JP2015537034A - 二重特異性抗体 - Google Patents
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Abstract
Description
いくつかの態様において、該免疫細胞が、T細胞、B細胞、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、食細胞、ナチュラルキラー細胞、好酸球、好塩基球及び肥満細胞から選ばれる。
いくつかの態様において、該融合ペプチドが、CD3、CD16、CD19、CD28及びCD64から選ばれる抗原に対して特異性を持つ。
いくつかの態様において、該重鎖及び/又は該融合ペプチドのFcフラグメントが、野生型の抗体フラグメントと比べて、1又は2以上の置換を含み、該置換が該重鎖とFcフラグメントとの間にノブ・イントゥー・ホール立体配座対を形成する。一態様において、該置換が表2から選ばれる。
いくつかの態様において、該CH2ドメインが該scFvフラグメントとCH3ドメインとの間に位置する。一態様において、該融合ペプチドがCH1ドメインを含まない。
他の実施例において、1又は2以上の抗原に結合する上記いずれかの実施例における抗体を含む複合体を提供する。
本発明は、さらに、(a)免疫細胞に対して特異性を持つ軽鎖−重鎖対、及び、(b)一本鎖可変フラグメント(scFv)と、CH2ドメインおよびCH3ドメインを有するFcフラグメントとを含み、腫瘍細胞に対して特異性を持つ融合ペプチドを混合することを含む抗体の作製方法を提供する。一態様において、本発明は該方法により作製される抗体を提供する。
なお、数が明確されていない実体限定は、1つまたは複数(種類)の実体を指す。例えば、「二重特異性抗体」は、1つまたは複数(種類)の二重特異性抗体であることを理解すべきである。同様に、用語「1つまたは複数」および「少なくとも1つ」は、本明細書において交換可能なものとして使用される。
「相同性」、「同一性」または「類似性」とは、2つのペプチド鎖分子間または2つの核酸分子間の類似度を指す。相同性は、各配列中の位置を比較することによって決定することができ、アライメントにより比較することができる。比較された配列の位置が、同じ塩基またはアミノ酸によって占められるとき、その分子はその位置で相同的である。複数の配列間の相同度は、これらの配列が共有するマッチングまたは相同位置の数の関数である。「無関係」または「非相同の」配列は、本発明の配列の一つと40%未満の同一性、好ましくは25%未満の同一性を有する。
本明細書で使用する用語「検出可能な標識」とは、「標識された」組成物を生成するように検出しようとする組成物(例えば、ポリヌクレオチド又はタンパク質、該タンパク質は、例えば抗体)に直接または間接的に結合され、直接または間接的に検出可能な化合物又は組成物を指す。該用語は、挿入配列の発現によりシグナルを提供する、該ポリヌクレオチドに結合する配列、例えば、緑色蛍光タンパク質(GFP)などをさらに含む。標識はそれ自体で検出可能(例えば放射性同位体標識または蛍光標識)であっても、または酵素標識の場合、基質化合物または組成物の化学的変化を触媒し、検出可能な生成物をもたらすものであってもよい。
「軽鎖−重鎖対」とは軽鎖と重鎖の集合を指し、これらは軽鎖のCLドメインとCH1ドメインの間のジスルフィド結合により二量体を形成できる。
先に示したように、さまざまな免疫グロブリンクラスの定常領域のサブユニット構造および三次元構造はよく知られている。本明細書で用いるとき、用語「VHドメイン」は免疫グロブリン重鎖のアミノ末端の可変ドメインを含み、用語「CH1ドメイン」は免疫グロブリン重鎖の第一の(多くはアミノ末端の)定常領域ドメインを含む。CH1ドメインはVHドメインに隣接しており、免疫グロブリン重鎖分子のヒンジ領域のアミノ末端にある。
「特異的に結合する」又は「…に対して特異性がある」とは、一般的に、抗体がその抗原結合ドメインを介してエピトープに結合すること、そしてその結合が抗原結合ドメインとエピトープの間でいくらかの相補性を必要とすることを意味する。この定義によれば、抗体は、それが無作為の無関係なエピトープに結合するよりも容易に、その抗原結合ドメインを介してそのエピトープと結合するとき、エピトープと「特異的に結合する」といわれる。用語「特異性」は、ある抗体がエピトープと結合する親和性を表すために本明細書中で用いられる。例えば、抗体「A」は、抗体「B」よりも特定のエピトープに対して高い特異性をもつとみなすことができ、または、抗体「A」は、関連エピトープ「D」に対するよりも高い特異性でエピトープ「C」に結合するということができる。
