JP2015510767A5

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Publication number: JP2015510767A5
Application number: JP2015500639A
Authority: JP
Filing date: 2013-03-15
Publication date: 2016-05-12
Anticipated expiration: 2033-03-15

Description

本明細書に記載される実施形態および態様のいずれも、特に明記しない限り、または文脈から明らかでない限り、互いに一緒に用いることができる。他の実施形態は、後に続く記載の概観から当業者にとって明らかになる。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される：
（項目１）
ヒトＶ _Ｌセグメント配列およびヒトＪ _Ｌセグメント配列を含む、単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域遺伝子配列を含む、免疫グロブリン軽鎖遺伝子座をその生殖細胞系列内に含む、遺伝子改変された非ヒト動物であって、
該単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域遺伝子配列の該ヒトＶ _Ｌセグメント配列および該ヒトＪ _Ｌセグメント配列が、対応するヒト生殖細胞系列のＶ _Ｌ遺伝子配列およびＪ _Ｌ遺伝子配列によってコードされない少なくとも１つのヒスチジンコドンを含む、
遺伝子改変された非ヒト動物。
（項目２）
前記単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン可変領域配列が、免疫グロブリン軽鎖定常領域遺伝子配列に作動可能に連結された、項目１に記載の動物。
（項目３）
前記免疫グロブリン軽鎖定常領域遺伝子配列が、非ヒト免疫グロブリン軽鎖定常領域遺伝子配列である、項目２に記載の動物。
（項目４）
前記非ヒト免疫グロブリン軽鎖定常領域遺伝子配列が、内因性非ヒト免疫グロブリン軽鎖定常領域遺伝子配列である、項目３に記載の動物。
（項目５）
免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子配列に作動可能に連結された、ヒトＶ _Ｈセグメント、ヒトＤ _Ｈセグメント、およびヒトＪ _Ｈセグメントを含む、再構成されていない免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子配列を含む、免疫グロブリン重鎖遺伝子座をその生殖細胞系列内にさらに含む、項目１に記載の動物。
（項目６）
前記免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子配列が、非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子配列である、項目５に記載の動物。
（項目７）
前記非ヒト重鎖定常領域遺伝子配列が、内因性非ヒト免疫グロブリン定常領域遺伝子配列である、項目６に記載の動物。
（項目８）
機能的な、再構成されていない免疫グロブリン軽鎖可変領域を欠く、項目１に記載の動物。
（項目９）
前記免疫グロブリン軽鎖遺伝子座が、内因性非ヒト免疫グロブリン軽鎖遺伝子座にある、項目１に記載の動物。
（項目１０）
前記免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、内因性非ヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座にある、項目５に記載の動物。
（項目１１）
前記少なくとも１つのヒスチジンコドンが、相補性決定領域（ＣＤＲ）３をコードするヌクレオチド配列内にある、項目１に記載の動物。
（項目１２）
前記少なくとも１つのヒスチジンコドンが、１つ、２つ、３つ、または４つのＣＤＲ３コドンである、項目１１に記載の動物。
（項目１３）
前記単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域が、ヒトＶκ１−３９遺伝子セグメントまたはヒトＶκ３−２０遺伝子セグメントに由来する、項目１に記載の動物。
（項目１４）
前記単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域が、再構成されたＶκ１−３９／Ｊκ５遺伝子配列またはＶκ３−２０／Ｊκ１遺伝子配列に由来する、項目１３に記載の動物。
（項目１５）
前記単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域が、再構成されたＶκ１−３９／Ｊκ５遺伝子配列に由来し、該Ｖκ１−３９／Ｊκ５遺伝子配列が、１０５、１０６、１０８、１１１位、およびこれらの組合せから選択される位置においてヒスチジンを発現するようにデザインされた、少なくとも１つの非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる置きかえを含む、項目１４に記載の動物。
