CN111448212A - 抗trem2抗体及其使用方法 - Google Patents

抗trem2抗体及其使用方法 Download PDF

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郝睿
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施菊
林坎·舒克拉
贝蒂娜·范伦格里奇
章莹
内森·莫尔克
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Abstract

在一个方面，提供了与人髓系细胞触发受体2(TREM2)蛋白特异性结合的抗体。在一些实施方案中，所述抗体增加可溶性TREM2(sTREM2)的水平。在一些实施方案中，所述抗体降低sTREM2的水平。在一些实施方案中，所述抗体增强TREM2活性。在一些实施方案中，所述抗体抑制TREM2活性。

Description

抗TREM2抗体及其使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2017年9月14日提交的美国临时专利申请号62/558,803、2017年11月8日提交的美国临时专利申请号62/583,379和2018年1月24日提交的美国临时专利申请号62/621,380的优先权，其中的每一个的内容以引用方式全文并入。
背景技术
髓系细胞触发受体2(triggering receptor expressed on myeloid cells-2，TREM2)是在小胶质细胞上表达的跨膜受体，并且据信在调节吞噬作用、细胞存活和促炎性细胞因子的产生中起作用。已经在神经变性疾病中鉴定出TREM2中的突变，所述神经变性疾病包括阿尔茨海默病、纳苏-哈科拉病(Nasu-Hakola disease)、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化症和额颞叶痴呆。另外，已有报道在TREM2中具有突变的患有阿尔茨海默病或额颞叶痴呆的患者的脑脊髓液中可溶性TREM2(sTREM2)的水平发生了改变。
仍然需要调节TREM2活性或sTREM2水平的治疗剂。
发明内容
在一个方面，提供了与人髓系细胞触发受体2(TREM2)蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分调节(例如，降低或增加)sTREM2的水平。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分调节(例如，降低或增加)sTREM2的水平，并进一步调节(例如，增强或抑制)一种或多种TREM2活性。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分调节(例如，增强或抑制)脾酪氨酸激酶(Syk)磷酸化。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分调节(例如，增强或抑制)吞噬作用。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分调节(例如，增强或抑制)髓系细胞、巨噬细胞、小胶质细胞或疾病相关小胶质细胞的迁移。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分调节(例如，增强或抑制)髓系细胞、巨噬细胞、小胶质细胞或疾病相关小胶质细胞的分化。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分调节(例如，增强或抑制)髓系细胞、巨噬细胞、小胶质细胞或疾病相关小胶质细胞的存活。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分在不阻断天然TREM2配体的结合的情况下调节(例如，增强或抑制)一种或多种TREM2活性。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分调节(例如，增强或抑制)由TREM2配体诱导的一种或多种TREM2活性。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分调节(例如，选择性地增强或选择性地抑制)由TREM2配体诱导的一种或多种TREM2活性。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分调节(例如，增强或抑制)由TREM2配体诱导的一种或多种TREM2活性，但是在不存在TREM2配体的情况下不调节(例如，增强或抑制)TREM2活性。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分阻止TREM2配体激活TREM2。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分阻断TREM2配体与TREM2的结合。在一些实施方案中，TREM2配体选自由以下组成的组：1-棕榈酰基-2-(5’-氧代-戊酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(POVPC)、2-花生四烯酸甘油酯(2-AG)、7-酮胆固醇(7-KC)、24(S)羟基胆固醇(24OHC)、25(S)羟基胆固醇(25OHC)、27-羟基胆固醇(27OHC)、酰基肉碱(AC)、烷基酰基甘油磷酸胆碱(PAF)、α-半乳糖基神经酰胺(KRN7000)、双(单酰基甘油)磷酸酯(BMP)、心磷脂(CL)、神经酰胺、神经酰胺-1-磷酸酯(C1P)、胆固醇酯(CE)、胆固醇磷酸酯(CP)、二酰基甘油34:1(DG34:1)、二酰基甘油38:4(DG 38:4)、二酰基甘油焦磷酸盐(DGPP)、二氢神经酰胺(DhCer)、二氢鞘磷脂(DhSM)、醚磷脂酰胆碱(PCe)、游离胆固醇(FC)、半乳糖基神经酰胺(GalCer)、半乳糖基鞘氨醇(GalSo)、神经节苷脂GM1、神经节苷脂GM3、葡糖基鞘氨醇(GlcSo)、汉克平衡盐溶液(HBSS)、Kdo2-脂质A(KLA)、乳糖基神经酰胺(LacCer)、溶血烷基酰基甘油磷酸胆碱(LPAF)、溶血磷脂酸(LPA)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰甘油(LPG)、溶血磷脂酰肌醇(LPI)、溶血鞘磷脂(LSM)、溶血磷脂酰丝氨酸(LPS)、N-酰基-磷脂酰乙醇胺(NAPE)、N-酰基-丝氨酸(NSer)、氧化磷脂酰胆碱(oxPC)、棕榈酸-9-羟基-硬脂酸(PAHSA)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰乙醇(PEtOH)、磷脂酸(PA)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、二氢神经鞘氨醇(Sphinganine)、二氢神经鞘氨醇-1-磷酸酯(Sa1P)、鞘磷脂(SM)、鞘氨醇、鞘氨醇-1-磷酸酯(So1P)和硫苷脂。
在另一方面，分离抗体或其抗原结合部分与人TREM2特异性结合并且识别人TREM2的与如本文所述的抗体克隆所识别的表位相同或基本上相同的表位。在一些实施方案中，抗体或抗原结合部分识别人TREM2的与抗体克隆所识别的表位相同或基本上相同的表位，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。在一些实施方案中，抗体或抗原结合部分识别人TREM2的与RS9.F6所识别的表位相同或基本上相同的表位。在一些实施方案中，抗体或抗原结合部分结合人TREM2上包含氨基酸残基140-144的表位。在一些实施方案中，抗体或抗原结合部分与残基Asp140、Leu141、Trp142、Phe143和Pro144中的一个或多个直接接触。在一些实施方案中，抗体或抗原结合部分与残基Trp142直接接触。在一些实施方案中，抗体或抗原结合部分与残基Asp140、Leu141、Trp142、Phe143和Pro144中的每一个直接接触。在一些实施方案中，抗体或抗原结合部分结合包含氨基酸残基140-148或由其组成的TREM2片段。
在一些实施方案中，具有如本文所述的一种或多种TREM2相关活性的抗体或其抗原结合部分还识别人TREM2的与如本文所述的抗体克隆(例如，选自由2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10组成的组的抗体克隆)所识别的表位相同或基本上相同的表位。在一些实施方案中，抗体或抗原结合部分识别人TREM2的与RS9.F6所识别的表位相同或基本上相同的表位。在一些实施方案中，抗体或抗原结合部分结合人TREM2上包含氨基酸残基140-144的表位。在一些实施方案中，抗体或抗原结合部分与残基Asp140、Leu141、Trp142、Phe143和Pro144中的一个或多个直接接触。在一些实施方案中，抗体或抗原结合部分与残基Trp142直接接触。在一些实施方案中，抗体或抗原结合部分与残基Asp140、Leu141、Trp142、Phe143和Pro144中的每一个直接接触。在一些实施方案中，抗体或抗原结合部分结合包含氨基酸残基140-148或由其组成的TREM2片段。
在另一方面，提供了具有本文所述抗体的一个或多个CDR、重链可变区和/或轻链可变区序列的抗体或其抗原结合部分。在一些实施方案中，抗体或抗原结合部分包含一个或多个互补决定区(CDR)(例如，所有CDR)，所述互补决定区与抗体克隆的CDR具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含一个或多个CDR(例如，所有CDR)，所述CDR相对于抗体克隆的CDR具有最多至两个氨基酸取代，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含与抗体克隆的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3相同的重链CDR1(CDR-H1)、重链CDR2(CDR-H2)、重链CDR3(CDR-H3)、轻链CDR1(CDR-L1)、轻链CDR2(CDR-L2)和轻链CDR3(CDR-L3)中的每一个，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含重链可变区，所述重链可变区包含与抗体克隆的重链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与抗体克隆的轻链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含重链可变区，所述重链可变区包含与抗体克隆的重链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与抗体克隆的轻链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含重链可变区，所述重链可变区包含氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)与抗体克隆的重链可变区具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10，并且(ii)包含与抗体克隆的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3相同的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含轻链可变区，所述轻链可变区包含氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)与抗体克隆的轻链可变区具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10，并且(ii)包含与抗体克隆的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3相同的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：
重链可变区，所述重链可变区包含氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)与抗体克隆的重链可变区具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10，并且(ii)包含与抗体克隆的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3相同的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及
轻链可变区，所述轻链可变区包含氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)与抗体克隆的轻链可变区具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10，并且(ii)包含与抗体克隆的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3相同的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
在一些实施方案中，具有如本文所述的一种或多种TREM2相关活性的抗体或其抗原结合部分还包含本文所述抗体(例如，选自由2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10组成的组的抗体克隆)的一个或多个CDR、重链可变区和/或轻链可变区序列。
在一些实施方案中，与人TREM2特异性结合的抗体或其抗原结合部分包含一个或多个(例如，一个、两个、三个、四个、五个或全部六个)选自由以下组成的组的CDR：
(a)重链CDR1序列，其与SEQ ID NO:8、36、39、45、51、57、62、68、74、81、85、307和315中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:8、36、39、45、51、57、62、68、74、81、85、307和315中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；
(b)重链CDR2序列，其与SEQ ID NO:9、37、40、46、52、58、63、75、79、82、86、308和316中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:9、37、40、46、52、58、63、75、79、82、86、308和316中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；
(c)重链CDR3序列，其与SEQ ID NO:10、41、47、53、59、64、70、76、83、87、309和317中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:10、41、47、53、59、64、70、76、83、87、309和317中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；
(d)轻链CDR1序列，其与SEQ ID NO:11、42、48、54、60、65、71、77、88和311中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:11、42、48、54、60、65、71、77、88和311中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；
(e)轻链CDR2序列，其与SEQ ID NO:12、38、43、49、55、66、72、312和319中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:12、38、43、49、55、66、72、312和319中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；以及
(f)轻链CDR3序列，其与SEQ ID NO:13、44、50、56、61、67、73、78、80、84、89和313中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:13、44、50、56、61、67、73、78、80、84、89和313中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含一个或多个(例如，一个、两个、三个、四个、五个或全部六个)选自由以下组成的组的CDR：
(a)重链CDR1序列，其包含SEQ ID NO:8、36、39、45、51、57、62、68、74、81、85、307和315中任一个的氨基酸序列；
(b)重链CDR2序列，其包含SEQ ID NO:9、37、40、46、52、58、63、75、79、82、86、308和316中任一个的氨基酸序列；
(c)重链CDR3序列，其包含SEQ ID NO:10、41、47、53、59、64、70、76、83、87、309和317中任一个的氨基酸序列；
(d)轻链CDR1序列，其包含SEQ ID NO:11、42、48、54、60、65、71、77、88和311中任一个的氨基酸序列；
(e)轻链CDR2序列，其包含SEQ ID NO:12、38、43、49、55、66、72、312和319中任一个的氨基酸序列；以及
(f)轻链CDR3序列，其包含SEQ ID NO:13、44、50、56、61、67、73、78、80、84、89和313中任一个的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：
(a)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(b)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ IDNO:11的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(c)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ IDNO:42的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(d)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ IDNO:48的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(e)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ IDNO:54的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(f)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ IDNO:60的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(g)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ IDNO:65的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(h)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ IDNO:71的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(i)包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ IDNO:77的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(j)包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ IDNO:77的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(k)包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ IDNO:60的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(l)包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ IDNO:88的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(m)包含SEQ ID NO:307的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:308的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:309的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ IDNO:311的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:312的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:313的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(n)包含SEQ ID NO:315的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:316的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:317的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ IDNO:48的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:319的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链CDR3序列。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：
重链可变区，所述重链可变区包含(i)与SEQ ID NO:6具有至少75％序列同一性的氨基酸序列和(ii)相应地SEQ ID NO:8、9和10的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；和/或
轻链可变区，所述轻链可变区包含(i)与SEQ ID NO:7具有至少75％序列同一性的氨基酸序列和(ii)相应地SEQ ID NO:11、12和13的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:6、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、306和314中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:7、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、310和318中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:6、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、306和314中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:7、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、310和318中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含：
(a)包含与SEQ ID NO:6具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:7具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(b)包含与SEQ ID NO:14具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:25具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(c)包含与SEQ ID NO:15具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:26具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(d)包含与SEQ ID NO:16具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:27具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(e)包含与SEQ ID NO:17具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:28具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(f)包含与SEQ ID NO:18具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:29具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(g)包含与SEQ ID NO:19具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:30具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(h)包含与SEQ ID NO:20具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:31具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(i)包含与SEQ ID NO:21具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:32具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(j)包含与SEQ ID NO:22具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:33具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(k)包含与SEQ ID NO:23具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:34具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(l)包含与SEQ ID NO:24具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:35具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(m)包含与SEQ ID NO:306具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:310具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(n)包含与SEQ ID NO:314具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:318具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，在本文所述的任何抗TREM2抗体中，抗体包含第一Fc多肽和任选地第二Fc多肽。在一些实施方案中，抗体包含第一Fc多肽和第二Fc多肽。在一些实施方案中，第一Fc多肽是修饰Fc多肽和/或第二Fc多肽是修饰Fc多肽。
在一些实施方案中，在本文所述的任何抗TREM2抗体中，抗体包含：
(a)包含与TREM2蛋白(例如，人TREM2)特异性结合的第一可变区的第一抗原结合部分，其中第一抗原结合部分包含(i)包含第一Fc多肽的第一重链，和(ii)第一轻链；以及
(b)包含与TREM2蛋白(例如，人TREM2)特异性结合的第二可变区的第二抗原结合部分，其中第二抗原结合部分包含(i)包含第一Fc多肽的第二重链，和(ii)第二轻链；
其中第一Fc多肽和第二Fc多肽形成Fc二聚体。
在一些实施方案中，第一Fc多肽是修饰Fc多肽和/或第二Fc多肽是修饰Fc多肽。
在一些实施方案中，第一可变区和第二可变区识别TREM2蛋白中的相同表位。在一些实施方案中，第一可变区和第二可变区识别TREM2蛋白中的不同表位。
在一些实施方案中，第一Fc多肽和第二Fc多肽各自含有促进异源二聚化的修饰。在一些实施方案中，根据EU编号，Fc多肽中的一个具有T366W取代，并且另一个Fc多肽具有T366S、L368A和Y407V取代。
在一些实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽包含天然FcRn结合位点。在一些实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽包含改变FcRn结合的修饰。
在一些实施方案中，第一Fc多肽和第二Fc多肽不具有效应子功能。在一些实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽包含降低效应子功能的修饰。在一些实施方案中，根据EU编号，降低效应子功能的修饰包括位置234处的Ala和位置235处的Ala的取代。
在一些实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽相对于天然Fc序列包含延长血清半衰期的氨基酸变化。在一些实施方案中，根据EU编号，氨基酸变化包括位置252处的Tyr、位置254处的Thr和位置256处的Glu的取代。可替代地，在其他实施方案中，根据EU编号，氨基酸变化包括位置428处的Leu和位置434处的Ser的取代。可替代地，在另外实施方案中，根据EU编号，氨基酸变化包括位置434处的Ser或Ala的取代。
在一些实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽特异性结合转铁蛋白受体。在一些实施方案中，根据EU编号，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽在选自由384、386、387、388、389、390、413、416和421组成的组的位置上包含至少两个取代。在一些实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽在所述位置中的至少三个、四个、五个、六个、七个、八个或九个处包含取代。
在一些实施方案中，根据EU编号，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽在包括380、391、392和415的位置上进一步包含1、2、3或4个取代。在一些实施方案中，根据EU编号，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽在包括414、424和426的位置上进一步包含1、2或3个取代。
在一些实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽在位置388处包含Trp。在一些实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽在位置421处包含芳族氨基酸。在一些实施方案中，位置421处的芳族氨基酸是Trp或Phe。
在一些实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽包含选自以下的至少一个位置：位置380是Trp、Leu或Glu；位置384是Tyr或Phe；位置386是Thr；位置387是Glu；位置388是Trp；位置389是Ser、Ala、Val或Asn；位置390是Ser或Asn；位置413是Thr或Ser；位置415是Glu或Ser；位置416是Glu；并且位置421是Phe。
在一些实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽包含选自以下的2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个位置：位置380是Trp、Leu或Glu；位置384是Tyr或Phe；位置386是Thr；位置387是Glu；位置388是Trp；位置389是Ser、Ala、Val或Asn；位置390是Ser或Asn；位置413是Thr或Ser；位置415是Glu或Ser；位置416是Glu；并且位置421是Phe。
在一些实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽包含如下的11个位置：位置380是Trp、Leu或Glu；位置384是Tyr或Phe；位置386是Thr；位置387是Glu；位置388是Trp；位置389是Ser、Ala、Val或Asn；位置390是Ser或Asn；位置413是Thr或Ser；位置415是Glu或Ser；位置416是Glu；并且位置421是Phe。
在一些实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽具有CH3结构域，所述结构域与SEQ ID NO:100-185、219-298和337-460中任一个的氨基酸111-217具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽包含SEQ ID NO:100-185、219-298和337-460中任一个的氨基酸序列。在一些实施方案中，与SEQID NO:100-185、219-298和337-460中任一个的EU索引位置380、384、386、387、388、389、390、391、392、413、414、415、416、421、424和426相对应的位置中的至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16个的残基未缺失或取代。
在一些实施方案中，在本文所述的任何抗TREM2抗体中，所述抗体包含选自由SEQID NO:219-298和351-460组成的组的Fc多肽。在一些实施方案中，抗体包含选自由SEQ IDNO:219、220、221、222、227、228、229、230、231、232、239、240、241、242、243、244、251、252、253、254、255、256、263、264、265、266、267、268、275、276、277、278、279、280、287、288、289、290、291、292、351、352、355、356、357、358、359、360、367、368、369、370、371、372、379、380、381、382、383、384、392、393、394、399、400、401、406、407、408、413、414、415、420、421、422、427、428、429、434、435、436、441、442、443、448、449、450、455、456和457组成的组的第一Fc多肽，以及选自由SEQ ID NO:223、224、225、226、233、234、235、236、237、238、245、246、247、248、249、250、257、258、259、260、261、262、269、270、271、272、273、274、281、282、283、284、285、286、293、294、295、296、297、298、353、354、361、362、363、364、365、366、373、374、375、376、377、378、385、386、387、388、389、390、395、396、397、402、403、404、409、410、411、416、417、418、423、424、425、430、431、432、437、438、439、444、445、446、451、452、453、458、459和460组成的组的第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗体包含选自由SEQ ID NO:219、220、221、222、351、352、406、407和408组成的组的第一Fc多肽和选自由SEQ ID NO:223、224、225、226、353、354、409、410和411组成的组的第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗体包含选自由SEQ ID NO:227、228、229、230、231、232、392、393和394组成的组的第一Fc多肽和选自由SEQ ID NO:233、234、235、236、237、238、395、396和397组成的组的第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗体包含选自由SEQ ID NO:239、240、241、242、243、244、434、435和436组成的组的第一Fc多肽和选自由SEQ ID NO:245、246、247、248、249、250、437、438和439组成的组的第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗体包含选自由SEQ ID NO:251、252、253、254、255、256、448、449和450组成的组的第一Fc多肽和选自由SEQ ID NO:257、258、259、260、261、262、451、452和453组成的组的第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗体包含选自由SEQ ID NO:263、264、265、266、267、268、455、456和457组成的组的第一Fc多肽和选自由SEQ ID NO:269、270、271、272、273、274、458、459和460组成的组的第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗体包含选自由SEQ ID NO:275、276、277、278、279、280、413、414和415组成的组的第一Fc多肽和选自由SEQ ID NO:281、282、283、284、285、286、416、417和418组成的组的第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗体包含选自由SEQ ID NO:287、288、289、290、291、292、420、421和422组成的组的第一Fc多肽和选自由SEQ ID NO:293、294、295、296、297、298、423、424和425组成的组的第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗体包含选自由SEQ ID NO:355、356、357、358、360、399、400和401组成的组的第一Fc多肽和选自由SEQ IDNO:361、362、363、364、365、366、402、403和404组成的组的第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗体包含选自由SEQ ID NO:367、368、369、370、371、372、441、442和443组成的组的第一Fc多肽和选自由SEQ ID NO:373、374、375、376、377、378、444、445和446组成的组的第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗体包含选自由SEQ ID NO:379、380、381、382、383、384、427、428和429组成的组的第一Fc多肽和选自由SEQ ID NO:385、386、387、388、389、390、430、431和432组成的组的第二Fc多肽。
在一些实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽结合转铁蛋白受体的顶端结构域。在一些实施方案中，双特异性抗体与转铁蛋白受体的结合基本上不抑制转铁蛋白与转铁蛋白受体的结合。
在一些实施方案中，与对应的野生型Fc多肽(例如，为人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4Fc多肽的野生型Fc多肽)相比，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽具有至少75％，或至少80％、90％、92％或95％的氨基酸序列同一性。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分在脑部的摄取大于在第一Fc多肽和/或第二Fc多肽中不具有导致转铁蛋白受体结合的修饰的抗体或其抗原结合部分的摄取。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分在脑部的摄取相比于在第一Fc多肽和/或第二Fc多肽中不具有导致转铁蛋白受体结合的修饰的抗体或其抗原结合部分的摄取大至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100倍。
在一些实施方案中，Fc多肽中的一个未被修饰以结合血脑屏障受体，并且另一个Fc多肽被修饰以特异性结合转铁蛋白受体。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分表现出与小鼠TREM2蛋白的交叉反应性。在一些实施方案中，抗体是嵌合抗体。在一些实施方案中，抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，抗体是完全人抗体。在一些实施方案中，抗原结合部分是Fab、F(ab’)2、scFv或二价scFv。
在另一方面，提供了与TREM2蛋白(例如，人TREM2)特异性结合的抗原结合片段。在一些实施方案中，抗原结合片段还包含Fc多肽。在一些实施方案中，Fc多肽是修饰Fc多肽。在一些实施方案中，Fc多肽含有一个或多个本文所述的修饰，例如以促进异源二聚化、降低效应子功能、延长血清半衰期，和/或结合转铁蛋白受体。作为非限制性实例，抗原结合片段可包括Fab片段，所述Fab片段进一步包含Fc多肽，例如，Fab-Fc融合体。在其他实施方案中，抗原结合片段还包含第一Fc多肽和第二Fc多肽。在一些实施方案中，第一Fc多肽是修饰Fc多肽和/或第二Fc多肽是修饰Fc多肽。在一些实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽含有一个或多个本文所述的修饰，例如以促进异源二聚化、降低效应子功能、延长血清半衰期，和/或结合转铁蛋白受体。作为非限制性实例，抗原结合片段可包括F(ab’)2片段，所述F(ab’)2片段进一步包含第一Fc多肽和第二Fc多肽，例如，F(ab’)2-Fc融合体。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分是多特异性抗体。在一些实施方案中，多特异性抗体是双特异性抗体。在一些实施方案中，双特异性抗体识别两个不同的TREM2表位。在一些实施方案中，双特异性抗体能够诱导TREM2集簇在细胞表面。在一些实施方案中，双特异性抗体具有比包含与双特异性抗体的单臂相同的序列的二价单特异性抗体低至少2倍(例如，至少5倍、10倍、20倍、30倍、50倍、100倍、200倍、500倍或1000倍)的EC50。在一些实施方案中，双特异性抗体的两个臂中的每一个选自抗体克隆，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10，其中两个臂处于不同的表位仓(epitope bin)。
在另一方面，提供了一种药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物包含与人TREM2特异性结合的抗体或其抗原结合部分。在一些实施方案中，药物组合物包含抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分具有如本文所述的一种或多种TREM2相关活性，识别人TREM2的与如本文所述的抗体克隆所识别的表位相同或基本上相同的表位，和/或包含如本文所述的抗体克隆的一个或多个CDR、重链和/或轻链序列。
在另一方面，提供了分离的多核苷酸。在一些实施方案中，分离的多核苷酸包含编码与如本文所述的人TREM2特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分的核苷酸序列。在另一方面，提供了包含这种分离的多核苷酸的载体和宿主细胞。
在另一方面，提供了与如本文所述的抗体克隆(例如，选自由2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10组成的组的抗体克隆)竞争以与人TREM2特异性结合的抗体。
在另一方面，提供了如本文所述用于治疗和预后用途的试剂盒。在一些实施方案中，试剂盒包含与如本文所述的人TREM2特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分，并且还包括用于治疗或预后用途的说明书。
在另一方面，提供了治疗神经变性疾病的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向患有神经变性疾病的受试者施用如本文所述的抗体或药物组合物。在一些实施方案中，神经变性疾病选自由以下组成的组：阿尔茨海默病、原发性年龄相关性tau蛋白病、进行性核上性麻痹(PSP)、额颞叶痴呆、与第17号染色体相关的额颞叶痴呆伴帕金森症(frontotemporal dementia with parkinsonism linked to chromosome 17)、嗜银颗粒性痴呆、肌萎缩性侧索硬化症、肌萎缩性侧索硬化症/关岛震颤麻痹痴呆综合征(ALS-PDC)、皮质基底节变性、慢性创伤性脑病、克雅病(Creutzfeldt-Jakob disease)、拳击员痴呆、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化、唐氏综合征、家族性英国痴呆症、家族性丹麦痴呆症、GSS氏病(Gerstmann-Straussler-Scheinker disease)、球状胶质tau蛋白病、瓜德罗普型帕金森病伴痴呆、瓜德罗普型PSP、哈勒沃登-施帕茨病(Hallevorden-Spatz disease)、伴球状体遗传性弥漫性白质脑病(HDLS)、亨廷顿氏病、包涵体肌炎、多系统萎缩症、肌强直性营养不良、那-哈病(Nasu-Hakola disease)、神经原纤维缠结优势性痴呆(neurofibrillary tangle-predominant dementia)、C型尼曼匹克病(Niemann-Pick disease type C)、苍白球-脑桥-黑质变性(pallido-ponto-nigral degeneration)、帕金森病、皮克氏病(Pick’sdisease)、脑炎后帕金森综合征、朊病毒蛋白脑淀粉样血管病、进行性皮层下神经胶质增生、亚急性硬化性全脑炎和仅缠结性痴呆。在一些实施方案中，神经变性疾病是阿尔茨海默病。
在另一方面，提供了降低患有神经变性疾病的受试者中的sTREM2水平的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向受试者施用如本文所述的抗体或药物组合物。
在另一方面，提供了增加患有神经变性疾病的受试者中的sTREM2水平的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向受试者施用如本文所述的抗体或药物组合物。
在另一方面，提供了增强患有神经变性疾病的受试者中的TREM2活性的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向受试者施用如本文所述的抗体或药物组合物。在一些实施方案中，抗体是在存在TREM2配体的情况下增强TREM2活性的抗体。在一些实施方案中，抗体是在存在而不是不存在TREM2配体的情况下增强TREM2活性的抗体。
在另一方面，提供了抑制患有神经变性疾病的受试者中的TREM2活性的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向受试者施用如本文所述的抗体或药物组合物。在一些实施方案中，抗体是在存在TREM2配体的情况下抑制TREM2活性的抗体。在一些实施方案中，抗体是在存在而不是不存在TREM2配体的情况下抑制TREM2活性的抗体。在一些实施方案中，抗体是在不存在TREM2配体的情况下抑制TREM2活性并且抑制TREM2的配体活化的抗体。
在另一方面，提供了减少患有神经变性疾病的受试者中的斑块积聚的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向受试者施用如本文所述的抗体或药物组合物。在一些实施方案中，受试者患有阿尔茨海默病。
在另一方面，提供了将患有神经变性疾病的受试者鉴定为用于使用抗TREM2抗体进行治疗的候选者的方法。
在一些实施方案中，所述方法包括：
测量来自受试者的样品中的sTREM2水平；
将来自受试者的样品中的sTREM2水平与对照值相比较，其中相对于对照值升高的来自受试者的样品中的sTREM2水平将受试者鉴定为治疗的候选者；以及
对于被鉴定为治疗的候选者的受试者，向受试者施用与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分(例如，本文所述的任何抗体)。在一些实施方案中，分离抗体或其抗原结合部分是降低sTREM2水平的抗体。
在一些实施方案中，所述方法包括：
测量来自受试者的样品中的sTREM2水平；
将来自受试者的样品中的sTREM2水平与对照值相比较，其中相对于对照值降低的来自受试者的样品中的sTREM2水平将受试者鉴定为治疗的候选者；以及
对于被鉴定为治疗的候选者的受试者，向受试者施用与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分(例如，本文所述的任何抗体)。在一些实施方案中，分离抗体或其抗原结合部分是增加sTREM2水平的抗体。
在另一方面，提供了治疗已被鉴定为用于使用抗TREM2抗体进行治疗的候选者的患有神经变性疾病的受试者的方法。在一些实施方案中，所述方法包括：
向受试者施用与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分(例如，本文所述的任何抗体)，其中受试者已被鉴定为相对于对照值具有增加的sTREM2水平。在一些实施方案中，分离抗体或其抗原结合部分是降低sTREM2水平的抗体。
在一些实施方案中，所述方法包括：
向受试者施用与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分(例如，本文所述的任何抗体)，其中受试者已被鉴定为相对于对照值具有降低的sTREM2水平。在一些实施方案中，分离抗体或其抗原结合部分是增加sTREM2水平的抗体。
在另一方面，提供了监测抗TREM2抗体对患有神经变性疾病的受试者的治疗功效的方法。在一些实施方案中，所述方法包括：
测量在施用抗TREM2抗体之前(例如，第一次施用给受试者)从受试者获得的第一样品中的sTREM2水平；
用与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分(例如，本文所述的任何抗体)治疗受试者；以及
测量在施用抗TREM2抗体之后从受试者获得的第二样品中的sTREM2水平；
其中与来自受试者的第一样品相比，来自受试者的第二样品中的sTREM2水平的变化表明受试者对使用抗TREM2抗体的治疗作出反应。
在一些实施方案中，与来自受试者的第一样品相比，来自受试者的第二样品中的sTREM2水平的降低表明受试者对使用抗TREM2抗体的治疗作出反应。在一些实施方案中，与来自受试者的第一样品相比，来自受试者的第二样品中的sTREM2水平的增加表明受试者对使用抗TREM2抗体的治疗作出反应。
附图说明
图1A-1D.抗TREM2抗体结合细胞上的表面TREM2。(A)针对与表达人TREM2的HEK细胞(未标记)和小鼠TREM2 HEK表达细胞(用NucBlue标记)的结合对抗TREM2抗体进行筛选。用缀合于APC的二级抗小鼠多重吸附抗体检测抗体结合。RS9.F6展示出与小鼠和人TREM2细胞的结合。57D7.A1与人TREM2细胞特异性结合。(B)亲代HEK-GFP细胞用作阴性对照，以排除非特异性结合。(C)hTREM2-HEK细胞中的抗TREM2抗体表面结合剂量反应。针对与表达人TREM2的HEK细胞的结合对抗TREM2抗体进行滴定。用缀合于APC的二级抗小鼠多重吸附抗体检测抗体结合。RS9.F6和RS9.F10展示出<2nM EC50的与人TREM2细胞的结合。(D)mTREM2-293F细胞中的抗TREM2抗体表面结合剂量反应。如(C)中那样针对结合对小鼠TREM2 HEK细胞进行滴定。RS9.F6和RS9.F10展示出<8nM EC50的与小鼠TREM2 HEK细胞的结合。
图2.抗TREM2抗体与原代人巨噬细胞的结合。通过FACS，针对与原代人单核细胞衍生的巨噬细胞的结合对抗TREM2抗体进行筛选。用缀合于APC的二级抗小鼠多重吸附抗体检测抗体结合。灰线＝仅二抗。黑线＝TREM2抗体。
图3A-3C.由抗TREM2抗体实现的P-Syk活化。(A)将抗TREM2抗体以30nM添加到表达人TREM2的HEK细胞中以诱导pSyk，如通过相对于缓冲液对照的倍数所计算的。(B-C)确定抗TREM2抗体的P-Syk活化剂量反应。在表达人TREM2的HEK细胞上进行抗TREM2抗体的剂量滴定，并通过相对于缓冲液对照的倍数计算pSyk诱导。EC50值显示每种抗体的nM效力和pSyk的诱导倍数。
图4.通过抗TREM2抗体调节可溶性TREM2。将表达人TREM2的细胞用指示浓度的抗体溶液处理过夜(18小时)。在SDS中变性后，通过ELISA测量可溶性TREM2浓度。基于标准曲线确定sTREM2的绝对量。数据用四参数逻辑斯蒂方程(four-parameter logisticequation)拟合。
图5A-5B.抗TREM2抗体诱导人巨噬细胞的存活。在滴定浓度的板包被的抗TREM2抗体或同种型对照的存在下，将从外周血中分离的人单核细胞与5ng/mL M-CSF一起孵育(A)或不与M-CSF一起孵育(B)。在第6天，通过CellTiter Glo活力测定确定细胞活力。抗TREM2抗体增加在有限的M-CSF或无M-CSF的情况下培养的人巨噬细胞的存活。
图6A-6D.抗TREM2抗体诱导信号传导途径。(A-D)用30nM抗体或对照刺激人巨噬细胞15分钟。通过Alpha-LISA测量细胞裂解物的p-Y525/526-SYK(A)、p-T202/Y204-ERK1/2(B)、p-S9-GSK3-β(C)和p-S473-AKT(D)。抗TREM2抗体诱导Syk磷酸化、ERK磷酸化、GSK3-β磷酸化和AKT磷酸化。
图7.抗TREM2抗体表位仓。抗TREM2抗体表位的特征在于竞争性分仓(binning)，并且展示出众多表位仓。使用生物素化的检测抗体评估交叉竞争，并且用链霉亲和素缀合的试剂以ELISA形式测量结合。连接线的距离表示仓的相似性。圆形线表示自竞争，其用作验证所述方法的阳性对照。
图8A-8C.由新型脂质配体造成的TREM2 p-Syk诱导。(A-B)用0.5mg/mL的含有30％所指示脂质和70％磷脂酰胆碱(PC)的脂质体刺激稳定过表达人TREM2(黑色条柱)和DAP12(灰色条柱)(A)或突变型TREM2 R47H(黑色条柱)和DAP12(灰色条柱)(B)的HEK293细胞，其中含有10％KLA和90％PC的Kdo2-脂质A(KLA)除外。通过AlphaLISA测量pSyk，并且数据示出为相对于缓冲液对照(HBSS)的倍数变化。条柱表示1-2次独立实验的平均值±标准偏差。(C)用0.5mg/mL的含有30％所指示脂质和70％磷脂酰胆碱(PC)的脂质体刺激人巨噬细胞，相对于含有10％KLA和90％PC的Kdo2-脂质A(KLA)除外。通过AlphaLISA测量pSyk，并且作为相对于缓冲液对照的倍数变化对数据作图。数据点代表来自3个独立人供体的2-3个技术重复的平均值。条柱表示平均值±标准偏差。***p<0.001，**p<0.01，*p<0.05，利用邓奈特氏(Dunnett’s)事后检验，与100％PC脂质体相比较，通过单因素ANOVA进行。有关脂质缩写的关键，参见表9。
图9A-9G.抗TREM2抗体与脂质配体相互作用以活化或阻断p-Syk的表征。(A)在TREM2脂质配体存在下pSyk的抗体诱导。在存在或不存在EC20(0.046mg/mL)、EC50(0.212mg/mL)或EC80(0.967mg/mL)浓度的含有30％磷脂酰丝氨酸(PS)/70％磷脂酰胆碱(PC)的脂质体的情况下，将抗TREM2抗体以30nM投用在表达人TREM2的HEK细胞上。通过相对于仅缓冲液对照的倍数计算pSyk活化。21D6.G2和3D3.A1定义了一类与脂质TREM2激活剂相加的TREM2抗体。(B)在TREM2脂质配体存在下pSyk的抗体诱导。在存在或不存在EC20(0.046mg/mL)、EC50(0.212mg/mL)或EC80(0.967mg/mL)浓度的含有30％磷脂酰丝氨酸(PS)/70％磷脂酰胆碱(PC)的脂质体的情况下，将抗TREM2抗体以10nM投用在人巨噬细胞上。在每个值上减去由仅脂质体产生的信号，以确定抗体是否对脂质配体驱动的pSyk活化具有协同、中性或抑制剂作用。(C)将抗TREM2抗体(30nM)或缓冲液与人巨噬细胞一起在37℃下孵育30分钟，去除抗体，然后添加脂质体或缓冲液，在37℃下5分钟。通过AlphaLISA在裂解细胞上进行的pSyk的检测用于确定与脂质体配体协同或阻断脂质体配体的抗体。(D)通过量化将细胞与抗体一起预孵育导致脂质体介导的pSyk信号传导阻断或增强的程度来确定抑制或协同作用的百分比。100％抑制定义为完全阻断脂质体介导的pSyk增加。(E)在TREM2脂质配体存在下pSyk的抗体抑制。与对照相比，21D4显著降低脂质体对TREM2的活化。(F-G)在逐渐增加的抗体浓度下，由抗体21D4(F)和21D11(G)造成的抗体抑制。
图10A-10C.TREM2和hTfR结合的ATV-抗TREM2 Biacore分析。(A)RS9.F6/3C35.21.17_LALAPG的TREM2结合。(B)RS9.F6的TREM2结合。(C)RS9.F6/3C35.21.17_LALAPG的人TfR结合。
