TW201625683A - 抗介白素－３３抗體及其用途 - Google Patents

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Abstract

本發明提供介白素-33(IL-33)抗體及其使用方法。

Description

抗介白素-33抗體及其用途
本發明係關於抗介白素-33(IL-33)抗體及其使用方法，包括用於治療IL-33介導之病症的方法。
介白素-33(IL-33)為由IL33基因編碼之介白素-1(IL-1)細胞因子家族之成員，且組成性地表現於結構細胞，諸如平滑肌細胞、上皮細胞及內皮細胞中。IL-33可由巨噬細胞及樹突細胞中之炎性因子誘導。由環境觸發物諸如過敏原、毒素及病原引起之細胞應激可導致IL-33釋放。生物可利用IL-33與由抑制致瘤性2(ST2)蛋白及介白素-1受體輔助蛋白(IL-1RAcP)組成之異二聚IL-33受體複合體結合以經由接頭蛋白骨髓分化初級反應88(MyD88)及可能MyD88-接頭樣(Mal)蛋白活化AP-1及NF-κB路徑。IL-33刺激多種細胞類型，包括先天II型(ILC2)細胞、肥大細胞、嗜鹼性球、嗜伊紅血球及樹突細胞，以促進2型免疫性。
IL-33路徑已被證明涉及在各種疾病中，包括過敏相關疾病，對於該等疾病仍存在開發改良之組合物(包括治療性抗IL-33拮抗劑)及治療方法的需要。
本發明係關於抗IL-33抗體(包括雙特異性抗IL-33/抗IL-13抗體)及其使用方法。
在一個態樣中，本發明提供一種經分離抗體，該抗體以約500pM或更低之KD特異性結合人類及食蟹獼猴(cyno)介白素-33(IL-33)兩者。在一些實施例中，該抗體以約100fM與約500pM之間之KD特異性結合人類IL-33。在一些實施例中，該抗體以約1pM與約200pM之間之KD特異性結合人類IL-33。在一些實施例中，該抗體以約15pM與約180pM 之間之KD特異性結合人類IL-33。在一些實施例中，該抗體以約15pM與約140pM之間之KD特異性結合人類IL-33。在一些實施例中，該抗體以約100fM與約500pM之間之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。在一些實施例中，該抗體以約1pM與約500pM之間之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。在一些實施例中，該抗體以約100pM與約500pM之間之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。在一些實施例中，該抗體以約125pM與約500pM之間之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。在一些實施例中，該抗體以約1pM與約500pM之間之KD特異性結合人類及食蟹獼猴IL-33兩者。在一些實施例中，該抗體以約1pM與約200pM之間之KD特異性結合人類IL-33。
在一些實施例中，前述抗體中任一者能夠抑制IL-33與IL-33受體(例如，ST2及/或IL-1RAcP)之結合。在一些實施例中，使用基於細胞之阻斷分析來量測該抑制。在一些實施例中，該抗體以約0.001μg/ml與約0.5μg/ml之間之90%抑制性濃度(IC90)抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。在一些實施例中，IC90為介於約0.002μg/ml與約0.25μg/ml之間。在一些實施例中，IC90為約0.17μg/ml。在一些實施例中，IC90為約0.004μg/ml。在一些實施例中，該抗體以約800fM與約10pM之間之50%抑制性濃度(IC50)抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。在一些實施例中，IC50為介於約1pM與約5pM之間。在一些實施例中，IC50為約2.5pM。在一些實施例中，該抗體以約1nM與約5nM之間之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合。在一些實施例中，IC50為約4nM。在一些實施例中，HEK-BLUETM IL-33/IL-1β細胞用於基於細胞之阻斷分析中。在一些實施例中，HEK-BLUETM IL-33/IL-1β細胞包含核酸，該核酸包含SEQ ID NO：311之序列。在一些實施例中，該分析包括用IL-33處理HEK-BLUETM IL-33/IL-1β細胞。在一些實施例中，IL-33包含SEQ ID NO：313-318中任一者之胺基酸序列。在一些實施例中，sST2-LZ在基於細胞之阻斷分析中用作陽性對照。在一些實施例中，sST2-LZ包含SEQ ID NO：310之胺基酸序列。
在上述態樣之一些實施例中，該抗體包含結合域，該結合域包含：(a)HVR-H1，其包含SFSMS(SEQ ID NO：1)之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含TISGGKTFTDYVDSVKG(SEQ ID NO：2)之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含ANYGNWFFEV(SEQ ID NO：3)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：12)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQAPGKGLEWVA(SEQ ID NO：13)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：14)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：15)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域進一步包含：(a)FR-H1，其包含DVNLVESGGGSVKPGGSLKLSCVASGFTFS(SEQ ID NO：16)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQTPEKRLEWVA(SEQ ID NO：17)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDDAKNTLYLQMSSLESEDTAMYYCTR(SEQ ID NO：18)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGAGTTVAVSS(SEQ ID NO：19)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：12)或EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：20)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQAPGKGLEWVA(SEQ ID NO：13)或WVRQAPGKGLEWVS(SEQ ID NO：21)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：22)、RFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：23)、RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：24)或RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：14)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：15)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域進一步包含：(a)HVR-L1，其包含RASESVAKYGLSLLN(SEQ ID NO：4)之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含AASNRGS(SEQ ID NO：5)之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含QQSKEVPFT(SEQ ID NO：6)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域進一步包含：(a)FR-L1，其包含EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：25)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WFQQKPGQPPRLLIF(SEQ ID NO：26)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GIPARFSGSGSGTDFT LTISSLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：27)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：28)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIVLTQSPGFLVVSLGQRATISC(SEQ ID NO：29)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WFQQKPGQPPKLLIF(SEQ ID NO：30)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFC(SEQ ID NO：31)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGSGTKLEIK(SEQ ID NO：32)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域進一步包含：(a)FR-L1，其包含EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：25)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WFQQKPGQPPRLLIF(SEQ ID NO：26)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：27)、GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC(SEQ ID NO：33)、GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：34)或GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC(SEQ ID NO：35)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：28)之胺基酸序列。
在上述態樣之一些實施例中，該抗體包含結合域，該結合域包含：(a)HVR-H1，其包含SSIFYWG(SEQ ID NO：65)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SIYYSGRTYYNPSLKS(SEQ ID NO：66)或SIYYSGRTYYNPALKS(SEQ ID NO：67)之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含AGGLYNWNDESFSFYMDV(SEQ ID NO：68)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域進一步包含：(a)FR-H1，其包含ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR(SEQ ID NO：72)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WIRQPPGKGLEWIG(SEQ ID NO：73)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR(SEQ ID NO：74)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTTVTVSS(SEQ ID NO：75)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域進一步包含：(a)FR-H1，其包含QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR(SEQ ID NO：76)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WIRQPPGKGLEWIG(SEQ ID NO：73)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR(SEQ ID NO：74)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGNGTTVTVSS(SEQ ID NO：78)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域進一步包含：(a)FR-H1，其包含ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR(SEQ ID NO：72)、QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR(SEQ ID NO：76)或QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR(SEQ ID NO：77)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WIRQPPGKGLEWIG(SEQ ID NO：73)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR(SEQ ID NO：74)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTTVTVSS(SEQ ID NO：75)或WGNGTTVTVSS(SEQ ID NO：78)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域進一步包含：(a)HVR-L1，其包含RASQSFSSSYLA(SEQ ID NO：69)之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含GASSRAT(SEQ ID NO：70)之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含QQYDRSPLT(SEQ ID NO：71)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域進一步包含：(a)FR-L1，其包含EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：79)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGQAPRLLIY(SEQ ID NO：80)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：81)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGGGTKVEIK(SEQ ID NO：82)之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含SFSX1S(SEQ ID NO：62)之胺基酸序列，其中X1為Met、Leu或Val；(b)HVR-H2，其包含TISGGKTFTDYVDX1VKG(SEQ ID NO：63)之胺基酸序列，其中X1為Ser或Ala；(c)HVR-H3，其包含ANYGX1X2FFEV(SEQ ID NO：64)之胺基酸序列，其中X1為Asn或Asp，且X2為Trp或Phe；(d)HVR-L1，其包含RASESVAKYGLSLLN(SEQ ID NO：4)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNRGS(SEQ ID NO：5)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKEVPFT(SEQ ID NO：6)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含SFSMS(SEQ ID NO：1)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含TISGGKTFTDYVDSVKG(SEQ ID NO：2)之胺基 酸序列；(c)HVR-H3，其包含ANYGNWFFEV(SEQ ID NO：3)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVAKYGLSLLN(SEQ ID NO：4)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNRGS(SEQ ID NO：5)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKEVPFT(SEQ ID NO：6)之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：36之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：37之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些實施例中，該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：12)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQAPGKGLEWVA(SEQ ID NO：13)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：14)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：15)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：25)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WFQQKPGQPPRLLIF(SEQ ID NO：26)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：27)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：28)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含DVNLVESGGGSVKPGGSLKLSCVASGFTFS(SEQ ID NO：16)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQTPEKRLEWVA(SEQ ID NO：17)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDDAKNTLYLQMSSLESEDTAMYYCTR(SEQ ID NO：18)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGAGTTVAVSS(SEQ ID NO：19)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：38之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIVLTQSPGFLVVSLGQRATISC(SEQ ID NO：29)之胺基酸序列；(b) FR-L2，其包含WFQQKPGQPPKLLIF(SEQ ID NO：30)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFC(SEQ ID NO：31)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGSGTKLEIK(SEQ ID NO：32)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：39之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：12)或EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：20)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQAPGKGLEWVA(SEQ ID NO：13)或WVRQAPGKGLEWVS(SEQ ID NO：21)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：22)、RFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：23)、RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：24)或RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：14)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：15)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：40之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：25)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WFQQKPGQPPRLLIF(SEQ ID NO：26)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：27)、GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC(SEQ ID NO：33)、GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：34)或GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC(SEQ ID NO：35)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：28)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：41之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：36之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：37之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：38之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：39之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：40之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：41之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含SSIFYWG(SEQ ID NO：65)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SIYYSGRTYYNPX1LKS(SEQ ID NO：90)之胺基酸序列，其中X1為Ser或Ala；(c)HVR-H3，其包含AGGLYNWNDESFSFYMDV(SEQ ID NO：68)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQSFSSSYLA(SEQ ID NO：69)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含GASSRAT(SEQ ID NO：70)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQYDRSPLT(SEQ ID NO：71)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含SSIFYWG(SEQ ID NO：65)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SIYYSGRTYYNPSLKS(SEQ ID NO：66)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含AGGLYNWNDESFSFYMDV(SEQ ID NO：68)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQSFSSSYLA(SEQ ID NO：69)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含GASSRAT(SEQ ID NO：70)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQYDRSPLT(SEQ ID NO：71)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含SSIFYWG(SEQ ID NO：65)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SIYYSGRTYYNPALKS(SEQ ID NO：67)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含AGGLYNWNDESFSFYMDV(SEQ ID NO：68)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQSFSSSYLA(SEQ ID NO： 69)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含GASSRAT(SEQ ID NO：70)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQYDRSPLT(SEQ ID NO：71)之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：84之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：85之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些實施例中，該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR(SEQ ID NO：72)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WIRQPPGKGLEWIG(SEQ ID NO：73)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR(SEQ ID NO：74)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTTVTVSS(SEQ ID NO：75)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：84之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：79)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGQAPRLLIY(SEQ ID NO：80)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：81)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGGGTKVEIK(SEQ ID NO：82)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：85之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：86之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：79)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGQAPRLLIY(SEQ ID NO：80)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：81)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGGGTKVEIK(SEQ ID NO：82)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：87之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR(SEQ ID NO：76)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含W IRQPPGKGLEWIG(SEQ ID NO：73)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR(SEQ ID NO：74)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGNGTTVTVSS(SEQ ID NO：78)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：88之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：79)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGQAPRLLIY(SEQ ID NO：80)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：81)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGGGTKVEIK(SEQ ID NO：82)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：89之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：84之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：85之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：86之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：87之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：88之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：89之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含NYX1MN(SEQ ID NO：97)之胺基酸序列，其中X1為Trp、Phe或Tyr；(b)HVR-H2，其包含EITLKFNX1YX2THYAESVKG(SEQ ID NO：98)之胺基 酸序列，其中X1為Asn、Asp、Ser或Ala，且X2為Ser或Ala；(c)HVR-H3，其包含RNYGX1X2YINV(SEQ ID NO：99)之胺基酸序列，其中X1為Asp或Asn，且X2為Trp或Phe；(d)HVR-L1，其包含RASESVDKFGX1SFLN(SEQ ID NO：100)之胺基酸序列，其中X1為Met、Val或Leu；(e)HVR-L2，其包含VASSQGS(SEQ ID NO：113)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKDIPYT(SEQ ID NO：114)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含NYWMN(SEQ ID NO：101)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含EITLKFNNYSTHYAESVKG(SEQ ID NO：104)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含RNYGDWYINV(SEQ ID NO：109)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVDKFGMSFLN(SEQ ID NO：112)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含VASSQGS(SEQ ID NO：113)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKDIPYT(SEQ ID NO：114)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含NYWMN(SEQ ID NO：101)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含EITLKFNNYSTHYAESVKG(SEQ ID NO：104)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含RNYGNWYINV(SEQ ID NO：110)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVDKFGMSFLN(SEQ ID NO：112)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含VASSQGS(SEQ ID NO：113)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKDIPYT(SEQ ID NO：114)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含NYWMN(SEQ ID NO：101)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含EITLKFNDYSTHYAESVKG(SEQ ID NO：105)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含RNYGNWYINV(SEQ ID NO：110)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVDKFGVSFLN(SEQ ID NO：115)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含VASSQGS(SEQ ID NO：113)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKDIPYT(SEQ ID NO：114)之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：134之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：135之胺基酸序列具有至 少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些實施例中，該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFS(SEQ ID NO：117)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQSPEKGLEWMA(SEQ ID NO：119)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFSISRDDSKSTVYLQMNNLRAEDTGIYYCAR(SEQ ID NO：121)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGAGTTVTVSS(SEQ ID NO：124)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：134之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIVLTQSPTSLAVSLGQRATISC(SEQ ID NO：126)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WFQQKPGQPPKLLIF(SEQ ID NO：128)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPVEEDDTAMYFC(SEQ ID NO：130)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGGGTKLEIK(SEQ ID NO：132)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：135之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：136之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：137之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些實施例中，該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：118)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQAPGKGLEWMA(SEQ ID NO：120)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：122)或RFTISRDDSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：123)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：125)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：138之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC(SEQ ID NO：127)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGQPPKLLIF(SEQ ID NO：129)之胺基酸序列；(c) FR-L3，其包含GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC(SEQ ID NO：131)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：133)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：139之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：134之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：135之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：136之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：137之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：138之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：139之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含KFWMN(SEQ ID NO：158)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含EIRLX1X2INYVKDYAESVKG(SEQ ID NO：161)之胺基酸序列，其中X1為Asn或Ser，且X2為Ser或Ala；(c)HVR-H3，其包含RNYGNWFFEI(SEQ ID NO：160)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVDRYGISFMN(SEQ ID NO：164)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNQGS(SEQ ID NO：165)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QHSKEVPYT(SEQ ID NO：166)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含KFWMN(SEQ ID NO：158)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含 EIRLNSINYVKDYAESVKG(SEQ ID NO：159)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含RNYGNWFFEI(SEQ ID NO：160)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVDRYGISFMN(SEQ ID NO：164)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNQGS(SEQ ID NO：165)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QHSKEVPYT(SEQ ID NO：166)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含KFWMN(SEQ ID NO：158)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含EIRLSSINYVKDYAESVKG(SEQ ID NO：162)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含RNYGNWFFEI(SEQ ID NO：160)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVDRYGISFMN(SEQ ID NO：164)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNQGS(SEQ ID NO：165)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QHSKEVPYT(SEQ ID NO：166)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含KFWMN(SEQ ID NO：158)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含EIRLNAINYVKDYAESVKG(SEQ ID NO：163)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含RNYGNWFFEI(SEQ ID NO：160)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVDRYGISFMN(SEQ ID NO：164)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNQGS(SEQ ID NO：165)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QHSKEVPYT(SEQ ID NO：166)之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：183之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：184之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些實施例中，該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFN(SEQ ID NO：167)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQSPEKGLEWVA(SEQ ID NO：168)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDDSKNSVYLQMNNLRAEDTGIYYCIR(SEQ ID NO：169)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGAGTTVTVSS(SEQ ID NO：170)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO： 183之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIVLTQSPASLAVSLGQRATISC(SEQ ID NO：175)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WFQQKPGQSPKLLIY(SEQ ID NO：176)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPLEEDDAAMYFC(SEQ ID NO：177)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGGGTKLEIK(SEQ ID NO：178)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：184之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：185之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：186之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些實施例中，VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFN(SEQ ID NO：171)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQAPGKGLEWVA(SEQ ID NO：172)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCIR(SEQ ID NO：173)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：174)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：185之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：179)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WFQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：180)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：181)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：182)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：186之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：187之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：188之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：189之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：190之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分 離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：183之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域其包含與SEQ ID NO：184之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：185之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域其包含與SEQ ID NO：186之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：187之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域其包含與SEQ ID NO：188之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：189之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域其包含與SEQ ID NO：190之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含DYNMN(SEQ ID NO：191)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含DINPKX1X2DTFYNQNFKD(SEQ ID NO：192)之胺基酸序列，其中X1為Asn或Ser，且X2為Gly或Ala；(c)HVR-H3，其包含HYYYGSSYGGFVY(SEQ ID NO：196)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含HASQNINVWLS(SEQ ID NO：197)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASKLHT(SEQ ID NO：198)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQGQSYPLT(SEQ ID NO：199)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含DYNMN(SEQ ID NO：191)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含 DINPKNGDTFYNQNFKD(SEQ ID NO：193)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含HYYYGSSYGGFVY(SEQ ID NO：196)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含HASQNINVWLS(SEQ ID NO：197)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASKLHT(SEQ ID NO：198)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQGQSYPLT(SEQ ID NO：199)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含DYNMN(SEQ ID NO：191)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含DINPKSGDTFYNQNFKD(SEQ ID NO：194)或DINPKNADTFYNQNFKD(SEQ ID NO：195)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含HYYYGSSYGGFVY(SEQ ID NO：196)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含HASQNINVWLS(SEQ ID NO：197)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASKLHT(SEQ ID NO：198)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQGQSYPLT(SEQ ID NO：199)之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：216之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：217之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些實施例中，該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVLLQQSGPELVKPGASVKISCNASGYTFS(SEQ ID NO：200)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVKQSHGKSLESIG(SEQ ID NO：201)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含KATLTIDKSSSTVYMELRSLTSEDTAMYYCAR(SEQ ID NO：202)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVAA(SEQ ID NO：203)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：216之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIQMNQSPSSLSASLGDTITITC(SEQ ID NO：208)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKAGNNPKLLIY(SEQ ID NO：209)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPSRFTGSGSGTLFTLTISSLQPEDIATYYC(SEQ ID NO：210)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGSGTNLELK(SEQ ID NO：211)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：217之胺基酸 序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：218之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：219之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些實施例中，該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFS(SEQ ID NO：204)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQAPGQGLESIG(SEQ ID NO：205)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RATLTIDKSTSTAYLELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：206)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：207)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：218之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：212)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGKNPKLLIY(SEQ ID NO：213)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：214)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：215)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：219之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：216之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：217之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在另一實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：220之胺基酸序列。在另一實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：219之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：218之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：219之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸 序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：220之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：219之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含SYWIN(SEQ ID NO：222)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含RIAPGSGFISYNELFKD(SEQ ID NO：223)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含EFYYGSFYGGFAY(SEQ ID NO：224)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含HASQNIHVWLS(SEQ ID NO：225)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含KASTLHT(SEQ ID NO：226)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQGQSSPLT(SEQ ID NO：227)之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：236之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：237之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些實施例中，該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含QVQLQQSGNDLVKPGASVKLSCKASGYTFT(SEQ ID NO：228)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WIKQRPGQGLEWIG(SEQ ID NO：229)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含KATLTVDTSSSTAYIQLGSLSSEDSAVYFCAR(SEQ ID NO：230)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSA(SEQ ID NO：231)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：236之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIQMNQSPSSLSASLGDTITITC(SEQ ID NO：232)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGNIPKLLIY(SEQ ID NO：233)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPSRFNGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYC(SEQ ID NO： 234)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGAGTKLEVK(SEQ ID NO：235)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：237之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：246之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：247之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些實施例中，該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：238)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQAPGQGLEWIG(SEQ ID NO：239)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RVTITRDTSTSTAYLELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：240)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：241)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：246之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：242)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：243)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：244)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：245)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：247之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：236之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：237之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：246之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域， 其包含與SEQ ID NO：247之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含GSAX1H(SEQ ID NO：248)之胺基酸序列，其中X1為Met或Ile；(b)HVR-H2，其包含RIRSX1X2NX3YATX4YX5ASVKG(SEQ ID NO：249)之胺基酸序列，其中X1為Arg或Lys，X2為Asn、Thr或Gly，X3為Asn或Ser，X4為Ala或Glu，且X5為Ala或Asp；(c)HVR-H3，其包含X1X2X3X4PFDY(SEQ ID NO：250)之胺基酸序列，其中X1為Leu或Gln，X2為Gln、Gly或Phe，X3為Gln或Gly，且X4為Pro或Asp；(d)HVR-L1，其包含RASQGIRNDLD(SEQ ID NO：251)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASSLQS(SEQ ID NO：252)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含LQHX1X2YPX3T(SEQ ID NO：253)之胺基酸序列，其中X1為Asp或Ser，X2為Ser或Ile，且X3為Leu或Pro。在一些實施例中，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含GSAMH(SEQ ID NO：254)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含RIRSRNNNYATAYAASVKG(SEQ ID NO：255)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含LQQPPFDY(SEQ ID NO：256)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQGIRNDLD(SEQ ID NO：251)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASSLQS(SEQ ID NO：252)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含LQHDSYPLT(SEQ ID NO：257)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含GSAIH(SEQ ID NO：258)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含RIRSRTNNYATEYDASVKG(SEQ ID NO：259)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含LGQPPFDY(SEQ ID NO：260)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQGIRNDLD(SEQ ID NO：251)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASSLQS(SEQ ID NO：252)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含LQHSIYPPT(SEQ ID NO：261)之胺基酸序列。在一些實施例中，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含GSAMH(SEQ ID NO：254)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含RIRSKGNSYATAYAASVKG(SEQ ID NO：262)之胺基酸序列；(c)HVR-H3， 其包含QFGDPFDY(SEQ ID NO：263)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQGIRNDLD(SEQ ID NO：251)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASSLQS(SEQ ID NO：252)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含LQHDSYPLT(SEQ ID NO：257)之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：282之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：283之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些實施例中，該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含QVQLVQSGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：264)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQASGKGLEWVG(SEQ ID NO：267)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDDSKRTTYLQMNSLKTEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：269)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：272)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：282之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：273)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGKAPKRLIY(SEQ ID NO：276)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPSRFNGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：277)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGGGTKVEIK(SEQ ID NO：280)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：283之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：284之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：285之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些實施例中，該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVESGGDLVQPGGSLKLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：265)之胺基酸序 列；(b)FR-H2，其包含WVRQASGKGLEWVG(SEQ ID NO：267)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDDSKRTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：270)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：272)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：284之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：274)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGKAPKRLIY(SEQ ID NO：276)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：278)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：281)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：285之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：286之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：287之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些實施例中，該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：266)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQAPGKGLEWVG(SEQ ID NO：268)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFSISRDDSKRTAYLQMSSLKTEDSAVYYCAR(SEQ ID NO：271)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：272)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：286之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含AIRITQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：275)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGKAPKRLIY(SEQ ID NO：276)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：279)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGGGTKVEIK(SEQ ID NO：280)之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：287之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：282之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：283之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：284之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：285之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：286之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：287之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含(a)重鏈，其包含與SEQ ID NO：288之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)輕鏈，其包含與SEQ ID NO：289之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含(a)重鏈，其包含與SEQ ID NO：290之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)輕鏈，其包含與SEQ ID NO：291之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含(a)重鏈，其包含與SEQ ID NO：292之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)輕鏈，其包含與SEQ ID NO：293之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含(a)重鏈，其包含與SEQ ID NO：294之胺基酸序列 具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)輕鏈，其包含與SEQ ID NO：295之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在前述態樣中任一者之一些實施例中，該抗體特異性結合人類或食蟹獼猴IL-33。在一些實施例中，該抗體特異性結合人類及食蟹獼猴IL-33兩者。在一些實施例中，該抗體以約1nM或更低之KD特異性結合人類及食蟹獼猴IL-33兩者。在一些實施例中，該抗體以約100fM與約1nM之間之KD特異性結合人類IL-33。在一些實施例中，該抗體以約1pM與約200pM之間之KD特異性結合人類IL-33。在一些實施例中，該抗體以約75pM與約180pM之間之KD特異性結合人類IL-33。在一些實施例中，該抗體以約75pM與約140pM之間之KD特異性結合人類IL-33。在一些實施例中，該抗體以約100fM與約1nM之間之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。在一些實施例中，該抗體以約1pM與約500pM之間之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。在一些實施例中，該抗體以約200pM與約500pM之間之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。在一些實施例中，該抗體以約250pM與約500pM之間之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。在一些實施例中，該抗體以約1pM與約500pM之間之KD特異性結合人類及食蟹獼猴IL-33兩者。在一些實施例中，該抗體以約1pM與約200pM之間之KD特異性結合人類IL-33。
在前述態樣中任一者之一些實施例中，該抗體能夠抑制IL-33與IL-33受體之結合。在一些實施例中，使用基於細胞之阻斷分析來量測該抑制。在一些實施例中，該抗體以約0.001μg/ml與約0.5μg/ml之間之90%抑制性濃度(IC90)抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。在一些實施例中，IC90為介於約0.002μg/ml與約0.25μg/ml之間。在一些實施例中，IC90為約0.17μg/ml。在一些實施例中，IC90為約0.004μg/ml。
在前述態樣中任一者之一些實施例中，該抗體包含去糖基化位點突變。
在前述態樣中任一者之一些實施例中，該抗體為單株抗體、人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體。
在前述態樣中任一者之一些實施例中，該抗體為結合IL-33之抗體片段。在一些實施例中，抗體片段係選自由Fab、Fab'-SH、Fv、scFv 及(Fab')2片段組成之群。
在前述態樣中任一者之一些實施例中，該抗體為全長抗體。在一些實施例中，該抗體為IgG抗體。在一些實施例中，該IgG抗體為IgG1抗體。在一些實施例中，該IgG抗體為IgG4抗體。在一些實施例中，該IgG4抗體在鉸鏈區中包含突變。在一些實施例中，該突變為取代突變。在一些實施例中，該取代突變處於胺基酸殘基S228(EU編號)處。在一些實施例中，該取代突變為S228P突變。
在前述態樣中任一者之一些實施例中，該抗體為單特異性抗體。
在前述態樣中任一者之一些實施例中，該抗體為多特異性抗體。在一些實施例中，該抗體為雙特異性抗體。在一些實施例中，該雙特異性抗體包含結合第二生物分子之第二結合域，其中該第二生物分子係選自由以下組成之群：介白素-13(IL-13)、介白素-4(IL-4)、介白素-5(IL-5)、介白素-17(IL-17)、因子D、HtrA1、VEGF及VEGF受體。在一些實施例中，該第二生物分子為因子D。在一些實施例中，該第二生物分子為HtrA1。在一些實施例中，該第二生物分子為VEGF。在一些實施例中，該第二生物分子為IL-13。在一些實施例中，該第二結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含AYSVN(SEQ ID NO：296)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含MIWGDGKIVYNSALKS(SEQ ID NO：297)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含DGYYPYAMDN(SEQ ID NO：298)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASKSVDSYGNSFMH(SEQ ID NO：299)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含LASNLES(SEQ ID NO：300)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQNNEDPRT(SEQ ID NO：301)之胺基酸序列。在一些實施例中，該第二結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：302之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：303之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些實施例中，該VH域包含SEQ ID NO：302之胺基酸序列。在一些實施例中，該VL域包含SEQ ID NO：303之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33及IL-13兩者之經分離抗體，其中該抗體包含特異性結合IL-33之第一結合域，該第一結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含SFSMS(SEQ ID NO：1)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含TISGGKTFTDYVDSVKG(SEQ ID NO：2)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含ANYGNWFFEV(SEQ ID NO：3)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVAKYGLSLLN(SEQ ID NO：4)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNRGS(SEQ ID NO：5)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKEVPFT(SEQ ID NO：6)之胺基酸序列；及特異性結合IL-13之第二結合域，該第二結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含AYSVN(SEQ ID NO：296)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含MIWGDGKIVYNSALKS(SEQ ID NO：297)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含DGYYPYAMDN(SEQ ID NO：298)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASKSVDSYGNSFMH(SEQ ID NO：299)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含LASNLES(SEQ ID NO：300)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQNNEDPRT(SEQ ID NO：301)之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33及IL-13兩者之經分離抗體，其中該抗體包含特異性結合IL-33之第一結合域，該第一結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含SSIFYWG(SEQ ID NO：65)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SIYYSGRTYYNPSLKS(SEQ ID NO：66)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含AGGLYNWNDESFSFYMDV(SEQ ID NO：68)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQSFSSSYLA(SEQ ID NO：69)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含GASSRAT(SEQ ID NO：70)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQYDRSPLT(SEQ ID NO：71)之胺基酸序列；及特異性結合IL-13之第二結合域，該第二結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含AYSVN(SEQ ID NO：296)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含MIWGDGKIVYNSALKS(SEQ ID NO：297)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含DGYYPYAMDN(SEQ ID NO：298)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASKSVDSYGNSFMH(SEQ ID NO：299)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含LASNLES(SEQ ID NO：300)之胺基酸序列；及(f) HVR-L3，其包含QQNNEDPRT(SEQ ID NO：301)之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33及IL-13兩者之經分離抗體，其中該抗體包含特異性結合IL-33之第一結合域，該第一結合域包含：(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：36之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：37之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及特異性結合IL-13之第二結合域，該第二結合域包含：(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：302之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：303之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33及IL-13兩者之經分離抗體，其中該抗體包含特異性結合IL-33之第一結合域，該第一結合域包含：(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：84之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：85之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及特異性結合IL-13之第二結合域，該第二結合域包含：(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：302之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：303之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33及IL-13兩者之經分離抗體，其中該抗體包含：(a)特異性結合IL-33之第一重鏈及第一輕鏈，其中該第一重鏈包含與SEQ ID NO：306之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，且該第一輕鏈包含與SEQ ID NO：307之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)特異性結合IL-13之第二重鏈及第二輕鏈，其中該第二重鏈包含與SEQ ID NO：304之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，且該第二輕鏈包含與SEQ ID NO：305之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種特異性結合IL-33及IL-13兩者之經分離抗體，其中該抗體包含：(a)特異性結合IL-33之第一重鏈及第 一輕鏈，其中該第一重鏈包含與SEQ ID NO：308之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，且該第一輕鏈包含與SEQ ID NO：309之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)特異性結合IL-13之第二重鏈及第二輕鏈，其中該第二重鏈包含與SEQ ID NO：304之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，且該第二輕鏈包含與SEQ ID NO：305之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
在前述態樣中任一者之一些實施例中，該抗體為抗原結合抗體片段。在一些實施例中，該抗原結合抗體片段係選自由Fab、Fab'-SH、Fv、scFv及(Fab')2片段組成之群。在一些實施例中，該抗原結合抗體片段為Fab。
在另一個態樣中，本發明提供一種編碼本文所述抗體中之任一者的經分離核酸。在另一個態樣中，本發明提供一種包含該經分離核酸之載體(例如，表現載體)以用於表現該抗體。在另一個態樣中，本發明提供包含前述核酸及/或載體之宿主細胞。在一些實施例中，該宿主細胞為哺乳動物細胞。在一些實施例中，該哺乳動物細胞為中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。在一些實施例中，該宿主細胞為原核細胞。在一些實施例中，該原核細胞為大腸桿菌細胞。
