JP2004010507A - Ｓｒｅｂｐ−２遺伝子発現促進剤 - Google Patents

Abstract

【課題】ＳＲＥＢＰ−２遺伝子の発現を促進させることのできる、新規なＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現促進剤を提供すること。
【解決手段】ブッチャーブルーム及びキキョウから選ばれる植物又はその抽出物を含有するＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現促進剤。本発明のＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現促進剤は、好ましくは食品又は経口投与される医薬品として用いられる。
【選択図】　　図１

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ＳＲＥＢＰ−２遺伝子の発現を促進させることができるＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現促進剤に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】
高脂血症の治療には、主としてＨＭＧ−ＣｏＡ（ヒドロキシメチルグルタリルＣｏＡ）還元酵素阻害剤や胆汁酸再吸収阻害剤が用いられている。これらは、肝臓のコレステロールを低下させ、ＬＤＬ（低比重リポタンパク質）受容体を活性化させることにより、血中のコレステロールを低下させる。
ＳＲＥＢＰ（Ｓｔｅｒｏｌ　Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　Ｅｌｅｍｅｎｔ−ｂｉｎｄｉｎｇ　Ｐｒｏｔｅｉｎ，ステロール応答性エレメント結合タンパク質）は、ＬＤＬ受容体を活性化させる因子として見い出されたものであり、ＳＲＥＢＰ−１とＳＲＥＢＰ−２の２種類のアイソフォームに大別されている。
ＳＲＥＢＰ−２によるＬＤＬ受容体の活性化は、細胞のコレステロール量の低下により、小胞体膜に存在する前駆体がプロテアーゼにより切断されて活性化型ＳＲＥＢＰ−２となり、これが核内に移行し、ＬＤＬ受容体遺伝子の転写開始点の上流にあるＳＲＥ（ステロール応答性エレメント）に結合することによるものであると考えられている。
ＳＲＥＢＰ−２の活性化については、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤の一つであるロバスタチンが、ＳＲＥＢＰ−２前駆体を切断するプロテアーゼを活性化し、それによりＳＲＥＢＰ−２が活性化することが報告されている（Ｃｅｌｌ，Ｖｏｌ．８９，ｐ３３１−３４０，１９９７）。
更に、近年、特定構造の化合物に、ＳＲＥＢＰ−２遺伝子自体の発現を促進する作用があることが報告されている（特開２０００−３３７４）。しかし、それらの化合物は、何れもＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤として従来知られているものである。
【０００３】
本発明の目的は、ＳＲＥＢＰ−２遺伝子の発現を促進させることができる、新規なＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現促進剤を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するべく、ＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現に影響を与える物質を探索した結果、特定の植物又はその抽出物に、ＳＲＥＢＰ−２遺伝子自体の発現を促進する作用があることを見い出した。
本発明は、斯かる知見に基づき完成されたものであり、ブッチャーブルーム及びキキョウから選ばれる植物又はその抽出物を含有するＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現促進剤を提供するものである。
【０００５】
【発明の実施の形態】
以下、本発明をその好ましい実施形態に基づいて詳細に説明する。
本発明におけるブッチャーブルームとしては、ユリ科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）のナギイカダ　Ｒｕｓｃｕｓ　ａｃｕｌｅａｔｕｓ　Ｌ．、Ｒｕｓｃｕｓ　ａｃｌｅａｔｕｓｖｅｒ．　ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｓ　Ｂｏｓｓ．、Ｒｕｓｃｕｓ　ｈｙｐｏ　ｇｌｏｓｓｕｍ　Ｌ．、Ｒｕｓｃｕｓ　ｈｙｐｏｐｈｙｌｌｕｍＬ．等のナギイカダ属（Ｒｕｓｃｕｓ）のすべての種を用いることができ、中でもナギイカダ　Ｒｕｓｃｕｓ　ａｃｕｌｅａｔｕｓ　Ｌ．、Ｒｕｓｃｕｓ　ａｃｕｌｅａｔｕｓｖｅｒ．　ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉｕｓ　Ｂｏｓｓ．が好ましく、ナギイカダ　Ｒｕｓｃｕｓ　ａｃｕｌｅａｔｕｓ　Ｌ．がより好ましい。
【０００６】
本発明におけるキキョウとしては、キキョウ科（Ｃａｍｐａｎｕｌａｃｅａｅ）のキキョウ（Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎ　ｇｌａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ（Ｊａｃｑ．）Ａ．ＤＣ．）等のキキョウ属（Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎ）のすべての種を用いることができ、中でもキキョウ（Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎ　ｇｌａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ（Ｊａｃｑ．）Ａ．ＤＣ．）が好ましい。
