KR20230093679A - 남오미자 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 조성물 - Google Patents
남오미자 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 남오미자 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것이다. 상기 추출물은 지질축적 인자인 PPARγ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ), CEBPα(CCAAT-enhancer-binding proteins-α), perilipin-1, FABP4(fatty acid binding protein 4) 및 Adiponectin의 발현 억제를 유도하고, 세포증식관련 인자인 β-catenin과 cyclin D1 발현억제를 기반으로 하여 지방세포의 성장을 억제함으로써 항비만 효능을 도출함으로써, 비만 질환의 예방, 치료, 개선용 약학 조성물이나 건강기능식품으로 용이하게 이용가능하다.
Description
본 발명은 남오미자(Kadsura japonica) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 조성물에 관한 것이다.
체지방이 건강에 유해한 영향을 미칠 정도로 과도하게 축적된 상태를 비만이라고 한다. 음식으로 섭취한 열량이 신체활동으로 소비하는 열량보다 많을 때 체지방으로 축적되는데, 남자는 체지방이 체중의 25% 이상일 때, 여자는 체중의 30% 이상일 때를 비만이라고 한다. 비만은 체내에 지방이 과다축적 되어있는 상태로서 외관상의 문제뿐 아니라 각종 성인병을 유발시키는 위험인자이다. 비만은 지방간, 고지혈증, 골관절염, 담석증, 고혈압, 당뇨병, 심혈관계 질환 등의 발생요인이다. 또한, 남성은 전립선암, 직장암 및 대장암이 비만과 관련이 있으며, 여성은 유방암, 난소암 및 자궁암이 비만과 관련이 있는 것으로 알려져 있다. 특히 비만은 심장질환의 중요 위험요소로, 심장의 구조와 기능에 큰 영향을 미칠 수 있음이 보고 되고 있으며, 소아기에 비만할수록 심부전증의 위험이 급상승하는 것으로 알려짐에 따라 건강관리에 있어 비만을 해결하는 것이 중요한 문제로 대두되고 있다. 비만의 원인은 시상하부의 기능 및 에너지 대사의 이상과 같은 질환과 유전적인 요인이 있으나, 대부분의 비만은 과도한 영양섭취와 신체 활동량의 감소로 인한 생활습관으로 발생한다. 최근에는 서구적인 식생활 패턴과 생활의 편리화로 인하여 즉석 식품의 섭취가 증가하고 운동부족을 야기하여 비만의 발병율이 계속적으로 증가하는 추세이며, 이러한 추세가 시간이 지날수록 더욱 심해질 것이라고 전망되고 있다. 최근 사회적으로 비만을 질병으로 인식함으로써, 다양한 제약 회사에서 비만을 치료하는 약물 개발에 박차를 가하고 있다. 지방 흡수 저해제인 제니칼(Xenical TM, 로슈제약회사, 스위스)은 세계적으로 가장 많이 사용되는 비만 치료제 중 하나이다. 제니칼의 성분이 오르리스타트(orlistat)는 소화된 지방과 결합해 장내에서의 흡수를 억제해 식사 중 지방 성분의 일부를 그대로 배설시키는 작용을 한다. 그밖에 개발된 약물로는 포만감을 증진시키는 리덕틸(Reductil TM, 애보트사, 미국)이나, 엑소리제(Exolise TM, 아토파마, 프랑스) 등이 있다. 그러나 상기 상업화된 약물들은 간손상, 위장 출혈, 취장염, 신장 결석을 비롯한 부작용이 보고되고 있으며, 심장질환, 호흡기 질환, 신경계 질환을 발생할 위험이 있다. 따라서 현재 상업화된 비만 치료제를 사용하는 경우 상기와 같은 안정성 등의 문제로 인해 부작용이 적으면서 비만 개선 효과가 우수한 소재의 개발이 요구된다.
