CN115768794A - 抗trem2抗体的使用方法 - Google Patents

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Abstract

本公开总体涉及抗TREM2抗体在有需要的个体中预防疾病、降低疾病风险或治疗疾病的用途。

Description

抗TREM2抗体的使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求于2020年2月24日提交的美国临时申请62/980,929的权益，所述临时申请特此通过引用整体并入。
技术领域
本公开涉及抗TREM2抗体的治疗用途。
ASCII文本文件的序列表的提交
以下提交的ASCII文本文件的内容通过引用整体并入本文：计算机可读形式(CRF)的序列表(文件名：735022003440SEQLIST.TXT，记录日期：2021年2月23日，大小：108KB)。
发明背景
多发性硬化(MS)是一种中枢神经系统(CNS)的慢性脱髓鞘疾病，其发病机制涉及炎症和神经退行性过程。MS的病理特点是在白质和灰质中形成脱髓鞘病变(Lassmann,Bruck等人,2007)。脱髓鞘期间的少突胶质细胞(OL)损失后接着是髓鞘再生，主要由分化为成熟OL的少突胶质前体细胞(OPC)维持。在MS中，OL的生成受损导致脱髓鞘和髓鞘再生之间的不平衡。MS中髓鞘再生的缺乏最终导致轴突损伤，其临床表现为神经功能障碍(Dulamea(2017)Adv Exp Med Biol,958:91-127)。
驻留的小神经胶质细胞和浸润的单核细胞/巨噬细胞被认为在脱髓鞘病变中发挥双重作用，这取决于病变形成的阶段。一方面，它们可能促进髓磷脂损伤和病变扩大；另一方面，它们可能通过清除髓磷脂碎片、抑制炎症和分泌再生因子来支持OL的生成并促进此类病变的髓鞘再生(Kotter,Li等人,2006；Lampron,Larochelle等人,2015；Franklin和French-Constant 2017；Voet,Prinz等人,2019)。TREM2是CNS中的小胶质细胞功能的重要调节剂(Cantoni,Bollman等人,2015；Poliani,Wang等人,2015；Kiialainen等人,2005；Schmid等人,2002)。TREM2的突变与神经退行性疾病有关，所述疾病例如Nasu-Hakola病(NHD)，这是一种罕见的遗传病症，其特征在于脑中的髓磷脂和轴突缺失(Klunemann,Ridha等人,2005)；阿尔茨海默病(Alzheimer's disease)；额颞叶痴呆；帕金森病(Parkinson'sdisease)；和肌萎缩侧索硬化(Guerreiro,Wojtas等人,2012,Jonsson,Stefansson等人,2012,Rayaprolu,Mullen等人,2013,Cady,Koval等人,2014)。
目前对脱髓鞘疾病如MS的治疗靶向炎性疾病成分，从而降低发作频率和严重程度。然而，目前没有可用于再生髓磷脂和阻止疾病进展的疗法。因此，本领域需要促进MS和其他脱髓鞘疾病中的髓鞘再生的治疗。
本文引用的所有参考文献，包括专利申请和出版物，均特此通过引用整体并入。
发明内容
本公开总体涉及治疗患有脱髓鞘疾病的个体的方法，所述方法包括向所述个体施用与TREM2蛋白结合的抗体，其中所述抗体是激动剂。
在一个方面，本文提供了一种用于治疗或预防中枢神经系统(CNS)脱髓鞘疾病的方法，所述方法包括向有需要的个体施用治疗有效量的与TREM2蛋白结合的激动剂抗体。在一些实施方案中，所述抗体促进所述个体的CNS中的一个或多个脱髓鞘病变中的髓鞘再生。
在另一方面，本文提供了一种用于促进患有中枢神经系统(CNS)脱髓鞘疾病的个体的一个或多个脱髓鞘病变的髓鞘再生的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的与TREM2蛋白结合的激动剂抗体。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述TREM2蛋白是哺乳动物蛋白或人类蛋白。在一些实施方案中，所述TREM2蛋白是野生型蛋白、天然存在的变体或疾病变体。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述抗体诱导一种或多种TREM2活性，所述TREM2活性选自：(a)TREM2与DAP12结合；(b)DAP12磷酸化；(c)Syk激酶的激活；(d)Syk募集到DAP12/TREM2复合物；或(e)增加一种或多种TREM2依赖性基因的活性，任选地其中所述一种或多种TREM2依赖性基因包含活化T细胞核因子(nuclear factor ofactivated T-cell，NFAT)转录因子。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述抗体增强在髓磷脂存在下诱导的一种或多种TREM2活性。在一些实施方案中，在髓磷脂存在下诱导的所述一种或多种TREM2活性包括增加一种或多种TREM2依赖性基因的活性，任选地其中所述一种或多种TREM2依赖性基因包含活化T细胞核因子(NFAT)转录因子。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述抗体促进少突胶质前体细胞(OPC)募集到个体的CNS中的一个或多个脱髓鞘病变。在一些实施方案中，所述OPC是PDGFRα阳性的。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述抗体促进个体的CNS中的一个或多个脱髓鞘病变中成熟少突胶质细胞(OL)的增加。在一些实施方案中，所述抗体促进个体的CNS中的一个或多个脱髓鞘病变中的OPC分化为成熟少突胶质细胞(OL)。在一些实施方案中，所述成熟OL是OLIG2和/或CNPase阳性的。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述抗体促进个体的CNS中的一个或多个脱髓鞘病变中磷酸化神经丝水平的增加。在一些实施方案中，所述磷酸化神经丝是SMI-31阳性的。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述抗体促进个体的一个或多个脱髓鞘病变中髓磷脂碎片的清除。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述抗体是鼠类抗体、人源化抗体、双特异性抗体、多价抗体、缀合抗体或嵌合抗体。在一些实施方案中，所述抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗体结合于以下各者内的一个或多个氨基酸：SEQ ID NO:1的氨基酸残基124-153，或TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基124-153的氨基酸残基；SEQ ID NO:1的氨基酸残基129-153，或TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基129-153的氨基酸残基；SEQ ID NO:1的氨基酸残基140-149，或TREM2蛋白上对应于SEQID NO:1的氨基酸残基140-149的氨基酸残基；SEQ ID NO:1的氨基酸残基149-157，或TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基149-157的氨基酸残基；或SEQ ID NO:1的氨基酸残基153-162，或TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基153-162的氨基酸残基。在一些实施方案中，所述抗体结合于选自SEQ ID NO:1的D140、L141、W142、F143、P144、E151、D152、H154、E156或H157的一个或多个氨基酸残基，或哺乳动物TREM2蛋白上对应于选自SEQID NO:1的D140、L141、W142、F143、P144、E151、D152、H154、E156或H157的氨基酸残基的一个或多个氨基酸残基。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述抗体包括包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的重链可变区和包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的轻链可变区，其中所述HVR-H1包含氨基酸序列YAFSSQWMN(SEQ ID NO:34)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIYPGGGDTNYAGKFQG(SEQ ID NO:35)，所述HVR-H3包含氨基酸序列ARLLRNQPGESYAMDY(SEQID NO:31)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RSSQSLVHSNRYTYLH(SEQ ID NO:41)，所述HVR-L2包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:33)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQID NO:32)。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗体包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的重链，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:47的轻链；或(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:44的重链和包含氨基酸序列SEQ ID NO:47的轻链。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述抗体包括包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的重链可变区和包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的轻链可变区，其中所述HVR-H1包含氨基酸序列YAFSSDWMN(SEQ ID NO:36)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIYPGEGDTNYARKFHG(SEQ ID NO:37)，所述HVR-H3包含氨基酸序列ARLLRNKPGESYAMDY(SEQID NO:38)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RTSQSLVHSNAYTYLH(SEQ ID NO:39)，所述HVR-L2包含氨基酸序列KVSNRVS(SEQ ID NO:40)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQID NO:32)。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗体包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:45的重链，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:48的轻链；或(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:46的重链，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:48的轻链。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述抗体是片段并且所述片段是Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv或scFv片段。在一些实施方案中，所述抗体属于IgG类、IgM类或IgA类。在一些实施方案中，所述抗体属于IgG类并且具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。在一些实施方案中，所述抗体具有人类IgG1同种型并且在Fc区中的残基位置P331S和E430G处包含氨基酸取代，其中残基的编号是根据EU编号。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述个体是人类。在一些实施方案中，所述个体包含至少一个拷贝的功能性TREM2基因。在一些实施方案中，所述个体对于TREM2基因中的突变是杂合的。在一些实施方案中，所述个体对于TREM2基因中的突变是纯合的。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述个体具有疾病特征或处于疾病特征的风险中，所述疾病特征选自：髓磷脂损伤、CNS中的一个或多个脱髓鞘病变、CNS中的炎症、CNS中的一个或多个斑块、髓鞘损失、轴突损伤、OPC减少、OL减少、髓磷脂碎片清除减少、轴突膨体、轴突球样变、神经胶质增生、自发荧光载脂巨噬细胞、轴突破坏或它们的任何组合。在一些实施方案中，所述个体具有CNS中的轴突损伤和/或一个或多个脱髓鞘病变或处于具有CNS中的轴突损伤和/或一个或多个脱髓鞘病变的风险中。在一些实施方案中，所述CNS中的轴突损伤和/或一个或多个脱髓鞘病变位于CNS的白质、灰质或胼胝体中。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述个体具有症状或处于具有症状的风险中，所述症状选自感觉变化、刺痛、麻木、肌肉无力、阵挛、肌肉痉挛、运动困难、协调困难、平衡困难、言语问题、吞咽问题、视觉问题、疲劳、急性疼痛、慢性疼痛、膀胱困难、肠道困难、认知障碍、抑郁、情绪不稳定、Uhthoff现象、莱尔米特征(Lhermitte's sign)或它们的任何组合。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，所述脱髓鞘疾病或病症是多发性硬化、视神经炎、视神经脊髓炎(Devic病)、横贯性脊髓炎、急性播散性脑脊髓炎、肾上腺脑白质营养不良或肾上腺脊髓神经病。在一些实施方案中，所述脱髓鞘疾病或病症是多发性硬化。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:52具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:53具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:54具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:55具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:56具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:57具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:52的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:53的HVR-H2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:54的HVR-H3；并且其中所述轻链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:55的HVR-L1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的HVR-L2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:57的HVR-L3。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:60具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:61具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:62具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:63具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:64具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:65具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:61的HVR-H2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:62的HVR-H3；并且其中所述轻链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:63的HVR-L1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:64的HVR-L2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:65的HVR-L3。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:68具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:69具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:70具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:71具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:72具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:73具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:68的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:69的HVR-H2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:70的HVR-H3；并且其中所述轻链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:71的HVR-L1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:72的HVR-L2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:73的HVR-L3。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:159具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:160具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:161具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:156具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:157具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:158具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:159的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:160的HVR-H2；和(c)包含氨基酸序列SEQ IDNO:161的HVR-H3；并且其中所述轻链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:156的HVR-L1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:157的HVR-L2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:158的HVR-L3。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:169具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:170具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:171具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:166具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:167具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:168具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:169的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:170的HVR-H2；和(c)包含氨基酸序列SEQ IDNO:171的HVR-H3；并且其中所述轻链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:166的HVR-L1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:167的HVR-L2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:168的HVR-L3。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:175具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:176具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:177具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:172具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:173具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:174具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:175的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:176的HVR-H2；和(c)包含氨基酸序列SEQ IDNO:177的HVR-H3；并且其中所述轻链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:172的HVR-L1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:173的HVR-L2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:174的HVR-L3。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:181具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:182具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:183具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:178具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:179具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:180具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:181的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:182的HVR-H2；和(c)包含氨基酸序列SEQ IDNO:183的HVR-H3；并且其中所述轻链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:178的HVR-L1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:179的HVR-L2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:180的HVR-L3。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:187具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:188具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:189具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:184具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:185具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:186具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:187的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:188的HVR-H2；和(c)包含氨基酸序列SEQ IDNO:189的HVR-H3；并且其中所述轻链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:184的HVR-L1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:185的HVR-L2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:186的HVR-L3。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体42E8.H1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体42E8.H1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:59的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体42E8.H1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体42E8.H1的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体42E8.H1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:59的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体42E8.H1的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体42E8.H1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体42E8.H1的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:58的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体42E8.H1的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:58的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体42E8.H1或SEQ ID NO:58的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体42E8.H1的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体42E8.H1的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体42E8.H1的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体42E8.H1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:59的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体42E8.H1的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:59的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体42E8.H1的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:59的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体42E8.H1或SEQ ID NO:59的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体42E8.H1的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体42E8.H1的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体42E8.H1的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:58的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:59的轻链可变区。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体RS9.F6的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体RS9.F6的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:67的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体RS9.F6的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体RS9.F6的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体RS9.F6的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:67的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体RS9.F6的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体RS9.F6的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体RS9.F6的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:66的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体RS9.F6的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:66的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体RS9.F6或SEQ ID NO:66的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体RS9.F6的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体RS9.F6的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体RS9.F6的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体RS9.F6的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:67的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体RS9.F6的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:67的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体RS9.F6的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:67的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体RS9.F6或SEQ ID NO:67的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体RS9.F6的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体RS9.F6的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体RS9.F6的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ IDNO:66的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:67的轻链可变区。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与SEQ ID NO:74的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:75的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与SEQ ID NO:74的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，SEQ ID NO:74的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，SEQ ID NO:74的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含SEQ ID NO:74的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与SEQ ID NO:75的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，SEQ ID NO:75的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，SEQ IDNO:75的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含SEQ ID NO:75的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:74的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:75的轻链可变区。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体6E7的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:149的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体6E7的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:148的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体6E7的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:149的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体6E7的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体6E7的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:148的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体6E7的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体6E7的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:149的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体6E7的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:149的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体6E7的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:149的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体6E7或SEQ ID NO:149的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体6E7的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体6E7的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体6E7的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体6E7的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:148的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体6E7的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:148的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体6E7的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:148的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体6E7或SEQ ID NO:148的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体6E7的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体6E7的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体6E7的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:149的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:148的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体5E3的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:151的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体5E3的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:150的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体5E3的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:151的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体5E3的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体5E3的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:150的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体5E3的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体5E3的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:151的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体5E3的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:151的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体5E3的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:151的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体5E3或SEQ ID NO:151的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体5E3的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体5E3的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体5E3的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体5E3的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:150的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体5E3的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:150的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体5E3的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:150的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体5E3或SEQ ID NO:150的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体5E3的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体5E3的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体5E3的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:151的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:150的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体24G6的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:153的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体24G6的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:152的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体24G6的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:153的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体24G6的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体24G6的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:152的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体24G6的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体24G6的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:153的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体24G6的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:153的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体24G6的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:153的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体24G6或SEQ ID NO:153的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体24G6的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体24G6的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体24G6的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体24G6的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:152的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体24G6的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:152的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体24G6的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:152的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体24G6或SEQ ID NO:152的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体24G6的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体24G6的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体24G6的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:153的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:152的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体25F12的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:155的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体25F12的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:154的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体25F12的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:155的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体25F12的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体25F12的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:154的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体25F12的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体25F12的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:155的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体25F12的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:155的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体25F12的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:155的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体25F12或SEQ ID NO:155的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体25F12的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体25F12的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体25F12的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体25F12的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:154的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体25F12的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:154的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体25F12的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:154的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体25F12或SEQ ID NO:154的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体25F12的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体25F12的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体25F12的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:155的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:154的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体13E7 14C12的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:165的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体13E7 14C12的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:164的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体13E7 14C12的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:165的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体13E7 14C12的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体13E714C12的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:164的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体13E7 14C12的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体13E7 