（項目１６）
前記単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域が、再構成されたＶκ３−２０／Ｊκ１遺伝子配列に由来し、該Ｖκ３−２０／Ｊκ１遺伝子配列が、１０５、１０６、１０７、１０９位、およびこれらの組合せから選択される位置においてヒスチジンを発現するようにデザインされた、少なくとも１つの非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる置きかえを含む、項目１４に記載の動物。
（項目１７）
目的の抗原に応答するＢ細胞集団であって、中性ｐＨと比較して、酸性ｐＨにおける解離半減期（ｔ _１／２）が少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、または少なくとも約３０倍の短縮を示す抗体が富化されたＢ細胞集団を含む、項目１に記載の動物。
（項目１８）
中性ｐＨと比較して、酸性ｐＨにおける解離半減期（ｔ _１／２）の前記短縮が、約３０倍以上の短縮である、項目１７に記載の動物。
（項目１９）
齧歯動物である、項目１に記載の動物。
（項目２０）
ラットまたはマウスである、項目１９に記載の齧歯動物。
（項目２１）
マウスである、項目２０に記載の齧歯動物。
（項目２２）
前記免疫グロブリン軽鎖可変領域遺伝子配列内の前記少なくとも１つのヒスチジンコドンによりコードされるアミノ酸位置において、少なくとも１つのヒスチジン残基を含むヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを含む抗体を発現する、項目１に記載の動物。
（項目２３）
ヒトＶ _Ｌセグメント配列およびヒトＪ _Ｌセグメント配列を含む、単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域遺伝子配列を含む、免疫グロブリン軽鎖遺伝子座をその生殖細胞系列内に含む遺伝子改変マウスであって、
該単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域配列の該ヒトＶ _Ｌセグメント配列および該ヒトＪ _Ｌセグメント配列が、対応するヒト生殖細胞系列のＶ _Ｌ遺伝子配列およびＪ _Ｌ遺伝子配列によってコードされない少なくとも１つのヒスチジンコドンを含み、
該マウスが、機能的な、再構成されていない免疫グロブリン軽鎖可変領域を欠く、
遺伝子改変マウス。
（項目２４）
前記単一の、再構成された免疫グロブリン軽鎖可変領域遺伝子配列が、免疫グロブリン軽鎖定常領域遺伝子配列に作動可能に連結された、項目２３に記載のマウス。
（項目２５）
前記免疫グロブリン軽鎖定常領域遺伝子配列が、ラットまたはマウスの免疫グロブリン軽鎖定常領域遺伝子配列から選択される、項目２４に記載のマウス。
（項目２６）
免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子配列に作動可能に連結された、ヒトＶ _Ｈセグメント、ヒトＤ _Ｈセグメント、およびヒトＪ _Ｈセグメントを含む、再構成されていない免疫グロブリン重鎖可変領域配列を含む、免疫グロブリン重鎖遺伝子座をその生殖細胞系列内にさらに含む、項目２３に記載のマウス。
（項目２７）
前記免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子配列が、ラットまたはマウスの重鎖定常領域遺伝子配列である、項目２６に記載のマウス。
（項目２８）
前記免疫グロブリン軽鎖遺伝子座が、内因性マウス免疫グロブリン軽鎖遺伝子座にある、項目２３に記載のマウス。
（項目２９）
前記免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、内因性マウス免疫グロブリン重鎖遺伝子座にある、項目２６に記載のマウス。
（項目３０）
前記少なくとも１つのヒスチジンコドンが、相補性決定領域（ＣＤＲ）３をコードするヌクレオチド配列内にある、項目２３に記載のマウス。
（項目３１）
前記少なくとも１つのヒスチジンコドンが、１つ、２つ、３つ、または４つのＣＤＲ３コドンである、項目３０に記載のマウス。
（項目３２）
前記単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域が、ヒトＶκ１−３９遺伝子セグメントまたはヒトＶκ３−２０遺伝子セグメントに由来する、項目２３に記載のマウス。
（項目３３）
前記単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域が、再構成されたＶκ１−３９／Ｊκ５遺伝子配列またはＶκ３−２０／Ｊκ１遺伝子配列に由来する、項目３２