本発明の一実施例は2つの異なる抗原結合性ポリペプチド単位を含むヘテロ二量体抗体を提供する。いくつかの態様において、該ヘテロ二量体は対応するホモ二量体と大きさが異なり、大きさの違いは、ヘテロ二量体およびホモ二量体の分離を容易にするために利用することができる。
いくつかの態様において、この2つの抗原結合性ポリペプチド単位の一つは野生型抗体と類似する軽鎖−重鎖対を含む。本発明全体において、該単位を「一価単位」ともいう。いくつかの態様において、他の抗原結合性ポリペプチド単位は一本鎖可変フラグメント(scFv)を含む。このようなscFvは抗体の定常フラグメント(Fc)に融合できる。本発明全体において、該融合ペプチドを「一本鎖単位」ともいう。
一実施例において、このような二重特異性抗体は、腫瘍細胞または微生物に対して特異性を有し、且つ免疫細胞に対して特異性を有することにより、腫瘍細胞または微生物を免疫細胞に近接させることができ、活性化免疫応答により腫瘍細胞または微生物を排除する。
別の実施例において、提供される抗体は、(a)微生物対する特異性を持ち、例えば、GP120がHIV対して、HA2がインフルエンザ対して、及び志賀様毒素2Bが大腸菌(E. Co1i)に対して特異性を持つ軽鎖−重鎖対、及び(b)一本鎖可変フラグメント(scFv)と、CH2ドメインおよびCH3ドメインを有するFcフラグメントとを含み、免疫細胞に対して特異性を持つ融合ペプチドを含む。
図1において、一態様において、所述軽鎖(6)はCLドメイン及びVLドメインを含み、VLaはエピトープ「a」にターゲティングすることをさらに示す。同様に、推定のCH2及びCH3ドメインを含有することに加え、該重鎖はさらにCH1ドメイン及びVHドメインを含み、VHaもエピトープ「a」にターゲティングする。一態様において、該軽鎖及び重鎖は例えば、CL及びCH1の間にジスルフィド結合により結合する。
図1において、一本鎖Fv(scFv)フラグメント(5)及びCH2及びCH3を含む定常領域(3)を含む一本鎖単位をさらに示した。該scFvフラグメントはVL(VLb)及びVH(VHb)ドメインからなり、全てエピトープ「b」にターゲティングし、該エピトープ「b」がエピトープ「a」と異なる。
いくつかの態様において、該一本鎖単位のCH2ドメインはscFvフラグメントとCH3ドメインの間に位置する。換言すれば、該scFvフラグメントは該FcフラグメントのCH2末端に接続される。いくつかの態様において、該一本鎖単位はCH1ドメインを含まない。
さらに抗体の活性を安定化または改善するように抗体を改変できる。例えば、一態様では、野生型抗体フラグメントと比較し、該一価単位重鎖のFcフラグメントおよび/または融合ペプチドのFcフラグメントは、1つまたは複数の置換を含むことができ、これらの置換同士は、イオン結合を形成する。
いくつかの態様において、1つのFcフラグメントにおけるK366は比較的に大きいアミノ酸残基、例えばチロシン(Y)又はトリプトファン(W)により置換される。その後、別のFcフラグメントにおけるY407は比較的に小さいアミノ酸残基、例えばトレオニン(T)、アラニン(a)又はバリン(V)により置換される。表2にこれらの置換の組み合わせの非限定的な例を示す。
「腫瘍抗原」は、腫瘍細胞において産生される抗原性物質であり、すなわち、宿主において免疫応答を誘発する。腫瘍抗原は、腫瘍細胞を同定するのに有用であり、癌を治療するための潜在的な候補である。体内で正常なタンパク質は抗原ではない。しかしながら、腫瘍形成の間に、あるタンパク質が生産または過剰発現され、従って身体に対する「外来」性が示される。これは、よく免疫系から避けられている正常のタンパク質、一般的に非常に少量で生産されるタンパク質、一般的にある発育段階に生産されるタンパク質、またはその構造は突然変異の原因で改変されたタンパク質を含む可能性がある。
いくつかの態様において、該一本鎖単位は免疫細胞対して特異性を有する。いくつかの態様において、該免疫細胞はT細胞、B細胞、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、食細胞、ナチュラルキラー細胞、好酸球、好塩基球及び肥満細胞から選ばれる。
