラフィー、膜分離などの精製方法が挙げられる。

前記ゲットウ抽出物の濃度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、５０μｇ／ｍＬ〜４００μｇ／ｍＬが好ましく、２００μｇ／ｍＬ〜４００μｇ／ｍＬがより好ましい。

＜ハス抽出物＞
前記ハスは、ハス科ハス属の多年性水生植物であり、学名は、Ｎｅｌｕｍｂｏｎｕｃｉｆｅｒａ（別名：蓮）である。前記ハスの原産地は、インド亜大陸とその周辺であり、これらの地域から容易に入手可能である。前記ハスは、地中の地下茎から茎を伸ばし水面に葉を出し、葉は、撥水性があり、円形で中央に葉柄を有し、草高は、約１ｍである。

前記ハスの抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、葉部、茎部、胚芽部、花部、果実部、根部などが挙げられるが、これらの中でも、胚芽部が好ましい。

前記ハスの抽出部位の調製方法としては、各部位を乾燥させた後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することにより得ることができる。前記乾燥は、天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。

前記ハス抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法により容易に得ることができる。前記ハスの抽出物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出液の希釈液、濃縮液、抽出液の乾燥物などが挙げられる。

前記ハスの抽出方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料である前記ハスの前記抽出部位を投入し、必要に応じて適宜攪拌しながら可溶性成分を溶出した後、濾過して抽出残渣を除くことにより抽出液を得る方法などが挙げられる。

前記ハスの抽出条件（抽出時間及び抽出温度）、及び前記ハスの抽出溶媒の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

前記ハスの抽出溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性溶媒、又はこれらの混合溶媒が挙げられる。前記水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水などが挙げられる。前記親水性溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられる。前記混合溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、低級アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部、多価アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、添加することが好ましい。また、前記ハスの抽出溶媒は、室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。これらの中でも、熱水を用いて抽出することが、好ましい。

前記ハス抽出物の精製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、液−液分配抽出、各種クロマトグラフィー、膜分離などの精製方法が挙げられる。

前記ハス抽出物の濃度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、１００μｇ／ｍＬ〜４００μｇ／ｍＬが好ましく、２００μｇ／ｍＬ〜４００μｇ／ｍＬがより好ましい。

＜ルイボス抽出物＞
前記ルイボスは、マメ科アスパラトゥス属の双子葉植物であり、学名は、Ａｓｐａｌａｔｈｕｓｌｉｎｅａｒｉｓ（Ｎ．Ｌ．Ｂａｒｕｍ．）Ｒ．Ｄａｈｌｇｒ（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ）（植物名：アスパラサスリネアリス）である。前記ルイボスの栽培地は、南アフリカのセダルバーク山脈であり、これらの地域から容易に入手可能である。前記ルイボスの発酵した若葉と枝との乾燥物は、鎮痙、強壮薬、嘔吐、下痢、その他の胃の軽い不調等に効果があると言われている。前記ルイボスの茶には、甘みがあり、カフェインを含まず、タンニン濃度もごく低く、抗酸化作用があるとされている。

前記ルイボスの抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、葉部、若葉部、枝部、幹部、樹皮部、花部、果実部、根部などが挙げられるが、これらの中でも、若葉部、枝部が好ましく、具体的には、若葉部と枝部との乾燥粉末（ルイボス茶）が好ましい。

前記ルイボスの抽出部位の調製方法としては、各部位を乾燥させた後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することにより得ることができる。前記乾燥は、天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。

前記ルイボス抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法により容易に得ることができる。前記ルイボスの抽出物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出液の希釈液、濃縮液、抽出液の乾燥物などが挙げられる。

前記ルイボスの抽出方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料である前記ルイボスの前記抽出部位を投入し、必要に応じて適宜攪拌しながら可溶性成分を溶出した後、濾過して抽出残渣を除くことにより抽出液を得る方法などが挙げられる。

前記ルイボスの抽出条件（抽出時間及び抽出温度）、及び前記ルイボスの抽出溶媒の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

