JP2018500883A - 抗インターロイキン−３３抗体及びその使用 - Google Patents

抗インターロイキン−３３抗体及びその使用 Download PDF

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Abstract

本発明は、インターロイキン−３３（ＩＬ−３３）抗体及びそれを使用する方法を提供する。【選択図】なし

Description

本発明は、抗インターロイキン−３３（ＩＬ−３３）抗体、及びＩＬ−３３媒介性障害の治療を含むその使用方法に関する。
インターロイキン−３３（ＩＬ−３３）は、ＩＬ３３遺伝子によってコードされる、インターロイキン−１（ＩＬ−１）サイトカインファミリーのメンバーであり、平滑筋細胞、上皮細胞、及び上皮細胞などの構造細胞において構成的に発現される。ＩＬ−３３は、マクロファージ及び樹状細胞において炎症性因子によって誘導され得る。アレルゲン、毒素、及び病原体などの環境上の誘発因子によって引き起こされる細胞ストレスが、ＩＬ−３３の放出につながり得る。バイオアベイラブルなＩＬ−３３は、腫瘍原性抑制２（ＳＴ２）タンパク質及びインターロイキン−１受容体補助タンパク質（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）から構成されるヘテロ二量体ＩＬ−３３受容体複合体と結合して、アダプタータンパク質である骨髄細胞分化一次応答８８（ＭｙＤ８８）及び可能性としてはＭｙＤ８８アダプター様（Ｍａｌ）タンパク質を通じてＡＰ−１及びＮＦ−κＢ経路を活性化する。ＩＬ−３３は、自然ＩＩ型（ＩＬＣ２）細胞、肥満細胞、好塩基球、好酸球、及び樹状細胞を含む、いくつかの細胞型を刺激して、２型免疫を促進する。
ＩＬ−３３経路は、治療用抗ＩＬ−３３アンタゴニストを含め改善された組成物及び治療方法の開発の必要が残っているアレルギー関連疾患を含む様々な疾患に関与していると示唆されている。
本発明は、二重特異性抗ＩＬ−３３／抗−ＩＬ−１３抗体を含む、抗ＩＬ−３３抗体及びその使用方法に関する。
一態様において、本発明は、ヒト及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）の両方のインターロイキン−３３（ＩＬ−３３）に、約５００ｐＭ以下のＫＤで特異的に結合する単離抗体を特徴とする。一部の実施形態では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１００ｆＭ〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約２００ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１５ｐＭ〜約１８０ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１５〜約１４０ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、約１００ｆＭ〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、約１００〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、約１２５〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は本抗体は、ヒト及びカニクイザルの両方のＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約２００ｐＭのＫＤで特異的に結合する。
一部の実施形態では、上述の抗体のうちのいずれかは、ＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体（例えば、ＳＴ２及び／またはＩＬ−１ＲＡｃＰ）との結合を阻害することができる。一部の実施形態では、阻害は、細胞に基づく遮断アッセイを用いて測定される。一部の実施形態では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約０．００１μｇ／ｍｌ〜約０．５μｇ／ｍｌの９０％阻害濃度（ＩＣ９０）で阻害する。一部の実施形態では、ＩＣ９０は、約０．００２μｇ／ｍｌ〜約０．２５μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ＩＣ９０は、約０．１７μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ＩＣ９０は、約０．００４μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約８００ｆＭ〜約１０ｐＭの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）で阻害する。一部の実施形態では、ＩＣ５０は、約１ｐＭ〜約５ｐＭである。一部の実施形態では、ＩＣ５０は、約２．５ｐＭである。一部の実施形態では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約１ｎＭ〜約５ｎＭのＩＣ５０で阻害する。一部の実施形態では、ＩＣ５０は、約４ｎＭである。一部の実施形態では、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ−３３／ＩＬ−１β細胞が、細胞に基づく遮断アッセイに用いられる。一部の実施形態では、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ−３３／ＩＬ−１β細胞は、配列番号３１１の配列を含む核酸を含む。一部の実施形態では、アッセイは、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ−３３／ＩＬ−１β細胞をＩＬ−３３で処理することを含む。一部の実施形態では、ＩＬ−３３は、配列番号３１３〜３１８のうちのいずれかのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ｓＳＴ２−ＬＺが、細胞に基づく遮断アッセイにおいて陽性対照として用いられる。一部の実施形態では、ｓＳＴ２−ＬＺは、配列番号３１０のアミノ酸配列を含む。
上述の態様の一部の実施形態では、本抗体は、（ａ）ＳＦＳＭＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）ＡＮＹＧＮＷＦＦＥＶ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む、結合ドメインを含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、（ａ）ＤＶＮＬＶＥＳＧＧＧＳＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＥＳＥＤＴＡＭＹＹＣＴＲ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＡＧＴＴＶＡＶＳＳ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１２）またはＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１３）またはＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２２）、ＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２３）、ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２４）、またはＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、（ａ）ＲＡＳＥＳＶＡＫＹＧＬＳＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）ＱＱＳＫＥＶＰＦＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を更に含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、（ａ）ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＦ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、（ａ）ＤＩＶＬＴＱＳＰＧＦＬＶＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＦ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＮＩＨＰＭＥＥＤＤＴＡＭＹＦＣ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、（ａ）ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＦ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２７）、ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣ（配列番号３３）、ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号３４）、またはＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。
上述の態様の一部の実施形態では、本抗体は、（ａ）ＳＳＩＦＹＷＧ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号６６）またはＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＡＬＫＳ（配列番号６７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）ＡＧＧＬＹＮＷＮＤＥＳＦＳＦＹＭＤＶ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、（ａ）ＥＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＲ（配列番号７２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号７３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＭＬＴＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号７４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号７５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、（ａ）ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＲ（配列番号７６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号７３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＭＬＴＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号７４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＮＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号７８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、（ａ）ＥＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＲ（配列番号７２）、ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＲ（配列番号７６）、またはＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＲ（配列番号７７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号７３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＭＬＴＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号７４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号７５）またはＷＧＮＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号７８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、（ａ）ＲＡＳＱＳＦＳＳＳＹＬＡ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｃ）ＱＱＹＤＲＳＰＬＴ（配列番号７１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を更に含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、（ａ）ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号７９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号８０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号８１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＳＦＳＸ１Ｓ（配列番号６２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１（Ｘ１はＭｅｔ、Ｌｅｕ、またはＶａｌである）、（ｂ）ＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＸ１ＶＫＧ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１はＳｅｒまたはＡｌａである）、（ｃ）ＡＮＹＧＸ１Ｘ２ＦＦＥＶ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３（Ｘ１はＡｓｎまたはＡｓｐであり、Ｘ２はＴｒｐまたはＰｈｅである）、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＡＫＹＧＬＳＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＫＥＶＰＦＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＳＦＳＭＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＡＮＹＧＮＷＦＦＥＶ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＡＫＹＧＬＳＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＫＥＶＰＦＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインは、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、（ａ）ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＦ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、（ａ）ＤＶＮＬＶＥＳＧＧＧＳＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＥＳＥＤＴＡＭＹＹＣＴＲ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＡＧＴＴＶＡＶＳＳ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号３８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、（ａ）ＤＩＶＬＴＱＳＰＧＦＬＶＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＦ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＮＩＨＰＭＥＥＤＤＴＡＭＹＦＣ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号３９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１２）またはＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１３）またはＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２２）、ＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２３）、ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２４）、またはＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、（ａ）ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＦ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２７）、ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣ（配列番号３３）、ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号３４）、またはＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号４１のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＳＳＩＦＹＷＧ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＸ１ＬＫＳ（配列番号９０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１はＳｅｒまたはＡｌａである）、（ｃ）ＡＧＧＬＹＮＷＮＤＥＳＦＳＦＹＭＤＶ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＳＦＳＳＳＹＬＡ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＹＤＲＳＰＬＴ（配列番号７１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＳＳＩＦＹＷＧ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号６６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＡＧＧＬＹＮＷＮＤＥＳＦＳＦＹＭＤＶ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＳＦＳＳＳＹＬＡ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＹＤＲＳＰＬＴ（配列番号７１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＳＳＩＦＹＷＧ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＡＬＫＳ（配列番号６７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＡＧＧＬＹＮＷＮＤＥＳＦＳＦＹＭＤＶ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＳＦＳＳＳＹＬＡ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＹＤＲＳＰＬＴ（配列番号７１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号８５のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインは、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、（ａ）ＥＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＲ（配列番号７２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号７３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＭＬＴＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号７４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号７５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号８４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、（ａ）ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号７９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号８０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号８１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号８５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号８６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、（ａ）ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号７９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号８０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号８１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号８７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、（ａ）ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＲ（配列番号７６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号７３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＭＬＴＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号７４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＮＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号７８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号８８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、（ａ）ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号７９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号８０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号８１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号８９のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号８５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号８６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号８７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＮＹＸ１ＭＮ（配列番号９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１（Ｘ１はＴｒｐ、Ｐｈｅ、またはＴｙｒである）、（ｂ）ＥＩＴＬＫＦＮＸ１ＹＸ２ＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１はＡｓｎ、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、またはＡｌａであり、Ｘ２はＳｅｒまたはＡｌａである）、（ｃ）ＲＮＹＧＸ１Ｘ２ＹＩＮＶ（配列番号９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３（Ｘ１はＡｓｐまたはＡｓｎであり、Ｘ２はＴｒｐまたはＰｈｅである）、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＫＦＧＸ１ＳＦＬＮ（配列番号１００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１（Ｘ１はＭｅｔ、Ｖａｌ、またはＬｅｕである）、（ｅ）ＶＡＳＳＱＧＳ（配列番号１１３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＫＤＩＰＹＴ（配列番号１１４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＮＹＷＭＮ（配列番号１０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＥＩＴＬＫＦＮＮＹＳＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１０４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＧＤＷＹＩＮＶ（配列番号１０９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＫＦＧＭＳＦＬＮ（配列番号１１２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＶＡＳＳＱＧＳ（配列番号１１３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＫＤＩＰＹＴ（配列番号１１４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＮＹＷＭＮ（配列番号１０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＥＩＴＬＫＦＮＮＹＳＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１０４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＧＮＷＹＩＮＶ（配列番号１１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＫＦＧＭＳＦＬＮ（配列番号１１２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＶＡＳＳＱＧＳ（配列番号１１３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＫＤＩＰＹＴ（配列番号１１４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＮＹＷＭＮ（配列番号１０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＥＩＴＬＫＦＮＤＹＳＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１０５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＧＮＷＹＩＮＶ（配列番号１１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＫＦＧＶＳＦＬＮ（配列番号１１５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＶＡＳＳＱＧＳ（配列番号１１３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＫＤＩＰＹＴ（配列番号１１４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号１３４のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１３５のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインは、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、（ａ）ＥＶＫＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＭＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＳＰＥＫＧＬＥＷＭＡ（配列番号１１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＳＩＳＲＤＤＳＫＳＴＶＹＬＱＭＮＮＬＲＡＥＤＴＧＩＹＹＣＡＲ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１２４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、（ａ）ＤＩＶＬＴＱＳＰＴＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣ（配列番号１２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＦ（配列番号１２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＮＩＨＰＶＥＥＤＤＴＡＭＹＦＣ（配列番号１３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号１３６のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１３７のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインは、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＡ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１２２）またはＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１２３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号１３８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、（ａ）ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣ（配列番号１２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＦ（配列番号１２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣ（配列番号１３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１３３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号１３９のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号１３４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号１３５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号１３６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号１３７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号１３８のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号１３９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＫＦＷＭＮ（配列番号１５８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＥＩＲＬＸ１Ｘ２ＩＮＹＶＫＤＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１はＡｓｎまたはＳｅｒであり、Ｘ２はＳｅｒまたはＡｌａである）、（ｃ）ＲＮＹＧＮＷＦＦＥＩ（配列番号１６０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＲＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号１６４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１６６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＫＦＷＭＮ（配列番号１５８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＥＩＲＬＮＳＩＮＹＶＫＤＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１５９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＧＮＷＦＦＥＩ（配列番号１６０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＲＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号１６４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１６６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＫＦＷＭＮ（配列番号１５８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＥＩＲＬＳＳＩＮＹＶＫＤＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１６２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＧＮＷＦＦＥＩ（配列番号１６０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＲＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号１６４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１６６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＫＦＷＭＮ（配列番号１５８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＥＩＲＬＮＡＩＮＹＶＫＤＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１６３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＧＮＷＦＦＥＩ（配列番号１６０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＲＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号１６４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１６６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号１８３のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１８４のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインは、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、（ａ）ＥＶＫＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＭＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＮ（配列番号１６７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＳＰＥＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１６８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＶＹＬＱＭＮＮＬＲＡＥＤＴＧＩＹＹＣＩＲ（配列番号１６９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１７０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号１８３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、（ａ）ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣ（配列番号１７５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＦＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹ（配列番号１７６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＮＩＨＰＬＥＥＤＤＡＡＭＹＦＣ（配列番号１７７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１７８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号１８４のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号１８５のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１８６のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインは、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮ（配列番号１７１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１７２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＩＲ（配列番号１７３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号１８５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１８１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１８２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号１８６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号１８７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号１８９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号１９０のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号１８３のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号１８４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号１８５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号１８６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号１８７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号１８８のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号１８９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号１９０のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＮＭＮ（配列番号１９１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＤＩＮＰＫＸ１Ｘ２ＤＴＦＹＮＱＮＦＫＤ（配列番号１９２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１はＡｓｎまたはＳｅｒであり、Ｘ２はＧｌｙまたはＡｌａである）、（ｃ）ＨＹＹＹＧＳＳＹＧＧＦＶＹ（配列番号１９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＨＡＳＱＮＩＮＶＷＬＳ（配列番号１９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＫＬＨＴ（配列番号１９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＱＳＹＰＬＴ（配列番号１９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＮＭＮ（配列番号１９１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＤＩＮＰＫＮＧＤＴＦＹＮＱＮＦＫＤ（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＨＹＹＹＧＳＳＹＧＧＦＶＹ（配列番号１９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＨＡＳＱＮＩＮＶＷＬＳ（配列番号１９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＫＬＨＴ（配列番号１９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＱＳＹＰＬＴ（配列番号１９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＤＹＮＭＮ（配列番号１９１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＤＩＮＰＫＳＧＤＴＦＹＮＱＮＦＫＤ（配列番号１９４）またはＤＩＮＰＫＮＡＤＴＦＹＮＱＮＦＫＤ（配列番号１９５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＨＹＹＹＧＳＳＹＧＧＦＶＹ（配列番号１９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＨＡＳＱＮＩＮＶＷＬＳ（配列番号１９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＫＬＨＴ（配列番号１９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＱＳＹＰＬＴ（配列番号１９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号２１６のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２１７のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインは、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、（ａ）ＥＶＬＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＮＡＳＧＹＴＦＳ（配列番号２００）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＳＩＧ（配列番号２０１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＫＡＴＬＴＩＤＫＳＳＳＴＶＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲ（配列番号２０２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＡＡ（配列番号２０３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号２１６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、（ａ）ＤＩＱＭＮＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＤＴＩＴＩＴＣ（配列番号２０８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＡＧＮＮＰＫＬＬＩＹ（配列番号２０９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＴＧＳＧＳＧＴＬＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ（配列番号２１０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＳＧＴＮＬＥＬＫ（配列番号２１１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号２１７のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号２１８のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２１９のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインは、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、（ａ）ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＳ（配列番号２０４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＳＩＧ（配列番号２０５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＡＴＬＴＩＤＫＳＴＳＴＡＹＬＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２０６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２０７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２１２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＮＰＫＬＬＩＹ（配列番号２１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号２１９のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号２１６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号２１７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。別の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号２２０のアミノ酸配列を含む。別の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号２１９のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号２１８のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号２１９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号２２０のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号２１９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＳＹＷＩＮ（配列番号２２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＲＩＡＰＧＳＧＦＩＳＹＮＥＬＦＫＤ（配列番号２２３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＥＦＹＹＧＳＦＹＧＧＦＡＹ（配列番号２２４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＨＡＳＱＮＩＨＶＷＬＳ（配列番号２２５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＫＡＳＴＬＨＴ（配列番号２２６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＱＳＳＰＬＴ（配列番号２２７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号２３６のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２３７のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインは、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、（ａ）ＱＶＱＬＱＱＳＧＮＤＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号２２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧ（配列番号２２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＫＡＴＬＴＶＤＴＳＳＳＴＡＹＩＱＬＧＳＬＳＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲ（配列番号２３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号２３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号２３６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、（ａ）ＤＩＱＭＮＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＤＴＩＴＩＴＣ（配列番号２３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＮＩＰＫＬＬＩＹ（配列番号２３３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＮＧＳＧＳＧＴＧＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ（配列番号２３４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＡＧＴＫＬＥＶＫ（配列番号２３５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号２３７のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号２４６のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２４７のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインは、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、（ａ）ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号２３８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧ（配列番号２３９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＶＴＩＴＲＤＴＳＴＳＴＡＹＬＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２４０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２４１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号２４６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２４２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２４３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２４４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２４５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号２４７のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号２３６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号２３７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号２４６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号２４７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＧＳＡＸ１Ｈ（配列番号２４８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１（Ｘ１はＭｅｔまたはＩｌｅである）、（ｂ）ＲＩＲＳＸ１Ｘ２ＮＸ３ＹＡＴＸ４ＹＸ５ＡＳＶＫＧ（配列番号２４９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１はＡｒｇまたはＬｙｓであり、Ｘ２はＡｓｎ、Ｔｈｒ、またはＧｌｙであり、Ｘ３はＡｓｎまたはＳｅｒであり、Ｘ４はＡｌａまたはＧｌｕであり、Ｘ５はＡｌａまたはＡｓｐである）、（ｃ）Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＦＤＹ（配列番号２５０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３（Ｘ１はＬｅｕまたはＧｌｎであり、Ｘ２はＧｌｎ、Ｇｌｙ、またはＰｈｅであり、Ｘ３はＧｌｎまたはＧｌｙであり、Ｘ４はＰｒｏまたはＡｓｐである）、（ｄ）ＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＤ（配列番号２５１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２５２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＬＱＨＸ１Ｘ２ＹＰＸ３Ｔ（配列番号２５３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３（Ｘ１はＡｓｐまたはＳｅｒであり、Ｘ２はＳｅｒまたはＩｌｅであり、Ｘ３はＬｅｕまたはＰｒｏである）を含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＧＳＡＭＨ（配列番号２５４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＲＩＲＳＲＮＮＮＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧ（配列番号２５５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＬＱＱＰＰＦＤＹ（配列番号２５６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＤ（配列番号２５１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２５２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＬＱＨＤＳＹＰＬＴ（配列番号２５７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＧＳＡＩＨ（配列番号２５８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＲＩＲＳＲＴＮＮＹＡＴＥＹＤＡＳＶＫＧ（配列番号２５９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＬＧＱＰＰＦＤＹ（配列番号２６０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＤ（配列番号２５１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２５２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＬＱＨＳＩＹＰＰＴ（配列番号２６１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＧＳＡＭＨ（配列番号２５４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＲＩＲＳＫＧＮＳＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧ（配列番号２６２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＱＦＧＤＰＦＤＹ（配列番号２６３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＤ（配列番号２５１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２５２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＬＱＨＤＳＹＰＬＴ（配列番号２５７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号２８２のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２８３のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインは、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、（ａ）ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２６４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＧ（配列番号２６７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＲＴＴＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２６９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号２８２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、（ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２７３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹ（配列番号２７６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＮＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２７７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２８０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号２８３のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号２８４のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２８５のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインは、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２６５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＧ（配列番号２６７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＲＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２７０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号２８４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、（ａ）ＡＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２７４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹ（配列番号２７６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２７８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２８１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号２８５のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号２８６のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２８７のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインは、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、（ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２６６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、（ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧ（配列番号２６８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＦＳＩＳＲＤＤＳＫＲＴＡＹＬＱＭＳＳＬＫＴＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２７１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び（ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号２８６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、（ａ）ＡＩＲＩＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２７５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、（ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹ（配列番号２７６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、（ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２７９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び（ｄ）ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２８０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号２８７のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号２８２のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号２８３のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号２８４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号２８５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号２８６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号２８７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号２８８のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、及び（ｂ）配列番号２８９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号２９０のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、及び（ｂ）配列番号２９１のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号２９２のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、及び（ｂ）配列番号２９３のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号２９４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、及び（ｂ）配列番号２９５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
上述の態様のうちのいずれかの一部の実施形態では、本抗体は、ヒトまたはカニクイザルＩＬ−３３に特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、ヒト及びカニクイザルの両方のＩＬ−３３に特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、ヒト及びカニクイザルの両方のＩＬ−３３に、約１ｎＭ以下のＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１００ｆＭ〜約１ｎＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約２００ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約７５ｐＭ〜約１８０ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約７５〜約１４０ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、約１００ｆＭ〜約１ｎＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、約２００〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、約２５０〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、ヒト及びカニクイザルの両方のＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約２００ｐＭのＫＤで特異的に結合する。
上述の態様のうちのいずれかの一部の実施形態では、本抗体は、ＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を阻害することができる。一部の実施形態では、阻害は、細胞に基づく遮断アッセイを用いて測定される。一部の実施形態では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約０．００１μｇ／ｍｌ〜約０．５μｇ／ｍｌの９０％阻害濃度（ＩＣ９０）で阻害する。一部の実施形態では、ＩＣ９０は、約０．００２μｇ／ｍｌ〜約０．２５μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ＩＣ９０は、約０．１７μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ＩＣ９０は、約０．００４μｇ／ｍｌである。
上述の態様のうちのいずれかの一部の実施形態では、本抗体は、アグリコシル化部位変異を含む。
上述の態様のうちのいずれかの一部の実施形態では、本抗体は、モノクローナル、ヒト、ヒト化、またはキメラである。
上述の態様のうちのいずれかの一部の実施形態では、本抗体は、ＩＬ−３３に結合する抗体フラグメントである。一部の実施形態では、抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２フラグメントからなる群から選択される。
上述の態様のうちのいずれかの一部の実施形態では、本抗体は、全長抗体である。一部の実施形態では、本抗体は、ＩｇＧ抗体である。一部の実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１抗体である。一部の実施形態では、ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ４抗体である。一部の実施形態では、ＩｇＧ４抗体は、ヒンジ領域に変異を含む。一部の実施形態では、変異は、置換変異である。一部の実施形態では、置換変異は、アミノ酸残基Ｓ２２８（ＥＵ番号付け）におけるものである。一部の実施形態では、置換変異は、Ｓ２２８Ｐ変異である。
上述の態様のうちのいずれかの一部の実施形態では、本抗体は、単一特異性抗体である。
上述の態様のうちのいずれかの一部の実施形態では、本抗体は、多重特異性抗体である。一部の実施形態では、本抗体は、二重特異性抗体である。一部の実施形態では、二重特異性抗体は、第２の生物学的分子に結合する第２の結合ドメインを含み、ここで、この第２の生物学的分子は、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−５（ＩＬ−５）、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）、Ｄ因子、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ、及びＶＥＧＦ受容体からなる群から選択される。一部の実施形態では、第２の生物学的分子は、Ｄ因子である。一部の実施形態では、第２の生物学的分子は、ＨｔｒＡ１である。一部の実施形態では、第２の生物学的分子は、ＶＥＧＦである。一部の実施形態では、第２の生物学的分子は、ＩＬ−１３である。一部の実施形態では、第２の結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＡＹＳＶＮ（配列番号２９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＭＩＷＧＤＧＫＩＶＹＮＳＡＬＫＳ（配列番号２９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＤＧＹＹＰＹＡＭＤＮ（配列番号２９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＫＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号３００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＮＮＥＤＰＲＴ（配列番号３０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。一部の実施形態では、第２の結合ドメインは、（ａ）配列番号３０２のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号３０３のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。一部の実施形態では、ＶＨドメインは、配列番号３０２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＶＬドメインは、配列番号３０３のアミノ酸配列を含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＳＦＳＭＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＡＮＹＧＮＷＦＦＥＶ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＡＫＹＧＬＳＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＫＥＶＰＦＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の結合ドメインと、以下の６つのＨＶＲＨＶＲ：（ａ）ＡＹＳＶＮ（配列番号２９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＭＩＷＧＤＧＫＩＶＹＮＳＡＬＫＳ（配列番号２９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＤＧＹＹＰＹＡＭＤＮ（配列番号２９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＫＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号３００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＮＮＥＤＰＲＴ（配列番号３０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＳＳＩＦＹＷＧ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号６６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＡＧＧＬＹＮＷＮＤＥＳＦＳＦＹＭＤＶ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＳＦＳＳＳＹＬＡ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＹＤＲＳＰＬＴ（配列番号７１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の結合ドメインと、以下の６つのＨＶＲ：（ａ）ＡＹＳＶＮ（配列番号２９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＭＩＷＧＤＧＫＩＶＹＮＳＡＬＫＳ（配列番号２９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＤＧＹＹＰＹＡＭＤＮ（配列番号２９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＫＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号３００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＮＮＥＤＰＲＴ（配列番号３０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ａ）配列番号３０２のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号３０３のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号８５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ａ）配列番号３０２のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号３０３のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む。
別の実施形態では、本発明は、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の重鎖及び第１の軽鎖（第１の重鎖は、配列番号３０６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、第１の軽鎖は、配列番号３０７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｂ）ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の重鎖及び第２の軽鎖（第２の重鎖は、配列番号３０４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、第２の軽鎖は、配列番号３０５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。
別の実施形態では、本発明は、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する単離抗体を特徴とし、ここで、本抗体は、（ａ）ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の重鎖及び第１の軽鎖（第１の重鎖は、配列番号３０８のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、第１の軽鎖は、配列番号３０９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｂ）ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の重鎖及び第２の軽鎖（第２の重鎖は、配列番号３０４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、第２の軽鎖は、配列番号３０５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。
上述の態様のうちのいずれかの一部の実施形態では、本抗体は、抗原結合抗体フラグメントである。一部の実施形態では、抗原結合抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２フラグメントからなる群から選択される。一部の実施形態では、抗原結合抗体フラグメントは、Ｆａｂである。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載される抗体のうちのいずれかをコードする単離核酸を特徴とする。別の態様では、本発明は、抗体を発現させるための単離核酸を含むベクター（例えば、発現ベクター）を特徴とする。別の態様では、本発明は、前述の核酸及び／またはベクターを含む宿主細胞を特徴とする。一部の実施形態では、宿主細胞は、哺乳動物細胞である。一部の実施形態では、哺乳動物細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。一部の実施形態では、宿主細胞は、原核細胞である。一部の実施形態では、原核細胞は、Ｅ．Ｃｏｌｉである。
別の態様では、本発明は、本明細書に記載される抗体のうちのいずれかを産生する方法を特徴とし、本方法は、前述のベクター（発現ベクター）のうちのいずれかを含む宿主細胞を培養培地で培養することを含む。一部の実施形態では、本方法は、宿主細胞または培養培地から抗体を回収することを更に含む。
別の態様では、本発明は、前述の抗体のうちのいずれか１つを含む組成物を特徴とする。一部の実施形態では、本組成物は、薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を更に含む。一部の実施形態では、本組成物は、薬学的組成物である。一部の実施形態では、本薬学的組成物は、ＳＴ２結合アンタゴニスト、Ｄ因子結合アンタゴニスト、ＨｔｒＡ１アンタゴニスト、ＶＥＧＦアンタゴニスト、トリプターゼ−ベータ結合アンタゴニスト、Ｔｈ２細胞上に発現される化学誘引物質受容体相同分子（ＣＲＴＨ２）結合アンタゴニスト、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）結合アンタゴニスト、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）結合アンタゴニスト、ＪＡＫ１アンタゴニスト、及び／またはインターロイキン−５（ＩＬ−５）結合アンタゴニストを更に含む。一部の実施形態では、薬学的組成物は、Ｄ因子結合アンタゴニストを含む。一部の実施形態では、Ｄ因子結合アンタゴニストは、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態では、薬学的組成物は、ＨｔｒＡ１アンタゴニストを含む。一部の実施形態では、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストは、抗ＨｔｒＡ１抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態では、薬学的組成物は、ＶＥＧＦアンタゴニストを含む。一部の実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合フラグメントである。
一部の態様では、前述の抗体のうちのいずれか１つを医薬品として使用してもよい。
一部の態様では、前述の抗体のうちのいずれか１つを、ＩＬ−３３媒介性障害の治療に使用してもよい。一部の実施形態では、ＩＬ−３３媒介性障害は、炎症性状態、免疫障害、線維性障害、好酸球性障害、感染症、疼痛、中枢神経系障害、固形腫瘍、及び眼科障害からなる群から選択される。一部の実施形態では、炎症性状態は、喘息、敗血症、敗血症性ショック、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、リウマチ性関節炎、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、免疫障害は、喘息、リウマチ性関節炎、アレルギー性鼻炎、乾癬、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、糖尿病、及び肝疾患からなる群から選択される。一部の実施形態では、線維性疾患は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。一部の実施形態では、好酸球性障害は、好酸球関連胃腸障害（ＥＧＩＤ）である。一部の実施形態では、ＥＧＩＤは、好酸球性食道炎である。一部の実施形態では、感染症は、蠕虫感染症、原虫感染症、またはウイルス感染症である。一部の実施形態では、原虫感染症は、大形リーシュマニア感染症である。一部の実施形態では、ウイルス感染症は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症またはインフルエンザ感染症である。一部の実施形態では、疼痛は、炎症性疼痛である。一部の実施形態では、中枢神経系障害は、アルツハイマー病である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、乳房腫瘍、結腸腫瘍、前立腺腫瘍、肺腫瘍、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、膵臓腫瘍、胃腫瘍、腸腫瘍、脳腫瘍、骨腫瘍、及び皮膚腫瘍からなる群から選択される。一部の実施形態では、眼科障害は、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、眼の網膜症、ポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、網膜剥離、緑内障、ブドウ膜炎、網膜色素変性、レーバー先天黒内障、シュタルガルト病、外傷性眼損傷、及び結膜炎からなる群から選択される。一部の実施形態では、ＡＭＤは、滲出型ＡＭＤ、萎縮型ＡＭＤ、または地図状萎縮（ＧＡ）である。一部の実施形態では、ＡＭＤは、中間型ＡＭＤまたは進行型ＡＭＤである。一部の実施形態では、眼の網膜症は、糖尿病性網膜症（ＤＲ）または未熟児網膜症（ＲＯＰ）である。一部の実施形態では、眼の網膜症は、高所ＤＲである。一部の実施形態では、結膜炎は、感染性結膜炎または非感染性結膜炎である。一部の実施形態では、結膜炎は、アレルギー性結膜炎である。
一部の態様では、前述の抗体のうちのいずれか１つを、ＩＬ−３３媒介性障害を治療するための医薬品の製造に使用してもよい。一部の実施形態では、ＩＬ−３３媒介性障害は、炎症性状態、免疫障害、線維性障害、好酸球性障害、感染症、疼痛、中枢神経系障害、固形腫瘍、及び眼科障害からなる群から選択される。一部の実施形態では、炎症性状態は、喘息、敗血症、敗血症性ショック、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、リウマチ性関節炎、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、免疫障害は、喘息、リウマチ性関節炎、アレルギー性鼻炎、乾癬、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、糖尿病、及び肝疾患からなる群から選択される。一部の実施形態では、線維性疾患は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。一部の実施形態では、好酸球性障害は、好酸球関連胃腸障害（ＥＧＩＤ）である。一部の実施形態では、ＥＧＩＤは、好酸球性食道炎である。一部の実施形態では、感染症は、蠕虫感染症、原虫感染症、またはウイルス感染症である。一部の実施形態では、原虫感染症は、大形リーシュマニア感染症である。一部の実施形態では、ウイルス感染症は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症またはインフルエンザ感染症である。一部の実施形態では、疼痛は、炎症性疼痛である。一部の実施形態では、中枢神経系障害は、アルツハイマー病である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、乳房腫瘍、結腸腫瘍、前立腺腫瘍、肺腫瘍、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、膵臓腫瘍、胃腫瘍、腸腫瘍、脳腫瘍、骨腫瘍、及び皮膚腫瘍からなる群から選択される。一部の実施形態では、眼科障害は、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、眼の網膜症、ポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、網膜剥離、緑内障、ブドウ膜炎、網膜色素変性、レーバー先天黒内障、シュタルガルト病、外傷性眼損傷、及び結膜炎からなる群から選択される。一部の実施形態では、ＡＭＤは、滲出型ＡＭＤ、萎縮型ＡＭＤ、または地図状萎縮（ＧＡ）である。一部の実施形態では、ＡＭＤは、中間型ＡＭＤまたは進行型ＡＭＤである。一部の実施形態では、眼の網膜症は、糖尿病性網膜症（ＤＲ）または未熟児網膜症（ＲＯＰ）である。一部の実施形態では、眼の網膜症は、高所ＤＲである。一部の実施形態では、結膜炎は、感染性結膜炎または非感染性結膜炎である。一部の実施形態では、結膜炎は、アレルギー性結膜炎である。一部の実施形態では、医薬品は、ＳＴ２結合アンタゴニスト、Ｄ因子結合アンタゴニスト、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニスト、ＶＥＧＦアンタゴニスト、トリプターゼ−ベータ結合アンタゴニスト、Ｔｈ２細胞上に発現される化学誘引物質受容体相同分子（ＣＲＴＨ２）結合アンタゴニスト、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）結合アンタゴニスト、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）結合アンタゴニスト、ＪＡＫ１アンタゴニスト、及び／またはインターロイキン−５（ＩＬ−５）結合アンタゴニストと組み合わせて使用するために製剤化されている。一部の実施形態では、医薬品は、Ｄ因子結合アンタゴニストと組み合わせて使用するために製剤化されている。一部の実施形態では、Ｄ因子結合アンタゴニストは、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態では、医薬品は、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストと組み合わせて使用するために製剤化されている。一部の実施形態では、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストは、抗ＨｔｒＡ１抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態では、医薬品は、ＶＥＧＦアンタゴニストと組み合わせて使用するために製剤化されている。一部の実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合フラグメントである。
別の態様では、本発明は、地図状萎縮（ＧＡ）を治療するための医薬品の製造における、ＩＬ−３３及びＤ因子の両方に特異的に結合する二重特異性抗体、またはその抗原結合抗体フラグメントの使用を提供する。一部の実施形態では、抗原結合抗体フラグメントは、（Ｆａｂ’）２フラグメントである。
別の態様では、前述の抗体のうちのいずれか１つを、地図状萎縮（ＧＡ）を治療するための医薬品の製造に使用してもよく、ここで、この医薬品は、Ｄ因子結合アンタゴニストと組み合わせて使用するように製剤化されている。一部の実施形態では、Ｄ因子結合アンタゴニストは、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合フラグメントである。
別の態様では、本発明は、地図状萎縮（ＧＡ）、ＡＭＤ（滲出型若しくは萎縮型）、ＤＲ、ＰＣＶ、またはＲＯＰを治療するための医薬品の製造における、ＩＬ−３３及びＨｔｒＡ１の両方に特異的に結合する二重特異性抗体またはその抗原結合抗体フラグメントの使用を提供する。一部の実施形態では、抗原結合抗体フラグメントは、（Ｆａｂ’）２フラグメントである。
別の態様では、前述の抗体のうちのいずれか１つを、地図状萎縮（ＧＡ）、ＡＭＤ（滲出型若しくは萎縮型）、ＤＲ、ＰＣＶ、またはＲＯＰを治療するための医薬品の製造に使用してもよく、ここで、この医薬品は、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストと組み合わせて使用するように製剤化されている。一部の実施形態では、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストは、抗ＨｔｒＡ１抗体またはその抗原結合フラグメントである。
別の態様では、本発明は、滲出型ＡＭＤを治療するための医薬品の製造における、ＩＬ−３３及びＶＥＧＦの両方に特異的に結合する二重特異性抗体またはその抗原結合抗体フラグメントの使用を提供する。一部の実施形態では、抗原結合抗体フラグメントは、（Ｆａｂ’）２フラグメントである。
別の態様では、前述の抗体のうちのいずれか１つを、滲出型ＡＭＤを治療するための医薬品の製造に使用してもよく、ここで、この医薬品は、ＶＥＧＦアンタゴニストと組み合わせて使用するように製剤化されている。一部の実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合フラグメントである。
別の態様では、本発明は、ＩＬ−３３媒介性障害の治療を、それを必要とする対象において行う方法を特徴とし、本方法は、対象に、治療有効量の前述の抗体のうちのいずれか１つを投与することを含む。一部の実施形態では、ＩＬ−３３媒介性障害は、炎症性状態、免疫障害、線維性障害、好酸球性障害、感染症、疼痛、中枢神経系障害、固形腫瘍、及び眼科障害からなる群から選択される。一部の実施形態では、炎症性状態は、喘息、敗血症、敗血症性ショック、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、リウマチ性関節炎、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される。一部の実施形態では、免疫障害は、喘息、リウマチ性関節炎、アレルギー性鼻炎、乾癬、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、糖尿病、及び肝疾患からなる群から選択される。一部の実施形態では、線維性疾患は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である。一部の実施形態では、好酸球性障害は、好酸球関連胃腸障害（ＥＧＩＤ）である。一部の実施形態では、ＥＧＩＤは、好酸球性食道炎である。一部の実施形態では、感染症は、蠕虫感染症、原虫感染症、またはウイルス感染症である。一部の実施形態では、原虫感染症は、大形リーシュマニア感染症である。一部の実施形態では、ウイルス感染症は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症またはインフルエンザ感染症である。一部の実施形態では、疼痛は、炎症性疼痛である。一部の実施形態では、中枢神経系障害は、アルツハイマー病である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、乳房腫瘍、結腸腫瘍、前立腺腫瘍、肺腫瘍、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、膵臓腫瘍、胃腫瘍、腸腫瘍、脳腫瘍、骨腫瘍、及び皮膚腫瘍からなる群から選択される。一部の実施形態では、眼科障害は、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、眼の網膜症、ポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、網膜剥離、緑内障、ブドウ膜炎、網膜色素変性、レーバー先天黒内障、シュタルガルト病、外傷性眼損傷、及び結膜炎からなる群から選択される。一部の実施形態では、ＡＭＤは、滲出型ＡＭＤ、萎縮型ＡＭＤ、または地図状萎縮（ＧＡ）である。一部の実施形態では、ＡＭＤは、中間型ＡＭＤまたは進行型ＡＭＤである。一部の実施形態では、眼の網膜症は、糖尿病性網膜症（ＤＲ）または未熟児網膜症（ＲＯＰ）である。一部の実施形態では、眼の網膜症は、高所ＤＲである。一部の実施形態では、結膜炎は、感染性結膜炎または非感染性結膜炎である。一部の実施形態では、結膜炎は、アレルギー性結膜炎である。一部の実施形態では、本方法は、対象に、ＳＴ２結合アンタゴニスト、Ｄ因子結合アンタゴニスト、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニスト、ＶＥＧＦアンタゴニスト、トリプターゼ−ベータ結合アンタゴニスト、Ｔｈ２細胞上に発現される化学誘引物質受容体相同分子（ＣＲＴＨ２）結合アンタゴニスト、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）結合アンタゴニスト、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）結合アンタゴニスト、ＪＡＫ１アンタゴニスト、及び／またはインターロイキン−５（ＩＬ−５）結合アンタゴニストを投与することを更に含む。一部の実施形態では、本方法は、Ｄ因子結合アンタゴニストを対象に投与することを更に含む。一部の実施形態では、Ｄ因子結合アンタゴニストは、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態では、本方法は、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストを対象に投与することを更に含む。一部の実施形態では、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストは、抗ＨｔｒＡ１抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の実施形態では、本方法は、ＶＥＧＦアンタゴニストを対象に投与することを更に含む。一部の実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合フラグメントである。
別の態様では、本発明は、地図状萎縮（ＧＡ）の治療を、それを必要とする対象において行う方法を特徴とし、ここで、本方法は、対象に、ＩＬ−３３及びＤ因子の両方に特異的に結合する治療有効量の二重特異性抗体またはその抗原結合抗体フラグメントを投与することを含む。一部の実施形態では、抗原結合抗体フラグメントは、（Ｆａｂ’）２フラグメントである。
別の態様では、本発明は、地図状萎縮（ＧＡ）の治療を、それを必要とする対象において行う方法を特徴とし、ここで、本方法は、対象に、治療有効量の前述の抗体のうちのいずれか１つ、及び治療有効量のＤ因子結合アンタゴニストを投与することを含む。一部の実施形態では、Ｄ因子結合アンタゴニストは、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合フラグメントである。
別の態様では、本発明は、地図状萎縮（ＧＡ）、ＡＭＤ（滲出型若しくは萎縮型）、ＤＲ、ＰＣＶ、またはＲＯＰの治療を、それを必要とする対象において行う方法を特徴とし、本方法は、対象に、ＩＬ−３３及びＨｔｒＡ１の両方に特異的に結合する治療有効量の二重特異性抗体またはその抗原結合抗体フラグメントを投与することを含む。一部の実施形態では、抗原結合抗体フラグメントは、（Ｆａｂ’）２フラグメントである。
別の態様では、本発明は、地図状萎縮（ＧＡ）、ＡＭＤ（滲出型若しくは萎縮型）、ＤＲ、ＰＣＶ、またはＲＯＰの治療を、それを必要とする対象において行う方法を特徴とし、本方法は、対象に、治療有効量の前述の抗体のうちのいずれか１つ、及び治療有効量のＨｔｒＡ１子結合アンタゴニストを投与することを含む。一部の実施形態では、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストは、抗ＨｔｒＡ１抗体またはその抗原結合フラグメントである。
別の態様では、本発明は、滲出型ＡＭＤの治療を、それを必要とする対象において行う方法を特徴とし、本方法は、対象に、ＩＬ−３３及びＶＥＧＦの両方に特異的に結合する治療有効量の二重特異性抗体またはその抗原結合抗体フラグメントを投与することを含む。一部の実施形態では、抗原結合抗体フラグメントは、（Ｆａｂ’）２フラグメントである。
別の態様では、本発明は、滲出型ＡＭＤ治療を、それを必要とする対象において行う方法を特徴とし、ここで、本方法は、対象に、治療有効量の前述の抗体のうちのいずれか１つ、及び治療有効量のＶＥＧＦアンタゴニストを投与することを含む。一部の実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合フラグメントである。
前述の方法のうちのいずれかの一部の実施形態では、本抗体は、皮下、静脈内、筋肉内、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、埋め込み、吸入、くも膜内（ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌｌｙ）、心室内、鼻腔内、硝子体内、眼球内、眼窩周囲、結膜、結膜下、テノン嚢下、前房内、網膜下、眼球後、または、毛細胆管内（ｉｎｔｒａｃａｎａｌｉｃｕｌａｒｌｙ）で投与される。一部の実施形態では、対象は、ヒトである。