图11A-11D.仅TREM2的时程氢/氘交换与TREM2和衍生自TREM2的肽的F6 Fab混合物的时程氢/氘交换相比较的差示热图(Differential heat map)。(A)SEQ ID NO:465的TREM2蛋白长度上的差示热图。TREM2蛋白的残基在热图的顶部指示。TREM2衍生肽未涵盖的残基1-37未示出。(B-D)示出(A)中所示的差示热图的部分的热图。(B)示出TREM2蛋白的残基1-68的差示热图。(C)示出TREM2蛋白的残基69-144的差示热图。(D)示出TREM2蛋白的残基145-193的差示热图。
图12A-12B.F6 Fab-TREM2肽共复合物结构。(A)Fab:肽复合物的卡通表示。示出Fab轻链(VL，左侧)、Fab重链(VH，右侧)和TREM2肽(中心)。(B)结合位点处的相互作用。示出TREM2肽(中心)、轻链(左侧)和重链(右侧)。Fab残基的顺序编号。
图13A-13B.F6-TREM2复合物界面残基。(A)使用Chothia编号的F6 Fab轻链可变结构域(SEQ ID NO:112的残基1-112)和重链可变结构域(SEQ ID NO:24)的氨基酸序列。Kabat定义中的CDR加有下划线。与TREM2肽直接接触的残基为红色。(B)TREM2肽与Fab之间的直接接触。肽残基处于圆圈中，并且Fab残基处于方框中。Fab残基的顺序编号。
具体实施方式
I.引言
髓系细胞触发受体2(TREM2)是在小胶质细胞、树突状细胞、巨噬细胞和破骨细胞的细胞表面上表达的跨膜受体。不受特定理论的束缚，据信在配体结合后，TREM2与跨膜衔接蛋白DNAX活化蛋白12(DAP12)形成信号传导复合物，所述复合物继而被蛋白激酶SRC酪氨酸磷酸化。据信，活化的TREM2/DAP12信号传导复合物通过募集和磷酸化诸如Syk激酶之类的激酶来介导细胞内信号传导。TREM2/DAP12信号传导调节活性，诸如吞噬作用、细胞生长和存活、促炎性细胞因子分泌，以及诸如小胶质细胞和巨噬细胞之类的细胞的迁移。
TREM2发生受调控的膜内蛋白水解，其中膜相关的全长TREM2被金属蛋白酶ADAM10切割成从细胞脱落的sTREM2部分和膜保留的C末端片段，所述片段进一步被γ-分泌酶降解。已报道患有阿尔茨海默病或额颞叶痴呆且TREM2中具有突变的患者中的sTREM2水平发生改变。另外，TREM2中的突变与诸如吞噬作用受损和小胶质细胞功能降低之类的功能改变相关。
如以下实施例部分中所详述的，已经产生了与人TREM2特异性结合并调节TREM2/DAP12信号传导复合物的一种或多种下游功能(诸如Syk激酶的磷酸化)的抗体。因此，在一个方面，本公开提供了抗TREM2抗体和其抗原结合部分。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强TREM2活性。因此，在另一方面，提供了增强TREM2活性的方法，例如在患有神经变性疾病的受试者中。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制TREM2活性。因此，在另一方面，提供了抑制TREM2活性的方法，例如在患有神经变性疾病的受试者中。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体减少sTREM2的脱落。因此，在另一方面，提供了降低sTREM2水平的方法，例如在患有神经变性疾病的受试者中。
在一些实施方案中，本公开的抗TREM2抗体增加sTREM2的脱落。因此，在另一方面，提供了增加sTREM2水平的方法，例如在患有神经变性疾病的受试者中。
II.定义
除非内容另外明确指出，否则如本文所用，单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括多个指代物。因此，例如，对“一种抗体”的提及任选地包括两种或更多种此类分子的组合等等。
如本文所用，术语“约”和“大约”在用于修饰以数值或范围指定的量时表示该数值以及本领域技术人员已知的该值的合理偏差，例如±20％、±10％或±5％，在所述值的预期含义内。
如本文所用，术语“TREM2蛋白”是指由基因Trem2编码的髓系细胞触发受体2蛋白。如本文所用，“TREM2蛋白”是指任何脊椎动物的天然(即，野生型)TREM2蛋白，所述脊椎动物诸如但不限于人、非人灵长类动物(例如，食蟹猴)、啮齿动物(例如，小鼠、大鼠)和其他哺乳动物。在一些实施方案中，TREM2蛋白是具有在UniprotKB登录号Q9NZC2(SEQ ID NO:96)中鉴定的序列的人TREM2蛋白。
如本文所用，术语“抗TREM2抗体”是指与TREM2蛋白(例如，人TREM2)特异性结合的抗体。
如本文所用，术语“抗体”是指具有免疫球蛋白折叠的蛋白质，所述蛋白质通过其可变区与抗原特异性结合。该术语涵盖完整的多克隆抗体、完整的单克隆抗体、单链抗体、多特异性抗体诸如双特异性抗体、单特异性抗体、一价抗体、嵌合抗体、人源化抗体和人抗体。如本文所用，术语“抗体”还包括保留结合特异性的抗体片段，包括但不限于Fab、F(ab’)2、Fv、scFv和二价scFv。抗体可以含有分为κ或λ的轻链。抗体可以含有分为γ、μ、α、δ或ε的重链，其分别依次定义免疫球蛋白类别IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。
示例性免疫球蛋白(抗体)结构单元包括四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链构成，每一对具有一条“轻”链(约25kD)和一条“重”链(约50-70kD)。每条链的N末端限定了主要负责抗原识别的约100至110或更多个氨基酸的可变区。术语“可变轻链”(VL)和“可变重链”(VH)分别指这些轻链和重链。
术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链中衍生自生殖系可变(V)基因、多样性(D)基因或连接(J)基因(而不是衍生自恒定(Cμ和Cδ)基因区段)并且赋予抗体与抗原结合的特异性的结构域。通常，抗体可变区包含四个保守的“框架”区，其间散布着三个高变的“互补决定区”。
术语“互补决定区”或“CDR”是指每条链中的三个高变区，其中断由轻链和重链可变区建立的四个框架区。CDR主要负责抗体与抗原表位的结合。每条链的CDR通常称为CDR1、CDR2和CDR3，从N末端开始顺序编号，并且通常还由特定CDR所定位的链来标识。因此，VHCDR3或CDR-H3位于其所存在的抗体的重链可变区中，而VL CDR1或CDR-L1是来自其所存在的抗体的轻链可变区的CDR1。
不同轻链或重链的“框架区”或“FR”在物种内相对保守。抗体的框架区，即构成轻链和重链的组合框架区，用于在三维空间中定位和排列CDR。框架序列可以从包括生殖系抗体基因序列的公共DNA数据库或公布的参考文献获得。例如，可以在人和小鼠序列的“VBASE2”生殖系可变基因序列数据库中找到人重链和轻链可变区基因的生殖系DNA序列。
CDR和框架区的氨基酸序列可以使用本领域各种众所周知的定义进行确定，例如，Kabat、Chothia、国际ImMunoGeneTics数据库(IMGT)、AbM和观察到的抗原接触(“Contact”)。在一些实施方案中，根据Contact定义确定CDR。参见，MacCallum等,J.Mol.Biol.,262:732-745(1996)。在一些实施方案中，通过Kabat、Chothia和/或ContactCDR定义的组合确定CDR。
术语“抗原结合部分”和“抗原结合片段”在本文可互换使用，并且是指抗体的一个或多个片段，其保留通过其可变区与抗原(例如，TREM2蛋白)特异性结合的能力。抗原结合片段的实例包括但不限于Fab片段(由VL、VH、CL和CH1结构域组成的一价片段)、F(ab’)2片段(包含通过铰链区的二硫键连接的两个Fab片段的二价片段)、单链Fv(scFv)、二硫键连接的Fv(dsFv)、互补决定区(CDR)、VL(轻链可变区)和VH(重链可变区)。
术语“表位”是指抗体的CDR特异性结合的抗原的区域或区，并且可以包括几个氨基酸或几个氨基酸的部分，例如5或6或更多个，例如20或更多个氨基酸，或那些氨基酸的部分。例如，在靶标是蛋白质的情况下，表位可以包含连续氨基酸(例如，线性表位)，或来自蛋白质的不同部分的因蛋白质折叠而邻近的氨基酸(例如，不连续或构象表位)。在一些实施方案中，表位在一个氨基酸处(例如，在丝氨酸或苏氨酸残基处)磷酸化。
如本文所用，关于抗TREM2抗体使用的短语“识别表位”是指抗体CDR在所述表位或含有所述表位的抗原的一部分上与抗原(即，TREM2蛋白)相互作用或特异性结合。
如本文所用，术语“多特异性抗体”是指包含两个或更多个不同抗原结合部分的抗体，其中每个抗原结合部分包含识别不同抗原的不同可变区，或通过其可变区与两种或更多种不同抗原结合的抗体的片段或部分。如本文所用，术语“双特异性抗体”是指包含两个不同抗原结合部分的抗体，其中每个抗原结合部分包含识别不同抗原的不同可变区，或通过其可变区与两种不同抗原结合的抗体的片段或部分。
“单克隆抗体”是指由细胞的单个克隆或单个细胞系产生并且由或基本上由一级氨基酸序列相同的抗体分子组成的抗体。
“多克隆抗体”是指从抗体的异质群体获得的抗体，其中所述群体中的不同抗体结合抗原的不同表位。
“嵌合抗体”是指抗体分子，其中恒定区或其部分被改变、替换或交换，使得抗原结合位点(即，可变区、CDR，或其部分)连接至不同或改变的类别、效应子功能和/或物种的恒定区，或其中可变区或其部分被改变、替换或交换为具有不同或改变的抗原特异性的可变区(例如，来自不同物种的CDR和框架区)。在一些实施方案中，嵌合抗体是单克隆抗体，其包含来自一种来源或物种(例如，小鼠)的可变区和来源于第二来源或物种(例如，人)的恒定区。用于产生嵌合抗体的方法在本领域中有所描述。
“人源化抗体”是来源于非人来源(例如，鼠)的嵌合抗体，其含有CDR之外的来源于非人免疫球蛋白的最小序列。一般来讲，人源化抗体将包含至少一个(例如，两个)抗原结合可变结构域，其中CDR区基本上对应于非人免疫球蛋白的那些，并且框架区基本上对应于人免疫球蛋白序列的那些。在一些情况下，人免疫球蛋白的某些框架区残基可以替换为来自非人物种的对应残基，以例如改善特异性、亲和力和/或血清半衰期。人源化抗体还可以包含免疫球蛋白(通常为人免疫球蛋白序列)恒定区(Fc)的至少一部分。抗体人源化的方法是本领域中已知的。
“人抗体”或“完全人抗体”是具有人重链和轻链序列的抗体，其通常衍生自人生殖系基因。在一些实施方案中，抗体通过人细胞，利用人抗体库通过非人动物(例如，基因工程改造以表达人抗体序列的转基因小鼠)或通过噬菌体展示平台产生。
术语“特异性结合”是指分子(例如，抗体(或其抗原结合部分)或修饰Fc多肽(或其靶标结合部分))结合表位或靶标，其中与其与另一表位或非靶标化合物(例如，结构上不同的抗原)的结合相比，其与样品中的所述表位或靶标的结合具有更大的亲和力、更大的亲合力和/或更长的持续时间。在一些实施方案中，特异性结合表位或靶标的抗体(或其抗原结合部分)或修饰Fc多肽(或其靶标结合部分)是以比其他表位或非靶标化合物高至少5倍的亲和力结合所述表位或靶标的抗体(或其抗原结合部分)或修饰Fc多肽(或其靶标结合部分)，例如，至少6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、25倍、50倍、100倍、1,000倍、10,000倍或更高的亲和力。在一些实施方案中，特异性结合TREM2蛋白(例如，人TREM2)的抗体以比非TREM2蛋白高至少5倍的亲和力结合TREM2蛋白(例如，至少10倍，50倍、100倍、1,000倍、10,000倍或更高的亲和力)。如本文所用，术语“特异性结合”、“特异性结合于”特定表位或靶标或对于所述特定表位或靶标“具有特异性”可以例如通过对其所结合的表位或靶标具有例如10- 4M或更小，例如10-5M、10-6M、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M或10-12M的平衡解离常数KD的分子表现出来。本领域技术人员应认识到，与来自一种物种的TREM2蛋白特异性结合的抗体也可特异性结合TREM2蛋白的直系同源物。
术语“结合亲和力”在本文用于指两个分子之间，例如抗体(或其抗原结合部分)与抗原之间，或修饰Fc多肽(或其靶标结合部分)与靶标之间的非共价相互作用的强度。因此，例如，除非上下文另外指出或清楚说明，否则该术语可指抗体(或其抗原结合部分)与抗原之间或修饰Fc多肽(或其靶标结合部分)与靶标之间的1:1相互作用。结合亲和力可通过测量平衡解离常数(KD)进行量化，所述平衡解离常数(KD)是指解离速率常数(kd，时间-1)除以缔合速率常数(ka，时间-1M-1)。KD可以通过测量复合物形成和解离的动力学进行确定，例如使用表面等离子体共振(SPR)方法，例如BiacoreTM系统；动力学排除测定诸如
Figure BDA0002467016930000391
以及BioLayer干涉法(例如，使用
Figure BDA0002467016930000392
Octet平台)。如本文所用，“结合亲和力”不仅包括正式(formal)结合亲和力，诸如反映抗体(或其抗原结合部分)与抗原之间或修饰Fc多肽(或其靶标结合部分)与靶标之间的1:1相互作用的那些，而且还包括计算出的其KD可反映亲合结合(avid binding)的表观亲和力。
如本文所用，“转铁蛋白受体”或“TfR”是指转铁蛋白受体蛋白1。人转铁蛋白受体1多肽序列在SEQ ID NO:97中列出。还已知来自其他物种的转铁蛋白受体蛋白1序列(例如，黑猩猩，登录号XP_003310238.1；恒河猴，NP_001244232.1；狗，NP_001003111.1；牛，NP_001193506.1；小鼠，NP_035768.1；大鼠，NP_073203.1；以及鸡，NP_990587.1)。术语“转铁蛋白受体”还涵盖示例性参考序列(例如人序列)的等位基因变体，其由转铁蛋白受体蛋白1染色体座位处的基因编码。全长转铁蛋白受体蛋白包括短的N末端细胞内区域、跨膜区和大的细胞外结构域。细胞外结构域通过三个结构域表征：蛋白酶样结构域、螺旋结构域和顶端结构域。
如本文所用，术语“Fc多肽”是指天然存在的免疫球蛋白重链多肽的C末端区域，其通过为结构域形式的Ig折叠表征。Fc多肽含有恒定区序列，所述恒定区序列包括至少CH2结构域和/或CH3结构域，并且可含有至少部分铰链区，但不含可变区。
“修饰Fc多肽”是指与野生型免疫球蛋白重链Fc多肽序列相比具有至少一个突变，例如取代、缺失或插入，但保留天然Fc多肽的总体Ig折叠或结构的Fc多肽。
如本文所用，术语“FcRn”是指新生儿Fc受体。Fc多肽与FcRn的结合降低清除率并增加Fc多肽的血清半衰期。人FcRn蛋白是异源二聚体，其由与主要组织相容性(MHC)I类蛋白类似的大小为约50kDa的蛋白质和大小为约15kDa的β2-微球蛋白组成。
如本文所用，“FcRn结合位点”是指Fc多肽的与FcRn结合的区域。在人IgG中，如使用EU索引所编号，FcRn结合位点包括L251、M252、I253、S254、R255、T256、M428、H433、N434、H435和Y436。这些位置对应于SEQ ID NO:98的位置21至26、198和203至206。
如本文所用，“天然FcRn结合位点”是指Fc多肽的与FcRn结合的区域，并且所述区域具有与天然存在的Fc多肽的与FcRn结合的区域相同的氨基酸序列。
如本文所用，术语“CH3结构域”和“CH2结构域”是指免疫球蛋白恒定区结构域多肽。出于本申请的目的，CH3结构域多肽是指如根据EU编号方案所编号的从约位置341至约位置447的氨基酸的区段，并且CH2结构域多肽是指如根据EU编号方案所编号的从约位置231至约位置340的氨基酸的区段并且不包括铰链区序列。根据IMGT Scientific图表编号(IMGT网站)，CH2和CH3结构域多肽也可通过IMGT(ImMunoGeneTics)编号方案进行编号，其中CH2结构域编号为1-110并且CH3结构域编号为1-107。CH2和CH3结构域是免疫球蛋白的Fc区的部分。Fc区是指如根据EU编号方案所编号的从约位置231至约位置447的氨基酸的区段，但是如本文所用，可以包括抗体的铰链区的至少一部分。例示性的铰链区序列是人IgG1铰链序列EPKSCDKTHTCPPCP(SEQ ID NO:99)。
如关于CH3或CH2结构域所用的术语“野生型”、“天然”和“天然存在的”是指具有天然存在的序列的结构域。
如本文所用，如关于突变多肽或突变多核苷酸所用的术语“突变”与“变异”可互换使用。相对于给定的野生型CH3或CH2结构域参考序列的变体可以包括天然存在的等位基因变体。“非天然”存在的CH3或CH2结构域是指在自然界的细胞中不存在并且通过天然CH3结构域或CH2结构域多核苷酸或多肽的基因修饰(例如，使用基因工程改造技术或诱变技术)产生的变异或突变结构域。“变体”包括相对于野生型包含至少一个氨基酸突变的任何结构域。突变可包括取代、插入和缺失。
如本文所用，术语“交叉反应”是指抗体结合除被针对产生所述抗体的抗原之外的抗原的能力。在一些实施方案中，交叉反应性是指抗体结合除被针对产生所述抗体的抗原之外的来自另一物种的抗原的能力。作为非限制性实例，针对人TREM2肽产生的如本文所述的抗TREM2抗体可以表现出与来自不同物种(例如，猴或小鼠)的TREM2肽或蛋白质的交叉反应性。
如关于核酸或蛋白质(例如抗体)所用的术语“分离”表示核酸或蛋白质基本上不含在天然状态中与其相关的其他细胞组分。纯度和均匀性通常使用分析化学技术诸如电泳(例如，聚丙烯酰胺凝胶电泳)或色谱(例如，高效液相色谱)确定。在一些实施方案中，分离的核酸或蛋白质(例如，抗体)的纯度为至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。
术语“氨基酸”是指天然存在的和合成的氨基酸，以及以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的那些氨基酸，以及后期修饰的那些氨基酸，例如，羟基脯氨酸、γ-羧基谷氨酸盐和O-磷酸丝氨酸。“氨基酸类似物”是指与天然存在的氨基酸具有相同的基本化学结构的化合物，即，结合至氢的α碳、羧基、氨基和R基团，例如，高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。此类类似物具有修饰的R基团(例如，正亮氨酸)或修饰的肽骨架，但保留了与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。“氨基酸模拟物”是指具有不同于氨基酸的一般化学结构的结构、但以类似于天然存在的氨基酸的方式起作用的化合物。氨基酸可在本文中由其通常已知的三字母符号或由IUPAC-IUB生物化学命名委员会推荐的单字母符号来表示。
术语“多肽”和“肽”在本文可互换用于指单链形式的氨基酸残基的聚合物。该术语应用于其中一个或多个氨基酸残基是对应的天然存在的氨基酸的人工化学模拟物的氨基酸聚合物，以及天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。氨基酸聚合物可包含完全L-氨基酸、完全D-氨基酸，或L和D氨基酸的混合物。
如本文所用，术语“蛋白质”是指多肽或单链多肽的二聚体(即两个)或多聚体(即三个或更多个)。蛋白质的单链多肽可通过共价键(例如，二硫键)或非共价相互作用连接。
术语“多核苷酸”和“核酸”可互换地指任何长度的核苷酸链，并且包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基和/或它们的类似物，或可以通过DNA或RNA聚合酶并入链中的任何基质。多核苷酸可包含修饰核苷酸，诸如甲基化核苷酸及其类似物。本文设想的多核苷酸的实例包括单链和双链DNA、单链和双链RNA，以及具有单链和双链DNA和RNA的混合物的杂交体分子。
术语“保守取代”和“保守突变”是指导致氨基酸被可以分类为具有相似特征的另一氨基酸取代的改变。以此方式定义的保守氨基酸组的类别的实例可以包括：“带电/极性组”，包括Glu(谷氨酸或E)、Asp(天冬氨酸或D)、Asn(天冬酰胺或N)、Gln(谷氨酰胺或Q)、Lys(赖氨酸或K)、Arg(精氨酸或R)和His(组氨酸或H)；“芳族组”，包括Phe(苯丙氨酸或F)、Tyr(酪氨酸或Y)、Trp(色氨酸或W)和(组氨酸或H)；以及“脂族组”，包括Gly(甘氨酸或G)、Ala(丙氨酸或A)、Val(缬氨酸或V)、Leu(亮氨酸或L)、Ile(异亮氨酸或I)、Met(甲硫氨酸或M)、Ser(丝氨酸或S)、Thr(苏氨酸或T)和Cys(半胱氨酸或C)。在每个组内，还可以鉴定亚组。例如，带电或极性氨基酸的组可细分为亚组，包括：包括Lys、Arg和His的“带正电的亚组”；包括Glu和Asp的“带负电的亚组”；以及包括Asn和Gln的“极性亚组”。在另一个实例中，芳族或环状组可细分为亚组，包括：包括Pro、His和Trp的“氮环亚组”；以及包括Phe和Tyr的“苯基亚组”。在另一个实例中，脂族组可细分为亚组，例如，包括Val、Leu、Gly和Ala的“脂族非极性亚组”；以及包括Met、Ser、Thr和Cys的“脂族弱极性亚组”。保守突变的类别的实例包括以上亚组内的氨基酸的氨基酸取代，诸如但不限于：Lys取代Arg或反之亦然，使得可以保持正电荷；Glu取代Asp或反之亦然，使得可以保持负电荷；Ser取代Thr或反之亦然，使得可以保持游离-OH；以及Gln取代Asn或反之亦然，使得可以保持游离-NH2。在一些实施方案中，用疏水氨基酸取代例如活性位点中的天然存在的疏水氨基酸，以保持疏水性。
在两个或更多个多肽序列的上下文中，术语“同一性”或百分比“同一性”是指当如使用序列比较算法或通过人工比对和目视检查所测量比较和比对在比较窗口或指定区域上的最大对应性时，两个或更多个序列或子序列在特定区域上是相同的或具有特定百分比的相同氨基酸残基(例如，至少60％同一性，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％或更大)。
对于多肽的序列比较，通常一个氨基酸序列充当参考序列，将其与候选序列比较。可以使用本领域技术人员可获得的各种方法进行比对，例如，目视比对或使用利用已知算法的公开可获得的软件，以实现最大比对。此类程序包括BLAST程序、ALIGN、ALIGN-2(Genentech,South San Francisco,Calif.)或Megalign(DNASTAR)。可以由本领域技术人员确定用于实现最大比对的用于比对的参数。出于本申请的目的，对于多肽序列的序列比较，使用了用于利用默认参数对两个蛋白质序列进行比对的BLASTP算法标准蛋白质BLAST。
当在多肽序列中的给定氨基酸残基的鉴定的上下文中使用时，术语“对应于”、“参考...确定”或“参考...编号”是指在将给定氨基酸序列与参考序列进行最大程度的比对和比较时指定参考序列的残基的位置。因此，例如，当在与SEQ ID NO:98最佳比对时残基与SEQ ID NO:98中的氨基酸对齐时，修饰Fc多肽中的氨基酸残基“对应于”SEQ ID NO:98中的氨基酸。与参考序列比对的多肽不必与参考序列具有相同的长度。
如本文可互换使用的术语“受试者”、“个体”和“患者”是指哺乳动物，包括但不限于人、非人灵长类动物、啮齿动物(例如，大鼠、小鼠和豚鼠)、兔、牛、猪、马和其他哺乳动物物种。在一个实施方案中，受试者、个体或患者是人。
术语“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”等在本文用于一般性地意指获得期望的药理和/或生理效果。“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”可指成功治疗或改善神经变性疾病(例如，阿尔茨海默病或本文所述的另一神经变性疾病)的任何指标，包括任何客观或主观参数，诸如消减、缓解、患者生存的改善、生存时间或生存率的增加、症状的减轻或使患者更耐受该疾病、退化或衰退速率的减缓，或患者身心健康的改善。症状的治疗或缓解可以基于客观或主观参数。可以将治疗的效果与未接受治疗的一个个体或一组个体进行比较，或与治疗前或治疗期间不同时间的同一患者进行比较。
术语“药学上可接受的赋形剂”是指在生物学或药理学上相容以用于人或动物的非活性药物成分，诸如但不限于缓冲剂、载剂或防腐剂。
如本文所用，药剂(例如，如本文所述的抗体)的“治疗量”或“治疗有效量”是药剂治疗、缓解、减轻或降低受试者的疾病症状的严重程度的量。药剂(例如，如本文所述的抗体)的“治疗量”可改善患者生存、增加生存时间或生存率、减弱症状、使损伤、疾病或病状(例如，神经变性疾病)更可耐受、减缓退化或衰退速率，或改善患者的身心健康。
术语“施用”是指将药剂、化合物或组合物递送至生物作用的期望部位的方法。这些方法包括但不限于局部递送、肠胃外递送、静脉内递送、皮内递送、肌内递送、鞘内递送、结肠递送、直肠递送或腹膜内递送。在一个实施方案中，如本文所述的抗体静脉内施用。
如在TREM2抗体增强由TREM2配体诱导的活性的上下文中使用的术语“选择性增强”是指相比于适当参考，例如，其对参考TREM2配体(例如，本文所述的任何TREM2参考配体)的增强或相比于一组TREM2配体(例如，本文所述的任何或所有TREM2配体)的平均增强，抗体在更大程度上增强TREM2配体的活性(例如，至少1.5倍、2倍、2.5倍、3倍、4倍、5倍、8倍、10倍、15倍、20倍、30倍或50倍)。
术语“对照”或“对照值”是指参考值或基线值。适当的对照可以由本领域技术人员确定。在一些情况下，可以相对于同一受试者或实验中的基线确定对照值，例如，在用抗TREM2抗体治疗之前获得的sTREM2的测量值可以是同一受试者的sTREM2水平的治疗后测量值的对照值。在其他情况下，可以相对于对照受试者(例如，健康对照或疾病对照)或对照受试者的群体(例如，健康对照或疾病对照，例如，10、20、50、100、200、500、1000个或更多个对照受试者的群体)中的平均值确定对照值，例如，可以将基线或治疗后受试者的sTREM2水平的测量值与健康对照值相比较。
III.抗TREM2抗体
在一个方面，提供了与TREM2蛋白特异性结合的抗体及其抗原结合部分。在一些实施方案中，抗体特异性结合人TREM2蛋白。在一些实施方案中，相比于其他TREM样受体(例如，TREM1)，抗TREM2抗体对TREM2具有选择性。
在一些实施方案中，与TREM2特异性结合的抗体是具有如本文所述的一种或多种TREM2活性的抗体，例如，是这样的抗体：其调节与TREM2/DAP12信号传导复合物相互作用的激酶(例如，Syk激酶)的募集或磷酸化，调节吞噬作用，调节细胞迁移，和/或调节细胞分化；调节sTREM2的水平；调节TREM2的配体活化；识别与如本文所述的抗体克隆(例如，2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1或RS12.3C10)所识别的表位相同或基本上相同的表位；和/或具有一个或多个CDR、重链可变区和/或轻链可变区序列，如本文所述的抗体克隆(例如，2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1或RS12.3C10)一样。
调节sTREM2脱落的抗TREM2抗体
在一些实施方案中，抗TREM2抗体改变样品中的sTREM2蛋白水平，例如，从细胞表面脱落到细胞外样品中的sTREM2的水平。在一些实施方案中，抗TREM2抗体降低sTREM2的水平。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增加sTREM2的水平。
在一些实施方案中，如果与对照值相比，经过处理的样品中的sTREM2量减少至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，那么抗TREM2抗体降低sTREM2的水平。在一些实施方案中，如果与对照值相比，经过处理的样品中的sTREM2量减少至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，那么抗TREM2抗体降低sTREM2的水平。在一些实施方案中，对照值是未处理样品(例如，来自未用抗TREM2抗体处理的表达TREM2的细胞的上清液，或来自未用抗TREM2抗体治疗的受试者的样品)或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的sTREM2量。
在一些实施方案中，如果与对照值相比，经过处理的样品中的sTREM2量增加至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，那么抗TREM2抗体增加sTREM2的水平。在一些实施方案中，如果与对照值相比，经过处理的样品中的sTREM2量增加至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，那么抗TREM2抗体增加sTREM2的水平。在一些实施方案中，对照值是未处理样品(例如，来自未用抗TREM2抗体处理的表达TREM2的细胞的上清液，或来自未用抗TREM2抗体治疗的受试者的样品)或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的sTREM2量。
在一些实施方案中，使用包含流体例如血液、血浆、血清、尿液或脑脊髓液的样品测量sTREM2脱落。在一些实施方案中，样品包含脑脊髓液。在一些实施方案中，样品包括来自细胞培养物的上清液(例如，来自内源性地表达TREM2的原代细胞或细胞系，诸如人巨噬细胞，或已工程改造以表达TREM2的原代细胞或细胞系的上清液，例如，如在下文实施例部分中所描述)。
在一些实施方案中，使用免疫测定测量样品中的sTREM2水平。免疫测定是本领域已知的并且包括但不限于酶免疫测定(EIA)，诸如酶倍增免疫测定(EMIA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、微粒酶免疫测定(MEIA)、免疫组织化学(IHC)、免疫细胞化学、毛细管电泳免疫测定(CEIA)、放射免疫测定(RIA)、免疫荧光、化学发光免疫测定(CL)和电化学发光免疫测定(ECL)。在一些实施方案中，使用ELISA测定来测量sTREM2水平。在一些实施方案中，使用ELISA测定来测量sTREM2水平，如在下文实施例部分中所描述。
在一些实施方案中，降低sTREM2水平的抗TREM2抗体还调节一种或多种TREM2活性，如下文所述。在一些实施方案中，增加sTREM2水平的抗TREM2抗体还调节一种或多种TREM2活性，如下文所述。
调节TREM2活性的抗TREM2抗体
在一些实施方案中，抗TREM2抗体调节一种或多种TREM2活性。例如，在一些实施方案中，抗TREM2抗体调节与TREM2/DAP12信号传导复合物相互作用的激酶的募集或磷酸化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体调节一种或多种下游活性，诸如吞噬作用、细胞生长、细胞存活、细胞分化、细胞因子分泌或细胞迁移。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强一种或多种TREM2活性，包括但不限于诱导与TREM2/DAP12信号传导复合物相互作用的激酶的磷酸化、增强吞噬作用(例如，细胞碎片、淀粉样蛋白β颗粒等的吞噬作用)、增强细胞迁移(例如，小胶质细胞或巨噬细胞的迁移)、增强细胞功能(例如，对于髓系细胞、小胶质细胞(包括疾病相关小胶质细胞)和巨噬细胞)，和/或增强细胞存活或细胞分化(例如，对于髓系细胞、小胶质细胞(包括疾病相关小胶质细胞)和巨噬细胞)。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强由配体诱导的一种或多种TREM2活性(例如，上文所述的那些)。增强由配体诱导的一种或多种TREM2活性的抗TREM2抗体在本文称为“正向变构调节剂”(“PAM”)。在一些实施方案中，抗TREM2抗体在不阻断天然TREM2配体的结合的情况下增强一种或多种TREM2活性。在一些实施方案中，抗TREM2抗体阻断TREM2配体与TREM2的结合。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强由配体诱导的一种或多种TREM2活性，但是在不存在配体的情况下不增强TREM2活性。在一些实施方案中，抗TREM2抗体选择性地增强TREM2配体的活性。在一些实施方案中，抗TREM2抗体阻止TREM2配体激活TREM2。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制一种或多种TREM2活性，包括但不限于减少或抑制与TREM2/DAP12信号传导复合物相互作用的激酶的磷酸化、减少或抑制吞噬作用(例如，细胞碎片、淀粉样蛋白β颗粒等的吞噬作用)、减少或抑制细胞迁移(例如，小胶质细胞或巨噬细胞的迁移)，和/或减少或抑制细胞存活或细胞分化(例如，对于髓系细胞、小胶质细胞(包括疾病相关小胶质细胞)和巨噬细胞)。在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制由配体诱导的一种或多种TREM2活性。抑制由配体诱导的一种或多种TREM2活性的抗TREM2抗体在本文称为“负向变构调节剂”(“NAM”)。在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制由配体诱导的一种或多种TREM2活性，但是在不存在配体的情况下不抑制TREM2活性。在一些实施方案中，抗TREM2抗体在不存在TREM2配体的情况下抑制TREM2活性，并抑制由配体诱导的一种或多种TREM2活性。在一些实施方案中，抗TREM2抗体阻止TREM2配体激活TREM2。在一些实施方案中，抗TREM2抗体在配体结合位点结合TREM2。在一些实施方案中，抗TREM2抗体阻断TREM2配体与TREM2的结合。
激酶磷酸化
在一些实施方案中，抗TREM2抗体诱导与TREM2/DAP12信号传导复合物相互作用的激酶(例如但不限于，Syk、ZAP70、PI3K、Erk、AKT或GSK3b)的磷酸化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体在不阻断天然TREM2配体的结合的情况下诱导与TREM2/DAP12信号传导复合物相互作用的激酶的磷酸化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体诱导Syk的磷酸化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用抗TREM2抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平增加了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，那么抗TREM2抗体诱导Syk的磷酸化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用抗TREM2抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平增加了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，那么抗TREM2抗体诱导Syk的磷酸化。在一些实施方案中，对照值是未处理样品(例如，包含未用抗TREM2抗体处理的表达TREM2的细胞的样品，或来自未用抗TREM2抗体治疗的受试者的样品)或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体在存在配体的情况下诱导与TREM2/DAP12信号传导复合物相互作用的激酶(例如但不限于，Syk、ZAP70、PI3K、Erk、AKT或GSK3b)的磷酸化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体在存在配体的情况下诱导Syk的磷酸化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平增加了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，那么抗TREM2抗体在存在配体的情况下诱导Syk的磷酸化。在一些实施方案中，如果与对照值(例如，在存在配体但不存在抗体的情况下的水平)相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平增加了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍或更多，那么抗TREM2抗体在存在配体的情况下诱导Syk的磷酸化。在一些实施方案中，对照值是未处理样品(例如，包含未用TREM2配体或抗TREM2抗体处理的表达TREM2的细胞的样品，或来自未用TREM2配体或抗TREM2抗体治疗的受试者的样品)或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体在存在配体而不是不存在配体的情况下诱导与TREM2/DAP12信号传导复合物相互作用的激酶(例如但不限于，Syk、ZAP70、PI3K、Erk、AKT或GSK3b)的磷酸化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体在存在而不是不存在配体的情况下诱导Syk的磷酸化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平增加了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，并且如果与对照值相比，用抗TREM2抗体但不用TREM2配体处理的样品中的Syk磷酸化水平没有显著增加(例如，与对照值相比，增加不超过10％或不超过5％)，那么抗TREM2抗体在存在而不是不存在配体的情况下诱导Syk的磷酸化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平增加了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、15倍、20倍、30倍或更多，并且如果与对照值相比，用抗TREM2抗体但不用TREM2配体处理的样品中的Syk磷酸化水平没有显著增加(例如，与对照值相比，增加不超过1.5倍或不超过1倍)，那么抗TREM2抗体在存在而不是不存在配体的情况下诱导Syk的磷酸化。在一些实施方案中，对照值是未处理样品(例如，包含未用TREM2配体或抗TREM2抗体处理的表达TREM2的细胞的样品，或来自未用TREM2配体或抗TREM2抗体治疗的受试者的样品)或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制与TREM2/DAP12信号传导复合物相互作用的激酶(例如但不限于，Syk、ZAP70、PI3K、Erk、AKT或GSK3b)的磷酸化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制Syk的磷酸化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用抗TREM2抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平降低了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，那么抗TREM2抗体抑制Syk的磷酸化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用抗TREM2抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平降低了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，那么抗TREM2抗体抑制Syk的磷酸化。在一些实施方案中，对照值是未处理样品(例如，包含未用抗TREM2抗体处理的表达TREM2的细胞的样品，或来自未用抗TREM2抗体治疗的受试者的样品)或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体在存在配体的情况下诱导与TREM2/DAP12信号传导复合物相互作用的激酶(例如但不限于，Syk、ZAP70、PI3K、Erk、AKT或GSK3b)的磷酸化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体在存在配体的情况下抑制Syk的磷酸化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平降低了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，那么抗TREM2抗体在存在配体的情况下抑制Syk的磷酸化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平降低了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，那么抗TREM2抗体在存在配体的情况下抑制Syk的磷酸化。在一些实施方案中，对照值是未处理样品(例如，包含未用TREM2配体或抗TREM2抗体处理的表达TREM2的细胞的样品，或来自未用TREM2配体或抗TREM2抗体治疗的受试者的样品)或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体在存在配体而不是不存在配体的情况下抑制与TREM2/DAP12信号传导复合物相互作用的激酶(例如但不限于，Syk、ZAP70、PI3K、Erk、AKT或GSK3b)的磷酸化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体在存在而不是不存在配体的情况下抑制Syk的磷酸化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平降低了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，并且如果与对照值相比，用抗TREM2抗体但不用TREM2配体处理的样品中的Syk磷酸化水平没有显著降低(例如，与对照值相比，降低不超过10％或不超过5％)，那么抗TREM2抗体在存在而不是不存在配体的情况下抑制Syk的磷酸化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平降低了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，并且如果与对照值相比，用抗TREM2抗体但不用TREM2配体处理的样品中的Syk磷酸化水平没有显著降低(例如，与对照值相比，降低不超过1.5倍或不超过1倍)，那么抗TREM2抗体在存在而不是不存在配体的情况下抑制Syk的磷酸化。在一些实施方案中，对照值是未处理样品(例如，包含未用TREM2配体或抗TREM2抗体处理的表达TREM2的细胞的样品，或来自未用TREM2配体或抗TREM2抗体治疗的受试者的样品)或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体在不存在配体的情况下抑制与TREM2/DAP12信号传导复合物相互作用的激酶(例如但不限于Syk、ZAP70、PI3K、Erk、AKT或GSK3b)的磷酸化，并且抑制由配体诱导的与TREM2/DAP12信号传导复合物相互作用的激酶的磷酸化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体在不存在配体的情况下抑制Syk的磷酸化，并且抑制由配体诱导的Syk的磷酸化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，在不存在TREM2配体的情况下用抗TREM2抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平降低了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，并且如果与对照值相比，用抗TREM2抗体和TREM2配体处理的样品中的Syk磷酸化水平降低了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，那么抗TREM2抗体在不存在配体的情况下抑制Syk的磷酸化，并且抑制由配体诱导的Syk的磷酸化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，在不存在TREM2配体的情况下用抗TREM2抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平降低了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，并且如果与对照值相比，用抗TREM2抗体和TREM2配体处理的样品中的Syk磷酸化水平降低了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，那么抗TREM2抗体在不存在配体的情况下抑制Syk的磷酸化，并且抑制由配体诱导的Syk的磷酸化。在一些实施方案中，对照值是未处理样品(例如，包含未用TREM2配体或抗TREM2抗体处理的表达TREM2的细胞的样品，或来自未用TREM2配体或抗TREM2抗体治疗的受试者的样品)或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平。
为了检测和/或定量样品中的磷酸化(例如，Syk磷酸化)，在一些实施方案中，使用免疫测定。在一些实施方案中，免疫测定是酶免疫测定(EIA)、酶倍增免疫测定(EMIA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、微粒酶免疫测定(MEIA)、免疫组织化学(IHC)、免疫细胞化学、毛细管电泳免疫测定(CEIA)、放射免疫测定(RIA)、免疫荧光、化学发光免疫测定(CL)或电化学发光免疫测定(ECL)。在一些实施方案中，使用利用放大发光接近均匀测定(amplifiedluminescent proximity homogenous assay，
Figure BDA0002467016930000551
PerkinElmer Inc.)的免疫测定对磷酸化进行检测和/或定量。
在一些实施方案中，使用包括一个或多个细胞，例如一个或多个表达TREM2的细胞(例如，内源性地表达TREM2的原代细胞或细胞系，诸如人巨噬细胞，或已工程改造以表达TREM2的原代细胞或细胞系，例如，如下文实施例部分中所描述)的样品测量磷酸化。在一些实施方案中，样品包含流体，例如血液、血浆、血清、尿液或脑脊髓液。在一些实施方案中，样品包含组织(例如，肺、脑、肾、脾、神经组织或骨骼肌)或来自此类组织的细胞。在一些实施方案中，样品包含内源性流体、组织或细胞(例如，来自人或非人受试者)。
吞噬作用
在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强死细胞碎片、组织碎片、淀粉样蛋白β颗粒或外来材料的吞噬作用。在一些实施方案中，抗TREM2抗体在不阻断天然TREM2配体的结合的情况下增强吞噬作用。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用抗TREM2抗体处理的样品中的吞噬作用水平增加了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，那么抗TREM2抗体增强吞噬作用。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用抗TREM2抗体处理的样品中的吞噬作用水平增加了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，那么抗TREM2抗体增强吞噬作用。在一些实施方案中，对照值是未处理样品或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的吞噬作用水平。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体在存在配体的情况下增强吞噬作用。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的吞噬作用水平增加了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，那么抗TREM2抗体在存在配体的情况下增强吞噬作用。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的吞噬作用水平增加了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，那么抗TREM2抗体在存在配体的情况下增强吞噬作用。在一些实施方案中，对照值是未处理样品或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的吞噬作用水平。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体在存在配体而不是不存在配体的情况下增强吞噬作用。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的吞噬作用水平增加了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，并且如果与对照值相比，用抗TREM2抗体但不用TREM2配体处理的样品中的吞噬作用水平没有显著增加(例如，与对照值相比，增加不超过10％或不超过5％)，那么抗TREM2抗体在存在而不是不存在配体的情况下增强吞噬作用。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的吞噬作用水平增加了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，并且如果与对照值相比，用抗TREM2抗体但不用TREM2配体处理的样品中的吞噬作用水平没有显著增加(例如，与对照值相比，增加不超过1.5倍或不超过1倍)，那么抗TREM2抗体在存在而不是不存在配体的情况下增强吞噬作用。在一些实施方案中，对照值是未处理样品或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的吞噬作用水平。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体减少吞噬作用。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用抗TREM2抗体处理的样品中的吞噬作用水平降低了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，那么抗TREM2抗体减少吞噬作用。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用抗TREM2抗体处理的样品中的吞噬作用水平降低了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，那么抗TREM2抗体减少吞噬作用。在一些实施方案中，对照值是未处理样品或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的吞噬作用水平。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体在存在配体的情况下减少吞噬作用。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的吞噬作用水平降低了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，那么抗TREM2抗体在存在配体的情况下减少吞噬作用。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的吞噬作用水平降低了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，那么抗TREM2抗体在存在配体的情况下减少吞噬作用。在一些实施方案中，对照值是未处理样品或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的吞噬作用水平。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体在存在配体而不是不存在配体的情况下减少吞噬作用。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的吞噬作用水平降低了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，并且如果与对照值相比，用抗TREM2抗体但不用TREM2配体处理的样品中的吞噬作用水平没有显著降低(例如，与对照值相比，降低不超过10％或不超过5％)，那么抗TREM2抗体在存在而不是不存在配体的情况下减少吞噬作用。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的吞噬作用水平降低了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，并且如果与对照值相比，用抗TREM2抗体但不用TREM2配体处理的样品中的吞噬作用水平没有显著降低(例如，与对照值相比，降低不超过1.5倍或不超过1倍)，那么抗TREM2抗体在存在而不是不存在配体的情况下减少吞噬作用。在一些实施方案中，对照值是未处理样品或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的吞噬作用水平。
在一些实施方案中，吞噬作用是使用吞噬作用测定，利用标记底物测量的。吞噬作用测定在本领域是已知的。在一些实施方案中，对包含内源性地表达TREM2的细胞(诸如人巨噬细胞或小胶质细胞)的样品进行吞噬作用测定。在一些实施方案中，对包含已工程改造以表达TREM2的细胞的样品进行吞噬作用测定。在一些实施方案中，如下文实施例部分中所述，使用人巨噬细胞吞噬作用测定来测量细胞迁移。
细胞迁移、存活、功能和分化
在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强细胞迁移、细胞存活或细胞分化(例如，对于髓系细胞、巨噬细胞和小胶质细胞，包括疾病相关小胶质细胞)。疾病相关小胶质细胞和检测疾病相关小胶质细胞的方法描述于Keren-Shaul等,Cell,2017,169:1276-1290中。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强一种或多种细胞类型(例如，髓系细胞、巨噬细胞或小胶质细胞)的细胞迁移。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强一种或多种细胞类型(例如，髓系细胞、巨噬细胞或小胶质细胞)的细胞存活。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强一种或多种细胞类型(例如，髓系细胞、巨噬细胞或小胶质细胞)的细胞分化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强髓系细胞的迁移、存活和/或分化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强巨噬细胞的迁移、存活和/或分化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强小胶质细胞的迁移、存活和/或分化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强小胶质细胞活化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强疾病相关小胶质细胞的迁移、存活和/或分化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体在不阻断天然TREM2配体的结合的情况下增强细胞迁移、细胞存活或细胞分化。
在一些实施方案中，如果与对照值相比，用抗TREM2抗体处理的样品中的活性(例如，迁移、存活或分化)水平增加了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，那么抗TREM2抗体增强细胞迁移、细胞存活或细胞分化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用抗TREM2抗体处理的样品中的活性(例如，迁移、存活或分化)水平增加了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，那么抗TREM2抗体增强细胞迁移、细胞存活或细胞分化。在一些实施方案中，对照值是未处理样品(例如，未用抗TREM2抗体处理的样品)或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的活性(例如，迁移、存活或分化)水平。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体在存在配体的情况下增强细胞迁移、细胞存活或细胞分化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的活性(例如，迁移、存活或分化)水平增加了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，那么抗TREM2抗体在存在配体的情况下增强细胞迁移、细胞存活或细胞分化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的活性(例如，迁移、存活或分化)水平增加了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，那么抗TREM2抗体在存在配体的情况下增强细胞迁移、细胞存活或细胞分化。在一些实施方案中，对照值是未处理样品(例如，未用TREM2配体或抗TREM2抗体处理的样品)或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的活性(例如，迁移、存活或分化)水平。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体在存在配体而不是不存在配体的情况下增强细胞迁移、细胞存活或细胞分化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的活性(例如，迁移、存活或分化)水平增加了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，并且如果与对照值相比，用抗TREM2抗体但不用TREM2配体处理的样品中的活性水平没有显著增加(例如，与对照值相比，增加不超过10％或不超过5％)，那么抗TREM2抗体在存在而不是不存在配体的情况下增强细胞迁移、细胞存活或细胞分化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的活性(例如，迁移、存活或分化)水平增加了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，并且如果与对照值相比，用抗TREM2抗体但不用TREM2配体处理的样品中的活性水平没有显著增加(例如，与对照值相比，增加不超过1.5倍或不超过1倍)，那么抗TREM2抗体在存在而不是不存在配体的情况下增强细胞迁移、细胞存活或细胞分化。在一些实施方案中，对照值是未处理样品(例如，未用TREM2配体或抗TREM2抗体处理的样品)或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的活性(例如，迁移、存活或分化)水平。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制细胞迁移、细胞存活或细胞分化(例如，对于髓系细胞、巨噬细胞和小胶质细胞，包括疾病相关小胶质细胞)。在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制一种或多种细胞类型(例如，髓系细胞、巨噬细胞或小胶质细胞)的细胞迁移。在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制一种或多种细胞类型(例如，髓系细胞、巨噬细胞或小胶质细胞)的细胞存活。在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制一种或多种细胞类型(例如，髓系细胞、巨噬细胞或小胶质细胞)的细胞分化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制髓系细胞的迁移、存活和/或分化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制巨噬细胞的迁移、存活和/或分化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制小胶质细胞的迁移、存活和/或分化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制小胶质细胞活化。在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制疾病相关小胶质细胞的迁移、存活和/或分化。