前記ルイボスの抽出溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性溶媒、又はこれらの混合溶媒が挙げられる。前記水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水などが挙げられる。前記親水性溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられる。前記混合溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、低級アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部、多価アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、添加することが好ましい。また、前記ルイボスの抽出溶媒は、室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。これらの中でも、熱水を用いて抽出することが、好ましい。

前記ルイボス抽出物の精製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、液−液分配抽出、各種クロマトグラフィー、膜分離などの精製方法が挙げられる。

前記ルイボス抽出物の濃度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、５０μｇ／ｍＬ〜４００μｇ／ｍＬが好ましく、２００μｇ／ｍＬ〜４００μｇ／ｍＬがより好ましい。

＜インディアンデーツ抽出物＞
前記インディアンデーツは、ジャケツイバラ科タマリンド属の常緑高木植物であり、学名は、ＴａｍａｒｉｎｄｕｓｉｎｄｉｃａＬ．である。前記インディアンデーツは、タマリンドとも呼ばれており、アジア、アフリカ等の熱帯地方に自生し、インド、タイ等の地方で栽培されており、これらの地域から容易に入手可能である。日本では、前記インディアンデーツの種子胚乳部分に含まれる多糖類（タマリンドシードガム）を増粘剤等の食品類に利用すると共に、種皮部分に含まれるタンニンを色素として利用している。

前記インディアンデーツの抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、葉部、枝部、幹部、樹皮部、花部、果実部、種子部、種皮部、根部などが挙げられるが、これらの中でも、種皮部が好ましい。
前記インディアンデーツの抽出部位の調製方法としては、各部位を乾燥させた後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することにより得ることができる。前記乾燥は、天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。

前記インディアンデーツ抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法により容易に得ることができる。前記インディアンデーツの抽出物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出液の希釈液、濃縮液、抽出液の乾燥物などが挙げられる。

前記インディアンデーツの抽出方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料である前記インディアンデーツの前記抽出部位を投入し、必要に応じて適宜攪拌しながら可溶性成分を溶出した後、濾過して抽出残渣を除くことにより抽出液を得る方法などが挙げられる。

前記インディアンデーツの抽出条件（抽出時間及び抽出温度）、及び前記インディアンデーツの抽出溶媒の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

前記インディアンデーツの抽出溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性溶媒、又はこれらの混合溶媒が挙げられる。前記水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水などが挙げられる。前記親水性溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられる。前記混合溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、低級アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部、多価アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、添加することが好ましい。また、前記インディアンデーツの抽出溶媒は、室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。これらの中でも、熱水を用いて抽出することが、好ましい。

前記インディアンデーツの抽出物の精製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、液−液分配抽出、各種クロマトグラフィー、膜分離などの精製方法が挙げられる。

前記インディアンデーツ抽出物の濃度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、１０μｇ／ｍＬ〜１００μｇ／ｍＬが好ましく、１０μｇ／ｍＬ〜２０μｇ／ｍＬがより好ましい。

＜カリン抽出物＞
前記カリンは、バラ科ボケ属の落葉高木であり、学名は、Ｃｈａｅｎｏｍｅｌｅｓｓｉｎｅｎｓｉｓである。前記カリンは、中国東部が原産であり、日本を始め、中国や朝鮮、アメリカ、フランスなどで栽培されており、これらの地域から容易に入手可能である。前記カリンの果実は、生薬名を和木瓜（ワモッカ）といい、古くからのどの炎症を抑える咳き止めとして広く利用されている。

前記カリンの抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、葉部、枝部、幹部、樹皮部、花部、果実部などが挙げられるが、これらの中でも、果実部が好ましい。
前記カリンの抽出部位の調製方法としては、各部位を乾燥させた後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することにより得ることができる。前記乾燥は、天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。

前記カリン抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法により容易に得ることができる。前記カリンの抽出物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出液の希釈液、濃縮液、抽出液の乾燥物などが挙げられる。

前記カリンの抽出方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料である前記カリンの前記抽出部位を投入し、必要に応じて適宜攪拌しながら可溶性成分を溶出した後、濾過して抽出残渣を除くことにより抽出液を得る方法などが挙げられる。

前記カリンの抽出条件（抽出時間及び抽出温度）、及び前記カリンの抽出溶媒の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