【０００７】
本発明のＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現促進剤の有効成分としての上記植物は、その植物の全草又はその一部（葉、根、根茎、果実、種子、花のうちの１以上等）をそのまま又は粉砕等の加工を施して用いられる。中でもブッチャーブルームは根茎、新芽、葉を用いることが好ましく、キキョウは根を用いることが好ましい。上記植物は、１種を単独で用いても良いし、２種以上を組み合わせて用いても良い。２種以上の組み合わせは、同一の属に属するもの同士の組み合わせの他、ナギイカダ属とキキョウ属との組み合わせ等であっても良い。
【０００８】
本発明において植物の抽出物とは、常温又は加温若しくは冷却下にて所定の溶剤を用いて上記植物を抽出するか又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出することにより得られる各種溶剤抽出液、その希釈液、その濃縮液又はその乾燥粉末等を意味するものである。上記抽出物は、２種以上の植物から得られた混合物であってもよい。
植物の抽出部位としては、本発明の効果を有するものであれば、全草、葉、芽、花、果実、根茎、根等のいずれでもよいが、ブッチャーブルームは根茎、新芽、葉が好ましく、キキョウは根が好ましい。
【０００９】
抽出に用いる溶剤としては水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、プチレングリコール等の多価アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化水素類；．ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ピリジン類などが挙げられ、これらは単独又は混合物として用いることができる。
【００１０】
また、液々分配等の技術により、上記抽出物から不活性な爽雑物を除去して用いることもでき、本発明においてはこのようなものを用いることが好ましい。これらは、必要により公知の方法で脱臭、脱色等の処理を施してから用いてもよい。
【００１１】
上記の植物又はその抽出物は、本発明のＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現促進剤としてそのまま用いることもできるが、当該抽出物を希釈調製して又は濃縮若しくは凍結乾燥した後、粉末又はペースト状に調製して、用いることもできる。
【００１２】
上記の植物又はその抽出物は、後述する実施例に示すように正常ヒト新生児包皮由来表皮角化細胞においてＳＲＥＢＰ−２遺伝子の発現（ＳＲＥＢＰ−２のｍＲＮＡの発現）を有意に促進する。
従って、これらを有効成分とする本願発明のＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現促進剤を用いれば、ＳＲＥＢＰ−２が関与する実験系の開発、新規な医薬のスクリーニング等が可能であると共に、ＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現によって促進又は惹起される各種効果を利用した医薬や食品（特に健康補助食品）等が得られる。
ＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現によって促進又は惹起される効果としては、ＬＤＬ受容体遺伝子の転写促進（ＬＤＬ受容体の活性化）及びそれによる血中中性脂肪、血中コレステロールの低下が挙げられる。
【００１３】
本発明のＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現促進剤を、医薬として用いる場合の投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤などによる経口投与又は静脈内注射、筋肉注射剤、坐剤、吸入薬、経皮吸収剤、点眼剤、点鼻剤などによる非経口投与が挙げられる。また、このような種々の剤型の医薬製剤を調製するには、上述した植物又はその抽出物を単独で、又は他の薬学的に許容される賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、嬌味剤、香料、被膜剤、担体、希釈剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
これらの投与形態のうち、好ましい形態は経口投与であり、経口投与用製剤として用いる場合の該製剤中の上記植物の含有量は、一般的に０．０１〜１００重量％とすることが好ましく、特に０．０５〜７０重量％とすることが好ましい。一方、植物抽出物の含有量は、原料植物により異なるが、一般的に固形分換算で０．００００１〜１００重量％とすることが好ましく、特に０．０００１〜７０重量％とすることが好ましい。
【００１４】
本発明のＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現促進剤を、食品として用いる場合の形態としては、上述した経口投与製剤と同様の形態（錠剤、カプセル剤、シロップ等）が挙げられる。種々の形態の食品を調製するには、上述した植物又はその抽出物を単独で、又は他の食品材料や、溶剤、軟化剤、油、乳化剤、防腐剤、香科、安定剤、着色剤、紫外線吸収剤、酸化防止剤、保湿剤、増粘剤等を適宜組み合わせて用いることができる。
本発明のＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現促進剤を、食品として用いる場合の該食品中の上記植物の含有量は、一般的に０．０１〜１００重量％とすることが好ましく、特に０．０５〜７０重量％とすることが好ましい。一方、植物抽出物の含有量は、原料植物により異なるが、一般的に固形分換算で０．００００１〜１００重量％とすることが好ましく、特に０．０００１〜７０重量％とすることが好ましい。