在一些实施方案中，如果与对照值相比，用抗TREM2抗体处理的样品中的活性(例如，迁移、存活或分化)水平降低了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，那么抗TREM2抗体抑制细胞迁移、细胞存活或细胞分化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用抗TREM2抗体处理的样品中的活性(例如，迁移、存活或分化)水平降低了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，那么抗TREM2抗体抑制细胞迁移、细胞存活或细胞分化。在一些实施方案中，对照值是未处理样品(例如，未用抗TREM2抗体处理的样品)或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的Syk磷酸化水平。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体在存在配体的情况下抑制细胞迁移、细胞存活或细胞分化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的活性(例如，迁移、存活或分化)水平降低了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，那么抗TREM2抗体在存在配体的情况下抑制细胞迁移、细胞存活或细胞分化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的活性(例如，迁移、存活或分化)水平降低了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，那么抗TREM2抗体在存在配体的情况下抑制细胞迁移、细胞存活或细胞分化。在一些实施方案中，对照值是未处理样品(例如，未用TREM2配体或抗TREM2抗体处理的样品)或用适当的非TREM2结合抗体处理的样品中的活性(例如，迁移、存活或分化)水平。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体在存在配体而不是不存在配体的情况下抑制细胞迁移、细胞存活或细胞分化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的活性(例如，迁移、存活或分化)水平降低了至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，并且如果与对照值相比，用抗TREM2抗体但不用TREM2配体处理的样品中的活性水平没有显著降低(例如，与对照值相比，降低不超过10％或不超过5％)，那么抗TREM2抗体在存在而不是不存在配体的情况下抑制细胞迁移、细胞存活或细胞分化。在一些实施方案中，如果与对照值相比，用TREM2配体和抗TREM2抗体处理的样品中的活性(例如，迁移、存活或分化)水平降低了至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，并且如果与对照值相比，用抗TREM2抗体但不用TREM2配体处理的样品中的活性水平没有显著降低(例如，与对照值相比，降低不超过1.5倍或不超过1倍)，那么抗TREM2抗体在存在而不是不存在配体的情况下抑制细胞迁移、细胞存活或细胞分化。在一些实施方案中，对照值是未处理样品(例如，未用TREM2配体或抗TREM2抗体处理的样品)中的活性(例如，迁移、存活或分化)水平。
在一些实施方案中，使用趋化性测定来测量细胞迁移。趋化性测定在本领域是已知的。在一些实施方案中，对包含内源性地表达TREM2的细胞(诸如人巨噬细胞)的样品进行细胞迁移测定(例如，趋化性测定)。在一些实施方案中，对包含已工程改造以表达TREM2的细胞的样品进行细胞迁移测定(例如，趋化性测定)。在一些实施方案中，如下文实施例部分中所述，使用人巨噬细胞趋化性测定来测量细胞迁移。
在一些实施方案中，使用细胞活力测定来测量细胞存活。细胞活力测定在本领域是已知的。在一些实施方案中，对包含内源性地表达TREM2的细胞(诸如人巨噬细胞)的样品进行细胞存活测定(例如，细胞活力测定)。在一些实施方案中，对包含已工程改造以表达TREM2的细胞的样品进行细胞存活测定(例如，细胞活力测定)。在一些实施方案中，如下文实施例部分中所述，使用人巨噬细胞活力测定来测量细胞存活。
在一些实施方案中，通过评估内源性地表达TREM2的细胞分化的能力来测量细胞分化。例如，在一些实施方案中，通过评估巨噬细胞从单核细胞分化的能力来测量细胞分化，例如，如下文实施例部分中所描述。
在一些实施方案中，在体内测量小胶质细胞的活化。在一些实施方案中，使用TSPO-PET成像测量小胶质细胞活化。TSPO-PET成像方法在本领域是已知的。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强小胶质细胞功能而不增加神经炎症。神经炎症的水平可以通过测量细胞因子(例如，炎性细胞因子)的水平来确定，所述细胞因子诸如但不限于TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-1ra、TGFβ、IL-15或IFN-γ。在一些实施方案中，使用免疫测定来测量细胞因子水平，所述免疫测定例如，酶免疫测定(EIA)、酶倍增免疫测定(EMIA)、酶联免疫吸附测定(ELISA)、微粒酶免疫测定(MEIA)、免疫组织化学(IHC)、免疫细胞化学、毛细管电泳免疫测定(CEIA)、放射免疫测定(RIA)、免疫荧光、化学发光免疫测定(CL)或电化学发光免疫测定(ECL)。
TREM2配体
在一些实施方案中，TREM2配体是如本文所述的脂质配体，例如，如下文实施例4中所述。在一些实施方案中，TREM2配体选自由以下组成的组：1-棕榈酰基-2-(5’-氧代-戊酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(POVPC)、2-花生四烯酸甘油酯(2-AG)、7-酮胆固醇(7-KC)、24(S)羟基胆固醇(24OHC)、25(S)羟基胆固醇(25OHC)、27-羟基胆固醇(27OHC)、酰基肉碱(AC)、烷基酰基甘油磷酸胆碱(PAF)、α-半乳糖基神经酰胺(KRN7000)、双(单酰基甘油)磷酸酯(BMP)、心磷脂(CL)、神经酰胺、神经酰胺-1-磷酸酯(C1P)、胆固醇酯(CE)、胆固醇磷酸酯(CP)、二酰基甘油34:1(DG 34:1)、二酰基甘油38:4(DG38:4)、二酰基甘油焦磷酸盐(DGPP)、二氢神经酰胺(DhCer)、二氢鞘磷脂(DhSM)、醚磷脂酰胆碱(PCe)、游离胆固醇(FC)、半乳糖基神经酰胺(GalCer)、半乳糖基鞘氨醇(GalSo)、神经节苷脂GM1、神经节苷脂GM3、葡糖基鞘氨醇(GlcSo)、汉克平衡盐溶液(HBSS)、Kdo2-脂质A(KLA)、乳糖基神经酰胺(LacCer)、溶血烷基酰基甘油磷酸胆碱(LPAF)、溶血磷脂酸(LPA)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰甘油(LPG)、溶血磷脂酰肌醇(LPI)、溶血鞘磷脂(LSM)、溶血磷脂酰丝氨酸(LPS)、N-酰基-磷脂酰乙醇胺(NAPE)、N-酰基-丝氨酸(NSer)、氧化磷脂酰胆碱(oxPC)、棕榈酸-9-羟基-硬脂酸(PAHSA)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰乙醇(PEtOH)、磷脂酸(PA)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、二氢神经鞘氨醇、二氢神经鞘氨醇-1-磷酸酯(Sa1P)、鞘磷脂(SM)、鞘氨醇、鞘氨醇-1-磷酸酯(So1P)和硫苷脂。
在一些实施方案中，如本文所述的抗TREM2抗体与一种或多种脂质配体(例如，如本文所述的脂质配体)相互作用以调节TREM2活性。在一些实施方案中，如本文所述的抗TREM2抗体与一种或多种脂质配体相互作用以调节涉及与TREM2/DAP12信号传导复合物相互作用的激酶的TREM2信号传导途径，所述激酶诸如但不限于Syk、ZAP70、PI3K、Erk、AKT或GSK3b。在一些实施方案中，抗TREM2抗体与脂质配体相互作用以活化Syk、ZAP70、PI3K、Erk、AKT或GSK3b。在一些实施方案中，抗TREM2抗体对信号传导途径(例如，Syk、ZAP70、PI3K、Erk、AKT或GSK3b)的活化表现出与脂质配体的相加作用。在一些实施方案中，抗TREM2抗体对p-Syk的活化表现出与脂质配体的相加作用。在一些实施方案中，抗TREM2抗体对信号传导途径(例如，Syk、ZAP70、PI3K、Erk、AKT或GSK3b)的脂质配体活化表现出阻断作用。在一些实施方案中，抗TREM2抗体对p-Syk的脂质配体活化表现出阻断作用。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体对TREM2信号传导途径组分(例如，p-Syk)的活化表现出与脂质配体的相加作用，并且识别与抗体克隆RS9.F6、22B8.B1、3D3.A1、42E8.H1、43E9.H1、21D6.G2、59C6.F1、53H11.D3、60A4.B1、26E2.A3、54C2.A1、44E2.H1、22G9.D1、49H11.B1、14D5.F1、26D11.B1、52H9.D1或7B10.A2所识别的表位相同或基本上相同的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体对TREM2信号传导途径组分(例如，p-Syk)的活化表现出与脂质配体的阻断作用，并且识别与抗体克隆RS9.F10、13B11.A1、21D4.D1、30A8.A1、57D7.A1、24B4.A1、39H10.A1、55B9.A1、14H11.B1、40H3.A4、30F2.A1、51D4.A1、26D2.D1、21D11.B1、44E3.B1、26D5.A1、38E9.E5、RS9.E2或2G4.B1所识别的表位相同或基本上相同的表位。
抗TREM2抗体的结合特征
在一些实施方案中，与如本文所述的TREM2蛋白特异性结合的抗体结合在细胞(例如，内源性地表达TREM2的原代细胞或细胞系，诸如人巨噬细胞，或已工程改造以表达TREM2的原代细胞或细胞系，例如，如以下实施例部分所述)上表达的TREM2。在一些实施方案中，与如本文所述的TREM2蛋白特异性结合的抗体结合纯化或重组的TREM2蛋白或包含TREM2或其部分的嵌合蛋白(例如，包含TREM2的Fc融合蛋白或包含TREM2的胞外结构域的Fc融合蛋白)。
在一些实施方案中，与人TREM2蛋白特异性结合的抗体表现出与另一物种的一种或多种其他TREM2蛋白的交叉反应性。在一些实施方案中，与人TREM2蛋白特异性结合的抗体表现出与小鼠TREM2蛋白的交叉反应性。在一些实施方案中，与人TREM2蛋白特异性结合的抗体表现出与食蟹猴(“cyno”)TREM2蛋白的交叉反应性。在一些实施方案中，与人TREM2蛋白特异性结合的抗体表现出与大鼠TREM2蛋白的交叉反应性。在一些实施方案中，与人TREM2蛋白特异性结合的抗体表现出与小鼠TREM2、cyno TREM2和大鼠TREM2中的一种、两种或全部三种的交叉反应性。在一些实施方案中，抗TREM2抗体表现出与人TREM2、cyno TREM2和小鼠TREM2的交叉反应性。
用于分析结合亲和力、结合动力学和交叉反应性的方法在本领域是已知的。这些方法包括但不限于固相结合测定(例如，ELISA测定)、免疫沉淀、表面等离子体共振(例如，BiacoreTM(GE Healthcare,Piscataway,NJ))、动力学排除测定(例如，
Figure BDA0002467016930000661
)、流式细胞术、荧光激活细胞分选(FACS)、BioLayer干涉法(例如，OctetTM(FortéBio,Inc.,MenloPark,CA))和蛋白质印迹分析。在一些实施方案中，使用ELISA确定结合亲和力和/或交叉反应性。用于执行ELISA测定的方法在本领域是已知的并且在以下实施例部分中另有描述。在一些实施方案中，使用表面等离子体共振(SPR)确定结合亲和力、结合动力学和/或交叉反应性。在一些实施方案中，使用动力学排除测定来确定结合亲和力、结合动力学和/或交叉反应性。在一些实施方案中，使用BioLayer干涉测定来确定结合亲和力、结合动力学和/或交叉反应性。
抗TREM2抗体识别的表位
在一些实施方案中，抗TREM2抗体识别人TREM2的与如本文所述的抗体克隆所识别的表位相同或基本上相同的表位。如本文所用，如关于如本文所述的抗体克隆所识别的表位所使用的术语“基本上相同”是指抗TREM2抗体识别的表位与如本文所述的抗体克隆所识别的表位相同、处于其之内，或几乎相同(例如，与其具有至少90％序列同一性，或相对于所述表位具有一个、两个或三个氨基酸取代，例如保守取代)，或与其具有显著重叠(例如，与其至少50％、60％、70％、80％、90％或95％重叠)。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体识别人TREM2的与抗体克隆所识别的表位相同或基本上相同的表位，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10.RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体识别人TREM2的与抗体克隆所识别的表位相同的表位，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体识别人TREM2的处于抗体克隆所识别的表位之内的表位，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体识别人TREM2的与抗体克隆所识别的表位具有至少90％同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％)的表位，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体识别人TREM2的相对于抗体克隆所识别的表位具有一个、两个或三个氨基酸取代(例如，保守取代)的表位，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体识别人TREM2的与抗体克隆所识别的表位显著重叠(例如，具有至少50％、60％、70％、80％、90％或95％重叠)的表位，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体降低sTREM2的水平并识别与抗体克隆42E8.H1所识别的表位相同或基本上相同的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体降低sTREM2的水平并识别人TREM2的与抗体克隆42E8.H1所识别的表位相同的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体降低sTREM2的水平并识别人TREM2的处于抗体克隆42E8.H1所识别的表位之内的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体降低sTREM2的水平并识别人TREM2的与抗体克隆42E8.H1所识别的表位具有至少90％同一性的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体降低sTREM2的水平并识别人TREM2的相对于抗体克隆42E8.H1所识别的表位具有一个、两个或三个氨基酸取代(例如，保守取代)的表位。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体增加sTREM2的水平并识别与抗体克隆21D4.D1所识别的表位相同或基本上相同的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增加sTREM2的水平并识别人TREM2的与抗体克隆21D4.D1所识别的表位相同的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增加sTREM2的水平并识别人TREM2的处于抗体克隆21D4.D1所识别的表位之内的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增加sTREM2的水平并识别人TREM2的与抗体克隆21D4.D1所识别的表位具有至少90％同一性的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增加sTREM2的水平并识别人TREM2的相对于抗体克隆21D4.D1所识别的表位具有一个、两个或三个氨基酸取代(例如，保守取代)的表位。
在一些实施方案中，抗TREM抗体增强TREM2活性(例如，诱导激酶磷酸化，增强吞噬作用，和/或增强细胞迁移、分化或存活)，并识别与抗体克隆2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14H11.A1、21D6.G2、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26E2.A3、30A8.A1、38E9.E5、39H10.A1、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、49H11.B1、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6或RS9.F10所识别的表位相同或基本上相同的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强TREM2活性并识别人TREM2的与抗体克隆所识别的表位相同的表位，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14H11.A1、21D6.G2、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26E2.A3、30A8.A1、38E9.E5、39H10.A1、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、49H11.B1、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6和RS9.F10。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强TREM2活性并识别人TREM2的处于抗体克隆所识别的表位之内的表位，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14H11.A1、21D6.G2、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26E2.A3、30A8.A1、38E9.E5、39H10.A1、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、49H11.B1、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6和RS9.F10。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强TREM2活性并识别人TREM2的与抗体克隆所识别的表位具有至少90％同一性的表位，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14H11.A1、21D6.G2、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26E2.A3、30A8.A1、38E9.E5、39H10.A1、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、49H11.B1、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6和RS9.F10。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强TREM2活性并识别人TREM2的相对于抗体克隆所识别的表位具有一个、两个或三个氨基酸取代(例如，保守取代)的表位，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14H11.A1、21D6.G2、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26E2.A3、30A8.A1、38E9.E5、39H10.A1、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、49H11.B1、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6和RS9.F10。
在一些实施方案中，抗TREM抗体抑制TREM2活性(例如，抑制激酶磷酸化，抑制吞噬作用，和/或抑制细胞迁移、分化或存活)，并识别与抗体克隆21D4.D1或21D11所识别的表位相同或基本上相同的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制TREM2活性并识别人TREM2的与抗体克隆21D4.D1或21D11所识别的表位相同的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制TREM2活性并识别人TREM2的处于抗体克隆21D4.D1或21D11所识别的表位之内的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制TREM2活性并识别人TREM2的与抗体克隆21D4.D1或21D11所识别的表位具有至少90％同一性的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制TREM2活性并识别人TREM2的相对于抗体克隆21D4.D1或21D11所识别的表位具有一个、两个或三个氨基酸取代(例如，保守取代)的表位。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强由配体诱导的TREM2活性(例如，诱导激酶磷酸化，增强吞噬作用，和/或增强细胞迁移、分化或存活)，并识别与抗体克隆3D3.A1、8A11.B1、14D5.F1、19F10.F3、21D6.G2、22B8.B1、22G9.D1、26D11.B1、26E.2.A3、30A8.A1、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、49H11.B1、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.F6或RS9.F10所识别的表位相同或基本上相同的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强由配体诱导的TREM2活性并识别人TREM2的与抗体克隆所识别的表位相同的表位，所述抗体克隆选自由以下组成的组：3D3.A1、8A11.B1、14D5.F1、19F10.F3、21D6.G2、22B8.B1、22G9.D1、26D11.B1、26E.2.A3、30A8.A1、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、49H11.B1、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.F6和RS9.F10。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强由配体诱导的TREM2活性并识别人TREM2的处于抗体克隆所识别的表位之内的表位，所述抗体克隆选自由以下组成的组：3D3.A1、8A11.B1、14D5.F1、19F10.F3、21D6.G2、22B8.B1、22G9.D1、26D11.B1、26E.2.A3、30A8.A1、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、49H11.B1、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.F6和RS9.F10。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强由配体诱导的TREM2活性并识别人TREM2的与抗体克隆所识别的表位具有至少90％同一性的表位，所述抗体克隆选自由以下组成的组：3D3.A1、8A11.B1、14D5.F1、19F10.F3、21D6.G2、22B8.B1、22G9.D1、26D11.B1、26E.2.A3、30A8.A1、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、49H11.B1、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.F6和RS9.F10。在一些实施方案中，抗TREM2抗体增强由配体诱导的TREM2活性并识别人TREM2的相对于抗体克隆所识别的表位具有一个、两个或三个氨基酸取代(例如，保守取代)的表位，所述抗体克隆选自由以下组成的组：3D3.A1、8A11.B1、14D5.F1、19F10.F3、21D6.G2、22B8.B1、22G9.D1、26D11.B1、26E.2.A3、30A8.A1、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、49H11.B1、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.F6和RS9.F10。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制由配体诱导的TREM2活性(例如，诱导激酶磷酸化，增强吞噬作用，和/或增强细胞迁移、分化或存活)，并识别与抗体克隆2G4.B1、13B11.A、14H11.A1、21D4.D1、21D11.B1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、44E3.B1、51D4.A1、55B9.A1、57D7.A1或RS9.E2所识别的表位相同或基本上相同的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制由配体诱导的TREM2活性并识别人TREM2的与抗体克隆所识别的表位相同的表位，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、13B11.A、14H11.A1、21D4.D1、21D11.B1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、44E3.B1、51D4.A1、55B9.A1、57D7.A1和RS9.E2。在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制由配体诱导的TREM2活性并识别人TREM2的处于抗体克隆所识别的表位之内的表位，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、13B11.A、14H11.A1、21D4.D1、21D11.B1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、44E3.B1、51D4.A1、55B9.A1、57D7.A1和RS9.E2。在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制由配体诱导的TREM2活性并识别人TREM2的与抗体克隆所识别的表位具有至少90％同一性的表位，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、13B11.A、14H11.A1、21D4.D1、21D11.B1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、44E3.B1、51D4.A1、55B9.A1、57D7.A1和RS9.E2。在一些实施方案中，抗TREM2抗体抑制由配体诱导的TREM2活性并识别人TREM2的相对于抗体克隆所识别的表位具有一个、两个或三个氨基酸取代(例如，保守取代)的表位，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、13B11.A、14H11.A1、21D4.D1、21D11.B1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、44E3.B1、51D4.A1、55B9.A1、57D7.A1和RS9.E2。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体识别人TREM2的包含SEQ ID NO:96的残基24-43、44-58、64-78、89-103、94-108、124-153、140-144或159-174，处于所述残基之内或由其组成的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体识别包含SEQ ID NO:96的残基24-43、处于所述残基之内或由其组成的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体识别人TREM2的包含SEQ IDNO:96的残基44-58、处于所述残基之内或由其组成的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体识别人TREM2的包含SEQ ID NO:96的残基64-78、处于所述残基之内或由其组成的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体识别人TREM2的包含SEQ ID NO:96的残基89-103、处于所述残基之内或由其组成的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体识别人TREM2的包含SEQID NO:96的残基94-108、处于所述残基之内或由其组成的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体识别人TREM2的包含SEQ ID NO:96的残基124-153、处于所述残基之内或由其组成的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体识别人TREM2的包含SEQ ID NO:96的残基140-148、处于所述残基之内或由其组成的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体识别人TREM2的包含SEQ ID NO:96的残基140-144、处于所述残基之内或由其组成的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体识别人TREM2的包含SEQ ID NO:96的残基140-144、处于所述残基之内或由其组成的表位。在一些实施方案中，抗TREM2抗体识别人TREM2的包含SEQ ID NO:96的残基159-174、处于所述残基之内或由其组成的表位。
在一些实施方案中，识别人TREM2的包含SEQ ID NO:96的残基140-148、处于所述残基之内或由其组成的表位(例如，识别人TREM2的包含SEQ ID NO:96的残基140-144、处于所述残基之内或由其组成的表位)的抗TREM2抗体与残基Asp140、Leu141、Trp142、Phe143和Pro144中的一个或多个直接接触。在一些实施方案中，抗TREM2抗体与残基Trp142直接接触。在一些实施方案中，抗TREM2抗体与残基Asp140、Leu141、Trp142、Phe143和Pro144中的每一个直接接触。
抗TREM2抗体序列
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含本文所述抗体的一个或多个互补决定区(CDR)、重链可变区和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含本文所述抗体的一个或多个CDR、重链可变区和/或轻链可变区序列，并且还包含如本文所述的一种或多种功能特征(例如，改变sTREM2的水平和/或调节一种或多种TREM2活性)。
CDR序列
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含与抗体克隆的CDR具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的一个或多个互补决定区(CDR)，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、24G7、26D2、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10；或包含相对于抗体克隆的CDR具有最多至两个氨基酸取代(即，零个、一个或两个氨基酸取代)的一个或多个CDR，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、24G7、26D2、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含与抗体克隆的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3相同的重链CDR1(CDR-H1)、重链CDR2(CDR-H2)、重链CDR3(CDR-H3)、轻链CDR1(CDR-L1)、轻链CDR2(CDR-L2)和轻链CDR3(CDR-L3)中的一个或多个，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、24G7、26D2、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含抗体克隆的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的两个、三个、四个、五个或全部六个，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、24G7、26D2、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含抗体克隆的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、24G7、26D2、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含抗体克隆的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、24G7、26D2、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含一个或多个CDR，所述CDR选自由以下组成的组：
(a)重链CDR1序列，其与SEQ ID NO:8、36、39、45、51、57、62、68、74、81、85、307或315中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:8、36、39、45、51、57、62、68、74、81、85、307或315中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；
(b)重链CDR2序列，其与SEQ ID NO:9、37、40、46、52、58、63、69、75、79、82、86、308或316中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:9、37、40、46、52、58、63、69、75、79、82、86、308或316中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；
(c)重链CDR3序列，其与SEQ ID NO:10、41、47、53、59、64、70、76、83、87、309或317中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:10、41、47、53、59、64、70、76、83、87、309或317中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；
(d)轻链CDR1序列，其与SEQ ID NO:11、42、48、54、60、65、71、77、88或311中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:11、42、48、54、60、65、71、77、88或311中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；
(e)轻链CDR2序列，其与SEQ ID NO:12、38、43、49、55、66、72、312或319中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:12、38、43、49、55、66、72、312或319中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；以及
(f)轻链CDR3序列，其与SEQ ID NO:13、44、50、56、61、67、73、78、80、84、89或313中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:13、44、50、56、61、67、73、78、80、84、89或313中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。在一些实施方案中，具有最多至两个氨基酸取代的CDR相对于参考序列具有一个氨基酸取代。在一些实施方案中，具有最多至两个氨基酸取代的CDR相对于参考序列具有两个氨基酸取代。在一些实施方案中，最多至两个氨基酸取代是保守取代。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含一个或多个CDR，所述CDR选自由以下组成的组：
(a)重链CDR1序列，其包含SEQ ID NO:8、36、39、45、51、57、62、68、74、81、85、307或315中任一个的氨基酸序列；
(b)重链CDR2序列，其包含SEQ ID NO:9、37、40、46、52、58、63、69、75、79、82、86、308或316中任一个的氨基酸序列；
(c)重链CDR3序列，其包含SEQ ID NO:10、41、47、53、59、64、70、76、83、87、309或317中任一个的氨基酸序列；
(d)轻链CDR1序列，其包含SEQ ID NO:11、42、48、54、60、65、71、77、88或311中任一个的氨基酸序列；
(e)轻链CDR2序列，其包含SEQ ID NO:12、38、43、49、55、66、72、312或319中任一个的氨基酸序列；以及
(f)轻链CDR3序列，其包含SEQ ID NO:13、44、50、56、61、67、73、78、80、84或89中任一个的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含为一个或多个共有序列的变体的一个或多个序列。作为非限制性实例，可以通过比对来自相同(或相似)生殖系的抗体的重链或轻链序列(例如，CDR)来鉴定共有序列。在一些实施方案中，共有序列可由抗体产生，所述抗体含有具有相同(或相似)长度和/或具有至少一个高度相似的CDR(例如，高度相似的CDR3)的序列。在一些实施方案中，可对这些抗体中的此类序列进行比对和比较，以鉴定保守的氨基酸或基序(即，其中序列的改变可改变蛋白质功能)和/或序列发生变异的区域(即，其中序列的变异不太可能显著影响蛋白质功能)。可替代地，可以通过对与相同或相似(例如，重叠)表位结合的抗体的重链或轻链序列(例如，CDR)进行比对，以确定保守的氨基酸或基序(即，其中序列的改变可改变蛋白质功能)以及其中序列的比对中发生变异的区域(即，其中序列的变异不太可能显著影响蛋白质功能)来鉴定共有序列。在一些实施方案中，可以针对识别与如本文所公开的抗TREM2抗体(例如，3D3.A1、7B10.A2、21D4.D1、21D11、24B4.A1、26D2.D1、26E2.A3、40H3.A4、42E8.H1、49H11.B1、51D4、54C2.A1、57D7.A1、RS9.F6或RS9.F10)相同或相似的表位的抗体鉴定一个或多个共有序列。示例性共有序列包括SEQ IDNO:320-332。在SEQ ID NO:320-332的共有序列中，大写字母代表在比对序列(例如，比对的CDR序列)间绝对保守的氨基酸残基，而“X”代表在比对序列间不绝对保守的氨基酸残基。应当认识到，当选择氨基酸以在由“X”标记的位置处插入时，在一些实施方案中，所述氨基酸选自在比对序列的对应位置处发现的那些氨基酸。
在一些实施方案中，抗体包含重链CDR1(CDR-H1)共有序列，所述共有序列包含式GX2X3X4X5X6X7X8X9X10X11(I)(SEQ ID NO:320)，其中X2为Y或F；X3为T、N或S；X4为F、L或I；X5为T、S或K；X6为D、S或E；X7为D或不存在；X8为H、Y或T；X9为A、N、G、V、W、T或Y；X10为M、I或W；并且X11为H、Q或N。在一些实施方案中，CDR-H1共有序列包含序列GYTFTSYWMH(SEQ ID NO:36)、GYTFTSYWIQ(SEQ ID NO:39)、GYTFTDHAMH(SEQ ID NO:45)、GYTFTSYVMH(SEQ ID NO:51)、GYTLSEYTMH(SEQ ID NO:62)、GFNIKDTYMH(SEQ ID NO:68)、GYSITSDYAWN(SEQ ID NO:74)、GYTFTDYNMH(SEQ ID NO:307)或GYTFTDYGMH(SEQ ID NO:315)。
在一些实施方案中，式I的氨基酸进一步定义如下：X2为Y；X3为T或S；X5为T或S；X8为H或Y；并且X9为A、N、G、V、W或T。在一些实施方案中，X7不存在。在一些实施方案中，X10为W并且X11为N。
在一些实施方案中，式I的氨基酸进一步定义如下：X3为T或N；X7不存在；X10为M或I，并且X11为H或Q。
在一些实施方案中，抗体包含CDR-H1共有序列，所述共有序列包含式GYX3X4X5X6X7X8X9X10X11(II)(SEQ ID NO:321)，其中X3为T或S；X4为F、L或I；X5为T或S；X6为D、S或E；X7为D或不存在；X8为H或Y；X9为A、N、G、V、W、T或A；X10为M、I或W；并且X11为H、Q或N。
在一些实施方案中，抗体包含CDR-H1共有序列，所述共有序列包含式GX2X3X4X5X6X8X9X10X11(III)(SEQ ID NO:322)，其中X2为Y或F；X3为T或N；X4为F、L或I；X5为T、S或K；X6为D、S或E；X8为H、Y或T；X9为A、N、G、V、W、T、Y或A；X10为M或I；并且X11为H或Q。
在一些实施方案中，抗体包含CDR-H1共有序列，所述共有序列包含式GYTX4X5X6X8X9X10X11(IV)(SEQ ID NO:323)，其中X4为F或L；X5为T或S；X6为D、S或E；X8为H、Y；X9为A、N、G、V、W、T；X10为M或I；并且X11为H或Q。
在一些实施方案中，在式I、II、III或IV中任一个的CDR-H1共有序列中，X4为F。在一些实施方案中，在式I、II、III或IV中任一个的CDR-H1共有序列中，X5为T。在一些实施方案中，在式I、II、III或IV中任一个的CDR-H1共有序列中，X4和X5分别为F和T。在一些实施方案中，在式I、II、III或IV中任一个的CDR-H1共有序列中，X6为D或S。在一些实施方案中，在式I、II、III或IV中任一个的CDR-H1共有序列中，X8为Y。在一些实施方案中，在式I、II、III或IV中任一个的CDR-H1共有序列中，X10为M。在一些实施方案中，在式I、II、III或IV中任一个的CDR-H1共有序列中，X11为H。在一些实施方案中，在式I、II、III或IV中任一个的CDR-H1共有序列中，X10和X11分别为M和H。在一些实施方案中，在式I、II、III或IV中任一个的CDR-H1共有序列中，X10和X11分别为I和Q。
在一些实施方案中，抗体包含重链CDR2(CDR-H2)共有序列，所述共有序列包含式X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10YX12X13X14X15X16X17(V)(SEQ ID NO:324)，其中X1为D、V、Y、R、G或T；X2为I、S或V；X3为L、S、N、D、I或Y；X4为P、T或不存在；X5为S、Y、N、T、A、G或F；X6为I、S、N、T或D；X7为G或D；X8为G、D、N、R或S；X9为R、T或A；X10为I、G、S、K、T、N或R；X12为G、N、D或T；X13为V、Q、E或P；X14为K或S；X15为F、Y或L；X16为K、R、Q或不存在；并且X17为G、T、D、S或不存在。在一些实施方案中，CDR-H1共有序列包含序列RSDPTTGGTNYNEKFKT(SEQ ID NO:37)、TIYPGDGDARYTQKFKG(SEQ ID NO:40)、VISTYSGDTGYNQKFKG(SEQ ID NO:46)、YINPYTDGTKYNEKFKG(SEQ ID NO:52)、DILPSIGGRIYGVKF(SEQ ID NO:58)、GVIPNSGGTSYNQKFRD(SEQ ID NO:63)、RIDPANGNTKYDPKFQG(SEQ ID NO:69)、YINYSGRTIYNPSLKS(SEQ ID NO:75)、YISFSGSTSYNPSLKS(SEQ ID NO:79)、YINPNNGGTTYNQKFKG(SEQ ID NO:308)或VISTYNGNTSYNQKYKG(SEQ ID NO:316)。
在一些实施方案中，式V的氨基酸进一步定义如下：X1为V、Y、R、G或T；X3为S、N、D、I或Y；X5为Y、N、T、A、G或F；X6为S、N、T或D；X9为T或A；X12为N、D或T；X13为Q、E或P；X16为K、R或Q；X17为G、T、D或S。在一些实施方案中，式V的氨基酸进一步定义如下：X4为P或T；X5为Y、N、T、A或G；X8为G、D或N；X10为G、S、K、T、N或R；X14为K；X15为F或Y；并且X17为G、T或D。
在一些实施方案中，抗体包含CDR-H2共有序列，所述共有序列包含式X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10YX12X13X14X15X16X17(VI)(SEQ ID NO:325)，其中X1为V、Y、R、G或T；X2为I、S或V；X3为S、N、D、I或Y；X4为P、T或不存在；X5为Y、N、T、A、G或F；X6为S、N、T或D；X7为G或D；X8为G、D、N、R或S；X9为T或A；X10为I、G、S、K、T、N或R；X12为N、D或T；X13为Q、E或P；X14为K或S；X15为F、Y或L；X16为K、R或Q；并且X17为G、T、D或S。
在一些实施方案中，抗体包含CDR-H2共有序列，所述共有序列包含式X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10YX12X13KX15X16X17(VII)(SEQ ID NO:326)，其中X1为V、Y、R、G或T；X2为I、S或V；X3为S、N、D、I或Y；X4为P或T；X5为Y、N、T、A或G；X6为S、N、T或D；X7为G或D；X8为G、D或N；X9为T或A；X10为G、S、K、T、N或R；X12为N、D或T；X13为Q、E或P；X15为F或Y；X16为K、R或Q；并且X17为G、T或D。
在一些实施方案中，抗体包含重链CDR3(CDR-H3)共有序列，所述共有序列包含式ARX3X4X5X6X7X8X9X10YAX13DY(VIII)(SEQ ID NO:327)，其中X3为G或N；X4为D或G；X5为D或I；X6为S或T；X7为Y或T；X8为R或A；X9为R或G；X10为G或Y；并且X13为L或M。在一些实施方案中，CDR-H3共有序列包含序列ARNGITTAGYYAMDY(SEQ ID NO:41)或ARGDDSYRRGYALDY(SEQ ID NO:64)。
在一些实施方案中，抗体包含轻链CDR1(CDR-L1)共有序列，所述共有序列包含式X1SSX4SLX7X8X9X10X11X12X13X14X15LX17(IX)(SEQ ID NO:328)，其中X1为R或K；X4为Q或K；X7为V或L；X8为H、D或Y；X9为I、N或S；X10为S或不存在；X11为D或N；X12为G或Q；X13为N、I或K；X14为T或S；X15为Y或F；并且X17为Q、H、Y、N或A。在一些实施方案中，CDR-L1共有序列包含序列RSSQSLVHNNGNTFLH(SEQ ID NO:11)、KSSQSLLDSDGKTYLN(SEQ ID NO:48)、RSSQSLVHINGNTYLQ(SEQ ID NO:60)、KSSQSLLYSSNQKSYLA(SEQ ID NO:65)、RSSKSLLHSNGITYLY(SEQ ID NO:71)或RSSQSLVHINGNTYLH(SEQ ID NO:77)。
在一些实施方案中，式IX的X4为Q。在一些实施方案中，式IX的X8为H。在一些实施方案中，式IX的X9为I或S。在一些实施方案中，式IX的X10不存在。在一些实施方案中，式IX的X11为N。在一些实施方案中，式IX的X12为G。在一些实施方案中，式IX的X13为N或K。在一些实施方案中，式IX的X14为T。在一些实施方案中，式IX的X15为Y。
在一些实施方案中，抗体包含CDR-L1共有序列，所述共有序列包含式X1ASX4X5IX7X8X9LX11(X)(SEQ ID NO:329)，其中X1为R、K或S；X4为E或Q；X5为N、D或G；X7为Y或S；X8为S或N；X9为N、R或Y；并且X11为A或N。在一些实施方案中，CDR-L1共有序列包含序列RASENIYSNLA(SEQ ID NO:42)、KASEDIYNRLA(SEQ ID NO:54)或SASQGISNYLN(SEQ ID NO:311)。
在一些实施方案中，抗体包含轻链CDR2(CDR-L2)共有序列，所述共有序列包含式X1X2SX4X5X6S(XI)(SEQ ID NO:330)，其中X1为K、Q、Y、V或L；X2为V、M或T；X4为N、K或Y；X5为R或L；并且X6为F、A、H或D。在一些实施方案中，CDR-L2共有序列包含序列KVSNRFS(SEQ ID NO:38)、VVSKLDS(SEQ ID NO:49)、QMSNLAS(SEQ ID NO:72)、YTSNLHS(SEQ ID NO:312)或LVSYLDS(SEQ ID NO:319)。
在一些实施方案中，式XI的X2为V。在一些实施方案中，式XI的X4为N。在一些实施方案中，式XI的X5为R。在一些实施方案中，式XI的X5为L。
在一些实施方案中，抗体包含轻链CDR3(CDR-L3)共有序列，所述共有序列包含式X1X2X3X4X5X6X7X8T(XII)(SEQ ID NO:331)，其中X1为S、W或Q；X2为Q或H；X3为S、T、G、Y或F；X4为T、F、W或S；X5为H、S、G或N；X6为V、A、F、Y、T或L；X7为P、T或L；并且X8为Y、F、P或W。在一些实施方案中，CDR-L2共有序列包含序列SQTTHVPPT(SEQ ID NO:13)、QHFWGTPYT(SEQ ID NO:44)、WQGTHFPYT(SEQ ID NO:50)、QQYWSTPWT(SEQ ID NO:56)、SQSTHVPYT(SEQ ID NO:61)、QQYFSYPPT(SEQ ID NO:67)、SQTTHALFT(SEQ ID NO:78)、SQSTHVTFT(SEQ ID NO:80)或QQYSNLPYT(SEQ ID NO:313)。
在一些实施方案中，式XII的氨基酸进一步定义如下：X1为Q；X3为Y或F；X4为F、W或S；X5为S、G或N；X6为Y、T或L；X7为P；X8为P、Y或W。在一些实施方案中，式XII的X2为Q。在一些实施方案中，式XII的X4为T。在一些实施方案中，X5为H。在一些实施方案中，式XII的氨基酸进一步定义如下：X1为S或W；X2为Q；X3为S、T或G；X4为T；X5为H；X6为V、A或F；X7为P、T或L；并且X8为Y、F或P。在一些实施方案中，式XII的X6为V或F。
在一些实施方案中，抗体包含CDR-L3共有序列，所述共有序列包含式QX2X3X4X5X6PX8T(XIII)(SEQ ID NO:332)，其中X2为Q或H；X3为Y或F；X4为F、W或S；X5为S、G或N；X6为Y、T或L；并且X8为P、Y或W。
可变区序列
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与抗体克隆的重链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与抗体克隆的轻链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与抗体克隆的重链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与抗体克隆的轻链可变区具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的氨基酸序列，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。
在一些实施方案中，抗TREM2包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:6、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、306或314中的任一个具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2包含重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:6、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、306或314中任一个的氨基酸序列。
在一些实施方案中，抗TREM2包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:7、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、310或318中的任一个具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2包含轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:7、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、310或318中任一个的氨基酸序列。
CDR和可变区序列
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)与抗体克隆的重链可变区具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10，并且(ii)包含与抗体克隆的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3相同的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)与抗体克隆的轻链可变区具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10，并且(ii)包含与抗体克隆的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3相同的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含：
(a)重链可变区，所述重链可变区包含氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)与抗体克隆的重链可变区具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10，并且(ii)包含与抗体克隆的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3相同的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及
(b)轻链可变区，所述轻链可变区包含氨基酸序列，所述氨基酸序列(i)与抗体克隆的轻链可变区具有至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10，并且(ii)包含与抗体克隆的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3相同的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体是与如本文所述的抗体(例如，选自由2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10组成的组的抗体克隆)竞争结合的抗体。