本明細書では、二重特異性リガントにおける各ポリペプチド鎖の例示的な配列を提供する。一態様において、該一本鎖単位の融合ペプチドは配列番号1で表されるアミノ酸配列を有する。一態様において、該一価単位の重鎖は配列番号3で表されるアミノ酸配列を有する。一態様において、該一価単位の軽鎖は配列番号5で表されるアミノ酸配列を有する。
本明細書に記載される抗体は、それらが由来する天然に存在する結合ポリペプチドとアミノ酸配列が異なるように改変され得ることも、当業者によって理解されるだろう。例えば、指定のタンパク質に由来するポリペプチドまたはアミノ酸配列は、出発配列と類似であり得、例えば、出発配列とある特定の同一性パーセントを有し、例えば、出発配列と60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%または99%同一であり得る。
他の実施例において、本発明の抗原結合性ポリペプチドは保存的アミノ酸置換を含むことができる。
以下の表に、アミノ酸の保存的置換を示す非限定的な例が提供される。0以上の類似性スコアは、2つのアミノ酸間に保存的置換があることを示す。
該抗体は治療薬にコンジュゲートまたは融合させることができ、該治療薬には、放射性標識、免疫調節剤、ホルモン、酵素、オリゴヌクレオチド、光活性治療薬または診断薬、細胞毒性薬(薬物でも毒素でもよい)、超音波増強剤、非放射性標識、それらの組合せ、および当技術分野で知られた他のこのような薬剤が含まれる。
本発明はさらに、本発明の抗体またはその変異体もしくは誘導体をコードする単離されたポリヌクレオチドまたは核酸分子を提供する。
例えば、図2は図1に示す抗体の各ペプチド鎖をコードする3つのポリヌクレオチドの構造を示す。
本明細書では、二重特異性配体における各ポリペプチド鎖をコードする例示的な配列を提供する。一態様において、該一本鎖単位の融合ペプチドは配列番号2の核酸配列によりコードされる。一態様において、該一価単位の重鎖は配列番号4の核酸配列によりコードされる。一態様において、該一価単位の軽鎖は配列番号6の核酸配列によりコードされる。
または、一本鎖単位の作製のために記載された技術(米国特許第4,694,778号、 Bird, Science 242:423−442 (1988)、 Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 55:5879− 5883 (1988)、およびWard et al., Nature 334:544−554 (1989))は、本発明の一本鎖単位を作製するために用いられる。一本鎖融合ペプチドは、Fv領域の重鎖フラグメントと軽鎖フラグメントを、アミノ酸ブリッジを介して連結して、一本鎖単位を形成することにより得られる。大腸菌(E. coli)内での機能性Fvフラグメントのアセンブリのための技術を用いてもよい(Skerra et al., Science 242: 1038−1041 (1988))。
本明細書に記載したように、本発明の抗原結合性ポリペプチド、変異体または誘導体は、癌または感染性の疾患と関連した特定の治療および診断方法において使用される。
本発明はさらに、抗体をベースとした治療方法に関し、その治療は、本明細書に記載する1つまたは複数の疾患または症状を治療するために、動物、哺乳動物、ヒトなどの患者に本発明の二重特異性抗体を投与することを含む。本発明の治療用化合物には、本発明の抗体(本明細書に記載のその変異体および誘導体を含む)、及び核酸または本発明の抗体(本明細書に記載のその変異体および誘導体を含む)をコードするポリヌクレオチドを含むが、これらに限定されない。
投与は全身投与または局所投与とすることができる。さらに、本発明の抗体は、脳室内およびくも膜下への注入を含む適切な経路で中枢神経系に導入することが望ましい場合があり、脳室内注入は、例えばオマヤレザバー(Ommaya reservoir)などのレザバーに取り付けられた、脳室内カテーテルによって促進される。また、肺投与も、例えば、吸入器またはネブライザーとエアロゾル化剤を含む製剤を用いることにより、利用することができる。
さらなる実施形態において、本発明の組成物は他の治療または予防レジメン、例えば放射線療法、と組み合わせて投与することができる。