前記カリンの抽出溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性溶媒、又はこれらの混合溶媒が挙げられる。前記水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水などが挙げられる。前記親水性溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられる。前記混合溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、低級アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部、多価アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、添加することが好ましい。また、前記カリンの抽出溶媒は、室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。これらの中でも、熱水を用いて抽出することが、好ましい。

前記カリンの抽出物の精製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、液−液分配抽出、各種クロマトグラフィー、膜分離などの精製方法が挙げられる。

前記カリン抽出物の濃度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、１０μｇ／ｍＬ〜４００μｇ／ｍＬが好ましく、２００μｇ／ｍＬ〜４００μｇ／ｍＬがより好ましい。

＜シジュウムグァバ抽出物＞
前記シジュウムグァバは、フトモモ科バンジロウ属の低木であり、学名は、ＰｓｉｄｉｕｍｇｕａｊａｖａＬ．である。前記シジュウムグァバは、熱帯アメリカを原産としており、これらの地域から容易に入手可能である。前記シジュウムグァバは、バンジロウとも呼ばれており、ポリフェノール化合物であるタンニン、葉緑素、葉酸、ビタミン類、ミネラル、たんぱく質、多糖類などを含み、健康食品として広く利用されている。

前記シジュウムグァバの抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、葉部、枝部、幹部、樹皮部、花部、果実部、根部などが挙げられるが、これらの中でも、果実部が好ましい。
前記シジュウムグァバの抽出部位の調製方法としては、各部位を乾燥させた後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することにより得ることができる。前記乾燥は、天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。

前記シジュウムグァバ抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法により容易に得ることができる。前記シジュウムグァバの抽出物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出液の希釈液、濃縮液、抽出液の乾燥物などが挙げられる。

前記シジュウムグァバの抽出方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料である前記シジュウムグァバの前記抽出部位を投入し、必要に応じて適宜攪拌しながら可溶性成分を溶出した後、濾過して抽出残渣を除くことにより抽出液を得る方法などが挙げられる。

前記シジュウムグァバの抽出条件（抽出時間及び抽出温度）、及び前記シジュウムグァバの抽出溶媒の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

前記シジュウムグァバの抽出溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性溶媒、又はこれらの混合溶媒が挙げられる。前記水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水などが挙げられる。前記親水性溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられる。前記混合溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、低級アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部、多価アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、添加することが好ましい。また、前記シジュウムグァバの抽出溶媒は、室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。これらの中でも、熱水を用いて抽出することが、好ましい。

前記シジュウムグァバの抽出物の精製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、液−液分配抽出、各種クロマトグラフィー、膜分離などの精製方法が挙げられる。

前記シジュウムグァバ抽出物の濃度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、１００μｇ／ｍＬ〜８００μｇ／ｍＬが好ましく、４００μｇ／ｍＬ〜８００μｇ／ｍＬがより好ましい。

＜ヒハツ抽出物＞
前記ヒハツは、コショウ科コショウ属の蔓性の常緑木本であり、学名は、Ｐｉｐｅｒｌｏｎｇｕｍである。前記ヒハツは、東南アジアの地域から容易に入手可能である。前記ヒハツの果穂は、多肉質の円筒状であり、乾燥物は、香辛料として広く用いられている。

前記ヒハツの抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、果穂部、葉部、茎部、花部、根部などが挙げられるが、これらの中でも、果穂部が好ましい。
前記ヒハツの抽出部位の調製方法としては、各部位を乾燥させた後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供することにより得ることができる。前記乾燥は、天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。

前記ヒハツ抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法により容易に得ることができる。前記ヒハツの抽出物としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出液の希釈液、濃縮液、抽出液の乾燥物などが挙げられる。

前記ヒハツの抽出方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料である前記ヒハツの前記抽出部位を投入し、必要に応じて適宜攪拌しながら可溶性成分を溶出した後、濾過して抽出残渣を除くことにより抽出液を得る方法などが挙げられる。

前記ヒハツの抽出条件（抽出時間及び抽出温度）、及び前記ヒハツの抽出溶媒の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。