RS9.F6和RS.F10
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:36的氨基酸序列的重链CDR1序列、包含SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:37的氨基酸序列的重链CDR2序列，以及包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链CDR1序列、包含SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列，以及包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:36的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:37的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ IDNO:10的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR3序列。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链CDR1序列、包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR2序列，以及包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链CDR1序列、包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链CDR2序列，以及包含SEQID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含分别包含SEQ ID NO:8、9、10、11、12和13的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的重链CDR1序列、包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的重链CDR2序列，以及包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链CDR1序列、包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列，以及包含SEQID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含分别包含SEQ ID NO:36、37、10、11、38和13的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:6或SEQ ID NO:24具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:6具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:24具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:7或SEQ ID NO:35具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:35的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:7具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:35具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:6具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:7具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链可变区，并且还包含有包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:24具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:35具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:24的氨基酸序列的重链可变区，并且还包含有包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:6具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:8、9和10的氨基酸序列的重链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:6具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:11、12和13的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:6具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:8、9和10的氨基酸序列的重链CDR1-3；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:6具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:11、12和13的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:24具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:36、37和10的氨基酸序列的重链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:35具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:11、38和13的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含：重链可变区，所述重链可变区包含与SEQID NO:24具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:36、37和10的氨基酸序列的重链CDR1-3；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQID NO:35具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:11、38和13的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体是与如本文所述的抗体(例如，包含分别包含SEQID NO:8、9、10、11、12和13的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体；包含有包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的重链可变区并且还包含有包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的轻链可变区的抗体；包含分别包含SEQ ID NO:36、37、10、11、38和13的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体；或包含有包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链可变区并且还包含有包含SEQ ID NO:35的氨基酸序列的轻链可变区的抗体)竞争结合的抗体。
21D11
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的重链CDR1序列、包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链CDR2序列，以及包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链CDR1序列、包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的轻链CDR2序列，以及包含SEQID NO:44的氨基酸序列的轻链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含分别包含SEQ ID NO:39、40、41、42、43和44的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:14具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:14的氨基酸序列的重链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:25具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:25的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:14具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:25具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:14的氨基酸序列的重链可变区，并且还包含有包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:14具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:39、40和41的氨基酸序列的重链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:25具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:42、43和44的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:14具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:39、40和41的氨基酸序列的重链CDR1-3；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:25具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:42、43和44的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体是与如本文所述的抗体(例如，包含有分别包含SEQ ID NO:39、40、41、42、43和44的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包含有包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的重链可变区并且还包含有包含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链可变区的抗体)竞争结合的抗体。
21D4.D1
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的重链CDR1序列、包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的重链CDR2序列，以及包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的重链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的轻链CDR1序列、包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的轻链CDR2序列，以及包含SEQID NO:50的氨基酸序列的轻链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含分别包含SEQ ID NO:45、46、47、48、49和50的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:15具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:15的氨基酸序列的重链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:26具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:26的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:15具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:26具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:15的氨基酸序列的重链可变区，并且还包含有包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:15具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:45、46和47的氨基酸序列的重链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:26具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:48、49和50的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:15具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:45、46和47的氨基酸序列的重链CDR1-3；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:26具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:48、49和50的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体是与如本文所述的抗体(例如，包含有分别包含SEQ ID NO:45、46、47、48、49和50的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包含有包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的重链可变区并且还包含有包含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链可变区的抗体)竞争结合的抗体。
26D2
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链CDR1序列、包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链CDR2序列，以及包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的重链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的轻链CDR1序列、包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的轻链CDR2序列，以及包含SEQID NO:56的氨基酸序列的轻链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含分别包含SEQ ID NO:51、52、53、54、55和56的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:16具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:16的氨基酸序列的重链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:27具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:27的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:16具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:27具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:16的氨基酸序列的重链可变区，并且还包含有包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:16具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:51、52和53的氨基酸序列的重链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:27具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:54、55和56的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:16具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:51、52和53的氨基酸序列的重链CDR1-3；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:27具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:54、55和56的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体是与如本文所述的抗体(例如，包含有分别包含SEQ ID NO:51、52、53、54、55和56的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包含有包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的重链可变区并且还包含有包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链可变区的抗体)竞争结合的抗体。
26E2.A3和24B4.A1
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的重链CDR1序列、包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的重链CDR2序列，以及包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的重链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链CDR1序列、包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列，以及包含SEQID NO:61的氨基酸序列的轻链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含分别包含SEQ ID NO:57、58、59、60、38和61的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:17具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:17的氨基酸序列的重链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:28具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:28的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:17具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:28具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:17的氨基酸序列的重链可变区，并且还包含有包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:17具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:57、58和59的氨基酸序列的重链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:28具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:60、38和61的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:17具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:57、58和59的氨基酸序列的重链CDR1-3；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:28具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:60、38和61的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体是与如本文所述的抗体(例如，包含有分别包含SEQ ID NO:57、58、59、60、38和61的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包含有包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链可变区并且还包含有包含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链可变区的抗体)竞争结合的抗体。
3D3.A1
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的重链CDR1序列、包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重链CDR2序列，以及包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的重链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的轻链CDR1序列、包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的轻链CDR2序列，以及包含SEQID NO:67的氨基酸序列的轻链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含分别包含SEQ ID NO:62、63、64、65、66和67的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:18具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:18的氨基酸序列的重链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:29具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:29的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:18具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:29具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:18的氨基酸序列的重链可变区，并且还包含有包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:18具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:62、63和64的氨基酸序列的重链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:29具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:65、66和67的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:18具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:62、63和64的氨基酸序列的重链CDR1-3；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:29具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:65、66和67的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体是与如本文所述的抗体(例如，包含有分别包含SEQ ID NO:62、63、64、65、66和67的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包含有包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链可变区并且还包含有包含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的轻链可变区的抗体)竞争结合的抗体。
40H3.A4
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的重链CDR1序列、包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的重链CDR2序列，以及包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的重链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的轻链CDR1序列、包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的轻链CDR2序列，以及包含SEQID NO:73的氨基酸序列的轻链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含分别包含SEQ ID NO:68、69、70、71、72和73的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:19具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:19的氨基酸序列的重链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:30具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:30的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:19具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:30具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:19的氨基酸序列的重链可变区，并且还包含有包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:19具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:68、69和70的氨基酸序列的重链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:30具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:71、72和73的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:19具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:68、69和70的氨基酸序列的重链CDR1-3；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:30具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:71、72和73的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体是与如本文所述的抗体(例如，包含有分别包含SEQ ID NO:68、69、70、71、72和73的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包含有包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链可变区并且还包含有包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的轻链可变区的抗体)竞争结合的抗体。
42E8.H1
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列的重链CDR1序列、包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链CDR2序列，以及包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链CDR1序列、包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列，以及包含SEQID NO:78的氨基酸序列的轻链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含分别包含SEQ ID NO:74、75、76、77、38和78的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:20具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:20的氨基酸序列的重链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:31具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:31的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:20具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:31具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:20的氨基酸序列的重链可变区，并且还包含有包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:20具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:74、75和76的氨基酸序列的重链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:31具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:77、38和78的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:20具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:74、75和76的氨基酸序列的重链CDR1-3；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:31具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:77、38和78的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体是与如本文所述的抗体(例如，包含有分别包含SEQ ID NO:74、75、76、77、38和78的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包含有包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的重链可变区并且还包含有包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链可变区的抗体)竞争结合的抗体。
49H11.B1
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列的重链CDR1序列、包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的重链CDR2序列，以及包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链CDR1序列、包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列，以及包含SEQID NO:80的氨基酸序列的轻链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含分别包含SEQ ID NO:74、79、76、77、38和80的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:21具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:21的氨基酸序列的重链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:32具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:32的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:21具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:32具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:21的氨基酸序列的重链可变区，并且还包含有包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:21具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:74、79和76的氨基酸序列的重链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:32具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:77、38和80的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:21具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:74、79和76的氨基酸序列的重链CDR1-3；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:32具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:77、38和80的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体是与如本文所述的抗体(例如，包含有分别包含SEQ ID NO:74、79、76、77、38和80的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包含有包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的重链可变区并且还包含有包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的轻链可变区的抗体)竞争结合的抗体。
54C2.A1
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链CDR1序列、包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链CDR2序列，以及包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列的重链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链CDR1序列、包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列，以及包含SEQID NO:84的氨基酸序列的轻链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含分别包含SEQ ID NO:81、82、83、60、38和84的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:22具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:22的氨基酸序列的重链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:33具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:33的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:22具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:33具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:22的氨基酸序列的重链可变区，并且还包含有包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:22具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:81、82和83的氨基酸序列的重链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:33具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:60、38和84的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:22具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:81、82和83的氨基酸序列的重链CDR1-3；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:33具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:60、38和84的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体是与如本文所述的抗体(例如，包含有分别包含SEQ ID NO:81、82、83、60、38和84的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包含有包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链可变区并且还包含有包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的轻链可变区的抗体)竞争结合的抗体。
57D7.A1
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列的重链CDR1序列、包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链CDR2序列，以及包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的轻链CDR1序列、包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列，以及包含SEQID NO:89的氨基酸序列的轻链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含分别包含SEQ ID NO:85、86、87、88、38和89的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:23具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:23的氨基酸序列的重链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:34具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:34的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:23具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:34具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:23的氨基酸序列的重链可变区，并且还包含有包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:23具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:85、86和87的氨基酸序列的重链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:34具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:88、38和89的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:23具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:85、86和87的氨基酸序列的重链CDR1-3；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:34具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:88、38和89的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体是与如本文所述的抗体(例如，包含有分别包含SEQ ID NO:85、86、87、88、38和89的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包含有包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变区并且还包含有包含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的轻链可变区的抗体)竞争结合的抗体。
7B10.A2
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:307的氨基酸序列的重链CDR1序列、包含SEQ ID NO:308的氨基酸序列的重链CDR2序列，以及包含SEQ ID NO:309的氨基酸序列的重链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:311的氨基酸序列的轻链CDR1序列、包含SEQ ID NO:312的氨基酸序列的轻链CDR2序列，以及包含SEQ ID NO:313的氨基酸序列的轻链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含分别包含SEQ ID NO:307、308、309、311、312和313的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:306具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:306的氨基酸序列的重链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:310具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:310的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:306具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:310具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:306的氨基酸序列的重链可变区，并且还包含有包含SEQ ID NO:310的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:306具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:307、308和309的氨基酸序列的重链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:310具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:311、312和313的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:306具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:307、308和309的氨基酸序列的重链CDR1-3；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:310具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ IDNO:311、312和313的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体是与如本文所述的抗体(例如，包含有分别包含SEQ ID NO:307、308、309、311、312和313的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包含有包含SEQ ID NO:306的氨基酸序列的重链可变区并且还包含有包含SEQ ID NO:310的氨基酸序列的轻链可变区的抗体)竞争结合的抗体。
51D4
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:315的氨基酸序列的重链CDR1序列、包含SEQ ID NO:316的氨基酸序列的重链CDR2序列，以及包含SEQ ID NO:317的氨基酸序列的重链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的轻链CDR1序列、包含SEQ ID NO:319的氨基酸序列的轻链CDR2序列，以及包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链CDR3序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含分别包含SEQ ID NO:315、316、317、48、319和50的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:314具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:314的氨基酸序列的重链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:318具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:318的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:314具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且还包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:318具有至少90％序列同一性(例如，至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含有包含SEQ IDNO:314的氨基酸序列的重链可变区，并且还包含有包含SEQ ID NO:318的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:314具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:315、316和317的氨基酸序列的重链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:318具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:48、319和50的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:314具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ ID NO:315、316和317的氨基酸序列的重链CDR1-3；并且包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:318具有至少75％序列同一性(例如，至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性)的氨基酸序列，并且包含分别包含SEQ IDNO:48、319和50的氨基酸序列的轻链CDR1-3。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体是与如本文所述的抗体(例如，包含有分别包含SEQ ID NO:315、316、317、48、319和50的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包含有包含SEQ ID NO:314的氨基酸序列的重链可变区并且还包含有包含SEQ ID NO:318的氨基酸序列的轻链可变区的抗体)竞争结合的抗体。
抗体的制备
在一些实施方案中，通过用抗原或抗原的混合物对一只或多只动物(例如，小鼠、兔或大鼠)进行免疫，以诱导抗体应答来制备抗体。在一些实施方案中，抗原或抗原的混合物与佐剂(例如弗氏佐剂)结合施用。初始免疫后，可施用一种或多种抗原的一次或多次后续加强注射，以改善抗体产生。免疫后，收获抗原特异性B细胞，例如从脾和/或淋巴组织中。为了产生单克隆抗体，将B细胞与骨髓瘤细胞融合，随后针对抗原特异性对其进行筛选。制备抗体的方法还在以下实施例部分中描述。
可以从细胞中克隆编码目标抗体的重链和轻链的基因，例如，可以从杂交瘤中克隆编码单克隆抗体的基因，并将其用于产生重组单克隆抗体。编码单克隆抗体的重链和轻链的基因文库也可以由杂交瘤或浆细胞制备。可替代地，可以使用噬菌体或酵母展示技术鉴定特异性结合所选抗原的抗体和Fab片段。也可以将抗体制成双特异性的，即能够识别两种不同的抗原。抗体也可以是异源缀合物(heteroconjugate)，例如两种共价连接的抗体，或免疫毒素。
可以使用任何数量的表达系统产生抗体，包括原核和真核表达系统。在一些实施方案中，表达系统是哺乳动物细胞表达，诸如杂交瘤，或CHO细胞表达系统。许多这样的系统可从商业供应商处广泛获得。在其中抗体包含VH和VL区的实施方案中，VH和VL区可使用单个载体表达，例如在双顺反子表达单元中，或在不同启动子的控制下。在其他实施方案中，可使用独立的载体表达VH和VL区。如本文所述的VH或VL区可任选地在N末端包含甲硫氨酸。
在一些实施方案中，抗体是嵌合抗体。用于制备嵌合抗体的方法在本领域中是已知的。例如，可以制备嵌合抗体，其中将来自一种物种(诸如小鼠)的抗原结合区(重链可变区和轻链可变区)与另一物种(诸如人)的效应子区域(恒定结构域)融合。作为另一个实例，可以制备“类别切换的”嵌合抗体，其中抗体的效应子区域被不同的免疫球蛋白类别或亚类的效应子区域取代。
在一些实施方案中，抗体是人源化抗体。通常，将非人抗体人源化以降低其免疫原性。人源化抗体通常包含非人的一个或多个可变区(例如CDR)或其部分(例如，衍生自小鼠可变区序列)，并且可能还包含一些非人的框架区或其部分，并且还包含衍生自人抗体序列的一个或多个恒定区。用于人源化非人抗体的方法在本领域中是已知的。转基因小鼠或其他生物体诸如其他哺乳动物可以用于表达人源化或人抗体。将抗体人源化的其他方法包括，例如，可变结构域表面重构、CDR移植、移植特异性决定残基(SDR)、定向选择(guidedselection)和框架重排。
作为人源化的替代方案，可以产生完全人抗体。作为一个非限制性实例，可以产生在无内源性免疫球蛋白产生的情况下在免疫之后能够产生人抗体的全谱的转基因动物(例如，小鼠)。例如，已有描述，在嵌合和生殖系突变小鼠中抗体重链连接区(JH)基因的纯合子缺失导致内源性抗体产生的完全抑制。人生殖系免疫球蛋白基因阵列在这种生殖系突变小鼠中的转移将导致在抗原激发后产生人抗体。作为另一个实例，人抗体可以通过基于杂交瘤的方法产生，诸如通过使用原代人B细胞生成产生人单克隆抗体的细胞系。
人抗体也可以使用噬菌体展示或酵母展示技术产生。在噬菌体展示中，将可变重链和可变轻链基因的库扩增并在噬菌体展示载体中表达。在一些实施方案中，抗体文库是由人来源扩增的天然库。在一些实施方案中，抗体文库是通过克隆重链和轻链序列并重组以产生大量具有不同抗原特异性的抗体而制备的合成文库。噬菌体通常展示抗体片段(例如，Fab片段或scFv片段)，然后针对与目标抗原的结合进行筛选。
在一些实施方案中，产生抗体片段(诸如Fab、Fab’、F(ab’)2、scFv、VH或VHH)。已经开发了各种技术用于产生抗体片段。传统上，这些片段是通过完整抗体的蛋白水解消化而衍生的。然而，现在可以使用重组宿主细胞直接产生这些片段。例如，可以从抗体噬菌体文库中分离抗体片段。可替代地，Fab’-SH片段可以直接从大肠杆菌细胞中回收并且以化学方式偶联以形成F(ab’)2片段。根据另一种方法，F(ab’)2片段可以直接从重组宿主细胞培养物中分离。用于产生抗体片段的其他技术对于本领域技术人员将是明显的。
在一些实施方案中，将抗体或抗体片段缀合于另一分子，例如聚乙二醇(聚乙二醇化)或血清白蛋白，以提供延长的体内半衰期。
多特异性抗体
在一些实施方案中，提供了包含如本文所述的抗TREM2抗体(或其抗原结合部分)的多特异性抗体，例如双特异性抗体。多特异性抗体是对至少两个不同位点具有结合特异性的抗体。在一些实施方案中，多特异性抗体(例如，双特异性抗体)对TREM2具有结合特异性，并且对至少一种其他抗原具有结合特异性。在一些实施方案中，多特异性抗体(例如，双特异性抗体)结合两个不同的TREM2表位。在一些实施方案中，多特异性抗体(例如，双特异性抗体)能够诱导TREM2集簇在细胞表面上。用于使用共焦FRET显微术测量受体集簇的例示性方法在Wallrabe等,Biophys.J.,2003,85:559-571中有所描述。
用于制备多特异性抗体的方法包括但不限于在宿主细胞中重组共表达两对重链和轻链、“旋钮入孔”工程改造、分子内三聚化，以及将抗体片段融合至另一抗体的N末端或C末端(例如串联可变结构域)。
核酸、载体和宿主细胞
在一些实施方案中，使用重组方法制备如本文所述的抗TREM2抗体。因此，在一些方面，本公开提供了分离的核酸，其包含编码如本文所述的任何抗TREM2抗体(例如，本文所述的CDR、重链可变区和轻链可变区中的任何一个或多个)的核酸序列；包含所述核酸的载体；以及其中引入核酸的宿主细胞，其用于复制编码抗体的核酸和/或表达抗体。
在一些实施方案中，多核苷酸(例如，分离的多核苷酸)包含编码如本文所述(例如，如在以上标题为“抗TREM2抗体序列”的部分中所述)的抗体或其抗原结合部分的核苷酸序列。在一些实施方案中，多核苷酸包含编码与抗体克隆的序列(例如，CDR、重链、轻链和/或框架区序列)相同的一个或多个氨基酸序列(例如，CDR、重链、轻链和/或框架区)的核苷酸序列，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、8A11.B1、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、19F10.F3、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。在一些实施方案中，如本文所述的多核苷酸可操作地连接于异源核酸，例如异源启动子。
含有编码本公开的抗体的多核苷酸或其片段的合适的载体包括克隆载体和表达载体。虽然所选择的克隆载体可根据意图使用的宿主细胞而变化，但是可用的克隆载体通常具有自我复制的能力，可拥有针对特定限制性内切核酸酶的单一靶标，和/或可携带可用于选择含有载体的克隆的标志物的基因。实例包括质粒和细菌病毒，例如pUC18、pUC19、Bluescript(例如，pBS SK+)以及其衍生物、mpl8、mpl9、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌体DNA，以及穿梭载体诸如pSA3和pAT28。这些和许多其他克隆载体可从商业供应商(诸如BioRad、Strategene和Invitrogen)获得。