さらに、本発明は医薬組成物を提供する。このような組成物は、治療的有効量、および薬学的に許容される担体を含む。一具体的な実施例において、用語「薬学的に許容される」は、連邦政府または州政府の規制当局によって承認されているか、または米国薬局方、または動物における、特にヒトにおける使用に関する一般に認識された薬局方に収載されていることを意味する。また、「薬学的に許容される担体」は一般に、無毒性の固体、半固体もしくは液体の充填剤、希釈剤、カプセル化材料、またはあらゆる種類の処方助剤である。
実施例1.抗Her2/neu−抗CD3二重特異性抗体の作製。
材料
1.発現ベクターの構築
pcDNA3.1(−)はハーセプチン重鎖発現構築物を作製するために、発現ベクターとして使用した。pcDNA3.1(+)Hygroはハーセプチン軽鎖発現構築物およびHOKT3単鎖構築物を作製するために、発現ベクターとして使用した。プライマーは、VL、VH、ScFv、CH1及びFcの配列並びにpcDNA3.1(−)とpcDNA3.1(+)Hygroベクターの多重クローニング部位により設計した(表5)。VLおよびCL、VH及びCH1、CH1およびFc、ScFv VLおよびVH、ScFvおよびFcフラグメントはオーバーラップ伸長PCR法により接続した。
FcおよびScFvのPCR増幅条件は、25サイクルにける各95℃で1分間の変性、56℃で1分間のアニーリング、および72℃で2分間の延長を除いて同様であった。図4には、PCR産物を示すゲル写真を提供する。
オーバーラップ伸長PCRを用いてハーセプチンのVH及びCH1、およびVL及びCLを接続した。等量のVH及びCH1、又はVL及びCL、及CH1及びFcを回収し、それぞれテンプレート及びプライマーとして用いられる。他の条件は従来のPCRと似て、2サイクルを行う条件は95℃で2分間変性し、55℃で2分間アニーリングし、72℃で2分間延長することである。その後、VH5’末端オリゴヌクレオチドプライマー及びCL3’末端プライマーを加え、95℃で1分間の変性、56℃で1分間のアニーリング、72℃で2分間の延長という条件で25サイクルを行う。終了サイクルは72℃で10分間の延長を含む。
点突然変異はキットQuickchange(登録商標)Site−Directed Mutagenesis Kit及びpcDNA3.1(−)−Herceptin heavy chain及びpcDNA3.1(+)Hygro−HOKT3single chainFcのプライマー(表6)により行う。該反応は、キットのマニュアルに従って行う。該突然変異は配列決定により確認した(配列決定ベクターが、図6〜8に示されている)。
組換えプラスミドを大腸菌(E.Co1i)TOP10に形質転換した。単一コロニーを採取して100 mg / Lのアンピシリンを含むLB培地上で増殖させ、37℃で振動条件下で16時間培養した。その後、8000×gで10分間遠心して細菌を集めた。Tiangenエンドトキシンキット(endotoxin kit)を用いてプラスミドを単離し、該プラスミドを1mlの溶出EB緩衝液に溶解した。イソプロパノール1.42ml及びNaC10.42mlを使用してプラスミドを沈殿させ、その後、70%エタノール0.5mlで2回洗浄し、その後、超クリーンベンチで空気乾燥した後、滅菌超純水(1mL)に溶解させた。OD260/280でプラスミド濃度を測定した。OD260/280値は1.8〜1.9の間にあることは、高純度のプラスミドDNAであることが示唆されている。
トランスフェクションの前の24時間において、37℃、8%CO2、130rpmという条件下で1×106の293F細胞を125mlのフラスコ内の28mlの293freestyle培地に播種した。100μl 293fectinを1mlのOPtiMEMに加え、撹拌条件下で、室温で5分間インキュベーションした。同時に、組み換えプラスミドpcDNA3.1(+)Hygro−HOKT3single chain LDY、pcDNA3.1−Herceptin heavy chain TKK(−)及びpcDNA3.1(+)Hygro−Herceptin light chainを3:2:1の割合で混合した。DNA全量は30μgであり、1mlOPtiMEMに溶解させた。DNA及び293fectinを完全に混合し、且つ全体積を2mlにし、室温で15分間インキュベーションした。その後、該混合物を細胞培養物に加えた。細胞を、37℃で且つ5%CO2を含むインキュベータで、130rpmで5日培養した。細胞上清中の抗体の発現は、SDS−PAGEおよびウエスタンブロット(図9)により検出した。該抗体、Her2/neuに対して特異性を有する一価軽鎖/重鎖単位及びCD3に対する特異性を有する一本鎖単位を含むMSBODYを指す。