細胞に基づくＩＬ−３３遮断アッセイの概要を示す図である。ＳＥＡＰをＮＦ−κＢ／ＡＰ−１分泌型アルカリホスファターゼのレポーター遺伝子として使用する。可溶性ＳＴ２（ｓＳＴ２）を陽性対照として使用する。 ヒトＩＬ−３３について、細胞に基づくＩＬ−３３遮断アッセイの結果を示すグラフである。 カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＩＬ−３３について、細胞に基づくＩＬ−３３遮断アッセイの結果を示すグラフである。 示されている抗ＩＬ−３３抗体クローンについて、細胞に基づくＩＬ−３３遮断アッセイの結果を示すグラフである。 示されている親抗ＩＬ−３３抗体及びヒト化抗ＩＬ−３３抗体について、細胞に基づくＩＬ−３３遮断アッセイの結果（ＩＣ５０及びＩＣ９０）を示す表である。 ＲＮＡ−ｓｅｑ分析のために解剖した網膜黄斑部及び網膜周辺部を示す図である。上方血管弓（ｖａｓｃｕｌａｒ ａｒｃａｄｅ）と下方血管弓との間の黄斑領域を、解剖用の鋏を用いて周辺眼底部から切り離した。ＲＮＡ−ｓｅｑのために網膜黄斑部組織及び網膜周辺部組織の両方からＲＮＡを単離した。破線の輪郭は黄変領域を示し、実線の円は網膜中心窩領域を示す。矢印は、視神経乳頭の位置を示す。 健常なドナーの眼の網膜黄斑部及び網膜周辺部におけるＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−３３、及びＩＬ−１８の発現を示す図である。正常なドナーの眼の網膜黄斑部（ｎ＝１４）及び網膜周辺部（ｎ＝２２）のを単離し、ＲＮＡをＲＮＡ−ｓｅｑにより分析した。データは、読み取り総数１００万当たりの１０００塩基当たりの読み取り値（ｒｅａｄｓ ｐｅｒ ｋｉｌｏｂａｓｅ ｐｅｒ ｍｉｌｌｉｏｎ ｔｏｒａｌ ｒｅａｄｓ、ＲＰＫＭ）として表す。水平方向の線は、平均を表す。＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、対応のない両側スチューデントｔ検定。 定量分析によって分析した（図５Ｂを参照されたい）、代表的な眼の中心部領域及び周辺部領域（それぞれ、実線及び破線で示される）の断面を示す画像である。矢印は、網膜中心窩及び毛様体を示す。バー５ｍｍ。 図５Ｂ及び５Ｃは、８４歳の男性ドナーからの対照の眼の網膜中心窩（図５Ｂ）及び網膜周辺部（図５Ｃ）におけるＩＬ−３３（緑色）、ビメンチン（赤色）、及びＧＦＡＰ（黄色）の三色の免疫組織化学的染色を示す画像である。４’，６−ジアミジノ−２−フェニルインドールフェニルインドール（ＤＡＰＩ）染色を青色で示す。矢印は内顆粒層（ＩＮＬ）におけるＩＬ−３３＋ミュラー細胞を示すが、黒塗りの矢じり記号は、網膜色素上皮（ＲＰＥ）におけるＩＬ−３３＋細胞を示し、白抜きの矢じり記号は、脈絡膜血管構造におけるＩＬ−３３＋細胞を示し、角括弧は、神経節細胞層（ＧＣＬ）におけるＩＬ−３３＋星状細胞を示す。バー５０μｍ。 各網膜層の中心窩領域及び周辺部領域におけるＩＬ−３３＋細胞の定量化を示すグラフである。ＩＬ−３３＋細胞は、６７〜８９歳（中央値８４歳、男性５人及び女性２人）の正常なヒトドナーからの７つの眼の中心窩領域及び周辺部領域内のおよそ５００μｍの切片に沿って定量化した。内顆粒層（ＩＮＬ）及び網膜色素上皮（ＲＰＥ）におけるＩＬ−３３＋細胞の数は、網膜中心窩では網膜周辺部と比較して高かった。ＧＣＬは神経節細胞層であり、ＯＮＬは外顆粒層である。＊Ｐ＜０．０５、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、ｎｓは有意差なし、対応のない両側スチューデントｔ検定。 対照ドナーの眼の中心窩領域のＧＣＬ、ＩＮＬ、ＲＰＥ、及び脈絡膜におけるＩＬ−３３＋細胞の一連の代表的な高倍率画像である。ＩＬ−３３（緑色）、ビメンチン（赤色）、及びＧＦＡＰ（黄色）での同時染色により、ＩＬ−３３＋星状細胞（ＧＦＡＰ＋、角括弧）及びＩＬ−３３＋ミュラー細胞（ビメンチン＋、矢印）が示された。脈絡膜血管構造のＩＬ−３３＋内皮細胞（白抜きの矢じり記号）は、ＩＬ−３３（赤色）及びＰＬＶＡＰ（緑色）の同時染色によって示されている。黒塗りの矢じり記号は、ＩＬ−３３＋ＲＰＥである。ＤＡＰＩ染色は青色で示されている。バー１０μｍ。 眼疾患の病歴のない８４歳の男性からの対照ヒトドナーの眼及びＡＭＤと診断された８２歳の女性の目からの網膜中心窩におけるＩＬ−３３（緑色）、Ｉｂａ１（赤色）、及びＧＦＡＰ（黄色）に対する三色の蛍光免疫組織化学的染色を示す一連の代表画像である。ＩＬ−３３＋ミュラー細胞及び単核食細胞（Ｉｂａ１＋細胞）の数は、網膜変性領域（ＡＭＤ：病変部）では、網膜変性を示さない同じドナーの隣接領域（ＡＭＤ：非病変部）と比較して、または対照ドナーの眼の網膜中心窩（対照：中心窩）と比較して、有意に増加していた。矢印はＩＬ−３３＋ミュラー細胞、矢じり記号はＩｂａ１＋細胞（網膜下腔内）。ＤＡＰＩ（青色）は核染色。バー１００μｍ。 対照の眼、ならびにＡＭＤ眼の病変及び非病変領域の網膜中心窩におけるＩＬ−３３（緑色）、Ｉｂａ１（赤色）、及びＧＦＡＰ（黄色）に関する免疫組織化学を示す、一連の代表的な高倍率画像である。明視野（ＢＦ）像は、ＡＭＤ病変部位におけるＲＰＥの消失を示す。バー５０μｍ。 図６Ｃ〜６Ｅは、６７〜８９歳（中央値８４歳）の７人の対照ヒトドナーの網膜中心窩内、ならびに８２〜９２歳（中央値８６歳）の７人のＡＭＤドナーの眼の病変領域及び非病変領域内で、およそ５００μｍの長さの切片にわたり計数した、ＩＮＬにおけるＩＬ−３３＋ミュラー細胞（図６Ｃ）、脈絡膜におけるＩＬ−３３＋細胞（図６Ｄ）、及び網膜におけるＩｂａ１＋細胞（図６Ｅ）の定量化を示すグラフである。＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、テューキーの事後検定を伴う一方向ＡＮＯＶＡ 水平方向の線は、平均を表す。 図６Ｃ〜６Ｅは、６７〜８９歳（中央値８４歳）の７人の対照ヒトドナーの網膜中心窩内、ならびに８２〜９２歳（中央値８６歳）の７人のＡＭＤドナーの眼の病変領域及び非病変領域内で、およそ５００μｍの長さの切片にわたり計数した、ＩＮＬにおけるＩＬ−３３＋ミュラー細胞（図６Ｃ）、脈絡膜におけるＩＬ−３３＋細胞（図６Ｄ）、及び網膜におけるＩｂａ１＋細胞（図６Ｅ）の定量化を示すグラフである。＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、テューキーの事後検定を伴う一方向ＡＮＯＶＡ 水平方向の線は、平均を表す。図６Ｆは、ヒトＡＭＤ患者からの硝子体におけるＩＬ−３３レベルの上昇を示すグラフである。ＩＬ−３３濃度は、ＡＭＤ患者（ｎ＝６、男性１人及び女性５人、６８〜９１歳、中央値７９歳）、黄斑パッカーを有する対照患者（ｎ＝１２、男性３人及び女性９人、５６〜７９歳、中央値７２歳）、ならびに黄斑円孔を有する対照患者（ｎ＝２１、男性５人及び女性１６人、４６〜７５歳、中央値６５歳）から採取した硝子体試料において、ＥＬＩＳＡによって判定した。＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、テューキーの事後検定を伴う一方向ＡＮＯＶＡ。水平方向の線は、平均を表す。 スプラーグドーリー（ＳＤ）ラットの網膜におけるＩＬ−３３（茶色）及びビメンチン（赤色）の免疫組織化学的染色の結果を示す。左パネルの画像の矢印は、ＩＬ−３３＋ミュラー細胞を示す。左パネルの差し込み図は、ＩＬ−３３＋ミュラー細胞（ビメンチン＋）を示す。網膜中心窩及び網膜周辺部でのＩＮＬ、ＲＰＥ、ＧＣＬ、及び脈絡膜におけるＩＬ−３３＋細胞を、約５００μｍの長さの切片に沿って計数した。この定量化の結果が、右パネルに示されている。バー１０μｍ。ＮＤは未検出。 ＢＡＬＢ／ｃマウスにおけるＩＬ−３３（茶色）の免疫組織化学的染色の結果を示す。左パネルの画像の矢印は、ＩＬ−３３＋ミュラー細胞を示す。網膜中心窩及び網膜周辺部でのＩＮＬ、ＲＰＥ、ＧＣＬ、及び脈絡膜におけるＩＬ−３３＋細胞を、約５００μｍの長さの切片に沿って計数した。この定量化の結果が、右パネルに示されている。バー１０μｍ。 ＥＬＩＳＡによって判定した、ＢＡＬＢ／ｃマウスの網膜におけるＩＬ−１ファミリーの遺伝子（ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−３３、及びＩＬ−１８）の発現を示すグラフである。各データ点は、個々のマウス（ｎ＝５）を表す。データは、類似の結果を有した少なくとも２回の実験を表す。 ＧＦＡＰ特異的抗体及びビメンチン特異的抗体または対照抗体を使用して細胞内染色した後、フローサイトメトリーを行って測定した、ｒＭＣ−１細胞におけるＧＦＡＰ及びビメンチンの発現を示す一連のグラフである。活性化されたミュラー細胞は、ＧＦＡＰ＋である。 ｒＭＣ−１細胞の核（「ｎｕｃｌ」）及び細胞質（「ｃｙｔｏ」）画分におけるＩＬ−３３の発現を示すウェスタンブロットである。全長（ＩＬ−３３ｐ３０）及びプロセシング形態（ＩＬ−３３ｐ１９）のＩＬ−３３が核内に検出されたが、細胞質中にはＩＬ−３３ｐ１９のみが存在していた。データは、類似の結果を有した少なくとも２回の実験を表す。 ｑＰＣＲによる、高グルコース培地（「ＨＧ」）で培養したｒＭＣ−１細胞におけるＧＦＡＰ発現の時間経過分析の結果を示すグラフである。ＧＦＡＰ ｍＲＮＡは、β−アクチンｍＲＮＡに対して正規化した。時間０でのＧＦＡＰ発現を１と設定した。データは、三連の実験の平均±標準誤差を表す。＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、一方向ＡＮＯＶＡに続いてダネットの事後検定。 高グルコース（ＨＧ）及び低グルコース（ＬＧ）含有培地で培養したｒＭＣ−１におけるＩＬ−３３分泌のＥＬＩＳＡ（左パネル）及びウェスタンブロット（右パネル）での分析を示す。ＩＬ−３３ｐ１９は、ラット硝子体及びｒＭＣ−１培養上清の両方に存在していた。示されるデータは、三連のウェルの平均±標準誤差であり、３回の独立した実験を表す。＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。ボンフェローニの事後検定を伴う二方向ＡＮＯＶＡ。データは、類似の結果を有した少なくとも２回の実験を表す。 ＨＧ培地で培養したｒＭＣ−１細胞におけるＩＬ−３３ｐ１９分泌の増加（図７Ｇを参照されたい）が、細胞死の増加とは関連していなかったことを示すグラフである。細胞生存率を、アネキシンＶ及びヨウ化プロピジウム（ＰＩ）染色のフローサイトメトリー分析によって評価した。生細胞を、アネキシンＶ−ＰＩ−としてゲーティングした。データは、三連のウェルの平均±標準誤差である。データは、類似の結果を有した少なくとも２回の実験を表す。 視細胞死を検出するための網膜切片の末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼｄＵＴＰニック端標識（ＴＵＮＥＬ）染色（茶色）を示す一連の画像である。スプラーグドーリー（ＳＤ）ラットを、示される日数、光（１２００ルクス）に曝露した。矢印は、ＴＵＮＥＬ＋視細胞を示す。バー５０μｍ。 フローサイトメトリーによる桿体（左パネル）及び錐体（右パネル）の定量化を示す一連のグラフである。各データ点は、個々のラット（ｎ＝８／時点）を表す。＊Ｐ＜０．０５、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。 ＣＬＥが、ラットの硝子体（左パネル）及び網膜（右パネル）におけるＩＬ−３３ｐ１９の発現及び分泌を増加させることを示す。ＳＤラットを、最大１０日間明るい光に暴露した（スキーム図を参照されたい）。硝子体及び網膜におけるＩＬ−３３発現を、ＥＬＩＳＡ及びウェスタンブロット（ＷＢ）によって分析した。網膜におけるＩＬ−３３ｐ１９とＩＬ−３３ｐ３０との比をＩｍａｇｅＪソフトウェアで定量化した。組み換えラットＩＬ−３３タンパク質（ｒｒＩＬ−３３）（アミノ酸１０９〜２６４、およそ１８ｋＤａ）を検出抗体の陽性対照として使用した。ＥＬＩＳＡでの各データ点は、２回の独立した実験のうちの１つからの個々のラット（ｎ＝８／時点）を表す。＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、ｎｓは有意差なし、ダネットの事後検定を伴う一方向ＡＮＯＶＡ。データは、類似の結果を有した少なくとも２回の実験を表す。 活性化ｒＭＣ−１細胞及び光損傷網膜（ＣＬＥ）におけるＩＬ−３３転写産物のＲＴ−ＰＣＲ分析を示す画像である。ＦＬは全長。 ＩＬ−３３サイトカインドメインがｄｓＲｅｄで置き換えられ、インタクトな核局在化配列（ＮＬＳ）及びクロマチン結合ドメイン（ＣＢＤ）を有する、ＩＬ３３ｔｍ２／ｔｍ２マウスは、ＩＮＬにおいてミュラー細胞の核内へのＩＬ−３３ Ｎ−ｔｅｒｍ−ｄｓＲｅｄの局在化を示すことを示す。画像（左パネル）は、ＩＬ３３ｔｍ２／ｔｍ２網膜をフラットマウントした共焦点顕微鏡撮像のＺ断面図である。ｄｓＲｅｄシグナルは赤色で示され、ＤＡＰＩシグナルは青色で示されている。矢印は、ＩＬ−３３＋ミュラー細胞を示す。ＩＬ３３ｔｍ２／ｔｍ２網膜のフローサイトメトリー分析（中央パネル）により、ミュラー細胞（ＭＣ）におけるＩＬ−３３の発現が確認されたが、桿体、神経節細胞（ＲＧＣ）、または小膠細胞（ＭＧＬ）では確認されなかった。ＣＬＥの後に、ＩＬ−３３ Ｎ−ｔｅｒｍ−ｄｓＲｅｄをプロセシングした。ＩＬ３３ｔｍ２／ｔｍ２ミュラー細胞のｄｓＲｅｄ平均蛍光強度（ＭＦＩ）、ならびにＣＬＥの０日目及び７日目における細胞数を、フローサイトメトリーによって測定した（右パネル）。データは、ＩＬ３３ｔｍ２／ｔｍ２マウスにおけるｄｓＲｅｄのＭＦＩをＩＬ３３＋／＋マウスのもので正規化したものを表す。各データ点は、２回の実験からプールした個々のマウス（ｎ＝６〜７／群）を表す。Ｒｈｏはロドプシン、ＦＣＳは順方向散乱。＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、対応のない両側スチューデントｔ検定。データは、類似の結果を有した少なくとも２回の実験を表す。 ＣＬＥ後に増加した膜結合型ＳＴ２（ＳＴ２Ｌ、左パネル）及び可溶性ＳＴ２（ｓＳＴ２、右パネル）の発現を示す一連のグラフである。様々な日数で光に曝露したＢＡＬＢ／ｃマウス由来の網膜ＲＮＡを、ＳＴ２Ｌ及びｓＳＴ２に特異的なプローブを用いてｑＰＣＲによって分析し、１８ｓ ｒＲＮＡ発現により正規化した。ＳＴ２発現の倍変化を、曝露していないマウス（０日目）におけるＳＴ２発現と比較して示す。各データ点は、個々のマウス（ｎ＝５〜６／時点）を表す。データは、２回の独立した実験を表す。＊Ｐ＜０．０５、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、ｎｓは有意差なし、ダネットの事後検定を伴う一方向ＡＮＯＶＡ。 様々な網膜細胞集団に対するＳＴ２発現のフローサイトメトリー分析を示す一連のグラフである。結果は、７日間の光への曝露後に、活性化ミュラー細胞（ＭＣ）における排他的なＳＴ２の発現を示す。ＳＴ２は、活性化ミュラー細胞（ＧＦＡＰ＋ビメンチン＋ＭＣ）にのみ発現したが、静止状態のミュラー細胞（ＧＦＡＰ−ビメンチン＋ＭＣ）、小膠細胞（ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５ｌｏＭＧＬ）、または視細胞では発現しなかった。ＳＴ２−／−マウスを、アイソタイプ対照抗体に加えて、陰性対照として使用した。 ＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスにおけるベースライン（０日目）及び７日間光に暴露した後の網膜厚さの光干渉断層法（ＯＣＴ）分析を示す。代表的な断面ＯＣＴを示す。網膜厚さの変化（デルタ）は、各マウス（ｎ＝１０／表現型）について０日目の網膜厚さから７日目のものを差し引くことによって計算した。示されるデータは、３回の独立した実験を表す。バー１００μｍ。＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、対応のない両側スチューデントｔ検定。 ＣＬＥ後にＩＬ−１Ｒ１−／−マウス及びＩＬ−１８Ｒ１−／−マウスにおいて網膜保護が欠如していることを示す一連のグラフである。ＳＴ２−／−マウス、ＩＬ−１Ｒ１−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒ１−／−マウス、ならびに対応する野生型（＋／＋）マウスを１４日間光に曝露した。網膜厚さをＯＣＴによって測定した。網膜厚さデルタは、個々のマウスについて、０日目の網膜厚さから１４日目のものを差し引くことによって計算した。各データ点は、個々のマウス（ｎ＝１０〜１５／遺伝子型）を表す。＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１。 桿体及び錐体がＳＴ２−／−マウスでは保護されていることを示す一連のグラフである。ＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスにおける網膜細胞を、ベースライン（０日目）及びＣＬＥ後の様々な時点でフローサイトメトリーによって定量化した。フローサイトメトリーのプロット（左上パネル）は、ベースライン及びＣＬＥ７日目でのＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスにおける桿体及び錐体のゲーティング戦略及びパーセンテージならびに絶対数（括弧内）（×１０５）を示す。下パネルのグラフ内の各データ点は、個々のマウス（ｎ＝５〜６／遺伝子型）を表す。データは、類似の結果を有した２回の独立した実験を表す。Ｒｈｏはロドプシン、ＣＡＲは錐体アレスチン。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、ｎｓは有意差なし、対応のない両側スチューデントｔ検定。 ベースライン（０日目）及び１４日間光に曝露した後のＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスのＯＮＬ厚さの形態計測分析を、視神経乳頭（ＯＮＨ）からの距離の関数としてプロットしたもの示すグラフである。ＳＴ２−／−マウスにおける網膜ＯＮＬの有意な保護が、上方象限及び下方象限の両方で観察された。示されるデータは、平均±標準誤差（ｎ＝５〜７／遺伝子型）である。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、テューキーの事後検定を伴う二方向ＡＮＯＶＡ。 ベースライン（０日目）及び７日間のＣＬＥ後のＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスの網膜電図検査法（ＥＲＧ）分析を示す一連のグラフである。ベースライン及び７日間のＣＬＥ後の２５ｃｄ・ｓ／ｍ２の閃光強度での代表的なＥＲＧが示されている。暗順応状態における１及び２５ ｃｄ・ｓ／ｍ２の閃光強度での平均のａ波及びｂ波の振幅は、７日間のＣＬＥ後にＳＴ２−／−マウスではＳＴ２＋／＋マウスと比較して有意に大きかった。示されるデータは、平均±標準誤差（ｎ＝１０／遺伝子型）である。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、テューキーの事後検定を伴う二方向ＡＮＯＶＡ。 可溶性ＳＴ２のインビトロ活性を示す一連のグラフである。骨髄由来の肥満細胞（ＢＭＭＣ）を、２０μｇ／ｍｌの可溶性ＳＴ２−Ｈｉｓ（ｓＳＴ２）または対照Ｈｉｓタグタンパク質の不在下において、１ｎｇ／ｍｌの組み換えマウスＩＬ−３３で２４時間刺激した。上清中のＩＬ−１３及びＩＬ−６の分泌を、ＥＬＳＩＡによって定量化した。データは、２回の独立した実験からの三連の実験の平均±標準誤差を表す。 ＡＡＶ−ｓＳＴ２の発現を示す。ＨＥＫ２９３細胞に、ｓＳＴ２−Ｈｉｓ（ｓＳＴ２）を発現するＡＡＶベクターまたは空のベクター（ＥＶ）を感染させた。感染の６日後に、培養上清中のｓＳＴ２発現を、ＥＬＩＳＡ（左パネル）及びウェスタンブロット（右パネル）によって判定した。データは、２回の実験の平均±標準誤差（ｎ＝８）を表す。ＮＤは未検出、ｒｓＳＴ２は組み換え可溶性ＳＴ２−Ｈｉｓ。 ＡＡＶ−ｓＳＴ２の発現を示す。ＢＡＬＢ／ｃマウスの網膜下に、可溶性ＳＴ２を発現するＡＡＶベクター（ＡＡＶ−ｓＳＴ２）、または空のＡＡＶベクター（ＡＡＶ−ＥＶ）（陰性対照の役割を果たした）を注射した。網膜（左パネル）及びＲＰＥ／脈絡膜（右パネル）におけるｓＳＴ２の発現を、注射３週間後にＥＬＩＳＡ及びウェスタンブロット（ＷＢ）によって分析した。ＳＴ２及びＧＡＰＤＨのウェスタンブロットを、１０μｇの網膜溶解液及び３μｇのＲＰＥ／脈絡膜溶解物に行った。ｒｓＳＴ２は組み換え可溶性ＳＴ２−Ｈｉｓ。 可溶性ＳＴ２の投与が光毒性ストレスから視細胞を保護することを示す一連のグラフである。マウスの網膜下に、可溶性ＳＴ２を発現するＡＡＶ（ＡＡＶ−ｓＳＴ２）を注射し、注射２１日後に光に曝露した（上パネルのスキーム）。空のＡＡＶベクター（ＡＡＶ−ＥＶ）を注射したマウスは対照の役割を果たした。桿体及び錐体を、光への曝露の前（０日目）及び７日間の曝露後（７日目）にフローサイトメトリーによって定量化した。各データ点は、個々のマウス（ｎ＝１０／群）を表す。＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、対応のない両側スチューデントｔ検定。データは、類似の結果を有した２回の独立した実験を表す。 光への曝露によって誘導される遺伝子（上位２２個）を示すが、これらは、ＣＬＥ後にＳＴ２−／−マウスではＳＴ２＋／＋マウスと比較して減少した。左パネルは、マイクロアレイによって分析した、ＣＬＥ前（０日目）及びＣＬＥ後（３日目）における網膜での遺伝子発現の結果を示すヒートマップである。Ｎ＝５。右パネルは、遺伝子記号、発現におけるｌｏｇ２倍変化、及びＰ値を示す表である。 ＳＴ２−／−マウスではＳＴ２＋／＋マウスと比較して発現が減少した遺伝子（図１１Ａを参照されたい）の遺伝子オントロジー（ＧＯ）分析を示す表である。ＧＯ概念が強化された上位１７個が示される。 ＣＣＬ２、ＩＬ−６、及びＩＬ−１βの発現を示す一連のグラフである。上パネルは、ＣＬＥ後の網膜におけるＣＣＬ２、ＩＬ−６、及びＩＬ−１βの発現の時間経過的ｑＰＣＲ分析を示す。結果は、ＳＴ２−／−マウスではＳＴ２＋／＋マウスと比較して減少した発現を示した（ｎ＝５〜６／遺伝子型）。０日目のＳＴ２＋／＋マウスにおける遺伝子発現を１と設定した。網膜におけるＣＣＬ２タンパク質の発現をＥＬＩＳＡによって測定した（下パネル）。データは、類似の結果を有した２回の独立した実験を表す。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、テューキーの事後検定を伴う一方向ＡＮＯＶＡ。 ＩＬ−３３の添加によりｒＭＣ−１からのＣＣＬ２の分泌が誘導されたことを示す一連のグラフである。ｒＭＣ−１細胞の表面でのＳＴ２の発現を、フローサイトメトリーによって検出した（左パネル）。ｒＭＣ−１細胞をＩＬ−３３で刺激することにより、用量依存性様式でＣＣＬ２の分泌が誘導され、刺激は、ＩＬ−３３ ＴＲＡＰの存在下では抑止されたが、対照タンパク質では抑止されなかった（右パネル）。２４時間の培養上清中のＣＣＬ２のレベルをＥＬＩＳＡによって測定した。示されるデータは、三連のウェルの平均±標準誤差であり、類似の結果を有する２回の独立した実験を表す。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、テューキーの事後検定を伴う一方向ＡＮＯＶＡ。 ｒＭＣ−１細胞からのＣＣＬ２の自己分泌誘導及び放出が、ＩＬ−３３ ＴＲＡＰの添加により遮断されたことを示す一連のグラフである。ｒＭＣ−１細胞を、ＩＬ−３３ ＴＲＡＰまたは対照タンパク質の存在下で最大７２時間ＨＧ含有培地において培養した。ＣＣＬ２ ｍＲＮＡの発現（左パネル）及び分泌（右パネル）を、それぞれ、ｑＰＣＲ及びＥＬＩＳＡによって測定した。データは、三連の実験の平均±標準誤差である。＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、テューキーの事後検定を伴う二方向ＡＮＯＶＡ。 フローサイトメトリーによって判定した、ＣＬＥの前（０日目）及び後（７日目）の網膜ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５ｌｏ骨髄系細胞でのＣＣＲ２、Ｌｙ６Ｃ、及びＣＤ１１５の発現を示す一連のグラフである。データは、類似の結果を有した少なくとも２回の独立した実験を表す。 図１２Ｂ及び１２Ｃは、光に曝露すると、ＳＴ２−／−マウスでは、ＳＴ２＋／＋マウスと比較してＯＮＬ、ＯＳ、及びＧＣＬにおけるＩｂａ１＋細胞が減少したことを示す。画像（図１２Ｂ）は、Ｉｂａ１染色（赤色）の代表的な免疫組織化学を示す。ＣＬＥの前（０日目）及び後（１４日目）における上方網膜及び下方網膜全体の各網膜層内の全Ｉｂａ１＋細胞（矢印）を定量化した。定量化の結果が、図１２Ｃに示されている。各データ点は、個々のマウス（ｎ＝１０／遺伝子型）を表す。バー４０μｍ。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、テューキーの事後検定を伴う一方向ＡＮＯＶＡ。 図１２Ｂ及び１２Ｃは、光に曝露すると、ＳＴ２−／−マウスでは、ＳＴ２＋／＋マウスと比較してＯＮＬ、ＯＳ、及びＧＣＬにおけるＩｂａ１＋細胞が減少したことを示す。画像（図１２Ｂ）は、Ｉｂａ１染色（赤色）の代表的な免疫組織化学を示す。ＣＬＥの前（０日目）及び後（１４日目）における上方網膜及び下方網膜全体の各網膜層内の全Ｉｂａ１＋細胞（矢印）を定量化した。定量化の結果が、図１２Ｃに示されている。各データ点は、個々のマウス（ｎ＝１０／遺伝子型）を表す。バー４０μｍ。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、テューキーの事後検定を伴う一方向ＡＮＯＶＡ。 ＣＬＥ処置中のクロドロネート枯渇時に血中の単球サブセットを定量化するためのフローサイトメトリーによるゲーティング戦略を示す。ＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスを、ＣＬＥ中、クロドロネート−リポソーム（Ｃｌｏｄ）または対照リポソーム（Ｃｔｒｌ）で毎日処置した。ＣＬＥの７日後に、末梢血単球をフローサイトメトリーによって定量化した。ＣＤ１１５＋Ｌｙ６Ｃｈｉ単球及びＣＤ１１５＋Ｌｙ６Ｃｌｏ／−単球を特定するための代表的なフローサイトメトリープロットを示す（左パネル）。結果を、右パネルにグラフで示す。ｎ＝４〜６／群。 ＣＬＥにおいてＩＬ−３３／ＳＴ２に媒介される視細胞の消失は、循環単球に依存している。ＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスを、左パネルの図に示されるように、ＣＬＥの２日前に開始して、クロドロネート−リポソーム（Ｃｌｏｄ）で毎日静脈内処置を行った。対照リポソーム（Ｃｔｒｌ）での処置は、対照として機能した。網膜細胞を、ＣＬＥの７日後にフローサイトメトリーによって定量化した（図１２Ｄを参照されたい）。ｎ＝４〜６／群。＊Ｐ＜０．０５、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、ｎｓは有意差なし、テューキーの事後検定を伴う一方向ＡＮＯＶＡ。データは、類似の結果を有した少なくとも２回の独立した実験を表す。 Ｎ末端核局在化配列及びクロマチン結合ドメインがｄｓＲｅｄで置き換えられているが（左パネルの図に示す）Ｃ末端サイトカインドメインを保持しているＩＬ３３ｔｍ１／ｔｍ１マウスが、ミュラー細胞の細胞質へのｄｓＲｅｄ−ＩＬ−３３−Ｃ−ｔｅｒｍｉｎの局在化を示したことを示す。画像（左パネル）は、ＩＬ３３ｔｍ１／ｔｍ１網膜をフラットマウントした共焦点顕微鏡撮像のＺ断面図である。ｄｓＲｅｄシグナルは赤色で示され、ＤＡＰＩシグナルは青色で示されている。矢印は、ＩＬ−３３＋ミュラー細胞を示す。ミュラー細胞におけるｄｓＲｅｄ−ＩＬ−３３−Ｃ−ｔｅｒｍの発現を、フローサイトメトリーによって検証した（右下パネル）。ｑＰＣＲによって測定した、ＩＬ３３ｔｍ１／−及びＩＬ３３ｔｍ１／ｔｍ１の網膜におけるＩＬ−３３ ｍＲＮＡは、野生型（ＷＴ）の網膜と同程度であったが、ＥＬＩＳＡによって測定した、ＩＬ３３ｔｍ１／−マウス及びＩＬ３３ｔｍ１／ｔｍ１マウスにおける網膜及び血清中のＩＬ−３３タンパク質レベルは、野生型マウスにおけるものよりも有意に高く、Ｎ末端を欠くＩＬ−３３が細胞から放出されたことを示した。各データ点は、個々のマウス（ｎ＝６／遺伝子型）を表す。データは、類似の結果を有した２回の独立した実験を表す。＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、テューキーの事後検定を伴う一方向ＡＮＯＶＡ ＩＬ３３ｔｍ１／ｔｍ１マウスにおける、ＣＣＬ２及びＩＬ−６の発現のＳＴ２依存性の増加、ならびに錐体及びＲＧＣの消失を示す一連のグラフである。ＳＴ２＋／−またはＳＴ２−／−のいずれかのバックグラウンドで飼育したＩＬ３３＋／＋マウス、ＩＬ３３ｔｍ１／＋マウス、及びＩＬ３３ｔｍ１／ｔｍ１マウスに由来する網膜を、ｑＰＣＲ及びフローサイトメトリーによって分析した。ＳＴ２＋／−バックグラウンドでは、ＩＬ３３＋／＋対照マウスと比較して、ＣＣＬ２及びＩＬ−６発現の有意な増加、ならびに錐体及びＲＧＣの消失がＩＬ３３ｔｍ１／＋マウス及びＩＬ３３ｔｍ１／ｔｍ１マウスにおいて観察されが、ＳＴ２−／−バックグラウンドでは、観察されなかった。各データ点は、個々のマウス（ｎ＝３〜７／遺伝子型）を表す。データは、類似の結果を有した２回の独立した実験を表す。＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、ｎｓは有意差なし、テューキーの事後検定を伴う一方向ＡＮＯＶＡ。 ＮａＩＯ３で処置したマウスにおけるミュラー細胞の活性化を示す一連の画像である。ＮａＩＯ３で処置したマウスにおけるＧＦＡＰ発現の免疫組織化学（赤色）は、生理食塩水で処置したマウスと比較して、ＧＦＡＰ＋ミュラー細胞の増加（矢印）を示した。バー１００μｍ。 ＮａＩＯ３で処置したマウスの網膜におけるＩＬ−３３プロセシングの増加を示す。網膜におけるＩＬ−３３の発現を、ウェスタンブロットによって分析した（左パネル）。ＩＬ−３３ｐ１９ とＩＬ−３３ｐ３０との比を、ＩｍａｇｅＪソフトウェアを用いて定量化した（右パネル）。ＩＬ−３３の１９ｋＤａのプロセシング形態は、ＮａＩＯ３処置後３日目にピークとなった。データは、２回の独立した実験を表す。 ＳＴ２＋／＋マウスと比較して、ＮａＩＯ３で処置したＳＴ２−／−マウスでは、網膜におけるＣＣＬ２誘導が減少したことを示すグラフである。網膜におけるＣＣＬ２発現を、ＥＬＩＳＡによって判定した。ｎ＝５〜７／遺伝子型。＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、ｎｓは有意差なし、テューキーの事後検定を伴う一方向ＡＮＯＶＡ。 ＳＴ２＋／＋マウスと比較して、ＮａＩＯ３で処置したＳＴ２−／−マウスでは、網膜におけるマクロファージ浸潤が減少したことを示す、一連のグラフである。網膜におけるマクロファージ（ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５ｈｉ）を、フローサイトメトリーによって定量化した（左上パネル）。網膜マクロファージは、小膠細胞（ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５ｌｏ）と比較して高いレベルのＣＣＲ２を発現する（左下パネル）。ｎ＝６〜７／遺伝子型。データは、３回の独立した実験を表す。ＭΦはマクロファージ、ＭＧＬは小膠細胞。＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、ｎｓは有意差なし、テューキーの事後検定を伴う一方向ＡＮＯＶＡ。 ＳＴ２＋／＋マウスと比較して、ＮａＩＯ３で処置したＳＴ２−／−マウスでは、ＯＳ及びＯＮＬにおいて、Ｉｂａ１＋細胞が減少したことを示す一連のグラフである。網膜切片を、免疫組織化学によってＩｂａ１に関して染色した。生理食塩水またはＮａＩＯ３で処置したマウス（３日目）において、上方網膜及び下方網膜全体のＯＳ及びＯＮＬにおけるＩｂａ１＋細胞を定量化した。ｎ＝６／遺伝子型。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、テューキーの事後検定を伴う一方向ＡＮＯＶＡ。 ＳＴ２−／−マウスにおける視細胞の保護を示す。ＮａＩＯ３処置の前（０日目）及び後（７日目）のＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスの網膜厚さを、ＯＣＴによって測定した（中央パネル）。代表的な断面ＯＣＴを示す（上パネル）。網膜厚さデルタは、個々のマウスについて、０日目の網膜厚さから７日目のものを差し引くことによって計算した。バー１００μｍ。生理食塩水またはＮａＩＯ３で処置したＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスの網膜細胞（３日目及び７日目）を、フローサイトメトリーによって定量化した（下パネル）。各データ点は、個々のマウス（ｎ＝６〜８／遺伝子型）を表す。データは、類似の結果を有した少なくとも２回の独立した実験を表す。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、対応のない両側スチューデントｔ検定。 ＲＰＥの損傷によって誘導される網膜変性では、ＩＬ−１Ｒ１−／−マウス及びＩＬ−１８−／−マウスにおいて網膜保護が欠如していることを示す一連のグラフである。ＩＬ−１Ｒ１−／−マウス及びＩＬ−１８−／−マウスを、２０ｍｇのＮａＩＯ３で処置した。ベースライン（０日目）での網膜厚さをＯＣＴによって測定した。網膜厚さデルタは、個々のマウスについて、０日目の網膜厚さから７日目のものを差し引くことによって計算した。各データ点は、個々のマウス（ｎ＝１０〜１３／遺伝子型）を表す。 血液単球のクロドロネート枯渇を示す一連のグラフである。ＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスを、ＮａＩＯ３処置１日前に開始して、クロドロネート−リポソーム（「Ｃｌｏｄ」）または対照リポソーム（「Ｃｔｒｌ」）で毎日処置した。ＮａＩＯ３処置の３日後、網膜細胞定量化のためにマウスを安楽死させたときに、抹消血単球をフローサイトメトリーによって定量化した。ＣＤ１１５＋Ｌｙ６Ｃｈｉ単球及びＣＤ１１５＋Ｌｙ６Ｃｌｏ／−単球を特定するための代表的なフローサイトメトリープロットを示す。各データ点は、個々のマウス（ｎ＝５／群）を表す。 ＩＬ−３３／ＳＴ２に媒介される視細胞の消失が循環単球に依存することを示す、一連のグラフである。ＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスを、スキーム図に示されるように、ＮａＩＯ３処置の１日前に開始して、クロドロネート−リポソーム（Ｃｌｏｄ）で毎日静脈内処置した。対照リポソーム（Ｃｔｒｌ）での処置は、対照として機能した。網膜細胞を、生理食塩水またはＮａＩＯ３での処置の３日後にフローサイトメトリーによって定量化した。各データ点は、個々のマウス（ｎ＝５／群）を表す。＊Ｐ＜０．０５、＊＊＊＊Ｐ＜０．０００１、ｎｓは有意差なし、テューキーの事後検定を伴う一方向ＡＮＯＶＡ。 ２型（Ｔｈ２）肺炎症のＮｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ感染モデルの概略図を示す Ｎ．ｂｒａｓｉｌｌｉｅｎｓｉｓによる感染後のＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−（ＳＴ２ ＫＯ）マウスにおける肺組織（左パネル）及びＢＡＬＦ（右パネル）中の好酸球（ｅｏｓ）数を示す。示される遺伝子型を有するマウスを、実施例４の節Ａに記載されているように、対照抗ブタクサ抗体または抗ＩＬ−１３（α−ＩＬ−１３）抗体で処置した。ナイーブＳＴ２＋／＋マウスは、対照の機能を果たした。下パネルは、この研究からの生データを示す表である。＊Ｐ＜０．０５、ｎｓは有意差なし。 実施例４に記載されるＴｈ２肺炎症のＮ．ｂｒａｓｉｌｌｉｅｎｓｉｓ感染モデルからのＢＡＬＦサイトカイン分析の結果を示す。実施例４の節Ａに示されるように、対照抗ブタクサ抗体、抗ＩＬ−１３（α−ＩＬ−１３）抗体、及び／またはＩＬ−４（α−ＩＬ−４）抗体で処置した、示される遺伝子型を有するマウスについて、ＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１３のレベルを示す。ナイーブマウスは、対照の機能を果たした。下パネルは、この研究からの生データを示す表である。＊Ｐ＜０．０５、ｎｓは有意差なし。 ＴＮＰ−ＯＶＡ抗原での感作／チャレンジ後のＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスに由来する肺組織中（左上パネル）及びＢＡＬＦ（右上パネル）中の好酸球数を示す。下パネルの表は、この研究からの生データを示す。示される遺伝子型を有するマウスを、実施例４の節Ｂに記載されているように、対照抗ブタクサ抗体または抗ＩＬ−１３（α−ＩＬ−１３）抗体で処置した。ナイーブマウスは、対照の機能を果たした。＊Ｐ＜０．０５。 実施例４の節Ｂに記載されている、ＴＮＰ−ＯＶＡモデルで得られた、細胞生存率（左パネル）及び抗原リコールアッセイにおけるサイトカイン分泌（ＩＬ−５が中央パネル、ＩＬ−１３が右パネル）を示す一連のグラフである。抗ＧＰ１２０（α−ＧＰ１２０）抗体は、対照の機能を果たした。 ＩＬ−３３による肥満細胞脱顆粒の増大を示す。上パネルは、肥満細胞脱顆粒アッセイのスキーム図を示し、下パネルは、β−ヘキサミノダーゼ（左）、トリプターゼ（中央）、及びヒスタミン（右）についての肥満細胞脱顆粒アッセイの結果のグラフを示す。 実施例５に記載される全身性アナフィラキシーアッセイを示すスキーム図である。 図１６Ｃ及び１６Ｄは、受動的全身性アナフィラキシーアッセイ（例えば、図１６Ｂを参照されたい）の結果を示すグラフである。図１６Ｃは、ＤＮＰ−ＨＳＡの付加なしにＩｇＥ及びＩＬ−３３で処置した、ＳＴ２＋／＋（野生型）マウスまたはＳＴ２−／−（ノックアウト）マウスから得られた結果を示す。図１６Ｄは、ＩＬ−３３付加なしにＩｇＥ及びＤＮＰ−ＨＳＡで処置した、ＳＴ２＋／＋（野生型）マウスまたはＳＴ２−／−（ノックアウト）マウスから得られた結果を示す。 受動的全身性アナフィラキシーアッセイの結果を示す一連のグラフである。左パネルのグラフは、ＩｇＥ、ＤＮＰ−ＨＳＡ、及びＩＬ−３３で処置したＳＴ２＋／＋（野生型）マウスまたはＳＴ２−／−（ノックアウト）マウスに関して、体温（°Ｆ）を時間（分）の関数として示す。右パネルのグラフは、示される遺伝子型及びチャレンジに関して、４５〜６０分までの曲線下面積（ＡＵＣ）を示す。 ＩＬ−３３が、インビトロでヒト肥満細胞によるＩｇＥ架橋依存性サイトカイン分泌を強化することを示す。上パネルは、実験のスキーム図を示す。下パネルのグラフは、ＩＬ−５（左）、ＩＬ−１３（中央）、及びＩＬ−８（右）に関して、ＩＬ−３３及びＩｇＥ架橋での刺激の後に、肥満細胞のサイトカイン測定から得られた結果を示す。 ＩＬ−３３が、インビトロで、ＩｇＥまたは抗原から独立して、肥満細胞サイトカイン分泌を直接刺激することを示す。上パネルは、実験のスキーム図を示す。下パネルのグラフは、ＩＬ−３３（０ｎｇ／ｍｌ）の不在下または１０ｎｇ／ｍＬのＩＬ−３３の存在下における。示されるサイトカイン（ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３、ＩＬ−５、またはＩＬ−８）の発現レベルを判定するためのＥＬＩＳＡ実験の結果を示す。 マイクロアレイ分析によって判定した、ＩＬ−３３刺激後の肥満細胞における示される遺伝子の相対発現を示す一連のグラフである。左パネルは、ＩＬ−３３刺激後に上方制御された遺伝子の例を示し、これらには、平滑筋成長／遊走に関与する遺伝子（例えば、ＣＣＬ１、ＩＬ−３、及びＩＬ−８）、平滑筋収縮に関与する遺伝子（例えば、ＴＮＦα、ＩＬ−１０、ＩＬ−６、ＩＬ１３、及びＩＬ−３）、ならびに反応亢進に関与する遺伝子（例えば、ＴＮＦα、ＩＬ−１０、及びＴＮＦＳＦ１４）が含まれていた。 ＩＬ３３＋／＋マウスと比較した、ＩＬ３３−／−マウスにおける、実施例６に記載されるＫ／ＢｘＮ血清移入実験からの関節炎スコアを示すグラフである。データは、ＳＴ２−／−マウスまたはＳＴ２＋／＋マウスの群からの平均を表す。 野生型（ＳＴ２＋／＋）マウスと比較した、ＳＴ２−／−マウスにおける、実施例６に記載されるＫ／ＢｘＮ血清移入実験からの関節炎スコアを示すグラフである（Ｃ５７Ｂｌ／６バックグラウンド）。データは、ＳＴ２−／−マウスまたはＳＴ２＋／＋マウスの群からの平均を表す。類似の結果が、Ｂａｌｂ／ＣバックグラウンドでＳＴ２−／−遺伝子型を用いて得られた。 図１７Ｃ〜１７Ｄは、野生型（ＳＴ２＋／＋）マウスと比較した、ＳＴ２−／−マウスにおける、Ｋ／ＢｘＮ血清移入研究からの関節炎スコアを示すグラフである。図１７Ｃは、実験全体にわたる毎日の平均臨床スコアを示し、一方で図１７Ｄは、個々のマウスに対する７日目の臨床スコアを示す。 実施例７に記載されるように、ＩＬ−３３に誘導されるマクロファージの動員が、ＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１３に依存するかどうかを判定するための実験のスキーム図である。 図１８Ｂ及び１８Ｃは、ＩＬ−３３に誘導される肺へのマクロファージの動員が、ＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１３に依存しないことを示すグラフである。 実施例８に記載されるように、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ−３３を用いた、ヒトＩＬ−３３に関する、細胞に基づくヒトＩＬ−３３遮断アッセイの結果を示すグラフである。ヒトＩＬ−３３ Ｎ−Ｈｉｓの濃度は、１５ｐＭであった。細胞を２０時間刺激した。下の表は、１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４、抗ＩＬ−３３／抗ＩＬ−１３二重特異性クローン１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ／ＩＬ−１３ ＩｇＧ４（略称「１０Ｃ１２−ＩＬ−１３ ＫＩＨ ＩｇＧ４」）、対照ＩｇＧ４抗体、及びＳＴ２−ＬＺのＩＣ９０及びＩＣ５０を示す。ＩＣ９０表の括弧内の値は、μｇ／ｍｌ単位のＩＣ９０値である。 実施例８に記載される好塩基球ＩＬ−３３ホスホ−ｐ３８アッセイのスキーム図である。 実施例８に記載される好塩基球ＩＬ−３３ホスホ−ｐ３８アッセイの結果を示す一連のグラフである。グラフは、ホスホ−ｐ３８蛍光強度の関数として、最大蛍光強度のパーセンテージを示す。 単一特異性抗ＩＬ−３３抗体１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及び二重特異性抗体１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ／ＩＬ−１３ ＩｇＧ４（「１０Ｃ１２−ＩＬ１３ ＫＩＨ ＩｇＧ４」）が、実施例８に記載されるように、好塩基球においてＩＬ−３３に誘導されるホスホ−Ｐ３８レベルに用量依存性の阻害をもたらしたことを示すグラフである。グラフは、平均蛍光強度（ＭＦＩ）（２人のドナーの平均）を抗体濃度の関数としてプロットしている。対照ＩｇＧ４抗体は、ホスホ−ｐ３８レベルを抑制しなかった。グラフは、抗体を添加しなかった対照実験（「抗体なし」）またはＩＬ−３３を添加しなかった対照実験（「ＩＬ−３３なし」）の結果も示す。 ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）３０００ ＳＰＲ分析によって評価した、ヒトＩＬ−３３、カニクイザルＩＬ−３３、及びヒトＩＬ−１３に対する１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ／ＩＬ−１３ ＩｇＧ４二重特異性抗体（１０Ｃ１２−ＩＬ−１３ ＫＩＨ ＩｇＧ４）の結合動態を示す表である。この表は、３回の独立した抗体調製物（ロット）の結果を示す。 ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ−３３／ＩＬ−１βレポーター細胞を用いた、細胞に基づくヒトＩＬ−３３遮断の結果を示すグラフである。用量応答曲線を使用して、示される抗ＩＬ−３３抗体（ＲＧ１〜２０及び１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４）、ｓＳＴ２−ＬＺ、ならびにアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ４）による１０ｐＭのヒトＩＬ−３３活性（ＯＤ６２０で測定）の阻害を判定した。グラフは、抗体を添加しなかった対照実験（「抗体なし」）またはＩＬ−３３を添加しなかった対照実験（「ＩＬ−３３なし」）の結果も示す。 ヒトＩＬ−３３に対するＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ−３３／ＩＬ−１βレポーター細胞の用量応答を示すグラフである。 示される抗ＩＬ−３３抗体によるＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ−３３／ＩＬ−１βレポーター細胞のヒト及びカニクイザルＩＬ−３３活性化の阻害を示す表である。 １０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及びｓＳＴ２−ＬＺと比較して高いヒトＩＬ−３３遮断活性を有した上位５つの抗ＩＬ−３３ ＲＧ抗体の用量応答曲線を示すグラフである。グラフは、抗体を添加しなかった対照実験（「抗体なし」）またはＩＬ−３３を添加しなかった対照実験（「ＩＬ−３３なし」）の結果も示す。 ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ−３３／ＩＬ−１βレポーター細胞を用いた、細胞に基づくカニクイザルＩＬ−３３遮断アッセイの結果を示すグラフである。用量応答曲線を使用して、示される抗ＩＬ−３３抗体（ＲＧ１−２０及び１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４）、ｓＳＴ２−ＬＺ、ならびにアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ４）による５ｐＭのカニクイザルＩＬ−３３活性の阻害を判定した。 カニクイザルＩＬ−３３に対するＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ−３３／ＩＬ−１βレポーター細胞の用量応答を示すグラフである。 １０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及びｓＳＴ２−ＬＺと比較して高いカニクイザルＩＬ−３３遮断活性を有した上位５つの抗ＩＬ−３３ ＲＧ抗体の用量応答曲線を示すグラフである。グラフは、抗体を添加しなかった対照実験（「抗体なし」）またはＩＬ−３３を添加しなかった対照実験（「ＩＬ−３３なし」）の結果も示す。 カニクイザルＩＬ−３３を遮断しなかった抗ＩＬ−３３ ＲＧ抗体の用量応答曲線を示すグラフである。 ヒトＰＢＭＣ由来の強化ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋ＣＤ３−）の純度のフローサイトメトリー分析を示す一連のグラフである。 ヒトＩＬ−３３に応答して初代ＮＫ細胞からのヒトＩＦＮ−γ分泌に関するＥＬＩＳＡ分析の結果を示すグラフである。用量応答曲線を、ＩＦＮ−γ ＥＬＩＳＡ ＯＤ４５０の値から生成した。 示される抗ＩＬ−３３抗体による初代ＮＫ細胞のヒトＩＬ−３３活性化の阻害を示すグラフである。用量応答曲線を使用して、示される抗ＩＬ−３３抗体（ＲＧ１〜ＲＧ２０及び１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４）、ｓＳＴ２−ＬＺ、ならびにアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ４）による、ＮＫ細胞におけるヒトＩＬ−３３活性の阻害を判定した。 示される抗ＩＬ−３３抗体による初代ＮＫ細胞のヒトＩＬ−３３活性化の阻害を示す表である。 １０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及びｓＳＴ２−ＬＺと比べて高いヒトＩＬ−３３遮断活性を有した上位５つの抗ＩＬ−３３ ＲＧ抗体の用量応答曲線を示すグラフである。 １０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及びｓＳＴ２−ＬＺに対する、抗ＩＬ−３３抗体ＲＧ１〜ＲＧ５の用量応答曲線を示すグラフである。 １０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及びｓＳＴ２−ＬＺに対する、抗ＩＬ−３３抗体ＲＧ６〜ＲＧ１０の用量応答曲線を示すグラフである。 １０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及びｓＳＴ２−ＬＺに対する、抗ＩＬ−３３抗体ＲＧ１１〜ＲＧ１５の用量応答曲線を示すグラフである。 １０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及びｓＳＴ２−ＬＺに対する、抗ＩＬ−３３抗体ＲＧ１６〜ＲＧ２０の用量応答曲線を示すグラフである。 ヒトＰＢＭＣに由来する初代好塩基球（ＣＤ１２３＋）における、ＩＬ−３３に誘導されるｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）リン酸化のフローサイトメトリー分析を示すスキーム図である。 漸増用量のヒトＩＬ−３３に応答した、初代好塩基球からのｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）リン酸化（ｐｈ−ｐ３８）の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を示すグラフである。 示される抗ＩＬ−３３抗体による初代好塩基球におけるヒトＩＬ−３３活性の阻害を示すグラフである。用量応答曲線を使用して、示される抗ＩＬ−３３抗体（ＲＧ１〜ＲＧ２０及び１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４）、ｓＳＴ２−ＬＺ、ならびにアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ４）による、好塩基球におけるヒトＩＬ−３３活性の阻害を判定した。 抗ＩＬ−３３抗体による初代好塩基球のヒトＩＬ−３３活性化の阻害を示す表である。「部分的阻害」は、最も高い抗体濃度でベースラインに到達できない用量依存性遮断活性を示す。 １０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及びｓＳＴ２−ＬＺと比べて高いヒトＩＬ−３３遮断活性を有した上位５つの抗ＩＬ−３３ ＲＧ抗体の用量応答曲線を示すグラフである。 初代好塩基球におけるヒトＩＬ−３３活性の阻害を示すグラフである。このグラフは、１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及びｓＳＴ２−ＬＺに対する、抗ＩＬ−３３抗体ＲＧ１〜ＲＧ５の用量応答曲線をプロットしている。 初代好塩基球におけるヒトＩＬ−３３活性の阻害を示すグラフである。このグラフは、１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及びｓＳＴ２−ＬＺに対する、抗ＩＬ−３３抗体ＲＧ６〜ＲＧ１０の用量応答曲線をプロットしている。 初代好塩基球におけるヒトＩＬ−３３活性の阻害を示すグラフである。このグラフは、１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及びｓＳＴ２−ＬＺに対する、抗ＩＬ−３３抗体ＲＧ１１〜ＲＧ１５の用量応答曲線をプロットしている。 初代好塩基球におけるヒトＩＬ−３３活性の阻害を示すグラフである。このグラフは、１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及びｓＳＴ２−ＬＺに対する、抗ＩＬ−３３抗体ＲＧ１６〜ＲＧ２０の用量応答曲線をプロットしている。 図２４Ｊ及び２４Ｋは、０．４ｎＭ（図２４Ｊ）または２ｎＭ（図２４Ｋ）の抗ＩＬ−３３抗体（ＲＧ１−ＲＧ２０及び１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４）、ｓＳＴ２−ＬＺ、及びアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ４）による、好塩基球における５００ｐＭのヒトＩＬ−３３活性の阻害の程度を判定するために使用した、ｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）リン酸化（Ｐｈ−ｐ３８）の平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を示すグラフである。各グラフの左側の表は、示される抗体に関する結果の概要である。 図２４Ｊ及び２４Ｋは、０．４ｎＭ（図２４Ｊ）または２ｎＭ（図２４Ｋ）の抗ＩＬ−３３抗体（ＲＧ１−ＲＧ２０及び１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４）、ｓＳＴ２−ＬＺ、及びアイソタイプ対照抗体（ＩｇＧ４）による、好塩基球における５００ｐＭのヒトＩＬ−３３活性の阻害の程度を判定するために使用した、ｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）リン酸化（Ｐｈ−ｐ３８）の平均蛍光強度（ＭＦＩ）値を示すグラフである。各グラフの左側の表は、示される抗体に関する結果の概要である。 図２５Ａ及び２５Ｂは、実施例９の節Ｆに記載されるように、ヒト（図２５Ａ）またはカニクイザル（図２５Ｂ）ＩＬ−３３に対する抗ＩＬ−３３抗体の遮断活性を測定するための競合的結合ＥＬＩＳＡ実験の結果を示すグラフである。このグラフは、抗ＩＬ−３３抗体濃度（Ｍ）の関数としてＩＬ−３３遮断％をプロットしている。 図２５Ａ及び２５Ｂは、実施例９の節Ｆに記載されるように、ヒト（図２５Ａ）またはカニクイザル（図２５Ｂ）ＩＬ−３３に対する抗ＩＬ−３３抗体の遮断活性を測定するための競合的結合ＥＬＩＳＡ実験の結果を示すグラフである。このグラフは、抗ＩＬ−３３抗体濃度（Ｍ）の関数としてＩＬ−３３遮断％をプロットしている。
Ｉ．定義
本明細書に使用される「約（ａｂｏｕｔ）」という用語は、本技術分野の当業者であれば容易に理解している、それぞれの値に対して通例的な誤差範囲を指す。本明細書において「約（ａｂｏｕｔ）」ある値またはパラメーターへの参照は、その値またはパラメーター自体を対象とした実施形態を含む（また記載する）。
本明細書における目的では、「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下に定義される、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでもよく、またはそれはアミノ酸配列変化を含有してもよい。一部の実施形態では、アミノ酸変化の数は、１０個以下、９個以下、８個以下、７個以下、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、または２個以下である。一部の実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列が同一である。
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の、共有結合ではない相互作用の強度の総計を指す。別途示されない限り、本明細書に使用されるとき、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体と抗原）の間の１：１の相互作用を反映する、本来の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載される方法を含む、当該技術分野で既知の一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例証的及び例示的な実施形態が、以下に記載される。
「親和性成熟」抗体は、１つ以上のＨＶＲ及び／またはフレームワーク領域に１つ以上の変化を有し、これらの変化が、変化（複数可）を有さない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性の向上をもたらす。好ましい親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモルまたは更にはピコモルの親和性を有するであろう。親和性成熟抗体は、当該技術分野で既知の手順によって産生される。例えば、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９−７８３，１９９２は、ＶＨ及びＶＬのドメインシャッフリングによる親和性成熟について記載している。ＨＶＲ及び／またはフレームワーク残基のランダム変異生成は、Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ ９１：３８０９−３８１３，１９９４、Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｇｅｎｅ １６９：１４７−１５５，１９９５、Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：１９９４−２００４，１９９５、Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４（７）：３３１０−３３１９，１９９５、及びＨａｗｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２６：８８９−８９６，１９９２によって記載されている。
本明細書における「抗体」という用語は、最も広義に使用され、所望される抗原結合活性を呈する限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、抗ＩＬ−３３／抗ＩＬ−１３二重特異性抗体を含む、二重特異性抗体）、及び抗体フラグメントを含むがこれらに限定されない、様々な抗体構造を包含する。
本明細書に使用される「インターロイキン−３３（ＩＬ−３３）」という用語は、別途示されない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル）ならびに齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源に由来する任意の天然のＩＬ−３３を指す。ＩＬ−３３はまた、当該技術分野において、高内皮細静脈の核内因子（ＮＦ−ＨＥＶ、例えば、Ｂａｅｋｋｅｖｏｌｄ ｅｔ ａｌ．Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６３（１）：６９−７９，２００３を参照されたい）、ＤＶＳ２７、Ｃ９ｏｒｆ２６、及びインターロイキン−１ファミリーメンバー１１（ＩＬ−１Ｆ１１）とも称される。この用語は、「全長」のプロセシングされていないＩＬ−３３、ならびに細胞内でのプロセシングにより得られるＩＬ−３３の任意の形態を包含する。ヒトの全長のプロセシングされていないＩＬ−３３は、２７０個のアミノ酸（ａ．ａ．）を含み、ＩＬ−３３１−２７０と称されることもある。ヒトＩＬ−３３のプロセシング形態としては、例えば、ＩＬ−３３９５−２７０、ＩＬ−３３９９−２７０、ＩＬ−３３１０９−２７０、ＩＬ−３３１１２−２７０、ＩＬ−３３１−１７８、及びＩＬ−３３１７９−２７０が挙げられる（Ｌｅｆｒａｎｃａｉｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．１０９（５）：１６７３−１６７８，２０１２及びＭａｒｔｉｎ，Ｓｅｍｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：４４９−４５７，２０１３）。一部の実施形態では、ヒトＩＬ−３３のプロセシング形態、例えば、ＩＬ−３３９５−２７０、ＩＬ−３３９９−２７０、ＩＬ−３３１０９−２７０、またはカルパイン、プロテイナーゼ３、好中球エラスターゼ、及びカテプシンＧなどのプロテアーゼによってプロセシングされた他の形態は、全長ＩＬ−３３と比較して向上した生物学的活性を有し得る。この用語はまた、ＩＬ−３３の天然の変異形、例えば、スプライス変異形（例えば、エクソン３を欠く構成的に活性なスプライス変異形ｓｐＩＬ−３３、Ｈｏｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８６（２２）：２００７８−２００８６，２０１１）またはアレル変異形を包含する。ＩＬ−３３は、細胞内（例えば、核内）に存在し得るか、または分泌サイトカイン形態として存在し得る。全長ＩＬ−３３タンパク質は、核局在化配列（ヒトＩＬ−３３のアミノ酸１〜７５）を含むヘリックスターンヘリックスのＤＮＡ結合モチーフを含んでおり、これには、クロマチン結合モチーフ（ヒトＩＬ−３３のアミノ酸４０〜５８）が含まれる。プロセシングされ、分泌されたＩＬ−３３の形態には、これらのＮ末端モチーフが欠けている。例示的なヒトＩＬ−３３のアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｏ９５７６０に見出すことができる。
「ＩＬ−３３軸」とは、ＩＬ−３３シグナル伝達に関与する核酸（例えば、遺伝子若しくは遺伝子から転写されたｍＲＮＡ）またはポリペプチドを意味する。例えば、ｌＬ−３３軸としては、リガンドＩＬ−３３、受容体（例えば、ＳＴ２及び／若しくはＩＬ−１ＲＡｃＰ）、アダプター分子（例えば、ＭｙＤ８８）、または受容体分子及び／若しくはアダプター分子と関連するタンパク質（例えば、インターロイキン−１受容体関連キナーゼ１（ＩＲＡＫ１）及びインターロイキン−１受容体関連キナーゼ４（ＩＲＡＫ４）などのキナーゼ、またはＴＮＦ受容体関連因子６（ＴＲＡＦ６）などのＥ３ユビキチンリガーゼ）を挙げることができる。
本明細書に互換的に使用される「インターロイキン１受容体様１（ＩＬ１ＲＬ１）」及び「ＳＴ２」という用語は、別途示されない限り、霊長類（例えば、ヒト）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源に由来する任意の天然のＳＴ２を指す。ＳＴ２はまた、当該技術分野において、ＤＥＲ４、Ｔ１、及びＦＩＴ−１とも称される。この用語は、「全長」のプロセシングされていないＳＴ２、ならびに細胞内でのプロセシングにより得られるＳＴ２の任意の形態を包含する。ＳＴ２には、以下に記載されるように、二重プロモーター系からの差次的ｍＲＮＡ発現により生じる可溶性（ｓＳＴ２、ＩＬ１ＲＬ１−ａとしても知られる）及び膜貫通（ＳＴ２Ｌ、ＩＬ１ＲＬ１−ｂとしても知られる）、ならびに選択的スプライシングから生じるＳＴ２Ｖ及びＳＴ２ＬＶを含む、少なくとも４つのアイソフォームが当該技術分野で知られている。ＳＴ２Ｌのドメイン構造には、３つの細胞外免疫グロブリン様Ｃ２ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞質Ｔｏｌｌ／インターロイキン−１受容体（ＴＩＲ）ドメインが含まれる。ｓＳＴ２は、ＳＴ２Ｌには含まれている膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインが欠けており、固有の９個のアミノ酸（ａ．ａ．）Ｃ末端配列が含まれる（例えば、Ｋａｋｋａｒ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃ．７：８２７−８４０，２００８を参照されたい）。ｓＳＴ２は、可溶性ＩＬ−３３を阻害するデコイ受容体として機能し得る。この用語はまた、ＳＴ２の天然の変異形、例えば、スプライス変異形（例えば、３つ目の免疫グロブリンモチーフを欠き、固有の疎水性尾部を有するＳＴ２Ｖ、及びＳＴ２Ｌの膜貫通ドメインを欠くＳＴ２ＬＶ）またはアレル変異形（例えば、本明細書に記載されるように、喘息の危険性に対して保護する変異形または喘息の危険性を与える変異形）を包含する。例示的なヒトＳＴ２のアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ０１６３８に見出すことができる。ＳＴ２は、共受容体ＩＬ−１ＲＡｃＰと共に、ＩＬ−３３受容体の１つである。ＩＬ−３３がＳＴ２と境受容体インターロイキン−１受容体補助タンパク質（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）に結合することにより、図１Ａに示されるように、下流シグナル伝達を促進する１：１：１の三重シグナル伝達複合体が形成される（例えば、Ｌｉｎｇｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ １７（１０）：１３９８−１４１０，２００９及びＬｉｕ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．１１０（３７）：１４９１８−１４９２４，２０１３を参照されたい）。
「抗ＩＬ−３３抗体」、「ＩＬ−３３に結合する抗体」、及び「ＩＬ−３３に特異的に結合する抗体」という用語は、抗体が診断剤及び／または治療剤としてＩＬ−３３を標的とすることに有用となるような十分な親和性でＩＬ−３３に結合することができる抗体を指す。一実施形態では、抗ＩＬ−３３抗体の無関係の非ＩＬ−３３タンパク質への結合の程度は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）によって測定した場合に、この抗体のＩＬ−３３への結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態では、ＩＬ−３３に結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば１０−９ Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（ＫＤ）を有する。ある特定の実施形態では、抗ＩＬ−３３抗体は、異なる種に由来するＩＬ−３３の間で保存されているＩＬ−３３のエピトープに結合する。
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて、参照抗体とその抗原との結合を５０％以上遮断する抗体、及び逆に、競合アッセイにおいて、抗体とその抗原との結合を５０％以上遮断する参照抗体を指す。例示的な競合アッセイは、本明細書に提供される。
「抗体フラグメント」には、インタクトな抗体の一部分、好ましくは、インタクトな抗体の抗原結合領域または可変領域が含まれる。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント；ダイアボディ；直鎖抗体（米国特許第５，６４１，８７０号、実施例２；Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２，１９９５を参照されたい）；一本鎖抗体分子；ならびに抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体が挙げられる。
抗体のパパイン分解により、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一な抗原結合フラグメントと、容易に結晶化する能力を反映して表記される残りの「Ｆｃ」フラグメントとが得られる。Ｆａｂフラグメントは、Ｈ鎖の可変領域ドメイン（ＶＨ）と共にＬ鎖全体、ならびに１つの重鎖の第１の定常領域ドメイン（ＣＨ１）からなる。抗体のペプシン処理により、２つのＦａｂフラグメントがジスルフィド結合した、二価の抗原結合活性を有するものにほぼ相当し、依然として抗原に架橋することが可能である、単一の大きなＦ（ａｂ’）２フラグメントが得られる。Ｆａｂ’フラグメントは、抗体のヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含めＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に追加の数個の残基を有することが、Ｆａｂフラグメントとは異なっている。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を有するＦａｂ’の本明細書における表記である。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは、元々は、間にヒンジシステインを有するＦａｂ’フラグメントの対として産生された。抗体フラグメントの他の化学的結合もまた、既知である。
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部分を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義して使用される。この用語は、天然配列のＦｃ領域及び変異形のＦｃ領域を含む。一実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端にまで及ぶ。しかしながら、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在することもあれば、しないこともある。本明細書において別途示されない限り、Ｆｃ領域または定常領域におけるアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載される、ＥＵインデックスとも称されるＥＵ番号付けシステムに従う。
「Ｆｖ」は、１つの重鎖及び１つの軽鎖の可変領域ドメインが緊密な比共有結合で結合した二量体からなる。これらの２つのドメインの折り畳みにより、抗原結合のためのアミノ酸に寄与し、抗原結合特異性を抗体に与える、６つの超可変ループ（Ｈ鎖及びＬ鎖からそれぞれ３つのループ）が得られる。しかしながら、単一の可変ドメイン（または抗原に特異的な３つのＨのみを含むＦｖの半分）ですら、親和性は全結合部位より低い場合があるとはいえ、抗原を認識し、それに結合する能力を有する。
「ｓＦｖ」または「ｓｃＦｖ」と短縮されることもある「一本鎖Ｆｖ」は、単一のポリペプチド鎖に結合されているＶＨ及びＶＬ抗体ドメインを含む、抗体フラグメントである。好ましくは、ｓＦｖポリペプチドは、更に、ＶＨ及びＶＬドメイン間にポリペプチドリンカーを含んでおり、このリンカーにより、ｓＦｖが抗原結合に望ましい構造を成すことが可能となっている。ｓＦｖに関する考察については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５，１９９４を参照されたい。
「ダイアボディ」という用語は、鎖内ではなく鎖間のＶドメイン対合が達成され、二価フラグメント、すなわち、２つの抗原結合部位を有するフラグメントが得られるように、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間に短いリンカー（約５〜１０個の残基）を用いてｓＦｖフラグメント（前の段落を参照されたい）を構築することによって調製された小さな抗体フラグメントを指す。二重特異性ダイアボディは、２つの抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメインが異なるポリペプチド鎖に存在している、２つの「交差」ｓＦｖフラグメントのヘテロ二量体である。ダイアボディは、例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第ＷＯ９３／１１１６１号、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８，１９９３により詳細に記載されている。
「結合ドメイン」は、標的のエピトープ、抗原、リガンド、または受容体に特異的に結合する、化合物または分子の一部を意味する。結合ドメインとしては、抗体（例えば、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、組み換え抗体、ヒト化抗体、及びキメラ抗体）、抗体フラグメントまたはその一部分（例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’２、ｓｃＦｖ抗体、ＳＭＩＰ、ドメイン抗体、ダイアボディ、ミニボディ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、アフィボディ、ナノボディ、ならびに抗体のＶＨ及び／またはＶＬドメイン）、受容体、リガンド、アプタマー、ならびに特定された結合パートナーを有する他の分子が挙げられるがこれらに限定されない。
「遮断」抗体または「アンタゴニスト」抗体は、それが結合する抗原の生物学的活性を阻害または低減させるものである。ある特定の遮断抗体またはアンタゴニスト抗体は、抗原の生物学的活性を実質的にまたは完全に阻害する。
「細胞に基づく遮断アッセイ」は、抗体が、それが結合した抗原の生物学的活性を阻害または低減させる能力を測定することができる、アッセイを指す。例えば、細胞に基づくアッセイを用いて、特定の生物学的または生化学的機能を阻害するのに必要とされる抗体の濃度を測定することができる。一部の実施形態では、細胞に基づく遮断アッセイを用いて、抗体（例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体）の半数阻害濃度（ＩＣ５０）及び／または９０％阻害濃度（ＩＣ９０）が測定される。一部の実施形態では、細胞に基づく遮断アッセイを用いて、抗体がリガンド（例えば、ＩＬ−３３）とその受容体（例えば、ＳＴ２及び／または共受容体ＩＬ−１ＲＡｃＰ）との間の相互作用を遮断するかどうかを判定する。ＩＬ−３３の例示的な細胞に基づく遮断アッセイは、本明細書では実施例２Ｂに提供される。ＩＬ−３３の更なる例示的な細胞に基づく遮断アッセイは、本明細書において例えば実施例８に提供され、これには、初代ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞アッセイ及び初代好塩基球細胞アッセイが含まれる。
抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメインまたは定常領域の型を指す。ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭの５つの主要な抗体クラスがあり、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に更に分割され得る。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれている。
抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列のＦｃ領域またはアミノ酸配列変異形Ｆｃ領域）に帰属する生物学的活性を指し、抗体の愛想タイプに応じて多様である。抗体のエフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞毒性、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞毒性（ＡＤＣＣ）、ファゴサイトーシス、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御、ならびにＢ細胞活性化が挙げられる。
「抗体依存性細胞媒介性細胞毒性」または「ＡＤＣＣ」は、ある特定の細胞毒性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）に分泌型Ｉｇが結合することにより、これらの細胞毒性エフェクター細胞が抗原保有標的細胞に特異的に結合し、次いで細胞毒により標的細胞を殺滅させることを可能にする、細胞毒性の形態を指す。抗体は細胞毒性細胞を「備え」ており、このような殺滅には絶対に必要である。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２，１９９１の４６４頁の表３にまとめられている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されるものなどのインビトロＡＤＣＣアッセイを行っても良い。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替または追加として、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ ９５：６５２−６５６，１９９８に開示されるものといった動物モデルにおいて、評価してもよい。
「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を示す。好ましいＦｃＲは、天然配列のヒトＦｃＲである。更に、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（ガンマ受容体）に結合するものであり、これらの受容体のアレル変異形及び代替としてはスプライシング形態を含め、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害性受容体」）を含み、これらは、主としてその細胞質ドメインが異なる、類似のアミノ酸配列を有する。活性化受容体であるＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに、免疫受容体チロシンに基づく活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含む。阻害性受容体であるＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに、免疫受容体チロシンに基づく阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含む（ｒｅｖｉｅｗ Ｍ．ｉｎ Ｄａｅｒｏｎ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４，１９９７を参照されたい）。ＦｃＲは、例えば、Ｒａｖｅｔｃｈ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２，１９９１、Ｃａｐｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２５−３４，１９９４、及びｄｅ Ｈａａｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−４１，１９９５において考察されている。今後特定されるものを含め、他のＦｃＲは、本明細書において「ＦｃＲ」という用語に包含される。この用語はまた、母体ＩｇＧの胎児への移入を担う胎児性受容体であるＦｃＲｎを含む（例えば、Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７，１９７６及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９，１９９４を参照されたい）。
「ヒトエフェクター細胞」は、１つ以上のＦｃＲを発現し、エフェクター機能を行う、白血球である。好ましくは、この細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を行う。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞毒性Ｔ細胞、及び好中球が挙げられ、ＰＢＭＣ及びＮＫ細胞が好ましい。エフェクター細胞は、天然の源、例えば血液から単離することができる。
「補体依存性細胞毒性」または「ＣＤＣ」は、補体の存在下における標的細胞の溶解を指す。古典的な補体経路の活性化は、補体系（Ｃ１ｑ）の第１の成分が、同種抗原に結合した（適切なサブクラスの）抗体に結合することによって開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３，１９９６に記載されるＣＤＣアッセイを行ってもよい。
「エピトープ」は、抗体が選択的に結合する抗原の部分である。ポリペプチド抗原については、エピトープは、通常、約４〜１５個のアミノ酸残基のペプチド部分である。
「全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」という用語は、天然の抗体構造に実質的に類似な構造を有するか、または本明細書に定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する、抗体を指して、本明細書に互換的に使用される。
「ヒト抗体」は、ヒトによって産生される抗体のものに対応するアミノ酸配列を有するもの、及び／またはヒト抗体を作成するための技法のうちの任意のものを用いて作製されているものである。ヒト抗体のこの定義は、比ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を具体的に除外する。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を代表する、フレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列の下位集団から行われる。一般に、配列の下位集団は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ，ｖｏｌｓ．１−３，１９９１にあるような下位集団である。一実施形態では、ＶＬに関して、下位集団は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記）にあるような下位集団カッパＩＩＩまたはカッパＩＶである。一実施形態では、ＶＨに関して、下位集団は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記）にあるような下位集団ＩＩＩである。
非ヒト（例えば、齧歯類）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体由来の配列を最小限に含んだキメラ抗体である。ほとんどの部分に関して、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であり、レシピエントの超可変領域からの残基が、所望される抗体特異性、親和性、及び機能性を有するマウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域からの残基で置き換えられている。一部の事例では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられている。更に、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体には見られない残基を含んでもよい。これらの修飾を行って、抗体の性能を更に改良してもよい。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、超可変ループの全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、場合によっては、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部分、典型的にはヒト免疫グロブリンのものが含まれるであろう。更に詳しくは、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２−５２５，１９８６、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９，１９８８、及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６，１９９２を参照されたい。
「免疫コンジュゲート」は、細胞毒性剤を含むがこれらに限定されない１つ以上の異種分子（複数可）にコンジュゲートされた抗体である。
本明細書に開示される様々な抗体について記載するために用いられる場合、「単離」という用語は、抗体が発現された細胞または細胞培養物から特定され、分離及び／または回収されている、抗体を意味する。その天然環境の混入成分は、典型的に、ポリペプチドの診断上または治療上の使用を妨げる材料であり、これらには、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性若しくは非タンパク質性の溶質を挙げることができる。一部の実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動法（例えば、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）、等電点電気泳動法（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動法）またはクロマトグラフィー法（例えば、イオン交換若しくは逆相ＨＰＬＣ）の方法によって判定した場合に、９５％または９９％を超える純度まで精製される。抗体の純度を評価するための方法の概説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ ８４８：７９−８７，２００７を参照されたい。好ましい実施形態では、抗体は、（１）スピニングカップシーケネータ（ｓｐｉｎｎｉｎｇ ｃｕｐ ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）を使用してＮ末端若しくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５個の残基を得るのに十分な程度まで、または（２）クーマシーブルー若しくは好ましくは銀染色を用いて非還元若しくは還元条件下でＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均質になるまで、精製されるであろう。単離抗体には、組み換え細胞内でインサイツの抗体が含まれるが、これは、ポリペプチドの天然環境の少なくとも１つの構成成分が存在しないためである。しかしながら、通常は、単離ポリペプチドは少なくとも１つの精製ステップによって調製されるであろう。
本明細書に使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られた抗体を指す、すなわち、その集団に含まれる個々の抗体は同一であり、かつ／または同じエピトープに結合するが、例えば、天然の変異を含むか、またはモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる、可能性のある変異形抗体は例外であり、このような変異形は、通常少量で存在している。異なる決定基（エピトープ）に指向される異なる抗体を典型的に含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物中の各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に指向されるものである。したがって、「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体の集団から得られるという抗体の特徴を示すものであり、いずれかの特定の方法による抗体の産生を必要とするものとして解釈されるものではない。例えば、本発明により使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組み換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含むトランスジェニック動物を用いる方法を含むがこれらに限定されない様々な技法によって作製することができ、かかる方法及びモノクローナル抗体を作製するための他の例示的な方法は、本明細書に記載されている。
「多重特異性抗体」という用語は、最も広義に使用され、特に、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体を含み、ここで、このＶＨＶＬ単位は、多重エピトープ特異性（すなわち、１つ生物分子上の２つの異なるエピトープまたは別々の生物分子上のそれぞれのエピトープに結合することができる）を有する。かかる多重特異性抗体としては、全長抗体、２つ以上のＶＬ及びＶＨドメインを有する抗体、抗体フラグメント、例えば、Ｆａｂ、Ｆｖ、ｄｓＦｖ、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、二重特異性ダイアボディ及びトリアボディ、共有結合または非共有結合で連結されている抗体フラグメントなどが挙げられるがこれらに限定されない。「多重エピトープ特異性」とは、同じかまたは異なる標的（複数可）上の２つ以上の異なるエピトープに特異的に結合することができる能力を指す。「二特異性」または「二重特異性」とは、同じかまたは異なる標的（複数可）上の２つの異なるエピトープに特異的に結合することができる能力を指す。しかしながら、二重特異性抗体とは対照的に、二特異性抗体は、アミノ酸配列が同一である２つの抗原結合アームを有し、各Ｆａｂアームにより２つの抗原を認識することができる。二特異性は、抗体が、高い親和性で単一のＦａｂまたはＩｇＧ分子として２つの異なる抗原と相互作用することを可能にする。一実施形態によると、ＩｇＧ１の形態の多重特異性抗体は、各エピトープに、５μＭ〜０．００１ｐＭ、３μＭ〜０．００１ｐＭ、１μＭ〜０．００１ｐＭ、０．５μＭ〜０．００１ｐＭ、または０．１μＭ〜０．００１ｐＭの親和性で結合する。「単一特異性」とは、１つのエピトープのみに結合する能力を指す。
本明細書に使用される「ノブ・イン・ホール」または「ＫｎＨ」技術という用語は、２つのポリペプチドを、それらが相互作用する界面において一方のポリペプチドに隆起（ノブ）を導入し、他方のポリペプチドに空洞（ホール）を導入することにより、インビトロまたはインビボで一緒に対合することを誘導する技術を指す。例えば、ＫｎＨは、抗体のＦｃ：Ｆｃ結合界面、ＣＬ：ＣＨ１界面、またはＶＨ／ＶＬ界面に導入されている（例えば、米国公開第２０１１／０２８７００９号、同第ＵＳ２００７／０１７８５５２号、国際公開第ＷＯ９６／０２７０１１号、同第ＷＯ９８／０５０４３１号、及びＺｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６：７８１−７８８，１９９７を参照されたい）。一部の実施形態では、ＫｎＨにより、多重特異性抗体の製造中に２つの異なる重鎖を一緒に対合することが促進される。例えば、Ｆｃ領域内にＫｎＨを有する多重特異性抗体は、各Ｆｃ領域に連結された単一可変ドメインを更に含むことができるか、または同様の若しくは異なる軽鎖可変ドメインと対合する異なる重鎖可変ドメインを更に含むことができる。ＫｎＨ技術はまた、２つの異なる受容体の細胞外ドメインを一緒に対合するか、または異なる標的認識配列を含む任意の他のポリペプチド配列（例えば、アフィボディ、ペプチボディ、及び他のＦｃ融合体を含む）を対合するために使用することができる。
本明細書に使用される「ノブ変異」という用語は、ポリペプチドが別のポリペプチドと相互作用する界面において、ポリペプチドに隆起（ノブ）を導入する、変異を指す。一部の実施形態では、他のポリペプチドは、ホール変異を有する（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、同第５，８０７，７０６号、同第５，８２１，３３３号、同第７，６９５，９３６号、及び同第８，２１６，８０５号を参照されたく、これらは、それぞれが参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
本明細書に使用される「ホール変異」という用語は、ポリペプチドが別のポリペプチドと相互作用する界面において、ポリペプチドに空洞（ホール）を導入する、変異を指す。一部の実施形態では、他のポリペプチドは、ノブ変異を有する（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、同第５，８０７，７０６号、同第５，８２１，３３３号、同第７，６９５，９３６号、及び同第８，２１６，８０５号を参照されたく、これらは、それぞれが参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
「ネイキッド抗体」とは、異種部分（例えば、細胞毒性部分）または放射標識にコンジュゲートしていない抗体を指す。ネイキッド抗体が薬学的組成物中に存在してもよい。
抗体と標的分子との結合に関して、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的上のエピトープに「特異的な結合」または「特異的に結合する」または「特異的である」という用語は、非特異的相互作用とはある程度異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、ある分子の結合を、対照分子の結合と比較して判定することによって測定することができる。例えば、特異的結合は、標的に類似である対照分子、例えば、過剰な非標識標的との競合によって、判定することができる。この事例では、特異的結合は、標識した標的のプローブへの結合が、過剰な非標識標的によって競合的に阻害された場合に、示される。本明細書に使用される、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープに「特異的な結合」または「特異的に結合する」または「特異的である」という用語は、例えば、標的に対して１０−４Ｍ以下、代替として１０−５Ｍ以下、代替として１０−６Ｍ以下、代替として１０−７Ｍ以下、代替として１０−８Ｍ以下、代替として１０−９Ｍ以下、代替として１０−１０Ｍ以下、代替として１０−１１Ｍ以下、代替として１０−１２Ｍ以下のＫＤ、または１０−４Ｍ〜１０−６Ｍ若しくは１０−６Ｍ〜１０−１０Ｍ若しくは１０−７Ｍ〜１０−９ＭのＫＤを有する分子によって表してもよい。当業者には理解されるように、親和性及びＫＤの値は、逆相関している。抗原の高い親和性は、低いＫＤ値によって測定される。一実施形態では、「特異的な結合」という用語は、ある分子が、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド上のエピトープに、任意の他のポリペプチドまたはポリペプチドのエピトープに実質的に結合することなく結合する、結合を指す。
「可変」という用語は、可変ドメインのある特定のセグメントが、抗体によって配列が大幅に異なるという事実を指す。可変または「Ｖ」ドメインは、抗原結合を媒介し、かつ特定の抗体の特定の抗原に対する特異性を定める。しかしながら、可変性は、１１０個のアミノ酸の長さの可変ドメイン全体に均等に分布しているわけではない。そうではなく、Ｖ領域は、１５〜３０個のアミノ酸の複数のフレームワーク領域（ＦＲ）と称される比較的不変の範囲が、それぞれ９〜１２個のアミノ酸長である「超可変領域」と呼ばれる極めて可変性の高い短い領域によって分離されたものからなる。本明細書に使用されるとき、「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、一般に、例えば、ＶＬでは大体残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、及び８９〜９７（Ｌ３）、ならびにＶＨでは残基約２６〜３５（Ｈ１）、４９〜６５（Ｈ２）、及び９５〜１０２（Ｈ３）（一実施形態では、Ｈ１は、残基約３１〜３５）、Ｋａｂａｔら（上記））からのアミノ酸残基、ならびに／または「超可変ループ」（例えば、ＶＬでは残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、及び９１〜９６（Ｌ３）、ならびにＶＨでは２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７，１９８７からの残基を含む。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、それぞれが、主としてベータシート構造を取る４つのＦＲを含み、これが３つの超可変領域によって結合され、それによってベータシート構造を結合するループ、またいくつかの場合にはその一部を形成するループが形成される。各鎖における超可変領域は、ＦＲによって、他方の鎖の超可変領域と近接して保持されており、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（Ｋａｂａｔら（上記）を参照されたい）。したがって、ＨＶＲ及びＦＲの配列は、一般に、ＶＨ（またはＶＬ）では次の配列で現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。定常ドメインは、抗体と抗原との結合に直接関与しないが、その抗体の抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）への関与など、様々なエフェクター機能を呈する。
「Ｋａｂａｔにおける可変ドメイン残基の番号付け」または「Ｋａｂａｔにおけるアミノ酸位の番号付け」及びそれらの変化形は、Ｋａｂａｔら（上記）における抗体の集合物の重鎖可変ドメインまたは軽鎖可変ドメインに用いられる番号付けシステムを指す。この番号付けシステムを用いると、実際の直鎖アミノ酸配列は、可変ドメインのＦＲまたはＨＶＲの短縮またはそこへの挿入に対応して、より少ないかまたは追加のアミノ酸を含有し得る。例えば、重鎖可変ドメインは、Ｈ２の残基５２の後に単一のアミノ酸挿入（Ｋａｂａｔによる残基５２ａ）、ならびに重鎖ＦＲ残基８２の後に挿入された残基（例えば、Ｋａｂａｔによる残基８２ａ、８２ｂ、及び８２ｃなど）を含み得る。残基のＫａｂａｔの番号付けは、抗体の配列と「標準的な」Ｋａｂａｔ配列との相同性の領域でアライメントをすることによって、所与の抗体に関して決定され得る。
Ｋａｂａｔ番号付けシステムは、一般に、可変ドメイン内の残基（軽鎖の残基１〜１０７及び重鎖の残基１〜１１３）を指すときに用いられる（例えば、Ｋａｂａｔら（上記））。「ＥＵ番号付けシステム」または「ＥＵインデックス」は、一般に、免疫グロブリン重鎖定常領域内の残基を指すときに用いられる（例えば、Ｋａｂａｔら（上記）に報告されているＥＵインデックス）。「ＫａｂａｔにおけるＥＵインデックス」とは、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基番号付けを指す。本明細書に別途示されない限り、抗体の可変ドメイン内の残基番号の参照は、Ｋａｂａｔ番号付けシステムによる残基番号付けを意味する。本明細書に別途示されない限り、抗体の定常ドメイン内の残基番号の参照は、ＥＵ番号付けシステムによる残基番号付けを意味する（例えば、米国仮出願第６０／６４０，３２３号、ＥＵ番号付けに関する図を参照されたい）。
本明細書に使用されるとき、「投与する」とは、ある投薬量の化合物（例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体若しくは本発明の抗ＩＬ−３３抗体をコードする核酸）または組成物（例えば、薬学的組成物、例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体を含む薬学的組成物）を対象に与える方法を意味する。本明細書に記載される方法に用いられる組成物は、例えば、硝子体内、筋肉内、静脈内、皮内、経皮（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、動脈内、腹腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内（ｉｎｔｒａｐｒｏｓｔａｔｉｃａｌｌｙ）、胸膜内、気管内、くも膜内（ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌｌｙ）、鼻腔内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹膜内、皮下、結膜下、小胞内、経粘膜、心膜内、臍帯内、眼球内、眼窩内、経口、局所、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｌｙ）、眼窩周囲、結膜、テノン嚢下、前房内、網膜下、眼球後、毛細胆管内（ｉｎｔｒａｃａｎａｌｉｃｕｌａｒｌｙ）、吸入、注射、埋め込み、注入、持続注入、標的細胞に直接的に流す局所灌流、カテーテル、洗浄、クリーム、または脂質組成物で投与することができる。本明細書に記載される方法に用いられる組成物はまた、全身または局所に投与することができる。投与方法は、様々な要因（例えば、投与される化合物または組成物、ならびに治療される状態、疾患、または障害の重症度）に応じて多様であり得る。
「喘息」という用語は、本明細書では、多様な再発性の症状、可逆的気流閉塞（例えば、気管支拡張剤による）、気管支過敏を特徴とする障害を指し、これらは、潜在的な炎症を伴うこともあれば、そうでないこともある。喘息は、したがって、炎症性／炎症喘息または非炎症性／非炎症喘息であり得る。喘息の例としては、アレルギー性喘息、運動誘発性喘息、アスピリン感受性／悪化性喘息、アトピー性喘息、重度の喘息、軽度の喘息、中等度〜重度の喘息、コルチコステロイド未投与喘息、慢性喘息、副腎皮質ステロイド耐性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断された未処置の喘息、喫煙に起因する喘息、コルチコステロイドで制御不良な喘息（ａｓｔｈｍａ ｕｎｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｏｎ ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄ）、及びＢｏｕｓｑｕｅｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２６（５）：９２６−９３８，２０１０に記載されている他の喘息が挙げられる。
「障害」または「疾患」は、本抗体での処置により利益を得るであろう任意の状態である。例えば、障害は、ＩＬ−３３媒介性障害であり得る。これには、哺乳動物が問題の障害にかかる素因となる病態を含め、慢性及び急性の障害または疾患が含まれる。本明細書における治療されるべき障害の例としては、ＩＬ−３３媒介性障害（例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、及び線維症（例えば、肺線維症、例えば、特発性肺線維症））が挙げられる。
「化学療法剤」は、がんの治療に有用な化学化合物である。化学療法剤の例としては、チオテパ及びシクロスホスファミド（ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））等のアルキル化剤；ブスルファン、イムプロスルファン、及びピポスルファン等のスルホン酸アルキル；ベンゾドーパ、カルボコン、メツレドーパ、及びウレドーパ等のアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、及びトリメチロメラミンを含む、エチレンイミン及びメチラメラミン（ｍｅｔｈｙｌａｍｅｌａｍｉｎｅ）；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン；デルタ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ−ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）、及び９−アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドレゼシン、カルゼレシン、及びビセレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成類似体ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチンＡ；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン、クロロロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビシン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロフォスファミド、ウラシルマスタード等の窒素マスタード類；カルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチン等のニトロソ尿素類；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン、特にカリケアマイシンガンマ１Ｉ及びカリケアマイシンオメガＩｌ（例えば、Ｎｉｃｏｌａｏｕ ｅｔ ａｌ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４））；ＣＤＰ３２３、経口アルファ−４インテグリン阻害剤；ダイネミシンＡを含む、ダイネミシン；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチン発色団及び関連する色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）、アクラノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カミノマイシン（ｃａｍｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｕｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン（登録商標）、モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、ドキソルビシンＨＣｌリポソーム注射（ＤＯＸＩＬ（登録商標））、リポソームドキソルビシンＴＬＣ Ｄ−９９（ＭＹＯＣＥＴ（登録商標））、ペグ化（ｐｅｇｌｙｌａｔｅｄ）リポソームドキソルビシン（ＣＡＥＬＹＸ（登録商標））、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン（ｅｓｏｒｕｂｉｃｉｎ）、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗薬、例えばメトトレキサート、ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））、カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、エポチロン、及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）；コンブレタスタチン；葉酸類似体、例えばデノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサート；プリン類似体、例えばフルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン（ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）、チオグアニン；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン；アンドロゲン、例えばカルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン；抗副腎剤（ａｎｔｉ−ａｄｒｅｎａｌ）、例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン；葉酸補液（ｆｏｌｉｃ ａｃｉｄ ｒｅｐｌｅｎｉｓｈｅｒ）、例えばフロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ）；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド（ａｌｄｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅ）；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビスアントレン；エダトラキサート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルチン；ジアジクオン；エルフォミチン（ｅｌｆｏｒｍｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダイニン（ｌｏｎｉｄａｉｎｉｎｅ）；マイタンシノイド、例えばマイタンシン及びアンサマイトシン；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；２−エチルヒドラジド（２−ｅｔｈｙｌｈｙｄｒａｚｉｄｅ）；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン（ｓｉｚｏｆｕｒａｎ）；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ−２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えば、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標））、及びドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｍｅ−Ｐｏｕｌｅｎｅ Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロランブシル（ｃｈｌｏｒａｎｂｕｃｉｌ）；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；白金剤、例えばシスプラチン、オキサリプラチン（例えば、ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標））、及びカルボプラチン；チューブリン重合により微小管が形成されるのを防止する、ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））、ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））、ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））、及びビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））を含む、ビンカ類；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ロイコボリン；ノバントロン；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））を含む、レチノイン酸などのレチノイド類；クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）またはＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ−５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、または、リセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））などのビスホスホネート類；トロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、異常な細胞増殖に関連するシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ−アルファ、Ｒａｆ、Ｈ−Ｒａｓ、及び上皮成長因子受容体（ＥＧＦ−Ｒ）（例えば、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（商標））など；及び細胞増殖を低減させるＶＥＧＦ−Ａ；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチン及び遺伝子療法ワクチンなどのワクチン類、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；トポイソメラーゼ１阻害剤（例えば、ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標））；ｒｍＲＨ（例えば、ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標））；ＢＡＹ４３９００６（ソラフェニブ、Ｂａｙｅｒ）；ＳＵ−１１２４８（スニチニブ、ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ）；ペリホシン、ＣＯＸ−２阻害剤（例えば、セレコキシブまたはエトリコキシブ）、プロテオソーム阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））；ＣＣＩ−７７９；チピファルニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ（ｏｒａｆｅｎｉｂ）、ＡＢＴ５１０；オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））などのＢｃｌ−２阻害剤；ピキサントロン；ＥＧＦＲ阻害剤；チロシンキナーゼ阻害剤；ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））などのセリン−スレオニンキナーゼ阻害剤；ロナファーニブ（ＳＣＨ ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲ（商標））などのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤；ならびに上記のうちのいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに上記のうちの２つ以上の組み合わせ、例えばＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、及びプレドニゾロンの組み合わせ療法の略語）；及びＦＯＬＦＯＸ（オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））と５−ＦＵ及びロイコボリンとを組み合わせた治療レジメンの略語）、ならびに上記のうちのいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに上記のうちの２つ以上の組み合わせが挙げられる。
本明細書に定義される化学療法剤には、「抗ホルモン剤」または「内分泌治療薬」が含まれ、これらは、がんの成長を促進し得るホルモンの作用を制御、低減、遮断、または阻害するように作用する。それらは、ホルモンそのものであってもよく、これには、次のものが挙げられるがこれらに限定されない：タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標））、４−ヒドロキシタモキシフェン、トレミフェン（ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））、イドキシフェン、ドロロキシフェン、ラロキシフェン（ＥＶＩＳＴＡ（登録商標））、トリオキシフェン、ケオキシフェン、及び選択性エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、例えばＳＥＲＭ３を含む、アゴニスト／アンタゴニストが入り混じったプロファイルを有する抗エストロゲン薬；フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標））及びＥＭ８００など、アゴニスト特性を有さない純粋な抗エストロゲン薬（かかる薬剤は、エストロゲン受容体（ＥＲ）二量体化の遮断、ＤＮＡ結合の阻害、ＥＲターンオーバーの増加、及び／またはＥＲレベルの抑制を行うことができる）；ホルメスタン及びエキセメスタン（ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標））などのステロイド性アロマターゼ阻害剤、ならびにアナストラゾール（ａｎａｓｔｒａｚｏｌｅ）（ＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標））、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標））、及びアミノグルテチミドなどの非ステロイド性アロマターゼ阻害剤を含む、アロマターゼ阻害剤、ならびに他のアロマターゼ阻害剤としては、ボロゾール（ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標））、酢酸メゲストロール（ＭＥＧＡＳＥ（登録商標））、ファドロゾール、及び４（５）−イミダゾールが挙げられる；ロイプロリド（ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）及びＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標））、ゴセレリン、ブセレリン、及びトリプテレリン（ｔｒｉｐｔｅｒｅｌｉｎ）を含む黄体ホルモン放出ホルモンアゴニスト；酢酸メゲストロール及び酢酸メドロキシプロゲステロンなどのプロゲスチン、ジエチルスチルベストロール及びプレマリンなどのエストロゲン、ならびにフルオキシメステロン、全トランス型レチノイン酸、及びフェンレチニドなどのアンドロゲン／レチノイドを含む、性ステロイド；オナプリストン；抗プロゲステロン薬；エストロゲン受容体下方制御剤（ＥＲＤ）；フルタミド、ニルタミド、及びビカルタミドなどの抗アンドロゲン薬；ならびに上記のうちいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびに上記の２つ以上の組み合わせ。
本明細書に使用される「細胞毒性剤」という用語は、細胞の機能を阻害若しくは阻止する、及び／または細胞の死滅若しくは破壊を引き起こす、物質を指す。細胞毒性剤には、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；化学療法剤または化学療法薬（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、または他のインターカレート剤）；成長阻害剤；核酸分解酵素などの酵素及びそのフラグメント；抗生物質；細菌、真菌、植物、または動物起源の小分子毒素または酵素的に活性な毒素（それらのフラグメント及び／若しくは変異形を含む）などの毒素；ならびに本明細書に開示される様々な抗腫瘍剤または抗がん剤が含まれるがこれらに限定されない。
薬剤、例えば、薬学的製剤の「有効量」は、必要な投薬量及び期間で、所望される治療的または予防的結果を達成するのに有効な量を指す。
本明細書に使用されるとき「成長阻害剤」は、インビトロまたはインビボのいずれかで細胞の成長を阻害する化合物または組成物を指す。したがって、成長阻害剤は、Ｓ期の細胞の割合を大幅に減少させるものであり得る。成長阻害剤の例としては、Ｇ１での停止及びＭ期での停止を誘導する薬剤など、細胞周期進行を（Ｓ期以外の場所で）遮断する薬剤が含まれる。古典的なＭ期遮断薬としては、ビンカ類（ビンクリスチン及びビンブラスチン）、タキサン類、ならびにドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、及びブレオマイシンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤が挙げられる。Ｇ１で停止させるこれらの薬剤はまた、Ｓ期での停止、例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５−フルオロウラシル、及びａｒａ−ＣなどのＤＮＡアルキル化剤にも及ぶ。更なる情報は、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，Ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ，Ｃｈａｐｔｅｒ １，ｅｎｔｉｔｌｅｄ“Ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ，ａｎｄ ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｄｒｕｇｓ”ｂｙ Ｍｕｒａｋａｍｉ ｅｔ ａｌ．（Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，１９９５）の例えば１３頁に見出すことができる。タキサン類（パクリタキセル及びドセタキセル）は、いずれもイチイに由来する抗がん薬である。ヨーロッパイチイに由来するドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ）は、パクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）の半合成類似体である。パクリタキセル及びドセタキセルは、チューブリン二量体からの微小管の構築を促進し、脱重合を防止することによって微小管を安定させ、それによって、細胞内での有糸分裂の阻害をもたらす。
「ＩＬ−３３媒介性障害」という用語は、本明細書に使用されるとき、ＩＬ−３３軸によって媒介されるか、またはそれと関連する、任意の障害または状態を指す。一部の実施形態では、ＩＬ−３３媒介性障害は、ＩＬ−３３のレベルまたは活性に起因して不規則な症状が身体の局所及び／または全身に現れ得る、過剰なＩＬ−３３のレベルまたは活性と関連付けられている。例示的なＩＬ−３３媒介性障害としては、炎症性状態、免疫障害、線維性障害、好酸球性障害、感染症、疼痛、中枢神経系障害、固形腫瘍、及び眼科障害が挙げられる。ＩＬ−３３媒介性障害は、例えば、Ｌｉｅｗ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １０：１０３−１１０，２０１０に記載されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