に記載のマウス。
（項目３４）
前記単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域が、再構成されたＶκ１−３９／Ｊκ５遺伝子配列に由来し、該Ｖκ１−３９／Ｊκ５遺伝子配列が、１０５、１０６、１０８、１１１位、およびこれらの組合せから選択される位置においてヒスチジンを発現するようにデザインされた、少なくとも１つの非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる置きかえを含む、項目３３に記載のマウス。
（項目３５）
前記Ｖκ１−３９／Ｊκ５遺伝子配列が、１０５、１０６、１０８、および１１１位においてヒスチジンを発現するようにデザインされた、ヒスチジンコドンによる非ヒスチジンコドンの置きかえを含む、項目３４に記載のマウス。
（項目３６）
前記Ｖκ１−３９／Ｊκ５遺伝子配列が、１０６、１０８、および１１１位においてヒスチジンを発現するようにデザインされた、ヒスチジンコドンによる非ヒスチジンコドンの置きかえを含む、項目３４に記載のマウス。
（項目３７）
前記単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域が、再構成されたＶκ３−２０／Ｊκ１遺伝子配列に由来し、該Ｖκ３−２０／Ｊκ１遺伝子配列が、１０５、１０６、１０７、１０９位、およびこれらの組合せから選択される位置においてヒスチジンを発現するようにデザインされた、少なくとも１つの非ヒスチジンコドンのヒスチジンコドンによる置きかえを含む、項目３３に記載のマウス。
（項目３８）
前記Ｖκ３−２０／Ｊκ１遺伝子配列が、１０５、１０６、１０７、および１０９位においてヒスチジンを発現するようにデザインされた、ヒスチジンコドンによる非ヒスチジンコドンの置きかえを含む、項目３７に記載のマウス。
（項目３９）
前記Ｖκ３−２０／Ｊκ１遺伝子配列が、１０５、１０６、および１０９位においてヒスチジンを発現するようにデザインされた、ヒスチジンコドンによる非ヒスチジンコドンの置きかえを含む、項目３７に記載のマウス。
（項目４０）
目的の抗原に応答する抗原特異的抗体の集団を発現し、全ての抗体が、
対応するヒト生殖細胞系列のＶ _Ｌ遺伝子配列およびＪ _Ｌ遺伝子配列によってコードされない少なくとも１つのヒスチジンコドンを含むヒトＶ _Ｌセグメント配列およびヒトＪ _Ｌセグメント配列を含む、同じ、単一の、再構成されたヒト軽鎖可変領域遺伝子配列に由来する免疫グロブリン軽鎖可変ドメインと、
ヒト重鎖Ｖセグメント、ヒト重鎖Ｄセグメント、およびヒト重鎖Ｊセグメントのレパートリーに由来するヒト重鎖可変ドメインを含む免疫グロブリン重鎖と
を含む、項目２３に記載のマウス。
（項目４１）
目的の抗原へのｐＨ依存性結合を示す抗体を生成する方法であって、
項目２３に記載のマウスを生成するステップと、
該マウスを目的の抗原で免疫するステップと、
中性ｐＨでは、該目的の抗原に所望の親和性で結合するが、酸性ｐＨでは、該目的の抗原への結合の低減を提示する抗体を選択するステップと
を含む方法。
（項目４２）
前記抗体が、酸性ｐＨおよび３７℃で、約２分間以下の解離半減期（ｔ _１／２）を示す、項目４１に記載の方法。
（項目４３）
目的の抗原へのｐＨ依存性結合を示す抗体を生成する方法であって、
その生殖細胞系列内にヒトＶ _Ｌセグメント配列およびヒトＪ _Ｌセグメント配列を含む単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域遺伝子配列を含む免疫グロブリン軽鎖遺伝子座を含む非ヒト動物において、目的の抗原に所望の親和性で結合する第一の抗体を生成するステップと、
該単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域遺伝子配列の該ヒトＶ _Ｌセグメント配列および該ヒトＪ _Ｌセグメント配列を、対応するヒト生殖細胞系列のＶ _Ｌセグメント配列およびＪ _Ｌセグメント配列によってコードされないヒスチジンコドンを含むように改変するステップと、
該第一の抗体の免疫グロブリン重鎖および該改変された免疫グロブリン軽鎖を細胞内で発現させるステップと、
該細胞内で発現した第二の抗体であって、中性ｐＨでは、該目的の抗原に対する所望の親和性を保持し、酸性ｐＨでは、該目的の抗原への結合の低減を提示する第二の抗体を選択するステップと
を含む方法。
（項目４４）
前記非ヒト動物において生成された前記第一の抗体が、ヒトＶ _Ｈセグメント、ヒトＤ _Ｈセグメント、およびヒトＪ _Ｈセグメントのレパートリーに由来する免疫グロブリン重鎖配列を含む、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