14C12的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:165的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体13E7 14C12的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:165的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体13E7 14C12的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:165的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体13E7 14C12或SEQ ID NO:165的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体13E7 14C12的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体13E7 14C12的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体13E7 14C12的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体13E7 14C12的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:164的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体13E7 14C12的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ IDNO:164的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体13E7 14C12的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:164的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体13E7 14C12或SEQ ID NO:164的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体13E714C12的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体13E7 14C12的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体13E714C12的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:165的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:164的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体13E7(SST202443)的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:163的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体13E7(SST202443)的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:162的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体13E7(SST202443)的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:163的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体13E7(SST202443)的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体13E7(SST202443)的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:162的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体13E7(SST202443)的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体13E7(SST202443)的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:163的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体13E7(SST202443)的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:163的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体13E7(SST202443)的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:163的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体13E7(SST202443)或SEQ ID NO:163的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体13E7(SST202443)的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体13E7(SST202443)的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体13E7(SST202443)的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体13E7(SST202443)的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:162的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体13E7(SST202443)的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:162的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体13E7(SST202443)的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:162的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体13E7(SST202443)或SEQ ID NO:162的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体13E7(SST202443)的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体13E7(SST202443)的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体13E7(SST202443)的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:163的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:162的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:34具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:35具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:31具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:41具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:33具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:32具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:36具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:37具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:38具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:39具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:40具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:32具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AL2p-47的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体AL2p-47的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:29的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体AL2p-47的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AL2p-47的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体AL2p-47的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:29的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AL2p-47的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体AL2p-47的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体AL2p-47的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:28的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AL2p-47的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:28的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体AL2p-47或SEQ ID NO:28的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AL2p-47的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AL2p-47的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AL2p-47的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体AL2p-47的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:29的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体AL2p-47的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:29的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AL2p-47的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:29的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体AL2p-47或SEQ ID NO:29的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AL2p-47的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AL2p-47的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AL2p-47的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的轻链可变区。
在可与任何前述实施方案组合的一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AL2p-58的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体AL2p-58的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:30的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体AL2p-58的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AL2p-58的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体AL2p-58的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:30的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AL2p-58的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体AL2p-58的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体AL2p-58的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:27的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AL2p-58的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:27的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体AL2p-58或SEQ ID NO:27的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AL2p-58的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AL2p-58的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AL2p-58的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体AL2p-58的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:30的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体AL2p-58的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:30的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AL2p-58的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:30的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体AL2p-58或SEQ ID NO:30的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AL2p-58的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AL2p-58的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AL2p-58的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的轻链可变区。
应当理解，本文描述的各种实施方案的一个、一些或所有特性可以组合以形成本发明的其他实施方案。本发明的这些和其他方面对于本领域技术人员来说将变得显而易见。本发明的这些和其他实施方案通过下面的详细描述进一步说明。
附图说明
专利或申请文件含有至少一幅彩色绘图。带有彩色绘图的本专利或专利申请公开的副本将在要求并支付必要费用后由专利局提供。
图1A-1C显示了分析具有双环己酮草酰二腙(cuprizone，CPZ)诱导的中枢神经系统(CNS)脱髓鞘的Trem2+/+、Trem2-/-和Trem2+/-小鼠脑中髓磷脂碎片清除的实验结果。图1A提供了具有CPZ诱导的CNS脱髓鞘的Trem2+/+、Trem2-/-和Trem2+/-小鼠胼胝体的代表性免疫组织化学图像。使用抗降解髓磷脂碱性蛋白(dMBP)抗体测定髓磷脂碎片积累量；使用抗Iba1抗体对Iba1+小胶质细胞进行成像；使用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)对DNA进行成像。图1B-1C提供了图1A所示实验的量化。在图1B中，条柱显示dMBP+染色百分比，其测量为每mm2的dMBP阳性像素数量。在图1C中，条柱显示Iba1+细胞密度，其测量为每mm2的Iba1+细胞数量。在图1B-1C中，所显示的数据是平均值±标准偏差(s.d.)，其中P<0.05被认为具有统计学意义。星号指示统计显著性(“*”＝p<0.05；“**”＝p<0.01；“***”＝p<0.001；“****”＝p<0.0001)。
图2显示评价抗TREM2抗体7E5对体外TREM2信号传导的影响的免疫沉淀实验结果。图2是来自用交联或可溶性抗TREM2抗体7E5或同种型对照抗体体外刺激的Trem2+/+和Trem2-/-骨髓来源巨噬细胞(BMDM)的TREM2免疫沉淀物中DAP12磷酸化的免疫印迹。使用抗磷酸酪氨酸抗体分析DAP12磷酸化。肌动蛋白免疫印迹用作加载/输入对照。在图2中，“x-link”指示抗TREM2抗体7E5或同种型对照抗体与二级抗体交联。“可溶”指示未进行与二级抗体的交联。
图3A-3B显示了使用表达小鼠TREM2和DAP12并在NFAT启动子控制下用荧光素酶报告基因转导的BWZ细胞的体外TREM2活性测定的结果。在图3A中，BWZ细胞用指定浓度的抗TREM2抗体7E5或同种型对照抗体处理。在图3B中，将BWZ细胞接种到指定浓度的髓磷脂上并且随后用抗TREM2抗体7E5或同种型对照抗体处理。在图3A-3B中，y轴显示由抗TREM2抗体7E5相比于同种型对照抗体诱导的发光的倍数(相比于对照的倍数)。所显示的数据是平均值±标准偏差(s.d.)，其中P<0.05被认为具有统计学意义。星号指示统计显著性(“*”＝p<0.05；“**”＝p<0.01；“***”＝p<0.001；“****”＝p<0.0001)。
图4A-4B显示了分析抗TREM2抗体7E5对体内TREM2信号传导的影响的免疫沉淀实验结果。图4A是来自硫代乙醇酸盐诱导的巨噬细胞的TREM2免疫沉淀物中DAP12磷酸化的免疫印迹，所述巨噬细胞获自用抗TREM2抗体7E5或同种型对照抗体处理的C57BL/6小鼠。使用抗磷酸酪氨酸抗体分析DAP12磷酸化。肌动蛋白免疫印迹用作加载/输入对照。图4B提供了图4A中所示的实验的量化。条柱指示归一化的磷酸酪氨酸信号(即磷酸化DAP12)。所显示的数据是平均值±标准偏差(s.d.)，其中P<0.05被认为具有统计学意义。星号指示统计显著性(“*”＝p<0.05；“**”＝p<0.01；“***”＝p<0.001；“****”＝p<0.0001)。
图5A-5C显示了评价抗TREM2抗体7E5对具有CPZ诱导的CNS脱髓鞘的Trem2+/-小鼠脑中髓磷脂碎片清除的影响的体内实验结果。图5A是抗TREM2抗体7E5或同种型对照抗体在Trem2+/-小鼠中的投用方案图。WKS＝周数；ON＝主动CPZ喂食；OFF＝CPZ喂食后；D＝天数；+3D＝CPZ停用后3天；+7D＝CPZ停用后7天；+14D＝CPZ停用后14天。星号指示收集脑样品进行分析的日期。“INJ”＝注射抗TREM2抗体7E5或同种型对照抗体。图5B显示了如图5A所示用抗TREM2抗体7E5或同种型对照抗体处理的具有CPZ诱导的CNS脱髓鞘的Trem2+/-小鼠脑的代表性免疫组织化学图像。使用抗dMBP抗体测定髓磷脂碎片积累量；使用DAPI对DNA进行成像。图5C提供了图5A-5B中所示实验的量化。条柱指示在指定时间点的dMBP+染色百分比，其测量为每mm2的dMBP阳性像素数量。所显示的数据是平均值±标准偏差(s.d.)，其中P<0.05被认为具有统计学意义。星号指示统计显著性(“*”＝p<0.05；“**”＝p<0.01；“***”＝p<0.001；“****”＝p<0.0001)。在图5B-5C中，WK 4＝CPZ喂食后4周；WK 4+3D＝CPZ停用后3天；WK 4+7D＝CPZ停用后7天；WK 4+14D＝CPZ停用后14天。
图6A-6B显示了评价抗TREM2抗体7E5对具有CPZ诱导的CNS脱髓鞘的Trem2+/-小鼠脑中的少突胶质前体细胞(OPC)募集到脱髓鞘病变的影响的体内实验结果。图6A显示了如图5A所示施用抗TREM2抗体7E5或同种型对照抗体的Trem2+/-小鼠脑中PDGFRα的代表性免疫组织化学图像。图6A中所示的图像来自CPZ停用后3天(WK4+3D)和7天(WK 4+7D)获取的脑样品。使用DAPI对DNA进行成像。图6B提供了图6A所示实验的量化。条柱指示在指定时间点的PDGFRα+细胞密度，其测量为每mm2的PDGFRα阳性细胞数量。所显示的数据是平均值±标准偏差(s.d.)，其中P<0.05被认为具有统计学意义。星号指示统计显著性(“*”＝p<0.05；“**”＝p<0.01；“***”＝p<0.001；“****”＝p<0.0001)。
图7A-7C显示了评价抗TREM2抗体7E5对具有CPZ诱导的CNS脱髓鞘的Trem2+/-小鼠脑中OPC分化为成熟少突胶质细胞(OL)的影响的体内实验结果。图7A显示了如图5A所示施用抗TREM2抗体7E5或同种型对照抗体的Trem2+/-小鼠脑中OLIG2和CNPase的代表性免疫组织化学图像。图7A中所示的图像来自CPZ停用后3天(WK4+3D)获取的脑样品。使用DAPI对DNA进行成像。图7B-7C提供了图7A所示实验在CPZ停用后3天(WK4+3D)和7天(WK 4+7D)的量化。在图7B中，条柱指示OLIG2+细胞密度，其测量为每mm2的OLIG2阳性细胞数量。在图7C中，条柱指示CNPase+染色百分比，其测量为每mm2的CNPase阳性像素数量。在图7B-7C中，所显示的数据是平均值±标准偏差(s.d.)，其中P<0.05被认为具有统计学意义。星号指示统计显著性(“*”＝p<0.05；“**”＝p<0.01；“***”＝p<0.001；“****”＝p<0.0001)。
图8A-8B显示了评价抗TREM2抗体7E5对具有CPZ诱导的CNS脱髓鞘的Trem2+/-小鼠脑中轴突健康的影响的体内实验结果。图8A显示了如图5A所示施用抗TREM2抗体7E5或同种型对照抗体的Trem2+/-小鼠脑中SMI-31的代表性免疫组织化学图像。图8A中所示的图像来自CPZ停用后7天(WK 4+7D)获取的脑样品。图8B提供了图8A所示实验在CPZ停用后3天(WK4+3D)和7天(WK 4+7D)的量化。条柱指示在指定时间的SMI31+染色百分比，其测量为每mm2的SMI31阳性像素数量。所显示的数据是平均值±标准偏差(s.d.)，其中P<0.05被认为具有统计学意义。星号指示统计显著性(“*”＝p<0.05；“**”＝p<0.01；“***”＝p<0.001；“****”＝p<0.0001)。
具体实施方式
本文提供了通过施用TREM2激动剂来治疗与脱髓鞘相关的病症和疾病的方法。此类疾病或病症包括但不限于多发性硬化、视神经炎、视神经脊髓炎(Devic病)、横贯性脊髓炎、急性播散性脑脊髓炎、肾上腺脑白质营养不良和肾上腺脊髓神经病。TREM2激动剂包括抗TREM2抗体，其诱导一种或多种TREM2活性，增强在髓磷脂存在下诱导的一种或多种TREM2活性，促进少突胶质前体细胞(OPC)募集到CNS中的一个或多个脱髓鞘病变，促进CNS中的一个或多个脱髓鞘病变中成熟少突胶质细胞(OL)的增加，促进CNS中的一个或多个脱髓鞘病变中OPC分化为成熟少突胶质细胞(OL)，促进CNS中的一个或多个脱髓鞘病变中磷酸化神经丝水平的增加，或促进个体的一个或多个脱髓鞘病变中髓磷脂碎片的清除。
定义
如本文所用，术语“预防”包括在可倾向于患上特定疾病、病症或疾患，易于患上特定疾病、病症或疾患，或处于发生特定疾病、病症或疾患的风险中，但尚未诊断出患有所述疾病、病症或疾患的个体中，提供关于所述疾病、病症或疾患的发生或复发的预防，包括延迟所述疾病、病症或疾患的发作。
如本文所用，处于发生特定疾病、病症或疾患“风险中”的个体可具有或可不具有可检测的疾病或疾病症状，并且可在本文所述的治疗方法之前已展示或可未展示可检测的疾病或疾病症状。“处于风险中”表示个体具有一种或多种风险因素，所述风险因素是如本领域已知的与特定疾病、病症或疾患的发生相关的可测量参数。具有这些风险因素中的一者或多者的个体发生特定疾病、病症或疾患的机率高于不具这些风险因素中的一者或多者的个体。
如本文所用，术语“治疗”是指经设计以改变所治疗个体在临床病理学进程期间的天然进程的临床干预。所需治疗效果包括降低特定疾病、病症或疾患的进展速率，改善或减轻病理状态，以及缓解或改善预后。例如，如果一种或多种与特定疾病、病症或疾患相关的症状缓和或消除，则个体得到成功地“治疗”。
“有效量”是指至少在所需剂量下和在所需时间段内有效实现所需治疗或预防结果的量。有效量可以一次或多次施用来提供。本文的有效量可根据例如以下因素而有所变化：疾病状态，个体的年龄、性别和体重，以及治疗在个体内引发所需反应的能力。有效量也是治疗有益效应胜过治疗的任何毒性或有害效应的量。对于预防性使用来说，有益或所需结果包括消除或降低疾病的风险、减轻疾病的严重程度或延迟疾病发作，所述疾病包括疾病的生物化学、组织学和/或行为症状、在疾病发展期间呈现的其并发症和中间病理学表型。对于治疗性使用来说，有益或所需结果包括例如以下的临床结果：减少从疾病引起的一种或多种症状，提高患病者的生活质量，减少治疗疾病所需的其他药剂的剂量，增强另一药剂的效应，例如延迟疾病的进展和/或延长存活。药物、化合物或药物组合物的有效量是足以直接或间接实现预防性或治疗性治疗的量。如在临床背景下所理解，药物、化合物或药物组合物的有效量可或可不结合另一药物、化合物或药物组合物来实现。因此，可认为“有效量”是在施用一种或多种治疗剂的背景下进行，并且如果结合一种或多种其他剂可实现或实现所需结果，则可认为单一剂是以有效量给予。
用于治疗、预防或降低风险目的的“个体”是指分类为哺乳动物的任何动物，包括人类、家养和农场动物以及动物园动物、运动型动物或宠物，例如狗、马、兔、牛、猪、仓鼠、沙鼠、小鼠、雪貂、大鼠、猫等。在一些实施方案中，所述个体是人类。
如本文所用，与另一化合物或组合物“结合”施用包括同时施用和/或于不同时间施用。结合施用还涵盖作为共配制剂施用或作为分开的组合物施用，包括以不同投用频率或间隔和使用相同施用途径或不同施用途径。
术语“免疫球蛋白”(Ig)在本文中可与“抗体”互换使用。本文中的术语“抗体”是以最广泛意义使用并且具体来说涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、由至少两种完整抗体形成的多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要其表现出所需的生物活性即可。
基础4链抗体单元是由两条相同轻(L)链和两条相同重(H)链构成的异四聚体糖蛋白。VH与VL配对一起形成单一抗原结合位点。关于不同类别抗体的结构和性质，参见例如Basic and Clinical Immunology,第8版,Daniel P.Stites,Abba I.Terr和TristramG.Parslow(编辑),Appleton&Lange,Norwalk,CT,1994,第71页和第6章。
来自任何脊椎动物物种的L链，可基于其恒定结构域的氨基酸序列，归类为两种明显不同类型(称为卡帕(“κ”)和拉姆达(“λ”))中的一者。根据其重链(CH)恒定结构域的氨基酸序列，可将免疫球蛋白归类为不同类别或同种型。存在五类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其重链分别命名为阿尔法(“α”)、德尔塔(“δ”)、伊普西龙(“ε”)、伽马(“γ”)和缪(“μ”)。基于CH序列和功能的相对较小差异将γ和α类别进一步划分成亚类(同种型)，例如人类表达以下亚类：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型已众所周知并且通常描述于例如Abbas等人,Cellular and MolecularImmunology,第4版(W.B.Saunders Co.,2000)中。
“天然抗体”通常是约150,000道尔顿(dalton)的异四聚体糖蛋白，其由两条相同轻(L)链和两条相同重(H)链构成。每条轻链由一个共价二硫键连接至重链，而在不同免疫球蛋白同种型的重链中二硫键联的数目各不相同。每条重链和轻链还具有规则地间隔开的链内二硫桥。每条重链在一端具有可变结构域(VH)，之后为多个恒定结构域。每条轻链在一端具有可变结构域(VL)并且在其另一端具有恒定结构域；轻链的恒定结构域与重链的第一恒定结构域对齐，并且轻链可变结构域与重链的可变结构域对齐。据信，特定氨基酸残基在轻链与重链可变结构域之间形成界面。
“经分离”抗体(例如本公开的分离的抗TREM2抗体)是已从其产生环境的组分(例如，天然或重组)鉴定、分离和/或回收的抗体。优选地，经分离多肽不与来自其产生环境的大体上所有其他污染性组分缔合。来自其产生环境的污染性组分(例如源自重组转染细胞的那些组分)是通常将干扰抗体的研究、诊断或治疗用途的物质，并且可包括酶、激素和其他蛋白质性或非蛋白质性溶质。在优选实施方案中，多肽将被纯化：(1)至如通过例如Lowry方法所确定大于95重量％的抗体，并且在一些实施方案中，至大于99重量％；(2)至通过使用旋杯式测序仪足以获得至少15个N末端或内部氨基酸序列残基的程度，或(3)至通过SDS-PAGE在非还原或还原条件下使用考马斯蓝(Coomassie blue)或优选银染色的均质性。
抗体(例如本公开的抗TREM2抗体)的“可变区”或“可变结构域”是指抗体的重链或轻链的氨基末端结构域。重链和轻链的可变结构域可分别称为“VH”和“VL”。这些结构域通常是抗体的最可变部分(相对于相同类别的其他抗体)并且含有抗原结合位点。
术语“可变”是指抗体(例如本公开的抗TREM2抗体)之间可变结构域的某些区段的序列差异极大的事实。可变结构域介导抗原结合并限定特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，可变性在整个可变结构域跨度中并非均匀分布。相反，其在轻链和重链可变结构域二者中均集中于三个称为超变区(HVR)的区段中。可变结构域的更保守部分称为框架区(FR)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含4个由三个HVR连结的主要采用β折叠构型的FR区，所述HVR形成连结且在一些情形下构成β折叠结构的一部分的环。每条链中的HVR通过FR区保持紧密靠近，并且与来自另一链的HVR一起促进形成抗体的抗原结合位点(参见Kabat等人,Sequences of Immunological Interest,第5版,National Institute of Health,Bethesda,MD(1991))。恒定结构域并不直接参与抗体与抗原的结合，但表现出各种效应功能，例如抗体参与抗体依赖性细胞毒性。
如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从大体上同源抗体的群体获得的抗体(例如本公开的单克隆抗TREM2抗体)，即，除可以少量存在的可能天然存在突变和/或翻译后修饰(例如，异构化、酰胺化等)以外，构成所述群体的个别抗体均相同。单克隆抗体针对单一抗原位点具有高度特异性。与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相比，每个单克隆抗体是针对抗原上的单一决定簇。除其特异性以外，单克隆抗体的优势在于它们可通过杂交瘤培养合成，大体上不受其他免疫球蛋白的污染。修饰词“单克隆”指示抗体的特性在于从大体上同源的抗体群体获得，并且不应解释为需要通过任何特定方法来产生所述抗体。例如，根据本发明使用的单克隆抗体可通过多种技术来制得，包括例如杂交瘤方法(例如，Kohler和Milstein.,Nature,256:495-97(1975)；Hongo等人,Hybridoma,14(3):253-260(1995)；Harlow等人,Antibodies:A Laboratory Manual,(Cold SpringHarbor Laboratory Press，第2版1988)；Hammerling等人,Monoclonal Antibodies andT-Cell Hybridomas 563-681(Elsevier,N.Y.,1981))、重组DNA方法(参见例如美国专利第4,816,567号)、噬菌体展示技术(参见例如Clackson等人,Nature,352:624-628(1991)；Marks等人,J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Sidhu等人,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee等人,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Nat'lAcad.Sci.USA 101(34):12467-472(2004)；和Lee等人,J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004))、酵母呈递技术(参见例如WO2009/036379A2；WO2010105256；WO2012009568，和Xu等人,Protein Eng.Des.Sel.,26(10):663-70(2013)，以及用于在具有部分或全部人类免疫球蛋白基因座或编码人类免疫球蛋白序列的基因的动物中产生人类或人类样抗体的技术(参见例如WO 1998/24893；WO 1996/34096；WO 1996/33735；WO 1991/10741；Jakobovits等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 90:2551(1993)；Jakobovits等人,Nature 362:255-258(1993)；Bruggemann等人,Year in Immunol.7:33(1993)；美国专利第5,545,807号；第5,545,806号；第5,569,825号；第5,625,126号；第5,633,425号；和第5,661,016号；Marks等人,Bio/Technology 10:779-783(1992)；Lonberg等人,Nature 368:856-859(1994)；Morrison,Nature 368:812-813(1994)；Fishwild等人,NatureBiotechnol.14:845-851(1996)；Neuberger,Nature Biotechnol.14:826(1996)；和Lonberg和Huszar，Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995))。
术语“全长抗体”、“完整抗体”或“全抗体”可互换使用，其是指与抗体片段相对的呈其大体上完整形式的抗体(例如本公开的抗TREM2抗体)。具体来说，全抗体包括具有重链和轻链并包括Fc区的那些抗体。恒定结构域可为天然序列恒定结构域(例如，人类天然序列恒定结构域)或其氨基酸序列变体。在一些情形下，完整抗体可具有一种或多种效应功能。
“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选完整抗体的抗原结合区和/或可变区。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双价抗体；直链抗体(参见美国专利5,641,870，实施例2；Zapata等人,Protein Eng.8(10):1057-1062(1995))；单链抗体分子和从抗体片段形成的多特异性抗体。
抗体(例如本公开的抗TREM2抗体)的木瓜酶消化产生两个相同抗原结合片段(称为“Fab”片段)和残余“Fc”片段，其命名反映容易结晶的能力。Fab片段由整个L链以及H链的可变区结构域(VH)和一条重链的第一恒定结构域(CH1)组成。每个Fab片段关于抗原结合都是单价的，即其具有单一抗原结合位点。抗体经胃蛋白酶处理产生单一大F(ab')2片段，所述片段大致对应于两个能够结合并交联抗原的经二硫键连接的Fab片段。Fab'片段与Fab片段的不同之处在于在CH1结构域的羧基末端具有几个额外残基，所述残基包括一个或多个来自抗体铰链区的半胱氨酸。Fab'-SH是本文针对恒定结构域的一个或多个半胱氨酸残基带有游离硫醇基的Fab'的命名。F(ab')2抗体片段可作为在其间具有铰链半胱氨酸的Fab'片段对产生。还已知抗体片段的其他化学偶联。
Fc片段包含通过二硫键保持在一起的两条H链的羧基末端部分。抗体的效应功能由Fc区中的序列确定，所述Fc区由某些细胞类型上发现的Fc受体(FcR)识别。
“Fv”是含有完全抗原识别和结合位点的最小抗体片段。此片段由紧密非共价缔合的一个重链可变区结构域与一个轻链可变区结构域的二聚体组成。从这两个结构域的折叠产生6个超变环(从H链和L链各自产生3个环)，所述超变环贡献用于抗原结合的氨基酸残基并赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使单一可变结构域(或Fv的一半，其仅包含三个对抗原具有特异性的HVR)可具有识别并结合抗原的能力，但其亲和力低于完整结合位点。
也缩写为“sFv”或“scFv”的“单链Fv”是包含连结成单一多肽链的VH和VL抗体结构域的抗体片段。优选地，sFv多肽还包含在VH与VL结构域之间的多肽接头，其使sFv能够形成所需的抗原结合结构。关于sFv的综述，参见Plückthun,The Pharmacology of MonoclonalAntibodies,第113卷,Rosenburg和Moore编辑,Springer-VerLAG-3,New York,第269-315页(1994)。
抗体(例如本公开的抗TREM2抗体)的“功能片段”包含完整抗体的一部分，所述部分通常包括完整抗体的抗原结合区或可变区或者抗体的保留或具有经修饰FcR结合能力的Fc区。
术语“双价抗体”是指通过以下方式制备的小抗体片段：用VH与VL结构域之间的短接头(约5-10个残基)构建sFv片段(参见前述段落)，使得实现可变结构域的链间而非链内配对，由此产生二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双价抗体更详细地描述于例如EP 404,097；WO 93/11161；Hollinger等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 90:6444-48(1993)中。
如本文所用，“嵌合抗体”是指其中重链和/或轻链的一部分与源自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而所述链的其余部分与源自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源的抗体(例如本公开的嵌合抗TREM2抗体)，以及此类抗体的片段，只要其表现出所需生物学活性即可(美国专利第4,816,567号；Morrison等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA、81:6851-55(1984))。嵌合抗体包括其中抗体的可变区源自鼠类抗体并且恒定区源自人类抗体的抗体。如本文所用，“人源化抗体”是“嵌合抗体”的子集。
非人类(例如，鼠类)抗体的“人源化”形式(例如本公开的抗TREM2抗体的人源化形式)是含有最少量源自非人类免疫球蛋白的序列的嵌合抗体。在一个实施方案中，人源化抗体是人类免疫球蛋白(接受者抗体)，其中来自接受者的HVR的残基被来自非人类物种(例如小鼠、大鼠、兔或非人类灵长类动物)的HVR(供体抗体)的具有所需特异性、亲和力和/或能力的残基代替。在一些情况下，人类免疫球蛋白的FR残基被相应的非人类残基代替。此外，人源化抗体可包含接受者抗体或供体抗体中不存在的残基。可进行这些修饰以进一步改善抗体性能，例如结合亲和力。一般来说，人源化抗体将包含大体上全部的至少一个并且通常两个可变结构域，其中全部或大体上全部的超变环对应于非人类免疫球蛋白序列的那些超变环，并且全部或大体上全部的FR区为人类免疫球蛋白序列的那些FR区，但FR区可包括改进抗体性能(例如结合亲和力、异构化、免疫原性等)的一个或多个个别FR残基取代。FR中的这些氨基酸取代的数量通常在H链中不超过6，并且在L链中不超过3。人源化抗体任选地将还包含免疫球蛋白恒定区(Fc)(通常为人类免疫球蛋白恒定区)的至少一部分。关于其他细节，参见例如Jones等人,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature 332:323-329(1988)；和Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。还参见例如Vaswani和Hamilton,Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105-115(1998)；Harris,Biochem.Soc.Transactions 23:1035-1038(1995)；Hurle和Gross,Curr.Op.Biotech.5:428-433(1994)；以及美国专利第6,982,321号和第7,087,409号。
“人类抗体”是具有对应于已使用如本文所公开或本领域中另外已知的用于制备人类抗体的技术中的任一者制备的抗体(例如本公开的抗TREM2抗体)的氨基酸序列的氨基酸序列的抗体。此人类抗体的定义明确排除包含非人类抗原结合残基的人源化抗体。人类抗体可使用本领域已知的各种技术(包括噬菌体展示文库)来产生。Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.,227:381(1991)；Marks等人,J.Mol.Biol.,222:581(1991)。描述于以下文献中的方法还可用于制备人类单克隆抗体：Cole等人,Monoclonal Antibodies and CancerTherapy,Alan R.Liss,第77页(1985)；Boerner等人,J.Immunol.,147(1):86-95(1991)。还参见van Dijk和van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)。人类抗体可通过向转基因动物施用抗原来制备，所述动物已经修饰从而响应于抗原攻击产生此类抗体，但其内源性基因座已失能，例如，经免疫xenomice(关于XENOMOUSETM技术，参见例如美国专利第6,075,181号和第6,150,584号)。关于经由人类B细胞杂交瘤技术所产生的人类抗体，还参见例如Li等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)。或者，人类抗体还可通过采用酵母文库和如例如WO2009/036379A2；WO2010105256；WO2012009568；和Xu等人,Protein Eng.Des.Sel.,26(10):663-70(2013)中所公开的方法来制备。
术语“超变区”或“HVR”在本文中使用时是指抗体可变结构域(例如本公开的抗TREM2抗体的可变结构域)的在序列上超变和/或形成结构上限定环的区。通常，抗体包含6个HVR；3个在VH中(H1、H2、H3)，并且3个在VL中(L1、L2、L3)。在天然抗体中，H3和L3展示6个HVR的大部分多样性，并且据信尤其H3在赋予抗体良好特异性方面具有独特作用。参见例如Xu等人,Immunity 13:37-45(2000)；Johnson和Wu,Methods in Molecular Biology 248:1-25(Lo编辑,Human Press,Totowa,NJ,2003))。实际上，仅由重链组成的天然存在的骆驼科动物抗体在不存在轻链下具有功能性且稳定。参见例如Hamers-Casterman等人,Nature363:446-448(1993)和Sheriff等人,Nature Struct.Biol.3:733-736(1996)。
本文使用且涵盖许多HVR的描述。在一些实施方案中，HVR可以是基于序列可变性的Kabat互补决定区(CDR)并且使用最为广泛(Kabat等人,同上)。在一些实施方案中，HVR可以是Chothia CDR。而Chothia是指结构环的位置(Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。在一些实施方案中，HVR可以是AbM HVR。AbM HVR表示Kabat CDR与Chothia结构环之间的折衷，并且用于Oxford Molecular的AbM抗体建模软件中。在一些实施方案中，HVR可以是“contact”HVR。“contact”HVR是基于对可获得的复杂晶体结构的分析。来自这些HVR中每一者的残基如下所示。
Figure BDA0003886640700000541
HVR可包含如下“延伸HVR”：VL中的24-36或24-34(L1)、46-56或50-56(L2)和89-97或89-96(L3)，以及VH中的26-35(H1)、50-65或49-65(优选实施方案)(H2)和93-102、94-102或95-102(H3)。对于这些延伸HVR定义中的每一者，根据Kabat等人(同上)对可变结构域残基进行编号。
“框架”或“FR”残基是除如本文所定义的HVR残基以外的那些可变结构域残基。
短语“如Kabat中的可变结构域残基编号”或“如Kabat中的氨基酸位置编号”和其变化形式是指用于Kabat等人(同上)中的抗体汇编的重链可变结构域或轻链可变结构域的编号系统。使用此编号系统，实际线性氨基酸序列可含有较少或额外的对应于可变结构域的FR或HVR的缩短或插入的氨基酸。例如，重链可变结构域可包括在H2的残基52后的单氨基酸插入(根据Kabat的残基52a)和重链FR残基82后的插入残基(例如，根据Kabat的残基82a、82b和82c等)。可通过将抗体序列的同源区与“标准”Kabat编号序列比对来确定给定抗体的残基的Kabat编号。
Kabat编号系统通常在提到可变结构域中的残基(大约轻链的残基1-107和重链的残基1-113)时使用(例如，Kabat等人,Sequences of Immunological Interest.第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991))。“EU编号系统”、“EU编号”或“EU索引”通常在提到免疫球蛋白重链恒定区中的残基时使用(例如，Kabat等人,同上中所报道的EU索引)。“如Kabat中的EU索引”是指人类IgG1 EU抗体的残基编号。对抗体可变结构域中的残基编号的提及意指根据Kabat编号系统的残基编号。对抗体恒定结构域中的残基编号的提及意指根据EU编号系统的残基编号(参见例如美国专利公开第2010-280227号)。
如本文所用的“接受体人类框架”是包含源自人类免疫球蛋白框架或人类共有框架的VL或VH框架的氨基酸序列的框架。“源自”人类免疫球蛋白框架或人类共有框架的接受体人类框架可包含其相同氨基酸序列，或者其可含有先前存在的氨基酸序列变化。在一些实施方案中，先前存在的氨基酸变化的数目为10或更小、9或更小、8或更小、7或更小、6或更小、5或更小、4或更小、3或更小、或2或更小。在VH中存在先前存在的氨基酸变化的情形下，优选地那些变化仅发生在位置71H、73H和78H中的三者、两者或一者处；例如，那些位置处的氨基酸残基可以是71A、73T和/或78A。在一个实施方案中，VL接受体人类框架的序列与VL人类免疫球蛋白框架序列或人类共有框架序列同一。
“人类共有框架”是代表在人类免疫球蛋白VL或VH框架序列的选择中最常出现的氨基酸残基的框架。通常，人类免疫球蛋白VL或VH序列的选择是来自可变结构域序列的亚组。通常，序列的亚组是如Kabat等人,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)中的亚组。对于VL来说，亚组可为例如如Kabat等人,同上中的亚组κI、κII、κIII或κIV。另外，对于VH来说，亚组可为例如如Kabat等人,同上中的亚组I、亚组II或亚组III。
在例如本公开的抗TREM2抗体的指定位置处的“氨基酸修饰”是指指定残基的取代或缺失，或毗邻指定残基的至少一个氨基酸残基的插入。“毗邻”指定残基插入意指在其一至两个残基内插入。插入可以是至指定残基的N末端或C末端。本文的优选氨基酸修饰是取代。
“亲和力成熟”抗体(例如本公开的亲和力成熟的抗TREM2抗体)是在其一个或多个HVR中具有一个或多个改变的抗体，与不具有那些改变的亲代抗体相比，所述改变使得所述抗体对抗原的亲和力有所改进。在一个实施方案中，亲和力成熟抗体对靶抗原具有纳摩尔级或甚至皮摩尔级亲和力。亲和力成熟抗体可通过本领域已知的程序来产生。例如，Marks等人,Bio/Technology 10:779-783(1992)描述了通过VH和VL结构域改组的亲和力成熟。HVR和/或框架残基的随机诱变描述于例如以下文献中：Barbas等人,Proc Nat.Acad.Sci,USA 91:3809-3813(1994)；Schier等人,Gene 169:147-155(1995)；Yelton等人,J.Immunol.155:1994-2004(1995)；Jackson等人,J.Immunol.154(7):3310-9(1995)；和Hawkins等人,J.Mol.Biol.226:889-896(1992)。
如本文所用，术语“特异性结合”是指靶标与抗体之间(例如抗TREM2抗体与TREM2之间)的可测量且可再现的结合相互作用，其决定异源性分子(例如生物分子)群体内靶标的存在。例如，特异性结合于靶标或靶标表位的抗体(例如本公开的抗TREM2抗体)是与其结合于其他无关靶标或表位相比例如以更大亲和力或亲合力优先结合此靶标或表位的抗体。还应理解，特异性结合于第一靶标的抗体可或可不特异性结合于第二靶标。因此，“特异性结合”不一定需要(但其可包括)排他性结合。特异性结合于靶标的抗体可具有至少约103M-1或104M-1、有时约105M-1或106M-1、在其他情况下约106M-1或107M-1、约108M-1至109M-1、或约1010M-1至1011M-1或更高的缔合常数。可使用多种免疫测定格式来选择与特定蛋白质特异性免疫反应的抗体。例如，通常使用固相ELISA免疫测定来选择与蛋白质特异性免疫反应的单克隆抗体。关于对可用于确定特异性免疫反应性的免疫测定格式和条件的说明，参见例如Harlow和Lane(1988)Antibodies,A Laboratory Manual,Cold Spring HarborPublications,New York；或Vashist和Luong(2018)Handbook of ImmunoassayTechnologies,Approaches,Performances,and Applications,Academic Press。
如本文所用，当抗体通过结合于两种蛋白质之一来破坏、降低或完全消除两种蛋白质之间的相互作用时，所述抗体“抑制所述两种蛋白质之间的相互作用”。
“激动剂”抗体是在与靶标结合后诱导(例如，增加)靶标的一种或多种活性或功能的抗体。
“拮抗剂”抗体或“阻断”抗体是在所述抗体结合抗原后降低或消除(例如，减少)所述抗原结合于一种或多种结合搭配物和/或在所述抗体结合抗原后降低或消除(例如，减少)所述抗原的一种或多种活性或功能的抗体。在一些实施方案中，拮抗剂抗体或阻断抗体大体上或完全抑制抗原结合于一种或多种结合搭配物和/或抗原的一种或多种活性或功能。
抗体“效应功能”是指那些可归因于抗体Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的生物学活性，并且随抗体同种型而有所变化。
术语“Fc区”在本文中用于界定免疫球蛋白重链的C末端区域，包括天然序列Fc区和变体Fc区。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界可有所变化，但通常将人类IgG重链Fc区界定为从位置Cys226处的氨基酸残基或从Pro230延伸至其羧基末端。Fc区的C末端赖氨酸(根据EU编号系统的残基447)可在例如抗体的产生或纯化期间或通过重组工程改造编码抗体重链的核酸去除。因此，完整抗体的组合物可包含去除全部K447残基的抗体群体、未去除K447残基的抗体群体和具有含有和不含有K447残基的抗体混合物的抗体群体。用于本公开的抗体中的适宜天然序列Fc区包括人类IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
“天然序列Fc区”包含与自然界中发现的Fc区的氨基酸序列同一的氨基酸序列。天然序列人类Fc区包括天然序列人类IgG1 Fc区(非A和A异型)；天然序列人类IgG2 Fc区；天然序列人类IgG3 Fc区；和天然序列人类IgG4 Fc区以及其天然存在变体。
“变体Fc区”包含因至少一个氨基酸修饰、优选地一个或多个氨基酸取代而与天然序列Fc区不同的氨基酸序列。优选地，所述变体Fc区与天然序列Fc区相比具有至少一个氨基酸取代，例如天然序列Fc区中的约1个至约10个氨基酸取代，并且优选地约1个至约5个氨基酸取代。本文中的变体Fc区优选将与天然序列Fc区具有至少约80％同源性，并且最优选与其具有至少约90％同源性，更优选与其具有至少约95％同源性。
“Fc受体”或“FcR”描述结合于抗体的Fc区的受体。优选FcR是天然序列人类FcR。此外，优选FcR是结合IgG抗体的FcR(γ受体)并且包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亚类的受体，包括这些受体的等位基因变体和选择性剪接形式，FcγRII受体包括FcγRIIA(“活化性受体”)和FcγRIIB(“抑制性受体”)，两者具有主要在其细胞质结构域中有所不同的类似氨基酸序列。活化性受体FcγRIIA在其细胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的活化基序(“ITAM”)。抑制性受体FcγRIIB在其细胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(“ITIM”)。(参见例如M.