오미자과(Schisandraceae)에 속하는 수종은 세계적으로 2속 22종이 존재하며, 변종을 포함하여 Schisandra 속에 25종, Kadsura 속에 22종 등 총 47종이 있는 것으로 알려져 있다. 주요 분포지는 북미와 열매 및 아열대 아시아 그리고 우리나라를 포함한 동 아시아 지역 등으로 광범위하게 분포하고 있다. 우리나라에는 Schisandra 속의 낙엽활엽 덩굴성 식물인 오미자(Schisandra chinensis Baill)와 흑오미자(Schisandra nigra Maxim) 및 Kadsura 속의 상록활엽 덩굴성 식물인 남오미자(Kadsura japonica (L.) Dunal)등 2속 3종이 자생하고 있다. Schisandra 속의 2종의 분포는 오미자가 지리산, 속리산, 태백산 등 중부 이북지역의 산야이고, 흑오미자는 제주도 한라산의 국소 지역이다. Kadsura 속의 남오미자는 남부 도서지역과 제주도 저지대의 온난한 지역에 분포한다. 이들 오미자과 식물의 열매는 그 맛이 독특하여 차와 같은 기호식품으로 사용되고 있으며, 노화 방지 효과와 숙취해소에 좋은 활성을 보여 약용자원으로서 가치 입증되고 있다. 많은 연구를 통해 오미자와 흑오미자의 약리학적 활성은 밝혀지고 있으나, 남오미자에 대한 약리학적 연구는 미비한 실정이다.
남오미자(Kadsura japonica)는 오미자과의 늘푸른 넓은잎 덩굴나무로 길이 3m 정도로 뻗어 나간다. 남부 지방 바닷가나 섬 지역 100~1,000m 고지의 산이나 들, 담장에 주로 서식하며 이웃 나무에 감아 올라가거나 바위에 기대어 자란다. 열매가 둥근 큰 공에 작은 공들이 매달린 모양이다. 잎은 길이 5~10㎝ 정도의 잎이 가지에 어긋나게 달린다. 끝은 뾰족하거나 무디게 뾰족한 긴 타원형이며 가장자리에 얕은 톱니가 드문드문 있다. 좌우 크기가 다르며 앞면에 윤기가 있다. 앞뒷면에 털이 없으며 뒷면에 기름점이 있다. 만져보면 두껍고 질기다. 겨울에도 푸르나 끝이 붉은 자주색을 띠기도 한다. 꽃은 4~8월에 잎 달린 자리에 피며 연노란 흰색으로 핀다. 지름 2㎝ 정도의 암꽃과 수꽃이 다른 나무에 달리며, 한 나무의 한 꽃에 암술과 수술이 함께 나오기도 한다. 암술은 붉은 공 모양으로 뭉쳐 있으며 암술 사이로 많은 수술들이 뻗어 나온다. 꽃잎은 6~8장으로 꽃받침잎 2~4장과 섞여 나온다. 열매는 9~10월에 큰 공처럼 부푼 꽃받침에 과육 있는 둥근 열매가 20여 개 정도 붙어서 총 지름 2~3㎝ 정도 되는 둥근 열매가 붉은색으로 여문다. 줄기껍질은 어린 나무에서는 붉은빛 도는 갈색을 띠고, 묵을수록 회색이 되고 코르크처럼 되며 세로로 얇게 벗겨진다. 겨울눈은 끝이 뾰족하고 긴 원뿔 모양이며, 붉은 갈색을 띤 것이 특징이다. 남오미자는 오미자 나무의 열매인 오미자(Schisandra chinensis)와는 차이가 있고, 기침 가래, 허약 체질, 당뇨, 잦은 소변, 술독 등을 해소하기 위해 사용되고, 거친 피부나, 거친 머릿결을 위해서도 사용한다. 화채나 차로도 복용/음용한다. 주된 약리효과는 남오미자가 오미자가 낫다고 알려져 있다.
이에 본 발명자들은 남오미자 추출물이 갖는 다양한 생리활성을 연구하던 중, 상기 남오미자 추출물이 항비만 효과가 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 남오미자(Kadsura japonica) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 조성물을 제공하는 데에 있다.
본 발명은 남오미자(Kadsura japonica) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항비만용 조성물에 관한 것이다.