前記ヒハツの抽出溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性溶媒、又はこれらの混合溶媒が挙げられる。前記水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水などが挙げられる。前記親水性溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられる。前記混合溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、低級アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、低級脂肪族ケトンを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部、多価アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、添加することが好ましい。また、前記ヒハツの抽出溶媒は、室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。これらの中でも、熱水を用いて抽出することが、好ましい。

前記ヒハツの抽出物の精製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、液−液分配抽出、各種クロマトグラフィー、膜分離などの精製方法が挙げられる。

前記ヒハツ抽出物の濃度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、５０μｇ／ｍＬ〜４００μｇ／ｍＬが好ましく、２００μｇ／ｍＬ〜４００μｇ／ｍＬがより好ましい。

＜その他の成分＞
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、賦形剤、防湿剤、防腐剤、強化剤、増粘剤、乳化剤、酸化防止剤、甘味料、酸味料、調味料、着色料、香料等、美白剤、保湿剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、増粘剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、皮膚栄養剤などが挙げられる。
また、前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、具体的には、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸加水分解物、コラーゲン、コラーゲン加水分解物、アスコルビン酸、アスコルビン酸誘導体、アスコルビン酸配糖体、コエンザイムＱ１０、プロポリス、ローヤルゼリー、ローヤルゼリー蛋白分解物、フコイダン、アロエ粉末、アロエ抽出物、ブルーベリー粉末、ブルーベリー抽出物、イソフラボン、ノニ粉末、ノニ抽出物、ニンニク粉末、ニンニク抽出物、ウコン粉末、ウコン抽出物、キトサン、グルコサミン、クロレラ粉末、クロレラ抽出物、カルニチン、マカ粉末、マカ抽出物、カシス粉末、カシス抽出物、ハナビラタケ粉末、ハナビラタケ抽出物、その他美容に有効であるとされる植物の粉末及び／又は抽出物などが挙げられる。

＜用途＞
本発明のＴｉｅ２活性化剤、血管の成熟化剤、血管の正常化剤、血管の安定化剤、及び血管新生抑制剤、並びに医薬品組成物は、優れたＴｉｅ２活性化作用、血管新生抑制作用、血管の成熟化作用、血管の正常化作用、及び血管の安定化作用を有するため、腫瘍、慢性関節リウマチ、糖尿病網膜症、高脂血症、高血圧などの血管病変を主体とした疾患、アトピー性皮膚炎、及び花粉症などのアレルギー性疾患に関する医薬品、並びにこれらの疾患に関する安全な予防薬として好適に用いることができ、その配合量、用法、及び剤型としては、その使用目的に応じて適宜選択することができる。また、本発明のＴｉｅ２活性化剤、血管の成熟化剤、血管の正常化剤、血管の安定化剤、及び血管新生抑制剤は、消化管で消化されるようなものではないことが確認されているので、美容用飲食品、健康用飲食品などの飲食品として好適に用いることができ、その配合量、用法、及び剤型としては、その使用目的に応じて適宜選択することができる。

前記配合量としては、抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、スターフルーツ抽出物、ゲットウ抽出物、ハス抽出物、ルイボス抽出物、インディアンデーツ抽出物、カリン抽出物、シジュウムグァバ抽出物、及びヒハツ抽出物の少なくともいずれかの精製物に換算して、０．０００１質量％〜２０質量％が好ましく、０．０００１質量％〜１０質量％がより好ましい。

前記用法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、経口、非経口、外用などの投与形態が挙げられる。

前記剤型としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、錠剤、粉剤、カプセル剤、顆粒剤、エキス剤、及びシロップ剤等の経口投与剤、注射剤、点滴剤、及び坐剤等の非経口投与剤、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、及び浴用剤、頭髪化粧料等の外用剤などが挙げられる。