在另一個態樣中，本發明提供一種產生本文所述抗體中之任一者的方法，該方法包括在培養基中培養包含前述載體(例如，表現載體)中之任一者的宿主細胞。在一些實施例中，該方法進一步包括由該宿主細胞或培養基回收該抗體。
在另一個態樣中，本發明提供一種包含前述抗體中之任一者的組合物。在一些實施例中，該組合物進一步包含醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑。在一些實施例中，該組合物為醫藥組合物。在一些實施例中，該醫藥組合物進一步包含ST2結合拮抗劑、因子D結合拮抗劑、HtrA1拮抗劑、VEGF拮抗劑、類胰蛋白酶-β結合拮抗劑、在Th2細胞上表現之化學引誘劑受體同源分子(CRTH2)結合拮抗劑、介白素-13(IL-13)結合拮抗劑、介白素-17(IL-17)結合拮抗劑、JAK1拮抗劑及/或介白素-5(IL-5)結合拮抗劑。在一些實施例中，該醫藥組合物包含因子D結合拮抗劑。在一些 實施例中，該因子D結合拮抗劑為抗因子D抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，該醫藥組合物包含HtrA1拮抗劑。在一些實施例中，該HtrA1結合拮抗劑為抗HtrA1抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，該醫藥組合物包含因子VEGF拮抗劑。在一些實施例中，該VEGF拮抗劑為抗VEGF抗體或其抗原結合片段。
在一些態樣中，前述抗體中之任一者均可用作藥劑。
在一些態樣中，前述抗體中之任一者均可用於治療IL-33介導之病症。在一些實施例中，IL-33介導之病症係選自由以下組成之群：發炎性病狀、免疫病症、纖維變性病症、嗜伊紅白血球性病症、感染、疼痛、中樞神經系統病症、實體腫瘤及眼科病症。在一些實施例中，該發炎性病狀係選自由以下組成之群：氣喘、敗血症、敗血性休克、異位性皮炎、過敏性鼻炎、類風濕性關節炎及慢性阻塞性肺病(COPD)。在一些實施例中，該免疫病症係選自由以下組成之群：氣喘、類風濕性關節炎、過敏性鼻炎、牛皮癬、發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病、糖尿病及肝病。在一些實施例中，該纖維變性疾病為特發性肺纖維化(IPF)。在一些實施例中，該嗜伊紅白血球性病症為嗜伊紅白血球相關之胃腸病症(EGID)。在一些實施例中，EGID為嗜伊紅白血球性食管炎。在一些實施例中，感染為蠕蟲感染、原蟲感染或病毒感染。在一些實施例中，原蟲感染為碩大利什曼原蟲(Leishmania major)感染。在一些實施例中，病毒感染為呼吸道融合性病毒(RSV)感染或流行性感冒感染。在一些實施例中，疼痛為發炎性疼痛。在一些實施例中，該中樞神經系統病症為阿茲海默氏病。在一些實施例中，該實體腫瘤係選自由以下組成之群：乳腺腫瘤、結腸腫瘤、前列腺腫瘤、肺腫瘤、腎腫瘤、肝腫瘤、胰腺腫瘤、胃腫瘤、腸腫瘤、腦腫瘤、骨腫瘤及皮膚腫瘤。在一些實施例中，該眼科病症係選自由以下組成之群：年齡相關性黃斑變性(AMD)、眼睛之視網膜病變、息肉樣脈絡膜血管病變(PCV)、糖尿病性黃斑水腫、乾眼病、貝塞特氏病、視網膜脫離、青光眼、葡萄膜炎、色素性視網膜炎、萊伯氏先天性黑朦(Leber Congenital Amaurosis)、斯塔加特氏病、創傷性眼損傷及結膜炎。在一些實施例中，該AMD為濕性 AMD、乾性AMD或地圖狀萎縮(GA)。在一些實施例中，該AMD為中期AMD或晚期AMD。在一些實施例中，眼睛之視網膜病變為糖尿病性視網膜病變(DR)或早產兒視網膜病變(ROP)。在一些實施例中，眼睛之視網膜病變為高原DR。在一些實施例中，結膜炎為感染性結膜炎或非感染性結膜炎。在一些實施例中，結膜炎為過敏性結膜炎。
在一些態樣中，前述抗體中之任一者均可用於製造用以治療IL-33介導之病症之藥劑。在一些實施例中，IL-33介導之病症係選自由以下組成之群：發炎性病狀、免疫病症、纖維變性病症、嗜伊紅白血球性病症、感染、疼痛、中樞神經系統病症、實體腫瘤及眼科病症。在一些實施例中，該發炎性病狀係選自由以下組成之群：氣喘、敗血症、敗血性休克、異位性皮炎、過敏性鼻炎、類風濕性關節炎及慢性阻塞性肺病(COPD)。在一些實施例中，該免疫病症係選自由以下組成之群：氣喘、類風濕性關節炎、過敏性鼻炎、牛皮癬、發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病、糖尿病及肝病。在一些實施例中，該纖維變性疾病為特發性肺纖維化(IPF)。在一些實施例中，該嗜伊紅白血球性病症為嗜伊紅白血球相關之胃腸病症(EGID)。在一些實施例中，EGID為嗜伊紅性白血球食管炎。在一些實施例中，感染為蠕蟲感染、原蟲感染或病毒感染。在一些實施例中，原蟲感染為碩大利什曼原蟲感染。在一些實施例中，病毒感染為呼吸道融合性病毒(RSV)感染或流行性感冒感染。在一些實施例中，疼痛為發炎性疼痛。在一些實施例中，該中樞神經系統病症為阿茲海默氏病。在一些實施例中，該實體腫瘤係選自由以下組成之群：乳腺腫瘤、結腸腫瘤、前列腺腫瘤、肺腫瘤、腎腫瘤、肝腫瘤、胰腺腫瘤、胃腫瘤、腸腫瘤、腦腫瘤、骨腫瘤及皮膚腫瘤。在一些實施例中，該眼科病症係選自由以下組成之群：年齡相關性黃斑變性(AMD)、眼睛之視網膜病變、息肉樣脈絡膜血管病變(PCV)、糖尿病性黃斑水腫、乾眼病、貝塞特氏病、視網膜脫離、青光眼、葡萄膜炎、色素性視網膜炎、萊伯氏先天性黑朦、斯塔加特氏病、創傷性眼損傷及結膜炎。在一些實施例中，AMD為濕性AMD、乾性AMD或地圖狀萎縮(GA)。在一些實施例中，該AMD為中期AMD或晚期AMD。在 一些實施例中，眼睛之視網膜病變為糖尿病性視網膜病變(DR)或早產兒視網膜病變(ROP)。在一些實施例中，眼睛之視網膜病變為高原DR。在一些實施例中，結膜炎為感染性結膜炎或非感染性結膜炎。在一些實施例中，結膜炎為過敏性結膜炎。在一些實施例中，該藥劑經調配以用於與ST2結合拮抗劑、因子D結合拮抗劑、HtrA1結合拮抗劑、VEGF拮抗劑、類胰蛋白酶-β結合拮抗劑、在Th2細胞上表現之化學引誘劑受體同源分子(CRTH2)結合拮抗劑、介白素-13(IL-13)結合拮抗劑、介白素-17(IL-17)結合拮抗劑、JAK1拮抗劑及/或介白素-5(IL-5)結合拮抗劑組合使用。在一些實施例中，該藥劑經調配以用於與因子D結合拮抗劑組合使用。在一些實施例中，該因子D結合拮抗劑為抗因子D抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，該藥劑經調配以用於與HtrA1結合拮抗劑組合使用。在一些實施例中，該HtrA1結合拮抗劑為抗HtrA1抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，該藥劑經調配以用於與VEGF拮抗劑組合使用。在一些實施例中，該VEGF拮抗劑為抗VEGF抗體或其抗原結合片段。
在另一個態樣中，本發明提供特異性結合IL-33及因子D兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段在製造用於治療地圖狀萎縮(GA)之藥劑中之用途。在一些實施例中，該抗原結合抗體片段為(Fab’)2片段。
在另一個態樣中，前述抗體中之任一者均可用於製造用以治療地圖狀萎縮(GA)之藥劑，其中該藥劑經調配以用於與因子D結合拮抗劑組合使用。在一些實施例中，該因子D結合拮抗劑為抗因子D抗體或其抗原結合片段。
在另一個態樣中，本發明提供特異性結合IL-33及HtrA1兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段在製造用於治療地圖狀萎縮(GA)、AMD(濕性或乾性)、DR、PCV或ROP之藥劑中之用途。在一些實施例中，該抗原結合抗體片段為(Fab’)2片段。
另一個態樣中，前述抗體中之任一者均可用於製造用以治療地圖狀萎縮(GA)、AMD(濕性或乾性)、DR、PCV或ROP之藥劑，其中該藥劑經調配以用於與HtrA1結合拮抗劑組合使用。在一些實施例中，該HtrA1結合拮抗劑為抗HtrA1抗體或其抗原結合片段。
在另一個態樣中，本發明提供特異性結合IL-33及VEGF兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段在製造用於治療濕性AMD之藥劑中之用途。在一些實施例中，該抗原結合抗體片段為(Fab’)2片段。
在另一個態樣中，前述抗體中之任一者均可用於製造用以治療濕性AMD之藥劑，其中該藥劑經調配以用於與VEGF拮抗劑組合使用。在一些實施例中，該VEGF拮抗劑為抗VEGF抗體或其抗原結合片段。
在另一個態樣中，本發明提供一種治療有需要之受試者中IL-33介導之病症的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之前述抗體中之任一者。在一些實施例中，IL-33介導之病症係選自由以下組成之群：發炎性病狀、免疫病症、纖維變性病症、嗜伊紅白血球性病症、感染、疼痛、中樞神經系統病症、實體腫瘤及眼科病症。在一些實施例中，該發炎性病狀係選自由以下組成之群：氣喘、敗血症、敗血性休克、異位性皮炎、過敏性鼻炎、類風濕性關節炎及慢性阻塞性肺病(COPD)。在一些實施例中，該免疫病症係選自由以下組成之群：氣喘、類風濕性關節炎、過敏性鼻炎、牛皮癬、發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病、糖尿病及肝病。在一些實施例中，該纖維變性疾病為特發性肺纖維化(IPF)。在一些實施例中，該嗜伊紅白血球性病症為嗜伊紅白血球相關之胃腸病症(EGID)。在一些實施例中，EGID為嗜伊紅白血球性食管炎。在一些實施例中，感染為蠕蟲感染、原蟲感染或病毒感染。在一些實施例中，原蟲感染為碩大利什曼原蟲感染。在一些實施例中，病毒感染為呼吸道融合性病毒(RSV)感染或流行性感冒感染。在一些實施例中，疼痛為發炎性疼痛。在一些實施例中，該中樞神經系統病症為阿茲海默氏病。在一些實施例中，該實體腫瘤係選自由以下組成之群：乳腺腫瘤、結腸腫瘤、前列腺腫瘤、肺腫瘤、腎腫瘤、肝腫瘤、胰腺腫瘤、胃腫瘤、腸腫瘤、腦腫瘤、骨腫瘤及皮膚腫瘤。在一些實施例中，該眼科病症係選自由以下組成之群：年齡相關性黃斑變性(AMD)、眼睛之視網膜病變、息肉樣脈絡膜血管病變(PCV)、糖尿病性黃斑水腫、乾眼病、貝塞特氏病、視網膜脫離、青光眼、葡萄膜炎、色素性視網膜炎、萊伯氏先天性黑朦、斯塔加特氏病、創傷性眼損傷 及結膜炎。在一些實施例中，AMD為濕性AMD、乾性AMD或地圖狀萎縮(GA)。在一些實施例中，該AMD為中期AMD或晚期AMD。在一些實施例中，眼睛之視網膜病變為糖尿病性視網膜病變(DR)或早產兒視網膜病變(ROP)。在一些實施例中，眼睛之視網膜病變為高原DR。在一些實施例中，結膜炎為感染性結膜炎或非感染性結膜炎。在一些實施例中，結膜炎為過敏性結膜炎。在一些實施例中，該方法進一步包括向該受試者投與ST2結合拮抗劑、因子D結合拮抗劑、HtrA1結合拮抗劑、VEGF拮抗劑、類胰蛋白酶-β結合拮抗劑、在Th2細胞上表現之化學引誘劑受體同源分子(CRTH2)結合拮抗劑、介白素-13(IL-13)結合拮抗劑、介白素-17(IL-17)結合拮抗劑、JAK1拮抗劑及/或介白素-5(IL-5)結合拮抗劑。在一些實施例中，該方法進一步包括向該受試者投與因子D結合拮抗劑。在一些實施例中，該因子D結合拮抗劑為抗因子D抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，該方法進一步包括向該受試者投與HtrA1結合拮抗劑。在一些實施例中，該HtrA1結合拮抗劑為抗HtrA1抗體或其抗原結合片段。在一些實施例中，該方法進一步包括向該受試者投與VEGF拮抗劑。在一些實施例中，該VEGF拮抗劑為抗VEGF抗體或其抗原結合片段。
在另一個態樣中，本發明提供一種治療有需要之受試者中地圖狀萎縮(GA)的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之特異性結合IL-33及因子D兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段。在一些實施例中，該抗原結合抗體片段為(Fab’)2片段。
在另一個態樣中，本發明提供一種治療有需要之受試者中地圖狀萎縮(GA)的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之前述抗體中之任一者及治療有效量之因子D結合拮抗劑。在一些實施例中，該因子D結合拮抗劑為抗因子D抗體或其抗原結合片段。
在另一個態樣中，本發明提供一種治療有需要之受試者中地圖狀萎縮(GA)、AMD(濕性或乾性)、DR、PCV或ROP的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之特異性結合IL-33及HtrA1兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段。在一些實施例中，該抗原結合抗體片段為(Fab’)2片段。
在另一個態樣中，本發明提供一種治療有需要之受試者中地圖狀萎縮(GA)、AMD(濕性或乾性)、DR、PCV或ROP的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之前述抗體中之任一者及治療有效量之HtrA1結合拮抗劑。在一些實施例中，該HtrA1結合拮抗劑為抗HtrA1抗體或其抗原結合片段。
在另一個態樣中，本發明提供一種治療有需要之受試者中濕性AMD的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之特異性結合IL-33及VEGF兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段。在一些實施例中，該抗原結合抗體片段為(Fab’)2片段。
在另一個態樣中，本發明提供一種治療有需要之受試者中濕性AMD的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之前述抗體中之任一者及治療有效量之VEGF拮抗劑。在一些實施例中，該VEGF拮抗劑為抗VEGF抗體或其抗原結合片段。
在前述方法中之任一者的一些實施例中，該抗體係經皮下、靜脈內、肌肉內、經局部、經口、經皮、腹膜內、眶內、藉由植入、藉由吸入、鞘內、心室內、鼻內、玻璃體內、眼內、眼周、經結膜、結膜下、筋膜下、前房內、視網膜下、眼球後或小管內投與。在一些實施例中，該受試者為人類。
圖1A為顯示基於細胞之IL-33阻斷分析之示意圖的圖。SEAP用作NF-κB/AP-1分泌之鹼性磷酸酶的報導基因。可溶性ST2(sST2)用作陽性對照。
圖1B為顯示針對人類IL-33之基於細胞之IL-33阻斷分析結果的圖。
圖1C為顯示針對食蟹獼猴(cyno)IL-33之基於細胞之IL-33阻斷分析結果的圖。
圖2為顯示針對所指示抗IL-33抗體純系之基於細胞之IL-33阻斷分析結果的圖。
圖3為顯示針對所指示親本及人類化抗IL-33抗體之基於細 胞之IL-33阻斷分析(IC50及IC90)結果的表。
圖4A為顯示經解剖用於RNA-seq分析之黃斑及周邊視網膜的影像。使用解剖剪使上顳血管弓與下顳血管弓之間之黃斑區與周邊眼底分離。RNA係自黃斑及周邊視網膜組織分離以用於RNA-seq。虛線輪廓指示黃斑區，且實心圓形指示視網膜中央窩區。箭頭指示視神經盤之位置。
圖4B為顯示健康供體眼睛之黃斑及周邊視網膜中IL-1α、IL-1β、IL-33及IL-18之表現的圖。分離正常供體眼睛之黃斑(n=14)及周邊視網膜(n=22)且藉由RNA-seq對RNA加以分析。資料呈現為每百萬總讀數每千鹼基之讀數(RPKM)。水準條表示平均值。**，P<0.01；****，P<0.0001；不成對雙尾司徒頓(Student’s)t檢驗。
圖5A為顯示藉由定量分析(參見圖5B)研究之具有分別由實線及虛線指示之中央及周邊區域的眼睛之代表性截面的影像。箭頭指示視網膜中央窩及睫狀體。條，5mm。
圖5B及5C為顯示來自84歲男性供體之對照眼睛之中央(圖5B)及周邊(圖5C)視網膜中IL-33(綠色)、波形蛋白(紅色)及GFAP(黃色)之免疫組織化學三重染色的影像。4’,6-二甲脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色以藍色顯示。箭頭指示內核層(INL)中之IL-33+ Müller細胞；閉合箭頭形(arrowhead)指示視網膜色素上皮(RPE)中之IL-33+細胞；開放箭頭形指示脈絡膜血管結構中之IL-33+細胞；且尖括號指示神經節細胞層(GCL)中之IL-33+星形細胞。條，50μm。
圖5D為顯示中央及周邊區域之各視網膜層中IL-33+細胞之定量的圖。沿來自年齡在67-89歲範圍之正常人類供體(中值年齡84歲，5名男性及2名女性)之7雙眼睛的中央及周邊區域內之大約500μm切片定量IL-33+細胞。相較於周邊視網膜，中央視網膜中內核層(INL)及視網膜色素上皮(RPE)中之IL-33+細胞的數目更高。GCL，神經節細胞層；ONL，外核層。*，P<0.05；****，P<0.0001；ns，不顯著；不成對雙尾司徒頓t檢驗。
圖5E為對照供體眼睛之中央區域中GCL、INL、RPE及脈絡膜中之IL-33+細胞的一系列代表性高放大率影像。IL-33(綠色)、波形蛋 白(紅色)及GFAP(黃色)共染色顯示IL-33+星形細胞(GFAP+，尖括號)及IL-33+ Müller細胞(波形蛋白+，箭頭)。脈絡膜血管結構之IL-33+內皮細胞(開放箭頭形)藉由IL-33(紅色)及PLVAP(綠色)共染色顯示。閉合箭頭形，IL-33+ RPE。DAPI染色以藍色顯示。條，10μm。
圖6A為顯示來自無眼部疾病病史之84歲男性及來自經診斷患有AMD之82歲女性供體之對照人類供體眼睛的中央視網膜中IL-33(綠色)、Iba1(紅色)及GFAP(黃色)之螢光免疫組織化學三重染色的一系列代表性影像。IL-33+ Muller細胞及單核吞噬細胞(Iba1+細胞)之數目相較於相同供體之未展現視網膜變性之鄰近區域(AMD：非病變)或相較於對照供體眼睛之中央視網膜(對照：中央)在視網膜變性(AMD：病變)之區域中顯著增加。箭頭，IL-33+ Müller細胞；箭頭形，視網膜下腔中之Iba1+細胞。DAPI(藍色)，核染色。條，100μm。
圖6B為顯示對照眼睛之中央視網膜及AMD眼睛之病變及非病變區域中IL-33(綠色)、Iba1(紅色)及GFAP(黃色)之免疫組織化學染色的一系列代表性高放大率影像。亮視野(BF)影像顯示AMD病變部位中之RPE損失。條，50μm。
圖6C-6E為顯示沿7名67-89歲(中值年齡84歲)對照人類供體之中央視網膜及來自7名82-92歲(中值年齡86)AMD供體眼睛之病變及非病變區域內之大約500μm長切片計數的INL中之IL-33+ Müller細胞(圖6C)、脈絡膜中之IL-33+細胞(圖6D)及視網膜中之Iba1+細胞(圖6E)之定量的圖。**，P<0.01；***，P<0.001，****，P<0.0001；單向ANOVA與圖凱氏後檢驗(Tukey’s post-test)。水準條表示平均值。
圖6F為顯示來自人類AMD患者之玻璃體中IL-33水準增加的圖。藉由ELISA測定自AMD患者(n=6，1名男性及5名女性，年齡68-91，中值年齡79)、具有黃斑皺褶之對照患者(n=12，3名男性及9名女性，年齡56-79，中值年齡72)及具有黃斑裂孔之對照患者(n=21，5名男性及16女性，年齡46-75，中值年齡65)獲得的玻璃體樣品中之IL-33濃度。****，P<0.0001；單向ANOVA與圖凱氏後檢驗。水準條表示平均值。
圖7A顯示斯普拉格-道利(Sprague-Dawley)(SD)大鼠視網膜 中之IL-33(棕色)及波形蛋白(紅色)之免疫組織化學染色的結果。左圖中之影像中的箭頭指示IL-33+ Müller細胞。左圖中之插圖顯示IL-33+ Müller細胞(波形蛋白+)。沿約500μm長切片計數中央及周邊視網膜中之INL、RPE、GCL及脈絡膜中的IL-33+細胞。此定量之結果顯示於右圖中。條，10μm。ND，未偵測。
圖7B顯示BALB/c小鼠中之IL-33(棕色)之免疫組織化學染色的結果。左圖中之影像中的箭頭指示IL-33+ Müller細胞。沿約500μm長切片計數中央及周邊視網膜中之INL、RPE、GCL及脈絡膜中的IL-33+細胞。此定量之結果顯示於右圖中。條，10μm。
圖7C為顯示如藉由ELISA測定之BALB/c小鼠視網膜中IL-1家族基因(IL-1α、IL-1β、IL-33及IL-18)之表現的圖。每一資料點代表個別小鼠(n=5)。該資料表示具有類似結果之至少兩個實驗。
圖7D為顯示使用GFAP特異性抗體及波形蛋白特異性抗體或對照抗體藉由細胞內染色、隨後流式細胞術量測之rMC-1細胞中GFAP及波形蛋白之表現的一系列圖。活化之Müller細胞為GFAP+。
圖7E為顯示rMC-1細胞之核(「nucl」)及細胞質(「cyto」)部分中之IL-33表現的西方墨點分析。在細胞核中偵測到IL-33之全長(IL-33p30)及加工形式(IL-33p19)，但僅IL-33p19存在於細胞質中。該資料表示具有類似結果之至少兩個實驗。
圖7F為顯示藉由qPCR進行之於高葡萄糖培養基(「HG」)中培養之rMC-1細胞中GFAP表現之時程分析結果的圖。將GFAP mRNA針對β-肌動蛋白mRNA加以校正。在0小時處GFAP表現設定為1。資料表示一式三份實驗之平均值±SEM。***，P<0.001；****，P<0.0001；單向ANOVA，隨後杜奈特氏(Dunnett’s)後檢驗。
圖7G顯示於含高葡萄糖(HG)及低葡萄糖(LG)培養基中培養之rMC-1細胞之IL-33分泌的ELISA(左圖)及西方墨點(右圖)分析。IL-33p19同時存在於大鼠玻璃體及rMC-1培養物上清液中。所顯示資料為一式三份孔之平均值±SEM且表示三個獨立實驗。***，P<0.001；****，P<0.0001。
雙向ANOVA與邦費羅尼氏(Bonferroni’s)後檢驗。該資料表示具有類似結果之至少兩個實驗。
圖7H為顯示於HG培養基中培養之rMC-1細胞中之IL-33p19分泌增加(參見圖7G)與細胞死亡增加不相關的圖。藉由膜聯蛋白V之流式細胞術分析及碘化丙啶(PI)染色來評估細胞活力。活細胞被門控為膜聯蛋白V-PI-。所顯示資料為一式三份孔之平均值±SEM。該資料表示具有類似結果之至少兩個實驗。
圖7I為顯示用於偵測光受體細胞死亡之視網膜切片之末端去氧核苷醯基轉移酶dUTP鏈裂端標記(TUNEL)染色(褐色)的一系列圖。使斯普拉格-道利(SD)大鼠暴露於光(1200lux)持續如所指示之天數。箭頭指示TUNEL+光受體。條，50μm。
圖7J為顯示藉由流式細胞術進行之視杆細胞(左圖)及視錐細胞(右圖)之定量的一系列圖。每一資料點代表個別大鼠(n=8/時間點)。*，P<0.05；***，P<0.001；****，P<0.0001。
圖7K顯示CLE增加大鼠玻璃體(左圖)及視網膜(右圖)中IL-33p19之表現及分泌。使SD大鼠暴露於強光持續達10天(參見示意圖)。藉由ELISA及西方墨點法(WB)對玻璃體及視網膜中之IL-33表現加以分析。用ImageJ軟體定量視網膜中之IL-33p19與IL-33p30之比率。重組大鼠IL-33蛋白(rrIL-33)(a.a.109-264；大約18kDa)用作偵測抗體之陽性對照。ELISA中之每一資料點代表來自兩個獨立實驗之一的個別大鼠(n=8/時間點)。****，P<0.0001；ns，不顯著；單向ANOVA與杜奈特氏後檢驗。該資料表示具有類似結果之至少兩個實驗。
圖7L為顯示經活化之rMC-1細胞及光損傷之視網膜(CLE)中IL-33轉錄物之RT-PCR分析的影像。FL，全長。
圖7M顯示具有由dsRed替代之IL-33細胞因子域及完整核定位序列(NLS)及染色質結合域(CBD)之IL33tm2/tm2小鼠顯示INL中Müller細胞核中之IL-33 N-末端-dsRed的定位。影像(左圖)為IL33tm2/tm2視網膜平坦安裝之共焦顯微鏡成像的Z-截面圖。dsRed信號以紅色示出；DAPI信號以藍色示出。箭頭指示IL-33+ Müller細胞。IL33tm2/tm2視網膜之流式細胞術 分析(中間圖)證實IL-33於Müller細胞(MC)中之表現，但不在視杆細胞、神經節細胞(RGC)或小神經膠質細胞(MGL)中表現。在CLE之後對IL-33 N-末端-dsRed進行加工。藉由流式細胞術來量測IL33tm2/tm2 Müller細胞之dsRed平均螢光強度(MFI)以及在第0天及CLE之第7天的細胞數目(右圖)。資料代表藉由IL33+/+小鼠之MFI校正之IL33tm2/tm2小鼠中dsRed之MFI。每一資料點代表自兩個實驗匯合之個別小鼠(n=6-7/組)。Rho，視紫紅質；FCS，前向散射。****，P<0.0001；不成對雙尾司徒頓t檢驗。該資料表示具有類似結果之至少兩個實驗。
圖8A為顯示在CLE後，膜結合(ST2L，左圖)及可溶性ST2(sST2，右圖)之表現增加的一系列圖。使用對ST2L及sST2具有特異性之探針藉由qPCR對來自暴露於光持續不同天數之BALB/c小鼠的視網膜RNA加以分析，且藉由18s rRNA表現加以校正。ST2表現之倍數變化相對於未暴露小鼠(第0天)中之ST2表現顯示。每一資料點代表個別小鼠(n=5-6/時間點)。資料表示兩個獨立實驗。*，P<0.05；****，P<0.0001；ns，不顯著；單向ANOVA與杜奈特氏後檢驗。
圖8B為顯示不同視網膜細胞群體上之ST2表現之流式細胞術分析的一系列圖。結果指示在7天光暴露之後經活化之Müller細胞(MC)上ST2之獨有表現。ST2僅在經活化之Müller細胞(GFAP+波形蛋白+MC)上表現，但不在靜止Müller細胞(GFAP-波形蛋白+MC)、小神經膠質細胞(CD11b+ CD45lo MGL)或光受體細胞上表現。除同型對照抗體之外，ST2-/-小鼠亦用作陰性對照。
圖8C顯示在基線(第0天)及7天暴露於光之後ST2+/+及ST2-/-小鼠中視網膜厚度之光學相干斷層攝影術(OCT)分析。顯示代表性截面OCT影像。對於每只小鼠(n=10/基因型)，藉由第0天之視網膜厚度減去第7天之視網膜厚度來計算視網膜厚度之變化(△)。所顯示資料表示三個獨立實驗。條，100μm。***，P<0.001；****，P<0.0001；不成對雙尾司徒頓t檢驗。
圖8D為顯示在CLE之後IL-1R1-/-及IL-18R1-/-小鼠中缺乏視網膜保護的一系列圖。使ST2-/-、IL-1R1-/-及IL-18R1-/-小鼠以及相應野生 型(+/+)小鼠暴露於光持續14天。藉由OCT量測視網膜厚度。對於個別小鼠，藉由第0天之視網膜厚度減去第14天之視網膜厚度來計算△視網膜厚度。每一資料點代表個別小鼠(n=10-15/基因型)。****，P<0.0001。
圖8E為顯示視杆細胞及視錐細胞在ST2-/-小鼠中受保護之一系列圖。藉由流式細胞術對基線(第0天)及在CLE之後不同時間點處ST2+/+及ST2-/-小鼠中之視網膜細胞進行定量。流式細胞術圖(左上圖)指示在基線及CLE第7天ST2+/+及ST2-/-小鼠中視杆細胞及視錐細胞(x105)之門控策略及百分比以及絕對數目(圓括號之間)。下圖中該等圖中之每一資料點代表個別小鼠(n=5-6/基因型)。資料表示具有類似結果之兩個獨立實驗。Rho，視紫紅質；CAR，視錐細胞抑制蛋白。*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001；****，P<0.0001；ns，不顯著；不成對雙尾司徒頓t檢驗。
圖8F為顯示在基線(第0天)及在14天暴露於光之後，繪製為與視神經頭(ONH)之距離之函數的ST2+/+及ST2-/-小鼠之ONL厚度之形態測定分析的圖。在上象限及下象限兩者中均觀察到ST2-/-小鼠中視網膜ONL之顯著保護。所顯示資料為平均值±SEM(n=5-7/基因型)。*，P<0.05；**，P<0.01；雙向ANOVA與圖凱氏後檢驗。
圖8G為顯示在基線(第0天)及CLE 7天之後ST2+/+及ST2-/-小鼠之視網膜電描記術(ERG)分析的一系列圖。顯示基線及CLE 7天之後在25cd．s/m2閃光強度下之代表性ERG記錄。在CLE7天後，在1及25cd．s/m2閃光強度下之平均暗適應a-及b-波振幅相較於ST2+/+小鼠在ST2-/-小鼠中顯著更大。所顯示資料為平均值±SEM(n=10/基因型)。*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001；雙向ANOVA與圖凱氏後檢驗。
圖9A為顯示可溶性ST2之活體外活性的一系列圖。將源於骨髓之肥大細胞(BMMC)在不存在或存在20μg/ml之可溶性ST2-His(sST2)或對照His標記之蛋白之情形下用1ng/ml重組小鼠IL-33刺激24小時。藉由ELISA定量上清液中之IL-13及IL-6分泌。資料表示來自兩個獨立實驗之一式三份實驗之平均值±SEM。
圖9B顯示AAV-sST2之表現。將HEK293細胞用表現sST2-His(sST2)之AAV載體或空載體(EV)感染。在感染之後6天，藉由 ELISA(左圖)及西方墨點法(右圖)測定培養物上清液中之sST2表現。資料表示兩個實驗之平均值±SEM(n=8)。ND，未偵測；rsST2，重組可溶性ST2-His。
圖9C顯示AAV-sST2之表現。將BALB/c小鼠視網膜下注射表現可溶性ST2之AAV(AAV-sST2)或AAV空載體(AAV-EV)，該空載體充當陰性對照。在感染後三週藉由ELISA及西方墨點法(WB)對視網膜(左圖)及RPE/脈絡膜(右圖)中之sST2之表現加以分析。對10μg之視網膜溶解物及3μg之RPE/脈絡膜溶解物進行ST2及GAPDH之西方墨點分析。rsST2，重組可溶性ST2-His。
圖10為顯示投與可溶性ST2保護光受體免受光毒性應激的一系列圖。將小鼠視網膜下注射表現可溶性ST2之AAV(AAV-sST2)且在感染後暴露於光21天(上圖中之示意圖)。注射AAV空載體(AAV-EV)之小鼠充當對照。在光暴露之前(第0天)及光暴露7天之後(第7天)藉由流式細胞術定量視杆細胞及視錐細胞。每一資料點代表個別小鼠(n=10/組)。***，P<0.001；****，P<0.0001；不成對雙尾司徒頓t檢驗。資料表示具有類似結果之兩個獨立實驗。
圖11A顯示在CLE持續3天之後相較於ST2+/+小鼠在ST2-/-小鼠中減少之前22種光暴露誘導性基因。左圖為顯示如藉由微陣列所分析在CLE之前(第0天)及之後(第3天)視網膜中基因表現之結果的熱圖。N=5。右圖為顯示基因符號、表現之log2倍數變化及P值的表。
圖11B為顯示相較於ST2+/+小鼠在ST2-/-小鼠中表現降低之基因(參見圖11A)之基因本體(GO)分析的表。顯示前17種增濃GO項。
圖11C為顯示CCL2、IL-6及IL-1β之表現的一系列圖。上圖顯示在CLE之後視網膜中之CCL2、IL-6及IL-1β表現的時程qPCR分析。結果顯示相較於ST2+/+小鼠在ST2-/-小鼠中表現降低(n=5-6/基因型)。第0天ST2+/+小鼠中之基因表現設定為1。藉由ELISA量測視網膜中之CCL2蛋白質表現(下圖)。資料表示具有類似結果之兩個獨立實驗。*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001；****，P<0.0001；單向ANOVA與圖凱氏後檢驗。
圖11D為顯示添加IL-33誘導自rMC-1細胞分泌CCL2的 一系列圖。藉由流式細胞術偵測rMC-1細胞表面上之ST2表現(左圖)。用IL-33刺激rMC-1細胞以劑量依賴性方式誘導CCL2分泌，且在IL-33 TRAP而不是對照蛋白存在下消除刺激(右圖)。藉由ELISA量測第24小時培養物上清液中之CCL2水準。所顯示資料為一式三份孔之平均值±SEM且表示具有類似結果之兩個獨立實驗。*，P<0.05；**，P<0.01；****，P<0.0001；雙向ANOVA與圖凱氏後檢驗。
圖11E為顯示藉由添加IL-33 TRAP阻斷自rMC-1細胞自分泌誘導及釋放CCL2的一系列圖。將rMC-1細胞在含HG培養基中在IL-33 TRAP或對照蛋白質存在下培養達72小時。分別藉由qPCR及ELISA量測CCL2 mRNA表現(左圖)及分泌(右圖)。所顯示資料為一式三份實驗之平均值±SEM。***，P<0.001；****，P<0.0001；雙向ANOVA與圖凱氏後檢驗。
圖12A為顯示如藉由流式細胞術所測定在CLE之前(第0天)及之後(第7天)視網膜CD11b+CD45lo骨髓細胞上之CCR2、Ly6C及CD115表現的一系列圖。該資料表示具有類似結果之至少兩個獨立實驗。
圖12B及12C顯示在光暴露之後，相較於ST2+/+小鼠，ST2-/-小鼠中之ONL、OS及GCL中之Iba1+細胞減少。影像(圖12B)顯示Iba1染色(紅色)之代表性免疫組織化學。定量在CLE之前(第0天)及之後(第14天)整個上及下視網膜之每個視網膜層內之總Iba1+細胞(箭頭)。該定量之結果顯示於圖12C中。每一資料點代表個別小鼠(n=10/基因型)。條，40μm。*，P<0.05；**，P<0.01；****，P<0.0001；單向ANOVA與圖凱氏後檢驗。
圖12D顯示用於定量在CLE處理期間氯膦酸鹽耗減中之血液單核細胞子集之流式細胞術門控策略。在CLE期間用氯膦酸鹽脂質體(Clod)或對照脂質體(Ctrl)每日處理ST2+/+及ST2-/-小鼠。在CLE之後七天，藉由流式細胞術定量周邊血液單核細胞。顯示用於識別CD115+Ly6Chi單核細胞及CD115+Ly6Clo/-單核細胞之代表性流式細胞術圖(左圖)。結果在右圖中之圖中示出。n=4-6/組。
圖12E顯示CLE中之IL-33/ST2介導之光受體細胞損失依賴於循環單核細胞。如左圖中之圖中所顯示，在CLE之前2天開始用氯膦酸鹽脂質體(Clod)每日靜脈內處理ST2+/+及ST2-/-小鼠。用對照脂質體(Ctrl) 處理充當對照。在CLE之後7天藉由流式細胞術定量視網膜細胞(參見圖12D)。n=4-6/組。*，P<0.05；****，P<0.0001；ns，不顯著；單向ANOVA與圖凱氏後檢驗。資料表示具有類似結果之至少兩個獨立實驗。
圖12F顯示其中N末端核定位序列及染色質結合域由dsRed替代(在左圖中之圖中顯示)但保留C末端細胞因子域之IL33tm1/tm1小鼠顯示Müller細胞之細胞質中dsRed-IL-33-C-末端之定位。影像(左圖)為IL33tm1/tm1視網膜平坦安裝之共焦顯微鏡成像的Z-截面圖。dsRed信號以紅色示出；DAPI信號以藍色示出。箭頭指示IL-33+ Müller細胞。藉由流式細胞術驗證Müller細胞中之dsRed-IL-33-C-末端之表現(右下圖)。雖然IL33tm1/-及IL33tm1/tm1視網膜中藉由qPCR量測之IL-33 mRNA可與野生型(WT)視網膜相比，但IL33tm1/-及IL33tm1/tm1小鼠中之視網膜及血清中藉由ELISA量測之IL-33蛋白質水準顯著高於WT小鼠中之IL-33蛋白質水準，從而指示自細胞釋放缺乏N末端之IL-33。每一資料點代表個別小鼠(n=6/基因型)。資料表示具有類似結果之兩個獨立實驗。**，P<0.01；***，P<0.001；****，P<0.0001；單向ANOVA與圖凱氏後檢驗。
圖12G為顯示IL33tm1/tm1小鼠中CCL2及IL-6表現之ST2依賴性增加以及視錐細胞及RGC之損失。藉由qPCR及流式細胞術對來自於ST2+/-或ST2-/-背景下育種之IL33+/+、IL33tm1/+及IL33tm1/tm1小鼠之視網膜加以分析。相較於IL33+/+對照小鼠，在ST2+/-背景下在IL33tm1/+及IL33tm1/tm1小鼠中觀察到CCL2及IL-6表現之顯著增加以及視錐細胞及RGC之損失，但在ST2-/-背景下未觀察到。每一資料點代表個別小鼠(n=3-7/基因型)。資料表示具有類似結果之兩個獨立實驗。**，P<0.01；***，P<0.001；****，P<0.0001；ns，不顯著；單向ANOVA與圖凱氏後檢驗。
圖13A為顯示用NaIO3處理之小鼠中Müller細胞活化的一系列影像。相較於鹽水處理之小鼠，用NaIO3處理之小鼠中GFAP表現之免疫組織化學(紅色)顯示GFAP+ Müller細胞增加(箭頭)。條，100μm。
圖13B顯示用NaIO3處理之小鼠之視網膜中IL-33加工增加。藉由西方墨點法對視網膜中之IL-33表現加以分析(左圖)。用ImageJ軟體定量IL-33p19與IL-33p30之比率(右圖)。在NaIO3處理之後IL-33之19-kDa 加工形式在第3天達到峰值。資料表示兩個獨立實驗。
圖13C為顯示相較於ST2+/+小鼠，NaIO3處理之ST2-/-小鼠之視網膜中CCL2誘導降低的圖。藉由ELISA測定視網膜中之CCL2表現。n=5-7/基因型。****，P<0.0001；ns，不顯著；單向ANOVA與圖凱氏後檢驗。
圖13D為顯示相較於ST2+/+小鼠，NaIO3處理之ST2-/-小鼠之視網膜中巨噬細胞浸潤降低的一系列圖。藉由流式細胞術定量視網膜中之巨噬細胞(CD11b+CD45hi)(左上圖)。相較於小神經膠質細胞，視網膜巨噬細胞表現較高水準之CCR2(CD11b+CD45lo)(左下圖)n=6-7/基因型。資料表示三個獨立實驗。MΦ，巨噬細胞；MGL，小神經膠質細胞。****，P<0.0001；ns，不顯著；單向ANOVA與圖凱氏後檢驗。
圖13E為顯示相較於ST2+/+小鼠，NaIO3處理之ST2-/-小鼠中之OS及ONL中Iba1+細胞減少的一系列圖。藉由免疫組織化學將視網膜切片對Iba1染色。定量鹽水或NaIO3處理之小鼠(第3天)中整個上視網膜及下視網膜之OS及ONL中的Iba1+細胞。n=6/基因型。*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001；****，P<0.0001；單向ANOVA與圖凱氏後檢驗。
圖13F顯示ST2-/-小鼠中光受體之保護。藉由OCT量測在NaIO3處理之前(第0天)及之後(第7天)ST2+/+及ST2-/-小鼠之視網膜厚度(中間圖)。顯示代表性截面OCT影像(上圖)。對於個別小鼠，藉由第0天之視網膜厚度減去第7天之視網膜厚度來計算△視網膜厚度。條，100μm。藉由流式細胞術定量用鹽水或NaIO3處理(第3天及第7天)之ST2+/+及ST2-/-小鼠之視網膜細胞(下圖)。每一資料點代表個別小鼠(n=6-8/基因型)。資料表示具有類似結果之至少兩個獨立實驗。*，P<0.05；**，P<0.01；***，P<0.001；****，P<0.0001；不成對雙尾司徒頓t檢驗。
圖13G為顯示在RPE損傷誘導之視網膜變性中IL-1R1-/-及IL-18-/-小鼠中缺乏視網膜保護的一系列圖。用20mg NaIO3處理IL-1R1-/-及IL-18-/-小鼠。藉由OCT量測在基線(第0天)及第7天之視網膜厚度。對於個別小鼠，藉由第0天之視網膜厚度減去第7天之視網膜厚度來計算△視網膜厚度。每一資料點代表個別小鼠(n=10-13/基因型)。
圖13H為顯示血液單核細胞之氯膦酸鹽耗減的一系列圖。在NaIO3處理之前1天開始用氯膦酸鹽脂質體(「Clod」)或對照脂質體(「Ctrl」)每日處理ST2+/+及ST2-/-小鼠。在NaIO3處理之後三天，當使小鼠安樂死以用於視網膜細胞定量時，藉由流式細胞術定量周邊血液單核細胞。顯示用於識別CD115+Ly6Chi單核細胞及CD115+Ly6Clo/-單核細胞之代表性流式細胞術圖。每一資料點代表個別小鼠(n=5/組)。
圖13I為顯示IL-33/ST2介導之光受體細胞損失依賴於循環單核細胞的一系列圖。如示意圖中所顯示，在NaIO3處理之前1天開始用氯膦酸鹽脂質體(Clod)每日靜脈內處理ST2+/+及ST2-/-小鼠。用對照脂質體(Ctrl)處理充當對照。在鹽水或NaIO3處理之後3天藉由流式細胞術定量視網膜細胞。每一資料點代表個別小鼠(n=5/組)。*，P<0.05；****，P<0.0001；ns，不顯著；單向ANOVA與圖凱氏後檢驗。
圖14A顯示2型(Th2)肺發炎之巴西日圓線蟲(Nippostrongylus brasiliensis)感染模型的示意圖。
圖14B顯示在感染巴西日圓線蟲之後源自ST2+/+及ST2-/-(ST2 KO)小鼠之肺組織(左圖)及BALF(右圖)中之嗜伊紅白血球(eos)數目。如實例4之章節A中所描述，用對照抗豬草或抗IL-13(α-IL-13)抗體處理具有所指示基因型之小鼠。未處理ST2+/+小鼠充當對照。下圖為顯示來自該研究之原始資料之表。*，P<0.05；ns，不顯著。
圖14C顯示來自實例4中描述之Th2肺發炎之巴西日圓線蟲感染模型之BALF細胞因子分析的結果。示出如實例4之章節A中所描述用對照抗豬草、抗IL-13(α-IL-13)及/或抗IL-4(α-IL-4)抗體處理之具有所指示基因型之小鼠的IL-4、IL-5及IL-13水準。未處理小鼠充當對照。下圖為顯示來自該研究之原始資料之表。*，P<0.05；ns，不顯著。
圖15A顯示在用TNP-OVA抗原敏化/激發之後源自ST2+/+及ST2-/-小鼠之肺組織(左上圖)及BALF(右上圖)中之嗜伊紅白血球數目。下圖中之表顯示來自該研究之原始資料。如實例4之章節B中所描述，用對照抗豬草或抗IL-13(α-IL-13)抗體處理具有所指示基因型之小鼠。未處理小鼠充當對照。*，P<0.05。
圖15B為顯示來自實例4之章節B中所描述之TNP-OVA模型之抗原記憶分析(IL-5，中間圖；IL-13，右圖)中細胞活力(左圖)及細胞因子分泌的一系列圖。抗GP120(α-GP120)抗體用作對照。
圖16A顯示藉由IL-33增強肥大細胞脫粒。上圖顯示肥大細胞脫粒分析之示意圖，且下圖顯示來自β-己糖胺酶(左)、類胰蛋白酶(中)及組胺(右)之肥大細胞脫粒分析之結果的圖。
圖16B為顯示實例5中描述之全身性過敏性分析之示意圖。
圖16C及16D為顯示來自被動全身性過敏性分析(參見例如，圖16B)之結果的圖。圖16C顯示在無DNP-HSA添加情形下來自用IgE及IL-33處理之ST2+/+(WT)或ST2-/-(KO)小鼠之結果。圖16D顯示在無IL-33添加情形下來自用IgE及DNP-HSA處理之ST2+/+(WT)或ST2-/-(KO)小鼠之結果。
圖16E顯示一系列圖，該等圖顯示來自被動全身性過敏性分析之結果。左圖中之圖顯示用IgE、DNP-HSA及IL-33處理之ST2+/+(WT)或ST2-/-(KO)小鼠隨時間(分鐘)變化之體溫(℉)。右圖中之圖顯示所指示基因型及激發之45至60分鐘之曲線下面積(AUC)。
圖16F顯示IL-33增強活體外人類肥大細胞之IgE交聯依賴性細胞因子分泌。上圖顯示實驗之示意圖。下圖中之圖顯示對於IL-5(左)、IL-13(中)及IL-8(右)，在用IL-33及IgE交聯刺激之後來自肥大細胞細胞因子量測之結果。
圖16G顯示IL-33在活體外獨立於IgE或抗原直接刺激肥大細胞細胞因子分泌。上圖顯示實驗之示意圖。下圖中之圖顯示用於在不存在IL-33(0ng/ml)或在存在10ng/mL IL-33情形下測定所指示細胞因子(TNF-α、IL-10、IL-13、IL-5或IL-8)之表現水準之ELISA實驗的結果。
圖16H為顯示如藉由微陣列分析所測定在IL-33刺激之後肥大細胞中之所指示基因之相對表現的一系列圖。左圖顯示在IL-33刺激之後上調之基因之實例，該等基因包括參與平滑肌生長/遷移之基因(例如，CCL1、IL-3及IL-8)；參與平滑肌收縮之基因(例如，TNFα、IL-10、IL-6、IL13及 IL-3)；及參與高反應性之基因(例如，TNFα、IL-10及TNFSF14)。
圖17A為顯示相較於IL33+/+小鼠，IL33-/-小鼠中來自如實例6中所述之K/BxN血清轉移實驗之關節炎計分的圖。資料表示來自ST2-/-或ST2+/+小鼠之組之平均值。
圖17B為顯示相較於野生型(ST2+/+)小鼠(C57Bl/6背景)，ST2-/-小鼠中來自如實例6中所述之K/BxN血清轉移實驗之關節炎計分的圖。資料表示來自ST2-/-或ST2+/+小鼠之組之平均值。在Balb/C背景下使用ST2-/-基因型獲得類似結果。
圖17C-17D為顯示相較於野生型(ST2+/+)小鼠，ST2-/-小鼠中來自K/BxN血清轉移研究之關節炎計分的圖。圖17C顯示在整個實驗內之平均每日臨床計分，而圖17D顯示對於個別小鼠在第7天之臨床得分。
圖18A為如實例7中所述，用於確定IL-33誘導之巨噬細胞募集是否依賴於IL-4、IL-5及IL-13之實驗的示意圖。
圖18B及18C為顯示IL-33誘導之巨噬細胞募集至肺中不依賴於IL-4、IL-5及IL-13的圖。
圖19A為顯示如實例8中所述，使用HEK-BLUETM IL-33細胞，針對人類IL-33之基於細胞之IL-33阻斷分析結果的圖。人類IL-33 N-His之濃度為15pM。將細胞刺激20小時。該圖下方之表顯示10C12.38.H6.87Y.58I IgG4(抗IL-33/抗IL-13雙特異性克隆10C12.38.H6.87Y.58I/IL-13 IgG4)(縮寫為「10C12-IL-13 KIH IgG4」)、對照IgG4抗體及ST2-LZ之IC90及IC50。對於IC90表，圓括號內之值為IC90值(以μg/ml為單位)。
圖19B為實例8中描述之嗜鹼性球IL-33磷酸化p38分析之示意圖。
圖19C為顯示來自如實例8中描述之嗜鹼性球IL-33磷酸化p38分析之結果的一系列圖。該等圖顯示隨磷酸化p38螢光強度變化之最大螢光強度之百分比。
圖19D為顯示如實例8中所描述，單特異性抗IL-33抗體10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及雙特異性抗體10C12.38.H6.87Y.58I/IL-13 IgG4 (「10C12-IL13 KIH IgG4」)引起嗜鹼性球中IL-33誘導之磷酸化p38水準之劑量依賴性抑制的圖。該圖繪製隨抗體濃度變化之平均螢光強度(MFI)(來自兩個供體之平均值)。對照IgG4抗體不會抑制磷酸化p38水準。該圖亦顯示來自未添加抗體(「無Ab」)或未添加IL-33(「無IL-33」)之對照實驗之結果。
圖20為顯示如藉由BIACORE® 3000 SPR分析所評估，10C12.38.H6.87Y.58I/IL-13 IgG4雙特異性抗體(10C12-IL-13 KIH IgG4)與人類IL-33、食蟹獼猴IL-33及人類IL-13之結合動力學的表。該表顯示來自三種獨立抗體製劑(批)之結果。
圖21A為顯示使用HEK-BLUETM IL-33/IL-1β報導細胞，基於細胞之人類IL-33阻斷之結果的圖。劑量反應曲線用於確定經由所指示之抗IL-33抗體(RG1-20及10C12.38.H6.87Y.58I IgG4)、sST2-LZ及同型對照抗體(IgG4)抑制10pM人類IL-33活性(藉由OD 620量測)。該圖亦顯示來自未添加抗體(「無Ab」)或未添加IL-33(「無IL-33」)之對照實驗之結果。
圖21B為顯示HEK-BLUETM IL-33/IL-1β報導細胞對人類IL-33之劑量反應的圖。
圖21C為顯示經由所指示之抗IL-33抗體抑制HEK-BLUETM IL-33/IL-1β報導細胞之人類及食蟹獼猴IL-33活化的表。
圖21D為顯示相較於10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及sST2-LZ，具有最高人類IL-33阻斷活性之五種抗IL-33 RG抗體之劑量反應曲線的圖。該圖亦顯示來自未添加抗體(「無Ab」)或未添加IL-33(「無IL-33」)之對照實驗之結果。
圖22A為顯示使用HEK-BLUETM IL-33/IL-1β報導細胞，基於細胞之食蟹獼猴IL-33阻斷分析之結果的圖。劑量反應曲線用於確定經由所指示之抗IL-33抗體(RG1-20及5C12.38.H6.87Y.58I IgG4)、sST2-LZ及同型對照抗體(IgG4)抑制5pM食蟹獼猴IL-33活性。
圖22B為顯示HEK-BLUETM IL-33/IL-1β報導細胞對食蟹獼猴IL-33之劑量反應的圖。
圖22C為顯示相對於10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及sST2-LZ， 具有最高食蟹獼猴IL-33阻斷活性之五種抗IL-33 RG抗體之劑量反應曲線的圖。該圖亦顯示來自未添加抗體(「無Ab」)或未添加IL-33(「無IL-33」)之對照實驗之結果。
圖22D為顯示對於食蟹獼猴IL-33而言非阻斷之抗IL-33 RG抗體之劑量反應曲線的圖。
圖23A為顯示來自人類PBMC之經富集NK細胞(CD56+ CD3-)之純度之流式細胞術分析的一系列圖。
圖23B為顯示響應於人類IL-33，來自原代NK細胞之人類IFN-γ分泌之ELISA分析結果的圖。自IFN-γ ELISA OD 450值生成劑量反應曲線。
圖23C為顯示經由所指示之抗IL-33抗體抑制原代NK細胞之人類IL-33活化的圖。劑量反應曲線用於確定經由所指示之抗IL-33抗體(RG1-RG20及10C12.38.H6.87Y.58I IgG4)、sST2-LZ及同型對照抗體(IgG4)抑制NK細胞中之人類IL-33活性。
圖23D為顯示經由所指示之抗IL-33抗體抑制原代NK細胞之人類IL-33活化的表。
圖23E為顯示相對於10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及sST2-LZ，具有最高人類IL-33阻斷活性之五種抗IL-33 RG抗體之劑量反應曲線的圖。
圖23F為顯示相對於10C12.38.H6.87Y.581 IgG4及sST2-LZ，抗IL-33抗體RG1-RG5之劑量反應曲線的圖。
圖23G為顯示相對於10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及sST2-LZ，抗IL-33抗體RG6-RG10之劑量反應曲線的圖。
圖23H為顯示相對於10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及sST2-LZ，抗IL-33抗體RG11-RG15之劑量反應曲線的圖。
圖23I為顯示相對於10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及sST2-LZ，抗IL-33抗體RG16-RG20之劑量反應曲線的圖。
圖24A為顯示來自人類PBMC之原代嗜鹼性球(CD123+)中IL-33誘導之p38 MAPK(Thr180/Tyr182)磷酸化之流式細胞術分析的示意
圖。
圖24B為顯示響應於增加劑量之人類IL-33，來自原代嗜鹼性球之p38 MAPK(Thr180/Tyr182)磷酸化(ph-p38)之平均螢光強度(MFI)的圖。
圖24C為顯示經由所指示之抗IL-33抗體抑制原代嗜鹼性球中之人類IL-33活性的圖。劑量反應曲線用於確定經由所指示之抗IL-33抗體(RG1-RG20及10C12.38.H6.87Y.58I IgG4)、sST2-LZ及同型對照抗體(IgG4)抑制嗜鹼性球中之人類IL-33活性。
圖24D為顯示經由抗IL-33抗體抑制原代嗜鹼性球中之人類IL-33活化表。「部分阻斷」指示在最高抗體濃度下未能達到基線水準之劑量依賴性阻斷活性。
圖24E為顯示相對於10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及sST2-LZ，具有最高人類IL-33阻斷活性之五種抗IL-33 RG抗體之劑量反應曲線的圖。
圖24F為顯示抑制原代嗜鹼性球中之人類IL-33活性的圖。該圖繪製相對於10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及sST2-LZ，抗IL-33抗體RG1-RG5之劑量反應曲線的圖。
圖24G為顯示抑制原代嗜鹼性球中之人類IL-33活性的圖。該圖繪製相對於10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及sST2-LZ，抗IL-33抗體RG6-RG10之劑量反應曲線的圖。
圖24H為顯示抑制原代嗜鹼性球中之人類IL-33活性的圖。該圖繪製相對於10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及sST2-LZ，抗IL-33抗體RG11-RG15之劑量反應曲線的圖。
圖24I為顯示抑制原代嗜鹼性球中之人類IL-33活性的圖。該圖繪製相對於10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及sST2-LZ，抗IL-33抗體RG16-RG20之劑量反應曲線的圖。
圖24J及24K為顯示用於確定經由0.4nM(圖24J)或2nM(圖24K)抗IL-33抗體(RG1-RG20及10C12.38.H6.87Y.58I IgG4)、sST2-LZ及同型對照抗體(IgG4)抑制嗜鹼性球中之500pM人類IL-33活性之程度的 p38 MAPK(Thr180/Tyr182)磷酸化(Ph-p38)之平均螢光強度(MFI)的圖。每幅圖左側的表概述所指示抗體的結果。
圖25A及25B為顯示如實例9，章節F中所描述，用於量測抗IL-33抗體對人類(圖25A)或食蟹獼猴(圖25B)IL-33之阻斷活性的競爭性結合ELISA實驗之結果的圖。該等圖繪製隨抗IL-33抗體濃度(M)變化之IL-33結合%。
I. 定義
如本文中所使用之術語「約」係指熟習此技術領域者容易獲知的各別值之慣常誤差範圍。本文中提及「約」某一值或參數包括(且描述)針對該值或參數本身之實施例。
出於本文之目的，「接受體人類構架」為以下構架，其包含源於如以下定義之人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之輕鏈可變域(VL)構架或重鏈可變域(VH)構架的胺基酸序列。「源於」人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之接受體人類構架可包含與人類免疫球蛋白構架或人類共同構架相同之胺基酸序列，或其可含有胺基酸序列變化。在一些實施例中，胺基酸變化數目為10處或10處以下、9處或9處以下、8處或8處以下、7處或7處以下、6處或6處以下、5處或5處以下、4處或4處以下、3處或3處以下，或2處或2處以下。在一些實施例中，VL接受體人類構架之序列與VL人類免疫球蛋白構架序列或人類共同構架序列一致。
「親和力」係指分子(例如抗體)之單個結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間非共價相互作用的強度總和。除非另外指示，否則如本文所用，「結合親和力」係指反映結合對之成員(例如抗體與抗原)之間的1：1相互作用之固有結合親和力。分子X對其搭配物Y之親和力通常可由解離常數(KD)表示。親和力可藉由此項技術中已知之常用方法(包括本文中所描述之彼等方法)加以量測。在下文中描述用於量測結合親和力之特定說明性及例示性實施例。
「親和力成熟之」抗體係為在一或多個HVR及/或構架區中具有一或多個改變之抗體，該等改變導致該抗體對抗原之親和力相較於不 具有彼等改變之親本抗體得以改良。較佳之親和力成熟抗體將對標靶抗原具有奈莫耳級或甚至皮莫耳級親和力。親和力成熟抗體藉由此項技術中已知之程序產生。例如，Marks等人Bio/Technology 10：779-783,1992描述藉由VH及VL域改組之親和力成熟。HVR及/或構架殘基之隨機突變誘發描述於：Barbas等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：3809-3813,1994；Shier等人Gene 169：147-155,1995；Yelton等人J.Immunol.155：1994-2004,1995；Jackson等人J.Immunol.154(7)：3310-3319,1995；及Hawkins等人J.Mol.Biol.226：889-896,1992。
術語「抗體」在本文中係以最廣泛意義使用且涵蓋各種抗體結構，包括但不限於單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體，包括抗IL-33/抗IL-13雙特異性抗體)及抗體片段，只要其展現所要抗原結合活性即可。
除非另外指示，否則如本文所用之術語「介白素-33(IL-33)」係指來自任何脊椎動物來源之任何天然IL-33，該脊椎動物來源包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類及食蟹獼猴)及齧齒動物(例如小鼠及大鼠)。IL-33在此項技術中亦稱為高內皮小靜脈之核因子(NF-HEV；參見例如，Baekkevold等人Am.J.Pathol.163(1)：69-79,2003)、DVS27、C9orf26及介白素-1家族成員11(IL-1F11)。該術語涵蓋「全長」未加工IL-33以及IL-33之由在細胞中加工所產生之任何形式。人類全長未加工IL-33包含270個胺基酸(a.a.)且亦可稱為IL-331-270。人類IL-33之加工形式包括例如IL-3395-270、IL-3399-270、IL-33109-270、IL-33112-270、IL-331-178及IL-33179-270(Lefrançais等人Proc.Natl.Acad.Sci.109(5)：1673-1678,2012及Martin,Semin.Immunol.25：449-457,2013)。在一些實施例中，人類IL-33之加工形式，例如IL-3395-270、IL-3399-270、IL-33109-270或由蛋白酶(諸如鈣蛋白酶、蛋白酶3、嗜中性白血球彈性蛋白酶及組織蛋白酶G)加工之其他形式相較於全長IL-33可具有增加之生物活性。該術語亦涵蓋IL-33之天然存在之變異體，例如剪接變異體(例如，缺乏外顯子3之組成性活性剪接變異體spIL-33，Hong等人J.Biol.Chem.286(22)：20078-20086,2011)或對偶基因變異體。IL-33可存在於細胞內(例如，細胞核內)或作為經分泌細胞因子形式存在。全長IL-33蛋白包含含有核定 位序列之螺旋-轉角-螺旋DNA結合基元(人類IL-33之a.a.1-75)，該DNA結合基元包含染色質結合基元(人類IL-33之a.a.40-58)。IL-33之加工及經分泌形式缺乏此等N末端基元。例示性人類IL-33之胺基酸序列可例如以UniProtKB寄存編號O95760找到。
「IL-33軸」意謂參與IL-33信號轉導之核酸(例如，基因或自該基因轉錄之mRNA)或多肽。例如，IL-33軸可包括配體IL-33、受體(例如，ST2及/或IL-1RAcP)、接頭分子(例如，MyD88)或與受體分子及/或接頭分子結合之蛋白質(例如，激酶，諸如介白素-1受體相關激酶1(IRAK1)及介白素-1受體相關激酶4(IRAK4)，或E3泛素連接酶，諸如TNF受體相關因子6(TRAF6))。
除非另外指示，否則在本文中可互換使用之術語「介白素-1受體樣1(IL1RL1)」及「ST2」係指來自任何脊椎動物來源之任何天然ST2，該脊椎動物來源包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類)及齧齒動物(例如小鼠及大鼠)。ST2在此項技術中亦稱為DER4、T1及FIT-1。該術語涵蓋「全長」未加工ST2以及ST2之由在細胞中加工所產生之任何形式。ST2之至少四種同功異型物在此項技術中為已知的，包括可溶性(sST2，亦稱為IL1RL1-a)及跨膜(ST2L，亦稱為IL1RL1-b)，其由來自雙啟動子系統之差異性mRNA表現產生；及ST2V及ST2LV，其由替代性剪接產生，如下文所描述。ST2L之域結構包括三個細胞外免疫球蛋白樣C2域、跨膜域及細胞質Toll/介白素-1受體(TIR)域。sST2缺乏包含於ST2L內之跨膜域及細胞質域且包含獨特9胺基酸(a.a.)C末端序列(參見例如，Kakkar等人Nat.Rev.Drug Disc.7：827-840,2008)。sST2可充當誘餌受體以抑制可溶性IL-33。該術語亦涵蓋ST2之天然存在之變異體，例如，剪接變異體(例如，ST2V，其缺乏第三免疫球蛋白基元且具有獨特疏水性尾；及ST2LV，其缺乏ST2L之跨膜域)或對偶基因變異體(例如，如本文所述針對氣喘風險為保護性或賦予氣喘風險之變異體)。例示性人類ST2之胺基酸序列可例如以UniProtKB寄存編號Q01638找到。ST2為IL-33受體連同共受體蛋白IL-1RAcP之一部分。IL-33與ST2及共受體介白素-1受體輔助蛋白(IL-1RAcP)之結合形成1：1：1三元信號傳導複合物以促進下游信號轉導，如圖1A中所展示(參見例 如，Lingel等人Structure 17(10)：1398-1410,2009，及Liu等人Proc.Natl.Acad.Sci.110(37)：14918-14924,2013)。
術語「抗IL-33抗體」、「結合IL-33之抗體」及「特異性結合IL-33之抗體」係指能夠以足夠親和力結合IL-33，以使得該抗體適用作靶向IL-33之診斷劑及/或治療劑的抗體。在一個實施例中，抗IL-33抗體與無關非IL-33蛋白之結合程度小於該抗體與IL-33之結合之約10%，如例如藉由放射免疫分析(RIA)所量測。在某些實施例中，結合IL-33之抗體之解離常數(KD)為1μM、100nM、10nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM(例如，10-8M或10-8M以下，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)。在某些實施例中，抗IL-33抗體結合在來自不同物種之IL-33中保守的IL-33抗原決定基。
與參照抗體「結合相同抗原決定基之抗體」係指在競爭分析中將參照抗體與其抗原之結合阻斷50%或50%以上之抗體，且反之，參照抗體在競爭分析中將該抗體與其抗原之結合阻斷50%或50%以上。本文提供例示性競爭分析。
「抗體片段」包含完整抗體之一部分，較佳為完整抗體之抗原結合或可變區。抗體片段之實例包括Fab、Fab’、F(ab’)2及Fv片段；雙功能抗體；線性抗體(參見美國專利第5,641,870號，實例2；Zapata等人Protein Eng.8(10)：1057-1062,1995)；單鏈抗體分子；及由抗體片段形成之多特異性抗體。
抗體之木瓜蛋白酶消化產生兩個稱為「Fab」片段的相同抗原結合片段；及殘留「Fc」片段，其為反映易於結晶能力之名稱。Fab片段由整個L鏈連同H鏈之可變區域(VH)及一個重鏈之第一恆定區(CH1)組成。抗體之胃蛋白酶產生單一大F(ab’)2片段，該片段大致對應於具有二價抗原結合活性之兩個二硫鍵連接之Fab片段且仍能夠交聯抗原。Fab’片段與Fab片段不同之處在於在CH1域之羧基末端具有一些額外殘基，包括一或多個來自抗體鉸鏈區之半胱胺酸。Fab’-SH在本文中為用於其中恆定域之半胱胺酸殘基帶有自由硫醇基之Fab’之名稱。F(ab’)2抗體片段最初產生為成對的Fab'片段，該等片段在其間具有鉸鏈半胱胺酸。抗體片段之其他化學偶合亦 為已知的。
術語「Fc區」在本文中用於定義免疫球蛋白重鏈之含有恆定區之至少一部分的C末端區。該術語包括天然序列Fc區及變異型Fc區。在一個實施例中，人類IgG重鏈Fc區自Cys226或Pro230延伸至重鏈之羧基末端。然而，Fc區之C末端離胺酸(Lys447)可能存在或可能不存在。除非本文另外規定，否則Fc區或恆定區中之胺基酸殘基之編號係根據EU編號系統，亦稱為EU索引，如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991中所述。
「Fv」由一個重鏈可變區域與一個輕鏈可變區域呈緊密、非共價結合形式之二聚體組成。自此等兩個域之褶疊產生六個高變環(3個環各自來自H及L鏈)，該等高變環有助於胺基酸殘基用於抗原結合且賦予該抗體抗原結合特異性。然而，即使單一可變域(或Fv之僅包含三個對抗原具有特異性之Hs的一半)亦具有識別且結合抗原之能力，但經常以比整個結合位點更低之親和力結合。
亦縮寫為「sFv」或「scFv」之「單鏈Fv」為包含連接至單一多肽鏈中之VH及VL抗體域之抗體片段。較佳地，sFv多肽進一步包含介於VH域與VL域之間之多肽接頭，該多肽接頭使sFv能夠形成用於抗原結合之所要結構。關於sFv之綜述，參見Pluckthun,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg and Moore編，Springer-Verlag,New York，第269-315頁，1994。
術語「雙功能抗體」係指藉由構築sFv片段(參見前一段落)製備之小抗體片段其在VH域與VL域之間具有短接頭(約5-10個殘基)以使得達成V域之鏈間而不是鏈內配對，從而產生二價片段，亦即，具有兩個抗原結合位點之片段。雙特異性雙功能抗體為兩個「交叉」sFv片段之異二聚體，其中兩個抗體之VH域及VL域存在於不同多肽鏈上。雙功能抗體更充分描述於例如EP 404,097；WO 93/11161；及Hollinger等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448,1993中。
「結合域」意謂化合物或分子之特異性結合標靶抗原決定基、 抗原、配體或受體之一部分。結合域包括但不限於抗體(例如單株、多株、重組、人類化及嵌合抗體)、抗體片段或其部分(例如，Fab片段、Fab'2、scFv抗體、SMIP、域抗體、雙功能抗體、迷你抗體、scFv-Fc、親和體、奈米抗體及抗體之VH及/或VL域)、受體、配體、適體及具有所鑑別之結合搭配物的其他分子。
「阻斷」抗體或「拮抗劑」抗體為抑制或降低其所結合之抗原之生物活性的抗體。某些阻斷抗體或拮抗劑抗體實質上或完全抑制抗原的生物活性。
「基於細胞之阻斷分析」係指其中能夠量測抗體抑制或降低其所結合之抗原之生物活性之能力的分析。例如，基於細胞之分析可用於量測抑制特定生物或生物化學功能所需之抗體的濃度。在一些實施例中，使用基於細胞之阻斷分析來量測抗體(例如，本發明之抗IL-33抗體)之半數最大抑制性濃度(IC50)及/或90%抑制性濃度(IC90)。在一些實施例中，基於細胞之阻斷分析用於測定抗體是否阻斷配體(例如，IL-33)與其受體(例如，ST2及/或共受體IL-1RAcP)之間之相互作用。用於IL-33之例示性基於細胞之阻斷分析在本文提供於實例2B中。用於IL-33之額外例示性基於細胞之阻斷分析在本文提供，例如，於實例8中，包括原代天然殺手(NK)細胞分析及原代嗜鹼性球細胞分析。
抗體之「類別」係指抗體重鏈所具有之恆定域或恆定區之類型。存在五種主要抗體類別：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且此等類別中之若干類別可進一步分成子類(同型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。對應於不同免疫球蛋白類別之重鏈恆定域分別稱為α、δ、ε、γ及μ。
抗體「效應功能」係指可歸因於抗體之Fc區(天然序列Fc區或胺基酸序列變異型Fc區)且隨抗體同型而變化之彼等生物活性。抗體效應功能之實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。
「抗體依賴性細胞介導之細胞毒性」或「ADCC」係指細胞 毒性之一種形式，其中存在於某些細胞毒性細胞(例如天然殺手(NK)細胞、嗜中性白血球及巨噬細胞)上之結合至Fc受體(FcR)上之經分泌Ig使此等細胞毒性效應細胞能夠特異性結合帶有抗原之標靶細胞且隨後用細胞毒素殺死標靶細胞。抗體「武裝」細胞毒性細胞且為此種殺傷絕對所需的。用於介導ADCC之原代細胞NK細胞僅表現FcγRIII，而單核細胞表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR在造血細胞上之表現概述於Ravetch等人Annu.Rev.Immunol.9：457-492,1991第464頁上之表3中。為評估相關分子之ADCC活性，可進行活體外ADCC分析，諸如描述於美國專利第5,500,362號或第5,821,337號中之活體外ADCC分析。用於此等分析之適用效應細胞包括外周血液單核細胞(PBMC)及天然殺手(NK)細胞。或者或另外，相關分子之ADCC活性可例如在動物模型，諸如Clynes等人Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 95：652-656,1998中揭示之動物模型中進行活體內評估。
「Fc受體」或「FcR」描述結合抗體之Fc區之受體。較佳FcR為天然序列人類FcR。此外，較佳FcR為結合IgG抗體之FcR(γ受體)且包括FcγRI、FcγRII及FcγRIII子類之受體，包括此等受體之對偶基因變異體及交替剪接形式。FcγRII受體包括FcγRIIA(「活化受體」)及FcγRIIB(「抑制受體」)，該等受體具有主要在其細胞質域方面不同之類似胺基酸序列。活化受體FcγRIIA在其細胞質域中包含基於免疫受體酪胺酸之活化基元(ITAM)。抑制受體FcγRIIB在其細胞質域中包含基於免疫受體酪胺酸之抑制基元(ITIM)(參見綜述M.於Daëron,Annu.Rev.Immunol.15：203-234,1997中)。FcR綜述於例如Ravetch等人Annu.Rev.Immunol.9：457-492,1991；Capel等人Immunomethods 4：25-34,1994；及de Haas等人J.Lab.Clin.Med.126：330-41,1995中。其他FcR(包括在未來欲鑑別之彼等FcR)由本文中術語「FcR」涵蓋。該術語亦包括新生兒受體FcRn，其負責將母體IgG轉移至胎兒(參見例如，Guyer等人J.Immunol.117：587,1976；及Kim等人J.Immunol.24：249,1994)。
「人類效應細胞」為表現一或多種FcR且執行效應功能之白血球。較佳地，該等細胞表現至少FcγRIII且執行ADCC效應功能。介導ADCC之人類白血球之實例包括外周血單核細胞(PBMC)、天然殺手(NK) 細胞、單核細胞、細胞毒性T細胞及嗜中性白血球；其中PBMC及NK細胞為較佳的。效應細胞可自天然來源，例如自血液分離。
「補體依賴性細胞毒性」或「CDC」係指在補體存在下溶解標靶細胞。經典補體路徑之活化係藉由補體系統(C1q)之第一組分結合至抗體(適當子類)來起始，該等抗體結合至其同源抗原。為評估補體活化，可進行例如如Gazzano-Santoro等人J.Immunol.Methods 202：163,1996中所述之CDC分析。
「抗原決定基」為抗原中抗體所選擇性地結合的部分。對於多肽抗原，抗原決定基一般為約4-15個胺基酸殘基之肽部分。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「完全抗體」在本文中可互換用於指具有與天然抗體結構實質上類似之結構或具有含有如本文中所定義之Fc區之重鏈的抗體。
「人類抗體」為具有對應於由人類所產生抗體之胺基酸序列之胺基酸序列及/或具有使用用於製備人類抗體之任何技術所製備之抗體。人類抗體之此定義明確排除包含非人類抗原結合殘基之人類化抗體。
「人類共同構架」為代表在人類免疫球蛋白VL或VH構架序列之選擇中最常存在之胺基酸殘基的構架。一般而言，人類免疫球蛋白VL或VH序列係選自可變域序列之亞群。一般而言，序列亞群為如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，NIH Publication 91-3242,Bethesda MD，第1-3卷，1991中之亞群。在一個實施例中，對於VL，亞群為如Kabat等人(同上)中之亞群κ III或κ IV。在一個實施例中，對於VH，亞群為如Kabat等人(同上)中之亞群III。
非人類(例如，齧齒動物)抗體之「人類化」形式為包含源自非人類抗體之最小序列之嵌合抗體。在很大程度上，人類化抗體為人類免疫球蛋白(接受者抗體)，其中來自接受者之高變區之殘基經來自具有所要抗體特異性、親和力及能力之諸如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類動物之非人類物種(供體抗體)的高變區之殘基替代。在一些情形下，人類免疫球蛋白之構架區(FR)殘基經相應非人類殘基替代。此外，人類化抗體可包含在接受者抗體中或在供體抗體中未發現之殘基。進行此等改性以進一步精製抗體 效能。一般而言，人類化抗體將包含至少一個且通常兩個可變域之實質上全部，其中全部或實質上全部高變環對應於非人類免疫球蛋白之高變環，且全部或實質上全部FR為人類免疫球蛋白序列之FR。人類化抗體視情況亦將包含免疫球蛋白恆定區(Fc)之至少一部分，通常為人類免疫球蛋白之至少一部分。關於進一步細節，參見Jones等人Nature 321：522-525,1986；Riechmann等人Nature 332：323-329,1988；及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2：593-596,1992。
「免疫結合物」為結合於一或多個異源分子(包括但不限於細胞毒性劑)之抗體。
術語「經分離」當用於描述本文揭示之各種抗體時意謂已自其得到表現之細胞或細胞培養物鑑別及分開及/或回收之抗體。其天然環境中之污染物組分為通常將干擾多肽之診斷性或治療性使用的物質，且可包括酶、激素及其他蛋白質或非蛋白質溶解物。在一些實施例中，將抗體純化至純度大於95%或99%，如藉由例如電泳(例如，十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、等電聚焦(IEF)、毛細管電泳)或層析(例如離子交換或逆相HPLC)方法所測定。關於評定抗體純度之方法之綜述，參見例如Flatman等人J.Chromatogr.B 848：79-87,2007。在較佳實施例中，抗體將經純化以(1)達到足以藉由使用旋杯式測序儀獲得N末端或內部胺基酸序列之至少15個殘基之程度，或(2)藉由SDS-PAGE在還原或非還原條件下使用庫馬斯藍(Coomassie blue)或較佳使用銀染色劑測定具均一性。經分離之抗體包括原位處於重組細胞內之抗體，因為將不存在多肽天然環境中之至少一種組分。然而，通常，經分離之多肽將藉由至少一個純化步驟來製備。
如本文所用之術語「單株抗體」係指自實質上均質抗體之群體獲得之抗體，亦即除可能之變異型抗體(例如含有天然存在之突變或在製造單株抗體製劑之期間產生之突變，此等變異體通常以少量存在)之外，構成該群體之個別抗體相同及/或結合相同抗原決定基。與通常包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體之多株抗體製劑不同，單株抗體製劑之各單株抗體係針對抗原上之單個決定子。因此，修飾語「單株」指示抗體係獲自實質上均質之抗體群體的特徵，且不應解釋為需要藉由任何特定方法來 產生抗體。舉例而言，欲根據本發明使用之單株抗體可藉由多種技術製備，該等技術包括但不限於融合瘤方法、重組DNA方法、噬菌體呈現方法及利用含有全部或一部分人類免疫球蛋白基因座之轉殖基因動物之方法，此等方法及製備單株抗體之其他例示性方法在本文中加以描述。
術語「多特異性抗體」係以最廣泛意義使用且具體涵蓋包含重鏈可變域(VH)及輕鏈可變域(VL)之抗體，其中該VHVL單元具有多抗原決定基特異性(亦即，能夠結合一個生物分子上之兩種不同抗原決定基或不同生物分子上之各抗原決定基)。此等多特異性抗體包括但不限於全長抗體、具有兩個或兩個以上VL及VH域之抗體、抗體片段諸如Fab、Fv、dsFv、scFv、雙功能抗體、雙特異性雙功能抗體及三功能抗體、共價或非共價連接之抗體片段。「多抗原決定基特異性」係指特異性結合同一或不同標靶上之兩種或兩種以上不同抗原決定基的能力。「雙重特異性」或「雙特異性」係指特異性結合同一或不同標靶上之兩種不同抗原決定基的能力。然而，與雙特異性抗體相比，雙重特異性抗體具有在胺基酸序列上相同之兩個抗原結合臂，且各Fab臂能夠識別兩種抗原決定基。雙重特異性允許抗體以高親和力與兩種不同抗原如單一Fab或IgG分子相互作用。根據一個實施例，呈IgG1形式之多特異性抗體以5μM至0.001pM、3μM至0.001pM、1μM至0.001pM、0.5μM至0.001pM或0.1μM至0.001pM之親和力結合各抗原決定基。「單特異性」係指結合僅一種抗原決定基之能力。
如本文所用之術語「鈕入孔」或「KnH」技術係指藉由在一個多肽與另一多肽相互作用之介面處將隆凸(鈕)引入一個多肽且凹穴(孔)引入另一多肽來在活體外或活體內指導兩個多肽配對在一起的技術。例如，KnH已引入抗體之Fc：Fc結合介面、CL：CH1介面或VH/VL介面(參見例如，US 2011/0287009、US2007/0178552、WO 96/027011、WO 98/050431及Zhu等人Protein Science 6：781-788,1997)。在一些實施例中，KnH在多特異性抗體之製造期間驅動兩個不同重鏈配對在一起。例如，在其Fc區中具有KnH之多特異性抗體可進一步包含連接至各Fc區之單一可變域，或進一步包含與相似或不同輕鏈可變域配對之不同重鏈可變域。KnH技術亦可用於將兩個不同受體細胞外域配對在一起或用於配對包含不同標靶識別序列之任何 其他多肽序列(例如，包括親和體、肽體及其他Fc融合體)。
如本文所用，術語「鈕突變」係指在多肽與另一個多肽相互作用之介面處將隆凸(鈕)引入該多肽之突變。在一些實施例中，該另一多肽具有孔突變(參見例如，美國專利第5,731,168號；第5,807,706號；第5,821,333號；第7,695,936號；及第8,216,805號，該等專利各自以全文引用的方式併入本文中)。
如本文所用，術語「孔突變」係指在多肽與另一個多肽相互作用之介面處將凹穴(孔)引入該多肽之突變。在一些實施例中，該另一多肽具有鈕突變(參見例如，美國專利第5,731,168號；第5,807,706號；第5,821,333號；第7,695,936號；及8,216,805號，該等專利各自以全文引用的方式併入本文中)。
「裸抗體」係指未結合於異源部分(例如細胞毒性部分)或放射性標記之抗體。裸抗體可存在於醫藥組合物中。
關於抗體與標靶分子之結合，術語「特異性結合」或「特異性地結合」或「對特定多肽或特定多肽標靶上之抗原決定基具有特異性」意謂明顯不同於非特異性相互作用之結合。特異性結合可例如藉由相較於對照分子之結合測定分子之結合來量測。舉例而言，特異性結合可藉由與類似於標靶(例如，過量未經標記之標靶)之對照分子之競爭來測定。在此情形下，若該經標記之標靶與探針之結合由過量未經標記之標靶競爭性地抑制，則指示特異性結合。如本文所用之術語「特異性結合」或「特異性地結合」或「對特定多肽或特定多肽標靶上之抗原決定基具有特異性」可例如由對該標靶具有10-4M或10-4M以下、或者10-5M或10-5M以下、或者10-6M或10-6M以下、或者10-7M或10-7M以下、或者10-8M或10-8M以下、或者10-9M或10-9M以下、或者10-10M或10-10M以下、或者10-11M或10-11M以下、或者10-12M或10-12M以下之KD，或10-4M至10-6M或10-6M至10-10M或10-7M至10-9M範圍內之KD的分子展現。如將由熟練技藝人士所瞭解，親和力及KD值為反向相關的。藉由低KD值量測對抗原之高親和力。在一個實施例中，術語「特異性結合」係指其中分子結合特定多肽或特定多肽上之抗原決定基而不實質上結合任何其他多肽或多肽抗 原決定基之結合。
術語「可變」係指可變域之某些區段之序列於抗體之間廣泛不同。可變或「V」域介導抗原結合且限定特定抗體對其特定抗原之特異性。然而，可變性在可變域之110個胺基酸跨度內並非均勻分佈。實情為，V區由具有15-30個胺基酸的稱為構架區(FR)之相對不變伸長區組成，該等伸長區係藉由各自為9-12個胺基酸長的稱為「高變區」之極具可變性的較短區分開。當在本文中使用時術語「高變區」或「HVR」係指抗體之負責抗原結合之胺基酸殘基。高變區一般包含來自例如VL中之約殘基24-34(L1)、50-56(L2)及89-97(L3)及VH中之約殘基26-35(H1)、49-65(H2)及95-102(H3)(在一個實施例中，H1為約殘基31-35)之胺基酸殘基；Kabat等人同上)及/或來自「高變環」之彼等殘基(例如，VL中之殘基26-32(L1)、50-52(L2)及91-96(L3)及VH中之殘基26-32(H1)、53-55(H2)及96-101(H3)；Chothia等人J.Mol.Biol.196：901-917,1987。天然重鏈及輕鏈之可變域各自包含四個FR，其主要採用由形成環連接之三個高變區連接之β-褶疊構型，且在一些情形下，形成β-褶疊結構之一部分。各鏈中之高變區由FR緊密鄰近保持在一起，且與來自另一鏈之高變區一起促進抗原結合位點之形成(參見Kabat等人，同上)。因此，HVR及FR序列一般按以下順序出現在VH(或VL)中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。恆定域不直接參與抗體與抗原之結合，但展現各種效應功能，諸如抗體參與抗體依賴性細胞毒性(ADCC)。
術語「如Kabat中之可變域殘基編號」或「如Kabat中之胺基酸位置編號」係指Kabat等人(同上)中用於編輯抗體之重鏈可變域或輕鏈可變域之編號系統。使用此編號系統，實際線性胺基酸序列可含有較少或額外胺基酸，該等胺基酸對應於可變域之FR或HVR之縮短或對其進行的插入。舉例而言，重鏈可變域可包括H2之殘基52之後的單一胺基酸插入(根據Kabat之殘基52a)及重鏈FR殘基82之後的插入殘基(例如根據Kabat之殘基82a、82b及82c等)。可藉由將抗體序列中具有同源性之區與「標準」Kabat編號序列比對來判定既定抗體中殘基之Kabat編號。
在提及可變域中之殘基(大致而言，輕鏈之殘基1-107及重鏈之殘基1-113)時一般使用Kabat編號系統(例如，Kabat等人，同上)。在 提及免疫球蛋白重鏈恆定區中之殘基時一般使用「EU編號系統」或「EU索引」(例如，Kabat等人(同上)中報導之EU索引)。「如Kabat中之EU索引」係指人類IgG1 EU抗體之殘基編號。除非在本文另外陳述，否則提及抗體可變域中之殘基編號意謂藉由Kabat編號系統進行殘基編號。除非本文另外陳述，否則提及抗體恆定域中之殘基編號意謂藉由EU編號系統進行殘基編號(例如，參見美國臨時申請案第60/640,323號，用於EU編號之圖)。
如本文中所使用，「投與」意謂給予受試者一定劑量之化合物(例如，本發明之抗IL-33抗體或編碼本發明之抗IL-33抗體的核酸)或組合物(例如，醫藥組合物，例如包含本發明之抗IL-33抗體的醫藥組合物)之方法。本文中所描述之方法中所利用的組合物可例如經玻璃體內、肌肉內、靜脈內、皮內、經皮膚、動脈內、腹膜內、病灶內、顱骨內、關節內、前列腺內、胸膜內、氣管內、鞘內、鼻內、陰道內、直腸內、經局部、腫瘤內、腹膜、皮下、結膜下、囊泡內、黏膜、心囊內、臍索內、眼內、眶內、經口、經局部、經皮、眼周、經結膜、眼筋膜囊內、前房內、視網膜下、眼球後、小管內、藉由吸入、藉由注射、藉由植入、藉由輸注、藉由連續輸注、藉由直接局部灌注洗浴靶細胞、藉由導管、藉由灌洗、於乳膏中或於脂質組合物中投與。本文中所描述之方法中所利用的組合物亦可全身性或局部投與。投與方法可視各種因素(例如所投與之化合物或組合物及所治療之病狀、疾病或病症之嚴重程度)而變化。
術語「氣喘」在本文中係指以可變及復發症狀、可逆氣流阻塞(例如，藉由支氣管擴張劑)及支氣管高反應性為特徵之病症，其可能或可能不與潛伏發炎相關。氣喘因此可為發炎性/發炎氣喘或非發炎性/非發炎氣喘。氣喘之實例包括過敏性氣喘、運動誘發之氣喘、阿司匹林敏感性/加劇性氣喘、異位性氣喘、重度氣喘、輕度氣喘、中度至重度氣喘、皮質類固醇天真氣喘、慢性氣喘、皮質類固醇耐藥型氣喘、皮質類固醇難治性氣喘、新近診斷且未經治療之氣喘、由於吸煙所致之氣喘、服用皮質類固醇不受控制氣喘之氣喘，以及如Bousquet等人J.Allergy Clin.Immunol.126(5)：926-938,2010中所提及之其他氣喘。
「病症」或「疾病」為將受益於用抗體治療之任何病狀。例 如，病症可為IL-33介導之病症。此包括慢性及急性病症或疾病，包括使哺乳動物易患所討論病症之彼等病理學病狀。本文中欲治療之病症的實例包括IL-33介導之病症(例如，氣喘、過敏性鼻炎、異位性皮炎及纖維化(例如，肺纖維化，例如特發性肺纖維化))。
「化學治療劑」為適用於治療癌症之化合物。化學治療劑之實例包括烷基化劑，諸如噻替派(thiotepa)及環磷醯胺(CYTOXAN®)；烷基磺酸鹽，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)及保釋芬(piposulfan)；氮丙啶，諸如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替哌(meturedopa)及烏瑞替哌(uredopa)；伸乙基亞胺及甲基三聚氰胺，包括六甲密胺(altretamine)、三伸乙基密胺、三伸乙基磷醯胺、三伸乙基硫代磷醯胺及三羥甲基三聚氰胺；多聚乙醯(尤其布拉它辛(bullatacin)及布拉它辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氫大麻酚(屈大麻酚(dronabinol)，MARINOL®)；β-拉帕醌；拉帕醇；秋水仙鹼；樺木酸；喜樹鹼(包括合成類似物拓朴替康(topotecan)(HYCAMTIN®)、CPT-11(伊立替康(irinotecan)，CAMPTOSAR®)、乙醯基喜樹鹼、東莨菪素(scopolectin)及9-胺基喜樹鹼)；苔蘚抑素(bryostatin)；卡利他汀(callystatin)；CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡摺來新(carzelesin)及比折來新(bizelesin)合成類似物)；足葉草毒素(podophyllotoxin)；足葉草酸(podophyllinic acid)；替尼泊苷(teniposide)；念珠藻素(cryptophycin)(尤其念珠藻素1及念珠藻素8)；朵拉司他汀(dolastatin)；度卡黴素(duocarmycin)(包括合成類似物KW-2189及CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；水鬼蕉鹼(pancratistatin)；珊瑚素(sarcodictyin)；海綿素(spongistatin)；氮芥類，諸如苯丁酸氮芥、萘氮芥(chlomaphazine)、氯環磷醯胺(chlorophosphamide)、雌氮芥、異環磷醯胺(ifosfamide)、甲氮芥、氧化甲氮芥鹽酸鹽、苯丙胺酸氮芥、新恩比興(novembichin)、苯芥膽固醇(phenesterine)、潑尼氮芥(prednimustine)、曲洛磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥；亞硝基脲，諸如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)及雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，諸如烯二炔抗生素(例如卡奇黴素(calicheamicin)，尤其卡奇黴素γ1I及卡奇黴素ωI1)(參見例如Nicolaou等人Angew.Chem Intl. Ed.Engl.,33：183-186(1994))；CDP323、口服α-4整合素抑制劑；達內黴素(dynemicin)，包括達內黴素A；埃斯培拉黴素(esperamicin)；以及新制癌菌素發色團及相關色蛋白烯二炔抗生素發色團)、阿克拉黴素(aclacinomysins)、放線菌素(actinomycin)、安麯黴素(authramycin)、重氮絲胺酸(azaserine)、爭光黴素(bleomycins)、放線菌素C(cactinomycin)、卡柔比星(carabicin)、洋紅黴素(caminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色黴素(chromomycins)、放線菌素D(dactinomycin)、道諾黴素(daunorubicin)、阿黴素(detorubicin)、6-重氮-5-側氧基-L-正白胺酸、阿黴素(包括ADRIAMYCIN®、N-嗎啉基阿黴素、氰基(N-嗎啉基)阿黴素、2-吡咯啉基阿黴素、去氧阿黴素鹽酸脂質體注射液(DOXIL®)、脂質體阿黴素TLC D-99(MYOCET®)、聚乙二醇化脂質體阿黴素(CAELYX®)及去氧阿黴素)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素(mitomycins)(諸如絲裂黴素C)、黴酚酸(mycophenolic acid)、諾加黴素(nogalamycin)、橄欖黴素(olivomycins)、培洛黴素(peplomycin)、泊非黴素(porfiromycin)、嘌呤黴素(puromycin)、三鐵阿黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈脲黴素(streptozocin)、殺結核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物，諸如胺甲蝶呤、吉西他濱(gemcitabine)(GEMZAR®)、替加氟(tegafur)(UFTORAL®)、卡培他濱(capecitabine)(XELODA®)、埃博黴素及5-氟尿嘧啶(5-FU)；康普立停(combretastatin)；葉酸類似物，諸如二甲葉酸、胺甲蝶呤、蝶羅呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達拉濱(fludarabine)、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物，諸如環胞苷、阿紮胞苷、6-氮尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷、二去氧尿苷、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苷；雄激素，諸如卡魯睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、環硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內酯；抗腎上腺抗體，諸如胺魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；葉酸補充劑，諸如亞葉酸；醋葡內酯；醛磷醯胺糖苷；胺基乙醯丙酸；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；貝斯布希(bestrabucil)；比生群(bisantrene)； 依達曲沙(edatraxate)；地磷醯胺(defofamine)；脫羰秋水仙鹼(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依洛尼塞(elfomithine)；依利醋銨(elliptinium acetate)；埃博黴素(epothilone)；依託格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖；氯尼達明(lonidainine)；美登素類，諸如美坦生及安絲菌素(ansamitocins)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達醇(mopidanmol)；硝呋旦(nitraerine)；噴司他丁(pentostatin)；苯來美特(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基醯肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK®多糖複合物(JHS Natural Products,Eugene,Oreg.)；雷佐生(razoxane)；根瘤菌素(rhizoxin)；西索菲蘭(sizofuran)；鍺螺胺(spirogermanium)；細交鏈孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2'-三氯三乙胺；單端孢菌素(尤其T-2毒素、黏液黴素A(verracurin A)、漆斑菌素A(roridin A)及蛇形菌素(anguidine))；尿烷(urethan)；長春地辛(vindesine)(ELDISINE®、FILDESIN®)；達卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴衛矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托辛(gacytosine)；阿拉伯糖苷(「Ara-C」)；噻替派；紫杉烷，例如太平洋紫杉醇(TAXOL®，Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，N.J.)、紫杉醇之經白蛋白工程改造之奈米粒子調配物(ABRAXANETM)及多烯紫杉醇(docetaxel)(TAXOTERE®，Rhome-Poulene Rorer，Antony，France)；苯丁酸氮芥；6-硫代鳥嘌呤；巰基嘌呤；胺甲蝶昤；鉑劑，諸如順鉑(cisplatin)、奧沙利鉑(oxaliplatin)(例如ELOXATIN®)及卡鉑(carboplatin)；長春花，其防止微管蛋白聚合形成微管，包括長春花鹼(VELBAN®)、長春新鹼(ONCOVIN®)、去乙醯長春醯胺(ELDISINE®、FILDESIN®)及長春瑞濱(vinorelbine)(NAVELBINE®)；依託泊苷(etoposide)(VP-16)；異環磷醯胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；甲醯四氫葉酸；諾消靈(novantrone)；依達曲沙；道諾黴素；胺基蝶呤；伊班膦酸鹽(ibandronate)；拓撲異構酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥胺酸(DMFO)；類視黃素，諸如視黃酸，包括蓓薩羅丁(bexarotene)(TARGRETIN®)；二膦酸鹽，諸如氯膦酸鹽(例如BONEFOS®或OSTAC®)、依替膦酸鹽(etidronate)(DIDROCAL®)、NE-58095、唑來膦酸(zoledronic acid)/唑來膦酸鹽(zoledronate)(ZOMETA®)、阿侖膦酸鹽(alendronate)(FOSAMAX®)、帕 米膦酸鹽(pamidronate)(AREDIA®)、替魯膦酸鹽(tiludronate)(SKELID®)或利塞膦酸鹽(risedronate)(ACTONEL®)；曲沙他濱(1,3-二氧戊環核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，尤其在異常細胞增殖中所牽涉之信號傳導路徑中抑制基因表現之彼等反義寡核苷酸，諸如，例如PKC-α、Raf、H-Ras及表皮生長因子受體(EGF-R)(例如埃羅替尼(erlotinib)(TarcevaTM))；及減輕細胞增殖之VEGF-A；疫苗，諸如THERATOPE®疫苗及基因療法疫苗，例如ALLOVECTIN®疫苗、LEUVECTIN®疫苗及VAXID®疫苗；拓撲異構酶1抑制劑(例如LURTOTECAN®)；rmRH(例如ABARELIX®)；BAY439006(索拉非尼(sorafenib)；Bayer)；SU-11248(舒尼替尼(sunitinib)，SUTENT®，Pfizer)；哌立福辛(perifosine)、COX-2抑制劑(例如塞來昔布或依託考昔)、蛋白體抑制劑(例如PS341)；硼替佐米(bortezomib)(VELCADE®)；CCI-779；替吡法尼(tipifarnib)(R11577)；奧拉非尼、ABT510；Bcl-2抑制劑，諸如奧利默森鈉(oblimersen sodium)(GENASENSE®)；匹生群(pixantrone)；EGFR抑制劑；酪胺酸激酶抑制劑；絲胺酸-蘇胺酸激酶抑制劑，諸如雷帕黴素(西羅莫司，RAPAMUNE®)；法尼基轉移酶抑制劑，諸如洛那法尼(lonafarnib)(SCH 6636,SARASARTM)；及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物；以及上述中兩者或更多者之組合，諸如CHOP，即環磷醯胺、阿黴素、長春新鹼及氫化潑尼松之組合療法之縮寫；及FOLFOX，即奧沙利鉑(ELOXATINTM)與5-FU及甲醯四氫葉酸組合之治療方案之縮寫，及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物；以及上述中兩者或更多者之組合。