상기 추출물은 PPARγ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ), CEBPα(CCAAT-enhancer-binding proteins-α), 페리리핀-1(Perilipin-1), FABP4(fatty acid binding protein 4), 아디포넥틴(Adiponectin), β-카테닌(β-catenin) 또는 사이클린 D1(cyclin D1)의 억제 효능이 있고, 지방세포의 성장 억제 효능, 지질 축적 억제 효능이 있다.
상기 추출물은 남오미자의 열매, 잎 또는 가지 추출물(부위별 추출물)일 수 있다. 또한, 상기 추출물은 물, C1~C4 알코올 또는 이들의 혼합용매를 용매로 하여 남오미자를 추출한 것일 수 있다. 상기 C1~C4 알코올은 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 부탄올 및 이소부탄올로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 추출 시, 추출물을 여과하여 추출 여과액을 얻고, 상기 여과액은 건조하여 분말화할 수 있으며, 동결건조, 열풍건조, 분무건조 등의 통상적인 건조법을 통해 분말화될 수 있다. 상기 남오미자 추출물은 항비만용 조성물로 이용되기 위해 유효농도가 바람직하게는 1~200㎍/㎖, 바람직하게는 10~200㎍/㎖, 더 바람직하게는 50~200㎍/㎖으로 처리되는 것이 좋다. 상기 추출물은 50㎍/㎖에서 40% 이상, 100㎍/㎖에서 60% 이상, 200㎍/㎖에서 65% 이상의 지질축적 억제 효능이 있을 수 있다.
본 발명에서 남오미자를 추출한 후에는 이를 살균하는 과정이 수행될 수 있다. 이 때 살균 적용시간은 80~130℃에서 10분 내지 1시간 이하인 것이 바람직하다.
당분야의 통상적인 방법으로서 상기 남오미자 추출물을 물에 녹인 후에 n-헥산, 메틸렌클로라이드, 아세톤, 클로로포름, 에틸아세테이트 및 n-부탄올로 이루어진 군 중에서 선택되는 1종 이상의 용매를 사용하여 추가적으로 분획하여 분획물로 제조할 수 있다. 또다른 방법으로는, 남오미자 추출물에, 물을 가하여 현탁한 후, 바람직하게는 남오미자 추출물의 중량의 1~1000배, 더 바람직하게는 1~500배, 가장 바람직하게는 1~50배의 물을 가하여 현탁한 후, 상기 현탁물에 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 및, 부탄올로 이루어진 군에서 선택되는 용매를 가하여 얻은 남오미자 분획물로 제조할 수 있다. 상기 남오미자 분획물은 바람직하게는, 남오미자 추출물을 물에 현탁한 후 헥산과 혼합하여 얻은 헥산층의 농축물, 상기 헥산층을 제거하고 남은 잔사(물층)에 클로로포름을 혼합하여 얻은 클로로포름층의 농축물, 또는 상기 클로로포름층을 제거하고 남은 잔사(물층)에 에틸아세테이트를 혼합하여 얻은 에틸아세테이트층의 농축물, 상기 에틸아세테이트층을 제거하고 남은 잔사(물층)에 부탄올을 혼합하여 얻은 부탄올층의 농축물, 또는 상기 부탄올층을 제거하고 남은 잔사(물층)의 농축물일 수 있다. 한편, 이 외의 분획조건은 제한되지는 않으나, 상기 남오미자 추출물에 남오미자 추출물의 중량의 1~50배의 물을 가하여 현탁물을 제조한 후, 상기 물과 동량의 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 및, 부탄올로 이루어진 군에서 선택되는 용매를 가하여 분획할 수 있다. 또한, 헥산층을 제거한 후 남은 잔사에 클로로포름을 가하고, 클로로포름층을 제거하고 남은 잔사에 에틸아세테이트를 가하고, 에틸아세테이트를 제거하고 남은 잔사에 부탄올을 가할 때에도, 단계적으로 이루어 질 때도 역시 잔사와 동량의 각 용매(클로로포름, 에틸아세테이트 또는 부탄올)를 순차적으로 가하여 분획할 수 있다.