以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。

［試験例１：Ｔｉｅ２活性化作用（ウエスタンブロット）試験］
（実施例１：スターフルーツ抽出物）
前記スターフルーツ抽出物の薬理効果について、リン酸化されたＴｉｅ２のタンパク質量を検出することにより、評価を行った。前記リン酸化されたＴｉｅ２のタンパク質量については、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウエスタンブロットを用いた免疫化学的手法により検出した。以下に手順を示す。
Ｔｉｅ２リン酸化解析は、マウスｐｒｏ−Ｂ細胞（Ｂａ／Ｆ３）に、ｈｕｍａｎＴｉｅ２（Ｂａ／Ｆ３−ｈｕｍａｎＴｉｅ２）を過剰発現させた細胞を用いた。マウスｐｒｏ−Ｂ細胞の刺激は、３７℃で、通常培養用培地（１０％ＦＢＳＲＰＭＩ１６４０（ＳＩＧＭＡ社製、Ｒ−８７５５）＋１ｐｇ／ｍＬｍｏｕｓｅＩＬ−３）に、スターフルーツ抽出物（丸善製薬株式会社製、スターフルーツ葉エキスパウダーＭＦ）（濃度単位：μｇ／ｍＬ）を所定濃度（図１に記載の濃度、濃度単位：μｇ／ｍＬ）添加することにより行った。１５分間経過後、細胞を冷ＰＢＳで洗浄し、ＲＩＰＡｌｙｓｉｓｂｕｆｆｅｒ（５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）；１５０ｍＭＮａＣｌ；１質量％ＮＰ−４０；０．５質量％ｓｏｄｉｕｍｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ；０．１質量％ＳＤＳ）により細胞抽出液を回収した。細胞抽出液を７．５質量％ＳＤＳゲル（ＮＰＵ−７．５Ｌ，アトー株式会社製）に電気泳動し、ｎｙｌｏｎｍｅｍｂｒａｎｅｓに転写した。転写されたｎｙｌｏｎｍｅｍｂｒａｎｅｓを５質量％スキムミルク／ＴＢＳＴで６０分間非特異的蛋白をブロックし、抗−Ｔｉｅ２抗体（Ａｂ３３：Ｕｐｓｔａｔｅ社製）、抗リン酸化−Ｔｉｅ２抗体（Ｔｙｒ９９２：ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）でブロットした。引き続き、ＨＲＰ標識した２次抗体でブロットし、得られた反応物は、電気化学発光（ＥＣＬ）溶液により、タンパク質のバンドを可視化して撮影した。結果を図１に示す。

（実施例２：ゲットウ抽出物）
実施例２において、前記スターフルーツ抽出物を、ゲットウ抽出物（丸善製薬株式会社製、月桃葉乾燥エキスＦ）に変更し、図１に記載の濃度（濃度単位：μｇ／ｍＬ）を用いた以外は、実施例１と同様にして、試験した。結果を図１に示す。

（実施例３：ハス抽出物）
実施例２において、前記スターフルーツ抽出物を、ハス抽出物（丸善製薬株式会社製、ハス胚芽エキスパウダーＭＦ）に変更し、図１に記載の濃度（濃度単位：μｇ／ｍＬ）を用いた以外は、実施例１と同様にして、試験した。結果を図１に示す。

（実施例４：ルイボス抽出物）
実施例２において、前記スターフルーツ抽出物を、ルイボス抽出物（丸善製薬株式会社製、ルイボス茶乾燥エキスＦ）に変更し、図２に記載の濃度（濃度単位：μｇ／ｍＬ）を用いた以外は、実施例１と同様にして、試験した。結果を図２に示す。

（実施例５：インディアンデーツ抽出物）
実施例２において、前記スターフルーツ抽出物を、インディアンデーツ抽出物（丸善製薬株式会社製、インディアンデーツエキスパウダーＭＦ）に変更し、図３に記載の濃度（濃度単位：μｇ／ｍＬ）を用いた以外は、実施例１と同様にして、試験した。結果を図３に示す。

（実施例６：カリン抽出物）
実施例２において、前記スターフルーツ抽出物を、カリン抽出物（丸善製薬株式会社製、カリンエキスパウダーＭＦ）に変更し、図４に記載の濃度（濃度単位：μｇ／ｍＬ）を用いた以外は、実施例１と同様にして、試験した。結果を図４に示す。