如本文中所定義之化學治療劑包括用於調控、減輕、阻斷或抑制會促進癌症生長之激素效應的「抗激素劑」或「內分泌治療劑」。其可為激素自身，包括但不限於：具有混合之促效劑/拮抗劑特性之抗雌激素，包括他莫西芬(NOLVADEX®)、4-羥基他莫西芬、托瑞米芬(FARESTON®)、艾多昔芬、屈洛昔芬、雷洛昔芬(EVISTA®)、曲沃昔芬、克沃昔芬(keoxifene)，及選擇性雌激素受體調節劑(SERM)諸如SERM3；無促效劑特性之純抗雌激素，諸如氟維司群(FASLODEX®)及EM800(此等藥劑可阻斷雌激素受體(ER)二聚化、抑制DNA結合、增加ER轉換及/或遏制ER水準)；芳香酶抑制劑，包括類固醇芳香酶抑制劑，諸如福美司坦及依西美坦(AROMASIN®)， 及非類固醇芳香酶抑制劑，諸如阿那曲唑(ARIMIDEX®)、來曲唑(FEMARA®)及胺魯米特，及其他芳香酶抑制劑，包括伏氯唑(RIVISOR®)、醋酸甲地孕酮(MEGASE®)、法倔唑及4(5)-咪唑；黃體化激素釋放激素促效劑，包括亮丙瑞林(LUPRON®及ELIGARD®)、歌舍瑞林、布舍瑞林及曲普瑞林(tripterelin)；性類固醇，包括孕酮，諸如醋酸甲地孕酮及醋酸甲羥孕酮，雌激素，諸如己烯雌酚及普雷馬林(premarin)，及雄激素/類視色素，諸如氟羥甲基睪酮、全反視黃酸及芬維A胺；奧那斯酮；抗黃體酮；雌激素受體下調劑(ERD)；抗雄激素，諸如氟他胺、尼魯米特及比卡魯胺；及上述任一者之醫藥學上可接受之鹽、酸或衍生物；以及上述兩者或更多者之組合。
如本文所用之術語「細胞毒性劑」係指抑制或阻止細胞功能及/或導致細胞死亡或破壞之物質。細胞毒性劑包括(但不限於)放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212及Lu之放射性同位素)；化學治療劑或藥物(例如甲胺蝶呤、阿德力黴素、長春花生物鹼(長春新鹼、長春花鹼、依託泊苷)、阿黴素、美法侖、絲裂黴素C、苯丁酸氮芥、道諾紅菌素或其他插入劑)；生長抑制劑；酶及其片段，諸如核分解酶；抗生素；毒素，諸如細菌、真菌、植物或動物來源之小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段及/或變異體；及本文揭示之各種抗腫瘤劑或抗癌劑。
藥劑(例如醫藥調配物)之「有效量」係指在必需劑量下且持續必需時期，有效達成所要治療或防治結果之量。
「生長抑制劑」當用於本文中時係指在活體外或活體內抑制細胞生長之化合物或組合物。因此，生長抑制劑可為顯著降低S期細胞之百分比的生長抑制劑。生長抑制劑之實例包括阻斷細胞週期進展(在除S期以外處)之藥劑，諸如誘導G1停滯及M期停滯的藥劑。經典M期阻斷劑包括長春花類(長春新鹼及長春花鹼)、紫杉烷類及拓撲異構酶II抑制劑，諸如阿黴素、表柔比星、道諾紅菌素、依託泊苷及爭光黴素。阻滯G1之彼等藥劑亦深入至S期停滯中，例如DNA烷基化劑，諸如他莫西芬、潑尼松、氮烯唑胺、甲氮芥、順鉑、胺甲蝶呤、5-氟尿嘧啶及ara-C。其他資訊可見於Mendelsohn等人編，The Molecular Basis of Cancer，第1章，Murakami等人， 標題為「Cell cycle regulation,oncogenes,and antineoplastic drugs」(W.B.Saunders,Philadelphia,1995)，例如第13頁。紫杉烷(太平洋紫杉醇及多烯紫杉醇)為均來源於紫杉樹之抗癌藥。來源於歐洲紫杉之多烯紫杉醇(TAXOTERE®，Rhone-Poulenc Rorer)為太平洋紫杉醇(TAXOL®，Bristol-Myers Squibb)之半合成類似物。太平洋紫杉醇及多烯紫杉醇促進由微管蛋白二聚物組裝微管且藉由防止解聚來穩定微管，由此抑制細胞中之有絲分裂。
如本文所用，術語「IL-33介導之病症」係指由IL-33軸介導之或與IL-33軸相關之任何病症或病狀。在一些實施例中，IL-33介導之病症與過量IL-33水準或活性相關，其中非典型症狀可由於體內局部及/或全身性IL-33之水準或活性而顯現。例示性IL-33介導之病症包括發炎性病狀、免疫病症、纖維變性病症、嗜伊紅白血球性病症、感染、疼痛、中樞神經系統病症、實體腫瘤及眼科病症。IL-33介導之病症描述於例如Liew等人Nature Reviews Immunology 10：103-110,2010中，其以全文引用的方式併入本文中。
例示性發炎性病狀包括氣喘(例如，過敏性氣喘、運動誘發之氣喘、阿司匹林敏感性/加劇性氣喘、異位性氣喘、重度氣喘、輕度氣喘、中度至重度氣喘、皮質類固醇天真氣喘、慢性氣喘、皮質類固醇耐藥型氣喘、皮質類固醇難治性氣喘、新近診斷且未經治療之氣喘、由於吸煙所致之氣喘、服用皮質類固醇不受控制氣喘之氣喘等)、氣道發炎、氣道高反應性(airway hyperreactivity)、氣道高反應性(airway hyperresponsiveness)、鼻竇炎、鼻竇炎伴鼻息肉、鼻息肉、關節炎(例如，骨關節炎、類風濕性關節炎、膠原蛋白誘發之關節炎、由於損傷所致關節炎性關節等)、嗜伊紅白血球性發炎、肥大細胞介導之發炎性疾病、敗血症、敗血性休克、血清反應陰性末端病及關節病(SEA)症候群、骨質疏鬆症、嗜伊紅白血球性食管炎、硬皮病、皮炎、異位性皮炎、過敏性鼻炎、大皰性類天皰瘡、慢性蕁麻疹、軟骨發炎、風濕性多肌痛、結節性多動脈炎、韋格納氏肉芽腫病、貝塞特氏病、肌炎(myolitis)、多發性肌炎(polymyolitis)、皮肌炎(dermatomyolitis)、皮肌炎(dermatomyositis)、血管炎、動脈炎、糖尿病性腎病、間質性膀胱炎、 移植物抗宿主病(GVHD)、胃腸發炎性病狀(例如，發炎性腸病(IBD)、潰瘍性結腸炎(UC)、克羅恩氏病(CD)、結腸炎(例如，由環境損害引起之結腸炎(例如，由治療方案引起或與治療方案相關之結腸炎，該治療方案諸如化學療法、放射療法等)、感染性結腸炎、缺血性結腸炎、膠原性或淋巴細胞性結腸炎、壞死性小腸結腸炎、諸如慢性肉芽腫病或乳糜瀉、食物過敏、胃炎、感染性胃炎或小腸結腸炎(例如，幽門螺桿菌感染之慢性活動性胃炎)病狀中之結腸炎及由傳染劑引起之其他形式之胃腸發炎)、發炎性肺部病狀(例如，慢性阻塞性肺病(COPD)、嗜酸性肺部發炎、感染誘發之肺部病狀(包括與病毒(例如，流行性感冒、副流感、輪狀病毒、人類間質肺炎病毒及呼吸道融合性病毒)、細菌、真菌(例如，麴菌屬)、寄生蟲或朊病毒感染相關之彼等感染誘發之肺部病狀)、過敏原誘發之肺部病狀、污染物誘發之肺部病狀(例如，石棉沈著病、矽肺病或鈹中毒)、胃吸入誘發之肺部病狀、免疫調控異常、具有遺傳傾向性之發炎性病狀諸如囊性纖維化、身體創傷誘發之肺部病狀(例如，呼吸機損傷)、肺氣腫、支氣管炎、類肉瘤病、組織細胞增多症、淋巴管肌瘤病、急性肺損傷、急性呼吸窘迫症候群、慢性肺病、支氣管肺發育異常、肺炎(例如，社區獲得性肺炎、醫院獲得性肺炎、呼吸機相關肺炎、病毒性肺炎、細菌性肺炎及重度肺炎)、氣道惡化及急性呼吸窘迫症候群(ARDS))。
例示性免疫病症包括至少部分藉由肥大細胞介導之彼等免疫病症，諸如氣喘(例如，過敏性氣喘)、濕疹、瘙癢、過敏、異位性過敏、過敏性、過敏性休克、過敏性支氣管肺麴菌病、過敏性鼻炎、過敏性結膜炎；以及自體免疫性病症，包括類風濕性關節炎、青少年類風濕性關節炎、牛皮癬關節炎、胰腺炎、牛皮癬、斑塊狀牛皮癬、滴狀牛皮癬、皮褶牛皮癬、膿皰性牛皮癬、紅皮性牛皮癬、副腫瘤性自體免疫性疾病、自體免疫性肝炎、大皰性類天皰瘡、重症肌無力、發炎性腸病、克羅恩氏病、潰瘍性結腸炎、乳糜瀉、甲狀腺炎(例如，格雷福斯病)、修格連氏症候群、格林-巴厘疾病、雷諾氏現象、阿狄森氏病、肝臟疾病(例如，原發性膽汁性肝硬化、原發性硬化性膽管炎、非酒精性脂肪肝病及非酒精性脂肪性肝炎)及糖尿病(例如，I型糖尿病)。
如本文所用，術語「纖維變性病症」或「纖維化」係指涉及在器官或組織中形成過量纖維結締組織之病狀。例示性纖維變性病症包括肺纖維化、肝纖維化(例如，與肝硬化(例如，酒精誘發之肝硬化、病毒誘發之肝硬化、丙型肝炎後肝硬化及原發性膽汁性肝硬化)、血吸蟲病、膽管炎(例如，硬化性膽管炎)及自體免疫誘發之肝炎相關之纖維化)、腎纖維化(例如，腎小管間質纖維化、硬皮病、糖尿病性腎炎及腎小球性腎炎)、皮膚纖維化(例如，硬皮病，肥大性及瘢痕疙瘩性瘢痕、腎源性纖維化皮膚病及燒傷)、骨髓纖維化、神經纖維瘤病、纖維瘤、腸纖維化及由外科手術程序產生之纖維化黏連)、心臟纖維化(例如，與心肌梗塞相關之纖維化)、血管纖維化(例如，與血管成形術後動脈再狹窄及動脈粥樣硬化相關之纖維化)、眼睛纖維化(例如，與白內障術後、增生性玻璃體視網膜病變及眶後纖維化相關之纖維化)及骨髓纖維化(例如，特發性骨髓纖維化及藥物誘發之骨髓纖維化)。纖維化可為器官特異性或全身性(例如，全身性硬化症及與GVHD相關之纖維化)。
肺纖維化之實例包括，例如，與特發性肺纖維化、伴隨膠原蛋白血管病之纖維化、赫曼斯基-普德拉克(Hermansky-Pudlak)症候群、成人呼吸窘迫症候群、非特異性間質性肺炎、呼吸性細支氣管炎、類肉瘤病、組織細胞增多症X、閉塞性細支氣管炎及隱原性機化性肺炎相關之肺部或肺纖維化。在一個實施例中，肺纖維化為特發性肺纖維化。
如本文所用，「嗜伊紅白血球性病症」為與過量嗜伊紅白血球數目相關之病症，其中非典型症狀可由於體內局部或全身性嗜伊紅白血球之水準或活性而顯現。嗜伊紅白血球性病症包括但不限於，氣喘(包括阿司匹林敏感性氣喘、異位性氣喘及重度氣喘)、嗜伊紅白血球性發炎、異位性皮炎、過敏性鼻炎(包括季節性過敏性鼻炎)、非過敏性鼻炎、慢性嗜伊紅白血球性肺炎、過敏性支氣管肺麴菌病、乳糜瀉、車格-施特勞斯症候群(Churg-Strauss syndrome)(結節性動脈周圍炎加特異反應性)、嗜伊紅白血球性肌痛症候群、嗜伊紅白血球增多症候群、水腫性反應(包括陣發性血管性水腫)、蠕蟲感染(其中嗜伊紅白血球可具有保護作用)、盤尾絲蟲性皮炎(onchocercal dermatitis)、嗜伊紅白血球相關之胃腸病症(EGID)(包括但不限 於嗜伊紅白血球性食管炎、嗜伊紅白血球性胃炎、嗜伊紅白血球性胃腸炎、嗜伊紅白血球性腸炎及嗜伊紅白血球性結腸炎)、鼻胃息肉病及息肉病、阿司匹林耐受不良及阻塞性睡眠呼吸暫停。嗜伊紅白血球源性之分泌產物亦與腫瘤中血管生成及結締組織形成之促進及見於諸如慢性氣喘、克羅恩氏病、硬皮病及心內膜心肌纖維化之病狀中的纖維變性應答相關(Munitz等人Allergy 59：268-275,2004；Adamko等人Allergy 60：13-22,2005；Oldhoff等人Allergy 60：693-696,2005)。其他實例包括癌症(例如，膠質母細胞瘤(如多形性膠質母細胞瘤)及非霍奇金氏淋巴瘤(NHL))、異位性皮炎、過敏性鼻炎、發炎性腸病、纖維化(例如，肺纖維化(例如，特發性肺纖維化(IPF)及繼發於硬化症之肺纖維化)及肝纖維化)及COPD。
感染之實例包括蠕蟲感染(例如，線蟲感染，諸如小鼠鼠鞭蟲感染，其是用於人類寄生蟲毛首鞭形線蟲感染之模型)、原生動物感染(例如，碩大利什曼原蟲感染)及病毒感染(例如，呼吸道融合性病毒感染及流行性感冒病毒感染)。
疼痛之實例包括發炎性疼痛、痛覺過敏(例如，機械性痛覺過敏)、異常性疼痛及超傷害感受(例如，皮膚及關節超傷害感受，其可能或可能不為抗原誘導的)。
中樞神經系統病症之實例包括蛛網膜下出血、中樞神經系統發炎性疾病、神經退化性疾病(例如，阿茲海默氏病、實驗性自體免疫性腦脊髓炎、多發性硬化、帕金森氏病、亨廷頓氏病)、雙極性病症及中樞神經系統感染(例如，病毒感染)。
實體腫瘤之實例包括結腸、乳腺、前列腺、肺、腎、肝、胰腺、卵巢、頭及頸、口腔、胃、十二指腸、小腸、大腸、胃腸道、肛門、膽囊、陰唇、鼻咽、皮膚、子宮、男性生殖器、泌尿器官、膀胱及皮膚之腫瘤。非上皮起源之實體腫瘤包括肉瘤、腦腫瘤及骨腫瘤。
眼科病症之實例包括年齡相關性黃斑變性(AMD)(包括濕性AMD、乾性AMD、中期AMD、晚期AMD及地圖狀萎縮(GA))、視網膜病變(例如，糖尿病性視網膜病變(DR)、早產兒視網膜病變(ROP)及高原DR)、息肉樣脈絡膜血管病變(PCV)、糖尿病性黃斑水腫、乾眼病、貝塞特 氏病、視網膜脫離、青光眼、葡萄膜炎(例如，感染性及非感染性葡萄膜炎)、色素性視網膜炎、萊伯氏先天性黑朦(Leber Congenital Amaurosis)(亦稱為萊伯氏先天性黑朦(Leber’s congenital amaurosis))、斯塔加特氏病、創傷性眼損傷及結膜炎(例如，感染性結膜炎、非感染性結膜炎及過敏性結膜炎)。
在一些實施例中，眼科病症包括AMD(包括濕性AMD、乾性AMD及GA)、視網膜病變(例如，DR及ROP)、PCV、糖尿病性黃斑水腫、乾眼病、貝塞特氏病、過敏性結膜炎及視網膜脫離。
應瞭解在其他實施例中，眼科病症包括中期AMD、晚期AMD、青光眼、葡萄膜炎(例如，感染性及非感染性葡萄膜炎)、色素性視網膜炎、萊伯氏先天性黑朦(Leber Congenital Amaurosis)(亦稱為萊伯氏先天性黑朦(Leber’s congenital amaurosis))、斯塔加特氏病、高原糖尿病性視網膜病變、創傷性眼損傷及結膜炎(例如，感染性結膜炎及非感染性結膜炎)。
上述清單並非詳盡的，且熟練技藝人士將瞭解疾病或病症可屬於各種類別。例如，氣喘可在一些情形下分類為發炎性病症及免疫病症且由一些臨床醫師認為係自體免疫性病症。
「IL-33軸結合拮抗劑」係指抑制IL-33軸結合搭配物與一或多種其結合搭配物之相互作用的分子。如本文所用，IL-33軸結合拮抗劑包括IL-33結合拮抗劑、ST2結合拮抗劑及IL1RAcP結合拮抗劑。例示性IL-33軸結合拮抗劑包括抗IL-33抗體及其抗原結合片段(例如，描述於歐洲專利EP1725261及/或WO 2014/164959中之抗IL-33抗體，該等專利各自以全文引用之方式併入本文中)；結合IL-33及/或其受體(ST2及/或IL-1RAcP)且阻斷配體受體相互作用之多肽(例如，ST2-Fc蛋白，諸如描述於WO 2014/152195中之彼等ST2-Fc蛋白，該專利各自以全文引用之方式併入本文中；免疫黏附素、肽體及可溶性ST2或其衍生物)；抗IL-33受體抗體(例如，抗ST2抗體，例如，描述於WO 2013/173761及WO 2013/165894中之抗ST2抗體，或ST2-Fc蛋白，諸如描述於WO 2013/173761；WO 2013/165894；或WO 2014/152195中之彼等ST2-Fc蛋白，該等專利各自以全文引用之方式併入本文中)；及IL-33受體拮抗劑，諸如小分子抑制劑、結合IL-33之適體及在嚴格條件下與IL-33軸核酸序列雜交之核酸(例如，短干擾RNA (siRNA)或成簇規律間隔的短迴文重複序列RNA(CRISPR-RNA或crRNA)，包括具有crRNA及tracrRNA序列之單引導RNA(sgRNA)，如描述於Mali等人(Science.339：823-26,2013)中，該文獻以全文引用之方式併入本文中)。
除非另外指示，否則如本文所用，「在Th2細胞上表現之化學引誘劑受體同源分子(CRTH2)」係指來自任何脊椎動物來源之任何天然CRTH2，該脊椎動物來源包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類)及齧齒動物(例如小鼠及大鼠)。CRTH2亦稱為G蛋白偶合受體44(GPR44)、分化叢集294(CD294)、DL1R及DP2。該術語涵蓋「全長」未加工CRTH2以及CRTH2之由在細胞中加工所產生之任何形式。例示性人類CRTH2之胺基酸序列可例如以UniProtKB寄存編號Q9Y5Y4找到。
術語「CRTH2結合拮抗劑」係指減少、阻斷、抑制、阻止或干擾由CRTH2與一或多個其結合搭配物(諸如前列腺素D2)之相互作用引起之信號轉導的分子。此項技術中已知之例示性CRTH2結合拮抗劑包括AMG-853、AP768、AP-761、MLN6095及ACT129968。
除非另外指示，否則如本文所用之術語「介白素-5(IL-5)」係指來自任何脊椎動物來源之任何天然IL-5，該脊椎動物來源包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類)及齧齒動物(例如小鼠及大鼠)。該術語涵蓋「全長」未加工IL-5以及IL-5之由在細胞中加工所產生之任何形式。該術語亦涵蓋IL-5之天然存在之變異體，諸如剪接變異體或對偶基因變異體。例示性IL-5之胺基酸序列可例如以UniProtKB寄存編號P05113找到。
術語「IL-5結合拮抗劑」係指減少、阻斷、抑制、阻止或干擾由IL-5與一或多個其結合搭配物(諸如IL-5受體α(IL5RA))之相互作用引起之信號轉導的分子。可用於本發明方法中之例示性IL-5結合拮抗劑包括，例如，抗IL-5抗體(例如，美泊利單抗及瑞利珠單抗)及抗IL-5R抗體。
除非另外指示，否則如本文所用，術語「介白素-13(IL-13)」係指來自任何脊椎動物來源之任何天然IL-13，該脊椎動物來源包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類)及齧齒動物(例如小鼠及大鼠)。IL-13為由許多細胞類型(包括T輔助2型(Th2)細胞)分泌之細胞因子。該術語涵蓋「全 長」未加工IL-13以及IL-13之由在細胞中加工所產生之任何形式。例示性人類IL-13之胺基酸序列可例如以UniProtKB寄存編號P35225找到。
術語「IL-13結合拮抗劑」係指減少、阻斷、抑制、阻止或干擾由IL-13與一或多個其結合搭配物(諸如IL-4受體α(IL4Rα)、IL-13受體α1(IL13RA1)及IL-13受體α2(IL13RA2))之相互作用引起之信號轉導的分子。IL-13結合拮抗劑包括抗IL-13抗體，例如來金珠單抗、228B/C-1、228A-4、227-26及227-43(參見例如，美國專利第7,674,459號；第8,067,199號；第8,088,618號；第8,318,160號；及第8,734,797號)。
除非另外指示，否則如本文所用，術語「介白素-17(IL-17)」係指來自任何脊椎動物來源之任何天然IL-17，該脊椎動物來源包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類)及齧齒動物(例如小鼠及大鼠)，且包括家族成員IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E及IL-17F。該術語涵蓋「全長」未加工IL-17以及IL-17之由在細胞中加工所產生之任何形式。例示性人類IL-17A之胺基酸序列可例如以UniProtKB寄存編號Q16552找到。例示性人類IL-17B之胺基酸序列可例如以UniProtKB寄存編號Q9UHF5找到。例示性人類IL-17C之胺基酸序列可例如以UniProtKB寄存編號Q9P0M4找到。例示性人類IL-17D之胺基酸序列可例如以UniProtKB寄存編號Q8TAD2找到。例示性人類IL-17E之胺基酸序列可例如以UniProtKB寄存編號Q9H293找到。例示性人類IL-17F之胺基酸序列可例如以UniProtKB寄存編號Q96PD4找到。
術語「IL-17結合拮抗劑」係指減少、阻斷、抑制、阻止或干擾由IL-17與一或多個其結合搭配物(諸如介白素-17受體(IL-17R)家族成員蛋白質介白素17受體A(IL17RA)、介白素17受體B(IL17RB)、介白素17受體C(IL17RC)、介白素17受體D(IL17RD)、介白素17受體E(IL17RE)及介白素17受體E樣(IL17REL)之相互作用引起之信號轉導的分子。例示性IL-17結合拮抗劑包括例如抗IL-17抗體(例如，伊克塞珠單抗(ixekizumab)(LY2439821)及抗IL-17R抗體(例如，巴羅達魯單抗(brodalumab)(AMG-827))。
除非另外指示，否則如本文所用之術語「詹納斯激酶(Janus kinase)1(JAK1)」係指來自任何脊椎動物來源之任何天然JAK1，該脊椎動物來源包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類)及齧齒動物(例如小鼠及大鼠)。該術語涵蓋「全長」未加工JAK1以及JAK1之由在細胞中加工所產生之任何形式。該術語亦涵蓋JAK1之天然存在之變異體，例如剪接變異體或對偶基因變異體。例示性JAK1之胺基酸序列可例如以UniProtKB寄存編號P23458找到。
如本文所用之術語「JAK1拮抗劑」係指抑制或降低JAK1之生物活性之化合物或藥劑。例示性JAK1拮抗劑包括小分子抑制劑(例如，盧梭利替尼(ruxolitinib)、GLPG0634及GSK2586184)。
術語「ST2結合拮抗劑」係指抑制ST2與IL-33、IL1RAcP及/或第二ST2分子之相互作用之分子。ST2結合拮抗劑可為蛋白質，諸如包含IL-33結合域(例如，ST2或IL1RAcP蛋白之全部或一部分)及多聚化域(例如，免疫球蛋白之Fc部分，例如，選自同型lgG1、lgG2、lgG3及lgG4以及各同型組內之任何同種異型之IgG的Fc域)之「ST2-Fc蛋白」，該IL-33結合域及多聚化域直接或經由接頭(例如，絲胺酸-甘胺酸(SG)接頭、甘胺酸-甘胺酸(GG)接頭或其變異體(例如，SGG、GGS、SGS或GSG接頭))彼此連接；且包括但不限於描述於WO 2013/173761、WO 2013/165894及WO 2014/152195中之ST2-Fc蛋白及其變異體，該等專利各自以全文引用之方式併入本文中。在一些實例中，ST2結合拮抗劑可為抗ST2抗體，例如描述於WO 2013/173761及WO 2013/165894中之抗ST2抗體。
除非另外指示，否則如本文所用，「類胰蛋白酶-β」係指來自任何脊椎動物來源之任何天然類胰蛋白酶-β，該脊椎動物來源包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類)及齧齒動物(例如小鼠及大鼠)。如本文所用，該術語涵蓋類胰蛋白酶β-1(由TPSAB1基因編碼，該基因亦編碼類胰蛋白酶α-1)及類胰蛋白酶β-2(由TPSB2基因編碼)。該術語涵蓋「全長」未加工類胰蛋白酶-β以及類胰蛋白酶-β之由在細胞中加工所產生之任何形式。例示性人類類胰蛋白酶β-2之胺基酸序列可例如以P20231寄存編號O95760找到。
如本文所用之術語「類胰蛋白酶-β拮抗劑」係指抑制或降 低類胰蛋白酶-β之生物活性之化合物或藥劑。
除非另外指示，否則如本文所用，「因子D」係指來自任何脊椎動物來源之任何天然因子D，該脊椎動物來源包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類)及齧齒動物(例如小鼠及大鼠)。因子D亦稱為C3前活化因子轉化酶、備解素因子D酯酶、因子D(補體)、補體因子D、CFD及降脂素(adipsin)。該術語涵蓋「全長」未加工因子D以及因子D之由在細胞中加工所產生之任何形式。例示性人類因子D之胺基酸序列可例如以UniProtKB寄存編號P00746找到。
如本文所用之術語「因子D結合拮抗劑」係指抑制或降低因子D之生物活性之化合物或藥劑。例示性因子D結合拮抗劑包括，例如，小分子抑制劑及抗因子D抗體，例如，描述於WO 2007/056227、WO 01/70818及/或US 2002/0081293中之任何抗因子D抗體，該等專利各自以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，抗因子D抗體為或源自單株抗體166-32，其藉由由ATCC寄存且指定HB 12476之融合瘤產生。
除非另外指示，否則如本文所用之術語「高溫需要A絲胺酸肽酶1」或「HtrA1」係指來自任何脊椎動物來源之任何天然HtrA1，該脊椎動物來源包括哺乳動物，諸如靈長類動物(例如人類)及齧齒動物(例如小鼠及大鼠)。HtrA1在此項技術中亦已知為HtrA絲胺酸肽酶1、L56及絲胺酸蛋白酶11。該術語涵蓋「全長」未加工HtrA1以及HtrA1之由在細胞中加工所產生之任何形式。該術語亦涵蓋HtrA1之天然存在之變異體，例如剪接變異體或對偶基因變異體。例示性人類HtrA1之胺基酸序列可例如以UniProtKB寄存編號Q92743找到。
如本文所用之術語「HtrA1結合拮抗劑」係指抑制或降低HtrA1之生物活性之化合物或藥劑。例示性HtrA1結合拮抗劑包括，例如，小分子抑制劑及抗HtrA1抗體，例如，描述於WO 2013/055998中之任何抗HtrA1抗體，該專利以全文引用之方式併入本文中。
術語「血管內皮生長因子」或「VEGF」係指血管內皮生長因子蛋白A，如由Swiss Prot寄存編號P15692例示。術語「VEGF」涵蓋具有由Swiss Prot寄存編號P15692例示之胺基酸序列之蛋白質以及其同源物 及同功異型物。術語「VEGF」亦涵蓋已知之同功異型物，例如，VEGF之剪接同功異型物(例如VEGF111、VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF189及VEGF206)，連同其天然存在之對偶基因形式及加工形式，包括藉由VEGF165之纖維蛋白溶酶裂解產生之110個胺基酸的人類血管內皮生長因子，如描述於Ferrara Mol.Biol.Cell.21：687(2010)；Leung等人Science,246：1306(1989)及Houck等人，Mol.Endocrin.,5：1806(1991)中。術語「VEGF」亦指來自非人類物種諸如小鼠、大鼠或靈長類動物之VEGF。有時來自特定物種之VEGF由術語諸如hVEGF(對於人類VEGF)、mVEGF(對於鼠類VEGF)等指示。術語「VEGF」亦用於指包含165個胺基酸之人類血管內皮生長因子之胺基酸8至109或1至109的多肽的截短形式。提及VEGF之任何此類形式可在本申請案中例如由「VEGF109」、「VEGF(8-109)」、「VEGF(1-109)」或「VEGF165」鑑別。「截短」天然VEGF之胺基酸位置係如天然VEGF序列中所指示進行編號。例如，截短天然VEGF中之胺基酸位置17(甲硫胺酸)亦為天然VEGF中之位置17(甲硫胺酸)。截短天然VEGF對KDR及Flt-1受體具有可與VEGF相當之結合親和力。如本文所用之術語「VEGF變異體」係指VEGF多肽，其在天然VEGF序列中包含一或多個胺基酸突變。視情況，該一或多個胺基酸突變包括胺基酸取代。出於本文所述VEGF變異體之簡寫名稱之目的，應注意數字係指沿推定天然VEGF之胺基酸序列的胺基酸殘基(在Leung等人，同上及Houck等人，同上中提供)。除非另外規定，否則如本文所用之術語「VEGF」指示VEGF-A。
如本文所用之術語「VEGF拮抗劑」係指能夠結合VEGF、降低VEGF表現水準或中和、阻斷、抑制、阻止、降低或干擾VEGF生物活性之分子，該等VEGF生物活性包括但並不限於，VEGF結合一或多種VEGF受體、VEGF信號傳導及VEGF介導之血管生成及內皮細胞存活或增殖。例如，能夠中和、阻斷、抑制、阻止、降低或干擾VEGF生物活性之分子能夠藉由結合一或多種VEGF受體(VEGFR)(例如，VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、膜結合VEGF受體(mbVEGFR)或可溶性VEGF受體(sVEGFR))來發揮其作用。包括為適用於本發明方法中之VEGF拮抗劑為特異性結合VEGF之多肽、抗VEGF抗體及其抗原結合片段、特異性結合VEGF從而 隔絕其與一或多種受體之結合之受體分子及衍生物、融合蛋白(例如，VEGF-Trap(Regeneron))及VEGF121-白樹毒素(Peregrine)。VEGF拮抗劑亦包括VEGF多肽之拮抗劑變異體，與編碼VEGF多肽之核酸分子之至少一個片段互補的反義核苷鹼基寡聚物；與編碼VEGF多肽之核酸分子之至少一個片段互補的小RNA；靶向VEGF之核糖酶；針對VEGF之肽體；及VEGF適體。VEGF拮抗劑亦包括結合VEGFR之多肽，抗VEGFR抗體及其抗原結合片段，及結合VEGFR從而阻斷、抑制、阻止、降低或干擾VEGF生物活性(例如，VEGF信號傳導)之衍生物，或融合蛋白。VEGF拮抗劑亦包括結合VEGF或VEGFR且能夠阻斷、抑制、阻止、降低或干擾VEGF生物活性之非肽小分子。因此，術語「VEGF活性」具體地包括VEGF之VEGF介導之生物活性。在某些實施例中，VEGF拮抗劑將VEGF之表現水準或生物活性降低或抑制至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或90%以上。在一些實施例中，VEGF特異性拮抗劑抑制之VEGF為VEGF(8-109)、VEGF(1-109)或VEGF165。
如本文所用，VEGF拮抗劑可包括但不限於，抗VEGFR2抗體及相關分子(例如，雷莫蘆單抗(ramucirumab)、tanibirumab、阿柏西普)；抗VEGFR1抗體及相關分子(例如，伊克蘆庫單抗(icrucumab)、阿柏西普(VEGF Trap-Eye；EYLEA®)及ziv-阿柏西普(VEGF Trap；ZALTRAP®))；雙特異性VEGF抗體(例如，MP-0250、vanucizumab(VEGF-ANG2)及揭示於US 2001/0236388中之雙特異性抗體)；包括抗VEGF、抗VEGFR1及抗VEGFR2臂中兩者之組合之雙特異性抗體；抗VEGF抗體(例如，貝伐單抗、賽伐珠單抗(sevacizumab)及雷珠單抗)；及非肽小分子VEGF拮抗劑(例如，帕唑帕尼、阿西替尼、凡德他尼、癌瑞格(stivarga)、卡博替尼、樂伐替尼(lenvatinib)、尼達尼布(nintedanib)、orantinib、替拉替尼(telatinib)、多韋替尼(dovitinig)、西地尼布、莫特塞尼(motesanib)、索凡替尼(sulfatinib)、阿法替尼(apatinib)、氟瑞替尼(foretinib)、法米替尼(famitinib)及替肟紮尼(tivozanib))。
術語「抗VEGF抗體」、「結合VEGF之抗體」及「特異性結合VEGF之抗體」係指能夠以足夠親和力結合VEGF，以使得該抗體適 用作靶向VEGF之診斷劑及/或治療劑的抗體。在一個實施例中，抗VEGF抗體與無關非VEGF蛋白之結合程度小於該抗體與VEGF之結合之約10%，如例如藉由放射免疫分析(RIA)所量測。在某些實施例中，結合VEGF之抗體之解離常數(Kd)為1μM、100nM、10nM、1nM、0.1nM、0.01nM或0.001nM(例如，10-8M或10-8M以下，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)。在某些實施例中，抗VEGF抗體結合VEGF中在來自不同物種之VEGF中保守的抗原決定基。
在某些實施例中，抗VEGF抗體可用作靶向且干擾其中涉及VEGF活性之疾病或病狀之治療劑。此外，可使該抗體經受其他生物活性分析，例如以便評估其作為治療劑之有效性。此類分析為此項技術中已知的且視標靶抗原及該抗體之預期用途而定。實例包括HUVEC抑制分析；腫瘤細胞生長抑制分析(如例如描述於WO 89/06692中)；抗體依賴性細胞毒性(ADCC)及補體介導之細胞毒性(CDC)分析(美國第5,500,362號)；及促效活性或造血作用分析(參見WO 95/27062)。抗VEGF抗體通常將不會結合其他VEGF同源物，諸如VEGF-B或VEGF-C，亦不會結合其他生長因子，諸如PlGF、PDGF或bFGF。在一個實施例中，抗VEGF抗體為與由融合瘤ATCC HB 10709產生之單株抗VEGF抗體A4.6.1結合相同抗原決定基之單株抗體。在另一個實例中，抗VEGF抗體為根據Presta等人(1997)Cancer Res.57：4593-4599產生之重組人類化抗VEGF單株抗體，包括但不限於已知為貝伐單抗(BV；AVASTIN®)之抗體。
亦已知為「rhuMAb VEGF」或「AVASTIN®」之抗VEGF抗體「貝伐單抗(BV)」為根據Presta等人(1997)Cancer Res.57：4593-4599產生之重組人類化抗VEGF單株抗體。其包含來自阻斷人類VEGF與其受體之結合之鼠類抗hVEGF單株抗體A.4.6.1的突變IgG1構架區及抗原結合互補決定區。貝伐單抗之大約93%的胺基酸序列(包括大部分構架區)係來源於人類IgG1，且約7%之序列係來源於鼠類抗體A4.6.1。貝伐單抗具有約149,000道爾頓之分子質量且經糖基化。貝伐單抗及其他人類化抗VEGF抗體進一步描述於2005年2月26日頒予之美國專利第6,884,879號中，該專利之全部揭示內容以引用的方式明確併入本文中。額外較佳抗體包括G6或 B20系列抗體(例如，G6-31、B20-4.1)，如描述於PCT申請公開案第WO 2005/012359及WO 2005/044853號中，其各自以全文引用之方式併入本文中。關於額外較佳抗體參見美國專利第7,060,269號、第6,582,959號、第6,703,020號、第6,054,297號；WO98/45332；WO 96/30046；WO94/10202；EP 0666868B1；美國專利申請公開案第2006009360號、第20050186208號、第20030206899號、第20030190317號、第20030203409號及第20050112126號；及Popkov等人，Journal of Immunological Methods 288：149-164(2004)。其他較佳抗體包括結合人類VEGF上包含殘基F17、M18、D19、Y21、Y25、Q89、191、K101、E103及C104或可替代地包含殘基F17、Y21、Q22、Y25、D63、183及Q89之功能性抗原決定基之彼等抗體。額外抗VEGF抗體包括描述於PCT申請公開案第WO 2009/155724號中之抗VEGF抗體。
亦稱為「LUCENTIS®」或「rhuFab V2」之抗VEGF抗體「雷珠單抗」為人類化、親和力成熟之抗人類VEGF Fab片段。雷珠單抗係藉由標準重組技術方法在大腸桿菌表現載體及細菌發酵中產生。雷珠單抗未經糖基化且具有約48,000道爾頓之分子質量。參見WO 98/45331及US 2003/0190317。
「經分離核酸」係指已與其自然環境之組分分離的核酸分子。經分離核酸包括通常含有核酸分子、但該核酸分子係存在於染色體外或存在於不同於其天然染色體位置之染色體位置處的細胞中含有之核酸分子。
術語「控制序列」係指用於在特定宿主生物體中表現可操作連接之編碼序列所需之DNA序列。適於原核生物之控制序列例如包括啟動子，視情況包括操縱子序列，及核糖體結合位點。已知真核細胞利用啟動子、聚腺苷酸化信號及強化子。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養物」可互換使用且係指已引入外源核酸之細胞，包括此等細胞之子代。宿主細胞包括「轉型體」及「轉化細胞」，其包括初代轉化細胞及源於其之子代而不考慮繼代數目。子代在核酸內含物方面可能與親本細胞不完全一致，而可能含有突變。本文包括具有與在最初轉化細胞中所篩選或選擇相同之功能或生物活性之突變子代。
當核酸與另一核酸序列呈某一功能關係時，其「經可操作地連接」。例如，若用於前序列或分泌前導序列之DNA表現為參與多肽分泌之前蛋白，則其可操作地連接至用於多肽之DNA；若啟動子或增強子影響序列轉錄，則其可操作地連接至編碼序列；或若核糖體結合位點經定位以便於翻譯，則其可操作地連接至編碼序列。一般而言，「可操作地連接」意謂連接之DNA序列為鄰近的，且就分泌前導序列而言，為鄰近的且處於閱讀相中。然而，增強子不必為連續的。連接藉由於適宜之限制位點接合來實現。若此等位點不存在，則根據習知實踐使用合成寡核苷酸轉接子或接頭。
關於本文所鑑別之多肽序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」定義為在比對該等多肽序列與候選序列且必要時引入間隙以達成最大序列一致性百分比之後，且在不將任何保守性取代視為序列一致性之一部分的情形下，候選序列中與所比較多肽序列中之胺基酸殘基一致的胺基酸殘基之百分比。用於測定胺基酸序列一致性百分比之目的的比對可以此項技術中之技能範圍內之多種方式達成，例如使用可公開獲得之電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體。熟習此項技術者可確定適用於量測比對之參數，包括在所比較之序列之全長上達成最大比對所需之任何演算法。然而，出於本文目的，使用序列比較電腦程序ALIGN-2產生胺基酸序列一致性%值。ALIGN-2序列比較電腦程序由Genentech公司創造，且原始碼已與用戶檔一起在美國版權辦公室(U.S.Copyright Office,Washington D.C.,20559)備案，其中其在美國版權登記號TXU510087下登記。ALIGN-2程序可自Genentech公司，South San Francisco,California公開獲得。ALIGN-2程序應經編譯以在UNIX操作系統(較佳地數位UNIX V4.0D)上使用。所有序列比較參數皆由ALIGN-2程序設定且不改變。
在採用ALIGN-2進行胺基酸序列比較之情形下，既定胺基酸序列A對於、與或相對於既定胺基酸序列B之胺基酸序列一致性%(或者可表述為既定胺基酸序列A對於、與或相對於既定胺基酸序列B具有或包含某一胺基酸序列一致性%)係如下加以計算： 100×分數X/Y
其中X為藉由序列比對程序ALIGN-2在彼程序進行A與B比對時計分為一致匹配之胺基酸殘基數，且其中Y為B中之胺基酸殘基總數。應瞭解當胺基酸序列A之長度不等於胺基酸序列B之長度時，A對於B之胺基酸序列一致性%將不等於B對於A之胺基酸序列一致性%。除非另外明確陳述，否則本文使用之所有胺基酸序列一致性%值皆係使用ALIGN-2電腦程序如前一段落中所述來獲得。
除非另外指定，否則本文所述之胺基酸序列為連續胺基酸序列。
術語「包裝插頁」用於指慣常包括在治療性產品之商業包裝中之說明書，其含有關於與使用此等治療性產品相關之適應症、用法、劑量、投藥、組合療法、禁忌症及/或警告的資訊。
術語「醫藥組合物」係指以下製劑：其呈允許其中所含之活性成分之生物活性有效之形式，且不含對將投與調配物之受試者具有不可接受毒性之額外組分。
「醫藥學上可接受之載劑」係指醫藥調配物中除活性成分以外之對受試者無毒的成分。醫藥學上可接受之載劑包括但不限於緩衝劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
如本申請案中所用之術語「前藥」係指醫藥活性物質之前驅體或衍生物形式，其相較於母體藥物對腫瘤細胞具有較低細胞毒性且能夠酶促活化或轉化成活性較高之母體形式。參見，例如Wilman,「Prodrugs in Cancer Chemotherapy」Biochemical Society Transactions,14，第375-382頁，615th Meeting Belfast(1986)及Stella等人「Prodrugs：A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery,」Directed Drug Delivery,Borchardt等人(編)，第247-267頁，Humana Press(1985)。本發明之前藥包括但不限於含磷酸鹽前藥、含硫代磷酸鹽前藥、含硫酸鹽前藥、含肽前藥、D-胺基酸改質前藥、糖基化前藥、含β-內醯胺前藥、含視情況經取代之苯氧基乙醯胺前藥或含視情況經取代之苯基乙醯胺前藥、5-氟胞嘧啶及可轉化成活性較高之無細胞毒性之藥物之其他5-氟尿苷前藥。可衍生化成用於本發明中之前藥形式的細胞 毒性藥物之實例包括但不限於上文所述之化學治療劑。
「降低或抑制」意謂能夠引起總體上降低較佳地20%或20%以上、更佳地50%或50%以上，且最佳地75%、85%、90%、95%或95%以上。降低或抑制可指所治療病症的症狀、轉移之存在或尺寸、原發性腫瘤之尺寸。
「受試者」為脊椎動物，較佳地哺乳動物，更佳地人類。哺乳動物包括但不限於農場動物(諸如母牛及綿羊)、運動動物、寵物(諸如貓、狗及馬)、靈長類動物(例如，人類及非人類靈長類動物，諸如猴)、及齧齒動物(例如小鼠及大鼠)。
術語「治療有效量」係指用於治療受試者之疾病或病症之抗體或抗體片段的量。在IL-33介導之病症之情形下，治療有效量之抗體或抗體片段(例如，抗IL-33抗體，包括結合IL-33及第二生物分子(例如，IL-13)之雙特異性抗IL-33抗體，例如雙特異性抗IL-33/抗IL-13抗體)可改善或治療疾病，或預防、減輕、改善或治療與該疾病相關之症狀。在增生性疾病(例如，實體腫瘤)之情形下，治療有效量之抗體或抗體片段可減少癌細胞之數目；降低原發性腫瘤尺寸；抑制(亦即在某種程度上減慢且較佳地停止)癌細胞浸潤至外周器官中；抑制(亦即在某種程度上減慢且較佳地停止)腫瘤轉移；在某種程度上抑制腫瘤生長；及/或在某種程度上減輕與病症相關之一或多種症狀。在抗體或抗體片段可預防生長及/或殺死現有癌細胞之程度上，其可為細胞抑制性的及/或細胞毒性的。對於癌症療法，可例如藉由評估存活持續時間、疾病進展時間(TTP)、無疾病存活持續時間(DFS)、無進展存活持續時間(PFS)、反應率(RR)、反應持續時間及/或生活品質來量測活體內功效。
如本文所用，「治療(treatment)」(及其語法變化形式，諸如「治療(treat)」或「治療(treating)」)係指試圖改變所治療個體之自然病程之臨床介入，且可為達成防治目的或在臨床病理過程中進行。合乎需要之治療作用包括但不限於防止疾病發生或復發、減輕症狀、減弱疾病之任何直接或間接病理學結果、預防轉移、降低疾病進展速率、改善或緩解疾病病況及緩和或改善預後。在一些實施例中，本發明之抗體用於延遲疾病發展 或減緩疾病進展。若例如，在接受氣喘療法之後，患者顯示以下中一或多者之可觀察到及/或可量測之減少或不存在，則該患者可針對氣喘經成功「治療」：反復喘息、咳嗽、呼吸困難、胸部緊迫感、在夜間發生或惡化之症狀、由冷空氣、運動或暴露於過敏原引起之症狀。
如本文中所使用之「腫瘤」係指所有贅生性細胞生長及增殖，無論為惡性或良性，及所有癌症前及癌性細胞及組織。
如本文所用，術語「載體」意欲指能夠轉運已連接之另一核酸之核酸分子。一種類型之載體為「質體」，其係指其中可接合額外DNA區段之環狀雙鏈DNA環。另一類型之載體為噬菌體載體。另一類型之載體為病毒載體，其中額外DNA區段可接合至病毒基因組中。某些載體能夠在引有其之宿主細胞(例如具有細菌複製起點之細菌載體，及附加型哺乳動物載體)中自體複製。其他載體(例如非附加型哺乳動物載體)在引入宿主細胞中時可整合至宿主細胞之基因組中，且藉此連同宿主基因組一起複製。此外，某些載體能夠引導與其可操作地連接之基因之表現。此等載體在本文中稱為「重組表現載體」(或簡稱為「重組載體」或「表現載體」)。一般而言，表現載體在重組DNA技術中之效用經常呈質體形式。在本說明書中，「質體」及「載體」可互換使用。
II. 組合物及方法
在一個態樣中，本發明係部分基於結合IL-33之新穎抗體。本發明之抗體例如適用於診斷或治療IL-33介導之病症。
A. 例示性抗IL-33抗體
本發明提供結合IL-33之經分離抗體。在某些實施例中，本發明之抗IL-33抗體以100nM或100nM以下(例如，100nM或100nM以下、10nM或10nM以下、1nM或1nM以下、100pM或100pM以下、10pM或10pM以下、1pM或1pM以下或0.1pM或0.1pM以下)之KD特異性結合人類及食蟹獼猴(cyno)IL-33兩者。在一些情形下，該抗體以1nM或1nM以下(例如1nm或1nm以下、100pM或100pM以下、10pM或10pM以下、1pM或1pM以下、或0.1pM或0.1pM以下)之KD結合人類IL-33。舉例而言，在一些情形下，該抗體以100fM與1nM之間之KD 特異性結合人類IL-33。在一些情形下，該抗體以1nM或1nM以下(例如1nm或1nm以下、100pM或100pM以下、10pM或10pM以下、1pM或1pM以下、或0.1pM或0.1pM以下)之KD結合食蟹獼猴IL-33。舉例而言，在一些情形下，該抗體以100fM與1nM之間之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。在某些情形下，該抗體以1nM或1nM以下(例如1nm或1nm以下、100pM或100pM以下、10pM或10pM以下、1pM或1pM以下、或0.1pM或0.1pM以下)之KD結合人類及食蟹獼猴IL-33兩者。舉例而言，在一些情形下，該抗體以1pM與500pM之間之KD特異性結合人類及食蟹獼猴IL-33兩者。在一些情形下，該抗體以1pM與10pM之間之KD特異性結合人類IL-33。在一些情形下，該抗體不特異性結合鼠類IL-33。
舉例而言，在一些情形下，該抗體以約1pM與約1nM之間(例如，約1pM與約900pM之間、約1pM與約800pM之間、約1pM與約700pM之間、約1pM與約600pM之間、約1pM與約500pM之間、約1pM與約400pM之間、約1pM與約300pM之間、約1pM與約200pM之間、約1pM與約190pM之間、約1pM與約180pM之間、約1pM與約170pM之間、約1pM與約160pM之間、約1pM與約150pM之間、約1pM與約140pM之間、約1pM與約130pM之間、約1pM與約120pM之間、約1pM與約110pM之間、約1pM與約100pM之間、約1pM與約90pM之間、約1pM與約80pM之間、約1pM與約70pM之間、約1pM與約60pM之間、約1pM與約50pM之間、約1pM與約40pM之間、約1pM與約30pM之間、約1pM與約20pM之間或約1pM與約10pM之間)之KD特異性結合人類IL-33。在一些情形下，該抗體以約1pM與約250pM之間(例如，約1pM與約250pM之間、約1pM與約225pM之間、約1pM與約200pM之間、約1pM與約190pM之間、約1pM與約180pM之間、約1pM與約170pM之間、約1pM與約160pM之間、約1pM與約150pM之間、約1pM與約140pM之間、約1pM與約130pM之間、約1pM與約120pM之間、約1pM與約110pM之間、約1pM與約100pM之間、約1pM與約90pM之間、約1pM與約80pM之間、約1pM與約70pM之間、約1pM與約60pM之間、約1pM與約50pM之間、約1pM 與約40pM之間、約1pM與約30pM之間、約1pM與約20pM之間或約1pM與約10pM之間)之KD特異性結合人類IL-33。在一些情形下，該抗體以約50pM與約180pM之間(例如，約50pM、約60pM、約70pM、約80pM、約90pM、約100pM、約110pM、約120pM、約130pM、約140pM、約150pM、約160pM或約180pM)之KD特異性結合人類IL-33。在一些實施例中，前述KD值中任一者可藉由表面電漿子共振來測定，例如，如本文所述(參見例如，實例，包括實例2章節D及實例8章節E)。
在一些情形下，該抗體在25℃下以約400pM或400pM以下之KD特異性結合人類IL-33。舉例而言，在一些情形下，該抗體在25℃下以約390pM或390pM以下、約380pM或380pM以下、約375pM或375pM以下、約350pM或350pM以下、約325pM或325pM以下、約300pM或300pM以下、約275pM或275pM以下、約250pM或250pM以下、約250pM或250pM以下、約225pM或225pM以下、約200pM或225pM以下、約175pM或175pM以下、約150pM或150pM以下、約130pM或130pM以下、約125pM或125pM以下、約100pM或100pM以下、約75pM或75pM以下、約50pM或50pM以下、或約25pM或25pM以下之KD特異性結合人類IL-33。在一些情形下，該抗體在25℃下以約20pM至約150pM(例如，約20pM、約30pM、約40pM、約50pM、約60pM、約70pM、約80pM、約90pM、約100pM、約110pM、約120pM、約130pM、約140pM或約150pM)之KD特異性結合人類IL-33。在一些情形下，該抗體在25℃下以約130pM之KD特異性結合人類IL-33。在一些實施例中，前述KD值中任一者可藉由表面電漿子共振來測定，例如，如本文所述(參見例如，實例，包括實例2章節D及實例8章節E)。
在一些情形下，該抗體在37℃下以約200pM或200pM以下之KD特異性結合人類IL-33。舉例而言，在一些情形下，該抗體在37℃下以約190pM或190pM以下、約180pM或180pM以下、約175pM或175pM以下、約150pM或150pM以下、約130pM或130pM以下、約125pM或125pM以下、約100pM或100pM以下、約90pM或90pM以下、約80pM或80pM以下、約75pM或75pM以下、約50pM或50pM 以下、或約25pM或25pM以下之KD特異性結合人類IL-33。在一些情形下，該抗體在37℃下以約20pM至約100pM(例如，約20pM、約30pM、約40pM、約50pM、約60pM、約70pM、約80pM、約90pM或約100pM)之KD特異性結合人類IL-33。在一些情形下，該抗體在37℃下以約90pM之KD特異性結合人類IL-33。在一些實施例中，前述KD值中任一者可藉由表面電漿子共振來測定，例如，如本文所述(參見例如，實例，包括實例2章節D及實例8章節E)。
在一些情形下，該抗體以約1pM與約1nM之間(例如，約1pM與約900pM之間、約1pM與約800pM之間、約1pM與約700pM之間、約1pM與約600pM之間、約1pM與約500pM之間、約1pM與約400pM之間、約1pM與約300pM之間、約1pM與約200pM之間、約1pM與約190pM之間、約1pM與約180pM之間、約1pM與約170pM之間、約1pM與約160pM之間、約1pM與約150pM之間、約1pM與約140pM之間、約1pM與約130pM之間、約1pM與約120pM之間、約1pM與約110pM之間、約1pM與約100pM之間、約1pM與約90pM之間、約1pM與約80pM之間、約1pM與約70pM之間、約1pM與約60pM之間、約1pM與約50pM之間、約1pM與約40pM之間、約1pM與約30pM之間、約1pM與約20pM之間或約1pM與約10pM之間)之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。在一些情形下，該抗體以約100pM與約750pM之間(例如，約100pM與約750pM之間、約200pM與約750pM之間、約225pM與約750pM之間、約250pM與約750pM之間、約265pM與約750pM之間、約275pM與約750pM之間、約300pM與約750pM之間、約325pM與約750pM之間、約350pM與約750pM之間、約375pM與約750pM之間、約400pM與約750pM之間、約425pM與約750pM之間、約450pM與約750pM之間、約475pM與約750pM之間、約500pM與約750pM之間、約525pM與約750pM之間、約550pM與約750pM之間、約575pM與約750pM之間、約600pM與約750pM之間、約650pM與約750pM之間或約250pM與約650pM之間)之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。在一些實施例中，前述KD值中任一者可藉由表面電漿子共振來測定， 例如，如本文所述(參見例如，實例，包括實例2章節D及實例8章節E)。
舉例而言，在一些情形下，該抗體在25℃下以約650pM或650pM以下之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。舉例而言，在一些情形下，該抗體在25℃下以約650pM或650pM以下、約625pM或625pM以下、約600pM或600pM以下、約575pM或575pM以下、約550pM或550pM以下、約525pM或525pM以下、約500pM或500pM以下、約475pM或475pM以下、約450pM或450pM以下、約425pM或425pM以下、約400pM或400pM以下、約375pM或375pM以下、約350pM或350pM以下、約325pM或325pM以下、約300pM或300pM以下、約275pM或275pM以下、約265pM或265pM以下、約250pM或250pM以下、約225pM或225pM以下、約200pM或200pM以下、約175pM或175pM以下、約150pM或150pM以下、約125pM或125pM以下、約100pM或100pM以下、約75pM或75pM以下、約50pM或50pM以下、或約25pM或25pM以下之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。在一些情形下，該抗體在25℃下以約150pM至約500pM(例如，約150pM、約175pM、約200pM、約225pM、約250pM、約265pM、約275pM、約300pM、約325pM、約350pM、約375pM、約400pM、約425pM、約450pM、約475pM或約500pM)之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。在一些情形下，該抗體在25℃下以約265pM之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。在一些實施例中，前述KD值中任一者可藉由表面電漿子共振來測定，例如，如本文所述(參見例如，實例，包括實例2章節D及實例8章節E)。
在其他情形下，該抗體在37℃下以約1nM或1nM以下之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。舉例而言，在一些情形下，該抗體在37℃下以約1nM或1nM以下、約950pM或以950pM下、約900pM或900pM以下、約850pM或850pM以下、約800pM或800pM以下、約750pM或750pM以下、約700pM或700pM以下、約650pM或650pM以下、約600pM或600pM以下、約550pM或550pM以下、約525pM或525pM以下、約500pM或500pM以下、約475pM或475pM以下、約450pM或450pM以下、約425pM或425pM以下、約400pM或400pM以下、 約350pM或350pM以下、約300pM或300pM以下、約250pM或250pM以下、約200pM或200pM以下、約150pM或150pM以下、約100pM或100pM以下、或約50pM或50pM以下之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。在一些情形下，該抗體在37℃下以約250pM至約750pM(例如，約250pM、約275pM、約300pM、約325pM、約350pM、約375pM、約400pM、約425pM、約450pM、約475pM、約500pM、約525pM、約550pM、約575pM、約600pM、約625pM、約650pM、約675pM、約700pM、約725pM或約750pM)之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。在一些情形下，該抗體在37℃下以約475pM之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。在一些實施例中，前述KD值中任一者可藉由表面電漿子共振來測定，例如，如本文所述(參見例如，實例，包括實例2章節D及實例8章節E)。在一些實施例中，本發明之抗IL-33抗體能夠抑制IL-33與IL-33受體之結合。在一些實施例中，使用基於細胞之阻斷分析來量測該抑制。在一些情形下，該抗體以約0.0001μg/ml至約1μg/ml之間(例如，約0.001μg/ml至約0.5μg/ml)之90%抑制性濃度(IC90)抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。在一些實施例中，IC90為介於約0.002μg/ml至約0.25μg/ml之間。在一些實施例中，IC90為約0.17μg/ml。在一些實施例中，IC90為約0.004μg/ml。在一些實施例中，IC90為約0.003μg/ml。在一些實施例中，IC90為約0.002μg/ml。在一些實施例中，IC90為約0.001μg/ml。
在一些情形下，該抗體以約750fM與約250pM之間(例如，約750fM與約250pM之間、約1pM與約250pM之間、約1pM與約100pM之間、約1pM與約50pM之間、約1pM與約10pM之間或約1pM與約5pM之間)之半數最大抑制性濃度(IC50)抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。在一些情形下，該抗體以約10pM或10pM以下(例如，約10pM或10pM以下、約9pM或9pM以下、約8pM或8pM以下、約7pM或7pM以下、約6pM或6pM以下、約5pM或5pM以下、約4pM或4pM以下、約3pM或3pM以下、約2.5pM或2.5pM以下、約2pM或2pM以下、約1pM或1pM以下、約900fM或900fM以下、約800fM或800fM以下、或約750fM或750fM以下)之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體之結 合。在一些情形下，該抗體以約2.4pM之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。在一些情形下，使用基於細胞之阻斷分析使用HEK-BLUETM細胞來量測抑制，例如，如實例8章節B中所描述。
在一些情形下，該抗體以約1nM與約10nM之間(例如，約1nM與約10nM之間、約1nM與約9nM之間、約1nM與約8nM之間、約1nM與約7nM之間、約1nM與約6nM之間、約1nM與約5nM之間、約1nM與約4nM之間或約1nM與約3nM之間)之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合。在一些情形下，該抗體以約4.2nM之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合。在一些情形下，使用基於細胞之阻斷分析使用HEK-BLUETM細胞來量測抑制，例如，如實例8章節B中所描述。
在一些情形下，該抗體抑制來自人類天然殺手(NK)細胞之TNF-α之人類IL-33及IL-12介導的誘導。舉例而言，在一些情形下，該抗體以約1pM與約200pM(例如約1pM與約200pM之間、約1pM與約175pM之間、約1pM與約150pM之間、約1pM與約125pM之間、約1pM與約100pM之間、約1pM與約75pM之間、約1pM與約50pM之間、約1pM與約30pM之間或約1pM與約25pM之間)之IC50抑制來自人類NK細胞之TNF-α之人類IL-33及IL-12介導的誘導。在一些情形下，該抗體以約100pM或100pM以下，例如，100pM或100pM以下、75pM或75pM以下、50pM或50pM以下、30pM或30pM以下、或25pM或25pM以下之IC50抑制來自人類NK細胞之TNF-α之人類IL-33及IL-12介導的誘導。在一些情形下，該抗體以約30pM之IC50抑制來自人類NK細胞之TNF-α之人類IL-33及IL-12介導的誘導。在一些情形下，使用NK原代細胞分析來量測抑制，例如，如實例8章節C中所描述。
在一些情形下，該抗體抑制人類嗜鹼性球中p38 MAPK(Thr180/Tyr182)磷酸化之人類IL-33介導的誘導。舉例而言，在一些情形下，該抗體以約1pM或1pM以下(例如，1pM或1pM以下、0.75pM或0.75pM以下、0.5pM或0.5pM以下、0.25pM或0.25pM以下、0.15pM或0.15pM以下、0.1pM或0.1pM以下、或0.05pM或0.05pM以下)之IC50抑制人 類嗜鹼性球中p38 MAPK(Thr180/Tyr182)磷酸化之人類IL-33介導的誘導。在一些情形下，該抗體以約0.15pM之IC50抑制人類嗜鹼性球中p38 MAPK(Thr180/Tyr182)磷酸化之人類IL-33介導的誘導。在一些情形下，使用嗜鹼性球原代細胞分析來量測抑制，例如，如實例8章節D中所描述。
在一些情形下，該抗體在競爭性結合ELISA分析中抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。在一些情形下，該抗體在競爭性結合ELISA分析中以約1pM與約200pM(例如，約1pM與約200pM之間、約1pM與約175pM之間、約1pM與約150pM之間、約1pM與約125pM之間、約1pM與約100pM之間、約1pM與約75pM之間、約1pM與約60pM之間、約1pM與約50pM之間、約1pM與約25pM之間、約10pM與約60pM之間、約10pM與約50pM之間或約20pM與約50pM之間)之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。在一些情形下，該抗體在競爭性結合ELISA分析中以約21pM之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。在一些情形下，使用競爭性結合ELISA來量測抑制，例如，如實例8章節F中所描述。
在一些情形下，該抗體在競爭性結合ELISA分析中抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合。在一些情形下，該抗體在競爭性結合ELISA分析中以約1pM與約20nM之間(例如，約1pM與約20nM之間、約1pM與約15nM之間、約1pM與約10nM之間、約1pM與約5nM之間、約1pM與約1nM之間、約1pM與約800pM之間、約1pM與約600pM之間、約1pM與約500pM之間、約1nM與約400pM之間、約1nM與約300pM之間、約200pM與約1nM之間、約200pM與約800pM之間、約200pM與約600pM之間、約200pM與約500pM之間、約300pM與約600pM之間或約300pM與約500pM之間)之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合。在一些情形下，該抗體在競爭性結合ELISA分析中以約1nM或1nM以下，例如約1nM或1nM以下、約800pM或800pM以下、約600pM或600pM以下、約500pM或500pM以下、約430pM或430pM以下、約400pM或400pM以下、或約300pM或300pM以下之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合。在一些情形下，該抗體 在競爭性結合ELISA分析中以約430pM之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合。在一些情形下，使用競爭性結合ELISA來量測抑制，例如，如實例8章節F中所描述。
在一些情形下，本文所述之抗IL-33抗體中之任一者(例如，上文或下文所述)可具有一或多種(例如，1、2、3、4、5、6、7或8)以下特徵：(i)該抗體以約1pM與約1nM之間之KD特異性結合人類IL-33；(ii)該抗體以約1pM與約1nM之間之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33；(iii)該抗體在使用HEK-BLUETM細胞之基於細胞的阻斷分析中以約750fM與約250pM之間之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體(例如，ST2及/或IL-1RAcP)之結合；(iv)該抗體在使用HEK-BLUETM細胞之基於細胞的阻斷分析中以約1nM與約10nM之間之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體(例如，ST2及/或IL-1RAcP)之結合；(v)該抗體以約1pM與約200pM之間之IC50抑制來自人類NK細胞之TNF-α之人類IL-33及IL-12介導的誘導；(vi)該抗體以約1pM或1pM以下之IC50抑制人類嗜鹼性球中p38 MAPK(Thr180/Tyr182)磷酸化之人類IL-33介導的誘導；(vii)該抗體在競爭性結合ELISA分析中以約1pM與約200pM之間之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體(例如，ST2及/或IL-1RAcP)之結合；及/或(viii)該抗體在競爭性結合ELISA分析中以約1pM與約20nM之間之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體(例如，ST2及/或IL-1RAcP)之結合。在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有前述特徵中之一種。在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有前述特徵中之兩種。在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有前述特徵中之三種。在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有前述特徵中之四種。在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有前述特徵中之五種。在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有前述特徵中之六種。在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有前述特徵中之七種。在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有前述特徵中之八種。
舉例而言，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任 一者可具有以下特徵：(i)該抗體以約1pM與約1nM之間(例如，約15pM與約180pM之間)之KD特異性結合人類IL-33；及(ii)該抗體以約1pM與約1nM之間(例如，約100pM與約500pM之間)之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。
在另一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體以約1pM與約1nM之間(例如，約15pM與約180pM之間)之KD特異性結合人類IL-33；及(ii)該抗體例如在使用HEK-BLUETM細胞之基於細胞的阻斷分析中以約750fM與約250pM之間(例如，約800fM與約10pM之間)之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。
在另一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體以約1pM與約1nM之間(例如，約15pM與約180pM之間)之KD特異性結合人類IL-33；及(ii)該抗體例如在使用HEK-BLUETM細胞之基於細胞的阻斷分析中以約1nM與約10nM之間(例如，約1nM與約5nM之間)之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合。
在又一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體以約1pM與約1nM之間(例如，約15pM與約180pM之間)之KD特異性結合人類IL-33；及(ii)該抗體以約1pM與約200pM之間(例如，約1pM與約80pM之間)之IC50抑制來自人類NK細胞之TNF-α之人類IL-33及IL-12介導的誘導。
在另一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體以約1pM與約1nM之間(例如，約15pM與約180pM之間)之KD特異性結合人類IL-33；及(ii)該抗體以約1pM或1pM以下(例如，約0.05pM至約0.5pM之間)之IC50抑制人類嗜鹼性球中p38 MAPK(Thr180/Tyr182)磷酸化之人類IL-33介導的誘導。
在另一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體以約1pM與約1nM之間(例如，約15pM與約180pM之間)之KD特異性結合人類IL-33；及(ii)該抗體在競爭性 結合ELISA分析中以約1pM與約200pM之間(例如，約1pM至約50pM之間)之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。
在另一實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體以約1pM與約1nM之間(例如，約15pM與約180pM之間)之KD特異性結合人類IL-33；及(ii)該抗體在競爭性結合ELISA分析中以約1pM與約20nM之間(例如，約200pM至約1nM之間)之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合。
在另一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體以約1pM與約1nM之間(例如，約100pM與約500pM之間)之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33；及(ii)該抗體例如在使用HEK-BLUETM細胞之基於細胞的阻斷分析中以約750fM與約250pM之間(例如，約800fM與約10pM之間)之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。
在又一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體以約1pM與約1nM之間(例如，約100pM與約500pM之間)之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33；及(ii)該抗體例如在使用HEK-BLUETM細胞之基於細胞的阻斷分析中以約1nM與約10nM之間(例如，約1nM與約5nM之間)之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合。在另一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體以約1pM與約1nM之間(例如，約100pM與約500pM之間)之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33；及(ii)該抗體以約1pM與約200pM之間(例如，約1pM與約80pM之間)之IC50抑制來自人類NK細胞之TNF-α之人類IL-33及IL-12介導的誘導。
在另一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體以約1pM與約1nM之間(例如，約100pM與約500pM之間)之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33；及(ii)該抗體以約1pM或1pM以下(例如，約0.05pM至約0.5pM之間)之IC50抑制人類嗜鹼性球中p38 MAPK(Thr180/Tyr182)磷酸化之人類IL-33介導的誘導。
在又一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體 中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體以約1pM與約1nM之間(例如，約100pM與約500pM之間)之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33；及(ii)該抗體在競爭性結合ELISA分析中以約1pM與約200pM之間(例如，約1pM至約50pM之間)之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。
在另一實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體以約1pM與約1nM之間(例如，約100pM與約500pM之間)之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33；及(ii)該抗體在競爭性結合ELISA分析中以約1pM與約20nM之間(例如，約200pM至約1nM之間)之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合。
在另一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體例如在使用HEK-BLUETM細胞之基於細胞的阻斷分析中以約750fM與約250pM之間(例如，約800fM與約10pM之間)之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體之結合；及(ii)該抗體例如在使用HEK-BLUETM細胞之基於細胞的阻斷分析中以約1nM與約10nM之間(例如，約1nM與約5nM之間)之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合。
在另一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體例如在使用HEK-BLUETM細胞之基於細胞的阻斷分析中以約750fM與約250pM之間(例如，約800fM與約10pM之間)之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體之結合；及(ii)該抗體以約1pM與約200pM之間(例如，約1pM與約80pM之間)之IC50抑制來自人類NK細胞之TNF-α之人類IL-33及IL-12介導的誘導。
在另一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體例如在使用HEK-BLUETM細胞之基於細胞的阻斷分析中以約750fM與約250pM之間(例如，約800fM與約10pM之間)之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體之結合；及(ii)該抗體以約1pM或1pM以下(例如，約0.05pM至約0.5pM之間)之IC50抑制人類嗜鹼性球中p38 MAPK(Thr180/Tyr182)磷酸化之人類IL-33介導的誘導。
在另一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體 中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體例如在使用HEK-BLUETM細胞之基於細胞的阻斷分析中以約750fM與約250pM之間(例如，約800fM與約10pM之間)之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體之結合；及(ii)該抗體在競爭性結合ELISA分析中以約1pM與約200pM之間(例如，約1pM至約50pM之間)之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。
在另一實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體例如在使用HEK-BLUETM細胞之基於細胞的阻斷分析中以約750fM與約250pM之間(例如，約800fM與約10pM之間)之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體之結合；及(ii)該抗體在競爭性結合ELISA分析中以約1pM與約20nM之間(例如，約200pM至約1nM之間)之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合。
在另一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體例如在使用HEK-BLUETM細胞之基於細胞的阻斷分析中以約1nM與約10nM之間(例如，約1nM與約5nM之間)之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合；及(ii)該抗體以約1pM與約200pM之間(例如，約1pM與約80pM之間)之IC50抑制來自人類NK細胞之TNF-α之人類IL-33及IL-12介導的誘導。
在另一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體例如在使用HEK-BLUETM細胞之基於細胞的阻斷分析中以約1nM與約10nM之間(例如，約1nM與約5nM之間)之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合；及(ii)該抗體以約1pM或1pM以下(例如，約0.05pM至約0.5pM之間)之IC50抑制人類嗜鹼性球中p38 MAPK(Thr180/Tyr182)磷酸化之人類IL-33介導的誘導。
在另一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體例如在使用HEK-BLUETM細胞之基於細胞的阻斷分析中以約1nM與約10nM之間(例如，約1nM與約5nM之間)之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合；及(ii)該抗體在競爭性結合ELISA分析中以約1pM與約200pM之間(例如，約1pM至約50pM之間)之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。
在另一實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體例如在使用HEK-BLUETM細胞之基於細胞的阻斷分析中以約1nM與約10nM之間(例如，約1nM與約5nM之間)之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合；及(ii)該抗體在競爭性結合ELISA分析中以約1pM與約20nM之間(例如，約200pM至約1nM之間)之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合。
在又一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體以約1pM與約200pM之間(例如，約1pM與約80pM之間)之IC50抑制來自人類NK細胞之TNF-α之人類IL-33及IL-12介導的誘導；及(ii)該抗體以約1pM或1pM以下(例如，約0.05pM至約0.5pM之間)之IC50抑制人類嗜鹼性球中p38 MAPK(Thr180/Tyr182)磷酸化之人類IL-33介導的誘導。
在另一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體以約1pM與約200pM之間(例如，約1pM與約80pM之間)之IC50抑制來自人類NK細胞之TNF-α之人類IL-33及IL-12介導的誘導；及(ii)該抗體在競爭性結合ELISA分析中以約1pM與約200pM之間(例如，約1pM至約50pM之間)之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。
在另一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體以約1pM與約200pM之間(例如，約1pM與約80pM之間)之IC50抑制來自人類NK細胞之TNF-α之人類IL-33及IL-12介導的誘導；及(ii)該抗體在競爭性結合ELISA分析中以約1pM與約20nM之間(例如，約200pM至約1nM之間)之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合。
在另一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體以約1pM或1pM以下(例如，約0.05pM至約0.5pM之間)之IC50抑制人類嗜鹼性球中p38 MAPK(Thr180/Tyr182)磷酸化之人類IL-33介導的誘導；及(ii)該抗體在競爭性結合ELISA分析中以約1pM與約200pM之間(例如，約1pM至約50pM之間) 之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。
在另一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體以約1pM或1pM以下(例如，約0.05pM至約0.5pM之間)之IC50抑制人類嗜鹼性球中p38 MAPK(Thr180/Tyr182)磷酸化之人類IL-33介導的誘導；及(ii)該抗體在競爭性結合ELISA分析中以約1pM與約20nM之間(例如，約200pM至約1nM之間)之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合。
在另一實例中，在一些實施例中，本文所述之抗IL-33抗體中任一者可具有以下特徵：(i)該抗體在競爭性結合ELISA分析中以約1pM與約200pM之間(例如，約1pM至約50pM之間)之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體之結合；及/或(ii)該抗體在競爭性結合ELISA分析中以約1pM與約20nM之間(例如，約200pM至約1nM之間)之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合。
在一些情形下，抗IL-33抗體可包括選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR：(a)HVR-H1，其包含SFSX1S(SEQ ID NO：62)之胺基酸序列，其中X1為Met、Leu或Val；(b)HVR-H2，其包含TISGGKTFTDYVDX1VKG(SEQ ID NO：63)之胺基酸序列，其中X1為Ser或Ala；(c)HVR-H3，其包含ANYGX1X2FFEV(SEQ ID NO：64)之胺基酸序列，其中X1為Asn或Asp，且X2為Trp或Phe；(d)HVR-L1，其包含RASESVAKYGLSLLN(SEQ ID NO：4)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNRGS(SEQ ID NO：5)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKEVPFT(SEQ ID NO：6)之胺基酸序列，或以上HVR中之一或多者及其與SEQ ID NO：4-6或62-64中任一者具有至少約80%序列一致性(例如，81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性)之一或多種變異體的組合。
舉例而言，抗IL-33抗體可包括選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR：(a)HVR-H1，其包含SFSMS(SEQ ID NO：1)、SFSLS(SEQ ID NO：7)或SFSVS(SEQ ID NO：8)之胺基酸序列；(b) HVR-H2，其包含TISGGKTFTDYVDSVKG(SEQ ID NO：2)或TISGGKTFTDYVDAVKG(SEQ ID NO：9)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含ANYGNWFFEV(SEQ ID NO：3)、ANYGNFFFEV(SEQ ID NO：10)或ANYGDWFFEV(SEQ ID NO：11)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVAKYGLSLLN(SEQ ID NO：4)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNRGS(SEQ ID NO：5)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKEVPFT(SEQ ID NO：6)之胺基酸序列，或以上HVR中之一或多者及其與SEQ ID NO：1-11中任一者具有至少約80%序列一致性(例如，81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性)之一或多種變異體的組合。
在一些情形下，抗IL-33抗體可包括以下重鏈構架區中之一個、兩個、三個或四個：FR-H1，其包含EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：12)、DVNLVESGGGSVKPGGSLKLSCVASGFTFS(SEQ ID NO：16)或EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：20)之胺基酸序列；FR-H2，其包含WVRQAPGKGLEWVA(SEQ ID NO：13)、WVRQTPEKRLEWVA(SEQ ID NO：17)或WVRQAPGKGLEWVS(SEQ ID NO：21)之胺基酸序列；FR-H3，其包含RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：14)、RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：22)、RFTISRDDAKNTLYLQMSSLESEDTAMYYCTR(SEQ ID NO：18)、RFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：23)、RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：24)或RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：14)之胺基酸序列；及FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：15)或WGAGTTVAVSS(SEQ ID NO：19)之胺基酸序列。
在一些情形下，抗IL-33抗體可包括以下輕鏈構架區中之一個、兩個、三個或四個：FR-L1，其包含EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：25)或DIVLTQSPGFLVVSLGQRATISC(SEQ ID NO：29)之胺基酸序列；FR-L2，其包含WFQQKPGQPPRLLIF(SEQ ID NO：26)或W FQQKPGQPPKLLIF(SEQ ID NO：30)之胺基酸序列；FR-L3，其包含GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：27)、GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFC(SEQ ID NO：31)、GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC(SEQ ID NO：33)、GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：34)或GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC(SEQ ID NO：35)之胺基酸序列；及FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：28)或FGSGTKLEIK(SEQ ID NO：32)之胺基酸序列。
在一些情形下，抗IL-33抗體包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：36、38或40-50中任一者具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：36、38或40-50中任一者之序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：37、39或51-61中任一者具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：37、39或51-61中任一者之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。舉例而言，在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：38之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：39之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：40之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：51之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：41之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：52之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：42之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：53之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：43之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：54之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：44之胺基酸序列；及 VL域，其包含SEQ ID NO：55之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：45之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：56之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：46之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：57之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：47之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：58之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：48之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：59之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：49之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：60之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：50之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：61之胺基酸序列。
舉例而言，該抗IL-33抗體可包含：(a)HVR-H1，其包含SFSMS(SEQ ID NO：1)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含TISGGKTFTDYVDSVKG(SEQ ID NO：2)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含ANYGNWFFEV(SEQ ID NO：3)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVAKYGLSLLN(SEQ ID NO：4)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNRGS(SEQ ID NO：5)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKEVPFT(SEQ ID NO：6)之胺基酸序列。在一些情形下，抗IL-33抗體包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：36具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：36之序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：37具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：37之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含以下重鏈構架區：FR-H1，其包含EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：12)之胺基酸序列；FR-H2，其包含WVRQAPGKGLEWVA(SEQ ID NO：13)之胺基酸序列； FR-H3，其包含RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：14)之胺基酸序列；及FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：15)之胺基酸序列。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含以下輕鏈構架區：FR-L1，其包含EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：25)之胺基酸序列；FR-L2，其包含WFQQKPGQPPRLLIF(SEQ ID NO：26)之胺基酸序列；FR-L3，其包含GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：27)之胺基酸序列；及FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：28)之胺基酸序列。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列。在一些情形下，例示性抗IL-33抗體為10C12.38.H6.87Y.58I。
