JP2016512034A5 - - Google Patents
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Claims (33)
- マウスであって、マウスの生殖系列ゲノム中に、
免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結した2つの再構成されていないヒト免疫グロブリンVκ遺伝子セグメントおよび2つまたはそれ超の再構成されていないヒト免疫グロブリンJκ遺伝子セグメントであって、ここで、該2つの再構成されていないヒト免疫グロブリンVκ遺伝子セグメントが、ヒトVκ1−39およびヒトVκ3−20であり、該2つまたはそれ超の再構成されていないヒト免疫グロブリンJκ遺伝子セグメントが、ヒトJκ1、ヒトJκ2、ヒトJκ3、ヒトJκ4、およびヒトJκ5からなる群から選択される、2つの再構成されていないヒト免疫グロブリンVκ遺伝子セグメントおよび2つまたはそれ超の再構成されていないヒト免疫グロブリンJκ遺伝子セグメント;ならびに
非ヒト免疫グロブリン定常領域配列に作動可能に連結した1つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンVH遺伝子セグメント、1つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンDH遺伝子セグメント、および1つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンJH遺伝子セグメント
を含み、
該ヒト免疫グロブリン遺伝子セグメントが、再構成することが可能であって、抗体のヒト免疫グロブリン可変ドメインをコードしており、さらに、該マウスが、免疫グロブリン軽鎖可変領域配列が形成されるように再構成することが可能な内因性免疫グロブリンVκ遺伝子セグメントを含まない、マウス。 - 前記2つの再構成されていないヒト免疫グロブリンVκ遺伝子セグメントおよび2つまたはそれ超の再構成されていないヒト免疫グロブリンJκ遺伝子セグメントが、マウスまたはラット免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結される、請求項1に記載のマウス
- 前記免疫グロブリン軽鎖定常領域配列がラットCκ領域である、請求項2に記載のマウス。
- 前記免疫グロブリン軽鎖定常領域配列がマウスCκ領域である、請求項2に記載のマウス。
- 5つのヒト免疫グロブリンJκ遺伝子セグメントを含む、請求項1から4のいずれか一項に記載のマウス。
- 前記5つのヒト免疫グロブリンJκ遺伝子セグメントが、ヒトJκ1、ヒトJκ2、ヒトJκ3、ヒトJκ4およびヒトJκ5である、請求項5に記載のマウス。
- 前記2つの再構成されていないヒト免疫グロブリンVκ遺伝子セグメントおよび2つまたはそれ超の再構成されていないヒト免疫グロブリンJκ遺伝子セグメントが、内因性免疫グロブリン軽鎖遺伝子座に存在する、請求項1から6のいずれか一項に記載のマウス。
- 前記1つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンVH遺伝子セグメント、1つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンDH遺伝子セグメント、および1つまたは複数の再構成されていないヒト免疫グロブリンJH遺伝子セグメントが、マウス定常領域に作動可能に連結している、請求項1から7のいずれか一項に記載のマウス。
- 機能的なλ軽鎖遺伝子座を含む、請求項1から8のいずれか一項に記載のマウス。
- 非機能的なλ軽鎖遺伝子座を含む、請求項1から8のいずれか一項に記載のマウス。
- 前記2つの再構成されていないヒト免疫グロブリンVκ遺伝子セグメントおよび2つまたはそれ超の再構成されていないヒト免疫グロブリンJκ遺伝子セグメントが、マウスまたはラット免疫グロブリン軽鎖定常領域配列に作動可能に連結され、ヒトVκ1−39遺伝子セグメント、ヒトVκ3−20遺伝子セグメント、ヒトJκ1、ヒトJκ2、ヒトJκ3、ヒトJκ4およびヒトJκ5を順番に含む遺伝子座に存在する、請求項1から10のいずれか一項に記載のマウス。
- DLC−5J遺伝子座を含むマウスであって、該DLC−5J遺伝子座が、配列番号38〜49から選択されるhVκ/hJκ/mCκ接合部配列を含む、請求項1から11のいずれか一項に記載のマウス。
- 請求項1から12のいずれか一項に記載のマウスの単離された細胞。
- 胚性幹(ES)細胞である、請求項13に記載の単離された細胞。
- 請求項14に記載のES細胞を含むマウス胚。
- B細胞である、請求項13に記載の単離された細胞。
- 請求項16に記載のB細胞を用いて作製されたハイブリドーマ。
- 抗体を生成するため、またはヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードする核酸配列を同定するための、請求項1から12のいずれか一項に記載のマウスの使用。
- 単一細胞において、
(a)免疫された請求項1から12のいずれか一項に記載のマウスの第1のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列を含む第1の免疫グロブリン重鎖をコードする第1の核酸配列であって、該ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列は、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域配列と融合している第1の核酸配列;および
(b)ヒト免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域配列を含む免疫グロブリン軽鎖をコードする第2の核酸配列であって、該ヒト免疫グロブリンカッパ軽鎖可変領域配列は、ヒト免疫グロブリン軽鎖定常領域配列と融合している、第2の核酸配列
を発現させるステップ、
該細胞を、完全ヒト抗体を発現するのに十分な条件下で維持するステップ;ならびに
該抗体を該細胞から単離するステップ
を含む、抗体を作製するための方法。 - 前記細胞が、免疫された請求項1から12のいずれか一項に記載のマウスの第2のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列を含む第2の免疫グロブリン重鎖をコードする第3の核酸配列を含み、該第2のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列がヒト免疫グロブリン重鎖定常領域配列と融合しており、前記第1のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列が第1のエピトープを認識する第1のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードし、該第2のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列が第2のエピトープを認識する第2のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードし、該第1のエピトープおよび該第2のエピトープが同一ではなく、該第1のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインおよび該第2のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインが前記第2の核酸配列によりコードされるヒト免疫グロブリン軽鎖と相互作用する、請求項19に記載の方法。