상기 남오미자 추출물 또는 이의 분획물의 추출용 기기로는 통상의 추출기기, 초음파분쇄추출기 또는 분획기를 이용할 수 있다. 이렇게 제조된 남오미자 추출물은 열풍건조, 감압건조 또는 동결건조하여 용매를 제거할 수 있다. 또한, 상기 남오미자 추출물 또는 이의 분획물은 컬럼크로마토그래피를 이용하여 정제하여 사용할 수 있다. 상기 남오미자 추출물은 상법에 따라, 유기용매(알코올, 에테르, 아세톤 등)에 의한 추출, 헥산과 물의 분배, 컬럼크로마토그래피에 의한 방법 등, 식물체 성분의 분리 추출에 이용되는 공지의 방법을 단독 또는 적합하게 조합한 방법을 이용하여 분획 또는 정제하여 사용할 수 있다. 상기 크로마토그래피는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 엘에이취-20 컬럼 크로마토그래피(LH-20 column chromatography), 이온교환수지 크로마토그래피(ion exchange resin chromatography), 중압 액체 크로마토그래피(medium pressure liquid chromatography), 박층 크로마토그래피(TLC; thin layer chromatography), 실리카겔 진공 액체 크로마토그래피(silica gel vacuum liquid chromatography) 및 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 중에서 선택될 수 있다.
또한, 본 발명은 남오미자 추출물을 함유하는 항비만용 약학 조성물을 제공한다. 상기 남오미자 추출물은 본 발명의 약학 조성물에 0.001~100 중량%로 하여 첨가될 수 있다.
상기 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 남오미자 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 투여량은 치료받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.01㎎/㎏/일 내지 대략 2000㎎/㎏/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 1㎎/㎏/일 내지 500㎎/㎏/일이다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 약학 조성물은 쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 추출물은 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.
또한, 본 발명은 남오미자 추출물 및 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 항비만용 건강기능식품을 제공한다. 상기 남오미자 추출물은 본 발명의 건강기능식품에 0.001~100 중량%로 하여 첨가될 수 있다. 본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 등의 형태를 포함하며, 본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 드링크제, 육류, 소세지, 빵, 캔디류, 스넥류, 면류, 아이스크림, 유제품, 스프, 이온음료, 음료수, 알코올 음료, 껌, 차 및 비타민 복합제 등이 있다.
본 발명은 남오미자 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물에 관한 것이다. 상기 추출물은 지질축적 인자인 PPARγ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ), CEBPα(CCAAT-enhancer-binding proteins-α), perilipin-1, FABP4(fatty acid binding protein 4) 및 Adiponectin의 발현 억제를 유도하고, 세포증식관련 인자인 β-catenin과 cyclin D1 발현억제를 기반으로 하여 지방세포의 성장을 억제함으로써 항비만 효능을 도출함으로써, 비만 질환의 예방, 치료, 개선용 약학 조성물이나 건강기능식품으로 용이하게 이용가능하다.
도 1a는 남오미자 열매 추출물(KJF), 남오미자 잎 추출물(KJL) 및 남오미자 가지 추출물(KJB)은 모두 지방세포 내 지질축적 억제 결과를 나타낸다.
도 1b는 남오미자 열매 추출물의 농도의존적 지방세포 내 지질축적 억제 효능을 제시한다.
도 1c는 Western blot 분석을 통해 남오미자 열매 추출물의 지질축적 관련 단백질인 CEBPα, PPARγ, Perilipin-1, FABP4, Adiponectin의 발현 감소효능을 제시한다.
도 1d는 남오미자 열매 추출물(KJF)과 오미자 열매 추출물(SCF)의 지질축적 억제활성의 비교 결과를 나타낸다.
도 2a는 남오미자 추출물이 DMI/insulin이 처리되지 않은 지방전구세포의 세포생육에는 영향이 없으나, DMI/insulin 처리에 의한 지방전구세포에서 지방세포로의 분화과정에서는 지방세포의 세포생육을 현저하게 억제하는 것을 제시한다.
도 2b는 남오미자 추출물이 DMI/insulin 처리에 의한 지방전구세포에서 지방세포로의 분화과정에서 농도의존적으로 지방세포의 세포생육을 억제함을 제시한다.