在其他情形下，抗IL-33抗體可包括選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR：(a)HVR-H1，其包含SSIFYWG(SEQ ID NO：65)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SIYYSGRTYYNPX1LKS(SEQ ID NO：90)之胺基酸序列，其中X1為Ser或Ala；(c)HVR-H3，其包含AGGLYNWNDESFSFYMDV(SEQ ID NO：68)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQSFSSSYLA(SEQ ID NO：69)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含GASSRAT(SEQ ID NO：70)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQYDRSPLT(SEQ ID NO：71)之胺基酸序列，或以上HVR中之一或多者及其與SEQ ID NO：65、68-71或90中任一者具有至少約80%序列一致性(例如，81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性)之一或多種變異體的組合。
舉例而言，抗IL-33抗體可包括選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR：(a)HVR-H1，其包含SSIFYWG(SEQ ID NO：65)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SIYYSGRTYYNPSLKS(SEQ ID NO：66)或SIYYSGRTYYNPALKS(SEQ ID NO：67)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含AGGLYNWNDESFSFYMDV(SEQ ID NO：68)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQSFSSSYLA(SEQ ID NO：69)之胺基酸序列；(e) HVR-L2，其包含GASSRAT(SEQ ID NO：70)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQYDRSPLT(SEQ ID NO：71)之胺基酸序列，或以上HVR中之一或多者及其與SEQ ID NO：65-71中任一者具有至少約80%序列一致性(例如，81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性)之一或多種變異體的組合。
在一些情形下，該抗IL-33抗體可包含以下重鏈構架區中之一個、兩個、三個或四個：FR-H1，其包含ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR(SEQ ID NO：72)、QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR(SEQ ID NO：77)或QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR(SEQ ID NO：76)之胺基酸序列；FR-H2，其包含WIRQPPGKGLEWIG(SEQ ID NO：73)之胺基酸序列；FR-H3，其包含RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR(SEQ ID NO：74)之胺基酸序列；及FR-H4，其包含WGQGTTVTVSS(SEQ ID NO：75)或WGNGTTVTVSS(SEQ ID NO：78)之胺基酸序列。
在一些情形下，該抗IL-33抗體可包含以下輕鏈構架區中之一個、兩個、三個或四個：FR-L1，其包含EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：79)之胺基酸序列；FR-L2，其包含WYQQKPGQAPRLLIY(SEQ ID NO：80)之胺基酸序列；FR-L3，其包含GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：81)或GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPKDFAVYYC(SEQ ID NO：83)之胺基酸序列；及FR-L4，其包含FGGGTKVEIK(SEQ ID NO：82)之胺基酸序列。
在一些情形下，抗IL-33抗體包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：84、86、88、91、92或95中任一者具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：84、86、88、91、92或95中任一者之序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：85、87、89、93、94或96中任一者具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：85、 87、89、93、94或96中任一者之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。舉例而言，在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：84之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：85之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：86之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：87之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：88之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：89之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：91之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：93之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：92之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：94之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：95之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：96之胺基酸序列。
舉例而言，該抗IL-33抗體可包含：(a)HVR-H1，其包含SSIFYWG(SEQ ID NO：65)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SIYYSGRTYYNPSLKS(SEQ ID NO：66)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含AGGLYNWNDESFSFYMDV(SEQ ID NO：68)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQSFSSSYLA(SEQ ID NO：69)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含GASSRAT(SEQ ID NO：70)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQYDRSPLT(SEQ ID NO：71)之胺基酸序列。在一些情形下，抗體包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：84具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：84之序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：85具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：85之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含以下重鏈構架區：FR-H1，其包含ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR(SEQ ID NO：72)之胺基酸序列； FR-H2，其包含WIRQPPGKGLEWIG(SEQ ID NO：73)之胺基酸序列；FR-H3，其包含RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR(SEQ ID NO：74)之胺基酸序列；及FR-H4，其包含WGQGTTVTVSS(SEQ ID NO：75)之胺基酸序列。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含以下輕鏈構架區：FR-L1，其包含EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：79)之胺基酸序列；FR-L2，其包含WYQQKPGQAPRLLIY(SEQ ID NO：80)之胺基酸序列；FR-L3，其包含GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：81)之胺基酸序列；及FR-L4，其包含FGGGTKVEIK(SEQ ID NO：82)之胺基酸序列。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含SEQ ID NO：84之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含SEQ ID NO：85之胺基酸序列。在一些情形下，例示性抗IL-33抗體為4G12.FW4。
在一些情形下，抗IL-33抗體可包含選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR：(a)HVR-H1，其包含NYX1MN(SEQ ID NO：97)之胺基酸序列，其中X1為Trp、Phe或Tyr；(b)HVR-H2，其包含EITLKFNX1YX2THYAESVKG(SEQ ID NO：98)之胺基酸序列，其中X1為Asn、Asp、Ser或Ala，且X2為Ser或Ala；(c)HVR-H3，其包含RNYGX1X2YINV(SEQ ID NO：99)之胺基酸序列，其中X1為Asp或Asn，且X2為Trp或Tyr；(d)HVR-L1，其包含RASESVDKFGX1SFLN(SEQ ID NO：100)之胺基酸序列，其中X1為Met、Val或Leu；(e)HVR-L2，其包含VASSQGS(SEQ ID NO：113)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKDIPYT(SEQ ID NO：114)之胺基酸序列，或以上HVR中之一或多者及其與SEQ ID NO：97-100、113或114中任一者具有至少約80%序列一致性(例如，81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性)之一或多種變異體的組合。在一些實施例中，前述抗體中之任一者不包含HVR-H1，其包含NYWMN(SEQ ID NO：101)之胺基酸序列。
舉例而言，抗IL-33抗體可包含選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR：(a)HVR-H1，其包含NYWMN(SEQ ID NO：101)、NYFMN(SEQ ID NO：102)或NYYMN(SEQ ID NO：103)之 胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含EITLKFNNYSTHYAESVKG(SEQ ID NO：104)、EITLKFNDYSTHYAESVKG(SEQ ID NO：105)、EITLKFNSYSTHYAESVKG(SEQ ID NO：106)、EITLKFNAYSTHYAESVKG(SEQ ID NO：107)或EITLKFNNYATHYAESVKG(SEQ ID NO：108)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含RNYGDWYINV(SEQ ID NO：109)、RNYGNWYINV(SEQ ID NO：110)或RNYGNFYINV(SEQ ID NO：111)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVDKFGMSFLN(SEQ ID NO：112)、RASESVDKFGVSFLN(SEQ ID NO：115)或RASESVDKFGLSFLN(SEQ ID NO：116)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含VASSQGS(SEQ ID NO：113)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKDIPYT(SEQ ID NO：114)之胺基酸序列，或以上HVR中之一或多者及其與SEQ ID NO：101-116中任一者具有至少約80%序列一致性(例如，81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性)之一或多種變異體的組合。在一些實施例中，前述抗體中之任一者不包含HVR-H1，其包含NYWMN(SEQ ID NO：101)之胺基酸序列。
在一些情形下，抗IL-33抗體可包括以下重鏈構架區中之一個、兩個、三個或四個：FR-H1，其包含EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFS(SEQ ID NO：117)或EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：118)之胺基酸序列；FR-H2，其包含WVRQSPEKGLEWMA(SEQ ID NO：119)或WVRQAPGKGLEWMA(SEQ ID NO：120)之胺基酸序列；FR-H3，其包含RFSISRDDSKSTVYLQMNNLRAEDTGIYYCAR(SEQ ID NO：121)、RFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：122)或RFTISRDDSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：123)之胺基酸序列；及FR-H4，其包含WGAGTTVTVSS(SEQ ID NO：124)或WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：125)之胺基酸序列。在一些實施例中，前述抗體中之任一者不包含HVR-H1，其包含NYWMN(SEQ ID NO：101)之胺基酸序列。
在一些情形下，抗IL-33抗體可包含以下輕鏈構架區中之一 個、兩個、三個或四個：FR-L1，其包含DIVLTQSPTSLAVSLGQRATISC(SEQ ID NO：126)或DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC(SEQ ID NO：127)之胺基酸序列；FR-L2，其包含WFQQKPGQPPKLLIF(SEQ ID NO：128)或WYQQKPGQPPKLLIF(SEQ ID NO：129)之胺基酸序列；FR-L3，其包含GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPVEEDDTAMYFC(SEQ ID NO：130)或GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC(SEQ ID NO：131)之胺基酸序列；及FR-L4，其包含FGGGTKLEIK(SEQ ID NO：132)或FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：133)之胺基酸序列。在一些實施例中，前述抗體中之任一者不包含HVR-H1，其包含NYWMN(SEQ ID NO：101)之胺基酸序列。
在一些情形下，抗IL-33抗體包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：134、136、138或140-148中任一者具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：134、136、138或140-148中任一者之序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：135、137、139或149-157中任一者具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：135、137、139或149-157中任一者之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。舉例而言，在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：134之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：135之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：136之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：137之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：138之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：139之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：140之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：149之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：141之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：150之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：142之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO： 151之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：143之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：152之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：144之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：153之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：145之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：154之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：146之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：155之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：147之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：156之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：148之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：157之胺基酸序列。在一些實施例中，前述抗體中之任一者不包含HVR-H1，其包含NYWMN(SEQ ID NO：101)之胺基酸序列。
舉例而言，該抗IL-33抗體可包含：(a)HVR-H1，其包含NYWMN(SEQ ID NO：101)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含EITLKFNNYSTHYAESVKG(SEQ ID NO：104)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含RNYGDWYINV(SEQ ID NO：109)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVDKFGMSFLN(SEQ ID NO：112)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含VASSQGS(SEQ ID NO：113)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKDIPYT(SEQ ID NO：114)之胺基酸序列。在一些情形下，抗體包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：134具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：134之序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：135具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：135之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含以下重鏈構架區：FR-H1，其包含EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFS(SEQ ID NO：117)之胺基酸序 列；FR-H2，其包含WVRQSPEKGLEWMA(SEQ ID NO：119)之胺基酸序列；FR-H3，其包含RFSISRDDSKSTVYLQMNNLRAEDTGIYYCAR(SEQ ID NO：121)之胺基酸序列；及FR-H4，其包含WGAGTTVTVSS(SEQ ID NO：124)之胺基酸序列。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含以下輕鏈構架區：FR-L1，其包含DIVLTQSPTSLAVSLGQRATISC(SEQ ID NO：126)之胺基酸序列；FR-L2，其包含WFQQKPGQPPKLLIF(SEQ ID NO：128)之胺基酸序列；FR-L3，其包含GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPVEEDDTAMYFC(SEQ ID NO：130)之胺基酸序列；及FR-L4，其包含FGGGTKLEIK(SEQ ID NO：132)之胺基酸序列。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含SEQ ID NO：134之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含SEQ ID NO：135之胺基酸序列。在一些情形下，例示性抗IL-33抗體為10H2。
在一些情形下，抗IL-33抗體可包括選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR：(a)HVR-H1，其包含KFWMN(SEQ ID NO：158)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含EIRLX1X2INYVKDYAESVKG(SEQ ID NO：161)之胺基酸序列，其中X1為Asn或Ser且X2為Ser或Ala，其中X1為Asn、Asp、Ser或Ala且X2為Ser或Ala；(c)HVR-H3，其包含RNYGNWFFEI(SEQ ID NO：160)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVDRYGISFMN(SEQ ID NO：164)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNQGS(SEQ ID NO：165)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QHSKEVPYT(SEQ ID NO：166)之胺基酸序列，或以上HVR中之一或多者及其與SEQ ID NO：158、160、161或164-166中任一者具有至少約80%序列一致性(例如，81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性)之一或多種變異體的組合。
舉例而言，抗IL-33抗體可包括選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR：(a)HVR-H1，其包含KFWMN(SEQ ID NO：158)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含EIRLNSINYVKDYAESVKG(SEQ ID NO：159)、EIRLSSINYVKDYAESVKG(SEQ ID NO：162)或EIRLNAINYVKDYAESVKG(SEQ ID NO：163)之胺基酸序列；(c)HVR-H3， 其包含RNYGNWFFEI(SEQ ID NO：160)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVDRYGISFMN(SEQ ID NO：164)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNQGS(SEQ ID NO：165)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QHSKEVPYT(SEQ ID NO：166)之胺基酸序列，或以上HVR中之一或多者及其與SEQ ID NO：158-160或162-166中任一者具有至少約80%序列一致性(例如，81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性)之一或多種變異體的組合。
在一些情形下，抗IL-33抗體可包括以下重鏈構架區中之一個、兩個、三個或四個：FR-H1，其包含EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFN(SEQ ID NO：167)或EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFN(SEQ ID NO：171)之胺基酸序列；FR-H2，其包含WVRQSPEKGLEWVA(SEQ ID NO：168)或WVRQAPGKGLEWVA(SEQ ID NO：172)之胺基酸序列；FR-H3，其包含RFTISRDDSKNSVYLQMNNLRAEDTGIYYCIR(SEQ ID NO：169)或RFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCIR(SEQ ID NO：173)之胺基酸序列；及FR-H4，其包含WGAGTTVTVSS(SEQ ID NO：170)或WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：174)之胺基酸序列。
在一些情形下，抗IL-33抗體可包含以下輕鏈構架區中之一個、兩個、三個或四個：FR-L1，其包含DIVLTQSPASLAVSLGQRATISC(SEQ ID NO：175)或DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：179)之胺基酸序列；FR-L2，其包含WFQQKPGQSPKLLIY(SEQ ID NO：176)或WFQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：180)之胺基酸序列；FR-L3，其包含GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPLEEDDAAMYFC(SEQ ID NO：177)或GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：181)之胺基酸序列；及FR-L4，其包含FGGGTKLEIK(SEQ ID NO：178)或FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：182)之胺基酸序列。
在一些情形下，抗IL-33抗體包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：183、185、187或189中任一者具有至少90%序列一致性 (例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：183、185、187或189中任一者之序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：184、186、188、190中任一者具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：184、186、188、190中任一者之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。例如，在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：183之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：184之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：185之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：186之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：187之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：188之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：189之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：190之胺基酸序列。
舉例而言，該抗IL-33抗體可包含：(a)HVR-H1，其包含KFWMN(SEQ ID NO：158)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含EIRLNSINYVKDYAESVKG(SEQ ID NO：159)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含RNYGNWFFEI(SEQ ID NO：160)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVDRYGISFMN(SEQ ID NO：164)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNQGS(SEQ ID NO：165)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QHSKEVPYT(SEQ ID NO：166)之胺基酸序列。在一些情形下，抗體包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：183具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：183之序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：184具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：184之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含以下重鏈構架區：FR-H1，其包含EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFN(SEQ ID NO：167)之胺基酸 序列；FR-H2，其包含WVRQSPEKGLEWVA(SEQ ID NO：168)之胺基酸序列；FR-H3，其包含RFTISRDDSKNSVYLQMNNLRAEDTGIYYCIR(SEQ ID NO：169)之胺基酸序列；及FR-H4，其包含WGAGTTVTVSS(SEQ ID NO：170)之胺基酸序列。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含以下輕鏈構架區：FR-L1，其包含DIVLTQSPASLAVSLGQRATISC(SEQ ID NO：175)之胺基酸序列；FR-L2，其包含WFQQKPGQSPKLLIY(SEQ ID NO：176)之胺基酸序列；FR-L3，其包含GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPLEEDDAAMYFC(SEQ ID NO：177)之胺基酸序列；及FR-L4，其包含FGGGTKLEIK(SEQ ID NO：178)之胺基酸序列。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含SEQ ID NO：183之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含SEQ ID NO：184之胺基酸序列。在一些情形下，例示性抗IL-33抗體為6C11。
在其他情形下，抗IL-33抗體可包括選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR：(a)HVR-H1，其包含DYNMN(SEQ ID NO：191)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含DINPKX1X2DTFYNQNFKD(SEQ ID NO：192)之胺基酸序列，其中X1是Asn或Ser且X2為Gly或Ala；(c)HVR-H3，其包含HYYYGSSYGGFVY(SEQ ID NO：196)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含HASQNINVWLS(SEQ ID NO：197)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASKLHT(SEQ ID NO：198)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQGQSYPLT(SEQ ID NO：199)之胺基酸序列，或以上HVR中之一或多者及其與SEQ ID NO：191、192或196-199中任一者具有至少約80%序列一致性(例如，81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性)之一或多種變異體的組合。
舉例而言，抗IL-33抗體可包括選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR：(a)HVR-H1，其包含DYNMN(SEQ ID NO：191)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含DINPKNGDTFYNQNFKD(SEQ ID NO：193)、DINPKSGDTFYNQNFKD(SEQ ID NO：194)或DINPKNADTFYNQNFKD(SEQ ID NO：195)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含HYYYGSSYGGFVY(SEQ ID NO：196)之胺基酸序列；(d)HVR-L1， 其包含HASQNINVWLS(SEQ ID NO：197)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASKLHT(SEQ ID NO：198)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQGQSYPLT(SEQ ID NO：199)之胺基酸序列，或以上HVR中之一或多者及其與SEQ ID NO：191或193-199中任一者具有至少約80%序列一致性(例如，81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性)之一或多種變異體的組合。
在一些情形下，抗IL-33抗體可包括以下重鏈構架區中之一個、兩個、三個或四個：FR-H1，其包含EVLLQQSGPELVKPGASVKISCNASGYTFS(SEQ ID NO：200)或EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFS(SEQ ID NO：204)之胺基酸序列；FR-H2，其包含WVKQSHGKSLESIG(SEQ ID NO：201)或WVRQAPGQGLESIG(SEQ ID NO：205)之胺基酸序列；FR-H3，其包含KATLTIDKSSSTVYMELRSLTSEDTAMYYCAR(SEQ ID NO：202)或RATLTIDKSTSTAYLELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：206)之胺基酸序列；及FR-H4，其包含WGQGTLVTVAA(SEQ ID NO：203)或WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：207)之胺基酸序列。
在一些情形下，抗IL-33抗體可包含以下輕鏈構架區中之一個、兩個、三個或四個：FR-L1，其包含DIQMNQSPSSLSASLGDTITITC(SEQ ID NO：208)或DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：212)之胺基酸序列；FR-L2，其包含WYQQKAGNNPKLLIY(SEQ ID NO：209)或WYQQKPGKNPKLLIY(SEQ ID NO：213)之胺基酸序列；FR-L3，其包含GVPSRFTGSGSGTLFTLTISSLQPEDIATYYC(SEQ ID NO：210)或GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：214)之胺基酸序列；及FR-L4，其包含FGSGTNLELK(SEQ ID NO：211)或FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：215)之胺基酸序列。
在一些情形下，抗IL-33抗體包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：216、218、220或221中任一者具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：216、218、220或221中任一者之序列； (b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：217或SEQ ID NO：219具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：217或SEQ ID NO：219之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。例如，在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：216之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：217之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：218之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：219之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：220之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：219之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：221之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：219之胺基酸序列。
舉例而言，該抗IL-33抗體可包含：(a)HVR-H1，其包含DYNMN(SEQ ID NO：191)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含DINPKNGDTFYNQNFKD(SEQ ID NO：193)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含HYYYGSSYGGFVY(SEQ ID NO：196)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含HASQNINVWLS(SEQ ID NO：197)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASKLHT(SEQ ID NO：198)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQGQSYPLT(SEQ ID NO：199)之胺基酸序列。在一些情形下，抗體包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：216具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：216之序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：217具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：217之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含以下重鏈構架區：FR-H1，其包含EVLLQQSGPELVKPGASVKISCNASGYTFS(SEQ ID NO：200)之胺基酸序列；FR-H2，其包含WVKQSHGKSLESIG(SEQ ID NO：201)之胺基酸序列；FR-H3，其包含KATLTIDKSSSTVYMELRSLTSEDTAMYYCAR(SEQ ID NO：202)之胺基酸序列；及FR-H4，其包含WGQGTLVTVAA(SEQ ID NO：203)之胺基酸序列。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含以下輕鏈構架區：FR-L1，其包含DIQMNQSPSSLSASLGDTITITC(SEQ ID NO：208)之胺基酸序列；FR-L2，其包含WYQQKAGNNPKLLIY(SEQ ID NO：209)之胺基酸序列；FR-L3，其包含GVPSRFTGSGSGTLFTLTISSLQPEDIATYYC(SEQ ID NO：210)之胺基酸序列；及FR-L4，其包含FGSGTNLELK(SEQ ID NO：211)之胺基酸序列。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含SEQ ID NO：216之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含SEQ ID NO：217之胺基酸序列。在一些情形下，例示性抗IL-33抗體為2B6。
舉例而言，抗IL-33抗體可包括選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR：(a)HVR-H1，其包含SYWIN(SEQ ID NO：222)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含RIAPGSGFISYNELFKD(SEQ ID NO：223)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含EFYYGSFYGGFAY(SEQ ID NO：224)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含HASQNIHVWLS(SEQ ID NO：225)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含KASTLHT(SEQ ID NO：226)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQGQSSPLT(SEQ ID NO：227)之胺基酸序列，或以上HVR中之一或多者及其與SEQ ID NO：222-227中任一者具有至少約80%序列一致性(例如，81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性)之一或多種變異體的組合。
在一些情形下，抗IL-33抗體可包括以下重鏈構架區中之一個、兩個、三個或四個：FR-H1，其包含QVQLQQSGNDLVKPGASVKLSCKASGYTFT(SEQ ID NO：228)或EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：238)之胺基酸序列；FR-H2，其包含WIKQRPGQGLEWIG(SEQ ID NO：229)或WVRQAPGQGLEWIG(SEQ ID NO：239)之胺基酸序列；FR-H3，其包含KATLTVDTSSSTAYIQLGSLSSEDSAVYFCAR(SEQ ID NO：230)或RVTITRDTSTSTAYLELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：240)之胺基酸序列；及FR-H4，其包含WGQGTLVTVSA(SEQ ID NO：231)或WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：241)之胺基酸序列。
在一些情形下，抗IL-33抗體可包含以下輕鏈構架區中之一個、兩個、三個或四個：FR-L1，其包含DIQMNQSPSSLSASLGDTITITC(SEQ ID NO：232)或DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：242)之胺基酸序列；FR-L2，其包含WYQQKPGNIPKLLIY(SEQ ID NO：233)或WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：243)之胺基酸序列；FR-L3，其包含GVPSRFNGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYC(SEQ ID NO：234)或GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：244)之胺基酸序列；及FR-L4，其包含FGAGTKLEVK(SEQ ID NO：235)或FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：245)之胺基酸序列。
在一些情形下，抗IL-33抗體包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：236或SEQ ID NO：246具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：236或SEQ ID NO：246之序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：237或SEQ ID NO：247具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：237或SEQ ID NO：247之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。
舉例而言，該抗IL-33抗體可包含：(a)HVR-H1，其包含SYWIN(SEQ ID NO：222)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含RIAPGSGFISYNELFKD(SEQ ID NO：223)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含EFYYGSFYGGFAY(SEQ ID NO：224)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含HASQNIHVWLS(SEQ ID NO：225)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含KASTLHT(SEQ ID NO：226)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQGQSSPLT(SEQ ID NO：227)之胺基酸序列。在一些情形下，抗體包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：236具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：236之序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：237具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO： 237之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含以下重鏈構架區：FR-H1，其包含QVQLQQSGNDLVKPGASVKLSCKASGYTFT(SEQ ID NO：228)之胺基酸序列；FR-H2，其包含WIKQRPGQGLEWIG(SEQ ID NO：229)之胺基酸序列；FR-H3，其包含KATLTVDTSSSTAYIQLGSLSSEDSAVYFCAR(SEQ ID NO：230)之胺基酸序列；及FR-H4，其包含WGQGTLVTVSA(SEQ ID NO：231)之胺基酸序列。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含以下輕鏈構架區：FR-L1，其包含DIQMNQSPSSLSASLGDTITITC(SEQ ID NO：232)之胺基酸序列；FR-L2，其包含WYQQKPGNIPKLLIY(SEQ ID NO：233)之胺基酸序列；FR-L3，其包含GVPSRFNGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYC(SEQ ID NO：234)之胺基酸序列；及FR-L4，其包含FGAGTKLEVK(SEQ ID NO：235)之胺基酸序列。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含SEQ ID NO：236之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含SEQ ID NO：237之胺基酸序列。在一些情形下，例示性抗IL-33抗體為9F6。
在其他情形下，抗IL-33抗體可包含選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR：(a)HVR-H1，其包含GSAX1H(SEQ ID NO：248)之胺基酸序列，其中X1為Met或Ile；(b)HVR-H2，其包含RIRSX1X2NX3YATX4YX5ASVKG(SEQ ID NO：249)，其中X1為Arg或Lys，X2為Asn、Thr或Gly，X3為Asn或Ser，X4為Ala或Glu，且X5為Ala或Asp；(c)包含X1X2X3X4PFDY(SEQ ID NO：250)之胺基酸序列，其中X1為Leu或Gln，X2為Gln、Gly或Phe，X3為Gln或Gly，且X4為Pro或Asp；(d)HVR-L1，其包含RASQGIRNDLD(SEQ ID NO：251)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASSLQS(SEQ ID NO：252)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含LQHX1X2YPX3T(SEQ ID NO：253)之胺基酸序列，其中X1為Asp或Ser，X2為Ser或Ile，且X3為Leu或Pro，或以上HVR中之一或多者及其與SEQ ID NO：248-253中任一者具有至少約80%序列一致性(例如，81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性)之一或多種變異體的組合。
舉例而言，抗IL-33抗體可包括選自以下之至少一個、兩個、 三個、四個、五個或六個HVR：(a)HVR-H1，其包含GSAMH(SEQ ID NO：254)或GSAIH(SEQ ID NO：258)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含RIRSRNNNYATAYAASVKG(SEQ ID NO：255)、RIRSRTNNYATEYDASVKG(SEQ ID NO：259)或RIRSKGNSYATAYAASVKG(SEQ ID NO：262)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含LQQPPFDY(SEQ ID NO：256)、LGQPPFDY(SEQ ID NO：260)或QFGDPFDY(SEQ ID NO：263)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQGIRNDLD(SEQ ID NO：251)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASSLQS(SEQ ID NO：252)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含LQHDSYPLT(SEQ ID NO：257)或LQHSIYPPT(SEQ ID NO：261)之胺基酸序列，或以上HVR中之一或多者及其與SEQ ID NO：251、252或254-263中任一者具有至少約80%序列一致性(例如，81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性)之一或多種變異體的組合。
在一些情形下，抗IL-33抗體可包括以下重鏈構架區中之一個、兩個、三個或四個：FR-H1，其包含QVQLVQSGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：264)、EVQLVESGGDLVQPGGSLKLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：265)或EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：266)之胺基酸序列；FR-H2，其包含WVRQASGKGLEWVG(SEQ ID NO：267)或WVRQAPGKGLEWVG(SEQ ID NO：268)之胺基酸序列；FR-H3，其包含RFTISRDDSKRTTYLQMNSLKTEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：269)、RFTISRDDSKRTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：270)或RFSISRDDSKRTAYLQMSSLKTEDSAVYYCAR(SEQ ID NO：271)之胺基酸序列；及FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：272)之胺基酸序列。
在一些情形下，抗IL-33抗體可包括以下輕鏈構架區中之一個、兩個、三個或四個：FR-L1，其包含DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：273)、AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：274)或AIRITQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：275)之胺基酸序列；FR-L2， 其包含WYQQKPGKAPKRLIY(SEQ ID NO：276)之胺基酸序列；FR-L3，其包含GVPSRFNGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：277)、GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：278)或GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：279)之胺基酸序列；及FR-L4，其包含FGGGTKVEIK(SEQ ID NO：280)或FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：281)之胺基酸序列。
在一些情形下，抗IL-33抗體包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：282、284或286中任一者具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：282、284或286中任一者之序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：283、285或287中任一者具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：283、285或287中任一者之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：282之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：283之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：284之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：285之胺基酸序列。在一些情形下，該抗體包含結合域，該結合域包含VH域，其包含SEQ ID NO：286之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：287之胺基酸序列。
舉例而言，該抗IL-33抗體可包含：(a)HVR-H1，其包含GSAMH(SEQ ID NO：254)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含RIRSRNNNYATAYAASVKG(SEQ ID NO：255)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含LQQPPFDY(SEQ ID NO：256)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQGIRNDLD(SEQ ID NO：251)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASSLQS(SEQ ID NO：252)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含LQHDSYPLT(SEQ ID NO：257)之胺基酸序列。在一些情形下，抗體包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：282具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一 致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：282之序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：283具有至少90%序列一致性(例如，至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：283之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含以下重鏈構架區：FR-H1，其包含QVQLVQSGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：264)之胺基酸序列；FR-H2，其包含WVRQASGKGLEWVG(SEQ ID NO：267)之胺基酸序列；FR-H3，其包含RFTISRDDSKRTTYLQMNSLKTEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：269)之胺基酸序列；及FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：272)之胺基酸序列。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含以下輕鏈構架區：FR-L1，其包含DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：273)之胺基酸序列；FR-L2，其包含WYQQKPGKAPKRLIY(SEQ ID NO：276)之胺基酸序列；FR-L3，其包含GVPSRFNGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：277)之胺基酸序列；及FR-L4，其包含FGGGTKVEIK(SEQ ID NO：280)之胺基酸序列。在一些情形下，該抗IL-33抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含SEQ ID NO：282之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含SEQ ID NO：283之胺基酸序列。在一些情形下，例示性抗IL-33抗體為101.B11。
在一些情形下，本發明提供一種抗體，該抗體包含(a)重鏈，其包含SEQ ID NO：288之胺基酸序列；及/或(b)輕鏈，其包含SEQ ID NO：289之胺基酸序列。在某些實施例中，該抗體為以IgG4.S228P形式表現之10C12.38.H6.87Y.58I。
在一些情形下，本發明提供一種抗體，該抗體包含(a)重鏈，其包含SEQ ID NO：292之胺基酸序列；及/或(b)輕鏈，其包含SEQ ID NO：293之胺基酸序列。在某些實施例中，該抗體為以IgG4.S228P形式表現之4G12.FW4。
在一些情形下，本發明提供一種抗體，該抗體包含(a)重鏈，其包含SEQ ID NO：290之胺基酸序列；及/或(b)輕鏈，其包含SEQ ID NO：291之胺基酸序列。在某些實施例中，該抗體為以IgG1形式表現之10C12.38.H6.87Y.58I。
在一些情形下，本發明提供一種抗體，該抗體包含(a)重鏈，其包含SEQ ID NO：294之胺基酸序列；及/或(b)輕鏈，其包含SEQ ID NO：295之胺基酸序列。在某些實施例中，該抗體為以IgG1形式表現之4G12.FW4。
在另一態樣中，本發明提供一種抗體，該抗體與本文提供之抗IL-33抗體結合相同抗原決定基。舉例而言，在某些實施例中，提供與10C12.38.H6.87Y.58I或4G12.FW4結合相同抗原決定基之抗體。
在本發明之另一態樣中，根據上述實施例中任一者之抗IL-33抗體為單株抗體，包括嵌合、人類化或人類抗體。在一個實施例中，抗IL-33抗體為抗體片段，例如Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab’)2片段。在另一實施例中，該抗體為全長抗體，例如，完整IgG1抗體、完整IgG4抗體或如本文所定義之其他抗體類別或同型。在一些情形下，該抗體為在鉸鏈區中包含突變之IgG4抗體。在一些情形下，該突變為取代突變。在一些情形下，該取代突變處於胺基酸殘基S228(EU編號)處。在一些情形下，該取代突變為S228P突變。
在另一態樣中，根據任何以上實施例之抗IL-33抗體可併有單一或呈組合形式之如以下章節1-7中所述之任何特徵。
1. 抗體親和力
在某些實施例中，本文中所提供之抗體的解離常數(KD)1μM、100nM、10nM、1nM、0.1nM、0.01nM、1pM或0.1pM(例如10-6M或10-6M以下，例如10-6M至10-9M或10-9M以下，例如10-9M至10-13M或10-13M以下)。
在一個實施例中，KD係藉由放射性標記抗原結合分析法(RIA)來量測。在一個實施例中，RIA係利用相關抗體及其抗原之Fab型式進行。舉例而言，Fab對抗原之溶液結合親和力係藉由在未標記抗原之滴定系列存在下用極低濃度之(125I)標記抗原平衡Fab，接著用經抗Fab抗體塗佈之培養盤俘獲已結合抗原來量測(參見例如Chen等人，J.Mol.Biol.293：865-881,1999)。為建立用於該分析法之條件，將MICROTITER®多孔培養盤(Thermo Scientific)用含5μg/ml俘獲抗Fab抗體(Cappel Labs)之50 mM碳酸鈉(pH 9.6))塗佈隔夜，且隨後在室溫(約23℃)下用含2%(w/v)牛血清白蛋白之PBS阻斷2至5小時。在一非吸附盤(Nunc #269620)中，將100pM或26pM[125I]-抗原與相關Fab之連續稀釋液混合(例如與Presta等人，Cancer Res.57：4593-4599,1997)中對抗VEGF抗體Fab-12之評估一致)。接著將相關Fab培育隔夜；然而，培育可持續較長時期(例如約65小時)以確保達到平衡。此後，將混合物轉移至捕捉盤中以在室溫下培育(例如1小時)。接著移除溶液且用含0.1%聚山梨醇酯20(TWEEN®-20)之PBS將盤洗滌八次。當盤已乾燥時，每孔添加150μl閃爍體(MICROSCINT-20TM；Packard)，且在TOPCOUNTTM γ計數器(Packard)上對盤持續10分鐘計數。選擇各Fab之達成小於或等於最大結合之20%的濃度以用於競爭性結合分析中。
根據另一實施例，KD係使用BIACORE®表面電漿子共振分析法來量測。舉例而言，使用BIACORE®-2000或BIACORE ®-3000(BIAcore,Inc.，Piscataway，NJ)之分析法係在25℃下用經固定之抗原CM5晶片以約10個反應單位(RU)進行。在一個實施例中，根據供應商之說明書用N-乙基-N’-(3-二甲基胺基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及N-羥基丁二醯亞胺(NHS)活化羧甲基化葡聚糖生物感測器晶片(CM5，BIACORE公司)。用10mM乙酸鈉(pH 4.8)將抗原稀釋至5μg/ml(約0.2μM)，隨後以5μl/分鐘流速注入以達成約10個反應單位(RU)之偶合蛋白質。在注射抗原之後，注射1M乙醇胺以阻斷未反應基團。對於動力學量測，在25℃下在約25μl/min流速下注射Fab於含0.05%聚山梨醇酯20(TWEEN®-20)介面活性劑之磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)(PBST)中之兩倍連續稀釋液(0.78nM至500nM)。藉由同時擬合結合及解離感測器圖，使用簡單一對一朗繆爾結合模型(BIACORE®評估軟體3.2版)計算結合速率(kon)及解離速率(koff)。平衡解離常數(KD)係計算為比率koff/kon。參見例如Chen等人(J.Mol.Biol.293：865-881,1999)。若由以上表面電漿子共振分析獲得之結合速率超過106M-1 s-1，則可藉由使用螢光淬滅技術來測定結合速率，該技術量測在如在分光計(諸如停流配備分光光度計(Aviv Instruments)或具有攪拌比色皿之8000系列SLM-AMINCOTM分光光度計(ThermoSpectronic))中量測之遞增濃度之抗原存在下，在25℃下於PBS(pH 7.2)中之20nM抗抗原抗體(Fab形式)之螢光 發射強度(激發=295nm；發射=340nm，16nm帶通)的增加或降低。
2. 抗體片段
在某些實施例中，本文中所提供之抗體為抗體片段。抗體片段包括但不限於Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv及scFv片段及下述其他片段。關於某些抗體片段之綜述，參見Hudson等人，Nat.Med.9：129-134(2003)。關於scFv片段之綜述，參見例如Pluckthün,The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg及Moore編，(Springer-Verlag,New York)，第269-315頁(1994)；亦參見WO 93/16185；及美國專利第5,571,894號及第5,587,458號。對於包含結合抗原決定基殘基之補救受體且活體內半衰期增加之Fab及F(ab')2片段之論述，參見美國專利第5,869,046號。
雙功能抗體為可為二價或雙特異性之具有兩個抗原結合位點之抗體片段。參見例如EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人Nat.Med.9：129-134,2003；及Hollinger等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448,1993。三功能抗體及四功能抗體亦描述於Hudson等人Nat.Med.9：129-134,2003中。
單域抗體為包含抗體之全部或一部分重鏈可變域或全部或一部分輕鏈可變域之抗體片段。在某些實施例中，單域抗體為人類單域抗體(參見例如，美國專利第6,248,516 B1號)。
抗體片段可藉由各種技術製備，包括但不限於蛋白水解消化完整抗體以及如本文所述，藉由重組宿主細胞(例如大腸桿菌或噬菌體)產生。
3. 嵌合及人類化抗體
在某些實施例中，本文中所提供之抗體為嵌合抗體。某些嵌合抗體例如描述於美國專利第4,816,567號；及Morrison等人Natl.Acad.Sci.USA,81：6851-6855,1984)中。在一個實例中，嵌合抗體包含非人類可變區(例如源於小鼠、大鼠、倉鼠、兔或非人類靈長類動物(諸如猴)之可變區)及人類恆定區。在另一實例中，嵌合抗體為「類別轉換」抗體，其中類別或子類已自親本抗體之類別或子類發生改變。嵌合抗體包括其抗原結合片段。
在某些實施例中，嵌合抗體為人類化抗體。通常，非人類抗體經人類化以降低對人類之免疫原性，同時保留親本非人類抗體之特異性及親和力。一般而言，人類化抗體包含一或多個可變域，其中例如HVR(或其部分)源於非人類抗體，且FR(或其部分)源於人類抗體序列。人類化抗體視情況亦將包含至少一部分人類恆定區。在一些實施例中，人類化抗體中之一些FR殘基經來自非人類抗體(例如HVR殘基所來源之抗體)之相應殘基取代，例如以恢復或改良抗體特異性或親和力。
人類化抗體及其製備方法綜述於例如Almagro等人Front.Biosci.13：1619-1633,2008中，且進一步描述於例如Riechmann等人Nature 332：323-329,1988；Queen等人Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 86：10029-10033,1989；美國專利第5,821,337號、第7,527,791號、第6,982,321號及第7,087,409號；Kashmiri等人Methods 36：25-34,2005(描述特異性決定區(SDR)移植)；Padlan,Mol.Immunol.28：489-498,1991(描述「表面重塑」)；Dall’Acqua等人Methods 36：43-60,2005(描述「FR改組」)；及Osbourn等人Methods 36：61-68 2005及Klimka等人，Br.J.Cancer,83：252-260,2000(描述FR改組之「引導選擇」方法)中。
可用於人類化之人類構架區包括但不限於：使用「最佳擬合」方法選擇之構架區(參見例如Sims等人J.Immunol.151：2296,1993)；源於輕鏈或重鏈可變區之特定子組之人類抗體的共同序列之構架區(參見例如Carter等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89：4285,1992；及Presta等人J.Immunol.,151：2623,1993)；人類成熟(體細胞突變)構架區或人類生殖系構架區(參見例如Almagro等人Front.Biosci.13：1619-1633,2008)；及由篩檢FR文庫獲得之構架區(參見例如Baca等人J.Biol.Chem.272：10678-10684,1997及Rosok等人J.Biol.Chem.271：22611-22618,1996)。
4. 人類抗體
在某些實施例中，本文中所提供之抗體為人類抗體。人類抗體可使用此項技術中已知的各種技術產生。人類抗體一般描述於van Dijk等人Curr.Opin.Pharmacol.5：368-74,2001及Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20：450-459,2008中。
人類抗體可藉由向已經修改以回應於抗原激發而產生完整人類抗體或具有人類可變區之完整抗體之轉殖基因動物投與免疫原來製備。此等動物通常含有全部或一部分人類免疫球蛋白基因座，其置換內源性免疫球蛋白基因座或存在於染色體外或隨機整合至動物之染色體中。在此等轉殖基因小鼠中，內源性免疫球蛋白基因座通常已不活化。關於自轉殖基因動物獲得人類抗體之方法之綜述參見Lonberg,Nat.Biotech.23：1117-1125,2005。亦參見例如描述XENOMOUSETM技術之美國專利第6,075,181號及第6,150,584號；描述HUMAB®技術之美國專利第5,770,429號；描述K-M MOUSE®技術之美國專利第7,041,870號及描述VELOCIMOUSE®技術之美國專利申請公開案第US 2007/0061900號)。來自由此等動物產生之完整抗體之人類可變區可例如藉由與不同人類恆定區組合而進一步修飾。
人類抗體亦可藉由基於融合瘤之方法製備。用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類異源骨髓瘤細胞株已有描述。(參見例如Kozbor J.Immunol.,133：3001,1984；Brodeur等人Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications，第51-63頁(Marcel Dekker公司，New York,1987)；及Boerner等人，J.Immunol.,147：86,1991)。經由人類B細胞融合瘤技術產生之人類抗體亦描述於Li等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103：3557-3562,2006中。額外方法包括例如描述於美國專利第7,189,826號(描述自融合瘤細胞株產生單株人類IgM抗體)及Ni,Xiandai Mianyixue,26(4)：265-268,2006(描述人類-人類融合瘤)中之方法。人類融合瘤技術(三源融合瘤技術)亦描述於Vollmers等人Histology and Histopathology20(3)：927-937,2005及Vollmers等人Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology27(3)：185-91,2005中。
人類抗體亦可藉由分離自人類來源噬菌體呈現文庫選擇之Fv純系可變域序列來產生。此等可變域序列可接著與所要人類恆定域組合。用於自抗體文庫選擇人類抗體之技術在以下描述。
5. 文庫來源之抗體
本發明之抗體可藉由篩檢組合文庫中具有一或多種所要活性之抗體來分離。舉例而言，此項技術中已知多種用於產生噬菌體呈現文 庫及篩檢此等文庫中具有所要結合特徵之抗體之方法。此等方法綜述於例如Hoogenboom等人Methods in Molecular Biology 178：1-37(O’Brien等人編，Human Press,Totowa,NJ,2001)中，且進一步描述於例如McCafferty等人Nature 348：552-554,1990；Clackson等人Nature 352：624-628,1991；Marks等人J.Mol.Biol.222：581-597,1992；Marks等人Methods in Molecular Biology 248：161-175(Lo編，Human Press,Totowa,NJ,2003)；Sidhu等人J.Mol.Biol.338(2)：299-310,2004；Lee等人J.Mol.Biol.340(5)：1073-1093,2004；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34)：12467-12472,2004；及Lee等人J.Immunol.Methods 284(1-2)：119-132(2004)中。
在某些噬菌體呈現方法中，藉由聚合酶鏈反應(PCR)分別選殖VH及VL基因之譜系且隨機重組於噬菌體文庫中，可接著篩檢抗原結合噬菌體，如Winter等人，Ann.Rev.Immunol.,12：433-455,1994中所述。噬菌體通常呈現呈單鏈Fv(scFv)片段形式或呈Fab片段形式之抗體片段。來自經免疫來源之文庫提供對免疫原具有高親和力之抗體而無需構築融合瘤。或者，可選殖(例如自人類選殖)天然譜系以提供單一來源之針對廣泛範圍之非自體抗原以及自體抗原的抗體而不進行任何免疫，如Griffiths等人EMBO J.12：725-734,1993所述。最後，天然文庫亦可藉由以下方式合成製備：自幹細胞選殖未重排V基因區段，及使用含有隨機序列之PCR引子以編碼高度可變HVR3區及在活體外達成重排，如Hoogenboom等人J.Mol.Biol.,227：381-388,1992所述。描述人類抗體噬菌體文庫之專利公開案包括例如：美國專利第5,750,373號、及美國專利公開案第2005/0079574號、第2005/0119455號、第2005/0266000號、第2007/0117126號、第2007/0160598號、第2007/0237764號、第2007/0292936號及第2009/0002360號。
自人類抗體文庫分離之抗體或抗體片段在本文中被視為人類抗體或人類抗體片段。
6. 多特異性抗體
在某些實施例中，本文提供之抗體為多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體為對至少兩個不同位點具有結合特異性之單株抗體。在某些實施例中，雙特異性抗體可結合IL-33之兩個不同抗原決定基。 在某些實施例中，該等結合特異性之一為針對IL-33且另一者為針對任何其他抗原(例如，第二生物分子，例如，IL-13、IL-4、IL-5、IL-17、因子D、HtrA1、VEGF或VEGF受體)。因此，雙特異性抗體可具有針對IL-33及IL-13；IL-33及IL-4；IL-33及IL-5；IL-33及IL-17；IL-33及因子D；IL-33及HtrA1；IL-33及VEGF；或IL-33及VEGF受體(例如，VEGFR1、VEGFR2、VEGFR3、膜結合VEGF受體(mbVEGFR)或可溶性VEGF受體(sVEGFR))之結合特異性。在一些情形下，該雙特異性抗體可具有針對IL-33及因子D之結合特異性。在其他情形下，該雙特異性抗體可具有針對IL-33及HtrA1之結合特異性。在其他情形下，該雙特異性抗體可具有針對IL-33及VEGF之結合特異性。在其他情形下，該雙特異性抗體可具有針對IL-33及VEGF受體之結合特異性。具體而言，該雙特異性抗體可具有針對IL-33及IL-13之結合特異性。雙特異性抗體可製備為全長抗體或抗體片段。
舉例而言，在一些情形下，包含特異性結合IL-33之第一結合域的雙特異性抗IL-33抗體可具有結合IL-13之第二結合域，該第一結合域包含選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR：(a)HVR-H1，其包含SFSX1S(SEQ ID NO：62)之胺基酸序列，其中X1為Met、Leu或Val；(b)HVR-H2，其包含TISGGKTFTDYVDX1VKG(SEQ ID NO：63)之胺基酸序列，其中X1為Ser或Ala；(c)HVR-H3，其包含ANYGX1X2FFEV(SEQ ID NO：64)之胺基酸序列，其中X1為Asn或Asp，且X2為Trp或Phe；(d)HVR-L1，其包含RASESVAKYGLSLLN(SEQ ID NO：4)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNRGS(SEQ ID NO：5)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKEVPFT(SEQ ID NO：6)之胺基酸序列，或以上HVR中之一或多者及其與SEQ ID NO：4-6或62-64中任一者具有至少約80%序列一致性(例如，81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性)之一或多種變異體的組合。特異性結合IL-13之第二結合域可例如包含選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR：(a)HVR-H1，其包含AYSVN(SEQ ID NO：296)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含MIWGDGKIVYNSALKS(SEQ ID NO：297)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含DGYYPYAMDN(SEQ ID NO：298)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASKSVDSYGNSFMH(SEQ ID NO：299)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含LASNLES(SEQ ID NO：300)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQNNEDPRT(SEQ ID NO：301)之胺基酸序列，或以上HVR中之一或多者及其與SEQ ID NO：296-301中任一者具有至少約80%序列一致性(例如，81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性)之一或多種變異體的組合。在一些實施例中，該第二結合域包含抗IL-13抗體來金珠單抗之一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR。
例如，在一些情形下，包含特異性結合IL-33之第一結合域的雙特異性抗IL-33抗體(諸如10C12.38.H6.87Y.58I)具有結合IL-13之第二結合域，該第一結合域包含選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個高變區(HVR)：(a)HVR-H1，其包含SFSMS(SEQ ID NO：1)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含TISGGKTFTDYVDSVKG(SEQ ID NO：2)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含ANYGNWFFEV(SEQ ID NO：3)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVAKYGLSLLN(SEQ ID NO：4)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNRGS(SEQ ID NO：5)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKEVPFT(SEQ ID NO：6)之胺基酸序列。特異性結合IL-13之第二結合域可包含例如選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個高變區HVR：(a)HVR-H1，其包含AYSVN(SEQ ID NO：296)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含MIWGDGKIVYNSALKS(SEQ ID NO：297)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含DGYYPYAMDN(SEQ ID NO：298)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASKSVDSYGNSFMH(SEQ ID NO：299)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含LASNLES(SEQ ID NO：300)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQNNEDPRT(SEQ ID NO：301)之胺基酸序列。在一些實施例中，該第二結合域包含抗IL-13抗體來金珠單抗之一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR。
在一些情形下，雙特異性抗IL-33抗體(諸如10C12.38.H6.87Y.58I)包含特異性結合IL-33之第一結合域，該第一結合域 包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：36具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：36之序列；(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：37具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：37之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域，可具有結合IL-13之第二結合域。特異性結合IL-13之第二結合域可例如包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：302具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：302之序列；(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：303具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：303之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些情形下，特異性結合IL-13之第二結合域可包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：328具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：328之序列；(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：329具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：329之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些情形下，特異性結合IL-13之第二結合域可包含(a)VH域，其包含與抗IL-13抗體來金珠單抗具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或抗IL-13抗體來金珠單抗之序列；(b)VL域，其包含與抗IL-13抗體來金珠單抗具有至少80%序列一致性(例如，80%、 81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或抗IL-13抗體來金珠單抗之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。
在其他情形下，包含特異性結合IL-33之第一結合域的雙特異性抗IL-33抗體可具有結合IL-13之第二結合域，該第一結合域包含選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR：(a)HVR-H1，其包含SSIFYWG(SEQ ID NO：65)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SIYYSGRTYYNPX1LKS(SEQ ID NO：90)之胺基酸序列，其中X1為Ser或Ala；(c)HVR-H3，其包含AGGLYNWNDESFSFYMDV(SEQ ID NO：68)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQSFSSSYLA(SEQ ID NO：69)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含GASSRAT(SEQ ID NO：70)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQYDRSPLT(SEQ ID NO：71)之胺基酸序列，或以上HVR中之一或多者及其與SEQ ID NO：65、68-71或90中任一者具有至少約80%序列一致性(例如，81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性)之一或多種變異體的組合。特異性結合IL-13之第二結合域可例如包含選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR：(a)HVR-H1，其包含AYSVN(SEQ ID NO：296)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含MIWGDGKIVYNSALKS(SEQ ID NO：297)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含DGYYPYAMDN(SEQ ID NO：298)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASKSVDSYGNSFMH(SEQ ID NO：299)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含LASNLES(SEQ ID NO：300)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQNNEDPRT(SEQ ID NO：301)之胺基酸序列，或以上HVR中之一或多者及其與SEQ ID NO：296-301中任一者具有至少約80%序列一致性(例如，81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致性)之一或多種變異體的組合。在一些實施例中，該第二結合域包含抗IL-13抗體來金珠單抗之一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR。