前記単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域配列が、Ｖκ１−３９／Ｊκ５遺伝子配列およびＶκ３−２０／Ｊκ１遺伝子配列から選択される、項目４３に記載の方法。
（項目４６）
前記単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域配列が、Ｖκ１−３９／Ｊκ５であり、前記改変が、１０５、１０６、１０８、１１１位、およびこれらの組合せから選択される位置でのＣＤＲ３コドンにおけるヒスチジンコドンによる少なくとも１つの非ヒスチジンコドンの置換を含む、項目４５に記載の方法。
（項目４７）
前記単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域配列が、Ｖκ３−２０／Ｊκ１であり、前記改変が、１０５、１０６、１０７、１０９位、およびこれらの組合せから選択される位置でのＣＤＲ３コドンにおけるヒスチジンコドンによる少なくとも１つの非ヒスチジンコドンの置換を含む、項目４５に記載の方法。
（項目４８）
前記抗体が、中性ｐＨと比較して、酸性ｐＨにおける解離半減期（ｔ _１／２）が少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、または少なくとも約３０倍の短縮を提示する、項目４３に記載の方法。
（項目４９）
前記抗体が、酸性ｐＨおよび３７℃で、約２分間以下の解離半減期（ｔ _１／２）を示す、項目４３に記載の方法。
（項目５０）
前記非ヒト動物が、マウスである、項目４３に記載の方法。
（項目５１）
遺伝子改変された免疫グロブリン軽鎖遺伝子座をその生殖細胞系列内に含む非ヒト動物
を作製する方法であって、
非ヒト動物のゲノムを改変して、免疫グロブリン軽鎖遺伝子座内の、内因性免疫グロブリン軽鎖Ｖセグメントおよび軽鎖Ｊセグメントを欠失させるか、または非機能的にするステップと、
対応するヒト生殖細胞系列のＶ _Ｌセグメント配列およびＪ _Ｌセグメント配列によってコードされない少なくとも１つのヒスチジンコドンを含むヒトＶ _Ｌセグメント配列およびヒトＪ _Ｌセグメント配列を含む、単一の、再構成されたヒト軽鎖可変領域遺伝子配列を該ゲノムに配置するステップと
を含む方法。
（項目５２）
目的の抗原へのｐＨ依存性結合を示す抗体が富化されたＢ細胞集団を含む、遺伝子改変された非ヒト動物を結果としてもたらす、項目５１に記載の方法。
（項目５３）
前記動物が、齧歯動物である、項目５１に記載の方法。
（項目５４）
前記動物が、マウスまたはラットである、項目５３に記載の方法。
（項目５５）
前記単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域配列が、ヒトのＶκ１−３９／Ｊκ５遺伝子配列またはＶκ３−２０／Ｊκ１遺伝子配列に由来し、前記少なくとも１つのヒスチジンコドンが、ＣＤＲ３コドンである、項目５１に記載の方法。

Claims

目的の抗原へのｐＨ依存性結合を示す抗体を生成する方法であって、
細胞において、
（ｉ）第一の抗体の重鎖可変ドメインを含む第一の免疫グロブリン重鎖であって、ここで該第一の抗体が、中性ｐＨでは、該目的の抗原に所望の親和性で結合し、その生殖系列ゲノムにおいて、限定されたレパートリーのＶ _Ｌ遺伝子セグメントおよびＪ _Ｌ遺伝子セグメントを含む核酸配列を含む非ヒト動物において生成され、該第一の抗体は、該限定されたレパートリーのＶ _Ｌ遺伝子セグメントおよびＪ _Ｌ遺伝子セグメントからのＶ _Ｌ遺伝子セグメントおよびＪ _Ｌ遺伝子セグメントによってコードされる軽鎖成分を含む、第一の免疫グロブリン重鎖、および
（ｉｉ）該第一の抗体の該軽鎖成分をコードし、少なくとも１つの非ヒスチジンコドンの、ヒスチジンコドンによる置換を含むように改変された、該Ｖ _Ｌ遺伝子セグメントおよびＪ _Ｌ遺伝子セグメントに由来する免疫グロブリン軽鎖ヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変ドメインを含む免疫グロブリン軽鎖
を共発現させるステップと、
該細胞内で発現した第二の抗体であって、該第一の免疫グロブリン重鎖および該免疫グロブリン軽鎖を含み、中性ｐＨでは、該目的の抗原に対する該所望の親和性を保持し、酸性ｐＨでは、該目的の抗原への結合の低減を提示する第二の抗体を選択するステップと
を含む方法。
前記第二の抗体が、完全ヒト第一の免疫グロブリン重鎖および完全ヒト免疫グロブリン軽鎖を含む、請求項１に記載の方法。
前記第二の抗体が、中性ｐＨと比較して、酸性ｐＨにおける解離半減期（ｔ_１／２）が少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、または少なくとも約３０倍の短縮を提示する、請求項１または請求項２に記載の方法。
前記第二の抗体が、酸性ｐＨおよび３７℃で、約２分間以下の解離半減期（ｔ_１／２）を示す、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