도 2c는 남오미자 추출물이 Western blot 분석을 통한 세포생육 관련 단백질인 β-catenin과 Cyclin D1의 발현 감소효능이 있음을 제시한다.
도 1b는 남오미자 열매 추출물의 농도의존적 지방세포 내 지질축적 억제 효능을 제시한다.
도 1c는 Western blot 분석을 통해 남오미자 열매 추출물의 지질축적 관련 단백질인 CEBPα, PPARγ, Perilipin-1, FABP4, Adiponectin의 발현 감소효능을 제시한다.
도 1d는 남오미자 열매 추출물(KJF)과 오미자 열매 추출물(SCF)의 지질축적 억제활성의 비교 결과를 나타낸다.
도 2a는 남오미자 추출물이 DMI/insulin이 처리되지 않은 지방전구세포의 세포생육에는 영향이 없으나, DMI/insulin 처리에 의한 지방전구세포에서 지방세포로의 분화과정에서는 지방세포의 세포생육을 현저하게 억제하는 것을 제시한다.
도 2b는 남오미자 추출물이 DMI/insulin 처리에 의한 지방전구세포에서 지방세포로의 분화과정에서 농도의존적으로 지방세포의 세포생육을 억제함을 제시한다.
도 2c는 남오미자 추출물이 Western blot 분석을 통한 세포생육 관련 단백질인 β-catenin과 Cyclin D1의 발현 감소효능이 있음을 제시한다.
이하 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 내용이 철저하고 완전해지도록, 당업자에게 본 발명의 사상을 충분히 전달하기 위해 제공하는 것이다.
<실시예 1: 남오미자 추출물의 제조>
본 발명의 남오미자 추출물은 다음과 같은 과정에 의해 제조된다. 남오미자 열매, 잎, 가지를 증류수로 깨끗이 씻고 동결건조 한 다음, 건조 분쇄물 10 g에 대해 20배 부피에 해당 하는 물을 가하고 40℃에서 24시간 침지추출하여 남오미자 추출물을 수득하였다. 이후 추출물을 여과한 후, 동결건조하여 최종 남오미자 열매 추출물 (KJF: Water extract from Kadsura japonica fruits), 남오미자 잎 추출물 (KJL: Water extract from Kadsura japonica leaves), 남오미자 가지 추출물 (KJB: Water extract from Kadsura japonica branches)을 수득하였다.
비교군으로서 오미자(Schisandra chinensis) 열매 추출물(SCF)도 같은 방법으로 제조하였다.
<실시예 2: 남오미자 추출물의 지방세포 내 지질축적 억제활성 분석>
지방전구세포인 3T3-L1 세포를 각 웰(well)당 1×105 개가 되도록 24웰 배양 플레이트에 분주하여 3일 동안 배양 후 DMI 배지(Adipogenic medium, MDI라 하기도 함)로 분화시켰다. MDI 배지는 10% FBS/DMEM에 0.5mM IBMX, 1μM 덱사메타손, 1㎍/㎖ 인슐린을 처리한 것을 사용하였다. 이 시점을 분화 0일로 하여 분화 2일 후에는 1㎍/㎖의 인슐린 배지로 교체하며 2일 배양 후에는 10% FBS 배지로 8일까지 유지하였다. 남오미자 추출물은 분화 0일 첨가하여 8일 동안 처리하였다. 분화 8일 경과 후 지방 세포 분화 정도 및 남오미자 추출물에 의한 분화 억제 정도를 오일 레드 O 염색을 통해 분석하였다. 지방 세포 분화 및 남오미자 추출물 처리가 완료된 세포를 1× phosphate buffered saline(PBS)로 세척한 다음 10%(w/v) 포르말린을 넣고 1시간 동안 상온에서 고정하였다. 포르말린을 제거하고 60%(v/v) 이소프로판올로 세포가 배양된 각 웰을 씻어낸 후 후드에서 이소프로판올을 완전히 날려주었다. 건조된 세포 배양 웰에 오일 레드 O 용액을 넣고 10분 동안 방치 후 증류수로 씻어내어 현미경 촬영으로 지방 세포 분화를 확인하였다. 염색된 세포 배양 웰은 100% 이소프로판올을 넣고 녹여내어 500 nm에서 흡광도를 측정하였다.