例如，在一些情形下，包含特異性結合IL-33之第一結合域 的雙特異性抗IL-33抗體(諸如4G12.FW4)可具有結合IL-13之第二結合域，該第一結合域包含選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個高變區(HVR)：(a)HVR-H1，其包含SSIFYWG(SEQ ID NO：65)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SIYYSGRTYYNPSLKS(SEQ ID NO：66)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含AGGLYNWNDESFSFYMDV(SEQ ID NO：68)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQSFSSSYLA(SEQ ID NO：69)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含GASSRAT(SEQ ID NO：70)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQYDRSPLT(SEQ ID NO：71)之胺基酸序列。特異性結合IL-13之第二結合域可包含例如選自以下之至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個高變區HVR：(a)HVR-H1，其包含AYSVN(SEQ ID NO：296)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含MIWGDGKIVYNSALKS(SEQ ID NO：297)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含DGYYPYAMDN(SEQ ID NO：298)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASKSVDSYGNSFMH(SEQ ID NO：299)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含LASNLES(SEQ ID NO：300)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQNNEDPRT(SEQ ID NO：301)之胺基酸序列。在一些實施例中，該第二結合域包含抗IL-13抗體來金珠單抗之一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR。
在一些情形下，包含特異性結合IL-33之第一結合域的雙特異性抗IL-33抗體(諸如4G12.FW4)可具有結合IL-13之第二結合域，該第一結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：84具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：84之序列；(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：85具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：85之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。特異性結合IL-13之第二結合域可例如包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：302具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：302之序列；(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：303具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：303之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些情形下，特異性結合IL-13之第二結合域可包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：328具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：328之序列；(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：329具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：329之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。在一些情形下，特異性結合IL-13之第二結合域可包含(a)VH域，其包含與抗IL-13抗體來金珠單抗具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或抗IL-13抗體來金珠單抗之序列；(b)VL域，其包含與抗IL-13抗體來金珠單抗具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或抗IL-13抗體來金珠單抗之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。
在一些情形下，雙特異性抗IL-33抗體可包含(a)特異性結合IL-33之第一重鏈及第一輕鏈，其中該第一重鏈包含與SEQ ID NO：306具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：306之序列，且該第一輕鏈包含與SEQ ID NO：307具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、 95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：307之序列；及(b)特異性結合IL-13之第二重鏈及第二輕鏈，其中該第二重鏈包含與SEQ ID NO：304或330具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：304或330之序列，且該第二輕鏈包含與SEQ ID NO：305或331具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：305或331之序列。在一些實施例中，特異性結合IL-13之第二重鏈及第二輕鏈為抗IL-13抗體來金珠單抗之重鏈及輕鏈。
在一些情形下，雙特異性抗IL-33抗體可包含(a)特異性結合IL-33之第一重鏈及第一輕鏈，其中該第一重鏈包含與SEQ ID NO：308具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：308之序列，且該第一輕鏈包含與SEQ ID NO：309具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：309之序列；及(b)特異性結合IL-13之第二重鏈及第二輕鏈，其中該第二重鏈包含與SEQ ID NO：304或330具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：304或330之序列，且該第二輕鏈包含與SEQ ID NO：305或331具有至少80%序列一致性(例如，80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：305或331之序列。在一些實施例中，特異性結合IL-13之第二重鏈及第二輕鏈為抗IL-13抗體來金珠單抗之重鏈及輕鏈。
前述雙特異性抗體中任一者可以約1nM或1nM以下之KD特異性結合人類及食蟹獼猴(cyno)IL-33兩者。前述雙特異性抗體中任一者可以約1nM或1nM以下之KD特異性結合人類IL-33。例如，在一些情形下，該雙特異性抗體以約1pM與約1nM之間(例如，約1pM與約900pM之間、約1pM與約800pM之間、約1pM與約700pM之間、約1pM與約600pM之間、約1pM與約500pM之間、約1pM與約400pM之間、約1pM與約300pM之間、約1pM與約200pM之間、約1pM與約190pM之間、約1pM與約180pM之間、約1pM與約170pM之間、約1pM與約160pM之間、約1pM與約150pM之間、約1pM與約140pM之間、約1pM與約130pM之間、約1pM與約120pM之間、約1pM與約110pM之間、約1pM與約100pM之間、約1pM與約90pM之間、約1pM與約80pM之間、約1pM與約70pM之間、約1pM與約60pM之間、約1pM與約50pM之間、約1pM與約40pM之間、約1pM與約30pM之間、約1pM與約25pM之間、約1pM與約20pM之間或約1pM與約10pM之間)之KD特異性結合人類IL-33。在一些情形下，該雙特異性抗體以約1pM與約250pM之間(例如，約1pM與約250pM之間、約1pM與約225pM之間、約1pM與約200pM之間、約1pM與約190pM之間、約1pM與約180pM之間、約1pM與約170pM之間、約1pM與約160pM之間、約1pM與約150pM之間、約1pM與約140pM之間、約1pM與約130pM之間、約1pM與約120pM之間、約1pM與約110pM之間、約1pM與約100pM之間、約1pM與約90pM之間、約1pM與約80pM之間、約1pM與約70pM之間、約1pM與約60pM之間、約1pM與約50pM之間、約1pM與約40pM之間、約1pM與約30pM之間、約1pM與約25pM之間、約1pM與約20pM之間或約1pM與約10pM之間)之KD特異性結合人類IL-33。在一些實施例中，該雙特異性抗體以約25pM之KD特異性結合人類IL-33。
前述雙特異性抗體中任一者可以約1nM或1nM以下之KD特異性結合人類IL-13。例如，在一些情形下，該雙特異性抗體以約1pM與約1nM之間(例如，約1pM與約900pM之間、約1pM與約800pM之 間、約1pM與約700pM之間、約1pM與約600pM之間、約1pM與約500pM之間、約1pM與約400pM之間、約1pM與約300pM之間、約1pM與約200pM之間、約1pM與約190pM之間、約1pM與約180pM之間、約1pM與約170pM之間、約1pM與約160pM之間、約1pM與約150pM之間、約1pM與約140pM之間、約1pM與約130pM之間、約1pM與約120pM之間、約1pM與約110pM之間、約1pM與約100pM之間、約1pM與約90pM之間、約1pM與約80pM之間、約1pM與約70pM之間、約1pM與約60pM之間、約1pM與約50pM之間、約1pM與約40pM之間、約1pM與約30pM之間、約1pM與約25pM之間、約1pM與約20pM之間或約1pM與約10pM之間)之KD特異性結合人類IL-13。在一些情形下，該雙特異性抗體以約1pM與約250pM之間(例如，約1pM與約250pM之間、約1pM與約225pM之間、約1pM與約200pM之間、約1pM與約190pM之間、約1pM與約180pM之間、約1pM與約170pM之間、約1pM與約160pM之間、約1pM與約150pM之間、約1pM與約140pM之間、約1pM與約130pM之間、約1pM與約120pM之間、約1pM與約110pM之間、約1pM與約100pM之間、約1pM與約90pM之間、約1pM與約80pM之間、約1pM與約70pM之間、約1pM與約60pM之間、約1pM與約50pM之間、約1pM與約40pM之間、約1pM與約30pM之間、約1pM與約25pM之間、約1pM與約20pM之間或約1pM與約10pM之間)之KD特異性結合人類IL-13。在一些實施例中，該雙特異性抗體以約10pM或10pM以下之KD特異性結合人類IL-13。在一些實施例中，該雙特異性抗體以約1pM至約10pM(例如，約1pM、約2pM、約3pM、約4pM、約5pM、約6pM、約7pM、約8pM、約9pM或約10pM)之KD特異性結合人類IL-13。
用於製備多特異性抗體之技術包括但不限於重組共表現具有不同特異性之兩對免疫球蛋白重鏈-輕鏈(參見Milstein等人Nature 305：537,1983；WO 93/08829及Traunecker等人EMBO J.10：3655,1991)及「孔入鈕」工程改造(參見例如美國專利第5,731,168號)。多特異性抗體亦可藉由以下方式來製備：工程改造用於製備抗體Fc異二聚分子之靜電牽引效應 (WO 2009/089004A1)；交聯兩個或兩個以上抗體或片段(參見例如美國專利第4,676,980號及Brennan等人Science,229：81,1985)；使用白胺酸拉鍊以產生雙特異性抗體(參見例如Kostelny等人J.Immunol.,148(5)：1547-1553,1992)；使用「雙功能抗體」技術來製備雙特異性抗體片段(參見例如Hollinger等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90：6444-6448,1993)；及使用單鏈Fv(sFv)二聚體(參見例如Gruber等人J.Immunol.,152：5368,1994)；及如例如Tutt等人J.Immunol.147：60,1991中所述製備三特異性抗體。
本文亦包括具有三個或三個以上功能性抗原結合位點之工程改造抗體，包括「章魚抗體」(參見例如US 2006/0025576A1)。
本文之抗體或片段亦包括「雙重作用性Fab」或「DAF」，其包含結合IL-33以及另一不同抗原之抗原結合位點(參見例如US 2008/0069820)。
鈕入孔
使用鈕入孔作為產生多特異性抗體之方法描述於例如美國專利第5,731,168號、WO2009/089004、US2009/0182127、US2011/0287009、Marvin及Zhu,Acta Pharmacol.Sin.(2005)26(6)：649-658及Kontermann(2005)Acta Pharmacol.Sin.,26：1-9中。以下提供簡要非限制性討論。
「隆凸」係指至少一個胺基酸側鏈，其例如從第一多肽之介面凸出且因此可定位於相鄰介面(亦即，第二多肽之介面)中之補償凹穴中以便使異二聚體穩定且由此相對於同二聚體形成有利於異二聚體形成。隆凸可存在於原始介面中或可合成引入(例如，藉由改變編碼該介面之核酸)。在一些實施例中，編碼該第一多肽之介面的核酸經改變以編碼該隆凸。為達成此，將編碼該第一多肽之介面中之至少一個「原始」胺基酸殘基之核酸用編碼至少一個「輸入」胺基酸殘基之核酸替代，該輸入胺基酸殘基具有比該原始胺基酸殘基更大之側鏈體積。將瞭解，可存在一個以上原始及對於輸入殘基。不同胺基殘基之側鏈體積在例如US 2011/0287009之表1或美國專利第7,642,228號之表1中顯示。
在一些實施例中，用於形成隆凸之輸入殘基為選自精胺酸(R)、苯丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)及色胺酸(W)之天然存在之胺基酸殘基。在一 些實施例中，輸入殘基為色胺酸或酪胺酸。在一些實施例中，用於形成隆凸之原始殘基具有較小側鏈體積，諸如丙胺酸、天冬醯胺、天冬胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸或纈胺酸。參見例如，美國專利第7,642,228號。
「凹穴」係指至少一個胺基酸側鏈，其自第二多肽之介面凹入且因此容納第一多肽之相鄰介面上的相應隆凸。凹穴可存在於原始介面中或可合成引入(例如，藉由改變編碼該介面之核酸)。在一些實施例中，編碼該第二多肽之介面的核酸經改變以編碼該凹穴。為達成此，將編碼該第二多肽之介面中之至少一個「原始」胺基酸殘基之核酸用編碼至少一個「輸入」胺基酸殘基之DNA替代，該輸入胺基酸殘基具有比該原始胺基酸殘基更小之側鏈體積。將瞭解，可存在一個以上原始及對於輸入殘基。在一些實施例中，用於形成凹穴之輸入殘基為選自丙胺酸(A)、絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)及纈胺酸(V)之天然存在之胺基酸殘基。在一些實施例中，輸入殘基為絲胺酸、丙胺酸或蘇胺酸。在一些實施例中，用於形成凹穴之原始殘基具有較大側鏈體積，諸如酪胺酸、精胺酸、苯丙胺酸或色胺酸。
隆凸「可定位」於凹穴中意謂對應第一多肽及第二多肽上之隆凸及凹穴之空間位置且隆凸及凹穴之尺寸為使得該隆凸可位於該凹穴中而不會顯著擾亂該第一及第二多肽在該介面處之正常結合。因為隆凸諸如Tyr、Phe及Trp通常不會自該介面之軸垂直延伸且具有較佳構形，所以隆凸與相應凹穴之對準在一些情形下可依賴於基於三維結構(諸如藉由X射線晶體學或核磁共振(NMR)獲得之三維結構)建模該隆凸/凹穴對。這可使用此項技術中廣泛接受之技術來達成。
在一些實施例中，IgG1恆定區中之鈕突變為T366W。在一些實施例中，IgG1恆定區中之孔突變包含選自T366S、L368A及Y407V之一或多個突變。在一些實施例中，IgG1恆定區中之孔突變包含T366S、L368A及Y407V。
在一些實施例中，IgG4恆定區中之鈕突變為T366W。在一些實施例中，IgG4恆定區中之孔突變包含選自T366S、L368A及Y407V之一或多個突變。在一些實施例中，IgG4恆定區中之孔突變包含T366S、L368A及Y407V。
7. 抗體變異體
在某些實施例中，涵蓋本文提供之抗體之胺基酸序列變異體。舉例而言，可能需要改良抗體之結合親和力及/或其他生物性質。抗體之胺基酸序列變異體可藉由將適當修飾引入編碼抗體之核苷酸序列中或藉由肽合成來製備。此等修飾包括例如抗體之胺基酸序列內之殘基的缺失及/或插入及/或取代。可對缺失、插入及取代進行任何組合以獲得最終構築體，其限制條件為最終構築體具有所要特徵，例如抗原結合性。
a)取代、插入及缺失變異體
在某些實施例中，提供具有一或多個胺基酸取代之抗體變異體。用於取代性突變誘發之相關位點包括HVR及FR。保守性取代顯示於表1中之標題「較佳取代」下。更多實質性變化提供於表1中之標題「例示性取代」下，且如以下關於胺基酸側鏈類別進一步所述。胺基酸取代可引入相關抗體中且篩檢具有所要活性(例如維持/改良之抗原結合性、降低之免疫原性或改良之ADCC或CDC)之產物。
可根據共同側鏈性質對胺基酸分組： (1)疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile； (2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln； (3)酸性：Asp、Glu； (4)鹼性：His、Lys、Arg； (5)影響鏈定向之殘基：Gly、Pro； (6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代將需要將此等類別之一之成員更換成另一類別。
一種類型之取代變異體涉及取代親本抗體(例如，人類化或人類抗體)之一或多個高變區殘基。一般而言，選用於進一步研究之所得變異體相對於親本抗體將在某些生物性質方面具有改變(例如改良)(例如親和力增加、免疫原性降低)及/或將實質上保留親本抗體之某些生物性質。一例示性取代變異體為親和力成熟抗體，其可例如使用基於噬菌體呈現之親和力成熟技術(諸如本文所述者)便利地產生。簡言之，使一或多個HVR殘基突變且使變異型抗體呈現在噬菌體上且針對特定生物活性(例如結合親和力)加以篩檢。
可在HVR中進行改變(例如取代)例如以改良抗體親和力。可在HVR「熱點」(亦即由在體細胞成熟過程期間以高頻率經受突變之密碼子編碼之殘基)(參見例如Chowdhury,Methods Mol.Biol.207：179-196,2008)及/或接觸抗原之殘基中進行此等改變，且測試所得變異型VH或VL之結合親和力。藉由構築二級文庫且自其進行再選擇來達成親和力成熟已例如 描述於Hoogenboom等人Methods in Molecular Biology 178：1-37(O’Brien等人編，Human Press,Totowa,NJ,2001)中。在親和力成熟之一些實施例中，藉由多種方法(例如易出錯PCR、鏈改組或寡核苷酸定向突變誘發)中之任一者將多樣性引入選用於成熟之可變基因中。接著產生二級文庫。接著篩檢文庫以識別具有所要親和力之任何抗體變異體。引入多樣性之另一方法涉及HVR定向方法，其中使若干HVR殘基(例如一次4-6個殘基)隨機化。可例如使用丙胺酸掃描突變誘發或模型化來特異性鑑別抗原結合中涉及之HVR殘基。特定言之，通常以HVR-H3及HVR-L3為標靶。
在某些實施例中，取代、插入或缺失可發生在一或多個HVR內，只要此等改變不實質上降低抗體結合抗原之能力即可。舉例而言，可在HVR中進行不實質上降低結合親和力之保守性改變(例如如本文提供之保守性取代)。舉例而言，該等變化可在HVR中之抗原接觸殘基以外。在以上提供之變異型VH及VL序列之某些實施例中，各HVR未改變或含有不超過一個、兩個或三個胺基酸取代。
一種適用於識別抗體之可作為突變誘發標靶之殘基或區域的方法稱為「丙胺酸掃描突變誘發」，如Cunningham等人Science244：1081-1085,1989所描述。在此方法中，鑑別某一殘基或一組標靶殘基(例如帶電荷殘基，諸如Arg、Asp、His、Lys及Glu)且置換為中性或帶負電荷胺基酸(例如Ala或聚丙胺酸)以確定抗體與抗原之相互作用是否受到影響。可在對初始取代顯示功能敏感性之胺基酸位置上引入進一步取代。或者或另外，使用抗原-抗體複合物之晶體結構來識別抗體與抗原之間的接觸點。此等接觸殘基及相鄰殘基可作為取代候選物而靶向或消除。可篩檢變異體以確定其是否含有所要性質。
胺基酸序列插入包括長度在一個殘基至含有一百個或一百個以上殘基之多肽之範圍內的胺基末端及/或羧基末端融合、以及具有單一或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N端甲硫胺醯基殘基之抗體。抗體分子之其他插入變異體包括抗體之N端或C端與增加抗體之血清半衰期之酶(例如，用於ADEPT)或多肽的融合。
b)糖基化變異體
在某些實施例中，改變本文提供之抗體以增加或降低抗體糖基化之程度。對抗體添加糖基化位點或使抗體缺失糖基化位點可藉由改變胺基酸序列以使得產生或移除一或多個糖基化位點來便利地達成。
當抗體包含Fc區時，可改變與其連接之碳水化合物。由哺乳動物細胞產生之天然抗體通常包含通常藉由N-鍵聯連接於Fc區之CH2域之Asn297的分支雙觸角寡醣。參見，例如Wright等人TIBTECH 15：26-32,1997。寡醣可包括各種碳水化合物，例如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸、以及連接於雙觸角寡醣結構之「主幹」中之GlcNAc的海藻糖。在一些實施例中，可對本發明之抗體中之寡醣進行修飾以產生具有某些改良性質之抗體變異體。
在一個實施例中，提供具有缺乏(直接或間接)連接於Fc區之海藻糖之碳水化合物結構的抗體變異體。舉例而言，海藻糖在此抗體中之量可為1%至80%、1%至65%、5%至65%或20%至40%。如藉由MALDI-TOF質譜法所量測，藉由相對於連接於Asn297之所有糖結構(例如複合、雜合及高甘露糖結構)之總和計算Asn297上之糖鏈內海藻糖的平均量來測定海藻糖之量，如例如WO 2008/077546中所述。Asn297係指位於Fc區中約位置297(Fc區殘基之Eu編號)上之天冬醯胺殘基；然而，Asn297亦可由於抗體中之微小序列變化而位於位置297之上游或下游約±3個胺基酸處，亦即在位置294與300之間。此等海藻糖基化變異體可具有改良之ADCC功能。參見，例如，美國專利公開案第2003/0157108號及第2004/0093621號。與「去海藻糖基化」或「海藻糖缺乏」抗體變異體相關之公開案之實例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO 2005/053742；WO 2002/031140；Okazaki等人J.Mol.Biol.336：1239-1249,2004；Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87：614.2004。能夠產生去海藻糖基化抗體之細胞株之實例包括缺乏蛋白質海藻糖基化作用之Lec13 CHO細胞(Ripka等人Arch.Biochem.Biophys.249：533-545,1986；US 2003/0157108； 及WO 2004/056312 A1，尤其在實例11中)及基因剔除細胞株，諸如α-1,6-海藻糖基轉移酶基因FUT8基因剔除CHO細胞(參見例如Yamane-Ohnuki等人Biotech.Bioeng.87：614,2004；Kanda等人，Biotechnol.Bioeng.,94(4)：680-688,2006；及WO 2003/085107)。
進一步提供具有二等分寡醣之抗體變異體，例如其中連接於抗體之Fc區之雙觸角寡醣係由GlcNAc二等分。此等抗體變異體可具有降低之海藻糖基化及/或改良之ADCC功能。此等抗體變異體之實例描述於例如WO 2003/011878；美國專利第6,602,684號；及US 2005/0123546中。亦提供在連接於Fc區之寡醣中具有至少一個半乳糖殘基之抗體變異體。此等抗體變異體可具有改良之CDC功能。此等抗體變異體描述於例如WO 1997/30087；WO 1998/58964；及WO 1999/22764中。
c)Fc區變異體
在某些實施例中，可將一或多個胺基酸修飾引入本文提供之抗體之Fc區中，藉此產生Fc區變異體。Fc區變異體可包含在一或多個胺基酸位置上包含胺基酸修飾(例如取代)之人類Fc區序列(例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)。
在某些實施例中，本發明涵蓋具有一些而非所有效應功能之抗體變異體，該等效應功能使該抗體變異體成為抗體之活體內半衰期較為重要但某些效應功能(諸如補體及ADCC)不必要或有害之應用所需要的候選物。可進行活體外及/或活體內細胞毒性分析以確認CDC及/或ADCC活性之降低/耗減。舉例而言，可進行Fc受體(FcR)結合分析以確保抗體缺乏FcγR結合(因此可能缺乏ADCC活性)，但保留FcRn結合能力。用於介導ADCC之原代細胞NK細胞僅表現FcγRIII，而單核細胞表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR在造血細胞上之表現概述於Ravetch等人Annu.Rev.Immunol.9：457-492,1991第464頁上之表3中。評估相關分子之ADCC活性之活體外分析的非限制性實例描述於美國專利第5,500,362號(參見例如Hellstrom等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83：7059-7063,1986及Hellstrom等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：1499-1502,1985；美國專利第5,821,337號(參見Bruggemann等人J.Exp.Med.166：1351-1361,1987)中。或者，可採用非放射 性分析方法，(參見例如用於流動式細胞量測術之ACTITM非放射性細胞毒性分析(CellTechnology公司Mountain View,CA)；及CytoTox 96®非放射性細胞毒性分析(Promega,Madison,WI)。適用於此等分析之效應細胞包括周邊血液單核細胞(PBMC)及自然殺手(NK)細胞。或者或另外，相關分子之ADCC活性可例如在動物模型，諸如Clynes等人Proc.Natl Acad.Sci.USA 95：652-656,1998中揭示之動物模型中進行活體內評估。亦可進行C1q結合分析以確認抗體不能結合C1q且因此缺乏CDC活性。參見例如WO 2006/029879及WO 2005/100402中之C1q及C3c結合ELISA。為評估補體活化，可進行CDC分析(參見例如Gazzano-Santoro等人J.Immunol.Methods 202：163,1996；Cragg等人Blood 101：1045-1052,2003；及Cragg等人Blood 103：2738-2743,2004)。亦可使用此項技術中已知之方法對FcRn結合及活體內清除率/半衰期進行測定(參見例如Petkova等人Intl.Immunol.18(12)：1759-1769,2006)。
效應功能降低之抗體包括Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329中之一或多者經取代之抗體(美國專利第6,737,056號)。此等Fc突變體包括在胺基酸位置265、269、270、297及327中之兩者或兩者以上處具有取代之Fc突變體，包括殘基265及297取代成丙胺酸之所謂「DANA」Fc突變體(美國專利第7,332,581號)。
與FcR之結合改良或削弱之某些抗體變異體已有描述。(參見例如美國專利第6,737,056號；WO 2004/056312及Shields等人J.Biol.Chem.9(2)：6591-6604,2001)。
在某些實施例中，抗體變異體包含具有一或多個改良ADCC之胺基酸取代(例如在Fc區之位置298、333及/或334(EU殘基編號)處之取代)之Fc區。
在一些實施例中，在Fc區中進行導致C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)改變(亦即改良或削弱)之改變，例如如美國專利第6,194,551號、WO 99/51642及Idusogie等人J.Immunol.164：4178-4184,2000中所述。
半衰期增加且與負責將母體IgG轉移至胎兒之新生兒Fc受 體(FcRn)(Guyer等人J.Immunol.117：587,1976及Kim等人J.Immunol.24：249,1994)之結合改良的抗體描述於US2005/0014934中。彼等抗體包含其中具有一或多個改良Fc區與FcRn之結合之取代的Fc區。此等Fc變異體包括在以下一或多個Fc區殘基處具有取代之變異體：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如Fc區殘基434之取代(美國專利第7,371,826號)。
亦參見Duncan等人Nature 322：738-40,1988；美國專利第5,648,260號及第5,624,821號；及WO 94/29351，涉及Fc區變異體之其他實例。
d)經半胱胺酸工程改造之抗體變異體
在某些實施例中，可能需要產生半胱胺酸工程改造抗體，例如「硫基單抗(thioMAb)」，其中抗體之一或多個殘基經半胱胺酸殘基取代。在特定實施例中，經取代殘基存在於抗體之可及位點處。藉由用半胱胺酸取代彼等殘基，反應性硫醇基藉此定位在抗體之可及位點處且可用於使抗體結合於其他部分(諸如藥物部分或接頭-藥物部分)以產生免疫結合物，如本文進一步所述。在某些實施例中，任一或多個以下殘基可經半胱胺酸取代：輕鏈之V205(Kabat編號)；重鏈之A118(EU編號)；及重鏈Fc區之S400(EU編號)。可如例如美國專利第7,521,541號中所述來產生半胱胺酸工程改造抗體。
e)抗體衍生物
在某些實施例中，本文提供之抗體可經進一步修飾以含有此項技術中已知且容易獲得之其他非蛋白質部分。適於使抗體衍生化之部分包括但不限於水溶性聚合物。水溶性聚合物之非限制性實例包括(但不限於)聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇之共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚-1,3-二氧雜環戊烷、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/順丁烯二酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)、及葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯啶酮)聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、聚環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙基化多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由於其在水中 之穩定性而可具有製造優勢。該聚合物可具有任何分子量，且可分支或未分支。連接於抗體之聚合物之數目可變化，且若連接一個以上聚合物，則其可為相同或不同分子。一般而言，用於衍生化之聚合物之數目及/或類型可基於包括但不限於欲改良之抗體之特定性質或功能、抗體衍生物是否將在確定條件下用於療法中等考慮因素加以確定。
在另一實施例中，提供抗體與可藉由曝露於輻射而選擇性加熱之非蛋白質部分的結合物。在一個實施例中，非蛋白質部分為碳奈米管(Kam等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102：11600-11605,2005)。輻射可具有任何波長，且包括但不限於不損害普通細胞但會將非蛋白質部分加熱至鄰近於抗體-非蛋白質部分之細胞被殺死之溫度的波長。
B. 重組方法及組合物
可使用重組方法及組合物產生抗體，例如如美國專利第4,816,567號中所描述。在一個實施例中，提供編碼本文中所描述之抗IL-33抗體的經分離核酸。此種核酸可編碼包含該抗體(例如該抗體之輕鏈及/或重鏈)之VL的胺基酸序列及/或包含其VH的胺基酸序列。在另一實施例中，提供包含此種核酸之一或多種載體(例如表現載體)。在另一實施例種，提供包含此種核酸之宿主細胞。在一個此種實施例中，宿主細胞包含(例如，經轉型而具有)：(1)包含編碼包含該抗體之VL之胺基酸序列及包含該抗體之VH之胺基酸序列的核酸的載體；或(2)包含編碼包含該抗體之VL之胺基酸序列的核酸的第一載體及包含編碼包含該抗體之VH之胺基酸序列的核酸的第二載體。在一個實施例中，該宿主細胞為真核細胞，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞、293細胞或淋巴樣細胞(例如Y0、NS0、Sp20細胞)。在一個實施例中，提供製備抗IL-33抗體之方法，其中該方法包括在適合表現該抗體之條件下培養如上文所提供之包含編碼該抗體之核酸的宿主細胞，及視情況自該宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收該抗體。
為了重組產生抗IL-33抗體，分離編碼抗體之核酸(例如，如上所描述)且插入一或多個載體中以便在宿主細胞中進行進一步選殖及/或表現。此種核酸可使用習知程序(例如，藉由使用能夠特異性結合編碼該抗體之重鏈及輕鏈之基因的寡核苷酸探針)容易地分離且測序。
適用於選殖或表現抗體編碼載體之宿主細胞包括本文中所描述之原核細胞或真核細胞。舉例而言，可在細菌中產生抗體，尤其在不需要糖基化及Fc效應功能時。對於抗體片段及多肽在細菌中之表現，參見例如美國專利第5,648,237號、第5,789,199號及第5,840,523號。(亦參見Charlton,Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo編，Humana Press,Totowa,NJ,2003)，第245-254頁，描述抗體片段在大腸桿菌中之表現)。在表現之後，抗體可自細菌細胞糊狀物分離於可溶性部分中且可經進一步純化。
除原核生物之外，諸如絲狀真菌或酵母之真核微生物亦為適於抗體編碼性載體之選殖或表現寄主，包括糖基化路徑已經「人類化」，從而產生具有部分或完全人類糖基化型態之抗體之真菌及酵母菌株。參見Gerngross Nat.Biotech.22：1409-1414,2004及Li等人Nat.Biotech.24：210-215,2006。
適於表現糖基化抗體之寄主細胞亦源於多細胞生物體(無脊椎動物及脊椎動物)。無脊椎動物細胞之實例包括植物及昆蟲細胞。已識別眾多可連同昆蟲細胞一起使用之桿狀病毒株，尤其用於轉染草地黏蟲(Spodoptera frugiperda)細胞。
植物細胞培養物亦可用作宿主。參見例如美國專利第5,959,177號、第6,040,498號、第6,420,548號、第7,125,978號及第6,417,429號(描述用於在轉殖基因植物中產生抗體的PLANTIBODIESTM技術)。
脊椎動物細胞亦可用作宿主。舉例而言，適於在懸浮液中生長之哺乳動物細胞株可能適用。適用哺乳動物宿主細胞株之其他實例為經SV40轉型之猴類腎CV1細胞株(COS-7)；人類胚腎細胞株(如例如Graham等人，J.Gen Virol.36：59,1977中所描述之293或293細胞)；幼倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠塞特利氏細胞(例如，如Mather Biol.Reprod.23：243-251,1980中所描述之TM4細胞)；猴腎細胞(CV1)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；人類子宮頸癌細胞(HELA)；犬類腎細胞(MDCK)；布法羅大鼠肝細胞(BRL 3A)；人類肺細胞(W138)；人類肝細胞(Hep G2)；小鼠乳房腫瘤(MMT 060562)；例 如，如Mather等人，Annals N.Y.Acad.Sci.383：44-68,1982中所描述之TRI細胞；MRC 5細胞；及FS4細胞。其他適用哺乳動物宿主細胞株包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包括DHFR- CHO細胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77：4216,1980)；及骨髓瘤細胞株，諸如Y0、NS0及Sp2/0。關於適用於產生抗體之某些哺乳動物宿主細胞株之綜述，參見例如Yazaki等人Methods in Molecular Biology，第248卷(B.K.C.Lo編，Humana Press,Totowa,NJ)，第255-268頁，2003。
C. 分析法
本文提供之抗IL-33抗體可藉由此項技術中已知的各種分析來鑑別、篩選或表徵其物理/化學性質及/或生物學活性。
1. 結合分析法及其他分析法
在一個態樣中，測試本發明之抗IL-33抗體之抗原結合活性，例如藉由諸如ELISA、西方墨點分析等已知方法。
在另一個態樣中，可使用競爭分析法來鑑別與本發明之抗IL-33抗體競爭結合IL-33的抗體。在某些實施例中，此種競爭抗體所結合之抗原決定基(例如線性或構形抗原決定基)與本發明之抗IL-33抗體所結合之抗原決定基相同。用於對抗體所結合之抗原決定基進行定位之詳細例示性方法提供於Morris「Epitope Mapping Protocols」,Methods in Molecular Biology第66卷(Humana Press,Totowa,NJ),1996中。
在一例示性競爭分析法中，在包含可結合IL-33之第一經標記抗體及據測試能夠與該第一抗體競爭結合IL-33之第二未經標記抗體之溶液中培育經固定之IL-33。該第二抗體可存在於融合瘤上清液中。作為對照，在包含該第一經標記抗體但不包含該第二未經標記抗體之溶液中培育經固定之IL-33。在允許該第一抗體與IL-33結合之條件下培育之後，移除過量未結合抗體，且量測與經固定之IL-33結合之標記的量。若測試樣品中與經固定之IL-33結合之標記的量相對於對照樣品實質上有所降低，則指示該第二抗體與該第一抗體競爭結合IL-33。參見Harlow等人Antibodies：A Laboratory Manual.第14章(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY),1988。
2. 活性分析
在一個態樣中，提供用於鑑別其具有生物活性之抗IL-33抗體之分析法。生物活性可包括例如活體內、活體外或離體結合IL-33(例如血流中之IL-33)或其肽片段。在其他實施例中，生物活性可包括阻斷或中和IL-33或防止IL-33結合配體，例如受體(例如，IL-33受體ST2及/或IL-1RAcP)。在一些實施例中，生物活性可包括結合IL-33上之位點1及阻斷與IL-33受體(亦即，ST2及/或IL-1RAcP)之結合。亦提供在活體內及/或活體外具有此種生物活性之抗體。在某些實施例中，針對此種生物活性測試本發明之抗體。在一些實施例中，在基於細胞之IL-33阻斷分析中針對抑制來測試本發明之抗IL-33抗體。在一些實施例中，在基於細胞之阻斷分析(例如，如本文所述之IL-33 HEK-BLUETM基於細胞之分析(參見例如，實例2及實例8，章節B))中針對抑制誘導之受體活性測試本發明之抗IL-33抗體。在一些實施例中，針對抑制原代細胞中之IL-33活性，例如在原代NK細胞分析(參見例如，實例8，章節C)或原代嗜鹼性球分析(參見例如，實例8，章節D)中測試本發明之抗體。在一些實施例中，在競爭性結合ELISA(參見例如實例8，章節F)中針對抑制IL-33與IL-33受體之結合測試本發明之抗體。
D. 免疫結合物
本發明亦提供包含本文中之抗IL-33抗體與一或多種細胞毒性劑結合之免疫結合物，該等細胞毒性劑為諸如化學治療劑或化學治療藥物、生長抑制劑、毒素(例如蛋白毒素、細菌、真菌、植物或動物來源之酶活性毒素或其片段)或放射性同位素。
在一個實施例中，免疫結合物為抗體-藥物結合物(ADC)，其中抗體與一或多種藥物結合，包括但不限於美登素(參見美國專利第5,208,020號、第5,416,064號及歐洲專利EP 0 425 235 B1)；澳瑞斯他汀，諸如單甲基澳瑞斯他汀藥物部分DE及DF(MMAE及MMAF)(參見美國專利第5,635,483號及第5,780,588號及第7,498,298號)；朵拉司他汀；卡奇黴素或其衍生物(參見美國專利第5,712,374號、第5,714,586號、第5,739,116號、第5,767,285號、第5,770,701號、第5,770,710號、第5,773,001號及 第5,877,296號；Hinman等人，Cancer Res.53：3336-3342,1993；及Lode等人，Cancer Res.58：2925-2928 1998)；蒽環類，諸如道諾黴素或阿黴素(參見Kratz等人，Current Med.Chem.13：477-523,2006；Jeffrey等人，Bioorganic & Med.Chem.Letters 16：358-362,2006；Torgov等人，Bioconj.Chem.16：717-721,2005；Nagy等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97：829-834,2000；Dubowchik等人，Bioorg.& Med.Chem.Letters 12：1529-1532,2002；King等人，J.Med.Chem.45：4336-4343,2002；及美國專利第6,630,579號)；胺甲蝶呤；長春地辛；紫杉烷，諸如多烯紫杉醇、太平洋紫杉醇、拉洛紫杉醇(larotaxel)、特西紫杉醇(tesetaxel)及歐塔紫杉醇(ortataxel)；單端孢黴毒素(trichothecene)；及CC1065。
在另一實施例中，免疫結合物包含如本文中所描述之抗體與酶活性毒素或其片段之結合物，該酶活性毒素包括但不限於白喉A鏈、白喉毒素之非結合活性片段、外毒素A鏈(得自於綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa))、蓖麻毒素A鏈、相思子毒素A鏈、莫迪素(modeccin)A鏈、α-帚麴菌素、油桐蛋白、石竹素蛋白、美國商陸(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII及PAP-S)、苦瓜抑制劑、麻瘋樹毒素、巴豆毒素、肥阜草(sapaonaria officinalis)抑制劑、白樹毒素(gelonin)、米托菌素(mitogellin)、侷限麴菌素、酚黴素、伊諾黴素及單端孢黴毒素。
在另一實施例中，免疫結合物包含如本文中所描述之抗體與放射性原子結合形成之反射性結合物。多種放射性同位素可用於產生放射性結合物。實例包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212及Lu之放射性同位素。當放射性結合物用於偵測時，其可包含用於閃爍研究之放射性原子，例如鍀-99m(tc99m)或I123；或用於核磁共振(NMR)成像(亦稱為磁共振成像，mri)之自旋標記物，諸如碘-123、碘-131、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳或鐵。
抗體與細胞毒性劑之結合物可使用多種雙官能蛋白偶合劑製造，諸如N-丁二醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(SPDP)、丁二醯亞胺基-4-(N-順丁烯二醯亞胺基甲基)環己烷-1-甲酸酯(SMCC)、亞胺基硫雜環戊烷(IT)、醯亞胺酯之雙官能衍生物(諸如己二酸二甲酯HCl)、活性酯(諸如辛 二酸二琥珀醯亞胺酯)、醛(諸如戊二醛)、雙-疊氮化合物(諸如雙(對-疊氮基苯甲醯基)己二胺)、雙-重氮鎓衍生物(諸如雙-(對-重氮鎓苯甲醯基)-乙二胺)、二異氰酸酯(諸如甲苯2,6-二異氰酸酯)及雙-活性氟化合物(諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。舉例而言，可如Vitetta等人，Science 238：1098,1987中所描述來製備篦麻毒素免疫毒素。經碳14標記之1-異硫氰酸酯基苯甲基-3-甲基二伸乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)為用於使放射性核苷酸與抗體結合之例示性螯合劑。參見WO 94/11026。接頭可為有助於在細胞中釋放細胞毒性藥物之「可裂解接頭」。舉例而言，可使用酸不穩定接頭、肽酶敏感性接頭、光不穩定接頭、二甲基接頭或含二硫鍵之接頭(參見例如，Chari等人Cancer Res.52：127-131,1992；美國專利第5,208,020號)。
本文中之免疫結合物或ADC明確涵蓋但不限於用交聯劑試劑製備之該等結合物，該等試劑包括但不限於BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC及磺基-SMPB，及市售SVSB(丁二醯亞胺基-(4-乙烯碸)苯甲酸酯)(例如得自Pierce Biotechnology,Inc.，Rockford，IL.，U.S.A)。
E. 用於診斷及偵測之方法及組合物
在某些實施例中，本文提供之抗IL-33抗體中任一者適用於偵測生物樣品中IL-33之存在。如本文中所使用之術語「偵測」涵蓋定量或定性偵測。在某些實施例中，生物樣品包含細胞或組織，諸如平滑肌、上皮細胞、內皮細胞、血液、血液細胞(例如，巨噬細胞、先天性II型(ILC2)細胞、肥大細胞、嗜鹼性球、嗜伊紅白血球及樹突細胞)、中樞神經細胞細胞(例如，神經膠質細胞)或眼睛細胞(例如，眼睛之視網膜細胞(例如，Müller細胞或視網膜色素上皮(RPE)細胞)及血管內皮細胞)。
在一個實施例中，提供用於診斷或偵測方法中之抗IL-33抗體。在另一態樣中，提供在生物樣品中偵測IL-33之存在的方法。在某些實施例中，該方法包括使該生物樣品與如本文中所描述之抗IL-33抗體在允許該抗IL-33抗體與IL-33結合之條件下接觸，及偵測該抗IL-33抗體與IL-33之間是否形成複合物。此種方法可為活體外或活體內方法。在一個實施例 中，抗IL-33抗體用於選擇適合於用抗IL-33抗體療法之受試者，例如，其中IL-33為用於選擇患者之生物標誌物。
可使用本發明之抗體診斷之例示性病症包括IL-33介導之病症，包括例如發炎性病狀(例如，氣喘、敗血症、敗血性休克、異位性皮炎、過敏性鼻炎、類風濕性關節炎及慢性阻塞性肺病(COPD))、免疫病症(例如，氣喘、類風濕性關節炎、過敏、異位性過敏、過敏性、過敏性休克、過敏性鼻炎、牛皮癬、發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病、糖尿病及肝病)、纖維變性病症(例如，肺纖維化(例如，特發性肺纖維化)、嗜伊紅白血球性病症(例如，嗜伊紅白血球相關之胃腸病症(EGID)，包括嗜伊紅白血球性食管炎)、感染(例如，蠕蟲感染、原蟲感染及病毒感染)、疼痛(例如，發炎性疼痛)、中樞神經系統病症(例如，阿茲海默氏病)、實體腫瘤(例如，乳腺腫瘤、結腸腫瘤、前列腺腫瘤、肺腫瘤、腎腫瘤、肝腫瘤、胰腺腫瘤、胃腫瘤、腸腫瘤、腦腫瘤、骨腫瘤及皮膚腫瘤)及眼科病症(例如，年齡相關性黃斑變性(AMD)或眼睛之視網膜病變)。在一些情形下，可使用本發明之抗體診斷的眼科病症包括AMD(例如，濕性AMD、乾性AMD、中期AMD、晚期AMD及地圖狀萎縮(GA))、視網膜病變(例如，糖尿病性視網膜病變(DR)、早產兒視網膜病變(ROP)及高原DR)、息肉樣脈絡膜血管病變(PCV)、糖尿病性黃斑水腫、乾眼病、貝塞特氏病、視網膜脫離、青光眼、葡萄膜炎(例如，感染性及非感染性葡萄膜炎)、色素性視網膜炎、萊伯氏先天性黑朦、斯塔加特氏病、創傷性眼損傷及結膜炎(例如，感染性結膜炎、非感染性結膜炎及過敏性結膜炎)。
在一些情形下，眼科病症包括AMD(包括濕性AMD、乾性AMD及GA)、視網膜病變(例如，DR及ROP)、PCV、糖尿病性黃斑水腫、乾眼病、貝塞特氏病、過敏性結膜炎及視網膜脫離。
在其他情形下，眼科病症包括中期AMD、晚期AMD、青光眼、葡萄膜炎(例如，感染性及非感染性葡萄膜炎)、色素性視網膜炎、萊伯氏先天性黑朦、斯塔加特氏病、高原糖尿病性視網膜病變、創傷性眼損傷及結膜炎(例如，感染性結膜炎及非感染性結膜炎)。
在某些實施例中，提供經標記之抗IL-33抗體。標記包括但 不限於例如藉由酶反應或分子間相互作用直接偵測之標記或部分(諸如螢光標記、發色標記、電子緻密標記、化學發光標記及放射性標記)，以及間接偵測之部分，諸如酶或配體。例示性標記包括但不限於放射性同位素32P、14C、125I、3H及131I；螢光團，諸如稀土螯合物或螢光素及其衍生物、若丹明及其衍生物、丹醯、傘形酮；螢光素酶，例如螢光蟲螢光素酶及細菌螢素光酶(美國專利第4,737,456號)；螢光素；2,3-二氫酞嗪二酮；辣根過氧化物酶(HRP)；鹼性磷酸酶；β-半乳糖苷酶；葡糖澱粉酶；溶菌酶；醣類氧化酶，例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖-6-磷酸脫氫酶；雜環氧化酶，諸如尿酸酶及黃嘌昤氧化酶，該等標記係與採用過氧化氫來氧化染料前驅物之酶偶合，諸如HRP、乳酸過氧化物酶或微過氧化物酶、生物素/親和素、自旋標記、噬菌體標記、穩定自由基及其類似物。
F. 醫藥調配物
本發明之抗IL-33抗體之醫藥調配物係藉由將具有所要純度之此種抗體與一或多種視情況選用之醫藥學上可接受之載劑(參見例如，Remington’s Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.編，1980)混合呈凍乾調配物或水溶液形式來製備。醫藥學上可接受之載劑在所採用之劑量及濃度下一般對受體無毒，且包括但不限於：緩衝劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苯甲基氯化銨；氯化六烴季銨；苯紮氯銨；苄索氯銨；苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯啶酮；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、二醣及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如，鋅-蛋白錯合物)；及/或非離子介面活性劑，諸如聚乙二醇(PEG)。本文中之例示性醫藥學上可接受之載劑進一步包括間質藥物分散劑，諸如可溶性中性活性透明質酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人類可溶性PH-20透明質酸酶糖蛋白，諸如rHuPH20 (HYLENEX®，Baxter International,Inc.)。某些例示性sHASEGP及使用方法(包括rHuPH20)描述於美國專利公開案第2005/0260186號及第2006/0104968號中。在一個態樣中，sHASEGP係與一或多種其他糖胺聚糖(諸如軟骨素酶)組合。
例示性凍乾抗體調配物描述於美國專利第6,267,958號中。水性抗體調配物包括美國專利第6,171,586號及WO 2006/044908中所描述者，後者之調配物包括組胺酸-乙酸鹽緩衝液。
本文中之調配物亦可含有超過一種對於所治療之特定適應症而言必需存在的活性成分，優選具有不會對彼此造成不利影響的互補活性的活性成分。例如，可能希望進一步提供ST2結合拮抗劑、補體路徑抑制劑(例如，因子D結合拮抗劑)、HtrA1結合拮抗劑、VEGF拮抗劑、類胰蛋白酶-β結合拮抗劑、在Th2細胞上表現之化學引誘劑受體同源分子(CRTH2)結合拮抗劑、介白素-13(IL-13)結合拮抗劑、介白素-17(IL-17)結合拮抗劑、JAK1拮抗劑及/或介白素-5(IL-5)結合拮抗劑。在一些情形下，該補體路徑抑制劑為因子D結合拮抗劑。在一些情形下，該因子D結合拮抗劑為抗因子D抗體或其抗原結合片段，例如，如以下在章節G「Therapeutic Methods and Compositions」中所描述。在一些情形下，該HtrA1結合拮抗劑為抗HtrA1抗體或其抗原結合片段，例如，如以下在章節G「Therapeutic Methods and Compositions」中所描述。在一些情形下，該抗HtrA1抗體片段為Fab、Fab'-SH、Fv、scFv或(Fab')2片段。在一些情形下，該抗因子D抗體片段為Fab、Fab'-SH、Fv、scFv或(Fab')2片段。在一些情形下，該VEGF拮抗劑為抗VEGF抗體或其抗原結合片段，例如，如以下在章節G「Therapeutic Methods and Compositions」中所描述。在一些情形下，該抗VEGF抗體片段為Fab、Fab'-SH、Fv、scFv或(Fab')2片段。在一些情形下，該VEGF拮抗劑為抗VEGF受體抗體或其抗原結合片段。在一些情形下，該抗VEGF受體抗體片段為Fab、Fab'-SH、Fv、scFv或(Fab')2片段。該等活性成分適合以組合形式以對預定目的有效之量存在。
活性成分可嵌埋在所製備之微膠囊中，例如藉由團聚技術或藉由介面聚合，例如羥甲基纖維素或明膠微膠囊及聚(甲基丙烯酸甲酯)微膠 囊，分別嵌埋於膠體藥物傳遞系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米粒子及奈米膠囊)或粗乳液中。該等技術揭示於Remington’s Pharmaceutical Sciences第16版，Osol,A.編，1980中。
可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑之適合實例包括含有該抗體之固體疏水性聚合物之半透性基質，該等基質呈成形物品形式，例如膜或微膠囊。
對於傳遞至眼睛(經眼傳遞)，本發明之抗體可例如與眼科學上可接受之防腐劑、共溶劑、介面活性劑、黏度增強劑、滲透增強劑、緩衝劑、氯化鈉及/或水組合。可包括防腐劑例如以抑制使用期間之微生物污染。適合防腐劑包括：乙二胺四乙酸二鈉、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、山梨酸、苯乙醇、氯丁醇、聚四級銨鹽-1或此項技術中已知之其他試劑。通常以0.001至1.0% w/v之水準採用此類防腐劑。在一些情形下，本發明之醫藥調配物不包括防腐劑。在某些情形下，意欲局部投與至眼睛之組合物可調配為滴眼劑或眼軟膏劑。在一些情形下，抗體之總量將為此種調配物之約0.001至1.0%(w/w)，例如，約0.01至約1.0%(w/w)。
欲用於活體內投與之調配物一般為無菌的。無菌可藉由例如通過無菌過濾膜進行過濾而容易地實現。
G. 治療方法及組合物
本發明之抗IL-33抗體中之任一者可用於治療方法中。
本發明提供一種IL-33軸結合拮抗劑，其係用作藥劑。在一個態樣中，提供一種抗IL-33抗體，其係用作藥劑。在其他態樣中，提供一種抗IL-33抗體，其係用於治療IL-33介導之病症。在某些實施例中，提供一種抗IL-33抗體，其係用於治療方法。在某些實施例中，本發明提供一種抗IL-33抗體，其係用於治療患有IL-33介導之病症之個體的方法，該方法包括向該個體投與有效量之抗IL-33抗體。在一個此種實施例中，該方法進一步包括向該個體投與有效量之至少一種額外治療劑，例如，如下文所描述。根據上述實施例中任一者之「個體」較佳為人類。
本發明提供一種IL-33軸結合拮抗劑，其係用於製造或製備藥劑。在另一態樣中，本發明提供抗IL-33抗體用於製造或製備藥劑之用途。 在一個實施例中，該藥劑係用於治療IL-33介導之病症。在另一實施例中，該藥劑係用於治療IL-33介導之病症的方法中，該方法包括向患有IL-33介導之病症的個體投與有效量之該藥劑。在一個此種實施例中，該方法進一步包括向該個體投與有效量之至少一種額外治療劑，例如，如下文所描述。根據上述實施例中任一者之「個體」可為人類。
在另一態樣中，本發明提供特異性結合IL-33及IL-13兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段在製造用於發炎性病症(諸如，例如氣喘、氣道高反應性、氣道發炎、敗血症、敗血性休克、異位性皮炎、過敏性鼻炎、類風濕性關節炎或慢性阻塞性肺病(COPD))或纖維變性病症(諸如，例如特發性肺纖維化(IPF))之藥劑中的用途。在一個例示性實施例中，本發明提供特異性結合IL-33及IL-13兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段在製造用於治療氣喘之藥劑中的用途。該雙特異性抗體可包含特異性結合IL-33之結合域，該結合域來源於本文所述之抗IL-33抗體中任一者。該雙特異性抗體可包含如本文所述之特異性結合IL-13之結合域。在一個例示性實施例中，特異性結合IL-33及IL-13兩者之雙特異性抗體包含特異性結合IL-33之第一結合域，該第一結合域包含以下6個HVR：HVR-H1，其包含SFSMS(SEQ ID NO：1)之胺基酸序列；HVR-H2，其包含TISGGKTFTDYVDSVKG(SEQ ID NO：2)之胺基酸序列；HVR-H3，其包含ANYGNWFFEV(SEQ ID NO：3)之胺基酸序列；HVR-L1，其包含RASESVAKYGLSLLN(SEQ ID NO：4)之胺基酸序列；HVR-L2，其包含AASNRGS(SEQ ID NO：5)之胺基酸序列；及HVR-L3，其包含QQSKEVPFT(SEQ ID NO：6)之胺基酸序列；及特異性結合IL-13之第二結合域，該第二結合域包含以下6個HVR：HVR-H1，其包含AYSVN(SEQ ID NO：296)之胺基酸序列；HVR-H2，其包含MIWGDGKIVYNSALKS(SEQ ID NO：297)之胺基酸序列；HVR-H3，其包含DGYYPYAMDN(SEQ ID NO：298)之胺基酸序列；HVR-L1，其包含RASKSVDSYGNSFMH(SEQ ID NO：299)之胺基酸序列；HVR-L2，其包含LASNLES(SEQ ID NO：300)之胺基酸序列；及HVR-L3，其包含QQNNEDPRT(SEQ ID NO：301)之胺基酸序列。在另一實施例中，特異性結合IL-33及IL-13兩者之雙特異性抗體包含特異性結合 IL-33之第一結合域，該第一結合域包含：(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：36之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：37之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及特異性結合IL-13之第二結合域，該第二結合域包含：(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：302之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：303之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在另一實施例中，特異性結合IL-33及IL-13兩者之雙特異性抗體包含特異性結合IL-33之第一結合域，該第一結合域包含：(a)VH域，其包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列；及特異性結合IL-13之第二結合域，該第二結合域包含：(a)VH域，其包含SEQ ID NO：302之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含SEQ ID NO：303之胺基酸序列。在另一個實施例中，特異性結合IL-33及IL-13兩者之雙特異性抗體包含：(a)特異性結合IL-33之第一重鏈及第一輕鏈，其中該第一重鏈包含與SEQ ID NO：308之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，且該第一輕鏈包含與SEQ ID NO：309之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)特異性結合IL-13之第二重鏈及第二輕鏈，其中該第二重鏈包含與SEQ ID NO：304之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，且該第二輕鏈包含與SEQ ID NO：305之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在另一實施例中，特異性結合IL-33及IL-13兩者之雙特異性抗體包含：(a)特異性結合IL-33之第一重鏈及第一輕鏈，其中該第一重鏈包含SEQ ID NO：308之胺基酸序列且該第一輕鏈包含SEQ ID NO：309之胺基酸序列；及(b)特異性結合IL-13之第二重鏈及第二輕鏈，其中該第二重鏈包含SEQ ID NO：304之胺基酸序列且該第二輕鏈包含SEQ ID NO：305之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供特異性結合IL-33及因子D兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段在製造用於治療地圖狀萎縮(GA)之藥劑中之用途。該雙特異性抗體可包含特異性結合IL-33之結合域，該結合域來源於本文所述之抗IL-33抗體中任一者。該雙特異性抗體可包含特異性結合因子D之結合域，該結合域來源於以下所述之抗因子D抗體中任一 者。在一些實施例中，該抗原結合抗體片段為(Fab’)2片段。
在另一個態樣中，本發明提供特異性結合IL-33及HtrA1兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段在製造用於治療地圖狀萎縮(GA)、AMD(濕性或乾性)、DR、PCV或ROP之藥劑中之用途。該雙特異性抗體可包含特異性結合IL-33之結合域，該結合域來源於本文所述之抗IL-33抗體中任一者。該雙特異性抗體可包含特異性結合HtrA1之結合域，該結合域來源於本文所述之抗HtrA1抗體中任一者。在一些實施例中，該抗原結合抗體片段為(Fab’)2片段。
在又一態樣中，本發明提供特異性結合IL-33及VEGF兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段在製造用於治療濕性AMD之藥劑中之用途。該雙特異性抗體可包含特異性結合IL-33之結合域，該結合域來源於本文所述之抗IL-33抗體中任一者。該雙特異性抗體可包含特異性結合VEGF之結合域，該結合域來源於以下所述之抗VEGF抗體中任一者。在一些實施例中，該抗原結合抗體片段為(Fab’)2片段。
在另一態樣中，本發明提供一種用於治療IL-33介導之病症的方法。在一些情形下，該方法包括向患有此種IL-33介導之病症的個體投與有效量之IL-33軸結合拮抗劑。在一個實施例中，該方法包括向患有此種IL-33介導之病症的個體投與有效量之抗IL-33抗體。在一個此種實施例中，該方法進一步包括向該個體投與有效量之至少一種額外治療劑，如下文所描述。根據上述實施例中任一者之「個體」可為人類。
在另一態樣中，本發明提供包含本文中所提供之抗IL-33抗體中任一者的醫藥調配物，其係用於例如任何上述治療方法。在一個實施例中，醫藥調配物包含本文中所提供之抗IL-33抗體中任一者及醫藥學上可接受之載劑。在另一實施例中，醫藥調配物包含本文中所提供之抗IL-33抗體中任一者及至少一種額外治療劑，例如，如下文所描述。
在前述態樣中之任一者中，IL-33介導之病症可為發炎性病狀、免疫病症、纖維變性病症、嗜伊紅白血球性病症、感染、疼痛、中樞神經系統病症、實體腫瘤或眼科病症。例如，在一些情形下，發炎性病狀可為氣喘、氣道高反應性、氣道發炎、敗血症、 敗血性休克、異位性皮炎、過敏性鼻炎、類風濕性關節炎或慢性阻塞性肺病(COPD)。在一些情形下，免疫病症可為氣喘、類風濕性關節炎、過敏、異位性過敏、過敏性、過敏性休克、過敏性鼻炎、牛皮癬、發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病、糖尿病或肝病。在一些情形下，該纖維變性疾病可為特發性肺纖維化(IPF)。在一些情形下，該嗜伊紅白血球性病症可為嗜伊紅白血球相關之胃腸病症(EGID)。在一些情形下，EGID可為嗜伊紅白血球性食管炎。在一些情形下，感染可為蠕蟲感染、原蟲感染或病毒感染。在一些情形下，原蟲感染可為碩大利什曼原蟲感染。在一些情形下，病毒感染可為呼吸道融合性病毒(RSV)感染或流行性感冒感染。在一些情形下，疼痛可為發炎性疼痛。在一些情形下，該中樞神經系統病症可為阿茲海默氏病。在一些情形下，該實體腫瘤可為乳腺腫瘤、結腸腫瘤、前列腺腫瘤、肺腫瘤、腎腫瘤、肝腫瘤、胰腺腫瘤、胃腫瘤、腸腫瘤、腦腫瘤、骨腫瘤或皮膚腫瘤。在具體情形下，IL-33介導之病症可為氣喘、過敏性鼻炎、異位性皮炎、COPD、嗜伊紅白血球性食管炎或肺纖維化(例如，IPF)。例如，在一些情形下，IL-33介導之病症為氣喘。在其他情形下，IL-33介導之病症為肺纖維化(例如，IPF)。
在前述態樣中任一者之一些情形下，IL-33介導之病症可為眼科病症，包括但不限於年齡相關性黃斑變性(AMD)(包括濕性AMD、乾性AMD、中期AMD、晚期AMD及地圖狀萎縮(GA))、視網膜病變(例如，糖尿病性視網膜病變(DR)、早產兒視網膜病變(ROP)及高原DR)、息肉樣脈絡膜血管病變(PCV)、糖尿病性黃斑水腫、乾眼病、貝塞特氏病、視網膜脫離、青光眼、葡萄膜炎(例如，感染性及非感染性葡萄膜炎)、色素性視網膜炎、萊伯氏先天性黑朦、斯塔加特氏病、創傷性眼損傷及結膜炎(例如，感染性結膜炎、非感染性結膜炎及過敏性結膜炎)。
在一些情形下，眼科病症包括AMD(包括濕性AMD、乾性AMD及GA)、視網膜病變(例如，DR及ROP)、PCV、糖尿病性黃斑水腫、乾眼病、貝塞特氏病、過敏性結膜炎及視網膜脫離。
在其他情形下，眼科病症包括中期AMD、晚期AMD、青 光眼、葡萄膜炎(例如，感染性及非感染性葡萄膜炎)、色素性視網膜炎、萊伯氏先天性黑朦、斯塔加特氏病、高原糖尿病性視網膜病變、創傷性眼損傷及結膜炎(例如，感染性結膜炎及非感染性結膜炎)。
例如，本發明提供一種治療有需要之受試者中之眼科病症的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之IL-33軸結合拮抗劑。在一些情形下，該IL-33軸結合拮抗劑為抗IL-33抗體，例如本發明之IL-33抗體。在一些情形下，該眼科病症可選自由以下組成之群：年齡相關性黃斑變性(AMD)(包括濕性AMD、乾性AMD、中期AMD、晚期AMD及地圖狀萎縮(GA))、視網膜病變(例如，糖尿病性視網膜病變(DR)、早產兒視網膜病變(ROP)及高原DR)、息肉樣脈絡膜血管病變(PCV)、糖尿病性黃斑水腫、乾眼病、貝塞特氏病、視網膜脫離、青光眼、葡萄膜炎(例如，感染性及非感染性葡萄膜炎)、色素性視網膜炎、萊伯氏先天性黑朦(Leber Congenital Amaurosis)(亦稱為萊伯氏先天性黑朦(Leber’s congenital amaurosis))、斯塔加特氏病、創傷性眼損傷及結膜炎(例如，感染性結膜炎、非感染性結膜炎及過敏性結膜炎)。在一些情形下，眼科病症包括AMD(包括濕性AMD、乾性AMD及GA)、視網膜病變(例如，DR及ROP)、PCV、糖尿病性黃斑水腫、乾眼病、貝塞特氏病、過敏性結膜炎及視網膜脫離。在其他情形下，眼科病症包括中期AMD、晚期AMD、青光眼、葡萄膜炎(例如，感染性及非感染性葡萄膜炎)、色素性視網膜炎、萊伯氏先天性黑朦、斯塔加特氏病、高原糖尿病性視網膜病變、創傷性眼損傷及結膜炎(例如，感染性結膜炎及非感染性結膜炎)。
IL-33軸結合拮抗劑(例如，本發明之抗IL-33抗體)可單獨或與其他藥劑組合用於療法中。舉例而言，IL-33軸結合拮抗劑(例如，本發明之抗IL-33抗體)可與至少一種額外治療劑共同投與。在某些實施例中，額外治療劑為ST2結合拮抗劑、補體路徑抑制劑(例如，因子D結合拮抗劑)、HtrA1結合拮抗劑、VEGF拮抗劑、類胰蛋白酶-β結合拮抗劑、在Th2細胞上表現之化學引誘劑受體同源分子(CRTH2)結合拮抗劑、介白素-13(IL-13)結合拮抗劑、介白素-17(IL-17)結合拮抗劑、JAK1拮抗劑及/或介白素-5(IL-5)結合拮抗劑。在一些實施例中，額外治療劑為化學治療劑、抗激素劑、 細胞毒性劑、生長抑制劑或其組合。
例如，IL-33軸結合拮抗劑(例如，本發明之抗IL-33抗體)可與抗IL-13抗體共同投與，例如用於治療發炎性病症，諸如，例如氣喘、氣道高反應性、氣道發炎、敗血症、敗血性休克、異位性皮炎、過敏性鼻炎、類風濕性關節炎或慢性阻塞性肺病(COPD)；或纖維變性病症，諸如，例如特發性肺纖維化(IPF)。在一個例示性實施例中，IL-33軸結合拮抗劑(例如，本發明之抗IL-33抗體)可與抗IL-13抗體共同投與以用於治療氣喘。本文所述之抗IL-13抗體中任一者可與抗IL-33軸結合拮抗劑組合投與。在一個實施例中，抗IL-33抗體係與抗IL-13抗體組合投與。在一個例示性實施例中，該抗IL-33抗體包含以下6個HVR：HVR-H1，其包含SFSMS(SEQ ID NO：1)之胺基酸序列；HVR-H2，其包含TISGGKTFTDYVDSVKG(SEQ ID NO：2)之胺基酸序列；HVR-H3，其包含ANYGNWFFEV(SEQ ID NO：3)之胺基酸序列；HVR-L1，其包含RASESVAKYGLSLLN(SEQ ID NO：4)之胺基酸序列；HVR-L2，其包含AASNRGS(SEQ ID NO：5)之胺基酸序列；及HVR-L3，其包含QQSKEVPFT(SEQ ID NO：6)之胺基酸序列；且該抗IL-13抗體包含以下6個HVR：HVR-H1，其包含AYSVN(SEQ ID NO：296)之胺基酸序列；HVR-H2，其包含MIWGDGKIVYNSALKS(SEQ ID NO：297)之胺基酸序列；HVR-H3，其包含DGYYPYAMDN(SEQ ID NO：298)之胺基酸序列；HVR-L1，其包含RASKSVDSYGNSFMH(SEQ ID NO：299)之胺基酸序列；HVR-L2，其包含LASNLES(SEQ ID NO：300)之胺基酸序列；及HVR-L3，其包含QQNNEDPRT(SEQ ID NO：301)之胺基酸序列。在另一實施例中，該抗IL-33抗體包含：(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：36之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：37之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；且該抗IL-13抗體包含：(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：302之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：303之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在另一實施例中，該抗IL-33抗體包含：(a)VH域，其包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列；且該抗IL-13抗體包含(a) VH域，其包含SEQ ID NO：302之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含SEQ ID NO：303之胺基酸序列。在另一實施例中，該抗IL-33包含：重鏈，其包含與SEQ ID NO：308之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：309之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；且該抗IL-13抗體包含：重鏈，其包含與SEQ ID NO：304之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：305之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在另一實施例中，該抗IL-33包含：重鏈，其包含SEQ ID NO：308之胺基酸序列，及輕鏈，其包含SEQ ID NO：309之胺基酸序列；且該抗IL-13抗體包含：重鏈，其包含SEQ ID NO：304之胺基酸序列，及輕鏈，其包含SEQ ID NO：305之胺基酸序列。
在另一實例中，IL-33軸結合拮抗劑(例如，本發明之抗IL-33抗體)可與補體路徑抑制劑共同投與。在一些情形下，補體路徑抑制劑可為替代補體路徑(例如，因子D、備解素、因子B、因子Ba及因子Bb)或經典補體路徑(例如，C3a、C5、C5a、C5b、C6、C7、C8、C9及C5b-9)之抑制劑。在一些情形下，該補體路徑抑制劑可為WO 2007/056227中所描述之任何補體路徑抑制劑，該專利以全文引用之方式併入本文中。在一些情形下，該補體路徑抑制劑可為因子D結合拮抗劑。在具體情形下，因子D結合拮抗劑可為抗因子D抗體或其抗原結合片段，例如，描述於WO 2007/056227、WO 01/70818及/或US 2002/0081293中之任何抗因子D抗體，該等專利各自以全文引用之方式併入本文中。作為非限制性實例，在一些情形下，抗因子D抗體可包含與自由美國菌種保存中心(ATCC)寄存且名稱為HB12476之融合瘤產生之單株抗體166-32具有至少70%序列一致性(例如，70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或該單株抗體之序列。在一些情形下，該抗因子D抗體為單株抗體166-32之人類化衍生物。在一些情形下，該抗因子D抗體與單株抗體166-32結合相同抗原決定基。在一些情形下，該抗因子D抗體為來源於單株抗體166-32之抗體片段。在一些 情形下，來源於單株抗體166-32之抗體片段為Fab、Fab'-SH、Fv、scFv或(Fab')2片段。在一些實施例中，來源於單株抗體166-32之抗體片段為Fab。
在另一實例中，IL-33軸結合拮抗劑(例如，本發明之抗IL-33抗體)可與HtrA1結合拮抗劑共同投與。在一情形下，該HtrA1結合拮抗劑可為抗HtrA1抗體或其抗原結合片段。可使用此項技術中已知及/或本文所述之抗HtrA1抗體或其抗原結合片段中之任一者。例如，在一些情形下，該抗HtrA1抗體為WO 2013/055998中所描述之抗HtrA1抗體。在一些情形下，該抗HtrA1抗體片段為Fab、Fab'-SH、Fv、scFv或(Fab')2片段。在一些實施例中，該抗HtrA1抗體片段為Fab。
在另一實例中，IL-33軸結合拮抗劑(例如，本發明之抗IL-33抗體)可與VEGF拮抗劑共同投與。在一些情形下，該VEGF拮抗劑可為抗VEGF抗體或其抗原結合片段。可使用此項技術中已知及/或本文所述之抗VEGF抗體或其抗原結合片段中之任一者。例如，在一些情形下，該抗VEGF抗體為貝伐單抗(AVASTIN®)或雷珠單抗(LUCENTIS®)。在一些情形下，該抗VEGF抗體片段為Fab、Fab'-SH、Fv、scFv或(Fab')2片段。在一些實施例中，該抗VEGF抗體片段為Fab。
在一些情形下，抗VEGF抗體或其抗原結合片段為或來源於WO 2005/044853中所描述之任何抗VEGF抗體，該專利以全文引用之方式併入本文中。例如，在一些情形下，抗VEGF抗體為或來源於G6系列抗體(例如，G6、G6-8、G6-23、G6-23.1、G6-23.2或G6-31)或B20系列抗體(例如，B20、B20-4或B20-4.1)。例如，在一些情形下，抗VEGF抗體包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：334、337或340中任一者具有至少80%序列一致性(例如至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：334、337或340中任一者之序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：335、336、338、339或341中任一者具有至少80%序列一致性(例如至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：335、336、 338、339或341中任一者之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。例如，在一些情形下，抗VEGF抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO：334之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：335之胺基酸序列(諸如抗VEGF抗體G6)。在一些情形下，抗VEGF抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO：334之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：336之胺基酸序列(諸如抗VEGF抗體G6.31)。在一些情形下，抗VEGF抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO：337之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：338之胺基酸序列(諸如抗VEGF抗體B20)。在其他情形下，抗VEGF抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO：337之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：339之胺基酸序列(諸如抗VEGF抗體B20-4)。在其他情形下，抗VEGF抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO：340之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：341之胺基酸序列(諸如抗VEGF抗體B20-4.1)。在一些實施例中，該抗VEGF抗體為前述抗體中任一者之人類化衍生物。在一些實施例中，該抗VEGF抗體為來源於前述抗體中任一者之抗體片段。在一些實施例中，該抗體片段為Fab、Fab'-SH、Fv、scFv或(Fab')2片段。在一些實施例中，該抗體片段為Fab。
在一個態樣中，本發明提供一種治療有需要之受試者中之發炎性病症(諸如，例如氣喘、氣道高反應性、氣道發炎、敗血症、敗血性休克、異位性皮炎、過敏性鼻炎、類風濕性關節炎或慢性阻塞性肺病(COPD))或纖維變性病症(諸如，例如特發性肺纖維化(IPF))的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之IL-33軸結合拮抗劑(例如，本發明之抗IL-33抗體)及治療有效量之抗IL-13抗體。在一個例示性實施例中，本發明提供一種治療有需要之受試者中之氣喘的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之IL-33軸結合拮抗劑(例如，本發明之抗IL-33抗體)及治療有效量之抗IL-13抗體。本文所述之抗IL-13抗體中任一者可與抗IL-33軸結合拮抗劑組合投與。在一個實施例中，抗IL-33抗體係與抗IL-13抗體組合投與。在一個例示性實施例中，該抗IL-33抗體包含以下6個HVR：HVR-H1，其包含SFSMS(SEQ ID NO：1)之胺基酸序列；HVR-H2，其包含TISGGKTFTDYVDSVKG(SEQ ID NO：2)之胺基酸序列；HVR-H3，其包含 ANYGNWFFEV(SEQ ID NO：3)之胺基酸序列；HVR-L1，其包含RASESVAKYGLSLLN(SEQ ID NO：4)之胺基酸序列；HVR-L2，其包含AASNRGS(SEQ ID NO：5)之胺基酸序列；及HVR-L3，其包含QQSKEVPFT(SEQ ID NO：6)之胺基酸序列；且該抗IL-13抗體包含以下6個HVR：HVR-H1，其包含AYSVN(SEQ ID NO：296)之胺基酸序列；HVR-H2，其包含MIWGDGKIVYNSALKS(SEQ ID NO：297)之胺基酸序列；HVR-H3，其包含DGYYPYAMDN(SEQ ID NO：298)之胺基酸序列；HVR-L1，其包含RASKSVDSYGNSFMH(SEQ ID NO：299)之胺基酸序列；HVR-L2，其包含LASNLES(SEQ ID NO：300)之胺基酸序列；及HVR-L3，其包含QQNNEDPRT(SEQ ID NO：301)之胺基酸序列。在另一實施例中，該抗IL-33抗體包含：(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：36之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：37之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；且該抗IL-13抗體包含：(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：302之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：303之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在另一實施例中，該抗IL-33抗體包含：(a)VH域，其包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列的；且該抗IL-13抗體包含(a)VH域，其包含SEQ ID NO：302之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含SEQ ID NO：303之胺基酸序列。在另一實施例中，該抗IL-33包含：重鏈，其包含與SEQ ID NO：308之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：309之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；且該抗IL-13抗體包含：重鏈，其包含與SEQ ID NO：304之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及輕鏈，其包含與SEQ ID NO：305之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在另一實施例中，該抗IL-33包含：重鏈，其包含SEQ ID NO：308之胺基酸序列，及輕鏈，其包含SEQ ID NO：309之胺基酸序列；且該抗IL-13抗體包含：重鏈，其包含SEQ ID NO：304之胺基酸序列，及輕鏈，其包含SEQ ID NO：305之胺基酸序列。
在另一個態樣中，本發明提供一種治療有需要之受試者中之發炎性病症(諸如，例如氣喘、氣道高反應性、氣道發炎、敗血症、敗血性休克、異位性皮炎、過敏性鼻炎、類風濕性關節炎或慢性阻塞性肺病(COPD))或纖維變性病症(諸如，例如特發性肺纖維化(IPF))的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之特異性結合IL-33及IL-13兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段。在一個例示性實施例中，本發明提供一種治療有需要之受試者中之氣喘的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之特異性結合IL-33及IL-13兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段。該雙特異性抗體可包含特異性結合IL-33之結合域，該結合域來源於本文所述之抗IL-33抗體中任一者。該雙特異性抗體可包含如本文所述之特異性結合IL-13之結合域。在一個例示性實施例中，特異性結合IL-33及IL-13兩者之雙特異性抗體包含特異性結合IL-33之第一結合域，該第一結合域包含以下6個HVR：HVR-H1，其包含SFSMS(SEQ ID NO：1)之胺基酸序列；HVR-H2，其包含TISGGKTFTDYVDSVKG(SEQ ID NO：2)之胺基酸序列；HVR-H3，其包含ANYGNWFFEV(SEQ ID NO：3)之胺基酸序列；HVR-L1，其包含RASESVAKYGLSLLN(SEQ ID NO：4)之胺基酸序列；HVR-L2，其包含AASNRGS(SEQ ID NO：5)之胺基酸序列；及HVR-L3，其包含QQSKEVPFT(SEQ ID NO：6)之胺基酸序列；及特異性結合IL-13之第二結合域，該第二結合域包含以下6個HVR：HVR-H1，其包含AYSVN(SEQ ID NO：296)之胺基酸序列；HVR-H2，其包含MIWGDGKIVYNSALKS(SEQ ID NO：297)之胺基酸序列；HVR-H3，其包含DGYYPYAMDN(SEQ ID NO：298)之胺基酸序列；HVR-L1，其包含RASKSVDSYGNSFMH(SEQ ID NO：299)之胺基酸序列；HVR-L2，其包含LASNLES(SEQ ID NO：300)之胺基酸序列；及HVR-L3，其包含QQNNEDPRT(SEQ ID NO：301)之胺基酸序列。在另一實施例中，特異性結合IL-33及IL-13兩者之雙特異性抗體包含特異性結合IL-33之第一結合域，該第一結合域包含：(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：36之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：37之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及特異性結合IL-13之第二結合域，該第二結合域包含：(a)VH域， 其包含與SEQ ID NO：302之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：303之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在另一實施例中，特異性結合IL-33及IL-13兩者之雙特異性抗體包含特異性結合IL-33之第一結合域，該第一結合域包含：(a)VH域，其包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列；及特異性結合IL-13之第二結合域，該第二結合域包含：(a)VH域，其包含SEQ ID NO：302之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含SEQ ID NO：303之胺基酸序列。在另一個實施例中，特異性結合IL-33及IL-13之雙特異性抗體包含：(a)特異性結合IL-33之第一重鏈及第一輕鏈，其中該第一重鏈包含與SEQ ID NO：308之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，且該第一輕鏈包含與SEQ ID NO：309之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)特異性結合IL-13之第二重鏈及第二輕鏈，其中該第二重鏈包含與SEQ ID NO：304之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，且該第二輕鏈包含與SEQ ID NO：305之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。在另一實施例中，特異性結合IL-33及IL-13兩者之雙特異性抗體包含：(a)特異性結合IL-33之第一重鏈及第一輕鏈，其中該第一重鏈包含SEQ ID NO：308之胺基酸序列且該第一輕鏈包含SEQ ID NO：309之胺基酸序列；及(b)特異性結合IL-13之第二重鏈及第二輕鏈，其中該第二重鏈包含SEQ ID NO：304之胺基酸序列且該第二輕鏈包含SEQ ID NO：305之胺基酸序列。
在另一態樣中，本發明提供一種治療有需要之受試者中之地圖狀萎縮的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之IL-33軸結合拮抗劑(例如，本發明之抗IL-33抗體)及治療有效量之因子D結合拮抗劑。在一些情形下，因子D結合拮抗劑可為抗因子D抗體或其抗原結合片段，例如，描述於WO 2007/056227、WO 01/70818及/或US 2002/0081293中之任何抗因子D抗體。例如，在一些情形下，抗因子D抗體可包含與自由美國菌種保存中心(ATCC)寄存且名稱為HB12476之融合瘤產生之單株抗體166-32具有至少70%序列一致性(例如，70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、 88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或該單株抗體之序列。在一些情形下，該抗因子D抗體為單株抗體166-32之人類化衍生物。在一些情形下，該抗因子D抗體與單株抗體166-32結合相同抗原決定基。在一些情形下，該抗因子D抗體為來源於單株抗體166-32之抗體片段。在一些情形下，來源於單株抗體166-32之抗體片段為Fab、Fab'-SH、Fv、scFv或(Fab')2片段。在一些實施例中，來源於單株抗體166-32之抗體片段為Fab。
在另一個態樣中，本發明提供一種治療有需要之受試者中地圖狀萎縮(GA)的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之特異性結合IL-33及因子D兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段。該雙特異性抗體可包含特異性結合IL-33之結合域，該結合域來源於本文所述之抗IL-33抗體中任一者。該雙特異性抗體可包含特異性結合因子D之結合域，該結合域來源於以上所述之抗因子D抗體中任一者。在一些實施例中，該抗原結合抗體片段為(Fab’)2片段。
在另一態樣中，本發明提供一種治療有需要之受試者中之GA、AMD(濕性或乾性)、DR、PCV或ROP的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之IL-33軸結合拮抗劑(例如，本發明之抗IL-33抗體)及治療有效量之HtrA1結合拮抗劑。在一情形下，該HtrA1結合拮抗劑可為抗HtrA1抗體或其抗原結合片段，例如，WO 2013/055998中所描述之任何HtrA1抗體。在一些情形下，該抗HtrA1抗體為抗體片段。在一些情形下，該抗體片段為Fab、Fab'-SH、Fv、scFv或(Fab')2片段。在一些實施例中，該抗體片段為Fab。
在另一個態樣中，本發明提供一種治療有需要之受試者中地圖狀萎縮(GA)、AMD(濕性或乾性)、DR、PCV或ROP的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之特異性結合IL-33及HtrA1兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段。該雙特異性抗體可包含特異性結合IL-33之結合域，該結合域來源於本文所述之抗IL-33抗體中任一者。該雙特異性抗體可包含特異性結合HtrA1之結合域，該結合域來源於以上所述之抗HtrA1抗體中任一者。在一些實施例中，該抗原結合抗體片段為(Fab’)2片段。