例示的な炎症性状態としては、喘息（例えば、アレルギー性喘息、運動誘発性喘息、アスピリン感受性／悪化性喘息、アトピー性喘息、重度の喘息、軽度の喘息、中等度〜重度の喘息、コルチコステロイド未投与の喘息、慢性喘息、コルチコステロイド耐性喘息、コルチコステロイド不応性喘息、新たに診断され治療されていない喘息、喫煙に起因する喘息、コルチコステロイドで制御不良な喘息など）、気道炎症、気道過反応、気道過敏、副鼻腔炎、ポリープを伴う副鼻腔炎、鼻ポリープ症、関節炎（例えば、骨関節炎、リウマチ性関節炎、コラーゲン誘発性関節炎、外傷の結果としての関節炎など）、好酸球性炎症、肥満細胞媒介性炎症性疾患、敗血症、敗血症性ショック、血清陰性腱付着部症及び関節症（ＳＥＡ）症候群、骨粗鬆症、好酸球性食道炎、強皮症、皮膚炎、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、水疱性類天疱瘡、慢性蕁麻疹、軟骨炎症、リウマチ性多発性筋痛、結節性多発性動脈炎（ｐｏｌｙａｒｔｅｒｉｔｉｓ ｎｏｄｏｓｓａ）、ウェゲナー肉芽腫症、ベーチェット病、筋炎（ｍｙｏｌｉｔｉｓ）、多発性筋炎（ｐｏｌｙｍｙｏｌｉｔｉｓ）、皮膚筋炎（ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｌｉｔｉｓ）、皮膚筋炎（ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ）、脈管炎、動脈炎、糖尿病性腎症、間質性膀胱炎、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、胃腸炎症性状態（例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、クローン病（ＣＤ）、大腸炎（例えば、環境障害により生じた大腸炎（ｃｏｌｉｔｉｓ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｉｎｓｕｌｔｓ）（例えば、化学療法、放射線療法などの治療レジメンによって生じたか、またはそれに関連するものなど）、感染性大腸炎、虚血性大腸炎、コラーゲン性またはリンパ球性大腸炎、壊死性腸炎、慢性肉芽腫性疾患またはセリアック病、食物アレルギー、胃炎、感染性胃炎、または全腸炎（例えば、ヘリコバクター・ピロリ菌感染性慢性活動性胃炎）などの状態における大腸炎、及び感染病原体によって引き起こされる胃腸炎症の他の形態）、ならびに感染性肺状態（例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、好酸球性肺炎症、感染症誘発性肺状態（例えば、ウイルス性（例えば、インフルエンザ、パラインフルエンザ、ロタウイルス、ヒトメタニューモウイルス、及び呼吸器合胞体ウイルス）、細菌性、真菌性（例えば、アスペルギルス）、寄生虫性、またはプリオン感染症と関連するもの、アレルゲン誘発性肺状態、汚染物質誘発性肺状態（例えば、アスベスト症、ケイ肺症、またはベリリウム症）、胃吸引誘発性肺状態、免疫制御不全、遺伝的素因による炎症性状態、例えば嚢胞性線維症、身体的外傷誘発性肺状態（例えば、呼吸器傷害）、肺気腫、気管支炎、サルコイドーシス、組織球増加症、リンパ管筋腫症、急性肺傷害、急性呼吸促迫症候群、慢性肺疾患、気管支肺異形成症、肺炎（例えば、市中肺炎、院内肺炎、人工呼吸器関連肺炎、ウイルス性肺炎、細菌性肺炎、及び重度の肺炎）、気道病態悪化（ａｉｒｗａｙ ｅｘａｃｅｒｂａｔｉｏｎ）、及び急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ））が挙げられる。
例示的な免疫障害としては、肥満細胞によって少なくとも部分的に媒介されるもの、例えば、喘息（例えば、アレルギー性喘息）、湿疹、痒み、アレルギー、アトピー性アレルギー、アナフィラキシー、アナフィラキシーショック、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、ならびに自己免疫障害、例えば、リウマチ性関節炎、若年性リウマチ性関節炎、乾癬性関節炎、膵炎、乾癬、尋常性乾癬、滴状乾癬、逆乾癬（ｉｎｖｅｒｓｅ ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）、膿疱性乾癬、乾癬性紅皮症、腫瘍随伴性自己免疫疾患、自己免疫性肝炎、水疱性類天疱瘡、重症筋無力症、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、セリアック病、甲状腺炎（例えば、グレーブス病）、シェーグレン症候群、ギラン・バレー疾患、レイノー現象、アジソン病、肝疾患（例えば、原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、非アルコール性脂肪性肝疾患、及び非アルコール性脂肪性肝炎）、及び糖尿病（例えば、Ｉ型糖尿病）が挙げられる。
本明細書に使用されるとき、「線維性障害」または「線維症」という用語は、器官または組織における過剰な線維性結合組織の形成を伴う状態を指す。例示的な線維性障害としては、肺線維症、肝線維症（例えば、肝硬変と関連する線維症（例えば、アルコール誘発性肝硬変、ウイルス誘発性肝硬変、Ｃ型肝炎後肝硬変、及び原発性胆汁性肝硬変）、住血吸虫症、胆管炎（例えば、硬化性胆管炎）、及び自己免疫誘発性肝炎）、腎線維症（例えば、尿細管間質性線維症、強皮症、糖尿病性腎炎、及び糸球体腎炎）、皮膚線維症（例えば、強皮症、肥厚性及びケロイド性瘢痕、腎性線維化性皮膚症、及び熱傷）、骨髄線維症、神経線維腫症、線維腫、腸管線維症、及び外科手術により生じた線維性癒着）、心線維症（例えば、心筋梗塞と関連する線維症）、血管線維症（例えば、血管形成術後の動脈再狭窄及びアテローム性動脈硬化と関連する線維症）、眼球線維症（例えば、白内障手術後に関連する線維症、増殖性硝子体網膜症、及び後眼窩線維症、）、ならびに脊髄線維症（例えば、特発性骨髄線維症及び薬物誘発性骨髄線維症）が挙げられる。線維症は、器官特異的でも全身性でもあり得る（例えば、全身性硬化症及びＧＶＨＤと関連する線維症）。
肺線維症の例としては、例えば、特発性肺線維症と関連する肺（ｌｕｎｇ）または肺（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ）線維症、膠原病性脈管疾患に伴う線維症、ヘルマンスキー・パドラック症候群、成人性呼吸促迫症候群、非特異性間質性肺炎、呼吸細気管支炎（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｂｒｏｎｃｉｏｌｉｔｉｓ）、サルコイドーシス、組織球増殖症Ｘ、閉塞性細気管支炎、及び特発性器質化肺炎が挙げられる。一実施形態では、肺線維症は、特発性肺線維症である。
本明細書に使用されるとき、「好酸球性障害」は、好酸球のレベルまたは活性に起因して不規則な症状が身体の局所及び／または全身に現れ得る、過剰な好酸球数と関連する障害である。好酸球性障害としては、喘息（アスピリン感受性喘息、アトピー性喘息、及び重度の喘息を含む）、好酸球性炎症、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎（季節性アレルギー性鼻炎を含む）、非アレルギー性鼻炎、慢性好酸球性肺炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、セリアック病、チャーグ・ストラウス症候群（結節性動脈周囲炎に加えてアトピー）、好酸球性筋痛症候群、好酸球増加症候群、発作性血管浮腫を含む浮腫性反応、蠕虫感染症（好酸球が保護的役割を有し得るもの）、回旋糸状虫性皮膚炎（ｏｎｃｈｏｃｅｒｃａｌ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ）、好酸球性食道炎、好酸球性胃炎、好酸球性胃腸炎、好酸球性小腸炎及び好酸球性大腸炎、鼻のマイクロポリープ症及びポリープ症、アスピリン不耐性、ならびに閉塞性睡眠時無呼吸を含むがこれらに限定されない好酸球関連胃腸障害（ＥＧＩＤ）が挙げられるが、これらに限定されない。好酸球由来の分泌産物もまた、腫瘍における血管新生及び結合組織形成ならびに慢性喘息、クローン病、強皮症、及び心内膜心筋線維症などの状態に見られる線維化応答促進と関連付けられている（Ｍｕｎｉｔｚ ｅｔ ａｌ．Ａｌｌｅｒｇｙ ５９：２６８−２７５，２００４、Ａｄａｍｋｏ ｅｔ ａｌ．Ａｌｌｅｒｇｙ ６０：１３−２２，２００５、Ｏｌｄｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．Ａｌｌｅｒｇｙ ６０：６９３−６９６，２００５）。他の例としては、がん（例えば、膠芽腫（多型膠芽細胞腫など）及び非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ））、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、炎症性腸疾患、線維症（例えば、肺線維症（例えば、特発性肺線維症（ＩＰＦ）及び硬化症に二次的な肺線維症）及び肝線維症）、ならびにＣＯＰＤが挙げられる。
感染症の例としては、蠕虫感染症（例えば、ヒト寄生虫である鞭虫による感染症のモデルであるマウスのネズミ鞭虫感染症などの線虫感染症）、原虫感染症（例えば、大形リーシュマニア感染症）、ならびにウイルス感染症（例えば、呼吸器合胞体ウイルス感染症及びインフルエンザウイルス感染症）が挙げられる。
疼痛の例としては、炎症性疼痛、痛覚過敏（例えば、機械的痛覚過敏）、アロディニア、及び侵害受容過敏（例えば、皮膚及び関節の侵害受容過敏（抗原に誘発される場合もそうでない場合もある））が挙げられる。
中枢神経系障害の例としては、クモ膜下出血、中枢神経系の炎症性疾患、神経変性疾患（例えば、アルツハイマー病、実験的自己免疫性脳脊髄炎、多発性硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病）、双極性障害、及び中枢神経系の感染症（例えば、ウイルス感染症）が挙げられる。
固形腫瘍の例としては、結腸、乳房、前立腺、肺、腎臓、肝臓、膵臓、卵巣、頭頸部、口腔、胃、十二指腸、小腸、大腸、胃腸管、肛門、胆嚢、口唇、鼻咽頭、皮膚、子宮、男性生殖器、泌尿器、膀胱、及び皮膚の腫瘍が挙げられる。非上皮起源の固形腫瘍としては、肉腫、脳腫瘍、及び骨腫瘍が挙げられる。
眼科障害の例としては、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）（滲出型ＡＭＤ、萎縮型（ｄｒｙ）ＡＭＤ、中間型ＡＭＤ、進行型ＡＭＤ、及び地図状萎縮（ＧＡ）を含む）、網膜症（例えば、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、及び高所ＤＲ）、ポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、網膜剥離、緑内障、ブドウ膜炎（例えば、感染性及び非感染性のブドウ膜炎）、網膜色素変性、レーバー先天黒内障（レーバーの先天黒内障としても知られる）、シュタルガルト病、外傷性眼損傷、及び結膜炎（例えば、感染性結膜炎、非感染性結膜炎、及びアレルギー性結膜炎）が挙げられる。
一部の実施形態では、眼科障害には、ＡＭＤ（滲出型ＡＭＤ、萎縮型ＡＭＤ、及びＧＡを含む）、網膜症（例えば、ＤＲ及びＲＯＰ）、ＰＣＶ、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、アレルギー性結膜炎、及び網膜剥離が含まれる。
他の実施形態では、眼科疾患には、中間型ＡＭＤ、進行型ＡＭＤ、緑内障、ブドウ膜炎（例えば、感染性及び非感染性）、網膜色素変性、レーバー先天黒内障（レーバーの先天黒内障としても知られる）、シュタルガルト病、高所糖尿病性網膜症、外傷性眼損傷、及び結膜炎（例えば、感染性結膜炎及び非感染性結膜炎）が含まれることを理解されたい。
上述のリストは包括的なものではなく、当業者であれば、疾患または障害が様々な分類に含まれ得ることを理解するであろう。例えば、喘息は、一部の事例では炎症性障害及び免疫障害の両方として分類され得るが、一部の医師によっては自己免疫障害と見なされ得る。
「ＩＬ−３３軸結合アンタゴニスト」は、ＩＬ−３３軸結合パートナーとその結合パートナーのうちの１つ以上との相互作用を阻害する分子を指す。本明細書に使用されるとき、ＩＬ−３３軸結合アンタゴニストには、ＩＬ−３３結合アンタゴニスト、ＳＴ２結合アンタゴニスト、及びＩＬ１ＲＡｃＰ結合アンタゴニストが含まれる。例示的なＩＬ−３３軸結合アンタゴニストとしては、抗ＩＬ−３３抗体及びその抗原結合フラグメント（例えば、ＡＮＢ−０２０（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ，Ｉｎｃ．）などの抗ＩＬ−３３抗体、または欧州特許第１７２５２６１号、米国特許第８１８７５９６号、国際公開第ＷＯ２０１１０３１６００号、同第ＷＯ２０１４１６４９５９号、同第ＷＯ２０１５０９９１７５号、若しくはＷＯ２０１５１０６０８０号（それぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載される抗体のいずれか）；ＩＬ−３３及び／またはその受容体（ＳＴ２及び／またはＩＬ−１ＲＡｃＰ）に結合し、リガンド−受容体の相互作用を遮断するポリペプチド（例えば、ＳＴ２−Ｆｃタンパク質、例えば国際公開第ＷＯ２０１４／１５２１９５号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるもの；イムノアドヘシン、ペプチボディ、及び可溶性ＳＴ２、またはそれらの誘導体）；抗ＩＬ−３３受容体抗体（例えば、抗ＳＴ２抗体、例えば、ＡＭＧ−２８２（Ａｍｇｅｎ）若しくはＳＴＬＭ１５（Ｊａｎｓｓｅｎ）、または国際公開第ＷＯ２０１３／１７３７６１号及び同第ＷＯ２０１３／１６５８９４号（それぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載される抗ＳＴ２抗体のいずれか；あるいはＳＴ２−Ｆｃタンパク質、例えば国際公開第ＷＯ２０１３／１７３７６１号、同第ＷＯ２０１３／１６５８９４号、または同第ＷＯ２０１４／１５２１９５号（それぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるもの）；ならびに小分子阻害剤などのＩＬ−３３受容体アンタゴニスト、ＩＬ−３３に結合するアプタマー、及びストリンジェントな条件下でＩＬ−３３軸の核酸配列とハイブリダイズする核酸（例えば、短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）またはクラスター化された等間隔にスペーサーがある短い回文型反復ＲＮＡ（ＣＲＩＳＰＲ−ＲＮＡ若しくはｃｒＲＮＡ）、Ｍａｌｉ ｅｔ ａｌ．（Ｓｃｉｅｎｃｅ．３３９：８２３−２６，２０１３）（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるｃｒＲＮＡ及びｔｒａｃｒＲＮＡ配列を有する一本鎖ガイドＲＮＡ（ｓｇＲＮＡ）を含む）が挙げられる。
本明細書に使用されるとき、「Ｔｈ２細胞に発現される化学誘引物質受容体相同分子（ＣＲＴＨ２）」は、別途示されない限り、霊長類（例えば、ヒト）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源に由来する任意の天然のＣＲＴＨ２を指す。ＣＲＴＨ２はまた、Ｇタンパク質結合型受容体４４（ＧＰＲ４４）、分化クラスター２９４（ＣＤ２９４）、ＤＬ１Ｒ、及びＤＰ２とも称される。この用語は、「全長」のプロセシングされていないＣＲＴＨ２、ならびに細胞内でのプロセシングにより得られるＣＲＴＨ２の任意の形態を包含する。例示的なヒトＣＲＴＨ２のアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９Ｙ５Ｙ４に見出すことができる。
「ＣＲＴＨ２結合アンタゴニスト」という用語は、ＣＲＴＨ２とその結合パートナー（プロスタグランジンＤ２など）のうちの１つ以上との相互作用により生じるシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、またはそれに干渉する分子を指す。当該技術分野で既知の例示的なＣＲＴＨ２結合アンタゴニストとしては、ＡＭＧ−８５３、ＡＰ７６８、ＡＰ−７６１、ＭＬＮ６０９５、及びＡＣＴ１２９９６８が挙げられる。
本明細書に使用される「インターロイキン−５（ＩＬ−５）」と言う用語は、別途示されない限り、霊長類（例えば、ヒト）ならびに齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源に由来する任意の天然のＩＬ−５を指す。この用語は、「全長」のプロセシングされていないＩＬ−５、ならびに細胞内でのプロセシングにより得られるＩＬ−５の任意の形態を包含する。この用語はまた、ＩＬ−５の天然の変異形、例えば、スプライス変異形またはアレル変異形を包含する。例示的なヒトＩＬ−５のアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ０５１１３に見出すことができる。
「ＩＬ−５結合アンタゴニスト」という用語は、ＩＬ−５とその結合パートナー（ＩＬ−５受容体アルファ（ＩＬ５ＲＡ）など）のうちの１つ以上との相互作用により生じるシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、またはそれに干渉する分子を指す。本発明の方法において使用することができる例示的なＩｌ−５結合アンタゴニストとしては、例えば、抗ＩＬ−５抗体（例えば、メポリズマブ及びレスリズマブ）ならびに抗ＩＬ−５Ｒ抗体が挙げられる。
本明細書に使用されるとき、「インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）」は、別途示されない限り、霊長類（例えば、ヒト）ならびに齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源に由来する任意の天然のＩＬ−１３を指す。ＩＬ−１３は、Ｔヘルパー２型（Ｔｈ２）細胞を含む、多数の細胞型により分泌されるサイトカインである。この用語は、「全長」のプロセシングされていないＩＬ−１３、ならびに細胞内でのプロセシングにより得られるＩＬ−１３の任意の形態を包含する。例示的なヒトＩＬ−１３のアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ３５２２５に見出すことができる。
「ＩＬ−１３結合アンタゴニスト」という用語は、ＩＬ−１３とその結合パートナー（ＩＬ−４受容体アルファ（ＩＬ４Ｒα）、ＩＬ−１３受容体アルファ１（ＩＬ１３ＲＡ１）、及びＩＬ−１３受容体アルファ２（ＩＬ１３ＲＡ２）など）のうちの１つ以上との相互作用により生じるシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、またはそれに干渉する分子を指す。ＩＬ−１３結合アンタゴニストとしては、抗ＩＬ−１３抗体、例えば、レブリキズマブ、２２８Ｂ／Ｃ−１、２２８Ａ−４、２２７−２６、及び２２７−４３（例えば、米国特許第７，６７４，４５９号、同第８，０６７，１９９号、同第８，０８８，６１８号、同第８，３１８，１６０号、及び同第８，７３４，７９７号を参照されたい）が挙げられる。
本明細書に使用されるとき、「インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）」は、別途示されない限り、霊長類（例えば、ヒト）ならびに齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源に由来する任意の天然のＩＬ−１７を指し、これには、ファミリーメンバーのＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ、及びＩＬ−１７Ｆが含まれる。この用語は、「全長」のプロセシングされていないＩＬ−１７、ならびに細胞内でのプロセシングにより得られるＩＬ−１７の任意の形態を包含する。例示的なヒトＩＬ−１７Ａのアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ１６５５２に見出すことができる。例示的なヒトＩＬ−１７Ｂのアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９ＵＨＦ５に見出すことができる。例示的なヒトＩＬ−１７Ｃのアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９Ｐ０Ｍ４に見出すことができる。例示的なヒトＩＬ−１７Ｄのアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ８ＴＡＤ２に見出すことができる。例示的なヒトＩＬ−１７Ｅのアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９Ｈ２９３に見出すことができる。例示的なヒトＩＬ−１７Ｆのアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９６ＰＤ４に見出すことができる。
「ＩＬ−１７結合アンタゴニスト」という用語は、ＩＬ−１７とその結合パートナー（ＩＬ−１７受容体（ＩＬ−１７Ｒ）ファミリーメンバーのタンパク質インターロイキン１７受容体Ａ（ＩＬ１７ＲＡ）、インターロイキン１７受容体Ｂ（ＩＬ１７ＲＢ）、インターロイキン１７受容体Ｃ（ＩＬ１７ＲＣ）、インターロイキン１７受容体Ｄ（ＩＬ１７ＲＤ）、インターロイキン１７受容体Ｅ（ＩＬ１７ＲＥ）、及びインターロイキン受容体Ｅ様（ＩＬ１７ＲＥＬ）など）のうちの１つ以上との相互作用により生じるシグナル伝達を減少させる、遮断する、阻害する、抑止する、またはそれに干渉する分子を指す。例示的なＩＬ−１７結合アンタゴニストとしては、例えば、抗ＩＬ−１７抗体（例えば、イクセキズマブ（ＬＹ２４３９８２１）及び抗ＩＬ−１７Ｒ抗体（例えば、ブロダルマブ（ＡＭＧ−８２７））が挙げられる。
「ヤヌスキナーゼ１（ＪＡＫ１）」という用語は、本明細書に使用されるとき、別途示されない限り、霊長類（例えば、ヒト）ならびに齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源に由来する任意の天然のＪＡＫ１を指す。この用語は、「全長」のプロセシングされていないＪＡＫ１、ならびに細胞内でのプロセシングにより得られるＪＡＫ１の任意の形態を包含する。この用語はまた、ＪＡＫ１の天然の変異形、例えば、スプライス変異形またはアレル変異形を包含する。例示的なＪＡＫ１のアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２３４５８に見出すことができる。
「ＪＡＫ１アンタゴニスト」という用語は、本明細書に使用されるとき、ＪＡＫ１の生物学的活性を阻害または低減させる化合物または薬剤を指す。例示的なＪＡＫ１アンタゴニストとしては、小分子阻害剤（例えば、ルキソリチニブ、ＧＬＰＧ０６３４、及びＧＳＫ２５８６１８４）が挙げられる。
「ＳＴ２結合アンタゴニスト」という用語は、ＳＴ２とＩＬ−３３、ＩＬ１ＲＡｃＰ、及び／または第２のＳＴ２分子との相互作用を阻害する分子を指す。ＳＴ２結合アンタゴニストは、ＩＬ−３３結合ドメイン（例えば、ＳＴ２またはＩＬ１ＲＡｃＰタンパク質の全部または一部分）及び多量体形成ドメイン（例えば、免疫グロブリンのＦｃ部分、例えば、アイソタイプｌｇＧ１、ｌｇＧ２、ｌｇＧ３、及びｌｇＧ４、ならびに各アイソタイプ群内の任意のアロタイプから選択されるＩｇＧのＦｃドメイン）を含む、「ＳＴ２−Ｆｃタンパク質」などのタンパク質であり得、これらのドメインは、直接的に、またはリンカー（例えば、セリン−グリシン（ＳＧ）リンカー、グリシン−グリシン（ＧＧ）リンカー、またはそれらの変異形（例えば、ＳＧＧ、ＧＧＳ、ＳＧＳ、若しくはＧＳＧシンカー））を介してのいずれかで互いに結合しており、ＳＴ２結合アンタゴニストとしては、国際公開第ＷＯ２０１３／１７３７６１号、同第ＷＯ２０１３／１６５８９４号、及び同第ＷＯ２０１４／１５２１９５号（それぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるＳＴ２−Ｆｃタンパク質及びそれらの変異形が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、ＳＴ２結合アンタゴニストは、抗ＳＴ２抗体、例えば、ＡＭＧ−２８２（Ａｍｇｅｎ）若しくはＳＴＬＭ１５（Ｊａｎｓｓｅｎ）または国際公開第ＷＯ２０１３／１７３７６１号及び同第ＷＯ２０１３／１６５８９４号に記載される抗ＳＴ２抗体のいずれかであり得る。
本明細書に使用されるとき、「トリプターゼ−ベータ」は、別途示されない限り、霊長類（例えば、ヒト）ならびに齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源に由来する任意の天然のトリプターゼ−ベータを指す。本明細書に使用されるとき、この用語は、トリプターゼ−ベータ１（トリプターゼ−アルファ１もコードするＴＰＳＡＢ１遺伝子によってコードされる）及びトリプターゼ−ベータ２（ＴＰＳＢ２遺伝子によってコードされる）を包含する。この用語は、「全長」のプロセシングされていないトリプターゼ−ベータ、ならびに細胞内でのプロセシングにより得られるトリプターゼ−ベータの任意の形態を包含する。例示的なヒトトリプターゼ−ベータ２のアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ２０２３１に見出すことができる。
「トリプターゼ−ベータアンタゴニスト」という用語は、本明細書に使用されるとき、トリプターゼ−ベータの生物学的活性を阻害または低減させる化合物または薬剤を指す。
本明細書に使用されるとき、「Ｄ因子」は、別途示されない限り、霊長類（例えば、ヒト）ならびに齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源に由来する任意の天然のＤ因子を指す。Ｄ因子は、Ｃ３プロアクティベーター転換酵素、プロパージンＤ因子エステラーゼ、Ｄ因子（補体）、補体Ｄ因子、ＣＦＤ、及びアジプシンとも称される。この用語は、「全長」のプロセシングされていないＤ因子、ならびに細胞内でのプロセシングにより得られるＤ因子の任意の形態を包含する。例示的なヒトＤ因子のアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｐ００７４６に見出すことができる。
「Ｄ因子結合アンタゴニスト」という用語は、本明細書に使用されるとき、Ｄ因子の生物学的活性を阻害または低減させる化合物または薬剤を指す。例示的なＤ因子結合アンタゴニストとしては、例えば、小分子阻害剤及び抗Ｄ因子抗体、例えば、国際公開第ＷＯ２００７／０５６２２７号、同第ＷＯ０１／７０８１８号、及び／または米国公開第２００２／００８１２９３号（それぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載される任意の抗Ｄ因子抗体が挙げられる。一部の実施形態では、抗Ｄ因子抗体は、ＡＴＣＣに寄託されておりＨＢ １２４７６と表記されるハイブリドーマによって産生されるモノクローナル抗体１６６−３２であるか、またはそれに由来する。
「高温要件Ａセリンペプチダーゼ１（Ｈｉｇｈ−ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ Ａ ｓｅｒｉｎｅ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ １）」または「ＨｔｒＡ１」という用語は、本明細書に使用されるとき、別途示されない限り、霊長類（例えば、ヒト）ならびに齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む、任意の脊椎動物源に由来する任意の天然のＨｔｒＡ１を指す。ＨｔｒＡ１はまた、当該技術分野において、ＨｔｒＡセリンペプチダーゼ１、Ｌ５６、及びセリンプロテアーゼ１１としても知られている。この用語は、「全長」のプロセシングされていないＨｔｒＡ１、ならびに細胞内でのプロセシングにより得られるＨｔｒＡ１の任意の形態を包含する。この用語はまた、ＨｔｒＡ１の天然の変異形、例えば、スプライス変異形またはアレル変異形を包含する。例示的なヒトＨｔｒＡ１のアミノ酸配列は、例えば、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ受託番号Ｑ９２７４３に見出すことができる。
本明細書に使用される「ＨｔｒＡ１結合アンタゴニスト」という用語は、ＨｔｒＡ１の生物学的活性を阻害または低減させる化合物または薬剤を指す。例示的なＨｔｒＡ１結合アンタゴニストとしては、例えば、小分子阻害剤及び抗ＨｔｒＡ１抗体、例えば、国際公開第ＷＯ２０１３／０５５９９８号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載される任意のＨｔｒＡ１抗体が挙げられる。
「血管内皮成長因子」または「ＶＥＧＦ」という用語は、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ１５６９２によって例示されるような、血管内皮成長因子タンパク質Ａを指す。「ＶＥＧＦ」という用語は、Ｓｗｉｓｓ Ｐｒｏｔ受託番号Ｐ１５６９２によって例示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、ならびにその相同体及びアイソフォームを包含する。「ＶＥＧＦ」という用語はまた、既知のアイソフォーム、例えば、ＶＥＧＦのスプライスアイソフォーム、例えば、ＶＥＧＦ１１１、ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１４５、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１８９、及びＶＥＧＦ２０６を、それらの天然のアレル形態及びプロセシング形態と共に包含し、これには、Ｆｅｒｒａｒａ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ．２１：６８７（２０１０），Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４６：１３０６（１９８９）及びＨｏｕｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．，５：１８０６（１９９１）に記載されるＶＥＧＦ１６５のプラスミン切断によって生成された１１０個のアミノ酸のヒト血管内皮細胞成長因子が含まれる。「ＶＥＧＦ」という用語はまた、マウス、ラット、または霊長類などの非ヒト種に由来するＶＥＧＦを指す。特定の種に由来するＶＥＧＦは、ヒトＶＥＧＦではｈＶＥＧＦ、マウスＶＥＧＦではｍＶＥＧＦなどの用語によって示される。「ＶＥＧＦ」という用語はまた、１６５個のアミノ酸のヒト血管内皮細胞成長因子のアミノ酸８〜１０９または１〜１０９を含む、ポリペプチドの切断形態を指して使用されることもある。ＶＥＧＦの任意のかかる形態への参照は、本出願では、例えば、「ＶＥＧＦ１０９」、「ＶＥＧＦ（８〜１０９）」、「ＶＥＧＦ（１〜１０９）」、または「ＶＥＧＦ１６５」によって特定することができる。「切断型」天然ＶＥＧＦのアミノ酸位は、天然ＶＥＧＦ配列に示される通りに番号付けされる。例えば、切断型天然ＶＥＧＦでのアミノ酸１７位（メチオニン）は、天然ＶＥＧＦでも１７位（メチオニン）である。切断型天然ＶＥＧＦは、ＫＤＲ及びＦｌｔ−１受容体に対して、天然ＶＥＧＦに匹敵する結合親和性を有する。本明細書に使用される「ＶＥＧＦ変異形」という用語は、天然ＶＥＧＦ配列に１つ以上のアミノ酸変異を含むＶＥＧＦポリペプチドを指す。場合によっては、この１つ以上のアミノ酸変異には、アミノ酸置換（複数可）が含まれる。本明細書に記載されるＶＥＧＦ変異形を簡潔に表記する目的で、数字は、推定上の天然ＶＥＧＦ（Ｌｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．（上記）及びＨｏｕｃｋ ｅｔ ａｌ．（上記）に提供される）のアミノ酸配列に沿ったアミノ酸残基の位置を指す。別途示されない限り、本明細書に使用される「ＶＥＧＦ」は、ＶＥＧＦ−Ａを示す。
「ＶＥＧＦアンタゴニスト」という用語は、本明細書に使用されるとき、ＶＥＧＦに結合すること、ＶＥＧＦ発現レベルを低減させること、または１つ以上のＶＥＧＦ受容体へのＶＥＧＦの結合、ＶＥＧＦのシグナル伝達、ならびにＶＥＧＦに媒介される血管新生及び内皮細胞生存若しくは増殖を含むがこれらに限定されないＶＥＧＦの生物学的活性を中和する、阻害する、抑止する、低減させる、若しくはそれに干渉することが可能な分子を指す。例えば、ＶＥＧＦの生物学的活性を中和する、遮断する、阻害する、抑止する、低減させる、またはそれに干渉することができる分子は、１つ以上のＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、膜結合型ＶＥＧＦ受容体（ｍｂＶＥＧＦＲ）、または可溶性ＶＥＧＦ受容体（ｓＶＥＧＦＲ））に結合することによって、その作用を発揮することができる。ＶＥＧＦに特異的に結合するポリペプチド、抗ＶＥＧＦ抗体及びその抗原結合フラグメント、ＶＥＧＦに特異的に結合し、それによって１つ以上の受容体への結合を封鎖する受容体分子及び誘導体、融合体タンパク質（例えば、ＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ）及びＶＥＧＦ１２１−ゲロニン（Ｐｅｒｅｇｒｉｎｅ）が、本発明の方法において有用なＶＥＧＦアンタゴニストとして含まれる。ＶＥＧＦアンタゴニストにはまた、ＶＥＧＦポリペプチドのアンタゴニスト変異形、ＶＥＧＦポリペプチドをコードする核酸分子の少なくとも１フラグメントに相補的なアンチセンス核酸塩基オリゴマー；ＶＥＧＦポリペプチドをコードする核酸分子の少なくとも１フラグメントに相補的な低分子ＲＮＡ；ＶＥＧＦを標的とするリボザイム；ＶＥＧＦに対するペプチボディ；及びＶＥＧＦアプタマーが含まれる。ＶＥＧＦアンタゴニストにはまた、ＶＥＧＦＲに結合するポリペプチド、抗ＶＥＧＦＲ抗体、及びそれらの抗原結合フラグメント、ならびにＶＥＧＦＲに結合し、それによってＶＥＧＦの生物学的活性（例えば、ＶＥＧＦのシグナル伝達）を遮断する、阻害する、抑止する、低減させる、若しくはそれに干渉する誘導体、または融合体タンパク質が含まれる。ＶＥＧＦアンタゴニストにはまた、ＶＥＧＦまたはＶＥＧＦＲに結合し、ＶＥＧＦの生物学的活性を遮断する、阻害する、抑止する、低減させる、またはそれに干渉することができる、非ペプチド小分子が含まれる。したがって、「ＶＥＧＦ活性」という用語は、ＶＥＧＦに媒介される、ＶＥＧＦの生物学的活性を具体的に含む。ある特定の実施形態では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、ＶＥＧＦの発現レベルまたは生物学的活性を、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上低減または阻害する。一部の実施形態では、ＶＥＧＦ特異的アンタゴニストによって阻害されるＶＥＧＦは、ＶＥＧＦ（８〜１０９）、ＶＥＧＦ（１〜１０９）、またはＶＥＧＦ１６５である。
本明細書に使用されるとき、ＶＥＧＦアンタゴニストとしては、抗ＶＥＧＦＲ２抗体及び関連分子（例えば、ラムシルマブ、タニビルマブ、アフリベルセプト）、抗ＶＥＧＦＲ１抗体及び関連分子（例えば、イクルクマブ、アフリベルセプト（ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ−Ｅｙｅ、ＥＹＬＥＡ（登録商標））、及びジブ−アフリベルセプト（ｚｉｖ−ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ）（ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ、ＺＡＬＴＲＡＰ（登録商標）））、二重特異性ＶＥＧＦ抗体（例えば、ＭＰ−０２５０、バヌシズマブ（ＶＥＧＦ−ＡＮＧ２）、及び米国公開第２００１／０２３６３８８号に開示される二重特異性抗体）、抗ＶＥＧＦ、抗ＶＥＧＦＲ１、及び抗ＶＥＧＦＲ２アームのうちの２つの組み合わせを含む二重特異性抗体、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ベバシズマブ、セバシズマブ、及びラニビズマブ）、ならびに非ペプチド小分子ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、パゾパニブ、アキシチニブ、バンデタニブ、スチバーガ、カボザンチニブ、レンバチニブ、ニンテダニブ、オランチニブ、テラチニブ、ドビチニグ（ｄｏｖｉｔｉｎｉｇ）、セジラニブ、モテサニブ、スルファチニブ、アパチニブ、フォレチニブ、ファミチニブ、及びチボザニブ）を挙げることができるがこれらに限定されない。
「抗ＶＥＧＦ抗体」、「ＶＥＧＦに結合する抗体」、及び「ＶＥＧＦに特異的に結合する抗体」という用語は、抗体が診断剤及び／または治療剤としてＶＥＧＦを標的とすることに有用となるような十分な親和性でＶＥＧＦに結合することができる抗体を指す。一実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体の無関係の非ＶＥＧＦタンパク質への結合の程度は、例えば、放射免疫測定法（ＲＩＡ）によって測定した場合に、この抗体のＶＥＧＦへの結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態では、ＶＥＧＦに結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、異なる種に由来するＶＥＧＦ間で保存されているＶＥＧＦのエピトープに結合する。
ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、治療剤として、ＶＥＧＦ活性が関与する疾患または状態を標的とし、それに干渉するのに使用することができる。また、本抗体は、例えば治療剤の有効性を評価するために、他の生物学的活性アッセイに供してもよい。かかるアッセイは当該技術分野で既知であり、抗体の標的抗原及び意図される使用に依存する。例としては、ＨＵＶＥＣ阻害アッセイ；腫瘍細胞成長阻害アッセイ（例えば、国際公開第ＷＯ８９／０６６９２号に記載される）；抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）及び補体媒介性細胞毒性（ＣＤＣ）アッセイ（米国特許第５，５００，３６２号）；ならびにアゴニスト活性または造血性アッセイ（国際公開第ＷＯ９５／２７０６２号を参照されたい）が挙げられる。抗ＶＥＧＦ抗体は、通常、ＶＥＧＦ−ＢまたはＶＥＧＦ−Ｃなどの他のＶＥＧＦ相同体に結合することも、ＰｌＧＦ、ＰＤＧＦ、またはｂＦＧＦなどの他の成長因子に結合することもない。一実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ハイブリドーマＡＴＣＣ ＨＢ １０７０９によって産生されたモノクローナル抗ＶＥＧＦ抗体Ａ４．６．１と同じエピトープに結合するモノクローナル抗体である。別の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体は、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９に従って生成される組み換えヒト化抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体であり、ベバシズマブ（ＢＶ、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））として知られる抗体が挙げられるがこれに限定されない。
「ｒｈｕＭＡｂ ＶＥＧＦ」または「ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）」としても知られる抗ＶＥＧＦ抗体「ベバシズマブ（ＢＶ）」は、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９に従って生成される組み換えヒト化抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体である。これは、変異型ヒトＩｇＧ１フレームワーク領域及びヒトＶＥＧＦがその受容体に結合するのを阻止するマウス抗ｈＶＥＧＦモノクローナル抗体Ａ．４．６．１由来の抗原結合性の相補性決定領域を含む。フレームワーク領域の大半を含む、ベバシズマブのアミノ酸配列のおよそ９３％が、ヒトＩｇＧ１に由来し、配列の約７％がマウス抗体Ａ４．６．１に由来する。ベバシズマブは、約１４９，０００ダルトンの分子量を有し、グリコシル化されている。ベバシズマブ及び他のヒト化抗ＶＥＧＦ抗体は、更に、２００５年２月２６日に発行された米国特許第６，８８４，８７９号に記載されており、その開示は、参照により明示的に本明細書に組み込まれる。更なる好ましい抗体としては、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００５／０１２３５９号及び同第ＷＯ２００５／０４４８５３号（それぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるＧ６またはＢ２０系統の抗体（例えば、Ｇ６−３１、Ｂ２０−４．１）が挙げられる。更なる好ましい抗体については、米国特許第７，０６０，２６９号、同第６，５８２，９５９号、同第６，７０３，０２０号、同第６，０５４，２９７号；国際公開第ＷＯ９８／４５３３２号、同第ＷＯ９６／３００４６号、同第ＷＯ９４／１０２０２号；欧州特許第０６６６８６８Ｂ１号；米国特許出願公開第２００６００９３６０号、同第２００５０１８６２０８号、同第２００３０２０６８９９号、同第２００３０１９０３１７号、同第２００３０２０３４０９号、及び同第２００５０１１２１２６号；ならびにＰｏｐｋｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８８：１４９−１６４（２００４）を参照されたい。他の好ましい抗体としては、残基Ｆ１７、Ｍ１８、Ｄ１９、Ｙ２１、Ｙ２５、Ｑ８９、１９１、Ｋ１０１、Ｅ１０３、及びＣ１０４、または代替として、残基Ｆ１７、Ｙ２１、Ｑ２２、Ｙ２５、Ｄ６３、１８３、及びＱ８９を含むヒトＶＥＧＦ上の機能的エピトープに結合するものが挙げられる。更なる抗ＶＥＧＦ抗体としては、ＰＣＴ出願公開第ＷＯ２００９／１５５７２４号に記載される抗ＶＥＧＦ抗体が挙げられる。
「ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）」または「ｒｈｕＦａｂ Ｖ２」としても知られる抗ＶＥＧＦ抗体「ラニビズマブ」は、ヒト化された親和性成熟抗ヒトＶＥＧＦ Ｆａｂフラグメントである。ラニビズマブは、大腸菌発現ベクターでの標準的な組み換え技法及び細菌発酵によって産生される。ラニビズマブは、グリコシル化されておらず、約４８，０００ダルトンの分子量を有する。国際公開第ＷＯ９８／４５３３１号及び米国公開第２００３／０１９０３１７号を参照されたい。
「単離核酸」は、核酸分子がその天然環境の構成成分から分離されたものを指す。単離核酸には、核酸分子が、その核酸分子を通常含有する細胞内に含有されたものが含まれるが、この核酸分子は、染色体外に、またはその天然の染色体上の位置とは異なる染色体上の位置に、存在している。
「制御配列」という用語は、特定の宿主生物における、操作可能に連結されたコード配列の発現に必要なＤＮＡ配列を指す。原核生物に適した制御配列には、例えば、プロモーター、場合によってはオペレーター配列、及びリボソーム結合部位が挙げられる。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーを用いることが知られている。
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」という用語は、互換的に使用され、外来性の核酸が導入された細胞を指し、これにはかかる細胞の子孫が含まれる。宿主細胞には、初代形質転換細胞及び継代の数に関わらずそれに由来する子孫を含む、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれる。子孫は、核酸含量において親細胞と完全に同一でない場合があるが、変異を含有し得る。元々形質転換された細胞においてスクリーニング若しくは選択されたものと同じ機能または生物活性を有する変異体子孫が、本明細書に含まれる。
核酸は、それが別の核酸配列と機能的な関係性に置かれているとき、「操作可能に連結」されている。例えば、プレ配列または分泌リーダーのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現する場合、ポリペプチドのＤＮＡと操作可能に連結している、プロモーターまたはエンハンサーは、それがコード配列の転写に影響を及ぼす場合、その配列に操作可能に連結している、あるいはリボソーム結合部位は、それが翻訳を促進するように配置されている場合、コード配列に操作可能に連結されている。一般に、「操作可能に連結」されるとは、連結しているＤＮＡ配列が連続的であること、及び分泌リーダーの場合では連続的であり、かつリーディング相にあることを意味する。しかしながら、エンハンサーは、連続的でなくてもよい。連結は、従来的な制限部位でのライゲーションによって達成される。かかる部位が存在していない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーが、従来的な慣例に従って使用される。
本明細書に特定されるポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、最大の配列同一性パーセントが得られるように、配列をアライメントし、必要に応じてギャップを導入した後に、いずれの保存的置換も配列同一性の一部とは見なさずに、候補配列内のアミノ酸残基が、比較されるポリペプチド内のアミノ酸残基と同一である割合として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを判定する目的のためのアライメントは、当該技術分野における技術の範囲内である様々な手段で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者であれば、比較されている配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含め、アライメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。本明細書における目的では、しかしながら、アミノ酸配列同一性％の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を用いて生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって記述されたものであり、そのソースコードは、ユーザ文書と共に米国著作権庁（Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｏｆｆｉｃｅ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９）に提出されており、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下に登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に利用可能である。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、ＵＮＩＸオペレーティングシステム、好ましくはデジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄで使用する場合はコンパイルすべきである。全ての配列比較パラメーターは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定されており、変更はない。
ＡＬＩＧＮ−２をアミノ酸配列比較に用いる場合、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、それとの、またはそれと対比した、所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（代替的に、所与のアミノ酸配列Ｂに対して、それと、またはそれと対比して、ある特定のアミノ酸配列同一性％を有する、またはそれを含む、所与のアミノ酸配列Ａと表現され得る）は、次のように計算される：
１００×分数Ｘ／Ｙ
式中、Ｘは、配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって、そのプログラムのＡとＢとのアライメントにおいて完全一致としてスコア付けされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂに含まれるアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、Ｂに対するＡのアミノ酸配列同一性％は、Ａに対するＢのアミノ酸配列同一性％とは等しくならないことが理解されよう。別途具体的に示されない限り、本明細書に使用される全てのアミノ酸配列同一性％の値は、直前の段落に記載されるように、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して得られたものである。
本明細書に記載されるアミノ酸配列は、別途示されない限り、連続的なアミノ酸配列である。
「添付文書」という用語は、治療用製品の商用パッケーに内に通例含まれている指示書を指して使用され、かかる治療用製品の適応症、試料法、投薬量、投与法、併用療法、禁忌症、及び／またはその使用に関する警告を含んでいる。
「薬学的組成物」という用語は、調製物中に含有される活性成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、かつその製剤が投与されるであろう対象にとって許容できないほどに有毒である追加の構成成分を全く含有しない、調製物を指す。
「薬学的に許容される担体」は、対象にとって無毒である、薬学的製剤中の活性成分以外の成分を指す。薬学的に許容される担体には、緩衝液、賦形剤、安定剤、または保存剤が含まれるがこれらに限定されない。
本出願に使用される「プロドラッグ」という用語は、親薬物と比較すると腫瘍細胞に対して細胞毒性が低く、酵素によってより活性な親形態へと活性化または変換され得る、薬学的に活性な物質の前駆体または誘導体形態を指す。例えば、Ｗｉｌｍａｎ，“Ｐｒｏｄｒｕｇｓ ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ” Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ，１４，ｐｐ．３７５−３８２，６１５ｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ Ｂｅｌｆａｓｔ（１９８６）及びＳｔｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．“Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，”Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ ｅｔ ａｌ．（ｅｄ．），ｐｐ．２４７−２６７，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（１９８５）を参照されたい。本発明のプロドラッグとしては、ホスフェート含有プロドラッグ、チオホスフェート含有プロドラッグ、スルフェート含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄアミノ酸修飾プロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、β−ラクタム含有プロドラッグ、任意に置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグまたは任意に置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、５−フルオロシトシン及び他の５−フルオロウリジンプロドラッグが挙げられるがこれらに限定されず、これらは、より活性な細胞毒性遊離薬物へと変換され得る。本発明において使用するためのプロドラッグ形態に誘導体化することができる細胞毒性薬の例としては、上述の化学療法剤が挙げられるがこれらに限定されない。
「低減または阻害」とは、２０％以上、より好ましくは５０％以上、最も好ましくは７５％、８５％、９０％、９５％、またはそれ以上の全体的な減少を引き起こす能力を指す。低減または阻害は、治療されている障害の症状、転移の存在またはサイズ、原発腫瘍のサイズに対して言及し得る。
「対象」は、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。哺乳動物には、家畜動物（ウシ及びヒツジなど）、競技用動物、愛玩動物（ネコ、イヌ、及びウマなど）、霊長類（例えば、ヒト、及びサルなどの非ヒト霊長類）、ならびに齧歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるがこれらに限定されない。
「治療有効量」という用語は、対象における疾患または障害を治療するための抗体または抗体フラグメントの量を指す。ＩＬ−３３媒介性障害の場合、治療有効量の抗体または抗体フラグメント（例えば、抗ＩＬ−３３抗体（ＩＬ−３３に結合する及び第２の生物学的分子、例えばＩＬ−１３に結合する二重特異性ＩＬ−３３抗体、例えば二重特異性抗ＩＬ−３３／抗ＩＬ−１３抗体を含む））により、疾患の緩和若しくは治療、または疾患と関連する症状の予防、低減、緩和、若しくは治療を行うことができる。増殖性疾患（例えば、固形腫瘍）の場合、治療有効量の抗体または抗体フラグメントにより、がん細胞の数の低減；原発腫瘍サイズの低減；がん細胞が末梢器官に浸潤することの阻害（すなわち、ある程度の遅延及び好ましくは停止）；腫瘍転移の阻害（すなわち、ある程度の遅延及び好ましくは停止）；腫瘍成長のある程度の阻害；ならびに／または障害と関連する症状のうちの１つ以上のある程度の軽減を行うことができる。抗体または抗体フラグメントが既存のがん細胞の成長の防止及び／またはそれらの殺滅を行うことができる限り、それは、細胞増殖抑制性及び／または細胞毒性であり得る。がん療法については、インビボでの有効性は、例えば、生存の期間、疾患進行に対する時間（ＴＴＰ）、無病生存期間（ＤＦＳ）、無憎悪生存期間（ＰＦＳ）、応答率（ＲＲ）、応答期間、及び／または生活の質を評価することによって測定することができる。
本明細書に使用されるとき、「治療」（及び「治療する」または「治療すること」など、その文法上の変化形）は、治療されている個体の自然経過を変化させることを目的として臨床介入を指し、これは、予防目的または臨床病理過程で行われ得る。望ましい治療効果としては、疾患の発生または再発の防止、症状の緩和、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減少、転移の防止、疾患進行速度の低減、疾患状態の回復または一時緩和、及び寛解または予後の改善が挙げられるがこれらに限定されない。一部の実施形態では、本発明の抗体は、疾患の発症を遅延させるため、または疾患の進行を遅延させるために用いられる。患者は、例えば、喘息治療法を受けた後に、その患者が以下の：繰り返す喘鳴、呼吸困難、胸部絞扼感、夜間に発生または悪化する症状、冷気、運動、またはアレルゲンへの曝露によって誘発される症状のうちの１つ以上において、観測できる及び／または測定できるほどの低減または不在を示した場合に、喘息の「治療」が成功したことになり得る。
「腫瘍」は、本明細書に使用されるとき、悪性または良性に関わらず、あらゆる腫瘍性の細胞成長及び増殖、ならびにあらゆる前がん性及びがん性の細胞及び組織を指す。
「ベクター」という用語は、本明細書に使用されるとき、ある核酸分子が、結合している別の核酸分子を輸送することができるものを指す。ベクターの一種には「プラスミド」があり、これは、追加のＤＮＡセグメントがライゲーションされ得る円形の二本鎖ＤＮＡループを指す。別の種類のベクターにはファージベクターがある。別の種類のベクターにはウイルスベクターがあり、ここでは、追加のＤＮＡセグメントがウイルスゲノムにライゲーションされ得る。ある特定のベクターは、それらが導入された宿主細胞において自律的複製を行うことができる（例えば、細菌の複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳動物ベクター）。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳動物ベクター）は、宿主細胞へ導入されると宿主細胞のゲノムに組み込まれ得、それによって宿主細胞と共に複製され得る。更に、ある特定のベクターは、操作可能に連結されている遺伝子の発現を導くことができる。かかるベクターは、本明細書において「組み換え発現ベクター」（または単純に「組み換えベクター」若しくは「発現ベクター」）と称される。一般に、組み換えＤＮＡ技法において有用である発現ベクターは、プラスミドの形態であることが多い。本明細書では、「プラスミド」及び「ベクター」は、互換的に使用され得る。
ＩＩ．組成物及び方法
一態様において、本発明は、ＩＬ−３３に結合する新規な抗体に部分的に基づく。本発明の抗体は、例えば、ＩＬ−３３媒介性障害の診断及び／または治療に有用である。
Ａ．例示的な抗ＩＬ−３３抗体
本発明は、ＩＬ−３３に結合する単離抗体を提供する。ある特定の実施形態において、本発明のＩＬ−３３抗体は、ヒト及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）の両方のＩＬ−３３に、１００ｎＭ以下（例えば、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、１００ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、０．１ｐＭ以下）のＫＤで特異的に結合する。一部の事例において、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、１ｎＭ以下（例えば、１ｎｍ以下、１００ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＫＤで特異的に結合する。例えば、一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、１００ｆＭ〜１ｎＭのＫＤで特異的に結合する。一部の事例において、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、１ｎＭ以下（例えば、１ｎｍ以下、１００ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＫＤで特異的に結合する。例えば、一部の事例では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、１００ｆＭ〜１ｎＭのＫＤで特異的に結合する。ある特定の事例において、本抗体は、ヒト及びカニクイザル両方のＩＬ−３３に、１ｎＭ以下（例えば、１ｎｍ以下、１００ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下）のＫＤで特異的に結合する。例えば、一部の事例では、本抗体は、ヒト及びカニクイザルの両方のＩＬ−３３に、１ｐＭ〜５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、１ｐＭ〜１０ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の事例では、本抗体は、マウスＩＬ−３３には特異的に結合しない。
例えば、一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約１ｎＭ（例えば、約１ｐＭ〜約９００ｐＭ、約１ｐＭ〜約８００ｐＭ、約１ｐＭ〜約７００ｐＭ、約１ｐＭ〜約６００ｐＭ、約１ｐＭ〜約５００ｐＭ、約１ｐＭ〜約４００ｐＭ、約１ｐＭ〜約３００ｐＭ、約１ｐＭ〜約２００ｐＭ、約１ｐＭ〜約１９０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１８０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１７０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１６０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１４０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１３０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１２０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１１０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１００ｐＭ、約１ｐＭ〜約９０ｐＭ、約１ｐＭ〜約８０ｐＭ、約１ｐＭ〜約７０ｐＭ、約１ｐＭ〜約６０ｐＭ、約１ｐＭ〜約５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約４０ｐＭ、約１ｐＭ〜約３０ｐＭ、約１ｐＭ〜約２０ｐＭ、または約１ｐＭ〜約１０ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する。一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約２５０ｐＭ（例えば、約１ｐＭ〜約２５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約２２５ｐＭ、約１ｐＭ〜約２００ｐＭ、約１ｐＭ〜約１９０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１８０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１７０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１６０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１４０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１３０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１２０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１１０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１００ｐＭ、約１ｐＭ〜約９０ｐＭ、約１ｐＭ〜約８０ｐＭ、約１ｐＭ〜約７０ｐＭ、約１ｐＭ〜約６０ｐＭ、約１ｐＭ〜約５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約４０ｐＭ、約１ｐＭ〜約３０ｐＭ、約１ｐＭ〜約２０ｐＭ、または約１ｐＭ〜約１０ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する。一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約５０ｐＭ〜約１８０ｐＭ（例えば、約５０ｐＭ、約６０ｐＭ、約７０ｐＭ、約８０ｐＭ、約９０ｐＭ、約１００ｐＭ、約１１０ｐＭ、約１２０ｐＭ、約１３０ｐＭ、約１４０ｐＭ、約１５０ｐＭ、約１６０ｐＭ、または約１８０ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、前述のＫＤの値のいずれも、例えば本明細書に記載されるように（例えば、実施例２の節Ｄ及び実施例８の節Ｅを含む、実施例を参照されたい）、表面プラズモン共鳴によって判定され得る。
一部の事例において、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、２５℃において約４００ｐＭのＫＤで特異的に結合する。例えば、一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、２５℃において、約３９０ｐＭ以下、約３８０ｐＭ以下、約３７５ｐＭ以下、約３５０ｐＭ以下、約３２５ｐＭ以下、約３００ｐＭ以下、約２７５ｐＭ以下、約２５０ｐＭ以下、約２５０ｐＭ以下、約２２５ｐＭ以下、約２００ｐＭ以下、約１７５ｐＭ以下、約１５０ｐＭ以下、約１３０ｐＭ以下、約１２５ｐＭ以下、約１００ｐＭ以下、約７５ｐＭ以下、約５０ｐＭ以下、または約２５ｐＭ以下のＫＤで特異的に結合する。一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、２５℃において、約２０ｐＭ〜約１５０ｐＭ（例えば、約２０ｐＭ、約３０ｐＭ、約４０ｐＭ、約５０ｐＭ、約６０ｐＭ、約７０ｐＭ、約８０ｐＭ、約９０ｐＭ、約１００ｐＭ、約１１０ｐＭ、約１２０ｐＭ、約１３０ｐＭ、約１４０ｐＭ、または約１５０ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する。一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、２５℃において約１３０ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、前述のＫＤの値のいずれも、例えば本明細書に記載されるように（例えば、実施例２の節Ｄ及び実施例８の節Ｅを含む、実施例を参照されたい）、表面プラズモン共鳴によって判定され得る。
一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、３７℃で約２００ｐＭ以下のＫＤで特異的に結合する。例えば、一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、３７℃において、約１９０ｐＭ以下、約１８０ｐＭ以下、約１７５ｐＭ以下、約１５０ｐＭ以下、約１３０ｐＭ以下、約１２５ｐＭ以下、約１００ｐＭ以下、約９０ｐＭ以下、約８０ｐＭ以下、約７５ｐＭ以下、約５０ｐＭ以下、または約２５ｐＭ以下のＫＤで特異的に結合する。一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、３７℃において、約２０ｐＭ〜約１００ｐＭ（例えば、約２０ｐＭ、約３０ｐＭ、約４０ｐＭ、約５０ｐＭ、約６０ｐＭ、約７０ｐＭ、約８０ｐＭ、約９０ｐＭ、または約１００ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する。一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に、３７℃において、約９０ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、前述のＫＤの値のいずれも、例えば本明細書に記載されるように（例えば、実施例２の節Ｄ及び実施例８の節Ｅを含む、実施例を参照されたい）、表面プラズモン共鳴によって判定され得る。
一部の事例では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約１ｎＭ（例えば、約１ｐＭ〜約９００ｐＭ、約１ｐＭ〜約８００ｐＭ、約１ｐＭ〜約７００ｐＭ、約１ｐＭ〜約６００ｐＭ、約１ｐＭ〜約５００ｐＭ、約１ｐＭ〜約４００ｐＭ、約１ｐＭ〜約３００ｐＭ、約１ｐＭ〜約２００ｐＭ、約１ｐＭ〜約１９０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１８０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１７０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１６０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１４０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１３０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１２０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１１０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１００ｐＭ、約１ｐＭ〜約９０ｐＭ、約１ｐＭ〜約８０ｐＭ、約１ｐＭ〜約７０ｐＭ、約１ｐＭ〜約６０ｐＭ、約１ｐＭ〜約５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約４０ｐＭ、約１ｐＭ〜約３０ｐＭ、約１ｐＭ〜約２０ｐＭ、または約１ｐＭ〜約１０ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する。一部の事例では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、約１００ｐＭ〜約７５０ｐＭ（例えば、約１００ｐＭ〜約７５０ｐＭ、約２００ｐＭ〜約７５０ｐＭ、約２２５ｐＭ〜約７５０ｐＭ、約２５０ｐＭ〜約７５０ｐＭ、約２６５ｐＭ〜約７５０ｐＭ、約２７５ｐＭ〜約７５０ｐＭ、約３００ｐＭ〜約７５０ｐＭ、約３２５ｐＭ〜約７５０ｐＭ、約３５０ｐＭ〜約７５０ｐＭ、約３７５ｐＭ〜約７５０ｐＭ、約４００ｐＭ〜約７５０ｐＭ、約４２５ｐＭ〜約７５０ｐＭ、約４５０ｐＭ〜約７５０ｐＭ、約４７５ｐＭ〜約７５０ｐＭ、約５００ｐＭ〜約７５０ｐＭ、約５２５ｐＭ〜約７５０ｐＭ、約５５０ｐＭ〜約７５０ｐＭ、約５７５ｐＭ〜約７５０ｐＭ、約６００ｐＭ〜約７５０ｐＭ、約６５０ｐＭ〜約７５０ｐＭ、または約２５０ｐＭ〜約６５０ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、前述のＫＤの値のいずれも、例えば本明細書に記載されるように（例えば、実施例２の節Ｄ及び実施例８の節Ｅを含む、実施例を参照されたい）、表面プラズモン共鳴によって判定され得る。
例えば、一部の事例では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、２５℃において、約６５０ｐＭ以下のＫＤで特異的に結合する。例えば、一部の事例では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、２５℃において、約６５０ｐＭ以下、約６２５ｐＭ以下、約６００ｐＭ以下、約５７５ｐＭ以下、約５５０ｐＭ以下、約５２５ｐＭ以下、約５００ｐＭ以下、約４７５ｐＭ以下、約４５０ｐＭ以下、約４２５ｐＭ以下、約４００ｐＭ以下、約３７５ｐＭ以下、約３５０ｐＭ以下、約３２５ｐＭ以下、約３００ｐＭ以下、約２７５ｐＭ以下、約２６５ｐＭ以下、約２５０ｐＭ以下、約２２５ｐＭ以下、約２００ｐＭ以下、約１７５ｐＭ以下、約１５０ｐＭ以下、約１２５ｐＭ以下、約１００ｐＭ以下、約７５ｐＭ以下、約５０ｐＭ以下、または約２５ｐＭ以下のＫＤで特異的に結合する。一部の事例では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、２５℃において、約１５０ｐＭ〜約５００ｐＭ（例えば、約１５０ｐＭ、約１７５ｐＭ、約２００ｐＭ、約２２５ｐＭ、約２５０ｐＭ、約２６５ｐＭ、約２７５ｐＭ、約３００ｐＭ、約３２５ｐＭ、約３５０ｐＭ、約３７５ｐＭ、約４００ｐＭ、約４２５ｐＭ、約４５０ｐＭ、約４７５ｐＭ、または約５００ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する。一部の事例では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、２５℃において、約２６５ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、前述のＫＤの値のいずれも、例えば本明細書に記載されるように（例えば、実施例２の節Ｄ及び実施例８の節Ｅを含む、実施例を参照されたい）、表面プラズモン共鳴によって判定され得る。
一部の事例では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、３７℃において約１ｎＭのＫＤで特異的に結合する。例えば、一部の事例では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、３７℃において、約１ｎＭ以下、約９５０ｐＭ以下、約９００ｐＭ以下、約８５０ｐＭ以下、約８００ｐＭ以下、約７５０ｐＭ以下、約７００ｐＭ以下、約６５０ｐＭ以下、約６００ｐＭ以下、約５５０ｐＭ以下、約５２５ｐＭ以下、約５００ｐＭ以下、約４７５ｐＭ以下、約４５０ｐＭ以下、約４２５ｐＭ以下、約４００ｐＭ以下、約３５０ｐＭ以下、約３００ｐＭ以下、約２５０ｐＭ以下、約２００ｐＭ以下、約１５０ｐＭ以下、約１００ｐＭ以下、または約５０ｐＭ以下のＫＤで特異的に結合する。一部の事例では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、３７℃において、約２５０ｐＭ〜約７５０ｐＭ（例えば、約２５０ｐＭ、約２７５ｐＭ、約３００ｐＭ、約３２５ｐＭ、約３５０ｐＭ、約３７５ｐＭ、約４００ｐＭ、約４２５ｐＭ、約４５０ｐＭ、約４７５ｐＭ、約５００ｐＭ、約５２５ｐＭ、約５５０ｐＭ、約５７５ｐＭ、約６００ｐＭ、約６２５ｐＭ、約６５０ｐＭ、約６７５ｐＭ、約７００ｐＭ、約７２５ｐＭ、または約７５０ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する。一部の事例では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、３７℃において約４７５ｐＭのＫＤで特異的に結合する。一部の実施形態では、前述のＫＤの値のいずれも、例えば本明細書に記載されるように（例えば、実施例２の節Ｄ及び実施例８の節Ｅを含む、実施例を参照されたい）、表面プラズモン共鳴によって判定され得る。一部の実施形態では、本発明の抗ＩＬ−３３抗体は、ＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を阻害することができる。一部の実施形態では、阻害は、細胞に基づく遮断アッセイを用いて測定される。一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約０．０００１μｇ／ｍｌ〜約１μｇ／ｍｌ（例えば、約０．００１μｇ／ｍｌ〜約０．５μｇ／ｍｌ）の９０％阻害濃度（ＩＣ９０）で阻害する。一部の実施形態では、ＩＣ９０は、約０．００２μｇ／ｍｌ〜約０．２５μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ＩＣ９０は、約０．１７μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ＩＣ９０は、約０．００４μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ＩＣ９０は、約０．００３μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ＩＣ９０は、約０．００２μｇ／ｍｌである。一部の実施形態では、ＩＣ９０は、約０．００１μｇ／ｍｌである。
一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体の結合を、約７５０ｆＭ〜約２５０ｐＭ（例えば、約７５０ｆＭ〜約２５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約２５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１００ｐＭ、約１ｐＭ〜約５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１０ｐＭ、または約１ｐＭ〜約５ｐＭ）の半数阻害濃度（ＩＣ５０）で阻害する。一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約１０ｐＭ以下（例えば、約１０ｐＭ以下、約９ｐＭ以下、約８ｐＭ以下、約７ｐＭ以下、約６ｐＭ以下、約５ｐＭ以下、約４ｐＭ以下、約３ｐＭ以下、約２．５ｐＭ以下、約２ｐＭ以下、約１ｐＭ以下、約９００ｆＭ以下、約８００ｆＭ以下、または約７５０ｆＭ以下）のＩＣ５０で阻害する。一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３〜ＩＬ−３３受容体との結合を、約２．４ｐＭのＩＣ５０で阻害する。一部の事例では、阻害は、例えば実施例８の節Ｂに記載されるように、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞を用いた細胞に基づく遮断アッセイを使用して測定される。
一部の事例では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ（例えば、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ、約１ｎＭ〜約９ｎＭ、約１ｎＭ〜約８ｎＭ、約１ｎＭ〜約７ｎＭ、約１ｎＭ〜約６ｎＭ、約１ｎＭ〜約５ｎＭ、約１ｎＭ〜約４ｎＭ、または約１ｎＭ〜約３ｎＭ）のＩＣ５０で阻害する。一部の事例では、本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３〜ＩＬ−３３受容体との結合を、約４．２ｎＭのＩＣ５０で阻害する。一部の事例では、阻害は、例えば実施例８の節Ｂに記載されるように、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞を用いた細胞に基づく遮断アッセイを使用して測定される。
一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３及びＩＬ−１２に媒介される、ヒトナチュラルキラー（ＮＫ）細胞からのＴＮＦ−αの誘導を阻害する。例えば、一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３及びＩＬ−１２に媒介されるヒトＮＫ細胞からのＴＮＦ−αの誘導を、約１ｐＭ〜約２００ｐＭ（例えば、約１ｐＭ〜約２００ｐＭ、約１ｐＭ〜約１７５ｐＭ、約１ｐＭ〜約１５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１２５ｐＭ、約１ｐＭ〜約１００ｐＭ、約１ｐＭ〜約７５ｐＭ、約１ｐＭ〜約５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約３０ｐＭ、または約１ｐＭ〜約２５ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３及びＩＬ−１２に媒介されるヒトＮＫ細胞からのＴＮＦ−αの誘導を、約１００ｐＭ以下、例えば、１００ｐＭ以下、７５ｐＭ以下、５０ｐＭ以下、３０ｐＭ以下、または２５ｐＭ以下のＩＣ５０で阻害する。一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３及びＩＬ−１２に媒介されるヒトＮＫ細胞からのＴＮＦ−αの誘導を約３０ｐＭのＩＣ５０で阻害する。一部の事例では、阻害は、例えば実施例８の節Ｃに記載されるように、ＮＫ初代細胞アッセイを用いて測定される。
一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に媒介されるヒト好塩基球におけるｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）リン酸化の誘導を阻害する。例えば、一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３に媒介されるヒト好塩基球におけるｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）リン酸化の誘導を、約１ｐＭ以下（例えば、１ｐＭ以下、０．７５ｐＭ以下、０．５ｐＭ以下、０．２５ｐＭ以下、０．１５ｐＭ以下、０．１ｐＭ以下、または０．０５ｐＭ以下）のＩＣ５０で阻害する。一部の事例では、本抗体は、ヒトＩＬ−３３媒介されるヒト好塩基球におけるｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）リン酸化の誘導を、約０．１５ｐＭのＩＣ５０で阻害する。一部の事例では、阻害は、例えば実施例８の節Ｄに記載されるように、好塩基球初代細胞アッセイを用いて測定される。
一部の事例では、本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を阻害する。一部の事例では、本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約１ｐＭ〜約２００ｐＭ（例えば、約１ｐＭ〜約２００ｐＭ、約１ｐＭ〜約１７５ｐＭ、約１ｐＭ〜約１５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１２５ｐＭ、約１ｐＭ〜約１００ｐＭ、約１ｐＭ〜約７５ｐＭ、約１ｐＭ〜約６０ｐＭ、約１ｐＭ〜約５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約２５ｐＭ、約１０ｐＭ〜約６０ｐＭ、約１０ｐＭ〜約５０ｐＭ、または約２０ｐＭ〜約５０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。一部の事例では、本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約２１ｐＭのＩＣ５０で阻害する。一部の事例では、阻害は、例えば実施例８の節Ｆに記載されるように、競合的結合ＥＬＩＳＡを用いて測定される。
一部の事例では、本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を阻害する。一部の事例では、本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約１ｐＭ〜約２０ｎＭ（例えば、約１ｐＭ〜約２０ｎＭ、約１ｐＭ〜約１５ｎＭ、約１ｐＭ〜約１０ｎＭ、約１ｐＭ〜約５ｎＭ、約１ｐＭ〜約１ｎＭ、約１ｐＭ〜約８００ｐＭ、約１ｐＭ〜約６００ｐＭ、約１ｐＭ〜約５００ｐＭ、約１ｎＭ〜約４００ｐＭ、約１ｎＭ〜約３００ｐＭ、約２００ｐＭ〜約１ｎＭ、約２００ｐＭ〜約８００ｐＭ、約２００ｐＭ〜約６００ｐＭ、約２００ｐＭ〜約５００ｐＭ、約３００ｐＭ〜約６００ｐＭ、または約３００ｐＭ〜約５００ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。一部の事例では、本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約１ｎＭ以下、例えば、約１ｎＭ以下、約８００ｐＭ以下、約６００ｐＭ以下、約５００ｐＭ以下、約４３０ｐＭ以下、約４００ｐＭ以下、または約３００ｐＭ以下のＩＣ５０で阻害する。一部の事例では、本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約４３０ｐＭのＩＣ５０で阻害する。一部の事例では、阻害は、例えば実施例８の節Ｆに記載されるように、競合的結合ＥＬＩＳＡを用いて測定される。
一部の事例では、本明細書に記載される（例えば、前述または後述の）抗ＩＬ−３３抗体はいずれも、以下の特徴のうちの１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、または８つ）を有し得る：（ｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３に約１ｐＭ〜約１ｎＭのＫＤで特異的に結合する；（ｉｉ）本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に約１ｐＭ〜約１ｎＭのＫＤで特異的に結合する；（ｉｉｉ）本抗体は、例えばＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞を用いた細胞に基づく遮断アッセイにおいて、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体（例えば、ＳＴ２及び／またはＩＬ−１ＲＡｃＰ）との結合を約７５０ｆＭ〜約２５０ｐＭのＩＣ５０で阻害する；（ｉｖ）本抗体は、例えばＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞を用いた細胞に基づく遮断アッセイにおいて、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体（例えば、ＳＴ２及び／またはＩＬ−１ＲＡｃＰ）との結合を約１ｎＭ〜約１０ｎＭのＩＣ５０で阻害する；（ｖ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３及びＩＬ−１２に媒介されるヒトＮＫ細胞からのＴＮＦ−αの誘導を約１ｐＭ〜約２００ｐＭのＩＣ５０で阻害する；（ｖｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３に媒介されるヒト好塩基球におけるｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）リン酸化の誘導を約１ｐＭ以下のＩＣ５０で遮断する；（ｖｉｉ）本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいてヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体（例えば、ＳＴ２及び／またはＩＬ−１ＲＡｃＰ）との結合を約１ｐＭ〜約２００ｐＭのＩＣ５０で阻害する；ならびに／あるいは（ｖｉｉｉ）本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいてカニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体（例えば、ＳＴ２及び／またはＩＬ−１ＲＡｃＰ）との結合を約１ｐＭ〜約２０ｎＭのＩＣ５０で阻害する。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のいずれかは、前述の特徴のうちの１つを有し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のいずれかは、前述の特徴のうちの２つを有し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のいずれかは、前述の特徴のうちの３つを有し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のいずれかは、前述の特徴のうちの４つを有し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のいずれかは、前述の特徴のうちの５つを有し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のいずれかは、前述の特徴のうちの６つを有し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のいずれかは、前述の特徴のうちの７つを有し得る。一部の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のいずれかは、前述の特徴のうちの８つを有し得る。
例えば、一部の事例では、本明細書に記載されるＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３に約１ｐＭ〜約１ｎＭ（例えば、約１５ｐＭ〜約１８０ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する；及び（ｉｉ）本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に約１ｐＭ〜約１ｎＭ（例えば、約１００ｐＭ〜約５００ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する。
別の例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３に約１ｐＭ〜約１ｎＭ（例えば、約１５ｐＭ〜約１８０ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する；及び（ｉｉ）本抗体は、例えばＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞を用いた細胞に基づく遮断アッセイにおいて、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約７５０ｆＭ〜約２５０ｐＭ（例えば、約８００ｆＭ〜約１０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。
別の例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３に約１ｐＭ〜約１ｎＭ（例えば、約１５ｐＭ〜約１８０ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する；及び（ｉｉ）本抗体は、例えばＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞を用いた細胞に基づく遮断アッセイにおいて、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ（例えば、約１ｎＭ〜約５ｎＭ）のＩＣ５０で阻害する。
更に別の例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３に約１ｐＭ〜約１ｎＭ（例えば、約１５ｐＭ〜約１８０ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する；及び（ｉｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３及びＩＬ−１２に媒介されるヒトＮＫ細胞からのＴＮＦ−αの誘導を約１ｐＭ〜約２００ｐＭ（例えば、約１ｐＭ〜約８０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。
更なる例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３に約１ｐＭ〜約１ｎＭ（例えば、約１５ｐＭ〜約１８０ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する；及び（ｉｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３に媒介されるヒト好塩基球におけるｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）リン酸化の誘導を約１ｐＭ以下（例えば、約０．０５ｐＭ〜約０．５ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。
なおも更なる例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３に約１ｐＭ〜約１ｎＭ（例えば、約１５ｐＭ〜約１８０ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する；及び（ｉｉ）本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を約１ｐＭ〜約２００ｐＭ（例えば、約１ｐＭ〜約５０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。
別の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３に約１ｐＭ〜約１ｎＭ（例えば、約１５ｐＭ〜約１８０ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する；及び（ｉｉ）本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を約１ｐＭ〜約２０ｎＭ（例えば、約２００ｐＭ〜約１ｎＭ）のＩＣ５０で阻害する。
別の例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に約１ｐＭ〜約１ｎＭ（例えば、約１００ｐＭ〜約５００ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する；及び（ｉｉ）本抗体は、例えばＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞を用いた細胞に基づく遮断アッセイにおいて、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約７５０ｆＭ〜約２５０ｐＭ（例えば、約８００ｆＭ〜約１０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。
更に別の例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に約１ｐＭ〜約１ｎＭ（例えば、約１００ｐＭ〜約５００ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する；及び（ｉｉ）本抗体は、例えばＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞を用いた細胞に基づく遮断アッセイにおいて、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ（例えば、約１ｎＭ〜約５ｎＭ）のＩＣ５０で阻害する。別の例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に約１ｐＭ〜約１ｎＭ（例えば、約１００ｐＭ〜約５００ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する；及び（ｉｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３及びＩＬ−１２に媒介されるヒトＮＫ細胞からのＴＮＦ−αの誘導を約１ｐＭ〜約２００ｐＭ（例えば、約１ｐＭ〜約８０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。
更なる例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に約１ｐＭ〜約１ｎＭ（例えば、約１００ｐＭ〜約５００ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する；及び（ｉｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３に媒介されるヒト好塩基球におけるｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）リン酸化の誘導を約１ｐＭ以下（例えば、約０．０５ｐＭ〜約０．５ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。
なおも更なる例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に約１ｐＭ〜約１ｎＭ（例えば、約１００ｐＭ〜約５００ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する；及び（ｉｉ）本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を約１ｐＭ〜約２００ｐＭ（例えば、約１ｐＭ〜約５０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。
別の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に約１ｐＭ〜約１ｎＭ（例えば、約１００ｐＭ〜約５００ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する；及び（ｉｉ）本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を約１ｐＭ〜約２０ｎＭ（例えば、約２００ｐＭ〜約１ｎＭ）のＩＣ５０で阻害する。
更なる例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、例えば、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞を用いた細胞に基づく遮断アッセイにおいて、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約７５０ｆＭ〜約２５０ｐＭ（例えば、約８００ｆＭ〜約１０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する；及び（ｉｉ）本抗体は、例えばＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞を用いた細胞に基づく遮断アッセイにおいて、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ（例えば、約１ｎＭ〜約５ｎＭ）のＩＣ５０で阻害する。
なおも更なる例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、例えば、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞を用いた細胞に基づく遮断アッセイにおいて、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約７５０ｆＭ〜約２５０ｐＭ（例えば、約８００ｆＭ〜約１０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する；及び（ｉｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３及びＩＬ−１２に媒介されるヒトＮＫ細胞からのＴＮＦ−αの誘導を約１ｐＭ〜約２００ｐＭ（例えば、約１ｐＭ〜約８０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。
別の例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、例えば、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞を用いた細胞に基づく遮断アッセイにおいて、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約７５０ｆＭ〜約２５０ｐＭ（例えば、約８００ｆＭ〜約１０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する；及び（ｉｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３に媒介されるヒト好塩基球におけるｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）リン酸化の誘導を約１ｐＭ以下（例えば、約０．０５ｐＭ〜約０．５ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。
更に別の例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、例えば、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞を用いた細胞に基づく遮断アッセイにおいて、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約７５０ｆＭ〜約２５０ｐＭ（例えば、約８００ｆＭ〜約１０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する；及び（ｉｉ）本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を約１ｐＭ〜約２００ｐＭ（例えば、約１ｐＭ〜約５０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。
別の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、例えば、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞を用いた細胞に基づく遮断アッセイにおいて、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約７５０ｆＭ〜約２５０ｐＭ（例えば、約８００ｆＭ〜約１０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する）；及び（ｉｉ）本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を約１ｐＭ〜約２０ｎＭ（例えば、約２００ｐＭ〜約１ｎＭ）のＩＣ５０で阻害する。
更なる例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、例えば、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞を用いた細胞に基づく遮断アッセイにおいて、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ（例えば、約１ｎＭ〜約５ｎＭ）のＩＣ５０で阻害する；及び（ｉｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３及びＩＬ−１２に媒介されるヒトＮＫ細胞からのＴＮＦ−αの誘導を約１ｐＭ〜約２００ｐＭ（例えば、約１ｐＭ〜約８０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。
なおも更なる例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、例えば、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞を用いた細胞に基づく遮断アッセイにおいて、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ（例えば、約１ｎＭ〜約５ｎＭ）のＩＣ５０で阻害する；及び（ｉｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３に媒介されるヒト好塩基球におけるｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）リン酸化の誘導を約１ｐＭ以下（例えば、約０．０５ｐＭ〜約０．５ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。
更に別の例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、例えば、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞を用いた細胞に基づく遮断アッセイにおいて、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ（例えば、約１ｎＭ〜約５ｎＭ）のＩＣ５０で阻害する；及び（ｉｉ）本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を約１ｐＭ〜約２００ｐＭ（例えば、約１ｐＭ〜約５０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。
別の実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、例えば、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞を用いた細胞に基づく遮断アッセイにおいて、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約１ｎＭ〜約１０ｎＭ（例えば、約１ｎＭ〜約５ｎＭ）のＩＣ５０で阻害する）；及び（ｉｉ）本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を約１ｐＭ〜約２０ｎＭ（例えば、約２００ｐＭ〜約１ｎＭ）のＩＣ５０で阻害する。
更に別の例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３及びＩＬ−１２に媒介されるＮＫ細胞からのＴＮＦ−αの誘導を約１ｐＭ〜約２００ｐＭ（例えば、約１ｐＭ〜約８０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する；及び（ｉｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３に媒介されるヒト好塩基球におけるｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）リン酸化の誘導を約１ｐＭ以下（例えば、約０．０５ｐＭ〜約０．５ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。
別の例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３及びＩＬ−１２に媒介されるＮＫ細胞からのＴＮＦ−αの誘導を約１ｐＭ〜約２００ｐＭ（例えば、約１ｐＭ〜約８０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する；及び（ｉｉ）本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を約１ｐＭ〜約２００ｐＭ（例えば、約１ｐＭ〜約５０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。
別の例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３及びＩＬ−１２に媒介されるＮＫ細胞からのＴＮＦ−αの誘導を約１ｐＭ〜約２００ｐＭ（例えば、約１ｐＭ〜約８０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する；及び（ｉｉ）本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を約１ｐＭ〜約２０ｎＭ（例えば、約２００ｐＭ〜約１ｎＭ）のＩＣ５０で阻害する。
別の例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３に媒介されるヒト好塩基球におけるｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）リン酸化の誘導を約１ｐＭ以下（例えば、約０．０５ｐＭ〜約０．５ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する；及び（ｉｉ）本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を約１ｐＭ〜約２００ｐＭ（例えば、約１ｐＭ〜約５０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する。
別の例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、ヒトＩＬ−３３に媒介されるヒト好塩基球におけるｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）リン酸化の誘導を約１ｐＭ以下（例えば、約０．０５ｐＭ〜約０．５ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する；及び（ｉｉ）本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を約１ｐＭ〜約２０ｎＭ（例えば、約２００ｐＭ〜約１ｎＭ）のＩＣ５０で阻害する。
別の例では、一部の実施形態において、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかは、以下の特徴を有し得る：（ｉ）本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を約１ｐＭ〜約２００ｐＭ（例えば、約１ｐＭ〜約５０ｐＭ）のＩＣ５０で阻害する；及び／または（ｉｉ）本抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を約１ｐＭ〜約２０ｎＭ（例えば、約２００ｐＭ〜約１ｎＭ）のＩＣ５０で阻害する。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＳＦＳＸ１Ｓ（配列番号６２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１（Ｘ１はＭｅｔ、Ｌｅｕ、若しくはＶａｌである）、（ｂ）ＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＸ１ＶＫＧ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１はＳｅｒ若しくはＡｌａである）、（ｃ）ＡＮＹＧＸ１Ｘ２ＦＦＥＶ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３（Ｘ１はＡｓｎ若しくはＡｓｐであり、Ｘ２はＴｒｐ若しくはＰｈｅである）、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＡＫＹＧＬＳＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＫＥＶＰＦＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲ、あるいは上述のＨＶＲのうちの１つ以上と、配列番号４〜６または６２〜６４のうちのいずれか１つに少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上の変異形との組み合わせを含み得る。
例えば、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＳＦＳＭＳ（配列番号１）、ＳＦＳＬＳ（配列番号７）、若しくはＳＦＳＶＳ（配列番号８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２）若しくはＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＡＶＫＧ（配列番号９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＡＮＹＧＮＷＦＦＥＶ（配列番号３）、ＡＮＹＧＮＦＦＦＥＶ（配列番号１０）、若しくはＡＮＹＧＤＷＦＦＥＶ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＡＫＹＧＬＳＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＫＥＶＰＦＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲ、あるいは上述のＨＶＲのうちの１つ以上と、配列番号１〜１１のうちのいずれか１つに対して少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上の変異形との組み合わせを含み得る。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１２）、ＤＶＮＬＶＥＳＧＧＧＳＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１６）、またはＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１３）、ＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡ（配列番号１７）、またはＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号１４）、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２２）、ＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＥＳＥＤＴＡＭＹＹＣＴＲ（配列番号１８）、ＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２３）、ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２４）、またはＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及びＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５）またはＷＧＡＧＴＴＶＡＶＳＳ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４のうちの１、２、３、または４つを含み得る。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の軽鎖フレームワーク領域：ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号２５）またはＤＩＶＬＴＱＳＰＧＦＬＶＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、ＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＦ（配列番号２６）またはＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＦ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２７）、ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＮＩＨＰＭＥＥＤＤＴＡＭＹＦＣ（配列番号３１）、ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣ（配列番号３３）、ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号３４）、またはＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及びＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２８）またはＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４のうちの１、２、３、または４つを含み得る。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号３６、３８、若しくは４０〜５０のうちのいずれか１つに少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３６、３８、若しくは４０〜５０のうちのいずれか１つの配列を含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号３７、３９、若しくは５１〜６１のうちのいずれか１つに少なくとも９０％の配列（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３７、３９、若しくは５１〜６１のうちのいずれか１つの配列を含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号５１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号５２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号４２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号５３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号５４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号５５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号４５のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号５６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号５７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号５８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号４８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号６０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号６１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。