도 1은 남오미자 추출물의 지방세포 내 지질축적 억제활성을 보여주는 것으로, 도 1a를 참고하면 남오미자 열매 추출물(KJF), 남오미자 잎 추출물(KJL) 및 남오미자 가지 추출물(KJB)은 모두 지방세포 내 지질축적을 억제하였다. 도 1b를 참고하면, 남오미자 열매는 농도의존적으로 지방세포 내 지질축적을 억제하였고, 도 1c를 참고하면, Western blot 분석을 통한 지질축적 관련 단백질 조사에서 남오미자 열매는 지질축적 관련 단백질인 CEBPα, PPARγ, Perilipin-1, FABP4, Adiponectin의 발현을 감소시켰다. 그리고 도 1d를 참고하면 남오미자 열매 추출물(KJF)은 오미자 열매 추출물(SCF)보다 지질축적 억제활성이 높은 것으로 나타났다.
한편, 추가적으로, 각 추출물을 더 낮은 농도에서 지질축적 억제 활성을 확인하였을 때, 남오미자(Kadsura japonica) 유래 추출물들은 이 활성이 여전히 유지되지만 일반 오미자(Schisandra chinensis) 유래 추출물은 낮은 농도에서는 지질축적 억제 효과가 잘 작용하지 않았다.
<실시예 3: 남오미자 추출물의 지방세포 내 지질축적 억제활성 분석>
지방전구세포인 3T3-L1 세포를 각 웰(well)당 1×105 개가 되도록 24웰 배양 플레이트에 분주하여 3일 동안 배양 후 DMI 배지(Adipogenic medium, MDI라 하기도 함)로 분화시켰다. MDI 배지는 10% FBS/DMEM에 0.5mM IBMX, 1μM 덱사메타손, 1㎍/㎖ 인슐린을 처리한 것을 사용하였다. 이 시점을 분화 0일로 하여 분화 2일 후에는 1㎍/㎖의 인슐린 배지로 교체하며 2일 배양 후에는 10% FBS 배지로 8일까지 유지하였다. 분화 8일 경과 후 지방 세포 분화 정도 및 남오미자 추출물에 의한 세포생육을 조사하였다.
도 2는 남오미자 추출물의 지방세포의 세포생육 억제활성을 보여주는 것으로, 도 2a를 참고하면, 남오미자 추출물은 DMI/insulin이 처리되지 않은 지방전구세포의 세포생육에는 영향이 없었으나, DMI/insulin 처리에 의한 지방전구세포에서 지방세포로의 분화과정에서는 지방세포의 세포생육을 현저하게 억제하는 것으로 나타났다. 도 2b를 참고하면, 남오미자 추출물은 DMI/insulin 처리에 의한 지방전구세포에서 지방세포로의 분화과정에서 농도의존적으로 지방세포의 세포생육을 억제하였다. 도 2c를 참고하면, Western blot 분석을 통한 세포생육 관련 단백질 조사에서 남오미자 추출물은 세포생육 관련 단백질인 β-catenin과 Cyclin D1의 발현을 감소시켰다.
도 1과 도 2의 결과를 통해, 남오미자 추출물은 지질축적관련 단백질과 세포생육관련 단백질의 발현을 억제하여 지방세포 내 지질 축적을 억제하여 항비만 활성을 가지는 것으로 확인된다.
<실시예 5: 세포독성 분석>
상기 실시예 1에서 수득한 본 발명의 남오미자 추출물이 세포에 대한 독성이 있는지 확인하기 위하여 in vitro 내에서 세포독성 여부를 분석하였다.