在另一態樣中，本發明提供一種治療有需要之受試者中之濕性AMD的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之IL-33軸結合拮抗劑(例如，本發明之抗IL-33抗體)及治療有效量之VEGF結合拮抗劑。在一些情形下，該VEGF拮抗劑可為抗VEGF抗體或其抗原結合片段。可使用此項技術中已知及/或本文所述之抗VEGF抗體或其抗原結合片段中之任一者。在一些情形下，抗VEGF抗體或其抗原結合片段為或來源於WO 2005/044853中所描述之抗VEGF抗體，該專利以全文引用之方式併入本文中。例如，在一些情形下，抗VEGF抗體為或來源於G6系列抗體(G6、G6-8、G6-23、G6-23.1、G6-23.2或G6-31)或B20系列抗體(例如，B20、B20-4或B20-4.1)。例如，在一些情形下，抗VEGF抗體包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：334、337或340中任一者具有至少80%序列一致性(例如至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：334、337或340中任一者之序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：335、336、338、339或341中任一者具有至少80%序列一致性(例如至少80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%序列一致性)之胺基酸序列或SEQ ID NO：335、336、338、339或341中任一者之序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。例如，在一些情形下，抗VEGF抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO：334之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：335之胺基酸序列(諸如抗VEGF抗體G6)。在一些情形下，抗VEGF抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO：334之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：336之胺基酸序列(諸如抗VEGF抗體G6.31)。在一些情形下，抗VEGF抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO：337之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：338之胺基酸序列(諸如抗VEGF抗體B20)。在其他情形下，抗VEGF抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO：337之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：339之胺基酸序列(諸如抗VEGF抗體B20-4)。在其他情形下，抗VEGF抗體包含VH域，其包含SEQ ID NO：340之胺基酸序列；及VL域，其包含SEQ ID NO：341之胺 基酸序列(諸如抗VEGF抗體B20-4.1)。在一些實施例中，該抗VEGF抗體為前述抗體中任一者之人類化衍生物。在一些實施例中，該抗VEGF抗體為來源於前述抗體中任一者之抗體片段。在一些實施例中，該抗體片段為Fab、Fab'-SH、Fv、scFv或(Fab')2片段。在一些實施例中，該抗體片段為Fab。
在另一個態樣中，本發明提供一種治療有需要之受試者中濕性AMD的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之特異性結合IL-33及VEGF兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段。該雙特異性抗體可包含特異性結合IL-33之結合域，該結合域來源於本文所述之抗IL-33抗體中任一者。該雙特異性抗體可包含特異性結合VEGF之結合域，該結合域來源於以上所述之抗VEGF抗體中任一者。在一些實施例中，該抗原結合抗體片段為(Fab’)2片段。
在又一態樣中，本發明提供一種治療有需要之受試者中之葡萄膜炎(例如，感染性或非感染性葡萄膜炎)的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之IL-33軸結合拮抗劑(例如，本發明之抗IL-33抗體)。在一些實施例中，該IL-33軸結合拮抗劑可作為單一療法投與。
在又一態樣中，本發明提供一種治療有需要之受試者中之結膜炎(例如，感染性結膜炎、非感染性結膜炎或過敏性結膜炎)的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之IL-33軸結合拮抗劑(例如，本發明之抗IL-33抗體)。在一些實施例中，該IL-33軸結合拮抗劑可作為單一療法投與。
在一些實施例中，額外治療劑為氣喘療法，如以下所述。當前用每日經吸入抗發炎性皮質類固醇或肥大細胞抑制劑(諸如色甘酸鈉或奈多羅米)加經吸入β2-促效劑(根據需要)(3-4次/天)治療中度氣喘以緩解突破性症狀或過敏原或運動誘發之氣喘。例示性經吸入皮質類固醇包括QVAR®、PULMICORT®、SYMBICORT®、AEROBID®、FLOVENT®、FLONASE®、ADVAIR®及AZMACORT®。額外氣喘療法包括長效支氣管擴張劑(LABD)。在某些實施例中，LABD為長效β-2促效劑(LABA)、白三烯受體拮抗劑(LTRA)、長效毒蕈鹼拮抗劑(LAMA)、茶鹼或口服皮質類固醇(OCS)。例示 性LABD包括SYMBICORT®、ADVAIR®、BROVANA®、FORADIL®、PERFOROMISTTM及SEREVENT®。
上文指出之該等組合療法涵蓋組合投藥(其中兩種或更多種治療劑包括於相同或獨立調配物中)及獨立投藥，在該情況下，可在投與額外治療劑之前、同時及/或之後投與本發明之抗體。在一個實施例中，投與抗IL-33抗體及投與額外治療劑彼此在約1個月內，或在約1、2或3週內，或在約1、2、3、4、5或6天內進行。本發明之抗體亦可用於與放射療法組合使用。
本發明之IL-33軸結合拮抗劑(例如，本發明之抗IL-33抗體)(及任何額外治療劑)可藉由任何合適之方法投與，包括非經腸、肺內及鼻內及希望用於局部治療時之病灶內投與。非經腸輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投藥。在一些情形下，本發明之IL-33軸結合拮抗劑(例如，抗IL-33抗體)可經玻璃體內、肌肉內、靜脈內、皮內、經皮膚、動脈內、腹膜內、病灶內、顱骨內、關節內、前列腺內、胸膜內、氣管內、鞘內、鼻內、陰道內、直腸內、經局部、腫瘤內、腹膜、皮下、結膜下、囊泡內、黏膜、心囊內、臍索內、眼內、眶內、經口、經局部、經皮、眼周、經結膜、眼筋膜囊內、前房內、視網膜下、眼球後、小管內、藉由吸入、藉由注射、藉由植入、藉由輸注、藉由連續輸注、藉由直接局部灌注洗浴靶細胞、藉由導管、藉由灌洗、於乳膏中或於脂質組合物中投與。本文中所描述之方法中所利用的組合物亦可全身性或局部投與。投藥可藉由任何合適之途徑進行，例如藉由注射，諸如靜脈內或皮下注射，部分視投藥為短暫投藥或是長期投藥而定。本文中涵蓋各種投藥時程，包括但不限於在不同的時間點進行單次或多次投藥、團注投藥及脈衝式輸注。
在一些情形下，IL-33軸結合拮抗劑(例如，本發明之IL-33抗體)可藉由眼部組織注射，例如使用玻璃體內、眼內、眼周、經結膜、結膜下、筋膜下、前房內、視網膜下、眼球後或小管內注射；藉由直接施加至眼睛，例如，使用導管或其他放置裝置(例如，視網膜球粒、眼內插入物、栓劑或包含多孔、無孔或凝膠狀材料之植入物)；藉由局部眼部滴劑或軟膏劑；或藉由陷凹中或鄰近鞏膜(經鞏膜)植入或鞏膜中(鞏膜內)或眼睛內之緩 釋裝置而直接投與至眼睛。前方內注射可經由角膜進入前房以允許藥劑到達小梁網。小管內注射可進入鞏膜靜脈竇引流靜脈收集通道或進入鞏膜靜脈竇。
將以符合良好醫學實務之方式調配、給與及投與本發明之抗體。在此情形下要考慮之因素包括所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個別患者之臨床病狀、病症之病因、藥劑之傳遞部位、投藥方法、投藥時程及醫學從業者已知的其他因素。抗體不必而是視情況與一或多種當前用於預防或治療所述病症之藥劑一起調配。該等其他藥劑之有效量視調配物中所存在之抗體之量、病症或治療之類型及上文論述之其他因素而定。此等一般以與如本文中所描述相同之劑量及投藥途徑，或以本文總所描述之劑量之約1%至99%，或用憑經驗/以臨床方式確定適當之任何劑量及任何途徑使用。
為了預防或治療疾病，本發明抗體之適當劑量(當單獨或與一或多種其他額外治療劑組合使用時)將視欲治療之疾病類型、抗體類型、疾病嚴重程度及病程、是出於預防目的或是治療目的投與抗體、先前療法、患者之臨床病史及對抗體之反應及主治醫師之判斷而定。該抗體適合一次性或經一系列治療投與患者。視疾病之類型及嚴重程度而定，約1μg/kg至15mg/kg(例如，0.1mg/kg至10mg/kg)之抗體可為投與至患者之初始候選劑量，無論例如藉由一或多次分開投與或藉由連續輸注。一個典型每日劑量可在約1μg/kg至100mg/kg或100mg/kg以上之範圍內，視以上提及之因素而定。對於經若干天或更久重複投與，視病狀而定，治療一般將持續直至出現對疾病症狀之所要抑制。該抗體之一個例示性劑量將在約0.05mg/kg至約10mg/kg範圍內。因而，可向患者投與一或多個約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg之劑量(或其任何組合)。此類劑量可間歇性地投與，例如每週、每兩週、每三週或每四週(例如，使得患者接收約2至約20個劑量，或例如約6個劑量之抗體)。例如，可每月一次投與劑量(例如，藉由皮下注射)。可投與初始較高負載劑量，隨後投與一或多個較低劑量。然而，其他劑量方案可為有用的。此療法之進展係藉由習知技術及分析法容易地監測。
應瞭解以上調配物或治療方法中之任一者可替代或除抗IL-33抗體之外使用本發明之免疫結合物來進行。
H. 製品
在本發明之另一態樣中，提供含有適用於治療、預防及/或診斷上述病症之材料的製品。該製品包含容器及處於該容器上或與該容器相關聯之標籤或包裝插頁。合適之容器包括例如瓶、小瓶、注射器、IV溶液袋等。該等容器可由多種材料(諸如玻璃或塑膠)製成。該容器容納可有效治療、預防及/或診斷病狀之一組合物自身或該組合物與另一組合物之組合，且可具有無菌進入口(例如，該容器可為靜脈內溶液袋或具有可由皮下注射針刺穿之瓶塞的小瓶)。該組合物中之至少一種活性劑為本發明之抗體。該標籤或包裝插頁指示該組合物用於治療所選病狀。此外，該製品可包含(a)其中含有組合物之第一容器，其中該組合物包含本發明之抗體；及(b)其中含有組合物之第二容器，其中該組合物包含另一細胞毒性劑或其他治療劑。本發明之此實施例中之製品可進一步包含指示該等組合物可用於治療特定病狀之包裝插頁。可替代地，或另外，該製品可進一步包括第二(或第三)容器，該容器包含醫藥學上可接受之緩衝劑，諸如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液及右旋糖溶液。其可進一步包括自商業及使用者之立場來看合乎需要之其他材料，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針及注射器。
應瞭解以上製品中之任一者可替代或除抗IL-33抗體之外包括本發明之免疫結合物。
III. 實例
以下為本發明之方法及組合物之實例。應瞭解鑒於以上提供之一般性描述，可實施各種其他實施例。
實例1. 產生抗IL-33抗體
可尋求若干策略來開發治療性抗IL-33抗體，如下文所述。候選抗IL-33抗體之所要特徵包括與人類IL-33特異性結合、與食蟹獼猴(cyno)IL-33之交叉反應性、抑制IL-33活性(如例如在基於細胞之IL-33報導體分析中所量測)及/或阻斷與IL-33受體(ST2及IL-1RAcP)之結合。
A. 開發及表徵小鼠單株抗人類IL-33融合瘤抗體
用與單磷醯基脂質A及海藻糖二棒分枝菌酸酯(MPL®+TDM)佐劑(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)，或Toll樣受體(TLR)促效劑MPL®(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO)、聚肌苷酸-聚胞苷酸(PolyI：C；InvivoGen,San Diego,CA)、R848(InvivoGen)及CpG寡去氧核苷酸(InvivoGen)之組合混合之各自2μg之人類(hu)IL-33及食蟹獼猴(cyno)IL-33蛋白(Genentech,Inc.)每週兩次腹膜內免疫BALB/c小鼠(Charles River,Hollister,CA)或IL33基因剔除(ko)小鼠(Genentech,Inc.)。在最後一次免疫之後三天收集脾及骨髓。經由電融合(Harvard Apparatus,Holliston,MA)使來自此等小鼠之脾細胞與P3X63-Ag8U.1小鼠骨髓瘤細胞(美國菌種保存中心，Rockville,MD)融合。將融合細胞在37℃、7% CO2下，在CLONACELLTM-HY培養基C(StemCell Technologies,Vancouver,BC,Canada)中培育隔夜，隨後再懸浮於具有抗物種IgG-FITC(Jackson ImmunoResearch,West Grove,PA)之半固體CLONACELLTM-HY培養基D(StemCell Technologies)中且接種至OMNIWELLTM盤(Thermo Fisher Scientific,Rochester,NY)中。在接種之後7天，使用CLONEPIXTM FL(Genetix,New Milton,Hampshire,UK)選擇螢光菌落且轉移至含有CLONACELLTM-HY培養基E(StemCell Technologies)之96孔盤中。如下文所描述，在揀選之後7天，藉由酶聯免疫吸附分析(ELISA)針對人類IL-33蛋白對上清液進行篩選。擴增顯示人類IL-33結合之融合瘤細胞株且藉由ELISA再測試；自藉由ELISA展示與人類及食蟹獼猴IL-33結合之細胞株收集上清液且藉由蛋白質A(MABSELECTTM SURETM,GE Healthcare,Pittsburgh,PA)純化。如下文所述，使用HEK-BLUETM細胞報導體套組(InvivoGen)評估經純化之IgG阻斷IL-33與ST2結合之能力。使用來自一大組融合瘤之高通量IgG純化系統允許較早及有效選擇潛在阻斷純系。使用RNEASY®套組(Qiagen,Hilden,Germany)自強阻斷融合瘤細胞株提取RNA，且產生及擴增cDNA以用於序列測定，如下文所述。將重鏈及輕鏈之可變區基因插入pRK質粒載體(Genentech,Inc.)中以用於表現。在293細胞中重組表現來自展示最高IL-33阻斷活性及親和力之獨特純系之質粒DNA。隨後藉由蛋白質A親和層析純化上清液。
B. 自單一B細胞選殖產生抗IL-33單株抗體
如上文所述用人類及食蟹獼猴IL-33免疫轉殖基因小鼠。在初始免疫及7次加強免疫之後，針對與IL-33之結合對來自經免疫之轉殖基因小鼠之血清進行測試。鑑別了對人類及食蟹獼猴IL-33具有顯著高效價之小鼠且隨後在HEK-BLUETM分析中針對IL-33與ST-2結合之血清抑制進行測試。自展示IL-33阻斷活性之小鼠分離脾、淋巴結及骨髓組織。將該等組織以機械方式減小為單細胞懸浮液，與IL-33抗原(人類及食蟹獼猴)預混合，且脾內植入muSCID小鼠中。7-8天之後，移除脾且作為單細胞再懸浮。將脾細胞用螢光團結合之標記物染色以鑑別CD138陽性漿母細胞及IgM陽性群體。藉由FACSTM流式細胞術將為IgM陰性且能夠結合人類及食蟹獼猴IL-33之漿母細胞群體單獨分選至96孔盤中。將經分選細胞之免疫球蛋白可變區進行分子克隆且重排至人類IgG1哺乳動物表現載體中。使各經重排之單株抗體短暫表現於哺乳動物細胞中且純化。一般性方法描述於Lin等人(Nature Protocols 9：1563-1577,2014)中。
C. 自經免疫噬菌體來源之文庫產生抗IL-33單株抗體
從分離自用人類及食蟹獼猴IL-33免疫之轉殖基因小鼠之RNA構築噬菌體上所呈現之單鏈Fv文庫。將ScFv噬菌體呈現文庫針對人類及食蟹獼猴IL-33淘洗若干輪。繁殖個別噬菌體純系且針對與人類及食蟹獼猴IL-33之結合藉由ELISA進行分析。將陽性結合純系重排以用於以IgG形式表現且短暫表現。自短暫表現培養物純化IgG且針對與IL-33之結合及針對IL-33與HEK-BLUETM細胞結合之抑制進行測試。
實例2. 抗IL-33抗體之篩選及測序
A. 針對抗人類/食蟹獼猴IL-33抗體之ELISA篩選
以ELISA形式針對產生結合人類及食蟹獼猴IL-33之單株抗體對如上所述產生之融合瘤純系進行篩選。為篩選所產生之1921融合瘤細胞株，總體上如Baker等人(Trends Biotechnol.20：149-156,2002)中所描述進行ELISA。簡言之，將96孔MAXISORP®平底盤(Nalge Nunc International,Rochester,NY)用50μl可溶性IL-33(Genentech)以於塗佈緩衝液(0.05M碳酸鹽緩衝液，pH 9.6)中2μg/ml之濃度塗佈，密封且在4℃下儲存隔夜。在 移除塗佈溶液之後，將含有於磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)(pH 7.4)(ELISA diluent)中之0.5%牛血清白蛋白(BSA)及0.05% TWEEN®-20之200μl分析/阻斷溶液添加至各孔且在室溫下在攪拌下培育一小時。隨後用300μl於PBS(洗滌緩衝液)中之0.05% TWEEN®-20洗滌孔三次。
在洗滌步驟之後，將來自個別融合瘤純系之100μl培養物上清液添加至個別孔。將培養盤在室溫下在攪拌下培育一小時，且用如之前之洗滌緩衝液洗滌孔三次。
在洗滌之後，將50μl與辣根過氧化酶偶合之綿羊抗小鼠IgG(與人類IgG(MP Biomedicals,Solon,OH)無交叉反應性)於ELISA稀釋劑中之1：1000稀釋液添加至各孔。將培養盤在室溫下在攪拌下培育一小時，用如之前之洗滌緩衝液洗滌三次且用紙巾拍乾。藉由添加50μl四甲基聯苯胺(TMB)微孔過氧化酶受質(BioFX Laboratories,Owing Mills,MD，目錄號TMBW-0100-01)至各孔且在室溫下培育5-10分鐘或直到觀察到顏色變化來使孔顯影。藉由添加50μl之TMB停止溶液(BioFX Laboratories目錄號BSTP-0100-01)至各孔來終止酶促顯色。用SUNRISETM盤讀取器(Tecan US,Inc.,Research Triangle Park,NC)在650nm下分析培養盤。
在第一次免疫之前採集之免疫前血清用作陰性對照。在7次免疫之後採集之免疫血清用作陽性對照。
純系2B6、6C11、9F6、10C12及10H2針對人類IL-33及食蟹獼猴IL-13結合為陽性。
B. 基於細胞之IL-33阻斷分析
藉由基於細胞之阻斷分析來測定使用上述方法獲得之抗IL-33抗體之IL-33中和活性，其中IL-33刺激HEK-BLUETM IL-33/IL-1β細胞(InvivoGen)且活化NF-κB及AP-1路徑，從而觸發經分泌鹼性磷酸酶(SEAP)之產生(圖1A)。HEK-BLUETM IL-33/IL-1β細胞為人類HEK293細胞，該等細胞已用人類ST2構築體(pUNO1-hIL01RL1a；SEQ ID NO：311)穩定轉染且包含在融合至五個NF-κB及五個AP-1結合位點之IFN-β最小啟動子(InvivoGen)控制下之SEAP報導基因。pUNO1-hIL01RL1a質粒編碼具有SEQ ID NO：312之胺基酸序列之ST2L蛋白。HEK293細胞表現內源性 IL-1RAcP。用於基於細胞之阻斷分析中之IL-33的胺基酸序列為如下：成熟人類IL-33(S112-T270)，SEQ ID NO：313；人類IL-33 N-His，SEQ ID NO：314；人類IL-33 N-His C-Avi，SEQ ID NO：315；成熟食蟹獼猴IL-33(S112-T270)，SEQ ID NO：316；食蟹獼猴IL-33 N-His，SEQ ID NO：317；及食蟹獼猴IL-33 N-His C-Avi，SEQ ID NO：318。
簡言之，使IL-33配體及預稀釋之抗IL-33抗體混合且在室溫下培育1小時。將該抗體與配體混合物轉移至HEK-BLUETM IL-33/IL-1β細胞。在37℃下在CO2培育箱中培育20小時之後，藉由在與鹼性磷酸酶受質(QUANTI-BLUETM,InvivoGen)培育之後記錄在630nm下之OD值來量測細胞培養物上清液中之SEAP活性。在基於細胞之阻斷分析中用作陽性對照之sST2-LZ(sST2(M1-F328)C末端白胺酸拉鍊(LZ)-Flag-His)(參見例如，圖2)之全長胺基酸序列可見於SEQ ID NO：319中。sST2-LZ之成熟形式(其中信號肽已移除)顯示於SEQ ID NO：310中。
當以IgG形式表現時，經純化之抗IL-33抗體顯示在小於1nM之濃度下完全抑制IL-33(圖2)。相比之下，用對IL-13具有特異性之陰性對照單株抗體未觀察到抑制(未顯示)。
C. 融合瘤分子選殖及測序
不經RNA純化自細胞直接選殖由各融合瘤細胞株表現之抗體。使用經修改之5’RACE(cDNA末端之快速擴增)方案(Qzawa等人Bio Techniques 40(4)：469-478,2006)選殖免疫球蛋白重鏈及輕鏈可變區。在55℃下持續1小時用對鼠類重鏈恆定區(5’-TTTYTTGTCCACCKTGGTGCTGC-3’，SEQ ID NO：320)及輕鏈恆定區(5’-GTAGAAGTTGTTCAAGAAG-3’；SEQ ID NO：321)具有特異性之寡核苷酸引子使用SUPERSCRIPT® III(Invitrogen,Carlsbad,CA)逆轉錄酶自融合瘤細胞直接產生第一股cDNA。設計簡併引子以允許在各種鼠類重鏈同型內觸發。在37℃下持續1小時使用末端去氧核苷醯基轉移酶(Promega,San Luis Obispo,CA)及dGTP(Roche Diagnostics,Indianapolis,IN)對逆轉錄酶產物之3’端poly-G加尾。使用巢式重鏈恆定區引子(5’-GTGTAGAGKYCAGACTSCAGG-3’；SEQ ID NO：322)及輕鏈恆定區引子(5’-GAGGCACCTCCAGATGTTAAC-3’；SEQ ID N O：323)及含poly-C之N末端引子(5’-GATTCAAATCTCAATTATATAATCCGAATATGTTTACCGGCTCGCTCATGGACCCCCCCCCCCCDN-3’；SEQ ID NO：324)藉由降落PCR(ADVANTAGE®-GC 2,Clontech,Mountain View,CA)單獨進行可變重鏈及輕鏈cDNA之擴增。使用N末端引子(5’-CAATTATATAATCCGAATATG-3’；SEQ ID NO：325)、重鏈恆定區引子(5’-GAARTARCCCTTGACCAGGC-3’；SEQ ID NO：326)及輕鏈恆定區引子(5’-GAAGATGGATACAGTTGGTGC-3’；SEQ ID NO：327)進行第二巢式降落PCR組。
將PCR產物接合至pCR2.1®-TOPO®選殖載體(TOPO® TA選殖套組，Invitrogen,Carlsbad,CA)且轉化至ONESHOT®前10勝任細胞中。分離經轉化之大腸桿菌(E.coli)菌落且培養以用於DNA質粒分離。對該等質粒進行測序以確定各細胞株之VH及VL之DNA序列。在序列測定之後，使用含有核酸內切酶限制位點(EcoRI及XhoI)之引子藉由PCR擴增重鏈及輕鏈可變區以允許次選殖至分別編碼哺乳動物IgG及IgK表現載體之鼠類IgG2a及κ恆定區中。
在次選殖融合瘤細胞之前，對親本純系進行分子選殖以測定重鏈可變域及輕鏈可變域之序列。在次選殖之前進行選殖以在融合瘤純系於次選殖過程期間由於不穩定性而損失之情形下俘獲序列。基於分子選殖序列資料，基於CDR及構架序列之比對確定17C4、17H2及19C11為姊妹株純系。這與針對三個純系產生之分析資料一致。
D. 鼠類融合瘤來源之純系之人類化
選擇表現以高親和力結合IL-33且阻斷細胞因子與其受體ST2之結合之抗體的鼠類融合瘤以用於人類化。將自選殖融合瘤獲得之抗體的可變序列與最接近匹配之人類可變共同序列進行比對。使用Kunkel突變誘發(參見，例如，Kunkel等人Methods Enzymol.154：367-382,1987)將來自鼠類融合瘤抗體之高變區(HVR)移植於相應人類可變共同序列中。藉由使輕鏈及重鏈中在游標位置處之殘基突變回至鼠類以及構架/HVR相互作用位點及可變重鏈及可變輕鏈相互作用來產生各純系之額外變異體。舉例而言，將融合瘤純系10C12之經選殖HVR序列移植於共同κIII輕鏈及共同 VHIII重鏈中以產生人類化變異體。
將融合瘤純系10H2之經選殖HVR序列移植於共同κIV輕鏈及共同VHIII重鏈中以產生人類化變異體。6C11、2B6及9F6之經選殖HVR序列以與10C12及10H2類似形式人類化。使人類化變異體短暫表現於293細胞中且隨後針對結合及功能進行測試。
在Biacore 3000或T200儀器(GE Healthcare)上使用表面電漿子共振(SPR)來量測融合瘤來源之純系10C12、10H2、6C11、2B6及9F6之人類化變異體與IL-33的結合動力學。根據製造商之方案經由基於胺之偶合將抗人類Fc(GE Healthcare)固定於CM5感測器晶片上。在500-600共振單位(RU)之水準下俘獲人類化變異體抗IL-33抗體。量測抗體與人類IL-33(Genentech,huIL33.his)之結合。範圍為0.78至50nM之人類IL-33的兩倍濃度系列用於實驗。在25℃溫度下使用2分鐘注入時間與30μl/分鐘流速、且用10mM HEPES(pH 7.4)、150mM NaCl、3mM EDTA及0.005% TWEEN®-20之操作緩衝液來記錄IL-33結合之感測圖(Sensogram)。在注入之後，在操作緩衝液中持續600秒監測配體與抗體之解離。在結合循環之間用3M氯化鎂之40μl注入來再生表面。在減去僅包含操作緩衝液之空白之後，使用1：1 Langmuir結合模型與由製造商供應之軟體對針對IL-33與人類化抗IL-33抗體之結合所觀察到之感測圖進行分析以計算動力學及結合常數，包括解離常數(KD)。在人類化之後，抗IL-33 10C12人類化變異體保留與人類IL-33之高親和力結合，如藉由Biacore所量測(參見圖3及表2)。表2亦顯示來源於B細胞選殖及噬菌體呈現之所選擇抗體純系的動力學資料。
為測試人類化抗IL-33抗體以及自單一B細胞選殖(例如，4G12及衍生物及3E3)及噬菌體呈現獲得之抗體的功能，如上文所述量測其在基於細胞之受體阻斷分析中之活性。針對阻斷人類及食蟹獼猴IL-33與ST2之結合對抗體進行測試。在表3中顯示針對所選擇抗體群之受體阻斷分析的結果。
表2：所選擇抗IL-33抗體純系之動力學資料
實例3. IL-33在眼科病症(包括年齡相關性黃斑變性(AMD))中之發炎 中的作用
發炎通常認為係由感染或損傷觸發之防禦反應。發炎亦可在不存在感染或明顯組織損傷情形下由組織緊張及功能障礙誘發。此類無菌發炎反應之實例見於中樞神經系統中之免疫特權區域處，包括視網膜。在AMD中，視網膜及襯底視網膜色素上皮(RPE)細胞終身暴露於各種刺激物(例如，光、氧化應激及蛋白水解酶)可導致異常心血管生成、RPE細胞死亡及光受體損失。神經視網膜損失經常與無菌發炎反應相關，其部分特徵在於光受體及光受體外節層中單核吞噬細胞之積聚。引發單核吞噬細胞之募集的因素在很大程度上仍然未知。
A. 人類黃斑之Müller細胞中之IL-33表現在AMD中增加
黃斑(人類視網膜中心附近之區域)對高銳度視力而言為重要的。黃斑中RPE及光受體細胞由於終身暴露於氧化應激或暴露於視覺循環之毒性副產物所致之活力降低可對於視功能具有嚴重後果。為確定IL-33表現是否相較於周邊視網膜在黃斑中不同，藉由RNA測序(RNA-seq)對經解剖之死後人類視網膜(圖4A)進行分析。IL-33轉錄物相較於正常供體之周邊視網膜在黃斑中顯著增加，而其他介白素1(IL-1)家族細胞因子IL-1α、IL-1β及IL-18之表現水準相較於黃斑在周邊視網膜中相似或增加(圖4B)。
為進一步確定正常人類視網膜中之IL-33之細胞來源，將來自無眼部疾病病史之人類供體的7只眼睛進行加工以用於免疫組織化學。與RNA測序結果一致，IL-33主要存在於中央視網膜之波形蛋白特異性Müller細胞之細胞核中，在周邊視網膜中具有顯著較低數目之IL-33陽性(IL-33+)Müller細胞(圖5A-5E)。IL-33亦表現於RPE細胞之亞群之細胞核中，其中相較於周邊視網膜在中央視網膜中具有略微更高表現(圖5B、5C及5D)。視網膜神經節細胞層中之IL-33+星形細胞(膠質纖維酸性蛋白陽性(GFAP+))及脈絡膜之IL-33+內皮細胞(質膜囊泡相關蛋白陽性(PLVAP+))的數目相較於周邊視網膜在中央視網膜中沒有不同。
在具有AMD病史之供體中，在黃斑中觀察到RPE區及光受體細胞損失、晚期乾性AMD或地圖狀萎縮之回憶(圖6A及6B)。使用多標記物螢光免疫組織化學，在RPE及光受體萎縮區域中觀察到增加數目之 IL-33+ Müller細胞及骨髓細胞(圖6A-6E)。AMD非病變區域中IL-33+ Müller細胞之數目顯著低於對照之中央視網膜中之彼等IL-33+ Müller細胞的數目(圖6C)。不希望受理論之約束，這可能係由於以下事實：非病變區域通常位於中央視網膜中，在中央視網膜中IL-33+ Müller細胞豐度比非AMD眼睛之中央視網膜中低(圖5D)。亦在AMD病變區域之脈絡膜中觀察到相對於對照或非病變區域增加之IL-33+細胞(圖6D)。Iba1+骨髓細胞中無一者對IL-33為陽性(圖6E)。在AMD患者之亞群之玻璃體中，IL-33水準相較於正常對照(具有黃斑裂孔或黃斑皺褶之患者)顯著增加(圖6F)。
B. 在光毒性應激之後IL-33在活體外及活體內加工且自Müller細胞釋放
在大鼠視網膜中，IL-33主要表現於中央及周邊視網膜之波形蛋白陽性Müller細胞中(圖7A)，如先前針對小鼠視網膜所描述(圖7B)。與人類眼睛中之IL-33表現模式相比，IL-33表現在正常大鼠及小鼠眼睛中之RPE或脈絡膜內皮細胞中極低，且在RPE或脈絡膜中幾乎未觀察到IL-33+細胞(圖7A及7B)。在正常小鼠眼睛中，IL-33 mRNA及蛋白質表現相較於其他IL-1家族成員(IL-1α、IL-1β及IL-18)(圖7C)高若干數量級。rMC-1細胞(自暴露於強光之大鼠獲得之Müller細胞株(Sarthy等人Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.39：212-216,1998)用於研究活體外IL-33釋放之調控。培養物中之rMC-1 Müller細胞展現經活化表型，如由GFAP表現所顯示(圖7D)(亦參見Sarthy等人同上)。rMC-1 Müller細胞之次細胞分級分離鑑別了細胞核部分中之30kDa pro-IL-33(IL-33p30)及約24kDa及約19kDa(IL-33p19)C末端肽，而IL-33p19為表現於細胞質中之主要物質(圖7E)。使rMC-1細胞暴露於高葡萄糖(25mM)培養基(其活化Müller細胞(圖7F；亦參見Sarthy等人，同上)相較於在低葡萄糖(5.5mM)培養基中培養之細胞(圖7G)顯著增加IL-33分泌。培養物上清液之西方墨點分析展示IL-33p19為僅有IL-33種類(圖7G)。高葡萄糖刺激(達72小鼠)未誘導rMC-1細胞上之細胞滲透或膜聯蛋白V染色(圖7H)，從而指示高葡萄糖培養基中增加之IL-33p19分泌與增加之細胞死亡不相關。此等資料證明IL-33表現於人類及齧齒動物Müller細胞中，主要定位至細胞核，且IL-33p19可自培養物中經 活化之活大鼠Müller細胞釋放。
接下來，進行IL-33是否在活體內Müller細胞活化之後自Müller細胞分泌之分析。使齧齒動物恆定暴露於強光(1200lux)持續若干天導致與Müller細胞、小神經膠質細胞及巨噬細胞活化增加同時之視杆細胞及視錐細胞的進行性損失(LaVail等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：11249-11253,1992)。在恆定光暴露之後(CLE)，在外核層(ONL)(圖7I)中觀察到增加數目之末端dUTP鏈裂端標記(TUNEL)陽性細胞，伴隨視杆細胞及視錐細胞之隨後損失(圖7J)。在Müller細胞所駐留之內核層(INL)中觀察到極少TUNEL陽性細胞。
為確定IL-33是否在活體內由細胞釋放，在CLE之後在不同時間點收集玻璃體。正常大鼠玻璃體中之IL-33水準為大約1ng/ml。IL-33濃度在經光活化之眼睛中增加兩倍，在第3天達到平臺期(圖7K)，這指示在光誘導之視網膜應激之後釋放IL-33。西方墨點分析證實在尺寸上與自培養物中之rMC-1細胞釋放之IL-33片段(圖7G)一致的經加工C末端19kDa蛋白質(IL-33p19)為在CLE之前或之後存在於玻璃體中之主要IL-33種類(圖7K)。全長IL-33p30為視網膜中之主要物質，其中在光暴露之後第3天開始經加工之IL-33p19種類之存在增加(圖7K)，具有與玻璃體中之IL-33p19表現類似之時程。為確定在光損傷之視網膜及於高葡萄糖培養基中培養之rMC-1細胞中IL-33p19之存在增加是否係由於替代性IL-33轉錄物變異體之存在，使用跨越IL-33之5’非翻譯區(5’-UTR)(外顯子1)至終止密碼子(外顯子9)之PCR引子進行RT-PCR。在兩種情形下僅偵測到全長IL-33轉錄物(圖7L)。不希望受理論之約束，此表明IL-33p19係藉由蛋白水解而非藉由替代性剪接產生。負責IL-33加工之蛋白酶尚待鑑別且為進行中研究之焦點。
在CLE之後，觀察到來自大鼠Müller細胞之天然IL-33之損失。對經遺傳工程改造之IL33tm2/tm2小鼠(Bessa等人J.Autoimmunity 55：33-41,2014)(其中IL-33之含有核定位信號及染色質結合域之N末端112個胺基酸融合至dsRed報導體)進行分析以測定活體內Müller細胞中之IL-33蛋白表現之調控。在來自IL33tm2/tm2小鼠之視網膜中，主要定位至Müller 細胞之細胞核的IL-33 N-端-dsRed位於視網膜之INL中(圖7M)，類似於天然全長IL-33之定位(圖7B)。IL33tm2/tm2視網膜之流式細胞術分析證實Müller細胞中IL-33-N-端-dsRed之選擇性表現(圖7M)。在CLE之後觀察到來自肝Müller細胞之IL-33-dsRed的顯著損失而無Müller細胞損失(圖7M)，此反映在不存在細胞死亡情形下自Müller細胞釋放IL-33 C末端。此發現與在光暴露之後所觀察到之來自大鼠Müller細胞之天然IL-33的損失一致。因此，此等資料證明IL-33之C末端加工形式響應於光毒性在細胞活化之後自Müller細胞釋放。
C. ST2表現於經活化Müller細胞上且促成光受體損失
IL-33在結合其異二聚受體ST2/IL1RAcP之後觸發MyD88介導之信號傳導(參見例如，Schmitz等人Immunity 23：479-490,2005)。編碼跨膜ST2(ST2L)及缺乏跨膜域之ST2剪接變異體(sST2)之視網膜轉錄物在CLE之後增加4至10倍，在第3天達到峰值(圖8A)。平行樣品中之流式細胞術分析鑑別經活化(GFAP+)Müller細胞為光暴露之視網膜中之跨膜ST2的主要來源(圖8B)，而ST2在光暴露之前在Müller細胞上不可偵測到。未在CD11b+CD45lo小神經膠質細胞(圖8B)、RGC或光受體上偵測到ST2。
進行分析以確定IL-33與ST2之結合是否影響CLE之後之光受體存活。譜域光學相干斷層攝影術(SD-OCT)展示在CLE7天(圖8C)及14天(圖8D)之後，相較於ST2+/+小鼠，ST2-/-中之視網膜之防護。總視網膜之流式細胞術分析進一步證實在CLE持續14天期間，相較於ST2+/+小鼠，視杆細胞、視錐細胞及神經節細胞在ST2-/-中受到保護(圖8E)。對穿過眼睛之截面的形態測定分析顯示在視網膜上半及下半中之視網膜光毒性損傷之後ST2-/-小鼠中之光受體的顯著保護(圖8F)。在CLE之後第7天記錄視網膜電流圖(ERG)且展示相較於ST2+/+小鼠，ST2-/-中視網膜細胞之翻譯為經改良之a及b波反應的防護，從而反映視網膜功能之改良(圖8G)。與ST2-/-小鼠之視網膜相比，分別缺乏針對IL-1α、IL1-β及IL-18之受體的IL-1R1-/-及IL-18R1-/-小鼠的視網膜在CLE之後相較於野生型同窩仔畜未受保護(圖8D)。
為進一步確定ST2/IL-33相互作用之藥理學阻斷是否保護光 受體，用表現可溶性ST2之重組腺相關病毒(AAV)(AAV-sST2)處理小鼠，隨後CLE。阻斷sST2之活性在經IL-33刺激之骨髓來源之肥大細胞(BMMC)中進行驗證(圖9A)。ELISA及西方墨點分析證實sST2於AAV感染之HEK293細胞中之表現(圖9B)。視網膜下注射AAV-sST2導致視網膜及RPE中sST2之高水準表現(圖9C)。用AAV-sST2而非對照載體處理光暴露之小鼠顯示視杆細胞、視錐細胞及神經節細胞之保護(圖10)。此等結果證明IL-33與其信號傳導受體ST2/IL1RAcP之結合產生導致光暴露視網膜中之光受體損失的病原性反應。
D. IL-33增加骨髓細胞募集至光受體層
為確定ST2/IL1RAcP信號傳導之下游哪些路徑引起光受體損失，進行暴露於恆定光持續3天之ST2+/+及ST2-/-小鼠之視網膜的微陣列分析。在CLE之後，相較於ST2-/-小鼠，ST2+/+小鼠之視網膜展現發炎特徵之總體增加，包括CCL2、IL-1β、IL-6、IRF1、IRF7及STAT3(圖11A及11B)。即時PCR證實CCL2、IL-1β及IL-6之表現增加，其中相較於ST2+/+小鼠，ST2-/-小鼠中之表現顯著更低(圖11C)。與mRNA表現資料一致，在CLE之後視網膜中之CCL2蛋白表現在ST2-/-中相較於ST2+/+小鼠降低(圖11C)。
進行分析以確定IL-33是否誘導Müller細胞中之CCL2表現。與以上所述之活體內結果一致，表現Müller細胞活化標記物GFAP之rMC-1細胞表現跨膜、表面暴露之ST2(圖11D)。當用重組IL-33刺激時，rMC-1細胞顯示CCL2表現之劑量依賴性增加，此藉由添加IL-33 TRAP阻斷，從而證實IL-33經由Müller細胞上之ST2傳導信號(圖11D)。除IL-33之外，當於高葡萄糖培養基中培養時rMC-1細胞隨時間推移表現且分泌CCL2(圖11E)。相較於在媒劑存在下培養之rMC-1細胞，藉由添加IL-33 TRAP至培養基中和由Müller細胞分泌之IL-33顯著降低CCL2表現(圖11E)。此等結果證明培養物中之Müller細胞釋放生物活性IL-33，該IL-33又可經由自分泌活化誘導誘導CCL2。
視網膜中之CD11b+CD45lo(圖12A及圖13D)及CD11b+CD45hi(圖13D)細胞表現CCR2(CCL2之受體)(圖12A)。為確定 IL-33是否對視網膜中之骨髓細胞分佈具有任何作用，在ST2+/+及ST2-/-小鼠中在CLE之前及之後定量各視網膜層中之Iba1+骨髓細胞。在光暴露之前，Iba1+細胞居於內網層(IPL)及外網層(OPL)中，在ONL、外節(OS)及視網膜神經節細胞層(GCL)中具有極少細胞(圖12B)。在CLE持續14天之後，Iba1+細胞在ONL、OS及GCL中積聚，伴隨ST2+/+小鼠中之OPL及IPL中之Iba1+細胞減少。相較於ST2+/+小鼠，ST2-/-小鼠顯示ONL及OS中之Iba1+細胞之40%-50%減少，及OPL中之Iba1+細胞之50%增加(圖12C)。因此，在CLE之後，ST2/IL1RAcP信號傳導促進CCL2表現、視網膜外層中之Iba1+骨髓細胞之存在增加及光受體視錐細胞及視杆細胞之損失。此等結果進一步闡述了Müller細胞分泌之CCL2在光損傷或視網膜脫離之後促進ONL中之骨髓細胞存在及誘導光受體死亡中的先前提出之作用。
為確定在光暴露時IL-33/ST2誘導之光受體損失是否藉由浸潤骨髓細胞介導，用氯膦酸鹽耗減ST2+/+及ST2-/-小鼠中之外周單核細胞且在CLE7天之後定量光受體及神經節細胞之數目。氯膦酸鹽處理分別使Ly6ChiCD115+及Ly6Clo/- CD115+外周單核細胞耗減80%以上及70%以上(圖12D)。在ST2+/+小鼠中，單核細胞耗減引起在CLE之後視杆細胞、視錐細胞及RGC之保護(圖12E)。然而，當耗減單核細胞時，ST2缺乏不提供針對光受體之進一步保護，從而指示浸潤骨髓細胞介導IL-33/ST2誘導之光受體損失。
為進一步確定自Müller細胞釋放之IL-33是否具有病原性作用，對經遺傳修飾之小鼠進行分析，在該小鼠中IL-33之N末端核定位信號及染色質結合域由dsRed替代(IL33tm1/tm1小鼠)(Bessa等人J.Autoimmunity 55：33-41,2014)(圖12F)。類似於IL33tm2/tm2小鼠，IL33tm1/tm1小鼠顯示神經視網膜之Müller細胞中選擇性地dsRed染色。然而，與IL33tm2/tm2小鼠(其中dsRed經由IL-33 N末端錨定至細胞核)相比，在IL33tm1/tm1小鼠中用dsRed替代IL-33 N末端防止IL-33錨定至細胞核，從而導致dsRed-IL-33-C-端跨越內核層釋放至Müller細胞突之細胞質中(圖12F)。與仍在內源啟動子控制下之IL-33轉錄相容(Bessa等人，同上)，視網膜中之IL-33 mRNA相較於IL33+/+同窩仔畜小鼠在IL33tm1/+及IL33tm1/tm1小鼠中未改變，而血清及視網 膜中之IL-33蛋白由於缺乏N末端之IL-33的自發釋放而升高(圖12F)。與IL-33軸之病原性作用進一步一致，當小鼠表現ST2受體鏈時(ST2+/-背景)，來自IL33tm1/+及IL33tm1/tm1小鼠之視網膜顯示CCL2及IL-6表現增加及光受體視錐細胞及神經節細胞之損失(圖12G)。CCL2及IL-6表現及視網膜細胞損失在缺乏ST2之IL33tm1/+及IL33tm1/tm1小鼠中恢復至對照值(圖12G)。此等結果指示IL-33在喪失其定位至細胞核之能力時自細胞釋放且誘導ST2依賴性細胞因子及趨化因子釋放，連同視網膜細胞之死亡。
E. 歸向視網膜之循環單核細胞係為視網膜色素上皮破壞之後IL-33/ST2誘導之光受體損失所需
視網膜色素上皮(RPE)經由攝取及再循環光受體外節、從而滅活毒性視覺循環產物且滿足視網膜之代謝需求而在光受體體內恆定中執行重要作用。RPE亦維持外部血液-視網膜障壁完整性(參見，例如，Strauss,「The Retinal Pigment Epithelium.」，於Webvision：The Organization of the Retina and Visual System(Kolb等人編)1995)。已提出RPE細胞之損失為AND濕性及乾性形式中之光受體損失之原因(參見，例如，Bhutto等人Molecular Aspects of Medicine 33：295-317,2012)。碘酸鈉(NaIO3)為在全身性投與時不可逆地影響RPE細胞存活之氧化化合物(Carido等人Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.55：5431-5444,2014)，從而允許研究在繼發於RPE細胞死亡之光受體損失中重要之視網膜路徑的作用。
全身性投與NaIO3導致到第3天消除中央視網膜中之大部分RPE細胞。此伴隨光受體外核細胞之損失、Müller細胞之活化(圖13A)及神經視網膜中19-kDa經加工形式之IL-33(IL-33p19)的存在，其在處理後第3天達到峰值(圖13B)。用NaIO3處理亦導致CCL2之>1500倍增加(圖13C)。由於NaIO3投與所致之CCL2蛋白水準之增加在缺乏ST2之小鼠中減弱大約35%(圖13C)。鑒於Müller細胞之IL-33刺激誘導CCL2(骨髓細胞之化學引誘劑)，進行分析以確定阻斷IL-33是否影響視網膜中之骨髓細胞的數目。用NaIO3處理ST2+/+小鼠導致存在於視網膜中之CD45hiCD11b+CCR2+骨髓細胞的數目增加>20倍，其在第3天達到峰值。相較於ST2+/+小鼠，在NaIO3處理之後ST2-/-小鼠分別在第3天及第7天顯示CD45hiCD11b+CCR2+ 骨髓細胞數目之增加減弱約70%及約50%(圖13D)。相比之下，CD45lowCD11b+CCR2+小神經膠質細胞之數目在ST2+/+及ST2-/-小鼠中在NaIO3處理之後第3天下降5倍以上，且在第7天未恢復。Iba1+細胞之免疫組織化學分析顯示在NaIO3處理之後第3天，相較於ST2+/+小鼠，ST2-/-小鼠中OS及ONL中之浸潤Iba1+骨髓細胞減少大約50%-60%(圖13E)。ST2-/-小鼠之神經視網膜在NaIO3處理之後受到保護，如由在NaIO3處理之後第7天，相較於ST2+/+小鼠，ST2-/-小鼠中顯著更厚之視網膜所顯示(圖13F)。藉由FACS分析進一步證明視杆細胞、視錐細胞及視網膜神經節細胞之顯著防護。與ST2-/-小鼠相比，IL-1R1-/-或IL-18-/-小鼠之視網膜在NaIO3處理之後第7天相較於WT小鼠未受保護(圖13G)。
為確定浸潤骨髓細胞是否為IL-33誘導之光受體損失所需，將ST2+/+及ST2-/-小鼠中之外周骨髓細胞在NaIO3處理之前用氯膦酸鹽耗減且定量第3天之光受體及神經節細胞之數目。藉由流式細胞術證實Ly6ChiCD11b+CCR2+及Ly6Clo/- CD115+CDR2+外周單核細胞及CD45hiCD11b+CCR2+視網膜巨噬細胞之成功耗減(圖13H及13I)。氯膦酸鹽介導之骨髓細胞耗減引起在NaIO3誘導之RPE細胞損失之後對神經視網膜之保護(圖13I)。類似於來自CLE中之單核細胞耗減實驗之結果，當耗減骨髓細胞時ST2之損失未產生進一步保護，從而指示浸潤巨噬細胞為在RPE破壞時IL-33/ST2誘導之光受體損失所需。
總之，使用遺傳及藥理學方法，此等結果證明IL-33促成骨髓細胞募集至光受體層及視網膜細胞損失。在光誘導之損傷模型(CLE)及RPE破壞模型中，IL-33軸信號傳導促進骨髓細胞積聚於視網膜之ONL及OS層中。在RPE細胞損失模型中，IL-33軸信號傳導促進骨髓細胞積聚於視網膜中。在視網膜損傷之兩者齧齒動物模型及人類AMD中，骨髓細胞積聚於受損之視網膜中在解剖學上與光受體損失相關。
F. 材料及方法
小鼠
ST2基因剔除(ST2-/-)BALB/c小鼠(八代)獲自MRC Laboratory of Molecular Biology,Cambridge,UK(參見Townsend等人J.Exp. Med.191：1069-1076,2000)。使ST2-/-小鼠逆代雜交至C57BL/6背景持續十代以產生ST2-/- C57Bl/6小鼠。IL33tm1/+及IL33tm2/tm2 BALB/c小鼠獲自F.Hoffmann-La Roche Ltd.,Basel,Switzerland(參見Bessa等人J.Autoimmunity 55：33-41,2014)。由於IL33tm1/+小鼠之顯著罹病率及死亡率，將IL33tm1/+小鼠與ST2-/- BALB/c小鼠雜交且維持在ST2-/-背景上。藉由使雌性IL33tm1/+ST2-/-小鼠與雄性IL33tm1/+ST2+/+小鼠育種來產生IL33tm1/tm1ST2+/-小鼠。IL-1R1-/-(Il1r1tm1Imx)、IL-18R1-/-(Il18r1tm1Aki)及IL-18-/-(Il18tm1Aki)C57Bl/6小鼠購自Jackson Laboratory。藉由高速同類系法(speed congenics)使IL-1R1-/-及IL-18R1-/-小鼠逆代雜交至BALB/c背景以分別產生IL-1R1-/-及IL-18R1-/-BALB/c小鼠(九代)。斯普拉格-道利大鼠購自Charles River Laboratories。所有動物在Genentech公司圈養於無病原體之動物設施中，伴隨12/12小時明/暗循環，且同窩仔畜用於實驗中。動物實驗根據由Genentech機構動物照護及使用委員會(Institutional Animal Care and Use Committee)批准之方案且根據關於眼科及視力研究中使用動物的視力及眼科研究協會(Association for Research in Vision and Ophthalmology)(ARVO)聲明進行。
重組蛋白質
重組小鼠IL-33(a.a.109-266)購自R&D Systems。藉由將編碼IL-33之胺基酸109-264之大鼠cDNA片段次選殖至pET28載體(Novagen)中來產生重組大鼠IL-33(a.a.109-264)。該蛋白質表現於大腸桿菌中且藉由Ni-NTA層析、隨後凝膠過濾純化。藉由將小鼠可溶性ST2(a.a.1-337)次選殖至在C末端具有8x-組胺酸(His)標籤之pRK5表現載體中來產生重組sST2。表現於CHO中之融合蛋白藉由Ni-NTA層析、隨後SUPERDEX® 200凝膠過濾進行純化。藉由阻斷來自經IL-33刺激之骨髓來源之肥大細胞(BMMC)之細胞因子產生來驗證sST2之中和活性。如所描述產生BMMC且用IL-33刺激(Moulin等人Cytokine 40：216-225,2007)。簡言之，將105個細胞在96孔盤中在20μg/ml sST2或對照His-標記之蛋白質存在下在200μl RPMI-1640培養基中用1ng/ml IL-33刺激24小時。收集培養物上清液以用於藉由ELISA(R&D Systems)量測IL-6及IL-13。使用鈕入孔技術(參見例如，美國專利第5,731,168號及Merchant等人Nature Biotechnology 16：677-681, 1998)產生重組IL-33 TRAP，其中將ST2之細胞外域(ECD)與IL1RAcP之ECD異二聚化。將具有含「鈕」突變之C末端mIgG2a Fc片段的編碼小鼠ST2(a.a.26-328)之ECD的pRK5表現載體與具有含「孔」突變之C末端mIgG2a Fc片段的編碼小鼠IL1RAcP(a.a.21-350)之ECD的pRK5表現載體共轉染至CHO細胞中。將融合蛋白藉由MabSURE SELECT管柱(GE Healthcare)及SUPERDEX® 200凝膠過濾進行純化。
恆定光暴露(CLE)
將8-12週齡之雄性BALB/c小鼠或6-8週齡之斯普拉格-道利大鼠保持正常圈養，伴隨<100lux之光強度(用作基線，第0天)。對於光暴露，將動物單獨圈養於稍加修改之僅用無過濾罩之扁鋼絲擱板覆蓋之正常籠中。為避免進入籠之光的破壞，將食物顆粒放置於籠之底部上且經由連接至籠側上之水瓶提供水。藉由將籠放置在在各貨架上裝備有48”冷白色螢光燈之Metro擱板貨架上來誘導視網膜變性。該擱板亦封閉於懸掛白色面板中以將光均勻反射回至貨架。相對於光源調整貨架高度以使得各貨架上之光強度為大約1200lux，如由光度計所量測。在CLE期間將籠在各貨架內且在貨架之間旋轉以確保相等光暴露。在評估之前使動物暴露於光持續如所指示之不同天數。
RPE損失誘導之視網膜變性
將6-8週齡之雄性C57Bl/6小鼠靜脈內注射20mg/kg體重之碘酸鈉(NaIO3)(Sigma)。基於先前劑量滴定實驗選擇NaIO3之劑量，藉由眼底成像評估RPE損失且藉由OCT評估視網膜厚度變化。如所指示，在NaIO3注射之後3或7天評估視網膜。注射等體積之鹽水的小鼠充當對照。
譜域光學相干斷層攝影術(SD-OCT)
在CLE之後，使用SPECTRALIS® HRA+OCT系統(Heidelberg Engineering)藉由SD-OCT來量測視網膜厚度。為調整以用於齧齒動物視神經，根據製造商之建議對系統進行修改，其中將55°廣角鏡頭置於照相機前方。藉由腹膜內注射氯胺酮(70-80mg/kg體重)及甲苯噻嗪(15mg/kg體重)使小鼠麻醉。使用若干滴托吡卡胺滴眼液USP 1%(Bausch & Lomb)使瞳孔擴張。雙側施加若干滴人工淚液以防止在程序期間之角膜脫水。 藉由距視神經之背側顳區(上象限)之水準體積掃描用於評估視網膜厚度。總視網膜厚度定義為截面影像上自內界膜(ILM)至RPE/脈絡膜層之寬度，且在MATLAB®(MathWorks)中使用定制自動影像分割常式進行量測。
視網膜電描記術(ERG)
用ESPION2TM電生理學系統(Diagnosys)進行ERG記錄。使小鼠在ERG記錄之前暗適應隔夜，且所有程序在昏暗紅光下進行。使小鼠麻醉且使其瞳孔如上所述擴張。使用恆溫板維持體溫且保持在37℃。經由前額皮下插入參比電極且在腰部中皮下插入地電極。將金環電極(小鼠電極1.5mm 3.2mm)(LKC Technologies)放置在各眼睛之角膜表面上。將一滴GONIOVISCTM羥丙甲纖維素眼用鎮痛溶液2.5%(HUB Pharmaceuticals)施加在角膜上以建立角膜與電極之間之電接觸，且在程序期間維持角膜濕度。將小鼠放置在用COLORDOMETM光刺激器覆蓋之平臺上。將小鼠以每強度五次閃光用三個閃光強度(0.05、1及25cd．s/m2)之白光刺激。藉由引入在最低刺激強度下15秒至最高刺激強度下1分鐘範圍內之刺激間時間間隔來允許在連續閃光之間之最大視杆細胞恢復。將信號在0.15-1000Hz下帶通濾波且在2kHz下採樣。在動物之間，使用乙醇擦拭巾清潔電極，隨後在無菌PBS中沖洗。在ERG之後，將眼用軟膏劑局部施加在角膜上以防止乾燥。使用定制MATLAB®軟體(Mathworks)對所有記錄之資料點進行分析，其中自a波之基線至波谷量測a波振幅，而自a波之波谷至b波之波峰量測b波振幅。對針對3-5次光刺激閃光之反應進行平均化。
氯膦酸鹽耗減耗減單核細胞/巨噬細胞
為耗減單核細胞/巨噬細胞，分別在CLE或NaIO3處理之前2天或1天開始每日靜脈內投與於200μl體積中1mg劑量之脂質體囊封之氯膦酸鹽(Encapsula Nano Sciences)。對照小鼠接受相同體積之對照脂質體。為監測全身性單核細胞耗減，在用異氟烷麻醉下經由心臟穿刺採集血液。用ACK(氯化鉀銨)溶解緩衝液(Life Technologies)自全血樣品除去紅血球。隨後將細胞再懸浮於流式細胞術緩衝液中，Fc阻斷，用別藻藍蛋白(APC)結合之抗CD115(純系AFS98，eBioscience)、異硫氰酸螢光素(FITC)結合之抗Ly6C(純系AL-21，BD Biosciences)及藻紅素(PE)結合之抗CCR2(R&D systems)染色，且藉由流式細胞術進行分析。
視網膜下注射AAV載體
在普遍存在之CAG啟動子控制下編碼小鼠sST2(a.a.1-337)-8xHis(SEQ ID NO：332)之AAV2/5載體由Vector Biosystems定制製備。小鼠sST2(a.a.1-337)-8XHis之胺基酸序列提供於SEQ ID NO：333中。藉由用105個基因組複本(GC)/細胞之感染倍率(MOI)感染HEK293細胞來驗證病毒活性。在感染後6天收集培養物上清液且使用山羊抗小鼠ST2 Ab(AF1004,R&D Systems)藉由ELISA(R&D Systems)及西方墨點分析針對sST2分泌進行分析。感染AAV空載體用作陰性對照。對於視網膜下注射AAV，用氯胺酮/甲苯噻嗪使小鼠麻醉且如上所述使瞳孔擴張。在解剖顯微鏡下，在與角膜接合處附近之鞏膜中用30號針進行小切口。使用鈍33號Hamilton針及自動注射裝置將含有1012GC/ml之1μl AAV懸浮液經由該切口注射至右眼之視網膜下腔。在注射之後，在自麻醉恢復之前局部施加三重抗生素(新黴素、多黏菌素B及桿菌肽)眼用軟膏劑以防止眼睛之感染及乾燥。
玻璃體及視網膜組織收集
為自大鼠眼睛收集玻璃體，經由CO2窒息使大鼠安樂死且摘出眼球。在除去角膜之後，用SUGI®楔形吸收拭子(Kettenbach Medical)吸收前房液。使用成角度之顯微外科鑷子自後房小心地拉出附有玻璃體之晶狀體。將晶狀體-玻璃體組織放置到含有溶解於PBS中之20μl蛋白酶抑制劑混合物(Roche)之過濾離心管(Costar)中且在4℃下在14,000 x G下離心5分鐘。玻璃體收集為來自下室之溶離液。將視網膜與鞏膜及色素上皮分離且在PBS中沖洗。將視網膜解離以用於流式細胞術分析或均質化以用於ELISA及西方墨點分析。使用組織均質器(IKA)將視網膜在細胞溶解緩衝液(Cell Signaling)中均質化。將視網膜及RPE/脈絡膜勻漿在4℃下在14,000 x G下離心10分鐘且收集上清液。將玻璃體及視網膜組織溶解物儲存在-80℃下直到分析。
流式細胞術
將視網膜如上所述分離且用含有20IU/ml木瓜蛋白酶及200 IU/ml DNA酶(Worthington Biochemicals)之厄爾(Earle)平衡鹽溶液(EBSS)在37℃下消化30分鐘。藉由輕輕吸移使組織解離。藉由將視網膜細胞再懸浮於含有卵類黏蛋白蛋白酶抑制劑(Worthington Biochemicals)之EBSS中來終止木瓜蛋白酶消化。藉由將等分試樣之單細胞懸浮液與標準濃度之6μm FLUORESBRITE® YG微球體(Polysciences)1：1混合、隨後在LSRFORTESSATM流式細胞儀(BD Biosciences)上計數來定量總視網膜細胞。活細胞門控在碘化丙啶陰性(PI-)細胞上。將原代視網膜細胞再懸浮於流式細胞術緩衝液(含有0.5%牛血清白蛋白及2mM EDTA之PBS，pH 8)中且與抗CD16/CD32(BD Biosciences)一起培育30分鐘以阻斷非特異性染色。將小鼠視網膜細胞用PE-CY7®結合之抗CD11b(純系M1/70，BD Biosciences)、APC結合之抗CD90.2(純系53-2.1，BD Biosciences)、ALEXA FLUOR® 700結合之抗CD45(純系30-F11，BioLegend)、FITC結合之抗ST2(純系DJ8，MD Bioproducts)、PE結合之抗CCR2(R&D systems)及FITC結合之抗Ly6C及PE結合之抗CD115(純系AFS98，eBioscience)染色。將大鼠視網膜細胞用PE-CY7®結合之抗CD11b/c(純系OX-42，BD Biosciences)、APC結合之抗CD90(純系OX-7，BD Biosciences)及/或ALEXA FLUOR® 700結合之抗CD45(純系OX-1，BioLegend)染色。
為偵測小鼠及大鼠之細胞內標記物，使用抗體結合套組(Abcam)根據製造商之說明書產生以下螢光團結合之抗體：PE結合之抗視錐細胞抑制蛋白(CAR)(EMD Millipore)、PE-CY7®結合之抗視紫紅質(Rho)(純系1D4，EMD Millipore)、PerCP-CY5.5®結合之抗膠質纖維酸性蛋白(GFAP)(純系GA5，Thermo Scientific)。ALEXA FLUOR® 647結合之抗波形蛋白(純系D21H3)購自Cell Signaling Technology。將細胞用紫色可固定活力染料(Life Technologies)染色，固定且藉由使用INTRAPREPTM透化試劑(Beckman Coulter)根據製造商之說明書來透化。隨後將細胞用抗體混合物染色30分鐘且洗滌且在LSRFORTESSATM流式細胞儀上進行分析。以與針對原代視網膜細胞所描述之相同方式進行rMC-1細胞中之ST2、波形蛋白及GFAP之染色。所有資料用BD FACSDIVATM軟體獲得且用FLOWJO®軟體(FlowJo)進行分析。藉由將各細胞類型之百分比乘以總活視網膜細胞來計算 視杆細胞(Rho+CAR-)、視錐細胞(Rho-CAR+)、神經節細胞(CD90+CD45-)、小神經膠質細胞(CD11b+CD45lo)及巨噬細胞(CD11b+CD45hi)之總數目。
rMC-1刺激
將rMC-1細胞(Kerafast)保持在含低葡萄糖(5.5mM)之具有10%熱滅活胎牛血清(FBS)、100U/ml青黴素及100μg/ml鏈黴素之杜氏改良伊氏培養基(LG-DMEM)中。對於高葡萄糖刺激，在37℃下將5 x 105個細胞在6孔盤在2ml具有2% FBS之LG-DMEM中培養隔夜。將培養基用LG-DMEM或具有2% FBS之含高葡萄糖(25mM)DMEM(HG-DMEM)替換且培養達72小時。藉由將細胞用膜聯蛋白V及碘化丙啶(PI)染色使用FITC膜聯蛋白V細胞凋亡偵測套組(BD Biosciences)根據製造商之說明書來測定細胞活力。收集培養物上清液且藉由ELISA及西方墨點分析來對IL-33表現進行分析。對於rMC-1細胞之IL-33刺激，將2 x 105個細胞在12孔板中在1ml具有10% FBS之LG-DMEM中培養且用大鼠IL-33(1、10或100ng/ml)刺激24小時。藉由在10μg/ml IL-33 TRAP或對照Fc蛋白存在下用IL-33刺激細胞來測定IL-33對rMC-1細胞之ST2依賴性活性。藉由ELISA量測培養物上清液中之CCL2水準。為測定rMC-1細胞中之IL-33之自分泌活性，如上所述在10μg/ml IL-33 TRAP或對照Fc蛋白存在下用高葡萄糖培養基刺激細胞持續如所指示之不同時間。分別藉由qPCR及ELISA針對CCL2表現收集RNA及培養物上清液。
ELISA
使用小鼠/大鼠IL-33 QUANTIKINE® ELISA套組(R&D Systems)量測玻璃體、視網膜溶解物、血清及rMC-1培養物上清液中之IL-33濃度。用QUANTIKINE® ELISA套組(R&D Systems)定量CCL2、IL-1α、IL-1β、ST2、IL-6及IL-13。用小鼠IL-18 ELISA套組(MBL International)量測IL-18。將視網膜溶解物中之細胞因子濃度針對藉由BCA分析(Pierce Biotechnology)所量測之總蛋白質含量加以校正。為評估AMD患者之玻璃體中之IL-33水準，在具有來自西方制度審查委員會(Western Institutional Review Board,WIRB)之批准及患者書面知情同意書情形下自中西部眼科研究所(Midwest Eye Institute)獲得經診斷患有AMD之患者(1名男性及5名女性，年齡68-91， 中值年齡79)及正經歷針對黃斑皺褶(3名男性及9名女性，年齡56-79，中值年齡72)及黃斑裂孔(5名男性及16女性，年齡46-75，中值年齡65)之外科手術的患者。如先前所描述進行眼睛解剖及玻璃體收集(Loyet等人Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.53：6628-6637,2012)。在局部麻醉下使用25號套管(Alcon)進行經結膜睫狀體平坦部玻璃體切除術。使用人類IL-33 QUANTIKINE® ELISA套組(R&D Systems)量測玻璃體中之IL-33水準。
定量RT-PCR
使用RNEASY® Plus小型套組(Qiagen)自視網膜及rMC-1細胞分離總RNA。使用高容量cDNA逆轉錄套組(Applied Biosystems)合成第一股cDNA。使用TAQMAN®基因表現分析與經驗證之引子及探針組(Applied Biosystems)進行IL-33、CCL2、ST2L、sST2、IL-6、IL-1α、IL-1β、IL-18及GFAP之定量PCR(qPCR)且藉由18s rRNA(小鼠)或β-肌動蛋白(大鼠)之表現對水準加以校正。為檢查rMC-1細胞及大鼠視網膜中之IL-33之潛在替代性剪接變異體，使用跨越全長IL-33 mRNA之5’非翻譯區(5’-UTR)(外顯子1)至終止密碼子(外顯子9)之PCR引子使用以下引子進行RT-PCR：5’-TTAAGACCAGCTATCTCCCATCA-3’(SEQ ID NO：342)及5’-ACGTTACATCTTAGAGAGCTTAAACA-3’(SEQ ID NO：343)。使用EXPANDTM高保真度PCR系統(Roche)根據製造商之說明書進行PCR。藉由1%瓊脂糖凝膠上之電泳對所得PCR產物進行分析。
西方墨點
藉由NOVEX® SDS 4-20% Tris-甘胺酸聚丙烯醯胺凝膠(Life Technologies)上之電泳分離玻璃體、視網膜溶解物或rMC-1培養物上清液且使用IBLOT®系統(Invitrogen)將其轉移至硝酸纖維素膜。在阻斷之後，用與大鼠IL-33交叉反應之山羊抗小鼠C末端IL-33(AF3626，R&D Systems)、或兔抗GAPDH(Cell Signaling)對膜進行探測，隨後用適當HRP結合之二級抗體(Jackson ImmunoResearch)進行探測。藉由使用ECL Plus西方墨點偵測試劑(GE Healthcare)對墨點進行處理。使用NE-PER®細胞核及細胞質提取試劑(Thermo Scientific)根據製造商之說明書來製備rMC-1細胞之細胞核及細胞質部分。藉由BCA蛋白質分析定量蛋白質濃度。如上所述藉由西方墨 點針對IL-33表現對相等量之蛋白質進行分析。藉由分別用小鼠抗HDAC2及抗HSP90(EMD Millipore)探測墨點來驗證細胞核及細胞質之次細胞分級分離。
微陣列分析
將總RNA轉化成雙鏈cDNA且隨後使用Agilent螢光線性擴增套組轉化成CY®染料標記之cRNA。如Agilent原位雜交套組Plus中所描述將CY®染料標記之cRNA片段化且雜交至Agilent全小鼠基因組陣列。將所有樣品用CY5®染料標記且針對CY3®染料標記之通用小鼠參比進行雜交。在雜交之後，將陣列洗滌、乾燥且在Agilent DNA微陣列掃描器上進行掃描。使用Agilent特徵提取軟體8.5對陣列成像資料進行分析。如先前所描述對原始特徵提取資料進行處理(Vander Lugt等人Nature Immunology 15：161-167,2014)。對微陣列資料進行過濾以僅包括單個探針/基因，從而在對於既定基因存在多個探針時選擇具有最高變異之探針(Bourgon等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 107：9546-9551,2010)。使用limma軟體套件(Smyth,Statistical Applications in Genetics and Molecular Biology 3：第3章，2004)進行差異表現分析。為鑑別在ST2-/-小鼠中差異性調控之基因，鑑別了在ST2+/+小鼠中藉由CLE上調之探針，從而選擇在Benjamini-Hochberg經調整之P值<0.01處顯示>1.5倍變化之探針(參見例如，Hochberg等人Statistics in Medicine 9：811-818,1990)。將此等探針進一步過濾成在Benjamini-Hochberg經調整之P值<0.05處顯示ST2+/+與ST2-/-小鼠之間之>1.25倍差異之彼等探針。
基因本體分析
使用GOstats R套件(Falcon等人Bioinformatics 23：257-258,2007)使鑑別為差異表現之基因經受基因本體分析。由ST2+/+及ST2-/-小鼠差異性調控之一組基因用作測試組，且由CLE差異性調控之一組基因用作要考慮之總基因。使用條件顯著性測試，使搜索限於生物過程本體。選擇了在標稱(未經調整)P值為0.01下顯示顯著增濃之基因本體項。
RNA-seq
對於人類視網膜之RNA-seq分析，在供體書面知情同意書 情形下自Lions眼科研究所獲得無眼部疾病病史之死後健康供體眼睛。將供體眼睛在死後4小時或4小時以下摘出眼球且在收集之後立即保存在RNALATER®中。黃斑完全包含於上顳血管弓與下顳血管弓之邊界內且可容易視覺化。在使用解剖剪自周邊眼底解剖黃斑之後，使黃斑視網膜與視網膜下方之RPE及脈絡膜分離。使用RNEASY®小型套組(Qiagen)自視網膜分離總RNA。使用NANODROPTM 8000分光光度計測定RNA濃度。保存於RNALATER®中之樣品通常產生高品質，如用Agilent 2100生物分析儀(Agilent Technologies)所評估。使用TRUSEQ® RNA樣品製備套組(Illumina)根據製造商之說明書製備RNA-seq文庫且然後藉由Illumina HISEQ® 2000系統(Illumina)進行測序。如先前所描述進行測序資料分析(Durinck等人Nature Genetics 47：13-21,2015)。使用GSNAP短序比對器(Wu等人Bioinformatics 26：873-881,2010)將測序讀數映射至參比人類基因組(GRCh37)。藉由將與既定基因中之編碼序列對準之讀數的數目針對該編碼序列之總長度及總讀數數目進行校正來量測表現(每百萬總讀數每千鹼基之讀數(RPKM))。
組織學及免疫組織化學
對於外核層(ONL)厚度之形態測定分析，將眼睛在大衛森氏固定劑(Davidson’s fixative)(Electron Microscopy Sciences)中固定24小時。沿眼球之垂直子午線切割覆蓋整個視網膜(包括視神經)之石蠟包埋的5μm切片且用蘇木精及曙紅(H&E)染色。在安裝切片之後，使用具有Olympus Uplan SApo 0.75 NA 20x物鏡之運行NDP Scan軟體的Olympus NANOZOOMER® 2.0 HT數位載片掃描器(Hamamatsu)掃描載片。在MATLAB®(MathWorks)中使用定制自動影像分割常式對影像進行分析。
僅分析穿過視神經切割之切片。量測自視神經頭之任一側開始0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8及1.0mm距離處之ONL厚度。對於IL33tm2/tm2及IL33tm1/tm1平坦安裝視網膜之成像，將眼睛在4%多聚甲醛中固定2小時且在PBS中沖洗。從眼球完整解剖視網膜組織且用於PBST緩衝液(1x PBS，0.5% TWEEN®-20)中之1μg/ml DAPI(Invitrogen)染色2小時，隨後在PBST緩衝液中洗滌五次且在PBS中沖洗。將視網膜平坦安裝且用Nikon A1R共 焦顯微鏡使用40x物鏡成像。藉由使用PHOTOSHOP®(Adobe)對亮度及對比度進行微調整來對圖7M及圖12F中之影像進行最佳化。對於大鼠眼睛之IL-33及波形蛋白共染色，將眼睛在大衛森氏固定劑中固定24小時，浸沒於70%乙醇中且加工以用於石蠟包埋及切片。在Dako Autostainer平臺(Dako)上進行切片之IHC染色。在再水合之後，將切片用Dako Target Retrieval Solution(Dako)進行處理。將切片與5μg/ml針對IL-33之小鼠單株抗體(mAb)mAb(純系Nessy 1，Enzo Life Sciences)及0.18μg/ml針對波形蛋白之兔mAb(Cell Signaling Technologies)或陰性對照抗體在阻斷緩衝液中培育1小時。在洗滌之後，將切片與PowerVision Poly-HRP抗小鼠IgG及Poly-AP抗兔IgG(Leica Biosystems)培育30分鐘，隨後用二胺基聯苯胺(DAB)及堅牢紅/磷酸萘酚試劑(ScyTek)偵測。在用蘇木精對比染色之後，用亮視野顯微鏡對切片進行成像。用針對GFAP之兔多株抗體(DAKO)(1：500)及針對Iba1之兔多株抗體(Wako Chemicals)(0.5μg/ml)以相同方式進行小鼠眼睛之IL-33、GFAP及Iba1染色。藉由沿在垂直子午線上切割之視網膜切片(包括視神經)之全部長度手動計數各視網膜層中之Iba1+細胞來進行小神經膠質細胞定量。用APOTAG®過氧化酶原位細胞凋亡偵測套組(Chemicon)根據製造商之說明書進行大鼠眼睛切片之TUNEL染色。
對於人類眼睛之IHC分析，在供體或供體家庭同意情形下自Lions眼科研究所獲得來自年齡範圍為67-89歲之7個正常供體(5名男性及2名女性)及年齡範圍為82-92歲之7名AMD患者(2名男性及5名女性)之眼睛。如上所述將眼睛固定且切片。使用如上所述針對IL-33、波形蛋白、GFAP及Iba1之抗體及針對PLVAP之內部小鼠單株抗體進行IL-33、波形蛋白、GFAP、Iba1及PLVAP之螢光IHC共染色，隨後用適當螢光染料標記之二級抗體或螢光染料-TSA(酪胺信號擴增)染色且用DAPI對比染色。如上所述用載片掃描器掃描載片。使用NDP view 2軟體(Hamamatsu)對圖5A-5C、5E及6A-6B中之影像進行亮度微調整以更加視覺化信號，但一個圖內之所用影像均類似地修改。藉由沿正常眼睛或AMD眼睛之病變及非病變區之中央及周邊區域中的大約500μm長區域手動計數IL-33+及Iba1+細胞來進行IL-33+及Iba1+細胞定量。
統計分析
除非另外指示，否則使用Prism6軟體(GraphPad)及對資料進行分析及製圖。如針對組之間比較所指示使用不成對雙尾司徒頓t檢驗或ANOVA進行統計分析。P值<0.05被視為顯著的。
實例4. 阻斷IL-33路徑及IL-13路徑導致相較於單獨阻斷任一路徑肺中2型發炎之更大抑制
A. 2型(Th2)發炎之巴西日圓線蟲模型
細胞因子IL-33及IL-13促進2型免疫反應中之發炎，其中大多數資料支援IL-33在調控IL-13之表現中之作用。應瞭解，IL-33路徑或IL-13路徑之損失減弱2型發炎性反應，從而揭示個別細胞因子在活體內之非冗餘作用。然而，尚不清楚IL-33信號之不存在係僅由於IL-13之減少抑或由於額外發炎性路徑之抑制而影響2型免疫性。
為解決這一問題，在存在或不存在針對鼠類IL-13之抗體情形下用引起活體內2型發炎之藥劑激發ST2+/+及ST2 -/-小鼠。蠕蟲巴西日圓線蟲引起肺及腸中之急性2型發炎性反應，其特徵在於嗜伊紅白血球移動至組織中及Th2細胞因子產生(IL-4、IL-5、IL-13)(參見例如，Frontiers in Immunology 4(74)：1,2013)。先天性及適應性免疫路徑皆為抗蠕蟲免疫性所需。將ST2+/+小鼠用抗IL-13或對照抗豬草抗體進行處理以評估IL-13在2型肺發炎中之作用(圖14A)。同樣，將ST2-/-小鼠用對照或抗體IL-13抗體進行處理以評估IL-33之促成作用及活體內IL-13及IL-33之組合促成作用。與先前報導(參見例如，Nature 464：1367)一致，巴西日圓線蟲感染引起ST2+/+小鼠之BALF及肺組織中之強烈嗜伊紅白血球性發炎，其在ST2存在下顯著減弱(亦即，如ST2-/-小鼠中所示)。類似地，用針對IL-13之中和抗體處理導致BALF及組織嗜伊紅白血球之顯著減少。出人意料地，IL-33信號傳導及IL-13之組合阻斷導致對嗜伊紅白血球移動至肺中之更大抑制，其中水準與未處理對照相當(圖14B)。此外，未在ST2-/-小鼠之BALF中偵測到IL-13，此與IL-33在IL-13誘導中之作用一致。此外，組合阻斷兩種路徑導致相對於單獨阻斷任一路徑BALF中之IL-4及IL-5之更大減少(圖14C)。
材料及方法
將7-9週齡之雌性ST2+/+及ST2-/- Balb/C小鼠用懸浮於200μl鹽水中之500巴西日圓線蟲L3幼蟲經由在第0天在側腹上皮下注射感染。在感染之後，將動物放置在多黏菌素b及新黴素介導之水上持續五天。在感染後第-1、1、3、6及8天時經由腹膜內(i.p.)注射投與抗體(於200μl之PBS中之200μg/小鼠)(參見圖14A)。在感染後第10天處死動物以用於分析肺發炎。收集支氣管灌洗液(BALF)及灌注肺組織以用於流式細胞術及蛋白質分析。未處理ST2+/+及ST2-/-小鼠用作對照。
對於肺組織處理，將灌注肺在37℃下在2mg/ml膠原酶D(Roche)中消化1小時且使用GENTLEMACSTM C管(Miltenyi)根據製造商之說明書進行解剖。將單細胞懸浮液與Fc受體阻斷劑(2.4G2；BD Pharmingen)一起培育15分鐘，之後在冰上用抗體染色30分鐘。用以下抗體分析嗜伊紅白血球、嗜中性白血球及巨噬細胞：生物素化抗CD45(30-F11；eBioscience)、別藻藍蛋白/Cy7-抗CD11b(M1/70；BD Pharmingen)、藻紅素/Cy7-抗CD11c(HL3；BD Pharmingen)、藻紅素-抗Siglec-F(E50-2440；BD Pharmingen)、別藻藍蛋白-抗F4/80(BM8；eBioscience)、異硫氰酸螢光素-抗Gr-1(RB6-8C5；BD Pharmingen)，且隨後抗生蛋白鏈菌素PACIFIC ORANGETM(S32365；Molecular Probes)。藉由ELISA量測BALF細胞因子。
B. TNP-OVA研究
在以上該實例之章節A中所描述之巴西日圓線蟲感染模型為對病原體之急性反應，且被認為未反映在慢性過敏性發炎中觀察到之抗原誘導的反應。使用氣道發炎之良好表徵之TNP-OVA敏化/激發模型來解決過敏性發炎中IL-33路徑與IL-13路徑之間之冗餘問題。在此模型中，安裝針對TNP-OVA抗原之適應性免疫反應，其特徵在於嗜伊紅白血球移動至組織中及T細胞IL-5及IL-13細胞因子產生。
將ST2+/+及ST2-/-小鼠用TNP-OVA/明礬敏化且在存在或不存在IL-13阻斷抗體下用TNP-OVA激發。與使用針對IL-33或ST2之中和試劑之研究一致，在TNP-OVA敏化/激發之後在ST2+/+小鼠中觀察到之強烈嗜伊紅白血球性發炎在ST2-/-菌株中顯著減弱(參見例如，Exp.Lung Research 40(2)：66,2014)。如先前所證明，抑制IL-13亦減弱肺組織嗜伊紅 白血球之積聚(Taube等人，J.Immunol.169(11)：6482,2002)。與以上此實例之章節A中所述之巴西日圓線蟲感染研究一致，組合阻斷IL-33信號傳導及IL-13使流入肺中之嗜伊紅白血球降低至在未處理小鼠中觀察到之水準(圖15A)。對TNP-OVA抗原之T細胞反應之分析再次揭示與單獨各路徑之抑制相比，兩種路徑之不存在對IL-13及IL-5產生具有更大作用(圖15B)。
在此實例之此章節及章節A中所描述之活體內研究證明阻斷IL-33及IL-13對2型肺發炎具有相較於單獨阻斷該等路徑中任一者更大之作用且突出IL-33及IL-13之非重疊功能。巴西日圓線蟲蠕蟲感染導致先天性及適應性免疫組分之活化，同時TNP-OVA研究為針對抗原之適應性免疫研究之經典模型。雖然該等模型反映2型發炎之不同態樣，但兩者均強調IL-13劑IL-33在介導嗜伊紅白血球性發炎中之作用，其中抑制兩種路徑完全阻止此反應。此等資料強調IL-33之促成發炎之額外功能，及阻斷IL-33及IL-13將為2型免疫病症(包括IL-33介導之病症，諸如氣喘)帶來之額外益處。
材料及方法
將7-8週齡之雌性ST2+/+及ST2-/- Balb/C小鼠在第0天經由腹膜內(i.p.)注射於100μl PBS中之50μg TNP-OVA及2mg明礬敏化(Biosearch Technologies)。每組使用七隻小鼠。在敏化後第35天開始，將小鼠用於PBS中之氣溶膠1% TNP-OVA經由噴霧器激發連續7天。在敏化後第35-41天腹膜內投與抗gp120 IgG1或抗小鼠IL-13 IgG1(於200μl PBS中之100μg/小鼠)。在第42天處死動物以用於分析肺發炎。收集BALF及灌注肺組織以用於流式細胞術及蛋白質分析。收集縱隔淋巴結以用於T細胞記憶分析。未處理ST2+/+及ST2-/-小鼠用作對照。藉由ELISA量測BALF細胞因子水準。將灌注肺在37℃下在2mg/ml膠原酶D(Roche)中消化1小時且使用GENTLEMACSTM C管(Miltenyi)根據製造商之說明書進行解剖。將單細胞懸浮液與Fc受體阻斷劑(2.4G2；BD Pharmingen)一起培育15分鐘，之後在冰上用抗體染色30分鐘。用以下抗體分析嗜伊紅白血球、嗜中性白血球及巨噬細胞：生物素化抗CD45(30-F11；eBioscience)、別藻藍蛋白/Cy7-抗CD11b(M1/70；BD Pharmingen)、藻紅素/Cy7-抗CD11c(HL3；BD Pharmingen)、藻紅素-抗Siglec-F(E50-2440；BD Pharmingen)、別藻藍蛋白-抗F4/80(BM8；eBioscience)、異硫氰酸螢光素-抗Gr-1(RB6-8C5；BD Pharmingen)，且隨後抗生蛋白鏈菌素PACIFIC ORANGETM(S32365；Molecular Probes)。
對於活體外T細胞回憶分析，將來自縱隔淋巴結之單細胞懸浮液(3x105個細胞/孔)在存在或不存在100μg/ml TNP-OVA(Biosearch Technologies)下在含有10% FBS且補充有L-麩胺醯胺及青黴素/鏈黴素之RPMI 1640培養基中培養6天。在6天之後，藉由CELLTITER-GLO®發光細胞活力分析(Promega)量測細胞增殖且收集上清液以用於經由ELISA分析細胞因子水準。
實例5. 藉由IL-33調控肥大細胞脫粒及細胞因子分泌
A. IL-33增強活體外及活體內抗原誘導之肥大細胞脫粒
用抗原-IgE複合物刺激肥大細胞導致自預成型顆粒快速釋放血管活性及促發炎介體。此等介體(其包括組胺、蛋白酶及蛋白聚糖)充當針對侵入病原體之第一線防禦。為確定IL-33是否增強此反應，將肥大細胞用IgE敏化24小時，且在IL-33存在或不存在下用抗IgE刺激1小時。雖然IL-33本身並未誘導脫粒，但其顯著增強β-己糖胺酶、類胰蛋白酶及組胺之脫粒(圖16A)。
為證實活體內肥大細胞活化及脫粒之IL-33依賴性增強，利用被動全身性過敏性模型。在用抗二硝基苯基(抗DNP)IgE敏化28小時之後，在有或無IL-33之情形下用DNP-HSA激發ST2+/+及ST2-/-小鼠。將過敏性反應量測為在1小時過程內體溫之降低(圖16B)。與以上所述之活體外研究類似，在抗原不存在下，IL-33未促進過敏性反應(圖16C)。同樣，ST2+/+及ST2-/-在FcεRI(FcεRI)活化之後展現體溫之類似變化(圖16D)。然而，與活體外研究一致，添加IL-33增強肥大細胞反應，如由相較於對照組體溫之更大下降所展示(圖16E)。
B. IL-33擴增抗原誘導之肥大細胞細胞因子分泌
除脫粒之外，肥大細胞經由分泌細胞因子及趨化因子促成宿主防禦。為評估IL-33在肥大細胞細胞因子釋放中之作用，將肥大細胞用IgE 敏化24小時，且在IL-33存在或不存在下用抗IgE刺激72小時。抗原刺激產生IL-8分泌，其藉由添加IL-33增強(圖16F)。單獨交聯FcεRI未產生IL-5或IL-13之分泌(圖16F)。如之前所報導，IL-33刺激IL-5及IL-13之釋放，其在添加FcεRI刺激情形下顯著增增加。此外，觀察到IL-33介導之自肥大細胞釋放TNF-α及IL-10(圖16G)。微陣列分析揭示IL-33誘導多種趨化因子、細胞因子及生長因子(圖16H)(參見例如，Nagarkar等人J.Allergy Clin.Immunol.136(1)：202-205,2015)。此等結果突出IL-33在促進肥大細胞反應及防禦機制中之作用。
C. 材料及方法
活體外肥大細胞分析
如先前所描述分離肥大細胞(參見例如，Nagarkar等人J.Allergy Clin.Immunol.136(1)：202-205,2015)。來源於10個供體之外周血來源的CD34+細胞購自Stemcell Technologies(Vancouver,BC,Canada)且如先前所描述在IL-6及SCF存在下持續12週之時間段分化成原代培養之活體外CD34+細胞來源的人類肥大細胞。在第0週，將細胞懸浮於含有200ng/ml SCF、50ng/ml IL-6、5ng/ml IL-3、11μM 2-巰基乙醇(2-ME，Invitrogen(Carlsbad,CA))、100U/ml青黴素及100μg/ml鏈黴素(Invitrogen)之無血清伊思考夫(Iscove’s)甲基纖維素培養基(METHOCULTTM SFBIT H4236，Stemcell Technologies)中且隨後在37℃下在5% CO2中孵育。在培養2週時，將含有200ng/ml SCF、50ng/ml IL-6、11μM 2-ME、100U/ml青黴素及100μg/ml鏈黴素之新鮮甲基纖維素培養基覆蓋於甲基纖維素培養物上。在培養4週時，將補充有200ng/ml SCF、50ng/ml IL-6、胰島素-轉鐵蛋白-硒(Invitrogen)、55μM 2-ME、100U/ml青黴素及100μg/ml鏈黴素之1ml等分試樣的伊思考夫改良杜氏培養基(IMDM)覆蓋於甲基纖維素培養物上。在培養6週時，在用PBS溶解甲基纖維素培養基之後收回所有細胞。隨後將細胞懸浮且在補充有100ng/ml SCF、50ng/ml IL-6、0.1% BSA、胰島素-轉鐵蛋白-硒、55μM 2-ME、100U/ml青黴素及100μg/ml鏈黴素之IMDM中培養，且在一週後更換培養基。再培養一週後，將培養基轉換為補充有100ng/ml SCF、50ng/ml IL-6、5% FBS(Invitrogen)、55μM 2-ME、100U/ml 青黴素及100μg/ml鏈黴素之IMDM。在其後每週更換培養基，且將細胞再培育5-7週。到12週結束時，大多數非肥大細胞預期經歷消耗。藉由在用1μg/ml骨髓瘤IgE(EMD Millipore,Billerica,MA)處理48小時之後培養12週後使用流式細胞術量測FcεRI表現來測定肥大細胞之最終純度。肥大細胞之最終純度為90%。以此方式產生來自10個獨立供體之肥大細胞。
對於IL-33刺激之肥大細胞的微陣列分析，將來自兩個供體之肥大細胞(1x106個細胞/ml)用10ng/ml IL-33一式兩份刺激24小時之時間段。隨後收集RNA以用於微陣列分析。對於測定IL-33反應，如所指示用IL-33刺激肥大細胞(圖16A)48小時。收集無細胞上清液以用於使用Meso Scale Discovery Th1/Th2 10叢面板(MSD,Rockville,MD)根據製造商之說明書分析IL-5、IL-13、IL-4、IL-10及TNF-α水準。對於IL-33及IgE交聯共刺激實驗，如所指示在10μg/ml抗IgE(411520；EMD Millipore)存在或不存在下用IL-33刺激IgE敏化之肥大細胞(0.5x106個細胞/ml)且在72小時之後收集無細胞上清液。用ELISA套組針對IL-8(DY208；R&D systems)、IL-5(88-7056；eBioscience)及IL-13(88-7439；eBioscience)分析所釋放之細胞因子水準。
脫粒
將人類肥大細胞脫粒量測為在總細胞含量內釋放之β-己糖胺酶、類胰蛋白酶及組胺之百分比。鈣離子載體A23187(C7522；Sigma Aldrich)在10μM下用作陽性對照。將肥大細胞用2μg/ml純化之人類IgE(AG30P；EMD Millipore)敏化24小時。洗滌經敏化之肥大細胞且以6.25x106個細胞/ml懸浮於Tyrode氏緩衝液(10mM HEPES、130mM NaCl、6.2mM D-葡萄糖、3.0mM KCl、1.4mM CaCl2、1.0mM MgCl2及0.1% BSA)中。將肥大細胞(6.25x104/孔)一式三份接種於96孔v底盤中且以20μl之最終體積在100ng/ml人類IL-33存在或不存在下用10μg/ml抗IgE(411520；EMD Millipore)刺激1小時。收集細胞上清液且用20μl之於Tyrode氏緩衝液中的0.5% TRITONTM X-100溶解細胞球粒。藉由使用螢光測定分析對β-己糖胺酶釋放進行分析。將上清液及細胞溶解物(10μl)與0.1M檸檬酸鹽緩衝液(pH 4.5)中之50μl 4mM對硝基苯基-N-乙醯基-β-D-胺基葡糖苷(N9376， Sigma Aldrich)一起培育1小時，且添加150μl 0.2M甘胺酸以終止反應。在ELISA讀取器中在405nm下量測吸光度。使用肥大細胞脫粒分析套組(IMM001；EMD Millipore)根據製造商之說明書計算上清液及細胞溶解物中之類胰蛋白酶水準及活性。使用組胺ELISA套組且按照製造商之說明書來分析上清液及細胞溶解物中之組胺水準(409010；Neogen)。
被動全身性過敏性
將7-8週齡之雌性ST2+/+及ST2-/- Balb/C小鼠用於200μl鹽水中之200μg DNP-小鼠IgE(Biosearch Technologies)經由在第0天靜脈內注射敏化。每組使用五隻小鼠。在28小時之後，將小鼠用100μg DNP-HAS(Biosearch Technologies)、2μg鼠類IL-33(R&D Systems)或於200μl鹽水中之組合靜脈內激發。藉由以5分鐘時間間隔持續激發後1小時用掃描儀掃描經植入之晶片來量測體溫。
基因表現分析
如先前所描述分離進行RNA提取及PCR(參見例如，Nagarkar等人J.Allergy Clin.Immunol.136(1)：202-205,2015)。使用Qiagen RNEASY®套組(Germantown,MD)自肥大細胞提取總RNA。使用來自Bio-Rad(Hercules,CA)之ISCRIPTTM逆轉錄Supermix自總RNA產生cDNA。使用TAQMAN®基因表現分析(Applied Biosystems,Foster City,CA)進行cDNA之擴增。除非另外指示，將基因表現之倍數變化與對應培養基對照相比較。對於微陣列分析，使來自肥大細胞樣品之RNA進行Agilent單輪擴增。
微陣列分析及統計學
如所描述進行微陣列及統計學(參見例如，Nagarkar等人J.Allergy Clin.Immunol.136(1)：202-205,2015)。分別使用ND-1000分光光度計(Thermo Scientific,Wilmington,DE,USA)及生物分析儀2100(Agilent Technologies,Santa Clara,CA,USA)測定總RNA樣品之數量及質量。根據製造商之說明書(Agilent Technologies)製備CY®染料標記之cRNA製劑及陣列雜交。
簡言之，將總RNA樣品轉化成雙鏈cDNA且隨後使用 Agilent Quick Amp標記套組轉化成CY®染料標記之cRNA。使用RNEASY®小型套組(Qiagen)純化經標記之cRNA。使用ND-1000分光光度計(Thermo Scientific)測定cRNA產率及CY®染料併入。將750ng之經標記cRNA片段化且雜交至Agilent全人類基因組4 44K v2陣列。將所有樣品用CY®5染料標記且針對CY®3染料標記之通用人類參比(Stratagene,La Jolla,CA,USA)進行雜交。將樣品在65℃下雜交17小時。在雜交之後，將陣列洗滌、乾燥且使用Agilent掃描器進行掃描。Agilent特徵提取軟體11.5版用於分析所獲得之陣列影像。使用R Project軟體套件2.15.1版進行所有統計計算。使用R之arrayQualityMetrics套件評估陣列品質控制。將微陣列校正且使用Bioconductor之vsn套件轉化探針強度。使用基因篩檢程序套件進行微陣列資料之獨立過濾以增加統計功效以偵測真陽性同時維持I型誤差控制。
因為不變或不對應於Entrez基因轉錄物之陣列特徵通常不提供針對差異基因表現分析之資訊，所以進行基於注釋及表現可變性之過濾。簡言之，如下進行過濾：1)僅保留代表Entrez或CCGf基因之陣列特徵；2)基於最高四分位數範圍(IQR)將對應於單一Entrez基因之複數個陣列特徵減少至單一陣列特徵；及3)用Bioconductor之limma套件進行基因表現微陣列資料之線性模型檢驗統計學。簡言之，此方法利用等效於針對綜合估計之經估計樣本方差之收縮的經驗貝葉斯法，從而在陣列數目受限時產生更穩定推理。差異表現檢驗統計學被估計為模型之線性對比，包括處理作為因子。利用Benjamini及Hochberg方法來解決說明多重假設檢驗之經調整P值。
實例6. IL-33軸在K/BxN血清轉移關節炎模型中之促發炎作用
A. IL33或ST2之損失改善關節炎疾病。
K/BxN血清包含針對葡萄糖-6-磷酸異構酶(GPI)之自體抗體，該等抗體形成免疫複合物。將此等免疫複合物投與至未處理免疫活性小鼠誘導類似於類風濕性關節炎之病理學，諸如關節腫脹、骨侵蝕、免疫細胞浸潤及細胞因子及趨化因子中之疾病。此反應依賴於先天性免疫系統，包括替代性補體路徑、肥大細胞及嗜中性白血球。先前證明瞭肥大細胞之非冗餘作用，特別是在疾病引發期間(參見例如，Lee等人Science 297：1689-1692,2002)。鑒於IL-33在肥大細胞活化中之作用(如實例6中所展示)，在IL33-/-(圖17A)及ST2-/-(圖17B-17D)小鼠中檢查疾病活性。與先前報導一致，ST2之缺乏導致減輕之關節炎。在IL33-/-小鼠中觀察到類似觀察結果。此等資料進一步闡述了細胞研究，該等細胞研究證明IL-33能夠影響肥大細胞功能之複數個態樣，包括促發炎細胞因子分泌、存活及脫粒。
B. 材料及方法
藉由使ST2+/+及ST2-/- Balb/C菌株逆代雜交10代來產生雌性ST2+/+及ST2-/- C57Bl/6小鼠。在第0天向7-8週齡小鼠靜脈內(i.v.)投與20μl關節性K/BxN血清。每組使用十隻小鼠。首先對血清進行測試以測定誘導ST2+/+小鼠中之關節炎所需之最佳量。每日針對關節炎之跡象檢查爪。使用以下量度藉由目測觀察對疾病之程度進行計分： 0=無紅斑及腫脹跡象
1=限於足弓(跗骨)或踝之紅斑及輕微腫脹
2=自踝延伸至足弓之紅斑及輕微腫脹
3=自踝延伸至蹠關節之紅斑及中度腫脹
4=紅斑及嚴重腫脹涵蓋踝、足及足趾。
將資料繪製為平均得分，其為4只爪得分之和。使用以下量度測定疾病嚴重程度： 輕微(平均得分0-3)
中度(平均得分4-8)
嚴重疾病(平均得分9以上)。
平均得分反映所涉及關節之數目。
在第0天向7-8週齡之雌性IL33+/+及IL33-/- C57Bl/6小鼠靜脈內(i.v.)投與70μl關節性K/BxN血清。每組使用五隻小鼠。再次對血清進行測試以測定誘導IL33 +/+菌株中之關節炎所需之最佳量。如以上所指示進行疾病活性之計分。
實例7. IL-33誘導之巨噬細胞募集至肺中不依賴於IL-4、IL-5及IL-13
本文所述之活體內研究例示IL-33在促進2型發炎中之非冗餘作用，包括例如嗜伊紅白血球募集至組織。然而，IL-33亦包括宿主防禦 之不完全與2型免疫性相關的其他組分。巨噬細胞尤其促成抗微生物反應及組織體內恆定之複數個態樣，包括吞噬作用、細胞因子及生長因子分泌及傷口修復。其功能之中心為募集至感染部位，其部分由細胞因子諸如IL-33介導。
為解決IL-33誘導之巨噬細胞移動至肺中是否不依賴於2型細胞因子且因此指示IL-33功能在免疫中之更廣泛態樣，在針對IL-4、IL-5及IL-13之中和抗體存在或不存在下用IL-33處理小鼠(圖18A-18C)。鑒於此等細胞因子在肺發炎中之作用，對BALF細胞性進行分析。與此等細胞因子在嗜伊紅白血球移動中之作用一致，IL-33誘導之嗜伊紅白血球浸潤至BALF中在IL-4、IL-5及IL-13阻斷時完全阻止(圖18C)。然而，巨噬細胞浸潤至肺中為由此處理擾亂(圖18B)，從而強調IL-33除誘導IL-4、IL-5及IL-13之外之獨特特性。鑒於巨噬細胞在宿主防禦中之作用，此等資料表明IL-33在活體內除傳統2型免疫反應之外之替代性功能。
材料及方法
7-8週齡之雌性C57BL/6小鼠購自Jackson Laboratory。每組使用五隻小鼠。重組小鼠IL-33(a.a.109-266)購自R&D Systems。一組對照動物僅接受鹽水處理。從第0至7天，將小鼠每日腹膜內(i.p.)注射100μg對照抗體或針對IL-4、IL-5及IL-13之中和抗體(抗IL-4及抗IL-5來自R&D Systems，抗IL13係內部產生)(圖18A)。在第1天至第7天，將小鼠每日腹膜內注射0.5μg重組鼠類IL-33。將小鼠在第8天安樂死且收集支氣管灌洗液(BALF)。藉由流式細胞術分析評估細胞計數。將BALF細胞與Fc受體阻斷劑(2.4G2；BD Pharmingen)一起培育15分鐘，之後在冰上用抗體染色30分鐘。用以下抗體分析嗜伊紅白血球、嗜中性白血球及巨噬細胞：生物素化抗CD45(30-F11；eBioscience)、別藻藍蛋白/Cy7-抗CD11b(M1/70；BD Pharmingen)、藻紅素/Cy7-抗CD11c(HL3；BD Pharmingen)、藻紅素-抗Siglec-F(E50-2440；BD Pharmingen)、別藻藍蛋白-抗F4/80(BM8；eBioscience)、異硫氰酸螢光素-抗Gr-1(RB6-8C5；BD Pharmingen)，且隨後抗生蛋白鏈菌素PACIFIC ORANGETM(S32365；Molecular Probes)。