例えば、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＳＦＳＭＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＡＮＹＧＮＷＦＦＥＶ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＡＫＹＧＬＳＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＫＥＶＰＦＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み得る。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号３６に少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３６の配列を含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号３７に少なくとも９０％の配列（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３７の配列を含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域：ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及びＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の軽鎖フレームワーク領域：ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、ＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＦ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及びＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含む。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。一部の事例では、例示的な抗ＩＬ−３３抗体は、１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉである。
他の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＳＳＩＦＹＷＧ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＸ１ＬＫＳ（配列番号９０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１はＳｅｒ若しくはＡｌａである）、（ｃ）ＡＧＧＬＹＮＷＮＤＥＳＦＳＦＹＭＤＶ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＳＦＳＳＳＹＬＡ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＹＤＲＳＰＬＴ（配列番号７１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲ、あるいは上述のＨＶＲのうちの１つ以上と、配列番号６５、６８〜７１、または９０のうちのいずれか１つに少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上の変異形との組み合わせを含み得る。
例えば、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＳＳＩＦＹＷＧ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号６６）若しくはＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＡＬＫＳ（配列番号６７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＡＧＧＬＹＮＷＮＤＥＳＦＳＦＹＭＤＶ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＳＦＳＳＳＹＬＡ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＹＤＲＳＰＬＴ（配列番号７１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲ、あるいは上述のＨＶＲのうちの１つ以上と、配列番号６５〜７１のうちのいずれか１つに少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上の変異形との組み合わせを含み得る。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域：ＥＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＲ（配列番号７２）、ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＲ（配列番号７７）、またはＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＲ（配列番号７６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号７３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＭＬＴＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号７４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及びＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号７５）またはＷＧＮＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号７８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４のうちの１、２、３、または４つを含み得る。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の軽鎖フレームワーク領域：ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号７９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号８０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、ＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号８１）またはＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＫＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号８３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及びＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４のうちの１、２、３、または４つを含み得る。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号８４、８６、８８、９１、９２、若しくは９５のうちのいずれか１つに少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号８４、８６、８８、９１、９２、若しくは９５のうちのいずれか１つの配列を含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号８５、８７、８９、９３、９４、若しくは９６のうちのいずれか１つに少なくとも９０％の配列（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号８５、８７、８９、９３、９４、若しくは９６のうちのいずれか１つの配列を含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号８５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号８７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号８９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号９１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号９３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号９２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号９４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号９６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。
例えば、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＳＳＩＦＹＷＧ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号６６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＡＧＧＬＹＮＷＮＤＥＳＦＳＦＹＭＤＶ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＳＦＳＳＳＹＬＡ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＹＤＲＳＰＬＴ（配列番号７１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み得る。一部の事例では、本抗体は、（ａ）配列番号８４に少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号８４の配列を含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号８５に少なくとも９０％の配列（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号８５の配列を含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域：ＥＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＲ（配列番号７２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号７３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＭＬＴＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号７４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及びＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号７５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の軽鎖フレームワーク領域：ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号７９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号８０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、ＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号８１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及びＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含む。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号８５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。一部の事例では、例示的な抗ＩＬ−３３抗体は、４Ｇ１２．ＦＷ４である。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＮＹＸ１ＭＮ（配列番号９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１（Ｘ１は、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、若しくはＴｙｒである）、（ｂ）ＥＩＴＬＫＦＮＸ１ＹＸ２ＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１は、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、若しくはＡｌａであり、Ｘ２はＳｅｒ若しくはＡｌａである）、（ｃ）ＲＮＹＧＸ１Ｘ２ＹＩＮＶ（配列番号９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３（Ｘ１はＡｓｐ若しくはＡｓｎであり、Ｘ２はＴｒｐ若しくはＴｙｒである）、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＫＦＧＸ１ＳＦＬＮ（配列番号１００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１（Ｘ１は、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、若しくはＬｅｕである）、（ｅ）ＶＡＳＳＱＧＳ（配列番号１１３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、（ｆ）ＱＱＳＫＤＩＰＹＴ（配列番号１１４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲ、あるいは上述のＨＶＲのうちの１つ以上と、配列番号９７〜１００、１１３、または１１４のうちのいずれか１つに少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上の変異形との組み合わせを含み得る。一部の実施形態において、上述の抗体のうちのいずれかは、ＮＹＷＭＮ（配列番号１０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１を含まない。
例えば、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＮＹＷＭＮ（配列番号１０１）、ＮＹＦＭＮ（配列番号１０２）、若しくはＮＹＹＭＮ（配列番号１０３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＥＩＴＬＫＦＮＮＹＳＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１０４）、ＥＩＴＬＫＦＮＤＹＳＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１０５）、ＥＩＴＬＫＦＮＳＹＳＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１０６）、ＥＩＴＬＫＦＮＡＹＳＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１０７）、若しくはＥＩＴＬＫＦＮＮＹＡＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１０８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＧＤＷＹＩＮＶ（配列番号１０９）、ＲＮＹＧＮＷＹＩＮＶ（配列番号１１０）、若しくはＲＮＹＧＮＦＹＩＮＶ（配列番号１１１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＫＦＧＭＳＦＬＮ（配列番号１１２）、ＲＡＳＥＳＶＤＫＦＧＶＳＦＬＮ（配列番号１１５）、若しくはＲＡＳＥＳＶＤＫＦＧＬＳＦＬＮ（配列番号１１６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＶＡＳＳＱＧＳ（配列番号１１３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＫＤＩＰＹＴ（配列番号１１４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲ、あるいは上述のＨＶＲのうちの１つ以上と、配列番号１０１〜１１６のうちのいずれか１つに少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上の変異形との組み合わせを含み得る。一部の実施形態において、上述の抗体のうちのいずれかは、ＮＹＷＭＮ（配列番号１０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１を含まない。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域：ＥＶＫＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＭＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１１７）またはＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、ＷＶＲＱＳＰＥＫＧＬＥＷＭＡ（配列番号１１９）またはＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＡ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、ＲＦＳＩＳＲＤＤＳＫＳＴＶＹＬＱＭＮＮＬＲＡＥＤＴＧＩＹＹＣＡＲ（配列番号１２１）、ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１２２）、またはＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１２３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及びＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１２４）またはＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４のうちの１、２、３、または４つを含み得る。一部の実施形態において、上述の抗体のうちのいずれかは、ＮＹＷＭＮ（配列番号１０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１を含まない。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の軽鎖フレームワーク領域：ＤＩＶＬＴＱＳＰＴＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣ（配列番号１２６）またはＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣ（配列番号１２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、ＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＦ（配列番号１２８）またはＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＦ（配列番号１２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＮＩＨＰＶＥＥＤＤＴＡＭＹＦＣ（配列番号１３０）またはＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣ（配列番号１３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及びＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１３２）またはＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１３３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４のうちの１、２、３、または４つを含み得る。一部の実施形態において、上述の抗体のうちのいずれかは、ＮＹＷＭＮ（配列番号１０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１を含まない。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号１３４、１３６、１３８、若しくは１４０〜１４８のうちのいずれか１つに少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号１３４、１３６、１３８、若しくは１４０〜１４８のうちのいずれか１つの配列を含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１３５、１３７、１３９、若しくは１４９〜１５７のうちのいずれか１つに少なくとも９０％の配列（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号１３５、１３７、１３９、若しくは１４９〜１５７のうちのいずれか１つの配列を含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号１３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１３９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１４９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１５０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号１４２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１５１のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１５２のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号１４４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１５３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１５４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号１４６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１５５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号１４７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１５６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号１４８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１５７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。一部の実施形態において、上述の抗体のうちのいずれかは、ＮＹＷＭＮ（配列番号１０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１を含まない。
例えば、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＮＹＷＭＮ（配列番号１０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＥＩＴＬＫＦＮＮＹＳＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１０４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＧＤＷＹＩＮＶ（配列番号１０９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＫＦＧＭＳＦＬＮ（配列番号１１２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＶＡＳＳＱＧＳ（配列番号１１３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＫＤＩＰＹＴ（配列番号１１４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み得る。一部の事例では、本抗体は、（ａ）配列番号１３４に少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号１３４の配列を含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１３５に少なくとも９０％の配列（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号１３５の配列を含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域：ＥＶＫＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＭＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、ＷＶＲＱＳＰＥＫＧＬＥＷＭＡ（配列番号１１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、ＲＦＳＩＳＲＤＤＳＫＳＴＶＹＬＱＭＮＮＬＲＡＥＤＴＧＩＹＹＣＡＲ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及びＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１２４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の軽鎖フレームワーク領域：ＤＩＶＬＴＱＳＰＴＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣ（配列番号１２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、ＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＦ（配列番号１２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＮＩＨＰＶＥＥＤＤＴＡＭＹＦＣ（配列番号１３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及びＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含み得る。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号１３４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号１３５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。一部の事例では、例示的な抗ＩＬ−３３抗体は、１０Ｈ２である。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＫＦＷＭＮ（配列番号１５８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＥＩＲＬＸ１Ｘ２ＩＮＹＶＫＤＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１はＡｓｎ若しくはＳｅｒであり、Ｘ２はＳｅｒ若しくはＡｌａであり、Ｘ１はＡｓｎ、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、若しくはＡｌａであり、Ｘ２はＳｅｒ若しくはＡｌａである）、（ｃ）ＲＮＹＧＮＷＦＦＥＩ（配列番号１６０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＲＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号１６４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１６６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲ、あるいは上述のＨＶＲのうちの１つ以上と、配列番号１５８、１６０、１６１、１６４〜１６６のうちのいずれか１つに少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上の変異形との組み合わせを含み得る。
例えば、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＫＦＷＭＮ（配列番号１５８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＥＩＲＬＮＳＩＮＹＶＫＤＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１５９）、ＥＩＲＬＳＳＩＮＹＶＫＤＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１６２）、若しくはＥＩＲＬＮＡＩＮＹＶＫＤＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１６３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＧＮＷＦＦＥＩ（配列番号１６０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＲＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号１６４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１６６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲ、あるいは上述のＨＶＲのうちの１つ以上と、配列番号１５８〜１６０または１６２〜１６６のうちのいずれか１つに少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上の変異形との組み合わせを含み得る。
一部の事例では、ＩＬ−３３抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域：ＥＶＫＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＭＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＮ（配列番号１６７）またはＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮ（配列番号１７１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、ＷＶＲＱＳＰＥＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１６８）またはＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１７２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＶＹＬＱＭＮＮＬＲＡＥＤＴＧＩＹＹＣＩＲ（配列番号１６９）またはＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＩＲ（配列番号１７３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及びＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１７０）またはＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４のうちの１、２、３、または４つを含み得る。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の軽鎖フレームワーク領域：ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣ（配列番号１７５）またはＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、ＷＦＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹ（配列番号１７６）またはＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＮＩＨＰＬＥＥＤＤＡＡＭＹＦＣ（配列番号１７７）またはＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１８１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及びＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１７８）またはＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１８２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４のうちの１、２、３、または４つを含み得る。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号１８３、１８５、１８７、若しくは１８９のうちのいずれか１つに少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号１８３、１８５、１８７、若しくは１８９のうちのいずれか１つの配列を含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１８４、１８６、１８８、１９０のうちのいずれか１つに少なくとも９０％の配列（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号１８４、１８６、１８８、１９０のうちのいずれか１つの配列を含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号１８５のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１８６のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号１８７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１８８のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号１８９のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１９０のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。
例えば、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＫＦＷＭＮ（配列番号１５８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＥＩＲＬＮＳＩＮＹＶＫＤＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１５９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＲＮＹＧＮＷＦＦＥＩ（配列番号１６０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＲＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号１６４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＨＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１６６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み得る。一部の事例では、本抗体は、（ａ）配列番号１８３に少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号１８３の配列を含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１８４に少なくとも９０％の配列（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号１８４の配列を含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域：ＥＶＫＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＭＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＮ（配列番号１６７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、ＷＶＲＱＳＰＥＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１６８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＶＹＬＱＭＮＮＬＲＡＥＤＴＧＩＹＹＣＩＲ（配列番号１６９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、ＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１７０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む。一部の事例では、ＩＬ−３３抗体は、以下の軽鎖フレームワーク領域：ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣ（配列番号１７５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、ＷＦＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹ（配列番号１７６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＮＩＨＰＬＥＥＤＤＡＡＭＹＦＣ（配列番号１７７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及びＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１７８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含む。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。一部の事例では、例示的な抗ＩＬ−３３抗体は、６Ｃ１１である。
他の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＤＹＮＭＮ（配列番号１９１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＤＩＮＰＫＸ１Ｘ２ＤＴＦＹＮＱＮＦＫＤ（配列番号１９２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１はＡｓｎ若しくはＳｅｒであり、少なくともＸ２はＧｌｙ若しくはＡｌａである）、（ｃ）ＨＹＹＹＧＳＳＹＧＧＦＶＹ（配列番号１９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＨＡＳＱＮＩＮＶＷＬＳ（配列番号１９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＫＬＨＴ（配列番号１９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＱＳＹＰＬＴ（配列番号１９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲ、あるいは上述のＨＶＲのうちの１つ以上と、配列番号１９１、１９２、または１９６〜１９９のうちのいずれか１つに少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上の変異形との組み合わせを含み得る。
例えば、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＤＹＮＭＮ（配列番号１９１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＤＩＮＰＫＮＧＤＴＦＹＮＱＮＦＫＤ（配列番号１９３）、ＤＩＮＰＫＳＧＤＴＦＹＮＱＮＦＫＤ（配列番号１９４）、若しくはＤＩＮＰＫＮＡＤＴＦＹＮＱＮＦＫＤ（配列番号１９５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＨＹＹＹＧＳＳＹＧＧＦＶＹ（配列番号１９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＨＡＳＱＮＩＮＶＷＬＳ（配列番号１９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＫＬＨＴ（配列番号１９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＱＳＹＰＬＴ（配列番号１９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲ、あるいは上述のＨＶＲのうちの１つ以上と、配列番号１９１または１９３〜１９９のうちのいずれか１つに少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上の変異形との組み合わせを含み得る。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域：ＥＶＬＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＮＡＳＧＹＴＦＳ（配列番号２００）またはＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＳ（配列番号２０４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、ＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＳＩＧ（配列番号２０１）またはＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＳＩＧ（配列番号２０５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、ＫＡＴＬＴＩＤＫＳＳＳＴＶＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲ（配列番号２０２）またはＲＡＴＬＴＩＤＫＳＴＳＴＡＹＬＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２０６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及びＷＧＱＧＴＬＶＴＶＡＡ（配列番号２０３）またはＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２０７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４のうちの１、２、３、または４つを含み得る。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の軽鎖フレームワーク領域：ＤＩＱＭＮＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＤＴＩＴＩＴＣ（配列番号２０８）またはＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２１２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、ＷＹＱＱＫＡＧＮＮＰＫＬＬＩＹ（配列番号２０９）またはＷＹＱＱＫＰＧＫＮＰＫＬＬＩＹ（配列番号２１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、ＧＶＰＳＲＦＴＧＳＧＳＧＴＬＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ（配列番号２１０）またはＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及びＦＧＳＧＴＮＬＥＬＫ（配列番号２１１）またはＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４のうちの１、２、３、または４つを含み得る。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号２１６、２１８、２２０、若しくは２２１のうちのいずれか１つに少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号２１６、２１８、２２０、若しくは２２１のうちのいずれか１つの配列を含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２１７若しくは配列番号２１９に少なくとも９０％の配列（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号２１７若しくは配列番号２１９の配列を含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号２１７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号２１８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号２１９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号２２０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号２１９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号２２１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号２１９のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。
例えば、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＤＹＮＭＮ（配列番号１９１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＤＩＮＰＫＮＧＤＴＦＹＮＱＮＦＫＤ（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＨＹＹＹＧＳＳＹＧＧＦＶＹ（配列番号１９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＨＡＳＱＮＩＮＶＷＬＳ（配列番号１９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＫＬＨＴ（配列番号１９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＱＳＹＰＬＴ（配列番号１９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み得る。一部の事例では、本抗体は、（ａ）配列番号２１６に少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号２１６の配列を含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２１７に少なくとも９０％の配列（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号２１７の配列を含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域：ＥＶＬＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＮＡＳＧＹＴＦＳ（配列番号２００）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、ＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＳＩＧ（配列番号２０１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、ＫＡＴＬＴＩＤＫＳＳＳＴＶＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲ（配列番号２０２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及びＷＧＱＧＴＬＶＴＶＡＡ（配列番号２０３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の軽鎖フレームワーク領域：ＤＩＱＭＮＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＤＴＩＴＩＴＣ（配列番号２０８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、ＷＹＱＱＫＡＧＮＮＰＫＬＬＩＹ（配列番号２０９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、ＧＶＰＳＲＦＴＧＳＧＳＧＴＬＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ（配列番号２１０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及びＦＧＳＧＴＮＬＥＬＫ（配列番号２１１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含む。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号２１６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号２１７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。一部の事例では、例示的な抗ＩＬ−３３抗体は、２Ｂ６である。
例えば、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＳＹＷＩＮ（配列番号２２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＲＩＡＰＧＳＧＦＩＳＹＮＥＬＦＫＤ（配列番号２２３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＥＦＹＹＧＳＦＹＧＧＦＡＹ（配列番号２２４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＨＡＳＱＮＩＨＶＷＬＳ（配列番号２２５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＫＡＳＴＬＨＴ（配列番号２２６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＱＳＳＰＬＴ（配列番号２２７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲ、あるいは上述のＨＶＲのうちの１つ以上と、配列番号２２２〜２２７のうちのいずれか１つに少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上の変異形との組み合わせを含み得る。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域：ＱＶＱＬＱＱＳＧＮＤＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号２２８）またはＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号２３８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、ＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧ（配列番号２２９）またはＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧ（配列番号２３９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、ＫＡＴＬＴＶＤＴＳＳＳＴＡＹＩＱＬＧＳＬＳＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲ（配列番号２３０）またはＲＶＴＩＴＲＤＴＳＴＳＴＡＹＬＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２４０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及びＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号２３１）またはＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２４１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４のうちの１、２、３、または４つを含み得る。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の軽鎖フレームワーク領域：ＤＩＱＭＮＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＤＴＩＴＩＴＣ（配列番号２３２）またはＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２４２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、ＷＹＱＱＫＰＧＮＩＰＫＬＬＩＹ（配列番号２３３）またはＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２４３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、ＧＶＰＳＲＦＮＧＳＧＳＧＴＧＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ（配列番号２３４）またはＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２４４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及びＦＧＡＧＴＫＬＥＶＫ（配列番号２３５）またはＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２４５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４のうちの１、２、３、または４つを含み得る。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号２３６若しくは配列番号２４６に少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号２３６若しくは配列番号２４６の配列を含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２３７若しくは配列番号２４７に少なくとも９０％の配列（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号２３７若しくは配列番号２４７の配列を含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。
例えば、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＳＹＷＩＮ（配列番号２２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＲＩＡＰＧＳＧＦＩＳＹＮＥＬＦＫＤ（配列番号２２３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＥＦＹＹＧＳＦＹＧＧＦＡＹ（配列番号２２４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＨＡＳＱＮＩＨＶＷＬＳ（配列番号２２５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＫＡＳＴＬＨＴ（配列番号２２６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＧＱＳＳＰＬＴ（配列番号２２７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み得る。一部の事例では、本抗体は、（ａ）配列番号２３６に少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号２３６の配列を含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２３７に少なくとも９０％の配列（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号２３７の配列を含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域：ＱＶＱＬＱＱＳＧＮＤＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号２２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、ＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧ（配列番号２２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、ＫＡＴＬＴＶＤＴＳＳＳＴＡＹＩＱＬＧＳＬＳＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲ（配列番号２３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及びＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号２３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の軽鎖フレームワーク領域：ＤＩＱＭＮＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＤＴＩＴＩＴＣ（配列番号２３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、ＷＹＱＱＫＰＧＮＩＰＫＬＬＩＹ（配列番号２３３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、ＧＶＰＳＲＦＮＧＳＧＳＧＴＧＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ（配列番号２３４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及びＦＧＡＧＴＫＬＥＶＫ（配列番号２３５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含む。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。一部の事例では、例示的な抗ＩＬ−３３抗体は、９Ｆ６である。
他の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＧＳＡＸ１Ｈ（配列番号２４８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１（Ｘ１はＭｅｔ若しくはＩｌｅである）、（ｂ）ＲＩＲＳＸ１Ｘ２ＮＸ３ＹＡＴＸ４ＹＸ５ＡＳＶＫＧ（配列番号２４９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１はＡｒｇ若しくはＬｙｓであり、Ｘ２はＡｓｎ、Ｔｈｒ、若しくはＧｌｙであり、Ｘ３はＡｓｎ若しくはＳｅｒであり、Ｘ４はＡｌａ若しくはＧｌｕであり、Ｘ５はＡｌａ若しくはＡｓｐである）、（ｃ）Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＦＤＹ（配列番号２５０）のアミノ酸配列を含む（Ｘ１はＬｅｕ若しくはＧｌｎであり、Ｘ２はＧｌｎ、Ｇｌｙ、若しくはＰｈｅであり、Ｘ３はＧｌｎ若しくはＧｌｙであり、Ｘ４はＰｒｏ若しくはＡｓｐである）、（ｄ）ＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＤ（配列番号２５１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２５２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＬＱＨＸ１Ｘ２ＹＰＸ３Ｔ（配列番号２５３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３（Ｘ１はＡｓｐ若しくはＳｅｒであり、Ｘ２はＳｅｒ若しくはＩｌｅであり、Ｘ３はＬｅｕ若しくはＰｒｏである）から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲ、あるいは上述のＨＶＲの１つ以上と、配列番号２４８〜２５３のうちのいずれか１つに少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上の変異形との組み合わせを含み得る。
例えば、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＧＳＡＭＨ（配列番号２５４）若しくはＧＳＡＩＨ（配列番号２５８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＲＩＲＳＲＮＮＮＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧ（配列番号２５５）、ＲＩＲＳＲＴＮＮＹＡＴＥＹＤＡＳＶＫＧ（配列番号２５９）、若しくはＲＩＲＳＫＧＮＳＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧ（配列番号２６２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＬＱＱＰＰＦＤＹ（配列番号２５６）、ＬＧＱＰＰＦＤＹ（配列番号２６０）、若しくはＱＦＧＤＰＦＤＹ（配列番号２６３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＤ（配列番号２５１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２５２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＬＱＨＤＳＹＰＬＴ（配列番号２５７）若しくはＬＱＨＳＩＹＰＰＴ（配列番号２６１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲ、あるいは上述のＨＶＲのうちの１つ以上と、配列番号２５１、２５２、または２５４〜２６３のうちのいずれか１つに対して少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上の変異形との組み合わせを含み得る。
一部の事例では、ＩＬ−３３抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域：ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２６４）、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２６５）、若しくはＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２６６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、ＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＧ（配列番号２６７）若しくはＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧ（配列番号２６８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＲＴＴＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２６９）、ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＲＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２７０）、若しくはＲＦＳＩＳＲＤＤＳＫＲＴＡＹＬＱＭＳＳＬＫＴＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２７１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及びＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４のうちの１、２、３、または４つを含み得る。
一部の事例では、ＩＬ−３３抗体は、以下の軽鎖フレームワーク領域：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２７３）、ＡＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２７４）、若しくはＡＩＲＩＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２７５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹ（配列番号２７６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、ＧＶＰＳＲＦＮＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２７７）、ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２７８）、若しくはＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２７９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及びＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２８０）若しくはＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２８１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４のうちの１、２、３、または４つを含み得る。
一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号２８２、２８４、若しくは２８６のうちのいずれか１つに少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号２８２、２８４、若しくは２８６のうちのいずれか１つの配列を含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２８３、２８５、若しくは２８７のうちのいずれか１つに少なくとも９０％の配列（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号２８３、２８５、若しくは２８７のうちのいずれか１つの配列を含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号２８２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号２８３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号２８４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号２８５のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。例えば、一部の事例では、本抗体は、配列番号２８６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号２８７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。
例えば、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＧＳＡＭＨ（配列番号２５４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＲＩＲＳＲＮＮＮＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧ（配列番号２５５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＬＱＱＰＰＦＤＹ（配列番号２５６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＤ（配列番号２５１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２５２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＬＱＨＤＳＹＰＬＴ（配列番号２５７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み得る。一部の事例では、本抗体は、（ａ）配列番号２８２に少なくとも９０％の配列同一性（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号２８２の配列を含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２８３に少なくとも９０％の配列（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号２８３の配列を含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の重鎖フレームワーク領域：ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２６４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、ＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＧ（配列番号２６７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＲＴＴＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２６９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及びＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を含む。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の軽鎖フレームワーク領域：ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２７３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹ（配列番号２７６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、ＧＶＰＳＲＦＮＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２７７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及びＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２８０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を含む。一部の事例では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号２８２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号２８３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、結合ドメインを含む。一部の事例では、例示的な抗ＩＬ−３３抗体は、１０１．Ｂ１１である。
一部の事例では、本発明は、（ａ）配列番号２８８のアミノ酸配列を含む重鎖及び／または（ｂ）配列番号２８９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本抗体は、ＩｇＧ４．Ｓ２２８Ｐ形式で発現する１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉである。
一部の事例では、本発明は、（ａ）配列番号２９２のアミノ酸配列を含む重鎖及び／または（ｂ）配列番号２９３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本抗体は、ＩｇＧ４．Ｓ２２８Ｐ形式で発現する４Ｇ１２．ＦＷ４である。
一部の事例では、本発明は、（ａ）配列番号２９０のアミノ酸配列を含む重鎖及び／または（ｂ）配列番号２９１のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本抗体は、ＩｇＧ１形式で発現する１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉである。
一部の事例では、本発明は、（ａ）配列番号２９４のアミノ酸配列を含む重鎖及び／または（ｂ）配列番号２９５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本抗体は、ＩｇＧ１形式で発現する４Ｇ１２．ＦＷ４である。
更なる態様では、本発明は、本明細書に提供される抗ＩＬ−３３抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある特定の実施形態では、１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉまたは４Ｇ１２．ＦＷ４と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
本発明の更なる態様では、上述の実施形態のいずれかによる抗ＩＬ−３３抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では、抗ＩＬ−３３抗体は、抗体フラグメント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、またはＦ（ａｂ’）２フラグメントである。別の実施形態では、本抗体は、全長抗体、例えば、本明細書に定義されるインタクトＩｇＧ１抗体、インタクトＩｇＧ４抗体、または他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。一部の事例では、本抗体は、ヒンジ領域に変異を含むＩｇＧ４抗体である。一部の事例では、変異は、置換変異である。一部の事例では、置換変異は、アミノ酸残基Ｓ２２８（ＥＵ番号付け）におけるものである。一部の事例では、置換変異は、Ｓ２２８Ｐ変異である。
更なる態様では、上述の実施形態のいずれかによる抗ＩＬ−３３抗体は、以下の節１〜７に記載される特徴のうちのいずれかを、単独または組み合わせで組み込み得る。
１．抗体親和性
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、１ｐＭ以下、または０．１ｐＭ以下（例えば、１０−６Ｍ以下、例えば、１０−６Ｍ〜１０−９Ｍ以下、例えば１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ以下）の解離定数（ＫＤ）を有する。
一実施形態では、ＫＤは、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。一実施形態では、ＲＩＡは、目的の抗体のＦａｂバージョンとその抗原を用いて行われる。例えば、抗原に対するＦａｂの結合親和性は、未標識抗原の一連の滴定の存在下で、Ｆａｂを最低濃度の（１２５Ｉ）標識抗原と平衡化し、次いで、抗Ｆａｂ抗体をコーティングしたプレートで結合した抗原を捕捉することによって測定される（例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１，１９９９を参照されたい）。アッセイの条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍＬの捕捉抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後、ＰＢＳ中２％（重量／体積）のウシ血清アルブミンにより、室温（およそ２３℃）で２〜５時間ブロッキングする。非吸着性のプレート（Ｎｕｎｃ番号２６９６２０）で、１００ｐＭまたは２６ｐＭの［１２５Ｉ］抗原を、目的のＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９，１９９７における抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ−１２の評価と一致）。目的のＦａｂを次いで一晩インキュベートするが、インキュベーションは、平衡が確実に達成されるようにより長い期間（例えば、約６５時間）継続してもよい。その後、混合物を、室温での（例えば、１時間にわたる）インキュベーションのために、捕捉プレートに移す。次いでこの溶液を除去し、プレートを、ＰＢＳ中０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、ＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）でプレートを１０分間計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイで使用するために選定する。
別の実施形態によると、ＫＤは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを用いて測定される。例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いたアッセイは、約１０応答単位（ＲＵ）で固定化した抗体ＣＭ５チップを用いて２５℃で行われる。一実施形態では、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、供給業者の指示に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて活性化させる。抗原を１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍＬ（約０．２μＭ）まで希釈した後、およそ１０応答単位（ＲＵ）のカップリングしたタンパク質が達成されるように、５μＬ／分の流速で注入する。抗原の注入後、１Ｍのエタノールアミンを注入して、未反応の基をブロッキングする。動態測定については、Ｆａｂの２倍段階希釈液（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中に０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（登録商標）２０）界面活性剤を含むもの（ＰＢＳＴ）に、２５℃で、およそ２５μＬ／分の流速で注入する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）は、単純な１対１のラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２）を使用して、会合センサグラムと解離センサグラムとを同時に当てはめることによって計算される。平衡解離定数（ＫＤ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算する。例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１，１９９９を参照されたい）。上記の表面プラズモン共鳴アッセイによって、オン速度が１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、このオン速度は、撹拌されたキュベットを備えるストップフロー装着分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）または８０００シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計において測定される、漸増濃度の抗原の存在下で、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の２５℃における蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の上昇または減少を測定する、蛍光消光技法を使用することによって、決定することができる。
２．抗体フラグメント
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体フラグメントである。抗体フラグメントには、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖフラグメント、ならびに以下に記載される他のフラグメントが含まれるがこれらに限定されない。ある特定の抗体フラグメントの概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖフラグメントの概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたく、また、国際公開第ＷＯ９３／１６１８５号、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加したインビボ半減期を有するＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメントの考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。
ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る、２つの抗原結合部位を有する抗体フラグメントである。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、国際公開第ＷＯ１９９３／０１１６１号、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４，２００３、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８，１９９３を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディもまた、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４，２００３に記載されている。
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て若しくは一部分または軽鎖可変ドメインの全て若しくは一部分を含む、抗体フラグメントである。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（例えば、米国特許第６，２４８，５１６Ｂ１号を参照されたい）。
抗体フラグメントは、本明細書に記載されるように、インタクトな抗体のタンパク質分解消化、ならびに組み換え宿主細胞（例えば、大腸菌またはファージ）による産生を含むがこれらに限定されない、種々の技法によって作製することができる。
３．キメラ抗体及びヒト化抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、及びＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５，１９８４）に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。更なる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のものから変化している、「クラススイッチされた」抗体である。キメラ抗体には、それらの抗原結合フラグメントが含まれる。
ある特定の実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的に、非ヒト抗体は、非ヒト親抗体の特異性及び親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減させるために、ヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ（またはそれらの部分）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはそれらの部分）がヒト抗体配列に由来する、１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部分も含む。一部の実施形態では、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を復元または向上させるために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基の由来となった抗体）に由来する対応する残基で置換される。
ヒト化抗体及びそれらを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３，２００８に概説されており、更に、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９，１９８８、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３，１９８９、米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、及び同第７，０８７，４０９号、Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５−３４，２００５（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフトについて記載）、Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８，１９９１（「リサーフェシング（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）」について記載）、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３−６０，２００５（「ＦＲシャッフリング」について記載）、ならびにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１−６８，２００５及びＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２−２６０，２０００（ＦＲシャッフリングへの「選択誘導（ｇｕｉｄｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」アプローチについて記載）に記載されている。
ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６，１９９３を参照されたい）、軽鎖または重鎖可変領域の特定の下位集団のヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，８９：４２８５，１９９２及びＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３，１９９３を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞成熟）フレームワーク領域またはヒト生殖系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３，２００８を参照されたい）、ならびにＦＲライブラリのスクリーニングから導出されるフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４，１９９７及びＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８，１９９６を参照されたい）が含まれるがこれらに限定されない。
４．ヒト抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で既知の様々な技法を使用して産生することができる。ヒト抗体は、概して、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４，２００１及びＬｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９，２００８に記載されている。
ヒト抗体は、抗原曝露に応答してインタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を含むインタクトな抗体を産生するように改変されているトランスジェニック動物に、免疫原を投与することによって、調製されてもよい。かかる動物は典型的に、内在性免疫グロブリン遺伝子座を置き換える、または染色体外に存在するか、若しくは動物の染色体中にランダムに組み込まれる、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部分を含有する。かかるトランスジェニックマウスにおいて、内在性免疫グロブリン遺伝子座は、概して、不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５，２００５を参照されたい。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術について記載している米国特許第６，０７５，１８１号及び同第６，１５０，５８４号、ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術について記載している米国特許第５，７７０，４２９号、Ｋ−Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載している米国特許第７，０４１，８７０号、ならびにＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載している米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照されたい。かかる動物によって生成されるインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、更に修飾されてもよい。
ヒト抗体はまた、ハイブリドーマに基づく方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫細胞株及びマウス−ヒト異種骨髄腫（ｈｅｔｅｒｏｍｙｅｌｏｍａ）細胞株が説明されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１，１９８４、Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）及びＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６，１９９１を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術により生成されるヒト抗体もまた、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２，２００６に記載されている。更なる方法には、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生について記載している）及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８，２００６（ヒト−ヒトハイブリドーマについて記載している）に記載されるものが含まれる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）もまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ２０（３）：９２７−９３７，２００５及びＶｏｌｌｍｅｒｓ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ２７（３）：１８５−９１，２００５に記載されている。
ヒト抗体はまた、ヒト由来ファージディスプレイライブラリから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成することもできる。かかる可変ドメイン配列は、次いで、所望のヒト定常ドメインと組み合わせてもよい。抗体ライブラリからヒト抗体を選択するための技法が、以下に記載される。
５．ライブラリ由来抗体
本発明の抗体は、コンビナトリアルライブラリを、所望の活性（複数可）を有する抗体についてスクリーニングすることによって、単離することができる。例えば、ファージディスプレイライブラリを生成し、所望の結合特性を保有する抗体についてかかるライブラリをスクリーニングするための多様な方法が当該技術分野で知られている。かかる方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に概説されており、更に、例えばＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５４，１９９０、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８，１９９１、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７，１９９２、Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）、Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０，２００４、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３，２００４、Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７−１２４７２，２００４、及びＬｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１−２）：１１９−１３２，２００４に記載されている。
ある特定のファージディスプレイ法では、ＶＨ遺伝子及びＶＬ遺伝子のレパートリーを、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングし、ファージライブラリにおいてランダムに組み換え、これを、次いで、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３−４５５，１９９４に記載されるように、抗原結合ファージに関してスクリーニングすることができる。ファージは、典型的に、抗体フラグメントを、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメントまたはＦａｂフラグメントとして提示する。免疫付与した源に由来するライブラリは、ハイブリドーマを構築する必要なしに、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ Ｊ．１２：７２５−７３４，１９９３に記載されるように、ナイーブレパートリーを（例えば、ヒトから）クローニングして、免疫付与を伴うことなく、広範な非自己抗原及び自己抗原に対する単一源の抗体を提供してもよい。最後に、ナイーブライブラリはまた、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１−３８８，１９９２に記載されるように、再配列されていないＶ遺伝子セグメントを幹細胞からクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して可変性の高いＨＶＲ３領域をコードし、インビトロで再配列を遂行することによって、合成により作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリについて記載している特許公開には、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、及び同第２００９／０００２３６０号が含まれる。
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体または抗体フラグメントは、本明細書においてヒト抗体またはヒト抗体フラグメントと見なされる。
６．多重特異性抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、ＩＬ−３３の２つの異なるエピトープに結合し得る。ある特定の実施形態では、これらの結合特異性のうちの一方は、ＩＬ−３３に対するものであり、他方は、任意の他の抗原（例えば、第２の生体分子、例えば、ＩＬ−１３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１７、Ｄ因子、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ、またはＶＥＧＦ受容体）に対するものである。したがって、二重特異性抗体は、ＩＬ−３３とＩＬ−１３、ＩＬ−３３とＩＬ−４、ＩＬ−３３とＩＬ−５、ＩＬ−３３とＩＬ−１７、ＩＬ−３３とＤ因子、ＩＬ−３３とＨｔｒＡ１、ＩＬ−３３とＶＥＧＦ、またはＩＬ−３３とＶＥＧＦ受容体（例えば、ＶＥＧＦＲ１、ＶＥＧＦＲ２、ＶＥＧＦＲ３、膜結合型ＶＥＧＦ受容体（ｍｂＶＥＧＦＲ）、若しくは可溶性ＶＥＧＦ受容体（ｓＶＥＧＦＲ））に対する結合特異性を有し得る。一部の事例では、二重特異性抗体は、ＩＬ−３３とＤ因子とに対する結合特異性を有し得る。他の事例では、二重特異性抗体は、ＩＬ−３３とＨｔｒＡ１とに対する結合特異性を有し得る。更に他の事例では、二重特異性抗体は、ＩＬ−３３とＶＥＧＦとに対する結合特異性を有し得る。他の事例では、二重特異性抗体は、ＩＬ−３３とＶＥＧＦ受容体とに対する結合特異性を有し得る。特に、二重特異性抗体は、ＩＬ−３３とＩＬ−１３とに対する結合特異性を有し得る。二重特異性抗体は、全長抗体または抗体フラグメントとして調製され得る。
例えば、一部の事例では、（ａ）ＳＦＳＸ１Ｓ（配列番号６２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１（Ｘ１はＭｅｔ、Ｌｅｕ、若しくはＶａｌである）、（ｂ）ＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＸ１ＶＫＧ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１はＳｅｒ若しくはＡｌａである）、（ｃ）ＡＮＹＧＸ１Ｘ２ＦＦＥＶ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３（Ｘ１はＡｓｎ若しくはＡｓｐであり、Ｘ２はＴｒｐ若しくはＰｈｅである）、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＡＫＹＧＬＳＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＫＥＶＰＦＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲ、あるいは上述のＨＶＲのうちの１つ以上と、配列番号４〜６または６２〜６４のうちのいずれかに少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上の変異形との組み合わせを含むＩＬ−３３に特異的に結合する第１の結合ドメインを含む二重特異性抗ＩＬ−３３抗体は、ＩＬ−１３に結合する第２の結合ドメインを有し得る。ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の結合ドメインは、例えば、（ａ）ＡＹＳＶＮ（配列番号２９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＭＩＷＧＤＧＫＩＶＹＮＳＡＬＫＳ（配列番号２９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＤＧＹＹＰＹＡＭＤＮ（配列番号２９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＫＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号３００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＮＮＥＤＰＲＴ（配列番号３０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲ、あるいは上述のＨＶＲのうちの１つ以上と、配列番号２９６〜３０１のいずれか１つに少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上の変異形との組み合わせを含み得る。一部の実施形態では、第２の結合ドメインは、ＩＬ−１３抗体レブリキズマブの１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む。
例えば、一部の事例では、（ａ）ＳＦＳＭＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＡＮＹＧＮＷＦＦＥＶ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＥＳＶＡＫＹＧＬＳＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＳＫＥＶＰＦＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つの超可変領域（ＨＶＲ）を含むＩＬ−３３に特異的に結合する第１の結合ドメインを含む二重特異性ＩＬ−３３抗体、例えば、１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉは、ＩＬ−１３に結合する第２の結合ドメインを有する。ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の結合ドメインは、例えば、（ａ）ＡＹＳＶＮ（配列番号２９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＭＩＷＧＤＧＫＩＶＹＮＳＡＬＫＳ（配列番号２９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＤＧＹＹＰＹＡＭＤＮ（配列番号２９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＫＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号３００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＮＮＥＤＰＲＴ（配列番号３０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含み得る。一部の実施形態では、第２の結合ドメインは、ＩＬ−１３抗体レブリキズマブの１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む。
一部の事例では、１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉなどの二重特異性抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号３６に少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３６の配列を含む、ＶＨドメイン、（ｂ）配列番号３７に少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３７の配列を含む、ＶＬドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含むＩＬ−３３に特異的に結合する第１の結合ドメインを含み、ＩＬ−１３に結合する第２の結合ドメインを有し得る。ＩＬ−１３に結合する第２の結合ドメインは、例えば、（ａ）配列番号３０２に少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３０２の配列を含む、ＶＨドメイン、（ｂ）配列番号３０３に少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３０３の配列を含む、ＶＬドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。一部の事例では、ＩＬ−１３に結合する第２の結合ドメインは、例えば、（ａ）配列番号３２８に少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３２８の配列を含む、ＶＨドメイン、（ｂ）配列番号３２９に少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３２９の配列を含む、ＶＬドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。一部の事例では、ＩＬ−１３に結合する第２の結合ドメインは、例えば、（ａ）抗ＩＬ−１３抗体レブリキズマブに少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または抗ＩＬ−１３抗体レブリキズマブの配列を含む、ＶＨドメイン、（ｂ）抗ＩＬ−１３抗体レブリキズマブに少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または抗ＩＬ−１３抗体レブリキズマブの配列を含む、ＶＬドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。