Figure BDA0003886640700000581
Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997))。FcR综述于Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-92(1991)；Capel等人,Immunomethods 4:25-34(1994)；和de Haas等人,J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)中。本文的术语“FcR”涵盖其他FcR。FcR还可延长抗体的血清半衰期。
可在例如表达人类FcR的转基因小鼠或经转染人类细胞系中或在施用具有变体Fc区的多肽的灵长类动物中测定人类FcR高亲和力结合多肽与FcR的体内结合和血清半衰期。WO 2004/42072(Presta)描述了具有改进或减少的与FcR结合的抗体变体。还参见例如Shields等人,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。
如本文所用，关于肽、多肽或抗体序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”和“同源性”是指在比对序列并引入空位(如果需要)以实现最大序列同一性百分比后，并且不将任何保守取代视为序列同一性的一部分的情况下，候选序列中与特定肽或多肽序列中的氨基酸残基同一的氨基酸残基的百分比。出于确定氨基酸序列同一性百分比的目的，比对可以本领域技术范围内的各种方式来实现，例如使用可公开获得的计算机软件，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALIGNTM(DNASTAR)软件。本领域技术人员可确定用于测量比对的适当参数，包括在所比较序列的全长范围内实现最大比对所需要的本领域已知的任何算法。
例如编码抗体(例如本公开的抗TREM2抗体)的“经分离”核酸分子是从其产生环境中通常与其缔合的至少一种污染性核酸分子鉴定并分离的核酸分子。优选地，分离的核酸不与和产生环境相关的大体上所有组分缔合。编码本文多肽和抗体的分离的核酸分子与细胞中天然存在的核酸不同。
如本文所用的术语“载体”旨在是指能够转运与其连接的另一核酸的核酸分子。一类载体为“质粒”，其是指额外DNA区段可连接至其中的环形双链DNA。另一类载体为噬菌体载体。另一类载体为病毒载体，其中额外DNA区段可连接至病毒基因组中。某些载体能够在已引入其的宿主细胞中进行自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体和游离型哺乳动物载体)。其他载体(例如非游离型哺乳动物载体)可在引入到宿主细胞中时整合至所述宿主细胞的基因组中，并且由此随宿主基因组一同复制。此外，某些载体能够引导与其可操作连接的基因的表达。此类载体在本文中称为“重组表达载体”或简称“表达载体”。一般来说，在重组DNA技术中可用的表达载体通常呈质粒形式。由于质粒是载体的最常用形式，所以在本说明书中“质粒”与“载体”可互换使用。
如本文中可互换使用的“多核苷酸”或“核酸”是指任何长度的核苷酸聚合物，并且包括DNA和RNA。核苷酸可为脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基和/或其类似物，或者可通过DNA或RNA聚合酶或通过合成反应并入至聚合物中的任何底物。多核苷酸可包含修饰的核苷酸，例如甲基化核苷酸和其类似物。如果存在，则可在聚合物的组装之前或之后赋予对核苷酸结构的修饰。核苷酸的序列可由非核苷酸组分中断。多核苷酸可包含在合成之后进行的一种或多种修饰，例如缀合至标记。其他类型的修饰包括例如“帽”；用类似物取代天然存在核苷酸中的一者或多者；以及核苷酸间修饰，例如具有不带电连接(例如，膦酸甲基酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯等)和具有带电连接(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的那些修饰，含有侧接部分(例如，蛋白质(例如，核酸酶、毒素、抗体、信号肽、聚-L-赖氨酸等)的那些修饰，具有嵌入剂(例如，吖啶、补骨脂素等)的那些修饰，含有螯合剂(例如，金属、放射性金属、硼、氧化金属等)的那些修饰，含有烷基化剂的那些修饰，具有经修饰连接(例如，α变旋异构核酸等)的那些修饰，以及多核苷酸的未经修饰形式。此外，通常存在于糖中的羟基中的任一者均可由例如膦酸酯基团、磷酸酯基团代替，由标准保护基团保护，或经活化以制备与额外核苷酸的额外连接，或者可缀合至固体或半固体载体。5'和3'末端OH可被胺或1至20个碳原子的有机封端基团部分磷酸化或取代。其他羟基还可衍生化成标准保护基团。多核苷酸还可含有本领域通常已知的核糖或脱氧核糖糖的类似形式，包括例如2'-O-甲基-、2'-O-烯丙基、2'-氟-或2'-叠氮基-核糖、碳环糖类似物、α-变旋异构糖、差向异构糖(例如阿拉伯糖、木糖或来苏糖(lyxose))、吡喃糖糖、呋喃糖糖、景天庚酮糖(sedoheptulose)、非环类似物和碱性核苷类似物(例如甲基核苷)。一个或多个磷酸二酯连接可由替代连接基团代替。这些替代连接基团包括(但不限于)以下实施方案：其中磷酸酯由P(O)S(“硫代酯”)、P(S)S(“二硫代酯”)、(O)NR2(“酰胺化物”)、P(O)R、P(O)OR'、CO或CH2(“甲缩醛”)代替，其中每个R或R'独立地是H或任选地含有醚(-O-)连接的被取代或未被取代的烷基(1-20个C)、芳基、烯基、环烷基、环烯基或芳烷基(araldyl)。并非多核苷酸中的所有连接均需要相同。前述说明适于本文中所提到的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。
“宿主细胞”包括单个细胞或细胞培养物，其可含有或含有载体或其他外源核酸，例如，其并入一种或多种多核苷酸插入物。在一些实施方案中，所述载体或其他外源核酸被整合到宿主细胞的基因组中。宿主细胞包括单一宿主细胞的子代，并且所述子代可因天然、偶然或特意突变而未必与原始亲代细胞完全相同(在形态中或在基因组DNA补体中)。宿主细胞包括在体内用本发明的多核苷酸转染的细胞。
如本文所用的“载体”包括在所采用剂量和浓度下对所暴露细胞或哺乳动物无毒的药学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂。通常，生理学上可接受的载体是pH缓冲水溶液。生理学上可接受的载体的实例包括缓冲剂，例如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(小于约10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，例如EDTA；糖醇，例如甘露糖醇或山梨糖醇；成盐抗衡离子，例如钠；和/或非离子型表面活性剂，例如TWEENTM、聚乙二醇(PEG)和PLURONICSTM。
如本文所用的术语“约”是指为本技术领域的技术人员容易知晓的相应值的一般误差范围。在本文中提及“约”一个值或参数包括(并描述)关于所述值或参数本身的实施方案。
除非上下文另外明确地指示，否则如本文和所附权利要求书中所使用，单数形式“一(a/an)”和“所述(the)”包括多个指示物。例如，对“抗体”的提及是对一个至许多抗体的提及，例如摩尔量，并且包括为本领域技术人员已知的其等效物，等等。
应理解，本文所述的本公开的方面和实施方案包括“包含”方面和实施方案、“由方面和实施方案组成”和“基本上由方面和实施方案组成”。
概述
本公开涉及通过施用TREM2激动剂来治疗与脱髓鞘相关的病症和疾病的方法。此类疾病或病症包括但不限于多发性硬化、视神经炎、视神经脊髓炎(Devic病)、横贯性脊髓炎、急性播散性脑脊髓炎、肾上腺脑白质营养不良和肾上腺脊髓神经病。TREM2激动剂包括抗TREM2抗体，其诱导一种或多种TREM2活性和/或增强由一种或多种配体与TREM2结合诱导的一种或多种活性。例如，激动剂抗TREM2抗体可降低可溶性TREM2，诱导脾酪氨酸激酶(Syk)磷酸化，诱导TREM2与DAP12结合，诱导DAP12磷酸化，增加树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞(Langerhans cell)、库普弗细胞(Kupffer cell)和小神经胶质细胞(小胶质细胞)的增殖、存活和/或功能，或增加TREM2依赖性基因的活性和/或表达。
脱髓鞘疾病，例如多发性硬化，其特征是大脑内持续脱髓鞘和髓磷脂碎片积累，最终导致轴突损伤，临床表现为神经功能障碍(Dulamea 2017)。脱髓鞘疾病中髓鞘再生受损的可能解释包括少突胶质前体细胞(OPC)激活或募集到脱髓鞘部位受损，和/或OPC分化为有髓鞘成熟少突胶质细胞(OL)的缺陷(Franklin和Ffrench-Constant 2017)。
因此，本公开的某些方面至少部分基于如下发现：使用体内鼠类毒素诱导的CNS脱髓鞘模型，激动性抗TREM2抗体(参见例如实施例2)显著增强体内髓磷脂碎片清除(参见例如实施例3)；促进少突胶质前体细胞(OPC)募集到体内脱髓鞘病变(参见例如实施例4)；在体内促进OPC分化为成熟的少突胶质细胞(参见例如实施例4)；并促进体内胼胝体中的轴突健康(参见例如实施例5)。
本公开的方法
本公开提供了治疗、预防中枢神经系统(CNS)脱髓鞘疾病或降低中枢神经系统(CNS)脱髓鞘疾病风险的方法，所述方法包括向有需要的个体施用治疗有效量的与TREM2蛋白结合的抗体，其中所述抗体是激动剂。在一些实施方案中，所述抗体促进个体的CNS中的一个或多个脱髓鞘病变中的髓鞘再生。
本文还提供了用于促进患有中枢神经系统(CNS)脱髓鞘疾病的个体中一个或多个脱髓鞘病变的髓鞘再生的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的与TREM2蛋白结合的抗体，其中所述抗体是激动剂。
脱髓鞘疾病
如本文所用，“脱髓鞘(demyelination)”或“脱髓鞘(demyelinating)”疾病是指以存在一个或多个脱髓鞘病变为特征的任何疾病、病症或疾患。通常，脱髓鞘病变，也称为斑块，其特征在于中枢神经系统的白质和/或灰质中的神经元髓鞘受损或损失。在一些情形下，脱髓鞘病变表现出T细胞和巨噬细胞介导的炎性反应。在一些实施方案中，脱髓鞘病变可根据本领域已知的方法进行诊断、测量和/或分类，例如，使用Lucchinetti等人,(2000),Am Neurological Assoc,47:707-17；和Popescu等人,(2013),Continuum(Minneap Minn),19(4Multiple Sclerosis):901-21中描述的四种脱髓鞘病变模式。脱髓鞘疾病包括但不限于多发性硬化和其他疾病，例如视神经炎、视神经脊髓炎(Devic病)、横贯性脊髓炎、急性播散性脑脊髓炎、肾上腺脑白质营养不良、肾上腺脊髓神经病、粘多糖贮积症(Hurler综合征)、鞘脂贮积病、克拉贝病(Krabbe disease)和其他脑白质营养不良、Leber遗传性视神经萎缩、苯丙酮尿症、Tay-Sachs病、Niemann-Pick病、Gaucher病、急性出血性白质脑炎、渗透性脱髓鞘综合征和Marchiafava-Bignami病。在一些实施方案中，所述脱髓鞘疾病是多发性硬化。
不希望受理论束缚，据信激动性TREM2将改善脱髓鞘疾病(例如多发性硬化)的症状。在某些实施方案中，如本文所述的TREM2抗体可激活或增加TREM2的信号传导以补偿或以其他方式挽救降低的TREM2功能或拷贝数。
在一些实施方案中，根据本文提供的方法施用抗TREM2抗体的个体具有疾病特征或处于疾病特征的风险中，所述疾病特征选自髓磷脂损伤、CNS中的一个或多个脱髓鞘病变、CNS中的炎症、CNS中的一个或多个斑块、髓鞘损失、轴突损伤、OPC减少、OL减少、髓磷脂碎片清除减少、轴突膨体、轴突球样变、神经胶质增生、自发荧光载脂巨噬细胞、轴突破坏或它们的任何组合。在一些实施方案中，所述个体具有CNS中的轴突损伤和/或一个或多个脱髓鞘病变或处于具有CNS中的轴突损伤和/或一个或多个脱髓鞘病变的风险中。在一些实施方案中，所述CNS中的轴突损伤和/或一个或多个脱髓鞘病变位于CNS的白质、灰质或胼胝体中。在一些实施方案中，所述个体具有症状或处于具有症状的风险中，所述症状选自感觉变化、刺痛、麻木、肌肉无力、阵挛、肌肉痉挛、移动困难、协调困难、平衡困难、言语问题、吞咽问题、视觉问题、疲劳、急性疼痛、慢性疼痛、膀胱困难、肠道困难、认知障碍、抑郁、情绪不稳定、Uhthoff现象、莱尔米特征或它们的任何组合。
多发性硬化
多发性硬化(MS)也可称为播散性硬化或播散性脑脊髓炎。MS是其中脑和脊髓轴突周围的脂肪髓鞘受损，从而导致脱髓鞘和瘢痕形成以及广泛体征和症状的炎症性疾病。MS影响脑和脊髓中的神经细胞彼此有效通信的能力。神经细胞通过沿称为轴突的长纤维发送称为动作电位的电信号来通信，所述长纤维含于称为髓磷脂的绝缘物质内。在MS中，身体自身的免疫系统攻击并损害髓磷脂。当髓磷脂丢失时，轴突不再能有效地传导信号。MS发作通常发生在年轻成人中，并且在女性中更常见。
MS的症状包括但不限于感觉变化，例如敏感性丧失或麻刺感；刺痛或麻木，例如感觉迟钝和感觉异常；肌肉无力；阵挛；肌肉痉挛；移动困难；协调和平衡困难，例如共济失调；言语问题，例如构音障碍，或吞咽问题，例如吞咽困难；视觉问题，例如眼球震颤、包括光幻视的视神经炎和复视；疲劳；急性或慢性疼痛；和膀胱和肠道困难；不同程度的认知障碍；抑郁的情绪症状或不稳定情绪；Uhthoff现象，其是由于暴露于高于通常的环境温度所致现有症状的恶化；和莱尔米特征，其是在弯曲颈部时从背部向下延伸的电感。
在一些实施方案中，施用本公开的抗TREM2抗体可预防多发性硬化、降低多发性硬化的风险和/或治疗多发性硬化。在一些实施方案中，施用抗TREM2抗体可诱导患有多发性硬化的个体的一种或多种TREM2活性(例如，DAP12磷酸化、PI3K活化、一种或多种抗炎性介质的表达增加和一种或多种促炎性介质的表达降低)。在一些实施方案中，施用本公开的抗TREM2抗体导致多发性硬化的一种或多种症状的改善或减轻，所述症状包括敏感性丧失或麻刺感；刺痛或麻木，例如感觉迟钝和感觉异常；肌肉无力；阵挛；肌肉痉挛；移动困难；协调和平衡困难，例如共济失调；言语问题，例如构音障碍，或吞咽问题，例如吞咽困难；视觉问题，例如眼球震颤、包括光幻视的视神经炎和复视；疲劳；急性或慢性疼痛；和膀胱和肠道困难；不同程度的认知障碍；抑郁的情绪症状或不稳定情绪；Uhthoff现象，其是由于暴露于高于通常的环境温度所致现有症状的恶化；和莱尔米特征，其是在弯曲颈部时从背部向下延伸的电感。
TREM2蛋白
本公开提供了治疗、预防个体的脱髓鞘疾病或降低其风险的方法，所述方法包括向所述个体施用与TREM2蛋白结合的抗体，其中所述抗体是激动剂。
骨髓细胞-2上表达的触发受体(TREM2)不同地称为TREM-2、TREM2a、TREM2b、TREM2c、骨髓细胞-2a上表达的触发受体和单核细胞-2上表达的触发受体。TREM2是230个氨基酸的膜蛋白。TREM2是主要在骨髓系细胞上表达的免疫球蛋白样受体，所述细胞包括但不限于巨噬细胞、树突细胞、单核细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、破骨细胞和小胶质细胞。在一些实施方案中，TREM2与DAP12一起形成受体信号传导复合物。在一些实施方案中，TREM2磷酸化并经由DAP12(ITAM结构域转接蛋白)进行信号传导。在一些实施方案中，TREM2信号传导导致PI3K或其他细胞内信号的下游活化。在骨髓细胞上，Toll样受体(TLR)信号对于TREM2活性的活化是重要的，例如，在感染反应的背景下。TLR在病理性炎性反应中也起着关键作用，例如，巨噬细胞和树突细胞中表达的TLR。
本公开的TREM2蛋白包括但不限于人类TREM2蛋白(Uniprot登录号Q9NZC2；SEQ IDNO:1)，和非人类哺乳动物TREM2蛋白，例如小鼠TREM2蛋白(Uniprot登录号Q99NH8；SEQ IDNO:2)、大鼠TREM2蛋白(Uniprot登录号D3ZZ89；SEQ ID NO:3)、恒河猴(Rhesus monkey)TREM2蛋白(Uniprot登录号F6QVF2；SEQ ID NO:4)、食蟹猴TREM2蛋白(NCBI登录号XP_015304909.1；SEQ ID NO:5)、马TREM2蛋白(Uniprot登录号F7D6L0；SEQ ID NO:6)、猪TREM2蛋白(Uniprot登录号H2EZZ3；SEQ ID NO:7)和狗TREM2蛋白(Uniprot登录号E2RP46；SEQ IDNO:8)。如本文所用，“TREM2蛋白”是指野生型序列和天然存在的变体序列二者。在一些实施方案中，本公开的激动剂抗TREM2抗体结合于野生型TREM2蛋白、TREM2蛋白的天然存在的变体、或TREM2蛋白的疾病变体。
在一些实施方案中，人类TREM2氨基酸序列的一个实例如下文SEQ ID NO:1所示：
Figure BDA0003886640700000671
在一些实施方案中，所述人类TREM2是包括信号肽的前蛋白。在一些实施方案中，所述人类TREM2是成熟蛋白质。在一些实施方案中，所述成熟TREM2蛋白不包括信号肽。在一些实施方案中，所述成熟TREM2蛋白在细胞上表达。在一些实施方案中，TREM2含有位于人类TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基1-18处的信号肽；位于人类TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基29-112处的细胞外免疫球蛋白样可变型(IgV)结构域；位于人类TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基113-174处的额外细胞外序列；位于人类TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基175-195处的跨膜结构域；和位于人类TREM2(SEQ ID NO:1)的氨基酸残基196-230处的细胞内结构域。TREM2切割位点已被鉴定为发生在组氨酸157的C末端侧(参见WO2018/015573)，并且该位点的切割导致TREM2细胞外结构域的相关部分脱落，可检测为对应于TREM2的所述部分的可溶性TREM2(sTREM2)的增加。
人类TREM2的跨膜结构域含有在氨基酸残基186处的赖氨酸，所述赖氨酸可与DAP12中的天冬氨酸相互作用，DAP12是转导来自TREM2、TREM1和其他相关IgV家族成员的信号传导的关键转接蛋白。
TREM2突变
在某些实施方案中，脱髓鞘疾病涉及与被认为具有“野生型”功能或具有被认为在正常范围内的功能的TREM2蛋白相比功能降低的TREM2蛋白。在某些实施方案中，脱髓鞘疾病的特征在于受影响个体的TREM2基因突变。在某些实施方案中，所述突变导致受影响个体中TREM2的功能降低。突变可以是任何类型，包括例如错义突变、插入缺失或产生截短蛋白质产物的突变。在一些实施方案中，所述个体包含至少一个拷贝的功能性TREM2基因。在一些实施方案中，所述个体对于TREM2基因中的突变是杂合的。在一些实施方案中，所述个体对于TREM2基因中的突变是纯合的。
抗TREM2抗体
本公开的某些方面涉及与TREM2蛋白结合的抗体(例如单克隆抗体)，其中所述抗TREM2抗体是激动剂。在一些实施方案中，本公开的抗体结合成熟TREM2蛋白。在一些实施方案中，本公开的抗体结合成熟TREM2蛋白，其中所述成熟TREM2蛋白在细胞上表达。在一些实施方案中，本公开的抗体结合在一种或多种人类细胞上表达的TREM2蛋白，所述细胞选自人类树突细胞、人类巨噬细胞、人类单核细胞、人类破骨细胞、人类皮肤朗格汉斯细胞、人类库普弗细胞、人类小胶质细胞和它们的任何组合。在一些实施方案中，本公开的抗体结合在一种或多种人类小胶质细胞上表达的TREM2蛋白。
诱导活性和/或增强配体诱导活性的抗TREM2抗体
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体是诱导一种或多种TREM2活性的激动剂抗体。在一些实施方案中，所述抗体在与在细胞上表达的TREM2蛋白结合后诱导一种或多种TREM2活性。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与TREM2蛋白结合而不与一种或多种TREM2配体竞争与TREM2蛋白的结合、抑制其与TREM2蛋白的结合或以其他方式阻断其与TREM2蛋白的结合。TREM2配体的实例包括但不限于大肠杆菌(E.coli)细胞表达的TREM2配体、凋亡细胞、核酸、阴离子脂质、APOE、APOE2、APOE3、APOE4、阴离子APOE、阴离子APOE2、阴离子APOE3、阴离子APOE4、脂质化APOE、脂质化APOE2、脂质化APOE3、脂质化APOE4、两性离子脂质、带负电的磷脂、磷脂酰丝氨酸、硫脂、磷酯酰胆碱、鞘磷脂、膜磷脂、脂质化蛋白质、蛋白脂质、脂质化肽和脂质化淀粉样蛋白β肽。因此，在某些实施方案中，所述一种或多种TREM2配体包含大肠杆菌细胞、凋亡细胞、核酸、阴离子脂质、两性离子脂质、带负电的磷脂、磷脂酰丝氨酸(PS)、硫脂、磷酯酰胆碱、鞘磷脂(SM)、磷脂、脂质化蛋白质、蛋白脂质、脂质化肽和脂质化淀粉样蛋白β肽。
本公开的方法中使用的抗TREM2抗体是激动剂抗体。在一些实施方案中，结合TREM2蛋白的本公开的抗体可包括由于其表位特异性结合TREM2并激活一种或多种TREM2活性的激动剂抗体。在一些实施方案中，此类抗体可结合于TREM2上的配体结合位点并模拟一种或多种TREM2配体的作用，或通过与并非配体结合位点的一个或多个结构域结合来刺激TREM2转导信号。在一些实施方案中，所述抗体不与配体竞争与TREM2结合或以其他方式阻断配体与TREM2的结合。在一些实施方案中，所述抗体与一种或多种TREM2配体加性或协同作用以激活和/或增强一种多种TREM2活性，如下文所述。
本公开的激动剂抗TREM2抗体可展示结合TREM2而不阻断一种或多种TREM2配体的同时结合的能力。本公开的抗TREM2抗体可进一步展示与一种或多种TREM2配体的加性和/或协同功能相互作用。因此，在一些实施方案中，在与本公开的抗TREM2抗体和本公开的一种或多种TREM2配体的组合结合时，TREM2的最大活性可大于(例如，增强)在暴露于饱和浓度的单独配体或饱和浓度的单独抗体时TREM2的最大活性。另外，TREM2在给定浓度的TREM2配体下的活性可在抗体存在下更大(例如，增强)。
因此，在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与一种或多种TREM2配体具有加性效应以在与TREM2蛋白结合时增强一种或多种TREM2活性。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与一种或多种TREM2配体协同增强一种或多种TREM2活性。在一些实施方案中，与不存在抗体下一种或多种TREM2配体诱导一种或多种TREM2活性的效力相比，本公开的抗TREM2抗体增加一种或多种TREM2配体诱导一种或多种TREM2活性的效力。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体在不存在TREM2的细胞表面聚集下增强一种或多种TREM2活性。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体通过诱导或保留TREM2的细胞表面聚集来增强一种或多种TREM2活性。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体通过在一种或多种免疫细胞上表达的一种或多种Fc-γ受体而聚集，所述免疫细胞包括但不限于B细胞和小神经胶质细胞。在一些实施方案中，在原代细胞上或细胞系上测量由一种或多种TREM2配体与TREM2蛋白结合诱导的一种或多种TREM2活性的增强，所述原代细胞包括但不限于树突细胞、骨髓源性树突细胞、单核细胞、小胶质细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、NK细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞和库普弗细胞。
在某些实施方案中，与在没有抗TREM2抗体的情况下由一种或多种TREM2配体与TREM2蛋白结合诱导的一种或多种TREM2活性水平相比，增强由一种或多种TREM2配体与TREM2蛋白结合诱导的一种或多种TREM2活性的本公开的抗TREM2抗体诱导一种或多种TREM2活性的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少14倍、至少15倍、至少16倍、至少17倍、至少18倍、至少19倍、至少20倍或更多倍增加。
在一些实施方案中，本公开的激动剂抗TREM2抗体增强在髓磷脂存在下诱导的一种或多种TREM2活性。在一些实施方案中，所述在髓磷脂存在下诱导的一种或多种TREM2活性包括增加一种或多种TREM2依赖性基因的活性。在一些实施方案中，所述一种或多种TREM2依赖性基因包括活化T细胞核因子(NFAT)转录因子。在一些实施方案中，抗TREM2抗体激活小鼠或人类TREM2依赖性基因的能力是使用在NFAT(活化T细胞核因子)启动子控制下的荧光素酶报告基因进行评价，例如，如下所述。
在一些实施方案中，可由本公开的抗TREM2抗体和/或本公开的一种或多种TREM2配体诱导和/或增强的TREM2活性包括但不限于TREM2与DAP12的结合；DAP12磷酸化；Syk激酶的激活；选自IFN-β、IL-1α、IL-1β、TNF-α、YM-1、IL-6、IL-8、CRP、CD86、MCP-1/CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCR2、CXCL-10、Gata3、Rorc、IL-20家族成员、IL-33、LIF、IFN-γ、OSM、CNTF、GM-CSF、CSF-1、MHC-II、OPN、CD11c、GM-CSF、IL-11、IL-12、IL-17、IL-18和IL-23的一种或多种促炎性介质的调节，任选地其中所述调节发生在选自巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、树突细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和小神经胶质细胞的一种或多种细胞中；Syk、ZAP70或两者募集到DAP12/TREM2复合物；增加一种或多种TREM2依赖性基因的活性，任选地其中所述一种或多种TREM2依赖性基因包含活化T细胞核因子(NFAT)转录因子；增加树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、小胶质细胞、M1小胶质细胞、活化的M1小胶质细胞和M2小胶质细胞或它们的任何组合的存活；选自CD83、CD86 MHCII类、CD40和它们的任何组合的一种或多种刺激分子的调节表达，任选地其中所述CD40在树突细胞、单核细胞、巨噬细胞或它们的任何组合上表达，并且任选地其中所述树突细胞包含骨髓来源树突细胞；增加记忆力；以及减少认知缺陷。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体在施用于个体时增加记忆和/或减少认知缺陷。
在一些实施方案中，本公开的激动剂抗TREM2抗体诱导一种或多种TREM2活性，所述活性选自TREM2与DAP12结合、DAP12磷酸化、Syk激酶活化、Syk募集到DAP12/TREM2复合物、增加一种或多种TREM2依赖性基因的活性，或它们的任何组合。在一些实施方案中，所述一种或多种TREM2依赖性基因包括活化T细胞核因子(NFAT)转录因子。
Syk磷酸化
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体可在与细胞中表达的TREM2蛋白结合后诱导脾酪氨酸激酶(Syk)磷酸化。
脾酪氨酸激酶(Syk)是一种细胞内信号分子，其通过将若干底物磷酸化而在TREM2下游发挥作用，从而促进信号复合物的形成，导致细胞活化和炎症过程。
在一些实施方案中，激动剂TREM2抗体诱导Syk活化的能力是通过培养小鼠巨噬细胞并测量细胞提取物中Syk蛋白的磷酸化状态来确定。在一些实施方案中，来自野生型(WT)小鼠、TREM2敲除(KO)小鼠和缺乏功能性Fc受体共同γ链基因(FcgR KO；REF:Takai T1994.Cell 76(3):519-29)表达的小鼠的骨髓来源巨噬细胞(BMDM)在1％血清RPMI中饥饿4小时，然后用PBS-EDTA从组织培养皿中取出，用PBS洗涤并计数。在一些实施方案中，细胞用全长TREM2抗体包被，或用对照抗体在冰上包被15分钟。在一些实施方案中，在用冷PBS洗涤后，将细胞在山羊抗人IgG存在下在37℃温育指定的时间段。在一些实施方案中，在刺激后，细胞用裂解缓冲液(1％v/v NP-40％、50Mm Tris-HCl(pH 8.0)、150mM NaCl、1mM EDTA、1.5mM MgCl2、10％甘油，加上蛋白酶和磷酸酶抑制剂)裂解，接着在4℃下以16,000g离心10min以除去不溶性物质。在一些实施方案中，然后用抗Syk抗体(用于BMDM的N-19或用于人类DC的4D10，Santa Cruz Biotechnology)对裂解物进行免疫沉淀。在一些实施方案中，沉淀的蛋白质通过SDS-PAGE分级分离，转移至PVDF膜并用抗磷酸酪氨酸抗体(4G10，Millipore)探测。在一些实施方案中，为了确认所有底物都被充分免疫沉淀，用抗Syk抗体(Abcam，用于BMDM)或抗Syk(Novus Biological，用于人类DC)重新探测免疫印迹。在一些实施方案中，使用增强化学发光(ECL)系统(GE Healthcare)进行可视化，如所述(例如，Peng等人,(2010)Sci Signal.,3(122):ra38)。
DAP12结合和磷酸化
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体可诱导TREM2与DAP12的结合。在其他实施方案中，本公开的抗TREM2抗体可在与细胞中表达的TREM2蛋白结合后诱导DAP12磷酸化。在其他实施方案中，TREM2介导的DAP12磷酸化是由一种或多种SRC家族酪氨酸激酶诱导。Src家族酪氨酸激酶的实例包括但不限于Src、Syk、Yes、Fyn、Fgr、Lck、Hck、Blk、Lyn和Frk。
DAP12不同地称为TYRO蛋白酪氨酸激酶结合蛋白、TYROBP、KARAP和PLOSL。DAP12是在其细胞质结构域中含有基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)的跨膜信号传导蛋白。在某些实施方案中，抗TREM2抗体可在其ITAM基序中诱导DAP12磷酸化。可使用本领域已知的用于确定蛋白质磷酸化(例如DAP12磷酸化)的任何方法。
在一些实施方案中，DAP12被SRC家族激酶磷酸化，导致Syk激酶、ZAP70激酶或两者至DAP12/TREM2复合物的募集和活化。
在一些实施方案中，TREM2抗体诱导DAP12活化的能力是通过培养小鼠巨噬细胞并测量细胞提取物中DAP12蛋白的磷酸化状态来确定。在一些实施方案中，在用抗体刺激之前，小鼠野生型(WT)骨髓来源巨噬细胞(BMDM)和TREM2敲除(KO)BMDM在1％血清RPMI中饥饿4h。在一些实施方案中，将15×106个细胞与全长TREM2抗体或对照抗体在冰中温育15min。在一些实施方案中，洗涤细胞并在山羊抗人IgG存在下在37℃温育指定的时间段。在一些实施方案中，在刺激后，细胞用裂解缓冲液(1％v/v正十二烷基-β-D-麦芽糖苷、50mM Tris-HCl(pH 8.0)、150mM NaCl、1mM EDTA、1.5mM MgCl2、10％甘油，加上蛋白酶和磷酸酶抑制剂)裂解，接着在4℃下以16,000g离心10min以去除不溶性物质。在一些实施方案中，细胞裂解物用第二TREM2抗体(R&D Systems)进行免疫沉淀。在一些实施方案中，沉淀的蛋白质通过SDS-PAGE分级分离，转移至PVDF膜，并用抗磷酸酪氨酸抗体(4G10，Millipore)探测。在一些实施方案中，膜用抗DAP12抗体(Cells Signaling，D7G1X)剥离并重新探测。在一些实施方案中，用于TREM2免疫沉淀的每种细胞裂解物含有等量的蛋白质，如对照抗体(抗肌动蛋白，Santa Cruz)所示。
表达TREM2的细胞的增殖、存活和功能性
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体在与细胞中表达的TREM2蛋白结合后可增加树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和小神经胶质细胞(小胶质细胞)的增殖、存活和/或功能。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体不抑制一种或多种先天免疫细胞的生长(例如，增殖和/或存活)。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体可在与细胞中表达的TREM2蛋白结合后增加小神经胶质细胞(小胶质细胞)的增殖、存活和/或功能。小神经胶质细胞是一类神经胶质细胞，其是脑和脊髓的驻留巨噬细胞，并因此充当中枢神经系统(CNS)中主动免疫防御的第一和主要形式。小神经胶质细胞构成脑内总神经胶质细胞群体的20％。小神经胶质细胞不断清除CNS中的斑块、受损神经元和传染原。脑和脊髓视为“免疫豁免”器官，这是因为其通过一系列称为血脑屏障的内皮细胞与身体的其他部分分离，这防止大部分感染到达脆弱的神经组织。在其中传染原直接引入至脑或跨越血脑屏障的情形下，小神经胶质细胞必须快速反应以降低炎症并在传染原损害敏感神经组织之前将其破坏。由于来自身体其他部分的抗体不可用(极少抗体足够小以跨越血脑屏障)，因此小胶质细胞必须能够识别异物，将其吞噬并用作使T细胞活化的抗原呈递细胞。由于此过程必须快速完成以防止潜在的致命损害，因此小神经胶质细胞对CNS中的微小病理性变化也极敏感。它们部分地因具有独特钾通道而实现这种敏感性，所述钾通道对细胞外钾的微小变化也有反应。
如本文所用，本公开的巨噬细胞包括但不限于M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞和M2巨噬细胞。如本文所用，本公开的小神经胶质细胞包括但不限于M1小神经胶质细胞、活化的M1小神经胶质细胞和M2小神经胶质细胞。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体可增加CD83和/或CD86在树突细胞、单核细胞和/或巨噬细胞上的表达。
如本文所用，如果用本公开的抗TREM2抗体治疗的受试者中树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能大于未用抗TREM2抗体治疗的相应受试者中树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能，则所述巨噬细胞、树突细胞、单核细胞和/或小胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能可包括增加的表达。在一些实施方案中，与未用抗TREM2抗体治疗的受试者中树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能相比，本公开的抗TREM2抗体可使相应受试者中树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能增加例如至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在其他实施方案中，与未用抗TREM2抗体治疗的受试者中树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能相比，本公开的抗TREM2抗体可使相应受试者中树突细胞、巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和/或小胶质细胞的增殖速率、存活和/或功能增加例如至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。
在一些实施方案中，为了评价抗TREM2抗体在体外诱导或增强细胞存活的能力，缺乏FcgRI、FcgRIII和FceRI受体的γ链亚基的巨噬细胞(Fcgr1KO小鼠，参考文献：Takai T,Li M,Sylvestre D,Clynes R,Ravetch J.(1994).76:519-529)在板结合的抗TREM2抗体存在下培养，并且当细胞在次优生长条件下培养时测定细胞活力。在一些实施方案中，来自FcgR1 KO小鼠(Taconic，型号584)的鼠类骨髓前体细胞通过用冷PBS冲洗胫骨和股骨骨髓细胞获得。在一些实施方案中，在用PBS洗涤一次后，使用ACK裂解缓冲液(Lonza)裂解红细胞，用PBS洗涤两次并以0.5x106个细胞/毫升悬浮在具有指定量的M-CSF(Peprotech)的完全RPMI培养基(10％ FCS、Pen/Strep、Gln、neAA)中以产生巨噬细胞。在一些实施方案中，为了分析骨髓来源巨噬细胞的细胞活力，如上制备细胞并以2.5x104/200μl接种于非组织培养处理板中具有次优量的M-CSF(10ng/ml)的96孔板中持续两天。在一些实施方案中，然后使用ToxGloTM试剂盒(Promega)对细胞进行定量，并测定发光作为细胞活力的量度。在一些实施方案中，所有实验均在存在或不存在抗TREM2抗体或同种型对照抗体的情况下进行。
TREM2依赖性基因表达
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体可增加TREM2依赖性基因(例如活化T细胞核因子(NFAT)转录因子家族的一种或多种转录因子)的活性和/或表达。
在一些实施方案中，可溶性全长抗TREM2抗体激活小鼠或人类TREM2依赖性基因的能力是使用在NFAT(活化T细胞核因子)启动子控制下的荧光素酶报告基因进行评价。在一些实施方案中，源自小鼠胸腺淋巴瘤T淋巴细胞的细胞系BW5147.G.1.4(
Figure BDA0003886640700000771
TIB48TM)被小鼠TREM2和DAP12以及Cignal Lenti NFAT-萤光素酶病毒(Qiagen)感染。在一些实施方案中，或者BW5147.G.1.4细胞系被人类TREM2/DAP12融合蛋白和Cignal Lenti NFAT-萤光素酶病毒(Qiagen)感染。在一些实施方案中，作为信号传导的阳性对照，将PMA(0.05ug/ml)和离子霉素(0.25uM)一起添加。在一些实施方案中，将细胞与可溶性抗TREM2和同种型对照抗体一起温育6小时，并通过将OneGlo试剂(Promega)添加到每个孔中并在室温下在板振荡器上温育3min来测量荧光素酶活性。在一些实施方案中，使用BioTek读板器测量萤光素酶信号。在一些实施方案中，由于内源性配体的存在或导致TREM2信号传导的自发受体集聚，细胞显示出强直性TREM2依赖性信号传导。
在一些实施方案中，例如利用体外细胞测定来测量由一种或多种TREM2配体与TREM2蛋白结合诱导的一种或多种TREM2活性的增强。在一些实施方案中，一种或多种TREM2活性的增加可通过本文所述或本领域已知的任何适宜的基于细胞的体外测定或适宜的体内模型来测量，例如，通过利用基于荧光素酶的报告基因测定来测量TREM2依赖性基因表达，使用Western印迹分析来测量TREM2诱导的下游信号传导搭配物(例如Syk)的磷酸化的增加，或通过利用流式细胞术，例如荧光激活细胞分选(FACS)来测量TREM2激活标志物的细胞表面水平的变化。本文所述或本领域已知的任何基于细胞的体外测定或适宜的体内模型可用于测量TREM2与一种或多种TREM2配体之间的相互作用(例如，结合)。
在一些实施方案中，一种或多种TREM2活性的增加是通过基于细胞的体外测定来测量。在一些实施方案中，为了评价抗TREM2抗体增强体外细胞存活的能力，缺乏FcgRI、FcgRIII和FceRI受体的γ链亚基的巨噬细胞(Fcgr1KO小鼠，参考文献：Takai T,Li M,Sylvestre D,Clynes R,Ravetch J.(1994).Cell,76:519-529)在板结合的抗TREM2抗体存在下培养，并且当细胞在次优生长条件下培养时测定细胞活力。在一些实施方案中，来自FcgR1 KO小鼠(Taconic，型号584)的鼠类骨髓前体细胞通过用冷PBS冲洗胫骨和股骨骨髓细胞获得。在一些实施方案中，在用PBS洗涤一次后，使用ACK裂解缓冲液(Lonza)裂解红细胞，用PBS洗涤两次并以0.5x106个细胞/毫升悬浮在具有指定量的M-CSF(Peprotech)的完全RPMI培养基(10％ FCS、Pen/Strep、Gln、neAA)中以产生巨噬细胞。在一些实施方案中，为了分析骨髓来源巨噬细胞的细胞活力，如上制备细胞并以2.5x104/200μl接种于非组织培养处理板中具有次优量的M-CSF(10ng/ml)的96孔板中持续两天。在一些实施方案中，然后使用ToxGloTM试剂盒(Promega)对细胞进行定量，并测定发光作为细胞活力的量度。在一些实施方案中，所有实验均在存在或不存在抗TREM2抗体或同种型对照抗体的情况下进行。
在一些实施方案中，一种或多种TREM2活性的增加通过基于细胞的体内测定来测量。在一些实施方案中，为了评价抗TREM2抗体增加体内免疫细胞数量的能力，向C57B16小鼠腹膜内(IP)注射抗TREM2抗体或小鼠IgG1同种型对照抗体，并且通过FACS量化脑中免疫细胞的数量。在一些实施方案中，每组三至四只小鼠接受40mg/kg抗TREM2抗体或同种型对照抗体mIgG1(克隆MOPC-21，Bioxcell)的IP注射。在一些实施方案中，48小时后，收获整个大脑，用PBS冲洗，在37℃下在含有1mg/ml胶原酶的PBS中温育，并通过细胞过滤器处理以获得单细胞悬浮液。在一些实施方案中，然后将细胞与抗CD45-PerCp-Cy7、抗CD11b-PerCP-Cy5.5、抗Gr1-FITC抗体和细胞活力染料(Life Technologies，目录#L34957)一起在冰上温育30min，然后用冷的FACS缓冲液洗涤两次。在一些实施方案中，然后通过FACS分析4％ PFA固定的样品。在一些实施方案中，在BD FACSCantoTM II细胞仪(Becton Dickinson)上采集数据并用FlowJo软件进行分析。
在一些实施方案中，当TREM2配体以其EC50浓度使用时，并且与在抗TREM2抗体不存在下由TREM2配体与TREM2蛋白的结合诱导的TREM2依赖性基因转录水平相比，如果本公开的抗TREM2抗体在以约0.5nM至约50nM范围内或大于50nM的浓度使用时在配体诱导的TREM2依赖性基因转录中诱导约1.5倍至约6倍范围内或超过6倍的增加，则其增强由TREM2配体与TREM2蛋白的结合诱导的一种或多种TREM2活性。在一些实施方案中，当TREM2配体以其EC50浓度使用时，并且与在抗TREM2抗体不存在下由TREM2配体与TREM2蛋白的结合诱导的TREM2依赖性基因转录水平相比，在以约0.5nM至约50nM范围内或大于50nM的浓度使用时，配体诱导的TREM2依赖性基因转录增加至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少14倍、至少15倍、至少16倍、至少17倍、至少18倍、至少19倍、至少20倍或更大。
在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体以如下浓度使用：至少0.5nM、至少0.6nM、至少0.7nM、至少0.8nM、至少0.9nM、至少1nM、至少2nM、至少3nM、至少4nM、至少5nM、至少6nM、至少7nM、至少8nM、至少9nM、至少10nM、至少15nM、至少20nM、至少25nM、至少30nM、至少35nM、至少40nM、至少45nM、至少46nM、至少47nM、至少48nM、至少49nM或至少50nM。在一些实施方案中，所述TREM2配体是磷脂酰丝氨酸(PS)。在一些实施方案中，所述TREM2配体是鞘磷脂(SM)。在一些实施方案中，一种多种TREM2活性的增加可通过本文所述或本领域已知的任何适宜的基于细胞的体外测定或适宜的体内模型来测量。在一些实施方案中，使用基于荧光素酶的报告基因测定来测量在抗体存在和不存在下配体诱导的TREM2依赖性基因表达的倍数增加，如例如WO2017/062672和WO2019/028292中所述。
如本文所用，利用本文所述或本领域已知的任何体外测定或基于细胞的培养测定，如果本公开的抗TREM2抗体在饱和抗体浓度下使配体与TREM2的结合降低小于20％，则其不与一种或多种TREM2配体竞争与TREM2之间的相互作用(例如，结合)、不对其进行抑制或不以其他方式对其进行阻断。在一些实施方案中，利用本文所述或本领域已知的任何体外测定或基于细胞的培养测定，本公开的抗TREM2抗体在饱和抗体浓度下使一种或多种TREM2配体与TREM2之间的相互作用(例如，结合)抑制小于20％、小于19％、小于18％、小于17％、小于16％、小于15％、小于14％、小于13％、小于12％、小于11％、小于10％、小于9％、小于8％、小于7％、小于6％、小于5％、小于4％、小于3％、小于2％或小于1％。