- ヒト二重特異性抗体の作製における、請求項1から12のいずれか一項に記載のマウスの使用。
- ヒト二重特異性抗体を作製するための方法であって、請求項1から12のいずれか一項に記載のマウスを免疫するステップ、および該マウス由来のB細胞のヒト可変領域遺伝子配列を使用して該二重特異性抗体を作製するステップを含む方法。
- (a)請求項1から12のいずれか一項に記載のマウスのクローン選択されたリンパ球を同定するステップであって、該マウスが免疫され、目的の抗原に対する免疫応答を生じるようにされており、該リンパ球が該目的の抗原に特異的に結合する抗体を発現し、該抗体がヒトVκ1−39またはヒトVκ3−20由来の軽鎖可変ドメインを含むステップ;
(b)該リンパ球または該抗体から、該目的の抗原に特異的に結合するヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を得るステップ;および
(c)(b)のヌクレオチド配列を二重特異性抗体の作製に使用するステップ
を含む、請求項22に記載の方法。 - 1回目に第1の抗体から第1のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードする第1のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列を生成するために目的の第1の抗原に対してステップ(a)および(b)を実施し、2回目に第2の抗体から第2のヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードする第2のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列を生成するために目的の第2の抗原に対してステップ(a)および(b)を実施し、ここで、該第1の抗体および該第2の抗体の各々が、同一のVκ遺伝子セグメント由来の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを含む、請求項23に記載の方法。
- 前記第1のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列が第1のヒト免疫グロブリン重鎖定常領域配列と融合して発現して、第1のヒト免疫グロブリン重鎖を形成し、前記第2のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列が第2のヒト免疫グロブリン重鎖定常領域とともに発現して、第2のヒト免疫グロブリン重鎖を形成し、該第1のヒト重鎖および該第2のヒト重鎖がヒトVκ1−39またはヒトVκ3−20由来の免疫グロブリン軽鎖可変ドメインを含む単一のヒト免疫グロブリン軽鎖の存在下で発現する、請求項24に記載の方法。
- (a)
(i)第1の免疫原を用いて免疫された請求項1から12のいずれか一項に記載のマウス;および
(ii)第2の免疫原を用いて免疫された同じマウス、または遺伝学的には同じである異なるマウス
由来のB細胞からヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列をクローニングするステップ、
(b)細胞において、ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域配列および同じ免疫グロブリン軽鎖とともに(a)のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列を発現させて二重特異性抗体を作製するステップ
を含む、請求項25に記載の方法。 - 前記第1のヒト免疫グロブリン重鎖が、前記第1のヒト免疫グロブリン重鎖のプロテインAに対する親和性を消失させるまたは実質的に低下させる改変を含み、前記第2のヒト免疫グロブリン重鎖がプロテインAに結合する能力を保持し、該第1のヒト免疫グロブリン重鎖のプロテインAに対する親和性を消失させるまたは実質的に低下させる改変が、95R(EU435R)、96F(EU436F)、およびこれらの組合せから選択される、請求項26に記載の方法。
- ヒト免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子セグメントを選択するために使用するための、請求項1から12のいずれか一項に記載のマウス。
- 免疫されている、請求項1から12のいずれか一項に記載のマウス。
- 抗体を産生する方法であって、請求項1から12のいずれか一項に記載のマウスを、抗原を用いて免疫するステップ、および結果として生ずる、該マウスにより該抗原に対して産生された抗体からヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインアミノ酸配列またはコードするヌクレオチド配列を得るステップ、および該ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインアミノ酸配列またはコードする核酸配列を抗体の作製に利用するステップを含む方法。
- (a)前記マウスを免疫した前記抗原の異なるエピトープに対する2種の異なる抗体から前記ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインアミノ酸配列またはコードするヌクレオチド配列を同定するステップ;または
(b)請求項1から12のいずれか一項に記載のマウスと同じマウス、またはさらなるマウスを、異なる抗原を用いて免疫し、次いで、該異なる抗原に特異的である、該マウスによって産生された抗体からヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインアミノ酸配列またはコードするヌクレオチド配列を同定するステップを含み、
該2種の異なるヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインアミノ酸配列またはコードするヌクレオチド配列を使用して二重特異性抗体を生成するステップをさらに含む、請求項30に記載の方法。 - 前記抗体または2つの抗体からヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインアミノ酸配列またはコードするヌクレオチド配列も同定するステップをさらに含む、請求項30または31に記載の方法。
- 請求項32に記載の方法であって、該方法によって産生された抗体において同定されたヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインアミノ酸配列もしくはコードするヌクレオチド配列および/またはヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインアミノ酸配列もしくはコードするヌクレオチド配列も使用し、二重特異性抗体を生成することを含む、方法。
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