他の事例では、（ａ）ＳＳＩＦＹＷＧ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＸ１ＬＫＳ（配列番号９０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１はＳｅｒ若しくはＡｌａである）、（ｃ）ＡＧＧＬＹＮＷＮＤＥＳＦＳＦＹＭＤＶ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＳＦＳＳＳＹＬＡ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＹＤＲＳＰＬＴ（配列番号７１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲ、あるいは上述のＨＶＲのうちの１つ以上と、配列番号６５、６８〜７１、または９０のうちのいずれか１つに少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上の変異形との組み合わせを含むＩＬ−３３に特異的に結合する第１の結合ドメインを含む二重特異性抗ＩＬ−３３抗体は、ＩＬ−１３に結合する第２の結合ドメインを含み得る。ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の結合ドメインは、例えば、（ａ）ＡＹＳＶＮ（配列番号２９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＭＩＷＧＤＧＫＩＶＹＮＳＡＬＫＳ（配列番号２９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＤＧＹＹＰＹＡＭＤＮ（配列番号２９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＫＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号３００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＮＮＥＤＰＲＴ（配列番号３０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲ、あるいは上述のＨＶＲのうちの１つ以上と、配列番号２９６〜３０１のいずれか１つに少なくとも約８０％の配列同一性（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の同一性）を有するそれらの１つ以上の変異形との組み合わせを含み得る。一部の実施形態では、第２の結合ドメインは、ＩＬ−１３抗体レブリキズマブの１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む。
例えば、一部の事例では、（ａ）ＳＳＩＦＹＷＧ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号６６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＡＧＧＬＹＮＷＮＤＥＳＦＳＦＹＭＤＶ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＱＳＦＳＳＳＹＬＡ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＹＤＲＳＰＬＴ（配列番号７１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つの超可変領域（ＨＶＲ）を含むＩＬ−３３に特異的に結合する第１のドメインを含む二重特異性抗ＩＬ−３３抗体、例えば、４Ｇ１２．ＦＷ４は、ＩＬ−１３に結合する第２の結合ドメインを有し得る。ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の結合ドメインは、例えば、（ａ）ＡＹＳＶＮ（配列番号２９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）ＭＩＷＧＤＧＫＩＶＹＮＳＡＬＫＳ（配列番号２９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）ＤＧＹＹＰＹＡＭＤＮ（配列番号２９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）ＲＡＳＫＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号３００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）ＱＱＮＮＥＤＰＲＴ（配列番号３０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される少なくとも１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含み得る。一部の実施形態では、第２の結合ドメインは、ＩＬ−１３抗体レブリキズマブの１、２、３、４、５、または６つのＨＶＲを含む。
一部の事例では、（ａ）配列番号８４に少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号８４の配列を含む、ＶＨドメイン、（ｂ）配列番号８５に少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号８５の配列を含む、ＶＬドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含むＩＬ−３３に特異的に結合する第１の結合ドメインを含む、二重特異性抗ＩＬ−３３抗体、例えば、４Ｇ１２．ＦＷ４は、ＩＬ−１３に結合する第２の結合ドメインを有し得る。ＩＬ−１３に結合する第２の結合ドメインは、例えば、（ａ）配列番号３０２に少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３０２の配列を含む、ＶＨドメイン、（ｂ）配列番号３０３に少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３０３の配列を含む、ＶＬドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。一部の事例では、ＩＬ−１３に結合する第２の結合ドメインは、例えば、（ａ）配列番号３２８に少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３２８の配列を含む、ＶＨドメイン、（ｂ）配列番号３２９に少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３２９の配列を含む、ＶＬドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。一部の事例では、ＩＬ−１３に結合する第２の結合ドメインは、例えば、（ａ）抗ＩＬ−１３抗体レブリキズマブに少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または抗ＩＬ−１３抗体レブリキズマブの配列を含む、ＶＨドメイン、（ｂ）抗ＩＬ−１３抗体レブリキズマブに少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または抗ＩＬ−１３抗体レブリキズマブの配列を含む、ＶＬドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。
一部の事例では、二重特異性抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の重鎖及び第１の軽鎖（第１の重鎖は、配列番号３０６に少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３０６の配列を含み、第１の軽鎖は、配列番号３０７に少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３０７の配列を含む）、ならびに（ｂ）ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の重鎖及び第２の軽鎖（第２の重鎖は、配列番号３０４若しくは３３０に少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３０４若しくは３３０の配列を含み、第２の軽鎖は、配列番号３０５若しくは３３１に少なくとも８０％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３０５または３３１の配列を含む）を含み得る。一部の実施形態では、ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の重鎖及び第２の軽鎖は、抗ＩＬ−１３抗体レブリキズマブの重鎖及び軽鎖である。
一部の事例では、二重特異性抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の重鎖及び第１の軽鎖（第１の重鎖は、配列番号３０８に少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３０８の配列を含み、第１の軽鎖は、配列番号３０９に少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３０９の配列を含む）、ならびに（ｂ）ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の重鎖及び第２の軽鎖（第２の重鎖は、配列番号３０４若しくは３３０に少なくとも８０％の配列同一性（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３０４若しくは３３０の配列を含み、第２の軽鎖は、配列番号３０５若しくは３３１に少なくとも８０％（例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３０５または３３１の配列を含む）を含み得る。一部の実施形態では、ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の重鎖及び第２の軽鎖は、抗ＩＬ−１３抗体レブリキズマブの重鎖及び軽鎖である。
前述の二重特異性抗体のいずかれは、ヒト及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＩＬ−３３の両方に、約１ｎＭ以下のＫＤで特異的に結合し得る。前述の二重特異性抗体のいずれかは、ヒトＩＬ−３３に、約１ｎＭ以下のＫＤで特異的に結合し得る。例えば、一部の事例では、二重特異性抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約１ｎＭ（例えば、約１ｐＭ〜約９００ｐＭ、約１ｐＭ〜約８００ｐＭ、約１ｐＭ〜約７００ｐＭ、約１ｐＭ〜約６００ｐＭ、約１ｐＭ〜約５００ｐＭ、約１ｐＭ〜約４００ｐＭ、約１ｐＭ〜約３００ｐＭ、約１ｐＭ〜約２００ｐＭ、約１ｐＭ〜約１９０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１８０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１７０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１６０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１４０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１３０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１２０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１１０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１００ｐＭ、約１ｐＭ〜約９０ｐＭ、約１ｐＭ〜約８０ｐＭ、約１ｐＭ〜約７０ｐＭ、約１ｐＭ〜約６０ｐＭ、約１ｐＭ〜約５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約４０ｐＭ、約１ｐＭ〜約３０ｐＭ、約１ｐＭ〜約２５ｐＭ、約１ｐＭ〜約２０ｐＭ、または約１ｐＭ〜約１０ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する。一部の事例では、二重特異性抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約２５０ｐＭ（例えば、約１ｐＭ〜約２５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約２２５ｐＭ、約１ｐＭ〜約２００ｐＭ、約１ｐＭ〜約１９０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１８０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１７０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１６０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１４０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１３０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１２０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１１０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１００ｐＭ、約１ｐＭ〜約９０ｐＭ、約１ｐＭ〜約８０ｐＭ、約１ｐＭ〜約７０ｐＭ、約１ｐＭ〜約６０ｐＭ、約１ｐＭ〜約５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約４０ｐＭ、約１ｐＭ〜約３０ｐＭ、約１ｐＭ〜約２５ｐＭ、約１ｐＭ〜約２０ｐＭ、または約１ｐＭ〜約１０ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する。一部の事例では、二重特異性抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約２５ｐＭのＫＤで特異的に結合する。
前述の二重特異性抗体のいずれかは、ヒトＩＬ−１３に、約１ｎＭ以下のＫＤで特異的に結合し得る。例えば、一部の事例では、二重特異性抗体は、ヒトＩＬ−１３に、約１ｐＭ〜約１ｎＭ（例えば、約１ｐＭ〜約９００ｐＭ、約１ｐＭ〜約８００ｐＭ、約１ｐＭ〜約７００ｐＭ、約１ｐＭ〜約６００ｐＭ、約１ｐＭ〜約５００ｐＭ、約１ｐＭ〜約４００ｐＭ、約１ｐＭ〜約３００ｐＭ、約１ｐＭ〜約２００ｐＭ、約１ｐＭ〜約１９０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１８０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１７０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１６０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１４０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１３０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１２０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１１０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１００ｐＭ、約１ｐＭ〜約９０ｐＭ、約１ｐＭ〜約８０ｐＭ、約１ｐＭ〜約７０ｐＭ、約１ｐＭ〜約６０ｐＭ、約１ｐＭ〜約５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約４０ｐＭ、約１ｐＭ〜約３０ｐＭ、約１ｐＭ〜約２５ｐＭ、約１ｐＭ〜約２０ｐＭ、または約１ｐＭ〜約１０ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する。一部の事例では、二重特異性抗体は、ヒトＩＬ−１３に、約１ｐＭ〜約２５０ｐＭ（例えば、約１ｐＭ〜約２５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約２２５ｐＭ、約１ｐＭ〜約２００ｐＭ、約１ｐＭ〜約１９０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１８０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１７０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１６０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１４０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１３０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１２０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１１０ｐＭ、約１ｐＭ〜約１００ｐＭ、約１ｐＭ〜約９０ｐＭ、約１ｐＭ〜約８０ｐＭ、約１ｐＭ〜約７０ｐＭ、約１ｐＭ〜約６０ｐＭ、約１ｐＭ〜約５０ｐＭ、約１ｐＭ〜約４０ｐＭ、約１ｐＭ〜約３０ｐＭ、約１ｐＭ〜約２５ｐＭ、約１ｐＭ〜約２０ｐＭ、または約１ｐＭ〜約１０ｐＭ）のＫＤで特異的に結合する。一部の事例では、二重特異性抗体は、ヒトＩＬ−１３に、約１０ｐＭ以下のＫＤで特異的に結合する。一部の事例では、二重特異性抗体は、ヒトＩＬ−１３に、約１ｐＭ〜約１０ｐＭ（例えば、約１ｐＭ、約２ｐＭ、約３ｐＭ、約４ｐＭ、約５ｐＭ、約６ｐＭ、約７ｐＭ、約８ｐＭ、約９ｐＭ、または約１０ｐＭのＫＤで特異的に結合する。
多重特異性抗体を作製するための技法としては、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組み換え同時発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７，１９８３、国際公開第ＷＯ９３／０８８２９号、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５，１９９１を参照されたい）ならびに「ノブ・イン・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ）」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号を参照されたい）が挙げられるがこれらに限定されない。多重特異性抗体はまた、静電的ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ ｓｔｅｅｒｉｎｇ）効果を操作して抗体Ｆｃ−ヘテロ二量体分子を作製すること（国際公開第ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１号）、２つ以上の抗体またはフラグメントを架橋すること（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１，１９８５を参照されたい）、ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３，１９９２を参照されたい）、「ダイアボディ」技術を使用して二重特異性抗体フラグメントを作製すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８，１９９３を参照されたい）、及び一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）二量体を使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８，１９９４を参照されたい）、ならびにＴｕｔｔ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０，１９９１に記載されるように三重特異性抗体を調製することによって調製することができる。
「オクトパス（Ｏｃｔｏｐｕｓ）抗体」を含む、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体もまた、本明細書に含まれる（例えば、米国公開第２００６／００２５５７６Ａ１号を参照されたい）。
本明細書における抗体またはフラグメントにはまた、ＩＬ−３３ならびに別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用（Ｄｕａｌ Ａｃｔｉｎｇ）Ｆａｂ」または「ＤＡＦ」が含まれる（例えば、米国公開第２００８／００６９８２０号を参照されたい）。
ノブ・イン・ホール
多重特異性抗体を産生する方法としてノブ・イン・ホールを使用することは、例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、国際公開第ＷＯ２００９／０８９００４号、米国公開第２００９／０１８２１２７号、同第２０１１／０２８７００９号、Ｍａｒｖｉｎ ａｎｄ Ｚｈｕ，Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．（２００５）２６（６）：６４９−６５８、及びＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ（２００５）Ａｃｔａ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｉｎ．，２６：１−９に記載されている。簡潔な非限定的考察が、以下に提供される。
「隆起」は、ヘテロ多量体を安定化させ、それにより、例えば、ホモ多量体形成よりもヘテロ多量体形成を優先するように、第１のポリペプチドの界面から突出し、したがって隣接する界面（すなわち、第２のポリペプチドの界面）にある相補的空洞内に位置付けることが可能な、少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。隆起は、元々の界面内に存在してもよく、または、合成により（例えば、界面をコードする核酸を変化させることによって）導入してもよい。一部の実施形態では、第１のポリペプチドの界面をコードする核酸を、隆起をコードするように変化させる。これを達成するために、第１のポリペプチドの界面にある少なくとも１つの「原型」アミノ酸残基をコードする核酸が、原型アミノ酸残基よりも大きな側鎖体積を有する少なくとも１つの「移入」アミノ酸残基をコードする核酸で置換される。１つを上回る原型残基及び対応する移入残基が存在し得ることが、理解されよう。様々なアミノ残基の側鎖体積は、例えば、米国公開第２０１１／０２８７００９号の表１または米国特許第７，６４２，２２８号の表１に示されている。
一部の実施形態では、隆起の形成のための移入残基は、アルギニン（Ｒ）、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、及びトリプトファン（Ｗ）から選択される天然のアミノ酸残基である。一部の実施形態では、移入残基は、トリプトファンまたはチロシンである。一部の実施形態では、隆起の形成のための原型残基は、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グリシン、セリン、スレオニン、またはバリンのように、小さな側鎖体積を有する。例えば、米国特許第７，６４２，２２８号を参照されたい。
「空洞」は、第２のポリペプチドの界面から凹んでおり、したがって隣接する第１のポリペプチドの界面上の対応する隆起を収容する、少なくとも１つのアミノ酸側鎖を指す。空洞は、元々の界面内に存在してもよく、または、合成により（例えば、界面をコードする核酸を変化させることによって）導入してもよい。一部の実施形態では、第２のポリペプチドの界面をコードする核酸を、空洞をコードするように変化させる。これを達成するために、第２のポリペプチドの界面にある少なくとも１つの「原型」アミノ酸残基をコードする核酸が、原型アミノ酸残基よりも小さな側鎖体積を有する少なくとも１つの「移入」アミノ酸残基をコードするＤＮＡで置換される。１つを上回る原型残基及び対応する移入残基が存在し得ることが、理解されよう。一部の実施形態では、空洞の形成のための移入残基は、アラニン（Ａ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、及びバリン（Ｖ）から選択される天然のアミノ酸残基である。一部の実施形態では、移入残基は、セリン、アラニン、またはスレオニンである。一部の実施形態では、空洞の形成のための原型残基は、チロシン、アルギニン、フェニルアラニン、またはトリプトファンのように、大きな側鎖体積を有する。
隆起は空洞内に「位置付けることが可能」であり、これは、それぞれ第１のポリペプチド及び第２のポリペプチドの界面上の隆起及び空洞の空間的位置、ならびに隆起及び空洞の大きさが、界面における第１及び第２のポリペプチドの正常な会合を著しく乱すことなく隆起が空洞内に位置し得るようなものであることを意味する。Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、及びＴｒｐなどの隆起は、典型的には界面の軸から直角に伸びず、好ましい立体構造を有しないため、対応する空洞との隆起のアライメントは、一部の事例では、Ｘ線結晶学または核磁気共鳴（ＮＭＲ）によって得られるものといった三次元構造に基づく隆起／空洞対のモデリングに依存し得る。これは、当該技術分野で広く許容されている技法を使用して達成することができる。
一部の実施形態では、ＩｇＧ１定常領域内のノブ変異は、Ｔ３６６Ｗである。一部の実施形態では、ＩｇＧ１定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖから選択される１つ以上の変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ１定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む。
一部の実施形態では、ＩｇＧ４定常領域内のノブ変異は、Ｔ３６６Ｗある。一部の実施形態では、ＩｇＧ４定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖから選択される１つ以上の変異を含む。一部の実施形態では、ＩｇＧ４定常領域内のホール変異は、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む。
７．抗体変異形
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列変異形が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／または他の生物学的特性を向上させることが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列変異形は、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な修飾を導入することによって、またはペプチド合成によって、調製することができる。かかる修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、及び／またはそこへの残基の挿入、及び／またはその中での残基の置換が含まれる。最終構築物に到達するように、欠失、挿入、及び置換を任意に組み合わせることができるが、但し、その最終構築物が、所望の特性、例えば、抗原結合性を保有することを条件とする。
ａ）置換、挿入、及び欠失変異形
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異形が提供される。置換変異生成に対する目的の部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、表１において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１において、「例示的な置換」の見出しの下に提供され、またアミノ酸側鎖クラスを参照して以下に更に記載される。アミノ酸置換が目的の抗体中に導入され、その産物が、所望の活性、例えば、保持された／向上した抗原結合、減少した免疫原性、または向上したＡＤＣＣ若しくはＣＤＣについて、スクリーニングされてもよい。
Figure 2018500883
アミノ酸は、以下の一般的な側鎖特性に従って分類することができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。
置換変異形の種類の１つは、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを伴う。一般に、更なる研究のために選択される、結果として生じる変異形（複数可）は、親抗体と比べて、ある特定の生物学的特性における改変（例えば、向上）（例えば、増加した親和性、低減した免疫原性）を有することになり、及び／または親抗体の、実質的に保持されたある特定の生物学的特性を有することになる。例示的な置換変異形は、親和性成熟抗体であり、これは、例えば、本明細書に記載されるものなど、ファージディスプレイに基づく親和性成熟技法を使用して、簡便に生成することができる。簡潔に述べると、１つ以上のＨＶＲ残基を変異させ、変異形抗体をファージ上に提示させ、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングする。
変化（例えば、置換）をＨＶＲに行って、例えば、抗体親和性を向上させてもよい。かかる変化は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６，２００８を参照されたい）、及び／または抗原に接触する残基に行われてもよく、結果として生じる変異形ＶＨまたはＶＬが、結合親和性について試験される。二次ライブラリを構築し、そこから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）に記載されている。親和性成熟の一部の実施形態において、多様性が、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性変異生成）のうちのいずれかによって、成熟のために選定された可変遺伝子中に導入される。次いで、二次ライブラリが作出される。次いでこのライブラリが、所望の親和性を有する任意の抗体変異形を特定するために、スクリーニングされる。多様性を導入するための別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、１回に４〜６つの残基）がランダム化される、ＨＶＲ指向性アプローチを伴う。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異生成またはモデリングを使用して、具体的に特定されてもよい。特に、ＨＶＲ−Ｈ３及びＨＶＲ−Ｌ３が標的とされることが多い。
ある特定の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、かかる変化が、抗原に結合する抗体の能力を実質的に低減させない限り、１つ以上のＨＶＲ内で生じてもよい。例えば、結合親和性を実質的に低減させない保存的変化（例えば、本明細書に提供される保存的置換）が、ＨＶＲにおいて行われてもよい。かかる変化は、ＨＶＲの抗原接触残基以外であってもよい。上記に提供された変異形ＶＨ及びＶＬ配列のある特定の実施形態では、各ＨＶＲは、未変化であるか、またはわずか１つ、２つ、若しくは３つのアミノ酸置換を含有するかのいずれかである。
変異生成のための標的とされ得る抗体の残基または領域を特定するための有用な方法の１つは、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５，１９８９に記載される、「アラニンスキャニング変異生成」と呼ばれるものである。この方法では、標的残基（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、及びＧｌｕなどの荷電残基）のうちのある残基または残基群を特定し、それを中性または負荷電アミノ酸（例えば、Ａｌａまたはポリアラニン）によって置き換えて、抗体と抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを判定する。更なる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の場所に導入されてもよい。代替または追加として、抗体と抗原との間の接触点を特定するための抗原−抗体複合体の結晶構造。かかる接触残基及び隣接する残基は、置換の候補として標的とされるか、または排除され得る。変異形をスクリーニングして、それらが所望の特性を含有するかどうかを判定してもよい。
アミノ酸配列挿入には、長さが１残基から１００個以上の残基を含有するポリペプチドに及ぶ、アミノ末端融合及び／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内（ｉｎｔｒａｓｅｑｕｅｎｃｅ）挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異形には、抗体の血清中半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴのための）またはポリペプチドに対する抗体のＮ末端またはＣ末端への融合が含まれる。
ｂ）グリコシル化変異形
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように変化されている。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位を作り出すかまたは除去するように、アミノ酸配列を変化させることによって、簡便に遂行することができる。
抗体がＦｃ領域を含む場合、そこに結合した炭水化物を変化させてもよい。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、典型的に、概してＮ−結合によってＦｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に結合される、分岐した二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６−３２，１９９７を参照されたい。オリゴ糖類には、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖類構造の「ステム」においてＧｌｃＮＡｃに結合したフコースが含まれる。一部の実施形態では、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾は、ある特定の向上した特性を有する抗体変異形を作り出すために行われてもよい。
一実施形態では、Ｆｃ領域に（直接的または間接的に）結合したフコースを欠いている炭水化物構造を有する、抗体変異形が提供される。例えば、かかる抗体におけるフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、または２０％〜４０％であっても良い。フコースの量は、例えば、国際公開第ＷＯ２００８／０７７５４６号に記載されるように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定した場合に、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖鎖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、及び高マンノース構造）の合計と比べた、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって判定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域内の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、Ａｓｎ２９７はまた、抗体における小規模な配列変異に起因して、２９７位から約±３アミノ酸上流または下流、すなわち、２９４位〜３００位の間に位置してもよい。かかるフコシル化変異形は、向上したＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許公開第２００３／０１５７１０８号及び同第２００４／００９３６２１号を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠損」抗体変異形に関連する刊行物の例としては、米国公開第２００３／０１５７１０８号、国際公開第ＷＯ２０００／６１７３９号、同第ＷＯ２００１／２９２４６号、米国公開第２００３／０１１５６１４号、同第２００２／０１６４３２８号、同第２００４／００９３６２１号、同第２００４／０１３２１４０号、同第２００４／０１１０７０４号、同第２００４／０１１０２８２号、同第２００４／０１０９８６５号、国際公開第ＷＯ２００３／０８５１１９号、同第ＷＯ２００３／０８４５７０号、同第ＷＯ２００５／０３５５８６号、同第ＷＯ２００５／０３５７７８号、同第ＷＯ２００５／０５３７４２号、同第ＷＯ２００２／０３１１４０号、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９，２００４、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４，２００４が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例としては、タンパク質フコシル化が欠損したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａ ｅｔ ａｌ．Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５，１９８６、米国公開第２００３／０１５７１０８号、及び国際公開第ＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１号（特に実施例１１））、ならびにアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞などのノックアウト細胞株（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４，２００４、Ｋａｎｄａ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．９４（４）：６８０−６８８，２００６、及び国際公開第ＷＯ２００３／０８５１０７号）が挙げられる。
二分されたオリゴ糖類を有する、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐オリゴ糖類がＧｌｃＮＡｃによって二分されている、抗体変異形が更に提供される。かかる抗体変異形は、低減されたフコシル化及び／または向上したＡＤＣＣ機能を有し得る。かかる抗体変異形の例は、例えば、国際公開第ＷＯ２００３／０１１８７８号、米国特許第６，６０２，６８４号、及び米国公開第２００５／０１２３５４６号に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖類に少なくとも１つのガラクトース残基を有する、抗体変異形もまた提供される。かかる抗体変異形は、向上したＣＤＣ機能を有し得る。かかる抗体変異形は、例えば、国際公開第ＷＯ１９９７／３００８７号、同第ＷＯ１９９８／５８９６４号、及び同第ＷＯ１９９９／２２７６４号に記載されている。
ｃ）Ｆｃ領域変異形
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾が、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それによってＦｃ領域変異形が生成され得る。Ｆｃ領域変異形は、１つ以上のアミノ酸位にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含む、ヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ領域）を含み得る。
ある特定の実施形態において、全てではないが一部のエフェクター機能を保有することにより、インビボでの抗体の半減期が重要であるが、ある特定のエフェクター機能（例えば補体及びＡＤＣＣ等）が不必要または有害である用途に望ましい候補となる、抗体変異形が本発明により企図される。インビトロ及び／またはインビボでの細胞毒性アッセイを行って、ＣＤＣ及び／またはＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行って、抗体がＦｃγＲ結合を欠いている（したがって、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力は保持していることを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞はＦｃ（ＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球はＦｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ、及びＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ｅｔ ａｌ．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２，１９９１の４６４頁の表３にまとめられている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ ８３：７０５９−７０６３，１９８６及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ ８２：１４９９−１５０２，１９８５、米国特許第５，８２１，３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１，１９８７を参照されたい）に記載されている。代替として、非放射性アッセイ法を用いてもよい（例えば、ＡＣＴＩ（商標）フローサイトメトリー用非放射性細胞毒性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ及びＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞毒性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照されたい。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替または追加として、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ ９５：６５２−６５６，１９９８に開示されるものといった動物モデルにおいて、評価してもよい。また、Ｃ１ｑ結合アッセイを行って、抗体がＣ１ｑに結合不可能であり、よってＣＤＣ活性を欠いていることを確認してもよい。例えば、国際公開第ＷＯ２００６／０２９８７９及び同第ＷＯ２００５／１００４０２号におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行ってもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３，１９９６、Ｃｒａｇｇ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５−１０５２，２００３、及びＣｒａｇｇ ｅｔ ａｌ．Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８−２７４３，２００４を参照されたい）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期の判定も、当該技術分野で既知の方法を使用して行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９，２００６を参照されたい）。
低減されたエフェクター機能を有する抗体としては、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７、及び３２９のうちの１つ以上の置換を有するものが含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号）。かかるＦｃ変異体には、残基２６５及び２９７のアラニンへの置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）、アミノ酸位２６５、２６９、２７０、２９７、及び３２７のうちの２つ以上における置換を有するＦｃ変異体が含まれる。
ＦｃＲへの結合が向上または減少した、ある特定の抗体変異形が記載される。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号、国際公開第ＷＯ２００４／０５６３１２号、及びＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４，２００１を参照されたい）。
ある特定の実施形態では、抗体変異形は、ＡＤＣＣを向上させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８位、３３３位、及び／または３３４位（残基のＥＵ番号付け）に置換を有する、Ｆｃ領域を含む。
一部の実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号、国際公開第ＷＯ９９／５１６４２号、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４，２０００に記載されるように、変化した（すなわち、向上または減少のいずれか）Ｃ１ｑ結合及び／または補体依存性細胞毒性（ＣＤＣ）をもたらす変化が、Ｆｃ領域になされる。
増加した半減期を有し、母体ＩｇＧの胎児への移入を担う（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７，１９７６及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９，１９９４）胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する向上した結合性を有する抗体が、米国公開第ＵＳ２００５／００１４９３４号に記載されている。これらの抗体は、ＦｃＲｎに対するＦｃ領域の結合性を向上させる１つ以上の置換を内部に有するＦｃ領域を含む。かかるＦｃ変異形には、Ｆｃ領域残基２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうちの１つ以上における置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換（米国特許第７，３７１，８２６号）を有するものが含まれる。
Ｆｃ領域変異形の他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８−４０，１９８８、米国特許第５，６４８，２６０号及び同第５，６２４，８２１号、ならびに国際公開第ＷＯ９４／２９３５１号もまた参照されたい。
ｄ）システイン操作抗体変異体
ある特定の実施形態では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作抗体、例えば、「チオＭＡｂ」を作成することが望ましい場合がある。特定の実施形態において、置換残基は、抗体の利用しやすい部位において生じる。それらの残基をシステインで置換することで、反応性のチオール基がそれにより抗体の利用しやすい部位に配置され、本明細書に更に記載されるように、この反応性チオール基を使用して、抗体を薬物部分またはリンカー−薬物部分などの他の部分にコンジュゲートして、免疫コンジュゲートを作り出すことができる。ある特定の実施形態では、次の残基のうちのいずれか１つ以上が、システインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔ番号付け）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるように生成してもよい。
ｅ）抗体誘導体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、容易に入手可能な、追加の非タンパク質性部分を含有するように、更に修飾されてもよい。抗体の誘導体化に好適な部分には、水溶性ポリマーが含まれるがこれらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、及びデキストランまたはポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレン（ｐｒｏｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）グリコールホモポリマー、プロリプロピレン（ｐｒｏｌｙｐｒｏｐｙｌｅｎｅ）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにこれらの混合物が挙げられるがこれらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性に起因して、製造における利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量のものであってもよく、分岐していても非分岐であってもよい。抗体に結合したポリマーの数は様々であり得、１つを超えるポリマーが結合される場合、それらは、同じ分子であっても異なる分子であってもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／または種類は、向上させるべき抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が規定の条件下で治療法において使用されるかどうかなどを含むがこれらに限定されない検討事項に基づいて、決定することができる。
別の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る、抗体と非タンパク質性部分とのコンジュゲートが提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ １０２：１１６００−１１６０５，２００５）。放射線は、任意の波長のものであり得、これには、一般の細胞には害を及ぼさないが、非タンパク質性部分を、抗体−非タンパク質性部分の付近の細胞が殺滅される温度まで加熱する波長が含まれるがこれらに限定されない。
Ｂ．組み換え方法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される、組み換え方法及び組成物を使用して産生されてもよい。一実施形態では、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体をコードする単離核酸が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／またはＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／または重鎖）をコードし得る。更なる実施形態では、かかる核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。更なる実施形態では、かかる核酸を含む宿主細胞が提供される。１つのかかる実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、２９３細胞、またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、抗ＩＬ−３３抗体を作製する方法が提供され、本方法は、上記に提供される抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することとを含む。
抗ＩＬ−３３抗体の組み換え産生については、例えば、上述の抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞での更なるクローニング及び／または発現のために、１つ以上のベクターに挿入される。かかる核酸は、従来的な手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）容易に単離され、配列決定され得る。
抗体コードベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、本明細書に記載される原核細胞または真核細胞が含まれる。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合に、細菌において産生されてもよい。細菌における抗体フラグメント及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（また、大腸菌における抗体フラグメントの発現について記載しているＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４も参照されたい）。発現後、抗体は、可溶性画分において細菌細胞ペーストから単離されてもよく、また更に精製されてもよい。
原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物は、抗体コードベクターに好適なクローニングまたは発現の宿主であり、それには、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全にヒトのグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌及び酵母株が含まれる。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４，２００４及びＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５，２００６を参照されたい。
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞はまた、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物及び昆虫細胞が挙げられる。特にスポドプテラ・フルギペルダ細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と併せて使用され得る多数のバキュロウイルス株が特定されている。
植物細胞培養物もまた、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術について記載している）を参照されたい。
脊椎動物細胞もまた、宿主として使用することができる。例えば、懸濁液中で成長するように適合された哺乳類細胞株が、有用であり得る。有用な哺乳類宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）；ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９，１９７７に記載される２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１，１９８０に記載されるＴＭ４細胞；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頸がん細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．３８３：４４−６８，１９８２に記載されるＴＲＩ細胞；ＭＲＣ ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳類宿主細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ ７７：４２１６，１９８０）を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ならびにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が含まれる。抗体産生に好適なある特定の哺乳類宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８，２００３を参照されたい。
Ｃ．アッセイ
本明細書に提供される抗ＩＬ−３３抗体は、当該技術分野で既知の様々なアッセイによって、それらの物理的／化学的特性及び／または生物学的活性について特定、スクリーニング、または特徴付けが行われ得る。
１．結合アッセイ及び他のアッセイ
一態様において、本発明の抗ＩＬ−３３抗体は、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロットなどの既知の方法によって、その抗原結合活性に関して試験される。
別の態様では、競合アッセイを用いて、ＩＬ−３３への結合について本発明の抗ＩＬ−３３抗体と競合する抗体が特定され得る。ある特定の実施形態では、かかる競合抗体は、本発明の抗ＩＬ−３３抗体が結合するものと同じエピトープ（例えば、直鎖または立体構造のエピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的方法は、Ｍｏｒｒｉｓ“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，”ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），１９９６に提供されている。
例示的な競合アッセイでは、固定化されたＩＬ−３３が、ＩＬ−３３に結合する第１の標識抗体と、ＩＬ−３３への結合について第１の抗体と競合するその能力について試験されている第２の未標識抗体とを含む溶液中で、インキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在してもよい。対照として、固定化されたＩＬ−３３が、第１の標識抗体を含むが第２の未標識抗体を含まない溶液中でインキュベートされる。ＩＬ−３３への第１の抗体の結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰の未結合抗体が除去され、固定化されたＩＬ−３３に結合した標識の量が測定される。固定化されたＩＬ−３３と結合した標識の量が、試験試料中では対照試料と比べて実質的に低減している場合、それは、第２の抗体がＩＬ−３３への結合について第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ），１９８８を参照されたい。
２．活性アッセイ
一態様において、生物学的活性を有する抗ＩＬ−３３抗体を特定するためのアッセイが提供される。生物学的活性には、例えば、ＩＬ−３３（例えば、血流中ＩＬ−３３）またはそのペプチドフラグメントに、インビボ、インビトロ、またはエキソビボのいずれかで結合することが含まれ得る。他の実施形態では、生物学的活性には、ＩＬ−３３の遮断若しくは中和、またはＩＬ−３３とリガンド、例えば受容体（例えば、ＩＬ−３３受容体ＳＴ２及び／若しくはＩＬ−１ＲＡｃＰ）との結合の防止が含まれ得る。一部の実施形態では、生物学的活性には、ＩＬ−３３上の部位１への結合ならびにＩＬ−３３受容体（すなわち、ＳＴ２及び／またはＩＬ−１ＲＡｃＰ）への結合の遮断が含まれ得る。インビボ及び／またはインビトロにおいてかかる生物学的活性を有する抗体が提供される。ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、かかる生物学的活性に関して試験される。一部の実施形態では、本発明の抗ＩＬ−３３抗体は、細胞に基づくＩＬ−３３遮断アッセイにおいて阻害に関して試験される。一部の実施形態では、本発明の抗ＩＬ−３３抗体は、細胞に基づく遮断アッセイ（例えば、本明細書（例えば、実施例２及び実施例８、節Ｂを参照されたい）に記載されるＩＬ−３３ ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞に基づくアッセイ）においてＩＬ−３３に誘導される受容体活性の阻害に関して試験される。一部の実施形態では、本発明の抗体は、初代細胞において、例えば、初代ＮＫ細胞アッセイ（例えば、実施例８、節Ｃを参照されたい）または初代好塩基球アッセイ（例えば、実施例８、節Ｄを参照されたい）において、ＩＬ−３３活性の阻害に関して試験される。一部の実施形態では、本発明の抗体は、競合的結合ＥＬＩＳＡ（例えば、実施例８、節Ｆを参照されたい）においてＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合の阻害に関して試験される。
Ｄ．免疫コンジュゲート
本発明はまた、化学療法剤若しくは化学療法薬、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク毒素、細菌、真菌、植物、若しくは動物源の酵素活性毒素、またはそれらのフラグメント）、または放射性同位体などの１つ以上の細胞毒性剤にコンジュゲートされた本明細書の抗ＩＬ−３３抗体を含む、免疫コンジュゲートも提供する。
一実施形態では、免疫コンジュゲートは、抗体が１つ以上の薬物にコンジュゲートされた抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）であり、この薬物としては、マイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号、同第５，４１６，０６４号、及び欧州特許第０ ４２５ ２３５ Ｂ１号を参照されたい）；モノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦを含むオーリスタチン（ＭＭＡＥ及びＭＭＡＦ）（米国特許第５，６３５，４８３号及び同第５，７８０，５８８号及び同第７，４９８，２９８号を参照されたい）；ドラスタチン：カリケアマイシンまたはその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号、同第５，７１４，５８６号、同第５，７３９，１１６号、同第５，７６７，２８５号、同第５，７７０，７０１号、同第５，７７０，７１０号、同第５，７７３，００１号、及び同第５，８７７，２９６号、Ｈｉｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：３３３６−３３４２，１９９３、ならびにＬｏｄｅ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：２９２５−２９２８，１９９８を参照されたい）：ダウノマイシンまたはドキソルビシンなどのアントラサイクリン（Ｋｒａｔｚ ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７−５２３，２００６、Ｊｅｆｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １６：３５８−３６２，２００６、Ｔｏｒｇｏｖ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７−７２１，２００５、Ｎａｇｙ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ ９７：８２９−８３４，２０００、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：１５２９−１５３２，２００２、Ｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６−４３４３，２００２、及び米国特許第６，６３０，５７９号）；メトトレキサート；ビンデシン；ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセル、及びオルタタキセルなどのタキサン；トリコテセン；ならびにＣＣ１０６５が挙げられるがこれらに限定されない。
別の実施形態では、免疫コンジュゲートは、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性フラグメント、外毒素Ａ鎖（シュードモナス・エルギノーザ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデッシンＡ鎖、アルファ−サルシン、アレウリテス・フォルディタンパク質、ジアンチンタンパク質、フィトラッカ・アメリカーナタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、モモルディカ・チャランチア阻害剤、クルシン、クロチン、サポアオナリア・オフィシナリス阻害剤、ゲロニン、マイトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、及びトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）を含むがこれらに限定されない、酵素活性毒素及びそのフラグメントにコンジュゲートされた、本明細書に記載される抗体を含む。
別の実施形態では、免疫コンジュゲートは、放射性原子にコンジュゲートされて放射性コンジュゲートを形成した、本明細書に記載される抗体を含む。様々な放射性同位体が、放射性コンジュゲートの産生に利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。放射性コンジュゲートを検出に使用する場合、それは、シンチグラフ研究のための放射性原子、例えば、テクネチウム−９９ｍ（ｔｃ９９ｍ）若しくはＩ１２３、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）撮像（磁気共鳴撮像ｍｒｉとしても知られる）のためのスピン標識、例えば、ここでもヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン、若しくは鉄を含み得る。
抗体と細胞毒性剤とのコンジュゲートは、様々な二官能性タンパク質結合剤、例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン２，６−ジイソシアネートなど）、及びビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）を使用して作製することができる。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８，１９８７に記載されるように調製することができる。炭素−１４で標識した１−イソチオシアナートベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性核種を抗体にコンジュゲートするための例示的なキレート剤である。国際公開第ＷＯ９４／１１０２６号を参照されたい。リンカーは、細胞内での細胞毒性薬の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であってもよい。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光分解性リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（例えば、Ｃｈａｒｉ ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１，１９９２、米国特許第５，２０８，０２０号を参照されたい）を使用してもよい。
本明細書の免疫コンジュゲートまたはＡＤＣは、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ−ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、ならびにＳＶＳＢ（スクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート）を含むがこれらに限定されない架橋試薬（これらは、（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ．，Ｕ．Ｓ．Ａから）市販入手可能である）を用いて調製されたコンジュゲートを明示的に企図するが、これらに限定されない。
Ｅ．診断及び検出のための方法及び組成物
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＩＬ−３３抗体は、生体試料中のＩＬ−３３の存在を検出するのに有用である。本明細書に使用される「検出する」という用語は、定量的検出または定性的検出を包含する。ある特定の実施形態では、生体試料は、細胞または組織、例えば、平滑筋、上皮細胞、内皮細胞、血液、血液細胞（例えば、マクロファージ、自然ＩＩ型（ＩＬＣ２）細胞、肥満細胞、好塩基球、好酸球、及び樹状細胞）、中枢神経系細胞（例えば、グリア細胞）、または眼細胞（例えば、網膜細胞（例えば、ミュラー細胞若しくは網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞）及び眼の血管内皮細胞）を含む。
一実施形態では、診断または検出の方法において使用するための抗ＩＬ−３３抗体が提供される。更なる態様では、生体試料中のＩＬ−３３の存在を検出する方法が提供される。ある特定の実施形態では、本方法は、生体試料と本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体とを、抗ＩＬ−３３抗体とＩＬ−３３との結合を許容する条件下で接触させること、及び抗ＩＬ−３３抗体とＩＬ−３３との間に複合体が形成されたかどうかを検出することを含む。かかる方法は、インビトロ法またはインビボ法であり得る。一実施形態では、例えば、ＩＬ−３３が患者の選択のためのバイオマーカーである場合に、抗ＩＬ−３３抗体を用いた治療法に適した対象を選択するために抗ＩＬ−３３抗体が用いられる。
本発明の抗体を用いて診断することができる例示的な障害としては、ＩＬ−３３媒介性障害が含まれ、これには、例えば、好酸球性障害（例えば、喘息、敗血症、敗血症性ショック、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、リウマチ性関節炎、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））、免疫障害（例えば、喘息、リウマチ性関節炎、アレルギー、アトピー性アレルギー、アナフィラキシー、アナフィラキシーショック、アレルギー性鼻炎、乾癬、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、糖尿病、及び肝疾患）、線維性障害（例えば、肺線維症（例えば、特発性肺線維症）、好酸球性障害（例えば、好酸球性食道炎を含む好酸球関連胃腸障害（ＥＧＩＤ））、感染症（例えば、蠕虫感染症、原虫感染症、及びウイルス感染症）、疼痛（例えば、炎症性疼痛）、中枢神経系障害（例えば、アルツハイマー病）、固形腫瘍（例えば、乳房、結腸、前立腺、肺、腎臓、肝臓、膵臓、胃、腸、脳、骨、及び皮膚の腫瘍）、及び眼科障害（例えば、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）または眼の網膜症）が挙げられる。一部の事例では、本発明の抗体を用いて診断することができる眼科障害としては、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ、萎縮型ＡＭＤ、中間型ＡＭＤ、進行型ＡＭＤ、及び地図状萎縮（ＧＡ）を含む）、網膜症（例えば、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、及び高所ＤＲ）、ポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、網膜剥離、緑内障、ブドウ膜炎（例えば、感染性及び非感染性のブドウ膜炎）、網膜色素変性、レーバー先天黒内障、シュタルガルト病、外傷性眼損傷、及び結膜炎（例えば、感染性結膜炎、非感染性結膜炎、及びアレルギー性結膜炎）が挙げられる。
一部の事例では、眼科障害には、ＡＭＤ（滲出型ＡＭＤ、萎縮型ＡＭＤ、及びＧＡを含む）、網膜症（例えば、ＤＲ及びＲＯＰ）、ＰＣＶ、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、アレルギー性結膜炎、及び網膜剥離が含まれる。
他の事例では、眼科疾患には、中間型ＡＭＤ、進行型ＡＭＤ、緑内障、ブドウ膜炎（例えば、感染性及び非感染性）、網膜色素変性、レーバー先天黒内障、シュタルガルト病、高所糖尿病性網膜症、外傷性眼損傷、及び結膜炎（例えば、感染性結膜炎及び非感染性結膜炎）が含まれる。
ある特定の実施形態では、標識された抗ＩＬ−３３抗体が提供される。標識には、直接検出される標識または部分（蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、及び放射性標識等）、ならびに例えば、酵素反応または分子相互作用を通じて間接的に検出される酵素またはリガンドなどの部分が含まれるが、これらに限定されない。例となる標識には、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、希土類キレートまたはフルオレセイン及びその誘導体などのフルオロフォア、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルセリフェラーゼ（ｌｕｃｅｒｉｆｅｒａｓｅ）、例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖質オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸塩デヒドロゲナーゼ、過酸化水素を用いて色素前駆体を酸化させる酵素、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、またはマイクロペルオキシダーゼとカップリングされた、ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼなどの複素環式オキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定した遊離ラジカル等が含まれるが、これらに限定されない。
Ｆ．薬学的製剤
本発明の抗ＩＬ−３３抗体の薬学的製剤は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、所望される度合いの純度を有するかかる抗体を、１つ以上の任意選択の薬学的に許容される担体（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．，１９８０を参照されたい）と混合することによって調製することができる。薬学的に許容される担体は、一般に、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントにとって毒性ではなく、この担体には、緩衝液、例えばリン酸、クエン酸、及び他の有機酸；酸化防止剤、例えばアスコルビン酸及びメチオニン；保存剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド：塩化ヘキサメトニウム：塩化ベンザルコニウム：塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチル若しくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチン、免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリジン；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、若しくはデキストリンを含む他の炭水化物；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖類、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）；ならびに／または非イオン性界面活性剤、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれるがこれらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容される担体には、例えば、介在性（ｉｎｓｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ）薬物分散剤、例えば可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えばヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質、例えばｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）が更に含まれる。ｒＨｕＰＨ２０を含むある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、１つ以上の追加のグリコサミノグリカナーゼ、例えばコンドロイチナーゼと組み合わされる。
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体製剤には、米国特許第６，１７１，５８６号及び国際公開第ＷＯ２００６／０４４９０８に記載されるものが含まれ、後者の製剤にはヒスチジン−酢酸緩衝液が含まれる。
本明細書の製剤はまた、治療されている特定の適応症の必要に応じて、１つを上回る活性成分、好ましくは相互に悪影響を及ぼさない相補的活性を有する成分を含有してもよい。例えば、ＳＴ２結合アンタゴニスト、補体経路阻害剤（例えば、Ｄ因子結合アンタゴニスト）、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニスト、ＶＥＧＦアンタゴニスト、トリプターゼ−ベータ結合アンタゴニスト、Ｔｈ２細胞上に発現される化学誘引物質受容体相同分子（ＣＲＴＨ２）結合アンタゴニスト、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）結合アンタゴニスト、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）結合アンタゴニスト、ＪＡＫ１アンタゴニスト、及び／またはインターロイキン−５（ＩＬ−５）結合アンタゴニストを更に提供することが望ましい場合がある。一部の事例では、補体経路阻害剤は、Ｄ因子結合アンタゴニストである。一部の事例では、Ｄ因子結合アンタゴニストは、例えば以下の節Ｇ「治療方法及び組成物」に記載される、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の事例では、ＨｒｔＡ１結合アンタゴニストは、例えば以下の節Ｇ「治療方法及び組成物」に記載される、抗ＨｔｒＡ１抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の事例では、抗ＨｔｒＡ１抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２フラグメントである。一部の事例では、抗Ｄ因子抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２フラグメントである。一部の事例では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、例えば以下の節Ｇ「治療方法及び組成物」に記載される、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２フラグメントである。一部の事例では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ受容体抗体またはその抗原結合フラグメントである。一部の事例では、抗ＶＥＧＦ受容体抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２フラグメントである。かかる活性成分は、意図される目的に有効な量で組み合わせて存在することが好適である。
活性成分は、例えばコアセルベーション技法若しくは界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロース若しくはゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセル中に、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、及びナノカプセル）中に、またはマクロエマルジョン中に封入され得る。かかる技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．，１９８０に開示されている。
徐放性調製物が調製されてもよい。徐放性調製物の好適な例としては、抗体または免疫コンジュゲートを含有する疎水性固体ポリマーの半透性マトリクスが挙げられ、このマトリクスは、成形品、例えばフィルムまたはマイクロカプセルの形態である。
眼への送達（眼科送達）のために、本発明の抗体は、例えば、眼科的に許容される保存剤、共溶媒、界面活性剤、粘度増強剤、透過促進剤、緩衝剤、塩化ナトリウム、及び／または水と組み合わされ得る。保存剤は、例えば、使用中の微生物混入を抑制するために含めることができる。好適な保存剤には、エデト酸二ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン、ソルビン酸、フェニルエチルアルコール、クロロブタノール、ポリクオタニウム−１、または当該技術分野で既知の他の薬剤が含まれる。かかる保存剤は、典型的に、０．００１〜１．０％重量／体積のレベルで用いられる。一部の事例では、本発明の薬学的製剤は、保存剤を含まない。ある特定の事例では、眼への局所投与が意図される組成物は、点眼剤または眼軟膏として製剤化されてもよい。一部の事例では、抗体の総量は、例えば、かかる製剤の約０．００１〜１．０％（重量／重量）、例えば、約０．０１〜約１．０％（重量／重量）となるであろう。
インビボ投与に使用されることになる製剤は、一般に、滅菌されている。滅菌状態は、例えば、滅菌濾過膜を通じた濾過によって、容易に達成することができる。
Ｇ．治療方法及び組成物
本明細書に提供される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかが、治療方法に使用され得る。
本発明は、医薬品として使用するためのＩＬ−３３軸結合アンタゴニストを提供する。一態様において、医薬品として使用するための抗ＩＬ−３３抗体が提供される。更なる態様では、ＩＬ−３３媒介性障害の治療に使用するための抗ＩＬ−３３抗体が提供される。ある特定の実施形態では、治療方法において使用するための抗ＩＬ−３３抗体が提供される。ある特定の実施形態では、本発明は、ＩＬ−３３媒介性障害を有する個体を治療する方法において使用するための抗ＩＬ−３３抗体を提供し、この方法は、有効量の抗ＩＬ−３３抗体を個体に投与することを含む。１つのかかる実施形態では、本方法は、例えば以下に記載されるような少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することを更に含む。上述の実施形態のいずれかによる「個体」は、好ましくはヒトである。
本発明は、医薬品の製造または調製におけるＩＬ−３３軸結合アンタゴニストを提供する。更なる態様では、本発明は、医薬品の製造または調製における抗ＩＬ−３３抗体の使用を提供する。一実施形態では、医薬品は、ＩＬ−３３媒介性障害の治療のためのものである。更なる実施形態では、医薬品は、ＩＬ−３３媒介性障害を治療する方法において使用するためのものであり、この方法は、ＩＬ−３３媒介性障害を有する個体に有効量の医薬品を投与することを含む。１つのかかる実施形態では、本方法は、例えば以下に記載されるような少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することを更に含む。上述の実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
別の態様では、本発明は、例えば、喘息、気道過敏、気道炎症、敗血症、敗血症性ショック、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、リウマチ性関節炎、若しくは慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの炎症性障害、または例えば特発性肺線維症（ＩＰＦ）などの線維性障害のための医薬品の製造における、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する二重特異性抗体またはその抗原結合抗体フラグメントの使用を提供する。例示的な実施形態では、本発明は、喘息の治療のための医薬品の製造における、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する二重特異性抗体またはその抗原結合抗体フラグメントの使用を提供する。二重特異性抗体は、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかに由来する、ＩＬ−３３に特異的に結合する結合ドメインを含み得る。二重特異性抗体は、本明細書に記載されるＩＬ−１３に特異的に結合する結合ドメインを含み得る。例示的な実施形態は、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する二重特異性抗体は、以下の６つのＨＶＲ：ＳＦＳＭＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ＡＮＹＧＮＷＦＦＥＶ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、ＲＡＳＥＳＶＡＫＹＧＬＳＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＫＥＶＰＦＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の結合ドメインと、以下の６つのＨＶＲ：ＡＹＳＶＮ（配列番号２９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＭＩＷＧＤＧＫＩＶＹＮＳＡＬＫＳ（配列番号２９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ＤＧＹＹＰＹＡＭＤＮ（配列番号２９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、ＲＡＳＫＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号３００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＮＮＥＤＰＲＴ（配列番号３０１）アミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む。別の実施形態では、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する二重特異性抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ａ）配列番号３０２のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号３０３のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む。別の実施形態では、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する二重特異性抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ａ）配列番号３０２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３０３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む。別の実施形態では、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する二重特異性抗体は、（ａ）ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の重鎖及び第１の軽鎖（第１の重鎖は、配列番号３０８のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、第１の軽鎖は、配列番号３０９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｂ）ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の重鎖及び第２の軽鎖（第２の重鎖は、配列番号３０４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、第２の軽鎖は、配列番号３０５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。別の実施形態では、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する二重特異性抗体は、（ａ）ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の重鎖及び第１の軽鎖（第１の重鎖は配列番号３０８のアミノ酸配列を含み、第１の軽鎖は配列番号３０９のアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｂ）ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の重鎖及び第２の軽鎖（第２の重鎖は配列番号３０４のアミノ酸配列を含み、第２の軽鎖は配列番号３０５のアミノ酸配列を含む）を含む。
別の態様では、本発明は、地図状萎縮（ＧＡ）を治療するための医薬品の製造における、ＩＬ−３３及びＤ因子の両方に特異的に結合する二重特異性抗体、またはその抗原結合抗体フラグメントの使用を提供する。二重特異性抗体は、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかに由来する、ＩＬ−３３に特異的に結合する結合ドメインを含み得る。二重特異性抗体は、後述の抗Ｄ因子抗体のうちのいずれかに由来する、Ｄ因子に特異的に結合する結合ドメインを含み得る。一部の実施形態では、抗原結合抗体フラグメントは、（Ｆａｂ’）２フラグメントである。
別の態様では、本発明は、地図状萎縮（ＧＡ）、ＡＭＤ（滲出型若しくは萎縮型）、ＤＲ、ＰＣＶ、またはＲＯＰを治療するための医薬品の製造における、ＩＬ−３３及びＨｔｒＡ１の両方に特異的に結合する二重特異性抗体またはその抗原結合抗体フラグメントの使用を提供する。二重特異性抗体は、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかに由来する、ＩＬ−３３に特異的に結合する結合ドメインを含み得る。二重特異性抗体は、本明細書に記載される抗ＨｔｒＡ１抗体のうちのいずれかに由来する、ＨｔｒＡ１に特異的に結合する結合ドメインを含み得る。一部の実施形態では、抗原結合抗体フラグメントは、（Ｆａｂ’）２フラグメントである。
更に別の態様では、本発明は、滲出型ＡＭＤを治療するための医薬品の製造における、ＩＬ−３３及びＶＥＧＦの両方に特異的に結合する二重特異性抗体またはその抗原結合抗体フラグメントの使用を提供する提供する。二重特異性抗体は、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかに由来する、ＩＬ−３３に特異的に結合する結合ドメインを含み得る。二重特異性抗体は、以下に記載される抗ＶＥＧＦ抗体のうちのいずれかに由来する、ＶＥＧＦに特異的に結合する結合ドメインを含み得る。一部の実施形態では、抗原結合抗体フラグメントは、（Ｆａｂ’）２フラグメントである。
更なる態様では、本発明は、ＩＬ−３３媒介性障害を治療するための方法を提供する。一部の事例では、本方法は、かかるＩＬ−３３媒介性障害を有する個体に、有効量のＩＬ−３３軸結合アンタゴニストを投与することを含む。一実施形態では、本方法は、かかるＩＬ−３３媒介性障害を有する個体に、有効量の抗ＩＬ−３３抗体を投与することを含む。１つのかかる実施形態では、本方法は、以下に記載されるような少なくとも１つの追加の治療剤を個体に投与することを更に含む。上述の実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。
更なる態様において、本発明は、例えば、上述の治療方法のいずれかにおいて使用するための、本明細書に提供される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかを含む、薬学的製剤を提供する。一実施形態では、薬学的製剤は、本明細書に提供される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかと、薬学的に許容される担体とを含む。別の実施形態では、薬学的製剤は、本明細書に提供される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかと、例えば以下に記載されるような少なくとも１つの追加の治療剤とを含む。
前述の態様のうちのいずれかにおいて、ＩＬ−３３媒介性障害は、炎症性状態、免疫障害、線維性障害、好酸球性障害、感染症、疼痛、中枢神経系障害、固形腫瘍、または眼科障害であり得る。例えば、一部の事例では、炎症性状態は、喘息、気道過敏、気道炎症、敗血症、敗血症性ショック、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、リウマチ性関節炎、または慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）であり得る。一部の事例では、免疫障害は、喘息、リウマチ性関節炎、アレルギー、アトピー性アレルギー、アナフィラキシー、アナフィラキシーショック、アレルギー性鼻炎、乾癬、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、糖尿病、または肝疾患であり得る。一部の事例では、線維性疾患は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）であり得る。一部の事例では、好酸球性障害は、好酸球関連胃腸障害（ＥＧＩＤ）であり得る。一部の事例では、ＥＧＩＤは、好酸球性食道炎であり得る。一部の事例では、感染症は、蠕虫感染症、原虫感染症、またはウイルス感染症であり得る。一部の事例では、原虫感染症は、大形リーシュマニア感染症であり得る。一部の事例では、ウイルス感染症は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症またはインフルエンザ感染症であり得る。一部の事例では、疼痛は、炎症性疼痛であり得る。一部の事例では、中枢神経系障害は、アルツハイマー病であり得る。一部の事例では、固形腫瘍は、乳房腫瘍、結腸腫瘍、前立腺腫瘍、肺腫瘍、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、膵臓腫瘍、胃腫瘍、腸腫瘍、脳腫瘍、骨腫瘍、または皮膚腫瘍であり得る。具体的な事例では、ＩＬ−３３媒介性障害は、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、ＣＯＰＤ、好酸球性食道炎、または肺線維症（例えば、ＩＰＦ）であり得る。例えば、一部の事例では、ＩＬ−３３媒介性障害は、喘息である。他の事例では、ＩＬ−３３媒介性障害は、肺線維症（例えば、ＩＰＦ）である。
前述の態様のうちのいずれかの一部の事例では、ＩＬ−３３媒介性障害は、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）（滲出型ＡＭＤ、萎縮型ＡＭＤ、中間型ＡＭＤ、進行型ＡＭＤ、及び地図状萎縮（ＧＡ）を含む）、網膜症（例えば、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、及び高所ＤＲ）、ポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、網膜剥離、緑内障、ブドウ膜炎（例えば、感染性及び非感染性ブドウ膜炎）、網膜色素変性、レーバー先天黒内障、シュタルガルト病、外傷性眼損傷、及び結膜炎（例えば、感染性結膜炎、非感染性結膜炎、及びアレルギー性結膜炎）を含むがこれらに限定されない、眼科障害であり得る。
一部の事例では、眼科障害には、ＡＭＤ（滲出型ＡＭＤ、萎縮型ＡＭＤ、及びＧＡを含む）、網膜症（例えば、ＤＲ及びＲＯＰ）、ＰＣＶ、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、アレルギー性結膜炎、及び網膜剥離が含まれる。
他の事例では、眼科疾患には、中間型ＡＭＤ、進行型ＡＭＤ、緑内障、ブドウ膜炎（例えば、感染性及び非感染性）、網膜色素変性、レーバー先天黒内障、シュタルガルト病、高所糖尿病性網膜症、外傷性眼損傷、及び結膜炎（例えば、感染性結膜炎及び非感染性結膜炎）が含まれる。
例えば、本発明は、眼科障害の治療を、それを必要とする対象において行う方法を提供し、この方法は、対象に、治療有効量のＩＬ−３３軸結合アンタゴニストを投与することを含む。一部の事例では、ＩＬ−３３軸結合アンタゴニストは、抗ＩＬ−３３抗体、例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体である。一部の事例では、ＩＬ−３３軸結合アンタゴニストは、ＡＮＢ−０２０（ＡｎａｐｔｙｘＢｉｏ Ｉｎｃ．）または国際公開第ＷＯ２０１４１６４９５９号、欧州特許第ＥＰ１７２５２６１号、米国特許第８１８７５６９号、国際公開第ＷＯ２０１１０３１６００号、同第ＷＯ２０１５０９９１７５号、若しくは同第ＷＯ２０１５１０６０８０号（それぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている抗体のうちのいずれかなどの抗ＩＬ−３３抗体；ＡＭＧ−２８２（Ａｍｇｅｎ）若しくはＳＴＬＭ１５（Ｊａｎｓｓｅｎ）、または国際公開第ＷＯ２０１３１７３７６１号若しくは同第ＷＯ２０１３１６５８９４号（それぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている抗体のうちのいずれかなどの抗ＳＴ２抗体；あるいは、国際公開第ＷＯ２０１３／１７３７６１号、同第ＷＯ２０１３／１６５８９４号、または同第ＷＯ２０１４／１５２１９５号（それぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているものなどのＳＴ２−Ｆｃタンパク質及びその変異形である。一部の事例では、眼科障害は、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）（滲出型ＡＭＤ、萎縮型ＡＭＤ、中間型ＡＭＤ、進行型ＡＭＤ、及び地図状萎縮（ＧＡ）を含む）、網膜症（例えば、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、未熟児網膜症（ＲＯＰ）、及び高所ＤＲ）、ポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、網膜剥離、緑内障、ブドウ膜炎（例えば、感染性及び非感染性のブドウ膜炎）、網膜色素変性、レーバー先天黒内障（レーバーの先天黒内障としても知られる）、シュタルガルト病、外傷性眼損傷、及び結膜炎（例えば、感染性結膜炎、非感染性結膜炎、及びアレルギー性結膜炎）からなる群から選択され得る。一部の事例では、眼科障害には、ＡＭＤ（滲出型ＡＭＤ、萎縮型ＡＭＤ、及びＧＡを含む）、網膜症（例えば、ＤＲ及びＲＯＰ）、ＰＣＶ、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、アレルギー性結膜炎、及び網膜剥離が含まれる。他の事例では、眼科疾患には、中間型ＡＭＤ、進行型ＡＭＤ、緑内障、ブドウ膜炎（例えば、感染性及び非感染性）、網膜色素変性、レーバー先天黒内障、シュタルガルト病、高所糖尿病性網膜症、外傷性眼損傷、及び結膜炎（例えば、感染性結膜炎及び非感染性結膜炎）が含まれる。
ＩＬ−３３軸結合アンタゴニスト（例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体）は、治療法において、単独または他の薬剤と組み合わせてのいずれかで使用することができる。例えば、ＩＬ−３３軸結合アンタゴニスト（例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体）は、少なくとも１つの追加の治療剤と共投与されてもよい。ある特定の実施形態では、追加の治療剤は、ＳＴ２結合アンタゴニスト、補体経路阻害剤（例えば、Ｄ因子結合アンタゴニスト）、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニスト、ＶＥＧＦアンタゴニスト、トリプターゼ−ベータ結合アンタゴニスト、Ｔｈ２細胞上に発現される化学誘引物質受容体相同分子（ＣＲＴＨ２）結合アンタゴニスト、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）結合アンタゴニスト、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）結合アンタゴニスト、ＪＡＫ１アンタゴニスト、及び／またはインターロイキン−５（ＩＬ−５）結合アンタゴニストである。一部の実施形態では、追加の治療剤は、化学療法剤、抗ホルモン剤、細胞毒性剤、成長阻害剤、またはこれらの組み合わせである。
例えば、ＩＬ−３３軸結合アンタゴニスト（例えば、本発明のＩＬ−３３抗体）は、例えば、例として喘息、気道過敏、気道炎症、敗血症、敗血症性ショック、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、リウマチ性関節炎、若しくは慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの炎症性障害、または例えば特発性肺線維症（ＩＰＦ）などの線維性障害の治療のために、抗ＩＬ−１３抗体と共投与され得る。例示的な実施形態では、ＩＬ−３３軸結合アンタゴニスト（例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体）は、喘息の治療のために、抗ＩＬ−１３と共投与され得る。本明細書に記載される抗ＩＬ−１３抗体のうちのいずれかは、抗ＩＬ−３３軸結合アンタゴニストと組み合わせて投与され得る。一実施形態では、抗ＩＬ−３３抗体は、抗ＩＬ−１３抗体と組み合わせて投与される。例示的な実施形態では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の６つのＨＶＲ：ＳＦＳＭＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ＡＮＹＧＮＷＦＦＥＶ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、ＲＡＳＥＳＶＡＫＹＧＬＳＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＫＥＶＰＦＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、抗ＩＬ−１３抗体は、以下の６つのＨＶＲ：ＡＹＳＶＮ（配列番号２９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＭＩＷＧＤＧＫＩＶＹＮＳＡＬＫＳ（配列番号２９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ＤＧＹＹＰＹＡＭＤＮ（配列番号２９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、ＲＡＳＫＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号３００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＮＮＥＤＰＲＴ（配列番号３０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。別の実施形態では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含み、抗ＩＬ−１３抗体は、（ａ）配列番号３０２のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３０３のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。別の実施形態では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含み、抗ＩＬ−１３抗体は、（ａ）配列番号３０２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３０３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。別の実施形態では、抗ＩＬ−３３は、配列番号３０８のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３０９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗ＩＬ−１３抗体は、配列番号３０４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３０５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。別の実施形態では、抗ＩＬ−３３は、配列番号３０８のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３０９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗ＩＬ−１３抗体は、配列番号３０４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３０５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
別の例では、ＩＬ−３３軸結合アンタゴニスト（例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体）は、補体経路阻害剤と共投与されてもよい。一部の事例では、補体経路阻害剤は、別の補体経路（例えば、Ｄ因子、プロパージン、Ｂ因子、Ｂａ因子、及びＢｂ因子）または古典的補体経路（例えば、Ｃ３ａ、Ｃ５、Ｃ５ａ、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、Ｃ９、及びＣ５ｂ−９）の阻害剤であってもよい。一部の事例では、補体経路阻害剤は、国際公開第ＷＯ２００７／０５６２２７号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載される任意の補体経路阻害剤であり得る。一部の事例では、補体経路阻害剤は、Ｄ因子結合アンタゴニストであり得る。特定の事例では、Ｄ因子結合アンタゴニストは、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、国際公開第ＷＯ２００７／０５６２２７号、同第ＷＯ０１／７０８１８号、及び／または米国公開第２００２／００８１２９３号（それぞれ、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている任意のＤ因子抗体であり得る。非限定的な例として、一部の事例では、抗Ｄ因子抗体は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託され、ＨＢ１２４７６と表記されるハイブリドーマから産生されるモノクローナル抗体１６６−３２に少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、またはモノクローナル抗体１６６−３２の配列を含み得る。一部の事例では、抗Ｄ因子抗体は、モノクローナル抗体１６６−３２のヒト化誘導体である。一部の事例では、抗Ｄ因子抗体は、モノクローナル抗体１６６−３２と同じエピトープに結合する。一部の事例では、抗Ｄ因子抗体は、モノクローナル抗体１６６−３２に由来する抗体フラグメントである。一部の事例では、モノクローナル抗体１６６−３２に由来する抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２フラグメントである。一部の事例では、モノクローナル抗体１６６−３２に由来する抗体フラグメントは、Ｆａｂである。
別の例では、ＩＬ−３３軸結合アンタゴニスト（例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体）は、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストと共投与されてもよい。一部の事例では、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストは、抗ＨｔｒＡ１抗体またはその抗原結合フラグメントである。当該技術分野で既知及び／または本明細書に記載される、抗ＨｔｒＡ１抗体またはその抗原結合フラグメントのいずれかを使用することができる。例えば、一部の事例では、抗ＨｔｒＡ１抗体は、国際公開第ＷＯ２０１３／０５５９９８号に記載される抗ＨｔｒＡ１抗体である。一部の事例では、抗ＨｔｒＡ１抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２フラグメントである。一部の実施形態では、抗ＨｔｒＡ１抗体フラグメントは、Ｆａｂである。
別の例では、ＩＬ−３３軸結合アンタゴニスト（例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体）は、ＶＥＧＦアンタゴニストと共投与されてもよい。一部の事例では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合フラグメントであり得る。当該技術分野で既知及び／または本明細書に記載される、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合フラグメントのいずれかを使用することができる。例えば、一部の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標））またはラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））である。一部の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２フラグメントである。一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体フラグメントは、Ｆａｂである。