目的の第一の抗原および目的の第二の抗原に対するｐＨ依存性結合を示す、二重特異性抗体を生成する方法であって、
（ａ）細胞において
（ｉ）第一の抗体の第一の重鎖可変ドメインを含む第一の免疫グロブリン重鎖であって、該第一の抗体は、中性ｐＨでは、該第一の目的の抗原に所望の親和性で結合する、第一の免疫グロブリン重鎖、
（ｉｉ）第二の抗体の第二の重鎖可変ドメインを含む第二の免疫グロブリン重鎖であって、該第二の抗体が、中性ｐＨでは、所望の親和性で該目的の第二の抗原に結合する、第二の免疫グロブリン重鎖、
ここで、該第一の抗体および該第二の抗体は、（１）その生殖系列ゲノムにおいて、限定されたレパートリーの軽鎖可変領域Ｖ _Ｌ遺伝子セグメントおよびＪ _Ｌ遺伝子セグメントを含む核酸配列を含む非ヒト動物において生成され、かつ（２）該限定されたレパートリーの軽鎖可変領域Ｖ _Ｌ遺伝子セグメントおよびＪ _Ｌ遺伝子セグメントからのＶ _Ｌ遺伝子セグメントおよびＪ _Ｌ遺伝子セグメントによってコードされる同じ軽鎖成分を含む、ならびに
（ｉｉｉ）（１）該第一の抗体および該第二の抗体の軽鎖成分をコードするＶ _Ｌ遺伝子セグメントおよびＪ _Ｌ遺伝子セグメントに由来し、かつ（２）少なくとも１つの非ヒスチジンコドンの、ヒスチジンコドンによる置換を含むように改変された、免疫グロブリン軽鎖ヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変ドメインを含む免疫グロブリン軽鎖、
を共発現させるステップと、
（ｂ）該細胞において、該第一の免疫グロブリン重鎖および第二の免疫グロブリン重鎖ならびに該免疫グロブリン軽鎖を含み、中性ｐＨでは、該目的の第一の抗原および該第二の抗原への所望の親和性を保持し、かつ酸性ｐＨでは該目的の第一の抗原および第二の抗原に対して低減した結合を提示する、発現された第三の抗体を選択するステップと
を含む方法。
前記第三の抗体が、完全ヒト第一の免疫グロブリン重鎖、完全ヒト第二の免疫グロブリン重鎖、および完全ヒト免疫グロブリン軽鎖を含む、請求項５に記載の方法。
前記第三の抗体が、中性ｐＨと比較して、酸性ｐＨにおける解離半減期（ｔ_１／２）が少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約１５倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約２５倍、または少なくとも約３０倍の短縮を提示する、請求項５または請求項６に記載の方法。
前記第三の抗体が、酸性ｐＨおよび３７℃で、約２分間以下の解離半減期（ｔ_１／２）を提示する、請求項５〜７のいずれか一項に記載の方法。
前記限定されたレパートリーの軽鎖可変領域Ｖ _Ｌ遺伝子セグメントおよびＪ _Ｌ遺伝子セグメントが、単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域配列であり、該免疫グロブリン軽鎖ヌクレオチド配列が、該単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン可変領域配列に由来する、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
前記単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域配列が、Ｖκ１−３９遺伝子配列およびＶκ３−２０遺伝子配列から選択されるＶκ配列を含む、請求項９に記載の方法。
前記単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域配列が、Ｖκ１−３９／Ｊκ５であり、前記免疫グロブリン軽鎖ヌクレオチド配列における少なくとも１つの非ヒスチジンコドンの、ヒスチジンコドンによる置換が、１０５、１０６、１０８、１１１位、およびこれらの組合せから選択される位置においてヒスチジンを発現するようにデザインされている、請求項１０に記載の方法。
前記単一の、再構成されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変領域配列が、Ｖκ３−２０／Ｊκ１を含み、前記免疫グロブリン軽鎖ヌクレオチド配列における少なくとも１つの非ヒスチジンコドンの、ヒスチジンコドンによる置換が、１０５、１０６、１０７、１０９位、およびこれらの組合せから選択される位置においてヒスチジンを発現するようにデザインされている、請求項１０に記載の方法。
前記非ヒト動物が、ヒトＶ _Ｈセグメント、ヒトＤ _ＨセグメントおよびヒトＪ _Ｈセグメントのレパートリーに由来する免疫グロブリン重鎖配列をさらに含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
前記非ヒト動物がマウスである、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の方法。