（実施例７：シジュウムグァバ抽出物）
実施例２において、前記スターフルーツ抽出物を、シジュウムグァバ抽出物（丸善製薬株式会社製、シジュウムグァバ乾燥エキスＦ）に変更し、図４に記載の濃度（濃度単位：μｇ／ｍＬ）を用いた以外は、実施例１と同様にして、試験した。結果を図４に示す。

（実施例８：ヒハツ抽出物）
前記ヒハツ抽出物の薬理効果について、リン酸化されたＴｉｅ２のタンパク質量を検出することにより、評価を行った。前記リン酸化されたＴｉｅ２のタンパク質量については、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウエスタンブロットを用いた免疫化学的手法により検出した。以下に手順を示す。
Ｔｉｅ２リン酸化解析は、ヒト臍帯静脈内皮細胞（Ｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ：ＨＵＶＥＣｓ）を用いた。Ａｎｇ１及び被検体によるＨＵＶＥＣの刺激は、まず細胞を１％ＦＢＳを含むＲＰＭＩ−１６４０培養液で３時間培養した。その後、検体を図５に記載の濃度（濃度単位：μｇ／ｍＬ）で添加して２０分後、細胞を冷ＰＢＳで洗浄し、ＲＩＰＡｌｙｓｉｓｂｕｆｆｅｒ（５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）；１５０ｍＭＮａＣｌ；１質量％ＮＰ−４０；０．５質量％ｓｏｄｉｕｍｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ；０．１質量％ＳＤＳ）により細胞抽出液を回収した。細胞抽出液を７．５質量％ＳＤＳゲルに電気泳動し、ｎｙｌｏｎｍｅｍｂｒａｎｅｓに転写した。転写されたｎｙｌｏｎｍｅｍｂｒａｎｅｓを５質量％ｓｋｉｍｍｉｌｋ／ＴＢＳＴで６０分間非特異的蛋白をブロックし、抗−Ｔｉｅ２抗体（Ａｂ３３：Ｕｐｓｔａｔｅ社製)、抗リン酸化−Ｔｉｅ２抗体（Ｔｙｒ９９２：ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）でブロットした。引き続きＨＲＰ標識した２次抗体でブロットし、得られた反応物は電気化学発光（ＥＣＬ）溶液により、タンパク質のバンドを可視化して撮影した。バンドの濃度は、Ｌａｓ３０００−ｍｉｎｉのＭａｌｔｉＧｕａｇｅ−Ｉｍａｇｅソフトを用いて計測し、ｐ−Ｔｉｅ２（各検体）／ｐ−Ｔｉｅ２（コントロール）として計算した。結果を図５に示す。

（参考例１：陽性コントロール）
実施例１において、前記スターフルーツ抽出物を、陽性コントロールとしてＡｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ−１（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍ社製）に変更し、各図面に記載の濃度（濃度単位：μｇ／ｍＬ）を用いたこと以外は、実施例１と同様にして、試験した。結果を各図面に示す。

（参考例２：陰性コントロール）
実施例１において、前記スターフルーツ抽出物を、陰性コントロールとしてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）のみに変更したこと以外は、実施例１と同様にして、試験した。結果を各図面に示す。

［試験例１：試験結果］
Ｔｉｅ２活性化作用（ウエスタンブロット）の試験結果について説明する。
図１〜図５は、ウエスタンブロットにより検出した各試料におけるリン酸化されたＴｉｅ２タンパク質のバンドを示している。検出されたバンドの濃さは、リン酸化されたＴｉｅ２のタンパク質量に比例している。バンドが濃い程、リン酸化されたＴｉｅ２のタンパク質量が多いことを示している。
図３〜図５より、シジュウムグァバ抽出物、インディアンデーツ抽出物、及びヒハツ抽出物は、生理的活性物質であるＡｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ−１程度のＴｉｅ２活性化を誘導することがわかった。これらの中でも、インディアンデーツ抽出物が、低濃度でもＡｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ−１に近い活性化レベルに達することがわかった。図１〜２及び図４より、スターフルーツ抽出物、ゲットウ抽出物、ルイボス抽出物、ハス抽出物、及びカリン抽出物については、Ｔｉｅ２活性化レベルは弱いが、Ｔｉｅ２の活性化の誘導が確認された。
なお、スターフルーツ抽出物、ゲットウ抽出物、ハス抽出物、ルイボス抽出物、インディアンデーツ抽出物、カリン抽出物、及びシジュウムグァバ抽出物について、ＨＵＶＥＣを用いてウエスタンブロッティングを行ったが、今回の解析結果と同様の結果が得られた。
以上より、実施例で用いた抽出物について、Ｔｉｅ２の活性化の誘導が確認されることがわかった。