實例8. 抗IL-33單特異性及抗IL-33/抗IL-13雙特異性抗體之表徵
先前確立了一種技術來在大腸桿菌中產生具有兩個不同輕鏈之人類IgG1雙特異性抗體(Yu等人，2011,Sci Transl Med 3,84ra44)。該方法利用鈕入孔技術(參見例如，美國專利第5,731,168號，Ridgway等人，1996,Protein Eng.9,617-621；Atwell等人，1997,J Mol Biol 270,26-35，其以全文引用之方式併入本文中)以促進免疫球蛋白重鏈之異二聚糖化。為能夠使用無輕鏈錯配之兩個不同輕鏈，將各臂在單獨大腸桿菌細胞中培養為半抗體。應用此方法以藉由將抗IL-33及抗IL-13親本抗體次選殖到允許將抗IL-33臂表現為人類IgG4孔且抗IL-13臂表現為人類IgG4鈕之載體中來產生抗IL-13/IL-33雙特異性抗體。
使用鈕入孔(KIH)技術來產生稱為10C12.38.H6.87Y.58I/IL-13 IgG4之雙特異性抗IL-33/抗IL-13抗體。10C12.38.H6.87Y.58I/IL-13 IgG4之抗IL-33臂具有SEQ ID NO：36之VH胺基酸序列及SEQ ID NO：37之VL胺基酸序列，其對應於抗體10C12.38.H6.87Y.58I。10C12.38.H6.87Y.58I/IL-13 IgG4之抗IL-33臂具有SEQ ID NO：302之VH胺基酸序列及SEQ ID NO：303之VL胺基酸序列。10C12.38.H6.87Y.58I/IL-13 IgG4之抗IL-33臂具有SEQ ID NO：306之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO：307之輕鏈胺基酸序列，且10C12.38.H6.87Y.58I/IL-13 IgG4之抗IL-13臂具有SEQ ID NO：304之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO：305之輕鏈胺基酸序列。
使雙特異性抗體之抗IL-13 CDR基於來金珠單抗，其已在先前產生且表徵。參見例如，PCT公開案第WO 2005/062967號。對於雙特異性抗體，抗IL-13抗體在FR區中具有相較於來金珠單抗之兩個偏差：重鏈上之Q1E及輕鏈上之M4L。
對於抗體表現，使用大腸桿菌菌株64B4。將隔夜培養物在30℃下生長於LB(100μg/ml卡本西林)中，1：100稀釋至5ml CRAP培養基(100μg/ml卡本西林)中(Simmons等人，2002,J.Immunol.Methods,263：133-147)且在30℃下生長24小時。
對於擴大至10L發酵槽中，將初始起子培養物(500ml)生長至固定相且用於接種10L發酵(Simmons等人，2002,J.Immunol.Methods, 263：133-147)。生長10L分批補料培養物且經由微流體收集全發酵液。然後在4℃下用0.4% PEI(v/v)之最終濃度處理經溶解之細胞隔夜。隨後將各混合物在15,000 x g下離心20分鐘，接著經由0.22μm過濾器過濾。隨後在400mL MabSURE SELECT柱(GE Healthcare Life Sciences)上在4℃下捕獲IL-33抗體。用25mM TRIS pH 7.5、150mM NaCl、2mM NaN3(TBS)將柱洗滌至基線，隨後用含有0.1% Triton X-114隔夜、0.4M KPO4、5mM EDTA、0.2%聚山梨酸酯20、1mM疊氮化鈉(pH 7.0)之TBS洗滌，且最終用TBS洗滌至基線。隨後用0.1M乙酸(pH 2.7)溶離IL-33臂且使用1M精胺酸/琥珀酸(pH 9.0)將經溶離池滴定至pH 5.0。
藉由液相層析電噴霧電離與飛行時間(LC-ESI/TOF)分析來證實IL-33及IL-13半抗體之一致性。藉由4%-20%梯度Tris-甘胺酸SDS PAGE凝膠分析純度且藉由SEC測定聚集物水準。
在與兩個半抗體組裝反應之後，藉由疏水性相互作用、離子交換及凝膠過濾層析來純化雙特異性抗體。具體地，對於該組裝，在室溫下使半抗體在精胺酸琥珀酸中在pH 8.5下以1：1莫耳比與200莫耳過量之GSH組合4天且接著在4℃下添加5mM DHAA持續16小時。使用含有25%異丙醇之硫酸銨梯度(pH 6.5)將此材料在疏水層析管柱(Thermo ProPac HIC-10)上分餾。隨後將含有IL-13/IL-33雙特異性抗體之池透析到20mM組胺(pH 5.5)(H緩衝液)中且負載到離子交換管柱(SPFF,GE Healthcare Life Sciences)上，用含有0.1% Triton X114、0.1% Triton X100之H緩衝液洗滌隔夜，用H緩衝液洗滌至基線且隨後用300mM精胺酸琥珀酸(pH 5.5)溶離。將雙特異性抗體部分彙集且負載到尺寸排除層析管柱(S200,GE Healthcare Life Sciences)上。含有經純化抗IL-13/IL-33雙特異性之部分彙集、透析且置於小瓶中。
使用利用報導細胞株之基於細胞之阻斷測定及在原代人細胞中檢查單特異性抗IL-33抗體(10C12.38.H6.87Y.58I IgG4)及雙特異性抗IL-33/抗IL-13雙特異性抗體10C12.38.H6.87Y.58I/IL-13 IgG4(在本文亦稱為「10C12-IL-13 KIH IgG4」)作為人類IL-33細胞活性之抑制劑的效能。將單特異性抗IL-33 IgG4及雙特異性抗IL-33/抗IL-13 IgG4形式針對誘餌受 體ST2-LZ之細胞效能進行測試。
用IL-33刺激HEK-BLUETM IL-33細胞導致穩健NF-kB及AP-1活化，其藉由NF-κB/AP-1驅動之SEAP報導基因活性進行量測。活性未由添加對照IgG4抗體擾亂。單特異性抗IL-33抗體10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及雙特異性抗體10C12-IL-13 KIH IgG4展現IL33活性之有效劑量依賴性抑制，其中IC90值分別為102.1及204.7pM(圖19A)。如所預期，雙特異性抗體活性之IC90值為針對單特異性對應物所獲得之值的大約一半。兩個純系皆展現相對於誘餌受體ST2-LZ(參見實例2)之較大抑制。
除使用HEK-BLUETM細胞之基於細胞之阻斷測定外，將單特異性抗IL-33抗體10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及雙特異性抗體10C12-IL-13 KIH IgG4針對抑制原代細胞中之IL-33活性進行測試。將IL-33添加至人類嗜鹼性球導致信號傳導分子p38之快速磷酸化，其可使用細胞內染色方法藉由流式細胞術進行量測(圖19B)。藉由添加CD123標記物，可檢查混合外周血單核細胞(PBMC)群體內之嗜鹼性球活性，從而避免對細胞分離之需要(圖19B)。使用此基於流式細胞術之方法，將單株及雙特異性抗體純系針對阻斷嗜鹼性球中磷酸化p38(磷酸化p38)之IL-33誘導進行檢查(圖19C)。與以上所述之報導細胞資料抑制，添加單特異性抗IL-33抗體10C12.38.H6.87Y.58I IgG4或雙特異性抗體10C12-IL-13 KIH IgG4引起嗜鹼性球中IL-33誘導之磷酸化p38水準之劑量依賴性抑制(圖19D)。對照IgG4抗體未影響IL-33信號(圖19D)。
使用BIACORE® 3000 SPR分析雙特異性抗體10C12-IL-13 KIH IgG4與人類IL-33、食蟹獼猴IL-33及人類IL-13之結合動力學(圖20)。使用不同抗體製劑此抗體在三個實驗內之平均KD在表4中示出。
材料及方法
HEK-BLUETM IL-33/IL-1β報導細胞購自Invivogen(目錄號hkb-il33)。將300pg/ml IL-33配體(IL-33 N-His，SEQ ID NO：314)及預稀釋 之抗IL-33抗體：對照IgG4抗IL33 10C12.38.H6.87Y.581 IgG4、10C12-IL13 KIH IgG4或ST2 LZ(SEQ ID NO：319)混合且在室溫下培育1小時。將該抗體與配體混合物轉移至HEK-BLUETM IL-33/IL-1β細胞，以50,000個細胞/孔接種。在CO2培育箱中在37℃下培育20小時之後，藉由在與鹼性磷酸酶受質(QUANTI-BLUETM,InvivoGen)培育之後記錄在630nm下之光密度(OD)值來量測細胞培養物上清液中之SEAP活性。
將人類PBMC用10ng/ml重組人類IL33刺激30分鐘。在刺激之前，將細胞用增加濃度之對照IgG4抗IL33 10C12.38.H6.87Y.581 IgG4或10C12-IL-13 KIH IgG4處理1小時。將細胞固定以用於FACS分析。使用異硫氰酸螢光素-抗CD123(11-1239-42；eBioscience)鑑別嗜鹼性球。藉由用別藻藍蛋白-抗磷酸化p38 MAPK(Thr180/Tyr182)(6908S；Cell Signaling)細胞內染色根據製造商之方案對IL-33活性進行分析。將資料顯示為門控CD123+嗜鹼性球群體內之磷酸化p38信號之平均螢光強度(MFI)。
使用BIACORE® 3000 SPR(GE Healthcare)上之SPR分析雙特異性抗體10C12-IL13 KIH IgG4與人類IL-33、食蟹獼猴IL-33及人類IL-13之結合動力學。根據製造商之方案經由基於胺之偶合將抗人類Fab(GE Healthcare)固定於CM5感測器晶片上。俘獲雙特異性抗體且量測與人類IL-33(Genentech)、食蟹獼猴IL-33(Genentech)及人類IL-13(Peprotech)之結合。範圍為1.56至25nM之細胞因子的兩倍濃度系列用於實驗。在25℃溫度下使用2分鐘注入時間與30μl/分鐘流速、且用10mM HEPES(pH 7.4)、150mM NaCl、3mM EDTA及0.005% TWEEN®-20之操作緩衝液來記錄細胞因子結合之感測圖。在注入之後，在操作緩衝液中持續600秒監測配體與抗體之解離。在結合循環之間用10mM甘胺酸-HCl(pH 2.1)之40μl注入來再生表面。在減去僅包含操作緩衝液之空白之後，使用1：1 Langmuir結合模型與由製造商供應之軟體對針對細胞因子與雙特異性抗體之結合所觀察到之感測圖進行分析以計算動力學及結合常數，包括解離常數(KD)。
實例9. 抗IL-33抗體10C12.38.H6.87Y.58I IgG4與其他抗IL-33抗體之抑制活性及結合動力學之比較
A. 引言
將抗IL-33抗體10C12.38.H6.87Y.58I IgG4之阻斷活性及結合動力學直接與國際專利申請公開案第WO 2014/164959號中所描述之IL-33抗體(在本文稱為RG1-RG20)之阻斷活性及結合動力學進行比較。來自WO 2014/164959之與10C12.38.H6.87Y.58I IgG4相比較之抗IL-33抗體顯示於表5中，其指示來自WO 2014/164959之抗體名稱、本文使用之縮寫名稱、針對各抗體之VH及VL之恆定區(IgG1或IgG4)及胺基酸及核苷酸序列SEQ ID NO。
B. 使用報導細胞株之基於細胞的IL-33阻斷分析
使用利用HEK-BLUETM報導細胞株之基於細胞的IL-33阻斷分析檢查抗IL-33抗體10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及在表5中列出的各抗IL-33抗體(RG1-RG20)作為人類IL-33細胞活性之抑制劑的效能(圖21A)。 IL-33活性之天然抑制劑sST2(sST2-LZ)充當陽性對照。用人類IL-33刺激HEK-BLUETM IL-33/IL-1β細胞導致穩健NF-κB及AP-1活化，其藉由NF-κB/AP-1驅動之SEAP報導基因活性進行量測(圖21B)。IL-33活性未由添加對照IgG4抗體擾亂(圖21A)。所測試之大多數抗IL-33抗體展現人類IL-33活性之劑量依賴性抑制(圖21A)，其中IC50值在圖21C中列出。僅兩種抗體展現相對於誘餌受體sST2-LZ(IC50=27pM)之較大抑制。10C12.38.H6.87Y.58I IgG4展現最高阻斷活性(IC50=2.4pM)，隨後為RG18抗體(IC50=11pM)。具有最高阻斷活性之五種RG抗體(RG3、RG4、RG7、RG8及RG18)展現於圖21D中，連同sST2-LZ及10C12.38.H6.87Y.58I IgG4。
類似地，使用利用HEK-BLUETM報導細胞株之基於細胞的阻斷分析檢查各抗體作為食蟹獼猴IL-33細胞活性之抑制劑的效能(圖22A)。用食蟹獼猴IL-33刺激HEK-BLUETM IL-33/IL-1β細胞導致穩健NF-κB及AP-1活化，其藉由NF-κB/AP-1驅動之SEAP報導基因活性進行量測(圖22B)。一般而言所測試之抗IL-33抗體展現相較於針對人類IL-33之阻斷活性對食蟹獼猴IL-33活性之較弱劑量依賴性抑制，其中IC50值在圖21C中列出。誘餌受體sST2-LZ展現最高阻斷活性(IC50=30pM)，且隨後為10C12.38.H6.87Y.58I IgG4(IC50=4.2nM)，且隨後為RG20抗體(IC50=6.1nM)。具有最高阻斷活性之五種RG抗體(RG3、RG9、RG10、RG12及RG20)展現於圖22C中，連同sST2-LZ及10C12.38.H6.87Y.58I IgG4。值得注意，展現針對人類IL-33之最高阻斷活性之RG18抗體展現相對於10C12.38.H6.87Y.58I IgG4針對食蟹獼猴IL-33之弱14倍阻斷活性。圖22D顯示在此分析中非阻斷之RG抗體的劑量反應曲線。
材料及方法
使用根據製造商之說明書進行的比色分析來量測HEK-BLUETM IL-33/IL-1β報導細胞(InvivoGen,hkb-il33)中之IL-33路徑活性。將HEK-BLUETM IL-33/IL-1β報導細胞在補充有2mM L-麩胺醯胺、10% FBS、50U/ml青黴素、50μg/mL鏈黴素、100μg/mL NORMOCINTM(InvivoGen,ant-nr-1)之DMEM 4.5g/l葡萄糖中以50,000細胞 /孔接種於96孔盤中。將細胞與範圍為139nM至0.003pM之人類IL-33(hIL-33；R&D Systems,#3625-IL-010/CF)或內部產生之食蟹獼猴N末端6-His標記及C末端Avi標記之IL-33(S112-T270)之5倍連續稀釋液一起培育(參見實例2)。對於阻斷實驗，將細胞與10pM之人類IL-33或5pM食蟹獼猴IL-33與範圍為90nM至0.51pM之抗體或sST2-LZ(sST2(M1-F328)C末端白胺酸拉鍊(LZ)-Flag-His)之3倍連續稀釋液的組合一起培育。在添加至細胞之前將抗體或sST2-LZ與IL-33一起在37℃下預培育30分鐘。各反應具有200μL/孔之最終體積且一式三份測試各條件。將細胞在37℃下在具有5% CO2之加濕培育箱中培育且在20小時之後收集上清液。使用QUANTI-BLUETM分析(InvivoGen,rep-qb1)偵測SEAP報導基因活性。將20μl上清液添加至於扁平96孔盤中之80μl經溶解及過濾之QUANTI-BLUETM試劑且在37℃下培育1小時。使用分光光度計在620nm下測定SEAP水準。
C. 針對IL-33活性之天然殺手(NK)原代細胞分析
除上述報導細胞分析之外，亦針對抑制原代人類天然殺手(NK)細胞中之IL-33活性對抗IL-33抗體10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及表5中所列出之各抗IL-33抗體(RG1-RG20)進行測試(圖23A-23D)。IL-33及IL-12本身不能活化NK細胞，但它們一起能夠增效來誘導來自NK細胞之IFN-γ(參見例如，Smithgall等人Int.Immunol.20(8)：1019-1030,2008)。將抗IL-33抗體10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及抗IL-33抗體RG1-RG20之抑制活性與天然抑制劑sST2(sST2-LZ)相比較。在IL-12存在下用增加濃度之人類IL-33刺激新鮮純化之NK細胞(圖23A)在24小時之後產生穩健IFN-γ分泌，如藉由ELISA所量測(圖23B)。所測試之大多數抗IL-33抗體展現人類IL-33活性之劑量依賴性抑制(圖23C)，其中IC50值在圖23D中列出。類似於以上在章節B中所述之報導細胞株結果，僅兩種抗體展現相對於誘餌受體sST2-LZ(IC50=150pM)之較大抑制。10C12.38.H6.87Y.58I IgG4展現最高阻斷活性(IC50=30pM)，隨後為RG18抗體(IC50=97pM)。具有最高阻斷活性之五種RG抗體(RG7、RG8、RG9、RG18及RG19)展現於圖23E中，連同sST2-LZ及10C12.38.H6.87Y.58I IgG4。圖23F-23I比較五種RG抗體、 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及sST2-LZ之組之間的IC50曲線。
材料及方法
藉由密度梯度離心自新鮮全血分離PBMC。將全血兩倍稀釋於PBS中，覆蓋於LEUCOSEPTM管(Greiner Bio One,#227290)中之FICOLL®-Paque(GE Healthcare,#17-1440-03)上且在室溫下在2,000RPM下離心20分鐘。將含有PBMC之中間相層抽吸且轉移至一個新的管，且用PBS洗滌兩次。使用NK細胞分離套組(Miltenyi Biotec,130-092-657)根據製造商之說明書分離NK細胞。藉由流式細胞術與CD56-APC(BD Pharmingen,555518)及CD3-FITC(BD Pharmingen,561807)染色來分析細胞之純度。
將經分離NK細胞(>90%純度)在補充有10% FBS、2mM L-麩胺醯胺、100U/ml青黴素及100μg/mL鏈黴素之RPMI 1640中以5x105個細胞/ml之最終濃度接種於平底96孔盤中。將細胞與1ng/ml之人類IL-12(hIL-12；R&D Systems,#219-IL-025/CF)及139nM至0.003pM單獨人類IL-33(huIL-33；R&D Systems,#3625-IL-010/CF)之5倍連續稀釋液或與260pM之huIL-33與100nM至0.56pM抗體或sST2-LZ之3倍連續稀釋液的組合一起培育。在添加至細胞之前將抗體或sST2-LZ與IL-33一起在37℃下預培育30分鐘。各反應在200μl/孔之最終體積且一式三份測試各條件。將細胞在具有5% CO2之加濕培育箱中在37℃下培育隔夜。在24小時之後收集上清液。藉由ELISA(R&D Systems,#DY285)根據製造商之說明書來量測培養物上清液中之人類IFN-γ的水準。對於各盤，如下計算IL-33活性%：
IL-33活性%=100 x(OD450樣品-OD450無IL-33)/(OD450無抗體-OD450無IL-33)。
D. IL-33誘導之人類嗜鹼性球中之p38 MAPK(Thr180/Tyr182)磷酸化
亦針對抑制原代人類嗜鹼性球中之IL-33活性對抗IL-33抗體10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及表5中所列出之各抗IL-33抗體(RG1-RG20)進行測試。將IL-33添加至人類嗜鹼性球導致信號傳導分子p38 MAPK(Thr180/Tyr182)之快速磷酸化，其可使用細胞內染色方法藉由流式細胞術進行量測。藉由添加CD123標記物，可檢查混合PBMC群體內之嗜鹼性球活性，從而避免對細胞分離之需要。
使用此基於流式細胞術之方法，將抗IL-33抗體針對阻斷嗜鹼性球中磷酸化p38之IL-33介導之誘導進行檢查(圖24A)。將IL-33添加至PBMC導致嗜鹼性球群體中之p38 MAPK(Thr180/Tyr182)磷酸化(磷酸化p38)的劑量依賴性增加(圖24B)。與以上所述之報導細胞株及NK細胞資料一致，添加抗IL-33抗體引起嗜鹼性球中之IL-33誘導之磷酸化p38的劑量依賴性抑制(圖24C)，其中IC50值在圖24D中列出。如使用IC50曲線所測定具有最高阻斷活性之抗體為RG11(IC50=0.14pM)、10C12.38.H6.87Y.58I IgG4(IC50=0.15pM)，隨後為RG18抗體(IC50=0.38pM)。具有最高阻斷活性之五種RG抗體(RG3、RG4、RG8、RG11及RG18)展現於圖24E中，連同sST2-LZ及10C12.38.H6.87Y.58I IgG4。圖24F-24I比較五種RG抗體、10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及sST2-LZ之組之間的IC50曲線。
因為IC50曲線係自僅六個點繪製，所以在特異性抗體濃度下分析上述結果(圖24J-24K)。繪製在0.4nM(圖24J)或2nM(圖24K)抗IL-33抗體或sST2-LZ濃度下獲得之平均螢光強度(MFI)。圖24J及24K中之曲線展現自最高至最低阻斷活性分選之抗體。在兩種濃度下，10C12.38.H6.87Y.58I IgG4展現最高阻斷活性，因此最低MFI值。與報導細胞株及NK原代細胞資料一致，就針對人類IL-33之阻斷活性而言，RG18抗體在前三抗體之中。
材料及方法
藉由密度梯度離心自新鮮全血分離PBMC。將全血兩倍稀釋於PBS中，覆蓋於LEUCOSEPTM管(Greiner Bio One,#227290)中之FICOLL®-Paque(GE Healthcare,#17-1440-03)上且在室溫下在2000RPM下離心20分鐘。將含有PBMC之中間相層抽吸且轉移至一個新的管，且用PBS洗滌兩次。將經分離PBMC以1百萬個細胞/孔在50μl PBS中接種於v底96孔盤中。抗IL-33抗體、sST2-LZ或同型對照抗體之5倍連續稀釋液(範圍為10nM至3.2pM)與500pM(最終濃度)之人類IL-33(R&D Systems,#6325-IL/CF)一起在37℃下預培育30分鐘。將50μl之混合物針對100μl/孔之最終體積添加至PBMC。將細胞在具有5% CO2之加濕培育箱中在37℃下培育20分鐘。藉由添加100μl之預熱BD PHOSFLOWTM固定緩衝液 (BD Biosciences,557870)終止反應且在37℃下培育10分鐘。藉由在1500RPM下離心5分鐘來使細胞球粒化且傾析上清液。用200μl流式細胞術緩衝液(1X PBS、0.5% BSA、0.05%疊氮化鈉)洗滌細胞球粒。藉由緩慢添加100μl冷BD PHOSFLOWTM Perm Buffer II(BD Biosciences,558052)來使細胞透化且在冰上培育30分鐘。將細胞球粒在流式細胞術緩衝液中洗滌兩次。藉由用抗磷酸化p38 MAPK(Thr180/Tyr182)-PE(以1：50使用，Cell Signaling Technology,6908S)及抗CD123-FITC(以1：10使用，eBiosciences,11-1239-42)染色各樣品來分析嗜鹼性球中p38之IL-33依賴性磷酸化。將樣品在室溫下在黑暗中培育1小時。將細胞球粒化且用流式細胞術緩衝液洗滌兩次。在BD FACSCALIBURTM上對細胞進行分析以測定CD123+嗜鹼性球中之磷酸化p38 MAPK(Thr180/Tyr182)的平均螢光強度(MFI)水準。
E. 如藉由表面電漿子共振所測定之抗IL-33抗體與IL-33之結合
在BIACORE® T200儀器(GE Healthcare)上使用表面電漿子共振(SPR)來量測抗IL-33抗體10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及表5中所列出之各抗IL-33抗體(RG1-RG20)與IL-33之結合動力學。根據製造商之方案經由基於胺之偶合將抗人類Fc或抗小鼠Fc(GE Healthcare，分別#BR-1008-39或BR-1008-38)固定於CM5感測器晶片上。表面用於俘獲單株人類IgG4及單株鼠類IgG以用於動力學研究。量測與人類IL-33(R&D systems,#3625-IL-010/CF)及食蟹獼猴IL-33 N-His(SEQ ID NO：317)(Genentech,Inc.)之抗體結合。範圍為3.7至100nM之細胞因子的三倍濃度系列用於實驗。使用4分鐘注入時間與30μl/分鐘流速，用0.01M N-(2-乙醯胺基)亞胺基二乙酸(ADA)pH 7.4)、0.15M NaCl、3mM EDTA及0.05% TWEEN®-20之操作緩衝液來記錄IL-33結合之感測圖。在注入之後，在操作緩衝液中持續10分鐘監測配體與抗體之解離。在循環之間用3M氯化鎂或甘胺酸-HCl(pH 1.7)之注入來再生表面。所有結合實驗在25℃及37℃之溫度下進行。在減去僅包含操作緩衝液之空白之後，使用1：1 Langmuir結合模型與由製造商供應之軟體對針對IL-33與抗IL-33抗體之結合所觀察到之感測圖進行分析以計算動力學及結合常數，包括解離常數(KD)。自動力學速率常數計算解離半衰期(t1/2)。KD(M)=koff/kon且t1/2(分鐘)=ln(2)/(60*koff)。表6顯示在25 ℃下與人類IL-33結合之結合動力學的結果。表7顯示在37℃下與人類IL-33結合之結合動力學的結果。表8顯示在25℃下與食蟹獼猴IL-33結合之結合動力學的結果。表9顯示在37℃下與食蟹獼猴IL-33結合之結合動力學的結果。在表6-9中，*IC指示由於觀察到抗體之弱俘獲，結果係為非決定性的，從而導致不良結合資料。
在每種條件下，相較於抗IL-33抗體RG1-RG20，抗IL-33抗體10C12.38.H6.87Y.58I IgG4對人類或食蟹獼猴IL-33具有最高親和力，如藉由KD所量測(表6-9)。相較於對人類IL-33具有最高親和力之RG抗體(其為RG18)，10C12.38.H6.87Y.58I IgG4具有大約2-4倍改良之親和力(表6及7)。相較於對食蟹獼猴IL-33具有最高親和力之RG抗體(其為在25℃下之RG2及在37℃下之RG10)，10C12.38.H6.87Y.58I IgG4亦具有大約2-4倍改良之親和力。
F. 用於量測抗IL-33抗體之阻斷活性的競爭性結合ELISA
材料
重組人類ST2-Fc嵌合體蛋白及人類IL-33蛋白係獲自R&D Systems(Minneapolis,MN)。在Genentech製備重組食蟹獼猴IL-33蛋白。使用EZ-LINK® NHS-PEG4-生物素(Thermo Scientific；Rockford,IL)根據製造商之方案將人類及食蟹獼猴IL-33蛋白進行生物素標記。
實驗方法
在競爭性結合ELISA中對抗IL-33抗體 10C12.38.H6.87Y.58I IgG4及表5中所列出之各抗IL-33抗體(RG1-RG20)阻斷人類IL-33或食蟹獼猴IL-33與人類ST2受體之結合的能力進行測試。簡言之，將1μg/ml在塗佈緩衝液(50mM碳酸鈉，pH 9.6)中製備之重組人類ST2-Fc嵌合體蛋白塗佈在384孔MAXISORP®盤(Nalgene Nunc International；Rochester,NY)上且在4℃下培育。在第二天，用含有0.5%(w/v)牛血清白蛋白(BSA)溶液之PBS阻斷非特異性結合。將在分析緩衝液(25mM PBS(pH 7.2)、0.1% BSA、0.05% TWEEN®-20)中製備之固定濃度的生物素化人類或食蟹獼猴IL-33與相等體積之連續稀釋的抗IL-33抗體或單獨分析緩衝液混合且在室溫下培育1小時。生物素化人類IL-33或食蟹獼猴IL-33之最終分析濃度分別為20pM及45pM，且各抗體之最終分析濃度範圍為0-300nM。將預固定溶液添加至經ST2-Fc塗佈之盤且在室溫下培育1小時。藉由順序添加抗生蛋白鏈菌素Poly-HRP80(Fitzgerald；Buckinghamshire,UK)及3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB)微孔過氧化酶受質系統(KPL；Gaithersburg,MD)來偵測生物素化IL-33與經塗佈ST2-Fc之結合。使用MULTISKAN ASCENT®盤讀取器(Thermo Scientific；Rockford,IL)記錄吸光度(450nm)。將在抗IL-33存在下生物素-IL-33與ST2之結合活性(%)繪製為抗體濃度之函數。使用Prism軟體(Graphpad Software；La Jolla,CA)將所產生之資料擬合至四參數方程以測定各抗體之IC50值(圖25A及25B)。將各抗體之最大阻斷(%)計算為在抗體存在下所量測之信號相對於單獨使用IL-33之信號與背景量測值之間之差異的減少比率。各抗體之IC50及最大阻斷活性總結於表10中。結果顯示三個獨立實驗之平均資料。
如表10中所顯示，10C12.38.H6.87Y.58I IgG4為所測試抗體中任一者之最有效阻斷劑，其中相較於來自WO 2014/164959之所有抗體具有較低IC50值且較高最大阻斷。
NA=不適用
NB=非阻斷劑
其他實施例
儘管上述本發明已出於清楚理解之目的藉由說明及實例方式相當詳細地加以描述，但描述及實例不應解釋為限制本發明之範疇。本文引用之所有專利及科學文獻之揭示內容皆以全文引用的方式明確併入本文中。
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<213> 人工序列
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成構築體
<220>
<221> MOD_RES
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
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<212> PRT
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<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<220>
<221> MOD_RES
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<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Xaa為Asn、Asp、Ser或Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Xaa為Ser或Ala
<400> 98
<210> 99
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Xaa為Asp或Asn
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa為Trp或Phe
<400> 99
<210> 100
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (11)..(11)
<223> Xaa為Met、Val或Leu
<400> 100
<210> 101
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 101
<210> 102
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 102
<210> 103
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 103
<210> 104
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 104
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<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<210> 108
<211> 19
<212> PRT
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<220>
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<210> 109
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成構築體
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<211> 10
<212> PRT
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<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
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<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
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<212> PRT
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成構築體
<400> 122
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成構築體
<400> 124
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 126
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<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成構築體
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<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<210> 135
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 138
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 139
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 142
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 143
<210> 144
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 144
<210> 145
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 150
<210> 151
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<210> 155
<211> 111
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<220>
<223> 合成構築體
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<220>
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<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 159
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 160
<210> 161
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Xaa為Asn或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa為Ser或Ala
<400> 161
<210> 162
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 162
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<211> 19
<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成構築體
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<211> 7
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<220>
<223> 合成構築體
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<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 167
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 170
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<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 171
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<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 172
<210> 173
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 173
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 174
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<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 175
<210> 176
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 176
<210> 177
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 177
<210> 178
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 178
<210> 179
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 179
<210> 180
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 180
<210> 181
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 181
<210> 182
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 182
<210> 183
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 183
<210> 184
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 184
<210> 185
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 185
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 186
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 187
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<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 188
<210> 189
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 189
<210> 190
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 190
<210> 191
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 191
<210> 192
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa為Asn或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Xaa為Gly或Ala
<400> 192
<210> 193
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 193
<210> 194
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 194
<210> 195
<211> 17
<212> PRT
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<223> 合成構築體
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<220>
<223> 合成構築體
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<220>
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成構築體
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<210> 243
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 243
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<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 244
<210> 245
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 245
<210> 246
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 246
<210> 247
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 247
<210> 248
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Xaa為Met或Ile
<400> 248
<210> 249
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Xaa為Arg或Lys
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Xaa為Asn、Thr或Gly
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Xaa為Asn或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Xaa為Ala或Glu
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Xaa為Ala或Asp
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<210> 250
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<220>
<221> MOD_RES
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<223> Xaa為Leu或Gln
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> Xaa為ln、Gly或Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (3)..(3)
<223> Xaa為Gln或Gly
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Xaa為Pro或Asp
<400> 250
<210> 251
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 251
<210> 252
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 252
<210> 253
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Xaa為Asp或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Xaa為Ser或Ile
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Xaa為Leu或Pro
<400> 253
<210> 254
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 254
<210> 255
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 255
<210> 256
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 256
<210> 257
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 257
<210> 258
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 258
<210> 259
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 259
<210> 260
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 260
<210> 261
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<210> 262
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 262
<210> 263
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 263
<210> 264
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 264
<210> 265
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 265
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<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 266
<210> 267
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 267
<210> 268
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<210> 270
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 270
<210> 271
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<210> 272
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 272
<210> 273
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 274
<210> 275
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 275
<210> 276
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<211> 32
<212> PRT
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<220>
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<220>
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<212> PRT
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<220>
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<400> 282
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 283
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<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 285
<210> 286
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 286
<210> 287
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 287
<210> 288
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 288
<210> 289
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 289
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 290
<210> 291
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 291
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 292
<210> 293
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 293
<210> 294
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 294
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<211> 215
<212> PRT
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<220>
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<211> 5
<212> PRT
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<220>
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<212> PRT
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<220>
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<400> 297
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<212> PRT
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<220>
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<400> 298
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<220>
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<220>
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<400> 302
<210> 303
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<220>
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<400> 303
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<220>
<223> 合成構築體
<400> 304
<210> 305
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 305
<210> 306
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 306
<210> 307
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 307
<210> 308
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 308
<210> 309
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 309
<210> 310
<211> 362
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 310
<210> 311
<211> 4852
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 311
<210> 312
<211> 556
<212> PRT
<213>
<400> 312
<210> 313
<211> 159
<212> PRT
<213> 智人
<400> 313
<210> 314
<211> 180
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 314
<210> 315
<211> 194
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 315
<210> 316
<211> 159
<212> PRT
<213> 食蟹獼猴
<400> 316
<210> 317
<211> 180
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 317
<210> 318
<211> 194
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 318
<210> 319
<211> 379
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 319
<210> 320
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 320
<210> 321
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 321
<210> 322
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 322
<210> 323
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 323
<210> 324
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<220>
<221> 雜項特征
<222> (66)..(66)
<223> n為a、c、g或t
<400> 324
<210> 325
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 325
<210> 326
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 326
<210> 327
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 327
<210> 328
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 328
<210> 329
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 329
<210> 330
<211> 444
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 330
<210> 331
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 331
<210> 332
<211> 1050
<212> DNA
<213> 小家鼠
<400> 332
<210> 333
<211> 349
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 333
<210> 334
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 334
<210> 335
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 335
<210> 336
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 336
<210> 337
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 337
<210> 338
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 338
<210> 339
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 339
<210> 340
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 340
<210> 341
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 341
<210> 342
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 342
<210> 343
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 343
<210> 344
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 344
<210> 345
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 345
<210> 346
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 346
<210> 347
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 347
<210> 348
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 348
<210> 349
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 349
<210> 350
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 350
<210> 351
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 351
<210> 352
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 352
<210> 353
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 353
<210> 354
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 354
<210> 355
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 355
<210> 356
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 356
<210> 357
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 357
<210> 358
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 358
<210> 359
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 359
<210> 360
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 360
<210> 361
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 361
<210> 362
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 362
<210> 363
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 363
<210> 364
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 364
<210> 365
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 365
<210> 366
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 366
<210> 367
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 367
<210> 368
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 368
<210> 369
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 369
<210> 370
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 370
<210> 371
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成構築體
<400> 371

Claims (348)

  1. 一種經分離抗體，該抗體以約500pM或更低之KD特異性結合人類及食蟹獼猴(cyno)介白素-33(IL-33)兩者。
  2. 如申請專利範圍第1項之抗體，其中該抗體以約100fM與約500pM之間之KD特異性結合人類IL-33。
  3. 如申請專利範圍第1或2項之抗體，其中該抗體以約1pM與約200pM之間之KD特異性結合人類IL-33。
  4. 如申請專利範圍第1-3項中任一項之抗體，其中該抗體以約15pM與約180pM之間之KD特異性結合人類IL-33。
  5. 如申請專利範圍第1-4項中任一項之抗體，其中該抗體以約15pM與約140pM之間之KD特異性結合人類IL-33。
  6. 如申請專利範圍第1-5項中任一項之抗體，其中該抗體以約100fM與約500pM之間之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。
  7. 如申請專利範圍第1-6項中任一項之抗體，其中該抗體以約1pM與約500pM之間之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。
  8. 如申請專利範圍第1-7項中任一項之抗體，其中該抗體以約100pM與約500pM之間之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。
  9. 如申請專利範圍第1-8項中任一項之抗體，其中該抗體以約125pM與約500pM之間之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。
  10. 如申請專利範圍第1、2、6及7項中任一項之抗體，其中該抗體以約1pM與約500pM之間之KD特異性結合人類及食蟹獼猴IL-33兩者。
  11. 如申請專利範圍第10項之抗體，其中該抗體以約1pM與約200pM之間之KD特異性結合人類IL-33。
  12. 如申請專利範圍第1-11項中任一項之抗體，其中該抗體能夠抑制IL-33與IL-33受體之結合。
  13. 如申請專利範圍第12項之抗體，其中使用基於細胞之阻斷分析來量測該抑制。
  14. 如申請專利範圍第1-13項中任一項之抗體，其中該抗體以約0.001μg/ml與約0.5μg/ml之間之90%抑制性濃度(IC90)抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。
  15. 如申請專利範圍第14項之抗體，其中該IC90為介於約0.002μg/ml與約0.25μg/ml之間。
  16. 如申請專利範圍第15項之抗體，其中該IC90為約0.17μg/ml。
  17. 如申請專利範圍第15項之抗體，其中該IC90為約0.004μg/ml。
  18. 如申請專利範圍第1-13項中任一項之抗體，其中該抗體以約800fM與約10pM之間之50%抑制性濃度(IC50)抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。
  19. 如申請專利範圍第18項之抗體，其中該IC50為介於約1pM與約5pM之間。
  20. 如申請專利範圍第19項之抗體，其中該IC50為約2.5pM。
  21. 如申請專利範圍第1-20項中任一項之抗體，其中該抗體以約1nM與約5nM之間之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合。
  22. 如申請專利範圍第21項之抗體，其中該IC50為約4nM。
  23. 如申請專利範圍第1-22項中任一項之抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含：(a)HVR-H1，其包含SFSMS(SEQ ID NO：1)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含TISGGKTFTDYVDSVKG(SEQ ID NO：2)之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含ANYGNWFFEV(SEQ ID NO：3)之胺基酸序列。
  24. 如申請專利範圍第23項之抗體，其中該結合域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：12)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQAPGKGLEWVA(SEQ ID NO：13)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：14)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：15)之胺基酸序列。
  25. 如申請專利範圍第23項之抗體，其中該結合域進一步包含：(a)FR-H1，其包含DVNLVESGGGSVKPGGSLKLSCVASGFTFS(SEQ ID NO：16)之胺基酸序列； (b)FR-H2，其包含WVRQTPEKRLEWVA(SEQ ID NO：17)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDDAKNTLYLQMSSLESEDTAMYYCTR(SEQ ID NO：18)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGAGTTVAVSS(SEQ ID NO：19)之胺基酸序列。
  26. 如申請專利範圍第23項之抗體，其中該結合域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：12)或EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：20)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQAPGKGLEWVA(SEQ ID NO：13)或WVRQAPGKGLEWVS(SEQ ID NO：21)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：22)、RFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：23)、RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：24)或RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：14)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：15)之胺基酸序列。
  27. 如申請專利範圍第23-26項中任一項之抗體，其中該結合域進一步包含：(a)HVR-L1，其包含RASESVAKYGLSLLN(SEQ ID NO：4)之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含AASNRGS(SEQ ID NO：5)之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含QQSKEVPFT(SEQ ID NO：6)之胺基酸序列。
  28. 如申請專利範圍第27項之抗體，其中該結合域進一步包含：(a)FR-L1，其包含EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：25)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WFQQKPGQPPRLLIF(SEQ ID NO：26)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：27)之胺基酸序列；及 (d)FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：28)之胺基酸序列。
  29. 如申請專利範圍第27項之抗體，其中該結合域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIVLTQSPGFLVVSLGQRATISC(SEQ ID NO：29)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WFQQKPGQPPKLLIF(SEQ ID NO：30)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFC(SEQ ID NO：31)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGSGTKLEIK(SEQ ID NO：32)之胺基酸序列。
  30. 如申請專利範圍第27項之抗體，其中該結合域進一步包含：(a)FR-L1，其包含EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：25)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WFQQKPGQPPRLLIF(SEQ ID NO：26)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：27)、GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC(SEQ ID NO：33)、GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：34)或GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC(SEQ ID NO：35)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：28)之胺基酸序列。
  31. 如申請專利範圍第1-22項中任一項之抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含：(a)HVR-H1，其包含SSIFYWG(SEQ ID NO：65)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SIYYSGRTYYNPSLKS(SEQ ID NO：66)或SIYYSGRTYYNPALKS(SEQ ID NO：67)之胺基酸序列；及(c)HVR-H3，其包含AGGLYNWNDESFSFYMDV(SEQ ID NO：68)之胺基酸序列。
  32. 如申請專利範圍第31項之抗體，其中該結合域進一步包含：(a)FR-H1，其包含ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR(SEQ ID NO：72)之胺基酸序列； (b)FR-H2，其包含WIRQPPGKGLEWIG(SEQ ID NO：73)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR(SEQ ID NO：74)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTTVTVSS(SEQ ID NO：75)之胺基酸序列。
  33. 如申請專利範圍第31項之抗體，其中該結合域進一步包含：(a)FR-H1，其包含QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR(SEQ ID NO：76)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WIRQPPGKGLEWIG(SEQ ID NO：73)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR(SEQ ID NO：74)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGNGTTVTVSS(SEQ ID NO：78)之胺基酸序列。
  34. 如申請專利範圍第31項之抗體，其中該結合域進一步包含：(a)FR-H1，其包含ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR(SEQ ID NO：72)、QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR(SEQ ID NO：76)或QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR(SEQ ID NO：77)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WIRQPPGKGLEWIG(SEQ ID NO：73)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR(SEQ ID NO：74)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTTVTVSS(SEQ ID NO：75)或WGNGTTVTVSS(SEQ ID NO：78)之胺基酸序列。
  35. 如申請專利範圍第31-34項中任一項之抗體，其中該結合域進一步包含：(a)HVR-L1，其包含RASQSFSSSYLA(SEQ ID NO：69)之胺基酸序列；(b)HVR-L2，其包含GASSRAT(SEQ ID NO：70)之胺基酸序列；及(c)HVR-L3，其包含QQYDRSPLT(SEQ ID NO：71)之胺基酸序列。
  36. 如申請專利範圍第35項之抗體，其中該結合域進一步包含：(a)FR-L1，其包含EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：79)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGQAPRLLIY(SEQ ID NO：80)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：81)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGGGTKVEIK(SEQ ID NO：82)之胺基酸序列。
  37. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含SFSX1S(SEQ ID NO：62)之胺基酸序列，其中X1為Met、Leu或Val；(b)HVR-H2，其包含TISGGKTFTDYVDX1VKG(SEQ ID NO：63)之胺基酸序列，其中X1為Ser或Ala；(c)HVR-H3，其包含ANYGX1X2FFEV(SEQ ID NO：64)之胺基酸序列，其中X1為Asn或Asp，且X2為Trp或Phe；(d)HVR-L1，其包含RASESVAKYGLSLLN(SEQ ID NO：4)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNRGS(SEQ ID NO：5)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKEVPFT(SEQ ID NO：6)之胺基酸序列。
  38. 如申請專利範圍第37項之抗體，其中該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含SFSMS(SEQ ID NO：1)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含TISGGKTFTDYVDSVKG(SEQ ID NO：2)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含ANYGNWFFEV(SEQ ID NO：3)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVAKYGLSLLN(SEQ ID NO：4)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNRGS(SEQ ID NO：5)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKEVPFT(SEQ ID NO：6)之胺基酸序列。
  39. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結 合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：36之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：37之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。
  40. 如申請專利範圍第39項之抗體，其中該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：12)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQAPGKGLEWVA(SEQ ID NO：13)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：14)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：15)之胺基酸序列。
  41. 如申請專利範圍第40項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：36之胺基酸序列。
  42. 如申請專利範圍第39-41項中任一項之抗體，其中該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：25)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WFQQKPGQPPRLLIF(SEQ ID NO：26)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：27)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：28)之胺基酸序列。
  43. 如申請專利範圍第42項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：37之胺基酸序列。
  44. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：36之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：37之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  45. 如申請專利範圍第39項之抗體，其中該VH域進一步包含： (a)FR-H1，其包含DVNLVESGGGSVKPGGSLKLSCVASGFTFS(SEQ ID NO：16)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQTPEKRLEWVA(SEQ ID NO：17)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDDAKNTLYLQMSSLESEDTAMYYCTR(SEQ ID NO：18)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGAGTTVAVSS(SEQ ID NO：19)之胺基酸序列。
  46. 如申請專利範圍第45項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：38之胺基酸序列。
  47. 如申請專利範圍第39、45及46項中任一項之抗體，其中該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIVLTQSPGFLVVSLGQRATISC(SEQ ID NO：29)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WFQQKPGQPPKLLIF(SEQ ID NO：30)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPMEEDDTAMYFC(SEQ ID NO：31)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGSGTKLEIK(SEQ ID NO：32)之胺基酸序列。
  48. 如申請專利範圍第47項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：39之胺基酸序列。
  49. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：38之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：39之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  50. 如申請專利範圍第39項之抗體，其中該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：12)或EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：20)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQAPGKGLEWVA(SEQ ID NO：13)或WVRQAPGKGLEWVS(SEQ ID NO：21)之胺基酸序列； (c)FR-H3，其包含RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：22)、RFTISRDDAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：23)、RFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：24)或RFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：14)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：15)之胺基酸序列。
  51. 如申請專利範圍第50項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：40之胺基酸序列。
  52. 如申請專利範圍第39、50及51項中任一項之抗體，其中該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含EIVLTQSPATLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：25)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WFQQKPGQPPRLLIF(SEQ ID NO：26)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：27)、GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC(SEQ ID NO：33)、GVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：34)或GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYFC(SEQ ID NO：35)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：28)之胺基酸序列。
  53. 如申請專利範圍第52項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：41之胺基酸序列。
  54. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：40之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：41之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  55. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含SSIFYWG(SEQ ID NO：65)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SIYYSGRTYYNPX1LKS(SEQ ID NO：90)之胺基 酸序列，其中X1為Ser或Ala；(c)HVR-H3，其包含AGGLYNWNDESFSFYMDV(SEQ ID NO：68)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQSFSSSYLA(SEQ ID NO：69)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含GASSRAT(SEQ ID NO：70)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQYDRSPLT(SEQ ID NO：71)之胺基酸序列。
  56. 如申請專利範圍第55項之抗體，其中該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含SSIFYWG(SEQ ID NO：65)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SIYYSGRTYYNPSLKS(SEQ ID NO：66)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含AGGLYNWNDESFSFYMDV(SEQ ID NO：68)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQSFSSSYLA(SEQ ID NO：69)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含GASSRAT(SEQ ID NO：70)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQYDRSPLT(SEQ ID NO：71)之胺基酸序列。
  57. 如申請專利範圍第55項之抗體，其中該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含SSIFYWG(SEQ ID NO：65)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SIYYSGRTYYNPALKS(SEQ ID NO：67)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含AGGLYNWNDESFSFYMDV(SEQ ID NO：68)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQSFSSSYLA(SEQ ID NO：69)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含GASSRAT(SEQ ID NO：70)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQYDRSPLT(SEQ ID NO：71)之胺基酸序列。
  58. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：84之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含 與SEQ ID NO：85之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。
  59. 如申請專利範圍第58項之抗體，其中該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含ELQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR(SEQ ID NO：72)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WIRQPPGKGLEWIG(SEQ ID NO：73)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR(SEQ ID NO：74)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTTVTVSS(SEQ ID NO：75)之胺基酸序列。
  60. 如申請專利範圍第59項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：84之胺基酸序列。