細胞培地を2000×gで遠心し、上清を集め、0.22μmのフィルターでろ過した。回収した液を10倍(体積で)結合緩衝液(9.5mM NaH2PO4+40.5mM NaH2PO4、pH7.0)で希釈し、その後、Sepharose Fast Flow protein Aアフィニティークロマトグラフィーカラム(GE社から入手、5ml体積)、Fab Affinity KBP Agarose アフィニティーフィラー(ACROBiosystems社から入手、5ml体積)及びSPカチオン交換クロマトグラフィーカラム(GE社から入手、10ml)により精製し、メーカーのマニュアルに基づいて行う。精製されたタンパク質を6%ゲルSDS−PAGE及びクマシーブリリアントブルー染色により検出した(図10参照)。
抗Her2/neu−抗−CD3二重特異性抗体(MSBODY)のHer2及びCD3を含む細胞に結合する能力はBT474及び末梢血単核細胞(PBMC)を使用して検出した。
細胞培養物から3×105のBT474細胞を集め、50μlPBS、10nMハーセプチン又は10nM二重特異性抗体でインキュベーションした。30分間後、細胞を1%FBS/PBSで2回洗浄し、その後、2.5μl PE標識抗ヒトIgG Fcと混合した。該混合物を室温下で30分間インキュベーションし、該細胞を再び1%FBS/PBSで洗浄した。その後、該サンプルをFACS機器により検出した。
末梢血単核細胞(PBMC)もCD3を表現する。1.5×106PBMC細胞を作製して50μlPBS、12.5nM HOKT3又は12.5nM二重特異性抗体でインキュベーションした。二重特異性リガント(黒実線)により結合されたPBMC細胞の存在量はHOKT3により結合された細胞(黒点線)と同じ高さである(図11B)。
BT−474細胞を、標的細胞として、96ウェルプレート(10000細胞/ウェル)に播種した。24時間後、単離したヒトPBMC(エフェクター細胞)を加え、次いで該混合物をHOKT3抗体、MSBODY、ヒトIgGタンパク質又はPBS単独と共にインキュベーションした(40:1エフェクター細胞−標的細胞(E−T)比)。図12には、各抗体についての細胞凝集を示す画像を提供する。対照サンプル(PBS)およびヒトIgGサンプルには、細胞凝集を示さないが、MSBODYは誘発下でHOKT3と同じ量の細胞凝集を有することが明らかである。
これにより、該実施例は、MSBODYが細胞凝集を引き起こすHOKT3と同程度に有効であり、且つハーセプチンとHOKT3両方よりも高い細胞毒性を有することが予想外に示された。
該実施例はMSBODYを他のタイプの抗体と比較し、これらの他のタイプの抗体がHer2/neu及びCD3の一方又は両方に対しても特異性を有し、該実施例がMSBODYの予想外に高い活性および安定性を示す。
本実施例で試験した様々なタイプの抗体は図15A−Eに示す。図15AはMSBODYを示し、一価単位がハーセプチンのVH及びVLを含み、且つ一本鎖単位がHOKT3のVH及びVLを含む。図15Bにける抗体はほとんどMSBODYの鏡像と呼ばれる「SMBODY」である。該SMBODYは一価単位及び一本鎖単位を含み、該一価単位がHOKT3のVH及びVLを含み、且該一本鎖単位がハーセプチンのVH及びVLを含む。
図15Dは2つの一本鎖単位が全てハーセプチンのVH及びVLを含む二重一本鎖抗体(「ハーセプチン一本鎖」と呼ばれる)を示す。そのうち、該抗体は単一特異性を有する。最後に、図15Eは、「HOKT3単鎖」と呼ばれるHOKT3のVHおよびVLを含む2つの単鎖単位を有する二重一本鎖抗体を示す。
上記の実施例は特異性一価一本鎖二重特異性抗体(MSBODY)の作製及び試験の方法を示し、該二重特異性抗体はHer2/neuに対して特異性を有する一価単位及びCD3に対して特異性を有する一本鎖単位を含む。同様の方法を使用し、それぞれ、腫瘍細胞を認識する一価単位及びエフェクター細胞を認識する一本鎖単位を有する他の該MSBODY作製及び使用できる。
本発明は、本発明の個々の態様の1つの例示として記載された具体的な実施形態によって範囲が限定されるものではなく、機能的に均等の組成物または方法はいずれも本発明の範囲に含まれる。さまざまな修飾および変更を、本発明の精神または範囲から逸脱することなく、本発明の方法および組成物においてなし得ることが、当業者には明らかであろう。したがって、本発明は、添付の特許請求の範囲およびその均等物の範囲に入るという条件で、そうした修飾および変更をカバーするものである。