［試験例２：Ｔｉｅ２活性化作用（イムノアッセイ）試験］
（実施例９：スターフルーツ抽出物）
コンフルエントまで培養した正常ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を、９６ウェルプレートへ２．０×１０^４細胞／０．１ｍＬ／ウェルとなるように播種し、低血清血管内皮細胞増殖用培地（倉敷紡績株式会社製、Ｈｕｍｅｄｉａ−ＥＧ２）を用いて一晩培養した。次に、一晩培養後の前記ＨＵＶＥＣを、細胞刺激（被験試料添加）の３時間前に０．１ｍＬの血管内皮細胞基礎培地（倉敷紡績株式会社製、Ｈｕｍｅｄｉａ−ＥＢ２）に置換し、再度培養を行った。その後、前記ウェル内に、被験試料として前記Ｈｕｍｅｄｉａ−ＥＢ２で表１に記載の濃度に調製したスターフルーツ抽出物（丸善製薬株式会社製、スターフルーツ葉エキスパウダーＭＦ）を０．１ｍＬ添加し、１０分間のインキュベーションを行った。インキュベーション後、イムノアッセイキット（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ社製、ＨｕｍａｎＰｈｏｓｐｈｏ−Ｔｉｅ２（Ｙ９９２）Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）を用いてプロトコールに従い、細胞内のリン酸化型Ｔｉｅ２量及び総Ｔｉｅ２量を測定し、総Ｔｉｅ２に対するリン酸化型Ｔｉｅ２の比率を計算した。
また、陰性コントロールとして用いたジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）についても、同様に総Ｔｉｅ２に対するリン酸化型Ｔｉｅ２の比率を計算した。
そして、下記式（１）に従いＴｉｅ２活性化率を計算し、リン酸化作用を評価した。結果を表１に示す。
Ｔｉｅ２活性化率（％）＝
［｛（被験試料添加時のリン酸化型Ｔｉｅ２の測定値）／（被験試料添加時の総Ｔｉｅ２の測定値）｝／｛（陰性コントロールでのリン酸化型Ｔｉｅ２の測定値）／（陰性コントロールでの総Ｔｉｅ２の測定値）｝］×１００・・・式（１）

（実施例１０：ゲットウ抽出物）
実施例９において、前記スターフルーツ抽出物を、ゲットウ抽出物（丸善製薬株式会社製、月桃葉乾燥エキスＦ）に変更し、表１に記載の濃度を用いた以外は、実施例９と同様にして、試験した。結果を表１に示す。

（実施例１１：ハス抽出物）
実施例９において、前記スターフルーツ抽出物を、ハス抽出物（丸善製薬株式会社製、ハス胚芽エキスパウダーＭＦ）に変更し、表１に記載の濃度を用いた以外は、実施例９と同様にして、試験した。結果を表１に示す。

（実施例１２：ルイボス抽出物）
実施例９において、前記スターフルーツ抽出物を、ルイボス抽出物（丸善製薬株式会社製、ルイボス茶乾燥エキスＦ）に変更し、表１に記載の濃度を用いた以外は、実施例９と同様にして、試験した。結果を表１に示す。

（実施例１３：インディアンデーツ抽出物）
実施例９において、前記スターフルーツ抽出物を、インディアンデーツ抽出物（丸善製薬株式会社製、インディアンデーツエキスパウダーＭＦ）に変更し、表１に記載の濃度を用いた以外は、実施例９と同様にして、試験した。結果を表１に示す。

（実施例１４：カリン抽出物）
実施例９において、前記スターフルーツ抽出物を、カリン抽出物（丸善製薬株式会社製、カリンエキスパウダーＭＦ）に変更し、表１に記載の濃度を用いた以外は、実施例９と同様にして、試験した。結果を表１に示す。