一部の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第ＷＯ２００５／０４４８５３号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている任意の抗ＶＥＧＦ抗体であるか、またはそれに由来する。例えば、一部の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、Ｇ６系の抗体（例えば、Ｇ６、Ｇ６−８、Ｇ６−２３、Ｇ６−２３．１、Ｇ６−２３．２、若しくはＧ６−３１）またはＢ２０系の抗体（例えば、Ｂ２０、Ｂ２０−４、若しくはＢ２０−４．１）であるか、またはそれらに由来する。例えば、一部の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）配列番号３３４、３３７、若しくは３４０のうちのいずれか１つに少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３３４、３３７、若しくは３４０のうちのいずれか１つの配列を含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号３３５、３３６、３３８、３３９、若しくは３４１のうちのいずれか１つに少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３３５、３３６、３３８、３３９、若しくは３４１のうちのいずれか１つの配列を含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。例えば、一部の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号３３４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３３５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（抗ＶＥＧＦ抗体Ｇ６など）を含む。一部の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号３３４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３３６のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（抗ＶＥＧＦ抗体Ｇ６．３１など）を含む。一部の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号３３７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３３８のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（抗ＶＥＧＦ抗体Ｂ２０など）を含む。他の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号３３７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３３９のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（抗ＶＥＧＦ抗体Ｂ２０−４など）を含む。更に他の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号３４０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３４１のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（抗ＶＥＧＦ抗体Ｂ２０−４．１など）を含む。一部の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、前述の抗体のうちのいずれかのヒト化誘導体である。一部の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、前述の抗体のうちのいずれかに由来する抗体フラグメントでる。一部の事例では、抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２フラグメントである。一部の実施形態では、抗体フラグメントは、Ｆａｂである。
一態様では、本発明は、例えば、喘息、気道過敏、気道炎症、敗血症、敗血症性ショック、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、リウマチ性関節炎、若しくは慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの炎症性障害、または例えば特発性肺線維症（ＩＰＦ）などの線維性障害の治療を、それを必要とする対象において行う方法を提供し、本方法は、対象に、治療有効量のＩＬ−３３軸結合アンタゴニスト（例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体）及び治療有効量の抗ＩＬ−１３抗体を投与することを含む。例示的な実施形態では、本発明は、喘息の治療をそれを必要とする対象において行う方法を提供し、本方法は、対象に、治療有効量のＩＬ−３３軸結合アンタゴニスト（例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体）及び治療有効量の抗ＩＬ−１３抗体を投与することを含む。本明細書に記載される抗ＩＬ−１３抗体のうちのいずれかは、抗ＩＬ−３３軸結合アンタゴニストと組み合わせて投与され得る。一実施形態では、抗ＩＬ−３３抗体は、抗ＩＬ−１３抗体と組み合わせて投与される。例示的な実施形態では、抗ＩＬ−３３抗体は、以下の６つのＨＶＲ：ＳＦＳＭＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ＡＮＹＧＮＷＦＦＥＶ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、ＲＡＳＥＳＶＡＫＹＧＬＳＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＫＥＶＰＦＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含み、抗ＩＬ−１３抗体は、以下の６つのＨＶＲ：ＡＹＳＶＮ（配列番号２９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＭＩＷＧＤＧＫＩＶＹＮＳＡＬＫＳ（配列番号２９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ＤＧＹＹＰＹＡＭＤＮ（配列番号２９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、ＲＡＳＫＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号３００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＮＮＥＤＰＲＴ（配列番号３０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。別の実施形態では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含み、抗ＩＬ−１３抗体は、（ａ）配列番号３０２のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３０３のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。別の実施形態では、抗ＩＬ−３３抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含み、抗ＩＬ−１３抗体は、（ａ）配列番号３０２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３０３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。別の実施形態では、抗ＩＬ−３３は、配列番号３０８のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３０９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗ＩＬ−１３抗体は、配列番号３０４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号３０５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。別の実施形態では、抗ＩＬ−３３は、配列番号３０８のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３０９のアミノ酸配列を含む軽鎖を含み、抗ＩＬ−１３抗体は、配列番号３０４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３０５のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
別の態様では、本発明は、例えば、喘息、気道過敏、気道炎症、敗血症、敗血症性ショック、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、リウマチ性関節炎、若しくは慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）などの炎症性障害、または例えば特発性肺線維症（ＩＰＦ）などの線維性障害の治療を、それを必要とする対象において行う方法を提供し、本方法は、対象に、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する治療有効量の二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。例示的な実施形態では、本発明は、喘息の治療をそれを必要とする対象において行う方法を提供し、本方法は、対象に、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する治療有効量の二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む。二重特異性抗体は、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかに由来する、ＩＬ−３３に特異的に結合する結合ドメインを含み得る。二重特異性抗体は、本明細書に記載されるＩＬ−１３に特異的に結合する結合ドメインを含み得る。例示的な実施形態は、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する二重特異性抗体は、以下の６つのＨＶＲ：ＳＦＳＭＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ＡＮＹＧＮＷＦＦＥＶ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、ＲＡＳＥＳＶＡＫＹＧＬＳＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＳＫＥＶＰＦＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の結合ドメインと、以下の６つのＨＶＲ：ＡＹＳＶＮ（配列番号２９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、ＭＩＷＧＤＧＫＩＶＹＮＳＡＬＫＳ（配列番号２９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、ＤＧＹＹＰＹＡＭＤＮ（配列番号２９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、ＲＡＳＫＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号３００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及びＱＱＮＮＥＤＰＲＴ（配列番号３０１）アミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む。別の実施形態では、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する二重特異性抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ａ）配列番号３０２のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号３０３のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む。別の実施形態では、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する二重特異性抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列を含むＶＬを含む、ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ａ）配列番号３０２のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号３０３のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む。別の実施形態では、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する二重特異性抗体は、（ａ）ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の重鎖及び第１の軽鎖（第１の重鎖は、配列番号３０８のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、第１の軽鎖は、配列番号３０９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｂ）ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の重鎖及び第２の軽鎖（第２の重鎖は、配列番号３０４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、第２の軽鎖は、配列番号３０５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。別の実施形態では、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する二重特異性抗体は、（ａ）ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の重鎖及び第１の軽鎖（第１の重鎖は配列番号３０８のアミノ酸配列を含み、第１の軽鎖は配列番号３０９のアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｂ）ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の重鎖及び第２の軽鎖（第２の重鎖は配列番号３０４のアミノ酸配列を含み、第２の軽鎖は配列番号３０５のアミノ酸配列を含む）を含む。
別の態様では、本発明は、地図状萎縮の治療をそれを必要とする対象において行う方法を提供し、本方法は、対象に、治療有効量のＩＬ−３３軸結合アンタゴニスト（例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体）及び治療有効量のＤ因子結合アンタゴニストを投与することを含む。一部の事例では、Ｄ因子結合アンタゴニストは、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、国際公開第ＷＯ２００７／０５６２２７号、同第ＷＯ０１／７０８１８号、及び／または米国公開第２００２／００８１２９３号に記載されている任意のＤ因子抗体であり得る。例えば、一部の事例では、抗Ｄ因子抗体は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）に寄託され、ＨＢ１２４７６と表記されるハイブリドーマから産生されるモノクローナル抗体１６６−３２に少なくとも７０％の配列同一性（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、またはモノクローナル抗体１６６−３２の配列を含み得る。一部の事例では、抗Ｄ因子抗体は、モノクローナル抗体１６６−３２のヒト化誘導体である。一部の事例では、抗Ｄ因子抗体は、モノクローナル抗体１６６−３２と同じエピトープに結合する。一部の事例では、抗Ｄ因子抗体は、モノクローナル抗体１６６−３２に由来する抗体フラグメントである。一部の事例では、モノクローナル抗体１６６−３２に由来する抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２フラグメントである。一部の事例では、モノクローナル抗体１６６−３２に由来する抗体フラグメントは、Ｆａｂである。
別の態様では、本発明は、地図状萎縮（ＧＡ）の治療を、それを必要とする対象において行う方法を特徴とし、ここで、本方法は、対象に、ＩＬ−３３及びＤ因子の両方に特異的に結合する治療有効量の二重特異性抗体またはその抗原結合抗体フラグメントを投与することを含む。二重特異性抗体は、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかに由来する、ＩＬ−３３に特異的に結合する結合ドメインを含み得る。二重特異性抗体は、上述の抗Ｄ因子抗体のうちのいずれかに由来する、Ｄ因子に特異的に結合する結合ドメインを含み得る。一部の実施形態では、抗原結合抗体フラグメントは、（Ｆａｂ’）２フラグメントである。
別の態様では、本発明は、ＧＡ、ＡＭＤ（滲出型若しくは萎縮型）、ＤＲ、ＰＣＶ、またはＲＯＰの治療を、それを必要とする対象において行う方法を提供し、本方法は、対象に、治療有効量のＩＬ−３３軸結合アンタゴニスト（例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体）及び治療有効量のＨｔｒＡ１結合アンタゴニストを投与することを含む。一部の事例では、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストは、抗ＨｔｒＡ１抗体またはその抗原結合フラグメント、例えば、国際公開第ＷＯ２０１３／０５５９９８号に記載されている任意のＨｔｒＡ１抗体であり得る。一部の事例では、抗ＨｔｒＡ１抗体は、抗体フラグメントである。一部の事例では、抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２フラグメントである。一部の実施形態では、誘導される抗体フラグメントは、Ｆａｂである。
別の態様では、本発明は、地図状萎縮（ＧＡ）、ＡＭＤ（滲出型若しくは萎縮型）、ＤＲ、ＰＣＶ、またはＲＯＰの治療を、それを必要とする対象において行う方法を特徴とし、本方法は、対象に、ＩＬ−３３及びＨｔｒＡ１の両方に特異的に結合する治療有効量の二重特異性抗体またはその抗原結合抗体フラグメントを投与することを含む。二重特異性抗体は、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかに由来する、ＩＬ−３３に特異的に結合する結合ドメインを含み得る。二重特異性抗体は、上述の抗ＨｔｒＡ１抗体のうちのいずれかに由来する、ＨｔｒＡ１に特異的に結合する結合ドメインを含み得る。一部の実施形態では、抗原結合抗体フラグメントは、（Ｆａｂ’）２フラグメントである。
別の態様では、本発明は、滲出型ＡＭＤの治療を、それを必要とする対象において行う方法を提供し、本方法は、対象に、治療有効量のＩＬ−３３軸結合アンタゴニスト（例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体）及び治療有効量のＶＥＧＦアンタゴニストを投与することを含む。一部の事例では、ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合フラグメントであり得る。当該技術分野で既知及び／または本明細書に記載される、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合フラグメントのいずれかを使用することができる。一部の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合フラグメントは、国際公開第ＷＯ２００５／０４４８５３号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている抗ＶＥＧＦ抗体であるか、またはそれに由来する。例えば、一部の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、Ｇ６系の抗体（Ｇ６、Ｇ６−８、Ｇ６−２３、Ｇ６−２３．１、Ｇ６−２３．２、若しくはＧ６−３１）またはＢ２０系の抗体（例えば、Ｂ２０、Ｂ２０−４、若しくはＢ２０−４．１）であるか、またはそれらに由来する。例えば、一部の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、（ａ）配列番号３３４、３３７、若しくは３４０のうちのいずれか１つに少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３３４、３３７、若しくは３４０のうちのいずれか１つの配列を含む、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号３３５、３３６、３３８、３３９、若しくは３４１のうちのいずれか１つに少なくとも８０％の配列同一性（例えば、少なくとも８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％の配列同一性）を有するアミノ酸配列、または配列番号３３５、３３６、３３８、３３９、若しくは３４１のうちのいずれか１つの配列を含む、軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、あるいは（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む。例えば、一部の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号３３４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３３５のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（抗ＶＥＧＦ抗体Ｇ６など）を含む。一部の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号３３４のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３３６のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（抗ＶＥＧＦ抗体Ｇ６．３１など）を含む。一部の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号３３７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３３８のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（抗ＶＥＧＦ抗体Ｂ２０など）を含む。他の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号３３７のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３３９のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（抗ＶＥＧＦ抗体Ｂ２０−４など）を含む。更に他の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、配列番号３４０のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号３４１のアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（抗ＶＥＧＦ抗体Ｂ２０−４．１など）を含む。一部の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、前述の抗体のうちのいずれかのヒト化誘導体である。一部の事例では、抗ＶＥＧＦ抗体は、前述の抗体のうちのいずれかに由来する抗体フラグメントでる。一部の事例では、抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、または（Ｆａｂ’）２フラグメントである。一部の実施形態では、抗体フラグメントは、Ｆａｂである。
別の態様では、本発明は、滲出型ＡＭＤの治療を、それを必要とする対象において行う方法を特徴とし、本方法は、対象に、ＩＬ−３３及びＶＥＧＦの両方に特異的に結合する治療有効量の二重特異性抗体またはその抗原結合抗体フラグメントを投与することを含む。二重特異性抗体は、本明細書に記載される抗ＩＬ−３３抗体のうちのいずれかに由来する、ＩＬ−３３に特異的に結合する結合ドメインを含み得る。二重特異性抗体は、上述の抗ＶＥＧＦ抗体のうちのいずれかに由来する、ＶＥＧＦに特異的に結合する結合ドメインを含み得る。一部の実施形態では、抗原結合抗体フラグメントは、（Ｆａｂ’）２フラグメントである。
更に別の態様では、本発明は、ブドウ膜炎（例えば、感染性または非感染性ブドウ膜炎）の治療を、それを必要とする対象において行う方法を提供し、本方法は、対象に、治療有効量のＩＬ−３３軸結合アンタゴニスト（例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体）を投与することを含む。一部の実施形態では、ＩＬ−３３軸結合アンタゴニストは、単剤療法として投与してもよい。
なおも更なる態様では、本発明は、結膜炎（例えば、感染性結膜炎、非感染性結膜炎、またはアレルギー性結膜炎）の治療を、それを必要とする対象において行う方法を提供し、本方法は、対象に、治療有効量のＩＬ−３３軸結合アンタゴニスト（例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体）を投与することを含む。一部の実施形態では、ＩＬ−３３軸結合アンタゴニストは、単剤療法として投与してもよい。
一部の実施形態では、追加の治療剤は、以下に記載されるように、喘息治療薬である。中等度の喘息は、現在、破綻的な症状またはアレルゲン若しくは運動に誘発される喘息を緩和するために、毎日の抗炎症コルチコステロイドの吸入、またはクロモグリク酸ナトリウム若しくはネドクロミルなどの肥満細胞阻害剤に加えて必要に応じてベータ２アゴニストの吸入（１日３〜４回）で処置されている。例示的な吸入コルチコステロイドとしては、ＱＶＡＲ（登録商標）、ＰＵＬＭＩＣＯＲＴ（登録商標）、ＳＹＭＢＩＣＯＲＴ（登録商標）、ＡＥＲＯＢＩＤ（登録商標）、ＦＬＯＶＥＮＴ（登録商標）、ＦＬＯＮＡＳＥ（登録商標）、ＡＤＶＡＩＲ（登録商標）、及びＡＺＭＡＣＯＲＴ（登録商標）が挙げられる。追加の喘息治療薬には、長時間作用型の呼吸器作用薬（ＬＡＢＤ）が含まれる。ある特定の実施形態では、ＬＡＢＤは、長時間作用型ベータ２アゴニスト（ＬＡＢＡ）、ロイコトリエン受容体アンタゴニスト（ＬＴＲＡ）、長時間作用型ムスカリンアンタゴニスト（ＬＡＭＡ）、テオフィリン、または経口コルチコステロイド（ＯＣＳ）である。例示的なＬＡＢＤとしては、ＳＹＭＢＩＣＯＲＴ（登録商標）、ＡＤＶＡＩＲ（登録商標）、ＢＲＯＶＡＮＡ（登録商標）、ＦＯＲＡＤＩＬ（登録商標）、ＰＥＲＦＯＲＯＭＩＳＴ（商標）、及びＳＥＲＥＶＥＮＴ（登録商標）が挙げられる。
かかる併用療法には、組み合わせ投与（２つ以上の治療剤が同じまたは別個の製剤中に含まれる）及び別個の投与が含まれ、別個の投与の場合、本発明の抗体または免疫コンジュゲートの投与は、追加の治療剤（複数可）の投与の前、それと同時、及び／またはその後に行うことができる。一実施形態では、抗ＩＬ−３３抗体の投与及び追加の治療剤の投与は、互いの約１ヶ月以内、または約１週間、２週間、若しくは３週間以内、または約１、２、３、４、５、若しくは６日以内に生じる。本発明の抗体は、放射線療法と組み合わせて用いることもできる。
ＩＬ−３３軸結合アンタゴニスト、例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、ならびに局所処置に所望される場合は病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与され得る。非経口注入には、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、または皮下投与が含まれる。一部の事例では、ＩＬ−３３軸結合アンタゴニスト、例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体は、硝子体内、筋肉内、静脈内、皮内、経皮（ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙ）、動脈内、腹腔内、病巣内、頭蓋内、関節内、前立腺内、胸膜内、気管内、くも膜内、鼻腔内、膣内、直腸内、局所、腫瘍内、腹膜内、皮下、結膜下、小胞内、経粘膜、心膜内、臍帯内、眼球内、眼窩内、経口、局所、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌｌｙ）、眼窩周囲、結膜、テノン嚢下、前房内、網膜下、眼球後、毛細胆管内、吸入、注射、埋め込み、注入、持続注入、標的細胞に直接的に流す局所灌流、カテーテル、洗浄、クリーム、または脂質組成物で投与することができる。本明細書に記載される方法に用いられる組成物はまた、全身または局所に投与することができる。投薬は、投与が短時間であるか慢性的であるかに部分的に応じて、任意の好適な経路、例えば、静脈内または皮下注射などの注射によるものであってもよい。単回または様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含むがこれらに限定されない様々な投薬スケジュールが本明細書で企図される。
一部の事例では、ＩＬ−３３軸結合アンタゴニスト（例えば、本発明の抗ＩＬ−３３抗体）は、眼組織注射、例えば、硝子体内、眼窩周囲、結膜、結膜下、テノン嚢下、前房内、網膜下、眼球後、若しくは小管内注射を用いて眼に直接的に；例えば、カテーテル若しくは他の配置デバイス（例えば、多孔性、無孔性、若しくはゼラチン質材料でできた網膜ペレット、眼内挿入物、坐剤、若しくは埋め込み片）を用いた眼への直接適用によって；局所点眼薬若しくは眼軟膏によって；または結膜嚢内若しくは強膜に隣接して若しくは眼内に埋め込まれた（経強膜）持続放出デバイスによって、投与され得る。前房内注射は、薬剤が線維柱帯網に到達できるように、角膜を通じて前房内に行われる。小管内注射は、シュレム管の排出先である静脈集合管（ｖｅｎｏｕｓ ｃｏｌｌｅｃｔｏｒ ｃｈａｎｎｅｌ）へ、またはシュレム管内へのものであり得る。
本発明の抗体は、良好な医療行為と一致した様式で、製剤化され、投薬され、投与されるであろう。この文脈における考慮の要因には、治療されている特定の障害、処置されている特定の哺乳動物、個々の患者の臨床的病態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジュール管理、及び医療従事者に既知の他の要因が含まれる。本抗体は、必須ではないが、場合によっては、問題の障害の予防または治療に現在使用されている１つ以上の薬剤と共に製剤化される。そのような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体の量、障害または治療の種類、及び上記に考察された他の要因に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載されるのと同じ投薬量で、本明細書に記載される投与経路により、または本明細書に記載される投薬量の約１〜９９％、または経験的／臨床的に適切であると決定される任意の投薬量及び任意の経路によって、使用される。
疾患の予防または治療に関して、本発明の抗体の適切な投薬量は（単独または１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）、治療すべき疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体が予防目的で投与されるか治療目的で投与されるか、以前の治療法、患者の病歴及び抗体への反応、ならびに主治医の裁量に依存するであろう。本抗体は、好適には、１回、または一連の治療にわたり、患者に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、１回以上の別個の投与によってであれ連続注入によってであれ、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体が、患者に投与するための初回候補投薬量となり得る。１つの典型的な投薬量は、上述の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上の範囲に及び得る。数日間またはそれ以上にわたる反復投与については、病態に応じて、疾患症状の所望の抑制が生じるまで治療が継続されることが一般的であろう。本抗体の１つの例示的な投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であろう。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇ（若しくはこれらの任意の組み合わせ）の１回以上の用量が患者に投与され得る。そのような用量は、断続的に、例えば、毎週、２週間毎、３週間毎、または４週間毎（例えば、患者が約２〜約２０回、または例えば約６回の用量の抗体を受容するように）投与されてもよい。例えば、用量は、１ヶ月に１回（例えば、皮下注射によって）投与してもよい。より高い初回負荷用量を投与し、続いてより低い用量が１回以上投与されてもよい。しかしながら、他の投薬レジメンも有用な場合がある。この治療の経過は、従来的な技法及びアッセイによって容易に監視される。
上の製剤または治療方法のうちのいずれも、抗ＩＬ−３３抗体の代わりに、またはそれに加えて、本発明の免疫コンジュゲートを使用して行われ得ることが理解される。
Ｈ．製品
本発明の別の態様では、上述の障害の治療、予防、及び／または診断に有用な物質を含有する製品が提供される。製品には、容器と、容器の上または容器と関連したラベルまたは添付文書とが含まれる。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなど、様々な材料から形成され得る。容器は、ある組成物を、それ自体、または状態を治療、予防、及び／若しくは診断するのに有効な別の組成物と組み合わせて保有し、また滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈注射用溶液バッグまたは皮下注射針によって穿刺可能な栓を有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性な薬剤は、本発明の抗体である。ラベルまたは添付文書は、選定された状態を治療するために組成物が使用されることを示す。更に、本製品は、（ａ）組成物が中に含有された第１の容器（この組成物は本発明の抗体を含む）、及び（ｂ）組成物が中に含有された第２の容器（この組成物は更なる細胞毒性剤または治療剤を含む）を含んでもよい。本発明のこの実施形態の製品は、組成物が特定の病態を治療するために使用され得ることを示す添付文書を更に含んでもよい。代替または追加として、製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸干渉食塩水、リンガー溶液、及びデキストロース溶液といった、薬学的に許容される緩衝液を含む第２（または第３）の容器を更に含んでもよい。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針、及びシリンジを含む、商業的立場及びユーザの立場から望ましい他の物質を更に含んでもよい。
上述の製剤のいずれも、抗ＩＬ−３３抗体の代わりに、またはそれに加えて、本発明の免疫コンジュゲートを含み得ることが理解される。
ＩＩＩ．実施例
以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。上記に提供される一般的説明を考慮すると、種々の他の実施形態が実施され得ることが理解される。
実施例１．抗ＩＬ−３３抗体の生成
以下に記載されるように、治療用抗ＩＬ−３３抗体を開発するために、いくつかの戦略を探求した。候補の抗ＩＬ−３３抗体に所望される特徴には、ヒトＩＬ−３３への特異的な結合、カニクイザル（ｃｙｎｏ）ＩＬ−３３との交差反応性、ＩＬ−３３活性の阻害（例えば、細胞に基づくＩＬ−３３レポーターアッセイにて測定）、及び／またはＩＬ−３３受容体（ＳＴ２及びＩＬ−１ＲＡｃＰ）への結合の阻害が含まれていた。
Ａ．マウスモノクローナル抗ヒトＩＬ−３３ハイブリドーマ抗体の開発及び特徴付け
ＢＡＬＢ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ、Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ）またはＩＬ３３ノックアウト（ｋｏ）マウス（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）に、ヒト（ｈｕ）ＩＬ−３３及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）ＩＬ−３３タンパク質（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）それぞれ２μｇをモノホスホリル脂質Ａ及びトレハロースジコリノミコレート（ＭＰＬ（登録商標）＋ＴＤＭ）アジュバント（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で、またはＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニストＭＰＬ（登録商標）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、ポリイノシン−ポリシチジン酸（ＰｏｌｙＩ：Ｃ、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、Ｒ８４８（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）、及びＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）の組み合わせと混合したもので、週２回腹腔内免疫付与を行った。最後の免疫付与の３日後に脾臓及び骨髄を採取した。これらのマウスからの脾細胞を、電気融合（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ、Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ）によりＰ３Ｘ６３−Ａｇ８Ｕ．１マウス骨髄腫細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）と融合させた。融合細胞を、ＣＬＯＮＡＣＥＬＬ（商標）−ＨＹ培地Ｃ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ，Ｃａｎａｄａ）において３７℃、７％ＣＯ２で一晩インキュベートした後、抗種ＩｇＧ−ＦＩＴＣ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）と共に半固体ＣＬＯＮＡＣＥＬＬ（商標）−ＨＹ培地Ｄ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に再懸濁させ、ＯＭＮＩＷＥＬＬ（商標）トレイ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）に播種した。播種７日後に、蛍光コロニーを選択し、ＣＬＯＮＥＰＩＸ（商標）ＦＬ（Ｇｅｎｅｔｉｘ、Ｎｅｗ Ｍｉｌｔｏｎ，Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ，ＵＫ）を用いてＣＬＯＮＡＣＥＬＬ（商標）−ＨＹ培地Ｅ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含有する９６ウェルプレートに移した。以下に記載されるように、ピッキングの７日後に上清を酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）によってヒトＩＬ−３３タンパク質に対してスクリーニングした。ヒトＩＬ−３３結合を示したハイブリドーマ細胞株を増殖させ、ＥＬＩＳＡによって再試験し、ＥＬＩＳＡによってヒト及びカニクイザルの両方のＩＬ−３３への結合を示した細胞株からの上清を採取し、プロテインＡ（ＭＡＢＳＥＬＥＣＴ（商標）ＳＵＲＥ（商標）、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）によって精製した。精製したＩｇＧを、以下に記載されるように、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞レポーターキット（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を用いてＩＬ−３３とＳＴ２との結合を遮断する能力に関して評価した。大きなハイブリドーマパネルからＩｇＧを精製する高スループットのシステムを使用することにより、可能性のある遮断クローンの迅速かつ効率的な選択が可能となった。ＲＮＥＡＳＹ（登録商標）キット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｈｉｌｄｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して強力な遮断ハイブリドーマ細胞株からＲＮＡを抽出し、以下に記載されるように、ｃＤＮＡを生成し、配列決定のために増幅させた。重鎖及び軽鎖の可変領域遺伝子を、発現のためにｐＲＫプラスミドベクター（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）に挿入した。最も高いＩＬ−３３遮断活性及び親和性を示した固有のクローンからのプラスミドＤＮＡを、２９３細胞において組み換え発現させた。次いで、上清をプロテインＡ親和性クロマトグラフィーによって精製した。
Ｂ．単一のＢ細胞クローニングによる抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体の生成
トランスジェニックマウスに、上述のようにヒト及びカニクイザルＩＬ−３３で免疫付与を行った。初回免疫付与及び７回の追加免疫付与の後に、免疫付与したトランスジェニックマウスからの血清を、ＩＬ−３３への結合に関して試験した。ヒト及びカニクイザルＩＬ−３３に対して有意に高い力価を示したマウスを特定し、次いで、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）アッセイにおいて血清のＳＴ−２へのＩＬ−３３の結合の阻害に関して試験した。ＩＬ−３３遮断活性を示したマウスから脾臓組織、リンパ節組織、及び骨髄組織を単離した。これらの組織を機械的に小さくして単一細胞懸濁液にし、事前にＩＬ−３３抗原（ヒト及びカニクイザル）と混合し、ｍｕＳＣＩＤマウスの脾臓内に埋め込んだ。７〜８日後に、脾臓を取り出し、単一細胞として再懸濁した。脾臓細胞をフルオロフォアコンジュゲートマーカーで染色して、ＣＤ１３８陽性形質芽細胞及びＩｇＭ陽性集団を特定した。ＩｇＭ陰性であり、ヒト及びカニクイザルの両方のＩＬ−３３に結合することができる、形質芽細胞集団を、ＦＡＣＳ（商標）フローサイトメトリーによって９６ウェルプレートに１つずつ分類した。分類した細胞の免疫グロブリン可変領域を分子的にクローニングし、ヒトＩｇＧ１哺乳動物発現ベクターに再形式決定（ｒｅｆｏｒｍａｔ）した。各再形式決定したモノクローナル抗体を哺乳動物細胞において一過性に発現させ、精製した。一般手順は、Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．（Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ９：１５６３−１５７７，２０１４）に記載されている。
Ｃ．免疫付与したファージ由来ライブラリからの抗ＩＬ−３３モノクローナル抗体の生成
ファージに提示された一本鎖Ｆｖライブラリを、ヒト及びカニクイザルＩＬ−３３で免疫付与したトランスジェニックマウスから単離したＲＮＡから構築した。ＳｃＦｖファージディスプレイライブラリを、ヒト及びカニクイザルＩＬ−３３に対して数回パンニングした。個々のファージクローンを増やし、ヒト及びカニクイザルＩＬ−３３への結合に関してＥＬＩＳＡによってアッセイした。結合が陽性のクローンを、ＩｇＧ形式での発現のために再形式決定し、一過性に発現させた。一過性発現培養物からＩｇＧを精製し、ＩＬ−３３への結合に関して、及びＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞へのＩＬ−３３ の結合の阻害に関して試験した。
実施例２．抗ＩＬ−３３抗体のスクリーニング及び配列決定
Ａ．抗ヒト／カニクイザルＩＬ−３３抗体に対するＥＬＩＳＡスクリーニング
上述のように生成したハイブリドーマクローンをヒト及びカニクイザルＩＬ−３３に結合するモノクローナル抗体の産生に関してＥＬＩＳＡ形式でスクリーニングした。生成した１９２１のハイブリドーマ細胞株をスクリーニングするために、概して、Ｂａｋｅｒ ｅｔ ａｌ．（Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：１４９−１５６，２００２）に記載されるようにＥＬＩＳＡを行った。簡単に言うと、９６ウェルのＭＡＸＩＳＯＲＰ（登録商標）平底プレート（Ｎａｌｇｅ Ｎｕｎｃ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）を、コーティング緩衝液（０．０５Ｍ炭酸緩衝液、ｐＨ９．６）中２μｇ／ｍｌの濃度の可溶性ＩＬ−３３（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）５０μｌでコーティングし、密封し、４℃で一晩保管した。コーティング溶液を除去した後、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）ｐＨ７．４中に０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）及び０．０５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０を含有する２００μｌのアッセイ／ブロッキング溶液（ＥＬＩＳＡ希釈液）を、各ウェルに添加し、室温で１時間、撹拌しながらインキュベートした。次いで、ＰＢＳ中０．０５％のＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０（洗浄緩衝液）３００μｌでウェルを３回洗浄した。
洗浄ステップの後、個々のハイブリドーマクローンからの培養上清１００μｌを、個々のウェルに添加した。プレートを室温で１時間撹拌しながらインキュベートし、ウェルを前のように洗浄緩衝液で３回洗浄した。
洗浄した後、西洋ワサビペルオキシダーゼと結合させたヒツジ抗マウスＩｇＧ（ヒトＩｇＧ（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ、Ｓｏｌｏｎ，ＯＨ）との交差反応性はない）のＥＬＩＳＡ希釈液中への１：１０００ 希釈液５０μｌを、各ウェルに添加した。プレートを室温で１時間撹拌しながらインキュベートし、ウェルを前のように洗浄緩衝液で３回洗浄し、軽く叩いて乾燥させた。５０μｌのテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）マイクロウェルペルオキシダーゼ基質（ＢｉｏＦＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｏｗｉｎｇ Ｍｉｌｌｓ，ＭＤ、カタログ番号ＴＭＢＷ−０１００−０１）を各ウェルに添加し、室温で５〜１０分間、または色の変化が観察されるまで、インキュベートすることによって、ウェルを着色した。５０μｌのＴＭＢ Ｓｔｏｐ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＢｉｏＦＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓカタログ番号ＢＳＴＰ−０１００−０１）を各ウェルに添加することによって酵素による着色を停止させた。６５０ｎｍでＳＵＮＲＩＳＥ（商標）プレートリーダー（Ｔｅｃａｎ ＵＳ，Ｉｎｃ．、Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ，ＮＣ）によりプレートを分析した。
第１回の免疫付与の前に採取した免疫前血清を陰性対照として使用した。７回の免疫付与の後に採取した免疫血清を陽性対照として使用した。
クローン２Ｂ６、６Ｃ１１、９Ｆ６、１０Ｃ１２、及び１０Ｈ２は、ヒトＩＬ−３３及びカニクイザルＩＬ−１３の結合に関して陽性であった。
Ｂ．細胞に基づくＩＬ−３３遮断アッセイ
上述の方法を用いて得られた抗ＩＬ−３３抗体のＩＬ−３３中和活性を、細胞に基づく遮断アッセイによって判定したが、このアッセイでは、ＩＬ−３３は、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ−３３／ＩＬ−１β細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）を刺激し、ＮＦ−κＢ及びＡＰ−１経路を活性化し、分泌型アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）の産生を誘発する（図１Ａ）。ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ−３３／ＩＬ−１β細胞は、ヒトＳＴ２構築物（ｐＵＮＯ１−ｈＩＬ０１ＲＬ１ａ、配列番号３１１）が安定にトランスフェクトされているヒトＨＥＫ２９３細胞であり、５つのＮＦ−κＢ及び５つのＡＰ−１結合部位（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）に融合したＩＦＮ−βの最小プロモーターの制御下で、ＳＥＡＰレポーター遺伝子を含有している。ｐＵＮＯ１−ｈＩＬ０１ＲＬ１ａプラスミドは、配列番号３１２のアミノ酸配列を有するＳＴ２Ｌタンパク質をコードする。ＨＥＫ２９３細胞は、内在性ＩＬ−１ＲＡｃＰを発現する。細胞に基づく遮断アッセイにおいて使用したＩＬ−３３のアミノ酸配列は、次の通りであった：成熟ヒトＩＬ−３３（Ｓ１１２−Ｔ２７０）、配列番号３１３；ヒトＩＬ−３３ Ｎ−Ｈｉｓ、配列番号３１４；ヒトＩＬ−３３ Ｎ−Ｈｉｓ Ｃ−Ａｖｉ、配列番号３１５；成熟カニクイザルＩＬ−３３（Ｓ１１２−Ｔ２７０）、配列番号３１６；カニクイザルＩＬ−３３ Ｎ−Ｈｉｓ、配列番号３１７；及びカニクイザルＩＬ−３３ Ｎ−Ｈｉｓ Ｃ−Ａｖｉ、配列番号３１８。
簡単に言うと、ＩＬ−３３リガンドと、事前希釈した抗ＩＬ−３３抗体とを混合し、室温で１時間インキュベートした。抗体とリガンドとの混合物を、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ−３３／ＩＬ−１β細胞に移入した。ＣＯ２インキュベータにおいて３７℃で２０時間インキュベートした後、細胞培養上清におけるＳＥＡＰ活性を、アルカリホスファターゼの基質（ＱＵＡＮＴＩ−ＢＬＵＥ（商標）、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）と共にインキュベートした後、６３０ｎｍでＯＤを記録することによって測定した。細胞に基づく遮断アッセイにおいて陽性対照（例えば、図２を参照されたい）として使用したｓＳＴ２−ＬＺ（ｓＳＴ２（Ｍ１−Ｆ３２８）Ｃ末端ロイシンジッパー（ＬＺ）−Ｆｌａｇ−Ｈｉｓ）の全長アミノ酸配列は、配列番号３１９に見出すことができる。シグナルペプチドを除去したｓＳＴ２−ＬＺの成熟形態は、配列番号３１０に示されている。
ＩｇＧ形式で発現した場合、精製した抗ＩＬ−３３抗体は、１ｎＭ未満の濃度でＩＬ−３３の完全な阻害を示した（図２）。対照的に、ＩＬ−１３に特異的な陰性対照のモノクローナル抗体では阻害は観察されなかった（図示されない）。
Ｃ．ハイブリドーマ分子クローニング及び配列決定
各ハイブリドーマ細胞株によって発現された抗体を、ＲＮＡ精製なしに細胞から直接クローニングした。重鎖及び軽鎖可変免疫グロブリン領域を、５’修飾ＲＡＣＥ（ｃＤＮＡ末端の高速増幅）プロトコル（Ｑｚａｗａ ｅｔ ａｌ．ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４０（４）：４６９−４７８，２００６）を用いてクローニングした。第１のｃＤＮＡ鎖は、５５℃で１時間、マウス重鎖（５’−ＴＴＴＹＴＴＧＴＣＣＡＣＣＫＴＧＧＴＧＣＴＧＣ−３’、配列番号３２０）及び軽鎖定常（５’−ＧＴＡＧＡＡＧＴＴＧＴＴＣＡＡＧＡＡＧ−３’、配列番号３２１）領域に特異的なオリゴヌクレオチドプライマーと共にＳＵＰＥＲＳＣＲＩＰＴ（登録商標）ＩＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）逆転写酵素を用いてハイブリドーマ細胞から直接生成した。縮重プライマーは、様々なマウス重鎖アイソタイプにわたってプライミングが可能となるように設計した。逆転写酵素産物の３’末端に、３７℃で１時間、末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｓａｎ Ｌｕｉｓ Ｏｂｉｓｐｏ，ＣＡ）及びｄＧＴＰ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）を用いてポリＧ尾部処理を行った。重鎖及び軽鎖可変ｃＤＮＡの増幅は、ネスト型重鎖定常領域プライマー（５’−ＧＴＧＴＡＧＡＧＫＹＣＡＧＡＣＴＳＣＡＧＧ−３’、配列番号３２２）及び軽鎖定常領域プライマー（５’−ＧＡＧＧＣＡＣＣＴＣＣＡＧＡＴＧＴＴＡＡＣ−３’、配列番号３２３）、ならびにポリ−Ｃ含有Ｎ末端プライマー（５’−ＧＡＴＴＣＡＡＡＴＣＴＣＡＡＴＴＡＴＡＴＡＡＴＣＣＧＡＡＴＡＴＧＴＴＴＡＣＣＧＧＣＴＣＧＣＴＣＡＴＧＧＡＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＤＮ−３’、配列番号３２４）を使用して、タッチダウンＰＣＲ（ＡＤＶＡＮＴＡＧＥ（登録商標）−ＧＣ ２、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）によって別個に行った。第２のネスト型タッチダウンＰＣＲセットは、Ｎ末端プライマー（５’−ＣＡＡＴＴＡＴＡＴＡＡＴＣＣＧＡＡＴＡＴＧ−３’、配列番号３２５）、重鎖定常領域プライマー（５’−ＧＡＡＲＴＡＲＣＣＣＴＴＧＡＣＣＡＧＧＣ−３’、配列番号３２６）、及び軽鎖定常領域プライマー（５’−ＧＡＡＧＡＴＧＧＡＴＡＣＡＧＴＴＧＧＴＧＣ−３’、配列番号３２７）を使用して行った。
ＰＣＲ産物をｐＣＲ２．１（登録商標）−ＴＯＰＯ（登録商標）クローニングベクター（ＴＯＰＯ（登録商標）ＴＡクローニングキット、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）にライゲーションし、ＯＮＥＳＨＯＴ（登録商標）ＴＯＰ１０コンピテント細胞に軽質転換した。形質転換したＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（Ｅ．ｃｏｌｉ）コロニーを単離し、ＤＮＡプラスミド単離のために培養した。プラスミドの配列決定を行って、各細胞株のＶＨ及びＶＬのＤＮＡ配列を決定した。配列決定の後に、重鎖及び軽鎖の可変領域を、エンドヌクレアーゼ制限部位（ＥｃｏＲＩ及びＸｈｏＩ）を含有するプライマーを用いてＰＣＲによって増幅させて、マウスＩｇＧ２ａならびにカッパ定常領域をコードする哺乳動物ＩｇＧ及びＩｇＫ発現ベクターにそれぞれサブクローニングさせた。
ハイブリドーマ細胞のサブクローニングの前に、親クローンを分子的にクローニングして、重鎖及び軽鎖の可変ドメインの配列を決定した。ハイブリドーマクローンがサブクローニングプロセス中に不安定性に起因して消失した場合に配列を捕捉するために、クローニングは、サブクローニングの前に行った。分子クローニング配列のデータに基づいて、１７Ｃ４、１７Ｈ２、及び１９Ｃ１１が、ＣＤＲ及びフレームワークの配列のアライメントに基づく同胞クローンであると決定した。これは、３つのクローンに対して得られたアッセイデータと一致していた。
Ｄ．マウスハイブリドーマ由来クローンのヒト化
ＩＬ−３３に高い親和性で結合しその受容体であるＳＴ２へのサイトカイン結合を遮断する抗体を発現するマウスハイブリドーマをヒト化に選択した。ハイブリドーマのクローニングにより得られた抗体の可変配列を、最も近似して一致するヒト可変コンセンサス配列とアライメントした。マウスハイブリドーマ抗体由来の超可変領域（ＨＶＲ）を、Ｋｕｎｋｅｌ変異生成（例えば、Ｋｕｎｋｅｌ ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７−３８２，１９８７）を用いて対応するヒト可変コンセンサス配列にグラフトした。重要なＶｅｒｎｉｅｒ位、ならびにフレームワーク／ＨＶＲ相互作用の部位及び重鎖可変及び軽鎖可変の相互作用の部位で、軽鎖及び重鎖の両方の残基をマウスのものに変異させることによって、各クローンの追加の変異形を生成した。例えば、ハイブリドーマクローン１０Ｃ１２のクローニングされたＨＶＲ配列を、コンセンサスカッパＩＩＩ軽鎖及びコンセンサスＶＨＩＩＩ重鎖にグラフとして、ヒト化変異形を生成した。
ハイブリドーマクローン１０Ｈ２のクローニングされたＨＶＲ配列を、コンセンサスカッパＩＶ軽鎖及びコンセンサスＶＨ ＩＩＩ重鎖にグラフトして、ヒト化変異形を生成した。６Ｃ１１、２Ｂ６、及び９Ｆ６のクローニングしたＨＶＲ配列を、１０Ｃ１２及び１０Ｈ２と類似の形式でヒト化した。ヒト化変異形を、２９３細胞において一過性に発現させ、次いで、結合及び機能に関して試験した。
ハイブリドーマ由来のクローン１０Ｃ１２、１０Ｈ２、６Ｃ１１、２Ｂ６、及び９Ｆ６のヒト化変異形のＩＬ−３３に対する結合動態を、Ｂｉａｃｏｒｅ ３０００またはＴ２００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて測定した。抗ヒトＦｃ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を、製造業者のプロトコルに従って、アミンに基づく結合を介してＣＭ５センサチップに固定した。ヒト化変異形抗ＩＬ−３３抗体を、５００〜６００共鳴単位（ＲＵ）のレベルで捕捉した。ヒトＩＬ−３３（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、ｈｕＩＬ３３．ｈｉｓ）に対する抗体結合を測定した。０．７８〜５０ｎＭの範囲で２倍濃度系のヒトＩＬ−３３を実験に使用した。ＩＬ−３３の結合のセンサグラムは、注入時間２分、流速３０μｌ／分、２５℃の温度で、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、及び０．００５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０の泳動緩衝液を用いて記録した。注入後、抗体からのリガンドの解離を泳動緩衝液において６００秒間監視した。結合サイクル間に、３Ｍの塩化マグネシウムを４０μｌ注入して表面を再生させた。泳動緩衝液のみを含有していたブランクを差し引いた後、ヒト化抗ＩＬ−３３抗体へのＩＬ−３３の結合が観察されたセンサグラムを、製造業者によって供給されたソフトウェアで１：１ラングミュア結合モデルを使用して分析して、動態及び結合定数（解離定数（ＫＤ）を含む）を計算した。抗ＩＬ−３３ １０Ｃ１２ヒト化変異形は、Ｂｉａｃｏｒｅによって測定したときに、ヒト化後にヒトＩＬ−３３への高い親和性を保持した（図３及び表２を参照されたい）。表２もまた、Ｂ細胞クローニング及びファージディスプレイに由来する選択された抗体クローンの動態データを示す。
ヒト化抗ＩＬ−３３抗体の機能、ならびに単一Ｂ細胞クローニングから得られた抗体（例えば、４Ｇ１２及び誘導体、ならびに３Ｅ３）及びファージディスプレイから得られた抗体を試験するために、細胞に基づく受容体遮断アッセイにおけるそれらの活性を、上述のように測定した。抗体を、ヒト及びカニクイザルの両方のＩＬ−３３とＳＴ２との結合の遮断に関して試験した。選択された抗体群の受容体遮断アッセイの結果を、表３に示す。
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実施例３．加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）を含む眼科障害の炎症におけるＩＬ−３３の役割
炎症は、典型的に、感染症または傷害によって誘発される防御応答であると考えられている。炎症はまた、感染症または明らかな組織損傷がない場合には、組織の応力または機能障害によって誘導されることもある。かかる無菌性炎症応答の例は、網膜を含む、中枢神経系における免疫特権領域で見られる。ＡＭＤの場合、網膜及びその下にある網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞が様々な刺激（例えば、光、酸化ストレス、及びタンパク質分解酵素）に生涯にわたり露出されることにより、異常な血管新生、ＲＰＥ細胞死、及び視細胞の消失につながり得る。神経網膜の消失は、無菌性の炎症応答と関連付けられることが多く、この応答は、ある程度、視細胞及び視細胞外節層における単核食細胞の蓄積によって特徴付けられる。単核食細胞の動員を開始する要因は、大部分が未知のままである。
Ａ．ＡＭＤではヒト黄斑のミュラー細胞におけるＩＬ−３３発現が増加している
ヒト網膜の中心付近の領域である黄斑は、高い視力にとって極めて重要である。酸化ストレスへの生涯的な曝露または視覚サイクルの毒性副生成物への曝露に起因する、黄斑でのＲＰＥ及び視細胞の生存率の低下は、視覚機能にとって重要な結果を有し得る。ＩＬ−３３の発現が、網膜黄斑部では網膜周辺部と比較して異なっているかどうかを判定するために、解剖した死後のヒト網膜（図４Ａ）をＲＮＡ配列決定（ＲＮＡ−ｓｅｑ）によって分析した。正常なドナーの網膜周辺部と比較してＩＬ−３３転写産物が黄斑部では有意に増加しており、一方で他のインターロイキン１（ＩＬ−１）ファミリーのサイトカインであるＩＬ−１α、ＩＬ−１β、及びＩＬ−１８の発現レベルは、網膜周辺部において黄斑部と比較して類似であったか、または増加していた（図４Ｂ）。
正常なヒト網膜におけるＩＬ−３３の細胞源を更に判定するために、眼科疾患の病歴のないヒトドナーからの７つの眼を、免疫組織化学処理を行った。ＩＬ−３３は、網膜中心窩のビメンチン陽性ミュラー細胞の核内に主に存在しており、網膜周辺部ではＩＬ−３３陽性（ＩＬ−３３＋）ミュラー細胞の数は有意に低かった（図５Ａ〜５Ｅ）。これはＲＮＡ配列決定結果と一致していた。ＩＬ−３３はまた、ＲＰＥ細胞の下位集団の核内にも発現しており、網膜中心窩では網膜周辺部と比較して発現がわずかに高かった（図５Ｂ、５Ｃ、及び５Ｄ）。網膜神経節細胞層におけるＩＬ−３３＋星状細胞（グリア線維性酸性タンパク質陽性（ＧＦＡＰ＋））の数及び脈絡膜のＩＬ−３３＋内皮細胞（原形質膜小胞関連タンパク質陽性（ＰＬＶＡＰ＋））の数は、網膜中心窩と網膜周辺部とを比較したときに、差はなかった。
ＡＭＤの病歴があるドナーでは、ＲＰＥ及び視細胞消失、進行形萎縮型ＡＭＤの徴候、または地図状萎縮の領域が、黄斑で確認された（図６Ａ及び６Ｂ）。多重マーカーの蛍光免疫組織化学法を用いて、ＩＬ−３３＋ミュラー細胞数及び骨髄系細胞数の増加が、ＲＰＥ及び視細胞萎縮の領域で観察された（図６Ａ〜６Ｅ）。ＡＭＤ非病変領域におけるＩＬ−３３＋ミュラー細胞の数は、対照の網膜中心窩におけるものよりも有意に低かった（図６Ｃ）。理論に束縛されることを望むものではないが、これは、非病変領域が、典型的に、網膜周辺部に位置しているという事実に起因する可能性があり、この網膜周辺部では、ＩＬ−３３＋ミュラー細胞は、非ＡＭＤ眼の網膜中心窩よりも数が少ない（図５Ｄ）。ＡＭＤ病変部の脈絡膜でも、対照または非病変領域と比べたＩＬ−３３＋細胞の増加が観察された（図６Ｄ）。Ｉｂａ１＋骨髄系細胞は全てがＩＬ−３３に関して陽性ではなかった（図６Ｅ）。ＡＭＤ患者の部分集団の硝子体では、ＩＬ−３３レベルは、正常な対照（黄斑円孔または黄斑パッカーを有する患者）と比較して有意に増加していた（図６Ｆ）。
Ｂ．光毒性ストレス後にインビトロ及びインビボでＩＬ−３３が処理され、ミュラー細胞から放出される。
マウス網膜に関して前述のように、ラット網膜において、ＩＬ−３３を、主に、網膜中心窩及び網膜周辺部のビメンチン陽性ミュラー細胞で発現させた（図７Ｂ）。ヒト眼でのＩＬ−３３発現パターンとは対照的に、正常なラット及びマウスの眼では、ＲＰＥまたは脈絡膜内皮細胞におけるＩＬ−３３発現が非常に低く、ＩＬ−３３＋細胞は、ＲＰＥまたは脈絡膜ではほとんど観察されなかった（図７Ａ及び７Ｂ）。正常なマウスの眼では、ＩＬ−３３ ｍＲＮＡ及びタンパク質の発現は、他のＩＬ−１ファミリーメンバー（ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、及びＩＬ−１８）と比較して、数桁高かった（図７Ｃ）。明るい光に曝露したラットから採取したミュラー細胞であるｒＭＣ−１細胞（Ｓａｒｔｈｙ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．３９：２１２−２１６，１９９８）を、インビトロでのＩＬ−３３の制御を研究するために使用した。培養液中のｒＭＣ−１ミュラー細胞は、ＧＦＡＰの発現によって示される活性化表現型を呈した（図７Ｄ）（Ｓａｒｔｈｙ ｅｔ ａｌ．（上記）も参照されたい）。ｒＭＣ−１ミュラー細胞の細胞成分分画抽出により、核分画中に３０ｋＤａのプロＩＬ−３３（ＩＬ−３３ｐ３０）ならびに約２４ｋＤａ及び約１９ｋＤａの（ＩＬ−３３ｐ１９）Ｃ末端ペプチドが特定されたが、ＩＬ−３３ｐ１９が、細胞質中に発現していた主な種であった（図７Ｅ）。ｒＭＣ−１細胞を高グルコース（２５ｍＭ）培地に曝露し、それによってミュラー細胞を活性化することにより（図７Ｆ、Ｓａｒｔｈｙ ｅｔ ａｌ．（上記）も参照されたい）、ＩＬ−３３の分泌が、低グルコース（５．５ｍＭ）培地で培養した細胞と比較して有意に増加した（図７Ｇ）。培養上清のウェスタンブロットでは、ＩＬ−３３種としてＩＬ−３３ｐ１９のみが示された（図７Ｇ）。高グルコース刺激（最大７２時間）は、細胞透過性またはｒＭＣ−１細胞へのアネキシンＶ染色を誘導しなかったため（図７Ｈ）、これにより、高グルコース培地でのＩＬ−３３ｐ１９分泌の増加が細胞死の増加と関連していなかったことが示された。これらのデータは、ＩＬ−３３が、ヒト及び齧歯類のミュラー細胞において主として核に局在化して発現されること、ならびにＩＬ−３３ｐ１９が、培養物中で活性化された生ラットミュラー細胞から放出され得ることを示した。
次に、インビボでのミュラー細胞の活性化の後にＩＬ−３３がミュラー細胞から分泌されるかどうかに関する分析を行った。明るい（１２００ルクス）光に齧歯類を数日間継続的に曝露したことによって、桿体及び錐体の進行的な消失がもたらされ、同時にミュラー細胞、小膠細胞、及びマクロファージの増加が見られた（ＬａＶａｉｌ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ ８９：１１２４９−１１２５３，１９９２）。継続的な光への曝露（ＣＬＥ）の後に、外顆粒層（ＯＮＬ）において末端ｄＵＴＰニック端標識（ＴＵＮＥＬ）陽性細胞数の増加が観察され（図７Ｉ）、その後で桿体及び錐体の消失が観察された（図７Ｊ）。ミュラー細胞が存在する内顆粒層（ＩＮＬ）ではＴＵＮＥＬ陽性細胞はほとんど観察されなかった。
ＩＬ−３３がインビボで細胞によって放出されるかどうかを判定するために、ＣＬＥ後の様々な時点で硝子体を採取した。正常なラット硝子体におけるＩＬ−３３のレベルは、およそ１ｎｇ／ｍｌであった。ＩＬ−３３濃度は光活性化眼では２倍に増加し、３日目でプラトーに達し（図７Ｋ）、光に誘導される網膜ストレス後のＩＬ−３３の放出を示した。培養物中においてｒＭＣ−１細胞から放出されたＩＬ−３３フラグメントと同一なサイズ（図７Ｇ）のＣ末端処理された１９ｋＤａのタンパク質（ＩＬ−３３ｐ１９）が、ＣＬＥの前後に硝子体中に存在していた主なＩＬ−３３種であったことを、ウェスタンブロットにより確認した（図７Ｋ）。全長ＩＬ−３３ｐ３０は網膜における主な種であり、硝子体におけるＩＬ−３３ｐ１９発現と同様な時系列で、光への曝露後３日目から処理型ＩＬ−３３ｐ１９種の存在が増加した（図７Ｋ）。光損傷を受けた網膜及び高グルコース培地で培養したｒＭＣ−１細胞におけるＩＬ−３３ｐ１９の存在の増加が、別のＩＬ−３３転写産物変異形の存在に起因していたかどうかを判定するために、ＩＬ−３３の５’非翻訳領域（５’−ＵＴＲ）（エクソン１）から終止コドン（エクソン９）に及ぶＰＣＲプライマーを用いてＲＴ−ＰＣＲを行った。いずれの場合も、全長ＩＬ−３３転写産物のみが検出された（図７Ｌ）。理論に束縛されることを望むものではないが、これは、ＩＬ−３３ｐ１９が、選択的スプライシングではなく、選択的スプライシングによって生成されたことを示唆する。ＩＬ−３３のプロセシングを担うプロテアーゼは、依然として特定されておらず、現在の研究の焦点となっている。
ＣＬＥ後に、ラットミュラー細胞からナイーブＩＬ−３３の消失が観察された。核局在化シグナル及びクロマチン結合ドメインを含有するＩＬ−３３のＮ末端の１１２個のアミノ酸がｄｓＲｅｄレポーターに融合されている、遺伝子組換えＩＬ３３ｔｍ２／ｔｍ２マウス（Ｂｅｓｓａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ ５５：３３−４１，２０１４）を分析して、インビボでミュラー細胞におけるＩＬ−３３タンパク質の制御を判定した。ＩＬ３３ｔｍ２／ｔｍ２マウス由来の網膜では、天然の全長ＩＬ−３３の局在化に類似して（図７Ｂ）、ＩＬ−３３−Ｎ−ｔｅｒｍ−ｄｓＲｅｄは、主に、網膜のＩＮＬに位置するミュラー細胞の核に局在化していた（図７Ｍ）。ＩＬ３３ｔｍ２／ｔｍ２網膜のフローサイトメトリー分析により、ミュラー細胞におけるＩＬ−３３−Ｎ−ｔｅｒｍ−ｄｓＲｅｄの選択的な発現を確認した（図７Ｍ）。生ミュラー細胞からのＩＬ−３３−ｄｓＲｅｄの有意な消失が、ミュラー細胞を消失することなくＣＬＥ後に観察されたが（図７Ｍ）、これは、細胞死を伴うことのないミュラー細胞からＩＬ−３３ Ｃ末端の放出を反映している。この発見は、光曝露後にラットミュラー細胞から天然のＩＬ−３３の消失が観察されたことと一致する。したがって、これらのデータは、ＩＬ−３３のＣ末端処理形態が、光毒性に応答して細胞活性化後にミュラー細胞から放出されることを示す。
Ｃ．ＳＴ２は、活性化ミュラー細胞において発現し、視細胞消失に寄与する。
ＩＬ−３３は、そのヘテロ二量体受容体であるＳＴ２／ＩＬ１ＲＡｃＰへの結合後に、ＭｙＤ８８に媒介されるシグナル伝達を誘発する（例えば、Ｓｃｈｍｉｔｚ ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２３：４７９−４９０，２００５）。膜貫通ＳＴ２（ＳＴ２Ｌ）及び膜貫通ドメインを欠くＳＴ２のスプライス変異形（ｓＳＴ２）をコードする網膜転写産物が、ＣＬＥ後に４〜１０倍増加し、３日目がピークであった（図８Ａ）。並列試料でのフローサイトメトリー分析により、光に曝露した網膜における主要な膜貫通ＳＴ２源として、活性化（ＧＦＡＰ＋）ミュラー細胞を特定したが（図８Ｂ）、ＳＴ２は光に曝露する前にはミュラー細胞で検出されていなかった。ＳＴ２は、ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５ｌｏ小膠細胞（図８Ｂ）、ＲＧＣ、または視細胞では検出されなかった。
ＳＴ２へのＩＬ−３３の結合が、ＣＬＥ後の視細胞の生存に影響を及ぼすかどうかを判定するために、分析を行った。スペクトラルドメイン光干渉断層法（ＳＤ−ＯＣＴ）により、ＳＴ２−／−では、ＳＴ２＋／＋マウスと比較してＣＬＥ後７日間（図８Ｃ）及び１４日間（図８Ｄ）の網膜の温存が示された。全網膜のフローサイトメトリーにより、更に、桿体、錐体、及び神経節細胞が、ＣＬＥの間１４日間、ＳＴ２−／−対ＳＴ２＋／＋マウスで保護されたことを確認した（図８Ｅ）。眼全体の切片に対する形態計測分析により、ＳＴ２−／−マウスでは、網膜の上半分及び下半分の両方において、網膜光毒性損傷後の視細胞の有意な保護が示された（図８Ｆ）。ＣＬＥ後７日目に網膜電図（ＥＲＧ）を記録し、これにより、ＳＴ２＋／＋マウスと比較して、ＳＴ２−／−での網膜細胞の温存は、ａ波及びｂ波応答の向上につながったことが示され、これは網膜機能の向上を反映していた（図８Ｇ）。ＳＴ２−／−マウスの網膜とは対照的に、それぞれＩＬ−１α、ＩＬ１−β、及びＩＬ−１８の受容体を欠くＩＬ−１Ｒ１−／−マウス及びＩＬ−１８Ｒ１−／−マウスの網膜は、ＣＬＥ後に、野生型同腹仔と比較して保護されなかった（図８Ｄ）。
ＳＴ２／ＩＬ−３３の相互作用の薬理学的遮断が視細胞を保護するかどうかを更に判定するために、マウスに、可溶性ＳＴ２を発現する組み換えアデノ関連ウイルス（ＡＡＶ）で処置を行い（ＡＡＶ−ｓＳＴ２）、ＣＬＥを行った。ｓＳＴ２の遮断活性を、ＩＬ−３３刺激型骨髄由来肥満細胞（ＢＭＭＣ）において検証した（図９Ａ）。ＥＬＩＳＡ及びウェスタンブロットにより、ＡＶＶ感染ＨＥＫ２９３細胞におけるｓＳＴ２の発現を確認した（図９Ｂ）。ＡＡＶ−ｓＳＴ２の網膜下注射により、網膜及びＲＰＥにおいて高いレベルのｓＳＴ２発現がもたらされた（図９Ｃ）。ＡＡＶ−ｓＳＴ２で処置し、光に曝露したマウスは、桿体、錐体、及び神経節細胞の保護を示したが、対照ベクターのものは保護を示さなかった（図１０）。これらの結果は、ＩＬ−３３とそのシグナル伝達受容体であるＳＴ２／ＩＬ１ＲＡｃＰとの結合が、光に曝露した網膜において、視細胞消失につながる病態応答をもたらすことを示している。
Ｄ．ＩＬ−３３は、視細胞層への骨髄系細胞の動員を増加させる
ＳＴ２／ＩＬ１ＲＡｃＰシグナル伝達の下流のどの経路が視細胞消失をもたらすかを判定するために、３日間継続的に光に曝露したＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスの網膜のマイクロアレイ分析を行った。ＣＬＥ後に、ＳＴ２＋／＋マウスの網膜は、ＳＴ２−／−マウスと比較して、ＣＣＬ２、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＲＦ１、ＩＲＦ７、及びＳＴＡＴ３を含む、炎症の徴候の全体的な増加を示した（図１１Ａ及び１１Ｂ）。リアルタイムＰＣＲにより、ＣＣＬ２、ＩＬ−１β、及びＩＬ−６の発現の増加が確認されたが、ＳＴ２−／−マウスでは、ＳＴ２＋／＋マウスと比較して発現が有意に低かった（図１１Ｃ）。ｍＲＮＡ発現データと一致して、網膜におけるＣＣＬ２タンパク質の発現は、ＣＬＥ後に、ＳＴ２＋／＋マウスと比較して、ＳＴ２−／−では低減された（図１１Ｃ）。
ＩＬ−３３がミュラー細胞においてＣＣＬ２発現を誘導するかどうかを判定するために、分析を行った。上述のインビボ結果と一致して、ミュラー細胞の活性化マーカーであるＧＦＡＰを発現するｒＭＣ−１細胞は、膜貫通の表面に露出したＳＴ２を発現した（図１１Ｄ）。組み換えＩＬ−３３で刺激したとき、ｒＭＣ−１細胞は、ＣＣＬ２発現の用量依存的増加を示したが、これは、ＩＬ−３３ ＴＲＡＰの添加によって遮断され、ＩＬ−３３が、ミュラー細胞上のＳＴ２を通じてシグナル伝達することが確認された（図１１Ｄ）。ＩＬ−３３に加えて、ｒＭＣ−１細胞は、高グルコース培地で培養したときに、経時的にＣＣＬ２を発現し、分泌した（図１１Ｅ）。ＩＬ−３３ ＴＲＡＰを培養培地に添加することによって、ミュラー細胞により分泌されるＩＬ−３３を中和することにより、ビヒクルの存在下で培養したｒＭＣ−１細胞と比較して、ＣＣＬ２発現が有意に低下した（図１１Ｅ）。これらの結果は、培養液中のミュラー細胞が生物活性ＩＬ−３３を放出し、これが、自己分泌活性化によりＣＣＬ２を誘導し得ることを示している。
網膜のＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５ｌｏ（図１２Ａ及び図１３Ｄ）及びＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５ｈｉ（図１３Ｄ）の両方の細胞が、ＣＣＬ２の受容体であるＣＣＲ２を発現する（図１２Ａ）。ＩＬ−３３が、網膜における骨髄系細胞の分布に何らかの影響を有していたかどうかを判定するために、各網膜層におけるＩｂａ１＋骨髄系細胞を、ＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスにおいてＣＬＥの前後に定量化した。光に暴露する前、Ｉｂａ１＋細胞は、内網状層（ＩＰＬ）及び外網状層（ＯＰＬ）に集中しており、ＯＮＬ、外節（ＯＳ）、及び網膜神経節細胞層（ＧＣＬ）にはこの細胞はほとんど存在しなかった（図１２Ｂ）。１４日間のＣＬＥの後、Ｉｂａ１＋細胞は、ＯＮＬ、ＯＳ、及びＧＣＬに蓄積し、ＳＴ２＋／＋マウスにおいて、ＯＰＬ及びＩＰＬ内のＩｂａ１＋細胞が同時に減少した。ＳＴ２−／−マウスは、ＳＴ２＋／＋マウスと比較して、ＯＮＬ及びＯＳにおけるＩｂａ１＋細胞の４０〜５０％の減少を示し、ＯＰＬにおけるＩｂａ１＋細胞の５０％の増加を示した（図１２Ｃ）。したがって、ＣＬＥ後に、ＳＴ２／ＩＬ１ＲＡｃＰシグナル伝達が、ＣＣＬ２の発現、外網膜層におけるＩｂａ１＋骨髄系細胞の存在の増加、ならびに視細胞の桿体及び錐体の消失を促進させた。これらの結果により、以前に提示された、ＯＮＬにおける骨髄系細胞の存在を強化すること及び光損傷または網膜剥離後の視細胞死の誘導における、ミュラー細胞により分泌されるＣＣＬ２の役割が更に拡大される。
光に曝露したときにＩＬ−３３／ＳＴ２に誘導される視細胞の消失が、骨髄系細胞の浸潤によって媒介されるかどうかを判定するために、ＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスにおいてクロドロネートにより抹消単球を枯渇させ、７日間のＣＬＥの後に視細胞及び神経節細胞の数を定量化した。クロドロネート処理により、Ｌｙ６ＣｈｉＣＤ１１５＋及びＬｙ６Ｃｌｏ／−ＣＤ１１５＋抹消単球を、それぞれ、８０％及び７０％を上回って枯渇させた（図１２Ｄ）。単球枯渇により、ＳＴ２＋／＋マウスでは、ＣＬＥ後に桿体、錐体、及びＲＧＣの保護がもたらされた（図１２Ｅ）。しかしながら、ＳＴ２欠損では、単球を枯渇させたときに、視細胞の更なる保護が得られず、骨髄系細胞の浸潤がＩＬ−３３／ＳＴ２に誘導される視細胞消失を媒介することが示された。
ミュラー細胞から放出されるＩＬ−３３が病原的役割を有するかどうかを更に判定するために、ＩＬ−３３のＮ末端核局在化シグナル及びクロマチン結合ドメインがｄｓＲｅｄで置き換えられた遺伝子修飾マウス（ＩＬ３３ｔｍ１／ｔｍ１マウス）を分析した（Ｂｅｓｓａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ ５５：３３−４１，２０１４）（図１２Ｆ）。ＩＬ３３ｔｍ２／ｔｍ２マウスに類似して、ＩＬ３３ｔｍ１／ｔｍ１マウスは、神経網膜のミュラー細胞に選択的にｄｓＲｅｄ染色を示した。しかしながら、ｄｓＲｅｄがＩＬ−３３のＮ末端を介して核に固定されているＩＬ３３ｔｍ２／ｔｍ２マウスとは対照的に、ＩＬ３３ｔｍ１／ｔｍ１マウスではＩＬ−３３のＮ末端をｄｓＲｅｄと置き換えたことにより、ＩＬ−３３が各に固定されるのが防止され、ｄｓＲｅｄ−ＩＬ−３３−Ｃ−ｔｅｒｍがミュラー細胞の細胞質に放出が内顆粒層に及ぶことになった（図１２Ｆ）。内在性プロモーターの制御下にあるＩＬ−３３の転写と適合して（Ｂｅｓｓａ ｅｔ ａｌ．（上記））、網膜のＩＬ−３３ ｍＲＮＡは、ＩＬ３３ｔｍ１／＋マウス及びＩＬ３３ｔｍ１／ｔｍ１マウスでは、ＩＬ３３＋／＋の同腹マウスと比較して変化していなかったが、血清及び網膜におけるＩＬ−３３タンパク質は、Ｎ末端を欠くＩＬ−３３の自発的な放出に起因して上昇していた（図１２Ｆ）。更に、ＩＬ−３３軸の病原的な役割と一致して、ＩＬ３３ｔｍ１／＋マウス及びＩＬ３３ｔｍ１／ｔｍ１マウスに由来する網膜は、マウスがＳＴ２受容体鎖を発現した場合（ＳＴ２＋／−バックグラウンド）、ＣＣＬ２及びＩＬ−６発現の増加ならびに視細胞錐体及び神経節細胞の消失を示した（図１２Ｇ）。ＣＣＬ２及びＩＬ−６の発現ならびに網膜細胞の消失は、ＳＴ２を欠くＩＬ３３ｔｍ１／＋マウス及びＩＬ３３ｔｍ１／ｔｍ１マウスでは対照の値まで回復した（図１２Ｇ）。これらの結果は、ＩＬ−３３が、核に移行するその能力が枯渇していた場合に、細胞から放出され、網膜細胞の死と共に、ＳＴ２依存性サイトカイン及びケモカイン放出を誘導することを示している。
Ｅ．網膜にホーミングする単球を循環させることが、網膜色素上皮破壊後のＩＬ−３３／ＳＴ２−に媒介される視細胞消失に必要である
網膜色素上皮（ＲＰＥ）は、視細胞外節の取り込み及び再循環を通じた視細胞の恒常性、毒性の視覚サイクル産物を不活性化すること、ならびに網膜の代謝要求を満たすことにおいて、重要な役割を果たしている。ＲＰＥはまた、外側血液網膜関門の一体性を維持する（例えば、Ｓｔｒａｕｓｓ，“Ｔｈｅ Ｒｅｔｉｎａｌ Ｐｉｇｍｅｎｔ Ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ．” Ｉｎ Ｗｅｂｖｉｓｉｏｎ：Ｔｈｅ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｅｔｉｎａ ａｎｄ Ｖｉｓｕａｌ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｋｏｌｂ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．）１９９５）を参照されたい。ＲＰＥ細胞の消失は、ＡＭＤの滲出型及び萎縮型の両方において視細胞消失を引き起こすことが提示されている（例えば、Ｂｈｕｔｔｏ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３３：２９５−３１７，２０１２）。ヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３）は、全身投与すると、ＲＰＥ細胞生存に不可逆的に影響を及ぼす酸化化合物であり（Ｃａｒｉｄｏ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．５５：５４３１−５４４４，２０１４）、ＲＰＥ細胞死に次いで視細胞消失に重要な網膜経路の役割の調査を可能にするものである。
ＮａＩＯ３の全身投与により、３日目に網膜中心窩におけるＲＰＥ細胞の大部分の排除がもたらされた。これには、視細胞の外顆粒細胞の消失、ミュラー細胞の活性化（図１３Ａ）、ならびに神経網膜における１９ｋＤａのＩＬ−３３処理形態（ＩＬ−３３ｐ１９）の存在の増加が付随し、処置後３日目がピークであった（図１３Ｂ）。ＮａＩＯ３での処置はまた、１５００倍を上回るＣＣＬ２の増加をもたらした（図１３Ｃ）。ＮａＩＯ３投与に起因するＣＣＬ２タンパク質レベルの増加は、ＳＴ２を欠くマウスではおよそ３５％緩和された（図１３Ｃ）。ミュラー細胞のＩＬ−３３刺激により骨髄系細胞の化学誘引物質であるＣＣＬ２が誘導されることを考慮して、ＩＬ−３３の遮断が、網膜における骨髄系細胞数に影響を及ぼしたかどうかを判定するために分析を行った。ＳＴ２＋／＋マウスをＮａＩＯ３で処置したことにより、網膜に存在するＣＤ４５ｈｉＣＤ１１ｂ＋ＣＣＲ２＋骨髄系細胞数に２０倍を上回る増加が生じ、３日目にピークを迎えた。ＳＴ２−／−マウスは、ＮａＩＯ３処置後に、３日目及び７日目で、それぞれ、ＳＴ２＋／＋マウスと比較して、ＣＤ４５ｈｉＣＤ１１ｂ＋ＣＣＲ２＋骨髄系細胞数の増加の約７０％及び約５０％の緩和を示した（図１３Ｄ）。対照的に、ＣＤ４５ｌｏｗＣＤ１１ｂ＋ＣＣＲ２＋小膠細胞数は、ＮａＩＯ３処置後３日目で、ＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスの両方において５倍を上回って低下し、７日目で回復しなかった。Ｉｂａ１＋細胞の免疫組織化学分析により、ＳＴ２−／−マウスでは、ＳＴ２＋／＋マウスと比較して、ＮａＩＯ３処置後３日目に、ＯＳ及びＯＮＬにおけるＩｂａ１＋骨髄系細胞の浸潤のおよそ５０〜６０％の低減が示された（図１３Ｅ）。ＮａＩＯ３処置後７日目に、ＳＴ２＋／＋マウスと比較して、ＳＴ２−／−マウスでは有意に厚い網膜によって示されるように、ＳＴ２−／−マウスの神経網膜は、ＮａＩＯ３処置の後、保護されていた（図１３Ｆ）。桿体、錐体、及び網膜細胞の有意な温存が、ＦＡＣＳ分析によって更に示された。ＳＴ２−／−マウスとは対照的に、ＩＬ−１Ｒ１−／−マウスまたはＩＬ−１８−／−マウスの網膜は、ＮａＩＯ３処置後７日目に、野生型マウスと比較して、保護されていなかった（図１３Ｇ）。
骨髄系細胞の浸潤がＩＬ−３３に誘導される視細胞消失に必要であったかどうかを判定するために、ＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスにおいてクロドロネートにより抹消骨髄系細胞を枯渇させた後、ＮａＩＯ３処置を行い、３日目における視細胞及び神経節細胞の数を定量化した。Ｌｙ６ＣｈｉＣＤ１１ｂ＋ＣＣＲ２＋及びＬｙ６Ｃｌｏ／−ＣＤ１１５＋ＣＤＲ２＋抹消単球ならびにＣＤ４５ｈｉＣＤ１１ｂ＋ＣＣＲ２＋網膜マクロファージの枯渇が成功したことを、フローサイトメトリーによって確認した（図１３Ｈ及び１３Ｉ）。クロドロネートに媒介される骨髄系細胞の枯渇により、ＮａＩＯ３に誘導されるＲＰＥ細胞の消失後に神経網膜の保護がもたらされた（図１３Ｉ）。ＣＬＥでの単球枯渇実験の結果と類似して、ＳＴ２の消失は、骨髄系細胞を枯渇させたときに、更なる保護をもたらすことはなく、マクロファージの浸潤は、ＲＰＥが破壊されている場合にはＩＬ−３３／ＳＴ２に誘導される視細胞消失には必要なかったことが示された。
まとめると、遺伝子学的アプローチ及び薬理学的アプローチを用いて、これらの結果により、ＩＬ−３３が、視細胞層への骨髄細胞の動員及び網膜細胞の消失に寄与していることが示された。光に誘導される傷害モデル（ＣＬＥ）及びＲＰＥ破壊モデルの両方において、ＩＬ−３３軸シグナル伝達により、網膜のＯＮＬ層及びＯＳ層での骨髄系細胞の蓄積が強化された。ＲＰＥ細胞消失のモデルでは、ＩＬ−３３軸シグナル伝達により、網膜における骨髄系細胞の蓄積が強化された。網膜損傷の齧歯類モデル及びヒトＡＭＤの両方において、損傷した網膜における骨髄系細胞の蓄積は、視細胞消失と解剖学的に関連していた。
Ｆ．材料及び方法
マウス
ＳＴ２ノックアウト（ＳＴ２−／−）ＢＡＬＢ／ｃマウス（８継代）をＭＲＣ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫから入手した（Ｔｏｗｎｓｅｎｄ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９１：１０６９−１０７６，２０００を参照されたい）。ＳＴ２−／−マウスを、１０代にわたってＣ５７ＢＬ／６バックグラウンドと戻し交配して、ＳＴ２−／−Ｃ５７Ｂｌ／６マウスを生成した。ＩＬ３３ｔｍ１／＋及びＩＬ３３ｔｍ２／ｔｍ２ＢＡＬＢ／ｃマウスを、Ｆ．Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ｌｔｄ．，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄから入手した（Ｂｅｓｓａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ ５５：３３−４１，２０１４を参照されたい）。ＩＬ３３ｔｍ１／＋マウスの罹患率及び死亡率が著しかったため、ＩＬ３３ｔｍ１／＋マウスを、ＳＴ２−／−ＢＡＬＢ／ｃマウスと交配して、ＳＴ２−／−バックグラウンドを維持した。ＩＬ３３ｔｍ１／ｔｍ１ＳＴ２＋／−マウスを、雌性ＩＬ３３ｔｍ１／＋ＳＴ２−／−マウスと雄性ＩＬ３３ｔｍ１／＋ＳＴ２＋／＋マウスとをかけ合わせて生成した。ＩＬ−１Ｒ１−／−（Ｉｌ１ｒ１ｔｍ１Ｉｍｘ）マウス、ＩＬ−１８Ｒ１−／−（Ｉｌ１８ｒ１ｔｍ１Ａｋｉ）マウス、及びＩＬ−１８−／−（Ｉｌ１８ｔｍ１Ａｋｉ）Ｃ５７Ｂｌ／６マウスを、Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。ＩＬ−１Ｒ１−／−マウス及びＩＬ−１８Ｒ１−／−マウスを、高速類似遺伝子導入（ｓｐｅｅｄ ｃｏｎｇｅｎｉｃｓ）によりＢＡＬＢ／ｃバックグラウンドと戻し交配して、それぞれ、ＩＬ−１Ｒ１−／−及びＩＬ−１８Ｒ１−／−ＢＡＬＢ／ｃマウス（９代）を生成した。スプラーグドーリーラットを、Ｔｈｅ Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから購入した。全ての動物は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃにおいて病原体の存在しない動物施設に１２／１２時間の明／暗サイクルで収容し、同腹仔を実験に使用した。動物実験は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認されたプロトコル及びＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｖｉｓｉｏｎ ａｎｄ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ（ＡＲＶＯ）Ｓｔａｔｅｍｅｎｔ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌｓ ｉｎ Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ａｎｄ Ｖｉｓｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈに従って行った。
組み換えタンパク質
組み換えマウスＩＬ−３３（アミノ酸１０９〜２６６）を、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから購入した。ＩＬ−３３のアミノ酸１０９〜２６４をコードするラットｃＤＮＡフラグメントをｐＥＴ２８ベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ）にサブクローニングすることによって、組み換えラットＩＬ−３３（アミノ酸１０９〜２６４）を生成した。タンパク質をＥ．ｃｏｌｉにおいて発現させ、Ｎｉ−ＮＴＡクロマトグラフィーを行った後、ゲル濾過を行って、精製した。マウス可溶性ＳＴ２（アミノ酸１〜３３７）を８回ヒスチジン（Ｈｉｓ）タグをＣ末端に有するｐＲＫ５発現ベクターにサブクローニングすることによって、組み換えｓＳＴ２を生成した。ＣＨＯ細胞に発現した融合タンパク質を、Ｎｉ−ＮＴＡクロマトグラフィーを行った後、ＳＵＰＥＲＤＥＸ（登録商標）２００ゲル濾過を行って、精製した。ｓＳＴ２の中和活性を、ＩＬ−３３刺激型骨髄由来肥満細胞（ＢＭＭＣ）からのサイトカインの産生を遮断することによって検証した。ＢＭＭＣは、上述のように生成し、ＩＬ−３３で刺激した（Ｍｏｕｌｉｎ ｅｔ ａｌ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ４０：２１６−２２５，２００７）。簡単に言うと、１０５個の細胞を、９６ウェルプレートにおいて２４時間、２００μｌのＲＰＭＩ−１６４０培養培地中で２０μｇ／ｍｌのｓＳＴ２または対照であるＨｉｓタグ付加タンパク質の存在下で１ｎｇ／ｍｌのＩＬ−３３で刺激した。ＥＬＩＳＡによるＩＬ−６及びＩＬ−１３の測定のために、培養上清を採取した（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）。ノブ・イン・ホール技術を用いてＳＴ２の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）がＩＬ１ＲＡｃＰのＥＣＤとヘテロ二量体を形成している組み換えＩＬ−３３ ＴＲＡＰを生成した（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号及びＭｅｒｃｈａｎｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １６：６７７−６８１，１９９８を参照されたい）。「ノブ」変異を含有するＣ末端ｍＩｇＧ２ａ Ｆｃフラグメントを有するマウスＳＴ２のＥＣＤ（アミノ酸２６〜３２８）をコードするｐＲＫ５発現ベクターを、「ホール」変異を含有するＣ末端ｍＩｇＧ２ａ Ｆｃフラグメントを有するマウスＩＬ１ＲＡｃＰのＥＣＤ（アミノ酸２１〜３５０）をコードするｐＲＫ５発現ベクターと共に、ＣＨＯ細胞にコトランスフェクトした。融合タンパク質を、ＭａｂＳＵＲＥ ＳＥＬＥＣＴカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）及びＳＵＰＥＲＤＥＸ（登録商標）２００ゲル濾過によって精製した。
継続的な光への曝露（ＣＬＥ）
８〜１２週齡の雄性ＢＡＬＢ／ｃマウスまたは６〜８週齡のスプラーグドーリーラットを、１００ルクス未満の光強度で通常の収容場所に保持した（ベースラインとして使用、ｄ０）。光への曝露のために、平坦なワイヤラックのみで覆われ、フィルタ蓋のない、わずかに変化させた通常のケージに動物を１匹ずつ収容した。光がケージに入るのを妨げないように、食物ペレットはケージの底に置き、水は、ケージの側面に取り付けた水用ボトルから提供した。Ｍｅｔｒｏラック棚（各棚の上に４８インチの白色蛍光灯が取り付けられている）にケージを置くことにより、網膜変性を誘導した。ラックには、光を棚に均等に反射し戻すためにぶら下がった白色パネルも含まれていた。ルミノメーターによって測定したときに各棚の光強度が約１２００ルクスとなるように、光源に対して棚の高さを調整した。均等な光への曝露を確実にするために、ＣＬＥの間は、各棚内及び棚間でケージを回転させた。示されるように、様々な日数で光に曝露させた後に、動物を評価した。
ＲＰＥ損傷に誘導される網膜変性
６〜８週齡の雄性Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに、体重１ｋｇ当たり２０ｍｇのヨウ素酸ナトリウム（ＮａＩＯ３）（Ｓｉｇｍａ）を静脈内注射した。ＮａＩＯ３の投薬量は、眼底撮像によるＲＰＥ損傷の評価及びＯＣＴによる網膜厚さの変化の評価を行う、前述の用量滴定実験にもとづいて選択した。示されるように、ＮａＩＯ３注射の３または７日後に網膜を評価した。同じ体積の生理食塩水を注射したマウスは対照としての機能を果たした。
スペクトラルドメイン光干渉断層法（ＳＤ−ＯＣＴ）
ＣＬＥの後、ＳＰＥＣＴＲＡＬＩＳ（登録商標）ＨＲＡ＋ＯＣＴシステム（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）を用いてＳＤ−ＯＣＴによって網膜厚さを測定した。齧歯類の光学系に関して調整するために、このシステムを修正して、製造業者が薦める通りに５５°の広視野レンズをカメラの前に設置した。ケタミン（７０〜８０ｍｇ／体重１ｋｇ）及びキシラジン（１５ｍｇ／体重１ｋｇ）の腹腔内注射によって、マウスに麻酔をかけた。数滴のトロピカミド点眼液ＵＳＰ１％（Ｂａｕｓｃｈ＆Ｌｏｍｂ）で瞳孔を散大させた。数滴の人工涙液を両側に適用して、処置中の角膜の乾燥を防いだ。視神経から背側部領域（上方象限）を通じた水平方向の体積のスキャンを使用して、網膜の厚さを評価した。全網膜厚さは、断面図上で内境界膜（ＩＬＭ）からＲＰＥ／脈絡膜層までの幅として定義し、ＭＡＴＬＡＢ（登録商標）（ＭａｔｈＷｏｒｋｓ）において慣例的な自動化画像区分化ルーチンを用いて測定した。
網膜電図検査法（ＥＲＧ）
ＥＳＰＩＯＮ２（商標）電気生理学システム（Ｄｉａｇｎｏｓｙｓ）を用いてＥＲＧ記録を行った。マウスは、ＥＲＧ記録の前に一晩暗所に適合させ、薄暗い赤色光の下で全ての手順を行った。マウスに麻酔を施し、上述のように瞳孔を散大させた。恒温プレートを用いて体温を維持し、３７℃に保った。基準電極を額から皮下に挿入し、設置電極を腰部領域の皮下に挿入した。金の環状電極（マウス電極１．５ｍｍ Φ３．２ｍｍ）（ＬＫＣ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を、両眼の角膜表面に置いた。角膜と電極との間の電気接点を確立させるため、及び手順の間の角膜の保湿を維持するために、ＧＯＮＩＯＶＩＳＣ（商標）ヒプロメローズ粘滑点眼液２．５％（ＨＵＢ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を角膜に１滴適用した。マウスを、ＣＯＬＯＲＤＯＭＥ（商標）光刺激装置で被覆されたプラットフォームに入れた。３つの閃光強度（０．０５、１、及び２５ｃｄ・ｓ／ｍ２）の白色光で、１強度当たり５回の閃光で、眼に刺激を与えた。最低刺激強度で１５秒から最高刺激強度で１分間の範囲の刺激間隔を導入することによって、連続的な閃光間で最大の桿体回復が得られた。シグナルを０．１５〜１０００Ｈｚでバンドパスフィルタに通し、２ｋＨｚで試料を得た。動物間では、エタノールワイプを用いて電極を洗浄し、次いで滅菌ＰＢＳで濯いだ。ＥＲＧ後に、眼軟膏を角膜に局所適用して乾燥を防いだ。記録したデータ点の全てを、特注のＭＡＴＬＡＢ（登録商標）ソフトウェア（Ｍａｔｈｗｏｒｋｓ）を使用して分析したが、ａ波の振幅はａ波のトラフからベースラインまでを測定し、一方でｂ波の振幅はａ波のトラフからｂ波のピークまでを測定した。３〜５回の閃光の光刺激に対する応答を平均した。
単球／マクロファージのクロドロネート枯渇
単球／マクロファージを枯渇させるために、２００μｌ体積のリポソーム封入したクロドロネート（Ｅｎｃａｐｓｕｌａ Ｎａｎｏ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）１ｍｇの毎日の投与を、ＣＬＥまたはＮａＩＯ３処置のそれぞれ２日前または１日前に開始した。対照マウスには、同じ体積の対照リポソームを受容させた。全身の単球枯渇を監視するために、イソフルランでの麻酔下において心臓穿刺によって血液を採取した。ＡＣＫ（アンモニウム−クロリド−カリウム）溶解緩衝液（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて全血試料から赤血球を除去した。次いで、細胞をフローサイトメトリー緩衝液中に再懸濁させ、Ｆｃをブロッキングし、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）とコンジュゲートした抗ＣＤ１１５（クローンＡＦＳ９８、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）とコンジュゲートした抗Ｌｙ６Ｃ（クローンＡＬ−２１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、及びフィコエリトリン（ＰＥ）とコンジュゲートした抗ＣＣＲ２（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）で染色し、フローサイトメトリーによって分析した。
ＡＡＶベクターの網膜下注射
遍在ＧＡＣプロモーターの制御下でマウスｓＳＴ２（アミノ酸１−３３７）−８ｘＨｉｓ（配列番号３３２）をコードするＡＡＶ２／５ベクターを、Ｖｅｃｔｏｒ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓによって特注で作製した。マウスｓＳＴ２（アミノ酸１〜３３７）−８ＸＨｉｓのアミノ酸配列は、配列番号３３３に提供されている。１０５ゲノムコピー（ＧＣ）／細胞の感染多重度（ＭＯＩ）でＨＥＫ２９３細胞を感染させることにより、ウイルス活性を検証した。感染の６日後に培養上清を採取し、ヤギ抗マウスＳＴ２抗体（ＡＦ１００４、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いてＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）及びウェスタンブロットによってｓＳＴ２分泌に関して分析した。ＡＡＶ不含のベクターによる感染を陰性対照として用いた。ＡＡＶの網膜下注射のために、マウスにケタミン／キシラジンで麻酔を施し、上述のように瞳孔を散大させた。解剖用顕微鏡下において、３０ゲージの針で角膜との交差部付近の強膜に小さな切開部を作った。１０１２ＧＣ／ｍｌを含有する１μｌのＡＡＶ懸濁液を、鋭利な３３ゲージのＨａｍｉｌｔｏｎ針と自動注入デバイスを用いて切開部から右眼の網膜下領域に注入した。注入後、３つの抗生物質（ネオマイシン、ポリミキシンＢ、及びバシトラシン）の眼軟膏を局所適用して、麻酔から回復する前の眼の感染及び乾燥を防いだ
硝子体及び網膜組織の採取
ラットの眼から硝子体を採取するために、ラットをＣＯ２窒息により安楽死させ、眼球を摘出した。角膜を除去した後、前房液をＳＵＧＩ（登録商標）の楔形吸収スワブ（Ｋｅｔｔｅｎｂａｃｈ Ｍｅｄｉｃａｌ）で吸収した。角度の付いた顕微手術用鉗子を用いて、硝子体がくっついたままの水晶体を後房から慎重に引き出した。ＰＢＳ中に溶解させた２０μｌのプロテアーゼ阻害剤混合液（Ｒｏｃｈｅ）を含有する濾過遠心管（Ｃｏｓｔａｒ）に水晶体−硝子体の組織を入れ、４℃で５分間１４，０００×Ｇで遠心分離にかけた。硝子体を、下方チャンバから溶離液として収集した。網膜を強膜及び色素上皮から分離して、ＰＢＳ中で濯いだ。網膜を、フローサイトメトリー分析のために切り離したか、またはＥＬＩＳＡ及びウェスタンブロットのために均質化させた。組織ホモジナイザ（ＩＫＡ）を用いて細胞溶解緩衝液（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）中で網膜を均質化した。網膜及びＲＰＥ／脈絡膜のホモジネートを、４℃で１０分間１４，０００×Ｇで遠心分離にかけ、上清を採取した。硝子体及び網膜組織溶解物は、分析するまで−８０℃で保管した。
フローサイトメトリー
網膜を上述のように単離し、２０ＩＵ／ｍｌのパパイン及び２００ＩＵ／ｍｌのＤＮａｓｅ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を含有するＥａｒｌｅの平衡塩類溶液（ＥＢＳＳ）で、３７℃において３０分間消化させた。組織は、緩徐なピペッティングによって切り離した。パパイン消化は、オボムコイドプロテアーゼ阻害剤（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を含有するＥＢＳＳ中に網膜細胞を再懸濁させることによって、終了させた。単一細胞懸濁液のアリコートを標準濃度の６μｍのＦＬＵＯＲＥＳＢＲＩＴＥ（登録商標）ＹＧミクロスフェア（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ）と１：１で混合した後、ＬＳＲＦＯＲＴＥＳＳＡ（商標）フローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で計数することによって、定量化した。生細胞を、ヨウ化プロピジウム陰性（ＰＩ−）細胞でゲーティングした。初代網膜細胞を、フローサイトメトリー緩衝液（０．５％ウシ血清アルブミン及び２ｍＭ ＥＤＴＡを含有するＰＢＳ、ｐＨ８）中に再懸濁させ、抗ＣＤ１６／ＣＤ３２（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）と共に３０分間インキュベートして非特異的な染色を遮断した。ＰＥ−ＣＹ７（登録商標）とコンジュゲートした抗ＣＤ１１ｂ（クローンＭ１／７０、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＡＰＣとコンジュゲートした抗ＣＤ９０．２（クローン５３−２．１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（登録商標）７００とコンジュゲートした抗ＣＤ４５（クローン３０−Ｆ１１、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、ＦＩＴＣとコンジュゲートした抗ＳＴ２（クローンＤＪ８、ＭＤ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ）、ＰＥとコンジュゲートした抗ＣＣＲ２（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）、ならびにＦＩＴＣとコンジュゲートした抗Ｌｙ６Ｃ及びＰＥとコンジュゲートした抗ＣＤ１１５（クローンＡＦＳ９８、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）でマウス網膜細胞を染色した。ＰＥ−ＣＹ７（登録商標）とコンジュゲートした抗ＣＤ１１ｂ／ｃ（クローンＯＸ−４２、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＡＰＣとコンジュゲートした抗ＣＤ９０（クローンＯＸ−７、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、及び／またはＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（登録商標）７００とコンジュゲートした抗ＣＤ４５（クローンＯＸ−１、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）でラット網膜細胞を染色した。
マウス及びラットの両方の細胞内マーカーを検出するために、抗体コンジュゲーションキット（Ａｂｃａｍ）を製造業者の説明書に従って使用して以下のフルオロフォアとコンジュゲートした抗体を生成した：ＰＥとコンジュゲートした抗錐体アレスチン（ＣＡＲ）（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、ＰＥ−ＣＹ７（登録商標）とコンジュゲートした抗ロドプシン（Ｒｈｏ）（クローン１Ｄ４、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、ＰｅｒＣＰ−ＣＹ５．５（登録商標）とコンジュゲートした抗グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）（クローンＧＡ５、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）。ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（登録商標）６４７とコンジュゲートした抗ビメンチン（クローンＤ２１Ｈ３）を、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙから購入した。細胞を、紫色固定可能生存性色素（ｖｉｏｌｅｔ ｆｉｘａｂｌｅ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｄｙｅ）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で染色し、ＩＮＴＲＡＰＲＥＰ（商標）透過処理試薬（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を製造業者の説明書に従って使用して固定及び透過処理を行った。次いで、細胞を抗体混合液で３０分間染色し、洗浄し、ＬＳＲＦＯＲＴＥＳＳＡ（商標）フローサイトメーターで分析した。ｒＭＣ−１におけるＳＴ２、ビメンチン、及びＧＦＡＰの染色を、初代網膜細胞に関して説明したものと同じ様式で行った。全てのデータはＢＤ ＦＡＣＳＤＩＶＡ（商標）ソフトウェアを用いて取得し、ＦＬＯＷＪＯ（登録商標）ソフトウェア（ＦｌｏｗＪｏ）で分析した。桿体（Ｒｈｏ＋ＣＡＲ−）、錐体（Ｒｈｏ−ＣＡＲ＋）、神経節細胞（ＣＤ９０＋ＣＤ４５−）、小膠細胞（ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５ｌｏ）、及びマクロファージ（ＣＤ１１ｂ＋ＣＤ４５ｈｉ）の総数は、各細胞型のパーセンテージに総生存網膜細胞を乗じて計算した。
ｒＭＣ−１刺激
ｒＭＣ−１細胞（Ｋｅｒａｆａｓｔ）を、１０％熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、及び１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを含むダルベッコ変法イーグル培地（ＬＧ−ＤＭＥＭ）において、低グルコース（５．５ｍＭ）で維持した。高グルコース刺激については、５×１０５個の細胞を、６ウェルプレートで２％ＦＢＳを含む２ｍｌのＬＧ−ＤＭＥＭにおいて３７℃で一晩培養した。培地をＬＧ−ＤＭＥＭまたは２％ＦＢＳを含む高グルコース（２５ｍＭ）含有ＤＭＥＭ（ＨＧ−ＤＭＥＭ）のいずれかで置き換え、最大７２時間培養した。細胞生存率は、細胞を、ＦＩＴＣ Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を製造業者の説明書に従って使用してアネキシンＶ及びヨウ化プロピジウム（ＰＩ）で染色することによって判定した。培養上清を採取し、ＩＬ−３３発現をＥＬＩＳＡ及びウェスタンブロットによって分析した。ｒＭＣ−１のＩＬ−３３刺激のために、２×１０５個の細胞を、１２ウェルプレートで１０％ＦＢＳを含む１ｍｌのＬＧ−ＤＭＥＭにおいて培養し、ラットＩＬ−３３（１、１０、または１００ｎｇ／ｍｌ）で２４時間刺激した。１０μｇ／ｍｌのＩＬ−３３ ＴＲＡＰまたは対照Ｆｃタンパク質の存在下において細胞をＩＬ−３３で刺激することによって、ｒＭＣ−１細胞に対するＩＬ−３３のＳＴ２依存性活性を判定した。培養上清中のＣＣＬ２のレベルをＥＬＩＳＡによって測定した。ｒＭＣ−１細胞におけるＩＬ−３３の自己分泌活性を判定するために、示されている様々な時間の間、１０μｇ／ｍｌのＩＬ−３３ ＴＲＡＰまたは対照Ｆｃタンパク質の存在下において、上述のように、高グルコース培地で刺激した。ＲＮＡ及び培養上清を、それぞれ、ｑＰＣＲ及びＥＬＩＳＡによるＣＣＬ２発現のために採取した。
ＥＬＩＳＡ
硝子体、網膜溶解液、血清、及びｒＭＣ−１培養上清中のＩＬ−３３の濃度を、マウス／ラットＩＬ−３３ ＱＵＡＮＴＩＫＩＮＥ（登録商標）ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて測定した。ＣＣＬ２、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＳＴ２、ＩＬ−６、及びＩＬ−１３を、ＱＵＡＮＴＩＫＩＮＥ（登録商標）ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）で定量化した。ＩＬ−１８は、マウスＩＬ−１８ ＥＬＩＳＡキット（ＭＢＬ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）で測定した。網膜溶解液中のサイトカイン濃度を、ＢＣＡアッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）によって測定したタンパク質含量に対して正規化した。ＡＭＤ患者の硝子体におけるＩＬ−３３のレベルを評価するために、ＡＭＤと診断された患者（男性１人及び女性５人、６８〜９１歳、中央値７９歳）、ならびに黄斑パッカーの手術を受けた患者（男性３人及び女性９人、５６〜７９歳、中央値７２歳）及び黄斑円孔の手術を受けた患者（男性５人及び女性１６人、４６〜７５歳、中央値６５歳）を、Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ｒｅｖｉｅｗ Ｂｏａｒｄ（ＷＩＲＢ）の承認を受け、また書面による患者へのインフォームドコンセントを伴って、Ｍｉｄｗｅｓｔ Ｅｙｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅから獲得した。前述のように、眼の解剖及び硝子体の採取を行った（Ｌｏｙｅｔ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．５３：６６２８−６６３７，２０１２）。２５ゲージのカニューレ（Ａｌｃｏｎ）を用いて局所麻酔下において、経結膜経扁平部硝子体切除術を行った。ヒトＩＬ−３３ ＱＵＡＮＴＩＫＩＮＥ（登録商標）ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて硝子体におけるＩＬ−３３のレベルを測定した。
定量的ＲＴ−ＰＣＲ
ＲＮＥＡＳＹ（登録商標）Ｐｌｕｓ Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、網膜及びｒＭＣ−１細胞から全ＲＮＡを単離した。Ｈｉｇｈ−Ｃａｐａｃｉｔｙ ｃＤＮＡ Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎキット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて１本目のｃＤＮＡを合成した。検証済みのプライマー及びプローブのセット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）と共にＴＡＱＭＡＮ（登録商標）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙを使用して、ＩＬ−３３、ＣＣＬ２、ＳＴ２Ｌ、ｓＳＴ２、ＩＬ−６、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−１８、及びＧＦＡＰの定量的ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）を行い、レベルを、１８ｓ ｒＲＮＡ（マウス）またはβ−アクチン（ラット）の発現によって正規化した。ｒＭＣ−１細胞及びラット網膜におけるＩＬ−３３の可能性のある代替的なスプライス変異形を試験するために、以下のプライマー：５’−ＴＴＡＡＧＡＣＣＡＧＣＴＡＴＣＴＣＣＣＡＴＣＡ−３’（配列番号３４２）及び５’−ＡＣＧＴＴＡＣＡＴＣＴＴＡＧＡＧＡＧＣＴＴＡＡＡＣＡ−３’（配列番号３４３）を用いて全長ＩＬ−３３ ｍＲＮＡの５’非翻訳領域（５’−ＵＴＲ）（エクソン１）から終止コドン（エクソン９）に及ぶＰＣＲプライマーを用いてＲＴ−ＰＣＲを行った。ＰＣＲは、ＥＸＰＡＮＤ（商標）Ｈｉｇｈ Ｆｉｄｅｌｉｔｙ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｒｏｃｈｅ）を製造業者の説明書に従って使用して行った。結果として得られたＰＣＲ産物を、１％アガロースゲルでの電気泳動によって分析した。
ウェスタンブロット