表达载体通常是含有本公开的核酸的可复制多核苷酸构建体。表达载体可在宿主细胞中作为游离体或作为染色体DNA的整体部分复制。合适的表达载体包括但不限于质粒、病毒载体(包括腺病毒、腺病毒相关病毒、逆转录病毒)，以及任何其他载体。
用于克隆或表达如本文所述的多核苷酸或载体的合适的宿主细胞包括原核或真核细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是原核细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是人细胞，例如人胚胎肾(HEK)细胞。
在另一方面，提供了制备如本文所述的抗TREM2抗体的方法。在一些实施方案中，所述方法包括在适合抗体表达的条件下培养如本文所述的宿主细胞(例如，表达如本文所述的多核苷酸或载体的宿主细胞)。在一些实施方案中，随后从宿主细胞(或宿主细胞培养基)中回收抗体。
IV.用于血脑屏障(BBB)受体结合的FC多肽修饰
在一些方面，本文提供了能够跨血脑屏障(BBB)转运的抗TREM2抗体。这样的蛋白质包含与BBB受体结合的修饰Fc多肽。BBB受体在BBB内皮以及其他细胞和组织类型上表达。在一些实施方案中，BBB受体是转铁蛋白受体(TfR)。
在各种Fc修饰中指定的氨基酸残基，包括在与BBB受体(例如TfR)结合的修饰Fc多肽中引入的那些氨基酸残基，在本文中使用EU索引编号进行编号。如本文所述，任何Fc多肽，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc多肽，可在一个或多个位置具有修饰，例如氨基酸取代。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含第一Fc多肽和任选地第二Fc多肽，其各自可以独立地被修饰。在一些实施方案中，与没有进行修饰情况下的摄取相比，对第一和/或第二Fc多肽进行的修饰(例如，促进TfR结合的修饰)导致抗体(或其抗原结合部分)的脑部摄取增加至少约2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19倍、20倍或更多。
修饰的(例如，增强异源二聚化和/或BBB受体结合)Fc多肽可以与天然Fc区序列或其片段(例如，长度为至少50个氨基酸或至少100个氨基酸或更大的片段)具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，天然Fc氨基酸序列是SEQ ID NO:98的Fc区序列。在一些实施方案中，修饰Fc多肽与SEQ ID NO:98的氨基酸1-110，或与SEQ ID NO:98的氨基酸111-217，或其片段(例如，长度为至少50个氨基酸或至少100个氨基酸或更大的片段)具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。
在一些实施方案中，修饰的(例如，增强异源二聚化和/或BBB受体结合)Fc多肽包含与天然Fc区氨基酸序列相对应的至少50个氨基酸，或至少60、65、70、75、80、85、90或95或更多个，或至少100个氨基酸，或更多个氨基酸。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含与天然Fc区氨基酸序列(诸如SEQ ID NO:98)相对应的至少25个连续氨基酸，或至少30、35、40或45个连续氨基酸，或50个连续氨基酸，或至少60、65、70、75、80 85、90或95或更多个连续氨基酸，或100或更多个连续氨基酸。
在一些实施方案中，针对BBB受体结合活性进行修饰的结构域是人Ig CH3结构域，诸如IgG1 CH3结构域。CH3结构域可以属于任何IgG亚型，即来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在IgG1抗体的上下文中，CH3结构域是指根据EU编号方案进行编号的从约位置341至约位置447的氨基酸的区段。
在一些实施方案中，针对BBB受体结合活性进行修饰的结构域是人Ig CH2结构域，诸如IgG CH2结构域。CH2结构域可以属于任何IgG亚型，即来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在IgG1抗体的上下文中，CH2结构域是指根据EU编号方案进行编号的从约位置231至约位置340的氨基酸的区段。
在一些实施方案中，修饰的(例如，结合BBB受体的)Fc多肽包含至少一个、两个或三个取代；并且在一些实施方案中，根据EU编号方案，包含处于包括266、267、268、269、270、271、295、297、298和299的氨基酸位置上的至少四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个取代。
在一些实施方案中，修饰的(例如，结合BBB受体的)Fc多肽包含至少一个、两个或三个取代；并且在一些实施方案中，根据EU编号方案，包含处于包括274、276、283、285、286、287、288、289和290的氨基酸位置上的至少四个、五个、六个、七个、八个或九个取代。
在一些实施方案中，修饰的(例如，结合BBB受体的)Fc多肽包含至少一个、两个或三个取代；并且在一些实施方案中，根据EU编号方案，包含处于包括268、269、270、271、272、292、293、294、296和300的氨基酸位置上的至少四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个取代。
在一些实施方案中，修饰的(例如，结合BBB受体的)Fc多肽包含至少一个、两个或三个取代；并且在一些实施方案中，根据EU编号方案，包含处于包括272、274、276、322、324、326、329、330和331的氨基酸位置上的至少四个、五个、六个、七个、八个或九个取代。
在一些实施方案中，修饰的(例如，结合BBB受体的)Fc多肽包含至少一个、两个或三个取代；并且在一些实施方案中，根据EU编号方案，包含处于包括345、346、347、349、437、438、439和440的氨基酸位置上的至少四个、五个、六个或七个取代。
在一些实施方案中，修饰的(例如，结合BBB受体的)Fc多肽包含至少一个、两个或三个取代；并且在一些实施方案中，根据EU编号方案，包含处于氨基酸位置384、386、387、388、389、390、413、416和421上的至少四个、五个、六个、七个、八个或九个取代。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体包含两个Fc多肽，其中一个Fc多肽未被修饰以结合BBB受体(例如，TfR)，并且另一个Fc多肽被修饰以特异性结合BBB受体(例如，TfR)。
FcRn结合位点
在某些方面，修饰的(例如，结合BBB受体的)Fc多肽或不特异性结合BBB受体的Fc多肽还可以包含FcRn结合位点。在一些实施方案中，FcRn结合位点处于Fc多肽或其片段内。
在一些实施方案中，FcRn结合位点包含天然FcRn结合位点。在一些实施方案中，相对于天然FcRn结合位点的氨基酸序列，FcRn结合位点不包含氨基酸变化。在一些实施方案中，天然FcRn结合位点是IgG结合位点，例如人IgG结合位点。在一些实施方案中，FcRn结合位点包含改变FcRn结合的修饰。
在一些实施方案中，一个或多个Fc多肽(例如，第一Fc多肽、第二Fc多肽，或第一和第二Fc多肽)含有影响(例如，增加)FcRn结合的修饰。在一些实施方案中，FcRn结合位点具有被突变(例如被取代)的一个或多个氨基酸残基，其中所述一个或多个突变增加血清半衰期或基本上不降低血清半衰期(即，当在相同条件下测定时，与在突变位置上具有野生型残基的对应物修饰Fc多肽相比，血清半衰期的降低不超过25％)。在一些实施方案中，根据EU编号方案，FcRn结合位点在位置251-256、428和433-436处具有一个或多个被取代的氨基酸残基。
在一些实施方案中，相对于天然人IgG序列，FcRn结合位点处或附近的一个或多个残基突变，以延长修饰多肽的血清半衰期。在一些实施方案中，根据EU编号方案，在位置244-257、279-284、307-317、383-390和428-435中的一个或多个处引入突变，例如取代。在一些实施方案中，根据EU编号方案，在位置251、252、254、255、256、307、308、309、311、312、314、385、386、387、389、428、433、434或436处引入一个或多个突变。在一些实施方案中，在位置252、254和256中的一个、两个或三个中引入突变。在一些实施方案中，突变是M252Y、S254T和T256E。在一些实施方案中，修饰Fc多肽还包含突变M252Y、S254T和T256E。在一些实施方案中，根据EU编号方案，修饰Fc多肽在位置T307、E380和N434中的一个、两个或全部三个处包含突变。在一些实施方案中，突变是T307Q和N434A。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含突变T307A、E380A和N434A。在一些实施方案中，根据EU编号方案，修饰Fc多肽在位置T250和M428处包含突变。在一些实施方案中，Fc多肽包含突变T250Q和/或M428L。在一些实施方案中，根据EU编号方案，修饰Fc多肽在位置M428和N434处包含突变。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含突变M428L和N434S。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含N434S或N434A突变。
结合转铁蛋白受体的Fc多肽
在一些实施方案中，如本文所公开的抗TREM2抗体包含与转铁蛋白受体(TfR)结合并且能够跨血脑屏障(BBB)转运的修饰Fc多肽。在一些实施方案中，特异性结合TfR的修饰Fc多肽在CH3结构域中包含取代。在一些实施方案中，特异性结合TfR的修饰Fc多肽在CH2结构域中包含取代。
在CH3结构域中包含突变的结合TfR的Fc多肽
在一些实施方案中，特异性结合TfR的修饰Fc多肽在CH3结构域中包含取代。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含针对TfR结合活性进行修饰的人Ig CH3结构域，诸如IgGCH3结构域。CH3结构域可以属于任何IgG亚型，即来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在IgG抗体的上下文中，CH3结构域是指根据EU编号方案进行编号的从约位置341至约位置447的氨基酸的区段。
在一些实施方案中，特异性结合TfR的修饰Fc多肽结合TfR的顶端结构域，并且可在不阻断或以其他方式抑制转铁蛋白与TfR的结合的情况下结合TfR。在一些实施方案中，转铁蛋白与TfR的结合基本上不受抑制。在一些实施方案中，转铁蛋白与TfR的结合的抑制小于约50％(例如，小于约45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％或5％)。在一些实施方案中，转铁蛋白与TfR的结合的抑制小于约20％(例如，小于约19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％)。
在一些实施方案中，根据EU编号方案，特异性结合TfR的修饰Fc多肽在位置384、386、387、388、389、390、413、416和421处包含至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个或九个取代。表11和12中示出可在这些位置引入的例示性取代。在一些实施方案中，位置388和/或421处的氨基酸是芳族氨基酸，例如，Trp、Phe或Tyr。在一些实施方案中，位置388处的氨基酸是Trp。在一些实施方案中，位置421处的芳族氨基酸是Trp或Phe。
在一些实施方案中，如下的至少一个位置被取代：位置384处的Leu、Tyr、Met或Val；位置386处的Leu、Thr、His或Pro；位置387处的Val、Pro或酸性氨基酸；位置388处的芳族氨基酸，例如Trp；位置389处的Val、Ser或Ala；位置413处的酸性氨基酸、Ala、Ser、Leu、Thr或Pro；位置416处的Thr或酸性氨基酸；或位置421处的Trp、Tyr、His或Phe。在一些实施方案中，修饰Fc多肽可包含保守取代，例如该集合中的一个或多个位置上的指定氨基酸的相同电荷分组、疏水性分组、侧链环结构分组(例如，芳族氨基酸)，或大小分组，和/或极性或非极性分组中的氨基酸。因此，例如，Ile可存在于位置384、386和/或位置413处。在一些实施方案中，位置387、413和416中的一个、两个或每一个位置上的酸性氨基酸是Glu。在其他实施方案中，位置387、413和416中的一个、两个或每一个上的酸性氨基酸是Asp。在一些实施方案中，位置384、386、387、388、389、413、416和421中的两个、三个、四个、五个、六个、七个或全部八个具有如在本段中所指出的氨基酸取代。
在一些实施方案中，如前两段中所述进行修饰的Fc多肽在位置390处包含天然Asn。在一些实施方案中，修饰Fc多肽在位置390处包含Gly、His、Gln、Leu、Lys、Val、Phe、Ser、Ala或Asp。在一些实施方案中，根据EU编号方案，修饰Fc多肽还在包括380、391、392和415的位置处包含一个、两个、三个或四个取代。在一些实施方案中，Trp、Tyr、Leu或Gln可存在于位置380处。在一些实施方案中，Ser、Thr、Gln或Phe可存在于位置391处。在一些实施方案中，Gln、Phe或His可存在于位置392处。在一些实施方案中，Glu可存在于位置415处。
在某些实施方案中，修饰Fc多肽包括选自以下的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或十一个位置：位置380处的Trp、Leu或Glu；位置384处的Tyr或Phe；位置386处的Thr；位置387处的Glu；位置388处的Trp；位置389处的Ser、Ala、Val或Asn；位置390处的Ser或Asn；位置413处的Thr或Ser；位置415处的Glu或Ser；位置416处的Glu；和/或位置421处的Phe。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包括如下的全部十一个位置：位置380处的Trp、Leu或Glu；位置384处的Tyr或Phe；位置386处的Thr；位置387处的Glu；位置388处的Trp；位置389处的Ser、Ala、Val或Asn；位置390处的Ser或Asn；位置413处的Thr或Ser；位置415处的Glu或Ser；位置416处的Glu；和/或位置421处的Phe。
在某些实施方案中，修饰Fc多肽包含位置384处的Leu或Met；位置386处的Leu、His或Pro；位置387处的Val；位置388处的Trp；位置389处的Val或Ala；位置413处的Pro；位置416处的Thr；和/或位置421处的Trp。在一些实施方案中，修饰Fc多肽还包含位置391处的Ser、Thr、Gln或Phe。在一些实施方案中，修饰Fc多肽还包含位置380处的Trp、Tyr、Leu或Gln和/或位置392处的Gln、Phe或His。在一些实施方案中，Trp存在于位置380处和/或Gln存在于位置392处。在一些实施方案中，修饰Fc多肽在位置380处不具有Trp。
在其他实施方案中，修饰Fc多肽包含位置384处的Tyr；位置386处的Thr；位置387处的Glu或Val；位置388处的Trp；位置389处的Ser；位置413处的Ser或Thr；位置416处的Glu；和/或位置421处的Phe。在一些实施方案中，修饰Fc多肽在位置390处包含天然Asn。在某些实施方案中，修饰Fc多肽还包含位置380处的Trp、Tyr、Leu或Gln；和/或位置415处的Glu。在一些实施方案中，修饰Fc多肽还包含位置380处的Trp和/或位置415处的Glu。
在另外的实施方案中，根据EU编号方案，修饰Fc多肽还在包括414、424和426的位置处包含一个、两个或三个取代。在一些实施方案中，位置414是Lys、Arg、Gly或Pro；位置424是Ser、Thr、Glu或Lys；和/或位置426是Ser、Trp或Gly。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含以下取代中的一个或多个：位置380处的Trp；位置386处的Thr；位置388处的Trp；位置389处的Val；位置413处的Thr或Ser；位置415处的Glu；和/或位置421处的Phe，根据EU编号方案。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽与SEQ ID NO:100-185、219-298或337-460(例如，SEQ ID NO:100-136或337-350)中任一个的氨基酸111-217具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽与SEQ ID NO:100-185、219-298或337-460(例如，SEQ ID NO:100-136或337-350)中的任一个具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQID NO:100-185、219-298或337-460(例如，SEQ ID NO:100-136或337-350)中任一个的EU索引位置384-390和/或413-421处的氨基酸。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:100-185、219-298或337-460(例如，SEQ ID NO:100-136或337-350)中任一个的EU索引位置380-390和/或413-421处的氨基酸。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:100-185、219-298或337-460(例如，SEQ ID NO:100-136或337-350)中任一个的EU索引位置380-392和/或413-426处的氨基酸。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽与SEQ ID NO:100-185、219-298或337-460(例如，SEQ ID NO:100-136或337-350)中的任一个具有至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性，并且还包括如下根据EU索引编号的位置中的至少五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个或十六个：位置380处的Trp、Tyr、Leu、Gln或Glu；位置384处的Leu、Tyr、Met或Val；位置386处的Leu、Thr、His或Pro；位置387处的Val、Pro或酸性氨基酸；位置388处的芳族氨基酸，例如Trp；位置389处的Val、Ser或Ala；位置390处的Ser或Asn；位置391处的Ser、Thr、Gln或Phe；位置392处的Gln、Phe或His；位置413处的酸性氨基酸、Ala、Ser、Leu、Thr或Pro；位置414处的Lys、Arg、Gly或Pro；位置415处的Glu或Ser；位置416处的Thr或酸性氨基酸；位置421处的Trp、Tyr、His或Phe；位置424处的Ser、Thr、Glu或Lys；以及位置426处的Ser、Trp或Gly。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:100-136或337-350中任一个的氨基酸序列。在其他实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:100-136或337-350中任一个的氨基酸序列，但是其中一个、两个或三个氨基酸被取代。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含另外的突变，诸如在以下第IV部分中描述的突变，包括但不限于，旋钮突变(例如，如参考EU编号进行编号的T366W)、孔突变(例如，如参考EU编号进行编号的T366S、L368A和Y407V)、调节效应子功能的突变(例如，如参考EU编号进行编号的L234A、L235A和/或P329G(例如，L234A和L235A))，和/或增加血清稳定性的突变(例如，如参考EU编号进行编号的M252Y、S254T和T256E，或N434S，有或没有M428L)。举例说明，SEQ ID NO:227-298和351-460提供了在CH3结构域中具有突变的修饰Fc多肽的非限制性实例(例如，克隆CH3C.35.20.1、CH3C.35.23.2、CH3C.35.23.3、CH3C.35.23.4、CH3C.35.21.17.2、CH3C.35.23、CH3C.35.21、CH3C.35.20.1.1、CH3C.35.23.2.1和CH3C.35.23.1.1)，其包含这些另外突变中的一个或多个。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含旋钮突变(例如，如参考EU编号进行编号的T366W)，并且与SEQ ID NO:227、239、251、263、275、287、355、367和379中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:227、239、251、263、275、287、355、367和379中任一个的序列。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含旋钮突变(例如，如参考EU编号进行编号的T366W)和调节效应子功能的突变(例如，如参考EU编号进行编号的L234A、L235A和/或P329G(例如，L234A和L235A))，并且与SEQ ID NO:228、229、240、241、252、253、264、265、276、277、288、289、351、356、357、368、369、380和381中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:228、229、240、241、252、253、264、265、276、277、288、289、351、356、357、368、369、380和381中任一个的序列。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含旋钮突变(例如，如参考EU编号进行编号的T366W)和增加血清稳定性的突变(例如，如参考EU编号进行编号的M252Y、S254T和T256E，或N434S，有或没有M428L)，并且与SEQ ID NO:230、242、254、266、278、290、358、370、382、392、399、406、413、420、427、434、441、448和455中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:230、242、254、266、278、290、358、370、382、392、399、406、413、420、427、434、441、448和455中任一个的序列。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含旋钮突变(例如，如参考EU编号进行编号的T366W)、调节效应子功能的突变(例如，如参考EU编号进行编号的L234A、L235A和/或P329G(例如，L234A和L235A))，以及增加血清稳定性的突变(例如，如参考EU编号进行编号的M252Y、S254T和T256E，或N434S，有或没有M428L)，并且与SEQ ID NO:231、232、243、244、255、256、267、268、279、280、291、292、352、359、360、371、372、383、384、393、394、400、401、407、408、414、415、421、422、428、429、435、436、442、443、449、450、456和457中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:231、232、243、244、255、256、267、268、279、280、291、292、352、359、360、371、372、383、384、393、394、400、401、407、408、414、415、421、422、428、429、435、436、442、443、449、450、456和457中任一个的序列。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含孔突变(例如，如参考EU编号进行编号的T366S、L368A和Y407V)，并且与SEQ ID NO:233、245、257、269、281、293、361、373和385中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:233、245、257、269、281、293、361、373和385中任一个的序列。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含孔突变(例如，如参考EU编号进行编号的T366S、L368A和Y407V)和调节效应子功能的突变(例如，如参考EU编号进行编号的L234A、L235A和/或P329G(例如，L234A和L235A))，并且与SEQ ID NO:234、235、246、247、258、259、270、271、282、283、294、295、353、362、363、374、375、386和387中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQID NO:234、235、246、247、258、259、270、271、282、283、294、295、353、362、363、374、375、386和387中任一个的序列。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含孔突变(例如，如参考EU编号进行编号的T366S、L368A和Y407V)和增加血清稳定性的突变(例如，如参考EU编号进行编号的M252Y、S254T和T256E，或N434S，有或没有M428L)，并且与SEQ ID NO:236、248、260、272、284、296、364、376、388、395、402、409、416、423、430、437、444、451和458中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQID NO:236、248、260、272、284、296、364、376、388、395、402、409、416、423、430、437、444、451和458中任一个的序列。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含孔突变(例如，如参考EU编号进行编号的T366S、L368A和Y407V)、调节效应子功能的突变(例如，如参考EU编号进行编号的L234A、L235A和/或P329G(例如，L234A和L235A))，以及增加血清稳定性的突变(例如，如参考EU编号进行编号的M252Y、S254T和T256E，或N434S，有或没有M428L)，并且与SEQ ID NO:237、238、249、250、261、262、273、274、285、286、297、298、354、365、366、377、378、389、390、396、397、403、404、410、411、417、418、424、425、431、432、438、439、445、446、452、453、459和460中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:237、238、249、250、261、262、273、274、285、286、297、298、354、365、366、377、378、389、390、396、397、403、404、410、411、417、418、424、425、431、432、438、439、445、446、452、453、459和460中任一个的序列。
在一些实施方案中，根据EU编号方案，特异性结合TfR的修饰Fc多肽在位置345、346、347、349、437、438、439和440处包含至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、或八个取代。SEQ ID NO:186-190中提供了例示性的修饰Fc多肽。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含位置437处的Gly；位置438处的Phe；和/或位置440处的Asp。在一些实施方案中，Glu存在于位置440处。在某些实施方案中，修饰Fc多肽包含如下位置处的至少一个取代：位置345处的Phe或Ile；位置346处的Asp、Glu、Gly、Ala或Lys；位置347处的Tyr、Met、Leu、Ile或Asp；位置349处的Thr或Ala；位置437处的Gly；位置438处的Phe；位置439处的His、Tyr、Ser或Phe；或位置440处的Asp。在一些实施方案中，位置345、346、347、349、437、438、439和440中的两个、三个、四个、五个、六个、七个或全部八个具有如在本段中所指出的取代。在一些实施方案中，修饰Fc多肽可包含保守取代，例如该集合中的一个或多个位置上的指定氨基酸的相同电荷分组、疏水性分组、侧链环结构分组(例如，芳族氨基酸)，或大小分组，和/或极性或非极性分组中的氨基酸。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽与SEQ ID NO:186-190中任一个的氨基酸111-217具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽与SEQ ID NO:186-190具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:186-190中任一个的氨基酸序列。在其他实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:186-190中任一个的氨基酸序列，但是其中一个、两个或三个氨基酸被取代。
在CH2结构域中包含突变的结合TfR的Fc多肽
在一些实施方案中，特异性结合TfR的修饰Fc多肽在CH2结构域中包含取代。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含针对TfR结合活性进行修饰的人Ig CH2结构域，诸如IgGCH2结构域。CH2结构域可以属于任何IgG亚型，即来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在IgG抗体的上下文中，CH2结构域是指根据EU编号方案进行编号的从约位置231至约位置340的氨基酸的区段。
在一些实施方案中，特异性结合TfR的修饰Fc多肽结合TfR的顶端结构域，并且可在不阻断或以其他方式抑制转铁蛋白与TfR的结合的情况下结合TfR。在一些实施方案中，转铁蛋白与TfR的结合基本上不受抑制。在一些实施方案中，转铁蛋白与TfR的结合的抑制小于约50％(例如，小于约45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％或5％)。在一些实施方案中，转铁蛋白与TfR的结合的抑制小于约20％(例如，小于约19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％)。
在一些实施方案中，根据EU编号方案，特异性结合TfR的修饰Fc多肽在位置274、276、283、285、286、287、288和290处包含至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个或九个取代。SEQ ID NO:191-195中提供了例示性的修饰Fc多肽。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含位置287处的Glu和/或位置288处的Trp。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含如下位置处的至少一个取代：位置274处的Glu、Gly、Gln、Ser、Ala、Asn、Tyr或Trp；位置276处的Ile、Val、Asp、Glu、Thr、Ala或Tyr；位置283处的Asp、Pro、Met、Leu、Ala、Asn或Phe；位置285处的Arg、Ser、Ala或Gly；位置286处的Tyr、Trp、Arg或Val；位置287处的Glu；位置288处的Trp或Tyr；位置289处的Gln、Tyr、His、Ile、Phe、Val或Asp；或位置290处的Leu、Trp、Arg、Asn、Tyr或Val。在一些实施方案中，位置274、276、283、285、286、287、288和290中的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个或全部九个具有如在本段中所指出的取代。在一些实施方案中，修饰Fc多肽可包含保守取代，例如该集合中的一个或多个位置上的指定氨基酸的相同电荷分组、疏水性分组、侧链环结构分组(例如，芳族氨基酸)，或大小分组，和/或极性或非极性分组中的氨基酸。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含位置274处的Glu、Gly、Gln、Ser、Ala、Asn或Tyr；位置276处的Ile、Val、Asp、Glu、Thr、Ala或Tyr；位置283处的Asp、Pro、Met、Leu、Ala或Asn；位置285处的Arg、Ser或Ala；位置286处的Tyr、Trp、Arg或Val；位置287处的Glu；位置288处的Trp；位置289处的Gln、Tyr、His、Ile、Phe或Val；和/或位置290处的Leu、Trp、Arg、Asn或Tyr。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含位置285处的Arg；位置286处的Tyr或Trp；位置287处的Glu；位置288处的Trp；和/或位置290处的Arg或Trp。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽与SEQ ID NO:191-195中任一个的氨基酸1-110具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽与SEQ ID NO:191-195具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:191-195中任一个的氨基酸序列。在其他实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:191-195中任一个的氨基酸序列，但是其中一个、两个或三个氨基酸被取代。
在一些实施方案中，根据EU编号方案，特异性结合TfR的修饰Fc多肽在位置266、267、268、269、270、271、295、297、298和299处包含至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个取代。SEQ ID NO:196-200中提供了例示性的修饰Fc多肽。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含位置270处的Pro；位置295处的Glu；和/或位置297处的Tyr。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含如下位置处的至少一个取代：位置266处的Pro、Phe、Ala、Met或Asp；位置267处的Gln、Pro、Arg、Lys、Ala、Ile、Leu、Glu、Asp或Tyr；位置268处的Thr、Ser、Gly、Met、Val、Phe、Trp或Leu；位置269处的Pro、Val、Ala、Thr或Asp；位置270处的Pro、Val或Phe；位置271处的Trp、Gln、Thr或Glu；位置295处的Glu、Val、Thr、Leu或Trp；位置297处的Tyr、His、Val或Asp；位置298处的Thr、His、Gln、Arg、Asn或Val；或位置299处的Tyr、Asn、Asp、Ser或Pro。在一些实施方案中，位置266、267、268、269、270、271、295、297、298和299中的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或全部十个具有如在本段中所指出的取代。在一些实施方案中，修饰Fc多肽可包含保守取代，例如该集合中的一个或多个位置上的指定氨基酸的相同电荷分组、疏水性分组、侧链环结构分组(例如，芳族氨基酸)，或大小分组，和/或极性或非极性分组中的氨基酸。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含位置266处的Pro、Phe或Ala；位置267处的Gln、Pro、Arg、Lys、Ala或Ile；位置268处的Thr、Ser、Gly、Met、Val、Phe或Trp；位置269处的Pro、Val或Ala；位置270处的Pro；位置271处的Trp或Gln；位置295处的Glu；位置297处的Tyr；位置298处的Thr、His或Gln；和/或位置299处的Tyr、Asn、Asp或Ser。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含位置266处的Met；位置267处的Leu或Glu；位置268处的Trp；位置269处的Pro；位置270处的Val；位置271处的Thr；位置295处的Val或Thr；位置197处的His；位置198处的His、Arg或Asn；和/或位置299处的Pro。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含位置266处的Asp；位置267处的Asp；位置268处的Leu；位置269处的Thr；位置270处的Phe；位置271处的Gln；位置295处的Val或Leu；位置297处的Val；位置298处的Thr；和/或位置299处的Pro。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽与SEQ ID NO:196-200中任一个的氨基酸1-110具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽与SEQ ID NO:196-200具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:196-200中任一个的氨基酸序列。在其他实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:196-200中任一个的氨基酸序列，但是其中一个、两个或三个氨基酸被取代。
在一些实施方案中，根据EU编号方案，特异性结合TfR的修饰Fc多肽在位置268、269、270、271、272、292、293、294和300处包含至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个取代。SEQ ID NO:201-205中提供了例示性的修饰Fc多肽。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含如下位置处的至少一个取代：位置268处的Val或Asp；位置269处的Pro、Met或Asp；位置270处的Pro或Trp；位置271处的Arg、Trp、Glu或Thr；位置272处的Met、Tyr、或Trp；位置292处的Leu或Trp；位置293处的Thr、Val、Ile或Lys；位置294处的Ser、Lys、Ala或Leu；位置296处的His、Leu、或Pro；或位置300处的Val或Trp。在一些实施方案中，位置268、269、270、271、272、292、293、294和300中的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或全部十个具有如在本段中所指出的取代。在一些实施方案中，修饰Fc多肽可包含保守取代，例如该集合中的一个或多个位置上的指定氨基酸的相同电荷分组、疏水性分组、侧链环结构分组(例如，芳族氨基酸)，或大小分组，和/或极性或非极性分组中的氨基酸。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含位置268处的Val；位置269处的Pro；位置270处的Pro；位置271处的Arg或Trp；位置272处的Met；位置292处的Leu；位置293处的Thr；位置294处的Ser；位置296处的His；和/或位置300处的Val。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含位置268处的Asp；位置269处的Met或Asp；位置270处的Trp；位置271处的Glu或Thr；位置272处的Tyr或Trp；位置292处的Trp；位置293处的Val、Ile或Lys；位置294处的Lys、Ala或Leu；位置296处的Leu或Pro；和/或位置300处的Trp。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽与SEQ ID NO:201-205中任一个的氨基酸1-110具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽与SEQ ID NO:201-205具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:201-205中任一个的氨基酸序列。在其他实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:201-205中任一个的氨基酸序列，但是其中一个、两个或三个氨基酸被取代。
在一些实施方案中，根据EU编号方案，特异性结合TfR的修饰Fc多肽在位置272、274、276、322、324、326、329、330和331处具有至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个取代。例示性的修饰多肽在位置330处包含Trp。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含如下位置处的至少一个取代：位置272处的Trp、Val、Ile或Ala；位置274处的Trp或Gly；位置276处的Tyr、Arg或Glu；位置322处的Ser、Arg或Gln；位置324处的Val、Ser或Phe；位置326处的Ile、Ser或Trp；位置329处的Trp、Thr、Ser、Arg或Asp；位置330处的Trp；或位置331处的Ser、Lys、Arg或Val。在一些实施方案中，位置272、274、276、322、324、326、329、330和331中的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个或全部九个具有如在本段中所指出的取代。在一些实施方案中，修饰Fc多肽可包含保守取代，例如该集合中的一个或多个位置上的指定氨基酸的相同电荷分组、疏水性分组、侧链环结构分组(例如，芳族氨基酸)，或大小分组，和/或极性或非极性分组中的氨基酸。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含选自以下的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个或九个位置：位置272是Trp、Val、Ile或Ala；位置274是Trp或Gly；位置276是Tyr、Arg或Glu；位置322是Ser、Arg或Gln；位置324是Val、Ser或Phe；位置326是Ile、Ser或Trp；位置329是Trp、Thr、Ser、Arg或Asp；位置330是Trp；并且位置331是Ser、Lys、Arg或Val。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含位置272处的Val或Ile；位置274处的Gly；位置276处的Arg；位置322处的Arg；位置324处的Ser；位置326处的Ser；位置329处的Thr、Ser或Arg；位置330处的Trp；和/或位置331处的Lys或Arg。
在一些实施方案中，修饰Fc多肽与SEQ ID NO:206-210中任一个的氨基酸1-110具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽与SEQ ID NO:206-210具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:206-210中任一个的氨基酸序列。在其他实施方案中，修饰Fc多肽包含SEQ ID NO:206-210中任一个的氨基酸序列，但是其中一个、两个或三个氨基酸被取代。
另外的Fc多肽突变
在一些方面，如本文所公开的抗TREM2抗体包含第一和任选的第二Fc多肽，所述多肽可各自包含独立选择的修饰或可以是野生型Fc多肽，例如人IgG1 Fc多肽。在一些实施方案中，一个或两个Fc多肽含有赋予与血脑屏障(BBB)受体例如转铁蛋白受体(TfR)的结合的一个或多个修饰。可以引入一个或两个Fc多肽中的其他突变的非限制性实例包括，例如，增加血清稳定性、调节效应子功能、影响糖基化、降低在人体中的免疫原性和/或提供Fc多肽的旋钮和孔异源二聚化的突变。
在一些实施方案中，Fc多肽包括旋钮和孔突变，以促进异源二聚体形成并阻碍同源二聚体形成。通常，修饰在第一多肽的界面处引入突出部(“旋钮”)，并且在第二多肽的界面中引入对应的腔穴(“孔”)，使得突出部可以定位在腔穴中，以便促进异源二聚体形成，并且从而阻碍同源二聚体形成。突出部通过将第一多肽的界面的小氨基酸侧链替换为更大侧链(例如，酪氨酸或色氨酸)来构造。在第二多肽的界面中通过将大氨基酸侧链替换为更小的氨基酸侧链(例如，丙氨酸或苏氨酸)而产生具有与突出部相同或相似大小的补偿性腔穴。在一些实施方案中，此类另外的突变处于Fc多肽中对多肽与BBB受体(例如TfR)的结合没有负面影响的位置上。
在用于二聚化的旋钮和孔方法的一个例示性实施方案中，Fc多肽中的一个的位置366(根据EU编号方案进行编号)包含色氨酸，代替了天然苏氨酸。二聚体中的另一个Fc多肽在位置407(根据EU编号方案进行编号)上具有缬氨酸，代替了天然酪氨酸。另一个Fc多肽还可包含这样的取代：其中位置366(根据EU编号方案进行编号)上的天然苏氨酸被丝氨酸取代，并且位置368(根据EU编号方案进行编号)上的天然亮氨酸被丙氨酸取代。因此，Fc多肽中的一个具有T366W旋钮突变，并且另一个Fc多肽具有Y407V突变，其通常伴有T366S和L368A孔突变。
在一些实施方案中，可引入增强血清半衰期的修饰。例如，在一些实施方案中，如根据EU编号方案进行编号，一个或两个Fc多肽可包含位置252处的酪氨酸、位置254处的苏氨酸和位置256处的谷氨酸。因此，一个或两个Fc多肽可具有M252Y、S254T和T256E取代。可替代地，根据EU编号，一个或两个Fc多肽可具有M428L和N434S取代。可替代地，一个或两个Fc多肽可具有N434S或N434A取代。
在一些实施方案中，一个或两个Fc多肽可包含降低效应子功能(即，在与介导效应子功能的在效应细胞上表达的Fc受体结合后诱导某些生物学功能的能力降低)的修饰。抗体效应子功能的实例包括但不限于C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)、Fc受体结合、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)、细胞表面受体(例如B细胞受体)的下调，以及B细胞活化。效应子功能可随抗体类别而变化。例如，天然人IgG1和IgG3抗体在与存在于免疫系统细胞上的适当Fc受体结合后可以引发ADCC和CDC活性；并且天然人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4在与存在于免疫细胞上的适当Fc受体结合后可以引发ADCP功能。
在一些实施方案中，一个或两个Fc多肽还可被工程改造以含有用于异源二聚化的其他修饰，例如，CH3-CH3界面内的天然带电的接触残基的静电工程改造或疏水性补丁修饰(patch modification)。
在一些实施方案中，一个或两个Fc多肽可包括调节效应子功能的另外修饰。
在一些实施方案中，一个或两个Fc多肽可包含减少或消除效应子功能的修饰。根据EU编号方案，降低效应子功能的例示性Fc多肽突变包括但不限于CH2结构域中的取代，例如在位置234和235处。例如，在一些实施方案中，一个或两个Fc多肽可以在位置234和235处包含丙氨酸残基。因此，一个或两个Fc多肽可具有L234A和L235A(“LALA”)取代。在一些实施方案中，包含促进与TfR的结合的一个或多个修饰的Fc多肽还包含LALA取代。在一些实施方案中，不包含促进与TfR的结合的一个或多个修饰的Fc多肽包含LALA取代。在一些实施方案中，两个Fc多肽均包含LALA取代。
根据EU编号方案，调节效应子功能的另外的Fc多肽突变包括但不限于位置238、265、269、270、297、327和329处的一个或多个取代。例示性的取代包括以下：位置329可具有其中脯氨酸被甘氨酸或精氨酸或大到足以破坏在Fc的脯氨酸329与FcγRIII的色氨酸残基Trp 87和Trp 110之间形成的Fc/Fcγ受体界面的氨基酸残基取代的突变。根据EU编号方案，另外的例示性取代包括S228P、E233P、L235E、N297A、N297D和P331S。还可存在多个取代，例如，根据EU编号方案，人IgG1 Fc区的L234A和L235A；人IgG1区的L234A、L235A和P329G；人IgG4 Fc区的S228P和L235E；人IgG1 Fc区的L234A和G237A；人IgG1 Fc区的L234A、L235A和G237A；人IgG2 Fc区的V234A和G237A；人IgG4 Fc区的L235A、G237A和E318A；以及人IgG4 Fc区的S228P和L236E。在一些实施方案中，一个或两个Fc多肽可具有调节ADCC的一个或多个氨基酸取代，例如，根据EU编号方案，在位置298、333和/或334处的取代。
包含另外的突变的例示性Fc多肽
通过非限制性实例的方式，本公开的抗TREM2抗体中存在的一个或两个Fc多肽可包含另外的突变，包括旋钮突变(例如，根据EU编号方案进行编号的T366W)、孔突变(例如，根据EU编号方案进行编号的T366S、L368A和Y407V)、调节效应子功能的突变(例如，根据EU编号方案进行编号的L234A、L235A和/或P329G(例如L234A和L235A))，和/或增加血清稳定性的突变(例如，(i)根据EU编号方案进行编号的M252Y、S254T和T256E，或(ii)参考EU编号进行编号的N434S，有或没有M428L)。
在一些实施方案中，Fc多肽可具有旋钮突变(例如，根据EU编号方案进行编号的T366W)并且与SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，Fc多肽可具有旋钮突变和SEQ IDNO:98、100-210和337-350中任一个的序列。在一些实施方案中，具有SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列的Fc多肽可被修饰，以具有旋钮突变。
在一些实施方案中，Fc多肽可具有旋钮突变(例如，根据EU编号方案进行编号的T366W)、调节效应子功能的突变(例如，根据EU编号方案进行编号的L234A、L235A和/或P329G(例如，L234A和L235A))，并且与SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，Fc多肽可具有旋钮突变、调节效应子功能的突变和SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列。在一些实施方案中，具有SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列的Fc多肽可被修饰，以具有旋钮突变和调节效应子功能的突变。
在一些实施方案中，Fc多肽可具有旋钮突变(例如，根据EU编号方案进行编号的T366W)、增加血清稳定性的突变(例如，(i)根据EU编号方案进行编号的M252Y、S254T和T256E，或(ii)参考EU编号进行编号的N434S，有或没有M428L)，并且与SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，Fc多肽可具有旋钮突变、增加血清稳定性的突变和SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列。在一些实施方案中，具有SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列的Fc多肽可被修饰，以具有旋钮突变和增加血清稳定性的突变。
在一些实施方案中，Fc多肽可具有旋钮突变(例如，根据EU编号方案进行编号的T366W)、调节效应子功能的突变(例如，根据EU编号方案进行编号的L234A、L235A和/或P329G(例如，L234A和L235A))、增加血清稳定性的突变(例如，(i)根据EU编号方案进行编号的M252Y、S254T和T256E，或(ii)参考EU编号进行编号的N434S，有或没有M428L)，并且与SEQID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，Fc多肽可具有旋钮突变、调节效应子功能的突变、增加血清稳定性的突变和SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列。在一些实施方案中，具有SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列的Fc多肽可被修饰，以具有旋钮突变、调节效应子功能的突变和增加血清稳定性的突变。
在一些实施方案中，Fc多肽可具有孔突变(例如，根据EU编号方案进行编号的T366S、L368A和Y407V)并且与SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，Fc多肽可具有孔突变和SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列。在一些实施方案中，具有SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列的Fc多肽可被修饰，以具有孔突变。
在一些实施方案中，Fc多肽可具有孔突变(例如，根据EU编号方案进行编号的T366S、L368A和Y407V)、调节效应子功能的突变(例如，根据EU编号方案进行编号的L234A、L235A和/或P329G(例如，L234A和L235A))，并且与SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，Fc多肽可具有孔突变、调节效应子功能的突变和SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列。在一些实施方案中，具有SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列的Fc多肽可被修饰，以具有孔突变和调节效应子功能的突变。
在一些实施方案中，Fc多肽可具有孔突变(例如，根据EU编号方案进行编号的T366S、L368A和Y407V)、增加血清稳定性的突变(例如，(i)根据EU编号方案进行编号的M252Y、S254T和T256E，或(ii)参考EU编号进行编号的N434S，有或没有M428L)，并且与SEQID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，Fc多肽可具有孔突变、增加血清稳定性的突变和SEQ IDNO:98、100-210和337-350中任一个的序列。在一些实施方案中，具有SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列的Fc多肽可被修饰，以具有孔突变和增加血清稳定性的突变。
在一些实施方案中，Fc多肽可具有孔突变(例如，根据EU编号方案进行编号的T366S、L368A和Y407V)、调节效应子功能的突变(例如，根据EU编号方案进行编号的L234A、L235A和/或P329G(例如，L234A和L235A))、增加血清稳定性的突变(例如，(i)根据EU编号方案进行编号的M252Y、S254T和T256E，或(ii)参考EU编号进行编号的N434S，有或没有M428L)，并且与SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，Fc多肽可具有孔突变、调节效应子功能的突变、增加血清稳定性的突变和SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列。在一些实施方案中，具有SEQ ID NO:98、100-210和337-350中任一个的序列的Fc多肽可被修饰，以具有孔突变、调节效应子功能的突变和增加血清稳定性的突变。
V.使用抗TREM2抗体的治疗和预后方法
在另一方面，提供了用于使用如本文所述的抗TREM2抗体的方法。在一些实施方案中，在本文所述方法的实践中使用如上文第III部分中所述的抗TREM2抗体。
使用抗TREM2抗体的治疗
在一些实施方案中，提供了调节患有神经变性疾病的受试者中的一种或多种TREM2活性的方法。在一些实施方案中，所述方法包括调节与TREM2/DAP12信号传导复合物相互作用的激酶(例如，Syk激酶)的募集或磷酸化；调节吞噬作用(例如，细胞碎片、淀粉样蛋白β颗粒等的吞噬作用)；调节细胞迁移(例如，髓系细胞、巨噬细胞、小胶质细胞和疾病相关小胶质细胞的迁移)；和/或调节细胞分化(例如，针对髓系细胞、巨噬细胞、小胶质细胞和疾病相关小胶质细胞)。在一些实施方案中，提供了增强患有神经变性疾病的受试者中的一种或多种TREM2活性的方法。在一些实施方案中，提供了抑制患有神经变性疾病的受试者中的一种或多种TREM2活性的方法。在一些实施方案中，调节受试者中的一种或多种TREM2活性的方法包括向受试者施用与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分，例如，如本文所述的抗TREM2抗体，或包含如本文所述的抗TREM2抗体的药物组合物。
在一些实施方案中，提供了调节患有神经变性疾病的受试者中的sTREM2水平的方法。在一些实施方案中，提供了降低患有神经变性疾病的受试者中的sTREM2水平的方法。在一些实施方案中，提供了增加患有神经变性疾病的受试者中的sTREM2水平的方法。在一些实施方案中，调节受试者中的sTREM2水平的方法包括向受试者施用与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分，例如，如本文所述的抗TREM2抗体，或包含如本文所述的抗TREM2抗体的药物组合物。