（実施例１５：シジュウムグァバ抽出物）
実施例９において、前記スターフルーツ抽出物を、シジュウムグァバ抽出物（丸善製薬株式会社製、シジュウムグァバ乾燥エキスＦ）に変更し、表１に記載の濃度を用いた以外は、実施例９と同様にして、試験した。結果を表１に示す。

（実施例１６：ヒハツ抽出物）
実施例９において、前記スターフルーツ抽出物を、ヒハツ抽出物（丸善製薬株式会社製、ヒハツエキスパウダーＭＦ）に変更し、表１に記載の濃度を用いた以外は、実施例９と同様にして、試験した。結果を表１に示す。

（参考例３：陽性コントロール）
実施例９において、前記スターフルーツ抽出物を、陽性コントロールとしてＡｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ−１（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍ社製）に変更し、表１に記載の濃度を用いた以外は、実施例９と同様にして、試験した。結果を表１に示す。

［試験例２：試験結果］
Ｔｉｅ２活性化作用（イムノアッセイ）の試験結果について説明する。
前記イムノアッセイキットによりＴｉｅ２活性化作用の評価を実施したところ、実施例で用いた抽出物により、Ｔｉｅ２がリン酸化して活性化されることが認められた。なお、陰性コントロールであるＤＭＳＯを添加した系では、Ｔｉｅ２の顕著なリン酸化は認められなかった。また、参考例３の陽性コントロールであるＡｎｇｉｏｐｏｉｅｔｉｎ−１を添加した系では、Ｔｉｅ２がリン酸化して活性化されることが認められた。ここで、Ｔｉｅ２のリン酸化により、血管成熟化、血管正常化、及び血管安定化がもたらされ、血管新生が抑制されることが知られている。
以上より、実施例で用いた抽出物が、Ｔｉｅ２リン酸化効果を有することにより、血管新生の抑制が起こり、血管の成熟化、血管の正常化、及び血管の安定化を誘導できることが示唆された。

本発明のＴｉｅ２活性化剤、血管新生抑制剤、血管の成熟化剤、血管の正常化剤、及び血管の安定化剤、並びに医薬品組成物は、優れたＴｉｅ２活性化作用、血管新生抑制作用、血管の成熟化作用、血管の正常化作用、及び血管の安定化作用を有するため、腫瘍、慢性関節リウマチ、糖尿病網膜症、高脂血症、高血圧などの血管病変を主体とした疾患に関する医薬品及びこれらの疾患に関する安全な予防薬として、幅広く用いることができる。
また、本発明のＴｉｅ２活性化剤、血管新生抑制剤、血管の成熟化剤、血管の正常化剤、及び血管の安定化剤は、消化管で消化されるようなものではないことが確認されているので、美容用飲食品、健康用飲食品などの飲食品として、幅広く用いることができる。

Claims

ハスの胚芽部の水抽出物、親水性溶媒抽出物、又は水と親水性溶媒との混合溶媒抽出物、及びカリンの果実部の水抽出物、親水性溶媒抽出物、又は水と親水性溶媒との混合溶媒抽出物の少なくともいずれかの抽出物を有効成分として含有することを特徴とするＴｉｅ２活性化剤。
ハスの胚芽部の水抽出物、親水性溶媒抽出物、又は水と親水性溶媒との混合溶媒抽出物、及びカリンの果実部の水抽出物、親水性溶媒抽出物、又は水と親水性溶媒との混合溶媒抽出物の少なくともいずれかの抽出物を有効成分として含有し、Ｔｉｅ２活性化作用に基づく血管の成熟化作用又は血管の安定化作用を有することを特徴とする血管の成熟化剤又は血管の安定化剤。
Ｔｉｅ２の活性化、血管の成熟化、及び血管の安定化の少なくともいずれかのために用いられる経口用組成物であって、
請求項１に記載のＴｉｅ２活性化剤、請求項２に記載の血管の成熟化剤、及び請求項２に記載の血管の安定化剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする経口用組成物。