降低可溶性TREM2的抗TREM2抗体
在一些实施方案中，激动剂抗TREM2抗体降低可溶性TREM2(sTREM2)。在一些实施方案中，激动剂抗TREM2抗体降低从细胞的细胞表面“脱落”到细胞外样品中的sTREM2水平(例如脱落)。在一些实施方案中，这种抗体与TREM2的区域结合，从而阻断TREM2的切割。在此类实施方案中，所述抗体结合于包含His157(TREM2的切割位点)的区域。
与不存在抗TREM2抗体时的sTREM2量相比，抗TREM2抗体对TREM2切割的抑制程度与抗TREM2抗体存在时可溶性TREM2(sTREM2)的量负相关。例如，如例如通过sTREM2的基于ELISA的定量所测定，如果在所述抗TREM2抗体存在下，sTREM2的量为不存在抗TREM2抗体的情况下sTREM2量的0-90％、优选0-80％、更优选0-70％、甚至更优选0-60％、甚至更优选0-50％并且甚至更优选0-20％，则抗TREM2抗体可被认为是抑制TREM2切割的抗TREM2抗体。
在一些实施方案中，如果经处理样品中的sTREM2的量相比于对照值减少至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，则抗TREM2抗体降低sTREM2的水平。在一些实施方案中，对照值是未经处理的样品(例如，来自未经抗TREM2抗体处理的表达TREM2的细胞的上清液，或来自未经抗TREM2抗体处理的受试者的样品)或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中sTREM2的量。
在一些实施方案中，使用包含流体的样品测量sTREM2脱落，所述流体例如血液、血浆、血清、尿液或脑脊液。在一些实施方案中，所述样品包含脑脊液。在一些实施方案中，所述样品包含来自细胞培养物的上清液(例如，来自内源性表达TREM2的原代细胞或细胞系，例如人类巨噬细胞，或已被工程化以表达TREM2的原代细胞或细胞系的上清液)。
在一些实施方案中，样品中sTREM2的水平使用免疫测定进行测量。免疫测定在本领域中是已知的并且包括但不限于酶免疫测定(EIA)如酶倍增免疫测定(EMIA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、微粒酶免疫测定(MEIA)、免疫组织化学(IHC)、免疫细胞化学、毛细管电泳免疫测定(CEIA)、放射免疫测定(RIA)、免疫荧光、化学发光免疫测定(CL)和电化学发光免疫测定(ECL)。在一些实施方案中，sTREM2水平使用ELISA测定进行测量。
在一些实施方案中，ELISA测定可用于定量细胞培养上清液中sTREM2的水平。在一些实施方案中，人类sTREM2的ELISA使用Meso Scale Discovery SECTOR成像仪2400进行。在一些实施方案中，抗生蛋白链菌素包被的96孔板在4℃下在0.5％牛血清白蛋白(BSA)和0.05％ Tween 20中在PBS(pH 7.4)(封闭缓冲液)中封闭过夜。在一些实施方案中，将板与在封闭缓冲液中稀释的生物素化多克隆山羊抗人TREM2捕获抗体(0.25mg/ml；R&DSystems)一起在室温下振摇1小时。在一些实施方案中，板随后用PBS中的0.05％ Tween 20(洗涤缓冲液)洗涤四次，并在室温下与用补充有蛋白酶抑制剂(Sigma)的0.25％ BSA和含0.05％ Tween 20的PBS(pH 7.4)(测定缓冲液)1:4稀释的样品一起温育2小时。在一些实施方案中，重组人类TREM2蛋白(Holzel Diagnostika)在测定缓冲液中以两倍连续稀释进行稀释并用于标准曲线(浓度范围，4000至62.5pg/ml)。在一些实施方案中，板用洗涤缓冲液洗涤三次持续5分钟，然后在室温下与在封闭缓冲液中稀释的小鼠单克隆抗TREM2抗体(1mg/ml；Santa Cruz Biotechnology；B-3)一起温育1小时。在一些实施方案中，在三个额外的洗涤步骤之后，将板与SULFO-TAG标记的抗小鼠二级抗体(1:1000；Meso ScaleDiscovery)一起温育并在黑暗中温育1小时。在一些实施方案中，板用洗涤缓冲液洗涤三次，接着在PBS中进行两个洗涤步骤，并通过加入Meso Scale Discovery Read缓冲液显色。在一些实施方案中，使用Meso Scale Discovery SECTOR成像仪2400读取器测量电化学刺激后620nm处的光发射。在一些实施方案中，为了定量分泌的sTREM2的水平，一式两份地分析来自生物学重复物的条件培养基。在一些实施方案中，使用MasterPlex ReaderFit软件(MiraiBio Group，Hitachi Solutions America)通过五参数逻辑拟合生成sTREM2标准曲线。在一些实施方案中，随后将sTREM2的水平相对于从Western印迹定量的未成熟TREM2的水平归一化。
在一些实施方案中，sTREM2可以是细胞TREM2受体的无活性变体。在一些实施方案中，sTREM2可存在于外周，例如在受试者的血浆或脑中，并且可隔离抗TREM2抗体。此类隔离的抗体将无法结合并激活例如细胞上存在的细胞TREM2受体。因此，在某些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体，例如本公开的激动剂抗TREM2抗体，不结合于可溶性TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体，例如本公开的激动剂抗TREM2抗体，在体内不结合于可溶性TREM2。在一些实施方案中，不结合可溶性TREM2的本公开的激动剂抗TREM2抗体可结合于TREM2上的表位，例如，所述表位可包括不包含在sTREM2中的细胞TREM2的细胞外结构域的一部分，例如氨基酸残基161-175内的一个或多个氨基酸残基；可能位于或接近TREM2的跨膜部分；或者可包括TREM2的跨膜部分。
促进髓磷脂清除的抗TREM2抗体
脱髓鞘疾病的病理特征是在CNS中形成脱髓鞘病变。例如，在多发性硬化中，可能在白质和灰质中发现脱髓鞘病变(Lassmann,Bruck等人,2007)。众所周知，吞噬细胞去除和清除髓磷脂碎片对于消除可能干扰组织中髓鞘再生的抑制信号至关重要(Kotter,Li等人,2006；Lampron,Larochelle等人,2015；Franklin和Ffrench-Constant2017)。
因此，在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体(例如，激动剂抗TREM2抗体)增加或促进个体的一个或多个脱髓鞘病变中(例如，个体的CNS中)髓磷脂碎片的清除。例如，在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体将个体的一个或多个脱髓鞘病变中髓磷脂碎片的量减少至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少100％。在一些实施方案中，与施用抗TREM2抗体之前个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓磷脂碎片的量相比，本公开的抗TREM2抗体减少相同个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓磷脂碎片的量。在一些实施方案中，与未施用抗TREM2抗体的个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓磷脂碎片的量相比，本公开的抗TREM2抗体减少相应个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓磷脂碎片的量。在一些实施方案中，与施用抗TREM2抗体之前多名个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓磷脂碎片的量相比，向相同的多名个体施用本公开的抗TREM2抗体将所述多名个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓磷脂碎片的量减少至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或100％。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体将一个或多个脱髓鞘病变中的髓磷脂碎片去除率提高至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。在一些实施方案中，与施用抗TREM2抗体之前个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓磷脂碎片去除率相比，本公开的抗TREM2抗体增加相同个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓磷脂碎片去除率。在一些实施方案中，与未施用抗TREM2抗体的个体中髓磷脂碎片去除率相比，本公开的抗TREM2抗体增加相应个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓磷脂碎片去除率。在一些实施方案中，与施用抗TREM2抗体之前多名个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓磷脂碎片去除率相比，向相同的多名个体施用本公开的抗TREM2抗体使所述多名个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓磷脂碎片去除率增加至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或100％。
脱髓鞘病变和/或髓鞘形成状态可使用本领域中的任何方法在个体中测量，例如磁化传递率(MTR)、受限质子分数f、髓磷脂水分数和扩散张量成像(DTI)、正电子发射断层扫描(PET)和磁共振成像(MRI)(参见例如Mallik等人,(2014)J Neurology,Neurosurgery,and Psychiatry,85(12):1396-1404)。
促进少突胶质细胞的抗TREM2抗体
通常情况下，脱髓鞘期间少突胶质细胞(OL)的丧失后接着是髓鞘再生，主要由少突胶质前体细胞(OPC)、广泛分布在CNS中的多能成体祖细胞维持。在多发性硬化中，由OPC生成的OL受损导致脱髓鞘和髓鞘再生之间的不平衡，这是脑内持续脱髓鞘和髓磷脂碎片积累的主要原因，最终导致轴突损伤，临床表现为神经功能障碍(Dulamea 2017)。不希望受理论束缚，据信在脱髓鞘疾病如MS中轴突髓鞘再生失败可能是由于OPC活化受损、OPC向脱髓鞘位点募集受损和/或OPC分化为有髓鞘成熟OL的缺陷(Franklin和Ffrench-Constant2017)。
因此，在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体(例如，激动剂抗TREM2抗体)增加或促进OPC募集到个体中(例如个体的CNS中)的一个或多个脱髓鞘病变。例如，在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体使个体的一个或多个脱髓鞘病变中的OPC数量增加至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。在一些实施方案中，与施用抗TREM2抗体之前个体的一个或多个脱髓鞘病变中的OPC数量相比，本公开的抗TREM2抗体增加相同个体的一个或多个脱髓鞘病变中的OPC数量。在一些实施方案中，与未施用抗TREM2抗体的个体的一个或多个脱髓鞘病变中的OPC数量相比，本公开的抗TREM2抗体增加相应个体的一个或多个脱髓鞘病变中的OPC数量。在一些实施方案中，与施用抗TREM2抗体之前多名个体的一个或多个脱髓鞘病变中的OPC数量相比，向相同的多名个体施用本公开的抗TREM2抗体使所述多名个体的一个或多个脱髓鞘病变中的OPC的数量增加至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或100％。在一些实施方案中，所述OPC是PDGFRa阳性的。
在其他实施方案中，本公开的抗TREM2抗体(例如激动剂抗TREM2抗体)增加或促进个体中(例如个体的CNS中)的一个或多个脱髓鞘病变中OPC分化为成熟OL。例如，在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体使一个或多个脱髓鞘病变中OPC分化为成熟OL的速率增加至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。在一些实施方案中，与在施用抗TREM2抗体之前个体的一个或多个脱髓鞘病变中OPC分化为成熟OL的速率相比，本公开的抗TREM2抗体增加相同个体的一个或多个脱髓鞘病变中OPC分化为成熟OL的速率。在一些实施方案中，与未施用抗TREM2抗体的个体的一个或多个脱髓鞘病变中OPC分化为成熟OL的速率相比，本公开的抗TREM2抗体增加相应个体的一个或多个脱髓鞘病变中OPC分化为成熟OL的速率。在一些实施方案中，与施用抗TREM2抗体之前多名个体的一个或多个脱髓鞘病变中的OPC分化为成熟OL的速率相比，向相同的多名个体施用本公开的抗TREM2抗体使所述多名个体的一个或多个脱髓鞘病变中OPC分化为成熟OL的速率增加至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或100％。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体(例如，激动剂抗TREM2抗体)促进个体中(例如个体的CNS中)一个或多个脱髓鞘病变中成熟OL的增加。例如，在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体使个体的一个或多个脱髓鞘病变中成熟OL的数量增加至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。在一些实施方案中，与施用抗TREM2抗体之前个体的一个或多个脱髓鞘病变中成熟OL的数量相比，本公开的抗TREM2抗体增加相同个体的一个或多个脱髓鞘病变中成熟OL的数量。在一些实施方案中，与未施用抗TREM2抗体的个体的一个或多个脱髓鞘病变中成熟OL的数量相比，本公开的抗TREM2抗体增加相应个体的一个或多个脱髓鞘病变中成熟OL的数量。在一些实施方案中，与施用抗TREM2抗体之前多名个体的一个或多个脱髓鞘病变中的成熟OL的数量相比，向相同的多名个体施用本公开的抗TREM2抗体使所述多名个体的一个或多个脱髓鞘病变中成熟OL的数量增加至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或100％。
在一些实施方案中，所述成熟OL是OLIG2和/或CNPase阳性的。已经描述了用于定量成熟OL的方法(参见例如Lucchinetti等人,(1999)Brain 122(12):2279-2295)。
促进髓鞘再生和轴突健康的抗TREM2抗体
脱髓鞘疾病如多发性硬化中的脱髓鞘最终导致轴突损伤，临床表现为神经功能障碍(Dulamea 2017)。
因此，在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体(例如，激动剂抗TREM2抗体)增加或促进个体中(例如个体的CNS中)的一个或多个脱髓鞘病变中的髓鞘再生。例如，在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体使个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓鞘再生增加至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。在一些实施方案中，与施用抗TREM2抗体之前个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓鞘再生相比，本公开的抗TREM2抗体增加相同个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓鞘再生。在一些实施方案中，与未施用抗TREM2抗体的个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓鞘再生相比，本公开的抗TREM2抗体增加相应个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓鞘再生。在一些实施方案中，与施用抗TREM2抗体之前多名个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓鞘再生相比，向相同的多名个体施用本公开的抗TREM2抗体使所述多名个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓鞘再生增加至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或100％。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体使一个或多个脱髓鞘病变中的髓鞘再生速率增加至少1.5倍、至少1.6倍、至少1.7倍、至少1.8倍、至少1.9倍、至少2.0倍、至少2.1倍、至少2.15倍、至少2.2倍、至少2.25倍、至少2.3倍、至少2.35倍、至少2.4倍、至少2.45倍、至少2.5倍、至少2.55倍、至少3.0倍、至少3.5倍、至少4.0倍、至少4.5倍、至少5.0倍、至少5.5倍、至少6.0倍、至少6.5倍、至少7.0倍、至少7.5倍、至少8.0倍、至少8.5倍、至少9.0倍、至少9.5倍或至少10倍。在一些实施方案中，与施用抗TREM2抗体之前个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓鞘再生速率相比，本公开的抗TREM2抗体增加相同个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓鞘再生速率。在一些实施方案中，与未施用抗TREM2抗体的个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓鞘再生速率相比，本公开的抗TREM2抗体增加相应个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓鞘再生速率。在一些实施方案中，与施用抗TREM2抗体之前多名个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓鞘再生速率相比，向相同的多名个体施用本公开的抗TREM2抗体使所述多名个体的一个或多个脱髓鞘病变中的髓鞘再生率增加至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或100％。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体(例如，激动剂抗TREM2抗体)增加或促进个体中(例如个体的CNS中)的一个或多个脱髓鞘病变中的轴突健康。例如，在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体将个体的一个或多个脱髓鞘病变中的磷酸化神经丝水平增加至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少110％、至少115％、至少120％、至少125％、至少130％、至少135％、至少140％、至少145％、至少150％、至少160％、至少170％、至少180％、至少190％或至少200％。在一些实施方案中，与施用抗TREM2抗体之前个体的一个或多个脱髓鞘病变中的磷酸化神经丝水平相比，本公开的抗TREM2抗体增加相同个体的一个或多个脱髓鞘病变中的磷酸化神经丝水平。在一些实施方案中，与未施用抗TREM2抗体的个体的一个或多个脱髓鞘病变中的磷酸化神经丝水平相比，本公开的抗TREM2抗体增加相应个体的一个或多个脱髓鞘病变中的磷酸化神经丝水平。在一些实施方案中，与施用抗TREM2抗体之前多名个体的一个或多个脱髓鞘病变中的磷酸化神经丝的水平相比，向相同的多名个体施用本公开的抗TREM2抗体使所述多名个体的一个或多个脱髓鞘病变中的磷酸化神经丝的水平增加至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或100％。在一些实施方案中，所述磷酸化神经丝是SMI31阳性的。
可使用本领域已知的任何方法，例如磁化传递率(MTR)、受限质子分数f、髓磷脂水分数和扩散张量成像(DTI)、正电子发射断层扫描(PET)、视觉诱发电位(VEP)和磁共振成像(MRI)，在个体中测量一个或多个脱髓鞘病变中的髓鞘再生水平、髓鞘再生速率和/或轴突健康(参见例如Malik等人,(2014)J Neurology,Neurosurgery,and Psychiatry,85(12):1396-1404；和Bove等人,(2017)Neurotherapeutics,14:894-904)。
在一些实施方案中，可使用轴突健康和/或神经变性的生物标志物来测量轴突健康。例如，可使用本领域已知的方法，例如ELISA、Western印迹、质谱和斑点印迹，在来自个体的脑脊液样品和/或血液样品中检测轴突健康和/或神经变性的生物标志物(例如SIM31、SMI35、NF-L、NF-H、NF-M、α-丝联蛋白、tau、氨基酸n-乙酰天冬氨酸、pNF-H和本领域已知的其他标志物)(参见例如Gresle等人,(2011)Multiple Sclerosis International,315406)。
影响TREM2聚集的抗体
在体内，本公开的抗TREM2抗体可通过多种潜在机制激活受体。在一些实施方案中，本公开的激动性抗TREM2抗体由于适当的表位特异性而具有在溶液中激活TREM2的能力，而不必与二级抗体聚集、结合在板上或通过Fcg受体聚集。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体具有人类抗体的同种型，例如IgG2，由于其独特的结构，其具有聚集受体或将受体保持在聚集构型中的内在能力，从而激活受体如TREM2而不与Fc受体结合(例如，White等人,(2015)Cancer Cell27,138-148)。
在某些实施方案中，激动剂抗TREM2抗体可诱导或维持在细胞表面上的聚集以激活TREM2并转导信号。在某些实施方案中，具有适当表位特异性的激动剂抗TREM2抗体可诱导或维持TREM2在细胞表面上的聚集和/或激活TREM2。在一些实施方案中，激动剂抗TREM2抗体结合于以下各者内的一个或多个氨基酸：SEQ ID NO:1的氨基酸残基124-153，或TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基124-153的氨基酸残基；SEQ ID NO:1的氨基酸残基129-153，或TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基129-153的氨基酸残基；SEQID NO:1的氨基酸残基140-149，或TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基140-149的氨基酸残基；SEQ ID NO:1的氨基酸残基149-157，或TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基149-157的氨基酸残基；或SEQ ID NO:1的氨基酸残基153-162，或TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基153-162的氨基酸残基。在一些实施方案中，激动剂抗TREM2抗体结合于选自由SEQ ID NO:1的D140、L141、W142、F143、P144、E151、D152、H154、E156和H157组成的组的一个或多个氨基酸残基，或哺乳动物TREM2蛋白上对应于选自由SEQID NO:1的D140、L141、W142、F143、P144、E151、D152、H154、E156和H157组成的组的氨基酸残基的一个或多个氨基酸残基。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体通过与毗邻细胞上的Fcg受体结合来聚集受体(例如，TREM2)。抗体的恒定IgG Fc部分与Fcg受体的结合导致抗体集聚，而抗体又集聚通过其可变区结合的受体(Chu等人,(2008)Mol Immunol,45:3926-3933；和Wilson等人,(2011)Cancer Cell 19,101-113)。本领域技术人员已知的任何适宜的测定(例如WO2017/062672和WO2019/028292中描述的那些)可用于确定抗体聚集。
其他机制也可用于聚集受体(例如，TREM2)。例如，在一些实施方案中，交联在一起的抗体片段(例如，Fab片段)可用于以类似于具有结合Fcg受体的Fc区的抗体的方式聚集受体(例如，TREM2)，如上所述。在一些实施方案中，如果交联抗体片段(例如，Fab片段)在细胞表面上诱导受体聚集并结合靶标(例如，TREM2)上的适当表位，则它们可起到激动剂抗体的作用。
依赖与FcgR受体结合以激活靶向受体的抗体如果经过工程改造以消除FcgR结合，则可能会失去其激动剂活性(参见例如Wilson等人,(2011)Cancer Cell 19,101-113；Armour等人,(2003)Immunology40(2003)585-593)；和White等人,(2015)Cancer Cell 27,138-148)。因此，认为具有适当表位特异性的本公开的抗TREM2抗体可在抗体具有Fc结构域时激活TREM2。
示例性抗体Fc同种型和修饰在下表A中提供。在一些实施方案中，所述抗体具有下表A中列出的Fc同种型。
表A：能够结合Fcγ受体的示例性抗体Fc同种型
Figure BDA0003886640700000921
Figure BDA0003886640700000931
Figure BDA0003886640700000941
在一些实施方案中，所述抗体属于IgG类、IgM类或IgA类。在一些实施方案中，所述抗体具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。
结合人类中的活化Fcg受体I、IIA、IIC、IIIA、IIIB和/或小鼠中的Fcg受体I、III和IV的具有人类IgG1或IgG3同种型的抗体和其突变体(例如Strohl(2009)Current Opinionin Biotechnology 2009,20:685-691)还可在体内用作激动剂抗体，但可能与ADCC有关的效应相关。然而，与抑制性Fcg受体FcgRIIB相比，此类Fcg受体似乎对于体内抗体结合可用性较低(参见例如White等人,(2013)Cancer Immunol.Immunother.62,941-948；和Li等人,(2011)Science333(6045):1030-1034.)。
在某些实施方案中，所述抗体具有IgG2同种型。在一些实施方案中，所述抗体含有人类IgG2恒定区。在一些实施方案中，所述人类IgG2恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，所述抗体独立于与Fc受体的结合而诱导一种或多种TREM2活性、DAP12活性或两者。在一些实施方案中，所述抗体结合抑制性Fc受体。在某些实施方案中，所述抑制性Fc受体是抑制性Fc-γ受体IIB(FcγIIB)，其最小化或消除ADCC。在一些实施方案中，所述Fc区含有一种或多种修饰。例如，在一些实施方案中，所述Fc区含有一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，所述一个或多个氨基酸取代选自V234A(Alegre等人,(1994)Transplantation57:1537-1543.31；Xu等人,(2000)Cell Immunol,200:16-26)、G237A(Cole等人,(1999)Transplantation,68:563-571)、H268Q、V309L、A330S、P331S(US 2007/0148167；Armour等人,(1999)Eur J Immunol29:2613-2624；Armour等人,(2000)The Haematology Journal 1(增刊1):27；Armour等人,(2000)TheHaematology Journal 1(增刊1):27)、C232S和/或C233S(White等人,(2015)Cancer Cell27,138-148)、S267E、L328F(Chu等人,(2008)Mol Immunol,45:3926-3933)、M252Y、S254T和/或T256E，其中氨基酸位置是根据EU编号惯例。
在一些实施方案中，所述抗体具有重链恒定结构域含有C127S氨基酸取代的IgG2同种型，其中氨基酸位置是根据EU编号惯例(White等人,(2015)Cancer Cell 27,138-148；Lightle等人,(2010)PROTEIN SCIENCE 19:753-762；和WO2008079246)。
在一些实施方案中，所述抗体具有κ轻链恒定结构域含有C214S氨基酸取代的IgG2同种型，其中氨基酸位置是根据EU编号惯例(White等人,(2015)Cancer Cell 27,138-148；Lightle等人,(2010)PROTEIN SCIENCE 19:753-762；和WO2008079246)。
在某些实施方案中，所述抗体具有IgG1同种型。在一些实施方案中，所述抗体含有小鼠IgG1恒定区。在一些实施方案中，所述抗体含有人类IgG1恒定区。在一些实施方案中，所述人类IgG1恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，所述抗体结合抑制性Fc受体。在某些实施方案中，所述抑制性Fc受体是抑制性Fc-γ受体IIB(FcγIIB)。在一些实施方案中，所述Fc区含有一种或多种修饰。例如，在一些实施方案中，所述Fc区含有一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，所述一个或多个氨基酸取代选自N297A(Bolt S等人,(1993)Eur J Immunol 23:403-411)、D265A (Shields等人,(2001)R.J.Biol.Chem.276,6591-6604)、L234A、L235A(Hutchins等人,(1995)Proc NatlAcad Sci USA,92:11980-11984；Alegre等人,(1994)Transplantation 57:1537-1543.31；Xu等人,(2000)Cell Immunol,200:16-26)、G237A(Alegre等人,(1994)Transplantation57:1537-1543.31；Xu等人,(2000)Cell Immunol,200:16-26)、C226S、C229S、E233P、L234V、L234F、L235E(McEarchern等人,(2007)Blood,109:1185-1192)、P331S(Sazinsky等人,(2008)Proc Natl Acad Sci USA 2008,105:20167-20172)、S267E、L328F、A330L、M252Y、S254T和/或T256E，其中氨基酸位置是根据EU编号惯例。
在一些实施方案中，所述抗体包括IgG2同种型重链恒定结构域1(CH1)和铰链区(White等人,(2015)Cancer Cell 27,138-148)。在某些实施方案中，所述IgG2同种型CH1和铰链区含有氨基酸序列ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGAL TSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSN TKVDKTVERKCCVECPPCP(SEQ ID NO:42)。在一些实施方案中，抗体Fc区含有S267E氨基酸取代、L328F氨基酸取代或两者，和/或N297A或N297Q氨基酸取代，其中氨基酸位置是根据EU编号惯例。
在某些实施方案中，所述抗体具有IgG4同种型。在一些实施方案中，所述抗体含有人类IgG4恒定区。在一些实施方案中，所述人类IgG4恒定区包括Fc区。在一些实施方案中，所述抗体结合抑制性Fc受体。在某些实施方案中，所述抑制性Fc受体是抑制性Fc-γ受体IIB(FcγIIB)。在一些实施方案中，所述Fc区含有一种或多种修饰。例如，在一些实施方案中，所述Fc区含有一个或多个氨基酸取代(例如，相对于相同同种型的野生型Fc区)。在一些实施方案中，所述一个或多个氨基酸取代选自L235A、G237A、S228P、L236E(Reddy等人,(2000)J Immunol,164:1925-1933)、S267E、E318A、L328F、M252Y、S254T和/或T256E，其中氨基酸位置是根据EU编号惯例。
在某些实施方案中，所述抗体具有杂合IgG2/4同种型。在一些实施方案中，所述抗体包括含有根据人类IgG2的EU编号的氨基酸118至260和根据人类IgG4的EU编号的氨基酸261-447的氨基酸序列(WO 1997/11971；WO 2007/106585)。
在某些实施方案中，所述抗体含有小鼠IgG4恒定区(Bartholomaeus等人,(2014).J.Immunol.192,2091-2098)。
在一些实施方案中，所述Fc区进一步含有一个或多个选自以下的额外氨基酸取代：根据EU编号的A330L、L234F、L235E或P331S；和它们的任何组合。
在某些实施方案中，所述抗体含有一个或多个在Fc区中选自以下的残基位置处的氨基酸取代：C127S、L234A、L234F、L235A、L235E、S267E、K322A、L328F、A330S、P331S、E345R、E430G、S440Y和它们的任何组合，其中残基编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有在位置E430G、L243A、L235A和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有在位置E430G和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有在位置E430G和K322A处的氨基酸取代，其中残基位置编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有在位置E430G、A330S和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有在位置E430G、K322A、A330S和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有在位置E430G、K322A和A330S处的氨基酸取代，其中残基位置编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有在位置E430G、K322A和P331S处的氨基酸取代，其中残基位置编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有在位置S267E和L328F处的氨基酸取代，其中残基位置编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有在位置C127S处的氨基酸取代，其中残基位置编号是根据EU编号。在一些实施方案中，所述Fc区含有在位置E345R、E430G和S440Y处的氨基酸取代，其中残基位置编号是根据EU编号。
在一些实施方案中，所述抗体具有人类IgG1同种型并且在Fc区中残基位置P331S和E430G处包含氨基酸取代，其中残基编号是根据EU编号。在残基位置P331S和E430G处包含氨基酸取代的Fc区可称为“PSEG”。
其他IgG突变
在一些实施方案中，本文所述IgG1变体中的一者或多者可与A330L突变(Lazar等人,(2006)Proc Natl Acad Sci USA,103:4005-4010)或L234F、L235E和/或P331S突变中的一者或多者(Sazinsky等人,(2008)Proc Natl Acad Sci USA,105:20167-20172)组合以消除补体活化，其中氨基酸位置是根据EU编号惯例。在一些实施方案中，本文所述的IgG变体可与一个或多个突变组合以延长人类血清中的抗体半衰期(例如根据EU编号惯例的M252Y、S254T、T256E突变)(Dall'Acqua等人,(2006)J Biol Chem,281:23514-23524；和Strohl等人,(2009)Current Opinion in Biotechnology,20:685-691)。
在一些实施方案中，本公开的IgG4变体可与根据EU编号惯例的S228P突变(Angal等人,(1993)Mol Immunol,30:105-108)和/或与Peters等人,(2012)J Biol Chem.13；287(29):24525-33)中所述的一个或多个突变组合以增强抗体稳定。
示例性抗TREM2抗体
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体以高亲和力结合于TREM2，为激动剂，并且诱导一种或多种TREM2活性。在一些实施方案中，与在分离的抗体不存在下由一种或多种TREM2配体与TREM2蛋白的结合诱导的一种或多种TREM2活性相比，所述抗TREM2抗体增强由一种或多种TREM2配体与TREM2蛋白结合而诱导的一种或多种TREM2活性。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体增强一种或多种TREM2活性，而不与一种或多种TREM2配体竞争与TREM2蛋白的结合或以其他方式阻断其结合。在一些实施方案中，所述抗体是人源化抗体、双特异性抗体、多价抗体或嵌合抗体。在整个本公开中可发现此类抗体的示例性说明。在一些实施方案中，所述抗体是识别第一抗原和第二抗原的双特异性抗体。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于人类TREM2或其同源物，包括但不限于哺乳动物(例如，非人类哺乳动物)TREM2蛋白、小鼠TREM2蛋白(Uniprot登录号Q99NH8)、大鼠TREM2蛋白(Uniprot登录号D3ZZ89)、恒河猴TREM2蛋白(Uniprot登录号F6QVF2)、食蟹猴TREM2蛋白(NCBI登录号XP_015304909.1)、马TREM2蛋白(Uniprot登录号F7D6L0)、猪TREM2蛋白(Uniprot登录号H2EZZ3)和狗TREM2蛋白(Uniprot登录号E2RP46)。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体特异性结合于人类TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体特异性结合于食蟹猴TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体特异性结合于人类TREM2和食蟹猴TREM2两者。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体诱导至少一种本公开的TREM2活性。
抗TREM2抗体结合区
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于SEQ ID NO:1的氨基酸残基124-153或TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基124-153的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸；SEQ ID NO:1的氨基酸残基129-153或TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基129-153的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸；SEQ ID NO:1的氨基酸残基140-149或TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基140-149的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸；SEQ ID NO:1的氨基酸残基149-157或TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基149-157的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸；或SEQ ID NO:1的氨基酸残基153-162或TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基153-162的氨基酸残基内的一个或多个氨基酸。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合SEQ ID NO:1的氨基酸残基D140、L141、W142、F143、P144、E151、D152、H154、E156和H157中的一者或多者，或哺乳动物TREM2蛋白上对应于选自由SEQ ID NO:1的D140、L141、W142、F143、P144、E151、D152、H154、E156和H157组成的组的氨基酸残基的一个或多个氨基酸残基。
抗TREM2抗体轻链和重链可变区