在一些实施方案中，提供了治疗神经变性疾病的方法。在一些实施方案中，神经变性疾病选自由以下组成的组：阿尔茨海默病、原发性年龄相关性tau蛋白病、进行性核上性麻痹(PSP)、额颞叶痴呆、与第17号染色体相关的额颞叶痴呆伴帕金森症、嗜银颗粒性痴呆、肌萎缩性侧索硬化症、肌萎缩性侧索硬化症/关岛震颤麻痹痴呆综合征(ALS-PDC)、皮质基底节变性、慢性创伤性脑病、克雅病、拳击员痴呆、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化、唐氏综合征、家族性英国痴呆症、家族性丹麦痴呆症、GSS氏病、球状胶质tau蛋白病、瓜德罗普型帕金森病伴痴呆、瓜德罗普型PSP、哈勒沃登-施帕茨病(Hallevorden-Spatz disease)、伴球状体遗传性弥漫性白质脑病(HDLS)、亨廷顿氏病、包涵体肌炎、多系统萎缩症、肌强直性营养不良、那-哈病、神经原纤维缠结优势性痴呆、C型尼曼匹克病、苍白球-脑桥-黑质变性、帕金森病、皮克氏病、脑炎后帕金森综合征、朊病毒蛋白脑淀粉样血管病、进行性皮层下神经胶质增生、亚急性硬化性全脑炎和仅缠结性痴呆。在一些实施方案中，神经变性疾病是阿尔茨海默病。在一些实施方案中，神经变性疾病是那-哈病。在一些实施方案中，神经变性疾病是额颞叶痴呆。在一些实施方案中，神经变性疾病是帕金森病。在一些实施方案中，所述方法包括向受试者施用与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分，例如，如本文所述的抗TREM2抗体，或包含如本文所述的抗TREM2抗体的药物组合物。
在一些实施方案中，如本文所述的抗TREM2抗体(或其抗原结合部分或药物组合物)用于治疗通过TREM2中的突变表征的神经变性疾病。在一些实施方案中，通过TREM2中的突变表征的神经变性疾病是阿尔茨海默病，例如通过TREM2中的R47H突变表征的阿尔茨海默病。
在一些实施方案中，待治疗的受试者是人，例如人类成人或人类儿童。
在一些实施方案中，提供了减少患有神经变性疾病的受试者中的斑块积聚的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向受试者施用如本文所述的抗体或药物组合物。在一些实施方案中，受试者患有阿尔茨海默病。在一些实施方案中，受试者是神经变性疾病的动物模型(例如，5XFAD或APP/PS1小鼠模型)。在一些实施方案中，通过淀粉样斑块成像和/或Tau成像，例如使用正电子发射断层(PET)扫描来测量斑块积聚。在一些实施方案中，与基线值(例如，施用抗TREM2抗体之前受试者中的斑块积聚水平)相比，抗TREM2抗体的施用使斑块积聚减少至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％。
在一些实施方案中，将抗TREM2抗体以治疗有效量或剂量施用给受试者。可以使用约0.01mg/kg至约500mg/kg，或约0.1mg/kg至约200mg/kg，或约1mg/kg至约100mg/kg，或约10mg/kg至约50mg/kg的日剂量范围。然而，剂量可根据若干因素变化，包括选择的施用途径、组合物的配方、患者反应、病状的严重程度、受试者的体重，以及处方医生的判断。剂量可以根据个体患者的需要随时间增加或减少。在某些情况下，初始给予患者低剂量，然后将其增加至该患者可耐受的有效剂量。有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内。
如本文所述的抗TREM2抗体的施用途径可以是口服、腹膜内、透皮、皮下、静脉内、肌内、鞘内、吸入、局部、病灶内、直肠、支气管内、鼻腔、透粘膜、肠、眼或耳部递送，或本领域已知的任何其他方法。在一些实施方案中，抗体经口、通过静脉或腹膜内施用。
在一些实施方案中，将抗TREM2抗体(和任选地另一治疗剂)在延长的时间段内施用给受试者，例如持续至少30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350天或更长时间。
将受试者鉴定为用于使用抗TREM2抗体进行治疗的候选者
在另一方面，提供了将患有神经变性疾病的受试者鉴定为用于使用抗TREM2抗体进行治疗的候选者的方法。
在一些实施方案中，所述方法包括：
测量来自受试者的样品中的sTREM2水平；
将来自受试者的样品中的sTREM2水平与对照值相比较，其中相对于对照值升高的来自受试者的样品中的sTREM2水平将受试者鉴定为治疗的候选者；以及
对于被鉴定为治疗的候选者的受试者，向受试者施用与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分(例如，如本文所述的抗体)。
在一些实施方案中，分离抗体或其抗原结合部分是降低sTREM2水平的抗体。在一些实施方案中，抗体还具有如本文所述的一种或多种TREM2相关活性，识别人TREM2的与如本文所述的抗体克隆所识别的表位相同或基本上相同的表位，和/或包含如本文所述的抗体克隆的一个或多个CDR、重链和/或轻链序列。
在一些实施方案中，所述方法包括：
测量来自受试者的样品中的sTREM2水平；
将来自受试者的样品中的sTREM2水平与对照值相比较，其中相对于对照值降低的来自受试者的样品中的sTREM2水平将受试者鉴定为治疗的候选者；以及
对于被鉴定为治疗的候选者的受试者，向受试者施用与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分(例如，如本文所述的抗体)。
在一些实施方案中，分离抗体或其抗原结合部分是增加sTREM2水平的抗体。在一些实施方案中，抗体还具有如本文所述的一种或多种TREM2相关活性，识别TREM2的与如本文所述的抗体克隆所识别的表位相同或基本上相同的人表位，和/或包含如本文所述的抗体克隆的一个或多个CDR、重链和/或轻链序列。
在另一方面，提供了治疗已被鉴定为用于使用抗TREM2抗体进行治疗的候选者的患有神经变性疾病的受试者的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向受试者施用与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分(例如，如本文所述的抗体)，其中受试者已被鉴定为相对于对照值具有增加的sTREM2水平。在一些实施方案中，分离抗体或其抗原结合部分是降低sTREM2水平的抗体。
在一些实施方案中，所述方法包括向受试者施用与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分(例如，如本文所述的抗体)，其中受试者已被鉴定为相对于对照值具有降低的sTREM2水平。在一些实施方案中，分离抗体或其抗原结合部分是增加sTREM2水平的抗体。
在一些实施方案中，将sTREM2的水平与针对健康对照或健康对照的群体(即，未罹患神经变性疾病)确定的对照值进行比较。在一些实施方案中，如果来自受试者的样品中的sTREM2水平与对照值相比相差至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多，那么将受试者鉴定为治疗的候选者。在一些实施方案中，如果来自受试者的样品中的sTREM2水平与对照值相比相差至少2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多，那么将受试者鉴定为治疗的候选者。在一些实施方案中，健康对照值通过评估全部已知不具有神经变性疾病的受试者或受试者群体(例如，10、20、50、100、200、500、1000个受试者或更多)中的sTREM2水平来确定。
在一些实施方案中，将sTREM2的水平与针对疾病对照或疾病对照群体(例如，罹患阿尔茨海默病的人或群体，或罹患通过TREM2中的突变表征的神经变性疾病(诸如通过TREM2中的R47H突变表征的阿尔茨海默病)的人或群体)确定的对照值进行比较。在一些实施方案中，如果来自受试者的样品中的sTREM2水平与疾病对照或疾病对照群体中的sTREM2水平相当(例如，在其20％、10％、5％、4％、3％、2％或1％之内)，那么将受试者鉴定为治疗的候选者。在一些实施方案中，疾病对照值通过评估全部已知具有神经变性疾病(例如，阿尔茨海默病)的受试者或受试者群体(例如，10、20、50、100、200、500、1000个受试者或更多)中的sTREM2水平来确定。
在一些实施方案中，根据一个或多个患者特征，诸如年龄、性别、种族或其他标准，将受试者群体与测试受试者匹配。在一些实施方案中，使用与用于评估测试受试者中的sTREM2水平的样品相同类型的来自受试者群体的样品(例如，包含脑脊髓液的样品)建立对照值。
在一些实施方案中，使用包含流体例如血液、血浆、血清、尿液或脑脊髓液的样品测量sTREM2水平。在一些实施方案中，样品包含脑脊髓液。
STREM2水平可以根据本文所述的方法测量，例如，如上文第III部分中所述。在一些实施方案中，使用ELISA测定来测量sTREM2水平。
监测抗TREM2抗体的治疗功效
在另一方面，提供了监测抗TREM2抗体对患有神经变性疾病的受试者的治疗功效的方法。在一些实施方案中，已经将被治疗的受试者诊断为患有如本文所述的神经变性疾病。在一些实施方案中，受试者已经被诊断为患有阿尔茨海默病。在一些实施方案中，受试者已经被诊断为患有通过TREM2中的突变表征的神经变性疾病，诸如通过TREM2中的R47H突变表征的阿尔茨海默病。
在一些实施方案中，所述方法包括：
测量在施用抗TREM2抗体之前(例如，第一次施用给受试者)从受试者获得的第一样品中的sTREM2水平；
用与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分(例如，如本文所述的抗体)治疗受试者；以及
测量在施用抗TREM2抗体之后从受试者获得的第二样品中的sTREM2水平；
其中与来自受试者的第一样品相比，来自受试者的第二样品中的sTREM2水平的降低表明受试者对使用抗TREM2抗体的治疗作出反应。
在一些实施方案中，与来自受试者的第一样品相比，来自受试者的第二样品中的sTREM2水平降低至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％表明受试者对使用抗TREM2抗体的治疗作出反应。
在一些实施方案中，所述方法包括：
测量在施用抗TREM2抗体之前(例如，第一次施用给受试者)从受试者获得的第一样品中的sTREM2水平；
用与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分(例如，如本文所述的抗体)治疗受试者；以及
测量在施用抗TREM2抗体之后从受试者获得的第二样品中的sTREM2水平；
其中与来自受试者的第一样品相比，来自受试者的第二样品中的sTREM2水平的增加表明受试者对使用抗TREM2抗体的治疗作出反应。
在一些实施方案中，与来自受试者的第一样品相比，来自受试者的第二样品中的sTREM2水平增加至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％表明受试者对使用抗TREM2抗体的治疗作出反应。
在一些实施方案中，测量步骤包括使用如本文所述的用于sTREM2水平的测定，例如，如上文第III部分中所述。在一些实施方案中，使用免疫测定(例如，ELISA测定)测量样品中的sTREM2水平。
在一些实施方案中，样品是如本文所述的样品(例如，如上文第III部分中所述)。在一些实施方案中，样品包含流体，例如血液、血浆、血清、尿液或脑脊髓液。在一些实施方案中，样品包含脑脊髓液。在一些实施方案中，第一样品和第二样品是相同类型的样品(例如，第一样品和第二样品各自为脑脊髓液样品)。
在一些实施方案中，受试者已经用抗TREM2抗体(例如，具有如本文所述的一种或多种TREM2相关活性，识别人TREM2的与如本文所述的抗体克隆所识别的表位相同或基本上相同的表位，和/或包含如本文所述的抗体克隆的一个或多个CDR、重链和/或轻链序列的抗体或其抗原结合部分)治疗了至少1周、至少2周、至少3周、至少4周、至少5周、至少6周、至少7周、至少8周、至少9周、至少10周或更长时间。在一些实施方案中，受试者已经用抗TREM2抗体治疗了至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月或更长时间。
在一些实施方案中，取决于与第一样品相比在第二样品中检测到的sTREM2水平的变化水平，所述方法还可包括调整施用给受试者的抗TREM2抗体的剂量(例如，增加或减少抗TREM2抗体的剂量和/或施用频率)。在一些实施方案中，所述方法还可包括调整所施用的抗TREM2抗体(例如，施用不同的抗TREM2抗体)。在一些实施方案中，所述方法还可包括中断使用抗TREM2抗体的治疗。
VI.药物组合物和试剂盒
在另一方面，提供了包含与人TREM2蛋白特异性结合的抗体的药物组合物和试剂盒。在一些实施方案中，药物组合物和试剂盒用于治疗神经变性疾病，例如通过TREM2中的突变表征的神经变性疾病。在一些实施方案中，药物组合物和试剂盒用于调节(例如，增强或抑制)一种或多种TREM2活性，例如Syk磷酸化。在一些实施方案中，药物组合物和试剂盒用于调节(例如，降低或增加)sTREM2水平。在一些实施方案中，药物组合物和试剂盒用于鉴定患有神经变性疾病的受试者是否是用于使用抗TREM2抗体进行治疗的合适候选者。在一些实施方案中，药物组合物和试剂盒用于监测抗TREM2抗体在患有神经变性疾病的受试者中的治疗功效。
药物组合物
在一些实施方案中，提供了包含抗TREM2抗体的药物组合物。在一些实施方案中，抗TREM2抗体是如上文第III部分中所述的抗体(或抗原结合部分)。
在一些实施方案中，药物组合物包含如本文所述的抗TREM2抗体，并且还包含一种或多种药学上可接受的载剂和/或赋形剂。药学上可接受的载剂包括生理上相容且不干扰或以其他方式抑制活性剂的活性的任何溶剂、分散介质或包衣。各种药学上可接受的赋形剂是本领域熟知的。
在一些实施方案中，载剂适于静脉内、肌内、口服、腹膜内、鞘内、透皮、局部或皮下施用。药学上可接受的载剂可含有一种或多种生理上可接受的化合物，所述化合物例如用来使组合物稳定或者增加或减少一种或多种活性剂的吸收。生理上可接受的化合物可以包括，例如，碳水化合物诸如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖，抗氧化剂诸如抗坏血酸或谷胱甘肽，螯合剂，低分子量蛋白质，减少活性剂的清除或水解的组合物，或赋形剂或其他稳定剂和/或缓冲剂。其他药学上可接受的载剂及其制剂是本领域众所周知的。
本文所述的药物组合物可以本领域技术人员已知的方式制造，例如通过常规的混合、溶解、粒化、糖衣片制造(dragee-making)、乳化、胶囊化、包埋或冻干过程。以下方法和赋形剂仅具有示例性且决不具有限制性。
对于口服施用，抗TREM2抗体可以通过将其与本领域公知的药学上可接受的载剂组合来配制。此类载剂使得化合物能够被配制成片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、乳液、亲脂和亲水性混悬液、液体、凝胶、糖浆、浆液、混悬液等，以用于由待治疗的患者口服摄入。用于口服使用的药物制剂可以通过以下方式获得：将化合物与固体赋形剂混合，任选地研磨所得混合物，并且(如果需要的话)在添加合适的助剂之后，加工颗粒混合物以获得片剂或糖衣丸核心。合适的赋形剂包括，例如，填充剂，诸如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纤维素制剂，诸如例如玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可以添加崩解剂，诸如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐，诸如海藻酸钠。
可以配制用于通过注射(例如通过弹丸式注射或连续输注)进行肠胃外施用的抗TREM2抗体。对于注射，可以通过将一种或多种化合物溶解、混悬或乳化于水性或非水性溶剂，诸如植物油或其他类似油、合成脂族酸甘油酯、高级脂肪酸的酯或丙二醇中；并且必要时与常规添加剂，诸如增溶剂、等张剂、混悬剂、乳化剂、稳定剂和防腐剂一起来将它们配制成制剂。在一些实施方案中，化合物可以配制于水溶液中，例如生理上相容的缓冲液诸如汉克氏溶液(Hanks’s solution)、林格氏溶液(Ringer’s solution)，或生理盐水缓冲液。用于注射的制剂可以单位剂型，例如于添加有防腐剂的安瓿或多剂量容器中提供。组合物可以采用诸如于油性或水性媒介物中的混悬液、溶液或乳液等形式，并且可以含有配制剂，诸如混悬剂、稳定剂和/或分散剂。
在一些实施方案中，抗TREM2抗体被制备成以持续释放、控制释放、延长释放、定时释放或延迟释放的制剂的形式，例如以含有活性剂的固体疏水性聚合物的半透性基质的形式递送。各种类型的持续释放材料已确立并且是本领域技术人员熟知的。当前的延长释放制剂包括膜衣片剂、多颗粒或丸剂体系、使用亲水性或亲脂性材料的基质技术以及具有成孔赋形剂的蜡基片剂。持续释放递送体系可以取决于其设计而经数小时或数天的过程释放化合物，例如经4、6、8、10、12、16、20、24小时或更长时间。通常，持续释放制剂可以使用天然存在的或合成的聚合物制备，所述聚合物例如聚合的乙烯基吡咯烷酮，诸如聚乙烯吡咯烷酮(PVP)；羧乙烯基亲水性聚合物；疏水性和/或亲水性水胶体，诸如甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素；以及羧基聚甲烯(carboxypolymethylene)。
通常，用于体内施用的药物组合物是无菌的。灭菌可以根据本领域已知的方法实现，例如加热灭菌、蒸汽灭菌、无菌过滤或辐照。
本公开的药物组合物的剂量和所需药物浓度可根据设想的特定用途而变化。确定施用的适当剂量或途径完全在本领域技术人员的范围内。合适的剂量还在上文第V部分中有所描述。
试剂盒
在一些实施方案中，提供了包含抗TREM2抗体的试剂盒。在一些实施方案中，抗TREM2抗体是如上文第III部分中所述的抗体(或抗原结合部分)。
在一些实施方案中，试剂盒还包含一种或多种另外的治疗剂。例如，在一些实施方案中，试剂盒包含如本文所述的抗TREM2抗体，并且还包含用于治疗神经变性疾病例如阿尔茨海默病的一种或多种另外的治疗剂。在一些实施方案中，治疗剂是用于治疗神经变性疾病的认知或行为症状的药剂(例如，抗抑郁剂、多巴胺激动剂或抗精神病药)。在一些实施方案中，治疗剂是神经保护剂(例如，卡比多巴/左旋多巴、抗胆碱能剂、多巴胺能剂、单胺氧化酶B(MAO-B)抑制剂、儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)抑制剂、谷氨酸能剂、组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂、大麻素、半胱天冬酶抑制剂、褪黑激素、抗炎剂、激素(例如，雌激素或孕酮)或维生素)。
在一些实施方案中，试剂盒包含如本文所述的抗TREM抗体，并且还包含一种或多种用于测量sTREM2水平的试剂。在一些实施方案中，试剂盒包含如本文所述的抗TREM抗体，并且还包含一种或多种用于测量TREM2活性(例如，用于测量Syk磷酸化)的试剂。
在一些实施方案中，试剂盒还包含说明材料，所述说明材料含有用于实践本文所述方法的指导(即，方案)(例如，将试剂盒用于如上文第V部分中所述的治疗或预后方法的说明书)。虽然说明材料通常包括书面或打印材料，但是它们并不限于这些。本公开涵盖能够存储此类说明书并且将它们传达给最终用户的任何介质。这样的介质包括但不限于电子存储介质(例如，磁盘、磁带、盒式磁带、芯片)、光学介质(例如，CD-ROM)等。这样的介质可包括提供此类说明材料的互联网网站的网址。
VII.实施例
将通过具体实施例来更详细地描述本发明。以下实施例仅出于说明目的而提供，且不欲以任何方式限制本发明。
实施例1.产生和表征抗TREM2抗体的方法
小鼠Fc融合的人TREM2 ECD的重组表达和纯化
将人TREM2(UniProtKB ID-Q9NZC2)的胞外结构域(残基19-172)亚克隆到在N末端区域具有来自小鼠IgGκ链V-III的分泌信号氨基酸1-20(UniProtKB ID–P01661)且在C末端区域具有小鼠Fc标签的pRK载体中，其中在TREM2 ECD与Fc之间具有GGGGS。
根据制造商的说明书，使用Expi293FTM表达系统试剂盒将纯化的质粒转染到Expi293FTM细胞(Thermo Fisher)中。为了抑制N连接聚糖的成熟并降低糖基化异质性，在转染之后立即以1μg/mL的浓度向培养物中添加高甘露糖苷酶I的抑制剂kifunensine(Sigma)。将转染细胞在轨道式振荡器(Infors HT Multitron)中于6％CO2的潮湿气氛中在125rpm和37℃下孵育。转染后16小时将ExpiFectamineTM 293转染增强剂1和2添加到细胞中，并且转染后96小时收获培养基上清液。向澄清的上清液中补充不含EDTA的蛋白酶抑制剂(Roche)，并储存于-80℃。
对于rhTREM2-mFc分离，将澄清的培养基上清液加样到HiTrap MabSelect SuReProtein A亲和柱(GE Healthcare Life Sciences)上，并用200mM精氨酸和137mM琥珀酸盐缓冲液pH 5.0洗涤。融合蛋白在100mM QB柠檬酸盐缓冲液pH 3.0和50mM NaCl中洗脱。洗脱后，立即将1M Tris-HCl缓冲液pH 8.0添加到蛋白质溶液中以中和pH。在Superdex 200increase 10/300GL柱(GE Healthcare Life Sciences)上，通过尺寸排阻色谱(SEC)分离蛋白质聚集物。SEC流动相缓冲液保持为20mM Tris-HCl pH 8.0、100mM NaCl和50mM精氨酸，这也是蛋白质储存缓冲液。所有色谱步骤均在AKTA pure或AKTA Avant系统(GEHealthcare Life Sciences)上进行。
His标签化的TREM2 ECD的重组表达和纯化
将TREM2(UniProtKB-Q9NZC2)的胞外结构域(残基19-172)亚克隆到在N末端区域具有来自小鼠Igκ链V-III的分泌信号氨基酸1-20(UniProtKB ID–P01661)且在C末端区域具有6X-His标签的pRK载体中。通过测序验证插入子，并进行maxi prep质粒纯化。
根据制造商的说明书，使用Expi293FTM表达系统试剂盒将纯化的质粒转染到Expi293FTM细胞(Thermo Fisher)中。将转染细胞在轨道式振荡器(Infors HT Multitron)中于6％CO2的潮湿气氛中在125rpm和37℃下孵育。转染后16小时将ExpiFectamineTM 293转染增强剂1和2添加到细胞中，并且转染后96小时收获培养基上清液。
向收获的培养基中补充1M咪唑pH 8.0，至10mM的最终浓度，并使用孔径为0.4微米的NalgeneTM Rapid-FlowTM一次性过滤装置(Thermo Fisher)进行过滤。将HisPurTM Ni-NTA树脂(Thermo Fisher)用MQ水洗涤，并用加样缓冲液(20mM Tris pH 8.0、150mM NaCl和10mM咪唑)平衡。使用重力流方法进行亲和纯化。将收获的培养基加样到树脂上，并用补充有50和100mM咪唑的加样缓冲液洗涤非特异性结合的蛋白质。用20mM Tris pH 8.0、150mMNaCl和200mM咪唑洗脱结合的His标签化的TREM2胞外结构域。使用Amicon 10kDa浓缩器浓缩洗脱的蛋白质，并使用AKTA Avant系统(GE Healthcare Life Sciences)通过凝胶过滤色谱进一步纯化浓缩的蛋白质。将蛋白质加样到用1x PBS平衡的HiLoad Superdex 20016/600(GE Healthcare Life Sciences)柱上，并使用1x PBS作为运行缓冲液洗脱并分级分离。在变性和天然条件下，通过聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳分析洗脱的级分。通过分析性尺寸排阻色谱和完整蛋白质质量测定进一步表征洗脱的级分。PAGE和分析性表征的结果用于合并糖基化程度高的蛋白质级分，并且将这些蛋白质级分等分并储存于-80℃。
小鼠的免疫
用TREM2Fc蛋白和表达TREM2和DAP12的BWZ细胞(“Trem2Dap12”)的交替注射对野生型Balb/c和KO C57Bl6小鼠进行免疫。每两周通过足垫用在Sigma佐剂中的5-10μg抗原进行免疫，持续4-6周。通过基于细胞的ELISA筛选血清滴度。滴度>104的动物被选择进行最终加强。在没有佐剂的情况下通过足垫对小鼠给予最终加强，并在加强后3天将其处死。收获腘和腹股沟淋巴结，通过使其通过细胞过滤网而制成单细胞悬浮液，然后如下所述将淋巴细胞用于杂交瘤的产生。
杂交瘤文库的产生
对从淋巴结中收获的B细胞进行处理和计数。将它们与P3X63Ag8细胞1:1混合，并使用BTX Hybrimune电融合设备融合。将融合的杂交瘤涂板于具有100μL/孔HAT(次黄嘌呤-氨基蝶呤-胸苷)选择培养基的60-96孔板中。一周后，向板中给料HT(次黄嘌呤胸苷)。两周后，收集50μL/孔的上清液并如下所述通过细胞ELISA针对抗原特异性结合进行筛选。
人TREM2/DAP12稳定表达HEK细胞系的产生
分别用表达野生型人TREM2和DAP12、变异型TREM2 R47H和Dap12，以及仅DAP12的载体转染HEK293细胞。选择稳定表达的克隆，并通过流式细胞仪评估细胞表面TREM2表达。使用APC缀合的大鼠抗人/小鼠TREM2单克隆抗体(R&D MAB17291)进行表面TREM2表达分析。克隆#6显示出最高的野生型TREM2表达水平，并且被选择并命名为HEK293-H6。具有变异型TREM2 R47H的最高表面表达的克隆命名为HEK293-R4。通过蛋白质印迹分析对稳定表达DAP12的克隆进行分析，并将选择的克隆命名为HEK293-DAP12#1。
通过蛋白质ELISA针对结合筛选抗体
在蛋白质ELISA中以384孔形式筛选杂交瘤上清液。将四种不同的蛋白质包被在4个象限中：将TREM2-His、ADAM10肽115-143氨基酸、134-154氨基酸和149-170氨基酸以1μg/ml包被在384孔板的PBS中。
将25μL/孔的杂交瘤上清液添加到板中。将板在室温下孵育1小时，用PBST缓冲液洗涤3次。将25μL/孔的以1:7000稀释于培养基中的二级检测抗体山羊抗小鼠HRP(SouthernBiotech)添加到板中并在室温下孵育1小时。1小时后，将板用PBST缓冲液洗涤三次。将板用25μL/孔的TMB底物(ThermoFisher)显影，并用25μL/孔的1 N硫酸淬灭。在
Figure BDA0002467016930001641
读板器上在A450处对信号定量。OD为TREM2和/或肽的背景的三倍的孔被认为是阳性的，并继续进行二次筛选。
抗TREM2抗体的抗体结合数据在下表1中示出。
表1.TREM2抗体的结合数据
Figure BDA0002467016930001642
Figure BDA0002467016930001651
N.D.＝未测定
NB＝未检测到结合
Biacore
通过胺偶联将抗鼠Fc抗体(获自GE Healthcare)固定在CM5芯片(获自GEHealthcare)的表面上，以达到约6,000至8,000个反应单位(RU)。通过注入均获自GEHealthcare的1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的混合物将表面活化7分钟。将抗鼠Fc抗体以25μg/mL稀释于乙酸钠(pH 5.0)中，并以5μL/分钟的流速注入10分钟，然后注入乙醇胺(获自GE Healthcare)7分钟。
纯化的抗TREM2杂交瘤(20μg/mL)被捕获，达到1000～1500RU。使用任一单循环动力学方法，以30μL/分钟的流速注入一系列连续稀释的TREM2-His蛋白(例如，3.4nM至300nM)。使用1:1朗格缪尔模型拟合传感图以估计kon和koff。
通过细胞ELISA针对与Trem2Dap12的结合筛选抗体
通过将表达Trem2Dap12的HEK 293涂板于96孔细胞培养Nunc板的培养基中进行初次筛选。将50,000个细胞/孔涂板在测定培养基中，并在37℃下孵育。第二天，从板中除去培养基并且向板中添加50μL//孔的杂交瘤上清液，在4℃下孵育1小时。孵育后，使用Biotek洗板器用HBSS缓冲液将板洗涤六次。将50μL/孔的以1:2000稀释于培养基中的二级检测抗体山羊抗小鼠HRP(Southern Biotech)添加到板中并在4℃下孵育1小时。1小时后，将板用HBSS缓冲液洗涤六次。将板用50μL/孔的TMB底物(ThermoFisher)显影，并用50μL/孔的1 N硫酸淬灭。在
Figure BDA0002467016930001661
读板器上在A450处对信号定量。OD为TREM2的背景的三倍的孔被认为是阳性的，并继续进行二次筛选。
来自初次筛选的阳性孔继续进行二次筛选，其中在如sTREM2、pSyk和FACS结合的功能测定中对其进行筛选。
混合细胞系上的FACS结合
通过0.05％胰蛋白酶收获过表达人TREM2的HEK 293(H6)和过表达GFP的HEK 293(B5)，并在37℃下孵育2小时以回收表面TREM2。收获过表达小鼠TREM2的293F，并用NucBlue活细胞染色ReadyProbes试剂标记10分钟(每mL培养基添加2滴试剂)。标记后，将细胞用1xPBS洗涤两次。将NucBlue标记的293F细胞与H6和B5在具有人Trustain FcX溶液(Biolegend，目录号422302)的FACS缓冲液(PBS+0.5％BSA)中混合，密度为每细胞系106/mL。将混合细胞系以每孔300,000个细胞接种在96孔圆底中，并在室温下孵育20分钟。孵育后，将细胞离心并添加测试的抗TREM2抗体，然后在冰上孵育45分钟。孵育后，将细胞离心并用FACS缓冲液洗涤三次。然后将细胞与二抗(Alexa Fluor 647 AffiniPure F(ab’)2片段山羊抗小鼠IgG，Fcγ片段特异性(1:200，Jackson ImmunoResearch，目录号115-606-071)一起在冰上孵育30分钟。孵育后，将细胞用FACS缓冲液洗涤三次，并重悬于90μL的FACS缓冲液中，然后通过流式细胞术(BD FACSCanto II,San Jose,CA)进行分析。对于每个样品获得20,000个事件。
抗TREM2抗体与表达人或小鼠TREM2的细胞的结合的抗体表面结合数据在图1A-D和下表2中示出。表2中的数据作为相对于结合的倍数(fold over binding，FOB)给出。
表2.与表达人或小鼠TREM2的HEK细胞的抗体表面结合
Figure BDA0002467016930001671
Figure BDA0002467016930001681
N.D.＝未测定
原代巨噬细胞上的FACS结合
按照RosetteSep人单核细胞富集混合液方案(Stemcell Technologies，目录号15068)分离人单核细胞。将分离的单核细胞在洗涤缓冲液(PBS+2％FBS)中洗涤，并重悬于10mL ACK裂解溶液中以裂解红血细胞。添加20mL洗涤缓冲液以停止ACK裂解，然后离心并用培养基(RPMI1640+10％FBS+P/S)再洗涤一次。在250mL烧瓶中，在50ng/mL人M-CSF的存在下，人单核细胞在培养基(RPMI1640+10％FBS+P/S)中分化成巨噬细胞。在第3天掺入新鲜的人M-CSF，并在第5天收获人巨噬细胞。将人巨噬细胞以106/mL的密度重悬于具有人Trustain FcX溶液(Biolegend，目录号422302)和1％人血清的FACS缓冲液中，并以每孔100,000个细胞接种于96孔圆底中，然后在室温下孵育20分钟。将细胞离心并弃去上清液，然后将测试的抗TREM2抗体添加(100nM)到96孔板中，并在冰上孵育45分钟。孵育后，将细胞离心并用FACS缓冲液洗涤三次。然后将细胞与二抗(APC山羊抗小鼠Ig，多重吸附，BDPharmingen，#550826，1:500)一起在冰上孵育30分钟。孵育后，将细胞用FACS缓冲液洗涤三次，并重悬于90μL的FACS缓冲液中，然后通过流式细胞术(BD FACSCanto II,San Jose,CA)进行分析。对于每个样品获得20,000个事件。
抗TREM2抗体与原代人巨噬细胞的结合在图2中示出。
TREM2蛋白/肽ELISA
将TREM2-His标签化蛋白或链霉亲和素吸附至384孔高结合板。通过添加3％BSA/含0.05％Tween-20的Tris缓冲盐水(TBST)将孔封闭。用TBST洗涤后，将与TREM2氨基酸115-143、134-154或149-170相对应的生物素化的肽添加到含有链霉亲和素的孔中。在添加杂交瘤上清液或对照抗体之前，将板洗涤。将一级检测抗体在室温下孵育1小时，接着进行五次TBST洗涤，然后添加抗小鼠IgG-HRP缀合的二抗。在五次TBST洗涤之后，添加检测试剂(一步式TMB Ultra，Thermo)并孵育7分钟，然后添加终止试剂(2N硫酸)。使用Biotek读板器测量450nm下的吸光度。所有步骤均使用Hamilton Nimbus液体处置器和Biotek 405洗板器进行。
TREM2 pSYK AlphaLisa
使用来自Perkin-Elmer的商业AlphaLisa测定来测量TREM2依赖性pSyk信号传导的激活。该测定使用被称为H6的细胞系，所述细胞系是过表达TREM2和DAP12(TREM2信号传导中的衔接蛋白)的工程改造的HEK 293细胞系。使细胞在T-150烧瓶中生长2-3天，然后在含有1X glutamax、10％FBS、1X Pen/Strep溶液和200μg/mL博莱霉素的DMEM中进行测定。在测定之前，通过胰蛋白酶消化、离心和重悬于新鲜的无抗生素培养基中回收细胞。然后将它们在37℃组织培养箱中在50mL锥形管中储存2-6小时，然后离心并重悬于HBSS中，以用于pSyk测定。
在剧烈振荡下，使用1小时的室温孵育，将用于在pSyk测定中进行筛选/测试的含有抗TREM2抗体的样品包被到96孔板中的磁性蛋白G包被的Dynabeads(ThermoScientific)上。包被后，将H6细胞的悬浮液添加到珠粒包被的抗体(从3,000,000个细胞/mL的悬浮液中取100μL/孔，每孔300,000个细胞)中。将含有抗体包被的珠粒和H6细胞的96孔板在37℃组织培养箱中短暂孵育5分钟。之后，将板取出并离心。通过吸移去除上清液，并通过添加25μL/孔的裂解缓冲液(来自Cell Signaling Technology，补充有1mM PMSF)制备裂解物，并通过吸移进行混合。在进行测定之前，将裂解物在冰上孵育30分钟。
在裂解物的制备和孵育之后，使用Perkin Elmer pSyk Alpha Lisa试剂盒的标准方案测定裂解物的pSyk。简而言之，将10μL裂解物/孔转移至白色不透明的384孔Optiplate(Perkin Elmer)中。接下来，每孔添加5μL受体混合物(含有受体珠粒的工作溶液)，然后用铝箔封口将板密封并在室温下孵育1小时。之后，在减光条件下将5μL供体混合物(含有供体珠粒的工作溶液)添加到每个孔中。再次将板密封并在室温下孵育1小时。最后，在PerkinElmer EnVision读板器上使用Alpha Lisa设置读板。由抗TREM2抗体造成的pSyk诱导在图3A和下表3中示出，并且作为相对于背景的倍数(fold over background，FOB)给出。图3B和表4示出所选抗体克隆在表达人TREM2的HEK细胞上的EC50值。
表3.由TREM2抗体造成的pSyk诱导
Figure BDA0002467016930001701
Figure BDA0002467016930001711
表4.表达人TREM2的HEK细胞上的TREM2抗体EC50
Figure BDA0002467016930001721
另外的数据在图3C中示出，所述数据证实非激动剂21D11和21D4不诱导p-Syk。这些数据如下产生。在实验之前两天，将稳定过表达TREM2和DAP12的HEK293细胞以40,000个细胞/孔涂板于96孔聚-D-赖氨酸包被的板上。在利用脂质囊泡的PAM实验中，接着使用Hamilton Nimbus液体处置器，以脂质体浓度0、脂质体EC20、EC50或EC80(参见下文)，在96孔板上将脂质囊泡(参见以下方案)与抗体(恒定浓度)混合于PBS中。仅在激动剂实验中(无脂质体)，将不含脂质体的抗体稀释于PBS中。使用Biotek 405/406洗板器，将细胞用HBSS洗涤3次，然后使用Hamilton Nimbus液体处置器每孔添加50μL脂质体/抗体混合物。然后将含有脂质体/抗体的细胞板转移至37℃培养箱中，持续5分钟。通过轻弹板去除脂质体/抗体溶液，并使用液体处置器添加40μL裂解缓冲液(Cell Signaling Technologies，CST)。将裂解物在4℃下孵育30分钟，然后冷冻于-80℃，或立即继续进行如上所述的alpha-LISA测定。
可溶性TREM2(TREM2脱落)测定
在抗体处理之前4-16小时，将稳定表达人TREM2和DAP12的HEK293细胞涂板到预先包被有聚-D-赖氨酸的96孔板上。将抗体上清液或对照抗体稀释到新鲜的完全培养基中，并一式三份添加到细胞上。将细胞与含有抗体的培养基一起孵育18小时，然后去除细胞上清液以通过TREM2 ELISA进行测定。将样品和标准品以1:10稀释到测定板中的封闭缓冲液(3％BSA/TBST)中。简而言之，将MSD小斑点(small spot)链霉亲和素板用生物素化的抗hTREM2多克隆抗体(R&D Systems)在4℃下包被过夜或在室温下包被1小时。然后用封闭缓冲液3％BSA/TBST将板在4℃下封闭过夜，或在室温下封闭1小时。在添加稀释剂(封闭缓冲液)和来自细胞培养物的变性上清液之前，在Biotek洗板器(用于所有洗涤)中用TBST将板洗涤3次。稀释于3％BSA/TBST中的TREM2-His蛋白用作绝对定量的标准品。在室温下孵育1小时后，将板用TBST洗涤。添加稀释于3％BSA/TBST中的一级检测抗体磺基标签化的山羊抗人TREM2(R&D Systems)，并在室温下孵育1小时。用TBST洗涤后，使用2x MSD读取缓冲液T使MSD板显影，然后使用MSD Sector读板器进行检测。使用Prism 7.0软件(Graphpad)，通过拟合标准曲线将MSD值转换为sTREM2的绝对量。TREM2脱落的调节表示为与培养基中没有特异性TREM2抗体的情况下培养的细胞的比率。TREM2脱落测定的结果在图4中示出。如图4所示，42E8定义了一类阻断TREM2脱落的抗体，而21D4定义了一类增强TREM2脱落的抗体。
正向变构调节剂(PAM)和单点pSyk筛选
在实验之前两天，将稳定过表达TREM2和DAP12的HEK293细胞以40,000个细胞/孔涂板于96孔聚-D-赖氨酸包被的板上。然后使用Hamilton Nimbus液体处置器，以浓度0、EC20、EC50或EC80(参见下文)，在96孔板上将脂质囊泡(参见以下方案)与抗体混合。使用Biotek 405/406洗板器，将细胞用HBSS洗涤3次，然后使用Hamilton Nimbus液体处置器每孔添加50μL脂质体/抗体混合物。然后将含有脂质体/抗体的细胞板转移至37℃培养箱中，持续5分钟。通过轻弹板去除脂质体/抗体溶液，并使用液体处置器添加40μL裂解缓冲液(Cell Signaling Technologies，CST)。将裂解物在4℃下孵育30分钟，然后冷冻于-80℃，或立即继续进行如上所述的alpha-LISA测定。
脂质体形成和滴定，以确定介导pSyk活性的脂质体在过表达TREM2/DAP12的细胞 上的EC20、EC50和EC80
在实验同一天制备脂质体，如下：将7mg DOPC(1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱)和3mg POPS(1-棕榈酰基-2-油基-sn-甘油-3-磷酸-L-丝氨酸)在玻璃小瓶中的氯仿中配混并在N2气流下干燥1-2小时，或直到完全干燥。将脂质混合物重悬于1mL HBSS(10mg/mL最终脂质浓度)中并涡旋2-3分钟。随后，使用构造有一个100nm孔径的膜的Avanti微型挤出机将脂质悬浮液挤出29次，以形成10mg/mL的小单层囊泡。
脂质体EC20、EC50和EC80通过在十点稀释曲线中以6mg/mL(使用等于793g/mol的分子量的摩尔百分比加权平均数计算)开始，下降至0.00157mg/mL滴定脂质体来单独确定。将脂质体稀释于HBSS中，并且如以上方案中那样，使用Hamilton Nimbus液体处置器将每孔50μL脂质体溶液添加到过表达TREM2/DAP12的细胞中。将细胞孵育5分钟，然后在40μL CST裂解缓冲液中裂解，在4℃下孵育30分钟，然后冷冻于-80℃或继续进行alpha-LISA测定。如上所述从10μL裂解物中测量pSyk反应，并且在Prism中使用非线性回归(4参数剂量反应)拟合来拟合曲线。测得的EC20为0.046mg/mL，EC50为0.212mg/mL，并且EC80为0.967mg/mL。
人巨噬细胞趋化性测定
按照RosetteSep人单核细胞富集混合液方案(Stemcell Technologies，目录号15068)分离人单核细胞。将分离的单核细胞在洗涤缓冲液(PBS+2％FBS)中洗涤，并重悬于10mL ACK裂解溶液中以裂解红血细胞。添加20mL洗涤缓冲液以停止ACK裂解，然后将样品离心并用培养基(RPMI1640+10％FBS+P/S)再洗涤一次。将细胞以100万/mL的密度重悬于培养基中，并且在125mL烧瓶(2500万/烧瓶)中在人MCSF(50ng/mL，Gibco，目录号PHC9501)的存在下分化为巨噬细胞。在第3天掺入新鲜的人M-CSF。在第5天收获人巨噬细胞，并用迁移测定缓冲液(RPMI，无酚红+0.1％BSA)洗涤。洗涤后，将细胞以1,000,000个细胞/mL的密度重悬于测定缓冲液中，并用1.33μM钙黄绿素AM荧光染料(Corning，目录号354217)标记，在细胞培养箱中放置45分钟。孵育后，将细胞用测定缓冲液洗涤一次，并以1,000,000/mL的密度重悬于测定缓冲液中。使用Corning FluoroBlok 24-多孔插入系统(Corning，目录号351158)进行人巨噬细胞趋化性测定。将标记细胞悬浮液添加到插入物上(100μl/孔)并放在一旁。在单独的24孔板中，添加650μL化学引诱物C5a(1ng/mL)。将含有细胞的多孔插入物轻轻降低到含有化学引诱物的板中，并且立即放置到处于485/530nm(Ex/Em)波长的底部荧光读板器(BioTeck，SYNERGY微板读取器)中。在各个时间点测量从已经迁移到插入物的底部表面的细胞发射的荧光。
吞噬作用测定
使用pHrodoTM红标记的髓磷脂制剂进行的吞噬作用测定可用于检查人和小鼠原代小胶质细胞、巨噬细胞或巨噬细胞/小胶质细胞系(分别诸如THP-1和ECO20)的吞噬活性。简而言之，将吞噬细胞涂板在96孔板上。用抗体对细胞预处理(或保持未处理以用作阴性对照，或用对照试剂进行处理)，将适量的标记底物添加到细胞中，并将细胞在37℃下孵育2至6小时。通过Opera Phenix高内涵筛选系统(PerkinElmer)测量吞噬活性。
细胞存活测定
先前的研究已表明，TREM2在巨噬细胞分化和存活中起到关键作用(Wu等,J.Exp.Med.,2009,212:681-697)。使用来自野生型和TREM2敲除小鼠的小胶质细胞进行的最新研究显示，来自敲除小鼠的小胶质细胞具有细胞存活缺陷(Zheng等,J Neurosci,2017,37:1772-1784)。TREM2可以支持小胶质细胞能量稳态(Ulland等,Cell,2017,170:649-663)。使用TREM2敲除小鼠进行的研究表明，TREM2是髓系细胞存活所必需的。为了了解在有限的M-CSF条件下用TREM2激动性抗体增强TREM2活性对于巨噬细胞/小胶质细胞的存活是否足够，使用如本文所述的抗体进行人巨噬细胞分化和存活研究。在滴定浓度的包被板的TREM2抗体或同种型对照的存在下，将从外周血中分离的人单核细胞与5ng/mL M-CSF一起孵育。在第6天，通过CellTiter Glo活力测定确定细胞活力。如图5A-B所示，抗TREM2抗体，诸如抗TREM2激动性抗体RS9.F6、54C2.A1、24B4.A1和19F10.F3，增加在受限的或无M-CSF条件下培养的人巨噬细胞的存活。
Western和AlphaScreen测定可用于观察细胞存活途径中的信号传导组分pS9-GSK3β、pT374-AKT和p-Erk的活化。对于这些测定，从人血细胞中分离单核细胞，并将其以100,000个细胞/孔涂板于96孔细胞培养板中，其中具有含有10％的hyclone FBS、抗生素和50ng/mL M-CSF的RPMI-1640培养基，并且由人单核细胞分化巨噬细胞。在分化的第6天，将细胞在M-CSF撤除下处理4-6小时。将抗TREM2抗体和适当的IgG同种型对照分别以适当的浓度添加到细胞中，并在37℃下孵育5分钟。快速去除培养基，将板置于冰上，并用200μL的冰冷TBS洗涤，并完全去除溶液。用40-50μL的细胞裂解缓冲液裂解细胞，在4℃下振荡1小时。裂解物可以储存于-80℃。来自PerkinElmer的AlphaScreen试剂盒以及pS9-GSK3β、pT374-AKT和p-Erk可用于根据制造商的说明书测量磷酸化。
针对若干信号传导途径，即SYK、ERK1/2、AKT和GSK3-β的活化对抗TREM2抗体进行表征。将由外周单核细胞分化的人巨噬细胞以100,000个细胞/孔的密度涂板于96孔板中。在三种条件下(在培养基中的0％、0.5％和10％FBS)对所述测定进行测试，持续3小时。用抗体RS9.F6、24B4.A1、8A11.B1、3D3.A1、54C2.A1、同种型对照IgG2ak、来自R&D的大鼠抗TREM2、同种型对照大鼠IgG2b刺激细胞15分钟，或不进行处理(NT)。使用Alpha-LISA试剂盒(Perkin Elmer)测量细胞裂解物的p-Y525/526-SYK、p-T202/Y204-ERK1/2、p-S9-GSK3-β和p-S473-AKT。如图6A、6B和6D所示，RS9.F6、24B4.A1、3D3.A1、54C2.A1和大鼠抗TREM2抗体诱导了强烈的p-SYK和pERK1/2信号。抗体中度刺激p-GSK信号(图6C)。
如本文所述的抗TREM2抗体的细胞结合特征、pSyk的活化、sTREM2水平的变化，以及与脂质配体的用以激活pSyk的相互作用的汇总在下表5中示出。
表5.TREM2抗体的汇总
Figure BDA0002467016930001771
Figure BDA0002467016930001781
N.D.＝未测定
*在细胞结合列中，空白表示没有细胞结合
**在pSyk列中，空白表示没有影响，且截止值比背景高5倍
***在sTREM2列中，使用了以下图例：NC＝不变；--＝降低的sTREM2；++＝增加的sTREM2
实施例2.杂交瘤测序
使用Qiagen RNeasy Mini试剂盒(Qiagen)从产生每种抗体的大约5×106个杂交瘤细胞中提取总RNA。使用SMART RACE cDNA扩增试剂盒(BD Biosciences Clontech)，按照供应商的方案合成第一链cDNA。使用分别退火至小鼠γ和κ链C区的3’引物(以下列出的序列)，以及SMART RACE cDNA扩增试剂盒中提供的5’通用引物，通过聚合酶链反应(PCR)扩增重链和轻链的可变区cDNA。
对于VH PCR，3’引物如下：
μIgG1：GGACAGGGATCCAGAGTTCC(SEQ ID NO:301)
μIgG2：AGCTGGGAAGGTGTGCACAC(SEQ ID NO:302)
μIgG3：CAGGGGCCAGTGGATAGAC(SEQ ID NO:303)
对于VL PCR，3’引物如下：
μCκ.1：GACATTGATGTCTTTGGGGT(SEQ ID NO:304)
μCκ.2：TTCACTGCCATCAATCTTCC(SEQ ID NO:305)
通过琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物。与VH和VL基因相对应的DNA片段通过QIA快速凝胶提取试剂盒(Qiagen)纯化，并使用TOPO TA克隆试剂盒(Invitrogen)亚克隆到pCRII-TOPO载体中。通过Sanger测序对每个成功的克隆进行测序，并且每个样品对至少8个克隆测序。
所测序抗体的重链序列、轻链序列和CDR序列在下表15中示出。
实施例3.抗TREM2抗体的表位分仓和表位作图
表位分仓
将有限量(0.25ng/mL)的TREM2-Fc蛋白包被到高结合聚苯乙烯96孔板(例如，Corning 3690)上。随后通过用补充有0.05％Tween 20和3％牛血清白蛋白的Tris缓冲盐水(10mM，Tris，pH 7.5，150mM NaCl)(3％BSA-TBST)填充将板封闭；所有后续抗体稀释液均处于3％BSA-TBST中。用TBST将孔洗涤五次。在室温下，将孔与测试抗体(10μg/ml)和生物素化的探针抗体(0.25-1ng/mL)一起同时孵育1小时。洗涤(5x TBST)后，将孔与链霉亲和素-辣根过氧化物酶缀合物一起在室温下孵育1小时。洗涤(5x TBST)并除去残余缓冲液后，通过添加TMB底物使板显影～1-2分钟，然后通过添加2N硫酸停止。使用Perkin Elmer Envision读板器确定450nm下的吸光度。结合竞争被确定为与不存在竞争抗体的情况相比，在竞争抗体的存在下探针抗体结合的减少百分比。通过计算若干不同抗体探针之间的相对竞争结合来确定表位仓。在图7中，示出抗体被相似的表位集簇。使用Cytoscape 3.5.1版计算集簇。
人TREM2-HEK细胞系上的FACS分仓
通过0.05％胰蛋白酶收获过表达人TREM2的HEK 293(H6)，并在37℃培养箱中孵育2小时以回收表面TREM2。孵育后，将细胞用1xPBS洗涤，并以106/mL的密度添加具有人Trustain FcX溶液(Biolegend，目录号422302)的FACS缓冲液(PBS+0.5％BSA)。将细胞以每孔100,000个细胞接种在96孔圆底中，并在室温下孵育20分钟。孵育后，将抗TREM2抗体(100nM)添加到细胞中，并将细胞在冰上孵育45分钟。孵育后，将大鼠抗h/mTREM2-APC抗体(1:100，R&D，目录号FAB17291A)添加到细胞中，并将细胞在冰上孵育30分钟。孵育后，将细胞用FACS缓冲液洗涤三次，并重悬于10μL的FACS缓冲液中，然后通过流式细胞术(BDFACSCanto II,San Jose,CA)进行分析。对于每个样品获得20,000个事件。与同种型或缓冲液对照孔相比，通过MFI分析确定与R&D抗体竞争的能力。FACS分仓的结果在下表6中示出。
抗TREM2抗体的Octet分仓
使用内部产生的生物素化的人Trem2-His蛋白，通过Octet Red完成与R&D抗体的竞争。将生物素化的人TREM2-His蛋白捕获在链霉亲和素针尖上，然后将针尖在100nM的R&D抗体或缓冲液中孵育3分钟，然后在100nM的测试杂交瘤中孵育3分钟。分析在有或没有与R&D抗体预结合的情况下杂交瘤结合曲线的差异以确定表位。Octet分仓的结果在下表6中示出。
表6.通过FACS和Octet进行的表位分仓
Figure BDA0002467016930001801
Figure BDA0002467016930001811
N.D.＝未测定
使用肽微阵列进行表位作图
人TREM2(SEQ ID NO:96；UniprotKB登录号Q9NZC2)细胞外结构域分成15个氨基酸肽，偏移5个氨基酸(重叠10个氨基酸)。将肽合成并一式三份地共价连接到二氧化硅载玻片上，斑点大小为0.5mm(JPT Technologies,Berlin,Germany)。在补充有0.05％Tween 20的Tris缓冲盐水(10mM，Tris，pH 7.5，150mM NaCl)中的3％牛血清白蛋白(3％BSA-TBST)中将抗体稀释至30μg/mL。如Pepstar用户手册(JPT)中所述，使稀释的抗体与打印到载玻片上的肽在室温下结合2小时。充分洗涤(5x 5min TBST)后，将载玻片与二抗(驴抗小鼠IgG，Alexafluor 647缀合物，在3％BSA-TBST中5μg/mL)一起在室温下孵育1小时。充分洗涤(5x5min TBST，5x5min超纯水)后，将载玻片在氮气下干燥，并在Opera Phenix上的647nm通道中成像。使用ImageJ将图像与肽阵列定义文件(galviewer，JPT)比对，其中对照小鼠IgG用作界标(landmark)。表位作图的结果在下表7中示出。
表7.抗TREM2抗体的表位作图
Figure BDA0002467016930001812
N.D.＝未测定
实施例4.新型TREM2-pSyk激活脂质的筛选
脂质是TREM2的生理配体。了解TREM2的潜在内源性脂质配体，诸如特定细胞或组织类型中或特定疾病状态下的内源性脂质配体，能够分析抗体-脂质生物学相互作用并预测体内功能。进行筛选以鉴定在表达野生型TREM2和DAP12、突变型TREM2和DAP12，或仅DAP12的HEK细胞，以及内源性地表达TREM2的巨噬细胞中诱导p-Syk的脂质配体。还对所选择的抗TREM2抗体进行测试，以表征用以激活p-Syk的抗体与脂质配体的相互作用。
脂质体制备
脂质购自Avanti Polar Lipids(Alabaster,AL)或Echelon Biosciences(SaltLake City,UT)。将每种所筛选的脂质重悬于氯仿中，并以30摩尔％的组成添加到70摩尔％的磷脂酰胆碱(PC；1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱，Avanti Polar Lipids)中。Kdo2-脂质A以10摩尔％的组成与90摩尔％的PC一起添加。将脂质混合物在氮气下干燥，并以4mg/mL的浓度重悬于HBSS中。将混合物涡旋或短暂超声波处理直至重悬，然后超声波浴1-5分钟。脂质体使用1-2周。实验中使用了3个独立批次的脂质体。
HEK293过表达细胞系培养
将过表达TREM2和DAP12、突变型TREM2-R47H和DAP12，或仅DAP12的HEK293细胞系以每孔40,000个细胞的密度涂板于96孔PDL包被的板中，并培养36-48小时，直到90-100％汇合。
人巨噬细胞分化培养
从太平洋血液中心(Blood Centers of the Pacific)获得10mL人血。使用RosetteSep人单核细胞富集混合液(STEMCELL Technologies Inc.；Vancouver,BC；#15068)，根据制造商的方案提取单核细胞。密度梯度用Ficoll-Paque Premium(GEHealthcare Life Sciences；Pittsburgh,PA；#17-5442-02)进行。将分离的单核细胞以
Figure BDA0002467016930001831
万个细胞/mL重悬，并在T175组织培养基处理过的烧瓶中，在补充有50ng/mL人M-CSF(Gibco，#PHC9501)的RPMI、10％Hyclone胎牛血清和青霉素/链霉素中培养5-6天。每2-3天重新补充M-CSF。用PBS洗涤细胞一次，添加15mL新鲜培养基，并通过刮擦收获细胞。在补充有10-25ng/mL M-CSF的组织培养基处理过的96孔板上，将细胞以每孔100,000个细胞的密度培养过夜。
HEK293过表达细胞系和人巨噬细胞的脂质体刺激测定
除去细胞培养基，并用200ul HBSS洗涤细胞一次。将脂质体稀释于HBSS中，浓度范围为0.03125mg/mL至2mg/mL，然后将50μl添加到孔中，每板2-3个技术重复。每个板含有HBSS阴性对照孔、100％PC脂质体对照、5μg/mL激动剂抗TREM2阳性对照(Abnova；台湾；#MAB2056)和5μg/mL小鼠IgG3同种型对照(R&D Systems；Minneapolis,MN；#MAB007)。将刺激物与细胞一起在37℃、5％CO2下孵育5分钟，除去脂质体，并将板冷冻于-80℃。
HEK293过表达细胞系和人巨噬细胞的磷酸化-Syk测定
将细胞在具有1mM PMSF的50ul/孔细胞裂解缓冲液(Cell SignalingTechnology；Danvers,MA；#9803)中，在冰上裂解30分钟至1小时。使用AlphaLISA SureFireUltra p-Syk Tyr525/526测定试剂盒(PerkinElmer，ALSU-PSYK-A10K)，按照制造商的方案测量裂解物中的pSyk水平。将10μl裂解物添加到384孔OptiPlates(PerkinElmer；#6007290)中，并使用EnVision多标记读板器(PerkinElmer)测量AlphaLISA荧光。
脂质体筛选分析
将PSyk AlphaLISA荧光转换为log2标度。从同一板上的HBSS刺激孔的平均荧光值中各自减去脂质体和对照的荧光值(log2(脂质体)-log2(HBSS平均)＝log2(信号))。将结果转换回标准标度以测量倍数变化(2log2(信号)＝倍数变化)。求技术重复倍数变化值的平均值，以获得相对于所列背景的倍数变化(pSyk FOB)。图示表示来自独立实验或个体人供体的值。HEK293过表达细胞系的筛选结果在下表9和图8A-8B中示出。原代人巨噬细胞的筛选结果在下表10和图8C中示出。相对于单独表达的DAP12，对TREM2显示出特异性的HEK293结果可用于推断哪些脂质物类可能在人巨噬细胞上充当TREM2配体。PAHSA、KLA、CL、C1P、BMP、PI、PS、LPE和GalCer可能通过TREM2进行信号传导，因为pSyk水平升高到高于DAP12对照细胞，而PA、So1P和GlcSo可能不通过TREM2进行信号传导。图9A示出所选抗TREM2抗体与脂质配体用以激活p-Syk的相互作用的表征。如图9A所示，21D6.G2和3D3.A1定义了一类可与脂质TREM2激活剂相加作用的TREM2抗体。21D4.D1定义了一类单独诱导pSyk信号传导，但阻断TREM2的脂质配体活化的TREM2抗体。
人巨噬细胞的TREM2 PAM/pSyk测定
使用人单核细胞富集混合液(Stem Cell Technologies)并且将单核细胞与人mCSF一起在巨噬细胞培养基(RPMI+10％Hyclone FBS+Glutamax+Pen/Strep+非必需氨基酸+丙酮酸钠)中培养五天，由供体血液分化人巨噬细胞。在第五天，从烧瓶上刮下人巨噬细胞，并以100,000个细胞/孔重新涂板于96孔聚-D-赖氨酸包被的板上的巨噬细胞培养基中(无mCSF)。将细胞孵育24小时至贴壁，然后去除培养基。
将与稀释于HBSS中的包含70％DOPC和30％POPS的脂质囊泡(根据上述用于制备囊泡的程序制备)预混合的抗体立即添加到细胞中，并使其在37℃下孵育5分钟。去除脂质体/抗体溶液，并使用液体处置器添加35μL裂解缓冲液(Cell Signaling Technologies，CST)。然后将裂解物在4℃下孵育30分钟，然后冷冻于-80℃，或立即继续进行如上所述的pSykAlphaLISA测定。在每个值上减去由仅脂质体产生的信号，以确定抗体是否对脂质配体驱动的pSyk活化具有协同、中性或抑制剂作用。测定的结果在图9B和下表8中示出。52H9.D1和7B10.A2定义了一类与脂质TREM2激活剂协同作用的TREM2抗体。RS9.F6和3D3.A1定义了一类对TREM2的脂质配体激活至少具有相加作用的TREM2抗体。21D4.D1定义了一类对TREM2的脂质配体激活具有抑制剂作用的TREM2抗体。
表8.TREM2脂质配体存在下的pSyk诱导
抗体 斜率+脂质体
52H9.D1 13,314
7B10.A2 5,370
RS9.F6 878
3D3.A1 94