이를 위해 지방전구세포인 3T3-L1을 KCLB에서 분양받아 사용하였는데, 세포배양용 플라스크(flask)에 세포를 분주한 후, DMEM 배지에 10% FBS(fetal bovine serum) 및 1% penicillin-streptomycin (10,000U/ml)을 첨가하고 37℃, 5% CO2 95% 습도조건이 유지되는 배양기에서 배양하여 사용하였다. 세포독성 평가는 MTT 분석법을 사용하였는데 상기 방법은 대사 과정이 온전한 세포의 미토콘드리아 내의 탈수소효소가 노란색 수용성 tetrazoliumsalt [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2-5-diphenyltetrazolium bromide] (MTT)를 비수용성의 짙은 자주색 MTT formazan 결정으로 환원시키는 원리를 이용한 것으로서, 상기 결정에 대해 적절한 파장 (주로 500-600 nm)에서 흡광도를 측정하여 세포독성을 평가하는 방법이다.
먼저, 3T3-L1을 1×105cells/well의 농도로 96well에 분주 후 24시간 동안 배양 후, 실시예 1에서 제조한 남오미자의 각 부위별 추출물을 각각 0, 50, 100, 200 ㎍/mL의 농도로 처리하고 24시간 배양 후 1 mg/mL 농도의 MTT를 넣고 2시간 동안 37℃ 배양기에서 반응시킨 후 DMSO(dimethyl sulfoxide)를 넣어 microplate reader를 이용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다.
분석 결과 모든 남오미자 추출물들이 세포독성이 없음을 확인하였다.
<제제예 1. 약학적 제제>
본 발명의 남오미자 부위별 추출물 200g을 락토오스 175.9g, 감자전분 180g 및 콜로이드성 규산 32g과 혼합하였다. 이 혼합물에 10% 젤라틴 용액을 첨가시킨 후, 분쇄해서 14 메쉬체를 통과시켰다. 이것을 건조시키고 여기에 감자전분 160g, 활석 50g 및 스테아린산 마그네슘 5g을 첨가해서 얻은 혼합물을 정제로 만들었다.
<제제예 2. 식품 제조>
제제예 2-1. 조리용 양념의 제조
본 발명의 남오미자 부위별 추출물을 조리용 양념에 1 중량%로 첨가하여 건강 증진용 조리용 양념을 제조하였다.
제제예 2-2. 밀가루 식품의 제조
본 발명의 남오미자 부위별 추출물을 밀가루에 0.1 중량%로 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.
제제예 2-3. 스프 및 육즙(gravies)의 제조
본 발명의 남오미자 부위별 추출물을 스프 및 육즙에 0.1 중량%로 첨가하여 건강 증진용 수프 및 육즙을 제조하였다.
제제예 2-4. 유제품(dairy products)의 제조
본 발명의 남오미자 부위별 추출물을 우유에 0.1 중량%로 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
제제예 2-5. 야채주스 제조
본 발명의 남오미자 부위별 추출물 0.5g을 토마토주스 또는 당근주스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 야채주스를 제조하였다.
제제예 2-6. 과일주스 제조
본 발명의 남오미자 부위별 추출물 0.1g을 사과주스 또는 포도주스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 과일주스를 제조하였다.
Claims (6)
- 남오미자(Kadsura japonica) 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 항비만용 조성물.
- 제1항에 있어서,
상기 추출물은 지질축적 억제 효능 또는 지방 세포의 세포 생육 억제 효능이 있는 것을 특징으로 하는 항비만용 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 추출물은 PPARγ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ), CEBPα(CCAAT-enhancer-binding proteins-α), 페리리핀-1(Perilipin-1), FABP4(fatty acid binding protein 4), 아디포넥틴(Adiponectin), β-카테닌(β-catenin) 또는 사이클린 D1(cyclin D1)의 발현억제 효능이 있는 것을 특징으로 하는 항비만용 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 추출물은 남오미자의 열매, 잎 또는 가지의 추출물인 것을 특징으로 하는 항비만용 조성물. - 제1항의 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 비만 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제1항의 조성물을 함유하는 것을 특징으로 하는 비만 질환의 예방 또는 개선용 건강기능식품.
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| KR101760959B1 (ko) | 2009-07-30 | 2017-07-24 | 라보라토이레즈 익스펜사이언스 | 남오미자 열매 추출물 및 이를 포함하는 화장학적 및 피부과학적 조성물 |
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