本明細書中に挙げたすべての刊行物および特許出願は、個々の刊行物または特許出願が参照により組み込まれることを具体的かつ個別に示されたかのように、同程度に参照により本明細書に組み込まれる。
Claims (26)
- 抗体であって、
(a)腫瘍細胞または微生物に対して特異性を持つ軽鎖−重鎖対;及び
(b)一本鎖可変フラグメント(scFv)と、CH2ドメインおよびCH3ドメインを有するFcフラグメントとを含み、免疫細胞に対して特異性を持つ融合ペプチド
を含む、前記抗体。 - 軽鎖−重鎖対が、腫瘍抗原に対して特異性を持つ、請求項1に記載の抗体。
- 腫瘍抗原が、EGFR、Her2、EpCAM、CD20、CD30、CD33、CD47、CD52、CD133、CEA、gpA33、ムチン、TAG−72、CIX、PSMA、葉酸結合タンパク質、GD2、GD3、GM2、VEGF、VEGFR、インテグリン、aVb3、a5b1、ERBB2、ERBB3、MET、IGF1R、EPHA3、TRAILR1、TRAILR2、RANKL、FAP及びテネイシンからなる群から選ばれる、請求項2に記載の抗体。
- 軽鎖−重鎖対が、腫瘍細胞において過剰発現されたタンパク質に対して、対応する非腫瘍細胞と比べて特異性を持つ、請求項1に記載の抗体。
- 軽鎖−重鎖対が、ウイルスまたは細菌に対して特異性を持つ、請求項1に記載の抗体。
- 軽鎖−重鎖対が、エンドトキシンに対して特異性を持つ、請求項5に記載の抗体。
- 免疫細胞が、T細胞、B細胞、単球、マクロファージ、好中球、樹状細胞、食細胞、ナチュラルキラー細胞、好酸球、好塩基球及び肥満細胞からなる群から選ばれる、請求項1〜6のいずれか一項に記載の抗体。
- 融合ペプチドが、CD3、CD16、CD19、CD28及びCD64からなる群から選ばれる抗原に対して特異性を持つ、請求項1〜7のいずれか一項に記載の抗体。
- 軽鎖が、ジスルフィド結合により重鎖に結合する、請求項1〜8のいずれか一項に記載の抗体。
- 重鎖が、1又は2以上のジスルフィド結合により融合ペプチドに結合する、請求項1〜9のいずれか一項に記載の抗体。
- 重鎖が、ヒトまたはヒト化のFcフラグメントを含む、請求項1〜10のいずれか一項に記載の抗体。
- 重鎖のFcフラグメントが、ヒトIgG Fcフラグメントを含む、請求項11に記載の抗体。
- 融合ペプチドのFcフラグメントが、ヒトまたはヒト化のFcフラグメントを含む、請求項1〜12のいずれか一項に記載の抗体。
- 融合ペプチドのFcフラグメントが、ヒトIgG Fcフラグメントを含む、 請求項13に記載の抗体。
- 重鎖及び/又は融合ペプチドのFcフラグメントが、野生型の抗体フラグメントと比べて、1又は2以上の置換を含み、前記置換が重鎖とFcフラグメントとの間にイオン結合を形成する、請求項1〜14のいずれか一項に記載の抗体。
- 置換が、表1から選ばれる、請求項15に記載の抗体。
- 重鎖及び/又は融合ペプチドのFcフラグメントが、野生型の抗体フラグメントと比べて、1又は2以上の置換を含み、前記置換が重鎖とFcフラグメントとの間にノブ・イントゥー・ホール立体配座対を形成する、請求項1〜16のいずれか一項に記載の抗体。
- 置換が、表2から選ばれる、請求項17に記載の抗体。
- 検出可能な標識をさらに含む、請求項1〜18のいずれか一項に記載の抗体。
- CH2ドメインが、scFvフラグメントとCH3ドメインとの間に位置する、請求項1〜19のいずれか一項に記載の抗体。
- 融合ペプチドが、CH1ドメインを含まない、請求項1〜20のいずれか一項に記載の抗体。
- 請求項1〜21のいずれか一項に記載の抗体及び担体を含む、組成物。
- 担体が、薬物担体である、 請求項22に記載の組成物。
- 1又は2以上の抗原に結合する、請求項1〜21のいずれか一項に記載の抗体を含む、複合体。
- 抗体の作製方法であって、
(a)免疫細胞に対して特異性を持つ軽鎖−重鎖対、及び、
(b)一本鎖可変フラグメント(scFv)と、CH2ドメインおよびCH3ドメインを有するFcフラグメントとを含み、腫瘍細胞に対して特異性を持つ融合ペプチド
を混合することを含む、前記方法。 - 請求項25に記載の方法により作製された抗体。
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