21D4.D1 -1.632
abnova 700
RnD -269
IgG2a 366
TREM2 pSyk拮抗剂测定
使用人单核细胞富集混合液(Stem Cell Technologies)并且将单核细胞与人mCSF一起在巨噬细胞培养基(RPMI+10％Hyclone FBS+Glutamax+Pen/Strep+非必需氨基酸+丙酮酸钠)中培养五天，由供体血液分化人巨噬细胞。在第五天，从烧瓶上刮下人巨噬细胞，并以100,000个细胞/孔重新涂板于96孔聚-D-赖氨酸包被的板上的巨噬细胞培养基中(无mCSF)。将细胞孵育24小时至贴壁，然后去除培养基。
将单独的稀释于RPMI中的抗体立即添加到细胞中，并使其在37℃下孵育30分钟。然后去除抗体。将HBSS中的包含70％DOPC和30％POPS的脂质囊泡(根据上述用于制备囊泡的程序制备)添加到细胞中并在37℃下孵育数分钟。去除脂质体/抗体溶液，并使用液体处置器添加35μL裂解缓冲液(Cell Signaling Technologies，CST)。然后将裂解物在4℃下孵育30分钟，然后冷冻于-80℃，或立即继续进行如上所述的pSyk AlphaLISA测定。在每个值上减去由仅脂质体产生的信号，以确定抗体是否对脂质配体驱动的pSyk活化具有协同、中性或抑制剂作用。测定的结果在图9C-9D中示出。如图9C和9D所示，51D4.A1、30F2.A2、21D11.B1和26D2.D1均阻断脂质体介导的pSyk信号传导，而54C2.A1、22B8.B1和26E2.A3均增强脂质体介导的pSyk信号传导。
图9E示出21D4和21D11抑制脂质体介导的pSyk。这些实验如下进行：在实验之前两天，将稳定过表达TREM2和DAP12的HEK293细胞以40,000个细胞/孔涂板于96孔聚-D-赖氨酸包被的板上。将单独的稀释于DMEM中的抗体立即添加到细胞中，并使其在37℃下孵育30分钟。然后去除抗体。将处于其EC20、EC50或EC80下的包含70％DOPC和30％POPS的脂质囊泡，或单独PBS添加到细胞中并在37℃下孵育5分钟。去除脂质体/抗体溶液，并使用液体处置器添加35μL裂解缓冲液(Cell Signaling Technologies，CST)。然后将裂解物在4℃下孵育30分钟，然后冷冻于-80℃，或立即继续进行如上所述的pSyk AlphaLISA测定。如图9C中那样计算抑制百分比。
图9F和9G分别示出在逐渐增加的抗体浓度下由21D4和21D11实现的抑制。这些实验的进行与图9E中所述的那些类似。这些图显示，21D4表现出拮抗活性，而21D11表现出较弱的拮抗活性。
表9.从HEK过表达细胞系的筛选中鉴定的新型TREM2-pSyk激活脂质
Figure BDA0002467016930001861
Figure BDA0002467016930001871
Figure BDA0002467016930001881
表10.从原代人巨噬细胞的筛选中鉴定的新型TREM2-pSyk激活脂质
Figure BDA0002467016930001882
Figure BDA0002467016930001891
实施例5.与TfR结合的修饰Fc多肽
本实施例描述赋予转铁蛋白受体(TfR)结合并跨血脑屏障(BBB)转运的对Fc多肽的修饰。除非另外指明，否则本实施例中氨基酸残基的位置基于人IgG1野生型Fc区的EU索引编号进行编号。
在位置384、386、387、388、389、390、413、416和421处包含修饰的Fc多肽的生成和 表征(CH3C克隆)
如下所述生成含有Fc区的酵母文库，所述Fc区具有引入到包括氨基酸位置384、386、387、388、389、390、413、416和421的位置中的修饰。与TfR结合的例示性克隆在表11和12中示出。
在另外两轮分选之后，对单克隆进行测序并鉴定出四个独特的序列。这些序列在位置388处具有保守Trp，并且在位置421处均具有芳族残基(即，Trp、Tyr或His)。在其他位置上具有很大的多样性。从文库中选择的四个克隆在CHO或293细胞中表达为与Fab片段的Fc融合体，并通过蛋白A和尺寸排阻色谱纯化，然后通过ELISA，，在存在或不存在holo-Tf的情况下，针对与人TfR的结合对其进行筛选。所述克隆均与人TfR结合，并且所述结合不受添加过量(5μM)holo-Tf的影响。还针对与内源性地表达人TfR的293F细胞的结合对克隆进行测试。所述克隆与293F细胞结合，但是总体结合显著弱于高亲和力阳性对照。
接下来，使用克隆CH3C.3作为测试克隆测试了克隆是否可以在表达TfR的细胞中内化。使贴壁的HEK 293细胞在96孔板中生长至约80％汇合，除去培养基，并以1μM的浓度添加样品：克隆CH3C.3、抗TfR基准阳性对照抗体(Ab204)、抗BACE1基准阴性对照抗体(Ab107)，以及人IgG同种型对照(获自Jackson Immunoresearch)。将细胞在37℃和8％CO2浓度下孵育30分钟，然后洗涤，用0.1％TritonTMX-100透化，并用抗人IgG-Alexa
Figure BDA0002467016930001901
488二抗染色。另外洗涤后，将细胞在高含量荧光显微镜(即，Opera PhenixTM系统)下成像，并对每个细胞的聚点(puncta)数进行定量。在1μM下，克隆CH3C.3显示出与阳性抗TfR对照类似的内化倾向，而阴性对照则显示无内化。
克隆的进一步工程改造
使用软性随机化方法生成另外的文库，以改善初始命中物对人TfR的亲和力，其中基于原始的四个命中物中的每一个，生成DNA oligo以引入软性诱变。鉴定出结合TfR的另外的克隆并选择。所选克隆分为两个一般序列组。第1组克隆(即，克隆CH3C.18、CH3C.21、CH3C.25和CH3C.34)具有位置384处的半保守Leu、位置386处的Leu或His、位置387和389处的相应的保守和半保守Val，以及位置413、416和421处的相应的半保守P-T-W基序。第2组克隆具有位置384处的保守Tyr、位置386-390处的基序TXWSX，以及位置413、416和421处的相应的保守基序S/T-E-F。在另外的研究中，使用克隆CH3C.18和CH3C.35作为每个序列组的代表成员。
表位作图
为了确定工程改造的Fc区是否结合TfR的顶端结构域，在噬菌体的表面上表达TfR的顶端结构域。为了正确折叠和展示顶端结构域，必须将其中一个环截短，并且序列必须环状排列。将克隆CH3C.18和CH3C.35包被在ELISA板上，并遵循噬菌体ELISA方案。简而言之，在洗涤并用1％PBSA封闭之后，添加噬菌体展示的稀释液并在室温下孵育1小时。随后洗涤板并添加抗M13-HRP，并且在另外洗涤后，将板用TMB底物显影并用2N H2SO4淬灭。在此测定中，两个克隆CH3C.18和CH3C.35均与顶端结构域结合。
互补位作图
为了了解Fc结构域中的哪些残基对于TfR结合最重要，产生一系列突变克隆CH3C.18和克隆CH3C.35Fc区，其中每个突变体在TfR结合寄存器(binding register)中具有突变回野生型的单个位置。将所得变体重组表达为Fab-Fc融合体，并测试其与人或cynoTfR的结合。对于克隆CH3C.35，位置388和421对于结合是重要的；将这些位置中的任一个回复为野生型完全消除与人TfR的结合。
成熟克隆的结合表征
如上所述，用纯化的Fab-Fc融合变体进行结合ELISA，其中人或cyno TfR包被在板上。来自克隆CH3C.18成熟文库的变体，即克隆CH3C.3.2-1、克隆CH3C.3.2-5和克隆CH3C.3.2-19，以大致相等的EC50值结合人和cyno TfR，而亲本克隆CH3C.18和CH3C.35与人TfR的结合相对cyno TfR好10倍以上。
接下来，测试修饰Fc多肽是否在人和猴细胞中内化。使用上述方案，测试在人HEK293细胞和恒河猴LLC-MK2细胞中的内化。与克隆CH3C.35相比，类似地结合人和cyno TfR的变体，即克隆CH3C.3.2-5和CH3C.3.2-19，在LLC-MK2细胞中具有显著改善的内化。
克隆的另外工程改造
用于进一步亲和成熟克隆CH3C.18和CH3C.35的另外的工程改造包括在通过直接相互作用、第二壳相互作用或结构稳定化增强结合的位置上添加另外的突变。这是通过由“NNK步移”或“NNK补丁”文库生成和选择来实现的。NNK步移文库涉及对互补位附近的残基进行逐一NNK突变。通过观察与FcγRI结合的Fc的结构(PDB ID：4W4O)，原始修饰位置附近的44个残基被鉴定为调查的候选者。具体而言，以下残基被靶向以进行NNK诱变：K248、R255、Q342、R344、E345、Q347、T359、K360、N361、Q362、S364、K370、E380、E382、S383、G385、Y391、K392、T393、D399、S400、D401、S403、K409、L410、T411、V412、K414、S415、Q418、Q419、G420、V422、F423、S424、S426、Q438、S440、S442、L443、S444、P4458、G446和K447。使用Kunkel诱变生成44个单点NNK文库，并将产物合并，并通过电穿孔引入酵母中，如上文针对其他酵母文库所述。
这些微型文库(每个微型文库具有一个突变位置，导致20个变体)的组合产生小型文库，使用酵母表面展示选择所述小型文库中导致更高亲和力结合的任何位置。使用TfR顶端结构域蛋白如上所述进行选择。经过三轮分选后，对来自富集酵母文库的克隆进行测序，并鉴定出若干“热点”位置，其中某些点突变显著改善与顶端结构域蛋白的结合。对于克隆CH3C.35，这些突变包括E380(突变为Trp、Tyr、Leu或Gln)和S415(突变为Glu)。克隆CH3C.35单一和组合突变体的序列在SEQ ID NO:100-104和160-166中列出。对于克隆CH3C.18，这些突变包括E380(突变为Trp、Tyr或Leu)和K392(突变为Gln、Phe或His)。克隆CH3C.18单一突变体的序列在SEQ ID NO:154-159中列出。
用以改善克隆CH3C.35亲和力的另外的成熟文库
如针对先前的酵母文库所述，产生另一文库，所述文库用于鉴定来自NNK步移文库的突变的组合，同时添加这些周边的若干另外的位置。在此文库中，YxTEWSS(SEQ ID NO:299)和TxxExxxxF(SEQ ID NO:300)基序保持恒定，并且六个位置被完全随机化：E380、K392、K414、S415、S424和S426。包括位置E380和S415是因为它们是NNK步移文库中的“热点”。包括位置K392、S424和S426是因为它们构成可定位结合区域的核心的一部分，而选择K414是由于其与位置415相邻。
如先前所述，此文库仅用cyno TfR顶端结构域进行分选。在五轮之后对富集库(enriched pool)进行测序，并且所鉴定的独特克隆的修饰区的序列在SEQ ID NO:105和169-185中列出。
设计下一个文库以进一步探索主要结合互补位中的可接受多样性。每个原始位置(384、386、387、388、389、390、413、416和421)加上两个热点(380和415)单独用NNK密码子随机化以在酵母上产生一系列单一位置饱和诱变文库。另外，将每个位置单独回复为野生型残基，并在酵母上展示这些单独的克隆。注意到位置380、389、390和415是仅有的在回复为野生型残基后保留与TfR的实质结合的位置(对于413回复为野生型，观察到一些残余但大大减少的结合)。
针对人TfR顶部结构域对单一位置NNK文库进行三轮分选，以收集前～5％的结合者，然后每个文库中对至少16个克隆测序。结果表明了在克隆CH3C.35的上下文中，每个位置上可以耐受而不显著降低与人TfR的结合的氨基酸。汇总如下：
位置380：Trp、Leu或Glu；
位置384：Tyr或Phe；
位置386：仅Thr；
位置387：仅Glu；
位置388：仅Trp；
位置389：Ser、Ala或Val(尽管野生型Asn残基似乎保留一些结合，但在文库分选后并未出现)；
位置390：Ser或Asn；
位置413：Thr或Ser；
位置415：Glu或Ser；
位置416：仅Glu；以及
位置421：仅Phe。
当以单一变化或组合的形式被取代到克隆CH3C.35中时，以上残基代表保持与TfR顶端结构域结合的互补位多样性。在这些位置具有突变的克隆包括表12所示的那些，并且这些克隆的CH3结构域的序列在SEQ ID NO:100-136和344-350中列出。
可以修饰以赋予TfR结合的另外Fc位置
产生了与转铁蛋白受体(TfR)结合的另外的修饰Fc多肽，其在Fc区的替代位点具有修饰，例如，在以下位置：
位置274、276、283、285、286、287、288和290(CH2A2克隆)；
位置266、267、268、269、270、271、295、297、298和299(CH2C克隆)；
位置268、269、270、271、272、292、293、294和300(CH2D克隆)；
位置272、274、276、322、324、326、329、330和331(CH2E3克隆)；或
位置345、346、347、349、437、438、439和440(CH3B克隆)。
与TfR结合的例示性CH3B克隆在SEQ ID NO:186-190中列出。与TfR结合的例示性CH2A2克隆在SEQ ID NO:191-195中列出。与TfR结合的例示性CH2C克隆在SEQ ID NO:196-200中列出。与TfR结合的例示性CH2D克隆在SEQ ID NO:201-205中列出。与TfR结合的例示性CH2E3克隆在SEQ ID NO:206-210中列出。
方法
噬菌体展示文库的产生
合成编码野生型人Fc序列的DNA模板，并将其掺入噬菌粒载体中。噬菌粒载体含有ompA或pelB前导序列、与c-Myc和6xHis表位标签融合的Fc插入子，以及琥珀终止密码子，接着是M13外壳蛋白pIII。
产生在用于修饰的期望位置处含有“NNK”三密码子(tricodon)的引物，其中N是任何DNA碱基(即，A、C、G或T)并且K是G或T。可替代地，使用用于“软性”随机化的引物，其中对应于70％野生型碱基和10％的其他三个碱基中的每一个的碱基的混合物用于每个随机化位置。通过以下方式产生文库：对与随机化的区域相对应的Fc区的片段进行PCR扩增，然后使用含有SfiI限制性位点的末端引物组装，然后用SfiI消化并连接到噬菌粒载体中。可替代地，使用引物进行Kunkel诱变。将连接产物或Kunkel产物转化到菌株TG1(获自
Figure BDA0002467016930001961
)的电感受态大肠杆菌细胞中。回收后，将大肠杆菌细胞用M13K07辅助噬菌体感染并生长过夜，然后将文库噬菌体用5％PEG/NaCl沉淀，重悬于PBS中的15％甘油中，并冷冻直到使用。典型的文库大小在约109至约1011个转化体的范围内。Fc二聚体通过pIII融合的Fc与未连接于pIII的可溶性Fc之间(后者是由于pIII之前的琥珀终止密码子而产生的)的配对在噬菌体上展示。
酵母展示文库的产生
合成编码野生型人Fc序列的DNA模板，并将其掺入酵母展示载体中。对于CH2和CH3文库，在Aga2p细胞壁蛋白上展示Fc多肽。两种载体均含有具有Kex2切割序列的前原(prepro)前导肽，以及与Fc的末端融合的c-Myc表位标签。
酵母展示文库使用与针对噬菌体文库所述的那些方法类似的方法组装，除了片段的扩增是用含有载体的同源末端的引物进行的。用线性化载体和组装的文库插入子对新鲜制备的电感受态酵母(即，菌株EBY100)进行电穿孔。电穿孔方法将是本领域技术人员已知的。在选择性SD-CAA培养基中恢复后，使酵母生长至汇合并分开(split)两次，然后通过转移至SG-CAA培养基诱导蛋白质表达。典型的文库大小在约107至约109个转化体的范围内。Fc二聚体通过相邻展示的Fc单体的配对形成。
用于噬菌体选择的一般方法
噬菌体方法改编自噬菌体展示：A Laboratory Manual(Barbas,2001)。另外的方案细节可以从此参考文献中获得。
板分选方法
在4℃下，将抗原在
Figure BDA0002467016930001971
微量滴定板上(通常1-10μg/mL)包被过夜。将噬菌体文库添加到每个孔中并孵育过夜以进行结合。微量滴定孔用含有0.05％
Figure BDA0002467016930001972
20的PBS(PBST)充分洗涤，并且通过将孔用酸(通常为具有500mM KCl的50mM HCl，或100mM甘氨酸，pH 2.7)孵育30分钟，将结合的噬菌体洗脱。将洗脱的噬菌体用1M Tris(pH 8)中和，并使用TG1细胞和M13/KO7辅助噬菌体扩增，并且在37℃下在含有50μg/mL羧苄青霉素和50ug/mL卡那霉素的2YT培养基中生长过夜。将从含有靶标的孔中洗脱的噬菌体的滴度与从不含靶标的孔中回收的噬菌体的滴度进行比较，以评估富集度。通过随后减少结合期间的孵育时间并增加洗涤时间和洗涤次数来提高选择严格性。
珠粒分选方法
使用NHS-PEG4-生物素(获自PierceTM)，通过游离胺将抗原生物素化。对于生物素化反应，在PBS中使用3至5倍摩尔过量的生物素试剂。用Tris淬灭反应，然后在PBS中充分渗析。将生物素化的抗原固定在链霉亲和素包被的磁珠(即，M280-链霉亲和素珠粒，获自Thermo Fisher)上。将噬菌体展示文库与抗原包被的珠粒一起在室温下孵育1小时。然后去除未结合的噬菌体并用PBST洗涤珠粒。通过与含有500mM KCl的50mM HCl(或0.1M甘氨酸，pH 2.7)一起孵育30分钟将结合的噬菌体洗脱，然后如上文针对板分选所述进行中和和繁殖。
在三至五轮淘选之后，通过在噬菌体上表达Fc或在大肠杆菌周质中可溶性地表达Fc来筛选单克隆。此类表达方法将是本领域技术人员已知的。将单独噬菌体上清液或周质提取物暴露于包被有抗原或阴性对照的封闭的ELISA板，随后使用HRP缀合的山羊抗Fc(获自Jackson Immunoresearch)检测周质提取物或使用抗M13(GE Healthcare)检测噬菌体，然后用TMB试剂(获自Thermo Fisher)显影。OD450值比背景大了约5倍的孔被视为阳性克隆并测序，此后一些克隆被表达为可溶性Fc片段或与Fab片段融合。
用于酵母选择的一般方法
珠粒分选(磁性辅助细胞分选(MACS))方法
MACS和FACS选择如Ackerman等,Biotechnol.Prog.,2009 25(3):774中描述的那样类似地进行。将链霉亲和素磁珠(例如，来自ThermoFisher的M-280链霉亲和素珠粒)用生物素化的抗原标记并与酵母(通常为5-10x文库多样性)一起孵育。去除未结合的酵母，洗涤珠粒，并使结合的酵母在选择培养基中生长并诱导以用于后续轮次的选择。
荧光激活细胞分选(FACS)方法
用抗c-Myc抗体标记酵母以监测表达和生物素化的抗原(浓度根据分选轮次而变化)。在一些实验中，将抗原与链霉亲和素-Alexa
Figure BDA0002467016930001981
647预混合，以便增强相互作用的亲合力。在其他实验中，在结合并用链霉亲和素-Alexa
Figure BDA0002467016930001982
647洗涤之后检测到生物素化的抗原。使用FACS Aria III细胞分选仪对具有结合的单重酵母(singlet yeast)进行分选。使分选的酵母在选择培养基中生长，然后诱导以用于后续选择轮次。
在实现富集酵母群之后，将酵母涂板于SD-CAA琼脂板上，使单菌落生长并诱导表达，然后如上所述进行标记以确定它们结合靶标的倾向。随后针对结合抗原，对阳性单克隆进行测序，然后将一些克隆表达为可溶性Fc片段或与Fab片段融合。
用于筛选的一般方法
通过ELISA进行筛选
从淘选输出中选择克隆，并使其在96孔深孔板的各个孔中生长。使用自动诱导培养基(获自EMD Millipore)诱导克隆进行周质表达，或用辅助噬菌体感染所述克隆以在噬菌体上进行单独Fc变体的噬菌体展示。ELISA板用通常0.5mg/mL的抗原包被过夜，然后在添加噬菌体或周质提取物之前用1％BSA封闭。孵育1小时并洗去未结合蛋白质之后，添加HRP缀合的二抗(即，对于可溶性Fc或噬菌体展示的Fc分别为抗Fc或抗M13)并孵育30分钟。再次洗涤板，然后用TMB试剂显影，并用2N硫酸淬灭。使用读板器
Figure BDA0002467016930001991
对450nm处的吸光度定量并在适用时使用Prism软件绘制结合曲线。在一些测定中，在结合步骤期间通常以显著的摩尔过量添加可溶性转铁蛋白或其他竞争物。
通过流式细胞术进行筛选
将Fc变体多肽(在噬菌体上表达、在周质提取物中表达，或作为与Fab片段的融合体可溶性地表达)添加到96孔V底板中的细胞(每孔约100,000个细胞，在PBS+1％BSA(PBSA)中)中，并在4℃下孵育1小时。随后将板旋转并去除培养基，然后将细胞用PBSA洗涤一次。将细胞重悬于含有二抗(通常为山羊抗人IgG-Alexa
Figure BDA0002467016930001992
647(获自Thermo Fisher))的PBSA中。30分钟后，将板旋转并去除培养基，将细胞用PBSA洗涤1-2次，然后在流式细胞仪(即FACSCantoTMII流式细胞仪)上读板。使用FlowJo软件计算每种条件的中值荧光值，并使用Prism软件绘制结合曲线。
表11.CH3结构域修饰
Figure BDA0002467016930002001
表12.另外的CH3结构域修饰
Figure BDA0002467016930002011
实施例6.包含修饰Fc多肽的抗TREM2抗体的产生和表征
与BBB穿透性Fc多肽融合的TREM2 Fab的产生
RS9.F6/3C.35.21.17
通过将克隆RS9.F6的Fd(VH+CH1区)克隆到包含Fc的表达载体中来构建第一RS9.F6重链，所述Fc被工程改造以结合转铁蛋白受体，并且还包含用以改变效应子功能的L234A、L235A和P331G取代(根据EU编号方案)和用以防止同源二聚化并促进与包含“孔”突变(T366W/L368A/Y407V)的Fc的异源二聚化的“旋钮”突变(T366W)。第一RS9.F6重链被设计成表达SEQ ID NO:91的序列。
通过将克隆RS9.F6的Fd(VH+CH1区)克隆到包含Fc的表达载体中来构建第二RS9.F6重链，所述Fc包含“孔”突变(T366W/L368A/Y407V)，并且还包含用以改变效应子功能的L234A、L235A和P331G取代(根据EU编号方案)，但缺乏转铁蛋白受体结合突变。第二RS9.F6重链被设计成表达SEQ ID NO:92的序列。
使用包含编码SEQ ID NO:35的序列的多核苷酸的表达载体构建RS9.F6的轻链。
将包含编码上述序列SEQ ID NO:35、91和92(对于RS9.F6)的多核苷酸的载体以1:1:2的比率(第一重链:第二重链:轻链)共转染至ExpiCHO或Expi293细胞中。通过本领域技术人员熟悉的方法，通过蛋白A色谱，接着通过制备型尺寸排阻色谱(SEC)纯化所表达的蛋白(称为“RS9.F6/3C.35.21.17”)。
3D3.A1/3C.35.21.17
通过将克隆3D3.A1的Fd(VH+CH1区)克隆到包含Fc的表达载体中来构建第一3D3重链，所述Fc被工程改造以结合转铁蛋白受体，并且还包含用以改变效应子功能的L234A、L235A和P331G取代(根据EU编号方案)和用以防止同源二聚化并促进与包含“孔”突变(T366W/L368A/Y407V)的Fc的异源二聚化的“旋钮”突变(T366W)。第一3D3.A1重链被设计成表达SEQ ID NO:94的序列。通过将克隆3D3.A1的Fd(VH+CH1区)克隆到包含Fc的表达载体中来构建第二3D3.A1重链，所述Fc包含“孔”突变(T366W/L368A/Y407V)，并且还包含用以改变效应子功能的L234A、L235A和P331G取代(根据EU编号方案)，但缺乏转铁蛋白受体结合突变。第二3D3.A1重链被设计成表达SEQ ID NO:95的序列。
使用包含编码SEQ ID NO:29的序列的多核苷酸的表达载体构建3D3.A1的轻链。
将包含编码上述序列SEQ ID NO:29、94和95(对于3D3.A1)的多核苷酸的载体以1:1:2的比率(第一重链:第二重链:轻链)共转染至ExpiCHO或Expi293细胞中。通过本领域技术人员熟悉的方法，通过蛋白A色谱，接着通过制备型尺寸排阻色谱(SEC)纯化所表达的蛋白(称为“3D3/3C.35.21.17”)。
RS9.F6/3C35.21.17与TREM2和转铁蛋白受体(TfR)的结合
在Biacore T200仪器上使用SPR测量TREM2/TfR结合蛋白RS9.F6/3C35.21.17与TREM2和TfR的结合。为了测量TfR结合，将抗人Fab固定在CM5芯片上，并捕获TREM2/TfR结合蛋白。使连续稀释(例如，1-1000nM的浓度)的全长人TfR或人TfR顶端结构域流过芯片(180秒缔合时间)，然后使其解离。使用1:1结合模型进行拟合。为了测量TREM2结合，将抗人Fc抗体固定在CM5芯片上，并捕获TREM2/TfR结合蛋白。使一定浓度范围的重组TREM2-His蛋白流过芯片，并使其缔合和解离。使用1:1朗格缪尔模型拟合所得的传感图，以估计kon和koff(图10)。
RS9.F6/3C35.21.17的Biacore评估
使用BiacoreTM T200通过表面等离子体共振确定RS9.F6/3C35.21.17对人TREM2和TfR的亲和力。将Biacore S系列CM5传感器芯片用两种单克隆小鼠抗Fab抗体的混合物(来自GE Healthcare的人Fab捕获试剂盒)固定。以30μL/min的流速注入每种抗原的连续3倍稀释液。监测抗原与捕获抗体的结合，持续30至180秒，然后在HBS-EP+运行缓冲液(GE，#BR100669)中监测其解离，持续30-300秒。通过减去来自空白流动池的RU来校正结合反应。同时对kon和koff进行拟合的1:1朗格缪尔模型用于动力学分析。RS9.F6/3C35.21.17的结合动力学在下表13中示出。Biacore结合显示，双特异性TREM2/TfR结合蛋白能够以高亲和力结合TREM2，并且对hTfR具有预期亲和力。
表13.RS9.F6/3C35.21.17和对照的结合动力学的汇总
Figure BDA0002467016930002041
N.D.＝未测定
实施例7.TREM2肽-F6 Fab共复合物的表位作图和X射线晶体学
如下所述，使用氢-氘交换质谱确定抗体RS9.F6的表位。另外，还阐明了与TREM2肽结合的RS9.F6的晶体结构。
通过氢-氘交换-质谱(HDX-MS)进行的F6 Fab表位作图
对于抗TREM2抗体RS9.F6的Fab片段(“F6”)与人TREM2的结合的表位作图，使用不具有信号肽和His标签的TREM2细胞外结构域(ECD)氨基酸序列：
SGAHNTTVFQGVAGQSLQVSCPYDSMKHWGRRKAWCRQLGEKGPCQRVVSTHNLWLLSFLRRWNGSTAITDDTLGGTLTITLRNLQPHDAGLYQCQSLHGSEADTLRKVLVEVLADPLDHRDAGDLWFPGESESFEDAHVEHSISRSLLEGEIPFPPTS(SEQ ID NO:333)
用以确定序列覆盖率的TREM2 ECD的胃蛋白酶/蛋白酶XIII消化和LC-MS
通过添加130μL的4M盐酸胍、0.85M TCEP缓冲液(最终pH为2.5)并将混合物在20℃下孵育3分钟而使5.77μg天然TREM2或130μL的对照缓冲液(30mM Tris、200mM氯化钠、3％甘油，pH8.0)中的7.4μg TREM2变性。然后，使用内部填充的胃蛋白酶/蛋白酶XIII柱(2.1x30mm)对混合物进行在线胃蛋白酶/蛋白酶XIII消化。使用由与Q ExactiveTM HybridQuadrupole-Orbitrap质谱仪(Thermo)联接的Waters Acquity UPLC组成的UPLC-MS系统分析所得的肽。在50x 1mm C8柱上，利用2-31％溶剂B(乙腈中的0.2％甲酸)的16.5分钟梯度分离肽。溶剂A为0.2％甲酸的水溶液。对于天然TREM2，注入阀和胃蛋白酶/蛋白酶XIII柱及其相关的连接管分别位于保持处于10℃的冷却箱内部。第二切换阀、C8柱及其相关的不锈钢连接管位于另一个保持处于-6℃的冷冻循环箱内部。通过用Mascot针对TREM2序列检索MS/MS数据来进行肽鉴定。前体和产物离子的质量公差分别为7ppm和0.02Da。
存在和不存在Fab情况下天然TREM2的HDX MS
将12μL的TREM2(5.77μg)或12μL的TREM2&TREM2 Fab混合物(5.77μg:28.85μg)与118μL氧化氘标记缓冲液(30mM Tris、200mM氯化钠、3％甘油，pD 7.6)一起在20℃下孵育0s、10s、60s、600s或3600s。通过添加130μL的4M盐酸胍、0.85M TCEP缓冲液(最终pH为2.5)淬灭氢/氘交换。随后，如上所述对淬灭的样品进行柱上胃蛋白酶/蛋白酶XIII消化和LC-MS分析。以仅MS模式记录质谱。
使用用于分析H/D交换MS数据的软件HDX WorkBench(J.Am.Soc.MassSpectrom.2012,23(9),1512-1521)处理原始MS数据。使用氘化肽与其天然形式(t0)之间的平均质量差计算氘水平。
结果
对于天然TREM2，实现了78.8％的序列覆盖率。将TREM2单独或以与Fab的复合物形式在氧化氘中孵育。氘交换在20℃下进行0s、10s、60s、600s或3600s。通过低pH淬灭交换反应，并且用胃蛋白酶/蛋白酶XIII消化蛋白质。由LC-MS上的质量偏移监测鉴定肽处的氘水平。绘制了所有肽在交换时间内的氘积累曲线。将仅TREM2的氢/氘交换与TREM2&Fab混合物的氢/氘交换相比较的差示热图在图11A-11D中示出。如图11A和11D所示，在与Fab结合时，TREM2在序列AA157-166(DLWFPGESES(SEQ ID NO:334)，对应于SEQ ID NO:96的人TREM2的残基140-149)处显示出氘吸收的减少，由此表明由Fab靶向以与天然TREM2结合的表位处于此肽区域内。
TREM2-F6 Fab共结晶方法
人TREM2合成肽9聚体氨基酸序列
对应于人TREM2的氨基酸残基140-148(根据UniProtKB条目TREM2_HUMAN)的合成9聚体肽DLWFPGESE(SEQ ID NO:335)用于共结晶。
F6 Fab表达
在2.5x 106个细胞/ml的初始细胞密度的Expi-293细胞中表达F6抗TREM2抗体的Fab片段。在转染之后96小时收获细胞。
F6纯化
用蛋白L树脂纯化Fab。用20mM Tris pH 8.5洗涤固定的Fab，并用0.1M甘氨酸pH2.5洗脱。蛋白质洗脱液立刻用1M Tris pH 8.0中和。来自蛋白L树脂的蛋白质洗脱液进一步通过Superdex 200尺寸排阻色谱纯化，其中在流动相中使用30mM Tris pH 8.0、200mMNaCl、3％甘油。
结晶
将纯化的Fab溶液在20mM M Tris pH 8.0、0.2M NaCl、3％甘油中浓缩至25mg/mL。将TREM2 9聚体肽以50mg/ml重构到20mM Tris pH 8.5中。通过将所述组分以1:10摩尔比与最终浓度23mg/ml的过量肽混合而获得Fab:肽复合物。
按照纳米结晶方案，在Intelli 96-3低剖面板中以坐滴形式在室温下进行结晶实验。所述设置包括20种可商业获得的和内部的筛选试剂，每种筛选试剂具有96种条件。适用于X射线分析的晶体是由0.1M HEPES缓冲液(pH 7.5)中的25％PEG 8000生长的。通过将晶体浸泡在补充有20％甘油的母液中，并且在液氮中急速冰冻而将所述晶体冷冻保护。
X射线数据收集
使用Dectris Pilatus 6M检测器在阿贡国家实验室(Argonne NationalLaboratory，ANL)的先进光子源(APS)上在IMCA-CAT光束线17-ID下收集X射线衍射数据。波长为
Figure BDA0002467016930002071
暴露时间为每0.25°图像0.25s。在空间群P21中使用XDS将衍射图像处理成分辨率为
Figure BDA0002467016930002072
晶胞大小为：
Figure BDA0002467016930002073
并且β＝107.29°。不对称单元含有一个Fab:肽复合物。
使用衍生自PDB条目5i16的检索模型，通过用Phaser进行分子置换来解析Fab:肽复合物的结构。该结构使用Coot手动重建，并使用Refmac5进行精细化。Fab模型含有重链的除Gln1和Ser131-Ser135之外的所有残基，以及每条链的C末端处的一些残基，所有所述残基都是无序的。TREM2肽的残基140-146在电子密度中清晰可见，而残基147-148则是无序的。X射线数据和精细化统计在下表14中给出。
表14.X射线数据和精细化统计
Figure BDA0002467016930002081
结构分析
图12A显示，F6 Fab在可变结构域之间的中央腔穴中结合TREM2肽。所述肽呈折叠的环样构象，其中N末端Trp142侧链深埋在结合槽中，从而与CDR框架残基接触。如图12B所示，残基DLWFP(SEQ ID NO:336；hTREM2蛋白的残基140-144)与Fab直接接触。肽的最后两个残基SE(hTREM2蛋白的残基147-148)是非结构化的并且在结构中不具有电子密度。对于许多蛋白质-蛋白质相互作用，这类浸入模式(immersed mode)的抗原结合是未知的。
所有六个CDR均参与抗原结合。总计24个Fab残基与该肽直接接触
Figure BDA0002467016930002082
其中的7个处于框架区(图13A-13B)。这些结果表明，错综复杂的接触网络支持F6高亲和力结合，并且与Trp142的接触可能是维持高亲和力的主要驱动力。
表15.非正式序列表
Figure BDA0002467016930002091
Figure BDA0002467016930002101
Figure BDA0002467016930002111
Figure BDA0002467016930002121
Figure BDA0002467016930002131
Figure BDA0002467016930002141
Figure BDA0002467016930002151
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Figure BDA0002467016930002661
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Figure BDA0002467016930002681
Figure BDA0002467016930002691
Figure BDA0002467016930002701
Figure BDA0002467016930002711
应了解，本文所述的实施例和实施方案仅用于例示性目的，并且将建议本领域的技术人员根据其进行各种修改或变化，并且它们将包括在本申请的精神和权限以及所附权利要求书的范围内。

Claims (211)

1.一种与人髓系细胞触发受体2(TREM2)蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分降低可溶性TREM2蛋白(sTREM2)的水平。
2.如权利要求1所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分识别与抗体克隆42E8.H1所识别的表位相同或基本上相同的表位。
3.如权利要求1所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分增强TREM2活性。
4.如权利要求3所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分诱导脾酪氨酸激酶(Syk)磷酸化。
5.如权利要求3或4所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分增强吞噬作用或增强髓系细胞、小胶质细胞或巨噬细胞的迁移、分化、功能或存活。
6.如权利要求5所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分增强小胶质细胞功能而不增加神经炎症。
7.如权利要求3至6中任一项所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分识别与抗体克隆42E8.H1所识别的表位相同或基本上相同的表位。
8.如权利要求3所述的分离抗体，其中所述抗体在不存在TREM2配体的情况下增加TREM2活性。
9.如权利要求3所述的分离抗体，其中所述抗体在不阻断天然TREM2配体的结合的情况下增强TREM2活性。
10.如权利要求3所述的分离抗体，其中所述抗体增强由TREM2配体诱导的TREM2活性。
11.如权利要求10所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分在存在TREM2配体的情况下诱导Syk磷酸化。
12.如权利要求3所述的分离抗体，其中所述抗体选择性地增强TREM2配体的活性。
13.如权利要求3所述的分离抗体，其中所述抗体阻止TREM2配体激活TREM2。
14.如权利要求3所述的分离抗体，其中所述抗体阻断TREM2配体与TREM2的结合。
15.如权利要求7所述的分离抗体，其中所述抗体增强由TREM2配体诱导的TREM2活性，但是在不存在所述TREM2配体的情况下不增强TREM2活性。
16.如权利要求15所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分在存在而不是不存在TREM2配体的情况下诱导Syk磷酸化。
17.如权利要求8至16中任一项所述的分离抗体，其中所述TREM2配体选自由以下组成的组：1-棕榈酰基-2-(5’-氧代-戊酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(POVPC)、2-花生四烯酸甘油酯(2-AG)、7-酮胆固醇(7-KC)、24(S)羟基胆固醇(24OHC)、25(S)羟基胆固醇(25OHC)、27-羟基胆固醇(27OHC)、酰基肉碱(AC)、烷基酰基甘油磷酸胆碱(PAF)、α-半乳糖基神经酰胺(KRN7000)、双(单酰基甘油)磷酸酯(BMP)、心磷脂(CL)、神经酰胺、神经酰胺-1-磷酸酯(C1P)、胆固醇酯(CE)、胆固醇磷酸酯(CP)、二酰基甘油34:1(DG 34:1)、二酰基甘油38:4(DG38:4)、二酰基甘油焦磷酸盐(DGPP)、二氢神经酰胺(DhCer)、二氢鞘磷脂(DhSM)、醚磷脂酰胆碱(PCe)、游离胆固醇(FC)、半乳糖基神经酰胺(GalCer)、半乳糖基鞘氨醇(GalSo)、神经节苷脂GM1、神经节苷脂GM3、葡糖基鞘氨醇(GlcSo)、汉克平衡盐溶液(HBSS)、Kdo2-脂质A(KLA)、乳糖基神经酰胺(LacCer)、溶血烷基酰基甘油磷酸胆碱(LPAF)、溶血磷脂酸(LPA)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰甘油(LPG)、溶血磷脂酰肌醇(LPI)、溶血鞘磷脂(LSM)、溶血磷脂酰丝氨酸(LPS)、N-酰基-磷脂酰乙醇胺(NAPE)、N-酰基-丝氨酸(NSer)、氧化磷脂酰胆碱(oxPC)、棕榈酸-9-羟基-硬脂酸(PAHSA)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰乙醇(PEtOH)、磷脂酸(PA)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、二氢神经鞘氨醇、二氢神经鞘氨醇-1-磷酸酯(Sa1P)、鞘磷脂(SM)、鞘氨醇、鞘氨醇-1-磷酸酯(So1P)和硫苷脂。
18.如权利要求1所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分抑制TREM2活性。
19.如权利要求18所述的分离抗体，其中所述抗体阻止TREM2配体激活TREM2。
20.如权利要求18所述的分离抗体，其中所述抗体阻断TREM2配体与TREM2的结合。
21.如权利要求19或20所述的分离抗体，其中所述TREM2配体选自由以下组成的组：1-棕榈酰基-2-(5’-氧代-戊酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(POVPC)、2-花生四烯酸甘油酯(2-AG)、7-酮胆固醇(7-KC)、24(S)羟基胆固醇(24OHC)、25(S)羟基胆固醇(25OHC)、27-羟基胆固醇(27OHC)、酰基肉碱(AC)、烷基酰基甘油磷酸胆碱(PAF)、α-半乳糖基神经酰胺(KRN7000)、双(单酰基甘油)磷酸酯(BMP)、心磷脂(CL)、神经酰胺、神经酰胺-1-磷酸酯(C1P)、胆固醇酯(CE)、胆固醇磷酸酯(CP)、二酰基甘油34:1(DG 34:1)、二酰基甘油38:4(DG38:4)、二酰基甘油焦磷酸盐(DGPP)、二氢神经酰胺(DhCer)、二氢鞘磷脂(DhSM)、醚磷脂酰胆碱(PCe)、游离胆固醇(FC)、半乳糖基神经酰胺(GalCer)、半乳糖基鞘氨醇(GalSo)、神经节苷脂GM1、神经节苷脂GM3、葡糖基鞘氨醇(GlcSo)、汉克平衡盐溶液(HBSS)、Kdo2-脂质A(KLA)、乳糖基神经酰胺(LacCer)、溶血烷基酰基甘油磷酸胆碱(LPAF)、溶血磷脂酸(LPA)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰甘油(LPG)、溶血磷脂酰肌醇(LPI)、溶血鞘磷脂(LSM)、溶血磷脂酰丝氨酸(LPS)、N-酰基-磷脂酰乙醇胺(NAPE)、N-酰基-丝氨酸(NSer)、氧化磷脂酰胆碱(oxPC)、棕榈酸-9-羟基-硬脂酸(PAHSA)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰乙醇(PEtOH)、磷脂酸(PA)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、二氢神经鞘氨醇、二氢神经鞘氨醇-1-磷酸酯(Sa1P)、鞘磷脂(SM)、鞘氨醇、鞘氨醇-1-磷酸酯(So1P)和硫苷脂。
22.如权利要求18所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分减少Syk磷酸化。
23.一种与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分增加sTREM2水平。
24.如权利要求23所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分识别与抗体克隆21D4.D1所识别的表位相同或基本上相同的表位。
25.如权利要求23所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分增强TREM2活性。
26.如权利要求25所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分诱导Syk磷酸化。
27.如权利要求25或26所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分增强吞噬作用或增强髓系细胞、小胶质细胞或巨噬细胞的迁移、分化、功能或存活。
28.如权利要求27所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分增强小胶质细胞功能而不增加神经炎症。
29.如权利要求25所述的分离抗体，其中所述抗体在不存在TREM2配体的情况下增加TREM2活性。
30.如权利要求25所述的分离抗体，其中所述抗体在不阻断天然TREM2配体的结合的情况下增强TREM2活性。
31.如权利要求25所述的分离抗体，其中所述抗体增强由TREM2配体诱导的TREM2活性。
32.如权利要求31所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分在存在TREM2配体的情况下诱导Syk磷酸化。
33.如权利要求25所述的分离抗体，其中所述抗体选择性地增强TREM2配体的活性。
34.如权利要求25所述的分离抗体，其中所述抗体阻止TREM2配体激活TREM2。
35.如权利要求25所述的分离抗体，其中所述抗体阻断TREM2配体与TREM2的结合。
36.如权利要求31所述的分离抗体，其中所述抗体增强由TREM2配体诱导的TREM2活性，但是在不存在所述TREM2配体的情况下不增强TREM2活性。
37.如权利要求36所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分在存在而不是不存在TREM2配体的情况下诱导Syk磷酸化。
38.如权利要求29至37中任一项所述的分离抗体，其中所述TREM2配体选自由以下组成的组：1-棕榈酰基-2-(5’-氧代-戊酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(POVPC)、2-花生四烯酸甘油酯(2-AG)、7-酮胆固醇(7-KC)、24(S)羟基胆固醇(24OHC)、25(S)羟基胆固醇(25OHC)、27-羟基胆固醇(27OHC)、酰基肉碱(AC)、烷基酰基甘油磷酸胆碱(PAF)、α-半乳糖基神经酰胺(KRN7000)、双(单酰基甘油)磷酸酯(BMP)、心磷脂(CL)、神经酰胺、神经酰胺-1-磷酸酯(C1P)、胆固醇酯(CE)、胆固醇磷酸酯(CP)、二酰基甘油34:1(DG 34:1)、二酰基甘油38:4(DG38:4)、二酰基甘油焦磷酸盐(DGPP)、二氢神经酰胺(DhCer)、二氢鞘磷脂(DhSM)、醚磷脂酰胆碱(PCe)、游离胆固醇(FC)、半乳糖基神经酰胺(GalCer)、半乳糖基鞘氨醇(GalSo)、神经节苷脂GM1、神经节苷脂GM3、葡糖基鞘氨醇(GlcSo)、汉克平衡盐溶液(HBSS)、Kdo2-脂质A(KLA)、乳糖基神经酰胺(LacCer)、溶血烷基酰基甘油磷酸胆碱(LPAF)、溶血磷脂酸(LPA)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰甘油(LPG)、溶血磷脂酰肌醇(LPI)、溶血鞘磷脂(LSM)、溶血磷脂酰丝氨酸(LPS)、N-酰基-磷脂酰乙醇胺(NAPE)、N-酰基-丝氨酸(NSer)、氧化磷脂酰胆碱(oxPC)、棕榈酸-9-羟基-硬脂酸(PAHSA)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰乙醇(PEtOH)、磷脂酸(PA)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、二氢神经鞘氨醇、二氢神经鞘氨醇-1-磷酸酯(Sa1P)、鞘磷脂(SM)、鞘氨醇、鞘氨醇-1-磷酸酯(So1P)和硫苷脂。
39.如权利要求23所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分抑制TREM2活性。
40.如权利要求39所述的分离抗体，其中所述抗体阻止TREM2配体激活TREM2。
41.如权利要求39所述的分离抗体，其中所述抗体阻断TREM2配体与TREM2的结合。
42.如权利要求40或41所述的分离抗体，其中所述TREM2配体选自由以下组成的组：1-棕榈酰基-2-(5’-氧代-戊酰基)-sn-甘油-3- 磷酸胆碱(POVPC)、2-花生四烯酸甘油酯(2-AG)、7-酮胆固醇(7-KC)、24(S)羟基胆固醇(24OHC)、25(S)羟基胆固醇(25OHC)、27-羟基胆固醇(27OHC)、酰基肉碱(AC)、烷基酰基甘油磷酸胆碱(PAF)、α-半乳糖基神经酰胺(KRN7000)、双(单酰基甘油)磷酸酯(BMP)、心磷脂(CL)、神经酰胺、神经酰胺-1-磷酸酯(C1P)、胆固醇酯(CE)、胆固醇磷酸酯(CP)、二酰基甘油34:1(DG 34:1)、二酰基甘油38:4(DG38:4)、二酰基甘油焦磷酸盐(DGPP)、二氢神经酰胺(DhCer)、二氢鞘磷脂(DhSM)、醚磷脂酰胆碱(PCe)、游离胆固醇(FC)、半乳糖基神经酰胺(GalCer)、半乳糖基鞘氨醇(GalSo)、神经节苷脂GM1、神经节苷脂GM3、葡糖基鞘氨醇(GlcSo)、汉克平衡盐溶液(HBSS)、Kdo2-脂质A(KLA)、乳糖基神经酰胺(LacCer)、溶血烷基酰基甘油磷酸胆碱(LPAF)、溶血磷脂酸(LPA)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰甘油(LPG)、溶血磷脂酰肌醇(LPI)、溶血鞘磷脂(LSM)、溶血磷脂酰丝氨酸(LPS)、N-酰基-磷脂酰乙醇胺(NAPE)、N-酰基-丝氨酸(NSer)、氧化磷脂酰胆碱(oxPC)、棕榈酸-9-羟基-硬脂酸(PAHSA)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰乙醇(PEtOH)、磷脂酸(PA)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、二氢神经鞘氨醇、二氢神经鞘氨醇-1-磷酸酯(Sa1P)、鞘磷脂(SM)、鞘氨醇、鞘氨醇-1-磷酸酯(So1P)和硫苷脂。
43.如权利要求39或40所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分识别与抗体克隆21D4.D1所识别的表位相同或基本上相同的表位。
44.如权利要求39所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分减少Syk磷酸化。
45.一种与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分增强TREM2活性。
46.如权利要求45所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分诱导Syk磷酸化。
47.如权利要求45或46所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分增强吞噬作用或增强髓系细胞、小胶质细胞或巨噬细胞的迁移、分化、功能或存活。
48.如权利要求47所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分增强小胶质细胞功能而不增加神经炎症。
49.如权利要求45至48中任一项所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分识别与抗体克隆2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14H11.A1、21D6.G2、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26E2.A3、30A8.A1、38E9.E5、39H10.A1、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、49H11.B1、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6或RS9.F10所识别的表位相同或基本上相同的表位。
50.如权利要求49所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分识别与抗体克隆RS9.F6所识别的表位相同或基本上相同的表位。
51.如权利要求50所述的分离抗体，其中所述抗体或抗原结合部分结合包含氨基酸残基140-148或由其组成的TREM2片段。
52.如权利要求50所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分结合人TREM2上包含氨基酸残基140-144的表位。
53.如权利要求52所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分与残基Asp140、Leu141、Trp142、Phe143和Pro144中的一个或多个直接接触。
54.如权利要求53所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分与残基Asp140、Leu141、Trp142、Phe143和Pro144中的每一个直接接触。
55.如权利要求45所述的分离抗体，其中所述抗体在不存在TREM2配体的情况下增加TREM2活性。
56.如权利要求45所述的分离抗体，其中所述抗体在不阻断天然TREM2配体的结合的情况下增强TREM2活性。
57.如权利要求45所述的分离抗体，其中所述抗体增强由TREM2配体诱导的TREM2活性。
58.如权利要求57所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分在存在TREM2配体的情况下诱导Syk磷酸化。
59.如权利要求45所述的分离抗体，其中所述抗体选择性地增强TREM2配体的活性。
60.如权利要求45所述的分离抗体，其中所述抗体阻断TREM2配体与TREM2的结合。
61.如权利要求45所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分增强由TREM2配体诱导的TREM2活性，但是在不存在所述TREM2配体的情况下不增强TREM2活性。
62.如权利要求61所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分在存在而不是不存在TREM2配体的情况下诱导Syk磷酸化。
63.如权利要求55至62中任一项所述的分离抗体，其中所述TREM2配体选自由以下组成的组：1-棕榈酰基-2-(5’-氧代-戊酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(POVPC)、2-花生四烯酸甘油酯(2-AG)、7-酮胆固醇(7-KC)、24(S)羟基胆固醇(24OHC)、25(S)羟基胆固醇(25OHC)、27-羟基胆固醇(27OHC)、酰基肉碱(AC)、烷基酰基甘油磷酸胆碱(PAF)、α-半乳糖基神经酰胺(KRN7000)、双(单酰基甘油)磷酸酯(BMP)、心磷脂(CL)、神经酰胺、神经酰胺-1-磷酸酯(C1P)、胆固醇酯(CE)、胆固醇磷酸酯(CP)、二酰基甘油34:1(DG 34:1)、二酰基甘油38:4(DG38:4)、二酰基甘油焦磷酸盐(DGPP)、二氢神经酰胺(DhCer)、二氢鞘磷脂(DhSM)、醚磷脂酰胆碱(PCe)、游离胆固醇(FC)、半乳糖基神经酰胺(GalCer)、半乳糖基鞘氨醇(GalSo)、神经节苷脂GM1、神经节苷脂GM3、葡糖基鞘氨醇(GlcSo)、汉克平衡盐溶液(HBSS)、Kdo2-脂质A(KLA)、乳糖基神经酰胺(LacCer)、溶血烷基酰基甘油磷酸胆碱(LPAF)、溶血磷脂酸(LPA)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰甘油(LPG)、溶血磷脂酰肌醇(LPI)、溶血鞘磷脂(LSM)、溶血磷脂酰丝氨酸(LPS)、N-酰基-磷脂酰乙醇胺(NAPE)、N-酰基-丝氨酸(NSer)、氧化磷脂酰胆碱(oxPC)、棕榈酸-9-羟基-硬脂酸(PAHSA)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰乙醇(PEtOH)、磷脂酸(PA)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、二氢神经鞘氨醇、二氢神经鞘氨醇-1-磷酸酯(Sa1P)、鞘磷脂(SM)、鞘氨醇、鞘氨醇-1-磷酸酯(So1P)和硫苷脂。
64.如权利要求57所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分识别与抗体克隆3D3.A1、8A11.B1、14D5.F1、19F10.F3、21D6.G2、22B8.B1、22G9.D1、26D11.B1、26E.2.A3、30A8.A1、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、49H11.B1、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.F6或RS9.F10所识别的表位相同或基本上相同的表位。
65.一种与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分抑制TREM2活性。
66.如权利要求65所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分识别与抗体克隆21D4.D1所识别的表位相同或基本上相同的表位。
67.如权利要求65所述的分离抗体，其中所述抗体阻止TREM2配体激活TREM2。
68.如权利要求65所述的分离抗体，其中所述抗体阻断TREM2配体与TREM2的结合。
69.如权利要求67或68所述的分离抗体，其中所述TREM2配体选自由以下组成的组：1-棕榈酰基-2-(5’-氧代-戊酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(POVPC)、2-花生四烯酸甘油酯(2-AG)、7-酮胆固醇(7-KC)、24(S)羟基胆固醇(24OHC)、25(S)羟基胆固醇(25OHC)、27-羟基胆固醇(27OHC)、酰基肉碱(AC)、烷基酰基甘油磷酸胆碱(PAF)、α-半乳糖基神经酰胺(KRN7000)、双(单酰基甘油)磷酸酯(BMP)、心磷脂(CL)、神经酰胺、神经酰胺-1-磷酸酯(C1P)、胆固醇酯(CE)、胆固醇磷酸酯(CP)、二酰基甘油34:1(DG 34:1)、二酰基甘油38:4(DG38:4)、二酰基甘油焦磷酸盐(DGPP)、二氢神经酰胺(DhCer)、二氢鞘磷脂(DhSM)、醚磷脂酰胆碱(PCe)、游离胆固醇(FC)、半乳糖基神经酰胺(GalCer)、半乳糖基鞘氨醇(GalSo)、神经节苷脂GM1、神经节苷脂GM3、葡糖基鞘氨醇(GlcSo)、汉克平衡盐溶液(HBSS)、Kdo2-脂质A(KLA)、乳糖基神经酰胺(LacCer)、溶血烷基酰基甘油磷酸胆碱(LPAF)、溶血磷脂酸(LPA)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、溶血磷脂酰甘油(LPG)、溶血磷脂酰肌醇(LPI)、溶血鞘磷脂(LSM)、溶血磷脂酰丝氨酸(LPS)、N-酰基-磷脂酰乙醇胺(NAPE)、N-酰基-丝氨酸(NSer)、氧化磷脂酰胆碱(oxPC)、棕榈酸-9-羟基-硬脂酸(PAHSA)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰乙醇(PEtOH)、磷脂酸(PA)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)、二氢神经鞘氨醇、二氢神经鞘氨醇-1-磷酸酯(Sa1P)、鞘磷脂(SM)、鞘氨醇、鞘氨醇-1-磷酸酯(So1P)和硫苷脂。
70.如权利要求67所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分识别与抗体克隆2G4.B1、13B11.A、14H11.A1、21D4.D1、21D11.B1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、44E3.B1、51D4.A1、55B9.A1、57D7.A1或RS9.E2所识别的表位相同或基本上相同的表位。
71.如权利要求65所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分减少Syk磷酸化。
72.一种与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分识别与抗体克隆2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1或RS12.3C10所识别的表位相同或基本上相同的表位。