在一些实施方案中，有待在本公开的方法中使用的抗TREM2抗体描述于WO2018/195506、WO2019/028292、WO2018/015573或WO2019/055841中，所述文献各自特此通过引用并入本文。在一些实施方案中，有待在本公开的方法中使用的抗TREM2抗体诱导或增强以下TREM2活性中的一者或多者：TREM2与DAP12结合；DAP12磷酸化；Syk激酶的激活；选自IFN-β、IL-1α、IL-1β、TNF-α、YM-1、IL-6、IL-8、CRP、CD86、MCP-1/CCL2、CCL3、CCL4、CCL5、CCR2、CXCL-10、Gata3、Rorc、IL-20家族成员、IL-33、LIF、IFN-γ、OSM、CNTF、GM-CSF、CSF-1、MHC-II、OPN、CD11c、GM-CSF、IL-11、IL-12、IL-17、IL-18和IL-23的一种或多种促炎性介质的调节，任选地其中所述调节发生在选自巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、树突细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞和小神经胶质细胞的一种或多种细胞中；Syk、ZAP70或两者募集到DAP12/TREM2复合物；增加一种或多种TREM2依赖性基因的活性，任选地其中所述一种或多种TREM2依赖性基因包含活化T细胞核因子(NFAT)转录因子；增加树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的M1巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、皮肤朗格汉斯细胞、库普弗细胞、小胶质细胞、M1小胶质细胞、活化的M1小胶质细胞和M2小胶质细胞或它们的任何组合的存活；选自CD83、CD86 MHC II类、CD40和它们的任何组合的一种或多种刺激分子的调节表达，任选地其中所述CD40在树突细胞、单核细胞、巨噬细胞或它们的任何组合上表达，并且任选地其中所述树突细胞包含骨髓来源树突细胞；增加记忆力；以及减少认知缺陷。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体在施用于个体时增加记忆和/或减少认知缺陷。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:34具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:35具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:31具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:41具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:33具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:32具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:36具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:37具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:38具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:39具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:40具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:32具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变区包括包含氨基酸序列YAFSSDWMN(SEQ ID NO:36)的HVR-H1、包含氨基酸序列RIYPGEGDTNYARKFHG(SEQ ID NO:37)的HVR-H2、包含氨基酸序列ARLLRNKPGESYAMDY(SEQ ID NO:38)的HVR-H3，并且所述轻链可变区包括包含氨基酸序列RTSQSLVHSNAYTYLH(SEQ ID NO:39)的HVR-L1、包含氨基酸序列KVSNRVS(SEQ ID NO:40)的HVR-L2和包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:32)的HVR-L3。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变区包括包含氨基酸序列YAFSSQWMN(SEQ ID NO:34)的HVR-H1、包含氨基酸序列RIYPGGGDTNYAGKFQG(SEQID NO:35)的HVR-H2、包含氨基酸序列ARLLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:31)的HVR-H3，并且所述轻链可变区包括包含氨基酸序列RSSQSLVHSNRYTYLH(SEQ ID NO:41)的HVR-L1、包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:33)的HVR-L2和包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:32)的HVR-L3。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含选自VH FR1、VH FR2、VH FR3和VH FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：所述VH FR1包含选自由SEQ ID NO:9-11组成的组的序列，所述VH FR2包含选自由SEQID NO:12和13组成的组的序列，所述VH FR3包含选自由SEQ ID NO:14和15组成的组的序列，并且所述VH FR4包含SEQ ID NO:16的序列；和/或所述轻链可变区包含选自VL FR1、VLFR2、VL FR3和VL FR4的一个、两个、三个或四个框架区，其中：所述L FR1包含选自由SEQ IDNO:17-20组成的组的序列，所述VL FR2包含选自由SEQ ID NO:21和22组成的组的序列，所述VL FR3包含选自由SEQ ID NO:23和24组成的组的序列，并且所述VL FR4包含选自由SEQID NO:25和26组成的组的序列。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AL2p-47的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:28的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体AL2p-47的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:29的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体AL2p-47的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AL2p-47的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体AL2p-47的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:29的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AL2p-47的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体AL2p-47的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体AL2p-47的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:28的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AL2p-47的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:28的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体AL2p-47或SEQ ID NO:28的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AL2p-47的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AL2p-47的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AL2p-47的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体AL2p-47的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:29的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体AL2p-47的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:29的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AL2p-47的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:29的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体AL2p-47或SEQ ID NO:29的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AL2p-47的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AL2p-47的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AL2p-47的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:28的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的轻链可变区。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体AL2p-58的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:27的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体AL2p-58的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:30的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体AL2p-58的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体AL2p-58的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体AL2p-58的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:30的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体AL2p-58的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体AL2p-58的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体AL2p-58的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:27的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AL2p-58的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:27的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体AL2p-58或SEQ ID NO:27的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AL2p-58的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体AL2p-58的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体AL2p-58的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体AL2p-58的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:30的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体AL2p-58的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:30的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体AL2p-58的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:30的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体AL2p-58或SEQ ID NO:30的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体AL2p-58的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体AL2p-58的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体AL2p-58的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的轻链可变区。
在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的重链，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:47的轻链；或包含氨基酸序列SEQ ID NO:44的重链，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:47的轻链。
在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:45的重链，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:48的轻链；或包含氨基酸序列SEQ ID NO:46的重链，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:48的轻链。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:52具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:53具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:54具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:55具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:56具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:57具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:52的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:53的HVR-H2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:54的HVR-H3；并且其中所述轻链可变结构域包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:55的HVR-L1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:56的HVR-L2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:57的HVR-L3。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:60具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:61具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:62具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:63具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:64具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:65具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:60的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:61的HVR-H2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:62的HVR-H3；并且其中所述轻链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:63的HVR-L1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:64的HVR-L2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:65的HVR-L3。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:68具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:69具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:70具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:71具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:72具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:73具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:68的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:69的HVR-H2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:70的HVR-H3；并且其中所述轻链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:71的HVR-L1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:72的HVR-L2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:73的HVR-L3。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:159具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:160具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:161具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:156具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:157具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:158具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:159的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:160的HVR-H2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:161的HVR-H3；并且其中所述轻链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:156的HVR-L1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:157的HVR-L2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:158的HVR-L3。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:169具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:170具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:171具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:166具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:167具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:168具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:169的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:170的HVR-H2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:171的HVR-H3；并且其中所述轻链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:166的HVR-L1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:167的HVR-L2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:168的HVR-L3。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:175具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:176具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:177具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:172具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:173具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:174具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:175的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:176的HVR-H2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:177的HVR-H3；并且其中所述轻链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:172的HVR-L1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:173的HVR-L2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:174的HVR-L3。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:181具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:182具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:183具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:178具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:179具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:180具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:181的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:182的HVR-H2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:183的HVR-H3；并且其中所述轻链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:178的HVR-L1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:179的HVR-L2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:180的HVR-L3。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-H1，其包含与SEQ ID NO:187具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-H2，其包含与SEQ ID NO:188具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-H3，其包含与SEQ ID NO:189具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或其中所述轻链可变结构域包含以下中的一者或多者：(a)HVR-L1，其包含与SEQ ID NO:184具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；(b)HVR-L2，其包含与SEQ ID NO:185具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和(c)HVR-L3，其包含与SEQ ID NO:186具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:187的HVR-H1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:188的HVR-H2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:189的HVR-H3；并且其中所述轻链可变结构域包含：(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:184的HVR-L1；(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:185的HVR-L2；和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:186的HVR-L3。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体42E8.H1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQID NO:58的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体42E8.H1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:59的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体42E8.H1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体42E8.H1的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体42E8.H1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:59的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体42E8.H1的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体42E8.H1的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:58的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体42E8.H1的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:58的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体42E8.H1的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:58的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体42E8.H1或SEQ ID NO:58的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体42E8.H1的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体42E8.H1的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体42E8.H1的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体42E8.H1的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:59的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体42E8.H1的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:59的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体42E8.H1的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:59的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体42E8.H1或SEQ ID NO:59的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体42E8.H1的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体42E8.H1的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体42E8.H1的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:58的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:59的轻链可变区。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体RS9.F6的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ IDNO:66的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体RS9.F6的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:67的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体RS9.F6的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体RS9.F6的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体RS9.F6的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:67的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体RS9.F6的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体RS9.F6的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:66的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体RS9.F6的重链可变结构域氨基酸序列或SEQID NO:66的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体RS9.F6的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:66的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体RS9.F6或SEQ ID NO:66的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体RS9.F6的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体RS9.F6的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体RS9.F6的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体RS9.F6的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:67的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体RS9.F6的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:67的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体RS9.F6的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:67的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体RS9.F6或SEQ ID NO:67的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体RS9.F6的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体RS9.F6的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体RS9.F6的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:66的重链可变区和包含氨基酸序列SEQID NO:67的轻链可变区。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与SEQ ID NO:74的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与SEQ ID NO:75的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与SEQ ID NO:74的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，SEQ ID NO:74的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，SEQ ID NO:74的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含SEQ ID NO:74的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与SEQ ID NO:75的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，SEQ ID NO:75的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，SEQ ID NO:75的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含SEQ ID NO:75的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:74的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:75的轻链可变区。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体6E7的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ IDNO:149的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体6E7的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:148的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体6E7的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:149的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体6E7的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体6E7的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:148的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体6E7的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体6E7的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:149的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体6E7的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:149的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体6E7的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:149的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体6E7或SEQ ID NO:149的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体6E7的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体6E7的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体6E7的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体6E7的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:148的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体6E7的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:148的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体6E7的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQID NO:148的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体6E7或SEQ ID NO:148的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体6E7的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体6E7的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体6E7的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ IDNO:149的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:148的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体5E3的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ IDNO:151的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体5E3的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:150的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体5E3的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:151的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体5E3的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体5E3的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:150的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体5E3的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体5E3的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:151的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体5E3的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:151的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体5E3的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:151的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体5E3或SEQ ID NO:151的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体5E3的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体5E3的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体5E3的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体5E3的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:150的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体5E3的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:150的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体5E3的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQID NO:150的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体5E3或SEQ ID NO:150的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体5E3的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体5E3的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体5E3的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ IDNO:151的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:150的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体24G6的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ IDNO:153的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体24G6的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:152的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体24G6的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:153的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体24G6的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体24G6的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:152的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体24G6的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体24G6的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:153的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体24G6的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:153的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体24G6的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:153的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体24G6或SEQ ID NO:153的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体24G6的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体24G6的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体24G6的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体24G6的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:152的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体24G6的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:152的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体24G6的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:152的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体24G6或SEQ IDNO:152的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体24G6的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体24G6的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体24G6的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:153的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:152的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体25F12的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ IDNO:155的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体25F12的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:154的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体25F12的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:155的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体25F12的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体25F12的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:154的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体25F12的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体25F12的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:155的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体25F12的重链可变结构域氨基酸序列或SEQID NO:155的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体25F12的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:155的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体25F12或SEQ ID NO:155的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体25F12的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体25F12的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体25F12的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体25F12的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:154的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体25F12的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:154的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体25F12的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:154的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体25F12或SEQ ID NO:154的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体25F12的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体25F12的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体25F12的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:155的重链可变区和包含氨基酸序列SEQID NO:154的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体13E714C12的重链可变结构域氨基酸序列或SEQID NO:165的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体13E7 14C12的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:164的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体13E7 14C12的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:165的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体13E7 14C12的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体13E7 14C12的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:164的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体13E714C12的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体13E7 14C12的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:165的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体13E7 14C12的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:165的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体13E714C12的重链可变结构域氨基酸序列或SEQID NO:165的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体13E7 14C12或SEQ ID NO:165的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体13E7 14C12的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体13E7 14C12的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体13E7 14C12的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体13E7 14C12的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:164的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体13E7 14C12的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:164的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体13E7 14C12的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:164的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体13E714C12或SEQ ID NO:164的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体13E7 14C12的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体13E714C12的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体13E7 14C12的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:165的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:164的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域包含与抗体13E7(SST202443)的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:163的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或所述轻链可变结构域包含与抗体13E7(SST202443)的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:162的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含重链可变结构域，其包含与抗体13E7(SST202443)的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:163的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述重链可变结构域包含抗体13E7(SST202443)的HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含轻链可变结构域，其包含与抗体13E7(SST202443)的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:162的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述轻链可变结构域包含抗体13E7(SST202443)的HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗TREM2抗体包含与抗体13E7(SST202443)的重链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:163的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的重链可变结构域(VH)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体13E7(SST202443)的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:163的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体13E7(SST202443)的重链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:163的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体13E7(SST202443)或SEQ ID NO:163的VH序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VH包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体13E7(SST202443)的HVR-H1氨基酸序列，(b)抗体13E7(SST202443)的HVR-H2氨基酸序列，和(c)抗体13E7(SST202443)的HVR-H3氨基酸序列。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体包含与抗体13E7(SST202443)的轻链可变结构域氨基酸序列或与SEQ ID NO:162的氨基酸序列具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性的轻链可变结构域(VL)序列并含有取代(例如，相对于参考序列的保守取代、插入或缺失)，但包含所述序列的抗TREM2抗体保留结合于TREM2的能力。在某些实施方案中，抗体13E7(SST202443)的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:162的氨基酸序列中总共1至10个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，抗体13E7(SST202443)的轻链可变结构域氨基酸序列或SEQ ID NO:162的氨基酸序列中总共1至5个氨基酸已经被取代、插入和/或缺失。在某些实施方案中，取代、插入或缺失发生在HVR以外的区域中(即FR区中)。在一些实施方案中，取代、插入或缺失发生在FR区中。任选地，所述抗TREM2抗体包含抗体13E7(SST202443)或SEQ ID NO:162的VL序列，包括所述序列的翻译后修饰。在一个特定的实施方案中，所述VL包含一个、两个或三个选自以下的HVR：(a)抗体13E7(SST202443)的HVR-L1氨基酸序列，(b)抗体13E7(SST202443)的HVR-L2氨基酸序列，和(c)抗体13E7(SST202443)的HVR-L3氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ ID NO:163的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:162的轻链可变区。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体与本段中描述的任何实施方案的抗体竞争结合于TREM2。在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体结合于与本段中描述的任何实施方案的抗体所结合的TREM2表位相同的TREM2表位。
在一些实施方案中，本公开的激动剂抗TREM2抗体是AL2p-58huIgG1 PSEG。在一些实施方案中，本公开的激动剂抗TREM2抗体是AL2p-47huIgG1。在本文提供的实施例中，抗TREM2抗体7E5用作示例性激动剂抗TREM2抗体。抗TREM2抗体7E5包含小鼠IgG1 Fc区并结合于小鼠和人类TREM2，使其适用于实施例中描述的小鼠双环己酮草酰二腙(CPZ)模型。抗TREM2抗体7E5具有与激动剂抗TREM2抗体AL2p-58huIgG1 PSEG和AL2p-47huIgG1相似的特性，包括激动剂活性，如本文实施例中所示以及如WO2017062672A2和WO2019028292中所公开的，所述文献特此通过引用整体并入。因此，抗TREM2抗体7E5是抗TREM2抗体AL2p-58huIgG1 PSEG和AL2p-47huIgG1的适宜替代物。
表B：序列
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本公开的任何抗体可由细胞系产生。在一些实施方案中，所述细胞系可以是哺乳动物细胞系。在某些实施方案中，所述细胞系可以是杂交瘤细胞系。在其他实施方案中，所述细胞系可以是酵母细胞系。本领域已知的任何适于抗体生产的细胞系均可用于生产本公开的抗体。用于抗体生产的示例性细胞系在本公开全文中进行了描述。
抗体片段
本公开的某些方面涉及与人类TREM2、人类TREM2的天然存在的变体和人类TREM2的疾病变体中的一者或多者结合的抗体片段。在一些实施方案中，所述抗体片段是Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv或scFv片段。
抗体框架
本文所述的任何抗体还包括框架。在一些实施方案中，所述框架是人类免疫球蛋白框架。例如，在一些实施方案中，抗体(例如，抗TREM2抗体)包含如任何上述实施方案中的HVR，并且还包含受体人类框架，例如，人类免疫球蛋白框架或人类共有框架。人类免疫球蛋白框架可以是人类抗体的一部分，或者非人类抗体可通过用人类框架区代替一个或多个内源框架而被人源化。可用于人源化的人类框架区包括但不限于：使用“最佳拟合”方法选择的框架区(参见例如Sims等人,J.Immunol.151:2296(1993))；来源于特定轻链或重链可变区亚组的人类抗体共有序列的框架区(参见例如Carter等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；和Presta等人,J.Immunol.,151:2623(1993))；人类成熟(体细胞突变)框架区或人类种系框架区(参见例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))；和源自筛选FR文库的框架区(参见例如Baca等人,J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)和Rosok等人,J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。
抗体制备
本公开的抗TREM2抗体可涵盖多克隆抗体、单克隆抗体、人源化和嵌合抗体、人类抗体、抗体片段(例如，Fab、Fab'-SH、Fv、scFv和F(ab')2)、双特异性和多特异性抗体、多价抗体、文库源抗体、具有改进的效应功能的抗体、含有抗体部分的融合蛋白和包括抗原识别位点(例如具有本公开的TREM2蛋白的氨基酸残基的表位)的免疫球蛋白分子的任何其他经修饰构型，包括抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体和共价修饰抗体。所述抗TREM2抗体可为人类、鼠类、大鼠或任何其他起源抗体(包括嵌合或人源化抗体)。
(1)多克隆抗体
多克隆抗体(例如抗TREM2多克隆抗体)通常通过多次皮下(sc)或腹膜内(ip)注射相关抗原和佐剂而在动物中产生。有用地，可使用双官能剂或衍生剂(例如，马来酰亚胺基苯甲酰基磺基琥珀酰亚胺酯(经由半胱氨酸残基缀合)、N-羟基琥珀酰亚胺(经由赖氨酸残基)、戊二醛、琥珀酸酐、SOCl2或R1N＝C＝NR，其中R和R1独立地是低级烷基)使相关抗原(例如，本公开的纯化或重组TREM2蛋白)与在待免疫物种体内具有免疫原性的蛋白质(例如，钥孔帽贝血蓝蛋白(KLH)、血清白蛋白、牛甲状腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制剂)缀合。可采用的佐剂的实例包括弗氏完全佐剂(Freund's complete adjuvant)和MPL-TDM佐剂(单磷酰基脂质A、合成海藻糖二棒杆霉菌酸酯(trehalose dicorynomycolate))。本领域技术人员无需过多实验即可选择免疫方案。
通过以下对动物进行针对所需抗原、免疫原性缀合物或衍生物的免疫：将例如100μg(对于兔)或5μg(对于小鼠)的蛋白质或缀合物与3体积的弗氏完全佐剂组合，并且将溶液皮内注射在多个位点。一个月后，通过多位点皮下注射用占初始量1/5至1/10的于弗氏完全佐剂中的肽或缀合物对动物加强免疫。7天至14天后，抽取动物的血液并对血清进行抗体效价测定。对动物加强免疫直至效价达到稳定状态。缀合物还可在重组细胞培养物中作为蛋白融合物来制得。此外，例如明矾的集聚剂适于增强免疫反应。
(2)单克隆抗体
单克隆抗体(例如抗TREM2单克隆抗体)是从大体上同源的抗体群体获得，即，除可少量存在的可能天然存在的突变和/或翻译后修饰(例如，异构化、酰胺化)外，构成所述群体的个别抗体均相同。因此，修饰语“单克隆”指示抗体并非分立抗体的混合物的特性。
例如，抗TREM2单克隆抗体可使用首先由
Figure BDA0003886640700001591
等人,Nature,256:495(1975)描述的杂交瘤方法来制得，或者可通过重组DNA方法(美国专利第4,816,567号)来制得。
在杂交瘤方法中，如上文所述对小鼠或其他适当宿主动物(例如仓鼠)进行免疫以诱发产生或能够产生将与免疫所用蛋白质(例如，本公开的纯化或重组TREM2蛋白)特异性结合的抗体的淋巴细胞。或者，可在体外对淋巴细胞进行免疫。然后，使用适宜融合剂(例如聚乙二醇)使淋巴细胞与永生细胞系如骨髓瘤细胞融合，以形成杂交瘤细胞(Goding,Monoclonal Antibodies:Principles and Practice,第59-103页(Academic Press,1986))。
可测定培养杂交瘤细胞的培养基中针对所需抗原(例如，本公开的TREM2蛋白)的单克隆抗体的存在，例如，如通过免疫沉淀或通过体外结合测定(例如放射免疫测定(RIA)或酶联测定(ELISA))来确定。此类技术和测定是本领域已知的。
在鉴定出产生具有所需特异性、亲和力和/或活性的抗体的杂交瘤细胞后，可对克隆进行亚克隆，并且可通过常规免疫球蛋白纯化程序如例如蛋白A-琼脂糖色谱、羟基磷灰石色谱、凝胶电泳、透析、亲和色谱和如上所述的其他方法将由亚克隆分泌的单克隆抗体从培养基、腹水或血清中分离出来。
抗TREM2单克隆抗体还可通过例如如上所述的重组DNA方法制得。编码单克隆抗体的DNA可使用常规程序容易地分离并测序(例如，通过使用特异性结合于编码鼠类抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)。杂交瘤细胞用作此DNA的优选来源。分离后，可将DNA置于表达载体中，然后将其转染至原本不产生免疫球蛋白的宿主细胞(例如大肠杆菌细胞、猿猴COS细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或骨髓瘤细胞)中，以在此类重组宿主细胞中合成单克隆抗体。关于编码抗体的DNA在细菌中的重组表达的综述文章包括Skerra等人,Curr.Opin.Immunol.,5:256-262(1993)和Plückthun,Immunol.Rev.130:151-188(1992)。
在某些实施方案中，抗TREM2抗体可从使用McCafferty等人,Nature,348:552-554(1990)中所述的技术产生的抗体噬菌体文库分离。Clackson等人,Nature,352:624-628(1991)和Marks等人,J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)分别描述了从噬菌体文库分离鼠类和人类抗体。后续出版物描述了通过链改组(Marks等人,Bio/Technology,10:779-783(1992))以及作为构建极大噬菌体文库的策略的组合感染和体内重组(Waterhouse等人,Nucl.Acids Res.,21:2265-2266(1993))来产生高亲和力(纳摩尔级(“nM”)范围)人类抗体。
还可例如通过以下方式来修饰编码抗体或其片段的DNA：用人类重链和轻链恒定结构域的编码序列取代同源鼠类序列(美国专利第4,816,567号；Morrison等人,Proc.NatlAcad.Sci.USA,81:6851(1984))，或将非免疫球蛋白多肽的全部或部分编码序列共价接合至免疫球蛋白编码序列。通常，此类非免疫球蛋白多肽取代抗体的恒定结构域，或者它们取代抗体的一个抗原组合位点的可变结构域以产生嵌合二价抗体，所述嵌合二价抗体包含一个对抗原具有特异性的抗原组合位点和另一个对不同抗原具有特异性的抗原组合位点。
(3)人源化抗体
本公开的抗TREM2抗体或其抗体片段还可包括人源化或人类抗体。非人类(例如，鼠类)抗体的人源化形式是嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(例如Fab、Fab'-SH、Fv、scFv、F(ab')2或抗体的其他抗原结合子序列)，其含有源自非人类免疫球蛋白的最小序列。人源化抗体包括人类免疫球蛋白(接受者抗体)，其中来自接受者的互补决定区(CDR)的残基由来自例如小鼠、大鼠或兔的非人类物种(供体抗体)的CDR并具有所需特异性、亲和力和能力的残基代替。在一些情况下，人类免疫球蛋白的Fv框架残基由相应非人类残基代替。人源化抗体还可包含在接受者抗体和引入的CDR或框架序列中均未发现的残基。一般来说，人源化抗体将包含大体上全部的至少一个且通常两个可变结构域，其中全部或大体上全部的CDR区对应于非人类免疫球蛋白的CDR区，并且全部或大体上全部的FR区是人类免疫球蛋白共有序列的那些FR区。人源化抗体任选地还包含免疫球蛋白恒定区(Fc)(通常为人类免疫球蛋白恒定区)的至少一部分。Jones等人,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature 332:323-329(1988)和Presta,Curr.Opin.Struct.Biol.2:593-596(1992)。
用于使非人类抗TREM2抗体人源化的某些方法是本领域已知的。通常，人源化抗体具有从非人类来源引入至其中的一个或多个氨基酸残基。这些非人类氨基酸残基通常称为“输入”残基，其通常取自“输入”可变结构域。人源化可基本上遵循Winter和合作者的方法(Jones等人,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等人,Nature332:323-327(1988)；Verhoeyen等人,Science 239:1534-1536(1988))或经由用啮齿类动物CDR或CDR序列取代人类抗体的相应序列来进行。因此，此类“人源化”抗体为嵌合抗体(美国专利第4,816,567号)，其中大体上少于一个完整人类可变结构域已由来自非人类物种的相应序列所取代。实际上，人源化抗体通常为人类抗体，其中一些CDR残基和可能一些FR残基由来自啮齿类动物抗体中类似位点的残基所取代。
待用于制备人源化抗体的人类可变结构域(轻和重)的选择可影响免疫原性。根据所谓的“最佳拟合”方法，针对已知人类可变结构域序列的整个文库来筛选啮齿类动物抗体的可变结构域的序列。然后将最接近啮齿类动物序列的人类序列视为人源化抗体的人类框架(FR)。Sims等人,J.Immunol.,151:2296(1993)；Chothia等人,J.Mol.Biol.,196:901(1987)。另一种方法使用衍生自轻链或重链的特定亚组的所有人类抗体的共有序列的特定框架。相同框架可用于若干种不同人源化抗体。Carter等人,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA89:4285(1992)；Presta等人,J.Immunol.151:2623(1993)。
人源化抗体优选保留对抗原的高亲和力和其他有利的生物学性质。为实现此目标，根据一种优选方法，人源化抗体是通过使用亲代和人源化序列的三维模型分析亲代序列和各种概念性人源化产物的方法来制备。三维免疫球蛋白模型通常可获得并且为本领域技术人员所熟悉。可使用计算机程序，所述计算机程序说明并展示所选候选免疫球蛋白序列的可能的三维构象结构。观察这些展示内容容许分析残基在候选免疫球蛋白序列功能行使中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白与其抗原结合的能力的残基。以这种方式，可从接受者序列和引入序列选择FR残基并组合使得实现所需抗体特性，例如对一种或多种靶抗原(例如，本公开的TREM2蛋白)的亲和力增加。一般来说，CDR残基直接地且最为实质性地涉及影响抗原结合。
涵盖人源化抗TREM2抗体的各种形式。例如，人源化抗TREM2抗体可以是抗体片段如Fab，或完整抗体如完整IgG1抗体。
(4)抗体片段
在某些实施方案中，有利地使用抗TREM2抗体片段而非完整抗TREM2抗体。在一些实施方案中，较小的片段大小容许快速清除和更好的脑渗透。
已开发出各种技术用于产生抗体片段。传统上，这些片段是经由蛋白水解消化完整抗体而获得(参见例如Morimoto等人,J.Biochem.Biophys.Method.24:107-117(1992)；和Brennan等人,Science 229:81(1985))。然而，例如使用编码本公开的抗TREM2抗体的核酸，这些片段现可由重组宿主细胞直接产生。Fab、Fv和scFv抗体片段全部均可在大肠杆菌中表达并从其分泌，由此容许大量这些片段的直接产生。抗TREM2抗体片段还可从如上文所论述的抗体噬菌体文库分离。或者，Fab'-SH片段可从大肠杆菌直接回收并化学偶联以形成F(ab')2片段(Carter等人,Bio/Technology 10:163-167(1992))。根据另一方法，F(ab')2片段可直接从重组宿主细胞培养物分离。具有延长的体内半衰期的Fab和F(ab')2抗体片段的产生描述于美国专利第5,869,046号中。在其他实施方案中，所选抗体是单链Fv片段(scFv)。参见WO93/16185；美国专利第5,571,894号和美国专利第5,587,458号。抗TREM2抗体片段也可以是“直链抗体”，例如如美国专利5,641,870中所述。此类直链抗体片段可为单特异性或双特异性片段。
(5)双特异性和多特异性抗体
双特异性抗体(BsAb)是对至少两个不同表位(包括在同一或另一蛋白质(例如，一种或多种本公开的TREM2蛋白)上的那些表位)具有结合特异性的抗体。或者，BsAb的一部分可臂接以结合于靶标TREM2抗原，并且另一部分可与结合于第二蛋白质的臂组合。此类抗体可源自全长抗体或抗体片段(例如，F(ab')2双特异性抗体)。
(6)效应功能工程化
还可能需要修饰本公开的抗TREM2抗体以改进效应功能和/或延长抗体的血清半衰期。例如，恒定区上的Fc受体结合位点可被修饰或突变以去除或降低与某些Fc受体(例如FcγRI、FcγRII和/或FcγRIII)的结合亲和力，以降低抗体依赖性细胞介导的细胞毒性。在一些实施方案中，通过去除抗体的Fc区(例如，在IgG的CH 2结构域中)的N-糖基化来削弱效应功能。在一些实施方案中，如PCT WO99/58572和Armour等人,Molecular Immunology40:585-593(2003)；Reddy等人,J.Immunology 164:1925-1933(2000)中所述，通过修饰例如人类IgG的233-236、297和/或327-331的区域来削弱效应功能。在其他实施方案中，还可能需要修饰本公开的抗TREM2抗体以改进效应功能，从而增加对含有ITIM的FcgRIIb(CD32b)的发现选择性以增加TREM2抗体在毗邻细胞上的聚集而不使体液反应(包括抗体依赖性细胞介导的细胞毒性和抗体依赖性细胞吞噬作用)活化。
为延长抗体的血清半衰期，可将补救受体结合表位并入至抗体(尤其是抗体片段)中，如例如美国专利5,739,277中所述。如本文所用，术语“补救受体结合表位”是指IgG分子(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)的Fc区的表位，其负责延长IgG分子的体内血清半衰期。
(7)其他氨基酸序列修饰
还涵盖对本公开的抗TREM2抗体或其抗体片段的氨基酸序列修饰。例如，可能需要改进抗体或抗体片段的结合亲和力和/或其他生物学性质。抗体或抗体片段的氨基酸序列变体是通过将适当核苷酸变化引入至编码所述抗体或抗体片段的核酸中或通过肽合成来制备。此类修饰包括例如抗体的氨基酸序列内残基的缺失和/或插入和/或取代。可进行缺失、插入和取代的任何组合以实现最终构建体，条件是所述最终构建体具有所需特性(即，与本公开的TREM2蛋白结合或物理相互作用的能力)。氨基酸变化还可改变抗体的翻译后过程，例如改变糖基化位点的数目或位置。
如Cunningham和Wells在Science,244:1081-1085(1989)中所述，可用于鉴定抗TREM2抗体中作为优选诱变位置的某些残基或区域的方法被称为“丙氨酸扫描诱变”。此处，鉴定残基或靶残基组(例如，带电残基，例如arg、asp、his、lys和glu)，并由中性或带负电的氨基酸(最优选为丙氨酸或聚丙氨酸)代替以实现氨基酸与靶抗原的相互作用。然后通过在取代位点或针对取代位点引入另外或其他变体来改进展现对取代具有功能敏感性的那些氨基酸位置。因此，在预先确定引入氨基酸序列变异的位点时，无需预先确定突变本身的性质。例如，为分析给定位点处突变的性能，在靶标密码子或区域处进行丙氨酸扫描诱变或随机诱变并且针对所需活性筛选所表达的抗体变体。
氨基酸序列插入包括氨基-(“N”)和/或羧基-(“C”)末端融合物(长度在一个残基至含有一百个或更多个残基的多肽范围内)，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的实例包括具有N末端甲硫氨酰基残基的抗体或与细胞毒性多肽融合的抗体。抗体分子的其他插入变体包括抗体的N末端或C末端与酶或延长抗体血清半衰期的多肽的融合物。
另一种变体类型是氨基酸取代变体。这些变体在抗体分子中至少一个氨基酸残基由不同残基代替。取代诱变的最受关注的位点包括超变区，但还涵盖FR改变。保守取代示于下表C中的“优选取代”标题下。如果此类取代引起生物学活性改变，则可引入更重要的改变(表C中命名为“示例性取代”，或如下文参考氨基酸类别所进一步描述)，并且对产物进行筛选。
表C：氨基酸取代
Figure BDA0003886640700001651
Figure BDA0003886640700001661
对抗体生物学性质的实质修饰可通过选择在维持以下特性的效应方面显著不同的取代来实现：(a)取代区域中多肽主链的结构，例如，呈折叠或螺旋构象，(b)靶位点处分子的电荷或疏水性，或(c)侧链的体积。基于常见侧链性质将天然存在的残基分为以下各组：
(1)疏水性：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；
(2)中性亲水性：cys、ser、thr；
(3)酸性：asp、glu；
(4)碱性：asn、gln、his、lys、arg；
(5)影响链定向的残基：gly、pro；和
(6)芳香族残基：trp、tyr、phe。
非保守性取代使得需要将这些类别中的一者的成员交换为另一类别。
不参与维持抗体的适当构象的任何半胱氨酸残基通常还可用丝氨酸取代，以改进分子的氧化稳定性并防止异常交联。相反，可将一个或多个半胱氨酸键添加至抗体以改进其稳定性(特别是在抗体为抗体片段(例如Fv片段)的情形下)。
取代变体的特别优选类型涉及取代亲代抗体(例如人源化或人类抗TREM2抗体)的一个或多个超变区残基。通常，所选用于进一步开发的一种或多种所得变体将相对于产生所述变体的亲代抗体具有改进的生物学性质。产生此类取代变体的便捷方式涉及使用噬菌体展示进行的亲和力成熟。简单地说，使若干超变区位点(例如6-7个位点)突变以在每个位点产生所有可能的氨基取代。由此产生的抗体变体以单价方式以与每个颗粒内所封装的M13基因III产物的融合物形式从丝状噬菌体颗粒展示出来。然后针对其生物学活性(例如，结合亲和力)来筛选噬菌体展示的变体，如本文所公开。为鉴定用于修饰的候选超变区位点，可进行丙氨酸扫描诱变以鉴定显著促进抗原结合的超变区残基。或者或另外，分析抗原-抗体复合物的晶体结构以鉴定抗体与抗原(例如，本公开的TREM2蛋白)之间的接触点可能有益。此类接触残基和附近残基是根据本文所述技术的候选取代残基。一旦产生此类变体，则如本文所述对变体组进行筛选，并且可选择在一个或多个相关测定中具有优越性质的抗体以供进一步开发。亲和力成熟还可通过采用酵母呈现技术来进行，例如WO2009/036379A2；WO2010105256；WO2012009568；和Xu等人,Protein Eng.Des.Sel.,26(10):663-70(2013)中所公开的技术。
抗体的另一类氨基酸变体改变抗体的原始糖基化模式。改变意指缺失一个或多个于抗体中发现的碳水化合物部分，和/或增加一个或多个在抗体中不存在的糖基化位点。
抗体的糖基化通常是N-连接或O-连接的。N-连接是指碳水化合物部分与天冬酰胺残基的侧链连接。三肽序列天冬酰胺-X-丝氨酸和天冬酰胺-X-苏氨酸(其中X是除脯氨酸外的任何氨基酸)是碳水化合物部分与天冬酰胺侧链酶促连接的识别序列。因此，多肽中存在这些三肽序列中的任一者均可产生潜在糖基化位点。O-连接的糖基化是指糖N-乙酰基半乳糖胺、半乳糖或木糖中的一者与羟基氨基酸(最常见为丝氨酸或苏氨酸，但还可使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸)的连接。
将糖基化位点添加至抗体可通过改变氨基酸序列以使其含有上述三肽序列中的一者或多者(对于N-连接糖基化位点)便捷地完成。还可通过向原始抗体的序列添加一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基或用一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基进行取代(对于O-连接糖基化位点)来实现所述改变。
(8)其他抗体修饰
本公开的抗TREM2抗体或其抗体片段可进一步被修饰以含有本领域已知且易于获得的额外非蛋白质性部分，或者含有本领域已知且易于获得的不同类型的药物缀合物。优选地，适于衍生抗体的部分是水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性实例包括但不限于聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纤维素、聚葡萄糖、聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚-1,3-二氧杂环戊烷、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/马来酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或无规共聚物)和聚葡萄糖或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚环氧丙烷/环氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如，甘油)、聚乙烯醇和其混合物。聚乙二醇丙醛可因其在水中具有稳定性而在制造方面具有优势。聚合物可具有任何分子量，并且可为支链或无支链的。连接至抗体的聚合物的数目可有所变化，并且如果连接一个以上的聚合物，则它们可为相同或不同分子。一般来说，衍生化所用聚合物的数目和/或类型可基于包括但不限于以下的考虑因素来确定：待改进抗体的特定性质或功能、抗体衍生物是否将用于所限定条件下的疗法等。此类技术和其他适宜制剂公开于Remington:The Science andPractice of Pharmacy,第20版,Alfonso Gennaro编辑,Philadelphia College ofPharmacy and Science(2000)中。
药物缀合涉及将生物活性细胞毒性(抗癌)有效载荷或药物与特异性靶向某一肿瘤标志物(例如理想地仅发现于肿瘤细胞中或肿瘤细胞上的蛋白质)的抗体偶联。抗体在体内追踪这些蛋白质并将自身附着至癌细胞表面。抗体与靶蛋白(抗原)之间的生物化学反应在肿瘤细胞中触发信号，然后所述肿瘤细胞将抗体与细胞毒素一起吸收或内化。在将ADC内化后，细胞毒性药物释放并杀死癌症。由于这种靶向，因此理想地所述药物具有较低的副作用并给出较其他化学治疗剂更宽的治疗窗。缀合如所公开抗体的技术是本领域已知的(参见例如Jane de Lartigue,OncLive 2012年7月5日；ADC Review on antibody-drugconjugates；和Ducry等人,(2010).Bioconjugate Chemistry 21(1):5-13)。
(9)结合测定和其他测定
可测试本公开的抗TREM2抗体的抗原结合活性，例如通过已知方法如ELISA、Western印迹等来进行。
用于定位抗体所结合表位的详细示例性方法提供于Morris(1996)“EpitopeMapping Protocols”,Methods in Molecular Biology第66卷(Humana Press,Totowa,NJ)中。
核酸、载体和宿主细胞