【００１５】
尚、本発明のＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現促進剤は、上述した医薬や食品の他に、検査薬や研究試薬等の他の用途に利用することもできる。
【００１６】
【実施例】
以下、実施例を挙げて本発明を更に説明する。
＜ブッチャーブルーム抽出物の製造＞
ナギイカダ（ＲｕｓｃｕｓａｃｕｌｅａｔｕｓＬ．）の乾燥根茎を細切し、その１０ｇに３０ｖｏｌ％濃度のエタノール水溶液１００ｍＬを加え、室温下時々攪拌しながら２４時間抽出した後、濾過した。これに水１００ｍＬを加え、４０℃で減圧下、約７０ｍＬまで濃縮した。この操作を３回行った後、水及びエタノールを加えて、エタノール濃度を３０ｖｏｌ％濃度に調整し、全体を１００ｍＬとした抽出物を得た（固形分１．２２％）。
【００１７】
＜キキョウ抽出物の製造＞
キキョウ（Ｐｌａｔｙｃｏｄｏｎｇｌａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ（Ｊａｃｑ．）Ａ．ＤＣ．）の乾燥根を細切し、その１０ｇに５０ｖｏｌ％濃度のエタノール溶液１００ｍＬを加え、室温下時々攪拌しながら２４時間抽出した後、濾過した。これに水１００ｍＬを加え、４０℃で減圧下、約７０ｍＬまで濃縮した。この操作を３回行った後、水及びエタノールを加えて、エタノール濃度を５０ｖｏｌ％濃度に調整し、全体を１００ｍＬとした抽出物を得た（固形分５．７９％）。
【００１８】
＜ＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現促進試験＞
正常ヒト新生児包皮由来表皮角化細胞（ＫＫ−４００９、ＳｔｒａｉｎＮｏ：８Ｃ０５０９、クラボウ）を試験に用いた。６穴プレートに細胞を播き込み、６０〜８０％コンフルエントになるまで２ｍＬのケラチノサイト−ＳＦＭ培地で培養した。培養は５％ＣＯ_２、３７℃条件下でおこなった。６０〜８０％コンフルエントに達した細胞は試験に用いるため、実験開始２４時間前に２ｍＬの添加剤不含のケラチノサイト−ＳＦＭ培地（ケラチノサイト−ＳＦＭ（−）培地）に交換し、馴化させた。試験は、培地を新しい１ｍＬのケラチノサイト−ＳＦＭ（−）培地に交換し、１０μＬ（１ｖｏｌ％濃度）の上記植物抽出物を直接培地に添加することで開始した。試験開始から一定時間後に培地を吸引除去し、ＰＢＳ（−）で細胞を２回洗浄した。その後、１ウェルあたり１ｍＬのＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジ−ン社）を添加し、ＲＮＡを得た。
得られたＲＮＡからＲＴ−ＰＣＲをおこない、遺伝子発現量（ｍＲＮＡ量）を調べた。ＳＲＥＢＰ−２（ＧｅｎｅＢａｎｋＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ：ＮＭ００４５９９）のＲＴ−ＰＣＲのプライマーには、センスプライマー：５‘−ＡＧＴＧＧＧＡＣＣＡＴＴＣＴＧＡＣＣＡＣＡＡＴＧ−３’、及びアンチセンスプライマー：５‘−ＡＧＧＴＣＧＡＴＧＣＣＣＴＴＴＡＧＡＡＧＣＴＴＧ−３’を用い、ＰＣＲは、アニーリング温度６０℃で２１サイクルおこなった。内部標準であるＣｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ（ＧｅｎｅＢａｎｋＡｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ：Ｍ６０４５７）のＲＴ−ＰＣＲのプライマーには、センスプライマー：５‘−ＣＣＡＣＣＣＡＴＧＧＣＡＡＡＴＴＣＣＡＴＧＧＣＡ−３’、及びアンチセンスプライマー：５‘−ＴＣＴＡＧＡＣＧＧＣＡＧＧＴＣＡＧＧＴＣＣＡＣＣ−３’を用い、ＰＣＲは、アニーリング温度６０℃で１８サイクルおこなった。ＲＴ−ＰＣＲ産物はアガロースゲル電気泳動をおこない、ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩで染色した後、蛍光イメージアナライザー（ＦＭ−ＢＩＯ）で目的のバンドのシグナル強度を測定した。
【００１９】
＜結果＞
図１は、培養時間（植物抽出物添加後、培地を吸引除去する迄の時間）と、上述のようにして測定したＳＲＥＢＰ−２のシグナル強度（内部標準であるＣｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎのシグナル強度で標準化した値、ＳＲＥＢＰ−２のｍＲＮＡ量に相当，０時間を１としたときの相対値）との関係を示すグラフである。尚、コントロールは、植物抽出物を添加しない以外は上記と同様にして測定した場合である。
図１から明らかなように、ブッチャーブルーム抽出物、及びキキョウ抽出物は、正常ヒト新生児包皮由来表皮角化細胞において、ＳＲＥＢＰ−２遺伝子の発現を促進した。
【００２０】
【発明の効果】
本発明によれば、ＳＲＥＢＰ−２遺伝子の発現を促進させることのできる、新規なＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現促進剤が提供される。このＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現促進剤の有効成分は、天然物である植物又はその抽出物であるので、医薬や食品等の商品とした場合に、消費者に天然物由来という安心感を与えることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、ＳＲＥＢＰ−２遺伝子の発現促進作用を示す図である。

Claims (2)

1. ブッチャーブルーム及びキキョウから選ばれる植物又はその抽出物を含有するＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現促進剤。
2. 食品又は経口投与される医薬品である請求項１記載のＳＲＥＢＰ−２遺伝子発現促進剤。

Images