硝子体、網膜溶解液、またはｒＭＣ−１培養上清を、ＮＯＶＥＸ（登録商標）ＳＤＳ ４〜２０％トリス−グリシンポリアクリルアミドゲル（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）での電気泳動によって分離し、ＩＢＬＯＴ（登録商標）システム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてニトロセルロース膜に移した。ブロッキングした後、膜を、ラットＩＬ−３３と交差反応するヤギ抗マウスＣ末端ＩＬ−３３（ＡＦ３６２６、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、またはウサギ抗ＧＡＰＤＨ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）でプローブした後、ＨＲＰとコンジュゲートした適切な二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）でプローブした。ＥＣＬ Ｐｌｕｓウェスタンブロット検出試薬（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いてブロットを処理した。ＮＥ−ＰＥＲ（登録商標）Ｎｕｃｌｅａｒ ａｎｄ Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を製造業者の説明書に従って使用して、ｒＭＣ−１細胞の核及び細胞質の画分を調製した。タンパク質濃度を、ＢＣＡタンパク質アッセイによって定量化した。等量のタンパク質を、上述のようにウェスタンブロットによってＩＬ−３３に関して分析した。核及び細胞質の細胞成分分画を、それぞれ、マウス抗ＨＤＡＣ２及び抗ＨＳＰ９０（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）でブロットをプローブすることによって、検証した。
マイクロアレイ分析
全ＲＮＡを二本鎖ｃＤＮＡに変換した後、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｌｉｎｅａｒ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎキットを用いてＣＹ（登録商標）色素標識ｃＲＮＡに変換した。ＣＹ（登録商標）ｃＲＮＡを、細分し、ＡｇｉｌｅｎｔのＩｎ Ｓｉｔｕ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ Ｋｉｔ Ｐｌｕｓに記載されるようにＡｇｉｌｅｎｔの全マウスアレイにハイブリダイズさせた。全ての試料を、ＣＹ５（登録商標）色素で標識し、ＣＹ３（登録商標）色素標識共通マウス参照物に対してハイブリダイズした。ハイブリダイゼーションの後に、アレイを洗浄し、乾燥させ、ＡｇｉｌｅｎｔのＤＮＡマイクロアレイスキャナでスキャンした。アレイ撮像データを、ＡｇｉｌｅｎｔのＦｅａｔｕｒｅ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎソフトウェア８．５を用いて分析した。未加工の特徴を抽出したデータを、前述のように処理した（Ｖａｎｄｅｒ Ｌｕｇｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５：１６１−１６７，２０１４）。マイクロアレイのデータを、１つの遺伝子に対して１つのみのプローブを含むようにフィルタリングし、所与の遺伝子に対して複数のプローブが存在していた場合には、最も分散の高いプローブを選択した（Ｂｏｕｒｇｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ １０７：９５４６−９５５１，２０１０）。ｌｉｍｍａソフトウェアパッケージ（Ｓｍｙｔｈ，Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３：Ａｒｔｉｃｌｅ ３，２００４）を用いて、差次的発現分析を行った。ＳＴ２−／−マウスにおいて差次的に制御される遺伝子を特定するために、ＳＴ２＋／＋マウスにおいてＣＬＥによって上方制御されるプローブを特定し、Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ−Ｈｏｃｈｂｅｒｇ法の調整されたＰ値＜０．０１で１．５倍を上回る変化を示したプローブを選択した（例えば、Ｈｏｃｈｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ９：８１１−８１８，１９９０を参照されたい）。これらのプローブを、更に、Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ−Ｈｏｃｈｂｅｒｇ法の調整されたＰ値＜０．０５でＳＴ２＋／＋マウスとＳＴ２−／−マウスとの間に１．２５倍を上回る差を示したものにフィルタリングした。
遺伝子オントロジー分析
差次的発現として徳手された遺伝子を、ＧＯｓｔａｔｓ Ｒパッケージを用いて遺伝子オントロジー分析に供した（Ｆａｌｃｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２３：２５７−２５８，２００７）。ＳＴ２＋／＋マウスとＳＴ２−／−マウスとでは異なって制御される遺伝子のセットを試験セットとして使用し、ＣＬＥでは異なって制御される遺伝子のセットを考慮する遺伝子の領域として使用した。研究は、条件付きの有意性検定を使用して、生物学的プロセスオントロジーに限定した。名目上の（未調整の）Ｐ値０．０１で有意な強化を示した遺伝子オントロジー概念を選択した。
ＲＮＡ−ｓｅｑ
ヒト網膜のＲＮＡ−ｓｅｑ分析のために、眼疾患の病歴のない死後の健常ドナーの眼を、書面によるドナーのインフォームドコンセントと共にＬｉｏｎｓ Ｅｙｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅから入手した。ドナーの眼は、死後４時間以内に摘出し、採取後すぐにＲＮＡＬＡＴＥＲ（登録商標）に保存した。黄斑は、上方血管弓と下方血管弓との境界内に完全に包含されており、容易に可視化される。解剖用鋏を用いて周辺眼底部から黄斑を解剖して取り出し、網膜黄斑を網膜の下のＲＰＥ及び脈絡膜から切り離した。ＲＮＥＡＳＹ（登録商標）Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて、網膜から全ＲＮＡを単離した。ＮＡＮＯＤＲＯＰ（商標）８０００ Ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒを用いてＲＮＡ濃度を判定した。ＲＮＡＬＡＴＥＲ（登録商標）中に保存されている試料は、通常、Ａｇｉｌｅｎｔ ２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で評価したときに、高い品質が得られる。ＴＲＵＳＥＱ（登録商標）ＲＮＡ Ｓａｍｐｌｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎキット（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）を製造業者の説明書に従って使用してＲＮＡ−ｓｅｑライブラリを調製した後、Ｉｌｌｕｍｉｎａ ＨＩＳＥＱ（登録商標）２０００システム（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）によって配列決定を行った。配列決定データの分析を、前述のように行った（Ｄｕｒｉｎｃｋ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ４７：１３−２１，２０１５）。ＧＳＮＡＰ短い読み取りアライメント装置を用いて、配列決定の読み取り値を基準ヒトゲノム（ＧＲＣｈ３７）にマッピングした（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２６：８７３−８８１，２０１０）。発現は、所与の遺伝子におけるコード配列と揃った読み取り数を、コード配列の全長及び読み取り総数に対して正規化することによって、読み取り総数１００万当たりの１０００塩基当たりの読み取り値（ＲＰＫＭ）で測定した。
組織学及び免疫組織化学
外顆粒層（ＯＮＬ）厚さの形態計測分析のために、眼をＤａｖｉｄｓｏｎの固定液（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）中に２４時間固定した。視神経を含めて網膜全体を被覆するパラフィン包埋５μｍ切片を、眼球の垂直軸に沿って切断し、ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色した。切片を載せた後、Ｏｌｙｍｐｕｓ Ｕｐｌａｎ ＳＡｐｏ ０．７５ ＮＡ ２０倍対物レンズを有するＮＤＰ Ｓｃａｎソフトウェアを起動するＯｌｙｍｐｕｓ ＮＡＮＯＺＯＯＭＥＲ（登録商標）２．０ ＨＴデジタルスライドスキャナー（Ｈａｍａｍａｔｓｕ）を用いて、スライドをスキャンした。ＭＡＴＬＡＢ（登録商標）（ＭａｔｈＷｏｒｋｓ）において、カスタマイズした自動化画像細分化ルーチンを用いて画像を分析した。
視神経を通って切断した切片のみを分析した。ＯＮＬ厚さを、視神経乳頭の片側から始めて０．１、０．２、０．３、０．４、０．６、０．８、及び１．０ｍｍの距離で測定した。ＩＬ３３ｔｍ２／ｔｍ２及びＩＬ３３ｔｍ１／ｔｍ１のフラットマウント網膜の撮像のために、眼を、４％のパラホルムアルデヒド中に２時間固定し、ＰＢＳ中で洗浄した。網膜組織を無傷で眼球から解剖し、ＰＢＳＴ緩衝液（１倍ＰＢＳ、０．５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０）中１μｇ／ｍｌのＤＡＰＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で染色した後、ＰＢＳＴ緩衝液中で５回洗浄し、ＰＢＳ中で濯いだ。網膜をフラットマウントし、４０倍対物レンズを用いてＮｉｋｏｎ Ａ１Ｒ共焦点顕微鏡で撮像した。図７Ｍ及び図１２Ｆの画像は、明るさ及びコントラストをＰＨＯＴＯＳＨＯＰ（登録商標）（Ａｄｏｂｅ）で微調整することによって最適化した。ラットの眼をＩＬ−３３及びビメンチンで共染色するために、眼をＤａｖｉｄｓｏｎの固定液中に２４時間固定し、７０％エタノールに浸漬し、パラフィン包埋及び切片作製のために処理した。切片のＩＨＣ染色は、Ｄａｋｏ Ａｕｔｏｓｔａｉｎｅｒプラットフォーム（Ｄａｋｏ）で行った。再水和した後、切片をＤａｋｏ Ｔａｒｇｅｔ Ｒｅｔｒｉｅｖａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｄａｋｏ）で処理した。切片を、ＩＬ−３３に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）であるマウスｍＡｂ（クローンＮｅｓｓｙ １、Ｅｎｚｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）５μｇ／ｍｌ及びビメンチンに対するウサギｍＡｂ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）０．１８μｇ／ｍｌ、またはブロッキング緩衝液中の陰性対照抗体と共に１時間インキュベートした。洗浄した後、切片をＰｏｗｅｒＶｉｓｉｏｎ ポリ−ＨＲＰ抗マウスＩｇＧ及びポリ−ＡＰ抗ウサギＩｇＧ（Ｌｅｉｃａ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）と共に３０分間インキュベートした後、ジアミノベンジジン（ＤＡＢ）及びＦａｓｔ Ｒｅｄ／Ｎａｐｈｔｈｏｌ Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ試薬（ＳｃｙＴｅｋ）で検出した。ヘマトキシリンで対比染色した後、切片を明視野顕微鏡で撮像した。マウス眼のＩＬ−３３、ＧＦＡＰ、及びＩｂａ１染色は、１：５００でのＧＦＡＰに対するウサギポリクローナル抗体（ＤＡＫＯ）及びＩｂａ１に対するウサギポリクローナル抗体（Ｗａｋｏ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）（０．５μｇ／ｍｌ）と同じ様式で行った。視神経乳頭を含む垂直軸で切断した網膜切片の全長に沿って、各網膜層におけるＩｂａ１＋細胞を手作業で計数することによって、小膠細胞の定量化を行った。ＡＰＯＴＡＧ（登録商標）Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｉｎ Ｓｉｔｕ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ）を製造業者の説明書に従って用いてラット眼切片のＴＵＮＥＬ染色を行った。
ヒト眼のＩＨＣ分析のために、年齢範囲６７〜８９歳の７人の正常なドナー（男性５人及び女性２人）及び年齢範囲８２〜９２歳の７人のＡＭＤ患者（男性２人及び女性５人）からの眼を、ドナーまたはドナー家族のコンセントと共にＬｉｏｎｓ Ｅｙｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅから入手した。眼を、上述のように固定し、切片を作製した。上述のように、ＩＬ−３３、ビメンチン、ＧＦＡＰ、及びＩｂａ１に対する抗体、ならびにＰＬＶＡＰに対するマウスモノクローナル抗体を用いて、ＩＬ−３３、ビメンチン、ＧＦＡＰ、Ｉｂａ１、及びＰＬＶＡＰの蛍光ＩＨＣ共染色を行った後、蛍光色素で標識した適切な二次抗体または蛍光色素−ＴＳＡ（チラミドシグナル増幅）での染色及びＤＡＰＩでの対比染色を行った。上述のように、スライドスキャナーでスライドをスキャンした。図５Ａ〜５Ｃ、５Ｅ、及び６Ａ〜６Ｂの画像については、シグナルをより良好に視覚化するために、ＮＤＰビュー２ソフトウェア（Ｈａｍａｍａｔｓｕ）を用いて明るさを微調整したが、パネル内の全ての画像は、同様に修正した。正常な眼、またはＡＭＤ眼の病変領域及び非病変領域の、中心窩領域及び周辺領域において、およそ５００μｍの長さの領域に沿って、ＩＬ−３３＋細胞及びＩｂａ１＋細胞を手作業で計数することによって、ＩＬ−３３＋細胞及びＩｂａ１＋細胞の定量化を行った。
統計学的分析
別途示されない限り、全てのデータは、Ｐｒｉｓｍ ６ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を用いて分析し、グラフにした。群間の比較のため、示されるように対応のない両側スチューデントｔ検定またはＡＮＯＶＡを用いて統計学的分析を行った。Ｐ値＜０．０５を有意とみなした。
実施例４．ＩＬ−３３経路及びＩＬ−１３経路の両方の遮断により、いずれかの経路を単独で遮断することと比較して、肺において２型炎症のより良好な阻害が得られる
Ａ．２型（Ｔｈ２）炎症のＮｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ・ｂｒａｓｉｌｌｉｅｎｓｉｓモデル
サイトカインＩＬ−３３及びＩＬ−１３は、２型免疫応答において炎症を促進し、多くのデータは、ＩＬ−１３発現の制御におけるＩＬ−３３の役割を裏付けている。ＩＬ−３３経路またはＩＬ−１３経路のいずれかを消失させることにより、２型炎症応答が緩和されることが理解され、インビボでの個々のサイトカインの非冗長的な役割が明らかとなっている。しかしながら、ＩＬ−３３シグナルが存在しないことが、単にＩＬ−１３の減少に起因して２型免疫に影響を及ぼすのか、それとも更なる炎症経路の阻害に起因しているのかははっきりわかっていない。
この問題に対処するために、ＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスに、マウスＩＬ−１３に対する中和抗体が存在する状態または存在しない状態で、インビボで２型炎症を引き起こす薬剤でチャレンジを行った。蠕虫Ｎ．ｂｒａｓｉｌｌｉｅｎｓｉｓは、肺及び腸において急性２型炎症応答を引き起こし、組織への好酸球動員及びＴｈ２サイトカイン産生（ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３）を特徴としている（例えば、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４（７４）：１，２０１３を参照されたい）。先天性及び獲得性の両方の免疫経路が、抗蠕虫免疫には必要である。２型肺炎症におけるＩＬ−１３の役割を評価するために、ＳＴ２＋／＋マウスを、抗ＩＬ−１３抗体または抗ブタクサ抗体で処置した（図１４Ａ）。同様に、インビボでのＩＬ−３３の寄与、ならびにＩＬ−１３及びＩＬ−３３の組み合わせによる寄与を評価するために、ＳＴ２−／−マウスを、対照抗体または抗ＩＬ−１３抗体で処置した。以前の報告（例えば、Ｎａｔｕｒｅ ４６４：１３６７を参照されたい）と一致して、Ｎ．ｂｒａｓｉｌｌｉｅｎｓｉｓ感染により、ＳＴ２＋／＋マウスのＢＡＬＦ及び肺組織の両方において、強力な好酸球炎症が引き起こされたが、これは、ＳＴ２が存在しない場合には有意に減少した（すなわち、ＳＴ２−／−マウスで示される）。同様に、ＩＬ−１３に対する中和抗体での処置により、ＢＡＬＦ及び組織好酸球の有意な減少がもたらされた。驚くべきことに、ＩＬ−３３シグナル伝達及びＩＬ−１３の両方の組み合わせ遮断により、ナイーブ対照に匹敵するレベルで、肺への好酸球動員のより良好な阻害がもたらされた（図１４Ｂ）。更に、ＩＬ−１３は、ＳＴ２−／−マウスのＢＡＬＦでは検出されず、ＩＬ−１３誘導におけるＩＬ−３３の役割と一致していた。加えて、両方の経路の組み合わせ遮断は、ＢＡＬＦにおいて、いずれかの経路を単独で遮断するよりも良好なＩＬ−４及びＩＬ−５の減少につながった（図１４Ｃ）。
材料及び方法
７〜９週齡の雌性ＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−Ｂａｌｂ／Ｃマウスを、０日目に尾部への皮下注射によって２００μＬの生理食塩水中に懸濁した５００匹のＮｉｐｐｏｓｔｒｏｎｇｙｌｕｓ・ｂｒａｓｉｌｌｉｅｎｓｉｓ（Ｎ．ｂｒａｓｉｌｌｉｅｎｓｉｓ）の幼虫（Ｌ３）に感染させた。注射した後、動物をポリミキシンｂ及びネオマイシンの入った水を５日間摂取させた。抗体（２００μｇ／マウス、ＰＢＳ２００μｌ中）を、注射の１日前、１、３、６、及び８日後に腹腔内注射によって投与した（図１４Ａ）。肺炎症の分析のために、注射後１０日目に動物に殺処理を行った。フローサイトメトリー及びタンパク質分析のために気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）及び灌流した肺組織を採取した。ナイーブＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスを対照として使用した。
肺組織処理のために、灌流した肺を２ｍｇ／ｍｌのコラゲナーゼＤ（Ｒｏｃｈｅ）中３７℃で１時間分解させ、製造業者の説明書に従ってＧＥＮＴＬＥＭＡＣＳ（商標）Ｃチューブ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して解剖した。単一細胞懸濁液を、Ｆｃ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｂｌｏｃｋ（２．４Ｇ２、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）と共に１５分間インキュベートした後、氷上において３０分間抗体で染色した。好酸球、好中球、及びマクロファージを以下の抗体：ビオチニル化抗ＣＤ４５（３０−Ｆ１１、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、アロフィコシアニン／Ｃｙ７−抗ＣＤ１１ｂ（Ｍ１／７０、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、フィコエリトリン／Ｃｙ７−抗ＣＤ１１ｃ（ＨＬ３、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、フィコエリトリン−抗Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆ（Ｅ５０−２４４０、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、アロフィコシアニン−抗Ｆ４／８０（ＢＭ８、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、フルオレセインイソチオシアネート−抗Ｇｒ−１（ＲＢ６−８Ｃ５、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を用いて分析した後、ストレプトアビジンＰＡＣＩＦＩＣ ＯＲＡＮＧＥ（商標）（Ｓ３２３６５、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）で分析した。ＢＡＬＦサイトカインをＥＬＩＳＡによって測定した。
Ｂ．ＴＮＰ−ＯＶＡ研究
本実施例の節Ａで上述のＮ．Ｂｒａｓｉｌｌｉｅｎｓｉｓ感染モデルは、病原体に対する急性応答であり、慢性アレルギー性炎症に見られる抗原誘導性応答を反映しないと考えられている。アレルギー性炎症におけるＩＬ−３３経路とＩＬ−１３経路との間の冗長性の問題は、十分に特徴付けられている気道炎症のＴＮＰ−ＯＶＡ感作／チャレンジモデルを用いて対処した。このモデルにおいて、ＴＮＰ−ＯＶＡ抗原に対する獲得性免疫応答を開始させ、組織への好酸球動員、ならびにＴ細胞によるＩＬ−５及びＩＬ−１３サイトカイン産生によって特徴付けた。
ＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスに、ＴＮＰ−ＯＶＡ／Ａｌｕｍで感作を行い、抗ＩＬ−１３遮断抗体が存在する状態または存在しない状態でＴＮＰ−ＯＶＡでのチャレンジを行った。ＩＬ−３３またはＳＴ２に対する中和試薬を用いた研究と一致して、ＴＮＰ−ＯＶＡ感作／チャレンジ後にＳＴ２＋／＋マウスにおいて確認された強力な好酸球炎症は、ＳＴ２−／−株では有意に減少した（例えば、Ｅｘｐ．Ｌｕｎｇ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４０（２）：６６，２０１４を参照されたい）。以前に示されたように、ＩＬ−１３の阻害によっても、肺組織好酸球の蓄積が緩和された（Ｔａｕｂｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９（１１）：６４８２，２００２）。本実施例の節Ａで上述のＮ．ｂｒａｓｉｌｌｉｅｎｓｉｓ感染研究と一致して、ＩＬ−３３シグナル伝達及びＩＬ−１３の両方の組み合わせ遮断により、肺への好酸球流入が、ナイーブマウスに見られるレベルまで低下した（図１５Ａ）。ＴＮＰ−ＯＶＡ抗原に対するＴ細胞応答の分析でも、両方の経路が存在しないことで、ＩＬ−１３及びＩＬ−５産生に対して、それぞれの経路を単独で阻害するよりも優れた効果を有したことがわかった（図１５Ｂ）。
本実施例のこの節及び節Ａに記載されているインビボ研究は、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方の遮断は、個別にいずれかの経路を遮断するのと比較して、２型肺炎症に対してより優れた効果を有していたことが実証され、ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の重複しない機能が強調される。Ｎ．ｂｒａｓｉｌｌｉｅｎｓｉｓ蠕虫感染は、先天性及び獲得性免疫の構成要素の活性化をもたらし、一方でＴＮＰ−ＯＶＡ研究は、抗原に対する獲得性免疫応答の古典的なモデルである。これらのモデルは２型炎症の異なる態様を反映するが、いずれも、好酸球炎症の媒介におけるＩＬ−１３及びＩＬ−３３の役割を強調し、用法の経路の阻害により、この応答が完全に抑止される。これらのデータにより、炎症に寄与するＩＬ−３３の更なる機能、ならびにＩｌ−３３及びＩＬ−１３の両方の遮断が喘息などのＩＬ−３３媒介性障害を含む２型免疫にもたらす更なる利点が強調される。
材料及び方法
７〜８週齡の雌性ＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−Ｂａｌｂ／Ｃマウスに、０日目に５０μｇのＴＮＰ−ＯＶＡ及び２ｍｇのミョウバン（ＰＢＳ１００μｌ中）を腹腔内注射することよって感作を行った（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）。１群当たり７匹のマウスを用いた。感作後３５日目から開始して、マウスに、７日間連続でネブライザーによってＰＢＳ中１％ＴＮＰ−ＯＶＡのエアロゾルでチャレンジを行った。抗ｇｐ１２０ ＩｇＧ１または抗マウスＩＬ−１３ ＩｇＧ１（１００μｇ／マウス、ＰＢＳ２００μｌ中）を、感作後３５〜４１日目に腹腔内投与した。肺炎症の分析のために、４２日目に動物に殺処理を行った。フローサイトメトリー及びタンパク質分析のためにＢＡＬＦ及び灌流した肺組織を採取した。Ｔ細胞リコールアッセイのために、縦隔リンパ節を採取した。ナイーブＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスを対照として使用した。ＢＡＬＦサイトカインレベルをＥＬＩＳＡによって測定した。灌流した肺を２ｍｇ／ｍｌのコラゲナーゼＤ（Ｒｏｃｈｅ）中３７℃で１時間分解させ、製造業者の説明書に従ってＧＥＮＴＬＥＭＡＣＳ（商標）Ｃチューブ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して解剖した。単一細胞懸濁液を、Ｆｃ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｂｌｏｃｋ（２．４Ｇ２、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）と共に１５分間インキュベートした後、氷上において３０分間抗体で染色した。好酸球、好中球、及びマクロファージを以下の抗体：ビオチニル化抗ＣＤ４５（３０−Ｆ１１、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、アロフィコシアニン／Ｃｙ７−抗ＣＤ１１ｂ（Ｍ１／７０、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、フィコエリトリン／Ｃｙ７−抗ＣＤ１１ｃ（ＨＬ３、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、フィコエリトリン−抗Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆ（Ｅ５０−２４４０、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、アロフィコシアニン−抗Ｆ４／８０（ＢＭ８、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、フルオレセインイソチオシアネート−抗Ｇｒ−１（ＲＢ６−８Ｃ５、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を用いて分析した後、ストレプトアビジンＰＡＣＩＦＩＣ ＯＲＡＮＧＥ（商標）（Ｓ３２３６５、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）で分析した。
インビトロＴ細胞リコールアッセイのために、縦隔リンパ節からの単一細胞懸濁液（１ウェル当たり３×１０５個の細胞）を、１０％ＦＢＳを含有し、Ｌ−グルタミン及びペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ １６４０培地において、１００μｇ／ｍｌのＴＮＰ−ＯＶＡ（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）の存在下または不在下で、６日間培養した。６日後に、細胞増殖を、ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ−ＧＬＯ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）によって測定し、ＥＬＩＳＡによるサイトカインレベル分析のために上清を採取した。
実施例５．ＩＬ−３３による肥満細胞脱顆粒及びサイトカイン分泌の制御
Ａ．ＩＬ−３３はインビトロ及びインビボで抗原に誘導される肥満細胞の脱顆粒を増大させる
抗原−ＩｇＥ複合体による肥満細胞の刺激により、既に形成されていた顆粒からの血管作動性及び炎症促進性の媒介因子の急速な放出がもたらされる。ヒスタミン、プロテアーゼ、及びプロテオグリカンを含むこれらの媒介因子は、侵襲してきた病原体に対する最前線の防御として働く。ＩＬ−３３がこの応答を増大させるかどうかを判定するために、肥満細胞に、ＩｇＥで２４時間感作を行い、ＩＬ−３３の存在下または不在下で１時間抗ＩｇＥで刺激した。ＩＬ−３３はそれ自体が脱顆粒を誘導することはなかったが、β−ヘキソサミニダーゼ、トリプターゼ、及びヒスタミンの脱顆粒を有意に増大させた（図１６Ａ）。
インビボでの肥満細胞の活性化及び脱顆粒のＩＬ−３３依存性増大を確認するために、受動的全身性アナフィラキシーモデルを用いた。抗ジニトロフェニル（抗ＤＮＰ）ＩｇＥで２８時間感作した後、ＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−マウスに、ＩＬ−３３ありまたはなしでＤＮＰ−ＨＳＡでチャレンジを行った。アナフィラキシー応答を、１時間の過程にわたる体温の低下として測定し（図１６Ｂ）。上述のインビトロ研究に類似して、抗原の不在下では、ＩＬ−３３は、アナフィラキシー応答を促進しなかった（図１６Ｃ）。同様に、ＳＴ２＋／＋及びＳＴ２−／−は、ＦｃεＲＩ（ＦｃイプシロンＲＩ）活性化後に体温の同様の変化を示した（図１６Ｄ）。しかしながら、インビトロ研究と一致して、ＩＬ−３３の添加により、対照群と比較した体温のより大きな低下によって示されるように、肥満細胞応答が増大した（図１６Ｅ）。
Ｂ．ＩＬ−３３は抗原に誘導される肥満細胞のサイトカイン分泌を増幅させる
脱顆粒に加えて、肥満細胞は、サイトカイン及びケモカインの分泌を通じて宿主防御に寄与する。肥満細胞のサイトカイン放出におけるＩＬ−３３の役割を評価するために、肥満細胞に、ＩｇＥで２４時間感作を行い、ＩＬ−３３の存在下または不在下で７２時間抗ＩｇＥで刺激した。抗原刺激により、ＩＬ−８の分泌がもたらされ、これは、ＩＬ−３３の添加によって増大した（図１６Ｆ）。ＦｃεＲＩ架橋のみでは、ＩＬ−５の分泌もＩＬ−１３の分泌も生じなかった（図１６Ｆ）。以前に報告されたように、ＩＬ−３３は、ＩＬ−５及びＩＬ−１３の放出を刺激したが、これは、ＦｃεＲＩ刺激の追加によって有意に増加した。加えて、ＩＬ−３３に媒介される肥満細胞からのＴＮＦ−α及びＩＬ−１０の放出が観察された（図１６Ｇ）。マイクロアレイ分析により、ＩＬ−３３がいくつかのケモカイン、サイトカイン、及び成長因子を誘導したことがわかった（図１６Ｈ）（例えば、Ｎａｇａｒｋａｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６（１）：２０２−２０５，２０１５を参照されたい）。これらの結果により、肥満細胞の応答及び防御機構を促進することにおけるＩＬ−３３の役割が強調される。
Ｃ．材料及び方法
インビトロ肥満細胞アッセイ
肥満細胞を、前述のように単離した（例えば、Ｎａｇａｒｋａｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６（１）：２０２−２０５，２０１５を参照されたい）。１０人のドナーに由来する末梢血由来のＣＤ３４＋細胞を、Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ，Ｃａｎａｄａ）から購入し、１２週間の期間で、前述のようにＩＬ−６及びＳＣＦの存在下において初代培養したインビトロＣＤ３４＋細胞由来ヒト脂肪細胞に分化させた。０週目に、細胞を、２００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦ、５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６、５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−３、１１μＭの２−メルカプトエタノール（２−ＭＥ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、及び１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有する血清不含イスコフメチルセルロース培地（ＭＥＴＨＯＣＵＬＴ（商標）ＳＦＢＩＴ Ｈ４２３６、Ｓｔｅｍｃｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に懸濁させた後、５％ＣＯ２において３７℃でインキュベートした。培養２週間の時点で、２００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦ、５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６、１１μＭの２−ＭＥ、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、及び１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを含有する新しいメチルセルロース培地の層を、メチルセルロース培養物の上に形成した。培養４週間の時点で、２００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦ、５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６、インスリン−トランスフェリン−セレン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、５５μＭの２−ＭＥ、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、及び１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補充したイスコフ変法ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）の１ｍｌのアリコートの層を、メチルセルロース培養物の上に形成した。培養６週間の時点で、メチルセルロース培地をＰＢＳで溶解させた後に、全ての細胞を取り出した。次いで、細胞を、１００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦ、５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６、０．１％のＢＳＡ、インスリン−トランスフェリン−セレン、５５μＭの２−ＭＥ、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、及び１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補充したＩＭＤＭ中に懸濁して培養し、培養培地を１週間後に置き換えた。更に１週間培養した後、培養培地を、１００ｎｇ／ｍｌのＳＣＦ、５０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−６、５％のＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、５５μＭの２−ＭＥ、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、及び１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを補充したＩＭＤＭに切り替えた。培養培地は、それ以降毎週取り替え、細胞を更に５〜７週間インキュベートした。１２週の終わりに、肥満細胞以外の大半が消耗を受けたと予測された。１μｇ／ｍｌの骨髄腫ＩｇＥ（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ）での処置の４８時間後、１２週間の培養後にフローサイトメトリーを用いてＦｃεＲＩ発現を測定することによって、肥満細胞の最終的な純度を判定した。肥満細胞の最終的な純度は９０％であった。１０人の独立したドナーからの肥満細胞をこの方式で生成した。
ＩＬ−３３で刺激した肥満細胞のマイクロアレイ分析のために、２人のドナーからの肥満細胞（１×１０６個の細胞／ｍｌ）に、１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−３３で二連に２４時間刺激を行った。次いで、マイクロアレイ分析のためにＲＮＡを採取した。ＩＬ−３３応答を判定するために、肥満細胞に、示されるように（図１６Ａ）ＩＬ−３３で４８時間刺激を行った．ＩＬ−５、ＩＬ−１３、ＩＬ−４、ＩＬ−１０、及びＴＮＦ−αレベルの分析のためにＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｈ１／Ｔｈ２ １０−ｐｌｅｘパネル（ＭＳＤ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）を製造業者の説明書に従って使用して、細胞不含上清を採取した。ＩＬ−３３及びＩｇＥ架橋の共刺激実験のために、ＩｇＥで感作した肥満細胞（０．５×１０６個の細胞／ｍｌ）に、１０μｇ／ｍｌの抗ＩｇＥ（４１１５２０、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）の存在下または不在下で、示されるようにＩＬ−３３で刺激を行い、７２時間後に細胞上清を採取した。放出されたサイトカインレベルを、ＩＬ−８（ＤＹ２０８、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）、ＩＬ−５（８８−７０５６、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、及びＩＬ−１３（８８−７４３９、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に関してＥＬＩＳＡキットで分析した。
脱顆粒
ヒト肥満細胞の脱顆粒を、全細胞内含量に対するβ−ヘキサミノダーゼ、トリプターゼ、及びヒスタミンのパーセンテージとして測定した。カルシウムイオノフォアＡ２３１８７（Ｃ７５２２、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）を１０μＭで陽性対照として用いた。肥満細胞に、２μｇ／ｍｌの精製ヒトＩｇＥ（ＡＧ３０Ｐ、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で２４時間感作を行った。感作した肥満細胞を洗浄し、６．２５×１０６個の細胞／ｍｌでタイロード緩衝液（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１３０ｍＭ ＮａＣｌ、６．２ｍＭ Ｄ−グルコース、３．０ｍＭ ＫＣｌ、１．４ｍＭ ＣａＣｌ２、１．０ｍＭ ＭｇＣｌ２、及び０．１％ＢＳＡ）中に再懸濁させた。肥満細胞（６．２５×１０４／ウェル）を、９６ウェルのＶ底プレートに三連に播種し、１００ｎｇ／ｍｌのヒトＩＬ−３３の存在下または不在下において、最終体積２０μｌで、１０μｇ／ｍｌの抗ＩｇＥ（４１１５２０、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）により１時間刺激した。細胞上清を採取し、細胞ペレットを、タイロード緩衝液中の０．５％ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ−１００（２０μｌ）で溶解させた。β−ヘキソサミニダーゼ放出を、蛍光定量アッセイを用いてアッセイした。上清及び細胞溶解液（１０μｌ）を、０．１Ｍクエン酸緩衝液ｐＨ４．５中の４ｍＭ ｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニド（Ｎ９３７６、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ）５０μｌと共に１時間インキュベートし、反応を停止させるために０．２Ｍのグリシン１５０μｌを添加した。ＥＬＩＳＡリーダーにおいて、４０５ｎｍで吸収を測定した。Ｍａｓｔ Ｃｅｌｌ Ｄｅｇｒａｎｕｌａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（ＩＭＭ００１、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を製造業者の説明書に従って使用して、上清及び細胞溶解液中のトリプターゼのレベル及び活性を計算した。Ｈｉｓｔａｍｉｎｅ ＥＬＩＳＡキットを用いて製造業者の説明書に従って（４０９０１０、Ｎｅｏｇｅｎ）、上清及び細胞溶解液中のヒスタミンのレベルをアッセイした。
受動的全身性アナフィラキシー
７〜８週齡の雌性ＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−Ｂａｌｂ／Ｃマウスに、０日目に静脈内注射によって２００μｌの生理食塩水中２００μｇのＤＮＰ−マウスＩｇＥ（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で感作を行った。１群当たり５匹のマウスを用いた。２８時間後に、マウスに、１００μｇのＤＮＰ−ＨＡＳ（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）、２μｇのマウスＩＬ−３３（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）、または組み合わせ（２００μｌの生理食塩水中）で静脈内によりチャレンジを行った。チャレンジ後１時間の間、５分間隔で埋め込みチップをスキャンすることによって体温を測定した。
遺伝子発現分析
ＲＮＡ抽出及びＰＣＲを、前述のように行った（例えば、Ｎａｇａｒｋａｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６（１）：２０２−２０５，２０１５を参照されたい）。Ｑｉａｇｅｎ ＲＮＥＡＳＹ（登録商標）Ｋｉｔ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、ＭＤ）を使用して肥満細胞から全ＲＮＡを抽出した。Ｂｉｏ−Ｒａｄ（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）からのＩＳＣＲＩＰＴ（商標）Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｓｕｐｅｒｍｉｘを使用して全ＲＮＡからｃＤＮＡを生成した。ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ａｓｓａｙｓ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を使用してｃＤＮＡの増幅を行った。別途示されない限り、遺伝子発現における倍変化をそれぞれの培地対照物と比較した。マイクロアレイ分析のために、肥満細胞からのＲＮＡを、Ａｇｉｌｅｎｔ単回増幅に提出した。
マイクロアレイ分析及び統計
記載されるように、マイクロアレイ及び統計を行った（例えば、Ｎａｇａｒｋａｒ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３６（１）：２０２−２０５，２０１５を参照されたい）。ＮＤ−１０００分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ，ＵＳＡ）及びＢｉｏａｎａｌｙｚｅｒ ２１００（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ，ＵＳＡ）を使用して、全ＲＮＡ試料の量及び性質を判定した。ＣＹ（登録商標）色素標識ｃＲＮＡ調製物及びアレイハイブリダイゼーションは、製造業者の説明書（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に従って調製した。
簡単に言うと、全ＲＮＡ試料を、二本鎖ｃＤＮＡに変換した後、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｑｕｉｃｋ Ａｍｐ Ｌａｂｅｌｉｎｇキットを用いてＣＹ（登録商標）色素標識ｃＲＮＡに変換した。標識したｃＲＮＡは、ＲＮＥＡＳＹ（登録商標）Ｍｉｎｉキット（Ｑｉａｇｅｎ）を用いて精製した。ｃＲＮＡの収率及びＣＹ（登録商標）色素の取り込みは、ＮＤ−１０００分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を用いて判定した。標識したｃＲＮＡ７５０ｎｇを、細分し、ＡｇｉｌｅｎｔのＷｈｏｌｅ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ ４ ４４Ｋ ｖ２アレイにハイブリダイズさせた。全ての試料を、ＣＹ（登録商標）５色素で標識し、ＣＹ（登録商標）３色素標識共通マウス参照物（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ，ＵＳＡ）に対してハイブリダイズさせた。試料は、６５℃で１７時間ハイブリダイズさせた。ハイブリダイゼーションの後に、アレイを洗浄し、乾燥させ、Ａｇｉｌｅｎｔのスキャナーでスキャンした。Ａｇｉｌｅｎｔ Ｆｅａｔｕｒｅ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎソフトウェアバージョン１１．５を使用して、取得したアレイ画像を分析した。統計学的計算は全て、Ｒ Ｐｒｏｊｅｃｔソフトウェアパッケージバージョン２．１５．１を使用して行った。アレイの品質管理は、Ｒ用のａｒｒａｙＱｕａｌｉｔｙＭｅｔｒｉｃｓパッケージを用いて評価した。マイクロアレイは、Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒのｖｓｎパッケージを用いて正規化し、プローブ強度を変換した。遺伝子フィルタリング（ｇｅｎｅｆｉｌｔｅｒ）パッケージを用いてマイクロアレイデータの独立したフィルタリングを行って、Ｉ型のエラー制御を維持しながら、真陽性のものを検出する統計学的検出力を向上させた。
不変であるか、Ｅｎｔｒｅｚ遺伝子転写産物に対応しないアレイ特徴は、典型的に、差次的遺伝子発現分析にとっては情報価値がないため、アノテーション及び発現の変動性に基づいてフィルタリングを行った。簡単に言うと、フィルタリングは次のように行った：１）ＥｎｔｒｅｚまたはＣＣＧｆ遺伝子を表すアレイ特徴のみを保持し、２）単一のＥｎｔｒｅｚ遺伝子に対応する複数のアレイ特徴を、最も高い四分位範囲（ＩＱＲ）に基づいて単一のアレイ特徴に縮小し、３）遺伝子発現マイクロアレイデータの直線モデルの検定統計をＢｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒのｌｉｍｍａパッケージで行った。要するに、本方法は、推定試料分散を併合推定値に縮減することに相当する、経験的なベイズのアプローチを利用し、結果として、アレイの数が限定されている場合に、はるかに安定した推論が得られる。差次的発現の検定統計量は、因子として処置を含むモデルの線形対称として推定した。複数の仮説検定を考慮するように調整されたＰ値は、Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ及びＨｏｃｈｂｅｒｇの方法を用いて対処した。
実施例６．Ｋ／ＢｘＮ血清移入関節炎モデルにおけるＩＬ−３３軸の炎症を促進する役割
Ａ．ＩＬ３３またはＳＴ２の消失により、関節炎疾患が緩和される。
Ｋ／ＢｘＮ血清は、免疫複合体を形成するグルコース−６−ホスフェート異性化酵素（ＧＰＩ）に対する自己抗体を含有する。これらの免疫複合体をナイーブな免疫コンピテントマウスに投与することにより、関節腫脹、骨侵食、免疫細胞浸潤、ならびにサイトカイン及びケモカインの増加など、リウマチ性関節炎に類似の病態が誘導される。この反応は、代替的な補体経路、肥満細胞、及び好中球を含む、先天性免疫系に依存するものである。肥満細胞の非冗長的な役割、特に、疾患発症時におけるものは、既に示されている（例えば、Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９７：１６８９−１６９２，２００２を参照されたい）。肥満細胞活性化におけるＩＬ−３３の役割（実施例６に示されている）を考慮して、疾患活性をＩＬ３３−／−マウス（図１７Ａ）及びＳＴ２−／−マウス（図１７Ｂ〜１７Ｄ）において試験した。これまでの報告と一致して、ＳＴ２の欠損により、関節炎が低減された。ＩＬ３３−／−マウスにおいて同様の観察が得られた。これらのデータにより、ＩＬ−３３が、炎症促進性サイトカイン分泌、生存、及び脱顆粒を含む肥満細胞機能の複数の態様に影響を及ぼし得ることを示す細胞研究が詳しく説明される。
Ｂ．材料及び方法
雌性ＳＴ２＋／＋マウス及びＳＴ２−／−Ｃ５７Ｂｌ／６マウスを、ＳＴ２＋／＋株及びＳＴ２−／−Ｂａｌｂ／Ｃ株を１０代戻し交配することによって生成した。７〜８週齡のマウスに、０日目に２０μｌの関節起源Ｋ／ＢｘＮ血清を静脈内投与した。１群当たり１０匹のマウスを用いた。血清を、まず、ＳＴ２＋／＋マウスに関節炎を誘導するのに必要な最適量を判定するために試験した。関節炎の徴候に関して、足を毎日調べた。疾患の程度は、次の基準を用いて目視観察によってスコア付けした。
０＝紅斑及び腫脹の徴候なし
１＝中足部（足根）または足首に限定された紅斑及び軽度の腫脹
２＝足首から中足部に及ぶ紅斑及び軽度の腫脹
３＝足首から中足骨関節に及ぶ紅斑及び中等度の腫脹
４＝足首、足、及び指を含む紅斑及び重度の腫脹
データは、４つの足のスコアの合計である平均スコアとしてプロットした。疾患の重症度は、以下の基準を用いて判定した。
軽度（平均スコア０〜３）
中等度（平均スコア４〜８）
重度疾患（平均スコア９以上）
平均スコアは、関与する関節の数を反映する。
０日目に７０μｌの関節起源Ｋ／ＢｘＮ血清を、７〜８週齡の雌性ＩＬ３３＋／＋マウス及びＩＬ３３−／−Ｃ５７Ｂｌ／６マウスに静脈内投与した。１群当たり５匹のマウスを用いた。血清を、ＩＬ３３＋／＋株において関節炎を誘導するのに必要な最適量を判定するために、再度試験した。疾患活性のスコア付けを、上述のように行った。
実施例７．ＩＬ−３３に誘導される肺へのマクロファージの動員は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１３に依存しない
本明細書に記載されるインビボ研究により、例えば、組織への好酸球動員を含む、２型炎症の促進におけるＩＬ−３３の非冗長的な役割を例証する。しかしながら、ＩＬ−３３は、２型免疫に排他的に関連するものではない宿主防御の他の構成要素も誘導する。特に、マクロファージは、ファゴサイトーシス、サイトカイン及び成長因子の分泌、ならびに創傷回復を含む、抗微生物応答及び組織恒常性の複数の態様に寄与する。それらの機能の中心は、ＩＬ−３３などのサイトカインによって部分的に媒介される、感染部位への動員である。
ＩＬ−３３に誘導される、肺へのマクロファージの動員が、２型サイトカインに非依存性であるかどうか、及び免疫におけるＩＬ−３３機能のより広い態様を示すかどうかを調べるために、マウスに、ＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１３に対する中和抗体の存在下または不在下においてＩＬ−３３での処置を行った（図１８Ａ〜１８Ｃ）。肺炎症におけるこれらのサイトカインの役割を考慮して、ＢＡＬＦ細胞充実度を分析した。好酸球動員におけるこれらのサイトカインの役割と一致して、ＩＬ−３３に誘導されるＢＡＬＦへの好酸球浸潤は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１３の遮断時には完全に抑止された（図１８Ｃ）。しかしながら、肺へのマクロファージの浸潤は、この処置により乱れ（図１８Ｂ）、ＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１３の誘導を超えるＩＬ−３３の固有な特性が強調された。宿主防御におけるマクロファージの役割を考慮して、これらのデータは、従来的な２型免疫応答を超えるインビボでのＩＬ−３３の代替的な機能を示唆している。
材料及び方法
７〜８週齡の雌性Ｃ５７ＢＬ／６マウスをＪａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙから購入した。１群当たり５匹のマウスを用いた。組み換えマウスＩＬ−３３（アミノ酸１０９〜２６６）を、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから購入した。対照動物群には、生理食塩水のみの処置を受けさせた。０〜７日目に、マウスに、１００μｇの対照抗体またはＩＬ−４、ＩＬ−５、及びＩＬ−１３に対する中和抗体（抗ＩＬ−４及び抗ＩＬ−５はＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから入手し、抗ＩＬ１３は社内で生成した）のいずれかを腹腔内注射した（図１８Ａ）。１日目から７日目に、マウスに０．５μｇの組み換えマウスＩＬ−３３を毎日腹腔内注射した。８日目にマウスを安楽死させ、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を採取した。細胞計数をフローサイトメトリー分析によって評価した。ＢＡＬＦ細胞をＦｃ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｂｌｏｃｋ（２．４Ｇ２、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）と共に１５分間インキュベートした後、氷上において３０分間抗体で染色した。好酸球、好中球、及びマクロファージを以下の抗体：ビオチニル化抗ＣＤ４５（３０−Ｆ１１、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、アロフィコシアニン／Ｃｙ７−抗ＣＤ１１ｂ（Ｍ１／７０、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、フィコエリトリン／Ｃｙ７−抗ＣＤ１１ｃ（ＨＬ３、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、フィコエリトリン−抗Ｓｉｇｌｅｃ−Ｆ（Ｅ５０−２４４０、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、アロフィコシアニン−抗Ｆ４／８０（ＢＭ８、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、フルオレセインイソチオシアネート−抗Ｇｒ−１（ＲＢ６−８Ｃ５、ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を用いて分析した後、ストレプトアビジンＰＡＣＩＦＩＣ ＯＲＡＮＧＥ（商標）（Ｓ３２３６５、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）で分析した。
実施例８．抗ＩＬ−３３単一特異性抗体及び抗ＩＬ−３３／抗ＩＬ−１３二重特異性抗体の特徴付け
以前に、Ｅ．ｃｏｉｌにおいて２つの異なる軽鎖を有するヒトＩｇＧ１二重特異性抗体を生成する技術を確立した（Ｙｕ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ３，８４ｒａ４４）。この方法は、ノブ・イン・ホール技術（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号、Ｒｉｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９，６１７−６２１、Ａｔｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２７０，２６−３５（これらは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる））を利用して、免疫グロブリン重鎖のヘテロ二量体化を促進する。軽鎖が誤って対合することなく、２つの異なる軽鎖の使用を確実にするために、各アームを、別個のＥ．ｃｏｉｌ細胞において半抗体として培養した。このアプローチを適用して、抗ＩＬ−３３及び抗ＩＬ−１３の親抗体をベクターにサブクローニングして抗ＩＬ−３３アームをヒトＩｇＧ４ホール、抗ＩＬ−１３アームをヒトＩｇＧ４ノブとして発現させることを可能にして、抗ＩＬ−１３／ＩＬ−３３二重特異性抗体を生成した。
１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ／ＩＬ−１３ ＩｇＧ４と称される二重特異性抗ＩＬ−３３／抗ＩＬ−１３抗体を、ノブ・イン・ホール（ＫＩＨ）技術を用いて生成した。１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ／ＩＬ−１３ ＩｇＧ４の抗ＩＬ−３３アームは、配列番号３６のＶＨアミノ酸配列及び配列番号３７のＶＬアミノ酸配列を有し、１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉに対応している。１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ／ＩＬ−１３ ＩｇＧ４の抗ＩＬ−３３アームは、配列番号３０２のＶＨアミノ酸配列及び配列番号３０３のＶＬアミノ酸配列を有する。１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ／ＩＬ−１３ ＩｇＧ４の抗ＩＬ−３３アームは、配列番号３０６の重鎖アミノ酸配列及び配列番号３０７の軽鎖アミノ酸配列を有し、１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ／ＩＬ−１３ ＩｇＧ４の抗ＩＬ−１３アームは、配列番号３０４の重鎖アミノ酸配列及び配列番号３０５の軽鎖アミノ酸配列を有する。
二重特異性抗体の抗ＩＬ−１３ ＣＤＲは、以前に生成され、特徴付けられているレブリキズマブを基準とした。例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００５／０６２９６７号を参照されたい。二重特異性抗体に関して、抗ＩＬ−１３抗体は、レブリキズマブと比較してＦＲ領域に次の２つの偏差を有していた：重鎖のＱ１Ｅ及び軽鎖のＭ４Ｌ。
抗体発現については、Ｅ．ｃｏｉｌ株６４Ｂ４を用いた。一晩培養物を３０℃でＬＢ（１００μｇ／ｍｌカルベニシリン）において成長させ、１：１００で５ｍｌ ＣＲＡＰ培地（１００μｇ／ｍｌカルベニシリン）中に希釈し（Ｓｉｍｍｏｎｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２６３：１３３−１４７）、３０℃で２４時間成長させた。
１０Ｌの発酵槽まで規模を拡大するため、初期開始培養物（５００ｍｌ）を成長させて静止期にして、それを用いて１０Ｌ発酵物に植菌した（Ｓｉｍｍｏｎｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，２６３：１３３−１４７）。１０Ｌの流加培養物を成長させ、全培養液を微小流体法により収集した。次いで、溶解した細胞を、４℃で一晩、最終濃度０．４％のＰＥＩ（体積／体積）で処理した。続いて、各混合物を１５，０００×ｇで２０分間遠心分離にかけた後、０．２２μｍのフィルタを通して濾過した。次いで、ＩＬ−３３抗体を、４℃で４００ｍＬのＭａｂＳＵＲＥ ＳＥＬＥＣＴカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に捕捉した。カラムを、２５ｍＭ ＴＲＩＳ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＮａＮ３（ＴＢＳ）でベースラインまで洗浄した後、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１１４を含有するＴＢＳ で一晩、０．４Ｍ ＫＰＯ４、５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．２％ポリソルベート２０、１ｍＭアジ化ナトリウム（ｐＨ７．０）で洗浄し、最終的にＴＢＳでベースラインまで洗浄した。次いで、ＩＬ−３３アームを０．１Ｍ酢酸（ｐＨ２．７）で溶出させ、溶出液プールを１Ｍアルギニン／スクシネート（ｐＨ９．０）でｐＨ５．０まで滴定した。
ＩＬ−３３及びＩＬ−１３半抗体の同一性を、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレーイオン化の飛行時間型（ＬＣ−ＥＳＩ／ＴＯＦ）分析によって確認した。４〜２０％の勾配のトリス−グリシンＳＤＳ ＰＡＧＥゲルによって純度を分析し、凝集レベルをＳＥＣによって判定した。
２つの半抗体とのアセンブリ反応後に、疎水性相互作用、カチオン交換、及びゲル濾過クロマトグラフィーによって二重特異性抗体を精製した。具体的には、アセンブリのために、半抗体を、室温で４日間、２００モル過剰のＧＳＨを有するアルギニンスクシネート中、ｐＨ８．５において１：１のモル比で合わせた後、５ｍＭ ＤＨＡＡを４℃で１６時間添加した。この材料を、ｐＨ６．５において２５％のイソプロパノールを含有する、硫酸アンモニウム勾配を用いて、疎水性クロマトグラフィーカラム（Ｔｈｅｒｍｏ ＰｒｏＰａｃ ＨＩＣ−１０）で分取した。ＩＬ−１３／ＩＬ−３３二重特異性抗体を含有するプールを、次いで、２０ｍＭヒスチジンｐＨ５．５（Ｈ緩衝液）に透析し、カチオン交換カラム（ＳＰＦＦ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に充填し、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１１４を含有するＨ緩衝液、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００（一晩）で洗浄し、Ｈ緩衝液でベースラインまで洗浄した後、３００ｍＭアルギニンスクシネートｐＨ５．５で溶出させた。二重特異性抗体画分をプールし、サイズ排除クロマトグラフィーカラム（Ｓ２００、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）に充填した。精製された抗ＩＬ−１３／ＩＬ−３３二重特異性抗体を含有する画分をプールし、透析し、バイアルに入れた。
単一特異性単一特異性抗ＩＬ−３３抗体（１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４）及び二重特異性抗ＩＬ−３３／抗ＩＬ−１３二重特異性抗体１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ／ＩＬ−１３ ＩｇＧ４（本明細書において「１０Ｃ１２−ＩＬ−１３ ＫＩＨ ＩｇＧ４」とも称される）のヒトＩＬ−３３細胞活性の阻害剤としての効力を、レポーター細胞株を使用し、初代ヒト細胞において、細胞に基づく遮断アッセイを用いて、試験した。単一特異性抗ＩＬ−３３ ＩｇＧ４及び二重特異性抗ＩＬ−３３／抗ＩＬ−１３ ＩｇＧ４形式のものを、デコイレポーターＳＴ２−ＬＺの細胞能に対して試験した。
ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ−３３細胞をＩＬ−３３で刺激することにより、強力なＮＦ−ｋＢ及びＡＰ−１活性化がもたらされ、これを、ＮＦ−κＢ／ＡＰ−１駆動型ＳＥＡＰレポーター活性によって測定した。活性は、対照ＩｇＧ４抗体の添加によって乱れることはなかった。単一特異性抗ＩＬ−３３抗体１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及び二重特異性抗体１０Ｃ１２−ＩＬ−１３ ＫＩＨ ＩｇＧ４の両方が、それぞれ、１０２．１及び２０４．７ｐＭのＩＣ９０値で、ＩＬ３３活性の強力な用量依存性阻害を示した（図１９Ａ）。予測した通り、二重特異性抗体の活性のＩＣ９０値は、単一特異性の対応物に対して得られた値のおよそ半分であった。両方のクローンが、デコイレポーターＳＴ２−ＬＺよりも優れた阻害を示した（実施例２を参照されたい）。
ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）細胞を用いた細胞に基づく遮断アッセイに加えて、単一特異性抗ＩＬ−３３抗体１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及び二重特異性抗体１０Ｃ１２−ＩＬ−１３ ＫＩＨ ＩｇＧ４を、初代細胞におけるＩＬ−３３活性の阻害に関して試験した。ＩＬ−３３をヒト好塩基球に添加することにより、シグナル伝達分子ｐ３８の急速なリン酸化がもたらし、これを、細胞内染色法を用いてフローサイトメトリーによって測定することができる（図１９Ｂ）。ＣＤ１２３マーカーを添加することにより、バルク末梢血単球（ＰＢＭＣ）集団内で好塩基球活性を試験することができ、細胞単離の必要性が回避される（図１９Ｂ）。このフローサイトメトリーに基づく方法を用いて、モノクローナル抗体及び二重特異性抗体のクローンを、好塩基球におけるリン酸化ｐ３８（ホスホ−ｐ３８）のＩＬ−３３誘導の遮断に関して試験した（図１９Ｃ）。上述のレポーター細胞のデータと一致して、単一特異性抗ＩＬ−３３抗体１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４または二重特異性抗体１０Ｃ１２−ＩＬ−１３ ＫＩＨ ＩｇＧ４のいずれかの添加により、好塩基球におけるＩＬ−３３誘導型ホスホ−ｐ３８レベルに用量依存性の阻害がもたらされた（図１９Ｄ）。対照ＩｇＧ４抗体は、ＩＬ−３３シグナルに影響を及ぼさなかった（図１９Ｄ）。
二重特異性抗体１０Ｃ１２−ＩＬ−１３ ＫＩＨ ＩｇＧ４とヒトＩＬ−３３、カニクイザルＩＬ−３３、及びヒトＩＬ−１３との結合の動態を、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）３０００ ＳＰＲを用いて評価した（図２０）。異なる抗体調製物を用いた３回の実験にわたるこの抗体の平均ＫＤを、表４に示す。
Figure 2018500883
材料及び方法
ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ−３３／ ＩＬ−１βレポーター細胞をＩｎｖｉｖｏｇｅｎから購入した（カタログ番号ｈｋｂ−ｉｌ３３）３００ｐｇ／ｍｌのＩＬ−３３リガンド（ＩＬ−３３ Ｎ−Ｈｉｓ、配列番号３１４）及び事前希釈した抗ＩＬ−３３抗体：対照ＩｇＧ４、抗−ＩＬ３３ １０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８１ ＩｇＧ４、１０Ｃ１２−ＩＬ１３ ＫＩＨ ＩｇＧ４、またはＳＴ２ ＬＺ（配列番号３１９）を混合し、室温で１時間インキュベートした。抗体及びリガンド混合物をＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ−３３／ＩＬ−１β細胞に移入させ、１ウェル当たり５０，０００個の細胞で播種した。３７℃で２０時間ＣＯ２インキュベータにおいてインキュベートした後、細胞培養上清におけるＳＥＡＰ活性を、アルカリホスファターゼの基質（ＱＵＡＮＴＩ−ＢＬＵＥ（商標）、ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）と共にインキュベートした後、６３０ｎｍで光学密度（ＯＤ）を記録することによって、測定した。
ヒトＰＢＭＣを、１０ｎｇ／ｍｌの組み換えヒトＩＬ３３で３０分間刺激した。刺激の前に、細胞を、漸増濃度の対照ＩｇＧ４、抗ＩＬ３３ １０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８１ ＩｇＧ４、または１０Ｃ１２−ＩＬ−１３ ＫＩＨ ＩｇＧ４で１時間処理した。ＦＡＣＳ分析のために細胞を固定した。フルオレセインイソチオシアネート抗ＣＤ１２３（１１−１２３９−４２、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を用いて好塩基球を特定した。製造業者のプロトコルに従ったフィコエリトリン−抗ホスホ−ｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）（６９０８Ｓ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）での細胞内染色によって、ＩＬ−３３活性を分析した。データを、ゲートしたＣＤ１２３＋好塩基球集団内のホスホ−ｐ３８シグナルの平均蛍光強度（ＭＦＩ）として示す。
二重特異性抗体１０Ｃ１２−ＩＬ１３ ＫＩＨ ＩｇＧ４とヒトＩＬ−３３、カニクイザルＩＬ−３３、及びヒトＩＬ−１３との結合の動態を、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）３０００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でＳＰＲを用いて評価した。抗ヒトＦａｂ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を、製造業者のプロトコルに従って、アミンに基づく結合を介してＣＭ５センサチップに固定した。二重特異性抗体を捕捉し、ヒトＩＬ−３３（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、カニクイザルＩＬ−３３（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、及びヒトＩＬ−１３（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）に対する結合を測定した。１．５６〜２５ｎＭの範囲で２倍濃度系のサイトカインを実験に使用した。サイトカインの結合のセンサグラムは、注入時間２分、流速３０μｌ／分、２５℃の温度で、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、及び０．００５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０の泳動緩衝液を用いて記録した。注入後、抗体からのリガンドの解離を泳動緩衝液において６００秒間監視した。結合サイクル間に、１０ｍＭグリシン−ＨＣｌ ｐＨ２．１を４０μｌ注入して表面を再生させた。泳動緩衝液のみを含有していたブランクを差し引いた後、二重特異性抗体へのサイトカインの結合が観察されたセンサグラムを、製造業者によって供給されたソフトウェアで１：１ラングミュア結合モデルを使用して分析して、動態及び結合定数（解離定数（ＫＤ）を含む）を計算した。
実施例９．阻害活性及び結合動態に関する抗ＩＬ−３３抗体１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４と他の抗ＩＬ−３３抗体との比較
Ａ．導入
抗ＩＬ−３３抗体１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４の遮断活性及び結合動態を、国際特許出願公開第ＷＯ２０１４／１６４９５９号に記載されている２０個の抗ＩＬ−３３抗体（本明細書ではＲＧ１〜ＲＧ２０と称する）の遮断活性及び結合動態と直接比較した。１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４と比較した国際公開第ＷＯ２０１４／１６４９５９号からの抗ＩＬ−３３抗体を表５に示すが、これは、国際公開第ＷＯ２０１４／１６４９５９号からの抗体名、本明細書で使用される略称、定常領域（ＩｇＧ１またはＩｇＧ４）、ならびに各抗体のＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列及びヌクレオチド配列の配列番号を示す。
Figure 2018500883
Ｂ．レポーター細胞株を使用した、細胞に基づくＩＬ−３３遮断アッセイ
ヒトＩＬ−３３細胞活性の阻害剤としての抗ＩＬ−３３抗体１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及び表５に列挙されている各抗ＩＬ−３３抗体（ＲＧ１〜ＲＧ２０）の効力を、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）レポーター細胞株を使用した細胞に基づくＩＬ−３３遮断アッセイを用いて試験した（図２１Ａ）。ＩＬ−３３活性の天然の阻害物質であるｓＳＴ２（ｓＳＴ２−ＬＺ）は、陽性対照の機能を果たした。ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ−３３／ＩＬ−１β細胞をヒトＩＬ−３３で刺激することにより、強力なＮＦ−κＢ及びＡＰ−１活性化がもたらされ、これを、ＮＦ−κＢ／ＡＰ−１駆動型ＳＥＡＰレポーター活性によって測定した（図２１Ｂ）。ＩＬ−３３活性は、対照ＩｇＧ４抗体の添加によって乱れることはなかった（図２１Ａ）。試験したほとんどのＩＬ−３３抗体が、図２１Ｃに列挙されるＩＣ５０値で、ヒトＩＬ−３３活性の用量依存性阻害を示した（図２１Ａ）。デコイ受容体ｓＳＴ２−ＬＺ（ＩＣ５０＝２７ｐＭ）よりも優れた阻害を示した抗体は２つだけであった。１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４が、最も高い遮断活性を示し（ＩＣ５０＝２．４ｐＭ）、ＲＧ１８抗体がそれに続いた（ＩＣ５０＝１１ｐＭ）。最も高い遮断活性を有した５つのＲＧ抗体（ＲＧ３、ＲＧ４、ＲＧ７、ＲＧ８、及びＲＧ１８）を、ｓＳＴ２−ＬＺ及び１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４と共に図２１Ｄに示す。
同様に、カニクイザルＩＬ−３３細胞活性の阻害剤としての各抗体の効力を、ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）レポーター細胞株を使用した細胞に基づく遮断アッセイを用いて試験した（図２２Ａ）。ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ−３３／ＩＬ−１β細胞をカニクイザルＩＬ−３３で刺激することにより、強力なＮＦ−κＢ及びＡＰ−１活性化がもたらされ、これを、ＮＦ−κＢ／ＡＰ−１駆動型ＳＥＡＰレポーター活性によって測定した（図２２Ｂ）。一般に、試験した抗ＩＬ−３３抗体は、ヒトＩＬ−３３に対する遮断活性と比較すると、カニクイザルＩＬ−３３活性にはより弱い用量依存性阻害を示しており、ＩＣ５０値が図２１Ｃに列挙されている。デコイ受容体であるｓＳＴ２−ＬＺが最も高い遮断活性を示し（ＩＣ５０＝３０ｐＭ）、１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４（ＩＣ５０＝４．２ｎＭ）がそれに続き、そしてＲＧ２０抗体（ＩＣ５０＝６．１ｎＭ）が続いた。最も高い遮断活性を有した５つのＲＧ抗体（ＲＧ３、ＲＧ９、ＲＧ１０、ＲＧ１２、及びＲＧ２０）を、ｓＳＴ２−ＬＺ及び１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４と共に図２２Ｃに示す。注目すべきことに、ヒトＩＬ−３３に対して高い遮断活性を示したＲＧ１８抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に対して、１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４と比べて１４倍弱い遮断活性を示した。図２２Ｄは、このアッセイにおいて遮断性のなかったＲＧ抗体の用量依存性応答曲線を示す。
材料及び方法
ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ−３３／ＩＬ−１βレポーター細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、ｈｋｂ−ｉｌ３３）におけるＩＬ−３３経路活性を、製造業者の説明書に従って比色分析アッセイを用いて測定した。ＨＥＫ−ＢＬＵＥ（商標）ＩＬ−３３／ＩＬ−１βレポーター細胞を、１ウェル当たり５０，０００個の細胞で９６ウェルプレートにおいて、４．５ｇ／ｌグルコース、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、１０％ＦＢＳ、５０Ｕ／ｍｌペニシリン、５０μｇ／ｍＬストレプトマイシン、１００μｇ／ｍＬ ＮＯＲＭＯＣＩＮ（商標）（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、ａｎｔ−ｎｒ−１）を補充したＤＭＥＭに播種した。１３９ｎＭ〜０．００３ｐＭのヒトＩＬ−３３（ｈＩＬ−３３、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、番号３６２５−ＩＬ−０１０／ＣＦ）または社内で生成したカニクイザルＮ末端６−Ｈｉｓタグ及びＣ末端ＡｖｉタグＩＬ−３３（Ｓ１１２−Ｔ２７０）の５倍連続希釈物と共に、細胞をインキュベートした（実施例２を参照されたい）。遮断実験のために、細胞を、９０ｎＭ〜０．５１ｐＭの範囲の抗体またはｓＳＴ２−ＬＺ（ｓＳＴ２（Ｍ１−Ｆ３２８）Ｃ末端ロイシンジッパー（ＬＺ）−Ｆｌａｇ−Ｈｉｓ）の３倍連続希釈物と組み合わせて、１０ｐＭヒトＩＬ−３３または５ｐＭカニクイザルＩＬ−３３と共にインキュベートした。抗体またはｓＳＴ２−ＬＺをＩＬ−３３と共に３７℃で３０分間事前インキュベートした後に細胞を添加した。各反応は、１ウェル当たり最終体積２００μＬであり、各条件を三連に試験した。細胞を５％ＣＯ２で加湿インキュベータにおいて３７℃でインキュベートし、上清を２０時間後に採取した。ＳＥＡＰレポーター活性を、ＱＵＡＮＴＩ−ＢＬＵＥ（商標）アッセイ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、ｒｅｐ−ｑｂ１）を用いて検出した。平底９６ウェルプレートにおいて、溶解し濾過したＱＵＡＮＴＩ−ＢＬＵＥ（商標）試薬８０μｌに、２０μｌの上清を添加し、３７℃で１時間インキュベートした。ＳＥＡＰレベルを、分光光度計を用いて６２０ｎｍで判定した。
Ｃ．ＩＬ−３３活性に関する初代ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞アッセイ
上述のレポーターアッセイに加えて、抗ＩＬ−３３抗体１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及び表５に列挙される各抗ＩＬ−３３抗体（ＲＧ１〜ＲＧ２０）を、初代ヒトナチュラルキラー（ＮＫ）細胞におけるＩＬ−３３活性の阻害に関しても試験した（図２３Ａ〜２３Ｄ）。ＩＬ−３３及びＩＬ−１２は、それら自体がＮＫ細胞を活性化することはできないが、一緒になると、相乗作用により、ＮＫ細胞からＩＦＮ−γを誘導することができる（例えば、Ｓｍｉｔｈｇａｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０（８）：１０１９−１０３０，２００８を参照されたい）。抗ＩＬ−３３抗体１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及び抗ＩＬ−３３抗体ＲＧ１〜ＲＧ２０の阻害活性を、天然の阻害物質であるｓＳＴ２（ｓＳＴ２−ＬＺ）と比較した。新たに精製したＮＫ細胞（図２３Ａ）を、ＩＬ−１２の存在下において漸増濃度のヒトＩＬ−３３で刺激することにより、ＥＬＩＳＡによって測定したときに、２４時間後に強力なＩＦＮ−γ分泌がもたらされた（図２３Ｂ）。試験したほとんどのＩＬ−３３抗体が、図２３Ｄに列挙されるＩＣ５０値で、ヒトＩＬ−３３活性の用量依存性阻害を示した（図２３Ｃ）。節Ｂで上述のレポーター細胞株の結果と類似して、デコイレポーターｓＳＴ２−ＬＺ（ＩＣ５０＝１５０ｐＭ）よりも優れた阻害を示した抗体は２つだけであった。１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４が、最も高い遮断活性を示し（ＩＣ５０＝３０ｐＭ）、ＲＧ１８抗体がそれに続いた（ＩＣ５０＝９７ｐＭ）。最も高い遮断活性を有した５つのＲＧ抗体（ＲＧ７、ＲＧ８、ＲＧ９、ＲＧ１８、及びＲＧ１９）を、ｓＳＴ２−ＬＺ及び１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４と共に図２３Ｅに示す。図２３Ｆ〜２３Ｉは、５つのＲＧ抗体、１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４、及びｓＳｔ２−ＬＺの群間のＩＣ５０曲線を比較する。
材料及び方法
ＰＢＭＣを、密度勾配遠心法によって新しい全血から単離した。全血をＰＢＳ中に２倍に希釈し、ＬＥＵＣＯＳＥＰ（商標）チューブ（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ Ｏｎｅ，番号２２７２９０）においてＦＩＣＯＬＬ（登録商標）−Ｐａｑｕｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、番号１７−１４４０−０３）上に層を作り、室温で２０分間２，０００ＲＰＭで遠心分離にかけた。ＰＢＭＣを含有する中間層を吸引し、新しいチューブに移し、ＰＢＳで洗浄した。製造業者の説明書に従ってＮＫ Ｃｅｌｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，１３０−０９２−６５７）を用いて、ＮＫ細胞を単離した。細胞の純度を、ＣＤ５６−ＡＰＣ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，５５５５１８）及びＣＤ３−ＦＩＴＣ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，５６１８０７）染色でのフローサイトメトリーによって分析した。単離したＮＫ細胞（純度９０％超）を、５×１０５個の細胞／ｍｌで平底９６ウェルプレートにおいて、１０％ＦＢＳ、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンを補充したＲＰＭＩ １６４０に播種した。細胞を、１ｎｇ／ｍｌのヒトＩＬ−１２（ｈＩＬ−１２、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、番号２１９−ＩＬ−０２５／ＣＦ）、及び１３９ｎＭ〜０．００３ｐＭの範囲のヒトＩＬ−３３（ｈｕＩＬ−３３、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、番号３６２５−ＩＬ−０１０／ＣＦ）単独の５倍連続希釈物、または２６０ｐＭのｈｕＩＬ−３３と１００ｎＭ〜０．５６ｐＭの抗体またはｓＳＴ２−ＬＺの３倍連続希釈物との組み合わせと共にインキュベートした。抗体またはｓＳＴ２−ＬＺは、３７℃で３０分間ＩＬ−３３と共に事前インキュベートした後に細胞に添加した。各反応は、１ウェル当たり最終体積２００μｌであり、各条件を三連に試験した。細胞を５％ＣＯ２で加湿インキュベータにおいて３７℃で一晩インキュベートした。２４時間後に上清を採取した。培養上清中のヒトＩＦＮ−γのレベルを、製造業者の説明書に従ってＥＬＩＳＡによって測定した（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、番号ＤＹ２８５）。各プレートについて、ＩＬ−３３活性％を次のように計算した：
ＩＬ−３３活性％＝１００×（ＯＤ４５０試料−ＯＤ４５０ＩＬ−３３なし）／（ＯＤ４５０抗体なし−ＯＤ４５０ＩＬ−３３なし）。
Ｄ．ヒト好塩基球におけるＩＬ−３３に誘導されるｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）リン酸化
抗ＩＬ−３３抗体１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及び表５に列挙される各抗ＩＬ−３３抗体（ＲＧ１〜ＲＧ２０）を、初代ヒト好塩基球におけるＩＬ−３３活性の阻害に関しても試験した。ＩＬ−３３をヒト好塩基球に添加することにより、シグナル伝達分子ｐ３８ ＭＡＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）の急速なリン酸化がもたらされたが、これを、細胞内染色法を用いてフローサイトメトリーによって測定することができる。ＣＤ１２３マーカーを添加することにより、バルクＰＢＭＣ集団内で好塩基球活性を試験することができ、細胞単離の必要性が回避される。
このフローサイトメトリーに基づく方法を用いて、抗ＩＬ−３３抗体を、好塩基球におけホスホ−ｐ３８のＩＬ−３３媒介性誘導の遮断に関して試験した（図２４Ａ）。ＩＬ−３３をＰＢＭＣに添加することにより、好塩基球集団におけるｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）リン酸化（ホスホ−ｐ３８）に用量依存性の増加がもたらされた（図２４Ｂ）。上述のレポーター細胞株及びＮＫ細胞のデータと一致して、抗ＩＬ−３３抗体の添加により、図２４Ｄに列挙されるＩＣ５０で、好塩基球におけるＩＬ−３３に誘導されるホスホ−ｐ３８の用量依存性の阻害が引き起こされた（図２４Ｃ）。ＩＣ５０曲線を用いて判定した最も高い遮断活性を有する抗体は、ＲＧ１１（ＩＣ５０＝０．１４ｐＭ）、１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４（ＩＣ５０＝０．１５ｐＭ）であり、ＲＧ１８抗体（ＩＣ５０＝０．３８ｐＭ）が続いた。最も高い遮断活性を有した５つのＲＧ抗体（ＲＧ３、ＲＧ４、ＲＧ８、ＲＧ１１、及びＲＧ１８）を、ｓＳＴ２−ＬＺ及び１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４と共に図２４Ｅに示す。図２４Ｆ〜２４Ｉは、５つのＲＧ抗体、１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４、及びｓＳｔ２−ＬＺの群間のＩＣ５０曲線を比較する。
ＩＣ５０曲線は、６つの点のみから作製されているため、上述の結果を、特定の抗体濃度で分析した（図２４Ｊ〜２４Ｋ）。０．４ｎＭ（図２４Ｊ）または２ｎＭ（図２４Ｋ）のいずれかの抗ＩＬ−３３抗体またはｓＳＴ２−ＬＺ濃度で得られた平均蛍光強度（ＭＦＩ）をプロットした。図２４Ｊ及び２４Ｋのプロットは、抗体を高い遮断活性から低い遮断活性に並び替えたものを示す。両方の濃度において、１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４が、最も高い遮断活性を示しており、そのため、最も低いＭＦＩ値を示した。レポーター細胞株及び初代ＮＫ細胞のデータと一致して、ＲＧ１８抗体は、ヒトＩＬ−３３に対する遮断活性という観点では、上位３つの抗体に含まれていた。
材料及び方法
ＰＢＭＣを、密度勾配遠心法によって新しい全血から単離した。全血をＰＢＳ中に２倍に希釈し、ＬＥＵＣＯＳＥＰ（商標）チューブ（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ Ｏｎｅ，番号２２７２９０）においてＦＩＣＯＬＬ（登録商標）−Ｐａｑｕｅ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、番号１７−１４４０−０３）上に層を作り、室温で２０分間２０００ＲＰＭで遠心分離にかけた。ＰＢＭＣを含有する中間層を吸引し、新しいチューブに移し、ＰＢＳで洗浄した。単離したＰＢＭＣを、１００万個の細胞／ウェルでｖ底９６ウェルプレートにおいて５０μｌのＰＢＳに播種した。５倍連続希釈物（１０ｎＭ〜３．２Ｍの範囲）の抗ＩＬ−３３抗体、ｓＳＴ２−ＬＺ、またはアイソタイプ対照抗体を、５００ｐＭ（最終濃度）のヒトＩＬ−３３（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、番号６３２５−ＩＬ／ＣＦ）と共に３７℃で３０分間インキュベートした。５０μｌの混合物を、１ウェル当たり最終濃度１００μｌでＰＢＭＣに添加した。細胞を５％ ＣＯ２で加湿インキュベータにおいて３７℃で２０分間インキュベートした。１００μｌの事前に温めたＢＤ ＰＨＯＳＦＬＯＷ（商標）固定緩衝液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，５５７８７０）を添加することによって反応を停止させ、３７℃で１０分間インキュベートした。細胞を、１５００ＲＰＭで５分間の遠心分離によってペレット化し、上清をデカンテーションした。細胞ペレットを２００μｌのフローサイトメトリー緩衝液（１×ＰＢＳ、０．５％ＢＳＡ、０．０５％アジ化ナトリウム）で洗浄した。細胞に、１００μｌの低温ＢＤ ＰＨＯＳＦＬＯＷ（商標）Ｐｅｒｍ Ｂｕｆｆｅｒ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，５５８０５２）をゆっくりと添加することによって透過処理を行い、氷上で３０分間インキュベートした。細胞ペレットをフローサイトメトリー緩衝液で２回洗浄した。抗ホスホ−ｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）−ＰＥ（１：５０で使用、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，６９０８Ｓ）及び抗ＣＤ１２３−ＦＩＴＣ（１：１０で使用、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、１１−１２３９−４２）で各試料を染色することによって、好塩基球におけるｐ３８のＩＬ−３３依存性リン酸化を分析した。試料を、暗所において室温で１時間インキュベートした。細胞をペレット化し、フローサイトメトリー緩衝液で２回洗浄した。細胞を、ＢＤ ＦＡＣＳＣＡＬＩＢＵＲ（商標）で分析して、ＣＤ１２３＋好塩基球におけるホスト−ｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２）の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を判定した。
Ｅ．表面プラズモンによって判定される、ＩＬ−３３への抗ＩＬ−３３抗体の結合
抗ＩＬ−３３抗体１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及び表５に列挙される各抗ＩＬ−３３抗体（ＲＧ１〜ＲＧ２０）の、ＩＬ−３３に対する結合動態を、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｔ２００機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）を用いて測定した。抗ヒトＦｃまたは抗マウスＦｃ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、それぞれ、番号ＢＲ−１００８−３９またはＢＲ−１００８−３８）を、製造業者のプロトコルに従って、アミンに基づく結合を介してＣＭ５センサチップに固定した。動態研究のために、モノクローナルヒトＩｇＧ４及びモノクローナルマウスＩｇＧｓを捕捉するのに表面を用いた。ヒトＩＬ−３３（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ、番号３６２５−ＩＬ−０１０／ＣＦ）及びカニクイザルＩＬ−３３ Ｎ−Ｈｉｓ（配列番号３１７）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）への抗体結合を測定した。３．７〜１００ｎＭの範囲で３倍濃度系のサイトカインを実験に使用した。ＩＬ−３３の結合のセンサグラムは、注入時間４分、流速３０μｌ／分、０．０１Ｍ Ｎ−（２−アセトアミド）イミノ二酢酸（ＡＤＡ）ｐＨ７．４、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ、及び０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０の泳動緩衝液を用いて記録した。注入後、抗体からのリガンドの解離を泳動緩衝液において１０分間監視した。サイクル間に、３Ｍ塩化マグネシウムまたはグリシン−ＨＣｌ（ｐＨ１．７）を注入して表面を再生させた。全ての結合実験は、２５℃及び３７℃で行った。泳動緩衝液のみを含有していたブランクを差し引いた後、抗ＩＬ−３３抗体へのＩＬ−３３の結合が観察されたセンサグラムを、製造業者によって供給されたソフトウェアで１：１ラングミュア結合モデルを使用して分析して、動態及び結合定数（解離定数（ＫＤ）を含む）を計算した。解離半減期（ｔ１／２）を動態速度定数から計算した。ＫＤ（Ｍ）＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎ及びｔ１／２（分）＝ｌｎ（２）／（６０＊ｋｏｆｆ）。表６は、２５℃でヒトＩＬ−３３への結合の結合動態の結果を示す。表７は、３７℃でヒトＩＬ−３３への結合の結合動態の結果を示す。表８は、２５℃でカニクイザルＩＬ−３３への結合の結合動態の結果を示す。表９は、３７℃でカニクイザルＩＬ−３３への結合の結合動態の結果を示す。表６〜９において、＊ＩＣは、抗体の捕捉が弱く、結合データが不十分となったために結果が不確定であることを示す。
各条件において、抗ＩＬ−３３抗体１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４は、ＫＤによって測定した場合、抗ＩＬ−３３抗体ＲＧ１〜ＲＧ２０と比較して、ヒトまたはカニクイザルＩＬ−３３に対して最も高い親和性を有していた（表６〜９）。１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４は、ヒトＩＬ−３３に対して最も高い親和性を有するＲＧ抗体（ＲＧ１８であった）と比較して、およそ２〜４倍高い親和性を有していた（表６及び７）。１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４は、カニクイザルＩＬ−３３に対して最も高い親和性を有するＲＧ抗体（２５℃ではＲＧ２であり、３７℃ではＲＧ１０であった）と比較して、およそ２〜４倍高い親和性を有していた。
Figure 2018500883
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Figure 2018500883
Figure 2018500883
Ｆ．抗ＩＬ−３３抗体の遮断活性を測定するための競合的結合ＥＬＩＳＡ
材料
組み換えヒトＳＴ２−Ｆｃキメラタンパク質及びヒトＩＬ−３３タンパク質を、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）から入手した。組み換えカニクイザルＩＬ−３３タンパク質は、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈで作製した。ヒト及びカニクイザルの両方のＩＬ−３３タンパク質を、製造業者のプロトコルに従ってＥＺ−ＬＩＮＫ（登録商標）ＮＨＳ−ＰＥＧ４−Ｂｉｏｔｉｎ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を用いてビオチンで標識した。
実験方法
抗ＩＬ−３３抗体１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４及び表５に列挙される各抗ＩＬ−３３抗体（ＲＧ１〜ＲＧ２０）が、ヒトＳＴ２受容体へのヒトＩＬ−３３またはカニクイザルＩＬ−３３のいずれかの結合を遮断する能力を、競合的結合ＥＬＩＳＡで試験した。簡単に言うと、コーティング緩衝液（５０ｍＭ炭酸ナトリウム、ｐＨ９．６）中に調製した１μｇ／ｍｌの組み換えヒトＳＴ２−Ｆｃキメラタンパク質を、３８４ウェルのＭＡＸＩＳＯＲＰ（登録商標）プレート（Ｎａｌｇｅｎｅ Ｎｕｎｃ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）にコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。翌日に、０．５％（重量／体積）のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液を含有するＰＢＳで非特異的な結合を遮断した。アッセイ緩衝液（２５ｍＭ ＰＢＳ、ｐＨ７．２、０．１％ＢＳＡ、０．０５％ＴＷＥＥＮ（登録商標）−２０）中に調製した固定濃度のビオチニル化ヒトまたはカニクイザルＩＬ−３３を、等体積の連続希釈した抗ＩＬ−３３抗体またはアッセイ緩衝液単独と混合し、室温で１時間インキュベートした。ビオチニル化ヒトＩＬ−３３またはカニクイザルＩＬ−３３の最終的なアッセイ濃度は、それぞれ、２０ｐＭ及び４５ｐＭであり、各抗体の最終的なアッセイ濃度は、０〜３００ｎＭの範囲に及んだ。事前混合した溶液を、ＳＴ２−Ｆｃをコーティングしたプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。コーティングしたＳＴ２−Ｆｃへのビオチニル化ＩＬ−３３の結合を、Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ Ｐｏｌｙ−ＨＲＰ８０（Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ、Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）及び３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｓｙｓｔｅｍ（ＫＰＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）の連続添加によって検出した。ＭＵＬＴＩＳＫＡＮ ＡＳＣＥＮＴ（登録商標）プレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を用いて吸収（４５０ｎｍ）を記録した。抗ＩＬ−３３の存在下におけるＳＴ２へのビオチン−ＩＬ−３３の結合活性（％）を、抗体濃度の関数としてプロットした。生成されたデータを４パラメーターの等式に当てはめて、Ｐｒｉｓｍソフトウェア（Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）を用いて各抗体のＩＣ５０値を判定した（図２５Ａ及び２５Ｂ）。各抗体の最大遮断（％）を、抗体の存在下において測定されたシグナルの、ＩＬ−３３単独との差及びバックグラウンド測定との間の差に対するシグナルの減少の比として計算した。各抗体のＩＣ５０及び最大遮断活性を、表１０に要約する。結果は、３回の独立した実験の平均データを示す。
表１０に示されるように、１０Ｃ１２．３８．Ｈ６．８７Ｙ．５８Ｉ ＩｇＧ４が、試験した抗体の全てのうちで最も効率的な遮断物質であり、国際公開第ＷＯ２０１４／１６４９５９号からの抗体の全てと比較して、より低いＩＣ５０値及び高い最大遮断を有していた。
Figure 2018500883
他の実施形態
上述の発明は、明確な理解のための例示説明及び例としてある程度詳細に記載されているが、これらの説明及び例は、本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本明細書で引用される全ての特許及び科学文献の開示は、参照によりそれらの全体が明示的に組み込まれる。

Claims (348)

  1. ヒト及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）の両方のインターロイキン−３３（ＩＬ−３３）に、約５００ｐＭ以下のＫＤで特異的に結合する、単離抗体。
  2. 前記抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１００ｆＭ〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１に記載の抗体。
  3. 前記抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約２００ｐＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１または２に記載の抗体。
  4. 前記抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１５ｐＭ〜約１８０ｐＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体。
  5. 前記抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１５ｐＭ〜約１４０ｐＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗体。
  6. 前記抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、約１００ｆＭ〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗体。
  7. 前記抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の抗体。
  8. 前記抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、約１００ｐＭ〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗体。
  9. 前記抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、約１２５ｐＭ〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の抗体。
  10. 前記抗体は、ヒト及びカニクイザルの両方のＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１、２、６、及び７のいずれか１項に記載の抗体。
  11. 前記抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約２００ｐＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１０に記載の抗体。
  12. 前記抗体は、ＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を阻害することができる、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の抗体。
  13. 前記阻害は、細胞に基づく遮断アッセイを用いて測定される、請求項１２に記載の抗体。
  14. 前記抗体は、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約０．００１μｇ／ｍｌ〜約０．５μｇ／ｍｌの９０％阻害濃度（ＩＣ９０）で阻害する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体。
  15. 前記ＩＣ９０は、約０．００２μｇ／ｍｌ〜約０．２５μｇ／ｍｌである、請求項１４に記載の抗体。
  16. 前記ＩＣ９０は、約０．１７μｇ／ｍｌである、請求項１５に記載の抗体。
  17. 前記ＩＣ９０は、約０．００４μｇ／ｍｌである、請求項１５に記載の抗体。
  18. 前記抗体は、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約８００ｆＭ〜約１０ｐＭの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）で阻害する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の抗体。
  19. 前記ＩＣ５０は、約１ｐＭ〜約５ｐＭである、請求項１８に記載の抗体。
  20. 前記ＩＣ５０は、約２．５ｐＭである、請求項１９に記載の抗体。
  21. 前記抗体は、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約１ｎＭ〜約５ｎＭのＩＣ５０で阻害する、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の抗体。
  22. 前記ＩＣ５０は、約４ｎＭである、請求項２１に記載の抗体。
  23. 前記抗体は、
    （ａ）ＳＦＳＭＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び
    （ｃ）ＡＮＹＧＮＷＦＦＥＶ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む結合ドメインを含む、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の抗体。
  24. 前記結合ドメインは、
    （ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項２３に記載の抗体。
  25. 前記結合ドメインは、
    （ａ）ＤＶＮＬＶＥＳＧＧＧＳＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＥＳＥＤＴＡＭＹＹＣＴＲ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＡＧＴＴＶＡＶＳＳ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項２３に記載の抗体。
  26. 前記結合ドメインは、
    （ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１２）またはＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１３）またはＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２２）、ＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２３）、ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２４）、またはＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項２３に記載の抗体。
  27. 前記結合ドメインは、
    （ａ）ＲＡＳＥＳＶＡＫＹＧＬＳＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｃ）ＱＱＳＫＥＶＰＦＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を更に含む、請求項２３〜２６のいずれか１項に記載の抗体。
  28. 前記結合ドメインは、
    （ａ）ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＦ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項２７に記載の抗体。
  29. 前記結合ドメインは、
    （ａ）ＤＩＶＬＴＱＳＰＧＦＬＶＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＦ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＮＩＨＰＭＥＥＤＤＴＡＭＹＦＣ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項２７に記載の抗体。
  30. 前記結合ドメインは、
    （ａ）ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＦ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２７）、ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣ（配列番号３３）、ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号３４）、またはＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項２７に記載の抗体。
  31. 前記抗体は、
    （ａ）ＳＳＩＦＹＷＧ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号６６）またはＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＡＬＫＳ（配列番号６７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＡＧＧＬＹＮＷＮＤＥＳＦＳＦＹＭＤＶ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む結合ドメインを含む、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の抗体。
  32. 前記結合ドメインは、
    （ａ）ＥＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＲ（配列番号７２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号７３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＭＬＴＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号７４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号７５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項３１に記載の抗体。
  33. 前記結合ドメインは、
    （ａ）ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＲ（配列番号７６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号７３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＭＬＴＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号７４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＮＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号７８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項３１に記載の抗体。
  34. 前記結合ドメインは、
    （ａ）ＥＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＲ（配列番号７２）、ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＲ（配列番号７６）、ＱＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＲ（配列番号７７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号７３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＭＬＴＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号７４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号７５）またはＷＧＮＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号７８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項３１に記載の抗体。
  35. 前記結合ドメインは、
    （ａ）ＲＡＳＱＳＦＳＳＳＹＬＡ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７０）アミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＱＱＹＤＲＳＰＬＴ（配列番号７１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を更に含む、請求項３１〜３４のいずれか１項に記載の抗体。
  36. 前記結合ドメインは、
    （ａ）ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号７９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号８０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号８１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項３５に記載の抗体。
  37. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＳＦＳＸ１Ｓ（配列番号６２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１（Ｘ１は、Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、またはＶａｌである）、