本公开的抗TREM2抗体可使用重组方法和组合物来产生，例如如美国专利第4,816,567号中所述。在一些实施方案中，提供具有编码本公开的任何抗TREM2抗体的核苷酸序列的分离的核酸。此类核酸可编码含有抗TREM2抗体的VL的氨基酸序列和/或含有抗TREM2抗体的VH的氨基酸序列(例如，抗体的轻链和/或重链)。在一些实施方案中，提供了一个或多个含有此类核酸的载体(例如，表达载体)。在一些实施方案中，还提供了含有这种核酸的宿主细胞。在一些实施方案中，所述宿主细胞含有以下各项(例如，已经以下各项转导)：(1)含有编码含有抗体的VL的氨基酸序列和含有抗体的VH的氨基酸序列的核酸的载体，或(2)含有编码含有抗体的VL的氨基酸序列的核酸的第一载体，和含有编码含有抗体的VH的氨基酸序列的核酸的第二载体。在一些实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如，Y0、NS0、Sp20细胞)。本公开的宿主细胞还包括但不限于分离的细胞、体外培养细胞和离体培养细胞。
提供了制备本公开的抗TREM2抗体的方法。在一些实施方案中，所述方法包括在适于表达抗TREM2抗体的条件下培养含有编码所述抗体的核酸的本公开的宿主细胞。在一些实施方案中，所述抗体随后从宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收。
为重组产生本公开的抗TREM2抗体，将编码所述抗TREM2抗体的核酸分离并将其插入至一个或多个载体中以用于在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。此核酸可使用常规程序容易地分离并测序(例如，通过使用能够与编码抗体的重链和轻链的基因特异性结合的寡核苷酸探针)。
本文所述的含有编码本公开的任何抗TREM2抗体或其片段、多肽(包括抗体)的核酸序列的适宜载体包括但不限于克隆载体和表达载体。适宜克隆载体可根据标准技术来构建，或者可选自本领域可获得的大量克隆载体。虽然所选择的克隆载体可根据打算使用的宿主细胞而有所变化，但可用的克隆载体通常具有自复制的能力，可具有特定限制性核酸内切酶的单一靶标，并且/或者可携带可用于选择含有所述载体的克隆的标志物的基因。适宜实例包括质粒和细菌病毒，例如，pUC18、pUC19、Bluescript(例如，pBS SK+)和其衍生物、mpl8、mpl9、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌体DNA和穿梭载体(例如pSA3和pAT28)。这些和许多其他克隆载体可从商业供应商如BioRad、Strategene和Invitrogen获得。
表达载体通常是含有本公开的核酸的可复制的多核苷酸构建体。表达载体可在宿主细胞中作为游离基因组或作为染色体DNA的整合部分来复制。适宜表达载体包括但不限于质粒、病毒载体，包括腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、粘粒和PCT公开第WO 87/04462号中所公开的一种或多种表达载体。载体组件可通常包括但不限于以下中的一者或多者：信号序列；复制起点；一个或多个标记基因；适宜转录控制元件(例如启动子、增强子和终止子)。对于表达(即，翻译)来说，通常还需要一个或多个翻译控制元件，例如核糖体结合位点、翻译起始位点和终止密码子。
可通过多种适当方式中的任一者将含有相关核酸的载体引入至宿主细胞中，所述方式包括电穿孔；采用氯化钙、氯化铷、磷酸钙、DEAE-聚葡萄糖或其他物质的转染；微粒轰击；脂转染；和感染(例如，其中载体是传染物如牛痘病毒)。引入载体或多核苷酸的选择将通常取决于宿主细胞的特征。在一些实施方案中，载体含有含一个或多个编码本公开的抗TREM2抗体的氨基酸序列的核酸。
用于克隆或表达编码抗体的载体的适宜宿主细胞包括原核或真核细胞。例如，特别是在不需要糖基化和Fc效应功能时，本公开的抗TREM2抗体可在细菌中产生。关于抗体片段和多肽在细菌中的表达(例如，美国专利第5,648,237号、第5,789,199号和第5,840,523号；以及Charlton,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编辑,HumanaPress,Totowa,NJ,2003),第245-254页，其描述抗体片段在大肠杆菌中的表达)。表达后，可以可溶性部分从细菌细胞团分离抗体并且可将其进一步纯化。
除原核生物以外，真核微生物(例如丝状真菌或酵母)也是编码抗体的载体的适宜克隆或表达宿主，包括其糖基化路径已经“人源化”，从而产生具有部分或完全人类糖基化模式的抗体的真菌和酵母菌株(例如，Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)；和Li等人,Nat.Biotech.24:210-215(2006))。
还可使用脊椎动物细胞作为宿主。例如，可使用适应于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系。可用哺乳动物宿主细胞系的其他实例是由SV40转化的猴肾CV1系(COS-7)；人类胚肾系(293或293细胞，如例如Graham等人,J.Gen Virol.36:59(1977)中所述)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠支持细胞(TM4细胞，如例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所述)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人类宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；布法罗大鼠肝细胞(buffalo rat liver cell)(BRL 3A)；人类肺细胞(W138)；人类肝细胞(Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，如例如Mather等人,AnnalsN.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中所述；MRC 5细胞；和FS4细胞。其他可用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；和骨髓瘤细胞系，例如Y0、NS0和Sp2/0。关于适于抗体产生的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见例如Yazaki和Wu,Methods inMolecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编辑，Humana Press,Totowa,NJ)，第255-268页(2003)。
药物组合物和制剂
本文提供了包含本公开的抗TREM2抗体和药学上可接受的载体的药物组合物。在一些实施方案中，本文提供了药物组合物，其包含在生理学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂(Remington's Pharmaceutical Sciences(1990)Mack Publishing Co.,Easton,Pa.)中具有所需纯度的本公开的抗TREM2抗体。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在使用的剂量和浓度下对接受者无毒。
在多个实施方案中，包含抗TREM2抗体的药物组合物以具有药学上可接受的载体的制剂提供(参见例如Gennaro,Remington:The Science and Practice of Pharmacywith Facts and Comparisons:Drugfacts Plus,第20版(2003)；Ansel等人,Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,第7版,LippencottWilliams and Wilkins(2004)；Kibbe等人,Handbook of Pharmaceutical Excipients,第3版,Pharmaceutical Press(2000))。适用于肠胃外施用的制剂包括水性和非水性等渗无菌注射溶液，其可包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使制剂与预期接受者的血液等渗的溶质，以及水性和非水性无菌悬浮液，其可包括助悬剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂。
药物剂量和施用
本文提供的抗TREM2抗体可通过任何适宜的方式施用，包括肠胃外、肺内、鼻内、病灶内施用，脑脊髓内、颅内、脊髓内、滑膜内、鞘内、口服、局部或吸入途径。肠胃外输注包括作为推注或通过在一段时间内连续输注的肌肉内、静脉内施用，动脉内、关节内、腹膜内或皮下施用。在一些实施方案中，施用是静脉内施用。在一些实施方案中，施用是皮下施用。可通过任何适宜的途径给药，例如通过注射，例如静脉内或皮下注射，部分取决于施用是短暂的还是长期的。本文考虑了各种给药方案，包括但不限于在不同时间点的单次或多次施用、推注施用和脉冲输注。
对于疾病的预防或治疗，抗TREM2抗体的适当剂量将取决于待治疗的疾病类型、特定抗体、疾病的严重程度和病程、抗体施用是用于预防还是治疗目的、既往疗法、患者的临床病史和对抗体的反应，以及主治医师的判断。抗体适合一次或在一系列治疗中施用于患者。
试剂盒/制品
本公开还提供了含有本公开的分离的抗体(例如，本文所述的抗TREM2抗体)或其功能片段的试剂盒。本公开的试剂盒可包括一个或多个包含本公开的纯化抗体的容器。在一些实施方案中，所述试剂盒还包括根据本公开的方法使用的说明书。在一些实施方案中，这些说明书包含对施用本公开的分离的抗体(例如，本文所述的抗TREM2抗体)以预防脱髓鞘疾病、病症或损伤，降低脱髓鞘疾病、病症或损伤的风险或治疗患有脱髓鞘疾病、病症或损伤的个体的说明。在一些实施方案中，所述脱髓鞘疾病、病症或损伤是多发性硬化、视神经炎、视神经脊髓炎(Devic病)、横贯性脊髓炎、急性播散性脑脊髓炎、肾上腺脑白质营养不良或肾上腺脊髓神经病。在一些实施方案中，所述脱髓鞘疾病、病症或损伤是多发性硬化。
在一些实施方案中，所述说明书包括对如何检测例如个体、组织样品或细胞中的TREM2的说明。所述试剂盒还可包含对基于鉴定个体是否患有疾病和疾病阶段来选择适于治疗的个体的说明。
在一些实施方案中，所述试剂盒还可包括本公开的另一抗体(例如，至少一种特异性结合于抑制性检查点分子的抗体、至少一种特异性结合于抑制性细胞因子的抗体和/或至少一种特异性结合于刺激性检查点蛋白的激动性抗体)和/或至少一种刺激性细胞因子。在一些实施方案中，所述试剂盒还可包括根据本公开的任何方法，关于将抗体和/或刺激性细胞因子与本公开的分离的抗体(例如，本文所述的抗TREM2抗体)组合使用的说明书、关于将本公开的分离的抗体与抗体和/或刺激性细胞因子组合使用的说明书、或关于使用本公开的分离的抗体和抗体和/或刺激性细胞因子的说明书。
所述说明书通常包括关于用于预期治疗的剂量、投用时间表和施用途径的信息。容器可为单位剂量、散装包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。本公开试剂盒中供应的说明书通常是标签或包装插页(例如，试剂盒中所包括的纸页)上的书面说明书，但机读说明书(例如，载于磁性或光学储存盘上的说明书)也是可接受的。
标签或包装插页指示组合物用于治疗例如本公开的疾病。可提供用于实践本文所述的任何方法的说明书。
本公开的试剂盒是呈适宜包装。适宜包装包括但不限于小瓶、瓶、广口瓶、柔性包装(例如，密封Mylar或塑料袋)等。还涵盖与特定装置(例如吸入器、经鼻施用装置(例如，雾化器)或输注装置如微型泵)组合使用的包装。试剂盒可具有无菌出入孔(例如，容器可为静脉内溶液袋或具有可由皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。容器还可具有无菌出入孔(例如，容器可为静脉内溶液袋或具有可由皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。组合物中的至少一种活性剂是本公开的分离的抗体(例如，本文所述的抗TREM2抗体)。容器还可包含第二药物活性剂。
试剂盒可任选地提供额外组分，例如缓冲液和解释性信息。通常，试剂盒包含容器和位于所述容器上或与所述容器相连的标签或一个或多个包装插页。
通过参考以下实施例将更全面地理解本公开。然而，不应将其解释为限制本公开的范围。整个本公开中的所有引用特此通过引用明确并入。
实施例
实施例1：Trem2单倍体不足导致髓磷脂碎片清除效率低下。
与Trem2+/+小鼠相比，纯合Trem2-/-小鼠在双环己酮草酰二腙(CPZ)诱导的脱髓鞘模型中表现出明显的髓磷脂碎片清除缺陷(参见例如Cantoni,Bollman等人,2015,Poliani,Wang等人,2015)。在本实施例中评价了杂合(Trem2+/-)小鼠是否会呈现与Trem2-/-小鼠相同或更温和的表型。
材料和方法
小鼠
使用了Trem2+/+、Trem2+/-和Trem2-/-小鼠(与C57BL/6背景回交12代)。三个品系平行培育。将小鼠维持在受控条件(19-22℃和12小时光/暗循环，不受限制地获取食物和水)。
CPZ诱导的脱髓鞘模型
向Trem2+/+、Trem2+/-和Trem2-/-小鼠喂食0.2％双环己酮草酰二腙饮食(5C5N：Modified
Figure BDA0003886640700001761
啮齿类动物w/0.2％双环己酮草酰二腙，TestDiet；来自Sigma的双环己酮草酰二腙(cod C9012-25G))，持续4周或持续4周后接着3天或7天或14天的常规食物(PicoLab Rodent Diet 20#5053,Purina)。
小鼠组织处理和组织学分析
小鼠用氯胺酮(100mgkg-1)麻醉并灌注4％多聚甲醛(PFA)。取出小鼠大脑并在4％PFA中后固定24小时，接着在30％蔗糖中浸没24-48小时。然后将样品包埋在OptimalCutting Temperature(OCT)中。将厚切片(5μm)置于载玻片上并用单色花青染色以确认是否存在如前所述的病变(Kiernan,1984)。切片用以下一级抗体染色：兔(Rb)抗dMBP(Millipore，ab5864,1:2000)、Rb抗Iba1(Wako，019-19741,1:600)、山羊(Gt)抗Iba1(Novus，NB100-1028,1:250)、Rb抗PDGFRa(ThermoFisher，PA5-16742,1:50)、Rb抗OLIG2(Milipore，AB9610,1:300)、小鼠(Ms)抗CNPase(Abcam，ab6319,1:100)和抗SMI-31抗体。使用了AlexaFluor缀合的二级抗体(Thermo Fisher，1:400)。一些图像是使用配备有10×、20×和60×物镜的Nikon Eclipse 90i荧光和明场显微镜采集的，并使用Metamorph 7.7软件进行分析。CNPase、SMI-31和dMBP被分析为相关区域内阳性染色的面积百分比(阳性像素数量/mm2)。Iba1、PDGFRa和OLIG2被量化为相关区域中的细胞密度(细胞数量/mm2)。对于共聚焦分析，使用配备有PlanApoN 60X、1.4NA超校正油物镜的Olympus FV1200激光扫描共聚焦显微镜(Olympus-America Inc.,Waltham,MA)获取图像。所述Olympus FV1200共聚焦显微镜配备了五个检测器：两个光谱检测器和一个基于滤光片的检测器，以及两个磷化砷化镓(GaAsP)光电倍增管(PMT)。使用405、488和559nm二极管激光器和635nm HeNe(氦氖)激光器与1个通风单位的最佳针孔来获取图像。最后用ImageJ软件处理图像。
髓磷脂碎片积累的免疫组织化学分析
为了评估胼胝体(CC)中髓磷脂碎片积累的量，胼胝体(CC)是CPZ模型中一个特别严重和一致的脱髓鞘位点(Matsushima和Morell 2001)，使用能够结合仅在髓磷脂降解后暴露的MBP表位的抗体通过免疫组织化学分析降解的髓磷脂碱性蛋白(dMBP)(Matsuo,Lee等人,1997)。
统计分析
Prism 8.0(GraphPad Software)用于统计分析。所显示的数据是平均值±标准偏差(s.d.)，P<0.05被认为具有统计学意义。通过单因素方差分析(ANOVA)并接着进行Sidak或Benjamini、Krieger和Yekutieli校正多重比较检验，或者通过双因素ANOVA并接着对多组进行Tukey多重比较检验来分析组差异。
结果
如图1A-1B所示，与Trem2+/+小鼠相比，在使用CPZ 4周后，Trem2-/-小鼠显示出dMBP信号显著增加。Trem2-/-小鼠中增加的dMBP信号伴随着Iba1+小胶质细胞的显著减少(参见图1A和图1C)。与Trem2+/+小鼠相比，Trem2-/-小鼠中OPC的数量也显著减少(数据未示出)。在Trem2+/+和Trem2-/-小鼠之间，量化为胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞的星形胶质细胞活化没有发现差异(数据未示出)。
值得注意的是，Trem2+/-小鼠展示出介于Trem2+/+和Trem2-/-小鼠之间的表型。例如，如图1A-1B所示，与Trem2+/+小鼠相比，Trem2+/-小鼠表现出dMBP信号显著增加，但所述增加显著小于在Trem2-/-小鼠中观察到的增加。与Trem2+/+小鼠相比，Trem2+/-小鼠也显示出较少的PDGFRα+OPC(数据未示出)。与Trem2+/+小鼠相比，Trem2+/-小鼠的胼胝体中Iba1+细胞的数量没有差异(图1A和图1C)，相比之下，与Trem2+/+小鼠相比，Trem2-/-小鼠中观察到的小胶质细胞数量显著减少。Trem2+/-和Trem2+/+小鼠之间胼胝体中GFAP+细胞的数量没有差异(数据未示出)。
本实施例中描述的结果表明，Trem2单倍体不足(即，损失一个TREM2拷贝)导致中间表型，表明小胶质细胞的髓磷脂去除对TREM2拷贝数敏感。特别是，Trem2单倍体不足导致髓磷脂碎片清除效率低下并减少OPC募集，即使它不影响胼胝体中积累的小胶质细胞的数量。这些结果表明，一个TREM2拷贝足以在CPZ诱导的损伤后维持小神经胶质细胞扩增，但不能支持小胶质细胞对清除源自大量少突胶质细胞死亡的髓磷脂碎片的全功能反应。
总体而言，本实施例中描述的结果表明，小胶质细胞上全功能TREM2受体的存在对于有效去除髓磷脂碎片和OPC募集是最佳的。此外，Trem2单倍体不足小鼠(Trem2+/-小鼠)展示中间表型，在髓磷脂碎片清除方面存在缺陷，这一发现为研究TREM2激动剂抗体对该过程的影响提供了模型。TREM2蛋白存在于Trem2单倍体不足的小鼠中，尽管与Trem2+/+小鼠相比水平可能降低，因此可测试TREM2激动剂抗体。
实施例2：激动剂抗TREM2抗体对TREM2信号传导的作用的表征。
在本实施例中，分析了激动剂抗TREM2抗体在体外和体内对TREM2信号传导的影响。
材料和方法
抗TREM2抗体的生成
靶向小鼠TREM2的单克隆抗体是通过用重组TREM2蛋白对基因缺陷的TREM2(Trem2-/-)小鼠进行免疫，接着生成杂交瘤而生成的。选择具有小鼠IgG1 Fc区(mIgG1)的抗TREM2抗体7E5是因为它与野生型(Trem2+/+)但不与Trem2-/-骨髓来源巨噬细胞(BMDM)特异性结合。
抗TREM2抗体7E5拥有具有以下序列的轻链可变结构域：
DVZMTQTPLTLSVTIGQPASISCKSSQSLLYSNGKTFLSWLLQRPGQSPKRLIYLVSKLDSGVPDRFAGSGSGTDFTLKISRLEADDLGIYYCMQGTHFPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO:50)。
抗TREM2抗体7E5拥有具有以下序列的重链可变结构域：
EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCAASGFTFSDAWMGWVRQSPEKGLEWVAEIRDKVKNHATYYAESVKGRFTISRDDSKSTVYLQMNTLRADDTGIYYCRLGVFDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO:51)。
在抗TREM2抗体7E5的轻链和重链可变结构域的上述序列中，HVR序列已加下划线。
骨髓来源巨噬细胞
通过用冷的PBS 2％ FBS冲洗胫骨和股骨骨髓细胞获得骨髓来源巨噬细胞(BMDM)。使用ACK裂解缓冲液(Thermo Fisher)裂解红细胞，并且在PBS 2％ FBS中洗涤两次后，将细胞重新悬浮在完全培养基(RPMI、10％ FBS、Pen/Strep、L-谷氨酰胺、非必需氨基酸)与(50ng/ml)鼠类M-CSF(m-MCSF)中，在6天后获得分化的巨噬细胞。用1mM EDTA在PBS中分离粘附的巨噬细胞。
体外和体内免疫沉淀和免疫印迹
对于体外免疫沉淀实验，BMDM细胞在含有1％ FBS的RPMI中饥饿4h。将10×106个细胞在4℃下与1μg对照抗体或抗TREM2抗体7E5一起温育15min。然后洗涤细胞并在山羊抗小鼠IgG(1.5μg用于1×106个细胞)存在下在37℃下温育。刺激后，细胞用裂解缓冲液(1％正十二烷基-β-D-麦芽糖苷、50Mm Tris-HCl(pH 8.0)、150mM NaCl、1mM EDTA、1.5mMMgCl2、10％甘油、蛋白酶和磷酸酶抑制剂)裂解并用相比于抗体7E5(大鼠抗h/m-TREM2，克隆237920，R&D System)结合TREM2的不同结构域的抗TREM2抗体或同种型对照免疫沉淀。
对于体内免疫沉淀实验，6-8周龄C57BL/6小鼠经腹膜内注射3ml的3％硫代乙醇酸盐。3天后，当腹腔富含表达TREM2的CD11b+F4/80+巨噬细胞时，向小鼠注射对照抗体或抗TREM2抗体7E5(40mg/kg)。抗体注射后24小时，收集腹膜巨噬细胞，立即在裂解缓冲液(如上所述)中裂解，并用大鼠抗h/m TREM2抗体(R&D System，克隆237920)进行免疫沉淀。
对于体外和体内实验，沉淀的蛋白质在非还原条件下通过SDS-PAGE分级分离，转移到PVDF膜上，并用抗磷酸酪氨酸抗体(4G10，Millipore)探测。在非还原条件下未检测到TREM2。为了确认所有底物均已充分免疫沉淀，还通过SDS-PAGE在还原条件下对来自每个样品的全细胞裂解物进行分级分离，并用抗肌动蛋白抗体(肌动蛋白，sc-47778Santa Cruz)进行免疫印迹。
NFAT-荧光素酶报告基因测定
用Cignal PLenti NFAT-荧光素酶病毒(Qiagen)感染表达小鼠TREM2和DAP12的稳定BW5147.G.1.4(
Figure BDA0003886640700001801
TIB48TM)(BWZ)细胞系，以产生在TREM2激活时诱导荧光素酶信号传导的稳定小鼠TREM2报告细胞系。使用佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(PMA)(0.05μg/ml)和离子霉素(0.25μM)验证报告基因的活性。为了测试抗TREM2抗体7E5是否诱导信号传导，将5μg/ml可溶性抗TREM2或对照抗体与100,000个细胞/孔一起添加到96孔培养板的每个孔中，并在37℃下在杜尔贝科改良伊格尔培养基(Dulbecco's Modified Eagle Medium,DMEM)中温育4-6小时。通过去除培养基并添加50μl PBS和50μl OneGlo试剂(Promega)来测量萤光素酶活性。然后将混合物在板振荡器上在室温下温育3分钟以裂解细胞。使用BioTek读板器测量荧光素酶信号。使用GraphPad Prism分析数据。
为了测试髓磷脂诱导的信号传导，将人类髓磷脂在PBS中稀释至200μg/ml，滴定到96孔组织培养板上并在4℃下温育过夜。第二天早上，除去溶液，并用200μl PBS洗板三次。将板风干，并加入BWZ细胞(有或没有抗体)，温育，并如上所述进行分析。
髓磷脂生产
制备人类髓磷脂并以冻干形式储存在-80℃。在使用前，将髓磷脂悬浮在DMEM中至最终浓度为2mg/ml，并通过涡旋和超声处理溶解。然后用10000RADS照射髓磷脂以达到无菌状态。等分试样储存在-80℃以供进一步使用。
结果
体外TREM2信号传导
为了测试交联的抗TREM2抗体7E5在受体接合后是否诱导信号传导，在体外用抗TREM2抗体7E5或同种型对照抗体刺激Trem2+/+和Trem2-/-BMDM，接着用二级抗体交联，以诱导受体聚集。然后将TREM2免疫沉淀，并分析DAP12磷酸化。如图2所示，交联(“x-link”)抗TREM2抗体7E5在Trem2+/+中而非在Trem2-/-BMDM中诱导TREM2相关DAP12的磷酸化。用同种型对照抗体处理未导致任何DAP12磷酸化。这些结果表明，交联的抗TREM2抗体7E5是DAP12磷酸化的强诱导剂，并充当介导TREM2信号传导的激动剂。
还测试了可溶性抗TREM2抗体7E5在没有交联的情况下受体接合后是否诱导信号传导。如图2所示，可溶性抗TREM2抗体7E5(无二次交联)诱导DAP12磷酸化。这些结果表明可溶性(非交联)抗TREM2抗体7E5诱导DAP12磷酸化并充当介导TREM2信号传导的激动剂。
还使用表达小鼠TREM2/DAP12复合物并在NFAT启动子控制下用荧光素酶报告基因转导的BWZ细胞在TREM2报告细胞测定中测试了可溶性抗TREM2抗体7E5激活TREM2信号传导的能力。如图3A所示，抗TREM2抗体7E5以剂量依赖性方式诱导TREM2信号传导，如通过相对于同种型对照抗体增加荧光素酶诱导所证明的。
随后，使用上述TREM2报告细胞测定来测试抗TREM2抗体7E5是否可阻断或增强髓磷脂诱导的TREM2信号传导。将抗TREM2抗体7E5或同种型对照抗体添加到接种于增加浓度的板结合髓磷脂的BWZ细胞中。如图3B所示，在较低的髓磷脂浓度(<100μg/ml)下，抗TREM2抗体7E5没有与同种型对照抗体不同地调节信号传导。相反，在较高浓度(>100μg/ml)下，抗TREM2抗体7E5相对于同种型对照抗体显著增加髓磷脂诱导的荧光素酶活化。这些结果表明抗TREM2抗体7E5在体外增强了髓磷脂介导的TREM2信号传导激活。
体内TREM2信号传导
接下来，研究了抗TREM2抗体7E5是否能够在体内诱导TREM2信号传导激活。在硫代乙醇酸盐诱导巨噬细胞向腹腔募集后，向小鼠注射抗TREM2抗体。然后将TREM2免疫沉淀，并分析DAP12磷酸化。如图4A-4B所示，与同种型对照相比，抗TREM2抗体7E5显著诱导了TREM2相关DAP12的磷酸化。这些结果表明抗TREM2抗体7E5是体内TREM2细胞内信号传导的有效诱导剂(通过可溶性刺激)。
总之，本实施例中描述的结果证明抗TREM2抗体7E5在体外和体内都是有效的TREM2激动剂，并且其激动活性因髓磷脂的存在而增强。
实施例3：激动剂抗TREM2抗体7E5加速髓磷脂碎片清除。
在本实施例中，评估了抗TREM2抗体7E5在Trem2+/-小鼠中促进清除由CPZ诱导的脱髓鞘引起的髓磷脂碎片的能力。
材料和方法
抗TREM2抗体7E5的施用
Trem2+/-小鼠用在开始CPZ喂食前4天以80mg/kg的剂量腹膜内给予的抗TREM2抗体7E5或同种型对照抗体处理，然后在整个实验中每周给药一次(参见图5A)。确定抗TREM2抗体到达大脑并在胼胝体和皮层中可检测到(数据未示出)。在CPZ喂食后4周(4WK；观察到脱髓鞘峰值时)进行分析，然后当向小鼠喂食常规饲料以允许髓鞘再生时，在CPZ停用后第3天(WK 4+3D)、第7天(WK 4+7D)和第14天(WK 4+14D)进行分析(参见图5A)。
结果
用抗TREM2抗体7E5进行体内处理导致Trem2+/-小鼠中CPZ诱导的病理学的改善。具体来说，如图5B-5C所示，抗TREM2抗体7E5处理相对于同种型对照抗体增强了髓磷脂碎片清除，如在使用CPZ 4周时dMBP染色减少的趋势所证明的。与用对照抗体处理的Trem2+/-小鼠相比，在用抗TREM2抗体7E5处理的Trem2+/-小鼠中观察到的增强的髓磷脂碎片清除在CPZ停用后3天具有高度统计学意义(图5C)。
本实施例中描述的体内实验结果证明抗TREM2抗体7E5加速髓磷脂清除，表明抗TREM2抗体7E5增强了TREM2对小胶质细胞的功能。不希望受理论束缚，据信抗TREM2抗体7E5对Trem2+/-小鼠髓磷脂清除的影响是由于抗TREM2抗体7E5对小胶质细胞的直接影响，CNS细胞类型始终显示表达TREM2(Schmid,Sautkulis等人,2002)，并且它与CPZ诱导的脱髓鞘后损伤的反应密切相关。
实施例4：激动剂抗TREM2抗体7E5促进少突胶质前体细胞的募集和向成熟少突胶质细胞的分化。
少突胶质前体细胞(OPC)维持髓鞘再生并抵消脱髓鞘期间发生的少突胶质细胞损失。在本实施例中，分析了抗TREM2抗体7E5对具有CPZ诱导的CNS脱髓鞘的Trem2+/-小鼠中OPC数量和OPC分化为成熟少突胶质细胞(OL)的影响。
材料和方法
如实施例3中所述进行CPZ诱导的脱髓鞘和抗TREM2抗体7E5或同种型对照抗体对Trem2+/-小鼠的施用。
如上所述进行免疫组织化学实验。
结果
OPC募集
如图6A-6B所示，与用对照抗体处理的Trem2+/-小鼠相比，在WK4+3D和WK4+7D进行抗TREM2抗体7E5处理后，在Trem2+/-小鼠的胼胝体中观察到PDGFRα+OPC密度的统计学显著增加。在WK4+3D观察到量化为PDGFRa+BrdU+细胞密度的PDGFRα+OPC增殖没有差异(数据未示出)。
OPC分化为成熟OL
分析由成熟OL特异性表达的OLIG2和CNPase标志物的表达，以评价抗TREM2抗体7E5对少突胶质细胞成熟的影响。如图7A-7C所示，与用对照抗体处理的Trem2+/-小鼠相比，在施用抗TREM2抗体7E5的Trem2+/-小鼠中，在CPZ停用后WK 4+3D时观察到OLIG2+细胞(图7A和图7B)和CNPase+细胞(图7A和图7C)的统计学显著增加。
本实施例中描述的结果表明，将抗TREM2抗体7E5施用于具有CPZ诱导的脱髓鞘的Trem2+/-小鼠导致少突胶质前体细胞募集到胼胝体。此外，抗TREM2抗体7E5促进OPC分化为成熟的少突胶质细胞。
这些结果表明，抗TREM2抗体7E5促进OPC从周围脑区募集到具有CPZ诱导的CNS脱髓鞘的Trem2+/-小鼠的胼胝体，而不是增强驻留OPC的增殖。然而，即使在使用CPZ 4周时未观察到抗TREM2抗体7E5对小胶质细胞增殖的影响，小胶质细胞增殖也可能在更早的时间点受到抗TREM2抗体7E5的影响，此时它更稳固(参见例如Gudi,Gingele等人,2014)。
实施例5：激动剂抗TREM2抗体7E5促进具有CPZ诱导的CNS脱髓鞘的小鼠的轴突健康。
在本实施例中，分析了抗TREM2抗体7E5对具有CPZ诱导的CNS脱髓鞘的Trem2+/-小鼠的胼胝体中轴突健康的影响。
材料和方法
如实施例3中所述进行CPZ诱导的脱髓鞘和抗TREM2抗体7E5或同种型对照抗体对Trem2+/-小鼠的施用。
如上所述进行免疫组织化学实验。
结果
SMI-31表达
如图8A-8B所示，与用对照抗体处理的Trem2+/-小鼠相比，在施用抗TREM2抗体7E5的Trem2+/-小鼠中在CPZ停用后WK 4+7D时观察到SMI-31表达的统计学显著增加，其是磷酸化神经丝的标志物。
磷酸化神经丝的存在是轴突健康的指标。因此，这些结果表明抗TREM2抗体7E5促进了具有CPZ诱导的CNS脱髓鞘的Trem2+/-小鼠的胼胝体中的轴突健康。
序列表
<110> 艾利妥
华盛顿大学
<120> 抗TREM2抗体的使用方法
<130> 73502-20034.40
<140> 尚未分配
<141> 同时随同提交
<150> US 62/980,929
<151> 2020-02-24
<160> 189
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 230
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Met Glu Pro Leu Arg Leu Leu Ile Leu Leu Phe Val Thr Glu Leu Ser
1 5 10 15
Gly Ala His Asn Thr Thr Val Phe Gln Gly Val Ala Gly Gln Ser Leu
20 25 30
Gln Val Ser Cys Pro Tyr Asp Ser Met Lys His Trp Gly Arg Arg Lys
35 40 45
Ala Trp Cys Arg Gln Leu Gly Glu Lys Gly Pro Cys Gln Arg Val Val
50 55 60
Ser Thr His Asn Leu Trp Leu Leu Ser Phe Leu Arg Arg Trp Asn Gly
65 70 75 80
Ser Thr Ala Ile Thr Asp Asp Thr Leu Gly Gly Thr Leu Thr Ile Thr
85 90 95
Leu Arg Asn Leu Gln Pro His Asp Ala Gly Leu Tyr Gln Cys Gln Ser
100 105 110
Leu His Gly Ser Glu Ala Asp Thr Leu Arg Lys Val Leu Val Glu Val
115 120 125
Leu Ala Asp Pro Leu Asp His Arg Asp Ala Gly Asp Leu Trp Phe Pro
130 135 140
Gly Glu Ser Glu Ser Phe Glu Asp Ala His Val Glu His Ser Ile Ser
145 150 155 160
Arg Ser Leu Leu Glu Gly Glu Ile Pro Phe Pro Pro Thr Ser Ile Leu
165 170 175
Leu Leu Leu Ala Cys Ile Phe Leu Ile Lys Ile Leu Ala Ala Ser Ala
180 185 190
Leu Trp Ala Ala Ala Trp His Gly Gln Lys Pro Gly Thr His Pro Pro
195 200 205
Ser Glu Leu Asp Cys Gly His Asp Pro Gly Tyr Gln Leu Gln Thr Leu
210 215 220
Pro Gly Leu Arg Asp Thr
225 230
<210> 2
<211> 227
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus musculus)
<400> 2
Met Gly Pro Leu His Gln Phe Leu Leu Leu Leu Ile Thr Ala Leu Ser
1 5 10 15
Gln Ala Leu Asn Thr Thr Val Leu Gln Gly Met Ala Gly Gln Ser Leu
20 25 30
Arg Val Ser Cys Thr Tyr Asp Ala Leu Lys His Trp Gly Arg Arg Lys
35 40 45
Ala Trp Cys Arg Gln Leu Gly Glu Glu Gly Pro Cys Gln Arg Val Val
50 55 60
Ser Thr His Gly Val Trp Leu Leu Ala Phe Leu Lys Lys Arg Asn Gly
65 70 75 80
Ser Thr Val Ile Ala Asp Asp Thr Leu Ala Gly Thr Val Thr Ile Thr
85 90 95
Leu Lys Asn Leu Gln Ala Gly Asp Ala Gly Leu Tyr Gln Cys Gln Ser
100 105 110
Leu Arg Gly Arg Glu Ala Glu Val Leu Gln Lys Val Leu Val Glu Val
115 120 125
Leu Glu Asp Pro Leu Asp Asp Gln Asp Ala Gly Asp Leu Trp Val Pro
130 135 140
Glu Glu Ser Ser Ser Phe Glu Gly Ala Gln Val Glu His Ser Thr Ser
145 150 155 160
Arg Asn Gln Glu Thr Ser Phe Pro Pro Thr Ser Ile Leu Leu Leu Leu
165 170 175
Ala Cys Val Leu Leu Ser Lys Phe Leu Ala Ala Ser Ile Leu Trp Ala
180 185 190
Val Ala Arg Gly Arg Gln Lys Pro Gly Thr Pro Val Val Arg Gly Leu
195 200 205
Asp Cys Gly Gln Asp Ala Gly His Gln Leu Gln Ile Leu Thr Gly Pro
210 215 220
Gly Gly Thr
225
<210> 3
<211> 228
<212> PRT
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 3
Met Glu Pro Leu His Val Phe Val Leu Leu Leu Val Thr Glu Leu Ser
1 5 10 15
Gln Ala Leu Asn Thr Thr Val Leu Gln Gly Val Ala Gly Gln Ser Leu
20 25 30
Arg Val Ser Cys Thr Tyr Asp Ala Leu Arg His Trp Gly Arg Arg Lys
35 40 45
Ala Trp Cys Arg Gln Leu Ala Glu Glu Gly Pro Cys Gln Arg Val Val
50 55 60
Ser Thr His Gly Val Trp Leu Leu Ala Phe Leu Arg Lys Gln Asn Gly
65 70 75 80
Ser Thr Val Ile Thr Asp Asp Thr Leu Ala Gly Thr Val Thr Ile Thr
85 90 95
Leu Arg Asn Leu Gln Ala Gly Asp Ala Gly Leu Tyr Gln Cys Gln Ser
100 105 110
Leu Arg Gly Arg Glu Ala Glu Val Leu Gln Lys Val Val Val Glu Val
115 120 125
Leu Glu Asp Pro Leu Asp Asp Gln Asp Ala Gly Asp Leu Trp Val Pro
130 135 140
Glu Glu Ser Glu Ser Phe Glu Gly Ala Gln Val Glu His Ser Thr Ser
145 150 155 160
Ser Gln Val Ser Ser Cys Gly Ser Pro Leu Thr Tyr His Leu Pro Pro
165 170 175
Lys Glu Pro Ile Arg Lys Asp Leu Leu Pro Thr His Phe His Ser Ser
180 185 190
Pro Pro Gly Leu Cys Pro Pro Glu Gln Ala Ser Tyr Ser Gln His Pro
195 200 205
Leu Gly Cys Gly Gln Gly Gln Ala Glu Ala Gly Asp Thr Cys Gly Gln
210 215 220
Trp Ala Arg Leu
225
<210> 4
<211> 260
<212> PRT
<213> 恒河猴(Macaca mulatta)
<400> 4
Met Pro Asp Pro Leu Phe Ser Ala Val Gln Gly Lys Asp Lys Ile Leu
1 5 10 15
His Lys Ala Leu Cys Ile Cys Pro Trp Pro Gly Lys Gly Gly Met Glu
20 25 30
Pro Leu Arg Leu Leu Ile Leu Leu Phe Ala Thr Glu Leu Ser Gly Ala
35 40 45
His Asn Thr Thr Val Phe Gln Gly Val Glu Gly Gln Ser Leu Gln Val
50 55 60
Ser Cys Pro Tyr Asp Ser Met Lys His Trp Gly Arg Arg Lys Ala Trp
65 70 75 80
Cys Arg Gln Leu Gly Glu Lys Gly Pro Cys Gln Arg Val Val Ser Thr
85 90 95
His Asn Leu Trp Leu Leu Ser Phe Leu Arg Arg Arg Asn Gly Ser Thr
100 105 110
Ala Ile Thr Asp Asp Thr Leu Gly Gly Thr Leu Thr Ile Thr Leu Arg
115 120 125
Asn Leu Gln Pro His Asp Ala Gly Phe Tyr Gln Cys Gln Ser Leu His
130 135 140
Gly Ser Glu Ala Asp Thr Leu Arg Lys Val Leu Val Glu Val Leu Ala
145 150 155 160
Asp Pro Leu Asp His Arg Asp Ala Gly Asp Leu Trp Val Pro Gly Glu
165 170 175
Ser Glu Ser Phe Glu Asp Ala His Val Glu His Ser Ile Ser Arg Ser
180 185 190
Leu Leu Glu Gly Glu Ile Pro Phe Pro Pro Thr Ser Val Leu Leu Leu
195 200 205
Leu Ala Cys Ile Phe Leu Ile Lys Ile Leu Ala Ala Ser Ala Leu Trp
210 215 220
Ala Ala Ala Trp His Gly Gln Lys Pro Gly Thr His Pro Pro Ser Glu
225 230 235 240
Pro Asp Cys Gly His Asp Pro Gly His Gln Leu Gln Thr Leu Pro Gly
245 250 255
Leu Arg Asp Thr
260
<210> 5
<211> 230
<212> PRT
<213> 长尾猕猴(Macaca fascicularis)
<400> 5
Met Glu Pro Leu Arg Leu Leu Ile Leu Leu Phe Ala Thr Glu Leu Ser
1 5 10 15
Gly Ala His Asn Thr Thr Val Phe Gln Gly Val Glu Gly Gln Ser Leu
20 25 30
Gln Val Ser Cys Pro Tyr Asp Ser Met Lys His Trp Gly Arg Arg Lys
35 40 45
Ala Trp Cys Arg Gln Leu Gly Glu Lys Gly Pro Cys Gln Arg Val Val
50 55 60
Ser Thr His Asn Leu Trp Leu Leu Ser Phe Leu Arg Arg Arg Asn Gly
65 70 75 80
Ser Thr Ala Ile Thr Asp Asp Thr Leu Gly Gly Thr Leu Thr Ile Thr
85 90 95
Leu Arg Asn Leu Gln Pro His Asp Ala Gly Phe Tyr Gln Cys Gln Ser
100 105 110
Leu His Gly Ser Glu Ala Asp Thr Leu Arg Lys Val Leu Val Glu Val
115 120 125
Leu Ala Asp Pro Leu Asp His Arg Asp Ala Gly Asp Leu Trp Val Pro
130 135 140
Gly Glu Ser Glu Ser Phe Glu Asp Ala His Val Glu His Ser Ile Ser
145 150 155 160
Arg Ser Leu Leu Glu Gly Glu Ile Pro Phe Pro Pro Thr Ser Val Leu
165 170 175
Leu Leu Leu Ala Cys Ile Phe Leu Ile Lys Ile Leu Ala Ala Ser Ala
180 185 190
Leu Trp Ala Ala Ala Trp His Gly Gln Lys Pro Gly Thr His Pro Pro
195 200 205