73.如权利要求72所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分与抗体克隆所识别的表位具有至少50％重叠，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1和RS12.3C10。
74.如权利要求72所述的分离抗体，其中所述抗体或抗原结合部分识别与抗体克隆RS9.F6所识别的表位相同或基本上相同的表位。
75.如权利要求74所述的分离抗体，其中所述抗体或抗原结合部分结合人TREM2上包含氨基酸残基140-144的表位。
76.如权利要求75所述的分离抗体，其中所述抗体或抗原结合部分与Asp140、Leu141、Trp142、Phe143和Pro144中的一个或多个直接接触。
77.如权利要求76所述的分离抗体，其中所述抗体或抗原结合部分与Asp140、Leu141、Trp142、Phe143和Pro144中的每一个直接接触。
78.如权利要求74所述的分离抗体，其中所述抗体或抗原结合部分结合包含氨基酸残基140-148或由其组成的TREM2片段。
79.如权利要求1至78中任一项所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含：
与抗体克隆2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1或RS12.3C10的CDR具有至少90％序列同一性的一个或多个互补决定区(CDR)；或
相对于抗体克隆2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1或RS12.3C10的CDR具有最多至两个氨基酸取代的一个或多个CDR。
80.一种与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分包含：
与抗体克隆2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1或RS12.3C10的CDR具有至少90％序列同一性的一个或多个互补决定区(CDR)；或
相对于抗体克隆2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1或RS12.3C10的CDR具有最多至两个氨基酸取代的一个或多个CDR。
81.如权利要求79或80所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含与抗体克隆2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1或RS12.3C10的CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3相同的重链CDR1(CDR-H1)、重链CDR2(CDR-H2)、重链CDR3(CDR-H3)、轻链CDR1(CDR-L1)、轻链CDR2(CDR-L2)和轻链CDR3(CDR-L3)中的每一个。
82.如权利要求1至81中任一项所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含：
重链可变区，其包含与抗体克隆2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1或RS12.3C10的所述重链可变区具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；和/或
轻链可变区，其包含与2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1或RS12.3C10的所述轻链可变区具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
83.如权利要求82所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含：
重链可变区，其包含(i)与抗体克隆2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1或RS12.3C10的所述重链可变区具有至少75％序列同一性的氨基酸序列；以及(ii)与所述抗体克隆的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3相同的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；和/或
轻链可变区，其包含(i)与抗体克隆2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6、RS9.F10、RS11.1F5、RS11.1G6、RS11.1A10、RS11.1D11、RS11.4A5、RS11.4H6、RS11.4D7、RS11.4D9、RS11.4F11、RS12.1C6、RS12.1C10、RS12.2D1、RS12.2D4、RS12.2E1、RS12.2F2、RS12.2G1、RS12.2H1或RS12.3C10的所述轻链可变区具有至少75％序列同一性的氨基酸序列；以及(ii)与所述抗体克隆的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3相同的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
84.如权利要求1至83中任一项所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含选自由以下组成的组的一个或多个CDR：
(a)重链CDR1序列，其与SEQ ID NO:8、36、39、45、51、57、62、68、74、81、85、307和315中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:8、36、39、45、51、57、62、68、74、81、85、307和315中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；
(b)重链CDR2序列，其与SEQ ID NO:9、37、40、46、52、58、63、69、75、79、82、86、308和316中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:9、37、40、46、52、58、63、69、75、79、82、86、308和316中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；
(c)重链CDR3序列，其与SEQ ID NO:10、41、47、53、59、64、70、76、83、87、309和317中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:10、41、47、53、59、64、70、76、83、87、309和317中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；
(d)轻链CDR1序列，其与SEQ ID NO:11、42、48、54、60、65、71、77、88和311中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:11、42、48、54、60、65、71、77、88和311中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；
(e)轻链CDR2序列，其与SEQ ID NO:12、38、43、49、55、66、72、312和319中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:12、38、43、49、55、66、72、312和319中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；以及
(f)轻链CDR3序列，其与SEQ ID NO:13、44、50、56、61、67、73、78、80、84、89和313中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:13、44、50、56、61、67、73、78、80、84、89和313中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代。
85.如权利要求84所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含选自由以下组成的组的一个或多个CDR：
(a)重链CDR1序列，其包含SEQ ID NO:8、36、39、45、51、57、62、68、74、81、85、307和315中任一个的氨基酸序列；
(b)重链CDR2序列，其包含SEQ ID NO:9、37、40、46、52、58、63、69、75、79、82、86、308和316中任一个的氨基酸序列；
(c)重链CDR3序列，其包含SEQ ID NO:10、41、47、53、59、64、70、76、83、87、309和317中任一个的氨基酸序列；
(d)轻链CDR1序列，其包含SEQ ID NO:11、42、48、54、60、65、71、77、88和311中任一个的氨基酸序列；
(e)轻链CDR2序列，其包含SEQ ID NO:12、38、43、49、55、66、72、312和319中任一个的氨基酸序列；以及
(f)轻链CDR3序列，其包含SEQ ID NO:13、44、50、56、61、67、73、78、80、84、89和313中任一个的氨基酸序列。
86.如权利要求85所述的分离抗体，其包含：
(a)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(b)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(c)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(d)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(e)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(f)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(g)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(h)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:70 的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(i)包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(j)包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(k)包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(l)包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(m)包含SEQ ID NO:307的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:308的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:309的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:311的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:312的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:313的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(n)包含SEQ ID NO:315的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:316的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:317的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:319的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链CDR3序列。
87.如权利要求85所述的分离抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ IDNO:6、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、306和314中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
88.如权利要求85所述的分离抗体，其包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ IDNO:7、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、310和318中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
89.如权利要求85所述的分离抗体，其包含：
(a)包含与SEQ ID NO:6具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:7具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(b)包含与SEQ ID NO:14具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:25具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(c)包含与SEQ ID NO:15具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:26具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(d)包含与SEQ ID NO:16具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:27具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(e)包含与SEQ ID NO:17具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:28具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(f)包含与SEQ ID NO:18具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:29具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(g)包含与SEQ ID NO:19具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:30具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(h)包含与SEQ ID NO:20具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:31具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(i)包含与SEQ ID NO:21具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:32具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(j)包含与SEQ ID NO:22具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:33具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(k)包含与SEQ ID NO:23具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:34具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(l)包含与SEQ ID NO:24具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:35具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(m)包含与SEQ ID NO:306具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:310具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(n)包含与SEQ ID NO:314具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:318具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
90.一种与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分包含：
(a)轻链可变区；以及
(b)重链可变区，其包含重链CDR1(CDR-H1)、重链CDR2(CDR-H2)和重链CDR3(CDR-H3)，其中：
(i)CDR-H1包含式GX2X3X4X5X6X7X8X9X10X11(I)，其中：X2为Y或F；X3为T、N或S；X4为F、L或I；X5为T、S或K；X6为D、S或E；X7为D或不存在；X8为H、Y或T；X9为A、N、G、V、W、T或Y；X10为M、I或W；并且X11为H、Q或N；
(ii)CDR-H2包含式X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10YX12X13X14X15X16X17(V)，其中：X1为D、V、Y、R、G或T；X2为I、S或V；X3为L、S、N、D、I或Y；X4为P、T或不存在；X5为S、Y、N、T、A、G或F；X6为I、S、N、T或D；X7为G或D；X8为G、D、N、R或S；X9为R、T或A；X10为I、G、S、K、T、N或R；X12为G、N、D或T；X13为V、Q、E或P；X14为K或S；X15为F、Y或L；X16为K、R、Q或不存在；并且X17为G、T、D、S或不存在；并且
(iii)CDR-H3包含选自由SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:59、SEQ ID NO:70、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:87、SEQ ID NO:319和SEQ ID NO:317组成的组的氨基酸序列或包含式ARX3X4X5X6X7X8X9X10YAX13DY(VIII)，其中：X3为G或N；X4为D或G；X5为D或I；X6为S或T；X7为Y或T；X8为R或A；X9为R或G；X10为G或Y；并且X13为L或M。
91.如权利要求90所述的分离抗体，其中式I的所述氨基酸进一步定义如下：X2为Y；X3为T或S；X5为T或S；X8为H或Y；并且X9为A、N、G、V、W或T。
92.如权利要求90或91所述的分离抗体，其中在CDR-H1中，X7不存在。
93.如权利要求90至92中任一项所述的分离抗体，其中在CDR-H1中，X10为W并且X11为N。
94.如权利要求90所述的分离抗体，其中式I的所述氨基酸进一步定义如下：X3为T或N；X7不存在；X10为M或I，并且X11为H或Q。
95.如权利要求91或92所述的分离抗体，其中CDR-H2具有式GYTX4X5X6X8X9X10X11(IV)，其中：X4为F或L；X5为T或S；X6为D、S或E；X8为H或Y；X9为A、N、G、V、W或T；X10为M或I，并且X11为H或Q。
96.如权利要求90至95中任一项所述的分离抗体，其中CDR-H1的X4为F。
97.如权利要求90至96中任一项所述的分离抗体，其中CDR-H1的X5为T。
98.如权利要求96或97所述的分离抗体，其中CDR-H1的X4和X5分别为F和T。
99.如权利要求90至98中任一项所述的分离抗体，其中CDR-H1的X6为D或S。
100.如权利要求99所述的分离抗体，其中CDR-H1的X6为D。
101.如权利要求99所述的分离抗体，其中CDR-H1的X6为S。
102.如权利要求90至101中任一项所述的分离抗体，其中CDR-H1的X8为Y。
103.如权利要求90至102中任一项所述的分离抗体，其中CDR-H1的X10为M。
104.如权利要求90至103中任一项所述的分离抗体，其中CDR-H1的X11为H。
105.如权利要求103或104所述的分离抗体，其中CDR-H1的X10和X11分别为M和H。
106.如权利要求90至102中任一项所述的分离抗体，其中CDR-H1的X10和X11分别为I和Q。
107.如权利要求90至106中任一项所述的分离抗体，其中式V的所述氨基酸进一步定义如下：X1为V、Y、R、G或T；X3为S、N、D、I或Y；X5为Y、N、T、A、G或F；X6为S、N、T或D；X9为T或A；X12为N、D或T；X13为Q、E或P；X16为K、R或Q；X17为G、T、D或S。
108.如权利要求107所述的分离抗体，其中式V的所述氨基酸进一步定义如下：X4为P或T；X5为Y、N、T、A或G；X8为G、D或N；X10为G、S、K、T、N或R；X14为K；X15为F或Y；并且X17为G、T或D。
109.如权利要求90至108中任一项所述的分离抗体，其中所述抗体包含轻链可变区，所述轻链可变区包含轻链CDR1(CDR-L1)、轻链CDR-2(CDR-L2)和轻链CDR3(CDR-L3)，其中：
(i)CDR-L1包含式X1SSX4SLX7X8X9X10X11X12X13X14X15LX17(IX)，其中：X1为R或K；X4为Q或K；X7为V或L；X8为H、D或Y；X9为I、N或S；X10为S或不存在；X11为D或N；X12为G或Q；X13为N、I或K；X14为T或S；X15为Y或F；并且X17为Q、H、Y、N或A；或CDR-L1包含式X1ASX4X5IX7X8X9LX11(X)，其中：其中X1为R、K或S；X4为E或Q；X5为N、D或G；X7为Y或S；X8为S或N；X9为N、R或Y；并且X11为A或N；
(ii)CDR-L2包含式X1X2SX4X5X6S(XI)，其中：X1为K、Q、Y、V或L；X2为V、M或T；X4为N、K或Y；X5为R或L；并且X6为F、A、H或D；或CDR-L2包含SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:66的氨基酸序列；并且
(iii)CDR-L3包含式X1X2X3X4X5X6X7X8T(XII)，其中：X1为S、W或Q；X2为Q或H；X3为S、T、G、Y或F；X4为T、F、W或S；X5为H、S、G或N；X6为V、A、F、Y、T或L；X7为P、T或L；并且X8为Y、F、P或W；或CDR-L3包含SEQ ID NO：73的氨基酸序列。
110.如权利要求109所述的分离抗体，其中式IX的X4为Q。
111.如权利要求109或110所述的分离抗体，其中式IX的X8为H。
112.如权利要求109至111中任一项所述的分离抗体，其中式IX的X9为I或S。
113.如权利要求109至112中任一项所述的分离抗体，其中式IX的X10不存在。
114.如权利要求109至113中任一项所述的分离抗体，其中式IX的X11为N。
115.如权利要求109至114中任一项所述的分离抗体，其中式IX的X12为G。
116.如权利要求109至115中任一项所述的分离抗体，其中式IX的X13为N或K。
117.如权利要求109至116中任一项所述的分离抗体，其中式IX的X14为T。
118.如权利要求109至111中任一项所述的分离抗体，其中式IX的X15为Y。
119.如权利要求109至118中任一项所述的分离抗体，其中式XI的X2为V。
120.如权利要求109至119中任一项所述的分离抗体，其中式XI的X4为N。
121.如权利要求109至120中任一项所述的分离抗体，其中式XI的X5为R。
122.如权利要求109至121中任一项所述的分离抗体，其中式XI的X5为L。
123.如权利要求109至122中任一项所述的分离抗体，其中式XII的所述氨基酸进一步定义如下：X1为Q；X3为Y或F；X4为F、W或S；X5为S、G或N；X6为Y、T或L；X7为P；X8为P、Y或W。
124.如权利要求109至123中任一项所述的分离抗体，其中式XII的X2为Q。
125.如权利要求109至124中任一项所述的分离抗体，其中式XII的X4为T。
126.如权利要求109至125中任一项所述的分离抗体，其中式XII的X5为H。
127.如权利要求109至122中任一项所述的分离抗体，其中式XII的所述氨基酸进一步定义如下：X1为S或W；X2为Q；X3为S、T或G；X4为T；X5为H；X6为V、A或F；X7为P、T或L；并且X8为Y、F或P。
128.如权利要求127所述的分离抗体，其中式XII的X6为V或F。
129.一种与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分包含选自由以下组成的组的一个或多个CDR：
(a)重链CDR1序列，其与SEQ ID NO:8、36、39、45、51、57、62、68、74、81、85、307和315中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:8、36、39、45、51、57、62、68、74、81、85、307和315中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；
(b)重链CDR2序列，其与SEQ ID NO:9、37、40、46、52、58、63、69、75、79、82、86、308和316中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:9、37、40、46、52、58、63、69、75、79、82、86、308和316中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；
(c)重链CDR3序列，其与SEQ ID NO:10、41、47、53、59、64、70、76、83、87、319和317中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:10、41、47、53、59、64、70、76、83、87、319和317中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；
(d)轻链CDR1序列，其与SEQ ID NO:11、42、48、54、60、65、71、77、88和311中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:11、42、48、54、60、65、71、77、88和311中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；
(e)轻链CDR2序列，其与SEQ ID NO:12、38、43、49、55、66、72、312和319中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:12、38、43、49、55、66、72、312和319中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代；以及
(f)轻链CDR3序列，其与SEQ ID NO:13、44、50、56、61、67、73、78、80、84、89和313中任一个的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或相对于SEQ ID NO:13、44、50、56、61、67、73、78、80、84、89和313中任一个的氨基酸序列具有最多至两个氨基酸取代。
130.如权利要求129所述的分离抗体，其包含选自由以下组成的组的一个或多个CDR：
(a)重链CDR1，其包含SEQ ID NO:8、36、39、45、51、57、62、68、74、81、85、307和315中任一个的氨基酸序列；
(b)重链CDR2序列，其包含SEQ ID NO:9、37、40、46、52、58、63、69、75、79、82、86、308和316中任一个的氨基酸序列；
(c)重链CDR3序列，其包含SEQ ID NO:10、41、47、53、59、64、70、76、83、87、319和317中任一个的氨基酸序列；
(d)轻链CDR1序列，其包含SEQ ID NO:11、42、48、54、60、65、71、77、88和311中任一个的氨基酸序列；
(e)轻链CDR2序列，其包含SEQ ID NO:12、38、43、49、55、66、72、312和319中任一个的氨基酸序列；以及
(f)轻链CDR3序列，其包含SEQ ID NO:13、44、50、56、61、67、73、78、80、84、89和313中任一个的氨基酸序列。
131.如权利要求130所述的分离抗体，其包含：
(a)包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(b)包含SEQ ID NO:36的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:37的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(c)包含SEQ ID NO:39的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(d)包含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:47的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的轻链CDR2 序列；以及包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(e)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:56的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(f)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:59的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(g)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:64的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(h)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(i)包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(j)包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(k)包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:82的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:83的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:60的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(l)包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:38的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:89的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(m)包含SEQ ID NO:307的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:308的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:309的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:311的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:312的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:313的氨基酸序列的轻链CDR3序列；或
(n)包含SEQ ID NO:315的氨基酸序列的重链CDR1序列；包含SEQ ID NO:316的氨基酸序列的重链CDR2序列；包含SEQ ID NO:317的氨基酸序列的重链CDR3序列；包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的轻链CDR1序列；包含SEQ ID NO:319的氨基酸序列的轻链CDR2序列；以及包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的轻链CDR3序列。
132.如权利要求130或131所述的分离抗体，其包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQ ID NO:6、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、306和314中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
133.如权利要求130或131所述的分离抗体，其包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:7、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、310和318中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
134.如权利要求129至131中任一项所述的分离抗体，其包含：
(a)包含与SEQ ID NO:6具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:7具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(b)包含与SEQ ID NO:14具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:25具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(c)包含与SEQ ID NO:15具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:26具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(d)包含与SEQ ID NO:16具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:27具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(e)包含与SEQ ID NO:17具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:28具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(f)包含与SEQ ID NO:18具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:29具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(g)包含与SEQ ID NO:19具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:30具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(h)包含与SEQ ID NO:20具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:31具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(i)包含与SEQ ID NO:21具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:32具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(j)包含与SEQ ID NO:22具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:33具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(k)包含与SEQ ID NO:23具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:34具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(l)包含与SEQ ID NO:24具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:35具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(m)包含与SEQ ID NO:306具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:310具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区；或
(n)包含与SEQ ID NO:314具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区；和包含与SEQ ID NO:318具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
135.如权利要求1至134中任一项所述的分离抗体，其中所述抗体包含第一Fc多肽和任选的第二Fc多肽。
136.如权利要求135所述的分离抗体，其中所述抗体包含所述第一Fc多肽和所述第二Fc多肽。
137.如权利要求135或136所述的分离抗体，其中所述第一Fc多肽是修饰Fc多肽和/或所述第二Fc多肽是修饰Fc多肽。
138.如权利要求1至137中任一项所述的分离抗体，其中所述抗体包含：
(a)第一抗原结合部分，其包含与所述人TREM2蛋白特异性结合的第一可变区，其中所述第一抗原结合部分包含(i)包含第一Fc多肽的第一重链和(ii)第一轻链；以及
(b)第二抗原结合部分，其包含与所述人TREM2蛋白特异性结合的第二可变区，其中所述第二抗原结合部分包含(i)包含第一Fc多肽的第二重链和(ii)第二轻链；
其中所述第一Fc多肽和所述第二Fc多肽形成Fc二聚体。
139.如权利要求138所述的分离抗体，其中所述第一Fc多肽是修饰Fc多肽和/或所述第二Fc多肽是修饰Fc多肽。
140.如权利要求138或139所述的分离抗体，其中所述第一可变区和所述第二可变区识别所述人TREM2蛋白中的相同表位。
141.如权利要求138或139所述的分离抗体，其中所述第一可变区和所述第二可变区识别所述人TREM2蛋白中的不同表位。
142.如权利要求137至141中任一项所述的分离抗体，其中所述第一Fc 多肽和所述第二Fc多肽各自含有促进异源二聚化的修饰。
143.如权利要求142所述的分离抗体，其中根据EU编号，所述Fc多肽中的一个具有T366W取代，并且另一个Fc多肽具有T366S、L368A和Y407V取代。
144.如权利要求137至143中任一项所述的分离抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含天然FcRn结合位点。
145.如权利要求137至143中任一项所述的分离抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含改变FcRn结合的修饰。
146.如权利要求137至145中任一项所述的分离抗体，其中所述第一Fc多肽和所述第二Fc多肽不具有效应子功能。
147.如权利要求137至145中任一项所述的分离抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含降低效应子功能的修饰。
148.如权利要求147所述的分离抗体，其中根据EU编号，降低效应子功能的所述修饰包括位置234处的Ala和位置235处的Ala的取代。
149.如权利要求137至148中任一项所述的分离抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽相对于天然Fc序列包含延长血清半衰期的氨基酸变化。
150.如权利要求149所述的分离抗体，其中根据EU编号，所述氨基酸变化包括位置252处的Tyr、位置254处的Thr和位置256处的Glu的取代。
151.如权利要求149所述的分离抗体，其中根据EU编号，所述氨基酸变化包括位置428处的Leu和位置434处的Ser的取代。
152.如权利要求149所述的分离抗体，其中根据EU编号，所述氨基酸变化包括位置434处的Ser或Ala的取代。
153.如权利要求137至152中任一项所述的分离抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽特异性结合转铁蛋白受体。
154.如权利要求153所述的分离抗体，其中根据EU编号，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽在选自由384、386、387、388、389、390、413、416和421组成的组的位置上包含至少两个取代。
155.如权利要求154所述的分离抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽在所述位置中的至少三个、四个、五个、六个、七个、八个或九个处包含取代。
156.如权利要求154或155所述的分离抗体，其中根据EU编号，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽在包括380、391、392和415的位置上进一步包含1、2、3或4个取代。
157.如权利要求154至156中任一项所述的分离抗体，其中根据EU编号，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽在包括414、424和426的位置上进一步包含1、2或3个取代。
158.如权利要求154至157中任一项所述的分离抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽在位置388处包含Trp。
159.如权利要求154至158中任一项所述的分离抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽在位置421处包含芳族氨基酸。
160.如权利要求159所述的分离抗体，其中位置421处的所述芳族氨基酸是Trp或Phe。
161.如权利要求154至160中任一项所述的分离抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含选自以下的至少一个位置：位置380是Trp、Leu或Glu；位置384是Tyr或Phe；位置386 是Thr；位置387是Glu；位置388是Trp；位置389是Ser、Ala、Val或Asn；位置390是Ser或Asn；位置413是Thr或Ser；位置415是Glu或Ser；位置416是Glu；并且位置421是Phe。
162.如权利要求161所述的分离抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含选自以下的2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个位置：位置380是Trp、Leu或Glu；位置384是Tyr或Phe；位置386是Thr；位置387是Glu；位置388是Trp；位置389是Ser、Ala、Val或Asn；位置390是Ser或Asn；位置413是Thr或Ser；位置415是Glu或Ser；位置416是Glu；并且位置421是Phe。
163.如权利要求162所述的分离抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含如下的11个位置：位置380是Trp、Leu或Glu；位置384是Tyr或Phe；位置386是Thr；位置387是Glu；位置388是Trp；位置389是Ser、Ala、Val或Asn；位置390是Ser或Asn；位置413是Thr或Ser；位置415是Glu或Ser；位置416是Glu；并且位置421是Phe。
164.如权利要求162或163所述的分离抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽具有CH3结构域，所述结构域与SEQ ID NO:100-185、219-298和337-460中任一个的氨基酸111-217具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。
165.如权利要求162或163所述的分离抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含SEQ ID NO:100-185、219-298和337-460中任一个的氨基酸序列。
166.如权利要求164或165所述的分离抗体，其中与SEQ ID NO:100-185、219-298和337-460中任一个的EU索引位置380、384、386、387、388、389、390、391、392、413、414、415、416、421、424和426相对应的所述位置中的至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16个的所述残基未缺失或取代。
167.如权利要求153至166中任一项所述的分离抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽结合所述转铁蛋白受体的顶端结构域。
168.如权利要求167所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分与所述转铁蛋白受体的结合基本上不抑制转铁蛋白与所述转铁蛋白受体的结合。
169.如权利要求135至168中任一项所述的分离抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽与对应的野生型Fc多肽相比具有至少75％或至少80％、90％、92％或95％的氨基酸序列同一性。
170.如权利要求169所述的分离抗体，其中所述对应的野生型Fc多肽是人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc多肽。
171.如权利要求153至121中任一项所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分在脑部的摄取比在所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽中不具有导致转铁蛋白受体结合的所述修饰的所述抗体或其抗原结合部分的摄取至少大十倍。
172.如权利要求135至171中任一项所述的分离抗体，其中所述Fc多肽中的一个未被修饰以结合血脑屏障受体，并且另一个Fc多肽被修饰以特异性结合转铁蛋白受体。
173.如权利要求1至172中任一项所述的分离抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分表现出与小鼠TREM2蛋白的交叉反应性。
174.如权利要求1至173中任一项所述的分离抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
175.如权利要求1至173中任一项所述的分离抗体，其中所述抗体是嵌合抗体。
176.如权利要求1至173中任一项所述的分离抗体，其中所述抗体是人源化抗体。
177.如权利要求1至173中任一项所述的分离抗体，其中所述抗体是完全人抗体。
178.如权利要求1至173中任一项所述的分离抗体，其中所述抗原结合部分是Fab、F(ab’)2、scFv或二价scFv。
179.如权利要求1至178中任一项所述的分离抗体，其中所述抗体是多特异性抗体。
180.如权利要求179所述的分离抗体，其中所述多特异性抗体是双特异性抗体。
181.如权利要求180所述的分离抗体，其中所述双特异性抗体识别两个不同的TREM2表位。
182.如权利要求180或181所述的分离抗体，其中所述双特异性抗体能够诱导TREM2集簇在细胞表面上。
183.如权利要求180至182中任一项所述的分离抗体，其中所述双特异性抗体具有比包含与所述双特异性抗体的单臂相同的序列的二价单特异性抗体低至少2倍的EC50。
184.如权利要求180至183中任一项所述的分离抗体，其中所述双特异性抗体的两个臂中的每一个选自抗体克隆，所述抗体克隆选自由以下组成的组：2G4.B1、3D3.A1、7B10.A2、13B11.A1、14D5.F1、14H11.A1、21D4.D1、21D6.G2、21D11、22B8.B1、22G9.D1、24B4.A1、26D2.D1、26D5.A1、26D11.B1、26E2.A3、30A8.A1、30F2.A2、38E9.E5、39H10.A1、40H3.A4、42E8.H1、43E9.H1、44E2.H1、44E3.B1、49H11.B1、51D4、52H9.D1、53H11.D3、54C2.A1、55B9.A1、57D7.A1、59C6.F1、60A4.B1、RS9.E2、RS9.F6和RS9.F10，其中所述两个臂处于不同的表位仓。
185.一种药物组合物，其包含如权利要求1至184中任一项所述的分离抗体和药学上可接受的载剂。
186.一种抗体，其与如权利要求1至184中任一项所述的分离抗体竞争结合所述人TREM2蛋白。
187.一种试剂盒，其包括：
如权利要求1至184中任一项所述的分离抗体或如权利要求185所述的药物组合物；以及
其使用说明书。
188.一种治疗神经变性疾病的方法，所述方法包括向患有神经变性疾病的受试者施用如权利要求1至184中任一项所述的分离抗体或如权利要求185所述的药物组合物。
189.如权利要求188所述的方法，其中所述神经变性疾病选自由以下组成的组：阿尔茨海默病、原发性年龄相关性tau蛋白病、进行性核上性麻痹(PSP)、额颞叶痴呆、与第17号染色体相关的额颞叶痴呆伴帕金森症、嗜银颗粒性痴呆、肌萎缩性侧索硬化症、肌萎缩性侧索硬化症/关岛震颤麻痹痴呆综合征(ALS-PDC)、皮质基底节变性、慢性创伤性脑病、克雅病、拳击员痴呆、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化、唐氏综合征、家族性英国痴呆症、家族性丹麦痴呆症、GSS氏病、球状胶质tau蛋白病、瓜德罗普型帕金森病伴痴呆、瓜德罗普型PSP、哈勒沃登-施帕茨病、伴球状体遗传性弥漫性白质脑病(HDLS)、亨廷顿氏病、包涵体肌炎、多系统萎缩症、肌强直性营养不良、那-哈病、神经原纤维缠结优势性痴呆、C型尼曼匹克病、苍白球-脑桥-黑质变性、帕金森病、皮克氏病、脑炎后帕金森综合征、朊病毒蛋白脑淀粉样血管病、进行性皮层下神经胶质增生、亚急性硬化性全脑炎和仅缠结性痴呆。
190.如权利要求189所述的方法，其中所述神经变性疾病是阿尔茨海默病。
191.一种降低患有神经变性疾病的受试者中的sTREM2水平的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求1至22或72至184中任一项所述的分离抗体。
192.一种增加患有神经变性疾病的受试者中的sTREM2水平的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求23至44或72至184中任一项所述的分离抗体。
193.一种增强患有神经变性疾病的受试者中的TREM2活性的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求45至64或72至184中任一项所述的分离抗体。
194.如权利要求193所述的方法，其中所述分离抗体或其抗原结合部分是增强由配体诱导的TREM2活性的抗体。
195.如权利要求193所述的方法，其中所述分离抗体或其抗原结合部分是选择性增强TREM2活性的抗体。
196.如权利要求193所述的方法，其中所述分离抗体或其抗原结合部分是在不阻断天然TREM2配体的结合的情况下增强TREM2活性的抗体。
197.一种抑制患有神经变性疾病的受试者中的TREM2活性的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求65至184中任一项所述的分离抗体。
198.如权利要求193至197中任一项所述的方法，其中所述分离抗体或其抗原结合部分是降低TREM2水平的抗体。
199.如权利要求193至197中任一项所述的方法，其中所述分离抗体或其抗原结合部分是增加TREM2水平的抗体。
200.一种将患有神经变性疾病的受试者鉴定为用于使用抗TREM2抗体进行治疗的候选者的方法，所述方法包括：
测量来自所述受试者的样品中的sTREM2水平；
将来自所述受试者的所述样品中的sTREM2水平与对照值相比较，其中相对于所述对照值升高的来自所述受试者的所述样品中的sTREM2水平将所述受试者鉴定为治疗的候选者；以及
对于被鉴定为治疗的候选者的受试者，向所述受试者施用与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述分离抗体或其抗原结合部分降低sTREM2水平。
201.一种治疗已被鉴定为用于使用抗TREM2抗体进行治疗的候选者的患有神经变性疾病的受试者的方法，其中所述受试者被鉴定为相对于对照值具有升高的sTREM2水平，所述方法包括向所述受试者施用与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述分离抗体或其抗原结合部分降低sTREM2水平。
202.如权利要求200或201所述的方法，其中所述分离抗体或其抗原结合部分是如权利要求1至22和72至184中任一项所述的抗体。
203.一种将患有神经变性疾病的受试者鉴定为用于使用抗TREM2抗体进行治疗的候选者的方法，所述方法包括：
测量来自所述受试者的样品中的sTREM2水平；
将来自所述受试者的所述样品中的sTREM2水平与对照值相比较，其中相对于所述对照值降低的来自所述受试者的所述样品中的sTREM2水平将所述受试者鉴定为治疗的候选者；以及
对于被鉴定为治疗的候选者的受试者，向所述受试者施用与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述分离抗体或其抗原结合部分增加sTREM2水平。
204.一种治疗已被鉴定为用于使用抗TREM2抗体进行治疗的候选者的患有神经变性疾病的受试者的方法，其中所述受试者已被鉴定为相对于对照值具有降低的sTREM2水平，所述方法包括向所述受试者施用与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分，其中所述分离抗体或其抗原结合部分增加sTREM2水平。
205.如权利要求203或204所述的方法，其中所述分离抗体或其抗原结合部分是如权利要求23至44和72至184中任一项所述的抗体。
206.一种监测抗TREM2抗体对患有神经变性疾病的受试者的治疗功效的方法，所述方法包括：
测量在施用抗TREM2抗体之前从所述受试者获得的第一样品中的sTREM2水平；
用与人TREM2蛋白特异性结合的分离抗体或其抗原结合部分治疗所述受试者；以及
测量在施用所述抗TREM2抗体之后从所述受试者获得的第二样品中的sTREM2水平；
其中与来自所述受试者的所述第一样品相比，来自所述受试者的所述第二样品中的sTREM2水平的变化表明所述受试者对使用所述抗TREM2抗体的治疗作出反应。
207.如权利要求71所述的方法，其中所述分离抗体或其抗原结合部分是如权利要求1至184中任一项所述的抗体。
208.如权利要求206所述的方法，其中与来自所述受试者的所述第一样品相比，来自所述受试者的所述第二样品中的sTREM2水平的降低表明所述受试者对使用所述抗TREM2抗体的治疗作出反应。
209.如权利要求206所述的方法，其中与来自所述受试者的所述第一样品相比，来自所述受试者的所述第二样品中的sTREM2水平的增加表明所述受试者对使用所述抗TREM2抗体的治疗作出反应。
210.如权利要求191至209中任一项所述的方法，其中所述神经变性疾病选自由以下组成的组：阿尔茨海默病、原发性年龄相关性tau蛋白病、进行性核上性麻痹(PSP)、额颞叶痴呆、与第17号染色体相关的额颞叶痴呆伴帕金森症、嗜银颗粒性痴呆、肌萎缩性侧索硬化症、肌萎缩性侧索硬化症/关岛震颤麻痹痴呆综合征(ALS-PDC)、皮质基底节变性、慢性创伤性脑病、克雅病、拳击员痴呆、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化、唐氏综合征、家族性英国痴呆症、家族性丹麦痴呆症、GSS氏病、球状胶质tau蛋白病、瓜德罗普型帕金森病伴痴呆、瓜德罗普型PSP、哈勒沃登-施帕茨病、伴球状体遗传性弥漫性白质脑病(HDLS)、亨廷顿氏病、包涵体肌炎、多系统萎缩症、肌强直性营养不良、那-哈病、神经原纤维缠结优势性痴呆、C型尼曼匹克病、苍白球-脑桥-黑质变性、帕金森病、皮克氏病、脑炎后帕金森综合征、朊病毒蛋白脑淀粉样血管病、进行性皮层下神经胶质增生、亚急性硬化性全脑炎和仅缠结性痴呆。
211.如权利要求210所述的方法，其中所述神经变性疾病是阿尔茨海默病。
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