  61. 如申請專利範圍第58-60項中任一項之抗體，其中該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：79)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGQAPRLLIY(SEQ ID NO：80)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：81)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGGGTKVEIK(SEQ ID NO：82)之胺基酸序列。
  62. 如申請專利範圍第61項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：85之胺基酸序列。
  63. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：84之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：85之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  64. 如申請專利範圍第59項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：86之胺基酸序列。
  65. 如申請專利範圍第58、59及64項中任一項之抗體，其中該VL域進 一步包含：(a)FR-L1，其包含EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：79)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGQAPRLLIY(SEQ ID NO：80)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：81)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGGGTKVEIK(SEQ ID NO：82)之胺基酸序列。
  66. 如申請專利範圍第65項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：87之胺基酸序列。
  67. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：86之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：87之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  68. 如申請專利範圍第58項之抗體，其中該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSIR(SEQ ID NO：76)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WIRQPPGKGLEWIG(SEQ ID NO：73)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RVTISVDTSKNQFSLMLTSVTAADTAVYYCAR(SEQ ID NO：74)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGNGTTVTVSS(SEQ ID NO：78)之胺基酸序列。
  69. 如申請專利範圍第68項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：88之胺基酸序列。
  70. 如申請專利範圍第58、68及69項中任一項之抗體，其中該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSC(SEQ ID NO：79)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGQAPRLLIY(SEQ ID NO：80)之胺基酸序列； (c)FR-L3，其包含GIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYC(SEQ ID NO：81)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGGGTKVEIK(SEQ ID NO：82)之胺基酸序列。
  71. 如申請專利範圍第70項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：89之胺基酸序列。
  72. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：88之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：89之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  73. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含NYX1MN(SEQ ID NO：97)之胺基酸序列，其中X1為Trp、Phe或Tyr；(b)HVR-H2，其包含EITLKFNX1YX2THYAESVKG(SEQ ID NO：98)之胺基酸序列，其中X1為Asn、Asp、Ser或Ala，且X2為Ser或Ala；(c)HVR-H3，其包含RNYGX1X2YINV(SEQ ID NO：99)之胺基酸序列，其中X1為Asp或Asn，且X2為Trp或Phe；(d)HVR-L1，其包含RASESVDKFGX1SFLN(SEQ ID NO：100)之胺基酸序列，其中X1為Met、Val或Leu；(e)HVR-L2，其包含VASSQGS(SEQ ID NO：113)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKDIPYT(SEQ ID NO：114)之胺基酸序列。
  74. 如申請專利範圍第73項之抗體，其中該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含NYWMN(SEQ ID NO：101)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含EITLKFNNYSTHYAESVKG(SEQ ID NO：104)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含RNYGDWYINV(SEQ ID NO：109)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVDKFGMSFLN(SEQ ID NO：112)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含VASSQGS(SEQ ID NO：113)之胺基酸序列；及 (f)HVR-L3，其包含QQSKDIPYT(SEQ ID NO：114)之胺基酸序列。
  75. 如申請專利範圍第73項之抗體，其中該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含NYWMN(SEQ ID NO：101)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含EITLKFNNYSTHYAESVKG(SEQ ID NO：104)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含RNYGNWYINV(SEQ ID NO：110)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVDKFGMSFLN(SEQ ID NO：112)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含VASSQGS(SEQ ID NO：113)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKDIPYT(SEQ ID NO：114)之胺基酸序列。
  76. 如申請專利範圍第73項之抗體，其中該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含NYWMN(SEQ ID NO：101)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含EITLKFNDYSTHYAESVKG(SEQ ID NO：105)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含RNYGNWYINV(SEQ ID NO：110)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVDKFGVSFLN(SEQ ID NO：115)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含VASSQGS(SEQ ID NO：113)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKDIPYT(SEQ ID NO：114)之胺基酸序列。
  77. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：134之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：135之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。
  78. 如申請專利範圍第77項之抗體，其中該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFS(SEQ ID NO：117)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQSPEKGLEWMA(SEQ ID NO：119)之胺基酸 序列；(c)FR-H3，其包含RFSISRDDSKSTVYLQMNNLRAEDTGIYYCAR(SEQ ID NO：121)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGAGTTVTVSS(SEQ ID NO：124)之胺基酸序列。
  79. 如申請專利範圍第78項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：134之胺基酸序列。
  80. 如申請專利範圍第77-79項中任一項之抗體，其中該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIVLTQSPTSLAVSLGQRATISC(SEQ ID NO：126)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WFQQKPGQPPKLLIF(SEQ ID NO：128)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPVEEDDTAMYFC(SEQ ID NO：130)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGGGTKLEIK(SEQ ID NO：132)之胺基酸序列。
  81. 如申請專利範圍第80項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：135之胺基酸序列。
  82. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：134之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：135之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  83. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：136之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：137之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。
  84. 如申請專利範圍第83項之抗體，其中該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：118)之胺基酸序列； (b)FR-H2，其包含WVRQAPGKGLEWMA(SEQ ID NO：120)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：122)或RFTISRDDSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：123)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：125)之胺基酸序列。
  85. 如申請專利範圍第84項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：136之胺基酸序列。
  86. 如申請專利範圍第83-85項中任一項之抗體，其中該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC(SEQ ID NO：127)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGQPPKLLIF(SEQ ID NO：129)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC(SEQ ID NO：131)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：133)之胺基酸序列。
  87. 如申請專利範圍第86項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：137之胺基酸序列。
  88. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：136之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：137之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  89. 如申請專利範圍第83項之抗體，其中該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：118)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQAPGKGLEWMA(SEQ ID NO：120)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDNSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：122)或RFTISRDDSKNTVYLQMNSLRAEDTAVYYCAR (SEQ ID NO：123)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：125)之胺基酸序列。
  90. 如申請專利範圍第89項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：138之胺基酸序列。
  91. 如申請專利範圍第83、89及90項中任一項之抗體，其中該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIVMTQSPDSLAVSLGERATINC(SEQ ID NO：127)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGQPPKLLIF(SEQ ID NO：129)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYC(SEQ ID NO：131)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：133)之胺基酸序列。
  92. 如申請專利範圍第91項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：139之胺基酸序列。
  93. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：138之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：139之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  94. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含KFWMN(SEQ ID NO：158)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含EIRLX1X2INYVKDYAESVKG(SEQ ID NO：161)之胺基酸序列，其中X1為Asn或Ser，且X2為Ser或Ala；(c)HVR-H3，其包含RNYGNWFFEI(SEQ ID NO：160)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVDRYGISFMN(SEQ ID NO：164)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNQGS(SEQ ID NO：165)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QHSKEVPYT(SEQ ID NO：166)之胺基酸序列。
  95. 如申請專利範圍第94項之抗體，其中該結合域包含以下6個HVR： (a)HVR-H1，其包含KFWMN(SEQ ID NO：158)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含EIRLNSINYVKDYAESVKG(SEQ ID NO：159)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含RNYGNWFFEI(SEQ ID NO：160)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVDRYGISFMN(SEQ ID NO：164)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNQGS(SEQ ID NO：165)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QHSKEVPYT(SEQ ID NO：166)之胺基酸序列。
  96. 如申請專利範圍第94項之抗體，其中該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含KFWMN(SEQ ID NO：158)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含EIRLSSINYVKDYAESVKG(SEQ ID NO：162)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含RNYGNWFFEI(SEQ ID NO：160)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVDRYGISFMN(SEQ ID NO：164)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNQGS(SEQ ID NO：165)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QHSKEVPYT(SEQ ID NO：166)之胺基酸序列。
  97. 如申請專利範圍第94項之抗體，其中該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含KFWMN(SEQ ID NO：158)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含EIRLNAINYVKDYAESVKG(SEQ ID NO：163)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含RNYGNWFFEI(SEQ ID NO：160)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVDRYGISFMN(SEQ ID NO：164)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNQGS(SEQ ID NO：165)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QHSKEVPYT(SEQ ID NO：166)之胺基酸序列。
  98. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：183之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：184之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序 列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。
  99. 如申請專利範圍第98項之抗體，其中該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVKLEESGGGLVQPGGSMKLSCVASGFTFN(SEQ ID NO：167)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQSPEKGLEWVA(SEQ ID NO：168)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDDSKNSVYLQMNNLRAEDTGIYYCIR(SEQ ID NO：169)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGAGTTVTVSS(SEQ ID NO：170)之胺基酸序列。
  100. 如申請專利範圍第99項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：183之胺基酸序列。
  101. 如申請專利範圍第98-100項中任一項之抗體，其中該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIVLTQSPASLAVSLGQRATISC(SEQ ID NO：175)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WFQQKPGQSPKLLIY(SEQ ID NO：176)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPARFSGSGSGTDFSLNIHPLEEDDAAMYFC(SEQ ID NO：177)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGGGTKLEIK(SEQ ID NO：178)之胺基酸序列。
  102. 如申請專利範圍第101項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：184之胺基酸序列。
  103. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：183之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：184之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  104. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：185之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含 與SEQ ID NO：186之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。
  105. 如申請專利範圍第104項之抗體，其中該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFN(SEQ ID NO：171)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQAPGKGLEWVA(SEQ ID NO：172)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDNAKNSVYLQMNSLRAEDTAVYYCIR(SEQ ID NO：173)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：174)之胺基酸序列。
  106. 如申請專利範圍第105項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：185之胺基酸序列。
  107. 如申請專利範圍第104-106項中任一項之抗體，其中該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：179)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WFQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：180)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：181)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：182)之胺基酸序列。
  108. 如申請專利範圍第107項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：186之胺基酸序列。
  109. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：185之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：186之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  110. 如申請專利範圍第105項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：187之胺基酸序列。
  111. 如申請專利範圍第107項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：188 之胺基酸序列。
  112. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：187之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：188之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  113. 如申請專利範圍第105項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：189之胺基酸序列。
  114. 如申請專利範圍第107項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：190之胺基酸序列。
  115. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：189之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：190之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  116. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含DYNMN(SEQ ID NO：191)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含DINPKX1X2DTFYNQNFKD(SEQ ID NO：192)之胺基酸序列，其中X1為Asn或Ser，且X2為Gly或Ala；(c)HVR-H3，其包含HYYYGSSYGGFVY(SEQ ID NO：196)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含HASQNINVWLS(SEQ ID NO：197)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASKLHT(SEQ ID NO：198)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQGQSYPLT(SEQ ID NO：199)之胺基酸序列。
  117. 如申請專利範圍第116項之抗體，其中該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含DYNMN(SEQ ID NO：191)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含DINPKNGDTFYNQNFKD(SEQ ID NO：193)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含HYYYGSSYGGFVY(SEQ ID NO：196)之胺基酸序列； (d)HVR-L1，其包含HASQNINVWLS(SEQ ID NO：197)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASKLHT(SEQ ID NO：198)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQGQSYPLT(SEQ ID NO：199)之胺基酸序列。
  118. 如申請專利範圍第116項之抗體，其中該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含DYNMN(SEQ ID NO：191)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含DINPKSGDTFYNQNFKD(SEQ ID NO：194)或DINPKNADTFYNQNFKD(SEQ ID NO：195)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含HYYYGSSYGGFVY(SEQ ID NO：196)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含HASQNINVWLS(SEQ ID NO：197)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASKLHT(SEQ ID NO：198)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQGQSYPLT(SEQ ID NO：199)之胺基酸序列。
  119. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：216之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：217之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。
  120. 如申請專利範圍第119項之抗體，其中該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVLLQQSGPELVKPGASVKISCNASGYTFS(SEQ ID NO：200)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVKQSHGKSLESIG(SEQ ID NO：201)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含KATLTIDKSSSTVYMELRSLTSEDTAMYYCAR(SEQ ID NO：202)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVAA(SEQ ID NO：203)之胺基酸序列。
  121. 如申請專利範圍第120項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：216之胺基酸序列。
  122. 如申請專利範圍第119-121項中任一項之抗體，其中該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIQMNQSPSSLSASLGDTITITC(SEQ ID NO：208)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKAGNNPKLLIY(SEQ ID NO：209)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPSRFTGSGSGTLFTLTISSLQPEDIATYYC(SEQ ID NO：210)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGSGTNLELK(SEQ ID NO：211)之胺基酸序列。
  123. 如申請專利範圍第122項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：217之胺基酸序列。
  124. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：216之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：217之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  125. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：218之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：219之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。
  126. 如申請專利範圍第125項之抗體，其中該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFS(SEQ ID NO：204)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQAPGQGLESIG(SEQ ID NO：205)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RATLTIDKSTSTAYLELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：206)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：207)之胺基酸序列。
  127. 如申請專利範圍第126項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：218之胺基酸序列。
  128. 如申請專利範圍第125-127項中任一項之抗體，其中該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：212)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGKNPKLLIY(SEQ ID NO：213)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：214)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：215)之胺基酸序列。
  129. 如申請專利範圍第128項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：219之胺基酸序列。
  130. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：218之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：219之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  131. 如申請專利範圍第126項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：220之胺基酸序列。
  132. 如申請專利範圍第128項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：219之胺基酸序列。
  133. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：220之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：219之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  134. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含SYWIN(SEQ ID NO：222)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含RIAPGSGFISYNELFKD(SEQ ID NO：223)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含EFYYGSFYGGFAY(SEQ ID NO：224)之胺基酸序列； (d)HVR-L1，其包含HASQNIHVWLS(SEQ ID NO：225)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含KASTLHT(SEQ ID NO：226)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQGQSSPLT(SEQ ID NO：227)之胺基酸序列。
  135. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：236之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：237之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。
  136. 如申請專利範圍第135項之抗體，其中該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含QVQLQQSGNDLVKPGASVKLSCKASGYTFT(SEQ ID NO：228)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WIKQRPGQGLEWIG(SEQ ID NO：229)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含KATLTVDTSSSTAYIQLGSLSSEDSAVYFCAR(SEQ ID NO：230)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSA(SEQ ID NO：231)之胺基酸序列。
  137. 如申請專利範圍第136項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：236之胺基酸序列。
  138. 如申請專利範圍第135-137項中任一項之抗體，其中該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIQMNQSPSSLSASLGDTITITC(SEQ ID NO：232)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGNIPKLLIY(SEQ ID NO：233)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPSRFNGSGSGTGFTLTISSLQPEDIATYYC(SEQ ID NO：234)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGAGTKLEVK(SEQ ID NO：235)之胺基酸序列。
  139. 如申請專利範圍第138項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：237 之胺基酸序列。
  140. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：236之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：237之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  141. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：246之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：247之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。
  142. 如申請專利範圍第141項之抗體，其中該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFT(SEQ ID NO：238)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQAPGQGLEWIG(SEQ ID NO：239)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RVTITRDTSTSTAYLELSSLRSEDTAVYYCAR(SEQ ID NO：240)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：241)之胺基酸序列。
  143. 如申請專利範圍第142項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：246之胺基酸序列。
  144. 如申請專利範圍第141-143項中任一項之抗體，其中該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：242)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO：243)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：244)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：245)之胺基酸序列。
  145. 如申請專利範圍第144項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：247 之胺基酸序列。
  146. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：246之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：247之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  147. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含GSAX1H(SEQ ID NO：248)之胺基酸序列，其中X1為Met或Ile；(b)HVR-H2，其包含RIRSX1X2NX3YATX4YX5ASVKG(SEQ ID NO：249)之胺基酸序列，其中X1為Arg或Lys，X2為Asn、Thr或Gly，X3為Asn或Ser，X4為Ala或Glu，且X5為Ala或Asp；(c)HVR-H3，其包含X1X2X3X4PFDY(SEQ ID NO：250)之胺基酸序列，其中X1為Leu或Gln，X2為Gln、Gly或Phe，X3為Gln或Gly，且X4為Pro或Asp；(d)HVR-L1，其包含RASQGIRNDLD(SEQ ID NO：251)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASSLQS(SEQ ID NO：252)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含LQHX1X2YPX3T(SEQ ID NO：253)之胺基酸序列，其中X1為Asp或Ser，X2為Ser或Ile，且X3為Leu或Pro。
  148. 如申請專利範圍第147項之抗體，其中該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含GSAMH(SEQ ID NO：254)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含RIRSRNNNYATAYAASVKG(SEQ ID NO：255)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含LQQPPFDY(SEQ ID NO：256)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQGIRNDLD(SEQ ID NO：251)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASSLQS(SEQ ID NO：252)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含LQHDSYPLT(SEQ ID NO：257)之胺基酸序列。
  149. 如申請專利範圍第147項之抗體，其中該結合域包含以下6個HVR： (a)HVR-H1，其包含GSAIH(SEQ ID NO：258)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含RIRSRTNNYATEYDASVKG(SEQ ID NO：259)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含LGQPPFDY(SEQ ID NO：260)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQGIRNDLD(SEQ ID NO：251)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASSLQS(SEQ ID NO：252)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含LQHSIYPPT(SEQ ID NO：261)之胺基酸序列。
  150. 如申請專利範圍第147項之抗體，其中該結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含GSAMH(SEQ ID NO：254)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含RIRSKGNSYATAYAASVKG(SEQ ID NO：262)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含QFGDPFDY(SEQ ID NO：263)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQGIRNDLD(SEQ ID NO：251)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASSLQS(SEQ ID NO：252)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含LQHDSYPLT(SEQ ID NO：257)之胺基酸序列。
  151. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：282之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：283之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。
  152. 如申請專利範圍第151項之抗體，其中該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含QVQLVQSGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：264)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQASGKGLEWVG(SEQ ID NO：267)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDDSKRTTYLQMNSLKTEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：269)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：272)之胺基酸序列。
  153. 如申請專利範圍第152項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：282之胺基酸序列。
  154. 如申請專利範圍第151-153項中任一項之抗體，其中該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：273)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGKAPKRLIY(SEQ ID NO：276)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPSRFNGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：277)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGGGTKVEIK(SEQ ID NO：280)之胺基酸序列。
  155. 如申請專利範圍第154項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：283之胺基酸序列。
  156. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：282之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：283之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  157. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：284之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：285之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。
  158. 如申請專利範圍第157項之抗體，其中該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVESGGDLVQPGGSLKLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：265)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQASGKGLEWVG(SEQ ID NO：267)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFTISRDDSKRTAYLQMNSLKTEDTAVYYCTR(SEQ ID NO：270)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：272)之胺基酸序列。
  159. 如申請專利範圍第158項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：284之胺基酸序列。
  160. 如申請專利範圍第157-159項中任一項之抗體，其中該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含AIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：274)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGKAPKRLIY(SEQ ID NO：276)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：278)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGQGTKVEIK(SEQ ID NO：281)之胺基酸序列。
  161. 如申請專利範圍第160項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：285之胺基酸序列。
  162. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：284之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：285之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  163. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)重鏈可變(VH)域，其包含與SEQ ID NO：286之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)輕鏈可變(VL)域，其包含與SEQ ID NO：287之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。
  164. 如申請專利範圍第163項之抗體，其中該VH域進一步包含：(a)FR-H1，其包含EVQLVESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFTFS(SEQ ID NO：266)之胺基酸序列；(b)FR-H2，其包含WVRQAPGKGLEWVG(SEQ ID NO：268)之胺基酸序列；(c)FR-H3，其包含RFSISRDDSKRTAYLQMSSLKTEDSAVYYCAR(SEQ ID NO：271)之胺基酸序列；及(d)FR-H4，其包含WGQGTLVTVSS(SEQ ID NO：272)之胺基酸序列。
  165. 如申請專利範圍第164項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：286之胺基酸序列。
  166. 如申請專利範圍第163-165項中任一項之抗體，其中該VL域進一步包含：(a)FR-L1，其包含AIRITQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO：275)之胺基酸序列；(b)FR-L2，其包含WYQQKPGKAPKRLIY(SEQ ID NO：276)之胺基酸序列；(c)FR-L3，其包含GVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO：279)之胺基酸序列；及(d)FR-L4，其包含FGGGTKVEIK(SEQ ID NO：280)之胺基酸序列。
  167. 如申請專利範圍第166項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：287之胺基酸序列。
  168. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含結合域，該結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：286之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：287之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  169. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含(a)重鏈，其包含與SEQ ID NO：288之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)輕鏈，其包含與SEQ ID NO：289之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  170. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含(a)重鏈，其包含與SEQ ID NO：290之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)輕鏈，其包含與SEQ ID NO：291之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  171. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含(a)重鏈，其包含與SEQ ID NO：292之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)輕鏈，其包含與SEQ ID NO：293之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  172. 一種特異性結合IL-33之經分離抗體，其中該抗體包含(a)重鏈，其包 含與SEQ ID NO：294之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)輕鏈，其包含與SEQ ID NO：295之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  173. 如申請專利範圍第37-172項中任一項之抗體，其中該抗體特異性結合人類或食蟹獼猴IL-33。
  174. 如申請專利範圍第173項之抗體，其中該抗體特異性結合人類及食蟹獼猴IL-33兩者。
  175. 如申請專利範圍第174項之抗體，其中該抗體以約1nM或更低之KD特異性結合人類及食蟹獼猴IL-33兩者。
  176. 如申請專利範圍第175項之抗體，其中該抗體以約100fM與約1nM之間之KD特異性結合人類IL-33。
  177. 如申請專利範圍第176項之抗體，其中該抗體以約1pM與約200pM之間之KD特異性結合人類IL-33。
  178. 如申請專利範圍第177項之抗體，其中該抗體以約15pM與約180pM之間之KD特異性結合人類IL-33。
  179. 如申請專利範圍第178項之抗體，其中該抗體以約15pM與約140pM之間之KD特異性結合人類IL-33。
  180. 如申請專利範圍第175項之抗體，其中該抗體以約100fM與約1nM之間之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。
  181. 如申請專利範圍第180項之抗體，其中該抗體以約1pM與約500pM之間之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。
  182. 如申請專利範圍第181項之抗體，其中該抗體以約100pM與約500pM之間之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。
  183. 如申請專利範圍第182項之抗體，其中該抗體以約125pM與約500pM之間之KD特異性結合食蟹獼猴IL-33。
  184. 如申請專利範圍第176或181項之抗體，其中該抗體以約1pM與約500pM之間之KD特異性結合人類及食蟹獼猴IL-33兩者。
  185. 如申請專利範圍第184項之抗體，其中該抗體以約1pM與約200pM之間之KD特異性結合人類IL-33。
  186. 如申請專利範圍第1-7或37-185項中任一項之抗體，其中該抗體能 夠抑制IL-33與IL-33受體之結合。
  187. 如申請專利範圍第186項之抗體，其中使用基於細胞之阻斷分析來量測該抑制。
  188. 如申請專利範圍第187項之抗體，其中該抗體以約0.001μg/ml與約0.5μg/ml之間之90%抑制性濃度(IC90)抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。
  189. 如申請專利範圍第188項之抗體，其中該IC90為介於約0.002μg/ml與約0.25μg/ml之間。
  190. 如申請專利範圍第189項之抗體，其中該IC90為約0.17μg/ml。
  191. 如申請專利範圍第189項之抗體，其中該IC90為約0.004μg/ml。
  192. 如申請專利範圍第1-7或37-191項中任一項之抗體，其中該抗體以約800fM與約10pM之間之IC50抑制人類IL-33與IL-33受體之結合。
  193. 如申請專利範圍第192項之抗體，其中該IC50為介於約1pM與約5pM之間。
  194. 如申請專利範圍第193項之抗體，其中該IC50為約2.5pM。
  195. 如申請專利範圍第1-7或37-194項中任一項之抗體，其中該抗體以約1nM與約5nM之間之IC50抑制食蟹獼猴IL-33與IL-33受體之結合。
  196. 如申請專利範圍第195項之抗體，其中該IC50為約4nM。
  197. 如申請專利範圍第1-196項中任一項之抗體，其中該抗體包含糖基化位點突變。
  198. 如申請專利範圍第1-198項中任一項之抗體，其中該抗體為單株抗體、人類抗體、人類化抗體或嵌合抗體。
  199. 如申請專利範圍第1-198項中任一項之抗體，其中該抗體為結合IL-33之抗體片段。
  200. 如申請專利範圍第199項之抗體，其中該抗體片段係選自由Fab、Fab'-SH、Fv、scFv及(Fab')2片段組成之群。
  201. 如申請專利範圍第1-198項中任一項之抗體，其中該抗體為全長抗體。
  202. 如申請專利範圍第201項之抗體，其中該抗體為IgG抗體。
  203. 如申請專利範圍第202項之抗體，其中該IgG抗體為IgG1抗體。
  204. 如申請專利範圍第202項之抗體，其中該IgG抗體為IgG4抗體。
  205. 如申請專利範圍第204項之抗體，其中該IgG4抗體在鉸鏈區中包含突變。
  206. 如申請專利範圍第205項之抗體，其中該突變為取代突變。
  207. 如申請專利範圍第206項之抗體，其中該取代突變處於胺基酸殘基S228(EU編號)處。
  208. 如申請專利範圍第207項之抗體，其中該取代突變為S228P突變。
  209. 如申請專利範圍第1-208項中任一項之抗體，其中該抗體為單特異性抗體。
  210. 如申請專利範圍第1-208項中任一項之抗體，其中該抗體為多特異性抗體。
  211. 如申請專利範圍第210項之抗體，其中該抗體為雙特異性抗體。
  212. 如申請專利範圍第211項之抗體，其中該雙特異性抗體包含結合第二生物分子之第二結合域，其中該第二生物分子係選自由以下組成之群：介白素-13(IL-13)、介白素-4(IL-4)、介白素-5(IL-5)、介白素-17(IL-17)、因子D、HtrA1、VEGF及VEGF受體。
  213. 如申請專利範圍第212項之抗體，其中該第二生物分子為因子D。
  214. 如申請專利範圍第212項之抗體，其中該第二生物分子為HtrA1。
  215. 如申請專利範圍第212項之抗體，其中該第二生物分子為VEGF。
  216. 如申請專利範圍第212項之抗體，其中該第二生物分子為IL-13。
  217. 如申請專利範圍第216項之抗體，其中該第二結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含AYSVN(SEQ ID NO：296)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含MIWGDGKIVYNSALKS(SEQ ID NO：297)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含DGYYPYAMDN(SEQ ID NO：298)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASKSVDSYGNSFMH(SEQ ID NO：299)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含LASNLES(SEQ ID NO：300)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQNNEDPRT(SEQ ID NO：301)之胺基酸序列。
  218. 如申請專利範圍第217項之抗體，其中該第二結合域包含(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：302之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：303之胺基酸序列具有至少95%序列一致性之胺基酸序列；或(c)如(a)中之VH域及如(b)中之VL域。
  219. 如申請專利範圍第218項之抗體，其中該VH域包含SEQ ID NO：302之胺基酸序列。
  220. 如申請專利範圍第218項之抗體，其中該VL域包含SEQ ID NO：303之胺基酸序列。
  221. 一種特異性結合IL-33及IL-13兩者之經分離抗體，其中該抗體包含特異性結合IL-33之第一結合域，該第一結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含SFSMS(SEQ ID NO：1)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含TISGGKTFTDYVDSVKG(SEQ ID NO：2)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含ANYGNWFFEV(SEQ ID NO：3)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASESVAKYGLSLLN(SEQ ID NO：4)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含AASNRGS(SEQ ID NO：5)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQSKEVPFT(SEQ ID NO：6)之胺基酸序列；及特異性結合IL-13之第二結合域，該第二結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含AYSVN(SEQ ID NO：296)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含MIWGDGKIVYNSALKS(SEQ ID NO：297)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含DGYYPYAMDN(SEQ ID NO：298)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASKSVDSYGNSFMH(SEQ ID NO：299)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含LASNLES(SEQ ID NO：300)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQNNEDPRT(SEQ ID NO：301)之胺基酸序列。
  222. 一種特異性結合IL-33及IL-13兩者之經分離抗體，其中該抗體包含特 異性結合IL-33之第一結合域，該第一結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含SSIFYWG(SEQ ID NO：65)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含SIYYSGRTYYNPSLKS(SEQ ID NO：66)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含AGGLYNWNDESFSFYMDV(SEQ ID NO：68)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASQSFSSSYLA(SEQ ID NO：69)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含GASSRAT(SEQ ID NO：70)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQYDRSPLT(SEQ ID NO：71)之胺基酸序列；及特異性結合IL-13之第二結合域，該第二結合域包含以下6個HVR：(a)HVR-H1，其包含AYSVN(SEQ ID NO：296)之胺基酸序列；(b)HVR-H2，其包含MIWGDGKIVYNSALKS(SEQ ID NO：297)之胺基酸序列；(c)HVR-H3，其包含DGYYPYAMDN(SEQ ID NO：298)之胺基酸序列；(d)HVR-L1，其包含RASKSVDSYGNSFMH(SEQ ID NO：299)之胺基酸序列；(e)HVR-L2，其包含LASNLES(SEQ ID NO：300)之胺基酸序列；及(f)HVR-L3，其包含QQNNEDPRT(SEQ ID NO：301)之胺基酸序列。
  223. 一種特異性結合IL-33及IL-13兩者之經分離抗體，其中該抗體包含特異性結合IL-33之第一結合域，該第一結合域包含：(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：36之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：37之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及特異性結合IL-13之第二結合域，該第二結合域包含：(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：302之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：303之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  224. 一種特異性結合IL-33及IL-13兩者之經分離抗體，其中該抗體包含特異性結合IL-33之第一結合域，該第一結合域包含：(a)VH域，其包 含與SEQ ID NO：84之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：85之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及特異性結合IL-13之第二結合域，該第二結合域包含：(a)VH域，其包含與SEQ ID NO：302之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，及(b)VL域，其包含與SEQ ID NO：303之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  225. 一種特異性結合IL-33及IL-13兩者之經分離抗體，其中該抗體包含：(a)特異性結合IL-33之第一重鏈及第一輕鏈，其中該第一重鏈包含與SEQ ID NO：306之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，且該第一輕鏈包含與SEQ ID NO：307之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)特異性結合IL-13之第二重鏈及第二輕鏈，其中該第二重鏈包含與SEQ ID NO：304之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，且該第二輕鏈包含與SEQ ID NO：305之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  226. 一種特異性結合IL-33及IL-13兩者之經分離抗體，其中該抗體包含：(a)特異性結合IL-33之第一重鏈及第一輕鏈，其中該第一重鏈包含與SEQ ID NO：308之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，且該第一輕鏈包含與SEQ ID NO：309之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列；及(b)特異性結合IL-13之第二重鏈及第二輕鏈，其中該第二重鏈包含與SEQ ID NO：304之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列，且該第二輕鏈包含與SEQ ID NO：305之胺基酸序列具有至少99%序列一致性之胺基酸序列。
  227. 如申請專利範圍第210-226項中任一項之抗體，其中該抗體為抗原結合抗體片段。
  228. 如申請專利範圍第227項之抗體，其中該抗原結合抗體片段係選自由Fab、Fab'-SH、Fv、scFv及(Fab')2片段組成之群。
  229. 如申請專利範圍第228項之方法，其中該抗原結合抗體片段為Fab或(Fab’)2片段。
  230. 一種經分離核酸，其編碼如申請專利範圍第1-229項中任一項之抗體。
  231. 一種載體，其包含如申請專利範圍第230項之經分離核酸。
  232. 一種宿主細胞，其包含如申請專利範圍第231項之載體。
  233. 如申請專利範圍第232項之宿主細胞，其中該宿主細胞為哺乳動物細胞。
  234. 如申請專利範圍第233項之宿主細胞，其中該哺乳動物細胞為中國倉鼠卵巢(CHO)細胞。
  235. 如申請專利範圍第232項之宿主細胞，其中該宿主細胞為原核細胞。
  236. 如申請專利範圍第235項之宿主細胞，其中該原核細胞為大腸桿菌。
  237. 一種產生如申請專利範圍第1-229項中任一項之抗體的方法，該方法包括在培養基中培養如申請專利範圍第232項之宿主細胞。
  238. 如申請專利範圍第237項之方法，其中該方法進一步包括自該宿主細胞或該培養基回收該抗體。
  239. 一種組合物，其包含如申請專利範圍第1-229項中任一項之抗體。
  240. 如申請專利範圍第239項之組合物，其進一步包含醫藥學上可接受之載劑、賦形劑或稀釋劑。
  241. 如申請專利範圍第240項之組合物，其中該組合物為醫藥組合物。
  242. 如申請專利範圍第239-241項中任一項之組合物，其中該醫藥組合物進一步包含ST2結合拮抗劑、因子D結合拮抗劑、HtrA1結合拮抗劑、VEGF拮抗劑、類胰蛋白酶-β結合拮抗劑、在Th2細胞上表現之化學引誘劑受體同源分子(CRTH2)結合拮抗劑、介白素-13(IL-13)結合拮抗劑、介白素-17(IL-17)結合拮抗劑、JAK1拮抗劑及/或介白素-5(IL-5)結合拮抗劑。
  243. 如申請專利範圍第242項之組合物，其中該醫藥組合物包含因子D結合拮抗劑。
  244. 如申請專利範圍第243項之組合物，其中該因子D結合拮抗劑為抗因子D抗體或其抗原結合片段。
  245. 如申請專利範圍第242項之組合物，其中該醫藥組合物包含HtrA1結合拮抗劑。
  246. 如申請專利範圍第245項之組合物，其中該HtrA1結合拮抗劑為抗 HtrA1抗體或其抗原結合片段。
  247. 如申請專利範圍第242項之組合物，其中該醫藥組合物包含VEGF拮抗劑。
  248. 如申請專利範圍第247項之組合物，其中該VEGF拮抗劑為抗VEGF抗體或其抗原結合片段。
  249. 如申請專利範圍第1-229項中任一項之抗體，其係用作藥劑。
  250. 如申請專利範圍第1-229項中任一項之抗體，其係用於治療IL-33介導之病症。
  251. 如申請專利範圍第250項之抗體，其中該IL-33介導之病症係選自由以下組成之群：發炎性病狀、免疫病症、纖維變性病症、嗜伊紅白血球性病症、感染、疼痛、中樞神經系統病症、實體腫瘤及眼科病症。
  252. 如申請專利範圍第251項之抗體，其中該發炎性病狀係選自由以下組成之群：氣喘、敗血症、敗血性休克、異位性皮炎、過敏性鼻炎、類風濕性關節炎及慢性阻塞性肺病(COPD)。
  253. 如申請專利範圍第251項之抗體，其中該免疫病症係選自由以下組成之群：氣喘、類風濕性關節炎、過敏、過敏性、過敏性休克、過敏性鼻炎、牛皮癬、發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病、糖尿病及肝病。
  254. 如申請專利範圍第251項之抗體，其中該纖維變性病症為特發性肺纖維化(IPF)。
  255. 如申請專利範圍第251項之抗體，其中該嗜伊紅白血球性病症為嗜伊紅白血球相關之胃腸病症(EGID)。
  256. 如申請專利範圍第255項之抗體，其中該EGID為嗜伊紅白血球性食管炎。
  257. 如申請專利範圍第251項之抗體，其中該感染為蠕蟲感染、原蟲感染或病毒感染。
  258. 如申請專利範圍第257項之抗體，其中該原蟲感染為碩大利什曼原蟲(Leishmania major)感染。
  259. 如申請專利範圍第257項之抗體，其中該病毒感染為呼吸道融合性病 毒(RSV)感染或流行性感冒感染。
  260. 如申請專利範圍第251項之抗體，其中該疼痛為發炎性疼痛。
  261. 如申請專利範圍第251項之抗體，其中該中樞神經系統病症為阿茲海默氏病。
  262. 如申請專利範圍第251項之抗體，其中該實體腫瘤係選自由以下組成之群：乳腺腫瘤、結腸腫瘤、前列腺腫瘤、肺腫瘤、腎腫瘤、肝腫瘤、胰腺腫瘤、胃腫瘤、腸腫瘤、腦腫瘤、骨腫瘤及皮膚腫瘤。
  263. 如申請專利範圍第251項之抗體，其中該眼科病症係選自由以下組成之群：年齡相關性黃斑變性(AMD)、眼睛之視網膜病變、息肉樣脈絡膜血管病變(PCV)、糖尿病性黃斑水腫、乾眼病、貝塞特氏病、視網膜脫離、青光眼、葡萄膜炎、色素性視網膜炎、萊伯氏先天性黑朦、斯塔加特氏病、創傷性眼損傷及結膜炎。
  264. 如申請專利範圍第263項之抗體，其中該AMD為濕性AMD、乾性AMD或地圖狀萎縮(GA)。
  265. 如申請專利範圍第263項之抗體，其中該AMD為中期AMD或晚期AMD。
  266. 如申請專利範圍第263項之抗體，其中該眼睛之視網膜病變為糖尿病性視網膜病變(DR)或早產兒視網膜病變(ROP)。
  267. 如申請專利範圍第263項之抗體，其中該眼睛之視網膜病變為高原DR。
  268. 如申請專利範圍第263項之抗體，其中該結膜炎為感染性結膜炎或非感染性結膜炎。
  269. 如申請專利範圍第263項之抗體，其中該結膜炎為過敏性結膜炎。
  270. 如申請專利範圍第1-229項中任一項之抗體的用途，其係用於製造用以治療IL-33介導之病症之藥劑。
  271. 如申請專利範圍第270項之用途，其中該IL-33介導之病症係選自由以下組成之群：發炎性病狀、免疫病症、纖維變性病症、嗜伊紅白血球性病症、感染、疼痛、中樞神經系統病症、實體腫瘤及眼科病症。
  272. 如申請專利範圍第271項之用途，其中該發炎性病狀係選自由以下組成之群：氣喘、敗血症、敗血性休克、異位性皮炎、過敏性鼻炎、類風濕性關節炎及慢性阻塞性肺病(COPD)。
  273. 如申請專利範圍第271項之用途，其中該免疫病症係選自由以下組成之群：氣喘、類風濕性關節炎、過敏、過敏性、過敏性休克、過敏性鼻炎、牛皮癬、發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病、糖尿病及肝病。
  274. 如申請專利範圍第271項之用途，其中該纖維變性病症為特發性肺纖維化(IPF)。
  275. 如申請專利範圍第271項之用途，其中該嗜伊紅白血球性病症為嗜伊紅白血球相關之胃腸病症(EGID)。
  276. 如申請專利範圍第275項之用途，其中該EGID為嗜伊紅白血球性食管炎。
  277. 如申請專利範圍第271項之用途，其中該感染為蠕蟲感染、原蟲感染或病毒感染。
  278. 如申請專利範圍第277項之用途，其中該原蟲感染為碩大利什曼原蟲感染。
  279. 如申請專利範圍第277項之用途，其中該病毒感染為RSV感染或流行性感冒感染。
  280. 如申請專利範圍第271項之用途，其中該疼痛為發炎性疼痛。
  281. 如申請專利範圍第271項之用途，其中該中樞神經系統病症為阿茲海默氏病。
  282. 如申請專利範圍第271項之用途，其中該實體腫瘤係選自由以下組成之群：乳腺腫瘤、結腸腫瘤、前列腺腫瘤、肺腫瘤、腎腫瘤、肝腫瘤、胰腺腫瘤、胃腫瘤、腸腫瘤、腦腫瘤、骨腫瘤及皮膚腫瘤。
  283. 如申請專利範圍第271項之用途，其中該眼科病症係選自由以下組成之群：AMD、眼睛之視網膜病變、PCV、糖尿病性黃斑水腫、乾眼病、貝塞特氏病、視網膜脫離、青光眼、葡萄膜炎、色素性視網膜炎、萊伯氏先天性黑朦、斯塔加特氏病、創傷性眼損傷及結膜炎。
  284. 如申請專利範圍第283項之用途，其中該AMD為濕性AMD、乾性AMD或GA。
  285. 如申請專利範圍第283項之用途，其中該AMD為中期AMD或晚期AMD。
  286. 如申請專利範圍第283項之用途，其中該眼睛之視網膜病變為DR或ROP。
  287. 如申請專利範圍第283項之用途，其中該眼睛之視網膜病變為高原DR。
  288. 如申請專利範圍第283項之用途，其中該結膜炎為感染性結膜炎或非感染性結膜炎。
  289. 如申請專利範圍第283項之用途，其中該結膜炎為過敏性結膜炎。
  290. 如申請專利範圍第270-289項中任一項之用途，其中該藥劑經調配以用於與ST2結合拮抗劑、因子D結合拮抗劑、HtrA1結合拮抗劑、VEGF拮抗劑、類胰蛋白酶-β結合拮抗劑、在Th2細胞上表現之化學引誘劑受體同源分子(CRTH2)結合拮抗劑、介白素-13(IL-13)結合拮抗劑、介白素-17(IL-17)結合拮抗劑、JAK1拮抗劑及/或介白素-5(IL-5)結合拮抗劑組合使用。
  291. 如申請專利範圍第290項之用途，其中該藥劑經調配以用於與因子D結合拮抗劑組合使用。
  292. 如申請專利範圍第291項之用途，其中該因子D結合拮抗劑為抗因子D抗體或其抗原結合片段。
  293. 如申請專利範圍第290項之用途，其中該藥劑經調配以用於與HtrA1結合拮抗劑組合使用。
  294. 如申請專利範圍第293項之用途，其中該HtrA1結合拮抗劑為抗HtrA1抗體或其抗原結合片段。
  295. 如申請專利範圍第290項之用途，其中該藥劑經調配以用於與VEGF拮抗劑組合使用。
  296. 如申請專利範圍第295項之用途，其中該VEGF拮抗劑為抗VEGF抗體或其抗原結合片段。
  297. 特異性結合IL-33及因子D兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片 段的用途，其係用於製造用以治療GA之藥劑。
  298. 如申請專利範圍第297項之用途，其中該抗原結合抗體片段為(Fab’)2片段。
  299. 如申請專利範圍第1-229項中任一項之抗體的用途，其係用於製造用以治療GA之藥劑，其中該藥劑經調配以用於與因子D結合拮抗劑組合使用。
  300. 如申請專利範圍第299項之用途，其中該因子D結合拮抗劑為抗因子D抗體或其抗原結合片段。
  301. 特異性結合IL-33及HtrA1兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段的用途，其係用於製造用以治療GA、AMD、DR、PCV或ROP之藥劑。
  302. 如申請專利範圍第301項之用途，其中該抗原結合抗體片段為(Fab’)2片段。
  303. 如申請專利範圍第1-229項中任一項之抗體的用途，其係用於製造用以治療GA、AMD、DR、PCV或ROP之藥劑，其中該藥劑經調配以用於與HtrA1結合拮抗劑組合使用。
  304. 如申請專利範圍第303項之用途，其中該HtrA1結合拮抗劑為抗HtrA1抗體或其抗原結合片段。
  305. 特異性結合IL-33及VEGF兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段的用途，其係用於製造用以治療濕性AMD之藥劑。
  306. 如申請專利範圍第305項之用途，其中該抗原結合抗體片段為(Fab’)2片段。
  307. 如申請專利範圍第1-229項中任一項之抗體的用途，其係用於製造用以治療濕性AMD之藥劑，其中該藥劑經調配以用於與VEGF拮抗劑組合使用。
  308. 如申請專利範圍第307項之用途，其中該VEGF拮抗劑為抗VEGF抗體或其抗原結合片段。
  309. 一種治療有需要之受試者中IL-33介導之病症的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之如申請專利範圍第1-229項中任一項之抗體。
  310. 如申請專利範圍第309項之方法，其中該IL-33介導之病症係選自由以下組成之群：發炎性病狀、免疫病症、纖維變性病症、嗜伊紅白血球性病症、感染、疼痛、中樞神經系統病症、實體腫瘤及眼科病症。
  311. 如申請專利範圍第310項之方法，其中該發炎性病狀係選自由以下組成之群：氣喘、敗血症、敗血性休克、異位性皮炎、過敏性鼻炎、類風濕性關節炎及慢性阻塞性肺病(COPD)。
  312. 如申請專利範圍第310項之方法，其中該免疫病症係選自由以下組成之群：氣喘、類風濕性關節炎、過敏、過敏性、過敏性休克、過敏性鼻炎、牛皮癬、發炎性腸病(IBD)、克羅恩氏病、糖尿病及肝病。
  313. 如申請專利範圍第310項之方法，其中該纖維變性病症為特發性肺纖維化(IPF)。
  314. 如申請專利範圍第310項之方法，其中該嗜伊紅白血球性病症為嗜伊紅白血球相關之胃腸病症(EGID)。
  315. 如申請專利範圍第314項之方法，其中該EGID為嗜伊紅白血球性食管炎。
  316. 如申請專利範圍第310項之方法，其中該感染為蠕蟲感染、原蟲感染或病毒感染。
  317. 如申請專利範圍第316項之方法，其中該原蟲感染為碩大利什曼原蟲感染。
  318. 如申請專利範圍第316項之方法，其中該病毒感染為呼吸道融合性病毒(RSV)感染或流行性感冒感染。
  319. 如申請專利範圍第310項之方法，其中該疼痛為發炎性疼痛。
  320. 如申請專利範圍第310項之方法，其中該實體腫瘤係選自由以下組成之群：乳腺腫瘤、結腸腫瘤、前列腺腫瘤、肺腫瘤、腎腫瘤、肝腫瘤、胰腺腫瘤、胃腫瘤、腸腫瘤、腦腫瘤、骨腫瘤及皮膚腫瘤。
  321. 如申請專利範圍第310項之方法，其中該眼科病症係選自由以下組成之群：AMD、眼睛之視網膜病變、PCV、糖尿病性黃斑水腫、乾 眼病、貝塞特氏病、視網膜脫離、青光眼、葡萄膜炎、色素性視網膜炎、萊伯氏先天性黑朦、斯塔加特氏病、創傷性眼損傷及結膜炎。
  322. 如申請專利範圍第321項之方法，其中該AMD為濕性AMD、乾性AMD或GA。
  323. 如申請專利範圍第321項之方法，其中該AMD為中期AMD或晚期AMD。
  324. 如申請專利範圍第321項之方法，其中該眼睛之視網膜病變為DR或ROP。
  325. 如申請專利範圍第321項之方法，其中該眼睛之視網膜病變為高原DR。
  326. 如申請專利範圍第321項之方法，其中該結膜炎為感染性結膜炎或非感染性結膜炎。
  327. 如申請專利範圍第321項之方法，其中該結膜炎為過敏性結膜炎。
  328. 如申請專利範圍第309-327項中任一項之方法，進一步包括向該受試者投與ST2結合拮抗劑、因子D結合拮抗劑、HtrA1結合拮抗劑、VEGF拮抗劑、類胰蛋白酶-β結合拮抗劑、在Th2細胞上表現之化學引誘劑受體同源分子(CRTH2)結合拮抗劑、介白素-13(IL-13)結合拮抗劑、介白素-17(IL-17)結合拮抗劑、JAK1拮抗劑及/或介白素-5(IL-5)結合拮抗劑。
  329. 如申請專利範圍第328項之方法，其中該方法進一步包括向該受試者投與因子D結合拮抗劑。
  330. 如申請專利範圍第329項之方法，其中該因子D結合拮抗劑為抗因子D抗體或其抗原結合片段。
  331. 如申請專利範圍第328項之方法，其中該方法進一步包括向該受試者投與HtrA1結合拮抗劑。
  332. 如申請專利範圍第331項之方法，其中該HtrA1結合拮抗劑為抗HtrA1抗體或其抗原結合片段。
  333. 如申請專利範圍第328項之方法，其中該方法進一步包括向該受試者投與VEGF拮抗劑。
  334. 如申請專利範圍第333項之用途，其中該VEGF拮抗劑為抗VEGF抗 體或其抗原結合片段。
  335. 一種治療有需要之受試者中GA的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之特異性結合IL-33及因子D兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段。
  336. 如申請專利範圍第335項之方法，其中該抗原結合抗體片段為(Fab’)2片段。
  337. 一種治療有需要之受試者中GA的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之如申請專利範圍第1-229項中任一項之抗體及治療有效量之因子D結合拮抗劑。
  338. 如申請專利範圍第337項之方法，其中該因子D結合拮抗劑為抗因子D抗體或其抗原結合片段。
  339. 一種治療有需要之受試者中GA、AMD、DR、PCV或ROP的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之特異性結合IL-33及HtrA1兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段。
  340. 如申請專利範圍第339項之方法，其中該抗原結合抗體片段為(Fab’)2片段。
  341. 一種治療有需要之受試者中GA、AMD、DR、PCV或ROP的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之如申請專利範圍第1-229項中任一項之抗體及治療有效量之HtrA1結合拮抗劑。
  342. 如申請專利範圍第341項之方法，其中該HtrA1結合拮抗劑為抗HtrA1抗體或其抗原結合片段。
  343. 一種治療有需要之受試者中濕性AMD的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之特異性結合IL-33及VEGF兩者之雙特異性抗體或其抗原結合抗體片段。
  344. 如申請專利範圍第343項之方法，其中該抗原結合抗體片段為(Fab’)2片段。
  345. 一種治療有需要之受試者中濕性AMD的方法，該方法包括向該受試者投與治療有效量之如申請專利範圍第1-229項中任一項之抗體及治療有效量之VEGF拮抗劑。
  346. 如申請專利範圍第345項之方法，其中該VEGF拮抗劑為抗VEGF抗 體或其抗原結合片段。
  347. 如申請專利範圍第309-346項中任一項之方法，其中該抗體係經皮下、靜脈內、肌肉內、經局部、經口、經皮、腹膜內、眶內、藉由植入、藉由吸入、鞘內、心室內、鼻內、玻璃體內、眼內、眼周、經結膜、結膜下、筋膜下、前房內、視網膜下、眼球後或小管內投與。
  348. 如申請專利範圍第309-347項中任一項之方法，其中該受試者為人類。
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