Ser Glu Pro Asp Cys Gly His Asp Pro Gly His Gln Leu Gln Thr Leu
210 215 220
Pro Gly Leu Arg Asp Thr
225 230
<210> 6
<211> 230
<212> PRT
<213> 家马(Equus caballus)
<400> 6
Met Glu Pro Leu Pro Leu Leu Ile Leu Leu Ser Val Ala Glu Leu Ser
1 5 10 15
Arg Gly His Asn Thr Thr Val Phe Gln Gly Thr Ala Gly Arg Ser Leu
20 25 30
Lys Val Ser Cys Pro Tyr Asn Ser Leu Met His Trp Gly Arg Arg Lys
35 40 45
Ala Trp Cys Arg Gln Leu Gly Glu Asp Gly Pro Cys Gln Gln Val Val
50 55 60
Ser Thr His Ser Leu Trp Leu Leu Ser Phe Leu Lys Arg Arg Asn Gly
65 70 75 80
Ser Thr Val Ile Thr Asp Asp Ala Leu Gly Gly Ile Leu Thr Ile Thr
85 90 95
Leu Arg Asn Leu Gln Ala His Asp Ala Gly Phe Tyr Gln Cys Gln Ser
100 105 110
Leu His Gly Gly Glu Ala Asp Thr Leu Arg Lys Val Leu Val Glu Val
115 120 125
Leu Ala Asp Pro Leu Asp His Gln Glu Pro Gly Asp Leu Trp Ile Pro
130 135 140
Lys Glu Ser Glu Ser Phe Glu Asp Ala Gln Val Glu His Ser Ile Ser
145 150 155 160
Arg Ser Leu Val Glu Glu Glu Ile Pro Ser Leu Pro Thr Ser Ile Leu
165 170 175
Leu Leu Leu Ala Cys Ile Phe Leu Ser Lys Leu Leu Ala Ala Ser Ala
180 185 190
Ile Trp Ala Ala Ala Trp His Gly Gln Lys Gln Glu Thr Pro Pro Ala
195 200 205
Ser Glu Pro Asp Arg Gly His Asp Pro Gly Tyr Gln Leu His Thr Leu
210 215 220
Thr Gly Glu Arg Asp Thr
225 230
<210> 7
<211> 233
<212> PRT
<213> 野猪(Sus scrofa)
<400> 7
Met Glu Thr Leu Gly Leu Leu Leu Leu Leu Trp Val Ala Glu Leu Ser
1 5 10 15
Arg Ala His Asn Thr Ser Val Phe Gln Gly Thr Ala Gly Gln Ser Leu
20 25 30
Arg Val Ser Cys Ser Tyr Asn Ser Leu Lys His Trp Gly Arg Arg Lys
35 40 45
Ala Trp Cys Arg Gln Leu Ser Glu Glu Gly Leu Cys Gln His Val Val
50 55 60
Ser Thr His Pro Thr Trp Leu Leu Ser Phe Leu Lys Arg Arg Asn Gly
65 70 75 80
Ser Thr Ala Ile Thr Asp Asp Ala Leu Gly Gly Thr Leu Thr Ile Thr
85 90 95
Leu Arg Asn Leu Gln Ala His Asp Ala Gly Leu Tyr Gln Cys Gln Ser
100 105 110
Leu His Gly Ser Glu Ala Asp Thr Leu Lys Lys Val Leu Val Glu Val
115 120 125
Leu Ala Asp Pro Leu Glu Ser Gln Ser Lys Ser Phe Gln Asp Val Gln
130 135 140
Met Glu His Ser Ile Ser Arg Asn Leu Ser Glu Glu Ser Leu Phe Pro
145 150 155 160
Pro Thr Ser Thr Leu Phe Leu Leu Ala Cys Val Phe Leu Ser Lys Leu
165 170 175
Leu Val Ala Ser Ala Leu Trp Ala Ala Ala Trp His Gly His Lys Gln
180 185 190
Arg Thr Ser Pro Ala Gly Gly Leu Asp Cys Gly Arg Asp Pro Gly Asp
195 200 205
Gln Asp Gln Thr Leu Thr Asp Glu Leu Gly Glu Ser Ser Asp Gln Asp
210 215 220
Gln Thr Leu Thr Glu Leu Arg Asp Thr
225 230
<210> 8
<211> 230
<212> PRT
<213> 家犬(Canis lupus familiaris)
<400> 8
Met Glu Pro Leu Trp Leu Leu Ile Leu Leu Ala Val Thr Glu Leu Ser
1 5 10 15
Gly Ala His Asn Thr Thr Val Phe Gln Gly Met Ala Gly Arg Ser Leu
20 25 30
Gln Val Ser Cys Pro Tyr Asn Ser Leu Lys His Trp Gly Arg Arg Lys
35 40 45
Ala Trp Cys Arg Gln Val Asp Lys Glu Gly Pro Cys Gln Arg Val Val
50 55 60
Ser Thr His Arg Ser Trp Leu Leu Ser Phe Leu Lys Arg Trp Asn Gly
65 70 75 80
Ser Thr Ala Ile Val Asp Asp Ala Leu Gly Gly Thr Leu Thr Ile Thr
85 90 95
Leu Arg Asn Leu Gln Ala His Asp Ala Gly Leu Tyr Gln Cys Gln Ser
100 105 110
Leu Tyr Gly Asp Glu Ala Asp Thr Leu Arg Lys Val Leu Val Glu Val
115 120 125
Leu Ala Asp Pro Leu Asp His Leu Asp Pro Gly Asp Leu Trp Ile Pro
130 135 140
Glu Glu Ser Lys Gly Phe Glu Asp Ala His Val Glu Pro Ser Val Ser
145 150 155 160
Arg Ser Leu Ser Glu Glu Glu Ile Pro Phe Pro Pro Thr Ser Ile Leu
165 170 175
Phe Leu Leu Ala Cys Ile Phe Leu Ser Lys Phe Leu Ala Ala Ser Ala
180 185 190
Leu Trp Ala Ala Ala Trp Arg Gly Gln Lys Leu Gly Thr Pro Gln Ala
195 200 205
Ser Glu Leu Asp Cys Ser Cys Asp Pro Gly Tyr Gln Leu Gln Thr Leu
210 215 220
Thr Glu Pro Arg Asp Met
225 230
<210> 9
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 9
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
20 25
<210> 10
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 10
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
20 25
<210> 11
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 11
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
20 25
<210> 12
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 12
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 13
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 13
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 14
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 14
Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 15
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 15
Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 16
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 16
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 17
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 17
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys
20
<210> 18
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 18
Gly Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys
20
<210> 19
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 19
Gly Val Val Met Ala Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys
20
<210> 20
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 20
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 21
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 21
Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 22
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 22
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 23
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 23
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 24
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 24
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 25
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 25
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 26
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 26
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 27
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Gln
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gly Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Leu Arg Asn Gln Pro Gly Glu Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 28
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 28
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Asp
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Glu Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Arg Lys Phe
50 55 60
His Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Leu Arg Asn Lys Pro Gly Glu Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 29
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 29
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Thr Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Ala Tyr Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Val Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr Arg Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 30
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 30
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Arg Tyr Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr Arg Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 31
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 31
Ala Arg Leu Leu Arg Asn Gln Pro Gly Glu Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 32
Ser Gln Ser Thr Arg Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 33
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 33
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 34
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 34
Tyr Ala Phe Ser Ser Gln Trp Met Asn
1 5
<210> 35
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 35
Arg Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gly Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 36
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 36
Tyr Ala Phe Ser Ser Asp Trp Met Asn
1 5
<210> 37
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 37
Arg Ile Tyr Pro Gly Glu Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Arg Lys Phe His
1 5 10 15
Gly
<210> 38
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 38
Ala Arg Leu Leu Arg Asn Lys Pro Gly Glu Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 39
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 39
Arg Thr Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Ala Tyr Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 40
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 40
Lys Val Ser Asn Arg Val Ser
1 5
<210> 41
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 41
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Arg Tyr Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 42
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 42
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
100 105 110
<210> 43
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 43
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Gln
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gly Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Leu Arg Asn Gln Pro Gly Glu Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Gly Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 44
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 44
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Gln
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Gly Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Gly Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Leu Arg Asn Gln Pro Gly Glu Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Gly Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly
450
<210> 45
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 45
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Asp
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Glu Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Arg Lys Phe
50 55 60
His Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Leu Arg Asn Lys Pro Gly Glu Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 46
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 46
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Asp
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Glu Gly Asp Thr Asn Tyr Ala Arg Lys Phe
50 55 60
His Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Leu Arg Asn Lys Pro Gly Glu Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly
450
<210> 47
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 47
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Arg Tyr Thr Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr Arg Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 48
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 48
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Thr Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Ala Tyr Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Val Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr Arg Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 49
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 1
<223> Xaa = Asp或Glu
<220>
<221> 变体
<222> 2, 3
<223> Xaa = 任何氨基酸，并且每个可存在或不存在
<220>
<221> 变体
<222> 5, 6
<223> Xaa = 任何氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> 7
<223> Xaa = Leu或Ile
<220>
<221> 变体
<222> 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15
<223> Xaa = 任何氨基酸，并且至多两个可存在或不存在
<220>
<221> 变体
<222> 17, 18
<223> Xaa = 任何氨基酸
<220>
<221> 变体
<222> 19
<223> Xaa = Leu或Ile
<400> 49
Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr
1 5 10 15
Xaa Xaa Xaa
<210> 50
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 50
Asp Val Glx Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Asn Gly Lys Thr Phe Leu Ser Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ala Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Leu Glu Ala Asp Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys Met Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105 110
<210> 51
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 51
Glu Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ala
20 25 30
Trp Met Gly Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Glu Ile Arg Asp Lys Val Lys Asn His Ala Thr Tyr Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Thr
65 70 75 80
Val Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala Asp Asp Thr Gly Ile Tyr
85 90 95
Tyr Cys Arg Leu Gly Val Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 52
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 52
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala Trp Asn
1 5 10
<210> 53
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 53
Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Arg Thr Ile Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 54
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 54
Ala Arg Trp Asn Gly Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 55
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 55
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ile Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His
1 5 10 15
<210> 56
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 56
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 57
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 57
Ser Gln Thr Thr His Ala Leu Phe Thr
1 5
<210> 58
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 58
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Asn Tyr Ser Gly Arg Thr Ile Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn His Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Ile Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Asn Gly Asn Tyr Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 59
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成构建体
<400> 59
Asp Trp Met Thr Gln Asn Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp
1 5 10 15
Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ile Asn
20 25 30
Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Thr Thr
85 90 95
His Ala Leu Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 60
<211> 7
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Glu Lys Asn Gln Asp Tyr
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Gly Ala Ser
1
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Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Arg Gln Gly Ile Trp Gly Asp Ala Leu Asp Phe Trp Gly
100 105 110
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115 120
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Gly
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Gly
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Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
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Gly
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Glu Gly Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr His Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10 15

Claims (39)

1.一种用于治疗或预防中枢神经系统(CNS)脱髓鞘疾病的方法，所述方法包括向有需要的个体施用治疗有效量的与TREM2蛋白结合的激动剂抗体。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述抗体促进所述个体的CNS中的一个或多个脱髓鞘病变中的髓鞘再生。
3.一种用于促进患有中枢神经系统(CNS)脱髓鞘疾病的个体的一个或多个脱髓鞘病变的髓鞘再生的方法，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的与TREM2蛋白结合的激动剂抗体。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述TREM2蛋白是哺乳动物蛋白或人类蛋白。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述TREM2蛋白是野生型蛋白、天然存在的变体或疾病变体。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述抗体诱导一种或多种TREM2活性，所述TREM2活性选自由以下组成的组：
a.TREM2与DAP12结合；
b.DAP12磷酸化；
c.Syk激酶的激活；
d.Syk募集到DAP12/TREM2复合物；以及
e.增加一种或多种TREM2依赖性基因的活性，任选地其中所述一种或多种TREM2依赖性基因包含活化T细胞核因子(NFAT)转录因子。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述抗体增强在髓磷脂存在下诱导的一种或多种TREM2活性。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述在髓磷脂存在下诱导的一种或多种TREM2活性包括增加一种或多种TREM2依赖性基因的活性，任选地其中所述一种或多种TREM2依赖性基因包含活化T细胞核因子(NFAT)转录因子。
9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述抗体促进少突胶质前体细胞(OPC)募集到所述个体的CNS中的一个或多个脱髓鞘病变。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述OPC是PDGFRα阳性的。
11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述抗体促进所述个体的CNS中的一个或多个脱髓鞘病变中成熟少突胶质细胞(OL)的增加。
12.如权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述抗体促进所述个体的CNS中的一个或多个脱髓鞘病变中OPC分化为成熟少突胶质细胞(OL)。
13.如权利要求11或权利要求12所述的方法，其中所述成熟OL是OLIG2和/或CNPase阳性的。
14.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述抗体促进所述个体的CNS中的一个或多个脱髓鞘病变中磷酸化神经丝水平的增加。
15.如权利要求14所述的方法，其中所述磷酸化神经丝是SMI-31阳性的。
16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述抗体促进所述个体的一个或多个脱髓鞘病变中髓磷脂碎片的清除。
17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述抗体是鼠类抗体、人源化抗体、双特异性抗体、多价抗体、缀合抗体或嵌合抗体。
18.如权利要求1-17中任一项所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体。
19.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述抗体结合于以下各者内的一个或多个氨基酸：SEQ ID NO:1的氨基酸残基124-153，或TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基124-153的氨基酸残基；SEQ ID NO:1的氨基酸残基129-153，或TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基129-153的氨基酸残基；SEQ ID NO:1的氨基酸残基140-149，或TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基140-149的氨基酸残基；SEQ ID NO:1的氨基酸残基149-157，或TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基149-157的氨基酸残基；或SEQ ID NO:1的氨基酸残基153-162，或TREM2蛋白上对应于SEQ ID NO:1的氨基酸残基153-162的氨基酸残基。
20.如权利要求1-18中任一项所述的方法，其中所述抗体结合于选自由SEQ ID NO:1的D140、L141、W142、F143、P144、E151、D152、H154、E156和H157组成的组的一个或多个氨基酸残基，或哺乳动物TREM2蛋白上对应于选自由SEQ ID NO:1的D140、L141、W142、F143、P144、E151、D152、H154、E156和H157组成的组的氨基酸残基的一个或多个氨基酸残基。
21.如权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述抗体包括包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的重链可变区和包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的轻链可变区，其中所述HVR-H1包含氨基酸序列YAFSSQWMN(SEQ ID NO:34)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIYPGGGDTNYAGKFQG(SEQ ID NO:35)，所述HVR-H3包含氨基酸序列ARLLRNQPGESYAMDY(SEQ ID NO:31)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RSSQSLVHSNRYTYLH(SEQ ID NO:41)，所述HVR-L2包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:33)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:32)。
22.如权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述抗体包括包含氨基酸序列SEQ IDNO:27的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的轻链可变区。
23.如权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述抗体包括包含HVR-H1、HVR-H2和HVR-H3的重链可变区和包含HVR-L1、HVR-L2和HVR-L3的轻链可变区，其中所述HVR-H1包含氨基酸序列YAFSSDWMN(SEQ ID NO:36)，所述HVR-H2包含氨基酸序列RIYPGEGDTNYARKFHG(SEQ ID NO:37)，所述HVR-H3包含氨基酸序列ARLLRNKPGESYAMDY(SEQ ID NO:38)，所述HVR-L1包含氨基酸序列RTSQSLVHSNAYTYLH(SEQ ID NO:39)，所述HVR-L2包含氨基酸序列KVSNRVS(SEQ ID NO:40)，并且所述HVR-L3包含氨基酸序列SQSTRVPYT(SEQ ID NO:32)。
24.如权利要求1-20或23中任一项所述的方法，其中所述抗体包括包含氨基酸序列SEQID NO:28的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的轻链可变区。
25.如权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述抗体是片段并且所述片段是Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv或scFv片段。
26.如权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述抗体属于IgG类、IgM类或IgA类。
27.如权利要求26所述的方法，其中所述抗体属于IgG类并且具有IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。
28.如权利要求26所述的方法，其中所述抗体具有人类IgG1同种型并且在Fc区中残基位置P331S和E430G处包含氨基酸取代，其中残基编号是根据EU编号。
29.如权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述抗体包含：
a.包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的重链，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:47的轻链；或
b.包含氨基酸序列SEQ ID NO:44的重链，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:47的轻链。
30.如权利要求1-20或23-24中任一项所述的方法，其中所述抗体包含：
a.包含氨基酸序列SEQ ID NO:45的重链，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:48的轻链；或
b.包含氨基酸序列SEQ ID NO:46的重链，和包含氨基酸序列SEQ ID NO:48的轻链。
31.如权利要求1-30中任一项所述的方法，其中所述个体是人类。
32.如权利要求1-31中任一项所述的方法，其中所述个体包含至少一个拷贝的功能性TREM2基因。
33.如权利要求32所述的方法，其中所述个体对于TREM2基因中的突变是杂合的。
34.如权利要求32所述的方法，其中所述个体对于TREM2基因中的突变是纯合的。
35.如权利要求1-34中任一项所述的方法，其中所述个体具有疾病特征或处于疾病特征的风险中，所述疾病特征选自由以下组成的组：髓磷脂损伤、CNS中的一个或多个脱髓鞘病变、CNS中的炎症、CNS中的一个或多个斑块、髓鞘损失、轴突损伤、OPC减少、OL减少、髓磷脂碎片清除减少、轴突膨体、轴突球样变、神经胶质增生、自发荧光载脂巨噬细胞、轴突破坏和它们的任何组合。
36.如权利要求35所述的方法，其中所述个体具有CNS中的轴突损伤和/或一个或多个脱髓鞘病变或处于具有CNS中的轴突损伤和/或一个或多个脱髓鞘病变的风险中。
37.如权利要求36所述的方法，其中所述CNS中的轴突损伤和/或一个或多个脱髓鞘病变位于所述CNS的白质、灰质或胼胝体中。
38.如权利要求1-37中任一项所述的方法，其中所述个体具有症状或处于具有症状的风险中，所述症状选自由以下组成的组：感觉变化、刺痛、麻木、肌肉无力、阵挛、肌肉痉挛、运动困难、协调困难、平衡困难、言语问题、吞咽问题、视觉问题、疲劳、急性疼痛、慢性疼痛、膀胱困难、肠道困难、认知障碍、抑郁、情绪不稳定、Uhthoff现象、莱尔米特征和它们的任何组合。
39.如权利要求1-38中任一项所述的方法，其中所述脱髓鞘疾病或病症是多发性硬化。
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