    （ｂ）ＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＸ１ＶＫＧ（配列番号６３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１は、ＳｅｒまたはＡｌａである）、
    （ｃ）ＡＮＹＧＸ１Ｘ２ＦＦＥＶ（配列番号６４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３（Ｘ１はＡｓｎまたはＡｓｐであり、Ｘ２はＴｒｐまたはＰｈｅである）、
    （ｄ）ＲＡＳＥＳＶＡＫＹＧＬＳＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＱＳＫＥＶＰＦＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  38. 前記結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＳＦＳＭＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＡＮＹＧＮＷＦＦＥＶ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＲＡＳＥＳＶＡＫＹＧＬＳＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＱＳＫＥＶＰＦＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項３７に記載の抗体。
  39. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  40. 前記ＶＨドメインは、
    （ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項３９に記載の抗体。
  41. 前記ＶＨドメインは、配列番号３６のアミノ酸配列を含む、請求項４０に記載の抗体。
  42. 前記ＶＬドメインは、
    （ａ）ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＦ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項３９〜４１のいずれか１項に記載の抗体。
  43. 前記ＶＬドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含む、請求項４２に記載の抗体。
  44. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  45. 前記ＶＨドメインは、
    （ａ）ＤＶＮＬＶＥＳＧＧＧＳＶＫＰＧＧＳＬＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＶＲＱＴＰＥＫＲＬＥＷＶＡ（配列番号１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮＴＬＹＬＱＭＳＳＬＥＳＥＤＴＡＭＹＹＣＴＲ（配列番号１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＡＧＴＴＶＡＶＳＳ（配列番号１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項３９に記載の抗体。
  46. 前記ＶＨドメインは、配列番号３８のアミノ酸配列を含む、請求項４５に記載の抗体。
  47. 前記ＶＬドメインは、
    （ａ）ＤＩＶＬＴＱＳＰＧＦＬＶＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣ（配列番号２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＦ（配列番号３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＮＩＨＰＭＥＥＤＤＴＡＭＹＦＣ（配列番号３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項３９、４５、及び４６のいずれか１項に記載の抗体。
  48. 前記ＶＬドメインは、配列番号３９のアミノ酸配列を含む、請求項４７に記載の抗体。
  49. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号３９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  50. 前記ＶＨドメインは、
    （ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１２）またはＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＫＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１３）またはＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号２１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２２）、ＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２３）、ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２４）、またはＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項３９に記載の抗体。
  51. 前記ＶＨドメインは、配列番号４０のアミノ酸配列を含む、請求項５０に記載の抗体。
  52. 前記ＶＬドメインは、
    （ａ）ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＦ（配列番号２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２７）、ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣ（配列番号３３）、ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号３４）、またはＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＦＣ（配列番号３５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項３９、５０、及び５１のいずれか１項に記載の抗体。
  53. 前記ＶＬドメインは、配列番号４１のアミノ酸配列を含む、請求項５２に記載の抗体。
  54. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  55. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＳＳＩＦＹＷＧ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＸ１ＬＫＳ（配列番号９０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１は、ＳｅｒまたはＡｌａである）、
    （ｃ）ＡＧＧＬＹＮＷＮＤＥＳＦＳＦＹＭＤＶ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＲＡＳＱＳＦＳＳＳＹＬＡ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＱＹＤＲＳＰＬＴ（配列番号７１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  56. 前記結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＳＳＩＦＹＷＧ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号６６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＡＧＧＬＹＮＷＮＤＥＳＦＳＦＹＭＤＶ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＲＡＳＱＳＦＳＳＳＹＬＡ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＱＹＤＲＳＰＬＴ（配列番号７１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項５５に記載の抗体。
  57. 前記結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＳＳＩＦＹＷＧ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＡＬＫＳ（配列番号６７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＡＧＧＬＹＮＷＮＤＥＳＦＳＦＹＭＤＶ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＲＡＳＱＳＦＳＳＳＹＬＡ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＱＹＤＲＳＰＬＴ（配列番号７１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項５５に記載の抗体。
  58. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号８５のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  59. 前記ＶＨドメインは、
    （ａ）ＥＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＲ（配列番号７２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号７３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＭＬＴＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号７４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号７５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項５８に記載の抗体。
  60. 前記ＶＨドメインは、配列番号８４のアミノ酸配列を含む、請求項５９に記載の抗体。
  61. 前記ＶＬドメインは、
    （ａ）ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号７９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号８０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号８１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項５８〜６０のいずれか１項に記載の抗体。
  62. 前記ＶＬドメインは、配列番号８５のアミノ酸配列を含む、請求項６１に記載の抗体。
  63. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号８５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  64. 前記ＶＨドメインは、配列番号８６のアミノ酸配列を含む、請求項５９に記載の抗体。
  65. 前記ＶＬドメインは、
    （ａ）ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号７９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号８０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号８１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項５８、５９、及び６４のいずれか１項に記載の抗体。
  66. 前記ＶＬドメインは、配列番号８７のアミノ酸配列を含む、請求項６５に記載の抗体。
  67. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号８６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号８７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  68. 前記ＶＨドメインは、
    （ａ）ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＩＲ（配列番号７６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＩＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＩＧ（配列番号７３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＶＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＭＬＴＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号７４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＮＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号７８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項５８に記載の抗体。
  69. 前記ＶＨドメインは、配列番号８８のアミノ酸配列を含む、請求項６８に記載の抗体。
  70. 前記ＶＬドメインは、
    （ａ）ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号７９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号８０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号８１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号８２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項５８、６８、及び６９のいずれか１項に記載の抗体。
  71. 前記ＶＬドメインは、配列番号８９のアミノ酸配列を含む、請求項７０に記載の抗体。
  72. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号８８のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号８９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  73. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＮＹＸ１ＭＮ（配列番号９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１（Ｘ１は、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、またはＴｙｒである）、
    （ｂ）ＥＩＴＬＫＦＮＸ１ＹＸ２ＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１は、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｓｅｒ、またはＡｌａであり、Ｘ２は、ＳｅｒまたはＡｌａである）、
    （ｃ）ＲＮＹＧＸ１Ｘ２ＹＩＮＶ（配列番号９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３（Ｘ１は、ＡｓｐまたはＡｓｎであり、Ｘ２は、ＴｒｐまたはＰｈｅである）、
    （ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＫＦＧＸ１ＳＦＬＮ（配列番号１００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１（Ｘ１は、Ｍｅｔ、Ｖａｌ、またはＬｅｕである）、
    （ｅ）ＶＡＳＳＱＧＳ（配列番号１１３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＱＳＫＤＩＰＹＴ（配列番号１１４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  74. 前記結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＮＹＷＭＮ（配列番号１０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＥＩＴＬＫＦＮＮＹＳＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１０４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＮＹＧＤＷＹＩＮＶ（配列番号１０９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＫＦＧＭＳＦＬＮ（配列番号１１２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＶＡＳＳＱＧＳ（配列番号１１３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＱＳＫＤＩＰＹＴ（配列番号１１４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項７３に記載の抗体。
  75. 前記結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＮＹＷＭＮ（配列番号１０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＥＩＴＬＫＦＮＮＹＳＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１０４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＮＹＧＮＷＹＩＮＶ（配列番号１１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＫＦＧＭＳＦＬＮ（配列番号１１２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＶＡＳＳＱＧＳ（配列番号１１３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＱＳＫＤＩＰＹＴ（配列番号１１４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項７３に記載の抗体。
  76. 前記結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＮＹＷＭＮ（配列番号１０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＥＩＴＬＫＦＮＤＹＳＴＨＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１０５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＮＹＧＮＷＹＩＮＶ（配列番号１１０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＫＦＧＶＳＦＬＮ（配列番号１１５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＶＡＳＳＱＧＳ（配列番号１１３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＱＳＫＤＩＰＹＴ（配列番号１１４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項７３に記載の抗体。
  77. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号１３４のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１３５のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  78. 前記ＶＨドメインは、
    （ａ）ＥＶＫＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＭＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１１７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＶＲＱＳＰＥＫＧＬＥＷＭＡ（配列番号１１９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＦＳＩＳＲＤＤＳＫＳＴＶＹＬＱＭＮＮＬＲＡＥＤＴＧＩＹＹＣＡＲ（配列番号１２１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１２４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項７７に記載の抗体。
  79. 前記ＶＨドメインは、配列番号１３４のアミノ酸配列を含む、請求項７８に記載の抗体。
  80. 前記ＶＬドメインは、
    （ａ）ＤＩＶＬＴＱＳＰＴＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣ（配列番号１２６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＦＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＦ（配列番号１２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＮＩＨＰＶＥＥＤＤＴＡＭＹＦＣ（配列番号１３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項７７〜７９のいずれか１項に記載の抗体。
  81. 前記ＶＬドメインは、配列番号１３５のアミノ酸配列を含む、請求項８０に記載の抗体。
  82. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号１３４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号１３５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  83. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号１３６のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１３７のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  84. 前記ＶＨドメインは、
    （ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＡ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１２２）またはＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１２３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項８３に記載の抗体。
  85. 前記ＶＨドメインは、配列番号１３６のアミノ酸配列を含む、請求項８４に記載の抗体。
  86. 前記ＶＬドメインは、
    （ａ）ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣ（配列番号１２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＦ（配列番号１２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣ（配列番号１３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１３３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項８３〜８５のいずれか１項に記載の抗体。
  87. 前記ＶＬドメインは、配列番号１３７のアミノ酸配列を含む、請求項８６に記載の抗体。
  88. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号１３６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号１３７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  89. 前記ＶＨドメインは、
    （ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号１１８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＭＡ（配列番号１２０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１２２）またはＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＴＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号１２３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１２５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項８３に記載の抗体。
  90. 前記ＶＨドメインは、配列番号１３８のアミノ酸配列を含む、請求項８９に記載の抗体。
  91. 前記ＶＬドメインは、
    （ａ）ＤＩＶＭＴＱＳＰＤＳＬＡＶＳＬＧＥＲＡＴＩＮＣ（配列番号１２７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＱＰＰＫＬＬＩＦ（配列番号１２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＡＥＤＶＡＶＹＹＣ（配列番号１３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１３３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項８３、８９、及び９０のいずれか１項に記載の抗体。
  92. 前記ＶＬドメインは、配列番号１３９のアミノ酸配列を含む、請求項９１に記載の抗体。
  93. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号１３８のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号１３９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  94. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＫＦＷＭＮ（配列番号１５８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＥＩＲＬＸ１Ｘ２ＩＮＹＶＫＤＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１６１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１はＡｓｎまたはＳｅｒであり、Ｘ２はＳｅｒまたはＡｌａである）、
    （ｃ）ＲＮＹＧＮＷＦＦＥＩ（配列番号１６０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＲＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号１６４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＨＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１６６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  95. 前記結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＫＦＷＭＮ（配列番号１５８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＥＩＲＬＮＳＩＮＹＶＫＤＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１５９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＮＹＧＮＷＦＦＥＩ（配列番号１６０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＲＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号１６４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＨＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１６６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項９４に記載の抗体。
  96. 前記結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＫＦＷＭＮ（配列番号１５８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＥＩＲＬＳＳＩＮＹＶＫＤＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１６２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＮＹＧＮＷＦＦＥＩ（配列番号１６０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＲＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号１６４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＨＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１６６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項９４に記載の抗体。
  97. 前記結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＫＦＷＭＮ（配列番号１５８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＥＩＲＬＮＡＩＮＹＶＫＤＹＡＥＳＶＫＧ（配列番号１６３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＮＹＧＮＷＦＦＥＩ（配列番号１６０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＲＡＳＥＳＶＤＲＹＧＩＳＦＭＮ（配列番号１６４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＡＡＳＮＱＧＳ（配列番号１６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＨＳＫＥＶＰＹＴ（配列番号１６６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項９４に記載の抗体。
  98. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号１８３のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１８４のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  99. 前記ＶＨドメインは、
    （ａ）ＥＶＫＬＥＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＭＫＬＳＣＶＡＳＧＦＴＦＮ（配列番号１６７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＶＲＱＳＰＥＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１６８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＮＳＶＹＬＱＭＮＮＬＲＡＥＤＴＧＩＹＹＣＩＲ（配列番号１６９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＡＧＴＴＶＴＶＳＳ（配列番号１７０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項９８に記載の抗体。
  100. 前記ＶＨドメインは、配列番号１８３のアミノ酸配列を含む、請求項９９に記載の抗体。
  101. 前記ＶＬドメインは、
    （ａ）ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＳＬＡＶＳＬＧＱＲＡＴＩＳＣ（配列番号１７５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＦＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹ（配列番号１７６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＳＬＮＩＨＰＬＥＥＤＤＡＡＭＹＦＣ（配列番号１７７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１７８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項９８〜１００のいずれか１項に記載の抗体。
  102. 前記ＶＬドメインは、配列番号１８４のアミノ酸配列を含む、請求項１０１に記載の抗体。
  103. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号１８３のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号１８４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  104. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号１８５のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号１８６のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  105. 前記ＶＨドメインは、
    （ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＮ（配列番号１７１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡ（配列番号１７２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＶＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＩＲ（配列番号１７３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号１７４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項１０４に記載の抗体。
  106. 前記ＶＨドメインは、配列番号１８５のアミノ酸配列を含む、請求項１０５に記載の抗体。
  107. 前記ＶＬドメインは、
    （ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号１７９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＦＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号１８０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号１８１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号１８２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項１０４〜１０６のいずれか１項に記載の抗体。
  108. 前記ＶＬドメインは、配列番号１８６のアミノ酸配列を含む、請求項１０７に記載の抗体。
  109. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号１８５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号１８６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  110. 前記ＶＨドメインは、配列番号１８７のアミノ酸配列を含む、請求項１０５に記載の抗体。
  111. 前記ＶＬドメインは、配列番号１８８のアミノ酸配列を含む、請求項１０７に記載の抗体。
  112. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号１８７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号１８８のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  113. 前記ＶＨドメインは、配列番号１８９のアミノ酸配列を含む、請求項１０５に記載の抗体。
  114. 前記ＶＬドメインは、配列番号１９０のアミノ酸配列を含む、請求項１０７に記載の抗体。
  115. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号１８９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号１９０のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  116. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＤＹＮＭＮ（配列番号１９１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＤＩＮＰＫＸ１Ｘ２ＤＴＦＹＮＱＮＦＫＤ（配列番号１９２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１はＡｓｎまたはＳｅｒであり、Ｘ２はＧｌｙまたはＡｌａである）、
    （ｃ）ＨＹＹＹＧＳＳＹＧＧＦＶＹ（配列番号１９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＨＡＳＱＮＩＮＶＷＬＳ（配列番号１９７）のアミノ酸配列ＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＡＡＳＫＬＨＴ（配列番号１９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＱＧＱＳＹＰＬＴ（配列番号１９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  117. 前記結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＤＹＮＭＮ（配列番号１９１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＤＩＮＰＫＮＧＤＴＦＹＮＱＮＦＫＤ（配列番号１９３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＨＹＹＹＧＳＳＹＧＧＦＶＹ（配列番号１９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＨＡＳＱＮＩＮＶＷＬＳ（配列番号１９７）のアミノ酸配列ＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＡＡＳＫＬＨＴ（配列番号１９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＱＧＱＳＹＰＬＴ（配列番号１９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１１６に記載の抗体。
  118. 前記結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＤＹＮＭＮ（配列番号１９１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＤＩＮＰＫＳＧＤＴＦＹＮＱＮＦＫＤ（配列番号１９４）またはＤＩＮＰＫＮＡＤＴＦＹＮＱＮＦＫＤ（配列番号１９５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＨＹＹＹＧＳＳＹＧＧＦＶＹ（配列番号１９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＨＡＳＱＮＩＮＶＷＬＳ（配列番号１９７）のアミノ酸配列ＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＡＡＳＫＬＨＴ（配列番号１９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＱＧＱＳＹＰＬＴ（配列番号１９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１１６に記載の抗体。
  119. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号２１６のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２１７のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  120. 前記ＶＨドメインは、
    （ａ）ＥＶＬＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＮＡＳＧＹＴＦＳ（配列番号２００）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＳＩＧ（配列番号２０１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＫＡＴＬＴＩＤＫＳＳＳＴＶＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＴＡＭＹＹＣＡＲ（配列番号２０２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＡＡ（配列番号２０３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項１１９に記載の抗体。
  121. 前記ＶＨドメインは、配列番号２１６のアミノ酸配列を含む、請求項１２０に記載の抗体。
  122. 前記ＶＬドメインは、
    （ａ）ＤＩＱＭＮＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＤＴＩＴＩＴＣ（配列番号２０８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＹＱＱＫＡＧＮＮＰＫＬＬＩＹ（配列番号２０９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＶＰＳＲＦＴＧＳＧＳＧＴＬＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ（配列番号２１０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＳＧＴＮＬＥＬＫ（配列番号２１１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項１１９〜１２１のいずれか１項に記載の抗体。
  123. 前記ＶＬドメインは、配列番号２１７のアミノ酸配列を含む、請求項１２２に記載の抗体。
  124. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号２１６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号２１７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  125. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号２１８のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２１９のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  126. 前記ＶＨドメインは、
    （ａ）ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＳ（配列番号２０４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＳＩＧ（配列番号２０５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＡＴＬＴＩＤＫＳＴＳＴＡＹＬＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２０６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２０７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項１２５に記載の抗体。
  127. 前記ＶＨドメインは、配列番号２１８のアミノ酸配列を含む、請求項１２６に記載の抗体。
  128. 前記ＶＬドメインは、
    （ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２１２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＮＰＫＬＬＩＹ（配列番号２１３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２１４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２１５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項１２５〜１２７のいずれか１項に記載の抗体。
  129. 前記ＶＬドメインは、配列番号２１９のアミノ酸配列を含む、請求項１２８に記載の抗体。
  130. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号２１８のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号２１９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  131. 前記ＶＨドメインは、配列番号２２０のアミノ酸配列を含む、請求項１２６に記載の抗体。
  132. 前記ＶＬドメインは、配列番号２１９のアミノ酸配列を含む、請求項１２８に記載の抗体。
  133. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号２２０のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号２１９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  134. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＳＹＷＩＮ（配列番号２２２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＲＩＡＰＧＳＧＦＩＳＹＮＥＬＦＫＤ（配列番号２２３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＥＦＹＹＧＳＦＹＧＧＦＡＹ（配列番号２２４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＨＡＳＱＮＩＨＶＷＬＳ（配列番号２２５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＫＡＳＴＬＨＴ（配列番号２２６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＱＧＱＳＳＰＬＴ（配列番号２２７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  135. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号２３６のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２３７のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  136. 前記ＶＨドメインは、
    （ａ）ＱＶＱＬＱＱＳＧＮＤＬＶＫＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号２２８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＩＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧ（配列番号２２９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＫＡＴＬＴＶＤＴＳＳＳＴＡＹＩＱＬＧＳＬＳＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲ（配列番号２３０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号２３１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項１３５に記載の抗体。
  137. 前記ＶＨドメインは、配列番号２３６のアミノ酸配列を含む、請求項１３６に記載の抗体。
  138. 前記ＶＬドメインは、
    （ａ）ＤＩＱＭＮＱＳＰＳＳＬＳＡＳＬＧＤＴＩＴＩＴＣ（配列番号２３２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＮＩＰＫＬＬＩＹ（配列番号２３３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＶＰＳＲＦＮＧＳＧＳＧＴＧＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣ（配列番号２３４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＡＧＴＫＬＥＶＫ（配列番号２３５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項１３５〜１３７のいずれか１項に記載の抗体。
  139. 前記ＶＬドメインは、配列番号２３７のアミノ酸配列を含む、請求項１３８に記載の抗体。
  140. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号２３６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号２３７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  141. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号２４６のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２４７のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  142. 前記ＶＨドメインは、
    （ａ）ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴ（配列番号２３８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＩＧ（配列番号２３９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＶＴＩＴＲＤＴＳＴＳＴＡＹＬＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２４０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２４１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項１４１に記載の抗体。
  143. 前記ＶＨドメインは、配列番号２４６のアミノ酸配列を含む、請求項１４２に記載の抗体。
  144. 前記ＶＬドメインは、
    （ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２４２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２４３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２４４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２４５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項１４１〜１４３にいずれか１項に記載の抗体。
  145. 前記ＶＬドメインは、配列番号２４７のアミノ酸配列を含む、請求項１４４に記載の抗体。
  146. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号２４６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号２４７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  147. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＧＳＡＸ１Ｈ（配列番号２４８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１（Ｘ１はＭｅｔまたはＩｌｅである）、
    （ｂ）ＲＩＲＳＸ１Ｘ２ＮＸ３ＹＡＴＸ４ＹＸ５ＡＳＶＫＧ（配列番号２４９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２（Ｘ１はＡｒｇまたはＬｙｓであり、Ｘ２は、Ａｓｎ、Ｔｈｒ、またはＧｌｙであり、Ｘ３はＡｓｎまたはＳｅｒであり、Ｘ４はＡｌａまたはＧｌｕであり、Ｘ５はＡｌａまたはＡｓｐである）、
    （ｃ）Ｘ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４ＰＦＤＹ（配列番号２５０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３（Ｘ１はＬｅｕまたはＧｌｎであり、Ｘ２はＧｌｎ、Ｇｌｙ、またはＰｈｅであり、Ｘ３はＧｌｎまたはＧｌｙであり、Ｘ４はＰｒｏまたはＡｓｐである）、
    （ｄ）ＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＤ（配列番号２５１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２５２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＬＱＨＸ１Ｘ２ＹＰＸ３Ｔ（配列番号２５３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３（Ｘ１はＡｓｐまたはＳｅｒであり、Ｘ２はＳｅｒまたはＩｌｅであり、Ｘ３はＬｅｕまたはＰｒｏである）を含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  148. 前記結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＧＳＡＭＨ（配列番号２５４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＲＩＲＳＲＮＮＮＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧ（配列番号２５５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＬＱＱＰＰＦＤＹ（配列番号２５６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＤ（配列番号２５１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２５２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＬＱＨＤＳＹＰＬＴ（配列番号２５７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１４７に記載の抗体。
  149. 前記結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＧＳＡＩＨ（配列番号２５８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＲＩＲＳＲＴＮＮＹＡＴＥＹＤＡＳＶＫＧ（配列番号２５９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＬＧＱＰＰＦＤＹ（配列番号２６０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＤ（配列番号２５１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２５２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＬＱＨＳＩＹＰＰＴ（配列番号２６１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１４７に記載の抗体。
  150. 前記結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＧＳＡＭＨ（配列番号２５４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＲＩＲＳＫＧＮＳＹＡＴＡＹＡＡＳＶＫＧ（配列番号２６２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＱＦＧＤＰＦＤＹ（配列番号２６３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＲＡＳＱＧＩＲＮＤＬＤ（配列番号２５１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＡＡＳＳＬＱＳ（配列番号２５２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＬＱＨＤＳＹＰＬＴ（配列番号２５７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項１４７に記載の抗体。
  151. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号２８２のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２８３のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  152. 前記ＶＨドメインは、
    （ａ）ＱＶＱＬＶＱＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２６４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＧ（配列番号２６７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＲＴＴＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２６９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項１５１に記載の抗体。
  153. 前記ＶＨドメインは、配列番号２８２のアミノ酸配列を含む、請求項１５２に記載の抗体。
  154. 前記ＶＬドメインは、
    （ａ）ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２７３）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹ（配列番号２７６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＶＰＳＲＦＮＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２７７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２８０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項１５１〜１５３のいずれか１項に記載の抗体。
  155. 前記ＶＬドメインは、配列番号２８３のアミノ酸配列を含む、請求項１５４に記載の抗体。
  156. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号２８２のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号２８３のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  157. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号２８４のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２８５のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  158. 前記ＶＨドメインは、
    （ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＤＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２６５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＶＲＱＡＳＧＫＧＬＥＷＶＧ（配列番号２６７）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＦＴＩＳＲＤＤＳＫＲＴＡＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＴＲ（配列番号２７０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項１５７に記載の抗体。
  159. 前記ＶＨドメインは、配列番号２８４のアミノ酸配列を含む、請求項１５８に記載の抗体。
  160. 前記ＶＬドメインは、
    （ａ）ＡＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２７４）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹ（配列番号２７６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２７８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２８１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項１５７〜１５９のいずれか１項に記載の抗体。
  161. 前記ＶＬドメインは、配列番号２８５のアミノ酸配列を含む、請求項１６０に記載の抗体。
  162. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号２８４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号２８５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  163. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号２８６のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、（ｂ）配列番号２８７のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  164. 前記ＶＨドメインは、
    （ａ）ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２６６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧ（配列番号２６８）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＲＦＳＩＳＲＤＤＳＫＲＴＡＹＬＱＭＳＳＬＫＴＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２７１）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ３、及び
    （ｄ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７２）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｈ４を更に含む、請求項１６３に記載の抗体。
  165. 前記ＶＨドメインは、配列番号２８６のアミノ酸配列を含む、請求項１６４に記載の抗体。
  166. 前記ＶＬドメインは、
    （ａ）ＡＩＲＩＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２７５）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ１、
    （ｂ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＲＬＩＹ（配列番号２７６）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ２、
    （ｃ）ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２７９）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ３、及び
    （ｄ）ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２８０）のアミノ酸配列を含むＦＲ−Ｌ４を更に含む、請求項１６３〜１６５のいずれか１項に記載の抗体。
  167. 前記ＶＬドメインは、配列番号２８７のアミノ酸配列を含む、請求項１６６に記載の抗体。
  168. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号２８６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号２８７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む結合ドメインを含む、前記単離抗体。
  169. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号２８８のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、及び（ｂ）配列番号２８９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記単離抗体。
  170. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号２９０のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、及び（ｂ）配列番号２９１のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記単離抗体。
  171. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号２９２のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、及び（ｂ）配列番号２９３のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記単離抗体。
  172. ＩＬ−３３に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号２９４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖、及び（ｂ）配列番号２９５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記単離抗体。
  173. 前記抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に特異的に結合する、請求項３７〜１７２のいずれか１項に記載の抗体。
  174. 前記抗体は、ヒト及びカニクイザルの両方のＩＬ−３３に特異的に結合する、請求項１７３に記載の抗体。
  175. 前記抗体は、ヒト及びカニクイザルの両方のＩＬ−３３に、約１ｎＭ以下のＫＤで特異的に結合する、請求項１７４に記載の抗体。
  176. 前記抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１００ｆＭ〜約１ｎＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１７５に記載の抗体。
  177. 前記抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約２００ｐＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１７６に記載の抗体。
  178. 前記抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１５ｐＭ〜約１８０ｐＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１７７に記載の抗体。
  179. 前記抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１５ｐＭ〜約１４０ｐＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１７８に記載の抗体。
  180. 前記抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、約１００ｆＭ〜約１ｎＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１７５に記載の抗体。
  181. 前記抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１８０に記載の抗体。
  182. 前記抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、約１００ｐＭ〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１８１に記載の抗体。
  183. 前記抗体は、カニクイザルＩＬ−３３に、約１２５ｐＭ〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１８２に記載の抗体。
  184. 前記抗体は、ヒト及びカニクイザルの両方のＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約５００ｐＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１７６または１８１に記載の抗体。
  185. 前記抗体は、ヒトＩＬ−３３に、約１ｐＭ〜約２００ｐＭのＫＤで特異的に結合する、請求項１８４に記載の抗体。
  186. 前記抗体は、ＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を阻害することができる、請求項１〜７または３７〜１８５のいずれか１項に記載の抗体。
  187. 前記阻害は、細胞に基づく遮断アッセイを用いて測定される、請求項１８６に記載の抗体。
  188. 前記抗体は、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約０．００１μｇ／ｍｌ〜約０．５μｇ／ｍｌの９０％阻害濃度（ＩＣ９０）で阻害する、請求項１８７に記載の抗体。
  189. 前記ＩＣ９０は、約０．００２μｇ／ｍｌ〜約０．２５μｇ／ｍｌである、請求項１８８に記載の抗体。
  190. 前記ＩＣ９０は、約０．１７μｇ／ｍｌである、請求項１８９に記載の抗体。
  191. 前記ＩＣ９０は、約０．００４μｇ／ｍｌである、請求項１８９に記載の抗体。
  192. 前記抗体は、ヒトＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約８００ｆＭ〜約１０ｐＭのＩＣ５０で阻害する、請求項１〜７または３７〜１９１のいずれか１項に記載の抗体。
  193. 前記ＩＣ５０は、約１ｐＭ〜約５ｐＭである、請求項１９２に記載の抗体。
  194. 前記ＩＣ５０は、約２．５ｐＭである、請求項１９３に記載の抗体。
  195. 前記抗体は、カニクイザルＩＬ−３３とＩＬ−３３受容体との結合を、約１ｎＭ〜約５ｎＭのＩＣ５０で阻害する、請求項１〜７または３７〜１９４のいずれか１項に記載の抗体。
  196. 前記ＩＣ５０は、約４ｎＭである、請求項１９５に記載の抗体。
  197. 前記抗体は、アグリコシル化部位変異を含む、請求項１〜１９６のいずれか１項に記載の抗体。
  198. 前記抗体は、モノクリップ、ヒト、ヒト化、またはキメラである、請求項１〜１９８のいずれか１項に記載の抗体。
  199. 前記抗体は、ＩＬ−３３に結合する抗体フラグメントである、請求項１〜１９８のいずれか１項に記載の抗体。
  200. 前記抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２フラグメントからなる群から選択される、請求項１９９に記載の抗体。
  201. 前記抗体は、全長抗体である、請求項１〜１９８のいずれか１項に記載の抗体。
  202. 前記抗体は、ＩｇＧ抗体である、請求項２０１に記載の抗体。
  203. 前記ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ１抗体である、請求項２０２に記載の抗体。
  204. 前記ＩｇＧ抗体は、ＩｇＧ４抗体である、請求項２０２に記載の抗体。
  205. 前記ＩｇＧ４抗体は、ヒンジ領域に変異を含む、請求項２０４に記載の抗体。
  206. 前記変異は、置換変異である、請求項２０５に記載の抗体。
  207. 前記置換変異は、アミノ酸残基Ｓ２２８（ＥＵ番号付け）におけるものである、請求項２０６に記載の抗体
  208. 前記置換変異は、Ｓ２２８Ｐ変異である、請求項２０７に記載の抗体。
  209. 前記抗体は、単一特異性抗体である、請求項１〜２０８にいずれか１項に記載の抗体。
  210. 前記抗体は、多重特異性抗体である、請求項１〜２０８のいずれか１項に記載の抗体。
  211. 前記抗体は、二重特異性抗体である、請求項２１０に記載の抗体。
  212. 前記二重特異性抗体は、第２の生物学的分子に結合する第２の結合ドメインを含み、前記第２の生物学的分子は、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−５（ＩＬ−５）、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）、Ｄ因子、ＨｔｒＡ１、ＶＥＧＦ、及びＶＥＧＦ受容体からなる群から選択される、請求項２１１に記載の抗体。
  213. 前記第２の生物学的分子は、Ｄ因子である、請求項２１２に記載の抗体。
  214. 前記第２の生物学的分子は、ＨｔｒＡ１である、請求項２１２に記載の抗体。
  215. 前記第２の生物学的分子は、ＶＥＧＦである、請求項２１２に記載の抗体。
  216. 前記第２の生物学的分子は、ＩＬ−１３である、請求項２１２に記載の抗体。
  217. 前記第２の結合ドメインは、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＡＹＳＶＮ（配列番号２９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＭＩＷＧＤＧＫＩＶＹＮＳＡＬＫＳ（配列番号２９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＤＧＹＹＰＹＡＭＤＮ（配列番号２９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＲＡＳＫＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号３００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＱＮＮＥＤＰＲＴ（配列番号３０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、請求項２１６に記載の抗体。
  218. 前記第２の結合ドメインは、（ａ）配列番号３０２のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、（ｂ）配列番号３０３のアミノ酸配列に少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン、または（ｃ）（ａ）にあるようなＶＨドメイン及び（ｂ）にあるようなＶＬドメインを含む、請求項２１７に記載の抗体。
  219. 前記ＶＨドメインは、配列番号３０２のアミノ酸配列を含む、請求項２１８に記載の抗体。
  220. 前記ＶＬドメインは、配列番号３０３のアミノ酸配列を含む、請求項２１８に記載の抗体。
  221. ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＳＦＳＭＳ（配列番号１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＴＩＳＧＧＫＴＦＴＤＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＡＮＹＧＮＷＦＦＥＶ（配列番号３）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＲＡＳＥＳＶＡＫＹＧＬＳＬＬＮ（配列番号４）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＡＡＳＮＲＧＳ（配列番号５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＱＳＫＥＶＰＦＴ（配列番号６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の結合ドメインと、
    以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＡＹＳＶＮ（配列番号２９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＭＩＷＧＤＧＫＩＶＹＮＳＡＬＫＳ（配列番号２９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＤＧＹＹＰＹＡＭＤＮ（配列番号２９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＲＡＳＫＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号３００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＱＮＮＥＤＰＲＴ（配列番号３０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の結合ドメインと、を含む、前記単離抗体。
  222. ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＳＳＩＦＹＷＧ（配列番号６５）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＳＩＹＹＳＧＲＴＹＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号６６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＡＧＧＬＹＮＷＮＤＥＳＦＳＦＹＭＤＶ（配列番号６８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＲＡＳＱＳＦＳＳＳＹＬＡ（配列番号６９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号７０）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＱＹＤＲＳＰＬＴ（配列番号７１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の結合ドメインと、
    以下の６つのＨＶＲ：
    （ａ）ＡＹＳＶＮ（配列番号２９６）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、
    （ｂ）ＭＩＷＧＤＧＫＩＶＹＮＳＡＬＫＳ（配列番号２９７）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、
    （ｃ）ＤＧＹＹＰＹＡＭＤＮ（配列番号２９８）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、
    （ｄ）ＲＡＳＫＳＶＤＳＹＧＮＳＦＭＨ（配列番号２９９）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、
    （ｅ）ＬＡＳＮＬＥＳ（配列番号３００）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び
    （ｆ）ＱＱＮＮＥＤＰＲＴ（配列番号３０１）のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む、ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の結合ドメインと、を含む、前記単離抗体。
  223. ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号３７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ａ）配列番号３０２のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号３０３のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む、前記単離抗体。
  224. ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、（ａ）配列番号８４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号８５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の結合ドメインと、（ａ）配列番号３０２のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）配列番号３０３のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の結合ドメインとを含む、前記単離抗体。
  225. ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、
    （ａ）ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の重鎖及び第１の軽鎖（前記第１の重鎖は、配列番号３０６のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、第１の軽鎖は、配列番号３０７のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに
    （ｂ）ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の重鎖及び第２の軽鎖（前記第２の重鎖は、配列番号３０４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、第２の軽鎖は、配列番号３０５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む、前記単離抗体。
  226. ＩＬ−３３及びＩＬ−１３の両方に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、
    （ａ）ＩＬ−３３に特異的に結合する第１の重鎖及び第１の軽鎖（前記第１の重鎖は、配列番号３０８のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、第１の軽鎖は、配列番号３０９のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに
    （ｂ）ＩＬ−１３に特異的に結合する第２の重鎖及び第２の軽鎖（前記第２の重鎖は、配列番号３０４のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、第２の軽鎖は、配列番号３０５のアミノ酸配列に少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む、前記単離抗体。
  227. 前記抗体は、抗原結合抗体フラグメントである、請求項２１０〜２２６のいずれか１項に記載の抗体。
  228. 前記抗原結合抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及び（Ｆａｂ’）２フラグメントからなる群から選択される、請求項２２７に記載の抗体。
  229. 前記抗原結合抗体フラグメントは、Ｆａｂ、または（Ｆａｂ’）２フラグメントである、請求項２２８に記載の抗体。
  230. 請求項１〜２２９のいずれか１項に記載の抗体をコードする単離核酸。
  231. 請求項２３０に記載の単離核酸を含む、ベクター。
  232. 請求項２３１に記載のベクターを含む、宿主細胞。
  233. 前記宿主細胞は、哺乳動物細胞である、請求項２３２に記載の宿主細胞。
  234. 前記哺乳動物細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、請求項２３３に記載の宿主細胞。
  235. 前記宿主細胞は、原核細胞である、請求項２３２に記載の宿主細胞。
  236. 前記原核細胞は、Ｅ．ｃｏｉｌである、請求項２３５に記載の宿主細胞。
  237. 請求項２３２に記載の宿主細胞を培養培地で培養することを含む、請求項１〜２２９のいずれか１項に記載の抗体の産生方法。
  238. 前記方法は、前記宿主細胞または前記培養培地から前記抗体を回収することを更に含む、請求項２３７に記載の方法。
  239. 請求項１〜２２９のいずれか１項に記載の抗体を含む、組成物。
  240. 薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤を更に含む、請求項２３９に記載の組成物。
  241. 前記組成物は、薬学的組成物である、請求項２４０に記載の組成物。
  242. 前記薬学的組成物は、ＳＴ２結合アンタゴニスト、Ｄ因子結合アンタゴニスト、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニスト、ＶＥＧＦアンタゴニスト、トリプターゼ−ベータ結合アンタゴニスト、Ｔｈ２細胞上に発現される化学誘引物質受容体相同分子（ＣＲＴＨ２）結合アンタゴニスト、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）結合アンタゴニスト、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）結合アンタゴニスト、ＪＡＫ１アンタゴニスト、及び／またはインターロイキン−５（ＩＬ−５）結合アンタゴニストを更に含む、請求項２３９〜２４１のいずれか１項に記載の組成物。
  243. 前記薬学的組成物は、Ｄ因子結合アンタゴニストを含む、請求項２４２に記載の組成物。
  244. 前記Ｄ因子結合アンタゴニストは、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項２４３に記載の組成物。
  245. 前記薬学的組成物は、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストを含む、請求項２４２に記載の組成物。
  246. 前記ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストは、抗ＨｔｒＡ１抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項２４５に記載の組成物。
  247. 前記薬学的組成物は、ＶＥＧＦアンタゴニストを含む、請求項２４２に記載の組成物。
  248. 前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項２４７に記載の組成物。
  249. 医薬品として使用するための請求項１〜２２９のいずれか１項に記載の抗体。
  250. ＩＬ−３３媒介性障害の治療に使用するための請求項１〜２２９のいずれか１項に記載の抗体。
  251. 前記ＩＬ−３３媒介性障害は、炎症性状態、免疫障害、線維性障害、好酸球性障害、感染症、疼痛、中枢神経系障害、固形腫瘍、及び眼科障害からなる群から選択される、請求項２５０に記載の抗体。
  252. 前記炎症性状態は、喘息、敗血症、敗血症性ショック、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、リウマチ性関節炎、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される、請求項２５１に記載の抗体。
  253. 前記免疫障害は、喘息、リウマチ性関節炎、アレルギー、アナフィラキシー、アナフィラキシーショック、アレルギー性鼻炎、乾癬、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、糖尿病、及び肝疾患からなる群から選択される、請求項２５１に記載の抗体。
  254. 前記線維性疾患は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である、請求項２５１に記載の抗体。
  255. 前記好酸球性障害は、好酸球関連胃腸障害（ＥＧＩＤ）である、請求項２５１に記載の抗体。
  256. 前記ＥＧＩＤは、好酸球性食道炎である、請求項２５５に記載の抗体。
  257. 前記感染症は、蠕虫感染症、原虫感染症、またはウイルス感染症である、請求項２５１に記載の抗体。
  258. 前記原虫感染症は、大形リーシュマニア感染症である、請求項２５７に記載の抗体。
  259. 前記ウイルス感染症は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症またはインフルエンザウイルス感染症である、請求項２５７に記載の抗体。
  260. 前記疼痛は、炎症性疼痛である、請求項２５１に記載の抗体。
  261. 前記中枢神経系障害は、アルツハイマー病である、請求項２５１に記載の抗体。
  262. 前記固形腫瘍は、乳房腫瘍、結腸腫瘍、前立腺腫瘍、肺腫瘍、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、膵臓腫瘍、胃腫瘍、腸腫瘍、脳腫瘍、骨腫瘍、及び皮膚腫瘍からなる群から選択される、請求項２５１に記載の抗体。
  263. 前記眼科障害は、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、眼の網膜症、ポリープ状脈絡膜血管症（ＰＣＶ）、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、網膜剥離、緑内障、ブドウ膜炎、網膜色素変性、レーバー先天黒内障、シュタルガルト病、外傷性眼損傷、及び結膜炎からなる群から選択される、請求項２５１に記載の抗体。
  264. 前記ＡＭＤは、滲出型ＡＭＤ、萎縮型ＡＭＤ、または地図状萎縮（ＧＡ）である、請求項２６３に記載の抗体。
  265. 前記ＡＭＤは、中間型ＡＭＤまたは進行型ＡＭＤである、請求項２６３に記載の抗体。
  266. 前記眼の網膜症は、糖尿病性網膜症（ＤＲ）または未熟児網膜症（ＲＯＰ）である、請求項２６３に記載の抗体。
  267. 前記網膜症は、高所ＤＲである、請求項２６３に記載の抗体。
  268. 前記結膜炎は、感染性結膜炎または非感染性結膜炎である、請求項２６３に記載の抗体。
  269. 前記結膜炎は、アレルギー性結膜炎である、請求項２６３に記載の抗体。
  270. ＩＬ−３３媒介性障害を治療するための医薬品の製造における、請求項１〜２２９のいずれか１項に記載の抗体の使用。
  271. 前記ＩＬ−３３媒介性障害は、炎症性状態、免疫障害、線維性障害、好酸球性障害、感染症、疼痛、中枢神経系障害、固形腫瘍、及び眼科障害からなる群から選択される、請求項２７０に記載の使用。
  272. 前記炎症性状態は、喘息、敗血症、敗血症性ショック、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、リウマチ性関節炎、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される、請求項２７１に記載の使用。
  273. 前記免疫障害は、喘息、リウマチ性関節炎、アレルギー、アナフィラキシー、アナフィラキシーショック、アレルギー性鼻炎、乾癬、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、糖尿病、及び肝疾患からなる群から選択される、請求項２７１に記載の使用。
  274. 前記線維性疾患は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である、請求項２７１に記載の使用。
  275. 前記好酸球性障害は、好酸球関連胃腸障害（ＥＧＩＤ）である、請求項２７１に記載の使用。
  276. 前記ＥＧＩＤは、好酸球性食道炎である、請求項２７５に記載の使用。
  277. 前記感染症は、蠕虫感染症、原虫感染症、またはウイルス感染症である、請求項２７１に記載の使用。
  278. 前記原虫感染症は、大形リーシュマニア感染症である、請求項２７７に記載の使用。
  279. 前記ウイルス感染症は、ＲＳＶ感染症またはインフルエンザウイルス感染症である、請求項２７７に記載の使用。
  280. 前記疼痛は、炎症性疼痛である、請求項２７１に記載の使用。
  281. 前記中枢神経系障害は、アルツハイマー病である、請求項２７１に記載の使用。
  282. 前記固形腫瘍は、乳房腫瘍、結腸腫瘍、前立腺腫瘍、肺腫瘍、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、膵臓腫瘍、胃腫瘍、腸腫瘍、脳腫瘍、骨腫瘍、及び皮膚腫瘍からなる群から選択される、請求項２７１に記載の使用。
  283. 前記眼科障害は、ＡＭＤ、眼の網膜症、ＰＣＶ、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、網膜剥離、緑内障、ブドウ膜炎、網膜色素変性、レーバー先天黒内障、シュタルガルト病、外傷性眼損傷、及び結膜炎からなる群から選択される、請求項２７１に記載の使用。
  284. 前記ＡＭＤは、滲出型ＡＭＤ、萎縮型ＡＭＤ、またはＧＡである、請求項２８３に記載の使用。
  285. 前記ＡＭＤは、中間型ＡＭＤまたは進行型ＡＭＤである、請求項２８３に記載の使用。
  286. 前記網膜症は、ＤＲまたはＲＯＰである、請求項２８３に記載の使用。
  287. 前記網膜症は、高所ＤＲである、請求項２８３に記載の使用。
  288. 前記結膜炎は、感染性結膜炎または非感染性結膜炎である、請求項２８３に記載の使用。
  289. 前記結膜炎は、アレルギー性結膜炎である、請求項２８３に記載の使用。
  290. 前記医薬品は、ＳＴ２結合アンタゴニスト、Ｄ因子結合アンタゴニスト、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニスト、ＶＥＧＦアンタゴニスト、トリプターゼ−ベータ結合アンタゴニスト、Ｔｈ２細胞上に発現される化学誘引物質受容体相同分子（ＣＲＴＨ２）結合アンタゴニスト、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）結合アンタゴニスト、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）結合アンタゴニスト、ＪＡＫ１アンタゴニスト、及び／またはインターロイキン−５（ＩＬ−５）結合アンタゴニストと組み合わせて使用するために製剤化されている、請求項２７０〜２８９のいずれか１項に記載の使用。
  291. 前記医薬品は、Ｄ因子結合アンタゴニストと組み合わせて使用するために製剤化される、請求項２９０に記載の使用。
  292. 前記Ｄ因子結合アンタゴニストは、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項２９１に記載の使用。
  293. 前記医薬品は、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストと組み合わせて使用するために製剤化される、請求項２９０に記載の使用。
  294. 前記ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストは、抗ＨｔｒＡ１抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項２９３に記載の使用。
  295. 前記医薬品は、ＶＥＧＦアンタゴニストと組み合わせて使用するために製剤化される、請求項２９０に記載の使用。
  296. 前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項２９５に記載の使用。
  297. ＧＡを治療するための医薬品の製造における、ＩＬ−３３及びＤ因子の両方に特異的に結合する二重特異性抗体またはその抗原結合抗体フラグメントの使用。
  298. 前記抗原結合抗体フラグメントは、（Ｆａｂ’）２フラグメントである、請求項２９７に記載の使用。
  299. ＧＡを治療するための医薬品の製造における請求項１〜２２９のいずれか１項に記載の抗体の使用であって、前記医薬品は、Ｄ因子結合アンタゴニストと組み合わせて使用するために製剤化される、前記使用。
  300. 前記Ｄ因子結合アンタゴニストは、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項２９９に記載の使用。
  301. ＧＡ、ＡＭＤ、ＤＲ、ＰＣＶ、またはＲＯＰを治療するための医薬品の製造における、ＩＬ−３３及びＨｔｒＡ１の両方に特異的に結合する二重特異性抗体またはその抗原結合抗体フラグメントの使用。
  302. 前記抗原結合抗体フラグメントは、（Ｆａｂ’）２フラグメントである、請求項３０１に記載の使用。
  303. ＧＡ、ＡＭＤ、ＤＲ、ＰＣＶ、またはＲＯＰを治療するための医薬品の製造における請求項１〜２２９のいずれか１項に記載の抗体の使用であって、前記医薬品は、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストと組み合わせて使用するために製剤化される、前記使用。
  304. 前記ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストは、抗ＨｔｒＡ１抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項３０３に記載の使用。
  305. 滲出型ＡＭＤを治療するための医薬品の製造における、ＩＬ−３３及びＶＥＧＦの両方に特異的に結合する二重特異性抗体またはその抗原結合抗体フラグメントの使用。
  306. 前記抗原結合抗体フラグメントは、（Ｆａｂ’）２フラグメントである、請求項３０５に記載の使用。
  307. 滲出型ＡＭＤを治療するための医薬品の製造における請求項１〜２２９のいずれか１項に記載の抗体の使用であって、前記医薬品は、ＶＥＧＦアンタゴニストと組み合わせて使用するために製剤化される、前記使用。
  308. 前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項３０７に記載の使用。
  309. ＩＬ−３３媒介性障害の治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記方法は、前記対象に、治療有効量の請求項１〜２２９のいずれか１項に記載の抗体を投与することを含む、前記方法。
  310. 前記ＩＬ−３３媒介性障害は、炎症性状態、免疫障害、線維性障害、好酸球性障害、感染症、疼痛、中枢神経系障害、固形腫瘍、及び眼科障害からなる群から選択される、請求項３０９に記載の方法。
  311. 前記炎症性状態は、喘息、敗血症、敗血症性ショック、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、リウマチ性関節炎、及び慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）からなる群から選択される、請求項３１０に記載の方法。
  312. 前記免疫障害は、喘息、リウマチ性関節炎、アレルギー、アナフィラキシー、アナフィラキシーショック、アレルギー性鼻炎、乾癬、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、糖尿病、及び肝疾患からなる群から選択される、請求項３１０に記載の方法。
  313. 前記線維性疾患は、特発性肺線維症（ＩＰＦ）である、請求項３１０に記載の方法。
  314. 前記好酸球性障害は、好酸球関連胃腸障害（ＥＧＩＤ）である、請求項３１０に記載の方法。
  315. 前記ＥＧＩＤは、好酸球性食道炎である、請求項３１４に記載の方法。
  316. 前記感染症は、蠕虫感染症、原虫感染症、またはウイルス感染症である、請求項３１０に記載の方法。
  317. 前記原虫感染症は、大形リーシュマニア感染症である、請求項３１６に記載の方法。
  318. 前記ウイルス感染症は、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染症またはインフルエンザウイルス感染症である、請求項３１６に記載の方法。
  319. 前記疼痛は、炎症性疼痛である、請求項３１０に記載の方法。
  320. 前記固形腫瘍は、乳房腫瘍、結腸腫瘍、前立腺腫瘍、肺腫瘍、腎臓腫瘍、肝臓腫瘍、膵臓腫瘍、胃腫瘍、腸腫瘍、脳腫瘍、骨腫瘍、及び皮膚腫瘍からなる群から選択される、請求項３１０に記載の方法。
  321. 前記眼科障害は、ＡＭＤ、眼の網膜症、ＰＣＶ、糖尿病性黄斑浮腫、ドライアイ疾患、ベーチェット病、網膜剥離、緑内障、ブドウ膜炎、網膜色素変性、レーバー先天黒内障、シュタルガルト病、外傷性眼損傷、及び結膜炎からなる群から選択される、請求項３１０に記載の方法。
  322. 前記ＡＭＤは、滲出型ＡＭＤ、萎縮型ＡＭＤ、またはＧＡである、請求項３２１に記載の方法。
  323. 前記ＡＭＤは、中間型ＡＭＤまたは進行型ＡＭＤである、請求項３２１に記載の方法。
  324. 前記網膜症は、ＤＲまたはＲＯＰである、請求項３２１に記載の方法。
  325. 前記網膜症は、高所ＤＲである、請求項３２１に記載の方法。
  326. 前記結膜炎は、感染性結膜炎または非感染性結膜炎である、請求項３２１に記載の方法。
  327. 前記結膜炎は、アレルギー性結膜炎である、請求項３２１に記載の方法。
  328. ＳＴ２結合アンタゴニスト、Ｄ因子結合アンタゴニスト、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニスト、ＶＥＧＦアンタゴニスト、トリプターゼ−ベータ結合アンタゴニスト、Ｔｈ２細胞上に発現される化学誘引物質受容体相同分子（ＣＲＴＨ２）結合アンタゴニスト、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）結合アンタゴニスト、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）結合アンタゴニスト、ＪＡＫ１アンタゴニスト、及び／またはインターロイキン−５（ＩＬ−５）結合アンタゴニストを前記対象に投与することを更に含む、請求項３０９〜３２７のいずれか１項に記載の方法。
  329. 前記方法は、Ｄ因子結合アンタゴニストを前記対象に投与することを更に含む、請求項３２８に記載の方法。
  330. 前記Ｄ因子結合アンタゴニストは、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項３２９に記載の方法。
  331. 前記方法は、ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストを前記対象に投与することを更に含む、請求項３２８に記載の方法。
  332. 前記ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストは、抗ＨｔｒＡ１抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項３３１に記載の方法。
  333. 前記方法は、ＶＥＧＦアンタゴニストを前記対象に投与することを更に含む、請求項３２８に記載の方法。
  334. 前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項３３３に記載の使用。
  335. ＧＡの治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記方法は、前記対象に、ＩＬ−３３及びＤ因子の両方に特異的に結合する治療有効量の二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む、前記方法。
  336. 前記抗原結合抗体フラグメントは、（Ｆａｂ’）２フラグメントである、請求項３３５に記載の方法。
  337. ＧＡの治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記方法は、前記対象に、治療有効量の請求項１〜２２９のいずれか１項に記載の抗体及び治療有効量のＤ因子結合アンタゴニストを投与することを含む、前記方法。
  338. 前記Ｄ因子結合アンタゴニストは、抗Ｄ因子抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項３３７に記載の方法。
  339. ＧＡ、ＡＭＤ、ＤＲ、ＰＣＶ、またはＲＯＰの治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記方法は、前記対象に、ＩＬ−３３及びＨｔｒＡ１の両方に特異的に結合する治療有効量の二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む、前記方法。
  340. 前記抗原結合抗体フラグメントは、（Ｆａｂ’）２フラグメントである、請求項３３９に記載の方法。
  341. ＧＡ、ＡＭＤ、ＤＲ、ＰＣＶ、またはＲＯＰの治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記方法は、前記対象に、治療有効量の請求項１〜２２９のいずれか１項に記載の抗体及び治療有効量のＨｔｒＡ１結合アンタゴニストを投与することを含む、前記方法。
  342. 前記ＨｔｒＡ１結合アンタゴニストは、抗ＨｔｒＡ１抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項３４１に記載の方法。
  343. 滲出型ＡＭＤの治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記方法は、前記対象に、ＩＬ−３３及びＶＥＧＦの両方に特異的に結合する治療有効量の二重特異性抗体またはその抗原結合フラグメントを投与することを含む、前記方法。
  344. 前記抗原結合抗体フラグメントは、（Ｆａｂ’）２フラグメントである、請求項３４３に記載の方法。
  345. 滲出型ＡＭＤの治療を、それを必要とする対象において行う方法であって、前記方法は、前記対象に、治療有効量の請求項１〜２２９のいずれか１項に記載の抗体及び治療有効量のＶＥＧＦアンタゴニストを投与することを含む、前記方法。
  346. 前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、抗ＶＥＧＦ抗体またはその抗原結合フラグメントである、請求項３４５に記載の方法。
  347. 前記抗体は、皮下、静脈内、筋肉内、局所、経口、経皮、腹腔内、眼窩内、埋め込み、吸入、くも膜内（ｉｎｔｒａｔｈｅｃａｌｌｙ）、心室内、鼻腔内、硝子体内、眼球内、眼窩周囲、結膜、結膜下、テノン嚢下、前房内、網膜下、眼球後、または、毛細胆管内（ｉｎｔｒａｃａｎａｌｉｃｕｌａｒｌｙ）で投与される、請求項３０９〜３４６のいずれか１項に記載の方法。
  348. 前記対象は、ヒトである、請求項３０９〜３４７のいずれか１項に記載の方法。
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